CN114295567B - 一种磷脂酶a2检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种磷脂酶A2检测试剂盒及其制备方法,该磷脂酶A2检测试剂盒包括R1试剂和R2试剂;R1试剂包括以下成分:缓冲液、pH调节液、无机盐、抗干扰剂、促聚剂和月桂酸;R2试剂包括以下成分:胶乳颗粒、活化体系、缓冲液、Lp‑PLA2单克隆抗体、封闭剂、稳定剂、防腐剂;其中,抗干扰剂包括乙二醇嵌段聚醚和吐温20。本发明提供的上述磷脂酶A2试剂盒的制备简单,无离心重悬等步骤,生产成本低;并且,该试剂盒通过抗干扰剂以及其他成分的改进,不仅大幅度地提高了试剂检测的灵敏度和稳定性,并且也提高了其抗干扰能力。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂领域,尤其涉及一种磷脂酶A2检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)属于磷脂酶超家族,是由441个氨基酸组成的一种丝氨酸酯酶,分子量为45kDa,又称血小板活化因子乙酰基水解酶(PAF-AH)。人血浆Lp-PLA2主要由炎症相关细胞(例如巨噬细胞、泡沫细胞、T淋巴细胞及肥大细胞等)在粥样斑块及肝脏中生成。血液循环中的Lp-PLA2以与脂蛋白颗粒结合的形式存在,80%通过载脂蛋白B与低密度脂蛋白(LDL)结合,其余的与高密度脂蛋白(HDL)、脂蛋白a(Lpa)和极低密度脂蛋白(VLDL)结合。结合在LDL上的Lp-PLA2被运送到血管壁上易受损伤的区域,水解氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),产生溶血卵磷脂(Lyso-PC)和氧化型游离脂肪酸(ox-FA),这二者是促炎介质,能促进炎症反应及动脉粥样硬化,导致血栓形成和心血管事件的发生。Lp-PLA2的参考区间为<170ng/mL,若超出参考区间则提示心血管事件风险增加。因此检测人体内Lp-PLA2的水平能对心血管疾病临床早期干预和治疗具有重要意义。
目前,国内测定Lp-PLA2的方法主要有活性法和质量法。活性法主要为连续监测法,能够反映Lp-PLA2的催化能力,该方法缺点是试剂稳定性差,抗干扰能力弱。质量法包括化学发光法、酶联免疫法、免疫比浊法,化学发光法存在试剂不稳定的问题,测试结果的重复性差,且仪器设备检测费用较高,不便于临床应用;酶联免疫法自动化程度低,检测时间长,操作复杂,并且受人为因素影响较大,定量准确性差。而免疫比浊法适用于全自动生化分析仪和即时检验(POCT)仪这两种设备,操作相对简单,能够进行快速、大样本量检测。
但现有免疫比浊法技术产品的不同批次试剂灵敏度和稳定性之间差异较大,且抗干扰能力不足,无法准确测量特殊体质的病人健康状况。因此,现有技术有待进一步改进。
发明内容
针对上述问题,本发明提供了一种灵敏度高、稳定性好,适用人群广泛,抗干扰能力强的磷脂酶A2检测试剂盒及其制备方法,有效用于测定人体中Lp-PLA2的含量。
为解决上述问题,本发明提供了以下技术方案:
一方面,本发明提供一种磷脂酶A2检测试剂盒,其包括R1试剂和R2试剂;其中:
R1试剂包括以下成分:缓冲液、pH调节液、无机盐、抗干扰剂、促聚剂和月桂酸;
R2试剂包括以下成分:胶乳颗粒、活化体系、缓冲液、Lp-PLA2单克隆抗体、封闭剂、稳定剂、防腐剂;
其中,抗干扰剂包括乙二醇嵌段聚醚和吐温20。
吐温20可以提高试剂特异性,并能够排除一定浓度的干扰物影响,但当干扰物存在基质效应(干扰物改变样品基质的物理特性,比如粘度、表面张力,浊度或离子强度,引起分析物的测量结果明显改变)时,排除干扰能力较差。乙二醇嵌段聚醚是一种良好的分散剂,能够促使样本中的颗粒均匀分散于介质中,对粘稠样本中具有特殊的抗干扰能力,但分散作用强容易使得胶乳试剂灵敏度下降,影响试剂性能。本发明通过合理调整乙二醇嵌段聚醚和吐温20的使用比例,既可以保证试剂反应灵敏度又可以提高试剂抗干扰性能。
优选地,所述乙二醇嵌段聚醚和吐温20的质量比为1:3-1:5。优选地,两者的质量比为1:3,该比例条件下,试剂反应的灵敏度和抗干扰性最佳。
优选地,所述磷脂酶A2检测试剂盒中,R1试剂包括以下浓度的各组分:
所述R2试剂包含以下浓度的各组分:
优选地,所述促聚剂为PEG6000、PEG8000、PEG12000中的一种或几种;促聚剂和月桂酸的质量比为1:2.5-1:4.5。PEG6000能够避免聚合物过多引起非特异反应和聚合物过少致使试剂灵敏度低的问题,能够提高特异性和灵敏度,月桂酸具有良好的乳化稳定作用,这两种成分按比例使用能显著改善了抗体和微球连接的稳定性,有效防止抗体脱落。
优选地,所述R1试剂中缓冲液为Tris缓冲液、HEPES缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种或几种;所述无机盐为氯化钠、氯化钙、氯化镁中的一种或几种。
优选地,所述R2试剂中缓冲液包括0.01-0.05mM/L的硼酸缓冲液、硼砂缓冲液或硼酸-硼砂缓冲液中的一种或几种。
优选地,所述封闭剂为BSA(牛血清白蛋白)、酪蛋白中的一种或几种。所述的防腐剂为Proclin300、叠氮钠、硫柳汞中的一种或几种。所述的稳定剂为海藻糖、蔗糖、酪蛋白、明胶、EDTA-2Na中的一种或几种。
进一步优选地,所述防腐剂为Proclin300;所述稳定剂为蔗糖、明胶、海藻糖和EDTA-2Na;多种稳定剂结合使用比单一的稳定剂效果更明显,试剂更加稳定。
优选地,所述胶乳微球粒径介于80-200nm。所述活化体系包括EDC和NHS;单克隆抗体为鼠抗人Lp-PLA2抗体。
R2试剂的上述活化体系采用NHS和EDC两种活化剂相结合的方法,NHS的加入使EDC介导的偶联效率提高,而EDC的含量直接影响偶联效率。NHS是将羧基转化为胺反应性NHS酯的化学修饰试剂,常用于生物偶联、交联、标记和固定。在本发明的体系中添加NHS,能将胶乳微球表面的羧基转化为胺反应性NHS酯,使EDC介导的偶联效率提高。实验证明,采用NHS/EDC活化体系的试剂比单一的EDC体系的试剂灵敏度更高,稳定性更好。另一方面,EDC起偶联的主要作用,EDC的含量直接影响抗体和微球的偶联效率,过量的EDC会使相邻微球上的抗体偶联导致微球聚集或者中和微球表面的羧基,影响试剂稳定性。本发明根据微球表面羧基浓度来精确计算EDC的用量,即1mol羧基添加2-3molEDC。本发明通过对EDC的精确用量使抗体和微球的偶联效率提高,并且有效防止微球凝集,使检测试剂盒更灵敏,更稳定。
进一步优选地,所述活化体系为0.01-0.03g/mL的NHS和0.006-0.008g/mL的EDC;所述封闭液为2%的BSA。
优选地,所述pH调节液为6mol/L的盐酸溶液。
另一方面,本发明提供一种上述磷脂酶A2检测试剂盒的制备方法,其包括以下步骤:
R1试剂的配制:按照R1试剂的组分含量,将Tirs缓冲液溶于水中,使用所述pH调节液将pH调至7.8-8.0,随后添加无机盐、抗干扰剂、促聚剂、月桂酸,搅拌均匀得到R1试剂;
R2试剂的配制:取胶乳微球加入适量纯水中,摇匀后加入现配的活化体系,置于摇床上,活化胶乳8-15min;随后边搅拌边依次加入硼砂缓冲液、硼酸缓冲液和两株Lp-PLA2单克隆抗体,置于摇床上偶联1-2h;再将其置于搅拌器上,再边搅拌边加入硼酸-硼砂缓冲液,摇床孵育20-40min后加入封闭剂,摇床孵育0.8-1.2h后,最后加入稳定剂和防腐剂,摇床上稳定过夜后即得R2试剂。
优选地,所述R2试剂的配制方法具体为:取胶乳微球加入适量纯水中,置于37℃摇床,200r/min,摇匀5min;之后加入现配的活化体系,NHS和EDC溶液,置于37℃摇床,200r/min,活化胶乳12min;随后进行搅拌,并依次加入硼砂缓冲液、硼酸缓冲液和两株单抗,置于37℃摇床,200r/min,偶联1.5h后从摇床中取出,置于搅拌器上,加入硼酸-硼砂缓冲液,37℃摇床孵育30min后加入封闭剂,37℃摇床孵育1h,最后加入稳定剂和防腐剂,在37℃摇床稳定过夜后即得R2试剂。
本发明具有以下有益效果:
1、本发明提供的磷脂酶A2试剂盒的制备和操作简单,无离心重悬等步骤,生产成本低;并且,所述试剂盒通过抗干扰剂以及其他成分的改进,不仅大幅度提高了试剂检测的灵敏度和稳定性,并且也提高了其抗干扰能力。
2、R1试剂中的PEG6000能够避免聚合物过多引起非特异反应和聚合物过少致使试剂灵敏度低的问题,能够提高特异性和灵敏度,月桂酸具有良好的乳化稳定作用,这两者按比例使用显著改善了抗体和微球连接的稳定性,防止抗体脱落。同时,通过合理调整乙二醇嵌段聚醚和吐温20的使用比例,既可以保证试剂反应灵敏度又可以提高试剂抗干扰性能。
3、R2活化体系采用NHS和EDC两种活化剂相结合的方法,NHS的加入使EDC介导的偶联效率提高,而EDC的含量直接影响偶联效率,本发明通过对EDC的精确用量使抗体和微球的偶联效率提高,并且有效防止微球凝集,使检测试剂盒更灵敏,更稳定。
附图说明
图1为实施例1定标曲线;
图2为实施例1的试剂盒的线性范围。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。在本发明中,若非特指,所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法,如无特别说明,均为本领域的常规方法。
实施例1
1、本实施例提供一种磷脂酶A2检测试剂盒,该试剂盒的制备方法包括以下步骤:
(1)R1试剂的配制:
按照R1试剂的组分含量,配制缓冲液,使用pH调节液将pH调至7.8-8.0,随后依次添加无机盐、抗干扰剂、促聚剂、月桂酸搅拌均匀,搅拌均匀即得R1试剂。
本实施例中,缓冲液为50mmol/L~100mmol/L的Tris缓冲液、6mol/L的盐酸溶液(pH调节液)、无机盐为氯化钠;抗干扰剂为吐温20和乙二醇嵌段聚醚、促聚剂为PEG6000。
配置完成后,R1的各组分的终浓度分别为:
(2)R2试剂的配制:
取粒径为200nm的胶乳微球加入适量纯水中,置于37℃摇床,200r/min,摇匀5min。之后加入现配的活化体系,置于37℃摇床,200r/min,活化胶乳12min;随后进行搅拌,加入硼砂缓冲液孵育4分钟,随后加入硼酸缓冲液和两株鼠抗人Lp-PLA2单抗,置于37℃摇床,200r/min,偶联1.5h后从摇床中取出,置于搅拌器上,加入硼酸-硼砂缓冲液,37℃摇床孵育30min后加入2%BSA,37℃摇床孵育1h,最后加入稳定剂和防腐剂,在37℃摇床稳定一夜后即得R2试剂。
本实施例中,单克隆抗体为鼠抗人Lp-PLA2抗体;所述缓冲液为0.01-0.05mM/L硼酸缓冲液、0.01-0.05mM/L硼砂缓冲液和0.01-0.05mM/L硼酸-硼砂缓冲液;所述活化体系为0.0245g/mL的NHS溶液和0.0075g/mL的EDC溶液,成分配比为3.5:1;所述封闭液为2%BSA;所述稳定剂为蔗糖、明胶、海藻糖和EDTA-2Na,四种稳定剂成分的配比为1:0.5:4:0.03;所述防腐剂为Proclin300。
上述R2试剂的配制过程相对简单,无需超声、离心等复杂工序。
配置完成后,R2的各组分的终浓度分别为:
实施例2
1、本实施例提供一种磷脂酶A2检测试剂盒,该试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
(1)R1试剂的配制:
按照R1试剂的组分含量,配制缓冲液,使用pH调节液将pH调至7.8-8.0,随后依次添加无机盐、抗干扰剂、促聚剂、月桂酸搅拌均匀,搅拌均匀即得R1试剂。
本实施例中,缓冲液为50mmol/L~100mmol/L的Tris缓冲液、6mol/L的盐酸溶液(pH调节液)、无机盐为氯化钠;抗干扰剂为吐温20和乙二醇嵌段聚醚、促聚剂为PEG6000。
配置完成后,R1的各组分的终浓度分别为:
(2)R2试剂的配制:
取粒径为200nm的胶乳微球加入适量纯水中,置于37℃摇床,200r/min,摇匀5min。之后加入现配的活化体系,置于37℃摇床,200r/min,活化胶乳12min;随后进行搅拌,加入硼砂缓冲液孵育4分钟,随后加入硼酸缓冲液和两株鼠抗人Lp-PLA2单抗,置于37℃摇床,200r/min,偶联1.5h后从摇床中取出,置于搅拌器上,加入硼酸-硼砂缓冲液,37℃摇床孵育30min后加入2%BSA,37℃摇床孵育1h,最后加入稳定剂和防腐剂,在37℃摇床稳定一夜后即得R2试剂。
本实施例中,单克隆抗体为鼠抗人Lp-PLA2抗体;所述缓冲液为0.01-0.05mM/L硼酸缓冲液、0.01-0.05mM/L硼砂缓冲液和0.01-0.05mM/L硼酸-硼砂缓冲液;所述活化体系为0.0245g/mL的NHS溶液和0.0075g/mL的EDC溶液,成分配比为3.5:1;所述封闭液为2%BSA;所述稳定剂为蔗糖、明胶、海藻糖和EDTA-2Na,四种稳定剂成分的配比为1:0.5:4:0.03;所述防腐剂为Proclin300。
上述R2试剂的配制过程相对简单,无需超声、离心等复杂工序。
配置完成后,R2的各组分的终浓度分别为:
实施例3
2、本实施例提供一种磷脂酶A2检测试剂盒,其包括R1试剂和R2试剂,其制备方法包括以下步骤:
(1)R1试剂的配制:
按照R1试剂的组分含量,将缓冲液溶于水中,使用pH调节液将pH调至7.8-8.0,随后依次添加无机盐、抗干扰剂、促聚剂、月桂酸搅拌均匀,搅拌均匀即得R1试剂。
本实施例中,缓冲液为50mmol/L~100mmol/L的Tris缓冲液、6mol/L的盐酸溶液(pH调节液)、无机盐为氯化钠;抗干扰剂为吐温20和乙二醇嵌段聚醚、促聚剂为PEG6000。
配置完成后,R1的各组分的终浓度分别为:
(2)R2试剂的配制:
取粒径为200nm的胶乳微球加入适量纯水中,置于37℃摇床,200r/min,摇匀5min。之后加入现配的活化体系,置于37℃摇床,200r/min,活化胶乳12min;随后进行搅拌,加入硼砂缓冲液孵育4分钟,随后加入硼酸缓冲液和两株鼠抗人Lp-PLA2单抗,置于37℃摇床,200r/min,偶联1.5h后从摇床中取出,置于搅拌器上,加入硼酸-硼砂缓冲液,37℃摇床孵育30min后加入2%BSA,37℃摇床孵育1h,最后加入稳定剂和防腐剂,在37℃摇床稳定一夜后即得R2试剂。
本实施例中,单克隆抗体为鼠抗人Lp-PLA2抗体;所述缓冲液为0.01-0.05mM/L硼酸缓冲液、0.01-0.05mM/L硼砂缓冲液和0.01-0.05mM/L硼酸-硼砂缓冲液;所述活化体系为0.0245g/mL的NHS溶液和0.0075g/mL的EDC溶液,成分配比为3.5:1;所述封闭液为2%BSA;所述稳定剂为蔗糖、明胶、海藻糖和EDTA-2Na,四种稳定剂成分的配比为1:0.5:4:0.03;所述防腐剂为Proclin300。
上述R2试剂的配制过程相对简单,无需超声、离心等复杂工序。
配置完成后,R2的各组分的终浓度分别为:
实施例4
参照实施例1的制备方法,按照下表制备以下多个实验组的试剂盒,其中实施组1为实施例1的技术方案。
其中,实验组1、实验组2和实验组3的试剂盒一同进行后续的试剂盒抗干扰实验;实验组1、实验组4和实验组5的试剂盒一同进行后续的试剂盒的稳定性实验。
实施例5磷脂酶A2检测试剂盒的应用
本实施例的一种上述磷脂酶A2检测试剂盒的检测方法,步骤如下:
以日立7180操作为例:测定波长为546nm,分别取不同浓度的校准品溶液(8uL),加入Lp-PLA2 R1试剂(160uL),混匀,37℃孵育5分钟后,加入Lp-PLA2 R2试剂(40uL),混匀,37℃孵育30秒后,读取各管吸光度值A1,反应5分钟后,读取各管吸光度值A2,计算吸光度差值△A=A2-A1,每管重复测定2次,以各校准管2次测得的吸光度差值△A的平均值为纵坐标,对应的校准品浓度为横坐标,绘制“浓度-吸光度差值”校准曲线。取待测血清或血浆样本,同法测定样本的吸光度差值,代入校准曲线,即可计算出待测样本中Lp-PLA2的含量。如果血清或血浆中Lp-PLA2的浓度超出校准曲线范围,需对样本进行稀释后再检测以保证检测结果的准确性。本试剂盒不仅适用于日立7180,还适用于其它品牌和型号的半自动、全自动生化分析仪,具体参数可根据仪器进行调整。
实施例6试剂盒的质量评价
(1)标准曲线的制定
A、实验方法
测定波长为546nm,分别取不同浓度的校准品溶液(8uL),加入Lp-PLA2 R1试剂(160uL),混匀,37℃孵育5分钟后,加入Lp-PLA2 R2试剂(40uL),混匀,37℃孵育30秒后,读取各管吸光度值A1,反应5分钟后,读取各管吸光度值A2,计算吸光度差值△A=A2-A1,每管重复测定2次,以各校准管2次测得的吸光度差值△A的平均值为纵坐标,对应的校准品浓度为横坐标,绘制“浓度-吸光度差值”校准曲线。
B、实验结果及分析
实施例1的试剂盒的标准曲线图见图1。
(2)线性范围
A、实验方法
线性范围为20-1000ng/mL。使用接近线性高值的样本和接近线性低值的样本,按照高值:低值为1:0;5:1;1:1;1:5;0:1的比例混合,得到一批混合样本,使用上述检测程序测定浓度,每个样本测定2-3次,取平均值,根据平均值和理论值绘制线性图,计算相关系数r和线性偏差。相关系数∣r∣≥0.9900;在[20.0,200.0]ng/mL区间内时,线性绝对偏差应不超过±20ng/mL;在(200.0,1000.0]ng/mL区间内,线性相对偏差应不超过±10%。
B、实验结果及分析
实施例1的试剂盒的标准曲线图见图1。
实施例1的试剂盒线性测试结果见表1。
表1.磷脂酶A2检测试剂盒线性测试结果
如表1的结果所示,四个实施例的线性相关系数和偏差均在可接受范围内,线性均符合要求,实施例1结果优于实施例2和3。
(3)分析灵敏度
A、实验方法
根据定标数据,计算97ng/mL样品所引起的吸光度变化值,要求其绝对值≥0.01。
B、实验结果及分析
表2.磷脂酶A2检测试剂盒分析灵敏度测试结果
如表2的结果所示,三个实施例的试剂盒的分析灵敏度均符合要求,其中实施例1灵敏度最高。
(4)重复性的检测
A、实验方法
用南京立鼎医疗科技有限公司标示值为100ng/mL的Lp-PLA2质控品作为低值样本,按所述生化分析仪检测方法进行测定,各浓度分别重复测定10次,分别计算测定均值(Mean)和标准差(SD),以计算变异系数(CV)对实施例1-4的试剂盒进行重复性考察,CV可接受范围为±10%。
B、实验结果及分析
表3磷脂酶A2检测试剂盒的重复性测试结果
如表1的结果所示,三个实施例的变异系数CV均在可接受范围内,表明本发明涉及的组分及其浓度范围均能具有良好的瓶内均匀性,实施例1组分和浓度的试剂CV结果优于实施例2和3。
(5)抗干扰实验
A、实验方法
取健康的血清或血浆样本,分别精密量取高浓度干扰物与样本混合,制成不同干扰物浓度的混合样本,每个样本重复测定3次,取其平均值。本实验使用的干扰物质分别是0.4g/L的胆红素、11mmol/L的甘油三酯、550IU/mL的类风湿因子,使用试剂的配制工艺为实施例4中的实验组1、实验组2和实验组3。
干扰度的计算方法为:
干扰度=(加干扰物样本均值-未加干扰物样本均值)/未加干扰物样本均值×100%
干扰度在±10%为可接受干扰范围。
B、实验结果及分析
表4磷脂酶A2检测试剂盒干扰度(%)测试结果
如表4所示,实验组1和实验组2添加干扰物的样本与未添加的相比,其干扰度均能控制在±10%以内,表明本试剂具有一定的抗干扰能力,数据表明实验组1的抗干扰能力更好,当检测样本中存在一定浓度的干扰物质如胆红素、甘油三酯和类风湿因子,对本发明试剂盒的测定结果影响很小。实验组3工艺中未添加乙二醇嵌段聚醚,抗干扰能力不符合要求。
(6)稳定性实验
A、实验方法
在2~8℃储存条件下,将本发明配制好的试剂盒分别于0月、4月、8月、12月、16月对同一低值质控品100ng/mL进行检测,每个样本测定5次取平均值,平均值与相应质控的相对偏差应≤±10%。稳定性实验使用试剂的配制工艺为实施例4中的实验组1、实验组4和实验组5。
B、实验结果及分析
稳定性实验相对偏差结果如表5所示,实验组1和实验组4的样本测值相对偏差均≤10%,实验组1的稳定性相对偏差更小,由此可见,本发明试剂盒可在2~8℃条件下稳定储存一年。而实验组5的试剂中未添加月桂酸,该试剂盒的稳定性结果不符合要求。
表5.磷脂酶A2检测试剂盒稳定性相对偏差(%)测试结果
可以理解的是,对本领域普通技术人员来说,可以根据本发明的技术方案及本发明构思加以等同替换或改变,而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。
Claims (7)
1.一种磷脂酶A2检测试剂盒,其特征在于,包括R1试剂和R2试剂;其中:
R1试剂包括以下成分:缓冲液、pH调节液、无机盐、抗干扰剂、促聚剂和月桂酸;
R2试剂包括以下成分:胶乳微球、活化体系、缓冲液、Lp-PLA2单克隆抗体、封闭剂、稳定剂、防腐剂;
R1试剂包括以下浓度的各组分:
缓冲液50-100mM/L;
PH值7.8-8.0;
无机盐40-60g/L;
抗干扰剂10-60g/L;
促聚剂2-10g/L;
月桂酸5-25g/L;
所述R2试剂包含以下浓度的各组分:
胶乳微球:0.5-1.2mg/L;
活化体系0.01-0.03mg/mL;
缓冲液0.01-0.05mM/L;
Lp-PLA2单抗14.0-6.0mg/mL;
Lp-PLA2单抗24.0-6.0mg/mL;
封闭剂0.02-0.06g/mL;
防腐剂0.8-1.2g/L;
稳定剂0.04-0.08g/mL;
抗干扰剂包括乙二醇嵌段聚醚和吐温20;乙二醇嵌段聚醚和吐温20的质量比为1:3-1:5;
促聚剂为PEG6000、PEG8000、PEG12000中的一种或几种;促聚剂和月桂酸的质量比为1:2.5-1:4.5。
2.根据权利要求1所述的磷脂酶A2检测试剂盒,其特征在于,所述缓冲液为Tris缓冲液、硼酸缓冲液、硼砂缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、HEPES缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种或几种;所述无机盐为氯化钠、氯化钙、氯化镁中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的磷脂酶A2检测试剂盒,其特征在于,所述胶乳微球粒径介于80-200nm;所述活化体系包括EDC和NHS中的一种或几种;单克隆抗体为鼠抗人Lp-PLA2抗体。
4.根据权利要求1所述的磷脂酶A2检测试剂盒,其特征在于,所述封闭剂为BSA、酪蛋白的一种或几种;所述的防腐剂为Proclin300、叠氮钠、硫柳汞中的一种或几种;所述的稳定剂为海藻糖、蔗糖、酪蛋白、明胶、EDTA-2Na中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述的磷脂酶A2检测试剂盒,其特征在于,所述pH调节液为6mol/L的盐酸溶液。
6.如权利要求1-5中任一项所述的磷脂酶A2检测试剂盒的制备方法,其特征在在于,包括以下步骤:
R1试剂的配制:按照R1试剂的组分含量,配制相应浓度的Tris缓冲液,使用所述pH调节液将pH调至7.8-8.0,随后加无机盐、抗干扰剂、促聚剂、月桂酸,搅拌均匀得到R1试剂;
R2试剂的配制:取胶乳微球加入适量纯水中,摇匀后加入现配的活化体系,置于摇床上,活化胶乳8-15min;随后边搅拌边依次加入硼砂缓冲液、硼酸缓冲液和两株Lp-PLA2单克隆抗体,置于摇床上偶联1-2h;再将其置于搅拌器上,再边搅拌边加入硼酸-硼砂缓冲液,摇床孵育20-40min后加入封闭剂,摇床孵育0.8-1.2h后,最后加入稳定剂和防腐剂,摇床上稳定过夜后即得R2试剂。
7.根据权利要求6所述的磷脂酶A2检测试剂盒的制备方法,其特征在于,所述R2试剂的配制方法具体为:取胶乳微球加入适量纯水中,置于35-40℃摇床,150-250r/min,摇匀3-10min;之后加入现配的活化体系,NHS和EDC溶液,置于35-40℃摇床,150-250r/min,活化胶乳10-20min;随后进行搅拌,并依次加入硼砂缓冲液、硼酸缓冲液和两株Lp-PLA2单克隆抗体,置于35-40℃摇床,150-250r/min,偶联1-2h后从摇床中取出,置于搅拌器上,加入硼酸-硼砂缓冲液,35-40℃摇床孵育20-40min后加入封闭剂,接着摇床孵育0.5-1.5h,最后加入稳定剂和防腐剂,在摇床稳定过夜后即得R2试剂。
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Citations (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102662061A (zh) * | 2012-04-17 | 2012-09-12 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 胶乳增强免疫比浊法测定人甲胎蛋白含量的试剂盒 |
CN103033629A (zh) * | 2012-12-12 | 2013-04-10 | 元升生物科技(上海)有限公司 | 一种脂蛋白磷脂酶a2的测定试剂及试剂的制备方法 |
CN103777023A (zh) * | 2013-12-16 | 2014-05-07 | 深圳市安之酶生物技术有限公司 | 纳米胶乳增强免疫比浊法测定脂联素的试剂盒 |
WO2016030711A1 (en) * | 2014-08-25 | 2016-03-03 | Diasys Diagnostics India Private Limited | Stable phosphatase substrate formulation and uses thereof |
JP2016099131A (ja) * | 2014-11-18 | 2016-05-30 | 古河電気工業株式会社 | 免疫アッセイによる微生物の検出方法、免疫アッセイに付す検体の処理方法、免疫アッセイ用検体前処理液、及びイムノクロマトグラフィー用試験キット |
CN105717292A (zh) * | 2016-02-01 | 2016-06-29 | 杭州惟新生物技术有限公司 | 脂蛋白磷脂酶a2检测试剂盒 |
CN108107201A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-06-01 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 一种胱抑素c检测试剂盒及其制备方法 |
WO2018129885A1 (zh) * | 2017-01-13 | 2018-07-19 | 深圳开立生物医疗科技股份有限公司 | 一种全血c反应蛋白检测试剂盒 |
CN109116022A (zh) * | 2018-07-06 | 2019-01-01 | 广州市伊川生物科技有限公司 | 一种用于检测脂蛋白磷脂酶a2的试剂盒 |
WO2019184248A1 (zh) * | 2018-03-27 | 2019-10-03 | 苏州长光华医生物医学工程有限公司 | 检测力生长因子、其e肽的金刚烷化学发光试剂盒、制法 |
CN110530809A (zh) * | 2019-09-19 | 2019-12-03 | 武汉瀚海新酶生物科技有限公司 | 一种高性能磷脂酶a2检测试剂盒 |
CN111060695A (zh) * | 2019-12-23 | 2020-04-24 | 江苏三联生物工程有限公司 | 检测抗lrp4抗体的电化学发光试剂盒及其制法 |
CN112763731A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-05-07 | 广州市伊川生物科技有限公司 | 一种脂蛋白(a)测定试剂盒及其检测方法 |
CN113075415A (zh) * | 2021-04-20 | 2021-07-06 | 苏州优诺康生物技术有限公司 | 一种脂联素的胶乳增强免疫比浊试剂盒及制备方法 |
CN113238049A (zh) * | 2021-05-07 | 2021-08-10 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 脂蛋白相关磷脂酶a2试剂盒及其制备方法 |
CN113687079A (zh) * | 2020-05-19 | 2021-11-23 | 常州爱复康生物科技有限公司 | 一种胃蛋白酶原ⅰ胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002053569A1 (fr) * | 2000-12-28 | 2002-07-11 | Azwell Inc. | Procede pour doser une activite de lysophospholipase d |
JP6691212B2 (ja) * | 2016-06-22 | 2020-04-28 | 旭化成ファーマ株式会社 | Lp−PLA2活性の測定 |
-
2021
- 2021-12-30 CN CN202111655511.3A patent/CN114295567B/zh active Active
Patent Citations (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102662061A (zh) * | 2012-04-17 | 2012-09-12 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 胶乳增强免疫比浊法测定人甲胎蛋白含量的试剂盒 |
CN103033629A (zh) * | 2012-12-12 | 2013-04-10 | 元升生物科技(上海)有限公司 | 一种脂蛋白磷脂酶a2的测定试剂及试剂的制备方法 |
CN103777023A (zh) * | 2013-12-16 | 2014-05-07 | 深圳市安之酶生物技术有限公司 | 纳米胶乳增强免疫比浊法测定脂联素的试剂盒 |
WO2016030711A1 (en) * | 2014-08-25 | 2016-03-03 | Diasys Diagnostics India Private Limited | Stable phosphatase substrate formulation and uses thereof |
JP2016099131A (ja) * | 2014-11-18 | 2016-05-30 | 古河電気工業株式会社 | 免疫アッセイによる微生物の検出方法、免疫アッセイに付す検体の処理方法、免疫アッセイ用検体前処理液、及びイムノクロマトグラフィー用試験キット |
CN105717292A (zh) * | 2016-02-01 | 2016-06-29 | 杭州惟新生物技术有限公司 | 脂蛋白磷脂酶a2检测试剂盒 |
WO2018129885A1 (zh) * | 2017-01-13 | 2018-07-19 | 深圳开立生物医疗科技股份有限公司 | 一种全血c反应蛋白检测试剂盒 |
CN108107201A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-06-01 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 一种胱抑素c检测试剂盒及其制备方法 |
WO2019184248A1 (zh) * | 2018-03-27 | 2019-10-03 | 苏州长光华医生物医学工程有限公司 | 检测力生长因子、其e肽的金刚烷化学发光试剂盒、制法 |
CN109116022A (zh) * | 2018-07-06 | 2019-01-01 | 广州市伊川生物科技有限公司 | 一种用于检测脂蛋白磷脂酶a2的试剂盒 |
CN110530809A (zh) * | 2019-09-19 | 2019-12-03 | 武汉瀚海新酶生物科技有限公司 | 一种高性能磷脂酶a2检测试剂盒 |
CN111060695A (zh) * | 2019-12-23 | 2020-04-24 | 江苏三联生物工程有限公司 | 检测抗lrp4抗体的电化学发光试剂盒及其制法 |
CN113687079A (zh) * | 2020-05-19 | 2021-11-23 | 常州爱复康生物科技有限公司 | 一种胃蛋白酶原ⅰ胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
CN112763731A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-05-07 | 广州市伊川生物科技有限公司 | 一种脂蛋白(a)测定试剂盒及其检测方法 |
CN113075415A (zh) * | 2021-04-20 | 2021-07-06 | 苏州优诺康生物技术有限公司 | 一种脂联素的胶乳增强免疫比浊试剂盒及制备方法 |
CN113238049A (zh) * | 2021-05-07 | 2021-08-10 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 脂蛋白相关磷脂酶a2试剂盒及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
植物体中磷脂酶A2研究进展;邓治,校现周;《华南热带农业大学学报》;第10卷(第3期);15-19 * |
纳米颗粒增强透射免疫比浊法检测乳酸脱氢酶同工酶3方法的建立及性能评价;董奕裕;吴奕征;沈丽丽;陈群;;检验医学;32(02);138-142 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114295567A (zh) | 2022-04-08 |
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