CN110530809A - 一种高性能磷脂酶a2检测试剂盒 - Google Patents
一种高性能磷脂酶a2检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110530809A CN110530809A CN201910886079.5A CN201910886079A CN110530809A CN 110530809 A CN110530809 A CN 110530809A CN 201910886079 A CN201910886079 A CN 201910886079A CN 110530809 A CN110530809 A CN 110530809A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reagent
- phospholipase
- buffer
- performance
- absorbance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 43
- 102100037611 Lysophospholipase Human genes 0.000 title claims abstract description 38
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 title claims abstract description 38
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 60
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 15
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims abstract description 13
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 8
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical group OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 40
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 21
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 11
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 10
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 claims description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 5
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- RDEIXVOBVLKYNT-HDZPSJEVSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-[(1r)-1-aminoethyl]oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol;(2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2 Chemical compound OS(O)(=O)=O.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)[C@@H](C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1[C@H]([C@@H](C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N RDEIXVOBVLKYNT-HDZPSJEVSA-N 0.000 claims description 3
- 235000005300 cardamomo Nutrition 0.000 claims description 3
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 claims description 3
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 3
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 claims description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 claims description 2
- 244000222991 cardamomo Species 0.000 claims 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 8
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- -1 and pH 7.5 Substances 0.000 abstract description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 3
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 abstract description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 abstract description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 102100025573 1-alkyl-2-acetylglycerophosphocholine esterase Human genes 0.000 description 5
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-N 2-O-acetyl-1-O-hexadecyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOC[C@@H](OC(C)=O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000002943 Elettaria cardamomum Species 0.000 description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 2
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010003541 Platelet Activating Factor Proteins 0.000 description 2
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical compound O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- LELOWRISYMNNSU-UHFFFAOYSA-N hydrogen cyanide Chemical compound N#C LELOWRISYMNNSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010048998 Acute phase reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 1
- 208000010718 Multiple Organ Failure Diseases 0.000 description 1
- 208000004221 Multiple Trauma Diseases 0.000 description 1
- 206010053159 Organ failure Diseases 0.000 description 1
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 description 1
- 206010033654 Pancreatitis necrotising Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- CDXSJGDDABYYJV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;ethanol Chemical compound CCO.CC(O)=O CDXSJGDDABYYJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000004658 acute-phase response Effects 0.000 description 1
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- QGJOPFRUJISHPQ-NJFSPNSNSA-N carbon disulfide-14c Chemical compound S=[14C]=S QGJOPFRUJISHPQ-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000000686 essence Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000001435 haemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000006749 inflammatory damage Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000035778 pathophysiological process Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，包括试剂盒，试剂盒包括试剂R1和试剂R2，试剂R1由缓冲液、抑制剂、聚乙二醇6000和保护剂组成，pH为7.5，试剂R2由缓冲液、防腐剂、助溶剂和底物组成，pH为5.5，试剂R1和试剂R2中的缓冲液均为HEPES缓冲液，缓冲液的浓度为50‑100mmol/L，本发明涉及生物医学检验技术领域。该高性能磷脂酶A2检测试剂盒，通过将全血样品替换为血清样本，可消除血浆中的干扰因素，减少全血样本的处理时间，保证了检测结果的准确性，同时在该检测试剂盒内加入抑制剂以及助溶剂，可有效提高试剂的反应速度以及灵敏度，且该检测试剂盒不容易受到外界因素的干扰，可在全自动生化分析仪上进行快速检测，满足实际的使用需求。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学检验技术领域，具体为一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒。
背景技术
磷脂酶A2是一种能催化磷脂甘油分子上二位酰基的水解酶，亦是花生四烯酸(AA)、前列腺素及血小板活化因子(PAF)等生物活性物质生成的限速酶，所产生的脂质介质在炎症和组织损伤时膜通道的活化、信息传递、血流动力学及病理生理过程中，以及在调节细胞内外代谢中起关键性作用，在急性胰腺炎、脓毒休克、创伤及多脏器功能衰竭(MSOF)患者血清中PLA2活性升高，在多发性创伤时，PLA2活性变化或许是导致MSOF组织损伤过程中的早期信号参数，磷脂酶A2(PLA2)根据依赖Ca2+的PLA2在体内的分布，可分为分泌型(PLA2-Ⅰ和PLA2-Ⅱ)和胞质型(PLA2-Ⅲ和PLA2-Ⅳ)两种，PLA2-Ⅱ是重症胰腺炎出现一系列并发症的早期标志物，作为急性时相反应介质，与重症胰腺炎的发展密切相关，因此，测定PLA2-Ⅱ对细菌感染性坏死性胰腺炎、重症AP并发多器官功能衰竭等具有重要的识别作用。
目前对磷脂酶A2试剂的检测方法多采用酶联免疫吸附法，而此种检测方法受到人为因素的影响较大，同时在全血样品中检测磷脂酶A2的干扰成分较多，则会影响检测的准确性，且酶联免疫吸附法受制于分析仪的自动化程度，从而导致反应时间长的问题，影响磷脂酶A2的检测灵敏度。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，解决了使用酶联免疫吸附法检测方法受到人为因素的影响较大，同时在全血样品中检测磷脂酶A2的干扰成分较多，则会影响检测的准确性，且酶联免疫吸附法受制于分析仪的自动化程度，从而导致反应时间过长的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，包括试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1由缓冲液、抑制剂、聚乙二醇6000和保护剂组成，pH为7.5，所述试剂R2由缓冲液、防腐剂、助溶剂和底物组成，pH为5.5。
优选的，所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液均为HEPES缓冲液，所述缓冲液的浓度为50-100mmol/L。
优选的，所述试剂R1中的抑制剂为1-壬烷磺酸钠或3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，所述抑制剂的浓度为20-30mmol/L。
优选的，所述试剂R1中的保护剂为20-40％v/v的乙醇，所述试剂R1中聚乙二醇6000的浓度为2-5g/L，乙醇有机化合物，分子式C2H6O，结构简式CH3CH2OH或C2H5OH，俗称酒精，是最常见的一元醇，乙醇在常温常压下是一种易燃、易挥发的无色透明液体，低毒性，纯液体不可直接饮用；具有特殊香味，并略带刺激；微甘，并伴有刺激的辛辣滋味，易燃，其蒸气能与空气形成爆炸性混合物，能与水以任意比互溶，能与氯仿、乙醚、甲醇、丙酮和其他多数有机溶剂混溶，相对密度(d15.56)0.816，醇的用途很广，可用乙醇制造醋酸、饮料、香精、染料、燃料等，医疗上也常用体积分数为70-75％的乙醇作消毒剂等，在国防化工、医疗卫生、食品工业、工农业生产中都有广泛的用途。
优选的，所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠、硫酸庆大霉素和硫柳汞中的一种或多种组合，所述防腐剂的浓度为0.05-0.07％w/v。
优选的，所述试剂R2中的助溶剂为20-30％v/v的甘油，丙三醇国家标准称为甘油，无色、无臭、味甜，外观呈澄明黏稠液态，是一种有机物，俗称甘油，丙三醇，能从空气中吸收潮气，也能吸收硫化氢、氰化氢和二氧化硫，难溶于苯、氯仿、四氯化碳、二硫化碳、石油醚和油类，丙三醇是甘油三酯分子的骨架成分，相对密度1.26362，熔点17.8℃，沸点290.0℃(分解)，折光率1.4746，闪点(开杯)176℃，急性毒性：LD50：31500mg/kg(大鼠经口)。
优选的，所述试剂R2中的底物为1-豆蔻酰基-2-(4-对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱，所述底物的浓度为30-50mmol/L。
优选的，高性能磷脂酶A2检测试剂盒的检测方法，具体包括以下步骤：
S1、全自动生化分析仪的波长设定：选择合适的全自动生化分析仪，同时在全自动生化分析仪上的设置主波长为405nm，副波长为505nm，设置完成后，开始进行检测工作；
S2、吸光度A1的测定工作：将试剂R1中的缓冲液、抑制剂、聚乙二醇6000和保护剂放入高速分散机内，然后在分散机内加入血清样本，在300-500r/min的转速条件下混合均匀，混合均匀后在35-37℃的温度条件下孵育3-5min，孵育完成后，对吸光度A1进行测定，并进行读取，等待备用，分散机广义上是搅拌机的一种，由于采用高速搅拌器(如圆盘锯齿型搅拌器)可以在局部形成很强的紊流，通常对物料有很强的分散乳化效果，所以对这类高速搅拌机又称为分散机，分散机主要分为升降式分散机和釜用分散机，升降式分散机按升降方式又可以分为：液压升降分散机，气动升降分散机和手摇升降分散机等；
S3、吸光度A2的测定工作：根据S2中在得到的混合液中加入试剂R2中的缓冲液、防腐剂、助溶剂和底物，继续进行混合，同时设定分散机的转速为500-700r/min，混合均匀后在35-37℃的温度条件下孵育3-5min，孵育完成后，对吸光度A2进行测定，并进行读取，等待备用；
S4、磷脂酶A2的活性测定工作：将S2中得到的吸光度A1以及S3中得到的吸光度A2进行计算，计算两者之间的差值，并根据校准曲线计算，得出样本中脂蛋白相关磷脂酶A2的活性。
(三)有益效果
本发明提供了一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒。具备以下有益效果：该高性能磷脂酶A2检测试剂盒，通过S1、全自动生化分析仪的波长设定：全自动生化分析仪的波长设定：选择合适的全自动生化分析仪，同时在全自动生化分析仪上的设置主波长为405nm，副波长为505nm，设置完成后，开始进行检测工作；S2、吸光度A1的测定工作：吸光度A1的测定工作：将试剂R1中的缓冲液、抑制剂、聚乙二醇6000和保护剂放入高速分散机内，然后在分散机内加入血清样本，在300-500r/min的转速条件下混合均匀，混合均匀后在35-37℃的温度条件下孵育3-5min，孵育完成后，对吸光度A1进行测定，并进行读取，等待备用；S3、吸光度A2的测定工作：吸光度A2的测定工作：根据S2中在得到的混合液中加入试剂R2中的缓冲液、防腐剂、助溶剂和底物，继续进行混合，同时设定分散机的转速为500-700r/min，混合均匀后在35-37℃的温度条件下孵育3-5min，孵育完成后，对吸光度A2进行测定，并进行读取，等待备用；S4、磷脂酶A2的活性测定工作：磷脂酶A2的活性测定工作：将S2中得到的吸光度A1以及S3中得到的吸光度A2进行计算，计算两者之间的差值，并根据校准曲线计算，得出样本中脂蛋白相关磷脂酶A2的活性，通过将全血样品替换为血清样本，可消除血浆中的干扰因素，减少全血样本的处理时间，保证了检测结果的准确性，同时在该检测试剂盒内加入抑制剂以及助溶剂，可有效提高试剂的反应速度以及灵敏度，且该检测试剂盒不容易受到外界因素的干扰，可在全自动生化分析仪上进行快速检测，满足实际的使用需求。
附图说明
图1为本发明的流程图；
图2为本发明对比实验数据统计表图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-2，本发明实施例提供三种技术方案：一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，包括试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1由缓冲液、抑制剂、聚乙二醇6000和保护剂组成，pH为7.5，所述试剂R2由缓冲液、防腐剂、助溶剂和底物组成，pH为5.5，试剂R1和试剂R2中的缓冲液均为HEPES缓冲液，所述缓冲液的浓度为50-100mmol/L，试剂R1中的抑制剂为1-壬烷磺酸钠或3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，所述抑制剂的浓度为20-30mmol/L，试剂R1中的保护剂为20-40％v/v的乙醇，所述试剂R1中聚乙二醇6000的浓度为2-5g/L，试剂R2中的防腐剂为叠氮钠、硫酸庆大霉素和硫柳汞中的一种或多种组合，所述防腐剂的浓度为0.05-0.07％w/v，试剂R2中的助溶剂为20-30％v/v的甘油，试剂R2中的底物为1-豆蔻酰基-2-(4-对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱，所述底物的浓度为30-50mmol/L。
一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒的检测方法，具体包括以下实施例：
实施例1
S1、全自动生化分析仪的波长设定：全自动生化分析仪的波长设定：选择合适的全自动生化分析仪，同时在全自动生化分析仪上的设置主波长为405nm，副波长为505nm，设置完成后，开始进行检测工作；
S2、吸光度A1的测定工作：吸光度A1的测定工作：将试剂R1中的50mmol/L缓冲液、20mmol/L抑制剂、2g/L聚乙二醇6000和20％v/v保护剂放入高速分散机内，然后在分散机内加入血清样本，在300r/min的转速条件下混合均匀，混合均匀后在35℃的温度条件下孵育3min，孵育完成后，对吸光度A1进行测定，并进行读取，等待备用；
S3、吸光度A2的测定工作：吸光度A2的测定工作：根据S2中在得到的混合液中加入试剂R2中的50mmol/L缓冲液、0.05％w/v防腐剂、20％v/v助溶剂和30mmol/L底物，继续进行混合，同时设定分散机的转速为500r/min，混合均匀后在35℃的温度条件下孵育3min，孵育完成后，对吸光度A2进行测定，并进行读取，等待备用；
S4、磷脂酶A2的活性测定工作：将S2中得到的吸光度A1以及S3中得到的吸光度A2进行计算，计算两者之间的差值，并根据校准曲线计算，得出样本中脂蛋白相关磷脂酶A2的活性。
实施例2
S1、全自动生化分析仪的波长设定：选择合适的全自动生化分析仪，同时在全自动生化分析仪上的设置主波长为405nm，副波长为505nm，设置完成后，开始进行检测工作；
S2、吸光度A1的测定工作：将试剂R1中的80mmol/L缓冲液、25mmol/L抑制剂、4g/L聚乙二醇6000和30％v/v保护剂放入高速分散机内，然后在分散机内加入血清样本，在400r/min的转速条件下混合均匀，混合均匀后在36℃的温度条件下孵育4min，孵育完成后，对吸光度A1进行测定，并进行读取，等待备用；
S3、吸光度A2的测定工作：根据S2中在得到的混合液中加入试剂R2中的80mmol/L缓冲液、0.06％w/v防腐剂、25％v/v助溶剂和40mmol/L底物，继续进行混合，同时设定分散机的转速为600r/min，混合均匀后在36℃的温度条件下孵育4min，孵育完成后，对吸光度A2进行测定，并进行读取，等待备用；
S4、磷脂酶A2的活性测定工作：将S2中得到的吸光度A1以及S3中得到的吸光度A2进行计算，计算两者之间的差值，并根据校准曲线计算，得出样本中脂蛋白相关磷脂酶A2的活性。
实施例3
S1、全自动生化分析仪的波长设定：选择合适的全自动生化分析仪，同时在全自动生化分析仪上的设置主波长为405nm，副波长为505nm，设置完成后，开始进行检测工作；
S2、吸光度A1的测定工作：将试剂R1中的100mmol/L缓冲液、30mmol/L抑制剂、5g/L聚乙二醇6000和40％v/v保护剂放入高速分散机内，然后在分散机内加入血清样本，在500r/min的转速条件下混合均匀，混合均匀后在37℃的温度条件下孵育5min，孵育完成后，对吸光度A1进行测定，并进行读取，等待备用；
S3、吸光度A2的测定工作：根据S2中在得到的混合液中加入试剂R2中的100mmol/L缓冲液、0.07％w/v防腐剂、30％v/v助溶剂和50mmol/L底物，继续进行混合，同时设定分散机的转速为700r/min，混合均匀后在37℃的温度条件下孵育5min，孵育完成后，对吸光度A2进行测定，并进行读取，等待备用；
S4、磷脂酶A2的活性测定工作：将S2中得到的吸光度A1以及S3中得到的吸光度A2进行计算，计算两者之间的差值，并根据校准曲线计算，得出样本中脂蛋白相关磷脂酶A2的活性。
对比实验
某生物医学检验中心对由实施例1、实施例2、实施例3分别制作出来的试剂盒以及市场上通用的试剂盒同时进行试剂检测工作，并在相同的时间以及条件下进行操作，在检测的过程中，同时统计数据并制作统计表图。
如表图2可知，本发明由实施例2加工出来的试剂盒在该磷脂酶A2检测过程中，通过将全血样品替换为血清样本，可消除血浆中的干扰因素，减少全血样本的处理时间，保证了检测结果的准确性，同时在该检测试剂盒内加入抑制剂以及助溶剂，可有效提高试剂的反应速度以及灵敏度，且该检测试剂盒不容易受到外界因素的干扰，可在全自动生化分析仪上进行快速检测，满足实际的使用需求。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，包括试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其特征在于：所述试剂R1由缓冲液、抑制剂、聚乙二醇6000和保护剂组成，pH为7.5，所述试剂R2由缓冲液、防腐剂、助溶剂和底物组成，pH为5.5。
2.根据权利要求1所述的一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液均为HEPES缓冲液，所述缓冲液的浓度为50-100mmol/L。
3.根据权利要求1所述的一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的抑制剂为1-壬烷磺酸钠或3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，所述抑制剂的浓度为20-30mmol/L。
4.根据权利要求1所述的一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的保护剂为20-40％v/v的乙醇，所述试剂R1中聚乙二醇6000的浓度为2-5g/L。
5.根据权利要求1所述的一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠、硫酸庆大霉素和硫柳汞中的一种或多种组合，所述防腐剂的浓度为0.05-0.07％w/v。
6.根据权利要求1所述的一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的助溶剂为20-30％v/v的甘油。
7.根据权利要求1所述的一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的底物为1-豆蔻酰基-2-(4-对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱，所述底物的浓度为30-50mmol/L。
8.根据权利要求1-7所述的一种高性能磷脂酶A2检测试剂盒，其特征在于：其检测方法具体包括以下步骤：
S1、全自动生化分析仪的波长设定：全自动生化分析仪的波长设定：选择合适的全自动生化分析仪，同时在全自动生化分析仪上的设置主波长为405nm，副波长为505nm，设置完成后，开始进行检测工作；
S2、吸光度A1的测定工作：吸光度A1的测定工作：将试剂R1中的缓冲液、抑制剂、聚乙二醇6000和保护剂放入高速分散机内，然后在分散机内加入血清样本，在300-500r/min的转速条件下混合均匀，混合均匀后在35-37℃的温度条件下孵育3-5min，孵育完成后，对吸光度A1进行测定，并进行读取，等待备用；
S3、吸光度A2的测定工作：吸光度A2的测定工作：根据S2中在得到的混合液中加入试剂R2中的缓冲液、防腐剂、助溶剂和底物，继续进行混合，同时设定分散机的转速为500-700r/min，混合均匀后在35-37℃的温度条件下孵育3-5min，孵育完成后，对吸光度A2进行测定，并进行读取，等待备用；
S4、磷脂酶A2的活性测定工作：磷脂酶A2的活性测定工作：将S2中得到的吸光度A1以及S3中得到的吸光度A2进行计算，计算两者之间的差值，并根据校准曲线计算，得出样本中脂蛋白相关磷脂酶A2的活性。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910886079.5A CN110530809A (zh) | 2019-09-19 | 2019-09-19 | 一种高性能磷脂酶a2检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910886079.5A CN110530809A (zh) | 2019-09-19 | 2019-09-19 | 一种高性能磷脂酶a2检测试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110530809A true CN110530809A (zh) | 2019-12-03 |
Family
ID=68669207
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910886079.5A Pending CN110530809A (zh) | 2019-09-19 | 2019-09-19 | 一种高性能磷脂酶a2检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110530809A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111504995A (zh) * | 2020-05-13 | 2020-08-07 | 暨南大学 | 一种基于比色原理检测磷脂酶a2的方法及其应用 |
| CN114047150A (zh) * | 2021-11-11 | 2022-02-15 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种脂蛋白相关磷脂酶a2的检测试剂、制备方法及其应用 |
| CN114295567A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-08 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 一种磷脂酶a2检测试剂盒及其制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104133062A (zh) * | 2014-08-20 | 2014-11-05 | 方磊 | 血浆脂蛋白磷脂酶a2活性检测试剂盒及其检测方法 |
| CN106086161A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-11-09 | 苏州博源医疗科技有限公司 | 一种脂蛋白磷脂酶a2检测试剂及其制备与使用方法 |
| CN107796941A (zh) * | 2017-08-25 | 2018-03-13 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种脂蛋白相关磷脂酶a2的测定试剂盒及其检测方法 |
| CN108562749A (zh) * | 2018-04-09 | 2018-09-21 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种脂蛋白相关磷脂酶a2检测试剂 |
-
2019
- 2019-09-19 CN CN201910886079.5A patent/CN110530809A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104133062A (zh) * | 2014-08-20 | 2014-11-05 | 方磊 | 血浆脂蛋白磷脂酶a2活性检测试剂盒及其检测方法 |
| CN106086161A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-11-09 | 苏州博源医疗科技有限公司 | 一种脂蛋白磷脂酶a2检测试剂及其制备与使用方法 |
| CN107796941A (zh) * | 2017-08-25 | 2018-03-13 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种脂蛋白相关磷脂酶a2的测定试剂盒及其检测方法 |
| CN108562749A (zh) * | 2018-04-09 | 2018-09-21 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种脂蛋白相关磷脂酶a2检测试剂 |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111504995A (zh) * | 2020-05-13 | 2020-08-07 | 暨南大学 | 一种基于比色原理检测磷脂酶a2的方法及其应用 |
| CN111504995B (zh) * | 2020-05-13 | 2021-10-12 | 暨南大学 | 一种基于比色原理检测磷脂酶a2的方法及其应用 |
| CN114047150A (zh) * | 2021-11-11 | 2022-02-15 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种脂蛋白相关磷脂酶a2的检测试剂、制备方法及其应用 |
| CN114047150B (zh) * | 2021-11-11 | 2022-07-26 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种脂蛋白相关磷脂酶a2的检测试剂、制备方法及其应用 |
| CN114295567A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-08 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 一种磷脂酶a2检测试剂盒及其制备方法 |
| CN114295567B (zh) * | 2021-12-30 | 2024-01-16 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 一种磷脂酶a2检测试剂盒及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110530809A (zh) | 一种高性能磷脂酶a2检测试剂盒 | |
| Kim et al. | Serum cholesterol assay using a stable Liebermann-Burchard reagent | |
| Artiss et al. | Measurement of cholesterol concentration | |
| CN102721684B (zh) | 血清中肌酐的二步酶法测定方法及测定试剂 | |
| CN107796941A (zh) | 一种脂蛋白相关磷脂酶a2的测定试剂盒及其检测方法 | |
| CN109438326A (zh) | 一种用于检测羧酸酯酶的荧光探针及其制备方法与专用检测试剂盒 | |
| CN108562749A (zh) | 一种脂蛋白相关磷脂酶a2检测试剂 | |
| Zemplényi et al. | Relationship of lipolytic and esterolytic activity of the aorta to susceptibility to experimental atherosclerosis | |
| US4812399A (en) | Analytical element and method for the determination of creatinine or creatine | |
| EP0036563B1 (en) | Bilirubin-resistant composition for the determination of cholesterol, test device containing the composition and method of making the test device | |
| EP0987553A1 (en) | Method for identifying cholesterol in the skin tissue | |
| Fossati et al. | Kinetic colorimetric assay of lipase in serum | |
| CN107153044A (zh) | 一种改良型的同型半胱氨酸试剂盒及其检测方法 | |
| CN101762577B (zh) | 血清中甘油三酯的两步酶测定方法 | |
| CN108690869A (zh) | 一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其检测方法 | |
| KR920007201B1 (ko) | 복막 염증 또는 감염을 검출하는 방법 및 이를 위한 백혈구 검출용 조성물 | |
| GB2049180A (en) | Bilirubin-resistant determination of uric acid | |
| CN106706627A (zh) | 原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶联合在鼻咽部上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒 | |
| Chauncey et al. | Enzymes of human saliva: II. Parotid saliva total esterases | |
| JPH05213944A (ja) | ナフトトリアゾリウム塩 | |
| JP2727207B2 (ja) | 鮮度測定法及びこれに用いる測定用キット | |
| CN110760565A (zh) | 一种对氧磷酶1的检测试剂盒及制备方法 | |
| CN110484598A (zh) | 酪蛋白平板法在蛋白酶酶活的定量分析中的应用 | |
| CN106480166A (zh) | 一类检测羧酸酯酶1的高特异性荧光探针的应用 | |
| CN106706628A (zh) | 原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶联合在前列腺细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20191203 |