CN108918887A - 一种铁蛋白免疫比浊法检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1和试剂R2。通过将试剂R1与试剂R2的缓冲液更换为50mmol/LpH为8.5的氨基乙酸缓冲液，同时在试剂R2中添加EDTA‑Na2，提高了试剂的稳定性，线性相关性较好，试剂的准确度也较好，有利于在市场中进一步的推广使用。

Description

一种铁蛋白免疫比浊法检测试剂盒
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒。
背景技术
血清铁蛋白是广泛存在于生物机体内的一种贮存铁的可溶组织蛋白，由一个蛋白质外壳和一个铁核心构成。铁蛋白的铁核心具有强大的结合铁和贮存铁的能力，以维持机体铁的供应和血红蛋白的相对稳定。铁蛋白是铁与蛋白的复合物，在肝脏、脾等许多组织中均可合成。体内绝大多数铁离子与铁蛋白呈结合态，铁蛋白水平与体内铁储存量呈正比关系，因此检测铁蛋白可以反映体内铁的储存状况。
近年来，在临床上血液铁蛋白含量测定是检查人体内铁储存含量的一个很好的指标，可以指示人体内铁离子的缺乏状态和使用铁治疗的状况。碱性铁蛋白与铁的长期铁储藏量有关，存在于肝脏、脾脏、骨髓中；酸性的铁蛋白主要存在于心肌和胎盘，与恶性肿瘤和心肌疾病相关。铁蛋白测定以300ng/mL为正常上限，某些肿瘤常常升高且大于此值，常见于：急性白血病、何杰金氏病、肺癌、结肠癌、肝癌和前列腺癌。检测铁蛋白对肝脏转移性肿瘤有诊断价值，76％的肝转移病人的铁蛋白含量高于300ng/mL，与甲胎蛋白联合检测，尤其是甲胎蛋白正常的肝癌患者，可提高诊断率。铁蛋白升高的原因可能是由于细胞坏死、红细胞生成受阻断或肿瘤组织中合成增多所致。
目前铁蛋白的检测方法较多，主要有放射免疫分析法、酶联免疫分析法、胶体金法和化学发光免疫分析法等。每种检测方法都有各自的优势，但在检测准确度、耗时、安全性、检测价格及操作等方面又存在一定局限性，限制了以上检测方法的广泛应用。本发明提供一种胶乳增强免疫比浊法检测铁蛋白的试剂盒，优化其反应体系，使其重复性好、稳定性好、可进行批量样本全自动化检测。
发明内容
本发明的目的是提供一种稳定的用于检测铁蛋白的试剂盒，该试剂盒采用胶乳增强免疫比浊法进行检测。该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性、线性相关性比常规的检测试剂盒好，有利于试剂在临床上的推广应用。
基本原理：
样本中铁蛋白与试剂中相应的抗体在溶液中相结合，立即形成抗原-抗体复合物，并形成一定的浊度。该浊度的高低在一定量的抗体存在时与抗原含量成正比。通过与同样处理的校准液比较，计算未知样本中铁蛋白的含量。
本发明是通过以下步骤得到的：
一种铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1 和试剂R2。
试剂R1组成为：50mmol/LpH为8.5氨基乙酸缓冲液、50mmol/L氯化钠、 2％TRITONX-100、10mmol/L叠氮钠；试剂R2组成为：50mmol/LpH为8.5氨基乙酸缓冲液、2％胶乳颗粒、1mg/mL铁蛋白抗体、100mmol/L EDTA-Na2、 10mmol/L叠氮钠。
所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于试剂R1缓冲液为25℃，pH为8.5的氨基乙酸缓冲液。
所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于试剂R2缓冲液为25℃，pH为8.5的氨基乙酸缓冲液。
所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于所述表面活性剂为TRITON X-100。
所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于所述金属离子螯合剂为EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二钠)。
所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于所述胶乳颗粒为聚苯丙烯，粒径为50-150nm。
所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，使用全自动生化分析仪采用终点法进行测定，检测主波长为570nm。
所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1 和试剂R2使用时的比例为R1:R2＝140:70。
本发明的试剂盒在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上进行，其具体使用方法见图3.
加入生理盐水、样本或校准品7μl，再加入140μl的R1试剂，预孵育5min 后读取吸光度A1，再加入70μl的R2试剂，反应5min后读取吸光度A2，并计算ΔA。
本发明的有益效果：
1)试剂R1和试剂R2采用新的缓冲体系，改善了试剂的稳定性；
2)试剂R2添加EDTA-Na2，增强了试剂的稳定性，而且不会对试剂的准确度产生影响；
3)试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，有利于该试剂在市场中进一步的推广。
附图说明
图1为两种试剂的相关性曲线图，
图2为两种试剂效期稳定性曲线图，
图3为试剂盒在具有双试剂功能的全自动生化分析仪。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：
实施例1
一种常规的铁蛋白检测试剂盒，它包括试剂R1和试剂R2。
其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
本实施例所述试剂R1和试剂R2，配置时需先加入缓冲物质氨基乙酸，调到适当pH值后，再添加其它物质。本实施例所述试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的迈瑞800全自动生化分析仪，利用终点法进行测定，检测主波长为570nm，操作如下：
加入生理盐水、样本或校准品7μl，再加入140μl的R1试剂，预孵育5min 后读取吸光度A1，再加入70μl的R2试剂反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA。
ΔA＝A2-A1
铁蛋白含量(ng/mL)＝(ΔA测定÷ΔA标准)×C标准。
ΔA测定：检测样本吸光度变化 ΔA标准：标准品吸光度变化
实施例2
准确度验证试验：将实施例1的铁蛋白检测试剂作为实验组，市场上获得认可的一种准确度好、稳定性好的铁蛋白检测试剂盒作为对照组进行检测，对20 个临床血清样本进行检测，检测结果如表1所示。获得了两种试剂的相关性曲线 (如图1所示)，结果表明，两组试剂盒的相关系数为0.9991，说明两者相关性比较好。证明本发明试剂盒添加及更改的组分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
表1实施例1试剂与市场认可的铁蛋白检测试剂盒对比检测结果
实施例3
线性相关性验证试验：选取铁蛋白含量为450ng/mL的高值样本，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，浓度依次为450ng/mL、360ng/mL、 270ng/mL、180ng/mL、90ng/mL、0ng/mL。分别利用实施例1试剂及对照组试剂进行检测，每个浓度的样本分别测定三次，分别取平均值，检测结果如表2 所示。
表2实施例1试剂线性相关验证实验检测结果
如上表所示，实施例1与对照组试剂检测结果相关系数均大于0.990，且实施例1试剂检测结果的相关系数略大于对照组试剂检测结果的相关系数，这表明本发明试剂具有更好的线性相关性。
实施例4
稳定性验证实验：在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测实施例1及对照组试剂的稳定性。两组试剂每月选取同一样本测定高值样本，测定三次取平均值，检测数据如表3所示。
表3实施例1试剂稳定性验证实验检测结果
实验结果显示，实施例1试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定，而对照组试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存12 个月后开始不稳定，说明本发明试剂更换缓冲液及添加EDTA-Na2后稳定性增强。
综上所述，本发明提供的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，试剂R1 与试剂R2的缓冲液更换为50mmol/LpH为8.5的氨基乙酸缓冲液，同时在试剂 R2中添加EDTA-Na2，提高了试剂的稳定性，线性相关性较好，试剂的准确度也较好。因此，本发明提供的铁蛋白免疫比浊法检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。

Claims (7)

1.一种铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，它包含试剂R1和试剂R2。其特征在于，试剂组成如下：
试剂R1组成为：50mmol/LpH为8.5氨基乙酸缓冲液、50mmol/L氯化钠、2％TRITON X-100、10mmol/L叠氮钠；试剂R2组成为：
50mmol/LpH为8.5氨基乙酸缓冲液、2％胶乳颗粒、1mg/mL铁蛋白抗体、100mmol/LEDTA-Na2、10mmol/L叠氮钠。
2.根据权利要求1所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于试剂R1缓冲液为25℃，pH为8.5的氨基乙酸缓冲液。
3.根据权利要求1所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于试剂R2缓冲液为25℃，pH为8.5的氨基乙酸缓冲液。
4.根据权利要求1所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于所述表面活性剂为TRITON X-100。
5.根据权利要求1所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于所述金属离子螯合剂为EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二钠)。
6.根据权利要求1所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于所述胶乳颗粒为聚苯丙烯，粒径为80-160nm。
7.根据权利要求1所述的铁蛋白胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，使用全自动生化分析仪采用终点法进行测定，检测主波长为570nm。
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