CN102243241A - 一种匀相溶胶颗粒型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒及其制备方法 - Google Patents
一种匀相溶胶颗粒型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102243241A CN102243241A CN2011100863642A CN201110086364A CN102243241A CN 102243241 A CN102243241 A CN 102243241A CN 2011100863642 A CN2011100863642 A CN 2011100863642A CN 201110086364 A CN201110086364 A CN 201110086364A CN 102243241 A CN102243241 A CN 102243241A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- kit
- homogeneous phase
- ngal
- reagent
- particle type
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供一种匀相溶胶颗粒型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法。使用本发明的试剂盒能检测人尿液、血清或血浆中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的含量。所述的匀相溶胶颗粒型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其胶体金颗粒直径为10-100nm。本发明的试剂盒具有特异性强、灵敏度高等特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种匀相溶胶颗粒型免疫测定试剂盒及其制备方法，具体地涉及用于测定人尿液、血清或血浆中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白免疫检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associatedlipocalin，NGAL)，也称为Lipocalin-2(脂质运载蛋白-2)，是脂质运载蛋白家族的一个新成员，于1993年在中性粒细胞内首先被发现，与炎症、胚胎发育、免疫应答、趋化作用、信号转导以及多种肿瘤的发生与发展等过程相关。NGAL不仅仅存在于嗜中性粒细胞中，也会出现在特定的上皮细胞内，例如发生缺血性和毒性肾损伤过程中，肾小管上皮细胞中的NGAL将显著增加，在开始的两个小时内，尿液和血液中NGAL水平将显著增加，因此NGAL是早期急性肾损伤的敏感标志物。
急性肾功能损伤过程中NGAL水平偏高，预后将发展成为急性肾功能衰竭。NGAL水平偏高通常出以下情况：心血管手术患者、病危人员、脓血性或出血性休克、肾移植、静脉X射线造影剂的反应和肾毒性治疗反映。50％以上的病人都会出现一定程度的急性肾功能衰竭，通常大病后期出现使得死亡率大大增加。通用的诊断方法如测定血清肌酐或者半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)都只能在肾功能退化后检测出，那只能损伤后一天甚者几天内检测。用NGAL 蛋白快速检测酶联免疫试剂盒，医生可在损伤几小时内对急性肾功能障碍做适当的处理。有研究表明，健康志愿者尿液中NGAL含量检测结果分布0.7-9.6ng/ml，平均值为5.3ng/ml。而血浆中的含量检测结果为37-106ng/ml，平均值为63ng/ml。当肾损伤后，NGAL水平将迅速陡增。随机检测重病患者，尿液NGAL的浓度为110ng/ml到40000ng/ml不等。而他们EDTA抗凝血浆检测结果为25ng/ml到3491ng/ml。根据急性肾衰竭患者检测的90％阳性预测值判断，尿液中NGAL的阳性判断值为350ng/ml，而血浆检测的阳性判断值为400ng/ml。近年来国内外的研究表明，NGAL蛋白在多种疾发过程中具有特异性表达变化的特点，使得NGAL成为检测疾病的生物标志物。
NGAL蛋白广泛分布在人体组织细胞中，如支气管、胃、小肠、胰腺、肾、前列腺、胸腺等。NGAL蛋白具有运输疏水性小分子、调节明胶酶B(MMP-9)活性等功能，并可能参与免疫炎症反应以及肿瘤的发生发展，特别是肿瘤的浸润转移等过程。实验证明，在卵巢癌细胞系、结肠肿瘤和乳腺癌等中的NGAL的表达明显增强。免疫组化证明在肺癌组织中的NGAL强阳性，而支气管肺泡细胞癌和粘液细胞癌染色最强，NGAL在胰腺癌中会从阴性增加到强阳性。这些研究表明，NGAL基因可能是人类的一种新的癌基因或促癌基因。
目前对于NGAL的检测方法比较常用的是丹麦Bioporto诊断公司开发的NGAL快速诊断ELISA检测试剂盒，主要运用于急性肾功能衰竭(APF)的早期诊断。该NGAL试剂盒虽能准确检测样品中NGAL的水平，其缺陷在于耗时长，一个检测程序需耗时1小时左右，不能满足快速检测的需求。匀相溶胶颗粒型免疫测定法测定时间短，而且可以在自动生化分析仪上进行，所以可以成为NGAL临床检测的常规应用技术。目前该技术已趋于成熟，而且操作简便，干扰因素少，对各种疾病的诊断及病情观察具有重要的临床意义。
匀相溶胶颗粒型免疫测定法的基本原理是：采用标记了抗NGAL抗体的胶体金，与待测标本中的NGAL发生凝聚反应使胶体金颜色发生变化，用540nm检测这种变化，以NGAL标准品的标准曲线测出样本中目标检测物NGAL的浓度。
发明内容
本发明要解决的问题是建立一种匀相溶胶颗粒型NGAL检测试剂盒，提供一种特异性的高灵敏度的匀相溶胶颗粒型免疫测定试剂盒，可以测定0.00359mg/L的NGAL含量。另外，本发明的目的还在于提供使用本发明匀相溶胶颗粒型免疫测定试剂盒测定NGAL含量的方法。
为了解决上述问题，本发明采用10-100nm胶体金颗粒标记于抗NGAL抗体，通过匀相溶胶颗粒免疫测定法检测样本中NGAL含量。
本发明提供以下的技术方案。
1.根据权利要求1-5记载的一种匀相溶胶颗粒型免疫测定试剂盒，其用于测定NGAL的含量，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2以及NGAL标准品，试剂R1和试剂R2的体积比为4∶1，所述试剂R1为含有多聚物的缓冲溶液，所述试剂R2为结合有抗人NGAL抗体的胶体金的缓冲溶液，其中胶体金颗粒的直径为10-100nm。
2.根据权利要求5记载的一种匀相溶胶颗粒型免疫测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒具有较高的准确性和灵敏度，可用于检测人尿液、血清或血浆中NGAL的浓度，适用于临床全自动生化分析仪。
附图说明
图1显示6种不同含量的NGAL参考标准的标准曲线，每个点代表不同含量的 NGAL参考标准，其中，x轴表示NGAL的含量，y轴表示吸光度。
图2显示本发明的试剂和对照试剂(某国际知名公司NGAL试剂盒)的相关性。图中的X、Y轴均为测定值(NGAL含量mg/L)。
具体实施方式
实施例1
一种匀相溶胶颗粒型NGAL测定试剂盒及其制备方法。
1.本发明试剂R1的配制
按照常规方法进行制备。
2.本发明试剂R2的配制
I.胶体金溶液的制备
(1)用超纯水配制1％氯金酸和10％柠檬酸三钠；
(2)超纯水配制万分之四氯金酸500ml(20ml 1％氯金酸加480ml超纯水)；
(3)加热搅拌至微沸，快速加入与氯金酸质量比为1.2∶1的柠檬酸三钠(即4ml 10％柠檬酸三钠)；
(5)加热搅拌至颜色变为酒红色，继续加热搅拌5-8min后停止；
(6)用紫外分光光度计检测500nm-560nm处的吸光度值，根据吸光度值分析出波峰的位置，以此大致确定金颗粒的粒径。
II.抗体标记(以标记100ml胶体金为例)
(1)100ml胶体金加10ml 0.1M pH8.4硼酸盐缓冲液再加2mg 1mg/ml NGAL多抗，混匀放置30min；
(2)加10ml 10％BSA，混匀放置30min；
(3)11000rpm离心30min；
(4)去上清，用含0.4％PEG8000的Tris缓冲液(10mM/L，PH7.5)重悬，离心30min；
(5)同上重复洗涤两次；
(6)用上述缓冲液复溶至30ml。
实施例2工作曲线测定
本发明的用量：本发明试剂R1和本发明试剂R2用量分别为160μl和40μl，样本用量为2μl。
本发明采用终点法进行测定：160μl R1加入2μl样本，于37℃5min后加入40μl试剂R2，即开始读点，反应5mi n后再次读点，得到吸光度差值。
制作本发明的标准曲线：采用本发明的标准品(选择6点校准，校准品NGAL含量分别为0.0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mg/ml)，使用迈瑞BS 300全自动生化仪，检测主波长为546nm，副波长为660nm；
按照上述测定步骤测得本发明NGAL标准品的标准曲线(如图1所示)。图1中曲线上的每个点代表一个含量的标准品。其中x轴表示NGAL的含量，y轴表示吸光度。
相关性实验：使用本发明的试剂和对照试剂(某国际知名公司NGAL试剂盒)。采用迈瑞BS300全自动生化分析仪对30份人血清进行测定，对测定值进行相关性分析。测定结果见图2，图中的X、Y轴均为测定值(NGAL含量mg/L)。结果显示本发明和对照试剂的相关性很高。
实施例3灵敏度实验
检测20次水和0.1mg/L的样本，记录吸光度数值，计算平均值和标准偏差， 测定的灵敏度实验数据如下表所示。
下表中，ΔA表示吸光度的差值。
本发明试剂盒的最低检测限(LLD)＝26.05+3*6.098＝44.34
本发明试剂盒的灵敏度＝0.10*44.34/1234.3＝0.00359mg/L 。
Claims (5)
1.一种匀相溶胶颗粒型免疫测定试剂盒，其用于测定人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的含量。
2.根据权利要求1记载的匀相溶胶颗粒型免疫测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2，以体积比计，试剂R1和试剂R2的含量比例为4∶1，该试剂盒中任选地含有中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白标准品，所述试剂R1为含有多聚物的缓冲液，所述试剂R2为结合有抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的胶体金的缓冲液。
3.根据权利要求1记载的匀相溶胶颗粒型免疫测定试剂盒，其特征在于，其中胶体金颗粒直径为10-100nm。
4.根据权利要求1记载的匀相溶胶颗粒型免疫测定试剂盒，其特征在于，它是基于免疫胶体金法定量检测样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量的试剂盒。
5.权利要求1记载的一种匀相溶胶颗粒型免疫测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒具有较高的准确性和灵敏度，可用于检测人尿液、血清或血浆中NGAL的浓度，适用于临床全自动生化分析仪。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011100863642A CN102243241A (zh) | 2011-04-07 | 2011-04-07 | 一种匀相溶胶颗粒型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011100863642A CN102243241A (zh) | 2011-04-07 | 2011-04-07 | 一种匀相溶胶颗粒型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102243241A true CN102243241A (zh) | 2011-11-16 |
Family
ID=44961406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2011100863642A Pending CN102243241A (zh) | 2011-04-07 | 2011-04-07 | 一种匀相溶胶颗粒型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102243241A (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013097606A1 (zh) * | 2011-12-30 | 2013-07-04 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 |
| CN103995128A (zh) * | 2014-05-08 | 2014-08-20 | 北京玖佳宜科技有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备 |
| CN104198723A (zh) * | 2014-08-11 | 2014-12-10 | 南京普朗医疗设备有限公司 | 一种基于氨基酸间臂的ngal快速检测试剂盒 |
| CN105891503A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-08-24 | 北京科美生物技术有限公司 | 用于检测嗜中性粒细胞明胶酶相关脂质(ngal)的胶体金免疫比色法试剂盒及其制备方法 |
| CN105891501A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-08-24 | 北京科美生物技术有限公司 | 用于检测视黄醇结合蛋白(rbp)的胶体金免疫比色法试剂盒及其制备方法 |
| CN105891504A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-08-24 | 北京科美生物技术有限公司 | 用于检测脂蛋白a(Lpa)的胶体金免疫比色法试剂盒及其制备方法 |
| CN105891505A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-08-24 | 北京科美生物技术有限公司 | 用于检测d-二聚体(dd)的胶体金免疫比色法试剂盒及其制备方法 |
| CN105891502A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-08-24 | 北京科美生物技术有限公司 | 用于检测α1-微球蛋白(AMG)的胶体金免疫比色法试剂盒及其制备方法 |
| CN106483297A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-03-08 | 浙江达美生物技术有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂及制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050272101A1 (en) * | 2004-06-07 | 2005-12-08 | Prasad Devarajan | Method for the early detection of renal injury |
| CN1978632A (zh) * | 2006-11-21 | 2007-06-13 | 汕头大学医学院 | 重组毕赤酵母及其表达ngal蛋白的方法 |
| WO2008116867A1 (en) * | 2007-03-26 | 2008-10-02 | Novartis Ag | Predictive renal safety biomarkers and biomarker signatures to monitor kidney function |
| WO2009107384A1 (ja) * | 2008-02-29 | 2009-09-03 | 国立大学法人名古屋大学 | 急性腎障害及び予後推定用バイオマーカー並びにその用途 |
| CN101566633A (zh) * | 2009-04-17 | 2009-10-28 | 武汉华美生物工程有限公司 | 一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法 |
| CN101699287A (zh) * | 2009-09-08 | 2010-04-28 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 匀相溶胶颗粒型胱抑素c测定试剂盒及其制备方法 |
-
2011
- 2011-04-07 CN CN2011100863642A patent/CN102243241A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050272101A1 (en) * | 2004-06-07 | 2005-12-08 | Prasad Devarajan | Method for the early detection of renal injury |
| CN1978632A (zh) * | 2006-11-21 | 2007-06-13 | 汕头大学医学院 | 重组毕赤酵母及其表达ngal蛋白的方法 |
| WO2008116867A1 (en) * | 2007-03-26 | 2008-10-02 | Novartis Ag | Predictive renal safety biomarkers and biomarker signatures to monitor kidney function |
| WO2009107384A1 (ja) * | 2008-02-29 | 2009-09-03 | 国立大学法人名古屋大学 | 急性腎障害及び予後推定用バイオマーカー並びにその用途 |
| CN101566633A (zh) * | 2009-04-17 | 2009-10-28 | 武汉华美生物工程有限公司 | 一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法 |
| CN101699287A (zh) * | 2009-09-08 | 2010-04-28 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 匀相溶胶颗粒型胱抑素c测定试剂盒及其制备方法 |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013097606A1 (zh) * | 2011-12-30 | 2013-07-04 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 |
| CN103995128A (zh) * | 2014-05-08 | 2014-08-20 | 北京玖佳宜科技有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备 |
| CN104198723A (zh) * | 2014-08-11 | 2014-12-10 | 南京普朗医疗设备有限公司 | 一种基于氨基酸间臂的ngal快速检测试剂盒 |
| CN105891503A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-08-24 | 北京科美生物技术有限公司 | 用于检测嗜中性粒细胞明胶酶相关脂质(ngal)的胶体金免疫比色法试剂盒及其制备方法 |
| CN105891501A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-08-24 | 北京科美生物技术有限公司 | 用于检测视黄醇结合蛋白(rbp)的胶体金免疫比色法试剂盒及其制备方法 |
| CN105891504A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-08-24 | 北京科美生物技术有限公司 | 用于检测脂蛋白a(Lpa)的胶体金免疫比色法试剂盒及其制备方法 |
| CN105891505A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-08-24 | 北京科美生物技术有限公司 | 用于检测d-二聚体(dd)的胶体金免疫比色法试剂盒及其制备方法 |
| CN105891502A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-08-24 | 北京科美生物技术有限公司 | 用于检测α1-微球蛋白(AMG)的胶体金免疫比色法试剂盒及其制备方法 |
| CN106483297A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-03-08 | 浙江达美生物技术有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂及制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102243241A (zh) | 一种匀相溶胶颗粒型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒及其制备方法 | |
| CN102253217B (zh) | 一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 | |
| Thaxton et al. | Nanoparticle-based bio-barcode assay redefines “undetectable” PSA and biochemical recurrence after radical prostatectomy | |
| Giovanella et al. | Comparison of serum calcitonin and procalcitonin in detecting medullary thyroid carcinoma among patients with thyroid nodules | |
| WO2017107974A1 (zh) | 血清psmd4蛋白的检测试剂盒及其检测方法与应用 | |
| Christensson et al. | The impact of the glomerular filtration rate on the human plasma proteome | |
| Whitley et al. | Thyroglobulin: a specific serum marker for the management of thyroid carcinoma | |
| CN101699287B (zh) | 匀相溶胶颗粒型胱抑素c测定试剂盒及其制备方法 | |
| EP3253800B1 (en) | Prostate antigen standards and uses thereof | |
| Lupoli et al. | Prognostic significance of thyroglobulin antibody epitopes in differentiated thyroid cancer | |
| CN104198732A (zh) | 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒 | |
| Hao et al. | IPO-38 is identified as a novel serum biomarker of gastric cancer based on clinical proteomics technology | |
| WO2013070089A1 (en) | Method and materials for the diagnosis of prostate cancers | |
| Fortunato | A new sensitive automated assay for procalcitonin detection: LIAISON® BRAHMS PCT® II GEN | |
| Bennett et al. | Proteomic analysis of acute kidney injury: biomarkers to mechanisms | |
| Yanagisawa et al. | L-amino acid transporter 1 may be a prognostic marker for local progression of prostatic cancer under expectant management | |
| CN105548547A (zh) | 基于流式细胞仪的检测肺癌标志物的流式阵列免疫分析试剂盒 | |
| CN105699665A (zh) | 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测试剂盒 | |
| Sonawane et al. | C-Reactive protein: a major inflammatory biomarker | |
| CN102147413A (zh) | 一种小粒径匀相溶胶颗粒型胱抑素c测定试剂盒及其制备方法 | |
| CN107942068A (zh) | β2‑微球蛋白测定试剂盒 | |
| Jain et al. | Evaluating new markers for minimal residual disease analysis by flow cytometry in precursor B lymphoblastic leukemia | |
| CN101493463A (zh) | 胃癌诊断试剂及其用途 | |
| CN104849224A (zh) | 一种补体c3检测试剂盒及其制备 | |
| Nath et al. | Prostate-specific antigen density: a measurement to differentiate benign hypertrophy of prostate from prostate carcinoma |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20111116 |