CN101566633A - 一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法 - Google Patents
一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101566633A CN101566633A CNA200910061639XA CN200910061639A CN101566633A CN 101566633 A CN101566633 A CN 101566633A CN A200910061639X A CNA200910061639X A CN A200910061639XA CN 200910061639 A CN200910061639 A CN 200910061639A CN 101566633 A CN101566633 A CN 101566633A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ngal
- cancer
- antibody
- people
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法。该检测方法是使用抗人嗜中性粒细胞明胶酶相关性脂笼蛋白(NGAL)的抗体，与待检标本的人NGAL反应，所形成的复合物引起浊度变化；用光投射强度或光散射强度表征这种变化；从人NGAL标准品的浓度与相应光散射强度或光透射强度的标准曲线查出待检标本的人NGAL的含量；最后根据检测出的NGAL含量来衡量癌症的严重程度，该方法具有灵敏度高、回收率高、重复性好的优点，为癌症病人尿液或血浆中NGAL确定了一个简便、重现性好、适应性强的检测手段，并使人NGAL对临床的指导作用及进一步研究其功能提供了可能。
Description
技术领域
本发明涉及一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法。具体的来讲，涉及病人尿液中人嗜中性粒细胞明胶酶相关性脂笼蛋白(NGAL)含量的测定方法。
背景技术
对于癌症病人的治疗目前没有最好的办法，提高癌症病人生存率最重要的方法就是早期的诊断。寻找癌症早期诊断的目标为防癌提供了不可磨灭的帮助。随着基因分析学和蛋白组学的发展，癌症相关分子及分子标志物的研究也随之取得了较大的进展。例如，在前列腺癌病人的血液中可以检测到前列腺特异抗原PSA，并且可以指示前列腺癌的存在，这样病人便可以通过血液检测PSA的水平来快速的检测出是否患有前列腺癌。
NGAL蛋白是1993年在中性粒细胞内首先被发现的，与炎症、胚胎发育、免疫应答、趋化作用、信号转导以及多种肿瘤的发生与发展等过程相关。近年来国内外的研究表明，NGAL蛋白在多种疾病发病过程中具有特异性表达变化的特点，使得NGAL成为检测疾病的生物标志物。
同源性分析表明，NGAL与小鼠的24p3和大鼠的neu相关lipocalin(neu-related lipocalin，NRL)具有很高的同源性。小鼠的24p3在肝脏中合成，炎症反应时上调，另外24p3也见于巨噬细胞和子宫内膜，尤其是生殖期的子宫内膜。用类固醇激素可使相应组织中的24p3水平升高，而一些生长因子和肿瘤促进因子也可以使其升高。猴病毒SV40、多瘤病毒或其他病毒感染可以刺激培养的小鼠肾细胞24p3 mRNA的表达增加7-10倍。且随着大T抗原的合成的增加而升高。因此24p3被认为是癌基因产物。这同时表明NGAL可能是人类的一种新的癌基因。
实验证明，在卵巢癌细胞系、结肠肿瘤和乳腺癌等中的NGAL的表达明显增强。免疫组化证明在肺癌组织中的NGAL强阳性，而支气管肺泡细胞癌和粘液细胞癌染色最强，NGAL在胰腺癌中会从阴性增加到强阳性。
这样，这些发现的事实为不同病期的癌症病人的快速有效诊断提供了客观可能性。作为癌症的特征分子，NGAL成为有效的临床检测工具。
发明内容
本发明提供了用于诊断或监测癌症的方法，所述方法包含以下步骤：
i)使用相关器械收集病人尿液。
ii)病人尿液与抗体接触反应。
iii)检测人NGAL的浓度，并根据浓度衡量评价癌症的严重程度。
优选通过免疫化学方法来测定NGAL水平，这种方法的例子包括但绝不限于免疫比浊法、夹心法ELISA、竞争法ELISA。
对病人尿液样本，可以用任何提供满意的分析特异性、灵敏度和精确度的方法来进行。检测实验中，使用NGAL的单克隆抗体、多克隆抗体或任何可与NGAL特异性结合的分子。结合分子首先固相化捕捉样品中的NGAL形成复合物，而另外一个标记可检测的结合分子再结合上述复合物，最后通过特定方法显示出复合物量的值从而间接反应出样品中NGAL的含量获得病情的严重性。另外可以直接利用游离的NGAL抗体或偶联乳胶颗粒以胶体形式存在的抗体与样品中的NGAL直接结合所形成的复合物引起浊度变化；用光投射强度或光散射强度表征这种变化；从人NGAL标准品的浓度与相应光散射强度或光透射强度的标准曲线查出待检标本的人NGAL的含量。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1乳胶增强免疫比浊法检测病人尿液中的NGAL含量
实现本实例的技术方案：一种检测人嗜中性粒细胞明胶酶相关性脂笼蛋白(NGAL)的免疫比浊法，用抗NGAL的多克隆抗体首先与乳胶交联，然后用交联后的乳胶溶液与待检标本的NGAL反应，所形成的复合物引起浊度变化；用光投射强度或光散射强度表征这种变化；从NGAL标准品的浓度与相应光散射强度或光投射强度的标准曲线查出待检样本的NGAL含量；其中所用的NGAL的多克隆抗体效价至少为1∶500，不含杂抗体，具有识别NGAL多种抗原决定簇；待检标本用稀释剂做1∶200-1∶1000稀释。
上述方法中，所述NGAL标准品是纯NGAL，其浓度为0.2mg/ml，先用稀释剂做1∶200倍稀释，再做倍比稀释，做成系列标准品，供作标准曲线用。
实施例2用夹心法ELISA确定病人尿液NGAL浓度
具体步骤是：包被NGAL抗体A；配制系列NGAL标准品；准备病人尿液；将系列标准品或待定值的病人尿液加入96微孔板孔内，再使已标记的、结合位点不同于包被在96微孔板上抗体A的抗体B结合，用基质液显色20-30分钟后终止显色，10分钟后测定上述系列标准品和待检测的病人尿液中NGAL反应后的吸光度；建立系列标准品的浓度和吸光度的标准曲线并从曲线中查出待定值的病人尿液的NGAL的浓度。
实施例3用竞争法ELISA确定病人尿液NGAL浓度
具体步骤是：包被NGAL多克隆抗体；配制系列NGAL标准品；准备病人尿液；使系列标准品或待定值的病人尿液和已标记的NGAL标准品混合；用基质液显色20-30分钟后终止显色，10分钟后测定上述系列标准品和待检测的病人尿液中NGAL反应后的吸光度；建立系列标准品的浓度和吸光度的标准曲线并从曲线中查出待定值的病人尿液的NGAL的浓度。
Claims (13)
1.一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，建立在抗原抗体特异性反应原理基础上，通过包括但不限于免疫比浊法以及酶联免疫(ELISA)法的免疫学方法检测样品中人嗜中性粒细胞明胶酶相关性脂笼蛋白(NGAL)的浓度。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是，包括如下步骤：
i)收集病人样品。
ii)样品中的NGAL与抗体接触反应。
iii)检测人NGAL的浓度，并根据浓度衡量评价癌症的严重程度。
4.根据权利要求1所述的癌症，其特征是，包括但不限于其病变与NGAL水平变化相关的癌症，例如乳腺癌、基底细胞癌、唇癌、口腔癌、食道癌、小肠癌、胃癌、肝癌、膀胱癌、胰脏癌、卵巢癌、肺癌、皮肤癌、肾癌、前列腺癌、肾细胞癌。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征是根据结果中NGAL的含量通过与正常的样品中的NGAL浓度比较得出病人是否得癌症或癌症的病情严重性的过程。
6.根据权利要求2所述的样品，其特征是包括但不限于病人的尿液和血浆。
7.根据权利要求3所述的抗体，其特征在于是该抗体是通过天然或重组的人NGAL免疫动物获得的多克隆抗体或者单克隆抗体。
8.根据权利要求2所述的免疫比浊法，其特征在于：用抗人NGAL的抗体，与待检标本的人NGAL反应，所形成的复合物引起浊度变化；用光投射强度或光散射强度表征这种变化；从人NGAL标准品的浓度与相应光散射强度或光透射强度的标准曲线查出待检标本的人NGAL的含量。
9.根据权利要求2所述的酶联免疫(ELISA)法，其特征在于：包括双抗夹心法ELISA、竞争法ELISA。
10.根据权利要求2所述的酶联免疫(ELISA)法，其特征在于：人NGAL预先固相化，或人NGAL抗体预先固相化。
11.根据权利要求2所述的酶联免疫(ELISA)法，其特征在于，检测人NGAL含量的范围为1ng/ml-500ng/ml。
12.根据权利要求9所述的竞争法，其特征在于，预先固相化人NGAL抗体或人NGAL。
13.根据权利要求10所述的固相化，其特征在于，将人NGAL或人NGAL抗体包被到固相支持物上，该支持物可以是，例如用于酶联免疫吸附试验的聚苯乙烯或聚氯乙烯表面，或胶乳(聚苯乙烯)颗粒，或由压缩的聚乙烯颗粒组成的过滤玻璃棒，或多孔消化纤维素基质，或事实上是在免疫化学分析使用中任何合适的支持物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA200910061639XA CN101566633A (zh) | 2009-04-17 | 2009-04-17 | 一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA200910061639XA CN101566633A (zh) | 2009-04-17 | 2009-04-17 | 一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101566633A true CN101566633A (zh) | 2009-10-28 |
Family
ID=41282893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA200910061639XA Pending CN101566633A (zh) | 2009-04-17 | 2009-04-17 | 一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101566633A (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102072960A (zh) * | 2010-03-29 | 2011-05-25 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 一种样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测方法 |
| CN102243241A (zh) * | 2011-04-07 | 2011-11-16 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 一种匀相溶胶颗粒型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒及其制备方法 |
| CN102253217A (zh) * | 2011-04-07 | 2011-11-23 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 |
| CN102590524A (zh) * | 2011-12-30 | 2012-07-18 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 |
| CN102662064A (zh) * | 2012-04-26 | 2012-09-12 | 苏州照康生物技术有限公司 | 检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的免疫比浊试剂盒及其制备方法 |
| CN102680698A (zh) * | 2011-07-29 | 2012-09-19 | 南京诺尔曼生物技术有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(ngal)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法) |
| CN103048464A (zh) * | 2012-10-17 | 2013-04-17 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法 |
| CN104313157A (zh) * | 2014-10-27 | 2015-01-28 | 东南大学 | 一种邻位连接技术检测ngal的方法 |
| CN105699654A (zh) * | 2014-12-15 | 2016-06-22 | 株式会社芳珂 | 皮肤角质层的ngal的表达量的用途 |
-
2009
- 2009-04-17 CN CNA200910061639XA patent/CN101566633A/zh active Pending
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102072960A (zh) * | 2010-03-29 | 2011-05-25 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 一种样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测方法 |
| CN102243241A (zh) * | 2011-04-07 | 2011-11-16 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 一种匀相溶胶颗粒型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒及其制备方法 |
| CN102253217A (zh) * | 2011-04-07 | 2011-11-23 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 |
| CN102253217B (zh) * | 2011-04-07 | 2013-08-07 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 |
| CN102680698A (zh) * | 2011-07-29 | 2012-09-19 | 南京诺尔曼生物技术有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(ngal)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法) |
| CN102680698B (zh) * | 2011-07-29 | 2016-03-30 | 南京诺尔曼生物技术有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(ngal)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法) |
| CN102590524B (zh) * | 2011-12-30 | 2016-01-06 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 |
| CN102590524A (zh) * | 2011-12-30 | 2012-07-18 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 |
| WO2013097606A1 (zh) * | 2011-12-30 | 2013-07-04 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 |
| CN102662064A (zh) * | 2012-04-26 | 2012-09-12 | 苏州照康生物技术有限公司 | 检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的免疫比浊试剂盒及其制备方法 |
| CN103048464A (zh) * | 2012-10-17 | 2013-04-17 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法 |
| CN103048464B (zh) * | 2012-10-17 | 2015-04-15 | 武汉生之源生物科技有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法 |
| CN104313157A (zh) * | 2014-10-27 | 2015-01-28 | 东南大学 | 一种邻位连接技术检测ngal的方法 |
| CN105699654A (zh) * | 2014-12-15 | 2016-06-22 | 株式会社芳珂 | 皮肤角质层的ngal的表达量的用途 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101566633A (zh) | 一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法 | |
| WO2017107974A1 (zh) | 血清psmd4蛋白的检测试剂盒及其检测方法与应用 | |
| CN101377492B (zh) | 胱抑素c测定试剂盒 | |
| CN106405104B (zh) | 一种新的肝硬化或肝纤维化标志物 | |
| CN102072960A (zh) | 一种样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测方法 | |
| US20180080937A1 (en) | Biomarker Panel For Diagnosing Cancer | |
| CN105572353B (zh) | 一种用于检测肝癌标志物的抗体芯片试剂盒 | |
| CN104198712A (zh) | 半乳凝素-3免疫测定法 | |
| CN102421799B (zh) | 用于高分子脂联素分析的新型单克隆抗体及其应用 | |
| US20120022793A1 (en) | Biomarkers for the diagnosis of prostate cancer in a non-hypertensive population | |
| US20120252040A1 (en) | Kit for diagnosing prostate cancer and diagnosis method | |
| US20120295288A1 (en) | Serological marker for detecting pancreatic cancer and a method for using the serological marker | |
| WO2024001044A1 (zh) | 一种与肺癌相关的生物标志物组合、含其的试剂盒及其用途 | |
| CN106680515B (zh) | 用于肺癌诊断的多分子标志物组合 | |
| WO2024067470A1 (zh) | 一种用于检测早期肝癌的试剂盒 | |
| JP6998626B2 (ja) | 自己抗体－抗原結合体を利用した肺癌診断用免疫学的組成物、これを用いた肺癌診断方法及びこれを含む肺癌診断用キット | |
| CN115201471A (zh) | 一种用于辅助诊断IgA肾病的标志物组合、其检测试剂盒及肾损伤无创检测方法 | |
| CN108802400B (zh) | 一种检测复合物IgA1-α1MG的方法及无创检测肾组织损伤的试剂盒 | |
| JP2016095233A (ja) | 早期肝細胞がん患者の再発リスクの予測を補助する方法、システム及びコンピュータプログラム製品 | |
| Sun et al. | Serum RelB is correlated with renal fibrosis and predicts chronic kidney disease progression | |
| WO2016127278A1 (zh) | 尿液补体c3蛋白的应用 | |
| CN115656510A (zh) | 用于肝细胞癌诊断的血浆外泌体蛋白标志物vcam1、试剂盒及其应用 | |
| CN109085355A (zh) | 血清蛋白标志物组合在肺癌筛查和诊治中的应用 | |
| JP5857385B2 (ja) | Ａｐｅ１／ｒｅｆ−１を含有する膀胱癌診断用組成物、及びこれを利用した膀胱癌診断キット | |
| JP6488236B2 (ja) | 可溶型線維芽細胞増殖因子受容体の高感度多重イムノアッセイ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C53 | Correction of patent for invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Hua Quangao Inventor after: Shen Hexiao Inventor before: Hua Quangao |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: HUA QUANGAO TO: HUA QUANGAO SHEN HEXIAO |
|
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20091028 |