JP6998626B2 - 自己抗体－抗原結合体を利用した肺癌診断用免疫学的組成物、これを用いた肺癌診断方法及びこれを含む肺癌診断用キット - Google Patents

自己抗体－抗原結合体を利用した肺癌診断用免疫学的組成物、これを用いた肺癌診断方法及びこれを含む肺癌診断用キット Download PDF

Info

Publication number
JP6998626B2
JP6998626B2 JP2020551472A JP2020551472A JP6998626B2 JP 6998626 B2 JP6998626 B2 JP 6998626B2 JP 2020551472 A JP2020551472 A JP 2020551472A JP 2020551472 A JP2020551472 A JP 2020551472A JP 6998626 B2 JP6998626 B2 JP 6998626B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
cyfra21
lung cancer
antibody
antigen
conjugate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2020551472A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2021517250A (ja
Inventor
タイスン キム
ケムソー ソン
ジュンフン キム
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Biometrix Technology Inc
Original Assignee
Biometrix Technology Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biometrix Technology Inc filed Critical Biometrix Technology Inc
Publication of JP2021517250A publication Critical patent/JP2021517250A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6998626B2 publication Critical patent/JP6998626B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3023—Lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
    • G01N33/539—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody involving precipitating reagent, e.g. ammonium sulfate
    • G01N33/541—Double or second antibody, i.e. precipitating antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4742—Keratin; Cytokeratin

Description

本発明は、本発明は自己抗体－抗原結合体を利用した肺癌診断用免疫学的組成物、これを用いた肺癌診断方法及びこれを含む肺癌診断用キットに関する。
肺癌は国際的に年間１００万名が死亡することと知られている。去る数十年間診断及び治療技術が開発されてきたが、特別な自覚症状がなく、かつ大部分進行性の癌または他の部位に転移された状態で発見されており、肺癌患者の完治率は３０％以下で予後が非常に良くない。
このような肺癌であるものの、早期診断ができれば生存率を８０％以上に画期的に増加させることができるが、現在肺癌診断のためにはイメージング法（Ｘ－ｒａｙ、ＣＴ、ＭＲＩなど）への依存度が高い方であり、生化学的指標として使用可能な物質は発見された例が少ない。
現在肺癌診断のためにバイオマーカーという名前で提示された物質が存在するが、依然として十分な特異度（specificity）と感度（sensitivity）を示していない。
したがって、国内外的に急速に増加している肺癌の有病率に係わって先進国を中心に肺癌バイオマーカー及び診断キットの開発の源泉技術の確保は必ず必要であり、肺癌を早期（０期～I期）に発見しうる新しい肺癌診断方法の開発が急がれる実情である。
肺癌の診断方法には次の三つがある：
１）イメージング法（Ｘ－ｒａｙ、ＣＴ、ＭＲＩ）：現在肺癌診断のためにはイメージング法への依存度が高い方であるが、肺癌を早期診断するには感度及び特異度が良くない。
２）組職検査：組職検査方法として、 喀痰細胞診検査 、気管支内視鏡検査、細針吸引生検 、縱隔鏡検査などがあり、生検組職を要する病理学的・細胞学的検出方法であって、侵襲的であり、かつ繰り返し測定しにくいという短所がある。
３）腫瘍マーカー検査：悪性腫瘍を診断する非侵襲的な診断方法であって、予後予測および治療効果の判定において良好な因子として広く用いられている。とりわけ、ＣＹＦＲＡ２１－１は、サイトケラチン１９フラグメントであり、１９９３年に肺癌マーカーとして提示されて以後、ずっとその有用性に関する研究が続けられており、多くの研究において非小細胞性肺癌のマーカーとしての価値を認められている。しかし、ほとんどの腫瘍マーカーは、濃度が一定以上になると癌と判断し、そうでなければ正常と判断する基準（ｃｕｔ ｏｆｆ）値を利用するため、正常人と癌患者とを区分する正確性においては限界がある。
正常基準値を超えたとしても、癌であると確信できず、正常基準値以下であるとしても癌ではないともいえない。それがゆえ癌を確定診断するためには組職検査などの精密検査が必要である。
腫瘍マーカー検査は、抗原検出方法を基本としており、腫瘍マーカーに対する研究が持続的に行われてきたが、腫瘍マーカー検査のみでは血液中における腫瘍マーカーの量的変化が癌病期０期～III期までは非常に小さく現われ、IV期の段階で量的な差が現われるので、量的変化が微々たる腫瘍マーカーである抗原のみを利用した検査だけでは８９％の特異度及び４３％の感度で低く現われるから正常と癌を区分しにくく、特に癌０期～I期の段階では正常と癌の区分が極めて難しい。
したがって正常と癌を区分するためには、正常と、癌が発生した場合とにおいて、血液中における量的変化が非常に大きく現われる新しい腫瘍マーカー（ｍａｒｋｅｒ）及びこれを用いた新しい検出及び診断方法が必要となった。
抗原に特異的に反応する自己抗体は、癌が発生すると量的増加が現われるが、癌の病期初期（０～I期）では免疫系が活発になるため自己抗体の量的増加が最も大きく現われ、正常である場合に比べ５～１０倍以上の増加幅を示す。
本発明は正常に比して癌である場合に血液中の量的増加が非常に大きく現われる自己抗体を測定して正常と癌とを区分する方法を開発しようとした。
前記課題を解決するために、本発明は、抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子及び、抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカーを含有する抗体組成物Ａと、抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子及び抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカーを含有する抗体組成物Ｂと、を含む肺癌診断用免疫学的組成物を提供する。
また、前記課題を解決するために、本発明は、前述した肺癌診断用免疫学的組成物を利用してヒトの生物学的試料で肺癌を診断する方法を提供し、下記段階を含む：
（ａ）抗体組成物Ａを利用して、 ＣＹＦＲＡ２１－１抗原の濃度を測定する段階；
（ｂ）抗体組成物Ｂを利用して、 抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体の 濃度を測定する段階；及び
（ｃ）前記（ａ）で得られた濃度及び前記（ｂ）で得られた濃度との比率から、前記生物学的試料で正常と肺癌を判定する段階。
本発明による肺癌診断用免疫学的組成物及び肺癌診断方法は、非侵襲的生物学的試料において、肺癌０～IV期が発病したか否かを９０％以上の特異度と７５％以上の感度で診断することができ、特に肺癌初期に濃度が急激に増加する自己抗体を利用するため、初期肺癌０～I期が発病したか否かを７６％以上の感度で診断することができる。
正常人と癌患者を対象として、本発明の自己抗体－抗原結合体及び抗原測定法を用いて得られた「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」と「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」との比率を示したグラフである。 「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」及び「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー」が生物学的試料中の「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」に結合して、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」：「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－Ｃｙ５」複合体を形成することを示す概念図である。 「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」及び「抗ヒトＩｇＧ抗体－Ｃｙ５」が生物学的試料中の「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原」に結合して、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」：「抗ヒトＩｇＧ抗体－Ｃｙ５」複合体を形成することを示す概念図である。 ９ＧＤＮＡメンブレン上でＣＹＦＲＡ２１－１抗原の検出形態を示す。 ９ＧＤＮＡメンブレン上で抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体の検出形態を示す図である。 正常及び肺癌病期別（０～III期別）による癌抗原（Ａｇ）及び自己抗体（オート抗体、ＡＡｂ）の血液中の量的変化を示すグラフである。 抗原検査（ＥＬＩＳＡ方式）による抗原濃度グラフであって、正常人と癌患者とを区分しにくいことをを示す図である。 本発明による「自己抗体－抗原結合体」及び「抗原」の濃度グラフであって、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」及び「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」が別の領域で現われるので、正常人と癌患者とを容易に区分することができることを示す図である。 「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」と「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－Ｃｙ５」を含む抗体組成物Ａの概念図；及び「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」及び「抗ヒトＩｇＧ抗体－Ｃｙ５」を含む抗体組成物Ｂの概念図をそれぞれ示す。 本発明による肺癌診断方法を９ＧＤＮＡメンブレン上で遂行した時、「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」が検出される過程を示す概念図である。 本発明による肺癌診断方法を９ＧＤＮＡメンブレン上で遂行した時、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」が検出される過程を示す概念図である。 本発明による肺癌診断用キットを９ＧＤＮＡメンブレンに適用した形態を示す図である。 ９ＧＤＮＡメンブレンに適用された肺癌診断用キットを検出し、読み取る過程を示す写真である。 本発明による肺癌診断組成物を正常２００検体及び肺癌I～IV期の５０検体に適用して肺癌感度を測定した病院の臨床結果を示すグラフである。
本発明は、抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子及び抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカーを含有する抗体組成物Ａと、抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子及び抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカーを含有する抗体組成物Ｂと、を含む肺癌診断用免疫学的組成物を提供する。
本発明の一実施形態によれば、前記測定マーカーは、発色酵素、蛍光物質、蛍光ビーズ、放射性アイソトープ、及びコロイドからなる群から選択されたいずれか一つであることができ、望ましくは蛍光物質から選択されることができる。
また、本発明は、前述した肺癌診断用免疫学的組成物を用いてヒトの生物学的試料で肺癌を診断する方法を提供し、下記の段階を含む：
（ａ）「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」及び「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー」を含有する抗体組成物Ａを利用して、前記生物学的試料中の「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」の有無または濃度を測定する段階；
（ｂ）「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」及び「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー」を含油する抗体組成物Ｂを利用して、前記生物学的試料中の「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」の有無または濃度を測定する段階；及び
（ｃ）前記（ａ）で得られた濃度と、前記（ｂ）で得られた濃度との比率から、前記生物学的試料で正常と肺癌を判定する段階。
本発明の一実施形態によれば、前記（ａ）で形成された「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」：「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー」複合体と、前記（ｂ）で形成された「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原」：「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー」複合体との比率を利用して前記生物学的試料で正常と肺癌を判定することができる。
本発明は前述した肺癌診断用免疫学的組成物及びバイオチップを含む肺癌診断用キットを提供する。
発明を実施のための形態
本発明は、生物学的試料において、抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体及びＣＹＦＲＡ２１－１抗原の検出方法に関するものであり、また抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体とＣＹＦＲＡ２１－１抗原との比率を利用して０～I期を含む肺癌を診断する診断用キットと診断方法に関する。
本発明の目的は、生体試料中のＣＹＦＲＡ２１－１抗原及びそれと結合された形態の抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体を測定し、それを利用する方法を提供するためのものである。
したがって、本発明の第１の目的は、抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子及び抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカーを含有する抗体組成物Ａと、抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子及び抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカーを含有する抗体組成物Ｂと、を含む肺癌診断用免疫学的組成物を提供することである。
本発明において、前記測定マーカー（detection marker）は発色、発光、蛍光などの形で検出されることができる。
本発明の一実施形態によれば、前記測定マーカーは蛍光物質、蛍光ビーズ、放射性アイソトープ、及びコロイドからなる群から選択されたいずれか一つであることができる。前述したコロイドは、一般的に肉眼測定のためのマーカーであることができ、例えばナノ金コロイドのようなナノ金属コロイドを使用してもよい。
本発明の一実施形態によれば、前記測定マーカーは、蛍光物質から選択されることができ、例えば、シアニンＣｙ３（５７０ｎｍ放出）、Ｃｙ５（６７０ｎｍ放出）、ＦＡＭ、ＶＩＣ、ＴＥＴ、ＪＯＥ、ＨＥＸ、ＲＯＸ、ＲＥＤ６１０、ＴＥＸＡＳ ＲＥＤ、ＲＥＤ６７０、ＴＹＥ５６３、及びＮＥＤが用いられることができる 。
本発明の第２の目的は、前述した肺癌診断用免疫学的組成物を用いてヒトの生物学的試料で肺癌を診断する方法を提供することであり、下記の段階を含む：
（ａ）「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」及び「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー」を含油する抗体組成物Ａを利用して、前記生物学的試料中の「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」の濃度を測定する段階；
（ｂ）「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」及び「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー」を含有する抗体組成物Ｂを利用して、前記生物学的試料中の「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」の濃度を測定する段階；及び
（ｃ）前記（ａ）で得られた濃度と、前記（ｂ）で得られた濃度との比率から、前記生物学的試料で正常と肺癌を判定する段階。
本発明の一実施形態によれば、前記（ａ）において、抗体組成物Ａに含有された「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」及び「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー」が生物学的試料中の「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」と結合して「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」：「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー」複合体を形成させて、「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」の有無または濃度を測定することができる。
本発明の一実施形態によれば、前記（ｂ）において、抗体組成物Ｂに含有された「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」及び「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー」が生物学的試料中の「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」と結合して「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原」：「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー」複合体を形成させて、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」の有無または濃度を測定することができる。
本発明の一実施形態によれば、前記（ｃ）において、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」：「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー」複合体と、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原」：「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー」複合体との比率を利用して、前記生物学的試料が正常状態であるか、それとも肺癌発病状態であるかを判定することができ、場合によって肺癌進行状態を判定することができる。
本発明の一実施形態によれば、前記（ｃ）において、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」/「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」の比率が一定数値（ｃｕｔ ｏｆｆ）、例えば１以上、望ましくは１．５以上、より望ましくは２以上、具体的に１～４、もっと具体的には１．５～３から選択され得る数値よりも高い場合、肺癌であると選別するか、又は肺癌の発病又は進行状態であると判定することができる。
本発明の一実施形態によれば、前記生物学的試料は、全血、血清、血漿、唾液、尿、喀痰、リンパ液、脳脊髄液、及び細胞液からなる群から選択されたいずれか一つであることができる。
本発明の一実施形態によれば、前記（ａ）及び（ｂ）で形成された抗原－抗体複合体は固形支持体に固定されることができる。
本発明の一実施形態によれば、前記固形支持体は９Ｇメンブレンまたは９ＧＤＮＡメンブレンを含むことができる。
本発明の一実施形態によれば、前記抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体に特異的な抗原は、ＣＹＦＲＡ２１－１タンパク質であることができる。
また、免疫複合体が「抗ＣＦＹＲＡ２１－１自己抗体－抗原」結合体にさらに 結合されることができる。前記「抗ＣＦＹＲＡ２１－１自己抗体－抗原」結合体は、ヒト自己抗体と抗原と結合体であり、抗ＣＦＹＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体に結合する分子は、抗ヒトＩｇＧ抗体である。
本発明は９ＧＤＮＡ技術（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ２０１１， ４７， ７１０４）に基づくＤＡＧＯＮ技術（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ２０１１， ４７， ７６１６）が適用されたプラットホームを利用して非侵襲的な方法である血液を用いた測定によって肺癌を０～I期で発見することがにより、生存率を高けるとともに、生活の質を向上させることにその目的がある。
したがって、本発明の第３の目的は、前述した肺癌診断用免疫学的組成物及びバイオチップを含む肺癌診断用キットを提供することである。
本発明の一実施形態によれば、前記バイオチップは９Ｇメンブレンまたは９ＧＤＮＡメンブレンを含むことができる。
本発明において、用語「９Ｇメンブレン」とは、連続した９つのグアニンを有するオリゴ遺伝子が固定化された表面がカリックスアレーン誘導体に変性されたガラス繊維メンブレンを意味し、用語「９ＧＤＮＡメンブレン」とは、連続した９つのグアニンを有するオリゴ遺伝子が固定化されたガラス繊維メンブレンを意味する。「９Ｇメンブレン」及び「９ＧＤＮＡメンブレン」は、前述した９ＧＤＮＡ技術（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ２０１１， ４７， ７１０４）に基盤を置いている。
以下、本発明を実施例及び図面を参照してより詳しく説明する。ただし本発明はこれらに限定されない。
本発明は正常に比して癌である場合に血液中の量的増加が非常に大きく現われる自己抗体を測定することで、抗原との量的比率を利用して正常と癌とを区分する方法を提供する。
肺癌が発生されれば血液中でを示す癌関連タンパク質であるＣＹＦＲＡ２１－１抗原と、該ＣＹＦＲＡ２１－１抗原に特異的に反応する抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体の量的増加が現われ、ここで抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体は、抗原と結合した形態である抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体として存在する。
本発明は癌０～I期で量的増加がほとんどないＣＹＦＲＡ２１－１抗原と、量的増加の幅が非常に大きい抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体と結合した抗原結合体の量を正確に検出することで、これらの量的比率を利用して正常と癌を早期に発見することができる方法を提供する（図１参照）。
正常と癌を癌０～I期の段階で区分するためには、生物学的試料中の抗原及び自己抗体の量的変化を正確に測定しなければならなく、試料中における如何なる干渉現象及び非特異的な反応があってはならない。
本発明において、公知の方法（韓国登録特許第１０－０８８３７６３号、第１０－１６８２３４７号）により製造された遺伝子が固定化されたガラス繊維を利用して干渉現象及び非特異的な反応のない肺癌診断用キットを製造し、それを使用する方法を提供する。
本発明の目的は、生体試料中のＣＹＦＲＡ２１－１抗原及びこれと結合された形態の抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体を測定し、それを利用する方法を提供することである。
本発明は、抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体及びＣＹＦＲＡ２１－１抗原を測定するための、蛍光免疫測定法に関する。詳しくは、本発明はヒトの生物学的試料において抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体及びＣＦＹＲＡ２１－１の抗原の有無及び比率を検定する、下記の段階を含む免疫測定法を提供する：
（ａ）抗体組成物Ａを利用してＣＹＦＲＡ２１－１抗原の有無または濃度を検定する段階：前記の段階では（抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子）及び（抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－Ｃｙ５）が生物学的試料中の（ＣＹＦＲＡ２１－１抗原）と結合して（抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子）：（ＣＹＦＲＡ２１－１抗原）：（抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－Ｃｙ５）複合体が形成される。（図２）
（ｂ）抗体組成物Ｂを利用して抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体の有無または濃度を検定する段階：前記の段階では（抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子）及び（抗ヒトＩｇＧ抗体－Ｃｙ５）が生物学的試料中の（抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体）と結合して（抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子）：（抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原）：（抗ヒトＩｇＧ抗体－Ｃｙ５）複合体が形成される。（図３）
（ｃ）前記で形成された（抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子）：（抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原）：（抗ヒトＩｇＧ抗体－Ｃｙ５）複合体と、（抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子）：（ＣＹＦＲＡ２１－１抗原）：（抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－Ｃｙ５）複合体との比率を利用して生物学的試料で正常と肺癌を判定する段階。
本発明は正常人と肺癌患者の血液、血漿のような非侵襲的生物学的試料を用いて 抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体と、ＣＹＦＲＡ２１－１抗原との比率を利用して９１．７％の特異度とI期７６％、II期８０％、III期７７％、IV期５０％の感度でI～IV期肺癌が発病したか否かを診断することができる診断キット及びその使用方法を提供する。
特に、自己抗体が急激に増加する時期である癌病期０～I期で７６％感度のレベルで肺癌の診断効果が高く現われるので、肺癌初期段階である０～I期で肺癌診断に非常に有効である。
図６は正常及び肺癌病期別（０～III期別）による肺癌腫瘍マーカーである癌抗原（Ａｇ）及び自己抗体（オート抗体、ＡＡｂ）の血液中における量的変化を示すグラフである。
図６を参照すれば、癌抗原（Ａｇ）は正常状態で肺癌０～III期まで変化量が多くなく、肺癌がよほど進行された肺癌III～IV期になってからこそ高い変化量を示すので、少なくとも肺癌０～I期の初期段階では抗原検査だけでは正常状態と肺癌発病状態とを区分して診断することが容易でないことが分かる。これに対し、自己抗体（ＡＡｂ）は初期段階である肺癌０～I期に正常状態に比べて５～１０倍以上増加して明確な変化量を示すので、肺癌を初期（０～I期）に診断することができることを示している。
本発明によれば、生物学的試料中の抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体とＣＹＦＲＡ２１－１抗原マーカーの増減を正確に検出できるように、抗体に遺伝子が結合された形態の「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子」を用いており、溶液上で抗原－抗体－遺伝子複合体が形成された後、遺伝子が固定された固体基質及び抗原－抗体－遺伝子複合体が固定されるので、生物学的試料中における如何なる干渉現象や非特異的な反応なしに固定されることができ、これにより血液中のマーカーの量的変化を正確に測定することができる。
以下の実施例は、本発明を具体的に説明するために提供されるものであって、本発明を限定することを意図しない。
ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子結合体の製造及び精製
ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子結合体に用いた物質は下記表１に示し 、使用したターゲット遺伝子（ＴＤ）の塩基配列は下記表２に示す
Figure 0006998626000001
Figure 0006998626000002
 ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子結合体は、表１の物質を使用して公知の方法によって製造及び精製して。ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子結合体を濃度２ｍｇ／ｍｌで８０μl得た。（韓国登録特許第１０－１６８２３４７号、実施例１、図１参照）
蛍光標識物質が付着した抗体－測定マーカー結合体の製造及び精製
測定マーカーとして蛍光物質を使用して「抗体－測定マーカー」結合体を製造したし、その製造に使用された物質を下記表３に示す。
Figure 0006998626000003
Figure 0006998626000004
表４には実施例１及び２で得られた生成物の濃度及び体積がそれぞれ記載されている。
肺癌診断用抗体組成物Ａ及びＢの製造
表５に記載された物質を使用して、抗体組成物Ａ及びＢを製造した。抗体の濃度はいずれも３００μl／ｍｌに希釈して使用した。
Figure 0006998626000005
 ５ｍｌのチューブ（ｔｕｂｅ）にそれぞれの構成物質を使用量によって添加して混合した。
肺癌診断用オリゴ遺伝子の固定化及び９ＧＤＮＡメンブレンの製造
下記表６に探針遺伝子の塩基配列を示す。
Figure 0006998626000006
 肺癌診断用オリゴ遺伝子の固定化及び９ＧＤＮＡメンブレンの製造に使用した物質は、表６に示しており、公知の方法によって図９のように９ＧＤＮＡメンブレンを製造した。（韓国登録特許第１０－０８８３７６３号、実施例２及び３参照）
ＣＹＦＲＡ２１－１抗原タンパク質及び抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体の検出
ＣＹＦＲＡ２１－１抗原タンパク質及び抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体の検出方法に関する概念は、図４及び図５に、その実験過程は図１０及び図１１に図式的に説明されている。
１）血液サンプル及び使用物質の準備
正常人と癌患者の血液サンプルは、正常２００検体、肺癌I～IV期５０検体を用い、原子力病院（KOREA CANCER CENTER HOSPITAL）から入手した（IRB#KIRAMS2018-10-006、2018-06-016）サンプルを利用した。癌患者のサンプルは、組職検査において肺癌を確定診断された患者の血漿サンプルを利用した。正常人のサンプルは、健康検診に参加した正常人のサンプルを利用した。実験に使用した物質は下記表７に示している 。
Figure 0006998626000007
２）サンプル混合及びインキュベーション
イ．ＣＹＦＲＡ２１－１抗原検出用抗原検出用０．２ｍｌサイズのマイクロチューブに標準物質２０μlを入れ、表７に示すように、準備した１００μlの抗体組成物Ａを混合して１１分間常温でインキュベーションした。
ロ．抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原検出用
自己抗体－抗原検出用０．２ｍｌサイズのマイクロチューブに標準物質２０ml を入れ、表７に示すように、準備した１００μlの抗体組成物Ｂを混合して１１分間常温でインキュベーションした。
３）試料負荷及び交雑反応
イ．ＣＹＦＲＡ２１－１抗原検出用
反応物１２０μlが入っている抗原検出用の０．２ｍｌサイズのマイクロチューブにＲ ｂｕｆｆｅｒを６０μl添加した後、試料をすべて採取して、１8０μlを図１２に示す抗原検出用の９ＧＤＮＡメンブレンのサンプルポートにローディングした後、１１分間常温で交雑反応した。
ロ．抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原検出用
反応物１２０μlが入っている自己抗体－抗原検出用の０．２ｍｌサイズのマイクロチューブにＲ ｂｕｆｆｅｒを６０μl添加後、試料をすべて採取して図１２に示す自己抗体－抗原検出用の９ＧＤＮＡメンブレンのサンプルポートに１８０μlをローディング後１１分間常温で交雑反応した。
４）洗浄及びスキャン
イ．ＣＹＦＲＡ２１－１抗原検出用
１８０μlのＷ ｂｕｆｆｅｒを抗原検出用の９ＧＤＮＡメンブレンの洗浄ポートにローディング後、１１分間常温で洗浄してから、図１３に示したように１Ｄスキャナーを用いて読み出した 。
ロ．抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原検出用
１８０μlのＷ ｂｕｆｆｅｒを自己抗体－抗原検出用の９ＧＤＮＡメンブレンの洗浄ポートにをローディング後、１１分間常温で洗浄してから、図１３に示したように１Ｄスキャナーを用いて読み出した。
５）結果の分析
５．１）ＣＹＦＲＡ２１－１抗原検出に対する蛍光感度の結果
抗体組成物Ａを用いて正常人と肺癌患者の血液サンプルに対するＣＹＦＲＡ２１－１抗原検出に対する蛍光感度を確認して下記表８に示している。
Figure 0006998626000008
 ＣＹＦＲＡ２１－１抗原に対する蛍光感度の平均値は、正常人の血液サンプルで２６７４５で現われ、肺癌患者の血液サンプルで１９９３５で現われることを確認した。
５．２）抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原検出に対する蛍光感度
抗体組成物Ｂを利用して正常人と肺癌患者の血液サンプルに対する抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原検出に対する蛍光感度を確認して下記表９に示す。
Figure 0006998626000009
 ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原に対する蛍光感度の平均値は正常人の血液サンプルで２６８６２で現われ、肺癌患者の血液サンプルで４７１６７で現われることを確認した。
５．３）血液サンプルで抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原／ＣＹＦＲＡ２１－１抗原の比率の確認
図７に示している ように、腫瘍マーカーＣＹＦＲＡ２１－１抗原検査だけでは正常と癌を区分することができない。大部分の癌関連抗原（腫瘍マーカー）は癌が発生すると血液中の量的増加が現われる。癌病期０～III期までの量的変化が非常に小さく、IV期段階になってからこそ量的変化の差が現われるため、一般的に正常と癌との区分が難しく、特に癌０～I期である場合には一層区分しにくい。
抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体は肺癌に対するＣＹＦＲＡ２１－１抗原が存在する時に特異的に反応する自己抗体であって、癌０～I期でその量的増加が正常時に比べて５～１０倍以上増加するようになる。
このため、正常と癌の区分において、抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原とＣＹＦＲＡ２１－１抗原との比率を利用して正常に比して一定数値（ｃｕｔ ｏｆｆ）以上なら癌と判定することができる。
Figure 0006998626000010
 蛍光感度の結果は表１０に示しており、癌病期による分析結果は図１４に示している 。ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体／抗原の比率（Ｂ／Ａ）が、それぞれ正常人が１．０３、肺癌患者が２．１５で確認された。Ｂ／Ａの比率値のカットオフ １．５を基準に１．５以下は正常と判定し、１．５以上は肺癌と判定した。２００人の正常人に対して９１．７％の特異度を得ており、５０人の癌患者を対象としてI期７６％、II期８０％、III期７７％、IV期５０％の感度を得た。
自己抗体が急激に増加する時期である癌病期０～I期では、７６％感度のレベルで効果が非常に大きく現われて、これによって肺癌早期診断用キット開発に有効であることを証明した。
本明細書でよく使われる用語に対する簡単な説明を次のように付記するが、これらは本発明の理解を助けるために提供されるもので、本発明の範囲を限定するか制限する意図で使われてはならない。
１．９Ｇメンブレン：連続した９個のグアニンが含まれたオリゴ遺伝子が固定化される表面がケルリックスアレン誘導体に変性されたガラス繊維メンブレン。
２．９ＧＤＮＡメンブレン：連続した９個のグアニンが含まれたオリゴ遺伝子が固定化されたガラス繊維メンブレン。
３．抗原（Ａｎｔｉｇｅｎ、Ａｇ）：免疫反応を起こして抗体を生産させる物質、一般的に体内で異物として見なされる物質の総体。
４．ＣＹＦＲＡ２１－１抗原：肺癌関連腫瘍マーカー。
５．抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－遺伝子：抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体に遺伝子が結合された抗体－遺伝子結合体。
６．抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－Ｃｙ５：抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体にＣｙ５－ｄｙｅ（蛍光マーカー）が付着した抗体－蛍光マーカー結合体。
７．自己抗体（Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ、ＡＡｂ）：自分の体成分と特異的に反応する抗体を意味し、自己抗体またはオート抗体とも言う。
８．抗ＣＹＦＲＡ－２１－１自己抗体（ａｎｔｉ－ＣＹＦＲＡ２１－１Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ）：肺癌関連タンパク質であるＣＹＦＲＡ２１－１抗原に特異的に反応する抗体。
９．抗ＣＹＦＲＡ－２１－１自己抗体－抗原結合体：抗ＣＹＦＲＡ－２１－１自己抗体とＣＹＦＲＡ２１－１抗原とが結合された形態。
１０．抗ヒトＩｇＧ抗体（ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ）：ヒト抗体に特異的に反応する抗体。
１１．抗ヒトＩｇＧ抗体－Ｃｙ５：抗ヒトＩｇＧ抗体にＣｙ５－ｄｙｅ（蛍光マーカー）が付着した抗体－蛍光マーカー結合体。

Claims (15)

  1. 「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－ＤＮＡオリゴヌクレオチド結合体」及び「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー結合体」を含有する抗体組成物Ａと、
    「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－ＤＮＡオリゴヌクレオチド結合体」及び「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー結合体」を含有する抗体組成物Ｂと、
    を含む肺癌バイオマーカーを検出するための組成物であって、
    前記抗体組成物Ａ及び前記抗体組成物Ｂは別個に使用され、
    前記ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、バイオチップの固形支持体に固定されたＤＮＡプローブとの相補的な結合力を有する、組成物。
  2. 前記測定マーカーは発色酵素、蛍光物質、蛍光ビーズ、放射性アイソトープ、及びコロイドからなる群から選択されたいずれか一つであることを特徴とする、請求項１記載の肺癌バイオマーカーを検出するための組成物。
  3. 前記測定マーカーは、蛍光物質から選択されることを特徴とする、請求項２記載の肺癌バイオマーカーを検出するための組成物。
  4. 人体から分離された血液試料において、請求項１記載の組成物を使用する肺癌バイオマーカーを検出するための方法であって、
    （ａ）「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－ＤＮＡオリゴヌクレオチド結合体」と「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー結合体」とを含む抗体組成物Ａを利用して、前記血液試料中の「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」の有無または濃度を測定する段階；
    （ｂ）「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－ＤＮＡオリゴヌクレオチド結合体」と「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー結合体」とを含む抗体組成物Ｂを利用して、前記血液試料中の「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」の有無または濃度を測定する段階；及び
    （ｃ）前記（ａ）で得られた濃度及び前記（ｂ）で得られた濃度との比率を確認する段階
    を含む、肺癌バイオマーカーを検出するための方法。
  5. 前記（ａ）において、抗体組成物Ａに含有された「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－ＤＮＡオリゴヌクレオチド結合体」及び「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー結合体」が血液試料中の「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」と結合して「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－ＤＮＡオリゴヌクレオチド結合体」：「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー結合体」複合体を形成させて、「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」の有無または濃度を測定することを特徴とする、請求項４記載の肺癌バイオマーカーを検出するための方法。
  6. 前記（ｂ）において、抗体組成物Ｂに含有された「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－ＤＮＡオリゴヌクレオチド結合体」及び「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー結合体」が血液試料中の「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」と結合して「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－ＤＮＡオリゴヌクレオチド結合体」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原」：「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー結合体」複合体を形成させて、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原結合体」の有無または濃度を測定することを特徴とする、請求項４記載の肺癌バイオマーカーを検出するための方法。
  7. 前記（ｃ）において、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－ＤＮＡオリゴヌクレオチド結合体」：「ＣＹＦＲＡ２１－１抗原」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１二次抗体－測定マーカー結合体」複合体と、「抗ＣＹＦＲＡ２１－１一次抗体－ＤＮＡオリゴヌクレオチド結合体」：「抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体－抗原」：「抗ヒトＩｇＧ抗体－測定マーカー結合体」複合体との比率を確認することを特徴とする、請求項４記載の肺癌バイオマーカーを検出するための方法。
  8. 前記血液試料は、全血、血清、及び血漿からなる群から選択されたいずれか一つであることを特徴とする、請求項４記載の肺癌バイオマーカーを検出するための方法。
  9. 前記（ａ）及び（ｂ）で形成された抗原－抗体の複合体は、固形支持体に固定されることを特徴とする、請求項４記載の肺癌バイオマーカーを検出するための方法。
  10. 前記固形支持体は、９Ｇメンブレンまたは９ＧＤＮＡメンブレンを含むことを特徴とする、請求項９記載の肺癌バイオマーカーを検出するための方法。
  11. 前記抗ＣＹＦＲＡ２１－１自己抗体に特異的な抗原は、ＣＹＦＲＡ２１－１タンパク質であることを特徴とする、請求項４記載の肺癌バイオマーカーを検出するための方法。
  12. 前記測定マーカーは、発色酵素、蛍光物質、蛍光ビーズ、放射性アイソトープ、及びコロイドからなる群から選択されたいずれか一つであることを特徴とする、請求項４記載の肺癌バイオマーカーを検出するための方法。
  13. 前記測定マーカーは、蛍光物質から選択されることを特徴とする、請求項１２記載の肺癌バイオマーカーを検出するための方法。
  14. 請求項１記載の肺癌バイオマーカーを検出するための組成物及びバイオチップを含む肺癌バイオマーカーを検出するためのキット。
  15. 前記バイオチップは、９Ｇメンブレンまたは９ＧＤＮＡメンブレンを含むことを特徴とする、請求項１４記載の肺癌バイオマーカーを検出するためのキット。
JP2020551472A 2019-02-22 2019-11-13 自己抗体－抗原結合体を利用した肺癌診断用免疫学的組成物、これを用いた肺癌診断方法及びこれを含む肺癌診断用キット Active JP6998626B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190021469A KR102172016B1 (ko) 2019-02-22 2019-02-22 항-cyfra21-1 자가항체-항원 결합체 및 cyfra21-1 항원 마커의 검출방법 및 이들 마커의 비율을 이용한 폐암 진단키트
KR10-2019-0021469 2019-02-22
PCT/KR2019/015477 WO2020171346A1 (ko) 2019-02-22 2019-11-13 자가항체-항원 결합체를 이용한 폐암 진단용 면역학적 조성물, 이를 사용한 폐암 진단 방법 및 이를 포함하는 폐암 진단용 키트

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2021517250A JP2021517250A (ja) 2021-07-15
JP6998626B2 true JP6998626B2 (ja) 2022-02-04

Family

ID=72144315

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020551472A Active JP6998626B2 (ja) 2019-02-22 2019-11-13 自己抗体－抗原結合体を利用した肺癌診断用免疫学的組成物、これを用いた肺癌診断方法及びこれを含む肺癌診断用キット

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20210003576A1 (ja)
EP (1) EP3929586A4 (ja)
JP (1) JP6998626B2 (ja)
KR (1) KR102172016B1 (ja)
CN (1) CN111610330A (ja)
WO (1) WO2020171346A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102306097B1 (ko) * 2021-07-13 2021-09-28 (주)바이오메트릭스 테크놀로지 고감도 면역접합체, 이의 제조방법, 이를 포함한 체외 진단시약 및 체외 진단키트
KR102506855B1 (ko) 2022-09-22 2023-03-06 경북대학교 산학협력단 신호 라벨링 프로브를 이용한 암진단 면역 센서 및 이를 채용한 암질환 진단칩

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011099435A1 (ja) 2010-02-12 2011-08-18 日東紡績株式会社 Ｋｕ８６とその自己抗体との複合体の免疫測定方法、それに用いるキット及びそれを用いた癌判定方法
JP2011163992A (ja) 2010-02-12 2011-08-25 Nitto Boseki Co Ltd Ｆｔｃｄとその自己抗体との複合体の免疫測定方法、それに用いるキット及びそれを用いた癌判定方法
JP2011247787A (ja) 2010-05-28 2011-12-08 Nitto Boseki Co Ltd コフィリンとその自己抗体との複合体の免疫測定方法、それに用いるキット及びそれを用いた癌判定方法
US20130225442A1 (en) 2010-10-20 2013-08-29 Rush University Medical Center Lung Cancer Tests
US20150072890A1 (en) 2013-09-11 2015-03-12 20/20 Gene Systems, Inc. Methods and compositions for aiding in the detection of lung cancer
KR101682347B1 (ko) 2014-03-24 2016-12-06 (주)바이오메트릭스 테크놀로지 심질환 바이오마커의 표준농도-감도 테이블에 의한 심질환의 진행상태 및 치료상태를 모니터링하는 방법 및 이를 위한 바이오칩
JP2020526762A (ja) 2017-07-13 2020-08-31 マグアレイ，インコーポレイテッド 自己抗体の定量方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100883763B1 (ko) 2007-11-15 2009-02-25 (주)바이오메트릭스 테크놀로지 아미노캘릭스아렌 유도체와 이민캘릭스아렌 유도체의단분자층으로 변성된 유리섬유 및 그의 제조방법과, 변성된유리섬유에 유전자를 고정화한 유리섬유 및 그의제조방법, 그리고 유전자 고정화된 유리섬유를 이용한유전자 형분석용 스트립 제조방법
WO2010098435A1 (ja) * 2009-02-27 2010-09-02 国立大学法人東京大学 癌転移部位検出方法、検出用キットおよびこれらを用いる癌の治療方法
CN106950376A (zh) * 2017-04-06 2017-07-14 广州恒泰生物科技有限公司 用于肺癌早中期快速诊断化学发光试剂盒

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011099435A1 (ja) 2010-02-12 2011-08-18 日東紡績株式会社 Ｋｕ８６とその自己抗体との複合体の免疫測定方法、それに用いるキット及びそれを用いた癌判定方法
JP2011163992A (ja) 2010-02-12 2011-08-25 Nitto Boseki Co Ltd Ｆｔｃｄとその自己抗体との複合体の免疫測定方法、それに用いるキット及びそれを用いた癌判定方法
JP2011247787A (ja) 2010-05-28 2011-12-08 Nitto Boseki Co Ltd コフィリンとその自己抗体との複合体の免疫測定方法、それに用いるキット及びそれを用いた癌判定方法
US20130225442A1 (en) 2010-10-20 2013-08-29 Rush University Medical Center Lung Cancer Tests
US20150072890A1 (en) 2013-09-11 2015-03-12 20/20 Gene Systems, Inc. Methods and compositions for aiding in the detection of lung cancer
KR101682347B1 (ko) 2014-03-24 2016-12-06 (주)바이오메트릭스 테크놀로지 심질환 바이오마커의 표준농도-감도 테이블에 의한 심질환의 진행상태 및 치료상태를 모니터링하는 방법 및 이를 위한 바이오칩
JP2020526762A (ja) 2017-07-13 2020-08-31 マグアレイ，インコーポレイテッド 自己抗体の定量方法

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GUPTA S.，Evaluation of autoantibody signatures in meningioma patients using human proteome arrays，Oncotarget，2017年，Vol.8 No.35，Page.58443-58456
Keum-Soo Song，9G DNAChip: a platform for the efficient detection of proteins，Chem. Commun，2011年，Vol.47，Page.7716-7718
Keum-Soo Song，Quantification of CYFRA 21-1 and a CYFRA 21-1anti-CYFRA 21-1 autoantibody immune complex for detection of early stage lung cancer，Chem. Commun，2019年09月04日，Vol.55 No.68，Page.10060-10063
LUO JinPing，Rapid detection of Cyfra 21-1 by optical-biosensing based on chemiluminescence immunoassay using bio-functionlized magnetic nanocomposites，Chin Sci Bull，2013年04月15日，Vol.58，Page.2567-2569
P. Zaenker，Autoantibody Production in Cancer―The Humoral Immune Response toward Autologous Antigens in Cancer Patients，Autoimmunity Reviews，2016年，Vol.15，Page.477-483
Wonho Choe，9G TestTM Cancer/Lung: A Desirable Companion to LDCT for Lung Cancer Screening，Cancers，2020年10月30日，Vol.12，Page.3192
Yongjung Park，Usefulness of Serum Anti-p53 Antibody Assay for Lungv Cancer Diagnosis，Arch Pathol Lab Med，2011年，Vol.135，Page.1570-1575
鉢村和男，早期肺癌患者を対象とした多種既知腫瘍マーカーに対する自己抗体の同時測定とその臨床的有用性，臨床病理，2015年10月20日，Vol.63 補冊，Page.224

Also Published As

Publication number Publication date
KR102172016B1 (ko) 2020-10-30
WO2020171346A1 (ko) 2020-08-27
JP2021517250A (ja) 2021-07-15
KR20200102886A (ko) 2020-09-01
CN111610330A (zh) 2020-09-01
EP3929586A4 (en) 2022-11-09
US20210003576A1 (en) 2021-01-07
EP3929586A1 (en) 2021-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240003877A1 (en) Devices, systems, and methods for the detection of a target analyte using magnetic focus lateral flow immunoassay techniques
JP4222756B2 (ja) 固相生体分子分析調製同定システム用コロイド組成物
Yang et al. Improvement of protein immobilization for the elaboration of tumor-associated antigen microarrays: application to the sensitive and specific detection of tumor markers from breast cancer sera
WO2010065968A1 (en) Cancer detection markers
JP7244883B2 (ja) 特定の比率を前立腺癌の指標とする方法、前立腺癌の判定を行うためのデータを得る方法、及び、前立腺癌判定用キット
WO2011085165A2 (en) Ca-125 immune complexes as biomarkers of ovarian cancer
JP6998626B2 (ja) 自己抗体－抗原結合体を利用した肺癌診断用免疫学的組成物、これを用いた肺癌診断方法及びこれを含む肺癌診断用キット
JP2023040024A (ja) シグナル発生型デジタルアッセイにおけるノイズを低減する方法
CN106680515B (zh) 用于肺癌诊断的多分子标志物组合
Gumus et al. Lateral flow assays for detection of disease biomarkers
WO2011126482A1 (en) Immunoassay for the diagnosis of prostate cancer
EP3215851B1 (en) Lung cancer sub-typing method
US20170097352A1 (en) Immunoglobulin-bound extracellular vesicles and uses thereof
US20220214365A1 (en) Methods of Detecting Anti-folic acid Antibodies and Uses Thereof
JP7253282B2 (ja) 高感度免疫接合体、この製造方法、これを含む体外診断試薬及び体外診断キット
Kim et al. Clinical studies of Ci-5, Sol-gel encapsulated multiplex antibody microarray for quantitative fluorometric detection of simultaneous five different tumor antigens
CN113267626B (zh) 一种用于高危人群贲门腺癌早期筛查的试纸条
US20230384297A1 (en) Electrothermal flow-enhanced electrochemical magneto-immunosensor
EP4278188A1 (en) Devices and methods for diagnosising thyroid medical conditions
JP6602481B2 (ja) 予後診断方法及び該方法において有用なキット
JP2024059621A (ja) がんの診断及び治療のための組成物及び方法
KR20240041943A (ko) 전립선암에 대한 위험 예측 모델
WO2022226496A1 (en) Devices, methods, and kits for diagnosing sars cov-2 infection
WO2023193109A1 (en) Biomarkers for the determination of sample adequacy and lung cancer metastases
KR20230018174A (ko) 대장암 진단용 통합 자기 전기화학장치 및 그 방법

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20200917

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20210817

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20211116

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20211130

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20211214

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6998626

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150