CN108982870A - 一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1和试剂R2。通过在试剂R2中添加EDTA‑Na2，提高了试剂的稳定性，线性相关性较好，试剂的准确度也较好，有利于在市场中进一步的推广使用。

Description

一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种尿微量白蛋白 免疫透射比浊法检测试剂盒。
背景技术
微量白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白，白蛋白是一种血液中的正 常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量白蛋白尿可 以反映肾脏异常渗漏蛋白质，尿微量白蛋白的增高多见于糖尿病肾病、高 血压、妊娠子痫前期，是肾损伤的早期敏感指标。通常应用尿微量蛋白指 标来监测肾病的发生，尿微量蛋白的检测是早期发现肾病最敏感、最可靠 的诊断指标。
尿微量白蛋白可以评估肾脏受损程度：当发现尿微量白蛋白在 20mg/L-200mg/L范围内，尿常规尿蛋白的显示为阴性(-)或(+-)，就 属于微量白蛋白尿，这个时候说明肾脏已经损伤，如果患者能够经过规范 的修复肾单位，逆转纤维化治疗，尚可彻底修复肾小球，消除蛋白尿。而 当尿中微量白蛋白超过200mg/L时，尿常规测试尿蛋白阳性(+)～(+++)，此时证明机体已有大量白蛋白漏出，可能出现低蛋白血症，如果不及时进 行医治，就会进入尿毒症期。
尿微量白蛋白的检测方法主要有免疫浊度法，免疫荧光法，放射免疫 法，酶免疫法等。国内目前采用最多的尿微量白蛋白检测方法仍为ELISA 法，但酶标法的操作步骤多，故重复性较差。本发明提供一种免疫透射比 浊法检测尿微量白蛋白的试剂盒，优化其反应体系，使其重复性好、稳定 性好、可进行批量样本全自动化检测。
发明内容
本发明的目的是提供一种稳定的用于检测尿微量白蛋白的试剂盒，该 试剂盒采用免疫透射比浊法进行检测。该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳 定性、线性相关性比常规的检测试剂盒好，有利于试剂在临床上的推广应 用。
基本原理：
样本中白蛋白与试剂中相应的抗体相结合，立即形成抗原-抗体复合 物，并形成一定的浊度。该浊度的高低在一定量的抗体存在时与抗原含量 成正比。通过与同样处理的校准液比较，计算未知样本白蛋白的含量。
本发明是通过以下步骤得到的：
一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，包含试剂R1和试剂 R2；
试剂R1组成为：200mmol/L pH为7.5磷酸盐缓冲液、50mmol/L氯 化钠、2％表面活性剂、10mmol/L叠氮钠；试剂R2组成为：200mmol/L pH为7.5磷酸盐缓冲液、2％胶乳颗粒、2mg/mL羊抗人白蛋白抗体、 50mmol/L金属离子螯合剂、10mmol/L叠氮钠。
进一步的，所述表面活性剂为TRITON X-100。
进一步的，所述金属离子螯合剂为EDTA-Na2。
进一步的，所述胶乳颗粒为聚苯丙烯，粒径为50-150nm。
进一步的，使用全自动生化分析仪采用终点法进行测定，检测主波长 为415nm。
进一步的，所述试剂R1和试剂R2使用时的比例为R1:R2＝250:50。
本发明的试剂盒在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上进行，其具体使用 方法见图3。
加入生理盐水、样本或校准品15μl，再加入250μl的R1试剂，预孵 育5min后读取吸光度A1，再加入50μl的R2试剂，反应5min后读取吸 光度A2，并计算ΔA。
本发明的有益效果：
1)试剂R2添加EDTA-Na2，增强了试剂的稳定性，而且不会对试剂 的准确度产生影响；
2)试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，有利于该试 剂在市场中进一步的推广。
附图说明
图1为两种试剂的相关性曲线图；
图2为两种试剂效期稳定性曲线图；
图3为试剂盒在全自动生化分析仪上的具体使用方法。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：
实施例1
一种常规的尿微量白蛋白检测试剂盒，它包括试剂R1和试剂R2。
其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
本实施例所述试剂R1和试剂R2，配置时需先加入缓冲物质，调到适 当pH值后，再添加其它物质。本实施例所述试剂盒，在使用时，其测定 方法是采用具有双试剂功能的迈瑞800全自动生化分析仪，利用终点法进 行测定，检测主波长为415nm，操作如下：
加入生理盐水、样本或校准品15μl，再加入250μl的R1试剂，预孵 育5min后读取吸光度A1，再加入50μl的R2试剂，反应5min后读取吸 光度A2，并计算ΔA。
ΔA＝A2-A1
尿微量白蛋白含量(mg/L)＝(ΔA测定÷ΔA标准)×C标准。
ΔA测定：检测样本吸光度变化 ΔA标准：标准品吸光度变化
实施例2
准确度验证试验：将实施例1的尿微量白蛋白检测试剂作为实验组， 市场上获得认可的一种准确度好、稳定性好的尿微量白蛋白检测试剂盒作 为对照组进行检测，对20个临床尿液样本进行检测，检测结果如表1所 示。获得了两种试剂的相关性曲线(如图1所示)，结果表明，两组试剂 盒的相关系数为0.9991，说明两者相关性比较好。证明本发明试剂盒添加 及更改的组分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
表1实施例1试剂与市场认可的尿微量白蛋白检测试剂盒对比检测 结果
实施例3
线性相关性验证试验：选取尿微量白蛋白含量为350mg/L的高值样 本，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，浓度依次为350 mg/L、280mg/L、210mg/L、140mg/L、70mg/L、0mg/L。分别利用实施 例1试剂及对照组试剂进行检测，每个浓度的样本分别测定三次，分别取 平均值，检测结果如表2所示。
表2实施例1试剂线性相关验证实验检测结果
如上表所示，实施例1与对照组试剂检测结果相关系数均大于0.990， 且实施例1试剂检测结果的相关系数略大于对照组试剂检测结果的相关系 数，这表明本发明试剂具有更好的线性相关性。
实施例4
稳定性验证实验：在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂， 检测实施例1及对照组试剂的稳定性。两组试剂每月选取同一样本测定高 值样本，测定三次取平均值，检测数据如表3所示。
表3实施例1试剂稳定性验证实验检测结果
实验结果显示，实施例1试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境 中贮存15个月稳定，而对照组试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环 境中贮存11个月后开始不稳定，说明本发明试剂添加EDTA-Na2后稳定性 增强。
综上所述，本发明提供的尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒， 试剂R2中添加EDTA-Na2，提高了试剂的稳定性，线性相关性较好，试 剂的准确度也较好。因此，本发明提供的尿微量白蛋白免疫比浊法检测试 剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普 通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改 进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，其特征在于，试剂组成如下：
试剂R1组成为：200mmol/L pH为7.5磷酸盐缓冲液、50mmol/L氯化钠、2％的表面活性剂、10mmol/L叠氮钠；
试剂R2组成为：200mmol/L pH为7.5磷酸盐缓冲液、2％胶乳颗粒、2mg/mL羊抗人白蛋白抗体、50mmol/L金属离子螯合剂、10mmol/L叠氮钠。
2.根据权利要求1所述的尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的缓冲液为25℃、pH为7.5的磷酸盐缓冲液。
3.根据权利要求1所述的尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2的缓冲液为25℃、pH为7.5的磷酸盐缓冲液。
4.根据权利要求1所述的尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为TRITON X-100。
5.根据权利要求1所述的尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述金属离子螯合剂为EDTA-Na2。
6.根据权利要求1所述的尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述胶乳颗粒为聚苯丙烯，粒径为50-150nm。
7.根据权利要求1所述的尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于，使用全自动生化分析仪采用终点法进行测定，检测主波长为415nm。
8.根据权利要求1所述的尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2使用时的比例为R1:R2＝250:50。
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