CN114414508A - 一种尿微量白蛋白检测试剂盒及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
一种尿微量白蛋白检测试剂盒，包括第一试剂、第二试剂和稀释液，所述第一试剂包括磷酸缓冲盐溶液和聚乙二醇6000，所述第二试剂还包括聚氧乙烯月桂醚、叠氮钠和羊抗人尿微量白蛋白抗体。本发明还公开上述试剂盒的使用方法。本发明试剂盒利用尿液中的微量白蛋白与羊抗人抗白蛋白抗体在液相中反应生成mAlb抗原抗体复合物，再通过吸光度值来显示尿液中的尿微量白蛋白含量，其方法简单同时使用的试剂都是常见试剂，便于对尿微量白蛋白的日常检查；同时用于检测尿微量白蛋白时准确性高且稳定性好，利用大规模使用。
Description
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种尿微量白蛋白检测试剂盒及其使用方法。
背景技术
目前，患糖尿病、高血压、心脑血管疾病的人数日益增多，随着病程的发展，肾脏受累的可能性与受累的程度也不断上升。通常，血尿素和血肌酐的测定值正常时并不能排除肾脏的受损，而尿常规蛋白测定结果为阳性时，肾脏的损伤往往已达到不可恢复的阶段，因此尿微量白蛋白的测定已越来越多地用做肾组织损伤的早期诊断指标。
尿微量白蛋白是大量疾病的诊断指标，及时的治疗干预可降低微量白蛋白水平，改善原发疾病的预后：
1.作为糖尿病肾病的早期诊断：
糖尿病肾病是糖尿病的重要并发症之一，在早期存在可逆性，如果能及早发现并进行干预治疗，肾脏损伤有可能恢复，通过检测糖尿病患者尿微量白蛋白帮助其早期识别及监测糖尿病肾病的发生，可以做为诊断糖尿病肾病的指标之一。
2.作为心血管疾病的早期诊断：
已有研究表明，微量白蛋白尿的是心、脑、肾及血管损伤的标志，因此它被认为能促进动脉硬化的形成，是动脉硬化的早期表现。尿微量白蛋白与心血管疾病危险增加和死亡增加密切相关。尿微量白蛋白与全身血管病变的相关性可能是因为非酶糖化蛋白质聚集在肾小球基底膜，使肾小球滤过屏障通透性增加，出现尿微量白蛋白，同时也积聚在全身大血管及微血管壁上，致大动脉中层脂质堆积和微血管病变。尿微量白蛋白的出现不仅是急性应激反应的结果，而且与全身血管功能不良，从而引起血管通透性增加有关，急性心肌梗死时应激反应引起血管急性损伤，会出现短暂性尿微量白蛋白增加。尿微量白蛋白的测定对AMI患者的预后有预测价值。因此尿微量白蛋白不仅是判断临床糖尿病肾病的一个重要指标，也是心血管病变的一个预测指标。
3.作为高血压肾病损害的早期诊断：
最近一些临床研究对高血压与尿微量白蛋白增高的相关性进行了大规模的临床观察，表明尿微量白蛋白是高血压肾脏损害的早期诊断指标。原发性高血压患者尿微量白蛋白明显增高，主要与收缩压相关，对原发性高血压患者的研究表明，尿微量白蛋白阳性患者心肌肥厚、空间隔增厚、心律失常的发生率高于尿微量白蛋白阴性者，两者之间有明显的统计学差异。目前认为对尿微量白蛋白阳性者必须强化高血压的治疗，其血压最好控制在130/80mmHg以下。
发明内容
为此，本发明的所要解决的技术问题是现有对尿微量白蛋白的日常检查问题，进而提供了一种尿微量白蛋白检测试剂盒及其使用方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
本发明提供一种尿微量白蛋白检测试剂盒，包括第一试剂、第二试剂和稀释液，所述第一试剂包括磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液)和聚乙二醇6000(PEG-6000)，所述第二试剂还包括聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)、叠氮钠和羊抗人尿微量白蛋白抗体(羊抗人MALB抗体)。
进一步地，所述稀释液为磷酸缓冲盐溶液。
进一步地，所述第一试剂中磷酸缓冲盐溶液为0.01mol/L，聚乙二醇6000为25ml/L；
所述第二试剂中聚氧乙烯月桂醚为300g/L，叠氮钠为300g/L，羊抗人尿微量白蛋白抗体为300mL/L,溶剂为去离子水；
所述稀释液中磷酸缓冲盐溶液为0.01mol/L。
优选地，包括50份第一试剂和50份第二试剂，每份第一试剂为400μL、每份第二试剂为20μL，所述稀释液为100mL。
本发明还提供上述尿微量白蛋白检测试剂盒的使用方法，将尿液样品取80μL加入2mL稀释液进行稀释，然后加入400μL第一试剂和20μL第二试剂充分反应，使用分光光度仪在340nm处读取吸光度值，根据标准曲线计算尿液样品中的尿微量白蛋白含量。
进一步地，分别取一系列标准浓度的尿微量白蛋白溶液80μL加入2mL稀释液进行稀释，然后加入400μL第一试剂和20μL第二试剂充分反应，使用分光光度仪在340nm处读取吸光度值，根据标准溶液的浓度和对应的吸光度值，得到所述标准曲线。
本发明具有如下优点：
(1)本发明试剂盒利用尿液中的微量白蛋白与羊抗人抗白蛋白抗体在液相中反应生成mAlb抗原抗体复合物，再通过吸光度值来显示尿液中的尿微量白蛋白含量，其方法简单同时使用的试剂都是常见试剂，便于对尿微量白蛋白的日常检查。
(2)本发明用于检测尿微量白蛋白时准确性高且稳定性好，利用大规模使用。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
本发明使用的羊抗人尿微量白蛋白抗体来自上海钹乐诗生物技术有限公司。
实施例1
本实施例提供一种试剂盒的制备方法，具体步骤如下：
(1)取2mL0.1mol/L的PBS缓冲液和0.5mL PEG-6000，加入去离子水定容至20mL，充分混合后平均分为50份，每份400μL的第一试剂；
(2)取0.3gBrij-35、0.3g叠氮钠和0.3mL羊抗人MALB抗体，加入去离子水定容至1mL，充分混合后平均分为50份，每份20μL的第二试剂；
(3)取10mL0.1mol/L的PBS缓冲液，加入去离子水定容至100mL，充分混合后得到稀释液；
(4)对上述步骤中得到的第一试剂、第二试剂以及稀释液取贴签，装盒，并附上说明书；
(5)对得到的试剂盒贴盒封口签。
实施例2
本实施例为实施例1得到的试剂盒的应用，测量3份临床尿液样品，具体步骤如下：
(1)制备一系列标准样品的尿微量白蛋白溶液，其尿微量白蛋白浓度依次为10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、100mg/L、150mg/L、250mg/L；
(2)取80μL一系列标准样品的尿微量白蛋白溶液加入2mL稀释液进行稀释，然后加入400μL第一试剂和20μL第二试剂充分反应，使用分光光度仪在340nm处读取吸光度值，其结果如下表1所示：
表1一系列标准样品的尿微量白蛋白溶液的吸光度
由表1可得标准曲线y＝0.0021x+0.0024，R2＝0.999，其中y为吸光度，x为尿微量白蛋白浓度；
(3)取80μL临床尿液样品加入2mL稀释液进行稀释，然后加入400μL第一试剂和20μL第二试剂充分反应，使用分光光度仪在340nm处读取吸光度值，对3份临床尿液样品平行测试10组，其结果如下表2所示：
表2人尿样品平行测试结果
由表2可知，本发明尿微量白蛋白浓度测试结果偏差较小。
试验例1
使用上海钹乐诗生物技术有限公司的检测盒对实施例2中检测的临床尿液样品进行检测，其测试结果分别为25.8mg/L、39.3mg/L、54.2mg/L,和表2中的均值相比，说明本发明得到的试剂盒其检测结果准确。
试验例2
对实施例1所得到的试剂盒进行稳定性测试。取连续三批试剂盒在2～8℃条件下放置35天进行开盖试验，取50mg/L尿微量白蛋白溶液，重复实施例2中的步骤，其得到的尿微量白蛋白浓度为50.3mg/L、48.7mg/L、49.3mg/L，说明其稳定性优秀。
试验例3
使用空白样品对实施例1所得到的试剂盒进行空白测试，重复实施例2中的步骤，其吸光度为0.013<0.02，满足空白测试要求。
试验例4
对所实施例1所得到的试剂盒进行加标回收实验，检测结果如表3：
表3加标回收实验结果
由上表可知，本试验回收率稳定，偏差较低。
试验例4
对所实施例1所得到的试剂盒进行精密度试验，精密度的表示通常用变异系数法来描述实验的重复性，以批内和批间误差来表示。按高中低原则配制3个浓度的标准溶液，每个浓度平行测定10次，以变异系数(CV)来描述实验的重复性。
批内误差：用同一试剂盒内的30组第一试剂和第二试剂来测试标准溶液，以标准缺陷的批内变异系数CVw表示。
批间误差：以3个不同批号来测试标准溶液，对测定结果进行平均，求得总的批间变异系数CVb。
平均批内CVw和批间CVb计算:
CVW＝(SDW/I)×100％；CVb＝(SDb/I)×100％
其中：SD-平均标准偏差；I-平均值。
通过对多次的批内和批间的重复实验，得到结果如表4所示：
表4精密度实验结果
由上表可知，本发明拥有很小的批内和批间误差。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (6)
1.一种尿微量白蛋白检测试剂盒，包括第一试剂、第二试剂和稀释液，其特征在于，所述第一试剂包括磷酸缓冲盐溶液和聚乙二醇6000，所述第二试剂还包括聚氧乙烯月桂醚、叠氮钠和羊抗人尿微量白蛋白抗体。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液为磷酸缓冲盐溶液。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂中磷酸缓冲盐溶液为0.01mol/L，聚乙二醇6000为25ml/L；
所述第二试剂中聚氧乙烯月桂醚为300g/L，叠氮钠为300g/L，羊抗人尿微量白蛋白抗体为300mL/L，溶剂为去离子水；
所述稀释液中磷酸缓冲盐溶液为0.01mol/L。
4.根据权利要求1-3任一权利要求所述的试剂盒，其特征在于，包括50份第一试剂和50份第二试剂，每份第一试剂为400μL、每份第二试剂为20μL，所述稀释液为100mL。
5.权利要求1-4任一权利要求所述的尿微量白蛋白检测试剂盒的使用方法，其特征在于，将尿液样品取80μL加入2mL稀释液进行稀释，然后加入400μL第一试剂和20μL第二试剂充分反应，使用分光光度仪在340nm处读取吸光度值，根据标准曲线计算尿液样品中的尿微量白蛋白含量。
6.根据权利要求5所述的使用方法，其特征在于，分别取一系列标准浓度的尿微量白蛋白溶液80μL加入2mL稀释液进行稀释，然后加入400μL第一试剂和20μL第二试剂充分反应，使用分光光度仪在340nm处读取吸光度值，根据标准溶液的浓度和对应的吸光度值，得到所述标准曲线。
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