CN109946295A

CN109946295A - 一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒

Info

Publication number: CN109946295A
Application number: CN201711382457.3A
Authority: CN
Inventors: 罗维晓; 王晨光; 胡晓飞
Original assignee: Ji'nan Tengben Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Ji'nan Tengben Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2017-12-20
Filing date: 2017-12-20
Publication date: 2019-06-28

Abstract

本发明公开了一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1和试剂R2。通过在试剂R2中添加EDTA‑Na₂，提高了试剂的稳定性，线性相关性较好，试剂的准确度也较好，有利于在市场中进一步的推广使用。

Description

一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒

技术领域

本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒。

背景技术

微量白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白，白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量白蛋白尿可以反映肾脏异常渗漏蛋白质，尿微量白蛋白的增高多见于糖尿病肾病、高血压、妊娠子痫前期，是肾损伤的早期敏感指标。通常应用尿微量蛋白指标来监测肾病的发生，尿微量蛋白的检测是早期发现肾病最敏感、最可靠的诊断指标。

尿微量白蛋白可以评估肾脏受损程度：当发现尿微量白蛋白在20mg/L-200 mg/L范围内，尿常规尿蛋白的显示为阴性(-)或(+-)，就属于微量白蛋白尿，这个时候说明肾脏已经损伤，如果患者能够经过规范的修复肾单位，逆转纤维化治疗，尚可彻底修复肾小球，消除蛋白尿。而当尿中微量白蛋白超过200mg/L 时，尿常规测试尿蛋白阳性(+)～(+++)，此时证明机体已有大量白蛋白漏出，可能出现低蛋白血症，如果不及时进行医治，就会进入尿毒症期。

尿微量白蛋白的检测方法主要有免疫浊度法，免疫荧光法，放射免疫法，酶免疫法等。国内目前采用最多的尿微量白蛋白检测方法仍为ELISA法，但酶标法的操作步骤多，故重复性较差。本发明提供一种免疫透射比浊法检测尿微量白蛋白的试剂盒，优化其反应体系，使其重复性好、稳定性好、可进行批量样本全自动化检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定的用于检测尿微量白蛋白的试剂盒，该试剂盒采用免疫透射比浊法进行检测。该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性、线性相关性比常规的检测试剂盒好，有利于试剂在临床上的推广应用。

基本原理：

样本中白蛋白与试剂中相应的抗体相结合，立即形成抗原-抗体复合物，并形成一定的浊度。该浊度的高低在一定量的抗体存在时与抗原含量成正比。通过与同样处理的校准液比较，计算未知样本白蛋白的含量。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂 R1和试剂R2。

试剂R1组成为：200mmol/LpH为7.5磷酸盐缓冲液、50mmol/L氯化钠、2％TRITONX-100、10mmol/L叠氮钠；试剂R2组成为：200mmol/LpH为7.5 磷酸盐缓冲液、2％胶乳颗粒、2mg/mL羊抗人白蛋白抗体、50mmol/LEDTA-Na2、 10mmol/L叠氮钠。

本发明的试剂盒在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上进行，其具体使用方法如图6：

加入生理盐水、样本或校准品15μl，再加入250μl的R1试剂，预孵育5min 后读取吸光度A1，再加入50μl的R2试剂，反应5min后读取吸光度A2，并计算ΔA。

本发明的有益效果：

1)试剂R2添加EDTA-Na₂，增强了试剂的稳定性，而且不会对试剂的准确度产生影响；

2)试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，有利于该试剂在市场中进一步的推广。

附图说明

图1为两种试剂的相关性曲线图，

图2为两种试剂效期稳定性曲线图。

图3实施例1试剂与市场认可的尿微量白蛋白检测试剂盒对比校测结果

图4实施例1试剂线性相关验证实验检测结果

图5实施例1试剂稳定性验证实验检测结果

图6本试剂盒在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上的使用方法

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

实施例1

一种常规的尿微量白蛋白检测试剂盒，它包括试剂R1和试剂R2。

其中试剂R1组成为：

试剂R2组成为：

本实施例所述试剂R1和试剂R2，配置时需先加入缓冲物质，调到适当pH 值后，再添加其它物质。本实施例所述试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的迈瑞800全自动生化分析仪，利用终点法进行测定，检测主波长为415nm，操作如下：

ΔA＝A2-A1

尿微量白蛋白含量(mg/L)＝(ΔA测定÷ΔA标准)×C标准。

ΔA测定：检测样本吸光度变化 ΔA标准：标准品吸光度变化

实施例2

准确度验证试验：将实施例1的尿微量白蛋白检测试剂作为实验组，市场上获得认可的一种准确度好、稳定性好的尿微量白蛋白检测试剂盒作为对照组进行检测，对20个临床尿液样本进行检测，检测结果如图3所示。获得了两种试剂的相关性曲线(如图1所示)，结果表明，两组试剂盒的相关系数为0.9991，说明两者相关性比较好。证明本发明试剂盒添加及更改的组分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。

实施例3

线性相关性验证试验：选取尿微量白蛋白含量为350mg/L的高值样本，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，浓度依次为350mg/L、280mg/L、 210mg/L、140mg/L、70mg/L、0mg/L。分别利用实施例1试剂及对照组试剂进行检测，每个浓度的样本分别测定三次，分别取平均值，检测结果如图4所示。

如图4所示，实施例1与对照组试剂检测结果相关系数均大于0.990，且实施例1试剂检测结果的相关系数略大于对照组试剂检测结果的相关系数，这表明本发明试剂具有更好的线性相关性。

实施例4

稳定性验证实验：在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测实施例1及对照组试剂的稳定性。两组试剂每月选取同一样本测定高值样本，测定三次取平均值，检测数据如图5所示。

实验结果显示，实施例1试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定，而对照组试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存11 个月后开始不稳定，说明本发明试剂添加EDTA-Na₂后稳定性增强。

综上所述，本发明提供的尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，试剂 R2中添加EDTA-Na₂，提高了试剂的稳定性，线性相关性较好，试剂的准确度也较好。因此，本发明提供的尿微量白蛋白免疫比浊法检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。

Claims

1.一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，它包含试剂R1和试剂R2；其特征在于，试剂组成如下：

试剂R1组成为：200mmol/L pH为7.5磷酸盐缓冲液、50mmol/L氯化钠、2%表面活性剂TRITON X-100、10mmol/L叠氮钠；试剂R2组成为：200mmol/L pH为7.5磷酸盐缓冲液、2%胶乳颗粒、2mg/mL羊抗人白蛋白抗体、50mmol/L EDTA -Na₂、10mmol/L叠氮钠。

2.根据权利要求1所述的一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于试剂R1缓冲液为25℃，pH为7.5的磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述的一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于试剂R2缓冲液为25℃，pH为7.5的磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述的一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于所述金属离子螯合剂为EDTA- Na₂（乙二胺四乙酸二钠）。

5.根据权利要求1所述的一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于所述胶乳颗粒为聚苯丙烯，粒径为50-150nm。

6.根据权利要求1所述的一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于，使用全自动生化分析仪采用终点法进行测定，检测主波长为415nm。

7.根据权利要求1所述的一种尿微量白蛋白免疫透射比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2使用时的比例为R1: R2=250: 50。