CN111929446B - 一种定量定性检测抗lkm-1抗体的试剂盒及其制备方法 - Google Patents

一种定量定性检测抗lkm-1抗体的试剂盒及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种定量定性检测抗LKM‑1抗体的试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括磁微粒试剂、生物酶标记的IgG试剂、样本稀释液、校准品、临界值质控品、阴性质控品、底物；样本稀释液的配方为：水、三(羟甲基)氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋白、Proclin300、Bronidox、TritonX‑100、PVP。本发明制备的试剂盒具有灵敏度高、特异性强、准确性好的优点，检测便捷，适用于半自动或全自动检测系统；本发明试剂盒将化学发光技术与磁微粒技术相结合，在临床上具有较高的使用价值，适于推广应用。

Description

一种定量定性检测抗LKM-1抗体的试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种定量定性检测抗LKM-1抗体的试剂盒及其制备方法。
背景技术
自身免疫性肝病(autoimmune liver diseases)主要包括三种与自身免疫密切相关的、以肝胆损伤为主的疾病：自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性胆管炎(PBC)和原发性硬化性胆管炎(PSC)。AIH是一种伴循环自身抗体和高免疫球蛋白血症、病因未明、呈慢性炎性坏死的肝脏疾病，LKM-1是II型AIH的主要抗体之一。
临床进行AIH的检测，常使用的方法有影像学检查、生化检测、免疫学方法以及病理检查，其中免疫学检测相关自身抗体是进行AIH诊断各方法中相对有效且创伤最小、易于接受的方法。抗LKM-1抗体的检测，常使用的方法有免疫印迹法、酶联免疫法，临床也有使用间接免疫荧光法对LKM抗体进行检测。现有进行自身免疫性肝炎诊断的方法，各有优缺点，具体描述如下：
1、病理学检查：
病理学检查被认为是AIH诊断的“金标准”，但肝活检组织病理学表现特异性不强，非自身免疫性肝病患者所特有；受取样位置的差异，能否取到病变组织的样本，对检查结果存在很大影响；而且因其创伤性，存在患者不愿使用该方法，并且有部分患者不适合进行该检查，因此病理学检查的应用存在一定的局限性。
2、影响学检查：
AIH患者影像学可表现为肝脏、胆囊、脾脏、淋巴结等异常，但其表现缺乏特异性。
3、生化检查：
AIH患者常见的生化异常主要表现在AST、ALT活性升高，以及血清胆红素或ALP水平升高，但生化指标的异常或正常，并不能完全正确表现患者的疾病状态，如在约1/3的AIH患者通常无症状，此类患者ALT水平明显低于有症状患者。
4、免疫学检查：
(1)间接免疫荧光法：该方法是检测自身抗体的常用技术创立于上世纪50年代，是自身抗体检测的经典方法，早先以手工稀释进行，确定滴度工作量大，现在主要厂家已推出自动稀释和自动判读系统，但仍在自动化、通量等方面较其他免疫学方法存在一定差距。并且抗LKM-1抗体在荧光片的判读上，在肝脏和肾脏都呈阳性反应，因此为了与其他自身抗体进行较为准确的区分，往往需要肝、肾、胃部3种基质综合判断。
(2)酶联免疫法：该方法操作简便、检测结果排除了人为主观性，但该方法一次试验只能检测单一指标，通量低，检测成本较高，在自身免疫疾病的诊断应用推广方面存在一定局限性。
(3)免疫印迹膜条法：该方法可进行多指标联合检测，组合形式多样，是目前临床实验室在AIH检测中常用的方法。但该方法用时长，通量受限。
基于上述检测方法的不足之处，有必要提供一种自动化程度高、通量大，并且在灵敏度、特异性、准确性上符合临床需求的检测方法。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种定量定性检测抗LKM-1抗体的试剂盒及其制备方法。该试剂盒适用于半自动或全自动检测系统，自动化程度高、通量大，并且灵敏度高、特异性强、准确性好。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种定量定性检测抗LKM-1抗体的试剂盒，该试剂盒包括磁微粒试剂、生物酶标记的IgG试剂、样本稀释液、校准品、临界值质控品、阴性质控品；
磁微粒试剂的配方为：0.1～1g LKM-1抗原-磁微粒复合物、1L水、0.2～0.3g磷酸二氢钠、2.5～3.0g磷酸氢二钠、8.5～9.0g氯化钠、8～12g牛血清白蛋白、0.1～2.0mLProclin300、0.1～0.5g Bronidox、2～8g蔗糖；
生物酶标记的IgG试剂的配方为：0.1～3mg生物酶标记的IgG抗体、1L水、0.2～0.3g磷酸二氢钠、2.5～3.0g磷酸氢二钠、8.5～9.0g氯化钠、8～12g牛血清白蛋白、0.1～2.0mL Proclin300、0.1～0.5g Bronidox、0.8～1.2mL Tween-20；
样本稀释液的配方为：1L水、12～12.5g三(羟甲基)氨基甲烷、5～15g氯化钠、8～12g牛血清白蛋白、0.1～2.0mL Proclin300、0.1～0.5g Bronidox、0.8～1.2mL TritonX-100、0.25‰～4‰PVP。
本发明提供了一种定量定性检测抗肝肾微粒体I型抗体的试剂盒，包括连接有特异性LKM-1抗原的磁微粒试剂，含有HRP标记的羊抗人IgG的试剂，样本稀释液，含抗LKM-1抗体的校准品，含抗LKM-1抗体的临界值质控品，不含抗LKM-1抗体的阴性质控品；所述磁微粒的表面含有羧基基团，所述样本稀释液含有两非离子型表面活性剂，其中一种为常规非离子型表面活性剂TritonX-100，另一种为高分子型非离子表面活性剂PVP(聚乙烯吡咯烷酮)。
作为优选，磁微粒试剂的配方为：0.2～1g LKM-1抗原-磁微粒复合物、1L水、0.25～0.3g磷酸二氢钠、2.8～2.9g磷酸氢二钠、8.7～8.8g氯化钠、9～11g牛血清白蛋白、0.5～1.5mL Proclin300、0.15～0.25g Bronidox、4～6g蔗糖；
生物酶标记的IgG试剂的配方为：0.1～2mg生物酶标记的IgG抗体、1L水、0.25～0.3g磷酸二氢钠、2.8～2.9g磷酸氢二钠、8.7～8.8g氯化钠、9～11g牛血清白蛋白、0.5～1.5mL Proclin300、0.15～0.25g Bronidox、0.9～1.1mL Tween-20；
样本稀释液的配方为：1L水、12～12.5g三(羟甲基)氨基甲烷、8～10g氯化钠、9～11g牛血清白蛋白、0.5～1.5mL Proclin300、0.15～0.25g Bronidox、0.9～1.1mLTritonX-100、0.5‰～2‰PVP。
优选地，磁微粒试剂的配方为：1g LKM-1抗原-磁微粒复合物、1L水、0.29g磷酸二氢钠、2.89g磷酸氢二钠、8.78g氯化钠、10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2gBronidox、5g蔗糖；
生物酶标记的IgG试剂的配方为：0.33mg生物酶标记的IgG抗体、1L水、0.29g磷酸二氢钠、2.89g磷酸氢二钠、8.78g氯化钠、10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2gBronidox、1mL Tween-20；
样本稀释液的配方为：1L水、12.12g三(羟甲基)氨基甲烷、9g氯化钠、10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2g Bronidox、1mL TritonX-100、1‰PVP。
作为优选，磁微粒试剂的pH值为7.25～7.45。
作为优选，生物酶标记的IgG试剂的pH值为7.25～7.45。
作为优选，样本稀释液的pH值为7.25～7.45。
作为优选，生物酶标记的IgG抗体为辣根过氧化物酶标记的IgG抗体。
作为优选，该试剂盒还可包括底物。
作为优选，底物包括含氧化剂的底物A液和含鲁米诺或其衍生物的底物B液。
作为优选，校准品的配方为：抗LKM-1抗体、1L水、10～15g三(羟甲基)氨基甲烷、5～10g氯化钠、8～12g牛血清白蛋白、0.8～1.2mL Proclin300、0.1～0.5g Bronidox，pH值7.25～7.45。
在本发明提供的具体实施例中，校准品的配方为：抗LKM-1抗体、1L水、12.12g三(羟甲基)氨基甲烷、9g氯化钠、10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2gBronidox，pH值7.25～7.45。
作为优选，校准品中抗LKM-1抗体的浓度为0～200AU/mL范围内的一系列浓度。
在本发明提供的具体实施例中，校准品中抗LKM-1抗体的浓度为0、8、20、40、100、200AU/mL。
作为优选，临界值质控品的配方为：抗LKM-1抗体、1L水、10～15g三(羟甲基)氨基甲烷、5～10g氯化钠、8～12g牛血清白蛋白、0.8～1.2mL Proclin300、0.1～0.5gBronidox，pH值7.25～7.45，临界值质控品中抗LKM-1抗体的浓度为15AU/mL。
在本发明提供的具体实施例中，临界值质控品的配方为：抗LKM-1抗体、1L水、12.12g三(羟甲基)氨基甲烷、9g氯化钠、10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2gBronidox。
作为优选，阴性质控品的配方为：不含抗LKM-1抗体样本、1L水、10～15g三(羟甲基)氨基甲烷、5～10g氯化钠、8～12g牛血清白蛋白、0.8～1.2mL Proclin300、0.1～0.5gBronidox，pH值7.25～7.45，阴性质控品中抗LKM-1抗体的检测浓度＜8AU/mL。
在本发明提供的具体实施例中，阴性质控品的配方为：不含抗LKM-1抗体样本、1L水、12.12g三(羟甲基)氨基甲烷、9g氯化钠、10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2gBronidox。
本发明还提供了上述试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
将水、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠混合溶解，调节pH值；加入牛血清白蛋白、Proclin300、Bronidox、蔗糖，得到磁微粒试剂保存缓冲液；将LKM-1抗原-磁微粒复合物加入磁微粒试剂保存缓冲液，得到磁微粒试剂；
将水、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠混合溶解，调节pH值；加入牛血清白蛋白、Proclin300、Bronidox、Tween-20，得到IgG试剂；将生物酶标记的IgG抗体加入IgG试剂，得到生物酶标记的IgG试剂；
将水、三(羟甲基)氨基甲烷、氯化钠混合溶解，调节pH值；加入牛血清白蛋白、Proclin300、Bronidox、TritonX-100、PVP混合溶解，得到样本稀释液；
将磁微粒试剂、生物酶标记的IgG试剂、样本稀释液、校准品、临界值质控品、阴性质控品组装成试剂盒。
本发明提供了一种定量定性检测抗LKM-1抗体的试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括磁微粒试剂、生物酶标记的IgG试剂、样本稀释液、校准品、临界值质控品、阴性质控品；样本稀释液的配方为：1L水、12～12.5g三(羟甲基)氨基甲烷、5～15g氯化钠、8～12g牛血清白蛋白、0.1～2.0mL Proclin300、0.1～0.5g Bronidox、0.8～1.2mL TritonX-100、0.25‰～4‰PVP。本发明具有的技术效果为：
1、检测便捷，能在较短时间内实现对抗LKM-1抗体的定量和定性检测，从而准确诊断出自身免疫性肝病的类型及严重程度，指导医生临床用药；
2、在进行定性检测时，不需要计算，可直接通过与cutoff质控比较进行结果判定。
3、本发明制备的试剂盒具有灵敏度高、特异性强、准确性好的优点，适用于半自动或全自动检测系统；本发明试剂盒将化学发光技术与磁微粒技术相结合，在临床上具有较高的使用价值，适于推广应用。
附图说明
图1示校准品线性关系。
具体实施方式
本发明公开了一种定量定性检测抗LKM-1抗体的试剂盒及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明公开了一种检测自身免疫性肝病相关抗肝肾微粒体Ⅰ型抗体(抗-LKM-1)的检测方法。该方法以磁性微球为载体，通过与LKM-1抗原的定向结合，实现对抗-LKM-1的定量定性检测，从而实现对自身免疫性肝病的分类的辅助诊断，指导临床用药。
术语解释：
AID：自身免疫性肝病(autoimmune liver diseases)
AIH：自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis)
PBC：原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cirrhosis)
PSC：原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis)
本发明提供的定量定性检测抗LKM-1抗体的试剂盒及其制备方法中所用试剂或仪器均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
本发明的制备方法，包含以下步骤：
一、磁微粒试剂的制备
第一步：配制磁微粒试剂保存缓冲液：
将1000mL纯化水、0.29g磷酸二氢钠、2.89g磷酸氢二钠、8.78g氯化钠加入容器中充分搅拌溶解；测定溶液pH值在7.25-7.45范围内；将10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2g Bro和5g蔗糖加入容器中，充分搅拌至完全溶解后，保存缓冲液配制完毕，2-8℃保存待用；
第二步：配制磁微粒试剂缓冲液1：
将1000mL纯化水、0.58g磷酸二氢钠、5.78g磷酸氢二钠、8.78g氯化钠加入到容器中充分搅拌溶解，测定pH值在7.0-7.5之间，2-8℃保存待用；
第三步、配制磁微粒试剂缓冲液2：
将1000mL纯化水，6.8g醋酸钠加入到容器中充分搅拌溶解，醋酸钠配制后的浓度为0.1M，测定pH值为5.0后，2-8℃保存待用；
第四步、制备磁微粒试剂：
取100mg表面含有羧基基团的磁微粒，先使用缓冲液1对该磁微粒进行洗涤，洗涤2-5次后，用缓冲液2对磁微粒再次进行洗涤，洗涤2-5次后待用；将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺均使用缓冲液2进行溶解，配制成终浓度在10mg/mL的溶液后，各取5mL加入到洗涤后的磁微粒中，混匀后在室温条件下反应1小时，得到活化的磁微粒混悬溶液；将活化的磁微粒混悬溶液，使用磁力架进行分离，静置2min后吸去上清，加入10mL缓冲液2，洗涤2-5min后，使用磁力架进行分离；使用缓冲液2重复洗涤2-4次后，加入10mL缓冲液2，摇匀磁微粒后，加入LKM-1抗原，室温混匀反应1小时，再次使用磁力架进行分离，静置2min后吸去上清；加入第1步配制的磁微粒试剂保存缓冲液10mL，室温混匀10min后，使用磁力架进行分离，静置2min后吸去上清，重复这个过程4次后，加入保存缓冲液，使磁微粒终浓度为1mg/mL，2-8℃保存待用。
二、含有HRP标记的羊抗人IgG试剂的制备
将1000mL纯化水、0.29g磷酸二氢钠、2.89g磷酸氢二钠、8.78g氯化钠加入容器中充分搅拌溶解；测定溶液pH值在7.25-7.45范围内；将10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2g Bro和1mL Tween-20加入容器中，充分搅拌至完全溶解后，保存缓冲液配制完毕，2-8℃保存待用；将HRP标记的羊抗人IgG抗体按照1/3000的比例，加入到保存缓冲液中，搅拌均匀后，完成含有HRP标记的羊抗人IgG试剂的制备，2-8℃保存待用。
三、样本稀释液的制备
将1000mL纯化水、12.12g三(羟甲基)氨基甲烷、9g氯化钠加入容器中充分搅拌溶解，调pH至7.25-7.45之间；将10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2g Bro、1mL TritonX-100、1‰PVP加入容器中，充分搅拌至完全溶解后，样本稀释液配制完毕，2-8℃保存待用；
四、抗LKM-1抗体校准品的制备
第一步：抗LKM-1抗体校准品保存缓冲液的制备
将1000mL纯化水、12.12g三(羟甲基)氨基甲烷、9g氯化钠加入容器中充分搅拌溶解，调pH至7.25-7.45之间；将10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2g Bro加入容器中，充分搅拌至完全溶解后，保存缓冲液配制完毕，2-8℃保存待用；
第二步：抗LKM-1抗体校准品的制备
将抗LKM-1抗体使用第一步中配制的保存缓冲液稀释至0、8、20、40、100、200AU/mL；配制好的校准品2-8℃保存待用。
五、抗LKM-1抗体临界值质控品的制备
按照抗LKM-1抗体校准品制备第1步中方法制备保存缓冲液，2-8℃保存待用；将抗LKM-1抗体使用保存缓冲液稀释至浓度为15AU/mL，得到抗LKM-1抗体临界值质控品，2-8℃保存待用。
六、抗LKM-1抗体阴性质控品的制备
按照抗LKM-1抗体校准品制备第1步中方法制备保存缓冲液，2-8℃保存待用；将不含抗LKM-1抗体样本，使用保存缓冲液稀释至浓度＜8AU/mL；得到抗LKM-1抗体阴性质控品2-8℃保存待用。
七、底物
底物使用安图生物工程股份有限公司生产的全自动免疫检验系统用底物液，该底物液由底物A液(含双氧水等氧化剂)和底物B液(含鲁米诺及其衍生物)组成，加入底物时，底物A和底物B加入量均为50μl/测试。
检测方法：试剂盒配套全自动免疫检测发光仪使用，具体包括以下步骤：
步骤一：实施例1中检测试剂盒与安图生物工程股份有限公司生产的全自动免疫检测发光仪配套使用，将试剂放于全自动免疫检测发光仪试剂仓相应位置，试剂信息通过扫描条形码输入仪器系统；
步骤二：扫描校准品条码(定量)卡自动获取校准品信息，将校准品转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中，装载样本架，在仪器软件界面中输入定标信息。选择“运行”开始测试，生成定标曲线。
步骤三：扫描校准品条码卡(定性)自动获取校准品信息，将临界值质控品、阴性质控品转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中，装载样本架，在仪器软件界面中输入定标信息。选择“运行”开始测试，生成定标曲线。
步骤四：将样本转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中，样本容器中样本量应≥150μl。装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。
说明：定量检测时，使用步骤二进行定标；进行定性检测时，使用步骤三进行定标；步骤二、步骤三选择其一进行；步骤一和步骤四在定量、定性检测时均不变。
试验例1
校准品线性：见图1。
空白限：使用零浓度校准品作为样本进行检测，重复测定20次，得到20次测量结果的发光值(RLU)，计算其平均值(M)和标准差(SD)，得到M+2SD所对应的RLU。校准品各点浓度值和信号值，按照四参数lin-log方式进行拟合，将M+2SD所对应的RLU代入拟合曲线，求出对应的浓度值，即为空白限。本方法的空白限要求不大于2AU/mL。空白限数据参见表1：
表1空白限评价
Figure BDA0002649651630000091
Figure BDA0002649651630000101
精密性：分析内精密性考核，在一次试验内，分别对高、中、低值质控重复测定20个测试，计算20个测试回算浓度值的平均值(X)和标准差(SD)，变异系数(CV％)＝SD/X*100％。要求分析内精密性＜10％，数据参见表2。
表2分析内精密性评价
Figure BDA0002649651630000102
Figure BDA0002649651630000111
特异性：取3份LKM-1IgG含量近似为0的样本，向其中分别加入HSV-1-IgG，使样本中HSV-1-IgG抗体含量在200AU/mL-800AU/mL之间，配制成交叉验证样本，检测结果均小于8AU/mL。数据见表3：
表3：特异性验证
Figure BDA0002649651630000112
PVP添加效果验证：添加PVP(含量在0.5-2‰)之间时，阴性样本反应性降低明显，而阳性样本信号值降低较少。数据见表4：
表4：PVP添加效果验证
不含PVP 0.25‰PVP 0.5‰PVP 1‰PVP 2‰PVP 4‰PVP
N1 1580905 1352739 1039512 640839 440932 240362
N2 748431 551178 340130 242835 139613 120029
N3 1012134 843908 540109 339091 142528 123246
N4 941214 1054048 642539 442953 240749 140203
N5 535230 497335 141220 120515 69390 39604
N6 984156 879716 542371 341419 143197 122132
P1 5247447 5142611 5153716 4497717 4295935 2611602
P2 39258614 38805624 35810395 33828320 32879597 19244037
结果显示，随着PVP添加量的增加，阴性样本信号值降低趋势明确，添加量至2‰时，基本达平台期；而阳性样本信号值随着PVP添加量的增加，也呈逐步降低趋势，但在0.25‰-2‰之间时，信号值降低幅度相对较小，超过2‰，阳性样本信号值有明显降低，因此PVP使用含量以在0.5％-2‰之间为宜。
试验例2
PVP与TritonX-100添加效果验证：分别对1‰PVP、1‰TritonX-100以及1‰PVP+1‰TritonX-100的效果进行验证，比较PVP与TritonX-100单独使用及协同使用的效果，结果见表5：
表5：PVP与TritonX-100添加效果验证
1‰TritonX-100 1‰PVP 1‰PVP+1‰TritonX-100
N1 1720263 1044144 553591
N2 858848 552442 195402
N3 1017092 739367 250599
N4 962097 1184473 437744
N5 655538 500131 101792
N6 821398 732635 332555
P1 5046149 4930343 4794720
P2 39312891 37619866 36173049
结果显示，单独使用1‰TritonX-100及1‰PVP时，阴性样本信号值明显偏高；将TritonX-100与PVP同时使用后，阴性样本信号值降低明显，本底显著改善，而阳性样本信号值降低不明显，两者共同使用效果较单独使用有优势。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种定量定性检测抗LKM-1抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括磁微粒试剂、生物酶标记的IgG试剂、样本稀释液、校准品、临界值质控品、阴性质控品；
所述磁微粒试剂的配方为：0.1~1g LKM-1抗原-磁微粒复合物、1L水、0.2~0.3g磷酸二氢钠、2.5~3.0g磷酸氢二钠、8.5~9.0g氯化钠、8~12g牛血清白蛋白、0.1~2.0mLProclin300、0.1~0.5g Bronidox、2~8g蔗糖；
所述生物酶标记的IgG试剂的配方为：0.1~3mg生物酶标记的IgG抗体、1L水、0.2~0.3g磷酸二氢钠、2.5~3.0g磷酸氢二钠、8.5~9.0g氯化钠、8~12g牛血清白蛋白、0.1~2.0mLProclin300、0.1~0.5g Bronidox、0.8~1.2mL Tween-20；
所述样本稀释液的配方为：1L水、12~12.5g三(羟甲基)氨基甲烷、5~15g氯化钠、8~12g牛血清白蛋白、0.1~2.0mL Proclin300、0.1~0.5g Bronidox、0.8~1.2mL TritonX-100、0.5‰ ~ 2‰ PVP。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂的配方为：0.2~1g LKM-1抗原-磁微粒复合物、1L水、0.25~0.3g磷酸二氢钠、2.8~2.9g磷酸氢二钠、8.7~8.8g氯化钠、9~11g牛血清白蛋白、0.5~1.5mL Proclin300、0.15~0.25g Bronidox、4~6g蔗糖；
所述生物酶标记的IgG试剂的配方为：0.1~2mg生物酶标记的IgG抗体、1L水、0.25~0.3g磷酸二氢钠、2.8~2.9g磷酸氢二钠、8.7~8.8g氯化钠、9~11g牛血清白蛋白、0.5~1.5mLProclin300、0.15~0.25g Bronidox、0.9~1.1mL Tween-20；
所述样本稀释液的配方为：1L水、12~12.5g三(羟甲基)氨基甲烷、8~10g氯化钠、9~11g牛血清白蛋白、0.5~1.5mL Proclin300、0.15~0.25g Bronidox、0.9~1.1mL TritonX-100、0.5‰ ~ 2‰ PVP。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂的配方为：1g LKM-1抗原-磁微粒复合物、1L水、0.29g磷酸二氢钠、2.89g磷酸氢二钠、8.78g氯化钠、10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2g Bronidox、5g蔗糖；
所述生物酶标记的IgG试剂的配方为：0.33mg生物酶标记的IgG抗体、1L水、0.29g磷酸二氢钠、2.89g磷酸氢二钠、8.78g氯化钠、10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2gBronidox、1mL Tween-20；
所述样本稀释液的配方为：1L水、12.12g三(羟甲基)氨基甲烷、9g氯化钠、10g牛血清白蛋白、1mL Proclin300、0.2g Bronidox、1mL TritonX-100、0.5‰ ~ 2‰ PVP。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂的pH值为7.25~7.45，所述生物酶标记的IgG试剂的pH值为7.25~7.45，所述样本稀释液的pH值为7.25~7.45。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物酶标记的IgG抗体为辣根过氧化物酶标记的IgG抗体。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品的配方为：抗LKM-1抗体、1L水、10~15g三(羟甲基)氨基甲烷、5~10g氯化钠、8~12g牛血清白蛋白、0.8~1.2mLProclin300、0.1~0.5g Bronidox，pH值7.25~7.45。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品中抗LKM-1抗体的浓度为0~200AU/mL范围内的一系列浓度。
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述临界值质控品的配方为：抗LKM-1抗体、1L水、10~15g三(羟甲基)氨基甲烷、5~10g氯化钠、8~12g牛血清白蛋白、0.8~1.2mLProclin300、0.1~0.5g Bronidox，pH值7.25~7.45，所述临界值质控品中抗LKM-1抗体的浓度为15AU/mL。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性质控品的配方为：不含抗LKM-1抗体样本、1L水、10~15g三(羟甲基)氨基甲烷、5~10g氯化钠、8~12g牛血清白蛋白、0.8~1.2mL Proclin300、0.1~0.5g Bronidox，pH值7.25~7.45，所述阴性质控品中抗LKM-1抗体的检测浓度＜8AU/mL。
10.权利要求1至9中任一项所述试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将水、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠混合溶解，调节pH值；加入牛血清白蛋白、Proclin300、Bronidox、蔗糖，得到磁微粒试剂保存缓冲液；将LKM-1抗原-磁微粒复合物加入磁微粒试剂保存缓冲液，得到磁微粒试剂；
将水、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠混合溶解，调节pH值；加入牛血清白蛋白、Proclin300、Bronidox、Tween-20，得到IgG试剂；将生物酶标记的IgG抗体加入IgG试剂，得到生物酶标记的IgG试剂；
将水、三(羟甲基)氨基甲烷、氯化钠混合溶解，调节pH值；加入牛血清白蛋白、Proclin300、Bronidox、TritonX-100、PVP混合溶解，得到样本稀释液；
将磁微粒试剂、生物酶标记的IgG试剂、样本稀释液、校准品、临界值质控品、阴性质控品组装成试剂盒。
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