CN103458926A - 改进的高浓度抗TNF α 抗体液体制剂 - Google Patents

改进的高浓度抗TNF α 抗体液体制剂 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种水性的液体药物制剂，其包含人抗TNFα抗体或其抗原结合部分，所述剂型当与注射包含至少一种盐和/或至少一种缓冲剂的在其他方面相同的制剂相比时，减轻受试者中与注射相关的疼痛至少约50％。本发明还提供了一种水性的液体药物制剂，其包含人抗TNFα抗体或其抗原结合部分，并在皮下施用到对象中后具有提高的生物利用度。所述制剂可以包含治疗性蛋白质，例如人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分或者其生物仿制药。

Description

改进的高浓度抗TNF α 抗体液体制剂
相关申请
本申请要求2010年11月11日提交的美国临时申请号61/412728和2010年11月15日提交的美国临时申请号61/413960的优先权，所述临时申请的全部内容在此通过引用引入。
发明背景
治疗性蛋白质例如抗体的制剂通常是一种挑战，这是由于所述制剂为了在经济上和治疗上成功而必须具备的大量所需性质，例如稳定性、施用的适合性、浓度。在制造、储存和递送期间，治疗性蛋白质已知发生物理和化学降解。这些不稳定性可能降低蛋白质的效力并增加患者中不良事件的风险，且因此显著影响监管机构的批准(参见例如Wang等，J.Pharm.Sci.96：1，2007)。因此，稳定的蛋白质制剂对于治疗性蛋白质的成功来说是必不可少的。
为了有效，许多治疗性蛋白质需要高剂量施用，所述剂量理想情况下配制在高浓度制剂中。高蛋白质浓度制剂是理想的，因为它们能够影响药物向受试者施用的方式(例如静脉内相比于皮下)和频率。
尽管高蛋白质浓度制剂是有利的，但配制高浓度治疗性蛋白质存在大量挑战。例如，提高蛋白质浓度通常不利地影响蛋白质的聚集、溶解性、稳定性和粘度(参见例如Shire等，J.Pharm.Sci.93：1390，2004)。粘度增加(这对于高蛋白质溶液来说是一种非常常见的问题)可能对制剂的施用具有负面影响，例如感觉疼痛和灼热症状以及在制造、加工、灌装和药物递送装置选项方面的限制(参见例如Shire等，J.Pharm.Sci.93：1390，2004)。即使对于具有常见结构特点的治疗性蛋白质例如抗体来说，到目前为止批准的制剂仍具有多样的成分和浓度范围。例如，抗CD20抗体利妥昔单抗以10mg/mL的浓度配制用于静脉内给药，而抗RSV抗体帕利珠单抗(Synagis)以100mg/mL的浓度配制用于肌肉内给药。因此，可用于治疗目的的高蛋白质制剂特别是抗体制剂仍然是一种挑战。
与治疗性蛋白质例如抗体相关的另一个挑战是药物递送。尽管自我施用装置使得患者免除前往医疗机构接受治疗的不必要的行程，但患者对与自我施用相伴的疼痛的自我意识和恐惧可能经常地影响自我施用型的药物递送。此外，具有高蛋白质浓度的制剂可能具有高粘度，从而引起递送时疼痛增强，特别是对于皮下施用来说。因此，尤其需要减轻与药物递送(例如自我注射)相关的疼痛的高浓度制剂。
因此，存在着对于在特别是减轻患者疼痛和/或提高生物利用度方面提供给药和管理优势的稳定的高浓度蛋白质制剂的需求。
发明简述
本发明至少部分地是基于治疗性抗体(包括人抗TNF-α抗体或其抗原结合片段，例如阿达木单抗)的新的高浓度制剂的发现。由于治疗性抗体的高浓度，本发明的制剂提供了许多令人惊奇的特征。具体来说，本发明提供了包含人抗TNFα抗体的药物制剂，其在皮下注射时出人意料地具有提高的生物利用度或减轻的疼痛。
特别地，本发明至少部分地是基于下述出人意料的和令人惊异的发现，即具有高抗体浓度、表面活性剂和多元醇的制剂在药物递送、特别是通过例如自我注射皮下施用所述抗体期间，为患者提供了急剧减轻的疼痛。本发明的制剂至少部分地建立在下述令人惊异的发现之上，即治疗性蛋白质(例如抗TNF-α抗体或其抗原结合部分)能够在高蛋白质浓度(例如至少约40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、96、100、105、110mg/ml或以上)下保持可溶，并维持适合于注射(例如皮下施用)的粘度。本发明的制剂的另一个惊人之处在于制剂不含缓冲剂或盐，但具有高浓度的抗体。值得注意的是，当与包含至少一种盐和/或至少一种缓冲剂而在其他方面相同的制剂的注射相比时，本发明的制剂将患者中与注射相关的疼痛减轻至少约50％(例如至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或以上)。
因此，一个方面中，本发明提供了一种水性液体制剂，其包含抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂以及多元醇；其中所述制剂不含缓冲剂或盐，并且当与包含至少一种盐和/或至少一种缓冲剂而在其他方面相同的制剂的注射相比时，减轻患者中与注射相关的疼痛至少约50％(例如至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或以上)。
在另一个方面中，本发明提供了一种水性液体制剂，其包含分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和少于50mg/ml的多元醇，其中所述制剂注射到人类受试者中产生低于1.0的疼痛视觉模拟量表(VAS)评分。在一种实施方式中，本发明提供了一种水性液体制剂，其基本上由分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和少于50mg/mL的多元醇组成，其中所述制剂注射到人类受试者中产生低于1.0的疼痛视觉模拟量表(VAS)评分。在一种实施方式中，VAS评分从0(无疼痛)至10(极度疼痛)。
在进一步的方面中，本发明提供了一种水性液体制剂，其包含分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和少于50mg/ml的多元醇，其中所述制剂不含缓冲剂和盐，并且其中与包含盐和/或缓冲剂而在其他方面相同的制剂的注射相比时，所述制剂的注射减轻人类受试者中与注射相关的疼痛至少约50％。在一种实施方式中，所述其他方面相同的制剂包含柠檬酸盐和磷酸盐缓冲剂和氯化钠。
本发明还提供了一种水性液体制剂，其包含浓度为至少约50mg/mL的抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和多元醇，其中所述制剂具有低于约2mS/cm的电导率。在一种实施方式中，所述制剂具有低于1mS/cm的电导率。在另一种实施方式中，所述制剂具有低于0.9mS/cm的电导率。
在另一种实施方式中，本发明还提供了一种水性液体制剂，其包含浓度为至少约50mg/mL的抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和多元醇，其中所述抗体或其抗原结合部分在所述制剂中具有小于4nm的水力直径。在一种实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分在所述制剂中具有小于3nm的水力直径。
本发明还提供了一种水性液体制剂，其包含分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和低于50mg/ml的多元醇；其中所述制剂具有选自下列的特征：低于约2mS/cm的电导率；比以给定浓度存在于缓冲的溶液中的所述蛋白质的水力直径(Dh)小至少约50％的Dh；和小于约4nm的水力直径(Dh)。在一种实施方式中，所述制剂具有低于约1mS/cm的电导率。在另一种实施方式中，所述制剂具有低于约0.9mS/cm的电导率。在一种实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分在所述制剂中具有小于约3nm的水力直径。在另一种实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分在所述制剂中具有小于约2nm的水力直径。
本发明还提供了一种水性液体制剂，其基本上由抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和多元醇组成；其中所述抗TNF-α抗体或其抗原结合部分的浓度为至少约50mg/mL、75mg/mL、100mg/mL或高于100mg/mL。
在特定实施方式中，本发明提供了一种水性液体制剂，其基本上由下列物质组成：浓度为90-110 mg/ml的分离的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分，其具有轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)，所述轻链可变区具有包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ IDNO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR1结构域，所述重链可变区具有包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR1结构域；聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯80；以及约38-46mg/ml的多元醇，例如甘露糖醇。
在另一个方面中，本发明提供了一种水性液体制剂，其包含分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和低于50mg/ml的多元醇，其中所述制剂在高达约30℃下稳定至少约6天、约10天或约14天，或在约28℃下稳定多达约24个月。
在另一个方面，本发明提供了一种向受试者施用分离的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分以使得减轻施用时的注射疼痛的方法，所述方法包括向所述受试者皮下施用包含所述抗体或其抗原结合部分的制剂，以使得减轻施用时的注射疼痛，其中所述制剂包含高于50mg/ml的所述抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和低于50mg/ml的多元醇。在一种实施方式中，所述注射疼痛根据疼痛视觉模拟量表(VAS)测定为低于1.0。
在某些实施方式中，使用疼痛视觉模拟量表(VAS)来评估所述与注射相关的疼痛。在一种实施方式中，VAS评分从0(无疼痛)至10(极度疼痛)。
在某些实施方式中，所述与注射相关的疼痛在注射后(例如注射后立即、不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分钟或不超过15分钟)进行评估。
在某些实施方式中，所述制剂与包含至少一种盐和/或至少一种缓冲剂而在其他方面相同的制剂的注射相比时，减轻所述患者中与注射相关的疼痛至少约60％、70％、80％或以上。
本发明还提供了一种水性液体制剂，其包含浓度为至少约50、75、100mg/mL或高于100mg/mL的抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和多元醇；其中所述制剂不含缓冲剂和盐。
在另一个方面中，本发明提供了一种水性液体制剂，其包含分离的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和低于50mg/ml的多元醇，其中所述制剂在高达约30℃下稳定至少约6天。在一种实施方式中，所述制剂在室温下稳定至少约7天。在一种实施方式中，所述制剂在室温下稳定至少约8天。在一种实施方式中，所述制剂在室温下稳定至少约9天。在一种实施方式中，所述制剂在室温下稳定至少约10天。在一种实施方式中，所述制剂在室温下稳定至少约11天。在一种实施方式中，所述制剂在室温下稳定至少约12天。在一种实施方式中，所述制剂在室温下稳定至少约13天。在一种实施方式中，所述制剂在室温下稳定至少约14天。在一种实施方式中，所述制剂在室温下稳定至少约15天。
在一种实施方式中，在本发明的制剂中使用的多元醇是甘露糖醇或山梨糖醇。
在一种实施方式中，本发明的制剂含有约20-60mg/mL的甘露糖醇或可选地约30-50mg/mL的甘露糖醇。在一种实施方式中，所述制剂含有约38-46mg/ml的甘露糖醇。
本发明还至少部分地基于下述出人意料和令人吃惊的发现，即具有高抗体浓度和表面活性剂的制剂与含有另外的赋形剂例如缓冲剂、多元醇和/或盐的类似制剂相比，提供明显更高的生物利用度。
因此，在一个方面，本发明提供了一种水性液体制剂，其包含表面活性剂和30-90mg的分离的人抗TNFα抗体或抗原结合部分，其中所述制剂具有90-110mg/ml的抗体浓度，并且其中与包含柠檬酸盐磷酸盐缓冲剂、氯化钠和甘露糖醇的制剂相比，在所述制剂皮下施用时，所述制剂对人类受试对提供了所述抗体或其抗原结合部分的提高的生物利用度。
在一个方面中，本发明提供了一种水性液体制剂，其基本上由表面活性剂和30-90mg的分离的人抗TNFα抗体或抗原结合部分组成，其中所述抗体或其抗原结合部分的浓度为90-110mg/ml。
在另一个方面中，本发明提供了一种水性液体制剂，其包含表面活性剂和30-90mg的分离的人抗TNFα抗体或抗原结合部分，其中所述制剂具有90-110mg/ml的抗体浓度，并且其中在所述制剂皮下施用时，所述制剂在人类受试者中提供了所述抗体或其抗原结合部分的提高的生物利用度，使得所述抗体或其抗原结合部分具有大于约1300μg*hr/ml的AUC0-360。
在另一个方面中，本发明提供了一种用于在人类受试者中提高分离的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分的生物利用度的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含有效量的所述抗体或其抗原结合部分和表面活性剂的制剂，以便提高所述抗体或其抗原结合部分的生物利用度，其中所述制剂不含缓冲剂、多元醇或盐。
在进一步的方面中，本发明提供了一种在受试者中提高分离的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分的生物利用度的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含有效量的所述抗体或其抗原结合部分和表面活性剂的制剂，以使得所述抗体或其抗原结合部分在所述受试者中的生物利用度与第二制剂相比提高至少约15％，其中所述制剂不含缓冲剂、多元醇或盐，并且其中所述第二制剂包含缓冲剂、多元醇和盐。在一种实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分的生物利用度与所述第二制剂相比提高至少约30％。在一种实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分的生物利用度与所述第二制剂相比提高至少约40％。
本发明还提供了一种在人类受试者中提高分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分的生物利用度的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含表面活性剂和有效量的所述抗体或其抗原结合部分的制剂，以使得提高所述抗体或其抗原结合部分的生物利用度，其中所述制剂具有选自下列的特征：低于约2mS/cm的电导率；所述抗体或其抗原结合部分具有比以给定浓度存在于缓冲的溶液中的所述抗体或其抗原结合部分的水力直径(Dh)小至少约50％的Dh；以及所述抗体或其抗原结合部分具有小于约4nm的水力直径(Dh)。在一种实施方式中，所述制剂具有低于约1mS/cm的电导率。在另一种实施方式中，所述制剂具有低于约0.9mS/cm的电导率。在一种实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分在所述制剂中具有小于约3nm的水力直径。
在一种实施方式中，所述生物利用度根据AUC水平或Cmax来确定。在一种实施方式中，所述生物利用度根据AUC0-360或AUC0-1344来确定。在一种实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分在皮下注射到人类受试者中时，其生物利用度为AUC0-360大于约1300μg*hr/ml。
在某些实施方式中，所述抗TNF-α抗体是分离的人抗体(例如人IgG1κ抗体)、人源化抗体、嵌合抗体或鼠抗体。例如，所述嵌合抗体可以是英夫利昔单抗或其生物仿制药(biosimilar)，和所述人抗体可以是戈利木单抗或阿达木单抗或其生物仿制药。
在一种实施方式中，所述人抗TNFα抗体或其抗原结合部分是IgG1或IgG4。
在一种实施方式中，人抗TNFα抗体或其抗原结合部分以1x 10-8M或更低的Kd与人TNFα解离，并具有1x 10-3s-1或更低的koff速率常数，两者都通过表面等离子体共振来测定。在某些实施方式中，所述人抗TNFα抗体或其抗原结合部分以1x 10-8M或更低的Kd与人TNFα解离，和具有1x 10-3s-1或更低的koff速率常数，两者都通过表面等离子体共振来测定，并且在标准的体外L929分析中以1x10-7M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性。
在某些实施方式中，所述人抗TNFα抗体或其抗原结合部分具有下列特征：如通过表面等离子体共振测定的，以1x 10-3s-1或更低的koff速率常数与人TNFα解离；具有轻链CDR3结构域，所述结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换或在1、3、4、6、7、8和/或9位的1至5个保守氨基酸置换修饰的氨基酸序列；以及(c)具有重链CDR3结构域，所述结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换或在2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12位的1至5个保守氨基酸置换修饰的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述人抗TNFα抗体或其抗原结合部分具有轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)，所述轻链可变区具有包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，所述重链可变区具有包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ IDNO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域。
在某些实施方式中，所述人抗TNFα抗体或其抗原结合部分具有轻链可变区(LCVR)和有重链可变区(HCVR)，所述轻链可变区具有包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR1结构域；所述重链可变区具有包含SEQ IDNO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR1结构域。
在某些实施方式中，所述人抗TNFα抗体或其抗原结合部分具有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和包含SEQID NO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。
在一种实施方式中，所述人抗TNFα抗体或其抗原结合部分包含对应于阿达木单抗的CDR。
在一种实施方式中，所述人抗TNFα抗体或其抗原结合部分是阿达木单抗或戈利木单抗或者其生物仿制药。
在某些实施方式中，所述制剂中人抗TNFα抗体或其抗原结合部分的浓度为至少约50mg/mL、约75mg/mL、约100mg/mL或高于100mg/mL。在一种实施方式中，在本发明的制剂中所述人抗TNFα抗体或其抗原结合部分的浓度为90-110mg/ml。在一种实施方式中，在本发明的制剂中所述人抗TNFα抗体或其抗原结合部分的浓度为95-105mg/ml。在一种实施方式中，所述制剂包含高于75mg/ml的所述抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，本发明提供了一种稳定的水性液体制剂，其包含高浓度(例如75-125mg/mL)的人抗hTNFa抗体。
在某些实施方式中，在本发明的制剂中使用的表面活性剂是聚山梨醇酯。在一种实施方式中，聚山梨醇酯的浓度为约0.1-1.5mg/ml、约0.2-1.4mg/ml、约0.3-1.3mg/ml、约0.4-1.2mg/ml、约0.5-1.1mg/ml、约0.6-1.0mg/ml、约0.6-1.1mg/ml、约0.7-1.1mg/ml、约0.8-1.1mg/ml或约0.9-1.1mg/ml。在某些实施方式中，所述聚山梨醇酯处于约0.1-10mg/mL、约0.5-5mg/mL、约0.1-2mg/mL或约1mg/mL的浓度下。在一种实施方式中，所述表面活性剂是聚山梨醇酯80。
在某些实施方式中，所述患者是人类或非人类哺乳动物。
在某些实施方式中，所述制剂是实施例中描述的制剂3或制剂4。
在某些实施方式中，所述其他方面相同的制剂是可商购的阿达木单抗制剂，其含有阿达木单抗、氯化钠、二水磷酸二氢钠、二水磷酸氢二钠、柠檬酸钠、单水柠檬酸、甘露糖醇、聚山梨醇酯80和注射用水。
在一种实施方式中，所述其他方面相同的制剂含有缓冲剂和盐。在某些实施方式中，所述盐是中性盐或来自于用于pH调节的碱(例如NaOH)的盐。在某些实施方式中，所述缓冲剂包括磷酸盐缓冲剂和/或柠檬酸盐缓冲剂。例如，所述磷酸盐缓冲剂可以含有约1.35-1.75mg/mL或约1.50-1.56mg/mL的Na2HPO4·2H2O，以及约0.75-0.95mg/mL或约0.83-0.89mg/mL的NaH2PO4·2H2O。所述柠檬酸盐缓冲剂可以含有约1.15-1.45mg/mL或约1.30-1.31mg/mL的单水柠檬酸，以及约0.2-0.4mg/mL或约0.30-0.31mg/mL的二水柠檬酸钠(sodiumcitrate dehydrate)。所述至少一种盐可以是中性盐，例如中性钠盐(例如NaCl)。
在一种实施方式中，本发明的制剂是药物制剂。
在某些实施方式中，本发明的制剂适合于皮下注射。在一种实施方式中，本发明的制剂适合于由受试者皮下自我施用。
在某些实施方式中，所述水性制剂的体积不超过1.5mL、1.0mL、0.8mL、0.5mL或0.4mL。
在某些实施方式中，所述制剂包含剂量为约30-90mg的所述抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，所述制剂包含约40mg所述抗TNF-α抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，所述制剂包含约50mg所述抗TNF-α抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，所述制剂包含约60mg所述抗TNF-α抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，所述制剂包含约70mg所述抗TNF-α抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，所述制剂包含约80mg所述抗TNF-α抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，所述制剂包含约90mg所述抗TNF-α抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，所述制剂包含60-85mg。在另一种实施方式中，所述制剂包含70-90mg。在另一种实施方式中，所述制剂包含30-110mg。在一种实施方式中，所述制剂包含70-110mg。
本发明的另一方面提供了一种预装填的注射器或自我注射器装置，其包含本文中描述的所述制剂中的任何一种。在某些实施方式中，储存在所述预装填注射器或自我注射器装置中的水性制剂含有约40mg阿达木单抗或其生物仿制药。在某些实施方式中，储存在所述预装填注射器或自我注射器装置中的水性制剂含有约80mg阿达木单抗或其生物仿制药。
本发明的另一方面提供了一种治疗患者中的与有害的TNFα活性相关的障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文描述的任一制剂。
在一种实施方式中，本发明的制剂或方法用于治疗患有类风湿性关节炎的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有克罗恩病的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有银屑病性关节炎的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有银屑病的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有幼年特发性关节炎(JIA)的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有强直性脊柱炎的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有溃疡性结肠炎的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有化脓性汗腺炎的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有糖尿病性视网膜病的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有巨细胞性动脉炎的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有白赛病的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有结节病例如表皮结节病的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有中轴型脊柱关节病的受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂或方法被用于治疗患有葡萄膜炎的受试者。
在一种实施方式中，所述制剂按照选自每周、每两周、每三周和每月的周期施用于所述受试者。在一种实施方式中，本发明的制剂含有30-90mg人抗TNFa抗体或其抗原结合部分，并以每两周的用药方案施用。在另一种实施方式中，本发明的制剂含有30-90mg人抗TNFa抗体或其抗原结合部分，并按照每月的用药方案施用。在一种实施方式中，本发明的制剂含有60-85mg人抗TNFa抗体或其抗原结合部分，并以每两周的用药方案施用。在另一种实施方式中，本发明的制剂含有60-85mg人抗TNFa抗体或其抗原结合部分，并按照每月的用药方案施用。
在某些实施方式中，本发明的制剂向受试者的施用通过自我施用来进行。
可设想的是，本文描述的任一实施方式可以与本发明的一个或多个其他实施方式(包括仅仅在本发明的一个方面中描述的实施方式)进行组合。
附图简述
图1是一组图，其显示了高浓度制剂1(F1)和2(F2)的施用与其他治疗组(F4和目前的商用制剂)相比，在注射后的所有时间点(立即、15分钟和30分钟)的疼痛评估中导致显著降低。
图2在线性标度上示出了在单次40mg阿达木单抗SC给药后56天的时间段内，阿达木单抗血清浓度的平均值和标准差。
图3A和3B的图示出了通过制剂中的总聚集物(3A)的数量或一定范围的聚山梨醇酯或多元醇中的总聚集物(3B)来评估的各种阿达木单抗制剂的稳定性。
发明详述
I.定义
为了可以更容易地理解本发明，首先对某些术语进行定义。此外应该指出，无论何时述及参数的值或值的范围，意图的是将所述值中间的值和范围也作为本发明的一部分。
当在本文中使用时，术语“(患者中)与注射相关的疼痛”是指与药物注射到患者或受试者的组织中相关的疼痛。在一种实施方式中，所述疼痛与由注射装置例如由注射针刺所引起的疼痛(如果有的话)分开。在一种实施方式中，与注射相关的疼痛可能源自于被注射到患者组织中的药物制剂。
与注射相关的疼痛可以使用多种本技术领域公认的手段来评估，例如疼痛视觉模拟量表(VAS)。在一种实施方式中，疼痛测量是可定量的，以使得可以使用统计方法对疼痛评分的百分减轻/增加进行直接比较。例如，当使用疼痛视觉模拟量表时，可以为各个治疗组指定疼痛数值(例如平均值±SD)，以便可以计算提高或降低百分率。
总的来说，视觉模拟量表(VAS)是测量据信范围跨越值的连续集的特征或状态的测量工具(参见例如Singer和Thods(1998)Academic Emergency Medicine 5：1007)。例如，患者感觉到的疼痛量跨越从无(分值为例如0)至极度疼痛量(分值为例如10)的连续集。从患者的角度来看，这一谱表现为是连续的——他们的疼痛不采取离散的跳跃的形式，正如无、轻度、中度和重度的分类方式所表明的。在操作上，VAS通常是长度为100mm的水平线，在各端用词语描述符标定，例如一端为“无疼痛”，另一端为“极度疼痛”(或其某种变化形式)。患者在线上标记他们感到代表他们对其目前状态的感受的点(例如0-10的分值)。可以通过测量从线的左手端至患者标记的点的毫米数来确定VAS评分。
存在各种不同的呈现VAS的方式，包括竖直线和带有额外描述符的线。参见Wewers&Lowe(“临床现象测量中视觉模拟量表的关键评论”(A critical review of visual analogue scales in themeasurement of clinical phenomena.)Research in Nursing and Health13：227-236，1990，在此引为参考)，其提供了不同样式VAS的优缺点的丰富的讨论。
术语“液体制剂”是指处于液体状态下的制剂，且不意图指称重悬浮的冻干制剂。本发明的液体制剂在储存时稳定，并且其稳定性不依赖于冻干(或其他状态改变方法，例如喷雾干燥)。
术语“水性液体制剂”是指使用水作为溶剂的液体制剂。在一种实施方式中，水性液体制剂是不需冻干、喷雾干燥和/或冷冻来维持稳定性(例如化学和/或物理稳定性和/或生物活性)的制剂。
当在本文中使用时，术语“药物”是指可用于治疗疾病或障碍的组合物，例如水性制剂。
术语“受试者”或“患者”意图包括哺乳动物生物体。受试者/患者的实例包括人类和非人类哺乳动物，例如非人类灵长动物、狗、奶牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人类动物。在本发明的特定实施方式中，受试者是人类。
术语“赋形剂”是指可以向制剂添加以提供所需特性(例如稠度、提高的稳定性)和/或调节渗透压的试剂。常用赋形剂的实例包括但不限于糖类、多元醇、氨基酸、表面活性剂和聚合物。
一种常用赋形剂是多元醇。当在本文中使用时，“多元醇”是具有多个羟基的物质，且包括糖类(还原和非还原糖)、糖醇和糖酸。多元醇的非限制性实例是果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖、棉籽糖、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、苏糖醇、山梨糖醇、甘油、L-葡萄糖酸及其金属盐。在一种实施方式中，在本发明的制剂或方法中使用的多元醇是甘露糖醇。在一种实施方式中，在本发明的制剂或方法中使用的多元醇是山梨糖醇。
“治疗活性抗体”或“治疗性抗体”是指可用于治疗目的，即用于治疗受试者中的障碍的抗体。应该指出，尽管治疗性蛋白质可用于治疗目的，但本发明不限于这样的用途，因为所述蛋白质也可以用于体外研究。
当在本文中使用时，“缓冲剂”是指通过其酸-碱共轭组分的作用而使溶液对抗pH变化的溶液中的试剂。缓冲剂的实例包括乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡萄糖酸、组氨酸、甲硫氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐/磷酸盐、咪唑、其组合和其他有机酸缓冲剂。在一种实施方式中，缓冲剂不是蛋白质。缓冲剂可以提供pH在约4至约8、约4.5至约7或约5.0至约6.5的范围内的溶液。
尽管本发明的制剂不含缓冲剂，但含有一种或多种缓冲剂的其他方面相同的制剂可用于疼痛或生物利用度比较的目的。这样的缓冲剂的实例包括磷酸盐、乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡萄糖酸、谷氨酸盐、组氨酸、柠檬酸盐和其他有机酸缓冲剂。在一种实施方式中，其他方面相同的制剂中的代表性缓冲剂包括柠檬酸盐缓冲剂和/或磷酸盐缓冲剂。
当在本文中使用时，术语“表面活性剂”一般包括保护蛋白质例如抗体免受空气/溶液界面诱导的应力、溶液/表面诱导的应力的影响以减少抗体的聚集或使制剂中颗粒物的形成最小化的试剂。示例性的表面活性剂包括但不限于非离子型表面活性剂例如聚山梨醇酯(如聚山梨醇酯20和80)或泊洛沙姆(如泊洛沙姆188)。术语“表面活性剂”或“去污剂”包括非离子型表面活性剂，例如但不限于聚山梨醇酯。在一种实施方式中，表面活性剂包括泊洛沙姆，例如泊洛沙姆188、泊洛沙姆407；聚氧乙烯烷基醚，例如
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Cremophor A25、Sympatens ALM/230；以及聚山梨醇酯/吐温，例如聚山梨醇酯20(吐温20)、聚山梨醇酯80(吐温80)、Mirj和泊洛沙姆例如泊洛沙姆188。
“稳定的”制剂是其中的抗体在制造过程期间和/或储存时基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的制剂。用于测量蛋白质稳定性的各种分析技术在本技术领域中是可得的，并综述在《肽和蛋白质药物递送》(Peptide and Protein Drug Delivery)247-301，Vincent Lee主编，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.(1991))，和Jones，A.(1993)Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90中(二者引入作为参考)。例如，在一种实施方式中，蛋白质的稳定性按照具有低百分比的降解(例如片段化)和/或聚集蛋白质的溶液中单体蛋白质的百分数来确定。在一种实施方式中，制剂可以在室温、约25-30℃或40℃下稳定至少1个月，和/或在约2-8℃下稳定至少1个月、1年或可选地至少2年。在另一种实施方式中，制剂可以在高达约30℃下稳定至少约6天、约10天或约14天，或在约28℃下稳定长达约24个月。在一种实施方式中，制剂可以在制剂冷冻(例如至-70℃)和融化(在后文中称为“冻/融循环”)后稳定。
如果抗体在颜色和/或澄清度目测检查时或通过UV光散射或通过孔径排阻层析测量时基本上不显示出例如聚集、沉淀和/或变性的迹象，则所述抗体在该药物制剂中“保持其物理稳定性”。聚集是单个分子或复合物共价或非共价缔合以形成聚集体的过程。聚集可以进行到形成可见沉淀物的程度。
制剂的稳定性例如物理稳定性可以通过本技术领域中公知的方法来评估，包括测量样品的表观消光度(吸光度或光密度)。这样的消光测量与制剂的浊度相关。制剂的浊度部分地是溶解在溶液中的蛋白质的固有性质，并且通常通过比浊法来测量，并用比浊法浊度单位(NTU)来量度。
随着例如溶液中一种或多种组分的浓度(例如蛋白质和/或盐浓度)而变化的浊度水平也被称为制剂的“乳浊”或“乳浊外观”。浊度水平可以参照使用已知浊度的悬液产生的标准曲线来计算。用于测定药物组合物的浊度水平的参比标准品可以基于《欧洲药典》标准(《欧洲药典》(European Pharmacopoeia)，第四版，“欧洲药品质量委员会指令”(Directorate for the Quality of Medicine of theCouncil of Europe)(EDQM)，Strasbourg，France)。根据《欧洲药典》标准，澄清溶液被定义为浊度低于或等于按照《欧洲药典》标准具有约3的参比悬液的浊度的溶液。比浊法的浊度测量可以检测在不存在缔合或非理想效应的情况下的瑞利散射，其通常随浓度线性变化。用于评估物理稳定性的其他方法在本技术领域中是公知的。
如果抗体在给定时间点的化学稳定性使得抗体被认为仍保持如下文中所定义的其生物活性，则所述抗体在药物制剂中“保持其化学稳定性”。可以通过例如检测或定量抗体的化学改变的形式来评估化学稳定性。化学改变可以包括尺寸改变(例如剪短)，其可以使用例如孔径排阻层析、SDS-PAGE和/或基质辅助的激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI/TOF MS)来评估。其他类型的化学改变包括电荷改变(例如作为脱酰胺或氧化的结果而发生)，其可以通过例如离子交换层析来评估。
如果药物制剂中的抗体对于其预期目的来说是生物活性的，则所述抗体在药物制剂中“保持其生物活性”。例如，如果抗体在药物制剂中的生物活性在所述药物制剂制备时表现出的生物活性(例如，如在抗原结合分析中所测定的)的约30％、约20％或约10％(在分析的误差之内)之内，则生物活性被保持。
在本发明的情形中，在药理学意义上，抗体的“治疗有效量”或“有效量”是指在抗体可以有效治疗的障碍的症状的预防或治疗或减轻方面有效的量。
当在本文中使用时，术语“人TNF-α”(在本文中缩写为hTNF-α、TNFα或简称为hTNF)意思是指一种人细胞因子，其作为17kDa的分泌形式和26kDa的膜结合形式存在，其生物活性形式由非共价结合的17kDa分子的三聚体构成。hTNF-α的结构进一步描述在例如Pennica，D.等，(1984)Nature 312：724-729；Davis，J.M.等，(1987)Biochem 26：1322-1326；和Jones，E.Y.等，(1989)Nature 338：225-228中。术语人TNF-α意图包括重组人TNF-α(rhTNF-α)，其可以通过标准的重组表达方法来制备或者商购(R&D Systems，目录号210-TA，Minneapolis，Minn.)。
当在本文中使用时，术语“抗体”意思是指免疫球蛋白分子，其由通过二硫键互连的4条多肽链，两条重(H)链和两条轻(L)链构成。其他天然存在的具有改变结构的抗体例如骆驼抗体(camelidantibody)也包含在该定义中。每条重链由重链可变区(缩写为HCVR或VH)和重链恒定区构成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3构成。每条轻链由轻链可变区(缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域CL构成。VH和VL区可以进一步细分成被称为互补决定区(CDR)的超变性区域，与被称为构架区(FR)的更保守性的区域间插。各个VH和VL由3个CDR和4个FR构成，其从氨基端至羧基端以下列顺序排列：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。在本发明的一种实施方式中，制剂所包含的抗体具有与各自在此引为参考的美国专利号6,090,382和6,258,562中所描述的相似的CDR1、CDR2和CDR3序列。在某些实施方式中，制剂包含在美国专利号6,090,382和6,258,562中所要求的抗体。
当在本文中使用时，术语“CDR”是指抗体可变序列内的互补决定区。在重链和轻链的各个可变区中存在3个CDR，其对于各个重链和轻链可变区被命名为CDR1、CDR2和CDR3。这些CDR的准确边界按照不同的系统有不同的定义。由Kabat(同上)描述的系统不仅提供了可适用于抗体的任何可变区的明确的残基编号系统，而且提供了定义3个CDR的准确残基边界。这些CDR可以被称为KabatCDR。Chothia等发现，Kabat CDR内的某些子部分采取几乎一致的肽骨架构型，尽管在氨基酸序列水平上具有大的多样性(Chothia等，(1987)Mol.Biol.196：901-917；Chothia等，(1989)Nature342：877-883)。这些子部分被命名为L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分别表示轻链和重链区域。这些区域可以被称为Chothia CDR，其具有与Kabat CDR交叠的边界。定义与Kabat CDR交叠的CDR的其他边界已由Padlan(1995)FASEB J.9：133-139和MacCallum(1996)J.Mol.Biol.262(5)：732-45描述。再其他的CDR边界定义可能不严格遵从本文中描述的系统之一，但仍然与Kabat CDR交叠，尽管它们可能被缩短或加长，这是由于根据预测或实验发现特定残基或残基组或甚至整个CDR不显著影响抗原结合。本文中使用的方法可以利用按照任何这些系统所定义的CDR，尽管某些实施方式使用了Kabat或Chothia定义的CDR。在一种实施方式中，在本发明的方法和组合物中使用的抗体包括来自于抗体阿达木单抗的6个CDR。
当在本文中使用时，术语抗体的“抗原结合部分”(或简称“抗体部分”)是指保留了特异性结合抗原(例如hTNF-α)的能力的一个或多个抗体片段。已证明，抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段执行。涵盖在术语抗体的“抗原结合部分”中的结合片段的实例包括：(i)Fab片段，其是由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，其是包含通过在铰链区的二硫桥相连的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，其由抗体单臂的VL和VH结构域组成；(v)dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341：544-546)，其由VH结构域组成；以及(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由独立的基因编码，但可以使用重组方法，通过合成的连接物将它们接合，所述连接物能够使得它们形成为单一蛋白链，其中VL和VH区配对以形成单价分子(被称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等，(1988)Science 242：423-426；和Huston等，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。这样的单链抗体也意图涵盖在术语抗体的“抗原结合部分”内。其他形式的单链抗体例如双特异抗体也涵盖在内。双特异抗体是二价的双特异性的抗体，其中VH和VL结构域被表达在单一多肽链上，但是使用过短而不允许同一链上的两个结构域之间配对的连接物，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点(参见例如Holliger，P.等，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-6448；Poljak，R.J.等，(1994)Structure 2：1121-1123)。在本发明的一种实施方式中，制剂含有美国专利号6,090,382和6,258,562中所描述的抗原结合部分，其各自引入作为参考。
短语“重组抗体”是指通过重组手段制备、表达、产生或分离的抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体、从重组体分离的抗体、组合抗体文库、从转基因有人免疫球蛋白基因的动物(例如小鼠)分离的抗体(参见例如Taylor等，(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295)，或者通过包括将特定免疫球蛋白基因序列(例如人免疫球蛋白基因序列)剪接到其他DNA序列上的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。重组抗体的实例包括重组人抗体、嵌合抗体、CDR嫁接抗体和人源化抗体。
当在本文中使用时，术语“人抗体”意图包括具有源自于人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区的抗体。在本发明中使用的人抗体可以包括非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或定点诱变或通过体内体细胞突变而引入的突变)，例如在CDR以及特别地CDR3中。然而，当在本文中使用时，术语“人抗体”不意图包括将源自于另一种哺乳动物物种例如小鼠的种系的CDR序列嫁接到人框架序列上的抗体。
术语“嵌合抗体”是指包含来自于一个物种的重链和轻链可变区序列以及来自于另一物种的恒定区序列的抗体，例如具有连接到人恒定区上的鼠类重链和轻链可变区的抗体。
术语“CDR嫁接抗体”是指包含来自于一个物种的重链和轻链可变区序列，但是其中VH和/或VL的一个或多个CDR区的序列被另一物种的CDR序列替换的抗体，例如具有其中一个或多个鼠类CDR(例如CDR3)已被人CDR序列替换的鼠类重链和轻链可变区的抗体。
当在本文中使用时，“分离的抗体”意图指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合hTNF-α的分离的抗体基本上不含特异性结合hTNF-α之外的抗原的抗体)。然而，特异性结合hTNF-α的分离的抗体可能具有对于其他抗原例如来自于其他物种的TNF-α分子的交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
当在本文中使用时，“中和抗体”(或“中和hTNF-α活性的抗体”)意图指与hTNF-α的结合引起hTNF-α生物活性的抑制的抗体。hTNF-α生物活性的这种抑制可以通过测量hTNF-α生物活性的一种或多种指标，例如hTNF-α诱导的细胞毒性(在体外或体内)、hTNF-α诱导的细胞活化和hTNF-α与hTNF-α受体的结合，来评估。hTNF-α生物活性的这些指标可以通过本技术领域中是已知的和描述在各自在此引入作为参考的美国专利号6,090,382和6,258,562中的几种标准的体外或体内分析中的一种或多种来评估。在一种实施方式中，抗体中和hTNF-α活性的能力通过对hTNF-α诱导的L929细胞的细胞毒性的抑制来评估。作为hTNF-α活性的其他或可选的参数，抗体抑制hTNF-α诱导的HUVEC上的ELAM-1表达的能力可以被评估作为hTNF-α诱导的细胞活化的量度。
当在本文中使用时，术语“表面等离子体共振”是指允许通过在生物传感器基质内，例如使用BIAcore系统(Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden和Piscataway，N.J.)检测蛋白质浓度的变化，来分析实时生物特异性相互作用的光学现象。对于进一步的描述，参见Jonsson，U.等，(1993)Ann.Biol.Clin.51：19-26；Jonsson，U.等，(1991)Biotechniques 11：620-627；Johnsson，B.等，(1995)J.Mol.Recognit.8：125-131；和Johnnson，B.等，(1991)Anal.Biochem.198：268-277。
当在本文中使用时，术语“kon”意图指结合蛋白质(例如抗体)与抗原缔合以形成例如本技术领域中已知的抗体/抗原复合物的结合速率常数。
当在本文中使用时，术语“koff”意图指抗体从抗体/抗原复合物解离的解离速率常数。
当在本文中使用时，术语“Kd”意图指特定抗体-抗原相互作用的解离常数，并且是指在滴定测量中在平衡时获得的值或通过用解离速率常数(koff)除以结合速率常数(kon)获得的值。
当在本文中使用时，(批准的基准产物/生物药物例如蛋白治疗剂、抗体等的)“生物仿制药”是指根据源自于下列研究的数据与基准产物类似的生物制品：(a)表明所述生物制品尽管在非临床活性组分方面有少量差异，但与所述基准产物仍高度相似的分析研究；(b)动物研究(包括毒性评估)；和/或(c)足以证明在所述基准产物被许可并意图使用的以及所述生物制品寻求许可的一种或多种适用病症中的安全性、纯度和效力的一项或多项临床研究(包括免疫原性和药代动力学或药效学评估)。在一种实施方式中，对于在建议说明书中规定、推荐或建议的一种或多种适用病症来说，生物仿制的生物制品和基准产物利用相同的一种或多种作用机理，但仅仅在对于所述基准产物已知的一种或多种作用机理的范围。在一种实施方式中，对于所述生物制品来说，在建议说明书中规定、推荐或建议的一种或多种适用病症已被预先批准使用所述基准产物。在一种实施方式中，所述生物制品的施用途径、剂型和/或强度与所述基准产物相同。在一种实施方式中，制备、加工、包装或保存所述生物制品的设施满足被设计以确保所述生物制品继续安全、纯净和有效的标准。所述基准产物可以在美国、欧洲或日本中的至少一个被批准。
当在本文中使用时，术语“用药”是指施用物质(例如抗TNFa抗体)以实现治疗目的(例如TNFa相关障碍的治疗)。
当在本文中使用时，术语“每周用药方案”、“每周用药”和“每周施用”是指向受试者施用物质(例如抗TNFα抗体)以实现治疗目的(例如TNFa相关障碍的治疗)的一定时间过程(或周期性)。在一种实施方式中，抗体或其抗原结合部分每6-8天或可选地每7天施用。
当在本文中使用时，术语“每两周用药方案”、“每两周用药”和“每两周施用”是指向受试者施用物质(例如抗TNFα抗体)以实现治疗目的(例如TNFa相关障碍的治疗)的一定时间过程(或周期性)。每两周用药方案不意图包括每周用药方案。在一种实施方式中，抗体或其抗原结合部分每9-19天、更优选每11-17天、更优选每13-15天、最优选每14天施用。
当在本文中使用时，术语“每月用药方案”、“每月用药”和“每月施用”是指向受试者施用物质(例如抗TNFα抗体)以实现治疗目的(例如TNFa相关障碍的治疗)的一定时间过程(或周期性)。在一种实施方式中，每月用药方案意味着抗体或其抗原结合部分每28-31天施用。在另一种实施方式中，每月用药方案意味着抗体或其抗原结合部分一月施用一次，例如在每个月的同一天，例如在每个月的第一天施用。
AUC、Cmax和Tmax是可用于表征特定药物制品在动物或人类受试者中的药代动力学反应的药代动力学参数。术语“AUC”是指表示物质例如人抗TNF-α抗体的血液、血清或血浆浓度随时间变化的曲线下面积”。当在本文中使用时，术语“Cmax”是指在物质施用后在受试者中观察到的物质的最大或峰值血液、血清或血浆浓度。术语“Tmax”是指从给药时间点计算的Cmax出现的时间。
术语颗粒的“水力直径”或“Dh”是指具有水的密度和与粒子相同的速率的球体的直径。因此，当在本文中使用时，术语“抗体的水力直径”是指使用动态光散射(DLS)在溶液中测定的抗体或其抗原结合部分，例如人抗TNF-α抗体或其抗原结合片段，的大小。DLS测量仪器以固定散射角测量由溶液中的抗体或其抗原结合片段散射的光强度的时间依赖性波动。Dh从强度的时间依赖性波动的强度自相关函数确定。使用DLS仪软件处理散射强度数据以确定散射分子(例如人抗TNF-α抗体或其抗原结合片段)样本的水力直径值和大小分布。
当在本文中使用时，术语“电导率”是指水性溶液在两个电极之间传导电流的能力。一般来说，电导率或比电导率是材料传导电流的能力的量度。在溶液中，电流通过离子转运流动。因此，随着水性溶液中存在的离子量的增加，溶液将具有更高的电导率。电导率的测量单位是mmhos(mS/cm)，并可以使用例如由Orion Research，Inc.(Beverly，MA)销售的电导仪来测量。溶液的电导率可以通过改变其中的离子浓度来改变。例如，可以改变溶液中缓冲剂和/或盐的浓度以便获得所需的电导率。
溶液的电导率按照本技术领域中已知的方法来测量。电导仪和电池可用于测定水性制剂的电导率，并且在使用前应该用标准溶液进行校准。在本技术领域中可用的电导仪的实例包括MYRON L Digital(Cole Parmer)、Conductometer(Metrohm AG)和3105/3115系列集成电导率分析仪(Kemotron)。
电导率测量可以使用任何可商购的适合于蛋白质溶液中的电导率分析的电导仪来进行，例如具有用于宽pH范围的扩展能力的SevenMulti型电导仪(Mettler Toledo，Schwerzenbach，Switzerland)。所述仪器按照制造商的指示操作(例如，如果更换Mettler Toledo仪器中的电导率传感器，必须再次进行校准，因为各个传感器具有不同的电池常数；参考SevenMulti型电导仪的操作说明书)。如果遵照说明书，可以通过将测量探头直接浸没在样品溶液中来获得电导率测量值。
在下面的部分中，对本发明的各个方面进行进一步详细描述。
II.本发明的制剂和方法
本发明的特点在于包含抗TNF-α抗体或其抗原结合部分的稳定的水性液体药物制剂，其与本技术领域公认的制剂相比具有改进的性质。尽管含有人抗TNFα抗体的高浓度制剂在本技术领域中是已知的(参见例如US20060153846和US20100278822)，但本发明提供的高浓度制剂具有出人意料的特征，即显著减轻的疼痛和提高的生物利用度。本发明的制剂至少部分地是基于仅仅一种或两种赋形剂的组合，即表面活性剂和多元醇，或可选地仅有表面活性剂。尽管具有较少的赋形剂，但本发明的制剂含有高浓度抗体，例如90-110mg/ml，并且是稳定的。
正如在下面的工作实施例中所述，含有抗体浓度超过50mg/ml的分离的人抗TNF-α抗体、低于50mg/ml的多元醇(例如甘露糖醇)和表面活性剂(例如聚山梨醇酯)的制剂，相对于其他高浓度制剂(包括US20060153846中描述的商品化阿达木单抗制剂和US20100278822中所描述的制剂，所述各个专利申请在此引入作为参考)，表现为在注射时具有显著减轻的疼痛。因此，在一种实施方式中，本发明的制剂尽管具有高抗体浓度(例如100mg/mL)并且没有缓冲剂或盐，但伴有疼痛的减轻。本文中描述的低疼痛制剂至少部分地是基于下述令人惊异的发现，即通过除去或不包含盐(例如NaCl)和/或缓冲剂(例如磷酸盐/柠檬酸盐缓冲剂)，可以将制剂中人抗TNFα抗体的浓度增加至例如约100mg/mL而同时减轻递送至患者时的疼痛。
在一种实施方式中，本发明的制剂的惊人之处在于制剂不含缓冲剂或盐，并且当与包含至少一种盐和/或至少一种缓冲剂而其他方面相同的制剂的注射相比，减轻患者中与注射相关的疼痛至少约50％。在一种实施方式中，当与另外包含盐和/或缓冲剂而其他方面相同的制剂相比，制剂减轻人类受试者中与注射相关的疼痛至少约30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或80％(例如约25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80％)。
在一种实施方式中，用于疼痛比较分析的其他方面相同的制剂包含至少一种缓冲剂例如柠檬酸盐缓冲剂和磷酸盐缓冲剂，和/或盐，例如NaCl。例如，缓冲剂(不包含在本发明的制剂中，而存在于用于疼痛比较的参比制剂中)可以包括单水柠檬酸、柠檬酸钠、二水磷酸氢二钠和/或二水磷酸二氢钠。缓冲剂可以包括约1.15-1.45mg/ml(例如约1.15、1.20、1.25、1.30、1.35、1.40或1.45)的柠檬酸、约0.2-0.4mg/mL(例如约0.2、0.25、0.3、0.35或0.4)的二水柠檬酸钠、约1.35-1.75mg/mL(例如约1.35、1.40、1.45、1.50、1.55、1.60、1.65、1.70或1.75)的二水磷酸氢二钠、约0.75-0.95mg/mL(例如约0.75、0.80、0.85、0.9或0.95)的二水磷酸二氢钠。上述浓度中间的值和范围也意图作为本发明的一部分。此外，还意图包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围，例如0.1至0.5mg/mL或1.20-1.40mg/mL。在一种实施方式中，制剂的pH用氢氧化钠调节。
在一种实施方式中，本发明的制剂包含高浓度例如90-110mg/ml的人抗TNFa抗体或其抗原结合部分、浓度低于50mg/ml的多元醇和表面活性剂，以使得制剂适合于施用而没有如通过视觉模拟量表(VAS)评分测定的显著疼痛。在一种实施方式中，本发明的制剂和方法包括高浓度的抗TNFα抗体或其抗原结合部分，并且没有缓冲剂或盐，以使得它们适合于施用例如皮下施用，而没有如通过视觉模拟量表(VAS)评分测定的感觉到的显著疼痛。例如，本发明的制剂在皮下施用后，可以在0(无疼痛)至10(最大可描绘疼痛)的量表上获得低于1的VAS评分。正如在实施例1中所述的，具有100mg/ml阿达木单抗、聚山梨醇酯80和甘露糖醇(低于50mg/ml)的制剂获得低于1、例如0.56的VAS评分，而其他高抗体浓度制剂获得1.79至4.12范围内的VAS评分。
在一种实施方式中，本发明提供了一种水性液体制剂，其包含分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和低于50mg/ml的多元醇，其中所述制剂的皮下注射在注射时获得低于1.0的疼痛视觉模拟量表评分。在一种实施方式中，制剂不含缓冲剂和盐，并且当与另外包含盐和/或缓冲剂的其他方面相同的制剂的注射相比，在皮下注射时导致疼痛减轻至少约50％。
因此，在本发明的一个方面中，本发明的液体制剂由于与含有缓冲剂和盐的制剂相比产生较轻疼痛而具有有利的耐受性性质。在某些实施方式中，制剂在受试者中减轻与注射(或任何其他施用形式)相关的疼痛。在某些实施方式中，与注射相关的疼痛减轻至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％(例如至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、6566、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94或95％)。在一种实施方式中，疼痛减轻至少约50％。
可以使用本技术领域中已知的任何类型的疼痛评估方法，包括例如视觉模拟量表、疼痛定性评估法或针痛评估法，来评估疼痛。例如，受试者感受到的注射部位疼痛可以使用疼痛视觉模拟量表(VAS)来评估。VAS是测量跨越值的连续集、例如从无至极度疼痛量的疼痛的测量工具。在操作上，VAS是长度约为100mm的水平线，用数值和/或文字描述符标定，例如0或10、或“无疼痛”或“极度疼痛”，并任选具有极值之间的其他文字或数值描述符，例如轻度、中度和重度，或1至9(参见例如Lee JS等，(2000)AcadEmerg Med 7：550，或Singer和Thods(1998)Academic EmergencyMedicine 5：1007)。疼痛可以在本发明的制剂施用后的单一时间或各个不同时间进行评估，例如在注射后立即、在注射后约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40或45分钟。
在本发明的某些实施方式中，制剂注射到受试者中产生在0(无疼痛)至10(极度疼痛)的标尺上低于0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0或5.0的疼痛视觉模拟量表评分。
用于疼痛评估的其他工具在本技术领域中是已知的，包括例如数值评定量表、语言评价量表和简明疼痛调查表。这样的工具也可用于评估按照在本发明的疼痛。
可以使用用于皮肤刺激的其他指数，包括例如Draize指数(DraizeScale)(出血、瘀点、红斑、浮肿、瘙痒)。
本发明的含有多元醇的制剂优选含有低于约50mg多元醇。在一种实施方式中，制剂含有低于约45mg/mL的多元醇。在另一种实施方式中，本发明的制剂含有约38-46mg/mL多元醇(例如甘露糖醇)，例如约35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54或55mg/mL的多元醇。此外，还意图包括使用任意上述值的组合作为上限和/或下限的值范围，例如39-45mg/ml、40-44mg/ml或37-47mg/ml。在一种实施方式中，本发明的制剂含有约12-72mg/ml的多元醇，例如甘露糖醇。在一种实施方式中，适合在本发明的制剂和方法中使用的多元醇是甘露糖醇或山梨糖醇。
在一种实施方式中，本发明的制剂含有阿达木单抗(或其生物仿制药)、聚山梨醇酯80、甘露糖醇和注射用水。在一种实施方式中，制剂含有80mg阿达木单抗、注射用水、42mg/ml甘露糖醇和1mg/ml聚山梨醇酯80。在一种实施方式中，制剂可以含有20-110mg、可选地20-90mg的阿达木单抗，或可选地30-80mg抗体。在一种实施方式中，制剂含有30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、51mg、52mg、53mg、54mg、55mg、56mg、57mg、58mg、59mg、60mg、61mg、62mg、63mg、64mg、65mg、66mg、67mg、68mg 69mg、70mg、71mg、72mg、73mg、74mg、75mg、76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg、90mg、91mg、92mg、93mg、94mg、95mg、96mg、97mg、98mg、99mg、100mg、101mg、102mg、103mg、104mg、105mg、106mg、107mg、108mg、109mg或110mg抗体。包括上述数字的范围也包括在本发明中，例如70-90mg、65-95或60-85mg。
本发明还至少部分地基于下述令人惊异的发现，即具有高浓度人抗TNFα抗体或其抗原结合部分以及表面活性剂(即不存在其他赋形剂)的水性液体药物制剂，与具有其他赋形剂的其他高浓度制剂相比，具有更高的生物利用度。正如在下面的工作实施例中所述的，含有超过50mg/ml的分离的人抗TNF-α抗体和聚山梨醇酯的制剂相对于其他高浓度制剂(包括US20060153846中所描述的商品化阿达木单抗制剂)具有提高的生物利用度。
如下面的实施例2中所述，可以通过将抗体与表面活性剂例如聚山梨醇酯80组合来提高抗TNFa抗体的生物利用度。生物利用度的提高是基于抗体与表面活性剂的组合并省略或除去其他赋形剂，包括缓冲剂、多元醇和盐。生物利用度的提高导致当皮下注射到人类受试者中时，抗TNF-α抗体或其抗原结合部分的AUC0-360大于约1300μg*hr/ml，或者抗TNF-α抗体或其抗原结合部分的AUC0-1344大于约2600μg*hr/ml。
因此，本发明提供了用于提高药物制剂中分离的抗TNF-α抗体或其抗原结合部分的生物利用度的方法。所述方法包括将治疗有效量的抗TNFa抗体或其抗原结合部分与表面活性剂组合，并排除或移除其他赋形剂例如缓冲剂、盐和多元醇或其组合，以使得提高抗体或其抗原结合部分的生物利用度。在一种实施方式中，制剂被皮下注射到人类受试者中。所述方法可以通过在皮下注射到人类受试者中时提供大于约1100、1125、1150、1175、1200、1225、1250、1275、1300、1325、1350、1375、1400、1425、1450、1475或约1500μg*hr/ml的抗TNF-α抗体或其抗原结合部分的AUC0-360来提高生物利用度。
本发明还提供了一种在受试者中提高分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分的生物利用度的方法，所述方法包括向受试者施用包含表面活性剂和有效量的抗体或其抗原结合部分的制剂，以使得与第二制剂相比将抗体或其抗原结合部分在受试者中的生物利用度提高至少约15％。在一种实施方式中，本发明的制剂不含缓冲剂、多元醇或盐，而第二制剂包含缓冲剂、多元醇和盐。在一种实施方式中，与第二制剂相比，抗体或其抗原结合部分的生物利用度提高至少约30％。在一种实施方式中，与第二制剂相比，抗体或其抗原结合部分的生物利用度提高至少约40％。在一种实施方式中，生物利用度可以根据AUC水平例如AUC0-360或AUC0-1344或Cmax来确定。
在一种实施方式中，本发明提供了包含表面活性剂和约30-90mg分离的人抗TNF-α抗体或抗原结合部分的水性液体制剂，其中所述制剂具有约90-110mg/ml的抗体浓度，并且其中所述制剂相对于包含柠檬酸盐磷酸盐缓冲剂、氯化钠和甘露糖醇的制剂，在制剂皮下注射时提供了抗体或其抗原结合部分在人类受试者中的提高的生物利用度。
在一种实施方式中，本发明提供了包含表面活性剂和30-90mg分离的人抗TNF-α抗体或抗原结合部分的水性液体制剂，其中所述制剂具有90-110mg/ml的抗体浓度，并且其中在所述制剂皮下注射时，制剂提供了抗体或其抗原结合部分在人类受试者中的提高的生物利用度，使得抗体或其抗原结合部分具有大于约1100、1125、1150、1175、1200、1225、1250、1275、1300、1325、1350、1375、1400、1425、1450、1475或约1500μg*hr/ml的AUC0-360。
在一种实施方式中，本发明的制剂含有阿达木单抗(或其生物仿制药)、聚山梨醇酯80和注射用水。在一种实施方式中，制剂含有80mg阿达木单抗、注射用水和1mg/ml聚山梨醇酯80。制剂可以含有20-110mg、可选地20-90mg的阿达木单抗，或可选地30-80mg抗体。在一种实施方式中，制剂含有30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、51mg、52mg、53mg、54mg、55mg、56mg、57mg、58mg、59mg、60mg、61mg、62mg、63mg、64mg、65mg、66mg、67mg、68mg 69mg、70mg、71mg、72mg、73mg、74mg、75mg、76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg、90mg、91mg、92mg、93mg、94mg、95mg、96mg、97mg、98mg、99mg、100mg、101mg、102mg、103mg、104mg、105mg、106mg、107mg、108mg、109mg或110mg的抗体。包括上述数字的范围也包含在本发明内，例如70-90mg、65-95mg或60-85mg。
因此，本发明的高抗体制剂和方法不仅克服了药物制剂的许多已知挑战，包括在稳定制剂中的高浓度，而且具有在注射到患者中时产生提高的生物利用度或提供明显低的疼痛水平的附加优点。
本发明的制剂所克服的另一个障碍是在室温下(在约25℃或高达约30℃下)保持稳定的能力。这样的稳定性为抗体的使用者提供了优势，从而提供了更灵活的储存选择，因为通常的冷藏需要不是必需的。减轻疼痛的制剂和提高生物利用度的制剂两者(在下面的实施例中分别由制剂F3和F4示例)在约25℃或高达约30℃下稳定至少6天。正如在实施例中更详细描述的，本发明的制剂在高达30℃下稳定至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天和至少14天。因此，本发明还提供了在室温(或约25℃或高达约30℃)下具有延长的(即至少6天、10天或14天)储存期的制剂。在一种实施方式中，本发明的制剂在20至32℃下稳定至少6天。在上述浓度中间的温度也意图作为本发明的部分，即20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31和32℃。包括上述温度的范围也包含在本发明内，例如22-26℃、25-30℃等。
本发明的制剂含有高抗体浓度，包括例如抗体浓度为约50mg/mL、55mg/mL、60mg/mL、65mg/mL、70mg/mL、75mg/ml、80mg/mL、85mg/mL、90mg/mL、95mg/mL 100mg/mL、105mg/mL、110mg/mL、115mg/mL(或以上)的人抗TNF-α抗体或其抗原结合片段。因此，正如在下面的实施例中所述的，在本发明的一个方面中，本发明的液体药物制剂含有50-100mg/mL或以上的人抗TNFα抗体浓度。在一种实施方式中，本发明的制剂可以包含约1mg/mL-150mg/mL或约40mg/mL-125mg/mL之间的抗体浓度。在一种实施方式中，制剂的抗体浓度为50-150mg/ml、55-150mg/ml、60-150mg/ml、65-150mg/ml、70-150mg/ml、75-150mg/ml、80-150mg/ml、85-150mg/ml、90-150mg/ml、90-110mg/ml、95-105mg/ml、95-150mg/ml、100-150mg/ml、105-150mg/ml、110-150mg/ml、115-150mg/ml、120-150mg/ml、125-150mg/ml、50-130mg/ml、75-125mg/ml等。上述浓度中间的浓度和范围也意图作为本发明的部分(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150mg/mL)。
本发明的制剂可以含有有效量的抗体。在一种实施方式中，有效量为约20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或约100mg人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，本发明的制剂和方法包含约20-100、约20-90、约30-90、约30-100、约60-100、约70-90、约40-90、约60-85mg或约40-100mg的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，制剂含有30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、51mg、52mg、53mg、54mg、55mg、56mg、57mg、58mg、59mg、60mg、61mg、62mg、63mg、64mg、65mg、66mg、67mg、68mg 69mg、70mg、71mg、72mg、73mg、74mg、75mg、76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg或90mg抗体。包括上述数字的范围也包含在本发明内，例如70-90或75-85mg或60-85mg。
本发明的制剂和方法的重要方面是省略缓冲剂和盐。因此，在一种实施方式中，本发明的制剂和方法不含任何缓冲剂(例如柠檬酸盐和磷酸盐)和盐。然而，应该指出，尽管本发明的优选制剂不含缓冲剂或盐(例如NaCl)，但少量缓冲剂和/或盐可能存在于制剂中。因此，在一种实施方式中，本发明的制剂不含可检测水平的缓冲剂和/或盐。
在一种实施方式中，从本发明的制剂(或用于比较的包含缓冲剂的制剂)省略的缓冲剂可以包括柠檬酸(例如约1.3-1.31mg/mL或1.305mg/mL)。在另一种实施方式中，缓冲剂系统包括二水柠檬酸钠(例如约0.27-0.33mg/mL或约0.305mg/mL)。在一种实施方式中，缓冲系统包括二水磷酸氢二钠(例如约1.5-1.56mg/mL或约1.53mg/mL)。在另一种实施方式中，缓冲系统包括二水磷酸二氢钠(例如约0.83-0.89mg/mL或约0.86mg/mL)。
在本发明的一种实施方式中，制剂的电导率可用于确定制剂是否具有缓冲剂和/或盐。据测定，制剂F3和F4(在下面的工作实施例中描述)具有低于约2mS/cm的电导率，例如约0.7μS/cm。因此，在一种实施方式中，本发明的减轻疼痛和提高生物利用度的制剂具有低于约2mS/cm的电导率。在另一种实施方式中，本发明的制剂具有低于约1mS/cm的电导率。
在一种实施方式中，本发明的制剂含有浓度为约100mg/mL(或75-125mg/mL)的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分、表面活性剂(例如聚山梨醇酯80)、多元醇(例如山梨糖醇或甘露糖醇)，并具有低于2mS/cm的电导率。在一种实施方式中，本发明的制剂含有浓度为约100mg/mL(或75-125mg/mL)的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分、约0.8-1.3mg/ml的表面活性剂(例如聚山梨醇酯80)、低于约50mg/ml的多元醇(例如山梨糖醇或甘露糖醇)，并具有低于2mS/cm的电导率。
在一种实施方式中，本发明的制剂含有浓度为约100mg/mL(或75-125mg/mL)的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分、表面活性剂(例如聚山梨醇酯80)，并具有低于2mS/cm的电导率。在一种实施方式中，本发明的制剂含有浓度为约100mg/mL(或75-125mg/mL)的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分、约0.8-1.3mg/ml的表面活性剂(例如聚山梨醇酯80)，并具有低于2mS/cm的电导率。
在另一种实施方式中，本发明提供了具有高浓度抗体或其抗原结合部分的稳定制剂，其中所述抗体或抗原结合部分具有小于约4nm的水力直径(z-平均值)，或其中所述抗体或抗原结合部分具有比相同抗体浓度下在缓冲的溶液中的水力直径小至少约50％的水力直径(z-平均值)。在一种实施方式中，所述抗体或抗原结合部分具有小于约3nm的水力直径(z-平均值)。
在一种实施方式中，本发明的制剂含有浓度为约100mg/mL(或75-125mg/mL)的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分、表面活性剂(例如聚山梨醇酯80)、多元醇(例如山梨糖醇或甘露糖醇)，并具有小于4nm的水力直径。在一种实施方式中，本发明的制剂含有浓度为约100mg/mL(或75-125mg/mL)的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分、约0.8-1.3mg/ml的表面活性剂(例如聚山梨醇酯80)、低于约50mg/ml的多元醇(例如山梨糖醇或甘露糖醇)，并具有小于4nm的水力直径。
在一种实施方式中，本发明的制剂含有浓度为约100mg/mL(或75-125mg/mL)的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分、表面活性剂(例如聚山梨醇酯80)，并具有小于4nm的水力直径。在一种实施方式中，本发明的制剂含有浓度为约100mg/mL(或75-125mg/mL)的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分、约0.8-1.3mg/ml的表面活性剂(例如聚山梨醇酯80)，并具有小于4nm的水力直径。
在本发明的抗体制剂中包含去垢剂或表面活性剂。示例性的去垢剂包括非离子型去垢剂例如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20、80等)或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。添加的去垢剂的量使得其减少配制的抗体的聚集和/或使制剂中颗粒物的形成最小化和/或减少吸附。在本发明的优选实施方式中，制剂包括作为表面活性剂的聚山梨醇酯。在本发明的另一种优选实施方式中，制剂含有去垢剂聚山梨醇酯80。在一种实施方式中，制剂含有约0.1至约2.0mg/mL之间的表面活性剂(例如聚山梨醇酯)，例如约1mg/mL。可以包含在本发明制剂中的聚山梨醇酯的其他范围包括0.1至1.5mg/ml、可选地0.2-1.4mg/ml、0.3-1.3mg/ml、0.4-1.2mg/ml、0.5-1.1mg/ml、0.6-1.0mg/ml、0.6-1.1mg/ml、0.7-1.1mg/ml、0.8-1.1mg/ml或0.9-1.1mg/ml。上述浓度中间的值和范围也意图作为本发明的部分，例如0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9。此外，还意图包括使用任意上述值的组合作为上限和/或下限的值范围，例如0.3至1.1mg/mL。
在一种实施方式中，本发明的制剂基本上由浓度为约100mg/mL(或75-125mg/mL)的人抗TNFα抗体或其抗原结合部分、表面活性剂(例如聚山梨醇酯80)、多元醇(例如山梨糖醇或甘露糖醇)组成，不含缓冲剂(例如单水柠檬酸、柠檬酸钠、二水磷酸氢二钠和/或二水磷酸二氢钠)，并且不含盐(例如NaCl)。
在某些实施方式中，出于疼痛或生物利用度目的与本发明的制剂进行比较的其他方面相同的制剂是含有阿达木单抗、氯化钠、二水磷酸二氢钠、二水磷酸氢二钠、柠檬酸钠、单水柠檬酸、甘露糖醇、聚山梨醇酯80和注射用水的制剂。
如果需要，本文中的制剂也可以与用于待治疗的特定适应症的一种或多种其他治疗剂组合。在一种实施方式中，这些具有互补活性的治疗剂对制剂的抗体没有不利影响。这样的治疗剂适当地以对预期目的有效的量存在于组合中。可以与本发明的制剂组合的其他治疗剂进一步描述在美国专利号6,090,382和6,258,562中，其各自在此引入作为参考。
本文描述的所有制剂也可以使用在本发明的方法中。
III.在本发明的制剂和方法中使用的抗体
本发明的制剂和方法包括抗体或其抗原结合部分，特别是抗TNF-α抗体或其抗原结合部分或片段。可以在本发明中使用的抗体的实例包括嵌合抗体、非人抗体、分离的人抗体、人源化抗体和结构域抗体(dAb)。本文描述的所有抗体也可用于本发明的方法中。
在一种实施方式中，本发明的制剂包含结合人TNFα的抗体或其抗原结合部分，包括例如阿达木单抗(也称为Humira、阿达木单抗或D2E7；Abbott Laboratories)。在进一步的实施方式中，制剂包含结合与阿达木单抗相同的表位的抗体，例如但不限于阿达木单抗的生物仿制抗体。在一种实施方式中，抗体是具有对应于阿达木单抗的轻链和重链的6个CDR的人IgG1抗体。
在一种实施方式中，本发明的特点在于分离的人抗体或其抗原结合部分，其以高亲和性和低解离速率与人TNF-α结合，并且也具有高的中和能力。在一种实施方式中，在本发明中使用的人抗体是重组的中和人抗hTNF-α抗体。
在一个方面中，本发明涉及阿达木单抗抗体和抗体部分、阿达木单抗相关抗体和抗体部分，以及具有与阿达木单抗等同的性质如以低解离动力学高亲和性结合hTNFa和高中和能力的其他人抗体和抗体部分。在一种实施方式中，抗体或其抗原结合片段定义为按照解离和结合特征与阿达木单抗类似。例如，制剂可以包含以1x 10-8M或更低的Kd和1x 10-3s-1或更低的koff速率常数与人TNFα解离的人抗体，所述Kd和koff两者都通过表面等离子体共振来测定。在另一种实施方式中，人抗体以1x 10-9M或更低的Kd与人TNFα解离。
在一种实施方式中，抗体或其抗原结合片段是以1x 10-8M或更低的Kd和1x 10-3s-1或更低的koff速率常数与人TNFα解离(所述Kd和koff两者都通过表面等离子体共振来测定)并且在标准的体外L929分析中以1x 10-7M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性的人抗体。产生对人TNFα具有高亲和性的人中和抗体(包括所述抗体的序列)的实例和方法描述在美国专利号6,090,382(被称为D2E7)中，在此引入作为参考。US 6,090,382中所描述的D2E7的氨基酸序列，在此以其整体引入作为参考。
在一种实施方式中，在本发明的制剂中使用的抗体是D2E7，也称为HUMIRATM或阿达木单抗(D2E7 VL区的氨基酸序列示出在SEQ ID NO：1中；D2E7 VH区的氨基酸序列示出在SEQ ID NO：2中)。D2E7(阿达木单抗/
Figure BPA00001718703400371
)的性质已描述在Salfeld等的美国专利号6,090,382、6,258,562和6,509,015中，其各自在此引入作为参考。
在一种实施方式中，人TNF-α或其抗原结合部分以1x 10-8M或更低的Kd和1x 10-3s-1或更低的koff速率常数与人TNFα解离，所述Kd和koff两者都通过表面等离子体共振来测定，并且在标准的体外L929分析中以1x 10-7M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性的人抗体。在一种实施方式中，分离的人抗体或其抗原结合部分以5x 10-4s-1或更低的koff与人TNF-α解离，或者在一种实施方式中以1x10-4s-1或更低的koff与人TNF-α解离。在一种实施方式中，分离的人抗体或其抗原结合部分在标准的体外L929分析中以1x 10-8M或更低的IC50中和人TNF-α细胞毒性，或者在一种实施方式中以1x 10-9M或更低的IC50中和人TNF-α细胞毒性，或者在一种实施方式中以1x 10-10M或更低的IC50中和人TNF-α细胞毒性。在一种实施方式中，抗体是分离的人重组抗体或其抗原结合部分。
在本技术领域中公知，抗体重链和轻链CDR3结构域在抗体对抗原的结合特异性/亲和性中发挥重要作用。因此，在另一个方面中，在本发明的制剂中使用的抗体对于与hTNF-α结合来说具有慢的解离动力学，并具有在结构上与阿达木单抗相同或相关的轻链和重链CDR3结构域。阿达木单抗VL CDR3的9位可以被Ala或Thr占据而基本上不影响koff。因此，阿达木单抗VL CDR3的共有基序包含氨基酸序列：Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A)(SEQ ID NO：3)。此外，阿达木单抗VH CDR3的12位可以被Tyr或Asn占据而基本上不影响koff。因此，阿达木单抗VH CDR3的共有基序包含氨基酸序列：V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N)(SEQ ID NO：4)。此外，正如在美国专利号6,090,382的实施例2中所证实的，阿达木单抗重链和轻链的CDR3结构域可经受单丙氨酸残基的置换(在VL CDR3内的1、4、5、7或8位处或在VH CDR3内的2、3、4、5、6、8、9、10或11位处)而基本上不影响koff。再进一步，专业技术人员将会认识到，尽管阿达木单抗VL和VH CDR3结构域具有经受丙氨酸置换的能力，但在CDR3结构域内发生其他氨基酸置换而同时仍保持低的解离速度常数可能也是可行的，特别是用保守氨基酸进行的置换。在一种实施方式中，在阿达木单抗VL和/或VH CDR3结构域内进行不超过1至5个保守氨基酸置换。在一种实施方式中，在阿达木单抗VL和/或VH CDR3结构域内进行不超过1至3个保守氨基酸置换。此外，保守氨基酸置换不应在对于与hTNFα的结合来说关键的氨基酸位置处进行。阿达木单抗VL CDR3的2和5位以及阿达木单抗VH CDR3的1和7位表现为对于与hTNFα的相互作用来说是关键的，因此优选不在这些位置处进行保守氨基酸置换(尽管如上所述，在阿达木单抗VL CDR3的5位处进行丙氨酸置换是可接受的)(参见美国专利号6,090,382)。
因此，在一种实施方式中，在本发明的制剂中使用的抗体或其抗原结合部分包含下列特征：
a)如通过表面等离子体共振测定的，以1x 10-3s-1或更低的koff速率常数与人TNFα解离；
b)具有轻链CDR3结构域，所述结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换或在1、3、4、6、7、8和/或9位的1至5个保守氨基酸置换修饰的氨基酸序列；
c)具有重链CDR3结构域，所述结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换或在2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12位的1至5个保守氨基酸置换修饰的氨基酸序列。
在某些实施方式中，抗体或其抗原结合部分以5x 10-4s-1或更低的koff与人TNF-α解离。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合部分以1x 10-4s-1或更低的koff与人TNF-α解离。
在再另一种实施方式中，抗体或其抗原结合部分含有轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)，轻链可变区(LCVR)具有包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，重链可变区(HCVR)具有包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换而修饰的氨基酸序列的CDR3结构域。在一种实施方式中，LCVR还具有包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR2结构域(即D2E7 VLCDR2)，并且HCVR还具有包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR2结构域(即D2E7 VH CDR2)。在一种实施方式中，LCVR还具有包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR1结构域(即D2E7 VLCDR1)，并且HCVR具有包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR1结构域(即D2E7 VH CDR1)。VL的框架区可以来自于VκI人种系家族，或来自于A20人种系Vk基因，或来自于美国专利号6,090,382的图1A和1B中所示的阿达木单抗VL框架序列。VH的框架区可以来自于VH3人种系家族，或来自于DP-31人种系VH基因，或来自于或美国专利号6,090,382的图2A和2B中所示的D2E7VH框架序列。对应于阿达木单抗轻链和重链可变区的核酸序列分别描述在SEQ ID NO：36和37中。
因此，在另一种实施方式中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列(即阿达木单抗VL)的轻链可变区(LCVR)和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列(即阿达木单抗VH)的重链可变区(HCVR)。在某些实施方式中，抗体包含重链恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区。在某些实施方式中，重链恒定区是IgG1重链恒定区或IgG4重链恒定区。此外，抗体可以包含轻链恒定区，即κ轻链恒定区或λ轻链恒定区。在一种实施方式中，抗体包含κ轻链恒定区。可选地，抗体部分可以是例如Fab片段或单链Fv片段。
在再其他实施方式中，本发明包括使用含有阿达木单抗相关VL和VH CDR3结构域的分离的人抗体或其抗原结合部分。例如，抗体或其抗原结合部分可以具有轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)，所述轻链可变区具有包含选自SEQ ID NO：3、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26的氨基酸序列的CDR3结构域，所述重链可变区具有包含选自SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：35的氨基酸序列的CDR3结构域。
在一种实施方式中，在本发明中使用的TNFα抗体包括嵌合抗体英夫利昔单抗(Johnson and Johnson；描述在美国专利号5,656,272中，在此引入作为参考)、CDP571(人源化单克隆抗TNF-α IgG4抗体)、CDP 870(人源化单克隆抗TNF-α抗体片段)、抗TNF dAb(Peptech)或CNTO 148(戈利木单抗；Medarex andCentocor，参见WO 02/12502)。可以在本发明中使用的其他TNF抗体描述在美国专利号6,593,458、6,498,237、6,451,983和6,448,380，其每个在此引入作为参考。
在本发明的方法和组合物中使用的抗体或抗体部分可以通过免疫球蛋白轻链和重链基因在宿主细胞中的重组表达来制备。为了重组地表达抗体，将宿主细胞用带有编码抗体的免疫球蛋白轻链和重链的DNA片段的一种或多种重组表达载体转染，以使得轻链和重链在宿主细胞中表达并优选分泌到培养宿主细胞的培养基中，抗体可以从所述培养基回收。使用标准的重组DNA方法获得抗体重链和轻链基因，将这些基因整合在重组表达载体中，并将载体导入到宿主细胞中，例如在Sambrook、Fritsch和Maniatis主编的《分子克隆实验指南》(Molecular Cloning；A Laboratory Manual)第二版，ColdSpring Harbor，N.Y.，(1989)，Ausubel，F.M.等主编的《分子生物学现代方法》(Current Protocols in Molecular Biology)，GreenePublishing Associates，(1989)和Boss等的美国专利号4,816,397中所描述的。
为了表达抗TNFa抗体例如阿达木单抗(D2E7)或阿达木单抗(D2E7)相关抗体，首先获得编码轻链和重链可变区的DNA片段。这些DNA可以通过使用聚合酶链反应(PCR)扩增和修饰种系轻链和重链可变区序列而获得。人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列在本技术领域中是已知的(参见例如“Vbase”人种系序列数据库；也参见Kabat，E.A.等，(1991)《免疫学重要的蛋白质序列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第五版，美国卫生和公共服务部(U.S.Department of Health and Human Services)，NIH出版号91-3242；Tomlinson，I.M.等，(1992)“人种系VH序列全集揭示出约50组具有不同超变环的VH区段”(The Repertoireof Human Germline VH aequences Reveals about Fifty Groups of VHSegments with Different Hypervariable Loops)，J.Mol.Biol.227：776-798；和Cox，J.P.L.等，(1994)“人种系V78区段目录揭示出它们的用法的强烈偏倚”(A Directory of Human Germ-line V78Segments Reveals a Strong Bias in their Usage)，Eur.J.Immunol.24：827-836；每个文献的内容在此明确引入作为参考)。例如，为了获得编码D2E7或D2E7相关抗体的重链可变区的DNA片段，通过标准PCR扩增人种系VH基因的VH3家族的成员。在某些实施方式中，扩增DP-31 VH种系序列。为了获得编码D2E7或D2E7相关抗体的轻链可变区的DNA片段，通过标准PCR扩增人种系VL基因的VκI家族的成员。在某些实施方式中，扩增A20 VL种系序列。适合用于扩增DP-31种系VH和A20种系VL序列的PCR引物可以使用标准方法，根据在上面引用的参考文献中公开的核苷酸序列来设计。
一旦获得种系VH和VL片段，可以将这些序列突变以编码本文中所公开的抗TNFa抗体的氨基酸序列。首先，将种系VH和VL DNA序列编码的氨基酸序列与抗TNFa抗体VH和VL的氨基酸序列进行比较，以鉴定抗TNFa抗体序列中与种系不同的氨基酸残基。然后，通过使用遗传密码确定应该进行的核苷酸改变，对种系DNA序列的适当核苷酸进行突变以使得突变的种系序列编码抗TNFa抗体氨基酸序列。种系序列的诱变通过标准方法来进行，例如PCR介导的诱变(其中将突变的核苷酸掺入到PCR引物中以使得PCR产物含有所述突变)或定点诱变。
此外，应该指出，如果通过PCR扩增获得的“种系”序列编码在框架区中与真正的种系构造有差异的氨基酸(即例如作为体细胞突变的结果，扩增的序列当与真正的种系序列相比的差异)，则可能理想的是将这些氨基酸差异改变回真正的种系序列(即框架残基“回复突变”为种系构造)。
一旦获得编码抗TNFa抗体VH和VL片段的DNA片段(例如通过如上所述的种系VH和VL基因的扩增和突变)，可以通过标准的重组DNA技术对这些DNA片段进行进一步操作，以例如将可变区基因转变成全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，将编码VL或VH的DNA片段与编码另一种蛋白质例如抗体恒定区或柔性连接物的另一个DNA片段可操作地连接。如在这种情形中使用的，术语“可操作地连接”意图是指将两个DNA片段接合以使由这两个DNA片段编码的氨基酸序列保持同框。
通过将编码VH的DNA与编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一个DNA分子可操作地连接，可以将编码VH区的分离的DNA转变成全长重链基因。人重链恒定区基因的序列在本技术领域中是已知的(参见例如Kabat，E.A.等，(1991)《免疫学重要的蛋白质序列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第五版，美国卫生和公共服务部(U.S.Department of Health and HumanServices)，NIH出版号91-3242)，并且涵盖这些区域的DNA片段可以通过标准的PCR扩增来获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但最优选是IgG1或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因来说，可以将编码VH的DNA与只编码重链CH1恒定区的另一个DNA分子可操作地连接。
通过将编码VL的DNA与编码轻链恒定区CL的另一个DNA分子可操作地连接，可以将编码VL区的分离的DNA转变成全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列在本技术领域中是已知的(参见例如Kabat，E.A.等，(1991)《免疫学重要的蛋白质序列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第五版，美国卫生和公共服务部(U.S.Department of Health and HumanServices)，NIH出版号91-3242)，并且涵盖这些区域的DNA片段可以通过标准的PCR扩增来获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。在一种实施方式中，轻链恒定区是κ恒定区。
为了产生scFv基因，将编码VH和VL的DNA片段与编码柔性连接物例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一个片段可操作地连接，以使得VH和VL序列可以作为连续的单链蛋白质表达，其中VL和VH区通过柔性连接物接合(参见例如Bird等，(1988)Science242：423-426；Huston等，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85：5879-5883；McCafferty等，Nature(1990)348：552-554)。
为了表达在本发明中使用的抗体或抗体部分，将如上所述获得的编码部分或全长轻链和重链的DNA插入到表达载体中以使得所述基因与转录和翻译控制序列可操作地连接。在这种情形中，术语“可操作地连接”意图指抗体基因被连接到载体中以使得载体内的转录和翻译控制序列起到它们调控抗体基因的转录和翻译的预期功能。表达载体和表达控制序列被选择以与所使用的表达宿主细胞相容。抗体轻链基因和抗体重链基因可以被插入到单独的载体中，或者更通常情况下，将两个基因插入到同一表达载体中。抗体基因通过标准方法插入到表达载体中(例如，将抗体基因片段和载体上的互补限制性位点进行连接，或者如果不存在限制性位点的情况下进行平端连接)。在插入抗TNFa抗体轻链或重链序列之前，表达载体可能已经携带抗体恒定区序列。例如，将抗TNFa抗体VH和VL序列转变成全长抗体基因的一种途径是将它们分别插入到已编码重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中，以使得VH片段在载体内与CH片段可操作地连接，VL片段在载体内与CL片段可操作的连接。此外或可选地，重组表达载体可以编码信号肽，其有助于抗体链从宿主细胞的分泌。可以将抗体链基因克隆到载体中，以使得信号肽与抗体链基因的氨基端同框连接。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即来自于非免疫球蛋白的信号肽)。
除了抗体链基因之外，本发明的重组表达载体还携带控制抗体链基因在宿主细胞中的表达的调控序列。术语“调控”序列意图包括启动子、增强子和控制抗体链基因的转录或翻译的其他表达控制元件(例如多腺苷化信号)。这样的调控虚了描述在例如Goeddel，《基因表达技术：酶学185中的方法》(Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185)，Academic Press，San Diego，CA(1990)中。本技术领域的专业人员将会认识到，表达载体的设计(包括调控序列的选择)可能取决于如待转化的宿主细胞的选择、所需的蛋白质表达水平等的因素。对于哺乳动物宿主细胞表达的优选调控序列包括在哺乳动物细胞中指导高水平蛋白质表达的病毒元件，例如源自于下列病毒的启动子和/或增强子：细胞巨化病毒(CMV)(例如CMV启动子/增强子)、猿猴病毒40(SV40)(例如SV40启动子/增强子)、腺病毒(例如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))和多瘤病毒。对于病毒调控元件及其序列的进一步描述参见例如Stinski的美国专利号5,168,062、Bell等的美国专利号4,510,245和Schaffner等的美国专利号4,968,615。
除了抗体链基因和调控序列之外，在本发明中使用的重组表达载体可以携带其他序列，例如调控载体在宿主细胞中的复制的序列(例如复制原点)和可选择标记基因。可选择标记基因便于其中已引入载体的宿主细胞的选择(参见例如都由Axel等的美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，可选择标记基因通常赋予其中已引入载体的宿主细胞对药物例如G418、潮霉素或氨甲喋呤的抗性。优选的可选择标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于使用氨甲喋呤选择/扩增的dhfr-宿主细胞中)和neo基因(用于G418选择)。
为了表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染到宿主细胞中。术语“转染”的各种形式意图涵盖常用于将外源DNA导入原核或真核宿主细胞中的各种各样的技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。尽管理论上可能在原核或真核宿主细胞中表达本发明的抗体，但抗体的表达优选在真核细胞中。在一种实施方式中，哺乳动物宿主细胞是最优选的，因为与原核细胞相比，这样的真核细胞、特别是哺乳动物细胞更可能组装并分泌正确折叠和免疫活性的抗体。已报道，抗体基因的原核细胞表达对于高产率的活性抗体产生来说是无效的(Boss，M.A.和Wood，C.R.(1985)Immunology Today 6：12-13)。
用于表达本发明的重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括中华仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括dhfr-CHO细胞，其描述在Urlaub和Chasin，(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216-4220中，与DHFR可选择标记一起使用，如在例如R.J.Kaufman和P.A.Sharp(1982)Mol.Biol.159：601-621中所述的)、NS0骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当编码抗体基因的重组表达载体被引入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足够长的时间以允许抗体在宿主细胞中表达，或更进一步在一种实施方式中，允许抗体分泌到宿主细胞在其中生长的培养基中，来产生抗体。可以使用标准的蛋白质纯化方法从培养基回收抗体。
宿主细胞也可用于产生完整抗体的部分，例如Fab片段或scFv分子。应该理解，上述过程的变型也在本发明的范围之内。例如，可能希望的是用编码本发的抗体的轻链或重链(但不是两者)的DNA来转染宿主细胞。重组DNA技术也可用于移除对于结合hTNFα来说非必需的一些或所有编码轻链和重链任一或两者的DNA。由这样的截短的DNA分子表达的分子也被本发明的抗体所涵盖。此外，通过标准的化学交联方法将本发明的抗体与第二抗体交联，可以产生其中一条重链和一条轻链是本发明的抗体，而另一条重链和轻链对hTNFα之外的抗原特异性的双功能抗体。
在用于重组表达本发明的抗体或其抗原结合部分的优选系统中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗体重链和抗体轻链两者的重组表达载体引入到dhfr-CHO细胞中。在重组表达载体内，抗体重链和轻链基因各自与CMV增强子/AdMLP启动子调控元件可操作地连接以驱动基因的高水平转录。重组表达载体还携带DHFR基因，其允许使用氨甲喋呤选择/扩增来选择已被载体转染的CHO细胞。对所选择的转化体宿主细胞进行培养以允许抗体重链和轻链的表达，并从培养基回收完整抗体。使用标准的分子生物学技术来制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞以及从培养基回收抗体。
鉴于上述内容，可用于本发明中使用的抗体和抗体部分的重组表达的核酸、载体和宿主细胞组合物包括包含人TNFα抗体阿达木单抗(D2E7)的核酸和包含所述核酸的载体。编码D2E7轻链可变区的核苷酸序列示出在SEQ ID NO：36中。LCVR的CDR1结构域涵盖70-102位核苷酸，CDR2结构域涵盖148-168位核苷酸，CDR3结构域涵盖265-291位核苷酸。编码D2E7重链可变区的核苷酸序列示出在SEQ ID NO：37中。HCVR的CDR1结构域涵盖91-105位核苷酸，CDR2结构域涵盖148-198位核苷酸，CDR3结构域涵盖295-330位核苷酸。专业技术人员将会认识到，编码D2E7相关抗体或其部分(例如CDR结构域，例如CDR3结构域)的核苷酸序列可以使用遗传密码和标准的分子生物学技术从编码D2E7 LCVR和HCVR的核苷酸序列产生。
在一种实施方式中，液体药物制剂包含与抗体阿达木单抗生物等效或生物类似的人TNFα抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，生物类似的抗体是当与参比抗体例如阿达木单抗相比时不显示出临床上有意义的差别的抗体。生物类似抗体具有与参比抗体例如阿达木单抗等同的安全性、纯度和效力。
IV.用于治疗TNFa相关障碍的本发明制剂的施用
本发明制剂的优点在于它们可用于向受试者皮下递送高浓度的抗TNFα抗体或抗原结合部分(例如阿达木单抗)，以使得注射时疼痛减轻或抗体的生物利用度提高。因此，在一种实施方式中，本发明的制剂被皮下递送至受试者。在一种实施方式中，受试者自己施用该制剂(自我施用)。
在一种实施方式中，施用有效量的制剂。制剂的有效量的实例是足以抑制有害的TNF-α活性或治疗其中TNFα活性有害的障碍的量。
当在本文中使用时，术语“其中TNFα活性有害的障碍”意图包括其中在患有所述障碍的受试者中TNF-α的存在已显示造成或怀疑造成了所述障碍的病理生理学或是造成所述障碍恶化的因素的疾病或其他障碍。因此，其中TNFα活性有害的障碍是其中TNF-α活性的抑制预期将减轻障碍的症状和/或进展的障碍。这样的障碍可以由例如患有所述障碍的受试者的生物流体中TNF-α浓度的增加(例如受试者的血清、血浆、滑液等中TNF-α浓度的增加)来证实，所述TNF-α浓度的增加可以例如使用抗TNF-α抗体来检测。
在一种实施方式中，抗体的有效量可以按照根据严格基于体重的用药计划(例如mg/kg)来确定，或者可以是与体重无关的全身剂量(也称为固定剂量)。在一种实施方式中，抗体的有效量为约20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或约100mg人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分。在一种实施方式中，抗体的有效量为约20-100、约20-90、约30-90、约30-100、约60-100、约70-90、约40-90、约60-85mg或约40-100mg。在一种实施方式中，制剂包含的抗体有效量为30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、51mg、52mg、53mg、54mg、55mg、56mg、57mg、58mg、59mg、60mg、61mg、62mg、63mg、64mg、65mg、66mg、67mg、68mg 69mg、70mg、71mg、72mg、73mg、74mg、75mg、76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg、90mg、91mg、92mg、93mg、94mg、95mg、96mg、97mg、98mg、99mg或100mg抗体。包括上述数值的范围也包含在本发明内，例如70-90或75-85mg或60-85mg。
在一个实例中，有效量的制剂为含有约80mg抗体的全身剂量的0.4mL或0.8mL制剂(即0.8mL 100mg/mL的本发明抗体的制剂)。在另一个实例中，有效量的制剂为含有约40mg抗体的全身剂量的0.4mL本发明的制剂(即0.4mL 100mg/mL的本发明抗体的制剂)。在再另一个实例中，有效量的制剂为含有约160mg抗体的全身剂量的两份0.8mL制剂(即两个单元，含0.8mL的各100mg/mL本发明抗体的制剂)。在进一步的实例中，有效量的制剂为含有约20mg抗体的全身剂量的0.2mL本发明的制剂(即0.2mL 100mg/mL本发明的抗体制剂)。可选地，有效量可以按照基于体重的固定用药方案来确定(参见例如WO 2008/154543，在此引入作为参考)。
在一种实施方式中，TNF-α是人TNF-α并且受试者是人类受试者。可选地，受试者可以是表达与本发明的抗体交叉反应的TNF-α的哺乳动物。更进一步地，受试者可以是已经引入hTNF-α(例如通过施用hTNF-α或通过表达hTNF-α转基因)的哺乳动物。
本发明的制剂可以施用于人类受试者以用于治疗目的(下面进一步讨论)。在本发明的一种实施方式中，液体药物制剂可以容易地施用，其包括例如由患者自我施用的制剂。在一种实施方式中，本发明的制剂通过皮下注射施用，例如单次使用的皮下注射剂。此外，本发明的制剂可以施用于表达与所述抗体交叉反应的TNF-α的非人类哺乳动物(例如灵长动物、猪或小鼠)以用于兽医学目的或作为人类疾病的动物模型。对于后一种情况来说，这样的动物模型可用于评估本发明抗体的治疗效能(例如测试剂量和施用的时程)。
本发明的制剂可以按照一定用药日程安排来施用。例如，制剂可以按照每周、每两周或每月用药方案来施用。可选地，制剂可以每隔三周施用一次。在一种实施方式中，制剂和方法包括按照选自每周、每两周、每三周和每月的周期向受试者施用人抗TNF-α抗体。
在一种实施方式中，本发明的水性液体制剂可以通过例如预装填注射器、自动注射笔或无针施用装置施用于受试者。因此，本发明的特点还在于包含本发明的水性液体制剂的自动注射笔、预装填注射器或无针施用装置。在一种实施方式中，本发明的特点在于一种递送装置，其包含一剂含有100mg/mL人TNFα抗体或其抗原结合部分的制剂，例如包含剂量为约19mg、20、mg、21mg、22mg、23mg、24mg、25mg、26mg、27mg、28mg、29mg、30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、51mg、52mg、53mg、54mg、55mg、56mg、57mg、58mg、59mg、60mg、61mg、62mg、63mg、64mg、65mg、66mg、67mg、68mg、69mg、70mg、71mg、72mg、73mg、74mg、75mg、76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg、90mg、91mg、92mg、93mg、94mg、95mg、96mg、97mg、98mg、99mg、100mg、101mg、102mg、103mg、104mg、105mg等的制剂的自动注射笔或预装填注射器。在一种实施方式中，注射器或自动注射器含有60-100mg、70-90mg或约80mg抗体。
在一种实施方式中，本发明的制剂可以使用例如预装填注射器或自动注射装置进行自我施用。自动注射装置提供了手动操作注射器的一种可选方式以用于将治疗剂递送到患者体内并允许患者自我施用注射剂。自动注射装置描述在例如下列公开中，其各在此引入作为参考：WO 2008/005315，WO 2010/127146，WO 2006/000785，WO 2011/075524，WO 2005/113039，WO 2011/075524。
因此，在一种实施方式中，本发明提供了含有本发明制剂的预装填注射器或自我注射装置，以及包含本文所述制剂的预装填注射器或自我注射装置在本发明方法中的用途。
在一种实施方式中，本发明的制剂被用于治疗其中TNFα活性有害的障碍。当在本文中使用时，术语“其中TNF-α活性有害的障碍”意图包括其中在患有所述障碍的受试者中TNF-α的存在已显示造成或怀疑造成所述障碍的病理生理学或是造成所述障碍恶化的因素的疾病或其他障碍。因此，其中TNF-α活性有害的障碍是其中TNF-α活性的抑制预期将减轻障碍的症状和/或进展的障碍。这样的障碍可以由例如患有所述障碍的受试者的生物流体中TNF-α浓度的增加(例如受试者的血清、血浆、滑液等中TNF-α浓度的增加)来证实，所述TNF-α浓度的增加可以例如使用如上所述的抗TNF-α抗体来检测。
其中TNF-α活性有害的障碍存在大量实例。其中TNF-α活性有害的实例也描述在美国专利号6,015,557、6,177,077、6,379,666、6,419,934、6,419,944、6,423,321、6,428,787和6,537,549以及PCT公开号WO 00/50079和WO 01/49321中，上述所有文献的整个内容在此引入作为参考。本发明的制剂也可用于治疗其中TNFα活性有害的障碍，如在美国专利号6,090,382、6,258,562和美国专利申请公开号US20040126372中所描述的，上述所有文献的整个内容在此引入作为参考。
下面进一步讨论本发明的制剂在特定示例性障碍的治疗中的应用：
A.脓毒症
本发明的制剂和方法可用于治疗患有脓毒症的受试者。肿瘤坏死因子在脓毒症的病理生理学中具有已确立的作用，其生物学效应包括低血压、心肌抑制、血管渗漏综合征、器官坏死、刺激毒性继发性介质的释放和凝血级联的激活(参见例如Tracey，K.J.和Cerami，A.(1994)Annu.Rev.Med.45：491-503；Russell，D和Thompson，R.C.(1993)Curr.Opin.Biotech.4：714-721)。因此，本发明的制剂可用于在脓毒症的任何临床情况包括脓毒性休克、内毒素休克、革兰氏阴性脓毒症和中毒性休克综合征中治疗脓毒症。
此外，为了治疗脓毒症，可以将本发明的制剂与可以进一步减轻脓毒症的一种或多种其他治疗剂共同施用，所述其他治疗剂例如是白介素-1抑制剂(例如在PCT公开号WO 92/16221和WO 92/17583中所描述的)、细胞因子白介素-6(参见例如PCT公开号WO93/11793)或血小板活化因子的拮抗剂(参见例如欧洲专利申请公开号EP 374 510)。
此外，在一种实施方式中，本发明的制剂被施用于在治疗时具有高于500pg/ml或者在一种实施方式中高于1000pg/ml的IL-6血清或血浆浓度的脓毒症患者亚组中的人类受试者(参见PCT公开号WO 95/20978)。
B.自射免疫性疾病
本发明的制剂和方法可用于治疗患有自身免疫性疾病的受试者。肿瘤坏死因子涉及到在各种自身免疫性疾病的病理生理学中发挥作用。例如，TNF-α涉及在类风湿性关节炎中激活组织炎症并引起关节破坏(参见例如Tracey和Cerami，同上；Arend，W.P.和Dayer，J-M.(1995)Arth.Rheum.38：151-160；Fava，R.A.等，(1993)Clin.Exp.Immunol.94：261-266)。TNF-α也涉及在糖尿病中促进胰岛细胞死亡并介导胰岛素抵抗(参见例如Tracey和Cerami，同上；PCT公开号WO 94/08609)。TNF-α还涉及在多发性硬化症中介导对少突胶质细胞的细胞毒性并诱导炎性斑块(参见例如Tracey和Cerami，同上)。可以使用本发明的制剂和方法治疗的自身免疫性疾病还包括幼年特发性关节炎(JIA)(也称为幼年型类风湿性关节炎)(参见Grom等，(1996)Arthritis Rheum.39：1703；Mangge等，(1995)ArthritisRheum.8：211)。
本发明的制剂可用于治疗自身免疫性疾病，特别是伴有炎症的自身免疫性疾病，包括类风湿性关节炎、类风湿性脊柱炎(也称为强直性脊柱炎)、骨关节炎和痛风性关节炎、过敏症、多发性硬化症、自身免疫性糖尿病、自身免疫性葡萄膜炎、幼年特发性关节炎(也称为幼年型类风湿性关节炎)和肾病综合征。
C.传染病
本发明的制剂和方法可用于治疗患有传染病的受试者。肿瘤坏死因子涉及介导在各种传染病中观察到的生物效应。例如，TNF-α涉及在疟疾中介导脑部炎症及毛细血管栓塞形成和梗塞(参见例如Tracey和Cerami，同上)。TNF-α还涉及在脑膜炎中介导脑部炎症、诱导血脑屏障的打破、引发脓毒性休克综合征和激活静脉梗塞(参见例如Tracey和Cerami，同上)。TNF-α还涉及在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)中诱导恶病质、刺激病毒增殖和介导中枢神经系统损伤(参见例如Tracey和Cerami，同上)。因此，本发明的抗体和抗体部分可用于治疗传染病，包括细菌性脑膜炎(参见例如欧洲专利申请公开号EP 585 705)、脑型疟疾、AIDS和AIDS相关症候群(ARC)(参见例如欧洲专利申请公开号EP 230 574)，以及移植继发的细胞巨化病毒感染(参见例如Fietze，E.等，(1994)Transplantation 58：675-680)。本发明的制剂还可用于减轻与传染病相关的症状，包括由感染(例如流感)引起的发热和肌痛以及感染继发(例如AIDS或ARC继发)的恶病质。
D.移植
本发明的制剂和方法可用于治疗具有移植的受试者。肿瘤坏死因子已显示是同种异体移植物排斥和移植物抗宿主病(GVHD)的关键介质，并且涉及介导在使用针对T细胞受体CD3复合物的大鼠抗体OKT3来抑制肾移植的排斥时观察到的不良反应(参见例如Tracey和Cerami，同上；Eason，J.D.等，(1995)Transplantation 59：300-305；Suthanthiran，M.和Strom，T.B.(1994)New Engl.J.Med.331：365-375)。因此，本发明的制剂可用于抑制移植排斥(包括同种异体移植物和异种移植物的排斥)和抑制GVHD。尽管所述抗体或抗体部分可以单独使用，但它也可以与抑制针对同种异体移植物的免疫应答或抑制GVHD的一种或多种其他药剂组合使用。例如，在一种实施方式中，本发明的制剂与OKT3组合使用以抑制OKT3诱导的反应。在另一种实施方式中，本发明的制剂与针对参与免疫应答调控的其他靶标例如细胞表面分子CD25(白介素-2受体α)、CD11a(LFA-1)、CD54(ICAM-1)、CD4、CD45、CD28/CTLA4、CD80(B7-1)和/或CD86(B7-2)的一种或多种抗体组合使用。在再另一种实施方式中，本发明的制剂与一种或多种通用免疫抑制剂例如环孢菌素A或FK506组合使用。
E.恶性肿瘤
本发明的制剂和方法可用于治疗患有癌症或恶性肿瘤的受试者。肿瘤坏死因子涉及在恶性肿瘤中诱导恶病质、刺激肿瘤生长、增加转移的可能性和介导细胞毒性(参见例如Tracey和Cerami，同上)。因此，本发明的制剂可用于恶性肿瘤的治疗，以抑制肿瘤生长或转移和/或减轻恶性肿瘤继发的恶病质。本发明的制剂可以全身施用或局部施用到肿瘤位点。
F.肺障碍
本发明的制剂和方法可用于治疗患有肺病的受试者。肿瘤坏死因子已显示与成人呼吸窘迫综合征的病理生理学相关，包括刺激白细胞-内皮细胞活化、指引针对肺细胞的细胞毒性和诱导血管渗漏综合征(参见例如Tracey和Cerami，同上)。因此，本发明的制剂可用于治疗各种肺障碍，包括成人呼吸窘迫综合征(参见例如PCT公开号WO 91/04054)、休克肺、慢性肺炎性疾病、肺结节病、肺纤维化和矽肺。本发明的制剂可以全身施用或例如作为气溶胶局部施用到肺表面。
G.肠障碍
本发明的制剂和方法可用于治疗患有肠障碍的受试者。肿瘤坏死因子已显示与炎性肠病的病理生理学相关(参见例如Tracy，K.J.等，(1986)Science 234：470-474；Sun，X-M.等，(1988)J.Clin.Invest.81：1328-1331；MacDonald，T.T.等，(1990)Clin.Exp.Immunol.81：301-305)。嵌合鼠抗hTNF-α抗体已进行用于克罗恩病治疗的临床试验(van Dullemen，H.M.等，(1995)Gastroenterology109：129-135)。本发明的制剂也可用于治疗肠障碍例如特发性炎性肠病，其包括两种综合征，克罗恩病和溃疡性结肠炎。在一种实施方式中，本发明的制剂被用于治疗克罗恩病。在一种实施方式中，本发明的制剂被用于治疗溃疡性结肠炎。
H.心脏障碍
本发明的制剂和方法也可用于治疗各种心脏障碍，包括心脏缺血(参见例如欧洲专利申请公开号EP 453 898)和心功能不全(心肌虚弱)(参见例如PCT公开号WO 94/20139)。
I.脊椎关节病
本发明的制剂和方法可用于治疗患有脊椎关节病的受试者，包括例如中轴型脊椎关节病。TNFα已显示与广泛的各种障碍包括如脊椎关节病的炎性疾病的病理生理学相关(参见例如Moeller，A.等，(1990)Cytokine 2：162-169；Moeller等的美国专利号5,231,024；Moeller，A的欧洲专利公开号260 610 B1)。在一种实施方式中，脊椎关节病是中轴型脊椎关节病。可以用本发明的TNFα抗体治疗的脊椎关节病的其他实例描述如下：
1.银屑病性关节炎
本发明的制剂和方法也可用于治疗患有银屑病性关节炎的受试者。肿瘤坏死因子涉及银屑病性关节炎的病理生理学(Partsch等，(1998)Ann Rheum Dis.57：691；Ritchlin等，(1998)J Rheumatol.25：1544)。如在本文中指称的，银屑病性关节炎(PsA)或与皮肤相关的银屑病是指与银屑病相关的慢性炎性关节炎。银屑病是常见的慢性皮肤病症，其在身体上引起红色斑片。20位患有银屑病的个体中约有1位将发生伴随皮肤病症的关节炎，并且在约75％的病例中，银屑病先于关节炎。PsA本身表现为多种形式，从轻度直至重度关节炎，其中关节炎通常影响手指和脊柱。当脊柱受影响时，症状与如上所述的强直性脊柱炎类似。
PsA有时伴有残毁性关节炎。残毁性关节炎是指以引起毁坏关节的总体侵蚀性变形的过度骨侵蚀为特征的障碍。在一种实施方式中，本发明的制剂和方法可用于治疗残毁性关节炎。
2.反应性关节炎/赖特综合征
本发明的制剂和方法可用于治疗患有赖特综合征或反应性关节炎的受试者。肿瘤坏死因子涉及也称为赖特综合征的反应性关节炎的病理生理学(Braun等，(1999)Arthritis Rheum.42(10)：2039)。反应性关节炎(ReA)是指与身体中其他部位的感染并发的关节炎，通常随后发生肠或泌尿生殖系统感染。ReA通常以某些临床症状为特征，包括关节的炎症(关节炎)、尿道炎、结膜炎及皮肤和粘膜的病变。此外，ReA可以在性传播疾病的感染或痢疾感染(包括衣原体、弯曲杆菌、沙门氏菌或耶尔森氏菌感染)后发生。
3.未分化脊椎关节病
本发明的制剂和方法也可用于治疗患有未分化脊椎关节病的受试者(参见Zeidler等，(1992)Rheum Dis Clin North Am.18：187)。用于描述未分化脊椎关节病的其他术语包括血清反应阴性少关节炎和未分化少关节炎。当在本文中使用时，未分化脊椎关节病是指受试者仅显示出与脊椎关节病相关的一些症状的障碍。这种病症通常在未患有IBD、银屑病或AS或赖特综合征的经典症状的年轻成人中观察到。在某些情况下，未分化脊椎关节病可能是AS的早期指征。
J.皮肤和指甲障碍
在一种实施方式中，本发明的制剂和方法可用于治疗皮肤和/或指甲障碍。当在本文中使用时，术语“其中TNFα活性有害的皮肤和指甲障碍”意图包括其中在患有所述障碍的受试者中TNFα的存在已显示造成或被怀疑造成所述障碍的病理生理学或是造成所述障碍恶化的因素的皮肤和/或指甲障碍和其他障碍，例如银屑病。可以使用本发明的制剂治疗的皮肤障碍的实例是银屑病。在一种实施方式中，本发明的制剂被用于治疗斑块型银屑病。肿瘤坏死因子涉及银屑病的病理生理学(Takematsu等，(1989)Arch Dermatol Res.281：398；Victor和Gottlieb(2002)J Drugs Dermatol.1(3)：264)。
1.银屑病
本发明的制剂和方法可用于治疗患有银屑病的受试者，包括患有斑块型银屑病的受试者。肿瘤坏死因子涉及银屑病的病理生理学(Takematsu等，(1989)Arch Dermatol Res.281：398；Victor和Gottlieb(2002)J Drugs Dermatol.1(3)：264)。银屑病被描述为以皮肤上发红、发痒及厚和干燥的银色鳞屑的频繁发作为特征的皮肤炎症(刺激和发红)。具体来说，病变的形成涉及表皮增殖的原发性和继发性改变、皮肤的炎性反应和调控分子例如淋巴因子和炎性因子的表达。银屑病皮肤在形态上以表皮细胞的更新加快、表皮增厚、异常角质化、炎性细胞浸润到表皮中以及多形核白细胞和淋巴细胞浸润到表皮层中而引起基底细胞周期增加为特征。银屑病通常涉及指甲，其经常表现出点蚀、指甲分离、增厚和变色。银屑病通常伴有其他炎性障碍，例如关节炎(包括类风湿性关节炎)、炎性肠病(IBD)和克罗恩病。
银屑病的迹象最通常在躯干、肘、膝、头皮、皮肤皱襞或手指甲上看到，但是它可能影响皮肤的任何部分或所有部分。通常情况下，新的皮肤细胞从下层向上移动到表面花费约1个月。在银屑病中，该过程仅花费几天时间，从而引起死亡皮肤细胞的积累和厚鳞屑的形成。银屑病的症状包括：皮肤斑片(其为干燥或红色的)、覆盖有银色鳞屑、凸起的皮肤斑片、伴有红色边界(其可能开裂并变得疼痛，并通常位于肘、膝、躯干、头皮和手上)；皮肤病变，包括脓疱、皮肤开裂和皮肤发红；关节疼痛或发痛，其可能伴有关节炎例如银屑病性关节炎。
银屑病的治疗通常包括局部皮质甾醇类、维生素D类似物以及局部或口服类维生素A，或其组合。在一种实施方式中，本发明的TNFα抑制剂与这些常用治疗之一组合或在其存在情况下施用。
银屑病的诊断通常基于皮肤的外观。此外，可能需要皮肤活组织检查或皮肤斑片的刮屑和培养来排除其他皮肤障碍。如果关节痛存在且持续，可以使用x-射线来检查银屑病性关节炎。
在本发明的一种实施方式中，使用TNFα抑制剂来治疗银屑病，包括慢性斑块型银屑病、滴状银屑病、皮褶银屑病、脓疱型银屑病、寻常型天疱疮、红皮病型银屑病、与炎性肠病(IBD)相关的银屑病和与类风湿性关节炎(RA)相关的银屑病。在本发明的治疗方法中包括的银屑病的具体类型在下面详细描述：
a.慢性斑块型银屑病
本发明的制剂和方法可用于治疗患有慢性斑块型银屑病的受试者。肿瘤坏死因子涉及慢性斑块型银屑病的病理生理学(Asadullah等，(1999)Br J Dermatol.141：94)。慢性斑块型银屑病(也称为寻常性银屑病)是银屑病的最常见形式。慢性斑块型银屑病以皮肤的隆起发红斑片(其尺寸从硬币大小直至大得多的尺寸)为特征。在慢性斑块型银屑病中，斑块可以是单个或多个，它们的尺寸可以在几毫米到几厘米之间变化。斑块通常为红色，具有鳞状表面，并在轻轻刮擦时反光而产生“银色”效果。慢性斑块型银屑病的病灶(其通常是对称的)出现于整个身体，但尤其倾向于伸肌面，包括膝、肘、腰骶区、头皮和指甲。有时，慢性斑块型银屑病可以出现在阴茎、外阴和皱褶上，但是通常不存在鳞屑。患有慢性斑块型银屑病的患者的诊断通常是基于上述临床特点。具体来说，慢性斑块型银屑病中病灶的分布、颜色和典型的银色鳞屑是慢性斑块型银屑病的特征。
b.滴状银屑病
本发明的制剂和方法可用于治疗患有滴状银屑病的受试者。滴状银屑病是指以水滴形鳞状斑块为特征的银屑病形式。滴状银屑病的爆发一般在感染之后，最显著为链球菌咽部感染之后。滴状银屑病的诊断通常是基于皮肤的外观以及通常具有最近咽喉痛病史的事实。
c.皮褶银屑病
本发明的制剂和方法可用于治疗患有皮褶银屑病的受试者。皮褶银屑病是其中患者具有光滑的、通常发红且发炎的湿润皮肤区域(这不同于与斑块型银屑病相关的鳞屑)的银屑病形式。皮褶银屑病也称为擦烂性银屑病或屈侧银屑病。皮褶银屑病大多数发生在腋窝、腹股沟中、乳房下方以及生殖器和臀部周围的其他皮肤折皱中，并且作为病灶出现部位的结果，摩擦和出汗可能刺激患病区域。
d.脓疱型银屑病
本发明的制剂和方法可用于治疗患有脓疱型银屑病的受试者。脓疱型银屑病是引起充脓水疱的银屑病形式，所述脓疱的尺寸和位置可变，但通常出现在手和足上。脓疱可以是局部的或分布在大的身体区域上。脓疱型银屑病可能是柔嫩且疼痛的，并可能引起发烧。
e.其他银屑病障碍
可以使用本发明的制剂和方法治疗的银屑病障碍的其他实例包括红皮病型银屑病、寻常性银屑病、与IBD相关的银屑病和与关节炎包括类风湿性关节炎相关的银屑病。
2.寻常性天疱疮
本发明的制剂和方法可用于治疗患有寻常性天疱疮的受试者。寻常性天疱疮是严重的自身免疫性系统性皮肤病，其通常影响口腔粘膜和皮肤。寻常性天疱疮的发病机理被认为是针对皮肤和口腔粘膜细胞桥粒的自身免疫性过程。结果，细胞不彼此粘附。所述障碍表现为大的流体填充的、易破裂的大泡，并具有显著的组织学外观。消炎药是这种具有高死亡率的疾病的唯一有效疗法。在患有寻常性天疱疮的患者中出现的并发症是难治性疼痛、营养干扰和流体损失以及感染。
3.特应性皮炎/湿疹
本发明的制剂和方法可用于治疗患有特应性皮炎的受试者。特应性皮炎(也称为湿疹)是通过鳞状和发痒斑块来分类的慢性皮肤障碍。患有湿疹的人通常具有过敏性病症例如哮喘、花粉热或湿疹的家族史。特应性皮炎是在皮肤中发生的超敏反应(类似于过敏症)，从而引起慢性炎症。炎症引起皮肤变得发痒和鳞状。长期刺激和刮擦可以引起皮肤增厚并变成皮革样质地。暴露于环境刺激物可能使症状恶化，皮肤干燥、暴露于水、温度变化以及应激也可能如此。
患有特应性皮炎的受试者可以通过某些症状鉴定，这些症状通常包括强烈发痒、伴有渗出和结壳的水疱、水疱周围的皮肤发红或炎症、皮疹、干燥、皮革样皮肤区域、由刮擦引起的皮肤原始区域和耳分泌物/出血。
4.结节病
本发明的制剂和方法可用于治疗患有结节病的受试者。结节病是在淋巴结、肺、肝脏、眼、皮肤和/或其他组织中出现肉芽肿性炎症的疾病。结节病包括表皮结节病(皮肤的结节病)和结节性结节病(淋巴结的结节病)。患有结节病的患者可以通过症状来鉴定，所述症状通常包括总体不适、不安或患病感觉、发热、皮肤病变。
5.结节性红斑
本发明的制剂和方法可用于治疗患有结节性红斑的受试者。结节性红斑是指以皮肤下(通常在小腿前侧上)的柔嫩的红色结节为特征的炎性障碍。与结节性红斑相关的病灶通常以平坦但坚固的发热红色疼痛肿块(约1英寸跨度)开始。在几天内，病灶可能变得发紫，然后经过几周后消退为棕褐色平坦斑片。
在某些情况下，结节性红斑可能与感染相关，包括链球菌、球孢子菌病、结核病、乙型肝炎、梅毒、猫抓病、兔热症、耶尔森氏菌、钩端螺旋体病鹦鹉热、组织胞浆菌病、单核细胞增多症(EBV)。在其他情况下，结节性红斑可能与对某些药物的敏感相关，所述药物包括口服避孕药、青霉素、磺胺药物、砜类、巴比妥酸盐、乙内酰脲、非那西汀、水杨酸盐、碘化物和孕酮。结节性红斑通常与其他障碍包括白血病、结节病、风湿热和溃疡性结肠炎相关。
结节性红斑的症状通常出现在胫部上，但是病变也可能出现在身体的其他区域上，包括臀部、腓、踝、大腿和上肢。患有结节性红斑的受试者的其他症状可以包括发热和不适。
6.化脓性汗腺炎
本发明的制剂和方法可用于治疗患有化脓性汗腺炎的受试者。化脓性汗腺炎是指在腹股沟中以及有时在手臂下和乳房下发生肿胀、疼痛、发炎的病变或肿块的皮肤障碍。化脓性汗腺炎在顶泌腺出口变得被汗液阻塞或由于腺体发育不完全而不能正常排液时发生。封闭在腺体中的分泌物迫使汗液和细菌进入周围组织，从而引起皮下硬结、炎症和感染。化脓性汗腺炎局限于身体含有顶泌腺的区域。这些区域是腋窝、乳晕、腹股沟、会阴、肛周和脐周区域。
7.扁平苔藓
本发明的制剂和方法可用于治疗患有扁平苔藓的受试者。肿瘤坏死因子涉及扁平苔藓的病理生理学(Sklavounou等，(2000)J OralPathol Med.29：370)。扁平苔藓是指引起炎症、发痒和显著皮肤病变的一种皮肤和粘膜障碍。扁平苔藓可能与丙型肝炎或某些药物相关。
8.斯威特(Sweet)综合征
本发明的制剂和方法可用于治疗患有斯威特综合征的受试者。炎性细胞因子包括肿瘤坏死因子涉及斯威特综合征的病理生理学(Reuss-Borst等，(1993)Br J Haematol.84：356)。斯威特综合征由R.D.Sweet在1964年描述，其以发热、白细胞增多和皮疹的突然发作为特征。皮疹由柔嫩、红斑样、界限分明的丘疹和斑块构成，其在显微镜下显示出致密的嗜中性粒细胞浸润。病灶可能出现在任何位置，但倾向于身体上部包括面部。单个病灶通常被描述为假水泡或假脓疱性的，但也可能是明显的脓疱、大疱或溃疡性的。在患有斯威特综合征的患者中也经常报道涉及口腔和眼(结膜炎或巩膜炎)。白血病也与斯威特综合征相关。
9.白癫风
本发明的制剂和方法可用于治疗患有白癜风的受试者。白癫风是指皮肤区域失去色素从而导致具有正常皮肤质地的不规则白色斑片的皮肤病症。白癜风的特征性的病灶表现为平坦的脱色区域。病灶的边缘界限明确但是不规则。在患有白癜风的受试者中经常受到影响的区域包括面部、肘和膝、手和足以及外生殖器。
10.硬皮病
本发明的制剂和方法可用于治疗患有硬皮病的受试者。肿瘤坏死因子涉及硬皮病的病理生理学(Tutuncu Z等，(2002)Clin ExpRheumatol.20(6Suppl 28)：S146-51；Mackiewicz Z等，(2003)ClinExp Rheumatol.21(1)：4l-8；Murota H等，(2003)Arthritis Rheum.48(4)：1117-25)。硬皮病是指以皮肤、血管、骨骼肌和内部器官的变化为特征的弥散性结缔组织病。硬皮病也被称为CREST综合征或进行性系统性硬化病，并且通常影响年龄在30-50岁之间的人。女性比男性更常患病。
硬皮病的病因未知。该疾病可以产生局部或全身症状。疾病的进程和严重性在患者中广泛变化。皮肤和其他器官中胶原蛋白的过度沉积产生症状。也出现对皮肤和患病器官内小血管的损伤。在皮肤中，可能发生溃疡、钙化和色素沉着的改变。全身性特征可以包括心、肺、肾和胃肠道的纤维化和退化。
患有硬皮病的患者表现出某些临床特点，包括手指和脚趾响应于热和冷而变白、变蓝或发红(Raynaud现象)，手指和关节疼痛、僵硬和肿胀，皮肤增厚及手和前臂发亮，食管返流或胃灼热，吞咽困难和呼吸短促。用于诊断硬皮病的其他临床症状包括红细胞沉降率(ESR)升高、类风湿因子(RF)升高、抗核抗体试验阳性、显示出蛋白和在显微镜下血的尿分析、可能显示出纤维化的胸部X-射线分析以及显示出限制性肺病的肺功能研究。
11.指甲障碍
本发明的制剂和方法可用于治疗患有指甲障碍的受试者。指甲障碍包括指甲的任何异常情况。具体的指甲障碍包括但不限于点蚀、反甲、博氏线、匙状甲、甲剥离、黄甲、翼状胬肉(见于扁平苔藓)和白甲病。点蚀以指甲表面上存在小的凹坑为特征。可以沿着指甲在“纵向”或“横向”方向上发生隆脊或线性升高。博氏线是在手指甲中“横向”(横断)发生的线性凹陷。白甲病描述指甲上的白色条纹或斑点。反甲是其中指甲具有升高的隆脊并且薄的手指甲异常形状，凹形反甲通常与铁缺乏相关。
可以用本发明的TNFα抗体治疗的指甲障碍还包括银屑病指甲。银屑病指甲包括可归因于银屑病的指甲变化。在某些情况下，银屑病可能只发生在指甲中而不发生在身体别处。指甲的银屑病性变化从轻度到重度不等，一般反映出甲板、甲基质即指甲从其生长的组织、甲床即指甲下面的组织以及指甲基部处的皮肤的银屑病牵连程度。由脓疱型银屑病造成的甲床损伤可能引起指甲丧失。银屑病中的指甲变化落入可能单一发生或全部一起发生的总体类别中。在一种类别的银屑病指甲中，可能是由于银屑病引起的指甲生长缺陷，甲板有深的凹陷。在另一类别中，指甲具有黄色至黄粉色变色，可能是由于银屑病牵连到甲床造成的。银屑病指甲的第三种亚型以在甲板下出现的白色区域为特征。所述白色区域实际上是气泡标记的斑点，其中甲板在那里与甲床脱离。在指甲周围还可能存在变红的皮肤。第四类别表现为甲板剥落成黄色斑片、即甲变形，可能是由银屑病牵连到甲基质造成的。第五类别以指甲整体丧失为特征，其是由于银屑病牵连到甲基质和甲床造成。
本发明的制剂和方法也可用于治疗通常与扁平苔藓相关的指甲障碍。患有扁平苔藓的受试者中的指甲通常显示出甲板变薄和表面粗糙，并具有纵向的隆脊或翼状胬肉。
本发明的制剂和方法可用于治疗指甲障碍，例如本文中所描述的指甲障碍。指甲障碍通常与皮肤障碍相关。在一种实施方式中，本发明包括使用TNFα抗体治疗指甲障碍的方法。在另一种实施方式中，指甲障碍与另一种障碍包括皮肤障碍如银屑病相关。在另一种实施方式中，与指甲障碍相关的障碍是关节炎、包括银屑病性关节炎。
12.其他皮肤和指甲障碍
本发明的制剂和方法可用于治疗其他皮肤和指甲障碍，例如慢性光化性皮炎、大疱性类天疱疮和斑秃。慢性光化性皮炎(CAD)也称为光敏性皮炎/光化性类网状细胞增多综合征(PD/AR)。CAD是皮肤(特别是在暴露于日光或人造光的区域中)变得发炎的一种病症。通常，CAD患者对于与他们的皮肤发生接触的某些物质、特别是各种花、树木、香水、防晒霜和橡胶化合物具有过敏性。大疱性类天疱疮是指以在躯干和四肢上形成大的水疱为特征的皮肤障碍。斑秃是指以头皮或胡须中的圆形全秃斑片为特征的脱发。
K.代谢障碍
本发明的制剂和方法可用于治疗代谢疾病。TNFα涉及广泛的各种障碍、包括代谢障碍例如糖尿病和肥胖症的病理生理学(Spiegelman和Hotamisligil(1993)Cell 73：625；Chu等，(2000)Int J Obes Relat Metab Disord.24：1085；Ishii等，(2000)Metabolism.49：1616)。
代谢障碍影响身体对完成生理功能所需的物质进行加工的方式。本发明的大量代谢障碍共有某些特征，即它们与胰岛素抵抗、调切血糖的能力缺失、体重增加和体重指数提高相关。代谢障碍的实例包括糖尿病和肥胖症。糖尿病的实例包括1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病性神经病、外周神经病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性溃疡形成、视网膜病溃疡形成、糖尿病性大血管病和肥胖症。可以使用本发明的制剂和方法治疗的代谢障碍的实例在下面更详细地描述：
1.糖尿病
本发明的制剂和方法可用于治疗糖尿病。肿瘤坏死因子涉及糖尿病的病理生理学(参见例如Navarro J.F.，Mora C.，Maca，Am J KidneyDis.2003 Jul；42(1)：53-61；Daimon M等，Diabetes Care.2003 Jul；26(7)：2015-20；Zhang M等，J Tongji Med Univ.1999；19(3)：203-5；Barbieri M等，Am J Hypertens.2003 Jul；16(7)：537-43.)。例如，TNFα涉及胰岛素抵抗的病理生理学。已发现，在患有胃肠癌的患者中血清TNF水平与胰岛素抵抗相关联(参见例如McCall，J.等，Br.J.Surg.1992；79：1361-3)。
糖尿病包括该障碍的两种最常见的类型，即I型糖尿病和II型糖尿病，其都是由于身体不能调控胰岛素而产生。胰岛素是由胰腺对血液中血糖(葡萄糖)水平升高作出响应而释放的激素。
当在本文中使用时，术语“1型糖尿病”是指当胰腺产生过少胰岛素而不能适当地调控血糖水平时发生的一种慢性疾病。1型糖尿病也被称为胰岛素依赖型糖尿病、IDMM、幼年发病型糖尿病和I型糖尿病。1型糖尿病显示出是胰腺β细胞的进行性自身免疫破坏及随后的胰岛素缺乏的结果。
术语“2型糖尿病”是指当胰腺不能产生足够胰岛素以保持正常血糖水平时发生的一种慢性疾病，通常是由于身体对胰岛素作出良好反应。2型糖尿病也被称为非胰岛素依赖型糖尿病、NDDM和II型糖尿病。
糖尿病可以通过进行葡萄糖耐受试验来诊断。在临床上，糖尿病通常被分为几个基本类别。这些类别的原发性实例包括自身免疫性糖尿病、非胰岛素依赖型糖尿病(1型NDDM)、胰岛素依赖型糖尿病(2型IDDM)、非自身免疫性糖尿病、非胰岛素依赖型糖尿病(2型NIDDM)和年轻人的成年发作型糖尿病(MODY)。通常为称为继发性的其他类别是指由引起或允许糖尿病症状发生的某些可鉴别的病症造成的糖尿病。继发性类别的实例包括由胰腺疾病、激素异常引起的糖尿病、药物或化学物质诱导的糖尿病、由胰岛素受体异常引起的糖尿病、与遗传综合征相关的糖尿病和其他原因的糖尿病(参见例如Harrison’s(1996)14th ed.，New York，McGraw-Hill)。
糖尿病本身表现在上述类别中，并能够引起在下面章节中讨论的几种并发症。因此，本发明的抗体或其抗原结合片段可用于治疗糖尿病。在一种实施方式中，本发明的TNFα抗体或其抗原结合片段被用于治疗与上述可鉴别的类别相关的糖尿病。
糖尿病通常用饮食、胰岛素药物和本文中描述的各种药物来治疗。因此，本发明的制剂也可以与常用于治疗代谢障碍和通常与糖尿病相关的疼痛的药剂组合施用。
糖尿病本身表现在许多与糖尿病相关的并发症和病症中，其包括下列类别：
a.糖尿病性神经病和外周神经病
本发明的制剂和方法可用于治疗糖尿病性神经病或外周神经病。肿瘤坏死因子涉及糖尿病性神经病和外周神经病的病理生理学(参见Benjafield等，(2001)Diabetes Care.24：753；Qiang，X.等，(1998)Diabetologia.41：1321-6；Pfeiffer等，(1997)Horm Metab Res.29：111)。
术语“神经病”(也被称为糖尿病性神经损伤)当在本文中使用时，是指糖尿病的一种常见并发症，其中作为高血糖(高水平血液葡萄糖)的结果而使神经受到损伤。已认识到多种糖尿病性神经病，例如远端多发感觉运动神经病、局灶性运动神经病和自主神经病。
术语“外周神经病”(也被称为外周神经炎和糖尿病性神经病)当在本文中使用时，是指神经不能将信息传入和传出脑和脊髓。外周神经病产生多种症状，例如疼痛、失去感觉和不能控制肌肉。在某些情况下，神经不能控制血管、肠功能和其他器官导致血压、消化异常和丧失其他基本非自主过程。外周神经病可能涉及单一神经或神经群的损伤(单发性神经病)，或者可能影响多个神经(多发性神经病)。
影响交感和副交感神经的小的有髓鞘和无髓鞘纤维的神经病被称为“外周神经病”。此外，外周神经病的相关障碍(也称为外周神经炎和糖尿病性神经病)是指神经不能将信息传入和传出脑和脊髓。这产生多种症状，例如疼痛、失去感觉和不能控制肌肉。在某些情况下，神经不能控制血管、肠功能和其他器官导致血压、消化异常和丧失其他基本非自主过程。外周神经病可能涉及单一神经或神经群的损伤(单发性神经病变)，或者可能影响多个神经(多发性神经病)。
术语“糖尿病性神经病”是指糖尿病的一种常见并发症，其中作为高血糖(高水平血液葡萄糖)的结果而使神经受到损伤。糖尿病性神经病变也被称为神经病和糖尿病性神经损伤。已认识到多种糖尿病性神经病变，例如远端多发感觉运动神经病、局灶性运动神经病和自主神经病。
b.糖尿病性视网膜病
本发明的制剂和方法可用于治疗糖尿病性视网膜病。肿瘤坏死因子涉及糖尿病视网膜病的病理生理学(Scholz等，(2003)TrendsMicrobiol.11：171)。当在本文中使用时，术语“糖尿病性视网膜病”是指由长期糖尿病引起的对眼的视网膜的进行性损伤。糖尿病性视网膜病包括增殖性视网膜病。增殖性神经病变又包括新血管形成、视网膜出血(pertinal hemmorrhave)和视网膜脱落。
在晚期视网膜病中，视网膜表面上的小血管增殖。这些血管脆弱，倾向于出血，并可能引起视网膜出血。出血可以使视力模糊，并且当出血被再吸收时形成纤维组织，因而倾向于发生视网膜脱落和丧失视力。此外，糖尿病性视网膜病包括增殖性视网膜病，其包括新血管形成、视网膜出血和视网膜脱落。糖尿病性视网膜病还包括“背景性视网膜病”，其涉及发生于视网膜层的变化。
c.糖尿病性溃疡形成和视网膜病溃疡形成
本发明的制剂和方法可用于治疗糖尿病性溃疡形成或视网膜病溃疡形成。肿瘤坏死因子涉及糖尿病性溃疡的病理生理学(参见Lee等，(2003)Hum Immunol.64：614；Navarro等，(2003)Am J KidneyDis.42：53；Daimon等，(2003)Diabetes Care.26：2015；Zhang等，(1999)J Tongji Med Univ.19：203；Barbieri等，(2003)Am JHypertens.16：537；Venn等，(1993)Arthritis Rheum.36：819；Westacott等，(1994)J Rheumatol.21：1710)。
当在本文中使用时，术语“糖尿病性溃疡形成”是指作为糖尿病的并发症而导致的溃疡。溃疡是皮肤或粘膜上由炎症、感染、恶性病症或代谢障碍所引起的坑状病变。糖尿病性溃疡形成通常可以出现在肢体和肢端上，更通常在足上。这些由糖尿病病症例如神经病变和血管机能不全引起的溃疡可以引起局部缺血和伤口愈合不良。更广泛的溃疡可能发展成骨髓炎。一旦发生骨髓炎，可能难以单独使用抗生素根治，并且可能必需截肢。
当在本文中使用时，“视网膜病溃疡形成”是指引起或导致对眼和眼的视网膜的损伤的溃疡。视网膜病溃疡形成可以包括如视网膜出血的病症。
d.糖尿病性大血管病
本发明的制剂和方法可用于治疗糖尿病性大血管病。肿瘤坏死因子涉及糖尿病性大血管病的病理生理学(Devaraj等，(2000)Circulation.102：191；Hattori Y等，(2000)Cardiovasc Res.46：188；Clausell N等，(1999)Cardiovasc Pathol.8：145)。术语“糖尿病性大血管病”(也称为“大血管病”)当在本文中使用时，是指由糖尿病引起的血管疾病。当例如脂肪和血凝块在大血管中积累并粘着于血管壁时发生糖尿病性大血管病并发症。糖尿病性大血管病包括多种疾病，例如冠状动脉病、脑血管疾病和外周血管病、高血糖症和心血管疾病以及中风。
2.肥胖症
本发明的制剂和方法可用于治疗肥胖症。肿瘤坏死因子涉及肥胖症的病理生理学(参见例如Pihlajamaki J等，(2003)ObesRes.11：912；Barbieri等，(2003)Am J Hypertens.16：537；Tsuda等，(2003)J Nutr.133：2125)。肥胖症增加人由于糖尿病、中风、冠状动脉疾病、高血压、高胆固醇及肾脏和胆囊障碍而患病和死亡的风险。肥胖症还可能增加某些类型的癌症的风险，并可能是发生骨关节炎和睡眠呼吸暂停的风险因子。肥胖症可以用本发明的抗体单独或与其他代谢障碍、包括糖尿病组合进行治疗。
L.血管炎
本发明的制剂和方法可用于治疗患有血管炎的受试者。TNFα涉及各种血管炎的病理生理学(参见例如Deguchi等，(1989)Lancet.2：745)。当在本文中使用时，术语“其中TNFα活性有害的血管炎”意图包括其中在患有所述障碍的受试者中TNF-α的存在已显示造成或怀疑造成了所述障碍的病理生理学或是造成所述障碍恶化的因素的血管炎。这样的障碍可以由例如患有所述障碍的受试者的生物流体中TNF-α浓度的增加(例如受试者的血清、血浆、滑液等中TNF-α浓度的增加)来证实，所述TNF-α浓度的增加可以例如使用如上所述的抗TNF-α抗体来检测。
其中TNFα活性有害的血管炎存在大量实例，包括白赛病。下面进一步讨论本发明的制剂和方法在特定血管炎治疗中的使用。在某些实施方式中，如下所述，将抗体或抗体部分与另一种治疗剂组合施用于受试者。
本发明的制剂和方法可用于治疗其中TNFα活性有害的血管炎，其中TNFα活性的抑制预期将减轻血管炎的症状和/或进展，或预防血管炎。患有血管炎或有发生血管炎风险的受试者可以通过临床症状和测试来鉴定。例如，患有血管炎的受试者通常产生针对嗜中性粒细胞的细胞质中的某些蛋白的抗体，抗嗜中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)。因此，在某些情况下，血管炎可以通过测量ANCA存在的测试(例如ELISA)来证实。
血管炎及其结果可能是疾病的唯一表现，或者它可能是另一种原发疾病的继发成分。血管炎可能局限于单一器官，或者它可能同时影响几个器官，并且取决于症状，可以影响所有尺寸的动脉和静脉。血管炎可以影响身体内的任何器官。
在血管炎中，血管腔通常受损，其伴有由所涉及血管供血的组织的局部缺血。由于可以涉及任何类型、尺寸和位置的血管(例如动脉、静脉、小动脉、小静脉、毛细血管)的这一事实，从这一过程可能引起广范围的障碍。如下所述，血管炎一般按照受影响血管的尺寸分类。应该指出，一些小血管和大血管的血管炎可能涉及中等尺寸的动脉；但大和中等尺寸血管的血管炎不涉及比动脉更小的血管。大血管疾病包括但不限于也称为颞动脉炎或颅动脉炎的巨细胞性动脉炎、风湿性多肌痛以及也称为主动脉弓综合征、青年女性动脉炎和无脉病的Takayasu病或动脉炎。中血管疾病包括但不限于经典结节性多动脉炎和也称为粘膜皮肤淋巴结综合征的川崎病。小血管病的非限制性实例是白塞综合征、韦格纳肉芽肿病、镜下多脉管炎、也称为皮肤血管炎的过敏性血管炎、小血管炎、Henoch-Schonlein紫癜、也称为Churg Strauss综合征的变应性肉芽肿病和血管炎。其他血管炎包括但不限于孤立的中枢神经系统血管炎和也称为Buerger病的血栓闭塞性血管炎。经典结节性多动脉炎(PAN)、镜下PAN和变应性肉芽肿病通常也分组在一起，并被称为系统性坏死血管炎。血管炎的进一步描述如下所述：
1.大血管的血管炎
在一种实施方式中，本发明的制剂和方法可用于治疗具有大血管的血管炎的受试者。当在本文中使用时，术语“大血管”是指主动脉和导向主要身体区域的最大分支。大血管包括例如主动脉及其分支和相应的静脉，例如锁骨下动脉、头肱动脉、颈总动脉、无名静脉、内和外颈静脉、肺动脉和静脉、腔静脉、肾动脉和静脉、股动脉和静脉以及颈动脉。大血管的血管炎的实例描述如下。
a.巨细胞性动脉炎(GCA)
本发明的制剂和方法可用于治疗巨细胞性动脉炎。肿瘤坏死因子涉及巨细胞性动脉炎的病理生理学(Sneller，M.C.(2002)Cleve.Clin.J.Med.69：SII40-3；Schett，G.等，(2002)Ann.Rheum.Dis.61：463)。巨细胞性动脉炎(GCA)是指涉及血管、特别是从颈部的外颈动脉分支的大或中动脉的炎症和损伤的血管炎。GCA也被称为颞动脉炎或颅动脉炎，是在老年人中最常见的原发血管炎。它几乎专门影响年龄超过50岁的个体，但是也有年龄为40岁或更年轻的患者的记录病例。GCA通常影响颅外动脉。GCA可以影响颈动脉的分支，包括颞动脉。GCA也是能够涉及多个部位中的动脉的全身性疾病。
在组织病理学上，GCA是在血管壁内具有炎性单核细胞浸润并常常伴有朗格汉斯型巨细胞形成的一种全动脉炎。存在内膜增殖、肉芽肿性炎症和内弹性膜的破碎。器官中的病理学发现是与所涉及的血管相关的局部缺血的结果。
患有GCA的患者表现出某些临床症状，包括发热、头痛、贫血和高红细胞沉降率(ESR)。GCA的其他典型指征包括颌和舌跛行、头皮压痛、全身症状、苍白色视盘水肿(特别是“石灰白”视盘水肿)和视觉障碍。诊断通过颞动脉活组织检查来证实。
b.风湿性多肌痛
本发明的制剂和方法可用于治疗风湿性多肌痛。肿瘤坏死因子涉及风湿性多肌痛的病理生理学(Straub，R.H.等，(2002)Rheumatology(Oxford)41：423；Uddhammar，A.等，(1998)Br.J.Rheumatol.37：766)。风湿性多肌痛是指与颈、肩和臀中的中度至重度肌肉疼痛和僵硬相关的风湿性障碍，在早晨最为明显。在患有风湿性多肌痛的患者中，在大多数循环单核细胞中也检测到IL-6和IL-1β表达。风湿性多肌痛可能独立发生，或者它可能与作为血管炎症的GCA共同存在或在GCA之前出现。
c.Takayasu动脉炎
本发明的制剂和方法可用于治疗Takayasu动脉炎。肿瘤坏死因子涉及Takayasu动脉炎的病理生理学(Kobayashi，Y.和Numano，F.(2002)Intern.Med.41：44；Fraga，A.和Medina F.(2002)Curr.Rheumatol.Rep.4：30)。Takayasu动脉炎是指以主动脉及其主要分支的炎症为特征的血管炎。Takayasu动脉炎(也称为主动脉弓综合征、青年女性动脉炎和无脉病)影响胸和腹主动脉及其主要分支或肺动脉。主动脉壁及其分支(例如颈、无名和锁骨下动脉)的纤维性增厚可能导致从主动脉弓来源的血管的内腔尺寸减小。这种病症通常也影响肾动脉。
Takayasu动脉炎主要影响年龄通常在20-40岁的年轻女性，特别是亚裔，并可能表现为不适、关节痛和肢端跛行的逐渐发作。大多数患者具有不对称降低的脉搏，通常伴有手臂的血压差。可能发生冠状动脉和/或肾动脉狭窄。
Takayasu动脉炎的临床特征可以分成早期炎性疾病的特征和晚期疾病的特征。Takayasu病的早期炎性阶段的临床特征是：不适、低度发热、体重减轻、肌痛、关节痛和多形性红斑。Takayasu病的晚期阶段以动脉的纤维性狭窄和血栓形成为特征。产生的主要临床特征是局部缺血现象，即微弱和不对称的动脉脉搏、手臂之间血压不一致、视觉紊乱例如暗点和偏盲、其他神经学特征包括眩晕和昏厥、轻偏瘫或中风。所述临床特征源自于由动脉狭窄和血栓形成造成的局部缺血。
2.中血管疾病
本发明的制剂和方法可用于治疗具有中血管血管炎的受试者。术语“中血管”被用于指称作为主要内脏动脉的那些血管。中血管的实例包括肠系膜动脉和静脉、髂动脉和静脉以及上颌动脉和静脉。中血管的血管炎的实例在下面描述。
a.结节性多动脉炎
本发明的制剂和方法可用于治疗结节性多动脉炎。肿瘤坏死因子涉及结节性多动脉炎的病理生理学(DiGirolamo，N.等，(1997)J.Leukoc.Biol.61：667)。结节性多动脉炎或结节性动脉周围炎是指一种作为严重血管疾病的血管炎，其中小和中等尺寸的动脉由于受到流浪免疫细胞的攻击而变得肿胀和受损。结节性多动脉炎通常比儿童更频繁地影响成人。它损坏由患病动脉供血的组织，因为没有适当的血液供应的情况下这些组织不能接受足够的氧气和营养。
在患有结节性多动脉炎的患者中表现出的症状一般来说由患病器官(通常为皮肤、心脏、肾和神经系统)的损伤引起。结节性多动脉炎的全身性症状包括发热、疲劳、虚弱、食欲不振和体重减轻。常见肌肉疼痛(肌肉痛)和关节疼痛(关节痛)。患有结节性多动脉炎的受试者的皮肤也可能显示出皮疹、肿胀、溃疡和团块(结节性病变)。
经典的PAN(结节性多动脉炎)是小至中肌肉动脉的系统性动脉炎，其中通常涉及肾和内脏动脉。在50％的PAN患者中，腹部血管具有动脉瘤或堵塞。经典的PAN不涉及肺动脉，尽管可能涉及支气管血管。肉芽肿、显著的嗜酸性粒细胞增多症和过敏素质不是该综合征的部分。尽管可能涉及任何器官系统，但最常见的表现包括外周神经病变、多发性单神经炎、肠缺血、肾缺血、睾丸痛和网状青斑。
b.川畸病
本发明的制剂和方法可用于治疗川崎病。肿瘤坏死因子涉及川畸病的病理生理学(Sundel，R.P.(2002)Curr.Rheumatol.Rep.4：474；Gedalia，A.(2002)Curr.Rheumatol.Rep.4：25)。尽管川崎病的病因未知，但它与冠状动脉的急性炎症相关，表明与该疾病相关的组织损伤可能由促炎性因子例如TNFα介导。川畸病是指影响粘膜、淋巴结、血管内衬和心脏的血管炎。川畸病通常也被称为粘膜皮肤淋巴结综合征、粘膜皮肤淋巴结病和幼儿多动脉炎。患有川畸病的受试者发生通常涉及冠状动脉的血管炎，其能够引起心肌炎和心包炎。通常随着急性炎症减退，冠状动脉可能发生动脉瘤、血栓症并引起心肌梗塞。
川畸病是伴有手掌和足底浮肿的发热性系统性血管炎，并伴有颈部淋巴结增大、唇皲裂和“草莓舌”。尽管在整个身体的血管中发现炎性反应，但最终器官损伤的最常见位点是冠状动脉。川畸病主要影响5岁以下儿童。在日本发病率最高，但在西方正越来越多被认识到，并且现在是美国儿童中获得性心脏病的主要病因。川崎病的最严重并发症是冠状动脉炎和动脉瘤形成，其发生在三分之一的未治疗患者中。
3.小血管疾病
本发明的制剂和方法可用于治疗小血管疾病。在一种实施方式中，本发明的TNFα抗体被用于治疗患有小血管炎的受试者。术语“小血管”被用于指称小动脉、小静脉和毛细血管。小动脉是只含1或2层平滑肌细胞且终止于并延续到毛细血管网络的动脉。小静脉将血液从毛细血管网络输送到静脉，毛细血管将小动脉和小静脉相连接。小血管的血管炎的实例描述如下。
a.白赛病
本发明的制剂和方法可用于治疗白赛病。肿瘤坏死因子涉及白塞病的病理生理学(Sfikakis，P.P.(2002)Ann.Rheum.Dis.61：ii51-3；Dogan，D.和Farah，C.(2002)Oftalmologia.52：23)。白赛病是涉及遍及身体的血管的炎症的慢性障碍。白赛病也可以引起各种类型的皮肤病变、关节炎、肠炎和脑膜炎(脑和脊髓的膜的炎症)。作为白赛病的结果，患有这种障碍的受试者可能在整个身体的组织和器官包括胃肠道、中枢神经系统、血管系统、肺或肾中具有炎症。白赛病在男性中比在女性中常见3倍，并且在东地中海地区和日本更常见。
b.韦格纳肉芽肿病
本发明的制剂和方法可用于治疗韦格纳肉芽肿病。肿瘤坏死因子涉及韦格纳肉芽肿病的病理生理学(Marquez，J.等，(2003)Curr.Rheumatol.Rep.5：128；Harman，L.E.和Margo，C.E.(1998)Surv.Ophthalmol.42：458)。韦格纳肉芽肿病是指引起上呼吸道(鼻、鼻窦、耳)、肺和肾中的血管炎症的血管炎。韦格纳肉芽肿病也被称为中线肉芽肿。韦格纳肉芽肿病包括涉及呼吸道的肉芽肿性炎症，以及影响小至中尺寸血管的坏死性血管炎。患有韦格纳肉芽肿病的受试者通常也具有关节炎(关节炎症)。在受影响的受试者中也可能存在肾小球性肾炎，但事实上可能牵涉任何器官。
c.Churg-Strauss综合征
本发明的制剂和方法可用于治疗Churg-Strauss综合征。肿瘤坏死因子涉及Churg-Strauss综合征的病理生理学(Gross，W.L(2002)Curr.Opin.Rheumatol.14：11；Churg，W.A.(2001)Mod.Pathol.14：1284)。Churg-Strauss综合征是指系统性的并表现出哮喘和嗜曙红血球增多的早期表象征兆的血管炎。Churg-Strauss综合征也被称为变应性肉芽肿病和脉管炎，并在过敏性鼻炎、哮喘和嗜曙红血球增多症的情形中出现。鼻窦炎和肺浸润也出现在Churg-Strauss综合征中，主要影响肺和心脏。常见涉及外周神经病变、冠状动脉炎和胃肠道。
M.其他疾病
本发明的制剂和方法也可用于治疗其中TNFα活性有害的各种其他障碍。TNFα活性涉及其病理生理学并因此可以使用本发明的抗体或抗体部分治疗的其他疾病和障碍的实例包括炎性骨障碍和骨吸收疾病(参见例如Bertolini.D.R.等，(1986)Nature 319：516-518；Konig，A.等，(1988)J.Bone Miner.Res.3：621-627；Lerner，U.H.和Ohlin，A.(1993)J.Bone Miner.Res.8：147-155；以及Shanlar.G.和Stem，P.H.(1993)Bone 14：871-876)、肝炎包括酒精性肝炎(参见例如McClain，C.J.和Cohen，D.A.(1989)Hepatology 9：349-351；Felver，M.E.等，(1990)Alcohol.Clin.Exp.Res.14：255-259；以及Hansen，J.等，(1994)Hepatology 20：461-474)、病毒性肝炎(Sheron，N.等，(1991)J.Hepatol.12：241-245；以及Hussain，M.J.等，(1994)J.Clin.Pathol.47：1112-1115)和暴发性肝炎；凝血功能障碍(参见例如van der Poll，T.等，(1990)N.Engl.J.Med.322：1622-1627；和van der Poll，T.等，(1991)Prog.Clin.Biol.Res.367：55-60)，烧伤(参见例如Giroir，B.P.等，(1994)Am.J.Physiol.267：H 118-124；以及Liu.X.S.等，(1994)Burns 20：40-44)，再灌注损伤(参见例如Scales.W.E.等，(1994)Am.J Physiol.267：G1122-1127；Serrick，C.等，(1994)Transplantation 58：1158-1162；和Yao，Y.M.等，(1995)Resuscitation 29：157-168)，瘢痕瘤形成(参见例如McCauley，R.L.等，(1992)J.Clin.Immunol.12：300-308)，瘢痕组织形成；发热；牙周疾病；肥胖症和辐射毒性。
可以用本发明的制剂和方法治疗的其他障碍的实例描述在US20040126372和US6258562，其各自在此引入作为参考。
在一种实施方式中，本发明的制剂和方法可用于治疗类风湿性关节炎、银屑病性关节炎或强直性脊柱炎。本发明的包含分离的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)的制剂可以按照对治疗类风湿性关节炎、银屑病性关节炎或强直性脊柱炎有效的用药方案和药剂量施用于人类受试者。在一种实施方式中，将在本发明的制剂中的剂量为约40mg的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)(例如0.4mL 100mg/mL的本发明制剂)每隔一周施用于人类受试者以治疗类风湿性关节炎、银屑病性关节炎或强直性脊柱炎。在一种实施方式中，将在本发明的制剂中的剂量为约80mg的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)(例如0.8mL 100mg/mL的本发明制剂)每月施用于人类受试者用于治疗类风湿性关节炎、银屑病关节炎或强直性脊柱炎。在一种实施方式中，制剂每隔一周(也称为每两周，参见在此引入作为参考的US20030235585中所描述的给药方法)皮下施用以治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎或银屑病性关节炎。在一种实施方式中，制剂每月皮下施用用于治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎或银屑病关节炎。
在一种实施方式中，本发明的制剂用于治疗克罗恩病或溃疡性结肠炎。本发明的包含分离的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)的制剂可以按照有效治疗克罗恩病的用药方案和药剂量施用于人类受试者。在一种实施方式中，将在本发明的制剂中的剂量为约160mg的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)(例如1.6mL 100mg/mL的本发明制剂)开始在约第1天施用于人类受试者，然后在两周后施用80mg抗体(例如0.8mL 100mg/mL的本发明制剂)的后续剂量，然后每隔一周施用约40mg(例如0.4mL 100mg/mL的本发明制剂)用于治疗克罗恩病。在一种实施方式中，制剂按照包含诱导剂量和维持剂量的多变剂量方案皮下施用(参见例如在此引入作为参考的美国专利公开号US20060009385和US20090317399)而用于治疗克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一种实施方式中，制剂每两周或每月皮下施用用于治疗克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一种实施方式中，将在本发明的制剂中的剂量为约80mg的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)(例如0.8mL 100mg/mL的本发明制剂)每月施用于人类受试者以用于治疗克罗恩病或溃疡性结肠炎。
在一种实施方式中，本发明的制剂被用于治疗银屑病。本发明的包含分离的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)的制剂可以按照有效治疗银屑病的用药方案和药剂量施用于人类受试者。在一种实施方式中，将在本发明的制剂中的初始剂量的约80mg的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)(例如0.8mL100mg/mL的本发明制剂)施用于人类受试者，随后从初始药剂后一周开始每隔一周施用40mg抗体(例如0.4mL 100mg/mL的本发明制剂)的后续剂量。在一种实施方式中，制剂按照包含诱导剂量和维持剂量的多变剂量方案皮下施用(参见例如各自在此引为参考的US20060009385和WO 2007/120823)以用于治疗银屑病。在一种实施方式中，制剂每两周或每月皮下施用用于治疗银屑病。在一种实施方式中，将在本发明的制剂中的剂量为约80mg的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)(例如0.8mL 100mg/mL的本发明制剂)每月施用于人类受试者以用于治疗银屑病。
在一种实施方式中，本发明的制剂被用于治疗幼年特发性关节炎(JIA)。本发明的包含分离的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)的制剂可以按照有效治疗JIA的用药方案和药剂量施用于人类受试者。在一种实施方式中，将在本发明的制剂中的20mg的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如0.2mL 100mg/mL的本发明制剂)每隔一周施用于体重为15kg(约33lbs)至低于30kg(66lbs)的受试者以用于治疗JIA。在另一种实施方式中，将在本发明的制剂中的40mg的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如0.4mL 100mg/mL的本发明制剂)每隔一周施用于体重大于或等于30kg(66lbs)的受试者以用于治疗JIA。在一种实施方式中，制剂按照基于体重的固定剂量(参见例如在此引为参考的美国专利公开号20090271164)皮下施用以用于治疗JIA。在一种实施方式中，制剂每两周或每月皮下施用以用于治疗JIA。
在一种实施方式中，分离的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)可以按照每月用药时间表施用于人类受试者以用于治疗与有害的TNFa活性相关的障碍，由此抗体每月或每四周施用一次。如上所述，可以使用本发明的制剂和方法按照每月用药时间表治疗的障碍的实例包括但不限于类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、JIA、银屑病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、化脓性汗腺炎、巨细胞性动脉炎、白赛病、结节病、糖尿病性视网膜病或银屑病性关节炎。因此，包含分离的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)的本发明制剂可以按照每月用药时间表施用于人类受试者以用于治疗与有害的TNFa活性相关的障碍。在一种实施方式中，将在本发明的制剂中的80mg人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如0.8mL100mg/mL的本发明制剂)施用于患有与有害的TNFa活性相关的障碍的受试者。在一种实施方式中，将在本发明的制剂中的80mg人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如0.8mL 100mg/mL的本发明制剂)每月或每两周施用于受试者以用于治疗与有害的TNFa活性相关的障碍。
本文描述的药剂量可以作为单一剂量递送(例如单剂量的40mg在0.4mL中或80mg剂量在0.8mL中)，或者可选地可以作为多个剂量递送(例如4个40mg剂量或2个80mg剂量用于递送160mg剂量)。
包含分离的人TNFα抗体或其抗原结合部分(例如阿达木单抗)的本发明制剂也可以与其他治疗剂组合施用于受试者。在一种实施方式中，将制剂与氨甲蝶呤或其他改善疾病的抗风湿药物(DMARD)组合施用于人类受试者以用于治疗类风湿性关节炎。在另一种实施方式中，将制剂与氨甲蝶呤或其他改善疾病的抗风湿药物(DMARD)组合施用于人类受试者以用于治疗JIA。其他组合疗法描述在美国专利号6,258,562和7,541,031以及美国专利公开号US20040126372中，所有这些专利和专利公开的全部内容在此引入作为参考。
包含人TNFα抗体或其抗原结合部分的本发明制剂也可用于治疗以前的TNF抑制剂疗法失败的受试者，例如对英夫利昔单抗失去响应或对英夫利昔单抗不耐受的受试者。
在下面的实施例中对本发明进行进一步示例说明，所述实施例不应被解释为进一步的限制。
实施例
实施例1：高浓度抗TNF-α抗体制剂减轻注射疼痛
与人抗TNF-α抗体例如阿达木单抗的皮下施用相关的疼痛已有报道。在安慰剂对照的临床试验中，用阿达木单抗治疗的患者中有20％发生注射部位反应(红斑和/或发痒、出血、疼痛或肿胀)，与此相比在接受安慰剂的患者中14％发生这些反应。大多数注射部位反应轻微且一般不需要中断药物。
与阿达木单抗相关的注射疼痛存在两种主要部分：与针刺相关的疼痛，以及与药物注射到组织中相关的疼痛。注射相关的疼痛可能与阿达木单抗制剂和/或药物体积相关。下面的研究检验了各种不同制剂是否对阿达木单抗皮下递送后的注射疼痛具有影响。
材料和方法
研究设计
本研究的主要目的是对在PHYSIOLISTM预装填注射器中的三种高浓度(100mg/mL)阿达木单抗制剂与在目前的预装填注射器中的现有(50mg/mL)阿达木单抗商品制剂的与注射相关的疼痛进行比较；以及评估三种高浓度(100mg/mL)阿达木单抗制剂与目前的(50mg/mL)阿达木单抗商品制剂相比的生物利用度。本研究的第二目的是评估所有4种阿达木单抗制剂的安全性和耐受性。
征募了200位满足本研究合格标准的健康成年男性和女性受试者参加本研究。总的来说，本研究按照随机平行分组设计进行。优选从所有200位受试者获得疼痛评估数据。药代动力学(PK)评测仅对前100位左右的受试者进行。
来自于各个治疗组的受试者按计划通过预装填注射器接受一次40mg阿达木单抗皮下注射。有4个治疗组，下面表1中示出的四种制剂每一种的一个治疗组。在满足选择标准后，将受试者以粗略相等的数量随机分配到表1中示出的4个治疗组之一中。
三种高浓度制剂(F1、F3和F4)在PHYSIOLISTM预装填注射器中，各自在0.4mL溶液中含有40mg阿达木单抗。将F1、F3和F4与在目前的预装填注射器中的40mg阿达木单抗在0.8mL溶液中的现有阿达木单抗商品制剂进行比较。各种制剂的成分描述在下面的表1中。表1中所描述的制剂也是指在下面的实施例2-7中所描述的制剂。
表1 治疗组
将满足所有入组标准并加入本研究中的前约100位受试者随机分配到四个治疗组中，每个组中人数近似相等，并作为同龄组1或同龄组2参加。将满足所有入组标准并在加入本研究中的后约100位受试者随机分配到四个治疗组中，每个组中人数近似相等，并作为同龄组3-5参加。如下面的表2中所述，同龄组编号指明受试者进行药代动力学(PK)和疼痛评估还是仅进行疼痛评估。
表2 研究受试者的分配
对约100位患者的前两个同龄组(同龄组1和2)中的所有受试者进行药代动力学样品收集和疼痛评估。同龄组3-5中的受试者仅参加疼痛评估，对这些受试者没有收集药代动力学样品。在所有5个同龄组的所有受试者中，进行安全性和耐受性评估。各位受试者被随机分配以在研究第1日接受一次阿达木单抗注射。每剂研究药物由适合的现场工作人员按照正确的注射方法通过预装填注射器进行皮下给药。注射在肚脐右侧2英寸的腹部中皮下进行。调查问卷由与进行注射的个人不同的研究工作人员尽可能频繁地进行。
同龄组1和2(药代动力学和疼痛评估)中的受试者被限制在研究现场，并观察约10天(9夜)。各受试者的封闭始于研究日第-1日(给药日前一天)，并在收集192小时血样和研究第9日的计划研究程序之后结束。收集连续的血液样品直至受试者进行门诊回访的给药后研究第57日。在整个研究中评估安全性和耐受性。同龄组3-5(仅仅疼痛评估)中的受试者被限制在研究现场并观察约3天(2夜)。各位受试者的封闭始于研究日第-1日(给药日前一天)，并在完成研究第2日的计划研究程序之后结束。在整个研究中评估安全性和耐受性。
除了生物利用度和AAA分析之外，优选如下进行耐受性评估：
1)在研究第1日的注射后即刻：由受试者完成疼痛评估模块。
2)在研究第1日注射后约10分钟：由合格的现场工作人员评定Draize量表(出血、瘀点、红斑、浮肿和瘙痒)。
3)在研究第1日注射后约15分钟：由受试者完成疼痛评估模块。
4)在研究第1日注射后约30分钟：分别由受试者和合格的现场工作人员完成疼痛评估模块和Draize量表评估。
治疗组中的受试者的人口统计数据如下，显示在下面的表3中。
表3 患者人口统计数据
Figure BPA00001718703400841
制剂
相对于商用的50mg/mL阿达木单抗制剂，研究了三种新的高浓度制剂(本文中分别称为制剂1、3或4，或F1、F3或F4)。这些制剂各自的组成列于下面的表4-7中。
表4：制剂1(F1)
本体溶液的组成
1mL本体溶液含有
Figure BPA00001718703400851
溶液的密度：1.041g/mL
*作为浓缩物使用。
表5：制剂3(F3)
本体溶液的组成
1mL本体溶液含有
Figure BPA00001718703400852
Figure BPA00001718703400861
*作为浓缩物使用。
溶液的密度：1.040g/mL
表6：制剂4(F4)
本体溶液的组成
1mL本体溶液含有
Figure BPA00001718703400862
*作为浓缩物使用。
溶液的密度：1.026g/mL
表7：商用50mg/mL阿达木单抗制剂
本体溶液的组成
1mL本体溶液含有
Figure BPA00001718703400863
Figure BPA00001718703400871
研究药物施用
将各种制剂中的研究药物(阿达木单抗)在研究第1日的第0时给药。四个治疗组在上面的表1中显示为组A、B、C和D。各个治疗组中的受试者通过预装填注射器皮下注射仅单一阿达木单抗制剂。
在本研究中使用了两种类型的注射器：目前可商购的玻璃预装填注射器(“目前预装填注射器”)用于参比的现有阿达木单抗商品制剂(40mg阿达木单抗在0.8mL溶液中)，PHYSIOLISTM预装填注射器用于三种高浓度试验制剂(40mg阿达木单抗在0.4mL溶液中)。PHYSIOLISTM预装填注射器具有29号针头(目前预装填注射器具有27号1/2英寸长的固定针头)、无乳胶针头护罩和进行了涂层以最小化沥滤的柱塞。
疼痛测试：疼痛量表
使用疼痛视觉模拟量表来定量评估疼痛感觉。按照下面的指示来评估疼痛视觉模拟量表(VAS)：
在注射后3个不同时间将疼痛量表给予受试者：研究第1天的注射后即刻、注射后15分钟以及注射后30分钟。向受试者出示并朗读疼痛量表，要求受试者沿着疼痛量表中的直线设置一个竖直标记以指示他们当前在注射部位的疼痛水平(例如参见下文)。指示0表示无疼痛，而最高评分(10)表示“可以想象的最大疼痛”。在研究中使用的示例性疼痛量表如下所示
你当前在注射部位处的疼痛水平如何？
                         
0                                    10
无疼痛                               可以想象的最大疼痛
疼痛的定性评估
在完成疼痛量表后，进行3次注射后疼痛的定性评估：研究第1天注射后即刻、注射后15分钟以及注射后30分钟。在本研究中使用的示例性疼痛定性评估如下所示：
选择描述了你当前在注射部位的疼痛水平的所有项：
闪痛
锐痛
刺痛
钝痛
不舒服
压迫
疼痛
酸痛
局部烧灼
其他＿______________________________________________________
或者
我目前在注射部位处没有不适
针痛评估
在完成疼痛的定性评估后，在注射后立即进行针痛评估。在本研究中使用的示例性针痛评估如下所示：
你能描述出针刺入你的皮肤的疼痛和由注射溶液导致的疼痛之间的差异吗？
是
否
a.如果是的话，你的主要疼痛是由刺入你的皮肤的针造成的还是由被注射溶液造成的？
我的主要疼痛由针刺入造成
我的主要疼痛由被注射溶液造成
Draize量表
在研究第1天注射后约10分钟和30分钟由合格的现场工作人员为每位受试者完成这项评估。
注射部位的出血/瘀点：
●0：无
●1：孤立的；最多5个瘀点
●2：孤立的；但是＞5个瘀点
●3：许多瘀点，某些接合
●4：表面上的血点
●5：明显的出血
注射部位的红斑：
●0：无红斑
●1：非常轻微的(几乎不能感觉到的)红斑
●2：明确的红斑
●3：中度至重度红斑
●4：重度红斑(甜菜红)
注射部位的浮肿：
●0：无浮肿
●1：非常轻微的(几乎不能感觉到的)浮肿
●2：轻微浮肿(由略微隆起明确界定的区域边缘)
●3：中度浮肿(隆起～1mm)
●4：重度浮肿(隆起＞1mm，延伸到注射区域之外)
注射位点处的瘙痒：
●0：无瘙痒
●1：偶尔瘙痒
●2：一直瘙痒
结果
为了确定是否可以改进阿达木单抗的递送，产生了新的高浓度制剂。如下所示，制剂F1、F3和F4与现有的商品阿达木单抗制剂相比具有一半的体积(即0.4mL相比于0.8mL)和两倍的蛋白质浓度(100mg/mL相比于50mg/mL)，并且它们还具有不同的赋形剂组成。本文中描述的实验被设计用于评估任一种新制剂是否优于现有的商品阿达木单抗制剂。
选择疼痛视觉模拟量表来评估注射部位疼痛，并用来评定制剂组成对疼痛感觉的影响。此外，将各种新阿达木单抗100mg/mL制剂的耐受性与现有的商品制剂(50mg/mL阿达木单抗制剂)进行比较。本实施例中的数据支持了下述令人吃惊的发现，即新制剂、特别是制剂3(F3)，与现有的商品制剂相比显著减轻疼痛。令人吃惊的是，F3与制剂F1和F4相比也显著减轻疼痛。
具体来说，图1示出了在注射后的所有时间点(即刻、15分钟和30分钟)，高浓度制剂1和3的施用与其他治疗组(F4和现有的商品制剂)相比在疼痛评估中引起显著降低。下面示出的表8概述了个体数据，并显示了F1、F3和F4制剂与0.8mL 50mg/mL商品制剂的比较。
如表8中所述，在注射后即刻，接受现有Humira制剂的受试者报告的平均(SD)疼痛评分为3.29(2.57)cm。制剂1和制剂3的平均疼痛评分在统计学上显著低于现有的Humira制剂的评分(p＜0.001)。与现有Humira制剂的估算差异对于制剂F1来说为-1.50(95％CI：-2.31--0.69cm)，对于制剂F3来说为-2.70(95％CI：-3.52--1.89cm)。因此，治疗A和B(高浓度制剂1和3)分别引起注射部位疼痛45.6％和82.7％的减轻。对于在注射后15分钟和30分钟时评估的疼痛评分未进行统计学检验，这是因为大部分受试者在这些时间点没有报告疼痛。如图1中所述，在注射后即刻的最小/最大VAS评分如下：制剂F1，0.00-8.3；制剂F3，0.00-2.20；制剂F4，0.20-8.70；现有的商品制剂，0.00-10.00。
显然，与现有商品制剂的注射相关疼痛相比，制剂3的与注射相关的疼痛急剧减轻。具体来说，在注射后立即通过疼痛视觉模拟量表(VAS)评估的平均疼痛值从现有商品制剂的平均3.29降低到制剂3的0.56，显著降低了83％。事实上，与制剂3相关的疼痛减轻如此显著，它比第二好(在疼痛方面)的制剂-制剂1(1.79)的水平降低了69％。
类似地，制剂1的平均疼痛评分降低至1.79，比与现有商品制剂相关的3.29的疼痛评分降低了45％。
表8 疼痛视觉模拟量表(VAS)
#来自于使用测试制剂的平均值≥现有制剂的平均值的零假设的单侧检验
&基于ANOVA。
对于所有4种阿达木单抗治疗来说，在注射后即刻、注射后15分钟和注射后30分钟也对受试者进行定性疼痛评估。在注射后即刻，接受制剂3的的受试者有31位受试者(31/50，62.0％)以最高频率报告“没有不适”的评估，接下来是接受制剂1的有19位受试者(19/50，38.0％)，接受现有Humira制剂的有7位受试者(7/50，14.0％)，接受制剂4的有1位受试者(1/50，2.0％)。在注射后即刻报告不适的受试者中，“刺痛”是报告频率最高的感觉，对于现有制剂和制剂4来说各有30位受试者(30/50，60％)，对于制剂1来说有16位受试者(16/50，32.0％)，对于制剂3来说有4位受试者(4/50，8.0％)。在注射后15分钟，绝大部分接受各种治疗的受试者报告在注射部位处“没有不适”。
研究现场人员还利用Draize量表来评估各位受试者在注射部位的出血/瘀点、红斑、浮肿和瘙痒。在注射后10分钟，所有治疗组中的大部分受试者没有观察到注射部位的出血或瘀点、浮肿或瘙痒。
在研究期间，所有4种制剂都被良好耐受。初步不利事件(AE)的总结显示在下面的表9中。
表9 初步不良事件(AE)
Figure BPA00001718703400921
因此，数据证实，新的100mg/mL制剂，特别是制剂1和3，良好耐受，并且与目前销售的阿达木单抗制剂相比，在相同治疗剂量皮下注射后有效地减轻注射部位疼痛。制剂F3相比于其他测试制剂具有特别低的VAS评分。
使用VAS评分的疼痛减轻与针头尺寸的差异无关(使用27G针头施用现有阿达木单抗商品制剂，使用29G针头施用制剂F1、F3和F4)。具体来说，针刺造成即刻疼痛反应，而通过VAS量表测量的疼痛反应表示几分钟内延续的疼痛，表明注射溶液本身造成该反应的主要部分。此外，所有测试制剂(F1、F3和F4)使用相同尺寸的针头注射，但F1、F3和F4仍具有非常不同的VAS评分。该结果进一步表明造成疼痛效应的是制剂，并且这可以与用于施用制剂的针头尺寸分开。
实施例2：高浓度抗TNFα抗体制剂提高在人类中的生物利用度
下面的实施例描述了在健康志愿者中进行的1期、单盲、单剂量、平行组设计的随机研究(与在上面在实施例1中所描述的相同研究)。本研究的主要目的是比较在Physiolis PFS中的三种高浓度(100mg/mL)阿达木单抗制剂与在目前PFS中的现有(50mg/mL)阿达木单抗(Humira)制剂的与注射相关的疼痛(参见实施例1)，并评估三种高浓度(100mg/mL)阿达木单抗制剂与现有商品(50mg/mL)阿达木单抗(Humira)制剂相比的生物利用度。本研究的第二目的是评估所有4种阿达木单抗制剂的安全性和耐受性。
研究设计
在本研究中召募了200位健康志愿者(表10)。从所有200位受试者获得疼痛评估数据。在前100位受试者中评估了阿达木单抗药代动力学。制剂的描述提供在上面的表1中。
表10.治疗组
Figure BPA00001718703400941
*对于制剂组成，参见表4-7。
在研究第1天，来自于各个治疗组的受试者通过PFS接受一次40mg阿达木单抗皮下注射。每剂研究药物由适合的现场工作人员按照方案中描述的正确注射方法皮下施用。注射在肚脐右侧2英寸的腹部中皮下进行。调查问卷由与进行注射的人不同的研究工作人员尽可能频繁地提供。
结果
药物动力学结果和结论
在单次皮下阿达木单抗给药后，药代动力学参数Tmax、Cmax、AUC0-360和AUC0-1344的中心值在治疗A、B(分别为高浓度阿达木单抗制剂1和3)与D(目前的商品Humira制剂)之间是相似的。在单剂施用后，治疗C(高浓度阿达木单抗制剂4)相对于治疗D来说，平均Tmax更早(图2和3)。治疗C相比于治疗D，Cmax和AUC0-360值的中心值更大(p＜0.05)。
治疗A、B和C(阿达木单抗高浓度制剂)相对于治疗D(商品Humira制剂)的生物利用度/生物等效性
对于治疗组A相比于D来说，治疗A和B的Cmax、AUC0-360和AUC0-1344中心值的比率的点估算值接近一致，且90％置信区间在0.80至1.25的范围内。对于治疗B相比于D来说，Cmax和AUC0-360中心值的比率的点估算值接近一致，且90％置信区间在0.80至1.25的范围内。对于AUC0-1344来说，治疗B相比于D的90％置信区间的上界高于1.25。对于治疗C相比于D来说，Cmax、AUC0-360和AUC0-1344中心值的比率的点估算值分别为1.429、1.309和1.170，表明治疗C(制剂4)的相对生物利用度更高。
表11.相对生物利用度和生物等效性评估的90％置信区间
Figure BPA00001718703400951
￡治疗A、B或C：分别为单剂高浓度阿达木单抗制剂1、3或4，使用Physiolis PFS作为单次sc注射施用(40mg/0.4mL)。治疗D：单剂现有Humira制剂，使用目前可用的玻璃PFS作为单次sc注射施用(40mg/0.8mL)。
PK＝药代动力学。
药代动力学结论
根据药代动力学结果，治疗A和B的相对生物利用度与治疗D(目前销售的Humira制剂)相似。当与治疗D相比时，治疗C的生物利用度更高。治疗C的生物利用度的出人意料的提高表明施用于受试者的有效剂量可以降低。
免疫原性结论
12位受试者在研究中的任何时间中具有阳性AAA样品，其中按照预定定义仅有两位受试者被确定为AAA阳性。由于样本量小和相对类似的AAA阳性样品数量，对于治疗之间的免疫原性不能作出结论。
安全性结论
所测试的治疗总体来说受试者耐受良好。在研究过程中，没有观察临床上有意义的生命征、ECG或实验室测量值。大部分不良事件被研究者评估为可能或确实不与研究药物相关，并且在严重程度方面轻微。没有不良事件被评估为严重。
在研究期间，没有发生死亡、严重不良事件或由于不良事件造成的中止。
其他安全性分析的结果，包括个别受试者变化和生命征、ECG和实验室测量值的潜在临床重要值，对于所有治疗组来说不显著。
耐受性
所进行的耐受性评估包括疼痛评估模块(疼痛视觉模拟量表[VAS]、定性疼痛评估和针痛评估)的完成以及Draize量表(参见实施例1)。
实施例3：高浓度抗TNFA抗体制剂在临床前模型中提高生物利用度
下面研究的目的是评估阿达木单抗制剂F4与阿达木单抗商品制剂(对于制剂的描述，参见上面的表7)相比的药物动力学分布。
在雄性和雌性比格犬中(2/性别/s.c.给药以及2只雄性/i.v.给药，Marshall Bio Resources USA，Inc.，North Rose，NY 14516)，在单次皮下(s.c.)注射HUMIRA商品制剂(阿达木单抗)和对应于前面实施例的制剂F4(阿达木单抗)的HUMIRA测试制剂以及作为对照的静脉内(i.v.)注射HUMIRA商品制剂后，研究HUMIRA(阿达木单抗)的药代动力学分布。给药剂量是40mg/狗(F4为100mg/mL，商品制剂为50mg/mL)。
为了确定阿达木单抗的血清暴露水平，在给药后(p.a.)0.083、4、24、48、96、168、240、312、384、456、528和864小时收集血液样品。检验的参数是临床征兆(每周两次)和死亡率。
除了在对照组的一只雄性动物的粘性粪便之外，没有观察到相关的临床征兆。临床征兆的发生率总结在下面的表14和15中。
本研究的药代动力学结果(描述在下面的表12中)表明，s.c.用药后的生物利用度约为80％，并且在s.c.用药后雌性动物中的暴露水平似乎高于雄性动物。在雄性动物中，与商品制剂的s.c.用药相比，在测试制剂的s.c.用药后存在较高暴露水平的趋势。
表12：药代动力学结果
Figure BPA00001718703400971
表13：动物身份
Figure BPA00001718703400982
表14：雄性动物中临床观察的概述
Figure BPA00001718703400983
Figure BPA00001718703400991
注：a＝具有观察现象的动物数
b＝看到观察现象的天数
表15：雌性中临床观察的概述
Figure BPA00001718703400992
类别，观察
注：a＝具有观察现象的动物数
b＝看到观察现象的天数
实施例4：高浓度抗TNFα抗体制剂对抗冻/融应力的稳定性
下面的实施例比较了高浓度制剂F1、F3和F4与商品阿达木单抗制剂的稳定性。稳定性使用冻/融试验来检验。
实验设置
高浓度人抗TNF-α抗体制剂如上面实施例1的表1中所述来制备。
将混合的溶液分别无菌过滤，并以20mL的量等份分装在8x 30mL PETG瓶中。在目测检查中，所述溶液事实上不含颗粒物。
将用于T0的样品直接置于2-8℃冰箱中。其他瓶子置于-80℃方盒中冷冻。
第二天，将瓶子分别在25℃或37℃温度的水浴中解冻。
将冻/融循环重复5次。在T0(在任何冻-融循环之前)、T1(一次冻-融循环后)、T3(三次冻-融循环后)和T5(5次冻-融循环后)时，取样进行分析并储存在2-8℃冰箱中。
→对于4种样品，每个取样点(pullpoint)n＝1
→样品体积：20mL
→冻/融：-80℃/25℃+37℃
→冻/化循环：5
在循环后，在实验室中使用各下述测量对样品进行分析：光学外观(在每个时间点)；340nm处的吸光度；显微镜下可见颗粒(在GGDDA下)；光子相关光谱(PCS)；尺寸排阻层析(SEC)；以及离子交换层析(IEC)。
显微镜下可见颗粒
显微镜下可见颗粒的测量在Klotz颗粒测量装置上进行。结果显示在表16中。
表16：＞＝1μm、＞＝10μm和＞＝25μm的颗粒计数
Figure BPA00001718703401001
Figure BPA00001718703401011
＞＝1μm的颗粒数据显示在T5时，Humira商品制剂和高浓度(HC)F1制剂中较高颗粒载量的明显趋势，反映出含有缓冲盐或氯化钠的阿达木单抗制剂的特征性性质。
＞＝10μm和＞＝25μm的显微镜下可见颗粒的计数非常低。冻/融循环不引起显微镜下可见颗粒数量的增加，表明测试制剂具有有利的稳定性。
尺寸排阻层析(SEC)
SEC结果示出在表17中。表17显示了在T0(任何冻-融循环之前)、T1(一次冻-融循环后)、T3(三次冻-融循环后)和T5(五次冻-融循环后)时各溶液中SEC聚集物、单体和片段的百分率。这些结果表明，制剂1、3和4各自显示出与商品制剂相近的稳定性。
表17：通过SEC评估的冻-融循环之前和之后聚集物、单体和片段 的百分率
Figure BPA00001718703401031
离子交换层析(IEC)
离子交换层析没有揭示出测试溶液的不同敏感性。不能观察到明显的降解。
然而，随着冻/融循环次数的增加，在25℃下解冻的样品在5次循环后在第二酸性区域中显示出较高的量。
IEC结果示出在表18中。
表18：冻-融循环之前和之后的IEC测量值
Figure BPA00001718703401032
Figure BPA00001718703401041
实施例5：高浓度抗TNFα抗体制剂对抗搅拌应力的稳定性
下面的实施例描述了使用搅拌应力试验来检验F1、F3和F4制剂的稳定性的研究。各种制剂在多种pH水平下进行试验。
材料
Figure BPA00001718703401042
Figure BPA00001718703401051
程序
在使用前，将小瓶、搅拌棒和塞子蒸汽灭菌。
搅拌实验使用下列实验设置来进行：
■蛋白质溶液：Humira HC F1、F3、F4各自在pH 4.2、4.7、5.7、6.2下，100mg/mL，Humira HC F3在pH 5.2下，100mg/mL，Humira来自于Vetter，50mg/mL，
■每6R小瓶5mL填充体积
■n＝3→2x搅拌(使用7x2mm磁力搅拌棒)，1个未搅拌对照(无磁力搅拌棒)
■多点磁力搅拌器HP：550rpm
■环境温度
■取样：t＝0，t＝1h，t＝4h，t＝24h，t＝48h
将各种蛋白质溶液以5mL装入3个6R小瓶，并用塞子封闭。其中两个小瓶装备有磁力搅拌棒。
将小瓶保持在5℃下过夜。第二天早晨，使用浊度计测量样品(每种蛋白质溶液1个样品，因为在开始时它们都是相同的)。在开始实验之前，将测量过的溶液装回到小瓶中。在1、4、24和48h后取样并测定浊度。
未搅拌的样品仅在0和48h时间点时进行测量。
对于pH 5.2下的Humira HC F3来说，也在所有时间点测定显微镜下可见颗粒。
结果
浊度
经历0、1、4、24或48小时搅拌应力的样品以及48小时的未搅拌对照样品的浊度结果示出在表19中。
表19：经历搅拌应力的样品的浊度(NTU)
Figure BPA00001718703401061
对于所有测试制剂(T0/未搅拌和搅拌样品两者)来说pH增加与浊度增加相关。这种效应对于制剂1来说最为显著。此外，制剂1在除了4.2的所有pH值下，在48h后显示出最高的浊度增加。制剂3和4显示出类似的性质，并且在所有时间点处的浊度值相当。
pH 5.2下的Humira HC(100mg/mL)F3随时间仅显示出浊度的轻微增加。相反，商品Humira溶液显示出明显更高的起始值和浊度随时间的增加。因此，制剂3与商品Humira制剂相比显示出较低浊度。
搅拌样品与未搅拌样品相比显示出较高浊度。与0h样品相比，未搅拌对照的浊度保持几乎恒定，表明在室温下进行实验不使结果发生偏离。
显微镜下可见颗粒
表20显示了显微镜下可见颗粒数量的结果。
表20：搅拌应力之前和之后显微镜下可见颗粒的计数
Figure BPA00001718703401071
≥1μm的颗粒
搅拌引起≥1μm的显微镜下可见颗粒计数略微增加。未搅拌对照与0h样品相当。
≥10μm的颗粒
搅拌对≥10μm的颗粒计数没有显著影响。未搅拌对照与0h样品相当。
≥25μm的颗粒
搅拌对≥25μm的颗粒计数没有显著影响。未搅拌对照与0h样品相当。
总体来说，实施例5中给出的实验结果显示，当经受搅拌应力时，制剂3与商品Humira溶液相比令人吃惊地稳定。根据浊度测量，制剂3对搅拌压应是稳定的，并且制剂3的搅拌对显微镜下可见颗粒也几乎没有或没有影响。
实施例6：高浓度抗TNFα抗体的长期储存稳定性
下面的实施例描述了检验F1、F3和F4制剂的长期储存稳定性(长达24个月)的研究。
在长期储存之前(初始)和储存制剂3、6、9、12、18和24个月后，对F1、F3和F4进行测试。使用下面的储存条件：(1)5℃，(2)25℃/60％相对湿度(R.H)，以及(3)40℃/75％R.H.。在储存期间，将样品包装在1ml预装填注射器中(无色，玻璃I型，Ph.Eur.)；BD Hypak注射器BD 260，带有灰色DB Hypak 4023/50Fluorotec柱塞。使用下面的测量来评估储存稳定性：颗粒状污染；可见颗粒；澄清度和乳浊度；溶液颜色(目测)；体外TNFα中和；阳离子交换层析(CEX-HPLC)，赃排阻层析(SE-HPLC)；颗粒状污染-显微镜下可见颗粒；容器封闭完整性；pH；和微生物学质量。
所有测试制剂在2-8℃的测试储存条件下稳定。
结果
制剂F1的结果显示在表21中。
表21：制剂F1的稳定性总结报告
Figure BPA00001718703401091
Figure BPA00001718703401101
Figure BPA00001718703401111
上面描述的结果显示，当在5℃下储存24个月时，制剂F1不显示可见的颗粒状污染，澄清度和乳浊度＜＝RS III，并且可见颜色＜＝BY7(棕黄色7)。制剂F1还显示出相对于参比标准品111％的TNF中和能力，83.9％的赖氨酸变体，99.3％的单体，＞＝10μm的颗粒为11，并且没有＞＝25μm的颗粒。此外，F1维持5.3的稳定pH，并显示出没有微生物生长的迹象。当在25℃/60％R.H.下储存6个月时，制剂F1显示出0.1的可见颗粒，澄清度和乳浊度＜＝RS III，可见颜色＜＝BY7，参比标准品81％的TNF中和能力，65％的赖氨酸变体，98.5％的单体，＞＝10μm的颗粒为102，＞＝25μm的颗粒为2，5.3的稳定pH，并且没有微生物生长的迹象。当在45℃/75％R.H.下储存6个月时，制剂F1显示出无可见颗粒，澄清度和乳浊度＜＝RS IV，可见颜色＜＝BY6，参比标准品68％的TNF中和能力，11.9％的赖氨酸变体，92.9％的单体，＞＝10μm的颗粒为98，＞＝25μm的颗粒为2，并且没有微生物生长的迹象。
制剂F3的结果显示在表22中。
表22：制剂F3的稳定性总结报告
Figure BPA00001718703401121
Figure BPA00001718703401141
表22中提供的结果表明，当在5℃下储存24个月时，制剂F3未显示可见的颗粒状污染，澄清度和乳浊度＜＝RS II，并且可见颜色＜＝BY7。制剂F3显示出参比标准品98％的TNF中和能力，85.1％的赖氨酸变体，99.4％的单体，＞＝10μm的颗粒为14，并且没有＞＝25μm的颗粒。pH几乎不显示变化，并且没有微生物生长的迹象。
当在25℃/60％R.H.下储存6个月时，制剂F3未显示出可见颗粒，澄清度和乳浊度＜＝RS II，且可见颜色＜＝BY7。此外，制剂F3显示出参比标准品101％的TNF中和能力，97.4％的赖氨酸变体，70.1％的单体，＞＝10μm的颗粒为157，＞＝25μm的颗粒为2。pH稳定，并且没有微生物生长的迹象。
当在45℃/75％R.H.下储存6个月时，制剂F3未显示出可见颗粒，澄清度和乳浊度＜＝RS II，可见颜色＜＝BY6。此外，制剂F3显示出参比标准品90％的TNF中和能力，16.5％的赖氨酸变体，93.8％的单体，＞＝10μm的颗粒275，＞＝25μm的颗粒9。pH相当稳定，并且没有微生物生长的迹象。
制剂F4的结果显示在表23中。
表23：制剂F4稳定性概述报告
Figure BPA00001718703401161
Figure BPA00001718703401171
Figure BPA00001718703401181
表23中提供的结果表明，当在5℃下储存18个月时，制剂F4未显示可见的颗粒状污染，澄清度和乳浊度＜＝RS II，并且可见颜色＜＝BY7。制剂F4显示出参比标准品104％的TNF中和能力，84.4％的赖氨酸变体，99.4％的单体。此外，pH稳定，并且没有微生物生长的迹象。
当在25℃/60％R.H.下储存6个月时，制剂F4未显示出可见颗粒，澄清度和乳浊度＜＝RS II，可见颜色＜＝BY7。制剂F4显示出参比标准品101％的TNF中和能力，68.7％的赖氨酸变体，98.8％的单体，＞＝10μm的颗粒144，＞＝25μm的颗粒1。此外，pH相当稳定，并且没有微生物生长的迹象。
当在45℃/75％R.H.下储存6个月时，制剂F4未显示出可见颗粒，澄清度和乳浊度＜＝RS II，和可见颜色＜＝BY6。制剂F4显示出参比标准品76％的TNF中和能力，15.7％的赖氨酸变体，93.1％的单体，＞＝10μm的颗粒218，＞＝25μm的颗粒1。此外，pH相当稳定，并且没有微生物生长的迹象。
总的来说，如表21-23中所示的长期稳定性实验的结果表明，当经历长期储存时，高浓度制剂F1、F3和F4令人吃惊地稳定。这些制剂的稳定性与商品制剂类似。在至少24个月的长期储存后，制剂F1和F3显示出与商品制剂相近的稳定性。在至少18个月的长期储存后，制剂F4显示出与商品制剂相近的稳定性。
实施例7：高浓度抗TNFα抗体的室温储存稳定性
含有治疗性抗体的液体药物制品通常需要储存在2-8℃下直至储存期结束。因此在购买药品至使用的时间内，还需要由患者进行冷藏。取决于所提出的用药方案，在自我施用药物的情况下这可能导致由患者负责的储存时间长达几周。
因此，不需在冷藏条件下储存的药物显示出对于家庭护理产品来说患者方便性的显著提高和不正确储存情况下药物品质影响的降低，从而减少了投诉率和温度偏离的监测。
目前销售的含有阿达木单抗的产品(Humira)被成功地以较高蛋白质浓度重新配制成如上面实施例1-6中所描述的制剂F3。下面的制剂F3的稳定性数据得到了对抗蛋白质降解的更高稳定性的发现。在25℃下测量的所得降解动力学参数满足环境储存长达3个月的要求。
对于与制剂F3在25℃下储存相关的一般性长期稳定性数据参见上面的实施例6。
下面的数据描述了制剂F3的长期储存特征。数据显示，即使在2-5℃下长期储存18个月和24个月之后，再在25℃/30℃下储存也是可接受的。
Figure BPA00001718703401201
Figure BPA00001718703401211
实施例8：高浓度抗TNFα抗体制剂的电导率
使用归一化至25℃的InoLab Cond Level2 WTW装置测定高浓度抗TNF-α抗体制剂F3和F4(参见上面实施例1-6)的电导率。表26示出了非离子型赋形剂对F3和F4阿达木单抗制剂的电导率的影响。
表26.制剂F3和F4的电导率
如上表26中所述，制剂F3和F4两者的平均电导率低于2mS/cm。
实施例9：高浓度抗TNFα抗体制剂的动态光散射(DLS)
使用稀释溶液的动态光散射分析来评估水力学直径(报告为平均值或Z-平均尺寸，通过DLS测量的强度自关联函数和粒子尺寸分布的多分散性指数PDI的累积量分析来计算)。具体来说，使用DLS测量来检测尺寸分布中的少量较高分子量物质例如聚集物，因为那些物质具有较高的散射强度(与d6成正比)，因此将显著影响作为Z-平均尺寸分布的指标的Z-平均值和多分散性指数(PDI)。
使用DLS对每种制剂F3和F4(参见上面的实施例1-6)的150μL样品进行测量，以分析粒子的平均尺寸(Z-平均值)和作为粒径分布的“宽度”的指标的多分散性指数(PDI)。结果显示如下。DLS数据没有显示发生较高分子量聚集物的任何迹象，因为作为低水平较高分子量亚群的灵敏指标的多分散性指数没有显著增加。
制剂F3
Figure BPA00001718703401231
制剂F4
Figure BPA00001718703401232
如上所述，F3和F4两者的z-平均值测量低于4nm。这种低水力学直径表明制剂F3和F4两者不含聚山梨醇酯和多元醇或聚山梨醇酯之外的其他赋形剂这一事实。
实施例10：影响高浓度抗TNFα抗体制剂的稳定性的因素
调查了各种不同甘露糖醇浓度和聚山梨醇酯浓度对阿达木单抗在水中的稳定性的影响。
制备了在水中含有100mg/ml阿达木单抗的制剂。随后，在一定浓度范围内添加各种浓度的甘露糖醇或聚山梨醇酯，通过聚集和断裂测量以确定每种赋形剂对制剂稳定性的影响。如图3A和3B中所示，聚山梨醇酯和甘露糖醇的浓度分别在0.1至1.0mg/ml和0-72mg/ml的范围内。如图3A中所示，甘露糖醇浓度从约12改变至约72mg/ml，对阿达木单抗的稳定性具有极小影响。同样地，聚山梨醇酯-80浓度从约0.1改变至约1.0mg/ml，对阿达木单抗的稳定性没有影响。
参考文献引用
所有在本申请中可能引证到的所有引用文献(包括例如文献参考书、专利、专利申请和网址)的内容，在此为任何目的明确地以其全文引为参考。除非另有指明，否则本发明的实践将利用本技术领域中公知的蛋白质制剂的常规技术。
等同物
本发明可以以不背离其精神或必需特征的其他具体形式体现。因此，上述实施方式在所有情况下被当作是示例性的而不是限制本文描述的发明。因此，本发明的范围由随附的权利要求书而不是前述描述指明，因此在本文中打算涵盖处于权利要求书的等同性意义和范围之内的所有改变。
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Figure IPA00001718702800111

Claims (59)

1.一种水性液体制剂，其包含：
(1)分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分；
(2)表面活性剂；以及
(3)少于50mg/ml的多元醇；
其中所述制剂注射到人类受试者中导致低于1.0的疼痛视觉模拟量表(VAS)评分。
2.一种水性液体制剂，其包含：
(1)分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分；
(2)表面活性剂；以及
(3)少于50mg/ml的多元醇；
其中所述制剂不含缓冲剂或盐，并且
其中当与包含盐和/或缓冲剂的在其他方面相同的制剂的注射相比时，所述制剂的注射减轻人类受试者中与注射相关的疼痛至少约50％。
3.一种水性液体制剂，其基本上由下述物质组成：
(1)超过50mg/ml的分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分；
(2)表面活性剂；以及
(3)低于50mg/ml的多元醇，
其中所述制剂注射到人类受试者中导致低于1.0的疼痛视觉模拟量表(VAS)分值。
4.权利要求2的制剂，其中所述与注射相关的疼痛使用疼痛视觉模拟量表(VAS)来评估。
5.权利要求2的制剂，其中所述其他方面相同的制剂包含柠檬酸盐磷酸盐缓冲剂和氯化钠。
6.一种水性液体制剂，其包含：
(1)分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分；
(2)表面活性剂；以及
(3)低于50mg/ml的多元醇；
其中所述制剂在高达约30℃下稳定至少6天。
7.权利要求6的制剂，其中所述制剂在高达约30℃下稳定10天。
8.权利要求6的制剂，其中所述制剂在高达约30℃下稳定14天。
9.权利要求1-8中任一项的制剂，其中所述多元醇是甘露糖醇或山梨糖醇。
10.权利要求9的制剂，其包含约38-46mg/ml的甘露糖醇。
11.权利要求1-10中任一项的制剂，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯。
12.权利要求11的制剂，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80。
13.权利要求11的制剂，其中所述聚山梨醇酯的浓度约为0.1至1.5。
14.权利要求1-13中任一项的制剂，其中所述抗TNF-α抗体或其抗原结合部分的浓度为95-105mg/ml。
15.权利要求1-14中任一项的制剂，其中所述抗体或其抗原结合部分以1x 10-8M或更低的Kd与人TNFα解离，并具有1x 10-3 s-1或更低的koff速率常数，二者都通过表面等离子体共振来测定。
16.权利要求1-14中任一项的制剂，其中所述抗体或其抗原结合部分具有下列特征：
(1)如通过表面等离子体共振测定的，以1x 10-3 s-1或更低的koff速率常数与人TNFα解离：
(2)具有轻链CDR3结构域，所述结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换或在1、3、4、6、7、8和/或9位的1至5个保守氨基酸置换修饰的氨基酸序列；并且
(3)具有重链CDR3结构域，所述结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换或SEQ ID NO：4的在2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12位的1至5个保守氨基酸置换修饰的氨基酸序列。
17.权利要求1-14中任一项的制剂，其中所述抗体或其抗原结合部分具有轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)，所述轻链可变区具有包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR1结构域；而所述重链可变区具有包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR1结构域。
18.权利要求1-14中任一项的制剂，其中所述抗体或其抗原结合部分具有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。
19.权利要求1-14中任一项的制剂，其中所述抗体是阿达木单抗或戈利木单抗或其生物仿制药。
20.一种水性液体制剂，其基本上由下述物质组成：
(1)浓度为90-110mg/ml的分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分，其具有轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)，所述轻链可变区具有包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR1结构域；所述重链可变区具有包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR1结构域；
(2)聚山梨醇酯；以及
(3)约38-46mg/ml的甘露糖醇。
21.权利要求1-20中任一项的制剂，其包含约30-90mg的所述抗体或其抗原结合部分。
22.一种水性液体制剂，其包含：
(1)分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分；
(2)表面活性剂；以及
(3)低于50mg/ml的多元醇；
其中所述制剂具有选自下列的特征：
a)低于约2mS/cm的电导率；
b)比以给定浓度存在于缓冲的溶液中的所述蛋白质的水力直径(Dh)小至少约50％的Dh；和
c)小于约4nm的水力直径(Dh)。
23.一种预装填的注射器或自我注射器装置，其包含权利要求1-22任一项的制剂。
24.一种治疗患者中的与有害的TNFα活性相关的障碍的方法，所述方法包括向所述患者施用权利要求1-22任一项的制剂。
25.权利要求24的方法，其中所述障碍选自类风湿性关节炎、克罗恩病、银屑病性关节炎、银屑病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎和化脓性汗腺炎。
26.权利要求24的方法，其中所述制剂按照选自每周、每两周、每三周和每月的周期施用于受试者。
27.权利要求26的方法，其中所述施用是自我施用。
28.一种向受试者施用分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分以使得减轻施用时的注射疼痛的方法，所述方法包括向所述受试者皮下施用包含所述抗体或其抗原结合部分的制剂以使得减轻施用时的注射疼痛，
其中所述制剂包含超过50mg/ml的所述抗体或其抗原结合部分、表面活性剂和低于50mg/ml的多元醇。
29.权利要求28的方法，其中所述注射疼痛根据疼痛视觉模拟量表(VAS)测定为低于1.0。
30.权利要求28或29的方法，其中所述表面活性剂为聚山梨醇酯。
31.权利要求28或29的方法，其中所述聚山梨醇酯的浓度约为0.1至1.5。
32.权利要求28-31中任一项的方法，其中所述制剂包含超过75mg/ml的所述抗体或其抗原结合部分。
33.权利要求27-32中任一项的方法，其中所述制剂包含的多元醇是甘露糖醇。
34.权利要求33的方法，其中所述制剂包含38-46mg/ml的甘露糖醇。
35.一种提高分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分在人类受试者中的生物利用度的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含表面活性剂和有效量的所述抗体或其抗原结合部分的制剂，以使得提高所述抗体或其抗原结合部分的生物利用度，其中所述制剂不含缓冲剂、多元醇或盐。
36.一种提高分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分在人类受试者中的生物利用度的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含表面活性剂和有效量的所述抗体或其抗原结合部分的制剂以使得提高所述抗体或其抗原结合部分的生物利用度，其中所述制剂具有选自下列的特征：
a)低于约2mS/cm的电导率；
b)所述抗体或其抗原结合部分具有比以给定浓度存在于缓冲的溶液中的所述蛋白质的水力直径(Dh)小至少约50％的Dh；和
c)所述抗体或其抗原结合部分具有小于约4nm的水力直径(Dh)。
37.权利要求36的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分具有小于约2nm的水力直径(Dh)。
38.权利要求36的方法，其中所述制剂的电导率低于约1mS/cm。
39.权利要求35-38中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分的有效量为30-90mg。
40.权利要求35-38中任一项的方法，其中所述药物制剂中所述抗体或其抗原结合部分的浓度为90-110mg/ml。
41.权利要求35-38中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分在皮下注射到所述人类受试者中时生物利用度为AUC0-360大于1300μg*hr/ml。
42.权利要求34-41中任一项的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯。
43.权利要求42的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯80。
44.权利要求43的方法，其中所述聚山梨醇酯80的浓度约为0.1至1.5。
45.一种提高分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分在受试者中的生物利用度的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含表面活性剂和有效量的所述抗体或其抗原结合部分的制剂以使得与第二制剂相比所述抗体或其抗原结合部分在所述受试者中的生物利用度提高至少15％，
其中所述制剂不含缓冲剂、多元醇或盐，并且
其中所述第二制剂包含缓冲剂、多元醇和盐。
46.权利要求45的方法，其中与所述第二制剂相比，所述抗体或其抗原结合部分的生物利用度提高至少30％。
47.权利要求45的方法，其中与所述第二制剂相比，所述抗体或其抗原结合部分的生物利用度提高至少40％。
48.权利要求45的方法，其中所述生物利用度根据AUC水平或Cmax来确定。
49.权利要求48的方法，其中所述生物利用度根据AUC0-360或AUC0-1344来确定。
50.权利要求32-45中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分选自：
(1)以1x 10-8M或更低的Kd与人TNFα解离，并具有1x 10-3s-1或更低的koff速率常数的抗体或其抗原结合部分，二者都通过表面等离子体共振来测定；
(2)具有下列特征的抗体或其抗原结合部分：
(a)如通过表面等离子体共振测定的，以1x 10-3 s-1或更低的koff速率常数与人TNFα解离；
(b)具有轻链CDR3结构域，所述结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换或在1、3、4、6、7、8和/或9位的1至5个保守氨基酸置换修饰的氨基酸序列；并且
(c)具有重链CDR3结构域，所述结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换或在2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12位的1至5个保守氨基酸置换修饰的氨基酸序列；
(3)具有轻链可变区(LCVR)的重链可变区(HCVR)的抗体或其抗原结合部分，所述轻链可变区具有包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR1结构域；所述重链可变区具有包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR1结构域；
(4)具有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的抗体或其抗原结合部分；以及
(5)阿达木单抗或其生物仿制药；和
(6)戈利木单抗或其生物仿制药。
51.一种水性液体制剂，其基本上由表面活性剂和30-90mg的分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分组成，
其中所述制剂具有90-110mg/ml的抗体浓度，并且
其中与包含柠檬酸盐磷酸盐缓冲剂、氯化钠和甘露糖醇的制剂相比，所述制剂在皮下注射时对人类受试者提供了所述抗体或其抗原结合部分的提高的生物利用度。
52.一种水性液体制剂，其基本上由表面活性剂和30-90mg的分离的人抗TNF-α抗体或其抗原结合部分组成，
其中所述制剂具有90-110mg/ml的抗体浓度，并且
其中在皮下注射所述制剂时，所述制剂在人类受试者中提供了所述或其抗原结合部分的提高的生物利用度，以使得所述抗体或其抗原结合部分具有高于1300μg*hr/ml的AUC0-360。
53.权利要求51或52的制剂，其中所述抗体或其抗原结合部分选自：
(1)以1x 10-8M或更低的Kd与人TNFα解离，并具有1x 10-3s-1或更低的koff速率常数的抗体或其抗原结合部分，二者都通过表面等离子体共振来测定；
(2)具有下列特征的抗体或其抗原结合部分：
(a)如通过表面等离子体共振测定的，以1x 10-3 s-1或更低的koff速率常数与人TNFα解离；
(b)具有轻链CDR3结构域，所述结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换或在1、3、4、6、7、8和/或9位的1至5个保守氨基酸置换修饰的氨基酸序列；并且
(c)具有重链CDR3结构域，所述结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换或在2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12位的1至5个保守氨基酸置换修饰的氨基酸序列；
(3)具有轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)的抗体或其抗原结合部分，所述轻链可变区具有包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或SEQ ID NO：3的通过在1、4、5、7或8位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR1结构域；所述重链可变区具有包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或SEQ ID NO：4的通过在2、3、4、5、6、8、9、10或11位的单丙氨酸置换修饰的氨基酸序列的CDR3结构域，包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR1结构域；
(4)具有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的抗体或其抗原结合部分；以及
(5)阿达木单抗或其生物仿制药；和
(6)戈利木单抗或其生物仿制药。
54.权利要求51-53中任一项的制剂，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯80。
55.一种预装填的注射器或自我注射器装置，其包含权利要求53-54任一项的制剂。
56.一种治疗患者中与有害的TNFα活性相关的障碍的方法，所述方法包括向所述患者施用权利要求51-53任一项的制剂。
57.权利要求56的方法，其中所述障碍选自类风湿性关节炎、克罗恩病、银屑病性关节炎、银屑病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎和化脓性汗腺炎。
58.权利要求56的方法，其中所述制剂按照选自每周、每两周、每三周和每月的周期施用于所述受试者。
59.权利要求58的方法，其中所述施用是自我施用。
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