CN101688176B - 具有羧基的酸性物质的生产方法 - Google Patents

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Abstract

通过在培养基中培养具备生产具有羧基的酸性物质的能力且经过修饰而增强了ybjL基因的表达的微生物，在该培养基中生成并蓄积具有羧基的酸性物质，并从该培养基收集具有羧基的酸性物质，来生产具有羧基的酸性物质。

Description

具有羧基的酸性物质的生产方法
技术领域
本发明涉及具有羧基的酸性物质的生产方法。L-谷氨酸、L-天冬氨酸作为调味品原料等有着广泛的应用。琥珀酸作为调味品、生物降解性塑料的原料等有着广泛的应用。 
背景技术
L-谷氨酸主要通过使用属于短杆菌属(Brevibacterium)、棒杆菌属(Corynebacterium)、微杆菌属(Microbacterium)的称作棒状杆菌型细菌(coryneform bacteria)的L-谷氨酸生产菌或者它们的突变菌株的发酵方法来生产(参照例如非专利文献1)。通过使用其它菌株的发酵法来生产L-谷氨酸的方法已知有：使用芽孢杆菌属(Bacillus)、链霉菌属(Streptomyces)或青霉属(Penicillium)属等微生物的方法(参照例如专利文献1)，使用假单胞菌属(Pseudomonas)、节杆菌属(Arthrobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)或假丝酵母属(Candida)等微生物的方法(参照例如专利文献2)，使用芽孢杆菌属、假单胞菌属、沙雷氏菌属或产气气杆菌(Aerobacter aerogenes)(现在名为产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes))等微生物的方法(例如参照专利文献3)，使用大肠杆菌的突变菌株的方法(参照例如专利文献4)，等等。此外，还公开了使用属于克雷伯氏菌属(Klebsiella)、欧文氏菌属(Erwinia)、泛菌属(Pantotea)或肠杆菌属(Enterobacter)的微生物的L-谷氨酸生产方法(参照例如专利文献5～7)。 
此外，已经公开了通过利用重组DNA技术来增强L-谷氨酸的生物合成酶的活性，来增加L-谷氨酸生产能力的各种技术。例如，有报道称：在棒杆菌属或短杆菌属细菌中，导入编码大肠杆菌或谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)来源的柠檬酸合酶的基因对于增强棒状杆菌型细菌的L-谷氨酸生产能力是有效的(参照例如专利文献8)。此外，有报道称：将棒状杆菌型细菌来源的柠檬酸合酶基因导入属于肠杆菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、欧文氏菌属或埃希氏菌属的肠杆菌科细菌，对增强 L-谷氨酸生产能力是有效的(参照例如专利文献7)。 
作为提高氨基酸等目的物质生产能力的方法，已知有对物质的摄入系统或排出系统进行修饰的方法。作为修饰物质的摄入系统的方法，例如已知有通过缺失或减弱将目的物质摄入细胞的摄入系统，来提高目的物质生产能力的方法。具体地，已知有通过缺失gluABCD操纵子或其一部分来缺失或减弱L-谷氨酸向细胞内的摄入，从而提高L-谷氨酸生产能力的方法(参照例如专利文献9)；以及通过弱化嘌呤核苷酸向细胞内的摄入，来强化嘌呤核苷酸生产能力的方法(参照例如专利文献10)等。 
另一方面，作为修饰排出系统的方法，已知有：强化目的物质的排出系统的方法，以及缺损或弱化目的物质生物合成系统的中间体或底物的排出系统的方法。作为强化目的物质排出系统的方法，已知有例如：使用强化了L-赖氨酸排出基因(LysE)的棒杆菌属细菌菌株的L-赖氨酸生产方法(参照例如专利文献11)、使用强化了L-谷氨酸排出系统基因(yhfK)的肠杆菌科细菌的L-谷氨酸生产方法(参照例如专利文献18)。此外，还报道了：利用被认为与L-氨基酸的排出相关的rhtA，B，C基因的L-氨基酸生产方法(参照例如专利文献12)。作为对目的物质生物合成系统的中间体或底物的排出系统进行缺损等的方法，已知有：当目的物质为L-谷氨酸时，通过突变或破坏2-酮戊二酸通透酶基因，来弱化目的物质的中间体2-酮戊二酸的排出的方法(参照例如专利文献13)。 
除此之外，还有人提出将编码与物质的细胞膜透过相关的ATP结合盒(ATP Binding cassette)超家族(ABC转运体)的基因应用于氨基酸的细胞膜输送被修饰的微生物的选育(参照例如专利文献14)。 
有报道称，在埃希氏菌属细菌中，通过增强预想与L-氨基酸的排出相关的yfiK等基因的表达，提高了L-谷氨酸的生产效率(参照例如专利文献15)。此外，有报道称，通过增强yhfK基因的表达也可以提高L-谷氨酸生产能力(例如参照专利文献18)。 
此外，在L-谷氨酸的生产方法方面，已知有在酸性条件下培养微生物，在发酵生产L-谷氨酸同时析出L-谷氨酸的方法(参照例如专利文献16)。在使L-谷氨酸析出的低pH条件下，L-谷氨酸的不带电荷的游离体的形式的存在比例升高，它们容易透过细胞膜。通常认为，L-谷氨酸一旦被摄入细胞内，则会由于谷氨酸脱氢酶的作用一步转变为TCA循环的中间体2-酮戊二酸， 因而被摄入细胞内的L-谷氨酸容易被代谢掉。但是，在L-谷氨酸的发酵生产中，使用2-酮戊二酸脱氢酶活性缺损或者降低的肠杆菌属细菌等或埃希氏菌属细菌(例如专利文献16、17)，这些微生物不能分解2-酮戊二酸，结果导致细胞内L-谷氨酸浓度上升而抑制生长，无法进行培养。因此，在上述专利文献16中，通过突变处理选育出缺损了2-酮戊二酸脱氢酶活性并且能够在生产L-谷氨酸的同时析出L-谷氨酸的菌株，来用于L-谷氨酸的生产。 
在发酵生产琥珀酸等非氨基有机酸时，通常使用厌氧螺菌属(Anaerobiospirillum)、放线杆菌属(Actinobacillus)等厌氧性细菌(专利文献19以及专利文献20、非专利文献2)。在使用厌氧性细菌时，产物的收率高，但另一方面增殖需要大量的营养素，必须在培养基中添加大量的CSL(玉米浆)等有机氮源。这些有机氮源的大量添加不仅造成培养基成本的提高，还造成取出产物时的纯化成本提高，因此是不经济的。 
此外，还已知先在需氧性条件下一次培养诸如棒状杆菌型细菌等需氧性细菌，使菌体增殖，然后收集菌体、清洗，以静止菌体的形式在不通氧的条件下生产非氨基有机酸的方法(专利文献21以及专利文献22)。这种情况下，在使菌体增殖时，即使有机氮的添加量少也能够利用简单的培养基实现充分增殖，因而是经济的，但在目的有机酸的生成量、生成浓度以及单位菌体的生产速度提高、生产工艺简化等方面还有改善的余地。此外，还报道了使用磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性增强的细菌来发酵生产非氨基有机酸的方法等(例如专利文献23)。 
此外，对于作为兼性厌氧性革兰氏阴性细菌的大肠杆菌，已知有和棒状杆菌型细菌一样先在需氧性条件下进行一次培养，使菌体增殖后，以静止菌体的形式在不通氧的条件下厌氧式地生产非氨基有机酸的方法(非专利文献3)，以及需氧地生产非氨基有机酸的方法(专利文献24)；然而，由于大肠杆菌是革兰氏阴性细菌，不耐渗透压，其在单位菌体的生产率等方面还有改善的余地。 
ybjL基因是存在于大肠杆菌的基因组上的基因(参照例如非专利文献4)，从预想的氨基酸序列的模体、拓扑结构等来分析，认为其编码某种转运体。但是，对于该基因，尚没有将其克隆、表达后加以分析的报道，其实际功能尚不清楚。 
专利文献1：美国专利第3,220,929号说明书 
专利文献2：美国专利第3,563,857号说明书 
专利文献3：特公昭32-9393号公报 
专利文献4：特开平5-244970号公报 
专利文献5：特开2000-106869号公报(美国专利第6,682,912号) 
专利文献6：特开2000-189169号公报(美国专利公开第2001009836号) 
专利文献7：特开2000-189175号公报(美国专利第7,247,459号) 
专利文献8：特公平7-121228号公报 
专利文献9：欧洲专利申请公开1038970号说明书 
专利文献10：欧洲专利申请公开1004663号说明书 
专利文献11：国际公开第2001/5959号小册子 
专利文献12：特开2000-189177号公报(美国专利公开第2005239177号) 
专利文献13：国际公开第97/23597号小册子 
专利文献14：国际公开第00/37647号说明书 
专利文献15：特开2000-189180号(美国专利第6,979,560) 
专利文献16：特开2001-333769号公报(美国专利公开第2007134773号) 
专利文献17：特开平7-203980号(美国专利第5,573,945号) 
专利文献18：特开2005-278643(美国专利公开第2005196846号) 
专利文献19：美国专利第5,142,834号公报 
专利文献20：美国专利第5,504,004号公报 
专利文献21：特开平11-113588号公报 
专利文献22：特开平11-196888号公报 
专利文献23：特开平11-196887号公报 
专利文献24：美国专利公开第20050170482号 
非专利文献1：明石邦彦等著《氨基酸发酵》(アミノ酸発酵)，学会出版中心(学会出版センタ一)、195～215页、1986年 
非专利文献2：Guettler，M.V.et al.1999.International Journal of SystematicBacteriology 49：207-216 
非专利文献3：Vemuri，G.N.et al.2002.Journal of Industrial Microbiology andBiotechnology 28(6)：325-332 
非专利文献4：Blattner，F.R.et al.1997.Science 277(5331)：1453-74 
发明内容
发明所要解决的问题 
本发明的课题是：提供能够高效生产具有羧基的酸性物质特别是L-谷氨酸、L-天冬氨酸、琥珀酸的菌株，以及提供应用该菌株高效地生产具有羧基的酸性物质的方法。 
解决问题的方法 
本发明人等为解决上述问题进行了深入研究，结果，分离出与L-谷氨酸抗性相关的基因ybjL，并发现ybjL基因表达加强的菌株使L-谷氨酸的发酵收率提高。而且还发现ybjL基因表达加强的菌株使琥珀酸等的生成速度或收率提高，从而完成了本发明。 
即，本发明提供以下的发明。 
(1)一种微生物，其具备生产具有羧基的酸性物质的能力，并且经过修饰而增强了ybjL基因的表达。 
(2)(1)所述的微生物，其经过下述方式修饰而增加了ybjL基因的表达：提高ybjL基因的拷贝数或者修饰ybjL基因的表达调节序列。 
(3)(1)或(2)所述的微生物，其中，ybjL基因是编码下述(A)或(B)所述的蛋白质的基因： 
(A)具有SEQ ID NO：2、4或87所示的氨基酸序列的蛋白质， 
(B)具有在SEQ ID NO：2、4或87所示的氨基酸序列取代、缺失、插入或添加了1个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列的蛋白质，并且在微生物内增强该蛋白质的表达可提高微生物生产具有羧基的酸性物质的能力。 
(4)(1)～(3)中任一项所述的微生物，其中，ybjL基因为编码SEQ IDNO：5或88所示的蛋白质的基因。 
(5)(1)～(4)中任一项所述的微生物，其中所述微生物为属于肠杆菌科的细菌。 
(6)(5)所述的微生物，所述微生物选自下组：埃希氏菌属细菌、肠杆菌属细菌、拉乌尔菌属细菌、泛菌属细菌和克雷伯氏菌属细菌。 
(7)(1)～(4)中任一项所述的微生物，其中，所述微生物为瘤胃细菌。 
(8)(7)所述的微生物，其中，所述微生物为产琥珀酸曼氏杆菌。 
(9)(1)～(8)中任一项所述的微生物，其中，所述酸性物质为选自琥珀酸、富马酸、苹果酸、草酰乙酸、柠檬酸、异柠檬酸以及α-酮戊二酸中的1 种或2种以上的有机酸。 
(10)(1)～(8)中任一项所述的微生物，其中，所述酸性物质为L-谷氨酸和/或L-天冬氨酸。 
(11)生产具有羧基的酸性物质的方法，其特征在于，在培养基中培养(1)～(10)中任一项所述的微生物，从而在该培养基中生成并蓄积具有羧基的酸性物质，并且从该培养基中收集具有羧基的酸性物质。 
(12)(11)所述的方法，其中，所述酸性物质为选自琥珀酸、富马酸、苹果酸、草酰乙酸、柠檬酸、异柠檬酸、以及α-酮戊二酸中的1种或2种以上的有机酸。 
(13)(11)所述的方法，其中，所述酸性物质为L-谷氨酸和/或L-天冬氨酸。 
(14)生产具有羧基的酸性物质的方法，其特征在于，通过使(1)～(10)中任一项所述的微生物或该微生物的处理产物在含有碳酸根离子、碳酸氢根离子或二氧化碳气体的反应液中作用于有机原料来生成具有羧基的酸性物质，并且收集该酸性物质。 
(15)(14)所述的方法，其中，所述酸性物质为选自琥珀酸、富马酸、苹果酸、草酰乙酸、柠檬酸、异柠檬酸、以及α-酮戊二酸中的1种或2种以上的有机酸。 
(16)生产含琥珀酸的聚合物的方法，该方法包括：通过(12)或(15)所述的方法生产琥珀酸的步骤，以及使所得的琥珀酸聚合的步骤。 
附图说明
图1为显示辅助质粒RSF-Red-TER的结构的图。 
图2为显示辅助质粒RSF-Red-TER的构建的图。 
图3为显示ybjL扩增株在高浓度L-谷氨酸存在下的生长的图。 
图4为显示埃希氏菌属细菌中ybjL扩增株的琥珀酸蓄积的图。 
图5为显示肠杆菌属细菌中ybjL扩增株的琥珀酸蓄积的图。 
发明的具体实施方式 
以下，对本发明进行详细说明。 
<1>本发明的具备生产具有羧基的酸性物质的能力的微生物 
本发明的微生物是具备生产具有羧基的酸性物质的能力，且经过了修饰而增强了ybjL基因的表达的微生物。“生产具有羧基的酸性物质的能力”是指当在培养基中培养本发明的微生物时，以可从细胞或培养基中回收的程度在细胞或培养基中生成、蓄积具有羧基的酸性物质的能力。作为具备生产具有羧基的酸性物质的能力的微生物，可以是本身具备生产具有羧基的酸性物质的能力的微生物，也可以是通过利用突变法或重组DNA技术对如下文所述的微生物进行修饰而具备了生产具有羧基的酸性物质的能力的微生物，或者可以是通过导入本发明的基因而赋予或增强了生产具有羧基的酸性物质的能力的微生物。 
在本发明中，“具有羧基的酸性物质”是指具有羧基，且在处于未形成盐的游离体的形式时显示酸性的有机化合物。具体而言，可以列举有机酸、以及具有两个羧基的L-氨基酸即酸性氨基酸。作为L-氨基酸，可以列举L-谷氨酸或L-天冬氨酸，作为有机酸，可以列举琥珀酸、富马酸、苹果酸、草酰乙酸、柠檬酸、异柠檬酸、α-酮戊二酸等。 
可在本发明中使用的微生物的亲本株没有特殊限制，优选是细菌。作为细菌，优选属于肠杆菌科的细菌、分类为瘤胃细菌的细菌、以及棒状杆菌型细菌。 
肠杆菌科中包括属于埃希氏菌(Escherichia)、肠杆菌(Enterobacter)、欧文氏菌(Erwinia)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、泛菌(Pantoea)、光状杆菌(Photorhabdus)、普罗威登斯菌(Providencia)、拉乌尔菌(Raoultella)、沙门氏菌(Salmonia)、沙雷氏菌(Serratia)、志贺氏菌(Shigella)、摩根氏菌(Morganella)、耶尔森菌(Yersinia)等属的细菌。特别是优选根据NCBI(National Center forBiotechnology Information)的数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgiyyid＝91347)中使用的分类法被分类为肠杆菌科的细菌。这其中，特别优选属于埃希氏菌属、肠杆菌属、拉乌尔菌属、泛菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属的细菌。 
所谓属于埃希氏菌属的细菌，并非特殊限制，是指该细菌根据微生物学家所知的分类被归类为埃希氏菌属。作为在本发明中使用的属于埃希氏菌属的细菌，例如但不限于大肠杆菌(Escherichia coli)。 
对于可在本发明中使用的属于埃希氏菌属的细菌没有特殊限制，例如包括Neidhardt等的著作(Neidhardt，F.C.Ed.1996.Escherichia coli and Salmonella：Cellular and Molecular Biology/Second Edition pp.2477-2483.Table 1.American Society for Microbiology Press，Washington，D.C.)中记述的种系的微生物。具体而言，可以列举源自原型野生株K12株的大肠杆菌W3110(ATCC 27325)、大肠杆菌MG1655(ATCC 47076)等。 
这些菌株可以从例如美国典型培养物保藏中心(地址12301 10801University Boulevard，Manassas，VA 20110，United States of America)通过分售获得。即，对各菌株给予了对应的登录号，可以利用该登录号通过分售获得。各菌株的相应登录号见美国典型培养物保藏中心的目录。 
泛菌属细菌、欧文氏菌属细菌和肠杆菌属细菌是被分类为γ-变形细菌(γ-Proteobacteria)的细菌，它们在分类学上的亲缘关系彼此非常接近(J.Gen.Appl.Microbiol.1997，43：355-361；Int.J.Syst.Bacteriol.199747：1061-1067)。近年来，依据DNA-DNA杂交实验等，属于肠杆菌属的细菌中有些被重新分类为成团泛菌(Pantoea agglomerans)或Pantoea dispersa等(Int.J.Syst.Bacteriol.1989，39：337-345)。此外，属于欧文氏菌属的细菌中有些被重新分类为菠萝泛菌(Pantoea ananas)、斯氏泛菌(Pantoeastewartii)(参照Int.J.Syst.Bacteriol.1993，43：162-173)。 
作为肠杆菌属细菌，可以列举成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)等。具体而言，可以使用欧洲专利申请公开952221号说明书中示例的菌株。作为肠杆菌属的代表性菌株，可以列举成团肠杆菌ATCC12287株、产气肠杆菌ATCC13048株、产气肠杆菌NBRC 12010株(Biotechnol Bioeng.2007Mar 27；98(2)：340-348)、产气肠杆菌AJ110637(FERM ABP-10955)株等。AJ110637株是2006年3月利用以甘油为碳源的液体蓄积培养从静冈县牧之原市须须木海岸边的土壤中获得的。后来测定了其16SrDNA的全长序列，结果与产气肠杆菌NCTC10006株显示99.9％的同源率。此外，在利用API试剂盒进行的生理学试验结果中，得到了与产气肠杆菌的基准菌种相同的结果，由此将该分离获得的株鉴定为产气肠杆菌。该菌株于2007年8月22日保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心( 
Figure G2008800124825D00081
305-8566日本国茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，保藏号FERM P-21348；2008年3月13日转为基于布达佩斯条约的国际保藏，并被给予FERM保藏号ABP-10955。 
作为泛菌属细菌的代表性菌株，可以列举Pantoea ananatis、斯氏泛菌、 成团泛菌、柠檬泛菌(Pantoea citrea)。具体地，可以列举下述菌株。 
Pantoea ananatis AJ13355株(FERM BP-6614)(欧洲专利申请公开0952221号说明书) 
Pantoea ananatis AJ13356株(FERM BP-6615)(欧洲专利申请公开0952221号说明书) 
而且，这些菌株在欧洲专利申请公开0952221号说明书中被描述为成团肠杆菌，但是现在，如上文所述，已通过16S rRNA的碱基序列分析等将其重新分类为Pantoea ananatis。 
作为欧文氏菌属细菌，可以列举解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)、胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)；作为克雷伯氏菌属细菌，可以列举植生克雷伯氏菌(Klebsiella planticola)；作为拉乌尔菌属细菌，可以列举植生拉乌尔菌(Raoultella planticola)。具体地，可以列举下述菌株。 
解淀粉欧文氏菌ATCC15580株 
胡萝卜软腐欧文氏菌ATCC15713株 
植生克雷伯氏菌AJ13399株(FERM BP-6600)(欧洲专利申请公开955368号说明书) 
植生克雷伯氏菌AJ13410株(FERM BP-6617)(欧洲专利申请公开955368号说明书) 
植生拉乌尔菌ATCC33531株 
而且，AJ13399株以及AJ13410株在保藏时被归类为植生克雷伯氏菌，但现在植生克雷伯氏菌已被归类为植生拉乌尔菌(Drancourt，M.2001.Int JSyst Evol Microbiol.51：925-32)。 
作为瘤胃细菌，可以列举曼氏杆菌属(Mannheimia)细菌、放线杆菌属细菌、厌氧螺菌属细菌、Pyrobacterium属细菌、月形单胞菌属(Selenomonas)细菌，可以使用产琥珀酸曼氏杆菌(Mannheimia succiniciproducens)、产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)、反刍月形单胞菌(Selenomonasruminantium)、小韦荣氏球菌(Veillonella parvula)、产琥珀酸沃林氏菌(Wolnella succinogenes)、产琥珀酸厌氧螺菌(Anaerobiospirillumsucciniciproducens)等细菌，特别优选使用产琥珀酸曼氏杆菌。作为具体菌株，可以列举曼氏杆菌属菌种55E株(KCTC0769BP株)(美国专利申请公开2003/0113885号公报、国际公开2005/052135号小册子)。 
<1-1>生产具有羧基的酸性物质的能力的赋予 
以下，说明赋予细菌以生产具有羧基的酸性物质的能力的方法，或增强如上所述的微生物的生产具有羧基的酸性物质的能力的方法。 
为了赋予生产具有羧基的酸性物质的能力，可以采用在用于通过发酵生产物质的细菌的选育中从来采用的方法，例如获取营养缺陷突变体、类似物抗性菌株或代谢调节突变菌株，创建具有羧基的酸性物质生物合成系统酶表达增强的重组菌株等等(参见《氨基酸发酵》(《アミノ酸発酵》)，(株)学会出版中心(学会出版センタ一)，1986年5月30日首次出版发行，第77-100页)。这里，在具有羧基的酸性物质生产菌的选育中，所赋予的营养缺陷性、类似物抗性或代谢调节突变等性质可以是单独一种，也可以是两种或者三种以上。此外，表达被增强的具有羧基的酸性物质生物合成系统酶可以是单独一种，也可以是两种或三种以上。另外，可以将营养缺陷性、类似物抗性或代谢调节突变等性质的赋予与生物合成系统酶的增强组合起来。 
具备生产具有羧基的酸性物质的能力的营养缺陷突变体菌株、具有羧基的酸性物质的类似物抗性菌株或代谢调节突变菌株可如下获得：对亲本菌株或野生型菌株施以常规突变处理，即X-射线或紫外线照射、或用诱变剂例如N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍等处理；然后从所得的突变菌株中选择显示营养缺陷性、类似物抗性或代谢调节突变并且具备生产具有羧基的酸性物质的能力的菌株。 
以下，具体地例示赋予微生物以生产氨基酸或有机酸的能力的方法、以及氨基酸或有机酸生产菌。 
<L-谷氨酸生产菌> 
作为通过修饰来赋予诸如上述的微生物以L-谷氨酸生产能力的方法，可以列举例如通过进行修饰而增强编码L-谷氨酸生物合成相关酶的基因的表达的方法。作为L-谷氨酸生物合成相关酶，可以列举例如谷氨酸脱氢酶(以下也称“GDH”)(gdhA)、谷氨酰胺合成酶(glnA)、谷氨酸合酶(gltAB)、异柠檬酸脱氢酶(icdA)、顺乌头酸水合酶(acnA，acnB)、柠檬酸合酶(以下也称“CS”)(gltA)、甲基柠檬酸合酶(以下也称“PRPC”)(prpC)、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(以下也称“PEPC”)(ppc)、丙酮酸羧化酶(pyc)、丙酮酸脱氢酶(aceEF，lpdA)、丙酮酸激酶(pykA，pykF)、磷酸烯醇丙酮酸合酶(ppsA)、烯醇化酶 (eno)、磷酸甘油变位酶(pgmA，pgmI)、磷酸甘油酸激酶(pgk)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapA)、丙糖磷酸异构酶(tpiA)、果糖二磷酸醛缩酶(fbp)、磷酸果糖激酶(pfkA，pfk3)、葡萄糖磷酸异构酶(pgi)等。此外，酶名称后的括号内为基因名称。这些酶中，优选CS或PRPC、PEPC和GDH中的1种以上，更优选全部这3种。 
以下，就对微生物进行修饰以增强目的基因的表达的方法进行说明。 
第一种方法是通过将目的基因克隆在适当的载体上，并用所得的质粒转化宿主微生物，来提高该基因的拷贝数的方法。例如，当使用编码CS的基因(gltA基因)、编码PEPC的基因(ppc基因)和编码GDH的基因(gdhA基因)作为目的基因时，由于这些基因的碱基序列在埃希氏菌属细菌和棒杆菌属细菌中已经阐明(Ner，S.et al.1983.Biochemistry 22：5243-5249；Fujita，N.et al.1984.J.Biochem.95：909-916；Valle，F.et al.1984.Gene 27：193-199；Microbiology 140：1817-1828，1994；Eikmanns，B.J.et al.1989.Mol.Gen.Genet.218：330-339；Bormann，E.R.et al.1992.Molecular Microbiology 6：317-326)，因此可以基于各碱基序列来合成引物，以染色体DNA为模板，通过PCR法获取。 
作为用于转化的质粒，可以列举能够在属于肠杆菌群的细菌中自主复制的质粒，例如pUC19、pUC18、pBR322、RSF1010、pHSG299、pHSG298、pHSG399、pHSG398、pSTV28、pSTV29(pHSG、pSTV可从TAKARABio公司获得)、pMW119、pMW118、pMW219、pMW218(pMW可从NIIPONGENE公司获得)等。而且，还可以以噬菌体DNA代替质粒作为载体使用。作为用于同时增强上述CS或PRPC、PEPC和GDH的活性的质粒，可以列举整合了gltA基因、ppc基因和gdhA基因的RSFCPG(参照欧洲专利申请公开第0952221号说明书)、和RSFCPG的gltA基因被替换成prpC的RSFPPG。 
作为转化方法，可以使用例如，用氯化钙处理受体菌细胞来增加DNA的透过性的方法，此方法被报道用于大肠杆菌K-12(Mandel，M.and Higa，A.，J.1970.Mol.Biol.53：159-162)，或者由处于增殖阶段的细胞制备感受态细胞并导入DNA的方法，此方法被报道用于枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)(Duncan，C.H.et al.1977.Gene，1：153)。或者，还可以应用将DNA受体菌的细胞制备成容易导入重组DNA的原生质体或原生质球的状态，再 将重组DNA导入DNA受体菌的方法，此方法被报道用于枯草芽孢杆菌、放线菌和酵母(Chang，S.and Choen，S.N.1979.Molec.Gen.Genet.168：111-115；Bibb，M.J.et al.1978.Nature 274：398；Hinnen，A.et al.1978.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75：1929)。此外，采用电脉冲法(特开平2-207791号公报)也能够进行微生物的转化。 
提高基因的拷贝数可以通过向微生物的染色体DNA上导入多个拷贝的目的基因来实现。为了将多个拷贝的目的基因导入到微生物的染色体DNA上，可以利用染色体DNA上以多拷贝存在的序列作为靶标，通过同源重组法(Experiments in Molecular Genetics，Cold Spring Harbor Lab.(1972))来进行。作为染色体DNA上以多拷贝存在的序列，可以利用重复DNA(repetitiveDNA)和存在于转座元件端部的反向重复序列。或者，可以如特开平2-109985号公报所述那样，将目的基因搭载在转座子上，使其发生转移，从而将多个基因拷贝导入染色体DNA上。另外，还可以通过使用Mu噬菌体的方法(特开平2-109985号)将目的基因整合到宿主染色体上。 
第2种方法是在染色体DNA上或质粒上、将目的基因的启动子等表达调节序列替换为强的表达调节序列来增强目的基因的表达的方法。例如，lac启动子、trp启动子、trc启动子等是已知的强启动子。此外，还可以如国际公开WO00/18935所公开的那样，在基因的启动子区域导入数个碱基的碱基取代，将其修饰成更强的启动子，以及对SD序列进行修饰。启动子强度的评价方法和强启动子的例子记载于Goldstein等的论文(Goldstein，M.A.，and Doi，R.H.1995.Biotechnol.Annu.Rev.1：105-128)等中。 
表达调节序列的取代例如可以像使用温度敏感型质粒的基因取代那样进行。作为可以在大肠杆菌或Pantoea ananatis中使用的、具有温度敏感型复制起点的载体，可以列举例如WO 99/03988号国际公开小册子所述的质粒pMAN997等。此外，表达调节序列的取代还可以通过下述方法来进行：利用λ噬菌体的Red重组酶(Red recombinase)的方法(Datsenko，K.A.andWanner，B.L.2000.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97(12)：6640-6645)，以及将Red驱动整合法与λ噬菌体来源的切出系统(Cho，E.H.et al.2002.J.Bacteriol.184：5200-5203)联合使用的方法(参照WO2005/010175号)等。而且，也可以将表达调节序列的修饰与如上所述的提高基因的拷贝数的方法联合使用。 
此外，Red驱动整合中，如参考例1所示，可以适合地使用对λRed基因产物有抗性的菌株例如Pantoea ananatis SC17(0)株。该菌株于2005年9月21保藏于俄罗斯国立工业微生物保藏中心(Russian National Collection ofIndustrial Microorganisms(VKPM)，GNII Genetika)(地址：Russia，117545Moscow，1 Dorozhny proezd.1)，保藏号VKPM B-9246。 
作为经采用以上方法进行修饰而增强了柠檬酸合酶基因、甲基柠檬酸合酶基因、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因和/或谷氨酸脱氢酶基因的表达的微生物，可以例示出特开平2001-333769号公报、特开2000-106869号公报、特开2000-189169号公报、特开2000-333769、特开2006-129840、国际公布2006/051660号小册子等中记载的微生物。 
此外，生产L-谷氨酸的能力也可以通过增强6-磷酸葡糖酸脱水酶活性、或2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡糖酸醛缩酶活性、或者这两者的活性来赋予。作为提高了6-磷酸葡糖酸脱水酶活性、2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡糖酸醛缩酶活性的微生物，可以列举特开2003-274988公开的微生物。 
用来赋予L-谷氨酸生产能力的修饰可以通过降低或缺损催化从L-谷氨酸生物合成途径中分支并合成L-谷氨酸以外的化合物的反应的酶的活性来进行。催化从L-谷氨酸生物合成途径中分支并合成L-谷氨酸以外的化合物的反应的酶的实例包括2-酮戊二酸脱氢酶(sucA)，异柠檬酸裂合酶(aceA)，磷酸乙酰转移酶(pta)，乙酸激酶(ack)，乙酰羟酸合酶(ilvG)，乙酰乳酸合酶(ilvI)，甲酸乙酰转移酶(pfl)，乳酸脱氢酶(ldh)，谷氨酸脱羧酶(gadAB)、1-吡咯啉5-羧酸脱氢酶(putA)等。酶名称之后的括弧中是基因名。这其中，特别优选降低或缺损2-酮戊二酸脱氢酶活性。 
为了降低或缺损如上所述的酶的活性，可以采用与后述的降低或缺损乳酸脱氢酶(LDH)的活性相同的方法。 
细胞中目的酶活性的降低或缺损，以及活性降低的程度，可以通过测定候选菌株的菌体提取液或纯化级分的酶活性并与野生株相比较来加以确认。例如，2-酮戊二酸脱氢酶活性可以按照Reed等的方法(Reed，L.J.andMukherjee，B.B.1969.Methods in Enzymology 13：55-61)来测定。 
在埃希氏菌属细菌中缺损或者降低2-酮戊二酸脱氢酶活性的方法记载于特开平5-244970号公报以及特开平7-203980号公报等中。此外，在棒状杆菌型细菌中缺损或者降低2-酮戊二酸脱氢酶活性的方法记载于国际公开 95/34672号小册子中。此外，对于肠杆菌属细菌，公开于特开2001-333769号公报中。 
作为缺损了2-酮戊二酸脱氢酶活性或降低了2-酮戊二酸脱氢酶活性的属于埃希氏菌属的细菌，可以列举以下的菌株(美国专利第5,378,616号和第5,573,945号)。 
大肠杆菌W3110sucA::Kmr 
大肠杆菌AJ12624(FERM BP-3853) 
大肠杆菌AJ12628(FERM BP-3854) 
大肠杆菌AJ12949(FERM BP-4881) 
大肠杆菌W3110sucA::Kmr是通过破坏大肠杆菌W3110的2-酮戊二酸脱氢酶基因(sucA基因)而得到的菌株。该菌株的2-酮戊二酸脱氢酶完全缺损。 
作为其它缺损或降低了2-酮戊二酸脱氢酶活性的细菌，具体地可以列举如下菌株。 
Pantoea ananatis AJ13601(FERM BP-7207欧洲专利公开说明书1078989) 
Pantoea ananatis AJ13356(FERM BP-6615美国专利6.331,419号) 
Pantoea ananatis SC17sucA(FERMBP-8646国际公开小册子WO2005/085419号) 
植生克雷伯氏菌AJ13410(FERM BP-6617美国专利6,197,559号) 
乳发酵短杆菌(Brevibacterium lactofermentum)ΔS株(参照国际公开95/34672号小册子) 
此外，SC17sucA株是这样得到的：从AJ13355株(它是作为能够在低pH下在含L-谷氨酸和碳源的培养基中增殖的菌株从自然界分离出来的)获得粘液低生产性突变株(SC17)，然后破坏该SC17菌株的2-酮戊二酸脱氢酶基因(sucA)。AJ13601株是在该SC17sucA株中导入包含大肠杆菌来源的gltA、ppc和gdhA基因的质粒RSFCPG，以及包含乳发酵短杆菌来源的gltA基因的质粒pSTVCB，而得到SC17sucA/RSFCPG+pSTVCB株；再从该SC17sucA/RSFCPG+pSTVCB株中选择对低pH下高浓度L-谷氨酸有抗性的菌株，并选择增殖度和L-谷氨酸生产能力高的菌株而得到的(欧洲专利申请公开0952221号说明书)。AJ13356株是AJ13355株的α-KGDH-E1亚单位基 因(sucA)缺失后得到的菌株。 
SC17sucA株的内部编号为AJ417，其于平成16年(2004年)2月26日保藏于产业技术综合研究所专利生物保藏中心(邮政编码305-8566茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，保藏号为FERM BP-08646。 
AJ13410株于平成10年(1998年)2月19日保藏于通产省工业技术院生命工学工业技术研究所(现产业技术综合研究所专利生物保藏中心，邮政编码305-8566茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，保藏号为FERMP-16647，并于平成11年(1999年)1月11日转为基于布达佩斯条约的国际保藏，保藏号为FERM BP-6617。 
上述Pantoea ananatis AJ13355株、AJ13356株、AJ13601株和前述的植生克雷伯氏菌AJ13399株具有于酸性条件下培养时在液体培养基中蓄积超过L-谷氨酸饱和浓度的量的L-谷氨酸的能力。 
此外，为了提高肠杆菌科的生产L-谷氨酸的能力，还可以采用缺损arcA基因的方法(美国专利7,090,998号公报)、扩增谷氨酸排出基因yhfK基因的方法(WO2005/085419小册子)。 
此外，作为具有L-谷氨酸生产能力的棒状杆菌型细菌，可以示例出以下菌株。 
黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)AJ11573(FERM P-5492)参照特开昭56-151495公报 
黄色短杆菌AJ12210(FERM P-8123)参照特开昭61-202694公报 
黄色短杆菌AJ12212(FERM P-8123)参照特开昭61-202694公报 
黄色短杆菌AJ12418(FERM-BP2205)参照特开平2-186994公报 
黄色短杆菌DH18(FERM P-11116)参照特开平3-232497公报 
栖糖蜜棒杆菌(Corynebacterium melassecola)DH344(FERM P-11117)参照特开平3-232497公报 
谷氨酸棒杆菌AJ11574(FERM P-5493)参照特开昭56-151495公报 
具有L-谷氨酸生产能力的微生物还包括：通过赋予对表面活性剂等生物素作用抑制物质的温度敏感型突变，从而能够在含过量生物素的培养基中在不存在生物素作用抑制物质的条件下生产L-谷氨酸的乳发酵短杆菌AJ13029株(FERM BP-5189；参照WO96/06180号)。此外还包括对L-谷氨酸代谢拮抗物质抗性的脂环酸杆菌(Alicyclobacillus)属微生物(特开平 11-262398号公报)。 
具有L-谷氨酸生产能力的微生物还可以是进一步具备L-谷氨酸分解活性降低的性质、或马来酸合酶(aceB)-异柠檬酸裂合酶(aceA)-异柠檬酸脱氢酶激酶/磷酸酶(aceK)操纵子(以下简称ace操纵子)的表达变为组成型的性质的微生物。作为具有这样的性质的微生物，可以列举例如： 
大肠杆菌AJ12628(FERMBP-3854) 
大肠杆菌AJ12624(FERMBP-3853)。 
前者是兼具2-酮戊二酸脱氢酶活性降低、L-谷氨酸分解活性降低、ace操纵子的表达变为组成型等性质的突变株；后者是2-酮戊二酸脱氢酶活性降低、且L-谷氨酸分解活性降低的突变株(参照法国专利2680178号说明书)。 
此外，当使用泛菌属细菌时，优选具有下述突变，所述突变使得当在含糖的培养基中进行培养时，产生到菌体外的粘液质比野生菌株少。产生到菌体外的粘液质比野生菌株少的突变，可以利用特开2001-333769所述的在固体培养基上筛选不生产粘性物质的菌株的方法，或者破坏与多糖合成相关的ams操纵子的方法。SEQ ID NO：66所示为多糖合成相关的ams操纵子的碱基序列，该操纵子编码的AmsH、I、A、C、B的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：67、68、69、70、71所示。 
<琥珀酸生产菌> 
作为琥珀酸生产菌，可以使用乙酸、乳酸、乙醇以及甲酸形成能力缺损的菌株，具体而言，可以列举大肠杆菌SS373株(国际公开99/06532号小册子)。 
乙酸、乳酸、乙醇、以及甲酸形成能力缺损的菌株通过如下方式获得：获取在基本培养基中不能同化乙酸以及乳酸的菌株；或者，降低以下的乳酸生物合成系统基因以及乙酸生物合成系统酶的活性。(国际公开2005/052135号小册子)。 
此外，如上所述的菌株可以通过赋予单氟乙酸抗性(US5,521,075)来获得。 
作为其他的获取琥珀酸生成能力提高的菌株的方法，可以列举下述方法：在厌氧条件下用富含葡萄糖的培养基培养缺损甲酸裂合酶和乳酸脱氢酶而无法同化丙酮酸的菌株，分离出具有丙酮酸同化能力的突变株(国际公 开1997/16528号小册子)。 
琥珀酸生产能力还可以通过下述方式获得：扩增以下的琥珀酸生物合成系统相关的酶的基因，或者缺损催化从该生物合成系统中分支而生成其它化合物的反应的酶的基因。 
还可以通过修饰而使得乳酸生物合成系统酶之一的乳酸脱氢酶(LDH，以下括号内为酶名称)的酶活性降低，来赋予琥珀酸生产能力(国际公开2005/052135号小册子、国际公开2005/116227号小册子、美国专利5,770,435号公报、美国专利申请公开2007/0054387号公报、国际公开99/53035号公报、Alam，K.Y.and Clark，D.P.1989.J.Bacteriol.171：6213-6217)。有些微生物具有L型乳酸脱氢酶和D型乳酸脱氢酶，可以通过修饰使得其中的任一种降低，优选使两者都降低。 
此外，还可以通过修饰而使得甲酸生物合成系统酶之一的丙酮酸-甲酸裂合酶(PFL)的酶活性降低，来赋予琥珀酸生产能力(美国专利申请公开2007/0054387号公报、国际公开2005/116227号小册子、国际公开2005/52135号小册子、Donnelly，M.I.et al.1998.Appl.Biochem.Biotechnol.70-72：187-198)。 
还可以通过进行修饰使得属于乙酸生物合成系统酶的磷酸乙酰转移酶(PTA)、乙酸激酶(ACK)、丙酮酸氧化酶(POXB)、乙酰CoA合成酶(ACS)、乙酰CoA水解酶(ACH)的酶活性降低，来赋予琥珀酸生产能力(美国专利申请公开2007/0054387号公报、国际公开2005/052135号公报、国际公开第99/53035号公报、国际公开2006/031424号公报、国际公开2005/113745号小册子、国际公开2005/113744号小册子)。 
此外，还可以通过修饰使得属于乙醇生物合成系统酶的醇脱氢酶(ADH)的酶活性降低，来提高琥珀酸生产能力(参照国际公开2006/031424号小册子)。 
此外，通过降低丙酮酸激酶、葡萄糖PTS(ptsG)、ArcA蛋白质、IclR蛋白质(iclR)、谷氨酸脱氢酶(gdh)和/或谷氨酰胺合成酶(glnA)、谷氨酸合酶(gltBD)的活性，也能够提高琥珀酸生产能力(国际公开第2006/107127号、第2007007933号、特开2005-168401)。酶名称后的括号内为基因名称。 
琥珀酸生产能力还可以通过增强与琥珀酸生产相关的生物合成系统酶来赋予。 
琥珀酸生产能力还可以通过增强丙酮酸羧化酶、苹果酸酶(malicenzyme)、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、富马酸酶、富马酸还原酶、苹果酸脱氢酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶的活性来提高(特开平11-196888号公报、国际公开第99/53035号小册子、Hong，S.H.，and S.Y.Lee.2001.Biotechnol.Bioeng.74：89-95、Millard，C.S.et al.1996.Appl.Environ.Microbiol.62：1808-1810、国际公开2005/021770号小册子特开2006-320208、Kim，P.et al.2004.Appl.Environ.Microbiol.70：1238-1241)。这些目的酶的酶活性的增强可以参照前面关于L-谷氨酸生产菌描述的增强目的基因表达的方法、以及下述的增强ybjL基因表达的方法来进行。 
具体而言，作为属于肠杆菌科的琥珀酸生产菌，可以列举以下菌株。 
大肠杆菌SS373株(国际公开99/06532号小册子) 
大肠杆菌AFP111株(国际公开9716528号小册子) 
大肠杆菌NZN111株(美国专利6,159,738号公报) 
大肠杆菌AFP184株(国际公开2005/116227号小册子) 
大肠杆菌SBS100MG株、SBS110MG株、SBS440MG株、SBS550MG株、SBS660MG株(国际公开2006/031424号公报) 
作为属于棒状杆菌型细菌的琥珀酸生产菌，可以列举以下菌株。 
黄色短杆菌AB-41株(特开平11-113588号公报) 
黄色短杆菌AB-41株/PC扩增株(特开平11-196888号公报) 
谷氨酸棒杆菌AJ110655株(FERM BP-10951) 
黄色短杆菌MJ233Δldh(国际公开第2005/021770号小册子) 
乳发酵短杆菌(谷氨酸棒杆菌)2256Δ(ldh，ach，pta，ack)(国际公开第2005/113744号小册子) 
乳发酵短杆菌2256Δ(ldh，pta，ack，poxB)(国际公开第2005/113745号小册子) 
谷氨酸棒杆菌Rldh-/pCRB-1PC株(国际公开2005/010182号小册子) 
作为属于瘤胃细菌的琥珀酸生产菌，可以列举以下菌株。 
产琥珀酸曼氏杆菌LPK，LPK7，LPK4(国际公开2005/052135号小册子) 
琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)130Z(美国专利5,504,004号公报) 
产琥珀酸厌氧螺菌(Anaerobiospirillum succiniciproducens)FZ10(美国专 利5,521,075号公报) 
产琥珀酸厌氧螺菌FZ53(美国专利5,573,931号公报) 
<1-2>ybjL基因的表达的增强 
本发明的微生物，可以通过对如上所述的具备生产具有羧基的酸性物质的能力的微生物进行修饰，使得ybjL基因的表达增强来获得。不过，也可以先进行修饰使得ybjL基因的表达增强，然后再赋予生产具有羧基的酸性物质的能力。此外，还可以是通过ybjL基因的扩增而被赋予或增强了生产具有羧基的酸性物质的能力的微生物。 
本发明的“ybjL基因”是指大肠杆菌的ybjL基因及其同源物，Pantoeaananatis的ybjL基因及其同源物，产气肠杆菌的ybjL基因及其同源物。作为大肠杆菌的ybjL基因，可以示例出编码具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的蛋白质的基因，优选包含SEQ ID NO：3的101位～1783位的碱基序列的基因。此外，作为Pantoea ananatis来源的ybjL基因，可以示例出编码具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的蛋白质的基因，优选包含SEQ IDNO：1的298位～1986位的DNA。此外，作为产气肠杆菌AJ110637株来源的ybjL基因，可以示例出编码具有SEQ ID NO：87所示的氨基酸序列的蛋白质的基因，优选包含SEQ ID NO：86的19位～1704位的DNA。而且，作为鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)来源的ybjL基因，可以示例出编码具有SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列的蛋白质的基因(SEQ ID NO：24)；作为鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)来源的ybjL基因，可以示例出编码具有SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列的蛋白质的基因(SEQ ID NO：26)；作为胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)来源的ybjL基因，可以示例出编码具有SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列的蛋白质的基因(SEQ ID NO：28)；作为霍乱弧菌(Vibrio cholerae)来源的ybjL基因，可以示例出编码具有SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列的蛋白质的基因(SEQ ID NO：30)；作为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)来源的ybjL基因，可以示例出编码具有SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列的蛋白质的基因(SEQ ID NO：32)；作为深海发光杆菌(Photobacterium profundum)来源的ybjL基因，可以示例出编码具有SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列的蛋白质的基因(SEQ ID NO：34)等。还可以是基于与上述示例的基因的同源性，从谷氨酸棒杆菌、乳发酵短杆菌等棒状杆菌型细菌，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等假 单胞菌属细菌，结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)等分枝杆菌属(Mycobacterium)细菌等中克隆得到的。而且，上述鼠伤寒沙门氏菌、鼠疫耶尔森氏菌、胡萝卜软腐欧文氏菌、霍乱弧菌、嗜水气单胞菌、深海发光杆菌的ybjL基因所编码的蛋白质的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：4的氨基酸序列96％、90％、88％、64％、60％、68％同源，而分别与SEQ ID NO：2的氨基酸序列86％、90％、84％、63％、60％、67同源。而且，SEQ ID NO：2与4的氨基酸序列之间的同源性为86％。SEQ ID NO：2、4之间的共有序列如SEQ ID NO：5所示。SEQ ID NO：4与87的氨基酸序列之间的同源性为92％，SEQ ID NO：2与87的氨基酸序列之间的同源性为83％。而且，产气肠杆菌AJ110637株来源的ybjL基因的序列(SEQ ID NO：86)以及其氨基酸序列(SEQ ID NO：87)是本发明人等首次发现的。SEQ ID NO：2、4、87之间的氨基酸序列间的共有序列如SEQ ID NO：88所示。 
所谓ybjL基因同源物，是指如下所述的基因，其来源于大肠杆菌、Pantoea ananatis和产气肠杆菌以外的微生物，与大肠杆菌、Pantoea ananatis或产气肠杆菌的ybjL基因结构显示高类似性，且编码通过在微生物内增强其表达能够提高微生物的生产具有羧基的酸性物质的能力的蛋白质。作为ybjL基因同源物，可以列举编码与SEQ ID NO：2、4或87的氨基酸序列全长，或相对于SEQ ID NO：2、4或87的氨基酸序列具有70％以上、优选80％以上、更优选90％以上、更优选95％以上、特别优选97％以上的同源性、并且编码通过在微生物内增强其表达能够提高微生物的物质生产能力的蛋白质的基因。而且，相对于上文记载的任一种氨基酸序列具有70％以上、优选80％以上、更优选90％以上、更优选95％以上、特别优选97％以上的同源性的ybjL基因同源物可以具有SEQ ID NO：5或88，优选SEQ IDNO：5记载的共有序列。氨基酸序列和碱基序列的同源性可以利用例如Karlin和Altschul的BLAST(Pro.Natl.Acad.Sci.USA，90，5873(1993))或FASTA(Methods Enzymol.，183，63(1990))算法来确定。基于该BLAST算法，开发出了称为BLASTN、BLASTX的程序(参照http://www.ncbi.nlm.nih.gov)。而且，在本说明书中，“同源性”(homology)”有时指“同一性”(identity)。 
就ybjL基因而言，只要通过增强其表达能够提高微生物生产目的物质的能力，还可以是人工修饰体等具有保守突变的基因。即，可以是编码具 有在现有蛋白质的氨基酸序列例如SEQ ID NO：2、4、25、27、29、31、33、35或SEQ ID NO：87的氨基酸序列中发生保守突变，具体地为在1个或数个位置上发生1个或数个氨基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的氨基酸序列的蛋白质的基因。这里，所谓“数个”，虽然因氨基酸残基的种类或其在蛋白质的立体结构中的位置而异，但优选为1～20个、更优选1～10个、特别优选1～5个。而且，ybjL基因还可以是编码如下所述的蛋白质的基因：所述蛋白质相对于SEQ ID NO：2、4、25、27、29、31、33、35或SEQ ID NO：87的氨基酸序列全长具有70％以上、优选80％以上、更优选90％以上、更优选95％以上、特别优选97％以上的同源性，并且通过在微生物内增强其表达能够提高微生物的物质生产能力。 
上述取代优选为保守取代。保守取代是一种功能上无变化的中性突变。关于保守突变，当取代位点是芳香族氨基酸时为Phe、Trp和Tyr之间；当取代位点是疏水氨基酸时为Leu、Ile和Val之间；当取代位点是极性氨基酸时为Gln和Asn之间；当取代位点是碱性氨基酸时为Lys、Arg和His之间、当取代位点是酸性氨基酸时为Asp和Glu之间；当取代位点是具有羟基的氨基酸时为Ser和Thr之间的相互取代的突变。典型的保守突变是保守取代，被视为保守取代的取代具体来说包括例如：用Ser或Thr取代Ala；用Gln、His或Lys取代Arg；用Glu、Gln、Lys、His或Asp取代Asn；用Asn、Glu或Gln取代Asp；用Ser或Ala取代Cys；用Asn、Glu、Lys、His、Asp或Arg取代Gln；用Gly、Asn、Gln、Lys或Asp取代Glu；用Pro取代Gly；用Asn、Lys、Gln、Arg或Tyr取代His；用Leu、Met、Val或Phe取代Ile；用Ile、Met、Val或Phe取代Leu；用Asn、Glu、Gln、His或Arg取代Lys；用Ile、Leu、Val或Phe取代Met；用Trp、Tyr、Met、Ile或Leu取代Phe；用Thr或Ala取代Ser；用Ser或Ala取代Thr；用Phe或Tyr取代Trp；用His、Phe或Trp取代Tyr；和用Met、Ile或Leu取代Val。 
诸如这样的基因例如可以通过采用定点突变法对由SEQ ID NO：1的298位～1986位组成的碱基序列、由SEQ ID NO：3的101位～1783位组成的碱基序列、由SEQ ID NO：86的19位～1704位组成的碱基序列、或SEQID NO：24、26、28、30、32、或者34所示的碱基序列进行修饰，而使得所编码的蛋白质的特定位点的氨基酸残基包含取代、缺失、插入或添加来 获得。此外，还可以通过传统的突变处理来获得。作为突变处理，可以列举：将具有上述的任一碱基序列的基因用羟胺等进行体外处理的方法，和对携带该基因的微生物例如埃希氏菌属细菌采用紫外线或使用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(NTG)或甲磺酸乙酯(EMS)等在常规突变处理中使用的突变剂来进行处理的方法。此外，如上所述的氨基酸的取代、缺失、插入、添加或倒位等还包括因基于携带ybjL基因的微生物的个体差异、种间差异等情形而天然发生的突变(mutant或variant)而产生的那些取代、缺失、插入、添加或倒位。 
而且，ybjL基因还可以是这样的DNA，其与具有由SEQ ID NO：1的298位～1986位组成的碱基序列的DNA、具有由SEQ ID NO：3的101位～1783位组成的碱基序列的DNA、具有由SEQ ID NO：86的19位～1704位组成的碱基序列的DNA、具有SEQ ID NO：1、3、24、26、28、30、32、34或者86的碱基序列的DNA的互补链、或者可由具有这些碱基序列的DNA制备的探针在严格条件下杂交，且编码通过在微生物内增强其表达能够提高微生物的物质生产能力的蛋白质。 
这里，“严格条件”是指形成所谓特异性杂交体而不形成非特异性杂交体的条件。将该条件明确地数值化是困难的，举一实例，有这样的条件：在该条件下，具有高同源性的DNA，例如具有80％以上，优选90％以上，更优选95％以上，特别优选具有97％以上同源性的DNA相互杂交，而同源性较之为低的DNA则不互相杂交；或者是这样的条件：在与常规Southern杂交的洗涤条件即60℃、1×SSC、0.1％SDS，优选0.1×SSC、0.1％SDS，更优选65℃、0.1×SSC、0.1％SDS，更优选68℃、0.1×SSC、0.1％SDS相当的温度、盐浓度下洗涤1次，更优选2～3次。 
探针可以具有ybjL基因的部分序列。这样的探针可以采用本领域技术人员知晓的方法，以基于各基因的碱基序列制备的寡核苷酸为引物，以包含各基因的DNA片段为模板，通过PCR反应来制备。而且，当使用300bp左右长度的DNA片段作为探针时，作为在上述条件下进行杂交后的洗涤条件，可以列举50℃、2×SSC，0.1％SDS。 
上文关于基因同源物以及保守突变的描述同样适用于本说明书中描述的其它酶基因。 
ybjL基因的表达的增强可以按照与上文所述关于增强L-谷氨酸生产菌 目的基因表达的方法相同的方法，借助下述手段来实现：通过转化、同源重组来提高ybjL基因的拷贝数，或者对ybjL基因的表达调节序列进行修饰，或者扩增能够提高ybjL的表达的调节子(regulator)，或缺失或弱化能够降低ybjL的表达的调节子。 
本发明的微生物优选通过增强ybjL基因的表达，来使得具有羧基的酸性物质的排出活性提高。“具有羧基的酸性物质的排出活性提高”可以通过将培养本发明的微生物时排出至培养基中的目的物质的量，与培养ybjL基因的表达未增强的对照微生物时排出至培养基中的目的物质的量相比较来加以确认。即，“具有羧基的酸性物质的排出活性的提高”可以通过与对照微生物相比、培养本发明的微生物时蓄积在培养基中的具有羧基的酸性物质的升高而观察到。此外，“具有羧基的酸性物质的排出活性的提高”还可以通过在本发明的微生物的细胞内具有羧基的酸性物质的浓度的降低而观察到。“具有羧基的酸性物质的排出活性”优选与ybjL基因的表达未增强的菌株相比，细胞内的具有羧基的酸性物质的浓度减少10％以上、优选20％以上、特别优选30％以上。微生物的绝对“具有羧基的酸性物质的排出活性”可以通过测定微生物细胞内的具有羧基的酸性物质的浓度与细胞外的具有羧基的酸性物质的浓度的差来检测。而且，“具有羧基的酸性物质的排出活性”还可以通过利用反转膜，用放射性同位素测定细胞内的氨基酸摄入活性来检测(J.Biol.Chem 2002 Vol 277.No.5 1p49841-49849)。例如，可以由表达ybjL基因的菌体制备反转膜小囊泡(reverted membrane vesicles)，添加ATP或者其它可作为驱动力的底物，通过测定用RI标记的谷氨酸的摄入活性来进行测定。此外，还可以通过使用活菌检测经标记的具有羧基的酸性物质与非标记的具有羧基的酸性物质的交换反应的速度来测定。 
本发明的微生物可以是具备在酸性条件下培养时在液体培养基中蓄积超过L-谷氨酸的饱和浓度的量的L-谷氨酸的能力(以下有时称为酸性条件下的L-谷氨酸蓄积能力)的微生物。这样的微生物可以是通过增强ybjL基因的表达而变得具有酸性条件下的L-谷氨酸蓄积能力的微生物，也可以是天然地具有酸性条件下的L-谷氨酸蓄积能力的微生物。 
作为具有酸性条件下的L-谷氨酸蓄积能力的微生物，具体而言，可以列举前述的Pantoea ananatis AJ13355株(FERM BP-6614)、AJ13356株(FERM BP-6615)以及AJ13601株(FERM BP-7207)(以上参照特开 2001-333769号公报)等。Pantoea ananatis AJ13355以及AJ13356株于平成10年(1998年)2月19日保藏于通产省工业技术院生命工学工业技术研究所(现名称为产业技术综合研究所生命工学工业技术研究所，地址：邮政编码305-8566茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，保藏号FERM P-16644和FERM P-16645，并于平成11年(1999年)1月11日转为基于布达佩斯条约的国际保藏，保藏号FERM BP-6614和FERM BP-6615。AJ13601于1999年8月18日保藏于工业技术院生命工学工业技术研究所(现名称为产业技术综合研究所专利生物保藏中心)，保藏号FERM P-17156，并于2000年7月6日转为基于布达佩斯条约的国际保藏，保藏号FERM BP-7207。而且，这些菌株在被分离出来时鉴定为成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)，并作为成团肠杆菌AJ13355、AJ13356和AJ13601株加以保藏，近年来根据16SrRNA的碱基序列解析等，将它们重新分类为Pantoea ananatis。 
在本方法中，生产有机酸特别是琥珀酸时，使用除了ybjL基因的表达上升之外、还进一步经过修饰使得乳酸脱氢酶(LDH)、醇脱氢酶(ADH)以及丙酮酸-甲酸裂合酶(PFL)中的1种或2种以上酶的活性降低的微生物株，是更为有效的。 
这里，“经修饰使得乳酸脱氢酶活性降低”是指：与乳酸脱氢酶非修饰株相比较，乳酸脱氢酶活性降低。乳酸脱氢酶活性优选与乳酸脱氢酶非修饰株相比较，每个菌体平均降低至10％以下。此外，乳酸脱氢酶活性也可以完全缺损。乳酸脱氢酶活性降低可以通过采用公知的方法(Kanarek，L.andHill，R.L.1964.J.Biol.Chem.239：4202)测定乳酸脱氢酶活性来确认。作为大肠杆菌的乳酸脱氢酶活性降低的突变株的具体生产方法，可以列举Alam，K.Y.，and Clark，D.P.1989.J.Bacteriol.171：6213-6217中记载的方法等。本发明的乳酸脱氢酶活性降低、且ybjL基因表达增强的微生物，例如可以这样获得：如后述的实施例1那样，制备LDH基因被破坏的微生物，并用含ybjL基因的重组载体转化该微生物。不过，用于降低LDH活性的修饰操作与用于增强ybjL表达的修饰操作先进行任一个均可。此处，大肠杆菌中，LDH由ldhA基因、lldD基因编码，ldhA基因的DNA序列示于SEQ ID NO：36、氨基酸序列示于SEQ ID NO：37，lldD基因的DNA序列示于SEQ ID NO：38、氨基酸序列示于SEQ ID NO：39。 
为了降低或缺损LDH的活性，可以采用常规突变处理方法在染色体上 的LDH基因中导入使得细胞中的LDH活性降低或缺损的突变。例如，可以通过采用基因重组，缺损染色体上的编码LDH的基因，或对启动子、Shine-Dalgarno(SD)序列等表达调节序列进行修饰等来实现。此外，还可以通过向染色体上的编码LDH的区域导入氨基酸取代(错义突变)、或导入终止密码子(无义突变)、或导入一～二个碱基的添加/缺失的移码突变、或缺失基因的一部分或整个区域来实现(Qiu Z.and Goodman M.F.1997.J.Biol.Chem.272：8611-8617)。此外，还可以通过基因破坏，例如构建编码区域缺失的编码突变型LDH的基因并通过同源重组等用其取代染色体上的正常型LDH基因，或者将转座子、IS因子导入该基因来实现LDH活性的降低或缺损。 
例如，为了通过基因重组导入使得LDH活性降低或缺损的突变，可以采用诸如以下的方法。对LDH基因的部分序列进行修饰，制备不产生正常发挥功能的酶的突变型LDH基因，用含该基因的DNA转化大肠杆菌，通过突变型基因与染色体上的基因之间发生重组，可以将染色体上的LDH基因替换成突变型。基于如上所述的利用同源重组的基因取代的位点特异性突变导入已经建立起来，包括下述方法：Datsenko和Wanner开发的称为“Red驱动整合(Red-driven integration)”的方法(Datsenko，K.A.and Wanner，B.L.2000.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，97(12)：p6640-6645)、组合使用Red驱动整合法与λ噬菌体来源的切出系统(Cho，E.H.et al.2002.J.Bacteriol.184：5200-5203)的方法(参照WO2005/010175号)等使用线性DNA的方法，或者使用含温度敏感型复制起点的质粒的方法等(美国专利第6303383号、或特开平05-007491号公报、WO2005/010175号公报)。此外，基于如上所述的利用了同源重组的基因取代的位点特异性突变导入还可以利用在宿主中不具有复制能力的质粒来进行。 
此外，“经修饰而降低了醇脱氢酶活性”是指与醇脱氢酶非修饰株相比醇脱氢酶活性降低。醇脱氢酶活性优选与醇脱氢酶非修饰株相比较，每个菌体平均降低至10％以下。此外，醇脱氢酶活性可以完全缺损。醇脱氢酶活性降低可以通过公知的方法(Lutstorf，U.M.et al.1970.Eur.J.Biochem.17：497-508)测定醇脱氢酶活性来确认。作为大肠杆菌的醇脱氢酶活性降低的突变株的具体生产方法，可以列举Sanchez，A.M.et al.2005.Biotechnol.Prog.21：358-365)中记载的方法等。本发明的醇脱氢酶活性降低、且ybjL基因 的表达增强的微生物例如可以这样获得：制备编码醇脱氢酶(ADH)的基因被破坏的微生物，并将该微生物用含ybjL基因的重组载体转化。不过，用于降低ADH活性的修饰操作与用于增强ybjL基因表达的修饰操作任一个先进行都是可以的。降低醇脱氢酶活性可以采用与上述的降低乳酸脱氢酶活性的方法相同的方法来进行。此外，作为产气肠杆菌的ADH基因(adhE)，产气肠杆菌AJ 110637(FERM ABP-10955)株的ADH基因的碱基序列(部分序列)如SEQ ID NO：74所示。该基因的全碱基序列可以采用例如下述方法确定：基于这些部分序列，从产气肠杆菌的染色体DNA中分离出ADH基因(adhE)。 
此外，“经修饰而降低了丙酮酸-甲酸裂合酶活性”是指与丙酮酸-甲酸裂合酶非修饰株相比丙酮酸-甲酸裂合酶活性降低。丙酮酸-甲酸裂合酶活性优选与丙酮酸-甲酸裂合酶非修饰株相比较，每菌体平均降低至10％以下。此外，丙酮酸-甲酸裂合酶活性也可以完全缺损。丙酮酸-甲酸裂合酶活性降低可以通过公知方法(Knappe，J.and Blaschkowski，H.P.1975.Meth.Enzymol.41：508-518)测定丙酮酸-甲酸裂合酶活性来确认。本发明的丙酮酸-甲酸裂合酶活性降低且ybjL基因表达增强的微生物可以例如这样获得：制备PFL基因被破坏的微生物，将该微生物用含ybjL基因的重组载体转化。不过，用于降低PFL活性的修饰操作与用于增强ybjL基因表达的修饰操作任一个先进行都是可以的。降低PFL活性可以采用与上述的降低乳酸脱氢酶活性相同的方法来进行。 
在本方法中，在生产有机酸特别是琥珀酸时，可以使用除增强了ybjL基因的表达之外，还进一步经过修饰而增强了丙酮酸羧化酶(PC)的活性的微生物。丙酮酸羧化酶活性的增强可以与乳酸脱氢酶活性、醇脱氢酶活性、和/或丙酮酸-甲酸裂合酶活性的降低相组合。“经过修饰而增强了丙酮酸羧化酶活性”是指丙酮酸羧化酶的活性相对于野生株或亲本株等非修饰株有所增加。丙酮酸羧化酶的活性例如可以采用后述的测定NADH的减少的方法来测定。 
本发明的方法中使用的PC基因，可以使用其碱基序列已经测定的基因，或者可以从微生物、动植物等的染色体分离出编码具有PC活性的蛋白质的DNA片段，测定其碱基序列后使用。此外，在确定了碱基序列后，还可以使用根据该序列合成的基因。 
作为PC基因，可以使用例如棒状杆菌型细菌谷氨酸棒杆菌来源的PC基因(Peters-Wendisch，P.G.et al.1998.Microbiology，144：915-927)。此外，PC基因可以有一部分碱基被其它碱基取代或被删除，或者有新的碱基插入，或者碱基序列的一部分发生易位，只要其编码的PC的功能即二氧化碳固定相关的性质实质上不受损害即可。 
此外，还可以使用谷氨酸棒杆菌以外的细菌、或者其它微生物或动植物来源的PC基因。特别地，以下所示的微生物或动植物来源的PC基因的序列是已知(示于以下文献)的，可以通过像上文所述那样进行杂交或者通过PCR法扩增其ORF部分来获得。 
人[Biochem.Biophys.Res.Comm.，202，1009-1014，(1994)] 
小鼠[Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，90，1766-1779，(1993)] 
大鼠[GENE，165，331-332，(1995)] 
酵母；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 
[Mol.Gen.Genet.，229，307-315，(1991)] 
粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe) 
[DDBJ登录号；D78170] 
嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus) 
[GENE，191，47-50，(1997)] 
埃特里根瘤菌(Rhizobium etli) 
[J.Bacteriol.，178，5960-5970，(1996)] 
而且，增强PC基因的表达可以按照与上述的L-谷氨酸生产菌的描述中的增强目的基因表达、以及增强ybjL基因表达的方法相同的方法进行。 
<2>本发明的具有羧基的酸性物质的生产方法 
通过在培养基中培养本发明的微生物，在培养基中生成并蓄积具有羧基的酸性物质，并且从该培养基收集具有羧基的酸性物质，可以生产具有羧基的酸性物质。此外，通过使本发明的微生物或该微生物的处理产物在含有碳酸根离子、碳酸氢根离子或二氧化碳气体的反应液中作用于有机原料，生成具有羧基的酸性物质，并收集该酸性物质，也可以生产具有羧基的酸性物质。前一种方法适合用于具有羧基的酸性物质为酸性氨基酸的情形。后一种方法适合用于具有羧基的酸性物质为有机酸的情形。以下，对于作为具有羧基的酸性物质的酸性氨基酸以及有机酸的生产，示例说明合 适的实施方式。 
<2-1>酸性氨基酸的生产 
通过在培养基中培养本发明的微生物，在培养基中生成并蓄积酸性氨基酸，并且从该培养基收集酸性氨基酸，可以生产酸性氨基酸。 
培养中所用的培养基可以使用含有碳源、氮源、无机盐类、其它视需要的氨基酸、维生素等有机微量营养素的常规培养基。合成培养基或天然培养基均可使用。培养基中使用的碳源和氮源，只要所培养的菌株能够利用即可，可以使用任何种类的碳源和氮源。 
作为碳源，可以使用葡萄糖、甘油、果糖、蔗糖、麦芽糖、甘露糖、半乳糖、淀粉水解物、糖蜜等糖类、此外，可以单独使用或者与其它碳源组合使用乙醇等醇类。此外，乙酸、柠檬酸等有机酸，当其不是目的物质时，也可以使用。作为氮源，可以使用氨气、硫酸铵、碳酸铵、氯化铵、磷酸铵、乙酸铵等铵盐或硝酸盐等。作为有机微量营养素，可以使用氨基酸、维生素、脂肪酸、核酸，以及含有它们的蛋白胨、酪蛋白氨基酸、酵母提取物、大豆蛋白分解产物等，在使用生长中需要氨基酸等的营养缺陷性突变株时，优选补加需求的营养素。作为无机盐类，可以使用磷酸盐、镁盐、钙盐、铁盐、锰盐等。 
培养优选在发酵温度20～45℃、pH控制在3～9的条件下进行通气培养。当培养中pH下降时，例如，添加碳酸钙，或者用氨气等碱进行中和。通过在这样的条件下培养优选10小时～120小时左右，可以在培养液中蓄积酸性氨基酸。 
此外，当酸性氨基酸为L-谷氨酸时，可以使用已调整至可使L-谷氨酸析出的条件的液体培养基，在进行培养的同时使L-谷氨酸析出至培养基中。作为L-谷氨酸析出的条件，可以列举例如：pH5.0～4.0、优选pH4.5～4.0、更优选pH4.3～4.0、特别优选pH4.0。 
从培养结束后的培养液收集L-谷氨酸的方法，可以按照公知的回收方法来进行。可以采用例如，从培养液中除去菌体后进行浓缩晶析的方法或者离子交换色谱等来收集。当在可使L-谷氨酸析出的条件下进行培养时，析出至培养液中的L-谷氨酸可以采用离心分离或过滤等来收集。此时，可以在将培养基中溶解的L-谷氨酸晶析后，一并进行分离。 
<2-2>有机酸的生产 
可以通过使本发明的微生物或该微生物的处理产物在含有碳酸根离子、碳酸氢根离子或二氧化碳气体的反应液中与有机原料作用，生成有机酸，并收集该有机酸，来生产有机酸。 
在第一种实施方式中，通过在含碳酸根离子、碳酸氢根离子或二氧化碳气体和有机原料的培养基中培养微生物，可以同时进行微生物的增殖和有机酸的生成。该实施方式中，培养基相当于所述反应液。而且，微生物的增殖与有机酸的生成可以同时进行，还可以具有主要增殖微生物的培养期和主要生成有机酸的培养期。 
此外，在第二种实施方式中，使在培养基中培养并增殖后的菌体与含碳酸根离子、碳酸氢根离子或二氧化碳气体和有机原料的反应液共存，在该反应液中使微生物作用于有机原料，来生成有机酸。该实施方式中，也可以使用微生物的菌体的处理产物。作为菌体的处理产物，可以列举例如：将菌体用丙烯酰胺、角叉藻聚糖等固定化而得到的固定化菌体，破碎菌体而得到的破碎物，离心分离该破碎物得到的上清，或者用硫酸铵处理等方法部分纯化该上清而得到的级分等。 
培养中使用的细菌可以是通过用琼脂培养基等固体培养基进行斜面培养而得到的，但优选是预先用液体培养基培养(种子培养)而得到的。 
用于培养的培养基可以使用常规微生物培养中使用的培养基。例如可以使用在由硫酸铵、磷酸钾、硫酸镁等无机盐构成的配方中添加肉提取物、酵母提取物、蛋白胨等天然营养源而得到的一般培养基。 
在所述第一种实施方式中，添加在培养基中的碳源也可以是用于生成有机酸的有机原料。 
在所述第二种实施方式中，培养后的菌体可以通过离心分离、膜分离等来回收，并用于有机酸生成反应。 
作为本发明的方法中使用的有机原料，没有特殊限制，只要是该微生物能够同化来生成琥珀酸的碳源即可，通常可以使用：半乳糖、乳糖、葡萄糖、果糖、甘油、蔗糖(sucrose)、蔗二糖(saccharose)、淀粉、纤维素等碳水化合物，甘油、甘露醇、木糖醇、核糖醇等多元醇类等发酵性糖质，这其中，优选葡萄糖、果糖、甘油，特别优选葡萄糖。此外，在有机酸为琥珀酸时，为了有效率地生产琥珀酸，可以如特开平5-68576那样添加富马酸等，或者也可以添加苹果酸来替代富马酸。 
此外，还可以使用含有上述发酵性糖质的淀粉糖化液、糖蜜等。这些发酵性糖质可以单独或组合使用。对于上述有机原料的使用浓度没有特殊限制，在不阻碍微生物的培养或有机酸的生成的范围内，尽可能高的浓度是有利的，通常，在所述第一种实施方式中，有机原料在培养基中的浓度为5～30％(W/V)、优选10～20％(W/V)的范围内。此外，在所述第二种实施方式中，反应液中的有机原料的浓度为5～30％(W/V)、优选10～20％(W/V)的范围内。此外，可以根据随着培养或反应的进行上述有机原料的减少，相应地补加有机原料。 
作为上述含碳酸根离子、碳酸氢根离子或二氧化碳气体和有机原料的反应液，没有特殊限制，例如可以是用于培养微生物的培养基，也可以是磷酸缓冲液等缓冲液。反应液优选为含氮源、无机盐等的水溶液。此处，作为氮源没有特殊限制，只要是该微生物能够同化来生成有机酸的氮源即可，具体而言，可以列举铵盐、硝酸盐、尿素、大豆水解物、酪蛋白分解产物、蛋白胨、酵母提取物、肉提取物、玉米浆等各种有机、无机含氮化合物。作为无机盐，各种磷酸盐、硫酸盐、镁、钾、锰、铁、锌等的金属盐。此外，视需要添加生物素、泛酸、肌醇、烟酸等维生素类，核苷酸，氨基酸等促进生长的因子。此外，为了抑制反应时的发泡，在培养液中预先添加适量的市售消泡剂是理想的。 
反应液的pH可以通过添加碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸镁、氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化镁等来调整。本反应中的pH优选通常为pH510、优选pH6～9.5，因此，反应中也可以视需要利用碱性物质、碳酸盐、尿素等将反应液的pH调节至上述范围内。 
作为本发明中使用的反应液，可以使用水、缓冲液、培养基等，最优选培养基。可以使培养基中含有例如上述的有机原料和碳酸根离子、碳酸氢根离子或二氧化碳气体，在厌氧条件下进行反应。碳酸根离子或碳酸氢根离子可以由亦可充当中和剂的碳酸镁、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾来提供，但可以视需要也可以由碳酸或者重碳酸(bicarbonic acid)或它们的盐或二氧化碳气体来提供。作为碳酸或重碳酸的盐的具体例子，可以列举例如碳酸镁、碳酸铵、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢铵、碳酸氢钠、碳酸氢钾等。而且，碳酸根离子、碳酸氢根离子可以添加0.001～5M、优选0.1～3M、更优选1～2M的浓度。在含有二氧化碳气体时，每1L溶液含有50mg～25g、 优选100mg～15g、更优选150mg～10g的二氧化碳气体。 
本反应中使用的微生物的生长最适温度，通常为25℃～40℃。反应时的温度通常为25℃～40℃、优选30℃～37℃。反应液中的菌体的量没有特殊规定，可以使用1～700g/L、优选10～500g/L、更优选20～400g/L。反应时间优选为1小时～168小时，更优选为3小时～72小时。此外，反应可以是分批式的，也可以是柱式(カラム式)的。 
培养细菌时，优选在需氧条件下进行。另一方面，有机酸的生成反应可以在需氧条件下进行，也可以在微需氧条件或厌氧条件下进行。微需氧条件或厌氧条件下的反应中，可以采用例如下述方法：密闭反应容器在不通气的条件下进行反应，向反应液中供给氮气等惰性气体的同时进行反应，向反应液中通入含二氧化碳气体的惰性气体，等等。 
反应液(培养液)中蓄积的有机酸，可以采用常规方法从反应液中分离并纯化。具体而言，可以在通过离心分离、过滤等除去菌体等固体物质后，用离子交换树脂等进行脱盐，然后采用结晶或者柱色谱从该溶液中分离并纯化有机酸。 
而且，在本发明中，当目的有机酸为琥珀酸时，在根据上述本发明的方法生产琥珀酸后，通过以所得琥珀酸为原料进行聚合反应，能够生产含琥珀酸的聚合物。近年来，造成环境负担的工业产品数量增加，而使用植物来源原料的聚合物一直受到关注，在本发明中生产的琥珀酸可以被加工成聚酯、聚酰胺等聚合物来使用(特开平4-189822)。作为含琥珀酸的聚合物，具体而言，可以列举由丁二醇、乙二醇等二醇与琥珀酸聚合而得到的琥珀酸聚酯，由六亚甲基二胺等二胺与琥珀酸聚合而得到的琥珀酸聚酰胺，等等。此外，采用本发明的生产方法所得的琥珀酸或者含琥珀酸的聚合物、或者含有它们的组合物可以用于食品添加剂、医药品、化妆品等。 
实施例
以下，通过实施例对本发明进行更具体的说明。 
〔参考例1〕对λRed基因产物有抗性的Pantoea ananatis菌株的构建 
为了在Pantoea ananatis中破坏sdhA基因，构建了用于高效率地进行称作“Red驱动整合(Red-driven integration)”或者“Red介导整合(Red-mediated integration)”的方法(Datsenko，K.A.and Wanner，B.L.2000. Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97：6640-6645)的受体菌。 
首先，构建了表达λ的gam、bet和exo各基因(以下称“λRed基因”)的新辅助质粒RSF-Red-TER(图1)。详细描述见参考例2。 
该质粒可以用于具有不同基因背景的广域宿主。理由是：1)其具有在许多革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌甚至植物中都能够稳定保持的RSF1010广宿主域质粒的复制子(Scholz，et al.，1989.Gene 75：271-288；Buchanan-Wollaston et al.1987.Nature 328：172-175)，2)λRed基因、gam、bet和exo基因受到能够被许多细菌的RNA聚合酶识别的PlacUV5启动子的调节(例如、Brunschwig，E.and Darzins，A.111.Gene 1：35-41；Dehio，M.et al 1998.Gene 215：223-229)；3)自调节因子PlacUV5-lacI、以及大肠杆菌rrnB操纵子的p非依赖性转录终止子(TrrnB)降低λRed基因的本底表达水平(Skorokhodova，A.Y.et al.2004.Biotekhnologiya(Rus)5：3-21)。而且，RSF-Red-TER质粒包含果聚糖蔗糖酶(levansucrase)基因(sacB)，利用该基因，可以在含蔗糖的培养基中从细胞回收质粒。 
在大肠杆菌中，PCR反应生成的DNA片段与由RSF-Red-TER质粒提供的短侧翼区域一起发生整合的频率与使用pKD46辅助质粒(Datsenko，K.A.和Wanner，B.L.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2000.97：6640-6645)时一样高。然而，λRed基因的表达对Pantoea ananatis显示毒性。用RSF-Red-TER辅助质粒转化的细胞在含IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，1mM)和适当抗生素(氯霉素25μg/ml或卡那霉素40μg/ml)的LB培养基上显示非常低的生长速度，λRed介导的重组(λRed-mediated recombination)的效率即使能够观察到，也是非常低的(10-8)。 
选择了对λRed基因的全部3个基因的表达均具有抗性的Pantoeaananatis突变菌株。为此目的，通过电穿孔将RSF-Red-TER质粒导入Pantoeaananatis SC17株(美国专利第6,596,517号)。培养18小时后，得到了约106个转化株，有10个克隆的菌落具有大的尺寸，其余的菌落都非常小。培养18小时后，大菌落为约2mm，小菌落为约0.2mm。将培养延长至24小时，小菌落不再继续生长，而大菌落继续生长。将对λRed基因的全部3个基因(gam、bet和exo)的表达均具有抗性的大菌落Pantoea ananatis突变菌株中的一个用于进一步分析。 
从1个大菌落克隆和数个小菌落克隆中分离出RSF-Red-TER质粒 DNA，用它们再次转化大肠杆菌MG1655，考察了质粒合成Red基因的活性产物的能力。由所得的转化体中Red依赖性整合的对照实验可知，只有从大菌落克隆分离的质粒可引起Red依赖性整合所必需的λRed基因的表达。为了考察所选的大菌落的克隆中是否发生Red介导的整合，使用PCR反应生成的下述线性DNA片段进行了电穿孔，所述DNA片段设计为包含KmR标记和与hisD基因同源的40bp侧翼区域，用于整合到Pantoea ananatis的hisD基因的SmaI识别位点。将2个小菌落的克隆用作对照。Pantoeaananatis的hisD基因的核苷酸序列示于SEQ ID NO：40。PCR中使用SEQ IDNO：41和42的寡核苷酸作为引物，使用pMW118-(λatt-Kmr-λatt)质粒作为模板。使用对λRed基因不具有抗性的2个小菌落的克隆作为对照。pMW118-(λattL-Kmr-λattR)质粒的构建在参考例3中详细描述。 
RSF-Red-TER质粒能够通过该质粒上的lacI基因诱导Red基因的表达。对两种诱导条件进行了考察。在第1组中，电穿孔1小时前添加IPTG(1mM)；在第2组中，在用于制备可电穿孔细胞的培养开始时添加IPTG。携带分离自大菌落克隆的RSF-Red-TER的SC17的后代的生长速度并不显著地低于不带有RSF-RedTER质粒的菌株。添加IPTG仅使这些培养物的生长速度有些许降低。另一方面，导入了分离自小菌落克隆的后代的RSF-Red-TER的SC17株在未添加IPTG的条件下生长非常缓慢，而加以诱导后，生长基本上停止。用分离自大菌落克隆的后代细胞的RSF-Red-TER进行电穿孔后，有许多KmR克隆(短诱导时间为18个克隆，延长诱导时间后为约100个克隆)生长。考察的全部100个克隆均具有His-表现型，通过PCR对20个克隆进行了确认，结果确认了这些细胞的染色体结构与预想的相同。而另一方面，用分离自小菌落克隆的后代细胞的RSF-Red-TER进行电穿孔也未能得到发生了整合的菌株。 
使所得大菌落克隆在含7％蔗糖的平板上生长，并使质粒脱落，用RSF-Red-TER再次进行转化。将不携带质粒的菌株命名为SC17(0)。该菌株已于2005年9月21保藏在俄罗斯国立工业微生物保藏中心(RussianNational Collection of Industrial Microorganisms(VKPM)，GNII Genetika)(地址：Russia，117545 Moscow，1 Dorozhny proezd.1)，保藏号VKPM B-9246。 
上述再次转化后生长出的全部克隆均与亲本菌株克隆SC17(0)一样具有较大的菌落尺寸。在用RSF-Red-TER质粒再次转化的SC17(0)株中进行 了Red介导的整合实验。对于所得的3个独立转化株，使用与前述实验所用的相同的DNA片段进行了考察。采用了短诱导时间(电穿孔1小时前)。在各个实验中，生长出超过10个的KmR克隆。测试的全部克隆均具有His-表现型。这样，就选择出了对λRed基因的表达具有抗性的突变菌株，将其命名为SC17(0)。该菌株可以作为用于对Pantoea ananatis染色体的Red依赖性整合的合适受体菌。 
〔参考例2〕辅助质粒RSF-Red-TER的构建 
辅助质粒RSF-Red-TER的构建方案如图2所示。 
作为构建的最初步骤，设计了RSFsacBPlacMCS载体。为此目的，分别使用SEQ ID NO：43、44、45、46的寡核苷酸，通过PCR扩增了包含pACYC184质粒的cat基因和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的sacB基因的结构部分的DNA片段。这些寡核苷酸的5′末端分别包含对进一步克隆而言必需且便利的BglII、SacI、XbaI、和BamHI限制酶位点。将所得的1.5kb的sacB片段克隆到此前获得的pMW119-PlaclacI载体的XbaI-BamHI位点。该载体是依照与pMW118-PlaclacI载体的相关描述(Skorokhodova，A.Y.et al.2004.Biotekhnologiya(俄语)5：3-21)相同的方法构建的。只是该载体包含来自pMW219而不是pMW218质粒的多接头位点。 
接下来，将上述的1.0kb的cat片段用BglII和SacI处理，并克隆到在先步骤中所得的pMW-PlaclacIsacB质粒的BamHI-SacI位点。所得的质粒pMW-PlaclacIsacBcat包含PlacUV5-lacI-sacB-cat片段。为了将该片段亚克隆到RSF1010载体，将pMW-PlaclacIsacBcat用BglII消化，并用DNA聚合酶I克列诺片段处理使末端平滑化，然后用SacI切割。从1％琼脂糖凝胶中洗提出pMWPlaclacIsacBcat质粒的3.8kb的BglII-SacI片段，将其与用PstI和SacI处理的RSF1010载体连接。用连接反应混合液转化大肠杆菌TG1，将其在含氯霉素(50mg/L)的LB培养基上铺板。对从生长出的克隆中分离的质粒进行限制酶分析，得到了RSFsacB质粒。为了构建RSFsacBPlacMCS载体，以SEQ ID NO：47和48的寡核苷酸为引物，以pMW119-PlaclacI质粒为模板，通过PCR扩增了包含PlacUV5启动子的DNA片段。将所得的146bp片段用SacI和NotI消化，将其与RSFsacB质粒的SacI-NotI大片段连接。然后，以SEQ ID NO：49和50的寡核苷酸为引物，以pKD46质粒(Datsenko，K.A.，Wanner，B.L.2000.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：6640-6645)为模板，通过PCR扩增了包含λRedαβγ基因和转录终止子tL3的2.3kb的DNA片段。将所得片段克隆到RSFsacBPlacMCS载体的PvuI-NotI位点。这样就设计了RSFRed质粒。 
为了排除Red基因的通读转录，将大肠杆菌rrnB操纵子的ρ-依赖性转录终止子插入到cat基因与PlacUV5启动子之间。为此，以SEQ ID NO：51和48的寡核苷酸为引物，以大肠杆菌BW3350的染色体为模板，通过PCR扩增了包含PlacUV5启动子与TrrnB终止子的DNA片段。将所得的这些片段用KpnI处理，并进行连接。然后，以SEQ ID NO：48和52的寡核苷酸为引物，通过使用寡核苷酸的PCR扩增了包含PlacUV5和TrrnB这两者的0.5kb片段。将所得DNA片段用EcoRI消化，并用DNA聚合酶I克列诺片段处理使末端平滑化，然后用BamHI切割，将其与RSF-Red载体的Ecl136II-BamHI大片段连接。将所得质粒命名为RSF-Red-TER。 
〔参考例3〕pMW118-(λattL-Kmr-λattR)质粒的构建 
pMW118-(λattL-Kmr-λattR)质粒是这样构建的：在pMW118-attL-Tc-attR(WO2005/010175)质粒中，用pUC4K质粒的卡那霉素抗性基因取代四环素抗性标记基因。为此目的，将pMW118-attL-Tc-attR质粒的EcoRI-HindIII大片段与pUC4K质粒的HindIII-PstI(676bp)和EcoRI-HindIII(585bp)这2个片段连接。作为基础的pMW118-attL-Tc-attR是通过连接以下4个片段而得到的。 
1)使用引物P1(SEQ ID NO：53)和P2(SEQ ID NO：54)从大肠杆菌W3350(包含λ原噬菌体)染色体的相当于attL的区域通过PCR扩增得到的具有attL(SEQ ID NO：55)的BglII-EcoRI片段(114bp)。这些引物包含BglII和EcoRI的附加识别位点。 
2)使用引物P3(SEQ ID NO：56)和P4(SEQ ID NO：57)从大肠杆菌W3350(包含λ原噬菌体)的染色体的相当于attR的区域通过PCR扩增得到的具有attR(SEQ ID NO：58)的PstI-HindIII片段(182bp)。这些引物包含PstI和HindIII的附加识别位点。 
3)pMW118-ter_rrnB的BglII-HindIII大片段(3916bp)。质粒pMW118-ter_rrnB是通过连接以下3个DNA片段而得到的。 
·pMW118的具有AatII-EcoRI片段的大片段(2359bp)。该片段是通过用EcoRI消化pMW118，并用DNA聚合酶I克列诺片段进行处理，再用 AatII进行消化而得到的。 
·具有氨苄青霉素抗性(ApR)的基因bla的pUC19的AatII-BglII小片段(1194bp)。该片段是使用引物P5和P6(SEQ ID NO：59和60)对pUC19质粒的相应区域进行PCR扩增而得到的。这些引物中包含PstI、AatII和BglII的附加识别位点。 
·转录终止子ter_rrnB的BglII-PstI小片段(363bp)。该片段是通过使用引物P7和P8(SEQ ID NO：61和62)对大肠杆菌MG1655染色体的相应区域进行PCR扩增而得到的。这些引物包含PstI、BglII和PstI的附加识别位点。 
4)具有四环素抗性基因和ter_thrL转录终止子的pML-Tc-ter_thrL的EcoRI-PstI小片段(1388bp)(SEQ ID NO：63)。pML-Tc-ter_thrL质粒是通过如下的2个步骤获得的。 
·将pML-MCS质粒(Mashko，S.V.et al.2001.Biotekhnologiya(俄语)no.5，3-20)用XbaI和BamHI消化，然后将大片段(3342bp)与包含ter_thrL终止子的XbaI-BamHI片段(68bp)连接。该包含ter_thrL终止子的片段是使用引物P9和P10(SEQ ID NO：64和65)对大肠杆菌MG1655染色体的相应区域进行PCR而得到的。这样，得到了pML-ter_thrL质粒。这些引物包含PstI、XbaI和BamHI的附加识别位点。 
·将pML-ter_thrL质粒用KpnI和XbaI消化，然后用DNA聚合酶I克列诺片段处理，再与具有四环素抗性基因的pBR322的EcoRI-Van91I小片段(1317bp)连接，从而得到了pML-Tc-ter_thrL质粒。而且，将pBR322用EcoRI和Van91I消化，然后再用DNA聚合酶I克列诺片段进行了处理。 
〔实施例1〕L-谷氨酸排出基因的探索 
L-谷氨酸排出基因的探索如下所述进行。L-谷氨酸可以在谷氨酸脱氢酶的作用下一步转变为作为三羧酸循环中间体的2-酮戊二酸，因而，可以推测许多具有谷氨酸脱氢酶、三羧酸循环的微生物中L-谷氨酸容易被代谢掉。但是，2-酮戊二酸脱氢酶缺损的菌株无法分解谷氨酸，因此在高浓度的谷氨酸存在下生长受到抑制。这里，作为2-酮戊二酸脱氢酶缺损株，使用了由Pantoea ananatisSC17sucA株(特开平2001-333769号公报参照)衍生的菌体外多糖生物合成系统缺损株SC17sucAams，以高浓度L-谷氨酸抗性为指标，进行了获取L-谷氨酸排出系统基因的尝试。 
当在含糖源的琼脂培养基上生长时，SC17sucA株会生成显著量的菌体外多糖，因而操作非常困难。因此，通过缺损其编码菌体外多糖生物合成系统基因的ams操纵子抑制菌体外多糖的生成。以pMW118-(λattL-Kmr-λattR)为模板，使用SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7的寡核苷酸进行PCR，扩增了这样的基因片段：其是在卡那霉素抗性基因的两端分别添加λ噬菌体的attL以及attR序列，进一步在其外侧分别添加amsI基因的上游50bp、amsC基因下游50bp的序列而成的。将该片段使用Wizard PCR Prep DNA Purification System(Promega公司制造)进行了纯化。 
然后，将SC17(0)用RSF-Red-TER转化，得到了SC17(0)/RSF-Red-TER株。将该菌株在含有25mg/L氯霉素的L培养基(细菌用胰蛋白胨10g、酵母抽提物5g、NaCl 5g含于纯水1L中而得的培养基，pH7.0)中培养过夜，将该过夜培养液以1/100量接种至含有25mg/L氯霉素和1mM异丙基-β-D-吡喃半乳糖苷的L培养基100mL中，34℃培养3小时。将这样制备的菌体收集起来，用冰冷的10％甘油清洗菌体3次后，最终将其悬浮于0.5mL的10％甘油中，以此作为感受态细胞使用GENE PULSER II(BioRad公司制造)以电场强度18kV/cm、电容器容量25μF、电阻值200Ω的条件导入前面制备的PCR片段100ng。向细胞悬浮液中添加预先冰冷的SOC培养基(细菌用胰蛋白胨20g/L、酵母抽提物5g/L、NaCl 0.5g/L、葡萄糖10g/L)，34℃振荡培养2小时，将其涂布于在L培养基(细菌用胰蛋白胨10g、酵母抽提物5g、NaCl 5g、琼脂15g含于纯水1L而得到的培养基，pH7.0)中添加极限培养基成分(每1L中含：葡萄糖5g、硫酸镁2mM、磷酸二氢钾3g、氯化钠0.5g、氯化铵1g、磷酸氢二钠6g)和40mg/L的卡那霉素而得到的培养基上。将出现的菌落用该培养基纯化后，通过PCR确认了ams基因已经被卡那霉素抗性基因取代。 
由ams基因缺损株使用Edge Biosystems公司制造的Bacterial GenomicDNA Purification Kit抽提了染色体。另一方面，将SC17sucA株用在L培养基添加前述极限培养基成分而得到的琼脂培养基培养过夜。用接种环刮取菌体、用预先冰冷的10％甘油清洗菌体3次，向菌体中加入10％甘油使得最终为500μL并将其悬浮，以此作为感受态细胞。使用GENE PULSER II(BioRad公司制造)以电场强度17.5kV/cm、电容器容量25μF、电阻值200Ω的条件，向感受态细胞中导入前述的染色体DNA 600ng。向细胞悬浮液中 添加预先冰冷的SOC培养基，34℃振荡培养2小时后，将其涂布于在L培养基中添加前述极限培养基成分和40mg/L卡那霉素而得到的琼脂培养基上。将出现的菌落用该培养基纯化后、通过PCR确认ams基因已被卡那霉素抗性基因取代，将该菌株命名为SC17sucAams株。 
将来自Pantoea ananatisAJ13355株的染色体DNA用限制酶Sau3AI部分消化后，回收约10kb的片段，将其导入pSTV28(TaKaRa Bio公司)的BamHI位点，制作了质粒文库。通过电穿孔将该质粒文库导入采用常规方法制备的SC17sucAams株的感受态细胞中。 
以氯霉素抗性为指标，用在L培养基(细菌用胰蛋白胨10g、酵母抽提物5g、NaCl 5g、琼脂15g含于纯水1L而得到的培养基，pH7.0)中添加极限培养基成分(葡萄糖0.5g、硫酸镁2mM、磷酸二氢钾3g、氯化钠0.5g氯化铵1g、磷酸氢二钠6g含于纯水1L中而得到的培养基)而得到的平板，对导入了质粒文库的SC17sucAams株进行选择，获得了转化体。将该转化体涂布在SC17sucAams无法形成菌落的、含高浓度L-谷氨酸的葡萄糖极限培养基(葡萄糖极限培养基中混合最终浓度0.2M的L-谷氨酸钠及赖氨酸、甲硫氨酸、二氨基庚二酸各100mg/L而得到的培养基)上。 
34℃培养3天，对于出现的菌落中的64个克隆，再次用相同的平板使之形成单一菌落，结果得知，其中有11个克隆在48小时后形成菌落，其余的克隆在72小时后形成菌落。 
然后、对导入各转化体的载体中插入的基因进行了解析。分别从各转化体抽提质粒，测定了碱基序列，结果得知，48小时后形成菌落的11个克隆中，有10个克隆包含相同的基因座，它们中的任何一个均包含与大肠杆菌的功能未知基因ybjL显示同源性的基因。而且，在WO2005/085419所述的获取谷氨酸排出系统基因yhfK的条件下不能获得该ybjL基因，反过来，在本次选择的条件下也不能获得yhfK基因。 
为了确认赋予该谷氨酸抗性的因子是ybjL，进行了ybjL基因的克隆。以AJ13355株的染色体DNA为模板，使用SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示的寡核苷酸ybjL-F1，ybjL-R2进行了PCR，扩增出了包含P.ananatis的ybjL基因的约1.8kb的片段。将该片段使用Wizard PCR Prep DNAPurification System(Promega公司制造)进行纯化后，用限制酶KpnI和SphI进行处理，将其与用相同酶处理的pSTV28(宝酒造株式会社制造)连接，从 而得到了pSTV-PanybjL。用该pSTV-PanybjL质粒和比较对照用质粒pSTV28(宝酒造株式会社制造)转化SC17sucA株，构建了SC17sucA/pSTV-PanybjL株、SC17sucA/pSTV28株。 
将SC17sucA/pSTV-ybjL涂布于含谷氨酸的极限培养基(葡萄糖0.5g或蔗糖0.5g、硫酸镁2mM、磷酸二氢钾3g、氯化钠0.5g、氯化铵1g、磷酸氢二钠6g、L-谷氨酸钠0.2M、赖氨酸、甲硫氨酸和二氨基庚二酸各100mg、琼脂15g含于纯水1L中而得到的培养基)。34℃培养2天，结果发现作为对照株的载体导入株SC17sucA/pSTV28株无法形成菌落，而SC17sucA/pSTV-ybjL能够在极限培养基上形成菌落。 
然后，将1SC7sucA/pSTV-PanybjL株用含有谷氨酸的液体极限培养基(葡萄糖0.5g、硫酸镁2mM、磷酸二氢钾3g、氯化钠0.5g、氯化铵1g磷酸氢二钠6g、L-谷氨酸钠0.2M、赖氨酸、甲硫氨酸、二氨基庚二酸各100mg/L含于纯水1L中而得到的培养基)进行培养，考察了在高浓度L-谷氨酸存在下的生长。 
结果如图3所示。可见，与作为对照株使用的SC17sucA/pSTV28株相比，ybjL基因增强的SC17sucA/pSTV-PanybjL在高浓度L-谷氨酸存在下的生长大幅提高。因此可以确认ybjL是对L-谷氨酸显示抗性的因子。 
〔实施例2〕<ybjL基因扩增对中性pH下的L-谷氨酸生产的效果> 
然后，为了研究该基因对L-谷氨酸生产的影响，将ybjL扩增用质粒pSTV-PanybjL导入到具有SEQ ID NO：10所示的L-谷氨酸生产用质粒RSFCPG的L-谷氨酸生产菌SC17sucA/RSFCPG(参照特开平2001-333769号公报)中，考察了L-谷氨酸生产率。 
通过电穿孔向SC17sucA/RSFCPG中分别导入pSTV-PanybjL和比较对照用的pSTV28(宝酒造株式会社制造)，以氯霉素抗性为指标获得了转化体。对质粒进行确认后，将导入了ybjL扩增用质粒的菌株命名为SC17sucA/RSFCPG+pSTV-PanybjL，将导入了的菌株命名为SC17sucA/RSFCPG+pSTV28。 
然后，使用SC17sucA/RSFCPG+pSTV-PanybjL和作为对照株的SC17sucA/RSFCPG+pSTV28进行培养，对L-谷氨酸的生产能力进行了研究。培养基的组成如下。 
〔培养培养基组成〕 
〔A区〕 
蔗糖                30g/L 
MgSO4·7H2O         0.5g/L 
〔B区〕 
KH2PO4              2.0g/L 
酵母提取物          2.0g/L 
FeSO4·7H2O         0.02g/L 
MnSO4·5H2O         0.02g/L 
L-赖氨酸盐酸盐      0.2g/L 
DL-甲硫氨酸         0.2g/L 
二氨基庚二酸        0.2g/L 
(用KOH调整至pH7.0) 
〔C区〕 
CaCO3               20g/L 
A区、B区分别于115℃高压灭菌器灭菌10分钟、C区于180℃干热灭菌3小时，然后进行混合，添加四环素盐酸盐/氯霉素至浓度分别为12.5mg/L和25mg/L。 
将SC17sucA/RSFCPG+pSTV29和SC17sucA/RSFCPG+pSTV-PanybjL用在L琼脂培养基(细菌用胰蛋白胨10g、酵母抽提物5g、NaCl 5g、琼脂15g含于纯水1L而得到的培养基pH7.0)中添加极限培养基成分(葡萄糖0.5g、硫酸镁2mM、磷酸二氢钾3g、氯化钠0.5g、氯化铵1g、磷酸氢二钠6g含于纯水1L中而得到的培养基)和25mg/L的氯霉素、12.5mg/L的四环素而得到的培养基进行前培养，适量地接菌到装有前述培养基5mL的试管中。 
培养17.5小时后，测定了培养液中的菌体浓度、L-谷氨酸浓度以及残留糖。菌体浓度通过使用用水稀释至51倍的培养液、用分光光度计(U-2000A日立制作所)测定620nm的浊度来考察。L-谷氨酸浓度是通过将培养液上清用水稀释适当倍率后，使用BIOTECH ANALYSER(AS-210 SAKURA SI)来测定。结果如表1所示。与对照SC17sucA/RSFCPG+pSTV28相比，ybjL扩增株SC17sucA/RSFCPG+pSTV-PanybjL的L-谷氨酸蓄积上升了约3g/L、相对于糖的收率上升了约9％。 
【表1】 
    OD620nm(×1/51)   L-谷氨酸  (g/L)   相对于糖的  收率(％)
  SC17sucA/RSFCPG+pSTV28   0.385   15.0   44.5
  SC17sucA/RSFCPG+pSTV-PanybjL   0.280   18.0   53.7
〔实施例3〕<大肠杆菌的ybjL基因的扩增效果> 
然后，将大肠杆菌的ybjL基因导入Pantoea ananatis SC17 sucA/RSFCPG株中，考察了对Glu生产能力的效果。 
以登录于GeneBank AP009048的大肠杆菌的ybjL的序列(SEQ ID NO：3)为基础，使用示于SEQ ID NO：11、12的寡核苷酸，以大肠杆菌W3110株(ATCC 27325)的染色体为模板进行PCR反应，得到了含ybjL基因的约1.7kb的片段。将该片段用KpnI、SphI处理，并连接在pSTV28(宝酒造株式会社制造)的相同位点上。将所得的大肠杆菌ybjL扩增用质粒作为ybjL扩增用质粒pSTV-EcoybjL。 
将所得的大肠杆菌ybjL基因扩增用质粒pSTV-EcoybjL通过电穿孔导入上述的SC17sucA/RSFCPG株，以氯霉素抗性为指标得到了转化体。将所得菌株命名为大肠杆菌ybjL基因扩增株SC17sucA/RSFCPG+pSTV-EcoybjL。 
然后，使用SC17sucA/RSFCPG+pSTV-EcoybjL和对照株SC17sucA/RSFCPG+pSTV28进行培养，对L-谷氨酸的生产能力进行了研究。培养基的组成如下。 
〔培养培养基组成〕 
〔A区〕 
蔗糖                30g/L 
MgSO4·7H2O         0.5g/L 
〔B区〕 
KH2PO4              2.0g/L 
酵母提取物          2.0g/L 
FeSO4·7H2O         0.02g/L 
MnSO4·5H2O         0.02g/L 
L-赖氨酸盐酸盐      0.2g/L 
DL-甲硫氨酸         0.2g/L 
二氨基庚二酸        0.2g/L 
(用KOH调整至pH7.0) 
〔C区〕 
CaCO3               20g/L 
A区、B区分别于115℃高压灭菌器灭菌10分钟、C区于180℃干热灭菌3小时，然后将它们混合，添加四环素盐酸盐和氯霉素至浓度分别为12.5mg/L和25mg/L。 
将SC17sucA/RSFCPG+pSTV28和SC17sucA/RSFCPG+pSTV-EcoybjL用在L琼脂培养基(细菌用胰蛋白胨10g、酵母抽提物5g、NaCl 5g、琼脂15g含于纯水1L而得到的培养基pH7.0)中添加极限培养基成分(葡萄糖0.5g、硫酸镁2mM、磷酸二氢钾3g、氯化钠0.5g、氯化铵1g、磷酸氢二钠6g含于纯水1L中而得到的培养基)和25mg/L的氯霉素、12.5mg/L的四环素而得到的培养基进行前培养，适量接菌到装有前述培养基5mL的试管中。 
培养17.5小时后，如实施例2那样测定了培养液中的菌体浓度以及L-谷氨酸浓度。结果如表2所示。与对照SC17sucA/RSFCPG+pSTV28相比，ybjL扩增株SC17sucA/RSFCPG+pSTV-EcoybjL的L-谷氨酸蓄积上升了约2g/L，相对于糖的收率上升了约7％。 
【表2】 
 
    OD620nm(×1/51)   L-谷氨酸  (g/L)   相对于  糖的收率(％)
  SC17sucA/RSFCPG+pSTV28   0.385   15.0   44.5
  SC17sucA/RSFCPG+pSTV-EcoybjL   0.348   17.2   51.2
〔实施例4〕<大肠杆菌中ybjL基因扩增对L-氨基酸生产能力的效果> 
然后，将Pantoea ananatis来源的ybjL基因、大肠杆菌来源的ybjL基因导入大肠杆菌中，研究了扩增效果。 
将上述的Pantoea ananatis来源的ybjL基因扩增用载体pSTV-PanybjL、大肠杆菌来源的ybjL基因扩增用载体pSTV-EcoybjL、以及对照用质粒pSTV28通过电穿孔导入大肠杆菌野生株W3110株中，得到了显示氯霉素抗性的转化体。将Pantoea ananatis来源的ybjL扩增株命名为W3110/pSTV-PanybjL，将大肠杆菌来源的ybjL扩增株命名为W3110/pSTV-EcoybjL，将对照pSTV28导入株命名为W3110/pSTV28。 
然后，使用ybjL扩增株W3110/pSTV-PanybjL和W3110/pSTV-EcoybjL、以及对照W3110/pSTV28，研究了L-谷氨酸的生产能力。将W3110/pSTV-PanybjL、W3110/pSTV-EcoybjL和对照W3110/pSTV28用在L培养基(细菌用胰蛋白胨10g、酵母抽提物5g、NaCl 5g、琼脂15g含于纯水1L中而得到的培养基，pH7.0)中添加氯霉素而得到的培养基进行前培养，用Nunc公司制造的1mL容量接种环取1环上述菌体，接菌到装有具有以下组成的培养基5mL的试管中，37℃振荡培养11.5小时。如实施例2那样测定了培养液中的菌体浓度以及L-谷氨酸浓度。结果如表3所示。 
〔培养培养基组成〕 
〔A区〕 
葡萄糖              30g/L 
MgSO4·7H2O         0.5g/L 
〔B区〕 
(NH4)2SO4           20g/L 
KH2PO4              2.0g/L 
酵母提取物          2.0g/L 
FeSO4·7H2O         20mg/L 
MnSO4·5H2O         20mg/L 
(用KOH调整至pH7.0) 
〔C区〕 
碳酸钙              20g/L 
A区、B区分别于115℃高压灭菌器灭菌10分钟、C区于180℃干热灭菌3小时，然后将它们混合，添加氯霉素使其为25mg/L。 
【表3】 
    OD620nm(×1/51)   L-谷氨酸(g/L)   相对于糖的收率(％)
  W3110/pSTV28   0.341   1.2   6.5
  W3110/pSTV-PanybjL   0.303   5.7   28.8
  W3110/pSTV-EcoybjL   0.310   4.8   25.2
与对照载体导入株W3110/pSTV29株相比，作为Pantoea ananatis ybjL基因扩增株的大肠杆菌W3110/pSTV-ybjL的L-谷氨酸生产能力大幅提高。 
然后，对ybjL扩增株的生产其它L-氨基酸的能力进行了研究。将 W3110/pSTV-PanybjL与对照的W3110/pSTV28用在L培养基(细菌用胰蛋白胨10g、酵母抽提物5g、NaCl 5g、琼脂15g含于纯水1L而得到的培养基，pH7.0)中添加氯霉素而得到的培养基进行前培养，用Nunc公司制造的5mL容量接种环取1环上述菌体，将其接菌到装有5mL具有以下组成的培养基的试管中，37℃振荡培养7小时。如实施例2那样，测定了培养液中的菌体浓度以及各L-氨基酸浓度。结果如表4所示。 
〔培养培养基组成〕 
〔A区〕 
葡萄糖              40g/L 
MgSO4·7H2O         0.5g/L 
〔B区〕 
(NH4)2SO4           20g/L 
KH2PO4              2.0g/L 
酵母提取物          2.0g/L 
FeSO4·7H2O         20mg/L 
MnSO4·5H2O         20mg/L 
(用KOH调整至pH7.0) 
〔C区〕碳酸钙       30g/L 
A区、B区分别于115℃高压灭菌器灭菌10分钟、C区于180℃干热灭菌3小时，然后加以混合，添加氯霉素使其为25mg/L。 
【表4】 
    W3110/pSTV28   W3110/pSTV-PanybjL   MS培养基*
  Asp   26.69   62.35   40.21
  Thr   0.00   0.00   36.23
  Ser   0.00   0.00   56.03
  Glu   1258.75   3702.74   127.50
  Gly   0.00   0.00   27.28
  Ala   5.49   9.79   77.61
  (Cys)2   16.49   13.72   10.13
  Val   3.30   8.02   59.32
  Met   0.00   0.00   85.06
  Ile   0.00   0.00   50.51
  Leu   0.00   0.00   80.02
  Tyr   48.20   0.00   38.80
  Phe   2.88   4.47   70.49
  Lys   8.07   8.00   50.50
  His   0.00   0.00   20.95
  Arg   0.00   0.00   35.80
  OD620nm(x1/51)   0.245   0.197   -
  残留的葡萄糖(g/L)   28.9   28.3   40.0
*：未接菌的空白 
可见与对照载体导入株W3110/pSTV28株相比，作为ybjL基因扩增株的大肠杆菌W3110/pSTV-PanybjL中，不仅是L-谷氨酸，L-天冬氨酸的蓄积量也有所提高。 
〔实施例5〕<植生克雷伯氏菌中ybjL基因扩增对L-谷氨酸生产能力的效果> 
将Pantoea ananatis来源的ybjL基因导入植生克雷伯氏菌，研究了扩增效果。 
通过电穿孔将上述的Pantoea ananatis来源ybjL基因扩增用载体pSTV-PanybjL与对照用质粒pSTV28导入植生克雷伯氏菌的L-谷氨酸生产菌AJ13410株(特愿平11-68324)中，得到了显示氯霉素抗性的转化体。将Pantoea ananatis来源的ybjL扩增株命名为AJ13410/pSTV-PanybjL，将对照pSTV28导入株命名为AJ13410/pSTV28。 
然后，使用ybjL扩增株AJ13410/pSTV-PanybjL、以及对照的AJ13410/pSTV28，研究了L-谷氨酸的生产能力。将AJ13410/pSTV-PanybjL和AJ13410/pSTV28用在L培养基(细菌用胰蛋白胨10g、酵母抽提物5g、NaCl 5g、琼脂15g含于纯水1L而得到的培养基，pH7.0)中添加氯霉素而得到的培养基进行前培养，用Nunc公司制造的1mL容量接种环取1环上述 菌体，将其接菌在装有具有以下组成的培养基5mL的试管中，37℃振荡培养17小时。如实施例2那样，测定了培养液中的菌体浓度以及L-谷氨酸浓度。结果如表5所示。 
〔培养培养基组成〕 
〔A区〕 
蔗糖               30g/L 
MgSO4·7H20        0.5g/L 
〔B区〕 
KH2PO4             2.0g/L 
酵母提取物         2.0g/L 
FeSO4·7H20        0.02g/L 
MnSO4·5H20        0.02g/L 
L-赖氨酸盐酸盐     0.2g/L 
DL-甲硫氨酸        0.2g/L 
二氨基庚二酸       0.2g/L 
(用KOH调整至pH7.0) 
〔C区〕 
CaCO3              20g/L 
A区、B区分别于115℃高压灭菌器灭菌10分钟、C区于180℃干热灭菌3小时，然后加以混合，添加氯霉素使其为25mg/L。 
【表5】 
 
    OD620nm(×1/51)   L-谷氨酸(g/L)   相对于糖的收率(％)
  AJ13410/pSTV28   0.236   5.3   23.3
  AJ13410/pSTV-PanybjL   0.220   12.1   48.7
可见与对照载体导入株AJ13410/pSTV28株相比，Pantoea ananatis来源的ybjL基因扩增株植生克雷伯氏菌AJ13410/pSTV-PanybjL的L-谷氨酸生产能力有大幅提高。 
〔参考例4〕<大肠杆菌L，D-乳酸脱氢酶基因缺损株的构建> 
该基因的缺失利用Datsenko和Wanner开发的称为“Red驱动整合(Red-driven integration)”的方法(Datsenko，K.A.和Wanner，B.L.2000.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97：6640-6645)与λ噬菌体来源的切出系统(Cho，E.H.， Gumport，R.I.和Gardner，J.F.2002.J.Bacteriol.184：5200-5203)来实施。通过该方法，使用将目的基因的一部分设计在其5’侧、将抗生素抗性基因的一部分设计在其3’侧而得到的合成寡核苷酸作为引物得到PCR产物，利用这样的PCR产物能够一步构建基因破坏株。通过进一步组合使用λ噬菌体来源的切出系统，能够除去整合到基因破坏株中的抗生素抗性基因。 
<1-1>编码D-乳酸脱氢酶的ldhA基因缺损株的构建 
按照WO2005/010175的记载，使用下述合成寡核苷酸作为引物，以质粒pMW118-attL-Cm-attR为模板进行了PCR：所述引物在其5’末端具有对应于ldhA基因的一部分的序列，在其3’末端具有对应于λ噬菌体的attL和attR的两端的序列。pMW118-attL-Cm-attR是在pMW118(宝生物公司制造)中插入作为λ噬菌体的附着位点的attL和attR基因以及抗生素抗性基因cat基因而得到的质粒，其中，按attL-cat-attR的顺序插入。用作引物的合成寡核苷酸的序列如SEQ ID NO：13、14所示。将扩增得到的PCR产物用琼脂糖凝胶纯化，通过电穿孔将其导入携带具有温度敏感型的复制能力的质粒pKD46的大肠杆菌MG1655株中。然后，获取质粒pKD46已脱落的氨苄青霉素敏感型菌株，通过PCR确认了ldhA基因缺失。PCR使用SEQ ID NO：15，16所示的合成寡核苷酸作为引物进行。亲本株的PCR产物为约1.2kb，而在缺损株中确认到约1.9kb的条带。 
而且，为了除去导入ldhA基因内的att-cat基因，用辅助质粒pMW-intxis-ts进行转化，选择出氨苄青霉素抗性株。此外，上述的pMW-intxis-ts是具有λ噬菌体来源的整合酶(Int)基因和切除酶(excisionase、Xis)，且复制是温度敏感型的质粒。然后，利用氨苄青霉素敏感性和氯霉素敏感性，通过PCR确认了att-cat和pMW-intxis-ts脱落的菌株。使用SEQ IDNO：15、16所示的合成寡核苷酸作为引物进行PCR，残存有att-cat的株的PCR产物为约1.9kb，与此相对的是，在att-cat脱落的菌株中确认到了约0.3kb的条带，将所得ldhA缺损株命名为MG1655ΔldhA株。 
<1-2>编码L-乳酸脱氢酶的lldD基因缺损株的构建 
按与ldhA基因缺损株的构建相同的方法进行了构建。使用下述合成寡核苷酸作为引物，以质粒pMW118-attL-Cm-attR为模板进行了PCR，所述合成寡核苷酸引物在其5’末端具有对应于lldD基因的一部分的序列，在其3’末端具有对应于λ噬菌体的attL和attR的两端的序列。用作引物的合成 寡核苷酸的序列如SEQ ID NO：17、18所示。将扩增得到的PCR产物用琼脂糖凝胶纯化，通过电穿孔将其导入携带具有温度敏感型的复制能力的质粒pKD46的大肠杆菌MG1655ΔldhA株中。然后，获取质粒pKD46已脱落的氨苄青霉素敏感型菌株，通过PCR确认了lldD基因缺失。PCR使用SEQID NO：19、20所示的合成寡核苷酸作为引物进行。与亲本株的PCR产物为约1.4kb相对，在缺损株中确认到约1.9kb的条带。 
而且，为了除去导入lldD基因内的att-cat基因，用辅助质粒pMW-intxis-ts进行转化，选择出氨苄青霉素抗性株。然后，利用氨苄青霉素敏感性和氯霉素敏感性，取得了att-cat和pMW-intxis-ts脱落的菌株，并通过PCR进行了确认。使用SEQ ID NO：19、20所示的合成寡核苷酸作为引物进行PCR。与残存有att-cat的菌株的PCR产物为约1.9kb相对的是，在att-cat脱落的菌株中确认到了约0.3kb的条带，将所得lldD缺损株命名为MG1655ΔldhAΔlldD株。 
〔实施例6〕<琥珀酸生产菌ybjL基因增强株的构建> 
<6-1>基因扩增用质粒的构建 
将质粒pMW219::Pthr用于ybjL基因的扩增。该质粒在载体pMW219(日本GENE公司制造)的HindIII位点和BamHI位点中具有SEQ ID NO：21所示的大肠杆菌基因组上的苏氨酸操纵子(thrLABC)的启动子区域。将基因克隆在该质粒的所述启动子的下游，能够实现基因的扩增。 
<6-2>ybjL增强用质粒的构建 
基于大肠杆菌基因组序列的ybjL基因的碱基序列(GenBank登录号U00096)，使用具有BamHI位点的SEQ ID NO：22所示的合成寡核苷酸作为5’引物、具有BamHI位点的SEQ ID NO：23所示的合成寡核苷酸作为3′侧引物，以大肠杆菌MG1655株的基因组DNA为模板进行PCR，并用限制酶BamHI进行处理，从而得到了含ybjL基因的基因片段。将经纯化的PCR产物与用BamHI处理后的载体pMW219::Pthr相连接，构建了ybjL扩增用质粒pMW219::Pthr::ybjL。 
<6-3>ybjL扩增株的制备 
使用上述(6-2)中得到的pMW219::Pthr::ybjL和pMW219，通过电脉冲法转化大肠杆菌MG1655ΔldhAΔlldD株，然后涂布在含卡那霉素25μg/ml的LB琼脂培养基上，37℃培养约18小时。纯化出现的菌落，按常规方法 抽提质粒，确认了目的质粒的导入。将所得菌株分别命名为MG1655ΔldhAΔlldD/pMW219::Pthr::ybjL、MG1655ΔldhAΔlldD/pMW219。此外，使用pMW219::Pthr::ybjL和pMW219采用电脉冲法转化产气肠杆菌AJ110637，然后涂布在含卡那霉素50μg/ml的LB琼脂培养基上，37℃培养约18小时。对出现的菌落进行纯化，采用常规方法抽提质粒，确认了目的质粒的导入。将所得菌株分别命名为AJ110637/pMW219::Pthr::ybjL、AJ110637/pMW219。 
〔实施例7〕埃希氏菌属细菌琥珀酸生产株中的ybjL扩增的效果 
将MG1655ΔldhAΔlldD/pMW219::Pthr::ybjL、MG1655ΔldhAΔlldD/pMW219均匀涂布在含25μg/ml的卡那霉素的LB平板，37℃培养16小时。然后，使用安宁包(Anaeropack)(三菱气体化学株式会社)将该平板在厌氧条件下37℃培养16小时。将所得平板的菌体用0.8％的食盐水清洗后，稀释51倍将其制备成OD＝1.0(600nm)。将该菌体悬浮液100μl与预先通过吹入氮气将培养基中溶解的气体置换为氮气而得到的生产培养基(葡萄糖10g/l、苹果酸二钠10g/l、TES 45.88g/l、Na2HPO4 6g/l、KH2PO4 3g/l、NH4Cl 1g/l，用KOH调整至pH7.3后，用滤膜过滤)1.3ml分装到1.5ml容量的微量管中，使用微量管用搅拌器31.5℃培养10小时。培养后，通过液相色谱分析了培养基中蓄积的琥珀酸量。所使用的柱子是由两根Shim-pack SCR-102H(Simazu)柱串联而成的，使用5mM对甲苯磺酸于50℃对样品进行洗脱。将洗脱液使用含5mM对甲苯磺酸和100μM EDTA的20mM Bis-Tris水溶液进行中和，通过使用CDD-10AD(Simazu)测定电导率来测定琥珀酸。 
第10小时的琥珀酸蓄积见表6，琥珀酸蓄积的经时变化如图4所示。 
与对照的MG1655ΔldhAΔlldD/pMW219相比，ybjL基因扩增株MG1655ΔldhAΔlldD/pMW219::Pthr::ybjL的琥珀酸蓄积显著上升。 
【表6】 
表6琥珀酸生产菌MG1655ΔldhAΔlldD中ybjL的扩增效果 
Figure G2008800124825D00491
〔实施例8〕肠杆菌属细菌琥珀酸生产株中的ybjL扩增的效果 
将AJ110637/pMW219::Pthr::ybjL、AJ110637/pMW219均匀涂布在含50μg/ml卡那霉素的LB平板上，37℃培养16小时。然后，使用安宁包(AnaeroPack，三菱气体化学株式会社)将该平板在厌氧条件下37℃培养16小时。将所得平板的菌体用0.8％食盐水清洗后，稀释51倍制备成OD＝1.0(600nm)。将该菌体悬浮液100μl与预先通过吹入氮气将培养基中溶解的气体置换为氮气而得到的生产培养基(葡萄糖10g/l、苹果酸二钠10g/l、TES 45.88g/l、Na2HPO4 6g/l、KH2PO4 3g/l、NH4Cl 1g/l，用KOH调整至pH7.3后，用滤膜过滤)1.3ml分装在1.5ml容量的微量管中，用微量管用搅拌器31.5℃培养6小时。培养后，通过液相色谱分析了培养基中蓄积的琥珀酸量。所使用的柱子是由二根Shim-pack SCR-102H(Simazu)串联而成的，使用5mM对甲苯磺酸于50℃对样品进行洗脱。将洗脱液使用含5mM对甲苯磺酸和100μMEDTA的20mM Bis-Tris水溶液进行中和，通过使用CDD-10AD(Simazu)测定电导率来测定琥珀酸。 
第6小时的琥珀酸蓄积见表7，琥珀酸蓄积的经时变化如图5所示。 
与对照的AJ110637/pMW219相比，ybjL基因扩增株AJ110637/pMW219::Pthr::ybjL的琥珀酸蓄积显著上升。 
【表7】 
表7AJ110637株中ybjL的扩增效果 
Figure G2008800124825D00501
〔实施例9〕 
<9-1>产气肠杆菌AJ110637中的adhE缺损株的构建 
产气肠杆菌AJ110637在厌氧条件下于含糖源的培养基上生长时，会生成显著量的乙醇，因此，通过缺损编码醇脱氢酶的adhE来抑制乙醇的生成。 
adhE缺损用基因片段是以WO2005/010175所述的质粒pMW-attL-Tc-attR为模板使用SEQ ID NO：72和SEQ ID NO：73的寡核苷酸通过PCR制备的。pMW118-attL-Tc-attR是在pMW118(宝生物公司制造)中插入作为λ噬菌体的附着位点的attL和attR基因、以及抗生素抗性基因Tc基因而得到的质粒，其中按照attL-Tc-attR的顺序插入。通过所述PCR，扩 增出了在四环素抗性基因的两端分别添加λ噬菌体的attL和attR的序列、进一步在其外侧分别添加了adhE基因的上游60bp、下游59bp的序列而成的基因片段。将该片段使用Wizard PCR Prep DNA PurificationSystem(Promega公司制造)进行了纯化。 
然后，用RSF-Red-TER转化产气肠杆菌AJ110637，得到了产气肠杆菌AJ110637/RSF-Red-TER株。将该菌株用含有40μg/ml氯霉素的LB培养基培养过夜，将该培养液以1/100量接种到含40μg/ml氯霉素和0.4mM异丙基-β-D-吡喃半乳糖苷的LB培养基50mL中，31℃培养4小时。收集菌体，用冰冷的10％甘油清洗菌体3次后，最终将其悬浮于0.5mL的10％甘油中并以此作为感受态细胞，使用GENE PULSER II(BioRad公司制造)在电场强度20kV/cm、电容器容量25μF、电阻值200Ω的条件下导入上项中制备的PCR片段。在细胞悬浮液中添加预先冰冷的LB培养基，31℃振荡培养2小时后，将其涂布于在LB培养基中添加25μg/ml的四环素而得到的培养基上。将出现的菌落用该培养基纯化后，通过PCR确认了adhE基因已被四环素抗性基因取代。 
<9-2>AJ110637ΔadhE株中丙酮酸羧化酶基因增强株的构建 
在产气肠杆菌AJ110637ΔadhE株中，通过扩增编码谷氨酸棒杆菌来源的丙酮酸羧化酶的pyc，赋予其琥珀酸生成能力。 
为了在AJ110637ΔadhE株中表达谷氨酸棒杆菌来源的pyc，尝试了获取大肠杆菌MG1655株的苏氨酸操纵子启动子片段。大肠杆菌(大肠杆菌K-12株)基因组的全碱基序列(Genbank登录号U00096)已经阐明(Science，277，1453-1474(1997))。基于该序列进行了苏氨酸操纵子(thrLABC)的启动子区域的PCR扩增。使用具有SacI位点的SEQ ID NO：75所示的合成寡核苷酸作为5’引物、SEQ ID NO：76所示的合成寡核苷酸作为3’侧引物，以大肠杆菌MG1655株(ATCC47076，ATCC700926)的基因组DNA为模板进行PCR，得到了苏氨酸操纵子启动子片段(A)(SEQ ID NO：77)。 
而且，获取了谷氨酸棒杆菌2256株(ATCC13869)来源的pyc基因片段。使用SEQ ID NO.78所示的合成寡核苷酸作为5’引物、具有SacI位点的SEQID NO：79所示的合成寡核苷酸作为3’侧引物，以谷氨酸棒杆菌2256株(ATCC13869)来源的基因组DNA为模板进行PCR，得到了pyc基因片段(B)(SEQ ID NO：80)。 
以上述片段(A)和(B)为模板，使用SEQ ID NO：75和SEQ ID NO：79的引物进行PCR反应，获得了由片段(A)和(B)连接而成的基因片段(C)。将该基因片段(C)用限制酶SacI处理并进行纯化，将纯化产物与用限制酶SacI消化的质粒载体pSTV28(宝生物公司制造)连接，构建了pyc扩增用质粒pSTV28::Pthr::pyc。 
通过电穿孔将pyc扩增用质粒pSTV28::Pthr::pyc导入上述的产气肠杆菌AJ110637ΔadhE株，得到了显示四环素和氯霉素抗性的转化体。将产气肠杆菌AJ110637ΔadhE的pyc扩增株命名为AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc。 
<9-3>AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc中产气肠杆菌来源的ybjL基因增强株的构建 
如上述那样进行了大肠杆菌(大肠杆菌K-12株)的苏氨酸操纵子(thrLABC)的启动子区域的PCR扩增。使用SEQ ID NO：81所示的合成寡核苷酸作为5’引物、SEQ ID NO：82所示的合成寡核苷酸作为3’侧引物，以大肠杆菌MG1655株(ATCC47076，ATCC700926)的基因组DNA为模板进行PCR，得到了苏氨酸操纵子启动子片段(A)(SEQ ID NO：83)。 
然后，为了进行产气肠杆菌AJ110637株的ybjL基因的克隆，使用SEQID NO：84所示的合成寡核苷酸作为5’引物、SEQ ID NO：85所示的合成寡核苷酸作为3’侧引物，以产气肠杆菌AJ110637株的基因组DNA为模板进行PCR，得到了ybjL基因片段(B)(SEQ ID NO：86)。 
以上述片段(A)和(B)为模板，使用SEQ ID NO：81和SEQ ID NO：85的引物进行PCR反应，得到了片段(A)和(B)连接而成的基因片段(C)。将该基因片段(C)使用TaKaRa BKL Kit(宝生物公司制造)进行平滑末端化，再进行5′末端的磷酸化。然后，将其与用限制酶SmaI消化，再用碱性磷酸酶进行了脱磷酸化处理的质粒载体pMW218连接，从而构建了ybjL扩增用质粒pMW218::Pthr::Ent-ybjL。 
通过电穿孔将上述的产气肠杆菌AJ110637来源ybjL基因扩增用载体pMW218::Pthr::Ent-ybjL与对照用质粒pMW218分别导入产气肠杆菌AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc株，得到了显示四环素、氯霉素以及卡那霉素抗性的转化体。将产气肠杆菌AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc株来源的ybjL扩增株命名为AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc/pMW218::Pthr::Ent-ybjL， 将对照的pMW218导入株命名为AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc/pMW218。 
<9-4>肠杆菌属细菌中的产气肠杆菌来源的ybjL扩增的效果 
将AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc/pMW218::Pthr::Ent-ybjL、AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc/pMW218分别均匀涂布在含50μg/ml卡那霉素、25μg/ml四环素以及40μg/ml氯霉素的LB平板上，31.5℃培养16小时。然后，将其接菌在分装有种子培养基(细菌用胰蛋白胨20g/l、酵母抽提物10g/l NaCl 20g/L)3ml的试管中，31.5℃振荡培养16小时。将所得的培养液添加在琥珀酸生产培养基(葡萄糖100g/l、干热灭菌3小时以上的碳酸钙50g/L)3ml中后，用硅胶塞密闭，31.5℃振荡培养24小时。培养后，通过液相色谱分析了培养基中蓄积的琥珀酸量。所使用的柱子是将两根Shim-pack SCR-102H(Simadzu)串联而成的，使用5mM对甲苯磺酸于50℃洗脱样品。洗脱液使用含5mM对甲苯磺酸和100μM EDTA的20mM Bis-Tris水溶液进行中和，通过用CDD-10AD(Simadzu)测定电导率测定了琥珀酸。 
第24小时的琥珀酸蓄积如表8所示。 
与对照的AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc/pMW218相比，ybjL基因扩增株AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc/pMW218::Pthr::Ent-ybjL中，琥珀酸蓄积以及琥珀酸的相对消耗的糖的收率显著上升。 
【表8】 
    AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc/pM  W218   AJ110637ΔadhE/pSTV28::Pthr::pyc/pMW218:  :Pthr::Ent-ybjE
  消耗的糖量  (g/L)   9.53(±1.85)   9.10(±0.66)
  OD(600nm)   8.90(±0.18)   8.72(±0.95)
  琥珀酸蓄积量  (g/L)   3.40(±0.56)   6.37(±0.51)
  琥珀酸相对消耗  的糖的收率(％)   35.80(±1.82)   69.70(±1.79)
〔序列表说明〕 
SEQ ID NO：1：Pantoea ananatis的ybjL基因 
SEQ ID NO：2：Pantoea ananatis的YbjL 
SEQ ID NO：3：大肠杆菌的ybjL基因 
SEQ ID NO：4：大肠杆菌的YbjL 
SEQ ID NO：5：Pantoea ananatis与大肠杆菌的YbjL的共有序列 
SEQ ID NO：6：ams基因破坏用引物 
SEQ ID NO：7：ams基因破坏用引物 
SEQ ID NO：8：P.ananatis的ybjL扩增用引物 
SEQ ID NO：9：P.ananatis的ybjL扩增用引物 
SEQ ID NO：10：RSFCPG质粒序列 
SEQ ID NO：11：大肠杆菌W3110的ybjL扩增用引物 
SEQ ID NO：12：大肠杆菌W3110的ybjL扩增用引物 
SEQ ID NO：13：ldhA缺损用引物 
SEQ ID NO：14：ldhA缺损用引物 
SEQ ID NO：15：ldhA缺损确认用引物 
SEQ ID NO：16：ldhA缺损确认用引物 
SEQ ID NO：17：lldD缺损用引物 
SEQ ID NO：18：lldD缺损用引物 
SEQ ID NO：19：lldD缺损确认用引物 
SEQ ID NO：20：lldD缺损确认用引物 
SEQ ID NO：21：苏氨酸启动子序列 
SEQ ID NO：22：大肠杆菌MG1655的ybjL扩增用引物 
SEQ ID NO：23：大肠杆菌MG1655的ybjL扩增用引物 
SEQ ID NO：24：鼠伤寒沙门氏菌的ybjL基因 
SEQ ID NO：25：鼠伤寒沙门氏菌的YbjL 
SEQ ID NO：26：鼠疫耶尔森氏菌的ybjL基因 
SEQ ID NO：27：鼠疫耶尔森氏菌的YbjL 
SEQ ID NO：28：胡萝卜软腐欧文氏菌的ybjL基因 
SEQ ID NO：29：胡萝卜软腐欧文氏菌的YbjL 
SEQ ID NO：30：霍乱弧菌的ybjL基因 
SEQ ID NO：31：霍乱弧菌的YbjL 
SEQ ID NO：32：嗜水气单胞菌的ybjL基因 
SEQ ID NO：33：嗜水气单胞菌的YbjL 
SEQ ID NO：34：深海发光杆菌的ybjL基因 
SEQ ID NO：35：深海发光杆菌的YbjL 
SEQ ID NO：36：大肠杆菌的ldhA基因 
SEQ ID NO：37：大肠杆菌的LdhA 
SEQ ID NO：38：大肠杆菌的lldD基因 
SEQ ID NO：39：大肠杆菌的LldD 
SEQ ID NO：40：Pantoea ananatis的hisD基因的碱基序列 
SEQ ID NO：41：用于扩增用于将Kmr基因导入hisD基因的片段的引物 
SEQ ID NO：42：用于扩增用于将Kmr基因导入hisD基因的片段的引物 
SEQ ID NO：43：cat基因扩增用引物 
SEQ ID NO：44：cat基因扩增用引物 
SEQ ID NO：45：sacB基因扩增用引物 
SEQ ID NO：46：sacB基因扩增用引物 
SEQ ID NO：47：用于扩增含PlacUV5启动子的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：48：用于扩增含PlacUV5启动子的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：49：用于扩增含λRedαβγ基因以及tL3的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：50：用于扩增含λRedαβγ基因以及tL3的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：51：用于扩增含PlacUV5启动子和TrrnB的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：52：用于扩增含PlacUV5启动子和TrrnB的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：53：attL扩增用引物 
SEQ ID NO：54：attL扩增用引物 
SEQ ID NO：55：attL的碱基序列 
SEQ ID NO：56：attR扩增用引物 
SEQ ID NO：57：attR扩增用引物 
SEQ ID NO：58：attR的碱基序列 
SEQ ID NO：59：用于扩增含bla基因的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：60：用于扩增含bla基因的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：61：用于扩增含ter_rrnB的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：62：用于扩增含ter_rrnB的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：63：含ter_thrL终止子的DNA片段的碱基序列 
SEQ ID NO：64：用于扩增含ter_thrL终止子的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：65：用于扩增含ter_thrL终止子的DNA片段的引物 
SEQ ID NO：66：Pantoea ananatis的ams操纵子 
SEQ ID NO：67：Pantoea ananatis的AmsH 
SEQ ID NO：68：Pantoea ananatis的AmsI 
SEQ ID NO：69：Pantoea ananatis的AmsA 
SEQ ID NO：70：Pantoea ananatis的AmsC 
SEQ ID NO：71：Pantoea ananatis的AmsB 
SEQ ID NO：72：adhE缺损用引物的碱基序列 
SEQ ID NO：73：adhE缺损用引物的碱基序列 
SEQ ID NO：74：产气肠杆菌AJ110637 adhE碱基序列(部分序列) 
SEQ ID NO：75：苏氨酸启动子扩增用引物 
SEQ ID NO：76：苏氨酸启动子扩增用引物 
SEQ ID NO：77：苏氨酸启动子基因片段 
SEQ ID NO：78：丙酮酸羧化酶基因扩增用引物 
SEQ ID NO：79：丙酮酸羧化酶基因扩增用引物 
SEQ ID NO：80：丙酮酸羧化酶基因片段 
SEQ ID NO：81：苏氨酸启动子扩增用引物 
SEQ ID NO：82：苏氨酸启动子扩增用引物 
SEQ ID NO：83：苏氨酸启动子基因片段 
SEQ ID NO：84：产气肠杆菌AJ110637 ybjL扩增用引物的碱基序列 
SEQ ID NO：85：产气肠杆菌AJ110637 ybjL扩增用引物的碱基序列 
SEQ ID NO：86：产气肠杆菌AJ110637 ybjL的碱基序列 
SEQ ID NO：87：产气肠杆菌AJ110637 YbjL的氨基酸序列 
SEQ ID NO：88：埃希氏菌属、泛菌属和肠杆菌属的YbjL的共有序列 
工业实用性
通过使用本发明的微生物，能够提高具有羧基的酸性物质的生产效率。 
序列表
<110>味之素株式会社(Ajinomoto Co.，Inc.)
<120>具有羧基的酸性物质的生产方法
<130>C913-C8021
<150>JP2007-108631
<151>2007-04-17
<150>JP2007-242859
<151>2007-09-19
<160>88
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>2229
<212>DNA
<213>Pantoea ananatis
<220>
<221>CDS
<222>(298)..(1986)
<400>1
acgccacctg atacgcaggt tgcccagaaa taataacgct gcggcataac tccccactca     60
ttaaaaacat gccaaaactt cgcctttgac cttgccgagc ctggtggaaa taaaaagaaa    120
cagtcgtttt gagaacgaat gaaagtcgcc aatggctgag aatgattttt ctgattagaa    180
tattggccgc gttacctttt cagacatcag tgatagctgg aggtaatctt acggcctgct    240
caagatagcg aaaaacaggc ctctcttcaa taggttacaa gtaaacaaga agttaaa       297
atg ttg aat gtt aac atc gca gaa ttg tta aga ggt aat gac att ctg      345
Met Leu Asn Val Asn Ile Ala Glu Leu Leu Arg Gly Asn Asp Ile Leu
1               5                   10                  15
tta tta ttt ttc gta ctg gca ctg gga ctt tgc ctg gga aaa tta cgt      393
Leu Leu Phe Phe Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg
            20                  25                  30
ttt ggc tcg ata caa ctc gga aat tcc att ggc gta tta gtg gtt tca      441
Phe Gly Ser Ile Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser
        35                  40                  45
tta tta tta ggt cag caa cac ttc tcg atg aat acg gat gcc ctg agc      489
Leu Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ser Met Asn Thr Asp Ala Leu Ser
    50                  55                  60
ctg ggt ttc atg ttg ttt att ttc tgc gtc ggc att gaa gca ggc ccc      537
Leu Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Ile Glu Ala Gly Pro
65                  70                  75                  80
aac ttt ttt tcc att ttc ttt cgg gat ggc aaa aat tat ttc atg ctc      585
Asn Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Phe Met Leu
                85                  90                  95
gcc att gtg atg gtg gtc agc gcc ctg ctg ctg gcc ctg gga ttc ggc      633
Ala Ile Val Met Val Val Ser Ala Leu Leu Leu Ala Leu Gly Phe Gly
            100                 105                 110
aag ctt ttt ggc tgg gac atc ggc ctg acc gca ggc gta ctg gcc ggc      681
Lys Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly Val Leu Ala Gly
        115                 120                 125
tcc atg acg tcc acg ccg gtc ctg gtt ggc gcg ggt gat acg ctg cgc      729
Ser Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg
    130                 135                 140
cag agc atc agc gat ccc aga cag ctg agc atc atg cag gat caa ctc      777
Gln Ser Ile Ser Asp Pro Arg Gln Leu Ser Ile Met Gln Asp Gln Leu
145                 150                 155                 160
agc ctg ggt tat gcc gta acc tat ctt gtc ggg tta gtc agc ctg att      825
Ser Leu Gly Tyr Ala Val Thr Tyr Leu Val Gly Leu Val Ser Leu Ile
                165                 170                 175
ttc ggc gca cgc tat ctg ccc cgt tta caa cat cag gac tta ccc acc      873
Phe Gly Ala Arg Tyr Leu Pro Arg Leu Gln His Gln Asp Leu Pro Thr
            180                 185                 190
tgc gcc cag cag att gcg cgc gaa cgc ggt ctt gac gct gac agc cag      921
Cys Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Ala Asp Ser Gln
        195                 200                 205
cgc aaa gtg ttt ctg ccg gtg att cgc gct tac cgc gtt ggc ccg gaa     969
Arg Lys Val Phe Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu
    210                 215                 220
ctg gtg gcg tgg agc ggc ggc aaa aac ttg cgc gag ctc ggt att tac    1017
Leu Val Ala Trp Ser Gly Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr
225                 230                 235                 240
cgg cag acc ggc tgc tat atc gaa cga att cgc cgc aat ggc atc ctt    1065
Arg Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu
                245                 250                 255
gcc agc ccg gat ggt gat gcg gtg ctg caa ctg ggg gac gat att tcc    1113
Ala Ser Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Leu Gly Asp Asp Ile Ser
            260                 265                 270
ctg gtg ggc tat ccg gat gcc cac gcg cgc ctg gat gcc agc ttt cgt    1161
Leu Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ala Arg Leu Asp Ala Ser Phe Arg
        275                 280                 285
aac ggc aaa gaa gtt ttt gac cgc gat ctg ctg gat atg cgg att gtg    1209
Asn Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val
    290                 295                 300
acg gaa gag atc gtg gtg aaa aac cac aat gcc gtc aac aaa cgg cta    1257
Thr Glu Glu Ile Val Val Lys Asn His Asn Ala Val Asn Lys Arg Leu
305                 310                 315                 320
agc aaa ctc aac ctt acc gat cac ggc tgc ttt ctc aac cgc gtg att    1305
Ser Lys Leu Asn Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile
                325                 330                 335
cgc agc cag atc gag atg cct att gat gac aac atc atg ctg aac aaa    1353
Arg Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Ile Met Leu Asn Lys
            340                 345                 350
ggt gat gtg ttg cag gtc agc ggc gag gcg cga cgg gtg aag agc gta    1401
Gly Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Glu Ala Arg Arg Val Lys Ser Val
        355                 360                 365
gcg gat cgc atc ggc ttt gtg gcg att cac agt cag atg acc gac ctg    1449
Ala Asp Arg Ile Gly Phe Val Ala Ile His Ser Gln Met Thr Asp Leu
    370                 375                 380
ctg gca ttc tgt gct ttt ttt atc atc ggt ctg atg gtc ggg tta att    1497
Leu Ala Phe Cys Ala Phe Phe Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Leu Ile
385                 390                 395                 400
acg ttc cag ttc agc aac ttt agc ttt ggc atc ggt aat gcc gca ggg    1545
Thr Phe Gln Phe Ser Asn Phe Ser Phe Gly Ile Gly Asn Ala Ala Gly
                405                 410                 415
ttg ttg ttt gcc ggc att atg ctg ggc ttc ctg cgc gct aac cat cct    1593
Leu Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro
            420                 425                 430
acc ttt ggc tat att ccg cag ggt gcg ctg acg atg gtg aaa gag ttc    1641
Thr Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Thr Met Val Lys Glu Phe
        435                 440                 445
ggg ctg atg gta ttc atg gcg ggc gtc ggg ctg agc gcc ggc agc ggt    1689
Gly Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Ser Gly
    450                 455                 460
atc gac cac ggt ata tcg ggt aac ggc gca ctg atg ctc ttg tgc ggc    1737
Ile Asp His Gly Ile Ser Gly Asn Gly Ala Leu Met Leu Leu Cys Gly
465                 470                 475                 480
ctg ctg gtc agc ctg tta ccg gtg gtg att tgc tac ctg ttt ggc gcc    1785
Leu Leu Val Ser Leu Leu Pro Val Val Ile Cys Tyr Leu Phe Gly Ala
                485                 490                 495
tat gtt ctg cgc atg aac cgc gcg ctg ctg ttt ggc gcc att atg ggt    1833
Tyr Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Ile Met Gly
            500                 505                 510
gca cgc acc tgc gcg cca gcc atg gag ata atc agc gac aca gct cgc    1881
Ala Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg
        515                 520                 525
agt aac atc ccg gca ctc ggc tac gcc ggg acc tat gct atc gcg aac    1929
Ser Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn
    530                 535                 540
gtt ttg cta acg ctg gcg gga aca tta atc gtt att atc tgg ccg tta    1977
Val Leu Leu Thr Leu Ala Gly Thr Leu Ile Val Ile Ile Trp Pro Leu
545                 550                 555                 560
ttg ccc tta taaaattttt ttactgacgt ccagaacttt ttttcccgac            2026
Leu Pro Leu
cacagtctga ataagtgcca ctgcttttct ttgaaatccc caaattgtgg agcccgctgg  2086
tctttttccc agcgggtttt tttatgcctt tctcctgccc gccctgcctg gacactaaaa  2146
catcattaaa cttaaaccgt tttgcaacct taacgcagat taagaacctt gtgatggact  2206
ctctgaccgt ctgcacgcag gat                                      2229
<210>2
<211>563
<212>PRT
<213>Pantoea ananatis
<400>2
Met Leu Asn Val Asn Ile Ala Glu Leu Leu Arg Gly Asn Asp Ile Leu
1               5                   10                  15
Leu Leu Phe Phe Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg
            20                  25                  30
Phe Gly Ser Ile Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser
        35                  40                  45
Leu Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ser Met Asn Thr Asp Ala Leu Ser
    50                  55                  60
Leu Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Ile Glu Ala Gly Pro
65                  70                  75                  80
Asn Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Phe Met Leu
                85                  90                  95
Ala Ile Val Met Val Val Ser Ala Leu Leu Leu Ala Leu Gly Phe Gly
            100                 105                 110
Lys Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly Val Leu Ala Gly
        115                 120                 125
Ser Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg
    130                 135                 140
Gln Ser Ile Ser Asp Pro Arg Gln Leu Ser Ile Met Gln Asp Gln Leu
145                 150                 155                 160
Ser Leu Gly Tyr Ala Val Thr Tyr Leu Val Gly Leu Val Ser Leu Ile
                165                 170                 175
Phe Gly Ala Arg Tyr Leu Pro Arg Leu Gln His Gln Asp Leu Pro Thr
            180                 185                 190
Cys Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Ala Asp Ser Gln
        195                 200                 205
Arg Lys Val Phe Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu
    210                 215                 220
Leu Val Ala Trp Ser Gly Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr
225                 230                 235                 240
Arg Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu
                245                 250                 255
Ala Ser Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Leu Gly Asp Asp Ile Ser
            260                 265                 270
Leu Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ala Arg Leu Asp Ala Ser Phe Arg
        275                 280                 285
Asn Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val
    290                 295                 300
Thr Glu Glu Ile Val Val Lys Asn His Asn Ala Val Asn Lys Arg Leu
305                 310                 315                 320
Ser Lys Leu Asn Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile
                325                 330                 335
Arg Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Ile Met Leu Asn Lys
            340                 345                 350
Gly Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Glu Ala Arg Arg Val Lys Ser Val
        355                 360                 365
Ala Asp Arg Ile Gly Phe Val Ala Ile His Ser Gln Met Thr Asp Leu
    370                 375                 380
Leu Ala Phe Cys Ala Phe Phe Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Leu Ile
385                 390                 395                 400
Thr Phe Gln Phe Ser Asn Phe Ser Phe Gly Ile Gly Asn Ala Ala Gly
                405                 410                 415
Leu Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro
            420                 425                 430
Thr Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Thr Met Val Lys Glu Phe
        435                 440                 445
Gly Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Ser Gly
    450                 455                 460
Ile Asp His Gly Ile Ser Gly Asn Gly Ala Leu Met Leu Leu Cys Gly
465                 470                 475                 480
Leu Leu Val Ser Leu Leu Pro Val Val Ile Cys Tyr Leu Phe Gly Ala
                485                 490                 495
Tyr Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Ile Met Gly
            500                 505                 510
Ala Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg
        515                 520                 525
Ser Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn
    530                 535                 540
Val Leu Leu Thr Leu Ala Gly Thr Leu Ile Val Ile Ile Trp Pro Leu
545                 550                 555                 560
Leu Pro Leu
<210>3
<211>1886
<212>DNA
<213>大肠杆菌(Escherichia coli)
<220>
<221>CDS
<222>(101)..(1783)
<400>3
ggtgcgctga atgaatctgc gccctgaatt ctggtaaaaa acattatcgt aaattaccat   60
ttctttcaac agcttactag taaacaagaa gttagcctcc gtg aat ata aac gtc    115
                                            Val Asn Ile Asn Val
                                            1               5
gcc gaa ttg tta aat ggg aat tac att ctg tta tta ttt gtg gtc ctc    163
Ala Glu Leu Leu Asn Gly Asn Tyr Ile Leu Leu Leu Phe Val Val Leu
                10                  15                  20
gcg ctt ggg cta tgt ctc gga aag tta cga ctt ggt tcg atc caa ctg    211
Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg Leu Gly Ser Ile Gln Leu
            25                  30                  35
ggt aat tcc att ggc gtt tta gtc gta tcg ctg tta tta ggc caa caa    259
Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser Leu Leu Leu Gly Gln Gln
        40                  45                  50
cat ttc agc att aac acc gat gcg ctt aat ctt ggc ttt atg ctg ttt    307
His Phe Ser Ile Asn Thr Asp Ala Leu Asn Leu Gly Phe Met Leu Phe
    55                  60                  65
att ttc tgc gtc ggg gtc gaa gcc gga ccg aac ttt ttt tcc att ttt    355
Ile Phe Cys Val Gly Val Glu Ala Gly Pro Asn Phe Phe Ser Ile Phe
70                  75                  80                  85
ttt cgc gat ggg aaa aat tac cta atg tta gca ctg gtg atg gtt ggc    403
Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Leu Met Leu Ala Leu Val Met Val Gly
                90                  95                  100
agt gcg ctg gtg atc gcc tta ggg tta ggt aag ctg ttt ggc tgg gat    451
Ser Ala Leu Val Ile Ala Leu Gly Leu Gly Lys Leu Phe Gly Trp Asp
            105                 110                 115
att ggc ctg acg gcc ggt atg tta gca ggc tct atg acg tcg aca ccg    499
Ile Gly Leu Thr Ala Gly Met Leu Ala Gly Ser Met Thr Ser Thr Pro
        120                 125                 130
gtt ctg gtc ggt gct ggc gat aca ctg cgt cat tcc ggc atg gaa agc    547
Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg His Ser Gly Met Glu Ser
    135                 140                 145
agg cag ctc tca ctg gca ctg gat aat ctg agc ctc ggg tat gcc tta    595
Arg Gln Leu Ser Leu Ala Leu Asp Asn Leu Ser Leu Gly Tyr Ala Leu
150                 155                 160                 165
acc tat tta atc ggt ctg gtg agt ttg att gtt ggt gcg cgt tac ttg    643
Thr Tyr Leu Ile Gly Leu Val Ser Leu Ile Val Gly Ala Arg Tyr Leu
                170                 175                 180
ccg aaa ttg cag cat cag gac tta cag acc agc gcc cag caa atc gcc    691
Pro Lys Leu Gln His Gln Asp Leu Gln Thr Ser Ala Gln Gln Ile Ala
            185                 190                 195
cgc gaa cgt ggc ctg gac act gat gcc aac cgt aag gtt tat tta ccg    739
Arg Glu Arg Gly Leu Asp Thr Asp Ala Asn Arg Lys Val Tyr Leu Pro
        200                 205                 210
gtg atc cgc gcc tat cgc gtc ggc ccg gaa ctg gtg gcc tgg acc gac    787
Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu Leu Val Ala Trp Thr Asp
    215                 220                 225
ggc aaa aat ctg cgt gaa ctg ggt att tat cga caa acc ggc tgc tac    835
Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr Arg Gln Thr Gly Cys Tyr
230                 235                 240                 245
att gaa cgt att cga cgt aac ggg att ctg gca aat cca gac ggt gat    883
Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu Ala Asn Pro Asp Gly Asp
                250                 255                 260
gcc gtg cta caa atg ggc gat gaa ata gcg ttg gta ggc tat ccc gac     931
Ala Val Leu Gln Met Gly Asp Glu Ile Ala Leu Val Gly Tyr Pro Asp
            265                 270                 275
gcc cat gcc cga ctc gat ccc agc ttc cgt aac ggt aaa gaa gtt ttc     979
Ala His Ala Arg Leu Asp Pro Ser Phe Arg Asn Gly Lys Glu Val Phe
        280                 285                 290
gat cgt gac ctt ctc gac atg cgt atc gtc act gaa gaa gtg gtc gtt    1027
Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val Thr Glu Glu Val Val Val
    295                 300                 305
aaa aac cat aac gct gta ggt aaa cgt ctc gca caa ctg aag ttg acc    1075
Lys Asn His Asn Ala Val Gly Lys Arg Leu Ala Gln Leu Lys Leu Thr
310                 315                 320                 325
gat cac ggt tgc ttc ctt aac cgc gtc att cgt agc cag att gag atg    1123
Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile Arg Ser Gln Ile Glu Met
                330                 335                 340
ccg ata gat gac aac gtc gtg ctt aac aaa ggt gac gtt tta caa gtc    1171
Pro Ile Asp Asp Asn Val Val Leu Asn Lys Gly Asp Val Leu Gln Val
            345                 350                 355
agc ggc gat gcc cgc cgc gta aaa acc atc gcc gat cgc atc ggc ttt    1219
Ser Gly Asp Ala Arg Arg Val Lys Thr Ile Ala Asp Arg Ile Gly Phe
        360                 365                 370
atc tcg att cac agc cag gtc act gac ctg ctg gca ttc tgc gcc ttc    1267
Ile Ser Ile His Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu Ala Phe Cys Ala Phe
    375                 380                 385
ttt gtt att ggg ctg atg atc ggg atg atc acc ttc cag ttc agc aca    1315
Phe Val Ile Gly Leu Met Ile Gly Met Ile Thr Phe Gln Phe Ser Thr
390                 395                 400                 405
ttc agt ttc ggc atg ggg aac gct gcc ggg ttg tta ttc gcc gga att    1363
Phe Ser Phe Gly Met Gly Asn Ala Ala Gly Leu Leu Phe Ala Gly Ile
                410                 415                 420
atg ctg ggc ttt atg cgt gct aac cac ccg acc ttc ggt tac att ccg    1411
Met Leu Gly Phe Met Arg Ala Asn His Pro Thr Phe Gly Tyr Ile Pro
            425                 430                 435
cag ggt gca tta agc atg gtg aaa gag ttc ggc ttg atg gtg ttt atg    1459
Gln Gly Ala Leu Ser Met Val Lys Glu Phe Gly Leu Met Val Phe Met
        440                 445                 450
gca ggc gtt ggt ctg agc gcc ggt agc ggt att aat aac ggc ctg ggc    1507
Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Ser Gly Ile Asn Asn Gly Leu Gly
    455                 460                 465
gcg att ggc ggt cag atg ttg att gcc gga ttg att gtc agt ctg gtg    1555
Ala Ile Gly Gly Gln Met Leu Ile Ala Gly Leu Ile Val Ser Leu Val
4704                 75                 480                 485
ccc gtg gtt atc tgt ttc ttg ttc ggt gct tat gta ttg cga atg aac    1603
Pro Val Val Ile Cys Phe Leu Phe Gly Ala Tyr Val Leu Arg Met Asn
                490                 495                 500
cgc gcg ctg ttg ttc ggc gca atg atg ggc gca cgt acc tgc gcg ccg    1651
Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Met Met Gly Ala Arg Thr Cys Ala Pro
            505                 510                 515
gca atg gag atc atc agt gat aca gct cgc agt aac atc ccg gcg ctg    1699
Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg Ser Asn Ile Pro Ala Leu
        520                 525                 530
ggc tat gcg ggc acc tat gca atc gcc aac gtc ctg ctg acg ctg gca    1747
Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn Val Leu Leu Thr Leu Ala
    535                 540                 545
ggg aca atc atc gtc atg gta tgg cca gga tta gga taaaactgaa         1793
Gly Thr Ile Ile Val Met Val Trp Pro Gly Leu Gly
550                 555                 560
gttgccctga aaatgaaatt tttttgcaca accgcagaac ttttccgcag ggcatcagtc  1853
ttaattagtg ccactgcttt tctttgatgt ccc                               1886
<210>4
<211>561
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>4
Val Asn Ile Asn Val Ala Glu Leu Leu Asn Gly Asn Tyr Ile Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Val Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg Leu
            20                  25                  30
Gly Ser Ile Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser Leu
        35                  40                  45
Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ser Ile Asn Thr Asp Ala Leu Asn Leu
    50                  55                  60
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Val Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Leu Met Leu Ala
                85                  90                  95
Leu Val Met Val Gly Ser Ala Leu Val Ile Ala Leu Gly Leu Gly Lys
            100                 105                 110
Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly Met Leu Ala Gly Ser
        115                 120                 125
Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg His
    130                 135                 140
Ser Gly Met Glu Ser Arg Gln Leu Ser Leu Ala Leu Asp Asn Leu Ser
145                 150                 155                 160
Leu Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Ile Gly Leu Val Ser Leu Ile Val
                165                 170                 175
Gly Ala Arg Tyr Leu Pro Lys Leu Gln His Gln Asp Leu Gln Thr Ser
            180                 185                 190
Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Thr Asp Ala Asn Arg
        195                 200                 205
Lys Val Tyr Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu Leu
    210                 215                 220
Val Ala Trp Thr Asp Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr Arg
225                 230                 235                 240
Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu Ala
                245                 250                 255
Asn Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Met Gly Asp Glu Ile Ala Leu
            260                 265                 270
Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ala Arg Leu Asp Pro Ser Phe Arg Asn
        275                 280                 285
Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val Thr
    290                 295                 300
Glu Glu Val Val Val Lys Asn His Asn Ala Val Gly Lys Arg Leu Ala
305                 310                 315                 320
Gln Leu Lys Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile Arg
                325                 330                 335
Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Val Val Leu Asn Lys Gly
            340                 345                 350
Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Asp Ala Arg Arg Val Lys Thr Ile Ala
        355                 360                 365
Asp Arg Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu
    370                 375                 380
Ala Phe Cys Ala Phe Phe Val Ile Gly Leu Met Ile Gly Met Ile Thr
385                 390                 395                 400
Phe Gln Phe Ser Thr Phe Ser Phe Gly Met Gly Asn Ala Ala Gly Leu
                405                 410                 415
Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Met Arg Ala Asn His Pro Thr
            420                 425                 430
Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Ser Met Val Lys Glu Phe Gly
        435                 440                 445
Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Ser Gly Ile
    450                 455                 460
Asn Asn Gly Leu Gly Ala Ile Gly Gly Gln Met Leu Ile Ala Gly Leu
465                 470                 475                 480
Ile Val Ser Leu Val Pro Val Val Ile Cys Phe Leu Phe Gly Ala Tyr
                485                 490                 495
Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Met Met Gly Ala
            500                 505                 510
Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg Ser
        515                 520                 525
Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn Val
    530                 535                 540
Leu Leu Thr Leu Ala Gly Thr Ile Ile Val Met Val Trp Pro Gly Leu
545                 550                 555                 560
Gly
<210>5
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<212>PRT
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<220>
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<400>5
Met Xaa Asn Xaa Asn Xaa Ala Glu Leu Leu Xaa Gly Asn Xaa Ile Leu
1               5                   10                  15
Leu Leu Phe Xaa Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg
            20                  25                  30
Xaa Gly Ser Ile Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser
        35                  40                  45
Leu Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ser Xaa Asn Thr Asp Ala Leu Xaa
    50                  55                  60
Leu Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Xaa Glu Ala Gly Pro
65                  70                  75                  80
Asn Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Xaa Met Leu
                85                  90                  95
Ala Xaa Val Met Val Xaa Ser Ala Leu Xaa Xaa Ala Leu Gly Xaa Gly
            100                 105                 110
Lys Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly Xaa Leu Ala Gly
        115                 120                 125
Ser Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg
    130                 135                 140
Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Gln Leu Ser Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Leu
145                 150                 155                 160
Ser Leu Gly Tyr Ala Xaa Thr Tyr Leu Xaa Gly Leu Val Ser Leu Ile
                165                 170                 175
Xaa Gly Ala Arg Tyr Leu Pro Xaa Leu Gln His Gln Asp Leu Xaa Thr
            180                 185                 190
Xaa Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Xaa Asp Xaa Xaa
        195                 200                 205
Arg Lys Val Xaa Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu
    210                 215                 220
Leu Val Ala Trp Xaa Xaa Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr
225                 230                 235                 240
Arg Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu
                245                 250                 255
Ala Xaa Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Xaa Gly Asp Xaa Ile Xaa
            260                 265                 270
Leu Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ala Arg Leu Asp Xaa Ser Phe Arg
        275                 280                 285
Asn Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val
    290                 295                 300
Thr Glu Glu Xaa Val Val Lys Asn His Asn Ala Val Xaa Lys Arg Leu
305                 310                 315                 320
Xaa Xaa Leu Xaa Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile
                325                 330                 335
Arg Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Xaa Xaa Leu Asn Lys
            340                 345                 350
Gly Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Xaa Ala Arg Arg Val Lys Xaa Xaa
        355                 360                 365
Ala Asp Arg Ile Gly Phe Xaa Xaa Ile His Ser Gln Xaa Thr Asp Leu
    370                 375                 380
Leu Ala Phe Cys Ala Phe Phe Xaa Ile Gly Leu Met Xaa Gly Xaa Ile
385                 390                 395                 400
Thr Phe Gln Phe Ser Xaa Phe Ser Phe Gly Xaa Gly Asn Ala Ala Gly
                405                 410                 415
Leu Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Xaa Arg Ala Asn His Pro
            420                 425                 430
Thr Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Xaa Met Val Lys Glu Phe
        435                 440                 445
Gly Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Ser Gly
    450                 455                 460
Ile Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Met Leu Xaa Xaa Gly
465                 470                 475                 480
Leu Xaa Val Ser Leu Xaa Pro Val Val Ile Cys Xaa Leu Phe Gly Ala
                485                 490                 495
Tyr Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Xaa Met Gly
            500                 505                 510
Ala Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg
        515                 520                 525
Ser Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn
    530                 535                 540
Val Leu Leu Thr Leu Ala Gly Thr Xaa Ile Val Xaa Xaa Trp Pro Xaa
545                 550                 555                 560
Leu Xaa Leu
<210>6
<211>80
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>6
agcggcgtat tcgcctctat caaacattaa ctgatagcga agatctaaat tgaagcctgc    60
ttttttatac taagttggca                                                80
<210>7
<211>80
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>7
ccaccagata accttccggt agcgttaaaa cgtcacgaca ttcaatagaa cgctcaagtt    60
agtataaaaa agctgaacga                                                80
<210>8
<211>45
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>8
gatcggtacc cagacatcag tgatagctgg aggtaatctt acggc                    45
<210>9
<211>50
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>9
gatcgcatgc gacgtcagta aaaaaatttt ataagggcaa taacggccag                 50
<210>10
<211>16214
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RSFCPG
<400>10
gaattccgcc agaaccttca tcagcagcat aaacaggtgc agtgaacagc agagatacgg      60
ccagtgcggc caatgttttt tgtcctttaa acataacaga gtcctttaag gatatagaat     120
aggggtatag ctacgccaga atatcgtatt tgattattgc tagtttttag ttttgcttaa     180
aaaatattgt tagttttatt aaattggaaa actaaattat tggtatcatg aattgttgta     240
tgatgataaa tatagggggg atatgataga cgtcattttc atagggttat aaaatgcgac     300
taccatgaag tttttaattc aaagtattgg gttgctgata atttgagctg ttctattctt     360
tttaaatatc tatataggtc tgttaatgga ttttattttt acaagttttt tgtgtttagg     420
catataaaaa tcaagcccgc catatgaacg gcgggttaaa atatttacaa cttagcaatc     480
gaaccattaa cgcttgatat cgcttttaaa gtcgcgtttt tcatatcctg tatacagctg     540
acgcggacgg gcaatcttca taccgtcact gtgcatttcg ctccagtggg cgatccagcc     600
aacggtacgt gccattgcga aaatgacggt gaacatggaa gacggaatac ccatcgcttt     660
caggatgata ccagagtaga aatcgacgtt cgggtacagt ttcttctcga taaagtacgg     720
gtcgttcagc gcgatgtttt ccagctccat agccacttcc agcaggtcat ccttcgtgcc     780
cagctctttc agcacttcat ggcaggtttc acgcattacg gtggcgcgcg ggtcgtaatt     840
tttgtacacg cggtgaccga agcccatcag gcggaaagaa tcatttttgt ctttcgcacg     900
acgaaaaaat tccggaatgt gtttaacgga gctgatttct tccagcattt tcagcgccgc     960
ttcgttagca ccgccgtgcg caggtcccca cagtgaagca atacctgctg cgatacaggc    1020
aaacgggttc gcacccgaag agccagcggt acgcacggtg gaggtagagg cgttctgttc    1080
atggtcagcg tgcaggatca gaatacggtc catagcacgt tccagaatcg gattaacttc    1140
atacggttcg cacggcgtgg agaacatcat attcaggaag ttaccggcgt aggagagatc    1200
gttgcgcggg taaacaaatg gctgaccaat ggaatacttg taacacatcg cggccatggt    1260
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cccgaagggt ggccgttagg ccagtttctc gaagagaaac cggtaagtgc gccctcccct    13380
acaaagtagg gtcgggattg ccgccgctgt gcctccatga tagcctacga gacagcacat    13440
taacaatggg gtgtcaagat ggttaagggg agcaacaagg cggcggatcg gctggccaag    13500
ctcgaagaac aacgagcgcg aatcaatgcc gaaattcagc gggtgcgggc aagggaacag    13560
cagcaagagc gcaagaacga aacaaggcgc aaggtgctgg tgggggccat gattttggcc    13620
aaggtgaaca gcagcgagtg gccggaggat cggctcatgg cggcaatgga tgcgtacctt    13680
gaacgcgacc acgaccgcgc cttgttcggt ctgccgccac gccagaagga tgagccgggc    13740
tgaatgatcg accgagacag gccctgcggg gctgcacacg cgcccccacc cttcgggtag    13800
ggggaaaggc cgctaaagcg gctaaaagcg ctccagcgta tttctgcggg gtttggtgtg    13860
gggtttagcg ggctttgccc gcctttcccc ctgccgcgca gcggtggggc ggtgtgtagc    13920
ctagcgcagc gaatagacca gctatccggc ctctggccgg gcatattggg caagggcagc    13980
agcgccccac aagggcgctg ataaccgcgc ctagtggatt attcttagat aatcatggat    14040
ggatttttcc aacaccccgc cagcccccgc ccctgctggg tttgcaggtt tgggggcgtg    14100
acagttattg caggggttcg tgacagttat tgcagggggg cgtgacagtt attgcagggg    14160
ttcgtgacag ttagtacggg agtgacgggc actggctggc aatgtctagc aacggcaggc    14220
atttcggctg agggtaaaag aactttccgc taagcgatag actgtatgta aacacagtat    14280
tgcaaggacg cggaacatgc ctcatgtggc ggccaggacg gccagccggg atcgggatac    14340
tggtcgttac cagagccacc gacccgagca aacccttctc tatcagatcg ttgacgagta    14400
ttacccggca ttcgctgcgc ttatggcaga gcagggaaag gaattgccgg gctatgtgca    14460
acgggaattt gaagaatttc tccaatgcgg gcggctggag catggctttc tacgggttcg    14520
ctgcgagtct tgccacgccg agcacctggt cgctttcagc tgtaagcgtc gcggtttctg    14580
cccgagctgt ggggcgcggc ggatggccga aagtgccgcc ttgctggttg atgaagtact    14640
gcctgaacaa cccatgcgtc agtgggtgtt gagcttcccg tttcagctgc gtttcctgtt    14700
tggggtcgtt tgcgggaagg ggcggaatcc tacgctaagg ctttggccag cgatattctc    14760
cggtgagatt gatgtgttcc caggggatag gagaagtcgc ttgatatcta gtatgacgtc    14820
tgtcgcacct gcttgatcgc ggcccaaggg ttggtttgcg cattcacagt tctccgcaag    14880
aattgattgg ctccaattct tggagtggtg aatccgttag cgaggtgccg ccggcttcca    14940
ttcaggtcga ggtggcccgg ctccatgcac cgcgacgcaa cgcggggagg cagacaaggt    15000
atagggcggc gcctacaatc catgccaacc cgttccatgt gctcgccgag gcggcataaa    15060
tcgccgtgac gatcagcggt ccagtgatcg aagttaggct ggtaagagcc gcgagcgatc    15120
cttgaagctg tccctgatgg tcgtcatcta cctgcctgga cagcatggcc tgcaacgcgg    15180
gcatcccgat gccgccggaa gcgagaagaa tcataatggg gaaggccatc cagcctcgcg    15240
tcgcgaacgc cagcaagacg tagcccagcg cgtcggccgc catgccggcg ataatggcct    15300
gcttctcgcc gaaacgtttg gtggcgggac cagtgacgaa ggcttgagcg agggcgtgca    15360
agattccgaa taccgcaagc gacaggccga tcatcgtcgc gctccagcga aagcggtcct    15420
cgccgaaaat gacccagagc gctgccggca cctgtcctac gagttgcatg ataaagaaga    15480
cagtcataag tgcggcgacg atagtcatgc cccgcgccca ccggaaggag ctgactgggt    15540
tgaaggctct caagggcatc ggtcgacgct ctcccttatg cgactcctgc attaggaagc    15600
agcccagtag taggttgagg ccgttgagca ccgccgccgc aaggaatggt gcatgcaagg    15660
agatggcgcc caacagtccc ccggccacgg ggcctgccac catacccacg ccgaaacaag    15720
cgctcatgag cccgaagtgg cgagcccgat cttccccatc ggtgatgtcg gcgatatagg    15780
cgccagcaac cgcacctgtg gcgccggtga tgccggccac gatgcgtccg gcgtagagga    15840
tccacaggac gggtgtggtc gccatgatcg cgtagtcgat agtggctcca agtagcgaag    15900
cgagcaggac tgggcggcgg ccaaagcggt cggacagtgc tccgagaacg ggtgcgcata    15960
gaaattgcat caacgcatat agcgctagca gcacgccata gtgactggcg atgctgtcgg 16020
aatggacgat atcccgcaag aggcccggca gtaccggcat aaccaagcct atgcctacag 16080
catccagggt gacggtgccg aggatgacga tgagcgcatt gttagatttc atacacggtg 16140
cctgactgcg ttagcaattt aactgtgata aactaccgca ttaaagctta tcgatgataa 16200
gctgtcaaac atga                                                   16214
<210>11
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>11
gatcggtacc ggtgcgctga atgaatctgc gccctgaatt                          40
<210>12
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>12
gatcgcatgc ggcaacttca gttttatcct aatcctggcc                          40
<210>13
<211>55
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>13
gtgattcaac atcactggag aaagtcttat gaaactctga agcctgcttt tttat         55
<210>14
<211>55
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>14
cctggaatgc aggggagcgg caagattaaa ccagttccgc tcaagttagt ataaa         55
<210>15
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>15
gcgcctacac taagcatagt tg                                             22
<210>16
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列
<400>16
ccatcagcag gcttagcgca ac                                              22
<210>17
<211>55
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>17
gagggagaaa aacgcatgat tatttccgca gccagcgtga agcctgcttt tttat          55
<210>18
<211>54
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>18
gcgcaaacga ctatgccgca ttccctttcg ccatggcgct caagttagta taaa           54
<210>19
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>19
gcgtaaagca atgatggcgc acc                                             23
<210>20
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>20
gcggtgtcgt ttcagagtga ggg                                             23
<210>21
<211>348
<212>DNA
<213>大肠杆菌
<400>21
aagctttacg cgaacgagcc atgacattgc tgacgactct ggcagtggca gatgacataa     60
aactggtcga ctggttacaa caacgcctgg ggcttttaga gcaacgagac acggcaatgt    120
tgcaccgttt gctgcatgat attgaaaaaa atatcaccaa ataaaaaacg ccttagtaag    180
tatttttcag cttttcattc tgactgcaac gggcaatatg tctctgtgtg gattaaaaaa    240
agagtgtctg atagcagctt ctgaactggt tacctgccgt gagtaaatta aaattttatt    300
gacttaggtc actaaatact ttaaccaata taggcgactc taggatcc                 348
<210>22
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>22
cgggatccca gcttactagt aaac                                          24
<210>23
<211>32
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>23
gggaaaggat ccgatgggct ccacaaaatg gg                                 32
<210>24
<211>1686
<212>DNA
<213>鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1686)
<400>24
gtg aat ata aac gtc gca gat ttg tta aat ggg aat tac atc ctg tta     48
Val Asn Ile Asn Val Ala Asp Leu Leu Asn Gly Asn Tyr Ile Leu Leu
1               5                   10                  15
tta ttt gtg gtc ctg gct ctt ggc ctg tgt ctt ggc aag tta cgt ctg     96
Leu Phe Val Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg Leu
            20                  25                  30
ggt tca gtc caa ctt ggt aat tcc att ggc gtt tta gtg gtc tct cta    144
Gly Ser Val Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser Leu
        35                  40                  45
tta tta ggg cag caa cac ttc agt att aac acc gac gcg cta aat ctg    192
Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ser Ile Asn Thr Asp Ala Leu Asn Leu
    50                  55                  60
gga ttt atg ctg ttt att ttt tgt gtc ggc gtc gag gct ggc ccc aac    240
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Val Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
ttt ttt tcg att ttt ttt cgc gac ggt aaa aat tat ctg atg ctt gcc    288
Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Leu Met Leu Ala
                85                  90                  95
ctg gtc atg gtc ggt agc gct ctg cta atc gcc tta ggc ctt ggt aag    336
Leu Val Met Val Gly Ser Ala Leu Leu Ile Ala Leu Gly Leu Gly Lys
            100                 105                 110
cta ttc ggc tgg gat atc ggc ctg acg gcc ggt atg ctg gcc ggc tca    384
Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly Met Leu Ala Gly Ser
        115                 120                 125
atg acc tcc acg ccc gtg ctg gtt ggc gca ggc gat acc ctg cga cat    432
Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg His
    130                 135                 140
tcc ggc atc gcc agc acc caa ctc tcc tcc gct ctt gat aat ctg agc    480
Ser Gly Ile Ala Ser Thr Gln Leu Ser Ser Ala Leu Asp Asn Leu Ser
145                 150                 155                 160
ctg ggc tat gcc ctg acc tat ctg att ggg ttg gtc agt ctg atc gtg    528
Leu Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Ile Gly Leu Val Ser Leu Ile Val
                165                 170                 175
ggc gcg cgc tac ttg cct aaa cta cag cat cag gat ttg caa acc agc    576
Gly Ala Arg Tyr Leu Pro Lys Leu Gln His Gln Asp Leu Gln Thr Ser
            180                 185                 190
gcc cag caa att gct cgc gag cgc ggt ctg gat acc gat gct aat cgc    624
Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Thr Asp Ala Asn Arg
        195                 200                 205
aag gtt tat ttg ccg gtt atc cgc gcc tat cgg gtt ggc ccg gaa ctg    672
Lys Val Tyr Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu Leu
    210                 215                 220
gtg gcc tgg act gac ggt aaa aac ctg cgc gag ctg ggt att tac cgc     720
Val Ala Trp Thr Asp Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr Arg
225                 230                 235                 240
cag aca ggc tgc tat atc gaa cgt att cgc cgt aac ggt att ctg gcg     768
Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu Ala
                245                 250                 255
aac ccg gat ggc gat gcg gtg ctg caa atg ggc gat gag att gcg ctg     816
Asn Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Met Gly Asp Glu Ile Ala Leu
            260                 265                 270
gtc ggc tat ccg gac gcg cac gcc agg ctc gat ccc agc ttc cgt aat     864
Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ala Arg Leu Asp Pro Ser Phe Arg Asn
        275                 280                 285
ggt aag gaa gta ttt gat cgc gat ctg ctt gat atg cgc atc gtg acg     912
Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val Thr
    290                 295                 300
gaa gaa att gtg gtg aaa aac cac aat gcg gtc ggt cgc cgc ctc gct     960
Glu Glu Ile Val Val Lys Asn His Asn Ala Val Gly Arg Arg Leu Ala
305                 310                 315                 320
cag ctc aag ctg acc gat cat ggc tgc ttc ctt aac cgc gtc atc cgc    1008
Gln Leu Lys Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile Arg
                325                 330                 335
agc cag atc gaa atg cct atc gac gat aac gtc gtg ctg aat aaa ggc    1056
Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Val Val Leu Asn Lys Gly
            340                 345                 350
gac gtg tta cag gtg agc ggc gac gcc aga cgc gta aaa acc atc gcc    1104
Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Asp Ala Arg Arg Val Lys Thr Ile Ala
        355                 360                 365
gat cgc att ggt ttt att tcg att cat agt cag gtg acg gac ctg ctt    1152
Asp Arg Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu
    370                 375                 380
gcc ttc tgc gct ttt ttt atc atc ggg tta atg atc ggg atg att acc    1200
Ala Phe Cys Ala Phe Phe Ile Ile Gly Leu Met Ile Gly Met Ile Thr
385                 390                 395                 400
ttc cag ttc agc aat ttt agt ttc ggt atc ggc aac gcg gcc gga ttg    1248
Phe Gln Phe Ser Asn Phe Ser Phe Gly Ile Gly Asn Ala Ala Gly Leu
                405                 410                 415
ctg ttc gcc ggg atc atg ctc ggt ttc ctg cgc gct aac cat cct acc    1296
Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro Thr
            420                 425                 430
ttt ggt tat att ccg cag ggc gcg ctt aat atg gtg aaa gaa ttc ggc    1344
Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Val Lys Glu Phe Gly
        435                 440                 445
ttg atg gtg ttt atg gca ggc gtt ggt tta agc gcc ggc agc ggt atc    1392
Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Ser Gly Ile
    450                 455                 460
agc aac ggt ctg ggc gcg gtc ggc gga caa atg ctg atc gcc ggg ctt    1440
Ser Asn Gly Leu Gly Ala Val Gly Gly Gln Met Leu Ile Ala Gly Leu
465                 470                 475                 480
gtc gtc agc ctg gta ccg gtg gtg atc tgc ttc ttg ttt ggc gct tat    1488
Val Val Ser Leu Val Pro Val Val Ile Cys Phe Leu Phe Gly Ala Tyr
                485                 490                 495
gtg ctg cgc atg aac cgg gcg ctg ctg ttc ggt gcc atg atg ggc gcg    1536
Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Met Met Gly Ala
            500                 505                 510
cgt acc tgc gcc ccg gcg atg gaa atc att agc gat acg gcg cgc agt    1584
Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg Ser
        515                 520                 525
aat att cca gcg ctg ggt tat gcg ggg act tac gcc atc gcc aac gtt    1632
Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn Val
    530                 535                 540
ctg cta acg ctg gcg ggg acg ctt att gtc atc atc tgg ccg ggg tta    1680
Leu Leu Thr Leu Ala Gly Thr Leu Ile Val Ile Ile Trp Pro Gly Leu
545                 550                 555                 560
gga taa                                                            1686
Gly
<210>25
<211>561
<212>PRT
<213>鼠伤寒沙门氏菌
<400>25
Val Asn Ile Asn Val Ala Asp Leu Leu Asn Gly Asn Tyr Ile Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Val Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg Leu
            20                  25                  30
Gly Ser Val Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser Leu
        35                  40                  45
Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ser Ile Asn Thr Asp Ala Leu Asn Leu
    50                  55                  60
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Val Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Leu Met Leu Ala
                85                  90                  95
Leu Val Met Val Gly Ser Ala Leu Leu Ile Ala Leu Gly Leu Gly Lys
            100                 105                 110
Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly Met Leu Ala Gly Ser
        115                 120                 125
Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg His
    130                 135                 140
Ser Gly Ile Ala Ser Thr Gln Leu Ser Ser Ala Leu Asp Asn Leu Ser
145                 150                 155                 160
Leu Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Ile Gly Leu Val Ser Leu Ile Val
                165                 170                 175
Gly Ala Arg Tyr Leu Pro Lys Leu Gln His Gln Asp Leu Gln Thr Ser
            180                 185                 190
Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Thr Asp Ala Asn Arg
        195                 200                 205
Lys Val Tyr Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu Leu
    210                 215                 220
Val Ala Trp Thr Asp Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr Arg
225                 230                 235                 240
Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu Ala
                245                 250                 255
Asn Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Met Gly Asp Glu Ile Ala Leu
            260                 265                 270
Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ala Arg Leu Asp Pro Ser Phe Arg Asn
        275                 280                 285
Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val Thr
    290                 295                 300
Glu Glu Ile Val Val Lys Asn His Asn Ala Val Gly Arg Arg Leu Ala
305                 310                 315                 320
Gln Leu Lys Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile Arg
                325                 330                 335
Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Val Val Leu Asn Lys Gly
            340                 345                 350
Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Asp Ala Arg Arg Val Lys Thr Ile Ala
        355                 360                 365
Asp Arg Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu
    370                 375                 380
Ala Phe Cys Ala Phe Phe Ile Ile Gly Leu Met Ile Gly Met Ile Thr
385                 390                 395                 400
Phe Gln Phe Ser Asn Phe Ser Phe Gly Ile Gly Asn Ala Ala Gly Leu
                405                 410                 415
Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro Thr
            420                 425                 430
Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Val Lys Glu Phe Gly
        435                 440                 445
Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Ser Gly Ile
    450                 455                 460
Ser Asn Gly Leu Gly Ala Val Gly Gly Gln Met Leu Ile Ala Gly Leu
465                 470                 475                 480
Val Val Ser Leu Val Pro Val Val Ile Cys Phe Leu Phe Gly Ala Tyr
                485                 490                 495
Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Met Met Gly Ala
            500                 505                 510
Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg Ser
        515                 520                 525
Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn Val
    530                 535                 540
Leu Leu Thr Leu Ala Gly Thr Leu Ile Val Ile Ile Trp Pro Gly Leu
545                 550                 555                 560
Gly
<210>26
<211>1689
<212>DNA
<213>鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1689)
<400>26
gtg aat ata aac gtc gca aat ttg tta aac ggc aac tat atc ttg ctg     48
Val Asn Ile Asn Val Ala Asn Leu Leu Asn Gly Asn Tyr Ile Leu Leu
1               5                   10                  15
tta ttc gtc gtc tta gcg ttg ggg tta tgc tta ggt aaa ttg cgc ctt     96
Leu Phe Val Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg Leu
            20                  25                  30
ggc tct atc caa tta ggt aac gct att ggt gta ctg gtg gta tca ctg    144
Gly Ser Ile Gln Leu Gly Asn Ala Ile Gly Val Leu Val Val Ser Leu
        35                  40                  45
ttg cta ggg caa cag cat ttc gcc atc aat act gaa gcg cta aat ctg    192
Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ala Ile Asn Thr Glu Ala Leu Asn Leu
    50                  55                  60
ggc ttt atg ttg ttt att ttt tgt gtc ggt gtt gaa gcc ggt cca aac    240
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Val Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
ttc ttt tct att ttc ttc cgt gat ggc aaa aat tac ctg atg ctc gcc    288
Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Leu Met Leu Ala
                85                  90                  95
ttg gtt atg gtg ggc agc gcg atg att tta gcg ttg ggg ctt ggc aaa    336
Leu Val Met Val Gly Ser Ala Met Ile Leu Ala Leu Gly Leu Gly Lys
            100                 105                 110
tta ttt ggt tgg gat atc ggt ctg acc gcc ggg atg ctg gca ggg tca    384
Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly Met Leu Ala Gly Ser
        115                 120                 125
atg aca tcg acc ccc gtt ttg gtt ggg gcc ggt gat acg cta cgc cat    432
Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg His
    130                 135                 140
acc atg gct aat ggt tcg tca ctg caa caa gca cag gat aat ttg agc    480
Thr Met Ala Asn Gly Ser Ser Leu Gln Gln Ala Gln Asp Asn Leu Ser
145                 150                 155                 160
ctc ggc tat gcc ctg act tat ctt atc ggg ctg gtt agc ctg att tta    528
Leu Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Ile Gly Leu Val Ser Leu Ile Leu
                165                 170                 175
ggt gcg cgc tat tta cct aag ctt cag cat cag gat tta ccg acc agc    576
Gly Ala Arg Tyr Leu Pro Lys Leu Gln His Gln Asp Leu Pro Thr Ser
            180                 185                 190
gcc caa caa att gcc cgc gaa cga ggg ctg gac acc gat agc cag cgt    624
Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Thr Asp Ser Gln Arg
        195                 200                 205
aaa gtg tat ttg cct gtc atc cgt gct tat cgt gta ggc ccg gag ctg    672
Lys Val Tyr Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu Leu
    210                 215                 220
gtt gcc tgg gca gat ggt aaa aac ttg cgt gaa tta ggg att tac cgc    720
Val Ala Trp Ala Asp Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr Arg
225                 230                 235                 240
caa acc ggt tgc tat atc gag cgt atc cgc cgc aac ggt att ctc gcg    768
Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu Ala
                245                 250                 255
aat ccg gat ggt gac gcc gtg cta caa gtc ggt gat gaa atc tcg ttg    816
Asn Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Val Gly Asp Glu Ile Ser Leu
            260                 265                 270
gtg ggt tac cca gat gcc cat tcc cgc ctt gac ccc agc ttc cgt aat    864
Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ser Arg Leu Asp Pro Ser Phe Arg Asn
        275                 280                 285
ggc aaa gaa gtt ttc gac cgt gat ctg ttg gat atg cgt atc gtc acc    912
Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val Thr
    290                 295                 300
gaa gag atc gtg gtc aaa aat agc aat gct gtc ggt aaa cgc ctc agc     960
Glu Glu Ile Val Val Lys Asn Ser Asn Ala Val Gly Lys Arg Leu Ser
305                 310                 315                 320
cat tta aaa ctc acc gat cac ggt tgc ttc ctt aat cgg gtc att cgt    1008
His Leu Lys Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile Arg
                325                 330                 335
agc caa att gaa atg ccc att gat gat aac gtg gtg ttg aat aaa ggt    1056
Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Val Val Leu Asn Lys Gly
            340                 345                 350
gat gtg ctg caa gtc agc ggt gat gcc cgg cga gtc aaa agc gtg gca    1104
Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Asp Ala Arg Arg Val Lys Ser Val Ala
        355                 360                 365
gaa aaa att ggc ttt atc tct att cac agt cag gtc act gac ctg ctg    1152
Glu Lys Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu
    370                 375                 380
gcc ttc tgc tca ttc ttt att ctt ggg tta atg att ggc ctg att act    1200
Ala Phe Cys Ser Phe Phe Ile Leu Gly Leu Met Ile Gly Leu Ile Thr
385                 390                 395                 400
ttc cag ttc agc aat ttc agc ttc ggt att ggc aat gcc gca ggg ctg    1248
Phe Gln Phe Ser Asn Phe Ser Phe Gly Ile Gly Asn Ala Ala Gly Leu
                405                 410                 415
tta tta gca ggg atc atg ctg gga ttt tta cgt gcc aac cae cct act    1296
Leu Leu Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro Thr
            420                 425                 430
ttt ggc tat atc ccg caa ggc gcc ttg aat atg gtg aaa gag ttc ggg    1344
Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Val Lys Glu Phe Gly
        435                 440                 445
tta atg gtc ttt atg gca ggt gtc ggg tta agt gcc ggg ggc ggc att    1392
Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Gly Gly Ile
    450                 455                 460
aat agc agc ctg ggc gcc gtc ggt gga caa atg ttg att tcc ggt ttg    1440
Asn Ser Ser Leu Gly Ala Val Gly Gly Gln Met Leu Ile Ser Gly Leu
465                 470                 475                 480
ata gtc agt ttg gtt ccg gtg gtg atc tgc ttt gtt ttt ggt gct tat    1488
Ile Val Ser Leu Val Pro Val Val Ile Cys Phe Val Phe Gly Ala Tyr
                485                 490                 495
gtt ctg cgt atg aac cgt gca ctg ctt ttt ggt gcc att atg ggg gcc    1536
Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Ile Met Gly Ala
            500                 505                 510
aga acc tgt gca ccc gcc atg gac atc atc agt gat acc gcg cgt agc    1584
Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Asp Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg Ser
        515                 520                 525
aat att ccc gca tta ggc tac gcg ggg act tac gct atc gcc aac gtc    1632
Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn Val
    530                 535                 540
tta ctg acc ttg gct ggc tcg ttg att gtc atc ctc tgg cca ggg ata    1680
Leu Leu Thr Leu Ala Gly Ser Leu Ile Val Ile Leu Trp Pro Gly Ile
545                 550                 555                 560
tta ggt tag                                                        1689
Leu Gly
<210>27
<211>562
<212>PRT
<213>鼠疫耶尔森氏菌
<400>27
Val Asn Ile Asn Val Ala Asn Leu Leu Asn Gly Asn Tyr Ile Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Val Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg Leu
            20                  25                  30
Gly Ser Ile Gln Leu Gly Asn Ala Ile Gly Val Leu Val Val Ser Leu
        35                  40                  45
Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ala Ile Asn Thr Glu Ala Leu Asn Leu
    50                  55                  60
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Val Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Leu Met Leu Ala
                85                  90                  95
Leu Val Met Val Gly Ser Ala Met Ile Leu Ala Leu Gly Leu Gly Lys
            100                 105                 110
Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly Met Leu Ala Gly Ser
        115                 120                 125
Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg His
    130                 135                 140
Thr Met Ala Asn Gly Ser Ser Leu Gln Gln Ala Gln Asp Asn Leu Ser
145                 150                 155                 160
Leu Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Ile Gly Leu Val Ser Leu Ile Leu
                165                 170                 175
Gly Ala Arg Tyr Leu Pro Lys Leu Gln His Gln Asp Leu Pro Thr Ser
            180                 185                 190
Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Thr Asp Ser Gln Arg
        195                 200                 205
Lys Val Tyr Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu Leu
    210                 215                 220
Val Ala Trp Ala Asp Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr Arg
225                 230                 235                 240
Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu Ala
                245                 250                 255
Asn Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Val Gly Asp Glu Ile Ser Leu
            260                 265                 270
Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ser Arg Leu Asp Pro Ser Phe Arg Asn
        275                 280                 285
Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val Thr
    290                 295                 300
Glu Glu Ile Val Val Lys Asn Ser Asn Ala Val Gly Lys Arg Leu Ser
305                 310                 315                 320
His Leu Lys Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile Arg
                325                 330                 335
Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Val Val Leu Asn Lys Gly
            340                 345                 350
Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Asp Ala Arg Arg Val Lys Ser Val Ala
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Glu Lys Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu
    370                 375                 380
Ala Phe Cys Ser Phe Phe Ile Leu Gly Leu Met Ile Gly Leu Ile Thr
385                 390                 395                 400
Phe Gln Phe Ser Asn Phe Ser Phe Gly Ile Gly Asn Ala Ala Gly Leu
                405                 410                 415
Leu Leu Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro Thr
            420                 425                 430
Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Val Lys Glu Phe Gly
        435                 440                 445
Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Gly Gly Ile
    450                 455                 460
Asn Ser Ser Leu Gly Ala Val Gly Gly Gln Met Leu Ile Ser Gly Leu
465                 470                 475                 480
Ile Val Ser Leu Val Pro Val Val Ile Cys Phe Val Phe Gly Ala Tyr
                485                 490                 495
Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Ile Met Gly Ala
            500                 505                 510
Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Asp Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg Ser
        515                 520                 525
Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn Val
    530                 535                 540
Leu Leu Thr Leu Ala Gly Ser Leu Ile Val Ile Leu Trp Pro Gly Ile
545                 550                 555                 560
Leu Gly
<210>28
<211>1689
<212>DNA
<213>胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1689)
<400>28
atg aat ata aac gtc gct gat ttg tta aac ggg aat tac att ctg ctt    48
Met Asn Ile Asn Val Ala Asp Leu Leu Asn Gly Asn Tyr Ile Leu Leu
1               5                   10                  15
tta ttc gtg gtt ctt tca tta gga ctc tgt ctg ggg aaa ttg cgc ctc     96
Leu Phe Val Val Leu Ser Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg Leu
            20                  25                  30
ggg cca gta caa ctc ggt aat tct att ggc gtt tta gtg gtt tct tta    144
Gly Pro Val Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser Leu
        35                  40                  45
tta ctc ggc caa caa cat ttt tcg att aat acc gaa gca ctg agc ctc    192
Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ser Ile Asn Thr Glu Ala Leu Ser Leu
    50                  55                  60
ggt ttt atg tta ttt att ttt tgc gtg gga gta gaa gcc ggg ccg aat    240
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Val Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
ttc ttt tct att ttc ttc cgc gac ggg aaa aat tat ttc atg ctg gcg    288
Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Phe Met Leu Ala
                85                  90                  95
ctg gtg atg gtc ggc agc gcc atg tta ctg gcg tta ggg tta ggc aaa    336
Leu Val Met Val Gly Ser Ala Met Leu Leu Ala Leu Gly Leu Gly Lys
            100                 105                 110
ctt ttc ggc tgg gga atc ggc ctg acc gcg ggg atg ctg gca gga tcc    384
Leu Phe Gly Trp Gly Ile Gly Leu Thr Ala Gly Met Leu Ala Gly Ser
        115                 120                 125
atg aca tcg aca ccg gtg ctg gtc ggt gca ggc gac aca cta cgc aat    432
Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg Asn
    130                 135                 140
acc gcc agt ttg ggt ggt caa ctc ggt gtt gaa caa gat cat ttg agc    480
Thr Ala Ser Leu Gly Gly Gln Leu Gly Val Glu Gln Asp His Leu Ser
145                 150                 155                 160
ctg ggc tat gcg ctg acg tat ctg gtc ggg ctg gtc agt ctc att ttt    528
Leu Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Val Gly Leu Val Ser Leu Ile Phe
                165                 170                 175
ggt gca cgc tat ctg ccc aaa ctt cag cat cag gat ctt ccc acc agt    576
Gly Ala Arg Tyr Leu Pro Lys Leu Gln His Gln Asp Leu Pro Thr Ser
            180                 185                 190
gcg cag caa att gca cgc gag cgc ggg ctg gat gta gac agc caa aga    624
Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Val Asp Ser Gln Arg
        195                 200                 205
aaa gtg tat ctg cca gtg att cgt gcc tat cgc gtc ggg cca gag ttg    672
Lys Val Tyr Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu Leu
    210                 215                 220
gtt gac tgg gcg gct ggc aaa aac ttg cgc gaa ctg gga atc tat cgc    720
Val Asp Trp Ala Ala Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr Arg
225                 230                 235                 240
cag acc ggt tgc tac atc gag cgc att cga cgc aac gga att ctg gca    768
Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu Ala
                245                 250                 255
aat ccc gac ggg gat gcc gtc ttg caa atc ggc gac gag atc gcg ctg    816
Asn Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Ile Gly Asp Glu Ile Ala Leu
            260                 265                 270
gtc ggt tat ccc gat gca cac tct cgt ctg aac tcc aat ttc cgc gat    864
Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ser Arg Leu Asn Ser Asn Phe Arg Asp
        275                 280                 285
ggc aaa gaa gtt ttc gac cgt aat ttg ttg gac atg cgc atc gtg acg    912
Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asn Leu Leu Asp Met Arg Ile Val Thr
    290                 295                 300
gaa gag att gtc gtc aag aat cac aac gcc gtc ggt aag cgc ctc agc    960
Glu Glu Ile Val Val Lys Asn His Asn Ala Val Gly Lys Arg Leu Ser
305                 310                 315                 320
caa ttg aag ctg act gac cac ggc tgt ttc ctt aac cgt att gtt cgc   1008
Gln Leu Lys Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Ile Val Arg
                325                 330                 335
agc cag ata gaa atg ccg ctc gac gat aac gtc gtg ctg aat aaa ggc   1056
Ser Gln Ile Glu Met Pro Leu Asp Asp Asn Val Val Leu Asn Lys Gly
            340                 345                 350
gat gtc tta cag gtc agc ggt gac gcc cgt cgg gta aaa agc att gct   1104
Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Asp Ala Arg Arg Val Lys Ser Ile Ala
        355                 360                 365
gag cga atc ggg ttc att tct att cac agt cag gtc acc gat tta ctg   1152
Glu Arg Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu
    370                 375                 380
gcc ttc tgc gcc ttt ttt gtt atc ggc gtg atg gtc ggg ctg atc acc   1200
Ala Phe Cys Ala Phe Phe Val Ile Gly Val Met Val Gly Leu Ile Thr
385                 390                 395                 400
atc cag ttc agc aac ttc acc ttt ggc atc ggt aac gcg gct ggg ttg    1248
Ile Gln Phe Ser Asn Phe Thr Phe Gly Ile Gly Asn Ala Ala Gly Leu
                405                 410                 415
ctc ttc gcc ggt atc atg ctg ggc ttc ctg cgc gcc aac cac ccg acc    1296
Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro Thr
            420                 425                 430
ttc ggc tat att ccg caa ggc gcg ctt aac atg gtc aaa gag ttt ggc    1344
Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Val Lys Glu Phe Gly
        435                 440                 445
ctg atg gtc ttt atg gcg ggc gta gga ctg agt gcc ggt agc acc atc    1392
Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Ser Thr Ile
    450                 455                 460
aac agt agc cta gga gaa gtc ggt atc cag atg ctg gct tca ggg ctg    1440
Asn Ser Ser Leu Gly Glu Val Gly Ile Gln Met Leu Ala Ser Gly Leu
465                 470                 475                 480
att gtc agt ctc gtg cca gtg gtg att tgt ttt ctg ttc ggc gcg tat    1488
Ile Val Ser Leu Val Pro Val Val Ile Cys Phe Leu Phe Gly Ala Tyr
                485                 490                 495
gtg ctg aaa atg aat cga gcg ctg ctg ttt ggt gcc atg atg ggc gct    1536
Val Leu Lys Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Met Met Gly Ala
            500                 505                 510
cgg acc tgc gcg cca gcc atg gag atc atc agc gat acc gct cgc agt    1584
Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg Ser
        515                 520                 525
aat att cct gct ctc ggc tat gcg ggt acc tac gcc atc gct aac gtt    1632
Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn Val
    530                 535                 540
ctg ctc aca tta gca ggt tca ctt atc gtg gtt atc tgg cct gaa ttg    1680
Leu Leu Thr Leu Ala Gly Ser Leu Ile Val Val Ile Trp Pro Glu Leu
545                 550                 555                 560
ccc ggc tga                                                        1689
Pro Gly
<210>29
<211>562
<212>PRT
<213>胡萝卜软腐欧文氏菌
<400>29
Met Asn Ile Asn Val Ala Asp Leu Leu Asn Gly Asn Tyr Ile Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Val Val Leu Ser Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg Leu
            20                  25                  30
Gly Pro Val Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser Leu
        35                  40                  45
Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ser Ile Asn Thr Glu Ala Leu Ser Leu
    50                  55                  60
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Val Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Phe Met Leu Ala
                85                  90                  95
Leu Val Met Val Gly Ser Ala Met Leu Leu Ala Leu Gly Leu Gly Lys
            100                 105                 110
Leu Phe Gly Trp Gly Ile Gly Leu Thr Ala Gly Met Leu Ala Gly Ser
        115                 120                 125
Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg Asn
    130                 135                 140
Thr Ala Ser Leu Gly Gly Gln Leu Gly Val Glu Gln Asp His Leu Ser
145                 150                 155                 160
Leu Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Val Gly Leu Val Ser Leu Ile Phe
                165                 170                 175
Gly Ala Arg Tyr Leu Pro Lys Leu Gln His Gln Asp Leu Pro Thr Ser
            180                 185                 190
Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Val Asp Ser Gln Arg
        195                 200                 205
Lys Val Tyr Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu Leu
    210                 215                 220
Val Asp Trp Ala Ala Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr Arg
225                 230                 235                 240
Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu Ala
                245                 250                 255
Asn Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Ile Gly Asp Glu Ile Ala Leu
            260                 265                 270
Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ser Arg Leu Asn Ser Asn Phe Arg Asp
        275                 280                 285
Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asn Leu Leu Asp Met Arg Ile Val Thr
    290                 295                 300
Glu Glu Ile Val Val Lys Asn His Asn Ala Val Gly Lys Arg Leu Ser
305                 310                 315                 320
Gln Leu Lys Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Ile Val Arg
                325                 330                 335
Ser Gln Ile Glu Met Pro Leu Asp Asp Asn Val Val Leu Asn Lys Gly
            340                 345                 350
Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Asp Ala Arg Arg Val Lys Ser Ile Ala
        355                 360                 365
Glu Arg Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu
    370                 375                 380
Ala Phe Cys Ala Phe Phe Val Ile Gly Val Met Val Gly Leu Ile Thr
385                 390                 395                 400
Ile Gln Phe Ser Asn Phe Thr Phe Gly Ile Gly Asn Ala Ala Gly Leu
                405                 410                 415
Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro Thr
            420                 425                 430
Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Val Lys Glu Phe Gly
        435                 440                 445
Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Ser Thr Ile
    450                 455                 460
Asn Ser Ser Leu Gly Glu Val Gly Ile Gln Met Leu Ala Ser Gly Leu
465                 470                 475                 480
Ile Val Ser Leu Val Pro Val Val Ile Cys Phe Leu Phe Gly Ala Tyr
                485                 490                 495
Val Leu Lys Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Met Met Gly Ala
            500                 505                 510
Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg Ser
        515                 520                 525
Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn Val
    530                 535                 540
Leu Leu Thr Leu Ala Gly Ser Leu Ile Val Val Ile Trp Pro Glu Leu
545                 550                 555                 560
Pro Gly
<210>30
<211>1677
<212>DNA
<213>霍乱弧菌(Vibrio cholerae)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1677)
<400>30
gtg aac atc gac gtc gtt ttg ttg cta gag caa aat cca att ttg ctg     48
Val Asn Ile Asp Val Val Leu Leu Leu Glu Gln Asn Pro Ile Leu Leu
1               5                   10                  15
ata ttt gtt gtc ctc gcc atc ggt ctc tct ttc ggg aaa att cgc ttt     96
Ile Phe Val Val Leu Ala Ile Gly Leu Ser Phe Gly Lys Ile Arg Phe
            20                  25                  30
ggc agc ttc caa ttg ggt aat tcg att gga gtg ctc atc acc tct ctg    144
Gly Ser Phe Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Ile Thr Ser Leu
        35                  40                  45
atc atg ggg cat ctt ggt ttt tcc ttt aca ccg gaa gca tta acc atc    192
Ile Met Gly His Leu Gly Phe Ser Phe Thr Pro Glu Ala Leu Thr Ile
    50                  55                  60
ggc ttt atg ctc ttt att tat tgt gtc ggc att gaa gcg ggt cct aac    240
Gly Phe Met Leu Phe Ile Tyr Cys Val Gly Ile Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
ttc ttt ggt att ttc ttc cgc gat ggt aaa cac tac tta att cta agc    288
Phe Phe Gly Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys His Tyr Leu Ile Leu Ser
                85                  90                  95
tta gtg gtc ttg atc act gcg act tgg att gcc tac ttt ggt ggt tac    336
Leu Val Val Leu Ile Thr Ala Thr Trp Ile Ala Tyr Phe Gly Gly Tyr
            100                 105                 110
tat ctt aat ctg gat tat ggc tta gcc gcc ggg atg atg gcg ggc gca    384
Tyr Leu Asn Leu Asp Tyr Gly Leu Ala Ala Gly Met Met Ala Gly Ala
        115                 120                 125
tta acc tca aca ccc gta ctg gtt ggt gct cag gat gcg ctc aat tct    432
Leu Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gln Asp Ala Leu Asn Ser
    130                 135                 140
ggg ctt gcc gcg gta cca aga cat atg gat tta tca ctg att tta gat    480
Gly Leu Ala Ala Val Pro Arg His Met Asp Leu Ser Leu Ile Leu Asp
145                 150                 155                 160
aat gtc tcg gtc ggt tat gcg atg gcc tac ttg atc ggc ctt atc agc    528
Asn Val Ser Val Gly Tyr Ala Met Ala Tyr Leu Ile Gly Leu Ile Ser
                165                 170                 175
atg atc atg ttt gct aaa tta ctc cct aag ttg caa aag caa aac ctg    576
Met Ile Met Phe Ala Lys Leu Leu Pro Lys Leu Gln Lys Gln Asn Leu
            180                 185                 190
tcc gat tcg gct caa caa atc gcg caa gaa cga ggg tta ggc agt cag    624
Ser Asp Ser Ala Gln Gln Ile Ala Gln Glu Arg Gly Leu Gly Ser Gln
        195                 200                 205
cgt aaa gtc tat ctg ccg atc atc cgt gcc tat cga gtc gga cct gaa    672
Arg Lys Val Tyr Leu Pro Ile Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu
    210                 215                 220
ctg att aac tgg atc gac ggt cgt aat ctg cgc gag ctg ggt atc tac    720
Leu Ile Asn Trp Ile Asp Gly Arg Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr
225                 230                 235                 240
cgt caa aca ggc tgt tat att gag cgt atc cgc cga cat ggc att ttg    768
Arg Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg His Gly Ile Leu
                245                 250                 255
gcc cat cct gat ggt gat gcc att ttg caa gaa ggg gat gaa att gct    816
Ala His Pro Asp Gly Asp Ala Ile Leu Gln Glu Gly Asp Glu Ile Ala
            260                 265                 270
ctc gta ggt ttc cca gat agt cac gct cgt ctt gac ccg agc ttt cgc    864
Leu Val Gly Phe Pro Asp Ser His Ala Arg Leu Asp Pro Ser Phe Arg
        275                 280                 285
aat ggc aaa gaa gtg ttt gac cgt aac tta ctc gac cta cga att tca    912
Asn Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asn Leu Leu Asp Leu Arg Ile Ser
    290                 295                 300
gaa gaa gag atc gtg gta aaa agt gac agc att gcg gga aaa cgt ctc    960
Glu Glu Glu Ile Val Val Lys Ser Asp Ser Ile Ala Gly Lys Arg Leu
305                 310                 315                 320
tcc gat ctt aat ctt tcg gaa tac ggc tgc ttc ctt aac cga gtc gtt   1008
Ser Asp Leu Asn Leu Ser Glu Tyr Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Val
                325                 330                 335
cgt gcg caa atc gaa atg ccg atg gat ctg gat atc gtg ctc gcc aaa   1056
Arg Ala Gln Ile Glu Met Pro Met Asp Leu Asp Ile Val Leu Ala Lys
            340                 345                 350
ggc gat gtc ctg caa gtc agc ggc gag aaa agc aaa gta aag ggg ctg   1104
Gly Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Glu Lys Ser Lys Val Lys Gly Leu
        355                 360                 365
gca gat aaa atc ggt ttt atc tct gta cac agc caa atg gct gat ctg   1152
Ala Asp Lys Ile Gly Phe Ile Ser Val His Ser Gln Met Ala Asp Leu
    370                 375                 380
ctt gct ttc tgt agc ttt ttt att ctt ggc att ctg ttt ggt ttg gtc   1200
Leu Ala Phe Cys Ser Phe Phe Ile Leu Gly Ile Leu Phe Gly Leu Val
385                 390                 395                 400
acc atg acc ttt ggc caa gtg tcg ttt agc tta ggt aat gcg gtg ggg   1248
Thr Met Thr Phe Gly Gln Val Ser Phe Ser Leu Gly Asn Ala Val Gly
                405                 410                 415
tta ctg ctc tct ggt atc act ttg ggc ttt ttg cga gcc aac cac ccg   1296
Leu Leu Leu Ser Gly Ile Thr Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro
            420                 425                 430
act ttc ggt tat gtt ccg caa ggc gca ctc aat atg gtc aaa gac ctt   1344
Thr Phe Gly Tyr Val Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Val Lys Asp Leu
        435                 440                 445
ggt cta gcc atc ttc atg gtc ggt att ggg ctc aat gca ggt agc aaa   1392
Gly Leu Ala Ile Phe Met Val Gly Ile Gly Leu Asn Ala Gly Ser Lys
    450                 455                 460
atg ttc cag cat ctc tcc gaa gta ggt gtg caa gtg atc ggt tta gcc   1440
Met Phe Gln His Leu Ser Glu Val Gly Val Gln Val Ile Gly Leu Ala
465                 470                 475                 480
ttt tta gtg agc gtt gta cct gtc gtg ttc gct tac ttg gtt ggc gcc    1488
Phe Leu Val Ser Val Val Pro Val Val Phe Ala Tyr Leu Val Gly Ala
                485                 490                 495
tac att cta aag atg aac cgc gct cta ttg ttt ggt gcg att att ggc    1536
Tyr Ile Leu Lys Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Ile Ile Gly
            500                 505                 510
gcg cgc acc tgt gct ccg gcg atg gat gtg gtt aat gaa tac gct aag    1584
Ala Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Asp Val Val Asn Glu Tyr Ala Lys
        515                 520                 525
tct acc att cca gca ctg ggt tat gcg ggc acc tac gcg att gcc aat    1632
Ser Thr Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn
    530                 535                 540
atc tta atg acc tta acg ggt acc atc ttt atc ttg ctc agt taa        1677
Ile Leu Met Thr Leu Thr Gly Thr Ile Phe Ile Leu Leu Ser
545                 550                 555
<210>31
<211>558
<212>PRT
<213>霍乱弧菌
<400>31
Val Asn Ile Asp Val Val Leu Leu Leu Glu Gln Asn Pro Ile Leu Leu
1                5                   10                  15
Ile Phe Val Val Leu Ala Ile Gly Leu Ser Phe Gly Lys Ile Arg Phe
            20                  25                  30
Gly Ser Phe Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Ile Thr Ser Leu
        35                  40                  45
Ile Met Gly His Leu Gly Phe Ser Phe Thr Pro Glu Ala Leu Thr Ile
    50                  55                  60
Gly Phe Met Leu Phe Ile Tyr Cys Val Gly Ile Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
Phe Phe Gly Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys His Tyr Leu Ile Leu Ser
                85                  90                  95
Leu Val Val Leu Ile Thr Ala Thr Trp Ile Ala Tyr Phe Gly Gly Tyr
            100                 105                 110
Tyr Leu Asn Leu Asp Tyr Gly Leu Ala Ala Gly Met Met Ala Gly Ala
        115                 120                 125
Leu Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gln Asp Ala Leu Asn Ser
    130                 135                 140
Gly Leu Ala Ala Val Pro Arg His Met Asp Leu Ser Leu Ile Leu Asp
145                 150                 155                 160
Asn Val Ser Val Gly Tyr Ala Met Ala Tyr Leu Ile Gly Leu Ile Ser
                165                 170                 175
Met Ile Met Phe Ala Lys Leu Leu Pro Lys Leu Gln Lys Gln Asn Leu
            180                 185                 190
Ser Asp Ser Ala Gln Gln Ile Ala Gln Glu Arg Gly Leu Gly Ser Gln
        195                 200                 205
Arg Lys Val Tyr Leu Pro Ile Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu
    210                 215                 220
Leu Ile Asn Trp Ile Asp Gly Arg Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr
225                 230                 235                 240
Arg Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg His Gly Ile Leu
                245                 250                 255
Ala His Pro Asp Gly Asp Ala Ile Leu Gln Glu Gly Asp Glu Ile Ala
            260                 265                 270
Leu Val Gly Phe Pro Asp Ser His Ala Arg Leu Asp Pro Ser Phe Arg
        275                 280                 285
Asn Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asn Leu Leu Asp Leu Arg Ile Ser
    290                 295                 300
Glu Glu Glu Ile Val Val Lys Ser Asp Ser Ile Ala Gly Lys Arg Leu
305                 310                 315                 320
Ser Asp Leu Asn Leu Ser Glu Tyr Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Val
                325                 330                 335
Arg Ala Gln Ile Glu Met Pro Met Asp Leu Asp Ile Val Leu Ala Lys
            340                 345                 350
Gly Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Glu Lys Ser Lys Val Lys Gly Leu
        355                 360                 365
Ala Asp Lys Ile Gly Phe Ile Ser Val His Ser Gln Met Ala Asp Leu
    370                 375                 380
Leu Ala Phe Cys Ser Phe Phe Ile Leu Gly Ile Leu Phe Gly Leu Val
385                 390                 395                 400
Thr Met Thr Phe Gly Gln Val Ser Phe Ser Leu Gly Asn Ala Val Gly
                405                 410                 415
Leu Leu Leu Ser Gly Ile Thr Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro
            420                 425                 430
Thr Phe Gly Tyr Val Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Val Lys Asp Leu
        435                 440                 445
Gly Leu Ala Ile Phe Met Val Gly Ile Gly Leu Asn Ala Gly Ser Lys
    450                 455                 460
Met Phe Gln His Leu Ser Glu Val Gly Val Gln Val Ile Gly Leu Ala
465                 470                 475                 480
Phe Leu Val Ser Val Val Pro Val Val Phe Ala Tyr Leu Val Gly Ala
                485                 490                 495
Tyr Ile Leu Lys Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala Ile Ile Gly
            500                 505                 510
Ala Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Asp Val Val Asn Glu Tyr Ala Lys
        515                 520                 525
Ser Thr Ile Pre Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn
    530                 535                 540
Ile Leu Met Thr Leu Thr Gly Thr Ile Phe Ile Leu Leu Ser
545                 550                 555
<210>32
<211>1686
<212>DNA
<213>嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1686)
<400>32
atg acc ata gat ttt gtg aca ctg cta cat caa agc gac tcc ctg ctg     48
Met Thr Ile Asp Phe Val Thr Leu Leu His Gln Ser Asp Ser Leu Leu
1               5                   10                  15
ctg ttc gtg gta ctg gcc ttc ggc ctg ctg ctc ggt aaa gtc agg ttc     96
Leu Phe Val Val Leu Ala Phe Gly Leu Leu Leu Gly Lys Val Arg Phe
            20                  25                  30
ggc aac ttc cag atc ggc aac acc atc ggc gtg ctg ttt acc gcc ctg    144
Gly Asn Phe Gln Ile Gly Asn Thr Ile Gly Val Leu Phe Thr Ala Leu
        35                  40                  45
ctg ttc ggc cag atg ggc ttc gaa ttc acc gcc acc acg gag aac gtc    192
Leu Phe Gly Gln Met Gly Phe Glu Phe Thr Ala Thr Thr Glu Asn Val
    50                  55                  60
ggc ttc atg ctg ttc atc ttc tgc gtg ggg ata gaa gcg ggg ccg cac    240
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Ile Glu Ala Gly Pro His
65                  70                  75                  80
ttc ttc agc gtc ttc ctg cgt gac ggc atc cac tac atc acc ctc acc    288
Phe Phe Ser Val Phe Leu Arg Asp Gly Ile His Tyr Ile Thr Leu Thr
                85                  90                  95
ctg gtg atc ctg ctg acc gcc ctc ttc ctc acc gtg ggg ctc gcc aag    336
Leu Val Ile Leu Leu Thr Ala Leu Phe Leu Thr Val Gly Leu Ala Lys
            100                 105                 110
ttc ttc aac ctg ggg ccg ggc atg gcg gcc ggc atc ctg gcc ggc tcg    384
Phe Phe Asn Leu Gly Pro Gly Met Ala Ala Gly Ile Leu Ala Gly Ser
        115                 120                 125
ctc acc tcg acc ccg gcg ctg gtg ggt gcg cag gat gcc ctg cgc agc    432
Leu Thr Ser Thr Pro Ala Leu Val Gly Ala Gln Asp Ala Leu Arg Ser
    130                 135                 140
ggc ctg ctc aac ctg ccc cat cag acc gac atg cag tcg gtg ctc gac    480
Gly Leu Leu Asn Leu Pro His Gln Thr Asp Met Gln Ser Val Leu Asp
145                 150                 155                 160
aac atg ggc atc ggc tat gcg ttg acc tat ctg gtg ggg ctg gtc ggc    528
Asn Met Gly Ile Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Val Gly Leu Val Gly
                165                 170                 175
ctg atg ctg gtg gtg cgc tac ctg cct tcg ctg gca cgg ctc gac ctc    576
Leu Met Leu Val Val Arg Tyr Leu Pro Ser Leu Ala Arg Leu Asp Leu
            180                 185                 190
aac acc gag gcg cag aag atc gcc cgt gag cgc ggc ctc tcc gac aac    624
Asn Thr Glu Ala Gln Lys Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Ser Asp Asn
        195                 200                 205
gag agc cgc aag acc tac ctg ccc atc atc cgt gcc tac cgg gtt ggt     672
Glu Ser Arg Lys Thr Tyr Leu Pro Ile Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly
    210                 215                 220
ccc gag ctc gcc gcc tgg atc ggc ggc cgc acc ctg cgc gag acc ggc     720
Pro Glu Leu Ala Ala Trp Ile Gly Gly Arg Thr Leu Arg Glu Thr Gly
225                 230                 235                 240
atc tac ccc cac acc ggc tgc tac gtg gag cgg atc cgc cgc aac ggc     768
Ile Tyr Pro His Thr Gly Cys Tyr Val Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly
                245                 250                 255
atc ctg gcg agc ccg gat ggc gac gcc gtc atc cag gaa ggg gac gag     816
Ile Leu Ala Ser Pro Asp Gly Asp Ala Val Ile Gln Glu Gly Asp Glu
            260                 265                 270
atc gcc ctg gtg ggt tac ccc gag agc cac gag aag ctc gac gtc aac     864
Ile Ala Leu Val Gly Tyr Pro Glu Ser His Glu Lys Leu Asp Val Asn
        275                 280                 285
tac cgc aac ggc aag gag gtg ttc gac cgc aac ctg ctt gac ctg cag     912
Tyr Arg Asn Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asn Leu Leu Asp Leu Gln
    290                 295                 300
atc gtc acc gaa gag ata gtg gtg aaa aac gat gcg gtg gtg ggt cgc     960
Ile Val Thr Glu Glu Ile Val Val Lys Asn Asp Ala Val Val Gly Arg
305                 310                 315                 320
cat ctg gtg gag ctc aac ctc acc gag aag ggc tgc ttc ctc aac cgg    1008
His Leu Val Glu Leu Asn Leu Thr Glu Lys Gly Cys Phe Leu Asn Arg
                325                 330                 335
gtg gtg cgc tcc cag atc gag atg ccg ttc gat cgc aac atc atg ctg    1056
Val Val Arg Ser Gln Ile Glu Met Pro Phe Asp Arg Asn Ile Met Leu
            340                 345                 350
caa aag ggc gac gtg ctg cag atc agc ggc gag aag cag cgg gtc aag    1104
Gln Lys Gly Asp Val Leu Gln Ile Ser Gly Glu Lys Gln Arg Val Lys
        355                 360                 365
ctg ctg gcc aac aag att ggc ttc atc agc atc cac agc cag acc acg    1152
Leu Leu Ala Asn Lys Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Thr Thr
    370                 375                 380
gat ctg gtg gcc ttc acc acc ttc ttc gtg ctg ggg ctg ctg ata ggc    1200
Asp Leu Val Ala Phe Thr Thr Phe Phe Val Leu Gly Leu Leu Ile Gly
385                 390                 395                 400
tcc gtc tcc ctg gtg ttc ggc cag ctc gag ttt ggg ctg ggc aac gcc    1248
Ser Val Ser Leu Val Phe Gly Gln Leu Glu Phe Gly Leu Gly Asn Ala
                405                 410                 415
gtc ggc ctg ctg ctg gcg ggg atc ctg atg ggc tac ctg cgc gcc aac    1296
Val Gly Leu Leu Leu Ala Gly Ile Leu Met Gly Tyr Leu Arg Ala Asn
            420                 425                 430
cac ccc acc gtc ggc tac gtg ccg ccg ggc gcc ctg cgt ctg gcc aag    1344
His Pro Thr Val Gly Tyr Val Pro Pro Gly Ala Leu Arg Leu Ala Lys
        435                 440                 445
gat ctc ggt ctg gcg gtg ttc atg gtg agc acc ggc ctc aaa gct ggc    1392
Asp Leu Gly Leu Ala Val Phe Met Val Ser Thr Gly Leu Lys Ala Gly
    450                 455                 460
ggc ggc att ctg gac cac ctg agc cag gtc ggt gcc gtg gtg ctc ttt    1440
Gly Gly Ile Leu Asp His Leu Ser Gln Val Gly Ala Val Val Leu Phe
465                 470                 475                 480
tcc ggc atg ctg gtg acc acc ctg ccg gtg ctg gtg ggc tac ctg ttc    1488
Ser Gly Met Leu Val Thr Thr Leu Pro Val Leu Val Gly Tyr Leu Phe
                485                 490                 495
gga gtc tgg gtg ctg aag atg aac ccg gcc ctg ctg ctc ggc gcc atc    1536
Gly Val Trp Val Leu Lys Met Asn Pro Ala Leu Leu Leu Gly Ala Ile
            500                 505                 510
acg ggg gcc cgc acc tgc gcc ccg gcc atg gac gtg gtg aac gag gcg    1584
Thr Gly Ala Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Asp Val Val Asn Glu Ala
        515                 520                 525
gcc aac agc tcc atc ccg gcg ctc ggc tat gcc ggc acc tat gcg gtg    1632
Ala Asn Ser Ser Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Val
    530                 535                 540
gcc aac gtc atg ctg acc ttg gcg ggc tcc ttc atc atc ggc ttc tgg    1680
Ala Asn Val Met Leu Thr Leu Ala Gly Ser Phe Ile Ile Gly Phe Trp
545                 550                 555                 560
ttc tag                                                            1686
Phe
<210>33
<211>561
<212>PRT
<213>嗜水气单胞菌
<400>33
Met Thr Ile Asp Phe Val Thr Leu Leu His Gln Ser Asp Ser Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Val Val Leu Ala Phe Gly Leu Leu Leu Gly Lys Val Arg Phe
            20                  25                  30
Gly Asn Phe Gln Ile Gly Asn Thr Ile Gly Val Leu Phe Thr Ala Leu
        35                  40                  45
Leu Phe Gly Gln Met Gly Phe Glu Phe Thr Ala Thr Thr Glu Asn Val
    50                  55                  60
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Ile Glu Ala Gly Pro His
65                  70                  75                  80
Phe Phe Ser Val Phe Leu Arg Asp Gly Ile His Tyr Ile Thr Leu Thr
                85                  90                  95
Leu Val Ile Leu Leu Thr Ala Leu Phe Leu Thr Val Gly Leu Ala Lys
            100                 105                 110
Phe Phe Asn Leu Gly Pro Gly Met Ala Ala Gly Ile Leu Ala Gly Ser
        115                 120                 125
Leu Thr Ser Thr Pro Ala Leu Val Gly Ala Gln Asp Ala Leu Arg Ser
    130                 135                 140
Gly Leu Leu Asn Leu Pro His Gln Thr Asp Met Gln Ser Val Leu Asp
145                 150                 155                 160
Asn Met Gly Ile Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Val Gly Leu Val Gly
                165                 170                 175
Leu Met Leu Val Val Arg Tyr Leu Pro Ser Leu Ala Arg Leu Asp Leu
            180                 185                 190
Asn Thr Glu Ala Gln Lys Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Ser Asp Asn
        195                 200                 205
Glu Ser Arg Lys Thr Tyr Leu Pro Ile Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly
    210                 215                 220
Pro Glu Leu Ala Ala Trp Ile Gly Gly Arg Thr Leu Arg Glu Thr Gly
225                 230                 235                 240
Ile Tyr Pro His Thr Gly Cys Tyr Val Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly
                245                 250                 255
Ile Leu Ala Ser Pro Asp Gly Asp Ala Val Ile Gln Glu Gly Asp Glu
            260                 265                 270
Ile Ala Leu Val Gly Tyr Pro Glu Ser His Glu Lys Leu Asp Val Asn
        275                 280                 285
Tyr Arg Asn Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asn Leu Leu Asp Leu Gln
    290                 295                 300
Ile Val Thr Glu Glu Ile Val Val Lys Asn Asp Ala Val Val Gly Arg
305                 310                 315                 320
His Leu Val Glu Leu Asn Leu Thr Glu Lys Gly Cys Phe Leu Asn Arg
                325                 330                 335
Val Val Arg Ser Gln Ile Glu Met Pro Phe Asp Arg Asn Ile Met Leu
            340                 345                 350
Gln Lys Gly Asp Val Leu Gln Ile Ser Gly Glu Lys Gln Arg Val Lys
        355                 360                 365
Leu Leu Ala Asn Lys Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Thr Thr
    370                 375                 380
Asp Leu Val Ala Phe Thr Thr Phe Phe Val Leu Gly Leu Leu Ile Gly
385                 390                 395                 400
Ser Val Ser Leu Val Phe Gly Gln Leu Glu Phe Gly Leu Gly Asn Ala
                405                 410                 415
Val Gly Leu Leu Leu Ala Gly Ile Leu Met Gly Tyr Leu Arg Ala Asn
            420                 425                 430
His Pro Thr Val Gly Tyr Val Pro Pro Gly Ala Leu Arg Leu Ala Lys
        435                 440                 445
Asp Leu Gly Leu Ala Val Phe Met Val Ser Thr Gly Leu Lys Ala Gly
    450                 455                 460
Gly Gly Ile Leu Asp His Leu Ser Gln Val Gly Ala Val Val Leu Phe
465                 470                 475                 480
Ser Gly Met Leu Val Thr Thr Leu Pro Val Leu Val Gly Tyr Leu Phe
                485                 490                 495
Gly Val Trp Val Leu Lys Met Asn Pro Ala Leu Leu Leu Gly Ala Ile
            500                 505                 510
Thr Gly Ala Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Asp Val Val Asn Glu Ala
        515                 520                 525
Ala Asn Ser Ser Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Val
    530                 535                 540
Ala Asn Val Met Leu Thr Leu Ala Gly Ser Phe Ile Ile Gly Phe Trp
545                 550                 555                 560
Phe
<210>34
<211>1638
<212>DNA
<213>深海发光杆菌(Photobacterium profundum)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1638)
<400>34
ttg ctt ttt gtt gtt ctc gct gtt ggt cta agt ttt ggt aaa att cgt     48
Leu Leu Phe Val Val Leu Ala Val Gly Leu Ser Phe Gly Lys Ile Arg
1               5                   10                  15
ttt gct aag atg caa gta ggc aat tct att ggt gtt tta ctg act gcc     96
Phe Ala Lys Met Gln Val Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Leu Thr Ala
            20                  25                  30
ata ctg ttc ggt aat gcc ggg ttt acc ttt aat act gaa gca tta aat    144
Ile Leu Phe Gly Asn Ala Gly Phe Thr Phe Asn Thr Glu Ala Leu Asn
        35                  40                  45
att ggc ttt atg ctg ttt att ttt tgt gtg ggt ata gag gct ggc ccc    192
Ile Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Ile Glu Ala Gly Pro
    50                  55                  60
aac ttt ttt ggt att ttc ttc cga gat ggt aaa cat tac ctt tta ctc    240
Asn Phe Phe Gly Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys His Tyr Leu Leu Leu
65                  70                  75                  80
gcc ctt gtt gtg ctg ctt tcc gcc ata gct atc act tta gcc atg act    288
Ala Leu Val Val Leu Leu Ser Ala Ile Ala Ile Thr Leu Ala Met Thr
                85                  90                  95
cat tat ctt ggg ctt gat ata ggt tta gcg aca ggc tta atg gct ggt    336
His Tyr Leu Gly Leu Asp Ile Gly Leu Ala Thr Gly Leu Met Ala Gly
            100                 105                 110
tca ttg aca gca aca cct gtt ctt gta ggt gca aaa gac gca ttg aat    384
Ser Leu Thr Ala Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Lys Asp Ala Leu Asn
        115                 120                 125
tcc gga tta tct ggc att agc gat cct gat atc att aaa caa acc att    432
Ser Gly Leu Ser Gly Ile Ser Asp Pro Asp Ile Ile Lys Gln Thr Ile
    130                 135                 140
gat agc cta agc gtt ggc tat gct atg tct tat tta atg ggc tta atc    480
Asp Ser Leu Ser Val Gly Tyr Ala Met Ser Tyr Leu Met Gly Leu Ile
145                 150                 155                 160
agt ctt att ttt ctc gct aaa cta atg cct aaa tta cag aaa caa gac    528
Ser Leu Ile Phe Leu Ala Lys Leu Met Pro Lys Leu Gln Lys Gln Asp
                165                 170                 175
ctg gct gaa tcg tcg caa caa att gcc cgt gaa cgc ggt att ggt gaa    576
Leu Ala Glu Ser Ser Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Ile Gly Glu
            180                 185                 190
gtg ggg caa cgt aaa gta tat ttg cca atc att cgc gct tac cgt gtt    624
Val Gly Gln Arg Lys Val Tyr Leu Pro Ile Ile Arg Ala Tyr Arg Val
        195                 200                 205
ggc cct gag ctt att aac tgg att gat agt cgt aac tta cgt gag ttg    672
Gly Pro Glu Leu Ile Asn Trp Ile Asp Ser Arg Asn Leu Arg Glu Leu
    210                 215                 220
ggc atc tac cgc caa aca ggc tgc tac atc gaa cgt ata cgg cga aac    720
Gly Ile Tyr Arg Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn
225                 230                 235                 240
ggt ata tta gct aac cca gat ggt gat gct att tta caa gaa ggt gat    768
Gly Ile Leu Ala Asn Pro Asp Gly Asp Ala Ile Leu Gln Glu Gly Asp
                245                 250                 255
gag att gcc tta gtg ggt tac cca gac agc cat gca cgt ttg gat ccc    816
Glu Ile Ala Leu Val Gly Tyr Pro Asp Ser His Ala Arg Leu Asp Pro
            260                 265                 270
agc ttt cga aac ggc aaa gaa gtt ttc gac cgt gat ctt ctc gac ctt    864
Ser Phe Arg Asn Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Leu
        275                 280                 285
cgt att gtt gaa gaa gag att gta gtt aag aat gac aac atc tct ggc     912
Arg Ile Val Glu Glu Glu Ile Val Val Lys Asn Asp Asn Ile Ser Gly
    290                 295                 300
aaa cgc cta tct gag cta aat tta tca gaa tac ggt tgt ttc ttg aac     960
Lys Arg Leu Ser Glu Leu Asn Leu Ser Glu Tyr Gly Cys Phe Leu Asn
305                 310                 315                 320
cgt gtt gtt cgc gca caa ata gaa atg ccg atg gac cat aat att ctt    1008
Arg Val Val Arg Ala Gln Ile Glu Met Pro Met Asp His Asn Ile Leu
                325                 330                 335
ttg aat aaa ggg gat att ttg caa gtc agt gga gaa aaa agt cga gta    1056
Leu Asn Lys Gly Asp Ile Leu Gln Val Ser Gly Glu Lys Ser Arg Val
            340                 345                 350
ctt ggt ctt gct gaa cgt att ggt ttt atc tcg att cac agt caa att    1104
Leu Gly Leu Ala Glu Arg Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Ile
        355                 360                 365
gcc gat cta tta gca ttc tgc tgt ttt ttt atc atc ggg tta ctt atc    1152
Ala Asp Leu Leu Ala Phe Cys Cys Phe Phe Ile Ile Gly Leu Leu Ile
    370                 375                 380
ggt tcg att aca tta gca ttt ggt cac gtt gca ttt ggt tta ggt agt    1200
Gly Ser Ile Thr Leu Ala Phe Gly His Val Ala Phe Gly Leu Gly Ser
385                 390                 395                 400
gct gca ggg ctt ctg att gcc ggt att aca tta gga ttc cta cgt gct    1248
Ala Ala Gly Leu Leu Ile Ala Gly Ile Thr Leu Gly Phe Leu Arg Ala
                405                 410                 415
aac cac cct act ttt ggc tat gta ccc caa ggt gcg ctt aat atg gcg    1296
Asn His Pro Thr Phe Gly Tyr Val Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Ala
            420                 425                 430
aaa gat ctt ggc tta atg gtc ttc atg gta gga att ggt ttg agt gcg    1344
Lys Asp Leu Gly Leu Met Val Phe Met Val Gly Ile Gly Leu Ser Ala
        435                 440                 445
ggt tct aat tta ttc gat tca ttt gca cat att ggc cct atg gtc tta    1392
Gly Ser Asn Leu Phe Asp Ser Phe Ala His Ile Gly Pro Met Val Leu
    450                 455                 460
gtc acc agc tta atg gtg agt gtg atc cct gtt gta ttg gca tac ctg    1440
Val Thr Ser Leu Met Val Ser Val Ile Pro Val Val Leu Ala Tyr Leu
465                 470                 475                 480
ttt ggt gct tac gta ctg aag atg aac cgt gca ctt tta ttt ggt gcc    1488
Phe Gly Ala Tyr Val Leu Lys Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala
                485                 490                 495
atc att ggt gct cga act tgt gca cct gcg atg gat atg atc aat gaa    1536
Ile Ile Gly Ala Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Asp Met Ile Asn Glu
            500                 505                 510
cat gct cga agc aca att cca gct tta ggc tat gct ggt act tat gcc    1584
His Ala Arg Ser Thr Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala
        515                 520                 525
att gcc aac gta ctg tta acg att gcc ggt acg tta atc atc atc atg    1632
Ile Ala Asn Val Leu Leu Thr Ile Ala Gly Thr Leu Ile Ile Ile Met
    530                 535                 540
aat taa                                                            1638
Asn
545
<210>35
<211>545
<212>PRT
<213>深海发光杆菌
<400>35
Leu Leu Phe Val Val Leu Ala Val Gly Leu Ser Phe Gly Lys Ile Arg
1               5                   10                  15
Phe Ala Lys Met Gln Val Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Leu Thr Ala
            20                  25                  30
Ile Leu Phe Gly Asn Ala Gly Phe Thr Phe Asn Thr Glu Ala Leu Asn
        35                  40                  45
Ile Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Ile Glu Ala Gly Pro
    50                  55                  60
Asn Phe Phe Gly Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys His Tyr Leu Leu Leu
65                  70                  75                  80
Ala Leu Val Val Leu Leu Ser Ala Ile Ala Ile Thr Leu Ala Met Thr
                85                  90                  95
His Tyr Leu Gly Leu Asp Ile Gly Leu Ala Thr Gly Leu Met Ala Gly
            100                 105                 110
Ser Leu Thr Ala Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Lys Asp Ala Leu Asn
        115                 120                 125
Ser Gly Leu Ser Gly Ile Ser Asp Pro Asp Ile Ile Lys Gln Thr Ile
    130                 135                 140
Asp Ser Leu Ser Val Gly Tyr Ala Met Ser Tyr Leu Met Gly Leu Ile
145                 150                 155                 160
Ser Leu Ile Phe Leu Ala Lys Leu Met Pro Lys Leu Gln Lys Gln Asp
                165                 170                 175
Leu Ala Glu Ser Ser Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Ile Gly Glu
            180                 185                 190
Val Gly Gln Arg Lys Val Tyr Leu Pro Ile Ile Arg Ala Tyr Arg Val
        195                 200                 205
Gly Pro Glu Leu Ile Asn Trp Ile Asp Ser Arg Asn Leu Arg Glu Leu
    210                 215                 220
Gly Ile Tyr Arg Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn
225                 230                 235                 240
Gly Ile Leu Ala Asn Pro Asp Gly Asp Ala Ile Leu Gln Glu Gly Asp
                245                 250                 255
Glu Ile Ala Leu Val Gly Tyr Pro Asp Ser His Ala Arg Leu Asp Pro
            260                 265                 270
Ser Phe Arg Asn Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Leu
        275                 280                 285
Arg Ile Val Glu Glu Glu Ile Val Val Lys Asn Asp Asn Ile Ser Gly
    290                 295                 300
Lys Arg Leu Ser Glu Leu Asn Leu Ser Glu Tyr Gly Cys Phe Leu Asn
305                 310                 315                 320
Arg Val Val Arg Ala Gln Ile Glu Met Pro Met Asp His Asn Ile Leu
                325                 330                 335
Leu Asn Lys Gly Asp Ile Leu Gln Val Ser Gly Glu Lys Ser Arg Val
            340                 345                 350
Leu Gly Leu Ala Glu Arg Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Ile
        355                 360                 365
Ala Asp Leu Leu Ala Phe Cys Cys Phe Phe Ile Ile Gly Leu Leu Ile
    370                 375                 380
Gly Ser Ile Thr Leu Ala Phe Gly His Val Ala Phe Gly Leu Gly Ser
385                 390                 395                 400
Ala Ala Gly Leu Leu Ile Ala Gly Ile Thr Leu Gly Phe Leu Arg Ala
                405                 410                 415
Asn His Pro Thr Phe Gly Tyr Val Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Ala
            420                 425                 430
Lys Asp Leu Gly Leu Met Val Phe Met Val Gly Ile Gly Leu Ser Ala
        435                 440                 445
Gly Ser Asn Leu Phe Asp Ser Phe Ala Hi sIle Gly Pro Met Val Leu
    450                 455                 460
Val Thr Ser Leu Met Val Ser Val Ile Pro Val Val Leu Ala Tyr Leu
465                 470                 475                 480
Phe Gly Ala Tyr Val Leu Lys Met Asn Arg Ala Leu Leu Phe Gly Ala
                485                 490                 495
Ile Ile Gly Ala Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Asp Met Ile Asn Glu
            500                 505                 510
His Ala Arg Ser Thr Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala
        515                 520                 525
Ile Ala Asn Val Leu Leu Thr Ile Ala Gly Thr Leu Ile Ile Ile Met
    530                 535                 540
Asn
545
<210>36
<211>990
<212>DNA
<213>大肠杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(990)
<400>36
atg aaa ctc gcc gtt tat agc aca aaa cag tac gac aag aag tac ctg    48
Met Lys Leu Ala Val Tyr Ser Thr Lys Gln Tyr Asp Lys Lys Tyr Leu
1               5                   10                  15
caa cag gtg aac gag tcc ttt ggc ttt gag ctg gaa ttt ttt gac ttt     96
Gln Gln Val Asn Glu Ser Phe Gly Phe Glu Leu Glu Phe Phe Asp Phe
            20                  25                  30
ctg ctg acg gaa aaa acc gct aaa act gcc aat ggc tgc gaa gcg gta    144
Leu Leu Thr Glu Lys Thr Ala Lys Thr Ala Asn Gly Cys Glu Ala Val
        35                  40                  45
tgt att ttc gta aac gat gac ggc agc cgc ccg gtg ctg gaa gag ctg    192
Cys Ile Phe Val Asn Asp Asp Gly Ser Arg Pro Val Leu Glu Glu Leu
    50                  55                  60
aaa aag cac ggc gtt aaa tat atc gcc ctg cgc tgt gcc ggt ttc aat    240
Lys Lys His Gly Val Lys Tyr Ile Ala Leu Arg Cys Ala Gly Phe Asn
65                  70                  75                  80
aac gtc gac ctt gac gcg gca aaa gaa ctg ggg ctg aaa gta gtc cgt    288
Asn Val Asp Leu Asp Ala Ala Lys Glu Leu Gly Leu Lys Val Val Arg
                85                  90                  95
gtt cca gcc tat gat cca gag gcc gtt gct gaa cac gcc atc ggt atg    336
Val Pro Ala Tyr Asp Pro Glu Ala Val Ala Glu His Ala Ile Gly Met
            100                 105                 110
atg atg acg ctg aac cgc cgt att cac cgc gcg tat cag cgt acc cgt    384
Met Met Thr Leu Asn Arg Arg Ile His Arg Ala Tyr Gln Arg Thr Arg
        115                 120                 125
gat gct aac ttc tct ctg gaa ggt ctg acc ggc ttt act atg tat ggc    432
Asp Ala Asn Phe Ser Leu Glu Gly Leu Thr Gly Phe Thr Met Tyr Gly
    130                 135                 140
aaa acg gca ggc gtt atc ggt acc ggt aaa atc ggt gtg gcg atg ctg    480
Lys Thr Ala Gly Val Ile Gly Thr Gly Lys Ile Gly Val Ala Met Leu
145                 150                 155                 160
cgc att ctg aaa ggt ttt ggt atg cgt ctg ctg gcg ttc gat ccg tat    528
Arg Ile Leu Lys Gly Phe Gly Met Arg Leu Leu Ala Phe Asp Pro Tyr
                165                 170                 175
cca agt gca gcg gcg ctg gaa ctc ggt gtg gag tat gtc gat ctg cca    576
Pro Ser Ala Ala Ala Leu Glu Leu Gly Val Glu Tyr Val Asp Leu Pro
            180                 185                 190
acc ctg ttc tct gaa tca gac gtt atc tct ctg cac tgc ccg ctg aca    624
Thr Leu Phe Ser Glu Ser Asp Val Ile Ser Leu His Cys Pro Leu Thr
        195                 200                 205
ccg gaa aac tat cat ctg ttg aac gaa gcc gcc ttc gaa cag atg aaa    672
Pro Glu Asn Tyr His Leu Leu Asn Glu Ala Ala Phe Glu Gln Met Lys
    210                 215                 220
aat ggc gtg atg atc gtc aat acc agt cgc ggt gca ttg att gat tct    720
Asn Gly Val Met Ile Val Asn Thr Ser Arg Gly Ala Leu Ile Asp Ser
225                 230                 235                 240
cag gca gca att gaa gcg ctg aaa aat cag aaa att ggt tcg ttg ggt    768
Gln Ala Ala Ile Glu Ala Leu Lys Asn Gln Lys Ile Gly Ser Leu Gly
                245                 250                 255
atg gac gtg tat gag aac gaa cgc gat cta ttc ttt gaa gat aaa tcc    816
Met Asp Val Tyr Glu Asn Glu Arg Asp Leu Phe Phe Glu Asp Lys Ser
            260                 265                 270
aac gac gtg atc cag gat gac gta ttc cgt cgc ctg tct gcc tgc cac    864
Asn Asp Val Ile Gln Asp Asp Val Phe Arg Arg Leu Ser Ala Cys His
        275                 280                 285
aac gtg ctg ttt acc ggg cac cag gca ttc ctg aca gca gaa gct ctg    912
Asn Val Leu Phe Thr Gly His Gln Ala Phe Leu Thr Ala Glu Ala Leu
    290                 295                 300
acc agt att tct cag act acg ctg caa aac tta agc aat ctg gaa aaa    960
Thr Ser Ile Ser Gln Thr Thr Leu Gln Asn Leu Ser Asn Leu Glu Lys
305                 310                 315                 320
ggc gaa acc tgc ccg aac gaa ctg gtt taa                            990
Gly Glu Thr Cys Pro Asn Glu Leu Val
                325
<210>37
<211>329
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>37
Met Lys Leu Ala Val Tyr Ser Thr Lys Gln Tyr Asp Lys Lys Tyr Leu
1               5                   10                  15
Gln Gln Val Asn Glu Ser Phe Gly Phe Glu Leu Glu Phe Phe Asp Phe
            20                  25                  30
Leu Leu Thr Glu Lys Thr Ala Lys Thr Ala Asn Gly Cys Glu Ala Val
        35                  40                  45
Cys Ile Phe Val Asn Asp Asp Gly Ser Arg Pro Val Leu Glu Glu Leu
    50                  55                  60
Lys Lys His Gly Val Lys Tyr Ile Ala Leu Arg Cys Ala Gly Phe Asn
65                  70                  75                  80
Asn Val Asp Leu Asp Ala Ala Lys Glu Leu Gly Leu Lys Val Val Arg
                85                  90                  95
Val Pro Ala Tyr Asp Pro Glu Ala Val Ala Glu His Ala Ile Gly Met
            100                 105                 110
Met Met Thr Leu Asn Arg Arg Ile His Arg Ala Tyr Gln Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Asp Ala Asn Phe Ser Leu Glu Gly Leu Thr Gly Phe Thr Met Tyr Gly
    130                 135                 140
Lys Thr Ala Gly Val Ile Gly Thr Gly Lys Ile Gly Val Ala Met Leu
145                 150                 155                 160
Arg Ile Leu Lys Gly Phe Gly Met Arg Leu Leu Ala Phe Asp Pro Tyr
                165                 170                 175
Pro Ser Ala Ala Ala Leu Glu Leu Gly Val Glu Tyr Val Asp Leu Pro
            180                 185                 190
Thr Leu Phe Ser Glu Ser Asp Val Ile Ser Leu His Cys Pro Leu Thr
        195                 200                 205
Pro Glu Asn Tyr His Leu Leu Asn Glu Ala Ala Phe Glu Gln Met Lys
    210                 215                 220
Asn Gly Val Met Ile Val Asn Thr Ser Arg Gly Ala Leu Ile Asp Ser
225                 230                 235                 240
Gln Ala Ala Ile Glu Ala Leu Lys Asn Gln Lys Ile Gly Ser Leu Gly
                245                 250                 255
Met Asp Val Tyr Glu Asn Glu Arg Asp Leu Phe Phe Glu Asp Lys Ser
            260                 265                 270
Asn Asp Val Ile Gln Asp Asp Val Phe Arg Arg Leu Ser Ala Cys His
        275                 280                 285
Asn Val Leu Phe Thr Gly His Gln Ala Phe Leu Thr Ala Glu Ala Leu
    290                 295                 300
Thr Ser Ile Ser Gln Thr Thr Leu Gln Asn Leu Ser Asn Leu Glu Lys
305                 310                 315                 320
Gly Glu Thr Cys Pro Asn Glu Leu Val
                325
<210>38
<211>1191
<212>DNA
<213>大肠杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1191)
<400>38
atg att att tcc gca gcc agc gat tat cgc gcc gca gcg caa cgc att     48
Met Ile Ile Ser Ala Ala Ser Asp Tyr Arg Ala Ala Ala Gln Arg Ile
1               5                   10                  15
ctg ccg ccg ttc ctg ttc cac tat atg gat ggt ggt gca tat tct gaa     96
Leu Pro Pro Phe Leu Phe His Tyr Met Asp Gly Gly Ala Tyr Ser Glu
            20                  25                  30
tac acg ctg cgc cgc aac gtg gaa gat ttg tca gaa gtg gcg ctg cgc    144
Tyr Thr Leu Arg Arg Asn Val Glu Asp Leu Ser Glu Val Ala Leu Arg
        35                  40                  45
cag cgt att ctg aaa aac atg tcc gac tta agc ctg gaa acg acg ctg    192
Gln Arg Ile Leu Lys Asn Met Ser Asp Leu Ser Leu Glu Thr Thr Leu
    50                  55                  60
ttt aat gag aaa ttg tcg atg ccg gtg gca ctg gct ccg gtg ggt ttg    240
Phe Asn Glu Lys Leu Ser Met Pro Val Ala Leu Ala Pro Val Gly Leu
65                  70                  75                  80
tgt ggc atg tat gcg cgt cgt ggc gaa gtt cag gca gcc aaa gcg gcg    288
Cys Gly Met Tyr Ala Arg Arg Gly Glu Val Gln Ala Ala Lys Ala Ala
                85                  90                  95
gac gcg cat ggt att ccg ttt act ctc tcg acg gtt tcc gtt tgc ccg    336
Asp Ala His Gly Ile Pro Phe Thr Leu Ser Thr Val Ser Val Cys Pro
            100                 105                 110
att gaa gaa gtc gcg cca gcc atc aag cgc cca atg tgg ttc cag ctt    384
Ile Glu Glu Val Ala Pro Ala Ile Lys Arg Pro Met Trp Phe Gln Leu
        115                 120                 125
tat gta ctg cgc gat cgc ggc ttt atg cgt aac gcg ctg gag cga gca     432
Tyr Val Leu Arg Asp Arg Gly Phe Met Arg Asn Ala Leu Glu Arg Ala
    130                 135                 140
aaa gca gcg ggt tgt tcg acg ctg gtt ttc acc gtg gat atg ccg aca     480
Lys Ala Ala Gly Cys Ser Thr Leu Val Phe Thr Val Asp Met Pro Thr
145                 150                 155                 160
ccg ggc gca cgc tac cgt gat gcg cat tca ggt atg agc ggc ccg aac     528
Pro Gly Ala Arg Tyr Arg Asp Ala His Ser Gly Met Ser Gly Pro Asn
                165                 170                 175
gcg gca atg cgc cgc tac ttg caa gcg gtg aca cat ccg caa tgg gcg     576
Ala Ala Met Arg Arg Tyr Leu Gln Ala Val Thr His Pro Gln Trp Ala
            180                 185                 190
tgg gat gtg ggc ctg aac ggt cgt cca cat gat tta ggt aat atc tca     624
Trp Asp Val Gly Leu Asn Gly Arg Pro His Asp Leu Gly Asn Ile Ser
        195                 200                 205
gct tat ctc ggc aaa ccg acc gga ctg gaa gat tac atc ggc tgg ctg     672
Ala Tyr Leu Gly Lys Pro Thr Gly Leu Glu Asp Tyr Ile Gly Trp Leu
    210                 215                 220
ggg aat aac ttc gat ccg tcc atc tca tgg aaa gac ctt gaa tgg atc     720
Gly Asn Asn Phe Asp Pro Ser Ile Ser Trp Lys Asp Leu Glu Trp Ile
225                 230                 235                 240
cgc gat ttc tgg gat ggc ccg atg gtg atc aaa ggg atc ctc gat ccg     768
Arg Asp Phe Trp Asp Gly Pro Met Val Ile Lys Gly Ile Leu Asp Pro
                245                 250                 255
gaa gat gcg cgc gat gca gta cgt ttt ggt gct gat gga att gtg gtt     816
Glu Asp Ala Arg Asp Ala Val Arg Phe Gly Ala Asp Gly Ile Val Val
            260                 265                 270
tct aac cac ggt ggc cgc cag ctg gac ggt gta ctc tct tcc gcc cgt     864
Ser Asn His Gly Gly Arg Gln Leu Asp Gly Val Leu Ser Ser Ala Arg
        275                 280                 285
gca ctg cct gct att gca gat gcg gtg aaa ggt gat ata gcc att ctg     912
Ala Leu Pro Ala Ile Ala Asp Ala Val Lys Gly Asp Ile Ala Ile Leu
    290                 295                 300
gcg gat agc gga att cgt aac ggg ctt gat gtc gtg cgt atg att gcg     960
Ala Asp Ser Gly Ile Arg Asn Gly Leu Asp Val Val Arg Met Ile Ala
305                 310                 315                 320
ctc ggt gcc gac acc gta ctg ctg ggt cgt gct ttc ttg tat gcg ctg    1008
Leu Gly Ala Asp Thr Val Leu Leu Gly Arg Ala Phe Leu Tyr Ala Leu
                325                 330                 335
gca aca gcg ggc cag gcg ggt gta gct aac ctg cta aat ctg atc gaa    1056
Ala Thr Ala Gly Gln Ala Gly Val Ala Asn Leu Leu Asn Leu Ile Glu
            340                 345                 350
aaa gag atg aaa gtg gcg atg acg ctg act ggc gcg aaa tcg atc agc    1104
Lys Glu Met Lys Val Ala Met Thr Leu Thr Gly Ala Lys Ser Ile Ser
        355                 360                 365
gaa att acg caa gat tcg ctg gtg cag ggg ctg ggt aaa gag ttg cct    1152
Glu Ile Thr Gln Asp Ser Leu Val Gln Gly Leu Gly Lys Glu Leu Pro
    370                 375                 380
gcg gca ctg gct ccc atg gcg aaa ggg aat gcg gca tag                1191
Ala Ala Leu Ala Pro Met Ala Lys Gly Asn Ala Ala
385                 390                 395
<210>39
<211>396
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>39
Met Ile Ile Ser Ala Ala Ser Asp Tyr Arg Ala Ala Ala Gln Arg Ile
1               5                   10                  15
Leu Pro Pro Phe Leu Phe His Tyr Met Asp Gly Gly Ala Tyr Ser Glu
            20                  25                  30
Tyr Thr Leu Arg Arg Asn Val Glu Asp Leu Ser Glu Val Ala Leu Arg
        35                  40                  45
Gln Arg Ile Leu Lys Asn Met Ser Asp Leu Ser Leu Glu Thr Thr Leu
    50                  55                  60
Phe Asn Glu Lys Leu Ser Met Pro Val Ala Leu Ala Pro Val Gly Leu
65                  70                  75                  80
Cys Gly Met Tyr Ala Arg Arg Gly Glu Val Gln Ala Ala Lys Ala Ala
                85                  90                  95
Asp Ala His Gly Ile Pro Phe Thr Leu Ser Thr Val Ser Val Cys Pro
            100                 105                 110
Ile Glu Glu Val Ala Pro Ala Ile Lys Arg Pro Met Trp Phe Gln Leu
        115                 120                 125
Tyr Val Leu Arg Asp Arg Gly Phe Met Arg Asn Ala Leu Glu Arg Ala
    130                 135                 140
Lys Ala Ala Gly Cys Ser Thr Leu Val Phe Thr Val Asp Met Pro Thr
145                 150                 155                 160
Pro Gly Ala Arg Tyr Arg Asp Ala His Ser Gly Met Ser Gly Pro Asn
                165                 170                 175
Ala Ala Met Arg Arg Tyr Leu Gln Ala Val Thr His Pro Gln Trp Ala
            180                 185                 190
Trp Asp Val Gly Leu Asn Gly Arg Pro His Asp Leu Gly Asn Ile Ser
        195                 200                 205
Ala Tyr Leu Gly Lys Pro Thr Gly Leu Glu Asp Tyr Ile Gly Trp Leu
    210                 215                 220
Gly Asn Asn Phe Asp Pro Ser Ile Ser Trp Lys Asp Leu Glu Trp Ile
225                 230                 235                 240
Arg Asp Phe Trp Asp Gly Pro Met Val Ile Lys Gly Ile Leu Asp Pro
                245                 250                 255
Glu Asp Ala Arg Asp Ala Val Arg Phe Gly Ala Asp Gly Ile Val Val
            260                 265                 270
Ser Asn His Gly Gly Arg Gln Leu Asp Gly Val Leu Ser Ser Ala Arg
        275                 280                 285
Ala Leu Pro Ala Ile Ala Asp Ala Val Lys Gly Asp Ile Ala Ile Leu
    290                 295                 300
Ala Asp Ser Gly Ile Arg Asn Gly Leu Asp Val Val Arg Met Ile Ala
305                 310                 315                 320
Leu Gly Ala Asp Thr Val Leu Leu Gly Arg Ala Phe Leu Tyr Ala Leu
                325                 330                 335
Ala Thr Ala Gly Gln Ala Gly Val Ala Asn Leu Leu Asn Leu Ile Glu
            340                 345                 350
Lys Glu Met Lys Val Ala Met Thr Leu Thr Gly Ala Lys Ser Ile Ser
        355                 360                 365
Glu Ile Thr Gln Asp Ser Leu Val Gln Gly Leu Gly Lys Glu Leu Pro
    370                 375                 380
Ala Ala Leu Ala Pro Met Ala Lys Gly Asn Ala Ala
385                 390                 395
<210>40
<211>1308
<212>DNA
<213>Pantoea ananatis
<400>40
atgagcagaa tcatgacgcc cgtgaactgg gaagcctgca gcagcgaggc gcagcaggcg     60
ctgttggcac gccctgcgct cgcctcgtct gacagcatca gccagatcgt gcgcgatgtg    120
ttggtcagag tgaaagagga aggcgatgcg gctttacgag aattcagcgc gcgctttgac    180
aaggttgaaa cagacgacct gcgcgttacg ccacagcaga tgcaggcggc cagcgatcgc    240
cttggtgacg agctgaaaca ggcgatggcc gtggccattg gcaatattga aacctttcac    300
cgtgcgcaga tcctgccgcc ggtggatgtg gaaacgcagc ccggcgtgcg ctgtcagcaa    360
attacgcgcc cgatgaaatc ggtgggcttg tatattccgg gcggttctgc cccgctgttt    420
tctaccgttc tgatgctggc taccccggcg cggattgcgg gctgtggtcg cgtggtgctg    480
tgctcgcccc cgccgattgc tgatgaaatt ctctacgcgg ccaaactttg cggtgtggaa    540
gaagtgttcc aggtgggtgg atcacaggcg attgccgccc tggcttttgg caccgaaagc    600
atccctaagg tagataaaat ttttggtccg ggcaacgcgt gggttaccga agccaaacgt    660
caggtcagcc agcgccttga tggcgcggcg attgatatgc ccgctggccc gtcggaagtg    720
ctggtgattg ccgatgaagg tgccacaccg gccttcgttg cctctgatct gctgtcgcag    780
gcggaacacg gccctgactc gcaggtgatt ttactgacgc cttcgctggc gctggccgag    840
cgcgtcgccg aggcggtgga ggatcagctg gcccagttgc cacgtgcggc gacagcccgc    900
caggcactgg aaagcagccg cctgatcgtc gcccgggata tgcagcaatg cattgcgatc    960
tccaaccgct atggtccgga gcacctgatt ctgcaaaccc gcacgccacg ggatctggtg   1020
gaacagatta ccagcgccgg ttcggttttc ctgggcgact ggtcaccgga atccgcagga   1080
gattatgctt cgggcaccaa ccacgtgctg ccgacctacg gctataccgc gacatgctcc   1140
agcctgggcc tggccgactt tcagaaacgc atgacggtac aggagctgac gccgcagggc   1200
ttcctgaacc tggcggcgac catcgaaacc ctggcggccg ctgaacagct gcacgcccac   1260
aaaaatgccg tcacgttgcg cgttgccgca ctcaaggagc aagcatga                1308
<210>41
<211>68
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>41
ccatagcggt tggagatcgc aatgcattgc tgcatatccc tgaagcctgc ttttttatac    60
taagttgg                                                             68
<210>42
<211>68
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>42
gcccgccagg cactggaaag cagccgcctg atcgtcgccc cgctcaagtt agtataaaaa    60
agctgaac                                                             68
<210>43
<211>33
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>43
tagcgagatc tctgatgtcc ggcggtgctt ttg                                 33
<210>44
<211>32
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>44
aaaaagagct cttacgcccc gccctgccac tc                                  32
<210>45
<211>34
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>45
caggatctag aaggagacat gaacgatgaa catc                                34
<210>46
<211>36
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>46
gataaggatc cgaaataaaa gaaaatgcca atagga                              36
<210>47
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>47
cctttgagct cgcgggcagt gagcgcaacg c                               31
<210>48
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>48
ctagagcggc cgccgatcgg gatcctcctg tgtgaaat tg ttatccgc            48
<210>49
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>49
ctctacgatc gaggaggtta taaaaaatgg atattaatac tg                   42
<210>50
<211>36
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>50
tcaaagcggc cgcttcttcg tctgtttcta ctggta                          36
<210>51
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>51
cctttggtac cgcgggcagt gagcgcaacg c                               31
<210>52
<211>34
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>52
aacaggaatt ctttgcctgg cggcagtagc gcgg                            34
<210>53
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物P1
<400>53
ctagtaagat cttgaagcct gcttttttat actaagttgg                           40
<210>54
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物P2
<400>54
atgatcgaat tcgaaatcaa ataatgattt tattttgact g                         41
<210>55
<211>120
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>编码attL的DNA片段
<400>55
agatcttgaa gcctgctttt ttatactaag ttggcattat aaaaaagcat tgcttatcaa     60
tttgttgcaa cgaacaggtc actatcagtc aaaataaaat cattatttga tttcgaattc    120
<210>56
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物P3
<400>56
atgccactgc agtctgttac aggtcactaa taccatctaa g                         41
<210>57
<211>46
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物P4
<400>57
accgttaagc tttctagacg ctcaagttag tataaaaaag ctgaac                    46
<210>58
<211>184
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>编码attR的DNA片段
<400>58
ctgcagtctg ttacaggtca ctaataccat ctaagtagtt gattcatagt gactgcatat     60
gttgtgtttt acagtattat gtagtctgtt ttttatgcaa aatctaattt aatatattga    120
tatttatatc attttacgtt tctcgttcag cttttttata ctaacttgag cgtctagaaa    180
gctt                                                                 184
<210>59
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物P5
<400>59
ttcttagacg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgc                             38
<210>60
<211>37
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物P6
<400>60
taacagagat ctcgcgcaga aaaaaaggat ctcaaga                              37
<210>61
<211>46
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物P7
<400>61
aacagagatc taagcttaga tcctttgcct ggcggcagta gcgcgg                    46
<210>62
<211>35
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物P8
<400>62
ataaactgca gcaaaaagag tttgtagaaa cgcaa                                35
<210>63
<211>1388
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>编码Tc基因和ter_thrL的DNA片段
<400>63
gaattctcat gtttgacagc ttatcatcga taagctttaa tgcggtagtt tatcacagtt     60
aaattgctaa cgcagtcagg caccgtgtat gaaatctaac aatgcgctca tcgtcatcct    120
cggcaccgtc accctggatg ctgtaggcat aggcttggtt atgccggtac tgccgggcct    180
cttgcgggat atcgtccatt ccgacagcat cgccagtcac tatggcgtgc tgctagcgct    240
atatgcgttg atgcaatttc tatgcgcacc cgttctcgga gcactgtccg accgctttgg    300
ccgccgccca gtcctgctcg cttcgctact tggagccact atcgactacg cgatcatggc    360
gaccacaccc gtcctgtgga tcctctacgc cggacgcatc gtggccggca tcaccggcgc    420
cacaggtgcg gttgctggcg cctatatcgc cgacatcacc gatggggaag atcgggctcg    480
ccacttcggg ctcatgagcg cttgtttcgg cgtgggtatg gtggcaggcc ccgtggccgg    540
gggactgttg ggcgccatct ccttgcatgc accattcctt gcggcggcgg tgctcaacgg    600
cctcaaccta ctactgggct gcttcctaat gcaggagtcg cataagggag agcgtcgacc    660
gatgcccttg agagccttca acccagtcag ctccttccgg tgggcgcggg gcatgactat    720
cgtcgccgca cttatgactg tcttctttat catgcaactc gtaggacagg tgccggcagc    780
gctctgggtc attttcggcg aggaccgctt tcgctggagc gcgacgatga tcggcctgtc    840
gcttgcggta ttcggaatct tgcacgccct cgctcaagcc ttcgtcactg gtcccgccac    900
caaacgtttc ggcgagaagc aggccattat cgccggcatg gcggccgacg cgctgggcta    960
cgtcttgctg gcgttcgcga cgcgaggctg gatggccttc cccattatga ttcttctcgc   1020
ttccggcggc atcgggatgc ccgcgttgca ggccatgctg tccaggcagg tagatgacga   1080
ccatcaggga cagcttcaag gatcgctcgc ggctcttacc agcctaactt cgatcactgg   1140
accgctgatc gtcacggcga tttatgccgc ctcggcgagc acatggaacg ggttggcatg   1200
gattgtaggc gccgccctat accttgtctg cctccccgcg ttgcgtcgcg gtgcatggag   1260
ccgggccacc tcgacctgaa tggaagccgg cggcacctcg ctaacggatt caccactcca   1320
actagaaagc ttaacacaga aaaaagcccg cacctgacag tgcgggcttt ttttttcgac   1380
cactgcag                                                            1388
<210>64
<211>36
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物P9
<400>64
agtaattcta gaaagcttaa cacagaaaaa agcccg                               36
<210>65
<211>43
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物P10
<400>65
ctagtaggat ccctgcagtg gtcgaaaaaa aaagcccgca ctg                       43
<210>66
<211>6550
<212>DNA
<213>Pantoea ananatis
<220>
<221>CDS
<222>(231)..(1370)
<220>
<221>CDS
<222>(1380)..(1814)
<220>
<221>CDS
<222>(1827)..(4004)
<220>
<221>CDS
<222>(4260)..(5396)
<220>
<221>CDS
<222>(5526)..(6443)
<400>66
aggttccggc gggcagattt ctctaaaaaa aagcggtacg gcattgataa accgaaatgt     60
tctgctttgc tttattccgt tccgggtaaa gcgcgtgatg ggtacaagac aggagctaag    120
aataatgaac gacatgttca gggcctgagt caggatagct tacttttttc gagcgcttac    180
acagcggcgt attcgcctct atcaaacatt aactgatagc gaagatctaa atg att       236
                                                       Met Ile
                                                       1
aca atg aaa atg aag atg ata cct gtt ctg gta tct gca act ttt atg    284
Thr Met Lys Met Lys Met Ile Pro Val Leu Val Ser Ala Thr Phe Met
        5                   10                  15
gcc ggg tgt act gtc gtg ccg ggg caa aat tta tcc act tcg gga aaa    332
Ala Gly Cys Thr Val Val Pro Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Gly Lys
    20                  25                  30
gat gtc att gag cag cag gac agc aat ttt gac atc gac aag tac gtt    380
Asp Val Ile Glu Gln Gln Asp Ser Asn Phe Asp Ile Asp Lys Tyr Val
35                  40                  45                  50
aac gtt tat ccg tta acg cca ggc ctg gtg gag aaa atg cgt cct aag    428
Asn Val Tyr Pro Leu Thr Pro Gly Leu Val Glu Lys Met Arg Pro Lys
                55                  60                  65
cca ctt gtg gca cag gct aat ccg tcg tta caa acc gaa att cag aac    476
Pro Leu Val Ala Gln Ala Asn Pro Ser Leu Gln Thr Glu Ile Gln Asn
            70                  75                  80
tac gaa tac cgc atc ggc atc ggt gat gtt ctc acc gtc acc gtg tgg    524
Tyr Glu Tyr Arg Ile Gly Ile Gly Asp Val Leu Thr Val Thr Val Trp
        85                  90                  95
gat cac ccc gaa ctc acc acg cct gcc ggt cag tac cgt agc gcc agt    572
Asp His Pro Glu Leu Thr Thr Pro Ala Gly Gln Tyr Arg Ser Ala Ser
    100                 105                 110
gac acc ggt aac tgg gtc cat tcc gac ggc acg att ttc tat cct tac    620
Asp Thr Gly Asn Trp Val His Ser Asp Gly Thr Ile Phe Tyr Pro Tyr
115                 120                 125                 130
atc ggc cgc gtc cgt gtt gcc ggc cgt acc gta ggt gac gtg cgt aat    668
Ile Gly Arg Val Arg Val Ala Gly Arg Thr Val Gly Asp Val Arg Asn
                135                 140                 145
gaa gtg gcg cgt cgt ctg gcg cag tac atc gaa agc ccc cag gtt gac    716
Glu Val Ala Arg Arg Leu Ala Gln Tyr Ile Glu Ser Pro Gln Val Asp
            150                 155                 160
gtc agc att gcc tcg ttt aag tca cag aag act tac gtg acc ggt gcc    764
Val Ser Ile Ala Ser Phe Lys Ser Gln Lys Thr Tyr Val Thr Gly Ala
        165                 170                 175
gtg acg acc tca ggc cag cag cct atc acc aac gta ccg ctg act atc    812
Val Thr Thr Ser Gly Gln Gln Pro Ile Thr Asn Val Pro Leu Thr Ile
    180                 185                 190
ctg gat gcg att aac gca gcg ggc ggc tta gcg gcg gac gca gac tgg    860
Leu Asp Ala Ile Asn Ala Ala Gly Gly Leu Ala Ala Asp Ala Asp Trp
195                 200                 205                 210
cgc aac gtt atc ctg acc cac aac ggc cgt gag cag cgc gtg tca ctg    908
Arg Asn Val Ile Leu Thr His Asn Gly Arg Glu Gln Arg Val Ser Leu
                215                 220                 225
cag gcc ctg atg caa aac ggc gat ctg agc cag aac cac ctg ctt tat    956
Gln Ala Leu Met Gln Asn Gly Asp Leu Ser Gln Asn His Leu Leu Tyr
            230                 235                 240
ccg ggt gac atc ctg tat gtg ccg cgt aac gac gac ctg aaa gtg ttt    1004
Pro Gly Asp Ile Leu Tyr Val Pro Arg Asn Asp Asp Leu Lys Val Phe
        245                 250                 255
gtc atg ggc gaa gtg aaa cag cag gcc acc ctg aaa atg gac cgc agc    1052
Val Met Gly Glu Val Lys Gln Gln Ala Thr Leu Lys Met Asp Arg Ser
    260                 265                 270
ggt atg acc ctg gct gaa gcg ctg ggt aat gcg gca ggc atg gat caa    1100
Gly Met Thr Leu Ala Glu Ala Leu Gly Asn Ala Ala Gly Met Asp Gln
275                 280                 285                 290
acc acg tcc gac gcg acc ggg gtc ttt gtt atc cga ccg acg cgc ggc    1148
Thr Thr Ser Asp Ala Thr Gly Val Phe Val Ile Arg Pro Thr Arg Gly
                295                 300                 305
tcc gat cgc agc aaa atc gcc aat atc tac cag ctg aat acc aaa gat    1196
Ser Asp Arg Ser Lys Ile Ala Asn Ile Tyr Gln Leu Asn Thr Lys Asp
            310                 315                 320
gcg gca tcc atg gtg atg ggt acc gaa ttc caa ctt gaa cct tac gat    1244
Ala Ala Ser Met Val Met Gly Thr Glu Phe Gln Leu Glu Pro Tyr Asp
        325                 330                 335
atc gtc tac gtg aca tcg acg ccg ctg acg cgt tgg aac cgc gtg ata    1292
Ile Val Tyr Val Thr Ser Thr Pro Leu Thr Arg Trp Asn Arg Val Ile
    340                 345                 350
tcg cag ttg ata cca acc ata gcc ggt gtt aac gat gcg acg cag gct    1340
Ser Gln Leu Ile Pro Thr Ile Ala Gly Val Asn Asp Ala Thr Gln Ala
355                 360                 365                 370
gca cag cgc atc cgc aac tgg tcg aac taa ggtttcgcc atg att aag tcc  1391
Ala Gln Arg Ile Arg Asn Trp Ser Asn               Met Ile Lys Ser
                375                               380
gtg tta gtc gtc tgc gta ggc aac atc tgc cgc tct cct acg gga gag    1439
Val Leu Val Val Cys Val Gly Asn Ile Cys Arg Ser Pro Thr Gly Glu
    385                 390                 395
cgc ctg ttc aaa cgc gcg ctg ccg cac ctg cct gtg gcc tcc gcc gga    1487
Arg Leu Phe Lys Arg Ala Leu Pro His Leu Pro Val Ala Ser Ala Gly
400                 405                 410                 415
ctc ggc gcc ctg gtt ggg cac gcg gcg gat aaa acg gcg acg gag gtg    1535
Leu Gly Ala Leu Val Gly His Ala Ala Asp Lys Thr Ala Thr Glu Val
                420                 425                 430
gca gcc gaa aaa ggc tta tcg ctg gaa ggt cat gag gct cag cag cta    1583
Ala Ala Glu Lys Gly Leu Ser Leu Glu Gly His Glu Ala Gln Gln Leu
            435                 440                 445
acg gcc agc ctg tgc cgg gag tat gac ctg att ctg gtg atg gaa aag    1631
Thr Ala Ser Leu Cys Arg Glu Tyr Asp Leu Ile Leu Val Met Glu Lys
        450                 455                 460
cgc cac att gaa cag gta aac cgc atc gat ccg gct gca cgc ggc aaa    1679
Arg His Ile Glu Gln Val Asn Arg Ile Asp Pro Ala Ala Arg Gly Lys
    465                 470                 475
acg atg ctg ctt ggg cac tgg ctc aat cag aag gaa att gcg gat ccg    1727
Thr Met Leu Leu Gly His Trp Leu Asn Gln Lys Glu Ile Ala Asp Pro
480                 485                 490                 495
tac aga aaa agc cgt gag gcc ttt gaa gag gtt tac ggg tta ctg gaa    1775
Tyr Arg Lys Ser Arg Glu Ala Phe Glu Glu Val Tyr Gly Leu Leu Glu
                500                 505                 510
cac gcc act cag aaa tgg gtc agc gta cta agc cga tag ttgggattat cc  1826
His Ala Thr Gln Lys Trp Val Ser Val Leu Ser Arg
            515                 520
atg aat ata aaa aac aaa gtc atg acc gcg ccg cgc gag gaa tcg aat    1874
Met Asn Ile Lys Asn Lys Val Met Thr Ala Pro Arg Glu Glu Ser Asn
    525                 530                 535
ggg tgg gat ctg gcg cat ctt gtg gga cag ctt att gat cac cgc tgg    1922
Gly Trp Asp Leu Ala His Leu Val Gly Gln Leu Ile Asp His Arg Trp
540                 545                 550                 555
gtt atc gtc gct gtc acc gct ttt ttc atg ctg gta gca acg ctc tac    1970
Val Ile Val Ala Val Thr Ala Phe Phe Met Leu Val Ala Thr Leu Tyr
                560                 565                 570
aca ctg ttt gcg acg cct att tac agc gcc gat gcc atg gtt cag gtg    2018
Thr Leu Phe Ala Thr Pro Ile Tyr Ser Ala Asp Ala Met Val Gln Val
            575                 580                 585
gag cag aag aat acc agc acc gtc ctg aat gaa tta cag acg ctg atg    2066
Glu Gln Lys Asn Thr Ser Thr Val Leu Asn Glu Leu Gln Thr Leu Met
        590                 595                 600
ccc acg acg cca gca tcg gat acc gaa atc cag att ctt gaa tca cgc    2114
Pro Thr Thr Pro Ala Ser Asp Thr Glu Ile Gln Ile Leu Glu Ser Arg
    605                 610                 615
atg gtg ctg gga aaa acc gtt cag gat ctt ggc ctg gat gca gtg gtt    2162
Met Val Leu Gly Lys Thr Val Gln Asp Leu Gly Leu Asp Ala Val Val
620                 625                 630                 635
tca cag aac tat ttc ccg gtt atc ggc aaa ggt ctg tcg cgc ctg atg    2210
Ser Gln Asn Tyr Phe Pro Val Ile Gly Lys Gly Leu Ser Arg Leu Met
                640                 645                 650
ggc aac aag cct ggc aat gtt gcg atc tcc cgt ctg gag att ccg cgt    2258
Gly Asn Lys Pro Gly Asn Val Ala Ile Ser Arg Leu Glu Ile Pro Arg
            655                 660                 665
acg atc gag aag cgc agt gtt gag ctc gag gtt acg ggt aaa gac agc    2306
Thr Ile Glu Lys Arg Ser Val Glu Leu Glu Val Thr Gly Lys Asp Ser
        670                 675                 680
tat acc gtt tct gcc gat ggc gat gag ctg ttc aaa ggc aaa gtg ggg    2354
Tyr Thr Val Ser Ala Asp Gly Asp Glu Leu Phe Lys Gly Lys Val Gly
    685                 690                 695
cag ttc gaa aaa cac ggc gat gtg agc atg ctg gtc agc gat atc aat    2402
Gln Phe Glu Lys His Gly Asp Val Ser Met Leu Val Ser Asp Ile Asn
700                 705                 710                 715
gcg gag ccg ggc acc acg ttt acc gtc acc aaa ctc aac gat ctg cag    2450
Ala Glu Pro Gly Thr Thr Phe Thr Val Thr Lys Leu Asn Asp Leu Gln
                720                 725                 730
gca att aac agc atc ctg tct aac ctg acc gtt gca gac aaa ggg aaa    2498
Ala Ile Asn Ser Ile Leu Ser Asn Leu Thr Val Ala Asp Lys Gly Lys
            735                 740                 745
gac acc ggc gta ctg gga ctg cag tat gtg ggt gaa gat cag gag cag    2546
Asp Thr Gly Val Leu Gly Leu Gln Tyr Val Gly Glu Asp Gln Glu Gln
        750                 755                 760
atc agc aaa gtt ctg aac cag atc gtg aat aac tac ctg ttg cag aac    2594
Ile Ser Lys Val Leu Asn Gln Ile Val Asn Asn Tyr Leu Leu Gln Asn
    765                 770                 775
gtg cag cgt aaa tcc gaa cag gcc gag aaa agc ctg gag ttc ctg aaa    2642
Val Gln Arg Lys Ser Glu Gln Ala Glu Lys Ser Leu Glu Phe Leu Lys
780                 785                 790                 795
cag caa ctg ccg gaa gtg cgt ggc aaa ctg gat cag gcg gaa gac aaa    2690
Gln Gln Leu Pro Glu Val Arg Gly Lys Leu Asp Gln Ala Glu Asp Lys
                800                 805                 810
ctt aac gcc ttc cgc cgt gag aac gag tcc gtt gac ctg tcg ctt gaa    2738
Leu Asn Ala Phe Arg Arg Glu Asn Glu Ser Val Asp Leu Ser Leu Glu
            815                 820                 825
gct aag tct gcg ttg gat tca tcc gtt agc gtg cag agc cag ctt aac    2786
Ala Lys Ser Ala Leu Asp Ser Ser Val Ser Val Gln Ser Gln Leu Asn
        830                 835                 840
gag ctg acg ttc cgc gaa gcc gaa gtt tcg cag ctg ttc acc aaa gat    2834
Glu Leu Thr Phe Arg Glu Ala Glu Val Ser Gln Leu Phe Thr Lys Asp
    845                 850                 855
cac cct acc tat cgg gcc ctg tta gaa aag cgt aaa acg ctg gaa gat    2882
His Pro Thr Tyr Arg Ala Leu Leu Glu Lys Arg Lys Thr Leu Glu Asp
860                 865                 870                 875
gag cag gcg cag ctg aac aag aaa att gcg cag atg ccg aaa act cag    2930
Glu Gln Ala Gln Leu Asn Lys Lys Ile Ala Gln Met Pro Lys Thr Gln
                880                 885                 890
cag gag att ctg cgt ctg acc cgc gat gtg cag tca ggt cag gaa atc    2978
Gln Glu Ile Leu Arg Leu Thr Arg Asp Val Gln Ser Gly Gln Glu Ile
            895                 900                 905
tac atg cag tta ctg aac cgc cag caa gag ctg agc atc agt aag gcc    3026
Tyr Met Gln Leu Leu Asn Arg Gln Gln Glu Leu Ser Ile Ser Lys Ala
        910                 915                 920
agc acc gtg ggt gat gtt cgc atc atc gat cag gcc gcc acg gca aac    3074
Ser Thr Val Gly Asp Val Arg Ile Ile Asp Gln Ala Ala Thr Ala Asn
    925                 930                 935
tcg ccg gtt gcg ccg aaa aag ctg ctg atc atc gca gcc agc ctg att    3122
Ser Pro Val Ala Pro Lys Lys Leu Leu Ile Ile Ala Ala Ser Leu Ile
940                 945                 950                 955
ctg ggg ctg atg gtg tcc gtc ggt gtg gtt ctg ctt aaa gcg ctg ttg    3170
Leu Gly Leu Met Val Ser Val Gly Val Val Leu Leu Lys Ala Leu Leu
                960                 965                 970
cat cac gga atc gag aac ccg gaa cag ctg gaa gag ctg ggc atg aac    3218
His His Gly Ile Glu Asn Pro Glu Gln Leu Glu Glu Leu Gly Met Asn
            975                 980                 985
gtc tat gcc agc gta ccg ctc tct gag tgg cag cgt aag  aag gat acc   3266
Val Tyr Ala Ser Val Pro Leu Ser Glu Trp Gln Arg Lys  Lys Asp Thr
        990                 995                 1000
gaa gca  ctg gcg cgt cgc ggt  cac aaa ggc aaa acc  gat ccg cat     3311
Glu Ala  Leu Ala Arg Arg Gly  His Lys Gly Lys Thr  Asp Pro His
    1005                 1010                 1015
gag acg  ctg ttg gca ctg ggt  aat cca acc gac ctc  tct att gaa     3356
Glu Thr  Leu Leu Ala Leu Gly  Asn Pro Thr Asp Leu  Ser Ile Glu
    1020                 1025                 1030
gcg att  cgt agc ctg cgt acc  agc ctg cac ttc gcc  atg atg gaa     3401
Ala Ile  Arg Ser Leu Arg Thr  Ser Leu His Phe Ala  Met Met Glu
    1035                 1040                 1045
gcg aaa  aac aac att ctg atg  atc acc ggc gcc agc  ccg ggt att     3446
Ala Lys  Asn Asn Ile Leu Met  Ile Thr Gly Ala Ser  Pro Gly Ile
    1050                 1055                 1060
ggt aaa  acc ttt atc tgc gtt  aac ctc gct acc ctg  gtg gcc aag     3491
Gly Lys  Thr Phe Ile Cys Val  Asn Leu Ala Thr Leu  Val Ala Lys
    1065                 1070                 1075
gcc ggt  cag aag gtg ttg ttt  atc gat ggt gac atg  cgc cgc ggt     3536
Ala Gly  Gln Lys Val Leu Phe  Ile Asp Gly Asp Met  Arg Arg Gly
    1080                 1085                 1090
tac acc  cac gaa ctg ctg ggg  gcg gac aat aaa tcc  ggt ctg tct     3581
Tyr Thr  His Glu Leu Leu Gly  Ala Asp Asn Lys Ser  Gly Leu Ser
    1095                 1100                 1105
aac gtc  ctg tct ggc aaa acc  gag ttt acg ccg acc  atg att cag     3626
Asn Val  Leu Ser Gly Lys Thr  Glu Phe Thr Pro Thr  Met Ile Gln
    1110                 1115                 1120
caa ggg  cca tac ggt ttt gat  ttc ctg ccg cgc gga  cag gtt cca     3671
Gln Gly  Pro Tyr Gly Phe Asp  Phe Leu Pro Arg Gly  Gln Val Pro
    1125                 1130                 1135
ccg aac  ccg tca gag ctg ttg  atg cac cgc cgc atg  ggc gag ctg    3716
Pro Asn  Pro Ser Glu Leu Leu  Met His Arg Arg Met  Gly Glu Leu
    1140                 1145                 1150
ctg gag  tgg gca agc aaa aac  tat gat tta gtc ctg  att gat aca    3761
Leu Glu  Trp Ala Ser Lys Asn  Tyr Asp Leu Val Leu  Ile Asp Thr
    1155                 1160                 1165
cca ccg  att ctg gcc gta acg  gat gcg tcc atc atc  ggt aag ctg    3806
Pro Pro  Ile Leu Ala Val Thr  Asp Ala Ser Ile Ile  Gly Lys Leu
    1170                 1175                 1180
gcc ggt  acc tcg ctg atg gtg  gcg cgt ttt gaa acc  aac acc aca    3851
Ala Gly  Thr Ser Leu Met Val  Ala Arg Phe Glu Thr  Asn Thr Thr
    1185                 1190                 1195
aaa gaa  gtg gat gtc agc ttc  aaa cgc ttc gcg cag  aac ggt atc    3896
Lys Glu  Val Asp Val Ser Phe  Lys Arg Phe Ala Gln  Asn Gly Ile
    1200                 1205                 1210
gaa atc  aaa ggg gtt atc ctg  aac gcc gtg gta cgt  aaa gcg gct    3941
Glu Ile  Lys Gly Val Ile Leu  Asn Ala Val Val Arg  Lys Ala Ala
    1215                 1220                 1225
aac tcg  tac ggt tat ggt tat  gac tac tac gac tac  gag tac ggt    3986
Asn Ser  Tyr Gly Tyr Gly Tyr  Asp Tyr Tyr Asp Tyr  Glu Tyr Gly
    1230                 1235                 1240
aaa cca  acg aaa agc taa gagctgaaag aaaaggggcg ggtttgaccg         4034
Lys Pro  Thr Lys Ser
    1245
ccccttttga tccctggctc atgataacga cacgtaacga tttgcacagg tgattctgga 4094
tacaacgcac aataagcgac gatctaacgt caatcatcag aattcatcat caacacgctt 4154
ttgtctgtcg cgatgtcggc gcagacctgc tgagagatca acccggaagg taatcagcac 4214
tggccactgt tggcatgaga acttgtggat ttaaggaatc acacc atg gct  cca    4268
                                                  Met Ala  Pro
                                                      1250
tat tgg tat ata  tca ggg ttt ttg ctg  ctg att tcg ctg ttc  gaa    4313
Tyr Trp Tyr Ile  Ser Gly Phe Leu Leu  Leu Ile Ser Leu Phe  Glu
            1255                 1260                 1265
atc ctg gtg aaa  aaa gac gaa cgc aca  aat tat att ttg acc  tgg    4358
Ile Leu Val Lys  Lys Asp Glu Arg Thr  Asn Tyr Ile Leu Thr  Trp
            1270                 1275                 1280
ctg ctg tgc ttt  gcg gcc att att ctg  atc gta ttc ggg ggg  att    4403
Leu Leu Cys Phe  Ala Ala Ile Ile Leu  Ile Val Phe Gly Gly  Ile
            1285                 1290                 1295
cgt ggc ctc ggc  acc ggc atg gat gac  ttc cag tac cgc agt  ttc    4448
Arg Gly Leu Gly  Thr Gly Met Asp Asp  Phe Gln Tyr Arg Ser  Phe
            1300                 1305                 1310
ttt gag gac ttt  gta cgg cgt att cag  atc aac ggt ttt ttc  aat    4493
Phe Glu Asp Phe  Val Arg Arg Ile Gln  Ile Asn Gly Phe Phe  Asn
            1315                 1320                 1325
acc gtc gcg ttt  ttc cgc tac gaa ccg  ctg att ttt gcg atg  gcg    4538
Thr Val Ala Phe  Phe Arg Tyr Glu Pro  Leu Ile Phe Ala Met  Ala
            1330                 1335                 1340
tgg ata acg agt  ctg ttt tcg cat aac  gcc agc gtg ttt ctg  ttc    4583
Trp Ile Thr Ser  Leu Phe Ser His Asn  Ala Ser Val Phe Leu  Phe
            1345                 1350                 1355
gtc ttc tgt gcg  att gcg gta tcc att  aac gcc ttc ttt ttc  aga    4628
Val Phe Cys Ala  Ile Ala Val Ser Ile  Asn Ala Phe Phe Phe  Arg
            1360                 1365                 1370
aag atg tcg cct  tat ccg gta ctg gcg  ctg gcg ctg tat tcg  gcg    4673
Lys Met Ser Pro  Tyr Pro Val Leu Ala  Leu Ala Leu Tyr Ser  Ala
            1375                 1380                 1385
cac atc ttt att  aac aaa gac atc aac  cag ata cgt ttt ggc  tta    4718
His Ile Phe Ile  Asn Lys Asp Ile Asn  Gln Ile Arg Phe Gly  Leu
            1390                 1395                 1400
agc tcc gcc ctg  ttc ctc ggc gtg ctg  tgg acg atc tac ctg  aag    4763
Ser Ser Ala Leu  Phe Leu Gly Val Leu  Trp Thr Ile Tyr Leu  Lys
            1405                 1410                 1415
cgt tac tgg tgg  gcc ttt acc ttt ttt  atc ctg tcg ttc atg  agt    4808
Arg Tyr Trp Trp  Ala Phe Thr Phe Phe  Ile Leu Ser Phe Met  Ser
            1420                 1425                 1430
cac aac acc gcc  gtt atg gtg ata acg  ctg gtg cct ttc ctg  ttt    4853
His Asn Thr Ala  Val Met Val Ile Thr  Leu Val Pro Phe Leu  Phe
            1435                 1440                 1445
att cgt gac tgg  cgc tgg tgg ccg gtg  gtg atc atc gtt gtc  agc    4898
Ile Arg Asp Trp  Arg Trp Trp Pro Val  Val Ile Ile Val Val  Ser
            1450                 1455                 1460
ctg ccg ctc tcg  gtc gtc ggg ggt tca  agc ttc atc gcc ctg  att    4943
Leu Pro Leu Ser  Val Val Gly Gly Ser  Ser Phe Ile Ala Leu  Ile
            1465                 1470                 1475
gcc gga cac ctc  gga tcg ctg ggg gaa  agg gca tcg ggc tat  aac    4988
Ala Gly His Leu  Gly Ser Leu Gly Glu  Arg Ala Ser Gly Tyr  Asn
            1480                 1485                 1490
aac gat ccc tcc  tat gca atg gat ggc  agc atc ctg tca gtc  tcg    5033
Asn Asp Pro Ser  Tyr Ala Met Asp Gly  Ser Ile Leu Ser Val  Ser
            1495                 1500                 1505
aac ctg aag aac  atc atg ctg gtg ttt  att ttc ttc tat ttc  atg    5078
Asn Leu Lys Asn  Ile Met Leu Val Phe  Ile Phe Phe Tyr Phe  Met
            1510                 1515                 1520
ctg act gaa gaa  ctg aag cgc gaa aac  tat gcc cag tat cgt  ctg    5123
Leu Thr Glu Glu  Leu Lys Arg Glu Asn  Tyr Ala Gln Tyr Arg  Leu
            1525                 1530                 1535
aac tac ttg ctg  att tta agt ttt gct  atc ggc ggg gcg atc  cgc    5168
Asn Tyr Leu Leu  Ile Leu Ser Phe Ala  Ile Gly Gly Ala Ile  Arg
            1540                 1545                 1550
atc ttc ctg tat  aac ttc ccg tca ggt  tcg cgt ctt tcc aac  tat    5213
Ile Phe Leu Tyr  Asn Phe Pro Ser Gly  Ser Arg Leu Ser Asn  Tyr
            1555                 1560                 1565
ttg caa cag gtt  gaa ccc atc att ctg  acc tcg ctt atc tac  cag    5258
Leu Gln Gln Val  Glu Pro Ile Ile Leu  Thr Ser Leu Ile Tyr  Gln
            1570                 1575                 1580
gcc aga cgc gtc  tgg aag ccg gcg ctg  ttt ggc atg ctg ttt  ttc    5303
Ala Arg Arg Val  Trp Lys Pro Ala Leu  Phe Gly Met Leu Phe  Phe
            1585                 1590                 1595
ttc ctg ctc tat  tac ctc tac tac aac  acc atc tca acc aag  cag    5348
Phe Leu Leu Tyr  Tyr Leu Tyr Tyr Asn  Thr Ile Ser Thr Lys  Gln
            1600                 1605                 1610
gcg gtt gta ggg  tac gaa gtg gcc cag  gag ttc tgg ctg att  cgg    5393
Ala Val Val Gly  Tyr Glu Val Ala Gln  Glu Phe Trp Leu Ile  Arg
            1615                 1620                 1625
taa cggacccggc ggcgcgcccc cagtgaacgg cttcacttcg cggggcggtc        5446
gcctgtaaca acacaggttt ttcttcggcg tttgtcgatt gaattgttta tttttgaata 5506
ctttaatgag gtgctggca atg aag gac att  cgt ttc tcc atc gta  att    5555
                     Met Lys Asp Ile  Arg Phe Ser Ile Val  Ile
                                 1630                 1635
ccg gct tat aac  gcg tca gaa tcg att  gtc acg acg ctg gat  tgc    5600
Pro Ala Tyr Asn  Ala Ser Glu Ser Ile  Val Thr Thr Leu Asp  Cys
            1640                 1645                 1650
gtt aaa gca caa  act tat cgc cat ttc  gaa gtc atc atc gtg  gat    5645
Val Lys Ala Gln  Thr Tyr Arg His Phe  Glu Val Ile Ile Val  Asp
            1655                 1660                 1665
gac aaa tct gcc  gat gcc gcc gcg ctg  gcg gaa gtg gtg cgc  agt    5690
Asp Lys Ser Ala  Asp Ala Ala Ala Leu  Ala Glu Val Val Arg  Ser
            1670                 1675                 1680
gag cgc tat cag  gac ctg gac atc aat  ctg gtc ttg tct gag  gtt    5735
Glu Arg Tyr Gln  Asp Leu Asp Ile Asn  Leu Val Leu Ser Glu  Val
            1685                 1690                 1695
aaa ctc aac ggt  gcc ggc gcg cgt aac  aaa ggc att gag ctg  gca    5780
Lys Leu Asn Gly  Ala Gly Ala Arg Asn  Lys Gly Ile Glu Leu  Ala
            1700                 1705                 1710
acg ggc gac tat  gtc agt ttt ctg gat  gcc gat gac gag tgg  cat    5825
Thr Gly Asp Tyr  Val Ser Phe Leu Asp  Ala Asp Asp Glu Trp  His
            1715                 1720                 1725
gcc gac aag ctt  ctg cag gtc agt gaa  aag att gcg gag cta  gag    5870
Ala Asp Lys Leu  Leu Gln Val Ser Glu  Lys Ile Ala Glu Leu  Glu
            1730                 1735                 1740
gcg cag ggt cag  cac aat acc att atc  ttc agc cag gta aat  atc    5915
Ala Gln Gly Gln  His Asn Thr Ile Ile  Phe Ser Gln Val Asn  Ile
            1745                 1750                 1755
tat cag gac ggt  gcg ttc ctg aag gtt  atg ccg atg cag cct  ccg    5960
Tyr Gln Asp Gly  Ala Phe Leu Lys Val  Met Pro Met Gln Pro  Pro
            1760                 1765                 1770
gca aaa aac gaa  act gtc gca gag tat  ctg ttt ggc tgt tat  ggc    6005
Ala Lys Asn Glu  Thr Val Ala Glu Tyr  Leu Phe Gly Cys Tyr  Gly
            1775                 1780                 1785
ttt att caa acc  agc acc atc gtg ctg  aag cgt gaa gat gcc  gct    6050
Phe Ile Gln Thr  Ser Thr Ile Val Leu  Lys Arg Glu Asp Ala  Ala
            1790                 1795                 1800
aaa att cag ttc  gat gcg cgt ttt atc  cgc cat cag gac tat  gac    6095
Lys Ile Gln Phe  Asp Ala Arg Phe Ile  Arg His Gln Asp Tyr  Asp
            1805                 1810                 1815
ttc tgc atc cgt  gcc gac cgc atg ggt  tac cgg ttt gaa atg  atc    6140
Phe Cys Ile Arg  Ala Asp Arg Met Gly  Tyr Arg Phe Glu Met  Ile
            1820                 1825                 1830
gcc gcc ccg ctg  gcc aac tac cac ctg  gtg acg aag ttt ggc  tcc    6185
Ala Ala Pro Leu  Ala Asn Tyr His Leu  Val Thr Lys Phe Gly  Ser
            1835                 1840                 1845
aaa cac aaa ggt  gaa tcg gtc aag tac  tcc ctg ttc tgg ctg  gat    6230
Lys His Lys Gly  Glu Ser Val Lys Tyr  Ser Leu Phe Trp Leu  Asp
            1850                 1855                 1860
acg atg aaa ccg  cac ctt acc gca cga  gat att cac acc tac  aaa    6275
Thr Met Lys Pro  His Leu Thr Ala Arg  Asp Ile His Thr Tyr  Lys
            1865                 1870                 1875
gca ttc aag ctg  ccc ctg cgc tac aaa  atg gac ggt aac tcg  ctg    6320
Ala Phe Lys Leu  Pro Leu Arg Tyr Lys  Met Asp Gly Asn Ser  Leu
            1880                 1885                 1890
atg gcg agc gtc  agc ttc gcg cgc tac  ttc ctg ctc acc aat  aaa    6365
Met Ala Ser Val  Ser Phe Ala Arg Tyr  Phe Leu Leu Thr Asn  Lys
            1895                 1900                 1905
gat aat cgc acc  tac ttc ctg aac cgc  gtg aaa gac aaa ctg  aaa    6410
Asp Asn Arg Thr  Tyr Phe Leu Asn Arg  Val Lys Asp Lys Leu  Lys
            1910                 1915                 1920
gcg cgg ttg ggt  ggc gaa aag gca ctc  tcc tga ttctattgaa          6453
Ala Arg Leu Gly  Gly Glu Lys Ala Leu  Ser
            1925                 1930
tgtcgtgacg ttttaacgct accggaaggt tatctggtgg ccccgtctat tttatttatt 6513
caggtatgaa aatgaataat cactctggta ccgtcgg                          6550
<210>67
<211>379
<212>PRT
<213>Pantoea ananatis
<400>67
Met Ile Thr Met Lys Met Lys Met Ile Pro Val Leu Val Ser Ala Thr
1               5                   10                  15
Phe Met Ala Gly Cys Thr Val Val Pro Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Lys Asp Val Ile Glu Gln Gln Asp Ser Asn Phe Asp Ile Asp Lys
        35                  40                  45
Tyr Val Asn Val Tyr Pro Leu Thr Pro Gly Leu Val Glu Lys Met Arg
    50                  55                  60
Pro Lys Pro Leu Val Ala Gln Ala Asn Pro Ser Leu Gln Thr Glu Ile
65                  70                  75                  80
Gln Asn Tyr Glu Tyr Arg Ile Gly Ile Gly Asp Val Leu Thr Val Thr
                8                  590                  95
Val Trp Asp His Pro Glu Leu Thr Thr Pro Ala Gly Gln Tyr Arg Ser
            100                 105                 110
Ala Ser Asp Thr Gly Asn Trp Val His Ser Asp Gly Thr Ile Phe Tyr
        115                 120                 125
Pro Tyr Ile Gly Arg Val Arg Val Ala Gly Arg Thr Val Gly Asp Val
    130                 135                 140
Arg Asn Glu Val Ala Arg Arg Leu Ala Gln Tyr Ile Glu Ser Pro Gln
145                 150                 155                 160
Val Asp Val Ser Ile Ala Ser Phe Lys Ser Gln Lys Thr Tyr Val Thr
                165                 170                 175
Gly Ala Val Thr Thr Ser Gly Gln Gln Pro Ile Thr Asn Val Pro Leu
            180                 185                 190
Thr Ile Leu Asp Ala Ile Asn Ala Ala Gly Gly Leu Ala Ala Asp Ala
        195                 200                 205
Asp Trp Arg Asn Val Ile Leu Thr His Asn Gly Arg Glu Gln Arg Val
    210                 215                 220
Ser Leu Gln Ala Leu Met Gln Asn Gly Asp Leu Ser Gln Asn His Leu
225                 230                 235                 240
Leu Tyr Pro Gly Asp Ile Leu Tyr Val Pro Arg Asn Asp Asp Leu Lys
                245                 250                 255
Val Phe Val Met Gly Glu Val Lys Gln Gln Ala Thr Leu Lys Met Asp
            260                 265                 270
Arg Ser Gly Met Thr Leu Ala Glu Ala Leu Gly Asn Ala Ala Gly Met
        275                 280                 285
Asp Gln Thr Thr Ser Asp Ala Thr Gly Val Phe Val Ile Arg Pro Thr
    290                 295                 300
Arg Gly Ser Asp Arg Ser Lys Ile Ala Asn Ile Tyr Gln Leu Asn Thr
305                 310                 315                 320
Lys Asp Ala Ala Ser Met Val Met Gly Thr Glu Phe Gln Leu Glu Pro
                325                 330                 335
Tyr Asp Ile Val Tyr Val Thr Ser Thr Pro Leu Thr Arg Trp Asn Arg
            340                 345                 350
Val Ile Ser Gln Leu Ile Pro Thr Ile Ala Gly Val Asn Asp Ala Thr
        355                 360                 365
Gln Ala Ala Gln Arg Ile Arg Asn Trp Ser Asn
    370                 375
<210>68
<211>144
<212>PRT
<213>Pantoea ananatis
<400>68
Met Ile Lys Ser Val Leu Val Val Cys Val Gly Asn Ile Cys Arg Ser
1               5                   10                  15
Pro Thr Gly Glu Arg Leu Phe Lys Arg Ala Leu Pro His Leu Pro Val
            20                  25                  30
Ala Ser Ala Gly Leu Gly Ala Leu Val Gly His Ala Ala Asp Lys Thr
        35                  40                  45
Ala Thr Glu Val Ala Ala Glu Lys Gly Leu Ser Leu Glu Gly His Glu
    50                  55                  60
Ala Gln Gln Leu Thr Ala Ser Leu Cys Arg Glu Tyr Asp Leu Ile Leu
65                  70                  75                  80
Val Met Glu Lys Arg His Ile Glu Gln Val Asn Arg Ile Asp Pro Ala
                85                  90                  95
Ala Arg Gly Lys Thr Met Leu Leu Gly His Trp Leu Asn Gln Lys Glu
            100                 105                 110
Ile Ala Asp Pro Tyr Arg Lys Ser Arg Glu Ala Phe Glu Glu Val Tyr
        115                 120                 125
Gly Leu Leu Glu His Ala Thr Gln Lys Trp Val Ser Val Leu Ser Arg
    130                 135                 140
<210>69
<211>725
<212>PRT
<213>Pantoea ananatis
<400>69
Met Asn Ile Lys Asn Lys Val Met Thr Ala Pro Arg Glu Glu Ser Asn
1               5                   10                  15
Gly Trp Asp Leu Ala His Leu Val Gly Gln Leu Ile Asp His Arg Trp
            20                  25                  30
Val Ile Val Ala Val Thr Ala Phe Phe Met Leu Val Ala Thr Leu Tyr
        35                  40                  45
Thr Leu Phe Ala Thr Pro Ile Tyr Ser Ala Asp Ala Met Val Gln Val
    50                  55                  60
Glu Gln Lys Asn Thr Ser Thr Val Leu Asn Glu Leu Gln Thr Leu Met
65                  70                  75                  80
Pro Thr Thr Pro Ala Ser Asp Thr Glu Ile Gln Ile Leu Glu Ser Arg
                85                  90                  95
Met Val Leu Gly Lys Thr Val Gln Asp Leu Gly Leu Asp Ala Val Val
            100                 105                 110
Ser Gln Asn Tyr Phe Pro Val Ile Gly Lys Gly Leu Ser Arg Leu Met
        115                 120                 125
Gly Asn Lys Pro Gly Asn Val Ala Ile Ser Arg Leu Glu Ile Pro Arg
    130                 135                 140
Thr Ile Glu Lys Arg Ser Val Glu Leu Glu Val Thr Gly Lys Asp Ser
145                 150                 155                 160
Tyr Thr Val Ser Ala Asp Gly Asp Glu Leu Phe Lys Gly Lys Val Gly
                165                 170                 175
Gln Phe Glu Lys His Gly Asp Val Ser Met Leu Val Ser Asp Ile Asn
            180                 185                 190
Ala Glu Pro Gly Thr Thr Phe Thr Val Thr Lys Leu Asn Asp Leu Gln
        195                 200                 205
Ala Ile Asn Ser Ile Leu Ser Asn Leu Thr Val Ala Asp Lys Gly Lys
    210                 215                 220
Asp Thr Gly Val Leu Gly Leu Gln Tyr Val Gly Glu Asp Gln Glu Gln
225                 230                 235                 240
Ile Ser Lys Val Leu Asn Gln Ile Val Asn Asn Tyr Leu Leu Gln Asn
                245                 250                 255
Val Gln Arg Lys Ser Glu Gln Ala Glu Lys Ser Leu Glu Phe Leu Lys
            260                 265                 270
Gln Gln Leu Pro Glu Val Arg Gly Lys Leu Asp Gln Ala Glu Asp Lys
        275                 280                 285
Leu Asn Ala Phe Arg Arg Glu Asn Glu Ser Val Asp Leu Ser Leu Glu
    290                 295                 300
Ala Lys Ser Ala Leu Asp Ser Ser Val Ser Val Gln Ser Gln Leu Asn
305                 310                 315                 320
Glu Leu Thr Phe Arg Glu Ala Glu Val Ser Gln Leu Phe Thr Lys Asp
325                 330                 335
His Pro Thr Tyr Arg Ala Leu Leu Glu Lys Arg Lys Thr Leu Glu Asp
                340                 345                 350
Glu Gln Ala Gln Leu Asn Lys Lys Ile Ala Gln Met Pro Lys Thr Gln
            355                 360                 365
Gln Glu Ile Leu Arg Leu Thr Arg Asp Val Gln Ser Gly Gln Glu Ile
        370                 375                 380
Tyr Met Gln Leu Leu Asn Arg Gln Gln Glu Leu Ser Ile Ser Lys Ala
385                 390                 395                 400
Ser Thr Val Gly Asp Val Arg Ile Ile Asp Gln Ala Ala Thr Ala Asn
                405                 410                 415
Ser Pro Val Ala Pro Lys Lys Leu Leu Ile Ile Ala Ala Ser Leu Ile
            420                 425                 430
Leu Gly Leu Met Val Ser Val Gly Val Val Leu Leu Lys Ala Leu Leu
        435                 440                 445
His His Gly Ile Glu Asn Pro Glu Gln Leu Glu Glu Leu Gly Met Asn
    450                 455                 460
Val Tyr Ala Ser Val Pro Leu Ser Glu Trp Gln Arg Lys Lys Asp Thr
465                 470                 475                 480
Glu Ala Leu Ala Arg Arg Gly His Lys Gly Lys Thr Asp Pro His Glu
                485                 490                 495
Thr Leu Leu Ala Leu Gly Asn Pro Thr Asp Leu Ser Ile Glu Ala Ile
            500                 505                 510
Arg Ser Leu Arg Thr Ser Leu His Phe Ala Met Met Glu Ala Lys Asn
        515                 520                 525
Asn Ile Leu Met Ile Thr Gly Ala Ser Pro Gly Ile Gly Lys Thr Phe
    530                 535                 540
Ile Cys Val Asn Leu Ala Thr Leu Val Ala Lys Ala Gly Gln Lys Val
545                 550                 555                 560
Leu Phe Ile Asp Gly Asp Met Arg Arg Gly Tyr Thr His Glu Leu Leu
                565                 570                 575
Gly Ala Asp Asn Lys Ser Gly Leu Ser Asn Val Leu Ser Gly Lys Thr
            580                 585                 590
Glu Phe Thr Pro Thr Met Ile Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Phe Asp Phe
        595                 600                 605
Leu Pro Arg Gly Gln Val Pro Pro Asn Pro Ser Glu Leu Leu Met His
    610                 615                 620
Arg Arg Met Gly Glu Leu Leu Glu Trp Ala Ser Lys Asn Tyr Asp Leu
625                 630                 635                 640
Val Leu Ile Asp Thr Pro Pro Ile Leu Ala Val Thr Asp Ala Ser Ile
                645                 650                 655
Ile Gly Lys Leu Ala Gly Thr Ser Leu Met Val Ala Arg Phe Glu Thr
            660                 665                 670
Asn Thr Thr Lys Glu Val Asp Val Ser Phe Lys Arg Phe Ala Gln Asn
        675                 680                 685
Gly Ile Glu Ile Lys Gly Val Ile Leu Asn Ala Val Val Arg Lys Ala
    690                 695                 700
Ala Asn Ser Tyr Gly Tyr Gly Tyr Asp Tyr Tyr Asp Tyr Glu Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Lys Pro Thr Lys Ser
                725
<210>70
<211>378
<212>PRT
<213>Pantoea ananatis
<400>70
Met Ala Pro Tyr Trp Tyr Ile Ser Gly Phe Leu Leu Leu Ile Ser Leu
1               5                   10                  15
Phe Glu Ile Leu Val Lys Lys Asp Glu Arg Thr Asn Tyr Ile Leu Thr
            20                  25                  30
Trp Leu Leu Cys Phe Ala Ala Ile Ile Leu Ile Val Phe Gly Gly Ile
        35                  40                  45
Arg Gly Leu Gly Thr Gly Met Asp Asp Phe Gln Tyr Arg Ser Phe Phe
    50                  55                  60
Glu Asp Phe Val Arg Arg Ile Gln Ile Asn Gly Phe Phe Asn Thr Val
65                  70                  75                  80
Ala Phe Phe Arg Tyr Glu Pro Leu Ile Phe Ala Met Ala Trp Ile Thr
                85                  90                  95
Ser Leu Phe Ser His Asn Ala Ser Val Phe Leu Phe Val Phe Cys Ala
            100                 105                 110
Ile Ala Val Ser Ile Asn Ala Phe Phe Phe Arg Lys Met Ser Pro Tyr
        115                 120                 125
Pro Val Leu Ala Leu Ala Leu Tyr Ser Ala His Ile Phe Ile Asn Lys
    130                 135                 140
Asp Ile Asn Gln Ile Arg Phe Gly Leu Ser Ser Ala Leu Phe Leu Gly
145                 150                 155                 160
Val Leu Trp Thr Ile Tyr Leu Lys Arg Tyr Trp Trp Ala Phe Thr Phe
                165                 170                 175
Phe Ile Leu Ser Phe Met Ser His Asn Thr Ala Val Met Val Ile Thr
            180                 185                 190
Leu Val Pro Phe Leu Phe Ile Arg Asp Trp Arg Trp Trp Pro Val Val
        195                 200                 205
Ile Ile Val Val Ser Leu Pro Leu Ser Val Val Gly Gly Ser Ser Phe
    210                 215                 220
Ile Ala Leu Ile Ala Gly His Leu Gly Ser Leu Gly Glu Arg Ala Ser
225                 230                 235                 240
Gly Tyr Asn Asn Asp Pro Ser Tyr Ala Met Asp Gly Ser Ile Leu Ser
                245                 250                 255
Val Ser Asn Leu Lys Asn Ile Met Leu Val Phe Ile Phe Phe Tyr Phe
            260                 265                 270
Met Leu Thr Glu Glu Leu Lys Arg Glu Asn Tyr Ala Gln Tyr Arg Leu
        275                 280                 285
Asn Tyr Leu Leu Ile Leu Ser Phe Ala Ile Gly Gly Ala Ile Arg Ile
    290                 295                 300
Phe Leu Tyr Asn Phe Pro Ser Gly Ser Arg Leu Ser Asn Tyr Leu Gln
305                 310                 315                 320
Gln Val Glu Pro Ile Ile Leu Thr Ser Leu Ile Tyr Gln Ala Arg Arg
                325                 330                 335
Val Trp Lys Pro Ala Leu Phe Gly Met Leu Phe Phe Phe Leu Leu Tyr
            340                 345                 350
Tyr Leu Tyr Tyr Asn Thr Ile Ser Thr Lys Gln Ala Val Val Gly Tyr
        355                 360                 365
Glu Val Ala Gln Glu Phe Trp Leu Ile Arg
    370                 375
<210>71
<211>305
<212>PRT
<213>Pantoea ananatis
<400>71
Met Lys Asp Ile Arg Phe Ser Ile Val Ile Pro Ala Tyr Asn Ala Ser
1               5                   10                  15
Glu Ser Ile Val Thr Thr Leu Asp Cys Val Lys Ala Gln Thr Tyr Arg
            20                  25                  30
His Phe Glu Val Ile Ile Val Asp Asp Lys Ser Ala Asp Ala Ala Ala
        35                  40                  45
Leu Ala Glu Val Val Arg Ser Glu Arg Tyr Gln Asp Leu Asp Ile Asn
    50                  55                  60
Leu Val Leu Ser Glu Val Lys Leu Asn Gly Ala Gly Ala Arg Asn Lys
65                  70                  75                  80
Gly Ile Glu Leu Ala Thr Gly Asp Tyr Val Ser Phe Leu Asp Ala Asp
                85                  90                  95
Asp Glu Trp His Ala Asp Lys Leu Leu Gln Val Ser Glu Lys Ile Ala
            100                 105                 110
Glu Leu Glu Ala Gln Gly Gln His Asn Thr Ile Ile Phe Ser Gln Val
        115                 120                 125
Asn Ile Tyr Gln Asp Gly Ala Phe Leu Lys Val Met Pro Met Gln Pro
    130                 135                 140
Pro Ala Lys Asn Glu Thr Val Ala Glu Tyr Leu Phe Gly Cys Tyr Gly
145                 150                 155                 160
Phe Ile Gln Thr Ser Thr Ile Val Leu Lys Arg Glu Asp Ala Ala Lys
                165                 170                 175
Ile Gln Phe Asp Ala Arg Phe Ile Arg His Gln Asp Tyr Asp Phe Cys
            180                 185                 190
Ile Arg Ala Asp Arg Met Gly Tyr Arg Phe Glu Met Ile Ala Ala Pro
        195                 200                 205
Leu Ala Asn Tyr His Leu Val Thr Lys Phe Gly Ser Lys His Lys Gly
    210                 215                 220
Glu Set Val Lys Tyr Ser Leu Phe Trp Leu Asp Thr Met Lys Pro His
225                 230                 235                 240
Leu Thr Ala Arg Asp Ile His Thr Tyr Lys Ala Phe Lys Leu Pro Leu
                245                 250                 255
Arg Tyr Lys Met Asp Gly Asn Ser Leu Met Ala Ser Val Ser Phe Ala
            260                 265                 270
Arg Tyr Phe Leu Leu Thr Asn Lys Asp Asn Arg Thr Tyr Phe Leu Asn
        275                 280                 285
Arg Val Lys Asp Lys Leu Lys Ala Arg Leu Gly Gly Glu Lys Ala Leu
    290                 295                 300
Ser
305
<210>72
<211>89
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>72
caagttgata agatcttccg tgccgccgct ctggccgctg cagatgctcg aatccctctc    60
tgaagcctgc ttttttatac taagttggc                                      89
<210>73
<211>89
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>73
acgtgagcca ggaaatcagc ttcctgaacg ccggcttcgc gaatagattt cggaataccc    60
gctcaagtta gtataaaaaa gctgaacga                                      89
<210>74
<211>2688
<212>DNA
<213>产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)
<220>
<221>misc_feature
<222>(663)..(663)
<223>n为a，c，g或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(1303)..(1303)
<223>n为a，c，g或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(1869)..(1869)
<223>n为a，c，g或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(2609)..(2610)
<223>n为a，c，g或t
<220>
<221>misc_feature
<222>(2618)..(2618)
<223>n为a，c，g或t
<400>74
tcgcatgctc ccggccgcca tggccgcggg attctcgttg agcgtgtaaa aaaagcccag    60
cattgaatat gccagtttca ctcaagaaca agttgataag atcttccgtg ccgccgctct   120
ggccgctgca gatgctcgaa tccctctcgc taaaatggct gttgccgaat ccggcatggg   180
tattattgaa gataaagtga tcaaaaacca cttcgcttcc gaatatatct acaacgccta   240
taaagatgaa aagacctgtg gcgtcctgtc tgaagacgac actttcggta ceatcaccat   300
tgctgagcca atcggtatta tttgcggtat cgtcccgact accaacccga cttctactgc   360
tatcttcaaa tcgctgatca gcctgaagac gcgtaacgcc atcatcttct ctccgcaccc   420
gcgtgctgct aaagacgcga ctaacaaagc ggcggacatc gtattgcagg cagctattgc   480
cgcaggcgcg ccgaaagatc tgatcggttg gatcgaccag ccttccgtag aactgtctaa   540
cgcactgatg catcatcctg acatcaacct gatcctcgcc accggcggcc caggtatggt   600
taaggccgct tatagctccg gtaaaccagc tatcggcgtt ggcgcgggca acacgccggt   660
tgntattgat gaaacggctg atatcaaacg cgctgtggcg tccgtactga tgtcaaaaac   720
cttcgataac ggcgttatct gtgcttctga acaatccgtg gtggttgtcg actccgtcta   780
cgacgccgtc cgcgagcgtt ttgccagcca tggcggctac ctgctgcagg gtaaagagct   840
gaaagccgtt caggacatca tcctgaaaaa tggcgcgctg aatgcggcga tcgttggtca   900
accagcggca aaaatcgctg aactggcagg cttcaccgtg ccagccacca ctaagattct   960
gatcggcgaa gttaccgacg ttgacgaaag cgaaccgttc gctcacgaaa aactgtctcc  1020
gacgctggca atgtaccgtg cgaaagattt cgaagacgcg gtcaataaag cagaaaaact  1080
ggtcgccatg ggcggtatcg gtcacacctc ttgcctgtac accgaccagg acaaccagcc  1140
ggctcgcgtg gcctacttcg gccagatgat gaaaaccgcg cgtatcctga tcaacacccc  1200
ggcttcccag ggtggtatcg gcgacctgta taacttcaag ctcgcacctt ccctgactct  1260
gggttgtggt tcctggggtg gtaactccat ctctgaaaac gtnggtccga aacacctgat  1320
caacaagaaa accgttgcta agcgagctga aaacatgttg tggcataaac ttccgaaatc  1380
tatctacttc cgtcgtggct cactgccaat cgcactggat gaagtgatta ctgatggtca  1440
caaacgcgcg ctgattgtga ctgaccgctt cctgttcaac aacggttacg cggaccagat  1500
cacttccgta ctgaaagcgg ctggcgtaga aaccgaagtg ttctttgaag ttgaagctga  1560
cccaacgctg actatcgtgc gtaaaggcgc ggatctggcc aactccttca aaccagacgt  1620
aatcatcgcc ctgggcggcg gttccccgat ggatgcggca aaaatcatgt gggtcatgta  1680
cgagcacccg gaaacccact tcgaagaact ggcgctgcgc tttatggata tccgtaaacg  1740
tatctacaag ttcccgaaaa tgggcgtcaa agccaagatg gttgccatta ccaccacctc  1800
cggtaccggt tctgaagtta ccccgttcgc cgtagtaacc gacgatgcaa ctggacagaa  1860
atatccgcng gctgactacg ctctgactcc ggatatggcg attgtcgatg ccaacctggt  1920
catggatatg ccgaagtctc tctgtgcctt cggtggtctg gatgccgtga ctcacgctct  1980
ggaagcttac gtctccgtac tggcttctga gttctccgat ggtcaggctc tgcaggcgct  2040
gaaactgctg aaagagtatc tgccggcctc ttaccatgaa ggttctaaga acccggtagc  2100
ccgcgaacgt gtgcacagcg ccgccactat cgccggtatc gcgtttgcta acgccttcct  2160
cggcgtgtgc cactcaatgg cgcacaaact gggctcgcag ttccacattc ctcacggtct  2220
ggcaaacgcc ctgctgatca gcaacgttat ccgctataac gcgaatgaca acccgaccaa  2280
gcagaccgca ttcagccagt atgaccgtcc gcaggcgcgc cgtcgctacg ctgagatcgc  2340
agaccacctg ggcctgagcg ctccgggcga ccgcactgcg gcgaaaatcg agaaactgct  2400
ggcatggctg gaaagcctca aagctgaact gggtattccg aaatctatcc gtgaagctgg  2460
cgttcaggaa gcagacttcc tggcgaacgt ggataaactg tctgaagatg cattcgatga  2520
ccagtgcacc ggcgctaacc cgcgttaccc gctgatctcc gagctgaaac agattctgct  2580
ggatacctac tacggtcgtg atttatgtnn agaaggtnga aactgcagcg aagaaagaag  2640
ctgctccggc taaagctgag aaaaaagcga aaaaatccgc ttaatcag               2688
<210>75
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>75
aagagctccg cgaacgagcc atgacattgc                                     30
<210>76
<211>43
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>76
gtcgacacac gtcattcctc cttgtcgcct atattggtta aag                       43
<210>77
<211>361
<212>DNA
<213>产气肠杆菌
<400>77
aagagctccg cgaacgagcc atgacattgc tgacgactct ggcagtggca gatgacataa     60
aactggtcga ctggttacaa caacgcctgg ggcttttaga gcaacgagac acggcaatgt    120
tgcaccgttt gctgcatgat attgaaaaaa atatcaccaa ataaaaaacg ccttagtaag    180
tatttttcag cttttcattc tgactgcaac gggcaatatg tctctgtgtg gattaaaaaa    240
agagtgtctg atagcagctt ctgaactggt tacctgccgt gagtaaatta aaattttatt    300
gacttaggtc actaaatact ttaaccaata taggcgacaa ggaggaatga cgtgtgtcga    360
c                                                                    361
<210>78
<211>44
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>78
aaggaggaat gacgtgtgtc gactcacaca tcttcaacgc ttcc                      44
<210>79
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>79
ttgagctctt tttacagaaa ggtttagg                                        28
<210>80
<211>3461
<212>DNA
<213>谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)
<400>80
aaggaggaat gacgtgtgtc gactcacaca tcttcaacgc ttccagcatt caaaaagatc     60
ttggtagcaa accgcggcga aatcgcggtc cgtgctttcc gtgcagcact cgaaaccggt    120
gcagccacgg tagctattta cccccgtgaa gatcggggat cattccaccg ctcttttgct    180
tctgaagctg tccgcattgg taccgaaggc tcaccagtca aggcgtacct ggacatcgat    240
gaaattatcg gtgcagctaa aaaagttaaa gcagatgcca tttacccggg atacggcttc    300
ctgtctgaaa atgcccagct tgcccgcgag tgtgcggaaa acggcattac ttttattggc    360
ccaaccccag aggttcttga tctcaccggt gataagtctc gcgcggtaac cgccgcgaag    420
aaggctggtc tgccagtttt ggcggaatcc accccgagca aaaacatcga tgagatcgtt    480
aaaagcgctg aaggccagac ttaccccatc tttgtgaagg cagttgccgg tggtggcgga    540
cgcggtatgc gttttgttgc ttcacctgat gagcttcgca aattagcaac agaagcatct    600
cgtgaagctg aagcggcttt cggcgatggc gcggtatatg tcgaacgtgc tgtgattaac    660
cctcagcata ttgaagtgca gatccttggc gatcacactg gagaagttgt acacctttat    720
gaacgtgact gctcactgca gcgtcgtcac caaaaagttg tcgaaattgc gccagcacag    780
catttggatc cagaactgcg tgatcgcatt tgtgcggatg cagtaaagtt ctgccgctcc    840
attggttacc agggcgcggg aaccgtggaa ttcttggtcg atgaaaaggg caaccacgtc   900
ttcatcgaaa tgaacccacg tatccaggtt gagcacaccg tgactgaaga agtcaccgag   960
gtggacctgg tgaaggcgca gatgcgcttg gctgctggtg caaccttgaa ggaattgggt  1020
ctgacccaag ataagatcaa gacccacggt gcagcactgc agtgccgcat caccacggaa  1080
gatccaaaca acggcttccg cccagatacc ggaactatca ccgcgtaccg ctcaccaggc  1140
ggagctggcg ttcgtcttga cggtgcagct cagctcggtg gcgaaatcac cgcacacttt  1200
gactccatgc tggtgaaaat gacctgccgt ggttccgact ttgaaactgc tgttgctcgt  1260
gcacagcgcg cgttggctga gttcaccgtg tctggtgttg caaccaacat tggtttcttg  1320
cgtgcgttgc tgcgggaaga ggacttcact tccaagcgca tcgccaccgg attcattgcc  1380
gatcacccgc acctccttca ggctccacct gctgatgatg agcagggacg catcctggat  1440
tacttggcag atgtcaccgt gaacaagcct catggtgtgc gtccaaagga tgttgcagct  1500
cctatcgata agctgcctaa catcaaggat ctgccactgc cacgcggttc ccgtgaccgc  1560
ctgaagcagc ttggcccagc cgcgtttgct cgtgatctcc gtgagcagga cgcactggca  1620
gttactgata ccaccttccg cgatgcacac cagtctttgc ttgcgacccg agtccgctca  1680
ttcgcactga agcctgcggc agaggccgtc gcaaagctga ctcctgagct tttgtccgtg  1740
gaggcctggg gcggcgcgac ctacgatgtg gcgatgcgtt tcctctttga ggatccgtgg  1800
gacaggctcg acgagctgcg cgaggcgatg ccgaatgtaa acattcagat gctgcttcgc  1860
ggccgcaaca ccgtgggata caccccgtac ccagactccg tctgccgcgc gtttgttaag  1920
gaagctgcca gctccggcgt ggacatcttc cgcatcttcg acgcgcttaa cgacgtctcc  1980
cagatgcgtc cagcaatcga cgcagtcctg gagaccaaca ccgcggtagc cgaggtggct  2040
atggcttatt ctggtgatct ctctgatcca aatgaaaagc tctacaccct ggattactac  2100
ctaaagatgg cagaggagat cgtcaagtct ggcgctcaca tcttggccat taaggatatg  2160
gctggtctgc ttcgcccagc tgcggtaacc aagctggtca ccgcactgcg ccgtgaattc  2220
gatctgccag tgcacgtgca cacccacgac actgcgggtg gccagctggc aacctacttt  2280
gctgcagctc aagctggtgc agatgctgtt gacggtgctt ccgcaccact gtctggcacc  2340
acctcccagc catccctgtc tgccattgtt gctgcattcg cgcacacccg tcgcgatacc  2400
ggtttgagcc tcgaggctgt ttctgacctc gagccgtact gggaagcagt gcgcggactg  2460
tacctgccat ttgagtctgg aaccccaggc ccaaccggtc gcgtctaccg ccacgaaatc  2520
ccaggcggac agttgtccaa cctgcgtgca caggccaccg cactgggcct tgcggatcgt  2580
ttcgaactca tcgaagacaa ctacgcagcc gttaatgaga tgctgggacg cccaaccaag  2640
gtcaccccat cctccaaggt tgttggcgac ctcgcactcc acctcgttgg tgcgggtgtg  2700
gatccagcag actttgctgc cgatccacaa aagtacgaca tcccagactc tgtcatcgcg  2760
ttcctgcgcg gcgagcttgg taaccctcca ggtggctggc cagagccact gcgcacccgc  2820
gcactggaag gccgctccga aggcaaggca cctctgacgg aagttcctga ggaagagcag  2880
gcgcacctcg acgctgatga ttccaaggaa cgtcgcaata gcctcaaccg cctgctgttc  2940
ccgaagccaa ccgaagagtt cctcgagcac cgtcgccgct tcggcaacac ctctgcgctg  3000
gatgatcgtg aattcttcta cggcctggtc gaaggccgcg agactttgat ccgcctgcca  3060
gatgtgcgca ccccactgct tgttcgcctg gatgcgatct ctgagccaga cgataagggt  3120
atgcgcaatg ttgtggccaa cgtcaacggc cagatccgcc caatgcgtgt gcgtgaccgc  3180
tccgttgagt ctgtcaccgc aaccgcagaa aaggcagatt cctccaacaa gggccatgtt  3240
gctgcaccat tcgctggtgt tgtcaccgtg actgttgctg aaggtgatga ggtcaaggct  3300
ggagatgcag tcgcaatcat cgaggctatg aagatggaag caacaatcac tgcttctgtt  3360
gacggcaaaa tcgatcgcgt tgtggttcct gctgcaacga aggtggaagg tggcgacttg  3420
atcgtcgtcg tttcctaaac ctttctgtaa aaagagctca a                      3461
<210>81
<211>32
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>81
aagcatgcta cgcgaacgag ccatgacatt gc                                  32
<210>82
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>82
catacgtcat tcctccttgt cgcctatatt ggttaaag                            38
<210>83
<211>357
<212>DNA
<213>大肠杆菌
<400>83
aagcatgctc gcgaacgagc catgacattg ctgacgactc tggcagtggc agatgacata     60
aaactggtcg actggttaca acaacgcctg gggcttttag agcaacgaga cacggcaatg    120
ttgcaccgtt tgctgcatga tattgaaaaa aatatcacca aataaaaaac gccttagtaa    180
gtatttttca gcttttcatt ctgactgcaa cgggcaatat gtctctgtgt ggattaaaaa    240
aagagtgtct gatagcagct tctgaactgg ttacctgccg tgagtaaatt aaaattttat    300
tgacttaggt cactaaatac tttaaccaat ataggcgaca aggaggaatg acgtatg       357
<210>84
<211>37
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>84
gacaaggagg aatgacgtat gaatataaac gtcgcag                              37
<210>85
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>85
gggaaggatc catcctggga aaaagttctg                                      30
<210>86
<211>1781
<212>DNA
<213>产气肠杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(19)..(1704)
<400>86
gacaaggagg aatgacgt atg aat ata aac gtc gca gat ttg tta aac ggg     51
                    Met Asn Ile Asn Val Ala Asp Leu Leu Asn Gly
                    1               5                   10
aat tac atc ctg tta ttg ttt gtt gta ctc gca ctg ggt ctt tgc ctg     99
Asn Tyr Ile Leu Leu Leu Phe Val Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu
            15                  20                  25
ggg aaa ctt cgc ctc ggg tca gta caa ctt ggt aat tcc att ggc gtt    147
Gly Lys Leu Arg Leu Gly Ser Val Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val
        30                  35                  40
tta gtc gtt tct tta tta tta ggt cag cag cac ttc gcc att aac aca    195
Leu Val Val Ser Leu Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ala Ile Asn Thr
    45                  50                  55
gat gcg cta aat ctt ggc ttt atg ctg ttt att ttc tgc gtc ggc gtc    243
Asp Ala Leu Asn Leu Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Val
60                  65                  70                  75
gaa gcg ggc ccc aac ttt ttt tcg att ttt ttc cgc gac ggc aaa aac    291
Glu Ala Gly Pro Asn Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn
                80                  85                  90
tat cta atg ctg gcg ctg gtg atg gtg gcc agc gcg atg tta atc gct    339
Tyr Leu Met Leu Ala Leu Val Met Val Ala Ser Ala Met Leu Ile Ala
            95                  100                 105
atg ggg ctg ggc aaa ttg ttt ggc tgg gac atc ggc ctg acc gcc ggg    387
Met Gly Leu Gly Lys Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly
        110                 115                 120
atg ctg gcg ggc gct atg acc tcc acc ccg gtg ctg gtg ggc gct ggc    435
Met Leu Ala Gly Ala Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly
    125                 130                 135
gat acc cta cgc cac ttt ggc ctg ccc agc gat cag ctg gcg cag tcg    483
Asp Thr Leu Arg His Phe Gly Leu Pro Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ser
140                 145                 150                 155
ctt gac cac ctg agc ctg ggt tac gcc ctg act tac ctg gtt ggc ctg    531
Leu Asp His Leu Ser Leu Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Val Gly Leu
                160                 165                 170
gtg agc ctg atc gtc ggc gcg cgc tat atg ccg aag ctg cag cat cag    579
Val Ser Leu Ile Val Gly Ala Arg Tyr Met Pro Lys Leu Gln His Gln
            175                 180                 185
gat ctg cag acc agc gcc cag cag atc gcc cgc gag cgc ggt ctg gat    627
Asp Leu Gln Thr Ser Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp
        190                 195                 200
acc gac tcc aag cgt aaa gtc tat ctg ccg gtt atc cgc gcc tac cgc    675
Thr Asp Ser Lys Arg Lys Val Tyr Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg
    205                 210                 215
gtc ggc ccg gaa ttg gtc gcg tgg gcg gac ggc aaa aat ctt cgt gag    723
Val Gly Pro Glu Leu Val Ala Trp Ala Asp Gly Lys Asn Leu Arg Glu
220                 225                 230                 235
ctg gga att tac cgc cag acc ggc tgc tat atc gag cgt att cgt cgt    771
Leu Gly Ile Tyr Arg Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg
                240                 245                 250
aac ggt atc ctg gcg aac ccg gat ggc gac gcg gta ctg cag atg ggc    819
Asn Gly Ile Leu Ala Asn Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Met Gly
            255                 260                 265
gac gat atc gcg ctg gtt ggc tac ccg gac gcc cat gcc cgc ctc gac    867
Asp Asp Ile Ala Leu Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ala Arg Leu Asp
        270                 275                 280
cca agc ttc cgt aac ggt aaa gag gtg ttt gac cgc gac ctg ctc gat    915
Pro Ser Phe Arg Asn Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp
    285                 290                 295
atg cgt atc gtc acc gaa gag att gtg gtt aag aat cat aac gcc gtc    963
Met Arg Ile Val Thr Glu Glu Ile Val Val Lys Asn His Asn Ala Val
300                 305                 310                 315
ggc cgc cgc ctg gcg cag ctg aag ctg acc gat cac ggc tgt ttc tta    1011
Gly Arg Arg Leu Ala Gln Leu Lys Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu
                320                 325                 330
aac cgg gtg atc cgc agc cag att gag atg cca atc gac gat aac gtg    1059
Asn Arg Val Ile Arg Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Val
            335                 340                 345
gtg ctc aat aaa ggc gac gtg ctg cag gtg agc ggc gac gcc cgc cgc    1107
Val Leu Asn Lys Gly Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Asp Ala Arg Arg
        350                 355                 360
gta aaa acc gtc gct gac cgc atc ggc ttt att tcg att cac agc cag    1155
Val Lys Thr Val Ala Asp Arg Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln
    365                 370                 375
gtg acc gat ctg ctg gct ttc tgc gcc ttc ttt atc gtc ggc ctg atg    1203
Val Thr Asp Leu Leu Ala Phe Cys Ala Phe Phe Ile Val Gly Leu Met
380                 385                 390                 395
atc ggc atg atc act ttc cag ttc agc tcg ttc agc ttc ggc atc ggt    1251
Ile Gly Met Ile Thr Phe Gln Phe Ser Ser Phe Ser Phe Gly Ile Gly
                400                 405                 410
aac gcc gcc ggc ctg ctg ttc gcc ggc att atg ctt ggc ttc ctg cgc    1299
Asn Ala Ala Gly Leu Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Leu Arg
            415                 420                 425
gcc aac cat ccg acc ttc ggc tat atc ccg cag ggc gca ttg aac atg    1347
Ala Asn His Pro Thr Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met
        430                 435                 440
gtt aag gag ttc ggt ctg atg gtg ttt atg gcc ggg gtc ggc ctg agc    1395
Val Lys Glu Phe Gly Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser
    445                 450                 455
gcc ggc gcg ggt att aat aac ggt ctg ggc gcc att ggc ggg caa atg    1443
Ala Gly Ala Gly Ile Asn Asn Gly Leu Gly Ala Ile Gly Gly Gln Met
460                 465                 470                 475
ctg gct gcc ggt ctt atc gtc agc ctg gtg ccg gtg gtg atc tgc ttc    1491
Leu Ala Ala Gly Leu Ile Val Ser Leu Val Pro Val Val Ile Cys Phe
                480                 485                 490
ctg ttc ggc gcc tat gtg cta cgc atg aac cgc gcg atg ctg ttc ggc    1539
Leu Phe Gly Ala Tyr Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Met Leu Phe Gly
            495                 500                 505
gcg atg atg ggc gcg cgc acc tgc gcc ccg gcg atg gaa att atc agc    1587
Ala Met Met Gly Ala Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser
        510                 515                 520
gat acc gcg cgc agc aac att ccc gca ctc ggc tat gct ggc act tac    1635
Asp Thr Ala Arg Ser Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr
    525                 530                 535
gct atc gcc aac gtg ctg ctc acc ctt gcc ggt acg cta atc gtc atc    1683
Ala Ile Ala Asn Val Leu Leu Thr Leu Ala Gly Thr Leu Ile Val Ile
540                 545                 550                 555
atc tgg ccg ggc ctt ggc tag ccccggccga aaatttttaa ctttttcgca       1734
Ile Trp Pro Gly Leu Gly
                560
aaaaaatcgg tgatgaacag aactttttcc caggatggat ccttccc                1781
<210>87
<211>561
<212>PRT
<213>产气肠杆菌
<400>87
Met Asn Ile Asn Val Ala Asp Leu Leu Asn Gly Asn Tyr Ile Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Val Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg Leu
            20                  25                  30
Gly Ser Val Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser Leu
        35                  40                  45
Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Ala Ile Asn Thr Asp Ala Leu Asn Leu
    50                  55                  60
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Val Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Leu Met Leu Ala
                85                  90                  95
Leu Val Met Val Ala Ser Ala Met Leu Ile Ala Met Gly Leu Gly Lys
            100                 105                 110
Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly Met Leu Ala Gly Ala
        115                 120                 125
Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg His
    130                 135                 140
Phe Gly Leu Pro Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ser Leu Asp His Leu Ser
145                 150                 155                 160
Leu Gly Tyr Ala Leu Thr Tyr Leu Val Gly Leu Val Ser Leu Ile Val
                165                 170                 175
Gly Ala Arg Tyr Met Pro Lys Leu Gln His Gln Asp Leu Gln Thr Ser
            180                 185                 190
Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Thr Asp Ser Lys Arg
        195                 200                 205
Lys Val Tyr Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu Leu
    210                 215                 220
Val Ala Trp Ala Asp Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr Arg
225                 230                 235                 240
Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu Ala
                245                 250                 255
Asn Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Met Gly Asp Asp Ile Ala Leu
            260                 265                 270
Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ala Arg Leu Asp Pro Ser Phe Arg Asn
        275                 280                 285
Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val Thr
    290                 295                 300
Glu Glu Ile Val Val Lys Asn His Asn Ala Val Gly Arg Arg Leu Ala
305                 310                 315                 320
Gln Leu Lys Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile Arg
                325                 330                 335
Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Val Val Leu Asn Lys Gly
            340                 345                 350
Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Asp Ala Arg Arg Val Lys Thr Val Ala
        355                 360                 365
Asp Arg Ile Gly Phe Ile Ser Ile His Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu
    370                 375                 380
Ala Phe Cys Ala Phe Phe Ile Val Gly Leu Met Ile Gly Met Ile Thr
385                 390                 395                 400
Phe Gln Phe Ser Ser Phe Ser Phe Gly Ile Gly Asn Ala Ala Gly Leu
                405                 410                 415
Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Leu Arg Ala Asn His Pro Thr
            420                 425                 430
Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Asn Met Val Lys Glu Phe Gly
        435                 440                 445
Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Ala Gly Ile
    450                 455                 460
Asn Asn Gly Leu Gly Ala Ile Gly Gly Gln Met Leu Ala Ala Gly Leu
465                 470                 475                 480
Ile Val Ser Leu Val Pro Val Val Ile Cys Phe Leu Phe Gly Ala Tyr
                485                 490                 495
Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Met Leu Phe Gly Ala Met Met Gly Ala
            500                 505                 510
Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg Ser
        515                 520                 525
Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn Val
    530                 535                 540
Leu Leu Thr Leu Ala Gly Thr Leu Ile Val Ile Ile Trp Pro Gly Leu
545                 550                 555                 560
Gly
<210>88
<211>561
<212>PRT
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<400>88
Xaa Asn Xaa Asn Xaa Ala Xaa Leu Leu Xaa Gly Asn Xaa Ile Leu Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Xaa Val Leu Ala Leu Gly Leu Cys Leu Gly Lys Leu Arg Xaa
            20                  25                  30
Gly Ser Xaa Gln Leu Gly Asn Ser Ile Gly Val Leu Val Val Ser Leu
        35                  40                  45
Leu Leu Gly Gln Gln His Phe Xaa Xaa Asn Thr Asp Ala Leu Xaa Leu
    50                  55                  60
Gly Phe Met Leu Phe Ile Phe Cys Val Gly Xaa Glu Ala Gly Pro Asn
65                  70                  75                  80
Phe Phe Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Lys Asn Tyr Xaa Met Leu Ala
                85                  90                  95
Xaa Val Met Val Xaa Ser Ala Xaa Xaa Xaa Ala Xaa Gly Xaa Gly Lys
            100                 105                 110
Leu Phe Gly Trp Asp Ile Gly Leu Thr Ala Gly Xaa Leu Ala Gly Xaa
        115                 120                 125
Met Thr Ser Thr Pro Val Leu Val Gly Ala Gly Asp Thr Leu Arg Xaa
    130                 135                 140
Xaa Xaa Met Glu Xaa Xaa Gln Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Leu Ser
145                 150                 155                 160
Leu Gly Tyr Ala Xaa Thr Tyr Leu Xaa Gly Leu Val Ser Leu Ile Xaa
                165                 170                 175
Gly Ala Arg Tyr Xaa Pro Xaa Leu Gln His Gln Asp Leu Xaa Thr Xaa
            180                 185                 190
Ala Gln Gln Ile Ala Arg Glu Arg Gly Leu Asp Xaa Asp Xaa Xaa Arg
        195                 200                 205
Lys Val Xaa Leu Pro Val Ile Arg Ala Tyr Arg Val Gly Pro Glu Leu
    210                 215                 220
Val Ala Trp Xaa Xaa Gly Lys Asn Leu Arg Glu Leu Gly Ile Tyr Arg
225                 230                 235                 240
Gln Thr Gly Cys Tyr Ile Glu Arg Ile Arg Arg Asn Gly Ile Leu Ala
                245                 250                 255
Xaa Pro Asp Gly Asp Ala Val Leu Gln Xaa Gly Asp Xaa Ile Xaa Leu
            260                 265                 270
Val Gly Tyr Pro Asp Ala His Ala Arg Leu Asp Xaa Ser Phe Arg Asn
        275                 280                 285
Gly Lys Glu Val Phe Asp Arg Asp Leu Leu Asp Met Arg Ile Val Thr
    290                 295                 300
Glu Glu Xaa Val Val Lys Asn His Asn Ala Val Xaa Xaa Arg Leu Xaa
305                 310                 315                 320
Xaa Leu Xaa Leu Thr Asp His Gly Cys Phe Leu Asn Arg Val Ile Arg
                325                 330                 335
Ser Gln Ile Glu Met Pro Ile Asp Asp Asn Xaa Xaa Leu Asn Lys Gly
            340                 345                 350
Asp Val Leu Gln Val Ser Gly Xaa Ala Arg Arg Val Lys Xaa Xaa Ala
        355                 360                 365
Asp Arg Ile Gly Phe Xaa Xaa Ile His Ser Gln Xaa Thr Asp Leu Leu
    370                 375                 380
Ala Phe Cys Ala Phe Phe Xaa Xaa Gly Leu Met Xaa Gly Xaa Ile Thr
385                 390                 395                 400
Phe Gln Phe Ser Xaa Phe Ser Phe Gly Xaa Gly Asn Ala Ala Gly Leu
                405                 410                 415
Leu Phe Ala Gly Ile Met Leu Gly Phe Xaa Arg Ala Asn His Pro Thr
            420                 425                 430
Phe Gly Tyr Ile Pro Gln Gly Ala Leu Xaa Met Val Lys Glu Phe Gly
        435                 440                 445
Leu Met Val Phe Met Ala Gly Val Gly Leu Ser Ala Gly Xaa Gly Ile
    450                 455                 460
Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Met Leu Xaa Xaa Gly Leu
465                 470                 475                 480
Xaa Val Ser Leu Xaa Pro Val Val Ile Cys Xaa Leu Phe Gly Ala Tyr
                485                 490                 495
Val Leu Arg Met Asn Arg Ala Xaa Leu Phe Gly Ala Xaa Met Gly Ala
            500                 505                 510
Arg Thr Cys Ala Pro Ala Met Glu Ile Ile Ser Asp Thr Ala Arg Ser
        515                 520                 525
Asn Ile Pro Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Tyr Ala Ile Ala Asn Val
    530                 535                 540
Leu Leu Thr Leu Ala Gly Thr Xaa Ile Val Xaa Xaa Trp Pro Xaa Leu
545                 550                 555                 560

Claims (6)

1.一种微生物，其具备生产具有羧基的酸性物质的能力，并且经过修饰而增强了ybjL基因的表达，
其中所述微生物选自下组：大肠杆菌(Escherichia coli)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、Pantoea ananatis、和植生克雷伯氏菌(Klebsiellaplanticola)，
其中所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：2、4或87的氨基酸序列组成的蛋白质的基因，并且
其中所述酸性物质选自L-谷氨酸、L-天冬氨酸和琥珀酸，条件是：
其中当所述酸性物质为L-谷氨酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ IDNO：2的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是大肠杆菌、Pantoea ananatis或植生克雷伯氏菌；
当所述酸性物质为L-谷氨酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是Pantoea ananatis；
当所述酸性物质为琥珀酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是大肠杆菌或产气肠杆菌；
当所述酸性物质为琥珀酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：87的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是产气肠杆菌；
当所述酸性物质为L-天冬氨酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ IDNO：2的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是大肠杆菌。
2.权利要求1所述的微生物，其经过下述方式进行修饰而增加了ybjL基因的表达：提高ybjL基因的拷贝数或者修饰ybjL基因的表达调节序列。
3.一种生产具有羧基的酸性物质的方法，其特征在于，在培养基中培养权利要求1或2所述的微生物，从而在该培养基中生成并蓄积具有羧基的酸性物质，并且从该培养基中收集具有羧基的酸性物质，其中所述酸性物质选自L-谷氨酸、L-天冬氨酸和琥珀酸，条件是：
当所述酸性物质为L-谷氨酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是大肠杆菌、Pantoeaananatis或植生克雷伯氏菌；
当所述酸性物质为L-谷氨酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是Pantoea ananatis；
当所述酸性物质为琥珀酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是大肠杆菌或产气肠杆菌；
当所述酸性物质为琥珀酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：87的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是产气肠杆菌；
当所述酸性物质为L-天冬氨酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ IDNO：2的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是大肠杆菌。
4.一种生产具有羧基的酸性物质的方法，其特征在于，通过使权利要求1或2所述的微生物或该微生物的处理产物在含有碳酸根离子、碳酸氢根离子或二氧化碳气体的反应液中作用于有机原料来生成具有羧基的酸性物质，并且收集该酸性物质，其中所述酸性物质选自L-谷氨酸、L-天冬氨酸和琥珀酸，条件是：
当所述酸性物质为L-谷氨酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是大肠杆菌、Pantoeaananatis或植生克雷伯氏菌；
当所述酸性物质为L-谷氨酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是Pantoea ananatis；
当所述酸性物质为琥珀酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是大肠杆菌或产气肠杆菌；
当所述酸性物质为琥珀酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ ID NO：87的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是产气肠杆菌；
当所述酸性物质为L-天冬氨酸，且当所述ybjL基因是编码由SEQ IDNO：2的氨基酸序列组成的蛋白质的基因时，所述微生物是大肠杆菌。
5.权利要求4所述的方法，其中所述酸性物质为琥珀酸。
6.生产含琥珀酸的聚合物的方法，该方法包括：通过权利要求3-5中任一项所述的方法生产琥珀酸的步骤，以及使所得的琥珀酸聚合的步骤。
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