CN101132807A - 抗过敏组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于提供副作用降低，对人体和皮肤温和的抗过敏组合物。为了实现该目的，提供由啤酒花的组织的冷水提取物或从啤酒花的组织的冷水提取物分离的类黄酮苷构成的抗过敏组合物。

Description

抗过敏组合物
技术领域
本发明涉及抗过敏组合物。
背景技术
近年来，发现茶叶的成分可调节生物体的各种生理活性，特别是儿茶酸等多酚类的抗氧化作用受到注目(非专利文献1)。此外，报道了作为抗氧化剂有效的成分可通过使啤酒花苞的水溶性成分吸附于凝胶型合成吸附剂而获得(专利文献1)。
专利文献1：日本专利第3477628号公报
非专利文献1：New Diet Therapy.Vo.19，9(2003)
发明的揭示
为了排除侵入到体内的异物(细菌、花粉、螨等；也称抗原)，人类具备起到产生与之对抗的生物成分(抗体和淋巴细胞等)来保护身体的作用的免疫机能。然而，有时由于该免疫反应变得过于敏感，因而变得对身体有害，引起各种疾病。这样的由免疫机能障碍引起的反应被称为变态反应，分为速发型变态反应(或I～III型变态反应)和迟发型变态反应(或Ⅳ型变态反应)。
变态反应中，发病频率高的是速发型，主要涉及免疫球蛋白E(IgE抗体)。IgE是作为免疫细胞的B细胞针对侵入到体内的抗原而产生的蛋白质，作用于肥大细胞和嗜碱性白细胞，使得从这些细胞放出组胺和血清素等多种活性物质，引起各种过敏症状。例如，皮肤上产生伴随搔痒的发红和肿起的出疹(荨麻疹)，或者在鼻或眼部引发炎症而搔痒，鼻涕或泪液的分泌变得旺盛。此外，出现呼吸道堵塞或引起呼吸困难的发作的症状(支气管哮喘)等。
以往，所使用的抗过敏组合物大多是以治疗由速发型变态反应引起的症状为目的的作用点比较明确的药剂。作为这样的药剂，例如可以例举使平滑肌松弛的镇痉剂、抑制毛细血管透过性的亢进的交感神经兴奋剂、组胺游离抑制剂，它们都是对症性的治疗药，而且几乎都是化学合成药品，需要注意是否产生副作用。
本发明是鉴于这样的现有技术的问题而完成的，其目的在于提供可以充分降低副作用、对人体和皮肤温和的抗过敏组合物。
本发明人使用以人嗜碱性白细胞测定组胺的游离的筛选体系，添加各种食品成分，判定其效果，结果发现通过规定方法从啤酒花提取的提取物具有组胺游离抑制作用、即抗过敏作用，从而完成了本发明。
即，本发明涉及由啤酒花的组织的冷水提取物构成的抗过敏组合物。
该抗过敏组合物具有组胺游离抑制作用，例如将该抗过敏组合物对小鼠进行强制经口给药后，将小鼠抗DNP-IgE抗体向小鼠耳廓进行皮内给药，然后作为抗原向尾静脉注射DNP-HAS，求出耳廓厚度增加量和耳廓浮肿率，确认产生显著的变态反应抑制效果。此外，本发明的抗过敏组合物从作为天然物的啤酒花提取，提取方法也不需要使用特殊的有机溶剂而以冷水进行，因此产生副作用的可能性小，可以用作对人体和皮肤温和的抗过敏组合物，能够用作抗过敏剂。
另外，上述专利文献1中从啤酒花的花苞以95℃或80℃获得热水提取物，但是如后述的实施例和比较例所示，这样的热水提取物几乎不表现出抗变应性。此外，由于即使将冷水提取物加热抗变应性也不会下降，因此认为热水提取物和冷水提取物的有效成分完全不同。
对于本发明的抗过敏组合物，为了获得合适的组合物，啤酒花较好是使用啤酒酿造用啤酒花，作为啤酒花的组织，可以使用茎、球花或叶。另外，上述组织较好是经干燥的球花的粉碎物且蛇麻素的大小以下的粉碎物的至少一部分被除去，更好是经干燥的花苞的粉碎物。
对于在啤酒等发泡性酒精饮料的酿造中使用的啤酒花，使除去了茎和叶的球花干燥，粉碎后进行筛分，将过筛的粉碎物成形，作为啤酒花颗粒使用，但未过筛的粉碎物被废弃。该被废弃的粉碎物除去了蛇麻素的大小以下的粉碎物的至少一部分，其大部分为花苞，因此如果将其作为原料用于抗过敏组合物的提取，则有利于工业废弃物的减少，可以有效地利用啤酒花的花苞。
另外，上述的经干燥的球花的粉碎物较好是经干燥的球花的冻结物的粉碎物。如果将经干燥的球花在冻结后进行粉碎，则粉碎效率增加，不易受到粉碎时产生的热量的影响，因此，可以稳定地维持粉碎物所含的抗过敏组合物的抗过敏活性。此外，蛇麻素的大小以下的粉碎物容易地通过筛，因此超过蛇麻素的大小的粉碎物的纯度高，也可以提高抗过敏组合物的纯度。
此外，上述组织可以采用由经干燥的球花有机溶剂提取或超临界流体提取而得的物质的至少一部分被除去了的啤酒花残渣。在啤酒等发泡性酒精饮料的酿造中使用的啤酒花除了被制成啤酒花颗粒使用之外，还被用于啤酒花提取物的提取，提取啤酒花提取物后剩余的残渣被废弃。该被废弃的粉碎物除去了有机溶剂提取或超临界流体提取而得的物质的至少一部分，因此如果将其作为原料用于抗过敏组合物的提取，则有利于工业废弃物的减少。
上述冷水提取物典型的是含有类黄酮苷，从冷水提取物分离而得的类黄酮苷起到抗过敏组合物的作用，可以用作抗过敏剂。该类黄酮苷较好是黄酮醇苷，作为黄酮醇苷，较好是包含山奈黄素苷。作为山奈黄素苷，可以例举选自山奈黄素芸香二糖苷、紫云英苷和山奈黄素丙二酰葡糖苷的至少1种，抗过敏组合物还可含有作为黄酮醇苷的槲皮黄酮丙二酰葡糖苷。另外，黄酮醇为具有以下的式(1)的结构作为主核的化合物。
Figure A20068000671900061
山奈黄素苷具有以下的通式(2)所示的骨架。通式(2)中，R1为氢原子、R2为芸香二糖残基的情况为山奈黄素芸香二糖苷，R1为氢原子、R2为葡萄糖残基的情况为紫云英苷，R1为氢原子、R2为丙二酰葡萄糖残基的情况为山奈黄素丙二酰葡糖苷(紫云英苷丙二酸酯)。另外，通式(2)中，R1和R2都为氢原子的情况为黄酮醇，R1为OH基、R2为丙二酰葡萄糖残基的情况为槲皮黄酮丙二酰葡糖苷(异槲皮苷丙二酸酯)。
Figure A20068000671900062
黄酮醇苷被认为如果口服，则在消化道内以糖苷的状态直接被吸收或在消化道内水解形成游离型(糖苷配基)后被吸收(临床营养Vol.102，No3，285(2003))。此外，具有山奈黄素(或槲皮黄酮)的母核的类黄酮苷被认为水解后以糖苷配基的状态被吸收。
另外，上述的抗过敏组合物可以用作药品、化妆品或饮食品的成分。
如果采用本发明，则可提供来自肥大细胞和嗜碱性白细胞的组胺和血清素等药理活性胺的释放抑制作用良好，可以用于花粉病等过敏疾病的预防或症状的缓解的抗过敏组合物。本发明的抗过敏组合物来源于天然植物，因此可以充分地降低副作用的水平，能够得到对人体和皮肤温和的抗过敏组合物。
附图的简单说明
图1为从啤酒花的叶(日本产富良野18号)用水提取的黄酮醇成分的HPLC图谱。
图2为从啤酒颗粒(捷克产萨兹种)用水提取的黄酮醇成分的HPLC图谱。
图3为表示实施例2和比较例1～2中得到的啤酒花提取物的组胺游离抑制率(％)的图。
图4为表示实施例2和比较例3～5中得到的啤酒花提取物的组胺游离抑制率(％)的图。
图5为表示实施例2的冷水提取物和实施例2的冷水提取物的热处理物的组胺游离抑制率(％)的图。
图6为表示实施例2～5的冷水提取物的组胺游离抑制率(％)的图。
图7为表示对于强制经口给予蒸馏水或啤酒花冷水提取液的小鼠，向一侧的耳廓皮内注射小鼠IgE，向相反侧皮内注射生理盐水(PS)后，注射抗原引发变态反应的情况下的各耳廓的浮肿率的图。
图8为表示对于强制经口给予蒸馏水、啤酒花颗粒冷水提取液、啤酒花叶冷水提取液或富马酸酮替芬水溶液的小鼠，向一侧的耳廓皮内注射小鼠IgE，向相反侧皮内注射生理盐水(PS)后，注射抗原引发变态反应的情况下的各耳廓的浮肿率的图。
实施发明的最佳方式
本发明中使用的啤酒花较好是啤酒酿造的捷克产萨兹(Saaz)种、德国产哈勒道传统(Hallertau Tridition)种、日本产富良野18号等啤酒酿造用啤酒花种。
黄酮醇的含有比例根据啤酒花的品种而不同，为了获得抗过敏活性高的啤酒花提取物，较好是使用捷克产萨兹种。此外，提取中使用的啤酒花的组织可以任意选择啤酒花的叶、球花或茎，也可以使用球花或浓缩啤酒花颗粒加工时得到的废弃啤酒花或碳酸气提取(超临界提取)得到的残渣。
从这样的啤酒花的组织用冷水提取的提取物为本发明的抗过敏组合物，这里的“冷水”是指室温以下的水。冷水的温度较好是超过0℃、50℃以下，通常为超过0℃、30℃以下。冷水的温度更好是超过0℃、10℃以下，最好是5±3℃(特别是5±2℃)。另外，为了提高提取效率，缩短提取时间，冷水中可以添加少量的醇，较好是添加10重量％以下的乙醇。
提取是水在0℃以下时，因冻结而提取实质上变得困难，不是冷水时(例如超过50℃时)，抗过敏活性显著下降，所以不适合使用。
啤酒花的组织的冷水提取采用常规方法。例如，将啤酒花颗粒和水加入到容器中，适当搅拌的同时静置规定时间。这样静置后得到的液体可以直接作为冷水提取物使用，也可以将例如采集该液体离心后生成的上清(以下称为“离心上清”)而得的液体作为冷水提取物使用。另外，还可以将从静置后得到的液体或离心上清中除去水分而得的提取物作为冷水提取物使用。
本发明的抗过敏组合物较好是将经干燥的啤酒花苞的粉碎物的冷水提取物作为有效成分，也较好是将从经干燥的球花的粉碎物除去了蛇麻素的大小以下的粉碎物的至少一部分而得的粉碎物的冷水提取物作为有效成分。冷水提取中使用的该干燥球花的粉碎物通过例如具备以下工序的制造方法得到：将啤酒花的球花干燥而得到干燥球花的干燥工序、粉碎干燥球花而得到粉碎物的粉碎工序以及从该粉碎物中除去蛇麻素的大小以下的粉碎物的筛选工序。
干燥工序中，使啤酒花的球花在100℃以下的温度下干燥，除去水分至可保存球花的程度即可，较好是在55℃以下的温度下干燥至水分含量为7～9％。粉碎工序中，将以上工序得到的干燥球花高效地粉碎成微粉状即可，例如使用销棒粉碎机、锤碎机、球磨机等粉碎机即可。筛选工序中，可以将干燥球花的粉碎物过筛，例如将长径在0.1mm以上的粉碎物筛选为“超过蛇麻素的大小”的粉碎物。该情况下，较好是将无法通过筛的大小设为长径0.3mm以上，更好是长径0.5mm以上。从干燥球花的粉碎物中除去蛇麻素的大小以下的粉碎物时，例如用孔径0.1、0.3或0.5mm的筛筛分干燥球花的粉碎物，回收未通过筛的粉碎物即可。另外，从干燥球花的粉碎物除去了蛇麻素的大小以下的粉碎物的至少一部分而得的粉碎物的冷水提取通过上述的方法进行提取即可。
另外，用于调制本发明的抗过敏组合物的经干燥的球花的粉碎物较好是经干燥的球花的冻结物的粉碎物。冻结经干燥的球花的方法没有特别限定，温度较好是在-10℃以下，更好是在-35℃以下。
此外，本发明的抗过敏组合物可以将由经干燥的球花有机溶剂提取或超临界流体提取而得的物质的至少一部分被除去了的啤酒花残渣的冷水提取物作为有效成分。作为有机溶剂提取中使用的有机溶剂，例如可以例举醇或己烷，较好是碳数1～4的低级醇，更好是乙醇。作为超临界流体提取中使用的超临界流体，例如可以例举二氧化碳、水、甲烷、乙烷、乙烯、丙烷、戊烷、甲醇、乙醇，较好是二氧化碳。
如果对啤酒花的组织的冷水提取物再实施分离操作而得到类黄酮苷，则该糖苷也可以用作抗过敏组合物。分离的方法的优选例如下。首先，进行使冷水提取物与己烷接触而在水侧得到第1提取物的步骤(以下称为“第1步骤”)，接着实施使第1提取物与乙酸乙酯接触而在水侧得到第2提取物的步骤(以下称为“第2步骤”)。然后，进行使第2提取物与水难溶性醇(即不与水以任意比例混合的醇，较好是碳数4～5的链烷醇，特别好是丁醇)接触而在其中得到第3提取物的步骤(以下称为“第3步骤”)，从而获得类黄酮苷。
第1步骤中，可以使除作为目标的有效成分(类黄酮苷)以外的啤酒花提取物溶出到己烷中，将其选择性地从冷水提取物中除去。作为冷水提取物与己烷的接触方法，可以例举例如将上述的离心上清和己烷加入到分液漏斗后，振荡该分液漏斗，使冷水提取物与己烷接触的方法。使冷水提取物与己烷接触后，将分液漏斗静置，使其分离为水层和己烷层，在第2步骤中使用水层。
第2步骤中，使第1步骤中得到的第1提取物与乙酸乙酯接触。由此，可以进一步将除作为目标的有效成分以外的啤酒花提取物提取到乙酸乙酯中。作为第1提取物与乙酸乙酯的接触方法，可以例举例如将第1提取物和乙酸乙酯加入到分液漏斗后，振荡该分液漏斗，使第1提取物与乙酸乙酯接触的方法。使第1提取物与乙酸乙酯接触后，将分液漏斗静置，使其分离为水层和乙酸乙酯层，在第3步骤中使用水层。
第3步骤中，使第2步骤中得到的第2提取物与水难溶性醇接触而得到类黄酮苷。作为第2提取物与水难溶性醇的接触方法，可以例举例如将第2提取物和水难溶性醇加入到分液漏斗后，振荡该分液漏斗的方法。然后，将分液漏斗静置，分离为水层和水难溶性醇层，类黄酮苷含于水难溶性醇层中。为了获得更多的类黄酮苷，第3步骤可以重复进行多次，较好是重复2～4次。
另外，也可以通过将啤酒花的组织的冷水提取物通过填充了合成吸附剂(例如作为合成吸附剂，可以例举Amberlite XAD-4、7和16(オルガノ公司制，商品名)、活性炭、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP；多酚吸附剂)，其中较好是使用XAD-4)的柱来分离类黄酮苷。即，也可以通过将啤酒花的组织的冷水提取物通过填充了合成吸附剂的柱，使其吸附成分溶出于例如水和甲醇的混合溶剂中，从而得到类黄酮苷。
本发明的抗过敏组合物可以用于例如过敏性皮炎、支气管哮喘、过敏性鼻炎、血管性浮肿、特应性疾病、过敏性接触性皮炎、花粉病、荨麻疹等各种过敏性疾病的预防或症状的缓解。即，发挥作为抗过敏组合物的作用。
本发明的抗过敏组合物表现出组胺游离抑制作用和耳廓浮肿形成抑制作用，所以特别适合用于特应性皮炎、接触性皮炎和花粉病的预防或症状的缓解。此外，为了这些疾病的预防和症状的缓解，可以特别作为药品制成特应性皮炎、接触性皮炎和花粉病的预防剂或治疗剂。
另外，为了特应性皮炎、接触性皮炎和花粉病的预防或症状的缓解，可以作为食品添加物掺入到特定保健用食品、特殊营养食品、营养辅助食品、健康食品、功能性食品和病人用食品等饮食品中，可以作为化妆品添加物添加到皮肤护理制品、粉底和彩妆制品等化妆品中。
实施例
以下，例举实施例对本发明进行具体说明，但本发明并不局限于这些实施例。此外，只要没有特别说明，“％”表示“重量％”。
(实施例1)
自啤酒花叶的冷水提取：
将啤酒花叶(日本产富良野18号)切碎，浸于10倍量(w/v)的水中，在5℃静置一晚后，以7000rpm离心15分钟，回收上清，得到冷水提取物。
冷水提取物的鉴定：
将上清移至分液漏斗，加入己烷，弃去移入己烷的成分。然后，在水层中加入乙酸乙酯，弃去移入乙酸乙酯的成分。最后，在水层中加入正丁醇，重复3次丁醇提取操作，合并得到的丁醇层，减压浓缩，得到黄酮醇成分(从啤酒花的组织的冷水提取物中分离得到的类黄酮苷)。
首先，将得到的黄酮醇成分用高效液相色谱(HPLC)进行分析。基于HPLC的分析在40℃使用C18柱(Waters Symmetry)，流速设为0.2mL/分钟。流动相采用将0.05％TFA/H2O作为1液，将乙腈作为2液，使2液的比例在16分钟内从10％变至50％的线性梯度。检测通过350nm的UV检测器进行。
然后，将上述黄酮醇成分的各峰用分取用HPLC分离，鉴定各峰的成分。基于HPLC的分取用分离在40℃使用C18柱(Waters SunFire)，流速设为6mL/分钟。流动相采用10％MeCN保持10分钟后经150分钟变为60％MeCN的线性梯度。检测通过350nm的UV检测器进行。HPLC的分析结果示于图1。
如图1所示，啤酒花的叶提取物的黄酮醇成分中主要存在3个峰，它们全部被鉴定为山奈黄素苷。具体来说，图1的1所示的峰为山奈黄素芸香二糖苷，2所示的峰为紫云英苷，3所示的峰为山奈黄素丙二酰葡糖苷。另外，几乎没有检出槲皮黄酮丙二酰葡糖苷等槲皮黄酮苷。
(实施例2)
自啤酒花颗粒的冷水提取：
将1kg啤酒花颗粒(捷克产萨兹种：90型)加入到10L蒸馏水中，在5℃时时搅拌而使颗粒状态消失的同时，静置一晚。以7000rpm离心分离15分钟后，回收上清，再将其浓缩，得到150g的冷水提取物。
冷水提取物的鉴定：
将上清通过与实施例1同样的方法取得丁醇提取成分，以HPLC进行分析，进行成分的鉴定。HPLC分析的结果示于图2。如图2所示，啤酒花颗粒提取物的黄酮醇成分中主要存在3个峰，它们被鉴定为山奈黄素苷(紫云英苷和山奈黄素丙二酰葡糖苷)。具体来说，图2的1所示的峰为山奈黄素丙二酰葡糖苷，2所示的峰为紫云英苷，3所示的峰为槲皮黄酮丙二酰葡糖苷。另外，图2的4所示的峰为芸香苷，5所示的峰为异槲皮苷，6所示的峰为山奈黄素芸香二糖苷。
(比较例1)
以啤酒花颗粒(捷克产萨兹种：90型)达到1％(w/w)的条件用三氯甲烷-甲醇溶液(三氯甲烷∶甲醇＝3∶1)进行提取。提取在三氯甲烷-甲醇溶液的沸点进行2小时。收率为约15％。
(比较例2)
以啤酒花颗粒(捷克产萨兹种：90型)达到1％(w/w)的条件用煮沸水进行提取2小时。收率为约23％。
啤酒花提取物的组胺游离抑制作用的确认：
使用实施例2和比较例1～2中得到的啤酒花提取物，如下进行组胺游离抑制作用的确认。
将人嗜碱性白细胞株化细胞(KU812)用含有10％的在56℃灭活30分钟而得的牛胎血清的RPMI1640培养基(Gibco)，在37℃于5％CO2气氛下进行培养。将细胞用蒂罗德溶液重复清洗2次后，悬浮于蒂罗德溶液中，以2×106细胞/mL分注到1.5mL容积的试管中。在细胞悬浮液中分别加入表1所示的量的缓冲液、10mM的CaCl2、50μM的A23187和/或被测试样(啤酒花提取物)，在37℃进行组胺游离反应20分钟后，放入冰中5分钟，使反应停止。
[表1]
  细胞内总组胺   自然游离(阴性对照)   A23187(阳性对照) 被测试样
  10mM CaCl2   -   110μl   110μl   110μl
  50μM A23187   -   -   110μl   110μl
  被测化合物   -   -   -   110μl
  缓冲液   600μl   490μl   380μl   270μl
  细胞悬浮液   500μl   500μl   500μl   500μl
然后，在4℃以1000rpm离心分离3分钟，回收上清。从回收得到的上清用有机溶剂提取游离组胺，使其与邻苯二甲醛反应，对产生的荧光在以波长350nm的光激发后在450nm的波长处测定荧光强度，从而对游离组胺进行定量。此外，细胞内总组胺通过将同量的细胞悬浮液在冰中超声波破碎1分钟后，对在4℃以10000rpm离心分离3分钟得到的上清中的组胺含量进行测定而得到。组胺游离抑制率(％)以100-{(各试样的上清中的组胺含量-自然游离量)×100/(A23187刺激产生的组胺游离量-自然游离量)}的式子求得。
以与实施例2同样的条件得到的啤酒花冷水提取物和比较例1～2中得到的啤酒花提取物的组胺游离抑制率(％)示于图3。如图3所示，确认以与实施例2同样的条件得到的啤酒花冷水提取物得到了非常高百分比的组胺游离抑制率，但三氯甲烷-甲醇提取物(比较例1)和热水提取物(比较例2)未发现组胺游离抑制能力。
(比较例3～5)
将100g啤酒花颗粒(捷克产萨兹种：90型)加入1L蒸馏水，煮沸15分钟、30分钟、60分钟，将其以7000rpm离心分离15分钟后，回收上清作为提取物(热水提取物)。进行提取15分钟而得到的提取物为比较例3，进行30分钟而得到的提取物为比较例4，进行60分钟而得到的提取物为比较例5。
使用以与实施例2同样的条件得到的啤酒花冷水提取物和比较例3～5的热水提取物，与上述同样地操作，求得组胺游离抑制率(％)。其结果示于图4(各数据以圆表示，平均值以横线表示)。如图4所示，与热水提取物相比，冷水提取物的组胺游离抑制率要好2～3倍左右。
为了确认比较例3～5中出现低组胺游离抑制率(％)的理由是否是加热产生的失活，进行了以下的实验。即，对于以与实施例2同样的条件得到的冷水提取物和该热处理物(100℃30分钟)，与上述同样地操作，求得组胺游离抑制率(％)。其结果示于图5(各数据以圆表示，平均值以横线表示)。如图5所示，冷水提取物即使通过热处理也不会失去活性。因此，可以得出比较例3～5的热水提取物的有效成分与实施例2的冷水提取物不同的结论。
(实施例3～5)
改变使用的啤酒花的种类或组织，与实施例1或2同样地操作，得到冷水提取物，与上述同样地操作，算出组胺游离抑制率(％)。使用德国产哈勒道传统种的颗粒的为实施例3，使用日本产富良野β的颗粒的为实施例4，使用日本产啤酒花的嫩叶的为实施例5。组胺游离抑制率(％)的结果示于图6。另外，对于使用与实施例2同样的啤酒花(捷克产萨兹种的颗粒)的提取物，在图6中与实施例2一并记载。如图6所示，作为啤酒花种，确认捷克产萨兹种、德国产哈勒道传统种、日本产富良野β良好，作为组织，叶也良好。
(实施例6)
小鼠DNP-HAS产生的耳廓浮肿的啤酒花水提取物的抑制作用
将6周龄的ICR类小鼠(雄或雌；日本CHARLES RIVER)每1笼4～5只，在室温24±2℃、湿度55±15％、每隔12小时的明暗循环(明亮时间8:00-20:00)的条件下进行饲养。一周以上的预备饲养后，供于试验。试验组分别以10mL/kg强制经口给予啤酒花颗粒水提取液、啤酒花叶水提取液或富马酸酮替芬水溶液，对照组以10mL/kg强制经口给予蒸馏水。在这里，啤酒花颗粒水提取液通过以达到10％(w/w)的条件在蒸馏水中加入啤酒花颗粒(捷克产萨兹种)，在4℃提取一晚后，以3000rpm离心分离10分钟，过滤而制成。啤酒花叶水提取液通过以达到10％(w/w)的条件在蒸馏水中加入干燥啤酒花叶(日本产啤酒花嫩叶)，在4℃提取一晚后，以3000rpm离心分离10分钟，过滤而制成。此外，富马酸酮替芬水溶液通过以达到0.5mg/mL的浓度的条件溶解于蒸馏水中而制成。
经口给药1小时后，向小鼠一侧的耳廓皮内注射20μl的10μg/mL的小鼠抗DNP-IgE抗体(Sigma)，向相反侧的耳廓皮内注射20μl生理盐水(PS)。皮内注射24小时后，分别从尾静脉注射100μl的1mg/mL的DNP-HSA(抗原)。对抗原给予前和抗原给予30分钟后的耳廓厚度用厚度计各测定3次，求得耳廓浮肿率和耳廓厚度增加量。各组间的显著差异测验通过t测验进行。另外，耳廓浮肿率(％)以(抗原给予30分钟后的耳廓厚度平均值-抗原给予前的耳廓厚度平均值)×100/抗原给予后的耳廓厚度平均值的式子求得，耳廓厚度增加量(mm)以抗原给予30分钟后的耳廓厚度平均值-抗原给予前的耳廓厚度平均值的式子求得。
经口给予蒸馏水和啤酒花(捷克产萨兹种)水提取液的小鼠的耳廓浮肿率示于图7(图7的PS表示生理盐水)。蒸馏水经口给予组中，皮内注射IgE抗体的耳廓的耳廓厚度增加量为0.081±0.019mm，耳廓浮肿率为31.1±6.4(％)。另一方面，啤酒花颗粒水提取液经口给予组中，皮内注射IgE抗体的耳廓的耳廓厚度增加量为0.019±0.010mm，耳廓浮肿率为9.7±3.2(％)。啤酒花颗粒水提取液经口给予组与蒸馏水经口给予组相比，显著地抑制了耳廓浮肿率(p＜0.01)。与之相对，皮内注射生理盐水(PS)的耳廓的耳廓厚度在对照组和试验组中都未发现增加。
此外，经口给予蒸馏水、啤酒花颗粒水提取液、啤酒花叶水提取液或富马酸酮替芬水溶液的小鼠的耳廓浮肿率示于图8。蒸馏水经口给予组中，皮内注射IgE抗体的耳廓的耳廓厚度增加量为0.081±0.024mm，耳廓浮肿率为22.9±6.8(％)。另一方面，作为化学介质游离抑制剂的富马酸酮替芬水溶液给予组中，皮内注射IgE抗体的耳廓的耳廓厚度增加量为0.045±0.020mm，耳廓浮肿率为12.7±5.4(％)。富马酸酮替芬水溶液给予组与蒸馏水给予组相比，显著地抑制了耳廓浮肿率(p＜0.05)。另一方面，啤酒花颗粒水提取液给予组和啤酒花叶水提取液给予组虽然相对于蒸馏水给予组未发现统计上的显著差异(拒绝域5％)，但是提示存在抑制耳廓浮肿的倾向(p值0.08)。

Claims (16)

1.抗过敏组合物，其特征在于，由啤酒花的组织的冷水提取物构成。
2.如权利要求1所述的抗过敏组合物，其特征在于，前述啤酒花为啤酒酿造用啤酒花。
3.如权利要求1或2所述的抗过敏组合物，其特征在于，前述组织为茎、球花或叶。
4.如权利要求1或2所述的抗过敏组合物，其特征在于，前述组织为经干燥的花苞的粉碎物。
5.如权利要求1或2所述的抗过敏组合物，其特征在于，前述组织为从经干燥的球花的粉碎物除去了蛇麻素的大小以下的粉碎物的至少一部分而得的粉碎物。
6.如权利要求5所述的抗过敏组合物，其特征在于，前述经干燥的球花的粉碎物为经干燥的球花的冻结物的粉碎物。
7.如权利要求1或2所述的抗过敏组合物，其特征在于，前述组织为由经干燥的球花有机溶剂提取或超临界流体提取而得的物质的至少一部分被除去的啤酒花残渣。
8.如权利要求1～7中任一项所述的抗过敏组合物，其特征在于，前述冷水提取物含有类黄酮苷。
9.抗过敏组合物，其特征在于，包括从啤酒花组织的冷水提取物分离得到的类黄酮苷。
10.如权利要求8或9所述的抗过敏组合物，其特征在于，前述类黄酮苷为黄酮醇苷。
11.如权利要求10所述的抗过敏组合物，其特征在于，作为前述黄酮醇苷，含有山奈黄素苷。
12.如权利要求11所述的抗过敏组合物，其特征在于，前述山奈黄素苷为选自山奈黄素芸香二糖苷、紫云英苷和山奈黄素丙二酰葡糖苷的至少1种。
13.如权利要求11或12所述的抗过敏组合物，其特征在于，作为前述黄酮醇苷，还含有槲皮黄酮丙二酰葡糖苷。
14.药品，其特征在于，以权利要求1～13中任一项所述的抗过敏组合物为有效成分。
15.化妆品，其特征在于，含有权利要求1～13中任一项所述的抗过敏组合物。
16.饮食品，其特征在于，含有权利要求1～13中任一项所述的抗过敏组合物。
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