CN105287669A - 一种刺五加提取物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种刺五加提取物的制备方法及其在预防和治疗睡眠障碍药物中的应用。该刺五加提取物是刺五加药材经水或含水醇溶液加热回流提取后得到提取液，然后经聚合物色谱柱过滤，浓缩滤液干燥制备而得。该刺五加提取物杂质含量少，有效成分刺五加苷B和E含量高，药理活性获得大幅提升。实验表明，本发明制备的刺五加提取物具有显著的改善睡眠障碍的功效，且相比普通刺五加提取物效果更好。本发明工艺简单、能耗低、所得提取物生理活性高，适合工业化生产，值得推广应用。

Description

一种刺五加提取物及其应用

技术领域

本发明涉天然植物提取物领域，具体地涉及一种刺五加提取物的制备方法及其在治疗和预防睡眠障碍及其相关疾病方面的应用。

技术背景

刺五加为五加科五加属植物，又名五加参，老虎钉子，刺拐棒，刺针等。刺五加主要分布在我国东北，华北地区，河北及山西，日本的北海道，朝鲜的北方，韩国，俄罗斯的远东地区等地。刺五加自古即被视为具有添精补髓及抗衰老作用的良药，在《神农本草经》中，刺五加被列为上品，久服可以轻身、延年益寿。近代医学研究证明刺五加的作用特点与人参基本相同，具有调节机体紊乱，使之趋于正常的功能。刺五加具有良好的抗疲劳、增强免疫的作用，除此之外还具有改善睡眠质量、抗肿瘤、心血管系统作用、抗衰老、内分泌调节等众多药理作用。

现代对刺五加成分的研究表明，刺五加含有与人参相似的多种皂苷、多糖、黄酮等药理成分。刺五加总苷是其主要生物活性成分之一，已分离出七种刺五加皂苷，包括A、B、C、D、E、F、G，其中刺五加苷B和刺五加苷E为主要的有效成分。刺五加皂苷在刺五加根茎中的含量约为0.6%-1.5%，其中刺五加苷B约为0.3%-0.7%，刺五加甘E约为0.04%-0.09%。对于刺五加有效成分的提取，现有技术大多采用传统水体或醇提技术，然后经过沉淀、过滤、浓缩等手段得到刺五加的提取物。如专利CN200610014210即是在传统技术的基础上进行了一定改进，通过碱水初步提取后，经阴离子交换柱吸附除杂富集后得到提取液，然后浓缩干燥得到刺五加提取物。该专利将刺五加提取物中总苷的含量由25-65%提高到15-85%，使得刺五加提取物中的有效成分含量得到提高，相应的提高了产物生理活性。尽管如此，现有技术还是仅仅停留在对于刺五加总皂苷含量的提高方面，对于主要有效成分刺五加苷B和刺五加苷E在提取物中含量的提升以及无关杂质的去除，目前还未见报道卓有成效的方法。刺五加有效成分的纯化对于后续产品的开发、质量控制具有重要意义，因此研究开发富集刺五加有效成分的提取方法显得十分必要。

以苯乙烯、甲基丙烯酸酯(UniPMM)及苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物(UniPSN)为基质的单分散聚合物色谱填料是一种新型的填料，通过对粒径、粒径分布、比表面积、孔径结构及表面功能基团等的精确控制，使得单分散聚合物色谱填料具有分辨率高、载量大、刚性强、耐酸碱、反压低、使用寿命长及非特异性吸附低等特点。还未见有使用该类填料进行刺五加有效成分提取分离的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种刺五加提取物在制备预防和治疗睡眠障碍药物中的应用。

该刺五加提取物的制备工艺更合理、质量可控、活性成分含量更高。

本发明提供的刺五加提取物制备方法包含如下步骤：

（1）取刺五加药材，切成小段，加入溶剂，加热回流提取，合并提取液得到刺五加提取液；

（2）取步骤（1）中所得刺五加提取液，离心过滤，取滤液，上预处理好的聚合物色谱柱，依次采用纯水、低级醇溶液洗脱，丢弃纯水洗脱下来的鞣质类杂质，收集低级醇溶液洗脱液，浓缩干燥后即得最终刺五加苷提取物。

进一步地，步骤（1）中所述刺五加药材为刺五加的干燥根、茎或叶；所述溶剂为纯水或含水醇溶液。

进一步地，步骤（1）中所述加热回流提取方法为：取切好的刺五加药材，加入2-10倍药材量的提取溶剂，加热回流提取2-5次，每次提取1小时。其中最优提取方式是加热回流提取3次，3次提取溶剂用量分别为药材量的6-10倍、4-8倍、2-6倍，最优分别为8、6、4倍。提取温度控制在60-100℃，最优为85℃。

进一步地，步骤（2）所述聚合物色谱柱其填料为以苯乙烯、甲基丙烯酸酯(UniPMM)及苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物(UniPSN)为基质的单分散聚合物色谱填料，填料粒径为50-300μm；所述的低级醇为甲醇，乙醇等碳原子低于5的醇，低级醇溶液浓度为20%-80%，最优为30%。

本发明提供的方法制备的刺五加提取物经标定所得样品中刺五加苷B+刺五加苷E含量≥15%，较原料中刺五加苷B、E的含量提高了50倍以上。

本发明的另一目的是提供上述方法制备的刺五加提取物在制备预防和治疗睡眠障碍及相关疾病药物或保健品中的应用。所述相关疾病包括但不限于因为睡眠障碍而引起的消化系统紊乱、代谢紊乱、抵抗力下降、视力衰退、记忆力衰退、心脑血管疾病等并发症状。

本发明制备的刺五加提取物可以单独使用，也可以与其他类似活性成分结合，添加一种或多种药学上可接受的辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、甘露醇、葡萄糖、β-环糊精等混合制成各种剂型。例如可以制备成片剂、口服液、胶囊剂、丸剂、散剂、注射剂、颗粒剂、粉针剂等，优选剂型为经胃肠道给药的剂型如胶囊剂、片剂。

与现有技术相比，本发明将刺五加提取物中刺五加苷B和刺五加苷E的总体含量相对于药材提高了50倍以上，经本发明方法制备的刺五加提取物有效成分含量更高、杂质含量更低，以此为原料生产相关医药保健产品质量可控性强、产品稳定性好、服用量更小、药理活性更优。本发明工艺简单，能耗更低，符合节能减排的大体趋势，适合工业化推广应用。

本发明通过动物实验和人体试食实验研究表明，以本发明方法制备的刺五加提取物为主要有效成分制备的试验样品具有显著的改善睡眠质量的功效，且实际效果优于普通方法制备的刺五加提取物。

以下实施例旨在进一步说明本发明组合物，而不是限制本发明。在不违背本发明精神和原则的前提下，对发明个别技术步骤进行的任何改动或改变都将落入本发明保护范围内。

具体实施方式

实施例1

（1）取刺五加药材20kg（从药材批发市场采购），切成2-4cm的小段，先用自来水冲洗浸泡20分钟，然后加入纯水回流加热提取3次，每次加水量分别为药材量的8、6、4倍，每次加热沸腾后继续加热1小时，合并3次提取液。

（2）取步骤（1）中所得刺五加提取液，离心过滤，取滤液，上预处理好的聚合物色谱柱纯化，依次采用纯水、30%乙醇洗脱，丢弃纯水洗脱下来的鞣质类杂质，收集30%乙醇洗脱液，浓缩干燥后得最终刺五加苷提取物3.89kg。经含量检测最终提取物中刺五加苷B和刺五加苷E的总含量为15.82%。

实施例2

（1）取刺五加药材15kg（从药材批发市场采购），切成2-4cm的小段，先用自来水冲洗浸泡20分钟，然后加入纯水回流加热提取3次，每次加水量分别为药材量的10、6、6倍，每次加热沸腾后继续加热1小时，合并3次提取液。

（2）取步骤（1）中所得刺五加提取液，离心过滤，取滤液，上预处理好的聚合物色谱柱纯化，依次采用纯水、30%甲醇洗脱，丢弃纯水洗脱下来的鞣质类杂质，收集30%甲醇洗脱液，浓缩干燥后得最终刺五加苷提取物3.17kg。经含量检测最终提取物中刺五加苷B和刺五加苷E的总含量为15.12%。

实施例3

（1）取刺五加药材25kg（从药材批发市场采购），切成2-4cm的小段，先用自来水冲洗浸泡20分钟，然后加入纯水回流加热提取3次，每次加水量分别为药材量的8、8、4倍，每次加热沸腾后继续加热1小时，合并3次提取液。

（2）取步骤（1）中所得刺五加提取液，离心过滤，取滤液，上预处理好的聚合物色谱柱纯化，依次采用纯水、30%甲醇洗脱，丢弃纯水洗脱下来的鞣质类杂质，收集30%甲醇洗脱液，浓缩干燥后得最终刺五加苷提取物4.72kg。经含量检测最终提取物中刺五加苷B和刺五加苷E的总含量为15.43%。

试验例1本发明提取物改善睡眠功能实验

根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）“改善睡眠功能检验方法”，对本发明方法制备的提取物改善睡眠功能评价如下：

表1本发明提取物对小鼠直接睡眠的影响（n=20)

组别	剂量（mg/kg）	睡眠率%
			对照组	-	0
本发明提取物低剂量组	300	0
			本发明提取物中剂量组	600	0
本发明提取物高剂量组	1200	0
			普通刺五加提取物	1200	0

表2本发明提取物对戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间的影响（X±S，n=20）

组别	剂量（mg/kg）	睡眠时间（min）
			对照组	-	22.75±2.88
本发明提取物低剂量组	300	23.27±3.11
			本发明提取物中剂量组	600	25.92±2.69*
本发明提取物高剂量组	1200	28.31±3.27**
			普通刺五加提取物	1200	25.24±2.87*

注：与对照组相比，^*P≤0.05，^**P≤0.01。

表3本发明提取物对阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生率的影响（n=20）

组别	剂量（mg/kg）	睡眠发生率%
			对照组	-	25
本发明提取物低剂量组	300	35
			本发明提取物中剂量组	600	60*
本发明提取物高剂量组	1200	85**
			普通刺五加提取物	1200	55*

注：与对照组相比，^*P≤0.05，^**P≤0.01。

表4本发明提取物对巴比妥钠诱导小鼠睡眠潜伏期的影响（X±S，n=20）

组别	剂量（mg/kg）	睡眠潜伏期（min）
			对照组	-	18.79±2.74
本发明提取物低剂量组	300	19.14±3.25
			本发明提取物中剂量组	600	15.89±2.11*
本发明提取物高剂量组	1200	14.21±1.38**
			普通刺五加提取物	1200	16.15±1.62*

注：与对照组相比，^*P≤0.05，^**P≤0.01。

表1-4结果表明，本发明提取物各剂量组以及普通刺五加提取物对小鼠均无直接安眠作用，与正常组比较，本发明提取物中高剂量组能明显延长小鼠睡眠时间及提高睡眠发生率，且具有剂量依赖性，说明本发明提取物具有改善睡眠的功效。对比发现，本发明提取物效果明显优于普通刺五加提取物，说明经本发明方法处理后刺五加提取物中有效成分的提高对实际作用效果也有明显的影响，反应出本发明提取物改善睡眠作用生理活性的提高。

试验例2本发明提取物人体试食实验

观测案例：患者共计120例，其中男65例，女55例，年龄在32-68岁之间，均有不同程度的睡眠障碍，自愿参与测试。

服用方法：本发明提取物制备成胶囊剂，每粒胶囊含提取物300mg，口服，每日1次，一次3-6粒，睡前服用，连服15天。

疗效评判标准：

痊愈：睡眠时间恢复正常，或夜间睡眠时间能维持在5小时以上，睡眠深沉，醒后精力充沛；

显效：睡眠明显好转，睡眠时间增加3小时以上，睡眠深度增加；

有效：症状减轻，睡眠时间较前增加大于1小时，不足3小时；

无效：睡眠时间增加不足1小时。

试验结果：

治愈11例，显效62例，有效26例，无效21例，总有效率达82.5%。

典型案例

1、刘某，女，36岁，患有严重失眠近8个月。症状为：入睡困难，睡后易醒，醒后再难以入睡，每天睡眠时间不足4小时，心情烦躁、急躁，大便干燥，经常叹气，手脚心、身体经常发热。服用本发明提取物制备的改善睡眠胶囊服，每天1次，每次4粒，每粒胶囊300mg，睡前30分钟服用。该患者连续服用本发明改善睡眠胶囊3周后，其睡眠质量明显改善，晚上睡眠时间能维持在5小时以上，诸症减轻，无其他不良反应。后随访2个月未见复发。

2、张某，男，58岁，患有失眠近3年，平时入睡困难，多梦易醒，醒后难以入睡，平时每天睡眠时间估计在5小时左右，但是都是断断续续的。失眠后心烦急躁，经常健忘、心慌、腹部胀满、痰多、大便干燥。服用本发明提取物制备成的改善睡眠胶囊，每日1次，每次6粒，每粒含本发明提取物300mg，睡前30分钟服用。连续服用15天后，该患者睡眠有所改善，每次入睡能维持3小时以上，每天睡眠时间可以达到6小时左右。持续服用2个月，睡眠质量有明显改善，各症状有所减轻，同时白天精力充沛，记忆力明显提高。

3、李某，男，32岁，患有失眠近2年，睡眠质量差，多梦，时有眩晕，记忆力下降，体倦乏力，口干口苦，大便稀溏，舌质红，苔滑腻。服用本发明提取物制成的改善睡眠胶囊，每日1次，每次3粒，每粒300mg，睡前30分钟服用。连续服用20天后，睡眠有较大改善，体倦、口干口苦等有所缓解；继续服用3个月，记忆力明显改善，随访3个月未见复发。

Claims (9)

1.一种刺五加提取物在制备预防和治疗睡眠障碍药物中的应用，该刺五加提取物的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

（1）取刺五加药材，切成小段，加入溶剂，加热回流提取，合并提取液得到刺五加提取液；

（2）取步骤（1）中所得刺五加提取液，离心过滤，取滤液，上预处理好的聚合物色谱柱，依次采用纯水、低级醇溶液洗脱，丢弃纯水洗脱下来的鞣质类杂质，收集低级醇溶液洗脱液，浓缩、干燥后即得最终刺五加苷提取物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述刺五加药材为刺五加的干燥根、茎、叶或种子。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述溶剂为纯水或含水醇溶液。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述加热回流提取方法为：取切好的刺五加药材，加入2-10倍药材量的提取溶剂，加热回流提取2-5次，每次提取1小时；其中最优为加热回流提取3次，3次提取溶剂用量分别为药材量的6-10倍、4-8倍、2-6倍，最优分别为8、6、4倍；提取温度控制在60-100℃，最优为85℃。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（2）所述聚合物色谱柱，其填料为以苯乙烯、甲基丙烯酸酯(UniPMM)及苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物(UniPSN)为基质的单分散聚合物色谱填料，填料粒径为50-300μm。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述的低级醇为甲醇，乙醇等碳原子低于5的醇，低级醇溶液浓度为20%-80%，最优为30%。

7.根据权利要求1-6任一项制备的刺五加提取物，其特征在于该提取物中刺五加苷B与刺五加苷E的总含量≥15%。

8.权利要求1-7任一项所述刺五加提取物在制备预防和治疗睡眠障碍及相关并发症药物中的应用；所述睡眠障碍相关并发症包括但不限于因睡眠障碍引起的听力下降、免疫力低下、消化系统紊乱、代谢紊乱、视力下降、心脑血管疾病等。

9.如权利要求1所述的药物，其为以刺五加提取物为有效成分与药学上可接受的载体制备成的注射液、冻干粉、片剂、胶囊剂、颗粒剂、分散片、滴丸、泡腾片、软胶囊或口服液。