CH673457A5

CH673457A5 -

Info

Publication number: CH673457A5
Application number: CH3406/86A
Authority: CH
Inventors: Klaus Dr Goerler; Guenter Dr Krumbiegel; Michael Prof Dr Hanack; Lakshmina R Dr Subramanian
Original assignee: Madaus Ag
Priority date: 1985-08-28
Filing date: 1986-08-25
Publication date: 1990-03-15
Also published as: YU43998B; SE8603589L; IE59239B1; ATA215186A; MX172917B; DK407586A; IE862288L; US4835178A; DK407586D0; LU86556A1; FI92396C; GB2179347B; PL148757B1; PT83258A; FR2586681B1; FI92396B; AR242568A1; NL8602127A; FI863282A; YU114987A

Description

BESCHREIBUNG Die vorliegende Erfindung betrifft Methylendioxyphe-nanthren- und Stilbenderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und Arzneimittel, die diese Verbindungen enthalten.

,0 Als immunostimulierende Mittel bei Prophylaxe und Therapie von Infektionskrankheiten sind Aristolochiasäuren der Formel (II)

in der R, ein H-Atom oder OCH3 bedeutet und R2, R3 zusammen eine C-C-Bindung bilden, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze, dadurch gekennzeichnet, dass eine Nitroverbindung der Formel

COOH

N02

(II)

bekannt, worin R, ein H-Atom oder die -OCH3-Gruppe bedeuten, die eine phagozytosesteigernde und antivirale Wirkung entfalten und die Heilerfolge bei Allgemeininfektionen 25 erhöhen und auch erfolgreich zur Behandlung von Eiterungen und Geschwüren appliziert werden können.

Bei pharmakologischen Untersuchungen in höheren Dosisbereichen wurde jedoch kürzlich eine zelluläre Entartung am Vormagen bei der Ratte festgestellt, so dass in der Verabreichung dieser für die Behandlung an sich sehr wertvollen Wirkstoffe Zurückhaltung notwendig erscheint.

Überraschenderweise wurde nun jedoch gefunden, dass die Verbindungen der allgemeinen Formel (I)

30

35

worin R] für H oder OCH3 steht, mit einem Polysulfid zu einer Verbindung der Formel (I) denitriert wird.

8. Verfahren zur Herstellung eines Phenanthren-Deriva-tes der allgemeinen Formel (I):

40

cooh cooh

(I)

45

in der Ri Hydroxyl bedeutet und R2, R3 zusammen eine C-C-Bindung bilden, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze, dadurch gekennzeichnet, dass man das nach Patentanspruch 7 erhaltene Phenanthren-Derivat der Formel I, worin Rj als Methoxy vorliegt, einer Etherspaltung unterwirft.

9. Arzneimittel enthaltend mindestens eine Verbindung der allgemeinen Formel (I):

50

55

cooh

60

(I)

65

in der Rj Wasserstoff, Methoxy oder Ethoxy bedeutet und R2, R3 jeweils für ein H-Atom stehen oder zusammen eine aromatische C-C-Bindung bilden, wobei in diesem Fall Ri worin Rj ein H-Atom, Methoxy oder Ethoxy bedeutet und R2 und R3 für je ein H-Atom stehen oder zusammen eine C-C-Bindung symbolisieren, wobei im letzteren Falle Ri für ein H-Atom, Hydroxyl oder Ethoxy steht, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze selbst bei sehr hoher Dosierung (gegenüber der in der Humantherapie üblichen Dosis von 1-10 ng/kg) bei Ratten (10 mg/kg) weder makroskopisch noch histologisch Anzeichen einer Plattenepithelhyper-plasie ergaben. Desgleichen wurden keine mutagenen Effekte festgestellt.

Sie eignen sich sehr gut zur Prophylaxe und Therapie von Infektionskrankheiten, da sie eine phagozytosesteigernde und antivirale Wirkung entfalten.

Von diesen Verbindungen ist zwar das l-Carboxy-3,4-methylendioxy -8-methoxy-phenanthren aus J. Nat. Products 46 (1983) 507 ff., bekannt, von dem berichtet wird,

dass es in Dosen von 90 mg/kg (beim Kaninchen) abortiv und von 60 mg/kg (bei der Maus) implantationshemmend wirkt. Eine immunstimulierende Wirkung desselben war danach nicht zu vermuten.

Die Stilben-Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in der Ri ein H-Atom, Methoxy oder Ethoxy bedeutet und R2, R3 für H-Atome stehen, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze, können erfindungsgemäss mit den Merkmalen des Patentanspruches 2 hergestellt werden.

673 457

4

Die Phenantren-Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in welcher Ri ein H-Atom, Methoxy oder Ethoxy bedeutet und R2, R3 zusammen eine C-C-Bindung bilden, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze, lassen sich erfin-dungsgemäss mit den Merkmalen des Patentanspruches 3 hérstellen.

Phenantren-Derivate der allgemeinen Formel (I), in welcher R] Hydroxyl bedeutet und R2, R3 zusammen eine C-C-Bindung bilden, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze, können erfindungsgemäss mit den Merkmalen des Patentanspruches 4 oder 8 hergestellt werden. Weiterhin können Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in welcher Rj ein H-Atom oder OCH3 bedeutet und R2, R3 zusammen eine C-C-Bindung bilden, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze erfindungsgemäss gemäss den Merkmalen von Patentanspruch 7 hergestellt werden.

Besondere Ausführungsformen des Verfahrens nach Patentanspruch 2 oder 3 lassen sich mit den Merkmalen des Patentanspruches 5 bzw. 6 erreichen.

Somit können Arzneimittel geschaffen werden, die mindestens eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) enthalten, wie es durch Patentanspruch 9 wiedergegeben ist.

Bei z.B. der Bromierung des Piperonylalkohols verwendet man als Niedrigalkylcarbonsäure vorzugsweise Essigsäure. . ...

Bei der Herstellung des Phosphoniumsalzes verwendet man als wasserfreies Lösungsmittel z.B. Benzol oder ein Al-kylbenzol, vorzugsweise Toluol oder Xylol.

Bei der Kondensation des Phosphoniumsalzes verwendet man als starke Base z.B. ein Alkalimetallalkoholat, vorzugsweise Lithium-Methylat. Das dadurch erhältliche Stilben liegt z.B. zu 85% in der Z-Form und zu 15% in der E-Form vor. Die beiden Isomeren können durch Behandlung mit Diethylether getrennt werden. Die trans-Verbindung geht in den Ether über; die gewünschte eis-Verbindung bleibt ungelöst.

Bei der UV-Bestrahlung des Stilbenbromids arbeitet man z.B. in einem Lösungsmittelgemisch aus absolutem THF und absolutem Cyclohexan im Mischungsverhältnis z.B. 1:12 unter Zusatz von Jod und Zufuhr von Stickstoff.

Für die Denitrierung verwendet man als Polysulfid vorzugsweise Ammoniumpolysulfid in schwach alkalischer wässriger Lösung.

Die 8-Methoxy- bzw. 8-Ethoxyphenantrenverbindungen (R2 und R3 bilden zusammen eine aromatische C-C-Bin-dung; R! steht für Methoxy oder Ethoxy) können durch Ether-Spaltung in die entsprechenden 8-Hydroxyverbindun-gen überführt werden, beispielsweise durch Hydrolyse mit Pyridinhydrochlorid.

Die Verbindungen nach der Erfindung dienen zur Steigerung der Infektabwehr. So bewirken sie eine signifikante Aktivierung der Phagozytose von Leukozyten. Die Verbindungen nach der Erfindung sind deshalb zur Behandlung von Allgemeininfektionen, z.B. durch Mykobakterien oder Pneumokokken, und zur Behandlung von lokalen Infektionen brauchbar. Sie sind auch anwendbar, wenn eine Depression der Phagozytose vorhegt, beispielsweise nach Anwendung von Corticosteroiden oder Zytostatika. Durch Anwendung der erfindungsgemässen Mittel ist die Phagozytosedepression wieder normalisierbar.

Darüber hinaus wurde eine antivirale Wirkung der Verbindungen nach der Erfindung gefunden.

Die erfindungsgemässen Verbindungen wurden u.a. hinsichtlich ihrer makrophagenaktivierenden Wirkung untersucht. Als Parameter wurde die Stimulation von Monozyten und Makrophagen in der Bauchhöhle von Mäusen herangezogen.

Zur Darstellung einer gesteigerten chemotaktischen Einwanderung von Monozyten in die Bauchhöhle und die Differenzierung der Monozyten zu Makrophagen mit gesteigerter Fähigkeit zur Phagozytose ist eine intraperitoneale Applikation der Testsubstanz zweckmässig.

5 Die Stimulation ist ein Prozess, der eine bestimmte Zeit erfordert. Die Prüfung der Phagozytoseaktivität wurde daher als übliches pharmakologisches Modell nach einer dreitägigen Vorbehandlung der Mäuse mit den erfindungsgemässen Verbindungen vorgenommen. In einigen Testgrup-pen wurde unmittelbar nach Substanzgabe die intraperitoneale Zellpopulation entnommen, um zu zeigen, dass die beobachtete Stimulation erst nach einer gewissen Inkubationszeit auftrat.

15

Substanzen und Materialien Die zu prüfenden Substanzen wurden wässrig gelöst 0,5 mg/ml und nach Bedarf verdünnt

NH4C1-Tris-Puffer 20 NH4C1 Tris [Tris-(hydroximethyl)-aminomethan]

Mischung

25

30

PBS/BSA 40,0 g NaCl 1,0 g KCl

7,2 g NaiHP04 x 2H20 1,0 gKH2P04

: 8,3 g/1

: 4,119 g/200 ml pH=7,65

: 1 Teil Tris + 9 Teile nh4ci, auf pH 7,2 einstellen mit 2N HCl auf 51 mit HiO auffüllen, pH = 7,4

35

+ 0,2 g BSA=Albumin, Bovine (Sigma, No. A-9647) auf 100 ml PBS

DMEM

= Dulbecco's modified Eagle medium with L-Gluta-

mine ohne Phenolrot (Gibco, Cat No. 041-1885) + 5% FCS bzw. 5% FCS + 0,2% Heparin

40 FCS

= Foetales Kälberserum (Gibco, Cat No. 011-6290)

May-Grünwald-Lösung modifiziert (Merck, Art. 1424)

Hammelblut

Nr. 5, 30.08.84, MPI Freiburg

45

Antiserum

50 Anti-Hammelerythozyten-Serum von Kaninchen Nr. 308, IKA 468/6-11 Tage; 18.07.78, MPI Freiburg

Versuchstiere

Die Untersuchungen wurden mit 18 Wochen alten weib-55 liehen Hybridmäusen (Balb/'c x C57B16) Fl durchgeführt. Die Tiere wurden vor Beginn der Experimente 5 Tage lang an die Laborbedingungen angepasst. Sie erhielten pelletiertes Standardfutter für Ratten und Mäuse (Altromin Nr. 1324) und Leitungswasser ad libitum. Sie wurden mit einem 60 Thioglycolat-Standard auf drei Makrophagenstimulierbar-keit geprüft und zeigten dabei gute Positiv-Reaktionen.

Dosierung und Applikation

Die Substanzen wurden in wässriger Lösung (0,5 mg/ml) 65 in den folgenden Dosen appliziert:

intraperitoneal: 20 meg/kg

500 meg/kg 5 mg/kg

673 457

Die Verdünnung der Mutterlösung für die Applikation der verschiedenen Dosen betrug bei

20 mcg/kg 1 mcg/ml

500 mcg/kg 25 mcg/ml 5 mg/kg 250 mcg/ml davon jeweils 0,4 ml

Applikationsschema 1 Gruppe = 5 Mäuse Vorbehandlung:

a) 3 Applikationen an 3 aufeinanderfolgenden Tagen; am 4. Tag Gewinnung der Makrophagen.

b) Eine Applikation unmittelbar vor der Makrophagen-gewinnung.

Gewinnung der Makrophagen-Zellsuspension und Phagozytose

Testprinzip

Nach Applikation von immunologisch aktivierenden Substanzen werden in den Versuchstieren Makrophagen stimuliert und Monozyten zur Differenzierung in Makrophagen veranlasst. Die ausdifferenzierten, stimulierten Makrophagen sind auch nach Isolierung in der Lage, mit entsprechenden Antikörpern opsonierte Antigenstrukturen, in diesem Fall Hammelerythrozyten, in vitro zu phagozytieren. Die phagozytierten Erythrozyten sind mikroskopisch erkennbar.

Durchführung

Nach entsprechender Vorbehandlung werden die Mäuse durch Halswirbelfraktur getötet. Das Peritoneum wird freigelegt und 4 ml DMEM (5% foetales Kälberserum, 0,2% Heparin) werden intraperitoneal appliziert. Nach ca. 30 sec Massage werden 3 ml Zellsuspension mit einer Spritze abgezogen und in einem Polypropylenröhrchen in ein Kältebad (0 °C) gebracht. Aus jeder Testgruppe wurde eine Maus zur Ermittlung der Zellkonzentration im Exsudat herangezogen; es wurde näherungsweise eine Konzentration um 4 x 105 Zellen/ml eingestellt.

Isolierung adhärenter Makrophagen:

Makrophagen und Monozyten werden aus der isolierten Zellpopulation dadurch selektiert, dass man sie auf Deckgläschen inkubiert; Makrophagen und Monozyten adhärie-ren hierbei, andere Zellen nicht. In Gewebekulturschalen mit 24 Näpfchen (Polystyrol, Fa. Costar) werden runde Deckgläschen gelegt und mit 0,25 ml DMEM (mit 5% foetalem Kälberserum) überschichtet. Zur gleichmässigen Verteilung der Zellen werden die Schalen auf einen Schüttler gebracht, und in jeden Einsatz werden unter Schütteln (5 min, ca. 200 UPM) 0,25 ml Zellsuspension pipettiert. Anschliessend werden die Gewebekulturschalen 1 Stunde bei 37 °C und 8% C02 im Brutschrank inkubiert. Nach der Inkubation werden die nicht adhärenten Zellen abgesaugt, danach zweimal mit 0,25 ml DMEM (plus 5% foetales Kälberserum) gewaschen.

Opsonieren der Hammelerythrozyten:

1 ml Hammelblut wird zweimal mit 4 ml PBS/BSA gewaschen (Zentrifugieren, 10 min, bei ca. 500 x g). Das gewaschene Blut wird 1:50 mit PBS/BSA verdünnt. Das Antise-rum gegen Hammelerythrozyten wird mit PBS/BSA 1:200/ verdünnt. Verdünntes Hammelblut und verdünntes Antise-rum wird 1:1 zusammengegeben und 1,5 Stunden unter schonendem Schütteln (ca. 80 UPM) inkubiert.

Phagazytose:

In jedes Näpfchen der Gewebekulturschalen mit adhärenten Makrophagen auf den Deckgläschen wird 0,5 ml opsonierte Erythrozytensuspension pipettiert. Die Schalen werden 20 min bei 37 °C und 8% C02 inkubiert. Danach werden die überschüssigen Erythrozyten abgesaugt und die 5 Deckgläschen zweimal mit DMEM (0,5% FCS) gewaschen.

Zur Lyse nicht phagozytierter Erythrozyten werden diese mit jeweils 1 ml NH4C1-Tris-Puffer behandelt (es wurde eine Einwirkzeit von 3,75 min als geeignet ermittelt). Nach Absaugen des Puffers wurden die Deckgläschen zweimal mit 10 PBS/BSA gewaschen.

Phagazytosedarstellung (Färbetechniken)

Nach Phagazytose werden Makrophagen nach Pappenheim nach einer kombinierten May-Grünwald-Giemsa-Me-15 thode angefärbt. Die Färbung wird in den Näpfchen der Gewebekulturschalen ausgeführt.

- 5 min May-Grünwald konz., absaugen

- 3 min H20 bidest., mit H3P04 mind 85% auf pH 7,0 eingestellt; absaugen

20 - 9 min Giemsa-Lösung 1:40 verdünnt und vor Gebrauch filtriert; absaugen

- mit H20 dest. aus der Spritzflasche nachspülen

Die Zellkerne sind nach der Färbung rotviolett, das Zy-toplasma hellblau. Die phagozytierten Erythrozyten sind 25 blassrosa erkennbar. Nach Lufttrocknung werden die Mikroskop-Präparate mit «Eukitt» auf Objektträgern festgeklebt (3 Präparate/Maus).

Mikroskopische Auswertung 30 Von den drei Mikroskop-Präparaten einer Maus wurden zwei ausgezählt. Es wurde ein Zeiss-Mikroskop bei 1000fa-cher Vergrösserung und Ölimmersion verwendet. Das dritte Präparat wurde herangezogen, wenn das Ergebnis aus zwei Präparaten nicht eindeutig war. Pro Präparat wurden 300 35 Zellen gezählt und in Abhängigkeit von der Phagozytoseaktivität unterteilt in Klassen mit steigender Anzahl Erythrozyten/Makrophage.

40

45

50

Klasse Erythrozyten/Makrophage

1 0

2 1

3 2

4 3

5 4

6 5

7 6

8 7

9 8

10 9

11 10

12 11-20+

+ Für Berechnungen wurde angenommen, dass bei > 11 Erythrozyten/MPH die Verteilung in der Klasse 12 einen 55 Schwerpunkt um 12 Erythrozyten/Makrophage aufweist. Makrophagen der 12. Klasse traten relativ selten auf.

Datenverarbeitung und graphische Darstellungen

Die Auszählung der mikroskopischen Präparate wurde 60 an einer Rechenanlage WANG LVP 2200 mit einem speziellen Eingabeprogramm ausgeführt, das die separate Erfassung der Zählklassen erlaubte. Die Mitteilung von Einzeldateien wurde mit dem Programm «MA 1», die graphischen Darstellungen mit dem Programm «NPL» ausgeführt. 65 Der Stimulationseffekt wurde für jede Testsubstanz und Dosis auf zwei Arten dargestellt:

1. Verteilung der Makrophagen auf die Klassen (Erythrozyten/Makrophage) in %, bezogen auf 300 Zellen als

673 457

100%. Hierbei geht auch die Anzahl der Makrophagen in die graphische Darstellung ein, die keinen Erythrozyten pha-gozytiert hatten.

2. Verteilung der phagozytierten Erythrozyten (Anzahl der NPH in einer Klasse x Anzahl der Erythrozyten/MPH) auf die Klassen in %, bezogen auf die Gesamtzahl der phagozytierten Erythrozyten als 100%. Hierbei bleibt die Zahl der Makrophagen, die keinen Erythrozyten phagozytiert hatten, unberücksichtigt.

Parameter

Als Parameter der Makrophagenstimulation wurde die Steigerung der Phagozytoseaktivität, ausgedrückt als Anzahl phagozytierter Erythrozyten pro Makrophage (=Klasse), betrachtet. Eine Stimulation zeigt sich in einer Abnahme der Makrophagen, die keine oder wenige Erythrozyten phagozytiert hatten und in einer Zunahme der Makrophagen mit mehreren Erythrozyten.

Ergebnisse

In den nachfolgenden Abb. 1,3 und 5 ist jeweils die Ma-krophagen-Stimulation MPH gegen die Klasse K und in

Abb. 2,4 und 6 sind die phagozytierten Erythrozyten/Klasse in Prozent PHE gegen die Klasse K aufgetragen.

MPH-Stimulation durch l-Carboxy-3,4-methylendioxy-B-methoxyphenanthren (i.p.):

5 Abb. l_und 2: 3 x 20 mcg/kg i.p. MPH-Stimulation nach 3 Tagen (x ± SEM)

a) Die Abb. 1 zeigt die Verteilung von 300 Zellen auf die Klassen 1 bis 12 in %.

b) Die Abb. 2 zeigt die Verteilung der phagozytierten 10 Erythrozyten auf die Klassen 1 bis 12 in %.

Abb. 3 und_4: 3 x 500 mcg/kg i.p. MPH-Stimulation nach 3 Tagen (x ± SEM)

a) Die Abb. 3 zeigt die Verteilung von 300 Zellen auf die Klassen 1 bis 12 in %.

15 b) Die Abb. 4 zeigt die Verteilung der phagozytierten Erythrozyten auf die Klassen 1 bis 12 in %.

Abk5 und 6: 3 x 5 mg/kg i.p. MPH-Stimulation nach 3 Tagen (x ± SEM)

a) Die Abb. 5 zeigt die Verteilung von 300 Zellen auf die 20 Klassen 1 bis 12 in %.

b) Die Abb. 6 zeigt die Verteilung der phagozytierten Erythrozyten auf die Klassen 1 bis 12 in %.

Tabelle:

3 x 20 mcg/kg i.p. MPH-Stimulation nach 3 Tagen a) Verteilung von 300 Zellen auf die Klassen 1 bis 12 in %

Kl.

Maus

n

1

2

3

4

x-quer

SD

SE

MD

1

1,00

75,67

71,33

66,50

72,17

71,417

3,777

1,889

71,750

2

2,00

12,67

17,00

20,00

15,50

16,292

3,056

1,528

16,250

3

3,00

6,83

6,17

8,67

7,67

7,333

1,080

0,540

7,250

4

4,00

2,17

3,33

3,50

2,50

2,875

0,644

0,322

2,917

5

5,00

0,67

1,67

1,17

1,167

0,408

0,204

1,167

6

6,00

1,33

0,17

0,458

0,583

0,292

0,167

7

7,00

0,17

0,33

0,00

0,50

0,250

0,215

0,108

0,250

8

8,00

0,00

0,17

0,042

0,083

0,042

0,000

9

9,00

0,17

0,00

0,042

0,083

0,042

0,000

10

10,00

0,00

0,000

11

11,00

0,33

0,00

0,17

0,125

0,160

0,080

0,083

12

12,00

0,00

0,000

b) Verteilung der phagozytierten Erythrozyten auf die Klassen 1 bis 12 in %

Kl.

Maus

n

1

2

3

4

x-quer

SD

SE

MD

1

1,00

0,0

0,00

2

2,00

26,5

34,8

37,5

31,2

32,50

4,77

2,38

33,01

3

3,00

28,6

25,3

32,5

30,9

29,30

3,14

1,57

29,72

4

4,00

13,6

20,5

19,7

15,1

17,21

3,39

1,69

17,39

5

5,00

5,6

13,7

8,8

9,4

9,34

3,32

1,66

9,07

6

6,00 ,

13,9

1,7

1,6

1,7

4,72

6,14

3,07

1,69

7

7,00

2,1

4,1

0,0

6,0

3,06

2,60

1,30

3,09

8

8,00

0,0

2,3

0,59

1,17

0,59

0,00

9

9,00

2,8

0,0

0,70

1,39

0,70

0,00

10

10,00

0,0

0,00

11

11,00

7,0

0,0

3,4

2,58

3,33

1,66

1,68

12

12,00

0,0

0,00

7

673 457

Tabelle:

3 x 500 mcg/kg i.p. MPH-Stimulation nach 3 Tagen a) Verteilung von 300 Zellen auf die Klassen 1 bis 12 in %

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

Kl.

1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,00 11,00 12,00

Maus 1

63,00 13,00 8,00 5,00 4,33 2,83 1,17 0,83 1,17 0,00 0,67 0,00

Maus 2

52,83 19,67 11,83 6,00 3,83 2,83 1,33 0,50 0,67 0,17 0,33 0,00

Maus 3

53,83 20,50 13,33 5,83 3,00 1,33 0,83 0,50 0,17 0,33 0,17 0,17

Maus 4

47,33 17,83 16,00 7,83 5,00 2,50 1,17 0,83 1,00 0,00 0,50 0,00

Maus 5

51,33 15,67 12,17 8,67 5,50 2,67 2,17 0,50 0,67 0,00 0,50 0,17

x-quer

53,667 17,333 12,267 6,667 4,333 2,433 1,333 0,633 0,733 0,100 0,433 0,067

SD

5,775 3,053 2,893 1,523 0,979 0,630 0,500 0,183 0,384 0,149 0,190 0,091

SE

2,583 1,365 1,294 0,681 0,438 0,282 0,224 0,082 0,172 0,067 0,085 0,041

b) Verteilung der phagozytierten Erythrozyten auf die Klassen 1 bis 12 in %

MD

52,833 17,833 12,167 6,000 4,333 2,667 1,167 0,500 0,667 0,000 0,500 0,000

Kl.

Maus

n

1

2

3

4

5

x-quer

SD

SE

MD

1

1,00

0,0

0,00

0, 00

2

2,00

12,5

17,5

20,3

13,5

11,9

15,13

3,60

1,61

13,54

3

3,00

15,3

21,0

26,4

24,3

18,5

21,11

4,41

1,97

21,04

4

4,00

14,4

16,0

17,3

17,8

19,8

17,06

2,02

0,90

17,30

5

5,00

16,6

13,6

11,9

15,2

16,7

14,80

2,07

0,93

15,19

6

6,00

13,6

12,6

6,6

9,5

10,1

10,48

2,75

1,23

10,14

7

7,00

6,7

7,1

4,9

5,3

9,9

6,79

1,95

0,87

6,71

8

8,00

5,6

3,1

3,5

4,4

2,7

3,85

1,17

0,52

3,46

9

9,00

8,9

4,7

1,3

6,1

4,1

5,03

2,79

1,25

4,74

10

10,00

0,0

1,3

3,0

0,0

0,86

1,31

0,59

0,00

11

11,00

6,4

3,0

1,6

3,8

3,72

1,73

0,77

3,80

12

12,00

0,0

3,3

0,0

2,5

1,17

1,62

0,72

0,00

Tabelle:

3x5 mg/kg i.p. MPH-Stimulation nach 3 Tagen a) Verteilung von 300 Zellen auf die Klassen 1 bis 12 in %

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

Kl.

1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,00 11,00 12,00

Maus 1

69,33 9,83 8,00 4,83 2,83 2,00 0,67 0,67 0,67 0,33 0,17 0,67

Maus 2

50,33 16,17 12,17 7,17 6,00 2,33 2,67 1,00 1,17 0,17 0,67 0,17

Maus 3

52,17 18,00 11,50 5,83 5,17 4,17 1,33 0,00 0,83 0,50 0,17 0,33

Maus

4

5

x-quer

SD

SE

MD

49,50

56,17

55,500

8,149

3,644

52,167

23,33

22,17

17,900

5,381

2,406

18,000

14,67

11,17

11,500

2,389

1,068

11,500

6,50

5,33

5,933

0,925

0,414

5,833

2,67

3,00

3,933

1,539

0,688

3,000

1,83

1,67

2,400

1,018

0,455

2,000

0,50

0,17

1,057

0,990

0,443

0,667

0,33

0,00

0,400

0,435

0,194

0,333

0,17

0,600

0,435

0,194

0,667

0,17

0,267

0,149

0,067

0,167

0,17

0,00

0,233

0,253

0,113

0,167

0,17

0,00

0,267

0,253

0,113

0,167

b) Verteilung der phagozytierten Erythrozyten auf die Klassen 1 bis 12 in %

Kl.

Maus

Maus n

1

2

3

4

5

1

1,00

0,0

2

2,00

10,5

11,4

14,1

22,2

26,2

3

3,00

17,1

17,2

18,0

27,9

26,4

4

4,00

15,5

15,2

13,7

18,5

18,9

5

5,00

12,1

17,0

16,2

10,1

14,2

6

6,00

10,7

8,2

16,3

8,7

9,8

7

7,00

4,3

11,3

6,3

2,9

1,2

x-quer SD SE MD

0,00 0,00 0,00 0,00

16,88 6,94 3,10 14,42

21,32 5,35 2,39 18,04

16,37 2,25 1,01 15,48

13,92 2,83 1,27 14,17

10,76 3,26 1,46 9,84

5,18 3,90 1,75 4,27

673457

8

(Fortsetzung)

Kl.

Maus

n

1

2

3

4

5

x-quer

SD

SE

MD

8

8,00

5,0

4,9

0,0

2,2

0,0

2,43

2,49

1,11

2,22

9

9,00

5,7

6,6

5,2

1,3

1,6

4,07

2,47

1,11

5,23

10

10,00

3,2

1,1

3,5

1,4

1,8

2,20

1,10

0,49

1,77

11

11,00

1,8

4,7

1,3

1,6

0,0

1,88

1,73

0,77

1,58

12

12,00

14,2

2,4

5,2

3,2

0,0

5,00

5,49

2,46

3,17

Dosisabhängigkeit des Stimulationseffekts

Die Kontrollgruppen nach i.p. bzw. p.o. Gabe von phys. NaCl-Lösung zeigen, dass die i.p. Applikation selbst bereits eine schwache Makrophagenaktivierung bewirkt. Ein hoher Anteil Makrophagen hat zwei Erythrozyten phagozytiert.

Ein Ansteigen der Makrophagen mit mehr als zwei Erythrozyten ist demnach als Substanzeffekt zu interpretieren. Die "/»-Summe der Erythrozyten ab der <*■. Klasse (Makrophagen mit 3 Erythrozyten und mehr) wurde daher zur Dosis in Relation gesetzt.

Abb. 7, in welcher die phagozytierten Erythrozyten (Prozent kumuliert) PHE gegen die Dosis D (mcg/kg; i.p.) aufgetragen sind, zeigt die Abhängigkeit der %-Summe der Erythrozyten ab der 4. Klasse und darüber von der Dosis nach i.p. Gabe von 20 mcg/kg, 500 mcg/kg und 5 mg/kg. Die Kontrolle liegt bei 45% ± 6% (x ± SEM). In der Abbildung ist der Bereich ± SEM um den Mittelwert durch die unterbrochene Linie angegeben.

Tabelle:

Dosisabhängigkeit der Makrophagen-Stimulation nach i.p. Gabe x = Dosis (mcg/kg)

y = %-Summe der phagozytierten Erythrozyten SEM = Standarderror of the means

15

20

25

30

35

Bewertung

Die Substanz bewirkt eine Steigerung der Makrophagenaktivierung von 38% bei 20 mcg/kg auf 64% bei 500 mcg/ kg. Eine weitere Steigerung der Dosis auf 5 mg/kg führt zu einer geringfügigen Abschwächung der Stimulation. Die Makrophagenaktivierung verläuft im gewählten Dosisbereich nicht linear.

Die Testgruppe, die unmittelbar vor Makrophagenge-winnung einmalig intraperitoneal appliziert wurde, demonstrierte, dass die beobachteten Effekte nur nach einer Inkubationszeit auftreten. Dieser Befund deutet daraufhin, dass die Substanz in vivo die für die Phagozytosesteigerung verantwortlichen Mechanismen in Makrophagen induzierte. Dieses deutet auf die folgenden Effekte:

1. Stimulation der Membraninternalisierungsrate

2. Steigerung der Fc-Rezeptorendichte und/oder

3. Erhöhung der Mobilität der C3b-Rezeptoren.

Die anderen erfindungsgemässen Verbindungen zeigen eine vergleichbare pharmakologische Wirkung. Die Wirkung konnte mit anderen pharmakologischen Modellen und klinisch bestätigt werden.

Die folgenden Beispiele erläutern die Herstellung der erfindungsgemässen Verbindungen.

Nr. x-Werte

1

2

3

20.0000 500.0000 5000.0000

y-Werte

38.2000 63.7600 61.8000

HgC:

SE-Werte

2.7800 3.3200 5.4200

N

4

5 5

+ Br->

40

ch2oh

(MG =152)

Beispiel 1

Herstellung von l-Carboxy-3,4-methylendioxy-2'-meth-oxy-stilben a) Darstellung von 6-Brompiperonylbromid

45

HOAc

HjjC:

;°J^VBr

CH2Br (MG«294)

Chemikalien:

Piperonylalkohol (EGA-Chemie bzw. Aldrich) = 120 g Brom 48 ml in 120 ml Essigsäure Essigsäure 240 ml

In einem 113-Halsrundkolben, versehen mit Tropftrichter, Trockenrohr und Innenthermometer, wird Piperonylalkohol in Essigsäure vorgelegt und im Eisbad gekühlt. Zu dieser Lösung tropft man unter Rühren Brom, gelöst in Es55

60

sigsäure, langsam zu, so dass die Temperatur zwischen 15-25 °C bleibt. Das Reaktionsgemisch wird über Nacht stehengelassen, und die ausgefallenen Kristalle werden abge-nutscht, mit Wasser gewaschen und aus Methanol umkristallisiert.

Fp. : 92-93 °C

Ausb. : 174 g, 75%

b) Darstellung des Triphenylphosphoniumsalzes

^O-rf^V-Br

^04jEcH2B,

(mg=294)

«■ (Ph)3P

-

O-S^^-CHzPfPh^Br

<MG"=556)

673 457

Chemikalien:

6-Brompiperonylbromid 294 g Triphenylphosphin 262 g Toluol

In einem 3 13-Halsrundkolben, versehen mit Rückflusskühler und KPG-Rührer, werden 6-Brompiperonylbromid und Triphenylphosphin vorgelegt und in absolutem Toluol unter Rühren gelöst. Das Reaktionsgemisch wird unter Rühren 2 Stunden erhitzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das gebildete Triphenylphosphoniumsalz wird ab-genutscht, mit wenig Toluol gewaschen und im Exsikkator getrocknet.

Ausbeute: 500 g, 95%

III. Darstellung des Stilbenderivates

>-r^pBr n^O-^^CHzPfPhkBr'

ch3o oho

-f H2C.

(mg=556)

(MG= 136)

OCH3

Chemikalien:

Lithium (Draht)

Methanol (absolut)

Triphenylphosphoniumsalz o-Anisaldehyd Dimethylformamid (absolut)

Reaktionsvorschrift:

Kleingeschnittenes Lithium (0,98 g, 0,14 g atom) wird zu unter Stickstoff vorgelegtem absolutem Methanol (30 ml) zugegeben. Nach Beendigung der Reaktion tropft man diese Lösung innerhalb von 2,5 Stunden in eine bei 90 °C gerührte Lösung aus Triphenylphosphoniumsalz (76,96 g, 0,14 mol) und o-Anisaldehyd (17,68 g, 0,13 mol), gelöst in absolutem Dimethylformamid (200 ml). Die Reaktionslösung wird eine weitere Stunde bei 90 °C gerührt. Nach Abkühlung auf Raumtemperatur wird das Reaktionsgemisch in Wasser (700 ml) eingegossen und der Niederschlag abfiltriert und getrocknet.

(mg =333)

Das getrocknete Produkt wird im Soxhlett mit Petrol-20 ether (30 bis 50 °C) extrahiert, bis der Rückstand in der Hülse kein Stilben mehr enthält (DC; Kieselgel; CH2C12). Der Petrolether wird unter Vakuum eingeengt und der Rückstand (64,82 g Gemisch) aus Ethanol umkristallisiert (hierdurch wird der grösste Teil der Verunreinigung bzw. des 25 nicht umgesetzten Produktes abgetrennt). Der ausgefallene Niederschlag (31,13 g) wird in Ether (300 ml) aufgeschlämmt und 2 Stunden gekocht (= Trennung des eis- und trans-Ge-misches). Nach Abkühlung wird der Feststoff abfxltriert und getrocknet.

30 Ausbeute:

23,87 g (52%)

reine Cis-Verbindung - geprüft durch DC, NMR Schmelzpunkt: 112 °C

35

d) Herstellung von l-Cyano-3,4-methylendioxy-2'-meth-oxystilben h,c:

Cu(CN)/DMFAâ

Chemikalien:

Kupfer(II)cyanid N,N-Dimethylformamid

Eine Mischung aus dem vorgetrockneten Stilbenbromid (3 g), Kupfer (EQ-cyanid (4 g) und Dimethylformamid (30 ml) wird für 8-12 h unter Rückfluss gekocht, bis kein Bromid im DC (Dichlormethan-Petrolether (1:2) ) mehr nachweisbar ist. Nach Abkühlung wird das Reaktionsgemisch in eine Lösung von Eisen(III)clilorid (4 g), HCl (1 ml) und Wasser (10 ml) gegeben und das Reaktionsgemisch auf

NaOH

70 °C für 20 Minuten gehalten. (Abzug: HCN-Entwick-lung!). Danach wird das abgekühlte Reaktionsgemisch mit 50 Chloroform (5 x 40 ml) extrahiert, mit Wasser (2 x 20 ml) gewaschen und über Calciumchlorid getrocknet. Nach Entfernung des Lösungsmittels wird der Rückstand aus Ethanol umkristallisiert.

Ausbeute: 2,0 g (70%)

55

e) Hydrolyse des Nitrils zum Endprodukt cooh och-,

OCH3

(mg= 277)

(mg= 296)

673 457

10

Chemikalien:

Stilbensäurenitril gemäss Formel NaOH Stilbensäurenitril (1 g) wird in möglichst wenig Ethanol (30 bis 50 ml) unter Erwärmen gelöst und mit Natriumhydroxidlösung versetzt (10 g in 15 ml H20). Das Reaktionsgemisch wird unter kräftigem Rückfluss gekocht, bis das DC (Ether) kein Cyanid mehr nachweist (18-20 h). Das Ethanol wird unter Vakuum abgezogen und zu dem Rückstand Wasser (50-100 ml) zugegeben. Die wässrige Phase wird mit Ether (2 x 30 ml) extrahiert und mit 6N HCl neutralisiert.

Der ausfallende flockige Niederschlag bleibt meist als Kolloid in der Lösung. Die Lösung wird kurz erwärmt und 24 Stunden stehengelassen.

Der koagulierte Niederschlag wird abgenutscht und aus s Ethanol umkristallisiert.

Ausbeute: 0,53 g (50%)

Beispiel 2

Herstellung von l-Carboxy-3,4-methylendioxy-2'-meth-10 oxy-stilben durch Umwandlung des Stilbenbromids in die Stilbensäure

H,C

OCH,

1. n-BuLi/Ether

2. C02

3. HCl

COOH

OCH3

Chemikalien:

Stilbenbromid gemäss Formel 17,44 g (0,05 mol)

n-Buli (1,55 molar) 40 ml (0,061 mol)

Ether 180 ml

Das Stilbenbromid wird in absolutem Ether gelöst und unter Stickstoff auf —72 °C gekühlt. In diese Reaktionslösung wird vorsichtig n-Buü eingespritzt und nach Zugabe innerhalb von 1 h auf Raumtemperatur erwärmt. Die Lösung wird dann sofort auf festes C02 gegeben, über Nacht reagieren lassen. Nach Zugabe von Wasser und der Phasentrennung wird die wässrige Phase mit Ether (2 x 100 ml) extrahiert. Die vereinigten wässrigen Phasen werden im Eisbad gekühlt und mit konzentrierter HCl angesäuert. Der ausgefallene Niederschlag wird abgenutscht und mit viel Wasser neutralgewaschen.

Nach 2- bis 3maligem Aufkochen mit Wasser (zur Entfernung von Buttersäure, die aus n-Buli stammt) wird das Rohprodukt aus Et0H/H20 umkristallisiert.

Ausbeute: 9,16 g (58,7%)

30 Fp.: 199,5 °C

Das entsprechende Stilbenbromid kann gemäss Beispiel 1, Stufen a bis c, erhalten werden.

35

Beispiel 3

Herstellung von l-Carboxy-3,4-methylendioxy-8-meth-oxy-phenanthren

40 a) Photochemische Umwandlung des Stilbenderivates in das entsprechende Phenanthrenderivat

H,c:

OCH-

.(MG ==333)

Chemikalien:

Stilbenbromid (eis-Verbindung) 1,2,3,4-Tetrahydro-9-fluorenon Cyclohexan Jod cis-Stilbenbromid (3,3 g, 0,01 mol) wird in absolutem l,2,3,4-Tetrahydro-9-fluorenon (100 ml) gelöst. Diese Lösung wird mit absolutem Cyclohexan (1 200 ml) verdünnt und mit Jod (1,7 g) versetzt. Die Lösung wird unter Stickstoffeinleitung mit einer Labortauchlampe mit Kühlrohr des Typs TQ 150 (Hanau) 12 bis 14 Tage beleuchtet. Die Reaktion wird mit DC (CH2C12/PE 30 bis 50 °C 1:2) kontrolliert. Die organische Phase mit wässriger Thiosulfat-Lösung 60 (3 x 300 ml), ausschütteln, um das überschüssige Jod zu entfernen. Nach dem Trocknen über MgS04 wird die organische Phase einrotiert. Das Rohprodukt wird aus Petrolether bei 60 bis 90 °C umkristallisiert.

Ausbeute: 1,55 g (47% der Theorie)

65

b) Herstellung von l-Cyano-3,4-methylendioxy-8-meth-oxy-phenanthren aus dem Phenanthrenbromid

Umwandlung des Phenanthrenbromids zum Nitrii

11

673 457

h,c hoc

Cu(CN)/DMF/^

Chemikalien:

Phenanthrenbromid gemäss Formel Kupfer(II)cyanid N ,N-Dimethylformamid

Eine Mischung aus dem vorgetrockneten Phenanthrenbromid (3 g), Kupfer(II)-cyanid (4 g) und Dimethylformamid (30 ml) wird für 8 bis 12 Stunden unter Rückfluss gekocht, bis kein Bromid im DC (Dichlormethan-Petrolether (1:2) ) nachweisbar ist. Nach Abkühlung wird das Reaktionsgemisch in eine Lösung von Eisen(III)-chlorid (4 g), HCl (1 ml) und Wasser (10 ml) gegeben und das Reaktions-

15

och,

(MG = 277)

gemisch auf 70 °C für 20 min gehalten (Abzug HCN-Ent-wicklung!). Danach wird das abgekühlte Reaktionsgemisch mit Chloroform (5 x 40 ml) extrahiert, mit Wasser (2 x 20 ml) gewaschen und über Calciumchlorid getrocknet. Nach Entfernung des Lösungsmittels wird der Rückstand aus Ethanol umkristallisiert.

20 Ausbeute: 2,0 g (70%); Fp: 215 °C

c) Hydrolyse des Phenanthrensäurenitrils zur Phenan-thrensäure h,c gn * -

NaOH

•och3

(MG = 277)

cooh och,

(MG = 296)

Chemikalien:

Phenanthrensäurenitril gemäss Formel NaOH Phenanthrensäurenitril (1 g) wird in möglichst wenig Ethanol (30 bis 50 ml) unter Erwärmen gelöst und mit Natriumhydroxidlösung versetzt (10 g in 15 ml H20). Das Reaktionsgemisch wird unter kräftigem Rückfluss gekocht, bis das DC (Ether) kein Cyanid mehr nachweist (18 bis 20 Stunden). Das Ethanol wird unter Vakuum abgezogen und zu dem Rückstand Wasser (50 bis 100 ml) zugegeben. Die wässrige Phase wird mit Ether (2 x 30 ml) extrahiert und mit 6N HCl neutralisiert. Der ausfallende flockige Niederschlag bleibt meist als Kolloid in der Lösung. Die Lösung wird kurz erwärmt und 24 Stunden stehengelassen.

Der koagulierte Niederschlag wird abgenutscht und aus Ethanol umkristallisiert.

Ausbeute: 0,53 g (50%)

Beispiel 4

Herstellung von l-Carboxy-3,4-methylendioxy-8-hy-droxy-phenanthren

1,0 g 1-Carboxy -3,4-methylendioxy -8-methoxy-phe-nanthren wurde mit 2,0 g Pyridin-hydrochlorid im Ölbad bei 170 °C zum Schmelzen gebracht und unter Begasung mit Stickstoff 1 Stunde auf dieser Temperatur gehalten. Nach dem Abkühlen wurde die erstarrte Masse mit 10 1 5prozenti-ger HCl aufgenommen und 3 x mit je 10 1 Chloroform extrahiert. Man vereinigte die Extrakte, wusch mit Wasser neutral und filtrierte zur Trocknung über silanisiertes Filterpapier (WHATMAN 1 PS). Nach Abdampfen des Lösungsmittels bei 30 °C am Rotationsverdampfer wurde das Gemisch aus Ausgangsmaterial und Hydrolysat zur Trennung 40 verestert, indem mit einem Gemisch aus 2,51 Methanol und 0,11 konzentrierter H2S04 3 Stunden unter Rückfluss destilliert wurde. Dann wurde in 101 Wasser eingegossen und die wässrig-methanolische Phase 3 x mit je 101 Diisopropyl-ether ausgeschüttelt. Das organische Lösungsmittel wurde, 45 nachdem mehrfach mit Wasser gewaschen worden war, mit 10 1 NaOH extrahiert, wobei der Methylester der 8-Meth-oxy-Verbindung in der organischen Schicht verblieb und die 8-Hydroxy-Verbindung unter gleichzeitiger Esterhydrolyse in die wässrige Phase überführt wurde. Nach Auswaschen 50 mit frischem Diisopropylether wurde die alkalische Phase angesäuert und mehrfach mit Chloroform ausgeschüttelt, über Phasentrennpapier WHATMAN 1 PS getrocknet und das Lösungsmittel am Rotationsverdampfer abgezogen. l-Carboxy-3,4-methylendioxy -8-hydroxy-phenantren blieb 55 als dünnschichtchromatographisch einheitliche Verbindung in fester Form zurück.

Fluoreszenz: (MeOH; ymax, mn): Anregung: 261, 302, 318, 329, 358, 377 Emission: 386,402 Ausbeute: 0,714 g (75%)

60

Beispiel 5

Herstellung von l-Carboxy-3,4-methylendioxy -8-meth-oxy-phenanthren durch Reduktion der Nitrogruppe

65

5 g Aristolochiasäure I werden in 1500 ml lprozentiger wässriger Natriumcarbonat-Lö-sung gelöst und anschliessend in einen 51-Kolben filtriert. Zu dieser klaren Salzlösung fügt man

673 457

1500 ml käufliche Ammoniumpolysulfid-Lösung hinzu. Das Reaktionsgemisch wird 2 Stunden bei Raumtemperatur (Abzug!) gerührt und verschlossen über Nacht aufbewahrt. Im Anschluss daran gibt man

1500 ml demin. Wasser hinzu und säuert tropfenweise unter Rühren mit ca.

550 ml konzentrierter Salzsäure das Reaktionsgemisch an. Das dabei entstehende Fällprodukt wird abfiltriert und mit Wasser nachgewaschen. Die wässrige Phase wird mit

1500 ml Ethylacetat extrahiert. Diese Ethylacetatphase setzt man zum Ausrühren des Fällproduktes ein und wiederholt anschliessend zweimal die Ausrührung mit je

1500 ml Ethylacetat. Die organischen Phasen werden vereinigt und zweimal mit je

500 ml Wasser gewaschen. Anschliessend extrahiert man die Ethylacetat-Lösung viermal mit je

750 ml 2prozentiger wässriger Natronlauge. Die organische Phase wird verworfen, die alkalisch-wässrige Lösung mit konzentrierter Salzsäure auf pH 4-3 eingestellt und dann wiederum viermal mit je 5 1000 ml Ethylacetat ausgeschüttelt. Die vereinigten organischen Phasen werden dreimal mit je

750 ml Wasser gewaschen. Die gewaschene organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und anschliessend nach Filtration im Vakuum zur Trockne gezogen (Badtem-10 peratur ca. 30 =C).

Ausbeute: 3,1 g Fp.: 285 °C (Zers.)

Zur Reinigung wird die Substanz aus Ethylacetat umkristallisiert.

C

2 Blatt Zeichnungen

Claims

673 457

2

PATENTANSPRÜCHE 1. Verbindungen der Formel (I):

h,c'

cooh worin

R] ein H-Atom, Methoxy oder Ethoxy bedeutet und R2, R3 jeweils ein H-Atom bedeuten oder zusammen eine C-C-Bindung bilden, wobei in letzterem Falle Rj für ein H-Atom, Hydroxyl oder Ethoxy steht, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze.
2. Verfahren zur Herstellung von Stilben-Verbindungen der allgemeinen Formel (I):

h,c:

(I)

cooh

(I)

in der R, ein H-Atom, Methoxy oder Ethoxy bedeutet und 10 R2, R3 zusammen eine C-C-Bindung bilden, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze, dadurch gekennzeichnet, dass man 6-Brompiperonylbromid der Formel

15

h,c;

""O

Br

CH2Br mit Triphenylphosphin in einem wasserfreien Lösungsmittel zu einem Phosphoniumsalz der Formel

20

h,C:

•cooh h,c:

.o-jj^l—

(i)

25 umsetzt, letztere Verbindung mit Benzaldehyd, o-Methoxy-benzaldehyd oder ortho-Ethoxybenzaldehyd in Anwesenheit einer starken Base zu einem Stilben der Formel Ia in der R[ ein H-Atom, Methoxy oder Ethoxy bedeutet und R2, R3 für H-Atome stehen, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze, dadurch gekennzeichnet, dass man 6-Brompiperonylbromid der Formel h,c:

'°ifVr h,c:

'o~rYBr * •

"O-k^J-CHzPtPhkBr h2c:

„O-~0-

-Br

30 H

35

la mit Triphenylphosphin in einem wasserfreien Lösungsmittel zu einem Phosphoniumsalz der Formel umsetzt, worin Rj für H, OCH3 oder OC2H5 steht, dieses Stilbenbromid durch UV-Bestrahlung in das Phenanthrende-rivat der Formel Ib

40

h,C:

45

umsetzt, letztere Verbindung mit Benzaldehyd, o-Methoxy-benzaldehyd oder ortho-Ethoxybenzaldehyd in Anwesenheit einer starken Base zu einem Stilben der Formel Ia

Ib

überführt und diese Verbindung entweder mit einem Metall-50 cyanid in einem polaren aprotischen Lösungsmittel in das entsprechende Nitrii umwandelt und dieses durch Hydrolyse in eine Säure der Formel (I) überführt oder mit n-Butyllithi-um und Kohlendioxid in eine Säure der Formel (I) überführt.

Ia 55 4. Verfahren zur Herstellung eines Phenanthren-Deriva-tes der allgemeinen Formel (I):

umsetzt, worin Rj für H, OCH3 oder OC2H5 steht, dieses Stilbenbromid entweder mit einem Metallcyanid in einem polaren aprotischen Lösungsmittel in das entsprechende Nitrii umwandelt und dieses durch Hydrolyse in eine Säure der Formel (I) überführt oder obiges Stilbenbromid mit n-Butyl-lithium und Kohlendioxid in eine Säure der Formel (I) überführt.
3. Verfahren zur Herstellung von Phenanthren-Verbin-dungen der allgemeinen Formel (I):

in der R] Hydroxyl bedeutet und R2, R3 zusammen eine C-C-Bindung bilden, und deren pharmazeutisch verträgliche Salze, dadurch gekennzeichnet, dass man ein nach Patent-

3

673 457

anspruch 3 erhaltenes Phenanthren-Derivat der Formel I, in welcher R, als Methoxy vorliegt, einer Etherspaltung unterwirft.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Stilbenbromid der Formel Ia oder das Phenanthrenbromid der Formel Ib mit Kupfercya-nid in dem polaren aprotischen Lösungsmittel in das entsprechende Nitrii umgewandelt wird.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass als polares aprotisches Lösungsmittel Dimethylform-amid verwendet wird.
7. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (I):

cooh auch Hydroxyl bedeuten kann, oder deren pharmazeutisch verträgliche Salze, gegebenenfalls in einem pharmazeutisch verträglichen Träger.