BRPI0615309A2 - benzimidazóis substituìdos como inibidores de cinase - Google Patents

Abstract

BENZIMIDAZOIS SUBSTITUIDOS COMO INIBIDORES DE CINASE. A presente invenção refere-se a novos compostos benzimidazóis substituidos de fórmula (1), composições e métodos de inibição de atividade de cinase associada com tumorigênese em um indivíduo humano ou animal. Em certas modalidades, os compostos e composições são eficazes para inibir a atividade de pelo menos uma serina/treonina cinase ou receptor tirosina cinase. Os novos compostos e composições podem ser usados ou sozinhos ou em combinação com pelo menos um agente adicional para o tratamento de um distúrbio mediado por serina/treonina cinase ou receptor tirosina cinase, tal como câncer.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para"BENZIMIDAZÓIS SUBSTITUÍDOS COMO INIBIDORES DE CINASE".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

O presente pedido reivindica o benefício sob 35 U.S.C. 119(e)para os pedidos provisórios N- de Série U.S. 60/712.539 depositado em 30de agosto de 2005, N- de Série U.S. 60/713.108 depositado em 30 de agos-to de 2005, Nq de Série U.S. Nq 60/731.591 depositado em 27 de outubro de2005 e Nq de Série U.S. N5 60/774.684 depositado em 17 de fevereiro de2006, cada um dos quais é aqui incorporado a título de referência em suatotalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a compostos benzimidazóis subs-tituídos, seus tautômeros, estereoisômeros, polimorfos, ésteres, metabólitose pró-fármacos, aos sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos, tau-tômeros, estereisômeros, polimorfos, ésteres, metabólitos e pró-fármacos, acomposições de qualquer uma das modalidades acima mencionadas juntocom veículos farmaceuticamente aceitáveis e a usos de qualquer uma dasmodalidades acima mencionadas, ou sozinhas ou em combinação com pelomenos um agente terapêutico adicional, na profilaxia ou tratamento de câncer.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Cinases conhecidas estar associadas com tumorigênese inclu-em as Raf serina/treonina cinases e os receptores tirosina cinases (RTKs).

As Ras serina/treonina cinases são componentes essenciais domódulo de sinalização de Ras/Proteína Sinase Ativada por Mitógeno (MAPK)que controla um programa transcripcional complexo em resposta a estímuloscelulares externos. Genes Raf codificam proteína cinases específicas deserina-treonina altamente conservadas que são conhecidas se ligar a onco-gene ras. Eles são parte de um curso de transdução de sinal acreditadoconsistir em receptores tirosina cinases, p21 ras, Raf proteínas cinases,Mekl (ativador ERK ou MAPKK) cinases e ERK (MAPK) cinases, que porfim fosforilam fatores de transcrição. Neste curso Raf cinases são ativadaspor Ras e fosforiladas e ativam duas isoformas de Proteína Cinase Ativadapor Mitógeno (chamadas Mekl e Mek2), que são treonina/tirosina cinases deespecificidade dupla. Ambas isoformas Mek ativam Cinases Ativadas porMitógeno 1 e 2 (MAPK, também chamadas Cinase Regulada por LiganteExtracelular 1 e 2 ou Erkl e Erk2). As MAPKs fosforilam muitos substratosincluindo fatores de transcrição e ao fazerem isso ajustam seu programatranscripcional. Participação de Raf cinase no curso Ras/MAPK influencia eregula muitas funções celulares tal como proliferação, diferenciação, sobre-vivência, transformação oncogênica e apoptose celular.

Ambos o papel essencial e a posição de Raf em muitos cursosde sinalização foram demonstrados a partir de estudos usando mutantes deRaf inibidores desregulados e dominantes em células de mamífero bem co-mo de estudos empregando técnicas bioquímicas e genéticas de organismosmodelo. Em muitos casos, a ativação de Raf por receptores que estimulamfosforilação de tirosina celular é dependente da atividade de Ras, indicandoque Ras funciona a montante de Raf. Quando da ativação, Raf-1 então fos-forila e ativa Mekl, resultando na propagação do sinal para efetores a jusan-te, tal como MAPK (proteína cinase ativada por mitógeno; Crews e outros,1993, Ce//74:215). As Raf serina/treonina cinases são consideradas ser osefetores Ras primários envolvidos na proliferação de células animais (Avruche outros, 1994, Trends Biochem. Sei. 19:279).

Raf cinase tem três isoformas distintas, Raf-1 (c-Raf), A-Raf e B-Raf, distinguidas pela sua habilidade em interagir com Ras, ativar curso deMAPK cinase, distribuição de tecido e localização subcelular (Marias e ou-tros, Biochem. J. 351:289-305, 2000; Weber e outros, Oncogene 19:169-176, 2000; Pritchard e outros, Mol. Cell BioL 15:6430-6442, 1995). Mutaçãode ativação de um dos genes Ras pode ser vista em cerca de 20% de todosos tumores e o curso Ras/Raf/MEK/ERK é ativado em cerca de 30% de to-dos os tumores (Bos e outros, Câncer Res. 49:4682-4689, 1989; Hoshino eoutros, Oncogene 18:813-822, 1999). Estudos recentes mostraram que mu-tação de B-Raf na marca de nascença na pele é uma etapa crítica no iníciode neoplasia melanocítica (Pollock e outros, Nature Genetics 25:1-2, 2002).Ainda, a maioria dos estudos recentes descreve que a mutação de ativaçãono domínio cinase de B-Raf acontece em cerca de 66% dos melanomas,12% de carcinoma de colo e 14% de câncer de fígado (Davies e outros, Na-ture 417:949-954, 2002; Yuen e outros, Câncer Research 62:6451-6455,2002; Brose e outros, Câncer Research 62:6997-7000, 2002).

Melanoma, que continua a representar uma necessidade médicainsatisfeita significante, é uma doença multigênica complexa com um prog-nóstico pobre, especialmente no estado metastático avançado. Mutaçõessomáticas de ativação no proto-oncogene B-Raf foram recentemente encon-tradas em uma variedade de males, e mais freqüentemente em melanomas.Aproximadamente 70% de melanomas expressam uma forma mutada e ati-vada de B-Raf (V600E), tornando-o um excelente alvo para desenvolvimentode fármaco. Ainda, outros 10-15% de melanoma expressam N-Ras mutante,demonstrando mais a importância do curso de MAPK no crescimento e so-brevivência de células de melanoma.

Inibidores do curso de Ras/Raf/MEK/ERK no nível de Raf cina-ses podem ser potencialmente eficazes como agentes terapêuticos contratumores com receptore tirosinas cinases super-expressos ou mutados, tiro-sina cinases intracelulares ativadas, tumores com Grb2 aberrantemente ex-presso (uma proteína adaptadora que permite estimulação de Ras pelo fatorde troca Sos) bem como tumores carregando mutações de ativação do pró-prio Raf. Nos primeiros testes clínicos inibidores de Raf-1 cinase que tam-bém inibem B-Raf mostraram promessa como agentes terapêuticos em tera-pia de câncer (Crump, Current Pharmaceutical Design 8:2243-2248, 2002;Sebastien e outros, Current Pharmaceuticai Design 8:2249-2253, 2002).

Rompimento de expressão de Raf em linhagens celulares atra-vés da aplicação de tecnologia de anti-sentido de RNA mostrou suprimir tu-morigenicidade mediada por ambas Ras e Raf (Kolch e outros, Nature349·.416-428, 1991; Monia e outros, Nature Medicine 2(6):668-675, 1996).Foi também mostrado que a administração de anticorpos de desativaçãocontra Raf cinase ou a co-expressão de Raf cinase negativa dominante ouMEK negativa dominante, o substrato de Raf cinase, leva à reversão de cé-lulas transformadas para o fenótipo de crescimento normal (vide Daum eoutros, Trenós Biochem. Sei. 1994, 19:474-80; Fridman e outros, J. BioiChem. 1994, 269:30105-8).

Vários inibidores de Raf cinase foram descritos como exibindoeficácia em inibição de proliferação celular em ensaios in vivo e/ou in vitro(vide, por exemplo, Patentes U.S. N9S 6.391.636, 6.358.932, 6.037.136,5.717.100, 6.458.813, 6.204.467 e 6.268.391). Outras patentes e pedidos depatente sugerem o uso de inibidores de Raf cinase para tratamento de leu-cemia (vide, por exemplo, Patentes U.S. N9S 6.268.391 e 6.204.467 e Pedi-dos de Patente publicados U.S. N9S 20020137774; 20020082192;20010016194; e 20010006975) ou para tratamento de câncer de mama (vi-de, por exemplo, Patentes U.S. NQs 6.358.932, 5.717.100, 6.458.813,6.268.391 e 6.204.467 e Pedido de Patente U.S. N9 20010014679).

Angiogênese também desempenha um papel importante nocrescimento de células cancerosas. Sabe-se que uma vez que um ninho decélulas cancerosas atinge um certo tamanho, aproximadamente 1 a 2 mm dediâmetro, as células de câncer devem desenvolver um fornecimento de san-gue a fim de que o tumor cresça uma vez que difusão não será suficientepara fornecer as células de câncer com oxigênio e nutrientes suficientes.Então, inibição de angiogênese é esperada inibir o crescimento de célulasde câncer.

Receptores tirosina cinases (RTKs) são polipeptídios de trans-membrana que regulam crescimento e diferenciação de célula de desenvol-vimento, remodelagem e regeneração de tecidos adultos (Mustonen, T. eoutros, J. Ceil Biology 129. 895-898, 1995; van der Geer, P. e outros, AnnRev. Cell Biol. 70:251-337, 1994). Ligantes de polipeptídio, conhecidos comofatores de crescimento ou citocinas, são conhecidos ativar RTKs. RTKs desinalização envolvem ligação de Iigante e uma mudança em conformação nodomínio externo do receptor resultando em sua dimerização (Lymboussaki,A. "Vascular. Endothelial Growth Factors and their Receptors in Embryos,Adults, and in Tumors" Academic Dissertation, University of Helsinki, Mo-lecular/Cancer Biology Laboratory and Department of Pathology, Haartmanlnstitute, 1999; Ullrich, A. e outros, Cell 61:203-212, 1990). Ligação do Iigan-te ao RTK resulta em transfosforilação de receptor em resíduos de tirosinaespecíficos e subseqüente ativação dos domínios catalíticos para a fosforila-ção de substratos citoplásmicos (Id).

Duas subiam ílias de RTKs são específicas para o endotélio vas-cular. Essas incluem a subfamília de fator de crescimento endotelial vascular(VEGF) e a subfamília de receptor Tie. RTKs de Classe V incluem VEG-FR1(FLT-1), VEGFR2 (KDR (humano), Flk-1 (camundongo)) e VEGFR3(FLT-4) (Shibuya1M. e outros, Oncogene 5:519-525, 1990; Terman, B. e ou-tros, Oncogene 6:1677-1683, 1991; Aprelikova, O. e outros, Câncer Res.52:746-748, 1992). Membros da subfamília VEGF foram descritos comosendo capazes de induzir permeabilidade vascular e proliferação de célulaendotelial e identificados ainda como um indutor principal de angiogênese evasculogênese (Ferrara, N. e outros, Endocrinol. fíev. 75:4-25, 1997).

VEGF é conhecido se ligar especificamente a RTKs incluindoFLT-1 e Flk-1 (DeVries, C. e outros, Science 255:989-991, 1992; Quinn, T. eoutros, Proc. Natl. Acad. Sei. 90:7533-1537, 1993). VEGF estimula a migra-ção e proliferação de células endoteliais e induz angiogênese ambos in vitroe in vivo (Connolly, D. e outros, J. Bioi Chem. 264:20017-20024, 1989; Con-nolly, D. e outros, J. Clin. Invest. 84:1470-1478, 1989; Ferrara, N. e outros,Endocrinol. Rev. 18:4-25, 1997; Leung, D. e outros, Science 246:1306-1309,1989; Plouet, J. e outros, EMBO J 8.3801-3806, 1989).

Estudos em vários sistemas de célula endotelial culturada esta-beleceram que VEGFR2 faz a mediação da maioria dos efeitos a jusante deVEGF em angiogênese (Wey S. e outros, Clinicai Advances in Hematologyand Oncology, 2:37-45, 2004). Proliferação de células endoteliais mediadapor VEGFR2 é acreditada envolver ativação do curso de Ras/Raf/Mek/Erk(Veikkola T. e outros, Câncer Res 60:203-212, 2000). Expressão de VEG-FR2 foi observada em melanoma, câncer de mama, câncer de bexiga, cân-cer de pulmão, câncer da tireóide, câncer de próstata e câncer ovariano (vi-de Wey e outros, supra). Anticorpos monoclonais de neutralização paraVEGFR2 (KDR) mostraram ser eficazes no bloqueio de angiogênese de tu-mor (vide Kim e outros, Nature 362:841, 1993; Rockwell e outros, Moi CellDiffer. 3:315, 1995). Devido ao fato de que a angiogênese é conhecida sercrítica para o crescimento de câncer e ser controlada por VEGF e VEGF-RTK, esforços substanciais foram feitos para desenvolver compostos queinibam ou retardem angiogênese e inibam VEGF-RTK.

Receptor cinase de fator de crescimento derivado de plaqueta(PDGFR) é outro tipo de RTK. Expressão de PDGF foi mostrada em váriostumores sólidos diferentes, de glioblastomas e osteossarcoma a carcinomasde próstata. Nesses vários tipos de tumor, o papel biológico de sinalizaçãode PDGF pode variar de estimulação autócrina de crescimento de célulacancerosa a interações parácrinas mais sutis envolvendo estroma adjacentee angiogênese. PDGF interage com receptores tirosina cinases PDGFRa ePDGFRp. Então, inibição da atividade de PDGFR cinase com moléculas pe-quenas é esperada interferir com crescimento e angiogênese de tumor.

Os receptores cinases de fator de crescimento de fibroblasto(FGFRs) representam outro tipo de RTKs. Os fatores de crescimento de fi-broblasto são uma família de fatores de crescimento de polipeptídio envolvi-da em uma variedade de atividades, incluindo mitogênese, angiogênse ecicatrização de ferida. Eles compreendem uma família de receptores de tiro-sina cinase relacionados, mas individualmente distintos, contendo um domí-nio extracelular ou com 2 ou 3 domínios do tipo imunoglobulina (Ig), um do-mínio de transmembrana e um domínio de tirosina cinase citoplásmico. Osreceptores de fator de crescimento de fibroblasto que foram identificadosincluem FGFR1 (Ruta, M e outros, Oncogene 3:9-15, 1988); FGFR2 (Dion-ne, C. e outros, Cytogenet. Cell Genet. 60:34-36, 1992); FGFR3 (Keegan, K.e outros, Proc. Nat. Acad. Sei. 88Λ095-1099, 1991); e FGFR4 (Partanen, J.e outros, EMBO J. 10:1347- 1354, 1991).

O papel de receptores de fator de crescimento de fibroblasto,particularmente FGFR3, em câncer foi esclarecido. Desregulagem de onco-genes através de translocação para o locai de cadeia pesada de imunoglo-bulina (IgH) em 14q32 é um evento seminal na patogênese de tumores decélula β. Em mieloma múltiplo, translocações para o local IgH acontecem em20 a 60% de casos. Para a maioria das translocações, o cromossomo part-ner é desconhecido; para as outras, uma disposição diversa de partnerscromossomais foi identificada, com 11 q13, o único cromossomo que é fre-qüentemente envolvido. Bergsagel e outros identificaram fragmentos de re-combinação de troca ilegítimos (definidos como contendo seqüências deapenas 1 região de troca) como marcadores potenciais de eventos de trans-locação nas regiões de troca IgH em 15 de 21 linhagens de célula de mielo-ma, incluindo 7 de 8 linhagens cariotipadas que não tinham nenhuma trans-locação 14q32 detectável. Esses pontos de interrupção de translocação en-volviam 6 locais de cromossomo: 4pl6.3; 6; 8q24.13; 11q13.3; 16q23.1; e21q22.1 (Bergsagel e outros, Proc. Nat. Acad. Sei. 93:13931-13936, 1996).Chesi e outros (Nature Genet. 16:260-264 1997) verificaram translocaçãocariotipicamente silenciosa (4;14)(p16.3;q32.3) em 5 linhagens de células demieloma e em pelo menos 3 de 10 tumores primários associados com mie-loma múltiplo exibir expressão e ativação aumentadas de mutação de FG-FR3. Os pontos de interrupção do cromossomo-4 foram agrupados em umaregião de 70 kb centrométrica para FGFR3, que foi imaginado ser o oncoge-ne desregulado. Duas linhagens e 1 tumor primário com esta translocaçãoseletivamente expressaram um alelo de FGFR3 contendo mutações ativadasidentificadas anteriormente em nanismo tanatofórico: tyr373 para cys, Iys650para glu e Iys650 para met. Para K650E, a ativação constitutiva de FGFR3na ausência de Iigante foi provada através de experimentos de transfecção.Chesi e outros (1997) propuseram que após a translocação de t(4;14), muta-ção somática durante progressão de tumor freqüentemente gera uma proteí-na FGFR3 que é ativa na ausência de ligante.

Rasmussen, T. e outros citaram uma freqüência de 3 a 24% pa-ra translocação de t(4;14) em mieloma múltiplo (Rasmussen, T. e outros, Br.J. Haematol. 7 77:626-628, 2002). A translocação foi observada em uma fre-qüência significantemente menor em pacientes com gamopatia monoclonalde significância indeterminada (MGUS), sugerindo um papel na transição deMGUS para mieloma múltiplo. A translocação de t(4;14) afeta 2 oncogenespotenciais: FGFR3 e domínio sei de mieloma múltiplo (MMSET). Rasmussene outros (2002) investigaram a freqüência de desregulagem de FGFR3 e seuvalor de prognóstico em mieloma múltiplo. Em 16 de 110 (14,5%) amostrasde medula óssea de mieloma múltiplo, eles encontraram expressão de FG-FR3 desregulada.

Ainda, evidência adicional foi apresentada indicando um papeloncogênico para FGFR3 em carcinomas (Cappellen, D. e outros (Letter) Na-ture Genet. 23:18-20, 1999). Cappellen e outros encontraram expressão deum FGFR3 constitutivamente ativado em uma grande proporção de 2 cânce-res epiteliais comuns, bexiga e cérvice. FGFR3 parecia ser o oncogene maisfreqüentemente mutado em câncer de bexiga, sendo mutado em mais de30% de casos. FGFR3 parece mediar sinais opostos, agindo como um regu-lador negativo de crescimento em osso e como um oncogene em vários ti-pos de tumor. Todas as mutações somáticas missenses de FGFR3 identifi-cadas nesses cânceres foram idênticas às mutações de ativação germinalque causam displasia tanatofórica (os autores notaram que em 2 mutações,esta ocorrência acontecia porque a isoforma de FGFR3b expressa em célu-las epiteliais contém mais 2 amino ácidos do que a isoforma FGFR3 expres-sa em osso). Das alterações de FGFR3c em tumores epiteliais, a mutaçãoS249C era a mais comum, afetando 5 de 9 cânceres de bexiga e 3 de 3cânceres cervicais.

Evidência foi também apresentada indicando que FGFR3 ativa-do é direcionado para degradação Iisossomal por ubiquitinação mediada porc-Cbl, e que mutações de ativação encontradas em pacientes com acondro-plasia e condrodisplasias relacionadas perturbam este processo, levando àreciclagem de receptores ativados e amplificação de sinais de FGFR (Cho eoutros, Proc. Nat. Acad. Sei. 707:609-614, 2004). Cho e outros sugeriramque este mecanismo contribui para a patogênese molecular de acondropla-sia e representa um alvo potencial para intervenção terapêutica. O defeito dedirecionamento Iisossomal é aditivo a outros mecanismos propostos paraexplicar a patogênese da acondroplasia.

Outros resultados indicam que FGFR2 e FGFR3 são fatores sig-nificantes na tumorigênese (Jang, J.H. e outros, "Mutations in fibroblastgrowth factor receptor 2 and fibroblast growth factor receptor 3 genes asso-ciated with human gastric and colorectal cancers" Câncer Res. 61{9):354 1-3, 2001). Devido ao seu papel em mieloma múltiplo, câncer de bexiga e tu-morigênese, desenvolvimento de inibidores de receptores cinases de fatorde crescimento de fibroblasto, particularmente inibidores de FGFR2 e FG-FR3, vai desempenhar um papel importante no tratamento de cânceres.

c-Kit é outro receptor tirosina cinase pertencente à família dereceptor PDGF e é normalmente expresso em células progenitoras hemato-poiéticas, mastócito e germe. Expressão de c-kit foi implicada em várioscânceres incluindo leucemia de mastócitos, tumores de célula germe, carci-noma de pulmão de célula pequena, tumores estromais gastrointestinais,leucemia mielógena aguda (AML), eritroleucemia, neuroblastoma, melano-ma, carcinoma ovariano, carcinoma de mama (Heinrieh, M. C. e outros; J.Clin. Onc. 20, 6 1692-1703, 2002 (artigo de revisão); Smolich, B. D. e outros,Blood, 97, 5; 1413-1421).

Superexpressão de CSF-1R, o receptor para fator-1 de estimu-lação de colônia (CSF-1), foi implicada em vários carcinomas humanos, in-cluindo carcinomas da mama, ovário, endométrio, pulmão, rim, pâncreas epróstata (Sapi, E., Exp. Bioi Med 229Λ- 11, 2004). CSF-1 R é um receptorde tirosina cinase que, quando ativado por seu Iigante CSF-1, dispara cursosde transdução de sinal controlando proliferação e diferenciação celular. CSF-1R é expresso na glândula mamária durante gravidez e lactação. Expressãode CSF-1 R anormal foi relacionada com 58% de todos os cânceres de ma-ma, e com 85% de carcinoma de mama invasivo (vide Sapi, supra).

Há uma necessidade contínua de compostos que inibam a proli-feração de capilares, inibam o crescimento de tumores, tratam câncer, mo-dulam parada de ciclo celular e/ou inibam moléculas tal como uma ou maisde Ras, Raf, B-Raf mutante, VEGFR2 (KDR, Flk-1), FGFR2/3, c-Kit, PDG-FRp, CSF-1 R e formulações farmacêuticas e medicamentos que contenhamtais compostos. Existe também a necessidade de métodos de administraçãode tais compostos, formulações farmacêuticas e medicamentos a pacientesou indivíduos com necessidade.SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Compostos benzimidazol novos substituídos são providos daformula (I)

<formula>formula see original document page 11</formula>

onde,

cada R1 é independentemente selecionado de hidróxi, halo, C1-6alquila, C1-6 alcóxi, (C1-6 alquil)sulfanila, (Cv6 alquil)sulfonila, cicloalquila, he-terocicloalquila, fenila e heteroarila;

R2 é C1-6 alquila ou halo(C1-6 alquila);

cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6alquila eC1-6 alcóxi;

cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alqui-la, C1-6 alcóxi, halo, heterocicloalquilcarbonila, carboxila, (C1-6 alcó-xi)carbonila, aminocarbonila, C1-6 alquilaminocarbonila, carbonitrila, cicloal-quila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila;

onde R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos comum ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo,C1-6 alquila, halo(C1-6)alquila, C1-6 alcóxi e halo(C1-6 alcóxi);

a é 1, 2, 3, 4 ou 5;

b é 0, 1, 2 ou 3; e

c é 1 ou 2;

ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substi-tuídos são providos da fórmula (II):<formula>formula see original document page 12</formula>

onde,

cada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, C1-6alcóxi, hidróxi, halo, (Ci-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila,heterocicloalquila, fenila e heteroarila;

cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila eC1-6 alcóxi;

cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alqui-la, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni-trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e hete-roarila;

onde R1, R21 R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos comum ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo,C1-6 alquila e C1-6 alcóxi;

a é 1, 2, 3, 4 ou 5;

béO, 1,2ou3;e

c é 1 ou 2;

ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substi-tuídos são providos da fórmula (III):

<formula>formula see original document page 12</formula>

ondecada R1 é independentemente selecionado de C1^ alquila, Ci-6alcóxi, hidróxi, halo, (Ci_6 alquil)sulfanila, (Ci-6 alquil)sulfonila, cicloalquila,heterocicloalquila, fenila e heteroarila;

cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, Ci-6 alqui-la, C1-Galcoxi, halo, carboxila, (C-|.6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni-trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e hete-roarila;

onde R1 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um oumais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, C1^alquila e C1^ alcóxi;

a é 1, 2, 3, 4 ou 5; ec é 1 ou 2;

ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

São também descritos compostos da fórmula (IV) que segue:

<formula>formula see original document page 13</formula>

onde,

cada R1 é independentemente selecionado de C1^ alquila, C1^alcóxi, hidróxi, halo, (C1^ alquil)sulfanila, (Ci-6 alquil)sulfonila, cicloalquila,heterocicloalquila, fenila e heteroarila;

R2 é C1-Salquila ou halo(C1-6)alquila;cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1^alquila eC1-6 alcóxi;

cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1^ alqui-la, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1^ alcóxi)carbonila, aminocarbonila, C1^ al-quilaminocarbonila, carbonitrila, carbonitriKCí-e alquila), cicloalquila, heteroci-cloalquila, heterocicloalquil(C1-6 alquila), heterocicloalquilcarbonila, fenila eheteroarila;

onde R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos comum ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo,C1-6 alquila e C1-6 alcóxi;

a é 1, 2, 3, 4 ou 5; e

b é 0, 1, 2 ou 3;

ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substi-tuídos são providos de fórmulas (l)-(IV), onde cada R1 é independentementeselecionado do grupo consistindo em hidróxi, cloro, flúor, bromo, metila, etila,propila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, trifluormetila, trifluoretila, triflu-ormetóxi, trifluoretóxi, trifluormetilsulfanila, piperidinila, Ci-6 alquilpiperidinila,piperazinila, Ci-6 alquilpiperazinila, tetraidrofuranila, piridinila e pirimidinila.Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos sãoprovidos de fórmulas (l)-(IV), onde a é 1 ou 2, e pelo menos um R1 é halo(Ci-6 alquila), tal como trifluormetila. Em outras modalidades, novos compostosbenzimidazol substituídos são providos de fórmulas (I) e (IV), onde R2 é C-|.6alquila, tal como, por exemplo, metila ou etila. Em modalidades adicionais,novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (I), (II)e (IV), onde b é O e então R3 não está presente. Em modalidades alternati-vas, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas(l)-(IV), onde b é 1, e R3 é C1-6 alcóxi, tal como, por exemplo, metóxi. Emmodalidades adicionais ainda, novos compostos benzimidazol substituídossão providos de fórmulas (l)-(ll), onde c é 1 ou 2, e pelo menos um R4 é ha-lo(C1-6 alquila), tal como, por exemplo, trifluormetila.

Em outros aspectos, a presente invenção provê métodos paratratamento de distúrbios relacionados com Raf em um indivíduo humano ouanimal com necessidade de tal tratamento compreendendo administrar aodito indivíduo uma quantidade de qualquer uma das modalidades de umcomposto ou sal farmaceuticamente aceitável de fórmula (I), (II), (III) ou (IV)eficaz para reduzir ou prevenir crescimento de tumor no indivíduo.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê métodospara tratamento de distúrbios relacionados com Raf em um indivíduo huma-no ou animal com necessidade de tal tratamento compreendendo adminis-trar ao dito indivíduo uma quantidade de qualquer uma das modalidades deum composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de fórmulas(I), (II), (III) ou (IV) eficaz para reduzir ou prevenir crescimento de tumor noindivíduo em combinação com pelo menos um agente adicional para o tra-tamento de câncer.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê composi-ções terapêuticas compreendendo pelo menos um composto ou um sal far-maceuticamente aceitável do mesmo de fórmulas (I), (II), (III) ou (IV) emcombinação com um ou mais agentes adicionais para o tratamento de cân-cer, como são geralmente empregados em terapia de câncer.

Os compostos da invenção são úteis no tratamento de cânceres,incluindo carcinomas (por exemplo, dos pulmões, pâncreas, ovários, tireóide,bexiga ou colo), melanoma, distúrbios mielóides (por exemplo, leucemia mie-lóide, mieloma múltiplo e eritroleucemia), adenomas (por exemplo, adenomado cólon viloso) e sarcomas (por exemplo, osteossarcoma).

Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a métodos deinibição de pelo menos uma serina/treonina cinase no curso de sinalizaçãode MAPK em um indivíduo, ou tratamento de uma condição biológica media-da por uma serina/treonina cinase no curso de sinalização de MAPK em umindivíduo, compreendendo administrar uma composição terapêutica compre-endendo pelo menos um composto ou um sal farmaceuticamente aceitáveldo mesmo de fórmulas (I), (II), (III) ou (IV) eficaz para inibir o curso de sinali-zação de MAPK no indivíduo. As composições terapêuticas são úteis paratratamento de pacientes com uma necessidade de tais inibidores (por exem-plo, aqueles sofrendo de câncer mediado por sinalização de MAPK anor-mal). Em uma modalidade, a invenção refere-se a métodos de inibição deRaf cinase em um indivíduo compreendendo administrar uma composiçãoterapêutica compreendendo {1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina e o tautôme-ro, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmoou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoi-sômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a métodos deinibição de pelo menos um receptor de tirosina cinase selecionado do grupoconsistindo em VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFR1, FGFR2, FG-FR3, c-Kit e CSF-1R em um indivíduo, ou tratamento de uma condição bio-lógica mediada por pelo menos um VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FG-FR1, FGFR2, FGFR3, c-Kit e CSF-1R compreendendo administrar umacomposição terapêutica compreendendo pelo menos um composto ou umsal farmaceuticamente aceitável do mesmo de fórmula (I), (II), (III) ou (IV)eficaz para inibir o receptor de tirosina cinase no indivíduo. Os compostosterapêuticos são úteis para tratamento de pacientes com uma necessidadede tais inibidores (por exemplo, aqueles sofrendo de câncer mediado porsinalização de receptor de tirosina cinase anormal). Em uma modalidade, ainvenção refere-se a métodos de inibição de uma tirosina cinase seleciona-dos do grupo consistindo em VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRT,FGFR2, FGFR3, c- Kit e CSF-1R em um indivíduo, compreendendo adminis-trar uma composição terapêutica compreendendo {1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-iloxi]-1H-benzoimidazol-2il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster,metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitáveldo composto, tautômero, estereoisômero, polimorfomo, éster, metabólito oupró-fármaco.

A invenção provê ainda composições, métodos de uso e méto-dos de fabricação conforme descrito na descrição detalhada da invenção.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Os aspectos acima e muitas das vantagens acompanhantes dapresente invenção serão melhor compreendidos através de referência àdescrição detalhada que segue, quando tomada em conjunto com os dese-nhos acompanhantes, onde:

Figura 1 é um gráfico mostrando a redução média em volume detumor de tumores melanoma humanos A375M em camundongos quandotratados com um composto da invenção, conforme descrito no Exemplo 78;

As Figuras 2A e 2B são lâminas PAGE mostrando a inibição desinalização a jusante de Raf cinase em células de tumor de melanoma hu-mano A375M em camundongos 4- (Figura 2A) e 24 horas (Figura 2B) apóstratamento com um composto da invenção, conforme descrito no Exemplo 79;

A Figura 3 é um gráfico mostrando a redução média em volumede tumor de tumores de câncer de colo humano HT29P em camundongosquando tratados com um composto da invenção, conforme descrito no E-xemplo 80;

As Figuras 4A, 4B e 4C são lâminas PAGE mostrando a inibiçãode sinalização a jusante de Raf cinase em células de tumor de câncer decólon humano HT29P em camundongos 1 hora (Figura 4A), 4 horas (Figura4B) e 24 horas (Figura 4C) após tratamento com um composto da invenção,conforme descrito no Exemplo 81;

A Figura 5 ilustra o curso de sinalização de MAPK incluindo Ras,Raf, MEK e ERK e o ponto proposto de inibição de sinalização a jusante deRaf cinase com o composto do Exemplo 1 conforme descrito nos Exemplos82-86;

As Figuras 6A, 6B e 6C são lâminas PAGE mostrando a inibiçãode sinalização a jusante de Raf cinase em células A375M (Figura 6A), célu-las SK-MEL2 (Figura 6B) e células CHL-1 (Figura 6C) após 4 horas de incu-bação em cultura com uma faixa de concentrações do composto do Exemplo1, conforme descrito no Exemplo 83;

A Figura 7A é um gráfico mostrando uma dose resposta na re-dução média em volume de tumor de tumores de melanoma humanosA375M (B-Raf V600E) em camundongos quando tratados com uma doseoral de 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 1, con-forme descrito no Exemplo 84;

A Figura 7B é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sinali-zação a jusante de Raf cinase em células de tumor A375M em camundon-gos 8 horas após o tratamento com o composto do Exemplo 1, conformedescrito no Exemplo 84;

A Figura 7C é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sinali-zação a jusante de Raf cinase em células de tumor A375M em camundon-gos 24 horas após o tratamento de 14 horas com o composto do Exemplo 1,conforme descrito no Exemplo 84;

A Figura 7D é uma lâmina PAGE mostrando a modulação demarcadores a jusante de Raf cinase em células de tumor A375M 24 horasapós o tratamento de 14 horas com o composto do Exemplo 1, conformedescrito no Exemplo 84;

A Figura 8A é um gráfico mostrando a redução média em volu-me de tumor de tumores de câncer de melanoma MEXF276 (B-Raf V600E)em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1, conformedescrito no Exemplo 85;

A Figura 8B é uma lâmina mostrando a inibição de sinalização ajusante de Raf cinase em células de tumor MEXF276 em camundongos 4horas após o 20s tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme des-crito no Exemplo 85;

A Figura 8C é uma lâmina PAGE mostrando a modulação demarcadores a jusante de Raf cinase em células de tumor MEXF276 4 horasapós o 202 tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme descrito noExemplo 85;

A Figura 9A é um gráfico mostrando a inibição média de cresci-mento de tumor de tumores de câncer de melanoma MEXF1341 (N-RasQ61K) em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1,conforme descrito no Exemplo 85;

A Figura 9B é uma lâmina PAGE mostrando a sinalização a ju-sante de Raf cinase em células de tumor MEXF1341 em camundongos 4horas após o 20- tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme des-crito no Exemplo 85;

A Figura 9C é uma lâmina mostrando a modulação de marcado-res a jusante de Raf cinase em células de tumor MEXF1341 4 horas após o209 tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exem-pio 85;

A Figura 10A é um gráfico mostrando a redução média em vo-lume de tumor de tumores de carcinoma colorretais HCT-116 (K-Ras G13D)em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1, conformedescrito no Exemplo 86;

A Figura 10B é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sina-lização a jusante de Raf cinase em células de tumor HCT-116 em camun-dongos 4 horas após o 3Q tratamento com o composto do Exemplo 1, con-forme descrito no Exemplo 86;

A Figura 10C é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sina-lização a jusante de Raf cinase em células de tumor HCT-116 em camun-dongos 8 horas após o 3Q tratamento com o composto do Exemplo 1, con-forme descrito no Exemplo 86;

A Figura 10D é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sina-lização a jusante de Raf cinase em células de tumor HCT-116 em camun-dongos 24 horas após o 39 tratamento com o composto do Exemplo 1, con-forme descrito no Exemplo 86;

A Figura 11 é um gráfico mostrando a redução média em volumede tumor de tumores de carcinoma colorretais HT-29 (B-Raf V600E) em ca-mundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1, conforme des-crito no Exemplo 86;

A Figura 12A é um gráfico mostrando a inibição média de cres-cimento de tumor de tumores de câncer de leucemia monocítica aguda MV4-11 (FLT3 ITD) em camundongos quando tratados com o composto do E-xemplo 1, conforme descrito no Exemplo 86;

A Figura 12B é uma lâmina PAGE mostrando a sinalização ajusante de Raf cinase em células de tumor MV4-11 em camundongos 4 ho-ras após o 3- tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme descritono Exemplo 86;

A Figura 13 é um gráfico mostrando a inibição de angiogênesemediada por VEGF em um modelo de CHO-VEGF Matrigel após tratamentocom 10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg do composto do Exemplo 1, conformedescrito no Exemplo 88;

A Figura 14A é um gráfico mostrando a redução média em vo-lume de tumor de tumores de melanoma A375M em camundongos quandotratados com 100 g/kg do composto do Exemplo 1 com um regime de dosa-gem de q2d, q3d ou q4d conforme descrito no Exemplo 89;

A Figura 14B é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sina-lização a jusante a partir de Raf cinase em células de tumor A375M em ca-mundongos 8 horas, 24 horas e 48 horas após o 5e tratamento com o com-posto do Exemplo 1 no regime de dosagem de q2d, conforme descrito noExemplo 89;

A Figura 14C é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sina-lização a jusante de Raf cinase em células de tumor A375M em camundon-gos 48 horas, 72 horas e 96 horas após o 3- tratamento com o composto doExemplo 1 no regime de dosagem de q4d, conforme descrito no Exemplo89; e

A Figura 15 é um gráfico mostrando a relação entre tratamentocom células de tumor A375M com várias concentrações do composto doExemplo 1, a concentração no soro do composto com o tempo e a concen-tração limiar para modulação direcionada, conforme descrito no Exemplo 90.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA MODALIDADE PREFERIDA

De acordo com um aspecto da presente invenção, compostosbenzimidazol substituídos são providos da fórmula (I):onde,

cada R1 é independentemente selecionado de hidróxi, halo, Ci-6alquila, C1-6 alcóxi, (C1-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila, he-terocicloalquila, fenila e heteroarila;

R2 é C1-6 alquila ou halo(C1-6 alquila);

cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila eC1 -6 alcóxi;

cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alqui-la, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, C1-6 al-quilaminocarbonila, carbonitrila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloal-quilcarbonila,fenila e heteroarila;

onde R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos comum ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo,C1-6 alquila, halo C1-6)alquila, C1-6 alcóxi e halo(C1-6 alcóxi);

a é 1, 2, 3, 4 ou 5;

b é 0, 1, 2 ou 3; e

c é 1 ou 2;

ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substi-tuídos são providos da fórmula (II):

<formula>formula see original document page 21</formula>

onde,

cada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, C1-6alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila,heterocicloalquila, fenila e heteroarila;

cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila eC1-6 alcóxi;

cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6alqui-la, C-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni-trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e hete-roarila;

onde R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos comum ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo,C1-6 alquila e C1-6 alcóxi;

a é 1, 2, 3, 4 ou 5;b é O, 1, 2 ou 3; ec é 1 -ou 2;

ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco dele ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto,tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substi-tuídos são providos da fórmula (III):

<formula>formula see original document page 22</formula>

onde

cada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, C1-6alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila,heterocicloalquila, fenila e heteroarila;

cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-Balqui-la, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni-trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e hete-roarila;

onde R1 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um oumais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, C1-6alquila e C1-6 alcóxi;

aé1,2, 3ou5;e

c é 1 ou 2;

ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

São também descritos compostos da fórmula (IV) que segue:<formula>formula see original document page 23</formula>

onde,

cada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, C1-6alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila,heterocicloalquila, fenila e heteroarila;

R2 é C1-6 alquila ou halo(Ci-6)alquila;cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila eC1-6 alcóxi;

cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alqui-la, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, C1-6 al-quilaminocarbonila, carbonitrila, carbonitril(C1-6alquila), cicloalquila, heteroci-cloalquila, heterocicloalquil(C1-6 alquila), heterocicloalquilcarbonila, fenila eheteroarila;

onde R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos comum ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo,C1-6 alquila e C1-6 alcóxi;

a é 1, 2, 3, 4 ou 5; e

bé O, 1, 2 ou 3;

ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substi-tuídos são providos de fórmulas (l)-(IV), onde cada R1 é independentementeselecionado do grupo consistindo em hidróxi, cloro, flúor, bromo, metila, etila,propila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, trifluormetila, trifluoretila, triflu-ormetóxi, trifluoretóxi, trifluormetilsulfanila, piperidinila, C1-6 alquilpiperidinila,piperazinila, C1-6 alquilpiperazinila, tetraidrofuranila, piridinila e pirimidinila.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos sãoprovidos de fórmulas (I)-(IV), onde a é 1 ou 2, e pelo menos um R1 é halo(C1-6 alquila), tal como trifluormetila. Em outras modalidades, novos compostosbenzimidazol substituídos são providos de fórmulas (I) e (IV), onde R2 é C1-6alquila, tal como, por exemplo, metila ou etila. Em modalidades adicionais,novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (I), (II)e (IV), onde b é 0 e então R3 não está presente. Em modalidades alternati-vas, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas(l)-(IV), onde b é 1 e R3 é C1-6alcóxi, tal como, por exemplo, metóxi. Em mo-dalidades adicionais ainda, novos compostos benzimidazol substituídos sãoprovidos de fórmulas (l)-(ll), onde c é 1 ou 2, e pelo menos um R4 é halo(C1-6alquila), tal como, por exemplo, trifluormetila.

Em algumas modalidades, R1, R21 R3 e R4 podem ser opcional-mente substituídos com um a cinco substituintes independentemente sele-cionados de hidróxi, halo, C1-6 alquila, halo(C1-6)alquila, C1-6alcóxi e halo(C1-6alcóxi).

Em algumas modalidades, R11 R2, R3 e R4 podem ser opcional-mente substituídos com um a três substituintes independentemente selecio-nados de hidróxi, halo, C1-6 alquila, halo(C1-6 alquila), C1-6 alcóxi e halo(C1-6alcóxi).

Em algumas modalidades, R1 é independentemente selecionadodo grupo consistindo em halo, C1-6 alcóxi, halo(Ci-6 alquila), hidróxi, halo(C1-6alcóxi), halo(C1-6 alquil)sulfonila, heteroarila, halo(C1-6 alquil)sulfanila, hetero-cicloalquila e (C1-6 alquil)heterocicloalquila. Em algumas modalidades, a é 1e R1 é independentemente selecionado do grupo consistindo em 2-cloro, 2-etila, 2-trifluormetila, 3-trifluormetila, 4-trifluormetila, 3-terc-butila, 4-terc-butila, 3-etila, 4-etila, 4-cloro-, 4-bromo, 4-trifluormetóxi, 4-trifluormetilsulfanila, 4-trifluormetilsulfonila e 4-(4-metilpiperazinila). Em ou-tras modalidades ainda, a é 2 e cada R1 é independentemente selecionadodo grupo consistindo em 2-flúor, 2-cloro-, 2-hidróxi, 2-metóxi, 3-metóxi, 5-metóxi, 4-cloro, 4-flúor, 3-trifluormetila, 4-trifluormetila, 5-trifluormetila, 5-piridinila, 5-piridinil-3-ila, 5-piridinil-4-ila, 3-tetraidrofuran-3-ila, 3-isopropila, 5-isopropila e 5-terc-butila.

Em algumas modalidades, R4 é selecionado do grupo consistin-do em C1-6 alquila, hidróxi(Ci-6 alquila), halo(Ci-6 alquila), halo(Ci-6 al-quil)sulfanila, (Ci-6 alcóxi)carbonila, (C1-6 alquil)heterocicloalquila, carbonitri-la, fenila, halo(Ci-6 alquil)fenila, (Ci-6 alquil heterocicloalquilcarbonila e hidró-xi(Ci-6 alquilaminocarbonila). Em algumas tais modalidades, c é 1 e R4 é se-lecionado do grupo consistindo em trifluormetila, carbonitrila, fenila, trifluor-metilsulfanila, metoxicarbonila, 4-etilpiperazinila, 4-etilpiperazinil-1-carbonilaou 2-hidroxietilaminocarbonila. Em ainda outras modalidades, c é 2 e cadaR4 é independentemente selecionado do grupo consistindo em metila, 3-trifluormetilfenila, 4-trifluormetilfenila, trifluormetila, etoxicarbonila, hidroxime-tila e fenila.

Em outras modalidades é provido um composto ou sal farmaceu-ticamente aceitável do mesmo onde o composto tem a fórmula:

<formula>formula see original document page 25</formula>

ou um tautômero do composto ou um sal farmaceuticamente aceitável dotautômero tendo a fórmula:

<formula>formula see original document page 25</formula>

Em outros aspectos, a presente invenção prove métodos paratratamento de distúrbios relacionados com Raf em um indivíduo humano ouanimal com necessidade de tal tratamento compreendendo administrar aodito indivíduo uma quantidade de um composto da fórmula (I), (II), (III) ou(IV) eficaz para reduzir ou prevenir crescimento de tumor no indivíduo.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê métodospara tratamento de distúrbios relacionados com Raf em um indivíduo huma-no ou animal com necessidade de tal tratamento compreendendo adminis-trar o dito indivíduo uma quantidade de um composto de fórmula (I), (II), (III)ou (IV) eficaz para reduzir ou prevenir crescimento de tumor no indivíduo emcombinação com pelo menos um agente adicional para o tratamento de câncer.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê métodospara tratamento de distúrbios relacionados com Raf em um indivíduo huma-no ou animal com necessidade de tal tratamento compreendendo adminis-trar ao dito indivíduo uma quantidade de um composto de fórmula (I), (II), (III)ou (IV) eficaz para reduzir ou prevenir crescimento de tumor no indivíduo emcombinação com pelo menos um agente adicional para o tratamento de cân-cer. Vários agentes anticâncer adequados a serem usados como terapêuti-cos de combinação são compreendidos para uso nos métodos da presenteinvenção. Na verdade, a presente invenção compreende, mas não é limitadaa, administração de vários agentes anticâncer tal como: agentes que indu-zem apoptose; polinucleotídeos (por exemplo, ribozimas); polipeptídeos (porexemplo, enzimas); fármacos; miméticos biológicos; alcalóides; agentes dealquilação; antibióticos antitumor; antimetabólitos; hormônios; composto deplatina; anticorpos monoclonais conjugados com fármacos anticâncer, toxi-nas e/ou radionuclídeos; modificadores de resposta biológicos (por exemplo,interferons [por exemplo, IFN-a, etc] e interleucinas [por exemplo, IL-2, etc],etc); agentes de imunoterapia adotivos; fatores de crescimento hematopoié-ticos; agentes que induzem diferenciação de célula de tumor (por exemplo,ácido-all-trans-retinóico, etc); reagentes de terapia de gene; reagentes deterapia anti-sentido e nucleotídeos; vacinas de tumor; inibidores de angiogê-nese e similar. Vários outros exemplos de compostos quimioterapêuticos eterapias anticâncer adequados para co-administração com os compostosdescritos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) são conhecidos daquele versado natécnica.Em modalidades preferidas, agentes anticâncer a serem usadosem combinação com compostos da presente invenção compreendem agen-tes que induzem ou estimulam apoptose. Agentes que induzem apoptoseincluem, mas não estão limitados a, radiação; inibidores de cinase (por e-xemplo, inibidor de cinase de Receptor de Fator de Crescimento Epidermal[EGFR], inibidor de cinase de Receptor de Fator de Crescimento Vascular[VGFR], inibidor de cinase de Receptor de Fator de Crescimento de Fibro-blasto [FGFR], inibidor de cinase I de Receptor de Fator de Crescimento de-rivado de Plaqueta [PGFR] e inibidores de cinase Bcr-Abl tal como STI-571,Gleevec e Glivec]); moléculas de anti-sentido; anticorpos [por exemplo, Her-ceptin e Rituxan]; antiestrogênios [por exemplo, raloxifeno e tamoxifen]; anti-androgênios [por exemplo, flutamida, bicalutamida, finasterida, aminoglute-tamida, cetoconazol e corticosteróides]; inibidores de ciclooxigenase 2(COX-2) [por exemplo, Celecoxib, meloxicam, NS-398 e fármacos antiinfla-matórios não-esteroidais (NSAIDs)]; e fármacos quimioterapêuticos para ocâncer, por exemplo, irinotecan (Camptostar), CPT-11, fludarabina (Fludara),dacarbazina (DTIC), dexametasona, mitoxantrona, Mylotarg, VP-16, cisplati-na, 5-FU, Doxorrubicina, Taxotere ou taxol]; moléculas de sinalização celu-lar; ceramidas e citocinas; e estaurosprina e similar.

Em outros aspectos, a presente invenção provê composiçõesfarmacêuticas compreendendo pelo menos um composto ou um sal farma-ceuticamente aceitável do mesmo de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) junto comum veículo farmaceuticamente aceitável adequado para administração a umindivíduo humano ou animal, ou sozinho ou junto com outros agentes anti-câncer.

Em outros aspectos, a presente invenção provê métodos de fa-bricação de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) conforme aqui descrito.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê compos-tos que são inibidores da enzima Raf cinase. Uma vez que a enzima é umefetor a jusante de p21ras, os presentes inibidores são úteis em composi-ções farmacêuticas para uso humano ou veterinário onde inibição do cursode Raf cinase é indicado, por exemplo, no tratamento de tumores e/ou cres-cimento de célula cancerosa mediado por Raf cinase. Em particular, oscompostos são úteis no tratamento de humano ou animal, por exemplo, cân-cer de murino, uma vez que a progressão desses cânceres é dependente dacascata de transdução de sinal de proteína Ras e então é suscetível a tra-tamento através da interrupção da cascata através da inibição da atividadede Raf cinase. Deste modo, os compostos da invenção são úteis no trata-mento de cânceres sólidos, tal como, por exemplo, carcinomas (por exem-plo, dos pulmões, pâncreas, tireóide, bexiga ou cólon), distúrbios mielóides(por exemplo, leucemia mielóide, mieloma múltiplo e eritroleucemia), ade-nomas (por exemplo, adenoma do cólon viloso) ou sarcomas (por exemplo,osteossarcoma).

"Inibidor de Raf" é usado aqui para se referir a um composto queexibe uma IC5o com relação à atividade de Raf cinase de não mais do quecerca de 100 μΜ e mais tipicamente não mais do que cerca de 50 μΜ, con-forme medido no Raf/Mek Filtration Assay descrito em geral abaixo. Isofor-mas preferidas de Raf Cinase onde os compostos da presente invenção se-rão mostrados inibir incluem, A-Raf, B-Raf e C-Raf (Raf-1). "IC50" é aquelaconcentração de inibidor que reduz a atividade de uma enzima (por exemplo,Raf cinase) para o nível médio-máximo. Compostos representativos da pre-sente invenção foram constatados exibir atividade inibidora contra Raf.Compostos da presente invenção exibem de preferência uma IC5o com rela-ção a Raf de não mais do que cerca de 10 μΜ, com mais preferência, nãomais do que cerca de 5 μΜ, com mais preferência ainda não mais do quecerca de 1 μΜ e com mais preferência não mais do que cerca de 200 nM,conforme medido nos ensaios de Raf cinase descritos aqui.

Conforme aqui usado, a expressão "curso de transdução de si-nal de MAPK" é uma abreviação que significa curso de transdução de sinalde proteína cinase ativada por mitógeno em um módulo que é formado dasmoléculas de sinalização Ras-Raf-MEKI-ERK.

"Alquila" refere-se a grupos hidrocarbila saturados que não con-têm heteroátomos e inclui grupos alquila de cadeia reta tal como metila, etila,propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila, nonila, decila, undecila, dodecilae similar. Alquila também inclui isômeros de cadeia ramificada de gruposalquila de cadeia reta incluindo, mas não limitado a, os que seguem são pro-vidos a título de exemplo: -CH(CH3)2, -CH(CH3)(CH2CH3), -CH(CH2CH3)2, -C(CH3)3, -C(CH2CH3)3, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH(CH2CH3)2, -CH2C(CH3)3, -CH2C(CH2CH3)3, -CH(CH3)-CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH2CH(CH3)2, -CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH2CH(CH2CH3)2, -CH2CH2C(CH3)3,-CH2CH2C(CH2CH3)3,CH(CH3)CH2CH(CH3)2, -CH(CH3)CH(CH3)CH(CHs)2,CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3) e outros. Então grupos alquila in-cluem grupos alquila primários, grupos alquila secundários e grupo alquilaterciários. A expressão "C1-12 alquila" refere-se a grupos alquila tendo de apartir de um a doze átomos de carbono. A expressão "C1-6 alquila" refere-sea grupos alquila tendo de a partir de um a seis átomos de carbono.

"Alquenila" refere-se a grupos hidrocarbila retos ou ramificadostendo de a partir de 2 a 6 átomos de carbono e de preferência 2 a 4 átomosde carbono e tendo pelo menos 1 e de preferência de a partir de 1 a 2 sítiosde instauração de vinila (>C=C<). Tais grupos são exemplificados, por e-xemplo, por vinila, alila e but-3-en-1-ila. Incluídos neste termo estão isôme-ros eis e trans ou misturas desses isômeros.

"Alcóxi" refere-se a RO- onde R é um grupo alquila. A expressão"C1-6 alcóxi" conforme aqui usado refere-se a RO- onde R é um grupo C1-6alquila. Exemplos representativos de grupos C1-6 alcóxi incluem metóxi, etó-xi, t-butóxi e similar.

"(C1-6 alcóxi)carbonila" refere-se a éster -C(=0)-0R onde R é C1-6 alquila.

"Amidino" refere-se ao grupo -C(=NH)NH2. "Amidina" refere-se aum composto contendo tal grupo.

"Aminocarbonila" refere-se aqui ao grupo -C(O)-NH2.

"C1-6 alquilaminocarbonila" refere-se ao grupo -C(O)-NRR' onde

R é C1-6alquila e R' é selecionado de hidrogênio e C1-6 alquila.

"Carbonila" refere-se ao grupo divalente -C(O)-."Carboxila" refere-se a -C(=0)-0H.

"Ciano", "carbonitrila" ou "nitrila" refere-se a-CN.

"Carbonitril(C1-6 alquila)" refere-se a C1-6 alquila substituída com

-CN.

"Cicloalquila" refere-se a um substituinte alquila mono- ou policí-clico. Grupos cicloalquila típicos têm de a partir de 3 a 8 átomos no anel car-bono. Grupos cicloalquila representativos incluem ciclopropila, ciclobutila,ciclopentila, cicloexila, cicloeptila e ciclooctila.

"Halogênio" ou "halo" refere-se a grupos cloro, bromo, flúor eiodo.

"Halo(C1-6 alquila)" refere-se a um radical C1-6 alquila substituídocom um ou mais átomos de halogênio, de preferência um a cinco átomos dehalogênio. Um grupo halo(C1-6 alquila) mais preferido é trifluormetila.

"Halo(C1-6 alquil)fenila" refere-se a um grupo fenila substituídocom um grupo halo(C1-6 alquila).

"Halo(C1-6 alcóxi)" refere-se a um radical alcóxi substituído comum ou mais átomos de halogênio, de preferência um a cinco átomos de ha-logênio. Um grupo halo(C1-6 alcóxi) mais preferido é trifluormetóxi.

"Halo(C1-6alquil)sulfonila" e "halo(C1-6 alquil)sulfanila" referem-seà substituição de grupos sulfonila e sulfanila com grupos halo(Ci-6 alquila)onde sulfonila e sulfanila são conforme aqui definido.

"Heteroarila" refere-se a um grupo aromático tendo de a partir de1 a 4 heteroátomos como átomos no anel em um anel aromático com o res-tante dos átomos no anel sendo átomos de carbono. Heteroátomos adequa-dos empregados em compostos da presente invenção são nitrogênio, oxigê-nio e enxofre, onde os átomos de nitrogênio e enxofre podem ser opcional-mente oxidados. Grupos heteroarila exemplares têm 5 a 14 átomos no anele incluem, por exemplo, benzimidazolila, benzotiazolila, benzoxazolila, dia-zapinila, furanila, pirazinila, pirazolila, piridila, piridazinila, pirimidinila, pirroli-la, oxazolila, isoxazolila, imidazolila, indolila, indazolila, quinolinila, isoquino-linila, quinazolinila, quinoxalinila, tiazolila, tienila e triazolila.

"Heterocicloalquila" refere-se aqui a substituintes cicloalquila quetêm de a partir de 1 a 5, e, mais tipicamente, de a partir de 1 a 2 heteroáto-mos na estrutura de anel. Heteroátomos adequados empregados em com-postos da presente invenção são nitrogênio, oxigênio e enxofre, onde os á-tomos de nitrogênio e enxofre podem ser opcionalmente oxidados. Porçõesheterocicloalquila representativas incluem, por exemplo, morfolino, piperazi-nila, piperidinila e similar.

"(Ci-6 alquil)heterocicloalquila" refere-se a um grupo heterociclo-alquila substituído com um grupo Ci-6alquila.

"Heterocicloalquil(Ci-6 alquila)" refere-se a uma C-|.6 alquila subs-tituida com heterocicloalquila.

"Heterocicloalquilcarbonila" refere-se aqui ao grupo -C(O)-R10onde R10 é heterocicloalquila.

"(C-i-6 alquil)heterocicloalquilcarbonila" refere-se ao grupo -C(O)-R11 onde R11 é (Ci-6alquil)heterocicloalquila.

"Hidróxi" refere-se a -OH.

"Hidróxi(C-i-6 alquila)" refere-se a um grupo Ci-6 alquila substituí-do com hidróxi.

"Hidróxi(Ci-6 alquilaminocarbonila)" refere-se a um grupo Ci-6alquilaminocarbonila substituído com hidróxi.

"Imidato" ou "éster imidato" refere-se ao grupo -C(=NH)0- ou a

um composto contendo tal grupo. Esteres imidato incluem, por exemplo, osmetil éster imidato -C(=NH)OCH3.

"Nitro" refere-se a -NO2.

"Sulfonila" refere-se aqui ao grupo -SO2-.

"Sulfanila" refere-se aqui ao grupo -S-. "Alquilsufonila" refere-sea uma sulfonila substituída da estrutura -SO2R12 onde R12 é alquila. "Alquil-sulfanila" refere-se a uma sulfanila substituída da estrutura -SR12 onde R12 éalquila. Grupos alquilsulfonila e alquilsulfanila em compostos da presenteinvenção incluem (Ci-6 alquil)sulfonila e (Ci-6 alquil)sulfanila. Deste modo,grupos típicos incluem, por exemplo, metilsulfonila e metilsulfanila (isto é,onde R12 é metila), etilsulfonila e etilsulfanila (isto é, onde R12 é etila), propil-sulfonila e propilsulfanila (isto é, onde R12 é propila e similar)."Grupo de proteção de hidróxi" refere-se a grupos de proteçãopara um grupo OH. O termo conforme aqui usado refere-se também à prote-ção do grupo OH de um COOH ácido. Grupos de proteção hidróxi adequa-dos bem como condições adequadas para proteção e desproteção de gru-pos funcionais particulares são bem-conhecidos na técnica. Por exemplo,vários tais grupos de proteção são descritos em T.W. Greene e P.G.M.Wuts1 Protecting Groups in Organic Synthesis, Terceira Edição, Wiley, NovaYork, 1999. Tais grupos de proteção hidróxi incluem C1-6 alquil éteres, benziléteres, p-metoxibenzil éteres, silil éteres e similar.

O termo "polimorfo" refere-se às formas de cristal diferentes deum composto. Polimorfos podem diferir um do outro em várias propriedadesfísicas tal como, por exemplo, diferenças em seus padrões de difração deraio X, padrões de espectroscopia de absorção infravermelha, pontos defusão, estabilidade ou solubilidade.

"Metabólito" refere-se a qualquer derivado produzido em um in-divíduo após administração de um composto de origem. Os derivados po-dem ser produzidos a partir do composto de origem através de várias trans-formações bioquímicas no indivíduo tal como, por exemplo, oxidação, redu-ção, hidrólise ou conjugação e incluem, por exemplo, óxidos e derivadosdesmetilados. Metabólitos correspondendo a tais derivados podem ser tam-bém produzidos através de métodos in vitro ou através de métodos sintéti-cos. Em algumas modalidades o metabólito de um composto de Fórmulas(I)-(IV) é um óxido. Em alguns aspectos, o óxido é um N-óxido que é forma-do sinteticamente através de tratamento de um composto de Fórmulas (I)-(IV) com um agente de oxidação. Em alguns aspectos o agente de oxidaçãoé um N-óxido ou um hidroperóxido de N-metilmorfolina tal como peróxido dehidrogênio. Em algumas modalidades, um composto de Fórmulas (I)-(IV) éconjugado com ácido glucurônico para formar um metabólito. Em outro as-pecto, é provido um metabólito, tautômero ou estereisômero do mesmo ten-do a estrutura:<formula>formula see original document page 33</formula>

Opcionalmente substituído" ou "substituído" refere-se à substitu-ição de um ou mais átomos de hidrogênio com um radical monovalente oudivalente.

Quando o substituinte substituído inclui um grupo de cadeia reta,a substituição pode acontecer ou dentro da cadeia (por exemplo, 2-hidroxipropila, 2-aminobutila e similar) ou no terminal da cadeia (por exem-plo, 2-hidroxietila, 3-cianopropila e similar). Substituintes substituídos podemser disposições de cadeia reta, ramificada ou cíclicas de carbono ou hete-roátomos covalentemente ligados.

É compreendido que as definições acima não pretendem incluirpadrões de substituição inadmissíveis (por exemplo, metila substituída comcinco grupos flúor ou um átomo de halogênio substituído com outro átomode halogênio). Tais padrões de substituições inadmissíveis são bem-conhecidos do versado na técnica.

Será também aparente àqueles versados na técnica que oscompostos da invenção, incluindo os compostos de Fórmula (I), (II), (III) ou(IV) ou seus estereoisômeros e polimorfos, bem como sais, ésteres, metabó-litos e pró-fármacos de qualquer um deles, podem ser submetidos à tauto-merização e podem então existir em várias formas tautoméricas onde umpróton de um átomo de uma molécula muda para um outro átomo e as liga-ções químicas entre os átomos das moléculas são conseqüentemente rear-ranjadas. Vide, por exemplo, March, Advanced Organic Chemistry: Reac-tions, Meehanisms and Struetures1 Quarta Edição, John Wiley & Sons, pági-nas 69-74 (1992). Conforme aqui usado, o termo "tautômero" refere-se aoscompostos produzidos pela mudança de próton, e deve ser compreendidoque todas as formas tautoméricas, na medida em que elas possam existir,estão incluídas na invenção. Por exemplo, o tautômero de um composto defórmula (Ia) abaixo que é um composto de Fórmula (I) onde c é 1, é umcomposto de fórmula (Ib). Similarmente, o tautômero de um composto defórmula (IVc) é um composto de fórmula (IVd) ou (IVe).

<formula>formula see original document page 34</formula>

Os compostos da invenção, incluindo os compostos de fórmula(I)1 (II), (III) ou (IV) ou seus tautômeros e polimorfos, bem como os sais, éste-res, metabólitos e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis de qualquerum deles, podem compreender átomos de carbono assimetricamente substi-tuídos. Tais átomos de carbono assimetricamente substituídos podem resul-tar nos compostos da invenção existindo em enantiômeros, diastereômerose outras formas estereisoméricas que podem ser definidas, em termos deestereoquímica absoluta, tal como em formas (R)- ou (S)-. Como resultado,todos tais possíveis isômeros, estereoisômeros individuais em suas formasopticamente puras, suas misturas, misturas racêmicas ( ou "racematos"),misturas de diastereômeros, bem como diastereômeros simples dos com-postos da invenção estão incluídos na presente invenção. Os termos confi-guração "S" e "R", conforme aqui usado, são conforme definido pela IUPAC1974 RECOMMENDATIONS FOR SECTION E, FUNDAMENTAL STEREO-CHEMISTRY, Pure Appi Chem. 45:13-30 (1976). Os termos α e β são em-pregados para posições de anel de compostos cíclicos. O lado α do plano dereferência é aquele lado onde o substituinte preferido se encontra na posiçãonumerada menor. Aqueles substituintes que se encontram no lado oposto doplano de referência são designados descritores β. Deve ser notado que esteuso difere daquele para stereoparents cíclicos, onde "a" significa "abaixo doplano" e significa configuração absoluta. Os termos configuração α e β, con-forme aqui usado, são conforme definido pelo CHEMICAL ABSTRACTS IN-DEX GUIDE- APPENDIX IV (1987) parágrafo 203.

Será também aparente àqueles versados na técnica que oscompostos da invenção, incluindo os compostos de fórmula (I), (II), (III) ou(IV) ou seus estereoisômeros e tautômeros, bem como os sais, ésteres, me-tabólitos e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um de-les, podem existir em várias formas cristalinas (ou "polimorfos") tendo pro-priedades físicas dintinguíveis. Deve ser compreendido que todos os poli-morfos dos compostos da invenção, incluindo seus metabólitos, pró-fármacos, estereoisômeros e tautômeros, bem como os sais farmaceutica-mente aceitáveis de qualquer um deles, na medida em que eles possam e-xistir, ou em forma isolada ou como suas misturas, estão incluídos na invenção.

Conforme aqui usado, o termo "sais farmaceuticamente aceitá-veis" refere-se ao ácido não-tóxico ou sais de metal alcalino-terroso do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco de Fórmula (I), (II), (III) ou (IV). Esses sais podem ser preparados insitu durante o isolamento e purificação finais dos compostos de Fórmula (I),(II), (III) ou (IV), ou reagindo separadamente as funções de base ou ácidascom um ácido ou base orgânico ou inorgânico adequado, respectivamente.Sais representativos incluem, mas não estão limitados a, o que segue: ace-tato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bis-sulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, ciclopentanopropio-nato, dodecilsulfato, etanossulfonato, glucoeptanoato, glicerofosfato, hemis-sulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, cloridrato, bromidrato, iodrato, 2-hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, metanossulfonato, nicotinato, 2-naftalenossulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, sulfato, tartarato,tiocianato, p-toluenossulfonato e undecanoato. Também, os grupos conten-do nitrogênio básico podem ser quaternizados com tais agentes como hale-tos de alquila inferior, tal como cloreto de metila, etila, propila e butila, bro-metos e iodetos; sulfatos de dialquila tal como sulfatos de dimetila, dietila,dibutila e diamila, haletos de cadeia longa tal como cloretos, brometos e io-detos de decila, laurila, miristila e estearila, haletos de fenil alquila tal comobrometos de benzila e fenetila e outros. Produtos solúveis ou dispersáveisem água ou óleo são então obtidos.

Exemplos de ácidos que podem ser empregados para formarsais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis incluem ácidos inorgâ-nicos tal como ácido clorídrico, ácido sulfúrico e ácido fosfórico e ácidos or-gânicos tal como ácido oxálico, ácido maléico, ácido metanossulfônico, ácidosuccínico e ácido cítrico. Sais de adição básicos podem ser preparados insitu durante o isolamento e purificação finais dos compostos de Fórmula (I)ou separadamente através de reação de porções de ácido carboxílico comuma base adequada tal como hidróxido, carbonato ou bicarbonato de umcátion de metal farmaceuticamente aceitável ou com amônia, ou uma aminaprimária, secundária ou terciária orgânica. Sais farmaceuticamente aceitá-veis incluem, mas não estão limitados a, cátions baseados nos metais alcali-nos e alcalino-terrosos, tal como sais de sódio, lítio, potássio, cálcio, magné-sio, alumínio e similar, bem como cátions de amônio, amônio quaternário eamina não-tóxicos, incluindo, mas não limitado a, amônio, tetrametilamônio,tetraetilamônio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilami-na e similar. Outras aminas orgânicas representativas úteis para a formaçãode sais de adição de base incluem dietilamina, etilenodiamina, etanolamina,dietanolamina, piperazina e similar.

Sais e formulações dos compostos da invenção são tambémdescritos nos pedidos provisórios intitulados "Formulations For Benzimidazo-le Pyridyl Ethers" (número de série US 60/832715; attorney docket numberPP028237.0001) depositado em 21 de julho de 2006 e "Salts of Benzimida-zolyl Pyridyl Ethers and Formulations Thereof" (attorney docket numberPP028258.0001) depositado em 30 de agosto de 2006 cada um dos quais éaqui incorporado a título de referência em sua totalidade.

Conforme aqui usado, o termo "éster farmaceuticamente aceitá-vel" refere-se a ésteres que hidrolisam in vivo e incluem aqueles que que-bram prontamente no corpo humano para deixar o composto de origem ouum sal do mesmo. Grupos éster adequados incluem, por exemplo, aquelesderivados de ácidos carboxílicos farmaceuticamente aceitáveis, particular-mente ácidos alcanóico, alquenóico, cicloalcanóico e alcanodióico, onde ca-da porção alquila ou alquenila vantajosamente não tem mais do que 6 áto-mos de carbono. Exemplos de ésteres particulares incluem formiatos, aceta-tos, propionatos, butiratos, acrilatos e etilsuccinatos.

O termo "pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis" conformeaqui usado refere-se àqueles pró-fármacos dos compostos da presente in-venção que são, dentro do escopo de julgamento médico seguro, adequadospara uso em contato com os tecidos de humanos e animais inferiores semtoxidez, irritação, resposta alérgica indevidas e similar, comensuráveis comuma razão de benefício/risco razoável e eficazes para seu uso pretendido,bem como as formas zwitteriônicas, onde possível, dos compostos da inven-ção. O termo "pró-fármaco" refere-se a compostos que são rapidamentetransformados in vivo para dar o composto de origem da fórmula acima, porexemplo, através de hidrólise em sangue. Uma discussão completa é provi-da em T. Higuchi e V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14do A.C.S. Symposium Series e em Edward B. Roche, ed., Bioreversible Car-riers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and PergamonPress, 1987, ambos aqui incorporados a título de referência.

Será aparente àqueles versados na técnica que os compostosda invenção, incluindo os compostos de Fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou seustautômeros, pró-fármacos, estereoisômeros e polimorfos, bem como os sais,ésteres e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis deles, podem ser pro-cessados in vivo através de metabolismo em um corpo humano ou animal oucélula para produzir metabólitos farmacologicamente ativos que retêm ativi-dade como inibidores. Os metabólitos ativos de um composto da invençãopodem ser identificados usando técnicas de rotina conhecidas no campo.Vide, por exemplo, Bertolini, G. e outros, J. Med. Chem. 40:2011- 2016(1997); Shan, D. e outros, J. Pharm. Sei. 86{7):765-767; Bagshawe K., DrugDev. fíes. 34:220-230 (1995); Bodor, N., Advances in Drug fíes. 73:224-331(1984); Bundgaard, H., Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985); e Larsen,I. K., Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development(Krogsgaard-Larsen e outros, eds., Harwood Academic Publishers, 1991).Deve ser compreendido que compostos químicos individuais que são meta-bólitos ativos de um composto da invenção estão incluídos na invenção.

O termo "câncer" refere-se a doenças de câncer que podem serbeneficialmente tratadas pela inibição de uma cinase, particularmente Rafcinase, incluindo, por exemplo, cânceres sólidos, tal como carcinomas (porexemplo, dos pulmões, pâncreas, tireóide, ovário, bexiga, mama, próstata oucólon), melanomas, distúrbios mielóides (por exemplo, leucemia mielóide,mieloma múltiplo e eritroleucemia), adenomas (por exemplo, adenoma docólon viloso) e sarcomas (por exemplo, osteossarcoma).

Em modalidades representativas da invenção, os compostos dainvenção incluem, por exemplo:

{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetilfenil)-amina,

(2-Flúor-5-piridin-3-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(2-Flúor-5-piridin-4-il-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2- il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(4-terc-Butil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina,

(3-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-il-óxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(4-Cloro-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(4-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-il- óxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(4-Cloro-3-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-ii)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-ilJ-amina,

(4-Flúor-3-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetóxi-fenil)-amina,

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1 -metil-5-{2-[5-metil-4-(3-trifluormetil-fenil)-1H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1H-benzoimidazo^amina,

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1-metil-5-{2-[5-metil-4-(4-trifluormetil-fenil)-1H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1H-benzoimidazol^amina,

Etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1-metil-1H-benzoimidazol-5-i!óxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-carboxílico,

(2-{4-[2-(2-Flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-il)-metanol,

2-{4-[1-Metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carbonitrila,

(3-terc-Butil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-il-óxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

{1 -Metil-5-[2-(5-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetilsulfanil-fenil)-amina,

(3-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

[4-Flúor-3-(tetraidro-furan-3-il)-fenil]-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(4-Bromo-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(4-Flúor-3-isopropil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,

{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetilsulfanil-fenil)-amina,

(2-Flúor-5-isopropil-fenil)-{ 1 -metil-5-[2-(5-trif luormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-lH-benzoimidazol-2-il}-amina,

(5-terc-Butil-2-flúor-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(2-Cloro-4-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

2-{4-[2-(2-Flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carbonitrila,

(5-terc-Butil-2-cloro-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-ilJ-amina,

(2-Cloro-5-tr!flüormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

{1 -Metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina,

(3-Etil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(4-íerc-Butil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(2-Cloro-5-trifluormetlil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetii-1 H- imi-dazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina;

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(2-Cloro-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(4-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

{1 -Metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina,

(5-terc-Butil-2-flúor-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,

[4-(4-Metil-piperazin-1 -il)-fenil]-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,

Metil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1-metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carboxílico,

Etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-cloro-5-trifluormetil-fenilamino)-1-metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-carboxílico,

(2-Flúor-4-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(2-Cloro-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(2,5-Dimetóxi-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

(3,5-Dimetóxi-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,

{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo- imidazol-2-il}-(2-trifluormetil-fenil)-amina,

(2-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-il-óxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-Etil-piperazin-1 -il)-(2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1 -metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-il)-metanona,

(2-Hidróxi-etil)-amida do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1-metil-1 H-benzoimidazol-5- ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carboxílico,

{1 -Etil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(2-flúor-5-trifluormetil-fenil)-amina,

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{6-metóxi-1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,

{6-Metóxi-1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina,

(4-Etil-piperazin-1 -il)-(2-{4-[1 -metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)-1H- benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-il)-metanona,

{1-Etil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina,

(2-Hidróxi-etil)-amida do ácido 2-{4-[1-metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]- piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carboxílico,

2-{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo- imidazol-2-ilamino}-5-trifluormetil-fenol, e

3-{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-ilamino}-6-trifluormetil-fenol;

ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto,tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outros aspectos, a presente invenção refere-se aos proces-sos para preparação dos compostos de Fórmula (I), (II), (III) ou (IV) e a in-termediários sintéticos úteis em tais processos.

A presente invenção refere-se também aos processos para pre-paração dos compostos da invenção e a intermediários sintéticos úteis emtais processos, conforme descrito em detalhes abaixo.

Métodos sintéticos

O Esquema 1 ilustra a construção da porção éter de biarila cen-tral dos compostos da invenção. O composto 1.1 é reagido com o composto1.2 onde um de L1 ou L2 é halo e o outro de L1 ou L2 é OH para formar éter1.3. O acoplamento pode ser realizado em um solvente orgânico tal comoacetonitrila ou sulfóxido de dimetila na presença de uma base e pode sertambém conduzido em temperaturas elevadas ou de refluxo. Bases adequa-das incluem K2CO3, CaCO3, KOH, NaOH ou KFAI2O3 {Journal of OrganicChemistry, Vol. 63, N2 18, 1998 pgs. 6338-6343). O grupo Q no composto1.1 pode ser NH2 ou um precursor amino tal como NO2 ou um grupo aminoprotegido que pode ser mais tarde convertido na amina através de respecti-vamente redução ou desproteção dos precursores amino. O grupo Z nocomposto 1.2 pode ser um grupo imidazol substituído com um ou dois gru-pos R4 ou um grupo funcional que pode ser usado para formar tal grupo imi-dazoíla. Grupos funcionais adequados incluem um aldeído ou qualquer pre-cursor de aldeído tal como um éster ou carbonitrila que possa mais tarde serconvertido no aldeído. Os grupos éster e carbonitrila podem ser reduzidos noaldeído com um agente de redução tal como hidreto de diisobutilalumínio. Zpode ser também -CH2OR51 onde R5 é um grupo de proteção hidróxi. O alde-ido pode ser não-mascarado em um estágio posterior através de desprote-ção do grupo R5 e oxidação do álcool resultante no aldeído. A conversão doaldeído em um grupo imidazoíla substituído é mostrada no Esquema 3. Ou-tros métodos para formação do grupo imidazoíla substituído são mostradosno Esquema 6.

Esquema 1:

<formula>formula see original document page 43</formula>

O Esquema 2 mostra um exemplo de uma síntese de certos éte-res de biarila. É compreendido que para propósitos ilustrativos, o Esquema 2emprega os padrões de substituição que seguem: Q é NO2l L1 é OH1 L2 é Cle Z é um t-butil éster. Um exemplo da síntese de aldeído 2.7 onde R2 é meti-la e b é O é mostrado no Exemplo 1. Amina 2.1 pode ser convertida em alquilamina 2.2 através de vários métodos conhecidos. Em um aspecto, amina 2.1é tratada com anidrido acético e ácido fórmico para formar a formamida cor-respondente que pode ser reduzida em alquil amina 2.2. Agentes de reduçãoadequados incluem NaBH4 na presença de BF3(OCH2CH3)2. Alternativamen-te, alquil amina 2.2 pode ser sintetizada reagindo amina 2.1 com anidridotrifluoracéitco, alquilação da amida correspondente com um agente de alqui-lação tal como haleto de alquila e remoção do grupo de proteção de trifluo-racetamida através de tratamento com base tal como NaOH.

Cloreto 2.5 pode ser preparado tratamento ácido picolínico 2.3com cloreto de tionila em excesso para formar cloreto ácido 2.4 que é entãoexposto a di-t-butil dicarbonato e piridina para dar cloreto 2.5. Acoplamentode álcool da alquil amina 2.2 com cloreto 2.5 sob condições básicas dá éter2.6 que pode ser convertido diretamente em aldeído 2.7 através de reduçãocom hidreto de diisobutilalumínio ou em duas etapas através de redução deéster 2.6 no álcool seguido por oxidação para o aldeído.

Esquema 2:

<formula>formula see original document page 44</formula>

O Esquema 3 ilustra a formação do anel imidazol. O Aldeído 2.7pode ser reagido com composto 3.1 onde Xb é =O ou =NHOH e R4p e R4q sãoindependentemente H ou R41 onde R4 é conforme anteriormente definido,contanto que pelo menos um de R4p e R4q seja R4. A reação pode ser reali-zada em um solvente polar tal como uma mistura de acetato de etila/etanol ena presença de NH4OH para prover composto 3.2. O grupo nitro do compos-to 3.2 pode ser reduzido em amina 3.3 através de tratamento com um agen-te de redução tal como ditionita de sódio (Na2S204).

Esquema 3:

O Esquema 4 ilustra formação do anel benzimidazol. Diamina3.3 é reagida com tioisocianato 4.1 para prover tiouréia 4.2. Tratamento de4.2 com um agente de dessulfurização dá um composto de Fórmula (I). Otermo "agente de dessulfurização" refere-se a agentes adequados para rea-lizar fechamento de anel tal como FeCI3, iodeto de 2-cloro-1-metilpiridínio(reagente Mukaiyama), cloreto de 2-cloro-1,3-dimetilimidazólio, POCI3 ou umhaleto de alquila tal como iodeto de metila. Reagentes Mukaiyama modifica-dos podem ser também usados (Journal of Organic Chemistry, Vol. 70, Ne 7,2005 pgs. 2835-2838).

Esquema 4:

Os compostos da invenção podem ser alternativamente sinteti-zados modificando a seqüência das reações de acoplamento. O Esquema 5ilustra acoplamento de 5.1 com 5.2 para formar a ligação éter e o acopla-mento de 5.3 com 3.1 para formar o anel imidazol como a penúltima etapade formação do núcleo pentacíclico completamente acoplado. Para interme-diários 5.1 e 5.2, um de L3 ou L4 é halo e o outro de L3 ou L4 é OH. Os inter-mediários podem ser preparados conforme mostrado nos esquemas anterio-res empregando materiais de partida e/ou grupos de proteção adequadosnas seqüências de reação apropriadas. Tais fatores estão dentro do versadona técnica. O aldeído 5.3, por exemplo, pode ser preparado através de redu-ção da carbonitrila correspondente, cuja síntese é mostrada no Exemplo 60,com hidreto de diisobutilalumínio. Reação de aldeído 5.3 de acordo com oEsquema 3 acima com cetona 3.1 dá compostos de Fórmula (I).

Esquema 5:

<formula>formula see original document page 46</formula>

Os compostos da invenção tendo um grupo terminal triazol po-dem ser preparados conforme mostrado no Esquema 6, através de reaçãodo composto 6.1 onde Z é uma carbonitrila com hidrazida 6.2. Um exemploda síntese de composto 6.3 é descrito no Exemplo 60.

Esquema 6:

<formula>formula see original document page 46</formula>

Será compreendido que os intermediários imidazol usados nasreações de acoplamento podem ser preparados usando outras vias sintéti-cas. Um tal método é mostrado no Esquema 7. O Composto 1.3, onde Z éCN, é convertido em um composto onde Z é um grupo amidino.

Esta transformação pode ser realizada reagindo 1.3 com um al-cóxido, tal como metóxido, para converter a carbonitrila em um éster imidatoque é em seguida reagido com um reagente de amônio tal como acetato deamônio ou benzoato de amônio para formar a amidina. Reação da amidinacom composto (Va), onde Xa é um grupo de saída, provê o composto alqui-lado e ciclizado 7.2 ou um tautômero do mesmo. Aquecimento do composto7.2 leva à eliminação de água (desidratação) e à formação de intermediário7.3. Outras condições de desidratação incluem tratamento de 7.2 com áci-dos orgânicos tal como ácido acético, ácido metanossulfônico, ácido canfor-sulfônico, ácido trifluormetanossulfônico e ácido trifluoracético, bem comocom ácidos inorgânicos tal como ácido clorídrico e ácido sulfúrico. A forma-ção de quatro reações de éster imidato, formação de amidina, alquila-ção/ciclização e desidratação são tipicamente realizadas em uma seqüênciade uma panela.

Esquema 7:

Os compostos da invenção são úteis in vitro ou in vivo em inibi-ção do crescimento de células de câncer. Os compostos podem ser usadossozinhos ou em composições junto com um veículo ou excipientes farma-ceuticamente aceitáveis. Veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitá-veis incluem, por exemplo, agentes de processamento e modificadores erealçadores de aplicação de fármaco, tal como, por exemplo, fosfato de cál-cio, estearato de magnésio, talco, monossacarídeos, dissacarídeos, amido,gelatina, celulose, metil celulose, carboximetilcelulose de sódio, dextrose,hidroxipropil-p-ciclodextrina, polivinilpirrolidinona, ceras de baixo derretimen-to, resinas de troca de íon e similar, bem como combinações de qualquer umde dois ou mais dos mesmos. Outros excipientes farmaceuticamente aceitá-veis adequados são descritos em "Remington1S Pharmaceutical Sciences,"Mack Pub. Co., New Jersey (1991), incorporado aqui a título de referência.

Quantidades eficazes dos compostos da invenção geralmenteincluem qualquer quantidade suficiente para detectavelmente inibir atividadede Raf através de qualquer um dos ensaios descritos aqui, através de outrosensaios de atividade de Raf cinase conhecidos dos ou prontamente determi-nados por aqueles ordinariamente ordinário na técnica ou através de detec-ção de uma inibição ou alívio de sintomas de câncer.

A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada comos materiais veículos para produzir uma forma de dosagem única vai variardependendo do hospedeiro tratado e do modo de administração particular.Será compreendido, no entanto, que o nível de dose específico para qual-quer paciente particular vai depender de uma variedade de fatores incluindoa atividade do composto específico empregado, da idade, peso do corpo,saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, via de administração, taxade excreção, combinação de fármaco e a severidade da doença particularsofrendo terapia. A quantidade terapeuticamente eficaz para uma dada situ-ação pode ser prontamente determinada através de experimentação de roti-na e está dentro do versado e julgamento do médico comum.

Para propósitos da presente invenção, uma dose terapeutica-mente eficaz vai geralmente ser uma dose diária total administrada a umhospedeiro em doses únicas ou divididas que pode ser em quantidades, porexemplo, de a partir de 0,001 a 1000 mg/kg de peso do corpo diariamente ede a partir de 1,0 a 30 mg/kg de peso do corpo diariamente. Composiçõesde unidade de dosagem podem conter tais quantidades de seus submúlti-plos para formar a dose diária.

Os compostos da presente invenção podem ser administradosoralmente, parenteralmente, sublingualmente, através de aerossolização ouspray de inalação, retalmente ou topicamente em formulações de unidade dedosagem contendo veículos, adjuvantes e veículos farmaceuticamente acei-táveis não-tóxicos conforme desejado. Administração tópica pode tambémenvolver o uso de administração transdermal tal como emplastros transder-mais ou dispositivos de ionoforese. O termo parenteral conforme aqui usadoinclui injeções subcutâneas, injeção intravenosa, intramuscular, intracisternalou técnicas de infusão.

Preparações injetáveis, por exemplo, suspensões aquosas ouoleagionosas injetáveis estéreis, podem ser formuladas de acordo com atécnica conhecida usando agentes de dispersão ou umectantes e agentesde suspensão adequados. A preparação injetável estéril pode ser tambémuma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente pa-renteralmente aceitável não-tóxico, por exemplo, como uma solução em 1,3-propanodiol. Dentre os veículos e solventes adequados que podem ser em-pregados estão água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotô-nica. Ainda, óleos fixos, estéreis, são convencionalmente empregados comoum solvente ou meio de suspensão. Para este propósito qualquer óleo fixosuave pode ser empregado incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos. Ain-da, ácidos graxos tal como ácido oléico encontram uso na preparação deinjetáveis.

Supositórios para administração retal do fármaco podem serpreparados através da mistura do fármaco com excipientes não-irritantesadequados tal como manteiga de cacau e polietileno glicóis, que são sólidosem temperaturas comuns mas líquidos na temperatura retal e vão então der-reter no reto e liberar o fármaco.

Formas de dosagem sólidas para administração oral podem in-cluir cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Em tais formas de do-sagem sólidas, o composto ativo pode ser misturado com pelo menos umdiluente inerte tal como sacarose, Iactose ou amido. Tais formas de dosa-gem podem também compreender, como é prática normal, substâncias adi-cionais outras que não diluentes inertes, por exemplo, agentes lubrificantestal como estearato de magnésio. No caso de cápsulas, comprimidos e pílu-las, as formas de dosagem podem também compreender agentes de tampo-namento. Comprimidos e pílulas podem ser adicionalmente preparados comrevestimentos entéricos.

Formas de dosagem líquidas para administração oral podemincluir emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamen-te aceitáveis contendo diluentes inertes geralmente usados na técnica, talcomo água. Tais composições podem também compreender adjuvantes, talcomo agentes umectantes, agentes emulsificantes e de suspensão, ciclo-dextrinas e agentes adoçantes, flavorizantes e de perfume.

Os compostos da presente invenção podem ser também admi-nistrados na forma de lipossomas. Como é conhecido na técnica, Iipossomassão geralmente derivados de fosfolipídeos ou outras substâncias lipídeo.Lipossomas são formados por cristais líquidos mono- ou multiiamelares hi-dratados que são dispersos em um meio líquido. Qualquer líquido não-tóxico, fisiologicamente aceitável e metabolizável capaz de formação de Ii-possomas pode ser usado. As presentes composições em forma de Iipos-soma podem conter, em adição a um composto da presente invenção, esta-bilizadores, conservantes, excipientes e similar. Os lipídeos preferidos sãoos fosfolipídeos e fosfatidil colinas (lecitinas), ambos naturais e sintéticos.Métodos para formar lipossomas são conhecidos na técnica. Vide, por e-xemplo, Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, AcademicPress, New York, N. W., p. 33 et seq. (1976).

Embora os compostos da invenção possam ser administradoscomo o único agente farmacêutico ativo, eles podem ser também usados emcombinação com um ou mais outros agentes usados no tratamento de cân-cer. Os compostos da presente invenção são também úteis em combinaçãocom agentes terapêuticos e agentes anticâncer conhecidos, e combinaçõesdos compostos aqui descritos com outros agentes anticâncer ou quimiotera-pêuticos estão dentro do escopo da invenção. Exemplos de tais agentes po-dem ser encontrados em Câncer Principies and Practice of Oncology, V. T.Devita and S. Hellman (editores), 6a edição (15 de fevereiro, 2001), Lippin-cott Williams & Wilkins Publishers. Uma pessoa versada na técnica seriacapaz de determinar quais combinações de agentes seriam úteis com basenas características particulares dos fármacos e o câncer envolvido. Tais a-gentes anticâncer incluem, mas não estão limitados a, o que segue: modula-dores de receptor de estrogênio, moduladores de receptor de androgênio,moduladores de receptor de retinóide, agentes citotóxicos/citostáticos, agen-tes antiproliferativos, inibidores de prenil-proteína transferase, inibidores deHMG-CoA redutase e outros inibidores de angiogênese, inibidores de prolife-ração celular e sinalização de sobrevivência, agentes de indução de apopto-se e agentes que interferem com checkpoints de ciclo celular. Os compostosda invenção são também úteis quando co-administrados com terapia de ra-diação.

Deste modo, em uma modalidade da invenção, os compostos dainvenção são também usados em combinação com agentes anticâncer co-nhecidos incluindo, por exemplo, moduladores de receptor de estrogênio,moduladores de receptor de androgênio, moduladores de receptor de reti-nóide, agentes citotóxicos, agentes antiproliferativos, inibidores de prenil-proteína transferase, inibidores de HMG-CoA redutase, inibidores de protea-se de HIV, inibidores de transcriptase reversa e outros inibidores de angio-gênese.

Moduladores de receptor de estrogênio são compostos que in-terferem com ou inibem a ligação de estrogênio ao receptor, sem importar omecanismo. Exemplos de moduladores de receptor de estrogênio incluem,mas não estão limitados a, tamoxifen, raloxifeno, idoxifeno, LY353381,LY117081, toremifeno, fulvestrant, 4-[7-(2,2-dimetil-1-oxopropóxi-4-metil- 2-[4-[2-(1 -piperidinil)etóxi]fenil]-2H-1 -benzopiran-3-il]-fenil-2,2-dimetil- propa-noato, 4,4'-diidroxibenzofenona-2,4-dinitrofenil-hidrazona e SH646.

Moduladores de receptor de androgênio são compostos que in-terferem com ou inibem a ligação de androgênios a um receptor de andro-gênio. Exemplos representativos de moduladores de receptor de androgênioincluem finasterida e outros inibidores de 5oc-redutase, nilutamida, flutamida,bicalutamida, Iiarozol e acetato de abiraterona. Moduladores de receptor deretinóide são compostos que interferem ou inibem a ligação de retinóides aum receptor de retinóide. Exemplos de moduladores de receptor de retinóideincluem bexaroteno, tretinoína, ácido 13-cis-retinóico, ácido 9-cis-retinóico,α-difluormetilornitina, LX23-7553, trans-N-(4'-hidroxifenil)retinamida e N4-carboxifenil retinamida.

Agentes citotóxicos e/ou citostáticos são compostos que causammorte celular ou inibem proliferação celular pricipalmente interferindo direta-mente com o funcionamento da célula ou inibem ou interferem com mitosede célula, incluindo agentes de alquilação, fatores de necrose de tumor, in-tercaladores, compostos ativáveis por hipoxia, inibidores de microtúbu-lo/agentes de estabilização de microtúbulo, inibidores de cinecinas mitóticas,inibidores de cinases envolvidas em progressão mitótica, antimetabólitos;modificadores de resposta biológica; agentes terapêuticos hormonais/anti-hormonais, fatores de crescimento hematopoiéticos, agentes terapêuticosdirecionados a anticorpo monoclonal, inibidores de topoisomerase, inibidoresde proteasoma e inibidores de ubiquitina ligase. Exemplos de agentes citotó-xicos incluem, mas não estão limitados a, sertenef, cachectin, ifosfamida,tasonermin, lonidamina, carboplatina, altretamina, prednimustina, dibromo-dulcitol, ranimustina, fotemustina, nedaplatina, oxaliplatina, temozolomida,heptaplatina, estramustina, tosilato de improsulfan, trofosfamida, nimustina,cloreto de dibrospídio, pumitepa, lobaplatina, satraplatina, profiromicina, cis-platina, irofulven, dexifosfamida, cis-aminodicloro(2-metil- piridina)platina,benzilguanina, glufosfamida, GPX100, tetracloreto de (trans, trans, trans)-bis-mu- (hexano-l,6-diamino)-mu-[diamino-platina(ll)]bis[diamino(cloro)platina(II)], diarizidinilespermina, trióxido arsênico, 1-(11-dodecilamino-10-hidroxiundecil)-3,7-dimetilxantina, zorrubicina, idarrubicina, daunorrubicina,bisantreno, mitoxantrona, pirarrubicina, pinafida, valrubicina, amrubicina, an-tineoplaston, 3'-desamino-3'- morfolino-13-desoxo-10-hidroxícarminomicina,annamicina, galarrubicina, elinafida, MEN10755 e 4-desmetóxi-3-desamino-3-aziridinil-4-metilsulfonil-daunorrubicina (vide WO 00/50032). Um exemplorepresentativo de composto ativável por hipoxia é tirapazamina. Inibidoresde proteasoma incluem, mas não estão limitados a, Iactacistina e bortezo-mib. Exemplos de inibidores de microtúbulo/agentes de estabilização de mi-crotúbulo incluem paclitaxel, sulfato de vindesina, 3',4'-didesidro-4'-desóxi-8l-norvincaleucoblastina, docetaxol, rizoxin, dolastatin, isetionato de mivobulin,auristatin, cemadotin, RPR109881, BMS 184476, vinflunina, criptoficina,2,3,4,5,6-pentaflúor-N-(3-flúor-4-metoxifenil) benzeno sulfonamida, anidro-vinblastina, N,N-dimetil-1 -valil-1 -valil-N-metil-1 - valil-1 -prolil-1 -prolino-t-butilamida, TDX258, como epotilonas (vide, por exemplo, Patentes U.S. N9S6.284.781 e 6.288.237) e BMS188797. Exemplos representativos de inibido-res de topoisomerase incluem topotecan, hicaptamina, irinotecan, rubitecan,6-etoxipropionil-3',4'-0-exo-benzilideno-chartreusin, 9-metóxi-N,N-dimetil-5-nitropirazol[3,4,5-kl]acridino-2-(6H) propanamina, 1 -amino-9-etil-5-flúor-2,3-diidro- 9-hidróxi-4-metil-1H,12H-benzo[de]pirano[3',4':b,7]-indolizino[1,2b]quinolino-10,13(9H, 15H)diona, lurtotecan, 7-[2-(N-isopropilamino)etil]-(20S)camptotecin, BNP1350, BNPI1100, ΒΝ80915,BN80942, etoposídeo fosfato, teniposíeo, sobuzoxana, 2'-dimetilamino-2'-desóxi-etoposídeo, GL331 , N-[2-(dimetilamino)etil]-9-hidróxi-5,6- dimetil-6H-pirido[4,3-b]carbazol-1-carboxamida, asulacrina, (5a, 5aB, 8aa, 9b)-9-[2-[N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metilamino]etil]-5-[4-hidróxi-3,5-dimetoxifenil]-5,5a,68,8a,9-hexaidrofuro(3',4,:6,7)nafto(2,3-d)-1,3-dioxol-6-ona, 2,3-(metileno-dióxi)-5-metil-7-hidróxi-8-metoxibenzo[c]-fenantridínio-6,9-bis [(2-amino- etil)amino]benzo[g]isoguinolina-5,10-diona, 5-(3-aminopropilamino)-7,10-diidróxi-2- (2-hidroxietilaminometil)-6H-pirazol[4,5, 1 '-de]acridin-6-ona,N-[1-[2(dietilamino)- etilamino]-7-metóxi-9-oxo-9H-tioxanten-4-ilmetil]formamida, N-(2-(dimetilamino)etil)acridino-4-carboxamida, 6-[[2-(dimetilamino)etil]amino]-3- hidróxi- 7H-indeno [2,1l-c]quinolin-7-ona e di-mesna. Exemplos de inibidores de cinesinas mitóticas, tal como cinesinamitótica humana KSP, são descritos nas Publicações PCT WO 01/30768 eWO 01/98278, WO 03/050.064 (19 de junho, 2003), WO 03/050.122 (19 dejunho, 2003), WO 03/049.527 (19 de junho, 2003), WO 03/049.679 (19 dejunho, 2003), WO 03/049.678 (19 de junho, 2003) e WO 03/39460 (15 demaio, 2003) Pedidos PCT pendentes N9S US03/06403 (depositado em 4 demarço, 2003), US03/15861 (depositado em 19 de maio, 2003), US03/15810(depositado em 19 de maio, 2003), US03/18482 (depositado em 12 de ju-nho, 2003) e US03/18694 (depositado em 12 de junho, 2003). Em uma mo-dalidade inibidores de cinesinas mitóticas incluem, mas não estão limitadosa, inibidores de KSP1 inibidores de MKLP1, inibidores de CENP-E, inibidoresde MCAK, inibidores de Kif14, inibidores de Mphosphl e inibidores de Rab6-KIFL.

Inibidores de cinases envolvidas em progressão mitótica inclu-em, mas não estão limitados a, inibidores de aurora cinase, inibidores decinases tipo Polo (PLK) (por exemplo, inibidores de PLK-1), inibidores debub-1 e inibidores de bub-R1. Agentes antiproliferativos incluem oligonucleo-tídeos de RNA e DNA de anti-sentido tal como G3139, ODN698, RVAS-KRAS, GEM231 e INX3001 e antimetabólitos tal como enocitabina, carmo-fur, tegafur, pentostatin, doxifíuridina, trimetrexato, fludarabina, capecitabina,galocitabina, ocfosfato de citarabina, hidrato de sódio de fosteabina, raltitre-xed, paltitrexid, emitefur, tiazofurin, decitabina, nolatrexed, pemetrexed, nel-zarabina, 2'-desóxi-2'-metilidenocitidina, 2'-fluormetileno- 2'-desoxicitidina, N-[5-(2,3-diidro-benzofuril)sulfonil]-N'-(3,4-diclorofenil)uréia) N6- [4-desóxi-4-[N2-[2(E),4(E)-tetradecadienoil]glicilamino]-1 -glicero-B-1 -mano- heptopirano-sil] adenina, aplidina, ecteinascidina, troxacitabina, ácido 4-[2-amino-4-oxo-4,6,7,8- tetraidro-3H-pirimidino[54-b][l,4]tiazin-6-il-(S)-etil]-2,5-tienoil-1 -glutâmico, aminopterina, 5-flurouracila, alanosina, éster do ácido 11 -acetil-8-(carbamoiloximetil)-4-formil-6- metóxi-14-oxa-1,1-diazatetraciclo(7.4.1.0.0)-tetradeca-2,4,6-trien-9-il acético, swainsonina, lometrexol, dexrazoxana, me-tioninase, 2'-ciano-2'-desóxi-N4-palmitoil-1-B- D-arabino furanosil citosina e3-aminopiridino-2-carboxaldeído tiosemicarbazona. Exemplos de agentesterapêuticos direcionados a anticorpo monoclonal incluem aqueles agentesterapêuticos que têm agentes citotóxicos ou radioisótopos ligados a um anti-corpo específico de célula de câncer ou monoclonal específico de célula di-recionada. Exemplos incluem, por exemplo, Bexxar. Inibidores de HMG-CoAredutase são inibidores de 3-hidróxi-3-metilglutaril-CoA redutase. Compostosque têm atividade inibidora para HMG-CoA redutase podem ser prontamenteidentificados usando ensaios bem-conhecidos na técnica tal como aquelesdescritos ou citados na Patente U.S. N9 4.231.938 e WO 84/02131. Exem-plos de inibidores de HMG-CoA redutase que podem ser usados incluem,mas não estão limitados a, Iovastatina (MEVACOR®; vide Patentes U.S. NsS4.231.938, 4.294.926 e 4.319.039), simvastatina (ZOCOR®; vide PatentesU.S. NQs 4.444.784, 4.820.850 e 4.916.239), pravastatina (PRAVACHOL®;vide Patentes U.S. NsS 4.346.227, 4.537.859, 4.410.629, 5.030.447 e5.180.589), fluvastatina (LESCOL®; vide Patentes U.S. NgS 5.354.772,4.911.165, 4.929.437, 5.189.164, 5.118.853, 5.290.946 e 5.356.896) e ator-vastatina (LIPITOR®; vide Patentes U.S. N2S 5.273.995, 4.681.893,5.489.691 e 5.342.952). As fórmulas estruturais desses inibidores de HMG-CoA redutase e adicionais que podem ser usados nos presentes métodossão descritas na página 81 de M. Yalpani, "Cholesterol Lowering Drugs",Chemistry & Industry, pp. 85-89 (5 de fevereiro, 1996) Patentes U.S. N9S4.782.084 e 4.885.314. Em uma modalidade, o inibidor de HMG-CoA reduta-se é selecionado de Iovastatina e simvastatina.

Inibidores de prenil-proteína transferase são compostos que ini-bem qualquer uma ou qualquer combinação das enzimas prenil-proteínatransferase, incluindo farnesil-proteína transferase (FPTase), geranilgeranil-proteína transferase tipo I (GGPTase-I) e geranilgeranil-proteína transferasetipo-ll (GGPTase-ll, também chamada Rab GGPTase). Exemplos de com-postos de inibição de prenil-proteína transferase incluem (±)-6-[amino(4-clorofenil)(1 -metil-1 H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1 -metil-2(1 H)-quinolinona, (-)-6-[amino(4-clorofenil)(1 -metil-1 H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1 -metil-2(1 H)-quinolinona, (+)-6-[amino(4-clorofenil)(1 -metil-1 H-imidazol-5-il) metil]-4-(3-clorofenil)-1 -metil-2(1 H)-quinolinona, 5(S)-n-butil-1 -(2,3-dimetilfenil)-4-[1 -(4-cianobenzil)-5-imnidazolilmetil-2-piperazinona, (S)-1 -(3-clorofenil)-4-[1-(4-cianobenzil)-5-imidazolilmetil]-5-[2-(etanossulfonil)metil)-2-piperazinona, 5(S)-n-butil-1 -(2-metillfenil)-4-[1 -(4-cianobenzil)-5-imidazolilmetil]-2-piperazinona, 1 -(3-clorofenil)-4-[1 -(4-cianobenzil)-2-metil-5-imidazolilmetil]-2-piperazinona, 1 -(2,2-difeniletil)-3-[N-(1 -(4-cianobenzil)-1 H-imidazol-5- iletil)carbamoil]piperidina, 4-{-[4-hidroximetil-4-(4-cloropiridin-2-ilmetil)-piperidino-1 -ilmetil]-2-nietilimidazol-1 -ilmetiljbenzonitrila, 4-{-5-[4-hidroximetil-4-(3-clorobenzil)-piperidino-1-ilmetil]-2-metilimidazol-1-ilmetil}-benzonitrila, 4-{3-[4-(2-oxo-2H-piridin-1-il)benzil]-3H-imidazol-4-ilmetiljbenzonitrila, 4-{3-[4-(5-cloro-2-oxo-2H-[1,2,]bipiridin-5'-ilmetil]-3H-imidazol-4-il-metil}benzonitrila, 4-{3-[4-(2-oxo-2H-[1,2,]bipiridin-5,-ilmetil]-3H-imidazol-4-il-metil} benzonitrila, 4-[3-(2-oxo-1-fenil-1,2-diidropiridin-4-ilmetil)-3H-midazol-4- ilmetiljbenzonitrila, 18,19-diidro-19-oxo-5H,17H-6,10:12,16-dimeteno-1 H-imidazo[4,3-c][1,11 ,4]dioxaazaciclo-nonadecino-9-carbonitrila,(±)-19,20-diidro-19-oxo-5H-18,21 -etano-12,14-eteno-6,10-meteno-22H-benzo[d]imidazo[4,3-k]-[1 ,6,9,12]oxatriaza-ciclooctadecino-9-carbonitrila,19,20-diidro-19-oxo-5H, 17H-18,2-etano-6,10:12,16-dimeteno-22H-imidazo[3,4-h][1,8,11,14]oxatriazacicloeicosino-9-carbonitrila e (+-)-19,20-diidro-3-metil-19-oxo-5H-18,21 -etano-12,14-eteno-6,10-meteno-22H-benzo[d]imidazo[4,3-k][l,6,9,12]oxa-triazaciclooctadecino-9-carbonitrila. Ou-tros exemplos de inibidores de prenil-proteína transferase podem ser encon-trados nas publicações e patentes: WO 96/30343. WO 97/18813, WO97/21701, WO 97/23478, WO 97/38665, WO 98/28980, WO 98/29119, WO95/32987, Pat. U.S. N2 5.420.245, U.S. Pat. Nq 5.523.430, Pat.U.S. N95.532.359, Pat. U.S. Ne 5.510.510, Pat. U.S. N5 5.589.485, Pat. U.S. Ne5.602.098, Publicação de Patente Européia 0 618 221, Publicação de Pat-ente Européia 0 675 112, Publicação de Patente Européia 0 604 181, Publi-cação de Patente Européia 0 696 593, WO 94/19357, WO 95/08542, WO95/11917, WO 95/12612, WO 95/12572, WO 95/10514, Pat. U.S. Ne5.661.152, WO 95/10515, WO 95/10516, WO 95/24612, WO 95/34535, WO95/25086, WO 96/05529, WO 96/06138, WO 96/06193, WO 96/16443, WO96/21701, WO 96/21456, WO 96/22278, WO 96/24611, WO 96/24612, WO96/05168, WO 96/05169, WO 96/00736, Pat. U.S. Ne 5.571.792, WO96/17861, WO 96/33159, WO 96/34850, WO 96/34851, WO 96/30017, WO96/30018, WO 96/30362, WO 96/30363, WO 96/31111, WO 96/31477, WO96/31478, WO 96/31501, WO 97/00252, WO 97/03047, WO 97/03050, WO97/04785, WO 97/02920, WO 97/17070, WO 97/23478, WO 97/26246, WO97/30053, WO 97/44350, WO 98/02436 e Patent U.S. N2 5.532.359. Paraum exemplo do papel de um inibidor de prenil-proteína transferase sobreangiogênese vide European J. of Câncer 55(9): 1394-1401 (1999).

Inibidores de angiogênese referem-se a compostos que inibem aformação de novos vasos sangüíneos, sem importar o mecanismo. Exem-plos de inibidores de angiogênese incluem, mas não estão limitados a, inibi-dores de tirosina cinase, tal como inibidores de receptores de tirosina cinaseFlt-1 (VEGFR1) e Flk-1/KDR (VEGFR2), inibidores de fatores de crescimentoderivados de epidermal, derivados de fibroblasto ou derivados de plaqueta,inibidores de MMP (metaloprotease de matriz), bloqueadores de integrina,interferon-alfa, interleucina-12, pentosan-polissulfato, inibidores de ciclooxi-genase, incluindo antiinflamatórios não-esteroidais (NSAIDs) tal como aspiri-na e ibuprofeno bem como inibidores de ciclooxigenase-2 seletivos tal comocelecoxib e rofecoxib (PAMS 89:7384 (1992); JNCI 69:475 (1982); Arch. O-phtalmol. 108:573 (1990); Anat. Rec. (238):68 (1994); FEBS Letters 372:83(1995); Clin. Orthop. 313:76 (1995); J. MoL Endocrinol. 16:107 (1996); Jpn.J. PharmacoL 75:105 (1997); Câncer Res. 57:1625 (1997); Cell 93:705(1998); Intl. J. MoL Med. 2:715 (1998); J. BioL Chem. 274:9116 (1999)), anti-inflamatórios esteroidais (tal como corticosteróides, mineralocorticóides, de-xametasona, prednisone, prednisolona, metilpred, betametasona), carboxi-amidotriazol, combretastatin A4, squalamina, 6-O-cloroacetil-carbonil)-fumagillol, talidomida, angiostatina, troponin-1, antagonistas de angiotensinaII (vide Fernandez e outros, J. Lab. Clin. Med. 105:141-145 (1985)) e anti-corpos para VEGF (vide, Nature Biotechnology, 17:963-968 (outubro, 1999);Kim e outros, Nature, 362:841-844 (1993); WO 00/44777; e WO 00/61186).Outros agentes terapêuticos que modulam ou inibem angiogênese e podemser então usados em combinação com os compostos da presente invençãoincluem agentes que modulam ou inibem o sistema de coagulação e fibrinó-lise (vide revisão em Clin. Chem. La. Med. 38:679-692 (2000)). Exemplo detais agentes que modulam ou inibem os cursos de coagulação e fibrinóliseicluem, mas não estão limitados a, heparina (vide Thromb. Haemost. 80:10-23 (1998)), heparinas e inibidores U de carboxipeptidase de baixo peso mo-lecular (também conhecidos como inibidores de inibidor de fibrinólise ativávelpor trombina ativa [TAFIa]) (vide Thrombosis Res. 707:329-354 (2001)). Ini-bidores de TAFIa foram descritos na Publicação PCT WO 03/013.526 U.S.Ne de Série 60/349.925 (depositada em 19 de janeiro, 2002). A invençãotambém compreende combinações dos compostos da invenção comNSAIDs que são inibidores de COX-2 seletivos (geralmente definidos comoaqueles que possuem uma especificidade para inibição de COX-2 sobreCOX-1 de pelo menos 100 vezes conforme medido através da razão de IC5opara COX-2 sobre IC50 para COX-1 avaliada através de ensaio de célula oumicrossomal). Tais compostos incluem, mas não estão limitados a, aquelesdescritos na Patente U.S. N9 5.474.995 expedida em 12 dê dezembro, 1995,Pat. U.S. Ne 5.861.419, expedida em 19 de janeiro, 1999, Pat. U.S. N96.001.843, expedida em 14 de dezembro, 1999, Pat. U.S. Ns 6.020.343, ex-pedida em 1 de fevereiro, 2000, Pat. U.S. N9 5.409.944, expedida em 25 deabril, 1995, Pat. U.S. Ne 5.436.265, expedida em 25 de julho, 1995, Pat. U.S.N9 5.536.752, expedida em 16 de julho, 1996, Pat U.S. N9 5.550.142, expe-dida em 27 de agosto, 1996, Pat. U.S. N9 5.604.260, expedida em 18 de fe-vereiro, 1997, Pat. U.S. N9 5.698.584, expedida em 16 de dezembro, 1997,Pat. U.S. N9 5.710.140, expedida em 20 de janeiro, 1998, WO 94/15932, pu-blicado em 21 de julho, 1994, Pat. U.S. N9 5.344.991, expedida em 6 de ju-nho, 1994, Pat. U.S. N9 5.134.142, expedida em 28 de julho, 1992, Pat.U.S.N9 5.380.738, expedida em 10 de janeiro, 1995, Pat. U.S. N9 5.393.790, ex-pedida em 20 de fevereiro, 1995, Pat. U.S. Ns 5.466.823, expedida em 14 denovembro, 1995, Pat. U.S. N9 5.633.272, expedida em 27 de maio, 1997 ePat. U.S. N9 5.932.598, expedida em 3 de agosto, 1999, todos aqui incorpo-rados a título de referência. Inibidores representativos de COX-2 que sãoúteis nos métodos da presente invenção incluem 3-fenil-4-(4-(metilsulfonil)fenil)-2-(5H)-furanona; e 5-cloro-3-(4-metilsulfonil)fenil-2-(2-metil-5-piridinil)piridina. Compostos que são descritos como inibidores espe-cíficos de COX-2 e são então úteis na presente invenção, e métodos de suasíntese, podem ser encontrados nas patentes, pedidos de patente e publica-ções que seguem, que são aqui incorporados a título de referência: WO94/15932, publicado em 21 de julho, 1994, Pat. U.S. N9 5.344.991, expedidaem 6 de junho, 1994, Pat. U.S. N9 5.134.142, expedida em 28 de julho,1992, Pat. U.S. N9 5.380.738, expedida em 10 de janeiro, 1995, Pat. U.S. N95.393.790, expedida em 20 de fevereiro, 1995, Pat. U.S. N9 5.466.823, ex-pedida em 14 de novembro, 1995, Pat. U.S. N9 5.633.272, expedida em 27de maio, 1997, Pat. U.S. Ne 5.932.598, expedida em 3 de agosto, 1999, Pat.U.S. Ns 5.474.995, expedida em 12 de dezembro, 1995, Pat. U.S. N25.861.419, expedida em 19 de janeiro, 1999, Pat. U.S. Ne 6.001.843, expe-dida em 14 de dezembro, 1999, Pat. U.S. N9 6.020.343, expedida em 1 defevereiro, 2000, Pat. U.S. N9 5.409.944, expedida em 25 de abril, 1995, Pat.U.S. N9 5.436.265, expedida em 25 de julho, 1995, Pat. U.S. N9 5.536.752,expedida em 16 de julho, 1996, Pat. U.S. N9 5.550.142, expedida em 27 deagosto, 1996, Pat. U.S. N9 5.604.260, expedida em 18 de fevereiro, 1997,Pat. U.S. N9 5.698.584, expedida em 16 de dezembro, 1997 e Pat. U.S. N95.710.140, expedida em 20 de janeiro, 1998. Outros exemplos de inibidoresde angiogênese incluem, mas não estão limitados a, endostatina, ukrain,ranpirnase, IM862, 5-metóxi-4-[2-metil-3-(3-metil-2-butenil)oxiranil]-1-oxaespiro[2,5]oct-6-il(cloroacetil)carbamato, acetildinanalina, 5-amino-1 -[[3,5-dicloro-4-(4-clorobenzoil)fenil]metil]-1 H-1,2,3-triazol-4-carboxamida,CM101, esqualamina, combretastatina, RPI4610, NX31838, fosfato de ma-nopentaose sulfatado, 7,7-(carbonil-bis[imino-N-metil-4:,2-pirrolcarbonilimino[N- metil-4 2-pirrol]-carbonilimino]-bis-(1,3-naftaleno dissul-fonato) e 3-[(2,4- dimetilpirrol-5-il)metileno]-2-indolinona (SU5416).

Agentes que interferem com os checkpoints de ciclo celular sãocompostos que inibem proteína cinases que transduzem sinais de checkpo-int de ciclo celular, deste modo sensibilizando a célula de câncer para agen-tes de dano de DNA. Tais agentes incluem inibidores de ATR, ATM, os inibi-dores de chkl e chk2 cinases e cdk e cdc cinases e são especificamenteexemplificados por 7-hidroxiestaurosporina, flavopiridol, CYC202 (CycIaceI)e BMS-387032.

Inibidores de proliferação celular e curso de sinalização de so-brevivência são agentes farmacêuticos que inibem receptor de superfície decélula e cascatas de transdução de sinal a jusante desses receptores de su-perfície. Tais agentes incluem inibidores de EGFR (por exemplo, gefitinib eerlotinib), inibidores de ERB-2 (por exemplo, trastuzumab), inibidores de IG-FR, inibidores de receptores de citocina, inibidores de MET, inibidores deΡΙ3Κ (por exemplo, LY294002), serina/treonina cinases (incluindo, mas nãolimitado a, inibidores de Akt tal como descrito nos WO 02/083064, WO02/083139, WO 02/083140 e WO 02/083138), inibidores de Raf cinase (porexemplo, BAY-43-9006), inibidores de MEK (por exemplo, CI-1040 e PD-098059) e inibidores de mTOR (por exemplo, Wyeth CCI-779). Tais agentesincluem compostos inibidores de molécula pequena e antagonistas de anti-corpo.

Agentes de indução de apoptose incluem ativadores de mem-bros da família de receptor TNF (incluindo os receptores TRAIL).

Em certas modalidades preferidas da invenção, agentes repre-sentativos úteis em combinação com os compostos da invenção para o tra-tamento de câncer incluem, por exemplo, irinotecan, topotecan, gemcitabina,5-fluoruracila, Ieucovorin carboplatina, cisplatina, taxanos, tezacitabina, ciclo-fosfamida, vinca alcalóides, imatinib (Gleevec), antraciclinas, rituximab, tras-tuzumab, bem como outros agentes quimioterapêuticos para câncer.

Os compostos acima a serem empregados em combinação comos compostos da invenção serão usados em quantidades terapêuticas con-forme indicado no Physicians1 Desk Reference (PDR) 47- Edição (1993), queé aqui incorporado a título de referência ou tais quantidades terapeuticamen-te úteis como seria conhecido de uma pessoa versada na técnica.

Os compostos da invenção e os outros agentes anticâncer po-dem ser administrados na dosagem clínica máxima recomendada ou emdoses menores. Os níveis de dosagem dos compostos ativos nas composi-ções da invenção podem ser variados de modo a se obter uma resposta te-rapêutica desejada dependendo da via de administração, severidade da do-ença e resposta do paciente. A composição pode ser administrada comocomposições separadas ou como uma forma de dosagem única contendoambos agentes. Quando administrados como uma combinação, os agentesterapêuticos podem ser formulados como composições separadas, que sãodadas ao mesmo tempo ou momentos diferentes, ou os agentes terapêuti-cos podem ser dados como uma composição única.

Antiestrogênios, tal como tamoxifeno, inibem o crescimento decâncer de mama através da indução de parada do ciclo celular, que requer aação do inibidor de ciclo celular p27Kip. Recentemente, foi mostrado queativação do curso de Ras-Raf-MAP cinase altera o estado de proliferação dep27Kip de modo que sua atividade inibidora em parada do ciclo celular éatenuada, deste modo contribuindo para resistência antiestrogênio (Donovane outros, J BioL Chem. 27(5:40888, 2001). Conforme relatado por Donovan eoutros, inibição de sinalização de MAPK através de tratamento com inibidorde MEK mudou o estado de fosforilação de p27 em linhagens de célula decâncer de mama refratárias a hormônio e ao fazer isso restaurou sensibili-dade a hormônio. Deste modo, em um aspecto, qualquer uma das modali-dades dos compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou um tautômero, salfarmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tau-tômero deles pode ser usada no tratamento de cânceres dependentes dehormônio, tal como cânceres de mama e próstata, para reverter resistência ahormônio geralmente vista nesses cânceres com agentes anticâncer con-vencionais.

Em cânceres hematológicos, tal como leucemia mielógena crô-nica (CML), translocação cromossômica é responsável pela tirosina cinaseBCR-AB1 constitutivamente ativada. Os pacientes afligidos são responsivosa Gleevec, um inibidor de tirosina cinase de molécula pequena, como umresultado de inibição de atividade de Ab1 cinase. No entanto, muitos pacien-tes com doença em estágio avançado respondem a Gleevec inicialmente,mas então relapsam mais tarde devido a mutações que conferem resistênciano domínio Ab1 cinase. Estudos in vitro demonstraram que BCV-AvI em-prega o curso de Raf cinase para elicitar seus efeitos. Ainda, inibição demais de uma cinase em alguns cursos provê proteção adicional contra muta-ções que conferem resistência. Deste modo, em outro aspecto da invenção,qualquer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV)ou um tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceutica-mente aceitável do tautômero deles é usada em combinação com pelo me-nos um agente adicional, tal como Gleevec, no tratamento de cânceres he-matológicos, tal como leucemia mielógena crônica (CML), para reverter ouprevenir resistência ao pelo menos um agente adicional.

Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a métodos deinibição de pelo menos uma serina/treonina cinase no curso de sinalizaçãode MAPK em um indivíduo, ou tratamento de uma condição biológica media-da por uma serina/treonina cinase no curso de sinalização de MAPK em umindivíduo, compreendendo administrar uma composição terapêutica compre-endendo pelo menos um composto de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou um tau-tômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente acei-tável do tautômero dele eficaz para inibir a atividade da pelo menos uma se-rina/treonina cinase no curso de sinalização de MAPK no indivíduo.

As composições terapêuticas de acordo com este aspecto dainvenção são úteis para tratamento de pacientes com uma necessidade detais inibidores (por exemplo, aqueles sofrendo de câncer mediado por sinali-zação de MAPK anormal). Tipos de câncer mediados por sinalização deMAPK anormal incluem, por exemplo, melanoma, câncer papilar, câncer datireóide, câncer ovariano, câncer de cólon, câncer pancreático, câncer decélula não-pequeria (NSCLC, leucemia linfoblástica aguda (ALL) e leucemiamielóide aguda. Sinalização de MAPK anormal pode ser inibida através daadministração de um composto que inibe formas do tipo selvagem ou mutan-te de Ras, Raf, MEK ou ERK.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibiçãode Ras (Ras do tipo selvagem ou mutante). O método inclui administraçãode uma quantidade eficaz de qualquer uma das modalidades de compostosde fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou um tautômero, sal farmaceuticamente acei-tável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômero dele a um indiví-duo com necessidade.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibiçãode Raf (Raf do tipo selvagem ou mutante). O método inclui administração deuma quantidade eficaz de um composto de qualquer uma das modalidadesde compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou um tautômero, sal farmaceu-ticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômerodele a um indivíduo com necessidade.Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibiçãode MEK. O método inclui administração de uma quantidade eficaz de qual-quer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ouum tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamen-te aceitável do tautômero dele a um indivíduo com necessidade.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibiçãode ERTK. O método inclui administração de uma quantidade eficaz de qual-quer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ouum tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamen-te aceitável do tautômero dele a um indivíduo com necessidade.

Um composto exemplar para uso nos métodos deste aspecto dainvenção, l-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]- 1H-benzoimidazol-2- il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina, exibiu inibição potente docurso de sinalização de MAPK, conforme descrito abaixo nos Exemplos 82-86 e 89-90 e mostrado nas Figuras 6-12B; 14A-C e 15. O composto é uminibidor potente de B-Raf1 c-Raf, B-Raf mutante e Ras mutante em ensaiosbioquímicos, conforme mostrado no Exemplo 82, demonstrando inibição deatividade B-Raf mutante (IC50 de 0,0053 μΜ), inibição de atividade de B-Raf(IC50 de 0,068 μΜ) e inibição de atividade de c-Raf (IC5o de 0,004 μΜ). Tra-tamento com o composto causou regressão de tumor em todos os três mo-delos de xenoenxerto de B-Raf mutante (A375M, MEXF276 e HT29) testa-dos e inibição de crescimento de tumor em modelos de xenoenxerto direcio-nados por K-Ras e N-Ras conforme sumarizado abaixo na TABELA 7 e des-crito nos Exemplos 84, 85 e 86.

Análise de modulação direcionada em células de tumor A375M,MEXF276 e HCT-116 após tratamento com {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina indicou que fosforilação de MEK foi inibida de uma maneira depen-dente da dose e do tempo, conforme mostrado nas Figuras 7B, 8B e 10C.Ainda, tratamento de células de tumor A375M, MEXF276 e HCT-116 com ocomposto modulou marcadores a jusante de Raf, incluindo BIM, Cyclin D1,p27Kip e pAKT conforme mostrado nas Figuras 7D, 8C e 9C. Esses ensaiosem modelos pré-clínicos indicam que {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina mostrou uma inibição dependente da dose e tempo de ambas molé-culas de fosforilação e sinalização de direcionamento de MEK a jusante deRaf no curso de MAPK.

Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a métodos deinibição de pelo menos um receptor de tirosina cinase selecionado do grupoconsistindo em VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRI, FGFR2, FGFR3,c-Kit e CSF-IR em um indivíduo, ou tratamento de uma condição biológicamediada por pelo menos um de VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRI,FGFR2, FGFR3, c-Kit e CSF-IR, compreendendo administrar uma composi-ção terapêutica compreendendo pelo menos um composto ou um sal farma-ceuticamente aceitável dele de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) eficaz para inibir oreceptor de tirosina cinase no indivíduo.

Os compostos terapêuticos de acordo com este aspecto da in-venção são úteis para tratamento de pacientes com uma necessidade detais inibidores (por exemplo, aqueles sofrendo de câncer mediado por sinali-zação de receptor de tirosina cinase anormal). Cânceres mediados por sina-lização de receptor de tirosina cinase anormal incluem, por exemplo, mela-noma, câncer de mama, câncer de bexiga, câncer de pulmão, câncer de ti-reóide, câncer de próstata, câncer ovariano, leucemia de mastócito, tumoresde célula germe, carcinoma de pulmão de célula pequena, tumores estro-mais gastrintestinais, leucemia mielógena aguda (AML), neuroblastoma ecâncer pancreático.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibiçãode VEGFR-2. O método inclui administração de uma quantidade eficaz deum composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável dele, de qualquer umadas modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) a um indivíduocom necessidade. O método pode ser útil para tratar um tumor sólido atra-vés da inibição de angiogênese.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibiçãode PDGFR-β. O método inclui administração de uma quantidade eficaz deum composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável dele, de qualquer umadas modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) a um indivíduocom necessidade.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibiçãode c-Kit. O método inclui administração de uma quantidade eficaz de umcomposto, ou um sal farmaceuticamente aceitável dele, de qualquer umadas modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) a um indivíduocom necessidade.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibiçãode CSF-1R. O método inclui administração de uma quantidade eficaz de umcomposto, ou um sal farmaceuticamente aceitável dele, de qualquer umadas modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) a um indivíduocom necessidade.

Um composto exemplar para uso nos métodos deste aspecto dainvenção, {1- Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-píridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2- il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina, é um inibidor potente de re-ceptores de tirosina cinase VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRI, FG-FR2, FGFR3, c-Kit e CSF-IR em um ensaio bioquímico. Os compostos de-monstram inibição de atividade de VEGFR-2 (IC5o de 0,07 μΜ), inibição dePDGFR-β (IC50 de 0,0032 μΜ), inibição de c-Kit (IC50 de 0,02 μΜ) e inibiçãode CSF-IR (IC5o de 0,20 μΜ), conforme descrito no Exemplo 87. Ainda, ocomposto induziu inibição de angiogênese em um modelo matrigel in vivo,conforme mostrado na Figura 13 e descrito no Exemplo 88.

A presente invenção será agora compreendida mais prontamen-te através de referência aos exemplos que seguem, que são providos a títulode ilustração e não pretendem ser Iimitantes da presente invenção.

Nos exemplos abaixo, bem como em todo o pedido, as abrevia-ções que seguem têm os significados que seguem. Se não definidos, ostermos têm seus significados geralmente aceitos.APCI Espectroscopia de massa de ionização química de pressão at-mosférica

aq. Aquosoatm Atmosfera

cm Centímetro

°C Graus Celsius

DIPEA Diisopropiletilamina

DMC Cloreto de 2-cloro-1,3-dimetilimidazólio

DMSO Sulfóxido de dimetila

eq. Equivalente

EtOAc Acetato de Etila

EtOH Etanol

g ou gm Grama(s)

h/hs Hora(s)

HPLC Cromatografia Líquida de Alto desempenho

IPA Álcool isopropílico

L Litro

LCAP Porcentagem de Área de Cromatografia Líquida

LC/EM Espectroscopia de massa de cromatografia líquida

M Molar

MeCN Acetonitrila

mL Mililitros

NaOMe Metóxido de Sódio

1-PrOH 1-PropanoI

TEA Trietilamina

TFAA Anidrido trifluoracético

THF Tetraidrofurano

Cadeias laterais representativas para uso nos compostos dosexemplos que seguem podem ser geralmente preparadas de acordo com osprocedimentos que seguem:Exemplo 1

Preparação de (1-Metil-5-r2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-in-piridin-4-ilóxi1-1H-benzoimidazol-2-il)-(4-trifluormetil-fenil)-amina

<formula>formula see original document page 67</formula>

Etapa 1

<formula>formula see original document page 67</formula>

Um frasco de três gargalos de 500 mL foi equipado com um agi-tador mecânico e carregado com K2CO3 (4,15 g, 30 mmols). O recipiente foivedado, evacuado e seco à chama. O aparelho foi deixado resfriar para tem-peratura ambiente e purgado com argônio. Ao frasco de reação foi adiciona-do 4-amino-3-nitrofenol 1a (3,08 g, 20 mmols), 4-cloropiridina-2-carboxilatode terc-butila 1b (5,2 g, 24 mmols) e DMSO seco (30 mL). A mistura resul-tante foi agitada vigorosamente e aquecida para 100°C por -14 horas. A re-ação foi verdida em tampão de fosfato gelado (pH = 7) e o frasco de reaçãofoi enxaguado bem com MTBE (metil terc butil éter) e água. A mistura bifási-ca combinada foi filtrada em Celite (chumaço de >2 cm). As camadas foramdivididas e separadas e a fase aquosa foi extraída com MTBE (3 χ 100 mL).As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (5 χ 100 mL),secas (MgSO4) e evaporadas. O resíduo bruto foi adsorvido em SiO2 e puri-ficado através de cromatografia instantânea (4:1, 2:1, 1:1 de hexanos-EtOAc(acetato de etila)) para dar 4,92 g (14,9 mmols, 74% de rendimento) de 1ccomo um sólido amarelo marrom. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,58 (d, J=5,8 Hz, 1H), 7,90 (d, J= 2,8 Hz, 1H),7,56 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 7,17 (dd, J= 2,8,8,8 Hz, 1H), 6,94 (dd, J= 2,8, 5,8, Hz, 1H), 6,91 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 6,15 (samplo, 2 H), 1,62 (s, 9 H); 13C RMN (75 MHz, CDCl3) δ 165,8, 164,0, 151,8,151,5, 143,4, 143,2, 131,5, 129,8, 121,0, 118,0, 114,2, 113,1, 83,0, 28,4; p.f.163-166 °C.

Etapa 2

<formula>formula see original document page 68</formula>

A uma solução de nitroanilina 1c (5,62 g, 17 mmols) em CH2CI2(85 mL) a 0°C foi adicionado TFAA (2,4 mL, 3,6 g, 17 mmols). O banho deresfriamento foi então removido e a reação mantida em temperatura ambien-te por 2 horas. A reação foi resfriada para 0°C e TBACI (cloreto de tetrabuti-lamônio, 2,5 g, 8,5 mmols), Me2SO4 (sulfato de dimetila 3,2 mL, 4,3 g, 34mmols) e NaOH a 10% (34 mL) foram adicionados. A mistura resultante foiagitada vigorosamente por 4 horas em temperatura ambiente. A reação foidiluída com água e as camadas resultantes foram divididas e separadas. Afase aquosa foi extraída com CH2Cl2 (3 χ 100 mL) e as camadas orgânicascombinadas foram lavadas com salmoura (2 χ 100 mL), secas (MgSO4) eevaporadas. O resíduo bruto foi adsorvido em sílica-gel e purificado atravésde cromatografia instantânea (4:1, 2:1, 1:1, 1:2 de hexanos/EtOAc) para dar4,5 g (13,0 mmols, 76%) de 1d como sólido amarelo-laranja. 1H RMN (300MHz, CDCI3) δ 8,54 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 8,04 (d amplo, J= 4,7 Hz, 1H), 7,93(d, J= 2,8 Hz1 1H), 7,53 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 7,25 (dd ap, J= 2,8, 9,1Hz, 1H),6,91 (m, 2 H), 3,04 (d, J= 4,9 Hz, 3 H), 1,59 (s, 9 H); 13C RMN (75 MHz, CD-Cl3) δ 165,9, 164,1, 151,5, 144,7, 142,1, 130,4, 118,8, 115,5, 114,1, 112,9,82,9, 30,4, 28,5; p.f. 187-189°C.

Etapa 3

<formula>formula see original document page 68</formula>

Um frasco de fundo redondo de três gargalos de 500 mL seco àchama purgado com N2 foi carregado com LAH (hidreto de alumínio lítio, 3,0g, 75 mmols) e THF seco (240 mL). A suspensão resultante foi resfriada pa-ra 0°C e t-butil éster 1d (20,7 g, 60 mmols) foi lentamente adicionado en-quanto matnendo a temperatura de reação interna sob 5°C. A mistura dereação foi então agitada a O0 C por 2 horas seguido por agitação em tempe-ratura ambiente da noite para o dia. NaBH4 (2,27 g, 60 mmols) foi adicionadoe a mistura de reação foi agitada por mais uma hora em temperatura ambi-ente. Após a reação ser julgada completa, a mistura de reação foi tratadacom adição em gotas sucessiva de água (3 mL), NaOH a 15% (3 mL) e água(9 mL). A mistura resultante foi filtrada em Celite e os sólidos restantes foramlavados com EtOAc e metanol. As porções orgânicas combinadas foram e-vaporadas e o resíduo bruto resultante foi adsorvido em SiO2 e purificadoatravés de cromatografia instantânea (97:3 CH2CI2-MeOH) para dar 7,63 g(27,7 mmols, 46%) de um sólido vermelho-laranja como 1e. 1H RMN (300MHz, CDCI3) δ 8,40 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 8,05 (s amplo, 1H), 7,96 (d, J= 2,75Hz, 1H), 7,29 (d, J= 2,75 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 9,35 Hz, 1H), 6,75 (m, 2 H),4,68 (s, 2 H), 3,07 (d, J= 5,23 Hz, 3 H).

Etapa 4

Um frasco de fundo redondo de 100 mL foi carregado com álcoolbenzílico 1e (1,38 g, 5,0 mmols), MnO2 (6,52 g, 75 mmols) e CHCI3 (20 mL).A suspensão resultante foi agitada em temperatura ambiente (TA) por 2 dias.A mistura de reação foi filtrada em Celite e os sólidos restantes foram Iava-dos sucessivamente com CHCI3 e EtOH. As porções orgânicas combinadasforam evaporadas, adsorvidas em sílica-gel e purificadas através de croma-tografia instantânea (98: 2 CH2CI2/MeOH) para dar 790 mg (2,89 mmols,58%) de um sólido laranja como 1f. 1HNMR (300 MHz, CDCI3) δ 10,01 (s,1H), 8,64 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 8,09 (s amplo, 1H), 7,96 (d, J= 2,75 Hz, 1H),7,37 (d, J= 2,48 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 2,75 Hz1 1H), 7,08 (dd, J= 2,47, 5,5 Hz,1H), 6,94 (d, J= 9,35 Hz, 1H), 3,08 (d, J= 5,23 Hz, 3 H).<formula>formula see original document page 70</formula>

Formação de anel imidazol (Baldwin, J. J.; Engelhardt1 E. L.;Hirschmann, R.; LundeII1G. F.; Ponticello, G. S. J. Med. Chem 1979, 22,687): Composto 1g (Lancaster (Windham, NH), 25,75 mL, 136,5 mmols) foiadicionado a uma solução de NaOAc (22,4 g, 273 mmols) em H2O (60 mL) ea solução resultante aquecida para 100°C por 40 minutos. Após esfriar paratemperatura ambiente (temperatura ambiente), a solução de 1h foi adiciona-da a uma suspensão de 1f (25 g, 91 mmols) em NH4OH (150 mL) e metanol(450 mL). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente da noitepara o dia. TLC (cromatografia de camada fina, 95:5 CH2CI2/MeOH) mostrouconsumo completo de 1f. O produto bruto foi concentrado em uma pastafluida aquosa e dividido com Na2CO3 e CH2CI2 saturados. A fase aquosa foiextraída três vezes com CH2CI2 e os orgânicos combinados lavados comsalmoura, então secos (MgSO4) e concentrados para dar 31,6 g de 1i (83mmols) como um sólido laranja (91% de rendimento). Nenhuma purificaçãoadicional foi requerida.

Outros intermediários para preparação de imidazóis substituídospodem ser preparados de uma maneira similar. Por exemplo, intermediário1i2 foi sintetizado seguindo a etapa 5 usando diidrato de 3,3,3-triflúor-1-fenilpropano-1,2-diona ao invés de 1 h conforme mostrado abaixo (MeOH =metanol, TA = temperatura ambiente, o/n = da noite para o dia, min = minu-tos):<formula>formula see original document page 71</formula>

O intermediário 1 i3 foi sintetizado seguindo a etapa 5 usando 1fenil,1,2-propanodiona ao invés de 1h conforme mostrado abaixo:

<formula>formula see original document page 71</formula>

O intermediário 1 i4 foi sintetizado seguindo a etapa 5 usando 1 -(3-trifluormetil-fenil)-1,2-propanodiona ou 1 -(4-trifluormetilfenil)-1,2-propanodiona ao invés de 1 h conforme mostrado abaixo:

<formula>formula see original document page 71</formula>

O intermediário 1 foi sintetizado seguindo a etapa 5, acopladocom procedimentos na Patente U.S. N2 5.374.615, usando (2Z)-4,4,4-triflúor-2-(hidroxiimino)-3-oxobutanoato de etila feito de 4,4,4-triflúor-3-oxobutanoatode etila ao invés de 1h conforme mostrado abaixo (NMA = N-metil acetami-da):

<formula>formula see original document page 71</formula><formula>formula see original document page 72</formula>

Uma pasta fluida de nitroanilina 1i (45,76 g, 120 mmols) emMeOH (220 mL) e EtOAc (200 mL) foi espalhada com N2 por 20 minutos eentão carregada com uma suspensão de Pd/C a 10% (12,77 g, 120 mmols)em MeOH (60 mL). A reação foi purgada com H2 e mantida sob uma atmos-fera de H2 por 2 dias. A reação foi filtrada em uma almofada de Celite e ossólidos coletados foram lavados sucessivamente com MeOH e EtOAc. Osfiltrados orgânicos combinados foram evaporados, o sólido resultante foi a -zeotropado com CH2CI2 e então secos da noite para o dia sob vácuo paradar 40,17 g (115 mmols) de 1j como um pó castanho (96% de rendimento).LC/EM m/z 336,1 (MH+), tR= 1,81 min.

Etapa 7

<formula>formula see original document page 72</formula>

Isotiocianato de 4-trifluormetilfenila (23,37 g, 115 mmols) foi adi-cionado a uma solução em agitação de diamina 1j (40,17 g, 115 mmols) emMeOH (460 mL) em temperatura ambiente. A reação foi mantida em tempe-ratura ambiente por 16 horas. Após a reação ser julgada completa, uma so-lução de FeCI3 (20,52 g, 126,5 mmols) em MeOH (50 mL) foi adicionada àreação e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente da noitepara o dia. A mistura de reação bruta foi adicionada a um funil de separaçãode 3 L contendo EtOAc (750 mL) e água (750 mL). As.camadas foram sepa-radas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (fase aquosa guardada). Ascamadas orgânicas foram combinadas, lavadas com solução de Na2CO3 a-quosa, água e salmoura, então secas (MgSO4) e concentradas. A fase a-quosa guardada foi tornada básica (pH = 10) através da adição de soluçãode Na2CO3 aquosa saturada e a pasta fluida resultante foi adicionada a umfunil separtório de 3L contendo EtOAc (500 mL). A mistura foi agitada e aemulsão resultante foi filtrada em papel filtro, e as camadas foram então se-paradas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (2 χ 500 mL). As camadasorgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, então secas (MgSO4)1adicionadas a material previamente extraído e concentradas. O produtocombinado foi triturado com CH2CI2 (500 mL), adsorvido em SiO2 e purifica-do através de cromatografia instantânea. Uma trituração final de materialcom CH2Cl2 produziu {1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]- 1H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina como um sólidobranco, puro. LC/EM m/z 519,1 (MH+); 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,44 (d,J = 5,5 Hz, 1H), 7,75 (d, J= 8,8 Hz, 2H), 7,61 (dd, J= 2,2, 8,5 Hz, 1H), 7,59(d, J= 8,8 Hz1 2 H), 7,56 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 7,38 (d ap, J= 8,5 Hz, 1H), 7,23(d, J= 1,9 Hz, 1H), 6,96 (dd, J= 2,2, 8,5 Hz, 1H), 6,93 (dd, J= 2,5, 5,5 Hz,1H), 3,76 (s, 3 H); LC/EM m/z= 519,0, tR = 2,57 min (MH+); Anál. calc. paraC24H16F6N6O: C 55,6, H 3,11, N 16,21; Encontrado: C 55,81, H 3,43, N16,42; p.f.: 217-220°C.

Exemplo 2

Preparação de (2-Flúor-5 -piridin-3-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil- 1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi1-1H-benzoimidazol-2-il)-amina

<formula>formula see original document page 73</formula>

(2-Flúor-5-piridin-3-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2- il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada con-forme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 3-(4-flúor-3-isotiocianato-fenil)-piridina. LC/EM m/z 546,1 (MH+), TR 1,82 min.

Exemplo 3

Preparação de (2-Flúor-5-piridin-4-il-fenilH 1 -metil-5-r2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi1-1 H-benzoimidazol-2-il )-amina

<formula>formula see original document page 74</formula>

(2-Flúor-5-piridin-4-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada con-forme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-(4-flúor-3-isotiocianato-fenil)-piridina. LC/EM m/z 546,5 (MH+), TR 1,83 min,

Exemplo 4

Preparação de (4-terc-Butil-fenilH1 -metil-5-r2-(5-trifluorometil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxil-1 H-benzoimidazol-2-il)-amina

<formula>formula see original document page 74</formula>

(4-ferc-Butil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin- 4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il -amina foi sintetizada conforme acimadescrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-ferc-butilfenilisotiocianato.LC/EM m/z 425,4 (MH+), TR 2,56 min.

Exemplo 5

Preparação de (1 -Metil-5-f2-(5-trífluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi1-1H- benzoimidazol-2-ilH3-trifluormetil-fenil)-amina

<formula>formula see original document page 74</formula>

{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina foi sintetizada conforme aci-ma descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 3-(trifluormetil)fenilisotiocianato. LC/EM m/z519,4 (MH+), TR 2,36 min.Exemplo 6

Preparação de (3-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi1-1H-benzoimidazol-2-il)-amina

<formula>formula see original document page 75</formula>

(3-Etil-fenil)-{1-metil-5-[-2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-il-óxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada conforme acima descritona Etapa 7 do Exemplo 1 usando fenilisotiocianato de 3-etila. LC/EM m/z479,4 (MH+), TR 2,32 min.

Exemplo 7

Preparação de (4-Cloro-fenilH1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il)-amina

<formula>formula see original document page 75</formula>

(4-Cloro-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4- ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il -amina foi sintetizada conforme acimadescrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-clorofenilisotiocianato. LC/EMm/z 485,4 (MH+), TR 2,23 min.

Exemplo 8

Preparação de (4-Etil-fenil)-(1-metil-5-r2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)- piri-din-4-ilóxil-1H-benzoimidazol-2-il)-amina

<formula>formula see original document page 75</formula>

(4-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-il- óxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada conforme acima descri-to na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-etilfenilisotiocianato. LC/EM m/z 479,5(MH+), Tr 2,31 min.

Exemplo 9Preparação de (4-Cloro-3-trifluormetil-fenil)- l1-metil-5-í2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxil-1 H-benzoimidazol-2-il)-amina

<formula>formula see original document page 76</formula>

(4-Cloro-3-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imi-dazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada con-forme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-cloro-3-(triflúor-metil)fenilisotiocianato. LC/EM m/z 553,4 (MH+), TR 2,51 min.

Exemplo 10

<formula>formula see original document page 76</formula>

Preparação de (4-Flúor-3-trÍfluormetil-fenilH1 -metil-5-f2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxil-1 H-benzoimidazol-2-il)-amina(4-Flúor-3-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada con-forme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-flúor-3-(triflúor- me-til)fenilisotiocianato. LC/EM m/z 537,4 (MH+), Rf 2,40 min.

Exemplo 11

Preparação de (1-Metil-5-r2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxn-1H- benzoimidazol-2-ilH4-trifluormetóxi-fenil)-amina

<formula>formula see original document page 76</formula>

{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetóxi-fenil)-amina foi sintetizada conformeacima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-(trifluormetóxi)fenilisotiocianato. LC/EM m/z 535,4 (MH+), TR 2,24 min.

Exemplo 12Preparação de (2-Flúor-5-trifluormetil-fenilH1 -metil-5-(2-r5-metil-4-(3-trifluormetil-fenil)-1-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi)-1H-benzoimidazol-2-il)-amina

<formula>formula see original document page 77</formula>

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1-metil-5-{2-[5-metil-4-(3-trifluormetil-fenil)-1 H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1 H-benzoimidazol-2-il)-amina foi sintetizada usando procedimentos similares conforme descrito a-cima no Exemplo 1 usando isotiocianato de 2-flúor-5-(trifluormetil)fenila.LC/EM m/z 627,5 (MH+), TR 2,79 min.

Exemplo 13

Preparação de (2-Flúor-5-trifluormetil-fenilH1 -metil-5-(2-r5-metil-4-(4-trifluormetil-fenil)-1H-imidazol-2-il1-piridin-4-ilóxil-1H-benzoimidazol-2-iamina

<formula>formula see original document page 77</formula>

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1-metil-5-{2-[5-metil-4-(4-trifluormetil-fenil)-1 H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1 -benzoimidazol-2-il)-aminafoi sintetizada usando procedimentos similares aos acima descrito no Exem-pio 1 usando isotiocianato de 2-flúor-5-(trifluormetil)-fenila. LC/EM m/z 627,5(MH+), TR 2,79 min.

Exemplo 14

Preparação de etil éster do ácido 2-{4-í2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1-metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi1-piridin-2-il)-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-carboxílico

<formula>formula see original document page 77</formula>

Etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1-metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-carboxílico foi sintetizado usando procedimentos similares conforme descritoacima no Exemplo 1 usando isotiocianato de 2-flúor-5-(trifluormetil)fenila.

LC/EM m/z 609,5 (MH+).

Exemplo 15

Prenaracão de (2-{4-r2-(2-Flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1-metil-1 H-hpn7oimidazol-5-ilóxn-niridin-2-l).

<formula>formula see original document page </formula>

Hidreto de (sódio bis(2-metoxietóxi)alumínio Red-AI, 65% emtolueno, 0,1 mL) foi adicionado em gotas a uma solução de etil éster do áci-do 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil- fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-carboxílico (0,0104 g, 0,017mmol) em tolueno. A efervescência foi observada e após 20 minutos, a rea-ção foi extinta com H2O, NaOH e extraída com EtOAc. A camada orgânicafoi lavada com H2O, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para dar 5,9 mgde (2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-i-metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-il)-metanol bruto que foi purifi-cado mais através de RP HPLC (HPLC de fase reversa) para dar 1,1 mg docomposto puro (98% de pureza). LC/EM m/z 567,1 (MH+), TR 2,40 min.

Exemplo 16

Prpparar.ãn de 2-Ι4-Π-Metil-2-(4-triflMnrmetil-fenilamino)-1 H-benzo-imidazol-5-ilóxil-piridin-2-il)-3H-imida7ol-4-carbonitrila

Uma pasta fluida de {l-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]- H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina foi prepa-rada de acordo com o Exemplo 1 (1,83 g, 3,4 mmols) e NH4OH a 28% (23mL) em MeOH (10 mL) foi vedado em um tubo e aquecido para 140° C por 3horas. Após a reação ter sido julgada completa através de LC/EM, a misturade reação bruta foi adicionada a um funil de separação e dividida com EtOAc(50) e água (50 mL). As camadas foram separadas e a.fase aquosa foi extra-ída com EtOAc (2 χ 50 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, lava-das com salmoura, então secas (MgSO4) e concentradas. O produto brutofoi adsorvido em SiO2 e purificado através de cromatografia instantânea paradar 2-{4-[1-metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)-1H-benzo- imidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carbonitrila como um sólido branco. LC/EM m/z476,1 (MH+).

Exemplos 17-59a

Os compostos mostrados na Tabela 1 que segue (Exemplos 17-59a) foram preparados a partir dos procedimentos que seguem descritospara os Exemplos 1-16. Vários materiais de partida usados na síntese doscompostos serão aparentes a um versado na técnica (por exemplo, Tordeux,M.; Langlois, B.; Walkselman, C., J. Chem. Soc Perkin Trans 11990, 2293).

Tabela 1

<table>table see original document page 79</column></row><table><table>table see original document page 80</column></row><table><table>table see original document page 81</column></row><table><table>table see original document page 82</column></row><table><table>table see original document page 83</column></row><table><table>table see original document page 84</column></row><table><table>table see original document page 85</column></row><table>

Exemplo 60

Preparação de (2-Flúor-5-trifluormetil-fenilH1 -metil-5-r2-f5-Diridin-2-il-2H-[1,2,4ltriazol-3-ilVpiridin-4-ilóxi1-1H-benzoimidazol-2-il)-amina

<formula>formula see original document page 85</formula>

Preparação de 442-(2-flúor-5-triflúor-fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxil-piridina-2-carbonitrila<formula>formula see original document page 86</formula>

Etapa 1. Síntese de 4-(4-Amino-3-nitro-fenóxi)piridina-2-carbonitrila:

<formula>formula see original document page 86</formula>

Carbonato de potássio (9 g) foi seco in vácuo com aquecimento,resfriado para a temperatura ambiente sob nitrogênio. 4-Amino-3-nitrofenol(3,4 g), 4-cloro-2-cianopiridina (3,0 g) e sulfóxido de dimetila (30 mL, anidro)foram adicionados. O sistema foi agitado sob nitrogênio conforme ele eraaquecido para 103°C e mantido nesta temperatura por 1 hora. A reação foientão resfriada para TR, vertida em gelo/H20 (500 mL), o precipitado foi co-letado, lavado (H2O), dissolvido (EtOAc), seco (Na2SO4)1 filtrado e esvaziadapara um sólido. Este foi suspenso em (Et2O), coletado, seco ao ar 4,1 g(73,5%) e a segunda parte foi coletada (0,55 g, 10%). m/z = 257 (M+1).

Etapa 2. Síntese de N-[4-(2-Ciano-piridin-4-ilóxi)-2-nitro-fenil]-2.2,2- triflúor-N-metil-acetamida:

<formula>formula see original document page 86</formula>

Carbonato de potássio (1,6 g) foi seco in vácuo com aquecimeto,resfriado para temperatura ambiente e suspenso em diclorometano (30 mL)com 4-(4-amino-3-nitro-fenóxi)piridina-2-carbonitrila (2,0 g) sob nitrogênio.Este foi resfriado para 0°C e anidrido trifluoracético (2,2 mL) foi adicionado,puro. O material de partida se transforma em solução rapidamente conformea adição é feita. Após 10 minutos a 0°C, a mistura foi diluída com diclorome-tano, lavada (H2O, NaCI aquoso), seca (K2CO3), filtrada e esvaziada parauma espuma amarela, m/z=353 (M+1). Este produto foi usado sem purifica-ção. Iodometano (0,53 mL) foi adicionado a uma suspensão de carbonato depotássio (1,858 g) em dimetilformamida (DMF) (30 mL contendo composto 2,-7,8 mmols) sob nitrogênio. A suspensão foi agitada da noite para o dia emtemperatura ambiente, então vertida em H2O (300 mL), extraída (Et2O1 3 χ150 mL), os extratos combinados foram lavados (H2O1 NaCI aquoso), secos(carbonato de potássio), filtrados e esvaziados para dar um óleo laranja(7,4922 g). m/z = 367 (M+1).

Etapa 3. Síntese de 4-(4-Metilamino-3-nitro-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila:

<formula>formula see original document page 87</formula>

NaOH (1 mL, aquoso a 1N) foi adicionado em gotas a uma solu-ção de N-[4-(2-ciano-piridin-4-ilóxi)-2-nitro-fenil]-2,2,2-triflúor-N-metil-acetamida (3, 440 mg) em etanol (6 mL) em temperatura ambiente. Após 40minutos, a mistura foi diluída com H2O (20 mL) e resfriada para O0 C. Cristaislaranja brilhantes foram coletados, lavados (H2O) e secos ao ar 311,1 mg(94%). m/z=271 (M+1).

Etapa 4. Síntese de 4-[2-(2-flúor-5-triflúor-fenilamino)-1-metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxn-Piridina-2-carbonitrila:

<formula>formula see original document page 87</formula>

Paládio sobre carbono (46 mg, 10% p/p) foi suspenso em MeOH(2 mL) sob nitrogênio. A suspensão resultante foi adicionada, sob nitrogênio,a uma suspensão de 4-(4- metilamino-3-nitro-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila(311 mg) em MeOH (3 mL) em temperatura ambiente. A atmosfera foi troca-da com hidrogênio e o sistema agitado vigorosamente sob 1 atm de hidrogê-nio por 1 hora. A atmosfera foi então trocada por nitrogênio, a mistura foifiltrada (celite) e o filtrado foi usado sem purificação adicional na reação se-guinte. m/z=242 (M+1). 2-Flúor-5-trifluormetilfenilisotiocianato (250 mg) foiadicionado a uma solução de composto 5 em MeOH (10 ml_). A solução foiagitada em refluxo por 2 horas. Após a reação ser julgada completa, FeCI3anidro (1,3 eq., 244 mg) foi adicionado à reação e a mistura resultante foiagitada em temperatura ambiente da noite para o dia. A mistura de reaçãobruta foi adicionada a um funil separador contendo EtOAc e água. As cama-das foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As camadasorgânicas foram combinadas, lavadas com solução de Na2CO3 aquosa satu-rada, água e salmoura, então secas (MgSO4) e concentradas. Este materialfoi cromatografado (gradiente 0-5% de MeOH em diclorometano em sílica-gel) para isolar o composto desejado em 28% de rendimento ã partir docomposto 4. m/z=428 (M+1).

Etapa 5. (2-Flúor-5-trifluormetil-fenilH 1 -metil-5-r2-(5-Piridin-2-il-2H-ri.2.4ltriazol-3-il)-piridin-4-ilóxi1-1H-benzoimidazol-2-ill-amina

Etapa 6

4-[2-(4-Flúor-fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridina-2- carbonitrila foi solubilizado em EtOH (0,1 M) e NaOEt foi adicio-nado (1 eq., 0,5 M em EtOH) seguido por picolinil hidrazida (1 eq.) e a solu-ção é aquecida em um microondas por 2000 segundos a 140°C. A misturade reação é então concentrada e purificada através de HPLC de fase rever-sa para dar o produto desejado, m/z=547 (M+1).

Exemplos 61-64

Os compostos mostrados na Tabela 2 que segue (Exemplos 61-64) foram preparados seguindo o procedimento descrito para o Exemplo 60.Tabela 2

<table>table see original document page 89</column></row><table>

Exemplo 65

Preparação de N-(4-hidróxi-2-nitrofenil)-formamida

<formula>formula see original document page 89</formula>

N-(4-hidróxi-2-nitrofenil)-formamida pode ser preparada de acor-do com o procedimento que segue:

1. Preparar um frasco de reação de 5 gargalos, 3 L1 equipadocom uma sonda de temperatura interna, controlador de temperatura, mantade aquecimento, condensador, agitador mecânico, funil de adição de 1L euma entrada de nitrogênio. Jatear o reator com nitrogênio por 5 minutos.

2. Carregar anidrido acético (245 mL) no frasco. Agitar sob nitro-gênio.

3. Carregar ácido fórmico (125 mL) em uma porção (um exoter-ma é observado devido à mistura e a reação entre anidrido acético e ácidofórmico).

4. Ajustar o ponto final da temperatura interna (IT) para 60°C einiciar aquecimento. Após a IT atingir 60°C, agitar e manter por mais 2 horas.

5. Resfriar os conteúdos com um banho gelado.

6. Quando a IT atingir temperatura ambiente (cerca de 20°C),iniciar a adição de uma solução de 4-amino-3-nitrofenol (160 g) em 700 mLde THF (tetraidrofurano) anidro através do funil de adição de 1L em porçõesde modo que a IT não exceda 40°C. O produto começa a precipitar como umsólido amarelo.

7. Quando a adição é completada, substituir o banho gelado comuma manta de aquecimento. Ajustar o ponto final da IT em 60°C e iniciar oaquecimento.

8. Monitorar o progresso da reação através de HPLC. A reaçãonormalmente leva menos do que 1 hora.

9. Quando o material de partida for <1 de % de área, adicionar500 mL de água. Resfriar para temperatura ambiente com um banho gelado.

10. Coletar o produto através de filtragem a vácuo. Lavar a tortado filtro com 3 χ 200 mL de água. Secar ao ar e secar mais em um forno a50°C em vácuo de 68,6 cm de Hg (27 pol de Hg). com um vazamento de arou nitrogênio suave até um peso consistente ser atingido.

Exemplo 66

Preparação de 4-metilamino-3-nitrofenol

<formula>formula see original document page 90</formula>

4-Metilamino-3-nitrofenol pode ser preparado de acordo com oprocedimento que segue:

1. Preparar um frasco de reação de 3 gargalos, 500 mL, equipa-do com uma sonda de temperatura interna e uma entrada de nitrogênio. Ja-tear o reator com nitrogênio por 5 minutos.

2. Carregar N-(4-hidróxi-2-nitrofenil)-formamida (5 g) e THF ani-dro (100 mL) no reator. Agitar sob N2 para dar uma pasta fluida amarela.

3. Adicionar o dietil eterato de trifluoreto de boro (3,83 mL) atra-vés de seringa lentamente.

4. Agitar a mistura de reação por 30 minutos em temperaturaambiente.

5. Adicionar o boroidreto de sódio (1,04 g) em porções com umfunil adicional.

6. Agitar a reação por uma hora e monitorar a reação através deHPLC de hora em hora em seguida (a reação tipicamente leva 3 horas).

7. Quando a amostra de HPLC mostra que o material de partidaé menos do que 1,0% lentamente adicionar HCI a 1M (40 mL) através deuma seringa durante um período de 10 minutos.

8. Agitar por 60 minutos.

9. Adicionar NaOH a 1M conforme necessário através de umaseringa para trazer o pH para 7 ± 0,5.

10. Verter a mistura de reação em um frasco de fundo redondode 500 mL e concentrar sob pressão reduzida (20 mm Hg, a 25°C) até cercade 100 mL de líquido transparente serem removidos.

11. Adicionar água (100 mL) ao recipiente de reação. Esfriar pa-ra 0 ± 2°C com agitação. O produto precipita como um sólido vermelho.

12. Coletar o produto através de filtragem a vácuo através de umfunil de frita grossa. Lavar a torta do filtro com água (2 χ 20 mL). Secar ao are então secar em um forno a 50°C/27 Hg pol. Até que um peso constanteseja atingido. Submeter as amostras à análise.

Exemplo 67

Preparação de cloreto de 4-cloropiridina-2-carbonila

<formula>formula see original document page 91</formula>

Cloreto de 4-cloropiridina-2-carbonila pode ser preparado de a-cordo com o procedimento que segue:

-1. Preparar um frasco de reação de 5 gargalos, 5L, equipadocom uma sonda de temperatura interna (IT), um controlador de temperatura,manta de aquecimento, condensador, agitador mecânico, entrada de nitro-gênio, entrada de gás no alto do condensador que é conectada a uma arma-dilha de líquido de 2 gargalhos, 2L, que é por sua vez conectada a um lava-dor de 12L cheio com aproximadamente 6 litros de solução de NaOH a 8M eagitado com um agitador magnético. Jatear o reator com nitrogênio por 5minutos e então desligar o fluxo de nitrogênio.

2. Carregar cloreto de tionila (1,18L) no reator, seguido por bro-meto de potássio (38,4 g) enquanto mantendo agitação moderada (cerca de200 rpm).

3. Carregar ácido picolínico (397 g) no reator.

4. Ajustar o ponto final da IT a 80°C e iniciar aquecimento.

5. Tomar as amostras e monitorar o progresso da reação atravésde HPLC. A reação normalmente leva 14 horas para terminar. Aquecimentoestendido vai resultar em mais descloração.

6. Quando a reação é considerada completa (menos do que 1%de ácido picolínico está presente na mistura de reação), parar aquecimento.Remover a manta de aquecimento.

7. Quando a IT estiver abaixo de 30°C, transferir o líquido paraum frasco de reação de 3L. Enxaguar o reator de 5L com 700 mL de tolueno.Transferir os enxágues para o frasco de 3L. Remover SOCI2 e tolueno emexcesso sob pressão reduzida. Repetir o processo com 2 χ 700 mL de tolue-no. Remover todo o solvente dando um sólido amarelo-laranja. Tolueno (400mL) foi adicionado à mistura de reação. A mistura resultante foi levada paraa próxima etapa.

Exemplo 68

Preparação de f-butil éster do ácido 4-cloropiridina-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 92</formula>

í-Butil éster do ácido 4-cloropiridina-2-carboxílico pode ser pre-parado de acordo com o procedimento que segue:

1. Equipar um frasco de fundo redondo de 12 L (4 gargalos) comum agitador mecânico e um termômetro.

2. Carregar o reator com tolueno (1L), piridina (977,7 g) e di-t-butil dicarbonato (BOC)2O (855,5 g).

3. Resfriar o reator de modo que a temperatura interna seja 0°C.

4. Adicionar o cloreto de 4-cloropiridina-2-carbonila (686 g) aoreator em uma taxa tal de modo a manter a temperatura interna da reaçãoabaixo de 5°C.

5. A reação foi deixada lentamente vir para a temperatura ambi-ente (~20°C) e agitada por 16 horas.

6. Quando a reação é considerada completa usando HPLC (ma-terial de partida <0,5% de área) a reação foi lavada com água (2x4 mL),então solução de HCl a 1M (2x2 L).

7. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzidapara remover tolueno e piridina residual.

8. Tolueno (500 mL) foi adicionado, e então a mistura de reaçãofoi concentrada sob pressão reduzida para se obter o produto desejado.

Exemplo 69

Preparação de f-butil éster do ácido 4-(4-metilamino-3-nitrofenóxi)- piridina-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 93</formula>

t-Butil éster do ácido 4-(4-metilamino-3-nitrofenóxi)-piridina-2-carboxílico pode ser preparado de acordo com o procedimento que segue:

1. Equipar um frasco de fundo redondo de 3L com um agitadormecânico, termômetro e entrada de nitrogênio.

2. Carregar o reator com K2CO3 (123 g).

3. Trazer o recipiente de ração sob atmosfera inerte.

4. Carregar o reator com 4-metilamino-3-nitrofenol (100 g), f-butiléster do ácido 4-cloropiridina-2-carboxílico (127 g) e DMSO seco (1L).

5. Agitar a reação vigorosamente e aquecer para 100°C.

6. Quando a reação for considerada completa usando HPLC(<0,5% de área de í-butil éster do ácido 4-cloropiridina-2-carboxílico), vertera mistura de reação quente em 3L de água fria em agitação (em volume).

7. Isolar o composto desejado através de filtragem, como umsólido laranja a laranja-marrom.8. Enxaguar o sólido isolado com água (2 χ 200 mL) seguido porheptano (2 χ 200 mL).

9. Secar material em forno a vácuo @ 45-50°C até peso cons-tante ser atingido.

Exemplo 70

Preparação de 4-(4-(metilamino)-3 -nitrofenóxi)piridina-2-carbaldeído4-(4-(metilamino)-3-nitrofenóxi)piridina-2-carbaldeído pode serpreparado de acordo com o procedimento que segue:

1. Equipar um frasco dè fundo redondo de 1000 mL com umaentrada de nitrogênio, agitador mecânico e termômetro.

2. Carregar o reator com í-butil éster do ácido 4-(4-metilamino-3-nitrofenóxi)-piridina-2-carboxílico (10 g) através de um funil para pó.

3. Adicionar 2-metil THF (100 mL) através de um funil para pó.

4. Resfriãr o reator até uma temperatura interna de -25°C.

5. Adicionar o DIBAL (hidreto de diisobutilalumínio, 1,5M em to-lueno; 72 mL) através de um funil adicional em taxa tal de modo a manter atemperatura interna sob-15°C.

6. Analisar a reação através de HPLC ou GC (cromatografia degás), checando o desaparecimento de éster.

7. Agitar a reação a -20°C, monitorando de hora em hora.

8. Se a reação falhar em progredir após 2 horas, adicionar mais0,5 equivalente de DIBAL (hidreto de diisobutilalumínio) e monitorar a rea-ção. Continuar repetindo esta etapa até que todo o éster tenha sido consumido.

9. Uma vez a reação estando completa esfriar lentamente comMeOH(IOmL).

10. Adicionar o tartrato de sódio potássio (40 g) a 200 mL de á-gua e agitar para dissolver.

11. Adicionar a solução aquosa à mistura de reação e deixar a-quecer para temperatura ambiente.

12. Adicionar 2-metila THF (100 mL) ao recipiente de reação.

13. Aquecer a reação para 50°C por 1 hora com agitação.

14. Permitir que as fases separem.

15. Remover a camada aquosa inferior.

16. Filtrar a camada orgânica através de um chumaço de celite.

17. Enxaguar a celite com 2-metila THF (2 χ 50 mL).

18. Adicionar a mistura de reação a um frasco de fundo redondode 500 mL.

19. Concentrar a mistura de reação para -50 mL através de des-tilação.

20. Resfriar a mistura de reação para O0 C com agitação.

21. Agitar a mistura de reação por 1 hora a O0 C.

22. Filtrar a mistura de reação através de um filtro de frita gros-sa.

23. Permitir que os sólidos sequem no filtro por 30 minutos a1 hora.

24. Analisar os sólidos através de GC e RMN para determinar a% de álcool, transformar em pasta fluida em metanol a 30°C por 1 hora (5mL de metanol por g de composto) se necessário para remover impureza doálcool.

Exemplo 71

Preparação de 4-(2-(5-(trifluormetil)-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi)-N-metil-2-nitrobenzenamina

<formula>formula see original document page 95</formula>

4-(2-(5-(trifluormetil)-1 H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N-metil-2-nitrobenzenamina pode ser preparada de acordo com o procedimento quesegue:

1. Equipar um frasco de fundo redondo de 2 L (3 gargalos) comum agitador mecânico, sonda de temperatura interna, controlador de tempe-ratura e condensador.

2. Carregar o reator com água (590 mL) através de um funil para pó.

3. Começar a agitar à mistura e carregar o reator com acetato desódio (240 g).

4. Enxaguar o frasco usado para a carga de acetato de sódiocom água (30 mL).

5. Aquecer a reação para 50°C.

6. Adicionar 3,3-dibromo-1,1,1-trifluorpropan-2-ona (395 g) emporções a 50°C mantendo a temperatura interna da reação sob 100°C.

7. Aquecer a reação para uma temperatura interna de 100°C.

8. Após agitar a reação por 1 hora a 100°C, remover uma amos-tra para análise.

9. Manter agitando a reação a 100°C até que o material de parti-da seja <1,5%.

10. Uma vez a reação estando completa esfriar a mistura de re-ação para <65°C.

11. Enquanto a reação está esfriando, equipar um frasco de fun-do redondo de 5L (revestido 4 gargalos) com uma sonda de temperaturainterna, controlador de temperatura, condensador de refluxo e agitador me-cânico.

12. Carregar o reator de 5L com acetato de etila (500 mL) atra-vés de um funil para pó e começar a agitar.

13. Carregar o reator de 5L com 4-(4-(metilamino)-3-nitrofenóxi)piridina-2-carbaldeído (200 g) através de funil para pó.

14. Enxaguar o funil para pó com acetato de etila (200 mL) noreator de 5 L.

15. Carregar o reator de 5 L com 95% de etanol (1,3L).

16. Transferir a mistura de reação de piruvaldeído do reator de-2L para o reator de 5L. A temperatura da mistura neste ponto é ~35°C.

17. Lentamente adicionar NH4OH concentrado (1,3L) em por-ções monitorando a temperatura. A reação é exotérmica de modo que osprimeiros 500 mL devem ser adicionados em porções mantendo a tempera-tura interna sob 50°C. O tempo de adição total é -25 minutos. Temperaturaselevadas fazem com que o produto final fique mais vermelho.

18. Aquecer o reator de 5L para 50°C.

19. Agitar a mistura de reação a 50°C. Solução neste ponto égeralmente de cor avermelhada-laranja.

20. Monitorar a reação de hora em hora até que a reação estejacompleta.

21. Uma vez a reação tendo sido considerada completa, esfriar amistura de reação para O0 C por 2 horas.

22. Isolar o produto através de filtragem em um filtro de vidrocom frita grossa.

23. Enxaguar o reator com etanol frio (150 mL). Transferir o en-xágue para o filtro.

24. Carregar o reator de 5 L com água (2L).

25. Agitar e esfriar o reator para 10°C.

26. Transferir a torta úmida do filtro para o reator de 5L.

27. Agitar a 10°C por 60 minutos.

28. Filtrar o produto através de um filtro de vidro com frita gros-sa.

29. Enxaguar o reator com água (250 mL). Transferir o enxáguepara o filtro.

30. Secar a torta úmida no filtro por 1 hora.

31. Transferir o produto para um frasco de fundo redondo de 2L(gargalo simples) e secar com tombamento usando um evaporador giratóriocom uma temperatura de banho de 45°C até que um peso constante sejaregistrado.Exemplo 72

Preparação de 4-(2-(5-(trifluormetil)-1 H-imidazol-2-inpiridin-4-ilóxi)-N1 -metilbenzeno-1,2-diamina

<formula>formula see original document page 98</formula>

4-(2-(5-(trifluormetil)-1H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N1 -metilbenzeno-1,2-diamina pode ser preparado de acordo com o procedimen-to que segue:

1. Equipar um frasco de fundo redondo de 2L (4 gargalos) comum agitador mecânico, sonda de temperatura interna, controlador de tempe-ratura, purga de nitrogênio e condensador de refluxo.

2. Carregar o reator com EtOH (125 mL) através de um funil pa-ra pó. Começar a agitar rapidamente.

3. Carregar o reator com 4-(2-(5-(trifluormetil)-1H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N-metil-2-nitrobenzenamina (50 g) através de um funil parapó.

4. Aquecer a reação para 50°C.

5. Enquanto a reação está aquecendo, carregar um Erlenmeyercom água (75 mL) através de um funil para pó. Começar a agitar rapidamen-te.

6. Carregar o Erlenmeyer de 250 mL com 3,0 eq. de carbonatode sódio (41,92 g) através de um funil para pó.

7. Agitar a mistura até que todos os sólidos sejam dissolvidos.

8. Assim que a suspensão atingir 50°C, transferir a mistura decarbonato de sódio do Erlenmeyer de 250 mL para a mistura de reação atra-vés de funil para pó.

9. Carregar um Erlenmeyer de 250 mL com água (75 mL) atra-vés de funil para pó. Começar a agitar rapidamente.

10. Carregar o Erlenmeyer de 250 mL com 1,0 eq. de ditionita desódio (22,95 g) através de funil para pó um pouco antes da adição ao frascode reação.11. Rapidamente agitar os sólidos até que eles sejam dissolvi-dos a maior parte.

12. Rapidamente transferir a mistura de ditionita de sódio do Er-lenmeyer de 250 mL para a mistura de reação através de funil para pó.

13. Agitar a reação a 50°C por 30 minutos.

14. Carregar um Erlenmeyer de 250 mL com água (75 mL) atra-vés de funil para pó. Começar a agitar rapidamente.

15. Carregar o Erlenmeyer de 250 mL com 1,0 eq. de ditionita desódio (22,95 g) através de funil para pó um pouco antes da adição ao frascode reação.

16. Rapidamente agitar os sólidos até que eles sejam dissolvi-dos a maior parte.

17. Rapidamente transferir a mistura de ditionita de sódio do Er-lenmeyer de 250 ml para a mistura de reação através de funil para pó.

18. Agitar a reação a 50°C por 30 minutos.

19. Carregar um Erlenmeyer de 250 mL com água (150 mL) a-través de funil para pó.

20. Carregar o Erlenmeyer de 250 mL com 2,0 eq. de ditionita desódio (45,90 g) através de funil para pó um pouco antes da adição ao frascode reação.

21. Rapidamente agitar os sólidos até que eles sejam dissolvi-dos a maior parte.

22. Rapidamente transferir a mistura de ditionita de sódio do Er-lenmeyer de 250 mL para a mistura de reação através de um funil para pó.

23. Agitar a reação a 50°C por 60 minutos.

24. Uma amostra é obtida para verificar o término da reação.

25. Se a reação estiver > 98% completa, ir para a etapa 36. Senão continuar para a etapa 26.

26. Carregar o frasco de reação de 2L com 1,0 eq. de ditionitade sódio (22,95 g) através de funil para pó.

27. Rapidamente agitar a mistura de reação a 50°C por 60 minutos.28. Uma amostra é obtida para verificar o término da reação.

29. Se a reação estiver > 98% completa, ir para a etapa 36. Senão continuar para a etapa 30.

30. Carregar o frasco de reação de 2L com 1,0 eq. de carbonatode sódio (13,97 g) através de um funil para pó.

31. Rapidamente agitar a mistura de reação a 50°C por 15 minu-tos.

32. Carregar o frasco de reação de 2L com 1,0 eq. de ditionitade sódio (22,95 g) através de funil para pó.

33. Rapidamente agitar a mistura de reação a 50°C por 60 minu-tos.

34. Uma amostra é tomada para verificar o término da reação.

35. Quando a reação estiver >98% completa, ir para a etapa 36.

36. Uma vez a reação considerada estar completa, carregar ofrasco de reação de 2L com água (125 ml_) através de um funil para pó.

37. Resfriar a mistura de reação para 10°C e agitar por 1 hora.

38. Isolar o produto através de filtragem em um filtro de vidrocom frita grossa.

39. Enxaguar o reator com água (50 mL), Transferir o enxáguepara o filtro.

40. Secar a torta úmida no filtro até que não pingue mais.

41. Carregar o frasco de reação de 2L com água (500 mL) atra-vés de um funil para pó.

42. Transferir a torta de volta para o frasco de reação através deum funil para pó.

43. Agitar material em temperatura ambiente por 60 minutos.

44. Isolar o produto através de filtragem em um filtro de vidro defrita grossa.

45. Enxaguar o reator com água (25 mL). Transferir o enxáguepara o filtro.

46. Secar a torta úmida no filtro por cerca de 1 hora.

47. Transferir o produto para um frasco de fundo redondo de 2L(gargalo simples) e lentamente secar com tombamento usando um evapora-dor giratório com uma temperatura de banho de 50°C até que um peso cons-tante seja registrado.

Exemplo 73

Preparação de (1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi1-1H- benzoimidazol-2-ilM4-trifluormetil-fenil)-amina

<formula>formula see original document page 101</formula>

{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina pode ser preparada de acor-do com o procedimento que segue:

1. Equipar um frasco de fundo redondo de 4 gargalos, 2L, comum agitador mecânico, sonda de temperatura interna, controlador de tempe-ratura, purga de nitrogênio e condensador.

2. Carregar o reator com 4-(2-(5-(trifluormetil)-1H-imidazol-2-il)piridin-4- ilóxi)-N1-metilbenzeno-1,2-diamina (200 g) através de um funilpara pó.

3. Carregar o reator com acetonitrila (1L) através de um funil pa-ra pó.

4. Começar a agitar a mistura em temperatura ambiente e sobuma atmosfera de nitrogênio.

5. Após 20 ± 5 min, carregar o reator com isotiocianato de 4-trifluormetilfenila (104 g) através de um funil para pó.

6. Uma amostra é tomada 30 minutos após adição do isotiocia-nato para verificar o término da reação.

7. Uma vez a reação estando completa, filtrar a mistura atravésde um filtro de frita grossa.

8. Enxaguar o reator com MeCN (200 mL). Transferir o enxáguepara o filtro.

9. Lavar os sólidos removidos com MeCN (200 mL).10. Transferir o filtrado para um frasco de fundo redondo de 4gargalos, 3L, com um agitador mecânico, sonda de temperatura interna, con-trolador de temperatura, purga de nitrogênio e condensador.

11. Carregar o reator com Ν,Ν-diisopropiletilamina através defunil para pó.

12. Carregar o reator com cloreto de 2-cloro-1,3-dimetilimidazolínio através de funil para pó em quatro porções equivalentes acada 10 minutos (tempo de adição total de 30 minutos). Após a adição final,permitir que a mistura de agitação agite mais 10 minutos.

13. Aquecer a reação para 50°C ± 5°C.

14. Uma amostra é tomada 30 minutos após aquecimento damistura para verificar o término da reação.

15. Uma vez a reação estando completa, transferir a mistura dereação através de um filtro de cápsula de 0,2 μητι em linha para um frasco defundo redondo de 3L equipado como na etapa 10.

16. Adicionar a água através de funil para pó.

17. Aquecer a reação para 50°C ± 5°C.

18. Após aquecer para 2 horas, permitir que a mistura de reaçãoesfrie para 20-25°C e agite mais 1 hora.

19. Isolar o produto através de filtragem em um filtro de vidro defrita média.

20. Enxaguar o reator com 2:1 de MeCN/água (300 mL). Trans-ferir o enxágue para o filtro.

21. Lavar a torta de filtro com 2:1 de MeCN/água (300 mL).

22. Secar a torta úmida no filtro por cerca de 1 hora.

23. Transferir o produto para um prato de secagem e secar omaterial em um forno a vácuo a 70 ± 5°C com um pequeno vazamento denitrogênio até que a quantidade de MeCN residual (acetonitrila) seja menosdo que 410 ppm.

24. Para recristalizar, produto é aquecido para refluxo em 15 vo-lumes (peso para volume) de EtOH em um reator equipado com um agitadormecânico, sonda de temperatura interna, controlador de temperatura, purgade nitrogênio e condensador.

25. A mistura é refluxada por 30 minutos quando um cabeçotede destilação substitui o condensador.

26. EtOH é destilado até que 4 volumes permaneçam. Aqueci-mento é parado e um volume de água é adicionado.

27. A mistura é deixada esfriar para 0-5°C.

28. Isolar o produto através de filtragem em um filtro de vidro defrita média.

29. Enxaguaro reator com 4:1 de EtOH/água (1 volume). Trans-ferir o enxágue para o filtro.

30. Lavar a torta de filtro com água (1 volume).

31. Secar a torta úmida no filtro por cerca de 1 hora.

32. Transferir o produto para um prato de secagem e secar omaterial em um forno a vácuo a 50°C ± 0C com um pequeno vazamento denitrogênio até que peso constante seja atingido.

Exemplo 74

Preparação de M-Metil-5-r2-(5 -trifluormetil- 1H-imidazol-2-iO-piridin-4-ilóxi1-1H- benzoimidazol-2-ilH4-trifluormetil-fenil)-amina

Isotiocianato de 4-trifluormetilfenila (1 mmol) foi adicionado àmistura de 4-(2-(5-(trifluormetil)-1H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N1-metilbenzeno-1,2- diamina (350 mg, 1 mmol) em 3 mL de acetonitrila. Apósagitar por 20 minutos em temperatura ambiente, análise de HPLC mostrouconversão completa. Trietilamina (0,3 mL, 2,2 mmols) foi adicionada seguidopor iodeto de 2-cloro-1-metilpiridínio (270 mg, 1,05 mmol). A mistura de rea-ção foi aquecida para 50°C por 5 horas. O aquecimento foi parado e 1,5 mLde água foi adicionado. Após agitar a mistura por 2 horas, o sólido foi coleta-do através de filtragem e lavado com 2:1 de acetonitrila/água (3 χ 1 mL) paradar 317 mg (61%) do composto do título.

Exemplo 74a

Preparação de 4-(2-(5-(trifluormetil)-1 H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N-metil-2-nitrobenzenamina<formula>formula see original document page 104</formula>

NaOMe (1,5 mL, 6,3 mmols, 25% em peso em MeOH) foi adicio-nado a uma mistura de 4-(4- (metilamino)-3-nitrofenóxi)piridina-2-carbonitrila(1,72 g, 6,3 mmols) em 1-PrOH (10 mL). A mistura foi aquecida para 50°C(temperatura interna). Após aquecer por 1 hora, análise de HPLC indicouconversão completa de material de partida. NH4OAc (1,46 g, 18,9 mmols) foiadicionado e a mistura aquecida para 70°C. Após 1 hora a 70°C, a misturafoi aquecida para 85°C. Simultaneamente, 3-bromo-1,1,1-trifluoracetona (0,8mL, 7,56 mmols) foi adicionada em porções de 4 χ 0,2 mL a cada 30 minu-tos. A mistura foi aquecida a 85°C por 20 horas. A mistura foi então resfriadapara temperatura ambiente e água (10 mL) foi adicionada. Após agitar porvárias horas, a mistura foi resfriada em um banho de gelo/água. Após 1 horano banho de gelo/água, o sólido foi coletado através de filtragem e lavadocom 1:1 de 1-PrOH/água (2x7 mL). O sólido foi seco em um forno a vácuoa 50°C por cerca de 16 horas para dar 0,982 g (41%) do composto do título.

Exemplo 74b

Preparação de 4-cloro-2-(5-(trifluormetil)- 1H-imidazol-2-iQpiridina

<formula>formula see original document page 104</formula>

NaOMe (0,46 mL, 2 mmols, 25% em peso em MeOH) foi adicio-nado a uma mistura de 4-cloro-2-ciano-piridina (277 mg, 2 mmols) em 1-PrOH (3 mL). A mistura foi aquecida para 50°C (temperatura de Reação-Block). Após aquecer por 1 hora, análise HPLC indicou conversão completade material de partida. A mistura foi aquecida para 70°C e NH4OAc (462 mg,6 mmols) foi adicionado. Após 1 hora a 70°C, a mistura foi aquecida para85°C. Simultaneamente, 3-bromo-1,1,1-trifluoracetona (0,25 mL, 2,4 mmols)foi adicionada em porções de 4 χ 0,063 mL a cada 30 minutos. A mistura foiaquecida a 85°C por cerca de 20 horas. O produto bruto era 72,4% (LCAP)através de análise de HPLC e foi confirmado através de análise de LC-EM.

Exemplo 74c4-Cloro-2-ciano-piridina

<formula>formula see original document page 105</formula>

4-Cloro-2-piridinocarboxamida (93,9 g, 0,6 mol) e TEA (125 mL,0,9 mol) em EtOAc (500 mL) foram resfriadas para 0,2°C através de umaunidade de esfriamento externa. TFAA (92 mL, 0,66 mmol) foi adicionadoatravés de um funil de adição durante 40 minutos. A temperatura internaaumentou para 10°C durante a adição. A temperatura no término da adiçãoera 0,0° C. Após adição, o esfriamento foi desligado. Após mais 30 minutos,análise HPLC mostrou 4,3% (LCAP) do material de partida. Mais 8,3 mL adi-cionais (0,06 mol) de TFAA foram adicionados. Após agitar a mistura de rea-ção por mais 20 minutos, análise de HPLC indicou conversão completa.K2CO3 aquoso a 10% (p/v, 500 mL) foi adicionado. A temperatura internaaumentou de 13,7 para 22,0° C. A mistura foi transferida para um funil deseparação após agitação por 20 minutos. As camadas foram separadas e acamada aquosa extraída com EtOAc (150 mL). As camadas orgânicas com-binadas foram lavadas com ácido cítrico aquoso a 10% (p/v, 300 mL), secas(Na2SO4), filtradas e concentradas. O produto bruto foi seco em um forno avácuo a 50°C por 16 horas para dar 72,85 g (87%) do composto do título: 1HRMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,6 (m, 1H), 7,7 (m, 1H), 7,5 (m, 1H); 13C RMN(100 MHz, CDCI3) δ 151,8, 145,3, 134,9, 128,7, 127,4, 116,1; HPLC >99%(LCAP).

Exemplo 74d

4-(4-Metilamino-3-nitro-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila

<formula>formula see original document page 105</formula>

Uma mistura de 4-cloro-2-ciano-piridina (6,9 g, 0,05 mol), 4-metilamino-3- nitrofenol (8,4 g, 0,05 mol) e K2CO3 (10,4 g, 0,075 mol) emDMSO (80 mL) foi aquecida para 60°C. Após 11,5 horas, análise de HPLCindicou conversão completa de ambos materiais de partida. Após esfriar pa-ra 20°C, água (240 mL) foi adicionada à mistura de reação. A temperaturaaumentou para 40°C antes de diminuir para temperatura ambiente. O sólidofoi coletado através de filtragem e lavado com água (2 χ 40 mL). O sólido foientão transformado em pasta em heptano (40 mL). O sólido foi coletado elavado com heptano (40 mL). O produto bruto foi seco em um forno a vácuoa 50°C por 16 horas para dar 10,33 g (76%) do composto do título. 1H RMN(400 MHz, DMSO-de) δ 8,5 (m, 1H), 8,2 (m, 1H), 7,9 (m, 1H), 7,7 (m, 1H), 7,5(m, 1H), 7,2 (m, 1H), 7,1 (m, 1H), 3,0 (s, 3 H); 13C RMN (100 MHz1 DMSO-de) δ 165,1, 152,9, 144,4, 140,6, 134,1, 130,4, 130,1, 117,9, 117,1, 117,0,116,5, 114,9, 29,8; APCI EM [Μ + H]+ = 271 ; HPLC >99% (LCAP).

Exemplo 74e

4-(4-Metilamino-3-amino-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila

<formula>formula see original document page 106</formula>

4-(4-Metilamino-3-nitro-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila (5,0 g,0,019 mol) em EtOH (15 mL) foi aquecida para 40°C, Na2CO3 (4,7 g, 0,044mol) foi adicionada seguido por H2O (8,4 mL), Na2S2O4 (3,3 g, 0,019 mol) foiadicionado seguido por H2O (10 mL). A temperatura aumentou para 44,5°C.Após esfriar para 36,7°C, Na2S2O4 (6,6 g, 0,038 mol) foi adicionado seguidopor H2O (20 mL). A temperatura aumentou para 44,0° C. Análise de HPLCmostrou 4,1% (LCAP) do material de partida. Mais Na2S204 (3,3 g, 0,019mol) foi adicionado. Após agitar mais 15 minutos, calor foi removido e H2O(12,5 mL) foi adicionada. A 25°C, mais Na2CO3 (1,3 g, 0,012 mol) foi adicio-nado e a mistura resfriada em um banho de gelo/água. Em menos de 5°C, amistura foi deixada envelhecer por 30 minutos (temperatura final de 1,5°C).O sólido foi coletado através de filtragem e lavado com H2O (10 mL seguidopor 5 mL). O sólido foi seco em um filtro por 30 minutos e então transferidopara o frasco de reação e H2O (50 mL) adicionada. A mistura foi agitada por45 minutos. O sólido foi então coletado através de filtragem e lavado comH2O (2x10 mL). O produto bruto foi seco em um forno a vácuo a 50°C por16 horas para dar 3,50 g (76%) do composto do título: 1H RMN (400 MHz,DMSO-de) δ 8,5 (m, 1H), 7,5 (m, 1H), 7,1 (m, 1H), 6,4 (m, 1H), 6,3 (m, 2 H),4,8 (s, 2 H), 4,7 (s, 1H), 2,7 (s, 3 H); APCI EM [M + H]+ = 241; HPLC >99%(LCAP).

Exemplo 74f

4-[1-Metil-2-(4-(trifluormetinfenilamino)-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridina-2-carbonitrila

<formula>formula see original document page 107</formula>

Isotiocianato de 4-(trifluormetil)fenila (9,65 g, 0,0475 mol) foi adi-cionado a uma solução de 4-(4-metilamino-3-amino-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila (12,0 g, 0,05 mol) em MeCN (60 mL). Análise de HPLC indicouconversão completa da amina após 40 minutos. A mistura foi filtrada e ossólidos removidos lavados com MeCN (2 χ 12 mL). DIPEA (17,5 mL, 0,1mol) foi adicionado ao filtrado. Cloreto de 2-cloro-1,3-dimetilimidazólio (DMC)foi adicionado em porções de 4 χ 2,11 g (8,44 g, 0,05 mmol) a cada 10 minu-tos. Após a adição final, a mistura foi deixada agitar mais 10 minutos quandoanálise de HPLC indicou conversão completa. A mistura foi então aquecidapara 50°C (temperatura interna). Após 45 minutos a 50°C, análise de HPLCindicou conversão completa para o produto. A mistura foi deixada esfriar pa-ra temperatura ambiente e então H2O (45 mL) foi adicionada. A mistura dereação era inicialmente homogênea antes do composto começar a precipitarda mistura. Após agitar por 2 horas, o sólido foi coletado através de filtragema lavado com 2:1 de MeCN/H20 (2 χ 20 mL). O produto bruto foi seco em umforno a vácuo a 50°C por 16 horas para dar 16,10 g (78%) do composto dotítulo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,5 (m, 1H), 8,5 (m, 1H), 8,0 (m, 2 H),7,7 (m, 2 H), 7,6 (m, 1H), 7,4 (m, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,1 (m, 1H), 6,9 (m, 1H),3,7 (m, 3 H); APCI EM [M + H]+ = 410; HPLC >99% (LCAP).

Exemplo 74q

(1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina<formula>formula see original document page 108</formula>

NaOMe (0,23 mL, 1 mmol, 25% em peso em MeOH) foi adicio-nado a uma mistura do Exemplo 74 f (409 mg, 1 mmol) em MeOH (4 mL).Após 1 hora em temperatura ambiente análise HPLC indicou 46,2% (LCAP)do material de partida. A mistura foi aquecida para 50°C (temperatura deReação-Block). Após aquecer por 1 hora, análise HPLC indicou 4,1%(LCAP) do material de partida restante. NH4OAc (231 mg, 3 mmols) foi adi-cionado seguido por 3-bromo-1,1,1-trifIuoracetona (0,13 mL, 1,2 mmol). Amistura foi aquecida a 50°C por cerca de 20 horas. Mais 3-bromo-1,1,1-trifluoracetona (0,06 mL, 0,58 mmol) foi adicionada e a mistura aquecida pa-ra 60°C. Após 24 horas a 60°C, a mistura foi deixada esfriar para temperatu-ra ambiente. Água (4 mL) foi adicionada seguida por EtOAc (4 mL). As ca-madas foram separadas e a camada aquosa extraída com EtOAc. As cama-das orgânicas combinadas foram secas (Na2S04), filtradas e concentradas.O produto bruto foi dissolvido em IPA (4 mL). Ácido metanossulfônico (0,020mL) foi adicionado a 1 mL de solução da solução de IPA. A mistura foi aque-cida para 80°C da noite para o dia. A mistura foi então resfriada para tempe-ratura ambiente e concentrada para dar o composto do título: APCI EM[M+H]+ = 519.

Exemplo 74h

(1 -Metil-5-í2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi1-1 H-benzoimidazol-2-il)-(4-trifluormetil-fenil)-amina

<formula>formula see original document page 108</formula>

NaOMe (0,23 mL, 1 mmol, 25% em peso em MeOH) foi adicio-nado a uma mistura do Exemplo 74f (409 mg, 1 mmol) em 1-PrOH (2 mL). Amistura foi aquecida para 50°C (temperatura de Reação-Block). Após aque-cer por 1 hora, análise de HPLC indicou conversão completa do material departida. A mistura foi aquecida para 70°C e NH4OAc (231 mg, 3 mmols) foiadicionado. Após 1 hora a 70°C, a mistura foi aquecida para 85°C. Simulta-neamente, 3-bromo-1,1,1-trifluoracetona (0,13 ml_, 1,3 mmol) foi adicionadaem porções de 4 χ 0,033 mL a cada 30 minutos. A mistura foi aquecida a85°C por cerca de 20 horas. A mistura foi deixada esfriar para temperaturaambiente e água (2 mL) foi adicionada. Após agitar por várias horas, o sólidofoi coletado através de filtragem e lavado com 1:1 de 1-PrOH/água (2x3mL). O sólido foi seco em um forno a vácuo a 50°C por cerca de 16 horaspara dar 0,11 g (21%) do composto do título.

Exemplo 75

Preparação de (1-Metil-5 -f2-(5-trifluormetil- 1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxn-1H- benzoimidazol-2-il)-(4-trifluormetil-fenil)-amina

Isotiocianato de 4-trifluormetilfenila (200 mg, 1 mmol) foi adicio-nado a uma mistura de 4-(2-(5-(trifluormetil)-1H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N1-metilbenzeno-1,2- diamina (350 mg, 1 mmol) em 3 L de acetonitrila. Apósagitar por 20 minutos em temperatura ambiente, análise de HPLC mostrouconversão completa. Uma mistura de tiouréia (553 mg, 1 mmol) em POCI3 (3mL) foi agitada em temperatura ambiente. Após 4 horas, a mistura foi aque-cida para aproximadamente 50°C. Após aquecer por 2 horas, análise HPLCindicou término de reação.

Exemplo 76

<table>table see original document page 109</column></row><table>33P-ATP: NEN Perkin Elmer N9 NEG 602 h

Aparelho de filtragem: Millipore No MAVM 096 OR Placas de ensaio de 96 cavidades: Placas de propileno de fundo em U Falcon Nq 35-1190

Placas de filtragem de 96 cavidades: Millipore Immobilon 1 N9 MAIP NOB

Fluido de cintilação: Wallac OptiPhase "SuperMix" N9 1200-439

Condições de ensaio

Raf aproximadamente 120 pMMek aproximadamente 60 nM33P-ATPIOOnM

Tempo de reação 45-60 minutos em temperatura ambienteProtocolo de ensaio

Raf e Mek foram combinadas em concentrações finais de 2X emtampão de ensaio (Tris a 50 mM, pH 7,5, MgCI2 a 15 mM, EDTA a 0,1 mM eDTT a 1 mM) e dispensadas 15 μl por cavidade em placas de ensaio depolipropileno (placas de ensaio de 96 cavidades de polipropileno de fundoem U Falcon Ng 35-1190). Os níveis de base são determinados em cavida-des contendo Mek e DMSO sem Raf.

Às cavidades contendo Raf/Mek foram adicionados 3 μl de 10Xde um composto de teste inibidor de raf cinase diluído em DMSO a 100%. Areação de atividade de raf cinase foi iniciada através da adição de 12 μΐ_ porcavidade de 2,5X 33P-ATP diluído em tampão de ensaio. Após 45-60 minu-tos, as reações foram paradas com a adição de 70 μΙ_ de reagente de para-da (EDTA a 30 mM). Placas de filtragem foram pré-umedecidas por 5 minu-tos com 70% de etanol e então enxaguadas através de filtragem com tam-pão de lavagem. Amostras (90 μl) das cavidades de reação foram entãotransferidas para as placas de filtragem. As placas de filtragem foram lava-das 6X com tampão de lavagem usando aparelho de filtragem Millipore. Asplacas foram secas e 100 μί por cavidade de fluido de cintilação (WallacOptiPhase "Supermix" N9 120-439) foram adicionados. CPM é então deter-minado usando uma leitora Wallac Microbeta 1450.Exemplo 77

ENSAIO 2: Avaliação de Raf Biotinilado

Avaliação de Raf In Vitro

A atividade de várias isoformas de Raf serina/treonina cinasespode ser medida provendo ATP, substrato de MEK e ensaiando a transfe-rência de porção fosfato para o resíduo MEK. Isoformas recombinantes deRaf foram obtidas através de purificação a partir de células de inseto sf9 in-fectadas com um vetor de expressão de baculovírus recombinante de Rafhumano. Mek inativa de cinase recombinante foi expressa em E. coli e mar-cada com Biotin pós-purificação. Para cada ensaio, compostos de teste fo-ram serialmente diluídos em DMSO, então misturados com Raf (0,50 nM) ebiotin-MEK inativa de cinase (50 nM) em tampão de reação mais ATP (1μΜ). As reações foram subseqüentemente incubadas por 2 horas em tempe-ratura ambiente e paradas através da adição de EDTA a 0,5 Μ. A mistura dereação parada foi transferida para uma placa revestida com neutradavin (Pi-erce) e incubada por 1 hora. Produto fosforilado foi medido com o sistema defluorescência resolvida no tempo DELFIA (Wallac), usando um anti-p-MEKde coelho (Cell Signaling) como o anticorpo primário e anticoelho marcadocom európio como o anticorpo secundário. Fluorescência resolvida no tempofoi lida em um fluorômetro Wallac 1232 DELFIA. A concentração de cadacomposto para 50% de inibição (IC5o) foi calculada através de regressãonão-linear usando software de análise de dados XL Fit.

Usando os procedimentos do Exemplo 76 ou 77, os compostosdos Exemplo 1 -64 foram mostrados ter uma atividade inibidora de raf cinaseem uma IC5ode menos do que 5 μΜ.

Exemplo 78

Inibição de Crescimento de Tumor de Melanoma

3 χ 106 células de melanoma humano A375 foram implantadassubcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas Nu/Nu de 10-12semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume de tu-mor médio atingiu aproximadamente 150 mm3 (17 dias pós-implante), oscamundongos foram aleatorizados pelo volume de tumor em quatro grupo denove camundongos cada e tratamento com um composto da invenção foiiniciado. Os camundongos foram dosados por gavagem oral todo dia por 14dias ou com veículo sozinho ou com 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg docomposto do Exemplo 25 todos em um volume de 0,2 mL. O volume do tu-mor foi medido duas vezes por semana usando calibradores digitais. O vo-lume de tumor médio é mostrado na Figura 1.

Exemplo 79

Inibicão de Sinalização de Raf Cinase em Células de Melanoma

Como no Exemplo 78, 3 χ 106 células de melanoma humanoA375M foram implantadas subcutaneamente no flanco direito de camundon-gos fêmeas de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g.Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 150 mm3 (17dias pós-implante), os camundongos foram aleatorizados por volume de tu-mor em quatro grupos e foram dosados através de gavagem oral todos osdias por 5 dias com veículo sozinho ou com 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100mg/kg do composto do Exemplo 25 todos em um volume de 0,2 mL. Em 4 e24 horas pós-dose, os camundongos foram eutanizados, os tumores coleta-dos e congelados rapidamente.

Os tumores congelados foram descongelados em gelo, pesadose então homogeneizados em tampão RIPA com comprimidos de coquetel deinibidor de protease livre de EDTA Mini, Roche Complete (2 comprimidos por25 mL de tampão), fluoreto de fenilmetilsulfonila a 1 mM (PMSF) e 1X SigmaPhosphatase Inhibitor Cocktail II, usando o Roche Magna-lyser (ciclos de 2 χ1 minuto a 6500 rpm a 4°C). Para cada 100 mg de tecido de tumor, 1 mL detampão de Iise RIPA foi adicionado. Os homogenatos foram centrifugados a14K RPM por 20 minutos em um microfuge a 4°C, seguido por homogenei-zação adicional usando Qiagen Qiashredders (9K RPM por 2 minutos a4°C). A concentração de proteína foi determinada usando o ensaio de prote-ína Pierce BCA e então 20 pg de cada amostra foram carregados por cavi-dade em um Tris-Glicina SDS-gel de poliacrilamida a 4-20%. Seguindo PA-GE, proteína foi transferida para membranas de nitrocelulose, bloqueada(5% de leite em pó desnatado em TBST) por 1 hora em temperatura ambien-te e então testada da noite para o dia a 4°C usando uma diluição 1:1000 (emtampão de bloqueio) de anticorpo antifosfo-ERK1/2 policlonal de coelho (CellSignaling Ne 9101), anticorpo antifosfo-MEK policlonal de coelho (Cell Signa-ling N9 9121), anticorpo antifosfo-MEK policlonal de coelho (Cell Signaling N29121), anticorpo anti-ERK1/2 policlonal de coelho (Cell Signaling N. 9102) ouanticorpo anti-MEK policlonal de coelho (Cell Signaling Ng 9122). As mem-branas foram então lavadas 5 vezes (5 minutos cada) com TBST em tempe-ratura ambiente e um anticorpo de coelho anticabra marcado com HRP foiadicionado em uma diluição de 1:5000 em todos os blots (em tampão debloqueio) e incubado em temperatura ambiente por 1 hora. A membrana foientão lavada 5 vezes (5 minutos cada) com TBST e as membranas foramincubadas com Pierce Super-Signal por 4 minutos, seguido por exposiçãosobre película por faixa de exposições de tempo de 1 segundo a 20 minutos.Os resultados para as amostras pós-dose de 4 e 24 horas são mostradosnas Figuras 2A e 2B, respectivamente.

Exemplo 80

Inibição de Crescimento de Tumor de Câncer de Cólon

2 χ 106 de células de câncer de cólon humano HT29P foram im-plantadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeasNu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quandoo volume de tumor médio atingiu aproximadamente 250 mm3 (14 dias pós-implante), os camundongos foram aleatorizados através de volume de tumorem quatro grupos de dez e tratamento com um composto da invenção foiiniciado. Os camundongos foram dosados através de gavagem oral todos osdias por 14 dias ou com veículo sozinho ou com 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100mg/kg do composto do Exemplo 25 todos em um volume de 0,2 mL. O volu-me do tumor foi medido duas vezes por semana usando calibradores digi-tais. O volume de tumor médio é mostrado na Figura 3.

Exemplo 81

Inibição de Sinalização de Raf Cinase em Células de Câncer de Cólon3 χ 106 de células de câncer de cólon humano HT29P foram im-plantadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeasNu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quandoo volume de tumor médio atingiu aproximadamente 150 mm3 (17 dias pós-implante), os camundongos foram aleatorizados através de volume de tumorem quatro grupos de dez e tratamento com um composto da invenção foiiniciado. Os camundongos foram dosados através de gavagem oral todos osdias por 5 dias ou com veículo sozinho ou com 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100mg/kg do composto do Exemplo 25 todos em um volume de 0,2 mL. Em 1, 4e 24 horas pós-dose, os camundongos foram eutanizados, os tumores cole-tados e congelados rapidamente. Os tumores congelados foram então trata-dos de acordo com o procedimento do Exemplo 79. Os resultados para asamostras pós-dose de 1, 4 e 24 horas são mostrados nas Figuras 4A, 4B e2C, respectivamente.

Exemplo 82

Inibição de Sinalização de Raf Cinase com o Composto do Exemplo 1 emum Ensaio Bioquímico In Vitro

Ensaio de Raf In Vitro

O efeito inibidor do Composto do Exemplo 1: 1-Metil-5-[2-(5-triflúor- metil- 1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]- 1 H-benzoimidazol-2-il } -(4-trifluormetil- fenil)-amina sobre B-Raf do tipo selvagem, c-Raf do tipo selva-gem e B-Raf mutante (V600E) foi determinado usando o ensaio biotiniladoque segue. A atividade de cinase das várias isoformas de Raf seri-na/treonina cinases foi medida provendo ATP, um substrato de MEK inativade cinase recombinante e ensaiando a transferência de porção fosfato parao resíduo de MEK. MEK de comprimento completo recombinante com umamutação no sítio de ligação de ATP K97R inativa (tornando sua cinase inati-va) foi expressa em E coli e marcada com Biotin pós-purificação. O cDNAde MEK foi subclonado com um tag N-terminal (his)6 e expresso em E colieo substrato de MEK recombinante foi purificado a partir de lisato de E coliatravés de cromatografia de afinidade de níquel seguido por troca de ânion.A preparação de substrato de MEK final foi biotinilada (Pierce EZ-Ling Sulfo-NHS-LC-Biotin) e concentrada para 11,25 μΜ. B-Raf recombinante, c-Raf eB-Raf mutante foram obtidos através de purificação de células de inseto sf9infectadas com os vetores de expressão recombinante de Raf humanos cor-respondentes. As isoformas Raf recombinantes foram purificadas através deuma interação de anticorpo Glu ou através de Cromatografia de Ion de Me-tal.

Para cada ensaio, o composto do Exemplo 1 foi serialmentediluído em DMSO e então misturado com B-Raf1 c-Raf ou B-Raf mutante(0,50 nM cada). O substrato de MEK-biotin inativa de cinase (50 nM) foi adi-cionado em tampão de reação mais ATP (1 μΜ). O tampão de reação conti-nha Tris-HCi2 a 309 mM, pH 7,5, MgCI2 a 10 mM, DTT a 2 mM, EDTA a 4mM, beta-gIicerofosfato a 25 mM, MnCI2 a 5 mM e BSA/PBS a 0,01%. Asreações foram subseqüentemente incubadas por 2 horas em temperaturaambiente e paradas através da adição de EDTA a 0,5M. A mistura de reaçãoparada foi transferida para uma placa revestida com neutradavin (Pierce) eincubada por 1 hora. Produto fosforilado foi medido com sistema de fluores-cência resolvida no tempo DELFIA (Wallac), usando um anti-p-MEK de coe-lho (Cell Signaling) como o anticorpo primário e anticoelho marcado comeurópio como o anticorpo secundário. Fluorescência resolvida no tempo foilida em um fluorômetro Wallac 1232 DELFIA. A concentração do compostodo Exemplo 1 para 50% de inibição (IC50) foi calculada através de regressãonão-linear usando software de análise de dados XL Fit.

Resultados:

O composto do Exemplo 1 exibiu inibição potente (IC50 < 0,1 μΜ)de atividade de B-Raf, c-Raf e B-Raf mutante (V600E) conforme mostradoabaixo na TABELA 3.

TABELA 3: Potência In Vivo do Composto do Exemplo 1 contra atividade deRaf

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Conforme mostrado acima na TABELA 3, o composto do Exem-plo 1 mostra atividade inibidora potente contra Raf cinase isoforma B-Raf dotipo selvagem, isoforma c-Raf do tipo selvagem e B-Raf mutante (V600E).Conforme mostrado na Figura 5, Raf-cinases são consideradas ser os efeto-res Ras primários no curso de sinalização de MAPK (Ras/Raf/MEK/ERK). AsRaf cinases são ativadas por Ras e fosforilam e ativam Mekl e Mek2, quepor sua vez ativam Cinases Ativadas por Mitógeno 1 e 2 (MAPK), no cursode MAPK. Raf cinases são conhecidas influenciar e regular proliferação, di-ferenciação, sobrevivência, transformação oncogênica e apoptose de célula.A isoforma B-Raf foi mostrada ser a forma mais ativa de Raf envolvida emsinalização e chave na propagação de sinalização de Ras.

Conforme mostrado abaixo na TABELA 4, o curso de sinalizaçãode MAPK está implicado em muitos cânceres humanos. Mutações de Ras(ativada) são encontradas em 15% de todos os cânceres humanos. Muta-ções em ERK (hiper-ativada) são encontradas em 30% de todos os câncereshumanos. Mutações de oncogene associadas com câncer são comuns emvários membros deste curso, por exemplo, a B-Raf mutante (V600E) aconte-ce em cerca de 70% de melanomas e cerca de 12% de carcinoma de cólon(Davies e outros, supra; Yuen e outros, supra e Brose e outros, supra).

TABELA 4: Associação entre moléculas de Sinalização de Mutante no cursode MAPK e Resultado Clínico Pobre

<table>table see original document page 116</column></row><table>Vide Sebolt-Leopole e Herrera, Nature Reviews Câncer (4):937 (2004).Conforme indicado acima na TABELA 4, a forma mutante de B-Raf (V600E), que é ativada, é um alvo importante para tratamento de câncerporque sua expressão é um indicador de prognose pobre, ela é construtiva-mente ativa e ela dirige vários tumores, incluindo melanoma, câncer da tire-óide papilar, câncer ovariano e câncer de cólon. Foi anteriormente demons-trado que inibidores de Raf cinase do tipo selvagem que também inibem B-Raf mutante mostraram promessa como agentes terapêuticos em terapiaanticâncer. Por exemplo, foi mostrado que depleção de B-Raf mutante porsiRNA oferece sinalização de ERK e proliferação em linhagens de célula demelanoma (Dibb, N.J. e outros, Nature Reviews Câncer (4):718, 2004). Des-te modo, é significante notar que B-Raf mutante é inibida ainda mais poten-tentemente com o composto do Exemplo 1 do que B-Raf do tipo selvagem,deste modo demonstrando a utilidade do composto para a inibição de Raf notratamento de doenças mediadas por Raf incluindo melanoma, câncer ovari-ano, câncer da tireóide papilar e câncer de cólon.

Exemplo 83

Inibição de Sinalização de B-Raf Cinase Mutante com o Composto do E-xemplo 1 em Ensaios Baseados em Célula

1. Inibição de Fosforilacão de ERK

Métodos:

Duas linhagens de célula de melanoma, A375M (B-Raf mutanteV600E) e SKMEL-28 (B-Raf mutante V600E) foram usadas para medir o e-feito inibidor do composto do Exemplo 1 em um ensaio baseado em célula.Fosforilação de ERK foi analisada após tratamento com diluições seriais docomposto do Exemplo 1: {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)- piri-din-4-ilóxi]- 1H-benzoimidazol-2-il} -(4-trifluormetil-fenil)-amina em célulasSKMEL-28 e células A375M. Valores ECsoforam determinados ajustando osdados em uma curva de quatro parâmetros.

Resultados:

Conforme mostrado abaixo na TABELA 5, o Composto do E-xemplo 1 inibe atividade de cinase de B-Raf mutante (V600E) em célulasSKMEL-28 e células A375M, conforme medido através da diminuição emfosfo-ERK.TABELA 5: Efeito inibidor de Composto do Exemplo 1 em Linhagens de Cé-lula de Melanoma Expressando Raf-B Mutante.

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2. Inibição de fosforilação de MEK

Métodos:

Três linhagens de célula de melanoma, A375M (B-Raf mutanteV600E), SKMEL-2 (Raf do tipo selvagem, N-Ras mutante) e CHL-1 (Raf dotipo selvagem, Ras do tipo selvagem) foram usadas para medir o efeito inibi-dor do composto do Exemplo 1 em um ensaio baseado em célula. As trêslinhagens celulares foram incubadas a 37°C em soro bovino fetal a 0,1%com concentrações de 0,1 μΜ, 0,5 μΜ, 1 μΜ, 5 μΜ e 10 μΜ do composto doExemplo 1. Após 4 horas de incubação, fosforilação de MEK foi analisadaatravés de análise Western blot.

Resultados:

Os resultados são mostrados nas Figuras 6A, 6B e 6C. Confor-me mostrado na Figura 6A, o composto do Exemplo 1 é um inibidor potentede sinalização a jusante de Raf em células A375M (Figura 6A), células SK-MEL-2 (Figura 6B) e em células CHL-1 (Figura 6C) em uma faixa de concen-tração de a partir de 0,1 μΜ a 10 μΜ.

3. Inibição de Crescimento Celular Independentemente de Ancoragem

A fim de verificar que inibição de Raf se traduz em atividade an-tiproliferativa, o composto do Exemplo 1 foi testado contra uma variedade delinhagens celulares e isolatos de tumor humano crescidos em ágar mole,conforme listado abaixo na TABELA 6.

Ensaio de Proliferação de Ágar Mole: Para cada linhagem decélula listada abaixo na TABELA 6, 500 células por 100 μl foram semeadasem placas Ultra Low Attachment Micro de fundo plano de 96 cavidades Cor-ning (Corning N2 3474). Agarose GTG seakem a 1% foi adicionada (50μl/cavidade) para completar o meio, deixada solidificar e então 100 μl demeio completo foram adicionados a cada cavidade. Diluições seriais docomposto do Exemplo 1: {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina foram feitasem uma concentração final de DMSO a 5% em meio livre de soro, e 25 μl docomposto diluído foram adicionados a cada cavidade (concentração de DM-SO final de 0,5%). Uma cavidade de controle continha DMSO a 0,5% semnenhum composto também incluído no ensaio. Após 7 dias de incubaçãodas células com o composto, 25 μl de Alamar Blue (Trek Diagnostic SystemsN- 00-100) foram adicionados a cada cavidade e incubados a 37°C por 4horas. As placas foram lidas com uma leitora de placa de fluorescência, exci-tação 530 nm, emissão 590 nm. Valores de EC50 foram determinados ajus-tando os dados em uma curva de quatro parâmetros.

O composto do Exemplo 1 foi também testado contra um painelde isolatos de tumor humano cultivado em ágar mole (Oncotest, GmbH,Freiburg, Alemanha). Os tumores foram isolados de pacientes e então pas-sados como pedaços de tumor em camundongos imunocomprometicos eensaiados usando os métodos descritos acima.

Resultados: O composto do Exemplo 1 tem um efeito antiprolife-rativo potente sobre linhagens celulares e isolatos de tumor humano expres-sando B-Raf mutante, K-Ras mutante e N-Ras mutante, conforme mostradoabaixo na TABELA 6.

TABELA 6: Ensaio de Proliferação em Ágar Mole: Inibicão com o Compostodo Exemplo 1

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A atividade inibidora do composto do Exemplo 1 sobre o painelamplo de linhagens de célula e isolatos de tumor humano mostrado acimana TABELA 6 demonstra a atividade antiproliferativa potente do compostoem células de tumor expressando B-Raf mutante. O composto mostrou ativi-dade potente contra as células de melanoma de B-Raf mutante na faixa de<0,0098 a 0,07 μΜ. O composto mostrou um grau similar de inibição contraas linhagens de célula colorretal de B-Raf mutante na faixa de 0,026 μΜ a0,13 μΜ. O composto também demonstrou atividade antiproliferativa potentenas duas células de tumor de carcinoma colorretal que expressam K-Rasmutante (0,07 μΜ a 0,016 μΜ), confirmando que inibição de B-Raf/c-Raf nocontexto de uma mutação de K-Ras a montante leva a uma atividade anti-proliferativa.

Em consonância com os resultados das linhagens de célula des-critos acima, o composto do Exemplo 1 nos isolatos de tumor humano de-monstrou a inibição mais potente contra os melanomas de B-Raf mutante(EC5o = 0,055 μΜ e 0,20 μΜ), seguido pelo melanoma mutante N-Ras (EC50= 0,57 μΜ). Um tumor pancreático e um tumor colorretal tinham uma EC5o nafaixa de 1 μΜ. Os tumores restantes deram valores de EC50 maiores do que1 μΜ. Os tumores humanos isolados de pacientes são acreditados apresen-tar um modelo mais preciso de doença do que as linhagens celulares, por-que os tumores são isolados de pacientes e passados como pedaços detumor em camundongos imunocomprometidos. Deste modo, eles não sãoselecionados para crescimento em plástico e eles mantêm um pouco da ar-quiteta de tumor primária.

É interessante notar que o composto do Exemplo 1 tem uma ati-vidade inibidora na faixa de mais do que 1 μΜ sobre os isolatos de tumor decarcinoma de célula renal. Embora o genótipo não possa ser determinadonesses tumores particulares, sabe-se que tumores de carcinoma de célularenal não expressam tipicamente Ras mutante ou B-Raf mutante. Deste mo-do, o composto do Exemplo 1 parece inibir especificamente as moléculas desinalização do curso de MAPK, em particular moléculas de Raf e Ras cinase.

Exemplo 84

Tratamento com o Composto do Exemplo 1 Causa Regressão de Tumor noModelo de Xenoenxerto de Melanoma Humano A375M (B-Raf V600E)

Métodos: 3x10® células de melanoma humano A375M foramimplantadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeasNu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quandoo volume de tumor médio atingiu aproximadamente 150 mm3 (17 dias pós-implante), os camundongos foram aleatorizados por volume de tumor emquatro grupos de nove camundongos cada e tratamento com o composto doExemplo 1 foi iniciado. Os camundongos foram dosados através de gava-gem oral todos os dias por 14 dias ou com veículo sozinho ou com 10 mg/kg,30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 1, todos em um volume de0,1 ml_. O composto do Exemplo 1: {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina foi for-mulado em PEG a 100%. O volume do tumor foi medido duas vezes por se-mana usando calibradores digitais.

Análise Western Blot

Em 8 e 24 horas após a 14â dose, os camundongos foram euta-nizados e tumores foram coletados e congelados rapidamente. Os tumorescongelados foram descongelados em gelo, pesados e então homogeneiza-dos em tampão RIPA com comprimidos de coquetel de inibidor dé proteaselivre de EDTA Mini, Roche Complete (2 comprimidos por 25 ml_ de tampão),fluoreto de fenilmetilsulfonila a 1 mM (PMSF) e 1X Sigma Phosphatase Inhi-bitor Cocktail II, usando o Roche Magna-Iyser (ciclos de 2 χ 1 minuto a 6500rpm a 4°C). Para cada 100 mg de tecido de tumor, 1 mL de tampão de IiseRIPA foi adicionado. Os homogenatos foram centrifugados a 14K RPM por20 minutos em um microfuge a 4°C, seguido por homogeneização adicionalusando Qiagen Qiashredders (9K RPM por 2 minutos a 4°C). A concentra-ção de proteína foi determinada usando o ensaio de proteína Pierce BCA eentão 20 pg de cada amostra foram carregados por cavidade em um Tris-Glicina SDS-gel de poliacrilamida a 4-20%. Seguindo PAGE, proteína foitransferida para membranas de nitrocelulose, bloqueada (5% de leite em pódesnatado em TBST) por 1 hora em temperatura ambiente e então testadada noite para o dia a 4°C usando uma diluição 1:1000 (em tampão de blo-queio) de anticorpo antifosfo-ERK1/2 policlonal de coelho (Cell Signaling N99101), anticorpo antifosfo-MEK policlonal de coelho (Cell Signaling N9 9121),anticorpo anti-ERK1/2 policlonal de coelho (Cell Signalling N. 9102) ou anti-corpo anti-MEK policlonal de coelho (Cell Signalling N9 9122). Análise damodulação de marcadores a jusante foi feita usando uma diluição 1:1000 deanticorpo anti-Bim (Chemicon, N9 AB17003), clone de anticorpo anti-Ciclina5D4 (Upstate1 N9 05-263), anticorpo anti-p27Kip-1 (182-198) (Calbiochem,№ 506127), anticorpo antifosfo-AKT (S473) (Cell Signaling, № 9271), anti-corpo antifosfo-Akt (T308) (Cell Signaling, № 9275) e anticorpo antifosfo-total Akt (Cell Signaling Ne 9272).

As membranas foram então lavadas 5 vezes (5 minutos cada)com TBST em temperatura ambiente e um anticorpo anticoelho de cabramarcado com HRP foi adicionado em diluição de 1:5000 em todos os blots(em tampão de bloqueio) e incubadas em temperatura ambiente por 1 hora.As membranas foram então lavadas 5 vezes (5 minutos cada) com TBST, eas membranas foram incubadas com Pierce Super-Signal por 4 minutos,seguido por exposição sobre película por faixa de exposições de tempo de 1segundo a 20 minutos.

Resultados:

A Figura 7A é um gráfico mostrando uma resposta de dose naredução média em volume de tumor de tumores de melanoma humano deA375M (B-Raf V600E) em camundongos tratados com uma dose oral de 10mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 1. Conforme mos-trado na Figura 7A, o composto do Exemplo 1 tem atividade antitumor poten-te em um perfil dependente da dose. Em uma dose oral de 100 mg/kg docomposto, regressões de tumor foram observadas em 9/9 dos camundongostestados.

Os resultados da análise Western blot para 8 horas e 24 horaspós-14^ dose da dose de 10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg do composto doExemplo 1 são mostrados na Figura 7B e na Figura 7C, respectivamente. Osdados de Western blot mostram que o composto inibe fosforilação de MEKna dose de 100 mg/kg (que induz regressão de tumor) e a inibição de MEK ésustentada mais de 24 horas após a última dose, conforme mostrado na Fi-gura 7C.

Conforme mostrado na Figura 7D, análise de modulação de bi-omarcador a jusante em Iisatos de tumor 24 horas pós a 14§ dose mostrouum aumento em BIM (marcador de apoptose) e p27Kip (marcador de paradade ciclo de célula) e uma diminuição em Ciclina D (inibição de ciclo de célu-la). Esses resultados confirmam que o composto do Exemplo 1 inibe sinali-zação de Raf no curso de MAPK.Exemplo 85

Tratamento com o Composto do Exemplo 1 Inibe Crescimento de Tumor deMelanoma

O composto do Exemplo 1 foi testado quanto à atividade inibido-ra em um modelo de melanoma de tumor MEXF276 (B-Raf mutante V600E)e B-Raf do tipo selvagem de modelo de tumor de melanoma MEXF1341, N-Ras mutante (Q61K).

Métodos: Células de tumor MEXF276 de melanoma humano se-rialmente passadas (B-Raf mutante V600E) foram implantadas subcutanea-mente no flanco traseiro de camundongos fêmeas Nu/Nu de 10-12 semanasde vida. Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 65mm3, os camundongos foram aleatorizados por volume de tumor e tratamen-to com o composto do Exemplo 1 {1- Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina foi inicia-do. Devido ao fato do modelo MEXF276 ser conhecido ser um pouco caqué-tico, com alguma toxidez esperada nos camundongos de controle não-tratados, regimes de dose intermitentes foram usados a fim de prevenir per-da de peso do corpo severa nos grupos tratados com fármaco, como segue.Os camundongos foram dosados através de gavagem oral ou com veículosozinho ou com o regime de dosagem que segue do composto do Exemplo1:10 mg/kg nos dias 0, 2, 4, 6, 14, 16 e 20; com 30 mg/kg nos dias 0, 2, 14,16, e 20 e com 100 mg/kg nos dias 0, 2, 14, 16 e 20.

Para o modelo MEXF1341, células de tumor MEXF1341 de me-lanoma humano serialmente passadas foram implantadas subcutaneamenteno flanco posterior de camundongos Nu/Nu fêmeas. Quando o volume detumor médio atingiu aproximadamente 78 mm3, os camundongos foram a-eatorizados por volume de tumor e tratamento com o composto do Exemplofoi iniciado. Os camundongos foram dosados através de gavagem oral oucom veículo sozinho ou com o regime de dosagem que segue do compostodo Exemplo 1: 10 mg/kg nos dias 0, 2, 4, 6, 10, 12, 18 e 20; 30 mg/kg nosdias 0, 2, 4, 6, 10, 12, 18 e 20; e 100 mg/kg nos dias 0, 2, 4, 6, 10, 12 e 20.

Em 4 horas pós-dose final, os camundongos dos modelosMEXF276 e MEXF1341 foram eutanizados e os tumores foram coletados econgelados rapidamente. Lisatos desses tumores foram subseqüentementeanalisados através de Western blot para modulação direcionada (pMEK) emodulação de marcadores a jusante (BIM, p27Kip e pAKT) conforme acimadescrito no Exemplo 84.

Resultados:

A Figura 8A é um gráfico mostrando a redução média em volu-me de tumor de tumores de câncer de melanoma de MEXF276 (B-RafV600E) em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1.Os resultados mostrados na Figura 8A indicam que o composto do Exemplo1 mostram inibição de crescimento de tumor significante em isolatos deMEXF276 a 10 mg/kg e maior do que ou igual a 50% de regressão de tumorem 8/8 camundongos a 30 mg/kg e 100 mg/kg. Análise de fosforilação depMEK (Figura 8B) e modulação de biomarcador a jusante em Iisatos de tu-mor (Figura 8C) confirmam que atividade de B-Raf mutante é inibida nostumores de MEXF276, conforme mostrado pela diminuição em fosfo-MEK naFigura 8B. Conforme mostrado na Figura 8C, um aumento em BIM (marca-dor para apoptose) e p27Kip (parada de ciclo celular) e uma diminuição emfosfo-AKT (sinalização de curso de sobrevivência) foram observados, con-firmando inibição de atividade de Raf cinase no curso de MAPK.

A Figura 9A é um gráfico mostrando a inibição média de cresci-mento de tumor de tumores de câncer de melanoma de MEXF1341 (N-RasQ61K) em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1.Os resultados mostrados na Figura 9A indicam que o composto do Exemplo1 causou inibição de crescimento de tumor significante (até 70% de inibição)no modelo de tumor de melanoma de N-Ras mutante MEXF1341 (N-RasQ61K) nas doses de 30 mg/kg e 100 mg/kg, mas não induziu regressão detumor. Conforme mostrado na Figura 9B, análise de fosfo-MEK pós-20 diasapós tratamento com 100 mg/kg do composto não mostrou uma diminuiçãoobservável em fosfo-MEK, em contraste com os resultados obtidos com omodelo MEXF276 (B-Raf mutante). Ainda, embora houvesse alguma evi-dência de que moléculas de sinalização no curso de MAPK a jusante de Rafno modelo MEXF1341 fossem eficazes, o efeito foi menos expressivo do queobservado no modelo MEXF276. Por exemplo, conforme mostrado na Figura9C, os níveis de p27Kip (parada de ciclo celular) aumentaram nos grupos de30 mg/kg e 100 mg/kg indicando parada de crescimento, e um ligeiro au-mento no marcador apoptótico BIM foi observado. Deste modo, parece que ocomposto do Exemplo 1 tem atividade potente no modelo de xenoenxertoMEXF276 (B-Raf mutante), causando regressão de tumor, e atividade signi-ficante, mas menos potente, no modelo de xenoenxerto MEXF1341 (B-Rafdo tipo selvagem, N-Ras mutante), causando inibição de crescimento de tu-mor.

Exemplo 86

Tratamento com o Composto do Exemplo 1 Inibe Crescimento de Tumor deCarcinoma Colorretal Humano

O composto do Exemplo 1 foi testado quanto à atividade inibido-ra em um modelo de xenoenxerto de carcinoma colorretal HCT-116 (K-Rasmutante G13D), HT-29 (B-Raf V600E) e modelo de xenoenxerto de leucemiaMV4-11 (FLT3 ITD).

Métodos: 5 χ 106 células HCT-116 (K-Ras mutante G13D) decarcinoma colorretal humano foram implantadas subcutaneamente no flancotraseiro de camundongos fêmea Nu/Nu de 10-12 semanas de vida pesandoaproximadamente 24 g. Quando o volume de tumor médio atigiu aproxima-damente 212 mm3 os camundongos foram dosados através de gavagem oralou com veículo sozinho ou com os regime de dosagem que segue do com-posto do Exemplo 1: 10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg através de gavagemoral no dia 1 e a cada 2 dias (q2d) por um total de 28 dias. Camundongossatélite foram eutanizados e tumores foram coletados em 4 horas, 8 horas e24 horas após a 3ã dose. Lisatos desses tumores foram subseqüentementeanalisados através de Western blot para modulação direcionada (pMEK)conforme acima descrito no Exemplo 84.

Um segundo modelo de carcinoma colorretal, HT-29 (B-RafV600), foi testado como segue. 2 χ 106 células HT-29 foram implantadassubcutaneamente no flanco traseiro de camundongos fêmeas Nu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume detumormédio atingiu aproximadamente 167 mm3 os camundongos foram do-sados através de gavagem oral ou com veículo sozinho ou com o regime dedosagem que segue do composto do Exemplo 1: 10 mg/kg, 30 mg/kg e 100mg/kg através de gavagem oral no dia 1 e a cada 2 dias (q2d) por um totalde 28 dias.

Um modelo de xenoenxerto de leucemia monolítica aguda, MV4-11 (FLT3 ITD) foi testado como segue: 5 χ 106 células MV4-11 foram implan-tadas subcutaneamente no flanco traseiro de camundongos fêmeas Nu/Nude 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o vo-lume do tumor médio atingiu aproximadamente 190 mm3 os camundongosforam dosados através de gavagem oral ou com veículo sozinho ou com oregime de dosagem que segue do composto do Exemplo 1:10 mg/kg, 30mg/kg e 100 mg/kg através de gavagem oral no dia 1 e a cada 2 dias (q2d)por um total de 16 dias. Camundongos satélite foram eutanizados e tumorescoletados em 4 horas após a 3ê dose. Lisatos desses tumores foram subse-qüentemente analisados através de Western blot para modulação direciona-da (pMEK) conforme acima descrito no Exemplo 84.

Resultados:

Os resultados para o estudo HCT-116 são mostrados nas Figu-ras 10A-D. A Figura 10A é um gráfico mostrando a redução média em volu-me de tumor de tumores de carcinoma colorretais HCT-116 (K-Ras G13D)em camundongos quando tratados com 100 mg/kg do composto do Exemplo1. Conforme mostrado nas Figuras 10B-10D, análise de fosfo-MEK 4 horas(Figura 10B), 8 horas (Figura 10C) e 24 horas (Figura 10D) após a 3- dosemostrou uma diminuição observável em fosfo-MEK.

A Figura 11 é um gráfico mostrando a redução média em volumede tumor de tumores de carcinoma colorretal HT-29 (B-Raf V600E) em ca-mundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1. Conforme mos-trado na Figura 11, regressão de tumor foi observada em 30 mg/kg e 100mg/kg.

Os resultados para o estudo de MV4-11 são mostrados nas Fi-guras 12Α-Β. A Figura 12A é um gráfico mostrando a inibição média decrescimento de tumor de tumores de câncer de leucemia monocítica agudaMV4-11 em camundongos tratados com o composto do Exemplo 1. As célu-las de tumor MV4-11 são direcionadas pelo receptor tirosina cinase mutante(MV4;11, FLT3 ITD). Conforme mostrado, composto do Exemplo 1 causouinibição de crescimento de tumor significante no modelo MV-11, no entanto,não houve nenhuma evidência de regressão de tumor (Figura 12A), nemhouve uma inibição observável de sinalização de MEK (Figura 12B). Emboranão desejando ser limitado pela teoria, no modelo MV4-11 é provável que aeficácia de inibição de crescimento de tumor seja um resultado da atividadeangiogênica do composto, principalmente através da inibição de VEGFR-2,conforme descrito abaixo nos EXEMPLOS 87-88.

Um sumário dos dados obtidos a partir da avaliação da eficáciado composto do Exemplo 1 em modelos de xenoenxerto de melanoma, car-cinoma colorretal e leucemia descritos acima é provido abaixo na TABELA 7.

TABELA 7: Sumário de Atividade do Composto do Exemplo 1 em VáriosModelos de Xenoenxerto

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A partir dos dados sumarizados na TABELA 7, conforme mos-trado nas Figuras 6-12, e conforme descrito nos Exemplo 82-86, o compostodo Exemplo 1 é eficaz em cada modelo de xenoenxerto testado onde B-Rafé mutado, causando regressão de tumores e modulação direcionada em to-dos os três modelos testados (A375M, MEXF276 e HT29).

Exemplo 87:

Ensaios de Inibição de Tirosina Cinase

I. Ensaios Bioquímicos:

A atividade de cinase de várias proteínas tirosina cinases foimedida provendo ATP e um peptídeo ou proteína apropriado contendo umresíduo de amino ácido tirosina para fosforilação, e ensaio quanto à transfe-rência da porção fosfato para o resíduo tirosina. Proteínas recombinantescorrespondendo aos domínios citoplásmicos de VEGFR2, PDGFRp, CSF-1Re c-Kit foram obtidas através de purificação a partir de células de inseto Sf9infectadas com um vetor de expressão de baculovírus recombinante VEG-FR2-, PDGFRp, CSF-1R e c-Kit. Para cada ensaio, o composto do Exemplo1{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina foi serialmente diluído emDMSO e então misturado com um tampão de reação de cinase apropriadomais ATP (a concentração de ATP usada estava na ou um pouco abaixo dorespectivo valor Km). A proteína cinase e um substrato de peptídeo biotinila-do apropriado foram adicionados para dar um volume final de 50-100 mL. Asreações foram incubadas por 1-3 horas em temperatura ambiente e entãoparadas através da adição de 25-50 μL de EDTA a 45 mM, Hepes a 50 mM,pH 7,5. A mistura de reação parada (75 pL) foi transferida para uma placa demicrotitulação revestida com estreptavidina (Boehringer Mannheim) e incu-bada por 1 hora. Produto de peptídeo fosforilado foi medido com o sistemade fluorescência resolvida no tempo DELFIA (Wallac ou PE Bioscience), u-sando um anticorpo antifosfotirosina marcado com Európio PT66 com a mo-dificação que o tampão de ensaio DELFIA foi suplementado com MgCl2 a 1mM para a diluição do anticorpo. Fluorescência resolvida no tempo foi lidaem um fluorômetro DELFIA 1232 ou uma leitora de sinal múltiplo PE Victor

II. A concentração de cada composto para 50% de inibição (IC5o) foi calcula-da empregando regressão não-linear usando software de análise de dados XL Fit.

VEGFR2 cinase (0,05 pg/mL) foi ensaiada em Hepes a 50 mMpH 7,0, MgCl2 a 0,2 mM, MnCI2 a 10 mM, NaF a 1 mM, ditiotreitol a 1 mM(DTT), 1 mg/mL de albumina de soro bovino (BSA), 1 a 30 μΜ de ATP e0,25 μΜ de substrato de peptídeo biotinilado "GGGGQDGKDYIVLPI" (SEQID NO:1).

Para o ensaio de PDGFR cinase, 120 μg/mL de enzima com asmesmas condições de tampão que acima foram usados exceto pelo carre-gamento de ATP e concentrações de substrato de peptídeo para 1,4 μΜATP e 0,25 μΜ de substrato de peptídeo biotinilado "GGGGQDGKDYIVLPI"(SEQ ID NO:1).

A atividade de cinase de CSF-1R foi ensaiada em tampão deensaio (HEPES a 50 mM, pH 7,0, MgCI2 a 5 mM, MnCI2 a 10 mM, BSA a0,1%, DTT a 1 mM, Tween a 0,01%, pH final 7,5), ATP a 1 μΜ e substratode peptídeo biotinilado a 50 nM "EEEEAYGWLNF" (SEQ ID NO:2).

A atividade de cinase de c-Kit foi medida provendo ATP e a pro-teína recombinante correspondendo ao domínio citoplásmico do receptor dec-Kit (obtido de Proquinase). A proteína c-Kit cinase (2 nM) e o substrato depeptídeo biotinilado (1 μΜ) "GGLFDDPSWNVQNL" (SEQ ID NO:3) foramadicionados em tampão de reação mais ATP (8 μΜ) para dar um volumefinal de 100 μL. O tampão de reação para c-Kit era HEPES a 50 mM, pH 7,5,NaF a 1 mM, MgCI2 a 2 mM, MnCI2 a 10 mM e 1 mg/mL de BSA. A reaçãofoi incubada por 2 horas em temperatura ambiente e parada através da adi-ção de 50 \iL de EDTA a 45 mM, HEPES a 50 mM, pH 7,5. A mistura de re-ação parada (75 μl) foi transferida para uma placa de microtitulação revesti-da com estreptavidina (Boehringer Manneheim) e incubada por 1 hora. Pro-duto de peptídeo fosforilado foi medido com sistema de fluorescência resol-vida no tempo DELFIA (Wallac ou PE Bioscience), usando um anticorpo anti-fosfotirosina marcado com Európio, PT66, com a modificação que o tampãode ensaio DELFIA foi suplementado com MgCl2 a 1 mM para a detecção deanticorpo. Valores de fluorescência resolvida no tempo foram determinadosem um fluorômetro Wallac 1232 DELFIA ou uma leitora de sinal múltiplo PEVictor II. A concentração do composto do Exemplo 1 para 50% de inibição(IC5o) foi calculada empregando regressão não-linear usando software deanálise de dados XL Fit.

Resultados: Conforme mostrado abaixo na TABELA 8, o com-posto do Exemplo 1 é um inibidor potente de VEGFR-2, c-Kit, PDGFR-β eCSF-1R.

TABELA 8: Inibicão de tirosina cinases com o composto do Exemplo 1

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Ensaios baseados em célula foram também usados para medir aatividade do composto do Exemplo 1 contra as moléculas direcionadas mos-tradas na TABELA 8 como segue.

Modulação direcionada em células HMVEC após tratamentocom o composto do Exemplo 1 mostrou inibição de fosforilação de VEGFR-2mediada por VEGF com uma EC50 de 0,03 μΜ, conforme medido através deuma diminuição em fosfo-VEGFR através de Western blot (não mostrado).

Análise de inibição de c-Kit em células Mo7e após tratamentocom composto do Exemplo 1 mostrou inibição de fosforilação de c-Kit comuma EC5O de 1,1 μΜ conforme medido através de uma diminuição em fosfo-c-Kit através de ELISA.

Análise de inibição de PDGFR-β em células MG63 após trata-mento com composto do Exemplo 1 mostrou inibição de fosfo-PDGFR-βcom uma EC5O de 0,7 μΜ conforme medido através de uma diminuição emfosfo-PDGFR-β através de ELISA.

Exemplo 88

Inibição de Angiogênese

Para investigar mais o efeito do composto do Exemplo 1 contraVEGFR-2, o composto foi avaliado em um modelo de angiogênese CHO-VEGF Matrigel.

Métodos: 110 camundongos Nu/Nu (n=10/grupo) foram aclima-tados uma semana antes do início do estudo. No dia 1, 5 χ 106 célulasVEGF-CHO em 0,5 mL de Matrigel foram subcutaneamente injetadas noabdômen superior dos camundongos. No dia 1, os camundongos receberamdoses orais ou de veículo, 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do compostodo Exemplo 1 em um programa de dosagem de qdx5. Após cinco dias ochumaço de Matrigel foi removido do camundongo e a concentração de he-moglobina nele foi quantificada.

Resultados:

A Figura 13 é um gráfico mostrando a inibição de angiogênesemediada por VEGF em um modelo de CHO-VEGF Matrigel após tratamentocom 10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg do composto do Exemplo 1. Conformemostrado na Figura 13, a dosagem do composto durante 5 dias inibiu signifi-cantemente angiogênese mediada por VEGF.

Exemplo 89

Efeitos de Programa de Dosagem

Estudos de programa de dosagem do composto do Exemplo 1foram feitos no modelo de xenoenxerto de melanoma humano A375M paraavaliar a relação entre a inibição de B-Raf mutante, resposta de tumor econcentração de composto no plasma.

Relações de dose-resposta claras foram estabelecidas no mode-lo A375M com o composto do Exemplo 1, conforme mostrado na Figura 7A.Os dados na Figura 7A indicam que o composto do Exemplo 1 induz regres-são de tumor em 100 mg/kg quando dado diariamente, e regressão de tumorestá associada com inibição sustentada de B-Raf mutante (conforme mos-trado através da diminuição em fosfo-MEK na Figura 7B). No entanto, nesteprograma de dosagem, o composto do Exemplo 1 não foi bem-tolerado emcamundongos nos níveis de dose de 30 mg/kg e 100 mg/kg, uma vez que oscamundongos perderam uma média de 10% de seu peso do corpo de parti-da por volta do dia 14. Deste modo, a dosagem mais eficaz de 100 mg/kg foiavaliada mais conforme descrito abaixo.

Métodos:

Como no Exemplo 84, 3 χ 106 células de melanoma humanoA375M foram implantadas subcutaneamente no flanco direito de camundon-gos fêmeas Nu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24g. Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 200 mm3, oscamundongos foram aleatorizados por volume de tumor em quatro gruposde nove camundongos cada e tratamento com o composto do Exemplo 1iniciado. Os camundongos foram dosados através de gavagem oral por 32dias ou com veículo sozinho ou com o composto do Exemplo 1 no regime dedosagem que segue: 100 mg/kg em um programa q2d, q3d ou q4d durante28 dias.

Neste estudo, grupos satélites de camundongos carregando tu-mor foram dosados a fim de monitorar a modulação direcionada em tumores.Tumores e plasma foram coletados dos camundongos em vários pontos detempo seguindo 5 doses no grupo q2d e 3 doses no grupo q4d. Os tumoresforam processados para análise Western blot de níveis de fosfo-MEK con-forme descrito no Exemplo 84, e plasma foi isolado para medição dos níveisde fármaco.

Resultados:

A Figura 14A é um gráfico mostrando a redução média em vo-lume de tumor de tumores de melanoma de A375M em camundongos quan-do tratados com 100 mg/kg do composto do Exemplo 1 com regime de do-sagem q2d, q3d ou q4d. Conforme mostrado na Figura 14A, o composto doExemplo 1 dosado oralmente a 100 mg/kg em um programa de q2d, q3d ouq4d resultou em eficácia significante. A análise Western blot mostrada naFigura 14B indica que os tumores nos camundongos tratados com compostodiminuíram os níveis de fosfo-MEK com relação aos controles tratados comveículo até 48 horas pós-dose nas amostras q2d. Nas amostras q4d, porvolta de 72 horas apenas um de três tumores tinha níveis menores de fosfo-MEK e por volta de 96 horas todos os tumores tratados com composto ti-nham níveis de fosfo-MEK comparáveis com tumores tratados com veículo.Esses resultados estão em consonância com os resultados obtidos no pro-grama q2d, mostrado na Figura 7B.

Conforme mostrado na TABELA 9, os programas q3d e q4d fo-ram melhor tolerados nos camundongos de teste, conforme medido pelaperda de peso.

TABELA 9: Estudo de dosagem de xenoenxerto A375M com 100 mg/mL docomposto do Exemplo 1

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Concluindo, guando os dados de modulação direcionada e da-dos de eficácia são considerados juntos, parece gue o programa g2d ou q3dresulta na regressão de tumor mais eficaz com tolerância de hospedeiro má-xima.

Exemplo 90

Estudos de Concentração no Plasma Alvo

Conforme acima descrito no Exemplo 89, amostras de soro fo-ram tomadas de camundongos tratados com o composto do Exemplo 1. Asconcentrações de fármaco foram determinadas a partir das amostras de so-ro, e os resultados são mostrados como gráficos de concentração de com-posto versus tempo na Figura 15. Uma concentração de fármaco limiar paramodulação alvo pode ser estimada a partir da Figura 15 considerando osdados de modulação alvo mostrados na Figura 14A e na Figura 14B. Con-forme mostrado na Figura 14B, em todos os pontos de tempo até 48 horaspós-dose, os níveis de fosfo-MEK foram reduzidos em tumores tratados comcomposto com relação a tumores tratados com veículo, deste modo as con-centrações de fármaco correspondentes devem estar acima deste limiar.Concluindo, o limiar do composto é estimado estar entre cerca de 50.000 e80.000 ng/mL, tal como aproximadamente 70.000 ng/mL (135 μΜ).

É interessante notar gue a concentração no plasma alvo nos es-tudos de xenoenxerto de camundongo descritos acima é aproximadamente1000 vezes maior do quea EC5O para modulação direcionada em célulasA375M (0,16 μΜ) in vitro (vide TABELA 5). Esta diferença pode ser ampla-mente explicada por ligação de proteína no plasma porque o composto doExemplo 1 é de mais de 99,9% de proteína ligada em plasma. Levando istoem consideração, uma estimativa aproximada de concentração de fármacolivre é aproximadamente 0,135 μΜ, que está próximo da EC50 in vitro de 0,16μΜ determinada para modulação direcionada em células A375M.

A fim de explorar mais o efeito de ligação de proteína no plasmasobre a atividade do composto do Exemplo 1, uma série de experimentos invitro foi realizada onde o composto foi pré-incubado em 50% de soro de ca-mundongo, rato, cachorro, macaco ou humano, e então aplicado a célulasA375M ou Mo7e. Os níveis de fosfo-MEK e fosfo-ERK foram medidos emcélulas A375M (para ensaiar inibição de B-Raf mutante) seguindo incubaçãoda noite para o dia. Níveis de fosfo-c-Kit foram medidos em células Mo7e(para ensaiar quanto à inibição de c-Kit) seguindo 4 horas de incubação. Osresultados desses ensaios são sumarizados abaixo na TABELA 10.

TABELA 10: Efeito de soro de várias espécies sobre a atividade do compos-to do Exemplo 1

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Os dados na TABELA 10 podem ser usados para avaliar a liga-ção relativa dos compostos do Exemplo 1 a proteínas do plasma de espé-cies diferentes e como uma base para um fator de correção para extrapolara concentração no plasma direcionada determinada em camundongos paraoutras espécies. Por exemplo, com base nesses dados uma pessoa estima-ria que a concentração no plasma direcionada em rato é aproximadamente 5vezes menor do que em camundongos, e a concentração no plasma alvo emseres humanos é aproximadamente 10 vezes menor do que em camundon-go.

Embora a modalidade preferida da invenção tenha sido ilustradae descrita, será compreendido que várias mudanças podem ser feitas semse afastar do espírito e escopo da invenção.

Claims (41)

1. Composto de fórmula (I):<formula>formula see original document page 138</formula>em que,cada R1é independentemente selecionado de hidróxi, halo, C1-6alquila, C1-6 alcóxi, (C1-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila, he-terocicloalquila, fenila e heteroarila;R2 é C1-6 alquila ou halo(C1-6 alquila);cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila eC1-6 alcóxi;cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alqui-la, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, C1-ealquilaminocarbonila, carbonitrila, cicloalquila, heterocicloalquila, heteroci-cloalquilcarbonila, fenila e heteroarila;em que R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídoscom um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi,halo, C1-6 alquila, halo(C1-6)alquila, C1-6 alcóxi e halo(C1-6 alcóxi);a é 1, 2, 3, 4 ou 5;bé0,1,2ou3;ec é 1 ou 2;ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que cada R1 éindependentemente selecionado do grupo consistindo em hidróxi, cloro, flú-or, bromo, metila, etila, propila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, trifluor-metila, trifluoretila, trifluormetóxi, trifluoretóxi, piperidinila, C1-6 alquilpiperidini-la, piperazinila, C1-6 alquilpiperazinila, tetraidrofuranila, pipridinila e pirimidini-la.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que a é 1 ou 2 e pelo menos um R1 é halo(C1-6alquila).

4. Composto de acordo com a reivindicação 3, em que pelo me-nos um Ri é trifluormetila.

5. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R2 é C1-6alquila.

6. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R2 é me-tila ou etila.

7. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que R2 é me-tila.

8. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que b é 0 eR3 não está presente.

9. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que b é 1 eR3 é C1-6alcóxi.

10. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que R3 émetóxi.

11. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que c é 1 ou 2 e pelo menos um R4 é halo(C1-6 alquila).

12. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que pelomenos um R4 é trifluormetila.

13. Composto de acordo com a reivindicação 1 tendo a fórmula(II):<formula>formula see original document page 139</formula>em quecada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, C1-6alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila,heterocicloalquila, fenila e heteroarila;cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila eC1-6 alcóxi;cada R4 é independentemente selecionado .de hidróxi, C1-6alqui-la, C1-6alcóxi, halo, carboxila, (C1-6alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni-trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e hete-roarila; em que R1 , R21 R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídoscom um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi,halo, C1-6alquila e C1-6alcóxi;a é 1, 2, 3, 4 ou 5;b é O, 1, 2 ou 3; ec é 1 ou 2;ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

14. Composto de fórmula (III):<formula>formula see original document page 140</formula>em quecada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, C1-6alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila,heterocicloalquila, fenila e heteroarila; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alqui-la, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni-trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e hete-roarila;em que R1 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com umou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, Ci-6alquila e C1-6alcóxi;a é 1, 2, 3, 4 ou 5; ec é 1 ou 2;ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólitoou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do com-posto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

15. Composto de acordo com a reivindicação 14, em que cadaR1 é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidróxi, cloro,flúor, bromo, metila, etila, propila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, triflu-ormetila, trifluoretila, trifluormetóxi, trifluoretóxi, piperidinila, C1-6 alquilpiperi-dinila, piperazinila, C1-6 alquilpiperazinila, tetraidrofuranila, piridinila e pirimi-dinila.

16. Composto de acordo com a reivindicação 15, em que a é 1ou 2 e pelo menos um R1 é halo(Ci-6alquila).

17. Composto de acordo com a reivindicação 16, em que pelomenos um R1 é trifluormetila.

18. Composto de acordo com a reivindicação 14, em que a é 1.

19. Composto de acordo com a reivindicação 18, em que R1 étrifluormetila.

20. Composto de acordo com a reivindicação 14, em que c é 1ou 2 e pelo menos um R4 é halo(C1-6alquila).

21. Composto de acordo com a reivindicação 20, em que pelomenos um R4 é trifluormetila.

22. Composto de acordo com a reivindicação 21, em que c é 1.

23. Composto selecionado do grupo consistindo em:{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetilfenil)-amina,(2-Flúor-5-piridin-3-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(2-Flúor-5-piridin-4-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-ferc-Butil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina,(3-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-ii)-piridin-4-il-óxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-Cloro-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-Etil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-il-óxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-Cloro-3-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-Flúor-3-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetóxi-fenil)-amina,(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1-metil-5-{2-[5-metil-4-(3-trifluormetil-fenil)-1 H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1 H-benzoimidazoí-2-il)-amina,(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1 -metil-5-{2-[5-metil-4-(4-trifluormetil-fenil)-1 H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1 H-benzoimidazol-2-il)-amina,Etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1-metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-carboxílico,(2-{4-[2-(2-Flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-il)-metanol,2-{4-[1 -Metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carbonitrila,(3-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-fenil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-il-óxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,{1 -Metil-5-[2-(5-fenil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetilsulfanil-fenil)-amina,(3-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,[4-Flúor-3-(tetraidro-furan-3-il)-fenil]-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil--1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-Bromo-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-Flúor-3-isopropil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,{1 -Metil-5-[2-(5-trif Iuormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetilsulfanil-fenil)-amina,(2-Flúor-5-isopropil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-ilJ-amina,(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(5-terc-Butil-2-flúor-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-metil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(2-Flúor-5-piridin-3-il-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,-2-{4-[2-(2-Flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carbonitrila,(2-Cloro-4-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(5-terc-Butil-2-cloro-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(2-Flúor-5-piridin-4-il-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(2-Cloro-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil--1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,{1-Metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina,(3-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(2-Cloro-5-trifluormetlil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina;(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(2-Cloro-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-terc-Butil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,{1 -Metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina,(5-terc-Butil-2-flúor-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,[4-(4-Metil-piperazin-1 -il)-fenil]-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,Metil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1·metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carboxílico,Etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-cloro-5-trifluormetil-fenilamino)-1·metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1 H-imidazol-4-carboxílico,(2-Flúor-4-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(2-Cloro-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(2,5-Dimetóxi-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(3,5-Dimetóxi-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo- imidazol-2-il}-(2-trifluormetil-fenil)-amina,(2-Etil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-- 4-il-óxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina,(4-Etil-piperazin-1 -il)-(2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1 -metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-il)-^(2-Hidróxi-etil)-amida do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carboxílico,{1 -Etil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(2-flúor-5-trifluormetil-fenil)-amina,(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{6-metóxi-1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,{6-Metóxi-1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina,(4-Etil-piperazin-1 -il)-(2-{4-[1 -metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)-1H- benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-il)-metanona,{1 -Etil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina,(2-Hidróxi-etil)-amida do ácido 2-{4-[1-metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carboxílico,- 2-{1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzo- imidazol-2-ilamino}-5-trifluormetil-fenol, e- 3-{1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-ilamino}-6-trifluormetil-fenol;ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto,tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

24. Composto de acordo com a reivindicação 23 ou um sal far-maceuticamente aceitável do mesmo em que o composto tem a fórmula:<formula>formula see original document page 146</formula>ou um tautômero do composto ou um sal farmaceuticamente aceitável dotautômero tendo a fórmula:<formula>formula see original document page 146</formula>

25. Composição compreendendo um composto, tautômero, salfarmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tau-tômero do mesmo como definido na reivindicação 1 ou 24 junto com um veí-culo farmaceuticamente aceitável.

26. Método para tratamento de um distúrbio de câncer em umindivíduo humano ou animal compreendendo administrar ao indivíduo huma-no ou animal uma composição compreendendo um composto, tautômero, salfarmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tau-tômero do mesmo como definido na reivindicação 1 ou 24.

27. Método de acordo com a reivindicação 26, em que a compo-sição inibe Raf cinase ou B-Raf cinase mutante.

28. Método de acordo com a reivindicação 26, o qual compreen-de ainda administração ao indivíduo humano ou animal de pelo menos umagente adicional para o tratamento de câncer.

29. Método de acordo com a reivindicação 28, em que o pelomenos um agente adicional para o tratamento de câncer é selecionado deirinotecan, topotecan, gemcitabina, 5-fluoruracila, Ieucovorin carboplatina,cisplatina, taxanos, tezacitabina, ciclofosfamida, vinca alcalóides, imatinib,antraciclinas, rituximab e trastuzumab.

30. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o distúr-bio de câncer é melanoma.

31. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o distúr-bio de câncer é câncer de mama ou câncer de próstata.

32. Uso de um composto, tautômero, sal farmaceuticamente a-ceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômero do mesmocomo definido na reivindicação 1 ou 24 para o tratamento de câncer.

33. Uso de um composto, tautômero, sal farmaceuticamente a-ceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômero do mesmocomo definido na reivindicação 1 ou 24 na fabricação de um medicamentopara o tratamento de câncer.

34. Método de inibição de pelo menos uma serina/treonina cina-se no curso de sinalização de MAPK em um indivíduo ou tratamento de umacondição biológica mediada por uma serina/treonina cinase no curso de si-nalização de MAPK em um indivíduo compreendendo: administrar ao indiví-duo uma composição compreendendo um composto, tautômero, sal farma-ceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômerodo mesmo de acordo com a reivindicação 1 ou 24.

35. Método de acordo com a reivindicação 34, em que a compo-sição inibe Raf cinase.

36. Método de acordo com a reivindicação 34, em que a compo-sição inibe a B-Raf cinase mutante.

37. Método de acordo com a reivindicação 34, em que a condi-ção biológica é selecionada do grupo consistindo em melanoma, câncer datireóide papilar, câncer ovariano, câncer de cólon, câncer pancreático, cân-cer de pulmão e leucemia.

38. Método de acordo com a reivindicação 34, em que a compo-sição compreende {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetilfenil)-amina ou um sal farmaceuti-camente aceitável, tautômero ou um sal farmaceuticamente aceitável do tau-tômero do mesmo.

39. Método de inibição de um receptor tirosina cinase em umindivíduo ou tratamento de uma condição biológica mediada pelo receptortirosina cinase em um indivíduo compreendendo administrar ao indivíduouma composição compreendendo um composto, tautômero, sal farmaceuti-camente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômero domesmo como definido na reivindicação 1 ou 24, em que o receptor tirosinacinase é selecionado do grupo consistindo em VEGFR-2, FGFR-3, c-Kit,PDGFR-β e CSF-1R.

40. Método de acordo com a reivindicação 39, em que a condi-ção biológica é selecionada do grupo consistindo em leucemia de célulamastóide, eritroleucemia, tumores de célula germe, carcinoma pulmonar decélula pequena, tumores estromais gastrintestinais, leucemia mielógena a-guda, neuroblastoma, melanoma, mieloma múltiplo, carcinoma ovariano ecarcinoma de mama.

41. Método de acordo com a reivindicação 39, em que a compo-sição compreende {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetilfenil)-amina ou um sal farmaceuti-camente aceitável, tautômero ou um sal farmaceuticamente aceitável do tau-tômero do mesmo.