KR20080039965A

KR20080039965A - 키나제 억제제로서의 치환된 벤즈이미다졸

Info

Publication number: KR20080039965A
Application number: KR1020087005202A
Authority: KR
Inventors: 미나 이. 아이카와; 페이만 아미리; 제프리 에이치. 도브; 배리 하스켈 레빈; 크리스토퍼 맥브라이드; 테레사 이. 피크; 다니엘 제이. 푼; 사비트리 라무르티; 폴 에이. 렌호웨; 신시아 샤퍼; 다린 스튜어트; 샤라드하 섭라마니안
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2005-08-30
Filing date: 2006-08-30
Publication date: 2008-05-07
Also published as: US20080287682A1; CU20080027A7; EA014230B1; US20090170904A1; GT200600394A; SI1924577T1; TW200804346A; PT1926722E; CA2619966A1; EP1926722A1; DK1926722T3; JP5210866B2; CY1112157T1; WO2007030377A1; RS52099B; JP2009507026A; PE20070427A1; NI200800060A; GEP20105004B; HK1117523A1

Abstract

하기 화학식 I의 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물, 조성물 및 인간 또는 동물 대상체에서의 종양발생과 관련된 키나제 활성의 억제 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 화합물 및 조성물은 하나 이상의 세린/트레오닌 키나제 또는 수용체 티로신 키나제의 활성을 억제하는데 효과적이다. 신규한 화합물 및 조성물은 단독으로 사용되거나, 또는 암과 같은 세린/트레오닌 키나제 또는 수용체 티로신 키나제 매개 장애의 치료용의 1종 이상의 추가의 작용제와 조합으로 사용될 수 있다.

<화학식 I>

키나제 매개 장애, 치환된 벤즈이미다졸, Raf 키나제, MAPK, 암 장애

Description

키나제 억제제로서의 치환된 벤즈이미다졸 {SUBSTITUTED BENZIMIDAZOLES AS KINASE INHIBITORS}

관련 출원의 상호 참조

본 출원은 2005년 8월 30일자로 출원된 미국 가출원 제60/712,539호, 2005년 8월 30일자로 출원된 미국 가출원 제60/713,108호, 2005년 10월 27일자로 출원된 미국 가출원 제60/731,591호, 및 2006년 2월 17일자로 출원된 미국 가출원 제60/774,684호에 대해 35 U.S.C. 119(e) 하의 이익을 청구하며, 상기 각각의 출원은 그 전문이 본원에 참고로 도입된다.

본 발명은 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물, 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 및 프로드러그, 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 및 프로드러그의 제약상 허용되는 염, 임의의 상기 언급된 실시양태 및 제약상 허용되는 담체와의 조성물, 및 단독으로 또는 1종 이상의 추가의 치료제와 조합된 암의 예방 또는 치료에 있어서의 임의의 상기 언급된 실시양태의 용도에 관한 것이다.

종양발생과 관련된 것으로 공지된 키나제에는 Raf 세린/트레오닌 키나제 및 수용체 티로신 키나제 (RTK)가 포함된다.

Raf 세린/트레오닌 키나제는 세포외 자극에 반응하여 복합 전사 프로그램을 제어하는 Ras/미토겐-활성화된 단백질 키나제 (MAPK) 신호전달 모듈의 필수적인 성분이다. Raf 유전자는 ras 종양유전자에 결합하는 것으로 알려진 고도로 보존된 세린-트레오닌-특이적 단백질 키나제를 코딩한다. 이는 수용체 티로신 키나제, p21 ras, Raf 단백질 키나제, Mek1 (ERK 활성화제 또는 MAPKK) 키나제 및 ERK (MAPK) 키나제로 이루어진 것으로 믿어지는 신호 전달 경로의 일부분인데, 상기 키나제들은 궁극적으로 전사 인자를 인산화시킨다. 상기 경로에서, Raf 키나제는 Ras에 의해 활성화되며, 이중 특이성 트레오닌/티로신 키나제인 미토겐-활성화된 단백질 키나제 키나제의 2가지 동종형 (Mek1 및 Mek2로 지칭됨)을 인산화 및 활성화시킨다. 2가지 Mek 동종형 모두는 미토겐 활성화된 키나제 1 및 2를 활성화시킨다 (MAPK, 세포외 리간드 조절된 키나제 1 및 2 또는 Erk1 및 Erk2로도 지칭됨). MAPK는 전사 인자를 비롯한 많은 기질을 인산화시키며, 그렇게 함으로써 그의 전사 프로그램을 설정한다. Ras/MAPK 경로에 있어서 Raf 키나제의 참여는 증식, 분화, 생존, 종양발생성 변형 및 아폽토시스와 같은 많은 세포 기능에 영향을 주며 이들을 조절한다.

많은 신호전달 경로에서 Raf의 필수적인 역할 및 위치는 모두 포유동물 세포의 탈조절되고 우세한 억제성 Raf 돌연변이체를 이용한 연구로부터 뿐만 아니라 모델 유기체의 생화학적 및 유전학적 기술을 이용한 연구로부터 입증되었다. 많은 경우, 세포 티로신 인산화를 자극하는 수용체에 의한 Raf의 활성화는 Ras의 활성에 의존하며, 이는 Ras가 Raf의 상류에서 작용함을 나타낸다. 활성화되면, Raf-1은 Mek1을 인산화 및 활성화시키며, 이는 MAPK (미토겐-활성화된 단백질 키나제)와 같은 하류 효과기로 신호가 전파되게 한다 (문헌 [Crews et al. (1993) Cell 74:215]). Raf 세린/트레오닌 키나제는 동물 세포의 증식에 관여하는 주요한 Ras 효과기인 것으로 여겨진다 (문헌 [Avruch et al. (1994) Trends Biochem. Sci. 19:279]).

Raf 키나제는 3가지 별개의 동종형, 즉 Raf-1 (c-Raf), A-Raf 및 B-Raf를 가지며, 이들은 Ras와 상호작용하는 능력, MAPK 키나제 경로를 활성화시키는 능력, 조직 분포 및 세포이하의 위치화에 의해 구분된다 (문헌 [Marias et. al., Biochem. J. 351:289-305, 2000]; [Weber et. al., Oncogene 19:169-176, 2000]; [Pritchard et. al., Mol. Cell. Biol. 15:6430-6442, 1995]). Ras 유전자 중 하나의 활성화 돌연변이는 모든 종양의 약 20％에서 볼 수 있으며, Raf/MEK/ERK 경로는 모든 종양의 약 30％에서 활성화된다 (문헌 [Bos et. al., Cancer Res. 49:4682-4689, 1989]; [Hoshino et. al., Oncogene 18:813-822, 1999]). 최근의 연구에서는 피부 모반에서의 B-Raf 돌연변이가 멜라닌세포 신생물의 개시에 있어서 중요한 단계임이 밝혀졌다 (문헌 [Pollock et. al., Nature Genetics 25:1-2, 2002]). 또한, 최근의 연구는 B-Raf의 키나제 도메인에서의 활성화 돌연변이가 흑색종의 약 66％, 결장 암종의 12％, 및 간암의 14％에서 발생함을 밝혀내었다 (문헌 [Davies et. al., Nature 417:949-954, 2002]) ([Yuen et. al., Cancer Research 62:6451-6455, 2002]) ([Brose et. al., Cancer Research 62:6997-7000, 2002]).

상당한 채워지지 않은 의학적 필요를 나타내는데 기여하는 흑색종은 특히 진행된 전이 단계에서 예후가 나쁜 복합 다중유전자 질환이다. B-Raf 원종양유전자에서 활성화 체세포 돌연변이는 최근 다양한 악성종양에서 발견되었으며, 가장 빈번하게는 흑색종에서 발견되었다. 흑색종의 대략 70％는 약물 개발을 위한 우수한 표적인 B-Raf (V600E)의 돌연변이되고 활성화된 형태를 발현한다. 또한, 또다른 10 내지 15％의 흑색종은 돌연변이형 N-Ras를 발현하는데, 이는 흑색종 세포의 성장 및 생존에서 MAPK 경로의 중요성을 추가로 입증한다.

Ras/Raf/MEK/ERK 경로의 Raf 키나제 수준에서의 억제제는 과발현되거나 돌연변이된 수용체 티로신 키나제, 활성화된 세포내 티로신 키나제를 갖는 종양, 비정상적으로 발현된 Grb2 (Sos 교환 인자에 의해 Ras를 자극시키는 어댑터 단백질)를 갖는 종양, 뿐만 아니라 Raf 자체의 활성화 돌연변이를 갖는 종양에 대한 치료제로서 잠재적으로 효과적일 수 있다. 초기 임상 시험에서, B-Raf를 또한 억제하는 Raf-1 키나제의 억제제는 암 요법에서 치료제로서 전망을 보여주었다 (문헌 [Crump, Current Pharmaceutical Design 8:2243-2248, 2002]; [Sebastien et al., Current Pharmaceutical Design 8:2249-2253, 2002]).

RNA 안티센스 기술의 적용을 통한 세포주에서의 Raf 발현의 파괴는 Ras 및 Raf-매개 종양발생 둘다를 억제하는 것으로 나타났다 (문헌 [Kolch et al., Nature 349:416-428, 1991]; [Monia et al., Nature Medicine 2(6):668-675, 1996]). 또한, Raf 키나제에 대한 탈활성화 항체의 투여 또는 우세한 음성 Raf 키나제 또는 우세한 음성 MEK (Raf 키나제의 기질)의 공동-발현은 형질전환된 세포를 정상적인 성장 표현형으로 전환시킴이 밝혀졌다 (문헌 [Daum et al., Trends Biochem. Sci 1994, 19:474-80]; [Fridman et al. J. Biol. Chem. 1994, 269:30105-8] 참조).

몇몇 Raf 키나제 억제제는 시험관내 및/또는 생체내 분석에서 종양 세포 증식 억제에 있어서의 현저한 효능이 기재되었다 (예를 들어, 미국 특허 제6,391,636호, 제6,358,932호, 제6,037,136호, 제5,717,100호, 제6,458,813호, 제6,204,467호 및 제6,268,391호 참조). 다른 특허 및 특허 출원들은 백혈병의 치료 (예를 들어, 미국 특허 제6,268,391호, 및 제6,204,467호, 및 공개된 미국 특허 출원 제20020137774호; 제20020082192호; 제20010016194호; 및 제20010006975호 참조), 또는 유방암의 치료 (예를 들어, 미국 특허 제6,358,932호, 제5,717,100호, 제6,458,813호, 제6,268,391호, 및 제6,204,467호, 및 공개된 미국 특허 출원 제20010014679호 참조)를 위한 Raf 키나제 억제제의 용도를 제안한다.

혈관신생은 또한 암 세포 성장에 중요한 역할을 한다. 일단 암 세포의 네스트가 특정 크기, 대략 직경 1 내지 2 mm에 도달하면, 암 세포에 충분한 산소 및 영양물을 공급하기에는 확산이 충분하지 않을 것이기 때문에, 암 세포는 종양이 보다 크게 성장하도록 하기 위해 혈액 공급을 발달시켜야 한다. 따라서, 혈관신생의 억제는 암 세포 성장을 억제할 것으로 예상된다.

수용체 티로신 키나제 (RTK)는 발달성 세포 성장 및 분화, 성숙한 조직의 개형 및 재생을 조절하는 막횡단 폴리펩티드이다 (문헌 [Mustonen, T. et al., J. Cell Biology 129:895-898, 1995]; [van der Geer, P. et al., Ann Rev. Cell Biol. 10:251-337, 1994]). 성장 인자 또는 사이토킨으로 알려진 폴리펩티드 리간드는 RTK를 활성화시키는 것으로 공지되어 있다. 신호전달 RTK는 리간드 결합, 및 수용체의 외부 도메인에서의 형태의 이동으로 인한 그의 이량체화에 관여한다 (문헌 [Lymboussaki, A. "Vascular. Endothelial Growth Ractors and their Receptors in Embryos, Adults, and in Tumors" Academic Dissertation, University of Helsinki, Molecular/Cancer Biology Laboratory and Department of Pathology, Haartman Institute, 1999]; [Ullrich, A. et al., Cell 61:203-212, 1990]). RTK에의 리간드의 결합은 특정 티로신 잔기에서 수용체 트랜스-인산화, 및 후속의 세포질 기질 인산화에 대한 촉매 도메인의 활성화를 초래한다 (Id).

RTK의 2가지 하위족은 혈관 내피에 대해 특이적이다. 이에는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 하위족, 및 Tie 수용체 하위족이 포함된다. 클래스 V RTK에는 VEGFR1 (FLT-1), VEGFR2 (KDR (인간), Flk-1 (마우스)) 및 VEGFR3 (FLT-4)이 포함된다 (문헌 [Shibuya, M. et al., Oncogene 5:519-525, 1990]; [Terman, B. et al, Oncogene 6:1677-1683, 1991]; [Aprelikova, O. et al., Cancer Res. 52:746-748, 1992]). VEGF 하위족의 구성원은 혈관 투과 및 내피 세포 증식을 유도할 수 있는 것으로 기재되었으며, 또한 혈관신생 및 혈관형성의 주요한 유도자로서 확인되었다 (문헌 [Ferrara, N. et al., Endocrinol. Rev. 18:4-25, 1997]).

VEGF는 FLT-1 및 Flk-1을 비롯한 RTK에 특이적으로 결합하는 것으로 공지되어 있다 (문헌 [DeVries, C. et al., Science 255:989-991, 1992]; [Quinn, T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 90:7533-1537, 1993]). VEGF는 내피 세포의 이동 및 증식을 자극시키며, 시험관내 및 생체내 둘다에서 혈관신생을 유도한다 (문헌 [Connolly, D. et al., J. Biol. Chem. 264:20017-20024, 1989]; [Connolly, D. et al., J. Clin. Invest. 84:1470-1478, 1989]; [Ferrara, N. et al., Endocrinol. Rev. 18:4-25, 1997]; [Leung, D. et al., Science 246:1306-1309, 1989]; [Plouet, J. et al., EMBO J 5:3801-3806, 1989]).

다양한 배양된 내피 세포 시스템에서의 연구는 VEGFR2가 혈관신생에서 VEGF의 하류 효과의 대다수를 매개함을 확립하였다 (문헌 [Wey S. et al., Clinical Advances in Hematology and Oncology, 2:37-45, 2004]). 내피 세포의 VEGFR2 매개된 증식은 Ras/Raf/Mek/Erk 경로의 활성화와 관련되는 것으로 믿어진다 (문헌 [Veikkola T. et al., Cancer Res 60:203-212, 2000]). VEGFR2 발현은 흑색종, 유방암, 방광암, 폐암, 갑상선암, 전립선암 및 난소암에서 관찰되었다 ([Wey et al., 상기 문헌] 참조). VEGFR2에 대한 중화 모노클로날 항체 (KDR)는 종양 혈관신생을 차단하는데 있어서 효능 있는 것으로 나타났다 (문헌 [Kim et al., Nature 362:841, 1993]; [Rockwell et al., Mol. Cell Differ. 3:315, 1995] 참조). 혈관신생은 암의 성장에 중요하며 VEGF 및 VEGF-RTK에 의해 제어되는 것으로 믿어지기 때문에, 실질적인 노력은 혈관신생을 억제하거나 지연시키고 VEGF-RTK를 억제하는 화합물을 개발하는데 기울여졌다.

혈소판 유래 성장 인자 수용체 키나제 (PDGFR)는 RTK의 또다른 유형이다. PDGF 발현은 교모세포종 및 골육종에서부터 전립선 암종에 이르기까지 다수의 상이한 고형 종양에서 나타났다. 이러한 다양한 종양 유형에서, PDGF 신호전달의 생물 학적 역할은 암 세포 성장의 자가분비성 자극에서부터 인접한 기질을 포함하는 보다 복잡한 측분비 상호작용 및 혈관신생에 이르기까지 다양할 수 있다. PDGF는 티로신 키나제 수용체 PDGFRα 및 PDGFRβ와 상호작용한다. 따라서, 소분자로 PDGFR 키나제 활성을 억제하는 것은 종양 성장 및 혈관신생을 간섭할 것으로 예상된다.

섬유모세포 성장 인자 수용체 키나제 (FGFR)는 또다른 유형의 RTK를 대표한다. 섬유모세포 성장 인자는 유사분열유도, 혈관신생 및 상처 치유를 비롯한 다양한 활성에 관여하는 폴리펩티드 성장 인자의 족이다. 이들은 관련된 족이지만 2개 또는 3개의 이뮤노글로불린 (Ig)-유사 도메인을 갖는 세포외 도메인, 막횡단 도메인 및 세포질 티로신 키나제 도메인을 함유하는 개별적으로 구별되는 티로신 키나제 수용체를 포함한다. 확인된 섬유모세포 성장 인자 수용체에는 FGFR1 (문헌 [Ruta, M et al., Oncogene 3:9-15, 1988]); FGFR2 ([Dionne, C et al., Cytogenet. Cell Genet. 60:34-36, 1992]); FGFR3 ([Keegan, K et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 88:1095-1099, 1991]); 및 FGFR4 ([Partanen, J et al., EMBO J. 10:1347-1354, 1991])이 포함된다.

섬유모세포 성장 인자 수용체, 특히 FGFR3의 암에서의 역할이 조명되었다. 14q32 상의 이뮤노글로불린 중쇄 (IgH) 좌위로의 전위에 의한 종양유전자의 조절이상은 B-세포 종양의 병인에서 중요한 사건이다. 다발 골수종에서, IgH 좌위로의 전위는 20 내지 60％의 경우에 일어난다. 대부분의 전위에 대해, 상대 염색체는 알러져 있지 않으며, 다른 것에 대해서는 빈번하게 관련되는 유일한 염색체인 11q13으로 염색체 상대의 다양한 어레이가 확인되었다. 베르그사겔(Bergsagel) 등 은 검출가능한 14q32 전위가 없는 8개의 핵형화된 세포주 중 7개를 포함하는 21개의 골수종 세포주 중 15개에서 IgH 스위치 영역으로의 전위 사건의 잠재적인 마커로서 변칙 스위치 재조합 단편 (1개의 스위치 영역만으로부터의 서열을 함유하는 것으로 정의됨)을 확인하였다. 상기 전위 파괴점은 6개의 염색체 좌위를 포함하였다: 4p16.3; 6; 8q24.13; 11q13.3; 16q23.1; 및 21q22.1 (문헌 [Bergsagel et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 93:13931-13936, 1996]). 문헌 [Chesi et al. Nature Genet. 16:260-264 1997]은 FGFR3의 증가된 발현 및 돌연변이의 활성화를 나타내는 5개의 골수종 세포주에서 및 다발 골수종과 관련된 10개의 원발성 종양 중 3개 이상에서 핵형상으로 침묵성인 전위 t(4;14)(pl6.3;q32.3)를 발견하였다. 염색체-4 파괴점은 FGFR3에 대한 70-kb 영역 중심체에 클러스터되어 있으며, 이는 조절이상된 종양유전자인 것으로 여겨진다. 이러한 전위를 갖는 2개의 세포주 및 1개의 원발성 종양은 치사성 난장이증에서 이미 확인된 활성화 돌연변이를 함유하는 FGFR3 대립유전자를 선택적으로 발현한다: cys에 대해 tyr373, glu에 대해 lys650 및 met에 대해 lys650. K650E에 대해, 리간드의 부재하에서의 FGFR3의 구조적 활성화는 전위 실험에 의해 입증되었다. 체시 등 (1997)은 t(4;14) 전위 후, 종양 진행 동안의 체세포 돌연변이는 리간드의 부재하에서 활성인 FGFR3 단백질을 빈번히 생성함을 제안하였다.

라스무센, 티(Rasmussen, T) 등은 다발 골수종에서 t(4;14) 전위에 대한 3 내지 24％의 빈도를 인용하였다 (문헌 [Rasmussen, T et al., Br. J. Haematol. 117:626-628, 2002]). 전위는 유의성 미확인 모노클로날 감므글로불린증 (MGUS)을 갖는 환자에서 유의하게 더 낮은 빈도로 관찰되었으며, 이는 MGUS에서 다발 골수종으로의 전이에서의 역할을 시사한다. t(4;14) 전위는 2가지 잠재적인 종양유전자인 FGFR3 및 다발 골수종 세트 도메인 (MMSET)에 영향을 준다. 라스무센 등 (2002)은 FGFR3 조절이상의 빈도 및 그의 다발 골수종에서의 예후치를 조사하였다. 110가지 다발 골수종 골수 샘플 중 16가지 (14.5％)에서, 조절이상된 FGFR3 발현이 발견되었다.

또한, 암종에서 FGFR3에 대한 종양발생 역할을 나타내는 추가의 증거가 제시되었다 (문헌 [Cappellen, D. et al., (Letter) Nature Genet. 23:18-20, 1999]). 카펠린 등은 2가지 공통적인 상피암, 방광암 및 자궁경부암의 많은 비율에서 구조적으로 활성화된 FGFR3의 발현을 발견하였다. FGFR3은 방광암에서 30％ 초과의 경우에 돌연변이되는 가장 빈번히 돌연변이되는 종양유전자인 것으로 나타났다. FGFR3은 반대 신호를 매개하며, 뼈의 성장의 음성 조절자로서 및 몇몇 종양 유형에서 종양유전자로서 작용하는 것으로 보인다. 상기 암에서 확인된 모든 FGFR3 미스센스 체세포 돌연변이는 치사성 형성이상을 유발하는 생식세포 활성화 돌연변이와 동일하였다 (저자들은 2가지 돌연변이에서 이들이 동등하게 발생되는데, 이는 상피 세포에서 발현된 FGFR3b 동종형이 뼈에서 발현된 FGFR3c 동종형보다 2개 더 많은 아미노산을 함유하기 때문이라고 보고하였다). 상피 종양의 FGFR3 변형 중, S249C 돌연변이는 가장 흔하며, 이는 9가지의 방광암 중 5가지 및 3가지의 자궁경부암 중 3가지에 영향을 준다.

또한, 활성화된 FGFR3이 c-Cb1-매개된 유비퀴틴화에 의한 리소좀 분해에 대 해 표적화되며, 연골무형성증 및 관련된 연골형성이상을 갖는 환자에서 발견된 활성화 돌연변이가 이러한 과정을 교란시켜 활성화된 수용체의 재사용 및 FGFR3 신호의 증폭을 초래한다는 증거가 제시되었다 (문헌 [Cho et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 101:609-614, 2004]). 조 등은 상기 메카니즘이 연골무형성증의 분자적 병인에 기여하며 치료 개입을 위한 잠재적인 표적으로 제시됨을 시사하였다. 리소좀 표적화 결함은 연골무형성증의 병인론을 설명하기 위해 제안된 다른 메카니즘에 추가된다.

다른 결과는 FGFR2 및 FGFR3이 종양발생에서 중요한 인자임을 지시한다 (문헌 [Jang JH et al., "Mutations in fibroblast growth factor receptor 2 and fibroblast growth factor receptor 3 genes associated with human gastric and colorectal cancers" Cancer Res. 61(9):354 1-3, 2001]). 다발 골수종, 방광암 및 종양발생에서의 역할 때문에, 섬유모세포 성장 인자 수용체 키나제의 억제제, 특히 FGFR2 및 FGFR3의 억제제의 개발은 암 치료에서 중요한 역할을 할 것이다.

c-Kit는 PDGF 수용체 족에 속하는 또다른 수용체 티로신 키나제이며, 조혈 전구세포, 비만세포 및 생식세포에서 통상적으로 발현된다. C-kit 발현은 비만세포성 백혈병, 생식세포 종양, 소세포 폐암종, 위장관 기질 종양, 급성 골수성 백혈병 (AML), 적백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 난소암종, 유방암종을 비롯한 다수의 암과 관련된다 (문헌 [Heinrieh, M. C. et al., J. Clin. One. 20, 6 1692-1703, 2002 (review article)]; [Smolich, B. D. et al., Blood, 97, 5;1413-1421]).

콜로니 자극 인자-1 (CSF-1)에 대한 수용체인 CSF-1R의 과발현은 유방, 난 소, 자궁내막, 폐, 신장, 췌장 및 전립선의 암종을 비롯한 다수의 인간 암종과 관련되었다 (문헌 [Sapi, E., Exp. Biol. Med 229:1-11, 2004]). CSF-1R은 그의 리간드 CSF-1에 의해 활성화될 경우 세포 증식 및 분화를 제어하는 신호 전달 경로를 촉발시키는 티로신 키나제 수용체이다. CSF-1R은 임신 및 수유 중 유선에서 발현된다. 비정상적인 CSF-1R 발현은 모든 유방암의 58％ 및 침습성 유방암종의 85％와 관련되었다 ([Sapi, 상기 문헌] 참조).

모세혈관의 증식을 억제, 종양의 성장을 억제, 암을 치료, 세포 주기 정지를 조절, 및/또는 하나 이상의 Ras, Raf, 돌연변이형 B-Raf, VEGFR2 (KDR, Flk-1), FGFR2/3, c-Kit, PDGFRβ, CSF-1R과 같은 분자를 억제하는 화합물 및 이러한 화합물을 함유하는 제약 제제 및 의약에 대한 계속되는 필요가 있다. 또한, 이러한 화합물, 제약 제제 및 의약을 이를 필요로 하는 환자 또는 대상체에게 투여하는 방법에 대한 필요가 있다.

발명의 요약

하기 화학식 I의 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물 또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

상기 식에서,

각각의 R¹은 히드록시, 할로, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, (C_1-6 알킬)술파닐, (C_1-6 알킬)술포닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

R²는 C_1-6 알킬 또는 할로(C_1-6 알킬)이고;

각각의 R³은 할로, C_1-6 알킬 및 C_1-6 알콕시로부터 독립적으로 선택되고;

각각의 R⁴는 히드록시, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 할로, 헤테로시클로알킬카르보닐, 카르복실, (C_1-6 알콕시)카르보닐, 아미노카르보닐, C_1-6 알킬아미노카르보닐, 카르보니트릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

R¹, R², R³및 R⁴는 임의로 히드록시, 할로, C_1-6 알킬, 할로(C_1-6 알킬), C_1-6 알콕시 및 할로(C_1-6 알콕시)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환 될 수 있고;

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

b는 0, 1, 2 또는 3이고;

c는 1 또는 2이다.

다른 실시양태에서, 하기 화학식 II의 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물 또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

상기 식에서,

각각의 R¹은 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 히드록시, 할로, (C_1-6 알킬)술파닐, (C_1-6 알킬)술포닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

각각의 R⁴는 히드록시, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 할로, 카르복실, (C_1-6 알콕 시)카르보닐, 아미노카르보닐, 카르보니트릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알킬카르보닐, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

R¹, R², R³ 및 R⁴는 임의로 히드록시, 할로, C_1-6 알킬 및 C_1-6알콕시로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있고;

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

b는 0, 1, 2 또는 3이고;

c는 1 또는 2이다.

다른 실시양태에서, 하기 화학식 III의 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물 또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

상기 식에서,

각각의 R⁴는 히드록시, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 할로, 카르복실, (C_1-6 알콕시)카르보닐, 아미노카르보닐, 카르보니트릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알킬카르보닐, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

R¹ 및 R⁴는 임의로 히드록시, 할로, C_1-6 알킬 및 C_1-6알콕시로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있고;

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

c는 1 또는 2이다.

또한, 하기 화학식 IV의 화합물 또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

상기 식에서,

각각의 R¹은 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 히드록시, 할로, (C_1-6 알킬)술파닐, (C_1-6 알킬)술포닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으 로 선택되고;

R²는 C_1-6 알킬 또는 할로(C_1-6 알킬)이고;

각각의 R⁴는 히드록시, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 할로, 카르복실, (C_1-6 알콕시)카르보닐, 아미노카르보닐, C_1-6 알킬아미노카르보닐, 카르보니트릴, 카르보니트릴(C_1-6 알킬), 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알킬(C_1-6 알킬), 헤테로시클로알킬카르보닐, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

b는 0, 1, 2 또는 3이다.

다른 실시양태에서, 각각의 R¹이 히드록시, 클로로, 플루오로, 브로모, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 트리플루오로메틸, 트리플루오로에틸, 트리플루오로메톡시, 트리플루오로에톡시, 트리플루오로메틸술파닐, 피페리디닐, C_1-6 알킬피페리디닐, 피페라지닐, C_1-6 알킬피페라지닐, 테트라히드로푸라닐, 피리디닐 및 피리미디닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 화학식 I 내지 IV의 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물이 제공된다. 다른 실시양태에서, a가 1 또는 2이고, 적어도 하나의 R¹이 할로(C_1-6 알킬), 예를 들어 트리플루오로메틸인 화학식 I 내지 IV의 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물이 제공된다. 다른 실시양태에서, R²가 C_1-6 알킬, 예를 들어, 메틸 또는 에틸인 화학식 I 및 IV의 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물이 제공된다. 추가의 실시양태에서, b가 0이고, 따라서 R³이 존재하지 않는 화학식 I, II 및 IV의 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물이 제공된다. 대안적인 실시양태에서, b가 1이고, R³이 C_1-6 알콕시, 예를 들어, 메톡시인 화학식 I 내지 IV의 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물이 제공된다. 추가의 실시양태에서, c가 1 또는 2이고, 적어도 하나의 R⁴가 할로(C_1-6 알킬), 예를 들어, 트리플루오로메틸인 화학식 I 내지 III의 신규한 치환된 벤즈이미다졸 화합물이 제공된다.

다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 종양 성장을 감소시키거나 방지하는데 유효한 양의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 임의의 실시양태를 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, Raf 관련된 장애의 치료가 필요한 인간 또는 동물 대상체에서 Raf 관련된 장애를 치료하는 방법을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 종양 성장을 감소시키거나 방지하는데 유효한 양의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 임의의 실시양태를 암 치료용의 1종 이상의 추가의 작용제와 조합으로 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, Raf 관련된 장애의 치료가 필요한 인간 또는 동물 대상체에서 Raf 관련된 장애를 치료하는 방법을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 1종 이상의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 암 요법에 통상적으로 사용되는 것과 같은 암 치료용의 1종 이상의 추가의 작용제와 조합으로 포함하는 치료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물은 암종 (예를 들어, 폐, 췌장, 난소, 갑상선, 방광 또는 결장의 암종), 흑색종, 골수양 장애 (예를 들어, 골수양 백혈병, 다발 골수종 및 적백혈병), 샘종 (예를 들어, 융모 결장 샘종) 및 육종 (예를 들어, 골육종)을 포함하는 암의 치료에 유용하다.

또다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 MAPK 신호전달 경로를 억제하는데 유효한 1종 이상의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 치료 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 MAPK 신호전달 경로에서 하나 이상의 세린/트레오닌 키나제를 억제하는 방법, 또는 상기 대상체에서 MAPK 신호전달 경로에서 세린/트레오닌 키나제에 의해 매개되는 생물학적 상태를 치료하는 방법에 관한 것이다. 치료 조성물은 이러한 억제제가 필요한 환자 (예를 들어, 비정상적인 MAPK 신호전달에 의해 매개되는 암을 앓고 있는 환자)의 치료에 유용하다. 일 실시양태에서, 본 발명은 {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오 로메틸-페닐)-아민 및 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 치료 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 Raf 키나제를 억제하는 방법에 관한 것이다.

또다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 티로신 키나제 수용체를 억제하는데 유효한 1종 이상의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 치료 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRl, FGFR2, FGFR3, c-Kit 및 CSF-1R로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 티로신 키나제 수용체를 억제하는 방법, 또는 하나 이상의 VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRl, FGFR2, FGFR3, c-Kit 및 CSF-1R에 의해 매개되는 생물학적 상태를 치료하는 방법에 관한 것이다. 치료 조성물은 이러한 억제제가 필요한 환자 (예를 들어, 비정상적인 MAPK 신호전달에 의해 매개되는 암을 앓고 있는 환자)의 치료에 유용하다. 일 실시양태에서, 본 발명은 {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민 및 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 치료 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFR1, FGFR2, FGFR3, c-Kit 및 CSF-1R로 이루어진 군으로부터 선택된 티로신 키나제를 억제하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 발명의 상세한 설명에 기재된 바와 같은 조성물, 사용 방법 및 제조 방법을 추가로 제공한다.

상기 측면 및 많은 본 발명의 많은 부수적인 이점은 첨부된 도면과 함께 취해질 경우 하기 상세한 설명을 참고로 보다 잘 이해될 것이다.

도 1은 실시예 78에 기재된 바와 같이, 본 발명의 화합물로 처치한 경우 마우스에서 A375M 인간 흑색종 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이고;

도 2A 및 2B는 실시예 79에 기재된 바와 같이, 본 발명의 화합물로 처치한 후 4시간 (도 2A) 및 24시간 (도 2B)에 마우스에서 A375M 인간 흑색종 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 3은 실시예 80에 기재된 바와 같이, 본 발명의 화합물로 처치한 경우 마우스에서 HT29P 인간 결장암 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이고;

도 4A, 4B 및 4C는 실시예 81에 기재된 바와 같이, 본 발명의 화합물로 처치한 후 1시간 (도 4A), 4시간 (도 4B) 및 24시간 (도 4C)에 마우스에서 HT29P 인간 결장암 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 5는 실시예 82 내지 86에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 경우 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제의 Ras, Raf, MEK 및 ERK, 및 제안된 지점을 포함하는 MAPK 신호전달 경로를 예시하고;

도 6A, 6B 및 6C는 실시예 83에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물의 농도 범위로 배양물에서 4시간 인큐베이션한 후 A375M 세포 (도 6A), SK-MEL2 세포 (도 6B) 및 CHL-1 세포 (도 6C)에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 7A는 실시예 84에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 또는 100 mg/kg의 경구 투여량으로 처치한 경우 마우스에서 A375M (B-Raf V600E) 인간 흑색종 종양의 종양 부피의 평균 감소의 투여량 반응을 나타내는 그래프이고;

도 7B는 실시예 84에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 14회째 처치 후 8시간에, 마우스에서 A375M 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 7C는 실시예 84에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 14회째 처치 후 24시간에, 마우스에서 A375M 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 7D는 실시예 84에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 14회째 처치 후 24시간에, 마우스에서 A375M 종양 세포에서 Raf 키나제로부터 하류에서 마커의 조절을 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 8A는 실시예 85에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물로 처치한 경우 마우스에서 MEXF276 (B-Raf V600E) 흑색종 암 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이고;

도 8B는 실시예 85에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 20회째 처치 후 4시간에, 마우스에서 MEXF276 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 8C는 실시예 85에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 20회째 처치 후 4시간에, 마우스에서 MEXF276 종양 세포에서 Raf 키나제로부터 하류에서 마커의 조절을 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 9A는 실시예 85에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물로 처치한 경우 마우스에서 MEXF1341 (N-Ras Q61K) 흑색종 암 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이고;

도 9B는 실시예 85에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 20회째 처치 후 4시간에, 마우스에서 MEXF1341 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 9C는 실시예 85에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 20회째 처치 후 4시간에, 마우스에서 MEXF1341 종양 세포에서 Raf 키나제로부터 하류에서 마커의 조절을 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 1OA는 실시예 86에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물로 처치한 경우 마우스에서 HCT-116 (K-Ras G13D) 직장결장 암종 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이고;

도 1OB는 실시예 86에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 3회째 처치 후 4시간에, 마우스에서 HCT-116 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 1OC는 실시예 86에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 3회째 처치 후 8시간에, 마우스에서 HCT-116 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 1OD는 실시예 86에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 3회째 처치 후 24시간에, 마우스에서 HCT-116 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 11은 실시예 86에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물로 처치한 경우 마우스에서 HT-29 (B-Raf V600E) 직장결장 암종 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이고;

도 12A는 실시예 86에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물로 처치한 경우 마우스에서 MV4-11 (FLT3 ITD) 급성 단핵구 백혈병 암 종양의 종양 성장의 평균 억제를 나타내는 그래프이고;

도 12B는 실시예 86에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 3회째 처치 후 4시간에, 마우스에서 MV4-11 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 13은 실시예 88에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 또는 100 mg/kg으로 처치한 후 CHO-VEGF 매트리겔 모델에서 VEGF-매개된 혈 관신생의 억제를 나타내는 그래프이고;

도 14A는 실시예 89에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물 100 mg/kg으로 q2d, q3d 또는 q4d 투여량 처방으로 처치한 경우 마우스에서 A375M 흑색종 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이고;

도 14B는 실시예 89에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 5회째 처치 후 8시간, 24시간 및 48시간에 마우스에서 A375M 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 14C는 실시예 89에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물을 사용한 3회째 처치 후 48시간, 72시간 및 96시간에 마우스에서 A375M 종양 세포에서 Raf 키나제로부터의 하류 신호전달의 억제를 나타내는 PAGE 슬라이드이고;

도 15는 실시예 90에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물의 다양한 농도를 사용한 A375M 종양 세포의 처치, 시간 경과에 따른 화합물의 혈청 농도 및 표적 조절을 위한 역치 농도 사이의 상관관계를 나타내는 그래프이다.

본 발명의 일 측면에 따라, 하기 화학식 I의 치환된 벤즈이미다졸 화합물 또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

<화학식 I>

상기 식에서,

R²는 C_1-6 알킬 또는 할로(C_1-6 알킬)이고;

각각의 R⁴는 히드록시, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 할로, 카르복실, (C_1-6 알콕시)카르보닐, 아미노카르보닐, C_1-6 알킬아미노카르보닐, 카르보니트릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알킬카르보닐, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

R¹, R², R³및 R⁴는 임의로 히드록시, 할로, C_1-6 알킬, 할로(C_1-6 알킬), C_1-6 알콕시 및 할로(C_1-6 알콕시)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있고;

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

b는 0, 1, 2 또는 3이고;

c는 1 또는 2이다.

<화학식 II>

상기 식에서,

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

b는 0, 1, 2 또는 3이고;

c는 1 또는 2이다.

<화학식 III>

상기 식에서,

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

c는 1 또는 2이다.

또한, 하기 화학식 IV의 화합물 또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염이 개시된다.

<화학식 IV>

상기 식에서,

R²는 C_1-6 알킬 또는 할로(C_1-6 알킬)이고;

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

b는 0, 1, 2 또는 3이다.

일부 실시양태에서, R¹, R², R³ 및 R⁴는 임의로 히드록시, 할로, C_1-6 알킬, 할로(C_1-6 알킬), C_1-6 알콕시 및 할로(C_1-6 알콕시)로부터 독립적으로 선택된 1개 내지 5개의 치환기로 치환될 수 있다.

일부 실시양태에서, R¹, R², R³ 및 R⁴는 임의로 히드록시, 할로, C_1-6 알킬, 할로(C_1-6 알킬), C_1-6 알콕시 및 할로(C_1-6 알콕시)로부터 독립적으로 선택된 1개 내지 3개의 치환기로 치환될 수 있다.

일부 실시양태에서, R¹은 할로, C_1-6 알콕시, 할로(C_1-6 알킬), 히드록시, 할로(C_1-6 알콕시), 할로(C_1-6 알킬)술포닐, 헤테로아릴, 할로(C_1-6 알킬)술파닐, 헤테로시클로알킬 및 (C_1-6 알킬)헤테로시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 이러한 실시양태에서, a는 1이고, R¹은 2-클로로, 2-에틸, 2-트리플루오로메틸, 3-트리플루오로메틸, 4-트리플루오로메틸, 3-tert-부틸, 4-tert-부틸, 3-에틸, 4-에틸, 4-클로로, 4-브로모, 4-트리플루오로메톡시, 4-트리플루오로메틸술파닐, 4-트리플루오로메틸술포닐 및 4-(4-메틸피페라지닐)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 다른 실시양태에서, a는 2이고, 각각의 R¹은 2-플루오로, 2-클로로, 2-히드록시, 2-메톡시, 3-메톡시, 5-메톡시, 4-클로로, 4-플루오로, 3-트리플루오로메틸, 4-트리플루오로메틸, 5-트리플루오로메틸, 5-피리디닐, 5-피리디닐-3-일, 5-피리디닐-4-일, 3-테트라히드로푸란-3-일, 3-이소프로필, 5-이소프로필 및 5-tert-부틸로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.

일부 실시양태에서, R⁴는 C_1-6 알킬, 히드록시(C_1-6 알킬), 할로(C_1-6 알킬), 할로(C_1-6 알킬)술파닐, (C_1-6 알콕시)카르보닐, (C_1-6 알킬)헤테로시클로알킬, 카르보니트릴, 페닐, 할로(C_1-6 알킬)페닐, (C_1-6 알킬)헤테로시클로알킬카르보닐 및 히드록시(C_1-6 알킬아미노카르보닐)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 이러한 실시양태에서, c는 1이고, R⁴는 트리플루오로메틸, 카르보니트릴, 페닐, 트리플루오로메틸술파닐, 메톡시카르보닐, 4-에틸피페라지닐, 4-에틸피페라지닐-1-카르보닐 또는 2-히드록시에틸아미노카르보닐로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, c는 2이고, 각각의 R⁴는 메틸, 3-트리플루오로메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 트리플루오로메틸, 에톡시카르보닐, 히드록시메틸 및 페닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.

다른 실시양태에서,

화학식

의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는

화학식

의 상기 화합물의 호변이성질체 또는 상기 호변이성질체의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 종양 성장을 감소시키거나 방지하는데 유효한 양의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, Raf 관련된 장애의 치료가 필요한 인간 또는 동물 대상체에서 Raf 관련된 장애를 치료하는 방법을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 종양 성장을 감소시키거나 방지하는데 유효한 양의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물을 암 치료용의 1종 이상의 추가의 작용제와 조합으로 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, Raf 관련된 장애의 치료가 필요한 인간 또는 동물 대상체에서 Raf 관련된 장애를 치료하는 방법을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 종양 성장을 감소시키거나 방지하는데 유효한 양의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물을 암 치료용의 1종 이상의 추가의 작용제와 조합으로 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, Raf 관련된 장애의 치료가 필요한 인간 또는 동물 대상체에서 Raf 관련된 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 조합 치료제로서 사용되는 다수의 적합한 항암제는 본 발명의 방법에 사용하기 위해 고려된다. 사실, 본 발명은 다수의 항암제, 예를 들어 아폽토시스를 유도하는 작용제; 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 리보자임); 폴리펩티드 (예를 들어, 효소); 약물; 생물학적 모방체; 알칼로이드; 알킬화제; 항종양 항생제; 항대사물질; 호르몬; 플래티늄 화합물; 항암 약물, 독소 및/또는 방사성핵종에 접합된 모노클로날 항체; 생물학적 반응 개질제 (예를 들어, 인터페론 [예를 들어 IFN-α 등] 및 인터루킨 [예를 들어 IL-2 등] 등); 입양 면역요법제; 조혈 성장 인자; 종양 세포 분화를 유도하는 작용제 (예를 들어 올-트랜스-레티노산 등); 유전자 요법 시약; 안티센스 요법 시약 및 뉴클레오티드; 종양 백신; 혈관신생의 억제제 등의 투여를 고려하지만, 이에 제한되지는 않는다. 화학식 I, II, III 또는 IV의 개시된 화합물과 공동투여하기에 적합한 화학요법 화합물 및 항암 요법의 다수의 다른 예는 당업자에게 공지되어 있다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 화합물과 조합으로 사용되는 항암제는 아폽토시스를 유도하거나 자극시키는 작용제를 포함한다. 아폽토시스를 유도하는 작용제에는 방사선; 키나제 억제제 (예를 들어, 상피 성장 인자 수용체 [EGFR] 키나제 억제제, 혈관 성장 인자 수용체 [VGFR] 키나제 억제제, 섬유모세포 성장 인자 수용체 [FGFR] 키나제 억제제, 혈소판-유래 성장 인자 수용체 [PGFR] I 키나제 억제제 및 Bcr-Ab1 키나제 억제제, 예를 들어 STI-571, 글리벡(Gleevec) 및 글리벡(Glivec)]); 안티센스 분자; 항체 [예를 들어, 허셉틴(Herceptin) 및 리툭산(Rituxan)]; 항에스트로겐 [예를 들어, 랄록시펜 및 타목시펜]; 항안드로겐 [예를 들어, 플루타미드, 비칼루타미드, 피나스테리드, 아미노글루테타미드, 케토코나졸 및 코르티코스테로이드]; 시클로옥시게나제 2 (COX-2) 억제제 [예를 들어, 셀레콕십(Celecoxib), 멜록시캄, NS-398 및 비-스테로이드성 항염증 약물 (NSAID)]; 및 암 화학요법 약물 [예를 들어, 이리노테칸 (캄토사르(Camptosar)), CPT-11, 플루다라빈 (플루다라(Fludara)), 다카바진 (DTIC), 덱사메타손, 미토크산트론, 밀로타르그(Mylotarg), VP-16, 시스플라티늄, 5-FU, 독소루비신(Doxrubicin), 탁소텔(Taxotere) 또는 탁솔]; 세포 신호전달 분자; 세라마이드 및 사이토킨; 및 스타우로스프린 등이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.

다른 측면에서, 본 발명은 1종 이상의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 단독으로 또는 다른 항암제와 함께 인간 또는 동물 대상체에게 투여하기에 적합한 제약상 허용되는 담체를 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물의 제조 방법을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 효소 Raf 키나제의 억제제인 화합물을 제공한다. 효소는 p21^ras의 하류 효과기이기 때문에, 본 발명의 억제제는 raf 키나제 경로의 억제가 예를 들어 Raf 키나제에 의해 매개되는 종양 및/또는 암성 세포 성장의 치료에서 지시되는 인간 또는 수의학 용의 제약 조성물에 유용하다. 특히, 상기 화합물은 인간 또는 동물, 예를 들어 마우스 암의 치료에 유용한데, 이는 상기 암이 Ras 단백질 신호 전달 캐스케이드에 의존하며 따라서 Raf 키나제 활성의 억제에 의한 캐스케이드의 간섭에 의한 치료에 감수성이기 때문이다. 따라서, 본 발명의 화합물은 고형암, 예를 들어, 암종 (예를 들어, 폐, 췌장, 갑상선, 방광 또는 결장의 암종), 골수양 장애 (예를 들어, 골수양 백혈병, 다발 골수종 및 적백혈병), 샘종 (예를 들어, 융모 결장 샘종), 또는 육종 (예를 들어, 골육종)의 치료에 유용하다.

"Raf 억제제"는 본원에서, 하기에 일반적으로 기재된 Raf/Mek 여과 분석에서 측정된 바와 같이 Raf 키나제 활성에 관한 IC₅₀을 약 100 μM 이하, 보다 전형적으로 약 50 μM 이하로 나타내는 화합물을 지칭하는데 사용된다. 본 발명의 화합물이 억제할 것으로 나타난 Raf 키나제의 바람직한 동종형에는 A-Raf, B-Raf 및 C-Raf (Raf-1)가 포함된다. "IC₅₀"은 효소 (예를 들어, Raf 키나제)의 활성을 최대치의 절반 수준으로 감소시키는 억제제의 농도이다. 본 발명의 대표적인 화합물은 Raf에 대해 억제 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 화합물은 바람직하게는 본원에 기재된 Raf 키나제 분석에서 측정된 바와 같이 Raf에 관한 IC₅₀을 약 10 μM 이하, 보다 바람직하게는, 약 5 μM 이하, 보다 더 바람직하게는 약 1 μM 이하, 가장 바람직하게는, 약 200 nM 이하로 나타낸다.

본원에 사용된 어구 "MAPK 신호 전달 경로"는 Ras-Raf-Mek1-ERK 신호전달 분자의 형태인 모듈에서의 미토겐 활성화된 단백질 키나제 신호 전달 경로를 나타내는 약어이다.

"알킬"은 헤테로원자를 함유하지 않으며 직쇄 알킬기를 포함하는 포화 탄화수소기, 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실, 운데실, 도데실 등을 지칭한다. 알킬에는 또한 직쇄 알킬기의 분지쇄 이성질체가 포함되며, 하기 -CH(CH₃)₂, -CH(CH₃)(CH₂CH₃), -CH(CH₂CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -C(CH₂CH₃)₃, -CH₂CH(CH₃)₂, -CH₂CH(CH₃)(CH₂CH₃), -CH₂CH(CH₂CH₃)₂, -CH₂C(CH₃)₃, -CH₂C(CH₂CH₃)₃, -CH(CH₃)CH(CH₃)(CH₂CH₃), -CH₂CH₂CH(CH₃)₂, -CH₂CH₂CH(CH₃)(CH₂CH₃), -CH₂CH₂CH(CH₂CH₃)₂, -CH₂CH₂C(CH₃)₃, -CH₂CH₂C(CH₂CH₃)₃, -CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂, -CH(CH₃)CH(CH₃)CH(CH₃)₂, -CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)CH(CH₃)(CH₂CH₃) 등은 그의 예로서 제공되지만, 이에 제한되지는 않는다. 따라서, 알킬기는 일차 알킬기, 이차 알킬기 및 삼차 알킬기를 포함한다. 어구 "C_1-12 알킬"은 탄소 원자 1개 내지 12개를 갖는 알킬기를 지칭한다. 어구 "C_1-6 알킬"은 탄소 원자 1개 내지 6개를 갖는 알킬기를 지칭한다.

"알케닐"은 탄소 원자 2개 내지 6개, 바람직하게는 탄소 원자 2개 내지 4개를 가지며 1개 이상, 바람직하게는 1개 내지 2개의 비닐 (>C=C<) 불포화 부위를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소기를 지칭한다. 이러한 기는 예를 들어 비닐, 알릴 및 부트-3-엔-1-일로 예시된다. 상기 정의에는 시스 및 트랜스 이성질체 또는 상기 이성질체의 혼합물이 포함된다.

"알콕시"는 R이 알킬기인 RO-를 지칭한다. 본원에 사용된 어구 "C_1-6 알콕시"는 R이 C_1-6 알킬기인 RO-를 지칭한다. C_1-6 알콕시기의 대표적인 예에는 메톡시, 에톡시, t-부톡시 등이 포함된다.

"(C_1-6 알콕시)카르보닐"은 R이 C_1-6 알킬인 에스테르-C(=O)-0R을 지칭한다.

"아미디노"는 -C(=NH)NH₂ 기를 지칭한다. "아미딘"은 이러한 기를 함유하는 화합물을 지칭한다.

"아미노카르보닐"은 본원에서 -C(O)-NH₂ 기를 지칭한다.

"C_1-6 알킬아미노카르보닐"은 -C(O)-NRR'기 (여기서, R은 C_1-6 알킬이고, R'는 수소 및 C_1-6 알킬로부터 선택됨)를 지칭한다.

"카르보닐"은 2가의 기 -C(O)-이다.

"카르복실"은 -C(=O)-OH를 지칭한다.

"시아노", "카르보니트릴" 또는 "니트릴" 또는 "시아노 관능기"는 -CN을 지칭한다.

"시클로알킬"은 모노시클릭 또는 폴리시클릭 알킬 치환기를 지칭한다. 전형적인 시클로알킬기는 3개 내지 8개의 탄소 고리 원자를 갖는다. 대표적인 시클로알킬기에는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 및 시클로옥틸이 포함된다.

"할로겐" 또는 "할로"는 클로로, 브로모, 플루오로 및 요오도기를 지칭한다.

"할로(C_1-6 알킬)"은 하나 이상의 할로겐 원자, 바람직하게는 1개 내지 5개의 할로겐 원자로 치환된 C_1-6알킬 라디칼을 지칭한다. 보다 바람직한 할로(C_1-6 알킬)기는 트리플루오로메틸이다.

"할로(C_1-6 알킬)페닐"은 할로(C_1-6 알킬)기로 치환된 페닐기를 지칭한다.

"할로(C_1-6 알콕시)"는 하나 이상의 할로겐 원자, 바람직하게는 1개 내지 5개의 할로겐 원자로 치환된 알콕시 라디칼을 지칭한다. 보다 바람직한 할로(C_1-6 알콕시)기는 트리플루오로메톡시이다.

"할로(C_1-6 알킬)술포닐" 및 "할로(C_1-6 알킬)술파닐"은 할로(C_1-6 알킬)기로 치환된 술포닐 및 술파닐기를 지칭하며, 여기서 술포닐 및 술파닐은 본원에 정의된 바와 같다.

"헤테로아릴"은 방향족 고리에서 고리 원자로서 1개 내지 4개의 헤테로원자를 가지며 고리 원자의 나머지는 탄소 원자인 방향족기를 지칭한다. 본 발명의 화합물에 사용되는 적합한 헤테로원자는 질소, 산소 및 황이며, 여기서 질소 및 황 원자는 임의로 산화될 수 있다. 예시적인 헤테로아릴기는 5개 내지 14개의 고리 원자를 가지며, 예를 들어, 벤즈이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 디아자피닐, 푸라닐, 피라지닐, 피라졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 이미다졸릴, 인돌릴, 인다졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 티아졸릴, 티에닐 및 트리아졸릴이 포함된다.

"헤테로시클로알킬"은 본원에서 고리 구조에 1개 내지 5개, 보다 전형적으로 1개 내지 2개의 헤테로원자를 갖는 시클로알킬 치환기를 지칭한다. 본 발명의 화합물에 사용되는 적합한 헤테로원자는 질소, 산소 및 황이며, 여기서 질소 및 황 원자는 임의로 산화될 수 있다. 대표적인 헤테로시클로알킬 잔기에는 예를 들어, 모르폴리노, 피페라지닐, 피페리디닐 등이 포함된다.

"(C_1-6 알킬)헤테로시클로알킬"은 C_1-6 알킬기로 치환된 헤테로시클로알킬기를 지칭한다.

"헤테로시클로알킬카르보닐"은 본원에서 R¹⁰이 헤테로시클로알킬인 -C(O)-R¹⁰기를 지칭한다.

"(C_1-6 알킬)헤테로시클로알킬카르보닐"은 R¹¹이 (C_1-6 알킬)헤테로시클로알킬인 -C(O)-R¹¹기를 지칭한다.

"히드록시"는 -OH를 지칭한다.

"히드록시(C_1-6 알킬)"은 히드록시로 치환된 C_1-6 알킬기를 지칭한다.

"히드록시(C_1-6 알킬아미노카르보닐)"은 히드록시로 치환된 C_1-6 알킬아미노카르보닐기를 지칭한다.

"이미데이트" 또는 "이미데이트 에스테르"는 -C(=NH)O-기 또는 이러한 기를 함유하는 화합물을 지칭한다. 이미데이트 에스테르에는 예를 들어, 메틸 에스테르 이미데이트 -C(=NH)OCH₃가 포함된다.

"니트로"는 -NO₂를 지칭한다.

"술포닐"은 본원에서 -SO₂-기를 지칭한다.

"술파닐"은 본원에서 -S-기를 지칭한다. "알킬술포닐"은 R¹²가 알킬인 구조 -SO₂R¹²의 치환된 술파닐을 지칭한다. "알킬술파닐"은 R¹²가 알킬인 구조 -SR¹²의 치환된 술파닐을 지칭한다. 본 발명의 화합물에서 사용된 알킬술포닐 및 알킬술파닐기에는 (C_1-6 알킬)술포닐 및 (C_1-6 알킬)술파닐이 포함된다. 따라서, 전형적인 기에는 예를 들어, 메틸술포닐 및 메틸술파닐 (즉, R¹²는 메틸임), 에틸술포닐 및 에틸술파닐 (즉, R¹²는 에틸임), 프로필술포닐 및 프로필술파닐 (즉, R¹²는 프로필임) 등이 포함된다.

"히드록시 보호기"는 OH기에 대한 보호기를 지칭한다. 본원에 사용된 용어는 또한 산 COOH의 OH기의 보호를 지칭한다. 적합한 히드록시 보호기 뿐만 아니라 특정 관능기를 보호 및 탈보호하는 적합한 조건은 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 다수의 이러한 보호기는 문헌 [T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York, 1999]에 기재되어 있다. 이러한 히드록시 보호기에는 C_1-6 알킬 에테르, 벤질 에테르, p-메톡시벤질 에테르, 실릴 에테르 등이 포함된다.

"대사물질"은 모(parent) 화합물의 투여 후 대상체에서 생성되는 임의의 유도체를 지칭한다. 유도체는 대상체에서 다양한 생화학적 변형, 예를 들어 산화, 환원, 가수분해 또는 접합에 의해 모 화합물로부터 생성될 수 있으며, 예를 들어 옥시드 및 탈메틸화된 유도체가 포함된다. 이러한 유도체에 상응하는 대사물질은 또한 시험관내 방법에 의해 또는 합성적 방법을 통해 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 I 내지 IV의 화합물의 대사물질은 옥시드이다. 일부 측면에서, 옥시드는 화학식 I 내지 IV의 화합물을 산화제로 처리함으로써 합성적으로 형성된 N-옥시드이다. 일부 측면에서, 산화제는 N-메틸모르폴린 N-옥시드 또는 히드로퍼옥시드, 예를 들어 과산화수소이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I 내지 IV의 화합물은 글루쿠론산에 접합되어 대사물질을 형성한다. 또다른 측면에서, 하기 구조의 대사물질, 그의 호변이성질체 또는 입체이성질체가 제공된다.

"임의로 치환된" 또는 "치환된"은 하나 이상의 수소 원자를 1가 또는 2가의 라디칼로 치환한 것을 지칭한다.

치환된 치환기가 직쇄기를 포함할 경우, 치환은 쇄 내에서 일어나거나 (예를 들어, 2-히드록시프로필, 2-아미노부틸 등) 또는 쇄 말단에서 일어날 수 있다 (예를 들어, 2-히드록시에틸, 3-시아노프로필 등). 치환된 치환기는 공유 결합된 탄소 또는 헤테로원자의 직쇄, 분지형 또는 고리형 배열일 수 있다.

상기 정의는 허용될 수 없는 치환 패턴 (예를 들어, 5개의 플루오로기로 치환된 메틸 또는 또다른 할로겐 원자로 치환된 할로겐 원자)을 포함하려는 의도는 아니다. 이러한 허용될 수 없는 치환 패턴은 당업자에게 널리 공지되어 있다.

또한, 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 입체이성질체 및 다형체, 뿐만 아니라 이들 중 임의의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 대사물질 및 프로드러그를 포함하는 본 발명의 화합물은 호변이성질체화될 수 있으며, 따라서 분자 중 한 원자의 양성자가 또다른 원자로 이동되고, 결과적으로 상기 분자의 원자 사이의 화학 결합이 재배열된 다양한 호변이성질체 형태로 존재할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structures, Fourth Edition, John Wiley & Sons, pages 69-74 (1992)]을 참조한다. 본원에 사용된 용어 "호변이성질체"는 양성자 이동에 의해 생성될 수 있는 화합물을 지칭하며, 모든 호변이성질체 형태는 이들이 존재할 수 있는 한에 있어서 본 발명 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 하기에서 c가 1인 화학식 I의 화합물인 화학식 Ia의 화합물의 호변이성질체는 화학식 Ib의 화합물이다. 유사하게, 화학식 IVc의 화합물의 호변이성질체는 화학식 IVd 또는 화학식 IVe의 화합물이다.

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 입체이성질체 및 다형체, 뿐만 아니라 이들 중 임의의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 대사물질 및 프로드러그를 포함하는 본 발명의 화합물은 비대칭적으로 치환된 탄소 원자를 포함할 수 있다. 이러한 비대칭적으로 치환된 탄소 원자는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 절대 입체화학의 관점에서 정의될 수 있는 다른 입체이성질체 형태, 예를 들어 (R)- 또는 (S)-형태로 존재하는 본 발명의 화합물을 초래할 수 있다. 결과적으로, 모든 이러한 가능한 이성질체, 그의 광학적으로 순수한 형태의 개별 입체이성질체, 그의 혼합물, 라세미 혼합물 (또는 "라세미체"), 부분입체이성질체의 혼합물, 뿐만 아니라 본 발명의 화합물의 단일 부분입체이성질체는 본 발명에 포함된다. 본원에 사용된 용어 "S" 및 "R" 배향은 문헌 [IUPAC 1974 RECOMMENDATIONS FOR SECTION E, FUNDAMENTAL STEREOCHEMISTRY, Pure Appl. Chem. 45:13-30 (1976)]에 의해 정의된 바와 같다. 용어 α 및 β는 고리형 화합물의 고리 위치에 대해 사용된다. 참조 평면의 α-면은 더 낮은 번호의 위치에 바람직한 치환기가 놓인 면이다. 참조 평면의 반대면에 놓여 있는 치환기는 β라는 기재어로 표시된다. 상기 용법은 "α"는 "평면 아래"를 의미하며 절대 배향을 나타내는 고리형 입체모체에 대한 용법과는 상이하다는 것을 유념해야 한다. 본원에 사용된 용어 α 및 β 배향은 문헌 [CHEMICAL ABSTRACTS INDEX GUIDE-APPENDIX IV (1987) paragraph 203]에 의해 정의된 바와 같다.

또한, 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 입체이성질체 및 호변이성질체, 뿐만 아니라 이들 중 임의의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 대사물질 및 프로드러그를 포함하는 본 발명의 화합물은 구별되는 물성을 갖는 다양한 결정질 형태 (또는 "다형체")로 존재할 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다. 그의 대사물질, 프로드러그, 입체이성질체 및 호변이성질체를 포함하는 본 발명의 화합물, 뿐만 아니라 이들 중 임의의 제약상 허용되는 염의 모든 다형체는, 단리된 형태로 또는 그의 혼합물로 이들이 존재할 수 있는 한, 본 발명 내에 포함된다.

본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 무독성 산 또는 알칼리 토금속 염을 지칭한다. 상기 염은 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 계내에서 제조되거나, 염기 또는 산 관능기를 적합한 유기 또는 무기 산 또는 염기와 각각 개별 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 대표적인 염에는 하기 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 비술페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 디글루코네이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 푸마레이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로요오다이드, 2-히드록시에탄술포네이트, 락테이트, 말레에이트, 메탄술포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, p-톨루엔술포네이트 및 운데카노에이트가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 염기성 질소-함유기는 저급 알킬 할라이드, 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드; 디알킬 술페이트, 예를 들어 디메틸, 디에틸, 디부틸 및 디아밀 술페이트, 장쇄 할라이드, 예를 들어 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드, 페닐 알킬 할라이드, 예를 들어 벤질 및 페네틸 브로마이드 등과 같은 작용제로 사급화될 수 있다. 그에 의해 수용성 또는 지용성 또는 분산성 생성물이 수득된다.

제약상 허용되는 산 부가염을 형성하는데 사용될 수 있는 산의 예에는 무기산, 예를 들어 염산, 황산 및 인산, 및 유기산, 예를 들어 옥살산, 말레산, 메탄술 폰산, 숙신산 및 시트르산이 포함된다. 염기 부가염은 화학식 I의 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 계내에서 제조되거나, 카르복실산 잔기를 제약상 허용되는 금속 양이온의 히드록시드, 카르보네이트 또는 바이카르보네이트와 같은 적합한 염기와 개별 반응시키거나, 또는 암모니아 또는 유기 일차, 이차 또는 삼차 아민과 개별 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 제약상 허용되는 염에는 알칼리 및 알칼리 토금속 기재 양이온, 예를 들어 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄 염 등, 뿐만 아니라 무독성 암모늄, 사급 암모늄, 및 아민 양이온, 예를 들어 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등 (이에 제한되지는 않음)이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 염기 부가염의 형성에 유용한 다른 대표적인 유기 아민에는 디에틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진 등이 포함된다.

본 발명의 화합물의 염 및 제제는 또한 2006년 7월 21일자로 출원된 발명의 명칭이 "벤즈이미다졸 피리딜 에테르에 대한 제제" (미국 가출원 제60/832715호; 대리인 사건 번호 PP028237.0001), 및 2006년 8월 30일자로 출원된 발명의 명칭이 "벤즈이미다졸릴 피리딜 에테르의 염 및 그의 제제" (대리인 사건 번호 PP028258.0001)인 가출원에 개시되어 있으며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참고로 도입된다.

본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 에스테르"는 생체내에서 가수분해되는 에스테르를 지칭하며, 인체 내에서 용이하게 분해되어 모 화합물 또는 그의 염을 방출시키는 것들을 포함한다. 적합한 에스테르기에는 예를 들어 제약상 허용되는 지방족 카르복실산으로부터 유도된 것들, 특히 알칸산, 알켄산, 시클로알칸산 및 알칸디오산이 포함되며, 각각의 알킬 또는 알케닐 잔기는 유리하게는 6개 이하의 탄소 원자를 갖는다. 특정 에스테르의 예에는 포르메이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 부티레이트, 아크릴레이트 및 에틸숙시네이트가 포함된다.

본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 프로드러그"는 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극성, 알러지 반응 등이 없이 인간 또는 하등 동물의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합하고, 합리적인 이익/위험 비율과 적합하며, 그의 의도되는 용도에 효과적인 본 발명의 화합물의 프로드러그, 및 가능하다면 본 발명의 화합물의 쯔비터이온 형태를 지칭한다. 용어 "프로드러그"는 예를 들어 혈액에서의 가수분해에 의해 생체내에서 용이하게 변형되어 상기 화학식의 모 화합물을 생성하는 화합물을 지칭한다. 면밀한 논의는 문헌 [T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series] 및 [Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987]에 제공되며, 이들 둘다는 본원에 참고로 도입된다.

화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체 및 다형체, 뿐만 아니라 이들 중 임의의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 프로드러그를 포함하는 본 발명의 화합물은 체내 대사를 통해 생체내에서 가공되어, 효소 Raf 키나제의 억제제로서의 활성을 보유하는 약리학상 활성 대사물질을 생성할 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명의 화합물의 활성 대사물질은 당업계에 공지된 통상적인 기술을 이용하여 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Bertolini, G. et al., J. Med. Chem. 40:2011-2016 (1997)]; [Shan, D. et al., J. Pharm. Sci. 86(7):765-767]; [Bagshawe K., Drug Dev. Res. 34:220-230 (1995)]; [Bodor, N., Advances in Drug Res. 13:224-331 (1984)]; [Bundgaard, H., Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985)]; 및 [Larsen, I. K., Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991)]을 참조한다. 본 발명의 화합물의 모든 활성 대사물질은 본 발명 내에 포함됨을 이해해야 한다.

용어 "암"은 키나제, 특히 Raf 키나제의 억제에 의해 유익하게 치료될 수 있는 암 질환을 지칭하며, 예를 들어 고형암, 예를 들어 암종 (예를 들어, 폐, 췌장, 갑상선, 난소, 방광, 유방, 전립선 또는 결장의 암종), 흑색종, 골수양 장애 (예를 들어, 골수양 백혈병, 다발 골수종 및 적백혈병), 샘종 (예를 들어, 융모 결장 샘종) 및 육종 (예를 들어, 골육종)이 포함된다.

본 발명의 대표적인 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 예를 들어

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸페닐)-아민,

(2-플루오로-5-피리딘-3-일-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-피리딘-4-일-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(3-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(3-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-클로로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-클로로-3-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-플루오로-3-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메톡시-페닐)-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-(1-메틸-5-{2-[5-메틸-4-(3-트리플루오로메틸-페닐)-1H-이미다졸-2-일]-피리딘-4-일옥시}-1H-벤조이미다졸-2-일)-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-(1-메틸-5-{2-[5-메틸-4-(4-트리플루오로메틸-페닐)-1H-이미다졸-2-일]-피리딘-4-일옥시}-1H-벤조이미다졸-2-일)-아민,

2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 에틸 에스테르,

(2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-일)-메탄올,

2-{4-[1-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르보니트릴,

(3-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸술파닐-페닐)-아민,

(3-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

[4-플루오로-3-(테트라히드로-푸란-3-일)-페닐]-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-브로모-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-플루오로-3-이소프로필-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H- 벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸술파닐-페닐)-아민,

(2-플루오로-5-이소프로필-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(5-tert-부틸-2-플루오로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-클로로-4-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르보니트릴,

(5-tert-부틸-2-클로로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(4-페닐-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-클로로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(4-페닐-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(4-페닐-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥 시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(3-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(3-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(4-페닐-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(4-페닐-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-클로로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-메틸-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-클로로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-메틸-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-메틸-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-메틸-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(3-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(5-tert-부틸-2-플루오로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-메틸-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다 졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르복실산 메틸 에스테르,

2-{4-[2-(2-클로로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 에틸 에스테르,

(2-플루오로-4-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-클로로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2,5-디메톡시-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(3,5-디메톡시-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-[트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(2-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(2-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-에틸-피페라진-1-일)-(2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-일)-메타논,

2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르복실산 (2-히드록시-에틸)-아미드,

{1-에틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{6-메톡시-1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{6-메톡시-1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(4-에틸-피페라진-1-일)-(2-{4-[1-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-일)-메타논,

{1-에틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

2-{4-[1-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르복실산 (2-히드록시-에틸)-아미드,

2-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일아미노}-5-트리플루오로메틸-페놀, 및

3-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일아미노}-6-트리플루오로메틸-페놀;

또는 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다른 측면에서, 본 발명은 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물의 제조 방 법, 및 이러한 방법에 유용한 합성 중간체에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 하기에 상세히 기재된 바와 같은 화합물의 제조 방법, 및 이러한 방법에 유용한 합성 중간체에 관한 것이다.

합성 방법

반응식 1은 본 발명의 화합물의 중심 바이아릴 에테르 잔기의 제조를 설명한다. 화합물 1.1을 화합물 1.2 (L¹ 또는 L² 중 하나는 할로이고, L¹ 또는 L² 중 다른 하나는 OH임)와 반응시켜 에테르 1.3을 형성한다. 커플링은 아세토니트릴 또는 디메틸술폭시드와 같은 유기 용매 중에서 염기의 존재하에 수행될 수 있고, 또한 승온 또는 환류 온도에서 수행될 수 있다. 적합한 염기에는 K₂CO₃, CaCO₃, KOH, NaOH 또는 KF·Al₂O₃가 포함된다 (문헌 [Journal of Organic Chemistry, Vol. 63, No. 18, 1998 pgs. 6338-6343]). 화합물 1.1에서 Q기는 NH₂, 또는 아미노 전구체, 예를 들어 NO₂, 또는 차후에 아미노 전구체를 각각 환원시키거나 탈보호시켜 아민으로 전환시킬 수 있는 보호된 아미노기이다. 화합물 1.2에서 Z기는 1개 또는 2개의 R⁴기로 치환된 이미다졸릴기 또는 이러한 이미다졸릴기를 형성하는데 사용될 수 있는 관능기일 수 있다. 적합한 관능기에는 알데히드, 또는 차후에 알데히드로 전환될 수 있는 임의의 알데히드 전구체, 예를 들어 에스테르 또는 카르보니트릴이 포함된다. 에스테르 및 카르보니트릴기는 디이소부틸알루미늄 히드라이드와 같은 환원제 를 사용해 알데히드로 환원시킬 수 있다. Z는 또한 -CH₂OR⁵일 수 있으며, 여기서 R⁵는 히드록시 보호기이다. 알데히드는 차후 단계에서 R⁵기를 탈보호시키고, 생성된 알코올을 알데히드로 산화시킴으로써 드러날 수 있다. 알데히드를 치환된 이미다졸릴기로 전환시키는 것은 반응식 3에 나타나 있다. 치환된 이미다졸릴기를 형성하는 다른 방법은 반응식 6에 나타나 있다.

반응식 2는 특정 바이아릴 에테르의 합성의 예를 나타낸다. 예시의 목적으로, 반응식 2는 하기 치환 패턴을 이용함이 이해될 것이다: Q는 NO₂이고, L¹은 OH이고, L²는 Cl이고, Z는 t-부틸 에스테르이다. R²가 메틸이고, b가 0인 알데히드 2.7의 합성의 예는 실시예 1에 나타나 있다. 아민 2.1을 다수의 공지된 방법을 통해 알킬 아민 2.2으로 전환시킬 수 있다. 일 측면에서, 아민 2.1을 아세트산 무수물 및 포름산으로 처리하여 상응하는 포름아미드를 형성하며, 이를 알킬 아민 2.2으로 환원시킬 수 있다. 적합한 환원제에는 BF₃(OCH₂CH₃)₂의 존재하의 NaBH₄가 포함된다. 대안적으로, 알킬 아민 2.2은 아민 2.1을 트리플루오로아세트산 무수물과 반응시키고, 상응하는 아미드를 알킬 할라이드와 같은 알킬화제로 알킬화시키고, 트리플루 오로아세트아미드 보호기를 NaOH와 같은 염기 처리에 의해 제거함으로써 합성할 수 있다.

클로라이드 2.5는 피콜린산 2.3을 과량의 티오닐 클로라이드로 처리하여 산 클로라이드 2.4를 형성한 후, 이를 디-t-부틸 디카르보네이트 및 피리딘에 노출시켜 클로라이드 2.5를 수득함으로써 제조할 수 있다. 알킬 아민 2.2과 클로라이드 2.5를 염기성 조건하에 커플링시켜 에테르 2.6을 수득한 후, 이를 디이소부틸알루미늄 히드라이드로 직접 알데히드 2.7로 전환시키거나, 에스테르 2.6을 알코올로 환원시킨 후 알데히드로 산화시키는 2단계로 전환시킬 수 있다.

반응식 3은 이미다졸 고리의 형성을 설명한다. 알데히드 2.7을 화합물 3.1 (X^b는 =0 또는 =NH0H이고, R^4p 및 R^4q는 독립적으로 H 또는 R⁴이고, R⁴는 앞에서 정의 된 바와 같되, R^4p 및 R^4q 중 적어도 하나는 R⁴임)과 반응시킬 수 있다. 반응은 에틸 아세테이트/에탄올 혼합물과 같은 극성 용매 중에서, NH₄OH의 존재하에 수행하여 화합물 3.2를 수득할 수 있다. 화합물 3.2의 니트로기를 나트륨 디티오나이트 (Na₂S₂O₄)와 같은 환원제로 처리하여 아민 3.3으로 환원시킬 수 있다.

반응식 4는 벤즈이미다졸 고리의 형성을 설명한다. 디아민 3.3을 티오이소시아네이트 4.1과 반응시켜 티오우레아 4.2를 수득한다. 화합물 4.2를 탈황제로 처리하여 화학식 I의 화합물을 수득한다. 용어 "탈황제"는 폐환을 수행하는데 적합한 작용제를 지칭하며, 예를 들어 FeCl₃, 2-클로로-1-메틸피리디늄 요오다이드 (무까이야마(Mukaiyama) 시약), 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸륨 클로라이드, POCl₃, 또는 알킬 할라이드, 예를 들어 메틸 요오다이드가 포함된다. 변형된 무까이야마 시약을 또한 사용할 수 있다 (문헌 [Journal of Organic Chemistry, Vol. 70, No. 7, 2005 pgs. 2835-2838]).

본 발명의 화합물은 대안적으로 커플링 반응의 순서를 변형시킴으로써 합성할 수 있다. 반응식 5는 완전히 커플링된 펜타시클릭 코어를 형성하기 위한 끝에서 두번째의 반응으로서 화합물 5.1을 화합물 5.2와 커플링시켜 에테르 결합을 형성하는 것, 및 화합물 5.3을 화합물 3.1과 반응시켜 이미다졸 고리를 형성하는 것을 설명한다. 중간체 화합물 5.1 및 5.2에 대해, L³ 또는 L⁴ 중 하나는 할로이고, L³ 또는 L⁴ 중 다른 하나는 OH이다. 상기 중간체는 적합한 출발 물질 및/또는 보호기를 적당한 반응 순서로 사용하여 앞의 반응식에 나타난 바와 같이 제조할 수 있다. 이러한 인자는 당업자의 기술 범위 내이다. 알데히드 5.3은 예를 들어 실시예 71에 나타난 합성인 상응하는 카르보니트릴을 디이소부틸알루미늄 히드라이드로 환원시켜 제조할 수 있다. 상기 반응식 3에 따른 알데히드 5.3과 케톤 3.1을 반응시켜 화학식 I의 화합물을 수득한다.

트리아졸 말단기를 갖는 본 발명의 화합물은 하기 반응식 6에 나타난 바와 같이 Z가 카르보니트릴인 화합물 6.1을 히드라지드 6.2와 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 화합물 6.3의 합성의 예는 실시예 60에 기재되어 있다.

커플링 반응에 사용된 이미다졸 중간체는 다른 합성 경로를 이용하여 제조할 수 있음이 이해될 것이다. 이러한 방법 중 하나는 반응식 7에 나타나 있다. Z가 CN인 화합물 1.3을 Z가 아미디노기인 화합물로 전환시킨다. 이러한 변형은 화합물 1.3을 메톡시드와 같은 알콕시드와 반응시켜 카르보니트릴을 이미데이트 에스테르로 전환시킨 다음, 암모늄 아세테이트 또는 암모늄 벤조에이트와 같은 암모늄 시약 과 반응시켜 아미딘을 형성함으로써 수행할 수 있다. 아미딘과 화합물 Va (X^a는 이탈기임)를 반응시켜 알킬화되고 고리화된 화합물 7.2 또는 그의 호변이성질체를 수득한다. 화합물 7.2를 가열하여 물을 제거하고 (탈수반응), 중간체 7.3을 형성한다. 다른 탈수반응 조건은 화합물 7.2를 유기산, 예를 들어 아세트산, 메탄술폰산, 캄포르술폰산, 트리플루오로메탄술폰산 및 트리플루오로아세트산, 뿐만 아니라 무기산, 예를 들어 염산 및 황산으로 처리하는 것을 포함한다. 4가지 반응 - 이미데이트 에스테르의 형성, 아미딘의 형성, 알킬화/고리화 및 탈수반응 - 은 전형적으로 단일 반응기(one pot) 순서로 수행된다.

본 발명의 화합물은 암 세포 성장 억제에 있어서 시험관내 또는 생체내에서 유용하다. 화합물은 단독으로, 또는 제약상 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 조성물로 사용될 수 있다. 적합한 제약상 허용되는 담체 또는 부형제에는 예를 들어 가공제 및 약물 전달 개질제 및 증진제, 예를 들어, 인산칼슘, 스테아르산마그네슘, 활석, 단당류, 이당류, 전분, 젤라틴, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 덱스트로스, 히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 폴리비닐피롤 리돈, 저융점 왁스, 이온 교환 수지 등, 뿐만 아니라 이들 중 임의의 2종 이상의 조합이 포함된다. 다른 적합한 제약상 허용되는 부형제는 본원에 참고로 도입된 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Pub. Co., New Jersey (1991)]에 기재되어 있다.

본 발명의 화합물의 유효량은 일반적으로 본원에 기재된 임의의 분석에 의해, 또는 당업자에게 공지되어 있거나 용이하게 확인되는 다른 Raf 키나제 활성 분석에 의해, 또는 암의 증상의 억제 또는 경감을 검출함으로써, Raf 활성을 검출가능하게 억제하는데 충분한 임의의 양을 포함한다.

담체 물질과 조합되어 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 다양할 것이다. 하지만, 임의의 특정 환자에 대한 특정 투여량 수준은 사용되는 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 투여 경로, 배설 경로, 약물 조합 및 요법을 받는 특정 질환의 중증도를 비롯한 다양한 인자에 의존할 것임이 이해될 것이다. 주어진 상황에 대한 치료 유효량은 통상적인 실험에 의해 용이하게 결정될 수 있으며, 통상적인 임상의의 기술 및 판단의 범위 내에 있다.

본 발명의 목적을 위해, 치료 유효 투여량은 일반적으로 단일 또는 분할 투여량으로 숙주에게 투여되는 총 일일 투여량일 것이며, 예를 들어 일일 0.001 내지 1000 mg/kg 체중 및 일일 1.0 내지 30 mg/kg 체중일 수 있다. 투여 단위 조성물은 일일 투여량을 구성하는 그의 하위다회의 이러한 투여량을 함유할 수 있다.

본 발명의 화합물은 경구, 비경구, 설하, 에어로졸 또는 흡입 스프레이에 의 해, 직장, 또는 국소로, 원할 경우 통상적인 무독성 제약상 허용되는 담체, 보조제 및 비히클을 함유하는 단위 투여 제제로 투여될 수 있다. 국소 투여는 또한 경피 패치 또는 이온이동 장치와 같은 경피 투여의 사용을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 비경구라는 용어에는 피하 주사, 정맥내, 근육내, 복장내 주사, 또는 주입 기술이 포함된다.

주사가능한 제제, 예를 들어 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 현탁액제는 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 이용하여 당업계에 공지된 바에 따라 제제화될 수 있다. 멸균 주사가능한 제제는 또한 무독성 비경구 허용되는 희석제 또는 용매 중 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액, 예를 들어 1,3-프로판디올 중 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거 용액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균, 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디-글리세라이드를 비롯한 임의의 블랜드 고정 오일이 사용될 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산은 주사가능한 제제에서 용도가 발견된다.

약물의 직장 투여용의 좌제는 통상적인 온도에서는 고체이지만 직장 온도에서는 액체이고, 따라서 직장에서 용해되고 약물을 방출시키는, 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 무자극성 부형제와 약물을 혼합함으로써 제조될 수 있다.

경구 투여용의 고체 투여 형태에는 캡슐제, 정제, 환제, 산제 및 과립제가 포함될 수 있다. 이러한 고체 투여 형태에서, 활성 화합물은 수크로스, 락토스 또 는 전분과 같은 1종 이상의 불활성 희석제와 혼합될 수 있다. 이러한 투여 형태는 또한 통상적인 실시에서와 같이 불활성 희석제 이외의 추가의 물질, 예를 들어 스테아르산마그네슘과 같은 윤활제를 포함할 수 있다. 캡슐제, 정제 및 환제의 경우, 투여 형태는 또한 완충제를 포함할 수 있다. 정제 및 환제는 추가로 장용 코팅으로 제조될 수 있다.

경구 투여용의 액체 투여 형태에는 당업계에 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예를 들어 물을 함유하는 제약상 허용되는 에멀젼제, 용액제, 현탁액제, 시럽제 및 엘릭시르제가 포함될 수 있다. 이러한 조성물은 또한 보조제, 예를 들어 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 시클로덱스트린 및 감미제, 향미제 및 방향제를 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 리포좀의 형태로 투여될 수 있다. 당업계에 공지된 바와 같이, 리포좀은 일반적으로 인지질 또는 다른 지질 물질로부터 유도된다. 리포좀은 수성 매질에 분산된 단층 또는 다층 수화된 액체 결정체에 의해 형성된다. 리포좀을 형성할 수 있는 임의의 무독성, 생리학상 허용되고 대사가능한 지질이 사용될 수 있다. 리포좀 형태의 본 발명의 조성물은 본 발명의 화합물 이외에 안정화제, 보존제, 부형제 등을 함유할 수 있다. 바람직한 지질은 인지질 및 포스파티딜 콜린 (레시틴)이며, 천연 및 합성 둘다이다. 리포좀을 형성하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N. W., p. 33 etseq. (1976)]을 참조한다.

본 발명의 화합물은 단독 활성 제약제로서 투여될 수 있지만, 또한 암의 치료에 사용되는 1종 이상의 다른 작용제와 조합으로 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 공지된 치료제 및 항암제와 조합으로도 유용하며, 본원에 개시된 화합물과 다른 항암제 또는 화학요법제의 조합은 본 발명의 범위 내에 있다. 이러한 작용제의 예는 문헌 [Cancer Principles and Practice of Oncology, V. T. Devita and S. Hellman (editors), 6^th edition (Feb. 15, 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers]에서 발견될 수 있다. 당업자는 약물의 특정한 특징 및 관여하는 암에 기초하여 작용제의 조합이 유용할 것인지 식별할 수 있을 것이다. 이러한 항암제에는 하기 에스트로겐 수용체 조절제, 안드로겐 수용체 조절제, 레티노이드 수용체 조절제, 세포독성제/세포활동억제제, 항증식제, 페닐-단백질 트랜스퍼라제 억제제, HMG-CoA 리덕타제 억제제 및 다른 혈관신생 억제제, 세포 증식 및 생존 신호전달의 억제제, 아폽토시스 유도제, 및 세포 주기 검사점을 간섭하는 작용제가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 화합물은 방사선 요법과 공동-투여될 경우에도 유용하다.

따라서, 본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 또한 공지된 항암제, 예를 들어 에스트로겐 수용체 조절제, 안드로겐 수용체 조절제, 레티노이드 수용체 조절제, 세포독성제, 항증식제, 프레닐-단백질 트랜스퍼라제 억제제, HMG-CoA 리덕타제 억제제, HIV 프로테아제 억제제, 역전사효소 억제제 및 다른 혈관신생 억제제와 조합으로 사용된다.

에스트로겐 수용체 조절제는 메카니즘에 상관 없이 수용체에의 에스트로겐의 결합을 간섭하거나 억제하는 화합물이다. 에스트로겐 수용체 조절제의 예에는 타목시펜, 랄록시펜, 이독시펜, LY353381, LY117081, 토레미펜, 풀베스트란트, 4-[7-(2,2-디메틸-1-옥소프로폭시-4-메틸-2-[4-[2-(1-피페리디닐)에톡시]페닐]-2H-1-벤조피란-3-일]-페닐-2,2-디메틸-프로파노에이트, 4,4'-디히드록시벤조페논-2,4-디니트로페닐-히드라존 및 SH646이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.

안드로겐 수용체 조절제는 안드로겐 수용체에의 안드로겐의 결합을 간섭하거나 방해하는 화합물이다. 안드로겐 수용체 조절제의 대표적인 예에는 피나스테리드 및 다른 5α-리덕타제 억제제, 닐루타미드, 플루타미드, 비칼루타미드, 리아로졸 및 아비라테론 아세테이트를 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 레티노이드 수용체 조절제는 레티노이드 수용체에의 레티노이드의 결합을 간섭하거나 억제하는 화합물이다. 레티노이드 수용체 조절제의 예에는 벡사로텐, 트레티노인, 13-시스-레티노산, 9-시스-레티노산, α-디플루오로메틸오르니틴, LX23-7553, 트랜스-N-(4'-히드록시페닐) 레틴아미드 및 N4-카르복시페닐 레틴아미드가 포함된다.

세포독성제 및/또는 세포증식억제제는 세포 사멸을 유발하거나, 주로 세포의 기능화를 직접적으로 억제함으로써 세포 증식을 억제하거나, 세포 유사분열을 억제 또는 간섭하는 화합물이며, 알킬화제, 종양 괴사 인자, 인터칼레이터, 저산소 활성화성 화합물, 미세소관 억제제/미세소관-안정화제, 유사분열 키네신의 억제제, 유사분열 진행에 관여하는 키나제의 억제제, 항대사물질; 생물학적 반응 개질제; 호르몬/항-호르몬 치료제, 조혈 성장 인자, 모노클로날 항체 표적 치료제, 토포이소 머라제 억제제, 프로테아좀 억제제 및 유비퀴틴 리가제 억제제가 포함된다. 세포독성제의 예에는 세르테넵, 카켁틴, 이포스파미드, 타소네르민, 로니다민, 카르보플라틴, 알트레타민, 프레드니무스틴, 디브로모둘시톨, 라니무스틴, 포테무스틴, 네다플라틴, 옥살리플라틴, 테모졸로미드, 헵타플라틴, 에스트라무스틴, 임프로술판 토실레이트, 트로포스파미드, 니무스틴, 디브로스피듐 클로라이드, 푸미테파, 로바플라틴, 사트라플라틴, 프로피로마이신, 시스플라틴, 이로풀벤, 덱시포스파미드, 시스-아민디클로로(2-메틸-피리딘)플래티늄, 벤질구아닌, 글루포스파미드, GPX1OO, (트랜스, 트랜스, 트랜스)-비스-뮤-(헥산-1,6-디아민)-뮤-디아민-플래티늄(II)]비스[디아민(클로로)플래티늄 (II)]테트라클로라이드, 디아리지디닐스페르민, 아르세닉 트리옥시드, 1-(11-도데실아미노-10-히드록시운데실)-3,7-디메틸크산틴, 조루비신, 이다루비신, 다우노루비신, 비산트렌, 미토크산트론, 피라루비신, 피나피드, 발루비신, 암루비신, 안티네오플라스톤, 3'-데아미노-3'-모르폴리노-13-데옥소-1O-히드록시카르미노마이신, 안나마이신, 갈라루비신, 엘리나피드, MEN10755 및 4-데메톡시-3-데아미노-3-아지리디닐-4-메틸술포닐-다우노루비신 (WO 00/50032 참조)이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 저산소 활성화성 화합물의 대표적인 예는 티라파자민이다. 프로테아좀 억제제에는 락타시스틴 및 보르테조밉이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 미세소관 억제제/미세소관-안정화제의 예에는 파클리탁셀, 빈데신 술페이트, 3',4'-디데히드로-4'-데옥시-8'-노르빈카류코블라스틴, 도세탁솔, 리족신, 돌라스타틴, 미보불린 이세티오네이트, 아우리스타틴, 세마도틴, RPR109881, BMS184476, 빈플루닌, 크립토피신, 2,3,4,5,6-펜타플 루오로-N-(3-플루오로4-메톡시페닐) 벤젠 술폰아미드, 언히드로빈블라스틴, N,N-디메틸-L-발릴-L-바릴-N-메틸-L-발릴-L-프로필-L-프롤린-t-부틸아미드, TDX258, 에포틸론 (예를 들어 미국 특허 제6,284,781호 및 제6,288,237호 참조) 및 BMS188797이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 토포이소머라제 억제제의 대표적인 예에는 토포테칸, 히캅타민, 이리노테칸, 루비테칸, 6-에톡시프로피오닐-3',4'-엑소-벤질리덴-카르트류신, 9-메톡시-N,N-디메틸-5-니트로피라졸로[3,4,5-kl]아크리딘-2-(6H) 프로판아민, 1-아미노-9-에틸-5-플루오로-2,3-디히드로-9-히드록시-4-메틸-1H,12H-벤조[데]피라노[3',4':b,7]-인돌리지노[1,2b]퀴놀린-10513(9H,15H)디온, 루르토테칸, 7-[2-(N-이소프로필아미노)에틸]-(20S)캄프토테신, BNP1350, BNPI11OO, BN80915, BN80942, 에토포시드 포스페이트, 테니포시드, 소부족산, 2'-디메틸아미노-2'-데옥시-에토포시드, GL331, N-[2-(디메틸아미노)에틸]-9-히드록시-5,6-디메틸-6H-피리도[4,3-b]카르바졸-1-카르복스아미드, 아술라크린, (5a, 5aB, 8aa, 9b)-9-[2-[N-[2-(디메틸아미노)에틸]-N-메틸아미노]에틸]-5-[4-히드록시-3,5-디메톡시페닐]-5,5a,6,8,8a,9-헥사히드로푸로(3',4':6,7)나프토(2,3-d)-1,3-디옥솔-6-온, 2,3-(메틸렌-디옥시)-5-메틸-7-히드록시-8-메톡시벤조[c]-페난트리디늄, 6,9-비스[(2-아미노-에틸)아미노]벤조[g]이소퀴놀린-5,10-디온, 5-(3-아미노프로필아미노)-7,10-디히드록시-2-(2-히드록시에틸아미노메틸)-6H-피라졸로[4,5,1'-데]아크리딘-6-온, N-[1-[2(디에틸아미노)-에틸아미노]-7-메톡시-9-옥소-9H-트오크산텐-4-일메틸]포름아미드, N-(2-(디메틸아미노)에틸)아크리딘-4-카르복스아미드, 6-[[2-(디메틸아미노)에틸]아미노]-3-히드록시-7H-인데노[2,1-c]퀴놀린-7-온 및 디메스나가 포함된다. 유사분열 키네신, 예를 들어 인간 유사분열 키네신 KSP의 억제제는 PCT 공개 WO 01/30768 및 WO 01/98278, WO 03/050,064 (2003년 6월 19일자), WO 03/050,122 (2003년 6월 19일자), WO 03/049,527 (2003년 6월 19일자), WO 03/049,679 (2003년 6월 19일자), WO 03/049,678 (2003년 6월 19일자) 및 WO 03/39460 (2003년 5월 15일자) 및 계류중인 PCT 출원 US03/06403 (2003년 3월 4일자 출원), US03/15861 (2003년 5월 19일자 출원), US03/15810 (2003년 5월 19일자 출원), US03/18482 (2003년 6월 12일자 출원) 및 US03/18694 (2003년 6월 12일자 출원)에 기재되어 있다. 일 실시양태에서, 유사분열 키네신의 억제제에는 KSP의 억제제, MKLP1의 억제제, CENP-E의 억제제, MCAK의 억제제, Kif14의 억제제, M포스포1의 억제제 및 Rab6-KIFL의 억제제가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.

유사분열 진행에 관여하는 키나제의 억제제에는 오로라 키나제의 억제제, 폴로-유사 키나제 (PLK)의 억제제 (예를 들어, PLK-1의 억제제), bub-1의 억제제 및 bub-R1의 억제제가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 항증식제에는 안티센스 RNA 및 DNA 올리고뉴클레오티드, 예를 들어 G3139, ODN698, RVASKRAS, GEM231 및 INX3001, 및 항대사물질, 예를 들어 에노시타빈, 카르모푸어, 테가푸어, 펜토스타틴, 독시플루리딘, 트리메트렉세이트, 플루다라빈, 카페시타빈, 갈로시타빈, 시타라빈 옥포스페이트, 포스테아빈 소듐 히드레이트, 랄티트렉시드, 팔티트렉시드, 에미테푸어, 티아조푸린, 데시타빈, 놀라트렉시드, 페메트렉시드, 넬자라빈, 2'-데옥시-2'-메틸리덴시티딘, 2'-플루오로메틸렌-2'-데옥시시티딘, N-[5-(2,3-디히드로-벤조푸릴)술포닐]-N'-(3,4-디클로로페닐)우레아, N6-[4-데옥시-4-[N2-[2(E),4(E)- 테트라데카디에노일]글리실아미노]-L-글리세로-B-L-만노-헵토피라노실] 아데닌, 아플리딘, 엑테이나시딘, 트록사시타빈, 4-[2-아미노-4-옥소-4,6,7,8-테트라히드로-3H-피리미디노[5,4-b][1,4]티아진-6-일-(S)-에틸]-2,5-티에노일-L-글루탐산, 아미노프테린, 5-플루오로우라실, 알라노신, 11-아세틸-8-(카르바모일옥시메틸)-4-포르밀-6-메톡시-14-옥사-1,1-디아자테트라시클로(7.4.1.0.0)-테트라데카-2,4,6-트리엔-9-일 아세트산 에스테르, 스와인소닌, 로메트렉솔, 덱스라족산, 메티오니나제, 2'-시아노-2'-데옥시-N4-팔미토일-1-B-D-아라비노 푸라노실 시토신 및 3-아미노피리딘-2-카르복스알데히드 티오세미카르바존이 포함된다. 모노클로날 항체 표적 치료제의 예에는 암 세포 특이적 또는 표적 세포 특이적 모노클로날 항체에 부착된 세포독성제 또는 방사성동위원소를 갖는 치료제가 포함된다. 그 예에는 예를 들어 벡사르(Bexxar)가 포함된다. HMG-CoA 리덕타제 억제제는 3-히드록시-3-메틸글루타릴-CoA 리덕타제의 억제제이다. HMG-CoA 리덕타제에 대한 억제 활성을 갖는 화합물은 미국 특허 제4,231,938호 및 WO 84/0213에 기재되거나 인용된 것과 같은 당업계에 널리 공지된 분석에 의해 용이하게 확인할 수 있다. HMG-CoA 리덕타제 억제제의 예에는 로바스타틴 (메바콜(MEVACOR)(등록상표); 미국 특허 제4,231,938호, 제4,294,926호 및 제4,319,039호 참조), 심바스타틴 (조콜(ZOCOR)(등록상표); 미국 특허 제4,444,784호, 제4,820,850호 및 제4,916,239호 참조), 프라바스타틴 (프라바콜(PRAVACHOL)(등록상표); 미국 특허 제4,346,227호, 제4,537,859호, 제4,410,629호, 제5,030,447호 및 제5,180,589호 참조), 플루바스타틴 (레스콜(LESCOL)(등록상표); 미국 특허 제5,354,772호, 제4,911,165호, 제4,929,437호, 제5,189,164호, 제5,118,853호, 제5,290,946호 및 제5,356,896호 참조) 및 아트로바스타틴 (리피톨(LIPITOR)(등록상표); 미국 특허 제5,273,995호, 제4,681,893호, 제5,489,691호 및 제5,342,952호 참조)이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 상기 및 추가의 HMG-CoA 리덕타제 억제제의 구조식은 문헌 [M. Yalpani, "Cholesterol Lowering Drugs", Chemistry & Industry, pp. 85-89 (5 Feb. 1996]의 제87면) 및 미국 특허 제4,782,084호 및 제4,885,314호에 기재되어 있다. 일 실시양태에서, HMG-CoA 리덕타제 억제제는 로바스타틴 및 심바스타틴으로부터 선택된다.

프레닐-단백질 트랜스퍼라제 억제제는 파르네실-단백질 트랜스퍼라제 (FPTase), 게라닐게라닐-단백질 트랜스퍼라제 제I형 (GGPTase-I) 및 게라닐게라닐-단백질 트랜스퍼라제 type-II (GGPTase-II, Rab GGPTase로도 지칭됨)을 비롯한, 프레닐-단백질 트랜스퍼라제 효소 중 임의의 1종 또는 임의의 조합을 억제하는 화합물이다. 프레닐-단백질 트랜스퍼라제 억제 화합물의 예에는 (±)-6-[아미노(4-클로로페닐)(1-메틸-1H-이미다졸-5-일)메틸]-4-(3-클로로페닐)-1-메틸-2(1H)-퀴놀리논, (-)-6-[아미노(4-클로로페닐)(1-메틸-1H-이미다졸-5-일)메틸]-4-(3-클로로페닐)-1-메틸-2(1H)-퀴놀리논, (+)-6-[아미노(4-클로로페닐)(1-메틸-1H-이미다졸-5-일)메틸]-4-(3-클로로페닐)-1-메틸-2(1H)-퀴놀리논, 5(S)-n-부틸-1-(2,3-디메틸페닐)-4-[1-(4-시아노벤질)-5-이미다졸리닐메틸-2-피페라지논, (S)-1-(3-클로로페닐)-4-[1-(4-시아노벤질)-5-이미다졸릴메틸]-5-[2-(에탄술포닐)메틸)-2-피페라지논, 5(S)-n-부틸-1-(2-메틸페닐)-4-[1-(4-시아노벤질)-5-이미다졸릴메틸]-2-피페라 지논, 1-(3-클로로페닐)-4-[1-(4-시아노벤질)-2-메틸-5-이미다졸릴메틸]-2-피페라지논, 1-(2,2-디페닐에틸)-3-[N-(1-(4-시아노벤질)-1H-이미다졸-5-일에틸)카르바모일]피페리딘, 4-{-[4-히드록시메틸-4-(4-클로로피리딘-2-일메틸)-피페리딘-1-일메틸]-2-메틸이미다졸-1-일메틸}벤조니트릴, 4-{-5-[4-히드록시메틸-4-(3-히드록시메틸)-피페리딘-1-일메틸]-2-메틸이미다졸-1-일메틸}-벤조니트릴, 4-{3-[4-(2-옥소-2H-피리딘-1-일)벤질]-3H-이미다졸-4-일메틸}벤조니트릴, 4-{3-[4-(5-클로로-2-옥소-2H-[1,2']비피리딘-5'-일메틸]-3H-이미다졸-4-일-메틸}벤조니트릴, 4-{3-[4-(2-옥소-2H-[1,2']비피리딘-5'-일메틸]-3H-이미다졸-4-일-메틸}벤조니트릴, 4-[3-(2-옥소-1-페닐-1,2-디히드로피리딘-4-일메틸)-3H-이미다졸-4-일메틸}벤조니트릴, 18,19-디히드로-19-옥소-5H,17H-6,10:12,16-디메테노-1H-이미다조[4,3-c][1,11,4]디옥사아자시클로-노나데신-9-카르보니트릴, (±)-19,20-디히드로-19-옥소-5H-18,21-에타노-12,14-에타노-6,10-메타노-22H-벤조[d]이미다조[4,3-k]-[1,6,9,12]옥사트리아조-시클로옥타데신-9-카르보니트릴, 19,20-디히드로-19-옥소-5H,17H-18,21-에타노-6,10:12,16-디메테노-22H-이미다조[3,4-h][1,8,11,14]옥사트리아자시클로에이코신-9-카르보니트릴 및 (±)-19,20-디히드로-3-메틸-19-옥소-5H-18,21-에타노-12,14-에타노-6,10-메테노-22H-벤조[d]이미다조[4,3-k][1,6,9,12]옥사-트리아자시클로옥타데신-9-카르보니트릴이 포함된다. 프레닐-단백질 트랜스퍼라제 억제제의 다른 예는 하기 공보 및 특허: WO 96/30343, WO 97/18813, WO 97/21701, WO 97/23478, WO 97/38665, WO 98/28980, WO 98/29119, WO 95/32987, 미국 특허 제5,420,245호, 미국 특허 제5,523,430호, 미국 특허 제5,532,359호, 미국 특허 제 5,510,510호, 미국 특허 제5,589,485호, 미국 특허 제5,602,098호, 유럽 특허 공보 0 618 221, 유럽 특허 공보 0 675 112, 유럽 특허 공보 0 604 181, 유럽 특허 공보 0 696 593, WO 94/19357, WO 95/08542, WO 95/11917, WO 95/12612, WO 95/12572, WO 95/10514, 미국 특허 제5,661,152호, WO 95/10515, WO 95/10516, WO 95/24612, WO 95/34535, WO 95/25086, WO 96/05529, WO 96/06138, WO 96/06193, WO 96/16443, WO 96/21701, WO 96/21456, WO 96/22278, WO 96/24611, WO 96/24612, WO 96/05168, WO 96/05169, WO 96/00736, 미국 특허 제5,571,792호, WO 96/17861, WO 96/33159, WO 96/34850, WO 96/34851, WO 96/30017, WO 96/30018, WO 96/30362, WO 96/30363, WO 96/31111, WO 96/31477, WO 96/31478, WO 96/31501, WO 97/00252, WO 97/03047, WO 97/03050, WO 97/04785, WO 97/02920, WO 97/17070, WO 97/23478, WO 97/26246, WO 97/30053, WO 97/44350, WO 98/02436 및 미국 특허 제5,532,359호에서 발견될 수 있다. 프레닐-단백질 트랜스퍼라제 억제제의 혈관신생에 대한 효과의 예를 위해, 문헌 [European J. of Cancer 55(9):1394-1401 (1999)]을 참조한다.

혈관신생 억제제는 메카니즘에 상관 없이 새로운 혈관의 형성을 억제하는 화합물을 지칭한다. 혈관신생 억제제의 예에는 티로신 키나제 억제제, 예를 들어 티로신 키나제 수용체 Flt-1 (VEGFR1) 및 Flk-1/KDR (VEGFR2)의 억제제, 상피-유래, 섬유모세포-유래, 또는 혈소판-유래 성장 인자의 억제제, MMP (매트릭스 메탈로프로테아제) 억제제, 인테그린 차단제, 인터페론-알파, 인터루킨-12, 펜토산 폴리술페이트, 시클로옥시게나제 억제제, 예를 들어 비스테로이드성 항염증제 (NSAID), 예를 들어 아스피린 및 이부프로펜, 뿐만 아니라 선택적 시클로옥시게나제-2 억제 제, 예를 들어 셀레콕시브 및 로페콕시브 ([PNAS 89:7384 (1992)]; [JNCI 69:475 (1982)]; [Arch. Ophthalmol. 108:573 (1990)]; [Anat. Rec, (238):68 (1994)]; [FEBS Letters 372:83 (1995)]; [Clin, Orthop. 313:76 (1995)]; [J Mol Endocrinol. 16:107 (1996)]; [Jpn. J. Pharmacol. 75:105 (1997)]; [Cancer Res. 57:1625 (1997)]; [Cell 93:705 (1998)]; [Intl. J. Mol. Med. 2:715 (1998)]; [J Biol. Chem. 274:9116 (1999)]), 스테로이드성 항염증제 (예를 들어, 코르티코스테로이드, 미네랄코르티코이드, 덱사메타손, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드, 베타메타손), 카르복시아미도트리아졸, 콤브레타스타틴 A4, 스쿠알라민, 6-O-클로로아세틸-카르보닐)-푸마길롤, 탈리도미드, 안지오스타틴, 트로포닌-1, 안지오스타틴 II 길항제 (문헌 [Fernandez et al., J. Lab. Clin. Med. 105:141-145 (1985)] 참조) 및 VEGF에 대한 항체 (문헌 [Nature Biotechnology, 17:963-968 (October 1999)]; [Kim et al., Nature, 362:841-844 (1993)]; WO 00/44777; 및 WO 00/61186 참조)가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 혈관신생을 조절하거나 억제하고 또한 본 발명의 화합물과 조합으로 사용될 수 있는 다른 치료제에는 응고 및 섬유소용해 시스템을 조절하거나 억제하는 작용제가 포함된다 (문헌 [Clin. Chem. La. Med. 38:679-692 (2000)]의 검토 참조). 응고 및 섬유소용해 경로를 조절하거나 억제하는 이러한 작용제의 예에는 헤파린 (문헌 [Thromb. Haemost. 80:10-23 (1998)] 참조), 저분자량 헤파린 및 카르복시펩티다제 U 억제제 (활성 트롬빈 활성화성 섬유소용해 억제제 [TAFIa]로도 지칭됨) (문헌 [Thrombosis Res. 101:329-354 (2001)] 참조)이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. TAFIa 억제제는 PCT 공보 WO 03/013,526 및 미국 출원 제60/349,925호 (2002년 1월 18일자 출원)에 기재되었다. 본 발명은 또한 선택적 COX-2 억제제 (일반적으로, 세포 또는 마이크로좀 분석에 의해 평가된, COX-1에 대한 IC₅₀에 비해 COX-2에 대한 IC₅₀의 비율에 의해 측정된 바와 같이, 100배 이상으로 COX-1에 비해 COX-2를 억제하는 특이성을 갖는 것들로 정의됨)인 NSAID와 본 발명의 화합물의 조합을 포함한다. 본 발명은 또한 선택적 COX-2 억제제인 NSAID와 본 발명의 화합물의 조합을 포함한다. 이러한 화합물에는 미국 특허 제5,474,995호 (1995년 12월 12일자로 허여), 미국 특허 제5,861,419호 (1999년 1월 19일자로 허여), 미국 특허 제6,001,843호 (1999년 12월 14일자로 허여), 미국 특허 제6,020,343호 (2000년 2월 1일자로 허여), 미국 특허 제5,409,944호 (1995년 4월 25일자로 허여), 미국 특허 제5,436,265호 (1995년 7월 25일자로 허여), 미국 특허 제5,536,752호 (1996년 7월 16일자로 허여), 미국 특허 제5,550,142호 (1996년 8월 27일자로 허여), 미국 특허 제5,604,260호 (1997년 2월 18일자로 허여), 미국 특허 제5,698,584호 (1997년 12월 16일자로 허여), 미국 특허 제5,710,140호 (1998년 1월 20일자로 허여), WO 94/15932 (1994년 7월 21일자로 공개), 미국 특허 제5,344,991호 (1994년 6월 6일자로 허여), 미국 특허 제5,134,142호 (1992년 7월 28일자로 허여), 미국 특허 제5,380,738호 (1995년 1월 10일자로 허여), 미국 특허 제5,393,790호 (1995년 2월 20일자로 허여), 미국 특허 제5,466,823호 (1995년 11월 14일자로 허여), 미국 특허 제5,633,272호 (1997년 5월 27일자로 허여) 및 미국 특허 제5,932,598호 (1999년 8월 3일자로 허여) (이들 모두는 본원에 참고로 도입됨)에 개시된 것들이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 방법에 유용한 대표적인 COX-2의 억제제에는 3-페닐-4-(4-(메틸술포닐)페닐)-2-(5H)-푸라논; 및 5-클로로-3-(4-메틸술포닐)페닐-2-(2-메틸-5-피리디닐)피리딘이 포함된다. COX-2의 특이적 억제제로서 기재되며 따라서 본 발명에 유용한 화합물 및 그의 합성 방법은 본원에 참고로 도입된 하기 특허, 계류중인 출원 및 공보에서 발견될 수 있다: WO 94/15932 (1994년 7월 21일자로 공개), 미국 특허 제5,344,991호 (1994년 6월 6일자로 허여), 미국 특허 제5,134,142호 (1992년 7월 28일자로 허여), 미국 특허 제5,380,738호 (1995년 1월 10일자로 허여), 미국 특허 제5,393,790호 (1995년 2월 20일자로 허여), 미국 특허 제5,466,823호 (1995년 11월 14일자로 허여), 미국 특허 제5,633,272호 (1997년 5월 27일자로 허여), 미국 특허 제5,932,598호 (1999년 8월 3일자로 허여), 미국 특허 제5,474,995호 (1995년 12월 12일자로 허여), 미국 특허 제5,861,419호 (1999년 1월 19일자로 허여), 미국 특허 제6,001,843호 (1999년 12월 14일자로 허여), 미국 특허 제6,020,343호 (2000년 2월 1일자로 허여), 미국 특허 제5,409,944호 (1995년 4월 25일자로 허여), 미국 특허 제5,436,265호 (1995년 7월 25일자로 허여), 미국 특허 제5,536,752호 1996년 7월 16일자로 허여), 미국 특허 제5,550,142호 (1996년 8월 27일자로 허여), 미국 특허 제5,604,260호 (1997년 2월 18일자로 허여), 미국 특허 제5,698,584호 (1997년 12월 16일자로 허여) 및 미국 특허 제5,710,140호 (1998년 1월 20일자로 허여). 혈관신생 억제제의 다른 예에는 엔도스타틴, 우크라인, 란피르나제, IM862, 5-메톡시-4-[2-메틸-3-(3-메틸-2-부테닐)옥시라닐]-1-옥사스피로[2,5]옥트- 6-일(클로로아세틸)카르바메이트, 아세틸딘알라닌, 5-아미노-1-[[3,5-디클로로-4-(4-클로로벤조일)페닐]메틸]-1H-1,2,3-트리아졸-4-카르복스아미드, CM101, 스쿨알라민, 콤브레타스타틴, RPI4610, NX31838, 술페이트화 만노펜타오스 포스페이트, 7,7-(카르보닐-비스[이미노-N-메틸-4,2-피롤로카르보닐이미노[N-메틸-4,2-피롤]-카르보닐이미노]-비스-(1,3-나프탈렌 디술포네이트) 및 3-[(2,4-디메틸피롤-5-일)메틸렌]-2-인돌리논 (SU5416)이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.

세포 주기 점검점을 간섭하는 작용제는 세포 주기 점검점 신호를 유도하는 단백질 키나제를 억제함으로써 암 세포를 DNA 손상제에 감작화시키는 화합물이다. 이러한 작용제에는 ATR, ATM, Chk1 및 Chk2 키나제의 억제제 및 cdk 및 cdc 키나제 억제제, 구체적으로 7-히드록시스타우로스포린, 플라보피리돌, CYC202 (시클라셀(Cyclacel)) 및 BMS-387032로 예시된다.

세포 증식 및 생존 신호전달 경로의 억제제는 표면 수용체의 하류에서 세포 표면 수용체 및 신호 전달 캐스케이드를 억제하는 약제이다. 이러한 작용제에는 EGFR의 억제제 (예를 들어 게피니티닙 및 에를로티닙), ERB-2의 억제제 (예를 들어 트라스투주맙), IGFR의 억제제, 사이토킨 수용체의 억제제, MET5의 억제제, PI3K의 억제제 (예를 들어 LY294002), 세린/트레오닌 키나제 (WO 02/083064, WO 02/083139, WO 02/083140 및 WO 02/083138에 기재된 바와 같은 Akt의 억제제가 포함되지만 이에 제한되지는 않음), Raf 키나제의 억제제 (예를 들어 BAY-43-9006), MEK의 억제제 (예를 들어 CI-1040 및 PD-098059) 및 mTOR의 억제제 (예를 들어 와이어스(Wyeth) CCI-779)가 포함된다. 이러한 작용제에는 소분자 억제제 화합물 및 항체 길항제가 포함된다.

아폽토시스 유도제에는 TNF 수용체 족 구성원 (TRAIL 수용체 포함)의 활성화제가 포함된다.

본 발명의 특정한 제시되는 바람직한 실시양태에서, 암 치료용으로 본 발명의 화합물과 조합으로 유용한 대표적인 작용제에는 예를 들어, 이리노테칸, 토포테칸, 겜시타빈, 5-플루오로우라실, 류코보린 카르보플라틴, 시스플라틴, 탁산, 테자시타빈, 시클로포스파미드, 빈카 알칼로이드, 이마티닙 (글리벡(Gleevec)), 안트라시클린, 리툭시맙, 트라스투주맙, 뿐만 아니라 다른 암 화학요법제가 포함된다.

본 발명의 화합물과 조합으로 사용되는 상기 화합물은 본원에 참고로 도입된 문헌 [Physicians' Desk Reference (PDR) 47th Edition (1993)]에 나타난 바와 같은 치료양으로 사용되거나, 당업자에게 공지되어 있는 바와 같은 이러한 치료상 유용한 양으로 사용될 것이다.

본 발명의 화합물 및 다른 항암제는 권고되는 최대 임상 투여량으로 또는 보다 낮은 투여량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 중 활성 화합물의 투여량 수준은 투여 경로, 질환의 중증도 및 환자의 반응에 따라 목적하는 치료적 반응을 얻도록 다양할 수 있다. 조합물은 별개의 조성물로서 또는 작용제 둘다를 함유하는 단일 투여 형태로 투여될 수 있다. 조합물로서 투여될 경우, 치료제는 동시에 또는 상이한 시간에 주어지는 개별 조성물로서 제제화될 수 있거나, 치료제는 단일 조성물로서 주어질 수 있다.

타목시펜과 같은 항에스트로겐은 세포 주기 억제제 p27Kip의 작용을 필요로 하는 세포 주기 정지의 유도를 통해 유방암 성장을 억제한다. 최근에, Ras-Raf-MAP 키나제 경로의 활성화는 세포 주기 정지에 있어서 그의 억제 활성이 약화되도록 p27Kip의 인산화 상태를 변경시킴으로써 항에스트로겐 내성에 기여한다는 것이 밝혀졌다 (문헌 [Donovan et al., J. Biol. Chem. 276:40888, 2001]). 도노반 등에 의해 보고된 바와 같이, MEK 억제제를 사용한 치료를 통한 MAPK 신호전달의 억제는 호르몬 리팩터리(refactory) 유방암 세포주에서 p27의 인산화 상태를 변화시키며, 그렇게 함으로써 호르몬 민감성을 복구시킨다. 따라서, 일 측면에서, 임의의 실시양태의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염은 유방암 및 전립선암과 같은 호르몬 의존성 암의 치료에 사용되어 상기 암에서 통상적인 항암제를 사용할 때 통상적으로 나타나는 호르몬 내성을 전환시킬 수 있다.

만성 골수성 백혈병 (CML)과 같은 혈액암에서, 염색체 전위는 구조적으로 활성화된 BCR-AB1 티로신 키나제가 담당한다. 병에 걸린 환자는 Ab1 키나제 활성의 억제의 결과로서, 소분자 티로신 키나제 억제제인 글리벡에 반응한다. 하지만, 진행된 단계의 질환을 갖는 많은 환자는 초기에는 글리벡에 반응하지만, 그 후에는 Ab1 키나제 도메인의 내성-부여 돌연변이 때문에 차후에 재발한다. 시험관내 연구는 BCR-Av1이 그의 효과를 발휘히는데 Raf 키나제 경로를 이용함을 입증하였다. 또한, 동일한 경로에서 하나 초과의 키나제의 억제는 내성-부여 돌연변이에 대한 추가의 보호를 제공한다. 따라서, 본 발명의 또다른 측면에서, 임의의 실시양태의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또 는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염은 만성 골수성 백혈병 (CML)과 같은 혈액암의 치료에서 글리벡과 같은 1종 이상의 추가의 작용제와 조합으로 사용되어, 1종 이상의 추가의 작용제에 대한 내성을 전환시키거나 방지한다.

또다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 MAPK 신호전달 경로에서 하나 이상의 세린/트레오닌 키나제의 활성을 억제하는데 유효한 1종 이상의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 상기 대상체에서 MAPK 신호전달 경로에서 하나 이상의 세린/트레오닌 키나제를 억제하는 방법, 또는 상기 대상체에서 MAPK 신호전달 경로에서 세린/트레오닌 키나제에 의해 매개되는 생물학적 상태를 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 상기 측면에 따른 치료 조성물은 이러한 억제제가 필요한 환자 (예를 들어, 비정상적인 MAPK 신호전달에 의해 매개되는 암을 앓고 있는 환자)의 치료에 유용하다. 비정상적인 MAPK 신호전달에 의해 매개되는 암 유형에는 예를 들어, 흑색종, 유두상암, 갑상선암, 난소암, 결장암, 췌장암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) 및 급성 골수양 백혈병이 포함된다. 비정상적인 MAPK 신호전달은 Ras, Raf, MEK 또는 ERK의 야생형 또는 돌연변이 형태를 억제하는 화합물을 투여함으로써 억제될 수 있다.

일 실시양태에서, 본 발명은 Ras (야생형 또는 돌연변이형 Ras)의 억제 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 임의의 실시양태의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이 성질체의 제약상 허용되는 염을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 Raf (야생형 또는 돌연변이형 B-Raf)의 억제 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 임의의 실시양태의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 MEK의 억제 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 임의의 실시양태의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 ERK의 억제 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 임의의 실시양태의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 상기 측면의 방법에 사용하기 위한 예시적인 화합물인 1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민은 하기 실시예 82 내지 86 및 89 내지 90, 및 도 6 내지 12B; 14A 내지 14C 및 15에 기재된 바와 같이, MAPK 신호전달 경로의 강 력한 억제를 나타내었다. 상기 화합물은 돌연변이형 B-Raf 활성의 억제 (IC₅₀ 0.0053 μM), B-Raf 활성의 억제 (IC₅₀ 0.068 μM) 및 c-Raf 활성의 억제 (IC₅₀ 0.004 μM)를 입증하는 실시예 82에 나타난 바와 같이 생화학적 분석에서 B-Raf, c-Raf, 돌연변이형 B-Raf 및 돌연변이형 Ras의 강력한 억제제이다. 하기 표 7 및에 요약되고 실시예 84, 85 및 86에 기재된 바와 같이, 상기 화합물을 사용한 치료는 시험된 모든 상기 돌연변이형 B-Raf 이종이식 모델 (A375M, MEXF276 및 HT29)에서 종양 퇴화를 유발하였으며, K-Ras 및 N-Ras 유래 이종이식 모델에서는 종양 성장 억제를 유발하였다.

도 7B, 8B 및 1OC에 나타난 바와 같이, {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민으로 처치한 후, 종양 세포 A375M, MEXF276 및 HCT-116에서의 표적 조절의 분석은, MEK의 인산화가 투여량 및 시간-의존성 방식으로 억제됨을 나타내었다. 또한, 도 7D, 8C 및 9C에 나타난 바와 같이, 상기 화합물로 종양 세포 A375M, MEXF276 및 HCT-116을 처치한 것은 BIM, 시클린 D1, p27Kip 및 pAKT를 비롯한 Raf로부터의 하류에서 마커를 조절하였다. 전임상 모델에서 상기 분석은 {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민이 MEK 표적 인산화 및 MAPK 경로에서 Raf로부터 하류에서의 신호전달 분자 둘다를 투여량 및 시간 의존적으로 억제함을 나타낸다.

또다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 티로신 키나제 수용체를 억제하는데 유효한 1종 이상의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 치료 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRl, FGFR2, FGFR3, c-Kit 및 CSF-1R로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 티로신 키나제 수용체를 억제하는 방법, 또는 하나 이상의 VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRl, FGFR2, FGFR3, c-Kit 및 CSF-1R에 의해 매개되는 생물학적 상태를 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 상기 측면에 따른 치료 화합물은 이러한 억제제가 필요한 환자 (예를 들어, 비정상적인 티로신 키나제 수용체 신호전달에 의해 매개되는 암을 앓고 있는 환자)의 치료에 유용하다. 비정상적인 티로신 키나제 수용체 신호전달에 의해 매개되는 암에는 예를 들어, 흑색종, 유방암, 방광암, 폐암, 갑상선암, 전립선암, 난소암, 비만세포성 백혈병, 생식세포 종양, 소세포 폐암종, 위장관 기질 종양, 급성 골수성 백혈병 (AML), 신경모세포종 및 췌장암이 포함된다.

일 실시양태에서, 본 발명은 VEGFR-2의 억제 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물의 임의의 실시양태의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 상기 방법은 혈관신생 억제에 의해 고형암을 치료하는데 유용할 수 있다.

일 실시양태에서, 본 발명은 PDGFR-β의 억제 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물의 임의의 실시양태의 화합물 또는 제약상 허용되는 염을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 c-Kit의 억제 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물의 임의의 실시양태의 화합물 또는 제약상 허용되는 염을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 CSF-1R의 억제 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 화학식 I, II, III 또는 IV의 임의의 실시양태의 화합물 또는 제약상 허용되는 염을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 상기 측면의 방법에 사용하기 위한 예시적인 화합물인 {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민은 생화학적 분석에서 티로신 키나제 수용체 VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFR1, FGFR2, FGFR3, c-Kit 및 CSF-1R의 강력한 억제제이다. 상기 화합물은 실시예 87에 기재된 바와 같이 VEGFR-2 활성의 억제 (IC₅₀ 0.07 μM), PDGFR-β의 억제 (IC₅₀ 0.0032 μM), c-Kit의 억제 (IC₅₀ 0.02 μM) 및 CSF-1R의 억제 (IC₅₀ 0.20 μM)가 입증되었다. 또한, 상기 화합물은 도 13에 나타나고 실시예 88에 기재된 바와 같이 생체내 매트리겔 모델에서 혈관신생의 억제를 유도하였다.

본 발명은 하기 실시예를 참고하여 보다 용이하게 이해될 것이며, 실시예는 예시로 제공되는 것이지 본 발명을 제한하려는 의도는 아니다.

하기 실시예 및 본 출원 전반에 걸쳐, 하기 약어는 하기 의미를 갖는다. 정 의되지 않을 경우, 용어는 그의 일반적으로 허용되는 의미를 갖는다.

APCI 대기압 화학적 이온화 질량 분광법

aq. 수성

atm 기압

cm 센티미터

℃ 섭씨 온도

DIPEA 디이소프로필에틸아민

DMC 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸리늄 클로라이드

DMSO 디메틸술폭시드

eq. 당량

EtOAc 에틸 아세테이트

EtOH 에탄올

g 또는 gm 그램

h/hr/hrs 시간

HPLC 고성능 액체 크로마토그래피

IPA 이소프로필 알코올

L 리터

LCAP 액체 크로마토그래피 면적 백분율

LC/MS 액체 크로마토그래피 질량 분광법

M 몰

MeCN 아세토니트릴

mL 밀리리터

NaOMe 나트륨 메톡시드

1-PrOH 1-프로판올

TEA 트리에틸아민

TFAA 트리플루오로아세트산 무수물

THF 테트라히드로푸란

하기 실시예의 화합물에 사용하기 위한 대표적인 측쇄는 일반적으로 하기 절차에 따라 제조할 수 있다.

실시예 1

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민의 제조

단계 1

500 mL 3구 플라스크에 기계식 교반기를 장착하고, K₂CO₃ (4.15 g, 30 mmol)로 충전시켰다. 용기를 밀폐시키고, 배기시키고, 열 건조시켰다. 장치를 실온으 로 냉각시키고, 아르곤으로 퍼징하였다. 반응 플라스크에 4-아미노-3-니트로페놀 (1a) (3.08 g, 20 mmol), tert-부틸 4-클로로피리딘-2-카르복실레이트 (1b) (5.2 g, 24 mmol) 및 무수 DMSO (디메틸술폭시드 30 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 격렬하게 교반하고, 100℃로 약 14시간 동안 가열하였다. 반응물을 빙냉된 인산염 완충액 (pH = 7)에 붓고, 반응 플라스크를 MTBE (메틸 tert-부틸 에테르) 및 물로 잘 세정하였다. 합한 2상 혼합물을 셀라이트 (2 cm 초과 패드)를 통해 여과하였다. 층을 분배시키고, 분리하고, 수성상을 MTBE (3 X 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (5 X 100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 증발시켰다. 조질의 잔류물을 SiO₂ 상에 흡착시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (4:1, 2:1, 1:1 헥산-EtOAc (에틸 아세테이트))에 의해 정제하여 4.92 g (14.9 mmol, 74％ 수율)의 화합물 Ic를 황갈색 고체로서 수득하였다.

단계 2

0℃의 CH₂Cl₂ (85 mL) 중 니트로아닐린 (1c) (5.62 g, 17 mmol)의 용액에 TFAA (2.4 mL, 3.6 g, 17 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 냉각조를 제거하고, 반응을 실온에서 2시간 동안 유지시켰다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, TBACl (테트라부틸암모늄 클로라이드, 2.5 g, 8.5 mmol), Me₂SO₄ (디메틸술페이트 3.2 mL, 4.3 g 34 mmol) 및 10％ NaOH (34 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 격렬하게 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, 생성된 층을 분배시키고, 분리하였다. 수성상을 CH₂Cl₂ (3 X 100 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 염수 (2 X 100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 증발시켰다. 조질의 잔류물을 실리카 겔 상에 흡착시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (4:1, 2:1, 1:1, 1:2 헥산/EtOAc)에 의해 정제하여 화합물 1d 4.5 g (13.0 mmol, 76％)을 노란 오렌지색 고체로서 수득하였다.

단계 3

N₂로 퍼징된 열-건조된 500 mL 3구 둥근 바닥 플라스크를 LAH (리튬 알루미늄 히드라이드, 3.0 g, 75 mmol) 및 무수 THF (240 mL)로 충전시켰다. 생성된 현 탁액을 0℃로 냉각시키고, t-부틸 에스테르 (1d) (20.7 g, 60 mmol)를 서서히 첨가하면서, 내부 반응 온도는 5℃ 미만으로 유지하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 실온에서 밤새 교반하였다. NaBH₄ (2.27 g, 60 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가 1시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 물 (3 mL), 15％ NaOH (3 mL) 및 물 (9 mL)로 연속 적가 처리하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 잔류의 고체를 EtOAc 및 메탄올로 세척하였다. 합한 유기 부분을 증발시키고, 생성된 조질의 잔류물을 SiO₂ 상에 흡착시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (97:3 CH₂Cl₂-MeOH)에 의해 정제하여 붉은 오렌지색 고체 7.63 g (27.7 mmol, 46％)을 화합물 1e로서 수득하였다.

단계 4

100 mL 둥근 바닥 플라스크를 벤질 알코올 (1e) (1.38 g, 5.0 mmol), MnO₂ (6.52 g, 75 mmol) 및 CHCl₃ (20 mL)로 충전시켰다. 생성된 현탁액을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 잔류의 고체를 CHCl₃ 및 EtOH로 연속적으로 세척하였다. 합한 유기 부분을 증발시키고, 실리카 겔 상에 흡착시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (98:2 CH₂Cl₂/MeOH)에 의해 정제하여 오렌지색 고체 790 mg (2.89 mmol, 58％)을 화합물 1f로서 수득하였다.

단계 5

이미다졸 고리 형성 (문헌 [Baldwin, J. J.; Engelhardt, E. L.; Hirschmann, R; Lundell, G. F.; Ponticello, G. S. J. Med. Chem 1979, 22, 687]): 화합물 1g (랜캐스터(Lancaster) (미국 뉴햄프셔주 윈드햄 소재) 25.75 mL, 136.5 mmol)를 H₂O (60 mL) 중 NaOAc (22.4 g, 273 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 용액을 100℃로 40분 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 화합물 1h의 용액을 NH₄OH (150 mL) 및 메탄올 (450 mL) 중 화합물 1f의 현탁액 (25 g, 91 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. TLC (박층 크로마토그래피, 95:5 CH₂Cl₂/MeOH)는 화합물 1f가 완전히 소비되었음을 보여주었다. 조질의 생성물을 수성 슬러리로 농축시키고, 포화 Na₂CO₃ 및 CH₂Cl₂ 사이에 분배시켰다. 수성상을 CH₂Cl₂로 3회 추출하고, 합한 유기층을 염수로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO₄), 농축시켜 화합물 1i 31.6 g (83 mmol)을 오렌지색 고체 (91％ 수율)로서 수득하였다. 추가의 정제는 필요하지 않았다.

치환된 이미다졸의 제조를 위한 다른 중간체는 유사한 방식으로 제조할 수 있다. 예를 들어, 단계 5에 따라 하기 나타낸 바와 같이 3,3,3-트리플루오로-1-페닐프로판-1,2-디온 디드레이트를 이용하여 중간체 1i²를 합성하였다 (MeOH = 메탄올, RT = 실온, o/n = 밤새, min = 분):

단계 5에 따라 하기 나타낸 바와 같이 화합물 1h 대신 1-페닐-1,2-프로판디온을 이용하여 중간체 1i³을 합성하였다.

단계 5에 따라 하기 나타낸 바와 같이 1-(3-트리플루오로메틸페닐)-1,2-프로판디온 또는 1-(4-트리플루오로메틸페닐)-1,2-프로판디온을 이용하여 중간체 1i⁴를 합성하였다.

단계 5에 따라 미국 특허 제5,374,615호의 절차와 결합하여 하기 나타낸 바와 같이 에틸 4,4,4-트리플루오로-3-옥소부타노에이트로부터 제조된 에틸 (2Z)-4,4,4-트리플루오로-2-(히드록시이미노)-3-옥소부타노에이트를 이용하여 중간체 1i⁵를 합성하였다 (NMA = N-메틸 아세트아미드).

단계 6

MeOH (220 mL) 및 EtOAc (200 mL) 중 니트로아닐린 (1i) (45.76 g, 120 mmol)의 슬러리를 N₂로 20분 동안 살포한 후, MeOH (60 mL) 중 10％ Pd/C (12.77 g, 120 mmol)의 현탁액으로 충전시켰다. 반응물을 H₂로 퍼징하고, H₂ 분위기하에 2일 동안 유지하였다. 반응물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 수집된 고체를 MeOH 및 EtOAc로 연속적으로 세척하였다. 합한 유기 여액을 증발시키고, 생성된 고체를 CH₂Cl₂로 공비시킨 후, 진공하에 밤새 건조시켜 화합물 1j 40.17 g (115 mmol)을 황갈색 분말 (96％ 수율)로서 수득하였다. LCMS m/z 336.1 (MH⁺), t_R = 1.81분.

단계 7

4-트리플루오로메틸페닐 이소티오시아네이트 (23.37 g, 115 mmol)를 실온의 MeOH (460 mL) 중 디아민 1j (40.17 g, 115 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 유지하였다. 반응이 완료된 것으로 판단된 후, MeOH (50 mL) 중 FeCl₃ (20.52 g, 126.5 mmol)의 용액을 반응물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 조질의 반응 혼합물을 EtOAc (750 mL) 및 물 (750 mL)을 함유하는 3 L 분별 깔대기에 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성상을 EtOAc로 추출하였다 (수성상을 남김). 유기층을 합하고, Na₂CO₃ 포화 수용액, 물 및 염수로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO₄), 농축시켰다. 남긴 수성상을 Na₂CO₃ 포 화 수용액을 첨가하여 염기성으로 만들고 (pH = 10), 생성된 슬러리를 EtOAc (500 mL)를 함유하는 3 L 분별 깔대기에 첨가하였다. 혼합물을 교반하고, 생성된 에멀젼을 필터지를 통해 여과한 후, 층을 분리하고, 수성상을 EtOAc (2 x 500 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 염수로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO₄), 앞에서 추출된 물질에 첨가하고, 농축시켰다. 합한 생성물을 CH₂Cl₂ (500 mL)로 연화처리하고, SiO₂ 상에 흡착시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 물질을 CH₂Cl₂로 최종 연화처리하여 {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민을 순수한 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS m/z 519.1 (MH⁺);

실시예 2

(2-플루오로-5-피리딘-3-일-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민의 제조

(2-플루오로-5-피리딘-3-일-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이 미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민을 3-(4-플루오로-3-이소티오시아네이토-페닐)-피리딘을 이용하여 실시예 1의 단계 7에서 상기 기재된 바와 같이 합성하였다. LCMS m/z 546.1 (MH⁺), R_t 1.82분.

실시예 3

(2-플루오로-5-피리딘-4-일-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민의 제조

(2-플루오로-5-피리딘-4-일-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민을 4-(4-플루오로-3-이소티오시아네이토-페닐)-피리딘을 이용하여 실시예 1의 단계 7에서 상기 기재된 바와 같이 합성하였다. LCMS m/z 546.5 (MH⁺), R_t 1.83분.

실시예 4

(4-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민의 제조

(4-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)- 피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민을 4-tert-부틸페닐이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1의 단계 7에서 상기 기재된 바와 같이 합성하였다. LCMS m/z 425.4 (MH⁺), R_t 2.56분.

실시예 5

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(3-트리플루오로메틸-페닐)-아민의 제조

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(3-트리플루오로메틸-페닐)-아민을 3-(트리플루오로메틸)페닐이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1의 단계 7에서 상기 기재된 바와 같이 합성하였다. LCMS m/z 519.4 (MH⁺), R_t 2.36분.

실시예 6

(3-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민의 제조

(3-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘 -4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민을 3-에틸 페닐이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1의 단계 7에서 상기 기재된 바와 같이 합성하였다. LCMS m/z 479.4 (MH⁺), R_t 2.32분.

실시예 7

(4-클로로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민의 제조

(4-클로로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민을 4-클로로페닐이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1의 단계 7에서 상기 기재된 바와 같이 합성하였다. LCMS m/z 485.4 (MH⁺), R_t 2.23분.

실시예 8

(4-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민의 제조

(4-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘 -4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민을 4-에틸페닐이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1의 단계 7에서 상기 기재된 바와 같이 합성하였다. LCMS m/z 479.5 (MH⁺), R_t 2.31분.

실시예 9

(4-클로로-3-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민의 제조

(4-클로로-3-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민을 4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1의 단계 7에서 상기 기재된 바와 같이 합성하였다. LCMS m/z 553.4 (MH⁺), R_t 2.51분.

실시예 10

(4-플루오로-3-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민의 제조

(4-플루오로-3-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸- 1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민을 4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1의 단계 7에서 상기 기재된 바와 같이 합성하였다. LCMS m/z 537.4 (MH⁺), R_t 2.40분.

실시예 11

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메톡시-페닐)-아민의 제조

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메톡시-페닐)-아민을 4-(트리플루오로메톡시)페닐이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1의 단계 7에서 상기 기재된 바와 같이 합성하였다. LCMS m/z 535.4 (MH⁺), R_t 2.24분.

실시예 12

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-(1-메틸-5-{2-[5-메틸-4-(3-트리플루오로메틸-페닐)-1H-이미다졸-2-일]-피리딘-4-일옥시}-1H-벤조이미다졸-2-일)-아민의 제조

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-(1-메틸-5-{2-[5-메틸-4-(3-트리플루오로메틸-페닐)-1H-이미다졸-2-일]-피리딘-4-일옥시}-1H-벤조이미다졸-2-일)-아민을 2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)페닐 이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1에 상기 기재된 바와 유사한 절차를 이용하여 합성하였다. LCMS m/z 627.5 (MH⁺), R_t 2.79분.

실시예 13

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-(1-메틸-5-{2-[5-메틸-4-(4-트리플루오로메틸-페닐)-1H-이미다졸-2-일]-피리딘-4-일옥시}-1H-벤조이미다졸-2-일)-아민의 제조

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-(1-메틸-5-{2-[5-메틸-4-(4-트리플루오로메틸-페닐)-1H-이미다졸-2-일]-피리딘-4-일옥시}-1H-벤조이미다졸-2-일)-아민을 2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)페닐 이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1에 상기 기재된 바와 유사한 절차를 이용하여 합성하였다. LCMS m/z 627.5 (MH⁺), R_t 2.79분.

실시예 14

2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다 졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 에틸 에스테르의 제조

2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 에틸 에스테르를 2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)페닐 이소티오시아네이트를 이용하여 실시예 1에 상기 기재된 바와 유사한 절차를 이용하여 합성하였다. LCMS m/z 609.5 (MH⁺).

실시예 15

(2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-일)-메탄올의 제조

Red-Al (나트륨 비스(2-메톡시에톡시)알루미늄 히드라이드, 톨루엔 중 65 중량％, 0.1 mL)을 톨루엔 중 2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 에틸 에스테르 (0.0104 g, 0.017 mmol)의 용액에 적가하였다. 비등 을 관찰하고, 20분 후에 반응을 H₂O, NaOH로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 H₂O로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조질의 (2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-일)-메탄올 5.9 mg을 수득한 후, RP HPLC (역상 HPLC)에 의해 추가로 정제하여 순수한 화합물 (98％ 순도) 1.1 mg을 수득하였다. LCMS m/z 567.1 (MH⁺), R_t 2.40분.

실시예 16

2-{4-[1-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르보니트릴의 제조

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민의 슬러리를 실시예 1에 따라 제조하고 (1.83 g, 3.4 mmol), MeOH (10 mL) 중 28％ NH₄OH (23 mL)를 튜브에서 밀폐시키고, 140℃로 3시간 동안 가열하였다. LC/MS에 의해 반응이 완료된 것으로 판단된 후, 조질의 반응 혼합물을 분별 깔대기에 첨가하고, EtOAc (50) 및 물 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 층을 분리하고, 수성상을 EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 염수로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO₄), 농축시켰다. 조질 의 생성물을 SiO₂ 상에 흡착시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 2-{4-[1-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르보니트릴을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS m/z 476.1 (MH⁺)

실시예 17 내지 59b

하기 표 1에 나타낸 화합물 (실시예 17 내지 59b)을 실시예 1 내지 16에 대해 기재된 절차에 따라 제조하였다. 화합물의 합성에 사용된 다양한 출발 물질은 당업자에게 명백할 것이다 (예를 들어 문헌 [Tordeux, M.; Langlois, B.; Wakselman, C. J. Chem Soc. Perkin Trans 1 1990, 2293]).

실시예 60

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-피리딘-2-일-2H-[1,2,4]트리아졸-3-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민의 제조

4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸5-일옥시]-피리딘-2-카르보니트릴의 제조

단계 1. 4-(4-아미노-3-니트로-페녹시)피리딘-2-카르보니트릴의 합성:

칼륨 카르보네이트 (9 g)를 가열하면서 진공에서 건조시키고, 질소하에 실온으로 냉각시켰다. 4-아미노-3-니트로페놀 (3.4 g), 4-클로로-2-시아노피리딘 (3.0 g) 및 디메틸술폭시드 (30 mL, 무수)를 첨가하였다. 반응계를 질소하에 교반하고, 103℃로 가열하고, 상기 온도에서 1시간 동안 방치하였다. 그 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음/H₂O (500 mL) 상에 붓고, 침전물을 수집하고, 세척하고 (H₂O), 용해시키고 (EtOAc), 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 스트리핑하여 고체를 수득하였다. 이를 현탁시키고 (Et₂O), 수집하고, 공기-건조시키고, 4.1 g (73.5％) 및 제2의 수확물을 수집하였다 (0.55 gm, 10％). m/z=257 (M+1).

단계 2. N-[4-(2-시아노-피리딘-4-일옥시)-2-니트로-페닐]-2,2,2-트리플루오로-N-메틸-아세트아미드의 합성:

칼륨 카르보네이트 (1.6 g)를 가열하면서 진공에서 건조시키고, 실온으로 냉각시키고, 질소하에 4-(4-아미노-3-니트로-페녹시)피리딘-2-카르보니트릴 (2.O g)이 함유된 디클로로메탄 (30 mL)에 현탁시켰다. 이를 O℃로 냉각시키고, 순수한 트리플루오로아세트산 무수물 (2.2 mL)을 첨가하였다. 출발 물질은 첨가되면 급속하게 용액이 되었다. 0℃에서 10분 후, 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 세척하고 (H₂O, 수성 NaCl), 건조시키고 (K₂CO₃), 여과하고, 스트리핑하여 발포체를 수득하였다. m/z=353 (M+1). 상기 생성물을 정제하지 않고 사용하였다. 요오도메탄 (0.53 mL)을 질소하에 디메틸포름아미드 DMF (화합물 2. 약 7.8 mmol을 함유하는 30 mL) 중 칼륨 카르보네이트 (1.858 g)의 현탁액에 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 밤새 교반한 후, H₂O (300 mL) 상에 붓고, 추출하고 (Et₂O, 3x 150 mL), 합한 추출물을 세척하고 (H₂O, 수성 NaCl), 건조시키고 (칼륨 카르보네이트), 여과하고, 스트리핑하여 오렌지색 오일을 수득하였다 (7.4922 g). m/z = 367 (M+1).

단계 3. 4-(4-메틸아미노-3-니트로-페녹시)-피리딘-2-카르보니트릴의 합성:

NaOH (1 mL, 1 N 수성)를 실온의 에탄올 (6 mL) 중 N-[4-(2-시아노-피리딘-4-일옥시)-2-니트로-페닐]-2,2,2-트리플루오로-N-메틸-아세트아미드 (3, 440 mg)의 용액에 적가하였다. 40분 후, 혼합물을 H₂O (20 mL)로 희석하고, O℃로 냉각시켰다. 밝은 오렌지색 결정체를 수집하고, 세척하고 (H₂O), 공기 건조시켜 311.1 mg (94％)을 수득하였다. m/z=271 (M+1).

단계 4. 4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-카르보니트릴의 합성:

탄소상 팔라듐 (46 mg, 10％ w/w)을 질소하에 MeOH (2 mL)에 현탁시켰다. 생성된 현탁액을 질소하에 실온의 MeOH (3 mL) 중 4-(4-메틸아미노-3-니트로-페녹시)-피리딘-2-카르보니트릴 (311 mg)의 현탁액에 첨가하였다. 분위기를 수소로 교환하고, 반응계를 1 atm 수소하에 1시간 동안 강하게 교반하였다. 그 후, 분위기를 질소로 대체하고, 혼합물을 여과하고 (셀라이트), 여액을 추가로 정제하지 않고 다음 반응에 사용하였다. m/z = 242 (M+1). 2-플루오로-5-트리플루오로메틸페닐이소티오시아네이트 (250 mg)를 MeOH (10 mL) 중 화합물 5의 용액에 첨가하였다. 용액을 환류에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 것으로 판단된 후, 무수 FeCl₃ (1.3 당량, 5 244 mg)를 반응물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 조질의 반응 혼합물을 EtOAc 및 물을 함유하는 분별 깔대기에 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성상을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na₂CO₃포화 수용액, 물 및 염수로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO₄), 농축시켰다. 상기 물질을 크로마토그래피하여 (실리카 겔 상의 디클로로메탄 중 MeOH 구배 0 내지 5％) 목적 화합물을 화합물 4로부터 28％ 수율로 단리하였다. m/z= 428 (M+1).

단계 5. (2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-피리딘-2-일-2H-[1,2,4]트리아졸-3-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민

단계 6

4-[2-(4-플루오로-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-카르보니트릴을 EtOH (0.1 M)에 가용화시키고, NaOEt를 첨가한 후 (1 당량, EtOH 중 0.5 M), 피콜리닐 히드라지드 (1 당량)를 첨가하고, 용액을 마이크로웨이브에서 140℃에서 2000초 동안 가열하였다. 그 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 역상 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. m/z = 547 (M+1).

실시예 61 내지 64

하기 표 2에 나타난 화합물 (실시예 61 내지 64)을 실시예 60에 대해 기재된 절차에 따라 제조하였다.

실시예 65

N-(4-히드록시-2-니트로페닐)-포름아미드의 제조

N-(4-히드록시-2-니트로페닐)-포름아미드는 하기 절차에 따라 제조할 수 있다.

1. 내부 온도 탐지기, 온도 제어기, 가열 맨틀, 응축기, 기계식 교반기, 1-L 첨가 깔대기 및 질소 유입구가 구비된 3-L, 5구 반응 플라스크를 설치하였다. 반응기를 질소로 5분 동안 플러싱하였다.

2. 아세트산 무수물 (245 mL)을 플라스크에 충전시켰다. 질소하에 교반하였다.

3. 포름산 (125 mL)을 한 부분으로 충전시켰다 (아세트산 무수물과 포름산 사이의 혼합과 반응에 의해 발열이 관찰되었다).

4. 내부 온도 (IT) 종말점을 60℃로 설정하고, 가열을 시작하였다. 내부 온도 (IT)가 60℃에 도달한 후, 교반하고, 추가의 2시간 동안 유지하였다.

5. 내용물을 빙조로 냉각시켰다.

6. IT가 주위 온도 (약 20℃)에 도달했을 때, 무수 THF (테트라히드로푸란) 700 mL 중 4-아미노-3-니트로페놀 (160 g)을, IT가 40℃를 초과하지 않도록 1-L 첨가 깔대기를 통해 일부분씩 첨가하기 시작하였다. 생성물은 황색 고체로서 침전되기 시작하였다.

7. 첨가가 완료되었을 때, 빙조를 가열 맨틀로 대체하였다. IT 종말점을 60℃로 설정하고, 가열하기 시작하였다.

8. 반응 과정을 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응은 통상적으로 1시간 미만이 걸린다.

9. 출발 물질이 1 면적％ 미만일 때, 물 500 mL을 첨가하였다. 빙조를 사용해 실온으로 냉각시켰다.

10. 진공 여과에 의해 생성물을 수집하였다. 필터 케이크를 물 3 x 200 mL로 세척하였다. 공기-건조시키고, 오븐에서 50℃에서 27 in. Hg 진공에서 온화한 공기로 또는 질소를 흘려서 일정한 중량에 도달할 때까지 추가로 건조시켰다.

실시예 66

4-메틸아미노-3-니트로페놀의 제조

4-메틸아미노-3-니트로페놀은 하기 절차에 따라 제조할 수 있다.

1. 내부 온도 탐지기 및 질소 유입구가 구비된 500 mL, 3구 반응 플라스크를 설치하였다. 반응기를 질소로 5분 동안 플러싱하였다.

2. N-(4-히드록시-2-니트로페닐)-포름아미드 (5 g) 및 무수 THF (100 mL)를 반응기에 충전시켰다. N₂ 하에 교반하여 황색 슬러리를 수득하였다.

3. 붕소 트리플루오라이드 디에틸 에테레이트 (3.83 mL)를 주사기를 통해 서서히 첨가하였다.

4. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다.

5. 나트륨 보로히드라이드 (1.04 g)를 첨가 깔대기를 통해 일부분씩 나누어 첨가하였다.

6. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 그 후 반응을 HPLC에 의해 매 시간마다 모니터링하였다 (반응은 전형적으로 3시간 걸린다).

7. HPLC 샘플이 출발 물질이 1.0％ 미만임을 나타낼 때, 1 M HCl (40 mL)을 주사기를 통해 10분에 걸쳐 서서히 첨가하였다.

8. 60분 동안 교반하였다.

9. 1 M NaOH를 필요에 따라 주사기를 통해 첨가하여 pH가 7 ± 0.5가 되게 하였다.

10. 반응 혼합물을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 붓고, 투명 액체 약 100 mL이 제거될 때까지 감압하에 농축시켰다 (20 mm Hg, 25℃).

11. 물 (10O mL)을 반응 용기에 첨가하였다. 교반하면서 0 ± 2℃로 냉각시켰다. 생성물은 적색 고체로서 침전되었다.

12. 생성물을 굵게 프릿화된 깔대기를 통해 진공 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 물 (2 x 20 mL)로 세척하였다. 공기-건조시킨 후, 오븐에서 50℃/27 in. Hg에서 일정한 중량에 도달할 때까지 건조시켰다. 샘플을 분석하였다.

실시예 67

4-클로로피리딘-2-카르보닐 클로라이드의 제조

4-클로로피리딘-2-카르보닐 클로라이드를 하기 절차에 따라 제조할 수 있다.

1. 내부 온도 (IT) 탐지기, 온도 제어기, 가열 맨틀, 응축기, 기계식 교반기, 질소 유입구, 응축기의 상부에 있는 가스 배출구가 구비된 5-L, 5구 반응 플라스크를 2-L, 2구 액체 트랩에 연결시키고, 이를 다시 8 M NaOH 용액 약 6 L가 충전된 12-L 스크러버에 연결시켜 설치하고, 자기 교반기로 교반하였다. 반응기를 질소로 5분 동안 플러싱한 후, 질소 흐름을 차단하였다.

2. 티오닐 클로라이드 (1.18 L)를 반응기에 충전시킨 후, 온건하게 교반하면서 (약 200 rpm) 칼륨 브로마이드 (38.4 g)를 충전시켰다.

3. 피콜린산 (397 g)을 반응기에 충전시켰다.

4. IT 종말점을 80℃로 설정하고, 가열을 시작하였다.

5. 샘플을 취하고, 반응 추이를 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응은 완료되는데 통상적으로 약 14시간 걸린다. 가열을 연장하면 보다 많은 이염소화를 초래할 것이다.

6. 반응이 완료된 것으로 보일 때 (피콜린산이 1％ 미만으로 반응 혼합물에 존재함), 가열을 중단하였다. 가열 맨틀을 제거하였다.

7. IT가 30℃ 미만일 때, 액체를 3-L 반응 플라스크에 옮겼다. 5-L 반응기를 톨루엔 70O mL로 세정하였다. 세정물을 3-L 플라스크에 옮겼다. 과량의 SOCl₂ 및 톨루엔을 감압하에 제거하였다. 상기 과정을 톨루엔 2 x 700 mL로 반복하였다. 모든 용매를 제거하여 노란 오렌지색 고체를 수득하였다. 톨루엔 (400 mL)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 다음 단계에 사용하였다.

실시예 68

4-클로로피리딘-2-카르복실산 t-부틸 에스테르의 제조

4-클로로피리딘-2-카르복실산 t-부틸 에스테르는 하기 절차에 따라 제조할 수 있다.

1. 12 L 둥근 바닥 플라스크 (4구)에 기계식 교반기 및 온도계를 장착시켰다.

2. 반응기를 톨루엔 (1 L), 피리딘 (977.7 g) 및 디-t-부틸 디카르보네이트 (BOC)₂O (855.5 g)로 충전시켰다.

3. 반응기를 내부 온도가 0℃가 되도록 냉각시켰다.

4. 4-클로로피리딘-2-카르보닐 클로라이드 (686 g)를 반응의 내부 온도가 5℃ 미만으로 유지되도록 하는 속도로 반응기에 첨가하였다.

5. 반응물을 서서히 실온으로 (약 20℃) 만들고, 16시간 동안 교반하였다.

6. HPLC를 이용하여 반응이 완료된 것으로 보일 때 (출발 물질 0.5 면적％ 미만), 반응물을 물 (2 x 4 L), 그 후 1 M HCl 용액 (2 x 2 L)으로 세척하였다.

7. 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 톨루엔 및 잔류의 피리딘을 제거하였다.

8. 톨루엔 (500 mL)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 69

4-(4-메틸아미노-3-니트로페녹시)-피리딘-2-카르복실산 t-부틸 에스테르의 제조

4-(4-메틸아미노-3-니트로페녹시)-피리딘-2-카르복실산 t-부틸 에스테르는 하기 절차에 따라 제조할 수 있다.

1. 3 L 둥근 바닥 플라스크에 기계식 교반기, 온도계 및 질소 유입구를 장착시켰다.

2. 반응기를 K₂CO₃ (123 g)로 충전시켰다.

3. 반응 용기를 불활성 분위기로 만들었다.

4. 반응기를 4-메틸아미노-3-니트로페놀 (100 g), 4-클로로피리딘-2-카르복실산 t-부틸 에스테르 (127 g) 및 무수 DMSO (1 L)로 충전시켰다.

5. 반응물을 격렬하게 교반하고, 100℃로 가열하였다.

6. HPLC를 이용하여 반응이 완료된 것으로 보일 때 (0.5 면적％ 미만의 4-클로로피리딘-2-카르복실산 t-부틸 에스테르), 고온의 반응 혼합물을 교반 냉각수 3 L (부피)에 부었다.

7. 목적 화합물을 여과에 의해 오렌지색 내지 오렌지-갈색 고체로서 단리하였다.

8. 단리된 고체를 물 (2 x 200 mL)로, 그 후 헵탄 (2 x 200 mL)으로 세척하였다.

9. 물질을 진공 오븐에서 45 내지 50℃에서 일정 중량이 달성될 때까지 건조시켰다.

실시예 70

4-(4-(메틸아미노)-3-니트로페녹시)피리딘-2-카르브알데히드의 제조

4-(4-(메틸아미노)-3-니트로페녹시)피리딘-2-카르브알데히드는 하기 절차에 따라 제조할 수 있다.

1. 1000 mL 둥근 바닥 플라스크에 질소 유입구, 기계식 교반기 및 온도계를 장착시켰다.

2. 반응기를 4-(4-메틸아미노-3-니트로페녹시)-피리딘-2-카르복실산 t-부틸 에스테르 (10 g)로 분말 깔대기를 통해 충전시켰다.

3. 2-메틸 THF (100 mL)를 분말 깔대기를 통해 첨가하였다.

4. 반응기를 내부 온도가 -25℃가 될 때까지 냉각시켰다.

5. DIBAL (디이소부틸알루미늄 히드라이드, 톨루엔 중 1.5 M; 72 mL)을 첨가 깔대기를 통해 내부 온도가 -15℃로 유지되도록 하는 속도로 첨가하였다.

6. 반응을 HPLC 또는 GC (기체 크로마토그래피)에 의해 분석하고, 에스테르가 사라지는지를 조사하였다.

7. 반응물을 -20℃에서 교반하고, 매 시간마다 모니터링하였다.

8. 2시간 후에 반응이 진행되지 않으면, 또다른 0.5 당량의 DIBAL (디이소부틸알루미늄 히드라이드)을 첨가하고, 반응을 모니터링하였다. 상기 단계를 모든 에스테르가 소비될 때까지 반복하였다.

9. 반응이 완료되면, MeOH (10 mL)로 서서히 켄칭하였다.

10. 칼륨 나트륨 타르트레이트 (40 g)를 물 200 mL에 첨가하고, 교반하여 용해시켰다.

11. 수용액을 반응 혼합물에 첨가하고, 실온으로 가온하였다.

12. 2-메틸 THF (100 mL)를 반응 용기에 첨가하였다.

13. 반응물을 50℃로 1시간 동안 교반하면서 가열하였다.

14. 상을 분리하였다.

15. 하부 수성층을 제거하였다.

16. 유기층을 셀라이트 플러그를 통해 여과하였다.

17. 셀라이트를 2-메틸 THF (2 x 50 mL)로 세정하였다.

18. 반응 혼합물을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 첨가하였다.

19. 반응 혼합물을 증류에 의해 약 50 mL로 농축시켰다.

20. 반응 혼합물을 교반하면서 0℃로 냉각시켰다.

21. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다.

22. 반응 혼합물을 굵게 프릿화된 필터를 통해 여과하였다.

23. 고체를 필터 상에서 30분 내지 1시간 동안 건조시켰다.

24. 고체를 GC 및 NMR에 의해 분석하여 알코올 비율(％)을 결정하고, 메탄올에 30℃에서 1시간 동안 슬러리화시키고 (화합물 g 당 메탄올 5 mL), 필요에 따라 알코올 불순물을 제거하였다.

실시예 71

4-(2-(5-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-2-일)피리딘-4-일옥시)-N-메틸-2-니트로벤젠아민의 제조

4-(2-(5-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-2-일)피리딘-4-일옥시)-N-메틸-2-니트로벤젠아민은 하기 절차에 따라 제조할 수 있다.

1. 2 L 둥근 바닥 플라스크 (3구)에 기계식 교반기, 내부 온도 탐지기, 온도 제어기 및 응축기를 장착시켰다.

2. 반응기를 분말 깔대기를 통해 물 (590 mL)로 충전시켰다.

3. 혼합물의 교반을 시작하고, 반응기를 나트륨 아세테이트 (240 g)로 충전시켰다.

4. 나트륨 아세테이트 충전에 사용된 플라스크를 물 (30 mL)로 세정하였다.

5. 반응물을 50℃로 가열하였다.

6. 3,3-디브로모-1,1,1-트리플루오로프로판-2-온 (395 g)을 반응의 내부 온도를 100℃ 미만으로 유지하면서 50℃에서 일부분씩 나누어 첨가하였다.

7. 반응물을 내부 온도 100℃로 가열하였다.

8. 반응물을 100℃에서 1시간 동안 교반한 후, 분석용 샘플을 제거하였다.

9. 반응물을 출발 물질이 1.5％ 미만이 될 때까지 100℃에서 교반을 유지하였다.

10. 반응이 완료되면 반응 혼합물을 65℃ 미만으로 냉각시켰다.

11. 반응물이 냉각되면, 5 L 둥근 바닥 플라스크 (재킷화된 4구)에 내부 온도 탐지기, 온도 제어기, 환류 응축기 및 기계식 교반기를 장착시켰다.

12. 5 L 반응기를 분말 깔대기를 통해 에틸 아세테이트 (500 mL)로 충전시키고, 교반을 시작하였다.

13. 5 L 반응기를 분말 깔대기를 통해 4-(4-(메틸아미노)-3-니트로페녹시)피리딘-2-카르브알데히드 (200 g)로 충전시켰다.

14. 분말 깔대기를 에틸 아세테이트 (200 mL)로 5 L 반응기 내로 세정하였다.

15. 5 L 반응기를 95％ 에탄올 (1.3 L)로 충전시켰다.

16. 피루브알데히드 반응 혼합물을 2 L 반응기에서 5 L 반응기로 옮겼다. 상기 지점에서 혼합물의 온도는 약 35℃이다.

17. 진한 NH₄OH (1.3 L)를 일부분씩 나누어 서서히 첨가하고, 온도를 모니터링하였다. 반응은 발열이며, 따라서 첫번째 500 mL은 내부 온도를 50℃ 미만으로 유지하면서 일부분씩 첨가되어야 한다. 총 첨가 시간은 약 25분이다. 승온은 최종 생성물이 더 붉어지게 하였다.

18. 5 L 반응기를 50℃로 가열하였다.

19. 반응 혼합물을 50℃에서 교반하였다. 상기 지점에서 용액은 통상적으로 붉은-오렌지색이다.

20. 반응이 완료될 때까지 반응을 매 시간마다 모니터링하였다.

21. 반응이 완료된 것으로 보이면, 반응 혼합물을 0℃로 2시간 동안 냉각시켰다.

22. 생성물을 굵게 프릿화된 유리 필터를 통한 여과에 의해 단리하였다.

23. 반응기를 냉각된 에탄올 (150 mL)로 세정하였다. 세정물을 필터에 옮겼다.

24. 5 L 반응기를 물 (2 L)로 충전시켰다.

25. 교반하고, 반응기를 10℃로 냉각시켰다.

26. 젖은 케이크를 필터에서 5 L 반응기로 옮겼다.

27. 10℃에서 60분 동안 교반하였다.

28. 생성물을 굵게 프릿화된 유리 필터를 통해 여과하였다.

29. 반응기를 물 (250 mL)로 세정하였다. 세정물을 필터에 옮겼다.

30. 젖은 케이크를 필터 상에서 1시간 동안 건조시켰다.

31. 생성물을 2 L 둥근 바닥 플라스크 (1구)에 옮기고, 온도가 45℃인 조를 사용해 회전 증발기를 이용하여 일정한 중량이 기록될 때까지 굴림 건조시켰다.

실시예 72

4-(2-(5-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-2-일)피리딘-4-일옥시)-N1-메틸벤젠-1,2-디아민의 제조

4-(2-(5-(트리루오로메틸)-1H-이미다졸-2-일)피리딘-4-일옥시)-N1-메틸벤젠-1,2-디아민은 하기 절차에 따라 제조할 수 있다.

1. 2 L 둥근 바닥 플라스크 (4구)에 기계식 교반기, 내부 온도 탐지기, 온도 제어기, 질소 퍼지 및 환류 응축기를 장착시켰다.

2. 반응기를 분말 깔대기를 통해 EtOH (125 mL)로 충전시켰다. 급속하게 교반을 시작하였다.

3. 반응기를 분말 깔대기를 통해 4-(2-(5-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-2-일)피리딘-4-일옥시)-N-메틸-2-니트로벤젠아민 (50 g)으로 충전시켰다.

4. 반응물을 50℃로 가열하였다.

5. 반응물을 가열하면서, 250 mL 에를렌마이어 플라스크를 분말 깔대기를 통해 물 (75 mL)로 충전시켰다. 급속하게 교반을 시작하였다.

6. 250 mL 에를렌마이어 플라스크를 분말 깔대기를 통해 3.0 당량 나트륨 카르보네이트 (41.92 g)로 충전시켰다.

7. 모든 고체가 용해될 때까지 혼합물을 교반하였다.

8. 현탁액이 50℃에 도달하면, 나트륨 카르보네이트 혼합물을 분말 깔대기를 통해 250 mL 에를렌마이어 플라스크에서 반응 혼합물로 옮겼다.

9. 250 mL 에를렌마이어 플라스크를 분말 깔대기를 통해 물 (75 mL)로 충전시켰다. 급속하게 교반을 시작하였다.

10. 250 mL 에를렌마이어 플라스크를 분말 깔대기를 통해 1.0 당량 나트륨 디티오나이트 (22.95 g)로 충전시킨 직후, 반응 플라스크에 첨가하였다.

11. 고체가 대부분 용해될 때까지 급속하게 교반하였다.

12. 나트륨 디티오나이트 혼합물을 분말 깔대기를 통해 250 mL 에를렌마이어 플라스크에서 반응 혼합물로 급속하게 옮겼다.

13. 반응물을 50℃에서 30분 동안 교반하였다.

14. 250 mL 에를렌마이어 플라스크를 분말 깔대기를 통해 물 (75 mL)로 충전시켰다. 급속하게 교반을 시작하였다.

15. 250 mL 에를렌마이어 플라스크를 분말 깔대기를 통해 1.0 당량 나트륨 디티오나이트 (22.95 g)로 충전한 직후, 반응 플라스크에 첨가하였다.

16. 고체가 대부분 용해될 때까지 급속하게 교반하였다.

17. 나트륨 디티오나이트 혼합물을 분말 깔대기를 통해 250 mL 에를렌마이어 플라스크에서 반응 혼합물로 급속하게 옮겼다.

18. 반응물을 50℃에서 30분 동안 교반하였다.

19. 250 mL 에를렌마이어 플라스크를 분말 깔대기를 통해 물 (150 mL)로 충전시켰다.

20. 250 mL 에를렌마이어 플라스크를 분말 깔대기를 통해 2.0 당량 나트륨 디티오나이트 (45.90 g)로 충전한 직후, 반응 플라스크에 첨가하였다.

21. 고체가 대부분 용해될 때까지 급속하게 교반하였다.

22. 나트륨 디티오나이트 혼합물을 분말 깔대기를 통해 250 mL 에를렌마이어 플라스크에서 반응 혼합물로 급속하게 옮겼다.

23. 반응물을 5O℃에서 60분 동안 교반하였다.

24. 샘플을 취하여 반응 완료를 확인하였다.

25. 반응이 98％ 이상 완료되면, 단계 36으로 넘어간다. 그렇지 않으면, 단계 26으로 계속 진행한다.

26. 2 L 반응 플라스크를 분말 깔대기를 통해 1.0 당량 나트륨 디티오나이트 (22.95 g)로 충전시켰다.

27. 반응 혼합물을 50℃에서 60분 동안 급속하게 교반하였다.

28. 샘플을 취하여 반응 완료를 확인하였다.

29. 반응이 98％ 이상 완료되면, 단계 36으로 넘어간다. 그렇지 않으면, 단계 30으로 계속 진행한다.

30. 2 L 반응 플라스크를 분말 깔대기를 통해 1.0 당량 나트륨 카르보네이트 (13.97 g)로 충전시켰다.

31. 반응 혼합물을 50℃에서 15분 동안 급속하게 교반하였다.

32. 2 L 반응 플라스크를 분말 깔대기를 통해 1.0 당량 나트륨 디티오나이트 (22.95 g)로 충전시켰다.

33. 반응 혼합물을 50℃에서 60분 동안 급속하게 교반하였다.

34. 샘플을 취하여 반응 완료를 확인하였다.

35. 반응이 98％ 이상 완료되면, 단계 36으로 넘어간다.

36. 반응이 완료된 것으로 보이면, 2 L 반응 플라스크를 분말 깔대기를 통해 물 (125 mL)로 충전시켰다.

37. 반응 혼합물을 10℃로 냉각시키고, 1시간 동안 교반하였다.

38. 생성물을 굵게 프릿화된 유리 필터를 통한 여과에 의해 단리하였다.

39. 반응기를 물 (50 mL)로 세정하였다. 세정물을 필터에 옮겼다.

40. 젖은 케이크를 더이상 뚝뚝 떨어지지 않을 때까지 필터 상에서 건조시켰다.

41. 2 L 반응 플라스크를 분말 깔대기를 통해 물 (500 mL)로 충전시켰다.

42. 케이크를 분말 깔대기를 통해 다시 반응 플라스크에 옮겼다.

43. 물질을 실온에서 60분 동안 교반하였다.

44. 생성물을 굵게 프릿화된 유리 필터를 통한 여과에 의해 단리하였다.

45. 반응기를 물 (25 mL)로 세정하였다. 세정물을 필터에 옮겼다.

46. 젖은 케이크를 필터 상에서 약 1시간 동안 건조시켰다.

47. 생성물을 2 L 둥근 바닥 플라스크 (1구)에 옮기고, 온도가 50℃인 조를 사용해 회전 증발기를 이용하여 일정한 중량이 기록될 때까지 굴림 건조시켰다.

실시예 73

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민은 하기 절차에 따라 제조할 수 있다.

1. 2 L, 4구 둥근 바닥 플라스크에 기계식 교반기, 내부 온도 탐지기, 온도 제어기, 질소 퍼지 및 응축기를 장착시켰다.

2. 반응기를 분말 깔대기를 통해 4-(2-(5-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-2-일)피리딘-4-일옥시)-N1-메틸벤젠-1,2-디아민 (200 g)으로 충전시켰다.

3. 반응기를 분말 깔대기를 통해 아세토니트릴 (1 L)로 충전시켰다.

4. 혼합물을 주위 온도에서 질소 분위기하에 교반을 시작하였다.

5. 20 ± 5분 후, 반응기를 분말 깔대기를 통해 4-트리플루오로메틸페닐 이소티오시아네이트 (104 g)로 충전시켰다.

6. 이소티오시아네이트를 첨가한 후 30분에 샘플을 취하여 반응 완료를 확인하였다.

7. 반응이 완료되면, 혼합물을 굵게 프릿화된 유리 필터를 통해 여과하였다.

8. 반응기를 아세토니트릴 (200 mL)로 세정하였다. 세정물을 필터에 옮겼다.

9. 제거된 고체를 아세토니트릴 (200 mL)로 세척하였다.

10. 여액을 기계식 교반기, 내부 온도 탐지기, 온도 제어기, 질소 퍼지 및 응축기가 구비된 3-L, 4구 둥근 바닥 플라스크에 옮겼다.

11. 반응기를 분말 깔대기를 통해 N,N-디이소프로필에틸아민으로 충전시켰다.

12. 반응기를 분말 깔대기를 통해 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸륨 클로라이드로 4개의 동등한 부분으로 나누어 매 10분마다 충전시켰다 (총 첨가 시간 30분). 최종 첨가 후, 반응 혼합물을 추가의 10분 동안 교반하였다.

13. 반응물을 50℃ ± 5℃로 가열하였다.

14. 혼합물을 가열한 후 30분에 샘플을 취하여 반응 완료를 확인하였다.

15. 반응이 완료되면, 반응 혼합물을 일렬 배열식(in-line) 0.2 μM 캡슐 필터를 통해 단계 10에서와 같이 구비된 3-L 둥근 바닥 플라스크에 옮겼다.

16. 물을 분말 깔대기를 통해 첨가하였다.

17. 반응물을 50℃ ± 5℃로 가열하였다.

18. 가열한 후 2시간에, 반응 혼합물을 20 내지 25℃로 냉각시키고, 추가 1시간 동안 교반하였다.

19. 생성물을 여과에 의해 중간정도 프릿화된 유리 필터를 통해 여과하였다.

20. 반응기를 2:1 아세토니트릴/물 (300 mL)로 세정하였다. 세정물을 필터에 옮겼다.

21. 필터 케이크를 2:1 아세토니트릴/물 (300 mL)로 세척하였다.

22. 젖은 케이크를 필터 상에서 약 1시간 동안 건조시켰다.

23. 생성물을 건조 디쉬에 옮기고, 물질을 진공 오븐에서 70 ± 5℃에서 소량의 질소를 흘려 잔류의 MeCN (아세토니트릴)의 양이 410 ppm 미만이 될 때까지 건조시켰다.

24. 재결정화시키기 위해, 생성물을 기계식 교반기, 내부 온도 탐지기, 온도 제어기, 질소 퍼지 및 응축기가 구비된 EtOH 15 부피로 (부피에 대한 중량) 환류 가열하였다.

25. 혼합물을 30분 동안 환류시키고, 응축기를 증류 헤드로 대체하였다.

26. EtOH를 4 부피가 잔류할 때까지 증류시켰다. 가열을 중단하고, 물 1 부피를 첨가하였다.

27. 혼합물을 0 내지 5℃로 냉각시켰다.

28. 생성물을 중간정도 프릿화된 유리 필터를 통한 여과에 의해 단리하였다.

29. 반응기를 4:1 EtOH/물 (1 부피)로 세정하였다. 세정물을 필터에 옮겼다.

30. 필터 케이크를 물 (1 부피)로 세척하였다.

31. 젖은 케이크를 필터 상에서 약 1시간 동안 건조시켰다.

32. 생성물을 건조 디쉬에 옮기고, 물질을 진공 오븐에서 50℃ ± 5℃에서 소량의 질소를 흘려 일정한 중량이 얻어질 때까지 건조시켰다.

실시예 74

4-트리플루오로메틸페닐 이소티오시아네이트 (200 mg, 1 mmol)를 아세토니트릴 3 mL 중 4-(2-(5-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-2-일)피리딘-4-일옥시)-N1-메틸벤젠-1,2-디아민 (350 mg, 1 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 주위 온도에서 20분 동안 교반하고, HPLC에 의해 모니터링하였다. 트리에틸아민 (0.3 mL, 2.2 mmol)을 첨가한 후, 2-클로로-1-메틸피리디늄 요오다이드 (270 mg, 1.05 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃로 5시간 동안 가열하였다. 가열을 중단하고, 물 1.5 mL을 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반한 후, 고체를 여과에 의해 수집하고, 2:1 아세토니트릴/물 (3 x 1 mL)로 세척하여 표제 화합물 317 mg (61％)을 수득하였다.

실시예 74a

NaOMe (1.5 mL, 6.3 mmol, MeOH 중 25 중량％)를 1-PrOH (10 mL) 중 4-(4-(메틸아미노)-3-니트로페녹시)피리딘-2-카르보니트릴 (1.72 g, 6.3 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃ (내부 온도)로 가열하였다. 1시간 동안 가열한 후, HPLC 분석은 출발 물질의 완전한 전환을 나타내었다. NH₄OAc (1.46 g, 18.9 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 70℃로 가열하였다. 70℃에서 1시간 후, 혼합물을 85℃로 가열하였다. 동시에, 3-브로모-1,1,1-트리플루오로아세톤 (0.8 mL, 7.56 mmol)을 매 30분마다 4 x 0.2-mL 부분씩 첨가하였다. 혼합물을 85℃에서 20시간 동안 가열하였다. 그 후, 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 물 (10 mL)을 첨가하였다. 몇 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 빙/수조에서 냉각시켰다. 빙/수조에서 1시간 후, 고체를 여과에 의해 수집하고, 1:1 1-PrOH/물 (2 x 7 mL)로 세척하였다. 고체를 진공 오븐에서 50℃에서 약 16시간 동안 건조시켜 표제 화합물 0.982 g (41％)를 수득하였다.

실시예 74b

4-클로로-2-(5-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-2-일)피리딘의 제조

NaOMe (0.46 mL, 2 mmol, MeOH 중 25 중량％)를 1-PrOH (3 mL) 중 4-클로로-2-시아노-피리딘 (277 mg, 2 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃ (반응-차단 온도)로 가열하였다. 1시간 동안 가열한 후, HPLC 분석은 출발 물질의 완전한 전환을 나타내었다. 혼합물을 70℃로 가열하고, NH₄OAc (462 mg, 6 mmol)를 첨가하였다. 70℃에서 1시간 후, 혼합물을 85℃로 가열하였다. 동시에, 3-브로모-1,1,1-트리플루오로아세톤 (0.25 mL, 2.4 mmol)을 매 30분마다 4 x 0.063-mL 부분씩 첨가하였다. 혼합물을 85℃에서 약 20시간 동안 가열하였다. 조질의 생성물은 HPLC 분석에 의해 72.4％ (LCAP)였고, 이를 LC-MS 분석에 의해 확인하였다.

실시예 74c

4-클로로-2-시아노-피리딘

EtOAc (500 mL) 중 4-클로로-2-피리딘카르복스아미드 (93.9 g, 0.6 mol) 및 TEA (125 mL, 0.9 mol)를 외부 냉각기 유닛을 통해 0.2℃로 냉각시켰다. TFAA (92 mL, 0.66 mol)를 첨가 깔대기를 통해 40분에 걸쳐 첨가하였다. 첨가하는 동안 내부 온도를 10℃로 상승시켰다. 첨가 종료시 온도는 0.0℃였다. 첨가 후, 냉각기를 껐다. 추가의 30분 후, HPLC 분석은 출발 물질의 4.3％ (LCAP)를 나타내었다. 추가의 8.3 mL (0.06 mol)의 TFAA를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가의 20분 동안 교반한 후, HPLC 분석은 완전한 전환을 나타내었다. 10％ 수성 K₂CO₃ (w/v, 500 mL)를 첨가하였다. 내부 온도를 13.7℃에서 22.0℃로 상승시켰다. 혼합물을 20분 동안 교반한 후 분별 깔대기에 옮겼다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc (150 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 10％ 수성 시트르산 (w/v, 300 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 조질의 생성물을 진공 오븐에서 5O℃에서 16시간 동안 건조시켜 표제 화합물 72.85 g (87％)을 수득하였다.

실시예 74d

4-(4-메틸아미노-3-니트로-페녹시)-피리딘-2-카르보니트릴

DMSO (80 mL) 중 4-클로로-2-시아노-피리딘 (6.9 g, 0.05 mol), 4-메틸아미노-3-니트로페놀 (8.4 g, 0.05 mol) 및 K₂CO₃ (10.4 g, 0.075 mol)의 혼합물을 60℃로 가열하였다. 11.5시간 후, HPLC 분석은 출발 물질 둘다의 완전한 전환을 나타내었다. 20℃로 냉각시킨 후, 물 (240 mL)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 온도를 40℃로 상승시킨 후, 주위 온도로 감소시켰다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 물 (2 x 40 mL)로 세척하였다. 그 후, 고체를 헵탄 (40 mL)에 슬러리화시켰다. 고체를 수집하고, 헵탄 (40 mL)으로 세척하였다. 조질의 생성물을 진공 오븐에서 50℃에서 16시간 동안 건조시켜 표제 화합물 10.33 g (76％)을 수득하였다.

실시예 74e

4-(4-메틸아미노-3-아미노-페녹시)-피리딘-2-카르보니트릴

EtOH (15 mL) 중 4-(4-메틸아미노-3-니트로-페녹시)-피리딘-2-카르보니트릴 (5.0 g, 0.019 mol)을 40℃로 가열하였다. Na₂CO₃ (4.7 g, 0.044 mol)를 첨가한 후, H₂O (8.4 mL)를 첨가하였다. Na₂S₂O₄ (3.3 g, 0.019 mol)를 첨가한 후, H₂O (10 mL)를 첨가하였다. 온도를 41.7℃에서 49.5℃로 상승시켰다. 41.7℃로 냉각시킨 후, Na₂S₂O₄ (3.3 g, 0.019 mol)를 첨가한 후, H₂O (10 mL)를 첨가하였다. 온도를 44.5℃로 상승시켰다. 36.7℃로 냉각시킨 후, Na₂S₂O₄ (6.6 g, 0.038 mol)를 첨가한 후, H₂O (20 mL)를 첨가하였다. 온도를 44.0℃로 상승시켰다. HPLC 분석은 출발 물질의 4.1％ (LCAP)를 나타내었다. 추가의 Na₂S₂O₄ (3.3 g, 0.019 mol)를 첨가하였다. 추가의 15분 동안 교반한 후, 열을 제거하고, H₂O (12.5 mL)를 첨가하였다. 25℃에서, 추가의 Na₂CO₃ (1.3 g, 0.012 mol)를 첨가하고, 혼합물을 빙/수조에서 냉각시켰다. 5℃ 미만에서, 혼합물을 30분 동안 숙성시켰다 (최종 온도 1.5℃). 고체를 여과에 의해 수집하고, H₂O (10 mL 후 5 mL)로 세척하였다. 고체를 필터 상에서 30분 동안 건조시킨 후, 반응 플라스크에 옮기고, H₂O (50 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 45분 동안 교반하였다. 그 후, 고체를 여과에 의해 수집하고, H₂O (2 x 10 mL)로 세척하였다. 조질의 생성물을 진공 오븐에서 50℃에서 16시간 동안 건조시켜 표제 화합물 3.50 g (76％)을 수득하였다.

실시예 74f

4-[1-메틸-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐아미노)-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-카르보니트릴

4-(트리플루오로메틸)페닐 이소티오시아네이트 (9.65 g, 0.0475 mol)를 MeCN (60 mL) 중 4-(4-메틸아미노-3-아미노-페녹시)-피리딘-2-카르보니트릴 (12.0 g, 0.05 mol)의 용액에 첨가하였다. HPLC 분석은 40분 후에 아민의 완전한 전환을 나타내었다. 혼합물을 여과하고, 제거된 고체를 MeCN (2 x 12 mL)으로 세척하였다. DIPEA (17.5 mL, 0.1 mol)를 여액에 첨가하였다. 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸리늄 클로라이드 (DMC)를 매 10분마다 4 x 2.11-g 부분씩 (8.44 g, 0.05 mol) 첨가하였다. 최종 첨가 후, 혼합물을 추가의 10분 동안 교반하였고, 이 때 HPLC 분석은 완전한 전환을 나타내었다. 그 후, 혼합물을 5O℃ (내부 온도)로 가열하였다. 50℃에서 45분 후, HPLC 분석은 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시킨 후, H₂O (45 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물은 처음에는 균질하였고, 그 후 화합물은 혼합물로부터 침전되기 시작하였다. 2시간 동안 교반한 후, 고체를 여과에 의해 수집하고, 2:1 MeCN/H₂O (2 x 20 mL)로 세척하였다. 조질의 생성물을 진공 오븐에서 50℃에서 16시간 동안 건조시켜 표제 화합물 16.10 g (78％)을 수득하였다.

실시예 74g

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민

NaOMe (0.23 mL, 1 mmol, MeOH 중 25 중량％)를 MeOH (4 mL) 중 실시예 77 (409 mg, 1 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 주위 온도에서 1시간 후, HPLC 분석은 출발 물질의 46.2％ (LCAP)를 나타내었다. 혼합물을 50℃ (반응-차단 온도)로 가열하였다. 1시간 동안 가열한 후, HPLC 분석은 출발 물질의 4.1％ (LCAP)가 잔류함을 나타내었다. NH₄OAc (231 mg, 3 mmol)를 첨가한 후, 3-브로모-1,1,1-트리플루오로아세톤 (0.13 mL, 1.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 약 20시간 동안 가열하였다. 추가의 3-브로모-1,1,1-트리플루오로아세톤 (0.06 mL, 0.58 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 60℃로 가열하였다. 60℃에서 24시간 후, 혼합물을 주위 온도로 냉각시켰다. 물 (4 mL)을 첨가한 후, EtOAc (4 mL)를 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 조질의 생성물을 IPA (4 mL)에 용해시켰다. 메탄술폰산 (0.020 mL)을 IPA 용액의 1 mL 용액에 첨가하였다. 혼합물을 8O℃로 밤새 가열하였다. 그 후, 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다: APCI MS [M + H]⁺ = 519.

실시예 74h

NaOMe (0.23 mL, 1 mmol, MeOH 중 25 중량％)를 1-PrOH (2 mL) 중 실시예 74f (409 mg, 1 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃ (반응-차단 온도)로 가열하였다. 1시간 동안 가열한 후, HPLC 분석은 출발 물질의 완전한 전환을 나타내었다. 혼합물을 70℃로 가열하고, NH₄OAc (231 mg, 3 mmol)를 첨가하였다. 70℃에서 1시간 후, 혼합물을 85℃로 가열하였다. 동시에, 3-브로모-1,1,1-트리플루오로아세톤 (0.13 mL, 1.2 mmol)을 매 30분마다 4 x 0.033-mL 부분씩 첨가하였다. 혼합물을 85℃에서 약 20시간 동안 가열하였다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 물 (2 mL)을 첨가하였다. 몇 시간 동안 교반한 후, 고체를 여과에 의해 수집하고, 1:1 1-PrOH/물 (2 x 3 mL)로 세척하였다. 고체를 진공 오븐에서 50℃에서 약 16시간 동안 건조시켜 표제 화합물 0.11 g (21％)을 수득하였다.

실시예 75

4-트리플루오로메틸페닐 이소티오시아네이트 (200 mg, 1 mmol)를 아세토니트릴 3 mL 중 4-(2-(5-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-2-일)피리딘-4-일옥시)-N1-메틸벤젠-1,2- 디아민 (350 mg, 1 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 주위 온도에서 20분 동안 교반한 후, HPLC 분석은 완전한 전환을 나타내었다. POCl₃ (3 mL) 중 티오우레아 (553 mg, 1 mmol)의 혼합물을 실온에서 교반하였다. 4시간 후, 혼합물을 대략 50℃로 가열하였다. 가열한 후 2시간에, HPLC 분석은 반응의 완료를 나타내었다.

실시예 76

Raf/Mek 여과 분석

완충액

분석용 완충액: 50 mM Tris, pH 7.5, 15 mM MgCl₂, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT

세척용 완충액: 25 mM Hepes, pH 7.4, 50 mM 피로인산나트륨, 500 mM NaCl

중단용 시약: 3O mM EDTA

재료

Raf, 활성: 업스테이트 바이오테크(Upstate Biotech) #14-352

Mek, 불활성: 업스테이트 바이오테크 #14-205

³³P-ATP: NEN 퍼킨 엘머(Perkin Elmer) #NEG 602 h

96 웰 분석 플레이트: 팔콘(Falcon) U-바닥 폴리프로필렌 플레이트 #35-1190

필터 장치: 밀리포어(Millipore) #MAVM 096 OR

96 웰 여과 플레이트: 밀리포어 이모빌론(Immobilon) 1 #MAIP NOB

섬광액: 월락 옵티페이즈(Wallac OptiPhase) "수퍼믹스(SuperMix)" #1200-439

분석 조건

Raf 대략 120 pM

Mek 대략 60 nM

³³P-ATP 1OO nM

반응 시간: 실온에서 45 내지 60분

분석 프로토콜

Raf 및 Mek를 2X 최종 농도로 분석용 완충액 (50 mM Tris, pH 7.5, 15 mM MgCl₂, 0.1 mM EDTA 및 1 mM DTT)에서 배합하고, 폴리프로필렌 분석 플레이트(팔콘 U-바닥 폴리프로필렌 96 웰 분석 플레이트 #35-1190) 중에 웰당 15 ㎕로 분배시켰다. 배경 수준은 Raf 없이 Mek 및 DMSO를 함유하는 웰에서 측정하였다.

Raf/Mek 함유 웰에 100％ DMSO에 희석된 1OX의 raf 키나제 억제제 시험 화합물 3 ㎕를 첨가하였다. raf 키나제 활성 반응은 분석용 완충액에 희석된 2.5X ³³P-ATP를 웰당 12 ㎕ 첨가함으로써 시작되었다. 45 내지 60분 후, 중단용 시약 (30 mM EDTA) 70 ㎕를 첨가하여 반응을 중단시켰다. 여과 플레이트를 70％ 에탄올로 5분 동안 예비-습윤화시킨 후, 세척용 완충액으로 여과에 의해 세정하였다. 그 후, 반응 웰로부터의 샘플 (90 ㎕)을 여과 플레이트에 옮겼다. 여과 플레이트를 밀리포어 여과 장치를 이용하여 세척용 완충액으로 세척하였다 (6X). 플레이트를 건조시키고, 섬광액 (월락 옵티페이즈 "수퍼믹스" #1200-439)을 웰당 100 ㎕ 첨가하였다. 그 후, CPM은 월락 마이크로베타(Microbeta) 1450 판독기를 이용하여 측정하였다.

실시예 77

분석 2: 바이오티닐화된 Raf 스크린

시험관내 Raf 스크린

Raf 세린/트레오닌 키나제의 다양한 동종형의 활성은, ATP, MEK 기질을 제공하고, 포스페이트 부분의 MEK 잔기로의 이동을 분석함으로써 측정할 수 있다. Raf의 재조합 동종형을 인간 Raf 재조합 바쿨로바이러스 발현 벡터로 감염된 sf9 곤충 세포로부터 정제하여 수득하였다. 재조합 키나제 불활성 MEK를 이. 콜라이(E. coli)에서 발현시키고, 정제한 후 바이오틴으로 표지하였다. 각각의 분석에 대해, 시험 화합물을 DMSO에 연속적으로 희석한 후, 반응 완충액 중 Raf (0.50 nM) 및 키나제 불활성 바이오틴-MEK (50 nM) + ATP (1 μM)와 혼합하였다. 이어서, 반응물을 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하고, 0.5 M EDTA를 첨가하여 반응을 중단시켰다. 중단된 반응 혼합물을 뉴트라다빈-코팅된 플레이트 (피어스(Pierce))에 옮기고, 1시간 동안 인큐베이션하였다. 인산화된 생성물을 일차 항체로서 토끼 항-p-MEK (셀 시그날링(Cell Signaling))를 이용하고 이차 항체로서 유로퓸 표지된 항-토끼를 이용하여 DELFIA 시간-분해 형광 시스템 (월락)로 측정하였다. 시간 분해 형광을 월락 1232 DELFIA 형광계 상에서 판독하였다. 각각의 화합물의 50％ 억제 (IC₅₀)에 대한 농도를 XL 피트(XL Fit) 데이타 분석 소프트웨어를 이용한 비-선형 회귀법에 의해 계산하였다.

실시예 76 또는 77의 절차를 이용하였을 때, 실시예 1 내지 64의 화합물은 5 μM 미만의 IC₅₀으로 raf 키나제 억제 활성을 갖는 것으로 나타났다.

실시예 78

흑색종 종양 성장의 억제

3 x 10⁶ A375M 인간 흑색종 세포를 중량이 대략 24 g인 10 내지 12 주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 150 mm³에 도달하였을 때 (이식 후 17일), 마우스를 종양 부피에 의해 각각 9마리 마우스의 4개의 군으로 무작위화시키고, 본 발명의 화합물을 사용한 처치를 시작하였다. 마우스에게 14일 동안 매일 비히클 단독으로, 또는 실시예 25의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 또는 100 mg/kg로 (모두 0.2 mL의 부피로) 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 디지털 캘리퍼스를 이용하여 종양 부피를 주당 2회 측정하였다. 평균 종양 부피는 도 1에 나타나 있다.

실시예 79

흑색종 세포에서 Raf 키나제 신호전달의 억제

실시예 78에서와 같이, 3 x 10⁶ A375M 인간 흑색종 세포를 중량이 대략 24 g인 10 내지 12 주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 150 mm³에 도달하였을 때 (이식 후 17일), 마우스를 종양 부피에 의해 4개의 군으로 무작위화시키고, 비히클 단독으로, 또는 실시예 25의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 또는 100 mg/kg로 (모두 0.2 mL의 부피로) 5일 동안 매일 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 투여후 4시간 및 24시간에, 마우스를 안락사시키고, 종양을 수확하고, 신선-동결시켰다.

동결된 종양을 얼음 상에서 해동시키고, 칭량한 후, RIPA 완충액에서 로슈 완전, 미니(Roche Complete, Mini) EDTA-무함유 프로테아제 억제제 칵테일 정제 (완충액 25 mL 당 정제 2개), 1 mM 페닐메틸술포닐플루오라이드 (PMSF) 및 1X 시그마(Sigma) 포스페이타제 억제제 칵테일 II가 함유된 RIPA 완충액에서, 로슈 마그나(Roche Magna)-레이저 (6500 rpm, 4℃에서 2 x 1 분 사이클)를 이용하여 균질화시켰다. 종양 조직의 매 100 mg에 대해, RIPA 용해 완충액 1 mL를 첨가하였다. 균질화물을 4℃에서 마이크로퓨즈에서 20분 동안 14K RPM으로 원심분리한 후, 키아겐(Qiagen) 키아슈레더(Qiashredder)를 이용하여 추가로 균질화시켰다 (9K RPM, 4℃에서 2분). 단백질 농도를 피어스(Pierce) BCA 단백질 분석을 이용하여 측정한 후, 각각의 샘플 20 ㎍을 4 내지 20％ Tris-글리신 SDS-폴리아크릴아미드 겔에서 웰당 로딩하였다. PAGE에 따라, 단백질을 니트로셀룰로스 막에 옮기고, 실온에서 1시간 동안 차단시킨 후 (TBST 중 5％ 비-지방 유 분말), 토끼 폴리클로날 항-포스포-ERK1/2 항체 (셀 시그널링(Cell Signalling) #9101), 토끼 폴리클로날 항-포스포-MEK 항체 (셀 시그널링 #9121), 토끼 폴리클로날 항-ERK1/2 항체 (셀 시그널링 #9102) 또는 토끼 폴리클로날 항-MEK 항체 (셀 시그널링 #9122)의 1:1000 희석 (차단 완충액 중)을 이용하여 4℃에서 밤새 프로빙하였다. 그 후, 막을 TBST로 실온에서 5회 (각각 5분) 세척하고, HRP-표지된 염소-항-토끼 항체를 모든 블롯 중에 (차단 완충액 중) 1:5000 희석으로 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 막을 TBST로 5-회 (각각 5분) 세척하고, 막을 피어스 수퍼-시그널(Super-Signal)로 4분 동안 인큐베이션한 후, 1초 내지 20분의 시간 노출 범위 동안 필름 상에 노출시켰다. 투여 후 4시간 및 24시간 샘플에 대한 결과는 각각 도 2A 및 2B에 나타나 있다.

실시예 80

결장암 종양 성장의 억제

2 x 10⁶ HT29P 인간 결장암 세포를 중량이 대략 24 g인 10 내지 12주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 250 mm³에 도달했을 때 (이식 후 14일), 마우스를 종양에 의해 10마리의 4개의 군으로 무작위화시키고, 본 발명의 화합물로 처리를 시작하였다. 마우스를 비히클 단독으로, 또는 실시예 25의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 또는 100 mg/kg로 (모두 0.2 mL의 부피로) 5일 동안 매일 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 디지털 캘리퍼스를 이용하여 종양 부피를 주당 2회 측정하였다. 평균 종양 부피는 도 3에 나타나 있다.

실시예 81

결장암 세포에서 Raf 키나제 시그널링의 억제

3 x 10⁶ HT29P 인간 결장암 세포를 중량이 대략 24 g인 10 내지 12주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 150 mm³에 도달했을 때 (이식 후 17일), 마우스를 종양에 의해 10마리의 4개의 군으로 무작위화시키고, 본 발명의 화합물로 처리를 시작하였다. 마우스를 비히클 단독으로, 또는 실시예 25의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 또는 100 mg/kg로 (모두 0.2 mL의 부피로) 5일 동안 매일 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 투여 후 1시간 및 24시간에, 마우스를 안락시키고, 종양을 수확하고, 신선-동결시켰다. 그 후, 동결된 종양을 실시예 79의 절차에 따라 처리하였다. 투여 후 1시간, 4시간 및 24시간 샘플에 대한 결과는 도 4A, 4B 및 2C에 각각 나타나 있다.

실시예 82

시험관내 생화학적 분석에서 실시예 1의 화합물을 사용한 Raf 키나제 시그널링의 억제

시험관내 Raf 분석

실시예 1의 화합물: {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로-메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민의 야생형 B-Raf, 야생형 c-Raf 및 돌연변이형 B-Raf (V600E)에 대한 억제 효과를 하기 바이오티닐화 분석을 이용하여 측정하였다. Raf 세린/트레오닌 키나제의 다양한 동종형의 키나제 활성을, ATP, 재조합 키나제 불활성 MEK 기질을 제공하고, 포스페이트 잔기의 MEK 잔기로의 이동을 분석함으로써 측정하였다. 불활성화 K97R ATP 결합 부위 돌연변이 (이를 키나제 불활성화시킴)를 갖는 재조합 전장 MEK를 이. 콜라이에서 발현시키고, 정제 후 바이오틴으로 표지하였다. MEK cDNA를 N-말단 (히스)₆ 태그로 서브클로닝하고, 이. 콜라이에서 발현시키고, 재조합 MEK 기질을 니켈 친화도 크로마토그래피, 그 후 음이온 교환에 의해 이. 콜라이 용해물로부터 정제하였다. 최종 MEK 기질 제조물을 바이오티닐화시키고 (피어스 EZ-링크 술포-NHS-LC-바이오틴), 11.25 μM로 농축시켰다. 재조합 B-Raf, c-Raf 및 돌연변이형 B-Raf를 상응하는 인간 Raf 재조합 발현 벡터로 감염된 sf9 곤충 세포로부터 정제하여 수득하였다. 재조합 Raf 동종형을 Glu 항체 상호작용을 통해, 또는 금속 이온 크로마토그래피에 의해 정제하였다.

각각의 분석에 대해, 실시예 1의 화합물을 DMSO에 연속 희석한 후, B-Raf, c-Raf 또는 돌연변이형 B-Raf (각각 0.50 nM)와 혼합하였다. 키나제 불활성 바이오틴-MEK 기질 (50 nM)을 반응 완충액 + ATP (1 μM)에 첨가하였다. 반응 완충액은 30 mM Tris-HCL pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 2 mM DTT, 4 mM EDTA, 25 mM 베타-글리세로포스페이트, 5 mM MnCl₂, 및 0.01％ BSA/PBS를 함유하였다. 이어서, 반응물을 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한 후, 0.5 M EDTA를 첨가하여 중단시켰다. 중단된 반응 혼합물을 뉴트라다빈-코팅된 플레이트 (피어스)에 옮기고, 1시간 동안 인큐베이션하였다. 일차 항체로서 토끼 항-p-MEK (셀 시그널링) 및 이차 항체로서 유로퓸 표지된 항-토끼를 이용하여, 인산화된 생성물을 DELFIA 시간-분해 형광 시스템 (월락)로 측정하였다. 시간 분해 형광을 월락 1232 DELFIA 형광계에서 판독하였다. 실시예 1의 화합물의 50％ 억제를 위한 농도 (IC₅₀)를 XL 피트 데이타 분석 소프트웨어를 이용하여 비-선형 회귀법에 의해 계산하였다.

결과:

실시예 1의 화합물은 하기 표 3에 나타난 바와 같이 B-Raf, c-Raf 및 돌연변이형 B-Raf (V600E) 활성의 강력한 억제 (IC₅₀ < 0.1 μM)를 나타내었다.

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 화합물은 야생형 동종형 B-Raf, 야생형 동종형 c-Raf 및 돌연변이형 B-Raf (V600E) Raf 키나제에 대해 강력한 억제 활성을 나타낸다. 도 5에 나타난 바와 같이, Raf 키나제는 MAPK (Ras/Raf/MEK/ERK) 신호전달 경로에서 주요한 Ras 효과기인 것으로 여겨진다. Raf 키나제는 Ras에 의해 활성화되고, Mek1 및 Mek2를 인산화 및 활성화시키며, 이는 다시 MAPK 경로에서 미토겐 활성화된 키나제 1 및 2 (MAPK)를 활성화시킨다. Raf 키나제는 세포 증식, 분화, 생존, 종양발생성 변형 및 아폽토시스에 영향을 주며 이를 조절하는 것으로 공지되어 있다. B-Raf 동종형은 신호전달에 관여하는 Raf의 가장 활성인 형태이며, Ras 신호전달을 전파하는데 있어서 중요한 것으로 밝혀졌다.

하기 표 4에 나타난 바와 같이, MAPK 신호전달 경로는 많은 인간 암에 관련된다. Ras 돌연변이 (활성화됨)는 모든 인간 암의 15％에서 발견된다. ERK 돌연변이 (과다-활성화됨)는 모든 인간 종양의 30％에서 발견된다. 암과 관련된 종양유전자 돌연변이는 상기 경로 중 몇몇 구성원에서 통상적이며, 예를 들어 돌연변이형 B-Raf (V600E)는 흑색종의 약 70％, 및 결장암종의 약 12％에서 발생한다 ([Davies et al., 상기 문헌]; [Yuen et al., 상기 문헌] 및 [Brose et al., 상기 문헌).

문헌 [Sebolt-Leopole and Herrera, Nature Reviews Cancer (4): 937 (2004)]을 참조한다.

상기 표 4에 나타난 바와 같이, 활성화된 B-Raf의 돌연변이 형태 (V600E)는 암 치료에 대한 중요한 표적인데, 이는 그의 발현이 나쁜 예후의 징표이고, 구조적으로 활성이며, 흑색종, 갑상선 유두상암, 난소암 및 결장암을 비롯한 몇몇 종양을 유도하기 때문이다. 돌연변이형 B-Raf를 또한 억제하는 야생형 Raf 키나제의 억제제는 암 요법에서 치료제로서 전망을 나타내었음은 앞에서 입증되었다. 예를 들어, siRNA에 의한 돌연변이형 B-Raf 결핍은 흑색종 세포주에서 ERK 신호전달 및 증식을 손상시킴이 밝혀졌다 (문헌 [Dibb, NJ. et al., Nature Reviews Cancer (4): 718, 2004]). 따라서, 돌연변이형 B-Raf는 야생형 B-Raf보다 실시예 1의 화합물로 보다 강력하게 억제되며, 그에 의해 흑색종, 난소암, 갑상선 유두상암 및 결장암을 비롯한 Raf-매개된 질환의 치료에서 Raf의 억제용의 화합물의 유용성이 입증됨을 유념하는 것이 중요하다.

실시예 83

세포-기반 분석에서 실시예 1의 화합물을 사용한 돌연변이형 B-Raf 키나제 신호전달의 억제

1. ERK 인산화의 억제

방법:

2가지 흑색종 세포주, A375M (돌연변이형 B-Raf V600E) 및 SKMEL-28 (돌연변이형 B-Raf V600E)를 사용하여 실시예 1의 화합물의 억제 효과를 세포-기반 분석에서 측정하였다. ERK 인산화를 SKMEL-28 세포 및 A375M 세포에서 실시예 1의 화합물: {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로-메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민의 연속 희석으로 처리한 후 분석하였다. 데이타를 4-변수 곡선으로 적합화시켜 EC₅₀ 값을 측정하였다.

결과:

하기 표 5에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 화합물은 포스포-ERK의 감소에 의해 측정된 바와 같이 SKMEL-28 세포 및 A375M 세포에서 돌연변이형 B-Raf (V600E) 키나제 활성을 억제하였다.

2. MEK 인산화의 억제

방법:

3가지 흑색종 세포주, A375M (돌연변이형 B-Raf V600E), SKMEL-2 (야생형 Raf, 돌연변이형 N-Ras) 및 CHL-1 (야생형 Raf, 야생형 Ras)을 이용하여 실시예 1의 화합물의 억제 효과를 세포-기반 분석에서 측정하였다. 3가지 세포주를 37℃에서 실시예 1의 화합물의 농도가 0.1 μM, 0.5 μM, 1 μM, 5 μM 및 10 μM인 0.1％ 소 태아 혈청에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후 4시간에, MEK 인산화를 웨스턴 블롯 분석에 의해 분석하였다.

결과:

결과는 도 6A, 6B 및 6C에 나타나 있다. 도 6A에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 화합물은 0.1 μM 내지 10 μM의 농도 범위에서 A375M 세포 (도 6A), SKMEL-2 세포 (도 6B) 및 CHL-1 세포 (도 6C)에서 Raf 하류 신호전달의 강력한 억제제이다.

3. 고정 독립성 세포 성장의 억제

Raf의 억제가 항증식 활성으로 옮겨가는 것을 확인하기 위해, 하기 표 6에 열거된 바와 같이 실시예 1의 화합물을 다양한 세포주에 대해 시험하고, 인간 종양 단리물을 연질-아가(agar)에서 성장시켰다.

연질 아가 증식 분석: 하기 표 6에 열거된 각각의 세포주에 대해, 500개 세포/100 ㎕를 코닝(Corning) 96 웰 평평 바닥 울트라 저 부착 마이크로 플레이트 (코닝 #3474). 1％ 시킴(seakem) GTG 아가로스를 완전 배지에 첨가하고 (50 ㎕/웰), 응고시킨 후, 완전 배지 1OO ㎕를 각각의 웰에 첨가하였다. 실시예 1의 화합물: {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로-메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민의 연속 희석을 혈청-무함유 배지 중 5％ DMSO의 최종 농도로 만들고, 희석된 화합물 25 ㎕를 각각의 웰에 첨가하였다 (최종 DMSO 농도 0.5％). 화합물이 없는 0.5％ DMSO가 함유된 대조군 웰을 또한 분석에 포함시켰다. 화합물로 세포를 7일 동안 인큐베이션한 후, 알라마 블루(Alamar Blue) (트렉 다이아그노스틱 시스템스(Trek Diagnostic Systems) #00-100) 25 ㎕를 각각의 웰에 첨가하고, 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 형광 플레이트 판독기로 여기 530 nm, 방출 590 nm에서 판독하였다. 데이타를 4-변수 곡선으로 적합화시켜 EC₅₀ 값을 측정하였다.

실시예 1의 화합물을 또한 연질 아가 (온코테스트 게엠베하(Oncotest, GmbH), 독일 프라이부르크 소재)에서 성장시킨 인간 종양 분리주의 패널에 대해 시험하였다. 종양을 환자로부터 단리한 후, 면역약화된 마우스에 종양 조각으로서 통과시키고, 상기 기재된 방법을 이용하여 분석하였다.

결과: 실시예 1의 화합물은 하기 표 6에 나타난 바와 같이 돌연변이형 B-Raf, 돌연변이형 K-Ras 및 돌연변이형 N-Ras를 발현하는 세포주 및 인간 종양 분리주에 대해 강력한 항증식 효과를 갖는다.

상기 표 6에 나타난 세포주 및 인간 종양 분리주의 넓은 패널에 대한 실시예 1의 화합물의 억제 효과는 돌연변이형 B-Raf를 발현하는 종양 세포에서 화합물의 강력한 항증식 활성을 입증한다. 화합물은 돌연변이형 B-Raf 흑색종 세포에 대해 0.0098 미만 내지 0.07 μM의 범위로 강력한 억제를 나타내었다. 화합물은 돌연변이형 B-Raf 직장결장 세포주에 대해 0.026 μM to 0.13 μM의 범위로 유사한 정도의 억제를 나타내었다. 화합물은 또한 돌연변이형 K-Ras를 발현하는 2가지 직장결장암종 종양 세포에서 강력한 항증식 효과를 입증하였으며 (0.07 μM 내지 0.016 μM), 이는 상류 K-Ras 돌연변이의 맥락에서 B-Raf/c-Raf의 억제가 항증식 활성을 초래함을 확인시켜 준다.

상기 기재된 세포주로부터의 결과와 일치하게, 인간 종양 분리주에 대해 실시예 1의 화합물은 돌연변이형 B-Raf 흑색종에 대해 가장 강력한 억제가 입증되었으며 (EC₅₀ = 0.055 μM 및 0.20 μM), 그 다음은 N-Ras 돌연변이형 흑색종이었다 (EC₅₀ = 0.57 μM). 하나의 췌장 종양 및 하나의 직장결장 종양은 1 μM 범위의 EC₅₀을 가졌다. 잔류의 종양은 1 μM보다 큰 EC₅₀ 값을 가졌다. 환자로부터 단리된 인간 종양은 세포주보다 질환의 보다 급성인 모델에서 나타나는 것으로 믿어지는데, 이는 종양을 환자로부터 단리하였고 면역약화된 마우스에 종양 조각으로서 계대배양시켰기 때문이다. 따라서, 이들은 플라스틱 상의 성장에 대해 선택되지 않으며, 일부 원발성 종양 구조를 유지한다.

흥미롭게도, 실시예 1의 화합물은 신세포 암종 종양 분리주에서 1 μM 초과의 범위로 억제 활성을 가짐에 주목한다. 유전자형은 상기 특정 종양에 대해 결정되었지만, 신세포 암종 종양은 전형적으로 돌연변이형 Ras 또는 돌연변이형 B-Raf를 발현하지 않는다. 따라서, 실시예 1의 화합물은 MAPK 경로의 신호전달 분자, 특히 Raf 및 Ras 키나제 분자를 특이적으로 억제하는 것으로 보인다.

실시예 84

실시예 1의 화합물을 사용한 처리는 A375M (B-Raf V600E) 인간 흑색종 이종이식 모델에서 종양 퇴화를 유발한다

방법: 3 x 10⁶ A375M 인간 흑색종 세포를 중량이 대략 24 g인 10 내지 12주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 150 mm³에 도달했을 때 (이식 후 17일), 마우스를 종양에 의해 각각의 9마리 마우스의 4개의 군으로 무작위화시키고, 본 발명의 화합물로 처리를 시작하였다. 마우스를 비히클 단독으로, 또는 실시예 1의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 또는 100 mg/kg로 (모두 0.1 mL의 부피로) 14일 동안 매일 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 실시예 1의 화합물: {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로-메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민을 100％ PEG에서 제제화시켰다. 디지털 캘리퍼스를 이용하여 종양 부피를 2회 측정하였다.

웨스턴 블롯 분석

14회째 투여 후 8시간 및 24시간에, 마우스를 안락사시키고, 종양을 수확하고, 신선-동결시켰다. 동결된 종양을 얼음 상에서 해동시키고, 칭량한 후, RIPA 완충액에서 로슈 완전, 미니 EDTA-무함유 프로테아제 억제제 칵테일 정제 (완충액 25 mL 당 정제 2개), 1 mM 페닐메틸술포닐플루오라이드 (PMSF) 및 1X 시그마 포스페이타제 억제제 칵테일 II가 함유된 RIPA 완충액에서, 로슈 마그나-레이저 (6500 rpm, 4℃에서 2 x 1 분 사이클)를 이용하여 균질화시켰다. 종양 조직의 매 100 mg에 대해, RIPA 용해 완충액 1 mL를 첨가하였다. 균질화물을 4℃에서 마이크로퓨즈에서 20분 동안 14K RPM으로 원심분리한 후, 키아겐 키아슈레더를 이용하여 추가로 균질화시켰다 (9K RPM, 4℃에서 2분). 단백질 농도를 피어스 BCA 단백질 분석을 이용하여 측정한 후, 각각의 샘플 20 ㎍을 4 내지 20％ Tris-글리신 SDS-폴리아크릴아미드 겔에서 웰당 로딩하였다. PAGE에 따라, 단백질을 니트로셀룰로스 막에 옮기고, 실온에서 1시간 동안 차단시킨 후 (TBST 중 5％ 비-지방 유 분말), 토끼 폴리클로날 항-포스포-ERK1/2 항체 (셀 시그널링 #9101), 토끼 폴리클로날 항-포스포-MEK 항체 (셀 시그널링 #9121), 토끼 폴리클로날 항-ERK1/2 항체 (셀 시그널링 #9102) 또는 토끼 폴리클로날 항-MEK 항체 (셀 시그널링 #9122)의 1:1000 희석 (차단 완충액 중)을 이용하여 4℃에서 밤새 프로빙하였다. 하류 마커의 조절의 분석을 항-Bim 항체 (케미콘(Chemicon), #AB 17003), 항-시클린 D1 항체 클론 5D4 (업스테이트(Upstate), #05-263), 항-p27Kip-1 (182-198) 항체 (칼바이오켐(Calbiochem), #506127), 항-포스포-AKT (S473) 항체 (셀 시그널링, #9271), 항-포스포-Akt (T308) 항체 (셀 시그널링 #9275), 및 항-포스포-총 Akt 항체 (셀 시그널링 #9272)의 1:1000 희석을 이용하여 수행하였다.

그 후, 막을 TBST 실온에서 5회 (각각 5분) 세척하고, HRP-표지된 염소-항-토끼 항체를 모든 블롯 중에 (차단 완충액 중) 1:5000 희석으로 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 막을 TBST로 5-회 (각각 5분) 세척하고, 막을 피어스 수퍼-시그널로 4분 동안 인큐베이션한 후, 1초 내지 20분의 시간 노출 범위 동안 필름 상에 노출시켰다.

결과:

도 7A는 실시예 1의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 또는 100 mg/kg의 경구 투여량으로 처치한 경우, 마우스에서 A375M (B-Raf V600E) 인간 흑색종 종양의 종양 부피의 평균 감소의 투여량 반응을 나타내는 그래프이다. 도 7A에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 화합물은 경구 투여량-의존성 프로파일로 강력한 항-종양 활성을 갖는다. 화합물 100 mg/k의 경구 투여량에서, 종양 퇴화는 시험된 마우스 9마리 중 9마리에서 관찰되었다.

실시예 1의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 및 100 mg/kg의 14회째 투여 후 8시간 및 24시간에 대한 웨스턴 블롯 분석의 결과는 각각 도 7B 및 7C에 나타나 있다. 도 7C에 나타난 바와 같이, 웨스턴 블롯 데이타는 화합물이 100 mg/kg 투여량에서 MEK 인산화를 억제하며 (종양 퇴화를 유도함), MEK 억제는 마지막 투여 후 24시간 초과로 유지됨을 보여준다.

도 7D에 나타난 바와 같이, 14회째 투여 후 24시간의 종양 용해물에서 하류 바이오마커 조절의 분석은 BIM (아폽토시스의 마커) 및 p27Kip (세포 주기 정지의 마커)의 증가, 및 시클린 D의 감소 (세포 주기 억제)를 보여주었다. 상기 결과는 실시예 1의 화합물이 MAPK 경로에서 Raf 신호전달을 억제함을 확인시켜 준다.

실시예 85

실시예 1의 화합물을 사용한 처리는 흑색종 종양 성장을 억제한다

실시예 1의 화합물을 흑색종 종양 모델 MEXF276 (돌연변이형 B-Raf V600E) 및 흑색종 종양 모델 MEXF 1341 야생형 B-Raf, 돌연변이형 N-Ras (Q61K)에서의 억제 활성에 대해 시험하였다.

방법: 연속 통과시킨 인간 흑색종 MEXF276 (돌연변이형 B-Raf V600E) 종양 세포를 10 내지 12주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 뒷옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 65 mm³에 도달했을 때, 마우스를 종양 부피에 의해 무작위화시키고, 실시예 1의 화합물: {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로-메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민으로 처리를 시작하였다. 비-처리된 대조군 마우스에서 약간의 독성이 예상되는 MEXF276 모델은 다소 악액질성인 것으로 알려져 있기 때문에, 약물 처리군에서 심각한 체중 소실을 방지하기 위해, 하기와 같이 간헐성 투여량 처방을 사용하였다. 마우스를 비히클 단독으로, 또는 실시예 1의 화합물의 하기 투여량 처방으로 경구 위관영양에 의해 투여하였다: 0, 2, 4, 6, 14, 16 및 20일에 10 mg/kg; 0, 2, 14, 16 및 20일에 30 mg/kg; 0, 2, 14, 16 및 20일에 100 mg/kg.

MEXF1341 모델에 대해, 연속 통과시킨 인간 흑색종 MEXF1341 종양 세포를 10 내지 12주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 뒷옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 78 mm³에 도달했을 때, 마우스를 종양 부피에 의해 무작위화시키고, 실시예 1의 화합물로 처리를 시작하였다. 비-처리된 대조군 마우스에서 약간의 독성이 예상되는 MEXF276 모델은 다소 악액질성인 것으로 알려져 있기 때문에, 약물 처리군에서 심각한 체중 소실을 방지하기 위해, 하기와 같이 간헐성 투여량 처방을 사용하였다. 마우스를 비히클 단독으로, 또는 실시예 1의 화합물의 하기 투여량 처방으로 경구 위관영양에 의해 투여하였다: 0, 2, 4, 6, 10, 12, 18 및 20일에 10 mg/kg; 0, 2, 4, 6, 10, 12, 18 및 20일에 30 mg/kg; 0, 2, 14, 16 및 20일에 100 mg/kg.

최종 투여 후 4시간에, MEXF276 및 MEXF1341 모델로부터의 마우스를 안락사시키고, 종양을 수화가고, 신선-동결시켰다. 이어서, 실시예 84에 상기 기재된 바와 같이, 상기 종양으로부터의 용해물을 표적 조절 (pMEK) 및 하류 마커 조절 (BIM, p27Kip 및 pAKT)을 위해 웨스턴 블롯에 의해 분석하였다.

결과:

도 8A는 실시예 1의 화합물로 처리한 후 마우스에서 MEXF276 (B-Raf V600E) 흑색종 암 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이다. 도 8A에 나타난 결과는 실시예 1의 화합물이 MEXF276 분리주에서 10 mg/kg으로, 8마리 마우스 중 8마리에서 30 mg/kg 및 100 mg/kg에서 50％ 이상의 종양 퇴화를 나타냄을 지시한다. 도 8B에서 포스포-MEK의 감소에 의해 나타난 바와 같이, 종양 용해물에서의 pMEK 인산화 (도 8B) 및 하류 및 하류 바이오마커 조절의 분석 (도 8C)은 MEXF276 종양에서 돌연변이형 B-Raf 활성이 억제됨을 확인시켜 준다. 도 8C에 나타난 바와 같이, BIM (아폽토시스에 대한 마커) 및 p27Kip (세포 주기 정지), 및 감소된 포스포-AKT (생존 경로 신호전달)이 관찰되었으며, 이는 MAPK 경로에서 Raf 키나제 활성의 억제를 확인시켜 준다.

도 9A는 실시예 1의 화합물로 처치한 경우 마우스에서 MEXF 1341 (N-Ras Q61K) 흑색종 암 종양의 종양 성장의 평균 억제를 나타내는 그래프이다. 도 9A에 나타난 결과는 실시예 1의 화합물이 MEXF 1341 돌연변이형 N-Ras (N-Ras Q61K) 흑색종 종양 모델에서 30 mg/kg 및 100 mg/kg 투여량에서 유의한 성장 억제 (70％까지 억제)를 유발하였지만, 종양 퇴화를 유도하지는 않았음을 나타낸다. 도 9B에 나타난 바와 같이, 화합물 100 mg/kg으로 처리한 후 20일 후에 포스포-MEK의 분석은, MEXF276 (돌연변이형 B-Raf) 모델에서 얻어진 결과와 반대로, 포스포-MEK의 관찰가능한 감소를 나타내지 않았다. 또한, MEXF 1341 모델에서 Raf의 하류의 MAPK 경로에서 신호전달 분자가 영향을 받았다는 일부 증거가 있는 반면, 그 효과는 MEXF276 모델에서 관찰된 것보다는 덜 현저하였다. 예를 들어, 도 9C에 나타난 바와 같이, p27Kip 수준 (세포 주기 정지)은 30 mg/kg 및 100 mg/kg 군에서 증가하였는데 이는 종양 성장을 나타내며, 아폽토시스 마커 BIM은 약간의 증가가 관찰되었다. 따라서, 실시예 1의 화합물은 MEXF276 (돌연변이형 B-Raf) 이종이식 모델에서 종양을 유발하고 유의한 강력한 활성을 갖지만, MEXF1341 (야생형 B-Raf, 돌연변이형 N-Ras) 이종이식 모델에서는 종양 성장 억제를 유발하는 덜 강력한 활성을 갖는 것으로 보인다.

실시예 86

실시예 1의 화합물을 사용한 처리는 인간 직장결장 암종 종양 성장을 억제한다

실시예 1의 화합물을 직장결장 암종 이종이식 모델 HCT-116 (돌연변이형 K-Ras G13D), HT-29 (B-Raf V600E) 및 급성 백혈병 이종이식 모델 MV4-11 (FLT3 ITD)에서 억제 활성에 대해 시험하였다.

방법: 5 x 10⁶ HCT-116 (돌연변이형 K-Ras G13D) 인간 직장결장 암종 세포를 중량이 대략 24 g인 10 내지 12주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 뒷옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 212 mm³에 도달했을 때, 마우스를 비히클 단독으로, 또는 실시예 1의 화합물의 하기 투여량 처방으로 경구 위관영양에 의해 투여하였다: 총 28일 동안 1일째에 및 2일마다 (q2d) 경구 위관영양에 의해 10 mg/kg, 30 mg/kg 및 100 mg/kg. 위성 마우스를 안락사시키고, 종양을 3회째 투여 후 4시간, 8시간 및 24시간에 수확하였다. 이어서, 상기 종양으로부터의 용해물을 실시예 84에 기재된 바와 같이 표적 조절 (pMEK)을 위한 웨스턴 블롯에 의해 분석하였다.

제2의 인간 직장결장 직장결장 모델, HT-29 (B-Raf V600E)를 하기와 같이 시험하였다. 2 x 10⁶ HT-29 세포를 중량이 대략 24 g인 10 내지 12주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 뒷옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 167 mm³에 도달했을 때, 마우스를 비히클 단독으로, 또는 실시예 1의 화합물의 하기 투여량 처방으로 경구 위관영양에 의해 투여하였다: 총 28일 동안 1일째에 및 2일마다 (q2d) 경구 위관영양에 의해 10 mg/kg, 30 mg/kg 및 100 mg/kg.

인간 급성 단핵구 백혈병 이종이식 모델, MV4-11 (FLT3 ITD)을 하기와 같이 시험하였다: 5 x 10⁶ MV4-11 세포를 중량이 대략 24 g인 10 내지 12주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 뒷옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 190 mm³에 도달했을 때, 마우스를 비히클 단독으로, 또는 실시예 1의 화합물의 하기 투여량 처방으로 경구 위관영양에 의해 투여하였다: 총 16일 동안 1일째에 및 2일마다 (q2d) 경구 위관영양에 의해 10 mg/kg, 30 mg/kg 및 100 mg/kg. 위성 마우스를 안락사시키고, 종양을 3회째 투여 후 4시간에 수확하였다. 이어서, 상기 종양으로부터의 용해물을 실시예 84에 기재된 바와 같이 표적 조절 (pMEK)을 위한 웨스턴 블롯에 의해 분석하였다.

결과:

HCT-116 연구에 대한 결과는 도 10A 내지 10D에 나타나 있다. 도 1OA는 실시예 1의 화합물 100 mg/kg으로 처치한 경우 마우스에서 HCT-116 (K-Ras G13D) 직장결장 암종 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이다. 도 1OB 내지 1OD에 나타난 바와 같이, 3회째 투여 후 4시간 (도 10B), 8시간 (도 10C) 및 24시간 (도 10D)의 포스포-MEK 분석은 포스포-MEK의 관찰가능한 감소를 나타내었다.

도 11은 실시예 1의 화합물로 처치한 경우 마우스에서 HT-29 (B-Raf V600E) 직장결장 암종 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이다. 도 11에 나타난 바와 같이, 30 mg/kg 및 100 mg/kg에서 종양 퇴화가 관찰되었다.

MV4-11 연구에 대한 결과는 도 12A 내지 12B에 나타나 있다. 도 12A는 실시예 1의 화합물로 처치한 경우 마우스에서 MV4-11 급성 단핵구 백혈병 암 종양의 종양 성장의 평균 억제를 나타내는 그래프이다. MV4-11 종양 세포는 돌연변이형 수용체 티로신 키나제 (MV4;11, FLT3 ITD)에 의해 유도되었다. 나타난 바와 같이, 실시예 1의 화합물은 MV4-11 모델에서 유의한 종양 성장 억제를 유발하였지만, 종양 퇴화의 증거는 없었으며 (도 12A), MEK 신호전달의 관찰가능한 억제도 없었다 (도 12B). 이론에 구애되기를 원하지는 않지만, 하기 실시예 87 내지 88에 기재된 바와 같이 MV4-11 모델에서, 종양 성장 억제의 효능은 주로 VEGFR-2의 억제를 통해 화합물의 항-혈관신생 활성의 결과인 것 같다.

흑색종, 직장결장 암종 및 백혈병 이종이식 모델에서 실시예 1의 화합물의 효능의 평가로부터 얻어진 데이타의 요약은 하기 표 7에 제공되어 있다.

표 7에 요약된 데이타로부터, 도 6 내지 12에 나타난 바와 같이, 및 실시예 82 내지 86에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 화합물은 B-Raf가 돌연변이된 시험된 모든 이종이식 모델에서 효능있으며, 이는 시험된 모든 3가지 모델 (A375M, MEXF276 및 HT29)에서 종양의 억제 및 표적 조절을 유발한다.

실시예 87:

티로신 키나제 억제 분석

1. 생화학적 분석:

다수의 단백질 티로신 키나제의 키나제 활성을, ATP 및 인산화를 위한 티로신 아미노산 잔기를 함유하는 적절한 펩티드 또는 단백질을 제공하고, 포스페이트 잔기의 티로신 잔기로의 이동을 분석함으로써 측정하였다. VEGFR2, PDGFRβ, CSF-1R 및 c-Kit의 세포질 도메인에 상응하는 재조합 단백질을, 상응하는 인간 VEGFR2, PDGFRβ, CSF-1R 및 c-Kit 재조합 바쿨로바이러스 발현 벡터로 감염시킨 Sf9 곤충 세포로부터 정제하여 수득하였다. 각각의 분석에 대해, 실시예 1의 화합물: {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로-메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민을 DMSO에 연속 희석한 후, 적절한 키나제 반응 완충액 + ATP와 혼합하였다 (사용된 ATP 농도는 각각의 Km 값이거나 바로 아래였음). 키나제 단백질 및 적절한 바이오티닐화된 펩티드 기질을 첨가하여 최종 부피가 50 내지 100 ㎕가 되게 하였다. 반응물을 실온에서 1 내지 3시간 동안 인큐베이션한 후, 45 mM EDTA, 5O mM Hepes (pH 7.5) 25 내지 50 ㎕를 첨가하여 중단시켰다. 중단된 반응 혼합물 (75 ㎕)을 스트렙타비딘-코팅된 플레이트 (뵈링거 만하임(Boehringer Mannheim))에 옮기고, 1시간 동안 인큐베이션하였다. 인산화된 펩티드 생성물을, DELFIA 분석 완충액이 항체 희석을 위해 1 mM MgCl₂로 보충된 점에서 변형된, 유로퓸 표지된 항-포스포티로신 항체 PT66을 이용하여, DELFIA 시간-분해 형광 시스템 (월락 또는 PE 바이오사이언시즈(PE Biosciences))로 측정하였다. 시간 분해 형광을 월락 1232 DELFIA 형광계 또는 PE 빅터(Victor) II 다중 신호 판독기 상에서 판독하였다. 각각의 화합물의 50％ 억제 (IC₅₀)에 대한 농도를 XL 피트 데이타 분석 소프트웨어를 이용한 비-선형 회귀법에 의해 계산하였다.

VEGFR2 키나제 (0.05 ㎍/mL)를 50 mM Hepes pH 7.0, 2 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM NaF, 1 mM 디티오트레이톨 (DTT), 1 mg/mL 소 혈청 알부민 (BSA), 1 내지 30 μM ATP, 및 0.25 μM 바이오티닐화된 펩티드 기질 "GGGGQDGKDYIVLPI" (서열 1)에서 분석하였다.

PDGFR 키나제 분석을 위해, ATP 및 펩티드 기질 농도를 1.4 μM ATP, 및 0.25 μM 바이오티닐화된 펩티드 기질 "GGGGQDGKDYIVLPI" (서열 1)로 바꾼 것을 제외하고는 상기와 동일한 완충액 조건을 갖는 120 ㎍/mL 효소를 사용하였다.

CSF-1R의 키나제 활성을 분석용 완충액 (5O mM HEPES pH 7.0, 5 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 0.1％ BSA, 1 mM DTT, 0.01％ 트윈(Tween), 최종 pH 7.5), 1 μM ATP 및 50 nM 바이오티닐화된 펩티드 기질 "EEEEAYGWLNF" (서열 2)에서 분석하였다.

c-Kit의 키나제 활성을, ATP, c-Kit 수용체 (프로퀴나제(Proquinase)로부터 수득)의 세포질 도메인에 상응하는 재조합 단백질을 제공함으로써 측정하였다. c-Kit 키나제 단백질 (2 nM) 및 바이오티닐화된 펩티드 기질 (1 μM) "GGLFDDPSWNVQNL" (서열 3)을 반응 완충액 + ATP (8 μM)에 첨가하여 최종 부피가 1OO ㎕가 되게 하였다. c-Kit에 대한 반응용 완충액은 5O mM HEPES pH 7.5, 1 mM NaF, 2 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂ 및 1 mg/mL BSA였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하고, 45 mM EDTA, 50 mM HEPES, pH 7.5 50 ㎕를 첨가하여 중단시켰다. 중단된 반응 혼합물 (75 ㎕)을 스트렙타비딘-코팅된 미세역가 플레이트 (뵈링거 만하임)에 옮기고, 1시간 동안 인큐베이션하였다. 인산화된 펩티드 생성물을, DELFIA 분석 완충액이 항체 검출을 위해 1 mM MgCl₂로 보충된 점에서 변형된 유로퓸-표지된 항-포스포티로신 항체, PT66을 이용하여 DELPHIA 시간-분해 형광 시스템 (월락 또는 PE 바이오사이언시즈)으로 분석하였다. 시간 분해 형광 값을 월락 1232 DELFIA 형광계 또는 PE 빅터 II 다중 신호 판독기 상에서 측정하였다. 각각의 화합물의 50％ 억제 (IC₅₀)에 대한 농도를 XL 피트 데이타 분석 소프트웨어를 이용한 비-선형 회귀법에 의해 계산하였다.

결과: 하기 표 8에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 화합물은 VEGFR-2, c-Kit, PDGFR-β 및 CSF-1의 강력한 억제제이다.

세포-기반 분석을 또한 이용하여 하기 표 8에 나타난 표적 분자에 대한 실시예 1의 화합물의 활성을 측정하였다.

실시예 1의 화합물로 처리한 후 HMVEC 세포에서 표적 조절은, 웨스턴 블롯에 의한 포스포-VEGFR의 감소에 의해 측정된 바와 같이, 0.03 μM의 EC₅₀을 갖는 VEGF 매개 VEGF-2 인산화의 억제를 나타내었다 (도시하지 않음).

실시예 1의 화합물로 처리한 후 Mo7e 세포에서 c-Kit의 억제의 분석은, ELISA에 의한 포스포-c-Kit의 감소에 의해 측정된 바와 같이, 1.1 μM의 EC₅₀을 갖는 c-Kit 인산화의 억제를 나타내었다.

실시예 1의 화합물로 처리한 후 MG63 세포에서 PDGFR-β의 억제의 분석은, ELISA에 의한 포스포-PDGFR-β의 감소에 의해 측정된 바와 같이, 0.7 μM의 EC₅₀을 갖는 포스포-PDGFR-β의 억제를 나타내었다.

실시예 88

혈관신생의 억제

VEGFR-2에 대한 실시예 1의 화합물의 효과를 추가로 검사하기 위해, 화합물을 CHO-VEGF 매트리겔 혈관신생 모델에서 평가하였다.

방법: 110 Nu/Nu 마우스 (n = 10/군)를 연구 시작 전에 1주 순응시켰다. 1일째에, 0.5 mL 매트리겔 중 5 x 10⁶ VEGF-CHO 세포를 마우스의 상복부에 걸쳐 피하 주사하였다. 제1일에, 마우스에게 비히클, 실시예 1의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 또는 100 mg/kg의 경구 투여량을 qdx5의 투여량 스케줄로 투여하였다. 5일 후, 매트리겔 플러그를 마우스로부터 제거하고, 그 내의 헤모글로빈 농도를 정량하였다.

결과:

도 13은 실시예 1의 화합물 10 mg/kg, 30 mg/kg 및 100 mg/kg으로 처리한 후 CHO-VEGF 매트리겔 모델에서 VEGF-매개 혈관신생의 억제를 나타내는 그래프이다. 도 13에 나타난 바와 같이, 5일에 걸친 화합물의 투여량은 VEGF-매개 혈관신생을 유의하게 억제하였다.

실시예 89

투여량 스케줄 효과

돌연변이형 B-Raf 억제, 종양 반응, 및 혈장 내의 화합물 농도 사이의 상관관계를 평가하기 위한 실시예 1의 화합물의 투여량 스케줄 연구를 A375M 인간 흑색종 이종이식 모델에서 수행하였다.

도 7A에 나타난 바와 같이, 명백한 투여량-반응 상관관계가 실시예 1의 화합물을 사용한 A375M 모델에서 수립되었다. 도 7A의 데이타는 실시예 1의 화합물이 일일로 주어졌을 때 100 mg/kg에서 종양 퇴화를 유도하며, 종양 퇴화는 돌연변이형 B-Raf의 지속된 억제와 관련됨을 나타낸다 (도 7B에서 포스포-MEK의 억제에 의해 나타내어진 바와 같음). 하지만, 상기 투여량 스케줄에 대해, 실시예 1의 화합물은 30 mg/kg 및 100 mg/kg 투여량 수준에서 마우스에서 충분한 내성이 없었는데, 이는 마우스가 14회째까지 그 처음 체중의 평균 10％를 소실하였기 때문이다. 따라서, 가장 효능 있는 투여량인 100 mg/kg을 하기 기재된 바와 같이 추가로 평가하였다.

방법:

실시예 84에서와 같이, 3 x 10⁶ A375M 인간 흑색종 세포를 중량이 대략 24 g인 10 내지 12주령 암컷 Nu/Nu 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 대략 200 mm³에 도달했을 때, 마우스를 종양에 의해 각각의 9마리 마우스의 4개의 군으로 무작위화시키고, 실시예 1의 화합물로 처리를 시작하였다. 마우스를 비히클 단독으로, 또는 실시예 1의 화합물로 하기 투여량 처방으로 32일 동안 경구 위관영양에 의해 투여하였다: 28일에 걸쳐 q2d, q3d or q4d 스케줄로 100 mg/kg.

상기 연구에서, 종양에서 표적 조절을 모니터링하기 위해, 종양-함유 마우스의 위성 군을 투여하였다. 종양 및 혈장을 q2d 군에 대해 5회 투여량 후, 및 q4d 군에 대해 3회 투여량 후 다양한 시점에서 마우스로부터 수확하였다. 종양을 시시예 84에 기재된 바와 같이, 포스포-MEK 수준의 웨스턴 블롯 분석에 대해 가공하고, 혈장을 약물 수준의 측정을 위해 단리하였다.

결과:

도 14A는 q2d, q3d 또는 q4d 투여량 처방으로 실시예 1의 화합물 100 mg/kg로 처리할 경우, 마우스에서 A375M 흑색종 종양의 종양 부피의 평균 감소를 나타내는 그래프이다. 도 14A에 나타난 바와 같이, q2d, q3d 또는 q4d 스케줄로 100 mg/kg으로 경구 투여된 실시예 1의 화합물은 유의한 효능을 초래하였다. 도 14B에 나타난 웨스턴 블롯 분석은 q2d 샘플로 투여후 48시간까지 화합물로 처리된 마우스에서의 종양이 비히클로 처리된 대조군에 비해 감소된 포스포-MEK 수준을 가짐을 나타낸다. q4d 샘플에서, 72시간까지 3가지 종양 중 단 하나만이 감소된 수준의 포스포-MEK를 가졌으며, 96시간까지 모든 화합물로 처리된 종양이 비히클로 처리된 종양에 필적하는 포스포-MEK 수준을 가졌다. 상기 결과는 도 7B에 나타난 q2d 스케줄로 얻어진 결과와 일치한다.

하기 표 9에 나타난 바와 같이, q3d 및 q4d 스케줄은 중량 손실에 의해 측정된 바와 같이 시험 마우스에서 보다 충분한 내성이 있었다.

결론적으로, 표적 조절 데이타 및 효능 데이타를 함께 고려할 때, q2d 또는 q3d 스케줄은 최대 숙주 내성을 갖는 대부분의 효능 있는 종양 퇴화를 초래하는 것으로 보인다.

실시예 90

표적 혈장 농도 연구

상기 실시예 89에 기재된 바와 같이, 혈청 샘플을 실시예 1의 화합물로 처리된 마우스에 대해 취하였다. 약물 농도를 혈청 샘플로부터 측정하고, 결과를 도 15에 화합물 농도 대 시간 플롯으로서 나타내었다. 표적 조절에 대한 역치 약물 농도는, 도 14A 및 도 14B에 나타난 표적 조절 데이타를 고려하여 도 15로부터 추정할 수 있다. 도 14B에 나타난 바와 같이, 투여 후 48시간 까지의 모든 시점에서, 포스포-MEK 수준은 비히클로 처리된 종양에 비해 화합물로 처리된 종양에서 감소되었으며, 따라서 상응하는 약물 농도는 상기 역치보다 높음에 틀림없다. 도 14C에 나타난 바와 같이, 투여 후 72시간 및 96시간에는 표적 조절이 없었으며, 따라서, 상응하는 약물 농도는 상기 역치보다 낮음에 틀림없다. 결론적으로, 화합물의 역치는 약 50,000 내지 80,000 ng/mL, 예를 들어 대략 70,000 ng/mL (135μM)인 것으로 추정된다.

흥미롭게도 주목할 것은, 상기 기재된 마우스 이종이식 연구에서 표적 혈장 농도는 시험관내에서 A375M 세포에서의 표적 조절에 대한 EC₅₀ (0.16 μM)보다 대략 1000배 높다는 점이다 (표 5 참조). 이러한 차이는 실시예 1의 화합물이 혈장에 결합된 99.9％의 단백질보다 더 크기 때문에 혈장 단백질에 의해 대부분 설명될 수 있다. 이를 고려하면, 유리 약물 농도의 대강의 추정치는 대략 0.135 μM이며, 이는 A375M 세포에서의 표적 조절에 대해 측정된 시험관내 EC₅₀ 값인 0.16 μM과 근사하다.

실시예 1의 화합물의 활성에 대한 혈장 단백질 결합의 효과를 추가로 조사하기 위해, 화합물을 마우스, 래트, 개, 원숭이 또는 인간으로부터의 50％ 혈청에서 예비-배양한 후, A375M 세포 또는 Mo7e 세포에 적용하였다. 밤새 인큐베이션한 후 포스포-MEK 및 포스포-ERK 수준을 A375M 세포에서 측정하였다 (돌연변이형 B-Raf 억제에 대해 분석하기 위해). 4시간 인큐베이션한 후 포스포-c-Kit 수준을 Mo7e 세포에서 측정하였다 (c-Kit 억제에 대해 분석하기 위해). 상기 분석 결과는 하기 표 10에 요약되어 있다.

표 10의 데이타는 상이한 종으로부터의 혈장 단백질에 대한 실시예 1의 화합물의 상대 결합을 평가하는 것, 및 다른 종에 대해 마우스에서 측정된 표적 혈장 농도를 외삽하기 위한 보정 인자를 위한 기초로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 데이타에 기초하여, 래트에서의 표적 혈장 농도는 마우스에서보다 대략 5배 낮고, 인간에서의 표적 혈장 농도는 마우스에서보다 대략 10배 낮음이 추정될 것이다.

본 발명의 바람직한 실시양태를 설명하고 기재하였지만, 본 발명의 개념 및 범위를 벗어나지 않으면서 이에 다양한 변화를 줄 수 있음이 이해될 것이다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염.

<화학식 I>

상기 식에서,

각각의 R¹은 히드록시, 할로, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, (C_1-6 알킬)술파닐, (C_1-6 알킬)술포닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

R²는 C_1-6 알킬 또는 할로(C_1-6 알킬)이고;

각각의 R³은 할로, C_1-6 알킬 및 C_1-6 알콕시로부터 독립적으로 선택되고;

각각의 R⁴는 히드록시, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 할로, 카르복실, (C_1-6 알콕시)카르보닐, 아미노카르보닐, C_1-6 알킬아미노카르보닐, 카르보니트릴, 시클로알 킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알킬카르보닐, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

R¹, R², R³및 R⁴는 임의로 히드록시, 할로, C_1-6 알킬, 할로(C_1-6 알킬), C_1-6 알콕시 및 할로(C_1-6 알콕시)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있고;

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

b는 0, 1, 2 또는 3이고;

c는 1 또는 2이다.
제1항에 있어서, 각각의 R¹이 히드록시, 클로로, 플루오로, 브로모, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 트리플루오로메틸, 트리플루오로에틸, 트리플루오로메톡시, 트리플루오로에톡시, 피페리디닐, C_1-6 알킬피페리디닐, 피페라지닐, C_1-6 알킬피페라지닐, 테트라히드로푸라닐, 피리디닐 및 피리미디닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 것인 화합물.
제1항에 있어서, a가 1 또는 2이고, 적어도 하나의 R¹이 할로(C_1-6 알킬)인 화합물.
제3항에 있어서, 적어도 하나의 R¹이 트리플루오로메틸인 화합물.
제1항에 있어서, R²가 C_1-6 알킬인 화합물.
제1항에 있어서, R²가 메틸 또는 에틸인 화합물.
제4항에 있어서, R²가 메틸인 화합물.
제1항에 있어서, b가 0이고, R³이 존재하지 않는 화합물.
제1항에 있어서, b가 1이고, R³이 C_1-6 알콕시인 화합물.
제9항에 있어서, R³이 메톡시인 화합물.
제1항에 있어서, c가 1 또는 2이고, 적어도 하나의 R⁴가 할로(C_1-6 알킬)인 화합물.
제11항에 있어서, 적어도 하나의 R⁴가 트리플루오로메틸인 화합물.
제1항에 있어서, 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염.

<화학식 II>

상기 식에서,

각각의 R¹은 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 히드록시, 할로, (C_1-6 알킬)술파닐, (C_1-6 알킬)술포닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

각각의 R³은 할로, C_1-6 알킬 및 C_1-6 알콕시로부터 독립적으로 선택되고;

각각의 R⁴는 히드록시, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 할로, 카르복실, (C_1-6 알콕 시)카르보닐, 아미노카르보닐, 카르보니트릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알킬카르보닐, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

R¹, R², R³ 및 R⁴는 임의로 히드록시, 할로, C_1-6 알킬 및 C_1-6알콕시로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있고;

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

b는 0, 1, 2 또는 3이고;

c는 1 또는 2이다.
하기 화학식 III의 화합물 또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염.

<화학식 III>

상기 식에서,

각각의 R¹은 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 히드록시, 할로, (C_1-6 알킬)술파닐, (C_1-6 알킬)술포닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

각각의 R⁴는 히드록시, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 할로, 카르복실, (C_1-6 알콕시)카르보닐, 아미노카르보닐, 카르보니트릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알킬카르보닐, 페닐 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고;

R¹ 및 R⁴는 임의로 히드록시, 할로, C_1-6 알킬 및 C_1-6알콕시로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있고;

a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;

c는 1 또는 2이다.
제14항에 있어서, 각각의 R¹이 히드록시, 클로로, 플루오로, 브로모, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 트리플루오로메틸, 트리플루오로에틸, 트리플루오로메톡시, 트리플루오로에톡시, 피페리디닐, C_1-6 알킬피페리디닐, 피페라지닐, C_1-6 알킬피페라지닐, 테트라히드로푸라닐, 피리디닐 및 피리미디닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 것인 화합물.
제15항에 있어서, a가 1 또는 2이고, 적어도 하나의 R¹이 할로(C_1-6 알킬)인 화합물.
제16항에 있어서, 적어도 하나의 R¹이 트리플루오로메틸인 화합물.
제14항에 있어서, a가 1인 화합물.
제18항에 있어서, R¹이 트리플루오로메틸인 화합물.
제14항에 있어서, c가 1 또는 2이고, 적어도 하나의 R⁴가 할로(C_1-6 알킬)인 화합물.
제20항에 있어서, 적어도 하나의 R⁴가 트리플루오로메틸인 화합물.
제21항에 있어서, c가 1인 화합물.
{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸페닐)-아민,

(2-플루오로-5-피리딘-3-일-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-피리딘-4-일-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이 미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(3-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(3-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-클로로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-클로로-3-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-플루오로-3-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메톡시-페닐)-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-(1-메틸-5-{2-[5-메틸-4-(3-트리플루오로메틸-페닐)-1H-이미다졸-2-일]-피리딘-4-일}-1H-벤조이미다졸-2-일)-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-(1-메틸-5-{2-[5-메틸-4-(4-트리플루 오로메틸-페닐)-1H-이미다졸-2-일]-피리딘-4-일옥시}-1H-벤조이미다졸-2-일)-아민,

2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 에틸 에스테르,

(2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-일)-메탄올,

2-{4-[1-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르보니트릴,

(3-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸술파닐-페닐)-아민,

(3-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

[4-플루오로-3-(테트라히드로-푸란-3-일)-페닐]-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-브로모-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-플루오로-3-이소프로필-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸술파닐-페닐)-아민,

(2-플루오로-5-이소프로필-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(5-tert-부틸-2-플루오로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-피리딘-3-일-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르보니트릴,

(2-클로로-4-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(5-tert-부틸-2-클로로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-피리딘-4-일-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(4-페닐-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-클로로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(4-페닐-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(4-페닐-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(3-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(3-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(4-페닐-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(4-페닐-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-클로로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-메틸-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-클로로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-메틸-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-tert-부틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-메틸-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-메틸-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(3-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(5-tert-부틸-플루오로-페닐-{1-메틸-5-[2-(5-메틸-4-페닐-1H-이미다졸-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르복실산 메틸 에스테르,

2-{4-[2-(2-클로로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 에틸 에스테르,

(2-플루오로-4-트리플루오로메틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2-클로로-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(2,5-디메톡시-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(3,5-디메톡시-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(2-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(2-에틸-페닐)-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘 -4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

(4-에틸-피페라진-1-일)-(2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-일)-메타논,

2-{4-[2-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르복실산 (2-히드록시-에틸)-아미드,

{1-에틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(2-플루오로-5-트리플루오로메틸-페닐)-{6-메톡시-1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-아민,

{6-메톡시-1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

(4-에틸-피페라진-1-일)-(2-{4-[1-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-일)-메타논,

{1-에틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸-페닐)-아민,

2-{4-[1-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐아미노)-1H-벤조이미다졸-5-일옥시]-피리딘-2-일}-3H-이미다졸-4-카르복실산 (2-히드록시-에틸)-아미드,

2-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일아미노}-5-트리플루오로메틸-페놀, 및

3-{1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]- 1H-벤조이미다졸-2-일아미노}-6-트리플루오로메틸-페놀;

또는 그의 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그, 또는 상기 화합물, 호변이성질체, 입체이성질체, 다형체, 에스테르, 대사물질 또는 프로드러그의 제약상 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물.
제23항에 있어서,

화학식

의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는

화학식

의 상기 화합물의 호변이성질체 또는 상기 호변이성질체의 제약상 허용되는 염.
제1항 또는 제24항의 화합물, 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 함께 포함하는 조성물.
제1항 또는 제24항의 화합물, 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조성물을 인간 또는 동물 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간 또는 동물 대상체에서 암 장애를 치료하는 방법.
제26항에 있어서, 조성물이 Raf 키나제 또는 돌연변이형 B-Raf 키나제를 억제하는 것인 방법.
제26항에 있어서, 암 치료용의 1종 이상의 추가의 작용제를 인간 또는 동물 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제28항에 있어서, 암 치료용의 1종 이상의 추가의 작용제가 이리노테칸, 토포테칸, 겜시타빈, 5-플루오로우라실, 류코보린, 카르보플라틴, 시스플라틴, 탁산, 테자시타빈, 시클로포스파미드, 빈카 알칼로이드, 이마티닙, 안트라시클린, 리툭시맙 및 트라스투주맙으로부터 선택된 것인 방법.
제26항에 있어서, 암 장애가 흑색종인 방법.
제26항에 있어서, 암 장애가 유방암 또는 전립선암인 방법.
암의 치료를 위한 제1항 또는 제24항의 화합물, 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염의 용도.
암 치료용 의약의 제조에 있어서의 제1항 또는 제24항의 화합물, 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염의 용도.
제1항 또는 제24항의 화합물, 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 MAPK 신호전달 경로 중 하나 이상의 세린/트레오닌 키나제를 억제하는 방법, 또는 상기 대상체에서 MAPK 신호전달 경로 중 세린/트레오닌 키나제에 의해 매개되는 생물학적 상태를 치료하는 방법.
제34항에 있어서, 조성물이 Raf 키나제를 억제하는 것인 방법.
제34항에 있어서, 조성물이 돌연변이형 B-Raf 키나제를 억제하는 것인 방법.
제34항에 있어서, 생물학적 상태가 흑색종, 갑상선 유두상암, 난소암, 결장암, 췌장암, 폐암 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
제34항에 있어서, 조성물이 {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸페닐)-아민 또는 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염을 포함하는 것인 방법.
제1항 또는 제24항의 화합물, 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 수용체 티로신 키나제가 VEGFR-2, FGFR-3, c-Kit, PDGFR-β 및 CSF-1R로 이루어진 군으로부터 선택되는, 상기 대상체에서 상기 수용체 티로신 키나제를 억제하는 방법, 또는 상기 대상체에서 상기 수용체 티로신 키나제에 의해 매개되는 생물학적 상태를 치료하는 방법.
제39항에 있어서, 생물학적 상태가 비만세포성 백혈병, 적백혈병, 생식세포 종양, 소세포 폐암종, 위장관 기질 종양, 급성 골수성 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 다발 골수종, 난소암종 및 유방암종으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
제39항에 있어서, 조성물이 {1-메틸-5-[2-(5-트리플루오로메틸-1H-이미다졸-2-일)-피리딘-4-일옥시]-1H-벤조이미다졸-2-일}-(4-트리플루오로메틸페닐)-아민 또 는 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 또는 상기 화합물의 호변이성질체의 제약상 허용되는 염을 포함하는 것인 방법.