BRPI0612845A2 - composto, formulação farmacêutica, e, uso de um composto - Google Patents

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Mark Matteucci
Jian-Xin Duan
Hailong Jiao
Jacob Kaizeman
Steve Ammons
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Threshold Pharmaceuticals Inc
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Abstract

COMPOSTO, FORMULAçãO FARMACêUTICA, E, USO DE UM COMPOSTO. Drogas alquiladoras de fosforoamidato podem ser usadas para tratar câncer quando administradas sozinhas ou em combinação com um ou mais agentes anti-neoplásicos.

Description

"COMPOSTO, FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA, E, USO DE UM COMPOSTO"
Referências cruzadas a pedidos relacionados
Este pedido reivindica o benefício do Pedido de patenteprovisional dos E.U.A. n° 60/695.755 depositado em 29 de junho de 2005,que é incorporado aqui por referência.
Fundamentos da invenção
Campo da invenção
A presente invenção proporciona composições e métodos paratratar câncer e outras condições de doença hiperproliferativa com pró-drogasde alquilador de fosforoamidato. A presente invenção refere-se de umamaneira geral aos campos da química, biologia, biologia molecular,farmacologia, e medicina.
Descrição da técnica relacionada
Agentes alquiladores ("alquiladores" ou "mostardas") usadosna quimioterapia do câncer compreendem um grupo distinto de químicos quetêm a capacidade de alquilar macromoléculas biologicamente vitais, comoDNA, em condições fisiológicas (ver Hardman et al., The PharmacologicalBasis of Therapeuties, 2001, 1389-1399, McGraw-Hill, New York, E.U.A.).A alquilação de DNA é postulada como sendo um mecanismo importante naatividade antitumor dos alquiladores. Os alquiladores quimioterápicos atuamcomo eletrófilos fortes, por exemplo, por meio da formação de intermediáriosônio estabilizados com heteroátomo adjacente, como um cátion aziridínio ouaziridina.
Alquiladores baseados em fosforoamidato usados na terapia docâncer, como Ciclofosfamida e Ifosfamida, são uma subclasse importante dealquiladores quimioterápicos. Ciclofosfamida e Ifosfamida são ativadas, cadauma, no fígado e o alquilador ativo liberou porções nucleofílicas alquiladas,como o DNA nas células de tumor, atuando como um agente quimioterápico.Se os alquiladores ativos são liberados para longe do tumor, então DNA eoutras porções nucleofílicas, como os grupos fosfato, amino, sulfidrila,hidroxila, carboxila e imidazo de biomoléculas de células saudáveis não-cancerosas, podem se tornar alquilados. Referida alquilação de célulassaudáveis pode resultar em eventos tóxicos indesejados em pacientes (verHardman et ai., acima).
<formula>formula see original document page 3</formula>
Permanece uma necessidade de novos alquiladores à base defosforoamidato que podem ser usados para tratar câncer ou outras condiçõesde doenças hiperproliferativas, de preferência compostos menos tóxicos paracélulas normais. A presente invenção atende estas necessidades e proporcionapró-drogas de alquilador de fosforoamidato inéditas e também métodos deterapia empregando as mesmas, como resumido na seção a seguir.
Breve resumo da invenção
Em um aspecto a presente invenção proporciona compostosque são pró-drogas de alquilador de fosforoamidato ativadas com hipoxia emétodos para sua síntese. As pró-drogas de alquilador de fosforoamidato dapresente invenção podem apresentar a fórmula Alq-T, em que Alq é umalquilador de fosforoamidato, T é L-Z3 em que L é um ligante, Z3 é um grupobiorredutor.
Em um aspecto, a presente invenção proporciona pró-drogasde alquilador de fosforoamidato de fórmula (I):
<formula>formula see original document page 3</formula>Y1 é O, S, NR6, ou NSO2R6 em que cada R6 éindependentemente Q-C6 alquila, CrC6 heteroalquila, arila, ou heteroarila;
Y2 é O, S, NR6, NCOR6, ou NSO2R6;
cada um de R1-R5 é independentemente hidrogênio, hidroxila,amino, CrC6 alquila, Ci-C6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila, heterociclila,C1-C6 alcóxi, CrC6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila, heteroarila, CrC6acila, CrC6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla; ou, em conjunto,
quaisquer dois de R1-R5 formam um C3-C10 heterociclo; ou
cada um de R1-R5 é independentemente um disparador T em que T é L-Z3L é selecionado dentre
- [C(Z 1 )2-Y3 ] ν- [C(=0)-0] q- [C(Z 1 )2-Z2-Y4] u- [C(Z 1 )2] z- [-C(Zi)=C(Zi)Jg-Z3 e -[C(Z1)2-Y3]v-(S(=0)2)q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Zi)2]2-[C(Zi)=C(Zi)Jg-Z3; em que cada um de z, v, q, u, e g é independentemente 0ou 1;
Y3 é S, O, ou NR7 em que cada R7 é independentementehidrogênio, hidroxila, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, CrC6 alcóxi, CrC6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila,heteroarila, Q-Cô acila, CrC6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla;Y4 é O, S, ou -NR7-C(=0)-0-;
cada Zj é independentemente hidrogênio, halogênio, Ci-C6alquila, CpC6 heteroalquila, arila, heteroarila, C3-Cs cicloalquila,heterociclila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla;Z2 é C1-C6 alquileno, C1-C6 heteroalquileno,
Y4 e O, S, ou -NR7-C(=O)-O-;
em que cada X1 é independentemente N ou CR8, cada R8 éindependentemente hidrogênio, halogênio, nitro, ciano, CO2H, CrC6 alquila,C1-C6 heteroalquila, C1-C6 cicloalquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquilamino, C1-C6 dialquilamino, arila, CON(R7)2, CrC6 acila, CrC6 heteroacila, aroíla, ouheteroaroíla;
X2 é NR7, S, ou O; e
Z3 é selecionado do grupo que consiste de:
<formula>formula see original document page 5</formula>
com a condição de que na fórmula (I):
(i) pelo menos dois de R1-R5 são selecionados do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila;
(ii) pelo menos um de R1-R5 é selecionado do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-Ci-C6alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, eheteroalquilsulfoniloxialquila; e pelo menos um de NR2R3 e NR4R5 é-O; ou
(iii) NR2R3 e NR4R5 são ambos, em conjunto
um isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica de isômeros, bioisósteroes, farmacóforos, um sal, solvato, hidrato,ou uma pró-droga farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em uma concretização, Z3 é um grupo biorredutor que podeaceitar um ou mais elétrons em uma reação de oxidação-redução.
Em uma concretização relacionada, a presente invençãoproporciona pró-drogas de alquilador de fosforoamidato apresentando IC50 ouGI5o, em células sob hipoxia, de 50 μΜ a 0,01 nm. Em uma concretizaçãorelacionada, a presente invenção proporciona pró-drogas de alquilador defosforoamidato apresentando citotoxicidade hipóxica que é até um milhão devezes, até 10.000 vezes, e até 1000 vezes menos tóxica em célulasnormóxicas correspondentes. Em uma concretização relacionada, acitotoxicidade celular é medida por meio de ensaios de antiproliferação eusando-se o valor IC5o relativo de um composto em células hipóxicas enormóxicas. Em uma concretização relacionada, a citotoxicidade celular émedida por meio de ensaios clonogênicos e usando-se os valores relativos deCio, C5o, ou C90 dos compostos em células hipóxicas e normóxicas.
Em outra concretização relacionada, a presente invençãoproporciona pró-drogas de alquilador de fosforoamidato apresentando valoresIC5o, em células sob hipoxia, de 50 μΜ a 0,01 nM. Em outra concretizaçãorelacionada, a presente invenção proporciona pró-drogas de alquilador defosforoamidato que são até 5000 menos tóxicas em células normóxicascorrespondentes conforme medido pelos valores IC5o relativos em célulashipóxicas e normóxicas. Em outra concretização relacionada, a presenteinvenção proporciona pró-drogas de alquilador de fosforoamidatoapresentando uma IC5o em células em hipoxia de 50 μΜ a 0,01 nM e que é até1000 vezes menos tóxica em células normóxicas correspondentes conformemedido pelos valores IC50 relativos em células hipóxicas e normóxicas.
Em uma concretização relacionada, pró-droga de alquilador defosforoamidato da presente invenção apresenta uma citotoxicidade hipóxicade 0,1 nM a 50 μΜ e uma relação de hipoxia citotoxicidade, HCR, medidapor meio da relação de citotóxicas normóxicas e hipóxicas, e definido commais detalhe mais adiante no pedido, de 10 a 100.000. Em uma concretizaçãorelacionada, a pró-droga de alquilador de fosforoamidato da presenteinvenção apresenta uma citotoxicidade hipóxica de 0,1 nM a 50 μΜ e umaHCR de 25 a 100.000. Em outra concretização relacionada, pró-droga dealquilador de fosforoamidato da presente invenção apresenta umacitotoxicidade hipóxica de 0,1 nM a 5 μΜ e uma HCR de 50 a 10.000.
Em um aspecto a presente invenção proporciona alquiladoresde fosforoamidatos inéditos para tratamento de câncer e outras doençashiperproliferativas.
Em um aspecto, a presente invenção proporciona umaformulação farmacêutica compreendendo as pró-drogas de alquilador defosforoamidato da invenção e um excipiente, veículo, ou diluentefarmaceuticamente aceitável.
Em um aspecto, a presente invenção proporciona um métodode tratar câncer e outras doenças hiperproliferativas compreendendoadministrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da invenção ou uma que é conhecida, a umpaciente que necessita desse tipo de referida. Em uma concretização, o câncertratado é resistente a terapia de primeira linha, segunda linha, ou terceiralinha, ou é um câncer reicindente. Em outra concretização, o câncer tratado éum câncer metastático. Em outra concretização, a pró-droga de alquilador defosforoamidato da invenção, ou uma que é conhecida, é administrada emcombinação com pelo menos outro agente anticâncer.
Breve descrição dos desenhos
Figura 1 demonstra o efeito do Composto 25 (50 mg/kg) sobrecrescimento de tumor no modelo de enxerto exógeno H460 em camundongo.
Figura 2 demonstra o efeito do Composto 25 (100 mg/kg)sobre crescimento de tumor no modelo de enxerto exógeno H460 emcamundongo.
Figura 3 demonstra o efeito do Composto 25 (150 mg/kg)dosado em combinação com CDDP sobre crescimento de tumor no modelo deenxerto exógeno H460 em camundongo.
Figura 4 demonstra o efeito do Composto 25 dosado emcombinação com CDDP sobre crescimento de tumor no modelo de enxertoexógeno H460 em camundongo.
Figuras 5, 6 e 7 demonstram o efeito do Composto 25 emcombinação com Gemcitabina sobre crescimento de tumor no modelo deenxerto exógeno H460 em camundongo.
Descrição detalhada da invenção
A descrição detalhada dos diferentes aspectos e concretizaçõesda presente invenção é organizada como a seguir: Seção I proporcionadefinições úteis; Seção II descreve os compostos da invenção e métodos parapreparação dos mesmos; Seção III descreve métodos de tratamento, terapias,administrações, e formulações, empregando os compostos da invençãosozinhos ou em combinação; e Seção IV proporciona exemplos de métodossintéticos e ensaios biológicos para os compostos da invenção. Esta descriçãodetalhada é organizada em seções apenas visando a conveniência do leitor, erevelação encontrada em qualquer seção é aplicável a qualquer aspecto dainvenção.
I. Definições
As definições a seguir são proporcionadas para auxiliar oleitor. Exceto se definido de outra forma, todos os termos de técnica,anotações e outros termos médicos ou científicos ou a terminologia usadaaqui devem ter os significados comumente compreendidos por aqueles comprática nas técnicas químicas e médicas. Em alguns casos, termos comsignificados comumente compreendidos são definidos aqui visando clarezae/ou fácil referência, e a inclusão de referidas definições aqui não deveria serinterpretada como representando uma diferença substancial relativamente àdefinição do termo como geralmente compreendido na técnica.
Como usado aqui, "um" ou "uma" meio "pelo menos um" ou"um ou mais".
"Alquila" significa um radical hidrocarboneto monovalentesaturado linear ou um radical hidrocarboneto monovalente saturadoramificado apresentando o número de átomos de carbono indicado no prefixo.Como usado nesta revelação, os prefixos (CrCqq), Crqq, ou Ci-Cqq, em queqq é um número inteiro de 2 a 20, têm os mesmos significados. Por exemplo,(CrC6) alquila, Cr8 alquila, ou Cr C8 alquila inclui metila, etila, n-propila, 2-propila, n-butila, 2-butila, t-butila, pentila, e análogos. Para cada uma dasdefinições dadas aqui (p. ex., alquila, alquenila, alcóxi, aralquilóxi), quandoum prefixo não é incluído para indicar o número de átomos de carbono dacadeia principal em uma porção alquila, o radical ou porção do mesmopossuirá seis ou menos átomos de carbono na cadeia principal. (CrC6) alquilapode ser opcionalmente substituído adicionalmente por substituintes,incluindo por exemplo, deutério ("D"), hidroxila, amino, mono ou di(Ci-C6)alquil-amino, halo, C2-C6 alquenil éter, ciano, nitro, etenila, etinila, CrC6alcóxi, CrC6 alquiltio, -COOH, -CONH2, mono- ou di(d-C6)alquilcarboxamido, -SO2NH2, -OSO2-(CrC6) alquila, mono ou di(CrC6)alquilsulfonamido, arila, heteroarila, alquilsulfonilóxi, heteroalquilsulfonilóxi,arilsulfonilóxi ou heteroarilsulfonilóxi.
"Alquenila" significa um radical hidrocarboneto monovalentelinear ou um radical hidrocarboneto monovalente ramificado apresentando onúmero de átomos de carbono indicado no prefixo e contendo pelo menosuma dupla ligação, porém não mais do que três duplas ligações. Por exemplo,(C2-C6) alquenila inclui, etenila, propenila, 1,3-butadienila e análogos.Alquenila pode ser opcionalmente substituído adicionalmente porsubstituintes, incluindo por exemplo, deutério ("D"), hidroxila, amino, monoou di(Ci-C6) alquila amino, halo, C2-C6 alquenil éter, ciano, nitro, etenila,etinila, CrC6 alcóxi, CrC6 alquiltio, -COOH, -CONH2, mono- ou di(CrC6)alquilcarboxamido, -SO2NH2, -OSO2-(Ci-Ce) alquila, mono ou di(Ci-C6)alquilsulfonamido, arila, heteroarila, alquila ou heteroalquilsulfonilóxi, e arilaou heteroarilsulfonilóxi.
"Alquilador" significa uma porção reativa capaz de formaruma ligação alquila covalente com macromoléculas via uma reaçãoeletrofílica com um nucleófilo na macromolécula. "Alquilador defosforoamidato" significa um alquilador para o qual um eletrófilo deaziridínio ou aziridina está presente ou é gerado por meio de ciclizaçãointramolecular.
"Alquileno" significa um radical hidrocarboneto divalentesaturado linear apresentando de um a doze átomos de carbono ou um radicalhidrocarboneto divalente saturado ramificado apresentando de um a dozeátomos de carbono opcionalmente substituídos por substituintes incluindo porexemplo, deutério ("D"), hidroxila, amino, mono ou di(CrC6)alquila amino,halo, C2-C6 alquenil éter, ciano, nitro, etenila, etinila, CrC6 alcóxi, CrC6alquiltio, -COOH, -CONH2, mono- ou di- -SO2NH2, -OSO2-(Ci-C6) alquila,mono ou di(CrC6) alquilsulfonamido, arila, heteroarila, alquila ouheteroalquilsulfonilóxi, e arila ou heteroarilsulfonilóxi. Por exemplo,alquileno inclui metileno, etileno, propileno, 2- metil-propileno, pentileno,hexileno, e análogos.
"Heteroalquileno" tem substancialmente o significado dadoacima para um alquileno exceto que um ou mais heteroátomos (i.e. oxigênio,enxofre, nitrogênio e/ou fosforoso) podem estar presentes no bi-radicalalquileno. Por exemplo, heteroalquileno inclui, -CH2OCH2O-,-CH2CH2OCH2CH2-, -CH2CH2N(CH3)CH2CH2-, -CH2CH2SCH2CH2-, eanálogos."Arila" refere-se a um radical hidrocarboneto aromáticomonocíclico ou bicíclico monovalente com de 6 a 10 átomos de anel que ésubstituído independentemente por de um a oito substituintes, de preferênciaum, dois, três, quatro ou cinco substituintes selecionados dentre deutério("D"), alquila, cicloalquila, cicloalquilalquila, halo, nitro, ciano, hidroxila,alcóxi, amino, acilamino, mono- alquilamino, di-alquilamino, haloalquila,haloalcóxi, heteroalquila, COR (em que R é hidrogênio, alquila, cicloalquila,cicloalquil-alquila, fenila ou fenilalquila), -(CR1Ru)n-COOR (em que η é umnúmero inteiro de 0 a 5, R' e R" são independentemente hidrogênio ou alquila,e R é hidrogênio, alquila, cicloalquila, cicloalquilalquila, fenila oufenilalquila) ou -(CR'R")n-CONRxRy (em que η é um número inteiro de 0 a 5,R' e R" são independentemente hidrogênio ou alquila, e Rx e Ry sãoindependentemente selecionado dentre hidrogênio, alquila, cicloalquila,cicloalquilalquila, fenila ou fenilalquila). Em uma concretização, Rx e Ry emconjunto são cicloalquila ou heterociclila. Mais especificamente, o termo arilainclui, embora sem limitação, fenila, bifenila, 1-naftila, e 2-naftila, e as suasformas substituídas.
"Cicloalquila" refere-se a um radical hidrocarboneto cíclicomonovalente de três a sete carbonos no anel. O grupo cicloalquila podeapresentar uma ou mais duplas ligações e também pode ser opcionalmentesubstituído independentemente por um, dois, três ou quatro substituintesselecionados dentre alquila, fenila opcionalmente substituído, ouque Rz é hidrogênio, alquila, haloalquila, amino, mono-alquilamino, di-alquilamino, hidroxila, alcóxi, ou fenila opcionalmente substituído). Maisespecificamente, o termo cicloalquila inclui, por exemplo, ciclopropila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, fenilciclo-hexila, 4-carboxiciclo-hexila, 2-carboxamidociclo-hexenila, 2- dimetilaminocarbonil-ciclo-hexila, e análogos.
"Heteroalquila" significa um radical alquila como definidoaqui com um, dois ou três substituintes selecionados independentementedentre ciano, -ORw, -NRxRy, e -S(0)pRz (em que ρ é um número inteiro de Oa 2), com a compreensão de que o ponto de ligação do radical heteroalquila éatravés de um átomo de carbono do radical heteroalquila. Rw é hidrogênio,alquila, cicloalquila, cicloalquil-alquila, arila, aralquila, alcoxicarbonila,ariloxicarbonila, carboxamido, ou mono- ou di-alquilcarbamoíla, Rx éhidrogênio, alquila, cicloalquila, cicloalquil-alquila, arila ou aralquila. Ry éhidrogênio, alquila, cicloalquila, cicloalquil-alquila, arila, aralquila,alcoxicarbonila, ariloxicarbonila, carboxamido, mono- ou di-alquilcarbamoilaou alquilsulfonila. Rz é hidrogênio (desde que η seja 0), alquila, cicloalquila,cicloalquil-alquila, arila, aralquila, amino, mono- alquilamino, di-alquilamino,ou hidroxialquila. Exemplos representativos incluem, por exemplo, 2-hidroxietila, 2,3-diidroxipropila, 2-metoxietila, benziloximetila, 2-cianoetila,e 2-metilsulfonil-etila. Para cada um dos indicados acima, Rw, Rx, Ry, e Rzpodem ser substituídos adicionalmente por amino, halo, flúor, alquilamino,di-alquilamino, OH ou alcóxi. Adicionalmente, o prefixo que indica o númerode átomos de carbono (p. ex., Ci-Ci o) refere-se ao número total de átomos decarbono na porção do grupo heteroalquila exclusive das porções ciano, -ORw,-NRxRy, ou -S(O)pRz.
Em uma concretização, Rx e Ry juntamente são cicloalquila ouheterociclila.
"Heteroarila" significa um radical monocíclico, bicíclico outricíclico monovalente com de 5 a 12 átomos de anel apresentando pelomenos um anel aromático contendo um, dois, ou três heteroátomos do anelselecionados dentre N, O, ou S, em que os átomos de anel remanescentes sãoC, com a compreensão de que o ponto de ligação do radical heteroarila seráno anel aromático. O anel heteroarila é opcionalmente substituídoindependentemente por de um a oito substituintes, de preferência um, dois,três ou quatro substituintes, selecionados dentre alquila, cicloalquila,cicloalquil-alquila, halo, nitro, ciano, hidroxila, alcóxi, amino, acilamino,mono-alquilamino, di-alquilamino, haloalquila, haloalcóxi, heteroalquila, -COR (em que R é hidrogênio, alquila, fenila ou fenilalquila, - (CR'R")n-COOR (em que η é um número inteiro de O a 5, R' e R" sãoindependentemente hidrogênio ou alquila, e R é hidrogênio, alquila,cicloalquila, cicloalquil-alquila, fenila ou fenilalquila), ou - (CR'R")n-CONRxRy (em que η é um número inteiro de O a 5, R1 e R" sãoindependentemente hidrogênio ou alquila, e Rx e Ry são, independentementeum do outro, hidrogênio, alquila, cicloalquila, cicloalquil-alquila, fenila oufenilalquila). Em uma concretização, Rx e Ry em conjunto são cicloalquila ouheterociclila. Mais especificamente o termo heteroarila inclui, embora semlimitação, piridila, furanila, tienila, tiazolila, isotiazolila, triazolila,imidazolila, isoxazolila, pirrolila, pirazolila, piridazinila, pirimidinila,benzofuranila, tetraidrobenzofuranila, isobenzofuranila, benzotiazolila,benzoisotiazolila, benzotriazolila, indolila, isoindolila, benzoxazolila,quinolila, tetraidroquinolinila, isoquinolila, benzimidazolila, benzisoxazolilaou benzotienila, indazolila, pirrolopirimidinila, indolizinila, pirazolopiridinila,triazolopiridinila, pirazolopirimidinila, triazolopirimidinila, pirrolotriazinila,pirazolotriazinila, triazolotriazinila, pirazolotetrazinila, hexaazaindenila, eheptaazaindenila e os seus derivados. Exceto se indicado de outra forma, adisposição dos heteroátomos no anel pode ser qualquer disposição permitidapelas características de ligação dos átomos de anel constituintes.
"Heterociclila" ou "ciclo-heteroalquila" significa um anelcíclico não-aromático saturado ou insaturado com de 3 a 8 átomos de anel emque de um a quatro átomos de anel são heteroátomos selecionado dentre O,NR (em que R é hidrogênio, alquila, cicloalquila, cicloalquilalquila, fenila oufenilalquila), P(=0)0Rw, ou S(0)p (em que ρ é um número inteiro de 0 a 2),em que os átomos de anel remanescentes são C, em que um ou dois átomos deC podem ser opcionalmente substituídos por um grupo carbonila. 0 anelheterociclila pode ser opcionalmente substituído independentemente por um,dois, três ou quatro substituintes selecionados dentre alquila, arila, arilalquila,heteroarila, heteroarilalquila, cicloalquila, cicloalquilalquila, halo, nitro,ciano, hidroxila, alcóxi, amino, mono-alquilamino, di-alquilamino,haloalquila, haloalcóxi, -COR (em que R é hidrogênio, alquila, cicloalquila,cicloalquilalquila, fenila ou fenilalquila), -(CR'R")n-COOR (n é um númerointeiro de O a 5, R1 e R" são independentemente hidrogênio ou alquila, e R éhidrogênio, alquila, cicloalquila, cicloalquilalquila, fenila ou fenilalquila), ou-(CRRn)n-CONRxRy (em que η é um número inteiro de O a 5, R' e R" sãoindependentemente hidrogênio ou alquila, Rx e Ry são, independentemente umdo outro, hidrogênio, alquila, cicloalquila, cicloalquilalquila, fenila oufenilalquila). Mais especificamente, o termo heterociclila inclui, embora semlimitação, piridila, tetraidropiranila, N-metilpiperidin-3-ila, N-metilpirrolidin-3-ila, 2-pirrolidon-1-ila, furila, quinolila, tienila, benzotienila, pirrolidinila,piperidinila, morfolinila, pirrolidinila, tetraidro furanila, tetraidrotiofuranila,1,1 -dioxo-hexaidro-1 A6-tiopiran-4-ila, tetraidroimidazo [4,5-c] piridinila,imidazolinila, piperazinila, e piperidin-2-inila e os seus derivados. O prefixoque indica o número de átomos de carbono (p. ex., C3-Cio) refere-se aonúmero total de átomos de carbono na porção do grupo ciclo-heteroalquila ouheterociclila exclusive o número de heteroátomos.
"C1-C6 Acila" significa -CO-(Ci-C6 alquila), em que o termoalquila é como definido acima.
"CrC6 Heteroacila" significa -CO-(Ci-C6 heteroalquila), emque o termo heteroalquila é como definido acima.
"Aroíla" significam -CO-arila, em que o termo arila é comodefinido acima.
"Heteroaroíla" significa -CO-heteroaila, em que o termoheteroarila é como definido acima.
"RsuiSulfonilóxi" significa RsurS(=0)2-0- incluindoalquilsulfonilóxi, heteroalquilsulfonilóxi, cicloalquilsulfonilóxi,heterociclilsulfonilóxi, arilsulfonilóxi e heteroarilsulfonilóxi em que Rsui éalquila, heteroalquila, cicloalquila, heterociclila, arila e heteroarilarespectivamente, e em que alquila, heteroalquila, cicloalquila, heterociclila,arila e heteroarila são definidos acima. Exemplos de alquilsulfonilóxi incluemMe-S(=0)2-0-, Et- S(=0)2-0-, CF3-S(O)2-O- e análogos, e exemplos dearilsulfonilóxi incluem
<formula>formula see original document page 15</formula>
e analogos.
Grupos alquilsulfonilóxi, heteroalquilsulfonilóxi,cicloalquilsulfonilóxi, heterociclilsulfonilóxi, arilsulfonilóxi, eheteroarilsulfonilóxi podem ser grupos de saída em alquiladores defosforoamidatos e podem ser substituídos em uma célula por ácidos nucleicos,como DNA ou RNA, e imidazóis, carboxilatos, ou tióis de proteínas,causando alquilação e morte celular. A taxa de reação de vários gruposRsuisulfonilóxi com ácidos nucleicos, proteínas ou água pode ser moduladadependendo, por exemplo, da natureza retiradora de elétrons e do volumeestérico da porção Rsui e pode proporcionar alquiladores de fosforoamidatos epró-drogas dos mesmos que são mais tóxicos para tumores em geral e zonasde tumor hipóxicas, em particular em células saudáveis.
Substituintes" significam, juntamente com substituintesparticularmente descritas na definição de cada um dos grupos acima, aquelesselecionados dentre: deutério, -halogênio, -OR', -NR'R", -SR', -SiR1R "R"', -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR1R", -NRuC(O)R', -NR'-C(0)NR"R"', -NRnC(O)2R', -NH-C(NH2)=NH, -NR1C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', - S(O)R', -S(O)2R', -S(O) 2NR'R", -NR1S(O)2R", -CN e -NO2, -25 compreendendo de zero até o número total de valências abertas no radical; eem que R', R" e R'" são selecionados independentemente dentre hidrogênio,grupos Ci-B alquila, C3.6 cicloalquila, C2_g alquenila, C2_g alquinila, arila nãosubstituído e heteroarila, (arila não substituída)-Ci.4 alquila, e arilóxi nãosubstituído-C 1.4 alquila, arila substituído por de 1 a 3 halogênios, Q.g alquilanão substituído, Ci_s alcóxi ou Q.g tioalcóxi, ou grupos arila não substituído-C1-4 alquila. Quando R1 e R" são ligados ao mesmo átomo de nitrogênio, elespodem ser combinados com o átomo de nitrogênio para formar um anel comde 3, 4, 5, 6, ou 7 membros. Por exemplo, -NR'R" significa que inclui 1-pirrolidinila e 4-morfolinila. Outros substituintes vantajosos incluem cada umdos substituintes arila acima ligados a um átomo de anel por um alquileno, emconjunto, com de 1 a 4 átomos de carbono. Dois dos substituintes em átomosadjacentes do anel arila ou heteroarila podem ser substituídos opcionalmentepor um substituinte da fórmula -T - C(0)-(CH2)q-U -, em que TeU sãoindependentemente -NH-, -O-, -CH2- ou uma ligação simples, e q é umnúmero inteiro de 0 a 2. Alternativamente, dois dos substituintes em átomosadjacentes do anel arila ou heteroarila podem ser opcionalmente substituídospor um substituinte da fórmula -A- (CH2)1JB-, em que AeB sãoindependentemente -CH2-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(O) 2NR'- ouuma ligação simples, e r é um número inteiro de 1 a 3. Uma das ligaçõessimples do novo anel assim formado pode ser opcionalmente substituída poruma dupla ligação. Alternativamente, dois dos substituintes em átomosadjacentes do anel arila ou heteroarila podem ser opcionalmente substituídospor um substituinte da fórmula -(CH2)s-X5-(CH2)t-, em que s e t sãoindependentemente números inteiros de O a 3, e X5 é -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, ou -S(O)2NR'-. O substituinte R' em -NR'- e -S(O)2NR'- é selecionadodentre hidrogênio ou Ci_6 alquila não substituído.
Determinados compostos da presente invenção possuemátomos assimétricos de carbono (centros ópticos) ou duplas ligações; osracemizados, diaestereômeros, isômeros geométricos, regioisômeros eisômeros individuais (p. ex., enanciômeros separados) devem sercompreendidos no escopo da presente invenção. Os compostos da presenteinvenção também podem conter proporções não-naturais de isótopos atômicosem um ou mais dos átomos que constituem determinados compostos. Porexemplo, os compostos podem ser rádio-marcados com isótopos radioativos,como por exemplo, trítio (3H), iodo- 125 (125I) ou carbono- 14 (14C). Todas asvariações isotópicas dos compostos da presente invenção, quer radioativas ounão, devem ser compreendidas pelo escopo da presente invenção.
O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" significa queinclui sais dos compostos ativos que são preparados com bases ou ácidosrelativamente não-tóxicos, dependendo dos substituintes particularesencontrados nos compostos aqui descritos. Quando compostos da presenteinvenção contêm funcionalidades relativamente ácidas, é possível obter saisde adição de base por meio de contato da forma neutra de referidos compostoscom uma quantidade suficiente da base desejada, seja pura ou em um solventeinerte vantajoso. Exemplos de sais derivados de bases inorgânicasfarmaceuticamente aceitáveis incluem alumínio, amônio, cálcio, cobre,férrico, ferroso, lítio, magnésio, mangânico, manganoso, potássio, sódio,zinco e análogos. Sais derivados de bases orgânicas farmaceuticamenteaceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias,incluindo aminas substituídas, aminas cíclicas, aminas naturalmenteocorrentes e análogos,, como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'-dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina,isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperadina,resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromo, trietilamina, trimetilamina,tripropilamina, trometamina e análogos. Quando compostos da presenteinvenção contêm funcionalidades relativamente básicas, sais de adição deácido podem ser obtidos contactando-se a forma neutra de referidoscompostos com uma quantidade suficiente do ácido desejado, seja puro ou emum solvente inerte vantajoso. Exemplos de sais de adição de ácidofarmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles derivados de ácidosinorgânicos, como ácido clorídrico, bromídrico, nítrico, carboxílico, mono-hidrogenocarboxílico, fosfórico, mono-hidrogenofosfórico,diidrogenofosfórico, sulfurico, mono-hidrogenossulfurico, iodídrico, ou ácidofosforoso e análogos, e também os sais derivados de ácidos orgânicosrelativamente não-tóxicos, como acético, propiônico, isobutírico, malônico,benzóico, succínico, subérico, fumárico, mandélico, ftálico,benzenossulfônico, p-tolilsulfônico, cítrico, tartárico, metanossulfônico, eanálogos. Inclui-se também sais de aminoácidos, como arginato e análogos, esais de ácidos orgânicos, como ácidos glucurônico ou galactunórico eanálogos (ver, p. ex., Berge, S.M., et al, "Pharmaceutical Salts", Journal ofPharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Determinados compostosespecíficos da presente invenção contêm tanto funcionalidades básicas comotambém ácidas que permitem que compostos sejam convertidos a base ou saisde adição de ácido.
As formas neutras dos compostos podem ser regeneradas pormeio de contato do sal com uma base ou ácido, e isolamento do compostoparental da maneira convencional. A forma parental do composto difere dasvárias formas salinas em determinadas propriedades físicas,, comosolubilidade em solventes polares, mas, de outra forma, os sais sãoequivalentes à forma parental do composto para os fins da presente invenção.
Determinados compostos da presente invenção podem existirem formas não-solvatadas e também formas solvatadas, incluindo formashidratadas. De uma maneira geral, as formas solvatadas são equivaletnes aformas não-solvatadas e devem ser compreendidas no escopo da presenteinvenção. Determinados compostos da presente invenção podem existir emformas amorfas ou cristalinas múltiplas. De uma maneira geral, todas asformas físicas são equivalentes para os usos considerados pela presenteinvenção e devem ser compreendidas no escopo da presente invenção.
Como usado aqui, um "análogo de glicose" inclui mono-, di- etri-sacarídeos. O análogo de glicose inclui sacarídeos compreendendoglucosamina, N-acetil-glucosamina; frutose; manose e derivados de manose;glicose e derivados de glicose, incluindo, embora sem limitação, 2-desoxiglicose (2-DG), N-acetil-2-amino-2-desoxiglicose, de 3 a amino-3-desóxi-glicose, 2-amino-2-desóxi-glicose; e galactose e derivados degalactose incluindo, embora sem limitação, D-2-desóxi-D-galactose, D-4-amino-4-desóxi-galactose e D-2-amino-2-desóxi-galactose. Assim, o análogode glicose pode diferir de glicose ou um derivado, como DG e glucosaminapelo fato de que é um epímero do mesmo. Adicionalmente, o análogo deglicose pode ser um derivados fluorado de qualquer um dos compostosprecedentes. Além disso, o oxigênio no anel de qualquer um dos compostosprecedentes pode ser substituído por um isoéster selecionado do grupo queconsiste de S, sulfona, e análogos. Por exemplo, análogo de glicose pode ser5-tio-D-glicose ou um derivado do mesmo.
Uma linha ondulada significa o ponto de ligação de umincidam que o grupo tio é o ponto de ligação a outro grupo ou porção.
Os termos CO, C(O), C(=0), -CO- são usados aquiintercambiavelmente. Os termos CO2 e COO são usados intercambiavelmenteaqui. Os termos; SO2, S(O)2 são usados intercambiavelmente aqui. Os termosSO e S(=0) são usados intercambiavelmente aqui. Os termos PO e P(=0) sãousados intercambiavelmente aqui.
Como usado aqui, um "bioisóstero" de uma porção química,como molécula, grupo, ou átomo, significa outra porção químicaapresentando disposição espacial de par ou pares de elétrons e tamanhossimilares. Bioisósteros e bioisoesterismo são ferramentas bem conhecidaspara predizer as atividades biológias de compostos, com base na premissa deque compostos com tamanho, forma, e densidade de elétrons similar podemapresentar atividade biológica. Substituições bioisoestéricas conhecidasincluem, por exemplo, a intercambialidade de -F, -OH, -NH2, -Cl, e -CH3; aintercambialidade de -Br e -i-C3H7; a intercambialidade de -I e -t-C^Hç; aintercambialidade de -O-, -S-, -NH-, -CH2, e -Se-; a intercambialidade de -N=, -CH=, e -P= (em porções cíclicas ou não-cíclicas); a intercambialidade degrupos fenila e piridila; a intercambialidade de -C=C- e -S- (por exemplo,benzeno e tiofeno); a intercambialidade de um nitrogênio aromático (Rar-N(Rar)-Rar) para um carbono insaturado (Rar- C(=Rar)-Rar); e aintercambialidade de -CO-, -SO-, e -SO2-. Estes exemplos não se limitam àfaixa de equivalentes bioisoestéricos, e alguém com prática na técnica serácapaz de identificar outras substituições bioisoestéricas conhecidas na técnica.Ver, por exemplo, Patani et al, 1996, Chem. Rev. 96:3147-76; e Burger, 1991,A Prog. DrugRes. 37:287-371.
Uma predição quantitativa razoável da capacidade de ligaçãoou a função de uma molécula conhecida pode ser realizada com base nadisposição espacial de um pequeno número de átomos ou grupos funcionaisna molécula. Como usado aqui, uma disposição do tipo referido é denominadaum "farmacóforo", e uma vez que o farmacóforo ou farmacóforos em umamolécula foram identificados, esta informação pode ser usada para identificaroutras moléculas contendo os mesmos farmacóforos ou similares. Referidosmétodos são bem conhecidos por pessoas com prática ordinária na técnica daquímica medicinal, e como a informação estrutural descrita neste pedidoidentifica o farmacóforo de pró-drogas de alquilador de fosforoamidato ealquiladores de fosforoamidatos. Um exemplo de programas disponíveis pararealizar buscas relacionadas com farmacóforos é o programa de busca SDPharmacophore do Chemical Computing Group (ver http: //www.chemcomp.com/fdept/prodinfo.htm).
"Opcional" ou "opcionalmente" significa que o evento oucircunstância descrita subseqüentemente pode, mas não precisa, ocorrer, e quea descrição inclui casos em que o evento ou circunstância ocorre e em que nãoocorre. Por exemplo, "grupo heterociclo opcionalmente mono- ou di-substituído por um grupo alquila" significa que o alquila pode, mas nãoprecisa, estar presente, e a descrição inclui situações em que o grupoheterociclo é mono- ou dissubstituído por um grupo alquila e situações emque o grupo heterociclo não é substituído por um grupo alquila.
Uma combinação de substituintes ou variáveis só é permissívelse uma referida combinação resulta em um composto estável ouquimicamente exeqüível. Um composto estável ou composto quimicamenteexeqüível é um em que a estrutura química não é substancialmente alteradaquando mantido a uma temperatura de 4 0C ou menos, na ausência deumidade ou outras condições quimicamente reativas, durante pelo menos umasemana.
Como usado aqui, uma "pró-droga" significa um compostoque, após administração, é metabolizado ou, de outra forma, convertido a umaforma ativa ou mais ativa com relação a pelo menos uma propriedadebiológica, relativamente a si mesmo. Para produzir uma pró-droga, umcomposto farmaceuticamente aceitável (ou um precursor vantajoso domesmo) é modificado quimicamente de tal modo que a forma modificada émenos ativa ou inativa, mas a modificação química é eficazmente reversívelem determinadas condições biológicas de tal modo que uma formafarmaceuticamente ativa do composto é gerada por meio de processosmetabólicos ou outros processos biológicos. Uma pró-droga pode apresentar,relativamente à droga, características de transporte ou estabilidade metabólicaalterada, menos efeitos colaterais ou menor toxicidade, ou aromaaperfeiçoado, por exemplo, (ver a referência Nogrady, 1985, MedicinalChemistry A Biochemical Approaeh, Oxford University Press, New York,páginas 388-392). Pró-drogas também podem ser preparadas usando-secompostos que não são drogas, mas que, após ativação em determinadascondições biológicas, geram um composto farmaceuticamente ativo. Comousado aqui uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é uma pró-drogaque, ao ser ativada, libera o alquilador de fosforoamidato ativo.
Como usado aqui, um "agente citotóxico" é um agente oucomposto que produz um efeito tóxico em células. Como usado aqui, um"agente citostático" é um agente que inibe ou suprime crescimento emultiplicação celular.
Como usado aqui "células hipóxicas" são células que seencontram em um ambiente hipóxico in vivo, como, por exemplo, em umazona de tumor hipóxica, ou in vitro. Como usado aqui "células normóxicas"são células que se encontram em um ambiente normóxico in vivo ou in vitro.Como usado aqui "citotoxicidade hipóxica" de um composto ou agente é suacitotoxicidade em células hipóxicas. Como usado aqui "citotoxicidadenormóxica" de um composto ou agente é sua citotoxicidade em célulasnormóxicas.
Como usado aqui, um "grupo bio-redutor" refere-se a umgrupo que aceita elétrons em uma reação de oxidação-redução. O grupo bio-redutor é um grupo (1) que pode ser reduzido, i.e., um grupo que pode aceitarelétrons, hidrogênio, e/ou ou um íon hidreto; (2) que pode ser reduzido in vivoe/ou in vitro\ (3) que pode ser reduzido in vivo e/ou in vitro sob hipoxia; (4)que pode ser reduzido in vivo e/ou in vitro por meio de DT-diaforase, tióis, ouvia meios fotoquímicos ou eletroquímicos; ou (5) que podem ser eliminadose/ou clivados por meio de um processo biológico,, como por meio de hidróliseenzimática, metabolismo etc.
Por exemplo, e como descrito mais detalhadamente abaixo, umgrupo biorredutor é um nitroimidazol que pode ser substituído por umavariedade de grupos. Outros exemplos de grupos biorredutors incluem,embora sem limitação, grupos baseados em nitrobenzenos com deficiência deelétrons, amidas de ácido nitrobenzóico com deficiência de elétrons,nitroazóis, nitroimidazóis, nitrotiofenos, nitrotiazóis, nitrooxazóis,nitrofuranos, e nitropirróis, em que cada uma destas classes de porções podeser opcionalmente substituída, de tal modo que o potencial redox para o grupobiorredutor se situe numa faixa em que o grupo pode ser submetido a reduçãonas condições hipóxicas de um tumor, por meio de DT-diaforase, e/ou pormeio de um tiol. Alguém com prática na técnica compreenderá, considerandoa revelação aqui apresentada, como substituir estes e outros gruposbiorredutors para proporcionar um grupo biorredutor apresentando umpotencial redox que se situa dentro de referida faixa.
De uma maneira geral, alguém com prática na técnica serácapaz de "ajustar" o potencial redox de um grupo biorredutor mediantemodificação daquele grupo para conter grupos retiradores de elétrons, gruposdoadores de elétrons, ou alguma combinação de referidos grupos. Porexemplo, grupos nitrotiofeno, nitrofurano, e nitrotiazol podem ser substituídopor um ou mais grupos doadores de elétrons, incluindo, embora semlimitação, grupos metila, metóxi, ou amina, para obter o potencial redoxdesejado. Em outro exemplo, a porção nitropirrol pode ser substituída por umgrupo retirador de elétron, incluindo, embora sem limitação, grupos ciano,carboxamida, -CF3, e sulfonamida, para se obter o potencial redox desejado.
Para tal fim, é possível usar grupos retiradores de elétron, como ciano,sulfona, sulfonamida, carboxamida, ou -CF3, e grupos retiradores de elétronsbrandos, como -CH2-halogênio, em que halogênio é -F, -Cl, ou -Br.
Como usado aqui, um "agente anti-neoplásico", "agente anti-tumor", ou "agente anti-câncer", refere-se a qualquer agente usado notratamento de câncer. Referidos agentes podem ser usados sozinhos ou emcombinação com outros compostos e podem aliviar, reduzir, melhorar,prevenir, ou colocar ou manter em um estado de remissão de sintomasclínicos ou marcadores diagnósticos associados com neoplasma, tumor oucâncer. Agentes anti-neoplásicos incluem, embora sem limitação, agentesanti-angiogênicos, agentes alquiladores ou alquiladores, antimetabólito,determinados produtos naturais, complexos de coordenação de platina,antracenodionas, uréias dissubstituídas, derivados de metil-hidrazina,supressores adrenocorticóides, determinados hormônios e antagonistas,polissacarídeos anti-câncer, quimioprotetores, e determinados extratos deervas ou outras plantas.
Como usado aqui, "câncer" refere-se a um grupo de mais de100 doenças causadas pelo crescimento descontrolado e a disseminação decélulas anormais que podem tomar a forma de tumores sólidos, linfomas, ecânceres não-sólidos, como leucemia.
Como usado aqui, "câncer maligno" refere-se a célula decâncer ou de cânceres que apresentam a capacidade de metástase, com perdade controle de crescimento e posicionai.
Como usado aqui, "neoplasma" (neoplasia) ou "tumor" refere-se a crescimento anormal de tecido ou de células novas, o que pode serbenigno ou maligno.
Como usado aqui, "tratar" uma condição ou paciente refere-sea empreender etapas para se obter resultados benéficos ou desejados,incluindo resultados clínicos. Para os fins desta invenção, resultados clínicosbenéficos ou desejados incluem, embora sem limitação, alívio oumelhoramento de um ou mais sintomas de câncer ou outras condições dedoenças hiperproliferativas, diminuição da extensão da doença, retardo oudesaceleração da progressão da doença, melhoramento, paliativo, ouestabilização do estado de doença, e outros resultados descritos abaixo.
Como usado aqui, "redução" de um sintoma ou sintomas (eequivalentes gramaticais desta expressão) significa redução da gravidade oufreqüência do(s) sintoma(s), ou eliminação do(s) sintoma(s).
Como usado aqui, "administrar" ou "administração de umadroga a um sujeito (e equivalentes gramaticais desta expressão) inclui tantoadministração direta, incluindo auto- administração, e administração indireta,incluindo o ato de prescrever uma droga. Por exemplo, como usado aqui, ummédico que instrui um paciente a auto-administrar uma droga e/ou fornece aum paciente uma prescrição de uma droga a ser administrada ao paciente.
Como usado aqui, uma "quantidade terapeuticamente eficaz"de uma droga é uma quantidade de uma droga que, quando administrada a umsujeito com câncer, exercerá o efeito terapêutico desejado, p. ex., alívio,melhora, paliativo ou eliminação de uma ou mais manifestações de câncer nosujeito. O efeito terapêutico pleno não ocorre necessariamente por meio deadministração de uma dose, e pode ocorrer apenas após administração de umasérie de doses. Assim, uma quantidade terapeuticamente eficaz pode seradministrada em uma ou mais administrações.
Como usado aqui, uma "quantidade profilaticamente eficaz" deuma droga é uma quantidade de uma droga que, quando administrada a umsujeito, exercerá o efeito profilático desejado, p. ex., prevenir ou retardar oinício (ou recorrência) de doença ou sintomas, ou reduzir a probabilidade doinício (ou recorrência) de doença ou sintomas. O pleno efeito profilático nãoocorre necessariamente por meio de administração de uma dose, e podeocorrer apenas após administração de uma série de doses. Assim, umaquantidade profilaticamente eficaz pode ser administrada em uma ou maisadministrações.
Como usado aqui, uma terapia de "segunda linha" refere-se aterapia que é dada para o tratamento de um câncer que falhou em responder aum primeiro regime de quimioterapia ou quimioterapia de "primeira linha".Diz-se que terapia de "terceira linha" refere-se a terapia que é dada para otratamento de um câncer quando tanto o tratamento inicial, terapia de primeiralinha, como também o tratamento subseqüente, terapia de segunda linha, nãofuncionam, ou cessam de funcionar.
Como usado aqui "LogP" significa uma medida delipofilicidade de uma substância determinada com base na repartição dasubstância entre octanol e água.
IIa. Compostos
A maior parte das terapias de câncer mediadas com câncer,terapias à base de alquilador de fosforoamidato, consiste de venenos,denominados agentes citotóxicos, seletivos para objetivação de células que sedividem, por exemplo, seu DNA replicante, microtúbulo, e vários fatores decrescimento e receptores de fator de crescimento. Estas drogas são eficazesporque células de câncer geralmente se dividem mais freqüentemente do quecélulas normais. No entanto, referidas drogas quase inevitavelmente nãomatam todas as células de câncer no paciente. Uma razão é que células decâncer podem mutar-se e desenvolver resistência à droga. Outra é que nemtodas as células de câncer se dividem mais freqüentemente do que célulasnormais, e células que se dividem lentamente podem ser tão, ou mesmo mais,insensíveis a referidos agentes citotóxicos do que células normais.
Algumas células de câncer encontram-se em um tumor sólidofracamente vascularizado, são incapazes de gerar a energia requerida paradivisão celular e dividem-se lentamente. À medida que o tumor cresce, elerequer um suprimento de sangue e, conseqüentemente, desenvolvimento denova vasculatura. A nova vasculatura que suporta o crescimento do tumorfreqüentemente é desordenada; deixando significativas regiões do tumor sub-vascularizadas e mesmo as regiões vascularizadas sujeitas a bloqueiointermitente. Estas regiões sub-vascularizadas e bloqueadas do tumor tornam-se hipóxicas - elas apresentam uma menor concentração de oxigênio ou umamenor pressão parcial de oxigênio do que o tecido normal correspondente, eas células nas mesmas apresentam menores taxas de divisão. Assim, aconcentração média de oxigênio de apenas dez por cento de tumores sólidosenquadra-se na faixa normal de 40 a 60 mm de Hg, e cinqüenta porcento dostumores sólidos apresentam concentrações médias de oxigênio inferiores a 10mm de Hg.
As áreas hipóxicas do tumor representam uma fontesignificativa de metástases e células de câncer resistentes a terapia (ver porexemplo, De Jaeger et al, Br J Câncer. 2001, 84(9): 1280-5 e Rofstad et al, BrJ Câncer. 1999, 80(11): 1697-707). Não é de surpreender que, então, baixosníveis de oxigênio no tumor estejam associados com uma baixa resposta àterapia, metástases incrementadas, e baixa taxa de sobrevida. Os mecanismosde ativação e ação da Ciclofosfamida e Ifosfamida podem exemplificar comoestes agentes não podem objetivar especificamente a dificuldade de matarzona hipóxica de um tumor.
Tanto a Ciclofosfamida como também a Ifosfamida são pró-drogas e podem ser ativadas oxidativamente no fígado por meio deintermediários dando alquiladores de fosforoamidatos ativos, Alquiladores 1(mostarda de ciclofosfamida) e 2 (mostarda de ifosfamida), respectivamente(ver abaixo). Os semiacetais 1 e 2 de carga neutra, podem ter uma meia-vidade muitos minutos e podem permear para dentro e para fora da célula. Emcontraste, os Alquiladores 1 e 2 aniônicos são muito menos permeáveis para amembrana celular e, uma vez formados extracelularmente, matam a célulaineficientemente por meio de alquilação de DNA celular.
Quando os alquiladores de fosforoamidatos atingem o tumor,eles geralmente matam células na zona externa do tumor normóxica, bemvascularizada, de crescimento rápido. No entanto, estes alquiladores defosforoamidatos não são efetivos para permear adentrando zonas de tumorinteriores progressivamente hipóxicas, menos vascularizadas, de crescimentomais lento, e para matar células de tumor ali existentes. Antes que qualquerum destes alquiladores ativos atinja o tumor, eles podem reagir com célulassaudáveis e resultar em toxicidade e/ou morte celular.
<formula>formula see original document page 28</formula>
Embora o tumor hipóxido seja difícil de tratar, a zona de tumorhipóxida pode gerar derivados reduzidos de vários grupos químicos (ver areferência Workman et ai., 1993, Câncer and Metast. Rev. 12: 73-82), e épossível desenvolver pró-drogas de citotoxinas para explorar referidosambientes bio-redutores (Pedidos PCT nums. US 04/009667 e US 05/08161;PCT/US2005/041959 e PCT/US2005/042095, todos para Matteucci et al).
Uma referida pró-droga reduzível com hipoxia (ou ativada por hipoxia) podeser construída empregando-se um grupo bio-redutor (Z3) juntamente com umalquilador. O grupo bio-redutor é empregado como parte de uma porçãodisparadora ligada covalentemente ou ligada ao alquilador de fosforoamidato.
Os compostos da invenção podem ser descritos geralmentecomo pró-drogas de alquilador de fosforoamidato. De uma maneira geral, aspró-drogas de alquilador de fosforoamidato da invenção apresentam aestrutura a seguir
Alq-disparador em que Alq é um alquilador de fosforoamidato,e disparador T apresenta uma estrutura L-Z3, em que o ligante L é ligado a umgrupo biorredutor Z3. Em uma concretização, o disparador T é um disparadorativado por hipoxia.Derivados de alquilador de fosforoamidato são reportados nasreferências, Borch et al, J. Med. Chem. 2000, 43: 2258-65; 2001, 44: 69-73;2001, 44: 74-7; Hernick et al J. Med. Chem. 2002, 45: 3540-8; Herniek et al,J. Med. Chem. 2003, 46: 148-54; Patentes dos Estados Unidos nums.4.908.356; 5.306.727; 5.403.932; 5.190.929; 5.472.956; e 6.656.926;Publicação de Pedido de Patente dos E.U.A. n0 US 2003/0008850; e Papot etal, Curr. Med. Chem., 2002, 2, 155-85, cujos compostos isolados são aquidivulgados, e não são o objeto da presente invenção. Em algumasconcretizações, as pró-drogas de alquilador de fosforoamidato da presenteinvenção apresentam uma ou mais das características a seguir: (i) umatoxicidade hipóxica mais elevada ou menor valor de IC50 ou ICç>o, em tecidohipóxico, (ii) menor citotoxicidade normóxica, e (iii) perfil de efeito colateralmenos tóxico ou algumas combinações destes atributos. Em algumasconcretizações, as pró-drogas de alquilador de fosforoamidato da presenteinvenção diferem de derivados conhecidos de alquilador de fosforoamidatoem virtude de: (i) a natureza do alquilador de fosforoamidato liberado, (ii) anatureza do ligante (L) e/ou do grupo biorredutor Z3, (iii) a presença de maisdo que uma porção de grupo biorredutor, ou algumas combinações destesatributos (iv) citotoxicidade seletiva à hipoxia incrementada medida pormaiores valores de HCR (v) maior solubilidade aquosa (vi) maior estabilidadeà degradação microssômica no fígado e/ou (vii) fornecimento de pró-drogaseficazes de alquilador de fosforamida que são aquirais e evitam metabolismoespecífico para enanciômero in vivo.
Para compreender porque os compostos de pró-droga dapresente invenção representam um avanço significativo relativamente aderivados conhecidos de alquilador de fosforoamidato anticâncer, será útiluma compreensão da biologia do tumor particularmente sob hipoxia e afarmacocinética e farmacodinâmica de pró-drogas aqui proporcionadas emparticular.Para eficaz terapia de tumor, uma pró-droga ativada porhipoxia deveria ser menos tóxica para células normóxicas saudáveis do quepara células de tumor hipóxicas. Em algumas concretizações, as pró-drogasativadas por hipoxia da invenção são menos ativas e menos tóxicas paracélulas normóxicas do que para células hipóxicas. Quando uma pró-droga dainvenção encontra o ambiente hipóxico redutor no interior de tecido de tumorsólido, a redução do grupo biorredutor causa dissociação do alquilador defosforoamidato ou da citotoxina ativa. O alquilador de fosforoamidato éliberado na zona de tumor e pode penetrar mais facilmente a região hipóxicado tumor sólido. Estes alquiladores de fosforoamidatos podem matar célulasse tiverem dificuldade de atingir região hipóxica do tumor sólido, ao mesmotempo que minimizam a morte de células saudáveis não-cancerosas e efeitoscolaterais tóxicos para o paciente. Assim, a presente invenção proporcionapró-drogas ativadas por hipoxia que são muito menos tóxicas para célulasnormóxicas saudáveis do que para células de tumor hipóxicas.
Em determinadas concretizações, as pró-drogas de alquiladorde fosforoamidato da presente invenção empregam porções indol quinona ouaromáticas contendo nitro como grupos biorredutors no disparador T. Notumor hipóxico, o grupo nitro é reduzido a um grupo hidroxilamino ou umgrupo amino e fluxo de um par de elétrons do grupo amino ou hidroxilaminoatravés do sistema de elétrons π conjugado do disparador T libera o alquiladorde fosforoamidato. Em outra concretização, em um tumor hipóxico, umaindol quinona é reduzida a uma indol hidroquinona, e fluxo de um par deelétrons da hidroquinona através do disparador T libera o alquilador defosforoamidato. O alquilador de fosforoamidato liberado mata células em e/oupróximo do tumor hipóxico.
Várias enzimas podem ser responsáveis pela redução do grupobiorredutor Z3 no disparador. Por exemplo, enzimas de citocromo P450redutase podem reduzir a porção nitro ou uma porção quinona a um grupobiorredutor numa primeira etapa respectivamente a um ânion de radicalsemiquinona ou NO2C-). A zona de tumor hipóxica pode apresentar umamaior concentração da enzima redutase em comparação com tecidonormóxico. Sob normoxia, como também em tecido saudável bemvascularizado, na presença de oxigênio, o ânion de radical semiquinona ouN02('-) formado pode reagir com oxigênio para reverter ao grupo biorredutore, não ultimamente, gerar ou liberar o alquilador de fosforoamidato. A porçãoarila ou heteroarila ligada covalentemente ao ânion de radical semiquinona ouN02('-) modula a sensibilidade ao oxigênio do ânion do radical.
A sensibilidade ao oxigênio do grupo biorredutor variadependendo parcialmente do potencial de redução do grupo biorredutor.Assim, por exemplo, um grupo biorredutor pode tornar-se reduzido em umazona de tumor hipóxica apresentando 1% de oxigênio, outro em uma zonaapresentando 0,1% de oxigênio, e outro ainda em uma zona apresentando0,01% de oxigênio.
Um grupo biorredutor perde parte ou toda sua especificidadehipóxica quando é tão facilmente reduzido que a enzima citocromo P450redutase ou outros agentes redutores ("agentes de redução") em tecidonormóxico saudável pode reduzir o mesmo na presença de oxigênio. Se umânion de radical de semiquinona ou NO2C-) em um SruP0 biorredutor nãoreage ou reage lentamente com oxigênio, o ânion de radical por si só podeliberar o alquilador de fosforoamidato, ou pode ser adicionalmente reduzido eliberar o alquilador de fosforoamidato, causando toxicidade para tecido ecélulas normóxicas saudáveis. As pró-drogas de alquilador de fosforoamidatoinéditas da presente invenção são mais tóxicas para o tecido e as células decâncer hipóxicas do que para o tecido e as células normóxicas saudáveis.
A facilidade ou dificuldade de reduzir o grupo biorredutor Z3pode ser medido por meio da redução potencial do grupo biorredutor e éinfluenciada pelo ligante (L), e o alquilador de fosforoamidato (Alq-H). Porexemplo, a ligação do grupo biorredutor a um ligante retirator de elétron ouum alquilador de fosforoamidato retirador de elétron pode tornar o grupobiorredutor mais fácil de reduzir em comparação com quando é ligadocovalentemente a um ligante rico em elétron ou um alquilador defosforoamidato rico em elétron.
O disparador T pode ser oxidado, hidrolisado, ou tiolisado epode liberar o alquilador de fosforoamidato de uma maneira não-seletiva parahipoxia. Telcyta™, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato que seencontra na clínica, pode liberar uma toxina ativa na ausência de hipoxia pormeio da ação de glutationa transferase (ver, p. ex., alquilador defosforoamidato If na seção "Métodos de Tratamento"). A natureza químicado ligante e/ou do alquilador de fosforoamidato pode influenciar aestabilidade oxidativa, hidrolítica ou tiolítica da pró-droga com relação àliberação de alquilador de fosforoamidato. Em uma concretização da presenteinvenção uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato ativada por hipoxia,não libera o alquilador de fosforoamidato em uma oxidação, hidrólise, outiólise não específica para hipoxia.
De acordo com a presente invenção, um disparador empregadoadequadamente pode ser usado para "ajustar" a propriedade farmacocinéticada pró-droga sem alterar suas propriedades citotóxicas. Por exemplo, umelevado volume de distribuição de um agente anticâncer assegura que a pró-droga é absorvida rapidamente no tecido. De acordo com a presente invenção,em uma concretização, o volume de distribuição de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato pode se modulado empregando-se umdisparador T contendo um grupo amino capaz de formar um cátion amônioem condições fisiológicas. Em uma concretização, um disparador T contendoum grupo amônio quaternário pode proporcionar um composto de pró-drogada invenção apresentando um elevado volume de distribuição enquanto seevita possível aprisionamento endossômico. Em outra concretização, umdisparador T compreendendo uma funcionalidade carboxila existirá como aforma de ânion carboxilato aniônico, C02( ) no espaço extracelular do ladoexterior de tecido saudável normal e não passará facilmente através damembrana celular normal. O pH no espaço extracelular do tumor podeconverter o C02( ) à forma "CO2H" não-carregada, permitindo que a pró-droga passe através da membrana da célula de tumor.
Um alquilador de fosforoamidato contendo um grupohidroxila, amino, mercapto, e/ou um grupo carboxila pode ser transformadonuma pró-droga por meio de ligação covalente de um disparador T a um oumais destes grupos funcionais. Durante a transformação de um alquilador defosforoamidato numa pró-droga, um grupo hidroxila no alquilador defosforoamidato pode ser transformado, por exemplo, num éter ou num acetal;um amino num alquilamino, um carbamato, ou uma amida; um grupocarboxila num éster; e um grupo mercapto num tioéter ou uma tioacila, comodescrito mais detalhadamente nas seções de Método de Síntese eExperimental abaixo. Estas transformações podem proporcionar uma pró-droga que é menos polar ou mais lipofílica do que o alquilador defosforoamidato correspondente. Pró-drogas de alquilador de fosforoamidatonão polares podem não ser facilmente solúveis em diluentes ou veículosfarmacêuticos aquosos. Grupos acentuadores de solubilidade, como CO2H,amino, alquilamino, dialilamino, e hidroxila, podem ser empregados nodisparador T para modular a solubilidade da pró-droga e superar quaisquerproblemas encontrados na preparação de formulações aquosas das pró-drogasde alquilador de fosforoamidato.
Alquiladores de fosforoamidatos da presente invenção podemapresentar uma ou mais N-(2- haloalquila) ou N-(2-haloetila) e/ou uma oumais porção C<> aziridina ligada covalentemente a uma porçâo P=O comomostrado abaixo. Após liberação da porção de alquilador de fosforoamidatoaniônica forma-se uma espécie de aziridina ou azirídio que pode alquilarDNA (ver seção de Exemplos, Exemplo 36). Dependendo da natureza deretirada de elétron de substituintes R2 e R3, a cinética da formação deaziridínio pode variar. Por exemplo, como mostrado na seqüência de reaçãoabaixo, a taxa de alquilação pode aumentar quando a porção NR2R3 émodificada de NH2 para
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(ver Engle et al, J. Med. Chem., 1987, 25: 1347-57). Substituintes nos átomosde nitrogênio podem alterar a geometria do alquilador de fosforoamidato, adeslocalização do par de elétrons sozinho neste átomo de nitrogênio na porçãoP=O, a disponibilidade dos pares de elétrons sozinhos de nitrogênio paraformação de aziridínio ou subseqüentemente aziridina, e a solubilidadeaquosa de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato e de alquilador defosforoamidato.
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A presente invenção provém, em parte, da descoberta de quepró-drogas de alquilador de fosforoamidato empregando grupo biorredutor de2-nitroimidazol mostram citotoxicidade hipóxica inesperadamente elevada,baixa toxicidade normóxica e elevada HCR e solubilidade incrementada. Porexemplo, Compostos 24 e 25 foram, respectivamente, de 400 a 1000 vezesmais tóxicos em células hipóxicas do que em células normóxicas em umensaio de citotoxicidade anti-proliferação com uma IC50 de 0,05 μΜ emcélulas sob hipoxia. (ver Seção de Exemplos). Pró-drogas de alquilador defosforoamidato contendo mostarda de ifosfamida ou análogos de mostarda deifosfamida e apresentando fórmulas:
Z3-CH2-0-P(=0)(NHCH2CH2X4)2, Z3-CH2-0-P(=0)(NHCH(R9)CH2X4)2, eZ3-CH(Z2)-0-P(=0)(NHCH(R9)CH2X4)2;em que Z2 é metila; R9 é hidrogênio, metila, ou isopropila; Z3 é l-N-metil-2-nitroimidazol-5-ila), 2-nitrotiofen-5-ila, ou 2-nitrofuran-5-ila; e cada X4 é Clou Br foram inesperadamente mais tóxicos em células hipóxicas do que emcélulas normóxicas, e/ou apresentaram inesperadamente valores de HCRelevados, em ensaios de citotoxicidade de células anti-proliferação, emcontraste com os valores de HCR de derivados conhecidos de alquilador defosforoamidato apresentando grupos 2-nitrotiofeno-5-ila, 2-nitrofuran-5-ila,ou 5-nitro imidazolila, grupos biorredutors (Z3), e mostarda de N,N'(tetraquis-2-coloroetil) fosforoamidato ou mostarda de ciclofosfamida; ou um grupoindol quinonila como Z3 e mostarda de ifosfamida (ver p. ex., compostos P4,P 14-17, P 19, e P21-22, em Borch et al, J. Med. Chem., e Patente dos EstadosUnidos n° 6.656.926 ambas indicadas acima).
Em um aspecto, a presente invenção proporciona pró-drogasde alquiladores de fosforoamidatos de fórmula (I):
<formula>formula see original document page 35</formula>
em que
Yi é O, S, NR6 ou NSO2R6 em que cada R6 éindependentemente CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, arila, ou heteroarila;
Y2 é O, S, NR6, NCOR6, ou NSO2R6;
cada um de R1-R5 é independentemente hidrogênio, hidroxila,amino, CrC6 alquila CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila, heterociclila, CrC6 alcóxi, CrC6 alquilamino, Ci-C6 dialquilamino, arila, heteroarila, CrC6acila, CrC6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla; ou, em conjunto, quaisquerdois de R1-R5 formam um C3-Cio heterociclo; ou cada um de R1-R5 éindependentemente um disparador T em que disparador é L-Z3;L é selecionado dentre-[C(Z1)2-Y3]v-[C(=0)-0]q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Z1)2]2-[-C(Z1)=C(Z1)]g-;e-[C(Z1)2-Y3]v-(S(=0)2)q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)]g-;em que cada um de z, v, q, u, e g é independentemente 0 ou 1;
Y3 é S, O, ou NR7 em que cada R7 é independentementehidrogênio, hidroxila, Ci-C6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, CrC6 alcóxi, CrC6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila,heteroarila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla;
Y4 é O, S, ou -NR7-C(O)-O-;
cada Z1 é independentemente hidrogênio, halogênio, C1-C6alquila, C1-C6 heteroalquila, arila, heteroarila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, Ci-C6 acila, C1-C6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla;
Z2 é Ci-C6 alquileno, CrC6 heteroalquileno,
<formula>formula see original document page 36</formula>
cada Xi é independentemente N ou CRg em que R8 éindependentemente hidrogênio, halogênio, OH, 0P(=0)(0H)2, nitro, ciano,CO2H5 C1-C6 alquila, C1-C6 heteroalquila, CrC6 cicloalquila, Cp C6 alcóxi,Ci-C6 alquilamino, Cj-C6 dialquilamino, arila, CON(R7)2, CrC6 acila, C1- C6heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla;
X2 é NR7, S, ou O; e
Z3 é um grupo biorredutor selecionado do grupo que consistede:<formula>formula see original document page 37</formula>
com a condição de que na fórmula (I):
(i) pelo menos dois de R1-R5 são selecionados do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2- alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila;
(ii) pelo menos um de R1-R5 é selecionado do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; e pelo menos um de NR2R3 e NR4R5 é
(iii) cada um de NR2R3 e NR4R5 é e
um isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica deisômeros, bioisósteros, farmacóforos, um sal, solvato, hidrato, ou uma pró-droga farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em uma concretização, ζ é 1.
Em uma concretização, R -R não são iguais.
Em uma concretização, qualquer um<formula>formula see original document page 38</formula>
Em uma concretização, a presente invenção proporciona pró-drogas de alquilador de fosforoamidato ativadas com hipoxia cada umaempregando dois alquiladores de fosforoamidatos. Em uma concretização, apró-droga de alquilador de fosforoamidato da presente invenção emprega umaporção l-N-alquil-2-nitroimidazol-5-ila ou uma porção l-N-metil-2-nitroimidazol-5-ila como um grupo biorredutor ou Z3. Em uma concretização,a pró-droga de alquilador de fosforoamidato da presente invenção empregauma porção 2-nitrofurano como um grupo biorredutor ou Z3.
Em uma concretização, a presente invenção exclui os compostos:
<formula>formula see original document page 38</formula><formula>formula see original document page 39</formula><formula>formula see original document page 40</formula><formula>formula see original document page 41</formula>indolquinonil)metila (P28),
bis[N-metil-N-(2-bromoetil)]fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-1 -metil-4,7-indolquinonil)metila (P29),
N,N-bis(2-cloroetil)fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-1 -metil-4,7-indolquinonil)metila (P30),
N,N-bis(2-bromoetil)- fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)metila (P31),
N,N-bis(2-bromoetil)-fosforodiamidato de 3-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquin-onil)metila (P32),
bis [N-metil-N-(2-bromoetil)] fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)metila (P33),
N,N-bis(2-cloroetil)- fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)metila (P34), e
N,N-bis(2-bromoetil)-fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-l -metil-4,7-indolquinonil)metila (P35)
Em uma concretização relacionada, a presente invençãoproporciona um composto de fórmula (I) com a condição de que
(i) pelo menos um de R1-R5 sejam selecionados do grupo queconsiste de 2- alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila e
pelo menos um de R1-R5 são selecionados do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; ou
(ii) pelo menos um de R1-R5 é selecionado do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-Ci-C6 alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; e pelo menos um de NR2R3 e NR4R5 é
ou(iii) cada um de NR2R3 e NR4R5 é
Em outra concretização relacionada, a presente invenção
proporciona um composto de fórmula (I) com a condição de que a fórmula (I)exclua R2 e R3 em conjunto formando um anel morfolina ou R4 e R5 emconjunto formam um anel morfolina.
Em uma concretização, a presente invenção exclui umcomposto com a estrutura a seguir:
em que Z1 é hidrogênio ou Cj-C6 alquila.
Em uma concretização, a presente invenção proporcionacompostos em que o disparador T é:
[C(Z1)2-Y3]-(C(=0)-0)-[C(Z1)2-Z2-Y4]-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)]-Z3;[C(Z ι )2-Y3] - [C(Z ι )2-Z2-Y4] - [C(Z ι )2] z- [C(Z ι )=C(Z j)] -Z3;[C(Z ι )2-Y3] - [C(Z1)2] z- [C(Z ι )=C(Z ι)] -Z3;[C(Z1)2-Y3-C(Z1)2Iz-Z3;
[C(Z1)2-Y3]-(C(=0)-0)-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)]-Z3;
[C(Z ι )2-Y3] -(C(=0)-0)- [C(Z ι )2]z-Z3;
[C(Z ι )2-Y3] -(C(=0)-0)- [C(Z ι )2] z- [C(Z1)=C(Z1)] -Z3;
[C(Z1)2-Z2-Y4]-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)]-Z3;
[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)]-Z3;<formula>formula see original document page 44</formula>
Em uma concretização adicional, Z3 é:
<formula>formula see original document page 44</formula>
Em uma concretização, cada um de -C(Zi)2- é: -CH2-, -CHMe-, -CH(CN)-, -CH(CO2H)-, - CH(CONH2)-, -CH(CF3)-, -CH(CHF2)-, -C(Me)2-, -C(Et)2-, -CH(CH2NMe2)-, - CH(CH2NMe2)-, -C(CH2NMe2)2-, ou -C(CH2CO2H)2-.
Em uma concretização, -C(Zi)2-Y3- é: -CH2-O-, -CH2-S-, -CH2-NMe, -CH2-NH-, CH(Me)-O-, CH(Me)-S-; -CH(Me)-NMe-, -CH(Me)-NH-; -CMe2-NMe-, -CMe2-NMe-, ou -CMe2-NMe-
Em uma concretização -Z2-Y4- em conjunto é:<formula>formula see original document page 45</formula>
Em uma concretização, -[C(ZO=C(Z])]- é: -CH=CH-, -C(CN)=CH-, -CH=C(CN)-, - C(Ar)=CH-, -CH=CAr-, -C(COAr)=CH-,-CH=C(COAr)-, -C(CORi2)=CH- ou - CH=C(CORi2)-, em que Ar é arilaopcionalmente substituído por até cinco substituintes selecionados do grupoque consiste de OH, OMe, CF3, O-CHF2, OCF3, NO2, CN, halo, halometila,di-halometila, tri-halometila, hidroximetila, CO2H, CONH2, CONMe2, eCONHMe; e R12 é independentemente hidrogênio, Ci-Có alquila, CrC6heteroalquila, C3-Cg cicloalquila, ou heterociclila.
Em outra concretização, disparador é:
<formula>formula see original document page 45</formula>
em outra concretização, disparador é
<formula>formula see original document page 45</formula>
em que cada um de Z1 é independentemente H ou CrC6 alquila.Em outra concretização, disparador é:
<formula>formula see original document page 46</formula>
em que cada um de Zi é hidrogênio ou CrC6 alquila e R8 é H, OH, ou -OP(O)(OH)2.
Em uma concretização, a presente invenção proporcionacompostos de fórmulas (II) e (III)
<formula>formula see original document page 46</formula>
em que cada R2-R5 é independentemente selecionado do grupo que consistede hidrogênio, hidroxila, Ci-C6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8cicloalquila, heterociclila, CrC6 alcóxi, Ci-C6 alquilamino, CpC6dialquilamino, arila e heteroarila; ou, em conjunto, quaisquer dois de R2-R5formam um C3-C10 heterociclo; cada Yi é independentemente S ou O; e cadadisparador T é definido como na fórmula (I);
com a condição de que nas fórmulas (II) ou (III):
(i) pelo menos dois de R1-R5 são selecionados do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2heteroalquilsulfoniloxialquila; ou
(ii) pelo menos um de R1-R5 é selecionado do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-Ci-C6 alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; e pelo menos um de NR2R3 e NR4R5 é
(iii) cada NR2R3 e NR4R5 sãoum isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica deisômeros, bioisósteros, farmacóforos, um sal, solvato, hidrato, ou uma pró-droga farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umcomposto de fórmula (II) em que disparador T é -CH2-Z3, -CH(Zi)-Z3, ou -C(Z1)2-Z3 em que Z χ é Ci-alquila e Z3 é:
<formula>formula see original document page 47</formula>
com a condição de que na fórmula (II):
(i) um de R2 e R3 é H e um de R4 e R5 é H;
(ii) um de R2 e R3 é Ci-alquila e um de R4 e R5 é Ci-alquila; ou
(iii) pelo menos um de R2-R5 é hidroxila, amino, C3-Cscicloalquila, heterociclila, CrC6 alcóxi, Ci-C6 alquilamino, CrC6dialquilamino, arila, heteroarila, CrC6 acila, C1-C6 heteroacila, ou aroíla ouheteroaroíla.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umcomposto de fórmula (II) em que Z3 é um grupo biorredutor selecionado de:
<formula>formula see original document page 47</formula>
com a condição de que na fórmula (I):
(i) pelo menos um de RpR5 são selecionados do grupo queconsiste de 2- alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila e
pelo menos um de Ri-R5 são selecionados do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2- alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; ou
(ii) pelo menos um de R1-R5 é selecionado do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-Ci-C6alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalauilsulfoniloxialquila; e pelo menos um de NR2R3 e NR4R5 é
<formula>formula see original document page 48</formula>
(iii) cada um NR2R3 e NR4R5 são ^j;
Em um aspecto, a presente invenção proporciona pró-drogasde alquilador de fosforoamidato de fórmula (I):
<formula>formula see original document page 48</formula>
em que
R1 é um -[C(Z1)2-Y3]v-[C(=0)-0]q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-Z3 ou -[C(Z 1 )2-Y3] v-(S(=0)2)q- [C(Zi )2-Z2-Y4] U-Z3, em que cada v, q, e u éindependentemente 0 ou 1; e Z3 é uma glicose ou um análogo da mesma coma condição de que exclua conjugados de glicose de alquiladores defosforoamidatos descritos na referência Wiessler et ai., Patente dos EstadosUnidos n° 5.622.936;
cada um de R2-R5 é independentemente hidrogênio, hidroxila,amino, CrCe alquila, Ci-Ce heteroalquila, C3-Cs cicloalquila, heterociclila,C1-C6 alcóxi, Ci-C6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila e heteroarila, Q-C6 acila, C1-C6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla; ou, em conjunto,quaisquer dois de Ri-R5 formam um C3-Cio heterociclo;
com a condição de que na fórmula (I):
(i) pelo menos dois de R2-R5 são selecionados do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2,-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila;
(ii) pelo menos um de R2-R5 é selecionado do grupo que
consiste de 2-haloalquila, 2-Ci-Có alquilsulfoniloxialquila, 2-
heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-
heteroalauilsulfoniloxialquila; e pelo menos um de NR2R3 e NR4R5 é
(iii) cada um de NR2R3 e NR4R5 são e
um isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica deisômeros, bioisósteros, farmacóforos, um sal, solvato, hidrato, ou uma pró-droga farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em outra concretização, a presente invenção proporciona oscompostos:
Fró-drogas de alquilador fosíoramidato
<formula>formula see original document page 49</formula>Em outra concretização, a presente invenção proporciona oscompostos:
<formula>formula see original document page 50</formula>
em que X4 e Z3 são definidos como acima.
Em outra concretização, a presente invenção proporciona oscompostos:
<formula>formula see original document page 50</formula>
Em uma concretização, R6 é -(N-CH2CH2X4)2.
Em outra concretização, a presente invenção proporciona oscompostos:
<formula>formula see original document page 50</formula>
em que R2 - R5 são definidos como na fórmula (II)O esquema a seguir exemplifica redução hipóxica da pró-droga de alquilador de fosforoamidato dando o alquilador de fosforoamidatocorrespondente.
<formula>formula see original document page 51</formula>
Em outra concretização, a presente invenção proporciona oscompostos:
<formula>formula see original document page 51</formula>
em que R2-R5 são definidos como na fórmula (II)
O esquema a seguir exemplifica redução hipóxica da pró-droga de alquilador de fosforoamidato dando o alquilador de fosforoamidatocorrespondente.
<formula>formula see original document page 51</formula>Em uma concretização, a presente invenção proporciona oscompostos das fórmulas (IV) - (VII)
<formula>formula see original document page 52</formula>
em que cada R9 é independentemente hidrogênio, deutério, arila, heteroarila,CrC6 alquila, Cj-Ce heteroalquila, C3-Cs cicloalquila, heterociclila, Ci-C6acila, CpC6 heteroacila, aroíla, heteroaroíla, Ci-C6 alcoxicarbonila, Ci-C6alquilaminocarbonila, di CrC6 alquilaminocarbonila, ou CrC6 alcóxi; ou, emconjunto, dois grupos R9 formam um heterociclo; cada Rio é hidrogênio, CrC6 alquila, Ci- C6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila, heterociclila aroíla ouheteroaroíla, ou, em conjunto, dois grupos Rio formam um heterociclo;
Rn é independentemente hidrogênio, deutério, arila,heteroarila, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-Cg cicloalquila,heterociclila, CrC6 acila, C1-C6 heteroacila, aroíla, heteroaroíla, CrC6alcoxicarbonila, CrC6 alquilaminocarbonila, di CrC6 alquilaminocarbonila,ou Ci-C6 alcóxi; ou, em conjunto, dois grupos R9 formam um heterociclo coma condição de que quando Rn é CpC6 alquila ou CrC6 heteroalquila entãoRn excluicada R9 é independentemente hidrogênio, deutério, Ci-C3 alquila, CrC6heteroalquila, C3-C6 cicloalquila, heterociclila, arila ou heteroarila. Em outraconcretização, cada R9 é independentemente hidrogênio, deutério, ou Q-Côalquila. Em outra concretização relacionada, cada R9 é independentementemetila, etila, propila, isopropila, isobutila, butila terciária, ou ciclopropila.
composto de fórmula (IV) em que um de Ri0 é -(CH2)e-Intercalador, em queum Intercalador é uma porção aromática ou heteroaromática capaz deintercalar entre um par de bases de ácidos nucleicos.
Em outra concretização, a presente invenção proporciona ocomposto:
<formula>formula see original document page 53</formula>
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umem que X4 e R10 é definido como na fórmula (IV)
Em outra concretização, a presente invenção proporciona ocomposto:
<formula>formula see original document page 53</formula>Em uma concretização, a presente invenção proporciona ocomposto de fórmula (VIII):
<formula>formula see original document page 54</formula>
em que cada R9 é independentemente hidrogênio, metila, etila, propila,isopropila, ou ciclopropila;
e N(R10))2 é selecionado dentre NH2, NHMe, NMe2, Net2,
<formula>formula see original document page 54</formula>
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ocomposto da fórmula (IX):
<formula>formula see original document page 54</formula>
em que cada R9 é independentemente hidrogênio, metila, etila, propila,isopropila, ou ciclopropila.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ocomposto da fórmula (X):<formula>formula see original document page 55</formula>
em que cada R9 é independentemente hidrogênio, metila, etila, propila,isopropila, ou ciclopropila; e cada Rn é independentemente hidrogênio,metila, etila, propila, isopropila, benzila, metila substituído, ciclopropila,metóxi, e hidroxila; ou, em conjunto, dois Ri 1 formam um heterociclo.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona oscompostos das fórmulas (X-A), (X-B) e (X-C):
<formula>formula see original document page 55</formula>
em que X2 e X4, são definidos na fórmula (I), e R10, e Rn são definidos comonas fórmulas (IV), (VI) e (VII).
Em uma concretização, a presente invenção proporciona oscompostos da fórmula (XI)-(XV):
<formula>formula see original document page 56</formula>
em que cada Rn é independentemente hidrogênio, metila ou metilasubstituído, benzila, isopropila, propila, ciclopropila, metóxi, e hidroxila; eX1, X2, e Z3 são definidos como acima; e X4 é Cl, Br, alquilsulfonilóxi,heteroalquilsulfonilóxi, cicloalquilsulfonilóxi, heterocicloalquilsulfonilóxi,arilsulfonilóxi, ou heteroarilsulfonilóxi. Em uma concretização, emcompostos de fórmulas (XII), (XIV), e (XV), quando X4 é Cl ou Br então Rnexclui isopropila. Em uma concretização, um composto de fórmula (X) excluium composto, em que Z3 é<formula>formula see original document page 57</formula>
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umcomposto de fórmula (XII), (XIV), ou (XV) em que cada Rn é hidrogênio.
Exemplos de compostos de fórmula XII, XIV, ou XV incluem compostos 5,7, 8, 9, 10, 13, 14, 15, 19, 23, 24, 25, 26, 32, 34, e 36. Em uma concretização,a presente invenção proporciona pró-drogas de alquilador de fosforoamidatode fórmulas XII, XIV, ou XV, em que Rn exclui propila ou isopropila. Emoutra concretização, a presente invenção exclui o composto:
<formula>formula see original document page 57</formula>
Em uma concretização a presente invenção proporciona umapró-droga de alquilador de fosforoamidato, em que Rn é C3-Cs cicloalquila.
Em outra concretização, o cicloalquila é ciclopropila. De uma forma geral, umgrupo ciclopropila pode ser mais estável do que um grupo alquila parametabolizar oxidativamente proteínas na célula, particularmente no fígado, oscompostos de pró-droga da invenção proporcionam uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato aperfeiçoado farmacocineticamente emcomparação com pró-drogas conhecidas de alquilador de fosforoamidato.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona oscompostos da fórmula (XVI)<formula>formula see original document page 58</formula>
em que K é Ci-Cealquileno ou CrC6 heteroalquileno. Em uma concretizaçãoK é (C(Ri2)2)e, CH2CH2(-X6-CH2CH2)f, ou CH2(-X6-CH2)f, em que e é 1-10, fé 0-3, e Χβ é O, S, ou NRi2, em que cada R]2 é independentemente definidocomo acima.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona oscompostos da fórmula (XVII - (XVIII)
<formula>formula see original document page 58</formula>
em que e é 0-4, X4 é Cl ou Br, alquilsulfonilóxi, heteroalquilsulfonilóxi,arilsulfonilóxi, ou heteroarilsulfonilóxi; X6 é O, S, ou NRj2 em que Ri2 édefinido como acima.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ocomposto de fórmula (XIX):
<formula>formula see original document page 58</formula>em que e é 0-4, e X4 é Cl, Br, alquilsulfonilóxi, heteroalquilsulfonilóxi,arilsulfonilóxi, ou heteroarilsulfonilóxi. Em uma concretização relacionada, apresente invenção proporciona um composto de fórmula (XIX) em que e é 1. VerSeção de Exemplos para exemplos de composto de fórmulas como descrito aqui.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ocomposto de fórmula (XX):
<formula>formula see original document page 59</formula>
em que Rg é glicose ou um análogo de glicose; e é 0-4, e X4 é Cl, Br,alquilsulfonilóxi, heteroalquilsulfonilóxi, arilsulfonilóxi, ouheteroarilsulfonilóxi. Como usado aqui, um análogo de glicose inclui mono,di e tri sacarídeos. Em uma concretização relacionada, a presente invençãoproporciona um composto de fórmula XX em que e é 1.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona os compostos:em que X4 é Cl, Br, ou alquilsulfonilóxi.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona oscompostos:
<formula>formula see original document page 60</formula>
em que R9 e X4 são definidos na fórmula VI.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ocomposto da fórmula (XXI)
<formula>formula see original document page 60</formula>
em que Yi é S ou O; e disparador T é definido como na fórmula (I).
Em outra concretização, a presente invenção proporciona oconjugado de oxima-alquilador de fosforoamidato:
Em uma concretização, um referido conjugado de oxima-alquilador de fosforoamidato pode ser hidrolisado enzimaticamente paraproduzir<formula>formula see original document page 61</formula>
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona os compostos da fórmula(XXII):
<formula>formula see original document page 61</formula>
RrR5, Yi, e Y2 são definidos na fórmula (I);
cada R1-R5 e Ri*-R5* é selecionado independentemente dogrupo que consiste de hidrogênio, hidroxila, CpC6 alquila, CrC6 alcóxi, CrCô alquilamino, Ci-Có dialquilamino, arila, heteroarila; ou, em conjunto, R2 eR2* formam um heterociclo; ou cada R1-R5 e Ri*-R5* é independentementeum disparador T selecionado do grupo que consiste de-[C(Z1)2-Y3]v-[C(=0)-0]q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Zi)2]z-[-C(Z1)=C(Z1)]g-Z3 e -[C(Z1)2-Y3]v-(S(=0)2)q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Zi)2]2-[C(Z1)=C(Zi)]g-Z3-; com acondição de que na fórmula (XXII):
(i) pelo menos dois de R1-R5 e Ri*-R5* são 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, ou 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; ou
(ii) pelo menos um de R1-R5 e Rj*-R5* é 2-haloalquila, 2-CrCe alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila ^-Weroalquilsulfoniloxialquila; e pelo menos um deNR2R3 e NR2*R3* é ^j;«™(iii) cada NR2R3 e NR2*R3*, ambos ; eum isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica de isômeros, bioisósteros, farmacóforos, um sal, solvato, hidrato, ouuma pró-droga farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
cada Z é independentemente C, S, ou P;
cada t é independentemente 1 ou 2;
cada r é independentemente 0 ou 1;
K é selecionado do grupo que consiste de Ci-C6alquileno, C1-C6 heteroalquileno, arileno, ou heteroarileno, (C(R9)2)n; e (Ys-(C(Rs))2)m-Y^(C(R9)2)m-Y6)n em que η é 1 -8;
cada m é independentemente de 1 a 4;
cada R9 é independentemente Ci-C6 alquila ou heteroalquila,ou, em conjunto, quando ligados covalentemente ao mesmo átomo de carbonoou átomos de carbono adjacentes são cicloalquila ou heterociclila; e
cada Y4,Y5, e Y6 é independentemente O, S, NR7, ou umaligação; com a condição de que um de Y^Y5, e Y6 precisa ser O, S, ou NR7.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona oscompostos da fórmula (XXIII):
<formula>formula see original document page 62</formula>
R1-R5, Y1, e Y2 são definidos na fórmula (I);
<formula>formula see original document page 62</formula>
cada R1-R5 e Ri*-R5* é selecionado independentemente dogrupo que consiste de hidrogênio, hidroxila, CrC6 alquila, CrC6 alcóxi, C1-C6 alquilamino, C1-C6 dialquilamino, arila, heteroarila; ou, em conjunto, R2 eR2* formam um heterociclo; ou cada RrR5* é independentemente umdisparador T selecionado do grupo que consiste de-[C(Z1)2-Y3]v-[C(=0)-0]q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Z1)2]z-[-C(Z1)-C(Z1)]g-Z3 e -[C(Z1)2-Y3]v-(S(=0)2)q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)]g-Z3-; com acondição de que na fórmula (XXIII)
(i) pelo menos dois de R2-R5 e R2*-R5* são 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, ou 2-heteroalquil-sulfoniloxialquila;
(ii) pelo menos um de R2-R5 e R2*-R5* é 2-haloalquila, 2-CrCe alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, ou 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; e um de NR2R3 eNR2*R3* é
; ou
(iii) NR2R3 e NR2*R3* em conjunto, são ambos
<formula>formula see original document page 63</formula>
ou
NR4R5 e NR4*R5* em conjunto são ambos e
um isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica de isômeros, bioisósteros, farmacóforos, um sal, solvato, hidrato, ouuma pró-droga farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
L2 é
<formula>formula see original document page 63</formula>
em que X é definido como acima.
Em outra concretização, a presente invenção proporciona ocomposto da fórmula (XXIV):<formula>formula see original document page 64</formula>
em que R2, R3, R4, R2*, R3*, R4*, Ζ, K e disparador são como definido naFórmula (XXII).
Em outra concretização, a presente invenção proporciona oscompostos de fórmula (XXIV) apresentando a estrutura de fórmula (XXV) ou(XXVI):
<formula>formula see original document page 64</formula>
Em outra concretização, a presente invenção proporciona ocomposto da fórmula (XXVI):
<formula>formula see original document page 64</formula>
em que Xi, X2, X4, e são definidos na fórmula (XXV).
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona ocomposto da fórmula (XXVII):<formula>formula see original document page 65</formula>
em que R2-R5, r, K, Y1, e disparador T são definidos na fórmula (XXIV).
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umcomposto de Fórmula:
<formula>formula see original document page 65</formula>
em que T é L-Z3;
L1 é CH2, CHMe, C(Me)2, CH2OCH2, (CH2)3, CH2S(CH2)2, CH2S(CH2)3,
<formula>formula see original document page 65</formula>
Em outra concretização, a presente invenção proporciona umZ3 selecionado do grupo que consiste de:<formula>formula see original document page 66</formula>
Em outra concretização, a presente invenção proporciona umaporção apresentando a fórmula:
<formula>formula see original document page 66</formula>
selecionado do grupo que consiste de:<formula>formula see original document page 67</formula><formula>formula see original document page 68</formula>
Em outra concretização, a presente invenção proporciona um Tselecionado do grupo que consiste de:
<formula>formula see original document page 68</formula>
em que cada um de Z1, R7, e Rg é como definido acima. Nesta concretização,Zi é hidrogênio, metila, ou etila; R7 é metila, trifluoroetila, etila, propila, eciclo-hexila; e Rg é OH ou 0P(=0)(0H)2. Nesta concretização,
<formula>formula see original document page 68</formula>
em que cada R9 é hidrogênio ou CrC6 alquila e cada X4 é halo ouRsuiS(=0)20-. Em outra concretização, R9 é hidrogênio, metila, etila,isopropila, ou isobutila; e X4 é cloro, bromo, ou metanossulfonilóxi.
Em outra concretização, a presente invenção proporciona umcomposto de Fórmula:
<formula>formula see original document page 69</formula>
em que T é como definido acima ou mais particularmente T é L-Z3, em que LCH2, CHMe, CMe2,
<formula>formula see original document page 69</formula>
Em um aspecto a presente invenção proporciona alquiladoresde fosforoamidatos deuterados e pró-drogas de alquilador de fosforoamidatodeuterado de fórmula<formula>formula see original document page 70</formula>
em que X4 é halo ou RsuiS(=0)20. Em outra concretização, X4 é Cl ou Br.Referidos alquiladores de fosforoamidatos deuterados e suas pró-drogas sãoigualmente citotóxicos com relação a tecido de tumor hipóxico quantoanálogos não-deuterados ou hidrogenados, como compostos 25, 36 eanálogos. No entanto, a presença de referidos análogos deuterados in vivo, porexemplo, no plasma sangüíneo, pode ser determinada mais eficientemente emcomparação com seus correspondentes alquiladores de fosforoamidatos e/oupró-drogas de alquilador de fosforoamidato por meio de métodos deressonância magnética nuclear, e referidos análogos deuterados podem serúteis na determinação de propriedades farmacocinéticas ou farmacodinâmicasdos alquiladores de fosforoamidatos e/ou pró-drogas de alquilador defosforoamidato. Informação farmacocinética e ou farmacodinâmica dealquiladores de fosforoamidatos e/ou pró-drogas de alquilador defosforoamidato é usado para determinar a dosagem, freqüência de dosagem, eparâmetros similares relacionados com a administração. A síntese de umcomposto octadeuterado 25 e alquilador de isofosfamida octadeuteradoencontra-se descrita na Seção de Exemplos.
Em outro grupo de concretizações, a presente invençãoproporciona os grupamentos individuais e seletivos dos compostos dosExemplos. Exemplos de compostos da invenção incluem:<formula>formula see original document page 71</formula><formula>formula see original document page 72</formula><formula>formula see original document page 73</formula><formula>formula see original document page 74</formula><formula>formula see original document page 75</formula><formula>formula see original document page 76</formula><formula>formula see original document page 77</formula>
Em uma concretização, a pró-droga de alquilador defosforoamidato contém
porque Z3 e mostra toxicidade específica para tumor hipóxico embora sejamuito menos tóxica para tecido saudável normóxico.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umapró-droga de alquilador de fosforoamidato inédita que, após biorredução,libera o alquilador de fosforoamidato correspondente inédito ou conhecido
<formula>formula see original document page 78</formula>
em que X4 é definido como na fórmula (I), e R9, Rj0; e Rn, são definidoscomo nas fórmulas (IV)- (VII), e formas ionizadas dos mesmos. Em umaconcretização relacionada, X4 é Cl, Br, metanossulfonilóxi,benzenosulfonilóxi, ou para-toluenossulfonilóxi.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umapró-droga de alquilador de fosforoamidato inédita que, após biorredução,libera os correspondentes alquiladores de fosforoamidatos inéditos ouconhecidos
<formula>formula see original document page 78</formula>
e formas ionizadas dos mesmos;
em que N(Ri0)2 é selecionado do grupo que consiste de NH2, NHMe, NMe2,NEt2,
<formula>formula see original document page 79</formula>
NHOMe e NHOH; em que cada Rn é independentemente hidrogênio, Me,etila, ciclopropila, isopropila, propila, benzila, metila substituído, ciclopropila,metóxi, e hidroxila; ou, em conjunto, dois Rn formam um heterociclo.
O agente anticâncer Ciclofosfamida metaboliza a Id (Ri0 éhidrogênio) e Ifosfamida metaboliza a Ie (cada Rn é hidrogênio), quandousado no tratamento de câncer. Glufosfamida, que está sendo avaliada naclínica para tratamento de câncer, libera um alquilador de fórmula Ie (cadaRn é hidrogênio, ver Wiessler et al, Patam 5.622.936; Pedido PCT n°US05/03370 intitulado "Terapias Anticâncer", Pedido de Patente dos E.U.A.n° 60/638995 intitulado "Terapia de Combinação com Glufosfamida" eProtocolo do advogado n° 021305- 005900US depositado em 11 de maio de2005 intitulado "Terapia de Combinação com Glufosfamida"). Telcyta™ queestá sendo avaliado na clínica para tratamento de câncer libera If (Rosen et al,Clin Câncer Res. 2004, 10(11):3689-98).
Pró-drogas conhecidas de alquilador de fosforoamidato, comoifosfamida e ciclofosfamida metabolizam para produzir subprodutoscitotóxicos, como acroleína e cloroacetaldeído, que causam efeitos colateraisindesejáveis para o paciente, como cistite hemorrágica, coma ou morte. Emuma concretização, a presente invenção proporciona uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato que, ao ser metabolizada, produz subprodutosmenos tóxicos por tratamento em comparação com aqueles produzidos pelometabolismo da ifosfamida e/ou ciclofosfamida. Em uma concretização, aspró-drogas de alquilador de fosforoamidato da presente invenção nãoproduzem acroleína por meio de metabolismo in vivo. Exemplos desubprodutos tóxicos resultantes do metabolismo das pró-drogas da invençãoincluem cloro, bromo, alquilsulfonilóxi, heteroalquilsulfonilóxi,arilsulfonilóxi, ou heteroarilsulfonilóxi-acetaldeído, (para a produçãometabólica de cloroacetaldeído de ifosfamida ver a referência Hardman et al,supra, página 1396). Em outra concretização, a presente invenção proporcionauma pró-droga de alquilador de fosforoamidato que, no metabolismooxidativo, produz de 5 a 95% tanto cloroacetaldeído ou um equivalente comodefinido acima, por tratamento, como o produzido pelo metabolismo daifosfamida.
O derivado de alquilador de fosforoamidato formado quandoda redução de Z3 pode ser diferente do alquilador de fosforoamidato que estásendo protegido e a pró-droga de alquilador de fosforoamidato e édenominado uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato modificada. Porexemplo, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato pode dar uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato modificada Alq-disparadormod quandoda redução do grupo biorredutor (Z3). Quando a redução do grupo biorredutorforma uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato modificada, o ligante(L) ligado ao alquilador de fosforoamidato pode sofrer degradação dando oalquilador de fosforoamidato ou alguma outra pró-droga de alquilador defosforoamidato modificada.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umcomposto que demonstra um efeito acessório quando da ativação no tecidohipóxico por meio de incorporação de um ligante (L) como descrito acima.Em uma concretização, o efeito acessório permite que um alquilador defosforoamidato modificado da presente invenção difunde ou penetra em zonasde tumor que não são suficientemente hipóxicas para ativar os compostos depró-droga da invenção mas encontra-se próximo da zona de tumor hipóxicaque pode ativar estas pró-drogas.
Quando da redução do grupo biorredutor (Z3) no disparador Té modificado a Z3.mod, dando uma alquilador de fosforoamidato pró-drogamodificada, como alquilador de fosforoamidato- Tm ou conjugado Alq- Tm.Em uma concretização o Tm é selecionado dentre:[C(Z! )2-Y3] -(C(=0)-0)- [C(Z i )2-Z2-Y4] - [C(Z \ )2] z- [C(Z ] )=C(Zi)] -Z3.mod;[C(Z ] )2-Y3] - [C(Z i )2-Z2-Y4] - [C(Z i )2]z- [C(Z! )=C(Z i)] -Z3.mod;[C(Z i )2-Y3] - [C(Z i )2] z- [C(Z i )=C(Z!)] -Z3.mod;[C(Z1)2-Y3]-[C(Z1)2]z-Z3.mod;
[C(Z1)2-Y3]-(C(=O)-O)-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)]-Z3.m0d;[C(Zi)2-Y3]-(C(=0)-0)-[C(Z1)2]z-z3.mod;[C(Z1)2-Y3]-(C(=0)-0)-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)-Z3.mod;[C(Zi)2-Z2-Y4]-[C(Z1)2]z-[C(Zi)=C(Z1)]-Z3.mod; e-[C(Zi)2]z-[C(Zi)=C(Zi)]-Z3.mod em que Z3.m0d é Z3 biorreduzido ou de outraforma reduzido ou modificado.
Em outra concretização, o Tm é selecionado dentre:[C(Z i )2-Y3] -(C(=0)-0)- [C(Z i )2-Z2-Y4] -H; [C(Z1)2-Y3HC(Z1)2-Z2-Y 4]-U; e[C(Zi)2-Y3]-H;
Em uma concretização, disparador T inclui os seguintesligantes (L) apresentando afórmula:
- [C(Z i )2-Y3] -(C(=0)-0)- [C(Z! )2-Z2-Y4] - [C(Z i )2]z- [C(Z i)=C(Z i)] -;
- [C(Zj )2-Y3] - [C(Z i )2-Z2-Y4] - [C(Zi )2]z- [C(Z i )-C(Z i)] -;
- [C(Z i )2-Y3] - [C(Z ] )2]z- [C(Z! )=C(Zi)] -; - [C(Z i )2-Y3] - [C(Z i )2]z-;
" [C(Z i )2-Y3] -(C(-O)-O)- [C(Z i )2]z- [C(Z i )=C(Z i)] -; - [C(Z i)2-Y3] -(C(^O)-O)-C(Z1)2-;
- [C(Z! )2-Y3] -(C(=0)-0)- [C(Z i )2] z- [C(Z! )=C(Z i)] -; e
- [C(Z i )2-Z2-Y4] - [C(Z] )2] z[(C(Z i )=C(Z i)] -; -[C(Z1)2]2-[C(Z1)=C(Z1)]- e -[C(Z1)2],-
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umdisparador T que, quando da biorredução, é modificado a disparadorMod ou Tme o alquilador de fosforoamidato é separada de Tm em menos de 0,1 segundo.Em outra concretização, o alquilador de fosforoamidato é separado de Tmentre de 0,01 a 0.10 segundo.Em outra concretização, o alquilador defosforoamidato é separado de Tm entre de 0,1 a 1,0 segundo. Em outraconcretização, o fosforoamidato ativo é separado de Tm entre de 1,0 a 10,0segundos. Em outra concretização, o alquilador de fosforoamidato é separadode Tm entre de 10,0 a 100,0 segundos.
Em uma concretização relacionada, quando da ativação ouredução, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato dá uma pró-drogacom um disparador T modificado (Tm) que, subseqüentemente, libera oalquilador de fosforoamidato de 20 a 500 (im do sítio de ativação ou redução;ou de 20 a 100 fim do sítio de ativação ou redução. O efeito acessório de umapró-droga de alquilador de fosforoamidato da presente invenção pode sermedido usando-se esferóides celulares e ensaio celular de camadas múltiplas(por exemplo, de ensaios como em Kyle et al, Câncer Res. 2004,64(17):6304-9 e West et al, Câncer Quimiother. Pharmacol, 1987, 20(2):109-14); e como descrito em maior detalhe nos Exemplos 35 e 37. Células detumor podem ser desenvolvidas em cultura como esferóides multicelularespara criar um modelo in vitro do microambiente do tumor em tumores sólidoscontendo uma região hipóxica e uma população de células quiescentesrespondendo aos estresses ambientais de nutrientes limitados e produçãoincrementada de rejeitos. Estes esferóides têm a propriedade única dedesenvolver gradientes de oxigênio e nutrientes como o agregado de célulascontinuam a dividir-se e crescer para fora. Após o rim viável atingir umtamanho de aproximadamente 150 jim, isto impele as células nesta região emum estado quiescente e, eventualmente, a morte celular. Desenvolve-se umnúcleo necrótico como um resultado das células que morrem. O esferóidepode ser dividido em 4 compartimentos distintos para modelar a efetividadede uma pró-droga ativada por hipoxia: 1) a região aeróbica exterior e a regiãode divisão ativa; 2) uma região de hipoxia intermediária; 3) uma região dehipoxia em que células não ciclizam; 4) e um núcleo necrótico contendocélulas mortas e fragmentos celulares. A resposta de uma droga dependerá devários fatores; a capacidade do composto em penetrar nas regiões maisprofundas do esferóide. A ativação de pró-droga ativada por hipoxia (HAP)via nitrorredutases; a reatividade da droga ativada na célula em que foiativada; e a capacidade da droga ativada em deixar o sítio de onde foi ativadae de matar células vizinhas (efeito acessório). Portanto, a avaliação daefetividade de um composto pode ser avaliada em diversos níveis diferentes.
O efeito do composto sozinho pode ser comparado com células em cultura demonocamada versus esferóides intactos. A HAP pode ser usada como umamonoterapia. A fração hipóxica do esferóide pode ser modulada variando-se aconcentração de O2 do gás de equilíbrio e, portanto, altera a relação doscompartimentos aeróbicos e hipóxicos. HAPs podem ser combinadas comoutros agentes quimioterápicos que, ou objetivam apenas as células aeróbicasexteriores ou são capazes de objetivar todo o esferóide. A morte de célulasesperada pode ser predita conhecendo-se a fração hipóxica e a morte decélulas esperada de cada uma das monoterapias.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umapró-droga de alquilador de fosforoamidato que, quando da ativação, comobiorredução, libera o alquilador de fosforoamidato com uma meia-vidainferior a 0,1 segundo; entre 0,01 e 0,10 segundo, entre 0,1 e 1,0 segundo,entre 1,0 e 10.0 segundos, e entre 10,0 e 100,0 segundos.
Drogas anticâncer podem ligar-se ao tecido que envolve avasculatura e/ou apresentar altos pesos moleculares que impedem difusão enão atingem, em concentrações terapeuticamente eficazes, zonas de tumorhipóxicas que podem encontrar-se afastadas em até 150 - 200 fjM davasculatura. Em uma concretização, a presente invenção proporciona pró-drogas de alquilador de fosforoamidato que podem alcançar células de câncerhipóxicas para além da vasculatura. Alguns métodos para determinar o efeitoacessório encontram-se descritos com maior detalhe nos Exemplos 35 e 37. Oalquilador de fosforoamidato usado em uma pró-droga ativada por hipoxiadesempenha um papel importante na eliminação eficiente de células de tumor.Por exemplo, no caso de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidatoativada por hipoxia, a citoxicidade do alquilador de fosforoamidato e sua taxade alquilação celular, e a permeabilidade da membrana celular da pró-droga eo impacto do alquilador de fosforoamidato [sobre] a seletividade hipóxica e acitotoxicidade hipóxica do pró-droga de alquilador de fosforoamidato.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona pró-drogas de alquilador de fosforoamidato que são mais seguras do que osalquiladores de fosforoamidatos correspondentes formados in vivo (pelomenos dez e até um milhão de vezes mais seguros). Em uma concretização, asegurança incrementada resulta de uma modificação no sítio de ligação dodisparador T (ativação da pró-droga de alquilador de fosforoamidato libera oagente alquilador/citotóxico). Em qualquer caso, as pró-drogas de alquiladorde fosforoamidato são convertidas ao alquilador correspondente em tecidoshipóxicos em virtude da ativação ou redução do grupo biorredutor (Z3),resultando em sua remoção e na concomitante ou subseqüente liberação ougeração do alquilador de fosforoamidato.
Em uma concretização, o disparador T é ligadocovalentemente ao alquilador de fosforoamidato, de uma maneira quemascara ou reduz a atividade citotóxica do alquilador de fosforoamidato. Esteefeito mascarador pode variar e pode depender da atividade citotóxica doalquilador de fosforoamidato. Tipicamente, a pró-droga de alquilador defosforoamidato mostrará pelo menos cerca de 10 vezes menos atividadecitotóxica do que o alquilador de fosforoamidato correspondente, e podeapresentar uma atividade citotóxica de até cerca de um milhão de vezes, oumenos. Em uma versão, a atividade citotóxica da pró-droga de alquilador defosforoamidato é de cerca de 100 vezes a cerca de 10.000 vezes menos do quea atividade citotóxica do alquilador de fosforoamidato correspondente. Comoum exemplo, para um alquilador de fosforoamidato com uma IC5o, IC90, ouLC5O de 1 nM, a IC50, IC90, ou LC5O da pró-droga de alquilador defosforoamidato correspondente pode ser de 1 jiM ou maior.
Em uma versão, compostos aqui proporcionados incluemcomo pró-droga de alquilador de fosforoamidato, qualquer alquilador defosforoamidato que pode ser ligado a um disparador T de uma maneira queproporcione uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato que é pelo menoscerca de 10 vezes a cerca de 1.000.000 vezes, e, tipicamente, de cerca de 100a cerca de 10.000 vezes, menos ativa que um agente citotóxico do que oalquilador de fosforoamidato correspondente ou alquilador de fosforoamidatomodificado que é liberado dos compostos em condições hipóxicas.
Para determinar se uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é seletivamente ativa em condições anóxicas ou hipóxicas,células são expostas à droga, seja com ar (normóxicas) ou sem oxigênio(anoxia) ou com mui pouco oxigênio (hipoxia). Alguém com prática natécnica perceberá que a citotoxicidade de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato conforme medido em um ensaio anti-proliferação é expressapela IC5o; e a citotoxicidade de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato conforme medida em um experimento de sobrevivênciaclonogênica é expressa como ICio ou LC10, ICç>0 ou LC90, ou IC99 ou LC99. Arelação de citotoxicidade conforme medida, por exemplo,, por IC5o, IC90,LC50, LC90, ou LC99 determinada em normoxia e hipoxia é denominadarelação de hipoxia citotoxicidade (HCR) e pode ser uma medida dacitotoxicidade seletiva para hipoxia das pró-drogas da presente invenção. Quanto maior a HCR da pró-droga de alquilador de fosforoamidato tantomaior é sua toxicidade seletiva para células hipóxicas, e maior a capacidadede eliminação de tumor hipóxico da pró-droga relativamente a célulasnormóxicas saudáveis. A HCR determinada com base em IC99 ou LC99 émaior do que aquela determinada com base em IC90 ou LC90.Em uma concretização relacionada, a pró-droga de alquiladorde fosforoamidato da presente invenção apresenta uma citotoxicidadehipóxica de 0,1 nM a 50 jjM e uma HCR de 10 a 100.000. Em umaconcretização relacionada, a pró-droga de alquilador de fosforoamidato dapresente invenção apresenta uma citotoxicidade hipóxica de 0,1 nM a 50 jaMe uma HCR de 25 a 100.000 (ver Seção de Exemplos). Em outraconcretização relacionada, a pró-droga de alquilador de fosforoamidato dapresente invenção apresenta uma citotoxicidade hipóxica de 0,1 nM a 5 |iM euma HCR de 50 a 10.000, como, por exemplo, os compostos como descritoem Exemplos 29, 30 e 31.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umapró-droga de alquilador de fosforoamidato apresentando toxicidade hipóxicaque é de 5 a 1.000.000 vezes maior do que a toxicidade normóxicacorrespondente. Em outra concretização, a presente invenção proporcionauma pró-droga de alquilador de fosforoamidato apresentando toxicidadehipóxica que é de 10 a 10.000 vezes maior do que a toxicidade normóxicacorrespondente. Em outra concretização, a presente invenção proporcionauma pró-droga de alquilador de fosforoamidato apresentando toxicidadehipóxica que é de 25 a 5.000 vezes maior do que a toxicidade normóxicacorrespondente.
Tumores apresentam um gradiente de concentração deoxigênio que pode variar de 10%, em tecidos adjacentes à vasculatura, a 0,5%em tecidos afastados em cerca de 150 (0.M, e menor em tecidos mais distantesda vasculatura e próximos do núcleo necrótico. Em uma concretização, apresente invenção proporciona pró-drogas de alquilador de fosforoamidatoque podem gerar alquiladores de fosforoamidatos, de 5 a 1.000.00; de 10 a10.00; e de 25 a 5.000 vezes mais tóxicas do que a pró-droga correspondente,numa variedade de concentrações de oxigênio. Em uma concretização, apresente invenção proporciona pró-drogas de alquilador de fosforoamidato[que] geram alquiladores de fosforoamidatos, de 5 a 1.000.00; de 10 a 10.00;e de 25 a 5.000 vezes mais tóxicos do que a pró-droga correspondente, aconcentrações abaixo de 0,5-0,6% de oxigênio.
O logP de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato dapresente invenção pode medir a lipofilicidade ou a hidrofilicidade da pró-droga. Em uma concretização, a presente invenção proporciona uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato apresentando um IogP inferior a 0.Referidas pró-drogas de alquilador de fosforoamidato podem ser hidrofílicas,como uma pró-droga apresentando fórmula XV em que cada Rn é H e podeser facilmente formulada como uma formulação aquosa para injeção i.v. oui.p. Outro exemplo de referidas pró-drogas são os compostos 24, 25 e 36.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona umapró-droga de alquilador de fosforoamidato apresentando um IogP maior que0. Em uma concretização, a presente invenção proporciona uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato apresentando um IogP entre 0 e 4, como aquelesexemplificados pelas fórmulas XIV; XX e XV em que cada Rn é metila ou,ciclopropila, e administrada a um paciente, pode atravessar a membrana dacélula penetrando no interior de células de câncer. Outro exemplo de umapró-droga apresentando um IogP entre 0 e é 5, 6, 7, ou 16. (para IogP medidode pró-drogas de alquilador de fosforoamidato da presente invenção ver Seçãode Exemplos).
IIb. Método de síntese
A presente invenção ocorreu em parte a partir da descoberta deque o composto 36 que não pôde ser isolado reagindo-se
l-N-metil-2-nitroimidazol-5-metanol, e n-butil lítio em umsolvente vantajoso, foi facilmente sintetizado empregando-se uma reação detipo Mitsunobu em que l-N-metil-2-nitroimidazol-5-metanol foi ativado pormeio da adição de trifenilfosfina e azodicarboxilato de diisopropila, e reagidocom
<formula>formula see original document page 88</formula>
dando composto 36.
Assim, em um aspecto a presente invenção proporciona ummétodo de sintetizar um composto de fosforoamidato compreendendo reagirum ácido fosforamídico ou um ácido fosforodiamídico e um álcool dando umfosforoamidato. Em outro aspecto, a presente invenção proporciona métodosde sintetizar os compostos inéditos de pró-droga de alquilador defosforoamidato da invenção ou aqueles que são conhecidos. Em umaconcretização, a presente invenção proporciona um método de sintetizar umapró-droga de alquilador de fosforoamidato compreendendo reagir umalquilador de fosforoamidato inédito ou conhecido, um disparador-OH, umafosfina trissubstituída, e um azodicarboxilato de dialquila dando uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato inédita ou conhecida. Em umaconcretização do método, em uma primeira etapa o disparador-OH é reagidocom o fosfina trissubstituído e o azodicarboxilato de dialquila dando umintermediário, e em uma segunda etapa, o alquilador de fosforoamidato éadicionado ao intermediário obtido da primeira etapa dando o produto. Umareferida reação do tipo Mitsunobu é particularmente vantajosa para a síntesede pró-drogas de alquilador de fosforoamidato inéditas ou conhecidas ouderivados, Alq-disparador, em que disparador éL-Z3, em que Z3 é:<formula>formula see original document page 89</formula>
em que R9 é como definido acima.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de sintetizar uma pró-droga de alquilador de fosforoamidatocompreendendo reagir cada um dentre alquiladores de fosforoamidatosinéditos ou conhecidos:
<formula>formula see original document page 89</formula>
com um disparador-OH, uma fosfina trissubstituída, e um azodicarboxilato dedialquila dando, respectivamente,<formula>formula see original document page 90</formula>
em que X4, R5j R7, e R8 são como definido como na fórmula (I).
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo para sintetizar um composto de Fórmula:
<formula>formula see original document page 90</formula>
compreendendo reagir (a) um alquilador de fosforoamidato inédito ouconhecido de Fórmula:
<formula>formula see original document page 90</formula>
em que R2-R5 são definidos na fórmula (I) com a condição de que
(i) pelo menos dois de R1-R5 sejam selecionados do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila;
(ii) pelo menos um de RrR5 é selecionado do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-CrC6 alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; e pelo menos um de NR2R3 e NR4R5 é
ou
(iii) NR2R3 e NR4R5 são ambos, em conjunto, wirfVj;
(b) um disparador-OH, em que disparador é definido como nafórmula (I), uma fosfina trissubstituída, e
(c) um azodicarboxilato de dialquila dando o composto deFórmula:
<formula>formula see original document page 91</formula>
Em uma concretização, o composto de Fórmula:
<formula>formula see original document page 91</formula>
é selecionado do grupo que consiste de:
<formula>formula see original document page 91</formula>
Em outra concretização, o grupo de Fórmula:
<formula>formula see original document page 91</formula>
é selecionado do grupo que consiste de:<formula>formula see original document page 92</formula><formula>formula see original document page 93</formula>
Em outra concretização, a reação inclui um solvente, comoTHF, dioxano, um acetato de Ci-C6 alquila, clorofórmio, diclorometano,acetonitrila e análogos. Em outra concretização, cada substituinte no fosfinatrissubstituído é selecionado independentemente de um substituinte CrC6alquila, Ci-C6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila, heterociclila, arila,heteroarila, e CpC6 alcóxi. Em outra concretização, disparador T- éem que Xj, X2, Zh e Z2 são definidos na fórmula (I).
Em outra concretização, a presente invenção proporciona ummétodo para sintetizar a pró-droga de alquilador de fosforoamidatocompreendendo
(i) reagir, em um solvente selecionado dentre THF, dioxano,diclorometano, clorofórmio, acetato de etila, acetato de propila, acetato debutila, ou acetonitrila, um composto de Fórmula:
<formula>formula see original document page 94</formula>
em que cada R11 é independentemente hidrogênio, cicloprpila, metila, etila,benzila, ou metóxi; em que cada R9 é independentemente hidrogênio, metila,etila, propila, ou ciclopropila; e X4 é halo, metilsulfonilóxi, fenilsulfonilóxi,4-metilfenilsulfonilóxi, e 4-halofenilsulfonilóxi;
(ii) uma fosfina trissubstituída selecionado dentretrifenilfosfina, tributilfosfina, tributilfosfito; e
(iii) azodicarboxilato de dietila ou diisopropila;dando um produto de Fórmula:
Em outra concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de sintetizar um composto de Fórmula:
<formula>formula see original document page 94</formula>
compreendendo as etapas de:
(i) reagir em um solvente aprótico, um disparador-OH, em quedisparador é definido como na fórmula (I); uma fosfina trissubstituída; e umazodicarboxilato de dialquila dando um Intermediário (i);(ii) reagir o Intermediário (i) obtido da etapa (i) com umcomposto de fórmula
<formula>formula see original document page 95</formula>
em que cada R9, Rn, e X4 é definido como na fórmula (I), dando o compostode Fórmula:
<formula>formula see original document page 95</formula>
Em outra concretização, o fosfina trissubstituído é P(Ri2)3 emque cada Ri2 é H, Ci-Có alquila, Ci-Cô heteroalquila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, arila, ou heteroarila. Em outra concretização, o fosfinatrissubstituído é uma fosfina trissubstituída suportado sobre polímero. Emoutra concretização, o fosfina trissubstituído é trifenilfosfina, tributilfosfina,tripropilfosfina, trietilfosfina, ou trimetilfosfina. Em outra concretização, ofosfina trissubstituído é um trifenil fosfina suportado sobre polímero. Fosfinastrissubstituídos suportados sobre polímeros são comercialmente obteníveis,por exemplo, da Varian Inc. de Palo Alto, Califórnia. Em outra concretização,a presente invenção proporciona um método de sintetizar os compostos, emque cada Rn é hidrogênio. Em outra concretização, a presente invençãoproporciona um método de sintetizar os compostos
<formula>formula see original document page 95</formula>Em outra concretização, a presente invenção proporciona ométodo de preparar um composto, em que o disparador [é] selecionado dogrupo que consiste de:
<formula>formula see original document page 96</formula>
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo para sintetizar a pró-droga de alquilador de fosforoamidatocompreendendo as etapas de:
(a) refluxar POCl3 com um sal de amônio de N-2-haloetil-N-(R13)amônio, em que Ri3 é hidrogênio, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila, heterociclila, arila, heteroarila, dando um intermediário dediclorofosforoamidato;
(b) reagir o intermediário de diclorofosforoamidato na etapa(a) com um sal de N-2- haloetil-N-(Ri3)amônio, em que Ri3 é hidrogênio, Ci-C6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila, heterociclila, arila,heteroarila, e uma base em um solvente dando um intermediário demonoclorofosforoamidato; e
(c) reagir o intermediário de monoclorofosforoamidato obtidona etapa (b) com disparador-OH e uma base em um solvente dando a pró-droga de alquilador de fosforoamidato.
Em uma concretização, o intermediário dediclorofosforoamidato da etapa (a) é separado do restante da mistura dereação antes de se submeter o mesmo à reação na etapa (b). Em outraconcretização, a separação é realizada removendo-se primeiramente o excessode POCI3 em vácuo e, depois, destilando-se o diclorofosforoamidato sobpressão reduzida.
Em uma concretização, a pró-droga de alquilador defosforoamidato da etapa (c) é separada do restante da mistura de reação pormeio de cromatografia de coluna de vaporização instantânea em sílica-gel.Em uma concretização, a base empregada na etapa (b) é uma amina terciária.Aminas terciárias vantajosas empregadas na etapa (b) incluem trialquilaminas, como, trietila amina ou diisopropiletilamina. Em uma concretização,o solvente empregado na etapa (b) é tetraidrofurano (THF) ou dioxano.
Em uma concretização, o intermediário demonoclorofosforoamidato da etapa (b) é separada do restante da mistura dereação por meio de cromatografia de coluna de vaporização instantânea emsílica-gel antes de ser submetida à reação na etapa (c). Em uma concretização,a base útil na etapa (c) é hexaalquildissilazida de lítio, sódio, ou potássio;hidreto de sódio ou potássio; ou diisopropilamida de lítio. Em umaconcretização, o solvente empregado na etapa (c) é dimetoxietano, diglima,éter de dietila, ou THF.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo para sintetizar uma pró-droga de alquilador de fosforoamidatocompreendendo as etapas de:
(a) reagir em um solvente cerca de 1 equivalente de cada umde POCl3, um disparador-OH, e uma base dando um intermediário dediclorofosfato; e
(b) reagir o intermediário de diclorofosfato na etapa (a) comum sal de N-2-haloetil-N-(Ri3)amônio, em que Ri3 é hidrogênio, CrC6alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila, heterociclila, arila,heteroarila, e uma base em um solvente dando a pró-droga de alquilador defosforoamidato.
Em uma concretização, etapas (a) e (b) são realizadas atemperaturas abaixo de O0C. Em outra concretização, a etapa (b) é realizada auma temperatura de 20 a IOO0C maior do que a temperatura da etapa (a).
Em outra concretização, a presente invenção proporciona ummétodo para sintetizar pró-drogas de alquilador de fosforoamidatoheterocíclicas da presente invenção como mostrado abaixo:
em que X4 = Br ou Cl; e = de 1 a 3
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo para sintetizar a pró-droga de alquilador de fosforoamidatocompreendendo as etapas de:
(a) reagir PCl3 com um sal de N,N-di(2-haloetil)amônio e umabase em um solvente dando um derivado de monoclorofosfamida;
(b) reagir o derivado de monoclorofosfamida com disparador-OH dando um intermediário; e(c) oxidar o intermediário na etapa (b) dando o pró-droga dealquilador de fosforoamidato.
Em uma concretização, a base usada na etapa (b) étrietilamina. Em outra concretização, o solvente usado na etapa (c) édimetoxietano, diglima, ou um CrC6 acetato de alquila. Em outraconcretização, disparador-OH é etapa (c) é
<formula>formula see original document page 99</formula>
Vários l-N-alquil-2-aminoimidazol-5-carboxilato[s] podemser sintetizados como descrito esquematicamente abaixo:
<formula>formula see original document page 99</formula>
Os l-N-alquil-2-aminoimidazol-5-carboxilatos podem serreduzidos dando vários derivados de l-N-alquil-2-amino-5-hidroximatilimidazol empregados na presente invenção como grupobiorredutor Z3.
Os métodos sintéticos são proporcionados de maneira maisdetalhada na seção de Exemplos abaixo.
Síntese de grupos biorredutors e pró-drogas de alquilador defosforoamidato, e métodos da presente invenção pode ser adaptada a partirdas referências Matteucci et al., Publ. de Pedido PCT n° WO 04/009667, epró-drogas ativadas por hipoxia [] Pedido de Pat. dos E.U.A. intitulado."Hypoxia Activated anti-Cancer Agents"; deGroot et al, 2001, Current Med.Chem. S: 1093-1122; Denny et al, Patams 5.750.782; 5.780.585; 5.872.129; e6.251.933; Davis et al, Pedidos Public. PCT nums. WO 04/85421 e WO04/85361; e Lin et al, Pedidos Public, dos E.U.A. nums. 2004/254103 e2005/043244, e Borch et al, (acima).Exemplos de métodos para sintetizar pró-drogas de alquiladorde fosforoamidato da presente invenção são proporcionados de maneira maisdetalhada na seção de "Exemplos" abaixo.
IIIa. Métodos de Tratamento
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer em um paciente que necessita de terapia por meio deadministração, ao paciente, de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidatoda presente invenção ou de uma que é conhecida. Alquiladores defosforoamidatos conhecidos são proporcionados pelas referências Borch et al,acima. Em uma concretização, a pró-droga de alquilador de fosforoamidatoempregada para tratar câncer de acordo com os métodos proporcionados pelapresente invenção apresenta a fórmula selecionada de (I) a (XXVII). Em umaconcretização, a pró-droga de alquilador de fosforoamidato empregada paratratar câncer de acordo com os métodos proporcionados pela presenteinvenção é selecionada dentre os compostos exemplificados na Seção deExemplos.
Terapia de câncer com agentes alquiladores pode levar aodesenvolvimento de cânceres que são resistentes a estes agentes alquiladores.
Agentes alquiladores podem matar células de câncer na região do câncer quese divide mais rapidamente ou que contém maior quantidade de oxigênio emcomparação com as células de câncer na região hipóxica do câncer que crescemais lentamente. As células referidas por último sobrevivem a tratamento poralquiladores e podem produzir células resistentes a referidos alquiladores.
Atividade incrementada de guanina-06-Alquiltransferase, glutationa,glutationa transferases, a via de reparo de excisão de nucleotídeo, e/ou asproteínas de reparo de malpareamento, e permeação reduzida de drogasativamente transportadas, como mecloretamina e melfalano, são postuladascomo sendo responsáveis pela resistência do câncer a alquiladores (porexemplo, ver, Hardman et al,páginas 1393 e 1433, acima).
As pró-drogas da presente invenção são eficazes para tratarcânceres resistentes a outras terapias. Células de câncer que se dividemlentamente na zona de câncer hipóxica atuam como uma fonte de células decâncer e cepas resistentes e são mortas pelas pró-drogas da presente invenção.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona um método de tratarum câncer resistente a tratamento por meio de um ou mais alquiladores pormeio de administração dos compostos da presente invenção sozinhos ou emcombinação com outro agente anticâncer. Em uma concretização, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato da invenção é administrada emcombinação com uma droga que apresenta substancialmente nenhumanefrotoxicidade. Em uma concretização as pró-drogas de alquiladores defosforoamidatos são administradas com carboplatina.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona pró-drogas de alquiladores de fosforoamidatos que não são resistentescruzadamente com alquiladores conhecidos. Em outra concretização, apresente invenção proporciona pró-drogas de alquiladores de fosforoamidatosque não são resistentes cruzadamente com os alquiladores ciclofosfamida,ifosfamida, glufosfamida, mecloretamina, melfalano, clorambucila,dacarbazina, temozolomida, carmustina, estreptozocina, bendamustina,bussulfano, tiotepa, cisplatina, carboplatina, e oxaliplatina.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de administração, como uma terapia deprimeira linha, os compostos da presente invenção sozinhos ou emcombinação com outros agentes anticâncer. Em outra concretização, apresente invenção proporciona um método de tratar um câncer metastático pormeio de administração, como uma terapia de primeira linha, os compostos dapresente invenção sozinhos ou em combinação com outros agentes anticâncer.Em uma concretização, a presente invenção proporciona um método de tratarcâncer por meio de administração, como uma terapia de segunda linha, oscompostos da presente invenção sozinhos ou em combinação com outrosagentes anticâncer. Em uma concretização, a presente invenção proporcionaum método de tratar câncer por meio de administração, como uma terapia deterceira linha, os compostos da presente invenção sozinhos ou em combinaçãocom outros agentes anticâncer. Em uma concretização, a presente invençãoproporciona um método de tratar câncer por meio de administração após umtratamento prévio com cirurgia e/ou terapia de radiação dos compostos dapresente invenção sozinhos ou em combinação com outros agentes anticâncer.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona um método de tratarcâncer, em que o câncer apresenta-se relapsado após quimioterapia prévia,cirurgia, radiação ou qualquer combinação dos mesmos, por meio deadministração dos compostos da presente invenção sozinhos ou emcombinação com outros agentes anticâncer.
Em métodos para tratar câncer proporcionados pela presenteinvenção, administra-se uma quantidade eficaz de pró-drogas de alquilador defosforoamidato ao sujeito. De uma maneira geral, o sujeito pode ser qualquerhumano ou mamífero não-humano. O sujeito preferido é um sujeito humano.Outro sujeitos particulares incluem, embora sem limitação, a primatas não-humanos, cães, gatos, animais agrícolas e cavalos. Em uma versão, a pró-droga de alquilador de fosforoamidato é administrada sozinha. Em umaversão a pró-droga de alquilador de fosforoamidato é administrada emcombinação com um ou mais agentes anticâncer adicionais. Em uma versão apró-droga de alquilador de fosforoamidato é administrada em conjunto comum tratamento terapêutico de câncer, incluindo embora sem limitação,cirurgia e radiação. A pró-droga de alquilador de fosforoamidato seráadministrada tipicamente em uma composição farmacêutica. Diversascomposições farmacêuticas que podem ser usadas encontram-se descritas naSeção de Formulações abaixo.A pró-droga de alquilador de fosforoamidato e suascomposições farmacêuticas podem ser usadas para tratar qualquer tipo decâncer em um sujeito, particularmente em um sujeito humano. Cânceres quepodem ser tratados incluem, embora sem limitação, leucemia, câncer demama, câncer de pele, câncer ósseo, câncer do fígado, câncer do cérebro,câncer da laringe, vesícula biliar, pâncreas, reto, paratireóide, tireóide,adrenal, tecido neural, cabeça e pescoço, estômago, brônquios, rins,carcinoma de células basais, carcinoma de células escamosas de tipoulcerativo e papilar, carcinoma metastático da pele, osteosarcoma, sarcoma deEwing, sarcoma de células de veticulum, mieloma, tumor de células gigantes,tumor de células pequenas do pulmão, pedras biliares, tumor de célulasilhotas, tumor primário do cérebro, tumores granulocítico e linfocítico agudoe crônico, tumor de células peludas, adenoma, hiperplasia, carcinomamedular, feocromocitoma, neuromas da mucosa, ganglioneuromas intestinais,tumor hiperplásico do nervo córneo, tumor do habitus marfanóide, tumor deWilm, seminoma, tumor de leiomiomater, displasia cervical, e carcinoma insitu, neuroblastoma, retinoblastoma, sarcoma de tecido mole, carcinóidemaligno, lesão tópica da pele, micose fungóide, rabdomiossarcoma, sarcomade Kaposi, sarcoma osteogênico e outro sarcoma, hipercalcemia maligna,tumor de células renais, policitemia vera, adenocarcinoma, glioblastomamultiforma, leucemias, linfomas, melanoma malignos, e carcinomasepidermóides.
A pró-droga de alquilador de fosforoamidato pode ser usadaparticularmente no tratamento de cânceres contendo áreas significativas detecido hipóxico. Referidos cânceres incluem, embora sem limitação, câncerpulmonar, particularmente câncer pulmonar de células não-pequenas, câncerde mama, câncer do colo, câncer da cabeça e pescoço, câncer ovariano, câncerpancreático, e câncer da próstata. Exemplos de tipos de cânceres que podemser tratados com as pró-drogas de alquilador de fosforoamidato da invençãosão proporcionados nas referências a seguir, em que cada uma delas éincorporada integralmente aqui por referência Tidmarsh et al, Pedido de Pat.PCT n° PCT/US2005/047314 depositado em 22 dezembro de 2005, e Pedidode Pat. PCT intitulado "Terapia de Combinação com Glufosfamida",Protocolo do advogado n° 021305-005900PC; e Pedido de Pat. dos E.U.A. n°60/760.599 e 60/719.787 e Pedido de Pat. Publ. PCT n0 WO 2005/076888.
Vários destes cânceres são discutidos para fins ilustrativos abaixo. Aquelescom prática na técnica considerarão que quimioterapia de câncerfreqüentemente envolve a administração simultânea ou sucessiva de umavariedade de agentes anticâncer, e como discutido adicionalmente abaixo, épossível usar uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato em terapias decombinação como proporcionado pelos métodos descritos aqui. Assim, nadescrição de cânceres ilustrativos contendo regiões hipóxicas passíveis detratamento com uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato, em queexemplos de terapias de combinação também são descritos.
Câncer do pulmão afeta mais de 100.000 elementos do sexomasculino e 50.000 elementos do sexo feminino nos Estados Unidos, em quea maior parte destes morre dentro de 1 ano do diagnóstico, tornando-o a causaprincipal de morte por câncer. Protocolos correntes para o tratamento decâncer do pulmão envolvem a integração de quimioterapia com ou semradioterapia ou cirurgia. Uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato podeser usada como um agente simples ou em combinação com terapias decombinação existentes. Uma variedade de regimes de combinações dequimioterapia foi reportada para câncer pulmonar de células pequenas,incluindo as combinações consistindo de ciclofosfamida, doxorrubicina evincristina (CAV); etoposida e cisplatina (VP-16); e ciclofosfamida,doxorrubicina e VP-16 (CAVP- 16). Reportou-se modestos benefícios desobrevida devidos a tratamento de combinação com quimioterapia (etoposidamais cisplatina) para câncer pulmonar de células não-pequenas.Da mesma forma, diversas drogas citotóxicas diferentesproduziram pelo menos regressão parcial de câncer ovariano. As drogas maisativas no tratamento de câncer ovariano têm sido agentes alquiladores,incluindo ciclofosfamida, ifosfamida, melfalano, clorambucila, tiotepa,cisplatina, e carboplatina. Terapias de combinação correntes para câncerovariano incluem cisplatina ou carboplatina em combinação comciclofosfamida em intervalos de 3 a 4 semanas durante de seis a oito ciclos.
Os compostos e métodos descritos aqui proporcionam formas de pró-drogas emétodos para tratar câncer ovariano em que uma pró-droga de alquilador defosforoamidato como descrito aqui é usada como um agente simples ou nareferida terapia de combinação existente, seja para substituir um agente ouadicionalmente ao(s) agente(s) correntemente usados.
Câncer da próstata é a malignidade mais comum em homensnos Estados Unidos, e é a segunda causa de câncer mais comum em homensacima da idade de 55, e reportou-se que este câncer consiste primariamente detecido hipóxico. Vários protocolos de quimioterapia foram reportados parauso na doença em estágio terminal após recidiva depois de tratamentohormonal. Agentes para o tratamento de câncer da próstata incluem osalquiladores fosfato de estramusina, prednimustina, e cisplatina.Quimioterapia de combinação também é usada para tratar câncer da próstata,incluindo tratamento com fosfato de estramusina mais prednimustina ecisplatina, e 5-fluorouracila, melfalano, e hidroxiuréia. A presente invençãoproporciona métodos para tratar câncer da próstata em que uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da presente invenção é usada em referidascombinações, seja para substituir um agente ou adicionalmente ao(s) agente(s)correntemente usados.
Câncer do intestino grosso é a segunda maior causa de mortepor câncer nos Estados Unidos e, da mesma forma, é um câncer caracterizadopor regiões hipóxicas. Embora a quimioterapia em pacientes com câncercolorretal avançado tenha provado proporcionar benefício apenas marginal, 5-fluorouracila é o tratamento mais efetivo para esta doença. 5-Fluorouracila éútil sozinha ou em combinação com outras drogas, mas está associada comuma probabilidade meramente de 15 a 20% de uma redução mensurável dasmassas tumorais em 50 porcento ou mais. Usando-se 5-FU em combinaçãocom os compostos e métodos descritos aqui, e os métodos para tratar câncerdo colo usando-se uma pró-droga podem oferecer significativo benefícioterapêutico e potencial para atender a necessidade não atendida de melhoresmétodos de tratamento para esta doença.
Em uma versão dos métodos de tratamento, é possível usaruma pró-droga de alquilador de fosforoamidato em diversas abordagensconhecidas de terapia do câncer incluindo, embora sem limitação, "terapiacom pró-droga de enzima dirigida para anticorpo" (ADEPT), "terapia compró-droga de enzima dirigida para vírus (VDEPT), " terapia com pró-droga deenzima dirigida para gene" (GDEPT), e " terapia com pró-droga de enzimadirigida para bactérias" (BDEPT). Os usos gerais de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato não se limitam aos métodos de tratamentoprecedentes.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um métodode tratamento de doenças hiperproliferativas não-câncer caracterizadas porhiperproliferação celular (p. ex., uma quantidade ou taxa anormalmenteincrementada de proliferação celular). Em uma concretização, a doençahiperproliferativa tratada de acordo com o presente método é selecionado dogrupo que consiste de angiite alérgia e granulomatose (doença de Churg-Strauss), asbestose, astma, gastrite atrófica, hiperplasia prostático benigno,penfigóice buloso, doença abdominal, bronquite crônica e doença obstrutivacrônica das vias aéreas, sinusite crônica, doença de Crohn, neuropatiasdesmielinadoras, dermatomiosite, eczema incluindo dermatite atópica,doenças do tubo de Eustáquio, arterite de células gigantes, rejeição deenxerto, pneumonite de hipersensibilidade, vasculite de hipersensibilidade(púrpura de Henoch-Schonlein), dermatite irritante, anemia hemolíticainflamatória, neutropenia inflamatória, doença do intestino inflamatório,doença de Kawasaki, esclerose múltipla, miocardite, miosite, pólipos nasais,doenças dos dutos nasolacrimais, vasculite neoplásica, pancreatite, pênfigovulgar, glomerulonefrite primária, psoríase, doença periodontal, doença dorim policístico, poliarterite nodosa, síndrome de superposição de poliangite,colangite esclerosante primária, artrite reumatóide, doença do soro, adesõescirúrgicas, estenose ou restenose, esclerite, escleroderma, estreitamentos dosdutos biliares, estreitamentos (do duodeno, intestino delgado, e colo), silicosee outras formas de pneumoconiose, diabetes de tipo I, colite ulcerativa,proctite ulcerativa, vasculite associada com distúrbios do tecido conectivo,vasculite associada com deficiências congênitas do sistema de complemento,vasculite do sistema nervoso central, e granulomatose de Wegener.
Em algumas concretizações da invenção, um composto dapresente invenção é administrado para tratar uma doença hiperproliferativaselecionada do grupo que consiste de psoríase, esclerose múltipla, artritereumatóide, restenose, e hiperplasia prostática benigna. Em umaconcretização, a doença hiperproliferativa tratada é psoríase, uma doençacaracterizado pela hiperproliferação celular de queratinócitos que se formasobre a pele formando lesões escamadas elevadas. Em outra concretização, adoença hiperproliferativa tratada é esclerose múltipla, uma doençacaracterizado por desmielinação progressiva no cérebro. Em outraconcretização, a doença hiperproliferativa tratada é artrite reumatóide, umadoença inflamatória, recidivante, crônica de multisistemas que pode levar àdestruição e anquilose de juntas afetadas. Em outra concretização, oscompostos da presente invenção são administrados para prevenir uma doençahiperproliferativa resultante de proliferação celular em uma próteseimplantada em um sujeito por meio de revestimento de prótese com umacomposição contendo um composto da presente invenção. Em outraconcretização, a doença hiperproliferativa tratada é hiperplasia prostáticabenigna, uma doença em que células epiteliais da próstata crescemanormalmente e, com isso, bloqueiam o fluxo de urina.
IIIb. Formulações, modos de administração, dosagens
Uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato seráformulada tipicamente como formulações farmacêuticas para administração aum sujeito. Descreve-se nesta seção modos de administração, formulações, edosagens que podem ser usadas quando se trata cânceres usando uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato descrita aqui.
Administração de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato para o tratamento de câncer pode ser efetuada por meio dequalquer método que permite o fornecimento das pró-drogas no sítio de ação,a região hipóxica de um tumor. Muitas drogas para câncer são administradaspor meio de injeção intravenosa, e uma pró-droga de alquilador defosforoamidato pode ser formulada para referida administração, incluindo nãosó formulações prontas para injeção, mas também formulações liofilizadas ouconcentradas que precisam ser reidratadas ou diluídas, respectivamente, antesda injeção. Adicionalmente a estas formulações, é possível formular uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato para administração por vias orais,intraduodenais, injeção parenteral (incluindo intravenosa, subcutânea,intramuscular, intravascular ou infusão), tópica, e via retal. Aqueles comprática na técnica perceberão que uma pró-droga de alquilador defosforoamidato pode ser ativada por bactérias no intestino. Se referidaativação não for desejada, então o praticante pode empregar uma via deadministração ou uma formulação que resulta em absorção de uma pró-drogade alquilador de fosforoamidato antes de sua entrada no intestino grosso oucolo. A via de administração eficaz e a correspondente formulação da pró-droga de alquilador de fosforoamidato dependerá do tipo de câncer que estásendo tratado, da pró-droga de alquilador de fosforoamidato selecionada paraadministração, da gravidade do câncer, e da idade, peso, e condição dopaciente, entre outros fatores.
A quantidade de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato administrada, e, portanto, a quantidade da pró-droga dealquilador de fosforoamidato contida na dose administrada e o produto quecompreende aquela dose, dependerá do sujeito a ser tratado, da gravidade docâncer, da localização do câncer, da taxa de administração, da disposição dapró-droga (p. ex., peso molecular, solubilidade e citotoxicidade normóxica ehipóxica), do agente citotóxico liberado por uma pró-droga de alquilador defosforoamidato, e do critério do médico prescrevente.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratamento de câncer em um paciente em que uma dosagem eficazencontra-se tipicamente na faixa de cerca de 0,001 a cerca de 0,1 g por kg depeso corporal, ou de cerca de 0,1 a cerca de 35 mg/kg/dia em doses simplesou divididas. Para um humano de 70 kg, isto poderia compreender de cerca de0,05 a cerca de 7 g/dia, de cerca de 0,2 a cerca de 2,5 g/dia. Em alguns casos,níveis de dosagem abaixo do limite inferior da faixa previamente indicadapodem ser mais do que adequados, enquanto que, em outros casos, é possívelempregar doses ainda maiores sem causar qualquer efeito colateral nocivo;também é possível dividir doses maiores em várias doses pequenas paraadministração ao longo do dia por meio de infusão durante uma hora, oucontinuamente usando-se um cateter central inserido perifericamente (linha dePICC) e bomba e bolsa intravenosa portátil.
Em uma concretização, a dose eficaz de um composto dapresente invenção para tratamento de câncer e outras doençashiperproliferativas situa-se na faixa de cerca de 0,1 a cerca de 35 mg/kg/dia;de cerca de 0,5 a cerca de 20 mg/kg/dia; de cerca de 0,5 a cerca de 15mg/kg/dia; de cerca de 0,5 a cerca de 10 mg/kg/dia; de cerca de 0,5 a cerca de8 mg/kg/dia; e de cerca de 1 a cerca de 5 mg/kg/dia em doses simples oudivididas. Em uma concretização, a dose eficaz de um composto da presenteinvenção para tratamento de câncer e outras doenças hiperproliferativas situa-se na faixa de cerca de 2 a cerca de 8 mg/kg/dia; de cerca de 2 a cerca de 4mg/kg/dia; e de cerca de 2 mg/kg/dia em doses simples ou divididas. Em umaconcretização, a dose eficaz de um composto da presente invenção paratratamento de câncer e outras doenças hiperproliferativas situa-se na faixa decerca de 0,25 a cerca de 2,5 mg/kg/dia; de cerca de 0,25 a cerca de 1mg/kg/dia; e de cerca de 0,25 a cerca de 0,5 mg/kg/dia em doses simples oudivididas. Em uma concretização, a dose é administrada IV, diariamente, sejacomo uma monoterapia (composto da presente invenção sozinho) ou emconjunto (combinação) com terapias de tratamento convencionais. Em umaconcretização, a dose eficaz para tratamento de câncer e outras doençashiperproliferativas situa-se na faixa descrita previamente administrada umavez por semana.
Em uma concretização, uma dose maior é administradaintermitentemente (menos freqüentemente); uma dose na faixa de cerca de 3 acerca de 20 mg/kg; de cerca de 6 a cerca de 10 mg/kg; ou de 8 mg/kg éadministrada uma vez a cada três dias durante duas semanas. Em outraconcretização, uma dose na faixa de cerca de 5 a cerca de 30 mg/kg; de cercade 10 a cerca de 15 mg/kg; ou de 12,5 mg/kg da pró-droga de alquilador defosforoamidato é administrada uma vez por semana durante quatro semanas.Em uma concretização, uma dose na faixa de cerca de 0,5 a cerca de 8mg/kg/dia é administrada durante 5 dias ao longo de ciclos de duas semanas.
Em outra concretização, para o tratamento de pacienteshumanos, a dose diária máxima de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato não é maior do que 500 mg/kg de peso do paciente e,correspondentemente, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato éadministrada numa dose diária na faixa de cerca de 1 mg de um alquilador defosforoamidato pró-droga/kg de peso do paciente a cerca de 500 mg de umapró-droga de alquilador de fosforoamidato/kg de peso do paciente. Em umaconcretização, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é administradanuma dose diária na faixa de cerca de 5 mg/kg a cerca de 500 mg/kg do pesocorporal do paciente a ser tratado. Em outra concretização, a doseterapeuticamente eficaz é uma dose diária de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é de cerca de 10 mg/kg a cerca de 250 mg/kg do peso corporaldo paciente a ser tratado. Em outra concretização, a dose terapeuticamente eficazde uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é de cerca de 25 mg/kg a cercade 150 mg/kg do peso corporal do paciente a ser tratado. Em outra concretização,a dose terapeuticamente eficaz de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidatoé de cerca de 25 mg/kg a cerca de 50 mg/kg de peso corporal do paciente a sertratado. Em outra concretização, a dose terapeuticamente eficaz de uma pró-drogade alquilador de fosforoamidato é de cerca de 1,25 mg/kg a cerca de 12,5 mg/kgde peso corporal do paciente a ser tratado.
Orientação referente à administração também pode serproporcionada por e de estudos em humanos e outros animais mamíferos. Umadose terapeuticamente eficaz determinada para um animal pode ser convertida àdose equivalente humana correspondente (HED) como descrito na tabela abaixo:
<table>table see original document page 111</column></row><table>
a Para converter dose animal em mg/kg a HED (presume-se um humano de 60 mg/kg, dividir a dose animal pelo fator de conversão de HED. Para espécies não listadasou para pesos fora das faixas convencionais, a dose equivalente humana (HED) pode sercalculada a partir da fórmula: HED = dose animal em mg/kg x (peso do animal em kg/pesohumano em kg)0'33.
b Por exemplo, cynomolgus, rhesus, ou cauda de toco.
Para se obter efetividade terapêutica, a dose diáriaterapeuticamente eficaz de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato éadministrada usualmente múltiplas vezes ao paciente. Em uma concretização,uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é administrada diariamentedurante um intervalo de tempo. Tipicamente, empregar-se-á administraçãodiária durante pelo menos 3 dias consecutivos. Em concretizaçõesrelacionadas, a administração é durante pelo menos 5 dias consecutivos, pelomenos 7 dias consecutivos, ou pelo menos 10 dias consecutivos. Dependendoda dose, formulação, e via de administração selecionada pelo praticante e aconveniência do paciente, a dose diária inteira pode ser administrada uma vezao dia, ou a dose diária pode ser administrada em múltiplas doses diárias umavez ao dia, ou a dose diária pode ser administrada em múltiplas dosesmenores ao longo de um dia (incluindo por meio de infusão com uma bombaou administração intravenosa). Por exemplo, a dose pode ser dividida em duasdoses menores e administrada duas vezes ao dia, ou dividida em três dosesmenores e administradas três vezes ao dia. Alguém com prática na técnica detratamento de câncer perceberá que, como usado aqui, administração "diária"não é limitada a uma administração por dia, mas pode incluir múltiplasadministrações.
Também é possível usar programas de administraçãodiferentes de administração diária consecutiva. Administração em diasalternados (qod) é particularmente vantajosa, e administração uma vez a cadaterceiro dia, ou uma vez por semana pode ser apropriada em alguns casos,mas, em qualquer caso, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato éadministrada repetidamente durante um determinado período. Por exemplo, sea administração for diária (incluindo, como indicado, uma dose diáriadividida), em dias alternados, ou menos freqüentemente, em umaconcretização uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é administradapelo menos 2 dias por semana durante pelo menos duas, três, quatro, cinco oupelo menos seis semanas consecutivas, ou, alternativamente, durante pelomenos duas, três, quatro, cinco ou pelo menos seis semanas em um intervalode tempo de seis meses, ou, alternativamente, durante pelo menos duas, três,quatro, cinco ou pelo menos seis semanas em um intervalo de tempo de dozemeses. Em uma concretização, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é administrada pelo menos 3 dias por semana durante pelomenos duas, três, quatro, cinco ou pelo menos seis semanas consecutivas, ou,alternativamente, durante pelo menos duas, três, quatro, cinco ou pelo menosseis semanas em um intervalo de tempo de seis meses, ou, alternativamente,durante pelo menos duas, três, quatro, cinco ou pelo menos seis semanas emum intervalo de tempo de doze meses. Em uma concretização uma pró-drogade alquilador de fosforoamidato é administrada pelo menos 10 dias por mês,opcionalmente pelo menos 20 dias por mês, durante pelo menos um mês oupelo menos dois, três, quatro, cinco ou pelo menos seis meses consecutivos,ou, alternativamente, pelo menos um, duas, três, quatro, cinco ou pelo menosseis meses durante um período de 6 meses.
Em uma concretização, a administração da doseterapeuticamente eficaz é continuada durante vários dias, tipicamente durantepelo menos três dias consecutivos, e freqüentemente durante pelo menos decinco a dez dias consecutivos, ou durante uma semana, ou durante váriassemanas ou mais. Assim, um paciente pode receber administração de umapró-droga de alquilador de fosforoamidato de acordo com os presentesmétodos durante vários dias, uma semana, um mês, dois meses, três meses,seis meses, ou um ano ou mais tempo.
De forma consistente com regimes de administração de outrosagentes anticâncer, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato pode seradministrada em múltiplos "ciclos" de administração. Por exemplo, emalgumas concretizações, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato podeser administrada uma vez ao dia durante pelo menos de três a dez, ou pelomenos de cinco a dez dias consecutivos, e referidos tratamentos de três a dezou de cinco a dez dias podem ser repetidos uma vez, duas vezes, ou três oumais vezes, algumas vezes com um período sem tratamento (com umalquilador de fosforoamidato pró-droga) compreendendo de uma a váriassemanas entre cada tratamento de múltiplos dias. De forma similar, emalgumas concretizações, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato éadministrada em dias alternados durante de duas a dez administrações, maisfreqüentemente de três a dez administrações, ou de cinco a dezadministrações, e referidas duas, três ou de cinco a dez administrações qodpodem ser repetidas uma vez, duas vezes, ou três ou mais vezes com umperíodo sem tratamento (com uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato)compreendendo de uma a várias semanas entre cada tratamento de múltiplosdias. Outros programas de administração de múltiplos ciclos serãocompreensíveis para o praticante versado guiado por esta descrição.
Em um aspecto, "administrar uma dose terapeuticamenteeficaz ou regime de um alquilador de fosforoamidato pró-droga" refere-se a(i) administrar uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato nas faixasindicadas (p. ex., de 1 mg a 1 g de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato por kg de peso do paciente, tipicamente de 5 a 150 mg de umapró-droga de alquilador de fosforoamidato por kg de peso do paciente)durante um número mínimo especificado de dias dentro de um período detempo especificado, em que a administração de uma pró-droga de alquiladorde fosforoamidato apresenta um efeito terapêutico sobre o câncer no paciente.Regimes ilustrativos de doses terapeuticamente eficazes para uma pró-drogade alquilador de fosforoamidato incluem aqueles descritos aqui, comoadministração de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato durante 3dias consecutivos, 5 dias consecutivos, 7 dias consecutivos, 10 diasconsecutivos, pelo menos 3 dias por semana, pelo menos 3 dias por semanadurante um mês, pelo menos 10 dias por mês, e pelo menos 20 dias por mês.
Na otimização de um regime de tratamento com pró-droga dealquilador de fosforoamidato de acordo com a presente invenção, a dose efreqüência de uma administração de pró-droga de alquilador defosforoamidato pode ser selecionada para se obter uma área sustentadamáxima sob a curva de concentração de plasma (AUC) durante o curso detratamento. O regime de dosagem teoricamente ótimo resultará numaexposição máxima das células de tumor a uma pró-droga de alquilador defosforoamidato, conforme medido com AUC, ao mesmo em que se minimizaa concentração plasmática máxima (Cmax) para uma qualquer administraçãosimples. Uma Cmax mais elevada contribuirá para a toxicidade, enquanto que aAUC determinará a eficácia. Como se compreende na técnica relativamente aoutras drogas terapêuticas para câncer, tratamento com uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato pode ser suspenso temporariamente caso não seobservar toxicidade, ou visando a conveniência do paciente, sem afastar-se doescopo da invenção, e então reiniciado.
Em uma concretização, a farmacocinética da pró-droga dealquilador de fosforoamidato da presente invenção empregada para otratamento de câncer pode determinar a dose, o método de administração, e otipo de câncer que é tratado com a pró-droga de alquilador de fosforoamidato.Em uma concretização, a pró-droga de alquilador de fosforoamidato dapresente invenção pode apresentar uma meia-vida in vivo entre de 1 a 300minutos. Em uma concretização, os compostos da presente invenção podemapresentar uma meia-vida in vivo entre de 3 a 10 minutos. Em umaconcretização, os compostos da presente invenção podem apresentar umameia-vida in vivo entre de 10 a 30 minutos. Uma meia-vida curta de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato pode requerer um tempo de infusão notratamento que é mais longo do que aquele requerido para uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato apresentando uma meia-vida mais longa. Umameia-vida curta da pró-droga de alquilador de fosforoamidato podeincrementar a dose máxima tolerada (MTD) para aquela pró-droga.
Em outra concretização, a presente invenção proporciona pró-drogas de alquilador de fosforoamidato que permanecem até 20% inalteradasquando incubadas com proteína de microssoma de fígado de camundongo(atualização com exemplo humano e dados, se disponíveis) durante 30minutos. Em outra concretização, a presente invenção proporciona pró-drogasde alquilador de fosforoamidato que permanecem de 20 a 80% inalteradasquando incubadas com proteína microssômica de fígado de camundongodurante 30 minutos. Em outra concretização, a presente invenção proporcionapró-drogas de alquilador de fosforoamidato que permanecem mais de 80%inalteradas quando incubadas com proteína microssômica de fígado decamundongo durante 30 minutos. Em outra concretização, exemplos de pró-drogas de alquilador de fosforoamidato da presente invenção que, quandoincubados com proteína microssômica de fígado de camundongo durante 30minutos permanecem acima de 80% inalterados incluem 1, 25, e 36. Quantomaior a estabilidade MLM de uma pró-droga da invenção, sua doseterapeuticamente eficaz e efeitos colaterais indesejáveis para o paciente serãomenores.
Em uma concretização relacionada, o grupo biorredutor daspró-drogas de alquilador de fosforoamidato da presente invenção, apósredução/ativação em uma zona de tumor hipóxica forma um conjugado dealquilador de fosforoamidato- Tm. O conjugado de alquilador defosforoamidato- Tm pode difundir-se e atingir outras partes do tumor ououtros tumores no caso de uma doença metastática. Vários parâmetrosfarmacocinéticos, como volume de distribuição em estado estacionário (Vss),eliminação (CL), área sob a curva (AUC), estabilidade microssômica defígado de camundongo (MLM), estabilidade plasmática, e Cmax de pró-drogasde alquilador de fosforoamidato da presente invenção foram medidas elistadas na seção de Exemplos (ver também Hardman et al, supra).
Em regimes de re-tratamento, a dose pode ser ajustada pararefletir a tolerância do paciente relativamente ao tratamento anterior. Emqualquer caso, à medida que se observa toxicidade durante a administraçãorepetida, a dosagem pode ser interrompida temporariamente à medida que seobserva sintomas graves. O período de interrupção temporária daadministração (feriado de droga) pode ser encerrado no momento em que oprimeiro órgão de toxicidade não contém mais concentrações significativas deuma pró-droga de alquilador de fosforoamidato ou um alquilador defosforoamidato liberado da mesma (o que pode ser medido ou determinadoindiretamente por meio da cessação dos sintomas). Portanto, um período dedosagem intermitente pode ser definido não só por meio de dias específicos,mas individualizado com feriados de droga que se baseiam em sintomas eeliminação normal pelo órgão de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato ou um alquilador de fosforoamidatos liberado da mesmo.
Uma formulação de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato pode encontrar-se, por exemplo, numa forma vantajosa paraadministração oral como um tablete, cápsula, pó de pílulas, formulação deliberação sustentada, solução, e suspensão; para injeção parenteral como umasuspensão, emulsão ou solução estéril; para administração tópica como umungüento ou creme; e para administração como um supositório. Umaformulação de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato pode ser umaforma de dosagem unitária apropriada para administração simples dedosagens precisas e incluirá tipicamente um excipiente ou veículofarmacêutico convencional.
Veículos farmacêuticos vantajosos incluem cargas ou diluentesinertes, água e vários solventes orgânicos. As composições farmacêuticaspodem conter, se desejado, ingredientes adicionais, como aromatizantes,ligantes, excipientes, e análogos. Assim,, para administração oral, tabletescontendo vários excipientes, como ácido cítrico, podem ser empregadosjuntamente com vários desintegrantes, como amido, ácido algínico, edeterminados silicatos complexos, e com agentes ligantes, como sacarose,gelatina e acácia. Adicionalmente, é possível usar agentes lubrificantes, comoestearato de magnésio, lauril sulfato de sódio, e talco para preparar as formasde tabletes de formulações de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidatodescrita aqui. Composições sólidas de um tipo similar podem ser empregadasem cápsulas de gelatina moles e duras enchidas. Portanto, materiaispreferidos, incluem lactose ou açúcar do leite e polietileno glicóis com altopeso molecular. Quando se deseja suspensões aquosas ou elixires paraadministração oral, em que a pró-droga presente pode ser combinada comvários agentes adoçantes ou aromatizantes, materiais de tingimento oucorantes e, se desejado, agentes emulsificantes ou agentes de suspensão,juntamente com diluentes, como água, etanol, propileno glicol, glicerina, oucombinações dos mesmos.
Formas de administração parenteral exemplares incluemsoluções ou suspensões de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato emsoluções aquosas estéreis, por exemplo, polietileno glicóis aquosos, soluçõesde propileno glicol ou dextrose. Referidas formas de dosagem podem sertamponadas de maneira vantajosa, se desejado.
Aqueles versados na técnica conhecem métodos de preparaçãode várias composições farmacêuticas com uma quantidade específica de drogaativa, ou serão compreensíveis mediante a leitura desta descrição. Paraexemplos, ver Remington1S Pharmaceutical Sciences, Mack PublishingCompany, Philadelphia, Pa., 17a edição (1984).
Os métodos de tratamento de câncer empregando uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato da presente invenção são efetivos paramatar as células de câncer mais difíceis de matar que crescem na regiãohipóxida de um tumor. Uma vez liberada na região hipóxica uma pró-drogade fosforoamidato pode difundir-se das células hipóxicas e matar as células decâncer em regiões adjacentes contendo populações crescentes de células quese dividem rapidamente. A região hipóxica atua como uma fábrica de drogapara produzir, no interior de um tumor, um alquilador para matar células decâncer normóxicas adjacentes levando a uma maior concentração doalquilador de fosforoamidato no interior do tumor, relativamente a tecidosnormais. O uso da pró-droga para gerar o alquilador de fosforoamidato nointerior do tumor pode reduzir efeitos colaterais tóxicos causados pelatoxicidade celular normal. Após a célula de câncer na região normóxica dotumor ter sido destruída, uma região hipóxica pode tornar-se normóxica ecomeçar a dividir-se. Neste ponto, referidas células podem ser mortas pelosalquiladores de fosforoamidatos gerados de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato desta invenção ou aqueles conhecidos, ou por outros agentesanticâncer ou citoxinas administradas em combinação com a pró-droga dealquilador de fosforoamidato, como descrito na seção a seguir.
IIIc. Terapias de combinação
De acordo com os métodos da invenção, uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato pode ser co-administrada em combinação comoutros agentes anticâncer ("agente anticâncer"). Sem desejar ligar-se aqualquer efeito ou mecanismo particular, referida co-administração pode, emalguns casos, proporcionar uma ou mais de várias vantagens relativamente aterapias de câncer conhecidas, como, por exemplo, a co-administração de umapró-droga de alquilador de fosforoamidato e o agente anticâncer apresenta umefeito sinérgico sobre a indução de morte celular do câncer. A co-administração proporciona um melhor resultado terapêutico do que aadministração do agente anticâncer sozinho, p. ex., maior alívio oumelhoramento de um ou mais sintomas do câncer, diminuição da extensão dadoença, retardo ou desaceleração da progressão da doença, melhoramento,paliativo ou estabilização do estado da doença, remissão parcial ou completa,sobrevida prolongada ou outros resultados terapêuticos benéficos.
A co-administração de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato aumenta a sensibilidade de células de câncer ao agenteanticâncer, permitindo administrar doses menores do agente anticâncer aopaciente ou permitindo o uso de um agente anticâncer para tratamento decélulas de outra forma resistentes ao agente anticâncer ou de outra formarefratárias a tratamento. Embora os agentes anticâncer conhecidos em geralobjetivem as células que se dividem rapidamente na região normóxica, as pró-drogas de alquilador de fosforoamidato da invenção objetivam as célulashipóxicas nas regiões de tumores que não mortas eficientemente pelo agenteanticâncer apenas.
Como usado aqui, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é "co-administrada" com outro agente anticâncer (tambémreferido aqui como, "Agente") quando uma pró-droga de alquilador defosforoamidato e Agente são administrados como parte do mesmo curso deterapia. Em uma concretização, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é administrada primeiramente antes da administração doAgente, (i.e., o início da outra terapia contra o câncer), e o tratamento comuma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é continuado durante o cursode administração do Agente (i.e., o curso da outra terapia). Em outraconcretização, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é administradaapós o início ou o término da outra terapia contra o câncer. Em outrasconcretizações, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato éadministrada primeiro contemporaneamente com o início da outra terapiacontra o câncer. Ver, por exemplo, terapias de combinação como descrito naSeção de Exemplos.
Em uma concretização, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é administrada primeiro antes da administração do Agente, etratamento com uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é continuadoapós cessar a administração do Agente. Em uma concretização, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é administrada primeiro antes daadministração do Agente, e tratamento com uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é continuado durante parte do período de administração doAgente. Para determinadas drogas, como determinados inibidores detopoisomerase, a administração de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato pode ser iniciada e completada antes da administração asegunda droga pode ser iniciada e completada antes da administração dasegunda droga.
redução de Z3 reage com oxigênio dando superóxido e Z3. Superóxido é umacitotoxina e a produção de superóxido em tecidos normóxicos pode levar aefeitos colaterais indesejados. Em uma concretização, a presente invençãoproporciona uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato administrada emcombinação com um agente quimioprotetor ou um quimioprotetor. Agentesquimioprotetores protegem tecido saudável contra efeitos tóxicos de drogasanticâncer. Em uma concretização, o agente quimioprotetor é um tiol ou umdisulfeto. Em uma concretização, o quimioprotetor pode reduzir superóxido.em outra concretização, o quimioprotetor pode reagir com o "receptor deMichael" gerado de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato e prevenirque o "receptor de Michael" venha a reagir com proteínas e ácido nucleico(ver abaixo).
Terapia com droga anticâncer envolve hoje em dia múltiplasoperações, ou "ciclos", de administração do(s) agente(s) anticâncer. Nocontexto da administração de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato,
Na presença de oxigênio, o ânion de radical formado após aNH0H(#)cada ciclo de administração (e também um conjunto completo de ciclos) podeser considerado como administração de uma segunda droga. Uma pró-drogade alquilador de fosforoamidato pode ser administrada em qualquer um ou emtodos os múltiplos ciclos de tratamento com o outro Agente; de uma formageral, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é administrada numabase diária durante pelo menos dois ou mais dias durante cada ciclo. Em umaspecto da invenção, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é co-administrada com o Agente de acordo com um programa repetido a cada ciclo.
Em uma versão do método de tratar câncer usando-se uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é administrada em combinação com uma quantidade eficaz deum ou mais agentes quimioterápicos, uma quantidade eficaz de radioterapia,um procedimento cirúrgico apropriado, ou qualquer combinação de referidasterapias adicionais.
Quando uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato éusada em combinação com uma ou mais das terapias adicionais, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato e terapia adicional podem seradministradas ao mesmo tempo, ou podem ser administradas separadamente.Por exemplo, se uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato éadministrada com um agente quimioterápico adicional, os dois agentes podemser administrados simultaneamente ou podem ser administradosseqüencialmente com algum intervalo entre as administrações. Alguém comprática na técnica compreenderá métodos de administração dos agentessimultânos e seqüenciais e possíveis intervalos de tempo entre asadministrações. Ver, por exemplo, terapias de combinação como descrito naSeção de Exemplos.
Os Agentes podem ser administrados como as mesmasformulações ou como formulações diferentes e podem ser administrados pelasmesmas vias ou por vias diferentes.
Agentes quimioterápicos que podem ser usados emcombinação com a pró-droga de alquilador de fosforoamidato da invençãoincluem, embora sem limitação, bussulfano, improsulfano, piposulfano,benzodepa, carboquona, 2-desóxi-D-glicose, lonidamina e análogos dosmesmos (referência apps), glufosfamida, gemcitibina, erlotiniba, meturedepa,uredepa, altretamina, imatiniba, trietilenomelamina, trietilenofosforamida,trietilenotiofosforamida, trimetilolomelamina, clorambucila, cloronafazina,estramustina, ifosfamida, gefitiniba, mecloretamina, cloridrato de óxido demecloretamina, melfalano, novembiquina, fenosterina, prednimustina,trofosfamida, mostarda uracila, carmustina, clorozotocina, fotemustina,nimustina, ranimustina, dacarbazina, manomustina, mitobronitol, mitolactol,pipobromano, aclacinomicinas, actinomicina F(I), antramicina, azaserina,bleomicina, cactinomicina, carubicina, carzinofilina, cromomicina,dactinomicina, daunorrubicina, daunomicina, 6-diazo-5-oxo-l-norleucina,ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, plicamicina,porfiromicina, puromicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina,ubenimex, zinostatina, zorubicina, denopterina, pteropterina, trimetrexato,fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina,6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina,enocitabina, floxuridina, 5-fluorouracila, tegafur, L-asparaginase, pulmozima,aceglatona, glicosídeo de aldofosfamida, ácido aminolevulínico, amsacrina,bestrabucila, bisantreno, carboplatina, defofamida, demecolcina, diaziquona,elfornitina, acetato de eliptínio, etoglucida, flutamida, nitrato de gálio,hidroxiuréia, interferon-alfa, interferon-beta, interferon-gama, interleucina-2,lentinano, mitoguazona, mitoxantrona, mopidamol, nitracrina, pentostatina,fenamet, pirarubicina, ácido podofilínico, 2-etil-hidrazida, procarbazina,razoxano, sizofirano, espirogermânio, paclitaxel, tamoxifeno, erlotonib,teniposida, ácido tenuazônico, triaziquona, 2,2',2"-triclorotrietilamina,uretana, vinblastina, ciclofosfamida, e vincristina. Outros agentesquimioterápicos que podem ser usados incluem derivados de platina,incluindo, embora sem limitação, eis platina, carboplatina, e oxoplatina.
Em uma versão, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato descrita aqui pode ser usada em combinação com um inibidoranti-angeogênese incluindo, embora sem limitação, Avastina e terápicossimilares. Em uma versão dos métodos de tratamento de combinação, umsujeito é tratado com um inibidor de anti-angeogênese e é tratadosubseqüentemente com uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato. Emuma versão dos métodos de tratamento de combinação, um sujeito é tratadocom um inibidor de anti-angeogênese e subseqüentemente tratado com umapró-droga de alquilador de fosforoamidato com outro agente quimioterápico,incluindo, embora sem limitação, Cisplatina, e carboplatina. Em uma versãodestes métodos de tratamento de combinação usando-se um inibidor de anti-angiogênese, o método é usado para tratar câncer de mama.
Em outra concretização, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é administrada com um agente anticâncer que atua, querdiretamente ou indiretamente, inibindo o fator de crescimento epidérmico oureceptor EGFR. Inibidores de EGFR vantajosos para co-administração comuma pró-droga de alquilador de fosforoamidato da invenção incluemgefitiniba e erlotoniba.
Em outra versão, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é administrada com um agente anticâncer que atua, sejadiretamente ou indiretamente, inibindo o fator induzível com hipoxia 1 alfa(HIFla) ou inibindo uma proteína ou enzima, como um transportador deglicose ou VEGF, cuja expressão ou atividade é incrementada com níveisincrementados de HIF la. Inibidores de HIFla vantajosos para uso nestaversão dos métodos e composições descritos aqui incluem inibidores dequinase P13; LY294002; rapamicina; inibidores de histona desacetilase, como[(E)- (1 S,4S, 1 OS,21 R)-7- [(Z)-etilideno] -4,21 -diisopropil-2-oxa-12,13-ditia-5,8,20,23- tetraazabiciclo-[8,7,6]-tricos-16-eno-3,6,9,19,22-pentanona(FR901228, depsipeptídeo); inibidores de proteína de choque com calor 90(Hsp90), como geldanamicina, 17-alilamino-geldanamicina (17- AAG), eoutros análogos de geldanamicina, e derivados de radicicol e radicicol, comoKF58333; genisteína; indanona; estaurosporina; inibidores de proteínaquinase-1 (MEK-1), como PD98059 (2,-amino-3'-metoxiflavona); PX-12 (1-dissulfeto de metilpropil 2-imidazolila); pleurotina PX-478; 1,4-dióxidos dequinoxalina; butirato de sódio (NaB); nitropurrusida de sódio (SNP) e outrosdoadores de NO; inibidores de microtúbulos, como novobiocina, panzem (2-metoxiestradiol ou 2-ME2), vincristinas, taxanos, epotilonas, discodermolida,e derivados de qualquer um dos seguintes; coumarinas; análogos de ácidobarbitúrico e tiobarbitúrico; camptotecinas; e YC-1, um composto descrito emBiochem. Pharmacol., 15 de abril de 2001, 61(8):947-954, incorporado aquipor referência, e seus derivados.
Em outra versão, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é administrada com um agente anti-angiogênico, incluindo,embora sem limitação, agentes anti-angiogênicos selecionados do grupo queconsiste de angiostatina, um agente que inibe ou, de outra forma, antagoniza aação do VEGF, batimastato, captopril, inibidor de derivado de cartilagem,genisteína, endostatina, interleucina, lavendustina A, acetato demedroxiprogesterona, fator de plaquetas humanas recombinante 4, Taxol,tecogalano, talidomida, trombospondina, TNP -470, e Avastina. Outrosinibidores de angiogênese úteis para os fins das terapias de combinaçãoproporcionadas pelos presentes métodos e composições aqui descritosincluem inibidores de Cox-2, como celecoxiba (Celebrex), diclofenaco(Voltaren), etodolaco (Lodine), fenoprofeno (Nalfon), indometacina(Indocin), cetoprofeno (Orudis, Oruvail), cetoralaco (Toradol), oxaprozina(Daipro), nabumetona (Relafen), sulindaco (Clinoril), tolmetina (Tolectin),rofecoxib (Vioxx), ibuprofeno (Advil), naproxeno (Aleve, Naprosyn),aspirina, e acetaminofeno (Tylenol).
Adicionalmente, como o ácido pirúvico desempenha um papelimportante na angiogênese, emuladores de piruvato e inibidores glicolíticos,como halopiruvatos, incluindo bromopiruvato, podem ser usados emcombinação com um composto anti-angiogênico e uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato para tratar câncer. Em outra versão, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é administrada com um agente anti-angiogênico e outro agente anticâncer, incluindo, embora sem limitação, umagente citotóxico selecionado do grupo que consiste de alquiladores,Cisplatina, Carboplatina, e inibidores de aglomeração de microtúbulos, paratratar câncer.
Adicionalmente à combinação de uma pró-droga de alquiladorde fosforoamidato com os Agentes descritos acima, os presentes métodos ecomposições aqui descritos proporcionam uma variedade de combinaçõessinérgicas de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato e outras drogasanticâncer. Aqueles com prática na técnica poderão determinar facilmente queas drogas anticâncer agem "sinergicamente" com uma pró-droga de alquiladorde fosforoamidato como descrito aqui. Por exemplo, a referência Vendetti,"Relevance of Transplantable Animal-Tumor Systems to the Selection ofNew Agents for Clinicai Trial", Pharmacological Basis of CâncerQuemotherapy, Williams e Wilkins, Baltimore, 1975, e Simpson Herren etal., 1985, "Evaluation of in vivo Tumor Models for Predicting ClinicaiActivity for Anticâncer Drugs", Proc. Am. Assoc. Câncer Res. 26: 330, emque cada uma é incorporada aqui por referência, descrevem métodos paraauxiliar na determinação de se duas drogas atuam sinergicamente.
Embora não seja necessária sinergia para o benefícioterapêutico de acordo com os métodos aqui descritos, em uma concretização,a presente invenção proporciona um método de tratamento de câncer, em quehá sinergia entre uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato e outroagente anticâncer. Diz-se que duas drogas apresentam sinergia terapêutica seum regime de combinação de doses das duas drogas produzir uma eliminaçãosignificativamente melhor de células de tumor do que a soma dos Agentesindividualmente mesmo com doses ótimas ou máximas toleradas. O "grau desinergia" pode ser definido como Iog puro da eliminação de células de tumorpor meio do regime de combinação ótimo, menos o Iog puro da eliminação decélulas de tumor com a dose ótima do Agente simples mais ativo. Diferençasna eliminação celular acima de dez vezes (um log) são consideradasconclusivamente indicativas de sinergia terapêutica.
Quando uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato éusada com outro agente anticâncer, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato será administrada, pelo menos em algumas concretizações,antes do início da terapia com a outra droga ou drogas, e a administração serátipicamente continuada durante o curso de tratamento com a outra droga oudrogas. Em algumas concretizações, a droga co-administrada com uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato será fornecida numa dose menor e,opcionalmente, durante períodos mais prolongados, do que seria o caso naausência de administração de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato.
Tais terapias "de dose baixa" podem envolver, por exemplo, a administraçãode uma droga anticâncer, incluindo, embora sem limitação, paclitaxel,docetaxel, doxorrubicina, cisplatina, ou carboplatina, numa dose inferior àdose aprovada e durante um período mais longo juntamente com uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato administrada de acordo com osmétodos descritos aqui.
Estes métodos podem ser usados para melhorar os resultadosdos pacientes relativamente a terapias praticadas correntemente por meio daeliminação mais eficaz de células de câncer ou da interrupção do crescimentode células de câncer, e também diminuindo efeitos colaterais indesejados daoutra terapia. Quando empregados em combinação com uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato, o agente(s) anticâncer adicional/adicionaisé/são dosado(s) usando-se as dosagens convencionais empregadas por aquelesAgentes ( i.e., quando usados sem uma pró-droga de alquilador defosforoamidato) foram inferiores àquelas dosagens.
Portanto, a administração de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato de acordo com os métodos descritos aqui podem permitir queo médico trate câncer com drogas existentes (ou aprovadas mais tarde) emdoses mais baixas (do que usado correntemente), desta forma melhorandoalguns ou todos os efeitos colaterais tóxicos de referidas drogas. A dosagemexata para um dado paciente varia de paciente para paciente, dependendo deuma variedade de fatores incluindo a combinação de drogas empregada, dadoença particular que está sendo tratada, e da condição e da história prévia dopaciente, mas pode ser determinada usando apenas a prática da pessoa comprática ordinária na técnica considerando os ensinamentos aqui contidos.
Regimes de doses específicos para agentes quimioterápicos ouagentes anti-neoplásicos conhecidos ou aprovados (i.e., a dose eficazrecomendada) são conhecidos pelos médicos e são indicados, por exemplo,nas descrições de produtos encontradas na obra Physician's Desk Referenee2003, (Physicians' Desk Reference, 57a ed.) Medicai Economics Company,Inc., Oradell, NJ e/ou podem ser obtidos junto à Federal DrugAdministration. Regimes ilustrativos de dosagens para determinadas drogasanticâncer também são fornecidos abaixo.
Drogas contra o câncer podem ser classificadas de umamaneira geral como alquiladores, antraciclinas, antibióticos, inibidores dearomatase, bisfosfonatos, inibidores de ciclo-oxigenase, moduladores dereceptor de estrogênio, antagonistas de folato, aresenatos inorgânicos,inibidores de microtúbulos, modificadores, nitrosouréias, análogos denucleosídeo, inibidores de osteoclastos, compostos contendo platina,retinóides, inibidores de topoisomerase 1, inibidores de topoisomerase 2, einibidores de tirosina quinase. De acordo com os métodos descritos aqui, umapró-droga de alquilador de fosforoamidato pode ser co-administrada comqualquer droga anticâncer de qualquer uma destas classes ou pode seradministrada antes ou após o tratamento com qualquer uma destas drogas oucombinação destas drogas. Adicionalmente, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato pode ser administrada em combinação com uma terapiabiológica (p. ex., tratamento com interferons, interleucinas, fatoresestimuladores de colônias e anticorpos monoclonais). Biologias usadas paratratamento de câncer são conhecidas na técnica e incluem, por exemplo,trastuzumab (Herceptin), tositumomab e I Tositumomab (Bexxar),rituximab (Rituxan).
Alquiladores úteis na prática dos métodos descritos aquiincluem, embora sem limitação, bussulfano (Myleran, Busulfex),clorambucila (Leukeran), ifosfamida (com ou sem MESNA), ciclofosfamida(Cytoxan, Neosar), glufosfamida, melfalano, L-PAM (Alqeran), dacarbazina(DTIC-Dome), e temozolamida (Temodar). De acordo com os métodosdescritos aqui, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é co-administrada com um alquilador para tratar câncer. Em uma versão, o cânceré leucemia mielógena crônica, mieloma múltiplo, ou astrocitoma anaplásico.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer tratável por meio de administração de um alquiladorpor meio de administração das pró-drogas de alquilador de fosforoamidato dapresente invenção ou daquelas sozinhas ou em combinação com pelo menosoutro alquilador ou uma pró-droga do mesmo. Alquiladores, como, porexemplo, ciclofosfamida, ifosfamida, glufosfamida, mecloretamina,melfalano, clorambucila, dacarbazina, temozolomida, carmustina,estreptozocina, bendamustina, bussulfano, tiotepa, cisplatina, carboplatina, eoxaliplatina, e tipos de cânceres tratados usando-se qualquer um de referidosalquiladores sozinhos ou em combinação com outros agentes anticâncer ouquimioprotetores encontram-se descritos, por exemplo, na referênciaHardman et al, (acima).
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de co-administração de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato com, pelo menos, o alquilador Ciclofosfamida,no tratamento de linfomas malignos em Estágios III e IV, mieloma múltiplo,leucemia, micose fungóide, neuroblastoma, adenocarcinoma ovariano,retinoblastoma, e carcinoma da mama. Ciclofosfamida é administrada paraterapia de indução em doses de 1500-1800 mg/m2 que são administradosintravenosamente em doses divididas ao longo de um período de três a cincodias; para terapia de manutenção administra-se de 350 a 550 mg/m2 a cada de7 a 10 dias, ou administra-se de 110 a 185 mg/m2 intravenosamente duasvezes por semana. De acordo com os métodos descritos aqui, uma pró-drogade alquilador de fosforoamidato é co-administrada com ciclosfosfamidaadministrada em doses como as referidas ou em doses mais baixas e/oudurante um período mais longo do que o normal para administração deCiclosfosfamida apenas.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de administração de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da invenção juntamente com um regime detratamento de câncer usando-se pelo menos o alquilador Mecloretamina. Porexemplo, Mecloretamina é usada na regime de quimioterapia de combinaçãoMOPP (mecloretamina, Oncovina (vincristina), procarbazina, e prednisona)em pacientes com doença de Hodgkin e administrada por meio deadministração de bolo em doses de 6 mg/m2 nos dias 1 e 8 do ciclo de 28 diasde cada curso de tratamento.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de administração de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da invenção com um regime de tratamento decâncer em que se usa pelo menos o alquilador Ifosfamida. Ifosfamida é usadapara tratar sarcomas pediátricos e adulstos, carcinomas do cérvice e dopulmão, e em combinação com outras drogas para câncer testicular de célulasgerminativas. Ifosfamida é usada como parte dos regimes ICE (Ifosfamida,Carboplatina, e Etoposida) e RICE (Rituxan e ICE) para tratar linfomas (verHardman et al, acima).
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de administração de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da invenção com um regime de tratamento decâncer usando pelo menos o alquilador Glufosfamida. Glufosfamida encontra-se na clínica para o tratamento de câncer pancreático ou Câncer pancreáticoresistente ao Gemzar. Glufosfamida pode ser usada para tratar câncer demama, Morbus Hodgkin, câncer do trato gastrintestinal, ou como parte doregime GCE (Glufosfamida, Carboplatina, e Etoposida) ou RGCE (Rituxanoe GCE), para tratar linfomas. (Tidmarsh et al, Pedido de Pat. PCT n°PCT/US2005/047314 depositado em 22 de dezembro de 2005, e Pedido dePat. PCT intitulado "Terapia de Combinação com Glufosfamida", Protocolodo advogado n° 021305-005900PC; e Pedido de Pat. dos E.U.A. n°60/760.599 e 60/719.787 e Pedido de Pat. Publ. PCT n0 WO 2005/076888,incorporados aqui integralmente por referência).
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de administração de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da invenção com um regime de tratamento decâncer usando pelo menos um alquilador selecionado do grupo que consistede etileniminas e metilmelaminas. Em outra concretização, a etilenimina éTrietilenomelamina ou Tiotepa.
Tiotepa pode ser usada para tratar adenocarcinomas da mama,ovário, e bexiga, linfomas malignos, carcinomas bronquiogênicos, e tumor deWilms. Usou-se Tiotepa em altas doses na quimioterapia de combinação comciclofosfamida em pacientes com tumores malignos refratários tratados comtransplante de osso autólogo e para tratar uma variedade de cânceresincluindo da bexiga, ovário, mama, pulmão, cérebro, e linfomas (ver,International Agency for Research on Câncer Monographs on the Evaluationof Carcinogenic Risk of Chemicals to Humans, 1975, 9: 286, Lyon, França;International Agency for Research on Câncer Monographs on the Evaluationof Carcinogenic Risk of Chemicals to Humans, 1990, 50: 415, Lyon, França;e MEDLINEplus, 2003, Drug Information: Tiotepa, National Library ofMedicine). A metilmelamina Altretamina é usada para tratar câncer ovarianoavançado após falha das primeiras terapias cíclicas.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de administração de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da invenção com um regime de tratamento decâncer usando pelo menos o alquilador Melfalano, Clorambucila, ouBendamustina. Melfalano é usado para tratar mieloma múltiplo e pode seradministrado oralmente. Clorambucila é usada para tratar leucemia lipocíticacrônica e macroblobulinemia primária. Bendamustina, desenvolvida pelaSalmedix Inc. pode ser usada para tratar tumores malignos hematológicos,como, por exemplo, linfoma não-Hodgkin, leucemia linfocítica crônica, emieloma múltiplo.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de administração de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da invenção com um regime de tratamento decâncer usando pelo menos o alquilador Bussulfano. Bussulfano é usado paratratar leucemia granulocítica crônica e leucemia mielógena crônica. Épossível usar altas doses de bussulfano em combinação com Ciclofosfamidapara tratar pacientes com leucemia mielógena aguda antes de transplante damedula óssea.Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de administração de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da invenção com um regime de tratamento decâncer usando pelo menos um alquilador de nitrosouréia. Em outraconcretização, o alquilador de nitrosouréia é Carmustina. Carmustina pode serusada para tratar doença de Hodgkin, linfomas, mielomas, astrocitomasmalignos, tumores metastáticos do cérebro, melanoma, e tumoresgastrintestinais. Em outra concretização, a nitrosouréia é Estreptozocina que éusada para tratar carcinoma de células ilhotas pancreáticas.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de administração de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da invenção com um regime de tratamento decâncer usando pelo menos um alquilador de triazeno. Em uma concretização,o alquilador de triazeno é Dacarbazina. Dacarbazina é usada para tratarmelanoma maligno, doença de Hodgkin, e sarcona adulto. Em outraconcretização, o alquilador de triazeno é Temozolomida. Temozolomida podeser usada para tratar gliomas malignos.
Em uma concretização, a presente invenção proporciona ummétodo de tratar câncer por meio de administração de uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato da invenção com um regime de tratamento decâncer usando pelo menos um alquilador de complexo de coordenação deplatina. Em uma concretização, o alquilador de complexo de coordenação deplatina é Cisplatina. Cisplatina pode ser usada para tratar câncer da bexiga,cabeça e pescoço, endométrio, carcinoma de células pequenas do pulmão, ealguns neoplasmas da infância. Cisplatina sozinha ou com ciclofosfamida éusada para tratar câncer ovariano avançado. Quimioterapia de combinação deCisplatina com Bleomicina, Etoposida, e Vinblastina é usada para tratarcâncer testicular avançado; e com um de Paclitaxel, Ciclofosfamida, ouDoxorrubicina para tratar carcinoma ovariano.Antraciclinas úteis na prática dos métodos descritos aquiincluem, embora sem limitação, doxorrubicina (Adriamicina, Doxil, Rubex),mitoxantrona (Novantrona), idarubicina (Idamicina), valrubicina (Valstar), eepirubicina (Ellence). De acordo com os métodos descritos aqui uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é co-administrada com umaantraciclina para tratar câncer. Em uma versão, o câncer é leucemia não-linfocítica aguda, sarcoma de Kaposi, câncer da próstata, câncer da bexiga,carcinoma metastático do ovário, e câncer de mama.
Como um exemplo, o composto (8S,10S)-10-[(3-Amino-2,3,6-tridesóxi-alfa-L-lixo-hexopiranosil)óxi]-8-glicoloil-7,8,9,10 a tetraidro-6,8,1 l-triidróxi-l-metóxi-5,12-naftacenodiona, conhecida mais comumentecomo doxorrubicina, é um antibiótico citotóxico de antraciclina isolado deculturas de Streptomyces peucetius var. caesius. Doxorrubicina tem sidousada com êxito para produzir regressão em condições neoplásicasdisseminadas, como leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloblásticaaguda, tumor de Wilm, neuroblastoma, sarcomas dos tecidos macios e dosossos, carcinoma da mama, carcinoma ovariano, carcinoma da bexiga decélulas transicionais, carcinoma da tireóide, linfomas de tipos Hodgkin e não-Hodgkin, carcinoma broncogênico, e carcinoma gástrico. Doxorrubicina éadministrada tipicamente em uma dose na faixa de 30 a 75 mg/m2 como umainjeção intravenosa simples administrada em intervalos de 21 dias; injeçãointravenosa semanal em doses de 20 mg/m2; ou doses de 30 mg/m2 em cadaum dos três dias sucessivos e foi repetida a cada quatro semanas. De acordocom os métodos descritos aqui, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrada começando antes e continuando após aadministração de doxorrubicina em doses como as referidas (ou em dosesmais baixas). Pró-drogas de citotoxina de antraciclina cíclica úteis na práticados métodos descritos aqui são proporcionados pela referência Matteuci et al,Pedido de Patente PCT n° US05/008161.Antibióticos úteis na prática dos métodos descritos aquiincluem, embora sem limitação, dactinomicina, actinomicina D (Cosmegen),bleomicina (Blenoxano), daunorrubicina, e daunomicina (Cerubidina,DanuoXome). De acordo com os métodos descritos aqui uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato é co-administrada com um antibiótico para tratarcâncer. Em uma versão, o câncer é um câncer selecionado do grupo queconsiste de leucemia linfocítica aguda, outras leucemias, e sarcoma deKaposi.
Inibidores de aromatase úteis na prática dos métodos descritosaqui incluem, embora sem limitação, nastrozol (Arimidax) e letroazol(Femara). De acordo com os métodos descritos aqui, uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato é co-administrada com um inibidor dearomatase para tratar câncer. Em uma versão, o câncer é câncer de mama.
Inibidores de bisfosfonato úteis na prática dos métodosdescritos aqui incluem, embora sem limitação, zoledronato (Zometa). Deacordo com os métodos descritos aqui uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrado com um inibidor de bifosfonato para tratarcâncer. Em uma versão, o câncer é um câncer selecionado do grupo queconsiste de mieloma múltiplo, metástases ósseas de tumores sólidos, oucâncer da próstata.
Inibidores de ciclooxigenase úteis na prática dos métodosdescritos aqui incluem, embora sem limitação, celecoxiba (Celebrex). Deacordo com os métodos descritos aqui uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrada com um inibidor de ciclo-oxigenase paratratar câncer. Em uma versão, o câncer é câncer do colo ou uma condição pré-cancerosa conhecida como polipose adenomatosa familiar.
Moduladores de recetor de estrogênio úteis na prática dosmétodos descritos aqui incluem, embora sem limitação, tamoxifeno(Nolvadex) e fulvestrant (Faslodex). De acordo com os métodos descritosaqui uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é co-administrada comum modulador de receptor de estrogênio para tratar câncer. Em uma versão, ocâncer é câncer de mama ou o tratamento é administrado para prevenir aocorrência ou recorrência de câncer de mama.
Antagonistas de folato úteis na prática dos métodos descritosaqui incluem, embora sem limitação, metotrexato e tremetrexato. De acordocom os métodos descritos aqui uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co- administrada com um antagonista de folato para tratarcâncer. Em uma versão, o câncer é osteosarcoma.
Como um exemplo, o composto N-[4-[[(2,4-diamino-6-pteridinil)metil memilamino]benzoil]-L-ácido glutâmico, comumenteconhecido como metotrexato, é uma droga antifolato que tem sido usada notratamento de coriocarcinoma gestacional e no tratamento de pacientes comchorioadenoma destruens e hydatiform mole. Também é útil no tratamento deestágios avançados de linfoma maligno e no tratamento de casos avançadosde micose fungóide. Metotrexato é administrado como a seguir. No caso docoriocarcinoma, administra-se injeções intramusculares de doses de 15 a 30mg diariamente durante um curso de cinco dias, em que referidos cursos sãorepetidos conforme necessário com período de descanso de uma ou maissemanas interpostas entre cursos de terapia. No caso de leucemias, duas vezespor semana administra-se injeções intramusculares em doses de 30 mg/m2. Nocaso da micose fungóide, injeções intramusculares semanais de doses de 50mg ou, alternativamente, de 25 mg são administradas duas vezes por semana.De acordo com os métodos descritos aqui, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrada com metotrexato administrado em dosescomo as referidas (ou em doses mais baixas). 5-Metil-6-[[(3,4,5-trimetoxifenil)-amino]metil]-2,4-quinazolinodiamina (comumente conhecidacomo trimetrexato) é outra droga antifolato que pode ser co-administrada comuma pró-droga de alquilador de fosforoamidato.Arseniatos inorgânicos úteis na prática dos métodos descritosaqui incluem, embora sem limitação, trióxido arsênico (Trisenox). De acordocom os métodos descritos aqui uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrado com um arseniato inorgânico para tratarcâncer. Em uma versão, o câncer é leucemia promielocítica aguda refratária(APL).
Inibidores de microtúbulos (como usado aqui, um "inibidor demicrotúbulos" é qualquer agente que interfere com a montagem oudesmontagem de microtúbulos) úteis na prática dos métodos descritos aquiincluem, embora sem limitação, vincristina (Oncovin), vinblastina (Velban),paclitaxel (Taxol, Paxene), vinorelbina (Navelbine), docetaxel (Taxotere),epotilona B ou D ou um derivado de um destes, e discodermolida ou seusderivados. Drogas anticâncer de ligação de tubulina e pró-drogas das mesmasque podem ser usadas na prática dos métodos da presente invenção sãoproporcionadas na referência Matteucci et ai, Pedido de Patente PCT n°PCT/US2005/042095; Pedidos de Patentes dos E.U.A. intitulados "TubulinBinding Anti Câncer Agents e Prodrugs Thereof (referências do advogadonums. 021305-008500US, 021305- 008400US e 021305-004520US). Deacordo com os métodos descritos aqui, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrada com um inibidor de microtúbulos paratratar câncer. Em uma versão, o câncer é câncer ovariano, câncer de mama,câncer pulmonar de células não-pequenas, sarcoma de Kaposi, e câncermetastático de origem mamária ou ovariana. Como um exemplo, o composto22-oxo-vincaleucoblastina, também comumente conhecido como vincristina,é um alcalóide obtido da planta pervinca comum (Vinca rosea, Linn.) e é útilno tratamento de leucemia aguda. Verificou-se também que é útil emcombinação com outros agentes oncolíticos no tratamento de doença deHodgkin, linfossarcoma, sarcoma de células do retículo, rabdomiossarcoma,neuroblastoma, e tumor de Wilm. Vincristina é administrada em dosesintravenosas semanais de 2 mg/m para crianças e de 1,4 mg/m para adultos.
De acordo com os métodos descritos aqui, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrada com vincristina administrada em dosescomo as referidas. Em uma versão, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato não é administrada antes do tratamento com um inibidor demicrotúbulos, como um taxano, mas, ao invés, a administração de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é administrada simultaneamente com,ou dentro de alguns poucos dias até uma semana após início do tratamentocom um inibidor de microtúbulos.
Modificadores úteis na prática dos métodos descritos aquiincluem, embora sem limitação, Leucovorina (Wellcovorin), que é usada comoutras drogas, como 5-fluorouracila para tratar câncer colorretal. De acordocom os métodos descritos aqui uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrada com um modificador e outro agenteanticâncer para tratar câncer. Em uma versão, o câncer é câncer do colo. Emuma versão, o modificador é um composto que aumenta a capacidade de umacélula em absorver glicose, incluindo, embora sem limitação, o composto N-hidroxiuréia. Reportou-se que a N-hidroxiuréia incrementa a capacidade deuma célula em absorver 2-desoxiglicose (ver a referência Smith et al., 1999,Câncer Letters 141: 85, incorporada aqui por referência), e administração deN-hidroxiuréia em níveis que, reporta-se, incrementam a absorção de 2-desoxiglicose ou para tratar leucemia juntamente com a administração de 2-desoxiglicose e uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato como descritoaqui é uma versão dos métodos terapêuticos aqui proporcionados. Em outraversão do tipo referido, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é co-administrada com óxido nítrico ou um precursor de óxido nítrico, como umnitrito orgânico ou um esperminaNONOato, para tratar câncer, porque oscompostos referidos por último estimulam a absorção de glicose.
Nitrosouréias úteis na prática dos métodos descritos aquiincluem, embora sem limitação, procarbazina (Matulane), lomustina, CCNU(CeeBU), carmustina (BCNU, BiCNU, Gliadel Wafer), e estramustina(Emcyt). De acordo com os métodos descritos aqui uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato é co-administrada com uma nitrosouréia paratratar câncer. Em uma versão, o câncer é câncer da próstata ou glioblastoma,incluindo glioblastoma multiforme recorrente.
Análogos de nucleosídeos úteis na prática dos métodosdescritos aqui incluem, embora sem limitação, mercaptopurina, 6-MP(Purinethol), fluorouracila, 5-FU (Adrucil), tioguanina, 6-TG (Tioguanina),hidroxiuréia (Hydrea), citarabina (Cytosar-U, DepoCyt), floxuridina (FUDR),fludarabina (Fludara), azacitidina (Vidaza), pentostatina (Nipent), cladribina(Leustatin, 2-CdA), gemcitabina (Gemzar), e capecitabina (Xeloda). Deacordo com os métodos descritos aqui, uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrada com um análogo de nucleosídeo para tratarcâncer. Em uma versão, o câncer é leucemia linfocítica de células B (CLL),leucemia de células peludas, adenocarcinoma do pâncreas, câncer metastáticode mama, câncer pulmonar de células não-pequenas, ou carcinoma colorretalmetastático. Como um exemplo, o composto 5-fluoro-2,4(lH,3H)-pirimidinadiona, também comumente conhecido como 5-fluorouracila, é umanálogo de nucleosídeo antimetabólito efetivo no controle paliativo decarcinoma do colo, reto, mama, estômago, e pâncreas em pacientes que sãoconsiderados incuráveis por meios cirúrgicos ou outros meios. 5-Fluorouracila é administrada na terapia inicial em doses de 12 mg/madministradas intravenosamente uma vez ao dia durante 4 dias sucessivos, emque a dose diária não deve exceder 800 mg. Caso não se observe toxicidade aqualquer momento durante o curso da terapia, 6 mg/kg são dadosintravenosamente no 6o, 8o, 10°, e 12° dias. Não se administrou terapia no 5o,7o, 9o, ou 110 dias. Em pacientes de baixo risco ou no caso daqueles que nãose encontram em um estado nutricional adequado, uma dose diária de 6 mg/kgé administrada durante três dias, em que a dose diária não excede 400 mg.Não se observando qualquer toxicidade a qualquer momento durante otratamento, é possível administrar 3 mg/kg no 5o, 7o, e 9o dias. Não seadministrou qualquer terapia no 4o, 6o, ou 8o dias. Uma seqüência de injeçõesem qualquer programa constitui um curso de terapia. De acordo com osmétodos descritos aqui, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é co-administrada com 5-FU que é administrado em doses do tipo referido ou coma forma de pró-droga Xeloda com doses correspondentemente ajustadas.
Como outro exemplo, o composto 2-amino-l,7-diidro-6H-purina-6-tiona,também comumente conhecido como 6-tioguanina, é um análogo denucleosídeo efetivo na terapia de leucemias não-pinfocíticas agudas. 6-Tioguanina é administrada oralmente em doses de cerca de 2 mg/kg de pesocorporal por dia. A dose diária total pode ser dada de uma só vez. Se apósquatro semanas de dosagem neste nível não ocorrer melhora, a dosagem podeser cuidadosamente incrementada a 3 mg/kg/dia. De acordo com os métodosdescritos aqui, uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é co-administrada com 6-TG administrado em doses do tipo referido (ou em dosesmais baixas).
Inibidores de osteoclastos úteis na prática dos métodosdescritos aqui incluem, embora sem limitação, pamidronato (Aredia). Deacordo com os métodos descritos aqui uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrada com um inibidor de osteoclasto para tratarcâncer. Em uma versão, o câncer consiste de metástases ósseas osteolíticas decâncer de mama, e um ou mais agentes anticâncer adicionais também são co-administrados com uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato.
Compostos de platina úteis na prática dos métodos descritosaqui incluem, embora sem limitação, cisplatina (Platinol) e carboplatina(Paraplatin). De acordo com os métodos descritos aqui uma pró-droga dealquilador de fosforoamidato é co-administrada com um composto de platinapara tratar câncer. Em uma versão, o câncer é câncer testicular metastático,câncer ovariano metastático, carcinoma ovariano, e câncer da bexiga decélulas transicionais. Como um exemplo, o composto cis-Diaminadicloro-platina (II), comumente conhecido como cisplatina, é útil no tratamentopaliativo de tumores ovarianos e testiculares metastáticos, e para o tratamentode câncer da bexiga de células transicionais que não é passível de cirurgia ouradioterapia. Cisplatina, quando usada para câncer da bexiga avançado, éadministrada em injeções intravenosas de doses de 50 a 70 mg/m uma vez acada três a quatro semanas. De acordo com os métodos descritos aqui, umapró-droga de alquilador de fosforoamidato é co-administrada com cisplatinaadministrada nestas doses (ou em doses mais baixas). Um ou mais agentesanticâncer adicionais podem ser co-administrados com o composto de platinae uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato. Como um exemplo,Platinol, Blenoxano, e Velbama podem ser co-administrados com uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato. Como outro exemplo, Platinol e
Adriamicina podem ser co-administrados com uma pró-droga de alquilador defosforoamidato.
Retinóides úteis na prática dos métodos descritos aquiincluem, embora sem limitação, tretinoína, ATRA (Vesanoid), alitretinoína(Panretin), e bexaroteno (Targretin). De acordo com os métodos descritosaqui uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é co-administrada comum retinóide para tratar câncer. Em uma versão, o câncer é um câncerselecionado do grupo que consiste de APL, sarcoma de Kaposi, e linfoma decélulas T.
Inibidores de topoisomerase 1 úteis na prática dos métodosdescritos aqui incluem, embora sem limitação, topotecano (Hycamtin) eirinotecano (Camptostar). De acordo com os métodos descritos aqui uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato é co-administrada com um inibidor detopoisomerase 1 para tratar câncer. Inibidores de topoisomerase e pró-drogasdos mesmos que são úteis na dos métodos da presente invenção são indicadosna referência Matteucci et al., Pedido de Patente PCT n°PCT/US2005/041959. Em uma versão, o câncer é carcinoma metastático doovário, do colo, ou reto, ou câncer pulmonar de células pequenas. Comoindicado acima, no entanto, em uma versão dos métodos descritos aqui, aadministração de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato ou precedeou segue, ou ambos, a administração de um inibidor de topoisomerase 1, masnão é administrado concorrentemente com o mesmo.
Inibidores de topoisomerase 2 úteis na prática dos métodosdescritos aqui incluem, embora sem limitação, etoposida, VP-16 (Vepesid),teniposida, VM-26 (Vumon), e fosfato de etoposida (Etopophos). De acordocom os métodos descritos aqui uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrada com um inibidor de topoisomerase 2 paratratar câncer. Em uma versão, o câncer é um câncer selecionado do grupo queconsiste de tumores testiculares refratários, leucemia linfoblástica agudarefratária (ALL), e câncer pulmonar de células pequenas. Como indicadoacima, no entanto, em uma versão dos métodos descritos aqui, aadministração de uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato ou precedeou segue, ou ambos, a administração de um inibidor de topoisomerase 2, masnão é administrado concorrentemente com o mesmo.
Inibidores de tirosina quinase úteis na prática dos métodosdescritos aqui incluem, embora sem limitação, imatiniba (Gleevec). Deacordo com os métodos descritos aqui uma pró-droga de alquilador defosforoamidato é co-administrada com um inibidor de tirosina quinase paratratar câncer. Em uma versão, o câncer é CML ou um tumor de estromagastrintestinal maligno metastático ou não-ressectável/.
Análogos de Lonidamina úteis na prática da presente invençãosão proporcionados em Matteucci et al. Pedidos de Pat. dos E.U.A. nums.11/346632; 60/764.427; 60/764.438; e pedidos intitulados "HeterocyclicLonidamine Analogs" (Protocolo do advogado n° 021305-007220US;021305-007900US) e Publicação PCT nums. WO 2006/015191, WO2006/015263 e WO 2006/01007 A2.
Assim, descreve-se aqui métodos de tratar câncer em que umapró-droga de alquilador de fosforoamidato ou um sal farmaceuticamenteaceitável da mesma e um ou mais agentes anticâncer adicionais sãoadministrados a um paciente. Versões específicas de referidos outros agentesanticâncer incluem sem limitação 5-metil-6-[[(3,4,5-trimetoxifenil)amino]-metil]-2,4-quinazolinodiamina ou um sal farmaceuticamente aceitável domesmo, (8S,10S)-10-(3-amino- 2,3,6-tridesóxi-alfa-L-lixo-hexopiranosil)óxi]-8-glicoloil-7,8,9,10 a tetraidro-6,8,11 a triidróxi-l-metóxi-5,12-naftacenodiona ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma; 5-fluoro-2,4(1 H,3H)-pirimidinadiona ou um sal farmaceuticamente aceitável damesma; 2-amino-l,7-diidro-6H-purina-6-tiona ou um sal farmaceuticamenteaceitável da mesma; 22-oxo- vincaleucoblastina ou um sal farmaceuticamenteaceitável da mesma; 2-bis[(2- cloroetil)amino]tetraidro-2H-1,3,2-oxazafosforina, 2-óxido, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo;ácido N- [4- [ [(2,4-diamino-6-pteridinil)metil] -metilamino]benzoil] -L-glutâmico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; oucisdiaminodicloro-platina (II).
IV. Exemplos
Nos exemplos a seguir, qualquer referência a um compostodesignado com uma letra é uma referência à estrutura mostrada próxima ouacima daquela letra nos esquemas de reação correspondentes.
Síntese
Métodos para sintetizar as pró-drogas de alquilador defosforoamidato da presente invenção são proporcionados na seção IIb.Adquiriu-se materiais de partida usados na síntese das pró-drogas dealquilador de fosforoamidato da presente invenção, quando disponíveis, juntoa fabricantes comerciais, como, por exemplo, a Sigma-Aldrich Co. I-N-Metil-2-nitroimidazol-5-metanol foi adquirido da Syngene, índia. Materiais departida que não são obtidos comercialmente podem ser sintetizados por meiode procedimentos convencionais não-comerciais via procedimentosconvencionais da literatura. Referidos procedimentos podem ser identificadospor meio de ferramentas de busca da literatura, como SciFinder, obteníveljunto à American Chemical Society, ou Beilstein, obtenível junto à MDLSoftware.
Reações com compostos sensíveis à umidade, como, porexemplo, POCI3 e PCl3, e seus derivados mono e di-cloro foram realizadosempregando-se solventes anidros e sob nitrogênio ou argônio. A separação deum produto da mistura de reação foi realizada empregando-se um tratamentoonde necessário, seguido de destilação a vácuo, cristalização, cromatografiade coluna, ou cromatografia de camada espessa preparativa. Um eluentevantajoso para a cromatografia de coluna de um composto pode serdeterminado mediante a leitura desta revelação e/ou determinando-se o Rf docomposto por meio de cromatografia de camada fina e selecionando-se umsolvente que segue a separação do composto desejado de compostosindesejados. A escolha de um eluente particular pode depender, entre outrosfatores, da natureza polar do composto, da existência de outros compostos deeluição próxima, do tipo da fase estacionária, como o sílica-gel ou a aluminausada, e da quantidade de pressão usada para eluir o solvente através da faseestacionária. Na prática, é possível usar diferentes composições de solventespara separar o mesmo composto.
Compostos separados foram analisados quanto a sua purezapor meio de técnicas analíticas convencionais, como TLC, espectroscopia deRMN, e LC-MS, e armazenados em um freezer ou uma geladeira, evitando-seumidade, luz ou ar. Soluções de consumo de compostos de pró-droga dealquilador de fosforoamidato foram preparados em DMSO e armazenados emum freezer.
Exemplo 1
Síntese de Composto 23
<formula>formula see original document page 145</formula>
A uma solução de álcool de 5-nitrofurfurila (200 mg, 1,4mmol) em THF (10 ml) a -78°C POCl3 adicionou-se de uma só vez seguidode uma adição por gotejamento de trietilamina (TEA, 0,22 ml, 1,54 mmol). Atemperatura foi incrementada a -3O0C em uma hora e, depois, adicionou-secloridrato de 2-cloroetilamina, seguido de TEA (1 ml, 7 mmol). Após atemperatura elevar-se à temperatura ambiente (ta), a reação foi prosseguidadurante mais uma hora, a mistura de reação foi extinta com água e a camadaorgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com DCM e a soluçãoorgânica combinada foi secada e concentrada. O Composto 23 foi separadopor meio de cromatografia de coluna de vaporização instantânea e analisadopor meio de espectroscopia de RMN e LC/MS até apresentar-se puro.
Exemplo 2
Síntese de Composto 5
<formula>formula see original document page 145</formula>
Uma suspensão de N-Metil-2-cloroetilcloreto de amônio (10 g)em POCl3 (40 ml) foi refluxada (135°C) de um dia para o outro. Após seremover o excesso de POCl3 sob vácuo o produto 5i fiu destilado sob vácuocomo óleo amarelo claro e analisado por meio de espectroscopia de RMN 1He 31P até apresentar-se puro.
A uma solução de 5i (1 g, 4,75 mmol) e N-Metil-2-cloroetilcloreto de amônio (0,62 g, 4,75 mmol) em THF a -78°C adicionou-selentamente diisopropiletilamina (DIEA, 1,65 ml, 9,5 mMol) e a mistura dereação foi aquecida à temperatura ambiente. Após agitação à temperaturaambiente durante uma hora, a mistura de reação foi diluída com acetato deetila e lavada com salmoura. A camada orgânica foi secada sobre MgSO4 econcentrada dando um resíduo que foi separado por meio de cromatografiapor vaporização instantânea dando composto 5ii como óleo.
A uma solução de N-metil 2-nitroimidazol-5-metanol (0,5 g,3,2 mmol) em dimetoxietano (DME) adicionou-se bis(trimetilsilil)amida delítio (3,2 mmol, 3,2 ml, 1 M em THF) a -78°C. Após 5 min, adicionou-se 5ii(2,9 mmol, 770 mg) e a mistura de reação foi aquecida até -20°C, diluída comacetato de etila e lavada com salmoura. A camada orgânica foi secada sobreMgSO4 e concentrada. Purificação por meio de cromatografia por vaporizaçãoinstantânea com de 6 a 12% de metanol em DCM deu 5.
Compostos de 8 e 16 foram sintetizados empregando-se oprocedimento usado para a preparação de composto 5.
<formula>formula see original document page 146</formula>Exemplo 3
Síntese de Composto 35
<formula>formula see original document page 147</formula>
A uma solução de etanolamina (6,03 ml, 100 mmol) e K2CO3(13,8 g, 100 mmol) em DMF (38 ml) adicionou-se por gotejamento umasolução de cloreto de p-toluenossulfonila (19 g, 100 mmol) à temperaturaambiente e a mistura de reação foi aquecida até 120°C (temperatura dobanho). Adicionou-se K2CO3 (27,6 g, 200 mmol) à mistura de reação, seguidoda adição por gotejamento de 1,3- dibromopropano (10 g, 50 mmol). Apósaquecimento durante mais duas horas, a reação foi resfriada à temperaturaambiente, despejada em água (250 ml), e extraída com acetato de etila. Acamada orgânica foi secada com Na2SÜ4 e concentrada dando composto 35acomo óleo amarelo que foi usado na reação seguinte.
Uma solução de composto 35a (5 g) em HBr aquoso (48%, 50ml) foi destilada para remover a porção aquosa (cerca de 20 ml), e a misturade reação foi refluxada durante 40 h. Porção aquosa adicional (5 ml) foiremovida por meio de destilação e a mistura de reação foi refluxada (4 h). Amistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com água (20ml), e filtrada através de um tablete de celite. O filtrado foi concentrado àsecura dando um resíduo que foi co-evaporado com etanol três vezes, e, apósa adição de um grande volume de acetona, um produto sólido branco 35b foifiltrado e lavado com acetona duas vezes e empregado na fosforilaçãoproporcionada abaixo.
Uma suspensão de composto 35b (1 g) em POCl3 (14 ml) foiaquecida a 13 O0C durante cerca de 14 h e o excesso de POCl3 foi removidosob vácuo a 13 O0C (temperatura do banho). O resíduo foi purificado por meiode cromatografia de coluna em sílica-gel empregando-se de 10 a 80% deETOAc/hexano dando produto 35c que foi convertido a composto 35 dapresente invenção empregando-se o mesmo procedimento proporcionado noExemplo 2 empregando-se, para separação em coluna cromatográfica, sílica-gel e 10-80% de acetona/tolueno como o eluente.
Exemplo 4
Síntese de Composto 7
Composto 7 foi preparado empregando-se N-ciclopropil-2-cloroetilcloreto de amônio como proporcionado abaixo<formula>formula see original document page 149</formula>
A uma solução de ciclopropilamina (25g) em THF seco (30ml) adicionou-se por gotejamento uma solução de 2-bromoetanol (17,6g,0,141 mol) em 30 ml de THF ao longo de 35 minutos. A mistura de reação foiagitada durante 1 hora à temperatura ambiente, e aquecida a 50°C durante 75minutos. Após resfriamento, a mistura de reação foi concentrada dando umóleo laranja a que se adicionou uma solução de hidróxido de sódio (7 g) emágua (50 ml). A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos, e extraída 4vezes com acetato de etila (75 ml). A camada orgânica combinada foi secada(MgSC>4) e evaporada dando um resíduo oleoso laranja. O resíduo foidestilado em vácuo a de 53 a 56°C (1 mm de Hg) dando um álcoolintermediário (5,94 g, 42% de rendimento) como um líquido transparenteincolor que foi analisado por meio de LC/MS e RMN 1H até tornar-se puro.
A uma solução do álcool intermediário (3,7 g, 36,6 mmol) emTHF seco (30 ml) adicionou-se uma solução de HCl em dioxano (4,OM, 18,3ml, 73,2 mmol). A mistura de reação foi resfriada a O0C e adicionou-se SOCI2(6,50 g, 54,9 mmol) por meio de seringa. A mistura de reação foi refluxada (6h), resfriada, e concentrada dando um resíduo. O resíduo foi triturado cométer seco (100 ml), filtrado, e voláteis residuais removidos em vácuo dando 7i(5,42 g, 95% de rendimento) que foi analisado por meio de RMN 1H até estar puro.
7i (3,00 g, 19,2 mmol) foi adicionado a POCl3 (15 ml) erefluxado sob nitrogênio durante 7,5 horas. A mistura de reação foiconcentrada e o óleo resultante destilado em vácuo através de um dispositivode destilação de circuito curto dando 7ii como um óleo amarelo clarotransparente (3,6 g, 79% de rendimento) que foi analisado por meio de RMN1H até estar puro.
7ii (0.50 g, 2,11 mmol) e cloridrato de N-ciclopropil-2-cloroetilamina (0,33 g, 2,11 mmol) foram combinados em THF seco sobargônio. A mistura de reação foi resfriada a - 78°C e adicionou-se lentamenteDIEA (0,545 g, 4,22 mmol) por meio de seringa, aquecida lentamente àtemperatura ambiente, agitada durante 1,5 hora e concentrada dando umresíduo oleoso laranja. O resíduo foi separado por meio de cromatografia porvaporização instantânea sobre sílica usando-se de 0 a 50% de hexano emacetato de etila dando 315 mg (47% da teoria) de óleo amarelo claro que foianalisado como sendo 7iii por meio de MS.
N-metil-2-nitroimidazol-5-metanol (76,8 mg, 0,489 mmol) foiparcialmente dissolvido em THF seco (2 ml) sob argônio. A mistura de reaçãofoi resfriada a -78°C e adicionou-se uma solução de bis(trimetilsilil)amida delítio em THF (1,6 M, 0,306 ml, 0,489 mmol). Após 15 minutos, adicionou-seuma solução de 7iii (172 mg, 0,538 mmol) em 2 ml de THF. Após 15 minutosa mistura de reação foi aquecida lentamente à temperatura ambiente, agitadadurante 2 horas, despejada em 25 ml de água e extraída 3 vezes com acetatode etila (30 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobreMgSO4 e concentradas dando um resíduo oleoso amarelo. O resíduo foiseparado por meio de cromatografia por vaporização instantânea em de 0 a10% de metanol em DCM dando composto 7 (110 mg, 51% de rendimento)como um óleo amarelo que foi analisado por meio de LC-MS e RMN 1H atéestar puro.
Exemplo 5
Síntese de compostos 6 e 15
<formula>formula see original document page 151</formula>
A uma suspensão de cloreto de bis(2-cloroetil) de amônio(1,43 g, 8,01 mmol) em diclorometano (DCM) adicionou-se tricloreto defósforo (0,32 ml, 3,64 mmol) à temperatura ambiente seguido de adição deTEA (3,05 ml, 21,84 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperaturaambiente durante 30 minutos e, depois, adicionou-se N-metil 2-nitroimidazolil metanol (0,474 g, 3,31 mmol) em DME. Após agitaçãodurante 0,5 hora, a mistura de reação foi resfriada a -20°C e adicionou-sehidroperóxido de t-butila (0,7 ml, 3,82 mmol, 5,5 M em Decano). A misturade reação foi aquecida à temperatura ambiente ao longo de um período deuma hora, e despejada em HCl aquoso a 10%. A camada orgânica foiseparada e a camada aquosa foi extraída com DCM. A solução orgânicacombinada foi secada com MgSO4 e concentrada dando um resíduo que foipurificado por meio de cromatografia por vaporização instantânea com de 6 a12% de metanol em DCM dando 6.
Composto 15 foi sintetizado usando-se o método descrito paraa síntese de Composto 6 acima.
<formula>formula see original document page 151</formula>Exemplo 6
Síntese de compostos 23, 26 e 36
<formula>formula see original document page 152</formula>
A uma solução de N-metil-2-nitroimidazol-5-metanol (180mg, 1,14 mmol), trifenilfosfina (300 mg, 1,14 mmol), e mostardaisofosforamida (lc, 127 mg, 0,57 mmol) em THF (10 ml) adicionou-se porgotejamento azodicarboxilato de diisopropila (DIAD, 0,22ml, 1,14 mmol) àtemperatura ambiente. Após duas horas a mistura de reação foi concentrada eo resíduo separado por meio de cromatografia por vaporização instantâneacom de 30 a 100% de acetona em tolueno dando composto 36.
Compostos 23 e 26 foram sintetizados empregando-se oprocedimento do Exemplo 6.
Exemplo 7
Síntese de Composto 1
<formula>formula see original document page 152</formula>
N-metil-2-nitroimidazol-5-metanol (50 mg, 0,318 mmol) foidissolvido em THF seco (2 ml) sob nitrogênio. A solução foi resfriada a -78°C e adicionou-se com uma seringa uma solução de bis(trimetilsilil) amidade lítio (1M em tolueno, 0,35 ml, 0,35 mmol). Após 5 minutos adicionou-seuma solução de dicloreto de bis(cloroetil) fosforamídico (91 mg, 0,35 mmol)em THF (2 ml). Após agitação a 78°C durante 30 minutos, a temperatura foireduzida a - 20°C empregando-se um banho de gelo/NaCl e borbulhou-seamônia anidra através da mistura de reação durante 5 minutos. A mistura dereação foi purgada com nitrogênio, aquecida à temperatura ambiente,despejada em 25 ml de água e extraída com acetato de etila (4 χ 25 ml). Ascamadas orgânicas combinadas foram secadas (MgSC^) e concentradas dandoum óleo amarelo claro que foi separado por meio de cromatografia porvaporização instantânea sobre sílica-gel usando-se de 0 a 10% de metanol emdiclorometano dando composto 1 (32 mg, 28% de rendimento) de um óleoque solidificou ao descansar e foi analisado por meio de LC/MS e RMN 1Haté estar puro.
Exemplo 8
Síntese de compostos 25, 26
A uma solução de brometo de 2-bromoetilamônio (19,4 g) emDCM (90 ml) a - 10°C adicionou-se uma solução de POCl3 (2,3 ml) em DCM(4 ml) seguido de adição de uma solução de TEA (14,1 ml) em DCM (25 ml).
A mistura de reação foi filtrada, o filtrado foi concentrado a ca. 30% dovolume original e filtrado. O resíduo foi lavado com DCM (3x25 ml) e asporções de DCM combinadas concentradas dando um sólido a que seadicionou uma mistura de THF (6 ml) e água (8 ml). THF foi removido emum evaporador rotativo, a solução resultante foi resfriada de um dia para ooutro em uma geladeira. O precipitado obtido foi filtrado, lavado com água(10 ml) e éter (30 ml), e secado em vácuo dando 2,1 g de:
<formula>formula see original document page 153</formula>
Mostarda isofosforamida
<formula>formula see original document page 153</formula>
pode ser sintetizada empregando-se o método proporcionado no Exemplo 8,substituindo-se brometo de 2-bromoetilamônio com cloreto de 2-cloroetilamônio. Síntese de Mostarda isofosforamida foi descrita (ver porexemplo, Wiessler et al., acima).A toxina de alquilador de fosforoamidato:
<formula>formula see original document page 154</formula>
foi transformada em compostos 24 e 25, empregando-se o métodoproporcionado no Exemplo 6 e o disparador-OH apropriado.
Exemplo 9
Síntese de compostos 37 - 105
Os compostos de 37 a 105 a seguir foram sintetizadosempregando-se o acoplamento de tipo Mitsunobu descrito para a síntese de 25ou 36 acima, e quando da substituição apropriada do disparador-OH e oanálogo de mostarda de ifosfamida empregado. Por exemplo, para a síntese decompostos 40, 81, 83, 87, 89, 95, 96, 100, e 104, o análogo de mostarda deifosfamida empregado foi H0P(=0)(NHCH2CH2C1)2; em compostos 50, 53,55, 56, de 58 a 65, de 68 a 71, de 73 a 75, de 77 a 80, 82, de 84 a 86, 88, de 90a 92, 94, de 97 a 99, de 101 a 103, e 105, o análogo de mostarda deifosfamida empregada é HOP(^O)(NHCH2CH2Br)2; nos compostos 37, 39,52, 54, e 93, o análogo de mostarda de ifosfamida empregado é oenanciômero R de H0P(=0)(NHCHMeCH2Cl)2; nos compostos 38, 41, 51, e57 o análogo de mostarda de ifosfamida empregado é o enanciômero S deH0P(=0)(NHCHMeCH2Cl)2; nos compostos 43 - 45 e 49 o análogo demostarda de ifosfamida empregado foi o enanciômero R deH0PC=0)(NHCH(CHMe2)CH2Cl)2; e nos compostos de 46 a 48, o análogode mostarda de ifosfamida empregado foi o enanciômero S deHOP(^O)(NHCH(CHMe2)CH2Cl)2.
Os vários compostos de disparador-OH empregados na síntesede compostos de 37 a 105, incluíram os seguintes compostos disparador-OH:1 -N-metil-2-nitroimidazol-5-metanol, 1 -N-metil-5-nitroimidazol-2-metanol,5-nitrofuran-2-metanol, 5-nitrotiofeno-2-metanol;<formula>formula see original document page 155</formula>no Exemplo 6.
Os compostos a seguir foram de acordo com o método descrito
<formula>formula see original document page 156</formula><formula>formula see original document page 157</formula><formula>formula see original document page 158</formula><formula>formula see original document page 159</formula>
Exemplos de 10 a 26 descrevem a síntese de vários compostosde disparador-OH empregados na síntese de pró-drogas de alquilador defosforoamidato da invenção.
Exemplo 10
Síntese de Composto 52i
<formula>formula see original document page 159</formula>Uma solução de composto 52ii (100 mg, 0,48 mmol), 52iii (73mg, 0,48 mmol), e KOAc (190 mg, 1,92 mmol) em DMF (5 ml) foidesgaseificada três vezes e adicionou-se PdCl2(dppf) (36 mg, 0,048 mmol) aisto à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio. A mistura dereação foi aquecida a 60°C durante duas horas, diluída com acetato de etila(EA) e lavada com salmoura. A camada orgânica foi secada, concentrada, e oresíduo separado por meio de cromatografia de coluna em sílica-gelempregando-se como eluente EA/Hex (0 - 80%) dando 52i.
Compostos 55i, 63i, 59i, 65i, e 68i foram preparados de umamaneira similar como descrito esquematicamente abaixo:
<formula>formula see original document page 160</formula>A uma solução de composto 68ii (100 mg, 0,31 mmol) e 3-amino-l-propanol (0,047 ml, 0,62 mmol) em THF (2,5 ml), adicionou-seDIEA (0,162 ml, 0,93 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reação foiagitada de um dia para o outro e concentrada dando um resíduo que foiseparado por meio de cromatografia de coluna em sílica-gel empregando-secomo eluente EA/Hex (0-80%) dando composto 68i.
Composto 69i foi preparado de forma similar como ilustradono esquema abaixo.
<formula>formula see original document page 161</formula>
Exemplo 12
<formula>formula see original document page 161</formula>
A uma solução de composto 70ii (100 mg, 0,87 mmol) ecomposto 70iii (112 mg, 0,87 mmol) em acetona (8 ml), adicionou-se K2CO3(78,6 mg, 0,87 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reação foiaquecida a 60°C com agitação durante 1 h, filtrada, e concentrada dando umresíduo que foi separado por meio de cromatografia de coluna em sílica-gelempregando-se (EAVHex) de 0 a 60% de rendimento de composto 70i.
Composto 5li foi preparado de forma similar como ilustradono esquema abaixo.
<formula>formula see original document page 161</formula>
Exemplo 13
(HAP dispara - verificação #s)<formula>formula see original document page 162</formula>
Uma solução de composto 59ii (200 mg, 0,96 mmol) e 59iii(127 mg, 0,96 mmol) em DMF (3 ml) foi desgaseificada três vezes eadicionou-se a isto PdCl2(dppf) (50 mg, 0,07 mmol), seguido de CuI (8,5 mg,0,043 mmol) e TEA (0,27 ml, 1,92 mmol), à temperatura ambiente, sobatmosfera de argônio e a mistura de reação foi aquecida a 60 0C durante duashoras. A mistura de reação foi diluída com EA, lavada com salmoura, acamada orgânica separada, secada, e concentrada dando um resíduo que foiseparado por meio de cromatografia de coluna em sílica-gel empregando-secomo eluente EAVHex (0-70%) dando composto 58i.
Exemplo 14
<formula>formula see original document page 162</formula>
A uma suspensão de 67i (472 mg, 2,69 mmol) em DCM (20ml) adicionou-se fenildiclorofosfato (0,2 ml, 1,34 mmol) a-20°C, seguido deadição por gotejamento de TEA (0,75 ml, 5,38 mmol) e agitação. A misturade reação foi aquecida até à temperatura ambiente, agitada à temperaturaambiente durante 1 h, despejada em salmoura, a camada orgânica foiseparada, e a camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicascombinadas foram secadas com MgSO4 e concentradas. O resíduo foiseparado por meio de cromatografia de coluna em sílica-gel empregando-seeluente EA/hexano (de 10 a 100%) dando composto 67ii. A uma solução decomposto 67ii (42 mg) em EtOH (5 ml) adicionou-se óxido de platina(IV) (20mg), a mistura de reação foi desgaseificada, e agitada vigorosamente sobhidrogênio durante 0,5 h. A mistura de reação foi diluída com MeOH, filtradaatravés de um filtro de seringa, o filtrado foi concentrado sob vácuo ecoevaporado com tolueno dando composto 67iii. Composto 67iii foi reagidocom l-N-metil-2-nitroimidazol-5-metanol empregando-se uma reação de tipoMitsunobu como descrito para a síntese de Composto 36.
Exemplo 15
Síntese de compostos 106 e 107
<formula>formula see original document page 163</formula>
A uma solução de álcool de 5-nitrofurfurila (200 mg, 1,4mmol) em THF (10 ml) adicionou-se POCl3 (0,13 ml, 1,4 mmol) a -78°C,seguido de adição por gotejamento de TEA (0,216 ml, 1,54 mmol). Atemperatura de reação foi elevada até -IO0C em 1 h, adicionando-se a istocloridrato de 2- (fenilsulfonil)etilamina (832 mg, 3,5 mMol), seguido deadição de TEA (1 ml, 7 mmol). A reação foi aquecida à temperaturaambiente, agitada durante 1 h, extinta com água e a camada orgânicaseparada. A camada aquosa foi extraída com DCM duas vezes, as camadasorgânicas combinadas foram secadas, concentradas dando um resíduo que foiseparado por meio de cromatografia de coluna em sílica-gel empregando-secomo eluente acetona\tolueno (de 30 a 100%) dando produto 106, Composto107:
<formula>formula see original document page 163</formula>foi sintetizado usando-se um método similar.
Compostos de 108 a 112, mostrado abaixo:
<formula>formula see original document page 164</formula>
foram sintetizados empregando-se o procedimento descrita para a síntese decomposto 35 no Exemplo 3 e substituindo
<formula>formula see original document page 164</formula>
Exemplo 16
Síntese de compostos de 113 a 117
<formula>formula see original document page 164</formula>
Composto 113 foi sintetizado seguindo-se um procedimentodescrito no Exemplo 7 como descrito aqui. A uma solução de 113ii (181 mg,1,16 mmol) em THF (8 ml) adicionou-se por gotejamento LiN(TMS)2 (1,2ml, solução 1 M de THF, 1,2 mmol) a -78 °C, seguido de adição de li. Amistura de reação foi aquecida até -20°C e borbulhou-se NH3 através damistura de reação durante 5 minutos. Adicionou-se água (20 ml) à mistura dereação e a mistura de reação extraída três vezes com EA (30ml). As camadasorgânicas combinadas foram secadas e concentradas dando um resíduo quefoi separado por meio de cromatografia de coluna em sílica-gel empregando-se acetona\tolueno (30-100%) dando composto 113.
Compostos de 114 a 117 foram sintetizados de acordo com ométodo descrito para Composto 13 e substituindo-se
<formula>formula see original document page 165</formula>
pelo disparador-OH apropriado como material de partida.
<formula>formula see original document page 165</formula>
Exemplo 17
Síntese de ifosfamida octadeuterada e Composto 64 (Composto 25octadeuterado)
<formula>formula see original document page 165</formula>
Adicionou-se por gotejamento 48% de HBr (60 ml) a d4-etanolamina a 0°C. A mistura de reação foi agitada durante 1 h à temperaturaambiente e, depois, cuidadosamente refluxada e lentamente destilada, em quese coletou 16 ml de líquido em 2 h até 155°C (banho de óleo). Isto foisubstituído duas vezes com 60 ml de HBr a 48% e a destilação continuoudurante mais 5 h. Coletou-se 90 ml de líquido. A solução resultante foiaquecida a 1650C durante 2 h e evaporada sob vácuo. O resíduo foirecristalizado de um etol absoluto (10 ml)-acetato de etila (30 ml) a 11,3 g debromidrato de d4-2-bromoetamina (composto 64i). Composto 64i (19,5mMol, 1,0 eq.) foi adicionado por gotejamento a uma suspensão debromidrato de d4-2-bromoetamina (40,0 mmol, 2,05 eq.) em DCM seco (100ml) sob argônio a -20°C, seguido de adição por gotejamento de TEA (81,9mmol, 4,2 eq.) a -20°C. A mistura de reação foi agitada a -20°C durante 0,5h, e à temperatura ambiente durante 2 h, despejada em água, e extraída duasvezes com DCM (30 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadascom salmoura, secadas sobre Na2SO4, e concentradas sob pressão reduzidadando um resíduo que foi separado por meio de cromatografia de coluna emsílica-gel empregando-se como eluente Hexano/EA (100:70(vol/vol)) dando7,0 g de composto 64ii. PtO2 (0,7 g) foi adicionado a uma solução decomposto 64ii (7,0 g) em MeOH (160 ml), a mistura de reação foidesgaseificada e trocada por H2 três vezes, agitada sob H2 durante 3 h àtemperatura ambiente, e diluída com MeOH até que o sólido branco namistura de reação se dissolvesse.
A mistura de reação diluída foi filtrada, ofiltrado concentrado sob pressão reduzida dando um resíduo que foi lavadocom éter anidro duas vezes dando 2,9 g de composto 64iii.A uma suspensãode compostos 64iii (1,92 g 1,0 eq.), l-N-metil-2-nitroimidazolemetanol (1,01g, 1,1 eq.), e PPh3 (2,39 g, 1,5 eq.) em THF (20 ml) adicionou-se DIAD (1,76ml, 1,5 eq.), sob argônio, a 0°C. A mistura de reação foi agitada durante 2horas enquanto era aquecida de O0C à temperatura ambiente, após o que osvoláteis foram removidos sob vácuo dando um resíduo. O resíduo foiseparado por meio de cromatografia por vaporização instantânea em sílica-gelempregando-se como eluente Acetona/Tolueno (100:70 (vol/vol)) dando 1,35g de composto 64.
Exemplo 18
Síntese de Composto 2i
<formula>formula see original document page 167</formula>
O derivado de vinila, 2iii, foi sintetizado de acordo com areferência Cavalleri et al., J. Het. Chem., 1972, 9: 979, e oximercurados comoa seguir. Hg(OAc)2 (208 mg, 0,653 mmol) foi dissolvido em água (0,7 ml) eTHF (0,7 ml), seguido de adição de composto 2iii (100 mg, 0,653 mmol). Amistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h,adicionou-se NaBHt (25 mg) em porções, e, após agitação durante 15 min, areação foi despejada em água, extraída com EA, a camada de EA foi secada econcentrada dando um resíduo que foi separado por meio de cromatografia decoluna em sílica-gel empregando-se como eluente EA/Hexano (de 0 a 100%)dando composto 2i (16 mg).
Exemplo 19
Síntese de Composto 94i
<formula>formula see original document page 167</formula>
Uma solução de 94iii (7,1 g) em Ac2O (9,7 ml) foi adicionadapor gotejamento em uma solução de ácido nítrico fumegante (1,5 ml) foiadicionada em AcOH (12 ml) a 0°C. A mistura de reação foi aquecida àtemperatura ambiente, agitada durante 1 h, adicionou-se ácido nítricofumegante (1 ml) por gotejamento em agitou-se durante 1,5 h. A mistura dereação foi despejada em água, extraída com EA, a camada de EA foi secada econcentrada dando um resíduo que foi separado por meio de cromatografia decoluna em sílica-gel empregando-se como eluente EA/Hexano (de 0 a 100%)dando composto 94ii. Composto 94ii (600 mg, 1,77 mmol) foi suspenso emmetanol (10 ml) a 0°C seguido de adição de NaBH4 (141 mg) em porções emuma mistura de reação ao longo de 5 min. Adicionou-se NaBH4 (100 mg)uma vez a cada hora por três vezes, a mistura de reação foi agitada durante3,5 h, despejada em água, extraída com EA, a camada de EA foi secada econcentrada dando um resíduo que foi separado por meio de cromatografia decoluna em sílica-gel empregando-se como eluente EA/Hexano (de 0 a 100%)dando composto 94i (289 mg) como um sólido amarelo.
Exemplo 20
Síntese de Composto 96i
<formula>formula see original document page 168</formula>
Uma mistura de A (1,4 g), CuCN (0,56g) e DMF (25 ml) foiagitada a 140°C durante 35 min e em 300 ml de gelo quebrado e agitadadurante 10 min. A mistura de reação foi então filtrada e o resíduo foi separadopor meio de cromatografia de coluna empregando-se como eluenteHexano:EA (de 1:0a 2:3) dando composto 96iii como óleo amarelo (617 mg).Composto 96iii foi convertido a álcool 96i e separado por meio decromatografia de coluna, seguindo-se um método similar conformeempregado para o composto 94iii em e usando-se THF em lugar de MeOHcomo solvente na reação.
Exemplo 21
Síntese de Composto 99i
<formula>formula see original document page 168</formula>
Uma mistura de 99ii (500 mg), PdCl2(PPh3)2 (208 mg), e CuI(56,4 mg) foi suspensa em TEA (15 ml), a mistura de reação foidesgaseificada e enxaguada com Ar 6 vezes cada um. Borbulhou-se propinoatravés da mistura de reação durante 15 min, e a reação foi continuada sobuma atmosfera de propino a uma temperatura do banho de 5O0C durante 2 h.A mistura de reação foi despejada em EA, filtrada, o filtrado concentradodando um resíduo que foi separado por meio de cromatografia de coluna emsílica-gel empregando-se como eluente EA/Hexano (de 0 a 100%) dandocomposto 99i (286 mg).
Exemplo 22
Síntese de 1 um etil éster do ácido N-metil-2-amino imidazol-5-carboxílico
<formula>formula see original document page 169</formula>
2. NCNH2l AcONa
Adicionou-se formiato de etila (500 ml) a cloridrato de metiléster de sarcosina (82 g, 585,7 mmol, moído a pó antes da reação) contido emum frasco de fundo redondo com volume de 1 litro. A mistura de reação foiresinada em um banho de gelo e água, agitada, uma saída de gás foiconectada ao frasco, adicionando-se NaH (suspensão de óleo a 60%, 54 g,1,35 mol) durante um período de 2 h, e isto foi agitado à temperaturaambiente durante cerca de 14 h. Voláteis foram removidos usando-se umevaporador rotativo dando um resíduo que foi triturado duas vezes comhexano (500 ml) dando uma pasta marrom clara pegajosa que foi dissolvidaem etanol (400 ml) e HCl conc. (50 ml) e isto foi agitado a 1IO0C durante 1,5h. Após a mistura de reação resfriar, o precipitado branco foi removido porfiltração e o resíduo foi lavado com 2 χ 25 ml de etanol. O filtrado foievaporada dando um óleo castanho espesso a que se adicionou HOAc aquosoa 10%, H2NCN (45 g, 1,07 mol), e acetato de sódio (88 g, 1,07 mol). Amistura de reação foi agitada a uma temperatura de 90 a 1OO0C durante 1,5 hdando uma solução transparente que foi resfriada, seu pH ajustado em 1usando-se HCl concentrado, e a solução resultante foi concentrada a 1/5 deseu volume original usando-se um evaporador rotativo a uma temperatura nãoacima de 45°C. A mistura de reação concentrada foi neutralizadacuidadosamente por meio de adição de K2CO3 a um pH de 8 a 9 e extraídacom EA (5 χ 200 ml seguido de 3 χ 50 ml). As camadas de acetato de etilacombinadas foram secadas sobre MgSO^ filtradas, e os voláteis foramremovidos dando 48 g de etil éster do ácido l-N-metil-2-amino imidazol-5-carboxílico.
Exemplo 23
Síntese de etil éster do ácido l-N-metil-2-amino imidazol-5-carboxílico
<formula>formula see original document page 170</formula>
Adicionou-se formiato de etila (850 ml) a sal de HCl de metiléster de sarcosina (205 g, 1,46 mol, moído a pó antes do uso), carbonato depotássio (205 g, 1,48 mol), e EtOH (800 ml,), em que isto foi agitado de umdia para o outro à temperatura ambiente, e filtrado. O filtrado foi concentradoem um evaporador rotativo durante o qual o resíduo foi separado em duascamadas. A camada superior foi separada e a camada inferior foi extraída comEA. Camadas de EA combinadas e a camada superior foi secada sobreMgSO4, filtrada, e concentrada dando 185 g (81%) de metil éster de N-formilsarcosina que foi usado para a reação a seguir. NaH (suspensão de óleo a60%, 16,0 g, 0,4 mol) foi adicionado cuidadosamente em várias porções, em 1h, a uma mistura de metil éster de N-formil sarcosina (50 g, 0,34 mol) eformiato de etila (160 ml) resfriado em um banho de gelo-água. A mistura dereação foi agitada, a temperatura foi elevada à temperatura ambiente, e aagitação continuou de um dia para o outro. A mistura de reação foi trituradaduas vezes com hexano (100 ml a cada vez), o resíduo foi dissolvido emEtOH (100 ml) e HCl concentrado (60 ml), e a mistura de reação foi agitada a110°C. Após 1 h, a mistura de reação foi resfriada, filtrada, o resíduo foilavado com EtOH e o filtrado concentrado dando um óleo castanho espesso.O óleo foi adicionado a 10% de HOAc em água (200 ml), NH2CN (35 g) eacetato de sódio (90 g), agitado a 95°C. Após lha mistura de reação foiconcentrada ao 1/3 de seu tamanho original em um evaporador rotativo e seupH foi ajustado em cerca de 9 por meio de adição de carbonato de sódio. Amistura de reação foi então extraída com EA (8 χ 100 ml), as camadas de EAcombinadas foram secadas, filtradas, e concentradas dando um resíduo que foipurificado por meio de recristalização dando etil éster do ácido l-N-metil-2-amino imidazol-5-carboxílico ("aminoéster").
Exemplo 24
Síntese de etil éster do ácido l-N-metil-2-nitroimidazol-5-carboxílico
<formula>formula see original document page 171</formula>
Uma solução do aminoéster (36,94 g, 0,218 mol) em 200 mlde ácido acético foi adicionada por gotejamento a uma solução de nitrito desódio (100 g, 1,449 mol) e água (300 ml) resfriada em um banho de gelo-água, e isto foi agitado. A temperatura da mistura de reação, que foi medidacomo estando em torno de -5 a 10°C, foi elevada à temperatura ambiente eque a mistura de reação foi agitada de um dia para o outro. A mistura dereação foi extraída com DCM (3 χ 150 ml). As camadas de DCM combinadasforam secadas e evaporadas dando um resíduo avermelhado que foi separadopor meio de cromatografia de coluna em sílica-gel empregando-se comoeluente EA/hexano (30%) dando etil éster do ácido l-N-metil-2-nitroimidazol-5-carboxílico ("nitro éster") como um sólido castanho claro (27g, rendimento de 62%).
Este método descrito no Exemplo 24 e empregando ácidoacético aquoso é um aperfeiçoamento do método usando-se cerca de 7% deácido sulfórico (vol/vol) para a formação do íon diazônio a partir doaminoéster. Usando-se ácido sulfurico aquoso, um volume de reação torna-segrande causando dificuldade de agitação da mistura de reação de maneiraeficaz. Por exemplo, uma reação envolvendo 150 g do aminoéster exigiu umvolume da mistura de reação de cerca de 12 1. O nitro éster pegajoso formou-se como produto em ácido sulfurico aquoso e interrompeu a agitação damistura de reação.
Exemplo 25
Síntese de ácido l-N-metil-2-nitroimidazol-5-carboxílico
<formula>formula see original document page 172</formula>
Uma suspensão do nitro éster nitro éster (39,2 g, 196,9 mmol)em NaOH IN (600 ml) e água (200 ml) foi agitada à temperatura ambientedurante cerca de 20 h dando uma solução castanha clara transparente. O pHda mistura de reação foi ajustado em cerca de 1 por meio de adição de HClconc. e a mistura de reação foi extraída com EA (5 χ 150 ml). As camadas deacetato de etila combinadas foram secadas sobre MgSÜ4 e concentradasdando ácido l-N-metil-2-nitroimidazol-5-carboxílico ("nitro ácido") como umsólido castanho claro (32,2 g, 95%).
Exemplo 26
Síntese de ácido l-N-metil-2-nitroimidazol-5-carboxílico
<formula>formula see original document page 172</formula>
Uma mistura do nitro ácido (30,82 g, 180,23 mmol) etrietilamina (140 ml, 285 mmol) em THF anidro (360 ml) foi agitadaenquanto que a mistura de reação foi resfriada em um banho de acetonitrila-gelo seco (temperatura < -20 °C). Adicionou-se por gotejamentocloroformiato de isobutila (37,8 ml, 288 mmol) a esta mistura de reaçãoresfriada durante um período de 10 min e agitada durante 1 h seguido deadição de boroidreto de sódio (36 g, 947 mmol) e adição por gotejamento deágua durante um período de 1 h enquanto se mantinha uma temperatura emtorno de ou inferior a 0°C. A mistura de reação foi aquecida até O0C. O sólidofoi removido por filtração e lavado com THF. As porções de THFcombinadas foram evaporadas dando l-N-metil-2-nitroimidazol-5-metanolcomo um sólido laranja (25 g) que foi recristalizado de acetato de etila.
Exemplo 27
Síntese de Composto 119
A uma suspensão de l-N-metil-2-nitroimidazol-5-metanol (50mg, 0,32 mmol) em DME, adicionou-se LiN(TMS)2 a -78°C, com agitaçãovigorosa. Após 10 min, adicionou-se o composto 119i (67 mg, 0,32 mmol) e amistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente. Após 1 h, a mistura dereação foi concentrada e o resíduo foi separado por meio de cromatografia emsílica-gel (de 0 a 100% de acetona/tolueno) dando Composto 119.
<formula>formula see original document page 173</formula>
Exemplos de 28A a 28V
Compostos de 134 a 155 foram sintetizados empregando-se ofosforoamidato substituído correspondente e disparador (disparador-OH)substituído por hidróxi, de acordo com os procedimentos descritos nosExemplos de 1 a 27 acima.
Exemplo 29A
A solubilidade dos compostos a seguir são listados abaixo:
<formula>formula see original document page 173</formula>
Exemplo 29B
Ensaio de anti-proliferação
Para determinar o efeito de pró-drogas de alquilador defosforoamidato sobre a proliferação de células, testou-se a atividadeantiproliferativa destes compostos em um ensaio à base de azul Alamar emmúltiplos poços. O crescimento celular na presença e ausência do compostode teste foi comparado, conforme medido por meio de uma leitora de placascom fluorescência a excitação de 550nm e emissão de 590 nm (ver BiosourceInternational Inc., Tech Application Notes, Use of Alamar Blue in themeasurement of Cell viability and Toxicity, Determining IC5o). A linhas decélulas a seguir foram testadas com 20.000 células/poço/500 μΐ de meio:células NCI-H460 (ATCC HTB-177, meio RPMI (Gibco Products, InvitrogenCorporation, Carlsbad, CA)), células HT29 (ATCC HTB- 38, meio RPMI(Gibco)), células MES-SA (ATCC CRL- 1976, meio de McCoy 5a (ATCC)),células MES-SA/Dx5 ((ATCC CRL-1977), meio de McCoy 5a (ATCC)),células ACHN (ATCC CRL-1611, Meio mínimo essencial, Eagle (ATCC)),células PC3 (ATCC CRL-1435, meio F12K de Ham (ATCC)).
As células foram semeadas em insertos de vidro em cada poçode uma placa de 24 poços na densidade e meio, como especificado acima, umdia antes do teste do composto. Após 24 horas, estas placas foram divididasem dois grupos - grupo de anoxia e grupo de ar. Adicionou-se um compostode teste em cada poço (volume de 200 μΐ) nos grupos de tratamento aconcentrações variando de 100, 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1, 0,03, a 0,01 μΜ. Todosos compostos de teste foram diluídos serialmente em meio completo comconcentrações de DMSO finais inferiores ou iguais a 1% em cada poço. Ascélulas no grupo de tratamento de anoxia foram incubadas durante 2 horas emuma câmara anaeróbica Bactron II. As células no grupo de tratamento com arforam incubadas durante 2 horas em incubadores de cultura de tecidosconvencionais. Após o tratamento de 2 horas com um composto de teste, ocomposto de teste foi removido de cada poço, células foram lavadas com 500μΐ de meio, e incubadas durante 3 dias em 500 μΐ de meio fresco. Após 3 dias,células foram manchadas com 10% de azul Alamar durante 2 horas após oque mediu-se a capacidade de células em proliferar (como mencionadoacima), e calculou-se a concentração inibidora de 50% do crescimento (GI5Q(também referida aqui como IC5o)) de compostos de teste, que se encontratabulado na Tabela X abaixo.
TabelaX: valores IC50 (uM)
<table>table see original document page 175</column></row><table><table>table see original document page 176</column></row><table><table>table see original document page 177</column></row><table><table>table see original document page 178</column></row><table>
Exemplo 30
Ensaio antiproliferação - Dependência de oxigênio
Para determinar a dependência do oxigênio de pró-drogas dealquilador de fosforoamidato, a atividade antiproliferativa destes compostosfoi testada em um ensaio de múltiplos poços à base de azul Alamar comodescrito previamente (ver Exemplo 29). Células NCI-H460 (ATCC HTB-177,meio RPMI (Gibco)) ou HT29 (ATCC HTB-38, meio RPMI (Gibco)) foramsemeadas a 20.000 células/poço/500 μΐ de meio em insertos de vidro emplacas de 24 poços um dia antes do teste. As células foram incubadas durante2 horas em uma câmara anaeróbica Bactron II enxaguada com gases com asconcentrações desejadas de oxigênio variando de anoxia, 0,1%, 0,3%, 0,6%,1%, 10% de oxigênio, e ar. Os valores calculados IC50 (μΜ) são tabulados naTabela Ila (células H460) ou Tabela Y2 (células HT29) abaixo.
Tabela Y1: Valores IC50 (μΜ) em células H460
<table>table see original document page 178</column></row><table><table>table see original document page 179</column></row><table><table>table see original document page 180</column></row><table>
Tabela Y2: Valores IC50 (μΜ) em células HT29
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Exemplo 31
Ensaio clonogênico - Dependência de oxigênio
Para determinar a dependência do oxigênio de pró-drogas dealquilador de fosforoamidato, realizou-se um ensaio de sobrevidaclonogênico. Células foram plaqueadas em placas de vidro de 60 mm (5x105células por placa em 5 ml de meio) 2 dias antes do teste do composto. Testou-se as linhas de células a seguir: células NCI-H460 (ATCC HTB- 177, meioRPMI (Gibco)), células HT29 (ATCC HTB-38, meio RPMI (Gibco)), célulasPC3 (ATCC CRL-1435, meio F12K de Ham (ATCC)). Preparou-se umasolução do composto de teste em meio completo imediatamente antes do testee isto foi adicionado diretamente nas células (volume de 2 ml). Anoxia ouhipoxia (menos de 200 ppm de O2) foi obtida expondo-se as placas de vidroem um câmara anaeróbica Bactron II ou em dispositivos de alumínio (verExemplo 33) durante 2 horas. Para a câmara anaeróbica, níveis desejados deoxigenação entre 200 ppm e ar foram obtidos enxaguando-se a câmaraanaeróbica com gases pré-calibrados antes da experimentação. Para os vasosde alumínio, obteve-se anoxia ou hipoxia por meio de exposição das placas devidro em dispositivos de alumínio estanques pré-aquecidos a uma série decinco evacuações rápidas e enxágües com 95% de nitrogênio mais 5% dedióxido de carbono em um banho de água a 37°C numa plataforma agitada(controles também são enxaguados). Após a quinta evacuação e enxágüe, aplataforma (com banho de água e dispositivos) foi agitada durante 5 minutos,após o que se realizou mais uma evacuação e enxágüe, e os dispositivos foramtransferidos para um agitador em uma incubadora a 37 graus C durante orestante da exposição à droga durante de 1 a 2 horas. Níveis de oxigenaçãoentre 200 ppm e ar foram obtidos variando-se o grau e o número deevacuações. As concentrações de oxigênio no meio e fases gasosas foramverificadas usando-se um eletrodo de oxigênio (Anima, Phoenixville, PA) emum dispositivo de alumínio modificado que permitiu monitorar as fases gás elíquido. Após a exposição à droga, as placas de vidro foram removidas dacâmara ou dispositivos de alumínio, e a droga foi lavada das células por meiode enxágüe com meio. As células foram então tripsinizadas e plaqueadas parasobrevida clonogênica em placas de Petri de plástico. De dez a 14 dias maistarde, as placas foram manchadas com violeta cristal (a 0,25% em 95% deetanol), e contou-se colônias contendo mais de 50 células (ver Exemplo 33).A concentração inibidora de crescimento a 90% (IC90, 90% de eliminação,10% de sobrevida) dos compostos de teste foi calculada e tabulada na TabelaY3 abaixo.Tabela Y3: Valores de ICo0 (μΜ)
<table>table see original document page 182</column></row><table>
Exemplo 32
Eletroquímica
Para determinar propriedades eletroquímicas e os potenciais deredução de pró-drogas de alquilador de fosforoamidato, gerou-sevoltamogramas cíclicos destes compostos pela Bioanalytical Systems, Inc.Realizou-se experimentos de AU com eletrodos de trabalho em carbono vítreo(3,0 mm de diâmetro), eletrodos de referência Ag/AgCl, e eletrodos auxiliaresde fio de platina. Compostos foram dissolvidos em Iml de metanol para sechegar a concentrações finais entre 0,5 e 1,5 mM após a adição de 9 ml desolução salina tamponada com fosfato (PBS). A solução foi adicionada emum frasco de célula eletroquímica e aspergida com argônio durante 5 minutospara remover a maior parte do oxigênio. Realizou-se voltametria cíclica ataxas de varredura de 100 mV/s e 10.000 mV/s em um eletrodo de trabalhoem carbono vítreo. Realizou-se uma operação de teste em um eletrodo demercúrio CGME (CGME em modo SMDE, capilar com diâmetro interno de150 μm, gota de tamanho 8), porém observou-se pouca diferença entrevoltamogramas de mercúrio e carbono vítreo, de modo que o eletrodo demercúrio não foi mais usado. Os potenciais de redução de elétrons simples ouelétrons múltiplos dos compostos foram gerados em cada taxa de varredura eencontram-se tabulados na tabela abaixo.Tabela: Potenciais de Redução (mV)
<table>table see original document page 183</column></row><table>
Exemplo 33
Ensaio de sobrevida clonogênico
As pró-drogas de alquilador de fosforoamidato da invençãoforam testadas no ensaio como a seguir. Células H460 humanas (obtidas doATCC) de crescimento exponencial são semeadas em discos de vidroranhurados de 60 mm a uma densidade entre 2,5 e 5 xlO5 células por placa edesenvolvidas em meio RPMI suplementado com 10% de soro bovino fetaldurante 2 dias antes de se iniciar o tratamento com droga. No dia do teste,preparou-se estoques de drogas com concentrações conhecidas em meiocompleto, e 2 ml do estoque desejado foram adicionados em cada placa. Parase obter equilíbrio completo entre a fase gás circundante e a fase líquidaremoveu-se a tampa da placa de vidro e a placa foi agitada durante 5 minutosem um agitador orbital. As placas foram recobertas e armazenadas no interiorde uma caixa de luvas. A caixa de luvas foi evacuada e gaseifiada com umamistura de gás anóxica certificada (95% de nitrogênio e 5% de dióxido decarbono) ou com uma mistura de gás aeróbica (normóxica) (95% de ar e 5%de dióxido de carbono). Células foram então incubadas com a droga durante 2horas a 37°C.
Ao término do tratamento com pró-droga, placas foramremovidas de cada vaso, e a pró-droga foi facilmente removida das células.Placas foram lavadas com solução salina tamponada com fosfato e umasolução de tripsina-EDTA e então tripsinizadas durante 5 minutos a 37°C.Células destacadas foram neutralizadas com meio acrescido de soro ecoletadas por meio de centrifugação durante 5 min a 100 χ g. Células foramressuspensas a aproximadamente IxlO6 células/ml e diluídas 10 vezes para serobter concentrações de estoque para plaqueamento. A concentração de cadaestoque foi determinada contando-se com um contador de partículas CoulterZ2. Números conhecidos de células foram plaqueados, e as placas foramcolocadas em uma incubadora durante entre 7 e 10 dias. Colônias foramfixadas e manchadas com uma solução de 95% etanol e 0,25% de violetacristal. Colônias acima de 50 células foram contadas, e determinou-se a fraçãosobrevivente.
Realizou-se ensaios clonogênicos baseados em HT 29 ecélulas da mesma maneira como descrito acima e no Exemplo 31.
Determinou-se a citotoxicidade de compostos (Tabelas IA eIB) em hipoxia e em normoxia por meio de ensaio clonogênico empregando-se linhas de células H460 e HT29 como proporcionado nos Exemplos 31 e 33e expressou-se a IC90 em μΜ, e realizou-se ensaio de anti-proliferaçãomodificando-se um ensaio de poços múltiplos descrito por Hay et al, J. Med.Chem., 2003, 46:169-82 empregando-se linhas de células H460, HT29, HCTl16, e DX-5 e expressou-se a IC50 em μΜ (ver Exemplo 29). A relação de IC50ou IC90 determinada em normoxia e hipoxia é denominada relação decitotoxicidade hipoxia (HCR) e pode ser uma medida da citotoxicidadesseletiva para hipoxia das pró-drogas da presente invenção.Tabela IA
<table>table see original document page 185</column></row><table><table>table see original document page 186</column></row><table>
Tabela IB
<table>table see original document page 186</column></row><table>
P = Proliferação; C = Clonogênica; H = Hipoxia; N = Normóxica
Exemplo 34
Efeito do Composto 25 sobre a distribuição de ciclos de células
Células (H60, PC3 e HT29) foram semeadas a uma densidadede 1,0 χ IO6 células/3ml de meio por placa de 60 mm. Após 24 h de ligação,células foram expostas a Composto 25 nas concentrações indicadas durante 2h sob normoxia (ar) ou anoxia (nitrogênio). Células foram lavadas duas vezes,e incubadas durante mais 22 h em meio fresco. Células foram tripsinizadas,centrifugadas, e fixadas em 75% de etanol durante pelo menos 24 h a -20°C.Determinou-se a distribuição de ciclos de células usando-se reagente GuavaCell Cycle (Guava, Hayward, CA) por meio de citometria de fluxo (Guava,Hayward, CA). Os dados demonstram que Composto 25 induz interrupção dociclo celular de maneira dependente do oxigênio da concentração emmúltiplas linhas de células de câncer humano.
<table>table see original document page 187</column></row><table>Células HT29
<table>table see original document page 188</column></row><table>
Exemplo 35
Modelo esferóide
Usou-se duas linhas de células de câncer humanas nestesestudos esferóides para se determinar a eficácia das pró-drogas de alquiladorde fosforoamidato ativadas hipoxicamente. Células de adenocarcinomacolorretal HT29 (carcinoma do colo) foram semeadas diretamente em umfrasco de centrifugação de 125 ml a 10.000 células/ml e desenvolvidas emmeio RPMI suplementado com 10% de FBS e antibióticos. A medida queestas células se dividiram, elas aderiram umas às outras e formaramesferóides. Células de carcinoma do pulmão H460 foram semeadas em umfrasco revestido com uma superfície não-aderente para formar pequenas bolasde células que podem ser semeadas em um frasco de centrifugação. Parainiciar as semeaduras com células H460, frascos de cultura de tecidos de 150cm foram revestidos com 1% de agarose e, depois, adicionou-se 10.000células por frasco e estas foram deixadas desenvolver em meio RPMIsuplementado com 10% de FBS e antibióticos de 3 a 5 dias antes dasemeadura em culturas de centrifugação. No caso de ambas as linhas decélulas, meio de crescimento foi trocado diariamente após os esferóides setornarem visíveis a olho nu.
Para determinar a morfologia e a localização de regiõeshipóxicas em um esferóide intacto, preparou-se esferóides inteiros parahistologia. No caso de seções congeladas, esferóides intactos foram lavadosem solução salina tamponada com fosfato (PBS) e embutidos em OCT erapidamente congelados em solução de gelo seco/2-metilbutano antes deserem armazenadas a -80°C. No caso de seções embutidas em parafina,esferóides intactos foram fixados em uma solução recentemente preparada de4% de paraformaldeído em PBS e subseqüentemente embutidas eseccionadas.
Para avaliar a capacidade de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato em penetrar as células de câncer hipóxicas interiores, setornarem ativadas, liberar o alquilador de fosforoamidato, e matar aquelascélulas de câncer interiores, mediu-se a sobrevida clonogênica de esferóidesexpostos à droga durante 2 h.
Esferóides foram colocados em um novo meio de crescimentoe incubados durante pelo menos 1 h antes de se iniciar experimentos.Esferóides entre 500 e 600 μιη foram isolados por meio de filtração da culturade esferóides através de uma série de filtros de tela estéreis de tamanhodefinido. Entre 10 e 20 esferóides foram colocados em uma placa Pirex de 60mm ranhurada e siliconizada em 3 ml de meio com a concentração desejadado composto de teste. Os discos foram colocados em vasos de alumíniofechados hermeticamente e expostos a uma série de evacuações egaseificações com gases certificados contendo 5% de CO2 e uma quantidadedefinida de O2 (0% de O2, 3% de O2, 10% de O2 ou ar). Esferóides foramincubados em um banho de água agitado para assegurar tanto o equilíbrio doO2 dissolvido na solução, como a integridade dos esferóides em soluçãodurante 2 h. O compostos de teste foi removido e os esferóides foram lavadosantes de serem completamente digeridos com tripsina. Como o núcleonecrótico contém fragmentos celulares, foi necessário um tratamento comDNase I dando uma suspensão de células simples uniforme. Células foramressuspensas a IO6 /ml e plaqueadas para sobrevida clonogênica.Realizou-se experimentos de resposta de dose inicial emcélulas de monocamada sob nitrogênio, 0,6% de O2, ou ar para estabelecer afaixa de dose apropriada e a dependência da liberação de aliviador deoxigênio de fosforoamidato de uma pró-droga de alquilador defosforoamidato. A sobrevida clonogênica foi o ponto terminal e os dadosencontram-se resumidos pelos valores de IC90 ou C90 (a concentraçãoinibitória requerida para matar 90% das células e proporcionar 10% desobrevida). Empregou-se daunorrubicina e cisplatina, em que cada um destespenetra em esferóides em graus diferentes, para matar as células de cânceraeróbicas do esferóide. Usou-se daunorrubicina para penetrar nas camadasexternas de um esferóide multicelular devido a sua afinidade pelas células eusou-se cisplatina em doses apropriadas para matar apenas as células decâncer aeróbicas exteriores. Como um controle para uma droga biorredutoraque matou células sob hipoxia em culturas de monocamada, mas não emcultura de células multicelulares devido a sua elevada reatividade e baixaconcentração, usou-se Tirapazamina tanto para experimentos baseados emmonocamada como em esferóides conforme tabulado abaixo para célulasH460 expostas durante 2 h.
Valores de IC90 para células H460 expostas como monocamadas ou esferóides
<table>table see original document page 190</column></row><table>
Testou-se uma série de pró-drogas de alquilador defosforoamidato em esferóides para determinar sua capacidade de penetrar nascélulas de câncer hipóxicas do revestimento interior, se tornarem ativadas, ematar as células hipóxicas. Os resultados são tabulados abaixo.IC90 para células H460 expostas como monocamadas ou esferóides a pró-drogas de fosforoamidato durante 2 h.<table>table see original document page 191</column></row><table>
Resultados similares quanto à eficácia do Composto 25 foramdemonstrados nos esferóides de HT29 conforme tabulado abaixo:
<table>table see original document page 191</column></row><table>
A pró-droga de alquilador de fosforoamidato foi combinadasimultaneamente com cisplatina ou daunorrubicina e os esferóides foramexpostos durante 2 h à combinação, seguido de medição da sobrevidaoncogênica. Os resultados encontram-se tabulados abaixo:
<table>table see original document page 191</column></row><table>
Pró-drogas de alquilador de fosforoamidato demonstram acapacidade de penetrar nas células que se encontram no interior do esferóide,e de matar células de câncer hipóxicas sozinhas e em combinação com outroagente que objetiva células de câncer aeróbicas.
Exemplo 36
Ensaio de anti-proliferação - Células de reparo de DNA mutante
Células de ovário de hâmster chinês mutantes com relação avias de reparo de DNA específicas foram obtidas da ATCC. As linhas decélulas a seguir foram testadas com 2.500 ou 3.000 células/poço/500 μΐ deMeio Eagle Modificado da Dulbecco (Gibco) suplementado com 10% de sorobovino fetal e antibióticos: células AA8 (ATCC CRL-1859), células EM9(ATCC CRL-1861), células UV41 (ATCC CRL-1860), células UV135(ATCC CRL-1867), células IRS1SF. Linhas de células AU foramselecionadas inicialmente com um ensaio anti-proliferação e aquelasdemonstrando sensibilidade foram retestadas com o ensaio clonogênico(como descrito previamente) para confirmar os resultados de proliferação.
Células foram expostas a doses selecionadas de pró-drogas de alquilador defosforoamidato da presente invenção durante 2 h em condições hipóxicas ouaeróbicas, o composto de teste foi removido, e as células ensaiadas. A tabela aseguir lista as linhas de células, a via mutada, e o defeito do gene específico:
<table>table see original document page 192</column></row><table>
A tabela a seguir lista o efeito da exposição de várias linhas decélulas a Compostos 25 e 36 em condições anóxicas ou aeróbicas e ensaiadaspor meio de proliferação conforme medido por IC50
<table>table see original document page 192</column></row><table>
A tabela a seguir lista os valores de IC90 com relação àsobrevida clonogênica para células selecionadas expostas a Composto 25 emcondições anóxicas ou aeróbicas.
<table>table see original document page 192</column></row><table>
Apenas linhas de células defectivas com relação àrecombinação homóloga foram sensíveis ao Composto 25 sob hipoxia. ComoUV41 participa tanto da via de reparo de excisão de nucleotídeo comotambém da via de reparo de recombinação homóloga, Composto 25possivelmente também produziu uma quantidade significativa de mono-produtos de adição química. No entanto, UVl35 que também está envolvidono reparo de excisão de nucleotídeo não foi sensível ao Composto 25. Aslesões predominantes produzidas pelo Composto 25 foram reticulações inter-filamentos de DNA. Estes resultados foram confirmados em células UV41 eirslSF com o ensaio clonogênico. A exposição em condições aeróbicasproduziu o mesmo espectro de sensibilidades como observado sob hipóxia,indicando que a toxicidade aeróbica produziu o mesmo espectro desensibilidades como observado sob hipoxia, indicando que a toxicidadeaeróbica também foi causada por formação de reticulação inter-filamentos deDNA. Composto 36 apresentou um padrão similar de sensibilidade nas linhasde células mutantes, indicando que o Composto 36 também produziureticulações inter-filamentos de DNA.
Exemplo 37
Ensaio de cultura de células em multi-camadas
Este exemplo demonstra o efeito do Composto 25 sobre apenetração no tecido usando-se cultura de células em multi-camadas (MCC) epara avaliar qualquer efeito acessório. MCCs foram incubadas com meiooxigenado (20% de O2 & 5% de O2) ou meio hipóxico (aproximadamente 0%de O2) e o composto de teste foi exposto de um lado (superfície exposta, ladonormóxico) enquanto que o outro lado foi temporariamente fechado (ladodistai, lado hipóxico). Quando as MCCs são incubadas em meio a 20% de O2ou 5% de O2 desenvolve-se um gradiente de oxigênio a partir da superfícieexposta ao meio no sentido da superfície distai da cultura. Os 50 μηι maisdistais do tecido tornam-se depletados de oxigênio. A extensão da depleção deO2 é maior no meio gaseifícado com 5% do que com 20% de O2; incubaçãocom 5% de O2 reflete mais estreitamente a situação in vivo. Incubando-seMCCs com meio a 0% O2 modela hipoxia limitada por perfusão, em quevasos sangüíneos do tumor tornam-se completamente depletados de oxigênio,e o composto de teste precisa penetrar distâncias excessivas para atingir todasas células. Assim, esta situação impõe uma barreira maior à penetração dadroga, se a ligação da droga ativada atuar limitando sua penetração.
Experimentos baseados em MCC foram realizados com meiogaseificado com 0, 5 ou 20% de O2 durante 45 minutos antes e durante aincubação com o composto de teste. Células HCTl 16 foram desenvolvidasaté uma espessura de 150 μπι em um suporte sólido, e uma lado de cadacultura foi grampeado para desenvolver hipoxia por limitação de difusão.Culturas foram expostas a composto de teste durante 1 h sob 0% de O2, 5% deO2 ou 20% de O2 e avaliou-se a eficácia medindo-se a inibição daincorporação de BrdU. As culturas foram incubadas durante uma segundahora em meio fresco a 20% de O2 e foram removidas do aparelho edevolvidas a uma câmara de crescimento normal, em que o meio flui sobreambos os lados da MCC. Culturas foram incubadas durante 24 horas antes damarcação de BrdUrd e subseqüente crio-seccionamento. A marcação deBrdUrd nos lados exposto e distai da MCC foi analisada usando-semanchamento imuno-histoquímico, diagnóstico por imagem commicroscópio, e análise de imagem por computador para avaliar o efeito doComposto 25 sobre a proliferação celular.
Quando culturas foram expostas a doses escalonadas deComposto 25 sob 20% de O2, foi necessário 5 vezes menos composto no ladodistai (hipóxico) em comparação com o lado exposto (normóxico) paraproduzir resultados comparáveis, demonstrando a penetração e ativaçãohipóxica do Composto 25. Quando MCCs foram expostas a composto de testesob uma condição fisiologicamente relevante de 5% de O2., Composto 25 foi10 vezes mais efetivo para inibir a incorporação de BrdU no lado hipóxico,em comparação com o lado normóxico. Lados normóxicos de culturas a 5%& 20% de O2 foram afetados igualmente por exposição ao Composto 25.
Composto 25 é mais efetivo no lado hipóxico de culturas sob5% de O2 do que com 0% de O2. Comparação de lados normóxicos versushipóxicos de culturas sob 5% de O2 demonstraram que o Composto 25penetra eficazmente através de tecido relativamente bem oxigenado.Composto 25 é capaz de matar células hipóxicas localizadas a cerca de 150μπι dos vasos sangüíneos funcionais. Observou-se uma redução deaproximadamente 3 vezes na exposição ao Composto 25 no lado hipóxido sob0% de O2 relativamente à exposição em condições de 5% de O2. Observou-seefeito Acessório apenas na concentração mais elevada.
A tabela a seguir lista o efeito de e exposto a dosesescalonadas de Composto 25 conforme medido com IC50 (concentração parainibir a incorporação de BrdU em 50%).
<table>table see original document page 195</column></row><table>
Exemplo 38
Metabolismo do Composto 25 com proteína microssômica humana e decamundongo
Realizou-se uma avaliação in vitro da estabilidade metabólicade uma pró-droga de alquilador de fosforoamidato (Composto 25) usando-seproteínas microsômicas de fígado humanas (HLM), de rato (RLM) ecamundongo (MLM) contendo enzimas de citocromo P450. Preparou-se umasolução de Composto 25 (500 μΐ, 5 μΜ) diluindo uma solução de consumo deDMSO 100 vezes em uma solução de ponte metanol:água, adicionando-seproteína microssômica (1 mg/ml) em PBSZMgCl2, e reações enzimáticasiniciadas por meio de adição de uma solução de NADPH. 50 μΐ da mistura dereação foram retirados a 0, 10, 20, e 30 minutos após a adição da solução deNADPH, as proteínas foram precipitadas com acetonitrila e o sobrenadantetransparente foi analisado quanto à quantidade de Composto 25 por meio deLC-MS/MS fase invertida. Usou-se nifedipina e testosterona como controlespositivos. O primeiro estudo comparou RLM com MLM (Tabela 1) e osegundo estudo comparou HLM com RLM (Tabelas 2A e 2B)
Tabela 1
<table>table see original document page 196</column></row><table>
Tabela 2B
<table>table see original document page 196</column></row><table>
Exemplo 39
Farmacocinética in vivo de pró-drogas de alquilador de fosforoamidato
Vários parâmetros farmacocinéticos plasmáticos de pró-drogasde alquilador de fosforoamidato foram determinados em camundongos CD-1,exceto onde indicado, conforme listado abaixo na Tabela 3.
Tabela 3
<table>table see original document page 197</column></row><table>
a camundongos Balb/c
Exemplo 40
Farmacocinética in vivo do Composto 25
Vários parâmetros farmacocinéticos do plasma ou tumorapresentados pelo Composto 25 foram determinados em camundongos CD-Iexceto onde indicado como listado abaixo na Tabela 4.
Tabela 4
<table>table see original document page 197</column></row><table>
a Camundongos nus com tumor de H460b Tumor PKc Biodisponibilidade
Exemplo 41
Inibição de citocromo P450 do metabolismo do ["] Composto 25
Preparou-se oito poços de reação com 100 μΐ de uma soluçãocontendo 50 mM de fosfato de potássio, pH 7,4, 2,6 mM de NADP+, 6,6 mMde glicose-6-fosfato, 0,8 U/ml de desidrogenase de glicose-6-fosfato, ediluições seriais a 1:3 do composto de teste (como Composto 25), juntamentecom oito poços de diluições seriais a 1:3 de um inibidor de controle positivoapropriado (como furafilina para CYPl A2, sulfafenazol para CYP2C9, N-benzilnirvanol para CYPC219, quinidina para CYP2D6 e cetoconazol paraCYP3A4). As concentrações de composto de teste compreendem de 0,0229μΜ a 200 μΜ. As reações foram iniciadas adicionando-se 100 μΐ de umasolução de substrato/enzima pré-aquecida. Preparou-se uma reação decontrole de momento zero adicionando-se 50 ml de ácido fórmico a 10% (400ml de acetonitrila durante 2C19) em água a 100 ml de solução de cofator parainativar as enzimas, depois, adicionando-se 100 ml de solução deenzima/substrato. Preparou-se também uma reação de controle sem inibidor.Após uma incubação adequada a 37 °C, as reações foram terminadas por meioda adição de 50 ml de 10% de ácido fórmico em água (400 ml de acetonitrilapara 2C19). As reações foram preparadas e analisadas quanto às formas demetabólito do substrato de sonda (fenacetina para CYP1A2, diclofenaco paraCYP2C9, (S)-mefenitoína para CYPC219, dextrometorfano para CYP2D6 emidazolama, testosterona e nifedipina para CYP3A4) usando-seHPLC/MS/MS. Cada ensaio foi realizado em duplicata. Um sumário dosvalores IC50 encontram-se listados abaixo.
Tabela 5
<table>table see original document page 198</column></row><table>
NI = nenhuma inibição significativa detectadaExemplo 42
Determinação dos metabólitos potenciais de Composto 25 formado emhepatócitos de camundongo, rato, cão e humano
Composto 25 é incubado com hepatócitos crio-conservados decamundongo, rato, cão, macaco e humano a uma concentração de 10 μΜ. Asreações são interrompidas após 0 minuto (pré-incubação), 30, 60 e 120minutos por meio de extinção com acetonitrila antes de centrifugação eanálise por meio de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) emconjunto com espectrometria de massa em tandem (LC/MS/MS). Metabólitospotenciais são identificados realizando-se varreduras plenas de 100 a 520amu. Os espectros de íon produzidos pelos metabólitos potenciais sãocoletados subseqüentemente e comparados com o espectro do íon produzidopelo composto parental para determinar se cada metabólito potencial estárelacionado com o Composto 25. O desaparecimento do composto parental(Composto 25) e o aparecimento de metabólitos potenciais ao longo do temposão monitorados comparando-se as alturas dos picos em cada momentoadquirido.
Exemplo 43
Determinação da farmacocinética in vivo do Composto 25 e seu(s)metabólitofs) em rato, cão e macaco
Parâmetros farmacocinéticos do Composto 25 e seu(s)metabólito(s) em ratos Sprague Dawley são determinados após administraçãointravenosa simples de 5, 20, 50 e 100 mg/kg de Composto 25. Afarmacocinética do Composto 25 e seu(s) metabólito(s) também serádeterminada em cães Beagle e macacos cynomologus após administraçãointravenosa simples de 20 mg/kg de Composto 25. Concentrações deComposto 25 e seu(s) metabólito(s) no plasma são determinadas por meio deum método de LC/MS/MS, e parâmetros farmacocinéticos médios sãocomputados.Exemplo 44
Estudo de balanço de massa em ratos
Ratos Sprague-Dawley normais e bile-canulados recebemadministração de 14C-Composto 25 como uma dose intravenosa simples.
Coleta-se plasma sangüíneo, urina, fezes em momentos especificados edetermina-se as concentrações de radioatividade total por meio de contagemde cintilação líquida (LSC).
Exemplo 45
Auto-radiografia quantitativa de corpo inteiro
Ratos Sprague-Dawley recebem administração de uma doseintravenosa simples de 14C-Composto 25. Em momentos especificados,eutaniza-se um rato a cada momento determinado. Centrifuga-se o sanguepara obter plasma, e o sangue e plasma são analisados quanto à concentraçãode radioatividade. Carcaças de rato congeladas são embutidas em 2% deCMC, congeladas em um bloco e seccionadas a 40 μιτι em um criomicrotomoLeica CM 3600. Seções coletadas são secadas com congelamento, montadas eexpostas em placas de formação de imagem com fósforo juntamente compadrões auto-radiográficos de 14C para calibração subseqüente do programade análise de imagem. Seleções expostas são submetidas a varredura usandoum Molecular Dynamics Storm 820 ou 860. A concentração de radioatividadeem tecidos selecionados incluindo adiposo (marrom e branco), glândulaadrenal, sangue, cérebro (cerebrum, cerebellum, medula), osso, medula óssea,ceco e seu conteúdo, epidídimo, esôfago, globo ocular (trato uveal, humoraquoso, lente), glândula Harderiana, coração, rim (cortex, medula, papila eseção inteira), intestino grosso e seu conteúdo, fígado, pulmão, nóduloslinfáticos submaxilares), pâncreas, glândula pituitária, glândula da próstata,glândula salivar, vesículas seminais, músculo esquelético, pele, estômago (eseu conteúdo), intestino delgado (e seu conteúdo), baço, medula espinhal,traquéia, tireóide, bexiga urinária (e seu conteúdo) são medidos por meio deanálise de imagem. Produz-se para cada animal auto-radioluminografias eimagens digitais.
Exemplo 46
Proteína plasmática que se liga ao Composto 25
A proteína de ligação em plasma de camundongo, rato, cão,macaco e humano do Composto 25 é determinada com o uso de ultrafiltração.
A ultrafiltração é realizada repartindo-se plasma aspergido com trêsconcentrações com Composto 25 em um dispositivo Centrifree® emtriplicata. Amostras de plasma AU são então equilibradas a 37°C. O aparelhoCentrifree® é centrifugado a 37°C durante 30 minutos a 2500 χ g. Umafração de 75 μΐ do ultrafiltrado é aspergida com o LS. (Composto 25deuterado) e analisada usando-se LC/MS/MS. Os ultrafiltrados são analisadose quantificados usando-se padrões de ultrafiltrado huano para a curva decalibração.
Exemplo 47
Exemplo 47 demonstra a utilidade de um composto destainvenção para tratar câncer empregando-se um modelo de enxerto exógeno decarcinoma do colo humano HT-29 em camundongo.
Camundongos CB 17/SCID fêmeas (adquiridos da CharlesRiver, Cambridge, MA), com de 7 a 8 semanas de idade, foram deixadosaclimatar durante pelo menos três dias, e manuseados em condições isentas depatógeno. A linhagem de células de carcinoma de colo humano HT-29 foiobtida da American Type Culture Collection. As linhas de células foramcultivadas em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro bovino fetal.Células foram mantidas em uma incubadora a 37°C com 5% de CO2. Ascélulas HT-29 foram colhidas da cultura e inoculadas a 3 χ IO6 células/animalno espaço subcutâneo peritoneal. Quando os tumores cresceram a um volumemédio de 100 mm (dia 8), cada grupo de 10 camundongos recebeu aadministração, durante três semanas, de veículo apenas (solução salina e PEG(10 ml/kg cada), Grupo 1), Composto 36 apenas (dissolvido em 30% deciclodextrina em PBS) a uma dose diária de 20, 60, ou 200 mg/kg (Grupos 2,3 e 4, respectivamente), e Composto 36 a uma dose diária de 20, 60, e 200mg/kg administrados de 2 a 3 horas após uma dose de 10 mg/kg de 5FU (emsolução salina) (Grupos 5, 6 e 7, respectivamente) e comparados com umgrupo que recebeu apenas 5FU a 10 mg/kg (Grupo 8) como tabulado abaixo.
O peso corporal de cada camundongo foi registrado duas vezespor semana. O crescimento de cada enxerto exógeno foi monitorado medindo-se externamente tumores em duas dimensões usando-se um paquímetro digitalduas vezes por semana. Determinou-se o volume do tumor (V) com a equaçãoa seguir: V = (L χ W ) /2, em que L é o comprimento, e W é a largura de umenxerto exógeno. Volumes do tumor foram medidos duas vezes por semana.
A administração de Composto 36 a 20, 60, e 200 mg/kg/diacada um, reduziu o crescimento do tumor em comparação com administraçãode veículo apenas. A administração de uma combinação de Composto 36 e5FU resultou em maior inibição, e em inibição relacionada com a dose, docrescimento do tumor, em comparação com veículo. Adicionalmente,combinações de 60 e 200 mg/kg de Composto 36 reduziram o crescimento dotumor num grau maior do que 5FU apenas.
<table>table see original document page 202</column></row><table>
Em associação com estes efeitos anti-tumor, houve algum graude perda de peso e mortalidade ocasional, particularmente no grupo tratadocom a alta dose de Composto 36 mas também em outros grupos. De umamaneira global, o Composto 36 apresentou taxas variáveis de inibição decrescimento do tumor.Exemplo 48
Exemplo 48 demonstra a utilidade de um composto destainvenção no tratamento de câncer empregando-se um modelo de enxertoexógeno de carcinoma de colo humano em camundongo NCI H460.
Camundongos CB 17/SCID fêmeas (adquiridos da CharlesRiver, Cambridge, MA), com de 7 a 8 semanas de vida, foram deixadosaclimatar durante pelo menos três dias, e manuseados em condições isentas depatógeno. A linhagem de células de carcinoma de colo humano NCI H460 foiobtida da American Type Culture Collection. As linhas de células foramcultivadas e coletadas de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 47e inoculadas a 1 χ IO6 células/animal no espaço subcutâneo peritoneal.
Quando os tumores se desenvolveram a um volume médio de 100 mm3 (dia8), cada grupo de camundongos recebeu a administração, durante trêssemanas, como tabulada na tabela abaixo: Composto 25 (2,5 mg/ml em 10%de PEG; via de administração- i.p.) e Taxol (1 mg/ml em 5% de EtOH, 5% deCremóforo e 90% de solução salina; administração - i.v. 2 h após aadministração do Composto 25). O peso corporal e volumes de tumor forammedidos como descrito no Exemplo 47 acima.
Protocolo de tratamento
<table>table see original document page 203</column></row><table>
Grupos Ia e lb, η = 5;
qld/qd = diariamente; q2d = a cada 2o dia; q7d = a cada 7o dia.
Resultados são apresentados na Tabela X2 com base namedição do volume do tumor no dia 29 quando camundongos tratados comveículo atingiram um volume de 946 mm . Grupos de 5 camundongos quereceberam saline ou nenhum tratamento foram adicionados para indicarquaisquer efeitos do veículo, mas não são usados para comparações nestaanálise.
<table>table see original document page 204</column></row><table>
Os resultados demonstram que todos os três regimes paradosagem do Composto 25 proporcionaram graus similares de inibição docrescimento do tumor, e que a terapia de combinação, particularmente comdosagem diária, proporcionou benefício adicional. Cada terapia decombinação foi associada com algum grau de perda de peso, mas nãosuficientemente grande para causar qualquer mortalidade. De uma maneirageral, resultados indicam que o Composto 25 é eficaz neste modelo de câncerdo pulmão e que proporciona benefício adicional àquele proporci9onado peloagente quimioterápico convencional, taxol.
Usando-se a conversão de camundongo para HED, Composto25 pode ser administrado numa dose terapeuticamente eficaz de cerca de 2 acerca de 8 mg/kg/dia, para o tratamento de câncer, particularmente câncerpulmonar, sozinho ou em combinação com Taxol™, em que a dose diáriapode ser administrada com uma freqüência menor de dosagem para dosesmaiores em comparação com doses menores.
Exemplo 49
Exemplo 49 descreve a utilidade de um composto destainvenção no tratamento de câncer como demonstrada empregando-se ummodelo de enxerto exógeno de carcinoma de pulmão de células não-pequenasH460 em camundongo. Camundongos CB17/SCID fêmeas (adquiridos daCharles River, Cambridge, MA), com de 7 a 8 semanas de vida, foramdeixados aclimatar durante pelo menos três dias, e manuseados em condiçõesisentas de patógeno. A linhagem de células de carcinoma de pulmão decélulas não-pequenas humano NCIH460 foi obtida da American Type CultureCollection. As linhas de células foram cultivadas e colhidas como descrito noExemplo 47 acima, e inoculadas a 3 χ IO6 células/ animal no espaçosubcutâneo peritoneal. Quando os tumores cresceram a um volume médio de100 mm3 (dia 8), cada grupo de camundongos (dez por grupo) recebeu aadministração, durante três semanas, como tabulado na tabela abaixo:Composto 25 (2,5mg/ml em 10% de PEG; via de administração - i.p.);Composto 24 (0,3, 0,1 mg/ml em 10% de PEG, via de administração - i.p.) eTaxol (1 mg/ml em 5% de EtOH, 5% de Cremóforo e 90% de solução salina;administração - i.v. 2 h após administração do composto de teste).
Protocolo de tratamento
<table>table see original document page 205</column></row><table>
* - 50% PEG
O peso corporal e volume do tumor foram determinados comodescrito no Exemplo 47 acima. Resultados para inibição de crescimento dotumor medida no dia 27 encontram-se tabulados abaixo. Comparações foramrealizadas no dia 27 porque esse foi o último dia de medições para o grupo deveículo e aqueles animais foram sacrificados.
<table>table see original document page 205</column></row><table>Estes resultados demonstram que doses diárias de 3 mg/kg deComposto 24 e 25 mg/kg de Composto 25 inibiram crescimento de tumor eque Composto 25 apresentou um benefício ligeiramente maior tanto comomonoterapia e em combinação com taxol. Estes efeitos foram acompanhadospor meio de redução branda de peso, particularmente no grupo de Composto25 + taxol.
Usando-se a conversão de camundongo para HED, Composto25 pode ser administrado numa dose terapeuticamente eficaz de 2 mg/kg/dia,para o tratamento de câncer, particularmente câncer pulmonar, sozinho ou emcombinação com Taxol™, e Composto 24 pode ser administrado numa doseterapeuticamente eficaz de 0,25 mg/kg/dia, para o tratamento de câncer,particularmente câncer pulmonar, sozinho ou em combinação com Taxol™.
Exemplo 50
Exemplo 50 descreve a utilidade de um composto destainvenção no tratamento de câncer como demonstrada empregando-se ummodelo de enxerto exógeno de carcinoma de colo humano HT-29 emcamundongo. Camundongos CB17/SCID fêmeas (adquiridos da CharlesRiver, Cambridge, MA), com de 7 a 8 semanas de vida, foram deixadosaclimatar durante pelo menos três dias, e manuseados em condições isentas depatógeno. A linhas de células de carcinoma de colo humano HT29 foi obtidada American Type Culture Collection. As linhas de células foram cultivada ecolhidas como descrito no Exemplo 47 acima, e inoculadas a 3 χ IO6células/animal no espaço subcutâneo peritoneal. Quando os tumorescresceram a um volume médio de 100 mm (dia 8), cada grupo decamundongos (dez por grupo) recebeu administração durante três semanas,como tabulado na tabela abaixo: Composto 24 (em 10% de PEG), via deadministração - i.p., administrada 2 h antes de 5-FU ou cisplatina (CDDP; emsolução salina) nos dias em que a terapia de combinação fora programada;5FU sozinho (em solução salina), ou CDDP apenas.Protocolo de tratamento
<table>table see original document page 207</column></row><table>
* - flanco de localização do tumor; ** - peritôneo de localização do tumor;Q3d = a cada 3o dia
Em grupos de controle, tumores foram implantados em doissítios com parte de um estudo separado de efeito da localização sobre ocrescimento do tumor no grupo de controle. Estes resultados não tiveramimpacto sobre a interpenetração do estudo e todos os tratamentos foramcomparados com o grupo de veículo, em que tumores no mesmo são docorpo. O peso corporal e o volume do tumor foram medidos como descrito noExemplo 47. Inibição do crescimento do tumor medida no dia 25 quandotumores no veículo atingiram o tamanho máximo e animais naquele grupoforam sacrificados, encontra-se tabulada abaixo.
<table>table see original document page 207</column></row><table>
Os resultados demonstram que Composto 24 comomonoterapia resultou em inibição do crescimento do tumor ligeiramenteacima de 40%, enquanto que combinando-se Composto 24 administrado emcombinação com CDDP ou 5FU, obteve-se cerca de 50 a 70% de inibição dotumor. De acordo com este Exemplo, a combinação terapeuticamente maiseficaz foi aquela do Composto 24 e 5FU. Os efeitos sobre o crescimento detumor foram associados com diminuições menores dos pesos doscamundongos durante o tratamento; no entanto, os camundongos recuperarama perda de peso após o término do tratamento.
Usando-se a conversão de camundongo para HED, oComposto 24 pode ser administrado numa dose terapeuticamente eficaz decerca de 0,25 a cerca de 0,50 mg/kg/dia, para o tratamento de câncer,particularmente câncer do colo, sozinho ou em combinação com 5FU ou CDDP.
Exemplo 51
Exemplo 51 descreve a utilidade de um composto destainvenção no tratamento de câncer como demonstrado empregando-se ummodelo de enxerto exógeno de carcinoma de pulmão de células não-pequenasH460 em camundongo. Camundongos CB17/SCID fêmeas (adquiridos daCharles River, Cambridge, MA), com de 7 a 8 semanas de vida, foramdeixados aclimatar durante pelo menos três dias, e manuseados em condiçõesisentas de patógeno. A linhagem de células de carcinoma do pulmão decélulas não-pequenas humano NCI H460 foi obtida da American Type CultureCollection. As linhas de células foram cultivadas e colhidas como descrito noExemplo 47 acima, e inoculadas a 3 χ IO6 células/animal no espaçosubcutâneo peritoneal. Quando os tumores cresceram a um volume médio de100 mm , iniciou-se tratamento em que grupos de 10 camundongosreceberam veículo (Grupo 1), CDDP a 3 ou 6 mg/kg (Grupos 2 e 3,respectivamente, IV uma vez), Composto 25 a 50 mg/kg em solução salina 5vezes por semana durante duas semanas (Grupo 4), Composto 25 a 100 mg/kga cada três dias durante 5 vezes (Grupo 5) ou a combinação de cada dose deComposto 25 com 3 ou 6 mg/kg de CDDP (Grupos 6 e 7, respectivamente).Resultados para grupos que recebem 50 mg/kg de Composto 25 são ilustradosna Figura 1. A Figura 2 mostra resultados similares para 100 mg/kg deComposto 25.
Estes resultados realizados com uma versão formulada comsolução salina de Composto 25 demonstram significativa diminuição dovolume do tumor que é relacionada com a dose, e aumento do retardo docrescimento do tumor com uma dose diária de 50 mg/kg, e 100 mg/kg comdosagem menos freqüente em comparação com aquela empregada para a dosediária de 50 mg/kg. Estes dados também demonstram que ambos os regimesde dosagem adicionam aos efeitos de CDDP neste modelo.
Usando-se a conversão de camundongo para HED5 Composto25 pode ser administrado numa dose terapeuticamente eficaz de cerca de 4 acerca de 8 mg/kg/dia, para o tratamento de câncer, particularmente câncerpulmonar, sozinho ou em combinação com 5FU ou CDDP, em que a dosediária pode ser administrada com uma freqüência decrescente de dosagempara doses maiores em comparação com doses menores.
Exemplo 52
Exemplo 52 descreve a utilidade de um composto destainvenção para tratar câncer como demonstrado empregando-se um Modelo deenxerto exógeno de carcinoma de colo humano HT-29 em camundongo.Camundongos CB17/SCID fêmeas (adquiridos da Charles River, Cambridge,MA), com de 7 a 8 semanas de vida, foram deixados aclimatar durante pelomenos três dias, e manuseados em condições isentas de patógeno. A linhagemde células de carcinoma de colo humano HT29 foi obtida da American TypeCulture Collection. As linhas de células foram cultivadas e colhidas comodescrito no Exemplo 47 e inoculadas a 3 χ IO6 células/animal no espaçosubcutâneo peritoneal. Quando os tumores cresceram a um volume médio de100 mm (dia 8), cada grupo de camundongos (dez por grupo) recebeuadministração durante três semanas, como tabulado na tabela abaixo:Composto 25 em solução salina, via de administração - i.p., administrado 2 hantes de CDDP nos dias em que a terapia de combinação é programada eCDDP (em solução salina, IV).
Protocolo de tratamento
<table>table see original document page 210</column></row><table>
O peso corporal e volume do tumor foi determinado comodescrito no Exemplo 47. Dados baseiam-se em volumes de tumor no dia 25quando tumores no grupo de veículo haviam atingido tamanho suficiente paratornar necessário sacrificar os camundongos. Os resultados da inibição decrescimento de tumor encontram-se tabulados abaixo.
<table>table see original document page 210</column></row><table>
Os resultados demonstram que monoterapia administrandoComposto 25, formulado em solução salina, a 50mg/kg/dia e 100 mg/kg/diacom uma variedade de regimes de dosagem resulta em inibição decrescimento do tumor neste modelo de câncer do colo, e que tratamento decombinação do Composto 25 e CDDP incrementou a efetividade doComposto 25 para tratamento de câncer do colo neste modelo. Este efeitosforam acompanhados pela perda modesta de peso corporal, tanto mais emgrupos de combinação; os camundongos recuperaram os pesos corporaisperdidos após o término do tratamento.
Usando-se a conversão de camundongo para HED, Composto25 pode ser administrado a uma dose terapeuticamente eficaz de cerca de 4 acerca de 8 mg/kg/dia, para o tratamento de câncer, particularmente câncerpulmonar de células não-pequenas, sozinho ou em combinação com CDDP,em que a dose diária pode ser administrada com uma freqüência decrescentede dosagem no caso de doses mais elevadas, em comparação com dosesmenores.
Exemplo 53
Exemplo 53 descreve a utilidade de um composto destainvenção para tratar câncer como demonstrado empregando-se um modelo deenxerto exógeno de carcinoma do pulmão de células não-pequenas H460 emcamundongo. Camundongos CB17/SCID fêmeas (adquirido da Charles River,Cambridge, MA), com de 7 a 8 semanas de vida, foram deixados aclimatardurante pelo menos três dias, e manuseados em condições isentas depatógeno. A linhagem de células de carcinoma de colo humano NCI H460 foiobtida da American Type Culture Collection. As linhas de células foramcultivadas e colhidas como descrito no Exemplo 47 e inoculadas a 3 χ IO6células/animal no espaço subcutâneo peritoneal. Quando os tumorescresceram a um volume médio de 100 mm , iniciou-se o tratamento em quegrupos de 10 camundongos receberam veículo (Grupo 1), CDDP a 6 mg/kg(IV uma vez, Grupo 2), Composto 25 a 150 mg/kg em solução salina, umavez por semana durante duas semanas (i.p., Grupo 3), ou a combinação dosdois agentes (Grupo 4).
Os resultados mostrados na Figura 3 demonstram que 150mg/kg por semana de Composto 25 proporcionaram maior redução dotamanho do tumor do que CDDP sozinho e que a combinação dos doisagentes resultou em benefício adicional. Estes resultados também indicam quedurante o período de duas semanas de dosagem o volume médio do tumor nãose modificou, indicando a inibição completa do crescimento tumoral. Estesdados indicam que o Composto 25 administrado a 150 mg/kg/dia comomonoterapia, uma vez por semana, é o regime de dosagem mais efetivodescrito nos exemplos precedentes (Exemplos de 47 a 52). Observou-se poucaalteração do peso corporal, sugerindo reduzida toxicidade com este regime dedosagem.
Usando-se a conversão de camundongo para HED5 Composto25 pode ser administrado a uma dose terapeuticamente eficaz de cerca de 12mg/kg/dia, para o tratamento de câncer, opcionalmente administrado numafreqüência de uma vez por semana, particularmente câncer pulmonar decélulas não-pequenas, sozinho ou em combinação com CDDP.
Exemplo 54
Exemplo 54 descreve a eficácia do Composto 25 via umainjeção de bolo ip ou infusão ip apenas ou em combinação com Cisplatina nomodelo de enxerto exógeno de H460 em camundongo. Camundongos nu/nuhomozigóticos fêmeas Nu-Foxnlnu (adquiridos da Charles River, Cambridge,MA), com 6 semanas de vida, foram deixados aclimatar durante pelo menostrês dias, e manuseados em condições isentas de patógeno. A linhagem decélulas de carcinoma de colo humano HT29 foi obtida da American TypeCulture Collection. As linhas de células foram cultivadas e colhidas comodescrito no Exemplo 47 e inoculadas a 3 χ IO6 células/animal no espaçosubcutâneo peritoneal. Quando os tumores cresceram a um volume médio de100 mm (dia 8), cada grupo de camundongos (dez por grupo) recebeuadministração durante três semanas, como tabulado na tabela abaixo:Composto 25 (formulado como uma solução salina a 15 mg/ml, via deadministração - i.p., administrado 2 h antes de CDDP nos dias em que aterapia de combinação é programada e CDDP em solução salina, IV.Protocolo de tratamento
<table>table see original document page 213</column></row><table>
* - Bomba Alze, 200 μΐ durante 1 semana χ 2 (re-implantar bomba nova ao fim de umasemana).
O peso corporal e volume do tumor foram determinados comodescrito no Exemplo 47. Os resultados são indicados na Figura 4. Os dadosindicam que, embora aplicação contínua do Composto 25 sozinho ou emcombinação com CDDP seja eficaz, dosagem intermitente, como uma vez porsemana, pode proporcionar maior benefício terapêutico no tratamento dedeterminados cânceres, como câncer pulmonar de células não-pequenas.
Exemplo 55
Terapia de combinação de Composto 25 e Gemcitabina
Uma combinação de Composto 25 e gemcitabina foiadministrada a camundongos nus que apresentavam tumores derivados decélulas de câncer pancreático humano de tipo MiPaca2. Tumor MiaPaca-2 éum tumor altamente invasivo, de crescimento rápido, que resulta em mortedentro de 20 a 30 dias em animais não tratados. As células de tumor foramtransfectadas com o gene para proteína fluorescente vermelha. Camundongosreceberam administração de doses de controle de veículo, gemcitabina,Composto 25, Composto 24, ou combinações de gemcitabina/Composto 25ou gemcitabina/Composto 24, por via intraperitoneal, como tabulado abaixo(8 camundongos/grupo). Compostos 24 e 25 foram formulados em soluçãosalina e proporcionados pela Threshold Pharmaceuticals, Inc. como um póseco. Gemcitabina foi obtida comercialmente e preparada recentemente deacordo com instruções do fabricante.Protocolo de tratamento
<table>table see original document page 214</column></row><table>
* qd = diariamente; qw = semanalmente
Tumores foram observados por meio de diagnóstico deimagem uma vez por semana até o término do estudo, em que neste momentose obteve imagens de corpo aberto para confirmar os efeitos. No Grupo 1, ostumores cresceram rapidamente (Figura 5) e resultaram em 100% deletalidade por volta do dia 30 (Figura 6).
Grupos 3 e 4 resultaram em efeitos menores sobre o volume dotumor e apresentaram pouco efeito sobre a sobrevida. Grupo 2 reduziusignificamente o volume do tumor e prolongou a sobrevida. Grupo 6proporcionou redução modesta no tamanho do tumor, mas sem efeitosadicionais sobre a sobrevida. Em contraste, Grupo 5 demonstrou crescimentode tumor significativamente reduzido e prolongou significativamente asobrevida em comparação com o Grupo 2, cinco de 8 tumores no Grupo 5regrediram rapidamente após tratamento e, dentro de um curto período,falharam em emitir fluorescência (Figura 7).
Quatro destes tumores permaneceram em fluorescência zeroaté o término do experimento e os tumores foram considerados curados. NoGrupo 2 não se considerou tumores como curados. Estes resultadosdemonstram que tratamento de combinação com Composto 25 e gemcitabinaapresenta maior benefício neste modelo de câncer em comparação commonoterapia com a gemcitabina convencional. Estes resultados demonstramque a redução de tumor em animais que receberam uma combinação deComposto 25 a 30 mg/mg/dia e gemcitabina é significativamente maior doque em animais tratados com gemcitabina como um agente único.Usando-se a conversão de camundongo para HED, Compostopode ser administrado a uma dose terapeuticamente eficaz de cerca de 2,5mg/kg/dia, para o tratamento de câncer, particularmente câncer pancreático,em combinação com gemcitabina.
Exemplo 56
Reconhece-se que moléculas eficazes para tratamento dedoenças humanas, incluindo câncer, podem ser tóxicas em doses próximas ou,por vezes até muito maiores, do que doses necessárias para se obter efeitosbenéficos. Para determinar a dose apropriada e a via de administração de umcomposto do tipo referido, é necessário compreender sua toxicidade.Rotineiramente, abordagens inicias para determinar a dose tóxica envolvem ouso de roedores, como camundongos, para proporcionar dados preliminaresque poderiam corroborar o projeto de estudos similares em animais maiores eem humanos. Compostos de teste (Compostos 24, 25 e 36) foram testados emcamundongos como experimentos preliminares para determinar doses a seremusadas em animais maiores. Composto 25 foi testados em doses tão altasquanto de 300 mg/kg como uma dose única, e verificou-se que causamtoxicidades renais, como necrose tubular e derramamento de proteína naurina. Reduções transientes em células sangüíneas brancas também foramobservadas. No entanto, observou-se pouca toxicidade em doses mais baixas(100 e 200 mg/kg). Estas doses selecionadas representam uma aproximaçãodas doses que poderiam ser usadas em animais maiores, como ratos e cães,com o fim de confirmar que referidas toxicidades existem, e para predizer se afunção frenal deveria ser medida em humanos.
Embora a presente invenção tenha sido descrita em detalhecom referência a concretizações específicas, aqueles versados na técnicaperceberão que modificações e melhoramentos encontram-se na abrangênciado escopo e espírito da invenção, como apresentada nas reivindicações aseguir. Todas as publicações e documentos de patentes (patentes, pedidos depatentes publicados, e pedidos de patentes não-publicados) aqui mencionadossão incorporados aqui por referência como se cada publicação ou documentohouvesse sido indicado especificamente e individualmente como incorporadoaqui por referência. Citação de publicações e documentos de patentes não sedestinam a representar uma admissão de que qualquer documento do tiporeferido é pertinente ao estado da técnica, nem constitui qualquer admissãoquanto ao teor ou dada dos mesmos. A invenção apresentada agora foidescrita com a descrição escrita e exemplos, em que aqueles versados natécnica perceberão que a invenção pode ser praticada numa variedade deconcretizações e que a descrição precedente e os exemplos são para fins deilustração e não de limitação das reivindicações a seguir.

Claims (43)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que é de fórmula (I):<formula>formula see original document page 217</formula>em queY1 é O, S, NR6 ou NSO2R6Y2 é O, S, NR6, NCOR6, ou NSO2R6 em que cada R6 éindependentemente (CrC6) alquila, CrC6 heteroalquila, arila, ou heteroarila;cada um de RrR5 é independentemente hidrogênio, hidroxila,amino, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila, heterociclila,C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquilamino, C1-C6 dialquilamino, arila, heteroarila, C1-C6acila, C1-C6 heteroacila, aroíla ou heteroaroíla; ou, em conjunto comquaisquer dois de R1-R5 formam um heterociclo de C3-C1O; ou cada um de R1-R5 é independentemente um disparador T de fórmula L-Z3;L é selecionado do grupo que consiste de-[C(Z1)2-Y3]v-[C(=0)-0]q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)Jg; e-[C(Z1)2-Y3]v-(S(=0)2)q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)Jg;em que cada um de z, v, q, u, e g é independentemente 0 ou 1;Y3 é S, O, ou NR7, em que cada R7 é independentementehidrogênio, hidroxila, C1-C6 alquila, C1-C6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquilamino, C1-C6 dialquilamino, arila,heteroarila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla;Y4 é O, S, ou -NR7-C(O)-O-;cada Z1 e Z1 é independentemente hidrogênio, halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 heteroalquila, arila, heteroarila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, CrC6 acila, CrC6Iieteroacila, aroíla, ou heteroaroíla;Z2 é CrC6 alquileno, CrC6 heteroalquileno, <formula>formula see original document page 218</formula> em que cada Xi é independentemente N ou CR8 em que R8 éindependentemente hidrogênio, halogênio, nitro, ciano, CHF2, CF3, CO2H,amino, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, CrC6 cicloalquila, CrC6 alcóxi,Ci-C6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila, CON(R7)2, CrC6 acila, CrC6heteroacila, aroíla ou heteroaroíla;X2 é NR7, S, ou O; eZ3 é um grupo biorredutor apresentando uma fórmulaselecionada do grupo que consiste de: <formula>formula see original document page 218</formula> um isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica de isômeros, bioisósteroes, farmacóforos, um sal, solvato, hidratofarmaceuticamente aceitável, ou uma pró-droga do mesmos; com a condiçãode que na fórmula (I):(ia) pelo menos dois de R1-R5 são selecionados do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila;(ib) pelo menos um de RrR5 é selecionado do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-CrC6 alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; e pelo menos um de NR2R3 ou NR4R5 é v^ ou(ic) NR2R3 e NR4R5 são ; e(ii) pelo menos um de RrR5 é o disparador T; e(iii) exclui compostos apresentando a fórmula selecionada dogrupo que consiste de:<formula>formula see original document page 219</formula><formula>formula see original document page 220</formula>em que Ra é H, Br, NMe2, CN, ou CONH2,<formula>formula see original document page 221</formula>em que R é H, Me ou alila;bispSÍ-metil-N-(2-bromoetil)]fosforodiamidato de 3-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)-metila,N,N-bis(2-bromoetil)] fosforodiamidato de 3-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)metila,bis[N-metil-N-(2-bromoetil)]fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)metila,N,N-bis(2-cloroetil) fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)metila,N,N-bis(2-bromoetil)- fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)metila,N,N-bis(2-bromoetil)- fosforodiamidato de 3-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)metila,bis[N-metil-N-(2-bromoetil)]fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-1-metil-4,7-indolquinonil)metila,N,N-bis(2-cloroetil)-fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)metila, eN,N-bis(2-bromoetil)- fosforodiamidato de 2-(5-metóxi-l-metil-4,7-indolquinonil)metila.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que Y1 e Y2 é O.
3. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que Ri é T.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que é de fórmula (II) ou (III):<formula>formula see original document page 222</formula>em que cada R2-Rs é independentemente hidrogênio, hidroxila,amino, C1-C6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila, heterociclila,C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila, heteroarila, C1-C6acila, C1-C6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla; ou, em conjunto comquaisquer dois de R2-R5, formam um heterociclo de C3-C10; em que cada Yi éindependentemente S ou O;com a condição de que nas fórmulas (II) ou (III):(i) pelo menos dois de R2-R5 são selecionados dentre 2-haloalquila, 2- alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2- heteroalquilsulfoniloxialquila;(ii) pelo menos um de R2-R5 é selecionado dentre 2-haloalquila, 2-CrC6 alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila,-2-arilsulfoniloxialquila, e-2-heteroalquüsulfoniloxialquila; e um de NR2R3 e NH4R5 é(iii) NR2R3 e NR4R5 ambos, em conjunto, são eum isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica de isômeros, bioisósteroes, farmacóforos, um sal, solvato, hidratofarmaceuticamente aceitável, ou uma pró-droga dos mesmos.
5. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizadopelo fato de que L é selecionado do grupo que consiste de:[C(Z1)2-Y3]-(C(=0)-0)-[C(Z1)2-Z2-Y4]-[C(Z1)2]Z-[C(Z1)=C(Z1)]-;[C(Z1)2-Y3]-[C(Z1)2-Z2-Y4]-[C(Z1)2]Z-[C(Z1)=C(Z1)]-;[C(Z1)2-Y3]-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)]-;[C(Z ι )2-Y3] - [C(Z! )2] z-;[C(Z1)2-Y3]-(C(=0)-0)-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)]-;[C(Z1)2-Y3]-(C(=0)-0)-[C(Z02]z-;[C(Z1)2-Y3]-(C(=0)-0)-[C(Z1)2]z-[C(Z1)=C(Z1)]S[C(Z ι ^-Z2-Y4J - [C(Z 1)2] z- [C(Z 1=C(Z 1)] -;-[C(Z1)2MC(Z1)=C(Z1)]-;e-[C(Z1)2Jz-.
6. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizadopelo fato de que L é -[C(Z1)2Jz-.
7. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizadopelo fato de que cada -C(Z1)2- é independentemente:-CH2-, -CHMe-, -CH(CN)-, -CH(CO2H)-, -CH(CONH2)-,-CH(CF3)-, -CH(CHF2)-,-C(Me)2-, -C(Et)2-, -CH(CH2NMe2)-,-CH(CH2NMe2)-, -C(CH2NMe2)2-, ou -C(CH2CO2H)2-.
8. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizadopelo fato de que -C(Z1)2-Y3- é:-CH2-O-, -CH2-S-, -CH2-NMe, -CH2-NH-, CH(Me)-O-,CH(Me)-S-; -CH(Me)-NMe-,-CH(Me)-NH-; -CMe2-NMe-, -CMe2-NMe-, ou-CMe2-NMe-.
9. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelofato de que -Z2-Y4- conjuntamente é selecionado do grupo que consiste de: <formula>formula see original document page 224</formula>
10. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizadopelo fato de que -[C(Zi)=C(Zl)]- é:-CH=CH-, -C(CN)=CH-, -CH=C(CN)-, -C(Ar)=CH-,-CH=CAr-, -C(COAr)=CH-,-CH=C(COAr)-, -C(CORi2)=CH- ou-CH=C(CORi2)- em que Ar é arila e Ri2 é independentemente hidrogênio, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila, ou heterociclila.
11. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizadopelo fato de que o Z3 é selecionado do grupo que consiste de: <formula>formula see original document page 224</formula><formula>formula see original document page 225</formula>
12. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizadopelo fato de que é de fórmula (IV), (V), (VI) ou (VII):<formula>formula see original document page 225</formula>em que cada R9 é independentemente hidrogênio, arila,heteroarila, C1-C4 alquila, C1-C6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, C3-Cs cicloalquila, heterociclila, C1-C6 acila, C1-C6 heteroacila,aroíla ou heteroaroíla, CrC6 alcoxicarbonila, C1-C6 alquilaminocarbonila, diC1-C6 alquilaminocarbonila ou C1-C6 alcóxi;cada R10 é hidrogênio, CrC6 alquila ou heteroalquila, C3-C8cicloalquila, heterociclila, CrC6 alcóxi, arila, heteroarila, ou, em conjunto,dois R10 formam um heterociclo; cada Ru é independentemente hidrogênio,arila, heteroarila, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, ou CrC6 alcóxi; ou, em conjunto, dois Rn formam umheterociclo; com a condição de que quando cada Rn é independentemente C1-C6 alquila, CrC6 heteroalquila, então Rn exclui<formula>formula see original document page 226</formula> X4 é Cl, Br, alquilsulfonilóxi, heteroalquilsulfonilóxi,arilsulfonilóxi, ou heteroalquilsulfonilóxi.
13. Composto de acordo com a reivindicação 12 de fórmula(IV), caracterizado pelo fato de que cada R9 é independentementehidrogênio, metila, etila, propila, isopropila, ou ciclopropila; e N(Ri0)2 éselecionado dentre NH2, NHMe, NMe2, NEt2, <formula>formula see original document page 226</formula> NHOMe, e NHOH.
14. Composto de acordo com a reivindicação 12 de fórmula(V), caracterizado pelo fato de que cada R9 é independentemente hidrogênio,metila, etila, propila, isopropila, ou ciclopropila.
15. Composto de acordo com a reivindicação 12 de fórmula(VI), caracterizado pelo fato de que cada R9 é independentementehidrogênio, metila, etila, propila, isopropila, ou ciclopropila e Rnhidrogênio ou metila.
16. Composto de acordo com a reivindicação 12 de fórmula(VII) caracterizado pelo fato de que cada R9 é independentemente hidrogênio,metila, etila, propila, isopropila, ou ciclopropila; e cada Rn éindependentemente hidrogênio, metila, etila, propila, isopropila, benzila,metila, ciclopropila, metóxi, e hidroxila substituída; ou, em conjunto, dois Rnformam um heterociclo.
17. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que T tem a fórmula: <formula>formula see original document page 226</formula>
18. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que T tem a fórmula:<formula>formula see original document page 227</formula>em que cada Zi é independentemente H ou CrC6 alquila.
19. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que T tem a fórmula:<formula>formula see original document page 227</formula>em que cada Z1 é hidrogênio ou Cj-Có alquila e Rg é Η, OH, ou<formula>formula see original document page 227</formula>
20. Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizadopelo fato de que é de fórmula (VIII), (IX), ou (X):<formula>formula see original document page 227</formula><formula>formula see original document page 228</formula>
21. Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizadopelo fato de que é de fórmula (XI), (XII), (XIII), (XIV), ou (XV): <formula>formula see original document page 228</formula><formula>formula see original document page 229</formula> em que cada Rn é independentemente hidrogênio, metila oumetila substituído, benzila, isopropila, ciclopropila, metóxi, e hidróxi; e X4 éCl, Br, alquilsulfonilóxi, heteroalquilsulfonilóxi, cicloalquilsulfonilóxi,heterocicloalquilsulfonilóxi, arilsulfonilóxi, ou heteroarilsulfonilóxi; com acondição de que(i) em (XII), (XIV), ou (XV) quando X4 é Cl ou Br então Rnexclui isopropila e(ii) fórmula (XVIII) exclui um composto em que Z3 é <formula>formula see original document page 229</formula>
22. Composto de acordo com a reivindicação 15 e 21,caracterizado pelo fato de que é de fórmula XII, XIV, ou XV em que cada R11é hidrogênio.
23. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizadopelo fato de que é de fórmula (XIX): <formula>formula see original document page 229</formula> em que K é Ci-C6alquileno ou CrC6 heteroalquileno.
24. Composto de acordo com a reivindicação 23, caracterizadopelo fato de que K é (C(Ri2)2)e, CH2CH2(-X6-CH2CH2)f, ou CH2(-X6-CH2)fem que e é de 1 a 10, f é de 0 a 3, X6 é O, S, ou NR!2 em que cada Rj2 éindependentemente hidrogênio, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8cicloalquila, ou heterociclila.
25. Composto de acordo com a reivindicação 21, caracterizadopelo fato de que é de fórmula (XVII) ou (XVIII):<formula>formula see original document page 230</formula>em que e é de 0 a 4, X4 é Cl ou Br, alquilsulfonilóxi,heteroalquilsulfonilóxi, arilsulfonilóxi, ou heteroarilsulfonilóxi.
26. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizadopelo fato de que é de fórmula:<formula>formula see original document page 230</formula>em que e é de 0 a 4, e X4 é Cl, Br, alquilsulfonilóxi,heteroalquilsulfonilóxi, arilsulfonilóxi, ou heteroarilsulfonilóxi.
27. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizadopelo fato de que é de fórmula (XXII):<formula>formula see original document page 231</formula>
28. Composto de acordo com a reivindicação 4 de fórmula (II),caracterizado pelo fato de que disparador T é -CH2-Z3 ou -CH(Zi)-Z3 em queZi é Q-alquila e Z3 é: <formula>formula see original document page 231</formula> com a condição de que na fórmula (II):(i) um de R2 e R3 é H e um de R4 e R5 é H;(ii) um de R2 e R3 é Cpalquila e um de R4 e R5 é Ci-alquila; ou(iii) pelo menos um de R2-R5 seja hidroxila, amino, C3-C8cicloalquila, heterociclila, CrC6 alcóxi, CrC6 alquilamino, CrC6dialquilamino, arila, heteroarila, CrC6 acila, CrC6 heteroacila, ou aroíla ouheteroaroíla.
29. Composto de acordo com a reivindicação 4 de fórmula (II),caracterizado pelo fato de que Z3 é um grupo biorredutor selecionado dentre: <formula>formula see original document page 231</formula> com a condição de que na fórmula (I):(i) pelo menos um de RpR5 são selecionados do grupo queconsiste de 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2- heteroalquilsulfoniloxialquila epelo menos um de RpR5 são selecionados do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2- alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; ou(ii) pelo menos um de R1-R5 é selecionado do grupo queconsiste de 2-haloalquila, 2-Ci-C6 alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; e pelo menos um de NR2R3 e NR4R5 é ;ou(iii) NR2R3 e NR4R5 ambos, em conjunto, são ""kk^
30. Composto, caracterizado pelo fato de que é de fórmula: <formula>formula see original document page 232</formula> em que, Y1 é O, S, NR6 ou NSO2R6;Y2 é O, S, NR6 ou NSO2R6 em que cada R6 éindependentemente (CrC6) alquila, CrC6 heteroalquila, arila, ou heteroarila;cada R1-R4 e R1-R4 é selecionado independentemente dogrupo que consiste de hidrogênio, hidroxila, amino, CpC6 alquila, Ci-C6alcóxi, CrC6 alquilamino, Ci-C6 dialquilamino, arila, heteroarila, CpC6 acila,CrC6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla; ou, em conjunto com quaisquer doisde RpR4 ou R^-R4* formam um heterociclo; ou cada Ri-R4 e Ri-R4* éindependentemente um disparador T selecionado do grupo que consiste de-[CÍZ^-Yalv-tCÍO^q-tCCZOz-Zz-YJu-tCCZ^^t-C(Zi)=C(Z,)]g-Z3 e-[C(Zi)2-Y3]v-(S(=0)2)q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Zi)2]z-[C(Z1)-C(Zi)Jg-Z3em que cada um de z, v, q, u, e g é independentemente 0 ou 1;Y3 é S, O, ou NR7 em que cada R7 é independentementehidrogênio, hidroxila, Cr C6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, CrC6 alcóxi, CrC6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila,heteroarila;Y4 é O5 S, ou -NR7-C(O)-O-;cada Zi e Zi é independentemente hidrogênio, halogênio, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, arila, heteroarila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, CrC6 acila, CrC6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla;Z2 e <formula>formula see original document page 233</formula> em que cada Xl é independentemente N ou CR8 em que R8 éindependentemente hidrogênio, halogênio, nitro, ciano, CHF2, CF3, CO2H,CrC6 alquila, Ci-C6 heteroalquila, CrC6 cicloalquila, CrC6 alcóxi, Cr C6alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila, e CON(R7)2;X2 é NR7, S, ou O; eZ3 é um grupo biorredutor apresentando a fórmula: <formula>formula see original document page 233</formula> cada Z é independentemente C, S, ou P; cada t éindependentemente 1 ou 2; cada r é independentemente O ou 1;K é CrC6 alquileno, CrC6 heteroalquileno, arileno, ouheteroarileno; com a condição de que na fórmula (XXI)(i) pelo menos um de Ri-R4 e um R^-R4* seja selecionado dogrupo que consiste de 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2- arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila;(ii) pelo menos um de R1-R4 e R^-R4* seja selecionado dogrupo que consiste de 2-haloalquila, 2-C1-C6 alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2- arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; e um de NR2R3 e NR2*R3* seja ^ ou(iii) NR2R3 e NR2*R3* em conjunto, sejam ambos ^^^ eum isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica de isômeros, bioisósteroes, farmacóforos, um sal, solvato, hidratofarmaceuticamente aceitável, ou uma pró-droga dos mesmos.
31. Composto, caracterizado pelo fato de que é de fórmula (XXI):<formula>formula see original document page 234</formula>em que, Y1 é O, S, NR6 ou NSO2R6;Y2 é O, S, NR6 ou NSO2R6 em que cada R6 éindependentemente CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, arila, ou heteroarila;cada R2-Rs e R2*-R5* é selecionado independentemente dogrupo que consiste de hidrogênio, hidroxila, CrC6 alquila, CpC6 alcóxi, CrC6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila, heteroarila; ou, em conjunto comquaisquer dois de R2*-R5* formam um heterociclo; ou cada R2*-R5* éindependentemente um disparador T selecionado do grupo que consiste de-[C(Z1)2-Y3]v-[C(=0)-0]q-[C(ZI)2-Z2-Y4]u-[C(Z1)2]z-[-C(Z1)=C(Z1)VZ3 e-[C(Z1)2-Y3]v-(S(=0)2)q-[C(Z1)2-Z2-Y4]u-[C(Z1)2]z-[C(Zi)=C(Zi)]g-Z3 em que cada um de z, v, q, u, e g é independentemente Oou 1;hidrogênio, hidroxila, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, CrC6 alcóxi, CrC6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila,heteroarila;C6 alquila, CrC6 heteroalquila, arila, heteroarila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, Ct-C6 acila, CrC6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla;em que cada Xj é independentemente N ou CR8 em que R8 éindependentemente hidrogênio, halogênio, nitro, ciano, CHF2, CF3, CO2H,CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, CrC6 cicloalquila, CrC6 alcóxi, CrC6alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila, e CON(R7)2;X2 é NR7, S, ou O; eZ3 é um grupo biorredutor apresentando a fórmula:Y3 é S, O, ou NR7 em que cada R7 é independentementeY4 é O, S, ou -NR7-C(=0)-0-;cada Zi e Zi é independentemente hidrogênio, halogênio, CrZ2 é<formula>formula see original document page 236</formula>em que Y4 é definido como acima;com a condição de que na fórmula (XXII):(i) pelo menos um de R2-R5 e um de R2*-R5* seja selecionadodo grupo que consiste de 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2- arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila;(ii) pelo menos um de R2-Rs e R2*-R5* é selecionado do grupoque consiste de 2-haloalquila, 2-C1-C6 alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2- arilsulfoniloxialquila, e 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; e pelo menos um de NR2R3 e NR2*R3* seja^^^ ou(iii) NR2R3 e NR2*R3* em conjunto, sejam ambos ^^^^ eum isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica de isômeros, bioisósteroes, farmacóforos, um sal, solvato, hidratofarmaceuticamente aceitável, ou uma pró-droga dos mesmos.
32. Composto, caracterizado pelo fato de que é de fórmula (XXVI)<formula>formula see original document page 237</formula> em que, Y1 é O, S, NR6 ou NSO2R6;Y2 é O, S, NR6 ou NSO2R6 em que cada R6 éindependentemente (CrC6)alquila, CrC6 heteroalquila, arila, ou heteroarila;cada R2-R5 e R2*-R5* é selecionado independentemente dogrupo que consiste de hidrogênio, hidroxila, Ci-C6 alquila, Ci-C6 alcóxi, CrC6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila, heteroarila; ou, em conjunto comquaisquer dois de R2-R5 ou R2*-R5* formam um heterociclo;cada disparador T é selecionado do grupo que consiste de-[C(Zi)2-Y3]v-[C(=0)-0]q-[C(Z,)2-Z2-Y4]u-[C(Z,)2]z-[-C(Zi)=C(Zi)]g-Z3 e-[C(Zi)2-Y3]v-(S(=0)2)q-[C(Z,)2-Z2-Y4]u-[C(Z,)2]z-[C(Zi)=C(Zi)]g-Z3 em que cada um de z, v, q, u, e g é independentemente 0ou 1;Y3 é S, O, ou NR7 em que cada R7 é independentementehidrogênio, hidroxila, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, CrC6 alcóxi, CrC6 alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila,heteroarila;Y4 é O, S, ou -NR7-C(=0)-0-;cada Zi e Zi é independentemente hidrogênio, halogênio, CrC6 alquila, CrC6 heteroalquila, arila, heteroarila, C3-C8 cicloalquila,heterociclila, CrC6 acila, CrC6 heteroacila, aroíla, ou heteroaroíla;Z2 é<formula>formula see original document page 238</formula> em que cada Xi é independentemente N ou CRg em que R8 éindependentemente hidrogênio, halogênio, nitro, ciano, CHF2, CF3, CO2H,Ci-C6 alquila, CrC6 heteroalquila, CrC6 cicloalquila, CrC6 alcóxi, CrC6alquilamino, CrC6 dialquilamino, arila, e CON(R7)2;X2 é NR7, S, ou O; eZ3 é um grupo biorredutor apresentando a fórmula: <formula>formula see original document page 238</formula> cada Z é independentemente C, S, ou P; cada t éindependentemente 1 ou 2; cada r é independentemente O ou 1;K é CrC6 alquileno, CrC6 heteroalquileno, arileno, ouheteroarileno;com a condição de que na fórmula (XXI)(i) pelo menos dois de RrR4 e RrR4* sejam 2-haloalquila, 2-alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, ou 2 heteroalquil-sulfoniloxialquila;(ii) pelo menos um de Ri-R4 e Ri-R4* seja 2-haloalquila, 2-CrC6 alquilsulfoniloxialquila, 2-heteroalquilsulfoniloxialquila, 2-arilsulfoniloxialquila, ou 2-heteroalquilsulfoniloxialquila; e um de NR2R3 eNR2*R3* seja ou(iii) NR2R3 e NR2 -R3* em conjunto sejam ambos ^^^^um isômero individual ou uma mistura racêmica ou não-racêmica de isômeros, bioisósteroes, farmacóforos, um sal, solvato, hidratofarmaceuticamente aceitável, ou uma pró-droga dos mesmos.
33. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 15,caracterizado pelo fato de que disparador T é selecionado do grupo queconsiste de:
34. Composto de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que Z1 é hidrogênio, metila, ou etila; R7 é metila, trifluoroetila,etila, propila, e ciclo-hexila; e R8 é OH ou 0P(=0)(0H)2; R9 é hidrogênio ouC1-C6 alquila e cada X4 é halo ou RsuiS(=0)20-.
35. Composto, caracterizado pelo fato de que é de fórmula:<formula>formula see original document page 239</formula>em que cada X4 são ambos Cl ou Br.
36. Composto de acordo com a reivindicação 35, caracterizadopelo fato de que é de fórmula:<formula>formula see original document page 240</formula>
37. Composto de acordo com a reivindicação 35, caracterizadopelo fato de que é de fórmula: <formula>formula see original document page 240</formula>
38. Formulação farmacêutica, caracterizada pelo fato de quecompreende o composto como definido na reivindicação 35 e um excipiente,veículo, ou diluente farmaceuticamente aceitável.
39. Uso de um composto da reivindicação 35, caracterizadopelo fato de ser na manufatura de um medicamento para tratar câncer.
40. Formulação farmacêutica, caracterizada pelo fato decompreender o composto como definido na reivindicação 36 e um excipiente,veículo, ou diluente farmaceuticamente aceitável.
41. Formulação farmacêutica, caracterizada pelo fato decompreender o composto como definido na reivindicação 37 e um excipiente,veículo, ou diluente farmaceuticamente aceitável.
42. Uso de um composto como definido na reivindicação 36,caracterizado pelo fato de ser na manufatura de um medicamento para tratarcâncer.
43. Uso de um composto como definido na reivindicação 37,caracterizado pelo fato de ser na manufatura de um medicamento para tratarcâncer.
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