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MEMOIRE DESCRIPTIF à l'appui d'une demande de
BREVET D ' I N V E N T I O N pour "Dérivés de morpholinyle daunorubicine, de morpholinyle doxorubicine et leurs analogues" par la Société : SRI INTERNATIONAL, 333 Ravenswood Avenue, Room AA273, MENLO PARK, Californie 94025. (Etats-Unis d'Amérique).
Priorité de deux demandes de brevet déposées aux Etats-Unis d'Amérique, les 20 juillet 1982, sous le NO 400. 120 et le 24 mai 1983, sous le NO 496. 122, aux noms de Carol Walker MOSHER, George Low TONG et Edward Me Intosh ACTON, dont la demanderesse est l'ayant droit. Inventeurs : Carol Walker MOSHER, George Low TONG et Edward Me Intosh ACTON.
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DERIVES DE MORPHOLINYLE DAUNORUB. ICINE, DE MORPHOLINYLE
DOXORUBICINE ET LEURS ANALOGUES
L'invention se situe dans le domaine de la chimie de l'antracy- cline. Elle concerne plus particulièrement des analogues des anthracyclines, doxorubicine et daunorubicine, utiles en tant qu'agents antitumoraux.
La doxorubicine (adriamycin) décrite et revendiquée dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 3. 590.028 de F. Arcamone et al., est peut être la nouvelle drogue anti-cancer la plus utile en usage actuellement. En même temps que la daunorubicine, elle est un agent essentiel dans le traitement d'un nombre remarquablement important de tumeurs massives et de leucémies. Malheureusement, de nombreux patients ayant ce type de tumeur ne sont pas sensibles à ces produits et pratiquement aucun des patients présentant des types de tumeurs sérieuses (cancer du colon, mélanome) n'y est sensible. En outre, sur quelques patients, un traitement chronique occasionne au coeur des dommages irréversibles pouvant conduire à une issue fatale si le traitement est poursuivi.
Ainsi, il existe un besoin important de corps analogues donnant un meilleur taux de réponse, un spectre de réponse plus large ou une cardiotoxicité réduite. Des agents plus efficaces et moins toxiques sont amplement recherchés et ils sont l'objet principal de la présente invention. Les nouveaux corps analogues les plus actifs jusqu'à maintenant, à en juger d'après des résultats de sélection par un test largement utilisé contre la leucémie P.
388 de la souris dans un programme de traitement à trois doses (q4d 5,9, 13), sont deux dérivés lipophiles (AD32 et N, N-dibenzyldaunorubicine) qui requièrent des doses significativement plus élevées et qui ne réussissent pas à réagir avec le DNA in vitro bien que l'on pense que le DNA est une cible biologique de premier ordre pour la série de l'anthracycline. La plupart des dérivés N-alkylés ont été actifs dans les expériences anti-tumorales contre la
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leucémie P. 388 de la souris, mais ils ne diffèrent pas significativement de la doxorubicine ou de la daunorubicine. Quelques uns de ces dérivés-. ont été inactifs.
Une grande partie de l'historique et de l'art antérieur de la doxorubicine et de ses dérivés analogues de l'anthracyclin se trouve dans 11artic1e "Adriamycine" de David W. Henry, ACS Symposium Series, No 30, Cancer Chemotherapy, American Chemical Society, pp. 15-57 (1976) et dans le livre Doxorubicine de Federico Arcamone, Academic Press, 1981. L'AD32est décrit dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 4. 035.566 daté du 12 juillet 1977.
La 5-iminodaunorubicine est décrite dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 4. 109.076 publié le 22 août 1978 de David W. Henry et George L. Tong cédé au titulaire de la présente invention. La doxorubicine équivalente est décrite dans"Synthesis and Preliminary Antitumor Evaluation of 5-Iminodoxorubicin", J. Medicinal Chem., 24,669 (1981) par Edward M. Acton et George L. Tong. La 5-iminodaunorubicine retient une activité qui réduit les effets secondaires tandis que la 5-iminodoxorubicine présente une activité améliorée mais nécessite des doses plus élevées.
La 3'-déamino-3'- (4-morpho1inyle) daunorubicine décrite dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 4. 301.277 publié le 17 novembre 1981 de Edward M. Acton et Carol W. Moscher et cédé au titulaire de la présente invention est active au quarantième de la dose de la doxorubicine mais donne une valeur T/C sensiblement identique (166% contre 160% pour la P. 388). Ce composé et sa préparation et ses propriétés sont aussi décrits dans"Enhanced Antitumor Properties of 3'- (4-morpho1iny1e) et 3'- (4-méthoxy-l-pipéridinyl) Derivatives of 31-deaminodaunorubicin", J. Medicinal Chem., 25, PP. 18-24 (1982) par Carol W. Mosher, Helen Y. Wu, Allan N. Fujiwara et Edvard M. Acton.
Un procédé général d'alkylation réductrice pour la préparation de nouveaux dérivés d'anthracyclines semi-synthétiques est décrit dans "Adriamycin Analogs. 3. Synthesis of N-A1ky1ated Anthracyclines With Enhanced Efficacy and Reduced Cardiotoxicity", J. Medicinal Chem., 22, pp. 912-918 (1979) par G. L. Tong, H. Y. Wu, T. H. Smith et D. W. Henry.
Le sujet de cet art antérieur est cité ici spécifiquement à titre de référence.
On a maintenant trouvé un nouveau groupe de dérivés de la daunorubicine et de la doxorubicine. Ces composés sont représentés par la formule générale 1 :
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EMI4.1
dans laquelle :
R représente CO-CH3 ou CHOH-CH3 dans le cas des dérivés de la dauno- rubicine ou CO-CH20H ou CHOH-CH20H dans le cas des dérivés de la doxorubicine ;
X représente 0 ou NH ; et,
A représente soit un groupe cyano (CN) soit un hydrogène avec la limitation que si X représente 0, A doit être un groupe cyano.
Lorsque A représente un hydrogène, ces composés peuvent aussi bien exister en tant que sels d'addition d'acides. Ces sels sont un aspect additionnel de la présente invention.
Un autre aspect plus large de la présente invention concerne des dérivés de ces composés formés par une ou plusieurs modifications représentées dans l'état de la technique pour être efficaces avec des produits analogues de la daunorubicine et de la doxorubicine. Ces modifications impliquent d'autres changements dans le groupe R, l'élimination du méthoxy en position 4, des changements dans les substituants du carbone 4', des changements en A et une substitution dans le cycle morpholinyle.
Les composés englobés par la formation de ces divers dérivés sont généralement classés sous le nom de morpholinyle ou analogues des dérivés morpholinyliques de produits du type de la daunorubicine et de la doxorubicine et sont représentés par la formule générale II :
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EMI5.1
EMI5.2
dans laquelle :
R représente-CO-CHa dans le cas des dérivés simples de la daunorubic-ine,-CO-CHsOH dans le cas des dérivés simples de la doxorubicine, un hydroxy, un radical alkyle contenant de 1 à 3 atomes de carbone tel que-CHzCHg, un radical terminal hydroxyalkyle comportant de 1 à 3 atomes de carbone tel que-CHz-OH des esters et diesters d'acides organiques, comportant de 2 à 7 atomes de carbone < de-CO-CHOH, - compris par exemple les acétate (-OAc), propionate (-OPr), benzoate (-OBz) et glycolate (-O-Gl) tels que -CO-CH2-OAc,-CO-CH2-OBz,-CO-CH2-OPr,-CO-CH2-OG1,-CH - (OAc) CH3 et-CH (OBz) CH3 ou analogue ; un remplacement par un alkyle-ou comportant de 1 à 6 atomes de carbone, de l'un ou plusieurs des hydroxyles de-CO-CHsOH,-CHOH-CHs, et-CHOH-CHsOH, tels que-CH (OCH3)-CH3,-CO-CH20-CH3,-CO-CH2O-C2Hs, - ou analogue ;
et des dérivés 13-cétimine de-CO-CH3 - tels que-C (NNHBz) CH3,-C - ou analogue ; Y est habituellement un méthoxy (-OCH3) mais peut aussi être un hydrogène ; X représente =0 ou =NH ; R'et R"ensemble un hydrogène et un hydroxy (c'est-à-dire
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que, soit R'soit R''est un hydroxy, l'autre étant un hydrogène), sont tous les deux des hydrogènes pu R'est un O-méthory de R"est un hydrogène ; et, A est choisi parmi un cyano (-C=N) et un hydrogène tel que exposé ci-dessus. Lorsque A représente un hydrogène, ces composés peuvent aussi exister sous la forme de sels d'addition d'acides.
Z est choisi parmi oxygène, soufre,-CH-
EMI6.1
I dans laquelle : R" 1 est un radical alkyle comportant de 1 à 3 atomes de car- bone ; et -CH2-, avec la réserve que lorsque Z est un-CH2-ou-CH-
EMI6.2
A est un-C=N.
OR'''Préparation des composés de la formule générale II
La préparation de ces composés est caractérisée en ce que l'on fait réagir la daunorubicine et la doxorubicine connues et les corps analogues de celles-ci de structure :
EMI6.3
dans laquelle :
R, R', R'', X et Y ont les significations données ci-dessus, dans un milieu organique polaire aqueux mixte avec un composé de la structure :
EMI6.4
ou un précurseur convenable de celui-ci et dans lequel Z est choisi parmi
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les oxygène, soufre, -CH2-, -CH-, et R'"'ayant la signification indi- OR"' quée ci-dessus, la réaction étant mise en oeuvre en présence d'un sel de cyanoborohydrure tel qu'un cyanoborohydrure de métal alcalin et en ce que les composés désirés sont isolés et purifiés d'une manière connue en soi.
Ces composés sont apparentés aux drogues anti-cancers déjà connues, daunorubicine et doxorubicine (adriamycine), ils sont préparés à partir de ceux-ci par synthèse chimique et par des techniques de. formation de. dérivés et ce sont des agents actifs contre le cancer. Il s'avère qu'ils réunissent deux propriétés avantageuses et très recherchées : efficacité anti-tumeur élevée et faiblesdoses exigées. Ainsi, ils offrent la promesse d'une efficacité élevée avec des effets secondaires tels que la cardiotoxicité liée au dosage réduite si on les compare aux produits décrits cidessus.
Par d'autres aspects, cette invention procure des préparations pharmaceutiques contenant ces nouveaux dérivés aussi bien qu'une méthode de traitement du cancer des mammifères par administration de ces préparations à un mammifère ayant besoin de ce traitement.
La présente invention procure des dérivés morpholinyliques de l'iminodaunorubicine et l'iminodoxorubicine et leurs sels pharmaceutiquement acceptables aussi bien que des dérivés cyanomorpholinyliques de daunorubicine, de doxorubicine, d'iminodaunorubicine et d'iminodoxorubicine. Ces composés sont énumérés dans le tableau I.
TABLEAU I
Composés de la présente invention
EMI7.1
<tb>
<tb> X <SEP> A <SEP> R <SEP> Nom <SEP> du <SEP> composé
<tb> NH <SEP> H <SEP> CO-CH3 <SEP> 3'-déainino-3'- <SEP> (4''-morpholinyle)-5-iminodauno- <SEP>
<tb> rubicine <SEP> et <SEP> ses <SEP> sels <SEP> pharmaceutiquement <SEP> acceptables
<tb> NH <SEP> H <SEP> CHOH-CH3 <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (4''-morpholinyle)-13-dihydro- <SEP>
<tb> 5-iminodaunorubicine <SEP> et <SEP> ses <SEP> sels <SEP> pharmaceutiquement <SEP> acceptables
<tb> NH <SEP> H <SEP> CO-CH20H <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (4''-morpholinyle)-5-iminodoxo- <SEP>
<tb> rubicine <SEP> et <SEP> ses <SEP> sels <SEP> pharmaceutiquement <SEP> acceptables
<tb> NH <SEP> H <SEP> CHOH-CH20H <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (4''-morpholinyle)
-13-dihydro- <SEP>
<tb> 5-iminodoxorubicine <SEP> et <SEP> ses <SEP> sels <SEP> pharmaceutiquement <SEP> acceptables
<tb>
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TABLEAU I Composes de la présente invention (suite)
EMI8.1
<tb>
<tb> X <SEP> A <SEP> R <SEP> Nom <SEP> du <SEP> composé
<tb> 0 <SEP> CN <SEP> CO-CH3 <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (3''-cyano-4''-morpholinyle)- <SEP>
<tb> daunorubicine
<tb> 0 <SEP> CN <SEP> CHOH-CH3 <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (3''-cyano-4"-morpholinyle)- <SEP>
<tb> 13-dihydro-daunorubicine
<tb> 0 <SEP> CN <SEP> CO-CH20H <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (3'¯'-cyano-4''-morpholinyle) <SEP> : <SEP> r <SEP>
<tb> doxorubicine.
<tb>
0 <SEP> CN <SEP> CHOH-CH20H <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (3''-cyano-4''-morpholinyle) <SEP> - <SEP>
<tb> 13-dihydrodoxorubicine
<tb> NH <SEP> CN <SEP> CO-CH3 <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (3'' <SEP> cyano-4''-morpholinyle)- <SEP>
<tb> 5-iminodaunorubicine
<tb> NH <SEP> CN <SEP> CHOH-CH3 <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (3''-cyano-4''-morpholinyle)-13- <SEP>
<tb> dihydro-5-iminodaunorubicine
<tb> NH <SEP> CN <SEP> CO-CH20H <SEP> 3'-deamino-3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)-5iminodoxorubicine
<tb> NH <SEP> CN <SEP> CHOH-CH20H <SEP> 3'-déamino-3'-(3"-cyano-4''-morpholinyle)-13dihydro-5-iminodoxorubicine
<tb>
EMI8.2
Cinq de ces composés sont préférés à cause de leur excellente activité comme agents anti-tumeurs. Ce sont les : 3'-déamino-3'- ; 31-déamino-3'- ; 3'-déamino-3'- ; 3'-déamino-3'- et, 31-déamino-3'- Le premier de ces cinq dérivés est celui que l'on plus.
Les quatre premiers composés suivant la présente invention énumérés dans le tableau 1 peuvent être les bases libres indiquées sur le tableau I ou ils peuvent être des sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables de ces bases. Les sels d'addition d'acides offrent l'avantage d'être solubles dans l'eau et dans des solvants aqueux mixtes tels que des solvants eau-alkanol, ou eau-alkanediols. Des exemples de ces solvants mixtes sont les mélanges eau-propylène glycol, eau-éthanol, eau-éthylène glycol, l'eau salée, divers autres milieux injectables aqueux et analogues. Les bases libres sont solubles dans des solvants organiques moins polaires tels que le chloroforme, le chlorure de méthylène, des solvants mixtes chloroforme-méthanol et analogues. Ils peuvent aussi être utilisés
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sous forme de suspension.
Les sels sont les produits d'addition d'acides des bases libres avec un acide pharmaceutiquement acceptable. Un acide"pharmaceutiquement acceptable"est un acide qui est non toxique et généralement employé dans les produits pharmaceutiques. Des exemples de ces acides sont les acides minéraux tels que les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique et phosphorique et des acides organiques tels que les acides carboxyliques, par exemple acétique, glycolique, maléique, malique, hydroxymaléique, T tartrique, citrique et salicylique et les acides organosulfoniques par exemple l'acide méthanesulfonique et l'acide paratoluènesulfonique.
Des mélanges de deux acides ou plus peuvent être utilisés comme on peut utiliser des mélanges de une base libre ou plus avec un ou plusieurs sels d'addition d'acides. Pour des raisons de simplicité et de solubilité facile, on préfère les sels de l'acide chlorhydrique et de l'acide bromhydrique.
Comme noté ci-dessus, ces composés peuvent aussi être présents sous la forme de leurs dérivés. Ces dérivés sont formés de façon à accroî- tre la solubilité des composés ou de façon à faire varier d'autres propriétés physiques des composés.
Préparation de quelques composés préférés suivant l'invention
Ces composés peuvent être préparés parla voie générale suivante :
Premièrement, on fait réagir de la daunorubicine ou de la doxorubicine (sous forme d'un sel d'addition d'acide) disponible dans le commerce dans des conditions d'alkylation réductrices avec de la 2, 2'-oxydiacé- aldéhyde O=CH CH=O
CH2-O-CH2 Cette alkylation donne un produit mixte contenant quatre composants principaux.
Dans le cas de la daunorubicine, ces composants sont :
EMI9.1
3'-déamino-3'- daunorubicine, 3'-déamino-3'- 3'-déamino-3'- et 3'-déamino-3'- Dans le cas de la doxorubicine, le produit de la réaction contient : 3'-déamino-3'- doxorubicine, 3'-déamino-3'- 3'-déamino-3'- doxorubicine, et 3'-déamino-3'- La 2, 2'-oxydiacétaldéhyde peut se former par hydrolyse acide de la
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2, 21-oxydiacétaldéhyde bis (diéthyl acétal)
EMI10.1
par la méthode de Field et al., brevet belge 655.436, ou par coupure du 1, 4-anhydroérythritol
EMI10.2
par la méthode de Barry et al., Carbohydrate Research, 7,299 (1968) and Greenberg et al., Carbohydrate Research,-35, 195 (1974).
L'alkylation réductrice peut être mise en oeuvre en utilisant un excès du dialdéhyde dans un milieu organique polaire aqueux mixte tel que eau-acétonitrile, généralement à un pH d'environ 7 en présence d'un agent de réduction tel qu'un cyanoborohydrure de métal alcalin, par exemple cyanoborohydrure de sodium ou de potassium. C'est une réaction relativement facile que l'on peut habituellement achever en une heure ou moins à la température ambiante. L'alkylation réductrice est illustrée dans les exemples et elle est aussi indiquée dans le brevet des Etats Unis cité ci-dessus n 4. 301.277 et dans J. Médicinal Chem., 25, pages 18-24 (1982).
L'élaboration du produit de la réaction mixte peut être mise en oeuvre par toute méthode permettant d'effectuer l'isolation et la séparation souhaitées. Une extraction à l'acide du produit de la réaction est efficace pour séparer les produits non substitués cyano pouvant être extraits à l'acide des matériaux substitués par un cyano insoluble dans l'acide. Les paires de produits qui en résultent peuvent alors être sépa- rées en composés individuels par différentes méthodes de chromatographie telles qu'une chromatographie en couche à l'échelle préparative, une chromatographie sur colonne ou une chromatographie liquide à haute performance à l'échelle préparative.
Les composés 5-imino peuvent être facilement et directement préparés à partir des composés 5-oxo isolés en utilisant la méthode décrite dans l'article indiqué ci-dessus J. Médicinal Chem., 24, page 669 (1981). Dans cette méthode, les produits 5-oxo sont mis en contact avec un excès d'ammoniac alcoolique à des températures faibles à modérées telles que de-25 C à +25 C pendant environ 0,5 à environ 100 heures. Dans le cas de la 3'-déamino-3'- (4''-morpholinyle) doxorubicine et de la 3'-déamino-3' (3''- cyano-41'-morpholinyle) doxorubicine, il est nécessaire de bloquer l'hydroxyle sur le carbone n 14 avant le traitement à l'ammoniac. On peut utiliser n'importe quel groupe protecteur labile par action d'un acide faible.
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A cause de son utilisation répandue en chimie pharmaceutique, le métoxy- trityle est un groupe protecteur que l'on préfère. La fonctionnalité trityle peut être introduite en traitant la 3'-déamino-3' (4''-morpholinyle) doxorubicine ou la 31-déamino-3'- (31'-cyano-4''-morpholinyle) doxorubicine avec un excès de p-anisylchlorodiphénylméthane à la température ambiante ou analogue. Après l'achèvement de la réaction avec l'ammoniac, le 14-hydroxyle peut être régénéré par contact avec un acide tel que l'acide acétique ou l'acide trifluoroacétique aqueux froid.
Dérivés et analogues
En outre, la présente invention procure des dérivés et analogues des douze composés primaires précédents. Comme l'indique la formule générale II, ces dérivés peuvent comprendre uneou plusieurs des modifications suivantes des composés primaires. a.-un ou plusieurs de n'importe quel des groupes hydroxyles présents en R peuvent être présents sous la forme d'esters d'acide organique comportant de 2 à 7 atomes de carbone, y compris les acides alkanoï- ques, les acides oxyalkanoïques, les acides hydroxyalkanoïques et l'acide benzoïque. Cette modification peut donner lieu à des groupes
R tels qu'indiqués sur le tableau II.
TABLEAU II
Esters de R
EMI11.1
<tb>
<tb> Acide <SEP> Ester <SEP> R
<tb> Acide <SEP> acétique.............. <SEP> -CO-CH2-O-C0CH3 <SEP>
<tb> - <SEP> CH <SEP> (OCOCHa)-CH <SEP> -O-COCHa
<tb> - <SEP> CH <SEP> (OCOCH3)-CH20H <SEP>
<tb> - <SEP> CH <SEP> (OCOCH3)-CH3 <SEP>
<tb> Acide <SEP> propionique <SEP> ........... <SEP> -CO-CH2-O-COC2H5
<tb> - <SEP> CH <SEP> (OCOC2H5)-CH2-0-COC2H5 <SEP>
<tb> -CH <SEP> (OCOC2H5)-CH3
<tb> Acide <SEP> glycolique <SEP> ............ <SEP> -CO-CH2-O-COCH2OH
<tb> -CH <SEP> (OCOCH2OH)-CH2-OCOCH2OH
<tb> -CH <SEP> (OCOCH2OH)-CH3
<tb> Acide <SEP> benzoïque <SEP> ............ <SEP> -CO-CH2-O-COC6H5
<tb> -CH <SEP> (OCOC6H5)-CH2-OCOC6H5
<tb> -CH <SEP> (OCOC6H5)-CH3
<tb> Acides <SEP> plus <SEP> complexes <SEP> tels <SEP> que
<tb> HOOC-CH <SEP> 2 <SEP> ............ <SEP> -CO-CH2-O-COCH(OC2H5)2
<tb> etc.
<tb>
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Les esters de doxorubicine ainsi décrits {Arcamone et al., J.
Medicinal Chem., 17,335 (1974) ; Maral et al., brevet belge 848.219 (10 mai 1977)} peuvent être facilement transformés par la méthode d'alkylation réductrice décrite ici en dérivés esters correspondants des composés suivant la présente invention. b.-Un ou plusieurs de l'un quelconque des hydroxyles présents en R peuvent être présents sous la forme d'éthers-notamment d'éthers d'alkyle comportant de 1 à 6 atomes de carbone ou éthers d'aryle comportant environ 6 à 7 atomes de carbone.
Des motifs R"éther"représentatifs sont indiqués sur le tableau III.
TABLEAU III
Ethers de R
EMI12.1
<tb>
<tb> Ether <SEP> méthy1 <SEP> ique............ <SEP> -CO-CH2-OCH3 <SEP>
<tb> - <SEP> CH <SEP> (OH)-CH2-OCH3 <SEP>
<tb> Ether <SEP> éthylique <SEP> ............ <SEP> -CO-CH2-OC2H5
<tb> - <SEP> CH <SEP> (OH)-CH2-OC2Hs <SEP>
<tb> Ether <SEP> butylique <SEP> ............. <SEP> -CO-CH2OC4H9
<tb> Ether <SEP> phénylique <SEP> ............ <SEP> -CO-CH2-O-C6H5
<tb> - <SEP> CH <SEP> (OH)-CH2-OC6Hs <SEP>
<tb>
Ces éthers-14 de doxorubicine ont été décrits (Masi et al.. Il
Farmaco, Ed. Sci., 34,907 (1979)} et peuvent être utilisés comme matériaux de départ dans la méthode d'alkylation réductrice suivant la présente invention. c.-les substituants du carbone 4'dans le cycle du"sucre"peuvent être modifiés.
Les dérivés 4'-0-méthyle (dans le motif sucre) de la doxo- rubicine et de la daunorubicine s'obtiennent facilement (Cassinelli,
J. Medicinal Chem., 22,121 (1979)} et se transforment en composés suivant la présente invention. D'autres modifications de structure connues en position 4'du motif du sucre sont les dérivés 4'-doxy (pas de OH) et 4'-épi (OH en haut) de la doxorubicine et de la dau- norubicine (Suarato et al., Carbohydrate Res. 98, cl (1981)} qui manifestent les propriétés pharmaceutiques prometteuses.
Ces compo- sés se transforment facilement par le procédé d'alkylation réduc- trice en composés correspondants suivant la présente invention. d.-les corps analogues 4-déméthoxy de la doxorubicine et de la dauno- rubicine (pas de CH3 dans le cycle-A de l'aglycone) s'obtiennent facilement (Arcamone et al., Cancer Test Rpts., 60,829 (1976) ;
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EMI13.1
Arcamone et al., brevet allemand n 652. 391 (26 mai 1977)} et sont transformés en composés suivant la présente o Il e.-les groupes carbonyles (-C-) des motifs R de la daunorubicine et de la doxorubicine peuvent être facilement transformes en groupes NIl (-C-) par les méthodes classiques de transformation des cétones en oximes, hydrazomes et autres cétimines. Le tableau IV énumère des cétimines R représentatives.
TABLEAU IV Cetmnnes de R - C (NOH)-CH20H -C (NOH)-CH3 -C (NOCH3)-CH2OH -C (NOCH3)-CH3 -C (NNHCOC6H5)-CH2OH - C (NNHCOC6Hs)-CH3 - C (NNHCONH2) CH20H -C(NNHCONH2)-CH3 et analogue.
Ces dérivés R-13-cétimine peuvent être facilement transformés en composés suivant la présente invention par la méthode d'alkylation réductrice décrite ci-dessus. f.-le motif R peut être simplifié pour éliminer le carbonyle et donner lieu aux simples motifs R hydroxyles représentés sur le tableau V.
TABLEAU V
R simplifiés - OH - CH20H -C2H4OH
Ces dérivés de daunorubicine et de doxorubicine sont indiqués dans
Penco et al., brevet allemand n 2. 757.057, 7 juillet 1978 et
Penco et al., J. Antibiotics, 30 : 764 (1977) et ils sont transformés en composés suivant la présente invention par alkylation réductrice. g. - 2-cyanopipéridino (Z = CH2) et le 2-cyano-4-méthoxypipéridino (Z =
CHOCH3) (formule II) : Les dérivés pipéridino de daunorubicine et de doxorubicine ont été décrits dans les brevets des Etats Unis suivants :
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EMI14.1
1 N brevet des Etats Unis d'Amérique nO 202. 967, 13 mai 1980 ) 1 N brevet des Etats Unis d'Amérique n'-4.
OCHs
EMI14.2
Les dérivés correspondants de 2-cyano-l-pipéridinyle peuvent être
4.synthétisés en transformant les composés ci-dessus par l'acide méta- chloroperbenzoîque en solution dans le dichlorométhane en N-oxydes, et par réarrangement de N-oxydes par l'anhydride trifluoroacétique en présence de l'ion cyanure (Polonovski-Potier-Husson).
EMI14.3
Z = -CH2- OU CHOCH3
Lorsque la méthode d'alkylation réductrice suivant la présente invention est mise en oeuvre sur la daunorubicine sauf que l'on utilise de la 2, 21-thiobisacétaldéhyde KCHCHsSCHCH ; Carbohydrate Res., 110, 195 (1982)} à la place de 2, 2'-oxybisacétaldéhyde et que le pH est faiblement acide (pH 6 au lieu de pH 7,2), on obtient le dérivé thiomorpholino (A=H) (formule I) de la daunorubicine. Ce procédé est aussi actif contre la leucémie P. 388 de la souris (T/C = 169%) que la doxorubicine (T/C = 160%), bien qu'une plus forte dose soit requise (50 mg/kg au lieu de 8 mg/ kg). De même, le dérivé thiomorpholino de la doxorubicine se forme lorsque l'on utilise de la doxorubicine dans cette réaction.
La fraction de produit neutre provenant de ces réactions et qui subsiste dans la couche organique après extraction avec de l'acide aqueux pour éliminer le dérivé thiomorpholino sous la forme de sel d'acide soluble dans l'eau contient les dérivés correspondants 3-cyano-1-thio-4-morpholinyle (A = CN) de la daunorubicine et de la doxorubicine.
Toutes les descriptions faites ci-dessus des méthodes de formation des dérivés sont incorporées ici à titre de référence.
L'invention sera expliquée plus en détail à l'aide des exemples
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suivants. Ils sont présentés pour illustrer l'invention et non pour en limiter la portée.
EXEMPLE 1
Préparation, séparation et identification de la 3'-déamino-3'-
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(3''-cyano-4''-morpholinyle) daunorubicine A.-En suivant la méthode de préparation du bromhydrate de 3'-déamino- 3'-morpholinodaunorubicine indiquée dans Mosher et al., J. Medicinal
Chem., 25, pages 18 à 24 (1982), on prépare un produit de réaction
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brut contenant de la 3'-déamino-3'- de la 31-déamino-3'- de (4''-morpholinyle) daunorubicine,la 3'-déamino-3'- (3''-cyano-4''-morpholinyle) daunorubicine et de la 3'-déamino-3'- (3''-cyano-4''-morpholinyle) -13-dihydrodaunorubicine.
(cet article est incorporé ici à titre de référence). Le matériau brut est extrait avec CHC13 comme cela y est noté pour éliminer les quatre produits primaires dans la phase CHC13. Une extraction exhaustive de la phase CHC13 avec du HCl 0,01 N enlève les deux produits morpholino basiques, tels que décrits dans la référence.
Le CHC13 neutre riche en produit est lavé avec une solution de
NaHC03, séché et évaporé. Les échantillons sont dissous dans un mélange 4/1 CHC13. CH30H et placés sur une colonne de chromatographie liquide à haute performance Waters Radial-Pak C-18. Il est élué par 2 ml/minute d'un ëluant 65 : 35 de tampon citrate pH 4 0,05 M :
CH3CN. Un produit (habituellement 19 à 24% du total) est élue en 6,1-6, 8 minutes tandis qu'un autre produit (habituellement de
26 à 27%) est élue à 11, 9 minutes. La détection se fait par UV à 254 nm. Comme on le montrera, le matériau à 6,1-6, 8 minutes est de la 3'-déamino-3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)-13-dihydrodauno- rubicine et le matériau à 11, 9 minutes est de la 3'-déamino-3'- (311-cyano-4"-morpholinyle) daunorubicine.
B.-Sur une plus grande échelle, on dissout 5,41 g du sous-produit solide dans 500 ml d'un mélange 9/1 de CHda-CHsOH. Cette solution est lavée avec du HCl 0,01 N (3 x 100 ml), H20 (1 x 100 ml) et NaHCOa dilué (1 x 100 ml). La phase organique est séchée, évaporée à siccité et le résidu est séché sous vide à 0,1 mm à la tempéra- ture ambiante pour donner 5,10 g de résidu vitreux. La phase aqueuse est également retenue.
C. - le résidu vitreux de la partie B., 5,09 g, est dissous dans 50 ml d'un mélange 4/1 de CH2C12-CH30H. La solution est agitée tandis
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que l'on ajoute goutte a. goutte 30 ml de CH3CN. La solution trouble qui en résulte est évaporée à siccité pour donner un résidu semi- solide que l'on triture avec 200 ml de CH3CN dans l'obscurité. Le solide insoluble est recueilli et trituré une seconde fois avec
100 ml de CH3CN. Les phases liquides des deux triturations contien- nent le produit désiré. Elles sont évaporées pour donner 2,23 g de résidu semi-solide.
0. - Le résidu semi-solide de la partie C. est dissous dans 5 ml de CHzCI et appliqué à une colonne. de 3,1 cm de diamètre intérieur x 59 cm de gel de silice de 200 à 325 mailles Mallinckrodt Silic
AR CC-7 lavéepar du CH2Cl2. La colonne est éluée avec CH2Cl2 (500 ml) et ensuite avec un mélange CH2Cl2-CH3OH (99/1,1. 500 ml ; 98/2,
1.000 ml ; 97/3,1. 500 ml ; 90/10,500 ml). Après rassemblement (frac- tions de 10 ml, surveillées par TLC) de 2.500 ml de l'éluat initial, on évapore une fraction de 190 ml pour donner 0,48 g de produit.
Le composant primaire est déterminé par chromatographie liquide à haute performance comparative et chromatographie en couche mince comme étant identique à un produit qui s'avère par la suite être la3'-déamino-3'- (3''-cyano-4''-morpholinyle)daunorubicine.
E.-On poursuit la purification de 0,35 g d'un échantillon du matériau de la partie D. tout d'abord dans l'obscurité sur cinq plaques de gel de silice de 2 mm x 20 x 20 cm avec deux développements par. un mélange CHzdz-CHsOH 29 : 1. Une bande centrale contenant 65% du poids introduit de l'échantillon est enlevée par découpage, éluée, filtrée et évaporée à siccité.
F.-Sur le produit de la partie E., en même temps que sur les autrés matériaux purifiés de façon équivalente récupérés à partie des zones latérales de chromatographie (0,18 g), on exécute une purification finale sur une colonne de 1,1 cm de diamètre intérieur x 27 cm de
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gel de silice de 200 à 400 mailles. La colonne est éluée avec un mé- lange CH2C12-EtOAc (80/20,30 ml ; 60/40,30 ml, 40/60,30 ml ;
20/80,30 ml) et ensuite EtOAc (175 ml). Après rassemblement (frac- tion de 2 ml surveillée par TLC) de 162 ml de l'eluat initial, on rassemble une fraction de 88 ml et on l'évapore, ce qui donne 0,15 g du produit.
Une analyse élémentaire de ce matériau pur vérifie que la structure est bien celle de la 3'-déamino-3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle) daunorubicine, ce que confirme une NMR de 360 MH2, l'UV, l'IR et la spectroscopie
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de masse.
L'apparition de ce produit sous la forme de mélange diastéréoiso- mère est indiquée par l'analyse en HPLC et NMR à 360 MHz. L'analyse HPLC sur une colonne Waters Radial-Pak C-18 avec un mélange tampon de citrate pH 4 0,05 M-CH3CN (60/40) à 2 ml/minute indique deux pics très proches l'un de l'autre (à 9,6 minutes et 10,2 minutes) dans le rapport 53/44.
Le spectre NMR à 360 MHz de ce matériau indique deux résonances pour les
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protons 6-OH, 11-OH, 1-H, 2-H, 3-H, l'-H, 7-H, 9-OH, 10A-H, 14-H3 et
NMR CDC13 à 360 MHz 6 13,99, 13,98 (2s, 6-OH) ; 13,25, 13,24 (2s, 11-OH) ; 8,02, 8,00 (2d, 1-H) ; 7,79, 7,77 (2t, 2-H) ; 7,40, 7,38 (2d, 3-H) ; 5,59, 5,56 (2d, 1'-H) ; 5,29, 5,26 (2bs, 7-H) ; 4,47*, 4,34* (2s, 9-OH) ; 4,08 (s, OCH :,), 3,97-4, 07 (m, 2"B-H, 5'-H) ; 3,92 (t, J=12 Hz, 3"-H) ; 3,74 (m, 2"A-H), (6"B-H) ; 3,68 (bs, 4'-H) ; 3,58 (t, J=12 Hz, 6"A-H) ; 3,20 (d, J=19 Hz, 10B-H) ; 2,91, 2,90 (2d, J=19 Hz, 10A-H) ; 2,75-2, 95 (m, 3'-H) ; 2,68 (m, 5"-H2) ; 2,43, 2,42 (2s, 14-H3) ; 2,35 (m, 8B-H) ; 2,13 (m, 8A-H) ; 1,70-2, 0 (m, 2'-H2) ; 1, 86* (s, 4'-OH, H20) ; 1,37, 1,36 (2d, J=6,4Hz), (6-H3).
* échangeable par D20.
Spectre de masse :
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{sous la forme de dérivés du triméthylsilyle (TMS)), 910 {M (TMS) 4}' 895 (M (TMS) 4-Me}, 883 (M (TMS) 4-HCN}, 838 {M (TMS) 3}' 823 (M (TMS) 3-Me}, 811 {M (TMS) 3-HCN}, une MS à 70 ev. un pic de base (HCN) à m/e 27.
EXEMPLE 2
Séparation de la 3'-déamino-3'- (3''-cyano-4''-morpholinyle)-13- dihydrodaunorubicine.
Dans l'exemple 1, partie D., on passe en chromatographie un mélange de 3'-déamino-3'- (3''-cyano-4''-morpholinyle) daunorubicine et de 3'-déamino- 3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine et l'on prélève une série de fractions. Après rassemblement de 3.460 ml d'éluant, une fraction de 430 ml contenant 12,5% du matériau chargé initialement est recueillie et évaporée sensiblement sous la forme d'un composé unique.
On détermine par HPLC que le composé de cette fraction est identique à un matériau que l'on a auparavant caractérisé par RMN et spectroscopie de masse comme étant la 3'-déamino-3'(3''-cyano-4''-morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine. Ce matériau pourrait être purifié essentiellement par les méthodes indiquées dans l'exemple 1 parties E. et F. pour donner de la 31-déamino- 3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine sensiblement pure.
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EXEMPLE 3
Séparation de la 3'-déamino-3'- (4''-morpholinyle) daunorubicine et de la 3'-déamino-3'- (4''-morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine.
Dans l'exemple 1, parties A. et B., on a séparé la phase HCl 0,01 N contenant la 3'-déamino-3'- (4"-morpholinyle) daunorubicine et la 3'-déamino- 3'- (4''-morpholinyle) -13-dihydrodaunorubicine. Cette phase aqueuse contient environ 40% du matériau charge. Cette phase aqueuse est alors élaborée en utilisant la méthode indiquée dans la référence incorporée ci-dessus-J. Medicinal Chem., 25, pour donner la 3-déamino-3t- (4"-morpholinyle) daunorubicine et la 3'-déamino-3'- (4''-morpholinyle) -13-dihydrodaunorubicine sous la forme de composés isolés séparés.
EXEMPLE 4
Préparation et séparation de la 3'-déamino-3'- (3''-cyano-4''-mor- pholinyle) doxorubicine et de la 3'-déamino-3'- (3''-cyano-4''-morpholinyle) - 13-dihydrodoxorubicine.
A.-Dans une réaction analogue à celle indiquée dans l'article J.
Medicinal Chem., 25, on ajoute à une solution agitée de 6,25 9 (60,0 mrnoles) de 1, 4-anhydroérythritol,
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dans 75 ml de H20 refroidie au bain d'eau à 15-20 C, 6, 42 g (30,0 mmoles) de métaperiodate de sodium. La solution claire qui en résulte est agitée à la température ambiante pendant 17 heures.
Le pH oe la solution est ajusté de 4,0 à 7,3 par NaHC03 et on. dilue ensuite tout en agitant par 75 ml de CH3CN. Un précipité se forme. Le mélange est agité et l'on ajoute 0,126 g (2,0 mmoles) de NaBH3CN dans 5 ml d'un mélange 1/1 (en volume) de CH3CN-H20. A ce mélange, on ajoute alors 1,16 g (2,0 mmoles) de chlorhydrate de doxorubicine dans 30 ml de CH3CN-H20 1/1. Après 10 minutes, on dilue le mélange reactionnel avec 50 ml de NaHC03 dilué et on extrait trois fois avec des portions de 50 ml de CHC13. Cet extrait brut contient de la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)doxorubicine, de la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine, de la 3'-déamino-3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)doxorbicine et de la 3'-déamino-3'- (3''-cyano-4''-morpholinyle)-13-dihhydrodoxorubicine.
Les extraits réunis sont extraits avec de l'acide acétique 0,1 N (5 x 25 ml) et ensuite avec H20 et lavés avec du NaHC03 dilué et
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du NaCl aqueux sature. La phase aqueuse acide est retenue. La phase chloroforme est séchée sur Na2S04, filtrée sur terre de diatomées
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o et concentrée pour donner un résidu. Ce résidu est dissous dans 25 ml de CHC13 et le solvant est ré-évaporé sous vide à la température ambiante. Ceci donne 0,518 9 (40%) d'un solide vitreux expansé rouge sombre.
B.-Un échantillon du solide vitreux expansé de la partie A., est dis- sous dans le CH3CN et injecté. dans une colonne de chromatographie- liquide à haute performance Waters Radial-Pak C-18 et élué avec un mélange tampon de citrate 0,05 M à pH 4, O-CH3CN 55/45 à
2 ml/minute. L'élution des composés est détectée à 254 nm. A 2,3 mi- nutes, un matériau identifié comme étant la 3'-déamino-3'- (3''- cyano-4''-morpholinyle) -13-dihydrodoxorubicine ressort avec un rendement de 13% (basé sur le mélange d'injection) et à 3,8 minu- tes, la 3'-déamino-3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)doxorubicine ressort avec un rendement de 69%. D'autres produits semblables rassemblés sont obtenus et séparés par HPLC.
C. - La séparation de la 3'-déamino-31- (3"'-cyano-4''-morpholinyle) doxorubicine et de la 3'-déamino-3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)- 13-dihydrodoxorubicine est ensuite répétée de la façon suivante :
A. 0,424 g du solide vitreux expansé de la partie A. est dissous dans 1,5 ml de CHsCI et appliqué sur une colonne de 1,5 x 35,5 cm de gel de silice Bio-Sil A de 200 à 400 mailles lavée par du
CH2Cl2. La colonne est éluée par CH2C12 (50 ml) et ensuite par un mélange CH2Cl2-CH3OH (99/1,150 ml ; 98/2,150 ml ; 97/3,300 ml ;
95/5,100 ml et 90/10,300 ml). Après rassemblement de 445 ml de l'éluat initial, une fraction de 80 ml est évaporée pour donner
0,217 g du produit.
Ce matériau est combiné avec 0,039 g de pro- duit purifié provenant d'une préparation antérieure et le mélange est dissous dans 2 ml de CHsClz, dilué avec 10 ml de CH30H et évaporé à siccité. La trituration de ce résidu avec 5 ml de CH30H donne 0,218 g de 3'-déamino-3'- (3''-cyano-4"-morpholinyle) doxo- rubicine.
Une HPLC et une analyse en NMR 400 MHz indique que ce produit est un mélange diastéréoisomère. Une analyse HPLC sur une colonne
Waters Radial-Pak C-18 avec un mélange tampon de citrate pH 4 0, 05 M - CH3CN (65/35) à 2 ml/minute indique deux pics très pro- ches l'un de l'autre (à 14,4 minutes et 15,7 minutes) dans le
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rapport 58/39. Le spectre à 400 MHz de ce matériau montre deux résonances pour les protons 1-H, 2-H, 3-H, l'-H, 7-H, 14-H2, 9-OH, OCH3, 10A-H et 6'-H3.
NMR CDC13 à 400 MHz 6 14, 02 (s, 6-OH) ; 13, 26 (s, 11-OH) ; 8, 05, 8, 04 (2d, 1-H) ; 7, 80, 7, 79 (2t, 2-H) ; 7, 41, 7, 40 (2d, 3-H) ; 5, 61, 5,57 (2d, l'-H) ; 5,34, 5,30 (2m, 7-H) ; 4,79, 4,78 (2s, 14-H2) ; 4,54, 4,42 (2s, 9-OH) ; 4,11, 4,10 (2s, OCH3) ; 4,05 (m, 5'-H) ; 3, 97 (m, 2"B-H, 3"-H, 6"B-H) ;. 3, 71 (m, 4'-H, 6"A-H) ; 3,58 (t,., 2"A-H) ; 3,30 (d, J=19 Hz, 10B-H) ; 3,07, 3,06 (2d, 10A-H) ; 3,03 (m, 3'-H) ; 2,69 (m, 5"-H2) ; 2,38 (ni, 8B-H) ; 2,22 (m, 8A-H) ; 1,84 (m, 2'-H2) ; 1,61 (s, H20) ; 1,40, 1,39 (2d, J=6,5Hz, 6'-H3).
UV-Vis (CH30H) max 234 nm (e 40. 100), 252 (27.700), 289 (9.420), 478 (13.000), 495 (12.900), 530 (7.190). Spectre de masse {sous la forme du dérivé triméthylsilyle (TMS)), m/e 899 M (TMS) 4-HCN.
A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule
C32H34N2012. 2H20 et on obtient les valeurs suivantes :
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<tb>
<tb> C <SEP> H <SEP> N
<tb> - <SEP> calculées........ <SEP> 56,97 <SEP> 5,68 <SEP> 4,15
<tb> - <SEP> trouvées......... <SEP> 57,07 <SEP> 5,37 <SEP> 4,17
<tb>
Une élution supplémentaire de la colonne ci-dessus donne 0,041 g de 3'-déamino-3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubi- cine. UV-Vis (CH30H) max 234 nm (E 37.400), 252 (28.000), 289- (9.390), 475 (12.700), 496 (12.800), 530 (7.410). Spectre de masse (sous la forme de dérivé triméthylsilyle (TMS)}, m/e 985 M (TMS) s- CH3, 973 M (TMS) s-HCN.
A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule
C32H36N2012. 1-1/2H20 et on obtient les valeurs suivantes :
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<tb>
<tb> C <SEP> H <SEP> N
<tb> - <SEP> calculées........ <SEP> 57,57 <SEP> 5,89 <SEP> 4,20
<tb> - <SEP> trouvées......... <SEP> 57,35 <SEP> 5,94 <SEP> 3,82
<tb>
EXEMPLE 5
Séparation de la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)doxorubicine et de la3'-déamino-3'- (4''-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine.
A.-La phase aqueuse acide obtenue dans la partie A. de l'exemple 4 est rendue basique avec NaHC03 et elle est extraite avec CHC13.
La phase CHC13 est lavée avec du NaCl saturé, séché sur Na2S04, (R) filtrée sur Célite, concentrée et séchée pour donner 0,828 g d'une
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mousse rouge qu'une HPLC, une NMR 90 MHz, NMR 300 MHz, une spec- troscopie UV-Vis et une spectroscopie de masse indiquent comme contenant deux composants primaires, la 3'-déamino-3'- (4''- morpholinyle) doxorubicine et la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)- 13-dihydrodoxorubicine.
B.-On prépare un rassemblement de 0,98 g du solide vitreux expansé tel que préparé dans la partie A. Ce matériau est dissous dans
3 ml de CH2C12 et passé en chromatographie sur une colonne de,
2,2 x 33 cm de gel de silice. La-colonne est éluée avec du CH2C12 (50 ml) et ensuite par CH2C12-CH30H (99/1,300 ml ; 98/2,
300 ml, 97/3,900 ml et 90/10,700 ml). Après un rassemblement initial de 1.170 ml d'éluant, on isole une fraction de 490 ml et on évapore pour donner un résidu. Ce résidu contient 45% de l'échan- tillon chargé et une HPLC indique qu'il s'agit de 3'-déamino-3'- (4''-morpholinyle) doxorubicine essentiellement pure (99+%).
NMR CDC13 90 MHz 6 13,88 (s, 6-OH) ; 13,07 (s, 11-OH) ; 7,90 (d,
J=8 Hz, 1-H) ; 7,72 (t, J=8 Hz, 2-H), 7,38 (d, J=8 Hz, 3-H) ; 5,51 (bs, l'-H) ; 5,20 (bs, 7-H) ; 4,75 (s, 14-H2) ; 4,68 (s, 9-OH) ;
4,07 (s, OCH3) ; 3,98 (m, 5'-H) ; 3,67 (m, 4'-H, 2"-H2, 6"-H2);
3,09 (d, j=19 Hz, 10B-H) ; 2,83 (d, J=19 Hz, 10A-H) ; 2,80-3, 20 (m, 3'-H) ; 2,50-3, 00 (bs, 4'-OH, 14-OH) ; 1,95-2, 65 (m, 8-H2, 3"-H2,
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5-Hp 5"-H2) ; 1, 38 (d, J=6, 5 Hz, 6'-Ha). de ; 1, 80 (m, 2'-H2)masse {sous la forme de dérivés de trimétylsilyle (TMS)), m/e 973 M (TMS) 5, 901 M (TMS) 4' La base libre est mise en suspension dans H20 et acidifiée à pH 4,4 par du HCl 0,1 N.
La solution qui en résulte est lyophilisée et le produit est dissous dans CH30H et précipité par 10 volumes d'éther pour donner le chlorhydrate.
A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule C31H35N012. HC1. 2H20 et on obtient les valeurs suivantes :
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<tb>
<tb> C <SEP> H <SEP> Cul <SEP> N <SEP>
<tb> - <SEP> calculées........ <SEP> 54, <SEP> 27 <SEP> 5, <SEP> 88 <SEP> 5, <SEP> 17 <SEP> 2, <SEP> 04 <SEP>
<tb> - <SEP> trouvées......... <SEP> 54, <SEP> 08 <SEP> 5,35 <SEP> 4,78 <SEP> 2,00
<tb>
EMI21.3
UV-Vis (CH30H) max 234 nm (E 39. 000) ; 252 (26. 300) ; 290 (8. 990) 480 (12. 600) ; 495 (12. 500) ; 530 (6.
Une fraction de 190 ml est recueillie et ensuite une fraction de 160 ml. Cette dernière fraction est évaporée et on tro. uj e--qu'elle
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contient 19,5% du matériau chargé sous la forme de 3'-déamino-3'- (4''-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine d'une pureté de 97%.
NMR CDCl3 300 MHz 6 13,98, 13,96 (2s, 6-OH) ; 13,34, 13,32 (2s, 11-
OH) ; 8,03 (d, 1-H) ; 7,79 (t, 2-H) ; 7,40 (d, 3-H) ; 5,56 (bs, l'-H) ;
5,29 (bs, 7-H) ; 4,64, 4,59 (2s, 9-OH) ; 4,09 (s, OCH3) ; 4,03 (m, 5'-H) ; 3,82-4, 05 (m, 4'-H, 13-H) ; 3,68 (m, 2"-H2, 6"-H2,14B-H) ;
3,54 (bs, 14A-H) ; 3,30 (m, 10B-H) ; 2,98 (bs, OH) ; 2,87 (bs, OH) ;
2,77 (m, 10A-H, 3'-H) ; 2,30-2, 70 (m, - 8B-H, 311¯H2'5"-H2) ; 1, 99, (m, 8A-H) ; 1,78 (m, 2'-H2) ; 1, 41. (d, 6'-H3). Spectre de masse (en tant que dérivé triméthylsilyle (TMS) J, m/e 975 M (TMS) 5, EXEMPLE 6
Préparation de la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)-5-iminodoxorubicine.
A.-A une solution de 0, 396 g de 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle) doxorubicine préparée comme indiquée dans l'exemple 5 dans 5 ml de pyridine sèche, on ajoute 0,990 g de p-anisyle chlorodiphényl- méthane. On laisse le mélange réagir a la température ambiante dans l'obscurité pendant environ 2 jours. La solution est refroi- die dans l'eau glacée et l'on ajoute 0,5 ml de CH30H. Le mélange est agité pendant 2 heures et l'on ajoute du NaHC03 dilué pour compléter à 50 ml et l'on extrait par CH2Cl2. Les extraits sont concentrés pour donner un résidu à consistance de gomme que l'on dissout dans le toluène, on concentre, on dissout dans CH2Cl2 et on précipite en ajoutant lentement de l'éther de pétrole 35 à 60 C.
Le précipité est récupéré, redissous dans CH2Cl2 et précipité par un mélange 2/1 éther de pétrole/éther diéthylique pour donner la 14-O-p-anisyldiphényle méthyle-3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle) doxorubicine (III) sous la forme de solide amorphe avec un rende- ment de 94%.
Ce matériau est identifié par RMN a 90 MHz dans CDCl3.
B.-Une solution de 0,532 g de 14-O-p-anisyldiphényle méthyle-3'- déamino-3'-(4''-morpholinyle)doxorubicine dans 10 ml de CHzCI est ajoutée à 30 ml de CH30H saturé par de 1'ammoniac a 0 C. Le mélange est agité à 0 C pendant 1 heure et on le laisse ensuite reposer à 3 C pendant 27 heures. Le solvant du produit réactionnel est évaporé. Le résidu est dissous dans CH2Cl2-CH3OH 4/1 et concen- tré. Ceci est répété deux fois et le solide est dissous dans CHCI filtré sur Célite #, concentré, dissous dans CH2Cl2-CH3OH 1/2 et
<Desc/Clms Page number 23>
de nouveau concentré et séché pour donner 0,52 g (97%) d'un résidu violet.
EMI23.1
C.-Le résidu ae la partie B. est dissous dans 2 ml de CH2Cl2 et appliqué sur une colonne de 1,5 x 40 cm de gel de silice et élué par CH2Cl2 (50 ml) et ensuite par (CIz-CHsOH (99/1,150 ml ;
98/2,150 ml, 97/3,500 ml, 95/5,100 ml ; 93/7,100 ml et 90/10,
200 ml). A la suite de 565 ml d'éluant, on sépare une fraction de
335 ml, on filtre et on évapore pour obtenir 50,9% de l'échantil- lon appliqué sous la forme d'un produit unique. Ce produit est identifié comme étant la 14-O-p-anisyldiphénylméthyl-3'-déamino- 3'- (4''-morpholinyle) -5-iminodoxorubicine par une RMN à 90 MHz.
D.-Un échantillon de 0,341 g du produit de l'étape C. est dissous dans 20 ml d'acide acétique à 80% et la solution est agitée dans l'obscurité pendant 7 heures. La solution est ensuite diluée avec
50 ml d'eau et extraite trois fois avec CHdg. La phase aqueuse contient le produit désiré et elle est lyophilisée dans l'obscu- rité pour donner 0,294 g de solide. Le solide est dissous dans de l'acide acétique 0,1 N. La solution est lavée avec CHC13 rendu basique par NaHC03 et extraite avec CHCl3. Le produit désiré passe dans la phase organique qui est lavée, séchée, filtrée et concen- trée pour donner un résidu.
Ce résidu est dissous dans CHC13-CH30H
<Desc/Clms Page number 24>
(1/10) concentré et séché pour donner 0,228 g de 3'-déamino-3'- (4''-morpholinyle) -5-iminodoxorubicine. L'identité du produit est vérifiée par RMN 300 MHz et par analyse élémentaire.
EXEMPLE 7
Préparation du sel d'addition d'acide.
Le produit basique libre de l'exemple 6 est mis en suspension dans 20 ml d'eau. Le mélange est agité et l'on ajoute lentement 3, 2 ml de HCl 0,1 N pour établir un pH de 4,5. Le solide mis en suspension se. dissout progressivement. La solution est. lyophilisée dans l'obscurité pour donner le sel d'addition d'acide chlorhydrate de 31-déamino-3'- (41'-morpho- linyle)-5-iminodoxorubicine avec une pureté de 97+% par analyse HPLC.
A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule C31H36N2011. HC1. 2H20 et on obtient les valeurs suivantes :
EMI24.1
<tb>
<tb> C <SEP> H <SEP> Cl <SEP> N <SEP>
<tb> - <SEP> calculées........ <SEP> 54,35 <SEP> 6,03 <SEP> 5,17 <SEP> 4,09
<tb> - <SEP> trouvées......... <SEP> 54,20 <SEP> 5,96 <SEP> 4,33 <SEP> 4,03
<tb>
EXEMPLE 8
Préparation et séparation de la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)- 5-imino-13-dihydrodoxorubicine.
A.-Une solution de 0,186 g de 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)-13- dihydrodoxorubicine préparée comme dans l'exemple 5 dans 6 ml de CHsClz-CHaOH 1/1 est ajoutée à 20 ml de CH30H saturé par de l'am- moniac à 0 C. Le mélange est agité pendant 1 heure et ensuite stocké à 30C pendant environ 27 heures, concentré et le produit résiduel est dissous dans CHCIs-CHaOH (4/1) et concentré trois fois pour éliminer complètement l'ammoniac. Le résidu qui en résulte est purifié par chromatographie en couche mince prépara- tive sur des plaques de gel de silice de 2 mm x 20 cm x 20 cm en utilisant un développement par CHC13-CH30H 9/1.
Des bandes conte- nant de la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)-5-imino-13-dihydro- doxorubicine sensiblement pure sont séparées, éluées et l'éluant est séché pour donner 0,139 g du produit basique libre tel qu'iden-
EMI24.2
tifié par NMR à 300 MHz. B.-La base libre de la partie A. est transformée en chlorhydrate par la méthode de l'exemple 7. Par analyse HPLC, on constate que le chlorhydrate est pur à 97-98%.
<Desc/Clms Page number 25>
A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule C31H3sN2011. HC1. 2H20 et on obtient les valeurs suivantes :
EMI25.1
<tb>
<tb> C <SEP> H <SEP> Cl- <SEP> N <SEP>
<tb> - <SEP> calculées........ <SEP> 54,19 <SEP> 6,31 <SEP> 5,16 <SEP> 4,08
<tb> - <SEP> trouvées......... <SEP> 54,17 <SEP> 5,95 <SEP> 4,88 <SEP> 3,87
<tb>
EXEMPLE 9
Préparation de la 3'-déamino-3'(3''-cyano-4''-morpholinyle)-5- iminodaunorubicine.
EMI25.2
Une solution de 0, 031 g de 3'-déamino-3'- daunorubicine dans 1, 0 ml de CHdz est ajoutée à 5 ml de méthanol saturé par de l'ammoniac à 0 C. Le mélange est agite pendant 30 minutes et on le stxkeensuite 30C pendant 45 heures. Le produit de cette réaction est évaporé à siccité pour donner un résidu que l'on dissout dans 5 ml de CHC13-CH30H 19/1 et concentré. Cette étape est répétée. Ce résidu est dissous dans CHC13-CH30H et appliqué sur une plaque de gel de silice de 2 mm x 20 cm x 20 cm et développé en utilisant CHC13-CH30H 9/1. La bande principale est éluée et analysée. Une spectroscopie de masse vérifie que le composé est la 3'-déamino-3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)-5-iminodaunorubicine.
EXEMPLE 10
La préparation de l'exemple 6 est répétée en utilisant la 31-déamino- 3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)daunorubicine préparée comme dans l'exemple 4 comme charge au lieu de la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle) doxorubicine. La séquence de séparation blocage-amination-déblocage de l'exemple 6
EMI25.3
est utilisée pour donner la 31-déamino-31- (31'-cyano-41 l-morpholinyle) : 5-iminodoxorubicine comme produit final.
Avec plus de détails, cette préparation se fait de la façon sui- vante :
A.-A une solution de 0,241 g de 3'-déamino-3'-(3''-cyano-4''-morpholi- nyle) doxorubicine préparée comme dans l'exemple 4 dans 4 ml de pyridine sèche, on ajoute 0,587 g de p-anisylchlorodiphénylméthane.
La solution est agitée à la température ambiante dans l'obscurité pendant 44 heures. Le mélange réactionnel est refroidi, dilué avec 0, 5 ml de CH30H, agité à la température ambiante pendant 3 heures et l'on ajoute ensuite du NaHC03 dilué pour compléter à 50 ml et l'on extrait avec du CHIC'2. Les extraits sont concentrés, le résidu est dissous dans 3 ml de CH2C12 et lion précipite en ajoutant-
<Desc/Clms Page number 26>
lentement 40 ml d'éther diéthylique pour donner 0,333 g (97%) de 14-O-p-anisyldiphénylméthyl-3'-déamino-3'(3''-cyano-4''-morpholinyle) doxorubicine.
RMN CDC13 90 MHz 6 13,84 (s, 6-OH) ; 12,99 (s, 11-OH) ; 7,82 (d, 1-H) ; 6,70-7, 75 (m, 2-H, 3-H, trityl-aryle) ; 5,42 (bs, l'-H) ; 5,08 (bs, 7-H) ; 4,45 (bs, 2, 14-H2) ; 4,19 (s, 9-OH) ; 4,00 (s, OCH3) ; 3,79 (s, OCH3) ; 3,30-4, 15 (m, 4'-H, 5'-H, 2"-H2, 3"-H, 6", H2) ; 1,60- 3,10 (m, 2'-H2, 8-H2, 5"-H2, 10-H2, 3'-H) ; 1,13 (d, 6'-Ha).
EMI26.1
B.-Une solution de 0, 369 g de 14-0-E-anisyldiphénylméthyl-3'-déamino- 3'- doxorubicine dans 8 ml de CHsClz est ajoutée à 25 ml de CH30H saturé par de l'ammoniac à O'C. Le mélange est agité à 0 C pendant 1 heure et on le laisse ensuite reposer à 3 C pendant 26 heures. Le mélange réactionnel est éva- poré pour éliminer complètement l'ammoniac et donner 0,376 g d'un résidu violet.
C.-Le résidu de la partie B. dans 1,5 ml de CHCt est appliqué à une colonne de 1,5 x 28 cm de gel de silice (de 200 à 400 mailles) et élué avec CHCIz (50 ml) et ensuite CH2Cl2-CH3OH (99/1,200 ml ;
98/2,300 ml, 97/3,100 ml, 95/5,100 ml et 90/10,200 ml). Après rassemblement de 360 ml d'éluat initial, une fraction de 125 ml est évaporée pour donner 0,203 g de 14-O-p-anisyldiphénylméthyl-
EMI26.2
3'-déamino-3'- D.-Un de 0, 158 g du résidu de la partie C. est refroidi à 00C et dissous dans 8 ml d'acide trifluoroacétique à 50% re- froidi par de la glace. La solution est agitée à OOC pendant 2 minutes et versée ensuite dans 100 ml d'eau glacée.
Le mélange aqueux est extrait par CHC13 (4 x 10 ml) et les extraits réunis sont lavés avec NaHC03 dilué et H20, séchés sur Na2S04, filtrés sur Célite et évaporés. Le résidu est dissous dans 3 ml de CHC13-CH30H (4/1), la solution est agitée et l'on ajoute goutte à goutte 25 ml d'éther. Le précipité qui en résulte est recueilli pour donner 0,093 g de 3'-déamino-3- (3''-cyano-4''-morpholinyle)- 5-iminodoxorubicine.
Une HPLC et une analyse RMN 300 MHz indiquent que ce matériau est un mélange diastéroisomère. Une analyse HPLC sur une colonne Waters Radial-Pak C-18 avec un mélange tampon de citrate pH 4 0,05 MCH30H (40/60) indique des pics à 18,4 minutes et 25,0 minutes dans le rapport 69/31. Le spectre à 300 MHz de ce produit indique deux
<Desc/Clms Page number 27>
résonances pour les protons 1-H, 2-H, 3-H, 11-H, 7-H, 14-H2, 9-OH, OCH3, 10A-H, ete'-Ha.
NMR CDC13 300 MHz 6 15,61 (s, 11-OH) ; 13,74 (d, 6-OH) ; 9,27 (d, NH) ; 8,21, 8,19 (2d, 1-H) ; 7,73, 7,72 (2t, 2-H) ; 7,33, 7,32 (2d, 3-H) ; 5,77, 5,72 (2d, 1'-H) ; 5,41, 5,38 (2m, 7-H) ; 4,79, 4,77 (2s, 14-H2) ; 4,72, 4,66 (2s, 9-OH) ; 4,15, 4,14 (2s, OCH3) ; 4,04 (m, 5'-H) ; 3,97 (m, 3"-H, 2"B-H) ; 3,75 (m, 6"-H2, 4'-H) ; 3,59 (m, 2"A-H) ; 3,23 (d, 10B-H) ; 3,03 (m, 10A-H, 3'-H) ; 2,72 (m, 5"-H2); 2,33 (m, 8B-H);
EMI27.1
2, 14 (m, 8A-H) ; 1, 85 (m, 21-H2) ; 38, 1, 37 (2d, 6'-H3).
UV-Vis (CH30H) max 221 nm (E 31. 000) ; 252 (32. 900) ; 307 (7. 110) ; 520 sh (9. 110) ; 551 (17. 400) ; 592 (20. 700). DCI-MS mie 638 (M + H) ; 611 (M + H-HCN).
A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule CszHasOn. HsO et on obtient les valeurs suivantes :
EMI27.2
<tb>
<tb> C <SEP> H <SEP> N
<tb> - <SEP> calculées........ <SEP> 58,62 <SEP> 5,69 <SEP> 6,41
<tb> - <SEP> trouvées........ <SEP> 58,79 <SEP> 5,47 <SEP> 6,30
<tb>
EXEMPLE 11
On répète la préparation de l'exemple 8 quatre fois en utilisant chaque fois une quantité molaire équivalente d'un matériau de départ différent au lieu de la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine. Dans la première répétition, on utilise la 3'-déamino-3'- (3''-cyano-
EMI27.3
41'-morpholinyle) comme charge pour donner comme produit final la 3'-déamino-31- -13-dihydrodoxorubicinedihydrodoxorubicine comme produit final.
Dans la secondé répétition, on utilise la 3'-déamino-3'- (4''-morpholinyle) daunorubicine comme charge pour donner comme produit final la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyline)-5-iminodaunorubicine. Dans la troisième répétition, on utilise comme charge la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine pour donner la 3'-déamino-3'-(4''-morpholinyle)-5-imino-13-dihydrodaunorubicine comme produit final. Dans la quatrième répétition, on utilise comme charge la
EMI27.4
3'-déamino-3'- pour donner comme produit final la 3'-déamino-3'-(3''-cyano-4''-morpholinyle)- 5-imino-13-dihydrodaunorubicine.
EXEMPLE 12
On répète les préparations des exemples 1 à 11 en utilisant au lieu de la doxorubicine et de la daunorubicine comme produits de départ la série de doxorubicines et de daunorubicines dérivées décrites et préparées
<Desc/Clms Page number 28>
comme décrit ici dans la section dénommée"dérivés et analogues". Ces répétitions donnent lieu aux dérivés et analogues correspondants des composés suivant la présente invention.
Les composés suivant la présente invention possèdent une utilité en tant qu'agents anti-tumeurs pour les mammifères. Cette activité est mise en évidence par des études in vivo et in vitro. Le test in vivo conduit en accord avec le protocole décrit dans Cancer Chemotherapy Reports, National Cancer Institute, 3, n 2, Part 3, Septembre, 1972, des souris saines sont inoculées par voie intrapéritonéale par un fluide ascitique de lymphocyte de leucémie P. 388. Les souris inoculées sont ensuite traitées les jours n 5, 9 et 13 de la période suivante par différentes quantités des produits suivant la présente invention.
A titre de comparaisons, d'autres souris restent non traitées et d'autres souris sont trai-
EMI28.1
tées avec de la daunorubicine ou de la doxorubicine ; de la 31-déamino-3'- (41'-morpholinyle) daunorubicine ou de la 31-déamino-31- (4' I-morpholinyle) - 13-dihydrodaunorubicine, du brevet des Etats Unis d'Amérique n 4. 301.277 ou de la 31-déamino-3'- (4-méthoxy-1-pipéridinyl) daunorubicine ou son équivalent 13-dihydro indiqués dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 4.314. 054.
Le temps moyen de survie des différentes souris traitées est déterminé et comparé avec celui des souris auxquelles on a inoculé le fluide ascitique de la leucémie mais auxquelles on n'a donné aucun traitement parles composés test. On présente dans le tableau A suivant les données ainsi obtenues. Les données sont présentées sous forme de valeurs T/C en % qui sont le temps de survie des souris traitées divisé par le temps de survie des souris de contrôle multiplié par 100. On donne aussi dans le tableau A les niveaux de dosage des divers composés que l'on observe pour produire les meilleures améliorations de temps de survie.
Ces résultats montrent que les composés suivant la présente invention ont une activité anti-tumeur in vivo allant de bonne à supérieure à des doses optimum faibles. Le composé NSC 357.704 indique un niveau de dosage optimum d'environ 1/150ème de celui qui est nécessaire avec le composé apparenté. D'autres produits suivant la présente invention montrent des niveaux de dosage optimum de loin inférieurs à celui de la daunorubicine et de la doxorubicine.
Ceci promet de procurer un agent anti-tumeur actif ayant une cardiotoxicité sensiblement diminuée.
<Desc/Clms Page number 29>
TABLEAU A
EMI29.1
<tb>
<tb> Activité <SEP> con-Leucémie <SEP> des
<tb> tre <SEP> la <SEP> leucé-cellules <SEP> L-1210
<tb> mie <SEP> P. <SEP> 388 <SEP> des
<tb> souris
<tb> temps <SEP> dose <SEP> Inhibition <SEP> de
<tb> de <SEP> opti-synthèse
<tb> survie <SEP> mum
<tb> (q4d <SEP> Ex50, <SEP> M
<tb> 5, <SEP> 9, <SEP> 13)
<tb> Composé <SEP> No <SEP> NSC* <SEP> T/C <SEP> % <SEP> mg/kg <SEP> DNA <SEP> NRA
<tb> 3'-déamino-3'-(3''-cyano-
<tb> 4"-morpholinyle) <SEP> daunorubicine <SEP> 332.304 <SEP> 197 <SEP> 0,4 <SEP> 0,012 <SEP> 0,002
<tb> 3'-déamino-3'- <SEP> (3''-cyano- <SEP>
<tb> 4''-morpholinyle)-13dihydrodaunorubicine <SEP> 332.305 <SEP> 143 <SEP> 0,1 <SEP> 0,019 <SEP> 0,
002
<tb> 3'-déamino-3'- <SEP> (3''-cyano- <SEP>
<tb> 4''-morpholinyle) <SEP> doxorubicine <SEP> 357.704 <SEP> 187 <SEP> 0,075 <SEP> 0,003 <SEP> 0,0005
<tb> 3'-déamino-3'-(3''-cyano-
<tb> 4"-morpholinyle) <SEP> -13- <SEP>
<tb> dihydrodoxorubicine <SEP> 360.291 <SEP> 150 <SEP> 0,2 <SEP> 0,021 <SEP> 0,0030
<tb> 3'-déamino-3'-(4''morpholinyle) <SEP> -13-dihydro- <SEP>
<tb> 5-iminodoxorubicine <SEP> 355.465 <SEP> 161 <SEP> 50 <SEP> > 100 <SEP> 24
<tb> 3'-déamino-31- <SEP> (41, <SEP> - <SEP>
<tb> morpholinyle) <SEP> daunorubicine <SEP> 327.451 <SEP> 166 <SEP> 0,2 <SEP> 0,76 <SEP> 0, <SEP> 10 <SEP>
<tb> 3'-déamino-3'-(4''morpholinyle) <SEP> -13dihydrodaunorubicine <SEP> 327.450 <SEP> 132 <SEP> 0,2 <SEP> 2,2 <SEP> 0,67
<tb> 3'-déamino-3'-(4''-méthoxy-
<tb> 1''-pipéridinyl) <SEP> daunorubicine <SEP> 334.
<SEP> 353 <SEP> 199 <SEP> 6,25 <SEP> 0,63 <SEP> 0,12
<tb> 3'-déamino-3'-(4-méthoxy-
<tb> 1-pipéridinyl) <SEP> -13-dihydrodaunorubicine <SEP> 334.354 <SEP> 199 <SEP> 12,5 <SEP> 0,58 <SEP> 0,08
<tb> Par <SEP> comparaison <SEP> :
<tb> daunorubicine <SEP> 82.151 <SEP> 130 <SEP> 8 <SEP> 0,66 <SEP> 0,33
<tb> doxorubicine <SEP> 123.127 <SEP> 160 <SEP> 8 <SEP> 1, <SEP> 5 <SEP> 0, <SEP> 58 <SEP>
<tb>
<Desc/Clms Page number 30>
EMI30.1
*NO NSC = Numéro d'enregistrement du Centre du Service National de l'Institut National du Cancer des Etats Unis d'Amérique.
Des tests vitro sur la 31-déamino-31- innyle) daunorubicine et le 3'-déamino-3'- (3''-cyano-4''-morpholinyle)-13- dihydrodaunorubicine montrent aussi l'activité accrue de cette classed composés. Lorsque ces matériaux sont traités en tant qu'inhibiteurs de la synthèse du DNA et du RNA sur des cellules L-1210 par la méthode décrite dans G. Tong, W. W. Lee, D. R. Black et D. W. Henry, J. Médicinal-Chem., 19,395 (1976) ; ils sont actifs ä des doses qui sont jusqu'à 600 fois plus faibles que les doses de daunorubicine, de doxorubicine ou des analogues antérieurs. On observe aussi qu'ils ont des propriétés inhibitrices beaucoup plus importantes vis-à-vis de la synthèse du RNA que vis-à-vis de la synthèse du DNA (rapport ED 50 DNA/RNA = 10 à 11).
Il a été suggéré par S. T. Crooke et al., Mol. Pharmacol., 14,290 (1978) qu'un tel rapport indique des anthracyclines de classe II ayant des propriétés thérapeutiques améliorées. Ces données sont indiquées sur le tableau A.
Les données du tableau A, indiquant une puissance anti-tumeur accrue avec la structure morpholino et une augmentation supplémentaire d'efficacité avec la structure cyano-morpholino indiquent le type d'activité de cette classe de composés.
Des tests supplémentaires sont effectués pour vérifier l'activité biologique des composés suivant la présente invention. Ce sont des tests in vivo sur des souris contre la leucémie P. 388 et L-1210 et le mélanome B-16 mis en oeuvre essentiellement par la méthode de l'article cité cidessus Cancer Chemotherapy Reports, 1972. On teste divers programmes de dosage et les voies d'administration intrapéritonéale, intraveineuse et orale. Les résultats sont indiqués sur le tableau B.
Les composés suivant la présente invention, y compris leurs sels, peuvent être administrés par toute voie disponible y compris l'administration par voies orale et parentérale (intraveineuse, intrepéritonéale, sous-cutané et intramusculaire). L'administration parentérale, notamment l'administration intraveineuse a été historiquement le mode de choix et c'est celle que l'on préfère. Le régime de dosage et la quantité administrée est suffisante pour améliorer la leucémie ou un autre type de cancer vis-à-vis desquels les composés sont efficaces.
Par exemple, dans le traitement des animaux d'essai inférieurs, un dosage d'un composé suivant la présente invention dans la gamme d'environ 0,0010 mg/kg à environ 25 mg/kg
<Desc/Clms Page number 31>
TABLEAU B Efficacité anti-tumeur sur la souris pour la dose optimum, T/C % (mg/kg)
EMI31.1
<tb>
<tb> Composé <SEP> NSC <SEP> ? <SEP> daunorubicine <SEP> doxorubicine
<tb> 82. <SEP> 151* <SEP> 123.127* <SEP> 327.451 <SEP> (4) <SEP> * <SEP> 327.450 <SEP> (1) <SEP> * <SEP> 332.304
<tb> ip <SEP> L-1210
<tb> d <SEP> 1, <SEP> ip <SEP> 168 <SEP> (5)
<tb> q4d <SEP> 1, <SEP> 5,9, <SEP> ip
<tb> qd <SEP> 1-9, <SEP> ip <SEP> 173 <SEP> (1)
<tb> ip <SEP> P.
<SEP> 388
<tb> d <SEP> 1, <SEP> ip <SEP> 252 <SEP> (7,5) <SEP> 155 <SEP> (0,25) <SEP> 175 <SEP> (0,25)
<tb> d <SEP> 1, <SEP> iv'185 <SEP> (10) <SEP> 152 <SEP> (0,5) <SEP> 157 <SEP> (0,5)
<tb> q4d <SEP> 1, <SEP> 5,9, <SEP> ip <SEP> 257 <SEP> (4)
<tb> q4d <SEP> 1, <SEP> 5,9, <SEP> po
<tb> qd <SEP> 1-9, <SEP> ip <SEP> > 285 <SEP> (2)
<tb> ip <SEP> B16d
<tb> d <SEP> 1, <SEP> ip <SEP> > 197 <SEP> (20)
<tb> q4d <SEP> 5,9, <SEP> 13, <SEP> ip <SEP> 129,146 <SEP> (3)
<tb> ip <SEP> B16 <SEP>
<tb> d <SEP> l,-ip <SEP> 195 <SEP> (4) <SEP> 292 <SEP> (4) <SEP> 135 <SEP> (0,25) <SEP> 121 <SEP> (0,25) <SEP> 138 <SEP> (0,15)
<tb>
* Composes antérieurs a titre de comparaison :
EMI31.2
(1) 3'-déamino-3'- (voir revendication 4 du brevet US 4. 301. 277) (2) 3'-déamino-3'- (voir revendication 6 du brevet US 4. 301. 277) (3) 31-déamino-31- (voir exemples 6 et 7 de 1a présente demande) (4) 31-déamino-31-'41 (voir revendication 5 du brevet US 4. 301. 277)
<Desc/Clms Page number 32>
TABLEAU B (suite) Efficacité anti-tumeur sur la souris pour la dose optimum, T/C % (mg/kg)
EMI32.1
<tb>
<tb> Composé <SEP> NSC <SEP> NO <SEP> 332.
<SEP> 305 <SEP> 354.646 <SEP> (2) <SEP> * <SEP> 355.277 <SEP> (3) <SEP> 357.704 <SEP> 360.291
<tb> ip <SEP> L-1210
<tb> d <SEP> 1, <SEP> ip <SEP> 152 <SEP> (0,05) <SEP> 164 <SEP> (0,025) <SEP> 152 <SEP> (0,025)
<tb> q4d <SEP> 1,5, <SEP> 9, <SEP> ip <SEP> > 164 <SEP> (0,0125) <SEP> > 128 <SEP> (0,05)
<tb> qd <SEP> 1-9, <SEP> ip <SEP> > 141 <SEP> (0,025) <SEP> 166 <SEP> (0,0063) <SEP> > 148 <SEP> (0,025)
<tb> ip <SEP> P.
<SEP> 388
<tb> d <SEP> 1, <SEP> ip <SEP> 182 <SEP> (0,05) <SEP> > 193 <SEP> (2) <SEP> 262 <SEP> (0,0125) <SEP> 183 <SEP> (0,05)
<tb> d <SEP> 1, <SEP> iv <SEP> > 143 <SEP> (0,062) <SEP> 166 <SEP> (2,5) <SEP> 152 <SEP> (0,05)
<tb> q4d <SEP> 1,5, <SEP> 9, <SEP> ip <SEP> 224 <SEP> (0,05)
<tb> q4d <SEP> 1,5, <SEP> 9, <SEP> po <SEP> 175 <SEP> (0,05) <SEP> > 158 <SEP> (0,1)
<tb> qd <SEP> 1-9, <SEP> ip <SEP> 209 <SEP> (0,0125) <SEP> > 360 <SEP> (0,0063) <SEP> 167 <SEP> (0,025)
<tb> ip <SEP> B16d
<tb> d <SEP> 1, <SEP> ip <SEP> > 138 <SEP> (0,0063) <SEP> 149 <SEP> (0,025)
<tb> q4d <SEP> 5,9, <SEP> 13, <SEP> ip <SEP> 123 <SEP> (0,0125) <SEP> 121 <SEP> (0,025)
<tb> ip <SEP> B16 <SEP>
<tb> d <SEP> 1, <SEP> ip <SEP> 131 <SEP> (0,0375)
<tb>
*Composés antérieurs à titre de comparaison :
EMI32.2
(1) 3'-déamino-3'i4''-morpholinyle) (voir revendication 4 du brevet US 4. 301. 277) (2) 3'-déamino-3'i4''-morpholinylejdoxorubicine (voir revendication 6 du brevet US 4. 301. 277) (3) 3'-déamino-3'i4''-morpholinyle) (voir exemples 6 et 7 de la présente demande) (4) 3'-déamino-3'i4''-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine (voir revendication 5 du brevet US 4. 301. 277)
<Desc/Clms Page number 33>
par jour, est suffisant pour améliorer la leucémie. La limite de dosage supérieure est celle imposée par les effets secondaires toxiques et peut être déterminée par essai et erreur pour les animaux à traiter. En général, le dosage avec les composés suivant la présente invention sera inférieur à celui requis avec les composés apparentés (par exemple de 1/20 à 1/200 de fois).
Une posologie d'une dose tous les deux à sept jours est efficace tandis que des intervalles plus courts par exemple 1 jour ou moins entre les doses peuvent aussi bien être convenables.
Pour faciliter l'administration, les composés suivant la présente invention, y compris leurs sels, peuvent être fournis sous la forme de compositions pharmaceutiques et notamment sous la forme de dose unitaire.
Tandis que les composés peuvent être administrés en soi, il est plus classique de les administrer en conjonction avec un support pharmaceutiquement acceptable qui dilue le composé et en facilite la manipulation.
Le terme"pharmaceutiquement acceptable"signifie que le vecteur (aussi bien que la composition qui en résulte) est stérile et non toxique.
Pour l'administration orale, le véhicule ou le diluant peut être solide, semi-solide ou liquide et peut servir de véhicule, d'excipient, ou de milieu pour l'agent tel que décrit dans les textes de la pharmacologie. Pour l'administration parentérale, le composé est dissous ou mis en suspension dans un milieu liquide injectable convenable comme cela est connu dans l'état de la technique.
Dans la préparation de ces formes de dosage, on peut utiliser les techniques reconnues dans l'art antérieur pour la formulation des agents pharmaceutiques solubles dans l'eau (dans le cas des sels) et des agents insolubles dans l'eau (dans le cas des bases libres). Par exemple, les matériaux injectables peuvent être formulés de la façon suivante : - Formulation A :
suspension stérile dans un véhicule aqueux
EMI33.1
<tb>
<tb> pour <SEP> injection <SEP> Mg
<tb> - <SEP> composé <SEP> des <SEP> exemples <SEP> 1, <SEP> 2,3, <SEP> 4,5, <SEP> 6,9 <SEP> ou <SEP> 10
<tb> sous <SEP> la <SEP> forme <SEP> de <SEP> poudre <SEP> pouvant <SEP> être <SEP> mise <SEP> en <SEP> suspension. <SEP> 3
<tb> - <SEP> citrate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 5,7
<tb> - <SEP> sodium <SEP> carboxyméthylcellulose' <SEP> (qualité <SEP> de <SEP> faible
<tb> viscosité) <SEP> 2,0
<tb> - <SEP> parahydroxybenzoate <SEP> de <SEP> méthyle.......................... <SEP> 1,5
<tb> - <SEP> parahydroxybenzoate <SEP> de <SEP> propyle <SEP> 0,2
<tb> - <SEP> eau <SEP> pour <SEP> injection <SEP> complétée <SEP> à <SEP> 1,0 <SEP> ml
<tb>
<Desc/Clms Page number 34>
- Formulation A' :
EMI34.1
<tb>
<tb> suspension <SEP> stérile <SEP> dans <SEP> un <SEP> véhicule <SEP> aqueux
<tb> pour <SEP> injection <SEP> Mg
<tb> - <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (3''-cyano-4''-morpholinyle)
<tb> doxorubicine <SEP> de <SEP> l'exemple <SEP> 4 <SEP> ............................. <SEP> 0,5
<tb> - <SEP> citrate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 5,7
<tb> - <SEP> sodium <SEP> carboxyméthylcellulose <SEP> (qualité <SEP> de <SEP> faible
<tb> viscosité) <SEP> 2,0
<tb> - <SEP> parahydroxybenzoate <SEP> de <SEP> méthyle........................... <SEP> 1, <SEP> 5 <SEP>
<tb> - <SEP> parahydroxybenzoate <SEP> de <SEP> propyle <SEP> 0,2
<tb> - <SEP> eau <SEP> Q. <SEP> S. <SEP> P. <SEP> 1,0 <SEP> ml
<tb>
- Formulation B :
EMI34.2
<tb>
<tb> solution <SEP> stérile <SEP> dans <SEP> un <SEP> système <SEP> de <SEP> véhicule <SEP> aqueux
<tb> pour <SEP> injection <SEP> Mg <SEP>
<tb> - <SEP> composé <SEP> de <SEP> l'exemple <SEP> 7 <SEP> 4
<tb> - <SEP> citrate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> ......................................... <SEP> 5,7
<tb> - <SEP> sodium <SEP> carboxyméthylcellulose <SEP> (qualité <SEP> de <SEP> viscosité
<tb> faible) <SEP> 2,0
<tb> - <SEP> parahydroxybenzoate <SEP> de <SEP> méthyle <SEP> 1,5
<tb> - <SEP> parahydroxybenzoate <SEP> de <SEP> propyle <SEP> D, <SEP> 2
<tb> - <SEP> eau <SEP> Q. <SEP> S. <SEP> P. <SEP> 1,0 <SEP> ml
<tb>
De même, on pourrait formuler des pastilles pour administration orale de la façon suivante : - formulation C :
EMI34.3
<tb>
<tb> formulation <SEP> des <SEP> pastilles <SEP> Mg
<tb> - <SEP> composé <SEP> de <SEP> l'exemple <SEP> 7.................................. <SEP> 5, <SEP> 0 <SEP>
<tb> -lactose <SEP> 91
<tb> - <SEP> amidon <SEP> de <SEP> blé <SEP> (séché) <SEP> 51,5
<tb> - <SEP> gélatine <SEP> 2,5
<tb> - <SEP> stéarate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> ..................................... <SEP> 1, <SEP> 0 <SEP>
<tb>
Le composé de l'exemple 7 est mis en poudre et passé à travers un tamis à mailles et bien mélangé avec le lactose et 30 mg de l'amidon de blé passant tous les deux à travers un tamis.
Les poudres mélangées sont composées avec une solution de gélatine chaude préparée en mélangeant la gélatine dans l'eau et en chauffant pour former une solution à 10% poids/poids. La masse est mise en granules par passage à travers un tamis et les granules humides sont séchées à 400C.
Les granulés secs sont regranulés par passage à travers un tamis
<Desc/Clms Page number 35>
et le reste de l'amidon et du stéarate de magnésium est ajouté et on mélange énergiquement.
Les granulés sont comprimés pour produire des pastilles pesant chacune 150 mg.
Des capsules pourraient être formulées de la façon suivante : - formulation D :
EMI35.1
<tb>
<tb> formulation <SEP> de <SEP> la <SEP> capsule <SEP> Mg
<tb> - <SEP> composé <SEP> de <SEP> l'exemple <SEP> 8 <SEP> 10
<tb> - <SEP> lactose <SEP> 190 <SEP>
<tb>
-formulation D':
EMI35.2
<tb>
<tb> formulation <SEP> de <SEP> la <SEP> capsule <SEP> Mg
<tb> - <SEP> 3'-déamino-3'- <SEP> (3''-cyano-4''-morpholinyle)doxorubicine
<tb> de <SEP> l'exemple <SEP> 4 <SEP> (C.)..................................... <SEP> 1
<tb> -lactose <SEP> 199
<tb>
On fait passer le composé de l'exemple 8 ou 4 (C. ) et le lactose à travers un tamis et les poudres sont bien mélangées ensemble avant d'être introduites dans des capsules de gélatine dures de taille convenable, de telle sorte que chaque capsule contienne 200 mg des poudres mélangées.
EMI35.3
1