Nouveaux dérivés aminés de 2",3" didésoxygiycosides d'épipodophyllotoxine, leur procédé de préparation, leur utilisation comme médicament et leur utilisation destinée aux traitements anticancéreux.
La présente invention concerne des nouveaux dérivés d'amino 2", 3" didésoxygiycosides d'épipodophyllotoxine, leur procédé de préparation, leur utilisation comme médicament et leur utilisation destinée aux traitements anticancéreux.
Parmi les dérivés issus de lignanes naturels, il existe la classe des épipodophylloïdes, ayant le squelette de base de la podophyllotoxine. Y figurent les dérivés hémisynthétiques tels que l'Etoposide ou le Téniposide lesquels sont utilisés de façon usuelle dans la préparation de médicaments pour le traitement du cancer. Ils sont considérés comme des produits majeurs dans ce domaine.
L'Etoposide possède des propriétés antitumorales et permet de traiter en particulier le cancer du poumon à petites cellules et le cancer des testicules.
L'inconvénient de ces produits est leur manque d'hydrosolubilité et rencontrent par conséquent des difficultés au niveau de la formulation et de l'administration.
L'objet de la présente invention est de montrer que des dérivés de la 4'-déméthyl épipodophyllotoxine, possédant en position 4, une substitution de structure 2"-désoxyglycoside, permet, par l'incorporation d'un ou plusieurs azotes, de former des composés dont les sels d'addition possèdent une solubilité aqueuse permettant de répondre au problème et montrent l'activité anticancéreuse recherchée.
Le brevet EP-0 196 618 relate des dérivés hydrosolubles de 4'-déméthyl épipodophyllotoxine de formule :
où R1 = Me, X1 = NH2, NMe2, X2 = OH
Le brevet EP-0 415 453 mentionne des dérivés β-D-altrosides de 4'-déméthyl épipodophyllotoxine de formule
où R
1 = Me R
2, R
3 = OH et NH
2 ou F et NH
2 de même que JP 0161, 423.
D'autres publications mentionnent des dérivés analogues (Carbohydr. Res. 1990, 206, 219 ; Chem. Pharm. Bull. 1986, 34, 3733 ; Chem. Pharm. Bull 1986, 34, 3741 ; Chem. Lett. 1987, 799).
Le fait d'utiliser un glycoside ayant une position 2"-désoxy est tout à fait particulier. Il permet d'obtenir des composés plus lipophiles que les analogues hydroxyles et, par conséquent, avoir un spectre d'activité antitumoral élargi. Cela leur permet d'avoir une meilleure pénétration membranaire et de pouvoir atteindre plus facilement la cible biologique comme, par exemple, les tumeurs solides peu irriguées. En outre, l'avantage de posséder une fonction amino par exemple en position 3", confère une possibilité de salification donc d'hydrosolubilité suffisante pour une meilleure formulation et une meilleure administration.
La présente invention concerne donc un composé de formule générale I
dans laquelle le groupement en 3" N(R
1 R
2) est en position β (série 2-désoxy D Arabino) ou α (série 2-désoxy D ribo) par rapport au cycle, R
1 et R
2 identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène, un groupe alkyle de C
1 à C
6, pouvant former un cycle, ce cycle pouvant comporter un hétéroatome comme un oxygène ou un azote, un groupe aminoalkyle en C
1 à C
6 ou cyanométhyle.
X et Y peuvent être identiques ou différents et représentent un OH, CH3, CH2- NH2, X et Y peuvent également être liés et constituer un cycle, comme par exemple, un 2-méthyl 1,3 dioxane, formant ainsi un squelette bicyclique osidique de type 4,6- éthylidène 3-amino-2,3-didésoxy-β-D arabino ou ribo-hexo pyranoside.
Elle concerne également leurs sels d'addition avec des acides minéraux ou organiques salifiant le ou les atomes d'azote, en particulier les chlorhydrates.
D'une manière avantageuse, le groupe NR1R2 est un groupement NH2 ou N(CH3)2.
Le groupe NR1R2 peut également être un groupe amino substitué une ou deux fois par un méthyl, CH2CN, CH2-CH2-NH2, former un cycle comme la morpholine.
De manière avantageuse, les composés de formule générale I seront choisis avec un glycoside pour lequel X et Y forment un cycle avec un enchaînement OCH(CH3)OCH2, tel qu'un 4,6 éthylidène-3-amino-2,3-didésoxy-β-D arabino-hexo pyranoside ou bien 4,6 éthylidène-3-amino-2,3-dιdésoxy-β-D-ribo-hexopyranoside.
En particulier, les composés selon l'invention sont sélectionnés parmi les composés suivants :
• 4'-Déméthyl-4-0(3-amino-4,6-éthylidène-2,3-didésoxy-β-D-arabinohexopyranosyI) épipodophyllotoxine,
• 4'-Déméthyl-4-0(3-amino-4,6-éthylidène-2,3-didésoxy-β-D-ribohexopyranosyl) épipodophyllotoxine,
• 4'-Déméthyl-4-0(3-diméthylamino-4,6-éthylidène-2,3-didésoxy-β-D-arabinohexo- pyranosyl) épipodophyllotoxine,
• 4'-Déméthyl-4-0(3-diméthylamino-4,6-éthylidène-2,3-didésoxy-β-D-ribohexo- pyranosyl) épipodophyllotoxine,
• 4'-Déméthyl-4-0(3-cyanométhylamino-4,6-éthylidène-2,3-didésoxy-β-D-ribohexo- pyranosyl) épipodophyllotoxine,
• 4'-Déméthyl-4-0(3-(N-morpholino)-4,6-éthylidène-2,3-didésoxy-β-D-ribohexo- pyranosyl) épipodophyllotoxine,
• 4'-Déméthyl-4-0[3(2-aminoéthylamino)-4,6-éthylidène-2,3-didésoxy-β-D-ribohexo- pyranosyl)] épipodophyllotoxine,
• 4'-Déméthyl-4-0(3-amino-2,3,6-tridésoxy-β-D-ribohexopyranosyl)
épipodophyllotoxine,
• 4'-Déméthy 1-4-0(3, 6-diamino-2,3,6-tridésoxy-β-D-ribohexopyranosyl)
épipodophyllotoxine.
La présente invention concerne aussi les compositions pharmaceutiques comprenant au moins un composé de formule générale I selon l'invention et un excipient approprié.
Les compositions pharmaceutiques peuvent être présentées de façon adaptée par l'administration par voie injectable ou par voie orale sous forme de capsule, de gélules, de comprimés à la posologie de 1 à 200 mg/m2 par voie injectable et de 5 à 500 mg/m2 par voie orale par période de 24 h.
Ces dérivés peuvent ainsi être administrés en clinique humaine pour traiter différentes formes de cancer tels le cancer du poumon à petites cellules, le cancer des testicules, les tumeurs embryonnaires, les neuroblastomes, le cancer du rein, les
lyphomes Hodgkiniens et non Hodgkiniens, les leucémies aiguës, les cancers colorectaux, les melanomes, les choriocarcinomes placentaires et les adénocarcinomes mammaires.
La présente invention est également relative aux procédés de préparation des composés de formule I ainsi que de leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables.
La présente invention concerne donc les procédés de préparation des composés de formule générale I selon l'invention, dans lesquels on fait réagir un composé de formule III ou IV ou V
avec la 4'-Déméthyl 4'-benzyloxycarbonyl épipodophyllotoxine avec l'éthérate de BF3, ou le triméthyl silyl trifluorométhanesulforate dans un solvant inerte à basse température ;
dans la formule III et IV, le substituant en position 3 peut être α ou β, NR1 R2 peut être un amino protégé par un groupe Z,
dans la formule V, P représente un groupe protecteur d'alcool et les produits résultants de cette condensation sont déprotégés et hydrogénés pour fournir les composés de formule I ,
les aminés primaires en position 3 du glycosyl sont méthylées par le formol et le cyanoborohydrure de sodium.
L'intermédiaire de formule IV est préparé en faisant réagir un mélange de diacétoxy azido glycoside VI
avec le chlorure de tertbutyl diméthylsilyl en présence d'imidazole, en ce que l'on sépare les produits résultant de cette réaction, en ce que chacun de ces produits sont déacétylés, cyclisés en 4,6-éthylidène avec l'acétal de l'acétaldehyde en milieu acide catalytique.
D'autres caractéristiques du procédé selon l'invention apparaîtront à la lumière de la description qui suit, notamment du procédé de synthèse reporté sur le schéma I.
Elle se fait selon une méthodologie décrite (J. C. Florent et C. Monneret, J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1987, 1 171 et B. Abbaci, J. C. Florent et C. Monneret, Bull. Soc. Chim. Fr. 1989, 667) à partir du glucal 1. L'ion azoture est condensé pour fournir un intermédiaire glycosidique 2 dont le OH anomérique est protégé par un groupement silyl exclusivement en position β selon la technique décrite (C. Kolar et G. Kneissl Angew. Chem. Int. Ed 29, 809 (1990)) pour fournir le mélange des 2 azides épimères : 3 et 4 séparables chromatographiquement à ce stade. Par déacétylation basique en présence de méthylate de sodium, les diols en position 4, 6 sont obtenus : composés 5 et 12. Le composé diol azide β 5 est cyclisé en éthylidène classiquement à l'aide de l'acétal de l'acétaldehyde en catalyse acide pour conduire au composé 6 dont l'azide se réduit en aminé 7 pour être protégée par un groupement benzyloxycarbonyle (Z) en composé 8, nécessaire pour effectuer le couplage avec la déméthyl épipodophyllotoxine, elle-même protégée sur son phénol en 4' par un groupe benzyloxycarbonyle, cet intermédiaire sera appelé DMEPT4'-OZ. Ce couplage s'effectue dans un premier temps par clivage du silyle protecteur par les ions F" suivi du traitement par l'éthérate de BF3 à basse température dans le même milieu. La déprotection des groupements Z par hydrogénolyse fournit le composé 10 de formule générale I (NR
1R
2 = βNH
2 ; XY = OCH(CH
3)OCH
2). Le composé 1 1 de formule générale I (NR
1R
2 = βNMe
2 ; XY = OCH(CH
3)OCH
2) s'obtient par méthylation de l'aminé primaire précédente par action du formol et du cyanoborohydrure de sodium.
L'intermédiaire glycosidique azide α 12 suit la même suite de réaction que son épimère et fournit de façon identique le dérivé de couplage avec la DMEPT4'OZ à partir de l'azide 3" α 13, dans ce cas le couplage est effectué plus facilement selon deux techniques.
La première technique consiste à traiter le dérivé ribohexopyranoside 13 par le triméthyl silyl trifluorométhane sulfonate (TMSOTf) à - 40°C dans du CH2Cl2. La deuxième technique consiste à utiliser l'éthérate de BF3 dans le CH2Cl2 à - 15°C. L'intermédiaire obtenu 14 est alors réduit catalytiquement pour conduire à 15 correspondant à la formule générale I où NR1R2 = αNH2 et XY = OCH(CH3)OCH2. La même méthylation que pour le composé βNH2 10, par le formol et le
cyanoborohydrure conduit au dérivé diméthylamino correspondant : formule générale I (NR1R2 = αNMe2 ; XY = OCH(CH3)OCH2). A partir de l'aminé primaire 15, il est possible d'alkyler l'azote avec un dérivé halogène comme l'iodoacétonitrile dans des conditions faiblement basiques avec la triéthylamine dans la DMF et conduire au dérivé 16 de formule générale I où NR1R2 = αNHCH2CN ; XY = OCH(CH3)OCH2. De la même façon, le dérivé 17 s'obtient en formant le cycle morpholine par cyclisation de l'éther diiodé sur le même intermédiaire aminé primaire 15. La même alkylation avec la iodoéthylamine protégée par un groupement Z sur le composé 15 fournit le dérivé 18 qui est réduit catalytiquement en 19 dérivé diamino correspondant à la formule générale I avec NR1R2 = α-NHCH2CH2NH2 ; XY = OCH(CH3)OCH2.
Les composés de formule I où XY ne forme pas un cycle s'obtiennent de la façon suivante représentés sur le schéma 2 :
l'azide α silylé 12 est tosylé sélectivement avec le chlorure de tosyle dans la pyridine en 21, le tosylate de l'alcool primaire est échangé en dérivé iodo 22. A ce stade, l'alcool secondaire en position 4 est protégé par un chloroacétate pour fournir le 2-desoxysucre fonctionnalisé 23 prêt à être condensé avec la DMEPT 4'-OZ dans les conditions usuelles avec l'éthérate de BF
3 dans le chlorure de méthylène à basse température. L'intermédiaire 24 obtenu, permet par passage sur la résine amberlite IRA410 traitée en milieu basique de déprotéger le groupe chloroacétate en composé 25 et l'hydrogénation catalytique finale permet en une étate de réduire la fonction azide en amino 3"α, de déprotéger la fonction Z en position 4' et de réduire le carbone 6" en méthyle pour fournir le dérivé 26 correspondant à la formule générale I où NR
1R
2 = 3"αNH
2 ; X =
OH ; Y = CH
3. L'intermédiaire 24 obtenu précédemment peut réagir avec l'ion azoture dans la DMF à température ambiante pour fournir le 3"αN
3, 6"-N
3 comportant un azidoacétate sur la position 4" 27, lequel peut se couper en alcool 4" par un traitement similaire au précédent : le passage sur résine échangeuse Amberlite IRA 410 pour fournir le diazidoalcool 28. L'étape de réduction catalytique finale permet d'obtenir le dérivé diaminé 29 correspondant à la formule générale I (où NRjR
2 = 3"αNH
2 ; X = OH ; Y = CH
2NH
2). Les sels formés à partir des composés azotés sont, par exemple, des chlorhydrates et se forment de façon classique en traitant une solution méthanolique du composé azoté par une solution stoechiométrique par rapport aux sites à salifier de méthanol chlorhydrique préalablement dosé. Le chlorhydrate cristallisé peut éventuellement s'obtenir par précipitation dans le milieu réactiormel par addition d'éther éthylique.
A titre indicatif et pour illustrer les différentes étapes de la synthèse mais, de façon non limitative, les exemples suivants sont donnés.
EXEMPLE 1
Formule générale I : NR1R2 = βNH2 ; XY = OCH(CH3)OCH2
4'-Déméthyl-4-0(3-amino-2,3-didésoxy-4,6-éthylidène-β-D-arabinohexopyranosyl) épipodophyllotoxine (composé 10)
Stade 1
Une solution de tri-O-acétyl-D-glucal 1 (50 g ; 183 mmol) dans de l'eau (400 ml) est chauffée durant 3 h à 80°C. Le milieu réactiormel est alors refroidi à 20°C avant addition d'azoture de sodium (17,9 g ; 275 mmol) et d'acide acétique (38 ml ; 600 mmol). Après agitation à température ambiante durant 24 h, le milieu est neutralisé par du NaHCO
3 (sel). La phase est extraite avec de l'acétate d'éthyle (3 × 500 ml). Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO
4 puis concentrées sous pression réduite. Ceci fournit 51 g de produit brut 2 immédiatement traité comme suit.
Stade 2
Tertbutyldiméthylsilyl-3-azido-2,3-didésoxy-4,6-di-O-acétyl-β-D-arabinohexopyranoside 3 et terbutyldiméthylsilyl-3-azido-2,3-didésoxy-4,6-di-O-acétyl-β-D-ribohexopyranoside 4
A une solution du mélange brut 2 (16,1 g ; 58 mmol) obtenu au stade 1 dans du dichlorométhane anhydre (200 ml) préalablement refroidi à 0°C, sont ajoutés successivement, sous argon, 6 g d'imidazole (87,8 mmol) et 13,24 g de chlorure de tertbutyldiméthylsilyle (87,8 mmol). Après agitation durant 15 min à 0°C et 19 h à 20°C, le milieu réactiormel est versé dans 500 ml H2O. La phase aqueuse est extraite par du CH2Cl2 (200 ml) puis après séchage sur MgSO4, la phase organique est concentrée sous pression réduite et le résidu (18,7 g) est chromatographié sur gel de silice (cyclohexane/AcOEt : 9/1). On isole ainsi 10,7 g de 3 (sirop ; 48 %) et 4,7 g de 4 (sirop ; 21 %) ; cependant que des fractions intermédiaires renferment un mélange de 3 et 4 (3,3 g ; 15 %).
Stade 3
Tertbutyldiméthylsilyl-3-azido-2,3-didésoxy-β-D-arabino-hexopyranoside 5
A une solution du dérivé 3 (3 g ; 7,7 mmol) obtenu au stade 2 dans du méthanol anhydre (40 ml) est ajoutée, sous argon, une solution de méthanolate de sodium 1M (1,9 ml). Après réaction durant 1 h 30 à 20°C, le milieu réactionnel est ramené à pH = 7 par addition de résine H+ (amberlite IRC 50 S). Le mélange réactionnel est filtré et le filtrat concentré sous pression réduite conduisant à 2,27 g de 5 (97 %).
Stade 4
Tertbutyldiméthylsilyl-3-azido-2,3-didésoxy-4,6-O-éthylidène-β-D-arabinohexopyranoside (6)
A une solution de 5 (0,20 g ; 0,6 mmol) obtenu au stade 3 dans 5 ml
d'acétonitrile, on ajoute 0,94 ml (6,6 mmol) du diéthylacétal de l'acétaldéhyde puis 15 mg d'acide paratoluènesulfonique (0,08 mmol). Le milieu réactionnel est agité à température ambiante durant 1 h puis dilué par de l'acétate d'éthyle (20 ml) avant lavage par une solution d'hydrogénocarbonate de sodium (pH = 9) (20 ml) puis par de l'eau (20 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4 puis concentrée sous pression réduite pour fournir 0,25 g de produit brut. Une purification sur gel de silice (cyclohexane/AcOEt : 95/5) permet d'isoler 0,19 g de 6 pur (86 %).
Stade 5
Tertbutyldiméthylsilyl-3-amino-2,3-didésoxy-4,6-O-éthylidène-β-D-arabino-hexopyranoside (7)
A une solution de 6 (2 g ; 6 mmol) obtenu au stade 4 dans 30 ml d'acétate d'éthyle sont ajoutés 50 μl de triéthylamine puis 0,5 g de charbon palladié à 10 %. Le milieu réactionnel est mis sous atmosphère d'hydrogène (pression atmosphérique). Après agitation durant 6 h à température ambiante, le catalyseur est éliminé par filtration et la phase organique concentrée sous pression réduite pour fournir 1,82 g de 7 pur (98 %).
Stade 6
Tertbutyldiméthylsilyl-3-aminobenzyloxycarbonyl-2,3-didésoxy-4,6-O-éthylidène-β-D- arabino-hexopyranoside (8)
Le chlorure de benzyloxycarbonyle (1,12 ml ; 7,88 mmol) est ajouté, sous argon, à une solution préalablement refroidie à 0°C de l'acétal 7 (1 ,82 g ; 6 mmol) obtenu au stade 5 dans un mélange de dichloroméîhane (30 ml) et de triéthylamine (1,27 ml ; 9,1 mmol) anhydres. Après agitation durant 8 h, le milieu réactionnel est versé dans 100 ml H2O et la phase aqueuse est extraite par du CH2C12 (100 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4, concentrée sous pression réduite et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane/AcOEt : 6/1 et 4/1) afin d'isoler 1,9 g de 8 (72 %).
Stade 7
3-aminobenzyloxycarbonyl-2,3-didésoxy-4,6-O-éthylidène-β-D-arabinohexopyranoside de la 4'-benzyloxycarbonyl-épipodophyllotoxine (9)
Au sucre 8 (2,0 g ; 4,57 mmol) obtenu au stade 6 en solution dans du dichlorométhane anhydre (100 ml) sont ajoutés 5,06 ml de fluorure de tétrabutylammonium (solution 1,1 M dans le THF ; 5,5 mmol). Lorsque la disparition totale de 8 est constatée par CCM (2 h d'agitation), le milieu réactionnel est refroidi à - 20°C. On additionne alors successivement la DMEPT 4'-OZ (2,57 g ; 4,8 mmol) puis 8,44 ml de BF
3.Et
2O (68,6 mmol). Après réaction durant 1 h à - 20°C, le milieu réactionnel est versé dans 200 ml d'une solution de NaHCO
3 saturée (addition de sels de NaHCO
3) (pH = 9). La phase organique est séchée sur MgSO
4, concentrée sous pression réduite, puis le résidu brut (6,2 g) est chromatographie sur gel de silice (CH
2Cl
2/Acétone : 98/2 puis 97/3) pour fournir 9 (2,1 g ; 54 %).
Stade 8
A une solution de 9 (0,28 g ; 0,33 mmol) dans 20 ml d'acétate d'éthyle sont ajoutés 30 μl de triéthylamine puis 150 mg de charbon palladié à 10 %. Le milieu réactionnel est mis sous atmosphère d'hydrogène (pression atmosphérique). Après agitation durant 1 h 30 à température ambiante, le catalyseur est éliminé par filtration et la phase organique concentrée sous pression réduite puis chromatographiée sur gel de silice (CH2Cl2/MeOH : 97/3 puis 95/5) pour fournir 172 mg du composé 10 pur (90 %). (Recristallisation dans CH2Cl2/pentane).
Préparation du chlorhydrate
A l'aminé 10 (61 mg ; 0,10 mmol) en solution dans du dichlorométhane anhydre (6 ml) est ajoutée une solution de méthanol chlorhydrique 0,098 M (1,09 ml ;
0,106 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 10 minutes. Le produit attendu est précipité après addition d'éther (20 ml). On recueille 56 mg (86 %) du chlorhydrate de
10.
EXEMPLE 2
Formule générale I (NR1R2 = βNMe2 ; XY = OCH(CH3)OCH2)
4'-Déméthyl-4-0(3-diméthylamino-2,3-didesoxy-4,6-éthylidène-β-D- arabinohexopyranosyl) épipodophyllotoxine (Composé 11)
A une solution de 10 (0,19 g ; 0,33 mmol) dans du dichlorométhane anhydre (15 ml) sont ajoutés successivement du formaldéhyde (13,5 μl) et du cyanoborohydrure de sodium (85 mg). Après agitation durant 45 min à température ambiante, ces mêmes réactifs sont additionnés et la réaction est poursuivie durant 45 min. Le milieu réactionnel est dilué par du CH2Cl2 (30 ml) et lavé par de l'eau (40 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4 et concentrée sous pression réduite. Le résidu est chromatographie sur gel de silice (CH2Cl2/MeOH : 97/3). Ceci fournit 101 mg de 1 1 (51 %).
Préparation du chlorhydrate
A l'aminé 1 1 (101 mg ; 0,17 mmol) en solution dans du dichlorométhane anhydre (7 ml) est ajoutée une solution de méthanol chlorhydrique 0,098 M (1,72 ml ; 0,17 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 10 minutes. Le produit attendu est précipité après addition d'éther (20 ml). On recueille 86 mg (81 %) du chlorhydrate de 1 1.
EXEMPLE 3
Formule générale I : NR1R2 = α-NH2 ; XY = OCH(CH3)OCH2
4'-Déméthyl-4-O-(3-amino-2,3-didésoxy-4,6-éthylidèneβ-D-ribohexopyranosyl) épipodophyllotoxine (composé 19)
Stade 1
Tertbutyldiméthylsilyl-3-azido-2,3-didésoxy-β-D ribo hexopyranoside (composé 12)
De façon similaire, au stade 3 de l'exemple 1 , mais en utilisant le composé 4, on obtient le composé 12 qui est engagé directement dans le stade 2.
Stade 2
Tertbutyldiméthylsilyl-3-azido-2,3-didésoxy-4,6-O-éthylidène-β-D-ribo hexopyranoside (13)
A une solution de 12 (0,25 g ; 0,8 mmol) obtenu au stade 1 dans 10 ml d'acétonitrile, on ajoute 1,1 ml (8 mmol) du diéthylacétal de l'acétaldéhyde puis 52 mg d'acide camphorsulfonique (0,24 mmol). Le milieu réactionnel est agité à température ambiante durant 9 h puis dilué par de l'acétate d'éthyle (30 ml) avant lavage par une solution d'hydrogénocarbonate de sodium (pH = 9) puis par de l'eau (30 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4 puis concentrée sous pression réduite pour fournir 0,3 g de produit brut. Une purification sur gel de silice (cyclohexane/AcOEt : 15/1) permet d'isoler 0,15 g de 13 pur (55 %).
Stade 3
3-azido-2,3-didésoxy-4,6-O-éthylidène-β-D-ribo-hexopyranoside de la 4'-benzyloxycarbonyl-épipodophyllotixne (composé 14)
lère voie de synthèse :
A un mélange de DMEPT 4'-OZ (438 mg ; 0,82 mmol), de 13 (270 mg ; 0,82 mmol) obtenu au stade 2 et de tamis moléculaire 4 A (1,5 g) dans du dichlorométhane anhydre (30 ml) refroidi à - 40°C, est ajouté le triméthylsilyltrifluorométhanesulfonate (TMSOTf) (446 μl ; 2,46 mmol). Après réaction durant 1 h 15 à - 40°C, le milieu réactionnel est neutralisé par de la triéthylamine (342 μl), filtré puis lavé par une solution saturée de NaCl (20 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4, concentrée sous pression réduite puis, le résidu brut est chromatographie sur gel de silice (cyclohexane/AcOEt : 65/35) pour fournir 14 (260 mg ; 45 %).
2ème voie de synthèse :
A un mélange de DMEPT 4'OZ ( 1 ,85 g ; 3 ,46 mmol), de 13 ( 1 ,20 g ; 3 ,64 mmol) obtenu au stade 2 dans du dichlorométhane anhydre (100 ml) refroidi à - 15°C, est ajouté l'éthérate de trifluorure de bore (BF3-Et2O) (425 μl ; 3,46 mmol). Après réaction durant 2 h à - 15°C, le milieu réactionnel est dilué par 100 ml de CH2C12 puis, versé dans 200 ml d'une solution de NaHCO3 saturée. La phase organique est séchée sur MgSO4, concentrée sous pression réduite puis, le résidu brut (2,9 g) est
chromatographie sur gel de silice (cyclohexane/AcOEt : 65/35) pour fournir 14 (1,19 g ; 47 %) (recristallisation Et2O/hexane).
Stade 4
3-amino-2,3-didésoxy-4,6-O-éthylidène-β-D-ribo-hexopyranoside
d'épipodophyllotixine 15
A une solution de 14 (1 10 mg ; 0,15 mmol) obtenu au stade 3 dans un mélange de 10 ml d'éthanol et de 5 ml d'acétate d'éthyle sont ajoutés 20 μl de triéthylamine puis 20 mg de charbon palladié à 10 %. Le milieu réactionnel est mis sous atmosphère d'hydrogène (pression atmosphérique). Après agitation durant 2 h à température ambiante, le catalyseur est éliminé par filtration et la phase organique concentrée sous pression réduite puis chromatographiée sur gel de silice (CH2Cl2/MeOH : 97/3 puis 95/5) pour fournir 63 mg de 15 pur (72 %).
HT et H
6') ; 6,51 (1H, s, H
8) ; 6,86 (1H, s, H
5).
Préparation du chlorhydrate
A l'aminé 15 (50 mg ; 0,087 mmol) obtenue au stade 4 sont ajoutés 890 μl d'une solution de méthanol chlorhydrique 0,098 M (0,087 mmol). Après agitation durant 10 minutes et addition d'éther (10 ml), les cristaux ou chlorhydrate (52 mg, 98 %) sont obtenus par filtration.
EXEMPLE 4
Formule générale I : NR1R2 = α-NMe2 ; XY = OCH(CH3)OCH2
4'-Déméthyl-4-O(3-N,N-diméthylamino-2,3-didésoxy-4,6-O-éthylidène-β-D-ribohexopyranosyl) épipodophyllotoxine 20
A une solution de 15 (29 mg : 0,05 mmol) obtenu au stade 4 de l'exemple 3 dans
1 ml d'acétonitrile sont ajoutés successivement du formaldéhyde (10,3 μl) et du cyanoborohydrure de sodium (12 mg). Après agitation durant 2 h à température ambiante, le milieu réactionnel est dilué par du CH2Cl2 (20 ml) et lavé par de l'eau (20 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4 et concentrée sous pression réduite. Le résidu est remis en réaction dans les mêmes conditions et après un traitement identique chromatographie sur gel de silice (CH2Cl2/MeOH : 97/3). Ceci fournit 29 mg de 20 (95 %).
Préparation du chlorhydrate
A l'aminé 20 (59 mg ; 0,1 mmol) en solution dans du méthanol anhydre (2 ml) est ajoutée une solution de méthanol chlorhydrique 0,098 M (1 ml ; 0,1 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 10 minutes. Le produit attendu est précipité après addition d'éther (20 ml). On recueille 33 mg (53 %) de cristaux.
EXEMPLE 5
Formule générale I : NR1R2 = α-NHCH2CN ; XY = OCH(CH3)OCH2
4'-Déméthyl-4-O-(3-cyanométhylamino-2,3-didésoxy-4,6-éthylidène-β-D-ribohéxopyranosyl) épipodophyllotoxine (Composé 16)
A une solution de 15 (120 mg ; 0,21 mmol) obtenu au stade 4 de l'exemple 3 dans 4 ml de diméthylformamide sont ajoutés 200 μl de triéthylamine (1,47 mmol) puis 100 μl d'iodoacétonitrile (1,47 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 20 h à température ambiante puis dilué par de l'acétate d'éthyle (30 ml) avant lavage par de l'eau (4 × 30 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4, concentrée sous pression réduite puis chromatographiée sur gel de silice (CH2Cl2/acétone : 92/8) pour fournir 71 mg de 16 pur (55 %).
EXEMPLE 6
Formule générale I : NR1R2 = α-morpholino ; XY = OCH(CH3)OCH2
4'-Déméthyl-4-O-(3-N-morpholino-2,3-didesoxy-4,6-éthylidène-β-D-ribohexopyranosyl) épipodophyllotoxine (Composé 17)
A une solution de 15 (60 mg ; 0, 10 mmol) obtenu au stade 4 de l'exemple 3 dans 2 ml de diméthylformamide sont ajoutés 58 μl de triéthylamine (0,42 mmol) puis 512 mg de di-iodoéthyléther (1,57 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 96 h à température ambiante et à l'obscurité puis, dilué par de l'acétate d'éthyle (30 ml) avant lavage par de l'eau (4 x 30 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4, concentrée sous pression réduite puis chromatographiée sur gel de silice (CH2Cl2/acétone : 92/8) pour fournir 46 mg de 17 pur (68 %).
EXEMPLE 7
Formule générale I : NR1R2 = α-NH2(CH2)2NH2 ; XY = OCH(CH3)OCH2
4'-Déméthyl-4-O[3-(2-Aminoéthylamino)-2,3-didésoxy-4,6-éthylidène-β-D-ribo- hexopyranosyl] épipodophyllotoxine 18
A une solution de 15 (173 mg ; 0,30 mmol) obtenu au stade 4 de l'exemple 3 dans 10 ml de diméthylformamide sont ajoutés de la triéthylamine (127 μl ; 0,91 mmol) et du N-benzyloxycarbonyl-2-iodoéthyl-amine (0,28 g ; 0,91 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 5 jours à température ambiante puis, dilué par de l'eau (30 ml). Après extraction de l'acétate d'éthyle (30 ml) lavage à l'eau (5 × 20 ml), la phase organique est séchée sur MgSO4, concentrée sous pression réduite, puis chromatographiée sur gel de silice (CH2Cl2/MeOH : 97/3) pour fournir 155 mg de 18 pur (68 %).
qui est engagé directement dans l'étape suivante de débenzylation :
A une solution de 18 (0,15 g ; 0,20 mmol) dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éthanol (10 ml, 1/1) sont ajoutés de la triéthylamine (30 μl) puis du charbon palladié à 10 % (0,1 g). Le milieu réactionnel est mis sous atmosphère d'hydrogène (pression atmosphérique).
Après agitation durant 1 h 30 à température ambiante en présence d'hydrogène à pression atmosphérique, le catalyseur est éliminé par filtration et la phase organique concentrée sous pression réduite et chromatographiée sur gel de silice (CH
2Cl
2/MeOH(NH
3) : 97/3) pour fournir 107 mg (84 %) de 19.
Préparation du chlorhydrate
A la di-amine 19 (64 mg ; 0,10 mmol) en solution dans du méthanol anhydre (3 ml) est ajoutée une solution de méthanol chlorhydrique 0,098 M (2,13 ml ; 0,21 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 10 minutes. Le produit attendu est précipité après addition d'éther (20 ml). On recueille 50 mg (73 %) du chlorhydrate.
EXEMPLE 8
Formule générale I : NR1R2 = α-NH2 ; X = OH ; Y = CH3
4'-Déméthyl-4-0(3-amino-2,3,6-tridésoxyβ-D-ribo-hexopyranosyl) épipodopoyllotoxine (composé 26)
Stade 1
Tertbutyldiméthylsilyl-3-azido-2,3-didésoxy-6-O-tosyl-β-D-ribo-hexopyranoside 21
Une solution de chlorure de tosyle (1,55 g ; 8,15 mmol) dans la pyridine (10 ml) est ajoutée, goutte à goutte, à une solution du diol 12 (2,06 g ; 6,79 mmol) obtenu au stade 1 de l'exemple 3 préalablement refroidie à 0°C. Après agitation à la même température durant 1 h, puis durant 18 h à 20°C, le milieu réactionnel est dilué par du
dichlorométhane (100 ml). La phase organique est lavée par de l'eau (2 × 100 ml), séchée sur MgSO4 et concentrée sous pression réduite. Le résidu est purifié sur gel de silice (cyclohexane/EtOAc : 8/2). Ceci fournit 2,02 g de 21 (65 %).
Stade 2
Tertbutyldiméthylsilyl-3-azido-6-iodo-2,3,6-tridésoxy-β-D-ribo-hexopyranoside 22
Le composé 21 (2,02 g ; 4,42 mmol) obtenu au stade 1 en solution dans 120 ml d'acétone est chauffé au reflux durant 72 h en présence d'iodure de sodium (2,65 g ;
17,68 mmol). Après refroidissement, le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite (30 ml) puis dilué par du dichlorométhane (100 ml). Après lavage par une solution aqueuse de thiosulfate de sodium à 10 %, puis séchage sur MgSO4 et évaporation sous pression réduite, on obtient un résidu qui est purifié sur silice (cyclohexane/EtOAc : 8/2) fournissant 1,5 g (82 %) de 22.
Stade 3
Tertbutyldiméthylsilyl-3-azido-6-iodo-4-O-chloroacétyl-2,3,6-tridésoxy-β-D-ribo- hexopyranoside (composé 23).
Du chlorure de chloroacétyle (396 ml ; 5 mmol) est ajouté à une solution de 22
(1,03 g ; 2,5 mmol) obtenu au stade précédent dans un mélange de dichlorométhane (20 ml) et de pyridine (404 μl ; 5 mmol). Après 1 h d'agitation à - 10°C, le milieu réactionnel est dilué par du CH
2Cl
2 (30 ml) et lavé par de l'eau (3 × 20 ml). Un traitement habituel, suivi d'une chromatographie sur silice (cyclohexane/EtOAc : 10/1) livre 1 ,1 g (90 %) de composé 23.
Stade 4
4'-Déméthyl-4-O(3-azido-6-iodo-2,3,6-tridésoxy-β-D ribohexopyranosyl) épipodophyllotoxine (composé 24)
A un mélange de DMEPT 4'-OZ (1 g ; 1,85 mmol), de 23 (1 g ; 2,04 mmol) du stade précédent dans du dichlorométhane anhydre (100 ml) refroidi à - 15°C, est ajouté l'éthérate de trifluorure de bore (BF3.Et2O) (455 μl ; 3,7 mmol). Après réaction durant 5 h (- 15°C→ 0°C), le milieu réactionnel est dilué par du CH2Cl2 (100 ml) puis, versé dans une solution de NaHCO3 saturée (200 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4, concentrée sous pression réduite. Le résidu brut est chromatographie sur gel de silice (cyclohexane/AcOEt : 7/3) pour fournir 24 (0,8 g ; 48 %).
Stade 5
4'-Déméthyl-4-O(3-Azido-6-iodo-2,3,6-tridesoxy-β-D ribo-hexopyranosyl)4'-benzyloxy carbonyl épipodophyllotoxine (composé 25)
A une solution de l'azido-glycoside 24 (257 mg ; 0,29 mmol) dans un mélange
CH
2Cl
2/MeOH (15 ml, 2/1) est ajoutée de la résine OH- (Amberlite IRA 410). Après réaction durant 3 h à 20° C, le milieu réactionnel est filtré puis concentré sous pression réduite pour fournir 0,22 g de 25 pur (94 %).
Stade 6
4'-Déméthyl-4-0(3-amino-2,3,6-tridesoxy-β-D ribohexopyranosyl) épipodophyllotoxine (composé 26)
A une solution de 25 (0,20 g ; 0,25 mmol) du stade précédent dans 10 ml d'acétate d'éthyle sont ajoutés de la triéthylamine (100 μl) puis du charbon palladié à 10 % (0,2 g). Après agitation durant 30 h à température ambiante en présence d'hydrogène à pression atmosphérique, le catalyseur est éliminé par filtration et la phase organique concentrée sous pression réduite puis chromatographiée sur gel de silice (CH2Cl2/MeOH : 92/8) pour fournir 50 mg (38 %) de 26.
Préparation du chlorhydrate
A l'aminé 26 (70 mg ; 0,14 mmol) précédente en solution dans du méthanol anhydre (6 ml) est ajoutée une solution de méthanol chlorhydrique 0,098 M (1,44 ml ;
0,14 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 10 minutes. Le produit attendu est précipité après addition d'éther (20 ml). On recueille 40 mg (53 %) de chlorhydrate cristallisé.
EXEMPLE 9
Formule générale I : NRιR2 = α-NH2 ; X = OH ; Y = CH2NH2
4'-Déméthyl-4-0-(3,6-diamino-2,3,6-tridésoxy-β-D ribohexopyranosyl) épipodo-
phyllotixine (composé 29)
Stade 1
4'-Déméthyl-4'-benzyloxycarbonyl-4-0(3,6-diazido-4-azidoacétyl-2,3,6-tridesoxy-β-D ribo-hexopyranosyl)épipodophyllotoxine (composé 27)
A une solution de 24 (0,45 g ; 0,51 mmol) obtenu au stade 4 de l'exemple 8 dans
10 ml de diméthylformamide est ajouté de l'azoture de sodium (0,1 g ; 1,5 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 64 h à température ambiante, dilué par de l'eau (30 ml) et de l'acétate d'éthyle (30 ml). La phase organique est lavée par de l'eau (4 × 20 ml), séchée sur MgSO4, concentrée sous pression réduite et chromatographiée sur gel de silice (cyclohexane/AcOEt : 7/3) pour fournir 0,36 g de 27 (90 %).
Stade 2
4'-Déméthyl-4'-benzyloxycarbonyl-4-0(3,6-diazido-2,3,6-tridésoxy-β-D-ribo- hexopyranosyl) épipodophyllotoxine (composé 28)
A une solution de l'azido-glycoside 27 (70 mg ; 0,08 mmol) dans 3 ml d'un mélange CH2Cl2/MeOH (2/1, v/v) est ajoutée de la résine OH- (Amberlite IRA 410).
Après réaction durant 5 h à 20°C, le milieu réactionnel est filtré puis concentré sous pression réduite pour fournir 59 mg de 28 pur (94 %).
Stade 3
4'-Déméthyl-4-0(3,6-diamino-2,3,6-tridesoxy-β-D-ribo-hexopyranosyl)
épipodophyllotoxine (composé 29)
A une solution de 28 (0,1 1 g ; 0,15 mmol) du stade précédent, dans un mélange
d'acétate d'éthyle et d'éthanol (10 ml, 1/1) sont ajoutés de la triéthylamine (20 μl) puis du charbon palladié à 10 % (70 mg). Après agitation durant 16 h à température ambiante en présence d'hydrogène à pression atmosphérique, le catalyseur est éliminé par filtration et la phase organique concentrée sous pression réduite pour fournir 78 mg (95 %) de 29.
Préparation du Dichlorhydrate
A la di-amine 29 (78 mg ; 0,14 mmol) précédente en solution dans du méthanol anhydre (2 ml) est ajoutée une solution de méthanol chlorhydrique 0,098 M (2,92 ml ;
0,28 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 10 minutes. Le produit attendu est précipité après addition d'éther (20 ml). On recueille 70 mg (79 %) de dichlorhydrate cristallisé.
Expérimentation biologique
Les molécules ont été testées en expérimentation biologique et ont montré leur intérêt en tant qu'agent anticancéreux dans les tests de la leucémie P 388 in vivo chez la souris. Ce test est couramment utilisé dans le domaine de la recherche de substances anticancéreuses (Protocols for screening chemical agents and natural products against animal tumors and other biological Systems, R. Geran, N.H. Greenberg, M.M. MacDonald, A. M. Schumacher and B.J. Abbott, Cancer Chemotherapy reports 1972, 3, N° 2).
Cependant, ce modèle expérimental est extrêmement chimiosensible et de très nombreux composés manifestent une bonne activité ce qui rend ce test peu discriminant.
Nous avons modifié le protocole du test pour le rendre plus sélectif. L'administration des cellules tumorales se fait par voie intraveineuse et non par voie
intrapéritonéale. Elles se disséminent ainsi par la circulation dans tout l'organisme rapidement. L'administration du produit à tester est faite ensuite par voie intrapéritonéale. Deux paramètres sont définis pour mettre en évidence l'activité des composés :
• détermination de la dose efficace 50 (DE50) qui représente la dose minimum unique du composé à administrer pour obtenir une survie des animaux significative par rapport aux animaux témoins non traités ;
• détermination du temps de survie maximum des animaux quelque soit la dose administrée par injection unique. Le fait de pouvoir administrer une dose importante du composé et d'observer une survie importante, permet d'obtenir une mesure de l'efficacité thérapeutique maximale du produit que l'on peut atteindre.
Origine de la tumeur
La leucémie P 388 a été chimiquement induite en 1955 par le 3-méthylcholanthrène sur une souris DBA/2 (Am. J. Pathol. 33, 603, 1957).
Procédure pharmacologique
Les tumeurs sont maintenues par passages hebdomadaires sous forme d'ascite dans le péritoine de souris DBA/2 (lignée d'origine) et les expérimentations sont effectuées sur les souris femelles hybrides CDF} (bal b/c femelles XDBA/2 mâles) de 20 ± 2 g (Cancer chemother. Rep. 3, 9, 1972). Les cellules tumorales sont implantées par voie intraveineuse (106 cellules par souris) au jour 0. Les animaux sont randomisés et répartis par groupe de 2 pour chaque série.
Les substances antitumorales sont administrées par voie intrapéritonéale (ip) un jour après l'inoculation des cellules leucémiques (traitement aigu). Les solutions sont injectées à raison de 10 ml/kg de souris. Le critère d'évaluation de l'activité antitumorale est la prolongation de la survie des animaux traités. 86 % des souris meurent le 7ème jour après la greffe tumorale. Une substance sera considérée comme active si elle induit une survie supérieure à 8 jours.
Le tableau suivant permet de mettre en évidence la solubilité aqueuse des
produits de l'invention, exprimée en mg/ml, l'activité de ces composés en terme de DE50, de survie exprimée en jours ou en T/C %, qui représente le rapport entre la survie moyenne du groupe d'animaux traités et la survie moyenne du groupe des animaux contrôle.
Il apparaît ainsi que les composés de l'invention ont conservé le niveau d'activité des composés de référence comme l'Etoposide et ont en plus l'avantage d'avoir une solubilité aqueuse avantageuse pour la formulation et l'administration.