FR2565982A1 - Nouveaux amino-3-tridesoxy-3,4,6-glycals, leurs procedes de preparation et anthracyclines obtenues a l'aide de ces glycals - Google Patents

Abstract

PROCEDES DE PREPARATION DE NOUVEAUX AMINO-3-TRIDESOXY-3,4,6-GLYCALS ET UTILISATION DE CES NOUVEAUX COMPOSES POUR LA PREPARATION D'ANTHRACYCLINES. LES NOUVEAUX GLYCALS, DE FORMULES GENERALES CI-DESSOUS, SONT PREPARES EN TRAITANT DES GLYCALS DE FORMULES 10 ET 11 PAR UN MELANGE D'HYDRURE DE SODIUM ET DE SULFURE DE CARBONE, PUIS DE L'IODURE DE METHYLE, POUR OBTENIR DES METHYLTHIOCARBONATES DE FORMULES GENERALES 12 ET 13 DONT LES GROUPES METHYL-THIOCARBONATES SONT ELIMINES PAR REDUCTION PAR L'HYDRURE DE TRIBUTYLETAIN EN PRESENCE D'AZO-BIS-ISOBUTYRONITRILE. APPLICATIONS : UTILISATION DES GLYCALS DE FORMULES 14 ET 15 POUR LA PREPARATION D'ANTHRACYCLINES; UTILISATION DE CES DERNIERES POUR LA PREPARATION DE MEDICAMENTS.

Description

i La présente invention est relative à des nouveaux amino-3-tridésoxy-3,4,

6-qlycals, à leurs proodés de Drénaration et à des

anthracyclines obtenues à l'aide de ces glycals.

Les anthracyclines constituent un très important groupe de médicaments antibiotiques et antitumoraux. A ce

groupe appartiennent par exemple la doxorubicine antibioti-

que cytostatique de grande efficacité ou la daunorubicine antibiotique, antimitotique indiqué spécialement contre les leucémies, la maladie de Hodgkin, le réticulo sarcomeo ou les

lymphosarcomes.

De très nombreuses recherches ont été effectuées sur ces molécules pour déterminer la relation entre leur structure et leur activité biologique. Il ressort de ces

recherches que des modifications au niveau des sucres abou-

tissent souvent à des analogues pharmacologiquement plus intéressants que le produit de départ. Ces modifications

entrainent en effet une diminution de la dose thérapeuti-

quement efficace, une activité antitumorale plus marquée, des réactions secondaires, notamment la cardiotoxicité,

diminuées(cf. notamment les travaux de F. Arcamone "Doxoru-

bicine"Acadéric Press, New York,1981 sur la dannosamine, sucre

des daunorubicine et doxorubicine.

Parmi les modifications proposées figure, entre

autres, la désoxygénation du C-4' du sucre (Cf. Brev. Europ.

0 048 967 de Farmitalial selon les auteursde ce brevet le produit 3

représenté sur la Fig.I ci-après présente une activité anti-tunm-

rale très intéressante.

O HH

-CH3 O

oAl' 4' 1 = R = OH; = H (daunorRubicine)

1 R =

2 = R1 = R2= OH (doxorubicine) -3 = R1 = R2 = H (Brev. Europ. 0 048 967) L'inversion de la configuration du sucre au niveau des carbones en 3' et/ou 4' - voir Fig. II ci-après-. - 2 2

II

6-CH3 C 2ROH

H '

R. R

HC1

4 R = OH; R1 = H; R2 = NH2

R - R = H; R1 = NH2

ontribue également à préparer des dérivés pharmaologiquement très in-

téressants. Le glyoside 4 a une forte activité antitumorale et le pro-

duit désoxygéné 5 a fait l'objet d'un brevet assez récent-carlo Eba Jpn. Kokai Tokkyo Koho Jp 57-142-981(82-142-981),Farmitalia,Be4BE 891,837.J

L'intérêt des deux amino-désoxy-sucres qui consti-

tuent la partie sucre des anthracyclines 3 et 5 ne fait donc aucun doute. Malheureusement la façon dont ces sucres

ont été préparés dans les brevets ci-dessus cités limite consi-

dérablement leur potentialité. Ainsi par exemple les pro-

cédés utilisés partent - soit de l'anthracycline elle-même (et alors une désoxygénation en C-4' par exemple au niveau du produit 1

ne peut trouver son application que pour préparer exclusi-

vement le produit 3); - soit des sucres que l'on modifie. Il est évident

que cette deuxième alternative est beaucoup plus intéressan-

te, et bien plus générale. Seulement leprocédé proposé est économiquement absolument non viable, car très compliqué, comportant beaucoup d'étapes, et faisant appel notamment

à la formation d'balogênosucres, produits difficiles à syn-

thétiser et très souvent instables.

La présente invention s'est par conséquent fixé pour but de pourvoir.à une synthèse des sucres qui.soit facile,

simple et éconon4qoe de manière à pouvoir synthétiser de nom-

breux glycosides.

La présente invention a pour objet une nouvelle

fatiille de sucres et notamment les amino-3-tridésoxy-3,4,6-

glycals de formules générales 14 ou415 ci-après

CH3 3

X/RR

NRR'

14 15

dans lesquelles R ou R' qui peuvent être identiques ou dif-

férents représentent un atome d'hydrogène, ou un groupe alkyle ou acyle, substitués ou non, ou encore R et R' représentent ensemble le groupe /

pour former avec l'atome d'azote le groupe morpholino.

Des publications récentes ont en effet démontré que le remplacement du groupe amino (NH2) en position 3' de la daunorubicine par un groupe morpholino ( -)." se traduit par une puissance supérieure (in vivo) de l'activité antitumorale (Cf. notamment les travaux de

C.W. MOSHER et Coll.,J. Med. Chem. 25, 18, 1982).

Selon un mode de réalisation particulièrement

avantageux de l'objet de l'invention R et/ou R' représen-

tent le groupe COCF3 La présente invention a également pour objet un procédé de préparation des amino-3-tridésoxy-3,4,6-glycals onfonme à la présente invention, lequel procédé est caractérisé en ce que l'on prépare au cours d'une première étape des méthyl-thiocarbonates en 4 de formulesgénérales 12 et 13 ci-après: 1 s

CH3S C 3 CH3S-A C

/1 RR'

NRR' 12 13

R et R' ayant la même signification que ci-dessus)par traite-

ment des glycals 10 et 11 ci-après:

H C\3 HO 3

NRR'

1.1

(R et R' ayant la même signification que ci-dessus), par un mélange d'hydrure de sodium et de sulfure de carbone Puis par l'iodure de méthyle et en ce qu'au cours d'une deuxième

étape on procède à l'élimination réductrice des groupes mé-

thyl-thiocarbonates par action de l'hydrure de tributylétain

en présence d'azo-bis-isobutyronitrile.

Les glycals 10 et 11 sont connus et leur préparation décrite par J. BOIV/N,M. PAIS et C. MONNERET, Carbohydr. Res.,79,

193 (1980).

La présente invention a encore pour objet une

autre variante du procédé de préparation des amino-3-tri-

désoxy-3,4,6 glycalsconformes à la présente invention laquelle variante est caractérisée en ce qu'au cours d'une première

étape on prépare les esters de formules générales 18 et 19.

/ CH3 / CH3

COR g < OCOR

RR' 1

RR'

18 19

(R et R' ayant la même signification que ci-dessus et R1 re-

présente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ou aryle substitués ou non)par action d'un anhydride d'acide ou d'un

halogénure d'acide en présence d'une base,sur les amino-

sucres de formules générales 16 et 17 ci-après:

/CH3 OH CH3

OH H

/C '

NRR' 16 17

R et R'ayant la nmeme signification que ci-dessus)et en ce qu'au cours d'une 2ème étape on prépare les glycals 14 et

recherchés par chauffage des esters 18 et 19 respecti-

vement.

Selon une modalité avantageuse de ce mode de réa-

lisation, le chauffage des esters 18 et 19 a lieu en pré-

sence d'un adsorbant,telle la silice SiO2, par exemple. Les

aminosucres 16 et 17 sont connus et leur préparation dé-

crite par H.H. BAER et H.R. HANNA, Can. J. Chem., 58,

1751, (1980).

La présente invention a en outre pour objet les anthracyclines obtenues à l'aide de glycals conformes à

la présente invention et à l'utilisation de ces anthracy-

clines seules ou en mélange avec d'autres principes actifs,

en tant que médicaments. -

Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comDrend

encore d'autres dispositions qui ressortiront de la description qui va suivi

La présente invention vise les nouveaux amio-3 tridé-

:soxy-3,4,6-glycalseurs procédés de préparation, les anthra-

cyclines obtenues à l'aide de ces glycals par glycosidation

des anthracyclinones, les médicaments contenant ces anthra-

cyclines, ainsi que les moyens propres à la préparation

et à l'utilisation de ces produits.

L'invention sera mieux comprise à l'aide du:; com-

plément de description qui va suivre, qui se réfère à des

exemples de mise en oeuvre des procédés conformes à la pré-

sente invention ainsi qu'a un compte- rendu d'expérimentation pharmacologique. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples de mise en oeuvre et ce compte-rendu sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention,

dont ils ne constituent en aucune manière une limitation.

EXEMPLE 1

Préparation de tridésoxy-2,3-,6 trifluoroacétamido-3 igéthyl-

thiocarbonate-4 L-arabino hexene-1 itol 12 (R, H, R' = COCF3) A une solution de 10 (R = H, R' = COCF3) (1,5 g; 6,6 mmoles) dans du tétrahydrofuranne anhydre (200 ml) on ajoute de l'hydrure de sodium à 80 % (400 mg, 12 mmoles) et laisse sous agitation sous atmosphère d'argon à 0 C durant 2h. On ajoute alors du sulfure de carbone (0,75 ml, 12 mmoles) puis de l'iodure de méthyle (0,75 ml, 12,1 mmoles). Apres une heure d'agitation à 0 C, le milieu réactionnel est dilué par de l'eau puis extrait par de l'éther. Ceci donne 1,7g de produit brut qui est filtré sur silice. L'élution par un

mélange d'hexane-dichlorométhane 2:1 fournit 0,8 g (Rendt.

%) de 12 (R=H, R'=CDECF3) pur cristallisé: F 145 C après recristallisa-

tion dans l'hexane; (a) 20 - 170 (c 1, chloroforme);

D -

I.r. vmax Nujol 360 (NH), 1690 et 1655 cm-1 (NCOCF3); R.m.n. (270 MHz, CDC13): 6,55 (1H, NH, m); 6,40 (1H, dd, J =5,5, J' = 1,8, H - 1); 5,89 (1H, t, J = J' = 9, H - 4); 4,88 (1H, m, J = J' = 9, J" = 2, J'" = 1,8, H 3); 4,68 (1H, dd, J = 5,5, J' = 1,8, H - 2); 4,18 (qd, J = 6,5, J' =

9, H-5); 2,57 (3H, s, SCH3); 1,32 (3H, d, J = 6,5, CH3-6).

EXEMPLE 2

Préparation de tétradésoxy-2,3,4,6 trifluoroacétamido-3 L-

threo hexene-17itol,-14i R - H, R' = COCF).

A une solution de 12 (R = H, R' = COCF3) (0,7 g, 2

mmoles) dans du toluène anhydre (100 ml) on ajoute sous ar-

gon, de l'azobis isobutyronitrile (50 mg) puis de l'hydrure de tributylétain (1 ml). Le milieu réactionnel est chauffé au reflux une nuit puis évaporé à sec et le résidu est remis en suspension dans du dichlorométhane et adsorbé sur silice (1 g) Une filtration sur 3,5 g de silice permet d'éluer dans les premières fractions (éluant hexane) l'excès d'hydrure de tributylétain. On isole dans les fractions suivantes (éluant hexane-dichlorométhane, 2:1) 440 mg de 14 (R = H, R' = COCF3)

(Rendement 95 %). Un échantillon est recristallisé pour ana-

lyse dans l'hexane F 101 - 102 C; - 29 (c l1 chlo-

-1 roforme); I.r. vmax Nujol: 3330 (NH); 1690 et 1640 cm (NHCOCF3); R.m.n. (270 MHz, CDC13): 6,42 (1H, d, J = 6, H-1); 6,15 (massif, NH); 4,67 (1H, m, J = 10, J' = 9, J" = , J'" = 2, H-3); 4,55 (1H, dd, J = 6, J' = 2, H-2) ; 4,08 (qd, J = 6,5, J' = 10, J" = 1, H-5); 2,32 (m, J = 14, J' = , J" = 1, H-4e); 1,48 (1H, m, J = 14, J' = J" = 10, H-4a);

1,30 (3H, d, J = 6,5, CH3-6).

EXEMPLE 3

Préparation du tridésoxy-2,3,6 trifluoroacétamido-3 méthyl-

thiocarbonate-4 L-ribo-hexene-l itol 13 (R = H, R' = COCF3).

Le produit 13 (R = H, R' = COCF3) est obtenu à par-

tir de 11 (R = H, R' = COCF3) de la même manière que le pro-

= duit 12 (R = H, R' = COCF3) à partir de 10 (R = H, R' = COCF3) F 92 C (CH2C12); /aD - 73 (c 1, chloroforme); I.r. cf 12 R.m.n. (CDC13, 270 MHz) ; 6,58 (1H, d, J 5,5, J' - 1 H-1); 6,56 (1H, m, J = 10, NH); 5,86 (1H, dd, J = 8, J' = 5, H-4); 4,92 (1H, m, J = 10, J' = J" = 5, H-3); 4,73 (1H, dd, J = ,5, J' = 5, H-2); 4,25 (1H, qd, J = 6,5, J' = 8, H-5);

2,57 (3H, s, SCH3); 1,35 (3H, d, J = 6,5, CH3-6).

EXEMPLE 4

Préparation de tétradésoxy-2,3,4,6 trifluoroacétamido-3 L-

erythro hexene-1 itol 15 (R -= H, R' = COCF3) Le produit est obtenu à partir de 13 (R = H. R' = COCF3) comme 14 (R = H, R' = COCF3) à partir de 12 (R = H, R' = COCF3); F 110 - 112 C (hexane); L20 -76 (c 1, chloroforme); I.r. vmax Nujol: cf 14; R.m.n. (270 MHz, CDC13): 6,49 (1H, d, J = 5,5, H-1); 6,46 (1H, massif, NH); 4,75 (1H, m, J = J' = 5, J" = 1, H-2); 4,33 (1H, m, H-3); 3,85 (1H, m, J = 6,5, J' = 10, J" = 2,5, H-5); 1, 95 (2H, m, J = 14, J' = 2,5, J" = 2,5, H-4e); 1,78 (2H, m, H-4a);

1,33 (3H, d, CH3-6).

EXEMPLE 5

Préparation d'O-acétyl-1 tétradésoxy-2,3,4,6 trifluoroacéta-

mido-3 L-threo-hexose 18 (R = H, R' = COCF3 R1 = CH3).

Une solution de tétradésoxy-2,3,4,6-trifluoro-

acétamido-3 L-threo hexose (16) (R = H, R' = COCF3) (2,2 g,

0,01 mole) dans 80 ml de pyridine et 30 ml d'anhydride acé-

tique est agitée durant une nuit à 'température ambiante. Une extraction classique au chlorure de méthylène conduit à 1,8 g

(70 %) d'acétates, 18. (anomères aL et L).

F mélange 130 - 155 C S.M.: m/z = 269 (M, absent); 209 (54 %); 194 (20 %);

(43 %); 140 (100 %).

I.R.: (CH2C12): 3440, 3060, 2995, 1750, 1730, 1560, 1450,

1430, 1380, 1370, 1330, 1320, 1280, 1230,

-1 1175, 1150, 1115, 1060, 1040, 1020 cm 1 RMN (CDC13) anomère aL: 6,62 ppm (NH); 6,22 (L1/2 = 6 Hz, H-1); 2,10 (singulet, COCH3); 1,22

(doublet, J = 6 Hz, CH3).

Anomère:B L

F = 162 - 163 C.

RMN (CDCl3): 6,27 (NH); 5,67 (doublet de doublet, J = 10 Hz; J 2,5 Hz, H1); 2,08 (singulet, COCH3);

1,27 (doublet, J = 6 Hz, CH3).

EXEMPLE 6

Préparation du tétradésoxy-2,3,4,6 trifluoroacétamido-3-L-

thréo he>ine-1 itol (14). (R = H, R' = COCF3) Une solution d'acétate 18 (600 mg; 2,23 mmoles) dans 100 ml de toluène en présence de 10 g de gel de silice

est portée à ébullition dans un ballon équipé d'un Dean-

Stark. Au bout d'une heure, le gel de silice est filtré et lavé à l'acétate d'éthyle. La solution organique est lavée par une solution de bicarbonate puis à l'eau. Après séchage et évaporation des solvants, le brut obtenu est purifié par un passage rapide sur une colonne de gel de silice. On obtient ainsi 210 mg (45 %) de glycal 14. (R = H, R' = COCF3) dont les

constantes sont celles déjà décrites dans l'Exemple 2.

SYNTHESES D 'ANTHRACYCLINES

Le couplage desglycals 14 (R = H, R' = COCF3) ou 15 (R = H, R' = COCF3) avec des anthracyclinones conduit à des

anthracyclines composés remarquables par leur activité anti-

tumorale. Cette synthèse comporte en général 2 étapes: a) la glycosidation b) la déprotection de fcnctions, car si R et R' des

glycals 14 et 15 représentent tous deux des atomes d'hydro-

gène, il faut, pour que la réaction ait lieu, protéger au

moins un atome d'hydrogène.

A titre d'exemple la daunomycinone 20 réagit avec le glycal 14 (R = H, R' = COCF3) dans différents solvants anhydres (par Ex: CH2C12, benzène,...) en présence d'acide

(par Ex: acide paratoluène sulfonique) à température ambiante.

On obtient à côté du composé 21, déjà décrit et l 1G prépare, les composés nouveaux 22a et 23a MeO O OH OH MeO O OH CHR 21 a R = COCF3

H0 0

+ 15. MeO 0 H bH MeO 0 OH O a R = COCr 23 a R = COCF3 22 b = H b R H

EXEMPLE 7 - " -

Réaction de glycosidation de la daunomycinone 20 par le glycal 14 (R = H, R' = COCF3) (Etape de glycosidation) A une solution de daunomycinone 20 (71 mg, 0,178 mmole) et de glycal 14 (R - H, R' = COCF3) (149 mg; 0,71 mmole) dans 15 ml de CH2C12 distillé sur P205, on ajoute

une quantité catalytique d'acide p-toluène sulfonique anhy-

dre (2,3 mg; 0,013 mmole).

Apres 4 heures sous agitation à température am-

biante, le milieu réactionnel est versé sur une solution de bicarbonate de sodium puis extrait de façon classique au

chlorure de méthylène. Une purification sur plaques de si-

lice (éluant: hexane/acétate d'éthyle 50/50) permet de séparer les trois glycosides formés il

-La O(t6tradésoxy-2',3', 4',6'trifluoroacétamido-

3-a-L_-threo-hexopyiannosyl)-7 daunomycinone 2_a(40 %;

rf = 0,26 hexane/acêtate d'&thyle 50/50).

-La O(tétradésoxy-2',3',4',6' trifluoroacétamido-

3e-L-threo-hexopyrannosyl) -9 daunomycinone 22a(35 %, rf =

0,28-hexane/acétate d'éthyle: 50/50).

-La di O-(tétradésoxy-2',3',4'1,6' trifluoroacâta-

mido-3-a-L-threo-hexopyrannosyl)-7,9 daunomycinone 23a(23 %;

rf = 0,34-hexane/ac6tate d'éthyle 50/50).

Produit 21a: Rendement 40 % F = 140 - 145 C (dec)

"D = 458 (C = 0,23; CHC13)

I.R. (KBr): 3500, 3330, 2940, 1705 (large),

1610, 1570, 1400, 1350, 1280,

1190, 1120, 1030, 980 cm 1.

RMN (CDC13): 1,3 (doublet, 3H); 2,4(singulet 3H) 4,4(singulet, 1H), 5,22 (multiplet,

L1/2 = 7 Hz, 1H); 5,56 (multi-

plet, L1/2 = 6,5 Hz, 1H); 6,10 (large, 1H); 13,1 (singulet,

1H); 13,85 (singulet, 1H).

rf= 0,7 (CH2C12-MeOH, 96-4)

rf = 0,26 (hexane-acétate d'éthyle, 50-50).

Produit 22a: Rendement 35 % F = 164 - 169 C (dec) aD = + 290 (C = 0,18; CHC13) I.R. (KBr): 3320 (large), 2980, 2940, 1720,

1710, 1610, 1580, 1550, 1450,

1415, 1380, 1350, 1290, 1250,

1210, 1140, 1070, 1040, 1010,

-1 990, 920 cm

RMN (CDC13): 2,37 (singulet, 3H); 4,03 (singu-

let, 3H), 4,98 (multiplet, L1/2 = 8 Hz, 1H); 5,42 (multiplet,L1/2 = 8 Hz, 1H); 13,27 (singulet, 1H);

13,79 (singulet, 1H).

rf = 0,66 (CH2C12-MeOH, 96-4).

rf = 0,28 (hexane-acétate d'éthyle, 50-50).

Produit 23a: Rendement 23 % F = 227 - 228 C (dec) aD = - 0,5 (C = 0,27, CHC13). I.R. (KBr): 3440, 3320, 2980, 2920, 1725, 1710,

1605, 1580, 1550, 1410, 1350, 1295,

1270, 1230, 1200, 1150, 1100, 1080,

1060, 1030, 1000, 980, 915 cm-1.

RMN (CDC13): 0,53 ppm (d, J = 6 Hz, 3H), 1,32 (d, J = 6 Hz, 3H); 2,31 (s, 3H); 4,03 (s, 3H); 4,97 (multiplet, L1/2 = 8 Hz, 2H); 5,47 (multiplet L1/2 = 8 Hz, 2H); 6,20 (large, NH, 2H); 13,23 (singulet, 1H); 13,79

(singulet, 1H).

rf = 0,58 (CH2C12/MeOH, 96-4).

rf = 0,34 (hexane/acétate d'éthyle, 50/50).

EXEMPLE 8

Préparation du chlorhydratede la diO-(ar.ino-3'-têtradésoxy-

2',3',4',6'-a-L-threo-hexopyrannosyl)-7,9-daunomycinone.23b (Etape de déprotection) La déprotection, c'est-à-dire l'élimination des groupements protecteurs (COCF3) des composés 21aet 23aest

réalisée en milieu basique aqueux.

A une solution de glycoside 23a(20 mg, 0,024 mmole) dans le tétrahydrofuranne (8 ml), on ajoute à 0 C et sous

atmosphère d'azote une solution de soude 0,1 N (8 ml).

Après 14 heures à 0 C, le pH est ajusté à 4 - 4,5 avec une solution d'acide chlorhydrique 0,1 N. La phase aqueuse

est lavée plusieurs fois au chlorure de méthylène, alca-

nisée par une solution de bicarbonate de sodium et extraite

au chlorure de méthylène de façon habituelle.

La di-O(amrino-3' tétradésoxy-2',3',4',6' a-L-theo-hexopy-

rannosyl)-7,9 daunomycinone 23b ainsi obtenue et mise en

solution dans CH2C12 anhydre (2 ml) est traitée par un équi-

* valent de HC1 en solution 0,05 N dans le méthanol. Le chlo-

rhydrate formé précipité dans l'éther (F = 173 - 174 C (dec".

EXEMPLE 9

Préparation du chlorhydrate de la O(avino-3' tétradésoxy-2',3', 4',6' a-Lthreohexopyrannosyl)-9 daunomycinone.22b Le chlorhydrate (F = 175 - 177 C (dec)) est obtenu

par la même méthode que celle décrite dans l'Exemple 8.

RMN (CDC13) 2,3 ppm (singulet, 3H); 4,0 (singulet, 3H);

4,90 (multiplet 1H); 5,32 (multiplet, 1H).

EXEMPLE 10

Préparation de la O-(aino-3'tétradésoxy-2',3',4',6' U-L-theO-

hexopyrannosyl)-7 daunomycinone ou (désoxy-4'-daunonycine)2lb.

Ce composé obtenu par la même méthode que

celle décrite dans l'Exemple 8 est purifié par chromatogra-

phie sur plaques de silice (éluant CHC13-MeOH-NH4OH; 180 -

- 1).

RMN (CDCl3): 2,37 (singulet, 3H), 4,0 (singulet, 3H); ,25 (multiplet, L1/2 = 7 Hz, 1H); 5,50

(multiplet L1/2 = 8 Hz, 1H).

EXEMPLE 11

Préparation du chlorhydrate de la O-(mrpholino-3'-tétradésoxv-

2',3',4',6'-a-Lthreo-hexopyrannosyl)-7 daunomycinone (ou

désamino-3-' désoxy-4' morpholino-3' daunomycine (24).

H O

OMe O OH È

24.

La désoxy-4' daunomycine 21b (38 mg; 0,074 mole) en solution dans 2 ml de DMF est traitée par le di(iod-2éthyl) éther (411 mg; 1,26 mmnole) et la triéthylamine (22 mg; 0,22 mmole) à température ambiante pendant 36 heures. Apres extraction et purification sur plaques de silice (éluant

CHC13-MeOH-NH4OH), on obtient le dérivé 24 (60 %). Ce der-

nier en solution dans CH2C12 (2 ml) est traité par un équi-

valent de HC1 en solution 0,05 N dans le méthanol. Le chlo-

rhydrate formé précipite dans l'éther.

F = 145 - 150 C (dec).

RMN (CDC13) 24: 1,27 (doublet, 3H, CH3); 2,40 (singu-

let, 3H, CH3); 2,44 (multiplet, CH2 x 2); 3,61 (multiplet, CH2 x 2); 4,78 (multiplet, 1H); 5,25 (multiplet, 1H); 5,55 (multiplet, 1H); 13,82

(singulet, 1H).

EXEMPLE 12

Réaction de couplage du glycal 15.

L'aglycone 25 préparé par Jean-Claude FLORENT et Claude YMNERET (Brev. Français 84-03634)réagit avec le glycal 15

(R = H, R' = COCF3) dans différents solvants anhydres en pré-

sence d'acide p-toluènesulfonique à température ambiante.

On obtient trois nouveaux composés, les anthra-

cyclines 26, 27,28.

H -.

0 OH OH

ô + 1NR

3025 15

=. HC OCt'3 HO3

35.0 OH

OHOH

0 OH

O OH O O OH O

NHCF NH 28

CH3 COCF3 A une solution de 25 (70 mg; 0,176 mmole) et de glycal 15 (R = H, R' = COCF3) (70 mg; 0,33 mmole) dans du

benzène anhydre (15 ml) on ajoute de l'acide p-toluènesulfo-

nique (70 mg; 0,41 mmole). Après 2 heures sous agitation à température ambiante le milieu réactionnel est versé sur une solution de bicarbonate de sodium puis extrait de façon classique par du dichlorométhane. On isole après lavages, séchage puis évaporation du solvant organique sous pression

réduite, 150 mg de produit brut.

Une chromatographie sur silice (éluant: toluene pur) permet de séparer les trois glycosides formés:

- La O(têtradésoxy-2',3',4',6' trifluoroacétamido-

3 a et -L érythro-hexopyrannosyl)-13 dihydro-6,11 dihydro-

xy-5,12 hydroxyméthyl-2 naphtacène dione-6,11 (25 % Rf 0,43

Toluène-acétone 90:10) 26.

- La O(tétradésoxy-2',3',4',6' trifluoroacétamido

-3 e-L-érythro-hexopyrannosyl)-i hexahydro 1,2,3,4,6,11 té-

trahydroxy-l(S), 3(S),5,12 hydroxyméthyl-3 naphtacène dione-

6,11 (45 %, Rf 0,15, toluène-acétone 90:10) 27.

- La O(tétradésoxy-2',3',4',6' trifluoroacétamido

-3 aL-érythro hexopyrannosyl)-l hexahydro-l,2,3,4,6,11 té-

trahydroxy-l(S),3(S),5,12 hydroxyméthyl-3 naphtacène dione-

6,11 (25 %, Rf 0,08 toluène-acétone 90:10) 28.

I - Anthracycline 26: O-(tétradésoxy-2',3',4',6' trifluoro-

acétamido-3 a et e L-érythro-hexopyrannosyl)-13 dihydro-6,11

- 2565982

dihydroxy-5; 12 hydroxyméthyl-2-naphtacène dione-6,11, mélange cristallisé F 155 -157 C (Toluene); - + 17 (c 0,03,THF);

I.R. (CHC13): 3380, 2920, 1720, 1590, 1540, 1510, 1460

(large), 1410, 1340, 1265, 1170, 1115, 1040 -1 980 cm 1;

RMN (CDC13): 15,65 (OH); 8,55 - 7,77 (multiplet, 7H aro-

matiques et NH); 5,17 (singulet,élargi,H-l'e et ,00(doublet,H-l'ax);4,95 (doublet) et 4,73

(doublet)(syst. AB, CH2-13); 4,00 (multi-

plet, 2H, H-5' et H-3'); 2,00 - 1,44 (multi-

plet, CH2-2' et 4'); 1,28 - 1,15 (multiplet,

6H, CH3-6').

Spectre de masse (DCI/NH3): m/z 547 (M+18, 1 %); 530(M+1, %); 321 (aglycone +1, 15 %); 245 (sucre

+18, 15 %); 227 (sucre, 25 %); 210 (sucre-

18, 100 %).

rf = 0,64 (CH2C12/MeOH, 98: 2)

rf = 0,25 (hexane/acétate d'éthyle, 66: 33).

II - Anthracycline 27 F 182 - 183 C(hexane); /_-20+ 139 (c 0,02, THF)

I.R. (CHC13): 3400, 2920, 1720, 1625, 1590, 1530, 1405,

-1

1370, 1170, 990 et 970 cm.

RMN (CDCl3): 13,53 et 13,26 (2 singulets, 2H, OH phé-

noliques); 8,33 (multiplet, 2H, Ar); 7,78 (multiplet, 2H, Ar); 5,45 (multiplet 1H,L1/2 = 7 Hz,H-7); 5,38 (doublet, 1H, J = 12, J' = 3, H-l'); 4,40 - 4,15 (multiplet, 2H, H-3' et OH); 4,00 (multiplet, 1H, H-5'); 3,81 (doUblet, lH, H-13); 3,45

(doublet, 1H, H-13); 3,32 (doublet dé-

doublé, 1H, H-10); 2,78 (doublet dédoublé, (lH,H-10); 2,12 - 1,35 (multiplet, 6H, 3 CH2); 1,23 (doublet, 3H, J = 6,5 Hz,

CH3-6').

Spectre de masse (DCI/NH3): m/z 583 (M+18,- -1%); 565 (M+, traces); 454 (7,5 %); 374 (aglycone + 18, traces); 356 (aglycone, 5 %); 341 (aglycone 15, i %); 338 (aglycone - 18,

traces); 245 (sucre + 18, 90 %); 227 (su-

cre, 25 %); 210 (sucre - 18, 100 %). rf = 0,27 (CH2C12:MeOH, 98:2)

rf = 0,10 (hexane:acétate d'éthyle, 66:33).

III - Anthracycline 28 F 162 - 164 C(acétone); /20+ 1400 (c 0,02, THF) I. R. (CHC13): cf 30

RMN (CDC13): 13,53 et 13,26 (2 singulets, 2H, OH phMno-

liques); 8,34 (multiplet, 2H Ar); 7,83 (multiplet, 2H, Ar); 5,33 (doublet, 1H, J = 3 Hz, H-1'); 5,07 (multiplet 1H,L1/2 = 7 Hz, H-7); 4,44 - 4,22 (multiplet, 2H, H-3' et OH); 4,06 (multiplet, H-5'); 3,90 (doublet, 1H, J = 10 Hz, H-13); 3,45 (doublet, 1H, J = 10 Hz, H-13); 3,20 (doublet dédoublé, 1H, J = 18, J' = 1,5 Hz, H-10); 2,64 (doublet, 1H, J = 18, H-10) ; 2,12 - 1,35 (multiplet, 6H, CH2-2',4' et 2); 1,23 (doublet, 1H,

J = 6,5 Hz, CH3-6').

Spectre de masse (DCI/NH3): m/z 583 (M + 18, 2 %);

566 (M + 1, 1 %); 454 (5 %); 374 (aglg-

cone + 18, 16 %); 356 (aglycone, 35 %); 339 (aglycone - 18, 7 %); 245 (sucre + 18, %); 227 (sucre, 15 %); 210 (sucre - 18, %). rf = 0,20 (CH2C12:MeOH, 98:2)

rf = 0,05 (hexane:acétate d'éthyle 66:33).

COMPTE RENDU PHARMACOLOGIQUE:

I.- Effet sur les cellules leucémiques L 1210 A.- Mode opératoire: Le test est-exécuté suivant la méthode de Hamburger et Salmon modifiée de la manière suivante: Le milieu utilisé est remplacé par celui de Mc Coy A. Le nombre de cellules mises dans les boites est réduit

à 5 x 102 / boite du fait de la croissance rapide des cellu-

les leucémiques L 1210.

Les cellules sont incubées pendant 1 heure à 37 C en présence de différentes concentrations de la substance testée. Puis les cellules sont lavées 2 fois à l'aide de Mc Coy 5 A et mises sur plaques d'agarose selon la méthode de

Hamburger et Salmon.

Par ailleurs, le test est réalisé parallèlement avec incubation continue avec différentes concentrations de la substance étudiée en introduisant la substance dans la couche

d'agarose avant la mise en culture des cellules.

Les boîtes sont mises à l'étuve à 37 C sous une at-

mosphère de 5 % CO2 et 20 % CO2, et humidité relative de 95 %

pendant 5 à 7 jours. Après cette période, les colonies de dia-

mètre supérieur à 60 mcm sont dénombrées à l'aide d'un mi-

croscope inversé.

B. - Les résultats: Les résultats résumés dans le Tableau I ci-après sont

rendus en pourcentage de colonies formées à partir des cellu-

les L 1210 traitées par rapport aux témoins non traités. Le

coefficient de variation, lors de la répétition des expé-

riences, est inférieur à 15 %.

RESULTATS TABLEAU I IC50 (mc/ml) Substance Exposition oontinue_ Produit 22b H sous forme de chlorhydrate 0,8

OCH3 0 OH H

22b O HO Produit 23b sous forme de chlorhydrate OHn xE) 0,31 x'e

NH3 C1-

23b H O Produit 24 sous forme de O chlorhydrate

OCH30 OH 0) 3

OCH3 O OH O1,6 x 10 X Adriamycine 2.102 Les IC50 sont calculées à partir des courbes doses-effets après

1 heure d'incubation continue.

II. - Test de prolifération (incorporation de Thymidine) A. - Mode opératoire:

Des cellules leucémiques L 1210 en phase de crois-

sance exponentielle (5 x 10 /ml en RPMI 1640) sont mises en incubation sur une plaque à microtitration contenant 96 puits pendant 72 heures (37 C, 5 % CO2, humidité relative 95 %) avec différentes concentrations de chacune de ses substances testées. Les témoins consistent en des cellules exposées en milieu de culture frais. Pour chaque concentration, on prépare 4 puits. Après 65 heures, 50 mcl de 14C-Thymidine (1,5 mcCi/ml) sont ajoutées de façon à marquer l'ADN cellulaire. Après une incubation de 7 heures, les cellules sont recueillies (Multi-

mask cells harvester, Dynatec), lavées avec de l'acide tri-

chloroacétique 5 %, eau et méthanol et séchées à 50 C (2 heu-

res). L'index de scintillation est déterminé à l'aide de 5 ml

d'un liquide de scintillation (Rotiszint 11).

Les résultats sont exprimés sous forme de rapport d'index de scintillation après incubation avec les substances

étudiées par rapport aux témoins.

Le coefficient de variation pour les expériences

répétées est inférieur à 15 %.

B. - Les résultats:

Les IC50 sont calculés à partir des courbes doses-

effets. RESULTATS TABLEAU Il C cg/l Provenance IC50 (mcg/ml) Produit 22 b sous forme de 0,26 chlorhydrate Ni3 22b Produit 23b ' sous forme de O OH 0,3 chlorhydrate xC

NH3 C1

23b Produit 24 O 3.10- sous forme de} 0 3.1

OCH3O OH È

chlorhydrate 3 Adriamycine 2,2.10-2 2,.1'

2565U82

Les résultats résumés dans les Tableaux I et II sont très prometteurs, et notamment en ce qui concerne le produit 24.

La posologie quotidienne chez l'homme est de l'or-

dre de 1 à 2 mg/kg.

Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'inven-

tion ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre de réalisation et d'application qui viennent d'être

décrits de façon plus explicite; elle en embrasse au con-

traire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la

portée,de la présente invention.

Claims (12)

REVENDICATIONS

1.- Amrino-3 tridésoxy-3,4,6-glycals de formules générales 14 et 15 ciaprès:

IO I

HLHCH

3

IIxNRR'

14 15

dans lesquelles R et R', qui peuvent être identiques ou dif-

férents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe al-

kyle ou acyle, substitués ou non, R et R' peuvent en outre représenter ensemble le groupe

/ \O

o

pour former avec l'atome d'azote le groupe morpholino.

2.- Amnino-3 tridésoxy-3,4,6-glycals, selon la reven-

dication 1, caractérisés en ce que R et/ou R' représentent le groupe COCF3.

3.- Procédé de préparation des amino-3 tridésoxy-3,

4,6-glycals selon les revendications 1 ou 2, caractérisé en oe que

l'on prépare au cours d'une première étape des méthylthio-

carbonates en 4 de formules générales 12 et 13 ci-après: S S o il oIl

CH3S-C CH 3S-C 3

RR'

NRF.' 12 13

(R et R' ayant la même signification que ci-dessus) par traitement des glycals 10 et 11 ci-après:

H H HO H3

\1/ '\E7 -rR'

NRR'

11

R et R' ayant lamême signification que ci-dessus), par un mélange d'hydrure de sodium et de sulfure de carbone puis par l'iodure de méthyle et en ce qu'au ours d'une deuxime étape on procède à l'élimination réductrice. des groupes méthylthiocarbonates par action de l'hydrure de tributylétain

en présence d'azo-bis-isobutyronitrile.

4.- Procédé de préparation des amrino-3 tridésoxy-3,4,6

glycals, selonles revendications 1 ou 2, caractérisé en ce

qu'au cours d'une première étape on prépare les esters de formules qénérales 18 et 19 ci-après: O

3 OCO3 - COR1

!RR'

18 19

(R et R' ayant lamême signification que ci-dessus et R1 repré-

sente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ou aryle substitués ou non) par action d'un anhydride d'acide ou d'un

halogénure d'acide en présence d'une base sur les amino-

sucres de formules générales 16 et 17 ci-après:

OXH O

PRR

NRR' 16 17

(R et R' ayant lamême signification que ci-dessus)et en ce qu'au cours d'une deuxième étape on prépare les glycals 14 et 15

recherchés par chauffage des esters 18 et 19 respectivement.

-5.- Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le chauffage des esters 18 et 19 a lieu en présence

d'un adsorbant.

6.- Anthracyclines obtenues à l'aide de glycals

selon les revendications 1 ou 2.

7.- Anthracyclines selon la revendication 6, carac- térisées en ce qu'elles répondent aux formules(22a et 22b) MeO Cr OH O)H 22 a R = COCF3 b R:H

8.- Anthracyclines selon la revendication 6, carac-

térisées en ce qu'elles répondent aux formules (23a et b): o H 0 Meo o oH 23 a R = COCF3 hHR b R= H

9.- Anthracycline selon la revendication 6, carac-

térisée en ce qu 'elle répond à la formule (24):

OCH3 0 OH

24L$

10.- Anthracycline selon la revendication 6, carac-

térisée en ce qu'elle répond à la formule (26)

0 OH

OCF3 o IHC

O OH

11.- Anthracycline selon la revendication 6, carac-

tériséeen ce qu'elle répond à la formiule(27)

0 OH

OH

0 OH O

CH3

12.- Anthracycline selon la revendication 6, carac-

térisée en ce qu'elle répond à la formule (28): O H

0 OH O

'CH

H3 28

2& COCF3 13.- Utilisation des anthracyclines selon l'une

quelconque des revendications 6 à 12 en tant que médicaments.