FR2530640A1 - Derives de morpholinyle daunorubicine, de morpholinyle doxorubicine et leurs analogues et leur application antitumorale - Google Patents

Abstract

1.LA PRESENTE INVENTION A POUR OBJET DES COMPOSES INDUSTRIELS NOUVEAUX. CES COMPOSES PRESENTENT LA STRUCTURE : (CF DESSIN DANS BOPI) DANS LAQUELLE : R EST CHOISI DANS LE GROUPE CONSTITUE PAR -CO-CH, -CHOH-CH, -CO-CHOH, -CHOH-CHOH, ETC.; Y UN HYDROGENE OU UN METHOXY; X O OU NH; R ET R ENSEMBLE H, OH OU METHOXY; A EST UN HYDROGENE OU UN CYANO; Z O,S, ETC. CES DERIVES ONT UNE APPLICATION ANTITUMORALE.

Description

DERIVES DE MORPHOLINYLE DAUNORUBICINE, DE MORPHOLINYLE

DOXORUBICINE ET LEURS ANALOGUES

L'invention se situe dans le domaine de la chimie de l'antracy-

cline Elle concerne plus particulièrement des analogues des anthra-

cyclines, doxorubicine et daunorubicine, utiles en tant qu'agents anti-

tumoraux. La doxorubicine (adrianmycine) décrite et revendiquée dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 3 590 028 de F Arcamone et al, est

peut être la nouvelle drogue anti-cancer la plus utile en usage actuelle-

ment En même temps que la daunorubicine, elle est un agent essentiel

dans le traitement d'un nombre remarquablement important de tumeurs mas-

sives et de leucémies Malheureusement, de nombreux patients ayant ce type de tumeur ne sont pas sensibles à ces produits et pratiquement aucun des patients présentant des types de tumeurs sérieuses (cancer du colon, mélanome) n'y est sensible En outre, sur quelques patients, un traitement chronique occasionne au coeur des dommages irréversibles pouvant conduire à une issue fatale si le traitement est poursuivi Ainsi, il existe un besoin

important de corps analogues donnant un meilleur taux de réponse, un spec-

tre de réponse plus large ou une cardiotoxicité réduite Des agents plus efficaces et moins toxiques sont amplement recherchés et ils sont l'objet principal de la présente invention Les nouveaux corps analogues les plus actifs jusqu'à maintenant, à en juger d'après des résultats de sélection par un test largement utilisé contre la leucémie P 388 de la souris dans un programme de traitement à trois doses (q 4 d 5, 9, 13), sont deux dérivés lipophiles (AD 32 et N,N-dibenzyldaunorubicine) qui requièrent des doses significativement plus élevées et qui ne réussissent pas à réagir avec le DNA in vitro bien que l'on pense que le DNA est une cible biologique de premier ordre pour la série de l'anthracycline La plupart des dérivés N-alkylés ont été actifs dans les expériences anti-tumorales contre la leucémie P 388 de la souris, mais ils ne diffèrent pas significativement de la doxorubicine ou de la daunorubicine Quelques uns de ces dérivés

ont été inactifs.

Une grande partie de l'historique et de l'art antérieur de la doxorubicine et de ses dérivés analogues de l'anthracycline se trouve dans l'article "Adriamycine" de David W Henry, ACS Symposium Series, N 30, Cancer Chemotherapy, American Chemical Society, pp 15-57 ( 1976) et dans le livre Doxorubicine de Federico Arcamone, Academic Press, 1981 L'AD 32 est décrit dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 035 566 daté du

12 juillet 1977.

La 5-iminodaunorubicine est décrite dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 109 076 publié le 22 août 1978 de David W Henry et George L Tong cédé au titulaire de la présente invention La doxorubicine

équivalente est décrite dans "Synthesis and Preliminary Antitumor Evalua-

tion of 5-Iminodoxorubicin", J Medicinal Chem, 24, 669 ( 1981) par Edward M Acton et George L Tong La 5-iminodaunorubicine retient une

activité qui réduit les effets secondaires tandis que la 5-iminodoxorubi-

cine présente une activité améliorée mais nécessite des doses plus élevées.

La 3 '-deamino-3 '-( 4-morpholinyle)daunorubicine décrite dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 301 277 publié le 17 novembre 1981

de Edward M Acton et Carol W Moscher et céde au titulaire de la pré-

sente invention est active au quarantième de la dose de la doxorubicine mais donne une valeur T/C sensiblement identique ( 166 % contre 160 % pour

la P 388) Ce composé et sa préparation et ses propriétés sont aussi dé-

crits dans "Enhanced Antitumor Properties of 3 '-( 4-mrorpholinyle)-et 3 '-( 4-méthoxy-1-pipéridinyl) Derivatives of 3 '-deaminodaunorubicin", J Medicinal Chem, 25, PP 18-24 ( 1982) par Carol W Mosher, Helen Y Wu,

Allan N Fujiwara et Edvard M Acton.

Un procéde général d'alkylation réductrice pour la préparation de nouveaux dérivés d'anthracyclines semi-synthétiques est décrit dans "Adriamycin Analogs 3 Synthesis of N-Alkylated Anthracyclines With Enhanced Efficacy and Reduced Cardiotoxicity", J Medicinal Chem, 22,

pp 912-918 ( 1979) par G L Tong, H Y Wu, T H Smith et D W Henry.

Le sujet de cet art antérieur est cité ici spécifiquement à titre

de référence.

On a maintenant trouvé un nouveau groupe de dérivés de la dauno-

rubicine et de la doxorubicine Ces composés sont représentés par la formule générale I: o HO Hli C X,OH 0

3 1

0 HOC

O

dans laquelle:

R représente CO-CH 3 ou CHOH-CH 3 dans le cas des dérivés de la dauno-

rubicine ou CO-CH 2 OH ou CHOH-CH 2 OH dans le cas des dérivés de la doxorubicine; X représente O ou NH; et, A représente soit un groupe cyano (CN) soit un hydrogène avec la

limitation que si X représente 0, A doit être un groupe cyano.

Lorsque A représente un hydrogène, ces composés peuvent aussi bien exister en tant que sels d'addition d'acides Ces sels sont un

aspect additionnel de la présente invention.

Un autre aspect plus large de la présente invention' concerne des

dérivés de ces composés formés par une ou plusieurs modifications repré-

sentées dans l'état de la technique pour être efficaces avec des produits analogues de la daunorubicine et de la doxorubicine Ces modifications impliquent d'autres changements dans le groupe R, l'élimination du méthoxy en position 4, des changements dans les substituants du carbone 4 ', des

changements en A et une substitution dans le cycle morpholinyle Les com-

posés englobés par la formation de ces divers dérivés sont généralement

classés sous le nom de morpholinyle ou analogues des dérivés morpho-

linyliques de produits du type de la daunorubicine et de la doxorubicine et sont représentés par la formule générale II: o OH R

(II)

Y X OH O

R' ' O -.

R '

N A

Z

dans laquelle: R représente -CO-CH 3 ou -CHOH-CH 3 dans le cas des dérivés simples de la daunorubicine, -CO-CH 20 H ou -CHOH-CH 2 OH dans le cas des dérivés simples de la doxorubicine, un hydroxy, un radical alkyle contenant de 1 à 3 atomes de carbone tel que -C Hz CH 3, un radical terminal hydroxyalkyle comportant de I à 3 atomes de carbone tel que -CH 2-OH ou -CH 2-CH 2-OH, des esters et diesters d'acides organiques, comportant de 2 à 7 atomes de carbone,de -CO-CH 20 H, -CHOH-CH 20 H et CHOH-CH 3 y compris par exemple les acetate (-O Ac), propionate (-O Pr), benzoate (-O Bz) et glycolate (-O-G 1) tels que -CO-CH 2-O Ac, -CO-CH 2-O Bz, -CO-CH 2-O Pr, -CO-CH 2-OG 1, -CH(O Ac)-CH 2-O Ac,

-CH(O Bz)-CH 2-O Bz, -CH(O Ac)CH 3 et -CH(O Bz)CH 3 ou analogue; un rempla-

cement par un alkyle ou aryle éther comportant de 1 à 6 atomnies de carbone, de l'un ou plusieurs des hydroxyles de -CO-CH 20 H, -CHOH-CH 3, et -CHOH-CH 20 H, tels que -CH(OCH 3)-CH 3, -CO-CH 20-CH 3, -CO-CH 20-C 2 H 5, -CO-CH 20-C 6 H 5 ou analogue; et des dérivés 13-cétimine de -CO-CH 3 ou -CO-CH 20 H tels que -C(NOH)-CH 3, -C(NNH Bz)CH 3, -C(NOCH 3)-CH 3, C(NOH)-CH 20 H, -C(NOCH 3)-CH 20 H, et -C(NNH Bz)-CH 20 H ou analogue;

Y est habituellement un méthoxy (-OCH 3) mais peut aussi être un hydro-

gène; X représente = O ou =NH; R'et R" ensemble représentent un hydrogène et un hydroxy (c'est-à-dire que, soit R' soit R"' est un hydroxy, l'autre étant un hydrogène), sont tous les deux des hydrogènes ou R' est un méthoxy et R" est un hydrogène; et, A est choisi parmi un cyano (-C-N) et un hydrogène tel que exposé ci-dessus Lorsque A représente un hydrogène, ces composés peuvent

aussi exister sous la forme de sels d'addition d'acides.

Z est choisi parmi oxygène, soufre, -CH-

OR"' dans laquelle:

R"'' est un radical alkyle comportant de 1 à 3 atomes de car-

bone;

et -CH 2-,avec la réserve que lorsque Z est un -CH 2 ou -CH-

A est un ICON OR' Préparation des composés de la formule générale II La préparation de ces composés est caractérisée en ce que l'on

fait réagir la daunorubicine et la doxorubicine connues et les corps ana-

logues de celles-ci de structure:

0 OH

O

OH Y X OH j d R'' Rf CH 3 R' NH 2 dans laquelle: R, R', R"', X et Y ont les significations données ci-dessus, dans un milieu organique polaire aqueux mixte avec un composé de la structure:

/CH 2-CHO

" CH 2-CHO

ou un précurseur convenable de celui-ci et dans lequel Z est choisi parmi

les oxygène, soufre, -CH 2-, -CH, et R'' ayant la signification indi-

OR"' quée ci-dessus, la réaction étant mise en oeuvre en présence d'un sel de cyanoborohydrure tel qu'un cyanoborohydrure de métal alcalin et en ce que les composes désirés sont isolés et purifiés d'une manière connue en soi. Ces composés sont apparentés aux drogues anti-cancers déjà connues, daunorubicine et doxorubicine (adriamycine), ils sont préparés à partir de ceux-ci par synthèse chimique et par des techniques de formation de dérivés et ce sont des agents actifs contre le cancer Il s'avère qu'ils réunissent deux propriétés avantageuses et très recherchées: efficacité anti-tumeur élevée et faiblesdoses exigées Ainsi, ils offrent la promesse

d'une efficacité élevée avec des effets secondaires tels que la cardiotoxi-

cité liée au dosage réduite sion les compare aux produits décrits ci-

dessus.

Par d'autres aspects, cette invention procure des préparations phar-

maceutiques contenant ces nouveaux dérivés aussi bien qu'une méthode de traitement du cancer des mammifères par administration de ces préparations

à un mammifère ayant besoin de ce traitement.

La présente invention procure des dérivés morpholinyliques de

l'iminodaunorubicine et l'iminodoxorubicine et leurs sels pharmaceutique-

ment acceptables aussi bien que des dérivés cyanomorpholinyliques de

daunorubicine, de doxorubicine, d'iminodaunorubicine et d'iminodoxorubi-

cine Ces composés sont énumérés dans le tableau I.

TABLEAU I

Composés de la présente invention X A R Nom du composé

NH H CO-CH 3 3 '-déamino-3 '-( 4 '" -morpholinyle)-5-iminodauno-

rubicine et ses sels pharmaceutiquement accep-

tables

NH H CHOH-CH 3 3 '-déamino-3 '-( 4 '"-morpholinyle)-13-dihydro-

-iminodaunorubicine et ses sels pharmaceuti- quement acceptables

NH H CO-CH 20 H 3 '-déamino-3 '-( 4 '"-morpholinyle)-5-iminodoxo-

rubicine et ses sels pharmaceutiquement accep-

tables

NH H CHOH-CH 20 H 3 '-déamino-3 '-( 4 '" -morpholinyle)-13-dihydro-

-iminodoxorubicine et ses sels pharmaceuti- quement acceptables

X A

O CN CC

O CN CH

O CN CO

O CN

CH

NH CN CC

NH CN CH

NH CN C(

NH CN C-

TABLEAU I

Composés de la présente invention (suite) R Nom du composé

)-CH 3 3 '-déamino-3 '-( 3 "'-cyano-4 "-morpholinyle)-

daunorubicine

HOH-CH 3 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 '"-morpholinyle)-

13-dihydro-daunorubicine

O-CH 20 H 3 '-déamino-3 '-( 3 ''-cyano-4 ''-morpholinyle) -

doxorubicine

HOH-CH 20 H 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 '"-morpholinyle)-

13-dihydrodoxorubicine

O-CH 3 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 "'-morpholinyle)-

-iminodaunorubicine

HOH-CH 3 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 '"-morpholinyle)-13-

dihydro-5-iminodaunorubicine

O-CH 2 OH 3 '-déamino-3 '-( 3 "-cyano-4 ' '-morpholinyle)-5-

iminodoxorubicine

HOH-CH 20 H 3 '-déamino-3 '-( 3 ''-cyano-4 ''-morpholinyle)-13-

dihydro-5-iminodoxorubicine

Cinq de ces composés sont préférés à cause de leur excellente acti-

vité comme agents anti-tumeurs Ce sont les: 3 '-déamino-3 '-( 3 ''-cyano4 ''-morpholinyle)-doxorubicine; 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 "'morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine; 3 '-déamino-3 '-( 3 "-cyano-4 "'morpholinyle)daunorubicine; 3 '-déamino-3 '-( 3 "'-cyano-4 '"morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine; et,

3 '-déamino-3 '-( 4 '" -morpholinyle)-5-iminodoxorubicine.

Le premier de ces cinq dérivés est celui que l'on préfère le plus.

Les quatre premiers composés suivant la présente invention énumérés dans le tableau I peuvent être les bases libres indiquées sur le tableau I

ou ils peuvent être des sels d'addition d'acides pharmaceutiquement accep-

tables de ces bases Les sels d'addition d'acides offrent l'avantage d'être

solubles dans l'eau et dans des solvants aqueux mixtes tels que des sol-

vants eau-alkanol, ou eau-alkanediols Des exemples de ces solvants mixtes sont les mélanges eau-propylène glycol, eau-éthanol, eau-éthylène

glycol, l'eau salée, divers autres milieux injectables aqueux et analo-

gues Les bases libres sont solubles dans des solvants organiques moins polaires tels que le chloroforme, le chlorure de méthylène, des solvants mixtes chloroforme-méthanol et analogues Ils peuvent aussi être utilisés

sous forme de suspension.

Les sels sont les produits d'addition d'acides des bases libres avec un acide pharmaceutiquement acceptable Un acide "pharmaceutiquement acceptable" est un acide qui est non toxique et généralement employé dans les produits pharmaceutiques Des exemples de ces acides sont les acides minéraux tels que les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique et phosphorique et des acides organiques tels que les acides carboxyliques, par exemple acétique, glycolique, maléique, malique, hydroxymaléique, tartrique, citrique et salicylique et les acides organosulfoniques par

1 l exemple l'acide méthanesulfonique et l'acide paratoluènesulfonique.

Des mélanges de deux acides ou plus peuvent être utilisés comme on peut utiliser des mélanges de une base libre ou plus avec un ou plusieurs sels d'addition d'acides Pour des raisons de simplicité et de solubilité

facile, on prefère les sels de l'acide chlorhydrique et de l'acide bromhy-

drique Comme noté ci-dessus, ces composés peuvent aussi être présents

sous la forme de leurs dérivés Ces dérivés sont formés de façon à accroi-

tre la solubilité des composés ou de façon à faire varier d'autres pro-

priétés physiques des composés.

Préparation de quelques composés préférés suivant l'invention Ces composés peuvent être préparés paria voie générale suivante:

Premièrement, on fait réagir de la daunorubicine ou de la doxoru-

bicine (sous forme d'un sel d'addition d'acide) disponible dans le comrier-

ce dans des conditions d'alkylation réductrices avec de la 2,2 '-oxydiacé-

taldëhyde

0 =C-H CH= O

CH 2-0-CH 2

Cette alkylation donne un produit mixte contenant quatre composants prin-

cipaux Dans le cas de la daunorubicine, ces composants sont: 3 '-déamino3 '-( 4 '"'-morpholinyle)daunorubicine, 3 '-deamino-3 '-( 4 "'morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine, 3 '-déamino-3 '-( 3 '" -cyano-4 '" -morpholinyle)daunorubicine, et

3 '-déamino-3 '-( 3 '" -cyano-4 '" -morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine.

Dans le cas de la doxorubicine, le produit de la réaction contient: 3 'déamino-3 '-( 4 '" -morpholinyle)doxorubicine, 3 '-déamino-3 '-( 4 '" morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine, 3 '-déamino-3 '-( 3 '" -cyano-4 '" morpholinyle)doxorubicine, et

3 '-déaminino-3 '-( 3 "'-cyano-4 "'-morpholinyle-13-dihydrodoxorubicine.

La 2,2 '-oxydiacétaldéhyde peut se former par hydrolyse acide de la 2,2 'oxydiacétaldéhyde bis(diéthyl acétal) (Et-0)2-CH CH-(O-Et)2

CH 2-O-CH 2.

par la méthode de Field et al, brevet belge 655 436, ou par coupure du 1, 4-anhydroérythritol

HO-CH CH-OH

CH 2-O-CH 2

par la méthode de Barry et alo, Carbohydrate Research, 7, 299 ( 1968) and

Greenberg et ai, Carbohydrate Research, 35, 195 ( 1974).

L'alkylation réductrice peut être mise en oeuvre en utilisant un excès du dialdéhyde dans un milieu organique polaire aqueux mixte tel que eauacétonitrile, généralement à un p H d'environ 7 en présence d'un agent de réduction tel qu'un cyanoborohydrure de métal alcalin, par exemple cyanoborohydrure de sodium ou de potassium C'est une réaction relativement

facile que l'on peut habituellement achever en une heure ou moins à la tem-

pérature ambiante L'alkylation réductrice est illustrée dans les exemples et elle est aussi indiquée dans le brevet des Etats Unis cité ci-dessus

n 4 301 277 et dans J Medicinal Chem, 25, pages 18-24 ( 1982).

L'élaboration du produit de la réaction mixte peut être mise en

oeuvre par toute méthode permettant d'effectuer l'isolation et la sépara-

tion souhaitées Une extraction à l'acide du produit de la réaction est

efficace pour séparer les produits non substitués cyano pouvant être ex-

traits à l'acide des matériaux substitués par un cyano insoluble dans

l'acide Les paires de produits qui en résultent peuvent alors être sépa-

rées en composés individuels par différentes méthodes de chromatographie

telles qu'une chromatographie en couche à l'échelle préparative, une chro-

matographie sur colonne ou une chromatographie liquide à haute performance

à l'échelle préparative.

Les composés 5-imino peuvent être facilement et directement prépa-

rés à partir des composés 5-oxo isolés en utilisant la méthode décrite dans l'article indiqué ci-dessus J Medicinal Chem, 24, page 669 ( 1981) Dans

cette méthode, les produits 5-oxo sont mis en contact avec un excès d'ammo-

niac alcoolique à des températures faibles à modérées telles que de -25 C à + 25 C pendant environ 0,5 à environ 100 heures Dans le cas de la

3 '-déamino-3 '-( 4 ''-mnorpholinyle)doxorubicine et de la 3 '-déamino-3 '( 3 ''-

cyano-4 ''-morpholinyle)doxorubicine, il est nécessaire de bloquer l'hydro-

xyle sur le carbone n 14 avant le traitement à l'ammoniac On peut utili-

ser n'importe quel groupe protecteur labile par action d'un acide faible.

A cause de son utilisation répandue en chimie pharmaceutique, le métoxy-

trityle est un groupe protecteur que l'on préfère La fonctionnalité trityle peut être introduite en traitant la 3 '-déamino-3 '( 4 ''morpholinyle) doxorubicine ou la 3 '-déamino-3 '-( 3 ''-cyano-4 ''morpholinyle)doxorubicine avec un excès de p-anisylchlorodiphénylméthane à la température ambiante ou analogue Après l'achèvement de la réaction avec l'ammoniac, le 14-hydroxyle peut être régénéré par contact avec un acide tel que l'acide acétique ou

l'acide trifluoroacétique aqueux froid.

Dérivés et analogues En outre, la présente invention procure des dérivés et analogues des douze composés primaires précédents Comme l'indique la formule générale

II, ces dérivés peuvent comprendre ureou plusieurs des modifications suivan-

tes des composés primaires.

a. un ou plusieurs de n'importe quel des groupes hydroxyles présents en R peuvent être présents sous la f-orme d'esters d'acide organique

comportant de 2 à 7 atomes de carbone, y compris les acides alkanoï-

ques, les acides oxyalkano Tques, les acides hydroxyalkanoîques et l'acide benzoîque Cette modification peut donner lieu à des groupes

R tels qu'indiqués sur le tableau Ii.

TABLEAU II

Esters de R Acide Ester R Acide acétique -CO-CH 2-O-COCH 3

-CH(OCOCH 3)-CH 2-O-COCH 3

-CH(OCOCH 3)-CH 20 H

-CH(OCOCH 3)-CH 3

Acide propionique -CO-CH 2-O-COC 2 H 5

-CH(OCOC 2 H 5)-CH 2-O-COC 2 H 5

-CH(OCOC 2 H 5)-CH 3

Acide glycolique -CO-CH 2-O-COCH 20 H

-CH(OCOCH 20 H)-CH 2-OCOCH 20 H

-CH(OCOCH 20 H)-CH 3

Acide benzoîque -CO-CH 2-O-COC 6 Hs

-CH(OCOC 6 H 5)-CH 2-OCOC 6 H 5

-CH(OCOC 6 H 5)-CH 3

Acides plus complexes tels que

HOOC-CH(OC 2 H 5)2 -CO-CH 2-O-COCH(OC 2 H 5)2

etc. tl Les esters de doxorubicine ainsi décrits {ercamone et al, J. Medicinal Chem, 17, 335 ( 1974); Maral et al, brevet belge 848 219 ( 10 mai 1977)} peuvent être facilement transformés par la méthode d'alkylation réductrice décrite ici en dérivés esters correspondants des composés suivant la présente invention. b. Un ou plusieurs de l'un quelconque des hydroxyles présents en R peuvent être présents sous la forme d'éthers notamment d'éthers d'alkyle comportant de I à 6 atomes de carbone ou éthers d'aryle

comportant environ 6 à 7 atomes de carbone.

Des motifs R "éther" représentatifs sont indiqués sur le tableau III.

TABLEAU III

Ethers de R Ether méthylique -CO-CH 2-OCH 3

-CH(OH)-CH 2-OCH 3

Ether éthylique -CO-CH 2-OC 2 H 5

-CH(OH)-CH 2-OC 2 H 5

Ether butylique o -CO-CH 20 C 4 H 9 Ether phénylique -CO-CHM-O-C 6 H 5 CH(OH)-CH 2-OC 6 Hs Ces éthers-14 de doxorubicine ont été décrits (Masi et alo Il Farmaco, Ed Sci, 34 L 907 ( 1979)} et peuvent être utilisés comme matériaux de départ dans la méthode d'alkylation réductrice suivant

la présente invention.

c. les substituants du carbone 4 ' dans le cycle du "sutcre" peuvent être

modifiés Les dérivés 4 '-O-méthyle (dans le motif sucre) de la doxo-

rubicine et de la daunorubicine s'obtiennent facilement {Cassinelli, J Medicinal Chemn, 22, 121 ( 1979)} et se transforment en composés suivant la présente invention D'autres modifications de structure connues en position 4 ' du motif du sucre sont les dérivés 4 '-déoxy

(pas de OH) et 4 '-épi (OH en haut) de la doxorubicine et de la dau-

norubicine {Suarato et aloi, Carbohydrate Res 98, cl ( 1981)} qui

manifestent les propriétés pharmaceutiques prometteuses Ces compo-

sés se transforment facilement par le procédé d'alkylation réduc-

trice en composés correspondants suivant la présente invention.

d les corps analogues 4-déméthoxy de la doxorubicine et de la dauno-

rubicine (pas de CH 3 dans le cycle-A de l'aglycone) s'obtiennent facilement {Arcamone et al, Cancer Test Rpts, 60, 829 ( 1976); Arcamone et al, brevet allemand n 2 652 391 ( 26 mai 1977)} et sont

transformés en composés suivant la présente invention.

o e. les groupes carbonyles (-C-) des motifs R de la daunorubicine et de la doxorubicine peuvent être facilement transformés en groupes N- il (-C-) par les méthodes classiques de transformation des cétones en oximes, hydrazomes et autres cétimines Le tableau IV énumère des

cétimines R représentatives.

TABLEAU IV

Cétimines de R

-C(NOH)-CH 20 H

-C(NOH)-CH 3

-C(NOCH 3)-CH 2 OH

C(NOCH 3)-CH 3

-C(NNHCOC 6 H 5)-CH 20 H

-C(NNHCOC 6 H 5) -CH 3

*-C(NNHCONH 2)CH 20 H

-C(NNHCONH 2)-CH 3 et analogue.

Ces dérivés R-13-cétimine peuvent être facilement transformés en composés suivant la présente invention par la méthode d'alkylation

réductrice décrite ci-dessus.

f. le motif R peut être simplifié pour éliminer le carbonyle et donner lieu aux simples motifs R hydroxyles représentés sur le tableau V.

TABLEAU V

R simplifiés -OH

-CH 2 OH

-C 2 H 4 OH

Ces dérivés de daunorubicine et de doxorubicine sont indiqués dans Penco et al, brevet allemand n 2 757 057, 7 juillet 1978 et Penco et al, J Antibiotics, 30:764 ( 1977) et ils sont transformés

en composés suivant la présente invention par alkylation réductrice.

g. 2-cyanopipéridino (Z = CH 2) et le 2-cyano-4-méthoxypipéridino (Z = CHOCH 3) (formule II) Les dérivés pipéridino de daunorubicine et de doxorubicine ont été décrits dans les brevets des Etats Unis suivants: I ôt brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 202 967, 13 mai 1980 I brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 314 054, 2 février 1982 Od H 3 Les dérivés correspondants de 2-cyano-1-pipéridinyle peuvent être

synthétisés en transformant lescomposésci-dessus par l'acide méta-

chloroperbenzo Tque en solution dans le dichlorométhane en N-oxydes, et par réarrangement de N-oxydes par l'anhydride trifluoroacétique

en présence de l'ion cyanure (Polonovski-Potier-Husson).

I

-> Cr DN > N CN Z = -CH 2 ou CHOCH 3 Lorsque la méthode d'alkylation réductrice suivant la présente invention est mise en oeuvre sur la daunorubicine sauf que l'on utilise de la 2,2 '-thiobisacétaldéhyde {O=CHCH 2 SCH 2 CH=O; Carbohydrate Res, 110,

( 1982)à la place de 2,2 '-oxybisacétaldéhyde et que le p H est faible-

ment acide (p H 6 au lieu de p H 7,2), on obtient le dérivé thiomorpholino (A=H) (formule I) de la daunorubicine Ce procéde est aussi actif contre la leucémie P 388 de la souris (T/C = 169 %) que la doxorubicine (T/C = %), bien qu'une plus forte dose soit requise ( 50 mg/kg au lieu de 8 mg/ kg) De même, le dérivé thiomorpholino de la doxorubicine se forme lorsque

l'on utilise de la doxorubicine dans cette réaction.

La fraction de produit neutre provenant de ces réactions et qui subsiste dans la couche organique après extraction avec de l'acide aqueux pour éliminer le dérivé thiomorpholino sous la forme de sel d'acide soluble dans l'eau contient les dérivés correspondants 3-cyano-1-thio-4morpholinyle

(A = CN) de la daunorubicine et de la doxorubicine.

Toutes les descriptions faites ci-dessus des méthodes de formation

des dérivés sont incorporées ici à titre de référence.

L'invention sera expliquée plus en détail à l'aide des exemples suivants Ils sont présentés pour illustrer l'invention et non pour en

limiter la portée.

EXEMPLE 1

Préparation, séparation et identification de la 3 '-déamino-3 '-

( 3 '"-cyano-4 ''-morpholinyle)daunorubicine

A. En suivant la méthode de préparation du bromhydrate de 3 '-déamino-

3 '-morpholinodaunorubicine indiquée dans Mosher et al, J Medicinal Chem, 25, pages 18 à 24 ( 1982), on prépare un produit de réaction brut contenant de la 3 '-déamino-3 '-( 4 '" -morpholinyle)daunorubicine, de la 3 '-déamino-3 '-( 4 '"-morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine, de la 3 'déamino-3 '-( 3 ''-cyano-4 ''-morpholinyle)daunorubicine et de la

3 '-déamino-3 '-( 3 "-cyano-4 "-morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine.

(cet article est incorporé ici à titre de référence) Le matériau brut est extrait avec CHC 13 comme cela y est noté pour éliminer les quatre produits primaires dans la phase CH C 13 Une extraction exhaustive de la phase CHC 13 avec du H Cl 0,01 N enlève les deux

produits morpholino basiques, tels que décrits dans la référence.

Le CH C 13 neutre riche en produit est lavé avec une solution de Na HC 03, séché et évaporé Les échantillons sont dissous dans un mélange 4/1 CH C 13 CH 30 H et placés sur une colonne de chromatographie liquide à haute performance Waters Radial-Pak C-18 Il est élué par 2 ml/minute d'un éluant 65:35 de tampon citrate p H 4 0,05 M: CH 3 CN Un produit (habituellement 19 à 24 % du total) est élué en 6,1-6,8 minutes tandis qu'un autre produit (habituellement de 26 à 27 %) est élue à 11,9 minutes La détection se fait par UV à 254 nm Comme on le montrera, le matériau à 6,1-6,8 minutes est

de la 3 '-déamino-3 '-( 3 ''-cyano-4 ''-morpholinyle)-13-dihydrodauno-

rubicine et le matériau à 11,9 minutes est de la 3 '-déamino-3 '-

( 3 '"-cyano-4 '"-morpholinyle)daunorubicine.

B Sur une plus grande échelle, on dissout 5,41 g du sous-produit solide dans 500 ml d'un mélange 9/1 de CH C 13-CH 30 H Cette solution est lavée avec du H Cl 0,01 N ( 3 x 100 ml), H 20 ( 1 x 100 ml) et Na HC 03 dilué ( 1 x 100 ml) La phase organique est séchée, évaporée

à siccité et le résidu est séché sous vide à 0,1 mm à la tempéra-

ture ambiante pour donner 5,10 g de résidu vitreux La phase aqueuse

est également retenue. C. le résidu vitreux de la partie B, 5,09 g, est dissous dans 50 ml d'un

mélange 4/1 de CH 2 C 12-CH 30 H La solution est agitée tandis que l'on ajoute goutte à goutte 30 ml de CH 3 CN La solution trouble

qui en résulte est évaporée à siccité pour donner un résidu semi-

solide que l'on triture avec 200 ml de CH 3 CN dans l'obscurité Le solide insoluble est recueilli et trituré une seconde fois avec 100 ml de CH 3 CN Les phases liquides des deux triturations contien- nent le produit désiré Elles sont évaporées pour donner 2,23 g

de résidu semi-solide.

D. Le résidu semi-solide de la partie C est dissous dans 5 ml de CH 2 C 12 et appliqué à une colonne de 3,1 cm de diamètre intérieur x 59 cm de gel de silice de 200 à 325 mailles Mallinckrodt Silic AR CC-^ 7 lavéepar du CH 2 C 12 La colonne est éluée avec CH 2 C 12 ( 500 il) et ensuite avec un mélange CH 2 C 12-CH 30 H ( 99/1, 1 500 ml; 98/2,

1.000 ml; 97/3, 1 500 ml; 90/10, 500 ml) Après rassemblement (frac-

tions de 10 ml, surveillées par TLC) de 2 500 ml de l'éluat initial,

on évapore une fraction de 190 ml pour donner 0,48 g de produit.

Le composant primaire est déterminé par chromatographie liquide à haute performance comparative et chromatographie en douche mince comme étant identique à un produit qui s'avère par la suite être

la 3 '-déamino-3 '-( 3 '" '-cyano-4 " '-morpholinyle)daunorubicine.

E On poursuit la purification de 0,35 g d'un échantillon du matériau de la partie D tout d'abord dans l'obscurité sur cinq plaques de gel de silice de 2 mm x 20 x 20 cm avec deux développements par un mélange CH 2 Cl 2-CH 30 H 29:1 Une bande centrale contenant 65 % du poids introduit de l'échantillon est enlevée par découpage, éluée,

filtrée et évaporée à siccité.

F. Sur le produit de la partie E, en même temps que sur les autres matériaux purifies de façon équivalente récupérés à partie des zones latérales de chromatographie ( 0,18 g), on exécute une purification finale sur une colonne de 1,1 cm de diamètre intérieur x 27 cm de

gel de silice de 200 à 400 mailles La colonne est éluée avec un mé-

lange CH 2 Cl 2-Et O Ac ( 80/20, 30 ml; 60/40, 30 ml, 40/60, 30 ml;

/80, 30 ml) et ensuite Et O Ac ( 175 ml) Après rassemblement (frac-

tion de 2 ml surveillée par TLC) de 162 ml de l'éluat initial, on rassemble une fraction de 88 ml et on l'évapore, ce qui donne 0,15 g

du produit.

Une analyse élémentaire de ce matériau pur vérifie que la structure

est bien celle de la 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 "''-morpholinyle) daunorubi-

cine, ce que confirme une NMR de 360 MH 2, l'UV, l'IR et la spectroscopie

de masse.

L'apparition de ce produit sous la forme de mélange diastéréoiso-

mère est indiquée par l'analyse en HPLC et NMR à 360 M Hz L'analyse HPLC sur une colonne Waters Radial-Pak C-18 avec un mélange tampon de citrate p H 4 0,05 M-CH 3 CN ( 60/40) à 2 ril/minute indique deux pics très proches

l'un de l'autre (à 9,6 minutes et 10,2 minutes) dans le rapport 53/44.

Le spectre NMR à 360 M Hz de ce matériau indique deux résonances pour les

protons 6-OH, 11-OH, 1 L-H, 2-H, 3-H 1 '-H, 7-1 l, 9-OH, l OA-H, 14-H 3 e% 6-H 3.

NMR CDC 13 à 360 M Hz d 13,99, i 398 ( 2 s, 6-OH); 13,25, 13,24 ( 2 s, 11OH); 8,02, 8,00 ( 2 d, I-H); 7,79, 7,77 ( 2 t, 2-H); 7,40, 7,38 ( 2 d, 3H); ,59, 5,56 ( 2 d, 1 '-H); 5,29, 5,26 ( 2 bs, 7-H); 4,47 *, 4,34 * ( 2 s, 9-OH); 4,08 (s, OCH 3), 3,97-4,07 (m, 2 " B-H, 5 '-H); 3,92 (t, J= 12 Hz,3 "-H); 3,74 (m, 2 "A-H), ( 6 "B-H); 3,68 (bs, 4 '-H); 3,53 (t, J= 12 Hz, 6 "A-H); 3,20 (d, -= 19 Hz, l OB-Hfl); 2,91 2190 ( 2 d, J= 19 Hz, 10 A-H); 2,75-2,95 (m, 3 '-H)s 2,68 (m, 5 "-H 2); 2,43, 2,42 ( 2 s, 14-H 3); 2,35 (m, 8 B-H); 2,13 (m, 8 A-H); 1,70-2,0 (m, 2 '-H 2); 1,86 * (s, 4 'OH, H 20); 1,37, 1,36 ( 2 d, J= 6,4 Hz),

( 6-H 3).

* échangeable par D 20.

Spectre de masse: {sous la forme de dérivés du triméthylsilyle (TMS)}, m/e 910 {M(TMS)4, 895 {M(TMS)4-Me}, 883 {M(TMS)4-HCN}, 838 {M(TMS)3}, 823 {M(TMS)3-Me},

811 i {M(TMS)3-HCN}, une MS à 70 ev indique un pic de base (HCN) à m/e 27.

EXEMPLE 2

Séparation de la 3 '-déamino-3 '-( 3 ''-cyano-4 ''-morpholinyle)-13-

dihydrodaunorubicine.

Dans l'exemple 1, partie D, on passe en chromatographie un mélange

de 3 '-déamino-3 '-( 3 "'-cyano-4 ''-morpholinyle)daunorubicine et de 3 'déamino-

3 '-( 3 '" -cyano-4 '" -morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine et l'on prélève une série de fractions Après rassemblement de 3 460 ml d'éluant, une fraction de 430 ml contenant 12,5 % du matériau chargé initialement est

recueillie et évaporée sensiblement sous la forme d'un composé unique.

On détermine par HPLC que le composé de cette fraction est identique à un matériau que l'on a auparavant caractérisé par RMN et spectroscopie de masse

comme étant la 3 '-daminino-3 '( 3 ''-cyano-4 ''-miorpholinyle)-13dihydrodauno-

rubicine Ce matériau pourrait être purifié essentiellement par les métho-

des indiquées dans l'exemple 1 parties E et F pour donner de la 3 'déamino-

3 '-( 3 '" -cyano-4 '" -morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine sensiblement pure.

EXEMPLE 3

Séparation de la 3 '-dêamino-3 '-( 4 '"-morpholinyle)daunorubicine et

de la 3 '-déamino-3 '-( 4 " -morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine.

Dans l'exemple 1, parties A et B, on a séparé la phase H Cl 0,01 N contenant la 3 '-déamino-3 '-( 4 '" -morpholinyle)daunorubicine et la 3 'déamino- 3 '-( 4 '"-morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine Cette phase aqueuse contient environ 40 % du matériau chargé Cette phase aqueuse est alors élaborée en utilisant la méthode indiquée dans la référence incorporée ci-dessus J Medicinal Chem, 25, pour donner la 3 '-déamino-3 '( 4 ''-morpholinyle) daunorubicine et la 3 '-déamino-3 '-( 4 '" morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine

sous la forme de composés isolés séparés.

EXEMPLE 4

Préparation et séparation de la 3 '-déamino-3 '-( 3 ''-cyano-4 '"'-mor-

pholinyle)doxorubicine et de la 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 'imorpholinyle)-

13-dihydrodoxorubicine.

A. Dans une réaction analogue à celle indiquée dans l'article J. Medicinal Chem, 25, on ajoute à une solution agitée de 6,25 g ( 60,0 mmoles) de 1,4-anhydroérythritol,

OH OH

dans 75 ml de H 20 refroidie au bain d'eau à 15-20 C, 6,42 g ( 30,0 mmoles) de métaperiodate de sodium La solution claire qui

en résulte est agitée à la température ambiante pendant 17 heures.

Le p H de la solution est ajusté de 4,0 à 7,3 par Na HCO 3 et on dilue ensuite tout en agitant par 75 ml de CH 3 CN Un précipité se forme Le mélange est agité et l'on ajoute 0,126 g ( 2,0 mmoles) de Na BH 3 CN dans 5 ml d'un mélange 1/1 (en volume) de CH 3 CN-H 20 A ce mélange, on ajoute alors 1,16 g ( 2,0 mmoles) de chlorhydrate de doxorubicine dans 30 ml de CH 3 CN-H 20 1/1 Après 10 minutes, on dilue le mélange réactionnel avec 50 ml de Na HCO 3 dilué et on extrait trois fois avec des portions de 50 ml de CHC 13 Cet extrait brut contient de la 3 '-déamino-3 '-( 4 '"morpholinyle)doxorubicine, de la 3 '-déamino-3 '-( 4 '"-morpholinyle)-13dihydrodoxorubicine, de la 3 '-déamino-3 '-( 3 '" -cyano-4 '"morpholinyle)doxorubicine et de la

3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 '" -morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine.

Les extraits réunis sont extraits avec de l'acide acétique 0,1 N ( 5 x 25 ml) et ensuite avec H 20 et lavés avec du Na HCO 3 dilué et du Na Ci aqueux saturé La phase aqueuse acide est retenue La phase chloroforme est séchée sur Na 2504, filtrée sur terre de diatomées Célite et concentrée pour donner un résidu Ce résidu est dissous dans 25 ml de CH C 13 et le solvant est ré-évaporé sous vide à la température ambiante Ceci donne 0, 518 g ( 40 %) d'un solide vitreux

expansé rouge sombre.

B. Un échantillon du solide vitreux expansé de la partie A, est dis-

sous dans le CH 3 CN et injecté dans une colonne de chromatographie liquide à haute performance Waters Radial-Pak C-18 et élué avec un mélange tampon de citrate 0,05 M à p H 4,0 CH 3 CN 55/45 à

2 ml/minute L'élution des composés est détectée à 254 nm A 2,3 mi-

nutes, un matériau identifié comme étant la 3 '-déamino-3 '-( 3 "-

cyano-4 '"-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine ressort avec un

rendement de 13 % (basé sur le mélange d'injection) et à 3,8 minu-

tes, la 3 '-déamnino-3 '-( 3 ''-cyano-4 ''-morpholinyle)doxorubicine ressort avec un rendement de 69 % D'autres produits semblables

rassemblés sont obtenus et séparés par HPLC.

C. La séparation de la 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 "-morpholinyle)

doxorubicine et de la 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 "-morpholinyle)-

13-dihydrodoxorubicine est ensuite répétée de la façon suivante: A 0,424 g du solide vitreux expansé de la partie A est dissous dans 1,5 ml de CH 2 C 12 et appliqué sur une colonne de 1,5 x 35,5 cm de gel de silice Bio- Sil A de 200 à 400 mailles lavée par du CH 2 C 12 La colonne est éluée par CH 2 C 12 ( 50 ml) et ensuite par un mélange CH 2 C 12-CH 30 H ( 99/1, 150 ml; 98/2, 150 ml; 97/3, 300 ml; /5, 100 ml et 90/10, 300 ml) Après rassemblement de 445 ml de l'éluat initial, une fraction de 80 ml est évaporée pour donner

0,217 g du produit Ce matériau est combiné avec 0,039 g de pro-

duit purifié provenant d'une préparation antérieure et le mélange est dissous dans 2 ml de CH 2 C 12, dilué avec 10 ml de CH 30 H et évaporé à siccité La trituration de ce résidu avec 5 ml de CH 30 H

donne 03218 g de 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 "-morpholinyle)doxo-

rubicine. Une HPLC et une analyse en NMR 400 M Hz indique que ce produit est un mélange diastéréoisomére Une analyse HPLC sur une colonne Waters Radial-Pak C-18 avec un mélange tampon de citrate p H 4

0,05 M CH 3 CN ( 65/35) à 2 ml/minute indique deux pics très pro-

ches l'un de l'autre (à 14,4 minutes et 15,7 minutes) dans le rapport 58/39 Le spectre à 400 M Hz de ce matériau montre deux résonances pour les protons 1-H, 2-H, 3-H, 1 '-H, 7-H, 14-H 2, 9-OH,

OCH 3, 10 A-H et 6 '-H 3.

NMR CD C 13 à 400 M Hz 6 14,02 (s, 6-OH); 13,26 (s, 11-OH); 8,05, 8,04 ( 2 d, 1-H); 7,80, 7,79 ( 2 t, 2-H); 7,41, 7,40 ( 2 d, 3-H); 5,61, ,57 ( 2 d, '-H); 5,34, 5,30 ( 2 m, 7-H); 4,79, 4,78 ( 2 s, 14-H 2); 4,54, 4,42 ( 2 s, 9-OH); 4,11, 4,10 ( 2 s, OCH 3); 4 j O 5 (m, 5 '-H); 3,97 (m, 2 "B-H, 3 "-H, 6 "B-H); 3,71 (m, 4 '-H, 6 "A-H); 3,58 (t, 2 "A-H); 3,30 (d, J= 19 Hz, 10 B-H); 3,07, 3,06 ( 2 d, 10 A-H); 3,03 (m, 3 '-H); 2,69 (m, 5 "- H 2); 2,38 (mni, 8 B-H); 2,22 (m, 8 A-H);

1,84 (m, 2 '-H 2); 1,61 (s, HO); 1,40, 1,39 ( 2 d, J= 6,5 Hz, 6 '-H 3).

UV-Vis (CH 30 H) max 234 nm (e 40 100), 252 ( 27 700), 289 ( 9 420), 478 ( 13 000), 495 ( 12 900), 530 ( 7 190) Spectre de masse {sous

la forme du dérivé triméthylsilyle (TMS)}, m/e 899 M(TMS)4-HCN.

A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule

C 32 H 3, N 2012 2 H 20

et on obtient les valeurs suivantes:

C H N

calculées 56,97 5,68 4,15 trouvées 57,07 5,37 4,17 Une élution supplémentaire de la colonne ci-dessus donne 0,041 g

de 3 '-déamiino-3 '-( 3 ' -cyano-4 ' '-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubi-

cine UV-Vis (CH 30 H) max 234 nm (c 37 400), 252 ( 28 000), 289 ( 9.390), 475 ( 12 700), 496 ( 12 800), 530 ( 7 410) Spectre de masse

{sous la forme de dérivé triméthylsilyle (TMS)}, m/e 985 M(TMS)5-

CH 3, 973 M(TMS)5-HCN.

A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule

C 32 H 36 N 2012 1/5 HO 20

et on obtient les valeurs suivantes:

C H N

calculées 57,57 5,89 4,20 trouvées 57,35 5,94 3,82

EXEMPLE 5

Séparation de la 3 '-déamino-3 '-( 4 ''-morpholinyle)doxorubicine et de

la 3 '-déamino-3 '-( 4 "'-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine.

A. La phase aqueuse acide obtenue dans la partie A de l'exemple 4

est rendue basique avec Na HCO 3 et elle est extraite avec CHC 13.

La phase CH C 13 est lavée avec du Na Cl saturé, séché sur Na 25 O 4, filtrée sur Célite , concentrée et séchée pour donner 0,828 g d'une

mousse rouge qu'une HPLC, une NMR 90 M Hz, NMR 300 M Hz, une spec-

troscopie UV-Vis et une spectroscopie de masse indiquent comme

contenant deux composants primaires, la 3 '-déamino-3 '-( 4 ''"-

morpholinyle)doxorubicine et la 3 '-déamino-3 '-( 4 ''-morpholinyle)-

13-dihydrodoxorubicine. B. On prépare un rassemblement de 0,98 g du solide vitreux expansé tel que préparé dans la partie A Ce matériau est dissous dans 3 ml de CH 2 CI 2 et passé en chromatographie sur une colonne de 2,2 x 33 cm de gel de silice La colonne est éluée avec du CH 2 CI 2 ( 50 ml) et ensuite par CH 2 C 12-CH 30 H ( 99/1, 300 ml; 98/2, 300 ml, 97/3, 900 ml et 90/10, 700 nil) Apres un rassemblement initial de 1 170 ml d'éluant, on isole une fraction de 490 ml et

on évapore pour donner un résidu Ce résidu contient 45 % de l'échan-

tillon chargé et une HPLC indique qu'il s'agit de 3 '-déamino-3 '-

( 4 ''-morpholinyle)doxorubicine essentiellement pure ( 99 +%).

NMR CDC 13 90 M Hz 6 13388 (s, 6-OH); 13,07 (s, 11-OH); 7,90 (d, J= 8 Hz, 1-H); 7,72 (t, J= 8 Hz, 2-H), 7,38 (d, J= 8 Hz, 3-H); 5,51 (bs, 1 '-H); 5, 20 (bs, 7-H); 4,75 (s, 14-H 2); 4,68 (s, 9-OH); 4,07 (s, OCH 3); 3,98 (m, 5 '-H); 3,67 (mni, 4 '-H, 2 "-H 2, 6 "-H 2); 3,09 (d, j= 19 Hz, 10 B-H); 2,83 (d, J= 19 Hz, 10 A-H); 2,80-3,20 (m, 3 '-H); 2,50-3,00 (bs, 4 '-OH, 14-OH); 1,95-2,65 (m, 8-H 2, 3 "-H 2, "-H 2); 1,80 (m, 2 '-H 2); 1,38 (d, J= 6,5 Hz, 6 '-H 3) Spectre de masse {sous la forme de dérivés de trimétylsilyle (TMS)}, m/e 973

M(TMS)5, 901 M(TMS)4.

La base libre est mise en suspension dans H 20 et acidifiée à p H 4,4 par du HCI 0,1 N La solution qui en résulte est lyophilisée et

le produit est dissous dans CH 30 H et précipité par 10 volumes d'é-

ther pour donner le chlorhydrate.

A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule C 31 H 3 s NO 12 H Clo 2 H 20 et on obtient les valeurs suivantes:

C H C 1 N

calculées 54,27 5,88 5,17 2,04 trouvées 54,08 5,35 4,78 2,00 UV-Vis (CH 30 H) max 234 nm (ú 39 000); 252 ( 26 300); 290 ( 8 990);

480 ( 12 600); 495 ( 12 500); 530 ( 6 700).

Une fraction de 190 ml est recueillie et ensuite une fraction de ml Cette dernière fraction est évaporée et on trouve qu'elle

contient 19,5 % du matériau chargé sous la forme de 3 '-déamino-3 '-

( 4 '" '-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine d'une pureté de 97 %.

NMR CD C 13 300 M Hz a 13,98, 13,96 ( 2 s, 6-OH); 13,34, 13,32 ( 2 s, 11-

OH); 8,03 (d, l-H); 7,79 (t, 2-H); 7,40 (d, 3-H); 5,56 (bs, 1 '-H); 5,29 (bs, 7-H); 4,64, 4,59 ( 2 s, 9-OH); 4,09 (s, OCH 3); 4,03 (m, '-H); 3,824,05 (m, 4 '-H, 13-H); 3,68 (mni, 2 "-H 2, 6 "-H 2,14 B-H); 3,54 (bs, 14 A-H); 3,30 (mni, 1 OB-H); 2,98 (bs, OH); 2,87 (bs, OH); 2,77 (mni, 10 A-H, 3 '-H); 2,30-2,70 (mni, 8 B-H, 3 "-H 2, 5 "-H 2); 1,99 (ni, 3 A-H); 1,78 (mni, 2 '-H-2); 1,41 (d, 6 '-H 3) Spectre de masse

{ en tant que dérivé triméthylsilyle (TMS)}, m/e 975 M(TMS)5.

EXEMPLE 6

Préparation de la 3 '-déamino-3 '-( 4 '" -morpholinyle)-5-iminodoxo-

rubicine. A. A une solution de 0,396 g de 3 '-déamino-3 '-( 4 ''morpholinyle) doxorubicine préparée comme indiquée dans l'exemple 5 dans 5 ml

de pyridine sèche, on ajoute 0,990 g de p-anisyle chlorodiphényl-

méthane On laisse le mélange réagir à la température ambiante

dans l'obscurité pendant environ 2 jours La solution est refroi-

die dans l'eau glacée et l'on ajoute 0,5 ml de CH 30 Ho Le mélange est agité pendant 2 heures et l'on ajoute du Na HCO 3 dilué pour compléter à 50 ml et l'on extrait par CH 2 C 12 Les extraits sont concentrés pour donner un résidu à consistance de gomme que l'on dissout dans letoluène, on concentre, on dissout dans CH 2 C 12 et

on précipite en ajoutant lentement de l'éther de pétrole 35 à 60 C.

Le précipité est récupéré, redissous dans CH 2 Cl 2 et précipité par un mélange 2/1 éther de pétrole/éther diéthylique pour donner la 14-O-panisyldiphényle méthyle-3 '-déamino-3 '-( 4 '"-morpholinyle)

doxorubicine (III) sous la forme de solide amorphe avec un rende-

ment de 94 %.

Ce matériau est identifié par RMN à 90 M Hz dans CD C 13.

B. Une solution de 0,532 g de 14-O-p-anisyldiphényle méthyle-3 '-

déamino-3 '-( 4 ''-mnorpholinyle)doxorubicine dans 10 ml de CH 2 C 12 est ajoutée à 30 ml de CH 30 H saturé par de l'ammoniac à O C Le nmélange est agité à O C pendant i heure et on le laisse ensuite reposer à 3 C pendant 27 heures Le solvant du produit réactionnel

est évaporé Le résidu est dissous dans CH 2 Cl 2-CH 3 OH 4/1 et concen-

tré Ceci est répété deux fois et le solide est dissous dans CH 2 C 12 filtré sur Célite , concentré, dissous dans CH 2 Cl 2-CH 30 H 1/2 et

de nouveau concentré et séché pour donner 0,52 g ( 97 %) d'un ré-

sidu violet.

O OH

-CO-C OCH 3

l N v \ > tt OH e /9 a/ ''(III)

H 3 CO O OH O

T H Oc\ \

N

C Le résidu de la partie B est dissous dans 2 ml de CH 2 C 12 et appliqué sur une colonne de 1,5 x 40 cm de gel de silice et élué par CH 2 C 12 ( 50 ml) et ensuite par CH 2 Ci 2-CH 30 H ( 99/1, 150 ml; 98/2, 150 ml, 97/3, 500 ml, 95/5, 100 ml; 93/7, 100 ml et 90/10, ml) A la suite de 565 ml d'éluant, on sépare une fraction de

335 ml, on filtre et on évapore pour obtenir 50,9 % de l'échantil-

ion appliqué sous la forme d'un produit unique Ce produit est'

identifié comme étant la 14-0-p-anisyldiphénylméthyl-3 '-déamino-

3 '-( 4 ''-morpholinyle)-5-iminodoxorubicine par une RMN à 90 M Hz.

D. Un échantillon de 0,341 g du produit de l'étape C est dissous dans 20 ml d'acide acétique à 80 % et la solution est agitée dans l'obscurité pendant 7 heures La solution est ensuite diluée avec ml d'eau et extraite trois fois avec CH C 13 La phase aqueuse

contient le produit désiré et elle est lyophilisée dans l'obscu-

rité pour donner 0,294 g de solide Le solide est dissous dans de l'acide acétique 0,1 N La solution est lavée avec CH C 13 rendu basique par Na HC 03 et extraite avec CH C 13 Le produit désiré passe

dans la phase organique qui est lavée, séchée, filtrée et concen-

trée pour donner un résidu Ce résidu est dissous dans CH C 13-CH 30 H

( 1/10) concentré et séché pour donner 0,228 g de 3 '-déamino-3 '-

( 4 "'-morpholinyle)-5-iminodoxorubicine L'identité du produit

est vérifiée par RMN 300 M Hz et par analyse élémentaire.

EXEMPLE 7

Préparation du sel d'addition d'acide. Le produit basique libre de l'exemple 6 est mis en suspension dans 20 ml d'eau Le mélange est agité et l'on ajoute lentement 352 ml de HC 1 0,1 N pour établir un p H de 4,5 Le solide mis en suspension se dissout progressivement La solution est lyophilisée dans l'obscurité pour

donner le sel d'addition d'acide chlorhydrate de 3 '-déamino-3 '-( 4 "''morpho-

linyle)-5-iminodoxorubicine avec une pureté de 97 +% par analyse HPLC.

A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule C 31 H 36 N 201 H Cl 2 H 20 et on obtient les valeurs suivantes:

C H C 1 N

calculées 54,35 6,03 5,17 4909 trouvées 54,20 5,96 4,33 4,03

EXEMPLE 8

Préparation et séparation de la 3 '-déamino-3 '-( 4 '"-morpholinyle)-

5-imino-13-dihydrodoxorubicine.

A. Une solution de 0,186 g de 3 '-déamino-3 '-( 4 ''-morpholinyle)-13-

dihydrodoxorubicine préparée comme dans l'exemple 5 dans 6 ml de

CH 2 C 12-CH 30 H 1/1 est ajoutée à 20 ml de CH 30 H saturé par de l'am-

moniac à O C Le mélange est agité pendant 1 heure et ensuite stocké à 3 C pendant environ 27 heures, concentré et le produit résiduel est dissous dans CH 2 C 12-CH 30 H ( 4/1) et concentré trois fois pour éliminer complètement l'ammoniac Le résidu qui en

résulte est purifié par chromatographie en couche mince prépara-

tive sur des plaques de gel de silice de 2 mm x 20 cm x 20 cm en

utilisant un développement par CHC 13-CH 30 H 9/1 Des bandes conte-

nant de la 3 '-déamino-3 '-( 4 '"-morpholinyle)-5-imino-13-dihydro-

doxorubicine sensiblement pure sont séparées, éluées et l'éluant

est séché pour donner 0,139 g du produit basique libre tel qu'iden-

tifié par NMR à 300 M Hz.

B La base libre de la partie A est transformée en chlorhydrate par la méthode de l'exemple 7 Par analyse HPLC, on constate que le

chlorhydrate est pur à 97-98 %.

A l'analyse, on constate que le produit obtenu C 31 H 38 N 2011 H Cl 2 H 20 et on obtient les valeurs suivantes: présente la formule calculées trouvées C 54,19 54,17 H 6,31 ,95 C 1- ,16 4,88 N 4,08 3,87

EXEMPLE 9

Préparation de la 3 '-deamino-3 '( 3 ''-cyano-4 '"-miorpholinyle)-5: iminodaunorubicine. Une solution de 0,031 g de 3 '-déamino-3 '-( 3 "cyano-4 ''-morpholinyle) cdaunorubicine dans 1,0 ml de CH 2 CI 2 est ajoutée à 5 ml de méthanol saturé par de il'ammoniac à O C Le mélange est agité pendant 30 minutes et on le stockeensuite à 3 C pendant 45 heures Le produit de cette réaction est évaporé à siccité pour donner un résidu que l'on dissout dans 5 ml de CHCI 3-CH-OH 19/1 et concentré Cette étape est répétée Ce résidu est dissous dans CH Cla-CH 30 H et appliqué sur une plaque de gel de silice de 2 mm x

cvm x 20 cm et développé en utilisant CH C 13-CH 30 H 9/1 La bande princi-

pale est éluée et analysée Une spectroscopie de masse vérifie que le

composé est la 3 '-déamino-3 '-C 3 ''-cyano-4 ''-morpholinyle)-5iminodauno-

rubicine.

EXEMPLE 10

La préparation de l'exemple 6 est répétée en utilisant la 3 '-déamino-

3 '-( 3 '"-cyano-4 "'-morpholinyle)daunorubicine préparée comme dans l'exem-

ple 4 comme charge au lieu de la 3 '-déamino-3 '-( 4 "-mniorpholinyle) doxorubi-

cine La séquence de séparation blocage-amination-déblocage de l'exemple 6

est utilisée pour donner la 3 '-déamino-3 '-( 3 '" -cyano-4 "morpholinyle) 5-

iminodoxorubicine comme produit final.

Avec plus de détails, cette préparation se fait de la façon sui-

vante:

A -

A une solution de 0,241 g de 3 '-déamino-3 '-( 3 ''-cyano-4 ''-morpholi-

* nyle)doxorubicine préparée comme dans l'exemple 4 dans 4 ml de

pyridine sèche, on ajoute 0,587 g de -anisylchlorodiphénylméthane.

La solution est agitée à la température ambiante dans l'obscurité pendant 44 heures Le mélange réactionnel est refroidi, dilué avec 0,5 ml de CH 30 H, agité à la température ambiante pendant 3 heures et l'on ajoute ensuite du Na HCO 3 dilué pour compléter à 50 ml et l'on extrait avec du CH 2 CI 2 Les extraits sont concentrés, le résidu est dissous dans 3 ml de CH 2 C 12 et l'on précipite en ajoutant lentement 40 ml d'éther diéthylique pour donner 0,333 g ( 97 %) de

14-O-j-anisyldiphénylméthyl-3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 '"'-morpholi-

nyle)doxorubicine. RMN CDC 13 90 M Hz a 13,84 (s, 6-OH); 12,99 (s, 11-OH); 7,82 (d, 1-H); 6,70-7,75 (m, 2-H, 3-H, trityl-aryle); 5,42 (bs, 1 '-H); 5,08 (bs, 7-H); 4,45 (bs, 2, 14-H 2); 4,19 (s 9-OH); 4,00 (s, OCH 3); 3,79

(s, OCH 3); 3,30-4,15 (m, 4 '-H, 5 '-H, 2 "-H 2, 3 "-H, 6 ",H 2); 1,60-

3,10 (m, 2 '-H 2, 8-H 2, 5 "-H 2, 10-H 2, 3 '-H); 1,13 (d, 6 '-H 3).

B. Une solution de 0,369 g de 14-O-p-anisyldiphénylméthyl-3 '-déamino-

3 '-( 3 "-cyano-4 '"-mniorpholinyle)doxorubicine dans 8 ml de CH 2 C 12 est ajoutée à 25 mi de CH 30 H saturé par de l'ammoniac à O C Le mélange est agité à O C pendant i heure et on le laisse ensuite

reposer à 3 C pendant 26 heures Le mélange réactionnel est éva-

poré pour éliminer complètement l'ammoniac et donner 0,376 g d'un

résidu violet.

C. Le résidu de la partie B dans 1,5 ml de CH 2 C 12 est appliqué à une colonne de 1,5 x 28 cm de gel de silice (de 200 à 400 mailles) et élué avec CH 2 C 12 ( 50 ml) et ensuite CH 2 C 12-CH 30 H ( 99/1, 200 ml; 98/2, 300 ml, 97/3, 100 ml, 95/5, 100 ml et 90/10, 200 ml) Apres rassemblement de 360 ml d'éluat initial, une fraction de 125 ml

est évaporée pour donner 0,203 g de 14-O-p-anisyldiphénylmnéthyl-

3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 "-morpholinyle)-5-iminodoxorubicine.

D. Un échantillon de 0,158 g du résidu de la partie C est refroidi

à O C et dissous dans 8 niml d'acide trifluoroacétique à 50 % re-

froidi par de la glace La solution est agitée à O C pendant 2 mi-

nutes et versée ensuite dans 100 ml d'eau glacée Le mélange aqueux est extrait par CH C 13 ( 4 x 10 ml) et les extraits réunis sont lavés avec Na HCO 3 dilué et H 20, séchés sur Na 2 SO 4, filtrés sur Célite et évaporés Le résidu est dissous dans 3 ml de CHC 13-CH 30 H ( 4/1), la solution est agitée et l'on ajoute goutte à goutte 25 ml d'éther Le précipité qui en résulte est recueilli

pour donner 0,093 g de 3 '-déamniino-3-( 3 ''-cyano-4 ''-morpholinyle)-

-iminodoxorubicine. Une HPLC et une analyse RMN 300 M Hz indiquent que ce matériau est un mélange diastéroisomère Une analyse HPLC sur une colonne Waters

Radial-Pak C-18 avec un mélange tampon de citrate p H 4 0,05 M -

CH 30 H ( 40/60) indique des pics à 18,4 minutes et 25,0 minutes dans le rapport 69/31 Le spectre à 300 M Hz de ce produit indique deux résonances pour les protons 1-H, 2-H, 3-H, 1 '-H, 7-1 H, 14-H 2, 9-OH,

OCH 3, 10 A-H, et 6 '-H 3.

NMR CD C 13 300 M Hz 6 15,61 (s, 11-OH); 13,74 (d, 6-OH); 9,27 (d, NH); 8, 21, 8,19 ( 2 d, 1-H); 7,73, 7,72 ( 2 t, 2-H); 7,33, 7,32 ( 2 d, 3-H); 5, 77, 5,72 ( 2 d, 1 '-H); 5,41, 5,38 ( 2 m, 7-H); 4,79, 4,77 ( 2 s, 14-H 2); 4,72, 4,66 ( 2 s, 9-OH); 4,15, 4,14 ( 2 s, OCH 3); 4,04 (m, 5 '-H); 3,97 (m, 3 '-H, 2 "B-H); 3575 (m, 6 "-H 2, 4 '-H); 3,59 (m, 2 "A=H); 3,23 (d, l OB-H); 3,03 (m, 10 A-H, 3 '-H); 2,72 (m, 5 "-H 2); 2,33 (ni, 8 B-H);

2,14 (m, 8 A-H); 1,85 (m, 2 '-H 2); 1,38, 1,37 ( 2 d, 6 '-H 3).

T O UV-Vis (C Hs OH) max 221 nm (e 31 000); 252 ( 32 900); 307 ( 7 110); 520 sh ( 9 110); 551 ( 17 400); 592 ( 20 700) DCI-MS m/e 638 (M + H);

611 (M + H-HCN).

A l Vanalyse, on constate que le produit obtenu présente la formule

C 32 H 35 N 3011 H 120

et on obtient les valeurs suivantes:

C H N

-calculées 58,62 5,69 6,41 trouvées 58,79 5,47 6,30

EXEMPLE 11

On répète la préparation de l'exemple 8 quatre fois en utilisant

chaque fois une quantité molaire équivaiente d'un matériau de départ dif-

férent au lieu de la 3 '-déamino-3 '-( 4 '"-inorpholinyle)-13dihydrodoxoru-

bicine Dans la première répétition on utilise la 3 '-déamino-3 '-( 3 ''cyano-

4 "-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubicine comme charge pour donner comme

produit final la 3 '-déamino-3 '-( 3 "'-cyano-4 "-morpholinyle)-5-imino13-

dihydrodoxorubicine comme produit final Dans la secondé répétition, oh utilise la 3 '-déamniino-3 '-( 4 ' '-morpholinyle)daunorubicine comme charge pour

donner comme produit final la 3 '-déamino-3 '-( 4 "-morpholinyline)-5imino-

daunorubicine Dans la troisième répétition, on utilise comme charge la 3 '-déamino-3 '-( 4 '" -morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine pour donner la 3 '-déamino-3 '-( 4 '" -morpholinyle)-5-imino-13-dihydrodaunorubicine comme produit final Dans la quatrième répétition, on utilise comme charge la 3 '-déamino-3 '-( 3 '" -cyano-4 '" -morpholinyle)-13dihydrodaunorubicine pour

donner comme produit final la 3 '-déamino-3 '-( 3 "'-cyano-4 "'morpholinyle)-5-imino-13-dihydrodaunorubicine.

EXEMPLE 12

On répète les préparations des exemples 1 à 11 en utilisant au lieu de la doxorubicine et de la daunorubicine comme produits de départ la série de doxorubicines et de daunorubicines dérivées décrites et préparées comme décrit ici dans la section dénommée "dérivés et analogues" Ces

répétitions donnent lieu aux dérivés et analogues correspondants des com-

posés suivant la présente invention.

Les composés suivant la présente invention possèdent une utilité en tant qu'agents anti-tumeurs pour les mammifères Cette activité est mise en évidence par des études in vivo et in vitro Le test in vivo conduit en accord avec le protocole décrit dans Cancer Chemotherapy Reports, National Cancer Institute, 3, n 2, Part 3,,Septembre, 19727 des souris saines sont inoculées par voie intrapéritonéale par un fluide ascitique

de lymphocyte de leucémie Po 388 Les souris inoculées sont ensuite trai-

tées les jours n 5, 9 et 13 de la période suivante par différentes quan-

tités des produits suivant la présente invention A titre de comparai-

sons, d'autres souris restent non traitées et d'autres souris sont trai-

tees avec de la daunorubicine ou de la doxorubicine; de la 3 '-déamino-3 '-

( 4 " '-norpholinyle)daunorubicine ou de la 3 '-déamino-3 '-( 4 'morpholinyle)-

13-dihydrodaunorubicine, du brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 o 301 o 277

ou de la 3 '-déamino-3 '-( 4-méthoxy-1-pipéridinyl)daunorubicine ou son équi-

valent 13-dihydro indiqués dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n

4.314 054.

Le temps moyen de survie des différentes souris traitées est déter-

miné et comparé avec celui des souris auxquelles on a inoculé le fluide ascitique de la leucémie mais auxquelles on n'a donné aucun traitement parles composés test On présente dans le tableau A suivant les données ainsi obtenues Les données sont présentées sous forme de valeurs T/C en % qui sont le temps de survie des souris traitées divisé par le temps de survie des souris de contrôle multiplié par 100 On donne aussi dans le tableau A les niveaux de dosage des divers composés que l'on observe

pour produire les meilleures améliorations de temps de survie.

Ces résultats montrent que les composés suivant la présente inven-

tion ont une activité anti-tumeur in vivo allant de bonne à supérieure à des doses optimum faibles Le composé NSC 357 704 indique un niveau de dosage optimum d'environ 1/150 ème de celui qui est nécessaire avec le composé apparenté D'autres produits suivant la présente invention montrent

des niveaux de dosage optimum de loin inférieurs à celui de la daunorubi-

cine et de la doxorubicine Ceci promet de procurer un agent anti-tumeur

actif ayant une cardiotoxicité sensiblement diminuée.

TABLEAU A

1 Activité con Leucémie de itre la leucé cellules L- 12 esl lmie P 388 des I souris _______________________________ temps dose Inhibition de de opt A synthèse survie mum (q 4 d E Dso, 1 p M

,9, 13)

Composé j N O % NS T /C %mg/kg D NA NRA

3 '- déamino-3 '-( 3 ' -cyano-

4 ' '-morphol inyl e) daunorubi cine 332 304, 197 0,4 0,012 0,002

3 '-déawiino 3 '-( 3 " -cyano-

4 ' '-morphol i nl e) 3 dihydrodaunorubicine 332 305 143 0,1 0,019 0,002

3 '-déamino-3 '-(j' '-cyano-

4-''-mforpholinyle)doxorubicine 357 704 i)87 0,075 0,003 0,0005

3 '-déanhino-3 '-( 3 ' -cyvano-

41 ''riorpholinyle)-13-

dihydrodoxorubicine 360 291 150 0,2 0,021 0,0030

3 '-déanmino-3 '-( 4 ' '-

morphol inyle)-13-dihydro-

-iminodoxorubicine 355 465 161 50 > 100 24

3 '-déamino-3 '-( 4 '-

mnorpholinyle)daunorubicine 327 451 166 0,2 0,76 0,10

3 '-déamino-3 '-( 4 ' '-

morphol inyle)-13-

dihydrodaunorubicine 327 450 132 0,2 2,2 0,67

3 '-déami no-3 ' -( 4 ' '-méthoxy-

1 ' '-pipéridinyl)-

daunorubicine 334 353 199 6,25 0,63 0,12

3 '-déami no-3 ' -( 4-méthoxy-

1-pipéridinyl)-13-dihydro-

daunorubicine 334 354 199 12,5 0,58 0,08 Par comparaison: daunorubicine 82 151 130 8 0,66 0,33 doxorubicine 123 127 160 8 1,5 0,58 -L -1 *N NSC = Numéro d'enregistrement du Centre du Service National de

l'Institut National du Cancer des Etats Unis d'Amérique.

Des tests in vitro sur la 3 '-déamino-3 '-( 3 "''-cyano-4 ''-morpholi-

nyle)daunorubicine et le 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 '" '-morpholinyle) -13-

dihydrodaunorubicine montrent aussi l'activité accrue de cette classede composés Lorsque ces matériaux sont traités en tant qu'inhibiteurs de

la synthèse du DNA et du RNA sur des cellules L-1210 par la méthode dé-

crite dans G Tong, W W Lee, D Ro Black et D W Henry, J Medicinal Chem, 19, 395 ( 1976); ils sont actifs à des doses qui sont jusqu'à 600 fois plus faibles que les doses de daunorubicine, de doxorubicine ou des analogues antérieurs On observe aussi qu'ils ont des propriétés inhibitrices beaucoup plus importantes vis-à-vis de la synthèse du RNA

que vis-à-vis de la synthèse du DNA (rapport ED 50 DNA/RNA = 10 à 11).

Il a été suggéré par S T Crooke et al, Mol Pharmacolo, 14, 290 ( 1978)

qu'un tel rapport indique des anthracyclines de classe II ayant des pro-

priétés thérapeutiques amelioréeso Ces données sont indiquées sur le

tableau A.

Les données du tableau A, indiquant une puissance anti-tumeur accrue avec la structure morpholino et une augmentation supplémentaire

d'efficacité avec la structure cyano-morpholino indiquent le type d'acti-

vité de cette classe de composés.

Des tests supplémentaires sont effectués pour vérifier l'activité biologique des composés suivant la présente invention Ce sont des tests in vivo sur des souris contre la leucémie P 388 et L-1210 et le mélanome

B-16 mis en oeuvre essentiellement par la méthode de l'article cité ci-

dessus Cancer Chemotherapy Reports, 1972 On teste divers programmes de dosage et les voies d'administration intrapéritonéale, intraveineuse et orale Les résultats sont indiqués sur le tableau B. Les composés suivant la présente invention, y compris leurs sels,

peuvent être administrés par toute voie disponible y compris l'administra-

tion par voies orale et parentérale (intraveineuse, intrepéritonéale, sous-cutané et intramusculaire) L'administration parentérale, notamment l'administration intraveineuse a été historiquement le mode de choix et

c'est celle que l'on préfère Le régime de dosage et la quantité adminis-

trée est suffisante pour améliorer la leucémie ou un autre type de cancer

vis-à-vis desquels les composés sont efficaces Par exemple, dans le trai-

tement des animaux d'essai inférieurs, un dosage d'un composé suivant la présente invention dans la gamme d'environ 0,0010 mg/kg à environ 25 mg/kg

TABLEAU B

Efficacité anti-tumeur sur la souris pour la dose optimum, T/C % (mg/kg) Composé NSC N daunorubicine doxorubicine

82.151 * 123 127 * 327 451 ( 4)* 327 450 ( 1)* 332 304

ip L-1210 d 1, ip 168 ( 5) q 4 d 1, 5, 9, ip qd 1-9, ip 173 ( 1) ip P 388 d 1, ip 252 ( 7 5) 155 ( 0,25) 175 ( 0,25) d 1, iv 185 ( 10) 152 ( 0,5) 157 ( 0,5) q 4 d 1, 5, 9, ip 257 ( 4) q 4 d 1, 5, 9, po qd 1-9, ip > 285 ( 2) ip B 16 d d 1, ip > 197 ( 20) q 4 d 5, 9, 13, ip 129, 146 ( 3) ip B 516 d 1, ip 195 ( 4) 292 ( 4) 135 ( 0,25) 121 ( 0,25) 138 ( 0,15) * Composés antérieurs à titre de comparaison: ( 1) 3 '-déamino-3 '-( 4 " 'morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine ( 2) 3 '-déamino-3 '-( 4 " morpholinyle)doxorubicine ( 3) 3 '-déamino-3 '-( 4 "-morpholinyle)-5iminodoxorubicine ( 4) 3 '-déamino-3 '-'4 '"-morpholinyle)-daunorubicine (voir revendication (voir revendication (voir exemples 6 et (voir revendication 4 du brevet US 4 301 277) 6 du brevet US 4 301 277) 7 de la présente demande) 2 du brevet li S 4 301 277) r Pl Ln (.b J P t C. TABLEAU B (suite) Efficacité anti-tumeur sur la souris pour la dose optimum, T/C % (mg/kg) Composé NSC N 332 305 354 646 ( 2)* 355 277 ( 3) 357 704 360 291 ip L-1210 d 1, ip 152 ( 0,05) 164 ( 0,025) 152 ( 0,025) q 4 d 1, 5, 9, ip > 164 ( 0,0125)> 128 ( 0,05) qd 1-9, ip > 141 ( 0,025) 166 ( 0,0063) > 148 ( 0,025) ip P 388 d 1, ip 182 ( 0,05) > 193 ( 2) 262 ( 0,0125) 183 ( 0,05) d 1, iv > 143 ( 0,062) 166 ( 2,5) 152 ( 0,05) q 4 d 1, 5, 9, ip 224 ( 0,05) q 4 d 1, 5, 9, po 175 ( 0,05) > 158 ( 0,1) qd 1-9, ip 209 ( 0,0125) > 360 ( 0,0063) 167 ( 0,025) ip B 16 d d 1, ip > 138 ( 0,0063) 149 ( 0,025) q 4 d 5, 9, 13, ip 123 ( 0,0125) 121 ( 0,025) ip B 16 d 1, ip 131 ( 0,0375) *Composés antérieurs à titre de comparaison: ( 1) 3 '-déamino-3 '( 4 T"-morpholinyle)-13-dihydrodaunorubicine ( 2) 3 '- déamino-3 '4 "'-morpholinyle)doxorubicine ( 3) 3 '-déamino-3 '4 ' "morpholinyle)-5-iminodoxorubicine ( 4) 3 '-déamino-3 '( 4 ''-morpholinyle) -13-dihydrodoxorubicine (voir (voir (voir (voir revendication 4 revendication 6 exemples 6 et 7 revendication 5 du brevet US 4 301 277) du brevet US 4 301 277) de la présente demande) du brevet US 4 301 277) ri n 0 % o o P% C> par jour, est suffisant pour améliorer la leucémie La limite de dosage supérieure est celle imposée par les effets secondaires toxiques et peut

être déterminée par essai et erreur pour les animaux à traiter En géné-

ral, le dosage avec les composés suivant la présente invention sera infé-

rieur à celui requis avec les composés apparentés (par exemple de 1/20 à 1/200 de fois) Une posologie d'une dose tous les deux à sept jours est efficace tandis que des intervalles plus courts par exemple 1 jour ou

moins entre les doses peuvent aussi bien être convenables.

Pour faciliter l'administration, les composés suivant la présente invention, y compris leurs sels, peuvent être fournis sous la forme de

compositions pharmaceutiques et notamment sous la forme de dose unitaire.

Tandis que les composés peuvent être administrés en soi, il est plus

classique de les administrer en conjonction avec un support pharmaceuti-

quement acceptable qui dilue le composé et en facilite la manipulation.

Le terme "pharmaceutiquement acceptable" signifie que le vecteur (aussi

bien que la composition qui en résulte) est stérile et non toxique.

Pour l'administration orale, le véhicule ou le diluant peut être solide, semi-solide ou liquide et peut servir de véhicule, d'excipient,

ou de milieu pour l'agent tel que décrit dans les textes de la pharmaco-

logie Pour l'administration parentérale, le composé est dissous ou mis en suspension dans un milieu liquide injectable convenable comme cela est

connu dans l'état de la technique.

Dans la préparation de ces formes de dosage, on peut utiliser les techniques reconnues dans l'art antérieur pour la formulation des agents pharmaceutiques solubles dans l'eau (dans le cas des sels) et des agents insolubles dans l'eau (dans le cas des bases libres) Par exemple, les matériaux injectables peuvent être formulés de la façon suivante: Formulation A: suspension stérile dans un véhicule aqueux pour injection Mg composé des exemples 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9 ou 10 sous la forme de poudre pouvant être mise en suspension 3 citrate de sodium 5,7 sodium carboxyméthylcellulose (qualité de faible viscosité) 2,0 parahydroxybenzoate de méthyle 1,5 parahydroxybenzoate de propyle 0,2 eau pour injection complétée à 1,0 ml Formulation A': suspension stérile dans un véhicule aqueux pour injection Mg 3 '-déamino-3 '-( 3 "'-cyano-4 ''morpholinyle) doxorubicine de l'exemple 4 0,5 citrate de sodium 5,7 sodium carboxyméthylcellulose (qualité de faible viscosité) 2,0 parahydroxybenzoate de méthyle 1,5 parahydroxybenzoate de propyle 0,2 eau Q S P 1,0 ml Formulation B: solution stérile dans un système de véhicule aqueux pour injection Mg composé de l'exemple 7, 4 citrate de sodium 5,7 sodium carboxyméthylcellulose (qualité de viscosité faible) 2,0 parahydroxybenzoate de méthyle 1,5 parahydroxybenzoate de propyle 3,2 eau Q S P 1,0 ml De même, on pourrait formuler des pastilles pour administration orale de la façon suivante: formulation C: formulation des pastilles Mg composé de l'exemple 7 5,0 lactose 91 amidon de blé (séché) 51,5 gélatine 2,5 stéarate de magnésium 1,0 Le composé de l'exemple 7 est mis en poudre et passé à travers un tamis à mailles et bien mélangé avec le lactose et 30 mg de l'amidon de

blé passant tous les deux à travers un tamis.

Les poudres mélangées sont composées avec une solution de gélatine chaude préparée en mélangeant la gélatine dans l'eau et en chauffant pour former une solution à 10 % poids/poids La masse est mise en granules par passage à travers un tamis et les granules humides sont séchées à 400 C. Les granulés secs sont regranulés par passage à travers un tamis

et le reste de l'amidon et du stéarate de magnésium est ajouté et on mé-

lange énergiquement.

Les granulés sont comprimés pour produire des pastilles pesant

chacune 150 mg.

Des capsules pourraient être formulées de la façon suivante: formulation D: formulation de la capsule Mg composé de l'exemple 8 10 lactose 190 formulation D': formulation de la capsule Mg 3 '-déamino-3 '-( 3 "-cyano4 " -morpholinyle)doxorubicine de l'exemple 4 (C) 1 lactose 199 On fait passer le composé de l'exemple 8 ou 4 (C) et le lactose à travers un tamis et les poudres sont bien mélangées ensemble avant

d'être introduites dans des capsules de gélatine dures de taille conve-

nable, de telle sorte que chaque capsule contienne 200 mg des poudres mélangées.

Claims (22)

REVENDICATIONS

1. A titre de composés industriels nouveaux, composé ayant la structure o OH R tw 1 OH

Y X OH O

O I

R' ' /7

N

1 A

(A dans laquelle: R est choisi dans le groupe constitué par -CO-CH 3, CHOH-CH 3,

-CO-CH 20 H, -CHIIOH-CH 20 H, un hydroxy D des radicaux alkyles compor-

tant de 1 à 3 atomes de carbone, des radicaux hydroxyalkyles terminaux comportant de 1 à 3 atomes de carbone et, des esters et diesters d'acide organique comportant de 2 à 7 atomes de carbone de -CO-CH 20 H, -CHOH-CH 20 H et -CHOH-CH -CO-CIH 20 H, -CHOH-CH 20 H et -CHOH-CH 3 possédant un radical alkyl ou aryl-éther à 1 à 6 atomes de carbone en remplacement de un ou plusieurs de leurs hydroxyles, et des dérivés 13-cétimines de -COCH 3 et -CO-CH 20 H; Y représente un hydrogène ou un méthoxy; X est égal à O ou NH, R' et R'' ensemble représentent un hydrogène + un hydroxy, tous les

deux sont des hydrogènes ou R' est O-méthoxy et R" est un hydro-

gène; A est un hydrogène ou un cyano avec la limitation que lorsque X = O, A doit être un cyano;

Z est choisi parmi l'oxygène, le soufre, -CH 2 et -CH-

OR"'' dans laquelle R'' est un radical alkyle comportant de I à 3 atomes

de carbone sous la réserve que lorsque Z est égal à -CH 2 ou -CH-

A est un cyano OR "

2. Composé suivant la revendication 1, ayant la structure

O OH

il -

uellr R il OH HO \f HOl_ laquelle: est choisi parmi CO-CH 3, CHOH-CH 3, CO-CH 20 H et CHOH-CH 20 H; est choisi parmi O et NH; et,

est choisi parmi CN et H, A étant CN lorsque X représente 0.

3. Composé suivant la revendication 2, ayant la structure o OH OH'X-

H 3 CO O OH O

N \r CN i O dans

R

X A

4. Composé suivant la revendication 2, ayant la structure N

5. Composé suivant la revendication 2, ayant la structure

O OH

>o"OH

H 3 CO NH OH O

N CN

dans laquelle:

R a la même signification que dans la revendication 2.

6. 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 '"-morpholinyle)-daunorubicine.

7. 3 '-déamniino-3 '-( 3 "'-cyano-4 "'-morpholinyle)-13-dihydrodauno-

rubicine.

8. 3 '-déamino-3 '-( 3 '" -cyano-4 "-morpholinyle)-doxorubicine.

R "OH

9. 3 '-déamino-3 '-( 3 ''-cyano-4 ''-morpholinyle)-13-dihydrodoxorubi-

cine.

10. 3 '-déamino-3 '-( 4 " morpholinyle)-5-iminodoxorubicine et ses

sels pharmaceutiquement acceptables.

11 Composition pharmaceutique comprenant un composé suivant la revendication 1, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce composé,

en mélange avec un véhicule ou diluant pharmaceutiquement acceptable.

12. Composition pharmaceutique anti-tumorale comprenant un composé

suivant les revendications 2 à 5, ou un sel pharmaceutiquement acceptable

de ces composés, en mélange avec un véhicule pharmaceutiquement accepta-

ble.

13. Composition pharmaceutique anti-tumorale comprenant une quantité

efficace de 3 '-déamino-3 '-( 3 "-cyano-4 " -morpholinyle)-daunorubicine.

14. Composition pharmaceutique anti-tumorale comprenant une quantité

efficace de 3 '-déamino-3 '-( 3 "-cyano-4 '"-morpholinyle)-13dihydrodauno-

rubicine.

15. Composition pharmaceutique anti-tumorale comprenant une quantité

efficace de 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 "-morpholinyle)-doxorubicine.

16. Composition pharmaceutique anti-tumorale comprenant une quantité

efficace de 3 '-déamino-3 '-( 3 '"-cyano-4 '"-morpholinyle)-13dihydrodoxoru-

bicine.

17. Composition pharmaceutique anti-tumorale comprenant une quantité

efficace de 3 '-déamino-3 '-( 4 ''-morpholinyle)-5-iminodoxorubicine.

18. Procédé de préparation d'un composé ayant la structure

O H

R OH

Y X OH

R'

A

z dans laquelle: R est choisi parmi -CO-CH 3, -CHOH-CH 3, -CO-CH 20 H, CHOH-CH 20 H,

un hydroxy, des radicaux alkyles possédant de i à 3 atomes de car-

bone, des radicaux hydroxyalkyles terminaux comportant de 1 à 3 atomes de carbone, des esters et diesters d'acides organiques comportant de 2 à 7 atomes de carbone de -CO-CH 2 OH, -CHOH-CH 20 H et -CHOH-CH 3, -CO-CH 20 H, -CHOH-CH 20 H et -CHOH-CH 3 comportant des alkyles ou aryles éthers à i à 6 atomes de carbone en remplacement d'un ou plusieurs de leurs hydroxyles, et des dérivés 13-cétimines de -CO-CH 3 et

-CO-CH 20 H;

Y représente un hydrogène ou un méthoxy; X égal O ou NH; R' et R"' ensemble représentent un hydrogène + un hydroxy, sont tous les deux des hydrogènes ou R' est un orthométhoxy et R ' est un hydrogène; A est un hydrogène ou un cyano sous réserve que, lorsque X = O, A doit être un cyano;

Z est choisi parmi l'oxygène, le soufre, -CH 2 o et -CH-

OR'"' dans laquelle R'' est un radical alkyle comportant de 1 à 3 atomes

de carbone avec la réserve que lorsque Z représente -CH 2 ou -CH-

OR' A est un cyano, caractérisé en ce que la daunorubicine et la doxorubicine connues et leurs analogues de structure: OOH R' H

R'

NH dans laquelle: R, R', R'', X et Y ont les significations indiquées cidessus, sont mis en réaction dans un milieu organique polaire aqueux mixte avec un composé de la structure

-/ CH 2-CHO

CH 2-CHO

ou un précurseur convenable de celui-ci dans lequel parmi oxygène, soufre, -CH -, -CH, et R"' a la OR'' Z est sélectionné

signification ci-des-

sus, la réaction étant mise en oeuvre en présence d'un sel de cyanoboro-

hydrure tel qu'un cyanoborohydrure de métal alcalin et en ce que les com-

posés souhaités sont isolés et purifés d'une manière connue en soi.

19. Procédé de préparation d'un composé ayant la structure -

H 3 CO

O OH

HO CN O dans laquelle: R est choisi parmi -CO-CH 3, -CHOH-CH 3, -CO-CH 20 H et -CHOH-CH 2 OH, caractérisé en ce qu'un composé de la structure OR OH

H 3 CO

0 OH

HO NH 2 dans laquelle: R a la signification ci-dessus, est mis en réaction dans un-milieu organique un composé de la structure polaire aqueux mixte avec

CH 2-CHO

CH 2-CHO

ou un précurseur convenable de celui-ci, la réaction étant effectuée en présence d'un sel de cyanoborohydrure tel qu'un cyanoborohydrure de métal alcalin et en ce que les composés désirés sont isolés et purifiés de

manière connue.

20. Procédé pour la préparation d'un composé de la structure

CO-CH 20 H

(IV) H 3 Co HO

N CN

O caractérisé en ce que la doxorubicine ou un sel habituel de celle-ci est mise en réaction dans un milieu organique polaire aqueux mixte avec la 2,2 '-oxydiacétaldéhyde ou un composé susceptible de l'engendrer "in situ"

en présence d'un cyanoborohydrure de métal alcalin tel qu'un cyanoborohy-

drure de sodium ou de potassium et en ce que le composé désiré est isolé

et purifié selon des méthodes physico-chimiques connues en soi.

21. Procédé pour la préparation du composé (IV) suivant la reven-

dication 20, caractérisé en ce que le produit réactionnel brut obtenu après la "fermeture du cycle morpholino" est séparé en fractions neutre et basique, et la fraction neutre est soumise à une purification par

chromatographie pour donner le produit (IV) pur.

22. Procédé pour la préparation d'un composé ayant la structure: OH " OH

H CO NH OH

S

3 O

H 3 O/

H Ot

N A

O dans laquelle: R est choisi parmi -CO-CH 3, -CHOH-CH 3, -CO-CH 20 H et CHOH-CH 2 OH; et, A est choisi parmi CN et H, caractérisé en ce que un composé ayant la structure: R OH

H 3 CO

Lm A Ns dans laquelle: R a la signification ci-dessus, et après que le groupe 14-hydroxy s'il est présent ait été convenablement bloqué par un groupe quelconque protecteur labile en milieu acide faible, est mis en réaction avec un excès d'ammoniac alcoolique à une température comprise entre -250 C et + 250 C et, en ce que, après séparation par coupure

du groupement protecteur labile en milieu acide faible, les composés dé-

sirés sont isolés et purifiés d'une manière connue.

1 *.