WO2012157723A1 - オリゴヌクレオチドの製造方法 - Google Patents

オリゴヌクレオチドの製造方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2012157723A1
WO2012157723A1 PCT/JP2012/062708 JP2012062708W WO2012157723A1 WO 2012157723 A1 WO2012157723 A1 WO 2012157723A1 JP 2012062708 W JP2012062708 W JP 2012062708W WO 2012157723 A1 WO2012157723 A1 WO 2012157723A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
octadecyloxy
reaction
formula
added
Prior art date
Application number
PCT/JP2012/062708
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
邦博 平井
智 片山
Original Assignee
味の素株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47175410&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=WO2012157723(A1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 味の素株式会社 filed Critical 味の素株式会社
Priority to CN201280020029.5A priority Critical patent/CN103476784B/zh
Priority to DK12785878.5T priority patent/DK2711370T3/en
Priority to JP2013515204A priority patent/JP5979139B2/ja
Priority to EP12785878.5A priority patent/EP2711370B1/en
Publication of WO2012157723A1 publication Critical patent/WO2012157723A1/ja

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C41/00—Preparation of ethers; Preparation of compounds having groups, groups or groups
    • C07C41/01—Preparation of ethers
    • C07C41/16—Preparation of ethers by reaction of esters of mineral or organic acids with hydroxy or O-metal groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a specific oligonucleotide. Furthermore, it relates to a specific pseudo solid phase protecting group and a specific nucleoside.
  • Oligonucleotide synthesis methods include the phosphate triester method, the H-phosphonate method, and the phosphoramidite method.
  • solid phase synthesis solid phase method
  • the solid-phase method is optimized for process and automated, and is advantageous in terms of speed, but there are restrictions on scale-up due to equipment constraints, the use of excessive reagents and raw materials, and the progress of the reaction at an intermediate stage Confirmation and intermediate structure analysis are also difficult.
  • methods for synthesizing oligonucleotides by a liquid phase method have been studied. However, since the operation is complicated and the yield is low, it is difficult to synthesize oligonucleotides having a high degree of polymerization in large quantities and quickly.
  • Non-Patent Documents 2 to 4 an oligonucleotide production method using monomethoxypolyethylene glycol (MPEG) as a protecting group has been disclosed as an attempt to eliminate the respective disadvantages of the liquid phase method and the solid phase method.
  • MPEG monomethoxypolyethylene glycol
  • Patent Document 1 a method for synthesizing oligonucleotides using a hydrophobic group-linked nucleoside is disclosed.
  • an object of the present invention is to provide an industrially advantageous production method in which a multi-step process including a crystallization isolation step, which should be called an essential step, is omitted in a method for synthesizing an oligonucleotide using a hydrophobic group-linked nucleoside. It is to be.
  • an n-polymerized oligonucleotide in which the hydroxyl group at the 3 ′ end is protected with a pseudo-solid phase protecting group and the hydroxyl group at the 5 ′ end is protected with a temporary protecting group is used as a raw material.
  • a deprotection step of a protected 5′-terminal hydroxyl group (2) an extension step to the 5′-end by adding p-polymerized oligonucleotide in which the 3′-position is phosphoramidite, and (3) a phosphite triester site
  • n + p-polymerized oligonucleotides (n and p are independently And any integer greater than or equal to 1) is provided.
  • the present inventors added a specific cation scavenger during or after the deprotection reaction of the 5′-position hydroxyl group protected with a temporary protecting group, and neutralized with an organic base after the deprotection reaction. It has been found that the above-mentioned problems can be solved by performing the treatment and further performing the oxidation treatment or the sulfuration treatment with the oxidizing agent or the sulfurizing agent.
  • the present invention includes the following.
  • a method for producing an oligonucleotide comprising the following steps (1) to (3): (1) n-polymerized oligonucleotide in which the 3′-position hydroxyl group is protected with a pseudo-solid phase protecting group and the 5′-position hydroxyl group is protected with a temporary protecting group that can be removed under acidic conditions in a nonpolar solvent (n Represents an arbitrary integer of 1 or more), an acid, and at least one cation scavenger selected from a pyrrole derivative and an indole derivative are reacted to remove a temporary protecting group at the 5′-position hydroxyl group, and then an organic base Neutralizing with (2) p polymerization in which the 3′-position hydroxyl group is converted to a phosphoramidite and the 5′-position hydroxyl group is protected with a temporary protecting group that can be removed under acidic conditions in the reaction solution after neutralization in step (1) N oligonucleotides from which the temporary protecting group of the 5′-
  • the nonpolar solvent is dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane, benzene, toluene, xylene, mesitylene, hexane, pentane, heptane, nonane, cyclohexane, ethyl acetate, isopropyl acetate, tert-butyl methyl ether, cyclopentyl methyl.
  • the polar solvent is an alcohol solvent or a nitrile solvent.
  • the pyrrole derivative or indole derivative is pyrrole, 3-methylpyrrole, 2,4-dimethylpyrrole, indole, 4-methylindole, 5-methylindole, 6-methylindole, 7-methylindole, 5,6-
  • the oxidizing agent is iodine, (1S)-(+)-(10-camphanylsulfonyl) oxaziridine, tert-butyl hydroperoxide, 2-butanone peroxide, 1,1-dihydroperoxycyclododecane, bis (trimethylsilyl)
  • the sulfurizing agent is 3-((N, N-dimethylaminomethylidene) amino) -3H-1,2,4-dithiazol-5-thione, 3H-1,2-benzodithiol-3-one 1,1-dioxide, 3H-1,2-benzodithiol-3-one, phenylacetyl disulfide, tetraethylthiuram disulfide, 3-amino-1,2,4-dithiazole-5-thione, or sulfur, [1] The method according to any one of [10].
  • R 4 is a hydrogen atom, or when R b is a group represented by the following formula (a3), together with R 6 represents a single bond or —O— And may form a fluorenyl group or a xanthenyl group
  • k R 5 's each independently represents an organic group having an aliphatic hydrocarbon group having 10 or more carbon atoms
  • k represents an integer of 1 to 4
  • Ring A includes, in addition to k OR 5 , a halogen atom, a C 1-6 alkyl group which may be substituted with a halogen atom, and a C 1-6 alkoxy group which may be substituted with a halogen atom. May have a substituent selected from the group consisting of; R a represents a hydrogen atom; and R b represents a hydrogen atom or the formula (a3):
  • Bases each independently represent a nucleobase that may be protected;
  • Q represents a hydrogen atom or a temporary protecting group that can be removed under acidic conditions;
  • X represents a hydrogen atom, a halogen atom, or an optionally protected hydroxyl group,
  • m X's each independently represent a hydrogen atom, a halogen atom, or an optionally protected hydroxyl group;
  • m R 8 s independently represent an oxygen atom or a sulfur atom,
  • m WGs each independently represent an electron-withdrawing group,
  • L represents the formula (a1):
  • R 4 represents a hydrogen atom or, when R b is a group represented by the following formula (a3), together with R 6 represents a single bond or —O— And may form a fluorenyl group or a xanthenyl group
  • k R 5 's each independently represents an organic group having an aliphatic hydrocarbon group having 10 or more carbon atoms
  • k represents an integer of 1 to 4
  • Ring A includes, in addition to k OR 5 , a halogen atom, a C 1-6 alkyl group which may be substituted with a halogen atom, and a C 1-6 alkoxy group which may be substituted with a halogen atom. May have a substituent selected from the group consisting of; R a represents a hydrogen atom; and R b represents a hydrogen atom or the formula (a3):
  • * indicates a bonding position
  • j represents an integer of 0 to 4
  • j R 7 's each independently represents an organic group having an aliphatic hydrocarbon group having 10 or more carbon atoms
  • R 6 represents a hydrogen atom, or together with R 4 may represent a single bond or —O— to form a fluorenyl group or a xanthenyl group together with ring A
  • ring B is j in addition to the number of oR 7, selected further halogen atoms, optionally substituted by a halogen atom C 1-6 alkyl groups, and from the group consisting of a C 1-6 alkoxy group optionally substituted by a halogen atom May have a substituent.
  • L in the general formula (II) is a succinyl group
  • R 5 and / or R 7 is an alkyl group having 12 to 30 carbon atoms. Nucleotides.
  • L in the general formula (II) is a succinyl group
  • YZ is a 3,4,5-tri (octadecyloxy) benzyloxy group, 3,5-di (docosyloxy) benzyloxy group, 3,5-di [3 ′, 4 ′, 5′-tri (octadecyloxy) benzyloxy] benzyloxy group, 3,4,5-tri [3 ′, 4 ′, 5′-tri (octadecyloxy) benzyloxy] benzyloxy group, 3,4,5-tri (octadecyloxy) benzylamino group, 2,4-di (docosyloxy) benzylamino group,
  • a specific cation scavenger is added, a neutralization treatment is performed after the deprotection reaction is completed, and an oxidation process or a sulfurization process
  • a specific oxidizing agent or sulfurizing agent as a raw material, n-polymerized oligonucleotides in which the 3 ′ terminal hydroxyl group is protected with a pseudo-solid phase protecting group and the 5 ′ terminal hydroxyl group is protected with a temporary protecting group, 1) deprotection step of 5′-terminal hydroxyl group protected with a temporary protecting group, (2) extension step to 5′-end by adding p-polymerized oligonucleotide in which the 3′-position is phosphoramidite, and (3) By performing the oxidation step or the sulfurization step of the phosphite triester site in this order continuously in the liquid, an n +
  • the present invention includes adding a specific cation scavenger in the deprotection step, applying a neutralization treatment after completion of the deprotection reaction, and using a specific oxidant or sulfidizing agent in the oxidation step or sulfurization step.
  • n-polymerized oligonucleotides in which the 3 ′ terminal hydroxyl group is protected with a pseudo-solid phase protecting group and the 5 ′ terminal hydroxyl group is protected with a temporary protecting group, (1) the 5 ′ terminal hydroxyl group protected with the temporary protecting group A deprotection step, (2) an extension step to the 5 ′ end by addition of p-polymerized oligonucleotide having a 3′-position phosphoramidite, and (3) an oxidation step or sulfurization step of the phosphite triester site.
  • This is a method for producing n + p-polymerized oligonucleotides efficiently and in a high yield by carrying out in the liquid continuously in this order.
  • nucleoside which is a structural unit of an oligonucleotide means a compound in which a nucleobase is bonded to the 1′-position of a sugar (eg, ribose) by N-glycosidation.
  • nucleobase is not particularly limited as long as it is used for nucleic acid synthesis, and examples thereof include pyrimidine bases such as cytosyl group, uracil group and thyminyl group, adenyl group, guanyl group and the like. Mention may be made of purine bases.
  • the “optionally protected nucleobase” means, for example, that an amino group may be protected in an adenyl group, guanyl group, or cytosyl group, which is a nucleobase having an amino group, Nucleobases in which the amino group of the nucleobase is protected by a protecting group that can withstand deprotection conditions at the 5 ′ position are preferred.
  • amino-protecting group is not particularly limited.
  • PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS, 3rd edition, John WILLY & SONS Protecting groups described in publications (1999).
  • Specific examples of such “amino-protecting group” include, for example, pivaloyl group, pivaloyloxymethyl group, trifluoroacetyl group, phenoxyacetyl group, 4-isopropylphenoxyacetyl group, 4-tert-butylphenoxyacetyl group, Examples thereof include an acetyl group, a benzoyl group, an isobutyryl group, a dimethylformamidinyl group, and a 9-fluorenylmethyloxycarbonyl group.
  • phenoxyacetyl group 4-isopropylphenoxyacetyl group, acetyl group, benzoyl group, isobutyryl group, and dimethylformamidinyl group are preferable.
  • the carbonyl group of the nucleobase may be protected, for example, phenol, 2,5-dichlorophenol, 3-chlorophenol, 3,5-dichlorophenol, 2-formylphenol, 2-naphthol, 4-methoxy Phenol, 4-chlorophenol, 2-nitrophenol, 4-nitrophenol, 4-acetylaminophenol, pentafluorophenol, 4-pivaloyloxybenzyl alcohol, 4-nitrophenethyl alcohol, 2- (methylsulfonyl) ethanol, 2 -(Phenylsulfonyl) ethanol, 2-cyanoethanol, 2- (trimethylsilyl) ethanol, dimethylcarbamic acid chloride, diethylcarbamic acid chloride, ethylphenyl
  • nucleobase includes a nucleobase having an arbitrary substituent (eg, halogen atom, alkyl group, aralkyl group, alkoxy group, acyl group, alkoxyalkyl group, hydroxy group, amino group).
  • Modified nucleobases eg, 8-bromoadenyl group, 8-bromoguanyl group, 5-bromocytosyl group substituted at any position by a group, monoalkylamino, dialkylamino, carboxy, cyano, nitro, etc.
  • halogen atom is a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, or an iodine atom.
  • examples of the “alkyl (group)” include linear or branched alkyl groups having 1 or more carbon atoms.
  • C 1- 10 alkyl group more preferably C 1-6 alkyl group.
  • Preferable specific examples in the case where the carbon number range is not limited include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, hexyl and the like, and methyl and ethyl are particularly preferable. .
  • examples of the “aralkyl (group)” include a C 7-20 aralkyl group, preferably a C 7-16 aralkyl group (C 6-10 aryl-C 1-6 alkyl group). Specific examples include benzyl, 1-phenylethyl, 2-phenylethyl, 1-phenylpropyl, naphthylmethyl, 1-naphthylethyl, 1-naphthylpropyl and the like, and benzyl is particularly preferable.
  • examples of the “alkoxy (group)” include an alkoxy group having 1 or more carbon atoms.
  • the carbon number range it is preferably a C 1-10 alkoxy group, more preferably Is a C 1-6 alkoxy group.
  • the carbon number range is not limited include methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, pentyloxy, hexyloxy, etc. Ethoxy is preferred.
  • examples of the “acyl (group)” include a linear or branched C 1-6 alkanoyl group, a C 7-13 aroyl group, and the like. Specific examples include formyl, acetyl, n-propionyl, isopropionyl, n-butyryl, isobutyryl, pivaloyl, valeryl, hexanoyl, benzoyl, naphthoyl, levulinyl and the like, which may each be substituted.
  • alkenyl (group) is preferably a linear or branched C 2-6 alkenyl group, such as vinyl, 1-propenyl, allyl, isopropenyl, butenyl, isobutenyl and the like. Can be mentioned. Of these, a C 2 -C 4 alkenyl group is preferable.
  • alkynyl (group) is preferably a C 2-6 alkynyl group, for example, ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, 1-butynyl, 2-butynyl, 3-butynyl, 1- Examples include pentynyl, 2-pentynyl, 3-pentynyl, 4-pentynyl, 1-hexynyl, 2-hexynyl, 3-hexynyl, 4-hexynyl, 5-hexynyl and the like. Of these, a C 2 -C 4 alkynyl group is preferable.
  • cycloalkyl (group) means a cyclic alkyl group, and examples thereof include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl and the like. Among them, C 3 -C 6 cycloalkyl groups such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl and the like are preferable, and cyclohexyl is particularly preferable.
  • aryl (group) means a monocyclic or polycyclic (fused) hydrocarbon group exhibiting aromaticity, and specifically includes, for example, phenyl, 1-naphthyl, 2 -C 6-14 aryl groups such as naphthyl, biphenylyl, 2-anthryl and the like. Among them, a C 6-10 aryl group is more preferable, and phenyl is particularly preferable.
  • examples of the “hydrocarbon group” include an aliphatic hydrocarbon group, an araliphatic hydrocarbon group, a monocyclic saturated hydrocarbon group, an aromatic hydrocarbon group, and the like.
  • a monovalent group such as an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, a cycloalkyl group, an aryl group, an aralkyl group, and a divalent group derived therefrom.
  • the “organic group having a hydrocarbon group” means a group having the “hydrocarbon group”, and the portion other than the “hydrocarbon group” in the “organic group having a hydrocarbon group” It can be set arbitrarily.
  • the linker may have sites such as —O—, —S—, —COO—, —OCONH—, and —CONH—.
  • the pseudo-solid phase protecting group used in the present invention is solubilized in a nonpolar solvent when the group is bonded to a reaction substrate, can be reacted in a liquid phase, and precipitated by addition of a polar solvent.
  • a protecting group that has both reactivity and ease of post-treatment that enables solid-liquid separation and is stable under acidic conditions that can remove the protecting group at the 5′-terminal hydroxyl group
  • the pseudo solid phase protecting group include groups disclosed in Non-Patent Documents 2 to 4, Patent Document 1 and the like. Among them, the pseudo solid phase protecting group represented by the following general formula (I) From the viewpoint that a high yield can be achieved in the method for producing an oligonucleotide, a pseudo-solid phase protecting group is preferable.
  • R 4 represents a hydrogen atom or, when R b is a group represented by the following formula (a3), together with R 6 represents a single bond or —O— And may form a fluorenyl group or a xanthenyl group
  • k R 5 's each independently represents an organic group having an aliphatic hydrocarbon group having 10 or more carbon atoms
  • k represents an integer of 1 to 4
  • Ring A includes, in addition to k OR 5 , a halogen atom, a C 1-6 alkyl group which may be substituted with a halogen atom, and a C 1-6 alkoxy group which may be substituted with a halogen atom. May have a substituent selected from the group consisting of; R a represents a hydrogen atom; and R b represents a hydrogen atom or the formula (a3):
  • * indicates a bonding position
  • j represents an integer of 0 to 4
  • j R 7 's each independently represents an organic group having an aliphatic hydrocarbon group having 10 or more carbon atoms
  • R 6 represents a hydrogen atom, or together with R 4 may represent a single bond or —O— to form a fluorenyl group or a xanthenyl group together with ring A
  • ring B is j in addition to the number of oR 7, selected further halogen atoms, optionally substituted by a halogen atom C 1-6 alkyl groups, and from the group consisting of a C 1-6 alkoxy group optionally substituted by a halogen atom May have a substituent.
  • Ring C includes, in addition to k ′ OR 5 ′, a halogen atom, a C 1-6 alkyl group which may be substituted with a halogen atom, and a C 1-6 alkoxy which may be substituted with a halogen atom. It may have a substituent selected from the group consisting of groups. ). ] Is shown. ].
  • Examples of the group protected by the pseudo-solid phase protecting group represented by the above formula (I) include a hydroxyl group and an amino group, and among them, a nucleoside or a 3 ′ hydroxyl group of a nucleotide is preferable.
  • L 1 represents an ethylene group or CH 2 —O-1,4-phenylene-O—CH 2 ;
  • L 2 represents a single bond, or ** C ( ⁇ O) N (R 2 ) —R 1 —N (R 3 ) *** (where ** represents the position of bonding to L 1 *** represents a bonding position with C ⁇ O,
  • R 1 represents a C 1-6 alkylene group,
  • R 2 and R 3 each independently represent a hydrogen atom or a substituted group A good C 1-6 alkyl group, or R 2 and R 3 together may form an optionally substituted C 1-6 alkylene bond.
  • L 1 represents an ethylene group
  • L 2 represents a single bond
  • linker L of formula (a1) wherein (a1), L 1 is, represents an ethylene group; and in L 2 in N (R 2) -R 1 -N ( R 3 ) is a group that represents a piperazinylene group.
  • L 1 represents an ethylene group
  • linker L is a succinyl group that is easily available and inexpensive.
  • a preferred embodiment of Y is an oxygen atom or NR (R represents a hydrogen atom, an alkyl group or an aralkyl group).
  • R is preferably a hydrogen atom, a C 1-6 alkyl group or a C 7-16 aralkyl group, more preferably a hydrogen atom, methyl, ethyl or benzyl, and particularly preferably a hydrogen atom.
  • a preferred embodiment of Z is a group represented by the formula (a2).
  • R a and R b both represent a hydrogen atom;
  • R 4 represents a hydrogen atom,
  • k R 5 's each independently represents an organic group having an aliphatic hydrocarbon group having 10 or more carbon atoms (eg, a C 10-40 alkyl group); and
  • k represents an integer of 1 to 3. It is a group.
  • k represents an integer of 1 to 3; R a and R b both represent a hydrogen atom; R 4 represents a hydrogen atom; k R 5 's independently represent a benzyl group having 1 to 3 aliphatic hydrocarbon groups having 10 or more carbon atoms or a cyclohexyl group having 1 to 3 aliphatic hydrocarbon groups having 10 or more carbon atoms.
  • ring a in addition to the k oR 5, further halogen atom, a C 1-6 alkyl group optionally substituted by a halogen atom, and may be substituted by a halogen atom C 1-6 It is a group optionally having a substituent selected from the group consisting of alkoxy groups.
  • R a represents a hydrogen atom
  • R b represents the above formula (a3) (wherein * represents a bonding position; j represents an integer of 0 to 3; j R 7 each independently represents a C 10-40 alkyl group) ; R 4 and R 6 both represent a hydrogen atom. ) Is a group represented by
  • R a represents a hydrogen atom
  • R b represents the above formula (a3) (wherein * represents a bonding position; j represents an integer of 0 to 3; j R 7 each independently represents a C 10-40 alkyl group)
  • R 6 together with R 4 of ring A forms a single bond or —O—, whereby ring A and ring B together represent a fluorenyl group or a xanthenyl group. )
  • pseudo-solid phase protecting group represented by the above general formula (I) a group that is difficult to cleave under acidic conditions capable of removing the protecting group at the 5'-terminal hydroxyl group and is cleaved under basic conditions is preferable.
  • L in the general formula (I) is a group represented by the above formula (a1) (preferably a succinyl group or the like), and Y Examples thereof include those in which —Z is the following group.
  • nucleotide whose 3′-position hydroxyl group is protected by a pseudo-solid phase protecting group and whose 5′-position hydroxyl group is protected by a temporary protecting group By attaching a pseudo solid phase protecting group used in the present invention to the 3′-position hydroxyl group of a nucleotide, a nucleotide suitable for pseudo solid phase synthesis can be produced.
  • preferred nucleotides from the viewpoint that a high yield can be achieved in the target oligonucleotide production method include compounds represented by the following general formula (II) (hereinafter sometimes referred to as the present compound). .
  • Bases each independently represent a nucleobase that may be protected;
  • Q represents a hydrogen atom or a temporary protecting group that can be removed under acidic conditions;
  • X represents a hydrogen atom, a halogen atom or an optionally protected hydroxyl group,
  • m X's each independently represent a hydrogen atom, a halogen atom, or an optionally protected hydroxyl group;
  • m R 8 s independently represent an oxygen atom or a sulfur atom,
  • m WGs each independently represent an electron-withdrawing group,
  • Y represents a single bond, an oxygen atom or NR (R represents a hydrogen atom, an alkyl group or an aralkyl group.)
  • Indicates, and L, and Z is ** of formula (a1) is a nucleotide 3 'and a hydroxyl group Is the same as the above except that the bonding position is indicated.
  • Y in the general formula (II) is an oxygen atom or NR (R represents a hydrogen atom, an alkyl group or an aralkyl group) are novel compounds.
  • the compound of the present invention is a p-polymerized oligonucleotide in which the 3′-position hydroxyl group is converted to a phosphoramidite and the 5′-position hydroxyl group is protected with a temporary protecting group via the oxygen atom of the 5′-position hydroxyl group (p is And an m + 1 + p polymerized oligonucleotide (p represents any integer of 1 or more).
  • p is
  • the compound of the present invention is interpreted as a “nucleoside” and is a starting compound at the 3′-position in oligonucleotide synthesis.
  • the compounds of the present invention include those in which the 5′-position hydroxyl group is unprotected (Q is a hydrogen atom) in a broad sense.
  • m represents an arbitrary integer of 0 or more, and is preferably 0.
  • the upper limit of m is not particularly limited, but is preferably 49 or less, more preferably 29 or less, and still more preferably 19 or less.
  • the 2-position group X and m number X ′ of the ribose residue constituting the nucleotide of the compound of the present invention are each independently a hydrogen atom, a halogen atom or an optionally protected hydroxyl group.
  • a halogen atom a fluorine atom and a chlorine atom are preferable, and a fluorine atom is more preferable.
  • the protecting group of the “optionally protected hydroxyl group” is not particularly limited, and for example, PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS, 3rd edition, John Willy and. Any protecting group described in JOHN WILLY & SONS publication (1999) can be used.
  • a triethylsilyl group, a triisopropylsilyl group, or a tert-butyldimethylsilyl group is preferable, and a tert-butyldimethylsilyl group is particularly preferable from the viewpoint of economical efficiency and availability.
  • the temporary protecting group Q that can be used as a protecting group for the 5′-position hydroxyl group of the compound of the present invention is not particularly limited as long as it can be deprotected under acidic conditions and can be used as a protecting group for a hydroxyl group.
  • Di (C 1 ) such as trityl group, 9- (9-phenyl) xanthenyl group, 9-phenylthioxanthenyl group, 1,1-bis (4-methoxyphenyl) -1-phenylmethyl group (dimethoxytrityl group) And a mono (C 1-18 alkoxy) trityl group such as a -6 alkoxy) trityl group and a 1- (4-methoxyphenyl) -1,1-diphenylmethyl group (monomethoxytrityl group).
  • C 1 such as trityl group, 9- (9-phenyl) xanthenyl group, 9-phenylthioxanthenyl group, 1,1-bis (4-methoxyphenyl) -1-phenylmethyl group (dimethoxytrityl group)
  • a mono (C 1-18 alkoxy) trityl group such as a -6 alkoxy) trity
  • m R 8 s independently represent an oxygen atom or a sulfur atom, preferably an oxygen atom.
  • the m WGs each independently represent an electron withdrawing group. Examples of the electron-withdrawing group include a cyano group and a nitro group, and a cyano group is preferable.
  • the “organic group having an aliphatic hydrocarbon group having 10 or more carbon atoms” represented as R 5 or R 7 has an aliphatic hydrocarbon group having 10 or more carbon atoms in the molecular structure. It is a monovalent organic group.
  • the “aliphatic hydrocarbon group” in the “organic group having an aliphatic hydrocarbon group” is a linear or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group having 10 or more carbon atoms. Group is preferable, an aliphatic hydrocarbon group having 10 to 40 carbon atoms is more preferable, and an aliphatic hydrocarbon group having 12 to 30 carbon atoms is particularly preferable.
  • the site of the “aliphatic hydrocarbon group” in the “organic group having an aliphatic hydrocarbon group” is not particularly limited, and may be present at the terminal (monovalent group) or at other sites. (For example, a divalent group).
  • the “aliphatic hydrocarbon group” includes a monovalent group such as a linear or branched alkyl group having 10 or more carbon atoms, a linear or branched alkenyl group, and a divalent group derived therefrom. Among them, an alkyl group having 10 to 40 carbon atoms is preferable, and an alkyl group having 12 to 30 carbon atoms is particularly preferable.
  • aliphatic hydrocarbon group examples include, for example, decyl group, dodecyl group, tridecyl group, myristyl group, cetyl group, stearyl group, oleyl group, linolyl group, aralkyl group, behenyl group, isostearyl group and the like. Examples thereof include monovalent groups and divalent groups derived therefrom.
  • Sites other than the “aliphatic hydrocarbon group” in the “organic group having an aliphatic hydrocarbon group” can be arbitrarily set.
  • the linker may have a moiety such as —O—, —S—, —COO—, —OCONH—, and —CONH—, and a hydrocarbon group (monovalent group or divalent group).
  • hydrocarbon group examples include an aliphatic hydrocarbon group, an araliphatic hydrocarbon group, a monocyclic saturated hydrocarbon group, an aromatic hydrocarbon group, and the like.
  • a monovalent group such as a group, an alkenyl group, an alkynyl group, a cycloalkyl group, an aryl group or an aralkyl group and a divalent group derived therefrom are used.
  • Examples of the “alkyl group”, “alkenyl group”, “alkynyl group”, “cycloalkyl group”, “aryl group”, or “aralkyl group” other than the “aliphatic hydrocarbon group” include those described above. The same thing can be mentioned.
  • the “hydrocarbon group” is selected from a halogen atom (chlorine atom, bromine atom, fluorine atom, iodine atom), a C 1-6 alkyl group optionally substituted by one or more halogen atoms, an oxo group, and the like. It may be substituted with a substituent.
  • a halogen atom chlorine atom, bromine atom, fluorine atom, iodine atom
  • C 1-6 alkyl group optionally substituted by one or more halogen atoms, an oxo group, and the like. It may be substituted with a substituent.
  • R constituting Y in the general formula (II) is a hydrogen atom, an alkyl group or an aralkyl group, preferably a hydrogen atom, a C 1-6 alkyl group or a C 7-16 aralkyl group. More preferably a hydrogen atom, methyl, ethyl or benzyl, and particularly preferably a hydrogen atom.
  • the “organic group having an aliphatic hydrocarbon group” represented as “R 5 (group)” and / or “R 7 (group)” constituting Z in the general formula (II) is a plurality of groups by branching or the like.
  • An “aliphatic hydrocarbon group” may be present.
  • each of them may be the same or different.
  • the lower limit of the total number of carbon atoms in the “organic group having an aliphatic hydrocarbon group” shown as “R 5 (group)” and / or “R 7 (group)” constituting Z in the general formula (II) Is preferably 10 or more, more preferably 12 or more, still more preferably 14 or more, still more preferably 18 or more, and still more preferably 30 or more.
  • the upper limit of the total number of carbon atoms in the “organic group having an aliphatic hydrocarbon group” shown as “R 5 (group)” and / or “R 7 (group)” is preferably 200 or less, and 150 or less.
  • m is 0 in the general formula (II)
  • Base is an optionally protected cytosyl group, uracil group, thyminyl group, adenyl group, or guanyl group
  • Q is a di (C 1-6 alkoxy) trityl group or a mono (C 1-6 alkoxy) trityl group
  • X is a hydrogen atom, a halogen atom, or an optionally protected hydroxyl group
  • LYZ is the same as the combination of groups shown as a preferred embodiment in the general formula (I).
  • m is 0 in the general formula (II)
  • Base is an optionally protected cytosyl group, uracil group, thyminyl group, adenyl group, or guanyl group
  • Q is a dimethoxytrityl group or a monomethoxytrityl group
  • X is a hydrogen atom, a halogen atom, or an optionally protected hydroxyl group
  • LYZ is the same as the combination of groups shown as a preferred embodiment in the general formula (I).
  • m is 0 in the general formula (II)
  • Base is an optionally protected cytosyl group, uracil group, thyminyl group, adenyl group, or guanyl group
  • Q is a dimethoxytrityl group
  • X is a hydrogen atom, a fluorine atom, a methoxy group, an acetoxy group, or a tert-butyldimethylsilyloxy group
  • LYZ is a group represented by the general formula (I) as a preferred embodiment. Same as combination, A compound.
  • a method for producing the precursor of the pseudo-solid phase protecting group is not particularly limited, but a method known per se (for example, Bull. Chem. Soc. Jpn. 2001, 74, 733-738, JP 2000-44493 A). , International Publication No. 2006/104166 Pamphlet, International Publication No. 2007/034812 Pamphlet, International Publication No. 2007/122847 Pamphlet, International Publication No. 2010/113939 Pamphlet or the like) be able to.
  • the compound used as a raw material compound for example, a halide corresponding to R 5 and R 7 constituting Z in the general formula (II) is available as a commercial product, or a method known per se Or it can manufacture in accordance with the method according to these.
  • the production method of the compound of the present invention represented by the general formula (II) in which m is 0 is not particularly limited, but is a method known per se or a method analogous thereto. (Richard T. Pon et al., Nucleic Acids Research 2004, 32, 623-631.).
  • the pseudo solid phase protecting group precursor (ZYH) can be produced according to a method known per se or a method analogous thereto, as described above.
  • the reaction is performed after protecting the raw material compound with an appropriate protective group in accordance with a known method in advance.
  • a protecting group can be removed after the reaction according to a known method such as acid treatment, alkali treatment or catalytic reduction.
  • a general method for producing a compound in which L in the general formula (IIa) is a succinyl group is shown below.
  • each symbol in the formula is as defined above.
  • the nucleoside (a) in which the 5′-position hydroxyl group is protected by the protecting group Q is reacted with succinic anhydride in the presence of a base to obtain a compound (b) in which succinic acid is introduced into the 3′-position hydroxyl group.
  • a compound represented by the general formula (IIa) can be obtained by subjecting compound (b) to dehydration condensation with ZYH in the presence of a condensing agent.
  • the conversion step of the above nucleoside (a) to compound (b) is advantageously performed in a solvent inert to the reaction.
  • a solvent is not particularly limited as long as the reaction proceeds, but halogenated hydrocarbon solvents such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, chloroform and carbon tetrachloride, and aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene.
  • a solvent, an aliphatic hydrocarbon solvent such as pentane, hexane, heptane, and octane, an ether solvent such as diethyl ether, tetrahydrofuran, cyclopentyl methyl ether, or a mixed solvent thereof is preferable.
  • dichloromethane or chloroform is particularly preferred.
  • the base is not particularly limited, and examples thereof include organic bases as described below, and triethylamine is preferable.
  • the above dehydration condensation step is advantageously performed in a solvent inert to the reaction.
  • a solvent is not particularly limited as long as the reaction proceeds, but halogenated hydrocarbon solvents such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, chloroform and carbon tetrachloride, and aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene.
  • a solvent, an aliphatic hydrocarbon solvent such as pentane, hexane, heptane, and octane, or a mixed solvent thereof is preferable.
  • dichloromethane and chloroform are particularly preferred.
  • Examples of the condensing agent used in the condensation reaction between the compound (b) and ZYH include dicyclohexylcarbodiimide (DCC), diisopropylcarbodiimide (DIC), N-ethyl-N′-3-dimethylaminopropylcarbodiimide and hydrochloric acid thereof.
  • EDC.HCl hexafluorophosphoric acid (benzotriazol-1-yloxy) tripyrrolidinophosphonium (PyBop), O- (benzotriazol-1-yl) -N, N, N ′, N′-tetramethyl Uronium tetrafluoroborate (TBTU), 1- [bis (dimethylamino) methylene] -5-chloro-1H-benzotriazolium-3-oxide hexafluorophosphate (HCTU), O-benzotriazole-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluo Phosphate (HBTU) and the like.
  • HBTU, HCTU, N-ethyl-N′-3-dimethylaminopropylcarbodiimide and its hydrochloride (EDC ⁇ HCl) are preferred.
  • the amount of the condensing agent to be used can be 1 to 10 mol, preferably 1 to 5 mol, per 1 mol of compound (b). Further, the amount of ZYH used can be 1 to 10 mol, preferably 1 to 5 mol, per 1 mol of compound (b).
  • the reaction temperature is not particularly limited as long as the reaction proceeds, but it is preferably ⁇ 10 ° C. to 50 ° C., more preferably 0 ° C. to 30 ° C.
  • the reaction time is 30 minutes to 70 hours.
  • L in the general formula (IIa) is other than a succinyl group
  • the corresponding acid anhydride, the corresponding dicarboxylic acid halide, the corresponding dicarboxylic acid active ester, etc. can manufacture by performing the same reaction using.
  • the production method of the present invention Next, a method for producing the oligonucleotide according to the present invention (hereinafter also referred to as “the production method of the present invention”) will be described. Specifically, a production method from an appropriately protected n-polymerized oligonucleotide to an appropriately protected n + p-polymerized oligonucleotide will be described.
  • the present invention is a method for producing an oligonucleotide comprising the following steps (1) to (3).
  • n-polymerized oligonucleotide in which the 3′-position hydroxyl group is protected with a pseudo-solid phase protecting group and the 5′-position hydroxyl group is protected with a temporary protecting group that can be removed under acidic conditions in a nonpolar solvent (n Represents an arbitrary integer of 1 or more), an acid, and at least one cation scavenger selected from a pyrrole derivative and an indole derivative are reacted to remove a temporary protecting group at the 5′-position hydroxyl group, and then an organic base Neutralizing with (2) p polymerization in which the 3′-position hydroxyl group is converted to a phosphoramidite and the 5′-position hydroxyl group is protected with a temporary protecting group that can be removed under acidic conditions in the reaction solution after neutralization in step (1) An oligonucleotide (p represents an arbitrary integer of 1 or more) is added, and n polymerization oligonucleotides obtained by removing the temporary protecting group
  • n is not particularly limited, but is preferably 50 or less, more preferably 30 or less, and still more preferably 20 or less.
  • the upper limit of p is not particularly limited, but is preferably 50 or less, more preferably 30 or less, still more preferably 20 or less, still more preferably 5 or less, and particularly preferably 3 or less.
  • step (4) it is possible to easily and effectively remove excess raw materials and by-products and purify n + p-polymerized oligonucleotides.
  • the step (4) of the present invention is a step specific to the pseudo solid phase protecting group that cannot exist in either the liquid phase method or the solid phase method.
  • step (4) as the basic unit of steps (1) to (3).
  • steps (1) to (4) as a basic unit from the viewpoint that the generation of by-products can be strictly controlled and controlled and can be led to a high-purity oligonucleotide.
  • an oligonucleotide can be isolated and produced.
  • Step (1) (Deprotection Step)
  • the temporary protecting group Q of the 5 ′ terminal hydroxyl group of Q (Q is as defined above). Is removed by adding an acid and then neutralized by adding an organic base (deprotection step).
  • m R 8 represents an oxygen atom or a sulfur atom
  • m WG represents an electron-withdrawing group (for example, a cyano group)
  • m X ′ each independently represents X And other symbols are as defined above.
  • This step is performed in a solvent that does not affect the reaction. Since the higher the solubility in the solvent, the better the reactivity can be expected, it is preferable to select a nonpolar solvent having a high solubility of the compound of the present invention.
  • halogen solvents such as chloroform, dichloromethane and 1,2-dichloroethane
  • aromatic solvents such as benzene, toluene, xylene and mesitylene
  • ester solvents such as ethyl acetate and isopropyl acetate
  • hexane, pentane and heptane Aliphatic solvents such as octane, nonane and cyclohexane
  • nonpolar ether solvents such as diethyl ether, cyclopentyl methyl ether and tert-butyl methyl ether.
  • n non-polar solvents are polymerized with n polar solvents such as nitrile solvents such as acetonitrile and propionitrile, and amide solvents such as N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide and N-methylpiperidone.
  • n polar solvents such as nitrile solvents such as acetonitrile and propionitrile
  • amide solvents such as N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide and N-methylpiperidone.
  • the concentration of the n-polymerized oligonucleotide (i) in the solvent in this step is not particularly limited as long as it is dissolved, but is preferably 1 to 30% by weight.
  • the removal reaction of the temporary protecting group Q at the 5′-position hydroxyl group of the n-polymerized oligonucleotide (i) It is essential to use a cation scavenger during or after the removal reaction.
  • the cation scavenger is not particularly limited as long as reprotection (returning the raw material) by the removed protecting group Q and side reaction to the deprotected functional group do not proceed, but pyrrole, 2-methylpyrrole, 3- Pyrrole derivatives such as methylpyrrole, 2,3-dimethylpyrrole, 2,4-dimethylpyrrole; indole, 4-methylindole, 5-methylindole, 6-methylindole, 7-methylindole, 5,6-dimethylindole, Indole derivatives such as 6,7-dimethylindole can be used.
  • pyrrole, 3-methylpyrrole, 2,4-dimethylpyrrole, indole, 4-methylindole, 5-methylindole, 6-methylindole, 7-methylindole, 5, 6-dimethylindole and 6,7-dimethylindole are preferred, pyrrole, 3-methylpyrrole and indole are more preferred, pyrrole and indole are more preferred, and pyrrole is particularly preferred.
  • the cation scavenger can be used in an amount of 1 to 50 mol, preferably 5 to 20 mol, per 1 mol of n polymerized oligonucleotide (i).
  • the acid used in this step is not particularly limited as long as good deprotection can be achieved, but trifluoroacetic acid, dichloroacetic acid, trifluoromethanesulfonic acid, trichloroacetic acid, methanesulfonic acid, hydrochloric acid, acetic acid, p-toluene It is preferable to use sulfonic acid or the like.
  • trifluoroacetic acid, dichloroacetic acid, trifluoromethanesulfonic acid and trichloroacetic acid are more preferable, trifluoroacetic acid, dichloroacetic acid and trifluoromethanesulfonic acid are more preferable, trifluoroacetic acid and trifluoromethanesulfone.
  • Acid is even more preferred, and trifluoroacetic acid is particularly preferred. These acids may be diluted with the nonpolar solvent. Moreover, when using the said acid, you may use combining a specific base and adjusting acidity suitably.
  • the amount of acid used in this step can be 1 to 100 mol, preferably 1 to 40 mol, per 1 mol of n-polymerized oligonucleotide (i).
  • the reaction temperature in this step is not particularly limited as long as the reaction proceeds, but it is preferably ⁇ 10 ° C. to 50 ° C., more preferably 0 ° C. to 40 ° C.
  • the reaction time varies depending on the type of n-polymerized oligonucleotide to be used, the type of acid, the type of solvent, the reaction temperature, etc., but is 5 minutes to 5 hours.
  • a p-polymerized oligonucleotide in which the 5′-position hydroxyl group is protected by a temporary protecting group Q and the 3′-position hydroxyl group is converted to phosphoramidite Removal or neutralization is necessary to induce deprotection of the protecting group Q in iii).
  • the organic base used for neutralization is not particularly limited as long as the acid can be neutralized and the obtained salt can function as a condensing agent, but the viewpoint that the reaction proceeds well.
  • the amount of the organic base used in this step can be 1 to 10 mol, preferably 1 to 3 mol, per 1 mol of acid.
  • particularly preferred combinations of acid and organic base are trifluoroacetic acid and pyridine, trifluoroacetic acid and 2,4,6-trimethylpyridine, or trifluoromethanesulfonic acid and benzimidazole.
  • Step (2) (Condensation step)
  • the deprotection body (ii) of the 5′-position hydroxyl group of the n-polymerized oligonucleotide obtained in the step (1) the 5′-position hydroxyl group is protected by the temporary protecting group Q
  • the p-polymerized oligonucleotide (iii) in which the 5′-position hydroxyl group is protected by the temporary protecting group Q and the 3′-position hydroxyl group is converted to phosphoramidite is obtained when p is 1 (that is, the 5′-position hydroxyl group is A nucleoside protected by a temporary protecting group Q and phosphorylated at the 3′-position hydroxyl group is preferred.
  • the upper limit of q is not particularly limited, but is preferably 49 or less, more preferably 29 or less, still more preferably 19 or less, still more preferably 4 or less, and particularly preferably 2 or less.
  • X ′ has the same meaning as X, and R 9 and R 10 each independently represents an alkyl group or is formed together with an adjacent nitrogen atom to form a 5- or 6-membered group.
  • Saturated cyclic amino group is shown. Such a saturated cyclic amino group may have one oxygen atom or sulfur atom as a ring constituent atom in addition to the nitrogen atom.
  • Other symbols are as defined above.
  • the 5′-position hydroxyl deprotected body (ii) of the n-polymerized oligonucleotide obtained in the step (1) was isolated without any isolation in the reaction solution after the step (1). It can be carried out by directly adding p-polymerized oligonucleotide (iii) in which the hydroxyl group is phosphoramidite and the 5′-position hydroxyl group is protected by the temporary protecting group Q.
  • a salt for example, pyridine / trifluoroacetate salt formed by salt formation of the acid added during the deprotection reaction in step (1) and the organic base added during the neutralization reaction is used as the condensing agent.
  • N-methylimidazole should be added for the purpose of suppressing the acidification of the reaction solution. Is preferred.
  • the amount of N-methylimidazole added for adjusting the acidity can be 0.1 to 1 mol, preferably 0.5 mol, per 1 mol of the organic base used for neutralization. It is.
  • the p-polymerized oligonucleotide (iii) in which the 3 'hydroxyl group is phosphoramidite and the 5' hydroxyl group is protected by the temporary protecting group Q used in this step is represented by the following formula:
  • P-polymerized oligonucleotides to which a group represented by Examples of the nucleobase of the p-polymerized oligonucleotide include the same groups as described above.
  • R 11 represents a halogen atom, and other symbols are as defined above.
  • This step is performed in a solvent that does not affect the reaction.
  • the nonpolar solvent similar to the said process (1) is mentioned.
  • the nonpolar solvent include nitrile solvents such as acetonitrile and propionitrile; ketone solvents such as acetone and 2-butanone; N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone and the like.
  • polar solvent amide solvents, nitrile solvents, and combinations thereof are preferable, acetonitrile, N, N-dimethylformamide, N-methylpiperidone, and combinations thereof are more preferable, and acetonitrile is particularly preferable.
  • the polar solvent may be added as a solution of p-polymerized oligonucleotide (iii) in which the 3′-position hydroxyl group is converted to phosphoramidite and the 5′-position hydroxyl group is protected by the temporary protecting group Q, a condensing agent, or the like.
  • the amount of p-polymerized oligonucleotide (iii) in which the 3′-position hydroxyl group is converted to phosphoramidite and the 5′-position hydroxyl group is protected by the temporary protecting group Q is the same as that of the 5′-position hydroxyl group obtained in the step (1).
  • 1 to 10 moles can be used, preferably 1 to 5 moles per mole of the n-polymerized oligonucleotide (ii) from which the temporary protecting group is removed.
  • the reaction temperature is not particularly limited as long as the reaction proceeds, but is preferably 0 ° C to 100 ° C, more preferably 20 ° C to 50 ° C.
  • the reaction time varies depending on the type of n-polymerized oligonucleotide to be condensed, the reaction temperature, etc., but is 5 minutes to 24 hours.
  • Process (3) (oxidation process or sulfurization process) By reacting the n + p polymerized oligonucleotide (iv) obtained in step (2) with an oxidizing agent or a sulfurizing agent, the phosphite triester bond of the n + p polymerized oligonucleotide (iv) is converted into a phosphate triester bond or This is a step of converting to a thiophosphate triester bond.
  • This step is performed by directly adding an oxidizing agent or a sulfurizing agent to the reaction solution after step (2) without isolating the n + p polymerization oligonucleotide (iv) obtained in step (2). be able to.
  • the “oxidant” used in this step is not particularly limited as long as it has an ability to oxidize a phosphite triester bond to a phosphate triester bond without oxidizing other sites.
  • iodine, (1S)-(+)-(10-camphanylsulfonyl) oxaziridine, tert-butyl hydroperoxide, 2-butanone peroxide, 1,1-dihydroperoxycyclododecane More preferably, iodine, (1S)-(+)-(10-camphanylsulfonyl) oxaziridine, tert-butyl hydroperoxide and 2-butanone peroxide are more preferable, iodine and tert-butyl hydroperoxide are still more preferable, and iodine is preferable. Particularly preferred.
  • Such an oxidizing agent can be used by diluting with an appropriate solvent so as to have a concentration of 0.05 to 2M.
  • a diluting solvent is not particularly limited as long as it is an inert solvent for the reaction, and examples thereof include pyridine, THF, dichloromethane, water, or any mixed solvent thereof. Among them, for example, iodine / water / pyridine-THF or iodine / pyridine-acetic acid, peroxide (TBHP) / dichloromethane or tert-butyl hydroperoxide / nonane is preferably used.
  • the “sulfurizing agent” used in this step is not particularly limited as long as it has an ability to convert a phosphite triester bond into a thiophosphate triester bond, but 3-((N, N-dimethylamino) is not limited.
  • Methylidene) amino) -3H-1,2,4-dithiazol-5-thione DDTT
  • 3H-1,2-benzodithiol-3-one-1,1-dioxide Beaucage reagent
  • 3H-1, 2-Benzodithiol-3-one phenylacetyl disulfide (PADS), tetraethylthiuram disulfide (TETD), 3-amino-1,2,4-dithiazol-5-thione (ADTT), and sulfur are preferably used.
  • PADS phenylacetyl disulfide
  • TETD tetraethylthiuram disulfide
  • ADTT 3-amino-1,2,4-dithiazol-5-thione
  • Such a sulfurizing agent can be used by diluting with a suitable solvent so as to have a concentration of 0.05 to 2M.
  • a diluting solvent is not particularly limited as long as it is an inert solvent for the reaction, and examples thereof include dichloromethane, acetonitrile, pyridine, and any mixed solvent thereof.
  • the amount of the oxidizing agent or sulfurizing agent used can be 1 to 50 mol, preferably 1 to 5 mol, per 1 mol of the n + p polymerization oligonucleotide (iv) obtained in the step (2).
  • the reaction temperature is not particularly limited as long as the reaction proceeds, but is preferably 0 ° C to 100 ° C, more preferably 20 ° C to 50 ° C.
  • the reaction time varies depending on the type of n + p-polymerized oligonucleotide (iv), the type of oxidizing agent or sulfurizing agent used, the reaction temperature, etc., but is 1 minute to 3 hours.
  • Step (4) (precipitation and solid-liquid separation step) This step is performed by adding a polar solvent to the reaction solution containing the n + p polymerization oligonucleotide (v) having the phosphate triester bond or thiophosphate triester bond obtained in the step (3).
  • (V) is a step of precipitating and obtaining by solid-liquid separation.
  • Examples of the polar solvent for precipitating the target n + p polymerized oligonucleotide (v) in this step include alcohol solvents such as methanol, ethanol and isopropanol; nitrile solvents such as acetonitrile and propionitrile; acetone, 2 -Ketone solvents such as butanone; polar ether solvents such as 1,4-dioxane and tetrahydrofuran; amide solvents such as dimethylformamide, dimethylacetamide and N-methylpiperidone; sulfoxide solvents such as dimethyl sulfoxide; water and the like 2 or more types of mixed solvents are mentioned.
  • alcohol solvents such as methanol, ethanol and isopropanol
  • nitrile solvents such as acetonitrile and propionitrile
  • acetone, 2 -Ketone solvents such as butanone
  • polar ether solvents such as 1,4-dioxane and
  • the polar solvent may contain water in order to minimize loss of the target product into the polar solvent.
  • the loss tends to increase due to dissolution of the target product in the polar solvent, and the loss can be minimized by using acetonitrile containing slightly water.
  • the content of water in the polar solvent is preferably 1 to 10% (v / v), more preferably 3 to 8% (v / v). If the water content is too low, the loss of the target product into the polar solvent may increase. If the water content is too high, removal of unnecessary monomers and other unnecessary materials into the polar solvent tends to be insufficient. There is.
  • coloring by iodine can be removed by using a solution in which sodium thiosulfate (hypo) is saturated in methanol as the precipitation solvent, It is possible to isolate the n + p polymerization oligonucleotide (v) in which the 5′-position hydroxyl group is protected with high purity.
  • trivalent phosphorus reagent for example, trimethyl phosphite, triethyl phosphite, tris (2-carboxyethyl) phosphine, etc.
  • hypo, etc. are added to methanol as a precipitation solvent. It is possible to isolate the n + p-polymerized oligonucleotide (v) in which the 5′-position hydroxyl group is protected with a high purity by using a solution in which the reducing agent is saturated.
  • the target oligonucleotide can be obtained with high purity and high yield by repeating the above steps (1) to (4) a desired number of times.
  • Step (5) (Deprotection / Oligonucleotide Isolation Step)
  • the oligonucleotide can be isolated by performing deprotection according to the type and nature of the protecting group. Deprotection methods are described, for example, in PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS, 3rd edition, John WILLY & Sons (1999), etc. According to the deprotection method that has been described, a step of removing all the protecting groups of the oligonucleotide can be performed.
  • the pseudo solid phase protecting group in the present invention and the cyanoethyl group protecting the phosphate skeleton, such as phenoxyacetyl group and acetyl group, which are protecting groups of nucleobases are ammonia water, ammonia water / ethanol. All can be removed by treating with a solution or a mixture of aqueous ammonia and aqueous methylamine.
  • the protecting group for the nucleotide 5 ′ hydroxyl group can be removed by treating with the acid used in step (1) or a solution obtained by appropriately diluting them. Since an oligonucleotide having no protecting group is easily degraded by an enzyme, it is preferable to isolate the oligonucleotide under air cleanliness control.
  • the confirmation of the progress of the reaction in each of the above steps can be performed by the same method as a general liquid phase organic synthesis reaction. That is, the reaction can be followed using thin layer silica gel chromatography, high performance liquid chromatography or the like.
  • oligonucleotide obtained from the step (4) or the step (5) can be further led to a desired oligonucleotide derivative by subjecting it to an organic synthesis reaction.
  • Oligonucleotides produced according to the present invention can be used for various human or veterinary drugs (RNA, DNA, oligonucleic acid drugs, etc.), functional foods, specified health foods, foods, chemical products, biological and industrial products. It can be used for various applications such as molecular materials.
  • lithium aluminum hydride (162 mg, 4.30 mmol) was added, and the reaction solution was stirred at room temperature for 2 hours.
  • lithium aluminum hydride 148 mg, 3.93 mmol
  • Ethyl acetate was added dropwise to decompose unreacted lithium aluminum hydride, and then diethyl ether was added and washed with aqueous hydrochloric acid.
  • the organic layer was concentrated under reduced pressure, and the precipitated solid was filtered by adding methanol to the concentrate. The resulting solid was dried under reduced pressure to give the title compound (1.73 g, 88.0%) as a white solid.
  • the obtained solid was filtered after slurry washing in acetonitrile, and the obtained solid was purified by silica gel column chromatography (dichloromethane-hexane) to obtain the title compound (2.31 g, 80.5%) as a white solid. It was.
  • Example 9 (1) The compound obtained in Example 9 (1) (500 mg, 474 ⁇ mol) was added and stirred at room temperature for 5 hours. After dropwise addition of 1N hydrochloric acid (1.3 ml) and stirring, the solvent was distilled off and the residue was washed with acetonitrile (10 ml) to obtain the title compound (340 mg, 408 ⁇ mol, yield 86%).
  • Example 2 (Continuous Synthesis of Dinucleotide in Solution 1): 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) deoxythymidine-3 ′-[O- (2-cyanoethyl)] phosphoryl-deoxythymidine-3 ′ Of 2-yl- [3,4,5-tris (octadecyloxy) benzyl] succinate
  • reaction mixture was neutralized with pyridine (322 ⁇ L, 3.98 mmol), and then N-methylimidazole (158 ⁇ L, 1.99 mmol), 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) deoxythymidine-3′-
  • N-methylimidazole 158 ⁇ L, 1.99 mmol
  • a solution of [O- (2-cyanoethyl)-(N, N-diisopropyl)]-phosphoramidite 494 mg, 664 ⁇ mol
  • Example 3 Continuous synthesis of phosphorothioate dimer in liquid: 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) deoxythymidine-3 ′-[O- (2-cyanoethyl)] phosphorothionyl deoxythymidine-3 ′ Of 2-yl- [3,4,5-tris (octadecyloxy) benzyl] succinate
  • reaction mixture was neutralized with pyridine (126 ⁇ L, 1.56 mmol), and then N-methylimidazole (61.8 ⁇ L, 0.779 mmol), 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) deoxythymidine-3 '-[O- (2-cyanoethyl)-(N, N-diisopropyl)]-phosphoramidite (194 mg, 260 ⁇ mol) in acetonitrile was added and stirred at room temperature for 60 minutes, and the reaction was completed by thin-layer chromatography. confirmed.
  • Example 4 Continuous Synthesis of Dinucleotide in Solution 2): 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) -2′-O- (tert-butyldimethylsilyl) uridine-3 ′-[O— ( 2-cyanoethyl)] phosphoryl deoxythymidin-3′-yl- [3,4,5-tris (octadecyloxy) benzyl] succinate
  • reaction mixture was neutralized with pyridine (126 ⁇ L, 1.56 mmol), and then N-methylimidazole (61.8 ⁇ L, 0.779 mmol), 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) -2′-.
  • O- (tert-butyldimethylsilyl) uridine-3 ′-[O- (2-cyanoethyl)-(N, N-diisopropyl)]-phosphoramidite (224 mg, 260 ⁇ mol) in acetonitrile was added, and the mixture was stirred at room temperature for 60 minutes. The mixture was stirred and the completion of the reaction was confirmed by thin layer chromatography.
  • Example 5 Continuous synthesis of 20-mer oligonucleotide in liquid: Deoxythymidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxycytidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxycytidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxycytidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxyguanidyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxycytidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxycytidinyl- [ 3 ' ⁇ 5']-deoxythymidinyl- [3 ' ⁇ 5'] -deoxyguanidyl- [3 ' ⁇ 5'] -deoxythymidinyl- [3 ' ⁇ 5'] -deoxyguanidyl- [3 ' ⁇ 5'] -deoxythymidinyl- [3 ' ⁇ 5']
  • Test Example 1 (Examination of cation scavenger) As a test compound, the compound of Example 1 (hereinafter abbreviated as DMTr-protected compound) in which the 5′-position hydroxyl group was protected with 4,4′-dimethoxytrityl (hereinafter also abbreviated as DMTr) may be used. ) was used to test and evaluate DMTr cation capture candidate substances.
  • DMTr protection compound (50.0 mg, 32.5 ⁇ mol) was dissolved in dichloromethane (350 ⁇ L) to obtain a raw material solution, a cation scavenger candidate substance (162 ⁇ mol) described in Table 1 was added, and trifluoroacetic acid (29.2 ⁇ L, 394 ⁇ mol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for about 30 minutes under the following TLC measurement conditions until the DMTr-protected compound spot in the reaction solution could be confirmed by both UV and color reaction. Further, the reaction solution neutralized with pyridine (31.8 ⁇ L, 394 ⁇ mol) was evaluated according to the following evaluation criteria under the following TLC measurement conditions.
  • Dimethyl sulfide, anisole, thioanisole, cresol, 1,3,5-trimethylbenzene, 1,3-dimethoxybenzene, 1,3,5-trimethoxybenzene, succinimide or phthalimide used as a cation scavenger In some cases, the 5′-terminal hydroxyl group was again protected by the protecting group Q after neutralization, and thus it was found that the compound did not function sufficiently as a cation scavenger.
  • pyrrole derivatives such as pyrrole, 3-methylpyrrole and 2,4-dimethylpyrrole
  • indole derivatives such as indole are effective as scavengers that can maintain the detoxified state of DMTr cation even after neutralization reaction. It was.
  • Test example 2 (when methanol is used as a cation scavenger)
  • the compound of Example 1 in which the protecting group at the 5′-position hydroxyl group is 4,4′-dimethoxytrityl was used. Whether the continuous synthesis in the liquid of the condensation is possible was examined by the method shown below.
  • Test Example 3 (when triethylsilane is used as a cation scavenger)
  • the compound of Example 1 in which the protecting group for the 5′-position hydroxyl group is 4,4′-dimethoxytrityl was used, and triethylsilane was used as the DMTr cation scavenger, and the deprotection reaction was examined by the following method. .
  • triethylsilane is effective for detoxifying DMTr cation during the deprotection reaction, but after neutralization, some of the 5′-position hydroxyl group of the deprotected body is triethylsilylated to adversely affect the continuous condensation process. Therefore, it was revealed that it is not suitable as a DMTr cation scavenger.
  • Test example 4 (when the precipitation and isolation steps after continuous reaction in liquid are changed)
  • 5′-OH-deoxythymidin-3′-yl- [3,4,5-tris (octadecyloxy) benzyl] succinate was used, and in the same system in the order of condensation, oxidation, and deprotection reaction
  • the continuous examination was performed by the following method.
  • Triethylamine salt of 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) deoxythymidine-3′-O-succinate (223 mg, 299 ⁇ mol) and 3,5-bis (docosyloxy) benzylamine (133 mg, 175 ⁇ mol) were dehydrated with dichloromethane. (5 mL), 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate [HBTU] (375 mg, 954 ⁇ mol), N, N-diisopropylethylamine (170 ⁇ L, 954 ⁇ mol) was added and stirred at room temperature for 2 hours.
  • Triethylamine salt of 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) deoxythymidine-3′-O-succinate (1.69 g, 2.24 mmol)
  • 2,4-bis (docosyloxy) benzyl alcohol 990 mg, 1 .32 mmol
  • 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate [HBTU] (2.77 g, 7 .20 mmol) and N, N-diisopropylethylamine (1.28 mL, 7.20 mmol) were added and stirred at room temperature for 1 hour.
  • Triethylamine salt (2.02 g, 2.71 mmol) of 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) deoxythymidine-3′-O-succinate and 4,4′-bis (docosyloxy) benzhydrylamine (1 .25 g, 1.50 mmol) was dissolved in dehydrated dichloromethane (15 mL) and 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate [HBTU] (3 .40 g, 8.93 mmol) and N, N-diisopropylethylamine (1.56 mL, 9.00 mmol) were added, and the mixture was stirred at 40 ° C.
  • Triethylamine salt of 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) deoxythymidine-3′-O-succinate (408 mg, 548 ⁇ mol), 3,4,5-tris [3,4,5-tris (octadecyloxy) ) Benzyloxy] benzyl alcohol (904 mg, 318 ⁇ mol) was dissolved in dehydrated dichloromethane (10 mL) and 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate [ HBTU] (1.09 g, 2.87 mmol) and N, N-diisopropylethylamine (507 ⁇ L, 2.85 mmol) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • Example 15 Deoxycytidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxyadenylyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxythymidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxythymidine (5′-d Synthesis of [CATT] -3 ′)
  • Example 16 Deoxycytidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxyadenylyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxythymidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxythymidine (5′-d Synthesis of [CATT] -3 ′)
  • dA-CE phosphoramidite reagent (334 mg, 387 ⁇ mol) dissolved in 0.25 mol / L 5- (benzylthio) -1H-tetrazole / acetonitrile solution (1.0 mL) was added for 10 minutes.
  • 0.2 mol / L iodine pyridine / tetrahydrofuran / water 49/49/2 solution (3.9 mL) was added and stirred for 10 minutes.
  • a methanol solution saturated with sodium thiosulfate was added to the reaction solution, and the resulting solid was filtered and dried to obtain the title compound (288 mg) quantitatively as a white solid.
  • Example 17 Deoxycytidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxyadenylyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxythymidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxythymidine (5′-d Synthesis of [CATT] -3 ′)
  • Example 18 Deoxycytidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxyadenylyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxythymidinyl- [3 ′ ⁇ 5 ′]-deoxythymidine (5′-d Synthesis of [CATT] -3 ′)
  • Example 21 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) -2′-fluorouridine-3 ′-[O- (2-cyanoethyl)] phosphoryl-2′-methoxyuridine-3′-yl- Synthesis of [3,4,5-tris (octadecyloxy) benzyl] succinate
  • Example 23 One-pot reaction using 2,4,6-trimethylpyridine as neutralizing base 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) -deoxythymidine-3 ′-[O- (2-cyanoethyl)] phosphoryl-deoxythymidin-3′-yl- [3,4,5-tris (octadecyl) Synthesis of ( oxy) benzyl] succinate Under argon atmosphere, 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) -deoxythymidin-3′-yl- [3,4,5-tris (octadecyloxy) benzyl] succinate ( 200 mg, 130 ⁇ mol) was dissolved in dichloromethane (3.0 mL), trifluoroacetic acid (96.3 ⁇ L, 1.30 mmol) and pyrrole (90.0 ⁇ L, 1.30 mmol) were added, and the mixture was stirred for 5 minutes.
  • Example 24 One-pot reaction using trifluoromethanesulfonic acid as a deprotecting reagent and benzimidazole as a neutralizing reagent 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) -deoxythymidine-3 ′-[O- (2-cyanoethyl)] phosphoryl-deoxythymidin-3′-yl- [3,4,5-tris (octadecyl) Synthesis of ( oxy) benzyl] succinate Under argon atmosphere, 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) -deoxythymidin-3′-yl- [3,4,5-tris (octadecyloxy) benzyl] succinate ( 200 mg, 130 ⁇ mol) was dissolved in dichloromethane (3.0 mL), trifluoromethanesulfonic acid (5.75 ⁇ L, 65.0 ⁇ mol) and pyrrole (90.0 ⁇ L
  • Example 25 One-pot reaction using 90% acetonitrile aqueous solution as precipitation solvent 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) -deoxythymidine-3 ′-[O- (2-cyanoethyl)] phosphoryl-deoxythymidin-3′-yl- [3,4,5-tris (octadecyl) Synthesis of ( oxy) benzyl] succinate Under argon atmosphere, 5′-O- (4,4′-dimethoxytrityl) -deoxythymidin-3′-yl- [3,4,5-tris (octadecyloxy) benzyl] succinate ( 200 mg, 130 ⁇ mol) was dissolved in dichloromethane (3.0 mL), trifluoroacetic acid (96.3 ⁇ L, 1.30 mmol) and pyrrole (90.0 ⁇ L, 1.30 mmol) were added, and the mixture was stirred for 5 minutes.
  • a specific cation scavenger in the deprotection step of the 5′-terminal hydroxyl group protected with a temporary protecting group applying a neutralization treatment after completion of the deprotection reaction, and a specific oxidant in the oxidation step or sulfurization step
  • a sulfurizing agent starting from n-polymerized oligonucleotides in which the hydroxyl group at the 3 ′ end is protected with a pseudo solid phase protecting group and the hydroxyl group at the 5 ′ end is protected with a temporary protecting group, (1) A step of deprotecting the temporary protecting group of the hydroxyl group at the 5 ′ end, (2) a step of extending the 5 ′ end by adding p-polymerized oligonucleotide in which the hydroxyl group at the 3 ′ end is converted to phosphoramidite, and (3) a phosphite triester A process for producing n + p-polymerized oligonucleotides in an efficient and
  • an oligonucleotide automatic synthesis program and an oligonucleotide automatic synthesizer using the method for producing an oligonucleotide of the present invention can be developed.
  • the “continuous improved phosphoramidite method” is changed from “(STEP1) deprotection step, (STEP2) condensation step, (STEP4) oxidation step as basic units, without isolation and purification steps after STEP1 and STEP2. If it is defined as “a method in which 2, 4 and 4 are continuously carried out in a liquid”, the method for producing the oligonucleotide of the present invention can also be expressed as follows. [1] A method for producing an oligonucleotide by a continuous improved phosphoramidite method, which comprises at least one cation scavenger selected from a pyrrole derivative and an indole derivative in the deprotection step.
  • [2] The method for producing an oligonucleotide according to [1], further comprising an organic base after the deprotection step and prior to the condensation step.
  • [3] The method for producing an oligonucleotide according to any one of [1] or [2], further comprising using an oxidizing agent or a sulfurizing agent in the oxidation step.
  • [4] The oligonucleotide production according to any one of [1] to [3], wherein after the oxidation step, the oxidant or sulfide is crystallized and isolated in a polar solvent. Method.
  • [5] The method for producing an oligonucleotide according to [4], further comprising deprotecting all protecting groups.
  • a continuous improved phosphonate that does not require an isolation and purification step after STEP 1 and 2 and does not require a capping step.
  • the ability to provide the loamidite method is very significant.

Abstract

　本発明の課題は、３'末端の水酸基を擬似固相保護基で保護され、５'末端の水酸基を保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを原料として、（１）５'末端の水酸基の脱保護工程、（２）３'位水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチドの添加による５'末端への伸長工程、および（３）ホスファイトトリエステルの酸化工程または硫化工程、を連続的に液中で行うことにより、効率的かつ高収率で、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを製造する方法を提供することである。　脱保護工程において特定のカチオン捕捉剤を添加すること、脱保護反応終了後に中和処理を施すこと、および酸化工程または硫化工程で特定の酸化剤または硫化剤を使用することにより、上記課題が解決できることを見出した。

Description

オリゴヌクレオチドの製造方法
　本発明は、特定のオリゴヌクレオチドの製造方法に関する。更に、特定の擬似固相保護基、および特定のヌクレオシドに関する。
　オリゴヌクレオチドの合成方法には、リン酸トリエステル法、Ｈ－ホスホネート法、ホスホロアミダイト法などがあり、現在ではホスホロアミダイト法を用いた固相合成（固相法）が最も汎用されている（非特許文献１）。固相法はプロセス最適化がなされ自動化も進んでおり、スピード面で有利であるが、設備制約上スケールアップに制限があり、試薬・原料を過剰に使用し、途中段階での反応の進行状況の確認、中間体構造解析等も困難という欠点がある。
　一方、液相法によるオリゴヌクレオチドの合成方法も検討されてきたが、操作が煩雑であり収率も低いため、多重合度のオリゴヌクレオチドを大量かつ迅速に合成することは困難であった。
　近年、液相法と固相法のそれぞれの欠点を解消しようとする試みとして、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ）を保護基として用いるオリゴヌクレオチド製法が開示されている（非特許文献２～４）。しかしながら２０量体までのＤＮＡの合成例が示されているものの、各反応での晶析単離操作が必須であることや、ＭＰＥＧ分子自身が単分子ではないために反応の進行状況等を確認することが困難であった。
　一方、疎水性基結合ヌクレオシドを用いたオリゴヌクレオチドの合成方法が開示されている（特許文献１）。当該方法により２１量体のオリゴヌクレオチドの合成が達成できたと報告されているが、５’－保護基の脱保護、カップリング、酸化の各工程で晶析単離操作が毎回実施されており、工程が著しく多く煩雑であった。
特開２０１０－２７５２５４号公報
S. L. Beaucage, D. E. Bergstorm, G. D. Glick, R. A. Jones, Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry; John Wiley & Sons (2000) Nucleic Acid Res., 1990, Vol.18, No.11, 3155-3159 Nucleic Acid Res., 1993, Vol.21, No.5, 1213-1217 Bioconjugate Chem., 1997, Vol.8, No.6, 793-797
　本発明者らは、上記課題を鑑みて鋭意検討した結果、特に、特許文献１に記載の疎水性基結合ヌクレオシドを用いたオリゴヌクレオチドの合成方法では、脱保護工程において遊離保護基（すなわち、カチオン）の捕捉剤として使用されているメタノールは次工程のカップリング反応の阻害物質となるゆえに、完全除去する必要があり、その目的のために晶析単離工程、共沸除去工程などの煩雑な操作が必須であることが分かった。
　また、特許文献１に例示されているメタノール以外のカチオン捕捉剤が使用された場合には、脱保護剤として使用される酸の中和工程において５’－水酸基が再保護化などの副反応が起こることが判明し、酸を中和でなく、晶析単離により除去する必要があることも判明した。
　すなわち、本発明の課題は、疎水性基結合ヌクレオシドを用いたオリゴヌクレオチドの合成方法において、必須工程ともいうべき晶析単離工程を含む多工程を省略した、工業的に有利な製造方法を提供することである。
　更に具体的には、３’末端の水酸基が擬似固相保護基で保護され、５’末端の水酸基が一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを原料として、（１）一時保護基で保護された５’末端水酸基の脱保護工程、（２）３’位がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチド添加による５’末端への伸長工程、および（３）ホスファイトトリエステル部位の酸化工程または硫化工程、を各工程ごとに晶析単離を要せず、連続的に液中で行うことにより、効率的かつ高収率で、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｎ及びｐは、独立して、１以上の任意の整数を示す。）を製造する方法を提供することである。
　本発明者らは鋭意検討の結果、一時保護基で保護された５’位水酸基の脱保護反応中または脱保護反応後に特定のカチオン捕捉剤を添加し、脱保護反応終了後に有機塩基により中和処理を施し、更に酸化剤または硫化剤で酸化処理または硫化処理を施すことにより、上記課題が解決できることを見出した。
　本発明は以下を含む。
［１］以下の工程（１）～（３）を含有する、オリゴヌクレオチドの製造方法。
（１）非極性溶媒中において、３’位水酸基が擬似固相保護基で保護され、かつ５’位水酸基が酸性条件下で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）、酸、ならびにピロール誘導体およびインドール誘導体から選択される少なくとも一種のカチオン捕捉剤を反応させて５’位水酸基の一時保護基を除去した後、有機塩基により中和する工程、
（２）工程（１）の中和後の反応液に、３’位水酸基がホスホロアミダイト化され、かつ５’位水酸基が酸性条件下で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）を添加して、工程（１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドと、その５’位水酸基を介してホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、ならびに
（３）工程（２）の反応液に、酸化剤または硫化剤を添加して、工程（２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合またはチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程。
［２］ｐが１である、上記［１］に記載の方法。
［３］更に、下記工程（４）を含有する、上記［１］または［２］に記載の方法。
（４）工程（３）で得られた反応液に極性溶媒を添加して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを沈殿させて、固液分離により取得する工程。
［４］更に、下記工程（５）を含有する、上記［３］に記載の方法。
（５）工程（４）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程。
［５］酸性条件下で除去可能な一時保護基が、ジメトキシトリチル基、またはモノメトキシトリチル基である、上記［１］～［４］のいずれか一つに記載の方法。
［６］非極性溶媒が、ハロゲン系溶媒、芳香族系溶媒、エステル系溶媒、脂肪族系溶媒、非極性エーテル系溶媒、およびこれらの組合せからなる群より選択される溶媒である、上記［１］～［５］のいずれか一つに記載の方法。
［７］非極性溶媒が、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２－ジクロロエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、ノナン、シクロヘキサン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、およびこれらの組合せからなる群より選択される溶媒である、上記［１］～［５］のいずれか一つに記載の方法。
［８］極性溶媒が、アルコール系溶媒、またはニトリル系溶媒である、上記［３］～［７］のいずれか一つに記載の方法。
［９］極性溶媒が、メタノール、またはアセトニトリルである、上記［３］～［７］のいずれか一つに記載の方法。
［１０］ピロール誘導体またはインドール誘導体が、ピロール、３－メチルピロール、２，４－ジメチルピロール、インドール、４－メチルインドール、５－メチルインドール、６－メチルインドール、７－メチルインドール、５，６－ジメチルインドール、および６，７－ジメチルインドールからなる群より選択される少なくとも一種である、上記［１］～［９］のいずれか一つに記載の方法。
［１１］酸化剤が、ヨウ素、（１Ｓ）－（＋）－（１０－カンファニルスルフォニル）オキサジリジン、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド、２－ブタノンペルオキシド、１，１－ジヒドロペルオキシシクロドデカン、ビス（トリメチルシリル）ペルオキシド、またはｍ－クロロ過安息香酸である、上記［１］～［１０］のいずれか一つに記載の方法。
［１２］硫化剤が、３－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン－１，１－ジオキシド、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン、フェニルアセチルジスルフィド、テトラエチルチウラムジスルフィド、３－アミノ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン、または硫黄である、上記［１］～［１０］のいずれか一つに記載の方法。
［１３］酸が、トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリクロロ酢酸、メタンスルホン酸、塩酸、酢酸またはｐ－トルエンスルホン酸である、上記［１］～［１２］のいずれか一つに記載の方法。
［１４］有機塩基が、ピリジン、２，４，６－トリメチルピリジン、ベンズイミダゾール、１，２，４－トリアゾール、Ｎ－フェニルイミダゾール、２－アミノ－４，６－ジメチルピリミジン、１，１０－フェナントロリン、イミダゾール、Ｎ－メチルイミダゾール、２－クロロベンズイミダゾール、２－ブロモベンズイミダゾール、２－メチルイミダゾール、２－フェニルベンズイミダゾール、Ｎ－フェニルベンズイミダゾール、および５－ニトロベンズイミダゾールからなる群より選択される少なくとも一種である、上記［１］～［１３］のいずれか一つに記載の方法。
［１５］脱保護ステップにおいて、ピロール誘導体、およびインドール誘導体から選択される少なくとも一種のカチオン捕捉剤を含有することを特徴とする、連続的改良ホスホロアミダイト法によるオリゴヌクレオチドの製造方法。
［１６］一般式（Ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
［式中、
Ｌは、式（ａ１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
（式中、＊は、Ｙとの結合位置を示し；
＊＊は、保護される基との結合位置を示し；
Ｌ１は、置換されていてもよい２価のＣ１－２２炭化水素基を示し；かつ
Ｌ２は、単結合を示すか、または＊＊Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ２）－Ｒ１－Ｎ（Ｒ３）＊＊＊（式中、＊＊は、Ｌ１との結合位置を示し、＊＊＊は、Ｃ＝Ｏとの結合位置を示し、Ｒ１は、置換されていてもよいＣ１－２２アルキレン基を示し、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子もしくは置換されていてもよいＣ１－２２アルキル基を示すか、またはＲ２およびＲ３が一緒になって、置換されていてもよいＣ１－２２アルキレン結合を形成していてもよい。）で表される基を示す。）で示される基を示し、
Ｙは、酸素原子、またはＮＲ（Ｒは、水素原子、アルキル基またはアラルキル基を示す。）を示し、ならびに
Ｚは、式（ａ２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
［式中、＊は、Ｙとの結合位置を示し；
Ｒ４は、水素原子であるか、あるいはＲｂが、下記式（ａ３）で表される基である場合には、Ｒ６と一緒になって単結合または－Ｏ－を示して、環Ｂと共にフルオレニル基またはキサンテニル基を形成していてもよく； 
ｋ個のＲ５は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｋは、１～４の整数を示し；
環Ａは、ｋ個のＯＲ５に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子を示し；ならびに
Ｒｂは、水素原子、または式（ａ３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
（式中、＊は、結合位置を示し；
ｊは、０～４の整数を示し；
ｊ個のＲ７は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ６は、水素原子を示すか、またはＲ４と一緒になって単結合または－Ｏ－を示して、環Ａと共にフルオレニル基またはキサンテニル基を形成していてもよく；かつ
環Ｂは、ｊ個のＯＲ７に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示す。］で表される基を示す。］
で示される、擬似固相保護基。
［１７］一般式（ＩＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
［式中、
ｍは、０以上の任意の整数を示し、
ｍ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ保護されていてもよい核酸塩基を示し、
Ｑは、水素原子、または酸性条件下で除去可能な一時保護基を示し、
Ｘは、水素原子、ハロゲン原子、または保護されていてもよい水酸基を示し、
ｍ個のＸ’は、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、または保護されていてもよい水酸基を示し、
ｍ個のＲ８は、独立してそれぞれ酸素原子もしくは硫黄原子を示し、
ｍ個のＷＧは、独立してそれぞれ電子吸引性基を示し、
Ｌは、式（ａ１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
（式中、＊は、Ｙとの結合位置を示し；
＊＊は、ヌクレオチド３’水酸基との結合位置を示し；
Ｌ１は、置換されていてもよい２価のＣ１－２２炭化水素基を示し；かつ
Ｌ２は、単結合を示すか、または＊＊Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ２）－Ｒ１－Ｎ（Ｒ３）＊＊＊（式中、＊＊は、Ｌ１との結合位置を示し、＊＊＊は、Ｃ＝Ｏとの結合位置を示し、Ｒ１は、置換されていてもよいＣ１－２２アルキレン基を示し、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子もしくは置換されていてもよいＣ１－２２アルキル基を示すか、またはＲ２およびＲ３が一緒になって、置換されていてもよいＣ１－２２アルキレン結合を形成していてもよい。）で表される基を示す。）で示される基を示し、
Ｙは、酸素原子、またはＮＲ（Ｒは、水素原子、アルキル基またはアラルキル基を示す。）を示し、ならびに
Ｚは、式（ａ２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
［式中、＊は、Ｙとの結合位置を示し；
Ｒ４は、水素原子を示すか、あるいはＲｂが、下記式（ａ３）で表される基である場合には、Ｒ６と一緒になって単結合または－Ｏ－を示して、環Ｂと共にフルオレニル基またはキサンテニル基を形成していてもよく； 
ｋ個のＲ５は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｋは、１～４の整数を示し；
環Ａは、ｋ個のＯＲ５に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子を示し；かつＲｂは、水素原子、または式（ａ３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
（式中、＊は、結合位置を示し；
ｊは、０～４の整数を示し；
ｊ個のＲ７は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ６は、水素原子を示すか、またはＲ４と一緒になって単結合または－Ｏ－を示して、環Ａと共にフルオレニル基またはキサンテニル基を形成していてもよく；かつ
環Ｂは、ｊ個のＯＲ７に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示す。］で表される基を示す。］
で示されるヌクレオチド。
［１８］ｍが０である、上記［１７］に記載のヌクレオチド。
［１９］一般式（ＩＩ）中のＬが、スクシニル基であり、かつ
Ｒ５および／またはＲ７が、炭素原子数１０～４０のアルキル基である、上記［１７］または［１８］に記載のヌクレオチド。
［２０］一般式（ＩＩ）中のＬが、スクシニル基であり、かつ
ＲａおよびＲｂが、共に水素原子であり、かつＲ５が、炭素原子数１０～４０のアルキル基である、上記［１７］または［１８］に記載のヌクレオチド。
［２１］一般式（ＩＩ）中のＬが、スクシニル基であり、かつ
Ｒ５および／またはＲ７が、炭素原子数１２～３０のアルキル基である、上記［１７］または［１８］に記載のヌクレオチド。
［２２］一般式（ＩＩ）中のＬが、スクシニル基であり、かつ
Ｙ－Ｚが、３，４，５－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ基、
３，５－ジ（ドコシルオキシ）ベンジルオキシ基、
３，５－ジ［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルオキシ基、
３，４，５－トリ［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルオキシ基、
３，４，５－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルアミノ基、
２，４－ジ（ドコシルオキシ）ベンジルアミノ基、
３，５－ジ（ドコシルオキシ）ベンジルアミノ基、
ジ（４－ドコシルオキシフェニル）メチルアミノ基、
４－メトキシ－２－［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアミノ基、
４－メトキシ－２－［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）シクロヘキシルメチルオキシ］ベンジルアミノ基、
２，４－ジ（ドデシルオキシ）ベンジルアミノ基、
フェニル（２，３，４－トリ（オクタデシルオキシ）フェニル）メチルアミノ基、
ジ［４－（１２－ドコシルオキシドデシルオキシ）フェニル］メチルアミノ基、
３，５－ジ［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアミノ基、および
３，４，５－トリ［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアミノ基
からなる群より選択される基である、上記［１７］または［１８］に記載のヌクレオチド。
［２３］Ｑが、モノメトキシトリチル基、またはジメトキシトリチル基である、上記［１７］～［２２］のいずれか一つに記載のヌクレオチド。
　一時保護基で保護された５’末端水酸基の脱保護反応中または脱保護反応後に特定のカチオン捕捉剤を添加すること、脱保護反応終了後に中和処理を施すこと、および酸化工程または硫化工程で特定の酸化剤または硫化剤を使用することにより、３’末端水酸基が擬似固相保護基で保護され、かつ５’末端水酸基が一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを原料として、（１）一時保護基で保護された５’末端水酸基の脱保護工程、（２）３’位がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチド添加による５’末端への伸長工程、および（３）ホスファイトトリエステル部位の酸化工程または硫化工程、をこの順序で連続的に液中で行うことにより、効率的かつ高収率で、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを製造する方法を提供できるようになった。
　本発明は、脱保護工程で特定のカチオン捕捉剤を添加すること、脱保護反応終了後に中和処理を施すこと、および酸化工程または硫化工程で特定の酸化剤または硫化剤を使用することにより、３’末端水酸基を擬似固相保護基で保護され、かつ５’末端水酸基を一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを原料として、（１）一時保護基で保護された５’末端水酸基の脱保護工程、（２）３’位がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチド添加による５’末端への伸長工程、および（３）ホスファイトトリエステル部位の酸化工程または硫化工程、をこの順序で連続的に液中で行うことにより、効率的かつ高収率で、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを製造する方法である。
　文中で特に断らない限り、本明細書で用いるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるのと同じ意味をもつ。本明細書に記載されたものと同様または同等の任意の方法および材料は、本発明の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法および材料を以下に記載する。本明細書で言及したすべての刊行物および特許は、例えば、記載された発明に関連して使用されうる刊行物に記載されている、構築物および方法論を記載および開示する目的で、参照として本明細書に組み入れられる。
　本明細書において、オリゴヌクレオチドの構成単位となる「ヌクレオシド」とは、核酸塩基が糖（例えば、リボース）の１’位にＮ－グリコシド化により結合された化合物を意味する。
　本明細書において、「核酸塩基」とは、核酸の合成に使用されるものであれば特に制限されず、例えば、シトシル基、ウラシル基、チミニル基等のピリミジン塩基、アデニル基、グアニル基等のプリン塩基を挙げることができる。また、「保護されていてもよい核酸塩基」とは、例えば、アミノ基を有する核酸塩基であるアデニル基、グアニル基、またはシトシル基において、アミノ基が保護されていてもよいことを意味し、核酸塩基のアミノ基が５’位の脱保護条件に耐え得る保護基により保護されている核酸塩基が好ましい。かかる「アミノ基の保護基」としては、特に限定されず、例えば、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（ＰＲＯＴＥＣＴＩＶＥ　ＧＲＯＵＰＳ　ＩＮ　ＯＲＧＡＮＩＣ　ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ）、第３版、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ（ＪＯＨＮ　ＷＩＬＬＹ＆ＳＯＮＳ）出版（１９９９年）等に記載されている保護基を挙げることができる。かかる「アミノ基の保護基」の具体例としては、例えば、ピバロイル基、ピバロイロキシメチル基、トリフルオロアセチル基、フェノキシアセチル基、４－イソプロピルフェノキシアセチル基、４－tert－ブチルフェノキシアセチル基、アセチル基、ベンゾイル基、イソブチリル基、ジメチルホルムアミジニル基、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基等を挙げることができる。これらの中でも、フェノキシアセチル基、４－イソプロピルフェノキシアセチル基、アセチル基、ベンゾイル基、イソブチリル基、及びジメチルホルムアミジニル基が好ましい。また、核酸塩基のカルボニル基が保護されていてもよく、例えば、フェノール、２，５－ジクロロフェノール、３－クロロフェノール、３，５－ジクロロフェノール、２－ホルミルフェノール、２－ナフトール、４－メトキシフェノール、４－クロロフェノール、２－ニトロフェノール、４－ニトロフェノール、４－アセチルアミノフェノール、ペンタフルオロフェノール、４－ピバロイロキシベンジルアルコール、４－ニトロフェネチルアルコール、２－（メチルスルフォニル）エタノール、２－（フェニルスルフォニル）エタノール、２－シアノエタノール、２－（トリメチルシリル）エタノール、ジメチルカルバミン酸クロライド、ジエチルカルバミン酸クロライド、エチルフェニルカルバミン酸クロライド、１－ピロリジンカルボン酸クロライド、４－モルホリンカルボン酸クロライド、ジフェニルカルバミン酸クロライド等を反応させて、カルボニル基を保護することが出来る。ここで、カルボニル基の保護基については、特に導入しなくてもよい場合がある。また、該「核酸塩基」には、上記した基の他に、核酸塩基が任意の置換基（例えば、ハロゲン原子、アルキル基、アラルキル基、アルコキシ基、アシル基、アルコキシアルキル基、ヒドロキシ基、アミノ基、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシ、シアノ、ニトロ等）により任意の位置に１～３個置換されている修飾核酸塩基（例えば、８－ブロモアデニル基、８－ブロモグアニル基、５－ブロモシトシル基、５－ヨードシトシル基、５－ブロモウラシル基、５－ヨードウラシル基、５－フルオロウラシル基、５－メチルシトシル基、８－オキソグアニル基、ヒポキサンチニル基等）も包含される。
　本明細書中、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子である。
　本明細書中、「アルキル（基）」としては、直鎖状または分岐鎖状の炭素数１以上のアルキル基が挙げられ、特に炭素数範囲の限定がない場合には、好ましくはＣ１－１０アルキル基であり、より好ましくはＣ１－６アルキル基である。炭素数範囲の限定がない場合の好適な具体例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル等が挙げられ、特にメチル、エチルが好ましい。
　本明細書中、「アラルキル（基）」としては、Ｃ７－２０アラルキル基が挙げられ、好ましくはＣ７－１６アラルキル基（Ｃ６－１０アリール－Ｃ１－６アルキル基）である。好適な具体例としては、ベンジル、１－フェニルエチル、２－フェニルエチル、１－フェニルプロピル、ナフチルメチル、１－ナフチルエチル、１－ナフチルプロピル等が挙げられ、特にベンジルが好ましい。
　本明細書中、「アルコキシ（基）」としては、炭素数１以上のアルコキシ基が挙げられ、特に炭素数範囲の限定がない場合には、好ましくはＣ１－１０アルコシ基であり、より好ましくはＣ１－６アルコキシ基である。炭素数範囲の限定がない場合の好適な具体例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ等が挙げられ、特にメトキシ、エトキシが好ましい。
　本明細書中、「アシル（基）」としては、例えば、直鎖状または分岐鎖状のＣ１－６アルカノイル基、Ｃ７－１３アロイル基等が挙げられる。具体的には、例えば、ホルミル、アセチル、ｎ－プロピオニル、イソプロピオニル、ｎ－ブチリル、イソブチリル、ピバロイル、バレリル、ヘキサノイル、ベンゾイル、ナフトイル、レブリニル等が挙げられ、これらはそれぞれ置換されていてもよい。
　本明細書中、「アルケニル（基）」としては、直鎖状または分岐鎖状のＣ２－６アルケニル基等が好ましく、例えば、ビニル、１－プロペニル、アリル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル等が挙げられる。中でも、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基が好ましい。
　本明細書中、「アルキニル（基）」としては、Ｃ２－６アルキニル基等が好ましく、例えば、エチニル、１－プロピニル、２－プロピニル、１－ブチニル、２－ブチニル、３－ブチニル、１－ペンチニル、２－ペンチニル、３－ペンチニル、４－ペンチニル、１－ヘキシニル、２－ヘキシニル、３－ヘキシニル、４－ヘキシニル、５－ヘキシニル等が挙げられる。中でも、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基が好ましい。
　本明細書中、「シクロアルキル（基）」は、環状アルキル基を意味し、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等が挙げられる。中でも、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等のＣ３－Ｃ６シクロアルキル基が好ましく、シクロヘキシルが特に好ましい。
　本明細書中、「アリール（基）」は、芳香族性を示す単環式あるいは多環式（縮合）の炭化水素基を意味し、具体的には、例えば、フェニル、１－ナフチル、２－ナフチル、ビフェニリル、２－アンスリル等のＣ６－１４アリール基等が挙げられる。中でもＣ６－１０アリール基がより好ましく、フェニルが特に好ましい。
　本明細書中、「炭化水素基」としては、例えば、脂肪族炭化水素基、芳香脂肪族炭化水素基、単環式飽和炭化水素基および芳香族炭化水素基等が挙げられ、具体的には、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基等の１価基およびそれらから誘導される２価基である。
　本明細書中、「炭化水素基を有する有機基」とは、前記「炭化水素基」を有する基を意味し、「炭化水素基を有する有機基」中の「炭化水素基」以外の部位は任意に設定することができる。例えば、リンカーとして－Ｏ－、－Ｓ－、－ＣＯＯ－、－ＯＣＯＮＨ－、および－ＣＯＮＨ－等の部位を有していてもよい。
〔擬似固相保護基〕
　本発明に使用される、擬似固相保護基とは、該基が反応基質に結合することにより非極性溶媒に可溶化し、液相中の反応が可能であると共に、極性溶媒の添加により沈殿し、固液分離が可能となる、反応性と後処理の簡便性を兼ね備えた保護基であって、５’末端水酸基の保護基を除去し得る酸性条件で安定な基でありさえすれば、特に限定されない。擬似固相保護基としては、例えば、非特許文献２～４、特許文献１等に開示された基が挙げられるが、中でも下記一般式（Ｉ）で表される擬似固相保護基は、目的とするオリゴヌクレオチド製造方法において高収率が達成できるという観点で好ましい擬似固相保護基である。
一般式（Ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
［式中、
Ｌは、式（ａ１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
（式中、＊は、Ｙとの結合位置を示し；
＊＊は、保護される基との結合位置を示し；
Ｌ１は、置換されていてもよい２価のＣ１－２２炭化水素基を有する基を示し；かつ
Ｌ２は、単結合を示すか、または＊＊Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ２）－Ｒ１－Ｎ（Ｒ３）＊＊＊（式中、＊＊は、Ｌ１との結合位置を示し、＊＊＊は、Ｃ＝Ｏとの結合位置を示し、Ｒ１は、置換されていてもよいＣ１－２２アルキレン基を示し、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子もしくは置換されていてもよいＣ１－２２アルキル基を示すか、またはＲ２およびＲ３が一緒になって、置換されていてもよいＣ１－２２アルキレン結合を形成していてもよい。）で表される基（リンカー）を示す。）で示される基を示し、
Ｙは、単結合、酸素原子、またはＮＲ（Ｒは、水素原子、アルキル基またはアラルキル基を示す。）を示し、ならびに
Ｚは、式（ａ２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
［式中、＊は、Ｙとの結合位置を示し；
Ｒ４は、水素原子を示すか、あるいはＲｂが、下記式（ａ３）で表される基である場合には、Ｒ６と一緒になって単結合または－Ｏ－を示して、環Ｂと共にフルオレニル基またはキサンテニル基を形成していてもよく； 
ｋ個のＲ５は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｋは、１～４の整数を示し；
環Ａは、ｋ個のＯＲ５に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子を示し；ならびに
Ｒｂは、水素原子、または式（ａ３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
（式中、＊は、結合位置を示し；
ｊは、０～４の整数を示し；
ｊ個のＲ７は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ６は、水素原子を示すか、またはＲ４と一緒になって単結合または－Ｏ－を示して、環Ａと共にフルオレニル基またはキサンテニル基を形成していてもよく；かつ
環Ｂは、ｊ個のＯＲ７に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基、または式（ａ２’）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
（式中、＊は、結合位置を示し；
ｋ’個のＲ５’は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｋ’は、１～４の整数を示し；
環Ｃは、ｋ’個のＯＲ５’に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で示される基を示す。］で示される基を示す。］で表される基である。
　上記式（Ｉ）で表される擬似固相保護基により保護される基としては、例えば、水酸基、アミノ基が挙げられ、中でもヌクレオシドまたはヌクレオチドの３’水酸基が好ましい。
　上記式（ａ１）で表されるリンカーＬの好ましい態様としては、式（ａ１）中、Ｌ１が、エチレン基、またはＣＨ２－Ｏ－１，４－フェニレン－Ｏ－ＣＨ２を示し；かつ
Ｌ２が、単結合を示すか、または＊＊Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ２）－Ｒ１－Ｎ（Ｒ３）＊＊＊（式中、＊＊は、Ｌ１との結合位置を示し、＊＊＊は、Ｃ＝Ｏとの結合位置を示し、Ｒ１は、Ｃ１－６アルキレン基を示し、Ｒ２およびＲ３は、独立してそれぞれ水素原子、もしくは置換されていてもよいＣ１－６アルキル基を示すか、またはＲ２およびＲ３が一緒になって、置換されていてもよいＣ１－６アルキレン結合を形成していてもよい。）で表される基である、基である。
　上記式（ａ１）で表されるリンカーＬの別の好ましい態様としては、式（ａ１）中、Ｌ１が、エチレン基を示し；かつ
Ｌ２が、単結合を示す、基である。
　上記式（ａ１）で表されるリンカーＬの別の好ましい態様としては、式（ａ１）中、Ｌ１が、エチレン基を示し；かつ
Ｌ２中のＮ（Ｒ２）－Ｒ１－Ｎ（Ｒ３）部分が、ピペラジニレン基を示す、基である。
　上記式（ａ１）で表されるリンカーＬの更に別の好ましい態様としては、式（ａ１）中、Ｌ１が、エチレン基を示し；かつ
Ｌ２が、＊＊Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ２）－Ｒ１－Ｎ（Ｒ３）＊＊＊（式中、＊＊は、Ｌ１との結合位置を示し、＊＊＊は、Ｃ＝Ｏとの結合位置を示し、Ｒ１は、ペンチレン基、またはヘキシレン基を示し、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子もしくはメチル基を示す。）で表される基である、基である。
　上記リンカーＬの特に好ましい例は、入手が容易で安価なスクシニル基である。
　Ｙの好ましい態様としては、酸素原子、またはＮＲ（Ｒは、水素原子、アルキル基またはアラルキル基を示す。）である。
　Ｒとして好ましくは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基またはＣ７－１６アラルキル基であり、より好ましくは水素原子、メチル、エチルまたはベンジルであり、特に好ましくは水素原子である。
　Ｚの好ましい態様としては、式（ａ２）で表される基である。
　上記式（ａ２）で表されるＺの好ましい態様としては、式（ａ２）中、ＲａおよびＲｂは、共に水素原子を示し；
Ｒ４は、水素原子を示し、 
ｋ個のＲ５は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基（例えば、Ｃ１０－４０アルキル基）を示し；かつ
ｋは、１～３の整数を示す、基である。
　上記式（ａ２）で表されるＺの別の好ましい態様としては、式（ａ２）中、
ｋは、１～３の整数を示し；
ＲａおよびＲｂは、共に水素原子を示し；
Ｒ４は、水素原子を示し； 
ｋ個のＲ５は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を１～３個有するベンジル基、または炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を１～３個有するシクロヘキシル基を示し；かつ
環Ａが、ｋ個のＯＲ５に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい、基である。
　上記式（ａ２）で表されるＺの別の好ましい態様としては、式（ａ２）中、
Ｒａは、水素原子を示し； 
Ｒｂは、上記式（ａ３）（式中、＊は結合位置を示し；ｊは、０～３の整数を示し；ｊ個のＲ７は、独立してそれぞれＣ１０－４０アルキル基を示し；
Ｒ４およびＲ６は、共に水素原子を示す。）で表される基である、基である。
　上記式（ａ２）で表されるＺの更に別の好ましい態様としては、式（ａ２）中、
Ｒａは、水素原子を示し；
Ｒｂは、上記式（ａ３）（式中、＊は結合位置を示し；ｊは、０～３の整数を示し；ｊ個のＲ７は、独立してそれぞれＣ１０－４０アルキル基を示し；
Ｒ６は、環ＡのＲ４と一緒になって単結合または－Ｏ－を形成し、それにより環Ａと環Ｂは一緒になってフルオレニル基またはキサンテニル基を示す。）で表される基である、基である。
　上記一般式（Ｉ）で表される擬似固相保護基としては、５’末端水酸基の保護基を除去し得る酸性条件下では切断されにくく、塩基性条件下で切断される基が好ましい。
　かかる擬似固相保護基の代表的な例としては、例えば、上記一般式（Ｉ）中のＬが、上記式（ａ１）で表される基（好ましくは、スクシニル基等）であり、かつ
Ｙ－Ｚが、以下の基であるものが挙げられる。
３，４，５－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ基、
３，５－ジ（ドコシルオキシ）ベンジルオキシ基、
３，５－ジ［３’，４'，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルオキシ基、
３，４，５－トリ［３’，４'，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルオキシ基、
３，４，５－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルアミノ基、
２，４－ジ（ドコシルオキシ）ベンジルアミノ基、
３，５－ジ（ドコシルオキシ）ベンジルアミノ基、
ジ（４－ドコシルオキシフェニル）メチルアミノ基、
４－メトキシ－２－［３’，４'，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアミノ基、
４－メトキシ－２－［３’，４'，５’－トリ（オクタデシルオキシ）シクロヘキシルメチルオキシ］ベンジルアミノ基、
２，４－ジ（ドデシルオキシ）ベンジルアミノ基、
フェニル（２，３，４－トリ（オクタデシルオキシ）フェニル）メチルアミノ基、
ジ［４－（１２－ドコシルオキシドデシルオキシ）フェニル］メチルアミノ基、
３，５－ジ［３’，４'，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアミノ基、または
３，４，５－トリ［３’，４'，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアミノ基。
〔擬似固相保護基により３’位水酸基が保護され、かつ５’位水酸基が一時保護基で保護されたヌクレオチド〕
　本発明に使用される、擬似固相保護基をヌクレオチドの３’位水酸基に結合させることにより、擬似固相合成に適したヌクレオチドを製造することができる。
　中でも目的とするオリゴヌクレオチド製造方法において高収率が達成できるという観点で好ましいヌクレオチドとしては、下記一般式（ＩＩ）で表される化合物（以下、本発明化合物と称することもある。）が挙げられる。
　一般式（ＩＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
［式中、
ｍは、０以上の任意の整数を示し、
ｍ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ保護されていてもよい核酸塩基を示し、
Ｑは、水素原子または酸性条件下で除去可能な一時保護基を示し、
Ｘは、水素原子、ハロゲン原子または保護されていてもよい水酸基を示し、
ｍ個のＸ’は、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、または保護されていてもよい水酸基を示し、
ｍ個のＲ８は、独立してそれぞれ酸素原子もしくは硫黄原子を示し、
ｍ個のＷＧは、独立してそれぞれ電子吸引性基を示し、
Ｙは、単結合、酸素原子またはＮＲ（Ｒは、水素原子、アルキル基またはアラルキル基を示す。）を示し、かつ
Ｌ、およびＺは、式（ａ１）の＊＊が、ヌクレオチド３’水酸基との結合位置を示すことを除いて、前記と同義である。］
　本発明化合物のうち、一般式（ＩＩ）中のＹが酸素原子またはＮＲ（Ｒは、水素原子、アルキル基またはアラルキル基を示す。）であるものは、新規化合物である。
　本発明化合物は、５’位の水酸基の酸素原子を介して、３’位水酸基がホスホロアミダイト化され、かつ５’位水酸基が一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）と結合し、ｍ＋１+ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）を形成する。
　ｍが０の時、本発明化合物は、「ヌクレオシド」と解し、オリゴヌクレオチド合成における３’位末端の出発化合物である。また、本発明化合物には、広義には５’位水酸基が未保護（Ｑが水素原子）のものも包含される。
　ｍは、０以上の任意の整数を示し、好ましくは、０である。ｍの上限は、特に限定されるものではないが、４９以下が好ましく、２９以下がより好ましく、１９以下が更に好ましい。
　本発明化合物であるヌクレオチドを構成するリボース残基の２位の基Ｘ及びｍ個のＸ’は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子または保護されていてもよい水酸基である。
　ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子が好ましく、フッ素原子がより好ましい。
　「保護されていてもよい水酸基」の保護基としては、特に限定されず、例えば、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（ＰＲＯＴＥＣＴＩＶＥ　ＧＲＯＵＰＳ　ＩＮ　ＯＲＧＡＮＩＣ　ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ）、第３版、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ（ＪＯＨＮ　ＷＩＬＬＹ＆ＳＯＮＳ）出版（１９９９年）等に記載されている任意の保護基を挙げることができる。具体的には、メチル基、ベンジル基、ｐ－メトキシベンジル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、メトキシメチル基、メトキシエチル基、２－テトラヒドロピラニル基、エトキシエチル基、シアノエチル基、シアノエトキシメチル基、フェニルカルバモイル基、１，１－ジオキソチオモルホリン－４－チオカルバモイル基、アセチル基、ピバロイル基、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、［（トリイソプロピルシリル）オキシ］メチル（Ｔｏｍ）基、１－（４－クロロフェニル）－４－エトキシピペリジン－４－イル（Ｃｐｅｐ）基等を挙げることができる。これらの中でも、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、またはｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基であることが好ましく、経済性及び入手の容易さの観点から、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基であることが特に好ましい。
　本発明化合物の５’位水酸基の保護基として用いることができる一時保護基Ｑとしては、酸性条件下で脱保護可能であり、水酸基の保護基として用いられるものであれば、特に限定はされないが、トリチル基、９－（９－フェニル）キサンテニル基、９－フェニルチオキサンテニル基、１，１－ビス（４－メトキシフェニル）－１－フェニルメチル基（ジメトキシトリチル基）等のジ（Ｃ１－６アルコキシ）トリチル基、１－（４－メトキシフェニル）－１，１－ジフェニルメチル基（モノメトキシトリチル基）等のモノ（Ｃ１－１８アルコキシ）トリチル基等を挙げることができる。これらの中でも、脱保護のしやすさ、入手の容易さの観点から、モノメトキシトリチル基、ジメトキシトリチル基であることが好ましく、より好ましくは、ジメトキシトリチル基である。
　ｍ個のＲ８は、独立してそれぞれ酸素原子もしくは硫黄原子を示し、好ましくは酸素原子である。
　ｍ個のＷＧは、独立してそれぞれ電子吸引性基を示す。当該電子吸引性基としては、例えば、シアノ基、ニトロ基等が挙げられ、好ましくはシアノ基である。
　本明細書中、Ｒ５またはＲ７として示される「炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基」とは、その分子構造中に炭素数が１０以上の脂肪族炭化水素基を有する１価の有機基である。
　「脂肪族炭化水素基を有する有機基」における「脂肪族炭化水素基」とは、直鎖または分岐状の飽和または不飽和の脂肪族炭化水素基であり、炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基が好ましく、炭素数１０～４０の脂肪族炭化水素基がより好ましく、炭素数１２～３０の脂肪族炭化水素基が特に好ましい。
　「脂肪族炭化水素基を有する有機基」における「脂肪族炭化水素基」の部位は、特に限定されず、末端に存在しても（１価基）、それ以外の部位に存在してもよい（例えば２価基）。
　「脂肪族炭化水素基」としては、炭素数１０以上の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基、直鎖状または分岐鎖状のアルケニル基等の１価基およびそれらから誘導される２価基が挙げられ、中でも炭素数１０～４０のアルキル基が好ましく、炭素数１２～３０のアルキル基が特に好ましい。「脂肪族炭化水素基」の具体例としては、例えば、デシル基、ドデシル基、トリデシル基、ミリスチル基、セチル基、ステアリル基、オレイル基、リノリル基、アラキル基、ベヘニル基、イソステアリル基等の１価基およびそれらから誘導される２価基が挙げられる。
　「脂肪族炭化水素基を有する有機基」中の「脂肪族炭化水素基」以外の部位は任意に設定することができる。例えば、リンカーとして－Ｏ－、－Ｓ－、－ＣＯＯ－、－ＯＣＯＮＨ－、および－ＣＯＮＨ－、並びに、炭化水素基（１価基または２価基）等の部位を有していてもよい。かかる「炭化水素基」としては、例えば、脂肪族炭化水素基、芳香脂肪族炭化水素基、単環式飽和炭化水素基および芳香族炭化水素基等が挙げられ、具体的には、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基等の１価基およびそれらから誘導される２価基が用いられる。「脂肪族炭化水素基」以外の部位の「アルキル基」、「アルケニル基」、「アルキニル基」、「シクロアルキル基」、「アリール基」、または「アラルキル基」としては、例えば、前記したのと同様のものを挙げることができる。当該「炭化水素基」は、ハロゲン原子（塩素原子、臭素原子、フッ素原子、ヨウ素原子）、１個以上のハロゲン原子により置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、オキソ基等から選択される置換基で置換されていてもよい。
　本明細書中、一般式（ＩＩ）中のＹを構成するＲは、水素原子、アルキル基またはアラルキル基であり、好ましくは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基またはＣ７－１６アラルキル基であり、より好ましくは水素原子、メチル、エチルまたはベンジルであり、特に好ましくは水素原子である。
　上記一般式（ＩＩ）中のＺを構成する「Ｒ５（基）」および／または「Ｒ７（基）」として示される「脂肪族炭化水素基を有する有機基」は、分岐等によって複数の「脂肪族炭化水素基」が存在してもよい。「脂肪族炭化水素基を有する有機基」中に「脂肪族炭化水素基」が複数存在する場合には、その各々は同一のものであっても異なるものであってもよい。
　上記一般式（ＩＩ）中のＺを構成する「Ｒ５（基）」および／または「Ｒ７（基）」として示される「脂肪族炭化水素基を有する有機基」における、炭素数合計の下限は１０以上が好ましく、１２以上がより好ましく、１４以上が更に好ましく、１８以上が更に一層好ましく、３０以上が殊更好ましい。一方、「Ｒ５（基）」および／または「Ｒ７（基）」として示される「脂肪族炭化水素基を有する有機基」における、炭素数合計の上限は、２００以下が好ましく、１５０以下がより好ましく、１２０以下が更に好ましく、１００以下が更に一層好ましく、８０以下が殊更好ましく、６０以下が特に好ましい。当該炭素数が大きいほど、オリゴヌクレオチドが長鎖となった場合でも本発明化合物の極性溶媒における結晶性が良好となる。
　一般式（ＩＩ）中のＹ－Ｚの好ましい態様は、前記一般式（Ｉ）におけるＹ－Ｚの好ましい態様と同様である。
　一般式（ＩＩ）で表される本発明化合物の好ましい態様としては、一般式（ＩＩ）中、ｍが０であり、
Ｂａｓｅが、それぞれ保護されていてもよい、シトシル基、ウラシル基、チミニル基、アデニル基、またはグアニル基であり；
Ｑが、ジ（Ｃ１－６アルコキシ）トリチル基、またはモノ（Ｃ１－６アルコキシ）トリチル基であり；
Ｘが、水素原子、ハロゲン原子、または保護されていてもよい水酸基であり；かつ
Ｌ－Ｙ－Ｚが、前記一般式（Ｉ）において好ましい態様として示された各基の組合せと同様である、
化合物である。
　上記一般式（ＩＩ）で表される本発明化合物の別の好ましい態様としては、一般式（ＩＩ）中、ｍが０であり、
Ｂａｓｅが、それぞれ保護されていてもよい、シトシル基、ウラシル基、チミニル基、アデニル基、またはグアニル基であり；
Ｑが、ジメトキシトリチル基、またはモノメトキシトリチル基であり；
Ｘが、水素原子、ハロゲン原子、または保護されていてもよい水酸基であり；かつ
Ｌ－Ｙ－Ｚが、前記一般式（Ｉ）において好ましい態様として示された各基の組合せと同様である、
化合物である。
　上記一般式（ＩＩ）で表される本発明化合物の更に別の好ましい態様としては、一般式（ＩＩ）中、ｍが０であり、
Ｂａｓｅが、それぞれ保護されていてもよい、シトシル基、ウラシル基、チミニル基、アデニル基、またはグアニル基であり；
Ｑが、ジメトキシトリチル基であり；
Ｘが、水素原子、フッ素原子、メトキシ基、アセトキシ基、またはｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリロキシ基であり；かつ
Ｌ－Ｙ－Ｚが、前記一般式（Ｉ）において好ましい態様として示された各基の組合せと同様である、
化合物である。
〔擬似固相保護基の前駆体（Ｚ－Ｙ－Ｈ）（アルコールまたはアミン）の製造方法〕
　前記擬似固相保護基の前駆体の製造方法としては、特に限定されないが、自体公知の方法（例えば、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．２００１，７４，７３３－７３８、特開２０００－４４４９３号公報、国際公開第２００６／１０４１６６号パンフレット、国際公開第２００７／０３４８１２号パンフレット、国際公開第２００７／１２２８４７号パンフレット、国際公開第２０１０／１１３９３９号パンフレット等参照）またはこれらに準ずる方法に従って原料化合物から製造することができる。
　なお、原料化合物として使用する化合物、例えば、一般式（ＩＩ）中のＺを構成するＲ５、Ｒ７に対応するハロゲン化物等は、市販品として入手可能であるか、あるいは、自体公知の方法またはこれらに準ずる方法に従って製造することができる。
　ｍが０である一般式（ＩＩ）（以下、「一般式（ＩＩａ）」と称する）で表される本発明化合物の製造方法としては、特に限定されないが、自体公知の方法またはこれらに準ずる方法（Ｒｉｃｈａｒｄ Ｔ．Ｐｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００４，３２，６２３－６３１．）に従って、上記擬似固相保護基の前駆体から製造することができる。
　なお、擬似固相保護基の前駆体（Ｚ－Ｙ－Ｈ）は、上記したとおり、自体公知の方法またはこれらに準ずる方法に従って製造することができる。また、原料化合物が反応に影響を及ぼす置換基（例えば、水酸基、アミノ基、カルボキシ基）を有する場合には、原料化合物を予め公知の方法に従い、適当な保護基で保護した後に反応を行うことが一般的である。かかる保護基は、反応後に、酸処理、アルカリ処理、接触還元等の公知の方法に従い除去することができる。
　上記一般式（ＩＩａ）のＬがスクシニル基である化合物の一般的な製造方法を以下に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
（式中の各記号は前記と同義である。）
　５’位水酸基が保護基Ｑにより保護されたヌクレオシド（ａ）を、塩基存在下、コハク酸無水物と反応させることにより、３’位水酸基にコハク酸が導入された化合物（ｂ）を得る。化合物（ｂ）を縮合剤存在下、Ｚ－Ｙ－Ｈと脱水縮合させることにより、一般式（ＩＩａ）で表される化合物を得ることができる。
　上記ヌクレオシド（ａ）から化合物（ｂ）の変換工程は、反応に不活性な溶媒中で行うのが有利である。このような溶媒としては、反応が進行する限り特に限定されないが、ジクロロメタン、１，２－ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素系溶媒、またはペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン等の脂肪族炭化水素系溶媒、またはジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、シクロペンチルメチルエーテル等のエーテル系溶媒、あるいはそれらの混合溶媒が好ましい。中でもジクロロメタン、またはクロロホルムが特に好ましい。
　塩基としては、特に限定されないが、例えば、後述するような有機塩基が挙げられ、好ましくはトリエチルアミンである。
　上記脱水縮合工程は、反応に不活性な溶媒中で行うのが有利である。このような溶媒としては、反応が進行する限り特に限定されないが、ジクロロメタン、１，２－ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素系溶媒、またはペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン等の脂肪族炭化水素系溶媒、或いはそれらの混合溶媒が好ましい。中でもジクロロメタン、クロロホルムが特に好ましい。
　化合物（ｂ）とＺ－Ｙ－Ｈとの縮合反応に使用する縮合剤としては、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、Ｎ－エチル－Ｎ’－３－ジメチルアミノプロピルカルボジイミドおよびその塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ）、ヘキサフルオロリン酸（ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ）トリピロリジノホスホニウム(ＰｙＢｏｐ)、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウム　テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－５－クロロ－１Ｈ－ベンゾトリアゾリウム－３－オキシド　ヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ）、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウム　ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）等が挙げられる。中でもＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、Ｎ－エチル－Ｎ’－３－ジメチルアミノプロピルカルボジイミドおよびその塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ）が好ましい。
　縮合剤の使用量は、化合物（ｂ）１モルに対して、１～１０モル使用することができ、好ましくは１～５モルである。また、Ｚ－Ｙ－Ｈの使用量は、化合物（ｂ）１モルに対して１～１０モル使用することができ、好ましくは１～５モルである。反応温度は、反応が進行しさえすれば特に限定されないが、－１０℃～５０℃が好ましく、０℃～３０℃がより好ましい。反応時間は、３０分～７０時間である。
　上記一般式（ＩＩａ）中のＬがスクシニル基以外の化合物についても、上記製造方法におけるコハク酸無水物に代えて、対応する酸無水物、対応するジカルボン酸ハライド、対応するジカルボン酸の活性エステル等を用いて、同様の反応を行うことにより製造することができる。
　ｍが１以上である一般式（ＩＩ）で示される化合物は、出発原料として、一般式（ＩＩａ）で示される化合物を用いて、下記の本発明の製造方法に従い、５’末端伸長プロセスを繰り返すことにより製造することができる。
〔本発明の製造方法〕
　次に、本発明にかかるオリゴヌクレオチドの製造方法（以下、「本発明の製造方法」ともいう。）について説明する。具体的には、適宜保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチドから、適宜保護されたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドへの製造方法について説明していくが、例えば、ｎ＝１の場合には、ｎ個重合オリゴヌクレオチドは、「ヌクレオシド」と解し、ｐ＝１の場合には、ｐ個重合オリゴヌクレオチドは、「ヌクレオシド」と解し、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドは、「ジヌクレオチド」と解すべきものである。
　本発明は、以下の工程（１）～（３）を含有するオリゴヌクレオチドの製造方法、である。
（１）非極性溶媒中において、３’位水酸基が擬似固相保護基で保護され、かつ５’位水酸基が酸性条件下で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）、酸、ならびにピロール誘導体およびインドール誘導体から選択される少なくとも一種のカチオン捕捉剤を反応させて５’位水酸基の一時保護基を除去した後、有機塩基により中和する工程、
（２）工程（１）の中和後の反応液に、３’位水酸基がホスホロアミダイト化され、かつ５’位水酸基が酸性条件下で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）を添加し、工程（１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドと、その５’位水酸基を介してホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、ならびに
（３）工程（２）の反応液に、酸化剤、または硫化剤を添加して、工程（２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合またはチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程。
　ｎの上限は、特に限定されるものではないが、５０以下が好ましく、３０以下がより好ましく、２０以下が更に好ましい。
　ｐの上限は、特に限定されるものではないが、５０以下が好ましく、３０以下がより好ましく、２０以下が更に好ましく、５以下が更に一層好ましく、３以下が特に好ましい。
　更に、下記工程（４）を含有させることにより、簡便かつ効果的に過剰原料や副生物を除去して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを精製することができる。
（４）工程（３）で得られた反応液に極性溶媒を添加して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを沈殿させて、固液分離により取得する工程。
　なお、本発明の工程（４）は、液相法にも、固相法にも存在し得ない、擬似固相保護基に特有の工程である。
　原料の当量管理と反応制御することによって副生物の発生量を制御できる状況であれば、工程（１）～工程（３）の基本単位として繰り返し、工程（４）を含有させることが好ましい。
　また、副生物発生を厳格に管理・制御でき、高純度のオリゴヌクレオチドに導けるという観点で、工程（１）～工程（４）を基本単位として繰り返すことが好ましい。
　本発明の製造方法には、更に、工程（５）を含有させることにより、オリゴヌクレオチドを単離・製造することができる。
（５）工程（４）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程。
　以下に、各工程について詳細に説明する。
工程（１）（脱保護工程）
　本工程は、非極性溶媒中において、３’位水酸基が擬似固相保護基で保護され、かつ５’位水酸基が酸性条件下で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｉ）（式中、ｍは、０以上の任意の整数を示し、ｍ＝０の場合は、ヌクレオシドを示す。）の５’末端水酸基の一時保護基Ｑ（Ｑは前記と同義である。）を、酸の添加により除去した後に、有機塩基の添加により中和する工程（脱保護工程）である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
（式中、ｍ個のＲ８は、酸素原子もしくは硫黄原子を示し、ｍ個のＷＧは、電子吸引性基（例えば、シアノ基）を示し、ｍ個のＸ’は、それぞれ独立してＸと同義であり、他の記号は、前記と同義である。）
　本工程は、反応に影響を及ぼさない溶媒中で行われる。当該溶媒における溶解度が高い程、優れた反応性が期待できるため、本発明の化合物の溶解度の高い非極性溶媒を選択することが好ましい。具体的には、クロロホルム、ジクロロメタン、１，２－ジクロロエタン等のハロゲン系溶媒；ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン等の芳香族系溶媒；酢酸エチル、酢酸イソプロピル等のエステル系溶媒；ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、オクタン、ノナン、シクロヘキサン等の脂肪族系溶媒；ジエチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル等の非極性エーテル系溶媒が挙げられる。これらの溶媒は２種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。また、上記非極性溶媒に、アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル系溶媒、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピペリドン等のアミド系溶媒等の極性溶媒を、ｎ個重合オリゴヌクレオチドが溶解し得る限り、適宜の割合で混合して用いてもよい。中でも、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２－ジクロロエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、ノナン、シクロヘキサン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、または、これらの組合せ等が好ましく、クロロホルム、ジクロロメタン、トルエンが特に好ましい。
　本工程におけるｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｉ）の溶媒中の濃度は、溶解していれば特に限定されないが、好ましくは１～３０重量％である。
　本脱保護工程、それに続く縮合工程、および酸化工程を液中で連続して行うためには、本工程において、ｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｉ）の５’位水酸基の一時保護基Ｑの除去反応中、または除去反応後に、カチオン捕捉剤を使用することが必須である。
　カチオン捕捉剤としては、除去された保護基Ｑによる再保護（原料戻り）や脱保護された官能基への副反応が進行しなければ、特に限定されないが、ピロール、２－メチルピロール、３－メチルピロール、２，３－ジメチルピロール、２，４－ジメチルピロール等のピロール誘導体；インドール、４－メチルインドール、５－メチルインドール、６－メチルインドール、７－メチルインドール、５，６－ジメチルインドール、６，７－ジメチルインドール等のインドール誘導体を使用することができる。良好なカチオン捕捉効果が得られるという観点で、ピロール、３－メチルピロール、２，４－ジメチルピロール、インドール、４－メチルインドール、５－メチルインドール、６－メチルインドール、７－メチルインドール、５，６－ジメチルインドール、６，７－ジメチルインドールが好ましく、ピロール、３－メチルピロール、インドールがより好ましく、ピロール、インドールが更に好ましく、ピロールが特に好ましい。
　本工程におけるカチオン捕捉剤の使用量は、ｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｉ）１モルに対し、１～５０モル使用することができ、好ましくは５～２０モルである。
　本工程に使用する酸としては、良好な脱保護が達成できさえすれば特に限定されないが、トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリクロロ酢酸、メタンスルホン酸、塩酸、酢酸、ｐ－トルエンスルホン酸等を使用することが好ましい。良好な反応を達成できるという観点で、トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリクロロ酢酸がより好ましく、トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸が更に好ましく、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸が更に一層好ましく、トリフルオロ酢酸が特に好ましい。これら酸は、上記非極性溶媒で希釈しても構わない。また、前記酸を使用する際には、特定の塩基を組み合わせて、酸性度を適宜調整して使用しても構わない。
　本工程における酸の使用量は、ｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｉ）１モルに対し、１～１００モル使用することができ、好ましくは１～４０モルである。
　本工程の反応温度は、反応が進行しさえすれば特に限定されないが、－１０℃～５０℃が好ましく、０℃～４０℃がより好ましい。反応時間は、使用するｎ個重合オリゴヌクレオチドの種類、酸の種類、溶媒の種類、反応温度等により異なるが、５分～５時間である。
　脱保護剤として使用される酸は次工程の縮合工程中に存在すると、５’位水酸基が一時保護基Ｑにより保護され、かつ３’位水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｉｉ）の保護基Ｑの脱保護を誘発するため、除去または中和処理が必要である。本発明では、反応液中で連続的に縮合工程を行うため、有機塩基により中和を行う。
　中和に使用する有機塩基としては、前出の酸を中和することができ、得られた塩が縮合剤として機能しうるものであれば特に限定されないが、反応が良好に進行するという観点で、ピリジン、２，４，６－トリメチルピリジン、ベンズイミダゾール、１，２，４－トリアゾール、Ｎ－フェニルイミダゾール、２－アミノ－４，６－ジメチルピリミジン、１，１０－フェナントロリン、イミダゾール、Ｎ－メチルイミダゾール、２－クロロベンズイミダゾール、２－ブロモベンズイミダゾール、２－メチルイミダゾール、２－フェニルベンズイミダゾール、Ｎ－フェニルベンズイミダゾール、５－ニトロベンズイミダゾールが好ましく、ピリジン、２，４，６－トリメチルピリジン、ベンズイミダゾール、１，２，４－トリアゾール、Ｎ－フェニルイミダゾール、Ｎ－メチルイミダゾール、２－アミノ－４，６－ジメチルピリミジン、１，１０－フェナントロリンがより好ましく、ピリジン、２，４，６－トリメチルピリジン、ベンズイミダゾール、１，２，４－トリアゾール、Ｎ－フェニルイミダゾールが更に好ましく、ピリジン、２，４，６－トリメチルピリジン、ベンズイミダゾール、１，２，４－トリアゾールが更に一層好ましく、ピリジン、２，４，６－トリメチルピリジン、ベンズイミダゾールが特に好ましい。
　本工程における有機塩基の使用量は、酸１モルに対し、１～１０モル使用することができ、好ましくは１～３モルである。
　本工程において、特に好ましい酸と有機塩基との組合せは、トリフルオロ酢酸とピリジン、トリフルオロ酢酸と２，４，６－トリメチルピリジンまたはトリフルオロメタンスルホン酸とベンズイミダゾールである。
工程（２）（縮合工程）
　本工程は、前記工程（１）で得られたｎ個重合オリゴヌクレオチドの５’位水酸基の脱保護体（ｉｉ）と、５’位水酸基が一時保護基Ｑにより保護され、かつ３’位水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｉｉ）（式中、ｑは、０以上の任意の整数を示し、ｑ＝０の場合は、ヌクレオシドを示す。）とを縮合させる工程である。
　５’位水酸基が一時保護基Ｑにより保護され、かつ３’位水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｉｉ）としては、ｐが１である場合（すなわち、５’位水酸基が一時保護基Ｑにより保護され、かつ３’位水酸基がホスホロアミダイト化されたヌクレオシド）が好ましい。
　ｑの上限は、特に限定されるものではないが、４９以下が好ましく、２９以下がより好ましく、１９以下が更に好ましく、４以下が更に一層好ましく、２以下が特に好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
［式中、Ｘ’は、Ｘと同義であり、Ｒ９、Ｒ１０は、それぞれ独立して、アルキル基を示すか、または隣接する窒素原子と一緒になって形成する、５または６員の飽和環状アミノ基を示す。かかる飽和環状アミノ基は、窒素原子の他に環構成原子として酸素原子または硫黄原子を１個有していてもよい。他の記号は前記と同義である。］
　本工程は、前記工程（１）で得られたｎ個重合オリゴヌクレオチドの５’位水酸基の脱保護体（ｉｉ）を単離することなく、工程（１）後の反応液に、３’位水酸基がホスホロアミダイト化され、かつ５’位水酸基が一時保護基Ｑにより保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｉｉ）を直接添加するだけで行うことができる。本縮合工程は、工程（１）の脱保護反応の際に添加した酸と、中和反応の際に添加した有機塩基が塩形成した塩（例えば、ピリジン・トリフルオロ酢酸塩）が縮合剤として作用することから、工程（１）および（２）を液中で連続して行うことは、単離操作の省略のみならず、反応効率を向上させるという利点も有する。本縮合反応の進行が遅い場合には、付加的に別途縮合剤（例えば、ピリジン・トリフルオロ酢酸塩、テトラゾール、５－ベンジルチオ－１Ｈ－テトラゾール、４，５－ジシアノイミダゾール等）を添加することにより反応効率を更に向上させることもできる。
　また、本工程においては、反応液の酸性度が高くなると、一時保護基Ｑが脱離する副反応が生じることがあるので、反応液の酸性化を抑える目的でＮ－メチルイミダゾールを添加することが好ましい。
　酸性度の調整のために添加するＮ－メチルイミダゾールの使用量は、中和の際に使用する有機塩基１モルに対し、０．１～１モル使用することができ、好ましくは０．５モルである。
　本工程に使用される、３’位水酸基がホスホロアミダイト化され、かつ５’位水酸基が一時保護基Ｑにより保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｉｉ）としては、下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
（式中の記号は、前記と同義である。）で表される基が結合したｐ個重合オリゴヌクレオチドを挙げることができる。かかるｐ個重合オリゴヌクレオチドの核酸塩基としては、前記と同義の基が挙げられる。
　本工程に使用される、３’位水酸基がホスホロアミダイト化され、かつ５’位水酸基が一時保護基Ｑにより保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｉｉ）は、５’位水酸基が一時保護基Ｑにより保護され、かつ３’位水酸基が保護されていないｐ個重合オリゴヌクレオチドに下記一般式（ｃ）、（ｄ）で表されるホスホロアミダイト化試薬を反応させる公知の方法（Ｍ．Ｈ．Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　１９８７，１５４，２８７－３１３；Ｓ．Ｌ．Ｂｅａｕｃａｇｅ　ａｎｄ　Ｍ．Ｈ．Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　１９８１，２２，１８５９－１８６２．）に従い、製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
（式（ｃ）、（ｄ）中、Ｒ１1は、ハロゲン原子を示し、他の記号は、前記と同義である。）
　本工程は、反応に影響を及ぼさない溶媒中で行われる。具体的には、前記工程（１）と同様の非極性溶媒が挙げられる。また、上記非極性溶媒に、アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル系溶媒；アセトン、２－ブタノン等のケトン系溶媒；Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン等のアミド系溶媒；１，４－ジオキサン、テトラヒドロフラン等の極性エーテル系溶媒；ジメチルスルホキシド等のスルホキシド系溶媒を、５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｉ）が溶解し得る限り、適宜の割合で混合して用いてもよい。
　この場合、極性溶媒としては、アミド系溶媒、ニトリル系溶媒、及びこれらの組合せが好ましく、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ－メチルピペリドン、及びこれらの組合せがより好ましく、アセトニトリルが特に好ましい。
　極性溶媒は、３’位水酸基がホスホロアミダイト化され、かつ５’位水酸基が一時保護基Ｑにより保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｉｉ）、縮合剤等の溶液として添加してもよい。
　３’位水酸基がホスホロアミダイト化され、かつ５’位水酸基が一時保護基Ｑにより保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｉｉ）の使用量は、工程（１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｉ）１モルに対し、１～１０モル使用することができ、好ましくは１～５モルである。
　反応温度は、反応が進行しさえすれば特に限定されないが、０℃～１００℃が好ましく、２０℃～５０℃がより好ましい。反応時間は、縮合させるｎ個重合オリゴヌクレオチドの種類、反応温度等によって異なるが、５分～２４時間である。
工程（３）（酸化工程、または硫化工程）
　工程（２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｖ）に酸化剤または硫化剤を反応させることにより、該ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｖ）のホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合またはチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
（式中の記号は、前記と同義である。）
　本工程は、工程（２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｖ）を単離することなく、工程（２）後の反応液に、酸化剤または硫化剤を、直接添加するだけで行うことができる。
　本工程に使用する「酸化剤」としては、他の部位を酸化することなく、ホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合に酸化する能力がありさえすれば、特に限定されないが、ヨウ素、（１Ｓ）－（＋）－（１０－カンファニルスルフォニル）オキサジリジン、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ）、２－ブタノンペルオキシド、１，１－ジヒドロペルオキシシクロドデカン、ビス（トリメチルシリル）ペルオキシド、ｍ－クロロ過安息香酸を使用することが好ましい。良好な酸化反応が達成できるという観点で、ヨウ素、（１Ｓ）－（＋）－（１０－カンファニルスルフォニル）オキサジリジン、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド、２－ブタノンペルオキシド、１，１－ジヒドロペルオキシシクロドデカンがより好ましく、ヨウ素、（１Ｓ）－（＋）－（１０－カンファニルスルフォニル）オキサジリジン、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド、２－ブタノンペルオキシドが更に好ましく、ヨウ素、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシドが更に一層好ましく、ヨウ素が特に好ましい。かかる酸化剤は、０．０５～２Ｍの濃度になるように適当な溶媒で希釈して使用することができる。かかる希釈溶媒としては、反応に不活性な溶媒であれば特に限定されないが、ピリジン、ＴＨＦ、ジクロロメタン、水、またはこれら任意の混合溶媒を挙げることができる。中でも、例えば、ヨウ素／水／ピリジン―ＴＨＦあるいはヨウ素／ピリジン―酢酸、過酸化剤（ＴＢＨＰ）／ジクロロメタンまたはｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド／ノナンを用いるのが好ましい。
　本工程に使用する「硫化剤」としては、ホスファイトトリエステル結合を、チオホスフェートトリエステル結合に変換しうる能力がありさえすれば、特に限定されないが、３－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン（ＤＤＴＴ）、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン－１，１－ジオキシド（Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬）、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン、フェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ）、テトラエチルチウラムジスルフィド（ＴＥＴＤ）、３－アミノ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン（ＡＤＴＴ）、硫黄を使用することが好ましい。良好な反応が進行しうるという観点で、３－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン（ＤＤＴＴ）、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン－１，１－ジオキシド（Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬）、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン、フェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ）がより好ましく、３－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン－１，１－ジオキシドが更に好ましく、３－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオンが特に好ましい。かかる硫化剤は、０．０５～２Ｍの濃度になるように適当な溶媒で希釈して使用することができる。かかる希釈溶媒としては、反応に不活性な溶媒であれば特に限定されないが、例えば、ジクロロメタン、アセトニトリル、ピリジン又はこれら任意の混合溶媒が挙げられる。
　酸化剤または硫化剤の使用量は、工程（２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｖ）１モルに対し、１～５０モル使用することができ、好ましくは１～５モルである。
　反応温度は、反応が進行しさえすれば特に限定されないが、０℃～１００℃が好ましく、２０℃～５０℃がより好ましい。反応時間は、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｉｖ）の種類、使用する酸化剤または硫化剤の種類、反応温度等によって異なるが、１分～３時間である。
工程（４）（沈殿化および固液分離工程）
　本工程は、工程（３）で得られたホスフェートトリエステル結合またはチオホスフェートトリエステル結合を有するｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｖ）を含む反応液に極性溶媒を添加することにより該ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｖ）を沈殿させて、固液分離により取得する工程である。
　本工程における目的物ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｖ）を沈殿させるための極性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール系溶媒；アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル系溶媒；アセトン、２－ブタノン等のケトン系溶媒；１，４－ジオキサン、テトラヒドロフラン等の極性エーテル系溶媒；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピペリドン等のアミド系溶媒、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド系溶媒；水等、ならびにこれら２種以上の混合溶媒が挙げられる。中でも、アルコール系溶媒、ニトリル系溶媒が好ましく、メタノールまたはアセトニトリルがより好適に使用される。本発明における極性溶媒としては、特に実用的観点からメタノールが好ましい。
　極性溶媒は、目的物の極性溶媒中へのロスを最小限とするために水を含んでいてもよい。特に、極性溶媒としてアセトニトリルを用いた場合には、目的物が極性溶媒へ溶解してロスが増加する傾向にあり、僅かに水を含むアセトニトリルを用いることでそのロスを最小限にすることができる。
　この場合、極性溶媒中の水の含量は、１～１０％（ｖ／ｖ）が好ましく、３～８％（ｖ／ｖ）がより好ましい。水含量が低すぎる場合は、目的物の極性溶媒中へのロスが増える場合があり、水含量が高すぎる場合は、過剰のモノマー等不要物の極性溶媒中への除去が不十分となる傾向がある。
　酸化剤としてヨウ素を使用した場合の沈殿化の際には、沈殿化溶媒であるメタノールにチオ硫酸ナトリウム（ハイポ）を飽和させた溶液を使用することにより、ヨウ素による着色を除去することができ、５’位水酸基が保護されたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｖ）を純度良く単離することが可能である。
　硫化剤を使用した場合の沈殿化の際には、沈殿化溶媒であるメタノールに３価のリン試薬（例えば、トリメチルホスファイト、トリエチルホスファイト、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン等）、ハイポ等の還元剤を飽和させた溶液を使用することにより、５’位水酸基が保護されたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｖ）を純度良く単離することが可能である。
　本発明のオリゴヌクレオチドの製造方法は、上記工程（１）～（４）を所望の回数繰返すことで高純度かつ高収率で目的のオリゴヌクレオチドを得ることができる。
工程（５）（脱保護・オリゴヌクレオチド単離工程）
　本発明のオリゴヌクレオチドの製造方法においては、工程（４）の後に、保護基の種類・性質に応じて、脱保護を行い、オリゴヌクレオチドを単離することができる。脱保護の方法としては、例えば、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（ＰＲＯＴＥＣＴＩＶＥ　ＧＲＯＵＰＳ　ＩＮ　ＯＲＧＡＮＩＣ　ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ）、第３版、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ（ＪＯＨＮ　ＷＩＬＬＹ＆ＳＯＮＳ）出版（１９９９年）等に記載されている脱保護方法に従い、オリゴヌクレオチドの全ての保護基を除去する工程を行うことができる。具体的には、本願発明における擬似固相保護基、ならびに核酸塩基の保護基であるフェノキシアセチル基、アセチル基等、リン酸骨格を保護しているシアノエチル基等は、アンモニア水、アンモニア水／エタノール溶液、またはアンモニア水とメチルアミン水溶液の混合液で処理することにより、全て除去することができる。また、ヌクレオチド５’水酸基の保護基は、工程（１）で使用される酸またはそれらを適宜希釈した溶液で処理することにより除去することができる。
　保護基を有しない、オリゴヌクレオチドは酵素により容易に分解されやすいため、空気清浄度管理下でオリゴヌクレオチドを単離することが好ましい。
　上記各工程における反応の進行の確認は、いずれも一般的な液相有機合成反応と同様の方法を適用できる。すなわち、薄層シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を用いて反応を追跡することができる。
　工程（４）、あるいは工程（５）より得られたオリゴヌクレオチドは、更に有機合成反応を施すことにより、所望のオリゴヌクレオチド誘導体へと導くこともできる。
　本発明によって製造されたオリゴヌクレオチドは、各種人体用または動物用の医薬品（ＲＮＡ、ＤＮＡ、オリゴ核酸医薬、等）、機能性食品、特定保健食品、食品、化成品、生体用や工業用の高分子材料、等の各種用途に使用することができる。
　以下、実施例に沿って本発明を更に詳細に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を何ら限定するものではない。また、本発明において使用する試薬や装置、材料は特に言及されない限り、商業的に入手可能である。また、本明細書において、略号で表示する場合、各表示は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅによる略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものである。
参考例１：３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルアミンの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
（１）３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルクロリドの合成
　アルゴン雰囲気下、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルアルコール（１０．０ｇ，１１．０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解させ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（８４．０μＬ，１．１０ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（１．２０ｍＬ，１６．４ｍｍｏｌ）を加えて３０℃で９０分間攪拌した。反応終了後の反応液を減圧濃縮し、アセトニトリルを添加することで析出した固体を濾過した。得られた固体を減圧乾燥し、表題の化合物（１０．０ｇ，９８．２％）を白色固体として得た。
（２）３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルアジドの合成
　３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルクロリド（４．０２ｇ，４．３１ｍｍｏｌ）をクロロホルム（４０ｍＬ）とＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１２０ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、アジ化ナトリウム（４１８ｍｇ，６．４２ｍｍｏｌ）を加えて８０℃で３時間攪拌した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、精製水（１５０ｍＬ）で洗浄後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後に濾過し、減圧濃縮した濾液にメタノールを添加することで析出した固体を濾過した。得られた固体を減圧乾燥させて表題の化合物（３．９２ｇ，９７．４％）を白色固体として得た。
（３）３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルアミンの合成
　アルゴン雰囲気下、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルアジド（３．００ｇ，３．２１ｍｍｏｌ）を脱水テトラヒドロフラン（３５ｍＬ）に溶解させ、氷冷下、水素化リチウムアルミニウム（１６２ｍｇ，４．３０ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で２時間攪拌した。反応終了後の反応液に精製水（２ｍＬ）と４．０ｍｏｌ／Ｌ　水酸化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を滴下して未反応の水素化リチウムアルミニウムを分解させた後、反応液をセライト濾過した。濾液を減圧濃縮後、アセトニトリルを添加することで析出した固体を濾過し、減圧乾燥させて表題の化合物（３．０９ｇ）を白色固体として定量的に得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８０（ジクロロメタン：ヘキサン＝１：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ，－ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），１．２７－１．４６（ｍ，９６Ｈ，－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），１．７０－１．８２（ｍ，６Ｈ，－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），３．７６（ｓ，２Ｈ，Ｈ２Ｎ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），３．９２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），３．９７（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），６．５０（ｓ，２Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ）
参考例２：３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアルコールの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
（１）メチル［３，５－ビス（ドコシルオキシ）］ベンゾエートの合成
　炭酸カリウム（１９．９ｇ，１４４ｍｍｏｌ）を、脱水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）中に懸濁させ、１－ブロモドコサン（１５．６ｇ，４６．７ｍｍｏｌ）、メチル（３，５－ジヒドロキシ）ベンゾエート（３．６０ｇ，２１．４ｍｍｏｌ）を加えて９０℃で終夜攪拌した。反応終了後、反応液を精製水（８００ｍＬ）中に注ぎ込み１時間攪拌した後、析出した固体を濾過した。得られた固体をジクロロメタン（８００ｍＬ）に再度溶解させて不溶物を濾過し、濾液を減圧濃縮後、アセトンを加えて再度固体を析出させた。濾過して得られた固体をメタノール中でスラリー洗浄し、濾過後に得られた固体を減圧乾燥させて表題の化合物（１３．９ｇ，９６．５％）を白色固体として得た。
（２）３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアルコールの合成
　アルゴン雰囲気下、メチル［３，５－ビス（ドコシルオキシ）］ベンゾエート（２．０３ｇ，２．５９ｍｍｏｌ）を脱水テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）に溶解させ、氷冷下、水素化リチウムアルミニウム（１４８ｍｇ，３．９３ｍｍｏｌ）を加えて４０℃で１時間攪拌した。酢酸エチルを滴下して未反応の水素化リチウムアルミニウムを分解させた後、ジエチルエーテルを加えて、塩酸水で洗浄した。有機層を減圧濃縮し、濃縮液にメタノールを添加することで析出した固体を濾過した。得られた固体を減圧乾燥させて表題の化合物（１．７３ｇ，８８．０％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８０（酢酸エチル：ヘキサン＝１：４）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．２５－１．８０（ｍ，８４Ｈ，－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），３．９３（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），４．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＨＯ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），６．３８（ｓ，１Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ），６．５０（ｓ，２Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ）
参考例３：３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアミンの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
　３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアルコールから参考例１の方法に従って表題の化合物を合成した。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５０（ジクロロメタン：ヘキサン＝１：４）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．２５－１．７９（ｍ，８４Ｈ，－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），３．７９（ｓ，２Ｈ，Ｈ２Ｎ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），３．９３（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），６．３４（ｓ，１Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ），６．４４（ｓ，２Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ）
参考例４：２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアルコールの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
（１）２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンズアルデヒドの合成
　アルゴン雰囲気下、２，４－ジヒドロキシベンズアルデヒド（３．００ｇ，２１．７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（３０．０ｇ，２１７ｍｍｏｌ）、１－ブロモドコサン（１７．３ｇ，４４．５ｍｍｏｌ）を脱水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１５０ｍＬ）中に加え、７０℃で終夜攪拌した。反応終了後の反応液を精製水（１Ｌ）中に注ぎ込み、１時間攪拌を行った後、析出した固体を濾過した。得られた固体をメタノール中でスラリー洗浄し、濾過して得られた固体を減圧乾燥させて表題の化合物（１６．３ｇ，９９．３％）を白色固体として得た。
（２）２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアルコールの合成
　アルゴン雰囲気下、２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンズアルデヒド（２．９９ｇ，３．９６ｍｍｏｌ）を脱水テトラヒドロフラン（６０ｍＬ）とメタノール（６．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、水素化ホウ素ナトリウム（３７５ｍｇ，９．９１ｍｍｏｌ）を加えて４０℃で２時間攪拌した。反応終了後、精製水（２．０ｍＬ）を滴下して未反応の水素化ホウ素ナトリウムを分解させた後、セライト濾過した。濾液を減圧濃縮し、メタノールを添加することで析出した固体を濾過した。得られた固体を減圧乾燥させて表題の化合物（２．７７ｇ，９２．９％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８０（酢酸エチル：ヘキサン＝１：４）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．２５－１．８０（ｍ，８４Ｈ，－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），２．２３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＨＯ－ｂｅｎｚｙｌ），３．９４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），３．９８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），４．６１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＨＯ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），６．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，－ｂｅｎｚｙｌ），６．４５（ｓ，１Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ），７．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，－ｂｅｎｚｙｌ）
参考例５：２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアミンの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
　２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアルコールから参考例１の方法に従って表題の化合物を合成した。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４０（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．２５－１．８１（ｍ，８４Ｈ，－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），３．７５（ｓ，２Ｈ，Ｈ２Ｎ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），３．９１－３．９７（ｍ，４Ｈ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），６．３９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，－ｂｅｎｚｙｌ），６．４４（ｓ，１Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ），７．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，－ｂｅｎｚｙｌ）
参考例６：２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリルアミンの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
（１）２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンゾフェノンの合成
　アルゴン雰囲気下、２，３，４－トリヒドロキシベンゾフェノン（１．６１ｇ，７．００ｍｍｏｌ）、１－ブロモオクタデカン（７．３２ｇ，２２．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（４．３５ｇ，３１．５ｍｍｏｌ）を脱水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中に加え、８０℃で終夜攪拌した。反応終了後、反応液に精製水（２００ｍＬ）を添加し、１時間攪拌した後に、析出した固体を濾過した。得られた固体をメタノール中でスラリー洗浄し、濾過後に減圧乾燥させて表題の化合物（６．３１ｇ，９１．１％）を白色固体として得た。
（２）２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリルアルコールの合成
　２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンゾフェノン（３．００ｇ，３．０４ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（３０ｍＬ）とメタノール（１０ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、水素化ホウ素ナトリウム（３６０ｍｇ，９．５１ｍｍｏｌ）を添加し、４５℃で２時間攪拌した。反応終了後、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸水を滴下することで未反応の水素化ホウ素ナトリウムを分解させた後、１．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後に濾過し、濾液を減圧濃縮した。濃縮液にメタノールを添加することで析出した固体を濾過後に減圧乾燥させて表題の化合物（２．９８ｇ，９９．０％）を白色固体として得た。
（３）Ｎ－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリルアミンの合成
　アルゴン雰囲気下、２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリルアルコール（２．４４ｇ，２．４６ｍｍｏｌ）、９－フルオレニルメチルカーバメート（１．０６ｇ，４．４１ｍｍｏｌ）を脱水トルエン（４０ｍＬ）中に５０℃で溶解させた後、メタンスルホン酸（５１．４μＬ，７４０μｍｏｌ）を加えて１００℃で終夜攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、メタノールを添加することで析出した固体を濾過した。得られた固体を減圧乾燥させて表題の化合物（３．３７ｇ，９８．１％）を白色固体として得た。
（４）２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリルアミンの合成
　Ｎ－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリルアミン（３．３７ｇ，２．８９ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（３０ｍＬ）とアセトニトリル（１５ｍＬ）の混合溶媒に溶解させた後、２０％ピペリジン［１－メチル－２－ピロリドン溶液］（２８．６ｍＬ，５７．９ｍｍｏｌ）を添加し、室温で３０分間攪拌した。反応終了後の反応液を減圧濃縮し、メタノールを添加することで析出した固体を濾過した。得られた固体を減圧乾燥することで表題の化合物（２．８０ｇ，９７．９％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６０（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），１．２６－１．８１（ｍ，１０２Ｈ，－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），３．７７－３．８６（ｍ，２Ｈ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），３．９１－３．９５（ｍ，４Ｈ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），５．４０（ｓ，１Ｈ，Ｈ２Ｎ－ＣＨ－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），７．２０－７．３７（ｍ，５Ｈ，－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ）
参考例７：３，４，５－トリス［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアルコールの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
（１）メチル｛３，４，５－トリス［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］｝ベンゾエートの合成
　アルゴン雰囲気下、没食子酸メチル（１８２ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルクロリド（２．８１ｇ，３．０１ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．３９ｇ，１０．１ｍｍｏｌ）を脱水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中に加え、７０℃で終夜攪拌した。反応液を室温まで冷却させた後、精製水（５０ｍＬ）を添加することで析出した固体を濾過した。得られた固体をアセトニトリル中でスラリー洗浄後に濾過し、得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン－ヘキサン）で精製し、表題の化合物（２．３１ｇ，８０．５％）を白色固体として得た。
（２）３，４，５－トリス［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアルコールの合成
　メチル｛３，４，５－トリス［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］｝ベンゾエート（１．０１ｇ，３５０μｍｏｌ）を脱水シクロペンチルメチルエーテル（２０ｍＬ）に溶解させ、氷冷下、水素化リチウムアルミニウム（３１．８ｍｇ，８４０μｍｏｌ）を加えて室温で２時間攪拌した。反応終了後、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸水を滴下することで未反応の水素化リチウムアルミニウムを分解させた後、１．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後に濾過した。得られた濾液を減圧濃縮後、メタノールを添加することで析出した固体を濾過後に減圧乾燥させて表題の化合物（９４０ｍｇ，９４．６％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８０（ジクロロメタン：ヘキサン＝２：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，２７Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），１．２６－１．７５（ｍ，３０６Ｈ，－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），３．７７（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），３．８７（ｔ，１０Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），３．９２（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），４．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＨＯ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），４．９７（ｓ，２Ｈ，ＨＯ－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ＣＨ ２ －ｐｈｅｎｙｌ），５．０１（ｓ，４Ｈ，ＨＯ－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ＣＨ ２ －ｐｈｅｎｙｌ），６．６１（ｓ，４Ｈ，ＨＯ－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ｂｅｎｚｙｌ），６．６３（ｓ，２Ｈ，ＨＯ－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ｂｅｎｚｙｌ），６．６６（ｓ，２Ｈ，ＨＯ－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ｂｅｎｚｙｌ）．
参考例８：４，４’－ビス（ドコシルオキシ）ベンズヒドロールの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
（１）４，４’－ジドコシルオキシ－ベンゾフェノンの合成
　４，４’－ジヒドロキシ－ベンゾフェノン（８．２ｇ，３８．３ｍｍｏｌ）、１－ブロモドコサン（３１．３ｇ，８０．４ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（３００ｍＬ）、炭酸カリウム（１５．９ｇ，１１５ｍｍｏｌ）を加え８０℃で６．５時間攪拌した。モノアルキル化体の消失を確認した後反応液を氷冷し、攪拌がしっかりとされている状態で１Ｎ塩酸（３００ｍＬ）と水（１５０ｍＬ）をゆっくりと加えた。スラリーをろ過し、得られた結晶を水およびメタノールで洗浄し表題の化合物（２８．３ｇ，３４．１ｍｍｏｌ，８９％）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３／３００ＭＨｚ）δ＝０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＯＣ２２Ｈ４５　Ｃ２２－Ｈ），１．１－１．６（７６Ｈ，ｂｒ，ＯＣ２２Ｈ４５　Ｃ３－２１－Ｈ），１．８１（４Ｈ，ｍ，ＯＣ２２Ｈ４５Ｃ２－Ｈ），２．０４（１Ｈ，ｓ，－ＯＨ），４．０３（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＯＣ２２Ｈ４５Ｃ１－Ｈ），６．９４（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，Ｐｈ　Ｃ３，３’，５，５’－Ｈ），７．７７（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｐｈ　Ｃ２，２’，６，６’－Ｈ）
（２）４，４’－ビス（ドコシルオキシ）ベンズヒドロールの合成
　４，４’－ジドコシルオキシ－ベンゾフェノン（２８．３ｇ，３４．１ｍｍｏｌ）にＴＨＦ（３００ｍＬ），メタノール（１５ｍＬ）を加え６０℃に加熱した。水素化ホウ素ナトリウム（６．１０ｇ，１６１ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、その温度のまま４時間攪拌した後反応液を氷冷し、１Ｎ塩酸（８０ｍＬ）を滴下した。ＴＨＦを留去し、水（４５０ｍＬ）を加えた後１Ｎ塩酸をｐＨが５～７になるまで加えスラリーをろ過し、得られた結晶を水およびメタノールで洗浄して、表題の化合物（２８．５ｇ，３４．１ｍｍｏｌ，９９％）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３／３００ＭＨｚ）δ０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＯＣ２２Ｈ４５　Ｃ２２－Ｈ），１．１－１．６（７６Ｈ，ｂｒ，ＯＣ２２Ｈ４５　Ｃ３－２１－Ｈ），１．７３（４Ｈ，ｍ，ＯＣ２２Ｈ４５Ｃ２－Ｈ），２．０４（１Ｈ，ｓ，－ＯＨ），３．９３（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＯＣ２２Ｈ４５　Ｃ１－Ｈ），５．７６（１Ｈ，ｓ，ＨＯ－ＣＨＰｈ２），６．８５（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｐｈ　Ｃ３，３’，５，５’－Ｈ），７．２５（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｐｈ　Ｃ２，２’，６，６’－Ｈ）
参考例９：４，４’－ビス（ドコシルオキシ）ベンズヒドリルアミンの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
（１）Ｎ－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－ビス（４－ドコシルオキシフェニル）メチルアミンの合成
　４，４’－ビス（ドコシルオキシ）ベンズヒドロール（７１３ｍｇ，８５６μｍｏｌ）にトルエン（１５ｍｌ）、９－フルオレニルメチルカーバメート（２４６ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）、メタンスルホン酸（８．３μｌ，１２８μｍｏｌ）を加え、１００℃で３時間攪拌した。４，４’－ビス（ドコシルオキシ）ベンズヒドロールの消失を確認した後、室温に戻した後、２．５％重曹水（１０ｍｌ）を加えて攪拌した。分層して有機層を水（１０ｍｌ×２）でさらに洗浄した。有機層を減圧留去し、残渣をメタノール（１０ｍｌ）で洗浄して、表題の化合物（５４０ｍｇ，５１２μｍｏｌ，収率６０％）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ　（ＣＤＣｌ３／３００ＭＨｚ）δ０．８８（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６，Ｃ２１Ｈ４２－ＣＨ ３ ），１．１０－１．５０（８２Ｈ，ｂｒ，Ａｌｋｙｌ－Ｈ），１．７７（４Ｈ，ｍ，－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ ２ －Ｃ２０Ｈ４１），３．９３（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６，－Ｏ－ＣＨ ２ －Ｃ２１Ｈ４３），４．２１（１Ｈ，ｂｒ，ｓ，ｆｌｕｏｒｅｎｅ　Ｃ９－Ｈ），４．４３（２Ｈ，ｂｒ，ｄ，Ｊ＝６．６，ｆｌｕｏｒｅｎｅ－ＣＨ ２ －Ｏ），５．２３（１Ｈ，ｂｒ，ｓ，Ｆｍｏｃ－ＮＨ－　ｏｒ　Ｆｍｏｃ－ＮＨ－ＣＨ），５．８５（１Ｈ，ｂｒ，ｓ，Ｆｍｏｃ－ＮＨ－　ｏｒ　Ｆｍｏｃ－ＮＨ－ＣＨ），６．８４（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７，Ｐｈ　Ｃ３，５－Ｈ），７．１１（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７，Ｐｈ　Ｃ２，６－Ｈ），７．２５－７．３５（２Ｈ，ｂｒ，ｍ，ｆｌｕｏｒｅｎｅ　Ｃ２，７－Ｈ），７．３９（２Ｈ，ｂｒ，ｔ，Ｊ＝６．９，ｆｌｕｏｒｅｎｅ　Ｃ３，６－Ｈ），７．５９（２Ｈ，ｂｒ，ｓ，ｆｌｕｏｒｅｎｅ　Ｃ１，８－Ｈ），７．７５（２Ｈ，ｂｒ，ｄ，Ｊ＝６．６，ｆｌｕｏｒｅｎｅ　Ｃ４，５－Ｈ）
（２）４，４’－ビス（ドコシルオキシ）ベンズヒドリルアミンの合成
　ジクロロメタン（１０ｍｌ）にＤＢＵ（１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－７－ウンデセン，２００μｌ）を加え、そこに、参考例９（１）で得られた化合物（５００ｍｇ，４７４μｍｏｌ）を加え室温で５時間攪拌した。１Ｎ塩酸（１．３ｍｌ）を滴下し、攪拌した後、溶媒を留去し残渣をアセトニトリル（１０ｍｌ）で洗浄して、表題の化合物（３４０ｍｇ，４０８μｍｏｌ，収率８６％）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３／３００ＭＨｚ）δ０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＯＣ２２Ｈ４５　Ｃ２２－Ｈ），１．１－１．６（７８Ｈ，ｂｒ，ＯＣ２２Ｈ４５Ｃ３－２１－Ｈ，－ＮＨ ２ ），１．７５（４Ｈ，ｍ，ＯＣ２２Ｈ４５Ｃ２－Ｈ），３．９２（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＯＣ２２Ｈ４５　Ｃ１－Ｈ），５．１２（１Ｈ，ｓ，Ｈ２Ｎ－ＣＨＰｈ２），６．８３（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｐｈ　Ｃ３，３’，５，５’－Ｈ），７．２４（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｐｈ　Ｃ２，２’，６，６’－Ｈ）
実施例１（ヌクレオシドの合成）：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
（１）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートの合成
　アルゴン雰囲気下、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン（５．００ｇ，９．１８ｍｍｏｌ）、コハク酸無水物（１．３８ｇ，１３．８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３．８５ｍＬ，２７．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（９５ｍＬ）に溶解して室温で８時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで反応の完結を確認した後、２．０Ｍ　リン酸－トリエチルアミン　バッファー（ｐＨ　７．５０）で３回分液洗浄した後、有機層を減圧留去し、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートのトリエチルアミン塩（７．０２ｇ，９８％）を無色の泡状固体として得た。
（２）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
　３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルアルコール（３．０６ｇ，３．３５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３５ｍＬ）に溶解し、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートのトリエチルアミン塩（３．００ｇ，４．０２ｍｍｏｌ）、２－（１Ｈベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオホスフェート［ＨＢＴＵ］（１．９８ｇ，５．２３ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（９２５μＬ，５．２３ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（６３９ｍｇ，５．２３ｍｍｏｌ）を加えて攪拌し、薄層クロマトグラフィーにて反応の完結を確認した後、メタノールを加えて濃縮し、吸引濾過し５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）］ベンジルスクシネート（４．７７ｇ，収率９３％）を白色固体として得た。
Ｒｆ＝０．７８（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，１０：１）．
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ＝０．８８（ｔ，９Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ３ ），１．２９（ｂｒ，ｓ，９０Ｈ，（ＣＨ ２ ）１５），１．３６（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ ），１．７７（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ２ＣＨ ２ ），２．４５（ｍ，２Ｈ，２’－Ｈ），２，６７（ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ ），３．４８（ｍ，２Ｈ，５’－Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ，ＤＭＴｒ－ＯＣＨ ３ ），３．９５（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ ２ ），４．１２（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ２ －ｓｕｃｃｉｎｙｌ），５．５０（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），６．４２（ｔ，１Ｈ，１’－Ｈ），６．５３（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８４－７．２６（ｍ，１３Ｈ，ＤＭＴｒ－Ａｒ－Ｈ），７．６０（ｓ，１Ｈ，Ｎ６－Ｈ）．
実施例２（ジヌクレオチドの液中連続合成１）：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
　アルゴン雰囲気下、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（５１１ｍｇ，３３２μｍｏｌ）をジクロロメタン（５．１１ｍＬ）に溶解し、ピロール（２３０μＬ，３．３２ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（２９６μＬ，３．９８ｍｍｏｌ）を加えて室温で１５分間攪拌し、反応の完結は薄層クロマトグラフィーにより確認した。反応混合液をピリジン（３２２μＬ，３．９８ｍｍｏｌ）で中和した後、Ｎ－メチルイミダゾール（１５８μＬ，１．９９ｍｍｏｌ）、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト（４９４ｍｇ，６６４μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液を加え、室温で６０分間攪拌し、薄層クロマトグラフィーにより反応の完結を確認した。更に、０．２Ｍ　ヨウ素　ピリジン／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ溶液（３．３２ｍＬ）を加えて室温で１０分間攪拌した。チオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を反応容器に投入し、０℃で１０分間攪拌した後、キリヤマ漏斗を用いた吸引濾過後、乾燥して５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル　デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（５９７ｍｇ，９９．２％）を白色固体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ＝０．８８（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝７．０４Ｈｚ，Ａｒ－ＣＨ ３ ），１．２６（ｂｒ，ｓ，９０Ｈ，（ＣＨ ２ ）１５），１．３０（ｓ，３Ｈ，Ｎ１ ５－ＣＨ ３ ），１．４０（ｓ，３Ｈ，Ｎ２ ５－ＣＨ ３ ），１．７７（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ２ＣＨ ２ ），２．３０（ｍ，２Ｈ，２’１－Ｈ），２．４０（ｍ，２Ｈ，２’２－Ｈ），２．６８（ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ ），２．７５（ｍ，２Ｈ，５’１－Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ，５’２－Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ，ＤＭＴｒ－ＯＣＨ ３ ），３．９４（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ ２ ），４．１１（ｍ，１Ｈ，４’１－Ｈ），４．２５（ｍ，４Ｈ，ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２　ａｎｄ　ｍ，１Ｈ，４’２－Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ２ －ｓｕｃｃｉｎｙｌ），５．１８（ｍ，１Ｈ，３’２－Ｈ），５．２７（ｍ，１Ｈ，３’１－Ｈ），６．２４（ｍ，１Ｈ、１’１－Ｈ），６．４２（ｍ，１Ｈ、１’２－Ｈ），６．５３（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８３－７．３８（ｍ，１３Ｈ，ＤＭＴｒ－Ａｒ－Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ，Ｎ６－Ｈ），７．５３（ｍ，１Ｈ，Ｎ６－Ｈ）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ＝０．８８（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝７．０４ＨＺ，Ａｒ－ＣＨ ３ ），１．２６（ｂｒ，ｓ，９０Ｈ，（ＣＨ ２ ）１５），１．３０（ｓ，３Ｈ，Ｎ１ ５－ＣＨ ３ ），１．４０（ｓ，３Ｈ，Ｎ２ ５－ＣＨ ３ ），１．７７（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ２ＣＨ ２ ），２．３０（ｍ，２Ｈ，２’１－Ｈ），２．６８（ｍ，２Ｈ，２’２－Ｈ　ａｎｄ　ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ ），２．７５（ｍ，２Ｈ，５’１－Ｈ），３．５３（ｍ，２Ｈ，５’２－Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ，ＤＭＴｒ－ＯＣＨ ３ ），３．９４（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ ２ ），４．１１（ｍ，１Ｈ，４’１－Ｈ），４．２５（ｍ，４Ｈ，ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ 　ａｎｄ　ｍ，１Ｈ，４’２－Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ２ －ｓｕｃｃｉｎｙｌ），５．１８（ｍ，１Ｈ，３’２－Ｈ），５．３１（ｍ，１Ｈ，３’１－Ｈ），６．２４（ｍ，１Ｈ、１’１－Ｈ），６．４２（ｍ，１Ｈ，１’２－Ｈ），６．５３（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８３－７．３８（ｍ，１３Ｈ，ＤＭＴｒ－Ａｒ－Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ，Ｎ１ ６－Ｈ），７．５３（ｍ，１Ｈ，Ｎ２ ６－Ｈ）
実施例３（ホスホロチオエート２量体の液中連続合成）：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホロチオニル　デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
　アルゴン雰囲気下、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（２００ｍｇ，１３０μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．００ｍＬ）に溶解し、ピロール（８９．８μＬ，１．３０ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（１１６μＬ，１．５６ｍｍｏｌ）を加えて室温で１５分間攪拌し、反応の完結を薄層クロマトグラフィーにより確認した。反応混合液をピリジン（１２６μＬ，１．５６ｍｍｏｌ）で中和した後、Ｎ－メチルイミダゾール（６１．８μＬ，０．７７９ｍｍｏｌ）、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト（１９４ｍｇ，２６０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液を加え、室温で６０分間攪拌し、薄層クロマトグラフィーにより反応の完結を確認した。更に、０．０５Ｍ　３－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン　ピリジン／アセトニトリル溶液（７．７９ｍＬ）を加えて室温で３０分間攪拌した。チオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を反応容器に投入し、キリヤマ漏斗を用いた吸引濾過後、乾燥して５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホロチオニル　デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（２４７ｍｇ，９９．５％）を白色固体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ＝０．８８（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ａｒ－ＣＨ ３ ），１．２８（ｂｒ，ｓ，９０Ｈ，（ＣＨ ２ ）１５），１．３０（ｓ，３Ｈ，Ｎ１ ５－ＣＨ ３ ），１．４６（ｓ，３Ｈ，Ｎ２ ５－ＣＨ ３ ），１．７３（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ２ＣＨ ２ ），２．２８（ｍ，２Ｈ，２’１－Ｈ），２．４１（ｍ，２Ｈ，２’２－Ｈ），２．６８（ｍ，２Ｈ，５’１－Ｈ　ａｎｄ　ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ ），３．４４（ｍ，２Ｈ，５’２－Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ，ＤＭＴｒ－ＯＣＨ ３ ），３．９５（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ ２ ），４．１０（ｍ，１Ｈ，４’１－Ｈ），４．３１（ｍ，４Ｈ，ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ 　ａｎｄ　ｍ，１Ｈ，４’２－Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ２ －ｓｕｃｃｉｎｙｌ），５．２６（ｍ，１Ｈ，３’１－Ｈ），５．３２（ｍ，１Ｈ，３’２－Ｈ），６．２７（ｍ，１Ｈ、１’１－Ｈ），６．３８（ｍ，１Ｈ、１’２－Ｈ），６．５３（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８４－７．２９（ｍ，１３Ｈ，ＤＭＴｒ－Ａｒ－Ｈ），７．２９（ｍ，１Ｈ，Ｎ１ ６－Ｈ），７．５６（ｍ，１Ｈ，Ｎ２ ６－Ｈ）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ＝０．８８（ｔ，９Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ３ ），１．２８（ｂｒ，ｓ，９０Ｈ，（ＣＨ ２ ）１５），１．３０（ｓ，３Ｈ，Ｎ１ ５－ＣＨ ３ ），１．４６（ｓ，３Ｈ，Ｎ２ ５－ＣＨ ３ ），１．７３（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ２ＣＨ ２ ），２．４１（ｍ，２Ｈ，２’２－Ｈ），２．６８（ｍ，２Ｈ，２’１－Ｈ　ａｎｄ　ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ ），２．７７（ｍ，２Ｈ，５’１－Ｈ），３．４４（ｍ，２Ｈ，５’２－Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ，ＤＭＴｒ－ＯＣＨ ３ ），３．９５（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ ２ ），４．１７（ｍ，１Ｈ，４’１－Ｈ），４．３１（ｍ，４Ｈ，ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ 　ａｎｄ　ｍ，１Ｈ，４’２－Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ２ －ｓｕｃｃｉｎｙｌ），５．３３（ｍ，１Ｈ，３’１－Ｈ　ａｎｄ　ｍ，１Ｈ，３’２－Ｈ），６．２７（ｍ，１Ｈ、１’１－Ｈ），６．３８（ｍ，１Ｈ、１’２－Ｈ），６．５３（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８４－７．２９（ｍ，１３Ｈ，ＤＭＴｒ－Ａｒ－Ｈ），７．２９（ｍ，１Ｈ，Ｎ１ ６－Ｈ），７．５６（ｍ，１Ｈ，Ｎ２ ６－Ｈ）
実施例４（ジヌクレオチドの液中連続合成２）：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－Ｏ－（tert－ブチルジメチルシリル）ウリジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル　デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
　アルゴン雰囲気下、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（２００ｍｇ，１３０μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．００ｍＬ）に溶解し、ピロール（８９．８μＬ，１．３０ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（１１６μＬ，１．５６ｍｍｏｌ）を加えて室温で１５分間攪拌し、反応の完結を薄層クロマトグラフィーにより確認した。反応混合液をピリジン（１２６μＬ，１．５６ｍｍｏｌ）で中和した後、Ｎ－メチルイミダゾール（６１．８μＬ，０．７７９ｍｍｏｌ）、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－Ｏ－（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）ウリジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト（２２４ｍｇ，２６０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液を加え、室温で６０分間攪拌し、薄層クロマトグラフィーにより反応の完結を確認した。更に、０．２Ｍ　ヨウ素　ピリジン／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ溶液（１．３３ｍＬ）を加えて室温で１０分間攪拌した。チオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を反応容器に投入し、キリヤマ漏斗を用いた吸引濾過後、乾燥して５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－Ｏ－（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）ウリジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル　デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（２５７ｍｇ，９８．３％）を白色固体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ＝０．１３（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，－ＯＳｉ（Ｍｅ ２ ）ｔＢｕ），０．８８（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝６．４，－ＯＳｉ（Ｍｅ２）ｔＢｕ　ａｎｄ　ｔ，９Ｈ，Ｊ＝６．３６，Ａｒ－ＣＨ ３ ），１．２８（ｂｒ，ｓ，９０Ｈ，（ＣＨ ２ ）１５），１．３０（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ ），１．７５（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ２ＣＨ ２ ），２．２６（ｍ，２Ｈ，２’２－Ｈ），２．３８（ｍ，１Ｈ，２’１－Ｈ），２．６６（ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ ），２．７３（ｍ，２Ｈ，５’１－Ｈ），３．４７（ｍ，２Ｈ，５’２－Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ，ＤＭＴｒ－ＯＣＨ ３ ），３．９４（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ ２ ），４．２５（ｍ，４Ｈ，ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ 　ａｎｄ　ｍ，１Ｈ，４’１－Ｈ），４．５１（ｍ，１Ｈ，４’２－Ｈ），４．９３（ｍ，１Ｈ，３’２－Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ２ －ｓｕｃｃｉｎｙｌ），５．２０（ｍ，１Ｈ，３’１－Ｈ），５．２５（ｍ，１Ｈ，Ｎ１ ５－Ｈ），５．９７（ｍ，１Ｈ、１’１－Ｈ），６．２１（ｍ，１Ｈ、１’２－Ｈ），６．５３（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８５－７．２８（ｍ，１３Ｈ，ＤＭＴｒ－Ａｒ－Ｈ），７．２９（ｍ，１Ｈ，Ｎ１ ６－Ｈ），７．８３（ｍ，１Ｈ，Ｎ２ ６－Ｈ）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ＝０．１３（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，－ＯＳｉ（Ｍｅ ２ ）ｔＢｕ），０．８８（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝６．４，－ＯＳｉ（Ｍｅ２）ｔＢｕ　ａｎｄ　ｔ，９Ｈ，Ｊ＝６．３６，Ａｒ－ＣＨ ３ ），１．２８（ｂｒ，ｓ，９０Ｈ，（ＣＨ ２ ）１５），１．３０（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ ），１．７５（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ２ＣＨ ２ ），２．３８（ｍ，１Ｈ，２’１－Ｈ），２．５８（ｍ，２Ｈ，２’２－Ｈ），２．６８（ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ ），２．７３（ｍ，２Ｈ，５’１－Ｈ），３．６２（ｍ，２Ｈ，５’２－Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ，ＤＭＴｒ－ＯＣＨ ３ ），３．９４（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ ２ ），４．２５（ｍ，４Ｈ，ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ 　ａｎｄ　ｍ，１Ｈ，４’１－Ｈ），４．５１（ｍ，１Ｈ，４’２－Ｈ），４．９３（ｍ，１Ｈ，３’２－Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ２ －ｓｕｃｃｉｎｙｌ），５．２５（ｍ，１Ｈ，Ｎ１ ５－Ｈ），５．３０（ｍ，１Ｈ，３’１－Ｈ），５．９７（ｍ，１Ｈ、１’１－Ｈ），６．２１（ｍ，１Ｈ、１’２－Ｈ），６．５３（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８５－７．２８（ｍ，１３Ｈ，ＤＭＴｒ－Ａｒ－Ｈ），７．２９（ｍ，１Ｈ，Ｎ１ ６－Ｈ），７．８３（ｍ，１Ｈ，Ｎ２ ６－Ｈ）
実施例５（２０量体オリゴヌクレオチドの液中連続合成）：デオキシチミジニル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシグアニジル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシチミジニル－［３’→５’］ －デオキシグアニジル－［３’→５’］ －デオキシチミジニル－［３’→５’］ －デオキシグアニジル－［３’→５’］－デオキシアデニリル－［３’→５’］ －デオキシシチジニル－［３’→５’］ －デオキシアデニリル－［３’→５’］ －デオキシチミジニル－［３’→５’］ －デオキシグアニジル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］ －デオキシアデニリル－［３’→５’］ －デオキシチミジニル－［３’→５’］ －デオキシチミジンの合成
（１）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ４ －ベンゾイル－デオキシシチジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ４ －ベンゾイル－デオキシシチジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ４ －ベンゾイル－デオキシシチジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ２ －イソブチリル－デオキシグアノシン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ４ －ベンゾイル－デオキシシチジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ４ －ベンゾイル－デオキシシチジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ２ －イソブチリル－デオキシグアノシン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ２ －イソブチリル－デオキシグアノシン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ６ －ベンゾイル－デオキシアデノシン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ４ －ベンゾイル－デオキシシチジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ６ －ベンゾイル－デオキシアデノシン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ２ －イソブチリル－デオキシグアノシン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ４ －ベンゾイル－デオキシシチジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ６ －ベンゾイル－デオキシアデノシン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン　３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
　実施例２と同様の操作を１９回繰り返して、上記化合物（２．５５ｇ）を得た。
（２）脱保護および精製工程
　実施例５の（１）で合成された化合物（１００ｍｇ，１０．３μｍｏｌ）と３０％アンモニア水：エタノール＝３：１溶液（５．００ｍＬ）をオートクレーブに入れて８０℃で２時間加熱した後、凍結乾燥した。凍結乾燥品を０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液で希釈し、Ｃ－１８カートリッジ精製を行い得られた溶出液を凍結乾燥し、目的物である　デオキシチミジニル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシグアニジル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシチミジニル－［３’→５’］ －デオキシグアニジル－［３’→５’］ －デオキシチミジニル－［３’→５’］ －デオキシグアニジル－［３’→５’］－デオキシアデニリル－［３’→５’］ －デオキシシチジニル－［３’→５’］ －デオキシアデニリル－［３’→５’］ －デオキシチミジニル－［３’→５’］ －デオキシグアニジル－［３’→５’］－デオキシシチジニル－［３’→５’］ －デオキシアデニリル－［３’→５’］ －デオキシチミジニル－［３’→５’］ －デオキシチミジンを得た。
ＨＰＬＣ（ｓｈｏｄｅｘ　ＯＤＰ（４．６φ×１５０ｍｍ）、ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　１．０ｍＬ／ｍｉｎ、ＭｅＣＮ、Ｈ２Ｏ　ｇｒａｄｉｅｎｔ：０－１５ｍｉｎ；２　ｔｏ　９８％、１５　ｔｏ　２５ｍｉｎ；９８％、λ＝２５４ｎｍ）：Ｒｔ＝５．６１ｍｉｎ（９６．３％）；
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ：６０４３．６６［Ｍ－Ｈ］-
試験例１（カチオン捕捉剤の検討）
　試験化合物として、５’位水酸基を４，４’－ジメトキシトリチル（以下、ＤＭＴｒと略称することもある。）で保護した、実施例１の化合物（以下、ＤＭＴｒ保護化合物と略称することもある。）を使用し、ＤＭＴｒカチオン捕捉候補物質の試験・評価を行った。
　ＤＭＴｒ保護化合物（５０．０ｍｇ，３２．５μｍｏｌ）をジクロロメタン（３５０μＬ）に溶解させて原料溶液とし、表１に記載のカチオン捕捉剤候補物質（１６２μｍｏｌ）を添加し、トリフルオロ酢酸（２９．２μＬ，３９４μｍｏｌ）を加えて、下記ＴＬＣ測定条件で、反応液のＤＭＴｒ保護化合物のスポットがＵＶと呈色反応の両者で消失確認できるまで、室温で約３０分間攪拌した。
　更に、ピリジン（３１．８μＬ，３９４μｍｏｌ）で中和後の反応液に対して、下記ＴＬＣ測定条件により、下記評価基準で評価を行った。
○（効果あり）：ＤＭＴｒ保護化合物のスポットが、ＵＶと呈色反応の両者で確認されなかった場合
×（効果なし）：ＤＭＴｒ保護化合物のスポットが、ＵＶと呈色反応のいずれか、または、両者で確認された場合
　結果を表１に示す。
〔薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）測定条件〕
　ＴＬＣ板（２ｃｍ×５ｃｍ角、メルク社製）に対して、ＴＬＣスポッティングキャピラリーチューブ５μＬ（Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｎ　Ｌａｂｏｒｇｅｒａｅｔｅ社製）を用いて、反応液を原点付近にスポットし、展開液（ジクロロメタン／メタノール＝１０／１）により展開し、ＵＶ（２５４ｎｍ）と、呈色反応（リンモリブデン酸－エタノール溶液に浸漬後、ホットプレート（約３００℃）で１０秒以上）で目視確認した。
（ＤＭＴｒ保護化合物Ｒｆ値＝０．７０，ＤＭＴｒ脱保護化合物Ｒｆ値＝０．４０）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000042
　カチオン捕捉剤として汎用されるジメチルスルフィド、アニソール、チオアニソール、クレゾール、１，３，５－トリメチルベンゼン、１，３－ジメトキシベンゼン、１，３，５－トリメトキシベンゼン、スクシンイミド、またはフタルイミドを使用した場合には、中和後に、再び５’末端水酸基が保護基Ｑにより保護されることから、カチオン捕捉剤として十分に機能しないことが分かった。また、慣用のカチオン捕捉剤であるトリアルキルシラン（例、トリイソプロピルシラン、トリエチルシラン等）を使用した場合には、５’末端水酸基が中和後にトリアルキルシリル化されるため、次の縮合工程に使用することができないことが分かった。更にメタノールをカチオン捕捉剤として使用した場合には、カチオンを不可逆的に捕捉するものの、次工程の縮合反応を妨げるため、適用できないことも分かった。
　一方、中和反応後もＤＭＴｒカチオンの無害化状態を保持できる捕捉剤として、ピロール、３－メチルピロール、２，４－ジメチルピロール等のピロール誘導体、インドール等のインドール誘導体が有効であることが分かった。
試験例２（カチオン捕捉剤としてメタノールを用いた場合）
　試験化合物として、５’位水酸基の保護基が４，４’－ジメトキシトリチルである実施例１の化合物を使用し、試験例１でＤＭＴｒカチオンスカベンジャーとして有効性が確認されたメタノールについて、脱保護・縮合の液中連続合成が可能であるか否かについて以下に示す方法で検討した。
　アルゴン雰囲気下、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルス］クシネート（１００ｍｇ，６５．０μｍｏｌ）をジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶解し、メタノール（１３．２μＬ，３２５μｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（５７．９μＬ，７７９μｍｏｌ）を加えて室温で１５分間攪拌し、反応の完結をＨＰＬＣにより確認した。反応混合液をピリジン（６３．０μＬ，７７９μｍｏｌ）で中和した後、Ｎ－メチルイミダゾール（３０．９μＬ，３９０μｍｏｌ）、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト（９６．８ｍｇ，１３０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液を加え、室温で６０分間攪拌後の反応系をＨＰＬＣにより分析した。脱保護反応後の反応系と縮合反応後の反応系のＨＰＬＣピーク面積値を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000043
　上記結果より、メタノールはＤＭＴｒカチオンの無害化を中和後も維持し続けたが、同一系内で縮合反応を連続して行っても、縮合反応はほとんど進行しないことが明らかとなった。
試験例３（カチオン捕捉剤としてトリエチルシランを用いた場合）
　試験化合物として、５’位水酸基の保護基が４，４’－ジメトキシトリチルである実施例１の化合物を使用し、ＤＭＴｒカチオンスカベンジャーとしてトリエチルシランを用い、脱保護反応を以下に示す方法で検討した。
　アルゴン雰囲気下、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（１００ｍｇ，６５．０μｍｏｌ）をジクロロメタン（１．５ｍL）に溶解し、トリエチルシラン（５１．７μＬ，３２５μｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（５７．９μＬ，７７９μｍｏｌ）を加えて室温で１５分間攪拌し、反応の完結を薄層クロマトグラフィーにより確認した。反応混合液をピリジン（６３．０μＬ，７７９μｍｏｌ）で中和した後、メタノール溶液を反応容器に投入し、キリヤマ漏斗を用いた吸引濾過後、乾燥した。乾燥して得られた固体の１Ｈ－ＮＭＲ（下記）を測定した結果、５’位水酸基がトリエチルシリル化された５’－Ｏ－（トリエチルシリル）デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートと５’－ＯＨ－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートが１’位のプロトン強度比で５’位トリエチルシリル体：５’位ＯＨ体＝０．２６：１．００の混合物として得られた。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ＝０．６８（ｄｄ，６Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ ２ ＣＨ３）３），０．８６（ｔ，９Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ３ ）， ０．９９（ｔ，９Ｈ，（ＣＨ２ＣＨ ３ ）３），１．２６（ｂｒ，ｓ，９０Ｈ，（ＣＨ ２ ）１５），１．３０（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ ），１．７５（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ２ＣＨ ２ ），２．１２（ｍ，２Ｈ，２’－Ｈ），２．６８（ｍ，６Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ－ＣＨ ２ ＣＨ ２ ），３．８８（ｍ，２Ｈ，５’－Ｈ），３．９８（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－ＯＣＨ ２ ），４．０７（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），５．０２（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－ＣＨ ２ －ｓｕｃｃｉｎｙｌ），５．２８（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），６．３７（ｔ，１Ｈ，１’－Ｈ），６．５４（ｓ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ，Ｎ６－Ｈ）
　上記結果より、トリエチルシランは脱保護反応中でのＤＭＴｒカチオン無害化には有効であるが、中和後には脱保護体の一部の５’位水酸基をトリエチルシリル化し、連続する縮合工程に悪影響を与えるため、ＤＭＴｒカチオンスカベンジャーとしては不適当であることが明らかとなった。
試験例４（液中連続反応後の沈殿化、単離を行う工程を変更した場合）
　試験化合物として、５’－ＯＨ－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートを使用し、縮合、酸化、および脱保護反応の順に同一系内で連続して行う検討を以下の方法で行った。
　アルゴン雰囲気下、５’－ＯＨ－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（７９．３ｍｇ，５２．３μｍｏｌ）をジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶解し、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト（７７．９ｍｇ，１０５μｍｏｌ）と１Ｈ－テトラゾール（３６．６ｍｇ，５２３μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液を加えた。室温で６０分間攪拌し、薄層クロマトグラフィーにより反応の完結を確認した。更に、反応液に０．２Ｍ　ヨウ素　ピリジン／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ溶液（１．１ｍＬ）を加えて室温で１０分間攪拌した後、ＴＦＡ（４６．６μＬ，６２８μｍｏｌ）を投入し、反応の追跡をＨＰＬＣ分析により行った。縮合反応後、ＴＦＡの投入前と投入後３０分間室温で攪拌させた反応系のＨＰＬＣピーク面積値を表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000044
　上記結果より、ヨウ素／ピリジンを酸化剤として用いた液中連続合成法を縮合反応から開始した場合、縮合反応後の反応系を２％ＴＦＡの状態にしても５’位水酸基のＤＭＴｒ基が脱保護されないことが明らかとなった。このことから、本発明におけるオリゴヌクレオチドの液中連続合成においては、５’位水酸基の一時保護基であるＤＭＴｒ基の除去（脱保護）、縮合、および酸化の順に行い、酸化後にハイポを飽和させたメタノール等の添加による沈殿化、および固液分離する単離操作を行うのが良いことが分かった。
実施例６：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシナメートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートのトリエチルアミン塩（１．４５ｇ，１．９４ｍｍｏｌ）、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルアミン（１．０２ｇ，１．１０ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解させ、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート［ＨＢＴＵ］（２．５３ｇ，６．６０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．１７ｍＬ，６．６０ｍｍｏｌ）を加えて室温で１時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後に濾過し、濾液を減圧濃縮した。濃縮液にメタノールを添加後、濾過して得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール，１％ｖ／ｖトリエチルアミン）で精製し表題の化合物（１．２２ｇ，７２．４％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５０（ジクロロメタン：メタノール＝４：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８９（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ（ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ）），１．２５－１．７９（ｍ，１０２Ｈ，－ＣＨ ２ －（ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ）），１．３５（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ －ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．４５（ｍ，２Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．５１（ｍ，２Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），２．７０（ｍ，２Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），３．４６（ｍ，２Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．７９（ｓ，６Ｈ，Ｈ ３ ＣＯ－ＤＭＴｒ），３．７９－３．９５（ｍ，６Ｈ，Ｂｎ－Ｏ－ＣＨ ２ －），４．１５（ｍ，１Ｈ，４’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），４．３２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），５．４７（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），５．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），６．４１（ｍ，１Ｈ，１’－Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．４５（ｓ，２Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ），６．８３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，ＤＭＴｒ），７．２４－７．３８（ｍ，９Ｈ，ＤＭＴｒ），７．６１（ｓ，１Ｈ，Ｎ６－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），７．９５（ｂｒ・ｓ，Ｎ３－ＮＨ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）
実施例７：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－［３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートのトリエチルアミン塩（８３７ｍｇ，１．１２ｍｍｏｌ）、３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアルコール（５００ｍｇ，６６０μｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（１０ｍＬ）と脱水ジエチルエーテル（１０ｍＬ）の混合溶媒に溶解させた後、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート［ＨＢＴＵ］（３．００ｇ，７．８２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．４０ｍＬ，７．８２ｍｍｏｌ）を加えて３０℃で４時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後に濾過した。濾液を減圧濃縮し、メタノールを添加することで析出した固体を濾過後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、１％ｖ／ｖトリエチルアミン）で精製することで表題の化合物（７０２ｍｇ，７６．９％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６０（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０，　Ｈ ３ Ｃ－ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．２５－１．７６（ｍ，８４Ｈ，－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．３５（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ －ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．４５（ｍ，２Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．６７（ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），３．４６（ｍ，２Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．７９（ｓ，６Ｈ，ＣＨ ３ Ｏ－ＤＭＴｒ），３．９０（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｂｎ－Ｏ－ＣＨ ２ －），４．１１（ｍ，１Ｈ，４’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），５．０３（ｓ，２Ｈ，ＮＨ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），５．４７（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．３８（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．８５（ｓ，２Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ），６．８３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝９．０，ＤＭＴｒ），７．２４－７．３８（ｍ，９Ｈ，ＤＭＴｒ），７．６０（ｍ，１Ｈ，Ｎ６－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），７．９７（ｂｒ・ｓ，１Ｈ，Ｎ３－ＮＨ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）
実施例８：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジル］スクシナメートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートのトリエチルアミン塩（２２３ｍｇ，２９９μｍｏｌ）、３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアミン（１３３ｍｇ，１７５μｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート［ＨＢＴＵ］（３７５ｍｇ，９５４μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１７０μＬ，９５４μｍｏｌ）を加えて室温で２時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後に濾過し、減圧濃縮した濾液にメタノールを添加することで析出した固体を濾過した。得られた固体を減圧乾燥させて表題の化合物（２０５ｍｇ，８４．６％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４０（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０，Ｈ ３ Ｃ－ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．２５－１．７５（ｍ，８４Ｈ，－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．３５（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ －ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．４５（ｍ，２Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．５２（ｍ，２Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），２．６９（ｍ，２Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），３．４６（ｍ，２Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．７９（ｓ，６Ｈ，ＣＨ ３ Ｏ－ＤＭＴｒ），３．８９（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），４．１４（ｍ，１Ｈ，４’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），４．３４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），５．４７（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），５．７４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ２－ｂｅｎｚｙｌ），６．３５（ｍ，１Ｈ，１’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．３８（ｓ，２Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ），６．８３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，－ＤＭＴｒ），７．２４－７．３８（ｍ，９Ｈ，－ＤＭＴｒ），７．６１（ｓ，１Ｈ，Ｎ６－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），７．９３（ｂｒ・ｓ，１Ｈ，Ｎ３－ＮＨ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）
実施例９：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－［２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートのトリエチルアミン塩（１．６９ｇ，２．２４ｍｍｏｌ）、２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアルコール（９９０ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート［ＨＢＴＵ］（２．７７ｇ，７．２０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．２８ｍＬ，７．２０ｍｍｏｌ）を加えて室温で１時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後に濾過し、減圧濃縮した濾液にメタノールを添加することで析出した固体を濾過後、乾燥させて表題の化合物（１．６８ｇ，９２．０％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．７０（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．２５－１．７５（ｍ，８４Ｈ，－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．３５（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ －ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．４４（ｍ，２Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．６４（ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），３．４５（ｍ，２Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．７９（ｓ，６Ｈ，Ｈ ３ Ｃ－ＤＭＴｒ），３．９２（ｍ，４Ｈ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），４．１０（ｍ，１Ｈ，４’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），５．１１（ｓ，２Ｈ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），５．４７（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．３９（ｍ，１Ｈ，１’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．４２（ｓ，２Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ），６．８３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，－ＤＭＴｒ），７．１７－７．３９（ｍ，９Ｈ，－ＤＭＴｒ），７．６０（ｓ，１Ｈ，Ｎ６－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），７．９７（ｂｒ・ｓ，１Ｈ，Ｎ３－ＮＨ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）
実施例１０：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジル］スクシナメートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートのトリエチルアミン塩（１．７０ｇ，２．２８ｍｍｏｌ）、２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジルアミン（１．０１ｇ，１．３２ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解させ、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート［ＨＢＴＵ］（２．７３ｇ，７．２０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．２８ｍＬ，７．２０ｍｍｏｌ）を加えて室温で１時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後に濾過した。減圧濃縮した濾液にメタノールを添加することで析出した固体を濾過し、減圧乾燥させて表題の化合物（１．７５ｇ，９６．０％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６０（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．２５－１．７４（ｍ，８４Ｈ，－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．３４（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ －ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．４５（ｍ，２Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．４６（ｍ，２Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），２．６６（ｍ，２Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），３．４５（ｍ，２Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．７９（ｓ，６Ｈ，Ｈ ３ ＣＯ－ＤＭＴｒ），３．８９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），３．９４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ２－ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），４．１１（ｍ，１Ｈ，４’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），４．３５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），５．４７（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），５．９３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ２－ｂｅｎｚｙｌ），６．３８（ｍ，１Ｈ，１’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．４２（ｓ，２Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ），６．８３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，－ＤＭＴｒ），７．１１－７．３８（ｍ，９Ｈ，－ＤＭＴｒ），７．６０（ｓ，１Ｈ，Ｎ６－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），７．９６（ｂｒ・ｓ，１Ｈ，Ｎ３－ＮＨ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）
実施例１１：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［４，４’－ビス（ドコシルオキシ）ベンズヒドリル］スクシナメートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートのトリエチルアミン塩（２．０２ｇ，２．７１ｍｍｏｌ）および４，４’－ビス（ドコシルオキシ）ベンズヒドリルアミン（１．２５ｇ，１．５０ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート［ＨＢＴＵ］（３．４０ｇ，８．９３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．５６ｍＬ，９．００ｍｍｏｌ）を加えて４０℃で終夜攪拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認した後、反応液を減圧濃縮し、濃縮液にメタノールを添加することで析出した固体を濾過した。得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール，１％ｖ／ｖトリエチルアミン）で精製し、表題の化合物（１．６５ｇ，７５．３％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．７０（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．２５－１．７６（ｍ，８４Ｈ，－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），１．３６（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ －ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．４２（ｍ，２Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．５５（ｍ，２Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），２．７０（ｍ，２Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），３．４５（ｍ，２Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．７８（ｓ，６Ｈ，Ｈ ３ ＣＯ－ＤＭＴｒ），３．８９（ｄｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．７，１３．６Ｈｚ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｄｏｃｏｓｙｌｏｘｙ），４．１１（ｍ，１Ｈ，４’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），５．４８（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．１０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．３９（ｍ，１Ｈ，１’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．８１（ｍ，４Ｈ，－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．８３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，－ＤＭＴｒ），７．０８－７．３９（ｍ，９Ｈ＋４Ｈ，－ＤＭＴｒ＋－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），７．５９（ｓ，１Ｈ，Ｎ６－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），７．８９（ｂｒ・ｓ，１Ｈ，Ｎ３－ＮＨ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）
実施例１２：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリル］スクシナメートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートのトリエチルアミン塩（１．２９ｇ，１．７０ｍｍｏｌ）、２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリルアミン（１．０１ｇ，１．０２ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート［ＨＢＴＵ］（２．３１ｇ，６．０９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．０７ｍＬ，６．０６ｍｍｏｌ）を加えて室温で１時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後に濾過した。減圧濃縮した濾液にメタノールを添加することで析出した固体を濾過し、減圧乾燥させて表題の化合物（１．１４ｇ，６８．８％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５０（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒ　１：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），１．１６－１．８０（ｍ，３Ｈ＋１０２Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ －ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ＋－ＣＨ２－ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），２．４２－２．８０（ｍ，１H＋４Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ＋ｓｕｃｃｉｎｙｌ）， ３．２６（ｍ，２Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．４５（ｍ，２Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．７８（ｓ，６Ｈ，Ｈ ３ ＣＯ－ＤＭＴｒ），３．９４（ｍ，６Ｈ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），４．１２（ｍ，１Ｈ，４’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），５．５０（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．４１（ｍ，１Ｈ，１’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，－ＮＨ－ＣH－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．８３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，－ＤＭＴｒ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），７．１１－７．３９（ｍ，９Ｈ＋５Ｈ，－ＤＭＴｒ＋－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），７．６０（ｓ，１Ｈ，Ｎ６－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），８．００（ｂｒ・ｓ，１Ｈ，Ｎ３－ＮＨ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒ　２：δ０．８８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ－ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），１．１６－１．８０（ｍ，３Ｈ＋１０２Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ －ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ＋－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），２．４２－２．８０（ｍ，１H＋４Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ＋ｓｕｃｃｉｎｙｌ）， ３．２６（ｍ，２Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．４５（ｍ，２Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．７８（ｓ，６Ｈ，Ｈ ３ ＣＯ－ＤＭＴｒ），３．９４（ｍ，６Ｈ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），４．１２（ｍ，１Ｈ，４’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），５．５０（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，－ＮＨ－ＣＨ－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．４１（ｍ，１Ｈ，１’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，－ＮＨ－ＣH－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），６．８３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，－ＤＭＴｒ），６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），７．１１－７．３９（ｍ，９Ｈ＋５Ｈ，－ＤＭＴｒ＋－ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌ），７．６０（ｓ，１Ｈ，Ｎ６－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），８．００（ｂｒ・ｓ，１Ｈ，Ｎ３－ＮＨ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）
実施例１３：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－イル－｛３，４，５－トリス［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジル｝スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－Ｏ－スクシネートのトリエチルアミン塩（４０８ｍｇ，５４８μｍｏｌ）、３，４，５－トリス［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアルコール（９０４ｍｇ，３１８μｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート［ＨＢＴＵ］（１．０９ｇ，２．８７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５０７μＬ，２．８５ｍｍｏｌ）を加えて室温で１時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後に濾過した。減圧濃縮した濾液にメタノールを添加することで析出した固体を濾過し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝９９／２，１％ｖ／ｖトリエチルアミン）で精製して表題の化合物（２０７ｍｇ，６５．２％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５０（ジクロロメタン：メタノール＝１９：１）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，２７Ｈ，Ｊ＝６．９，　Ｈ ３ Ｃ－ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），１．２５－１．７５（ｍ，３０６Ｈ，－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），１．３５（ｓ，３Ｈ，Ｎ５－ＣＨ ３ －ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．４７（ｍ，２Ｈ，２’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），２．６６（ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），３．４７（ｍ，２Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．７４（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），３．７８（ｓ，６Ｈ，ＣＨ ３ Ｏ－ＤＭＴｒ），３．８６（ｔ，１０Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），３．９２（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ＣＨ ２ －ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ），４．１５（ｍ，１Ｈ，４’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），４．９９（ｍ，２Ｈ＋６Ｈ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ＣＨ２－ｂｅｎｚｙｌ＋－Ｏ－ＣＨ２－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），５．４８（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．４２（ｍ，１Ｈ，３’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），６．６１（ｓ，６Ｈ，－Ｏ－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ｂｅｎｚｙｌ），６．６６（ｓ，２Ｈ，－Ｏ－ｂｅｎｚｙｌ－Ｏ－ｂｅｎｚｙｌ），６．８２（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＤＭＴｒ），７．２３－７．３８（ｍ，９Ｈ，ＤＭＴｒ），７．６０（ｍ，１Ｈ，Ｎ６－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），７．９３（ｂｒ・ｓ，１Ｈ，Ｎ３－ＮＨ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）
実施例１４：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－メトキシウリジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
（１）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－メトキシウリジン－３’－Ｏ－スクシネートの合成
　アルゴン雰囲気下、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－メトキシウリジン（１．９８ｇ，３．５７ｍｍｏｌ）、コハク酸無水物（６３１ｍｇ，６．３０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．４９ｍＬ，１０．７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解して室温で３時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで反応の完結を確認した後、２．０Ｍリン酸－トリエチルアミンバッファー（ｐＨ７．５０）で３回分液洗浄した後、有機層を減圧留去し、表題の化合物のトリエチルアミン塩（２．８０ｇ）を無色の泡状固体として定量的に得た。
（２）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－メトキシウリジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
　実施例１４－（１）で合成した化合物（１．４０ｇ，１．８４ｍｍｏｌ）、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジルアルコール（９８９ｍｇ，１．０８ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解させ、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート［ＨＢＴＵ］（２．４６ｇ，６．４８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．１３ｍＬ，６．４８ｍｍｏｌ）を加えて室温で１時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認した後、反応液にメタノールを添加後、濾過して得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル，１％ｖ／ｖトリエチルアミン）で精製し表題の化合物（１．４１ｇ，８４．０％）を白色固体として得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．７２（ジクロロメタン：メタノール＝９：1）
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ０．８８（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ ３ Ｃ（ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ）），１．１８－１．８０（ｍ，１０２Ｈ，－ＣＨ ２ －（ｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘｙ）），２．７０（ｍ，４Ｈ，ｓｕｃｃｉｎｙｌ），３．４２－３．５０（ｍ，１Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．４６（ｓ，３Ｈ，２'－ＯＭｅ），３．５６－３．６２（ｍ，１Ｈ，５’－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ），３．７９（ｓ，６Ｈ，Ｈ ３ ＣＯ－ＤＭＴｒ），３．９０－４．００（ｍ，６Ｈ，Ｂｎ－Ｏ－ＣＨ ２ －），４．０８（ｍ，１Ｈ，２’－Ｈ），４．２４（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ，－Ｏ－ＣＨ ２ －ｂｅｎｚｙｌ），５．２８－５．３３（ｍ，２Ｈ，３’－H　ａｎｄ　Ｎ５－Ｈ），６．０２（ｍ，１Ｈ，１’－H），６．５３（ｓ，２Ｈ，－ｂｅｎｚｙｌ），６．８４（ｍ，４Ｈ，ＤＭＴｒ），７．２４－７．３８（ｍ，９Ｈ，ＤＭＴｒ），７．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，Ｎ６－Ｈ），８．１０（ｂｒ・ｓ，Ｎ３－ＮＨ）
実施例１５：デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシアデニリル－［３’→５’］－デオキシチミジニル－［３’→５’］－デオキシチミジン（５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
を用いた５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’の合成
（１）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシナメートの合成
　実施例６で合成した化合物（３０２ｍｇ，１９５μｍｏｌ）をジクロロメタン（４．５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（７２．２μＬ，９７５μｍｏｌ）、ピロール（６６．９μＬ，９７５μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（７８．９μＬ，９７５μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（３８．７μＬ，４８８μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．５ｍＬ）で溶解させたｄＴ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト）（４３５ｍｇ，５８５μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（５．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムの飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（３８５ｍｇ）を白色固体として定量的に得た。
（２）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ ６ －ベンゾイル－２’－デオキシアデノシン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシナメートの合成
　実施例１５－（１）で合成した化合物（３８３ｍｇ，２００μｍｏｌ）をジクロロメタン（４．５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（７２．２μＬ，９７５μｍｏｌ）、ピロール（６６．９μＬ，９７５μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（７８．９μＬ，９７５μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（３８．７μＬ，４８８μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．５ｍＬ）で溶解させたｄＡ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ６－ベンゾイル－２’－デオキシアデノシン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト）（５１４ｍｇ，６００μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（５．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（４７９ｍｇ，９９．８％）を白色固体として得た。
（３）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ ４ －ベンゾイル－２’－デオキシシチジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ６ －ベンゾイル－２’－デオキシアデノシン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシナメートの合成
　実施例１５－（２）で合成した化合物（４７６ｍｇ，１９８μｍｏｌ）をジクロロメタン（４．５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（７２．２μＬ，９７５μｍｏｌ）、ピロール（６６．９μＬ，９７５μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（７８．９μＬ，９７５μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（３８．７μＬ，４８８μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．５ｍＬ）で溶解させたｄＣ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ４－ベンゾイル－２’－デオキシシチジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト）（５００ｍｇ，６００μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（５．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（５２２ｍｇ，９１．９％）を白色固体として得た。
（４）デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシアデニリル－［３’→５’］－デオキシチミジニル－［３’→５’］－デオキシチミジン（５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’）の合成
　実施例１５－（３）で合成した化合物と、２８％アンモニア水溶液：エタノール＝３：１の溶液（４．０ｍＬ）をオートクレーブにいれて６５℃で１６時間加熱した後、反応液を遠心エバポレーターで減圧濃縮した。Ｃ－１８逆相カートリッジカラムに吸着させた後、０．１ｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム水溶液で洗浄し、２％トリフルオロ酢酸水溶液により、５’末端の水酸基に結合したジメトキトリチル基を脱保護し、２０％アセトニトリル水溶液で溶出して表題の化合物を得た。
ｍ／ｚ（ＭＡＬＤＩ　ＴＯＦ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ３９Ｈ５１Ｎ１２Ｏ２３Ｐ３：１１４８．２．Ｆｏｕｎｄ　１１４７．０（Ｍ－Ｈ）－
実施例１６：デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシアデニリル－［３’→５’］－デオキシチミジニル－［３’→５’］－デオキシチミジン（５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
を用いた５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’の合成
（１）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－［３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
　実施例７で合成した化合物（２０２ｍｇ，１４６μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（５３．５μＬ，７２３μｍｏｌ）、ピロール（５０．０μＬ，７２３μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（５８．４μＬ，７２３μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（２８．６μＬ，３６１μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＴ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（２０８ｍｇ，２８９μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（２．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２２６ｍｇ，８９．０％）を白色固体として得た。
（２）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ ６ －ベンゾイル－２’－デオキシアデノシン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－［３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
　実施例１６－（１）で合成した化合物（２２５ｍｇ，１２９μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（４７．８μＬ，６４５μｍｏｌ）、ピロール（４４．６μＬ，６４５μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（５２．１μＬ，６４５μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（２５．６μＬ，３２３μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＡ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（３３４ｍｇ，３８７μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（３．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２８８ｍｇ）を定量的に白色固体として得た。
（３）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ ４ －ベンゾイル－２’－デオキシシチジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ６ －ベンゾイル－２’－デオキシアデノシン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］－ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－［３，５－ビス（ドコシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
　実施例１６－（２）で合成した化合物（２８７ｍｇ，１２９μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（４７．８μｌ，６４５μｍｏｌ）、ピロール（４４．６μｌ，６４５μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（５２．１μＬ，６４５μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（２５．６μＬ，３２３μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＣ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（３２５ｍｇ，３８７μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（３．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（３１６ｍｇ，９１．２％）を白色固体として得た。
（４）デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシアデニリル－［３’→５’］－デオキシチミジニル－［３’→５’］－デオキシチミジン（５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’）の合成
　実施例１６－（３）で合成した化合物と、２８％アンモニア水溶液：エタノール＝３：１の溶液（４．０ｍＬ）をオートクレーブにいれて６５℃で１６時間加熱した後、反応液を遠心エバポレーターで減圧濃縮した。濃縮液をＣ－１８逆相カートリッジカラムに吸着させた後、０．１ｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム水溶液で洗浄し、２％トリフルオロ酢酸水溶液により、５’末端の水酸基に結合したジメトキトリチル基を脱保護し、２０％アセトニトリル水溶液で溶出して表題の化合物を得た。
ｍ／ｚ（ＭＡＬＤＩ　ＴＯＦ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ３９Ｈ５１Ｎ１２Ｏ２３Ｐ３：１１４８．２．Ｆｏｕｎｄ　１１４７．０（Ｍ－Ｈ）－
実施例１７：デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシアデニリル－［３’→５’］－デオキシチミジニル－［３’→５’］－デオキシチミジン（５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
を用いた５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’の合成
（１）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジル］スクシナメートの合成
　実施例１０で合成した化合物（１９７ｍｇ，１４３μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（５３．５μＬ，７２０μｍｏｌ）、ピロール（５０．０μＬ，７２０μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（５８．４μＬ，７２０μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（２８．６μＬ，３６０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＴ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（２０１ｍｇ，２８９μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（２．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２４８ｍｇ，９９．９％）を白色固体として得た。
（２）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ ６ －ベンゾイル－２’－デオキシアデノシン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジル］スクシナメートの合成
　実施例１７－（１）で合成した化合物（２３５ｍｇ，１３５μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（５３．５μＬ，７２０μｍｏｌ）、ピロール（５０．０μＬ，７２０μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（５８．４μＬ，７２０μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（２８．６μＬ，３６０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＡ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（３４７ｍｇ，４０５μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（３．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２７６ｍｇ，９１．９％）を白色固体として得た。
（３）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ ４ －ベンゾイル－２’－デオキシシチジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ６ －ベンゾイル－２’－デオキシアデノシン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［２，４－ビス（ドコシルオキシ）ベンジル］スクシナメートの合成
　実施例１７－（２）で合成した化合物（２５３ｍｇ，９４．２μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（３４．９μＬ，４７１μｍｏｌ）、ピロール（３２．６μＬ，４７１μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（３８．１μＬ，４７１μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（１８．７μＬ，２３５μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＣ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（２３６ｍｇ，２８２μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（３．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２５２ｍｇ，９９．５％）を白色固体として得た。
（４）デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシアデニリル－［３’→５’］－デオキシチミジニル－［３’→５’］－デオキシチミジン（５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’）の合成
　実施例１７－（３）で合成した化合物と、２８％アンモニア水溶液：エタノール＝３：１の溶液（４．０ｍＬ）をオートクレーブにいれて６５℃で１６時間加熱した後、反応液を遠心エバポレーターで減圧濃縮した。濃縮液をＣ－１８逆相カートリッジカラムに吸着させた後、０．１ｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム水溶液で洗浄し、２％トリフルオロ酢酸水溶液により、５’末端の水酸基に結合したジメトキトリチル基を脱保護し、２０％アセトニトリル水溶液で溶出して表題の化合物を得た。
ｍ／ｚ（ＭＡＬＤＩ　ＴＯＦ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ３９Ｈ５１Ｎ１２Ｏ２３Ｐ３：１１４８．２４．Ｆｏｕｎｄ　１１４９．６３（Ｍ＋Ｈ）＋
実施例１８：デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシアデニリル－［３’→５’］－デオキシチミジニル－［３’→５’］－デオキシチミジン（５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
を用いた５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’の合成
（１）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリル］スクシナメートの合成
　実施例１２で合成した化合物（４０１ｍｇ，２４６μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（９１．０μＬ，１．２３ｍｍｏｌ）、ピロール（８５．０μＬ，１．２３ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（９９．５μＬ，１．２３ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（４８．８μｌ，６１５μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＴ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（３７３ｍｇ，４９２μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（４．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（４９１ｍｇ，９５．７％）を白色固体として得た。
（２）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ ６ －ベンゾイル－２’－デオキシアデノシン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリル］スクシナメートの合成
　実施例１８－（１）で合成した化合物（２２８ｍｇ，１１５μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（４２．６μＬ，５７５μｍｏｌ）、ピロール（３９．８μＬ，５７５μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（４６．５μＬ，５７５μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（２２．９μＬ，２８８μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＡ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（２９６ｍｇ，３４５μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（２．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２６９ｍｇ，９４．１％）を白色固体として得た。
（３）５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ ４ －ベンゾイル－２’－デオキシシチジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－Ｎ ６ －ベンゾイル－２’－デオキシアデノシン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－Ｎ－［２，３，４－トリス（オクタデシルオキシ）ベンズヒドリル］スクシナメートの合成
　実施例１８－（２）で合成した化合物（２５４ｍｇ，１０２μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（３７．８μＬ，５１０μｍｏｌ）、ピロール（３５．３μＬ，５１０μｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（４１．２μＬ，５１０μｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（２０．２μＬ，２５５μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＣ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（２５４ｍｇ，３０６μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（２．１ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２９３ｍｇ，９７．３％）を白色固体として得た。
（４）デオキシシチジニル－［３’→５’］－デオキシアデニリル－［３’→５’］－デオキシチミジニル－［３’→５’］－デオキシチミジン（５’－ｄ［ＣＡＴＴ］－３’）の合成
　実施例１８－（３）で合成した化合物と、２８％アンモニア水溶液：エタノール＝３：１の溶液（４．０ｍＬ）をオートクレーブにいれて６５℃で１６時間加熱した後、反応液を遠心エバポレーターで減圧濃縮した。濃縮液をＣ－１８逆相カートリッジカラムに吸着させた後、０．１ｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム水溶液で洗浄し、２％トリフルオロ酢酸水溶液により、５’末端の水酸基に結合したジメトキトリチル基を脱保護し、２０％アセトニトリル水溶液で溶出して表題の化合物を得た。
ｍ／ｚ（ＭＡＬＤＩ　ＴＯＦ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ３９Ｈ５１Ｎ１２Ｏ２３Ｐ３：１１４８．２４．Ｆｏｕｎｄ　１１４６．８（Ｍ－Ｈ）－
実施例１９：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－フルオロウリジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（２１４ｍｇ，１３８μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（９６．３μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）、ピロール（９０．０μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（１０５μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（５１．６μＬ，６９０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．５ｍＬ）で溶解させた２’－Ｆ－Ｕ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－フルオロウリジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト）（３９０ｍｇ，５２０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（３．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２４３ｍｇ，９３．２％）を白色固体として得た。
ｍ／ｚ（ＥＳＩ－ＭＳ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ１０８Ｈ１６３ＦＮ５Ｏ２０Ｐ：１９００．１６．Ｆｏｕｎｄ　１９１９．１９（Ｍ＋ＮＨ４）＋
実施例２０：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－メトキシウリジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－２’－メトキシウリジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－メトキシウリジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（２０２ｍｇ，１２９μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（９６．３μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）、ピロール（９０．０μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（１０５μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（５１．６μＬ，６９０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．５ｍＬ）で溶解させた２’－ＯＭｅ－Ｕ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－メトキシウリジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト）（４０２ｍｇ，５２８μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（３．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２３７ｍｇ，９５．７％）を白色固体として得た。
ｍ／ｚ（ＥＳＩ－ＭＳ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ１０９Ｈ１６６Ｎ５Ｏ２２Ｐ：１９２９．４８．Ｆｏｕｎｄ　１９４７．２１（Ｍ＋ＮＨ４）＋
実施例２１：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－フルオロウリジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－２’－メトキシウリジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－メトキシウリジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（１９７ｍｇ，１２７μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（９６．３μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）、ピロール（９０．０μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（１０５μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（５１．６μＬ，６９０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．５ｍＬ）で溶解させた２’－Ｆ－Ｕ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（４０４ｍｇ，５３９μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（３．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２２８ｍｇ，９４．７％）を白色固体として得た。
ｍ／ｚ（ＥＳＩ－ＭＳ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ１０８Ｈ１６３ＦＮ５Ｏ２１Ｐ：１９１７．４４．Ｆｏｕｎｄ　１９３５．１８（Ｍ＋ＮＨ４）＋
実施例２２：５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－２’－メトキシウリジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
　５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（２１４ｍｇ，１３８μｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（９６．３μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）、ピロール（９０．０μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（１０５μＬ，１．３８ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（５１．６μＬ，６９０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．５ｍＬ）で溶解させた２’－ＯＭｅ－Ｕ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（３９６ｍｇ，５２０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（３．９ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２４６ｍｇ，９４．０％）を白色固体として得た。
ｍ／ｚ（ＥＳＩ－ＭＳ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ１０９Ｈ１６６Ｎ５Ｏ２１Ｐ：１９１２．１８．Ｆｏｕｎｄ　１９３１．２１（Ｍ＋ＮＨ４）＋
実施例２３：中和塩基として２，４，６－トリメチルピリジンを用いたワンポット反応
５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
　アルゴン雰囲気下、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（２００ｍｇ，１３０μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（９６．３μＬ，１．３０ｍｍｏｌ）、ピロール（９０．０μＬ，１．３０ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、２，４，６－トリメチルピリジン（１７１μＬ，１．３０ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（４８．６μＬ，６５０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＴ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（１９３ｍｇ，２６０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（２．６ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２４１ｍｇ，９６．９％）を白色固体として得た。
ｍ／ｚ（ＥＳＩ－ＭＳ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ１０９Ｈ１６６Ｎ５Ｏ２０Ｐ：１８９６．１９．Ｆｏｕｎｄ　１９１５．２３（Ｍ＋ＮＨ４）＋
実施例２４：脱保護試薬としてトリフルオロメタンスルホン酸を用い、中和試薬としてベンズイミダゾールを用いたワンポット反応
５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
　アルゴン雰囲気下、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（２００ｍｇ，１３０μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロメタンスルホン酸（５．７５μＬ，６５．０μｍｏｌ）、ピロール（９０．０μＬ，１．３０ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ベンズイミダゾール（７．６８ｍｇ，６５．０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）で溶解させたｄＴ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（１９３ｍｇ，２６０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（２．６ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和したメタノール溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２４８ｍｇ，９８．６％）を白色固体として得た。
ｍ／ｚ（ＥＳＩ－ＭＳ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ１０９Ｈ１６６Ｎ５Ｏ２０Ｐ：１８９６．１９．Ｆｏｕｎｄ　１９１５．２３（Ｍ＋ＮＨ４）＋
実施例２５　析出溶媒として９０％アセトニトリル水溶液を用いたワンポット反応
５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－［Ｏ－（２－シアノエチル）］ホスホリル－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネートの合成
　アルゴン雰囲気下、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）－デオキシチミジン－３’－イル－［３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル］スクシネート（２００ｍｇ，１３０μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（９６．３μＬ，１．３０ｍｍｏｌ）、ピロール（９０．０μＬ，１．３０ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより脱保護反応の終了を確認し、ピリジン（１０５μＬ，１．３０ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルイミダゾール（５１．６μＬ，６５０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した。中和後の反応液に０．２５ｍｏｌ／Ｌ　５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール／アセトニトリル溶液（１．５ｍＬ）で溶解させたｄＴ－ＣＥ　ホスホロアミダイト試薬（１９３ｍｇ，２６０μｍｏｌ）を加えて１０分間撹拌した後、０．２ｍｏｌ／Ｌ　ヨウ素　ピリジン／テトラヒドロフラン／水＝４９／４９／２溶液（２．６ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。反応終了後の反応液にチオ硫酸ナトリウムを飽和した９０％アセトニトリル水溶液を添加し、生じた固体を濾過後乾燥し、表題の化合物（２４８ｍｇ，９９．６％）を白色固体として得た。
ｍ／ｚ（ＥＳＩ－ＭＳ）：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃ．ｆｏｒ　Ｃ１０９Ｈ１６６Ｎ５Ｏ２０Ｐ：１８９６．１９．Ｆｏｕｎｄ　１９１５．２２（Ｍ＋ＮＨ４）＋
　一時保護基で保護された５’末端水酸基の脱保護工程において特定のカチオン捕捉剤を添加すること、脱保護反応終了後に中和処理を施すこと、および酸化工程または硫化工程で特定の酸化剤または硫化剤を使用することにより、３’末端の水酸基を擬似固相保護基で保護され、かつ５’末端の水酸基を一時保護基により保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを原料して、（１）５’末端の水酸基の一時保護基の脱保護工程、（２）３’末端の水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチド添加による５’末端伸長工程、および（３）ホスファイトトリエステル部位の酸化（または硫化）工程、を含有させることによって、効率的かつ高収率なｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの製造方法、更にはＲＮＡ、ＤＮＡ、核酸医薬等を提供できるようになった。また、本発明のオリゴヌクレオチドの製造方法を利用した、オリゴヌクレオチド自動合成プログラム、オリゴヌクレオチド自動合成装置も展開できるようになった。
　「“ゲノムケミストリー” 関根光雄・齋藤烈編、講談社サイエンティフィック、１－３（２００３）」によれば、通常のホスホロアミダイト法は、以下を基本単位とすることが知られている。
　ＳＴＥＰ１：脱保護ステップ（鎖伸長生成物の５’水酸基の保護基の除去）、
　ＳＴＥＰ２：縮合ステップ（種々の官能基を保護したヌクレオシド－３’－ホスホロアミダイトと保護ヌクレオチドとを縮合するステップ）、
　ＳＴＥＰ３：キャッピングステップ（未反応の５’－水酸基をキャッピングするステップ）、および
　ＳＴＥＰ４：酸化ステップ（酸化してヌクレオシドホスフェートトリエステル体を得るステップ）。
　「連続的改良ホスホロアミダイト法」を「(ＳＴＥＰ１)脱保護ステップ、（ＳＴＥＰ２）縮合ステップ、(ＳＴＥＰ４）酸化ステップを基本単位とし、ＳＴＥＰ１、２の後で単離精製工程を経ることなく、ＳＴＥＰ１、２、４を液中で連続的に実施する方法」と定義するならば、本発明のオリゴヌクレオチドの製造方法を、以下のように表すこともできる。
〔１〕脱保護ステップにおいて、ピロール誘導体およびインドール誘導体から選択される少なくとも一種のカチオン捕捉剤を含有することを特徴とする、連続的改良ホスホロアミダイト法によるオリゴヌクレオチドの製造方法。
〔２〕更に、脱保護ステップの後、縮合ステップに先立ち、有機塩基を含有することを特徴とする、〔１〕記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
〔３〕更に、酸化ステップにおいて、酸化剤または硫化剤を使用することを特徴とする、〔１〕または〔２〕のいずれか記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
〔４〕更に、酸化ステップの後、酸化体または硫化体を極性溶媒下で晶析単離することを特徴とする、〔１〕～〔３〕のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
〔５〕更に、全保護基を脱保護することを特徴とする、〔４〕記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
　このように、ピロール誘導体およびインドール誘導体から選択される少なくとも一種のカチオン捕捉剤を共存させることにより、ＳＴＥＰ１、２の後で単離精製工程を経ることなく、キャッピングステップも不要な、連続的改良ホスホロアミダイト法を提供できるようになったことは大変意義深い。
　本出願は、日本で出願された特願２０１１－１１０８７２を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含されるものである。

Claims (23)

  1. 　以下の工程（１）～（３）を含有する、オリゴヌクレオチドの製造方法。
    （１）非極性溶媒中において、３’位水酸基が擬似固相保護基で保護され、かつ５’位水酸基が酸性条件下で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）、酸、ならびにピロール誘導体およびインドール誘導体から選択される少なくとも一種のカチオン捕捉剤を反応させて５’位水酸基の一時保護基を除去した後、有機塩基により中和する工程、
    （２）工程（１）の中和後の反応液に、３’位水酸基がホスホロアミダイト化され、かつ５’位水酸基が酸性条件下で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）を添加して、工程（１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドと、その５’位水酸基を介してホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、ならびに
    （３）工程（２）の反応液に、酸化剤または硫化剤を添加して、工程（２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合またはチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程。
  2. 　ｐが１である、請求項１に記載の方法。
  3. 　更に、下記工程（４）を含有する、請求項１または２に記載の方法。
    （４）工程（３）で得られた反応液に極性溶媒を添加して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを沈殿させて、固液分離により取得する工程。
  4. 　更に、下記工程（５）を含有する、請求項３に記載の方法。
    （５）工程（４）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程。
  5. 　酸性条件下で除去可能な一時保護基が、ジメトキシトリチル基、またはモノメトキシトリチル基である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 　非極性溶媒が、ハロゲン系溶媒、芳香族系溶媒、エステル系溶媒、脂肪族系溶媒、非極性エーテル系溶媒、およびこれらの組合せからなる群より選択される溶媒である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 　非極性溶媒が、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２－ジクロロエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、ノナン、シクロヘキサン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、およびこれらの組合せからなる群より選択される溶媒である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  8. 　極性溶媒が、アルコール系溶媒、またはニトリル系溶媒である、請求項３～７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 　極性溶媒が、メタノール、またはアセトニトリルである、請求項３～７のいずれか一項に記載の方法。
  10. 　ピロール誘導体またはインドール誘導体が、ピロール、３－メチルピロール、２，４－ジメチルピロール、インドール、４－メチルインドール、５－メチルインドール、６－メチルインドール、７－メチルインドール、５，６－ジメチルインドール、および６，７－ジメチルインドールからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 　酸化剤が、ヨウ素、（１Ｓ）－（＋）－（１０－カンファニルスルフォニル）オキサジリジン、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド、２－ブタノンペルオキシド、１，１－ジヒドロペルオキシシクロドデカン、ビス（トリメチルシリル）ペルオキシド、またはｍ－クロロ過安息香酸である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 　硫化剤が、３－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン－１，１－ジオキシド、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン、フェニルアセチルジスルフィド、テトラエチルチウラムジスルフィド、３－アミノ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン、または硫黄である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  13. 　酸が、トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリクロロ酢酸、メタンスルホン酸、塩酸、酢酸またはｐ－トルエンスルホン酸である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 　有機塩基が、ピリジン、２，４，６－トリメチルピリジン、ベンズイミダゾール、１，２，４－トリアゾール、Ｎ－フェニルイミダゾール、２－アミノ－４，６－ジメチルピリミジン、１，１０－フェナントロリン、イミダゾール、Ｎ－メチルイミダゾール、２－クロロベンズイミダゾール、２－ブロモベンズイミダゾール、２－メチルイミダゾール、２－フェニルベンズイミダゾール、Ｎ－フェニルベンズイミダゾール、および５－ニトロベンズイミダゾールからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 　脱保護ステップにおいて、ピロール誘導体、およびインドール誘導体から選択される少なくとも一種のカチオン捕捉剤を含有することを特徴とする、連続的改良ホスホロアミダイト法によるオリゴヌクレオチドの製造方法。
  16. 　一般式（Ｉ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     ［式中、
    Ｌは、式（ａ１）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （式中、＊は、Ｙとの結合位置を示し；
    ＊＊は、保護される基との結合位置を示し；
    Ｌ１は、置換されていてもよい２価のＣ１－２２炭化水素基を示し；かつ
    Ｌ２は、単結合を示すか、または＊＊Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ２）－Ｒ１－Ｎ（Ｒ３）＊＊＊（式中、＊＊は、Ｌ１との結合位置を示し、＊＊＊は、Ｃ＝Ｏとの結合位置を示し、Ｒ１は、置換されていてもよいＣ１－２２アルキレン基を示し、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子もしくは置換されていてもよいＣ１－２２アルキル基を示すか、またはＲ２およびＲ３が一緒になって、置換されていてもよいＣ１－２２アルキレン結合を形成していてもよい。）で表される基を示す。）で示される基を示し、
    Ｙは、酸素原子、またはＮＲ（Ｒは、水素原子、アルキル基またはアラルキル基を示す。）を示し、ならびに
    Ｚは、式（ａ２）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     ［式中、＊は、Ｙとの結合位置を示し；
    Ｒ４は、水素原子であるか、あるいはＲｂが、下記式（ａ３）で表される基である場合には、Ｒ６と一緒になって単結合または－Ｏ－を示して、環Ｂと共にフルオレニル基またはキサンテニル基を形成していてもよく； 
    ｋ個のＲ５は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
    ｋは、１～４の整数を示し；
    環Ａは、ｋ個のＯＲ５に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
    Ｒａは、水素原子を示し；ならびに
    Ｒｂは、水素原子、または式（ａ３）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     （式中、＊は、結合位置を示し；
    ｊは、０～４の整数を示し；
    ｊ個のＲ７は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
    Ｒ６は、水素原子を示すか、またはＲ４と一緒になって単結合または－Ｏ－を示して、環Ａと共にフルオレニル基またはキサンテニル基を形成していてもよく；かつ
    環Ｂは、ｊ個のＯＲ７に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示す。］で表される基を示す。］
    で示される、擬似固相保護基。
  17. 　一般式（ＩＩ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     ［式中、
    ｍは、０以上の任意の整数を示し、
    ｍ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ保護されていてもよい核酸塩基を示し、
    Ｑは、水素原子、または酸性条件下で除去可能な一時保護基を示し、
    Ｘは、水素原子、ハロゲン原子または保護されていてもよい水酸基を示し、
    ｍ個のＸ’は、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、または保護されていてもよい水酸基を示し、
    ｍ個のＲ８は、独立してそれぞれ酸素原子もしくは硫黄原子を示し、
    ｍ個のＷＧは、独立してそれぞれ電子吸引性基を示し、
    Ｌは、式（ａ１）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     （式中、＊は、Ｙとの結合位置を示し；
    ＊＊は、ヌクレオチド３’水酸基との結合位置を示し；
    Ｌ１は、置換されていてもよい２価のＣ１－２２炭化水素基を示し；かつ
    Ｌ２は、単結合を示すか、または＊＊Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ２）－Ｒ１－Ｎ（Ｒ３）＊＊＊（式中、＊＊は、Ｌ１との結合位置を示し、＊＊＊は、Ｃ＝Ｏとの結合位置を示し、Ｒ１は、置換されていてもよいＣ１－２２アルキレン基を示し、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子もしくは置換されていてもよいＣ１－２２アルキル基を示すか、またはＲ２およびＲ３が一緒になって、置換されていてもよいＣ１－２２アルキレン結合を形成していてもよい。）で表される基を示す。）で示される基を示し、
    Ｙは、酸素原子、またはＮＲ（Ｒは、水素原子、アルキル基またはアラルキル基を示す。）を示し、ならびに
    Ｚは、式（ａ２）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     ［式中、＊は、Ｙとの結合位置を示し；
    Ｒ４は、水素原子を示すか、あるいはＲｂが、下記式（ａ３）で表される基である場合には、Ｒ６と一緒になって単結合または－Ｏ－を示して、環Ｂと共にフルオレニル基またはキサンテニル基を形成していてもよく； 
    ｋ個のＲ５は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
    ｋは、１～４の整数を示し；
    環Ａは、ｋ個のＯＲ５に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
    Ｒａは、水素原子を示し；
    かつＲｂは、水素原子、または式（ａ３）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     （式中、＊は、結合位置を示し；
    ｊは、０～４の整数を示し；
    ｊ個のＲ７は、独立してそれぞれ炭素数１０以上の脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
    Ｒ６は、水素原子を示すか、またはＲ４と一緒になって単結合または－Ｏ－を示して、環Ａと共にフルオレニル基またはキサンテニル基を形成していてもよく；かつ
    環Ｂは、ｊ個のＯＲ７に加えて、更にハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、およびハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示す。］で表される基を示す。］
    で示されるヌクレオチド。
  18. 　ｍが０である、請求項１７に記載のヌクレオチド。
  19. 　一般式（ＩＩ）中のＬが、スクシニル基であり、かつ
    Ｒ５および／またはＲ７が、炭素原子数１０～４０のアルキル基である、請求項１７または１８に記載のヌクレオチド。
  20. 　一般式（ＩＩ）中のＬが、スクシニル基であり、かつ
    ＲａおよびＲｂが、共に水素原子であり、かつＲ５が、炭素原子数１０～４０のアルキル基である、請求項１７または１８に記載のヌクレオチド。
  21. 　一般式（ＩＩ）中のＬが、スクシニル基であり、かつ
    Ｒ５および／またはＲ７が、炭素原子数１２～３０のアルキル基である、請求項１７または１８に記載のヌクレオチド。
  22. 　一般式（ＩＩ）中のＬが、スクシニル基であり、かつ
    Ｙ－Ｚが、３，４，５－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ基、
    ３，５－ジ（ドコシルオキシ）ベンジルオキシ基、
    ３，５－ジ［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルオキシ基、
    ３，４，５－トリ［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルオキシ基、
    ３，４，５－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルアミノ基、
    ２，４－ジ（ドコシルオキシ）ベンジルアミノ基、
    ３，５－ジ（ドコシルオキシ）ベンジルアミノ基、
    ジ（４－ドコシルオキシフェニル）メチルアミノ基、
    ４－メトキシ－２－［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアミノ基、
    ４－メトキシ－２－［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）シクロヘキシルメチルオキシ］ベンジルアミノ基、
    ２，４－ジ（ドデシルオキシ）ベンジルアミノ基、
    フェニル（２，３，４－トリ（オクタデシルオキシ）フェニル）メチルアミノ基、
    ジ［４－（１２－ドコシルオキシドデシルオキシ）フェニル］メチルアミノ基、
    ３，５－ジ［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアミノ基、および
    ３，４，５－トリ［３’，４’，５’－トリ（オクタデシルオキシ）ベンジルオキシ］ベンジルアミノ基
    からなる群より選択される基である、請求項１７または１８に記載のヌクレオチド。
  23. 　Ｑが、モノメトキシトリチル基、またはジメトキシトリチル基である、請求項１７～２２のいずれか一項に記載のヌクレオチド。
PCT/JP2012/062708 2011-05-17 2012-05-17 オリゴヌクレオチドの製造方法 WO2012157723A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201280020029.5A CN103476784B (zh) 2011-05-17 2012-05-17 制备寡核苷酸的方法
DK12785878.5T DK2711370T3 (en) 2011-05-17 2012-05-17 PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF OLIGONUCLEOTIDES
JP2013515204A JP5979139B2 (ja) 2011-05-17 2012-05-17 オリゴヌクレオチドの製造方法
EP12785878.5A EP2711370B1 (en) 2011-05-17 2012-05-17 Method for producing oligonucleotides

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2011-110872 2011-05-17
JP2011110872 2011-05-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2012157723A1 true WO2012157723A1 (ja) 2012-11-22

Family

ID=47175410

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2012/062708 WO2012157723A1 (ja) 2011-05-17 2012-05-17 オリゴヌクレオチドの製造方法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US9029528B2 (ja)
EP (1) EP2711370B1 (ja)
JP (3) JP5979139B2 (ja)
CN (1) CN103476784B (ja)
DK (1) DK2711370T3 (ja)
WO (1) WO2012157723A1 (ja)

Cited By (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014189142A1 (ja) 2013-05-24 2014-11-27 味の素株式会社 モルフォリノオリゴヌクレオチドの製造方法
JPWO2013122236A1 (ja) * 2012-02-17 2015-05-18 味の素株式会社 塩基部保護オリゴヌクレオチド
WO2016117663A1 (ja) * 2015-01-21 2016-07-28 味の素株式会社 沈殿促進剤およびそれを用いる沈殿化方法
WO2017086397A1 (ja) * 2015-11-17 2017-05-26 日産化学工業株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
WO2017104836A1 (ja) * 2015-12-16 2017-06-22 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法、およびヌクレオシド、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド
WO2017111137A1 (ja) * 2015-12-22 2017-06-29 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
WO2018203574A1 (ja) * 2017-05-02 2018-11-08 日産化学株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
US10214555B2 (en) 2012-11-14 2019-02-26 Takeda Pharmaceutical Company Limitjed Method for liquid-phase synthesis of nucleic acid
WO2019131719A1 (ja) 2017-12-27 2019-07-04 神戸天然物化学株式会社 高脂溶性ホスホラミダイトの製造
WO2019216433A1 (ja) 2018-05-10 2019-11-14 日本新薬株式会社 オリゴ核酸化合物の製造方法
WO2020017085A1 (ja) 2018-07-20 2020-01-23 藤本化学製品株式会社 アルコキシフェニル誘導体、ヌクレオシド保護体およびヌクレオチド保護体、オリゴヌクレオチド製造方法、ならびに、置換基除去方法
WO2020166705A1 (ja) 2019-02-15 2020-08-20 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
WO2020196890A1 (ja) 2019-03-28 2020-10-01 味の素株式会社 ホスホロチオエート化部位を有するオリゴヌクレオチドの製造方法
JP2020203902A (ja) * 2018-07-20 2020-12-24 藤本化学製品株式会社 アルコキシフェニル誘導体、ヌクレオシド保護体およびヌクレオチド保護体、オリゴヌクレオチド製造方法、ならびに、置換基除去方法
WO2021039935A1 (ja) * 2019-08-29 2021-03-04 富士フイルム株式会社 核酸化合物の製造方法、及び、核酸化合物
WO2021095874A1 (ja) 2019-11-13 2021-05-20 日本新薬株式会社 オリゴ核酸化合物の製造方法
WO2021095875A1 (ja) 2019-11-13 2021-05-20 日本新薬株式会社 オリゴ核酸化合物の製造方法
EP3885434A1 (en) 2020-03-25 2021-09-29 Ajinomoto Co., Inc. Ligase mutant
WO2022195111A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Bachem Holding Ag Improved oligonucleotide synthesis
WO2022214692A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 Bachem Holding Ag Pseudo solid phase protecting group and methods for the synthesis of oligonucleotides and oligonucleotide conjugates
JP7220439B1 (ja) 2022-03-14 2023-02-10 国立大学法人東北大学 キメラ分子の製造方法
WO2024024873A1 (ja) * 2022-07-28 2024-02-01 住友化学株式会社 チオ化溶液
JP7433684B1 (ja) 2023-05-24 2024-02-20 塩野フィネス株式会社 疑似固相保護基、それを用いたヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体、オリゴアミダイト前駆体の製造方法

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5979139B2 (ja) * 2011-05-17 2016-08-24 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
WO2013179412A1 (ja) * 2012-05-30 2013-12-05 北海道システム・サイエンス株式会社 高分散性液相支持体を用いたオリゴヌクレオチド合成法
WO2016060135A1 (ja) 2014-10-14 2016-04-21 味の素株式会社 モルフォリノオリゴヌクレオチドの製造方法
TW201940695A (zh) * 2018-01-12 2019-10-16 英商卡美納生物科學公司 用於無模板幾何型酶催化性核酸合成之組成物和方法
JP2022531876A (ja) * 2019-05-08 2022-07-12 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド オリゴヌクレオチドの収束液相合成
WO2024061842A1 (en) 2022-09-19 2024-03-28 Bachem Holding Ag Improved oligonucleotide synthesis

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000044493A (ja) 1998-07-27 2000-02-15 Asahi Chem Ind Co Ltd 化合物ライブラリー合成用保護基
WO2005085272A1 (ja) * 2004-03-05 2005-09-15 Takeshi Wada ボラノホスフェートモノマーおよびそれを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法
WO2006104166A1 (ja) 2005-03-29 2006-10-05 National University Corporation, Tokyo University Of Agriculture And Technology 晶析分離用担体及び化合物の分離方法
WO2007034812A1 (ja) 2005-09-20 2007-03-29 National University Corporation, Tokyo University Of Agriculture And Technology 分離用担体、化合物の分離方法、及びこれを用いたペプチド合成方法
WO2007122847A1 (ja) 2006-03-24 2007-11-01 National University Corporation, Tokyo University Of Agriculture And Technology 有機合成用試薬、及び当該試薬を用いた有機合成反応方法
WO2010113939A1 (ja) 2009-03-30 2010-10-07 味の素株式会社 ジフェニルメタン化合物
JP2010275254A (ja) 2009-05-29 2010-12-09 Tokyo Univ Of Agriculture & Technology 疎水性基結合ヌクレオシド、疎水性基結合ヌクレオシド溶液、及び疎水性基結合オリゴヌクレオチド合成方法
JP2011110872A (ja) 2009-11-30 2011-06-09 Mitsubishi Electric Corp 熱転写型プリンタ

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5510476A (en) 1994-07-07 1996-04-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocation scavenging during oligonucleotide synthesis
WO1996003417A1 (en) 1994-07-25 1996-02-08 Hybridon, Inc. Improved methods of detritylation for oligonucleotide synthesis
US6274725B1 (en) 1998-06-02 2001-08-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Activators for oligonucleotide synthesis
WO2005070859A1 (ja) * 2004-01-27 2005-08-04 Takeshi Wada フルオラス担体およびそれを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法
JP5346585B2 (ja) 2005-12-15 2013-11-20 サーントゥル ナシオナル ドゥ ラ ルシェルシュ シャーンティフィク （セ エン エール エス） カチオン性オリゴヌクレオチド、同ヌクレオチドの自動調製法およびそれらの使用
CN101679474A (zh) 2007-05-22 2010-03-24 集润德斯股份公司 寡核苷酸的合成
JP2009135237A (ja) * 2007-11-29 2009-06-18 Nagoya Institute Of Technology 溶解性フラーレン誘導体
CN101684136A (zh) 2008-09-23 2010-03-31 苏州瑞博生物技术有限公司 一种寡核苷酸的制备方法
JP5979139B2 (ja) * 2011-05-17 2016-08-24 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
EP3296306B1 (en) 2012-02-17 2022-11-09 Ajinomoto Co., Inc. Base-protected oligonucleotide

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000044493A (ja) 1998-07-27 2000-02-15 Asahi Chem Ind Co Ltd 化合物ライブラリー合成用保護基
WO2005085272A1 (ja) * 2004-03-05 2005-09-15 Takeshi Wada ボラノホスフェートモノマーおよびそれを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法
WO2006104166A1 (ja) 2005-03-29 2006-10-05 National University Corporation, Tokyo University Of Agriculture And Technology 晶析分離用担体及び化合物の分離方法
WO2007034812A1 (ja) 2005-09-20 2007-03-29 National University Corporation, Tokyo University Of Agriculture And Technology 分離用担体、化合物の分離方法、及びこれを用いたペプチド合成方法
WO2007122847A1 (ja) 2006-03-24 2007-11-01 National University Corporation, Tokyo University Of Agriculture And Technology 有機合成用試薬、及び当該試薬を用いた有機合成反応方法
WO2010113939A1 (ja) 2009-03-30 2010-10-07 味の素株式会社 ジフェニルメタン化合物
JP2010275254A (ja) 2009-05-29 2010-12-09 Tokyo Univ Of Agriculture & Technology 疎水性基結合ヌクレオシド、疎水性基結合ヌクレオシド溶液、及び疎水性基結合オリゴヌクレオチド合成方法
JP2011110872A (ja) 2009-11-30 2011-06-09 Mitsubishi Electric Corp 熱転写型プリンタ

Non-Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"GENOME CHEMISTRY", 2003, KODANSHA SCIENTIFIC, pages: 1 - 3
"PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS", 1999, JOHN WILLY&SONS
"PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS", 1999, JOHN WILLY&SONS, article "optionally protected hydroxyl group"
BIOCONJUGATE CHEM., vol. 8, no. O.6, 1997, pages 793 - 797
M.H. CARUTHERS ET AL., METHOD IN ENZYMOLOGY, vol. 15, no. 4, 1987, pages 287 - 313
NUCLEIC ACID RES., vol. 18, no. 11, 1990, pages 3155 - 3159
NUCLEIC ACID RES., vol. 21, no. 5, 1993, pages 1213 - 1217
RAVIKUMAR VASULINGA T. ET AL.: "Efficient Synthesis of Deoxyribonucleotide Phosphorothioates by the Use of DMT Cation Scavenger", TETRAHEDRON LETTERS, vol. 36, no. 37, 1995, pages 6587 - 6590, XP027445879 *
RICHARD T. PON ET AL., NUCLEIC ACIDS RESEARCH, vol. 32, 2004, pages 623 - 631
S. L. BEAUCAGE; D. E. BERGSTORM; G. D. GLICK; R. A. JONES: "Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry", 2000, JOHN WILEY & SONS
S.L. BEAUCAGE; M.H. CARUTHERS, TETRAHEDRON LETTERS, vol. 22, 1981, pages 1859 - 1862

Cited By (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2013122236A1 (ja) * 2012-02-17 2015-05-18 味の素株式会社 塩基部保護オリゴヌクレオチド
US10730904B2 (en) 2012-11-14 2020-08-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Method for liquid-phase synthesis of nucleic acid
US10214555B2 (en) 2012-11-14 2019-02-26 Takeda Pharmaceutical Company Limitjed Method for liquid-phase synthesis of nucleic acid
US9790497B2 (en) 2013-05-24 2017-10-17 Ajinomoto Co., Inc. Morpholino oligonucleotide manufacturing method
US10415036B2 (en) 2013-05-24 2019-09-17 Ajinomoto Co., Inc. Morpholino oligonucleotide manufacturing method
JPWO2014189142A1 (ja) * 2013-05-24 2017-02-23 味の素株式会社 モルフォリノオリゴヌクレオチドの製造方法
WO2014189142A1 (ja) 2013-05-24 2014-11-27 味の素株式会社 モルフォリノオリゴヌクレオチドの製造方法
JP2020117534A (ja) * 2015-01-21 2020-08-06 味の素株式会社 沈殿促進剤およびそれを用いる沈殿化方法
JPWO2016117663A1 (ja) * 2015-01-21 2017-11-02 味の素株式会社 沈殿促進剤およびそれを用いる沈殿化方法
EP4049991A1 (en) 2015-01-21 2022-08-31 Ajinomoto Co., Inc. Precipitation promoter and precipitation method in which same is used
US10464966B2 (en) 2015-01-21 2019-11-05 Ajinomoto Co., Inc. Precipitation promoter and precipitation method in which same is used
WO2016117663A1 (ja) * 2015-01-21 2016-07-28 味の素株式会社 沈殿促進剤およびそれを用いる沈殿化方法
JPWO2017086397A1 (ja) * 2015-11-17 2018-09-06 日産化学株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
JP2022000444A (ja) * 2015-11-17 2022-01-04 日産化学株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
US11548910B2 (en) 2015-11-17 2023-01-10 Nissan Chemical Corporation Oligonucleotide production method
WO2017086397A1 (ja) * 2015-11-17 2017-05-26 日産化学工業株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
JP2022009923A (ja) * 2015-12-16 2022-01-14 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法、およびヌクレオシド、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド
US10919928B2 (en) 2015-12-16 2021-02-16 Ajinomoto Co., Inc. Oligonucleotide production method, and nucleoside, nucleotide, or oligonucleotide
JP7027889B2 (ja) 2015-12-16 2022-03-02 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法、およびヌクレオシド、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド
JPWO2017104836A1 (ja) * 2015-12-16 2018-10-11 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法、およびヌクレオシド、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド
WO2017104836A1 (ja) * 2015-12-16 2017-06-22 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法、およびヌクレオシド、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド
JPWO2017111137A1 (ja) * 2015-12-22 2018-10-18 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
WO2017111137A1 (ja) * 2015-12-22 2017-06-29 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
JPWO2018203574A1 (ja) * 2017-05-02 2020-03-12 日産化学株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
WO2018203574A1 (ja) * 2017-05-02 2018-11-08 日産化学株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
JP7306263B2 (ja) 2017-05-02 2023-07-11 日産化学株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
WO2019131719A1 (ja) 2017-12-27 2019-07-04 神戸天然物化学株式会社 高脂溶性ホスホラミダイトの製造
WO2019216433A1 (ja) 2018-05-10 2019-11-14 日本新薬株式会社 オリゴ核酸化合物の製造方法
JP2020203902A (ja) * 2018-07-20 2020-12-24 藤本化学製品株式会社 アルコキシフェニル誘導体、ヌクレオシド保護体およびヌクレオチド保護体、オリゴヌクレオチド製造方法、ならびに、置換基除去方法
JP7296636B2 (ja) 2018-07-20 2023-06-23 藤本化学製品株式会社 アルコキシフェニル誘導体、ヌクレオシド保護体およびヌクレオチド保護体、オリゴヌクレオチド製造方法、ならびに、置換基除去方法
JP2020011932A (ja) * 2018-07-20 2020-01-23 藤本化学製品株式会社 アルコキシフェニル誘導体、ヌクレオシド保護体およびヌクレオチド保護体、オリゴヌクレオチド製造方法、ならびに、置換基除去方法
WO2020017085A1 (ja) 2018-07-20 2020-01-23 藤本化学製品株式会社 アルコキシフェニル誘導体、ヌクレオシド保護体およびヌクレオチド保護体、オリゴヌクレオチド製造方法、ならびに、置換基除去方法
WO2020166705A1 (ja) 2019-02-15 2020-08-20 味の素株式会社 オリゴヌクレオチドの製造方法
WO2020196890A1 (ja) 2019-03-28 2020-10-01 味の素株式会社 ホスホロチオエート化部位を有するオリゴヌクレオチドの製造方法
WO2021039935A1 (ja) * 2019-08-29 2021-03-04 富士フイルム株式会社 核酸化合物の製造方法、及び、核酸化合物
JPWO2021039935A1 (ja) * 2019-08-29 2021-03-04
WO2021095875A1 (ja) 2019-11-13 2021-05-20 日本新薬株式会社 オリゴ核酸化合物の製造方法
WO2021095874A1 (ja) 2019-11-13 2021-05-20 日本新薬株式会社 オリゴ核酸化合物の製造方法
EP3885434A1 (en) 2020-03-25 2021-09-29 Ajinomoto Co., Inc. Ligase mutant
WO2022195111A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Bachem Holding Ag Improved oligonucleotide synthesis
EP4276104A2 (en) 2021-03-19 2023-11-15 Bachem Holding AG Improved oligonucleotide synthesis suppressing depurination
WO2022214692A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 Bachem Holding Ag Pseudo solid phase protecting group and methods for the synthesis of oligonucleotides and oligonucleotide conjugates
WO2023176773A1 (ja) * 2022-03-14 2023-09-21 国立大学法人東北大学 キメラ分子の製造方法
JP2023133992A (ja) * 2022-03-14 2023-09-27 国立大学法人東北大学 キメラ分子の製造方法
JP7220439B1 (ja) 2022-03-14 2023-02-10 国立大学法人東北大学 キメラ分子の製造方法
WO2024024873A1 (ja) * 2022-07-28 2024-02-01 住友化学株式会社 チオ化溶液
JP7433684B1 (ja) 2023-05-24 2024-02-20 塩野フィネス株式会社 疑似固相保護基、それを用いたヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体、オリゴアミダイト前駆体の製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN103476784B (zh) 2017-05-24
JP6281599B2 (ja) 2018-02-21
EP2711370A1 (en) 2014-03-26
US20120296074A1 (en) 2012-11-22
JP2016179993A (ja) 2016-10-13
JPWO2012157723A1 (ja) 2014-07-31
US9029528B2 (en) 2015-05-12
EP2711370B1 (en) 2018-01-03
JP5979139B2 (ja) 2016-08-24
JP6673373B2 (ja) 2020-03-25
EP2711370A4 (en) 2015-08-19
DK2711370T3 (en) 2018-02-26
CN103476784A (zh) 2013-12-25
JP2018090598A (ja) 2018-06-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6281599B2 (ja) 擬似固相保護基およびヌクレオチド
CN108473526B (zh) 寡核苷酸的制备方法以及核苷、核苷酸或寡核苷酸
JP6237237B2 (ja) 塩基部保護オリゴヌクレオチド
CA2627216C (en) Polynucleotide labelling reagent
EP3263579B1 (en) Precipitation promoter and precipitation method in which same is used
JP6673211B2 (ja) モルフォリノオリゴヌクレオチドの製造方法
JPWO2017111137A1 (ja) オリゴヌクレオチドの製造方法
AU2006316903A1 (en) Polynucleotide labelling reagent
EP3925964A1 (en) Production method for oligonucleotides
US10414790B2 (en) Exocyclic nitrogen atom protected nucleoside and method for producing and using the same

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12785878

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2013515204

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2012785878

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE