WO2006035939A1

WO2006035939A1 - 免疫刺激オリゴヌクレオチドおよびその医薬用途

Info

Publication number: WO2006035939A1
Application number: PCT/JP2005/018148
Authority: WO
Inventors: Hideki Narumi; Akihito Kaneda; Kazumasa Fukao; Shizuo Akira
Original assignee: Osaka University; Toray Industries, Inc.
Priority date: 2004-09-30
Filing date: 2005-09-30
Publication date: 2006-04-06
Also published as: JP2008000001A

Abstract

強い免疫応答の誘導活性を示す新規な免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよびこの免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含む医薬品とその用途が開示されている。本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、例えばggtgccgatcggcaggggggのような配列を有するオリゴヌクレオチドである。これらのオリゴヌクレオチドは、アレルギー疾患の治療又は予防剤等の医薬の有効成分として用いられる。免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、強い免疫刺激活性を有するため、本発明を用いることにより高い治療、予防、改善効果が得られること、更に、投与回数低減による副作用低下、QOL改善が期待される。

Description

明細書

免疫刺激オリゴヌクレオチドおよびその医薬用途

技術分野

[0001] 本発明は、免疫刺激オリゴヌクレオチド配列およびそのオリゴヌクレオチドを含む治療剤に関する。

背景技術

[0002] 悪性腫瘍、感染症、免疫不全疾患ある!/、は自己免疫疾患に対する免疫調節型治療剤としては、各種の細菌製剤、多糖、レバミゾールなどの種々の合成低分子化合物、またはインターフェロンなどの種々のサイト力インなどが用いられ、または研究されている。し力しながらこれらの治療剤の効果は必ずしも充分なものではなぐいずれも様々な副作用を呈する。このためさらに効果の高く副作用の少ない治療剤が求められている。

[0003] いくつかのポリヌクレオチドが生体応答調節作用を持つことが知られている。その代表的な例としては RNAである Poly(I:C)が挙げられる。 Poly(I:C)は、 IFN産生の強力なインデューサーであり、そしてマクロファージのァクチベータ一および NK活性のインデューサーである。 Poly(I:C)を腫瘍治療に用いる研究が行われたが、発熱等の副作用を有するため現在までに治療薬として実用化されるに至っていない。

[0004] また、特定のタイプの細菌性 DNAが免疫応答を刺激することが示されて、る。細菌性 DNAは、マクロファージおよびナチュラルキラー（NK)細胞によるサイト力イン産生を誘導する。細菌性 DNAの細胞活性ィ匕は、非メチルイ匕された CpGジヌクレオチド (以下 CpGと記す）を中心に含む短い配列によるとされている。マウス脾細胞の NK細胞活性を増強する活性について試験された場合、 3'-AACGCT-5'、 3'-AGCGCT-5'、 3'-GACGTC-5，の 6塩基を含む配列が最も免疫刺激活性が強、（非特許文献 1)。

[0005] 細菌性 DNAがマクロファージを刺激して、 IL- 12および TNF- aの産生を誘導することも報告されている。これらのサイト力インは、さらに脾細胞から IFN- γの産生を誘導することが知られている。また、細菌性 DNAまたは CpGを含む免疫刺激オリゴヌクレオチドのいずれかによる脾細胞の in vitro処理は、 IL- 6、 IL-12、 IFN- γの産生を誘導することが報告されている（非特許文献 2)。これらの結果は、 CpG含有配列が Thl型の免疫応答を誘導する能力を有することを示して、る。

[0006] このような性質、すなわち NK細胞活性の増強または Thl型の免疫応答の誘導を示す CpG含有免疫刺激オリゴヌクレオチドの配列として既に幾つかのタイプが見い出されており、多数の報告がある。例としては、ある種の CpGを含むパリンドローム構造を有するポリデォキシヌクレオチドの配列が徳永らによって見い出されており、この配列はマウスにぉ、て免疫応答の誘導活性を示すことが報告されて!、る（特許文献 1)。また、他のタイプの免疫刺激オリゴヌクレオチド配列および特性も報告されている（特許文献 2、特許文献 3、特許文献 4、非特許文献 3、非特許文献 4)。

[0007] このようなオリゴヌクレオチドの活性増強を目的とした研究も行われて、る。徳永らは、 CpGを含むパリンドローム外の配列にデォキシグァニル酸の繰り返し構造 (ポリ G 配列）を付加することによって、免疫応答の誘導が増強されることを見い出している（非特許文献 5)。また、天然に存在するホスホジエステルヌクレオチドは細胞内および細胞培地中において様々な核酸分解活性によって分解されやすい。そのため、核酸分解活性の攻撃標的であるヌクレオチド間のホスホジエステル結合を置換することによる安定化、さらにその結果としての活性増加の検討が行われている。頻繁に用いられている置換方法としては、ホスホロチォエートへの置換である。 Klinmanらの研究では、免疫刺激オリゴヌクレオチドのパリンドローム外の G配列をホスホチロォエート修飾することにより、免疫応答の誘導が増強されることを示している (非特許文献 6)。ヒトの免疫応答を誘導する公知の CpG含有配列としては、 D-Type及び K-typeの免疫刺激オリゴヌクレオチドがある（特許文献 5、非特許文献 6)。 D-Typeの免疫オリゴヌクレオチドは、 Typelインターフェロンの産生を誘導し、また、ヒト NK細胞を活性化させ、 K-typeは B細胞を活性ィ匕することが知られている。また、 B細胞活性ィ匕を測定した研究では、 5'-プリン、プリンもしくはピリミジン、 CpG、プリンもしくはピリミジン、ピリミジン -3'の 6塩基を含む配列が最も活性が強いことが示されている（特許文献 6、特許文献 7、非特許文献 7)。

[0008] Thl型の免疫応答の誘導を示す免疫刺激オリゴヌクレオチドを利用した治療法が研究されている。例えば、抗原と免疫刺激ヌクレオチドの結合体、あるいはそれに類する近接体を投与する方法が見い出されている。結合体の投与によって、特定の抗原に対する Th2型免疫応答を抑制しながら同じ抗原に対する Thl型免疫応答を増強されることが示されている。このような処置は、アレルギー、腫瘍、自己免疫疾患などの疾患に有効であることが述べられて、る（特許文献 8及び 9)。

[0009] 近年の研究において、 Toll様受容体 (TLR)と呼ばれる受容体が見い出されている。

哺乳類における TLRファミリーの役割は、細菌の共通構造を認識するパターン認識受容体として先天的な免疫認識に関わっていると考えられている。また、 TLRファミリ一は NF- κ Bの活性化、 Typelインターフェロンの産生を誘導することが知られている。非メチル化 CpGを含む細菌性 DNAの受容体は TLR9であることが TLR9ノックアウトマウスを用いた研究において見い出されている。（特許文献 10、非特許文献 8)その後の研究にお!、て、ヒト TLR9とマウス TLR9を活性ィ匕する最適な CpG配列が異なることが示され、種特異性があることが明らかにされた。（非特許文献 9)ヒトで免疫刺激活性を示す配列にぉ、てヒト以外の種への交差性が低ヽと、うことは、免疫刺激オリゴヌクレオチドを医薬品として開発する際に大きな障害となる。すなわち、ヒトでの臨床試験の前に必須である免疫刺激オリゴヌクレオチド含有医薬品の動物を用いた非臨床試験において、治療効果の確認および毒性作用の早期発見が困難となる。したがつて、免疫刺激オリゴヌクレオチドがヒトにおいて高い免疫刺激活性を示し、且つヒト以外の種に交差性を示すことは重要である。

[0010] 免疫刺激オリゴヌクレオチドを用いた治療法にぉ、て、使用する免疫刺激オリゴヌクレオチドの活性の強さは非常に重要である。 in vitroにおいて強い免疫刺激活性、即ち Thlサイト力イン産生を誘導するオリゴヌクレオチドを動物へ処置することにより T hi型の強ヽ免疫応答を誘導し、感染症やアレルギー症に有効であることが示されている。したがって、 in vitroで示す免疫刺激活性の強さは in vivoにおける免疫応答誘導効果と相関性を示すことは明らかである (特許文献 8、非特許文献 10)。また、免疫刺激オリゴヌクレオチドの活性に依存して、投与量、投与回数を減らすことが可能となり、その結果、毒性作用が発生する可能性の低下、また、 QOLを上昇させる可能性が極めて高い。

[0011] 以上のことから、ヒトにおいて、既に見出されている上述の免疫刺激配列と比較して、高い免疫刺激活性を示し、さらにヒト以外の種に活性を示す配列を見出すことは、産業利用上、非常に有用であり、有益性が極めて高い。

[0012] 特許文献 1：特開平 4-352724

特許文献 2： WO2004/058179

特許文献 3 :WO2005/014611

特許文献 4: CN1498895

特許文献 5 :WO00/61151

特許文献 6：特表平 10-506265

特許文献 7：特表 2001-503267

特許文献 8：特表 2002-517156

特許文献 9：特表 2002-500159

特許文献 10：特開 2002-34565

非特許文献 l :Yamamotoら J. Immunol. 1992 148:4072-4076

非特許文献 2 : Klinmanら Pro Natl. Acad. Sci. 1996 93:2879-2883

非特許文献 3 : Klinmanら Immunological review 2004 199:201-216

非特許文献 4: Li Dongら ARTHRITIS & RHEUMATISM 2004 50(5): 1686- 1689 非特許文献 5 :Tokunagaら J. Biochem. 116:991-994

非特許文献 6 : Klinmanら J. Immunol. 2001 166:2372-2377

非特許文献 7 : Kriegら Nature 374:546-549

非特許文献 8 : Hemmiら Nature 2000 408:740-745

非特許文献 9 : Bauerら PNAS 2001 98(16):92379242

非特許文献 10 :Tigheら J. Allergy. Clin. Immunol. 2000 106(1 Pt 1): 124- 134 発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0013] 本発明が解決しょうとしている課題は、強い免疫応答の誘導活性を示す新規な免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよびこの免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含む医薬品とその用途を提供することである。

課題を解決するための手段 [0014] 本発明者らはこの課題を解決するため、鋭意検討を重ねた結果、徳永らが示している CpGを含む 6塩基力ら構成されるパリンドロームの 5'-および 3'-末端にある種の塩基配列を付加したオリゴヌクレオチドの中に、高ヽ免疫刺激活性を示すオリゴヌクレオチドを見い出し、本発明を完成するに至った。

[0015] すなわち、本発明は、配列番号 1に示される塩基配列、又は該塩基配列において 1 個ないし数個の塩基が置換し、欠失し及び Z若しくは挿入された塩基配列を含み、免疫刺激活性を有する、オリゴヌクレオチドを提供する。さらに、本発明は、配列番号 1に示される塩基配列、又は該塩基配列において 1個ないし 4個の塩基が置換し、欠失し及び Z若しくは挿入された塩基配列を含み、ヒトおよびマウスに対して免疫刺激活性を有する、オリゴヌクレオチドを提供する。さら〖こ、本発明は、上記本発明のオリゴヌクレオチドの全てまたは一部のリン酸結合、リボース糖部及び Z又は塩基部が修飾され、強い免疫刺激活性を有するオリゴヌクレオチド誘導体を提供する。さらに、本発明は、上記本発明のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体又はオリゴヌクレオチド複合体を有効成分として含有する医薬を提供する。さらに、本発明は、上記本発明のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体又はオリゴヌクレオチド複合体を有効成分として含有するアレルギー疾患の治療又は予防剤を提供する。上記本発明のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体又はオリゴヌタレォチド複合体をアジュバントとして含有するワクチンを提供する。さらに、本発明は、上記本発明のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体又はオリゴヌクレオチド複合体の有効量を投与することを含む、アレルギー疾患の治療又は予防方法を提供する。さら〖こ、本発明は、上記本発明のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体又はオリゴヌクレオチド複合体のアレルギー疾患の治療又は予防剤の製造のための使用を提供する。

発明の効果

[0016] 本発明で提供される免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、強ヽ免疫刺激活性を有するため、本発明を用いることにより高い治療、予防、改善効果が得られること、更に、投与回数低減による副作用低下、 QOL改善が期待される。さらに、ヒト以外の種に対して免疫刺激活性を示すため、動物を用いた非臨床試験によってヒトに対する効果を予測することが容易である。したがって、本発明が提供する免疫刺激ヌクレオチドおよびその使用は、医薬品および産業上の利用において、有益性および有用性の高いことが期待される。

発明を実施するための最良の形態

[0017] 本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、好ましくは、配列表の配列番号 1で示される塩基配列を含み、強い免疫刺激活性を有するものである。さらに本発明は配列番号 1で示される配列を含み、ヒト及びマウスに対して免疫刺激活性を有するものである。実施例において具体的に示される通り、配列番号 1で示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドは、ヒトに対する強い免疫刺激活性を有し、さらにマウスに対しても免疫刺激活性を示すことが確認された。

[0018] 配列番号 1で示される塩基配列において、 1個ないし数個の塩基が置換し、欠失し及び z若しくは挿入された塩基配列を含むものであって、免疫刺激活性を有する、好ましくはヒト及びマウスに対して免疫刺激活性を有するオリゴヌクレオチドは本発明の範囲に含まれる。このような置換、欠失及び/又は挿入の塩基数は、好ましくは 4 個以下、さらに好ましくは 3個以下、さらに好ましくは 2個以下、さらに好ましくは 1個以下である。このようなオリゴヌクレオチドは、好ましくは配列表中の配列番号 4乃至 18 で示される配列を含むものであり、特に配列番号 4乃至 18で示される配列カゝら成るォリゴヌクレオチドである。実施例において具体的に示される通り、配列番号 4乃至 18 で示される塩基配列力なるオリゴヌクレオチドが強い免疫刺激活性を有することが確認された。なお、配列番号 14では、配列番号 1における 3'末端から 3個の塩基が欠失しているが配列番号 1と同等な免疫刺激活性を有しているので、 3'末端の 3個の塩基の欠失は免疫刺激活性に影響を与えない。なお、本発明のオリゴヌクレオチドは、配列番号 1で示される塩基配列又は上記した置換、欠失及び Z又は挿入配列のみ力も成っていてもよいし、あるいは、該塩基配列を含んでいれば、免疫刺激活性を有する限り、他の塩基配列がさらに結合されていてもよい。また、更に核酸以外の分子が結合されていてもよい。オリゴヌクレオチドのサイズは、ヒトに対して免疫刺激活性を有する限り特に限定されないが、好ましくは 20塩基ないし 50塩基、さらに好ましくは 20塩基な!/、し 25塩基である。 [0019] 免疫刺激オリゴヌクレオチドが免疫刺激活性を有するとは、ヒトにおいては平均的な反応性を有するヒト検体の末梢血単核球 (PBMC)、マウスにおいては骨髄由来榭状細胞 (BMDC)からのサイト力イン産生を誘導する作用のことを示し、本発明においてはヒト末梢血単核球において免疫刺激オリゴヌクレオチド処置によりインターフェロン y (以下 IFN- γ )及びインターフェロン a (以下 IFN- α )、マウス骨髄由来榭状細胞において免疫刺激オリゴヌクレオチド処置によりインターロイキン 12ρ40 (以下 I L-12p40)の産生誘導を指標とした活性を示している。免疫刺激活性は、好ましくは、ヒト末梢血単核球においては 10 M以下の免疫刺激オリゴヌクレオチド処置により 20 ng/ml以上のインターフェロン γ (以下 IFN- γ )、マウス骨髄由来榭状細胞においては 1 μ Μ以下の免疫刺激オリゴヌクレオチド処置により 40ng/ml以上のインターロイキン一 12p40 (以下 IL- 12p40)を誘導し得るものである。より好ましくは、本発明のオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性は、配列番号 1から成るオリゴヌクレオチドが示す、ヒト末梢血単核球において免疫刺激オリゴヌクレオチド処置によりインターフェロン a ( 以下 IFN- α )の産生誘導が、 1 Μの用量において、配列番号 1の塩基配列から成る 20塩基のオリゴヌクレオチドによる産生誘導の 80%以上、さらに好ましくは 90%以上を示すものである。また、本発明において、いくつかの免疫刺激オリゴヌクレオチド配列の活性を比較する時に用いる強、免疫刺激活性とは、上記細胞に免疫刺激ォリゴヌクレオチドを処置した場合に他よりも低濃度において多量のサイト力インを誘導することをいう。

[0020] 本発明の免疫刺激オリゴヌクレオチドによる PBMCのサイト力イン産生誘導の有無を確認する手段として、 PBMCからのインターフェロン γおよび αの in vitroでの誘導評価試験が挙げられる。具体的方法を以下に示す。ヒト血液から Histopaque 1077を用いた密度勾配遠心を 2000rpm,室温で 25分間行い PBMCを単離する。単離した PB MCを 10%FCS入り RPMI1640培地で lml当たり 4.0 X 10⁶個の細胞が含まれるように調製後、 U底の 96穴マイクロプレートに 1ゥエルあたり 4.0 X 10⁵個の細胞を播き、同時に C pG-ODNを存在下で 24時間、または 7日間刺激し、それぞれ培養上清を回収する。 I FN aの産生量は 24時間の刺激終了後、 IFN yの産生量は 7日間の刺激終了後に回収した培養上清を用いて ELISA法にて定量する。 [0021] 本発明の免疫刺激オリゴヌクレオチドによるマウス骨髄由来榭状細胞のサイト力イン産生誘導の有無を確認する手段として、マウス榭状細胞における免疫刺激オリゴヌクレオチドのサイト力イン（IL-12p40)の in vitroでの誘導評価試験が挙げられる。具体的方法を以下に示す。ォス 10-25週齢の CL57BL/6Nマウスの大腿骨'脛骨より骨髄細胞を取得し、 10ng/ml murine GM-CSFを含む 10%FCS入り RPMI1640培地で培養する。 2日毎の培地交換により、主に顆粒球力もなる浮遊細胞を除去しながら 6日間培養し、榭状前駆細胞から未成熟榭状細胞 GmDC)に分化させる。 6日間培養した後、 imDCをピペッティングにより回収し、平底の 96穴プレートに 1ゥエル当たり 2.0 X 10 5個の細胞となるように播き、 CpG-ODNで 2日間刺激する。刺激終了後、培養上清中に放出された Thl反応由来のサイト力インである IL-12p40の量を ELISAにて定量する

[0022] 本発明はまた、上記配列の全てまたは一部のリン酸結合、リボース糖部および塩基部を修飾した免疫刺激オリゴヌクレオチドを含む。好適な実施形態としては、上記の修飾がホスホロチォエート型オリゴヌクレオチド化である。さらに好適な実施形態としては、 5'-及び 3'-末端の一部または全ての連続する G配列のヌクレオチド残基間がホスホロチォエート修飾されて、る。

[0023] 本発明の免疫刺激オリゴヌクレオチドは従来の技術及び核酸合成装置で合成できる。これらの合成方法は酵素的方法、化学的方法、本発明の配列より長い配列の分解を含むが、必ずしもこれに限定されるものではない。また、修飾されたオリゴヌタレォチドも従来の技術において合成される。例えば、オリゴヌクレオチドホスホルアミデートを硫黄で処理することにより、ホスホロチォエート修飾されたオリゴヌクレオチドが得られる力必ずしもこれに限定されるものではない。これらのオリゴヌクレオチドの合成技術、修飾技術は本明細中に引用されている特許文献、非特許文献においても用いられており、その他にも多数の報告が確認される公知の技術である。

[0024] 上記した本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチド又は上記したその誘導体は、医薬としての使用を目的としたオリゴヌクレオチド複合体の形態にあってもよい。複合体とは、該免疫刺激オリゴヌクレオチド又はその誘導体と他の物質との混合物および結合体、該免疫刺激オリゴヌクレオチドを取り込ませたリボソームおよびナノスフィァがあげられる力必ずしもこれに限定されるものではない。好適な実施形態としては、上記の複合体がオリゴヌクレオチド又はその誘導体を埋封したリボソームである。埋封とは、リボソームの脂質膜表面との結合、脂質膜中への取り込み、あるいはリボソームの内腔への取り込みを指し示す。

リボソームを構成する脂質としては、リボソームを構成するために知られて、る任意の常用の脂質を単独で又は複数組合せて使用することができる。例えば、天然物、例えば卵黄、大豆、又はその他の動植物力得られる脂質、これらの脂質を水素添加によって不飽和度を低下したものを使用することができる。具体的には、例えば、ステロール類（例えばコレステロール）、ホスファチジルエタノールアミン類（例えばジパルミトイルホスファチジルエタノールァミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールァミン）、ホスファチジルコリン類（例えばジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン）、ホスファチジルセリン類（例えばジパルミトイルホスファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルセリン）、ホスファチジン酸類（例えばジパルミトイルホスファチジン酸、ジステアロイルホスファチジン酸）等があげられる。リポノームの作製は公知の方法を用いる。ボルテックス法および超音波法が一般的である力そのほかにエタノール注入法、エーテル法および逆相蒸発法などが適用でき、これらを組合せて使用することもできる。例えば、ボルテックス法および超音波法においては、所定の脂質を有機溶剤、例えばメタノール、エタノール、クロ口ホルム又はこれらの混合物、例えばメタノールとクロ口ホルムとの混合物に溶解した後、該有機溶剤を蒸発除去することにより脂質の薄層を得る。この際、上記した脂質を様々な組み合わせ、濃度比率で有機溶剤に溶解することにより、多様なリボソームを製造することが可能である。次に、この脂質の薄層に水性媒体を加えてボルテックス処理又は超音波処理することによりリボソームが形成される。この際に、上記水性媒体にリポソ一ム内へ埋封する物質を混入、例えば溶解又は懸濁させておくことにより、物質をリポノームに埋封することができる。水性媒体に溶解する埋封物質の濃度は、特に限定はされないが、タンパク質においては 37.5 μ g〜375mg/ml、核酸においては 0.5 μ g〜 5000 g/mlであることが好ましい。以下にリボソームの具体的な製造方法を示す。 10 mMのジパルミトイルホスファチジルコリン（DPPC)のクロ口ホルム'メタノール（2 : 1, V ZV)溶液（以下、 CZM溶液と略す）と 10mMのコレステロール（Choi)の CZM溶液を 1 : 1の割合に混ぜて、クロ口ホルムを加えて通常合計 3mlにし、 10mlの梨型フラスコに取り、エバポレーターに梨型フラスコを接続させ、 40°Cで減圧下、 CZM溶液を蒸発除去する。フラスコの底に薄い脂質膜ができるが、これにクロ口ホルムを加えて膜を一旦溶かした後に、再度溶媒を蒸発除去する。この操作をさらに 2〜3回繰り返すと、脂質の薄膜ができる。デシケーターにフラスコを 1時間以上入れて完全に溶媒を除き、脂質フィルムとする。次にリボソームの調製は作製した脂質フィルムにスギ花粉抗原 Cry j 1 (3.75mg/ml)及び本発明である配列番号 1のオリゴヌクレオチド誘導体 (10 /z M、およそ 30 g/ml)の混合溶液をカ卩え、ボルテックスをかけて水和する。これは multilamella vesicle (多重層）タイプのリボソームである。このリボソーム懸濁液に P BS (リン酸緩衝液)を加え、整粒器を使用して加圧下で整粒し、リボソームの粒径をそろえる。埋封されなカゝつた抗原、オリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチド誘導体は、リボソーム液に PBSをカ卩えて 15, OOOrpmにて遠心し、上清除去することを 3 回繰り返すことで除き、沈殿物を目的のリボソームとして用いる。実施例にて具体的に示す通り、ボルテックス法により本発明のオリゴヌクレオチド及び抗原を埋封したリポソームをマウスに処置すると、 IgE増加が抑制されることを確認した。

上記本発明のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体、上記本発明のオリゴヌクレオチド複合体は、各種用途の医薬として用いることができる。実施形態の好適な適応症としては、アレルギー疾患があげられる力必ずしもこれに限定されるものではない。アレルギー疾患とは、花粉、ダニ、犬、猫などの動物、食物、ハウスダストなどに由来する抗原物質を起因とし、鼻炎、結膜炎、皮膚炎、喘息などの炎症を症状とする疾患である力さらに好適な実施形態としては、上記アレルギー疾患が花粉アレルギー症である。花粉アレルギーとは特にスギ花粉由来の蛋白を抗原とするアレルギーを指す力ヒノキ、シラカバ、ハンノキ、ブタクサ、ョモギ、カモガヤなどの他の花粉由来物質が抗原であっても良い。実施例において具体的に示される通り、抗原及び本発明のオリゴヌクレオチド誘導体を埋封したリボソームをスギ花粉抗原感作マウスに処置することにより、スギ花粉アレルギー発症の主要因である血清中 IgEの増加を抑制することを確認した。この試験方法は、スギ花粉以外の抗原を用いて試験することが可能である。また、実施例と同様の方法を用いて喘息などのアレルギーを誘発し、誘発抗原とは異なる抗原を処置することにより、治療効果が得られることが確認されている。したがって、上記本発明のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体、または上記本発明のオリゴヌクレオチド複合体が各種アレルギーに対して高ヽ治療効果を示すことが示唆される。

[0027] また、上記医薬は、本発明のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体、または上記本発明のオリゴヌクレオチド複合体をアジュバントとして含む、ワクチンであっても良い。ワクチンの使用可能な疾患は感染症、悪性腫瘍、及びアレルギー症である。感染症とはウィルス、細菌、真菌、及び原虫等を原因として発症する疾患である。また、悪性腫瘍とは、脳、肺 (例えば小細胞および非小細胞）、卵巣、乳房、前立腺、結腸などの腫瘍であるが、必ずしもこれに限定されるものではない。通常、ワクチンとは、患者に投与し、免疫反応を活性化する、感染性因子、感染因子のある部分、腫瘍組織特異的に発現する因子、または動植物由来の因子を含む抗原性懸濁液または溶液をいう。ワクチンを構成する抗原性部分は、タンパク質、ペプチド、脂質、多糖、核酸のどれであっても良い。好ましい実施形態としては、特に限定はされないが、本発明のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド誘導体、もしくはオリゴヌクレオチド複合体と上記ワクチンの混合液である。また、本発明のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド誘導体と上記ワクチンの抗原性部分との複合体であってもよい。例としては、ワクチンの抗原性部分と本発明のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド誘導体を埋封したリボソームがあげられ、上記したリボソームの製造方法を用いて作製することができる。

[0028] このような医薬として用いる場合、投与経路は、特に限定されないが、皮下注射、皮内注射、静脈内注射、筋肉内注射、患部組織への注入、経鼻投与、経眼投与等、経咽頭投与、経肺投与、経皮投与、舌下投与などが好ましい。また、投与量は、患者の症状、治療目的、投与経路等により適宜選択されるが、通常、成人 1日当り、オリゴヌクレオチド量として、 0.1pmol〜10 μ mol、好ましくは lpmol〜l μ mol程度である。アジュバントとして使用する場合の投与量も、投与目的、投与経路等により適宜選択されるが、通常、上記と同程度の投与量でよい。また、オリゴヌクレオチド又はその誘導体は、通常、採用される剤形を製剤する周知の製剤方法により製剤される。

[0029] 以下に本発明を、実施例をもって詳細に説明する。なお、以下の説明文中で使用されて、る免疫刺激オリゴヌクレオチドの配列の略号および特性は、配列表に記載されている。また、実施例中に記載されている公知の免疫刺激オリゴヌクレオチドの配列、略号および特性は表 1に示した。

[0030] [表 1-1]

公知の免疫刺激オリゴヌクレオチド（0DN)

0DN略号配列番号 51用特許文献又は非特許文献修飾

D19N+GS 配列番号 19 W000/61151 配列番号 72* 5 'および 3 '末端の G配列

間をホロチォエー

ト修飾

D35 配列番号 19 W000/61151 配列番号 72* 5 'および 3 '末端の 2つの G

配列間のみホスホロチ

ォエート修飾

1018 配列番号 20 特表 2002-517156 配列番号^ 全てのヌ'クレオチド残

特表 2002-500159 配列番号 19 基間をホ- ホロチォェ

ート修飾

A151 配列番号 21 ARTHRITIS & 隱 LJMATISM 2004 50 (5) 全てのヌ'クレオチド残

: 1686-1689 基間をホ- ホロチォェ

ート修飾

K3 配列番号 22 W000/61151 配列番号 20* 全てのヌ'クレオチド残

The Journal of Immunolo gy 2001 16 基間をホ- ホロチォェ

6: 2372-2377 ート修飾

T1 配列番号 23 特開平 4-352724 配列番号 I リン酸骨格修飾してい

ない

T1S 配列番号 23 特開平 4-352724 配列番号 1 全てのヌ'クレオチド残

基間をホロチォェ

ート修飾

T8 配列番号 24 特開平 4-352724 配列番号 8 リン酸骨格修飾してい

ない

T8S 配列番号 24 特開平 4-352724 配列番号 8 全てのヌ'クレオチド残

基間をホ- ホロチォェ

ート修飾

[0031] [表 1-2]

0DN略号配列番号引用特許文献又は非特許文献修飾

T15 配列番号 25 特開平 4-352724 配列番号 1 リン酸骨格修飾してい

ない

T15S 配列番号 25 特開平 4-352724 配列番号 1 全てのヌクレオチド残

基間をホスホロチォェ

一ト修飾

T49 配列番号 26 特開平 4-352724 配列番号 49 リン酸骨格修飾してい

ない

T49S 配列番号 26 特開平 4-352724 配列番号 49 全てのヌクレオチド残

基間をホスホロチォェ

一ト修飾

11 配列番号 27 特表平 10-506265 配列番号 1 5^;および 3^;末端の G配列

間をホスホロチォ

卜修飾

12 配列番号 28 特表平 10-506265 配列番号^ リン酸骨格修飾してい

ない

I2S 配列番号 28 特表平 10-506265 配列番号^ 全てのヌクレオチド残

基間をホスホロチォェ

一ト修飾

114 配列番号 29 特表平 10-506265 配列番号 14* リン酸骨格修飾してい

ない

I14S 配列番号 29 特表平 10-506265 配列番号 14* 全てのヌクレオチド残

基間をホスホロチォェ

一ト修飾

DVAX-5 配列番号 30 CN1498895 配列番号 5 * リン酸骨格修飾してい

W0 2005/014611 配列番号 4 * ない

DVAX-5S 配列番号 30 CN1498895 配列番号 5 * 全てのヌクレオチド残

W0 2005/014611 配列番号 4 基間をホスホロチォェ

一ト修飾

M - no n-CpG 配列番号 31 Nature 2000 408： : 740-745 全てのヌクレオチド残

基間をホスホロチォェ

一ト修飾

*:文献中の配列番号

実施例 1

[0032] ノ《リンドローム配列両末端のホスホロチォエート修飾された G配列を含む免疫刺激ォリゴヌクレオチドの、ヒト PBMCにおけるサイト力イン産生の誘導活性、及び D19N+GSとの活性比較

徳永らが示しているパリンドローム配列（特開平 4-352724、配列 3および 15)を含むノ《リンドローム配列の両末端に、ホスホロチォエート修飾された G配列を含むヌクレオチド配列を付加した免疫誘導オリゴヌクレオチド、 mod2 (配列番号 1)、 mod9 (配列番号 2)、および modl2 (配列番号 3)を構築した。そしてこれらの配列のヒト PBMCにおけるサイト力イン産生の誘導活性のスクリーニング、さらに公知の免疫刺激オリゴヌタレォチドである D19N+GSとの免疫刺激活性の比較を行った。

[0033] ヒト PBMCに D19N+GS、 mod2、 9および 12を各々処置したところ、 mod2の配列は 3 M以上の処置において IFN- γ産生を誘導し、 Μ- non- CpG、 D19N+GS、 mod9及び mo dl2と比較してサイト力イン誘導活性が高力つた。（図 1)。 [0034] また、 D19N+GSおよび mod2について、 IFN- a産生の誘導活性のスクリーニングを行った。その結果、これらのオリゴヌクレオチド（3 μ Μ)を PBMCに処置すると、 D19N+ GSは 3ng/ml前後の産生量であった。それに対して、 mod2を処置すると 30ng/ml以上の産生量が確認され、 D19N+GSと比較して、 PBMCからの IFN- αの産生誘導能が顕著に高力つた。（図 2)。

したがって、これらの結果から、オリゴヌクレオチド配列 mod2が公知配列 D19N+GSよりも強、免疫刺激活性を有することが確認された。

さらに、 mod9及び modl2の活性が低いことから、徳永らの配列の末端に G配列を含むヌクレオチド配列を付加すること力必ずしもヒトにおける活性の増加に結びつかないことが示され、本発明である mod2のような免疫刺激活性の高い配列は、容易に類推できなヽ発明であることが示された。

実施例 2

[0035] 免疫刺激オリゴヌクレオチド mod2、 Tl、 T8、 T15及び Τ49の、ヒト PBMCにおけるサイト力イン産生誘導効果の比較

徳永らが示して、る免疫刺激オリゴヌクレオチド配列にぉ、て強、活性を有する配列（T1及び T8)及び mod2に含まれる 6塩基（CGATCG)を有する配列（T15及び T49) と mod2の免疫刺激活性について、ヒト PBMCを用いたスクリーニングにより活性の比較を行った。

[0036] その結果、 mod2の 1 μ Μ処置により IFN- a産生の誘導が確認された。 Tl、 T8、 T15 及び Τ49におヽては IFN- aの誘導は弱ぐこれらの配列をリン酸骨格修飾した配列（ T1S、 T8S、 T15S及び T49S)においても同様の結果であった（図 3)。また、上記のオリゴヌクレオチドの IFN- γ産生誘導活性を確認した結果、 IFN- aと同様の傾向が確認された（図 4)。

[0037] 従って、本発明のオリゴヌクレオチドである mod2の免疫刺激活性は、徳永らが示しているオリゴヌクレオチド Tl、 T8、 T15及び Τ49よりも強い活性を有することが確認された。

実施例 3

[0038] 免疫刺激オリゴヌクレオチド mod2、 K3及び 1018の、ヒト PBMCにおけるサイト力イン産生誘導活性の比較

WO00/61151にお!/、て示されて!/、るオリゴヌクレオチド配列（K3)、特表 2002-51715

6

及び特表 2002-500159において示されているオリゴヌクレオチド配列（1018)と、本発明の mod2の免疫刺激活性について、ヒト PBMCを用いたスクリーニングにより活性比較を行った。

[0039] ヒト PBMCに mod2を 500nM処置した結果、 IFN- a産生誘導が確認された力 K3及び 1018処置による IFN- α産生の誘導はほとんど確認できなかった（図 5)。

[0040] 以上の結果から、本発明のオリゴヌクレオチド mod2の免疫刺激活性は、 WO00/611 51にお!/、て示されて!/、る配列 K3及び特表 2002-517156、特表 2002-500159にお!/、て示されて!/、る 1018よりも強、ことが確認された。

実施例 4

[0041] 免疫刺激オリゴヌクレオチド mod2、 II、 12、 I2S、 114及び I14Sの、ヒト PBMCにおけるサイト力イン産生誘導活性の比較

特表平 10-506265にお、て示され、強、免疫刺激活性を有するとされて、るオリゴヌクレオチド配列（11、 12、 I2S、 114及び I14S)と本発明の mod2の免疫刺激活性について、ヒト PBMCを用いたスクリーニングにより活性比較を行った。

[0042] ヒト PBMCに mod2を処置した結果、 ΙΟΟηΜ以上の処置により IFN- α産生誘導が確認された。 12及び 114の IFN- α産生の誘導はほとんど確認できず、これらの配列にリン酸骨格修飾した配列についても同様の結果であった。また、配列の両末端にリン酸骨格修飾された G配列を有する IIは、 300nM以上の処置により IFN- aの産生誘導が確認された力その産生量は mod2には及ばなかった（図 6)。

[0043] 以上の結果から、本発明のオリゴヌクレオチド mod2の免疫刺激活性は、特表平 10- 506265において示されている配列 II、 12、 I2S、 114及び I14Sよりも強いことが確認された。

実施例 5

[0044] 免疫刺激オリゴヌクレオチド mod2及び DVAX-5の、ヒト PBMCにおけるサイト力イン産生誘導活性の比較 CN1498895において示され、 mod2と同じ徳永らの 6塩基配列（CGATCG)を含む免疫刺激オリゴヌクレオチド (DVAX- 5)と本発明の mod2の免疫刺激活性について、ヒト PBMCを用いたスクリーニングにより活性比較を行った。

[0045] ヒト PBMCに mod2を処置した結果、 ΙΟΟηΜの処置により IFN- α産生誘導が確認された。 DVAX-5の IFN- α産生の誘導はほとんど確認できず、この配列をリン酸骨格修飾した配列 DVAX-5Sは IFN- a産生の誘導が見られた力その産生量は mod2よりも低かった。（図 7)。

[0046] 以上の結果から、本発明のオリゴヌクレオチド mod2の免疫刺激活性は、 CN149889 5に示されて!/、る配列 DVAX-5よりも強!、ことが確認された。

実施例 6

[0047] ノ《リンドローム配列両末端のホスホロチォエート修飾された G配列を含む免疫刺激ォリゴヌクレオチドの、マウス BMDCにおけるサイト力イン産生の誘導活性及び D19N+GS との活性比較

実施例 1におヽて使用した免疫刺激オリゴヌクレオチド mod2、および免疫刺激ヌクレオチド D19N+GSをマウス BMDCに処置し、マウスにおける免疫刺激活性のスクリーユングによる活性の比較を行った。

[0048] マウス BMDCに上記のオリゴヌクレオチドを各々処置したところ、 mod2の 1 /z M処置において、 IL-12p40産生の誘導活性が D19N+GSと比較して高いことを確認し、 5 M ではさらに活性が上昇した。また、実施例 1と同様、 M-non-CpG、 mod9及び modl2の免疫刺激活性は低いことを確認した。（図 8)

[0049] したがって、 mod2がヒトだけでなくマウスに対しても免疫刺激活性を示し、実施例 1と同様、本発明の免疫刺激オリゴヌクレオチドが D19N+GSよりも免疫刺激活性が高ぐさらに容易に類推できない発明であることが、マウスにおいても示された。

実施例 7

[0050] 免疫刺激オリゴヌクレオチド mod2の配列に塩基を置換、欠失および挿入した配列のサイト力イン産生誘導効果

本発明のオリゴヌクレオチド mod2の配列に 1塩基を挿入（modl9:配列番号 4、 mod2 1:配列番号 6、 mod22:配列番号 7)、 2塩基を挿入（mod20:配列番号 5、 mod23:配列番号 8)、 1塩基を置換 (mod24:配列番号 9、mod25:配列番号 10)、 2塩基を置換 (mo d26:配列番号 11、 mod29:配列番号 15、 mod37:配列番号 16、 mod38:配列番号 17、 mod39:配列番号 18)、 1塩基を欠失（mod27:配列番号 12、 mod28:配列番号 13)、および 3塩基を欠失 (3'末端の 3塩基を欠失 (ただし、さらに 5'末端に 4塩基を付加)。 Mo d33:配列番号 14)し、さらに末端 G配列間をホスホロチォエート修飾した配列を合成し、ヒト PBMCを用いて上記配列の免疫刺激活性のスクリーニングを行った。

[0051] ヒト PBMCに上記配列 1 μ Μを処置した結果、各処置により IFN- a産生の誘導が確認され、その産生量は mod2と比較して同程度であった（図 9)。また、上記配列 0.3及び 1 μ Μを処置した結果、各濃度の処置により IFN- yの産生が確認され、 IFN- aと同様、その産生量は mod2と比較して同程度であった（図 10)。

[0052] 従って、本発明のオリゴヌクレオチドである mod2配列の塩基を置換、挿入、及び欠失しても、 mod2と同等の活性が維持されることが確認された。

実施例 8

[0053] スギ花粉抗原感作マウスにおける抗原およびオリゴヌクレオチド共封入リボソーム処置の IgE増加抑制効果 1

mod2または D35をスギ花粉抗原 Cry j 1と共にリボソームへ封入し、投与抗原蛋白量が 1 gとなるようにマウスへ 1週間隔で 3回皮内投与した。最後の皮内投与から 1 週間後、抗原とァラム (説明)混合液の腹腔内投与（1週間隔 2回、投与抗原蛋白量 1 O ^ g)により強制的に IgEを増加させた。抗原ァラム投与力もさらに 2週間後、各個体の血清中総 IgE量を ELISA法にて測定し、各種 CpG '抗原封入リボソームの IgE増加抑制効果を観察した。

[0054] Mod2共封入リボソーム処置群は、 D35または 1018共封入リボソーム処置群と比較して、血清中 IgE量が低い値を示した。したがって、 mod2は in vitroだけでなぐ in vivoにぉヽても免疫刺激活性を示し、公知の配列である D35および 1018よりも強、活性を示すことが確認された。（図 11)また、上記した配列の in vitro及び in vivoの活性が相関してヽることから、サイト力イン産生誘導評価試験にぉヽて強ヽ免疫刺激活性を示すことは、臨床での有用性すなわち高い治療効果に結びつくことを確認した。

実施例 9 [0055] スギ花粉抗原感作マウスにおける抗原およびオリゴヌクレオチド共封入リボソーム処置の IgE増加抑制効果 2

mod2、 A151または K3をスギ花粉抗原 Cry j 1と共にリボソームへ封入し、実施例 4と同様の方法により各種 CpG'抗原封入リボソームの IgE増加抑制効果を観察した。

[0056] Mod2共封入リボソーム処置群は、 A151または K3共封入リボソーム処置群と比較して、血清中 IgE量が低い値を示し、その値はマウスで強い活性を示す M-CpG共封入リボソームと同程度の値であることを確認した。したがって、実施例 4と同様、 mod2は公知の配列である A151または K3よりも強い活性を示し、 in vivoにおいて強い免疫刺激活性を有することが確認された。（図 12)

実施例 10

[0057] ヒト PBMCを用いた D35および mod2の IgE産生抑制評価

ヒト PBMC(4 X 10⁵細胞/ well)を IL- 4 (10 ng/mL)と抗 CD40抗体（100 ng/mL)で共刺激して、 14日間培養すると、 IgE産生が誘導される。この系を用いて IgE産生誘導の刺激と同時に各種 CpG- ODN (0.3および 1.0 /z M)を添カ卩し、 14日間後の培養上清中の I gE濃度を ELISA法により測定した。その結果、各 CpG-ODN濃度依存的に IgE産生を抑制する傾向であった。 0.3 μ Μの処置において、 mod2は顕著に IgE産生を抑制し、 D35と比較して、 in vitroにおける IgE産生抑制活性が高いことを確認した。したがって、本発明の免疫オリゴヌクレオチドは公知の配列である D35よりもヒトにおける IgE産生抑制活性が高いことが確認された。（図 13)

図面の簡単な説明

[0058] [図 1]本発明および公知の免疫刺激オリゴヌクレオチドを処置したヒト PBMCにおける I FN- y産生量の結果を示す図である。

[図 2]本発明および公知の免疫刺激オリゴヌクレオチドを処置したヒト PBMCにおける I FN- a産生量の結果を示す図である。

[図 3]本発明および公知の免疫刺激オリゴヌクレオチドを処置したヒト PBMCにおける I FN- a産生量の結果を示す図である。

[図 4]本発明および公知の免疫刺激オリゴヌクレオチドを処置したヒト PBMCにおける I FN- y産生量の結果を示す図である。 [図 5]本発明および公知の免疫刺激オリゴヌクレオチドを処置したヒト PBMCにおける I FN- a産生量の結果を示す図である。

[図 6]本発明および公知の免疫刺激オリゴヌクレオチドを処置したヒト PBMCにおける I FN- a産生量の結果を示す図である。

[図 7]本発明および公知の免疫刺激オリゴヌクレオチドを処置したヒト PBMCにおける I FN- a産生量の結果を示す図である。

[図 8]本発明および公知の免疫刺激オリゴヌクレオチドを処置したマウス BMDCにおける IL-12p40産生量の結果を示す図である。

[図 9]本発明の免疫刺激オリゴヌクレオチドを処置したヒト PBMCにおける IFN- a産生量の結果を示す図である。

[図 10]本発明の免疫刺激オリゴヌクレオチドを処置したヒト PBMCにおける IFN- γ産生量の結果を示す図である。

[図 11]本発明および公知の免疫オリゴヌクレオチドとスギ花粉抗原 Cry j 1を共封入したリボソームをスギ花粉抗原感作マウスに処置した時の血清中 IgE増加抑制効果を示す図である。

[図 12]本発明および公知の免疫オリゴヌクレオチドとスギ花粉抗原 Cry j 1を共封入したリボソームをスギ花粉抗原感作マウスに処置した時の血清中 IgE増加抑制効果を示す図である。

[図 13]本発明および公知の免疫刺激オリゴヌクレオチド (終濃度 0.3および 1.0 M)と共に抗 CD40抗体（0.1 μ g/ml)と IL-4(20 ng/ml)を処置したヒト PBMCの IgE産生量の結果を示す図である。

Claims

請求の範囲

[I] 配列番号 1に示される塩基配列、又は該塩基配列において 1個乃至数個の塩基が置換し、欠失し及び Z若しくは挿入された塩基配列を含み、免疫刺激活性を有するオリゴヌクレオチド。

[2] 配列番号 1に示される塩基配列、又は該塩基配列において 1個乃至 4個の塩基が置換し、欠失し及び Z若しくは挿入された塩基配列を含み、免疫刺激活性を有する請求項 1記載のオリゴヌクレオチド。

[3] 配列番号 1に示される塩基配列、又は該塩基配列において 1個乃至 3個の塩基が置換し、欠失し及び Z若しくは挿入された塩基配列を含み、免疫刺激活性を有する請求項 2記載のオリゴヌクレオチド。

[4] 配列番号 1に示される塩基配列、又は該塩基配列において 1個又は 2個の塩基が置換し、欠失し及び Z若しくは挿入された塩基配列を含み、免疫刺激活性を有する請求項 3記載のオリゴヌクレオチド。

[5] ヒト及びマウスに対して免疫刺激活性を示す、請求項 1ないし 4のいずれか 1項に記載のオリゴヌクレオチド。

[6] 配列番号 4乃至 18の、ずれかの配列を含む請求項 1記載のオリゴヌクレオチド。

[7] 請求項 1乃至 6のいずれ力 1項に記載のオリゴヌクレオチドの全て、あるいは一部のリン酸結合、リボース糖部及び Z又は塩基部が修飾され、免疫刺激活性を有するォリゴヌクレオチド誘導体。

[8] 前記修飾が、ホスホジエステル結合を有するオリゴヌクレオチドのリン酸基部の酸素原子を硫黄原子で置換したホスホロチォエート型オリゴヌクレオチドィ匕である請求項 7 に記載のオリゴヌクレオチド誘導体。

[9] 5'-及び Z又は 3'-末端の連続する G配列のヌクレオチド残基間がホスホロチォエート修飾されてヽる、請求項 8に記載のオリゴヌクレオチド誘導体。

[10] 請求項 1乃至 9のいずれか 1項に記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド誘導体を含む、オリゴヌクレオチド複合体。

[II] 前記オリゴヌクレオチド複合体力オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド誘導体を埋封したリボソームである、請求項 10に記載のオリゴヌクレオチド複合体。 [12] 請求項 1乃至 9のいずれか 1項に記載のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体、又は請求項 10若しくは 11に記載のオリゴヌクレオチド複合体を有効成分として含有する医薬。

[13] 請求項 1乃至 9のいずれか 1項に記載のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体、又は請求項 10若しくは 11に記載のオリゴヌクレオチド複合体を有効成分として含有する、アレルギー疾患の治療又は予防剤。

[14] 前記アレルギー疾患が花粉アレルギー症である、請求項 13に記載の治療又は予防剤。

[15] 請求項 1乃至 9のいずれか 1項に記載のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体、又は請求項 10若しくは 11に記載のオリゴヌクレオチド複合体をアジュバントとして含むワクチン。

[16] 請求項 1乃至 9のいずれか 1項に記載のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体、又は請求項 10若しくは 11に記載のオリゴヌクレオチド複合体の有効量を投与することを含む、アレルギー疾患の治療又は予防方法。

[17] 前記アレルギー疾患が花粉アレルギー症である、請求項 16に記載の方法。

[18] 請求項 1乃至 9のいずれか 1項に記載のオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド誘導体、又は請求項 10若しくは 11に記載のオリゴヌクレオチド複合体のアレルギ一疾患の治療又は予防剤の製造のための使用。

[19] 前記アレルギー疾患が花粉アレルギー症である、請求項 18に記載の使用。

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[図