JP2003510290A - 免疫刺激核酸誘導インターフェロンに関する方法 - Google Patents

免疫刺激核酸誘導インターフェロンに関する方法

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Abstract

(57)【要約】 方法および組成物は、種々のウイルス性障害および増殖性障害の処置においてＩＦＮ−αの臨床的利用を広げるために提供される。他の局面中で、本発明は、ＩＦＮ−α処置の効力を増強し、そしてＩＦＮ−α処置に関連する副作用を減少する方法を提供する。さらに、方法は、インビトロで外因性のＩＬ−３またはＧＭ−ＣＳＦなしに、天然インターフェロン産生細胞（ＩＰＳ）の生存を支えるため、および天然インターフェロン産生細胞を活性化するため提供される。本発明は、特定のＣｐＧおよび非ＣｐＧ ＩＳＮＡが、ＩＰＣの生存および刺激を促進するという知見に基づく。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の背景） 白血球インターフェロンおよびαインターフェロンとしても公知であるヒトイ
ンターフェロンα（ＩＦＮ−α）は、抗ウイルス活性、抗増殖活性および免疫調
節活性を有する細胞外シグナル伝達タンパク質のファミリーを含む。同定されそ
して特徴付けられたインターフェロンの第１の型（ＩＦＮ−α）は、臨床適用の
ために最も広範に使用されるインターフェロンのままである。
【０００２】 ＩＦＮ−αは、Ｉ型インターフェロンファミリーのメンバーであり、これはま
た、ＩＦＮ−β、ω（白血球（ＩＩ））インターフェロンおよびτ（栄養膜）イ
ンターフェロンを含む。ωインターフェロンおよびτインターフェロンは、臨床
的には使用されない。ＩＦＮ−β（線維芽細胞インターフェロンとしても公知で
ある）は、良好に特徴づけられているが、臨床的にはＩＦＮ−αより利用されて
いない。線維芽細胞は、ＩＦＮ−βの優性な細胞性プロデューサーである。ＩＦ
Ｎ−βは、多発性硬化症の再発性形態を処置するために米国において認可されて
いる。インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）（γインターフェロンとしても公知で
ある）は、唯一の既知のＩＩ型インターフェロンである。ＩＦＮ−γは、活性化
Ｔリンパ球により産生されそしてＴｈ１免疫応答の確立において重要な役割を果
たす。その治療的用途は限定される。米国においては、ヒトＩＦＮ−γは、慢性
肉芽腫症を伴う感染の頻度および重症度を減少させるために認可されている。
【０００３】 ＩＦＮ−α自体は、１ダースを超える関連した相同タンパク質（アイソフォー
ム、表１）のファミリーを示し、各々は、特有の遺伝子によりコードされ、そし
て各々は、特有の活性プロフィールを示す。ウイルスに対する異なるαインター
フェロン種の活性は、１２倍以上も変化し得る。
【０００４】 臨床的使用におけるＩＦＮ−α生成物は、単一のアイソフォームの、組換えタ
ンパク質または高度に精製された天然のタンパク質である。組換えＩＦＮ−αは
、種々の腫瘍およびウイルス性疾患の処置における使用について認可されている
（表２）。
【０００５】 最近まで、Ｂリンパ球は、ＩＦＮ−αの優性プロデューサーであると考えられ
ていた。最近、新たな細胞型が、末梢血においてＩ型インターフェロン生成の主
要な供給源として同定された。これらの以前は同定されていなかった「天然イン
ターフェロン産生細胞」（ＩＰＣ）は、ウイルス感染に際して、非常に大量のＩ
型ＩＦＮを合成し得る稀なＣＤ４+／ＭＨＣ クラスＩＩ+集団（末梢血単核細胞
（ＰＢＭＣ）内で１：１０００）として長年記載されていた。Ｃｅｌｌａ Ｍら
、Ｎａｔ Ｍｅｄ ５：９１９（１９９９）；Ｇａｌｙ Ａら Ｂｌｏｏｄ ９
５：１２８（２０００）；Ｓｉｅｇａｌ ＦＰら Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１
８３５（１９９９）。末梢血からのＩＰＣの単離後、ＩＬ−３は、この細胞型の
生存に必要とされる。
【０００６】 （表１．ヒトＩＦＮ−αのファミリー）
【０００７】
【表１】 （表２．ＩＦＮ−αの現在の臨床認可）
【０００８】
【表２】 樹状細胞（ＤＣ）は、新抗原に対する免疫応答のプライミングにおいて重要な
役割を果たすと考えられる。Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ Ｊら、Ｎａｔｕｒｅ ３９
２：２４５（１９９８）。最近の証拠は、ヒト末梢血中のいくつかの異なるＤＣ
サブタイプの存在を示唆する。Ｚｈｏｎｇ ＲＫら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６
３：１２５４（１９９９）。ＤＣのこれらのサブタイプは、骨髄様ＤＣ（ｍＤＣ
）およびプラズマ細胞様ＤＣ（ｐＤＣ、ＤＣ２細胞としても公知）を含む。前駆
体樹状細胞は、２つのサブセット（ＣＤ１１ｃ+／ＣＤ１２３+/-集団（ｍＤＣの
前駆体）およびＣＤ１１ｃ-／ＣＤ１２３++集団（ｐＤＣの前駆体））を含む。
後者は最近非常に注目された。なぜなら、これは、天然のＩ型ＩＦＮ産生細胞（
ＩＰＣ）と同一であることが報告されたからである。Ｏ’Ｄｏｈｅｒｔｙ Ｕら
Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７８：１０６７（１９９３）；Ｇｒｏｕａｒｄ Ｇら
Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８５：１１０１（１９９７）；Ｔｈｏｍａｓ Ｒら
Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５３：４０１６（１９９４）。成熟に際して、この細胞
型は、ＤＣの特徴的な特色を発達させる。Ｏ’Ｄｏｈｅｒｔｙ Ｕら Ｊ Ｅｘ
ｐ Ｍｅｄ １７８：１０６７（１９９３）；Ｔｈｏｍａｓ Ｒら Ｊ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ １５３：４０１６（１９９４）；Ｇａｌｙ Ａら Ｂｌｏｏｄ ９５
：１２８（２０００）；Ｃｈｅｈｉｍｉ Ｊら Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６８：
４８８．（１９８９）。
【０００９】 正常な個体におけるＰＢＭＣにおけるＩＰＣの頻度は、０．２％と０．６％と
の間で変化する。これらは、系統マーカーＣＤ３（Ｔ細胞）、ＣＤ１４（単球）
、ＣＤ９（Ｂ細胞）およびＣＤ５６（ＮＫ細胞）の非存在により、ＣＤ１１ｃの
非存在により、そしてＣＤ４、ＣＤ１２３（ＩＬ−３レセプターα、ＩＬ−３Ｒ
α）およびＭＨＣクラスＩＩのそれらの発現により特徴付けられる。Ｇｒｏｕａ
ｒｄ Ｇら Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８５：１１０１−１１（１９９７）；Ｒ
ｉｓｓｏａｎ Ｍ−Ｃら Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８３：１１８３−６（１９９９）
；Ｓｉｅｇａｌ ＦＰら Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１８３５−７（１９９９）
；Ｃｅｌｌａ Ｍら Ｎａｔ Ｍｅｄ ５：９１９−２３（１９９９）。形態学
的にＩＰＣは、リンパ球と似ている。ＩＰＣは、磁気ビーズ活性化細胞分類（Ｍ
ＡＣＳ）と蛍光活性化細胞分類（フローサイトメトリー、ＦＡＣＳ）との組み合
わせによりＰＢＭＣから単離され得る。ＩＬ−３の添加なしでは、ほとんどのＩ
ＰＣは、細胞培養の３日以内に死滅する。ヘルペス単純ウイルス（ＨＳＶ，Ｓｉ
ｅｇａｌ ＦＰら Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１８３５−７（１９９９））また
はインフルエンザウイルス（Ｃｅｌｌａ Ｍら Ｎａｔ Ｍｅｄ ５：９１９−
２３（１９９９））でのＩＰＣの感染は、バイオアッセイ（水疱性口内炎ウイル
スに対する線維芽細胞の防護）により測定する場合、大量のＩ型インターフェロ
ンの産生を導く。
【００１０】 遺伝暗号を運搬する際のその役割の他に、ＤＮＡは、シグナル伝達分子として
機能することが最近示されている（Ｋｒｉｅｇ ＡＭ、１９９８、Ｂｉｏｄｒｕ
ｇｓ）。高等真核生物の免疫系は、特に塩基内容で、非メチル化ＣｐＧジヌクレ
オチドの関係に基づいて原核生物核酸を検出するための機構を進化させたようで
ある。Ｋｒｉｅｇ ＡＭら Ｎａｔｕｒｅ ３７４：５４６−９（１９９５）。
非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドは、細菌ＤＮＡに共通であるが、脊椎動物ＤＮ
Ａにおいて比重分に提示され（「ＣｐＧ抑制」）、そしてメチル化される。Ｂｉ
ｒｄ ＡＰ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ３：３４２（１９８７）
。免疫刺激性塩基関係におけるこれらの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む
ＤＮＡ（「ＣｐＧモチーフ」）はＢ細胞活性化を誘導することによる体液性免疫
、活性化誘導アポトーシスに対する耐性、ならびにＩＬ−６およびＩｇＭ分泌を
誘発する。Ｋｒｉｅｇ ＡＭら Ｎａｔｕｒｅ ３７４：５４６−９（１９９５
）；Ｙｉ ＡＫら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５７：５３９４（１９９６）；およ
びＫｌｉｎｍａｎ Ｄら Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９
３：２８７９（１９９６）。このようなＣｐＧ ＤＮＡはまた、単球およびマク
ロファージを直接活性化してＴｈ１様サイトカインを分泌する。Ｂａｌｌａｓ
ＺＫら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５７：１８４０（１９９６）；Ｃｏｗｄｅｒｙ
ＪＳら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５６：４５７０（１９９６）；およびＨａｌ
ｐｅ ｍ ＭＤら Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６７：７２（１９９６）。こ
れは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞溶解活性の活性化およびＩＦＮ−γ分泌を
導く。Ｂａｌｌａｓ ＺＫら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５７：１８４０（１９９
６）；Ｃｏｗｄｅｒｙ ＪＳら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５６：４５７０（１９
９６）；およびＣｈａｃｅ ＪＨ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐ
ａｔｈ ８４：１８５−９３（１９９７）。
【００１１】 Ｙａｍａｍｏｔｏらは、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ（ＢＣＧ）
から抽出した核酸画分（ＭＹ−１と称した）がインビトロでＩ型インターフェロ
ンを含むことを１９８８年の彼らの知見において報告した。Ｙａｍａｍｏｔｏ
Ｓら Ｊｐｎ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７９：８６６−７３（１９８８）。
引き続き、Ｔｏｋｕｎａｇａらは、３つの無作為に選択された公知のＢＣＧタン
パク質をコードするｃＤＮＡに存在する配列を有する４５マーのオリゴヌクレオ
チドのパネルを引き続いて合成し、そして１つの配列（ＢＣＧ−Ａ４）がマウス
脾細胞懸濁液中でのＩ型ＩＦＮの潜在的なインデューサーであることを見出した
。Ｔｏｋｕｎａｇａ Ｔら Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３６：５５
−６６（１９９２）。５’の３０マーのフラグメント（ＢＣＧ−Ａ４ａ）は、イ
ンタクトな４５マーのＢＣＧ−Ａ４と同様にＩＦＮの強力なインデューサーであ
ることが報告された。
【００１２】
【化１４】 次いで、これらの研究者は、ＩＦＮを誘導する全てのオリゴヌクレオチドが、ヘ
キサマーパリンドローム配列のＧＡＣＧＴＣ（ＢＣＧ−Ａ４およびＢＣＧ−Ａ４
ａに存在する）、ＡＧＣＧＣＴ、およびＡＡＣＧＴＴを含むが、ＡＣＣＧＧＴを
含まないことを報告した。Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｓら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４
８：４０７２−６（１９９２）。次いで、Ｋｉｍｕｒａらは、ヘキサマーパリン
ドロームＡＡＣＧＴＴならびにオリゴＡ、オリゴＣ、オリゴＴおよびオリゴＧ末
端を含む３０マーのホスホジエステルオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）の
中でも、後者（
【００１３】
【化１５】 ）が、マウス脾細胞懸濁液において最も強力なＩ型ＩＦＮのインデューサーであ
ったことを見出した。Ｋｉｍｕｒａ Ｙら Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｔｏｋｙｏ）
１１６：９９１−４（１９９４）。
【００１４】 最近、驚くべきことに、ヒトＢ細胞に対して最も強力な活性を有するＣｐＧ
ＯＤＮ配列が、ＰＢＭＣにおける検出可能なレベルのＩ型ＩＦＮを誘導しないこ
とが発見された。Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：１６
１７−２４（２０００）。
【００１５】 （発明の要旨） 本発明に従って、特定の免疫刺激核酸（ＩＳＮＡ）がＩＰＣの生存および刺激
の両方を促進するための単一の薬剤として特に適切であることが発見された。特
定のＩＳＮＡが、ＩＰＣ生存のためのＩＬ−３の必要性およびＩＰＣ活性化のた
めのウイルス感染の必要性を取り除くこともまた、本発明に従って発見された。
【００１６】 さらに、驚くべきことに、特定のＣｐＧ ＩＳＮＡが、大量のＩ型ＩＦＮの産
生を誘導するが、Ｂ細胞の活性化には最小限の効果しか有さず、一方、特定の他
のＣｐＧ ＩＳＮＡはヒトＢ細胞およびＩＰＣを強力に活性化するが、Ｉ型ＩＦ
Ｎの誘導には最小限の効果しか有さないことが本発明に従って発見された。驚く
べきことに、Ｉ型ＩＦＮの強力なインデューサーであるＣｐＧ ＩＳＮＡがＹａ
ｍａｍｏｔｏおよび同僚により記載されたヘキサマーパリンドロームのＧＡＣＧ
ＴＣ、ＡＧＣＧＣＴまたはＡＡＣＧＴＴを必ずしも含まないことが発見された。
Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｓら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８：４０７２−６（１９９
２）。
【００１７】 これらの発見は、ＩＦＮ−αの使用を必要とする臨床的適用のための治療剤と
しての、ＩＳＮＡ、そして特に特定のＣｐＧ ＩＳＮＡの使用への道を開放する
。臨床的ストラテジーは、ＩＳＮＡの局所的および全身的なインビボ投与、なら
びにインビトロのＩＳＮＡ活性化単離ＩＰＣが局所的または全身的に患者へ再注
入されるエキソビボストラテジーを含む。これらの治療ストラテジーは、他の増
殖因子（ＩＬ−３、ＧＭ−ＣＳＦ、ｆｌｔ−３リガンドなど）との組み合わせ、
ならびに他の刺激（スーパー抗原、ウイルス性産物）との組み合わせを含む。Ｉ
型ＩＦＮのインデューサーである本発明のＣｐＧ ＩＳＮＡはまた、ＩＰＣに由
来する恒久細胞株を使用する天然インターフェロンのインビトロ産性を可能にす
る。天然ＩＦＮ−αは１ダースを超える別々の遺伝子産物のファミリーであるの
で、これらの個々の産物は、独特の活性プロフィールを有し、天然インターフェ
ロンの臨床的使用は、単一組換えＩＦＮ−α遺伝子由来の組換えＩＦＮ−αと比
較して好ましくあり得る。
【００１８】 驚くべきことに、Ｉ型ＩＦＮがγδＴ細胞と呼ばれるＴリンパ球のサブセット
を活性化することもまた、本発明に従って発見された。さらに、Ｉ型ＩＦＮの強
力なインデューサーであることを伴わないＢ細胞およびｐＤＣの強力なアクチベ
ーターであるＣｐＧ ＯＤＮではなく、Ｉ型ＩＦＮの強力なインデューサーであ
るＣｐＧ ＯＤＮが、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の集団内に存在するγδＴ細
胞を活性化し得ることが、本発明に従ってさらに発見された。特定の理論に固執
することなく、Ｉ型ＩＦＮ誘導ＣｐＧ ＯＤＮが、これもまたＰＢＭＣに存在す
るＩＰＣによるＩ型ＩＦＮ分泌を誘発するそれらの能力によりＰＢＭＣ内に存在
するγδＴ細胞を活性化し得ることは明らかであるようである。
【００１９】 驚くベきことに、γδＴ細胞を活性化する能力に加えて、Ｉ型ＩＦＮの強力な
インデューサーであることを伴わないＢ細胞およびｐＤＣの強力なアクチベータ
ーであるＣｐＧ ＯＤＮではなく、Ｉ型ＩＦＮ誘導ＣｐＧ ＯＤＮが、ＰＢＭＣ
の集団内に存在する抗原活性化γδＴ細胞の増殖を増強し得ることが、本発明に
従って発見された。特に、増殖は、特定の非ペプチド性抗原（例えば、ホスホ抗
原イソペンテニルピロホスフェート（ＩＰＰ））の存在と組み合わせて増強され
得る。
【００２０】 驚くべきことに、ＩＰＰと組み合わせた特定のＣｐＧ ＯＤＮが、ＩＦＮ−γ
およびγδＴ細胞中のパーフォリンの産性を相乗的に誘導することが、本発明に
従って発見された。
【００２１】 本発明に従う別の驚くべき発見において、Ｉ型ＩＦＮの強力なインデューサー
であることを伴わないＢ細胞およびｐＤＣの強力なアクチベーターであるＣｐＧ
ＯＤＮではなく、Ｉ型ＩＦＮ誘導ＣｐＧ ＯＤＮが、ＰＢＭＣにおけるＣＤ４
０刺激ＩＬ−１２産生をブロッキングし得ることが見出された。さらに、驚くべ
きことに、Ｉ型ＩＦＮの強力なインデューサーとなることなしにＢ細胞およびｐ
ＤＣの強力なアクチベーターであるＣｐＧ ＯＤＮが、反対の効果を有したこと
（すなわち、これらのＯＤＮは実際にＰＢＭＣにおけるＣＤ４０刺激ＩＬ−１２
産生を増強した）が見出された。
【００２２】 Ｉ型ＩＦＮの強力なインデューサーであることを伴わずにＢ細胞およびｐＤＣ
の強力なアクチベーターであるＣｐＧ ＯＤＮが、Ｉ型ＩＦＮの潜在的なインデ
ューサーであるＣｐＧ ＯＤＮよりも、抗原特異的プライミングのより良好なプ
ロモーターであり、そしてヒト細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を必要とするこ
とが、本発明に従ってさらに発見された。
【００２３】 本発明の１つの局面に従って、改良が、被検体へのＩＦＮ−αの投与を含む治
療に提供される。この改良は、有効量の単離されたＩＳＮＡを同時投与すること
を含む。１つの実施形態では、ＩＦＮ−αは、ＩＦＮ−α単独について臨床的に
確立された有効量で投与される。別の実施形態では、ＩＦＮ−αは、ＩＦＮ−α
単独について臨床的に確立された有効量未満で投与される。ＩＦＮ−αはまた、
オリゴヌクレオチドの非存在下でＩＦＮ−αについての最大許容量で投与され得
る。他の実施形態では、ＩＦＮ−αは、ＩＦＮ−αの最大許容量またはＩＦＮ−
α単独について臨床的に確立された有効量の２０％未満、３０％未満、４０％未
満、または５０％未満でさえも投与される。
【００２４】 いくつかの実施形態では、ＩＳＮＡは、ＣｐＧ核酸である。他の実施形態では
、ＩＳＮＡは、非ＣｐＧ核酸である（すなわち、ＩＳＮＡは、ＣｐＧ核酸ではな
い）。１つの実施形態における非ＣｐＧ核酸は、Ｔに富む核酸である。別の実施
形態では、非ＣｐＧ核酸は、ポリ−Ｇ核酸である。なお別の実施形態では、免疫
刺激核酸は、ＣｐＧ核酸、Ｔに富む核酸およびポリ−Ｇ核酸を含む群より選択さ
れる少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである。
【００２５】 いくつかの実施形態では、ＩＳＮＡは改変される。特定の実施形態では、ＩＳ
ＮＡは、少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性分子内結合を有する改変された骨格
を有する。ヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合、
ホスホロジチオエート結合、メチルホスホネート結合およびペプチド結合を含む
群から選択され得る。特定の実施形態では、改変ＩＳＮＡは、少なくとも１つの
ヌクレオチドアナログまたは少なくとも１つのヌクレオチドアナログを含む。特
定の実施形態では、ＩＳＮＡはパリンドロームであり、一方、他の実施形態では
、ＩＳＮＡはパリンドロームではない。いくつかの好ましい実施形態では、ＩＳ
ＮＡは８ヌクレオチド長と１００ヌクレオチド長との間であり、一方、他の好ま
しい実施形態では、ＩＳＮＡは１２ヌクレオチド長と４０ヌクレオチド長との間
である。好ましいサイズ、配列および改変は、以下に詳細に記載されている。
【００２６】 特定の好ましい実施形態では、ＩＳＮＡは、式５’Ｙ1Ｎ1ＣＧＮ2Ｙ2３’（こ
こでＹ1およびＹ2は、互いに独立して、１と１０との間のヌクレオチドを有する
核酸分子であり、そしてここでＹ1は、少なくとも１つの改変されたヌクレオチ
ド間結合を含み；Ｙ2は、少なくとも１つの改変されたヌクレオチド間結合を含
み；そしてＮ1およびＮ2は、０と２０との間のヌクレオチド（いくつかの実施形
態では、３と８との間のヌクレオチド）を有する、互いに独立した核酸分子であ
るが、ここでＮ1ＣＧＮ2は、全部で少なくとも６ヌクレオチドを有し、かつここ
でＮ1ＣＧＮ2は、ホスホジエステル骨格を有する）により例示されるキメラＣｐ
Ｇ ＯＤＮである。
【００２７】 特定の好ましい実施形態では、ＩＳＮＡは、以下：
【００２８】
【化１６】 （ここで、各小文字は、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字は、ホ
スホジエステル結合を示す）に対応する配列を有する。
【００２９】 特定のより好ましい実施形態では、ＩＳＮＡは以下：
【００３０】
【化１７】 （ここで、各小文字は、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字は、ホ
スホジエステル結合を示す）に対応する配列を有する。
【００３１】 １つの実施形態では、改良は、被検体へ顆粒球−単球コロニー刺激因子（ＧＭ
−ＣＳＦ）を同時投与することを含む。
【００３２】 別の実施形態では、被検体は、増殖性障害およびウイルス感染からなる群より
選択される状態を有する。１つの実施形態では、被検体は、増殖性障害（例えば
、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性硬化症、
濾胞性リンパ腫、扁平上皮細胞癌、悪性腫瘍、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細
胞癌、前立腺癌、膀胱細胞癌、終脳形成異常および結腸癌）を有する。別の実施
形態では、被検体は、ウイルス感染（例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、尖圭コンジ
ローム、ヒト免疫不全ウイルス、疱疹、サイトメガロウイルス、エプスタイン−
バーウイルスおよびパピローマウイルス）を有する。
【００３３】 本発明の別の局面に従って、方法は、被検体のＩＦＮ−α処置を補足するため
に提供される。本発明のこの局面は、有効量の本発明のＩＦＮ−αおよびＩＳＮ
ＡをＩＦＮ−α処置を必要とする被検体に投与することを含む。本発明のこの局
面に従う、ＩＦＮ−αの処置のためのＩＦＮ−α用量、ＩＳＮＡ、併用治療およ
びＩＦＮ−αでの処置を必要とする状態は、上記のとおりである。
【００３４】 本発明の別の局面に従って、方法は、被検体を処置してその被検体のＩＰＣを
活性化するために提供される。この方法は、このような処置を必要とする被検体
からＩＰＣを単離する工程、単離されたＩＰＣをインビトロで培養する工程、こ
のＩＰＣを有効量の単離されたＩＳＮＡとインビトロで接触させる工程、および
この接触させた細胞を被検体に戻す工程を包含する。この細胞はまた、インビト
ロで増殖因子またはサイトカインと接触され得る。１つの実施形態では、方法は
、ＩＰＣ細胞をＩＬ−３またはＧＭ−ＣＳＦとインビトロで接触させる工程を包
含する。別の実施形態では、この細胞は、ＩＬ−３またはＧＭ−ＣＳＦの非存在
下でインビトロで培養される。本発明のこの局面に従って、ＩＦＮ−αでの処置
に必要とされるＩＳＮＡおよび条件は、上記されるとおりである。
【００３５】 本発明の別の局面に従って、被験体のＩＦＮ−α処置の効力を増加させるため
の方法が提供される。この方法は、ＩＦＮ−αによる処置の必要な被験体に、Ｉ
ＦＮ−αを含む薬学的組成物を投与する工程、および投与されたＩＦＮ−αと共
に、効果的なＩＦＮ−α処置である量のＩＳＮＡを含む薬学的組成物を被験体に
同時投与する工程を包含する。ＩＦＮ−α処置の効力は、ＩＳＮＡを同時投与し
ない場合のＩＦＮ−αと同じ量を投与する効力より大きい。本発明のこの局面に
従うＩＳＮＡおよびＩＦＮ−αによる処置を必要とする状態は上に記載されると
おりである。１つの実施形態において、薬学的組成物は局所的に投与される。
【００３６】 本発明の別の局面に従って、被験体の効果的な処置のために必要なＩＦＮ−α
の用量を減らすための方法が提供される。この方法は、ＩＦＮ−αによる処置を
必要とする患者にＩＦＮ−αを含む薬学的組成物を投与する工程、および被験体
にＩＳＮＡを含む薬学的組成物を同時投与する工程を包含する。投与されたＩＦ
Ｎ−αの量は、ＩＳＮＡの同時投与しない場合と同じ治療的利点を達成するため
に必要とされるＩＦＮ−αより少ない。特定の実施形態において、投与されるＩ
ＦＮ−α量は、免疫刺激核酸の同時投与しない場合に必要とされるＩＦＮ−α量
より少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくと
も５０％さえも少ない。ＩＳＮＡを含む薬学的組成物は、局所的に投与され得る
。本発明のこの局面に従うＩＳＮＡおよびＩＦＮ−αによる処置を必要とする状
態は上に記載されるとおりである。
【００３７】 本発明の別の局面に従って、ＩＦＮ−αによる処置を受けているかまたは必要
とする被験体におけるＩＦＮ−α処置に関連する副作用を避けるための方法が提
供される。この方法は、処置が必要な被験体に、ＩＦＮ−α薬学的組成物、およ
び投与されたＩＦＮ−αと一緒になって効果的なＩＦＮ−α処置となる量の免疫
刺激核酸含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。ＩＦＮ−α処置に関連す
る副作用は、ＩＳＮＡの同時投与を伴わずにＩＦＮ−αが投与される場合の副作
用と比較して、減少される。ＩＦＮ−α処置に関連する副作用は全身的であり得
る。この方法によって防がれるＩＦＮ−αに関連する副作用は、インフルエンザ
様症状、発熱、頭痛、悪寒、筋肉痛、疲労、食欲不振、吐気、嘔吐、下痢、およ
びうつ病のいずれか１つを含み得る。ＩＳＮＡを含む薬学的組成物は、局所的に
投与され得る。本発明のこの局面に従うＩＳＮＡおよびＩＦＮ−αによる処置を
必要とする状態は上に記載されるとおりである。
【００３８】 本発明の別の局面に従って、このような処置が必要な患者におけるＩＦＮ−α
処置の効力を増強するための方法が提供される。この方法は、このような処置が
必要な被験体に、状態を処置するためのＩＦＮ−αを含む有効量の薬学的組成物
を投与する工程、ドナーから天然のＩＦＮ産生細胞を単離する工程、ＩＦＮ産生
細胞にＩＦＮ−αを放出させるのに有効な量のＩＳＮＡに、単離されたＩＦＮ産
生細胞をエキソビボで接触させる工程、および接触させた細胞を被験体に投与す
る工程を包含する。ドナーは、被験体であってもよいが、被験体である必要はな
い。この方法は、抗原に単離された細胞を接触させる工程をさらに含み得る。細
胞の投与は、この方法の目的に適切な任意の様式でなされ得、そして局所的な注
射を含み得る。局所的な注射は、標的組織を供給する血管を介され得る。この血
管は、とりわけ、肝動脈、門脈、腹腔動脈、および脾動脈から、選択され得る。
本発明のこの局面に従うＩＳＮＡおよびＩＦＮ−αによる処置を必要とする状態
は上に記載されるとおりである。
【００３９】 本発明の別の局面に従って、インビトロでＩＰＣの生存を支持するための方法
が提供される。この方法は、被験体からこのような細胞を単離する工程、組織培
養に適切な無菌培地において細胞を培養する工程、およびＩＬ−３の非存在下で
細胞の増殖を支持するのに有効な量のＩＳＮＡと細胞とをインビトロで接触させ
る工程を包含する。好ましい実施形態において、細胞は、前駆体２型樹状細胞で
あり得る。培養条件はまた、ＩＬ−３なし、および／もしくはＧＭ−ＣＳＦなし
から選択され得るか、あるいは培養条件はＩＬ−３、ＧＭ−ＣＳＦ、もしくは他
の増殖因子およびサイトカインを含み得る。本発明のこの局面に従うオリゴヌク
レオチド、配列、改変体など含む好ましいＩＳＮＡは、上に記載されるとおりで
ある。
【００４０】 本発明の別の局面により、単離したＩＰＣをインビトロで刺激するための方法
が提供される。その方法は、被験体からこのような細胞を単離する工程、組織培
養に適した滅菌培地で細胞を培養する工程、および少なくとも１つのＩ型インタ
ーフェロンの分泌またはＣＤ８０の発現を誘導するに有効な量のＩＳＮＡとその
細胞とをインビトロで接触させる工程を包含する。培養条件は、インターロイキ
ン−３、ＧＭ−ＣＳＦ、または他の増殖因子およびサイトカインの存在または非
存在下であり得る。ＩＣＰは、２型樹状突起細胞の前駆体であり得る。本発明の
この局面による、オリゴヌクレオチド、配列、改変体などを含む好ましいＩＳＮ
Ａが、上記されている。
【００４１】 本発明の別の局面により、少なくとも３、４、５、６、７、または８以上もの
インターフェロンサブタイプのアレイの生成を刺激する方法が提供される。その
方法は、ＩＦＮ産生細胞とＩＳＮＡを接触させる工程を包含する。細胞は、単離
されていてもされていなくてもよい。接触工程は、インビボまたはインビトロで
あり得る。本発明のこの局面によるオリゴヌクレオチド、配列、改変体などを含
む好ましいＩＳＮＡが、本明細書中に記載されている。
【００４２】 本発明の別の局面により、ＩＬ−１２生成を阻害するための方法が提供される
。その方法は、ＩＬ−１２産生細胞が通常ＩＬ−１２を産生する条件でインター
フェロン産生細胞の存在下で、Ｉ型インターフェロンの分泌を誘導するに有効な
量の免疫刺激核酸とＩＬ−１２産生細胞とを接触させる工程を包含する。特定の
実施形態において、免疫刺激核酸は配列番号１〜３７の少なくとも１つを含む。
【００４３】 本発明のなお別の局面により、γδＴ細胞を活性化するための方法が提供され
る。１つの実施形態において、その方法は、γδＴ細胞とＩ型ＩＦＮとを接触さ
せる工程を包含する。別の実施形態において、その方法は、Ｉ型ＩＦＮを誘導す
るに有効な量の免疫刺激核酸とインターフェロン産生細胞を含む細胞の集団中の
γδＴ細胞とを接触させる工程を包含する。
【００４４】 別の局面において、本発明は、γδＴ細胞の増殖を促進する方法を提供する。
その方法は、γδＴ細胞と免疫刺激核酸の非存在下よりも存在下においてより大
きな増殖応答を誘導するに有効な量の免疫刺激核酸およびγδＴ細胞増殖の誘導
物質とを接触させる工程を包含する。特定の実施形態において、免疫刺激核酸は
、ＣｐＧ核酸である。好ましい実施形態において、免疫刺激核酸は、配列番号１
〜３７の中から選択される。いくつかの実施形態におけるγδＴ細胞増殖の誘導
物質はリン酸抗原、好ましくはＩＰＰである。
【００４５】 別の局面において、本発明は、以下を含む群より選択される配列を有する単離
された核酸を提供する：
【００４６】
【化１８】 （ここで、各小文字はホスホロチオエート結合を表し、そして各大文字はホスホ
ジエステル結合を示す）。
【００４７】 なお別の局面において、本発明は、以下を含む群より選択される配列を有する
単離された核酸を含む薬学的組成物および薬学的に受容可能なキャリアを提供す
る：
【００４８】
【化１９】 （ここで、各小文字はホスホロチオエート結合を表し、そして各大文字はホス
ホジエステル結合と薬学的に受容可能なキャリアを示す）。いくつかの実施形態
において、薬学的組成物はまた、ＩＦＮ−αを含む。
【００４９】 本発明の別の局面により、被験体への投与のためのインターフェロン組成物が
提供される。その組成物は被験体に投与するための容器中にインターフェロンを
含む。容器中のインターフェロンの量は、容認される最大許容用量（ＭＴＤ）よ
り少なくとも約１０％より少ない量である。好ましくは、容器中のインターフェ
ロンの量は、ＭＴＤの少なくとも２０％未満、ＭＴＤの少なくとも３０％未満、
ＭＴＤの少なくとも４０％未満、またはさらにＭＴＤの少なくとも５０％未満で
ある。容器はまた、ＩＳＮＡを含み得る。
【００５０】 本発明のさらに別の局面において、被験体にインターフェロンおよびＩＳＮＡ
を投与するためのキットが提供される。そのキットは、ＩＦＮαを含む組成物を
含む容器およびＭＴＤより少なくとも約１０％少ない、ＭＴＤより少なくとも約
２０％少ない、ＭＴＤより少なくとも約３０％少ない、ＭＴＤより少なくとも約
４０％少ない、またはＭＴＤより約５０％少ない量でのこのような処置を必要と
する被験体にインターフェロンを投与するための説明書を含む。このキットは、
同じ容器、または別の容器中にＩＳＮＡを含み得る。このキットはまた、ＩＦＮ
−αでの処置に対して感受性の状態の被験体を処置するための説明書を含み得る
。
【００５１】 本発明の各々の限定は、本発明の種々の実施形態を包括し得る。従って、任意
の１つの要素または要素の組み合わせを含む本発明の各々の限定が本発明の各々
の局面に包含され得ることが予測される。
【００５２】 本発明のこれらおよび他の局面は、以下により詳細に記載される。
【００５３】 （発明の詳細な説明） 本発明は、血球の特定のサブセットである天然のＩＦＮ産生細胞（ＩＰＣ）が
ＩＳＮＡにより刺激され、ＩＦＮ−αを産生するという発見を包含する。ＵＶ照
射されたウイルスまたは加熱殺菌された細菌のどの構成要素が、ＩＰＣによるＩ
ＦＮ−α産生の誘導に寄与するのか、以前は周知でなかったので、本発見は驚く
べきものであった。Ｓｉｅｇａｌ ＦＰら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１８３５
〜７（１９９９）。本発見はまた、ＩＰＣから生じる成熟したＤＣ２がＩＦＮ−
αの強力なプロデューサーではなかったことから、驚くべきものであった。さら
に、単球誘導化樹状突起細胞（ＤＣ１）がＣｐＧ核酸に対する応答においてＩＦ
Ｎ−αを産生しないことはまた、公知であった。ＩＦＮ−α分子のブロードなア
レイが刺激されることも驚くべきものであった。さらに、本発明は、ＩＳＮＡ投
与部位でのＩＦＮ−αの局所的な誘導を包含し、従って、同様のＩＦＮ−αの局
所的な濃度を達成するために必要な用量でのＩＦＮ−αの全身投与に関連する有
毒な影響を回避する。本発明はまた、ＩＳＮＡがＩＦＮ産生細胞を刺激し得、そ
れらを活性化し、刺激分子であるＣＤ８０（Ｂ７−１）と同時に発現するという
予期しない発見を含む。別の予期しない発見は、ＩＳＮＡが、インターロイキン
−３の非存在下でさえ、ＩＦＮ産生細胞の生存を支持し得るということである。
これらの種々の発見は、本明細書中で記載されたインビボ、エキソビボ、および
インビトロでの発明をもたらした。
【００５４】 ＩＳＮＡは、免疫系の細胞を接触させる際に、ＩＳＮＡ自身が、免疫系の接触
した細胞に増殖および／または活性化させ得る核酸分子である。接触させること
は直接または間接であり得、例えばＩＳＮＡは、第１型免疫細胞を直接的に刺激
して産物を発現し得、次いで、その産物は、ＩＳＮＡに曝露されないか、または
ＩＳＮＡ第２型免疫細胞に応答性のない第２型免疫細胞を刺激する。ＩＳＮＡの
免疫刺激効果は、ＩＳＮＡの配列により偶然にコードされ得た任意の産物とは分
別される。同様に、ＩＳＮＡの免疫刺激効果は、任意のアンチセンスメカニズム
とは異なり、そして任意のアンチセンスメカニズムに依存しない。特定の核酸の
みが、ＩＳＮＡである。本来は、特定のパリンドローム配列が免疫刺激性である
と考えられた。Ｔｏｋｕｎａｇａ Ｔら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ
３６：５５〜６６（１９９２）；Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｔら、Ａｎｔｉｓｅｎｓ
ｅ Ｒｅｓ Ｄｅｖ ４：１１９〜２２（１９９４）。さらなる研究は、非パリ
ンドローム配列も免疫刺激性であることを示したが、但しそれらは、特定の配列
背景（ＣｐＧモチーフ）中のＣｐＧジヌクレオチドを含む。Ｋｒｉｅｇ ＡＭ
ら、Ｎａｔｕｒｅ ３７４：５４６〜９（１９９５）。ＩＳＮＡは一本鎖または
二本鎖であり得る。一般的に、二本鎖核酸分子はインビボでより安定であり、一
方、一本鎖核酸分子は、増加した免疫活性を有する。従って、本発明のいくつか
の局面においては、ＩＳＮＡが一本鎖であることが好ましく、そして他の局面に
おいては、ＩＳＮＡが二本鎖でありことが好ましい。
【００５５】 用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は互換可能に使用され、複数の共
有結合したヌクレオチドを意味する。ここで、各々のヌクレオチドはホスフェー
トおよび交換可能な有機塩基に結合した糖（例えば、リボースまたはデオキシリ
ボース）を含み、これらは、置換ピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン
（Ｔ）、またはウラシル（Ｕ））、または置換プリン（例えば、アデニン（Ａ）
またはグアニン（Ｇ））のいずれかである。
【００５６】 本明細書中で使用される場合、用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」と
は、オリゴリボヌクレオチドおよびオリゴデオキシリボヌクレオチドをいう。こ
の用語はまた、ポリヌクレオシド（すなわち、ホスフェートを除いたポリヌクレ
オチド）および任意の他の有機塩基含有ポリマーを含む。核酸分子は現存の核酸
供給源（例えば、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ）から得られ得るが、好ましくは
、合成である（例えば、オリゴヌクレオチド合成より産生される）。
【００５７】 用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」はまた、共有結合的に改変された
塩基および／または糖を有する核酸またはオリゴヌクレオチドを含む。例えば、
それらは、３’位のヒドロキシル基以外および５’位のリン酸基以外の低分子量
有機基に共有結合された糖の基本骨格を有する核酸を含む。従って、改変された
核酸は２’−Ｏ−アルキル化されたリボース基を含み得る。さらに、改変された
核酸はリボースの代わりにアラビノースのような糖を含み得る。従って、核酸は
、基本骨格の組成物おいて異種であり得、それによってペプチド核酸（これは、
核酸塩基とともにアミノ酸基本骨格を有する）などと結合したポリマー単位の任
意の可能な組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、基本骨格の組成物
において核酸は同種である。
【００５８】 核酸はまた、Ｃ−５プロピン改変塩基などの塩基アナログを含み得る。Ｗａｇ
ｎｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４０〜８４４
（１９９６）。プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グアニ
ン、チミン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロ
プリン、２，６−ジアミノプリン、ヒポキサンチン、および他の天然に存在する
か、または人工的に生じる核酸塩基、置換および非置換の芳香族部分が挙げられ
るが、限定ではない。
【００５９】 核酸は、塩基のポリマー、核酸塩基アナログ、またはヌクレオチドに結合され
る。核酸の結合した単位に関して本明細書中で使用される場合、「結合した」ま
たは「結合」は、２つの要素が互いに任意の物理化学的手段により結合されるこ
とである。当業者に公知の任意の結合（共有結合または非共有結合）が含まれる
。このような結合は当業者に周知である。本来、天然に見出され、核酸の個々の
単位を結合している天然の結合が最も一般的である。しかし、核酸の個々の単位
は、合成的結合または改変された結合により結合され得る。
【００６０】 ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、メチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドの
少なくとも１つを含むオリゴヌクレオチドである。少なくとも１つの非メチル化
されたＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、非メチル化されてい
たシトシン−グアニンジヌクレオチド配列（すなわち、５’シトシン、次いで３
’グアニンを含み、そしてホスフェート結合により結合された「ＣｐＧ ＤＮＡ
」またはＤＮＡ）を含み、そして免疫系を活性化する核酸分子である。ＣｐＧオ
リゴヌクレオチド全体が、非メチル化されても、または一部が非メチル化されて
もよいが、少なくとも５’ＣＧ３’のＣは非メチル化されなければならない。Ｃ
ｐＧオリゴヌクレオチドは、二本鎖または一本鎖であり得る。本明細書中で使用
される場合、ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたはＣｐＧ核酸という用語は、特に示
さない限り、免疫刺激ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたは核酸をいう。
【００６１】 １つの好ましい実施形態において、本発明は少なくとも以下の式で表されるＣ
ｐＧオリゴヌクレオチドを提供する： ５’Ｘ1Ｘ2ＣＧＸ3Ｘ4３’ ここで、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4はヌクレオチドである。１つの実施形態にお
いて、Ｘ2は、アデニン、グアニンまたはチミンである。別の実施形態において
Ｘ3は、シトシン、アデニンまたはチミンである。
【００６２】 別の実施形態において、本発明は、少なくとも以下の式で表される単離された
ＣｐＧオリゴヌクレオチドを提供する： ５’Ｎ1Ｘ1Ｘ2ＣＧＸ3Ｘ4Ｎ2３’ ここでＸ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4はヌクレオチドであり、そしてＮは任意のヌクレ
オチドでありかつＮ1およびＮ2は、各々約０〜２５のＮからなる核酸配列である
。１つの実施形態において、Ｘ1Ｘ2は以下からなる群より選択されるジヌクレオ
チドである：ＧｐＴ、ＧｐＧ、ＧｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＴ、ＡｐＧ、ＣｐＴ、Ｃｐ
Ａ、ＣｐＧ、ＴｐＡ、ＴｐＴおよびＴｐＧ；そしてＸ3Ｘ4は以下からなる群より
選択されるジヌクレオチドである：ＴｐＴ、ＡｐＴ、ＴｐＧ、ＡｐＧ、ＣｐＧ、
ＴｐＣ、ＡｐＣ、ＣｐＣ、ＴｐＡ、ＡｐＡおよびＣｐＡ。好ましくは、Ｘ1Ｘ2は
ＧｐＡまたはＧｐＴであり、そしてＸ3Ｘ4はＴｐＴである。他の実施形態におい
て、Ｘ1もしくはＸ2または両方がプリンでありかつＸ3もしくはＸ4または両方が
ピリミジンであるか、またはＸ1Ｘ2がＧｐＡでありかつＸ3もしくはＸ4または両
方がピリミジンである。別の好ましい実施形態において、Ｘ1Ｘ2が以下からなる
群より選択されるジヌクレオチドである：ＴｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＣ、ＡｐＧおよ
びＧｐＧ。さらに別の実施形態において、Ｘ3Ｘ4は以下からなる群より選択され
るジヌクレオチドである：ＴｐＴ、ＴｐＡ、ＴｐＧ、ＡｐＡ、ＡｐＧ、ＧｐＡお
よびＣｐＡ。別の実施形態におけるＸ1Ｘ2は、以下からなる群より選択されるジ
ヌクレオチドである：ＴｐＴ、ＴｐＧ、ＡｐＴ、ＧｐＣ、ＣｐＣ、ＣｐＴ、Ｔｐ
Ｃ、ＧｐＴおよびＣｐＧ；Ｘ3はＡおよびＴからなる群より選択されるジヌクレ
オチドであり、そしてＸ4はヌクレオチドであるが、ここでＸ1Ｘ2がＴｐＣ、Ｇ
ｐＴまたはＣｐＧである場合、Ｘ3Ｘ4はＴｐＣ、ＡｐＴまたはＡｐＣではない。
【００６３】 別の好ましい実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列５’ＴＣ
Ｎ1ＴＸ1Ｘ2ＣＧＸ3Ｘ4３’を有する。いくつかの実施形態において本発明のＣ
ｐＧオリゴヌクレオチドは、ＧｐＴ、ＧｐＧ、ＧｐＡおよびＡｐＡからなる群よ
り選択されるＸ1Ｘ2を含み、そしてＸ3Ｘ4は、ならびにＴｐＴ、ＣｐＴおよびＴ
ｐＣからなる群より選択される。
【００６４】 細胞への取り込みを容易にするために、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドを含む
ＩＳＮＡは好ましくは８〜１００塩基長の範囲内である。しかし、より大きな核
酸は細胞内でオリゴヌクレオチドへ消化されることから、十分な免疫刺激モチー
フが存在する場合、本発明に従って、８ヌクレオチド以上の任意のサイズ（さら
に多くのｋｂ単位の長さ）の核酸が、免疫応答を誘導し得る。好ましくは、ＩＳ
ＮＡは８ヌクレオチド長と１００ヌクレオチド長の間の範囲内である。いくつか
の好ましい実施形態において、ＩＳＮＡは１２ヌクレオチド長と４０ヌクレオチ
ド長の間である。より好ましい実施形態においてＩＳＮＡは、８ヌクレオチド長
と３０ヌクレオチド長の間である。最も好ましい実施形態において、ＩＳＮＡは
８ヌクレオチド長と２４ヌクレオチド長の間である。
【００６５】 「パリンドローム配列」は、反転した繰り返しを意味する。（すなわち、ＡＢ
ＣＤＥＥ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’のような配列（ＡおよびＡ’、ＢおよびＢ’、Ｃお
よびＣ’、ＤおよびＤ’ならびにＥおよびＥ’は、通常のワトソン−クリックの
塩基対を形成し得る塩基である））。インビボでは、このようなパリンドローム
配列は二本鎖構造を形成し得る。１つの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレ
オチドは、パリンドローム配列を含む。この前後関係において使用されるパリン
ドローム配列とは、ＣｐＧがパリンドロームの一部であるそのパリンドローム、
そして好ましくはＣｐＧがパリンドロームの中心であることをいう。別の実施形
態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドはパリンドロームを含まない。パリンド
ロームを含まないＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＣｐＧジヌクレオチドがパリン
ドロームの一部ではないＣｐＧオリゴヌクレオチドである。このようなオリゴヌ
クレオチドは、ＣｐＧがパリンドロームの中心でないパリンドロームを含み得る
。
【００６６】 本発明のＣｐＧ核酸配列は、上記に広範囲に記載され、そしてそれぞれ１９９
５年２月７日および１９９７年１０月３０に出願された米国出願番号０８／３８
６，０６３号および同０８／９６０，７７４の優先権を主張するＰＣＴ公開特許
出願ＰＣＴ／ＵＳ９５／０１５７０および同ＰＣＴ／ＵＳ９７／１９７９１に開
示される。例示的な配列として、表３および表５に示される免疫刺激配列が挙げ
られるが、これに限定されない。 （表３．例示的なＣｐＧ ＩＳＮＡ）
【００６７】
【表３】 本発明の免疫刺激核酸はまた、Ｔに富むモチーフを有する核酸を含む。本明細
書中で使用される場合，「Ｔに富む核酸」は、少なくとも１つのポリＴ配列を含
み，そして／またはＴヌクレオチド残基が２５％より多いヌクレオチド組成物を
有する核酸である。ポリＴ配列を有する核酸は，５’ＴＴＴＴ３’のように少な
くとも４つの一列に並んだＴを含む。好ましくは，Ｔに富む核酸は、１以上のポ
リＴ配列を含む。好ましい実施形態において，Ｔに富む核酸は２、３、４などの
ポリＴ配列を有し得る。最も高い免疫刺激性のＴに富むオリゴヌクレオチドの１
つは、すべてＴヌクレオチド残基で構成される核酸である。他のＴに富む核酸は
、Ｔヌクレオチド残基が２５％より多いヌクレオチド組成を有するが、ポリＴ配
列を含む必要はない。これらのＴに富む核酸において，Ｔヌクレオチド残基は他
の型のヌクレオチド残基（すなわちＧ，Ｃ，およびＡ）により互いに分離され得
る。いくつかの実施形態において，Ｔに富む核酸は，Ｔヌクレオチド残基が３５
％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％および９９％より多いヌ
クレオチド組成物、およびその間のすべての整数％のヌクレオチド組成を有する
。好ましくは，Ｔに富む核酸は，少なくとも１つのポリＴ配列および２５％より
多くくのＴヌクレオチド残基がヌクレオチド組成を有する。
【００６８】 Ｔに富む核酸はまた、１９９９年９月２５日に出願された米国仮特許出願第６
０／１５６，１１３号の優先権を主張する２０００年９月２５日に出願された米
国出願第 号に記載されそして特許請求されており、これは本明細書中に
より参考として援用される。表３に示された多くのＣｐＧ ＯＤＮはまた、ここ
に定義されたようなＴに富む核酸である。
【００６９】 多くの参考文献がまた、ポリＧ核酸（以下に定義される）の免疫刺激特性を記
載する。ＰｉｓｅｔｓｋｙおよびＲｅｉｃｈ（１９９３）Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒ
ｅｐｏｒｔｓ １８：２１７〜２２１；ＫｒｉｅｇｅｒおよびＨｅｒｚ（１９９
４）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６３：６０１〜６３７；Ｍａｃａｙａら
（１９９３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：３７４５
〜３７４９；Ｗｙａｔｔら（１９９４）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ
ＵＳＡ ９１：１３５６〜１３６０；ＲａｎｄｏおよびＨｏｇａｎ（１９９８
）Ａｐｐｌｉｅｄ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＫｒｉｅｇおよびＳｔｅｉｎ編、３３５〜３５２頁；なら
びにＫｉｍｕｒａら（１９９４）Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １１６：９９１〜９９４
。ポリＧ含有オリゴヌクレオチドは、細菌感染およびウイルス感染を処置および
予防するのに有用である。
【００７０】 ポリＧに富むオリゴヌクレオチドが、例えば，ＣｐＧオリゴヌクレオチド，コ
ンカナバリンＡ、細菌ＤＮＡなどの化合物、または１３−酢酸１２−ミリスチン
酸ホルボール（ＰＭＡ）とカルシウムイオノフォア Ａ ２３１８７との組み合
わせ（ＨａｌｐｅｒｉｎおよびＰｉｓｅｔｓｋｙ（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｐｈ
ａｒｍａｃｏｌ ２９：４７〜５２）、ならびにＩＦＮ−γの下流ブロック効果
によりＩＦＮ−γ産生を阻害することは、先行技術において以前に示唆された。
例えば，Ｒａｍａｎａｔｈａｎらは、ポリＧオリゴヌクレオチドがＩＦＮ−γが
そのレセプターに結合するのを阻害し，このことが、ＩＦＮ−γに応答したＭＨ
ＣクラスＩおよびＩＣＡＭ−１の正常な増加を阻止する。Ｒａｍａｎａｔｈａｎ
ら（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：６１２〜６１５。ポリ
Ｇオリゴヌクレオチドはまた、リンパ球からのＩＦＮ−γの分泌を阻害し得るこ
とが見出された。ＨａｌｐｅｒｉｎおよびＰｉｓｅｔｓｋｙ（１９９５）Ｉｍｍ
ｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ ２９：４７〜５２。
【００７１】 好ましくは，ポリＧ核酸は以下の式を有する核酸である： ５’Ｘ1Ｘ2ＧＧＧＸ3Ｘ4３’ ここで、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4はヌクレオチドである。好ましい実施形態にお
いて，Ｘ3およびＸ4の少なくとも１つはＧである。他の実施形態においては、Ｘ 3 およびＸ4の両方はＧである。さらに他の実施形態において，好ましい式は、５
’ＧＧＧＮＧＧＧ３’または５’ＧＧＧＮＧＧＧＮＧＧＧ３’であり、ここでＮ
は０と２０の間のヌクレオチドを表す。他の実施形態において、ポリＧ核酸（例
えば，配列番号９５〜１１４、１１７〜１２１、１２３〜１３０、１３２および
１３３として表４に列挙される核酸）がＣｐＧジヌクレオチド含まない。他の実
施形態において，ポリＧ核酸（例えば，配列番号１１５、１１６、１２２、１３
１、および１３４〜１３６として表４に列挙される核酸）は少なくとも１つのＣ
ｐＧジヌクレオチドを含む。特に好ましいＩＳＮＡは配列番号１３４、１３５、
および１３６である。 （表４．ポリ−Ｇ ＩＳＮＡ）
【００７２】
【表４】 より一般的に、本発明のＩＳＮＡは、少なくとも２つの種類のＩＳＮＡ（Ｃｐ
Ｇ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸を含む）の任意の組み合わせを含み得
る。このような組み合わせは、キメラ核酸の形態で生じ得、ここで、少なくとも
２つの種類のＩＳＮＡが、単一の核酸分子で表現される。
【００７３】 さらに、異なる配列および／または異なる種類のＩＳＮＡを有する少なくとも
２つの個々の核酸分子が一緒に使用され得る。一緒に使用される少なくとも２つ
の個々の核酸分子は、単一の種類のまたは少なくとも２つの種類のＩＳＮＡを表
現し得る。
【００７４】 ＩＦＮ−αを誘導するための好ましい組成物は、ホスホジエステル中心領域を
有する分子の３’末端および５’末端において、ホスフェート改変を有するオリ
ゴヌクレオチドを含む組成物である。この好ましい分子は、以下の式： ５’Ｙ1Ｎ1ＣＧＮ2Ｙ2３’ によって例示され、ここで、Ｙ1およびＹ2は、互いに独立しており、１ヌクレオ
チドと１０ヌクレオチドの間を有する核酸分子であり、そしてここで、Ｙ1が少
なくとも１つの改変されたヌクレオチド間連結を含み、そしてＹ2が少なくとも
１つの改変されたヌクレオチド間連結を含み、そしてＮ1およびＮ2が、核酸分子
であり、それぞれが互いに独立して０ヌクレオチドと２０ヌクレオチドの間を有
し、そしていくつかの実施形態において、３ヌクレオチドと８ヌクレオチドの間
を有するが、Ｎ1ＣＧＮ2は、合計で少なくとも６ヌクレオチドを有し、そしてＮ 1 ＣＧＮ2のヌクレオチドは、ホスホジエステル骨格を有する。中心領域が１つ以
上のホスホジエステルヌクレオチド間連結を有する１つ以上のホスホロチオエー
ト改変ヌクレオチド間連結を有するオリゴヌクレオチドが、ＩＦＮ−αを誘導す
る予期されない高い能力を示した。これらのオリゴヌクレオチドの活性は、最初
の２つおよび最後の５つのヌクレオチド間連結がホスフェート改変を含み、そし
て／またはオリゴヌクレオチドがポリＧ末端を含む場合、特に高かった。
【００７５】 Ｙ1およびＹ2は、互いに独立していると考えられる。これは、Ｙ1およびＹ2の
それぞれが、同じ分子内で互いに異なる配列および異なる骨格連結を有しいても
良いし有していなくても良いことを意味する。配列は、種々であるが、いくつか
の場合において、Ｙ1およびＹ2が、ポリＧ配列を有する。ポリＧ配列とは、列に
おける少なくとも３つのＧをいう。他の実施形態において、ポリＧ配列とは、列
における少なくとも４つ、５つ、６つ、７つ、または８つのＧをいう。
【００７６】 いくつかの実施形態において、Ｙ1およびＹ2は、３ヌクレオチドと８ヌクレオ
チドの間または４ヌクレオチドと７ヌクレオチドの間を有する。これらのヌクレ
オチドの少なくとも１つは、改変されたヌクレオチド間連結を含む。いくつかの
実施形態において、Ｙ1およびＹ2は、少なくとも２つの改変されたヌクレオチド
間連結を含み、そして他の実施形態において、Ｙ1およびＹ2は、２つと５つの間
の改変されたヌクレオチド間連結を含む。なお他の実施形態において、Ｙ1は、
２つの改変されたヌクレオチド間連結を有し、そしてＹ2は、５つの改変された
ヌクレオチド間連結を有する。他の実施形態において、Ｙ1は、５つの改変され
たヌクレオチド間連結を有し、そしてＹ2が、２つの改変されたヌクレオチド間
連結を有する。
【００７７】 Ｉ型ＩＦＮの分泌を誘導するための、本発明の例示的な好ましいＩＳＮＡは、
以下の表５に示され、小文字がホスホロチオエート連結を示し、そして大文字が
ホスホジエステル連結を示す。
【００７８】
【表５】 本発明における使用のために、核酸は、当該分野において周知の任意の多くの
手順を使用して、新たに合成され得る。例えば、核酸は、β−シアノエチルホス
ホラミダイト法（Ｂｅａｕｃａｇｅ ＳＬおよびＣａｒｕｔｈｅｒｓ ＭＨ Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２２：１８５９（１９８１））またはヌクレ
オシド Ｈ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅ
ｔｔ ２７：４０５１（１９８６）；Ｆｒｏｅｈｌｅｒら、Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄ
Ｒｅｓ １４：５３９９（１９８６）；Ｇａｒｅｇｇら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒ
ｏｎ Ｌｅｔｔ ２７：４０５５（１９８６）；Ｇａｆｆｎｅｙら、Ｔｅｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２９：２６１９（１９８８））を使用して合成され得
る。これらの化学は、市場で入手可能な種々の自動化オリゴヌクレオチド合成機
によって実行され得る。これらのオリゴヌクレオチドは、合成ヌクレオチドと呼
ばれる。あるいは、ＩＳＮＡは、プラスミド中で大量に作製され得（Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋ、Ｔ．ら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８９を参照のこと）、そして
より小さな片に分離され得るかまたは全体として投与され得る。オリゴヌクレオ
チドは、公知技術（例えば、制限酵素、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレ
アーゼを使用する技術）を使用して、既存の核酸配列（例えば、ゲノムＤＮＡま
たはｃＤＮＡ）から調製され得る。この方法で調製されるオリゴヌクレオチドは
、単離されたオリゴヌクレオチドと呼ばれる。用語ＩＳＮＡは、合成された免疫
刺激性核酸と単離された免疫刺激性核酸との両方を包含する。
【００７９】 インビボでの使用のために、ＩＳＮＡは、好ましくは、分解に対して比較的耐
性である（例えば、安定化される）。「安定化された核酸分子」は、インビボ分
解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）に対して比
較的耐性である核酸分子を意味する。安定化は、長さまたは２次構造の関数であ
り得る。例えば、数十〜数百ｋｂの長さであるＩＳＮＡは、インビボ分解に対し
て比較的耐性である。より短いＩＳＮＡについて、二次構造は、安定化され得そ
してそれらの効果を増加し得る。例えば、オリゴヌクレオチドの３’末端が上流
領域に対して自己相補性を有し、その結果、折り畳まれそして一種のステムルー
プ構造を形成し得る場合、オリゴヌクレオチドは、安定化され、従ってより活性
を示す。
【００８０】 あるいは、核酸安定化は、ホスフェート骨格改変を介して達成され得る。本発
明の好ましい安定化されたオリゴヌクレオチドは、改変された骨格を有する。オ
リゴヌクレオチド骨格の改変が、インビボで投与される場合、ＩＳＮＡの活性の
増加を提供することが示されている。これらの安定化された構造は、本発明のＩ
ＳＮＡが少なくとも部分的に改変された骨格を有するので、好ましい。例えば、
オリゴヌクレオチドの５’末端に少なくとも２つのホスホロチオエート連結およ
び３’末端に複数のホスホロチオエート連結（好ましくは、５つ）を含む所与の
配列のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、最大の活性を提供し、そして細胞内エキソ
ヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼによる分解からオリゴヌクレオチドを保
護する。他の改変オリゴヌクレオチドには、ホスホジエステル改変オリゴヌクレ
オチド、ホスホジエステルおよびホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの組み
合わせ、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエー
ト、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。これらの組み合わせのそれぞれ
および免疫細胞に対するそれらの特定の効果は、ＰＣＴ公開特許出願ＰＣＴ／Ｕ
Ｓ９５／０１５７０およびＰＣＴ／ＵＳ９７／１９７９１（１９９５年２月７日
および１９９７年１０月３０日にそれぞれ出願された米国シリアル番号０８／３
８６，０６３号および同０８／９６０，７７４号について優先権を主張する）に
さらに詳細に議論され、この全体の内容が、本明細書によって参考として援用さ
れる。これらの改変された骨格オリゴヌクレオチドが、増強されたヌクレアーゼ
耐性、増加した細胞取り込み、増加したタンパク質結合、および／または改変さ
れた細胞内局在化に起因して、より刺激性の活性を示し得ると考えられる。
【００８１】 ホスホロチオエートのような改変された骨格を、ホスホルアミデートまたはＨ
−ホスホネートのいずれかの化学を用いて、自動化技術を使用して合成し得る。
アリールホスホネートおよびアルキルホスホネートを、例えば、米国特許第４，
４６９，８６３号に記載されるように作製し得る；そしてアルキルホスホトリエ
ステル（ここで、荷電した酸素部分は、米国特許第５，０２３，２４３号および
欧州特許第０９２，５７４号に記載されるようにアルキル化される）を、市販の
試薬を使用して、自動化固相合成によって調製し得る。ＤＮＡ骨格の他の改変お
よび置換を行うための方法が、記載されている。Ｕｈｌｍａｎｎ ＥおよびＰｅ
ｙｍａｎ Ａ Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９０：５４４（１９９０）；Ｇｏｏｄｃｈｉ
ｌｄ Ｊ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ １：１６５（１９９０）。
【００８２】 他の安定化オリゴヌクレオチドとしては、以下が挙げられる：非イオン性ＤＮ
Ａアナログ（例えば、アルキルホスフェートおよびアリールホスフェート（ここ
で、荷電したホスホネート酸素が、アルキル基またはアリール基によって置換さ
れている）ならびにアルキルホスホジエステルおよびアルキルホスホトリエステ
ル（ここで、荷電した酸素部分がアルキル化されている））。いずれかまたは両
方の末端においてジオールを含むオリゴヌクレオチド（例えば、テトラエチレン
グリコールまたはヘキサエチレングリコール）もまた、ヌクレアーゼ分解に対し
て実質的に抵抗性であることが示された。
【００８３】 いくつかの実施形態において、本発明によって有用なＩＳＮＡは、ＳおよびＲ
のキラルなＩＳＮＡである。「ＳキラルＩＳＮＡ」とは、本明細書中において使
用される場合に、少なくとも２つのヌクレオチドがキラル中心を形成する骨格改
変を有し、そしてこれらの複数のキラル中心がＳキラリティーを有する、ＩＳＮ
Ａである。「ＲキラルＩＳＮＡ」とは、本明細書中において使用される場合に、
少なくとも２つのヌクレオチドがキラル中心を形成する骨格改変を有し、そして
これらの複数のキラル中心がＲキラリティーを有する、ＩＳＮＡである。骨格改
変は、キラル中心を形成する任意の型の改変であり得る。この改変としては、ホ
スホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホ
ロチオエート、およびこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されな
い。
【００８４】 キラルＩＳＮＡは、骨格改変を有する少なくとも２つのヌクレオチドを、オリ
ゴヌクレオチド内に有さなければならない。しかし、このオリゴヌクレオチド内
の全てまたは一部のヌクレオチドが、改変された骨格を有し得る。改変された骨
格を有するヌクレオチド（キラル中心と呼ぶ）のうちの複数のものが、単一のキ
ラリティー（ＳまたはＲ）を有する。「複数」とは、本明細書中において使用さ
れる場合に、５０％より多い量をいう。従って、一部のキラル中心は、複数のキ
ラル中心がＳまたはＲのキラリティーを有する限り、ＳまたはＲのキラリティー
を有し得る。いくつかの実施形態において、少なくとも５５％、６０％、６５％
、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％のキラル
中心が、ＳまたはＲのキラリティーを有する。他の実施形態において、少なくと
も５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％
、または１００％のヌクレオチドが、骨格改変を有する。
【００８５】 ＳおよびＲのキラルＩＳＮＡは、キラル的に純粋なオリゴヌクレオチドを生成
するための、当該分野において公知の任意の方法によって、調製され得る。立体
的に純粋なホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドを、オキサチアホス
ホラン法を使用して生成するための方法を教示する、多くの参考文献が、刊行さ
れている。Ｓｔｅｃ ＷＪら、Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １１７：１２０１
９（１９９５）。キラル的に純粋なオリゴヌクレオチドを作製するための他の方
法は、ＩＳＩＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのような会社によって、記載
されている。米国特許もまた、これらの方法を記載している。例えば、米国特許
第５，８８３，２３７号；同第５，８３７，８５６号；同第５，５９９，７９７
号；同第５，５１２，６６８号；同第５，８５６，４６５号；同第５，３５９，
０５２号；同第５，５０６，２１２号；同第５，５２１，３０２号；および同第
５，２１２，２９５号（これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援
用される）は、立体的に純粋なオリゴヌクレオチドを生成するための方法を開示
する。
【００８６】 「被験体」とは、ヒトまたは脊椎動物を意味するべきであり、イヌ、ネコ、ウ
マ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、非ヒト霊長類（例えば、サル）、魚
類（水産養殖種、例えば、サケ）、ウサギ、ラット、およびマウスが挙げられる
が、これらに限定されない。
【００８７】 「増殖性障害を有する被験体」とは、検出可能な所望でない増殖性細胞を有す
る被験体である。所望でない増殖性細胞は、癌を有する被験体における癌細胞で
あり得る。癌は、悪性の癌であっても非悪性の癌であってもよい。癌または腫瘍
としては、胆管癌；膀胱癌；脳癌；乳癌；頸部癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌
；食道癌；胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）；上皮内新生物；白血病；肝
癌；肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）；リンパ腫；黒色腫；多発性骨髄腫
；神経芽細胞腫；口腔癌；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；腎癌；肉腫；皮
膚癌；胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）；精巣癌；および甲状腺癌；なら
びに他の癌腫および肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態
において、所望でない増殖性細胞は、非癌性であり得る（例えば、自己免疫状態
または炎症性状態に関連する細胞）。
【００８８】 「ウイルス感染を有する被験体」とは、ウイルスに曝露され、そして急性また
は慢性の症状発現または検出可能なレベルのウイルスを身体内に有する、被験体
である。
【００８９】 ヒトにおいて見出されたウイルスの例としては、以下が挙げられるが、これら
に限定されない：Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（
例えば、ＨＩＶ−ｌ（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶもしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／Ｌ
ＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩともまた呼ばれる）；および他の単離体（例えば、
ＨＩＶ−ＬＰ））；Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ポリオウイルス、
Ａ型肝炎ウイルス）；エンテロウイルス属、ヒトコクサッキーウイルス、ライノ
ウイルス、ＥＣＨＯウイルス）；Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ（例えば、胃腸炎を
引き起こす株）；Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウ
イルス）；Ｆｌａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、デン
グ熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ
（例えば、コロナウイルス）；Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、水疱性口
内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、エボラウ
イルス）；Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、パラインフルエンザウイ
ルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、ＲＳウイルス）；Ｏｒｔｈｏｍ
ｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、インフルエンザウイルス）；Ｂｕｎｇａｖｉｒ
ｉｄａｅ（例えば、ハンターンウイルス、ブンヤウイルス（ｂｕｎｇａ ｖｉｒ
ｕｓ）、プレボウイルスおよびナイロウイルス（Ｎａｉｒｏ ｖｉｒｕｓ））；
アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、レオウ
イルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）；Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ；Ｈ
ｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ（Ｂ型肝炎ウイルス）；Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａ（
パルボウイルス）；Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ（パピローマウイルス、ポリオ
ーマウイルス）；Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ（大部分のアデノウイルス）；Ｈｅ
ｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘−
帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；Ｐ
ｏｘｖｉｒｉｄａｅ（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）
；Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、アフリカ豚コレラウイルス）；ならびに
分類されていないウイルス（例えば、海綿状脳障害の病因学的因子、デルタ型肝
炎の因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損サテライトであると考えられる）、非Ａ非Ｂ
肝炎の分類されていない因子（クラス１＝内部に透過した；クラス２＝非経口的
に透過した）；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス、およびアストロウイ
ルス）。
【００９０】 上記ウイルスの多くはヒトの障害に関連するが、本発明はまた、非ヒト脊椎動
物の処置にも有用である。非ヒト脊椎動物はまた、本明細書中に開示されるＩＳ
ＮＡで予防または処置され得る感染を発生させ得る。例えば、感染性のヒトの疾
患の処置に加えて、本発明の方法は、動物の感染を処置するために有用である。
【００９１】 ヒトと非ヒト脊椎動物との両方の感染性ウイルスとしては、レトロウイルス、
ＲＮＡウイルスおよびＤＮＡウイルスが挙げられる。レトロウイルスのこの群は
、単純レトロウイルスと複雑レトロウイルスとの両方を含む。単純レトロウイル
スは、Ｂ型レトロウイルス、Ｃ型レトロウイルス、およびＤ型レトロウイルスの
サブグループを含む。Ｂ型レトロウイルスの例は、マウス乳腺癌ウイルス（ＭＭ
ＴＶ）である。Ｃ型レトロウイルスとしては、Ｃ型Ａ群（ラウス肉腫ウイルス（
ＲＳＶ）、鳥類白血病ウイルス（ＡＬＶ）および鳥類骨髄芽球症ウイルス（ＡＭ
Ｖ）を含む）およびＣ型Ｂ群（マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、ネコ白血病ウ
イルス（ＦｅＬＶ）、マウス肉腫ウイルス（ＭＳＶ）、テナガザル白血病ウイル
ス（ＧＡＬＶ）、脾臓壊死ウイルス（ＳＮＶ）、細網内皮症ウイルス（ＲＶ）お
よびサル肉腫ウイルス（ＳＳＶ）を含む）が挙げられる。Ｄ型レトロウイルスと
しては、マソン−ファイザーサルウイルス（ＭＰＭＶ）およびサルレトロウイル
ス１型（ＳＲＶ−ｌ）が挙げられる。複雑レトロウイルスとしては、レンチウイ
ルス、Ｔ細胞白血病ウイルスおよび泡沫状ウイルスのサブグループが挙げられる
。レンチウイルスとしては、ＨＩＶ−１が挙げられるが、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、
ビスナウイルス、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＬＶ）、およびウマ伝染性貧血ウイ
ルス（ＥＩＡＶ）もまた挙げられる。Ｔ細胞白血病ウイルスとしては、ＨＴＬＶ
−１、ＨＴＬＶ−２、サルＴ細胞白血病ウイルス（ＳＴＬＶ）、およびウシ白血
病ウイルス（ＢＬＶ）が挙げられる。泡沫状ウイルスとしては、ヒト泡沫状ウイ
ルス（ＨＦＶ）、サル泡沫状ウイルス（ＳＦＶ）およびウシ泡沫状ウイルス（Ｂ
ＦＶ）が挙げられる。
【００９２】 脊椎動物において抗原である他のＲＮＡウイルスの例としては、以下が挙げら
れるが、これらに限定されない：オルソレオウイルス属（哺乳動物とニワトリの
両方のレトロウイルスの複数の血清型）、オルビウイルス属（ブルータングウイ
ルス、ユーベナンギー（Ｅｕｇｅｎａｎｇｅｅ）ウイルス、ケメロボウイルス、
アフリカウマ疫ウイルス、およびコロラドダニ熱ウイルス）、ロタウイルス属（
ヒトロタウイルス、ネブラスカ仔ウシ症下痢ウイルス、マウスロタウイルス、サ
ルロタウイルス、ウシまたはヒツジロタウイルス、ニワトリロタウイルス）を含
むレオウイルス科のメンバー；エンテロウイルス属 (ポリオウイルス、コクサッ
キーウイルスのＡ群およびＢ群、 腸細胞変性ヒトオーファン（ｅｎｔｅｒｉｃ
ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｈｕｍａｎ ｏｒｐｈａｎ）（ＥＣＨＯ）ウイルス,
Ａ型肝炎ウイルス、シミアンエンテロウイルス、マウス脳脊髄炎（ＭＥ）ウイル
ス、ポリオウイルスムリス（ｍｕｒｉｓ）、ウシエンテロウイルス、ブタエンテ
ロウイルス、カルジオウイルス属(脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣ）、メンゴウイル
ス）、ライノウイルス属（少なくとも１１３のサブタイプを含むヒトライノウイ
ルス；他のライノウイルス）、アプトウイルス（Ａｐｔｈｏｖｉｒｕｓ）属（口
蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ））を含むピコルナウイルス科；ブタ水疱性ウイルス、
サン・ミエルアシカウイルス、ネコピコルナウイルスおよびノーウォークウイル
スを含むカルシウイルス科；アルファウイル属（東部ウマ脳炎ウイルス、セムリ
キ森林ウイルス、シンドビスウイルス、チクングンヤウイルス、オニオニオンウ
イルス、ロスリバーウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイ
ルス）、フラビウイルス（Ｆｌａｖｉｒｉｕｓ）属（モスキート媒介性黄熱病ウ
イルス、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マリ
ー渓谷脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、クンジンウイルス、中央ヨーロッパダ
ニ媒介性ウイルス、極東ダニ媒介性ウイルス、キャサヌール森林病ウイルス、跳
躍病（Ｌｏｕｐｉｎｇ ＩＩＩ）ウイルス、ポワサンウイルス、オムスク出血熱
ウイルス）、ルビウイルス属（風疹ウイルス）、ペスチウイルス属（粘膜病ウイ
ルス、豚コレラウイルス、国境病ウイルス）を含むトガウイルス科；ブニヤウイ
ルス属（ブニャンベラウイルスおよび関連ウイルス、カリフォルニア脳炎群ウイ
ルス）、フレボウイルス属(サシチョウバエ熱シシリー型（Ｓｉｃｉｌｉａｎ）
ウイルス、リフトバレー熱ウイルス）、ナイロウイルス属（クリミア−コンゴ出
血性熱ウイルス、ナイロビヒツジ病ウイルス）、およびウウクウイルス属（ウウ
クニエミーウイルスおよび関連ウイルス）を含むブニヤウイルス科；インフルエ
ンザウイルス属（Ａ型インフルエンザウイルス、多くのヒトサブタイプ）；ブタ
インフルエンザウイルス、ならびにニワトリおよびウマのインフルエンザウイル
ス；Ｂ型インフルエンザ（多くのヒトサブタイプ）、そしてＣ型インフルエンザ
（おそらく異なる属）を含むオルトミクソウイルス科；パラミクソウイルス属(
Ｉ型パラインフルエンザウイルス、センダイウイルス、血球吸着ウイルス、２型
〜５型のパラインフルエンザウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ムンプスウ
イルス）、モルビリウイルス属（麻疹ウイルス、亜急性硬化性汎脳炎ウイルス、
ジステンパーウイルス、牛疫ウイルス）、ニューモウイルス属（ＲＳウイルス（
ＲＳＶ）、ウシＲＳウイルスおよびマウス肺炎ウイルス）を含むパラミクソウイ
ルス科；森林ウイルス、シンドビスウイルス、チクングンヤウイルス、オニオニ
オンウイルス、ロスリバーウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳
炎ウイルス）、フラビウイルス（Ｆｌａｖｉｒｉｕｓ）属（モスキート媒介性黄
熱病ウイルス、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス
、マリー渓谷脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、クンジンウイルス、中央ヨーロ
ッパダニ媒介性ウイルス、極東ダニ媒介性ウイルス、キャサヌール森林病ウイル
ス、跳躍病（Ｌｏｕｐｉｎｇ ＩＩＩ）ウイルス、ポワサンウイルス、オムスク
出血熱ウイルス）、ルビウイルス属（風疹ウイルス）、ペスチウイルス属（粘膜
病ウイルス、豚コレラウイルス、国境病ウイルス）；ブニヤウイルス属（ブニャ
ンベラウイルスおよび関連ウイルス、カリフォルニア脳炎群ウイルス）、フレボ
ウイルス属(サシチョウバエ熱シシリー型（Ｓｉｃｉｌｉａｎ）ウイルス、リフ
トバレー熱ウイルス）、ナイロウイルス属（クリミア−コンゴ出血性熱ウイルス
、ナイロビヒツジ病ウイルス）、およびウウクウイルス属（ウウクニエミーウイ
ルスおよび関連ウイルス）を含むブニヤウイルス科；インフルエンザウイルス属
（Ａ型インフルエンザウイルス、多くのヒトサブタイプ）；ブタインフルエンザ
ウイルス、ならびにニワトリおよびウマのインフルエンザウイルス；Ｂ型インフ
ルエンザ（多くのヒトサブタイプ）、そしてＣ型インフルエンザ（おそらく異な
る属）を含むオルトミクソウイルス科；パラミクソウイルス属(Ｉ型パラインフ
ルエンザウイルス、センダイウイルス、血球吸着ウイルス、２型〜５型のパライ
ンフルエンザウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ムンプスウイルス）、モル
ビリウイルス属（麻疹ウイルス、亜急性硬化性汎脳炎ウイルス、ジステンパーウ
イルス、牛疫ウイルス）、ニューモウイルス属（ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ウシ
ＲＳウイルスおよびマウス肺炎ウイルス）を含むパラミクソウイルス科；ベジキ
ュロウイルス属（ＶＳＶ）（チャンディプラウイルス、フランダース−ハートパ
ークウイルス）、リサウイルス属（狂犬病ウイルス）、魚類ラブドウイルスなら
びに２つの推定ラブドウイルス（マールブルクウイルスおよびエボラウイルス）
を含むラブドウイルス科；リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭ）、タカリベ
ウイルス複合体、およびラッサウイルスを含むアレナウイルス科；伝染性気管支
炎ウイルス（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス、ヒト腸コロナ（Ｈｕｍａｎ ｅｎ
ｔｅｒｉｃ ｃｏｒｏｎａ）ウイルス、およびネコの伝染性腹膜炎（ネコのコロ
ナウイルス）を含むコロナウイルス（Ｃｏｒｏｎｏａｖｉｒｉｄａｅ）科。
【００９３】 脊椎動物において抗原である例示のＤＮＡウイルスは、制限されないで：オル
トポックスウイルス属（大疱瘡ウイルス、小疱瘡ウイルス、サルポックスワクシ
ニア、ウシポックス、バッファローポックス、ウサギポックス、エクトロメリア
）、ウサギポックスウイルス属（粘液腫ウイルス、線維腫ウイルス）、トリポッ
クスウイルス属（ニワトリポックスウイルス、その他のトリポックスウイルス）
、ヤギポックスウイルス属（ヒツジポックス、ヤギポックス）、スイポックス属
（ブタポックス）、パラポックスウイルス属（伝染性膿瘡性皮膚炎ウイルス、偽
ウシポックス、ウシ丘疹性口内炎ウイルス）を含む、ポックスウイルス科；イリ
ドウイルス科（アフリカブタコレラウイルス、カエルウイルス２および３、魚の
リンパ嚢腫ウイルス）；αヘルペスウイルス（１型および２型単純ヘルペス、水
痘−帯状ヘルペス、ウマ流産ウイルス、２型および３型ウマヘルペスウイルス、
仮性狂犬病ウイルス、ウシ伝染性角結膜炎ウイルス、ウシ伝染性鼻気管炎ウイル
ス、ネコ鼻気管炎ウイルス、伝染性咽頭気管炎ウイルス）βヘルペスウイルス（
ヒトサイトメガロウイルス、ならびにブタ、サルおよびげっ歯類のサイトメガロ
ウイルス）；γヘルペスウイルス（エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、マ
レク病ウイルス、リスザルヘルペスウイルス、クモザルヘルペスウイルス、ノウ
サギヘルペスウイルス、モルモットヘルペスウイルス、リュッケ腫瘍ウイルス）
を含むヘルペスウイルス科；マストアデノウイルス属（ヒトＡ、Ｂ、Ｃ、ＤＥ亜
群および非群（ｕｎｇｒｏｕｐｅｄ））；サルアデノウイルス（少なくとも２３
の血清型）、イヌ伝染性肝炎、ならびにウシ、ブタ、ヒツジ、カエルその他の多
くの種のアデノウイルス、トリアデノウイルス属（トリアデノウイルス類）：お
よび培養可能でないアデノウイルス類を含むアデノウイルス科；パピローマウイ
ルス属（ヒトパピローマウイルス、ウシパピローマウイルス、ショープウサギパ
ピローマウイルス、およびその他の種の種々の病原性パピローマウイルス）、ポ
リオーマウイルス属（ポリオーマウイルス、サル空胞形成因子（ＳＶ−４０）、
ウサギ空胞形成因子（ＲＫＶ）、Ｋウイルス、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス、お
よびリンパ増殖性パピローマウイルスのようなその他の霊長類ポリオーマウイル
ス）を含むパピローマウイルス科；アデノ随伴ウイルス属、パルボウイルス属（
ネコ汎白血球減少症ウイルス、ウシパルボウイルス、イヌカルボウイルス、アリ
ューシャンミンク病ウイルスなど）を含むパルボウイルス科を含む。最後に、Ｄ
ＮＡウイルスは、クルーおよびクロイツフェルト−ヤーコブ病ウイルスおよび慢
性伝染性神経障害因子（ＣＨＩＮＡウイルス）のような上記の科に適合しないウ
イルスを含み得る。
【００９４】 先行するリストの各々は例示であり、そして制限されることを意図しない。さ
らに、インタクトな形態またはそのフラグメントとしてのいずれかであるこれら
のウイルスが、免疫化手順における抗原として用いられ得る。抗原は、免疫系に
よって異物として認識される物質であり、そしてこれは、特異的免疫を誘導する
。抗原は、炭水化物（例えば、多糖類、糖脂質、および糖タンパク質を含む）、
タンパク質およびポリペプチド、ならびにその他のオリゴマー、ポリマー、およ
び免疫細胞上の抗原レセプターに結合し得る小分子であり得る。抗原に対する特
異的免疫は、Ｔ細胞および／またはＢ細胞による抗原認識を含み得る。
【００９５】 適切なＩＳＮＡを含む核酸は、任意の脊椎動物で有効であり得る。ＩＳＮＡを
含む異なる核酸は、哺乳動物種に依存して最適な免疫刺激を引き起こし得る。そ
れ故、ヒトにおいて最適刺激または阻害を引き起こすオリゴヌクレオチドは、マ
ウスにおける最適刺激または阻害を引き起こさないかもしれないし、そのまた逆
も同様である。当業者は、本明細書で提供される指針を用い、本明細書に記載お
よび／または当該分野で公知の慣用的なアッセイを用いて目的の特定の哺乳動物
種に対して有効な最適オリゴヌクレオチドを同定し得る。
【００９６】 このＩＳＮＡは、被験体に直接投与され得るか、または核酸送達複合体ととも
に投与され得る。「核酸送達複合体」は、標的化手段（例えば、標的細胞（例え
ばＢ細胞表面）に対してより高い親和性結合を生じるか、および／または標的細
胞による増加した細胞取り込みを生じる分子）と会合した（イオン的または共有
結合により；またはその中にカプセル化される）核酸分子を意味する。核酸送達
複合体の例は：ステロール（例えばコレステロール）、脂質（例えばカチオン性
脂質、ビロソームまたはリポソーム）、または標的細胞特異的結合剤（例えば標
的細胞の特異的レセプターにより認識されるリガンド）と会合した核酸を含む。
好適な複合体は、標的細胞によるインターナリゼーションの前の有意な非カップ
リングを防ぐに十分、インビボで安定であり得る。しかし、この複合体は、細胞
内の適切な条件下で切断可能であり得、その結果この核酸は機能的形態で放出さ
れる。
【００９７】 このＩＳＮＡまたはその他の治療剤は、単独で投与され得るか（例えば、生理
食塩水または緩衝液）、または当該分野で公知の任意の送達ビヒクルを用いて投
与され得る。例えば、以下の送達ビヒクルが報告されている：蝸牛殻（ｃｏｃｈ
ｌｅａｔｅ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅら、１９９４、１９９６）；エマ
ルソーム（Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８、Ｌｏｗｅｌｌら、１９９７）；ＩＳＣ
ＯＭ（Ｍｏｗａｔら、１９９３、Ｃａｒｌｓｓｏｎら、１９９１、Ｈｕら、１９
９８、Ｍｏｒｅｉｎら、１９９９）；リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓら、１９９
９、Ｍｉｃｈａｌｅｋら、１９８９、１９９２、ｄｅ Ｈａａｎ １９９５ａ、
１９９５ｂ）；生存細菌ベクター（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｅｓｈｅｒ
ｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ、
Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）（Ｈｏｎｅら、１９９６、Ｐ
ｏｕｗｅｌｓら、１９９８、Ｃｈａｔｆｉｅｌｄら、１９９３、Ｓｔｏｖｅｒら
、１９９１、Ｎｕｇｅｎｔら、１９９８）；生存ウイルスベクター（例えば、ワ
クシニア、アデノウイルス、単純ヘルペス）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎら、１９９３
、１９９５、Ｍｏｓｓら、１９９６、Ｎｕｇｅｎｔら、１９９８、Ｆｌｅｘｎｅ
ｒら、１９８８、Ｍｏｒｒｏｗら、１９９９）；マイクロスフェア（Ｇｕｐｔａ
ら、１９９８、Ｊｏｎｅｓら、１９９６、Ｍａｌｏｙら、１９９４、Ｍｏｏｒｅ
ら、１９９５、Ｏ’Ｈａｇａｎら、１９９４、Ｅｌｄｒｉｄｇｅら、１９８９）
；核酸ワクチン（Ｆｙｎａｎら、１９９３、Ｋｕｋｌｉｎら、１９９７、Ｓａｓ
ａｋｉら、１９９８、Ｏｋａｄａら、１９９７、Ｉｓｈｉｉら、１９９７）；ポ
リマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａ
ら、１９９８、Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌら、１９９８）；ポリマーリング（Ｗｙ
ａｔｔら、１９９８）；プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８、Ｌｏｗ
ｅｌｌら、１９８８、１９９６、１９９７）；フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉら
、１９９８）；トランスジェニック植物（Ｔａｃｋｅｔら、１９９８、Ｍａｓｏ
ｎら、１９９８、Ｈａｑら、１９９５）；ビロソーム（Ｇｌｕｃｋら、１９９２
、Ｍｅｎｇｉａｒｄｉら、１９９５、Ｃｒｙｚら、１９９８）；ウイルス様粒子
（Ｊｉａｎｇら、１９９９、Ｌｅｉｂｌら、１９９８）。当業者は、当該分野で
公知であるその他の送達ビヒクルもまた用いられ得ることを認識する。
【００９８】 本明細書で提供される教示と組み合わせ、種々の活性化合物の中から選択する
こと、および効力、相対的な生体利用性、患者体重、副作用の重篤度および投与
の好適な様式のような因子を重み付けすることによって、実質的な毒性を引き起
こさず、そしてなお特定の患者を処置するために完全に有効である有効な予防ま
たは治療処置養生法が計画され得る。任意の特定の適用のために有効な量は、処
置される疾患または症状、投与される特定のＩＳＮＡ（例えば、非メチル化Ｃｐ
Ｇモチーフの数もしくは核酸中のそれらの位置、オリゴヌクレオチドに対するキ
ラリティーの程度）、抗原、被験体のサイズ、または疾患または症状の重篤度の
ような因子に依存して変化し得る。当業者は、特定のＩＳＮＡおよび／または抗
原および／またはその他の治療薬剤の有効量を、過度の実験を必要とすることな
く経験的に決定し得る。
【００９９】 成人ヒト被験体には、本明細書に記載されるＩＳＮＡ化合物の用量は、代表的
には、約５０μｇ／用量〜２０ｍｇ／用量、より代表的には約８０μｇ／用量〜
８ｍｇ／用量、そして最も代表的には約８００μｇ／用量〜４ｍｇ／用量の範囲
である。被験体体重に関して記述すれば、代表的な投与量は、約０．５〜５００
μｇ／ｋｇ／用量、より代表的には約１〜１００μｇ／ｋｇ／用量、そして最も
代表的には、約１０〜５０μｇ／ｋｇ／用量の範囲である。用量は、投与の経路
を含む因子に依存し得、例えば、経口投与は、皮下投与より実質的に大きな用量
を必要とし得る。
【０１００】 本発明の処方物は、薬学的に受容可能な溶液中で投与され、これは、慣用的に
、薬学的に受容可能な濃度の塩、緩衝化剤、保存剤、適合キャリア、アジュバン
ト、および必要に応じてその他の治療成分を含み得る。
【０１０１】 このＩＳＮＡは、ＩＦＮαと組み合わせると有用であることが当該分野で公知
であるその他の薬剤と組み合わせて与えられ、ウイルスおよび増殖性障害を処置
し得る。ＩＦＮαと組み合わせて現在使用されているか、または使用のために調
査中であるこのような他の薬剤の例は、リバビリン、アマンタジン、化学的治療
剤（例えば、５−フルオロウラシルおよびＢＣＮＵ）、放射線照射治療、光治療
、ならびにＩＬ−２、ＩＬ−１２、およびＩＦＮ−γを含むサイトカインを含む
。
【０１０２】 治療における使用には、このＩＳＮＡの有効量は、所望の部位、例えば、粘膜
、全身に、このＩＳＮＡを送達する任意の様式によって被験体に投与され得る。
本発明の薬学的組成物を「投与すること」は、当業者に公知の任意の手段により
達成され得る。好適な投与の経路は、制限されないで、経口、非経口、損傷内、
局所的、経皮、筋肉内、鼻内、気管内、吸入、眼、膣、および直腸を含む。
【０１０３】 経口投与には、化合物（すなわち、ＩＳＮＡ、抗原、その他の治療剤）は、こ
れら化合物（単数または複数）を、当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリ
アと組み合わせることにより容易に処方され得る。このようなキャリアは、本発
明の化合物を、処置される被験体による経口摂取のために、錠剤、ピル、糖衣丸
、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして処方されるこ
とを可能にする。経口使用のための薬学的調製物は、固形の賦形剤として得られ
得、必要に応じて、得られる混合物を砕き、そして所望であれば、適切な補助剤
を添加した後に顆粒の混合物を処理する。適切な賦形剤は、詳細には糖などの充
填剤であり、これには、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビ
トール；例えば、トウモロコシスターチ、小麦スターチ、コメスターチ、ポテト
スターチ、ゼラチン、ガムトラガンタ、メチルセルロース、ヒドロキシプロピル
メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポ
リビニルピロリドン（ＰＶＰ）が含まれる。所望であれば、架橋ポリビニルピロ
リドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩
などの崩壊剤が添加され得る。必要に応じて、この経口処方物はまた、内部の酸
性条件を中和するために、生理食塩水または緩衝液中に処方され得るか、または
任意のキャリアなくして投与され得る。
【０１０４】 糖衣丸コアは、適切なコーティングとともに提供される。この目的には、濃縮
された糖溶液が用いら得、これは、必要に応じて、アラビアガム、タルク、ポリ
ビニルピロリドン、カルボポルゲル、ポリエチレングリセロール、および／また
は二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物が含ま
れ得る。染料材料または色素が、異なる組み合わせの活性化合物用量を識別また
は特徴付けるために錠剤または糖衣丸コーティングに添加され得る。
【０１０５】 経口的に用いられ得る薬学的調製物は、ゼラチンから作られるプッシュ−フィ
ットカプセル、およびゼラチンとグリセロールまたはソルビトールのような可塑
剤とから作られるソフトシールカプセルを含む。このプッシュ−フィットカプセ
ルは、ラクトースのような充填剤、スターチのような結合剤、および／またはタ
ルクもしくはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ならびに必要に応じて
安定剤との混合物中に活性成分を含み得る。ソフトカプセルでは、活性化合物は
、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールのような適切な
液体中に溶解もしくは懸濁され得る。さらに、安定剤が添加され得る。経口投与
のために処方されたマイクロスフェアもまた用いられ得る。このようなマイクロ
スフェアは、当該分野で良く規定されている。経口投与のためのすべての処方物
は、このような投与のために適切な用量であるべきである。
【０１０６】 口腔投与には、組成物は、従来様式で処方される錠剤またはロゼンジの形態を
とり得る。
【０１０７】 吸入による投与について、本発明に従う使用のための化合物は、適切な推進薬
（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテ
トラフルオロエタン、炭酸ガスまたは他の適切な気体）の使用を伴う圧縮された
容器またはネブライザからのエアロゾルスプレー提示（ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏ
ｎ）の形態で都合よく送達され得る。圧縮されたエアロゾルの場合、用量単位は
、決められた（ｍｅｔｅｒｅｄ）量を送達するための弁を提供することによって
決定され得る。例えば、吸入器または注入器における使用のためのゼラチンのカ
プセルおよびカートリッジは、化合物および適切な粉末ベース（例えば、乳酸ま
たは澱粉）の粉末混合物を含んで処方され得る。
【０１０８】 化合物は、全身性に投与されることが所望される場合、非経口的投与（例えば
、ボーラス注射または連続注入）による注射について処方され得る。注入のため
の処方物は、単位用量形態（例えば、添加された防腐剤を含むアンプル中または
複数の投薬容器（ｍｕｌｔｉ−ｄｏｓｅ ｃｏｎｔａｉｎｅｒ）中）において示
され得る。組成物は、油性または水性のビヒクル中の懸濁液、溶液、または乳濁
液のような形態をとり得、そして懸濁剤、安定化剤および／または分散剤のよう
な処方薬を含み得る。
【０１０９】 非経口投与のための薬学的処方物は、水溶性形態での活性化合物の水性溶液を
含む。さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注入懸濁液として調製され得
る。適切な脂肪親和性溶媒またはビヒクルは、脂肪性の油（例えば、ゴマ油）ま
たは合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド）
、あるいはリポソームを含む。水性注入懸濁液は、懸濁液の粘着性を増加する物
質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデ
キストラン）を含み得る。任意には、懸濁液はまた、適切な安定剤または化合物
の安定性を増加して高度に濃縮された溶液の調製物を可能にする薬剤を含み得る
。
【０１１０】 あるいは、活性な化合物は、使用前に適切なビヒクル（例えば、滅菌した、発
熱物質のない水）との構成のための粉末形態にあり得る。
【０１１１】 化合物はまた、直腸用組成物または膣用組成物（例えば、坐剤または貯留浣腸
（例えば、ココアバターもしくは他のグリセリドのような慣用的な坐剤ベースを
含む））で処方され得る。
【０１１２】 以前に記載される処方物に加えて、化合物はまた、貯留調製物として処方され
得る。このように長く作用する処方物は、適切な重合体物質または疎水性物質（
例えば、受容可能な油中の乳濁液として）またはイオン交換レジンと処方され得
るか、あるいは、緩やかに溶解し得る誘導体として（例えば、緩やかに溶解し得
る塩として）処方され得る。
【０１１３】 薬学的組成物はまた、適切な固体またはゲル相キャリアまたは賦形剤を含み得
る。このようなキャリアまたは賦形剤の例としては、以下が挙げられるが、これ
らに限定されない：炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、澱粉、セル
ロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールのようなポリマー。
【０１１４】 適切な液体または固体の薬学的調製物形態は、例えば、吸入のための水溶液ま
たは生理食塩水であるか、微小カプセル化されたか、蝸牛殻状にされた（ｅｎｃ
ｏｃｈｌｅａｔｅｄ）か、微細な金粒子状に被膜されたか、リポソームに含まれ
たか、霧状にされた、エアロゾル、皮膚中への移植のためのペレット、または皮
膚を引っ掻くべき鋭利な物上に乾燥された。薬学的組成物としてはまた、以下が
挙げられる：顆粒、粉末、錠剤、被膜された錠剤、（微小）カプセル、坐剤、シ
ロップ、乳濁液、懸濁液、クリーム、ドロップまたは遅延された放出を伴う活性
な化合物を伴う調製物。これらの調製物において、賦形剤および添加剤および／
または補助剤（例えば、崩壊剤、結合剤、被膜剤、膨張剤、滑剤、調味料（ｆｌ
ａｖｏｒｉｎｇ）、甘味料または可溶剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｒ））は、上記
のように習慣的に使用される。薬学的組成物は、種々の薬物送達系における使用
に適切である。薬物送達のための方法の簡単な総説については、Ｌａｎｇｅｒ
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７（１９９０）（本明細書中に参考として援用
される）を参照のこと。
【０１１５】 ＩＳＮＡは、それ自体（生で）かまたは薬学的に受容可能な塩の形態で投与さ
れ得る。薬において使用される場合、塩は、薬学的に受容可能であるべきである
が、薬学的に受容可能でない塩は、その薬学的受容可能な塩を調製するために慣
用的に使用され得る。このような塩としては、以下の酸から調製される塩を含む
がこれらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸
、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスル
ホン酸、蟻酸、マロン酸、琥珀酸、ナフタレン−２−スルホン酸およびベンゼン
スルホン酸。このような塩はまた、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の塩（
例えば、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩）として
調製され得る。
【０１１６】 適切な緩衝化剤としては以下が挙げられる：酢酸および塩（１〜２％ｗ／ｖ）
；クエン酸および塩（１〜３％ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ｗ
／ｖ）；ならびにリン酸および塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）。適切な防腐剤として
は、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）；クロロブタノー
ル（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）およ
びチメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０１１７】 本発明の薬学的組成物は、有効量のＩＳＮＡならびに必要に応じて抗原および
／または必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア中に含まれる他の治療剤を含
む。用語「薬学的に受容可能なキャリア」は、ヒトまたは脊椎動物への投与に適
した１つ以上の適合性の、固体または液体の充填剤、希釈剤またはカプセル化物
質を意味する。用語「キャリア」は、活性な成分が適用を容易にするために合わ
される、天然または合成の有機成分または無機成分を意味する。薬学的組成物の
成分はまた、所望の薬学的効果を実質的に損なう相互作用がないような様式で、
本発明の化合物と互いに混ぜ合わされ得る。
【０１１８】 種々の投与経路が利用可能である。選択される特定の様式は、当然、選択され
る特定のアジュバントまたは抗原、処置される特定の状態、および治療効果のた
めに必要とされる投薬量に依存する。本発明の方法は、一般的に言うと、医学的
に受容可能である任意の投与様式（これは、臨床的に受容可能でない有害効果を
引き起こさずに、効果的なレベルの免疫応答を生成する任意の様式を意味する）
を用いて実施され得る。好ましい投与様式は、上記に議論される。
【０１１９】 組成物は、単一投薬形態で好都合に提示され得、そして薬学の分野で周知の任
意の方法によって調製され得る。全ての方法は、化合物を、１つ以上の付属成分
を構成するキャリアと結合させる工程を包含する。一般的に、組成物は、均一か
つ完全に、この化合物を、液体キャリア、細かく分離された固体キャリア、また
はこれらの両方と結合させ、次いで必要な場合、生成物を成形することによって
調製される。液体用量単位は、バイアルまたはアンプルである。固体用量単位は
、錠剤、カプセルおよび坐剤である。患者の処置に関して、化合物の活性、投与
様式、免疫の目的（すなわち、予防的または治療的）、障害の性質および重篤度
、患者の年齢および体重に依存して、異なる用量が必要であり得る。所定の用量
の投与は、個々の用量単位形態での単一投与によってかさもなければ数回の類似
した用量単位の両方によって実行され得る。
【０１２０】 他の送達システムとしては、時間放出送達系、徐放性放出送達系または持続性
放出送達系が挙げられ得る。このような系は、化合物の反復投与を回避し得、被
験体および医師に対する簡便性を増加する。多くの型の放出送達系が利用可能で
あり、そして当業者に公知である。これらとしては、ポリマーベースの系（例え
ば、ポリ（ラクチド−グリコリド）、コポリオキサレート、ポリカプロラクトン
、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸、およびポリ
無水物）が挙げられる。薬物を含む上記ポリマーのマイクロカプセルは、例えば
、米国特許第５，０７５，１０９号に記載される。送達系としてはまた、非ポリ
マー系（コレステロール、コレステロールエステルおよび脂肪酸のようなステロ
ールまたはモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドのような中性脂
肪を含む脂質；ヒドロゲル放出系；シラスティック系；ペプチドベースの系；ワ
ックスコーティング；従来の結合剤および賦形剤を用いて圧縮された錠剤；部分
的に融合されたインプラントなど）が挙げられる。特定の例としては、（ａ）本
発明の薬剤がマトリックス内の形態で含まれる侵食系（例えば、米国特許第４，
４５２，７７５号、同第４，６７５，１８９号、および同第５，７３６，１５２
号に記載されるもの）、および（ｂ）活性成分がポリマーから制御された速度で
浸透する拡散系（例えば、米国特許第３，８５４，４８０号、同第５，１３３，
９７４号、および同第５，４０７，６８６号に記載される）が挙げられるが、こ
れらに限定されない。さらに、ポンプベース機材の送達系が使用され得、これら
のいくつかは、移植に適用される。
【０１２１】 本明細書中に使用される場合、ＩＦＮ−αの投与を要する方法は、所望の治療
結果を達成する目的を伴うＩＦＮ−αの投与によって被験体を処置するための臨
床方法あてはまる。ＩＦＮ−αが確立された治療剤である多くの臨床徴候が存在
する。ＩＦＮ−α処置の必要がある被験体は、ＩＦＮ−αが確立された治療剤で
ある臨床徴候を有する。これらの臨床徴候としては、特定のウイルス感染および
特定の増殖障害、顕著には、癌および前癌状態が挙げられる。ＩＦＮ−αが米国
において現在使用を承認されているウイルス感染は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、およ
び尖圭コンジローム（性病いぼまたは肛門性器いぼ）である。ＩＦＮ−αが米国
において現在使用を承認されている新生物は、ヘアリーセル白血病、皮膚Ｔ細胞
白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫、悪性黒色腫、およ
びＡＩＤＳ関連カポージ肉腫である。米国外において、ＩＦＮ−αはまた、膀胱
細胞癌腫、結腸癌腫、腎細胞癌腫、多発性骨髄腫、頚部形成異常、および喉頭部
乳頭腫症のための臨床使用である。ＩＦＮ−α処置に関して調査下である他の徴
候としては、他のウイルス感染ならびに例えば、ベーチェット病、ＨＩＶ、前立
腺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、扁平上皮細胞癌腫、神経膠腫、および悪性胸膜中皮
腫などを含む他の癌が挙げられる。
【０１２２】 本明細書中に使用される場合、ＩＦＮ−αを含む薬学的組成物は、薬学的使用
に適した組換えまたは天然のＩＦＮ−αの調製物に関する。ＩＦＮ−αは、天然
の材料（例えば、白血球、骨髄球、リンパ球）もしくはこれらから誘導された材
料（例えば、細胞株）、または組換えＤＮＡ技術を用いて調製されたものから誘
導され得る。ＩＦＮ−αのクローニングおよびこの直接発現（特に、Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉにおいて）の詳細は、多くの刊行物の対象である。組換
えＩＦＮの調製は、例えば、Ｇｒａｙら、Ｎａｔｕｒｅ ２９５：５０３−８（
１９８２）、Ｇｏｅｄｄｅｌら、Ｎａｔｕｒｅ ２８４：３１６−２０（１９８
０）、Ｇｏｅｄｄｅｌら、Ｎａｔｕｒｅ ２９０：２０−２６（１９８１）、お
よびＥＰ １７４１４３から公知である。米国において、ＩＦＮ−αは、組換え
ヒトＩＦＮ−α２ａ（ＲＯＦＥＲＯＮ−Ａ）、組換えヒトＩＦＮ−α２ｂ（ＩＮ
ＴＲＯＮ Ａ）として、そして精製された天然ＩＦＮ−αｎ３（ＡＬＦＥＲＯＮ
Ｎ）として利用可能である。米国外では、ＩＦＮ−αはまた、精製された天然
ＩＦＮ−αｎ１（ＷＥＬＬＦＥＲＯＮ）として利用可能である。
【０１２３】 本明細書中に使用される場合、ＩＦＮ−α単独のための臨床的に確立された有
効量は、ＩＦＮ−αのバイオアベイラビリティを増加する別の薬剤の非存在下で
投与される組換えまたは天然のＩＦＮ−α用量を参照し、これは、特定の臨床徴
候に対して標準的な推奨用量である。しかし、ＩＦＮ−α単独のための臨床的に
確立された有効量は、他の薬剤または処置様式（例えば、従来の化学療法、放射
線治療、抗ウイルス剤および手術）と組み合わせたＩＦＮ−αの使用を含み得る
。大多数の被験体において、特定の臨床徴候のためのＩＦＮ−αの標準的な推奨
用量は、所望の臨床効果を発揮するために予測される。所定の被験体における所
定の臨床適用において、ＩＦＮ−α単独のための臨床的に確立された有効量はま
た、その被験体の状態を処置するためにその被験体において有効であると予測さ
れているかまたは予測される、ＩＦＮの用量を参照し得る。例えば、被験体は、
標準の推奨用量よりも少ないＩＦＮ−α単独用量に対して応答性であるかもしれ
ない。逆に、被験体は、ＩＦＮ−α処置の実際の副作用または予想される副作用
に起因して、臨床的に確立された有効用量を寛容し得ないかもしれない。
【０１２４】 任意の治療化合物に関する最大許容用量（ＭＴＤ）は、その臨床評価の一部と
して同定される。例えば、フェーズＩ試験は、最大許容用量、用量−境界毒性（
ＤＬＴ）および試験化合物の薬物動態学の決定を含み得る。従って、食品医薬品
局（ＦＤＡ）で承認された任意の治療化合物のＭＴＤは、公的な記録として当業
者に公知である。任意の特定の治療化合物に関するＭＴＤは、その処方（例えば
、注射可能な処方、移植可能な生物侵食可能な（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）ポリ
マー処方、経口処方）、送達経路（例えば、静脈内、経口、腫瘍内）、投与様式
（例えば、注入、ボーラス注射）、投与スケジュール（例えば、時間ごと、日ご
と、週ごと）などに従って変化し得る。ＭＴＤ頻度は、その薬物を投与された被
験体の５０％が用量−境界毒性を発生する最も高い用量レベルとして規定される
。臨床的に明らかでありそして一般的に受け入れられている他の定義が、当業者
に公知である。
【０１２５】 種々の型のＩＦＮ−ａに関するＭＴＤの例は、種々の投与経路、徴候、他の薬
剤との組み合わせおよび臨床設定を含む研究において公開されている。１つの研
究において、組換えＩＦＮ−α２ａのＭＴＤは、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（菌状息肉
腫およびセザリー症候群）の処置に対して光線療法と組み合わせて１週間に３回
筋内に提供された場合、１８００万国際単位（ＩＵ）であった。Ｋｕｚｅｌ Ｔ
Ｍら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ ８２：２０３−７（１９９０）
。独立した研究において、皮膚Ｔ細胞リンパ腫の処置に関するＩＦＮ−α２ｂの
ＭＴＤは、１週間に３回筋内に提供された場合、１８００万ＩＵであることが見
出された。Ｑｉｕ ＢおよびＣｈｅｎ Ｍ Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊ（Ｅｎｇｌ）
１０９：４０４−６（１９９６）。ＩＦＮ−α２ａに対するＭＴＤはより低く、
直腸癌に対して高い用量の骨盤照射を受けている患者に関して、１週間に３回皮
下的で、３００万ＩＵであった。Ｐｅｒｅｒａ Ｆら、Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａ
ｔ Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ ３７：２９７−３０３（１９９７）。Ｉ
ＦＮ−α２ｂに対するＭＴＤは、細胞傷害性化学療法の後にＡＩＤＳ関連カポー
ジ肉腫を有する患者に関して、毎日で、１０００万ＩＵであった。Ｇｉｌｌ Ｐ
Ｓら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｍｏｄ ９：５１２−６（１９９０）
。さらに別の研究において、ＩＦＮ−α２ｂのＭＴＤは、転移直腸結腸癌を有す
る患者に対して、５−フルオロウラシルおよびロイコボリンと組み合わせて２４
時間注入として毎週の場合、１８００万ＩＵ／ｍ2であった。Ｃａｓｃｉｎｕ
Ｓら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ７：５２０−４（１９９６）。
【０１２６】 最大許容用量の測定は、被験体の体重あたりの薬物重量、体表面積あたりの薬
物重量などとして表現され得る。抗癌化合物のＭＴＤは、しばしば、体表面積の
平方メートルあたりの重量（ｍｇ／ｍ2）として表現される。ＭＴＤはまた、時
間成分に対する用量、例えば、１日あたりの体表面積あたりの薬物重量として表
現され得る。
【０１２７】 ヒト臨床試験に未だ供されていないか、またはヒトにおけるＭＴＤの任意の決
定に供されていない治療物質（例えば、実験化合物または非常に毒性の化合物）
に関して、当業者は、動物モデルを使用することによってＭＴＤを概算し得る。
動物におけるＭＴＤの算出は、多数の生理学的パラメーター（例えば、死、特定
の毒性、および薬物誘導の体重減少）に基づき得る。死を終点として使用すると
、ＭＴＤは、試験群の各メンバーが生存する試験動物を提供する最も高い用量で
あり得る。毒性を終点として使用すると、ＭＴＤは、重篤ではなく適度な毒性が
観察される用量であり得る。体重減少を終点として使用すると、ＭＴＤは、それ
より上で特定のパーセントの体重変化が誘導される用量であり得る。動物モデル
および種々の終点を用いてＭＴＤを決定するための他の方法は、当業者に公知で
ある。治療化合物に関する動物ＭＴＤからヒトＭＴＤへの相関は、薬学分野にお
いて受容されている慣例である。
【０１２８】 従って、１つの局面において、本発明は、被験体、好ましくはヒト被験体への
投与のための組成物および処方物を提供し、これらは、インターフェロンに関し
て最大許容用量よりも下の量のインターフェロンを含む。
【０１２９】 本発明の１つの局面において、ＩＦＮ−αの投与と組み合わせた有効量の単離
されたＩＳＮＡの同時投与を必要とする、ＩＦＮ−αを用いた処置が必要な被験
体を処置するための改善された方法が提供される。本明細書中に使用される場合
、単離されたＩＳＮＡの有効量は、ＩＦＮ−αを産生するための細胞を引き起こ
す単離されたＩＳＮＡの量をいう。１つの好ましい実施形態において、単離され
たＩＳＮＡの有効量は、インビボでＩＦＮ−αを産生するための細胞を引き起こ
す単離されたＳＩＮＡの量をいう。別の好ましい実施形態において、単離された
ＩＳＮＡの有効量は、インビトロでＩＦＮ−αを産生するための細胞を引き起こ
す量に対応した、単離されたＩＳＮＡの量をいう。別の好ましい実施形態におい
て、単離されたＩＳＮＡの有効量は、外因性ＩＦＮ−αの投与のみから生じる対
応するレベルより上の、局所または循環しているＩＦＮ−α量における増加を引
き起こす、単離されたＩＳＮＡの量をいう。別の好ましい実施形態において、単
離されたＩＳＮＡの有効量は、ＩＳＮＡなしで得られるより上の、外因性ＩＦＮ
−αの治療効果を増加する単離されたＩＳＮＡの量をいう。さらに別の実施形態
において、単離されたＩＳＮＡの有効量は、オリゴヌクレオチドがより低い用量
のＩＦＮ−αと同時投与された場合に所定の量のＩＦＮ−αに対して達成される
ものと同じ治療効果を可能にする、単離されたＩＳＮＡの量をいう。
【０１３０】 本明細書中に使用される場合、用語、同時投与は、少なくとも２つの薬剤を臨
床的に互いに関連して投与することをいう。同時投与は、少なくとも２つの薬剤
を、一緒または連続して投与することを含み得る。好ましい実施形態において、
ＩＦＮ−αの局所濃度または全身濃度が、同じ量のＩＦＮ−α単独を投与するこ
とによって達成されるＩＦＮ−αの対応する濃度よりも増加される場合、ＩＳＮ
Ａは、ＩＦＮ−αを投与する前、同じ時、または後のいずれかで投与される。同
時投与は、ＩＳＮＡの投与に対して時間が十分に近接したインターフェロン−α
の投与を意味し、その結果、これらの効果は、いずれか１つが単独で同じ用量で
投与される場合に達成される効果よりも大きい効果である。好ましくは、この効
果は、少なくとも付加的である。これらはまた、異なる様式（例えば、インター
フェロンを全身的に投与し、そしてＩＳＮＡを局所的に投与するなど）を介して
投与され得る。
【０１３１】 同時的な同時投与を含む特定の実施形態において、ＩＦＮ−αおよびＩＳＮＡ
は、単一処方物として調製され得る。同時的な同時投与を含む別の実施形態にお
いて、ＩＦＮ−αおよびＩＳＮＡは、別々に調製され、そして投与され得る。こ
の後者の場合、個々のＩＦＮ−αおよびＩＳＮＡ処方物は、同時的な投与に関す
る指示書を有するキットとして共にパッケージングされ得る。同様に、連続的な
同時投与を必要とする実施形態において、個々のＩＦＮ−αおよびＩＳＮＡ処方
物は、これらの連続的な投与に関する指示書を有するキットとして共にパッケー
ジングされ得る。
【０１３２】 本明細書中に使用される場合、局所的に投与されることは、ＩＦＮ−αの全身
濃度を超えるＩＦＮ−αの局所濃度を達成する経路による投与をいう。例えば、
特定の病変またが器官への局所投与は、この病変もしくは器官への直接注入によ
ってか、または処置される病変もしくは器官と結合し、供給している輸入性血管
への直接注入によって達成され得る。例示的な肝臓への局所投与において、局所
投与は、肝動脈、腹腔動脈、または門脈への注射または注入によって達成され得
る。
【０１３３】 別の局面において、本発明は、ＩＦＮ−α処置が必要な被験体のＩＦＮ−α処
置を補完する方法を提供し、ここで、有効量のＩＦＮ−αおよび単離されたＩＳ
ＮＡは、両方とも被験体へ投与される。ＩＳＮＡによって誘導されたＩＦＮ−α
は、被験体へ直接投与されるＩＦＮ−αを補完し、従って、所定の用量のＩＦＮ
−αの臨床効果を拡大する。さらに、ＩＳＮＡ誘導ＩＦＮ−αは、代表的には、
複数のサブタイプを誘導し、一方直接投与されたＩＦＮ−αは代表的に単一サブ
タイプのみを含むので、ＩＦＮ−α処置によって与えられた生物学的効果の範囲
はまた、ＩＳＮＡおよびＩＦＮ−αの同時投与によって拡大される。
【０１３４】 本発明はまた、被験体のＩＦＮ−α処置の効果を増加する方法を提供する。本
発明のこの局面に従う方法は、ＩＦＮ−αを用いた処置が必要な被験体にＩＦＮ
−αを含む薬学的組成物を投与する工程、およびこのような処置が必要な被験体
に、投与されるＩＦＮ−αと一緒にＩＦＮ−α処置に効果的である量のＩＳＮＡ
を含む薬学的組成物を投与する工程（ここで、ＩＦＮ−α処置の効果は、ＩＳＮ
Ａの同時投与がない場合に同じ量のＩＦＮ−αを投与する効果よりも大きい）包
含する。
【０１３５】 本明細書中に使用される場合、被験体のＩＦＮ−α処置の効果を増強する方法
またはこの効果を増加する方法は、所定の用量のＩＦＮ−αを被験体へ投与する
効果が、同じ用量のＩＦＮ−αを用いた場合に予期または事前に観察されるもの
よりもより大きな臨床効果を引き起こす方法をいう。好ましい実施形態において
、この方法は、ＩＰＣによるＩＦＮ−αの産生を誘導するのに有効な量である量
のＩＳＮＡを同時投与することを含む。この方法において局所的または全身的に
達成されるＩＦＮ−αの量は、投与されたＩＦＮ−αおよび誘導されたＩＦＮ−
αの両方からの寄与を反映し、これによって、所定の用量の投与されたＩＦＮ−
αに対して増強した効果のＩＦＮ−α処置を達成する。この増加した効果は、例
えば、処置に対するより大きな程度の応答、処置に対するより迅速な応答経過、
または処置レジメンとの改善したコンプライアンスとして明らかにされ得る。
【０１３６】 本発明の別の局面に従って、ＩＦＮ−αを用いた処置が必要な被験体を処置す
るのに効果的なＩＦＮ−αの用量を減少するための方法が、提供される。この方
法は、ＩＦＮ−αを用いた処置が必要な被験体へ、ＩＦＮ−αを含む薬学的組成
物を投与する工程、およびこのような処置が必要な被験体へ、投与されるＩＦＮ
−αと一緒になって、ＩＦＮ−α処置に効果的である量で免疫刺激核酸を含む薬
学的組成物を同時投与する工程（ここで、投与されるＩＦＮ−αの量は、免疫刺
激核酸の同時投与なしで必要とされるＩＦＮ−αの量よりも少ない）を包含する
。
【０１３７】 本明細書中に使用される場合、被験体を処置するのに効果的なＩＦＮ−αの用
量を減少する方法は、ＩＦＮ−αが、被験体の状態を処置する際に所望される臨
床効果を達成しながら、以前に確立された量および頻度と比較して減少されてい
る量および頻度で、被験体に投与される方法をいう。好ましい実施形態において
、投与量は、例えば、ＩＦＮ−α単独の慣習的または最大許容用量よりも少なく
とも１０パーセント下の量まで、臨床的に決定された程度で減少され得る。他の
より好ましい実施形態において、ＩＦＮ−α投与量は、ＩＦＮ−α単独の慣習的
または最大許容用量よりも少なくとも２０パーセント、少なくとも３０パーセン
ト、または少なくとも４０パーセント下の量まで、臨床的に決定された程度で減
少され得る。最も好ましい実施形態において、ＩＦＮ−α投与量は、ＩＦＮ−α
単独の慣習的または最大許容用量よりも少なくとも５０パーセント下の量まで、
臨床的に決定された程度で減少され得る。別の好ましい実施形態において、投与
頻度は、ＩＦＮ−α単独の慣習的または最大許容用量よりも例えば少なくとも１
０パーセント下の頻度まで、臨床的に決定された程度で減少され得る。他のより
好ましい実施形態において、ＩＦＮ−α投与頻度は、ＩＦＮ−α単独の慣習的ま
たは最大許容用量よりも少なくとも２０パーセント、少なくとも３０パーセント
、または少なくとも４０パーセント下の頻度まで、臨床的に決定された程度で減
少され得る。最も好ましい実施形態において、ＩＦＮ−α投与頻度は、ＩＦＮ−
α単独の慣習的または最大許容用量よりも少なくとも５０パーセント下の頻度ま
で、臨床的に決定された程度で減少され得る。
【０１３８】 本発明のさらに別の局面は、ＩＦＮ−αを用いた処置をうけるかまたはその必
要がある被験体において、ＩＦＮ−α処置関連副作用を回避する方法である。こ
の方法は、ＩＦＮ−αを用いた処置が必要な被験体へ、ＩＦＮ−αを含む薬学的
組成物を投与する工程、およびこのような処置が必要な被験体へ、投与されるＩ
ＦＮ−αと一緒になって、ＩＦＮ−α処置に効果的である量で免疫刺激核酸を含
む薬学的組成物を同時投与する工程（ここで、ＩＦＮ−α処置関連副作用の影響
は、ＩＦＮ−αが免疫刺激核酸の同時投与なしで投与される場合の副作用との比
較において減少されている）を包含する。
【０１３９】 ＩＦＮ−αに関するアッセイは、当該分野で周知である。これらとしては、直
接試験（例えば、少なくとも１つのＩＦＮ−αに特異的である酵素結合イムノソ
ルベント検定法（ＥＬＩＳＡ））、および間接試験（例えば、ＮＫ細胞活性化／
細胞傷害性（Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ Ｇ Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４７：１８
７−３７６（１９８９））およびクラスＩ ＭＨＣに関する蛍光活性化細胞分類
（ＦＡＣＳ）分析による表現型決定を含む機能試験）が挙げられる。当該分野で
周知であるさらなる特異的アッセイ方法は、ＩＦＮ−αの局所濃度または局所存
在が目的である設定において得に有用であり得；これらの方法としては、例えば
、免疫組織化学、核酸ハイブリダイゼーション（例えば、ノーザンブロッティン
グ）、ウエスタンブロッティング、逆転写酵素／ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ／
ＰＣＲ）、およびインサイチュＲＴ／ＰＣＲが挙げられる。さらなる方法（フロ
ーサイトメトリーによる細胞内ＩＦＮ−αの検出を含む）が、以下の実施例６に
開示される。
【０１４０】 本明細書中に使用される場合、被験体におけるＩＦＮ−α処置関連副作用を回
避する方法は、ＩＦＮ−α処置を受ける被験体によって経験されるＩＦＮ−α処
置関連副作用の発生または重篤度を減少する方法をいう。本明細書中に使用され
る場合、ＩＦＮ−α処置関連副作用は、被験体へのＩＦＮ−αの投与結果として
被験体中で誘導される臨床副作用である。多数のこのような副作用が、臨床経験
および臨床試験を通じて十分に文書化されている。このような副作用は、しばし
ば、被験体において用量−境界的である。最も一般的に遭遇する全身性ＩＦＮ−
α処置関連副作用としては、以下が挙げられる：インフルエンザ様症候群、熱、
頭痛、悪寒、筋肉痛、疲労、食欲不振、悪心、嘔吐、下痢、鬱病、甲状腺機能亢
進症、好中球減少症および貧血。好ましい実施形態において、ＩＦＮ−α処置関
連副作用は、十分に減少されて、ＩＦＮ−α処置とのよりいっそうのコンプライ
アンスを促進する。別の好ましい実施形態において、ＩＦＮ−α処置関連副作用
は、十分に減少されて、さもなければ副作用によって排除されるＩＦＮ−α処置
の再開を可能にする。別の好ましい実施形態において、ＩＦＮ−α処置関連副作
用は十分に減少されて、ＩＦＮ−α処置の強化を可能にする。
【０１４１】 本発明の別の局面において、ＩＦＮ−α処置が必要な被験体においてこのよう
な処置の効果を増強するための第２の方法が、提供される。この方法は、このよ
うな処置が必要な被験体に、この被験体の状態を処置するのに有効な量のＩＦＮ
−αを含む薬学的組成物を投与する工程、ドナーから天然のインターフェロン産
生細胞（ＩＰＣ）を単離する工程、この単離されたＩＰＣを、エキソビボで、Ｉ
ＦＮ−αを放出するためにＩＰＣを誘導するのに有効な量の免疫刺激核酸を含む
薬学的組成物と接触させる工程、およびこの接触された細胞を被験体へ投与する
工程を包含する。ドナーおよび被験体は、単一個体であり得るか、またはこれら
は、異なる個体であり得る。特定の実施形態において、接触された細胞は、処置
される標的組織を供給する血管へ局所様式で（例えば、注射または注入を介して
）被験体に投与される。本発明のこの局面に従う方法は、必要に応じて、単離さ
れたＩＰＣを抗原と接触させる工程を包含し得る。特定の実施形態において、こ
の方法はまた、単離されたＩＰＣを、増殖因子（ＩＰＣはこれら自身を産生しな
い）と接触させる工程を包含し得る。ＩＰＣによって産生されないこのような増
殖因子としては、例えば、ＩＬ−３またはＧＭ−ＣＳＦが挙げられ得、そしてＩ
Ｌ−８およびＴＮＦ−αを除外する。
【０１４２】 本明細書中に使用される場合、用語、増殖因子は、成熟および有糸分裂を引き
起こすための応答性の細胞型を誘導する可溶性シグナル伝達因子をいう。増殖因
子の分類としては、多数のサイトカイン、増殖因子それ自身、およびホルモンが
挙げられる。増殖因子の特定の例としては、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、Ｉ
Ｌ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＰＤＦＧ、ＴＧＦ−β、ＮＧＦ，ＩＧＦ，
増殖ホルモン、エリスロポイエチン、トロンボポイエチンなどが挙げられるが、
これらに限定されない。天然に存在する増殖因子に加えて、増殖因子アナログお
よび融合タンパク質のような増殖因子誘導体が、本発明の目的のために使用され
得る。
【０１４３】 本明細書中に使用される場合、用語、天然のインターフェロン産生細胞（ＩＰ
Ｃ）は、エンベロープウイルス、細菌および腫瘍に応じるＩＦＮ−αの主要な産
生者である特定化された白血球型をいう。ＩＰＣは、低い頻度で末梢血単核細胞
（ＰＢＭＣ）および扁桃組織中に存在する系譜陰性（ｌｉｎ−）／ＣＤ４＋／Ｍ
ＨＣ クラスＩＩ＋細胞である。Ｓｉｅｇａｌ ＦＰら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８
４：１８３５−７（１９９９）；Ｇｒｏｕａｒｄ Ｇら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ
１８５：１１０１−１１（１９９７）。正常な個体におけるＰＢＭＣ中のＩＰＣ
の頻度は、０．２と０．６との間のパーセントで変化する。これらは、系譜マー
カーＣＤ３（Ｔ細胞）、ＣＤ１４（単球）、ＣＤ１９（Ｂ細胞）およびＣＤ５６
（ＮＫ細胞）の非存在下、ＣＤ１１ｃの非存在下、ならびにＣＤ４、ＣＤ１２３
（ＩＬ−３レセプターα、ＩＬ−３Ｒα）およびＭＨＣクラスＩＩの発現によっ
て特徴付けられる。Ｇｒｏｕａｒｄ Ｇら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８５：１１
０１−１１（１９９７）；Ｒｉｓｓｏａｎ Ｍ−Ｃら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８３
：１１８３−８６（１９９９）；Ｓｉｅｇａｌ ＦＰら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８
４：１８３５−７（１９９９）；Ｃｅｌｌａ Ｍら、Ｎａｔ Ｍｅｄ ５：９１
９−２３（１９９９）。
【０１４４】 本明細書中に使用される場合、被験体からＩＰＣを単離することは、被験体か
らＩＰＣを含む体液もしくは組織を取り除くプロセス、および少なくとも１パー
セントの細胞がＩＰＣである程度まで体液もしくは組織からのＩＰＣを富化する
プロセスをいう。最も好ましい実施形態において、少なくとも９９パーセントの
細胞がＩＰＣである。別の好ましい実施形態において、少なくとも９５パーセン
トの細胞がＩＰＣである。別の好ましい実施形態において、少なくとも９０パー
セントの細胞がＩＰＣである。別の好ましい実施形態において、少なくとも８０
パーセントの細胞がＩＰＣである。別の好ましい実施形態において、少なくとも
７０パーセントの細胞がＩＰＣである。別の好ましい実施形態において、少なく
とも６０パーセントの細胞がＩＰＣである。別の好ましい実施形態において、少
なくとも５０パーセントの細胞がＩＰＣである。別の好ましい実施形態において
、少なくとも４０パーセントの細胞がＩＰＣである。別の好ましい実施形態にお
いて、少なくとも３０パーセントの細胞がＩＰＣである。別の好ましい実施形態
において、少なくとも２０パーセントの細胞がＩＰＣである。別の好ましい実施
形態において、少なくとも１０パーセントの細胞がＩＰＣである。別の好ましい
実施形態において、少なくとも５パーセントの細胞がＩＰＣである。富化する工
程は、一連の選択工程によって達成され得、この工程は、例えば、細胞を、系譜
マーカーに対して特異的な抗体（例えば、抗ＣＤ３、抗ＣＤ１１ｃ、抗ＣＤ１４
、抗ＣＤ１６、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ５６）と結合した磁気ビーズと接触させ、次
いで、接触されたこの細胞を強い磁場の存在下で除去カラムを通過することによ
る、系譜陽性細胞の陰性選択；除去カラムを通過する細胞を抗ＣＤ４と結合され
たマイクロビーズと接触させ、この接触された細胞を陽性選択カラム上を通過さ
せることを含む陽性選択；ならびに抗ＣＤ１２３および抗ＭＨＣクラスＩＩを用
いる蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）によるＩＰＣのさらなる増強を含み得る。
少なくとも１パーセントの生存細胞がＩＰＣである程度まで（ｌｉｎ−）／ＣＤ
４＋／ＣＤ１２３＋／ＭＨＣ クラスＩＩ＋インターフェロン産生細胞の単離お
よび富化を引き起こす場合、他の方法が、当業者に理解されるように、等しい効
果に対して使用され得る。
【０１４５】 本発明のさらに別の局面において、インビトロにおいて天然のインターフェロ
ン産生細胞（ＩＰＣ）の生存を支持するための方法が、提供される。この方法は
、被験体から（上記のように）ＩＰＣを単離する工程、組織培養に適した滅菌培
地中でＩＰＣを培養する工程、およびインビトロでＩＰＣを、インターロイキン
３（ＩＬ−３）の非存在下でＩＰＣの増殖を支持するに有効な量の免疫刺激核酸
と接触させる工程を包含する。好ましい実施形態において、ＩＰＣは、前駆体２
型樹状細胞（ｐＤＣ２；プラズマ細胞様単球）である。Ｓｉｅｇａｌ ＦＰら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１８３５−７（１９９９）。ＩＰＣは、外因性ＩＬ−
３および／またはＧＭ−ＣＳＦの有りまたは（より顕著には）無しのいずれかの
適切な組織培養条件下で培養され得る。
【０１４６】 本明細書中に使用される場合、インビトロでインターフェロン産生細胞（ＩＰ
Ｃ）の生存を支持する方法は、因子を提供すること、またはインビトロ培養物中
に配置されたＩＰＣの生存能力を促進するシグナルを誘導することをいう。例え
ば、ＩＬ−３の非存在下、通常多くのＩＰＣは細胞培養物中に配置された３日以
内に死ぬ。ＩＰＣへのＩＬ−３の添加は、培養物中のＩＰＣの生存を支持する。
本発明のこの局面に従って、ＩＬ−３は、ＩＰＣが有効量のＩＳＮＡと接触され
る場合、インビトロにおけるＩＰＣの生存に必要とされない。
【０１４７】 別の局面において、本発明は、インビトロにおいて単離されたインターフェロ
ン産生細胞（ＩＰＣ）を刺激するための方法を提供する。この方法は、被験体か
ら（上記のように）ＩＰＣを単離する工程、組織培養に適した滅菌培地中でＩＰ
Ｃを培養する工程、およびインビトロでこのＩＰＣを、少なくとも１つのＩ型の
インターフェロンの分泌を誘導するのに有効な量の免疫刺激核酸と接触させる工
程を包含する。好ましい実施形態において、この方法によって誘導される１型イ
ンターフェロンは、ＩＦＮ−αである。上記のように、好ましいＩＰＣは、前駆
体２型樹状細胞（ｐＤＣ２；プラズマ細胞様単球）である。Ｓｉｅｇａｌ ＦＰ
ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１８３５−７（１９９９）。重要なことには、Ｉ
ＰＣは、ＧＭ−ＣＳＦの非存在下および例えば、センダイウイルス、ＨＳＶまた
はインフルエンザウイルスによるウイルス感染なしで、培養中刺激され得る。活
性化は、当該分野で周知の方法を用いてアッセイされ得、これは、細胞表面活性
化マーカーＣＤ８０のＦＡＣＳ分析およびＩ型ＩＦＮに対するＥＬＩＳＡまたは
バイオアッセイ（例えば、水疱性口内炎ウイルスに対する線維芽細胞の保護）が
挙げられる。
【０１４８】 本明細書中に使用される場合、インビトロにおいて、単離されたインターフェ
ロン産生細胞（ＩＰＣ）を刺激する方法は、因子を提供すること、またはＩＰＣ
の大きさ、形態、もしくは細胞表面抗原の発現、転写に変化を引き起こすシグナ
ル、またはこの因子もしくはシグナルの非存在下においてＩＰＣに特徴的でない
分泌産物を誘導することをいう。ウイルス感染によって提供されるシグナル、Ｃ
Ｄ４０Ｌ連結、またはＧＭ−ＣＳＦの非存在下において、新鮮に単離されたＩＰ
Ｃは、８〜１０μｍの直径を有するなめらかな円形のリンパ形態を示し、その細
胞表面にＣＤ８０またはＣＤ８６を発現し ない。Ｇｒｏｕａｒｄ Ｇら、Ｊ
Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８５：１１０１−１１（１９９９）。同様に、新鮮に単離さ
れたＩＰＣは、ＩＦＮ−αを大量に分泌しない。Ｓｉｅｇａｌ ＦＰら、Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２８４：１８３５−７（１９９９）。対照的に、ＩＬ−３に曝露され
たＩＰＣは、インビトロで偽足および不鮮明な形態を発生し、ＣＤ８０およびＣ
Ｄ８６をその表面上に発現し、そして紫外線照射された単純疱疹ウイルス、セン
ダイウイルス、または熱殺傷Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓに対
して曝露される場合、大量のＩ型ＩＦＮ（ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β）を分泌
する。Ｇｒｏｕａｒｄ Ｇら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８５：１１０１−１１（
１９９９）；Ｓｉｅｇａｌ ＦＰら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１８３５−７（
１９９９）。本発明のこの局面に従って、ＩＳＮＡは、ウイルス感染、ＣＤ４０
Ｌ連結、またはＧＭ−ＣＳＦの代わりに使用されて、インビトロにおいて単離さ
れたＩＰＣを刺激するのに有効なシグナルを誘導し得る。
【０１４９】 本発明はさらに、被験体のインターフェロン産生細胞（ＩＰＣ）を活性化する
ために被験体を処置するための方法を提供する。この方法は、このような処置が
必要な被験体からＩＰＣを単離する工程、ＩＰＣをインビトロで培養する工程、
インビトロでこのＩＰＣを有効量の単離された免疫刺激核酸と接触させる工程、
およびこの接触されたＩＰＣを被験体へ戻す工程を包含する。ＩＰＣは、被験体
から上記のように単離され、そして適したインビトロ細胞培養条件下で培養物中
に配置される。このような培養条件は、必要に応じて、外因性増殖因子（ＩＬ−
３またはＧＭ−ＣＳＦを含む）の供給を含み得る。しかし、ＩＬ−３またはＧＭ
−ＣＳＦは、本発明の目的に必要とされないかもしれない。この方法に従って、
被験体は、ＩＦＮ−αの薬学的調製物の直接投与を伴わずに処置され得る。ＩＰ
Ｃの活性化は、同様に得られ培養されたがＩＳＮＡと接触されていないＩＰＣに
対してなされた参照物を用いて、上記のようにアッセイされ得る。
【０１５０】 さらに別の局面において、本発明は、多数のＩ型ＩＦＮサブタイプの産生を刺
激するための方法を提供する。この方法は、ＩＰＣを、少なくとも２つのＩ型イ
ンターフェロンの分泌を誘導するのに有効な量の、免疫刺激核酸と接触させる工
程を包含する。１つの実施形態において、ＩＰＣは、インビボでＩＳＮＡと接触
させられる。別の実施形態において、ＩＰＣは、単離され、そして／または適切
な細胞培養条件下においてインビトロでＩＳＮＡと接触される。種々の他の実施
形態は、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、
少なくとも７個、および少なくとも８個のＩ型ＩＦＮサブタイプの誘導を引き起
こす。種々のサブタイプは、当該分野で十分に記載される方法を用いて決定され
得、そして当業者に公知であり、例えば、サブタイプ特異的ＥＬＩＳＡ、アミノ
末端配列決定および質量分析法（ＭＳ）である。
【０１５１】 マトリックス補助レーザー脱着／イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ）
−ＭＳおよびエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）−ＭＳは、現在、フェムト
モル量で利用可能なペプチドを同定するために使用される標準的な方法である。
Ｍａｎｎ ＭおよびＴａｌｂｏ Ｇ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌ ７：１１−１９（１９９６）；Ｍａｎｎ ＭおよびＷｉｌｍ Ｍ Ｔｒｅｎ
ｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ ２０：２１９−２４（１９９５）；Ｍａｎｎ
Ｍら、Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ ６１：１７０２−８（１９８９）。個々のバンドは
、ポリアクリルアミドゲルから切り出され、トリプシンを用いて切断され、次い
で、溶出されて、ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ−ＭＳまたはＥＳＩ−ＭＳ分析に供される
ペプチドフラグメントを生じる。ＭＳからの質量／電荷のデータ、トリプシン消
化の切断部位特異性、およびペプチド配列データの組み合わせは、個々のタンパ
ク質およびペプチドの同定を可能にする。ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ−ＭＳ分析は、切
断され分析されたタンパク質の質量フィンガープリントを提供する。このフィン
ガープリントは、完全に配列決定されたタンパク質に対応する算出されたペプチ
ド質量のデータベースに対してスキャンするためのみに有用である。ＥＳＩ−Ｍ
Ｓ分析は、より困難であるが、これは、完全な配列データまたは部分的な配列デ
ータのいずれかへの比較に基づく同定を可能にする。いずれかの方法に関する質
量の精度は、０．０１パーセントを超え得、すなわち、１０ｋＤａ辺り１Ｄａで
ある。
【０１５２】 別の局面において、本発明は、Ｉ型ＩＦＮがγδＴ細胞の活性化および増殖を
誘導する発見に関する。このγδＴ細胞は、一般的なホスフェート含有非ペプチ
ド抗原に応答する前活性化段階の抗原特異的Ｔ細胞である。γδＴ細胞抗原の例
としては、熱殺傷マイコバクテリア由来のホスフェート含有非ペプチド分子；イ
ソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）および関連プレニルピロリン酸誘導体；モノ
エチルホスフェート；ならびにヌクレオシドおよびデオキシヌクレオシド三リン
酸のγ−モノエチル誘導体が挙げられる。Ｔａｎａｋａ Ｙら、Ｎａｔｕｒｅ
３７５：１５５−８（１９９５）。以前の研究により、γδＴ細胞が種々のリン
ホカイン（ｌｙｍｐｈｏｃｋｉｎｅ）を分泌し、そして細胞溶解応答を起こし得
ることが示された。例えば、γδＴ細胞のこれらのホスフェート含有非ペプチド
抗原への曝露は、ＡＰＣの非存在下においてＩＦＮ−γ産生を刺激する。明らか
にＴ細胞系譜に属するが、ヒトγδＴ細胞は、α／βＴ細胞とは明らかに異なり
、そしてこれらは、ＮＫ細胞といくつかの特徴を共有する。γδ細胞がマイコバ
クテリア感染によって引き起こされた病変に凝集し、ウイルス非特異的様式でウ
イルス感染された細胞に応答し、抗原プロセシングも抗原提示細胞のいずれも必
要とせず、そしてこれらが優先的に種々の上皮に局在するという発見は、一緒に
なって、γδ細胞が、パターン認識に応答性であり、そして防御の第１線を担い
得ることを示唆する。
【０１５３】 ＩＦＮ−γおよびパーフォリンの産生によって測定された場合に、ＩＰＰと組
み合わせたＣｐＧ ＯＤＮが、ＰＢＭＣ内に存在するヒトγδＴ細胞の活性化を
相乗的に誘導することが、本発明のこの局面に従って発見された。さらに、ＩＰ
Ｐと組み合わせたＣｐＧ ＯＤＮが、ＰＢＭＣ内に存在するヒトγδＴ細胞の増
殖を相乗的に誘導することがまた、本発明のこの局面に従って発見された。これ
らの効果は、γδＴ細胞をＰＢＭＣから単離することによってか、またはＩ型Ｉ
ＦＮに対する中和抗体の添加によって排除され、そしてこれらは、組換えＩ型Ｉ
ＦＮの添加によって再び産生された。著しく、ＯＤＮ２２１６および１５８５（
両方ともＩ型ＩＦＮの強力なインデューサー）は、ＯＤＮ２００６よりもγδＴ
細胞に対してその効果がより強力であった。
【０１５４】 ヒトにおいて、Ｔｈ１応答は、ＩＬ−１２および／またはＩＦＮ−γによって
駆動される。ＩＬ−１２およびＩＦＮ−α／βの両方は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞
においてＩＦＮ−γ合成を促進する。ＩＬ−１２がγδＴ細胞を促進してＩＦＮ
−γを分泌することが以前に知られた。ＩＦＮ−βはＩＬ−１２産生をダウンレ
ギュレートすることが記載されているので、Ｉ型ＩＦＮを誘導するＩＳＮＡによ
って発揮されるＩＬ−１２産生に対する効果を研究するために実験が実行された
。これらの実験（実施例１３）の結果は、特定のＣｐＧ ＯＤＮがＣＤ４０依存
性ＩＬ−１２ｐ７０産生を、ＩＬ−１２ｐ４０ ｍＲＮＡ産生に対するＩＦＮ−
α／β媒介陰性フィードバック機構によって抑制することを示した。従って、Ｃ
Ｄ４０Ｌを介するＴ細胞および抗原提示細胞の相互作用は、ＩＬ−１２またはＩ
ＦＮ−α／βによって支配されるサイトカイン環境を導く。両者がＴｈ１応答を
促進するが、Ｉ型ＩＦＮよりも良好なＢ細胞活性化のインデューサーであるＣｐ
Ｇ ＯＤＮは、ナイーブＴ細胞のプライミングに関して優れ得、そして逆に、Ｉ
型ＩＦＮの強力なインデューサーであるＣｐＧ ＯＤＮは、より高い活性を有し
て、前活性化および記憶Ｔ細胞を支持し得る。
【０１５５】 本発明の別の局面に従って、被験体への投与のためのインターフェロン組成物
が、提供される。この組成物は、組換えまたは天然のインターフェロンを、被験
体への投与のための容器中に含む。この容器中のインターフェロンの量は、最大
許容用量（ＭＴＤ）よりも少なくとも約１０パーセント少ない。好ましくは、こ
の容器中のインターフェロンの量は、ＭＴＤより少なくとも約２０パーセント下
、ＭＴＤより少なくとも３０パーセント下、ＭＴＤより少なくとも４０パーセン
ト下、またはさらに、ＭＴＤより少なくとも５０パーセント下である。他の実施
形態において、この容器中のインターフェロンの量は、臨床的に確立された有効
用量よりも少なくとも約２０パーセント下、３０パーセント下、４０パーセント
下、またはさらに５０パーセント下である。この容器はまた、ＩＳＮＡを含み得
る。
【０１５６】 本発明のさらに別の局面において、インターフェロンおよびＩＳＮＡを被験体
へ投与するためのキットが、提供される。キット１１を描く図１８を参照して、
このキットは、ＩＦＮ−αを含む組成物１７を含む容器１９および最大許容用量
（ＭＴＤ）よりも少なくとも約１０パーセント下、ＭＴＤよりも２０パーセント
下、ＭＴＤよりも３０パーセント下、ＭＴＤよりも４０パーセント下、またはＭ
ＴＤよりも５０パーセント下の量での、このような処置が必要な被験体へのイン
ターフェロンの投与に関する指示書２１を備える。このキット１１は、同じ容器
または別の容器１９中に、ＩＳＮＡを備え得る。このキットはまた、ＩＦＮ−α
を用いた処置に対して感受性である状態を有する患者を処置するための指示書２
１を備え得る。このような状態の例（増殖およびウイルス）は、上記に記載され
るようなものである。キット１１はまた、箱様パッケージ１５を備える。
【０１５７】 本発明は、さらに以下の実施例によって例示され、これらは、さらなる限定と
していずれにも構築されるべきではない。本願を通じて引用される全ての参考文
献（論文の参考文献、発行された特許、公開された特許出願、および同時係属中
の特許出願を含む）の全内容は、本明細書によって参考として明確に援用される
。
【０１５８】 （実施例） （実施例１ ＩＰＣの単離及び特徴付け） 末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は合計０．２〜０．４パーセントのＩＰＣを含有
しており、そしてこれらは系譜マーカー（ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１
９、ＣＤ２０、ＣＤ５６）の欠如によって特徴付けられ、そして他の系譜陰性細
胞とはＣＤ４、ＣＤ１２３（ＩＬ−３Ｒα）及びＭＨＣクラスＩＩの発現によっ
て識別することができる。
【０１５９】 ＩＰＣは、ＶＡＲＩＯＭＡＣＳ技術（Ｍｉｌｔｅｎｙ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂ
ｕｒｎ，ＣＡ）及び以前に記載された技術を使用して末梢血液から単離された。
Ｏ’Ｄｏｈｅｒｔｙ Ｕ等、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７８：１０６７〜１０７６
（１９９３年）。ＰＢＭＣは、以前に記載されたようにしてＦｉｃｏｌｌ−Ｐａ
ｑｕｅ密度勾配遠心分離法（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７、Ｓｉｇｍａ）に
よって健康な血液ドナーの軟膜から取得された。Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇ等、Ａｎ
ｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ ６：２９１〜
２９９（１９９６年）。ＣＤ３（ＵＣＨＴ１）、ＣＤ１４（Ｍ５Ｅ２）及びＣＤ
１９（Ｂ４３）に対するモノクローナル抗体はＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ）から購入した。ＰＢＭＣは、コロイド状超常磁気マイクロビーズと
結合体化した抗ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９及びＣＤ５６抗体と共に
インキュベートし、そして強磁場中で除去カラムを通過させた。通過中で得られ
た系譜陰性（ｌｉｎ−）細胞をＣＤ４に対するマイクロビーズ結合体化抗体と共
にインキュベートし、そして陽性選択カラムを通過させた。ｌｉｎ−／ＣＤ４＋
細胞からＩＰＣの＞９９パーセントまでの更なる精製は、フィコエリトリン（Ｐ
Ｅ）標識抗ＣＤ１２３及びＦＩＴＣ標識抗ＭＨＣクラスＩＩを使用して蛍光活性
化細胞分類（ＦＡＣＳ）で達成された。
【０１６０】 表面抗原染色は以前に記載されたようにして実施した。Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇ
等、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ２８５：９２０〜９２８（１
９９８年）。ＭＨＣクラスＩＩに対するモノクローナル抗体（ＨＬＡ−ＤＲ、Ｉ
ｍｍｕｎ−３５７）及びＣＤ８０に対するモノクローナル抗体（ＭＡＢ１０４）
はＩｍｍｕｎｏｔｅｃｈ（Ｍａｒｓｅｉｌｌｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）から購入した
。他の全ての抗体はＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）から購入した
：ＣＤ３（ＵＣＨＴ１）、ＣＤ１４（Ｍ５Ｅ２）、ＣＤ１９（Ｂ４３）及びＣＤ
８６（２３３１（ＦＵＮ−１））に対するｍＡｂ。ＦＩＴＣ標識ＩｇＧ１，κ（
ＭＯＰＣ−２１）及びフィコエリトリン標識ＩｇＧ２ｂ，κを使用して特異的な
染色をコントロールした。Ｌｙｏｎｓ ＡＢ及びＰａｒｉｓｈ ＣＲ、Ｊ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １７１：１３１〜１３７（１９９４年）。
【０１６１】 フローサイトメトリーデータはＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎ
ｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ
，ＣＡ）で得た。スペクトルのオーバーラップは適切に補償して補正した。分析
は、形態学的ゲート内の生育可能な細胞で実施した（前方散乱（ＦＳＣ）、側方
散乱（ＳＳＣ）、細胞の＞９４パーセントがＭＨＣクラスＩＩ陽性で且つ系譜マ
ーカー陰性）。データはコンピュータープログラムＦＬＯＷＪＯ（第２．５．１
版、Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ、Ｓｔａｎｆｏｒｄ，ＣＡ）で分析した。
【０１６２】 結果。トリパンブルー排除で測定された生育能力は＞９５パーセントであった
。新たに単離されたＩＰＣは共刺激分子ＣＤ８０及びＣＤ８６について陰性であ
った。図１は、ＰＢＭＣから単離されたＩＰＣの磁気ビーズ及びフローサイトメ
トリーによるＦＡＣＳ分析を描写している。左から右に次のとおり示されている
：ＰＢＭＣからｌｉｎ−／ＭＨＣクラスＩＩ＋細胞の選択；ｌｉｎ−／ＭＨＣク
ラスＩＩ＋細胞からＣＤ１２３＋／ＭＨＣクラスＩＩ＋細胞の更なる選択；及び
新たに単離されたｌｉｎ−／ＭＨＣクラスＩＩ＋／ＣＤ１２３＋ＩＰＣのＣＤ８
０−としての特徴付け。
【０１６３】 （実施例２ ＣｐＧオリゴヌクレオチドはインビトロでのＩＰＣの生存及び活
性化を支持する。） 新たに単離されたＩＰＣの大部分は、ＩＬ−３又はＧＭ−ＣＳＦの存在下でイ
ンキュベートしなかった場合、３日以内に死滅する。残存している生存細胞は活
性化されないか又は弱くしか活性化されない。ＩＰＣの細胞培養物にＣｐＧオリ
ゴヌクレオチドは添加されるが、他の増殖因子は添加されない場合、ＩＰＣは生
存し、そして共刺激分子（例えば、ＣＤ８０、図２）の発現増加によって示され
るように、高度に活性化されるようになる。
【０１６４】 新たに単離されたＩＰＣ（実施例１参照）を、１０パーセント（容量／容量）
の加熱不活性化（５６℃、１時間）ＦＣＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ）、１．５ｍＭのＬ
−グルタミン、１００単位／ｍｌのペニシリン及び１００μｇ／ｍｌのストレプ
トマイシン（これらは全て、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬから）を補充したＲＰＭＩ １
６４０培養培地（完全培地）中に懸濁した。化合物は全てエンドトキシンを試験
して購入した。新たに調製したＩＰＣ（最終濃度１ｍｌ当たり５×１０5個の細
胞）を完全培地単独か、又は６μｇ／ｍｌのホスホロチオエートＣｐＧ ＯＤＮ
２００６（５’−ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔ−３’
；配列番号１４７）、１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙ
ｐｈｉｍｕｒｉｕｍ由来、Ｓｉｇｍａ カタログ番号Ｌ２２６２）、８００単位
／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ（１．２５×１０4単位／ｍｇ、Ｇｅｎｚｙｍｅ）を補充
するか若しくはＧＭ−ＣＳＦと組み合わせたＣｐＧオリゴヌクレオチドを補充し
た完全培地中で２日間培養した。ＩＰＣ上でのＣＤ８０及びＭＨＣクラスＩＩの
発現はフローサイトメトリーで試験した（実施例１参照）。
【０１６５】 結果 ５つの独立した実験の代表的な結果は図２に描写する。新たに調製され
たＩＰＣにＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（配列番号１４７、２μｇ／ｍｌ）の単回
添加はＧＭ−ＣＳＦ（８００単位／ｍｌ）より細胞生存の促進において優れてい
た（７４．３パーセント±５．２パーセント対５７．１パーセント±２．３パー
セント）。ＧＭ−ＣＳＦとＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（配列番号１４７）の組合
せは生存可能な細胞の数を更に増加させた（８１．０パーセント±６．７パーセ
ント）。新たに単離されたＩＰＣをＩＬ−３又はＧＭ−ＣＳＦ無しで２日間培養
すると、ＬＰＳを上記培地に加えたときであっても、ＣＤ８０に対する染色欠如
によって示されるように、依然として不活性のままであった。ＧＭ−ＣＳＦの添
加によってＣＤ８０が誘導された。ＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（配列番号１４７
、６μｇ／ｍｌ）の添加によってＩＰＣはＧＭ−ＣＳＦ（８００単位／ｍｌ）よ
り一層大きな程度にまで活性化された。ＧＭ−ＣＳＦとＣｐＧオリゴヌクレオチ
ドが一緒に存在したとき、ＩＰＣの更なる活性化が生じた。これは、ＩＰＣの生
存支持においてＣｐＧがＩＬ−３及びＧＭ−ＣＳＦを代替することを示している
。ＬＰＳはＩＰＣの生存又は活性化のどちらにも寄与しなかった（図２）。
【０１６６】 （実施例３ ＣｐＧオリゴヌクレオチドはインビトロでＩＰＣを活性化するが
、ポリＩＣはＩＰＣを活性化しない。） ＩＬ−３はＩＰＣの優れた生存をもたらすが、ＩＰＣを活性化しない。ＩＬ−
３をＣｐＧオリゴヌクレオチドと組み合わせたとき、ＣＤ８０の発現は５〜２０
倍増加した（図３）。ポリＩＣ（骨髄性細胞（樹状細胞、マクロファージ）に対
して周知の免疫刺激機能を有する別１つのポリヌクレオチド）はＩＰＣを刺激し
なかった。
【０１６７】 新たに調製されたＩＰＣ（実施例１参照、最終濃度１ｍｌ当たり３×１０5個
の細胞）を、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−３を補充した完全培地（実施例２参照）中
で３日間培養した。次いで、ＩＰＣの培養は、（ａ）更なる補充物無しで、（ｂ
）６μｇ／ｍｌのＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（配列番号１４７）を添加した後に
、そして（ｃ）１０μｇ／ｍｌのポリＩＣを添加した後に更に２４時間継続した
。前方散乱（ＦＳＣ）、側方散乱（ＳＳＣ）並びにＩＰＣ上でのＣＤ８０及びＭ
ＨＣクラスＩＩの発現はフローサイトメトリーで試験した（実施例１参照）。
【０１６８】 結果 ３つの独立した実験の代表的な結果は図３に示す。ＩＬ−３及びＣｐＧ
ＯＤＮ ２００６（配列番号１４７、６μｇ／ｍｌ）を補充した完全培地中で
培養したＩＰＣは、ＩＬ−３単独を含有する完全培地、又はＩＬ−３及びポリＩ
Ｃを補充した完全培地中で培養したＩＰＣより大きくそしてより粒状であった。
加えて、ＩＬ−３及びＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（配列番号１４７、６μｇ／ｍ
ｌ）を補充した完全培地中で培養したＩＰＣはＩＬ−３単独を含有する完全培地
又はＩＬ−３及びポリＩＣを補充した完全培地中で培養したＩＰＣより高度に活
性化された。これはＣｐＧオリゴヌクレオチドがインビトロでＩＰＣを活性化す
ることを示している。
【０１６９】 （実施例４ ＣｐＧオリゴヌクレオチドはＩＰＣによるＩＦＮ−α産生を誘導
する。） 全ＰＢＭＣ内でのＣｐＧによるＩ型インターフェロンの誘導は以前に示されて
いる。Ｓｕｎ Ｓ等、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８８：２３３５〜２３４２（１９
９８年）。ここで初めて、試験したＩＦＮ−αの１０個のサブ種のうち９個に特
異的なＥＬＩＳＡを使用して、ＩＦＮ−αがＣｐＧオリゴヌクレオチドによって
４８時間以内にＩＰＣ内に誘導されることが示されている。
【０１７０】 新たに調製されたＩＰＣ（実施例１参照、最終濃度１ｍｌ当たり３×１０5個
の細胞）を、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−３及び８００単位／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ（
１．２５×１０4単位／ｍｇ、Ｇｅｎｚｙｍｅ）を補充した完全培地（実施例２
参照）中で２日間培養した。この培養物の半分に６μｇ／ｍｌのＣｐＧ ＯＤＮ
２００６（配列番号１４７）を補充した。ＩＦＮ−αを、ＩＦＮ−α（ヒトＩ
ＦＮ−α多種ＥＬＩＳＡ、ＰＢＬ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ、Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ）及びＩＦＮ−β（ＰＢＬ Ｂｉｏ
ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｎ
Ｊ）に特異的な別個のＥＬＩＳＡの組合せを使用し供給者の指示に従って実施し
て上清液中で測定した。上記の多種ＩＦＮ−α ＥＬＩＳＡは１００〜５０００
ｐｇ／ｍｌの範囲を有しており、ＩＦＮ−αＦを除いて、ヒトＩＦＮ−αサブタ
イプを全て検出し、そしてＩＦＮ−β又はＩＦＮ−γは検出しない。ＩＦＮ−β
ＥＬＩＳＡは２５０〜１０，０００ｐｇ／ｍｌの範囲を有している。
【０１７１】 結果。３つの独立した実験の代表的な結果を図４に表す。１０ｎｇ／ｍｌのＩ
Ｌ−３、８００単位／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ及び６μｇ／ｍｌのＣｐＧ ＯＤＮ
２００６（配列番号１４７）を補充した完全培地中で４８時間培養したＩＰＣは
、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが添加されていない同様な培養物と比較して、強く
誘導されてＩＦＮ−αを分泌した。この結果は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドがヒ
トＩＰＣを誘導してＩＦＮ−αの多数のサブ種を分泌させることを示している。
この結果はまた、ＣｐＧオリゴヌクレオチドがＩＰＣ由来の恒久的細胞株を使用
して天然インターフェロンのインビトロ産生を可能にすることも示している。
【０１７２】 （実施例５ ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β誘導活性を有するＣｐＧ ＯＤＮの
同定） ３つの連続「ヒト」ＣｐＧモチーフ（５’ＧＴＣＧＴＴ３’）を含む２４マー
のＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（配列番号１４７）は、ヒトＢ細胞を活性化する最
も強力なＣｐＧ配列の１つである。Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ １６４：９４４〜９５３（２０００）；Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇら、Ｊ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ １６４：１６１７〜１６２４（２０００）。他の微生物刺激因子（
例えば、ＬＰＳおよびポリ（Ｉ：Ｃ））と比較して、ＯＤＮ ２００６は、ｐＤ
Ｃ前駆体の生存および活性化を強力に促進する。しかし、ＮＫ細胞を活性化する
その強力な能力と比較して、ｐＤＣ中のＩ型ＩＦＮを誘導するＯＤＮ ２００６
の能力は、比較的弱い。
【０１７３】 他のＣｐＧ ＯＤＮがｐＤＣ中のＩ型ＩＦＮを誘導することによってＮＫ細胞
を活性化し得るという仮説を試験するために、既知のＮＫ細胞活性を有するＣｐ
Ｇ ＯＤＮのパネルを、それらがＰＢＭＣにおけるＩＦＮ−α産生を刺激する能
力について試験した。ＣｐＧ ＯＤＮのパネルには、以下のものが含まれ、ここ
で、小文字はホスホロチオエート結合を示し、大文字はホスホジエステル結合を
示し、そしてｍは７−デアザ−グアノシンを示す：
【０１７４】
【化２０】 ＯＤＮは全て、２０ｍｇ／ｍｌの濃度でＴＥ緩衝液（１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ８）に溶解した。ＰＢＳ中に希釈したアリコート（
０．４ｍｇ／ｍｌ）を−２０℃で貯蔵し、そして使用前に解凍した。発熱物質不
含試薬を全ての希釈物に使用した。ＯＤＮを、ＬＡＬアッセイ（Ｂｉｏ Ｗｈｉ
ｔｔａｋｅｒ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ；検出下限０．１ＥＵ／ｍｌ）
を使用してエンドトキシンについて試験した。
【０１７５】 新たに単離されたＰＢＭＣを、ＣｐＧ ＯＤＮ（３μｇ／ｍｌ）と共に４８時
間インキュベートした。ＩＦＮ−αを、その上清において、ＩＦＮ−αの１３の
アイソフォームのうち１０のアイソフォームを検出するＥＬＩＳＡによって測定
した。最初に試験した全ての配列の中で、ＣｐＧ ＯＤＮ１５８５（配列番号１
）が、ＰＢＭＣにおいてＩＦＮ−αを誘導する最も高い活性を示した。ＯＤＮ１
５８５は、両末端にポリＧそして１０マーのパリンドローム内に中央のＣｐＧ−
ジヌクレオチドを有する、キメラＯＤＮ（混合ホスホロチオエート−ホスホジエ
ステル骨格）である。Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇら、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘ
ｐ Ｔｈｅｒ ２８５：９２０（１９９８）。ＯＤＮ１５８５は、ＰＢＭＣ中で
有意な量のＩＦＮ−αを誘導しなかった（０．０２１±０．０１５ｎｇ／ｍｌ；
ｎ＝８）ＯＤＮ２００６と比較して、ナノグラム範囲でＩＦＮ−αを刺激した（
１．３±０．４ｎｇ／ｍｌ；ｎ＝７）（図５）。コントロールのＯＤＮ２１９７
（ポリＧ末端における７−デアザ−グアノシン置換体（Ｇ四量体を形成できない
））およびＯＤＮ２１９８（ＣＧおよびポリＧ末端を有するが、パリンドローム
を有さない）は、本質的に不活性であった（図５）。次いで、ＯＤＮ１５８５の
配列に基づいて、ＣｐＧ ＯＤＮの新しいパネルを設計した。ポリＧ末端とパリ
ンドローム内に３つのＣＧジヌクレオチドを含む、ＯＤＮ２２１６（ｇｇＧＧＧ
ＡＣＧＡＴＣＧＴＣｇｇｇｇｇＧ；配列番号７）は、ＰＢＭＣ中で顕著なＩＦＮ
−α誘導活性を有する（２３．７±５．２ｎｇ／ｍｌ；ｎ＝７）いくつか配列中
の１例である。
【０１７６】 ＣｐＧ ＯＤＮは、濃度依存性様式でＩＦＮ−α産生を刺激した（図６）。Ｏ
ＤＮ２２１６およびＯＤＮ１５８５の活性を、１２μｇ／ｍｌまでの濃度につい
て試験し、ＯＤＮ２２１６のより高い能力が、濃度依存性の効果でないことが確
認された。０．４μｇ／ｍｌ程度の少ないＯＤＮ２２１６が、ＰＢＭＣ中でかな
りの量のＩＦＮ−α（０．７ｎｇ／ｍｌ）を誘導したのに対して、ＯＤＮ２００
６、およびＯＤＮ２２１６のＧＣコントロール（ｇｇＧＧＧＡＧＣＡＴＧＣＴＣ
ｇｇｇｇｇＧ；ＯＤＮ２２４３；配列番号１５０）は、より高い濃度でさえ効果
を有さなかった。最大活性には３μｇ／ｍｌで到達した。ＩＦＮ−αの産生は、
インキュベーション６時間後に既に検出され得（０．２ｎｇ／ｍｌ）、そして４
８時間後にプラトーに到達した。
【０１７７】 ウイルス感染によるＰＢＭＣ中の天然インターフェロン産生細胞は、ｐＤＣ前
駆体と同一であり、０．５％未満の頻度である。ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞
および単球の枯渇によって、ｐＤＣ前駆体について１０〜７０倍富化された（２
〜１８％のＣＤ１２３++ｐＤＣ；３〜１０％のＣＤ１１ｃ+骨髄性ＤＣ（ｍＤＣ
）；５０〜９０％のＢ細胞；ｎ＝４）。ｐＤＣの生存性を高めるために、ＩＬ−
３を全てのサンプルに加えた。この手順の結果、ＩＦＮ−α産生が３０〜６０倍
増加した（ＯＤＮ２２１６で４２８．３±５６．８ｎｇ／ｍｌまで；ｎ＝４；図
７、上パネル、左側）。ＰＢＭＣ中で最も活性のＣｐＧ ＯＤＮはまた、ｐＤＣ
について富化されたサンプル中でも最も活性であった。ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ
２１９７またはＩＬ−３単独では、ＩＦＮ−αをほとんど誘導しなかった（平均
値；それぞれ、０．８ｎｇ／ｍｌ、０．４ｎｇ／ｍｌおよび０．６ｎｇ／ｍｌ、
ｎ＝４）。二本鎖ＲＮＡを模倣しそしてマクロファージ内でＩＦＮ−αを誘導す
ることが公知のポリ（Ｉ：Ｃ）（７μｇ／ｍｌ）は、ｐＤＣについて富化された
細胞においてさらに弱い刺激因子であった（０．３ｎｇ／ｍｌ、図面には無し）
。大量のＩＦＮ−αを誘導した同じＣｐＧ ＯＤＮはまた、ＩＦＮ−β産生も刺
激した（２．８±０．８ｎｇ／ｍｌまで、ｎ＝４；図７、下パネル、左側）。Ｉ
ＦＮ−βが単一のアイソフォームを表すこと、およびＩＦＮ−αが少なくとも１
３種のアイソフォームからなることを考慮すると、かなりの量のＩＦＮ−βが産
生される。
【０１７８】 ＣｐＧ ＯＤＮの細胞取り込みが、ＣｐＧ ＯＤＮによるＩＦＮ−αおよびＩ
ＦＮ−βの誘導に重要であるのか否かを決定するために、陽イオン脂質リポフェ
クチンの効果を試験した（図７、上パネルおよび下パネル、右側）。正に荷電し
た陽イオン脂質は、負に荷電したＯＤＮと複合体を形成し、そしてこれはＯＤＮ
の細胞取り込みを増加する。リポフェクチンは、ＣｐＧ ＯＤＮによって誘導さ
れるＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βの産生を増強した（７８６ｎｇ／ｍｌまでのＩ
ＦＮ−α、ｎ＝３；および９ｎｇ／ｍｌまでのＩＦＮ−β、ｎ＝３）。この増加
は、試験した全てのＣｐＧ ＯＤＮで見られたが、ＯＤＮ１５８５で最も顕著で
あった（２０倍）。
【０１７９】 （実施例６ ＣｐＧ ＯＤＮで誘導されるＩＦＮ−αは、専ら形質細胞様（ｐ
ｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ）樹状前駆細胞によって産生される） ＰＢＭＣ内のどの細胞型がＣｐＧ ＯＤＮに応答してＩＦＮ−αを産生するの
かを試験するために、フローサイトメトリーによって単一の細胞に基づいて細胞
内ＩＦＮ−αの検出を可能にするプロトコルを開発した。ＰＢＭＣを、３μｇ／
ｍｌのＯＤＮ２２１６（配列番号７）またはＯＤＮ２００６（配列番号１４７）
と共にインキュベートした。５時間後、細胞を採集し、そしてＩＦＮ−αの細胞
内染色を実施した。
【０１８０】 細胞内ＩＦＮ−αの分析では、インキュベーション期間中にタンパク質分泌を
遮断するブレフェルディンＡを添加しなかった。ＰＢＭＣを採集し（約６００，
０００細胞／チューブ）、抗ＣＤ１２３−ビオチン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）と
共にインキュベートし、ＰＢＳ（４００ｇ、５分間、４℃）中で洗浄し、そして
ストレプトアビジン−ＡＰＣ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＦＩＴＣ結合体化抗系
譜（ａｎｔｉ−ｌｉｎｅａｇｅ）カクテル（抗ＣＤ３、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ１６
、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０および抗ＣＤ５６からなる；Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋ
ｉｎｓｏｎ）、および抗ＨＬＡ ＤＲ−ＰｅｒＣＰ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉ
ｎｓｏｎ）で染色した。次に、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、１００μｌの固定緩衝
液Ａ（Ｆｉｘ ａｎｄ Ｐｅｒｍ Ｋｉｔ、Ｃａｌｔａｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）中に再懸濁し、そして室温で１５分間イ
ンキュベートした。細胞を２ｍｌのＰＢＳ中で再度洗浄し、次いで、１００μｌ
の浸透性緩衝液Ｂ（Ｆｉｘ ａｎｄ Ｐｅｒｍ Ｋｉｔ）中に再懸濁した。４μ
ｇ／ｍｌのマウス抗ヒトＩＦＮ−α ｍＡｂ（ＭＭＨＡ−１１、ＰＢＬ Ｂｉｏ
ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を添加した。ＰＥ標識マウスＩｇ
Ｇ１（ＭＯＰＣ−２１、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を、コントロール抗体として使
用した。暗所中、室温で１５分間のインキュベーション後、細胞を２ｍｌのＰＢ
Ｓ中で洗浄した。細胞内ＩＦＮ−αを検出するために、細胞を１００μｌの浸透
性緩衝液Ｂ（Ｆｉｘ ａｎｄ Ｐｅｒｍ Ｋｉｔ）中に再懸濁し、そして二次抗
体としてＰＥ標識ラット抗マウスＩｇκ軽鎖（Ｒ８−１４０、Ｐｈａｒｍｉｎｇ
ｅｎ）を用いて染色した。ＰＢＳ中で洗浄した後、細胞を、２つのレーザー（４
８８ｎｍおよび６３５ｎｍで励起）を備えたＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ
ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒによる４色フローサイトメトリーで分析した。スペ
クトルのオーバーラップは適切に補償して補正し、そしてアイソタイプのコント
ロール抗体を使用してゲートを設定した。分析を、形態学的ゲート内の生育可能
な細胞で実施した（ＦＳＣ、ＳＳＣ、ヨウ化プロピジウム染色で確認した場合に
、＞９７％の生育可能な細胞）。データを、ＣＥＬＬＱＵＥＳＴ（Ｂｅｃｔｏｎ
Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）またはＦＬＯＷＪＯソフトウエア（バージョン２．５．
１、Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ， Ｉｎｃ．、Ｓｔａｎｆｏｒｄ，ＣＡ）を使用して分
析した。
【０１８１】 （結果） 図８Ａに示されるように、系譜+および系譜-（ｌｉｎ+およびｌｉ
ｎ-）細胞を、系譜マーカー発現および前方散乱特性によって規定した。ＯＤＮ
２２１６で刺激した後、細胞内ＩＦＮ−αは、潜在的なＩＦＮ−α産生細胞とし
て単球やマクロファージを含むｌｉｎ+細胞において検出されなかった（図８Ｃ
）。主としてｐＤＣやｍＤＣを含むｌｉｎ-細胞内では、中間体ＨＬＡ ＤＲ（
ＭＨＣクラスＩＩ）発現を有する別の集団が、ＩＦＮ−αについて陽性に染色し
た（図８Ｄ）。
【０１８２】 ｌｉｎ-集団内では、ｍＤＣおよびｐＤＣは、それらのＨＬＡ ＤＲ／ＣＤ１
２３表現型によって区別可能であり得る（図８Ｂ）。ｍＤＣは、ＣＤ１２３+/-
およびＨＬＡ ＤＲ++であり（ゲートＩＩ）；ｐＤＣは、ＣＤ１２３++およびＨ
ＬＡ ＤＲ+である（ゲートＩＩＩ）。ＣＤ１２３++／ＨＬＡ ＤＲ-集団は、好
塩基球である。図９Ａは、ｌｉｎ-／ＨＬＡ ＤＲ+細胞内におけるＩＦＮ−αの
細胞内染色を示す。ＩＦＮ−αは、ＯＤＮ２００６に応答してではなく、専らＯ
ＤＮ２２１６に応答してｐＤＣによって産生された。ｐＤＣ中で４６％が、ＩＦ
Ｎ−αについて陽性に染色し、そしてこれは、この特定の染色時点でＩＦＮ−α
を産生した０．２５％のＰＢＭＣ内細胞頻度に相当する。他の３つの実験では、
ＯＤＮ２２１６に応答するＩＦＮ−α産生細胞の頻度は、ＰＢＭＣの０．０８％
、０．０５％および０．２２％であった（ｐＤＣの１６％、８％および６３％）
。
【０１８３】 ｐＤＣでの結果とは対照的に、ｍＤＣにおいては、ＩＦＮ−α合成は、ＯＤＮ
２００６またはＯＤＮ２２１６による刺激後に全く検出されなかった。
【０１８４】 従って、ｐＤＣは、ＣｐＧ ＯＤＮに応答してＩＦＮ−αを産生したＰＢＭＣ
内の唯一の細胞であった。重要なことに、細胞内ＩＦＮ−α染色は、ブレフェル
ディンＡを用いずに行われた。従って、検出されたＩＦＮ−αの量は、数時間に
わたるＩＦＮ−αの累積量ではなくて、採集時点での実際のＩＦＮ−α産生を表
していた。タンパク質分泌を遮断するためにインキュベーション中にブレフェル
ディンＡを加えた（細胞内サイトカイン染色用の標準的なプロトコル）場合、Ｉ
ＦＮ−α産生細胞を検出することはできなかった。
【０１８５】 （実施例７ ＩＦＮ−α誘導性およびＩＦＮ−α非誘導性ＣｐＧ ＯＤＮは共
に、形質細胞様樹状細胞内で初期ＴＮＦ産生を刺激する。） ｐＤＣは、ＩＬ−３に応答してＴＮＦ−αを産生し、そしてその結果オートク
ライン様式でこれら自体の成熟を促進することが報告されている。Ｈａｒｔｍａ
ｎｎ Ｇら、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅ
ｖ ６：２９１−２９９（１９９６）。従って、ｐＤＣ内におけるＴＮＦ−αの
細胞内蓄積を、異なるＣｐＧ ＯＤＮに応じて試験した（図９Ｂ）。ＰＢＭＣを
、ＩＬ−３の非存在下で３μｇ／ｍｌのＯＤＮ２２１６（配列番号７）またはＯ
ＤＮ２００６（配列番号１４７）と共に５時間インキュベートした。ブレフェル
ディンＡ（１μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ）を、５時間の刺激期間中に加えて、サイ
トカイン分泌を遮断した。ＰＢＭＣを採集し（約６００，０００細胞／チューブ
）、抗ＣＤ１２３−ビオチンと共にインキュベートし、ＰＢＳ（４００ｇ、５分
間、４℃）中で洗浄し、そしてストレプトアビジン−ＡＰＣ（Ｐｈａｒｍｉｎｇ
ｅｎ）、ＦＩＴＣ結合体化系統カクテルおよび抗ＨＬＡ ＤＲ−ＰｅｒＣＰ（Ｂ
ｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で染色した。次いで、細胞を、ＰＢＳ中で洗
浄し、１００μｌの固定緩衝液Ａ（Ｆｉｘ ａｎｄ Ｐｅｒｍ Ｋｉｔ、Ｃａｌ
ｔａｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）中に再度懸
濁し、そして室温で１５分間インキュベートした。細胞を、２ｍｌのＰＢＳ中で
再度洗浄し、そして次いで１００μｌの浸透性緩衝液Ｂ（フィックス・アンド・
パーム・キット）中に再度懸濁した。５μｇ／ｍｌのＰＥ標識マウス抗ヒトＴＮ
Ｆ−α ｍＡｂ（ＭＡｂ１１、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を、初期抗体として加え
た。ＰＥ標識マウスＩｇＧ１（ＭＯＰＣ−２１、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を、コ
ントロール抗体として使用した。暗所中、室温での１５分間のインキュベーショ
ン後、細胞を、２ｍｌのＰＢＳ中で洗浄し、そして次いで上記に記載のようにし
て４色フローサイトメトリーで分析した。
【０１８６】 （結果） ＩＦＮ−αとは対照的に、ＯＤＮ２００６とＯＤＮ２２１６に応答
するＴＮＦ−α産生ｐＤＣの百分率は類似していた（５９％対５６％）。２つの
他の実験は、比較可能な結果（ＯＤＮ２００６およびＯＤＮ２２１６での、それ
ぞれ２６％対２２％および８対６％のＴＮＦ−α+ ｐＤＣ）を示した。１細胞
当たりのＴＮＦ−α産生（ＭＦＩ、平均蛍光強度）は、ＯＤＮ２００６よりＯＤ
Ｎ２２１６で一定して高かった（図９Ｂ）。ＴＮＦ−αは、ｍＤＣ内では検出さ
れなかった。系統+細胞は、ＯＤＮ２００６またはＯＤＮ２２１６のいずれかに
応じる顕著な量のＴＮＦ−αを産生しなかった。
【０１８７】 （実施例８ ＩＦＮ−α誘導性ＣｐＧ ＯＤＮに応じるｐＤＣ上での共刺激分
子のアップレギュレーション。） 以前の研究で、ＯＤＮ２００６は、ＣＤ４+末梢血ＤＣ上での共刺激分子の発
現を刺激することが報告された。Ｚｈｏｎｇ ＲＫら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １
６３：１３５４（１９９９）。ｐＤＣ上のＣＤ８０およびＣＤ８６をアップレギ
ュレーションする異なるＣｐＧ ＯＤＮの能力を試験するために、ＰＢＭＣを、
単球、Ｔ細胞およびＮＫ細胞から枯渇し、そして残っている細胞を、ＩＬ−３の
存在下で異なるＣｐＧ ＯＤＮを使用して刺激した。４８時間後、ＣＤ８０およ
びＣＤ８６の発現を、３色フローサイトメトリーによってｐＤＣ（ＣＤ１２３++ ／ＨＬＡ ＤＲ+）上で試験した。Ｂ細胞（ＣＤ１２３-／ＨＬＡ ＤＲ+）およ
びｍＤＣ（ＣＤ１２３+/-／ＨＬＡ ＤＲ++）を、分析から除外した。図１０に
示されているように、ｐＤＣ上でのＣＤ８６の発現を、ＯＤＮ２００６（配列番
号１４７）並びにＯＤＮ１５８５（配列番号１）およびＯＤＮ２２１６（配列番
号７）によって増大した。ＯＤＮ１５８５の効果を、７−デアザ−グアノシンを
用いるポリＧテール（ＯＤＮ２１９７；配列番号１４８）の置換によって消滅さ
せた。非パリンドロームＣｐＧ ＯＤＮ２１９８（配列番号１４９）は、不活性
であった。ＣＤ８０およびＨＬＡ ＤＲのアップレギュレーションは、ＣＤ８６
に類似していた。弱いＩＦＮ−α誘導ＯＤＮ２００６に応じるＣＤ８０およびＣ
Ｄ８６の発現の増大は、６時間後に検出可能であった。対照的に、ＯＤＮ１５８
５およびＯＤＮ２２１６は、遅延応答を示し、１２時間より遅れて始まった。強
いＩＦＮ−α誘導性のＣｐＧ ＯＤＮ（ＯＤＮ１５８５、ＯＤＮ２２１６）およ
び弱いＩＦＮ−α誘導性のＣｐＧ ＯＤＮ（ＯＤＮ２００６）の両方によって、
４８時間後にプラトーに到達した。より遅い時点では、フローサイトメトリーに
よるＰＢＭＣ中のｐＤＣの同定を、細胞培養中のＣＤ１２３のダウンレギュレー
ションによって阻害した。
【０１８８】 （実施例９ ＣｐＧ ＯＤＮによるＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β産生の刺激は
、形質細胞様樹状細胞に対する直接的な効果であり、そして抗ＣＤ４磁気ビーズ
によって部分的に遮断される。） ＣｐＧ ＯＤＮが、ＩＦＮ−α産生を直接誘導するのかどうかを試験するため
に、ｐＤＣ富化ＰＢＭＣよりむしろ、精製ｐＤＣを試験した。ＰＢＭＣを、単球
、Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびＢ細胞から枯渇した。ＣＤ１２３++およびＨＬＡ Ｄ
Ｒ+ ｐＤＣを、残りの細胞集団からＦＡＣＳでソートして、精製（９７％）ｐ
ＤＣを得た（図１１Ａ）。精製ｐＤＣ（１６０，０００細胞／ｍｌ）を、ＩＬ−
３の存在下でＯＤＮ２２１６（配列番号７）と共に、または無しでインキュベー
トした。４８時間後、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βを、上清液中でＥＬＩＳＡに
よって測定した。図１１Ｂに示されているように、ＯＤＮ２２１６は、ＩＬ−３
単独（＜１０ｐｇ／ｍｌ）と比較して、高レベルのＩＦＮ−α（１４６ｎｇ／ｍ
ｌ；１個のｐＤＣ当たり１ｐｇ）およびＩＦＮ−β（１ｎｇ／ｍｌ）産生を刺激
した。
【０１８９】 ＰＢＭＣ内およびｐＤＣ富化ＰＢＭＣ内では、１個のｐＤＣ当たり４．２±０
．８ｐｇのＩＦＮ−α（０．８Ｕ〜１．４Ｕ；ｎ＝４）が産生された。磁気的標
識抗ＣＤ４ ｍＡｂを使用してｐＤＣを富化した場合、ｐＤＣのＩＦＮ−α産生
は、はるかにより低かった。これは、ＣＤ４-画分がＩＦＮ−αを産生しなかっ
たので、ＣＤ４-画分内のＩＦＮ−α産生細胞の喪失によるものではなかった。
ＣＤ４-フラクションをＣＤ４+ＤＣに戻して加えることは、ＩＦＮ−α応答を回
復しなかったため、ＣＤ４-画分内のアクセサリー細胞を介するＣｐＧ ＯＤＮ
の二次的な効果を排除した。従って、ｐＤＣの表面におけるＣＤ４の架橋化が、
活性低下の原因であるように思われた。
【０１９０】 （実施例１０ ＩＦＮ−α誘導性ＣｐＧ ＯＤＮは、ＩＦＮ−α非誘導性Ｃｐ
Ｇ ＯＤＮと比較して優れた間接的なＮＫ細胞の活性化を提供する。） 大量のＩＦＮ−αを誘導するＣｐＧ ＯＤＮはまた、ＮＫ細胞のより高い活性
化を示すかどうかを試験するために、ＰＢＭＣを、異なるＣｐＧ ＯＤＮと共に
インキュベートした。ＮＫ細胞の活性化を、ＣＤ６９発現（ＦＡＣＳ）に関連し
てそしてインビトロＮＫ細胞溶解活性によって測定した。ＮＫ細胞溶解活性を測
定するために、ＰＢＭＣを、異なる濃度の種々のＯＤＮと共にインキュベートし
た。１８時間後、細胞を採集し、そしてＫ５６２標的細胞に対する標準的な４時
間51Ｃｒ放出アッセイにおいて、エフェクター細胞として、以前に記載されたよ
うにして使用した。Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ６：８
９３（１９９９）。陽性コントロールは、組換えＩＬ−２（１００ＩＵ／ｍｌ）
を含んでおり、そして陰性コントロールは培地だけを含んでいた。結果は比溶解
％として表される：比溶解（％）＝（（実験のカウント−自然発生的放出カウン
ト）／（最大放出カウント−自然発生的放出カウント））×１００％。
【０１９１】 （結果） ＩＦＮ−α誘導性のＯＤＮ２２１６およびＯＤＮ１５８５は、刺激
因子を有していないコントロール（８±２％；ｎ＝５）と比較して、２４時間以
内にＣＤ６９陽性（活性化の初期マーカー）ＮＫ細胞のパーセントを高めた（Ｏ
ＤＮ２２１６で３８±１２％；ｎ＝５）。ＯＤＮ２００６はより低い応答を示し
た（１９％±６％）。ＰＢＭＣを、ＣｐＧ ＯＤＮと共にインキュベートした場
合、ＣＤ６９発現の増加と一致して、Ｋ５６２細胞のＮＫ細胞媒介溶解は顕著に
高くなった。０．６μｇ／ｍｌの低濃度でさえ、ＯＤＮ２２１６（配列番号７）
は、ＮＫ細胞溶解活性を刺激するのに依然としてＩＬ−２（１００ＩＵ／ｍｌ）
と同程度に有効であった（図１２）。ＯＤＮ１５８５（配列番号１）およびＯＤ
Ｎ２００６（配列番号１４７）はより有効でなかった。より高濃度（６μｇ／ｍ
ｌ）でさえ、ＯＤＮ１５８５のＧＣコントロール（５’ｇｇＧＧＴＣＡＡＧＣＴ
ＴＧＡｇｇｇｇｇＧ３’；ＯＤＮ２１１８；配列番号１５１）は、培地単独と比
較して完全に不活性であった（図１２）。精製ＮＫ細胞をＣｐＧ ＯＤＮと共に
インキュベートする場合、ＣＤ６９発現およびＫ５６２細胞の溶解は、増加せず
、ＮＫ細胞に対するＣｐＧ ＯＤＮの間接的な効果が示された。
【０１９２】 （実施例１１ ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＩＰＣによって大量のＩＬ−８
産生を誘導する。） ＩＬ−８は、他の免疫細胞を誘引するケモカインである。ＩＬ−３内で増殖し
たＩＰＣはＩＬ−８を産生しないが、一方ＣｐＧオリゴヌクレオチドはＩＰＣに
よって大量のＩＬ−８産生を刺激する（平均２３ｎｇ／ｍｌ、図１３）。
【０１９３】 新たに調製されたＩＰＣ（実施例１を参照のこと、最終濃度１ｍｌ当たり２×
１０5〜５×１０5個の細胞）を、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−３を補充した完全培地
中で２日間培養した。１組の平行培養物に１０μｇ／ｍｌのポリＩＣを補充し、
そして別の１組の平行培養物には６μｇ／ｍｌのＣｐＧ ＯＤＮ２００６（配列
番号１４７）を補充した。上清液は、ヒトＩＬ−８に特異的なＥＬＩＳＡ（Ｒ＆
Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネソタ州ミネアポリス）を使用して、供給者の指示に従
ってＩＬ−８について分析した。
【０１９４】 （結果） ３人の異なるドナーから得られた代表的なデータは図１３に示す。
ＩＰＣによるＩＬ−８分泌は、ＩＬ−３を含有している完全培地にＣｐＧオリゴ
ヌクレオチドを添加することによって強く誘導された。対照的に、この培地への
ポリＩＣの添加は、効果を有していなかった。この結果は、ＣｐＧオリゴヌクレ
オチドがＩＰＣを誘導して大量のＩＬ−８を産生させることを示している。
【０１９５】 （実施例１２ Ｉ型ＩＦＮは、γδＴ細胞の活性化および増殖を誘導する。） γδＴ細胞（Ｖγ９／Ｖδ２）は、通常の非ペプチド性リン抗原に応答する前
活性化段階の抗原特異的Ｔ細胞である。これらの抗原へのγδＴ細胞の暴露は、
ＡＰＣの非存在下でＩＦＮ−γ産生を刺激する。γδＴ細胞活性化を試験するた
めに、健康なドナーから得られたＰＢＭＣ（２×１０6／ｍｌ）を、１５μＭの
イソペンテニルピロホスフェート（ＩＰＰ、Ｖγ９／Ｖ８２細胞に対して特異的
なリン抗原）の存在下または非存在下で６μｇ／ｍｌのＣｐＧ ＯＤＮ（２００
６、１５８５または２２１６）もしくは培地単独と共に３日間刺激した。ブレフ
ェルディンＡは最後の４時間に加えた。Ｖγ９ ＴＣＲおよびＣＤ３を表面染色
した後、細胞を固定し、浸透性にし、そしてＩＦＮ−γに対するｍＡｂで染色し
た。３色フローサイトメトリーにおいて、γδＴ細胞を、これらのＦＳＣ／ＳＳ
Ｃプロフィール、ＣＤ３およびＴＣＲ Ｖγ９発現を使用してゲートし、そして
ＩＦＮ−γ発現について分析した。異なるドナーから得られた結果を比較するた
めに、データを、培地またはＩＰＰコントロールと比較したｘ倍増加として先ず
計算し、そしてその後、それぞれ、培地およびＩＰＰの平均値を掛けた。１４人
と２０人との間のドナーを、各ＣｐＧ ＯＤＮについて分析した。データを、平
均値＋ＳＥＭとして表し；*（ｐ＜０．０１）および**（ｐ＜０．００１）は、
培地コントロールをＣｐＧ ＯＤＮおよびＩＰＰ単独をＩＰＰ＋ＣｐＧ ＯＤＮ
と比較する、組み合わされたサンプルについてスチューデントのｔ検定で計算し
たｐ値を示す。
【０１９６】 γδＴ細胞増殖を試験するために、健康なドナーからから得られたＰＢＭＣを
、異なるＣｐＧ ＯＤＮ（２００６、１５８５または２２１６、各々６μｇ／ｍ
ｌで）の存在下または非存在下でＩＰＰ（３０μＭ）を用いて刺激した。γδＴ
ＣＲ陽性細胞の拡張を、抗Ｖγ９抗体を使用してフローサイトメトリーで評価し
、そして生育可能なＰＢＭＣ内のＴＣＲ Ｖγ９陽性細胞％として示される。９
人と１６人との間のドナーを各ＯＤＮについて分析した。データはＩＰＰ単独と
比較したｘ倍増加として示される（平均値＋ＳＥＭ）；*は＜０．０５を示す（
ＩＰＰ対ＩＰＰ＋ＣｐＧ ＯＤＮ）。
【０１９７】 （結果） ＰＢＭＣ内で、γδＴ細胞とＮＫ細胞は共にＣｐＧ ＯＤＮに応答
してＣＤ６９発現、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α産生、パーフォリン含有量およ
び溶解活性を高めたが、αβＴ細胞は応答しなかった。ＩＰＰと組み合わせたＣ
ｐＧ ＯＤＮはγδＴ細胞におけるＩＦＮ−γ（図１４）およびパーフォリンの
産生を相乗的に誘導した。この相乗効果はＯＤＮ２００６よりＯＤＮ２２１６お
よび１５８５、すなわち、Ｉ型ＩＦＮの強力なインデューサーであるＯＤＮでよ
り顕著であった。精製されたγδＴ細胞またはＮＫ細胞では、ＣｐＧ ＯＤＮは
活性を全く示さないか、またはＩＰＰで刺激される活性を低下さえさせた。
【０１９８】 さらに、ＣｐＧ ＯＤＮはＩＰＰに対するγδＴ細胞の増殖応答を相乗的に高
めた（図１５）。図１５Ａは、１つの代表的な実験から得られるγδＴ細胞拡張
の動力学を示す。図１５Ｂは、ＩＰＰ単独または異なるＣｐＧ ＯＤＮと組み合
わせたＩＰＰによる刺激から１０日後のγδＴ細胞の拡張を示す。
【０１９９】 組換え体ＩＦＮ−α／βまたはＩＬ−１２の添加はＰＢＭＣ内におけるＣｐＧ
ＯＤＮの刺激効果を模擬している。機能的なＩＬ１２ｐ７０は、ＣｐＧ ＯＤ
Ｎで刺激したＰＢＭＣの上清液中では検出することができなかった。ＣｐＧ Ｏ
ＤＮがγδＴ細胞およびＮＫ細胞を活性化する潜在能力は、ＩＦＮ−α／βを誘
導する能力と良好に相関していた。ＩＦＮ−α／βタンパク質の中和抗体および
対応するレセプターの組合せによるＩＦＮ−α／β機能の遮断は、γδＴ細胞お
よびＮＫ細胞のＣｐＧ ＯＤＮ誘導による活性化を阻害した。ＩＬ−１２の中和
抗体またはＩＬ−１８結合タンパク質の添加は、基線ＩＦＮ−γを減少したが、
ＣｐＧ ＯＤＮ刺激によるＩＦＮ−γを減少しなかった。ＴＮＦ−α、ＩＬ−Ｉ
βまたはＬＬ−１５の中和は効果を全く示さなかった。結論すると、これらの結
果によって、（ｉ）ＩＦＮ−α／βはγδＴ細胞の強力なアクチベーターであり
；（ｉｉ）ＣｐＧ ＯＤＮは、ＩＦＮ−α／βの誘導によって、γδＴ細胞およ
びＮＫ細胞を活性化し；（ｉｉｉ）Ｉ型ＩＦＮの強力なインデューサーであるＣ
ｐＧ ＯＤＮは、γδＴ細胞およびＮＫ細胞を活性化するように、Ｉ型ＩＦＮの
強力なインデューサーでないＯＤＮより強力であり；（ｉｖ）ＣｐＧ ＯＤＮは
、γδＴ細胞内の抗原特異的Ｔ細胞応答を共刺激し；そして（ｖ）ＣｐＧ ＯＤ
Ｎで誘導されるγδＴ細胞およびＮＫ細胞の非特異的な活性化はＴｈ１応答を促
進する初期ＩＦＮ−γを提供することが示された。
【０２００】 （実施例１３ Ｉ型ＩＦＮ誘導ＩＳＮＡは、ＩＬ−１２産生を阻害する。） ＩＦＮ−βはＩＬ−１２産生をダウンレギュレーションすると記載されている
。従って、ＩＬ−１２産生に対するＩ型ＩＦＮ誘導およびＩ型ＩＦＮ非誘導ＩＳ
ＮＡの効果を以下ようにして試験した。健康なドナー由来のＰＢＭＣ（２×１０ 6 ／ｍｌ）は、ＩＬ−４（１００Ｕ／ｍｌ）、ＧＭ−ＣＳＦ（１０Ｕ／ｍｌ）お
よびＩＦＮ−γ（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で２５μｇ／ｍｌの刺激性抗ＣＤ４
０抗体で刺激した。培地、６μｇ／ｍｌのＯＤＮ２００６（配列番号１４７）、
６μｇ／ｍｌのＯＤＮ１５８５（配列番号１）、または５０００Ｕ／ｍｌの組換
え体ＩＦＮ−αと５００Ｕ／ｍｌのＩＦＮ−βの組合せ物のいずれかを加えた。
４８時間後、ＩＬ１２ｐ７０を上清液中でＥＬＩＳＡによって測定した。データ
は、抗ＣＤ４０単独によるＩＬ１２ｐ７０産生（平均値＝１４３ｐｇ／ｍｌ）の
ｘ倍として示し、そして３人の異なるドナーの平均値（＋ＳＥＭ）を表す。
【０２０１】 （結果） 図１６は抗ＣＤ４０と組み合わせたＯＤＮ１５８５が、抗ＣＤ４０
コントロールと比較して、組換え体ＩＦＮ−αおよび組換え体ＩＦＮ−βの添加
による阻害と同様な程度ＩＬ１２ｐ７０産生を阻害したことを示している。対照
的に、抗ＣＤ４０と組み合わせたＯＤＮ２００６は抗ＣＤ４０陽性コントロール
を超えてＩＬ１２ｐ７０産生を高めた。これらの結果は、ＰＢＭＣにおいて、Ｉ
型ＩＦＮを誘導するＩＳＮＡはＩＬ−１２ｐ７０の産生を抑制し得、そして反対
に、Ｉ型ＩＦＮを誘導しないＩＳＮＡはＩＬ−１２ｐ７０の産生を高め得ること
を示している。
【０２０２】 定量的な実時間ＰＣＲによるｍＲＮＡレベルの分析は、Ｉ型ＩＦＮを誘導しな
いＩＳＮＡによるＩＬ−１２ｐ４０およびＩＬ−１２ｐ３５ ｍＲＮＡの少数で
はあるが等しいコピー数の誘導を明らかにした。対照的に、Ｉ型ＩＦＮを誘導す
るＩＳＮＡはＩＬ−１２ｐ３５ ｍＲＮＡのより多数のコピーを誘導したが、Ｉ
Ｌ−１２ｐ４０ ｍＲＮＡを検出することはできなかった。Ｉ型ＩＦＮを誘導し
ないＩＳＮＡはＩＬ−１２ｐ７０合成を高め（１７０％）、そしてＩ型ＩＦＮを
誘導するＩＳＮＡはＩＬ−１２ｐ７０合成を遮断した（２５％）。ＩＬ−１２ｐ
７０の阻害は組換え体ＩＦＮ−βで模擬することができ得る。ＩＦＮ−α／βタ
ンパク質の中和抗体とレセプターの組合せはＩＬ−１２ｐ７０のＩ型ＩＦＮ誘導
ＩＳＮＡ媒介阻害を反転させた。これらの結果は、Ｉ型ＩＦＮの強力なインデュ
ーサーであるＣｐＧ ＯＤＮが、ＩＬ−１２ｐ４０ ｍＲＮＡ産生に対するＩＦ
Ｎ−α／β媒介負フィードバックメカニズムによってＣＤ４０依存性ＩＬ−１２
ｐ７０産生を抑制することを示している。従って、Ｔ細胞と抗原提示細胞のＣＤ
４０Ｌを介した相互作用は、ＩＬ−１２（Ｉ型ＩＦＮを誘導しないＩＳＮＡ）ま
たはＩＦＮ−α／β（Ｉ型ＩＦＮを誘導するＩＳＮＡ）によって支配されるサイ
トカイン環境を導く。Ｉ型ＩＦＮを誘導しないＩＳＮＡはナイーブＴ細胞をプラ
イミングするのに優れて得、そしてＩ型ＩＦＮを誘導するＩＳＮＡは前活性化さ
れているメモリーＴ細胞を支持するのにより高い活性を有し得るが、これらは共
にＴｈ１応答を促進する。
【０２０３】 （実施例１４ 一次およびリコールペプチド特異的ヒトＣＴＬ応答に対するＣ
ｐＧ ＯＤＮの効果。） ＨＬＡ Ａ２陽性の健康なドナーから得られたＣＤ８＋Ｔ細胞（１×１０6）
は、６μｇ／ｍｌのＣｐＧ ＯＤＮ２００６（配列番号１４７）、１５８５（配
列番号１）または２２１６（配列番号７）の存在下または非存在下、インフルエ
ンザマトリックスタンパク質から誘導されるＨＬＡ Ａ２制限ペプチド（ＧＩＬ
ＧＦＶＦＴＬ）またはメランＡ（ｍｅｌａｎ Ａ）／マート−１（ｍａｒｔ−１
）タンパク質から誘導されるペプチド（ＥＬＡＧＩＧＩＬＴＶ）のどちらかを用
いて２４ウエルプレート中で刺激した。自己由来ＰＢＭＣ（３×１０6）をＡＰ
Ｃとして使用した。１４日後、細胞を採集し、洗浄し、そしてインフルエンザマ
トリックスまたはメラン−Ａペプチドで６時間再度刺激した。ブレフェルディン
Ａは最後の４時間に加えた。細胞はＣＤ８およびＣＤ３について染色し、引き続
いて固定し、浸透性にし、そしてＩＦＮ−γに対するｍＡｂで染色した。１４日
後にはまた、四量体陽性ＣＤ８+Ｔ細胞（ＨＬＡ−Ａ２／メラン−Ａ−ペプチド
およびＨＬＡ−Ａ２／インフルエンザマトリックス−ペプチド）の百分率を、フ
ローサイトメトリーで測定した。四量体は、ペプチド特異的Ｔ細胞レセプターと
特異的に結合し、そしてフローサイトメトリーを使用してペプチド特異的Ｔ細胞
を同定できるように設計されている蛍光色素標識ＭＨＣ−ペプチド四量体である
。Ａｌｔｍａｎ ＪＤら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４：９４−９６（１９９６）；
米国特許第５，６３５，３６３号。
【０２０４】 （結果） ３色フローサイトメトリーでは、ＣＤ８+Ｔ細胞（ＣＴＬ）をＩＦ
Ｎ−γ発現について分析した。結果は図１７Ａおよび１７Ｃに、全ＣＤ８+Ｔ細
胞のＩＦＮ−γ陽性細胞％として表されている。ペプチド特異性は、ＨＩＶ ｐ
ｏｌから誘導された無関係のＨＬＡ Ａ２ペプチドで刺激して試験し、そして全
てのサンプルで＜０．２％であった。７人のドナーから得られたデータは、平均
値＋ＳＥＭとして表されている。これらの結果は、より少ないリコールＣＴＬを
誘導しそして一次ＣＴＬの発生に効果を有していなかったかまたは阻害さえした
ＯＤＮ１５８５およびＯＤＮ２２１６とは対照的に、ＯＤＮ２００６が、メラン
Ａ／マート−１ペプチドおよびインフルエンザペプチドに対する一次およびリコ
ールＣＴＬ応答を共にそれぞれ高めたことを示している。
【０２０５】 ＭＨＣ−四量体染色を使用する抗原特異的ＣＴＬの定量から得られた結果は、
それぞれ図１７Ｂおよび１７ＤでインフルエンザペプチドおよびメランＡ／マー
ト−１ペプチドに対して示されている。７人のドナーから得られたデータは、平
均値＋ＳＥＭとして表されている；*は、組み合わせられたサンプルについてス
チューデントのｔ検定（培地をＣｐＧ ＯＤＮによる刺激と比較）によって計算
された＜０．０５のｐ値を示す。
【０２０６】 （実施例１５ 「高応答者」におけるＩＦＮ−α分泌） １２人の異なるドナーから得られたＰＢＭＣは、ＯＤＮ２３３６（配列番号３
７）、ＯＤＮ２３３４（配列番号３６）、ＯＤＮ２２９５（配列番号２０）、Ｏ
ＤＮ２２５５（配列番号１６）、ＯＤＮ２２４７（配列番号１１）、ＯＤＮ２２
１６（配列番号７）およびＯＤＮ２００６（配列番号１４７）を含んでいるパネ
ルＯＤＮから選択した種々の濃度のＯＤＮと共にインキュベートした。この試験
から得られた結果は、６人の血液ドナーの細胞は選択したＯＤＮとのインキュベ
ーション後に５００ｐｇ／ｍｌより多く（７０００ｐｇ／ｍｌまで）のＩＦＮ−
αを分泌したので、これらのドナーの内６人は「高応答者」として分類され得る
ことを示していた。残りの６人のドナーの細胞が１０と５００ｐｇ／ｍｌとの間
の量のＩＦＮ−αしか分泌しなかったので、「高」応答者と「低」応答者との間
を識別し得た。これらの異なる結果に対する１つの理由は、少なくとも２４時間
齢の軟膜を使用したことから生じて得る。ＩＦＮ−αを分泌する主要な細胞型で
あるｐＤＣは細胞培養物中に約３日間しか生存しないので、少なくとも２４時間
齢の軟膜から得られたＰＢＭＣは非常に少数のこの細胞型を含有し得る。
【０２０７】 ＩＦＮ−αは、ＩＦＮ−αの全サブタイプを認識するイライザキットを使用し
て上記実験で測定した。対照的に、他の大部分のイライザキットはＩＦＮ−α２
Ｂしか測定しない。従って、ＩＦＮ−α２Ｂの量は、異なるＩＦＮ−αサブタイ
プの誘導において起こり得る差異に関する情報を得るために、幾つかの実験で全
てのＩＦＮ−αサブタイプと比較した。加えて、ＩＦＮ−αの量をＩＦＮ−γと
比較した。この試験の結果に基づいて、ＩＦＮ−α２Ｂ誘導と全ＩＦＮ−αサブ
タイプの誘導との間には相関関係が存在していた。しかしながら、対照的に、Ｉ
ＦＮ−αとＩＦＮ−γ間には明確な相関関係は存在していなかった。
【０２０８】 （実施例１６ 選択したＣｐＧ ＯＤＮによるＩＦＮ−α分泌の誘導） 単一ドナーから得られたヒトＰＢＭＣは、単球、ＮＫ細胞およびＴ細胞を枯渇
させ、主としてＢ細胞、ＲＢＣおよびＤＣを残すミルテニィ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ
）ＤＣ単離キットの第１工程を通過させてＤＣを富化した。次いで、これらをＩ
Ｌ−３（１０ｎｇ／ｍｌ）および６μｇ／ｍｌの種々のＯＤＮ：ＯＤＮ１５８５
（配列番号１）、ＯＤＮ２０２２（配列番号２）、ＯＤＮ２１１８（配列番号１
５１）、ＯＤＮ２１８４（配列番号３）、ＯＤＮ２１８５（配列番号４）、ＯＤ
Ｎ２１９２（配列番号５）、ＯＤＮ２１９７（配列番号１４８）、ＯＤＮ２１９
８（配列番号１４９）、ＯＤＮ２２０４（配列番号６）、ＯＤＮ２２１６（配列
番号７）またはＯＤＮ２２１７（配列番号８）の存在下で２日間インキュベート
した。平行サンプルにおいて、ＩＦＮ−γを１０００Ｕ／ｍｌで加えた。上清液
を集め、そしてＩＦＮ−αに特異的なＥＬＩＳＡで分析した。
【０２０９】 （結果） ＯＤＮは種々の程度にＩＦＮ−αを誘導し、その際ＩＦＮ−γの添
加によって幾らか増大した。ＯＤＮのうち幾つかは、ＩＦＮ−γを添加しなかっ
た場合でさえ、ＩＦＮ−αを例外的な程度（＞５０，０００ｐｇ／ｍｌ）に誘導
した。
【０２１０】 （実施例１７ ドナーおよび種々のＯＤＮに対するＩＦＮ−α応答の配列依存
性。） ４人の異なるドナーから取得したＰＢＭＣを、０．１μｇ／ｍｌの多様なＯＤ
Ｎと共に２日間インキュベートした。このＯＤＮパネルには以下：
【０２１１】
【化２１】 が含まれていた。上清液を集めそしてＩＦＮ−αについてＥＬＩＳＡでアッセイ
した。１組の平行実験では、同じ４人のドナーから取得したＰＢＭＣを１μｇ／
ｍｌのＯＤＮの女性パネルと共に２日間インキュベートした。
【０２１２】 （結果） ４人のドナー由来および０．１μｇ／ｍｌのＯＤＮと共にインキュ
ベートしたＰＢＭＣの結果および再び１μｇ／ｍｌのＯＤＮと共にインキュベー
トしたＰＢＭＣの結果は、用量およびドナー変動を示し、その際幾つかのＯＤＮ
はＩＦＮ−αを少なくとも５０００ｐｇ／ｍｌのレベルに誘導しそしていくつか
のＯＤＮはＩＮＦ−αを５０００ｐｇ／ｍｌを優に超えるレベルに誘導した。
【０２１３】 当業者は、日常的な実験手法以外を使用しないで、本明細書に記載されている
本発明の特定の実施形態に対する多数の等価物を認識するか、または確認し得る
。このような等価物は以下の特許請求の範囲に包含されるように意図されている
。
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、磁性ビーズおよびフローサイトメトリーを用いて行われたＩＰＣの単
離および特徴付けの間の細胞集団のＦＡＣＳ分析を示す。左から右に以下が示さ
れる：ＰＢＭＣからのｌｉｎ−／ＭＨＣクラスＩＩ＋細胞の選択；ｌｉｎ−／Ｃ
Ｄ４＋／ＭＨＣクラスＩＩ＋細胞からのＣＤ１２３＋／ＭＨＣクラスＩＩ＋細胞
のさらなる選択；および新しく単離されたｌｉｎ−／ＣＤ４＋／ＭＨＣクラスＩ
Ｉ＋／ＣＤ１２３＋ＩＰＣのＣＤ８０−としての特徴付け。
【図２】 図２は、選択された増殖因子および刺激の存在下で、２日間インキュベートし
た後に新しく単離されたＩＰＣの生存および活性化（ＣＤ８０）のＦＡＣＳ分析
を表す。各々のパネルに対する増殖因子（ＧＭ−ＣＳＦ）および／または刺激物
質（ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたはＬＰＳ）は以下である：上段左は、なし；
上段中央は、ＣｐＧオリゴヌクレオチド；上段右は、ＬＰＳ；下段左は、ＧＭ−
ＣＳＦ；ならびに下段中央は、ＧＭ−ＣＳＦおよびＣｐＧオリゴヌクレオチド。
各々のパネルの右上隅の数字は、ＣＤ８０についての平均蛍光強度（ＭＦＩ）で
ある。５つの独立した実験結果が示されている。
【図３】 図３は、新しく単離されたＩＰＣの生存および活性化に対するＣｐＧおよびポ
リＩＣが有する異なる影響を示すＦＡＣＳ分析を示す。すべての細胞は、ＩＬ−
３の存在下で、３日間培養された。次いで、細胞は以下を添加してさらに２４時
間培養された：なし（左のパネル）；ＣｐＧ（中央のパネル）；またはポリＩＣ
（右のパネル）。ＣＤ８０についてのＭＦＩは、下段のパネルの各々の右上に示
される。結果は、３つの独立した実験を代表する。
【図４】 図４は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドと一緒（黒塗りの棒）またはＣｐＧオリゴ
ヌクレオチドなし（白塗りの棒）のいずれかにおいて、ＩＬ−３およびＧＭ−Ｃ
ＳＦの存在下で２日間培養したＩＰＣの上清中に存在するＩＦＮ−αの濃度（Ｉ
ＦＮ−α特異性ＥＬＩＳＡにより決定）を示すグラフである。結果は、３つの独
立した実験を代表する。
【図５】 図５は、３μＭ ＯＤＮ ２００６（ｎ＝７）、１５８５（ｎ＝７）、２１９
７（ｎ＝６）、２１９８（ｎ＝５）の存在下でか、またはＯＤＮ（ｎ＝７）を添
加しない培地中で４８時間のインキュベーション後、異なるドナー由来のＰＢＭ
Ｃの上清中に誘導されたＩＦＭ−αの濃度を示すグラフである。エラーバーはＳ
ＥＭを示す。
【図６】 図６は、０．２〜１２μｇ／ｍｌの範囲の濃度のＯＤＮ ２２１６、１５８５
、２００６、および２２４３の存在下で４８時間培養したＰＢＭＣによるＣｐＧ
ＯＤＮ誘導ＩＦＮ−α合成の応答用量を表すグラフである。
【図７】 図７は、リポフェクチン（１０μｇ／ｍｌ）の添加（ｎ＝３）および非添加（
ｎ＝４）でプラズマ細胞様（ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ）突起細胞に対して富化
されたＰＢＭＣにおけるＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β産生のＣｐＧ ＯＤＮ媒介
性刺激を示すグラフである。ＰＢＭＣはＩＬ−３単独（−）またはＯＤＮ ２０
０６、１５８５、２１９７または２２１６を添加したＩＬ−３の存在下で４８時
間培養された。結果は、異なるドナーを用いる３または４の独立した実験の平均
として表され、各々は２回実施された。エラーバーはＳＥＭを示す。*ｐ＜０．
００１８（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ−Ｄｕｎｎ補正）
【図８】 図８は、細胞内ＩＦＮ−αを試験する４つのＦＡＣＳ実験の結果を示す４つの
一連のグラフである。パネルＡは、ｌｉｎ＋およびｌｉｎ-細胞の同定である。
パネルＢは、ｌｉｎ-細胞におけるＣＤ１２３+/-／ＨＬＡ ＤＲ++ｍＤＣ（ゲー
トＩＩ）およびＣＤ１２３++／ＨＬＡ ＤＲ+ｐＤＣ（ゲートＩＩＩ）の同定で
ある。パネルＣは、ｌｉｎ+細胞における細胞内ＩＦＮ−αに対する染色の欠如
である。パネルＤは、ｌｉｎ-細胞における細胞内ＩＦＮ−αについての染色を
表す。
【図９】 図９は、細胞内ＩＦＮ−α（パネルＡ）、および異なるＣｐＧオリゴヌクレオ
チド（２００６、２２１６、両者とも３μｇ／ｍｌ）で刺激した後のｌｉｎ-／
ＨＬＡ ＤＲ+プラズマ細胞様突起細胞前駆体細胞における細胞内ＩＮＦ−α（
パネルＢ）を試験する６つのＦＡＣＳ実験の結果を表す６つの一連のグラフであ
る。インキュベーションの間にＩＮＦ−αに対し、ブレフェルディンＡが添加さ
れた。ＭＦＩは、平均蛍光強度である。
【図１０】 図１０は、ＩＬ−３単独（−）または種々のＣｐＧ ＯＤＮ（２００６、１５
８５、２１９７、または２２１６、各々３μｇ／ｍｌ）を伴うＩＬ−３に対する
応答におけるプラズマ細胞様突起細胞上のＣＤ８６発現を示すグラフである。結
果は、異なるドナー由来の細胞を用いた３つの独立した実験の平均として表され
る。エラーバーは、ＳＥＭを示す。*ｐ＜０．００１８（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ
−Ｄｕｎｎ補正）。
【図１１】 図１１は、プラズマ細胞様突起細胞のＦＡＣＳ精製（パネルＡ）ならびにＯＤ
Ｎ ２２１６を伴うＩＬ−３およびＯＤＮ ２２１６を伴わないＩＬ−３（パネ
ルＢ）に対する応答における精製されたプラズマ細胞様細胞によるＩＦＮ−αお
よびＩＦＮ−βの分泌を表すグラフを示す。
【図１２】 図１２は、ＰＢＭＣの、ＯＤＮ ２２１６、１５８５、２００６、２１１８、
ＩＬ−２、または培地単独への曝露後のＮＫ細胞媒介Ｋ５６２細胞の溶解を表す
。
【図１３】 図１３は、ＩＬ−３単独（左）、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを補充されたＩＬ
−３（中央）、またはポリＩＣを補充されたＩＬ−３（右）の存在下で２日間培
養したＩＰＣの上清中に存在するＩＬ−８の濃度（ＩＬ−８特異的ＥＬＩＳＡに
より決定された）を示すグラフである。結果は、３つの独立した実験を代表する
。
【図１４】 図１４は、非ペプチド性抗原であるイソペンテニルピロホスフェート（ＩＰＰ
）の存在または非存在下で、ＣｐＧ ＯＤＮ ２００６、１５８５または２２１
６への応答におけるγδＴ細胞によるＩＦＮ−γ産生を示すグラフである。結果
は、培地単独の場合を陰性コントロールとしたＩＦＮ−γについての細胞内染色
についての平均蛍光強度（ＭＩＦ）に関して示される。データは、平均＋ＳＥＭ
として表される；*（ｐ＜０、０１）および**（ｐ＜０、００１）は、培地コン
トロールとＣｐＧ ＯＤＮとを比較し，そしてＩＰＰ単独とＩＰＰ＋ＣｐＧ Ｏ
ＤＮとを比較する対にした、サンプルに対するスチューデントのｔ−検定により
計算されたｐ値を示す。
【図１５】 図１５は、非ペプチド性抗原であるイソペンテニルピロホスフェート（ＩＰＰ
）の存在または非存在下で、ＣｐＧ ＯＤＮ ２００６、１５８５、または２２
１６に応答したγδＴ細胞の増殖を表す１対のグラフである。パネルＡは、１つ
の代表的な実験からの１０日間にわたるγδＴ細胞の増殖速度論を示す。パネル
ＢはＩＰＰ単独での刺激後、または異なるＣｐＧ ＯＤＮとの組み合わせを用い
た刺激後の１０日間のγδＴ細胞の増殖を示す。９と１６との間のドナーが各々
のＯＤＮに対して分析された。データは、ＩＰＰ単独の場合と比較したｘ倍の増
加として表される（平均＋ＳＥＭ）；*はｐ＜０，０５示す（ＩＰＰ＋ＣｐＧ
ＯＤＮに対するＩＰＰ）。
【図１６】 図１６は、Ｉ型ＩＦＮおよび種々のＣｐＧ ＯＤＮによるＣＤ４０誘導ＩＬ−
１２ｐ７０産生の調節を示すグラフである。データは、抗ＣＤ４０単独（平均＝
１４３ｐｇ／ｍｌ）によるＩＬ−１２ｐ７０産生のｘ倍として示され、そして３
つの異なるドナーの平均＋ＳＥＭを表す。
【図１７】 図１７は、リコールおよび主要なペプチド特異性ヒトＣＴＬ応答に対するＣｐ
Ｇ ＯＤＮ ２００６、１５８５および２２１６の効果を示す一連のグラフであ
る。パネルＡおよびＣは、ペプチド特異的ＩＦＮ−γ産生ＣＴＬを、リコール（
ｒｅｃａｌｌ）抗原であるインフルエンザ−マトリックスペプチドおよび主要な
抗原であるｍｅｌａｎ−Ａ／ｍａｒｔ−１ペプチドの各々についての全てＣＤ８
＋Ｔ細胞のパーセンテージとして示す。パネルＢおよびＤはそれぞれ、リコール
抗原インフルエンザ−マトリックスペプチドおよび主要な抗原ｍｅｌａｎ−Ａ／
ｍａｒｔ−１ペプチドに対する抗原特異的テトラマー−陽性染色ＣＤ８+Ｔ細胞
である。
【図１８】 図１８は、容認される最大用量（ＭＩＤ）の少なくとも約１０％より少ない量
のＩＦＮ−αを含む組成物を含む容器を備え、そしてその同じ容器または別の容
器にＩＳＮＡを含むキットの代表的な該略図である。キットはまた、ＩＦＮ−α
での処置に対して感受性の状態の被験体を処置するための説明書を含み得る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 1/08 Ａ６１Ｐ 29/00 1/16 31/12 29/00 31/18 31/12 31/22 31/18 35/00 31/22 35/02 35/00 37/04 35/02 43/00 １１７ 37/04 １２１ 43/00 １１７ Ａ６１Ｋ 37/66 Ｇ １２１ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｅ Ｃ１２Ｎ 5/06 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ， ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ハルトマン， グンター ドイツ国 80336 ムニッヒ， ツィーム センシュトラーセ １， ルドウィグ−マ キシミリアンズ−ユニバーシティ オブ ムニッヒ， ディビジョン オブ クリニ カル ファーマコロジー， デパートメン ト オブ インターナル メディシン (72)発明者 ブラッツラー， ロバート エル． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02481， ウェレスリー， ウィリアム ストリート−スイート 115 20， コー リー ファーマシューティカル グルー プ， インコーポレイテッド (72)発明者 クレイグ， アーサー アメリカ合衆国 アイオワ 52242， ア イオワ シティー， イーエム アールビ ー 540， デパートメント オブ イン ターナル メディシン， ユニバーシティ ー オブ アイオワ リサーチ ファウン デイション Ｆターム(参考） 4B065 AA93X BA25 BD35 BD39 CA44 4C084 AA02 AA03 AA06 AA07 AA13 BA01 BA02 BA08 BA16 BA17 BA18 BA19 CA25 CA53 CA56 CA59 DA01 DA19 DA22 MA02 MA66 NA05 NA14 ZA072 ZA082 ZA662 ZA712 ZA752 ZB032 ZB052 ZB112 ZB262 ZB272 ZB332 ZC552 4C086 AA01 AA02 EA16 MA02 MA04 NA05 NA06 NA14 ZA07 ZA08 ZA66 ZA71 ZA75 ZB03 ZB05 ZB09 ZB11 ZB26 ZB27 ZB33 ZC55 4C087 AA01 AA02 AA03 BB63 BB64 BB65 NA14 ZA07 ZA08 ZA66 ZA71 ZA75 ZB03 ZB05 ZB11 ZB26 ZB27 ZB33 ZC55

Claims (203)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ＩＦＮ−αの投与を要する方法において、単離された免疫刺
    激核酸の有効量を共投与する工程を包含する改良。
  2. 【請求項２】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−α単独について臨床的に確立さ
    れた有効用量未満の用量で投与される、請求項１に記載の改良。
  3. 【請求項３】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−αについて前記核酸の非存在下
    で最大に許容される用量で投与される、請求項１に記載の改良。
  4. 【請求項４】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−αについて被験体において最大
    に許容される用量よりも少なくとも２０％少なくで投与される、請求項１に記載
    の改良。
  5. 【請求項５】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−αについて被験体において最大
    に許容される用量よりも少なくとも３０％少なくで投与される、請求項１に記載
    の改良。
  6. 【請求項６】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−αについて被験体において最大
    に許容される用量よりも少なくとも４０％少なくで投与される、請求項１に記載
    の改良。
  7. 【請求項７】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−αについて被験体において最大
    に許容される用量よりも少なくとも５０％少なくで投与される、請求項１に記載
    の改良。
  8. 【請求項８】 前記免疫刺激核酸が、改変されたものである、請求項１に記
    載の改良。
  9. 【請求項９】 前記免疫刺激核酸が、以下： ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびペプ
    チド からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結
    合を有する骨格を含む、請求項１に記載の改良。
  10. 【請求項１０】 前記免疫刺激核酸が、少なくとも１つのヌクレオチドアナ
    ログまたはヌクレオチド誘導体を含む、請求項１に記載の改良。
  11. 【請求項１１】 前記免疫刺激核酸が、パリンドロームでない、請求項１に
    記載の改良。
  12. 【請求項１２】 前記免疫刺激核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項１に記載
    の改良。
  13. 【請求項１３】 前記免疫刺激核酸が、非ＣｐＧ核酸である、請求項１に記
    載の改良。
  14. 【請求項１４】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、Ｔリッチ核酸である、請求
    項１３に記載の改良。
  15. 【請求項１５】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、ポリＧ核酸である、請求項
    １３に記載の改良。
  16. 【請求項１６】 前記免疫刺激核酸が、以下： ＣｐＧ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸 からなる群より選択される少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである、請
    求項１に記載の改良。
  17. 【請求項１７】 前記免疫刺激核酸が、８と１００との間のヌクレオチド長
    である、請求項１に記載の改良。
  18. 【請求項１８】 前記免疫刺激核酸が、１２と４０との間のヌクレオチド長
    である、請求項１に記載の改良。
  19. 【請求項１９】 請求項１に記載の改良であって、ここで前記免疫刺激核酸
    が、以下： 【化１】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 改良。
  20. 【請求項２０】 被験体にＧＭ−ＣＳＦを共投与する工程をさらに包含する
    、請求項１に記載の改良。
  21. 【請求項２１】 被験体が、増殖性障害およびウイルス性感染からなる群よ
    り選択される状態を有する、請求項１に記載の改良。
  22. 【請求項２２】 請求項１に記載の改良であって、ここで、被験体が、以下
    ： 毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞
    性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、
    前立腺癌、膀胱細胞癌、子宮頚部形成異常、および結腸癌 からなる群より選択される増殖性障害を有する、改良。
  23. 【請求項２３】 請求項１に記載の改良であって、ここで、被験体が、以下
    ： Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、尖圭コンジローム、ヒト免疫不全ウイルス、ヘルペス、サ
    イトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、およびパピローマウイルス
    からなる群より選択されるウイルス性障害を有する、改良。
  24. 【請求項２４】 ＩＦＮ−αおよび単離された免疫刺激核酸の有効用量をＩ
    ＦＮ−α処置の必要な被験体に投与する工程を包含する、被験体のＩＦＮ−α処
    置を補う方法。
  25. 【請求項２５】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−α単独について臨床的に確立
    された有効用量未満の用量で投与される、請求項２４に記載の方法。
  26. 【請求項２６】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−αについて前記免疫刺激核酸
    の非存在下で最大に許容される用量で投与される、請求項２４に記載の方法。
  27. 【請求項２７】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−αについて前記被験体におい
    て最大に許容される用量よりも少なくとも２０％少なくで投与される、請求項２
    ４に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−αについて前記被験体におい
    て最大に許容される用量よりも少なくとも３０％少なくで投与される、請求項２
    ４に記載の方法。
  29. 【請求項２９】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−αについて前記被験体におい
    て最大に許容される用量よりも少なくとも４０％少なくで投与される、請求項２
    ４に記載の方法。
  30. 【請求項３０】 前記ＩＦＮ−αが、ＩＦＮ−αについて前記被験体におい
    て最大に許容される用量よりも少なくとも５０％少なくで投与される、請求項２
    ４に記載の方法。
  31. 【請求項３１】 前記免疫刺激核酸が、改変されたものである、請求項２４
    に記載の方法。
  32. 【請求項３２】 前記免疫刺激核酸が、以下： ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびペプ
    チド からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結
    合を有する骨格を含む、請求項２４に記載の方法。
  33. 【請求項３３】 前記免疫刺激核酸が、少なくとも１つのヌクレオチドアナ
    ログまたはヌクレオチド誘導体を含む、請求項２４に記載の方法。
  34. 【請求項３４】 前記免疫刺激核酸が、パリンドロームでない、請求項２４
    に記載の方法。
  35. 【請求項３５】 前記免疫刺激核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項２４に記
    載の方法。
  36. 【請求項３６】 前記免疫刺激核酸が、非ＣｐＧ核酸である、請求項２４に
    記載の方法。
  37. 【請求項３７】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、Ｔリッチ核酸である、請求
    項３６に記載の方法。
  38. 【請求項３８】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、ポリＧ核酸である、請求項
    ３６に記載の方法。
  39. 【請求項３９】 前記免疫刺激核酸が、以下： ＣｐＧ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸 からなる群より選択される少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである、請
    求項２４に記載の方法。
  40. 【請求項４０】 前記免疫刺激核酸が、８と１００との間のヌクレオチド長
    である、請求項２４に記載の方法。
  41. 【請求項４１】 前記免疫刺激核酸が、１２と４０との間のヌクレオチド長
    である、請求項２４に記載の方法。
  42. 【請求項４２】 請求項２４に記載の方法であって、ここで前記免疫刺激核
    酸が、以下： 【化２】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 方法。
  43. 【請求項４３】 前記被験体にＧＭ−ＣＳＦを共投与する工程をさらに包含
    する、請求項２４に記載の方法。
  44. 【請求項４４】 前記被験体が、増殖性障害およびウイルス性感染からなる
    群より選択される状態を有する、請求項２４に記載の方法。
  45. 【請求項４５】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記被験体が
    、以下： 毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞
    性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、
    前立腺癌、膀胱細胞癌、子宮頚部形成異常、および結腸癌 からなる群より選択される増殖性障害を有する、方法。
  46. 【請求項４６】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記被験体が
    、以下： Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、尖圭コンジローム、ヒト免疫不全ウイルス、ヘルペス、サ
    イトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、およびパピローマウイルス
    からなる群より選択されるウイルス性障害を有する、方法。
  47. 【請求項４７】 被験体のインターフェロン産生細胞（ＩＰＣ）を活性化す
    るように、該被験体を処置する方法であって、該方法は、以下： このような処置を必要とする被験体からＩＰＣを単離する工程、 インビトロで該ＩＰＣを培養する工程、 インビトロで該ＩＰＣを、単離された免疫刺激核酸の有効量と接触させる工程
    、および 接触させた該ＩＰＣを該被験体へ戻す工程、 を包含する、方法。
  48. 【請求項４８】 前記ＩＰＣをインビトロで成長因子と接触させる工程をさ
    らに包含する、請求項４７に記載の方法。
  49. 【請求項４９】 前記ＩＰＣをインビトロでＩＬ−３と接触させる工程をさ
    らに包含する、請求項４７に記載の方法。
  50. 【請求項５０】 前記ＩＰＣをインビトロでＧＭ−ＣＳＦと接触させる工程
    をさらに包含する、請求項４７に記載の方法。
  51. 【請求項５１】 前記ＩＰＣが、インビトロでＩＬ−３の非存在下で培養さ
    れる、請求項４７に記載の方法。
  52. 【請求項５２】 前記ＩＰＣが、インビトロでＧＭ−ＣＳＦの非存在下で培
    養される、請求項４７に記載の方法。
  53. 【請求項５３】 前記免疫刺激核酸が、改変されたものである、請求項４７
    に記載の方法。
  54. 【請求項５４】 前記免疫刺激核酸が、以下： ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびペプ
    チド からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結
    合を有する骨格を含む、請求項４７に記載の方法。
  55. 【請求項５５】 前記免疫刺激核酸が、少なくとも１つのヌクレオチドアナ
    ログまたはヌクレオチド誘導体を含む、請求項４７に記載の方法。
  56. 【請求項５６】 前記免疫刺激核酸が、パリンドロームでない、請求項４７
    に記載の方法。
  57. 【請求項５７】 前記免疫刺激核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項４７に記
    載の方法。
  58. 【請求項５８】 前記免疫刺激核酸が、非ＣｐＧ核酸である、請求項４７に
    記載の方法。
  59. 【請求項５９】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、Ｔリッチ核酸である、請求
    項５８に記載の方法。
  60. 【請求項６０】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、ポリＧ核酸である、請求項
    ５８に記載の方法。
  61. 【請求項６１】 前記免疫刺激核酸が、以下： ＣｐＧ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸 からなる群より選択される少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである、請
    求項４７に記載の方法。
  62. 【請求項６２】 前記免疫刺激核酸が、８と１００との間のヌクレオチド長
    である、請求項４７に記載の方法。
  63. 【請求項６３】 前記免疫刺激核酸が、１２と４０との間のヌクレオチド長
    である、請求項４７に記載の方法。
  64. 【請求項６４】 請求項４７に記載の方法であって、ここで前記免疫刺激核
    酸が、以下： 【化３】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 方法。
  65. 【請求項６５】 被験体のＩＦＮ−α処置の効力を増強する方法であって、
    ここで、該方法が、以下： ＩＦＮ−αでの処置を必要とする被験体に対して、ＩＦＮ−αを含む薬学的組
    成物を投与する工程、および そのような処置を必要とする該被験体に、該投与されるＩＦＮ−αと一緒のと
    きに有効なＩＦＮ−α処置である量で免疫刺激核酸を含む薬学的組成物を共投与
    する工程、を包含する方法であって、ここで該ＩＦＮ−α処置の該効力が、該免
    疫刺激核酸を共投与する工程なしに同量のＩＦＮ−αを投与する工程の効力より
    も大きい、 方法。
  66. 【請求項６６】 前記免疫刺激核酸を含む薬学的組成物が、局所的に投与さ
    れる、請求項６５に記載の方法。
  67. 【請求項６７】 前記免疫刺激核酸が、改変されたものである、請求項６５
    に記載の方法。
  68. 【請求項６８】 前記免疫刺激核酸が、以下： ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびペプ
    チド からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結
    合を有する骨格を含む、請求項６５に記載の方法。
  69. 【請求項６９】 前記免疫刺激核酸が、少なくとも１つのヌクレオチドアナ
    ログまたはヌクレオチド誘導体を含む、請求項６５に記載の方法。
  70. 【請求項７０】 前記免疫刺激核酸が、パリンドロームでない、請求項６５
    に記載の方法。
  71. 【請求項７１】 前記免疫刺激核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項６５に記
    載の方法。
  72. 【請求項７２】 前記免疫刺激核酸が、非ＣｐＧ核酸である、請求項６５に
    記載の方法。
  73. 【請求項７３】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、Ｔリッチ核酸である、請求
    項７２に記載の方法。
  74. 【請求項７４】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、ポリＧ核酸である、請求項
    ７２に記載の方法。
  75. 【請求項７５】 前記免疫刺激核酸が、以下： ＣｐＧ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸 からなる群より選択される少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである、請
    求項６５に記載の方法。
  76. 【請求項７６】 前記免疫刺激核酸が、８と１００との間のヌクレオチド長
    である、請求項６５に記載の方法。
  77. 【請求項７７】 前記免疫刺激核酸が、１２と４０との間のヌクレオチド長
    である、請求項６５に記載の方法。
  78. 【請求項７８】 請求項６５に記載の方法であって、ここで前記免疫刺激核
    酸が、以下： 【化４】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 方法。
  79. 【請求項７９】 前記被験体が、増殖性障害およびウイルス性感染からなる
    群より選択される状態を有する、請求項６５に記載の方法。
  80. 【請求項８０】 請求項６５に記載の方法であって、ここで、前記被験体が
    、以下： 毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞
    性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、
    前立腺癌、膀胱細胞癌、子宮頚部形成異常、および結腸癌 からなる群より選択される増殖性障害を有する、方法。
  81. 【請求項８１】 請求項６５に記載の方法であって、ここで、前記被験体が
    、以下： Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、尖圭コンジローム、ヒト免疫不全ウイルス、ヘルペス、サ
    イトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、およびパピローマウイルス
    からなる群より選択されるウイルス性障害を有する、方法。
  82. 【請求項８２】 被験体を処置するために有効なＩＦＮ−αの用量を減少す
    る方法であって、ここで、該方法が、以下： ＩＦＮ−αでの処置を必要とする被験体に対し、ＩＦＮ−αを含む薬学的組成
    物を投与する工程、および そのような処置を必要とする該被験体に、該投与されるＩＦＮ−αと一緒のと
    きに有効なＩＦＮ−α処置である量で免疫刺激核酸を含む薬学的組成物を共投与
    する工程、を包含する方法であって、ここで、投与されるＩＦＮ−αの量が、該
    免疫刺激核酸を共投与する工程がない場合に必要とされるＩＦＮ−αの量よりも
    少ない、 方法。
  83. 【請求項８３】 前記投与されるＩＦＮ−αの量が、前記免疫刺激核酸を共
    投与する工程がない場合に必要とされる前記ＩＦＮ−αの量よりも少なくとも２
    ０％少なくである、請求項８２に記載の方法。
  84. 【請求項８４】 前記投与されるＩＦＮ−αの量が、前記免疫刺激核酸を共
    投与する工程がない場合に必要とされる前記ＩＦＮ−αの量よりも少なくとも３
    ０％少なくである、請求項８２に記載の方法。
  85. 【請求項８５】 前記投与されるＩＦＮ−αの量が、前記免疫刺激核酸を共
    投与する工程がない場合に必要とされる前記ＩＦＮ−αの量よりも少なくとも４
    ０％少なくである、請求項８２に記載の方法。
  86. 【請求項８６】 前記投与されるＩＦＮ−αの量が、前記免疫刺激核酸を共
    投与する工程がない場合に必要とされる前記ＩＦＮ−αの量よりも少なくとも５
    ０％少なくである、請求項８２に記載の方法。
  87. 【請求項８７】 前記免疫刺激核酸を含む薬学的組成物が、局所的に投与さ
    れる、請求項８２に記載の方法。
  88. 【請求項８８】 前記免疫刺激核酸が、改変されたものである、請求項８２
    に記載の方法。
  89. 【請求項８９】 前記免疫刺激核酸が、以下： ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびペプ
    チド からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結
    合を有する骨格を含む、請求項８２に記載の方法。
  90. 【請求項９０】 前記免疫刺激核酸が、少なくとも１つのヌクレオチドアナ
    ログまたはヌクレオチド誘導体を含む、請求項８２に記載の方法。
  91. 【請求項９１】 前記免疫刺激核酸が、パリンドロームでない、請求項８２
    に記載の方法。
  92. 【請求項９２】 前記免疫刺激核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項８２に記
    載の方法。
  93. 【請求項９３】 前記免疫刺激核酸が、非ＣｐＧ核酸である、請求項８２に
    記載の方法。
  94. 【請求項９４】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、Ｔリッチ核酸である、請求
    項９３に記載の方法。
  95. 【請求項９５】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、ポリＧ核酸である、請求項
    ９３に記載の方法。
  96. 【請求項９６】 前記免疫刺激核酸が、以下： ＣｐＧ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸 からなる群より選択される少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである、請
    求項８２に記載の方法。
  97. 【請求項９７】 前記免疫刺激核酸が、８と１００との間のヌクレオチド長
    である、請求項８２に記載の方法。
  98. 【請求項９８】 前記免疫刺激核酸が、１２と４０との間のヌクレオチド長
    である、請求項８２に記載の方法。
  99. 【請求項９９】 請求項８２に記載の方法であって、ここで前記免疫刺激核
    酸が、以下： 【化５】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 方法。
  100. 【請求項１００】 前記被験体が、増殖性障害およびウイルス性感染からな
    る群より選択される状態を有する、請求項８２に記載の方法。
  101. 【請求項１０１】 請求項８２に記載の方法であって、ここで、前記被験体
    が、以下： 毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞
    性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、
    前立腺癌、膀胱細胞癌、子宮頚部形成異常、および結腸癌 からなる群より選択される増殖性障害を有する、方法。
  102. 【請求項１０２】 請求項８２に記載の方法であって、ここで、前記被験体
    が、以下： Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、尖圭コンジローム、ヒト免疫不全ウイルス、ヘルペス、サ
    イトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、およびパピローマウイルス
    からなる群より選択されるウイルス性障害を有する、方法。
  103. 【請求項１０３】 ＩＦＮ−αでの処置を受けつつあるまたは必要とする被
    験体においてＩＦＮ−α処置に関連する副作用を防ぐ方法であって、該方法は、
    以下： ＩＦＮ−αでの処置を必要とする被験体に対し、ＩＦＮ−αを含む薬学的組成
    物を投与する工程、および そのような処置を必要とする該被験体に、該投与されるＩＦＮ−αと一緒のと
    きに有効なＩＦＮ−α処置である量で免疫刺激核酸を含む薬学的組成物を共投与
    する工程、を包含する方法であって、ここで、ＩＦＮ−α処置に関連する副作用
    が、ＩＦＮ−αが該免疫刺激核酸を共投与する工程なしに投与される場合の副作
    用と比較して減少される、 方法。
  104. 【請求項１０４】 前記免疫刺激核酸を含む薬学的組成物が、局所的に投与
    される、請求項１０３に記載の方法。
  105. 【請求項１０５】 前記ＩＦＮ−α処置に関連する副作用が、全身性である
    、請求項１０３に記載の方法。
  106. 【請求項１０６】 前記ＩＦＮ−α処置に関連する副作用が、インフルエン
    ザ様症候群、熱、頭痛、悪寒、筋痛、疲労、食欲不振、悪心、嘔吐、下痢、およ
    びうつ病からなる群より選択される、請求項１０３に記載の方法。
  107. 【請求項１０７】 前記免疫刺激核酸が、改変されたものである、請求項１
    ０３に記載の方法。
  108. 【請求項１０８】 前記免疫刺激核酸が、以下： ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびペプ
    チド からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結
    合を有する骨格を含む、請求項１０３に記載の方法。
  109. 【請求項１０９】 前記免疫刺激核酸が、少なくとも１つのヌクレオチドア
    ナログまたはヌクレオチド誘導体を含む、請求項１０３に記載の方法。
  110. 【請求項１１０】 前記免疫刺激核酸が、パリンドロームでない、請求項１
    ０３に記載の方法。
  111. 【請求項１１１】 前記免疫刺激核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項１０３
    に記載の方法。
  112. 【請求項１１２】 前記免疫刺激核酸が、非ＣｐＧ核酸である、請求項１０
    ３に記載の方法。
  113. 【請求項１１３】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、Ｔリッチ核酸である、請
    請求項１１２に記載の方法。
  114. 【請求項１１４】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、ポリＧ核酸である、請求
    項１１２に記載の方法。
  115. 【請求項１１５】 前記免疫刺激核酸が、以下： ＣｐＧ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸 からなる群より選択される少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである、請
    求項１０３に記載の方法。
  116. 【請求項１１６】 前記免疫刺激核酸が、８と１００との間のヌクレオチド
    長である、請求項１０３に記載の方法。
  117. 【請求項１１７】 前記免疫刺激核酸が、１２と４０との間のヌクレオチド
    長である、請求項１０３に記載の方法。
  118. 【請求項１１８】 請求項１０３に記載の方法であって、ここで前記免疫刺
    激核酸が、以下： 【化６】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 方法。
  119. 【請求項１１９】 前記被験体が、増殖性障害およびウイルス性感染からな
    る群より選択される状態を有する、請求項１０３に記載の方法。
  120. 【請求項１２０】 請求項１０３に記載の方法であって、ここで、前記被験
    体が、以下： 毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞
    性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、
    前立腺癌、膀胱細胞癌、子宮頚部形成異常、および結腸癌 からなる群より選択される増殖性障害を有する、方法。
  121. 【請求項１２１】 請求項１０３に記載の方法であって、ここで、前記被験
    体が、以下： Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、尖圭コンジローム、ヒト免疫不全ウイルス、ヘルペス、サ
    イトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、およびパピローマウイルス
    からなる群より選択されるウイルス性障害を有する、方法。
  122. 【請求項１２２】 ＩＦＮ−α処置を必要とする被験体において、該ＩＦＮ
    −α処置の効力を高める方法であって、ここで該方法が、以下： そのような処置を必要とする被験体に、該被験体の状態を処置するために有効
    な量のＩＦＮ−αを含む薬学的組成物を投与する工程； ドナーから天然インターフェロン産生細胞（ＩＰＣ）を単離する工程； 該単離されたＩＰＣを、該ＩＰＣを導入してＩＦＮ−αを放出するために有効
    な量の免疫刺激核酸を含む薬学的組成物とエキソビボで接触させる工程；および 該被験体に該接触させた細胞を投与する工程、 を包含する、方法。
  123. 【請求項１２３】 前記ドナーが、前記被験体である、請求項１２２に記載
    の方法。
  124. 【請求項１２４】 前記単離されたＩＰＣを抗原と接触させる工程をさらに
    包含する、請求項１２２に記載の方法。
  125. 【請求項１２５】 前記接触させた細胞を投与する工程が、局所注入を包含
    する、請求項１２２に記載の方法。
  126. 【請求項１２６】 前記局所注入が、標的組織を提供する血管を介する、請
    求項１２５に記載の方法。
  127. 【請求項１２７】 前記血管が、肝動脈、門脈、腹腔動脈、および脾動脈か
    らなる群より選択される、請求項１２６に記載の方法。
  128. 【請求項１２８】 前記免疫刺激核酸が、改変されたものである、請求項１
    ２２に記載の方法。
  129. 【請求項１２９】 前記免疫刺激核酸が、以下： ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびペプ
    チド からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結
    合を有する骨格を含む、請求項１２２に記載の方法。
  130. 【請求項１３０】 前記免疫刺激核酸が、少なくとも１つのヌクレオチドア
    ナログまたはヌクレオチド誘導体を含む、請求項１２２に記載の方法。
  131. 【請求項１３１】 前記免疫刺激核酸が、パリンドロームでない、請求項１
    ２２に記載の方法。
  132. 【請求項１３２】 前記免疫刺激核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項１２２
    に記載の方法。
  133. 【請求項１３３】 前記免疫刺激核酸が、非ＣｐＧ核酸である、請求項１２
    ２に記載の方法。
  134. 【請求項１３４】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、Ｔリッチ核酸である、請
    請求項１３３に記載の方法。
  135. 【請求項１３５】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、ポリＧ核酸である、請求
    項１３３に記載の方法。
  136. 【請求項１３６】 前記免疫刺激核酸が、以下： ＣｐＧ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸 からなる群より選択される少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである、請
    求項１２２に記載の方法。
  137. 【請求項１３７】 前記免疫刺激核酸が、８と１００との間のヌクレオチド
    長である、請求項１２２に記載の方法。
  138. 【請求項１３８】 前記免疫刺激核酸が、１２と４０との間のヌクレオチド
    長である、請求項１２２に記載の方法。
  139. 【請求項１３９】 請求項１２２に記載の方法であって、ここで前記免疫刺
    激核酸が、以下： 【化７】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 方法。
  140. 【請求項１４０】 前記被験体が、増殖性障害およびウイルス性感染からな
    る群より選択される状態を有する、請求項１２２に記載の方法。
  141. 【請求項１４１】 請求項１２２に記載の方法であって、ここで、前記被験
    体が、以下： 毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞
    性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、
    前立腺癌、膀胱細胞癌、子宮頚部形成異常、および結腸癌 からなる群より選択される増殖性障害を有する、方法。
  142. 【請求項１４２】 請求項１２２に記載の方法であって、ここで、前記被験
    体が、以下： Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、尖圭コンジローム、ヒト免疫不全ウイルス、ヘルペス、
    サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、およびパピローマウイル
    ス からなる群より選択されるウイルス性障害を有する、方法。
  143. 【請求項１４３】 インビトロで天然インターフェロン産生細胞（ＩＰＣ）
    の生存を支える方法であって、該方法は、以下： 被験体からＩＰＣを単離する工程； 組織培養に適した滅菌培地において該ＩＰＣを培養する工程；および 該ＩＰＣを、インターロイキン３（ＩＬ−３）の非存在下で該ＩＰＣの増殖を
    支えるために有効な量の免疫刺激核酸とインビトロで接触させる工程、 を包含する、方法。
  144. 【請求項１４４】 前記ＩＰＣが、前駆体２型樹状細胞（ｐＤＣ２）である
    、請求項１４３に記載の方法。
  145. 【請求項１４５】 前記ＩＰＣが、ＩＬ−３の非存在下で培養される、請求
    項１４３に記載の方法。
  146. 【請求項１４６】 前記ＩＰＣが、ＧＭ−ＣＳＦの非存在下で培養される、
    請求項１４３に記載の方法。
  147. 【請求項１４７】 前記免疫刺激核酸が、改変されたものである、請求項１
    ４３に記載の方法。
  148. 【請求項１４８】 前記免疫刺激核酸が、以下： ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびペプ
    チド からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結
    合を有する骨格を含む、請求項１４３に記載の方法。
  149. 【請求項１４９】 前記免疫刺激核酸が、少なくとも１つのヌクレオチドア
    ナログまたはヌクレオチド誘導体を含む、請求項１４３に記載の方法。
  150. 【請求項１５０】 前記免疫刺激核酸が、パリンドロームでない、請求項１
    ４３に記載の方法。
  151. 【請求項１５１】 前記免疫刺激核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項１４３
    に記載の方法。
  152. 【請求項１５２】 前記免疫刺激核酸が、非ＣｐＧ核酸である、請求項１４
    ３に記載の方法。
  153. 【請求項１５３】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、Ｔリッチ核酸である、請
    請求項１５２に記載の方法。
  154. 【請求項１５４】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、ポリＧ核酸である、請求
    項１５２に記載の方法。
  155. 【請求項１５５】 前記免疫刺激核酸が、以下： ＣｐＧ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸 からなる群より選択される少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである、請
    求項１４３に記載の方法。
  156. 【請求項１５６】 前記免疫刺激核酸が、８と１００との間のヌクレオチド
    長である、請求項１４３に記載の方法。
  157. 【請求項１５７】 前記免疫刺激核酸が、１２と４０との間のヌクレオチド
    長である、請求項１４３に記載の方法。
  158. 【請求項１５８】 請求項１４３に記載の方法であって、ここで前記免疫刺
    激核酸が、以下： 【化８】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 方法。
  159. 【請求項１５９】 単離されたインターフェロン産生細胞（ＩＰＣ）をイン
    ビトロで刺激する方法であって、該方法は、以下 被験体からＩＰＣを単離する工程； 組織培養に適した滅菌培地において該ＩＰＣを培養する工程；および 該ＩＰＣを、少なくとも１つのＩ型インターフェロンの分泌を誘導するために
    有効な量の免疫刺激核酸とインビトロで接触させる工程、 を包含する、方法。
  160. 【請求項１６０】 前記ＩＰＣが、前駆体２型樹状細胞（ｐＤＣ２）である
    、請求項１５９に記載の方法。
  161. 【請求項１６１】 前記Ｉ型インターフェロンが、ＩＦＮ−αである、請求
    項１５９に記載の方法。
  162. 【請求項１６２】 前記ＩＰＣが、ＩＬ−３の非存在下で培養される、請求
    項１５９に記載の方法。
  163. 【請求項１６３】 前記ＩＰＣが、ＧＭ−ＣＳＦの非存在下で培養される、
    請求項１５９に記載の方法。
  164. 【請求項１６４】 前記免疫刺激核酸が、改変されたものである、請求項１
    ５９に記載の方法。
  165. 【請求項１６５】 前記免疫刺激核酸が、以下： ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびペプ
    チド からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結
    合を有する骨格を含む、請求項１５９に記載の方法。
  166. 【請求項１６６】 前記免疫刺激核酸が、少なくとも１つのヌクレオチドア
    ナログまたはヌクレオチド誘導体を含む、請求項１５９に記載の方法。
  167. 【請求項１６７】 前記免疫刺激核酸が、パリンドロームでない、請求項１
    ５９に記載の方法。
  168. 【請求項１６８】 前記免疫刺激核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項１５９
    に記載の方法。
  169. 【請求項１６９】 前記免疫刺激核酸が、非ＣｐＧ核酸である、請求項１５
    ９に記載の方法。
  170. 【請求項１７０】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、Ｔリッチ核酸である、請
    求項１６９に記載の方法。
  171. 【請求項１７１】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、ポリＧ核酸である、請求
    項１６９に記載の方法。
  172. 【請求項１７２】 前記免疫刺激核酸が、以下： ＣｐＧ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸 からなる群より選択される少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである、請
    求項１５９に記載の方法。
  173. 【請求項１７３】 前記免疫刺激核酸が、８と１００との間のヌクレオチド
    長である、請求項１５９に記載の方法。
  174. 【請求項１７４】 前記免疫刺激核酸が、１２と４０との間のヌクレオチド
    長である、請求項１５９に記載の方法。
  175. 【請求項１７５】 請求項１５９に記載の方法であって、ここで前記免疫刺
    激核酸が、以下： 【化９】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 方法。
  176. 【請求項１７６】 ＩＰＣを、少なくとも２つのＩ型インターフェロンの分
    泌を誘導するために有効な量の免疫刺激核酸と接触させる工程を包含する、複数
    のＩ型ＩＦＮサブタイプの産生を刺激する方法。
  177. 【請求項１７７】 前記接触させる工程が、インビボで起こる、請求項１７
    ６に記載の方法。
  178. 【請求項１７８】 前記接触させる工程が、インビトロで起こる、請求項１
    ７６に記載の方法。
  179. 【請求項１７９】 前記ＩＰＣが、前駆体２型樹状細胞（ｐＤＣ２）である
    、請求項１７６に記載の方法。
  180. 【請求項１８０】 前記ＩＰＣが、単離されたものである、請求項１７６に
    記載の方法。
  181. 【請求項１８１】 前記ＩＰＣが、少なくとも３つのＩ型インターフェロン
    を分泌するために誘導される、請求項１７６に記載の方法。
  182. 【請求項１８２】 前記ＩＰＣが、少なくとも４つのＩ型インターフェロン
    を分泌するために誘導される、請求項１７６に記載の方法。
  183. 【請求項１８３】 前記ＩＰＣが、少なくとも５つのＩ型インターフェロン
    を分泌するために誘導される、請求項１７６に記載の方法。
  184. 【請求項１８４】 前記ＩＰＣが、少なくとも６つのＩ型インターフェロン
    を分泌するために誘導される、請求項１７６に記載の方法。
  185. 【請求項１８５】 前記ＩＰＣが、少なくとも７つのＩ型インターフェロン
    を分泌するために誘導される、請求項１７６に記載の方法。
  186. 【請求項１８６】 前記ＩＰＣが、少なくとも８つのＩ型インターフェロン
    を分泌するために誘導される、請求項１７６に記載の方法。
  187. 【請求項１８７】 前記免疫刺激核酸が、改変されたものである、請求項１
    ７６に記載の方法。
  188. 【請求項１８８】 前記免疫刺激核酸が、以下： ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびペプ
    チド からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結
    合を有する骨格を含む、請求項１７６に記載の方法。
  189. 【請求項１８９】 前記免疫刺激核酸が、少なくとも１つのヌクレオチドア
    ナログまたはヌクレオチド誘導体を含む、請求項１７６に記載の方法。
  190. 【請求項１９０】 前記免疫刺激核酸が、パリンドロームでない、請求項１
    ７６に記載の方法。
  191. 【請求項１９１】 前記免疫刺激核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項１７６
    に記載の方法。
  192. 【請求項１９２】 前記免疫刺激核酸が、非ＣｐＧ核酸である、請求項１７
    ６に記載の方法。
  193. 【請求項１９３】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、Ｔリッチ核酸である、請
    求項１９２に記載の方法。
  194. 【請求項１９４】 前記非ＣｐＧ免疫刺激核酸が、ポリＧ核酸である、請求
    項１９２に記載の方法。
  195. 【請求項１９５】 前記免疫刺激核酸が、以下： ＣｐＧ核酸、Ｔリッチ核酸、およびポリＧ核酸 からなる群より選択される少なくとも２つの核酸の任意の組み合わせである、請
    求項１７６に記載の方法。
  196. 【請求項１９６】 前記免疫刺激核酸が、８と１００との間のヌクレオチド
    長である、請求項１７６に記載の方法。
  197. 【請求項１９７】 前記免疫刺激核酸が、１２と４０との間のヌクレオチド
    長である、請求項１７６に記載の方法。
  198. 【請求項１９８】 請求項１７６に記載の方法であって、ここで前記免疫刺
    激核酸が、以下： 【化１０】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 方法。
  199. 【請求項１９９】 ＩＬ−１２産生を阻害する方法であって、該方法が、Ｉ
    Ｌ−１２産生細胞を、該ＩＬ−１２細胞がＩＬ−１２を正常に産生する条件下で
    、インターフェロン産生細胞の存在下で、Ｉ型インターフェロンの分泌を誘導す
    るために有効な量で免疫刺激核酸と接触させる工程を包含する、方法。
  200. 【請求項２００】 請求項１９９に記載の方法であって、ここで前記免疫刺
    激核酸が、以下： 【化１１】 からなる群より選択される配列を有し、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 方法。
  201. 【請求項２０１】 以下： 【化１２】 からなる群より選択される配列を有する単離された核酸であって、 ここで各小文字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホ
    ジエステル結合を示す、 単離された核酸。
  202. 【請求項２０２】 以下： 【化１３】 からなる群より選択される配列を有する単離された核酸であって、ここで各小文
    字が、ホスホロチオエート結合を示し、そして各大文字が、ホスホジエステル結
    合を示す、単離された核酸；および 薬学的に受容可能なキャリア、を含む薬学的組成物。
  203. 【請求項２０３】 ＩＦＮ−αをさらに含む、請求項２０２に記載の薬学的
    組成物。
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