KR20080072934A - 면역자극성 올리고리보뉴클레오티드 - Google Patents

Abstract

본 발명은 면역자극성 조성물 및 질환 치료를 위한 약제의 제조에 있어 상기 화합물의 용도 및 시험관내 용도를 제공한다. 특히, 본 발명의 조성물은 서열-의존성 면역자극성 서열 모티프를 혼입한 면역자극성 올리고리보뉴클레오티드를 포함한다. 포스페이트 결합을 포함하는 특정 변이체, 뉴클레오티드 유사체, 부가물 및 그의 조합이 제공된다. 항원을 포함할 수 있거나 포함하지 않는 본 발명의 조성물은 면역 반응을 자극하거나 증대시키기 위해 단독으로 또는 다른 치료제와 함께 사용될 수 있다. 감염, 암, 알레르기 질환, 천식, 기도 재형성 또는 면역결핍을 갖는 대상을 치료하기에 유용한 조성물 및 방법도 또한 제공된다. 본 발명의 면역자극성 올리고리보뉴클레오티드는 톨-유사 수용체 8(TLR8)을 자극하는 것으로 생각된다.

Description

면역자극성 올리고리보뉴클레오티드{IMMUNOSTIMULATORY OLIGORIBONUCLEOTIDES}

본 발명은 일반적으로 면역학 분야에 관한 것이며, 보다 특히는 면역자극성 분자에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 면역자극 활성을 갖는 올리고리보뉴클레오티드를 포함한 리보핵산(RNA) 분자에 관한 것이다.

톨-유사 수용체(Toll-like receptor; TLR)는 병원체-관련 분자 패턴(pathogen-associated molecular pattern; PAMP)을 인지하고 포유동물에서 선천성 면역에서 중요한 역할을 하는 고도로 보존된 패턴 인지 수용체(pattern recognition receptor, PRP) 폴리펩티드의 한 부류이다. 현재, TLR1 내지 TLR10으로 나타내는 적어도 10 부류의 구성원이 확인되었다. 다양한 TLR의 세포질 영역은 톨-인터류킨 1 수용체(Toll-interleukin 1 receptor, TIR) 영역을 특징으로 한다[Medzhitov R. et al., Moll Cell 2:258-258, 1998]. TLR에 의한 미생물 침습의 인지는 초파리(Drosophila) 및 포유동물에서 진화적으로 보존되는 신호전달 단계의 활성화를 유발한다. TIR 영역-함유 어댑터 단백질 MyD88은 TLR과 결합하여 인터류 킨 1 수용체-관련 키나제(IRAK) 및 종양 괴사 인자(TNF) 수용체-관련 인자 6(TRAF6)을 TLR에 공급하는 것으로 보고되었다. MyD88-의존성 신호전달 경로는 면역 활성화의 중요한 단계인 NF-κΒ 전사 인자 및 c-Jun NH₂ 말단 키나제(Jnk) 미토겐-활성화 단백질 키나제(MAPK)의 활성화. 및 염증성 사이토카인의 생성을 유발하는 것으로 생각된다(고찰을 위해서는, 문헌 [Aderem A. et al., Nature 406:782-787, 2000; and Akira S. et al., Nat Rev Immunol 4:499-511, 2004] 참조).

많은 특정 TLR 리간드가 확인되었다. TLR2에 대한 리간드는 펩티도글리칸 및 리포펩티드를 포함한다[Yoshimura A. et al., J Immunol 163:1-5, 1999; Aliprantis AO et al., Science 285:736-739, 1999]. 리포폴리사카라이드(LPS)는 TLR4에 대한 리간드이다[Poltorak A. et al., Science 282:2085-2088, 1998; Hoshino K. et al., J. Immunol 162:3749-3752, 1999]. 세균의 플라젤린(flagellin)은 TLR5에 대한 리간드이다[Hayashi F. et al., Nature 410:1099-1103, 2001]. 펩티도글리칸은 TLR2에 대한 리간드일 뿐 아니라 TLR6에 대한 리간드인 것으로 보고되었다[Ozinsky A. et al., Proc Natl Acad Sci USA 97:13766-13771, 2000; Takeuchi O. et al., Int Immunol 13:933-940, 2001]. 최근에, 특정 분자량의 합성 화합물인 이미다조퀴놀린 이미퀴모드(R-837) 및 레시퀴모드(R-848)가 TLR7 및 TLR8의 리간드인 것으로 보고되었다[Hemmi H. et al., Nat Immunol 3:196-200, 2002; Jurk M. et al., Nat Immunol 3:499, 2002].

비메틸화 세균 DNA 및 그의 합성 유사체(CpG DNA)가 TLR9에 대한 리간드라는 최근의 발견[Hemmi H. et al., Nature 408:740-745, 2000; Bauer S. et al., Proc Natl Acad Sci USA 98:9237-9242, 2001]으로부터 시작하여, 특정 TLR에 대한 리간드는 특정 핵산 분자를 포함하는 것으로 보고되었다. 최근에, 특정 유형의 RNA가 서열-독립성 또는 서열-의존성 방식으로 면역자극성인 것이 보고되었다. 또한, 이들 다양한 면역자극성 RNA는 TLR3, TLR7 또는 TLR8을 자극하는 것으로 보고되었다.

발명의 요약

본 발명은 일반적으로 특정 면역자극성 RNA 모티프를 함유하는 면역자극성 올리고리보뉴클레오티드(ORN), 및 상기 면역자극성 ORN을 함유하는 관련된 면역자극성 조성물, 및 상기 면역자극성 ORN 및 조성물의 사용 방법에 관한 것이다. 본 발명의 면역자극성 ORN은 면역 반응을 자극하거나 증대시킬 필요가 있는 임의의 환경 또는 용도에서 유용하다. 하기에 개시되는 바와 같이, 본 발명의 면역자극성 ORN은 감염, 암, 알레르기 및 천식을 포함하여 다양한 질병의 치료에 사용하기 위한, 보조제, 백신 및 기타 약제를 포함한 약학적 조성물의 제조에 특히 유용하다. 따라서, 특정 태양에서, 본 발명은 본 발명의 면역자극성 ORN을 포함하는 면역자극성 조성물 및 그의 사용 방법에 관한 것이다. 또한 하기에 개시되는 바와 같이, 본 발명의 면역자극성 ORN 및 면역자극성 조성물은, 면역 세포를 활성화하고, 대상을 백신접종하고, 면역계 결핍이 있는 대상을 치료하고, 감염이 있는 대상을 치료하고, 자가면역 질환이 있는 대상을 치료하고, 암이 있는 대상을 치료하고, 알레르기 질환이 있는 대상을 치료하고, 천식, 기도 재형성이 있는 대상을 치료하고, 에 피토프 확장 및 항체-의존성 세포 독성(ADCC)을 촉진하기 위한 방법에서 특히 유용하다.

하기에서 매우 상세히 개시하는 바와 같이, 본 발명의 면역자극성 ORN은 하나 이상의 서열-의존성 면역자극성 RNA 모티프의 혼입을 특징으로 한다. 서열-의존성 면역자극성 RNA 모티프는 일반적으로 짧은 RNA 서열이지만, 특정 태양에서 상기 모티프는 또한 변형된 뉴클레오티드간 포스페이트 결합, 변형된 핵염기, 변형된 당, 뉴클레오티드 유사체, 또는 그의 임의의 조합과 같은 변형을 포함할 수 있다. 하기에서 상세히 기술하는 바와 같이, 한 태양에서 면역자극성 RNA 모티프는 본 발명의 보다 긴 면역자극성 ORN에서 일어난다. 또한, 면역자극성 RNA 모티프는 키메라 DNA:RNA 핵산 분자에서 일어난다.

서열-의존성 면역자극성 RNA 모티프 및 상기 모티프를 포함하는 면역자극성 ORN은 TLR8에 대한 작용물질인 것으로 개시되어 있다. 보다 특히, 적어도 특정한 서열-의존성 면역자극성 RNA 모티프, 면역자극성 ORN, 및 면역자극성 키메라 DNA:RAN 핵산 분자는 TLR8의 작용물질이지만 TLR7의 작용물질은 아닌 것으로 개시되어 있다.

본 발명의 일부 태양에 따른 면역자극성 RNA 모티프는 N-U-R₁-R₂이다.

N은 리보뉴클레오티드이며 N은 U를 포함하지 않는다. 일부 태양에서, N은 아데노신 또는 시토신(C) 또는 그의 유도체이다.

U는 우라실 또는 그의 유도체이다.

R은 리보뉴클레오티드이며, 이때 R₁ 및 R₂ 중 하나 이상은 아데노신(A) 또는 시토신 또는 그의 유도체이다. R은 N-U-R₁-R₂가 2개 이상의 A를 포함하지 않는 한 U가 아니다.

본 발명의 ORN은 하나 이상, 일부 태양에서는 하나보다 많은(즉, 2, 3 또는 4개) 면역자극성 모티프, N-U-R₁-R₂를 포함한다. ORN은 TLR7/8 모티프를 포함하지 않는다. ORN은 바람직하게는 길이가 4 내지 100개 뉴클레오티드이고, 하나 이상의 주쇄 변형을 포함하거나 포함하지 않는다.

N-U-R₁-R₂는 일부 태양에서 3개 이상의 A 또는 2개 이상의 C를 포함한다. 선택적으로, N-U-R₁-R₂는 하나 이상의 G 또는 C를 포함한다.

일부 태양에서, ORN은 ACCCAUCUAUUAUAUAACUC(서열번호 89)가 아니다.

다른 태양에서, ORN 모티프는 비-뉴클레오티드 링커에 의해 5' 리보뉴클레오티드로부터 분리된다. 또 다른 태양에서, ORN 모티프는 비-뉴클레오티드 링커에 의해 3' 리보뉴클레오티드로부터 분리된다. 선택적으로, ORN 모티프는 비-뉴클레오티드 링커에 의해 5' 및 3' 리보뉴클레오티드로부터 분리된다.

ORN은 또한 N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄메틸-설페이트(DOTAP)와 같은 지질 담체이거나 지질 담체가 아닌, 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 다른 태양에서, ORN은 DOTAP와 복합체를 형성하지 않는다.

ORN은 단일 가닥이거나 또는 이중 가닥일 수 있다.

다른 태양에서, ORN은 하나 이상의 AU를 포함한다. 또 다른 태양에서, ORN은 하나 이상의 CU를 포함한다.

일부 태양에서, ORN은 다음 중 하나이다:

ORN은 특히 TLR7/8 모티프를 배제한다. TLR7/8 모티프는, 예를 들면, 다음으로부터 선택된 리보뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다:

(i) 5'-C/U-U-G/U-U-3';

(ii) 5'-R-U-R-G-Y-3';

(iii) 5'-G-U-U-G-B-3';

(iv) 5'-G-U-G-U-G/U-3'; 및

(v) 5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C-3'

상기에서, C/U는 시토신(C) 또는 우라실(U)이고, G/U는 구아닌(G) 또는 U이고, R은 퓨린이고, Y는 피리미딘이고, B는 U, G 또는 C이고, G/C는 G 또는 C이고, A/C는 아데닌(A) 또는 C이다.

다양한 태양에서, 5'-C/U-U-G/U-U-3'는 CUGU, CUUU, UUGU 또는 UUUU이다.

다양한 태양에서, 5'-R-U-R-G-Y-3'는 GUAGU, GUAGC, GUGGU, GUGGC, AUAGU, AUAGC, AUGGU 또는 AUGGC이다. 한 태양에서, 염기 서열은 GUAGUGU이다.

다양한 태양에서, 5'-G-U-U-G-B-3'는 GUUGU, GUUGG 또는 GUUGC이다.

다양한 태양에서, 5'-G-U-G-U-G/U-3'는 GUGUG 또는 GUGUU이다. 한 태양에서, 염기 서열은 GUGUUUAC이다.

다양한 태양에서, 5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C-3'는 GUAGGCAC, GUCGGCAC, CUAGGCAC 또는 CUCGGCAC이다.

한 태양에서, 본 발명은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 보조제를 포함하는 면역자극성 조성물을 제공한다. 다양한 태양에서, 보조제는 데포 효과(depot effect)를 제공하는 보조제, 면역-자극 보조제, 또는 데포 효과를 제공하고 면역계를 자극하는 보조제이다. 한 태양에서, 본 발명의 상기 태양에 따른 면역자극성 조성물은 면역자극성 ORN과 보조제의 결합체이다. 본 발명의 상기 태양에 따른 한 태양에서, 면역자극성 ORN은 보조제에 공유 결합된다. 다른 태양에서, 이들은 결합되지 않는다. 한 태양에서, 보조제는 TLR9의 작용물질이다. 한 태양에서, 보조제는 면역자극성 CpG 핵산이다.

본 발명의 조성물은 항원을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 따라서, 한 태양에서, 본 발명은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 항원을 포함하는 백신을 제공한다. 한 태양에서, 본 발명은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 항원의 결합체를 포함하는 백신을 제공한다. 한 태양에서, 본 발명의 상기 태양에 따른 결합체는 항원에 공유 결합된 면역자극성 ORN을 포함한다. 다른 태양에서, 이들은 결합되지 않는다. 다양한 태양에서, 항원은 항원 자체일 수 있다. 항원은 암 항원, 미생물 항원 또는 알레르겐을 포함하여, 임의의 항원일 수 있다.

한 태양에서, 본 발명은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 친유성 잔기의 결합체를 포함하는 면역자극성 조성물을 제공한다. 한 태양에서, 면역자극성 ORN은 친유성 잔기에 공유 결합된다. 한 태양에서, 친유성 잔기는 콜레스테릴, 팔미틸 및 지방 아실로 이루어진 군에서 선택된다. 한 태양에서, 친유성 잔기는 콜레스테롤의 유도체, 예를 들면, 콜레스테릴이다.

한 태양에서, 면역자극성 ORN은 하나 이상의 데옥시리보뉴클레오티드를 포함한다. 하나 이상의 데옥시리보뉴클레오티드가 일반적으로 면역자극성 RNA 모티프 이외의 어디에나 존재할 수 있다. 다양한 태양에서, 하나 이상의 데옥시리보뉴클레오티드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24개의 연속 데옥시리보뉴클레오티드이다. 비연속 데옥시리보뉴클레오티드를 포함하는 면역자극성 ORN도 또한 본 발명에 포함된다. 다양한 태양에서, 하나 이상의 데옥시리보뉴클레오티드는 면역자극성 ORN의 5' 말단, 3' 말단, 또는 5' 말단 및 3' 말단 둘 다이다. 하나 이상의 데옥시리보뉴클레오티드는 또한 키메라 DNA:RNA 분자의 DNA 부분에 상응한다. 한 태양에서, 키메라 DNA:RAN 분자의 DNA 성분은 CpG 핵산, 즉, TLR9 작용물질을 포함한다. 한 태양에서, 키메라 DNA:RNA 분자의 DNA 및 RNA 부분은 뉴클레오티드간 포스페이트 결합을 통해 공유 결합된다. 또 다른 태양에서, 키메라 DNA:RNA 분자의 DNA 및 RNA 부분은 링커, 예를 들면, 비-뉴클레오티드 링커를 통해 공유 결합된다.

한 태양에서, 본 발명은 공유적으로 닫힌(covalently closed), 부분적으로 단일-가닥의 아령-형 핵산 분자를 포함하는 면역자극성 조성물을 제공하는데, 이때 상기 분자의 하나 이상의 단일-가닥 부분은 본 발명의 면역자극성 RNA 모티프를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 양이온성 지질, 리포솜, 코클레이트(cochleate), 바이로솜(virosome), 면역자극성 복합체(ISCOM), 미세입자, 미립구(microsphere), 나노구(nanosphere), 단층 소포(unilamella vesicle, LUV), 다층 소포, 수중유적형 유화액, 유중수적형 유화액, 유화액 및 다가양이온성(polycationic) 펩티드, 및 선택적으로, 약학적으로 허용되는 담체로부터 선택된 전달 비히클와 함께, 본 발명의 임의의 전술한 태양의 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 한 태양에서, 약학 조성물은 항원을 포함한다.

ORN은 분무기 또는 흡입기, 예를 들면, 정량식 흡입기 또는 분말 흡입기로 제형화될 수 있다. 일부 태양에서, ORN은 또한 화학요법제, 항바이러스제 또는 약학적으로 허용되는 담체와 같은 추가의 조성물을 포함한다. 약학적으로 허용되는 담체는 주사 또는 점막 투여용으로 제형화될 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 및 다른 태양에 따라, 다양한 태양에서, 면역자극성 ORN은 하나 이상의 5'-5' 뉴클레오티드간 결합, 하나 이상의 3'-3' 뉴클레오티드간 결합, 링커 잔기를 포함하는 하나 이상의 5'-5' 뉴클레오티드간 결합, 링커 잔기를 포함하는 하나 이상의 3'-3' 뉴클레오티드간 결합, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 한 태양에서, 링커 잔기는 비-뉴클레오티드 링커 잔기이다.

또한, 본 발명의 상기 및 다른 태양에 따라, 다양한 태양에서, 면역자극성 ORN은 하나 이상의 2'-2' 뉴클레오티드간 결합, 하나 이상의 2'-3' 뉴클레오티드간 결합, 하나 이상의 2'-5' 뉴클레오티드간 결합 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 바람직한 태양에서, 하나 이상의 2'-2' 뉴클레오티드간 결합, 하나 이상의 2'-3' 뉴클레오티드간 결합 또는 하나 이상의 2'-5' 뉴클레오티드간 결합은 면역자극성 RNA 모티프 이외에 존재한다.

또한, 본 발명의 상기 및 다른 태양에 따라서, 면역자극성 ORN은, 한 태양에서, 하나 이상의 멀티플라이어(multiplier) 단위를 포함한다. 따라서, 특정 태양에서, 본 발명의 면역자극성 ORN은 분지된 구조를 가질 수 있다. 분지된 조성물은 3'-5', 5'-5', 3'-3', 2'-2', 2'-3' 또는 2'-5' 뉴클레오티드간 결합을 임의의 조합으로 포함할 수 있다. 한 태양에서, 면역자극성 ORN은 2개 이상의 멀티플라이어 단위를 포함하여, 소위 덴드리머(dendrimer)를 제공한다. 또한, 특정 태양에서, 본 발명의 면역자극성 ORN은, 예를 들면, 분지된 구조의 상이한 팔 위에 선형 ORN을 따라 일렬로 정렬되거나, 또는 선형 ORN을 따라 일렬로 및 분지된 구조의 상이한 팔 위 둘 다에 정렬된, 2개 이상의 면역자극성 RNA 모티프를 포함할 수 있다. 덴드리머를 포함하여 분지된 구조는, 예를 들면, 분지된 구조의 별도의 팔로서 하나 이상의 면역자극성 CpG 핵산을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 및 다른 태양에 따라, 한 태양에서, 면역자극성 ORN은 CG DNA 또는 RNA 다이뉴클레오티드를 포함하지 않는다.

한 태양에서, 본 발명은 면역억제성 CD4+ 조절 (Treg) 세포를 하향조절하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 CD4+ Treg 세포를 본 발명 의 TLR8-특이적 면역자극성 ORN을 CD4+ Treg 세포의 억제 효과를 감소시키기에 효과량으로 함유하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 상기 조성물은 TLR8-특이적 ORN 및 면역자극성 CpG 핵산을 포함하는데, 이때 TLR8-특이적 ORN 및 면역자극성 CpG 핵산은 연결되지 않는다. 한 태양에서, 상기 조성물은 TLR8-특이적 ORN 및 면역자극성 CpG 핵산을 포함하며, 이때 상기 TLR8-특이적 ORN 및 면역자극성 CpG 핵산은 결합체로서 존재한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 대상에서 면역 반응을 조절하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 태양에서, ORN은 대상에서 자가면역 질환 또는 기도 재형성을 치료하기 위해 대상에게 전달될 수 있다. ORN은 대상에게 항원의 존재 또는 부재하에 투여될 수 있다. 선택적으로, ORN은 경구, 코, 설하, 정맥내, 피하, 점막, 호흡기, 직접 주사 및 피부와 같은 경로에 의해 전달된다. ORN은 TNFα, IL-10, IL-6, IFN-γ, MCP1 및 IL-12와 같은 사이토카인 발현을 유도하기에 효과량으로 대상에게 전달될 수 있다.

한 태양에서, 본 발명은 대상을 백신접종하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 대상에게 항원 및 본 발명의 면역자극성 ORN을 투여하는 단계를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 감염성 질환을 가지거나 감염성 질환을 가질 위험이 있는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 상기 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 면역자극성 ORN을 투여하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 대상은 바이러스 감염을 갖는다. 바이러스 감염은, 예를 들면, B형 간염 또는 C형 간염일 수 있다. 항바이러스제도 또한 대상에게 투여될 수 있다. 선택적으로, 항바이러스제는 ORN에 결합된다.

한 태양에서, 본 발명은 암을 가지거나 암을 가질 위험이 있는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 상기 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 면역자극성 ORN을 투여하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 화학요법제 또는 방사선도 또한 대상에게 투여된다.

한 태양에서, 본 발명은 암을 가지거나 암을 가질 위험이 있는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 대상에게 본 발명의 TLR8-특이적 면역자극성 ORN을 함유하는 조성물 효과량을 투여하여 CD4+ Treg 세포의 억제 효과를 감소시키는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 상기 조성물은 TLR8-특이적 ORN 및 면역자극성 CpG 핵산을 포함하며, 이때 TLR8-특이적 ORN 및 면역자극성 CpG 핵산은 연결되지 않는다. 한 태양에서, 상기 조성물은 TLR8-특이적 ORN 및 면역자극성 CpG 핵산을 포함하며, 이때 상기 TLR8-특이적 ORN 및 면역자극성 CpG 핵산은 결합체로서 존재한다.

한 태양에서, 본 발명은 알레르기 질환을 가지거나 알레르기 질환을 가질 위험이 있는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 상기 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 면역자극성 ORN을 투여하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 대상은 알레르기성 비염을 갖는다.

한 태양에서, 본 발명은 천식을 가지거나 천식을 가질 위험이 있는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 상기 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 면역자극성 ORN을 투여하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 천식은 바이러스 감염에 의해 악화된 천식이다. ORN은 알레르겐의 존재 또는 부재하에 투여될 수 있다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 기도 재형성을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 면역자극성 ORN을 투여하는 단계를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 항체-의존성 세포독성(ADCC)을 증가시키는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 증가된 ADCC가 필요한 대상에게 효과량의 본 발명의 면역자극성 ORN 및 항체를 투여하여 ADCC를 증가시키는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 항체는 암 항원 또는 암 세포에 의해 발현된 다른 항원에 대해 특이적인 항체이다. 한 태양에서, 항체는 IgG 항체이다.

한 태양에서, 본 발명은 에피토프 확장(epitope spreading)을 증대시키는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 면역계의 세포를 항원과 접촉시키고 이어서 상기 세포를 두 용량 이상의 본 발명의 면역자극성 ORN과 접촉시키는 연속 단계를 포함한다. 한 태양에서, 상기 방법은 생체내에서 수행된다. 상기 방법은, 한 태양에서, 대상에게 항원 및 보조제를 포함하는 백신을 투여하고 이어서 대상에게 두 용량 이상의 본 발명의 면역자극성 ORN을 다중 에피토프-특이적 면역 반응을 유도하기에 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 상기 방법은 대상에서 면역계 항원 노출을 야기하는 치료 프로토콜을 적용한 후에, 두 용량 이상의 본 발명의 면역자극성 ORN을 다중 에피토프-특이적 면역 반응을 유도하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다. 다양한 태양에서, 상기 치료 프로토콜은 수술, 방사선, 화학요법, 기타 암 치료제, 백신 또는 암 백신이다. 한 태양에서, 두 용량 이상의 면역자극성 ORN은 적어도 1 일 내지 1 주일 서로 별도로 투여된다. 한 태양에서, 두 용량 이상의 면역자극성 ORN은 적어도 1 주일 내지 1 개월 서로 별도로 투여된다. 한 태양에서, 두 용량 이상의 면역자극성 ORN은 적어도 1개월 내지 6개월 서로 별도로 투여된다.

한 태양에서, 본 발명은 TLR8 발현 세포를 N-U-R₁-R₂를 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN)와 전구염증성 사이토카인 생성을 자극하기에 효과적인 양으로 접촉시킴으로써 전구염증성 사이토카인의 생성을 자극하는 방법으로, 이때 N은 리보뉴클레오티드이고 N은 U를 포함하지 않으며, U는 우라실 또는 그의 유도체이고, R은 리보뉴클레오티드이며, 이때 R₁ 및 R₂ 중 하나 이상은 아데노신(A) 또는 시토신 또는 그의 유도체이고, R은 N-U-R₁-R₂가 2개 이상의 A를 포함하지 않는 한 U가 아니고, ORN은 TLR7/8 모티프를 포함하지 않고, ORN은 길이가 4 내지 100개 뉴클레오티드이며, 이때 ORN에 대한 IFN-α 생성은 배경에 비해 상당히 유도되지 않는다. 일 부 태양에서, ORN에 대한 IFN-α 생성은 300 pg/ml 미만이다. 한 태양에서, ORN은 ACCCAUCUAUUAUAUAACUC(서열번호 89)가 아니다. ORN은 N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄메틸-설페이트(DOTAP)와 복합체를 형성하거나 형성하지 않는다.

일부 태양에서, TLR8 발현 세포는 단핵구 또는 mDC이다. 또 다른 태양에서, TLR8 발현 세포는 시험관내 또는 생체내이다.

본 발명의 상기 및 다른 특징들은 발명의 상세한 설명과 관련하여 더 상세히 설명할 것이다.

도 1은 PBMC 자극시 ORN 유도된 사이토카인 생성을 나타낸 일련의 그래프이다. IFN-알파 및 TNF-알파 사이토카인을 측정함으로써, TLR8과 TLR7/8 모티프 사이의 생성율 차이를 나타내었다. 인간 PBMC는 완전 적정 곡선에서 DOTAP(25 ㎍/ml, 1/3 희석)와 복합체를 형성한 나타낸 ORN(1/3 희석율하에 2μM)으로, 또는 R-848(1/3 희석율하에 2μM)로 자극하였다. 16 시간후에, 상등액을 수거하고, IFN-알파(도 1a) 및 TNF-알파(도 1b)를 ELISA로 측정하였다. 데이터는 3회 이상의 독립적 실험의 3명 헌혈자의 평균을 나타낸다. DOTAP 만으로는 효과를 나타내지 않았다. ORN은 DOTAP와 복합체를 형성하고, R-848은 복합체를 형성하지 않는다. DOTAP 단독이 대조군이다. 도 1c에서는, 인간 PBMC를 DOTAP(2.2 ㎍/ml)와 복합체를 형성한 0.2μM의 나타낸 ORN으로 또는 R-848(2μM)로 자극하였다. 16 시간후 에, 상등액을 수거하고, IFN-알파(좌측 패널) 및 TNF-알파(우측 패널)를 ELISA로 측정하였다. 데이터는 3명 제공자의 평균(±SEM)이다.

도 2는 분리된 pDC(도 2a), 단핵구(도 2b) 및 mDC(도 2c) 자극시 ORN 유도된 사이토카인 생성을 나타낸 일련의 막대 그래프이다. 세포는 10 ㎍/ml DOTAP와 복합체를 형성한 0.5μM ORN, 0.5μM CpG ODN 또는 DOTAP 또는 배지 단독으로 자극하였으며, IFN-알파(도 2a), TNF-알파(도 2c) 및 IL-12p40(도 2c)을 측정하였다.

도 3은 PBMC 자극시 ORN 유도된 사이토카인 생성을 나타낸 일련의 막대 그래프이다. 인간 PBMC는 10 ㎍/ml DOTAP와 복합체를 형성한 나타낸 ORN(0.5μM ORN)으로 자극하고, IFN-알파(도 3a) 및 TNF-알파(도 3b)를 측정하고, 사이토카인 생성을 ELISA 기술 및 비교된 루미넥스(Luminex) 기술로 측정하였다.

도 4는 나타낸 ORN의 IFN-알파(도 4a) 및 TNF-알파(도 4b) 최대 활성의 비교를 나타낸 막대 그래프이다. 인간 PBMC는 DOTAP(1/3 희석율하에 25 ㎍/ml로부터 출발)와 복합체를 형성한 ORN(7개 농도, 1/3 희석율하에 2μM부터 출발)으로 자극하였으며, 2회의 개별적 실험에서 3 내지 6명의 헌혈자의 0.6μM에서 평균 최대 활성을 평가하였다.

도 5는 IFN-알파 최대 활성(도 5a) 대 IFN-알파 EC50(도 5b)의 비교를 나타낸 막대 그래프이다. 인간 PBMC를 DOTAP와 복합체를 형성한 ORN으로 자극하였으며, IFN-알파를 측정하였다.

도 6은 3명 헌혈자의 PBMC, 분리된 pDC 또는 분리된 단핵구에 대해 TLR8(서열번호 13) 또는 TLR7/8(서열번호 21)에 의한 ORN에 대한 적정 곡선을 비교한 일련 의 그래프이다. 세포는 DOTAP(1/4 희석율하에 25 ㎍/ml로부터 출발)와 복합체를 형성한 ORN(4개 농도, 1/4 희석율하에 1μM로부터 출발)으로 자극하였다. 16 시간후에, 상등액을 수거하고 루미넥스 기술로 사이토카인 생성을 측정하였다. 그래프는 서열번호 21(0.3μM에서)의 사이토카인 생성율 퍼센트를 나타낸다.

도 7a 내지 7d는 PBMC, 분리된 단핵구, 분리된 pDC 및 CD14-CD123-PBMC에 대한 3명 헌혈자의 임의 농도에서 평균 최대 활성을 입증하는 일련의 막대 그래프를 나타낸다. 세포는 DOTAP(1/4 희석율하에 25 ㎍/ml로부터 출발)와 복합체를 형성한 ORN(4개 농도, 1/4 희석율하에 1μM로부터 출발)으로 자극하였다. 16 시간후에, 상등액을 수거하고 루미넥스 기술로 사이토카인 생성을 측정하였다. 적색 사각형은 DOTAP 및 배지의 배경에 대해 양성 반응을 나타내었다.

도 8은 TLR8(서열번호 13) 및 TLR7/8(서열번호 21) ORN 사이의 차이를 나타내는 일련의 막대 그래프이다. 세포는 DOTAP(1/4 희석율하에 25 ㎍/ml로부터 출발)와 복합체를 형성한 ORN(4개 농도, 1/4 희석율하에 1μM로부터 출발)으로 자극하였다. 16 시간후에, 상등액을 수거하고 루미넥스 기술로 사이토카인 생성을 측정하였다. 그래프는 TLR8 ORN(서열번호 13) 대 TLR7/8 ORN(서열번호 21)의 사이토카인 생성율 퍼센트로서 임의의 농도에서 측정된 평균 최대치를 나타낸 것이다. 이것은 분리된 pDC, PBMC, 분리된 단핵구 및 CD123-CD14-PBMC에 대해 나타낸 것이다.

도 9는 안정한 형질감염된 HEK-293 세포 내에서 TLR8을 통해 작용하는 TLR8 ORN(서열번호 13) 및 TLR7/8 ORN(서열번호 21)의 반응을 나타낸 일련의 막대 그래 프 및 곡선이다. NFκΒ-루시퍼라제 판독 리포터 및 인간 TLR8로 안정하게 형질감염된 HEK-293 세포를 나타낸 ORN으로 16 시간동안 자극하였다. 16 시간후에, 상등액을 제거하고, 세포를 용해하고, 루시퍼라제 활성 또는 사이토카인 수준을 측정하였다. 도 9a 및 9b는 자극후 NFκΒ-루시퍼라제의 접힘 유도를 나타낸다. 도 9c는 억제제의 존재하에 자극후 NFκΒ-루시퍼라제의 접힘 유도를 나타낸다. 도 9d는 루시퍼라제 분석에 의해 측정된 바와 같이 자극후 IP-10의 자극을 나타낸다.

도 10은 AU-풍부 또는 GU-풍부 ORN으로 인간 pDC 자극시에 표면 마커 발현을 나타내는 일련의 그래프이다. CD123+ 정제된 pDC(도 10a 및 10b) 또는 분리된 단핵구(도 10c)를 25 ㎍/ml DOTAP와 복합체를 형성한 1μM ORN 또는 DOTAP 단독(도 10a) 또는 DOTAP와 복합체를 형성한 나타낸 양의 ORN 또는 DOTAP 단독(도 10b 내지 10c)과 함께 배양하였다. 16 시간후에, 세포를 수확하고 CD123, CD11c 및 HLA-DR 항체(도 10a 및 10b) 또는 CD14 및 CD19(도 10c)로 염색하였다. 세포 표면 마커 활성화는 CD86(도 10a 및 10b) 또는 CD80(도 10c) 발현으로 측정하였다. 도 10a는 AU-풍부 ORN(서열번호 13) 및 GU-풍부 ORN(서열번호 21)이 pDC 자극시 CD86 표면 마커 발현에 차이를 보임을 입증하는 FACS 분석을 나타내고 있다. 도 10b는 인간 pDC 자극시 CD86 표면 마커 발현이 용량-의존성임을 예시하는 그래프이다. 도 10c는 AU-풍부 ORN(서열번호 13) 및 GU-풍부 ORN(서열번호 21)이 인간 PBMC(데이터 나타내지 않음) 및 CD14-양성 세포 자극시 CD80 표면 마커 발현에 차이를 나타내지 않음을 보여주는 그래프이다.

도 11은 TLR8 ORN(서열번호 13)과 TLR7/8 ORN(서열번호 21) 사이의 차이를 나타내는 일련의 막대 그래프이다. 서열번호 5의 ORN을 대조군으로 사용하였다. 소의 PBMC를 10 ㎍/ml의 ORN(HD) 또는 2.5 ㎍/ml의 ORN(LD)과 함께 48 시간동안 배양하였다. 상등액을 수거하고 ELISA로 분석하였다. 도 11a 내지 c는 각각 IL-12, IFN-γ 및 TNF-알파의 수준을 나타낸다.

도 12는 뮤린 세포가 생체내 또는 시험관내에서 AU-풍부 ORN(서열번호 13)에 반응하지 않음을 나타내는 일련의 그래프이다. 사용된 세포는 생체내 마우스의 대식세포주 Raw264.7 세포(도 12a), J774 세포(도 12b), 정제된 마우스 CD11c+ 세포(sv129 마우스)(도 12c 내지 12g) 및 마우스 세포였다. 사이토카인 농도는 ELISA로 평가하였다.

도 13은 래트의 비장림프구(splenocyte)가 AU-풍부 ORN(서열번호 13)에 반응하지 않음을 나타내는 그래프이다. 3 마리의 스프래그-돌리(Sprague-Dawley) 래트로부터의 비장림프구를 모아서, 나타낸 농도의 서열번호 21, 서열번호 13(둘 다 1/5 희석율하에 62.5 ㎍/ml의 DOTAP와 복합체를 형성함), R-848 또는 DOTAP 단독(62.5 ㎍/ml, 1/5 희석율)으로 자극하였다. 상등액을 20 시간후에 수거하고 TNF-알파 수준을 ELISA로 측정하였다.

본 발명은 부분적으로 본 발명자들에 의한 많은 서열-특이적 면역자극성 RNA 모티프의 발견에 관한 것이다. 본 발명에서 면역자극성 RNA 모티프를 함유하는 분자는, 단독으로 또는 특정한 다른 성분과 함께, 면역 반응을 유도하거나 증대시키거나 방향을 변화시키기에 유리한 질병을 가지거나 가질 위험이 있는 대상을 치료하기 위한 많은 방법에서 용도를 갖는 중요한 면역자극성 화합물인 것으로 밝혀졌다. 본원에서 사용된 바와 같이, 한 태양에서, 본 발명의 면역자극성 조성물은 본 발명의 면역자극성 ORN이다.

특정한 서열-특이적 RNA 모티프는 TLR7 및 TLR8에 작용하는 다른 모티프(GU 풍부 및 CU 풍부)와 대조적으로, TLR8을 통해 작용하는 면역자극성인 것으로 밝혀졌다. 바람직하게는 AU-풍부 서열을 함유하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN)은 TLR8을 통해 면역 반응을 자극한다. IFN-알파, TNF-알파, IFN-감마 및 IL-12 생성율 사이의 차이는 상기 별개 부류의 ORN, 예를 들면, AU- 및 GU-함유 반복서열을 함유하는 ORN에서 관찰되었다. 흥미롭게도, 본 발명의 면역자극성 ORN은 IFN-알파 및 IFN-알파 관련 분자를 제외하고, 강한 전구염증성 사이토카인 반응을 생성하는 것으로 밝혀졌다. 상기 신규 ORN으로 자극시 IFN-알파 생성은 감소하거나 결여된다.

본 발명의 일부 태양에 따른 면역자극성 RNA 모티프는 N-U-R₁-R₂이다.

N은 리보뉴클레오티드이며 N은 U를 포함하지 않는다. 일부 태양에서, N은 아데노신 또는 시토신(C) 또는 그의 유도체이다.

U는 우라실 또는 그의 유도체이다.

R은 리보뉴클레오티드이며, 이때 R₁ 및 R₂ 중 하나 이상은 아데노신(A) 또는 시토신 또는 그의 유도체이다. R은 N-U-R₁-R₂가 2개 이상의 A를 포함하지 않는 한 U가 아니다.

본 발명의 ORN은 하나 이상, 일부 태양에서는 하나보다 많은(즉, 2, 3 또는 4개) 면역자극성 모티프, N-U-R₁-R₂를 포함한다. ORN은 TLR7/8 모티프를 포함하지 않는다.

ORN은 올리고뉴클레오티드이다. 선택적으로, 올리고뉴클레오티드는 길이가 4 내지 100개 뉴클레오티드이다. ORN은 또한, 예를 들면, 길이가 8 내지 40개, 15 내지 25개 또는 20 내지 30개 뉴클레오티드이다. 선택적으로, ORN은 하나 이상의 주쇄 변형을 포함한다.

N-U-R₁-R₂는 일부 태양에서 3개 이상의 A 또는 2개 이상의 C를 포함한다. 선택적으로, N-U-R₁-R₂는 하나 이상의 G 또는 C를 포함한다.

일부 태양에서, ORN은 ACCCAUCUAUUAUAUAACUC(서열번호 89)가 아니다.

ORN은 또한 N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄메틸-설페이트(DOTAP)와 같은 지질 담체이거나 지질 담체가 아닌 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 다른 태양에서, ORN은 DOTAP와 복합체를 형성하지 않는다. 다른 태양에서, 약학적으로 허용되는 담체는 다가양이온성 펩티드와 같은 펩티드일 수 있다. 다가양이온성 펩티드는, 예를 들면, 다중 폴리-라이신, 폴리-아르기닌, 및 50% 보다 많은 염기성 아미노산, 특히 아르기닌 또는 라이신 잔기를 5개 이상, 특히 8개 이상의 아미노산 잔기 또는 그의 혼합물의 범위로 함유하는 폴리-펩티드를 포함하며, 예를 들면, 천연 곤충 항균 단백질의 유도체를 포함할 수 있다.

다른 태양에서, ORN은 하나 이상의 AU를 포함한다.

서열-특이성인 것 이외에, 면역자극성 RNA 모티프는 단일-가닥 RNA, 부분적으로 이중-가닥 RNA, 또는 전체적으로 이중-가닥 RNA로서 효과적이다.

IFN-알파 및 IFN-알파 관련 분자와 다른 전구염증성 사이토카인, 예를 들면, TNF-알파, IFN-감마, IL-10, IL-6 및 IL-12의 생성율 사이의 명백한 차이는 본 발명의 ORN, 및 TLR7/8 모티프, 즉, GU-함유 반복서열을 갖는 ORN에서 관찰되었다. N-U-R₁-R₂ 모티프를 갖는 본 발명의 ORN, 예를 들면, AU 또는 AUU 반복서열을 함유하는 것들(서열번호 12, 서열번호 13)은 PBMC 및 pDC 자극시 IFN-알파 사이토카인 생성을 나타내지 않았다. 대조적으로, 3개 이상의 U를 연속적으로 갖는 ORN(서열번호 14, 서열번호 15)은 A의 존재에도 불구하고 IFN-알파 생성을 유도하였다. 흥미롭게, A를 G로 교체한 것을 제외하고 동일한 세트의 ORN을 사용하여, PBMC 자극시 강한 IFN-알파 생성이 관찰되었다. 본원에 나타낸 데이터는 2가지의 상이한 ORN 부류의 존재를 강하게 시사한다: 단핵구 및 mDC와 같은 TLR8을 발현하는 세포에 작용하는 부류(서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 16 내지 서열번호 18), 본 발명의 N-U-R₁-R₂ 모티프를 함유하는 ORN, 및 CU, GU 및 GUU 서열을 함유하는, 단핵구, mDC 및 pDC와 같은 TLR7/8을 둘 다 발현하는 세포에 작용하는 또 다른 부류(서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 19 내지 서열번호 23).

따라서, 본 발명의 ORN은 배경에 대해 상당량의 IFN-알파 또는 IFN-알파 관련 분자를 유도하지 않고 면역 반응을 유도하는 능력을 갖는다. 배경에 대해 IFN-알파 또는 IFN-알파 관련 분자의 상당량은 바람직하게는 배경에 대해 IFN-알파 또는 IFN-알파 관련 분자의 수준에서 20% 미만의 변화이다. 일부 태양에서, 상기 양은 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이다. 다른 태양에서, 유도되는 IFN-알파 또는 관련 분자의 양은 배경과 같거나 배경 수준 미만이다. 또 다른 태양에서, 본 발명의 ORN에 의해 유도된 IFN-알파의 양은 TLR7/8 ORN에 의해 유도된 IFN-알파의 20% 이하이다. 본 발명의 ORN에 의해 유도된 IFN-알파의 양은 선택적으로 시험관내 분석에서 300 pg/ml 미만일 수 있거나, 또는 1.5μM보다 큰 EC50을 가질 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, IFN-알파 관련 분자는 IFN-알파의 발현에 관련되는 사이토카인 또는 인자이다. 상기 분자들로는 MIP1-베타, IP-10 및 MIP1-알파가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

최근에, CD4+ Treg 세포는 TLR8을 발현하며 상기 세포에서 TLR8 신호전달은 그의 면역억제 기능을 감소시키거나 역전시키는 것으로 보고되었다[Peng G. et al., Science 309:1380-1384, 2005]. CD4+ Treg 세포의 증가된 개체군이 다양한 유형의 암을 갖는 환자에서 관찰되었으며, 이때 면역억제가 면역 "회피" 및 상기 암의 비조절 성장에 기여할 수 있다. 따라서, Treg-매개 억제의 역전은 암을 치료하는데 유리할 것으로 예상된다.

ORN은 특이적으로 TLR7/8 모티프를 배제한다. TLR7/8 모티프는 본 발명의 ORN의 특징적인 면역자극성을 은폐하는 우세한 결과를 야기할 수 있는 것으로 밝혀졌다. TLR7/8 모티프는, 예를 들면, 5'-C/U-U-G/U-U-3', 5'-R-U-R-G-Y-3', 5'-G-U-U-G-B-3', 5'-G-U-G-U-G/U-3' 또는 5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C-3'와 같은 리보뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. C/U는 시토신(C) 또는 우라실(U)이고, G/U는 구아닌(G) 또는 U이고, R은 퓨린이고, Y는 피리미딘이고, B는 U, G 또는 C이고, G/C는 G 또는 C이고, A/C는 아데닌(A) 또는 C이다. 5'-C/U-U-G/U-U-3'는 CUGU, CUUU, UUGU 또는 UUUU일 수 있다. 다양한 태양에서, 5'-R-U-R-G-Y-3'는 GUAGU, GUAGC, GUGGU, GUGGC, AUAGU, AUAGC, AUGGU 또는 AUGGC이다. 한 태양에서, 염기 서열은 GUAGUGU이다. 다양한 태양에서, 5'-G-U-U-G-B-3'는 GUUGU, GUUGG 또는 GUUGC이다. 다양한 태양에서, 5'-G-U-G-U-G/U-3'는 GUGUG 또는 GUGUU이다. 한 태양에서, 염기 서열은 GUGUUUAC이다. 다양한 다른 태양에서, 5'-G/C-U-A/C-G-G-C-A-C-3'는 GUAGGCAC, GUCGGCAC, CUAGGCAC 또는 CUCGGCAC이다.

본 발명은 일반적으로 하나 이상의 면역자극성 RNA 모티프를 포함하는 면역자극성 올리고리보뉴클레오티드, 하나 이상의 본 발명의 면역자극성 ORN을 함유하는 면역자극성 조성물, 및 본 발명의 면역자극성 ORN 및 면역자극성 조성물의 사용 방법에 관한 것이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "RNA" 및 동등하게 "천연 RNA"는 3'-5' 포스포다이에스터 결합(들)에 의해 함께 공유 결합된 2개 이상의 리보뉴클레오티드(즉, 포스페이트 기 및 퓨린 또는 피리미딘 핵염기(예를 들면, 구아닌, 아데닌, 시토신 또는 우라실)에 결합된 리보스 당을 각각 포함하는 분자)를 말한다.

면역자극성 RNA 모티프는 면역자극성 ORN의 말단에서 존재할 수 있다(면역자극성 ORN이 유리 말단을 가질 때). 예를 들면, 유리 말단을 갖는 면역자극성 ORN 및 면역자극성 ORN의 말단에 위치한 면역자극성 RNA 모티프는 X_aM 또는 MX_b로 나타낼 수 있으며, 이때 M은 면역자극성 RNA 모티프를 나타내고, X_a 및 X_b 각각은 독립적으로 면역자극성 RNA 모티프를 제외하고 면역자극성 ORN의 하나 이상의 같거나 다른 뉴클레오티드를 나타낸다.

또는, 면역자극성 RNA 모티프는, 면역자극성 ORN이 유리 말단을 갖든지 갖지 않든지, 면역자극성 ORN의 하나 이상의 추가의 뉴클레오티드에 의해 그의 양쪽 말단 모두에 인접할 수 있다. 예를 들면, 유리 말단을 갖는 면역자극성 ORN 및 면역자극성 RNA 모티프에 인접한 뉴클레오티드는 X_aMX_b로 나타낼 수 있으며, 이때 M은 면역자극성 RNA 모티프를 나타내고, X_a 및 X_b 각각은 독립적으로 면역자극성 RNA 모티프를 제외하고 면역자극성 ORN의 하나 이상의 같거나 다른 뉴클레오티드를 나타낸다.

상이한 태양에서, 면역자극성 RNA 모티프를 포함하는 면역자극성 ORN은 단일 모티프, 또는 하나보다 많은 면역자극성 RNA 모티프를 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역자극성 ORN이 2개 이상의 TLR과 맞물릴 수 있도록 모티프가 이격되는 경우, 단일 면역자극성 ORN에 2개 이상의 면역자극성 RNA 모티프를 갖는 것이 유리할 수 있는 것으로 생각된다. 예를 들면, 면역자극성 ORN은 2개 이상의 TLR8 수용체와 맞물림으로써, 야기된 면역자극 효과를 증대시키거나 변화시킬 수 있다.

면역자극성 ORN이 하나보다 많은 면역자극성 RNA 모티프를 포함하는 경우, 면역자극성 ORN은 한 태양에서, M₁XM₂로 나타낼 수 있으며, 이때 M₁ 및 M₂는 각각 독립적으로 면역자극성 RNA 모티프를 나타내고, X는 면역자극성 RNA 모티프를 제외하고 면역자극성 ORN의 하나 이상의 같거나 다른 뉴클레오티드를 나타낸다. 한 태양에서, X는 본원에서 기술한 바와 같은 비-뉴클레오티드 링커를 포함한다. 한 태양에서, X는 본원에서 기술한 바와 같은 분지 단위를 포함한다.

면역자극성 ORN에 하나보다 많은 면역자극성 RNA 모티프가 존재하는 경우, 모티프는 일반적으로 면역자극성 ORN을 따라 임의의 위치에 존재할 수 있다. 예를 들면, 2개의 모티프가 존재하는 경우, 이들은 각각 면역자극성 ORN의 말단에 존재할 수 있다. 또는, 한 모티프는 말단에 존재할 수 있고, 한 모티프는 면역자극성 ORN의 하나 이상의 추가의 뉴클레오티드에 의해 그 말단 양쪽에 인접할 수 있다. 또 다른 태양에서, 각각의 모티프는 면역자극성 ORN의 하나 이상의 추가의 뉴클레오티드에 의해 그 말단의 양쪽에 인접할 수 있다.

면역자극성 ORN에는 좌측에서 우측으로 읽어 5'에서 3'로 나타낸 다음 서열이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

일부 태양에서, ORN은 하기 표 1 및 2에 나타낸 활성 ORN의 하나, 예를 들면, 다음이다:

상기에서 언급했듯이, RNA는 3'-5' 포스포다이에스터 결합을 통해 연결된 리보뉴클레오티드의 중합체이다. 특정 태양에서, 본 발명의 면역자극성 ORN은 RNA이다. 그러나, 본 발명의 면역자극성 ORN은 하기에서 설명하는 바와 같이, RNA로 제한되지 않는다.

본 발명의 면역자극성 ORN은, 한 태양에서, 하나 이상의 변형된 핵염기, 즉, A, C, G 및 U의 유도체를 포함할 수 있다. 상기 변형된 핵염기의 특정 태양은 5-치환된 시토신(예를 들면, 5-메틸-시토신, 5-플루오로-시토신, 5-클로로-시토신, 5-브로모-시토신, 5-요오도-시토신, 5-하이드록시-시토신, 5-하이드록시메틸-시토신, 5-다이플루오로메틸-시토신, 및 비치환되거나 치환된 5-알키닐-시토신), 6-치환된 시토신, N4-치환된 시토신(예를 들면, N4-에틸-시토신), 5-아자-시토신, 2-머캅토-시토신, 아이소시토신, 슈도-아이소시토신, 축합된 고리 시스템을 갖는 시토신 유사체(예를 들면, N,N'-프로필렌 시토신 또는 페녹사진), 및 우라실 및 그의 유도체(예를 들면, 5-플루오로-우라실, 5-브로모-우라실, 5-브로모비닐-우라실, 4-티오-우라실, 5-하이드록시-우라실, 5-프로피닐-우라실), 티민 유도체(예를 들면, 2-티오티민, 4-티오티민, 6-치환된 티민), 구아노신 유도체(7-데아자구아닌, 7-데아자-7-치환된 구아닌(예를 들면, 7-데아자-7-(C2-C6)알키닐구아닌), 7-데아자-8-치환된 구아닌, 하이포잔틴, N2-치환된 구아닌(예를 들면, N2-메틸-구아닌), 8-치환된 구아닌(예를 들면, 8-하이드록시구아닌 및 8-브로모구아닌), 및 6-티오구아닌), 또는 아데노신 유도체(5-아미노-3-메틸-3H,6H-티아졸[4,5-d]피리미딘-2,7-다이온, 2,6-다이아미노퓨린, 2-아미노퓨린, 퓨린, 인돌, 아데닌, 치환된 아데닌(예를 들면, N6-메틸-아데닌, 8-옥소-아데닌))을 포함하나, 이로 한정되지는 않는다. 염기는 또한 보편적인 염기(예를 들면, 4-메틸-인돌, 5-나이트로-인돌, 3-나이트로피롤, P-염기 및 K-염기), 방향족 고리 시스템(예를 들면, 벤즈이미다졸 또는 다이클로로-벤즈이미다졸, 1-메틸-1H-[1,2,4]트리아졸-3-카복실산 아마이드), 방향족 고리 시스템(예를 들면, 플루오로벤젠 또는 다이플루오로벤젠) 또는 수소 원자(d스페이서)로 치환될 수 있다. 바람직한 염기 변형은 우라실 및 7-데아자-구아닌이다. 이들 변형된 U 핵염기 및 그의 상응하는 리보뉴클레오시드는 상업적 공급처에서 구입가능하다.

변형된 G 핵염기의 특정 태양은 N²-다이메틸구아닌, 7-데아자구아닌, 8-아자구아닌, 7-데아자-7-치환된 구아닌, 7-데아자-7-(C2-C6)알키닐구아닌, 7-데아자-8-치환된 구아닌, 8-하이드록시구아닌, 6-티오구아닌 및 8-옥소구아닌을 포함한다. 한 태양에서, 변형된 G 핵염기는 8-하이드록시구아닌이다. 이들 변형된 G 핵염기 및 그의 상응하는 리보뉴클레오시드는 상업적 공급처에서 구입가능하다.

특정 태양에서, 하나 이상의 β-리보스 단위는 β-D-데옥시리보스 또는 변형된 당 단위로 치환될 수 있으며, 이때 변형된 당 단위는, 예를 들면, β-D-리보스, α-D-리보스, β-L-리보스("스피겔머(Spiegelmer)"에서와 같이), α-L-리보스, 2'-아미노-2'-데옥시리보스, 2'-플루오로-2'-데옥시리보스, 2'-O-(C1-C6)알킬-리보스로부터 선택되고, 바람직하게 2'-O-(C1-C6)알킬-리보스는 2'-O-메틸리보스, 2'-O-(C2-C6)알케닐-리보스, 2'-[O-(C1-C6)알킬-O-(C1-C6)알킬]-리보스, LNA 및 α-LNA[Nielsen P. et al., Chemistry-A-European Journal, 8:712-722, 2002], βD-자일로-퓨라노스, α-아라비노퓨라노스, 2'-플루오로 아라비노퓨라노스, 및 카복실산 및/또는 개방쇄 당 유사체(예를 들면, 문헌 [Vandendriessche et al., Tetrahedron 49:7223, 1993]에 기술된) 및/또는 바이사이클로당 유사체(예를 들면, 문헌 [Tarkov M. et al., Helv CHim Acta 76:481, 1993]에 기술된)이다.

본 발명의 면역자극성 ORN의 개개 리보뉴클레오티드 및 리보뉴클레오시드는 대안적으로 비-뉴클레오티드 링커, 특히 비염기 링커(d스페이서), 트라이에틸렌 글라이콜 단위 또는 헥사에틸렌 글라이콜 단위에 의해 연결될 수 있다. 추가의 링커는 알킬아미노 링커, 예를 들면, C3, C6 및 C12 아미노링커, 및 또한 알킬티올 링커, 예를 들면, C3 또는 C6 티올 링커이다. 본 발명의 면역자극성 ORN의 개개 뉴클레오티드 및 리보뉴클레이시드는 대안적으로, 알킬 또는 치환된 알킬기로 더 치환될 수 있는 방향족 잔기에 의해 연결될 수 있다.

RNA는 3'-5' 포스포다이에스터 결합을 통해 연결된 리보뉴클레오티드의 중합체이다. 본 발명의 면역자극성 ORN의 뉴클레오티드는 또한 3'-5' 포스포다이에스터 결합을 통해 연결될 수 있다. 그러나, 본 발명은 또한 특히 5'-5', 3'-3', 2'-2', 2'-3' 및 2'-5' 뉴클레오티드간 결합을 포함하여, 비-통상적 뉴클레오티드간 결합을 갖는 면역자극성 ORN을 포함한다. 한 태양에서, 상기 비-통상적 결합은, 하나 이상의 상기 결합이 면역자극성 ORN 내의 어디에나 존재할 수 있을 지라도 면역자극성 RNA 모티프로부터 배제된다. 유리 말단을 갖는 면역자극성 ORN의 경우, 하나의 3'-3' 뉴클레오티드간 결합의 혼입은 2개의 유리 5' 말단을 갖는 면역자극성 ORN을 야기할 수 있다. 반대로, 유리 말단을 갖는 면역자극성 ORN의 경우, 하나의 5'-5' 뉴클레오티드간 결합의 혼입은 2개의 유리 3' 말단을 갖는 면역자극성 ORN을 야기할 수 있다.

본 발명의 면역자극성 조성물은 분지 단위를 통해 연결될 수 있는 2개 이상의 면역자극성 RNA 모티프를 함유할 수 있다. 뉴클레오티드간 결합은 3'-5', 5'-5', 3'-3', 2'-2', 2'-3' 또는 2'-5' 결합일 수 있다. 이때, 술어 2'-5'는 리보스의 탄소원자에 따라 선택된다. 비통상적 뉴클레오티드간 결합은 포스포다이에스터 결합일 수 있으나, 또는 포스포로티오에이트로서 또는 본원에 기술된 바와 같은 임의의 다른 변형된 결합으로서 변형될 수 있다. 하기의 식은 뉴클레오티드 분지 단위를 통한 본 발명의 분지된 면역자극성 ORN에 대한 일반 구조를 나타낸 것이다. 이때, Nu₁, Nu₂ 및 Nu₃은 3'-5', 5'-5', 3'-3', 2'-2', 2'-3' 또는 2'-5' 결합을 통해 연결될 수 있다. 면역자극성 ORN의 분지는 또한 비-뉴클레오티드 링커 및 비염기성 스페이서의 사용을 포함할 수 있다. 한 태양에서, Nu₁, Nu₂ 및 Nu₃은 같거나 다른 면역자극성 RNA 모티프를 나타낸다. 또 다른 태양에서, Nu₁, Nu₂ 및 Nu₃은하나 이상의 면역자극성 RNA 모티프 및 하나 이상의 면역자극성 CpG DNA 모티프를 포함한다.

면역자극성 ORN은 더블러(doubler) 또는 트레블러(trebler) 단위(글렌 리서치(Glen Research), 버지니아주 스텔링), 특히 3'-3' 결합을 갖는 면역자극성 ORN을 함유할 있다. 한 태양에서, 더블러 단위는 1,3-비스-[5-(4,4'-다이메톡시트리틸옥시)펜틸아미도]프로필-2-[(2-사이아노에틸)-(N,N-다이아이소프로필)]-포스포르아미다이트를 기초로 할 수 있다. 한 태양에서, 트레블러 단위는 트리스-2,2,2-[3-(4,4'-다이메톡시트리틸옥시)프로필옥시메틸]에틸-[(2-사이아노에틸)-(N,N-다이아이소프로필)]-포스포르아미다이트의 혼입을 기초로 할 수 있다. 다중 더블러, 트레블러 또는 다른 멀티플라이어 단위에 의한 면역자극성 ORN의 분지는 본 발명의 또 다른 태양인 덴드리머를 유도한다. 분지된 면역자극성 ORN은 면역자극성 ORN의 비-분지 형태에 비해 명백한 면역 효과를 갖는, 면역자극성 RNA에 대한 수용체, 예를 들면, TLR3, TLR7 및 TLR8의 가교결합을 유도할 수 있다. 또한, 분지되거나 또는 다량체 면역자극성 ORN의 합성은 RNA를 분해로부터 안정화시킬 수 있으며, 약하거나 부분적으로 효과적인 RNA 서열이 치료적으로 유용한 수준의 면역 활성을 나타내도록 할 수 있다. 면역자극성 ORN은 또한 펩티드 변형 시약 또는 올리고뉴클레오티드 변형 시약(글렌 리서치)으로부터 비롯된 링커 단위를 함유할 수 있다. 또한, 면역자극성 ORN은 펩티드(아마이드) 결합에 의해 중합체에 연결된 하나 이상의 천연 또는 비천연 아미노산 잔기를 함유할 수 있다.

3'-5', 5'-5', 3'-3', 2'-2', 2'-3' 및 2'-5' 뉴클레오티드간 결합은 직접적이거나 간접적일 수 있다. 이와 관련하여 직접 결합은 중간의 링커 잔기없이, 본원에 개시된 바와 같은 포스페이트 또는 변형된 포스페이트 결합을 말한다. 중간 링커 잔기는 본원에 개시된 바와 같은 포스페이트 또는 변형된 포스페이트 결합과 별개의 유기 잔기로서, 이것은, 예를 들면, 폴리에틸렌 글라이콜, 트라이에틸렌 글라이콜, 헥사에틸렌 글라이콜, d스페이서(즉, 비염기성 데옥시뉴클레오티드), 더블러 단위 또는 트레블러 단위를 포함할 수 있다.

특정 태양에서, 면역자극성 ORN은 또 다른 존재에 결합되어 결합체를 제공한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 결합체는 소수성 상호작용 및 공유 커플링을 포함하여 임의의 물리화학적 수단에 의해 서로에 결합된 임의의 2개 이상의 존재의 조합을 말한다.

또 다른 태양에서, 면역자극성 ORN은 면역조절 수용체에 의해 인지되는 저분자량 리간드에 결합될 수 있다. 상기 수용체는 바람직하게는 TLR 부류의 구성원, 예를 들면, TLR2, TLR3, TLR4, TLR7, TLR8 또는 TLR9이다. 저분자량 리간드는 이들 수용체에 대한 천연 리간드의 모방체이다. 예로는 R-848(레시퀴모드(Resiquimod)), R-837(이미퀴모드(Imiquimod); 알다라(ALDARA, 등록상표), 3M 파마슈티칼스), 7-데아자-구아노신, 7-티아-8-옥소-구안소신, 및 TLR7 또는 TLR8을 자극하는 7-알릴-8-옥소-구안소신(록소리빈(Loxoribine))이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. D-글루코피라노스 유도체, 예를 들면, 3D-MPL(TLR4 리간드)도 또한 면역자극성 ORN에 결합될 수 있다. Pam3-시스는 면역자극성 ORN에 결합될 수 있는 TLR2 리간드의 한 예이다. CpG 모티프를 함유하는 올리고데옥시뉴클레오티드는 TLR9 리간드이고, 이들은 또한 본 발명의 면역자극성 ORN에 결합될 수 있다. 한 태양에서, TLR9 신호전달을 자극하는데 효과적인 CpG 모티프를 포함하는 하나 이상의 올리고데옥시뉴클레오티드가 본 발명의 면역자극성 ORN에 결합된다. 한 분자에 상이한 TLR에 대한 리간드들의 결합은 수용체들의 다량체화를 유도하여, 증대된 면역 자극 또는 임의의 단일 상기 리간드로부터 비롯되는 바와 상이한 면역자극 프로필을 야기할 수 있다.

한 태양에서, 본 발명은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 친유성 잔기의 결합체를 제공한다. 특정 태양에서, 면역자극성 ORN은 친유성 잔기에 공유 결합된다. 친유성 잔기는 일반적으로 유리 말단을 갖는 면역자극성 ORN의 하나 이상의 말단에서 존재하지만, 특정 태양에서, 친유성 잔기는 면역자극성 ORN을 따라 어디에나 존재할 수 있으므로 면역자극성 ORN이 유리 말단을 가질 필요는 없다. 한 태양에서, 면역자극성 ORN은 3' 말단을 가지며, 친유성 잔기는 3' 말단에 공유 결합된다. 친유성기는 일반적으로 콜레스테릴, 변형된 콜레스테릴, 콜레스테롤 유도체, 환원된 콜레스테롤, 치환된 콜레스테롤, 콜레스탄, C16 알킬쇄, 담즙산, 콜산, 타우로콜산, 데옥시콜레이트, 올레일 리토콜산, 올레오일 콜렌산, 당지질, 인지질, 스핑고지질(sphingolipid), 이소프레노이드, 예를 들면, 스테로이드, 바이타민, 예를 들면, 바이타민 E, 포화지방산, 불포화지방산, 지방산 에스터, 예를 들면, 트라이글리세라이드, 피렌, 포피린, 텍사피린, 아다만테인, 아크리딘, 비오틴, 쿠마린, 플루오레세인, 로다민, 텍스사-레드(Texas-Red), 다이곡시제닌, 다이메톡시트리틸, t-뷰틸다이메틸실릴, t-뷰틸다이페닐실릴, 사이아닌 염료(예를 들면, Cy3 또는 Cy5), 훽스트(Hoechst) 33258 염료, 프소랄렌 또는 이부프로펜일 수 있다. 특정 태양에서, 친유성 잔기는 콜레스테릴, 팔미틸 및 지방산으로부터 선택된다. 한 태양에서, 친유성 잔기는 콜레스테릴이다. 본 발명의 면역자극성 ORN중 하나 이상의 상기 친유성 잔기의 혼입은 뉴클레아제에 의한 분해에 대해 추가의 안정성을 부여하는 것으로 생각된다. 본 발명의 단일 면역자극성 ORN에 2개 이상의 친유성 잔기가 존재하는 경우, 각각의 친유성 잔기는 서로 독립적으로 선택될 수 있다.

한 태양에서, 친유성기는 면역자극성 ORN의 뉴클레오티드의 2'-위치에 결합된다. 친유성기는 양자택일적으로 또는 그에 더해 면역자극성 ORN의 뉴클레오티드의 헤테로사이클릭 핵염기에 결합될 수 있다. 친유성 잔기는 임의의 적당한 직접 또는 간접적 결합을 통해 면역자극성 ORN에 공유 결합될 수 있다. 한 태양에서, 상기 결합은 직접 결합이며 에스터 또는 아마이드이다. 한 태양에서, 상기 결합은 간접 결합이며, 스페이서 잔기, 예를 들면, 하나 이상의 비염기성 뉴클레오티드 잔기, 올리고에틸렌글라이콜, 예를 들면, 트라이에틸렌글라이콜(스페이서 9) 또는 헥사에틸렌글라이콜(스페이서 18), 또는 알케인-다이올, 예를 들면, 뷰테인다이올을 포함한다.

한 태양에서, 본 발명의 면역자극성 ORN은 양이온성 지질 또는 양이온성 펩티드와 결합되는 것이 유리하다. 양이온성 지질 및 양이온성 펩티드는 면역자극성 ORN이 TLR8이 발견되는 이입소체 구획(endosomal compartment)내로 수송되는 것을 촉진하는 것으로 생각된다. 한 태양에서, 양이온성 지질은 DOTAP(N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄 메틸-설페이트)이다. DOTAP는 RNA 올리고머를 세포내로 운반하고 특히 이입소체 구획으로 수송하는 것으로 생각되며, 이입소체 구획에서 DOTAP는 RNA 올리고머를 pH-의존성 방식으로 방출할 수 있다. 일단, 이입소체 구획에서, RNA는 특정 세포내 TLR과 상호작용하여 면역 반응을 일으키는데 수반되는 TLR-매개 신호 전달 경로를 유발할 수 있다. 이입소체 구획으로의 수송을 포함하여 유사한 성질을 갖는 다른 물질을 DOTAP 대신 또는 그 외에 더 사용할 수 있다. 다른 지질 제형으로는, 예를 들면, 이펙틴(EFFECTENE, 등록상표)(특정 DNA 축합 증강제를 갖는 비-리포솜 지질) 및 슈퍼펙트(SUPERFECT, 등록상표)(새로운 활성 덴드리머 기술)가 포함된다. 리포솜은 깁코(Gibco) BRL로부터, 예를 들면, 리포펙틴(LIPOFECTIN, 등록상표) 및 리포펙테이스(LIPOFECTACE, 등록상표)로 상업적으로 시판하며, 이들은 N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)-프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄 클로라이드(DOTMA) 및 다이메틸 다이옥타데실암모늄 브로마이드(DDAB)와 같은 양이온성 지질로 이루어진다. 리포솜 제조 방법은 당해 분야에 공지되어 있으며, 많은 출판물에 기술되어 있다. 리포솜은 또한 문헌 [Gregoriadis G, Trends Biotechnol 3:235-241, 1985]에서 고찰되었다.

한 태양에서, 본 발명의 면역자극성 ORN은 1급 및 2급 구조를 둘 다 갖는, 공유적으로 닫힌 아령형 분자의 형태이다. 하기에서 설명하는 바와 같이, 한 태양에서, 상기 환상 올리고리보뉴클레오티드는 중간 이중-가닥 단편에 의해 연결된 2개의 단일-가닥 루프를 포함한다. 한 태양에서, 하나 이상의 단일-가닥 루프는 본 발명의 면역자극성 RNA를 포함한다. 본 발명의 다른 공유적으로 닫힌 아령형 분자는, 예를 들면, 이중-가닥 단편이 적어도 부분적으로 DNA(예를 들면, 동종이량체성 dsDNA 또는 헤테로이량체성 DNA:RNA)이고 하나 이상의 단일-가닥 루프가 본 발명의 면역자극성 RNA 모티프를 포함하는 키메라성 DNA:RNA 분자를 포함한다. 또는, 키메라 분자의 이중 가닥 단편은 RNA이다.

특정한 태양에서, 면역자극성 ORN을 분리한다. 분리된 분자는 실질적으로 순수하고 통상적으로 천연에서 또는 생체내 시스템에서 그의 의도한 용도에 실제적이고 적절한 정도로 발견되는 다른 물질들이 없는 분자이다. 특히, 면역자극성 ORN은 충분히 순수하며, 예를 들면, 약학 제제를 생성하는데 유용하도록 세포의 다른 생물학적 구성물을 거의 함유하지 않는다. 본 발명의 분리된 면역자극성 ORN은 약학 제제에서 약학적으로 허용되는 담체와 혼합될 수 있기 때문에, 면역자극성 ORN은 제제의 적은 중량% 만을 차지할 수 있다. 그럼에도 불구하고, 면역자극성 ORN은 생체 시스템에서 결합될 수 있는 물질과 실질적으로 분리되었다는 점에서 실질적으로 순수하다.

본 발명에 사용하기 위해, 본 발명의 면역자극성 ORN은 당해 분야에 공지된 많은 임의의 절차를 이용하여 또는 상기 절차로부터 변형하여 새로 합성할 수 있다. 예를 들면, β-사이아노에틸 포스포르아미다이트 방법[Beaucage SL et al., Tetrahedron Lett 22:1859, 1981]; 뉴클레오시드 H-포스포네이트 방법[Garegg P et al., Tetrahedron Lett 27:4051-4054, 1986; Froehler BC et al., Nucl Acid Res 14:5399-5407, 1986; Garegg P et al., Tetrahedron Lett 27:4055-4058, 1986; Gaffney BL et al., Tetrahedron Lett 29:2619-2622, 1988]. 상기 화학적방법은 시중에서 시판하는 다양한 자동 핵산 합성기에 의해 수행될 수 있다. 본 발명에 따라 유용한 또 다른 합성 방법은 문헌 [Uhlmann E et al., Chem Rev 90:544-584, 1990; and Goodchild J, Bioconjugate Chem 1:165, 1990]에 개시되어 있다.

올리고리보뉴클레오티드 합성은 용액으로 또는 고체상 지지체 상에서 수행될 수 있다. 용액으로, 블록 커플링 반응(이량체, 삼량체, 사량체 등)이 바람직한 반면, 고체상 합성은 바람직하게는 단량체 구성 블록을 사용하는 단계적 과정으로 수행한다. 포스포트라이에스터 방법, H-포스포네이트 방법 및 포스포르아미다이트 방법과 같은 다양한 화학적방법이 기술되었다[Eckstein F, Oligomucleotides and Analogues, A Practical Approach, IRL, Press, Oxford, 1991]. 포스포트라이에스터 방법에서는 반응성 인 기가 산화 상태 +V로 존재하는 반면, 보다 반응성인 인 +III 유도체는 포스포르아미다이트 및 H-포스포네이트 접근방법에 따라 커플링 반응에 사용된다. 후자의 두 접근방법에서는, 인을 커플링 단계후에 산화시켜 안정한 P(V) 유도체를 수득한다. 산화제가 요오드/물/염기인 경우, 탈보호후 포스포다이에스터가 수득된다. 대조적으로, 산화제가 뷰케이지(Beaucage) 시약과 같은 침화제(sulfurizing agent)인 경우, 탈보호후에 포스포로티오에이트가 수득된다.

올리고리보뉴클레오티드 합성에 효과적인 방법은 올리고데옥시뉴클레오티드에 대해 문헌 [Matteucci and Caruthers, J Am Chem Soc 103:3185, 1981]에 원래 기술된 바와 같은 포스포르아미다이트 화학방법을 이용한 고체-지지체 합성법의 조합이다.

올리고리보뉴클레오티드의 합성은 올리고리보뉴클레오티드에 존재하는 2'-하이드록시기를 적절한 하이드록시 보호기로 보호해야 하는 것을 제외하고, 올리고데옥시뉴클레오티드와 유사하다. 단량체는, 예를 들면, RNA 단량체 구성 블록중 2'-O-t-뷰틸다이메틸실릴(TBDMS)기에 의해 보호될 수 있다. 그러나, 2'-O-트라이아이소프로필실릴옥시메틸(TOM)기(TOM-보호기, 등록상표)를 함유하는 단량체를 사용한 RNA 합성법에 의해 보다 높은 커플링 효율이 얻어지는 것으로 보고되었는데, 그 이유는 TOM-보호기가 TBDMS기보다 입체 장애를 덜 나타내기 때문이다. TBDMS 보호기를 플루오라이드를 사용하여 제거하는 동안, 실온에서 에탄올/물중 메틸아민을 사용하여 TOM 기에 신속한 탈보호가 달성된다. 올리고(리보)뉴클레오티드 합성에서, 3'-에서 5'-말단으로의 쇄 연장이 바람직하며, 이것은 3'-인(III) 기 또는 그의 활성화된 유도체를 갖는 리보뉴클레오티드 단위를 또 다른 뉴클레오티드 단위의 5'-하이드록시기에 커플링시켜 달성된다.

합성은 자동화 DNA/RNA 합성기를 이용하여 편리하게 수행할 수 있다. 이때, 합성기 공급자가 권장하는 바와 같은 합성 주기를 이용할 수 있다. 리보뉴클레오시드 포스포르아미다이트 단량체의 경우, 커플링 시간은 데옥시뉴클레오시드 단량체에 비해 더 길다(예를 들면, 400 초). 고체 지지체로서, 500 내지 1000 Å의 기공 조절 유리(CPG) 지지체 또는 유기 중합체 지지체, 예를 들면, 프라이머 지지체 PS200(아머샴(Amersham))을 사용할 수 있다. 고체 지지체는 통상적으로 그의 3'-말단에 결합된 제 1 뉴클레오시드, 예를 들면, 5'-O-다이메톡시트리틸-N-6-벤조일아데노신을 함유한다. 트라이클로로아세트산으로 5'-O-다이메톡시트리틸을 분리한 후, 예를 들면, 5'-O-다이메톡시트리틸-N-보호된-2'-O-3급-뷰틸다이메틸실릴-뉴클레오시드-3'-O-포스포르아미다이트를 사용하여 쇄 연장을 달성한다. 연속적인 반복 주기후에, 완성된 올리고리보뉴클레오티드를 지지체로부터 분리하고, 30 ℃에서 24 시간동안 진한 암모니아/에탄올(3:1, v/v)로 처리하여 탈보호시킨다. TBDMS 차단 기는 최종적으로 트라이에틸아민/HF를 사용하여 분리시킨다. 조 올리고리보뉴클레오티드는 이온 교환 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 이온-쌍 역상 HPLC, 또는 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동(PAGE)에 의해 정제하고 질량 분광법으로 특성화할 수 있다.

5'-결합체의 합성은 고체상 합성에서 말단 뉴클레오티드의 5'-하이드록시기에 접합될 분자의 포스포르아미다이트를 커플링시킴으로써 간단하다. 상기 리간드의 다양한 포스포르아미다이트 유도체, 예를 들면, 콜레스테롤, 아크리딘, 비오틴, 프소랄렌, 에틸렌글라이콜 또는 아미노알킬 잔기는 상업적으로 시판한다. 또는, 아미노알킬 작용기를 고체상 합성중에 도입할 수 있는데, 이로 인해 활성화된 결합체 분자, 예를 들면, 활성 에스터, 아이소티오시아네이트 또는 요오도-아세트아마이드에 의한 합성후 유도체화가 가능하다.

3'-말단 결합체의 합성은 통상적으로 상응하게 변형된 고체 지지체, 예를 들면, 상업적으로 시판하는 콜레스테롤-유도체화 고체 지지체를 사용하여 달성된다. 그러나, 결합은 또한 뉴클레오티드간 결합, 핵염기 또는 리보스 잔기에서, 예를 들면, 리보스의 2'-위치에서 수행될 수 있다.

환상 올리고리보뉴클레오티드의 경우, 올리고뉴클레오티드 쇄의 연장은 표준 포스포르아미다이트 화학을 이용하여 뉴클레오티드 PS 고체 지지체(글렌 리서치) 상에서 수행할 수 있다. 이어서, 포스포트라이에스터 커플링 절차[Alazzouzi et al., Nucleosides Nucleotides 16:1513-1514, 1997]를 이용하여 고체 지지체 상에서 환화 반응을 수행한다. 수산화암모늄으로 최종 탈보호시, 실질적으로 용액으로 생성되는 생성물 만이 목적하는 환상 올리고뉴클레오티드이다.

본 발명의 환상 올리고리보뉴클레오티드는 닫힌 원형 형태의 RNA를 포함하며, 이중-가닥 RNA의 존재 또는 부재하에 단일-가닥 RNA를 포함할 수 있다. 예를 들면, 한 태양에서, 환상 올리고리보뉴클레오티드는 이중-가닥 RNA를 포함하며, 중간 이중-가닥 단편에 의해 연결된 2개의 단일-가닥 루프를 갖는 아령형 구조를 취한다. 공유적으로 닫힌, 아령형 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드는 미국 특허 제 6,849,725 호에 기술되었다. 또 다른 태양에서, 환상 올리고뉴클레오티드는 이중-가닥 RNA를 포함하며, 중간 이중-가닥 단편에 의해 연결된 3개 이상의 단일-가닥 루프를 갖는 구조를 취한다. 한 태양에서, 면역자극성 RNA 모티프는 하나 이상의 단일-가닥 단편에 위치한다.

본 발명의 면역자극성 ORN은 단독으로 또는 다른 약제와 함께 보조제로서 유용하다. 본원에서 사용되는 바와 같은 보조제는 항원에 대해 면역세포 활성화, 예를 들면, 체액 및/또는 세포 면역 반응을 증대시키는 항원 이외의 다른 물질을 말한다. 보조제는 보조 세포의 축적 및/또는 활성화를 촉진하여 항원-특이적 면역 반응을 증대시킨다. 보조제는 백신, 즉, 항원에 대해 보호 면역을 유도하기 위해 사용되는 항원-함유 조성물의 효능을 증대시키기 위해 사용된다.

보조제에는 일반적으로 데포 효과를 제공하는 보조제, 면역자극 보조제, 및 데포 효과를 제공하고 면역계를 자극하는 보조제가 포함된다. 본원에서 사용된 바와 같이 데포 효과를 야기하는 보조제는 항원이 체내에서 서서히 방출되게 하여, 면역세포가 항원에 노출되는 것을 지연시키는 보조제이다. 상기 부류의 보조제로는 명반(예를 들면, 수산화알루미늄, 인산알루미늄); 광유, 비-광유, 유중수적형 또는 수중유적형 유화액, 수중유적형 유화액, 예를 들면, 세픽(Seppic) ISA 계열의 몬타나이드(Montinide) 보조제(예를 들면, 몬타나이드 ISA 720; 에어리퀴드(AirLiquide), 프랑스 파리)를 포함한 유화계 제형; MF-59(스판(Span) 85 및 트윈(Tween) 80으로 안정화시킨 수중 스쿠알렌형 유화액; 카이론 코포레이션(Chiron Corp.), 캘리포니아주 에머리빌); 및 프로박스(PROVAX)(안정화 세제 및 미셀 형성제를 함유하는 수중유적형 유화액; 아이데크 파마슈티칼스 코포레이션(IDEC Pharmaceuticals Corp.), 캘리포니아주 샌디에고)가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

면역자극 보조제는 면역계 세포의 활성화를 야기하는 보조제이다. 상기 보조제는, 예를 들면, 면역 세포가 사이토카인을 생성하고 분비하게 한다. 상기 부류의 보조제로는 사포나리아(Q. saponaria) 나무의 나무껍질로부터 정제된 사포닌, 예를 들면, QS21(HPLC 분류에서 21번째 피크에서 용출되는 당지질; 아퀼라 바이오파마슈티칼스, 인코포레이티드(Aquila Biopharmaceuticals, Inc.), 매사추세츠주 워세스터); 폴리[다이(카복실레이토페녹시)포스파젠(PCPP 중합체; 바이러스 리서치 인스티튜트(Virus Research Institute), 미국); 리포폴리사카라이드의 유도체, 예를 들면, 모노포스포릴 지질 A(MPL; 리비 임뮤노켐 리서치 인코포레이티드(Ribi ImmunoChem Research, Inc.), 몬태나주 해밀턴), 뮤라밀 다이펩티드(MDP; 리비) 및 트레오닐-뮤라밀 다이펩티드(t-MDP; 리비); OM-174(지질 A와 관련된 글루코사민 다이사카라이드; OM Pharma SA, 스위스 메이린); 및 리슈마니아(Leishmania) 연장 인자(정제된 리슈마니아 단백질; 코릭사 코포레이션(Corixa Corp.), 워싱턴주 시애틀)가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 상기 부류의 보조제는 또한 CpG DNA를 포함한다.

데포 효과를 제공하고 면역계를 자극하는 보조제는 상기 정의한 기능 둘 다를 갖는 화합물들이다. 상기 부류의 보조제로는 이스콤스(ISCOMS)(혼합 사포닌, 지질을 함유하고, 항원을 유지할 수 있는 기공을 갖는 바이러스-크기 입자를 형성하는 면역자극 복합체; CSL, 호주 멜버른); SB-AS2(MPL 및 QS21을 함유하는 수중유적형 유화액인 스미스클라인 비챔(SmithKline Beecham) 보조제 시스템 #2; 스미스클라인 비챔 바이올로지칼스[SBB], 벨기에 리센사르); 미셀을 형성하는 비-이온성 블록 공중합체, 예를 들면, CRL 1005(이들은 폴리옥시에틸렌 쇄에 인접된 소수성 폴리옥시프로필렌의 선형 쇄를 함유한다; 박셀 인코포레이티드(Vaxcel, Inc.), 캐나다 노르크로스); 및 신텍스 보조제 제형(Syntex Adjuvant Formulation)(SAF, 트윈 80 및 비이온성 블록 공중합체를 함유하는 수중유적형 유화액; 신텍스 케미칼스 인코포레이티드(Syntex Chemicals, Inc.), 콜로라도주 볼더)이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

본 발명은, 한 태양에서, 본 발명의 면역자극성 ORN 자체를 포함하는 보조제를 제공한다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 하나 이상의 다른 보조제를 포함하는 보조제(혼합 보조제)를 제공한다. 다른 보조제로는 데포 효과를 제공하는 보조제, 면역자극 보조제, 데포 효과를 제공하고 면역계를 자극하는 보조제, 및 그의 임의의 혼합물이 포함될 수 있다. 한 태양에서, 본 발명의 면역자극성 ORN 및 하나 이상의 다른 보조제는 서로 공유 결합될 수 있다. 본 발명에 따른 혼합 보조제는 면역자극성 ORN 단독 및 하나 이상의 다른 보조제 단독의 효과를 합한 것에 비해 상승적인 면역자극 효과를 나타낼 수 있다. 게다가 또는 대안적으로, 본 발명에 따른 혼합 보조제는 면역자극성 ORN 단독 또는 하나 이상의 다른 보조제 단독에 비해 변화된 면역자극 프로필을 나타낼 수 있다. 예를 들면, 혼합 보조제는 한 태양에서 보다 균형잡힌 형태의 Th1/Th2 면역자극을 제공할 수 있거나, 또는 또 다른 태양에서는 보다 비대칭인 형태의 Th1/Th2 면역자극을 제공할 수 있다. 당해 분야에 숙련된 자라면 바람직한 유형의 면역자극, 예를 들면, Th1 및 Th2 특성에 대해 보다 균형잡히거나 보다 비대칭인 면역자극을 촉진하도록 개개 성분들을 선택하는 방법을 인지할 것이다. Th1 및 Th2는 하기에서 더 설명한다.

본 발명의 면역자극성 ORN 및 또 다른 보조제를 포함하는 조성물로서 상기 또 다른 보조제가 사이토카인인 조성물도 또한 제공된다. 한 태양에서, 조성물은 본 발명의 면역자극성 ORN과 사이토카인의 결합체이다.

사이토카인은 염증 및 면역 반응을 매개하는 많은 유형의 세포에 의해 생성된 가용성 단백질 및 당단백질이다. 사이토카인은 면역계 세포들 사이의 전달을 매개하여 국소적으로 및 전신적으로 작용하여 세포를 보충하고 그의 기능 및 증식을 조절한다. 사이토카인의 종류로는 선천성 면역의 매개제 및 조절제, 획득성 면역의 매개제 및 조절제, 및 조혈작용의 자극제가 포함된다. 사이토카인에는 인터류킨(예를 들면, 특히, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, 및 인터류킨 19 내지 32(IL-19 내지 IL-32)), 케모카인(예를 들면, 특히, IP-10, 란테스(RNATES), MIP-1α, MIP-1β, MIP-3α, MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4, 에오탁신, I-TAC, 및 BCA-1), 및 1형 인터페론(예를 들면, IFN-α 및 IFN-β), 2형 인터페론(예를 들면, IFN-γ), 종양괴사인자-알파(TNF-α), 전환 성장인자-베타(TGF-β)를 포함한 기타 사이토카인, 및 GM-CSF, G-CSF 및 M-CSF를 포함하여 다양한 콜로니 자극 인자(CSF)가 포함된다.

본 발명의 면역자극성 ORN 및 면역자극성 CpG 핵산을 포함하는 조성물도 또한 제공된다. 한 태양에서, 상기 조성물은 본 발명의 면역자극성 ORN과 CpG 핵산의 결합체, 예를 들면, RNA:DNA 결합체이다. 한 태양에서, 상기 조성물은 본 발명의 면역자극성 ORN과 CpG 핵산의 혼합물이다, 즉, RNA:DNA 결합체가 아니다.

본원에서 사용된 바와 같이, 면역자극성 CpG 핵산은 CpG 모티프를 포함하고 면역계 세포의 활성화 또는 증식을 자극하는 천연 또는 합성 DNA 서열을 말한다. 면역자극성 CpG 핵산은 미국 특허 제 6,194,388; 6,207,646; 6,214,806; 6,218,371; 6,239,116 및 6,339,068 호를 포함하여, 많은 허여된 특허, 공개된 특허출원 및 기타 출판물에 기재되었다. 한 태양에서, 면역자극성 CpG 핵산은 6 내지 100개 뉴클레오티드 길이의 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드(CpG ODN)이다. 한 태양에서, 면역자극성 CpG 핵산은 8 내지 40개 뉴클레오티드 길이의 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드(CpG ODN)이다.

면역자극성 CpG 핵산은 상이한 부류의 CpG 핵산을 포함한다. 한 부류는 B 세포를 활성화시키는데는 유효하지만 IFN-α 및 NK 세포 활성화를 유도하는데는 비교적 약하며, 상기 부류는 B 부류로 지칭되었다. B 부류 CpG 핵산은 전형적으로 완전히 안정화되고 특정한 바람직한 염기 배경내에 비메틸화 CpG 다이뉴클레오티드를 포함한다(예를 들면, 미국 특허 제 6,194,388; 6,207,646; 6,214,806; 6,218,371; 6,239,116 및 6,339,068 호를 참조하시오). 또 다른 부류는 IFN-α 및 NK 세포 활성화를 유도하는데에는 유효하지만, B 세포를 자극하는데에는 비교적 약하며, 상기 부류는 A 부류로 지칭되었다. A 부류 CpG 핵산은 전형적으로 6개 이상의 뉴클레오티드의 회문형(palindrome) 포스포다이에스터 CpG 다이뉴클레오티드-함유 서열, 및 5' 및 3' 말단중 어느 하나 또는 둘 다에 안정화된 폴리-G 서열을 갖는다(예를 들면, 공개된 국제 특허출원 WO 01/22990 호를 참조하시오). 또 다른 부류의 CpG 핵산은 B 세포 및 NK 세포를 활성화시키고 IFN-α를 유도하며; 상기 부류는 C 부류로 지칭되었다. 처음 특성화된 바와 같이 C 부류의 CpG 핵산은 전형적으로 완전히 안정화되고, B 부류 유형의 서열 및 GC-풍부 회문 또는 거의 회문형 서열을 포함한다. 상기 부류는 본원에 참고로 인용된, 공개된 미국 특허출원 제 2003/0148976 호에 기술되었다.

면역자극성 CpG 핵산은 또한, 본원에 참고로 인용된 공개 미국 특허출원 제 2003/0148976 호에 개시된 바와 같이, 소위 연질 및 반-연질 CpG 핵산을 포함한다. 상기 연질 및 반-연질 면역자극성 CpG 핵산은 뉴클레아제-내성 및 뉴클레아제-민감성 뉴클레오티드간 결합의 조합을 혼입하며, 이때 상이한 유형의 결합이 특정 규칙에 따라 배치된다.

본 발명의 면역자극성 ORN 및 또 다른 보조제를 포함하는 조성물이 또한 제공되며, 이때 다른 보조제는 리포펩티드, 예를 들면, Pam3Cys, 양이온성 폴리사카라이드, 예를 들면, 키토산, 또는 양이온성 펩티드, 예를 들면, 프로타민이다. 한 태양에서, 조성물은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 다른 보조제의 결합체이다.

본 발명은, 한 태양에서, 본 발명의 면역자극성 ORN 및 항원을 포함하는 백신을 제공한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "항원"은 T-세포 항원 수용체 또는 B-세포 항원 수용체에 의해 인지될 수 있는 임의의 분자를 말한다. 상기 용어는 광범위하게 숙주 면역계에 의해 외부물질로 인지되는 임의 유형의 분자를 포함한다. 항원은 일반적으로 세포, 세포 추출물, 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 폴리사카라이드, 폴리사카라이드 결합체, 폴라사카라이드 및 다른 분자의 펩티드 및 비-펩티드 유사체, 소분자, 지질, 당지질, 폴리사카라이드, 탄수화물, 바이러스 및 바이러스 추출물, 및 다세포성 유기체, 예를 들면, 기생충, 및 알레르겐을 포함한다. 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드인 항원과 관련하여, 상기 항원은 상기 항원을 암호화하는 핵산 분자를 포함할 수 있다. 항원은 보다 특히, 암 세포, 및 암 세포중에서 또는 암 세포 상에서 발현되는 분자를 포함하는 암 항원; 미생물 및 미생물중에서 또는 미생물상에서 발현되는 분자를 포함하는 미생물 항원; 및 알레르겐을 포함한다. 따라서, 본 발명은 특정 태양에서 암을 위한 백신, 감염성 물질 및 알레르겐을 제공한다.

본 발명은, 한 태양에서, 대상을 백신접종하기 위한 약제의 제조를 위한 본 발명의 면역자극성 ORN의 용도를 제공한다.

한 태양에서, 본 발명은 백신의 제조 방법을 제공한다. 상기 방법은 본 발명의 면역자극성 ORN을 항원, 및 선택적으로 약학적으로 허용되는 담체와 균질하게 혼합하는 단계를 포함한다.

다양한 태양에서, 항원은 미생물 항원, 암 항원 또는 알레르겐이다. 본원에서 사용된 바와 같이, "미생물 항원"은 미생물의 항원이며, 바이러스, 세균, 기생충 및 진균을 포함하나, 이로 한정되지는 않는다. 상기 항원은 비손상 미생물, 및 그의 천연 분리균 및 단편 또는 유도체, 및 또한 천연 미생물 항원과 동일하거나 유사하고 미생물 항원에 특이적인 면역 반응을 유도하는 합성 화합물을 포함한다. 화합물은 천연 미생물 항원에 대해 면역 반응(체액성 및/또는 세포성)을 유도하는 경우 천연 미생물 항원과 유사하다. 상기 항원은 당해 분야에서 통상적으로 사용되며, 당해 분야에 통상의 기술을 가진 자에게 공지되어 있다.

바이러스는 일반적으로 핵산 코어 및 단백질 외피를 함유하지만 독립적으로 살아있는 유기체가 아닌 소 감염성 물질이다. 바이러스는 또한 단백질이 없는 감염성 핵산의 형태를 가질 수 있다. 바이러스는 그것이 복제될 수 있는 살아있는 세포가 없이는 생존할 수 없다. 바이러스는 세포내유입(endocytosis) 또는 DNA(파아지)의 직접 주입에 의해 특정한 살아있는 세포에 들어가 증식하여 질환을 유발한다. 이어서, 증식된 바이러스는 방출되고 다른 세포를 감염시킬 수 있다. 일부 바이러스는 DNA-함유 바이러스이며, 다른 바이러스는 RNA-함유 바이러스이다. 일부 태양에서, 본 발명은 또한, 예를 들면, 광우병(즉, 미친소 질환, BSE) 또는 동물에서 스크래피(scrapie) 감염 또는 인간에서 크로이츠펠트-야콥병과 같은 질환의 진행에 프리온이 관련되는 질환을 치료하기 위한 것이다.

바이러스로는 엔테로바이러스(피코르나바이러스과(picornaviridae)의 바이러스, 예를 들면, 폴리오 바이러스, 콕사키 바이러스, 에코 바이러스를 포함하나, 이로 한정되지는 않는다), 로타바이러스, 아데노바이러스, 간염 바이러스가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 인간에서 발견된 바이러스의 특정 예로는 다음이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다: 레트로바이러스과(Retroviridae)(예를 들면, 인간 면역결핍 바이러스, 예를 들어, HIV-1(HTLV-III, LAV 또는 THLV-III/LAV 또는 HIV-III으로도 지칭됨) 및 기타 분리균, 예를 들어, HIV-LP); 피코르나바이러스과(Picornaviridae)(예를 들면, 폴리오 바이러스, A형 간염 바이러스, 엔테로바이러스, 인간 콕사키 바이러스, 리노바이러스, 에코바이러스); 칼시바이러스과(Calciviridae)(예를 들면, 위장염을 유발하는 균주); 토가바이러스과(Togaviridae)(예를 들면, 말 뇌염 바이러스, 풍진 바이러스); 플라비바이러스과(Flaviviridae)(예를 들면, 뎅기열 바이러스, 뇌염 바이러스, 황열병 바이러스); 코로나바이러스과(Coronaviridae)(예를 들면, 코로나바이러스); 라브도바이러스과(Rhabdoviridae)(예를 들면, 수포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스); 필로바이러스과(Filoviridae)(예를 들면, 에볼라 바이러스); 파라믹소바이러스과(Paramyxoviridae)(예를 들면, 파라인플루엔자 바이러스, 이하선염 바이러스, 홍역 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스); 오르토믹소바이러스과(Orthomyxoviridae)(예를 들면, 인플루엔자 바이러스); 분야바이러스과(Bunyaviridae)(예를 들면, 한탄 바이러스, 분야 바이러스, 플레보바이러스 및 나이로 바이러스); 아레나바이러스과(Arenaviridae)(출혈열 바이러스); 레오바이러스과(Reoviridae)(예를 들면, 레오바이러스, 오르비바이러스 및 로타바이러스); 비르나바이러스과(Birnaviridae); 헤파드나바이러스과(Hepadnaviridae)(B형 간염 바이러스); 파보바이러스과(Parvoviridae)(파보바이러스); 파포바바이러스과(Papovaviridae)(파필로마바이러스, 폴리오마 바이러스); 아데노바이러스과(Adenoviridae)(대부분의 아데노바이러스); 헤르페스바이러스과(Herpesviridae)(단순포진 바이러스(HSV) 1 및 2, 수두-대상포진 바이러스, 사이토메갈로바이러스(CMV)); 폭스바이러스과(Poxviridae)(천연두 바이러스, 백시니아 바이러스, 수두 바이러스); 이리도바이러스과(Iridoviridae)(예를 들면, 아프리카 돼지 콜레라 바이러스); 및 분류되지 않은 바이러스(예를 들면, 광우병의 원인 병원체, 델타 간염의 병원체(B형 간염 바이러스의 결함성 부수체인 것으로 생각됨), 비-A형, 비-B형 간염의 병원체(부류 1 = 체내 전염; 부류 2 = 비경구 전염(즉, C형 간염)); 노르워크(Norwalk) 및 관련 바이러스, 및 아스트로바이러스).

세균은 이분열에 의해 무성으로 증식하는 단세포 유기체이다. 이들은 그의 형태, 염색 반응, 영양 및 대사 요구물, 항원 구조, 화학 조성 및 유전적 상동성을 기준으로 분류되고 명명된다. 세균은 그의 조직 형태를 기준으로 3개의 군; 구형(구균), 평평한 막대형(바실러스) 및 굽거나 나선형 막대형(비브리오, 캄필로박터, 나선균 및 스피로헤타)으로 분류될 수 있다. 세균은 또한 보다 보편적으로 그의 염색 반응을 기준으로 두 부류의 유기체, 그람-양성 및 그람-음성균으로 특성화된다. 그람은 미생물 실험실에서 통상적으로 수행되는 염색 방법을 말한다. 그람-양성 유기체는 염색 절차후 색소를 보유하고 진한 자주색을 나타낸다. 그람-음성 유기체는 색소를 보유하지 않지만 반대-색소를 흡수하므로 분홍색을 나타낸다.

감염성 세균으로는 그람 음성균 및 그람 양성균이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 그람 양성 세균으로는 파스튜렐라(Pasteurella) 종, 스태필로코키(Staphylococci) 종 및 스트렙토코커스(Streptococcus) 종이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 그람 음성 세균으로는 에스케리키아 콜라이, 슈도모나스 종 및 살모넬라 종이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 감염성 세균의 특정 예로는 다음이 포함되나, 이들로 한정되지는 않는다: 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pyloris), 보렐리아 버그도르페리(Borrelia burgdorferi), 레지오넬라 뉴모필리아(Legionella pneumophilia), 마이코박테리아(Mycobacteria) 속(예를 들면, 마이코박테리아 투베르쿨로시스(M. tuberculosis), 마이코박테리아 아비움(M. avium), 마이코박테리아 인트라셀룰라(M. intracellulare), 마이코박테리아 칸사시(M. kansasii), 마이코박테리아 고르도네(M. gordonae)), 스태필로코커스 오레우스(Staphylococcus aureus), 나이제리아 고노리아(Neisseria gonorrhoeae), 나이제리아 메닌지티디스(N. meningitidis), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 스트렙토코커스 피오제네스(S. pyogenes)(A군 스트렙토코커스), 스트렙토코커스 아갈락티아(S. agalactiae)(B군 스트렙토코커스), 스트렙토코커스(비리단스 군), 스트렙토코커스 페칼리스(S. faecalis), 스트렙토코커스 보비스(S. bovis), 스트렙토코커스(혐기성 종), 스트렙토코커스 뉴모니에(S. pneumoniae), 병원성 캄필로박터 속, 엔테로코커스 속, 헤모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenza), 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterium diphtheriae), 코리네박테리움 속, 에리시펠로트릭스 루시오파티에(Erysipelothrix rhusiopathiae), 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 클로스트리듐 테타니(C. tetani), 엔테로박터 에로제네스(Enterobacter aerogenes), 클렙시엘라 뉴모니에(Klebsiella pneumoniae), 파스튜렐라 멀토시다(Pasturella multocida), 박테로이데스(Bacteroides) 속, 푸소박테리움 뉴클레아텀(Fusobacterium nucleatum), 스트렙토바실러스 모닐리포미스(Streptobacillus moniliformis), 트레포네마 팔리둠(Treponema pallidum), 트레포네마 퍼테뉴(T. pertenue), 렙토스피라(Leptospira), 리케챠(Rickettsia) 및 액티노마이세스 이스라엘리(Actinomyces israelli).

기생충은 생존하기 위해 다른 유기체를 의존하는 유기체이므로, 그의 수명을 지속하기 위해 또 다른 유기체에 들어가거나 다른 유기체를 감염시켜야만 한다. 감염된 유기체, 즉, 숙주는 기생충에게 영양과 번식지를 둘 다 제공한다. 가장 광의에서 기생충이란 용어는 모든 감염성 병원체(즉, 세균, 바이러스, 진균, 원충(protozoa) 및 연충(helminth))를 포함할 수 있지만, 일반적으로 말하면, 상기 용어는 단지 원충, 연충 및 체외기생 절지류(예를 들면, 진드기(tick), 좀진드기(mite) 등)를 말하기 위해 사용된다. 원충은 특히 혈액, 장관 또는 조직의 세포외 매트릭스에서, 세포내 및 세포외 모두로 복제될 수 있는 단세포 유기체이다. 연충은 거의 항상 세포외로 복제되는(트리키넬라(Trichinella) 속 제외) 다세포 유기체이다. 연충은 정상적으로는 복제되기 위해 1차 숙주로부터의 출구 및 2차 숙주로의 전달을 필요로 한다. 이들 전술한 부류와 대조적으로, 체외기생 절지류는 숙주 몸체의 외부 표면과 기생 관계를 이룬다.

기생충은 세포내 기생충 및 편성 세포내 기생충을 포함한다. 기생충의 예로는 플라스모듐 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 플라스모듐 오베일(P. ovale), 플라스모듐 말라리아(P. malariae), 플라스모듐 비박스(P. vivax), 플라스모듐 노우레시(P. knowlesi), 바베시아 미크로티(Babesia microti), 바베시아 디버젠스(Babesia divergens), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii), 트리키넬라 스피랄리스(Trichinella spiralis), 리슈마니아 메이저(Leishmania major), 리슈마니아 도노바니(L. donovani), 리슈마니아 브라질리엔시스(L. braziliensis), 리슈마니아 트로피카(L. tropica), 트리파노소마 잠비엔스(T. gambiense), 트리파노소마 로데시엔스(T. rhodesiense) 및 쉬스토소마 만소니(Schistosoma mansoni)가 포함되나, 이들로 한정되지는 않는다.

진균은 그중 일부만이 척추 동물에서 감염을 야기하는 진핵 유기체이다. 진균은 진핵 유기체이므로, 이들은 크기, 구조 조직, 수명 및 증식 메카니즘에 있어 원핵 세균과 상당히 다르다. 진균은 일반적으로 형태학적 특징, 재생 방식 및 배양 특성을 기준으로 분류된다. 진균은 대상에서 상이한 유형의 질환, 예를 들면, 진균 항원 흡입후 호흡기 알레르기, 독성 물질, 예를 들면, 아마니타 팔로이데스(Amanita phalloides) 독소 및 독버섯에 의해 생성된 팔로톡신(pallotoxin) 및 아스퍼질러스(aspergillus) 종에 의해 생성된 아플라톡신(aflatoxin)의 섭취로 인한 진균성 중독을 유발할 수 있지만, 모든 진균이 감염 질환을 야기하는 것은 아니다.

감염성 진균은 전신적 또는 표면적 감염을 야기할 수 있다. 1차 전신 감염은 정상적인 건강한 대상에서 일어날 수 있으며, 기회 감염은 면역결함(immunocompromised) 대상에서 가장 흔히 발견된다. 1차 전신 감염을 유발하는 가장 보편적인 진균 병원체로는 블라스토마이세스(Blastomyces), 코키디오이드(Coccidioides) 및 히스토플라스마(Histoplasma)가 포함된다. 면역결함 또는 면역억제 대상에서 기회 감염을 유발하는 통상적인 진균으로는 캔디다 알비칸(Candida albicans), 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans) 및 다양한 아스퍼질러스 속들이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 전신 진균 감염은 내부 기관의 침습성 감염이다. 유기체는 통상적으로 폐, 위장관 또는 정맥내 카테터를 통해 체내에 들어간다. 이들 유형의 감염은 1차 병원성 진균 또는 기회성 진균에 의해 유발될 수 있다.

표면적 진균 감염은 내부 조직의 침습없이 외부 표면상에서의 진균의 성장을 포함한다. 전형적인 표면적 진균 감염으로는 피부, 모발 또는 손톱을 포함한 피부 진균 감염이 포함된다.

진균 감염과 관련된 질환으로는 아스퍼질러스증, 블라스토마이세스증, 칸디다증, 크로모블라스토마이세스증, 콕시디오이데스진균증, 크립토코커스증, 진균 안감염, 진균 모발, 손톱 및 피부 감염, 히스토플라스마증, 로보진균증, 균종, 이진균증, 파라콕시디오이데스진균증, 파종성 페니실리움 마르네피(Penicillium marneffei), 피하갈색사상균증, 리노스포리듐증, 스포로트리쿰증 및 접합균증이 포함된다.

다른 의학적으로 관련된 미생물은 문헌에 광범위하게 기재되었다(예를 들면, 본원에 참고로 인용된 문헌 [C.G.A Thomas, Medical Microbiology, Bailliere Tindall, Great Britain, 1983] 참조). 전술한 목록은 각각 예시적인 것이며 제한하는 것이 아니다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "암 항원" 및 "종양 항원"은 종양 또는 암 세포와 결합되고 주조직적합성 복합체(MHC) 분자와 관련하여 항원이 존재하는 세포 표면상에서 발현되는 경우 면역 반응을 유발할 수 있는 화합물, 예를 들면, 펩티드, 단백질 또는 당단백질을 언급하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 암 항원은 암 세포에 의해 차별적으로 발현되어 암 세포를 표적화하기 위해 이용될 수 있다. 암 항원은 명백히 종양-특이적 면역 반응을 잠재적으로 자극할 수 있는 항원이다. 이들 항원의 일부는, 반드시 발현되지는 않지만, 정상 세포에 의해 암호화된다. 이들 항원은 통상적으로 정상 세포에서는 침묵하는(즉, 발현되지 않는) 항원, 분화의 특정 단계에서만 발현되는 항원, 및 배아 및 태아 항원과 같이 일시적으로 발현되는 항원으로 규정될 수 있다. 다른 암 항원은 돌연변이 세포 유전자, 예를 들면, 발암유전자(예를 들면, 활성화된 ras 발암유전자), 억제 유전자(예를 들면, 돌연변이 p53), 내부 결실 또는 염색체 전위로부터 비롯된 융합 단백질에 의해 암호화된다. 다른 암 항원은 RNA 및 DNA 종양 바이러스 상에서 전달되는 바와 같은 바이러스 유전자에 의해 암호화될 수 있다.

암 항원은, 예를 들면, 문헌 [Cohen PA et al., Cancer Res 54:1055-1058, 1994]에 기술된 바와 같이, 항원을 부분적으로 정제하여, 또는 재조합 기술에 의해, 또는 알려져 있는 항원의 신생 합성에 의해, 암 세포의 조 추출물을 제조함으로써 암 세포로부터 제조할 수 있다. 암 항원으로는 재조합적으로 발현된, 그의 면역원성 부분 또는 전체 종양 또는 암 또는 세포인 항원이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 상기 항원은 재조합적으로 또는 당해 분야에 공지된 임의의 다른 수단에 의해 분리되거나 제조될 수 있다.

종양 항원의 예로는 다음이 포함된다: MAGE, MART-1/Melan-A, gp100, 다이펩티딜 펩티다제 IV(DPPIV), 아데노신 데아미나제-결합 단백질(ADAbp), 사이클로필린 b, 결장 관련 항원(CRC)-C017-1A/GA733, 태아성암 항원(CEA) 및 그의 면역원성 에피토프 CAP-1 및 CAP-2, etv6, aml1, 전립선 특이 항원(PSA) 및 그의 면역원성 에피토프 PSA-1, PSA-2 및 PSA-3, 전립선-특이 막 항원(PSMA), T-세포 수용체/CD3-제타 쇄, MAGE-부류의 종양 항원(예를 들면, MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A6, MAGE-A7, MAGE-A8, MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-A11, MAGE-A12, MAGE-Xp2(MAGE-B2), MAGE-Xp3(MAGE-B3), MAGE-Xp4(MAGE-B4), MAGE-C1, MAGE-C2, MAGE-C3, MAGE-C4, MAGE-C5), GAGE-부류의 종양 항원(예를 들면, GAGE-1, GAGE-2, GAGE-3, GAGE-4, GAGE-5, GAGE-6, GAGE-7, GAGE-8, GAGE-9), BAGE, RAGE, LAGE-1, NAG, GnT-V, MUM-1, CDK4, 티로시나제, p53, MUC 부류, HER2/neu, p21ras, RCAS1, α-태아단백질, E-카드헤린, α-카테닌, β-카테닌 및 γ카테닌, p120ctn, gp100^Pmel117, 프레임(PRAME), NY-ESO-1, cdc27, 선종성 폴립증 단백질(APC), 포드린, 커넥신(Connexin) 37, Ig-유전자형, p15, gp75, GM2 및 GD2 강글리오시드, 바이러스 산물, 예를 들면, 인간 파필로마바이러스 단백질, Smad 부류의 종양 항원, lmp-1, P1A, EBV-암호화 핵 항원(EBNA)-1, 뇌 글리코겐 포스포릴라제, SSX-1, SSX-2(HOM-MEL-40), SSX-1, SSX-4, SSX-5, SCP-1 및 CT-7, 및 c-erbB-2. 상기 목록은 제한하는 것을 의미하지 않는다.

본원에서 사용된 바와 같이, "알레르겐"은 IgE의 생성을 특징으로 하는 면역 반응을 유발할 수 있는 분자이다. 알레르겐은 또한 민감한 대상에서 알레르기 또는 천식 반응을 유도할 수 있는 물질이다. 따라서, 본 발명에 있어, 알레르겐이란 용어는 IgE 항체에 의해 매개되는 알레르기 반응을 유발할 수 있는 특정 유형의 항원을 의미한다.

알레르겐의 목록은 방대하며, 꽃가루, 곤충독, 동물의 비듬 먼지, 진균 포자 및 약물(예를 들면, 페니실린)이 포함될 수 있다. 천연 동물 및 식물 알레르겐의 예로는 다음의 속에 특이적인 단백질이 포함된다: 카니스(카니스 파밀리아리스(Canis familiaris)); 더마토파고이데스(예를 들면, 더마토파고이데스 파리네(Dermatophagoides farinae)); 펠리스(펠리스 도메스티쿠스(Felis domesticus)); 암브로시아(암브로시아 아르테미스이폴리아(Ambrosia artemisiifolia)); 롤리움(예를 들면, 롤리움 페렌(Lolium perenne) 및 롤리움 멀티플로럼(L. multiflorum)); 크립토메리아(크립토메리아 자포니카(Cryptomeria japonica)); 알터나리아(알터나리아 알터나타(Alternaria alternata)); 알더(Alder); 알누스(알누스 걸티노사(Alnus gultinosa)); 베툴라(베툴라 베루코사(Betula verrucosa)); 퀘르커스(퀘르커스 알바(Quercus alba)); 올레아(올레아 유로파(Olea europa)); 아르테미시아(아르테미시아 불가리스(Artemisia vulgaris)); 플란타고(예를 들면, 플란타고 란세올라타(Plantago lanceolata)); 파리에타리아(예를 들면, 파리에타리아 오피시날리스(Parietaria officinalis) 및 파리에타리아 주다이카(P. judaica)); 블라텔라(예를 들면, 블라텔라 게르마니카(Blattela germanica)); 아피스(예를 들면, 아피스 멀티플로럼(Apis multiflorum)); 큐프레서스(Cupressus)(예를 들면, 큐프레서스 셈퍼바이렌스(Cupressus sempervirens), 큐프레서스 아리조니카(C. arizonica) 및 큐프레서스 마크로카파(C. macrocarpa)); 쥬니페러스(예를 들면, 쥬니페러스 사비노이데스(Juniperus sabinoides), 쥬니페러스 버지니아나(J. virginiana), 쥬니페러스 콤뮤니스(J. communis) 및 쥬니페러스 아세이(J. ashei)); 투야(예를 들면, 투야 오리엔탈리스(Thuya orientalis)); 카메시파리스(예를 들면, 카메시파리스 오브투사(Chamaecyparis obtusa)); 페리플라네타(예를 들면, 페리플라네타 아메리카나(Periplaneta americana)); 아그로피론(예를 들면, 아그로피론 레펜스(Agropyron repens)); 세케일(예를 들면, 세케일 세레알(Secale cereale)); 트리티컴(예를 들면, 트리티컴 아스티붐(Triticum aestivum)); 닥틸리스(예를 들면, 닥틸리스 글로메라타(Dactylis glomerata)); 페스투카(예를 들면, 페스투카 엘라티오(Festuca elatior)); 포아(예를 들면, 포아 프라텐시스(Poa pratensis) 및 포아 콤프레사(P. compressa)); 아베나(예를 들면, 아베나 사티바(Avena sativa)); 홀커스(예를 들면, 홀커스 라나투스(Holcus lanatus)); 안토잔툼(예를 들면, 안토잔툼 오도라툼(Anthoxanthum odoratum)); 아레나테룸(예를 들면, 아레나테룸 엘라티우스(Arrhenatherum elatius)); 아그로스티스(예를 들면, 아그로스티스 알바(Agrostis alba)); 플레움(예를 들면, 플레움 프라텐스(Phleum pratense)); 팔라리스(예를 들면, 팔라리스 아룬디나세아(Phalaris arundinacea)); 파스팔룸(예를 들면, 파스팔룸 노타텀(Paspalum notatum)); 소르검(예를 들면, 소르검 할레펜시스(Sorghum halepensis)); 및 브로무스(예를 들면, 브로무스 이너미스(Bromus inermis)).

본 발명은 한 태양에서, 본 발명의 면역자극성 ORN과 항원의 결합체를 포함한다. 한 태양에서, 본 발명의 면역자극성 ORN은 항원에 공유 결합된다. 면역자극성 ORN과 항원 사이의 공유 결합은 적당한 유형의 공유 결합일 수 있으나, 단, 면역자극성 ORN 및 항원은 상기와 같이 결합되는 경우 각각의 개개 성분의 측정가능한 기능 활성을 유지한다. 한 태양에서, 공유 결합은 직접 결합이다. 또 다른 태양에서, 공유 결합은, 예를 들면, 링커 잔기를 통한 간접 결합이다. 공유 결합된 면역자극성 ORN 및 항원은 세포내에서 둘을 구별하여 방출하도록 처리될 수 있다. 이런 식으로, 어느 한 성분의 세포로의 전달은 별도의 제제 또는 별도 성분으로 투여되는 경우 그의 전달에 비해 증대될 수 있다. 한 태양에서, 항원은 항원 자체일 수 있다, 즉, 미리형성된 항원이다.

한 태양에서, 본 발명은 전달 비히클과 함께 본 발명의 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 다양한 태양에서, 전달 비히클은 양이온성 지질, 리포솜, 코클레이트, 바이로솜, 면역자극성 복합체(ISCOM), 미세입자, 미립구, 나노구, 단층 소포(LUV), 다층 소포, 수중유적형 유화액, 유중수적형 유화액, 유화액 및 다가양이온성 펩티드, 및 선택적으로, 약학적으로 허용되는 담체로부터 선택될 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 하기에서 고찰한다. 본 발명의 약학 조성물은 추가로 항원을 포함하거나 하지 않을 수 있다. 본 발명의 조성물은, 존재하는 경우 항원과 함께, 임의의 적당한 방법을 이용하여 전달 비히클과 물리적으로 혼합된다. 면역자극성 조성물은 전달 비히클내에 함유될 수 있거나, 또는 전달 비히클의 용매-노출된 표면위에 존재하거나 표면과 결합될 수 있다. 한 태양에서, 면역자극성 ORN은 전달 비히클의 용매-노출 표면위에 존재하거나 그에 결합되며, 항원은 존재하는 경우 전달 비히클내에 함유된다. 또 다른 태양에서, 면역자극성 ORN 및 항원은 둘 다 전달 비히클의 용매-노출 표면 위에 존재하거나 또는 그와 결합된다. 또 다른 태양에서, 항원은 전달 비히클의 용매-노출 표면위에 존재하거나 그와 결합되고, 면역자극성 ORN은 전달 비히클 내에 함유된다. 또 다른 태양에서, 면역자극성 ORN 및 항원(항원이 포함되는 경우)은 둘 다 전달 비히클 내에 함유된다.

본 발명은 또한 본 발명의 면역자극성 조성물의 사용 방법을 제공한다. 한 태양에서, 본 발명은 면역 세포를 활성화시키는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 면역 세포를 시험관내 또는 생체내에서 효과량의 본 발명의 조성물과 접촉시켜 면역 세포를 활성화시키는 단계를 포함한다. 본 발명의 조성물은 항원을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이 "면역 세포"는 선천성 또는 획득성 면역 반응에 관여할 수 있는 임의의 골수 유래 세포를 말한다. 면역계 세포로는, 제한하지 않고, 수지상 세포(DC), 자연 살해(NK) 세포, 단핵구, 대식세포, 과립구, B 림프구, 형질 세포, T 림프구, 및 그의 전구체 세포가 포함된다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "효과량"은 목적하는 생물 효과를 야기하기 위해 필요하거나 충분한 물질의 양을 말한다. 효과량은 단일 투여로 투여되는 양일 수 있으나 이로 제한될 필요는 없다.

본원에서 사용된 바와 같이, "면역 세포를 활성화시킨다"는 용어는 면역 세포가 면역 반응과 관련하여 활성화 상태로 유입되게 유도하는 것을 말한다. "면역 세포를 활성화시킨다"는 용어는 면역 반응을 유도하고 증대시키는 것 모두를 말한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "면역 반응"은 증식하거나, 작동인자 면역 기능을 수행하거나, 또는 면역 반응에 수반되는 유전자 산물을 생성하기 위한 면역 세포의 활성화를 반영하는 선천성 또는 획득성 면역 반응의 임의의 태양을 말한다. 면역 반응에 수반되는 유전자 산물은 분비된 산물(예를 들면, 항체, 사이토카인 및 케모카인), 및 면역 기능의 세포내 및 세포 표면 분자 특징(예를 들면, 특정 분화 집단(CD) 항원, 전사 인자 및 유전자 전사물)을 포함할 수 있다. 용어 "면역 반응"은 단일 세포 또는 세포 집단에 적용될 수 있다.

사이토카인의 생성은, 생물 반응 분석, 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA), 세포내 형광-활성화 세포 분류(FACS) 분석, 및 역 전사효소/중합효소 연쇄 반응(RT-PCR)을 포함하여, 당해 분야에 공지된 임의의 여러 방법에 의해 평가할 수 있다.

한 태양에서, 면역 반응은 전구염증성 사이토카인 면역 반응을 수반한다. 전구염증성 사이토카인 면역 반응은 IFN-γ, TNF-α, IL-12, IL-10, IL-6 및 그의 임의의 조합을 포함하여, 임의의 특정 사이토카인 및 케모카인의 발현을 포함할 수 있다. 상기 면역 반응은 특이적으로 본 발명에 있어서 IFN-α를 제외한다.

한 태양에서, 면역 반응은 면역 세포 활성화의 세포 표면 마커, 예를 들면, CD25, CD80, CD86 및 CD154의 상향조절을 수반한다. 상기 마커의 세포 표면을 측정하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있으며, FACS 분석을 포함한다.

세포 또는 세포 집단에서 면역 반응의 측정을 위해, 한 태양에서, 세포 또는 세포 집단은 TLR8을 발현한다. 세포는 TLR을 천연으로 발현할 수 있거나, 또는 상기 세포는 TLR에 적당한 발현 벡터를 세포내에 도입하여 TLR을 발현하도록 조작될 수 있다. 한 태양에서, 세포 또는 세포 집단은 말초혈 단핵 세포(PBMC)로서 수득된다. 한 태양에서, 세포 또는 세포 집단은 TLR을 발현하는 세포주로서 수득된다. 한 태양에서, 세포 또는 세포 집단은 TLR을 발현하는 일시적 형질감염체로서 수득된다. 한 태양에서, 세포 또는 세포 집단은 TLR을 발현하는 안정한 형질감염체로서 수득된다.

또한, 세포 또는 세포 집단에서 면역 반응을 측정하는데 사용하기 위해, 세포 또는 세포 집단내에 TLR에 의해 세포내 신호전달에 반응하는 리포터 구조물을 도입하는 것이 편리할 수 있다. 한 태양에서, 상기 리포터는 NF-κΒ 프로모터의 조절하에 있는 유전자이다. 한 태양에서, 프로모터의 조절하에 있는 유전자는 루시퍼라제이다. 적당한 활성화 조건하에서, 루시퍼라제 리포터 구조물이 발현되고, 루미노미터를 사용하여 정량적으로 측정될 수 있는 측정가능한 광 신호를 방출한다. 상기 리포터 구조물 및 다른 적당한 리포터 구조물은 상업적으로 시판한다.

본 발명은 또한 TLR 활성화를 검출하는 무세포 방법의 사용을 포함한다.

본 발명은, 특정 태양에서, 치료에 사용하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명의 면역자극성 조성물은 단독으로 또는 다른 치료제와 함께 사용될 수 있다. 면역자극성 조성물 및 다른 치료제는 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 본 발명의 면역자극성 조성물 및 다른 치료제를 동시에 투여하는 경우, 이들은 동일하거나 또는 별개의 제형으로 투여될 수 있으나, 이들은 동시에 투여된다. 또한, 본 발명의 면역자극성 조성물 및 다른 치료제를 동시에 투여하는 경우, 이들은 동일하거나 또는 별개의 투여 경로를 통해 투여될 수 있으나, 이들은 동시에 투여된다. 본 발명의 면역자극성 조성물 및 또 다른 치료제는, 본 발명의 면역자극성 조성물의 투여가 다른 치료제의 투여와 일시적으로 분리될 때 순차적으로 투여된다. 상기 화합물들의 투여 사이의 시간의 간격은 수분의 범위일 수 있거나, 또는 더 길 수 있다. 한 태양에서, 본 발명의 면역자극성 조성물은 다른 치료제의 투여전에 투여된다. 한 태양에서, 본 발명의 면역자극성 조성물은 다른 치료제의 투여후에 투여된다. 또한, 본 발명의 면역자극성 조성물 및 다른 치료제를 순차적으로 투여하는 경우, 이들은 동일하거나 또는 별개의 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 다른 치료제로는 보조제, 항원, 백신, 및 감염, 암, 알레르기 및 천식의 치료에 유용한 약제가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

한 태양에서, 본 발명은 대상을 백신접종하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 대상에게 항원 및 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 항원을 투여하는 것은 항원을 암호화하는 핵산을 투여하는 것을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "대상"은 척추 동물을 말한다. 다양한 태양에서, 대상은 인간, 비-인간 영장류 또는 다른 포유동물이다. 특정 태양에서, 대상은 마우스, 래트, 기니 피그, 토끼, 고양이, 개, 돼지, 양, 염소, 소 또는 말이다.

대상을 백신접종하는 방법에 사용하기 위해, 한 태양에서, 본 발명의 조성물은 항원을 포함한다. 항원은 본 발명의 ORN과 별개이거나 또는 그에 공유 결합될 수 있다. 한 태양에서, 본 발명의 조성물은 자체로는 항원을 포함하지 않는다. 상기 태양에서, 항원은 대상에게 본 발명의 조성물과 별도로, 또는 본 발명의 조성물과 함께 투여될 수 있다. 별개의 투여는 시간에서 별개이거나, 투여 위치 또는 경로에서 별개이거나, 또는 시간 및 투여 위치 및 경로 둘 다에서 별개이다. 본 발명의 조성물 및 항원을 시간에서 별개로 투여하는 경우, 항원은 본 발명의 조성물 이전 또는 이후에 투여될 수 있다. 한 태양에서, 항원은 본 발명의 조성물 투여후 48 시간 내지 4 주후에 투여된다. 상기 방법은 또한 항원 및 조성물의 초기 투여후, 항원 단독, 조성물 단독, 또는 항원과 조성물의 1회 이상의 추가접종 용량의 투여를 포함한다.

본 발명에는 또한, 항원을 포함하지 않는 본 발명의 조성물을 대상에게 투여함으로써 미래에 미지의 항원과의 접촉에 대해 대상을 준비시킬 수 있는 것도 포함된다. 상기 태양에 따르면, 대상의 면역계는, 예를 들면, 환경상 또는 직업상 노출을 통해, 대상이 나중에 접촉하게 되는 항원에 대해 보다 강한 반응을 개시하도록 준비된다. 상기 방법은, 예를 들면, 미생물 병원체에 노출되기 쉬운 여행자, 의료 종사자 및 군인을 위해 이용될 수 있다.

한 태양에서, 본 발명은 면역계 결핍을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 대상에게 대상을 치료하기에 효과적인 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "면역계 결핍"은 항원에 대한 면역 반응을 개시하는 면역계의 비정상적으로 저하된 능력을 말한다. 한 태양에서, 면역계 결핍은 대상의 면역계가 정상 능력으로 작용하지 않거나 또는, 예를 들면, 대상에서 종양 또는 암 또는 감염을 제거하기 위해 대상의 면역 반응을 증대시키는데 유용한 질환 또는 장애이다. 본원에서 사용된 바와 같이, "면역 결핍을 갖는 대상"은 항원에 대한 면역 반응을 개시하는 대상 면역계의 저하된 능력을 갖는 대상을 말한다. 면역 결핍을 갖는 대상은 후천성 면역 결핍을 갖는 대상, 및 선천성 면역계 결핍을 갖는 대상을 포함한다. 후천성 면역 결핍을 갖는 대상으로는, 제한하지 않고, 만성 염증성 질병이 있는 대상, 만성 신기능부전 또는 신부전이 있는 대상, 감염이 있는 대상, 암을 갖는 대상, 면역억제 약물을 투여받는 대상, 다른 면역억제 치료를 받는 대상 및 영양실조를 갖는 대상이 포함된다. 한 태양에서, 대상은 억제된 CD4+ T-세포 집단을 갖는다. 한 태양에서, 대상은 인간 면역결핍 바이러스(HIV)에 의한 감염을 가지거나 또는 후천성 면역결핍 증후군(AIDS)을 갖는다. 따라서, 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 보다 강한 면역 반응이 필요한 대상에서 면역 반응을 증대시키거나 또는 면역 반응을 개시하는 능력을 증대시키는 방법을 제공한다.

본 발명의 조성물 및 방법은 단독으로 또는 감염의 치료에 유용한 다른 약제 및 방법과 함께 사용될 수 있다. 한 태양에서, 본 발명은 감염을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 감염을 갖는 대상에게 대상을 치료하기에 효과량의 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 감염을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 감염을 갖는 대상에게 대상을 치료하기에 효과적인 양의 본 발명의 조성물 및 감염 치료제를 투여하는 단계를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 대상에서 감염을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 본 발명의 면역자극성 ORN의 용도를 제공한다.

한 태양에서, 본 발명은 감염을 치료하는데 유용한 조성물을 제공한다. 상기 태양에 따른 조성물은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 감염 치료제를 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 질환 또는 질병을 갖는 대상과 관련하여 사용된 바와 같은 용어 "치료하다"는 대상에서 질환 또는 질병의 하나 이상의 징후 또는 증상을 예방하거나 경감시키거나 배제시키는 것을 의미한다.

"감염을 갖는 대상"은 감염성 미생물에 의해 표면적으로, 국소적으로 또는 전신적으로 대상의 침습으로부터 야기된 질환을 갖는 대상이다. 감염성 미생물은 전술한 바와 같은 바이러스, 세균, 진균 또는 기생충일 수 있다.

감염 치료제로는 항균제, 항바이러스제, 항진균제 및 진균제가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. "항감염제", "항생물질", "항균제", "항바이러스제", "항진균제", "구충제" 및 "기생충박멸제"와 같은 어구는 당해 분야에 통상의 기술을 가진 자에게 확립된 의미를 가지며, 표준 의학 교재에 정의되어 있다. 간략하게, 항균제는 세균을 사멸하거나 억제하며, 항생물질 및 유사한 기능을 갖는 다른 합성 또는 천연 화합물을 포함한다. 항바이러스제는 천연 공급원으로부터 분리되거나 합성될 수 있으며, 바이러스를 사멸하거나 억제하는데 유용하다. 항진균제는 표면 진균 감염 및 기회성 및 1차 전신 진균 감염을 치료하기 위해 사용된다. 구충제는 기생충을 사멸하거나 억제한다. 많은 항생물질은 미생물과 같은 세포에 의해 2차 대사물로 생성되는 저분자량 분자이다. 일반적으로, 항생물질은 미생물에 특이적이고 숙주 세포에는 존재하지 않는 하나 이상의 기능 또는 구조를 방해한다.

항-감염 요법에 따른 문제 중 하나는 항감염제로 치료되는 숙주에서 발생하는 부작용이다. 예를 들면, 많은 항감염제가 광범위한 미생물을 사멸하거나 억제할 수 있으며 특정 유형의 종에 특이적이지 않다. 상기 유형의 항감염제로 치료하면 감염성 미생물뿐 아니라 숙주에서 기생하는 정상적인 미생물 균총도 사멸시키게 된다. 미생물 균총의 소실은 질환 합병증을 유발하고 숙주가 다른 병원균에 의한 감염에 걸리기 쉽게 만드는데, 그 이유는 미생물 균총이 감염성 병원균과 경쟁하여 그에 대한 장벽으로 작용하기 때문이다. 다른 부작용은 숙주의 비-미생물 세포 또는 조직에 대한 상기 화학 물질의 특이적 또는 비-특이적 효과의 결과로서 야기될 수 있다.

항감염제의 광범위한 사용에 따른 또 다른 문제는 미생물의 항생물질-내성 균주의 발생이다. 이미, 반코마이신-내성 엔테로코커스, 페니실린-내성 뉴모코커스, 다중-내성 스태필로코커스 오레우스 및 다중-내성 투베르쿨로시스 균주가 발생하였으며, 주된 임상적 문제가 되고 있다. 항감염제의 광범위한 사용은 많은 항생물질-내성 세균 균주를 야기하기 쉽다. 그 결과, 새로운 항감염 방법이 상기 미생물을 해결하기 위해 필요하다.

광범위한 세균을 사멸하거나 억제하는데 효과적인 항균성 항생물질은 광범위 항생물질로 지칭된다. 다른 유형의 항균성 항생물질은 주로 그람-양상 또는 그람-음성균 부류의 세균에 대해 효과적이다. 상기 유형의 항생물질은 좁은 범위의 항생물질로 지칭된다. 단일 유기체 또는 질환에 대해서는 효과적이나 다른 유형의 세균에 대해서는 효과적이지 않은 다른 항생물질은 제한-범위 항생물질로 지칭된다.

항균제는 때때로 그의 주요 작용 양식을 기준으로 분류된다. 일반적으로, 항균제는 세포벽 합성 억제제, 세포막 억제제, 단백질 합성 억제제, 핵산 합성 또는 기능 억제제 및 경쟁성 억제제이다. 세포벽 합성 억제제는 세포벽 합성 과정, 및 일반적으로 세균 펩티도글리칸의 합성에서의 단계를 억제한다. 세포벽 합성 억제제로는 β-락탐 항생물질, 천연 페니실린, 반합성 페니실린, 암피실린, 클라불란산, 세팔로스포린 및 바시트라신이 포함된다.

β-락탐은 펩티도글리칸 합성의 마지막 단계를 저해하는 4-원 β-락탐 고리를 함유하는 항생물질이다. β-락탐 항생물질은 합성되거나 천연일 수 있다. 페니실리움에 의해 생성된 β-락탐은 천연 페니실린, 예를 들면, 페니실린 G 또는 페니실린 V이다. 이들은 페니실리움 크라이소게넘의 발효에 의해 생성된다. 천연 페니실린은 좁은 범위의 활성을 가지며, 일반적으로 스트렙토코커스, 고노코커스 및 스태필로코커스에 대해 효과적이다. 그람-양성균에 대해 또한 효과적인 다른 유형의 천연 페니실린으로는 페니실린 F, X, K 및 O가 포함된다.

반합성 페니실린은 일반적으로 사상균에 의해 생성된 분자 6-아미노페니실란산의 변이체이다. 6-아미노페니실란산은 천연 페니실린보다 광범위한 스펙트럼의 활성 또는 다양한 다른 유리한 성질을 갖는 페니실린을 생성하는 측쇄의 부가에 의해 변형될 수 있다. 일부 유형의 반합성 페니실린은 그람-양성 및 그람-음성균에 대해 광범위한 스펙트럼을 갖지만, 페니실라나제에 의해 불활성화된다. 이들 반합성 페니실린으로는 암피실린, 카베니실린, 옥사실린, 아즐로실린, 메즐로실린 및 피페라실린이 포함된다. 다른 유형의 반합성 페니실린은 그람-양성균에 대해 보다 좁은 활성을 갖지만, 이들이 페니실라나제에 의해 불활성화되지 않도록 개선된 성질을 갖는다. 이들로는, 예를 들면, 메타실린, 디클록사실린 및 나프실린이 포함된다. 광범위 반합성 페니실린의 일부는 β-락타마제 억제제, 예를 들면, 클라불란산 및 설박탐과 함께 사용될 수 있다. β-락타마제 억제제는 항미생물 활성을 갖지 않지만, 이들은 페니실라나제를 억제하는 작용을 하므로, 반합성 페니실린이 분해되는 것을 보호한다.

또 다른 유형의 β-락탐 항생물질은 세팔로스포린이다. 이들은 세균성 β-락타마제에 의한 분해에 민감하므로, 단독으로 항상 효과적인 것은 아니다. 그러나, 세팔로스포린은 페니실라나제에 내성이다. 이들은 다양한 그람-양성 및 그람-음성균에 대해 효과적이다. 세팔로스포린으로는 세팔로틴, 세파피린, 세팔렉신, 세파만돌, 세파클로르, 세파졸린, 세푸록신, 세폭시틴, 세포탁심, 세프설로딘, 세페타메트, 세픽심, 세프트리악손, 세포페라존, 세프타지딘 및 목사락탐이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

세균은 서브유니트를 막의 외부로 전달하는 분자로부터 뮤로펩티드 서브유니트 또는 펩티도글리칸의 방출을 억제함으로써 세포벽 합성을 억제하는 또 다른 부류의 항생물질이다. 바시테라신이 그람-양성균에 대해 효과적이긴 하지만, 그의 사용은 그의 높은 독성으로 인해 일반적으로 국소 투여로 제한된다.

카바페넴은 세포벽 합성을 억제할 수 있는 또 다른 광범위 β-락탐 항생물질이다. 카바페넴의 예로는 이미페넴이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 모노박탐도 또한 광범위 β-락탐 항생물질이며, 유즈트레오남을 포함한다. 스트렙토마이세스에 의해 생성된 항생물질인 반코마이신도 또한 세포막 합성을 억제함으로써 그람-양성균에 대해 효과적이다.

또 다른 부류의 항균제는 세포막 억제제인 항균제이다. 이들 화합물은 구조를 파괴하거나 세균 막의 기능을 억제한다. 세포막 억제제인 항균제에 따른 한가지 문제는 이들이 세균 및 진핵생물 막중 인지질의 유사성으로 인해 세균 뿐 아니라 진핵 세포에서 효과를 미칠 수 있다는 것이다. 따라서, 이들 화합물은 전신적으로 사용되는 것이 허용되기에 충분히 특이적이지 않으며, 국소 투여시 고용량 사용이 금지된다.

임상적으로 유용한 한 세포막 억제제는 폴리믹신이다. 폴리믹신은 막 인지질에 결합함으로써 막 기능을 방해한다. 폴리믹신은 주로 그람-음성균에 대해 효과적이며, 일반적으로 중증 슈도모나스 감염 또는 덜 독성인 항생물질에 내성인 슈도모나스 감염에 사용된다. 상기 화합물의 전신 투여와 관련된 심각한 부작용으로는 신장 및 다른 기관에 대한 손상이 포함된다.

다른 세포막 억제제로는 전신 진균 감염 및 칸디다 효모 감염의 치료에 주로 사용되는 항진균제인 안포테리신 B 및 나이스타틴이다. 이미다졸은 또 다른 부류의 세포막 억제제인 항생물질이다. 이미다졸은 항진균제로서 뿐 아니라 항균제로서, 예를 들면, 효모 감염, 피부진균 감염 및 전신 진균 감염의 치료에 사용된다. 이미다졸로는 클로트리마졸, 미코나졸, 케토코나졸, 이트라코나졸 및 플루코나졸이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

많은 항균제가 단백질 합성 억제제이다. 이들 화합물은 세균이 구조 단백질 및 효소를 합성하는 것을 방해하므로, 세균 세포 성장 또는 기능의 억제 또는 세포 사멸을 야기한다. 일반적으로, 이들 화합물은 전사 또는 번역 과정을 방해한다. 전사를 차단하는 항균제로는 리팜핀스(Rifampins) 및 에탐부톨(Ethanbutol)이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 효소 RNA 폴리머라제를 억제하는 리팜핀스는 광범위 활성을 가지며, 그람-양성 및 그람-음성균 및 마이코박테리움 투베르쿨로시스에 효과적이다. 에탄부톨은 마이코박테리움 투베르쿨로시스에 효과적이다.

번역을 차단하는 항균제는 세균 리보솜에 간섭하여 mRNA가 단백질로 번역되는 것을 방해한다. 일반적으로, 상기 부류의 화합물로는 테트라사이클린, 클로람페니콜, 마크롤라이드(예를 들면, 에리트로마이신) 및 아미노글라이코시드(예를 들면, 스트렙토마이신)가 포함되나, 이들로 한정되지는 않는다.

아미노글라이코시드는 세균 스트렙토마이세스에 의해 생성되는 항생물질 부류, 예를 들면, 스트렙토마이신, 카나마이신, 토브라마이신, 아미카신 및 젠타마이신이다. 아미노글라이코시드는 그람-양성 및 그람-음성균에 의해 야기된 매우 다양한 세균 감염에 대해 사용되어 왔다. 스트렙토마이신은 투베르쿨로시스의 치료에 주된 약물로서 광범위하게 사용되었다. 젠타마이신은 특히 토브라마이신과 함께 슈도모나스 감염을 포함하여 많은 그람-양성 및 그람-음성균주에 사용된다. 카나마이신은 페니실린-내성 스태필로코커스를 포함하여 많은 그람-양성균에 사용된다. 임상적으로 그의 사용을 제한하는 아미노글라이코시드의 한가지 부작용은, 효과에 필수적인 투여량에서 연장 사용이 신장 기능을 손상시키고 청신경에 손상을 야기하여 난청을 유발하는 것으로 밝혀졌다는 것이다.

또 다른 유형의 전사 억제 항균제는 테트라사이클린이다. 테트라사이클린은 광범위하며 다양한 그람-양성 및 그람-음성균에 효과적인 항생물질 부류이다. 테트라사이클린의 예로는 테트라사이클린, 미노사이클린, 데옥시사이클린 및 클로르테트라사이클린이 포함된다. 이들은 많은 유형의 세균의 치료에 중요하지만, 특히 라임병의 치료에 중요하다. 그의 낮은 독성 및 최소한의 직접적 부작용으로 인해, 테트라사이클린은 의료계에서 남용 및 오용되어 문제를 일으켜 왔다. 예를 들면, 그의 남용은 광범위한 내성의 발달을 야기하였다.

마크롤라이드와 같은 항균제는 50 S 리보솜 서브유니트에 가역적으로 결합하며 펩티딜 트랜스퍼라제에 의한 단백질의 연장을 억제하거나 또는 세균 리보솜으로부터 비하전된 tRNA의 방출을 방해하거나 또는 둘 다이다. 이들 화합물로는 에리트로마이신, 록시트로마이신, 클라리트로마이신, 올렌도마이신 및 아지트로마이신이 포함된다. 에리트로마이신은 대부분의 그람-양성균, 나이제리아, 레지오넬라 및 헤모필러스에 대해 활성이나, 엔테로박테리아과에 대해서는 활성이 아니다. 단백질 합성시 펩티드 결합 형성을 차단하는 린코마이신 및 클린다마이신은 그람-양성균에 대해 사용된다.

또 다른 유형의 번역 억제제는 클로람페니콜이다. 클로람페니콜은 세균 효소 펩티딜 트랜스퍼라제를 억제하는 70 S 리보솜에 결합하여 단백질 합성시 폴리펩티드 쇄의 성장을 방해한다. 클로람페니콜과 관련된 한가지 심각한 부작용은 재생불량성 빈혈이다. 재생불량성 빈혈은 낮은 비율(1/50,000)의 환자에서 세균을 치료하는데 효과적인 클로람페니콜 용량에서 나타난다. 한때 많이 처방되던 항생물질이었던 클로람페니콜은 현재 빈혈로 인한 사망의 결과로 거의 사용되지 않는다. 그의 효과로 인해 생명-치료 상황(예를 들면, 장티푸스)에서는 여전히 사용된다.

일부 항균제는 핵산 합성 또는 기능을 파괴한다, 예를 들면, DNA 또는 RNA에 결합하여 그들의 메시지를 판독할 수 없게 한다. 이들로는 둘 다 합성 화학물질인 퀴놀론 및 코-트리목사졸과 천연 또는 반합성 화학물질인 리파마아신이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 퀴놀론은, 세균이 그의 원형 DNA를 생성하기 위해 필요한 효소인 DNA 자이레이스를 억제하여 세균 DNA 복제를 차단한다. 이들은 광범위하며, 그 예로는 노르플록사신, 시프로플록사신, 에녹사신, 날리딕산 및 테마플록사신이 포함된다. 날리딕산은 DNA 복제에 필수적인 DNA 자이레이스 효소(토포아이소머라제)에 결합하고 슈퍼코일이 이완 및 재성형되게 하여 DNA 자이레이스 활성을 억제하는 살균제이다. 날리딕산의 주 용도는, 요로 감염(UTI)의 공통 원인인 여러 유형의 그람-음성균, 예를 들면, 이. 콜라이, 엔테로박터 에로제네스, 클렙시엘라 뉴모니에 및 프로테우스 속에 효과적이므로, 약한 요로 감염(UTI)의 치료에 사용된다. 코-트리목사졸은 DNA 뉴클레오티드를 제조하는데 필요한 폴산의 세균 합성을 차단하는, 설파메톡사졸과 트리메토프림의 혼합물이다. 리팜피신은 그람-양성균(마이코박테리움 투베르쿨로시스 및 나이제리아 메닌지티디스에 의해 야기된 수막염 포함) 및 일부 그람-음성균에 대해 활성인 리파마이신의 유도체이다. 리팜피신은 폴리머라제의 베타 서브유니트에 결합하여 폴리머라제를 활성화시키는데 필수적인 제 1 뉴클레오티드의 부가를 차단함으로써 mRNA 합성을 차단한다.

또 다른 부류의 항균제는 세균 효소의 경쟁적 억제제로 작용하는 화합물이다. 경쟁성 억제제는 주로 모두 구조적으로 세균 성장 인자와 유사하며 결합에 대해 경쟁하지만 세포에서 대사 기능을 수행하지는 않는다. 이들 화합물로는 설폰아마이드 및 훨씬 더 높고 광범위한 항균 활성을 갖는 설파닐아마이드의 화학적으로 변형된 형태이다. 설폰아마이드(예를 들면, 잔트리신 및 트리메토프림)는 스트렙토코커스 뉴모니에, 베타-용혈성 스트렙토코커스 및 이. 콜라이의 치료에 유용하며, 이. 콜라이에 의해 야기된 단순 UTI의 치료에 및 수막구균성 수막염의 치료에 사용되었다.

항바이러스제는 바이러스 또는 세포내 바이러스의 복제에 의한 세포의 감염을 예방하는 화합물이다. 바이러스 복제 과정이 숙주 세포내 DNA 복제와 매우 밀접하게 관련되고, 비-특이적 항바이러스제가 종종 숙주에 독성이기 때문에, 항균성 약물보다 항바이러스 약물이 훨씬 소수이다. 항바이러스제에 의해 차단되거나 억제될 수 있는 바이러스 감염 과정에 여러 단계가 존재한다. 상기 단계로는, 바이러스가 숙주 세포에 부착하는 단계(면역글로불린 또는 결합 펩티드), 바이러스의 해체 단계(예를 들면, 아만타딘), 바이러스 mRNA의 합성 또는 번역 단계(예를 들면, 인터페론), 바이러스 RNA 또는 DNA의 복제 단계(예를 들면, 뉴클레오시드 유사체), 새로운 바이러스 단백질의 성숙 단계(예를 들면, 프로테아제 억제제) 및 바이러스의 발아 및 방출 단계가 포함된다.

또 다른 부류의 항바이러스제는 뉴클레오시드 유사체이다. 뉴클레오시드 유사체는 뉴클레오시드와 유사하지만 불완전하거나 비정상적인 데옥시리보스 또는 리보스 기를 갖는 합성 화합물이다. 일단, 뉴클레오시드 유사체가 세포에 존재하면, 이들은 포스포릴화되어 트라이포스페이트 형태를 생성하고, 이것은 바이러스 DNA 또는 RNA 내로의 혼입에 대해 정상 뉴클레오티드와 경쟁한다. 일단, 트라이포스페이트 형태의 뉴클레오시드 유사체가 성장하는 핵산 쇄에 혼입되면, 이것은 바이러스 폴리머라제의 비가역적 결합을 야기하므로 쇄 종료를 야기한다. 뉴클레오시드 유사체로는 아시클로버(단순포진 바이러스 및 수두-대상포진 바이러스의 치료에 사용), 잔시클로버(사이토메갈로바이러스의 치료에 사용), 이독스우리딘, 리바비린(호흡기 세포융합 바이러스의 치료에 유용), 디데옥시이노신, 디데옥시사이티딘 및 지도부딘(아지도티미딘)이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

또 다른 부류의 항바이러스제로는 인터페론과 같은 사이토카인이 포함된다. 인터페론은 바이러스에 감염된 세포 뿐 아니라 면역 세포에 의해 분비되는 사이토카인이다. 인터페론은 감염 세포에 인접한 세포상의 특정 수용체와 결합함으로써 작용하여 세포내 변화를 야기하여 바이러스에 의한 감염으로부터 보호한다. α- 및 β-인터페론은 또한 감염 세포의 표면상에 부류 I 및 부류 II MHC 분자의 발현을 유도하여, 숙주 면역 세포 인지에 증가된 항원 표현을 야기한다. α- 및 β-인터페론은 재조합 형태로서 유용하며 만성 B형 및 C형 간염 감염의 치료에 사용되어 왔다. 항바이러스 요법에 효과적인 투여량에서, 인터페론은 발열, 나른함 및 체중 감소와 같은 심각한 부작용을 갖는다.

면역글로불린 요법은 바이러스 감염의 예방에 이용된다. 바이러스 감염을 위한 면역글로불린 요법은 세균 감염과 상이한데, 그 이유는 면역 글로불린 요법이 항원-특이적이기 보다는, 세포외 바이런에 결합하여 그들이 바이러스 감염에 걸리기 쉬운 세포에 부착하고 그에 유입되는 것을 방해함으로써 작용하기 때문이다. 상기 요법은 항체가 숙주에 존재하는 기간동안 바이러스 감염을 예방하는데 유용하다. 일반적으로, 두가지 유형의 면역글로불린 요법, 즉 정상 면역 글로불린 요법 및 과-면역 글로불린 요법이 존재한다. 정상 면역 글로불린 요법은 정상 헌혈자의 혈청으로부터 제조되고 모아진 항체 생성물을 이용한다. 상기 모아진 생성물은 광범위한 인간 바이러스, 예를 들면, A형 간염, 파보바이러스, 엔테로바이러스(특히, 신생아에서)에 대해 낮은 역가의 항체를 함유한다. 과-면역 글로불린 요법은 특정한 바이러스에 대한 고 역가의 항체를 갖는 개인의 혈청으로부터 제조된 항체를 이용한다. 상기 항체들은 특정 바이러스에 대해 사용된다. 과-면역 글로불린의 예로는 대상포진 면역 글로불린(면역결함 아동 및 신생아에서 수두의 예방에 유용), 인간 광견병 면역 글로불린(광견병에 걸린 동물에 의해 물린 대상의 노출후 예방에 유용), B형 간염 면역 글로불린(특히 바이러스에 노출된 대상에서 B형 간염 바이러스의 예방에 유용) 및 RSV 면역 글로불린(호흡기 세포융합 바이러스 감염의 치료에 유용)이 포함된다.

항진균제는 감염성 진균의 치료 및 예방에 유용하다. 항진균제는 때때로 그의 작용 메카니즘에 의해 분류된다. 일부 항진균제는 글루코스 합성을 억제함으로써 세포벽 억제제로 작용한다. 이들로는 바시운진/ECB가 포함되나 이로 한정되지는 않는다. 다른 항진균제는 막의 보존상태를 불안정화시킴으로써 작용한다. 이들로는 이미다졸, 예를 들면, 클로트리마졸, 세타콘졸, 플루코나졸, 이트라코나졸, 케토코나졸, 미코나졸 및 보리코나콜, 및 FK 463, 암포테리신 B, BAY 38-9502, MK 991, 프라디마이신, UK 292, 부테나핀 및 터비나핀이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 다른 항진균제는 키틴(예를 들면, 키티나제) 또는 면역억제(501 크림)를 파괴함으로써 작용한다.

기생충박멸제는 기생충을 직접 사멸시키는 약제이다. 상기 화합물은 당해 분야에 공지되어 있으며, 일반적으로 상업적으로 시판한다. 인간 투여에 유용한 기생충박멸제의 예로는 알벤다졸, 암포테리신 B, 벤즈니다졸, 비티오놀, 클로로퀸 HCl, 클로로퀸 포스페이트, 클린다마이신, 데하이드로에메틴, 다이에틸카바마진, 디록사나이드 푸로에이트, 에플로니틴, 푸라졸리다온, 글루코코르티코이드, 할로판트린, 요오도퀴놀, 이베르멕틴, 메벤다졸, 메플로퀸, 메글루민 안티모니에이트, 멜라소프롤, 메트리포네이트, 메트로니다졸, 니클로사미드, 니퍼티목스, 옥삼니퀸, 파로모마이신, 펜타미딘 이세티오네이트, 피페라진, 프라지콴텔, 프리마퀸 포스페이트, 프로구아닐, 피란텔 파모에이트, 피리메탄마인-설폰아마이드, 피리메탄마인-설파독신, 퀴나크린 HCl, 퀴닌 설페이트, 퀴니딘 글루코네이트, 스피라마이신, 스티보글루코네이트 나트륨(나트륨 안티몬 글루코네이트), 슈라민, 테트라사이클린, 독시사이클린, 티아벤다졸, 티니다졸, 트리메트로프림-설파메톡사졸 및 트리파사미드가 포함되나, 이들로 한정되지는 않는다.

ORN은 또한 자가면역 질환을 치료하고 예방하는데 유용하다. 자가면역 질환은 대상 자신의 항체가 숙주 조직과 반응하거나 또는 면역 작동인자 T 세포가 내인성 자가 펩티드에 자가반응성이어서 조직의 파괴를 야기하는 질환의 한 부류이다. 따라서, 면역 반응은 자가 항원으로 지칭되는 대상 자신의 항원에 대해 개시된다. 자가면역 질환으로는 류마티스성 관절염, 크론씨병, 다발성 경화증, 전신성 홍반성 루프스(SLE), 자가면역 뇌척수염, 중증근무력증(MG), 하시모토 갑상선염, 굿패스쳐 증후군(Goodpastrue's syndrome), 천포창(예를 들면, 심상성 천포창), 그레이브스병, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역 혈소판감소성 자반병, 항-콜라겐 항체를 갖는 경피증, 혼합 결합 조직병, 다발성근염, 악성 빈혈, 특발성 애디슨병, 자가면역-관련 불임, 사구체신염(예를 들면, 반월상 사구체신염, 증식성 사구체신염), 수포성 유사천포창, 쇼그렌 증후군, 인슐린 내성 및 자가면역성 당뇨병이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

본원에서 사용된 바와 같이, "자가-항원"은 정상 숙주 조직의 항원을 말한다. 정상 숙주 조직은 암 세포를 포함하지 않는다. 따라서, 자가면역 질환과 관련하여, 자가-항원에 대해 개시되는 면역 반응은 바람직하지 않은 면역반응이며 정상 조직의 파괴 및 손상에 기여하는 반면, 암 항원에 대해 개시된 면역 반응은 바람직한 면역 반응이며 종양 또는 암의 파괴에 기여한다. 따라서, 자가면역 질환을 치료하는 것을 목적으로 하는 본 발명의 일부 태양에서, ORN을 자가 항원, 특히 자가면역 질환의 표적인 자가 항원과 함께 투여하는 것은 권장되지 않는다.

다른 경우에서, ORN은 저용량의 자가-항원과 함께 전달될 수 있다. 많은 동물 연구에서 저용량 항원의 점막 투여가 면역 반응저하 또는 "관용(tolerance)"의 상태를 야기할 수 있음이 입증되었다. 활성 메카니즘은 주로 Th2 및 Th3(즉, TGF-β가 우세한) 반응에 대해 Th1에서 벗어난 사이토카인-매개 면역 치우침인 것으로 보인다. 저용량 항원 전달에 의한 활성 억제는 또한 자가면역 질환, 예를 들면, 류마티스성 관절염 및 SLE의 치료에서 상당히 주목되는 비관련 면역 반응(방관자 억제)을 억제할 수 있다. 방관자 억제는 전구염증성 및 Th1 사이토카인이 항원-특이적 또는 항원-비특이적 방식으로 방출되는 국소 환경에서 Th1-상대-조절성 억제 사이토카인의 분비를 수반한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "관용"은 상기 현상을 지칭하기 위해 사용된다. 사실상, 경구 관용은 다음을 포함하여, 동물에서의 여러 자가면역 질환의 치료에서 효과적이었다: 실험적 자가면역성 수막염(EAE), 실험적 자가면역 중증근무력증, 콜라겐-유발성 관절염(CIA) 및 인슐린-의존성 당뇨병. 상기 모델에서, 자가면역 질환의 예방 및 억제는 Th1으로부터 Th2/Th3 반응까지 항원-특이적 체액성 및 세포성 반응과 관련된다.

본 발명의 조성물 및 방법은 단독으로 이용되거나, 또는 암 치료에 유용한 다른 약제 및 방법과 함께 이용될 수 있다. 한 태양에서, 본 발명은 암을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 암을 갖는 대상에게 대상을 치료하기에 효과량의 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 암을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 암을 갖는 대상에게 대상을 치료하기에 효과량의 본 발명의 조성물 및 항암 치료제를 투여하는 단계를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 대상에서 암을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, 본 발명의 면역자극성 ORN의 용도를 제공한다.

한 태양에서, 본 발명은 암 치료에 유용한 조성물을 제공한다. 상기 태양에 따른 조성물은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 암 치료제를 포함한다.

암을 갖는 대상은 검출가능한 암 세포를 갖는 대상이다. 암은 악성 또는 비-악성 암일 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "암"은 신체 기관 및 시스템의 정상 기능을 방해하는 세포의 통제되지 않는 성장을 말한다. 그의 원래 위치 및 핵 생명기관으로부터 확산되는 암은 결국 병에 걸린 기관의 기능 저하를 통해 대상의 사망을 유도할 수 있다. 조혈성 암, 예를 들면, 백혈병은 대상에서 정상 조혈 구획보다 우월하게 작용할 수 있어서, 조혈 결핍(빈혈, 혈소판감소증, 호중구감소증의 형태로)을 유발하여 결국 사망을 야기할 수 있다.

전이는 1차 종양으로부터 신체의 다른 부분으로 암 세포의 파종으로부터 비롯된, 1차 종양 위치와 별개의 암 세포의 영역이다. 1차 종양괴의 진단시, 대상은 전이의 존재에 대해 조사할 수 있다. 전이는 가장 흔하게는 특정 증상의 모니터링 이외에 자기 공명 영상(MRI) 스캔, 컴퓨터 단층촬영(CT) 스캔, 혈구 및 혈소판수, 간기능 연구, 흉부 X-선 및 뼈 스캔의 단독 또는 복합 사용을 통해 검출된다.

암으로는 기저세포암, 담관암, 방광암, 뼈암, 뇌 및 중추신경계(CNS) 암, 유방암, 자궁경부암, 융모막암종, 결장 및 직장 암, 결합조직암, 소화기계 암, 자궁내막암, 식도암, 안암, 두경부암, 상피내암, 신장암, 후두암, 백혈병, 간암, 폐암(예를 들면, 소세포 및 비-소세포), 호지킨 및 비-호지킨 림프종을 포함한 림프종, 흑색종, 골수종, 신경아세포종, 구강암(예를 들면, 입술, 혀, 구강 및 인두), 난소암, 췌장암, 전립선암, 망막아세포종, 횡문근육종, 직장암, 호흡기계 암, 육종, 피부암, 위암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 비뇨기계 암, 및 기타 암종, 선암 및 육종이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

본 발명의 면역자극성 조성물은 또한 항암 치료제와 함께 투여될 수 있다. 항암 요법에는 암 치료제, 방사선 및 수술 절차가 포함된다. 본원에서 사용된 바와 같이, "암 치료제"는 암을 치료할 목적으로 대상에게 투여되는 약제를 말한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "암을 치료하는"은 암의 진전을 예방하고, 암의 증상을 저하시키고/시키거나 정착된 암의 성장을 억제하는 것을 포함한다. 다른 태양에서, 암 치료제는 암이 진전될 위험을 감소시킬 목적으로 암이 진전될 위험이 있는 대상에게 투여된다. 다양한 유형의 암 치료용 약제를 본원에서 기술한다. 상기 열거를 위해, 암 치료제는 화학요법제, 면역치료제, 암 백신, 호르몬 요법 및 생물 반응 조절제로 분류된다.

화학요법제는 다음으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이들로 한정되지는 않는다: 메토트렉세이트, 빈크리스틴, 아드리아마이신, 시스플라틴, 비-당 함유 클로로에틸나이트로소유레아제, 5-플루오로우라실, 미토마이신 C, 블레오마이신, 독소루비신, 데카바진, 탁솔, 프라길린, 메글라민 GLA, 발루비신, 카무스타틴 및 폴리퍼포산, MMI270, BAY 12-9566, RAS 파네실 트랜스퍼라제 억제제, 파네실 트랜스퍼라제 억제제, MMP, MTA/LY231514, LY264618/로메텍솔, 글라몰렉, CI-994, TNP-470, 하이캄틴/토포테칸, PKC412, 발스포다르/PSC833, 노반트론/미트록산트론, 메타레트/슈라민, 바티마스타트, E7070, BCH-4556, CS-682, 9-AC, AG3340, AG3433, 인셀/VX-710, VX-853, ZD0101, ISI641, ODN 698, TA 2516/마르미스타트, BB2516/마르미스타트, CDP 845, D2163, PD183805, DX8951f, 레모날 DP 2202, FK 317, 피시바닐/OK-432, AD 32/발루비신, 메타스트론/스트론튬 유도체, 테모달/테모졸로미드, 에바세트/리포솜 독소루비신, 예우탁산/파클리탁셀, 탁솔/파클리탁셀, 젤로드/카페시타빈, 퍼툴론/독시플루리딘, 사이클로팍스/경구용 파클리탁셀, 경구용 탁소이드, SPU-077/시스플라틴, HMF 1275/플라보피리돌, CP-358(774)/EGFR, CP-609(754)/RAS 발암유전자 억제제, BMS-182751/경구용 백금, UFT(테가푸르/우라실), 에르가미솔/레바미솔, 에닐우라실/776C85/5FU 증강제, 캄프토/레바미솔, 캄프토사르/이리노테칸, 튜모덱스/랄리트렉세드, 류스타틴/클라드리빈, 팍섹/파클리탁셀, 독실/리포솜 독소루비신, 카엘릭스/리포솜 독소루비신, 플루다라/플루다라빈, 파마루비신/에피루비신, 데포시트, ZD1839, LU 79553/비스-나프탈이미드, LU103793/돌라스틴, 카에틱스/리포솜 독소루비신, 겜자르/겜시타빈, ZD0473/아노르메드, YM 116, 요오드 시드, CDK4 및 CDK2 억제제, PARP 억제제, D4809/덱시포사미드, 이페스/메스넥스/이포사미드, 뷰몬/테니포시드, 파라플라틴/카보플라틴, 플란티놀/시스플라틴, 베페시드/에토포시드, ZD 9331, 탁소테어/도세탁셀, 구아닌 아라비노시드의 전구약물, 탁산 유사체, 니트로소유레아, 알킬화제, 예를 들면, 멜펠란 및 사이클로포스파미드, 아미노글루테티미드, 아스파라지나제, 부설판, 카보플라틴, 클로롬부실, 시타라빈 HCI, 닥티노마이신, 다우노루비신 HCl, 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨, 에토포시드(VP16-213), 플록수리딘, 플루오로우라실(5-FU), 플루타미드, 하이드록시유레아(하이드록시카바미드), 이포스파미드, 인터페론 알파-2a, 알파-2b, 류프롤리드 아세테이트(LHRH-방출 인자 유사체), 로무스틴(CCNU), 메클로레타민 HCl(질소 머스타드), 머캅토퓨린, 메스나, 미토탄(o.p'-DDD), 미톡산트론 HCl, 옥트레오티드, 플리카마이신, 프로카바진 HCl, 스트렙토조신, 타목시펜 시트레이트, 티오구아닌, 티오테파, 빈블라스틴 설페이트, 암사크린(m-AMSA), 아자시티딘, 에트로포이에틴, 헥사메틸멜라민(HMM), 인터류킨 2, 미토구아존(메틸-GAG; 메틸 글리옥살 비스-구아닐하이드라존; MGBG), 펜토스타틴(2'데옥시코포마이신), 세무스틴(메틸-CCNU), 테니포시드(VM-26) 및 빈데신 설페이트.

면역치료제는 다음으로 이루어진 군에서 선택된 군에서 선택될 수 있으나, 이로 한정되지는 않는다: 3622W94, 4B5, ANA Ab, 항-FLK-2, 항-VEGF, 아트라젠(ATRAGEN), 아바스틴(AVASTIN)(베바시주맙; 진엔테크), BABS, BEC2, 벡사르(BEXXAR)(토시투모맙; 글락소스미스클라인), C225, 캄패스(CAMPATH)(알렘투주맙; 겐자임 코포레이션), 세아시드(CEACIDE), CMA 676, EMD-72000, 에르비툭스(ERBITUX)(세툭시맙; 임클론 시스템즈, 인코포레이티드), 글리오맙-H, GNI-250, 헤르셉틴(HERCEPTIN)(트라스투주맙; 진엔테크), 이데크(IDEC)-Y2B8, 이뮤레이트-세아(ImmuRAIT-CEA), 이오르 c5, 이오르 egf.r3, 이오르 t6, LDP-03, 림포시드(LymphoCide), MDX-11, MDX-22, MDX-210, MDX-220, MDX-260, MDX-447, 멜리뮨(MELIMMUNE)-1, 멜리뮨-2, 모노팜(Monopharm)-C, 노보맙(NovoMAb)-G2, 온코림(Oncolym), OV103, 오바렉스, 파노렉스, 프레타게트, 쿠아드라메트, 리부탁신, 리툭산(RITUXAN)(리툭시맘; 진엔테크), 스마트(SMART) 1D10 Ab, 스마트 ABL 364 Ab, 스마트 M195, TNT 및 제나팍스(ZENAPAX)(다클리주맙; 로슈).

암 백신은 다음으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이로 한정되지는 않는다: EGF, 항-유전자형 암 백신, Gp75 항원, GMK 흑색종 백신, MGV 강글리오시드 결합체 백신, Her2/neu, 오바렉스, M-백스, O-백스, L-백스, STn-KHL 테라토프, BLP25(MUC-1), 리포솜 유전자형 백신, 멜라신, 펩티드 항원 백신, 독소/항원 백신, MVA-계 백신, 파시스(PACIS), BCG 백신, TA-HPV, TA-CIN, DISC-바이러스 및 이뮤시스트/테라시스(ImmuCyst/TheraCys).

본 발명의 조성물 및 방법은 단독으로 또는 알레르기 치료를 위한 다른 약제 및 방법과 함께 사용될 수 있다. 한 태양에서, 본 발명은 알레르기 질환을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 알레르기 질환을 갖는 대상에게 대상을 치료하기에 효과량의 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 알레르기 질환을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 알레르기 질환을 갖는 대상에게 대상을 치료하기에 효과량의 본 발명의 조성물 및 항-알레르기 치료제를 투여하는 단계를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 대상에서 알레르기 질환을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 본 발명의 면역자극성 ORN의 용도를 제공한다.

한 태양에서, 본 발명은 알레르기 질환을 치료하는데 유용한 조성물을 제공한다. 상기 태양에 따른 조성물은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 알레르기 약제를 포함한다.

"알레르기 질환을 갖는 대상"은 알레르겐에 대해 알레르기 반응을 현재 겪고 있거나 이미 겪었던 대상을 말한다.

"알레르기 질환" 또는 "알레르기"는 물질(알레르겐)에 대한 후천성 과민증을 말한다. 알레르기 질환에는 습진, 알레르기성 비염 또는 코감기, 건초열, 알레르기성 결막염, 기관지 천식, 두드러기 및 음식 알레르기, 아토피 피부염을 포함한 기타 아토피 질환, 아나필락시스, 약물 알레르기 및 혈관부종이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

알레르기는 전형적으로 알레르겐에 대한 특정 부류의 면역글로불린 IgE로부터의 항체 생성과 관련된 삽화적 질환이다. 일반적인 공기 알레르겐에 대한 IgE-매개 반응의 진행은 또한 천식의 진행에 대한 소인을 나타내는 인자이다. 알레르겐이 호염기구(혈액에서 순환하는) 또는 비만 세포(고형 종양 전체에 분산된)의 표면상에서 IgE Fc 수용체(FcεR)에 결합된 특정 IgE와 만나면, 세포는 활성화되어 히스타민, 세로토닌 및 지질 매개체와 같은 매개체의 생성 및 방출을 야기한다.

알레르기 반응은 IgE 유형의 조직-민감화 면역글로불린이 외래 알레르겐과 반응할 때 일어난다. IgE 항체는 비만 세포 및/또는 호염기구에 결합되며, 이들 분화된 세포는 항체 분자의 말단을 가교하는 알레르겐에 의해 상기와 같이 자극되는 경우 알레르기 반응의 화학 매개체(혈관작용성 아민)를 방출한다. 히스타민, 혈소판 활성화 인자, 아라키돈산 대사물 및 세로토닌은 인간에서 알레르기 반응의 가장 잘 알려진 매개체이다. 히스타민 및 기타 혈관작용성 아민은 통상적으로 비만 세포 및 호염기성 백혈구에 저장된다. 비만 세포는 동물 조직 전체에 분산되며, 호염기구는 혈관계 내에서 순환된다. 이들 세포는 IgE 결합을 수반하는 상황의 분화 결과가 그의 방출을 유발하도록 일어나지 않는 한, 세포내에 히스타민을 제조하고 저장한다.

알레르기 반응의 증상은 IgE가 항원과 반응하는 신체내 부위에 따라 달라진다. 반응이 호흡기 상피를 따라 일어나는 경우, 증상은 일반적으로 재채기, 기침 및 천식 반응이다. 음식 알레르기의 경우에서와 같이 소화관에서 상호작용이 일어나는 경우, 복통 및 설사가 보편적이다. 예를 들면, 알레르기 대상에게 봉침 또는 페니실린 투여후, 전신적 알레르기 반응은 심각할 수 있으며 종종 생명을 위협한다.

알레르기는 적어도 부분적으로 Th2 사이토카인 IL-4 및 IL-5를 특징으로 하는 Th2-유형의 면역 반응, 및 IgE로 전환되는 항체 아이소타이프와 관련된다. Th1 및 Th2 면역 반응은 서로 역-조절성(counter-regulatory)이어서, Th1-유형의 면역 반응에 대한 면역 반응의 비대칭(skewing)이 알레르기를 포함하여 Th2-유형의 면역 반응을 방지하거나 경감시킬 수 있다. 그러므로, 본 발명의 면역자극성 ORN은 자체로 알레르기 질환을 갖는 대상을 치료하는데 유용한데, 그 이유는 면역자극성 ORN이 Th1-유형의 면역 반응에 대한 면역 반응을 비대칭되게 할 수 있기 때문이다. 대안적으로, 또는 게다가, 본 발명의 면역조절성 ORN은 알레르기 질환을 갖는 대상을 치료하기 위해 알레르겐과 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 면역자극성 조성물은 항-알레르기 치료제와 함께 투여될 수 있다. 알레르기를 치료 또는 예방하는 통상적인 방법은 알레르기 약제 또는 탈민감화 요법의 사용을 포함한다. 알레르기를 치료하거나 예방하기 위해 발전된 일부 요법은 중화 항-IgE 항체의 사용을 포함한다. 알레르기 반응의 화학 매개체의 효과를 차단하는 항-히스타민 및 다른 약물은 알레르기 증상의 중증도를 조절하는 것을 촉진하지만, 알레르기 반응을 예방하지는 않으며 이어지는 알레르기 반응에 영향을 미치지 못한다. 탈민감화 요법은 알레르겐에 대한 IgG-유형 반응을 유도하기 위해, 통상적으로 피부하 주사에 의해 소용량의 알레르겐을 제공함으로써 수행된다. IgG 항체의 존재는 IgE 항체의 유도로부터 비롯된 매개체의 생성을 무력화시키는 것을 촉진하는 것으로 생각된다. 초기에, 심각한 반응을 피하기 위해 대상을 매우 저용량의 알레르겐으로 치료하고, 용량을 서서히 증가시킨다. 상기 유형의 요법은 대상이 실질적으로 알레르기 반응을 유발하는 화합물을 투여받기 때문에 위험하며, 심한 알레르기 반응이 야기될 수 있다.

알레르기 약제로는 항-히스타민, 코르티코스테로이드 및 프로스타글란딘 유도인자가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 항-히스타민은 비만세포 또는 호염기구에 의해 방출된 히스타민에 반작용하는 화합물이다. 이들 화합물은 당해 분야에 공지되어 있으며 통상적으로 알레르기 치료에 사용된다. 항-히스타민으로는 아크리바스틴, 아스테미졸, 아자타딘, 아젤라스틴, 베타타스틴, 브롬페니라민, 부클리진, 세티리진, 세티리진 유사체, 클로르페니라민, 클레마스틴, CS 560, 시프로헵타딘, 데스로라타딘, 덱스클로르페니라민, 에바스틴, 에피나스틴, 펙소페나딘, HSR 609, 하이드록시진, 레보카바스틴, 로라티딘, 메트스코폴아민, 미졸라스틴, 노라스테미졸, 페닌다민, 프로메타진, 피릴아민, 터페나딘 및 트라닐라스트가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

코르티코스테로이드로는 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 베클로메타손, 부데소나이드, 덱사메타손, 플루니솔리드, 플루티카손, 프로피오네이트 및 트리암시놀론이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 덱사메타손은 소염 작용을 갖는 코르티코스테로이드이지만, 고도로 흡수되고 효과적인 용량에서 장기 억제성 부작용을 갖기 때문에 흡입 형태로 알레르기 또는 천식 치료에 규칙적으로 사용되지 않는다. 그러나, 덱사메타손은 본 발명의 조성물과 함께 투여될 때 부작용을 감소시키기 위해 낮은 용량으로 투여될 수 있기 때문에, 알레르기 또는 천식을 치료하기 위해 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 코르티코스테로이드 사용과 관련된 부작용의 일부로는 기침, 언어장애, 아구창(칸디다증), 및 보다 높은 용량에서, 전신적 영향, 예를 들면, 부신 억제, 당내인성, 골다공증, 뼈의 비패혈성 괴사, 백내장 생성, 성장 억제, 고혈압, 근육 약화, 피부 약화(thinning) 및 쉽게 멍드는 현상이 포함된다[Barnes & Peterson, Am Rev Respir Dis 148:S1-S26, 1993; and Kamada AK et al., Am J Respir Crit Care Med 153:1739-1748, 1996].

본 발명의 조성물 및 방법은 단독으로 또는 천식을 치료하는데 유용한 다른 약제 및 방법과 함께 사용될 수 있다. 한 태양에서, 본 발명은 천식을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 천식을 갖는 대상에게 대상을 치료하기에 효과량의 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 천식을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 천식을 갖는 대상에게 대상을 치료하기에 효과량의 본 발명의 조성물 및 항-천식 치료제를 투여하는 단계를 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 대상에서 천식을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 본 발명의 면역자극성 ORN의 용도를 제공한다.

한 태양에서, 본 발명은 천식을 치료하는데 유용한 조성물을 제공한다. 상기 태양에 따른 조성물은 본 발명의 면역자극성 ORN 및 천식 약제를 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "천식"은 기도의 염증 및 협착, 및 흡입제에 대한 기도의 증가된 반응성을 특징으로 하는 호흡기계의 질환을 말한다. 천식은 흔히, 전적인 것은 아니지만 아토피 또는 알레르기 질환과 관련된다. 천식의 증상은 기도 폐색으로부터 야기되는 쌕쌕거림, 호흡곤란, 가슴 답답함 및 기침의 재발성 삽화를 포함한다. 천식과 관련된 기도 염증은 많은 생리학적 변화, 예를 들면, 기도 상피의 삭박, 기저막하 콜라겐 침착, 부종, 비만 세포 활성화, 호중구, 호산구 및 림프구를 포함하여 염증 세포 침윤의 관찰을 통해 발견될 수 있다. 기도 염증의 결과로, 천식 환자들은 흔히 기도 과민상태, 기류 폐쇄, 호흡기 증상 및 질환의 만성화를 겪게 된다. 기류 폐쇄로는 급성 기관지수축, 기도 부종, 점액질 플러그 생성, 및 흔히 기관지 폐색을 유도하는 특징을 갖는 기도 재형성이 포함된다. 천식의 일부 경우에서, 기저막하 섬유증이 일어나 폐 기능에 계속적인 이상을 유발할 수 있다.

과거 수년동안의 연구로부터 천식은 염증 세포, 매개체, 및 기도에 내재하는 다른 세포 및 조직 사이의 복잡한 상호작용으로부터 야기되기 쉬운 것으로 밝혀졌다. 비만 세포, 호산구, 상피 세포, 대식세포 및 활성화 T 세포는 모두 천식과 관련된 염증 과정에서 중요한 역할을 한다[Djukanovic R et al., Am Rev Respir Dis 142:434-457, 1990]. 상기 세포들은 국소 조직에 직접 또는 간접적으로 작용할 수 있는 미리형성되고 새로 합성된 매개체의 분비를 통해 기도의 기능에 영향을 미칠 수 있는 것으로 생각된다. 또한, T 림프구의 아형(Th2)이 선택적 사이토카인을 방출하고 질환 만성화를 정착시킴으로써 기도에서의 알레르기 염증을 조절하는데 중요한 역할을 하는 것으로 인식되어 왔다[Robinson DS et al., N Engl J Med 326:298-304, 1992].

천식은 발육의 상이한 단계에서 야기되는 복잡한 질환이며, 증상의 정도에 따라 급성, 아급성(subacute) 및 만성으로 분류될 수 있다. 급성 염증 반응은 기도내로 세포의 조기 동원(recruitment)과 관련된다. 아급성 염증 반응은 세포의 동원, 및 보다 지속적인 패턴의 염증을 야기하는 내재성 세포의 활성화를 수반한다. 만성 염증 반응은 지속적인 수준의 세포 손상 및 진행하는 회복 과정을 특징으로 하는데, 이것은 기도에 영구적인 이상을 야기할 수 있다.

"천식을 갖는 대상"은 기도의 염증 및 협착, 및 흡입제에 대한 기도의 증가된 반응성을 특징으로 하는 호흡기계의 질환을 갖는 대상이다. 천식의 개시와 관련된 인자로는 알레르겐, 저온, 운동, 바이러스 감염 및 SO₂가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

상기에서 언급했듯이, 천식은 Th2-유형의 면역 반응과 관련될 수 있는데, 상기 반응은 적어도 부분적으로 Th2 사이토카인 IL-4 및 IL-5, 및 IgE로 전환되는 항체 아이소타입을 특징으로 한다. Th1 및 Th2 면역 반응은 서로 역-조절성이어서, Th1-유형의 면역 반응에 대한 면역 반응의 비대칭이 알레르기를 포함하여 Th2-유형의 면역 반응을 방지하거나 경감시킬 수 있다. 그러므로, 본 발명의 면역자극성 ORN은 자체로 천식을 갖는 대상을 치료하는데 유용한데, 그 이유는 면역자극성 ORN이 Th1-유형의 면역 반응에 대한 면역 반응을 비대칭되게 할 수 있기 때문이다. 대안적으로, 또는 게다가, 본 발명의 면역조절성 ORN은 천식을 갖는 대상을 치료하기 위해 알레르겐과 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 면역자극성 조성물은 또한 천식 치료제와 함께 투여될 수 있다. 천식을 치료 또는 예방하기 위한 통상적인 방법은 항-알레르기 치료제(전술함) 및 흡입제를 포함하여 많은 다른 약제의 사용을 수반하였다.

천식을 치료하기 위한 약물치료는 일반적으로 두 부류, 즉 신속 완화 약물치료 및 장기 조절 약물치료로 나뉜다. 천식 환자는 지속성 천식의 제어를 달성하고 유지하기 위해 일일 기준으로 장기 조절 약물치료를 취한다. 장기 조절 약물치료는 소염제, 예를 들면, 코르티코스테로이드, 크로몰린 나트륨 및 네도크로밀; 장기-작용 기관지확장제, 예를 들면, 장기-작용 β₂-작용물질 및 메틸잔틴; 및 류코트리엔 조절제를 포함한다. 신속-완화 약물치료로는 단기-작용 β₂ 작용물질, 항-콜린제 및 전신성 코르티코스테로이드가 포함된다. 상기 약물들 각각과 관련하여 많은 부작용이 있으며, 약물들 어느 것도 단독으로 또는 함께 천식을 예방하거나 완전히 치료할 수는 없다.

천식 약제로는 PDE-4 억제제, 기관지확장제/베타-2 작용물질, K+ 채널 개방제, VLA-4 길항물질, 뉴로킨 길항물질, 트롬복산 A2(TXA2) 합성 억제제, 잔틴, 아라키돈산 길항물질, 5 리폭시게나제 억제제, TXA2 수용체 길항물질, TXA2 길항물질, 5-리폭스 활성화 단백질의 억제제 및 프로테아제 억제제가 포함되나, 이들로 한정되지는 않는다.

기관지확장제/β₂ 작용물질은 기관지확장 또는 평활근 이완을 야기하는 화합물의 한 부류이다. 기관지확장제/β₂ 작용물질로는 살메테롤, 살부타몰, 알부테롤, 터부탈린, D2522/포모테롤, 페노테롤, 비톨테롤, 피르부에롤 메틸잔틴 및 오르시프레날린이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 장기-작용 β₂ 작용물질 및 기관지확장제는 소염 치료 이외에 증상의 장기 예방에 사용되는 화합물들이다. 장기-작용 β₂ 작용물질로는 살메테롤 및 알부테롤이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 이들 화합물은 통상적으로 코르티코스테로이드와 함께 사용되며, 일반적으로 임의의 염증 치료없이는 사용되지 않는다. 이들은 빈맥, 골격근 떨림, 저칼륨혈증, 및 과량복용시 QTc 간격의 연장과 같은 부작용과 관련되었다.

예를 들어, 테오필린을 포함하여 메틸잔틴은 증상의 장기 조절 및 예방을 위해 사용되었다. 이들 화합물은 포스포다이에스터라제 억제 및 아마도 아데노신 길항작용으로부터 비롯되는 기관지확장을 야기한다. 용량-관련 급성 독성은 상기 유형의 화합물에 따른 특별한 문제이다. 그 결과, 독성, 및 대사 제거율에서의 개인별 차이로부터 비롯되는 좁은 치료 범위를 고려하기 위해 일상적인 혈청 농도를 모니터해야 한다. 부작용으로는 빈맥, 부정빈맥, 구역질 및 구토, 중추신경계 자극, 두통, 발작, 토혈, 고혈당증 및 저칼륨혈증이 포함된다. 단기-작용 β₂ 작용물질로는 알부테롤, 비톨테롤, 피르부테롤 및 터부탈린이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 단기-작용 β₂ 작용물질의 투여와 관련된 부작용의 일부로는 빈맥, 골격근 떨림, 저칼륨혈증, 락트산 증가, 두통 및 고혈당증이 포함된다.

크로몰린 나트륨 및 네도크로밀은 주로 운동으로부터 야기되는 천식 증상 또는 알레르겐으로부터 야기되는 알레르기 증상을 예방하기 위한 장기 조절 약물로 사용된다. 상기 화합물들은 클로라이드 채널 기능을 방해하여 알레르겐에 대한 조기 및 말기 반응을 차단하는 것으로 생각된다. 이들은 또한 비만 세포막을 안정화시키고 이노시네오필(inosineophil) 및 상피 세포로부터 매개체의 활성화 및 방출을 억제한다. 최대 이점을 달성하기 위해서는 일반적으로 4 내지 6주의 투여 기간이 필요하다.

항콜린제는 일반적으로 급성 기관지경련의 완화에 사용된다. 이들 화합물은 무스카린성 콜린작용성 수용체의 경쟁적 억제에 의해 작용하는 것으로 생각된다. 항콜린제로는 이프라트로퓸 브로마이드가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 이들 화합물은 콜린성-매개 기관지경련만을 역전시키며, 항원에 대한 어떤 반응도 조절하지 않는다. 부작용으로는 구강 및 호흡기 분비물의 건조, 일부 개인에서 쌕쌕거림의 증가, 및 눈에 분무되는 경우 흐릿한 시야가 포함된다.

본 발명의 면역조절성 ORN은 또한 기도 재형성을 치료하는데 유용할 수 있다. 기도 재형성은 기도에서 평활근 세포 증식 및/또는 점막하비대로부터 야기되며, 궁극적으로 기도의 협착을 야기하여 기류 폐쇄를 유발한다. 본 발명의 면역자극성 ORN은 또한 재형성을 예방하고, 아마도 심지어 재형성 과정으로부터 비롯되는 조직 증대를 감소시킬 수 있다.

본 발명의 면역자극성 ORN은 수지상 세포의 생존, 분화, 활성화 및 성숙을 개선시키는데 유용하다. 면역조절성 올리고리보뉴클레오티드는 수지상 세포의 세포 생존, 분화, 활성화 및 성숙을 촉진하는 독특한 능력을 갖는다.

본 발명의 면역조절성 ORN은 또한 자연 살해 세포 용해 활성 및 항체-의존성 세포 독성(ADCC)을 증가시킨다. ADCC는 면역자극성 ORN을 세포 표적, 예를 들면, 암세포에 특이적인 항체와 함께 사용하여 수행될 수 있다. 면역자극성 ORN을 항체와 함께 대상에 투여하는 경우, 대상의 면역계는 종양 세포를 사멸하도록 유도된다. ADCC 절차에 유용한 항체로는 체내에서 세포와 상호작용하는 항체가 포함된다. 세포 표적에 특이적인 많은 상기 항체들은 당해 분야에 기술되었으며 대부분이 상업적으로 시판한다. 한 태양에서, 항체는 IgG 항체이다.

특정 태양에서, 본 발명은 에피토프 확장을 증대시키는 방법을 제공한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "에피토프 확장"은 상기 단백질(분자내 확장) 또는 다른 단백질(분자간 확장) 상의 부차로 우세하고/하거나 숨겨진 에피토프에 대해, 자가 또는 외래 단백질에 대해 유도된, 초기의 집중된 우세한 에피토프-특이적 면역 반응으로부터의 에피토프 특이성의 다양화를 말한다. 에피토프 확장은 다중 에피토프-특이적 면역 반응을 야기한다.

면역 반응은, 자가면역 질환에서와 같이 해로울 수 있거나 또는 백신접종에서와 같이 유리할 수 있는 초기 확대기, 및 면역계를 항상성으로 복귀시키고 기억력을 이루는 후기 하향-조절기로 이루어진다. 에피토프 확장은 상기 두 시기의 중요한 부분일 수 있다. 종양 환경에서 에피토프 확장의 증대는, 종양군에서 회피 변이체의 가능성을 감소시키고 따라서 질환의 진행에 영향을 미치면서, 대상의 면역계로 하여금 원래의 치료 프로토콜에 대한 반응으로 면역계에 의해 초기에 인지되지 않은 추가의 표적 에피토프를 결정할 수 있게 만든다.

본 발명의 올리고리보뉴클레오티드는 암, 바이러스 및 세균 감염, 및 알레르기와 같은 치료적으로 유리한 적응증에서 에피토프 확장을 촉진하는데 유용할 수 있다. 한 태양에서, 상기 방법은 항원 및 보조제를 포함하는 백신을 대상에게 투여하고, 이어서 대상에게 다중 에피토프-특이적 면역 반응을 유도하기에 효과적인 양으로 두 용량 이상의 본 발명의 면역자극성 ORN을 투여하는 단계를 포함한다. 상기 방법은, 한 태양에서, 종양 항원 및 보조제를 포함하는 백신을 대상에게 투여하고, 이어서 다중 에피토프-특이적 면역 반응을 유도하기에 효과적인 양으로 두 용량 이상의 본 발명의 ORN을 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기 방법은, 한 태양에서, 대상에서 면역계 항원 노출을 야기하는 치료 프로토콜을 적용한 후, 본 발명의 면역자극성 올리고리보뉴클레오티드를 2회 이상 투여하여 다중 에피토프-특이적 변역 반응을 유도, 즉, 에피토프 확장을 촉진하는 것을 포함한다. 다양한 태양에서, 치료 프로토콜은 수술, 방사선, 화학요법, 기타 암 치료제, 백신 또는 암 백신이다.

치료 프로토콜은 후속 면역자극 요법 이외에, 면역자극제와 함께 이행될 수 있다. 예를 들면, 치료 프로토콜이 백신인 경우, 백신은 보조제와 함께 투여될 수 있다. 백신과 보조제의 조합은 혼합물이거나 또는 별도 투여, 즉, 주사(즉, 동일 배액 영역)일 수 있다. 투여는 반드시 동시에 할 필요는 없다. 비-동시 주사를 이용하는 경우, 시간 조정은 보조제를 미리 주사한 후 백신 제형을 주사하는 것을 포함한다.

치료 프로토콜을 수행한 후, 면역자극성 단일요법이 개시된다. 투여의 최적 횟수, 기간 및 부위는 표적 및 기타 요인들에 따라 달라질 것이지만, 예를 들면, 6 개월 내지 2 년의 기간동안 한달에 한번 내지 두달에 한번일 수 있다. 또는, 투여는 매일, 매주 또는 격주 기준으로 수행될 수 있거나, 또는 투여는 하루, 일주 또는 한달에 여러 회일 수 있다. 몇몇 경우에서, 투여 기간은 치료 길이에 따라 달라질 수 있다, 예를 들면, 투여는 1 주일후, 1 개월후, 1 년후 또는 수 년후에 종료될 수 있다. 다른 경우에서, 단일요법은 정맥내 점적에 의해 연속적일 수 있다. 면역자극제는 표적에 공통적인 배액 영역으로 투여될 수 있다.

요법에 사용하기 위해, 화합물의 활성, 투여 방식, 면역화 목적(즉, 예방 또는 치료), 질환의 특성 및 중증도, 대상의 연령 및 체중에 따라, 상이한 용량들이 대상의 치료에 필요할 수 있다. 주어진 용량의 투여는 개별 용량 단위 또는 여러 소 용량 단위의 형태로 단일 투여에 의해 수행될 수 있다. 항원-특이적 면역 반응을 증대시키기 위해 수주 또는 수개월의 특정 간격으로 용량의 다중 투여를 이용할 수 있다.

본원에 제공된 교지내용과 함께, 다양한 활성 화합물, 및 가중 인자, 예를 들면, 효능, 상대적 생체이용률, 환자의 체중, 부작용의 중증도 및 바람직한 투여 방식 중에서 선택함으로써, 실질적인 독성을 야기하지 않고 전적으로 특정 대상을 치료하는데 효과적인 유효한 예방 또는 치료 요법을 설계할 수 있다. 임의의 특별한 용도에 효과적인 양은 치료되는 질환 또는 질병, 투여되는 특정 치료제, 대상의 크기, 또는 질환 또는 질병의 중증도와 같은 요인들에 따라 달라질 수 있다. 당해 분야에 통상의 기술을 가진 자라면 과도한 실험의 필요없이 특정한 핵산 및/또는 다른 치료제의 효과량을 실험적으로 결정할 수 있다.

본원에 기술된 화합물의 대상 용량은 전형적으로 0.1 ㎍ 내지 10,000 mg, 보다 전형적으로는 약 1 ㎍/일 내지 8000 mg, 가장 전형적으로는 약 10 내지 100 ㎍의 범위이다. 대상 체중의 관점에서 말하면, 전형적은 투여량은 약 0.1 ㎍ 내지 20 mg/kg/일, 보다 전형적으로는 약 1 내지 10 mg/kg/일, 가장 전형적으로는 약 1 내지 5 mg/kg/일의 범위이다.

핵산 및/또는 다른 화합물을 함유하는 약학 조성물은 약제를 투여하기 위한 임의의 적당한 경로에 의해 투여될 수 있다. 다양한 투여 경로가 이용가능하다. 선택된 특정 방식은 선택된 특정 약제 또는 약제들, 치료되는 특정 질환 및 치료 효능에 필요한 투여량에 따라 달라질 것은 물론이다. 본 발명의 방법은, 일반적으로 말해서, 의료적으로 허용되는 임의의 투여 방식, 즉, 임상적으로 허용될 수 없는 부작용을 야기하지 않고 효과적인 수준의 면역 반응을 유발하는 임의의 방식을 이용하여 실행될 수 있다. 바람직한 투여 방식을 본원에서 논의한다. 치료에 사용하기 위해, 효과량의 핵산 및/또는 다른 치료제를 약제를 목적하는 표면, 예를 들면, 점막, 전신에 전달하는 임의의 방식에 의해 대상에게 투여할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물을 투여하는 것은 숙련된 전문가에게 공지된 임의의 방법에 의해 달성될 수 있다. 투여 경로로는 경구, 비경구, 정맥내, 근육내, 복강내, 비강내, 설하, 기관내, 흡입, 피하, 안내, 질내 및 직장내가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 천식 또는 알레르기의 치료 또는 예방을 위해, 상기 화합물들은 바람직하게는 흡입되거나 섭취되거나 또는 전신 경로로 투여된다. 전신 경로로는 경구 및 비경구가 포함된다. 흡입 약제는 주로 천식 환자에서 염증 부위인 폐로 직접 전달되기 때문에 일부 태양에서 바람직하다. 여러 유형의 장치를 흡입에 의해 투여하기 위해 적절히 사용한다. 상기 유형의 장치로는 정량식 흡입제(MDI), 호흡 작동식 MDI, 건조 분말 흡입기(DPI), MDI와 함께 스페이서/보유 챔버, 및 분무기가 포함된다.

본 발명의 치료제는 벡터를 사용하여 특정 조직, 세포 유형 또는 면역계에 전달될 수 있다. 광의에서, "벡터"는 표적 세포로의 조성물의 전달을 촉진할 수 있는 임의의 비히클이다. 벡터는 일반적으로 면역자극성 핵산, 항체, 항원 및/또는 질병-특이적 약제를, 벡터의 부재를 야기하는 분해 정도에 비해 감소된 분해율하에 표적 세포로 수송한다.

일반적으로, 본 발명에 유용한 벡터는 생물 벡터 및 화학/물리적 벡터의 두 부류로 나뉜다. 생물 벡터 및 화학/물리적 벡터는 본 발명 치료제의 전달 및/또는 흡수에 유용하다.

대부분의 생물 벡터는 핵산의 전달에 사용되며, 면역자극성 핵산이거나 면역자극성 핵산을 포함하는 치료제의 전달에 가장 적절하다.

본원에서 논의한 생물 벡터 이외에, 화학/물리적 벡터는 면역자극성 핵산, 항체, 항원, 및 질병-특이적 약제를 포함하는 치료제를 전달하는데 사용될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "화학/물리적 벡터"는 핵산 및/또는 다른 약제를 전달할 수 있는, 세균학적 또는 바이러스 공급원에서 유래된 것이 아닌 천연 또는 합성 분자를 말한다.

본 발명의 바람직한 화학/물리적 벡터는 콜로이드성 분산 시스템이다. 콜로이드성 분산 시스템으로는 수중유적형 유화액, 미셀, 혼합 미셀 및 리포솜을 포함하는 액체 시스템을 포함한다. 본 발명의 바람직한 콜로이드성 시스템은 리포솜이다. 리포솜은 생체내 또는 시험관내에서 전달 벡터로 유용한 인공 막 용기이다. 가 0.2 내지 4.0 ㎛의 범위인 거대 단층 소포(LUV)는 거대한 고분자를 캡슐화할 수 있는 것으로 밝혀졌다. RNA, DNA 및 비손상 바이런은 수성 내부에 캡슐화될 수 있으며 생물학적 활성 형태로 세포에 전달될 수 있다[Fraley et al., Trends Biochem Sci 6:77, 1981].

리포솜은 리포솜을 특정 리간드, 예를 들면, 단클론성 항체, 당, 당지질 또는 단백질에 커플링시킴으로써 특정 조직으로 표적화될 수 있다. 리포솜을 면역 세포로 표적화하는데 유용할 수 있는 리간드로는 다음이 포함되나, 이들로 한정되지는 않는다: 면역 세포 특이적 수용체와 상호작용하는 분자의 비손상 단편, 및 면역세포의 세포 표면 마커와 상호작용하는 분자, 예를 들면, 항체. 상기 리간드는 당해 분야에 숙련자에게 공지된 결합 분석법에 의해 용이하게 확인될 수 있다. 또 다른 태양에서, 리포솜은 앞에서 논의한 면역치료 항체 중 하나에 리포솜을 커플링시킴으로써 암에 표적화될 수 있다. 또한, 벡터는, 벡터를 숙주 세포의 핵으로 유도할 핵 표적화 펩티드에 커플링될 수 있다.

형질감염을 위한 지질 제형은 키아겐(QIAGEN)에서, 예를 들면, 이펙틴(EFFECTENE, 등록상표)(특정 DNA 축합 증강제를 갖는 비-리포솜 지질) 및 슈퍼펙트(SUPERFECT, 등록상표)(신규 작용 덴드리머 기술)로서 상업적으로 시판한다.

리포솜은 깁코(Gibco) BRL에서, 예를 들면, N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)-프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄 클로라이드(DOTMA) 및 다이메틸 다이옥타데실암모늄 브로마이드(DDAB)와 같은 양이온성 지질로 이루어진 리포펙틴(LIPOFECTIN, 등록상표) 및 리포펙테이스(LIPOFECTACE, 등록상표)로서 상업적으로 시판한다. 리포솜의 제조 방법은 당해 분야에 공지되어 있으며 많은 출판물에서 기술되었다. 리포솜은 또한 문헌 [Gregoriadis G, Trends Biotechnol 3:235-241, 1985]에서 고찰되었다.

특히 N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)-프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄 메틸-설페이트(DOTAP)를 포함하여 특정 양이온성 지질은 본 발명의 변형된 올리고뉴클레오티드 유사체와 혼합될 때 특히 유리한 것으로 보인다.

한 태양에서, 비히클은 포유동물 수용체에 이식 또는 투여하기에 적합한 생체적합성 미세입자 또는 이식물이다. 상기 방법에 따라서 유용한 대표적인 생분해성 이식물은 PCT 국제 출원 PCT/US/03307 호(공개 번호 WO 95/24929 호, 발명의 명칭: "중합체 유전자 전달 시스템(Polymeric Gene Delivery System)")에 기술되어 있다. PCT/US/03307 호는 적절한 프로모터의 조절하에 내인성 유전자를 함유하기 위한 생체적합성, 바람직하게는 생분해성 중합체 매트릭스를 기술하고 있다. 중합체 매트릭스는 대상에서 치료제의 지연된 방출을 달성하기 위해 사용될 수 있다.

중합체 매트릭스는 바람직하게는 미립구(핵산 및/또는 다른 치료제가 고체 중합체 매트릭스 전체에 분산된다) 또는 미세캡슐(핵산 및/또는 다른 치료제가 중합체 쉘의 코어에 저장된다)과 같은 미세입자의 형태이다. 치료제를 함유하기 위한 중합체 매트릭스의 다른 형태로는 필름, 코팅, 겔, 이식물 및 스텐트가 포함된다. 중합체 매트릭스 장치의 크기 및 구성은 매트릭스가 도입되는 조직에서 유리한 방출 역학을 야기하도록 선택된다. 중합체 매트릭스의 크기는 또한 사용될 전달 방법에 따라, 전형적으로는 조직내에 주사, 또는 코 및/또는 폐 영역내로 에어로졸에 의해 현탁액의 투여에 따라 선택된다. 바람직하게, 에어로졸 경로를 이용하는 경우, 중합체 매트릭스 및 핵산 및/또는 다른 치료제는 계면활성제 비히클에 포함된다. 중합체 매트릭스 조성물은 둘 다 유리한 분해율을 가지고 또한 생체접착성인 물질로 이루어지며, 매트릭스가 상처 입은 코 및/또는 폐 표면에 투여되는 경우 전달 효율을 더 증가시키도록 선택될 수 있다. 매트릭스 조성은 또한 분해되지 않고 연장된 기간동안 확산에 의해 방출되도록 선택될 수 있다. 일부 바람직한 태양에서, 핵산은 다른 치료제가 급성으로 투여되는 동안 이식물을 통해 대상에게 투여된다. 경구 또는 점막 전달과 같이 전달에 적합한 생체적합성 미립구는 문헌 [Chickering et al., Biotech Bioeng 52:96-101, 1996l and Mathiowitz E. et al., Nature 386:410-414, 1997] 및 PCT 특허 출원 WO97/03702 호에 개시되어 있다.

비-생분해성 및 생분해성 중합체 매트릭스는 둘 다 대상에게 핵산 및/또는 다른 치료제를 전달하기 위해 사용될 수 있다. 생분해성 매트릭스가 바람직하다. 상기 중합체는 천연 또는 합성 중합체일 수 있다. 중합체는 방출을 목적하는 시간 기간, 일반적으로는 수시간 내지 1년 이상의 기간을 기준으로 선택된다. 전형적으로, 수시간 내지 3 내지 12개월 범위의 기간에 걸친 방출이 특히 핵산 물질에 가장 바람직하다. 중합체는 선택적으로 물에서 그 중량의 약 90% 이하까지 흡수할 수 있는 하이드로겔의 형태이며, 선택적으로 다가 이온 또는 다른 중합체와 가교결합된다.

특히 주목되는 생체접착성 중합체로는 본원에 참고로 인용된 문헌 [C.P. Pathak and J.A. Hubell, Macromolecules, 26:581-587, 1993]에 기술된 생분해성 하이드로겔이 포함된다. 이들로는 폴리히알루론산, 카세인, 젤라틴, 글루틴, 폴리무수물, 폴리아크릴산, 알기네이트, 키토산, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(뷰틸메타크릴레이트), 폴리(아이소뷰틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(아이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(아이소프로필 아크릴레이트), 폴리(아이소뷰틸 아크릴레이트) 및 폴리(옥타데실 아크릴레이트)가 포함된다.

치료제가 핵산인 경우, 압축제(compaction agent)의 사용도 또한 바람직할 수 있다. 압축제는 또한 단독으로 또는 생물학적 또는 화학/물리적 벡터와 함께 사용될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "압축제"는 핵산 상의 음전하를 중화시켜 핵산을 미세 과립으로 압축시키는 히스톤과 같은 약제를 말한다. 핵산의 압축은 표적 세포에 의한 핵산의 흡수를 촉진한다. 압축제는 단독으로, 즉, 세포에 의에 더 효과적으로 흡수되는 형태로 핵산을 전달하도록 사용되거나, 또는 보다 바람직하게는, 하나 이상의 전술한 벡터와 함께 사용될 수 있다.

핵산의 흡수를 촉진하기 위해 사용될 수 있는 다른 예시적인 조성물로는 인산칼슘 및 세포내 전달의 다른 화학 매개체, 미세주입 조성물, 전기천공 및 상동성 재조합 조성물(예를 들면, 핵산을 표적 세포 염색체내의 미리 선택된 위치에 통합시키기 위한)이 포함된다.

화합물은 단독으로(예를 들면, 식염수 또는 완충액 중에서) 또는 당해 분야에 공지된 임의의 전달 비히클을 사용하여 투여될 수 있다. 예를 들면, 하기의 전달 비히클들이 기재되었다: 코클레이트[Gould-Fogerite et al., 1994, 1996]; 에멀좀(Emulsome)[Vancott et al., 1988; Lowell et al., 1997]; 이스콤(ISCOM)[Mowat et al., 1993; Carlsson et al., 1991; Hu et al., 1998; Morein et al., 1997]; 리포솜[Childers et al., 1999; Michalek et al., 1989, 1992; de Haan 1995a, 1999b]; 생 세균 벡터(예를 들면, 살모넬라, 에스케리키아 콜리, 바실러스 칼미테-게링, 쉬겔라, 락토바실러스)[Hone et al., 1996; Pouwels et al., 1998; Chatfield et al., 1993; Stover et al., 1991; Nugent et al., 1998]; 생 바이러스 벡터(예를 들면, 백시니아, 아데노바이러스, 단순포진)[Gallichan et al., 1993, 1995; Moss et al., 1996; Nugent et al., 1998; Flexner et al., 1988; Morrow et al., 1999]; 미립구[Gupta et al., 1998; Jones et al., 1996; Maloy et al., 1994; Moore et al., 1995; O'Hagan et al., 1994; Eldridge et al., 1989]; 핵산 백신[Fynan et al., 1993; Kuklin et al., 1997; Sasaki et al., 1998; Okada et al., 1997; Ishii et al., 1997]; 중합체(예를 들면, 카복시메틸셀룰로스, 키토산)[Hamajima et al., 1998; Jabbal-Gill et al., 1998]; 중합체 고리[Wyatt et al., 1998]; 프로테오솜[Vancott et al., 1998; Lowell et al., 1988, 1996, 1997]; 플루오르화 나트륨[Hashi et al., 1998]; 유전자도입 식물[Tacket et al., 1998; Mason et al., 1998; Haq et al., 1995]; 바이로솜[Gluck et al., 1992; Mengiardi et al., 1995; Cryz et al., 1998]; 및 바이러스-유사 입자[Jiang et al., 1999; Leibl et al., 1998].

본 발명의 제형은, 통상적으로 약학적으로 허용되는 농도의 염, 완충제, 방부제, 상용성 담체, 보조제, 및 선택적으로 다른 치료 성분을 함유할 수 있는, 약학적으로 허용되는 용액으로 투여된다.

용어 약학적으로 허용되는 담체는 인간 또는 다른 척추 동물에 투여하기에 적합한 하나 이상의 상용성 고체 또는 액체 충전제, 희석제 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 용어 담체는 적용을 촉진하기 위해 활성 성분과 혼합되는, 천연 또는 합성 유기 또는 무기 성분을 의미한다. 약학 조성물의 성분들은 또한, 실질적으로 목적하는 약학적 효능을 손상시키는 상호작용이 없도록 하는 방식으로 본 발명의 화합물과 및 서로와 혼합될 수 있다.

경구 투여의 경우, 화합물(즉, 핵산, 항원, 항체 및 다른 치료제)은 당해 분야에 공지된 약학적으로 허용되는 담체와 활성 화합물(들)을 혼합함으로써 용이하게 제형화될 수 있다. 상기 담체는 본 발명의 화합물이 치료될 대상에 의한 경구 섭취를 위한 정제, 환제, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 제형화될 수 있게 한다. 경구 사용하기 위한 약학 제제는, 선택적으로 생성된 혼합물을 분쇄하고, 바람직한 경우 적당한 보조제를 가한 후에 과립의 혼합물을 가공하여 정제 또는 당의정 코어를 수득하여, 고체 부형제로서 수득할 수 있다. 적당한 부형제는, 특히 충전제, 예를 들면, 락토스, 슈크로스, 만니톨 또는 솔비톨을 포함한 당; 셀룰로스 제제, 예를 들면, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트라가칸트 고무, 메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로스, 나트륨 카복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)이다. 경우에 따라, 붕해제, 예를 들면, 가교결합된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 또는 알긴산 또는 나트륨 알기네이트와 같은 그의 염을 가할 수 있다. 선택적으로, 경구용 제형은 또한 내부 산 조건을 중화시키기 위해 식염수 또는 완충액중에 제형화될 수 있거나, 또는 어떤 담체도 없이 투여될 수 있다.

당의정 코어에는 적당한 코팅을 제공한다. 이를 위해, 아라비아 고무, 활석, 폴리비닐 피롤리돈, 카보폴 겔, 폴리에틸렌 글라이콜, 및/또는 이산화티타늄, 래커 용액, 및 적당한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 함유하거나 함유하지 않을 수 있는 농축 당 용액을 사용할 수 있다. 확인을 위해 또는 활성 화합물 용량의 상이한 혼합물을 규정하기 위해 염료 또는 안료를 정제 또는 당의정 코팅에 첨가할 수 있다.

경구로 사용될 수 있는 약학 제제는 젤라틴으로 제조된 압입(push-fit) 캡슐, 및 젤라틴 및 가소제, 예를 들어, 글리세롤 또는 솔비톨로 제조된 연질 밀봉 캡슐이 포함된다. 압입 캡슐은 락토스와 같은 충전제, 전분과 같은 결합제, 및/또는 활석 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제, 및 선택적으로 안정화제와 함께 활성 성분을 함유할 수 있다. 연질 캡슐에서, 활성 화합물은 적당한 액체, 예를 들면, 지방 오일, 액체 파라핀 또는 액체 폴리에틸렌 글라이콜에 용해되거나 현탁될 수 있다. 또한, 안정화제를 가할 수 있다. 경구 투여용으로 제형화된 미립구도 또한 사용할 수 있다. 상기 미립구는 당해 분야에서 명확히 정의되었다. 모든 경구 투여용 제형은 상기 투여에 적당한 투여량이어야 한다.

구강 투여의 경우, 조성물은 통상적인 방식으로 제형화된 정제 또는 로젠지의 형태일 수 있다.

흡입에 의한 투여의 경우, 본 발명에 따라 사용하기 위한 화합물은, 적당한 추진제, 예를 들면, 다이클로로다이플루오로메테인, 트라이클로로플루오로메테인, 다이클로로테트라플루오로에테인, 이산화탄소 또는 다른 적당한 가스를 사용하여, 가압 팩 또는 분무기로부터 에어로졸 스프레이 외양의 형태로 편리하게 전달될 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투여 단위는 정량을 전달하기 위한 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 화합물 및 적당한 분말 베이스, 예를 들면, 락토스 또는 전분의 분말 혼합물을 함유하는, 흡입기 또는 취입기에 사용하기 위한, 예를 들면, 젤라틴으로 된 캡슐 및 카트리지가 제형화될 수 있다.

화합물을 전신으로 전달하는 것이 바람직한 경우, 상기 화합물은 주사에 의해, 예를 들면, 일시 주사 또는 연속 주입에 의해 비경구 투여를 위해 제형화될 수 있다. 주사용 제형은 방부제 첨가와 함께 단위 투여형, 예를 들면, 앰플 또는 다중용량 용기에 제공될 수 있다. 조성물은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 유화액과 같은 형태를 가질 수 있으며, 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 함유할 수 있다.

비경구 투여용 약학 제형은 수용성 형태의 활성 화합물의 수용액을 포함한다. 또한, 활성 화합물의 현탁액은 적절한 유성 주사 현탁액으로 제조될 수 있다. 적당한 친유성 용매 또는 비히클로는 지방 오일, 예를 들면, 호마유, 또는 합성 지방산 에스터, 예를 들면, 에틸 올리에이트 또는 트라이글리세라이드, 또는 리포솜이 포함된다. 수성 주사 현탁액은 현탁액의 점도를 증가시키기 위한 물질, 예를 들면, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 솔비톨 또는 덱스트란을 함유할 수 있다. 선택적으로, 현탁액은 또한 적당한 안정화제, 또는 고도로 농축된 용액의 제조를 가능케 하기 위해 화합물의 용해도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다.

또는, 활성 화합물은 사용전에 적당한 비히클, 예를 들면, 멸균 발열물질-비함유 물로 복원되기 위한 분말 형태일 수 있다.

화합물은 또한, 예를 들면, 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드와 같은 통상적인 좌약 베이스를 함유하는 좌약 또는 정체 관장약과 같은 직장 또는 질 조성물로 제형화될 수 있다.

전술한 제형들 이외에, 화합물은 또한 데포(depot) 제제로 제형화될 수 있다. 상기 장기-작용 제형들은 적당한 중합체 또는 소수성 물질(예를 들면, 허용되는 오일중 유화액으로서) 또는 이온 교환 수지를 사용하여, 또는 난용성 유도체, 예를 들면, 난용성 염으로서 제형화될 수 있다.

약학 조성물은 또한 적당한 고체 또는 겔 상 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 상기 담체 또는 부형제의 예로는 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당, 전분, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 및 폴리에틸렌 글라이콜과 같은 중합체가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

적당한 액체 또는 고체 약학 제제 형태는, 예를 들면, 흡입용 수용액 또는 식염수 용액이거나, 미세캡슐화되거나, 코클레이트화되거나, 금 미립자상에 코팅되거나, 리포솜에 함유되거나, 분무화되거나, 에어로졸이거나, 피부에 이식되기 위한 펠릿이거나, 또는 피부에 스크래치되기 위해 예리한 물체상으로 건조된다. 약학 조성물은 또한 과립, 분말, 정제, 코팅정, (미세)캡슐, 좌약, 시럽, 유화액, 현탁액, 크림, 점적제, 또는 활성 화합물의 지연 방출을 갖는 제제가 포함되며, 여기서 통상적으로 제제 부형제 및 첨가제 및/또는 보조제, 예를 들면, 붕해제, 결합제, 코팅제, 팽윤제, 윤활제, 향료, 감미제 또는 가용화제를 전술한 바와 같이 사용한다. 약학 조성물은 다양한 약물 전달 시스템에 사용하기에 적합하다. 약물 전달 방법에 대한 간단한 고찰은, 본원에 참고로 인용된 문헌 [Lnager R, Science 249:1527-1533, 1990]을 참조하시오.

핵산 및 선택적으로 다른 치료제 및/또는 항원은 자체로(순수하게) 또는 약학적으로 허용되는 염의 형태로 투여될 수 있다. 약제에 사용되는 경우, 염은 약학적으로 허용되어야 하지만, 비-약학적으로 허용되는 염은 그의 약학적으로 허용되는 염을 제조하기 위해 편리하게 사용될 수 있다. 상기 염으로는 다음의 산: 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 말레산, 아세트산, 살리실산, p-톨루엔 설폰산, 타르타르산, 시트르산, 메테인 설폰산, 폼산, 말로산, 석신산, 나프탈렌-2-설폰산 및 벤젠 설폰산으로부터 제조된 염들이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 또한, 상기 염은 알칼리 금속염 또는 알칼리토 금속염, 예를 들면, 카복실산 기의 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염으로 제조될 수 있다.

적당한 완충제로는 아세트산 및 염(1 내지 2% w/v); 시트르산 및 염(1 내지 3% w/v); 붕산 및 염(0.5 내지 2.5% w/v); 및 인산 및 염(0.8 내지 2% w/v)이 포함된다. 적당한 방부제로는 벤즈알코늄 클로라이드(0.003 내지 0.03% w/v); 클로로뷰탄올(0.3 내지 0.9% w/v); 파라벤(0.01 내지 0.25% w/v) 및 티메로살(0.004 내지 0.02% w/v)이 포함된다.

조성물은 편리하게는 단위 투여형으로 제공될 수 있으며, 약학 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 모든 방법은 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 화합물을 혼합하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 조성물은 화합물을 액체 담체, 미분 고체 담체, 또는 둘 다와 균일하게 및 균질하게 혼합한 다음, 필요한 경우 생성물을 성형함으로써 제조된다. 액체 투여 단위는 바이알 또는 앰플이다. 고체 투여 단위는 정제, 캡슐 및 좌약이다.

다른 전달 시스템으로는 서방성(time-release), 방출 지연 또는 서방형 전달 시스템을 포함할 수 있다. 상기 시스템은 화합물의 반복 투여를 피할 수 있어, 대상 및 의사에게 편리함을 증대시킨다. 많은 유형의 방출 전달 시스템이 당해 분야에 통상의 기술을 가진 자에게 이용가능하며 공지되어 있다. 이들로는 중합체 베이스 시스템, 예를 들면, 폴리(락타이드-글리콜라이드), 코폴리옥살레이트, 폴리카프로락톤, 폴리에스터아마이드, 폴리오쏘에스터, 폴리하이드록시뷰티르산 및 폴리무수물이 포함된다. 상기 중합체 함유 약물의 미세캡슐은, 예를 들면, 미국 특허 제 5,075,109 호에 기술되어 있다. 전달 시스템은 또한 다음과 같은 비-중합체 시스템을 포함한다: 스테롤, 예를 들면, 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스터 및 지방산 또는 중성 지방, 예를 들면, 모노-, 다이- 및 트라이-글리세라이드를 포함한 지질; 하이드로겔 방출 시스템; 실라스틱(silastic) 시스템; 펩티드계 시스템; 왁스 코팅; 통상적인 결합제 및 부형제를 사용하는 압축 정제; 부분 융합된 이식물 등. 특정 예로는 다음이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다: (a) 미국 특허 제 4,452,775, 4,675,189 및 5,736,152 호에 기술된 바와 같이, 본 발명의 약제가 매트릭스 내의 형태로 함유된 침식 시스템, 및 (b) 미국 특허 제 3,854,480, 5,133,974 및 5,407,686 호에 기술된 바와 같이 활성 성분이 중합체로부터 제어된 속도로 침투하는 확산 시스템. 또한, 일부가 이식을 위해 변형된, 펌프-기재 하드웨어 전달 시스템을 사용할 수 있다.

본 발명은 하기 실시예로 더욱 예시하며, 이들은 결코 더 제한하는 것으로 해석해서는 안된다.

실시예 1

N-U-R ₁ -R ₂ -함유 올리고리보뉴클레오티드에 대한 인간 PBMC의 반응성

방법: 루미넥스 기술

미립구로 불리는 루미넥스 컬러-코드 소형 비드를 100개의 별개 세트로 만든다. 각각의 비드 세트를, 샘플로부터의 특정 분석물의 포착 및 검출을 가능케하는 특정한 생물분석법에 특이적인 시약으로 코팅할 수 있다. 루미넥스 콤팩트 분석기내에서, 레이저는 각각의 미립구 입자를 확인하는 내부 염료, 및 또한 분석동안 포획된 임의의 리포터 염료를 여기시킨다. 각 비드 세트에 많은 판독물을 얻어서 결과를 더 확인한다. 이렇게, 루미넥스 기술에 의해 단일 샘플내에서 100개 이하의 특징적인 분석의 다중화가 신속하게 정확하게 가능해진다.

인간 말초혈 단핵세포(PBMC)를 건강한 헌혈자로부터 분리하고 배양하고 16 시간동안 다양한 시험 및 대조용 면역자극성 물질로 시험관내에서 자극시켰다. 16 시간후에, 상등액을 수거한 다음, ELISA 분석법으로 분석하였다. DOTAP와 복합체를 형성한 N-U-R₁-R₂-함유 올리고리보뉴클레오티드를 완전 적정 곡선(7개 농도)을 사용하여 25 ㎍/ml DOTAP와 복합체를 형성한 2μM ORN으로부터 출발하여 1/3 희석 단계하에 시험하였다. 배지 단독 및 DOTAP(25㎍/ml 배양 웰; "리포솜") 단독을 포함하여 특정한 음성 대조군도 또한 포함되었다. 대조군 면역자극제로는 TLR7에 대해 보고된 리간드인 이미다조퀴놀린 R-848(1/3 희석 단계하에 2μM 및 7개 농도), AU 및 AUU 서열(서열번호 13 내지 서열번호 15)과 같은 TLR8 모티프를 갖는 ORN, CU, GU 및 GUU 서열(서열번호 19 내지 서열번호 23)과 같은 TLR7/8 모티프를 갖는 ORN이 포함된다. 결과는 도 1 및 3에 나타내었다.

상이한 ORN 서열을 시험하는 유사한 분석을 분리된 pDC, 단핵구 및 mDC 자극을 이용하여 수행하였다. 세포를 10 ㎍/ml DOTAP와 복합체를 형성한 0.5μM ORN, 0.5μM CpG ODN 또는 DOTAP 또는 배지 단독으로 자극하였다. 16 시간후에, 상등액을 수거하고 IFN-알파, TNF-알파 및 IL-12p40 수준을 ELISA로 측정하였다. 결과를 도 2에 나타내었다.

도 1은 AU 서열을 함유하는 서열번호 12 및 GU 서열을 함유하는 서열번호 21에 대해 PBMC 자극시 TNF-알파 및 IFN-알파 생성율 사이의 명백한 차이를 보여준다. 다른 서열 분석은 CUA 반복서열(서열번호 24)가 IFN-알파 생성이 없는 ORN을 유도하는 추가의 TNF-알파임을 나타내었다. AU 및 GU 반복서열(서열번호 29 내지 서열번호 34)를 함유하는 더 짧은 ORN은 더 긴 ORN(서열번호 12 내지 서열번호 23)과 비교하여 유사한 결과를 나타내었지만 효율 및 효능은 떨어졌다.

도 2 및 6은 AU-ORN(서열번호 13)에 대해 매우 감소된 IFN-알파 생성 및 두 ORN 모두에 대한 명백한 TNF-알파 및 IL-12p40 생성을 나타내는, 분리된 단핵구, pDC 및 mDC에 대한 AU-ORN(서열번호 13) 및 GU-ORN(서열번호 21)의 분석을 나타낸다. pDC로부터 ORN 자극시 IFN-알파 생성은 TLR7 매개되는 것으로 보이는 반면, 분리된 단핵구 및 mDC로부터 TNF-알파 및 IL-12p40 생성은 TLR8 매개되는 것으로 보인다.

루미넥스 결과는 ELISA 데이터에 필적하는 결과를 나타내었으며, GU-ORN과 AU-ORN 사이의 주된 차이가 IFN-알파 생성 및 IFN-알파 관련 유전자/사이토카인(도 3 및 8a)에 기인함을 입증하였다. 또한, 추가의 루미넥스 데이터는 IFN-알파 및 IFN-알파 관련 유전자/사이토카인과 대조적으로 다른 사이토카인/케모카인은 CD123-CD14 세포로부터 IL-6은 제외하고 영향을 받지 않음을(도 7 및 도 8a 내지 d) 나타내었다. 상기 IL-6 생성은 TLR7 매개된 B-세포 활성화에 기인할 수 있다.

실시예 2

올리고리보뉴클레오티드의 IFN-알파 및 TNF-알파 최대 활성의 비교

인간 PBMC를 DOTAP와 복합체를 형성한 ORN으로 자극하였다. 16 시간후에, 상등액을 수거하고 TNF-알파 및 IFN-알파 수준을 측정하였다. 3 내지 6명 헌혈자 및 2명의 개인 실험자의 0.6μM에서 평균/최대 활성을 측정하였다. 결과는 도 4에 나타내었다. 이들 데이터는 TLR8과 TLR7/8 모티프 사이를 명백히 구별한다: 모티프 N-U-R₁-R₂를 갖는 ORN은 300 pg/ml하에서 IFN-알파를 나타낸 반면, TLR7/8 ORN은 PBMC 자극시 더 높은 IFN-알파 생성을 나타내었다(도 4a). TLR8 및 TLR7/8 ORN은 적색 선으로 나뉜다. 대조적으로, TNF-알파 수준의 측정은 TLR8을 갖는 ORN과 TLR7/8 모티프를 갖는 ORN이 둘 다 TNF-알파 생성을 자극함을 나타내었다.

실시예 3

올리고리보뉴클레오티드의 IFN-알파 EC50에 대한 IFN-알파 최대 활성의 비교

인간 PBMC를 DOTAP와 복합체를 형성한 ORN으로 자극시켰다. 16 시간후에, 상등액을 수거하고 IFN-알파 수준을 측정하였다. 3 내지 6명 헌혈자 및 2명의 개인 실험자의 0.6μM에서의 평균/최대 활성 및 완전 적정 곡선(범위: 2μM 내지 0.9nM)의 EC50을 측정하였다. 결과는 도 5에 나타내었다. EC50 및 최대 활성은 TLR8 및 TLR7/8 모티프와 관련하여 필적하는 결과를 나타내었다. 낮은 EC50/높은 최대 활성은 TLR7/8 ORN(도 5a)을 나타내는 반면, 높은 EC50 및 낮은 최대 활성은 TLR8 ORN(도 5b)을 나타낸다.

표 1에 나타낸 ORN 서열을 인간 PBMC 자극시 IFN-알파 및 TNF-알파 생성율에 대해 시험하였다. 인간 PBMC를 나타낸 ORN으로 16 시간동안 자극하고, 상등액을 회수하고 사이토카인 생성을 ELISA로 측정하였다. 표 2는 IFN-알파 및 TNF-알파 생성에 대한 ORN의 최소/최대 활성 및 EC50을 요약한 것이다.

실시예 4

합성 ORN은 인간 PBMC 자극시 IFN-알파와 TNF-알파 방출 사이에 구분된다

CD123+ 정제된 pDC(도 10a 및 10b) 또는 분리된 단핵구(도 10c)를 25㎍/ml DOTAP와 복합체를 형성한 1μM ORN 또는 DOTAP 단독(도 10a) 또는 DOTAP와 복합체를 형성한 나타낸 양의 ORN 또는 DOTAP 단독(도 10b 내지 10c)과 함께 배양하였다. 16 시간후에 세포를 수거하고, CD123, CD11c 및 HLA-DR 항체(도 10a 및 10b) 또는 CD14 및 CD19(도 10c)로 염색하였다. CD86에 대한 FACS 분석은 AU-풍부 ORN(서열번호 13) 및 GU-풍부 ORN(서열번호 21)이 pDC 자극시 CD86 표면 마커 발현에 차이를 나타냄을 보여준다(도 10a). AU-풍부 ORN(서열번호 13)으로 자극한 결과 매우 낮은 CD86 활성화가 야기된 반면, GU-풍부 ORN(서열번호 21)으로 자극한 결과 상당한 CD86 활성화가 야기되었다. 상기 활성화는 용량-의존성인 것으로 측정되었다(도 10b). AU-풍부 ORN(서열번호 13) 및 GU-풍부 ORN(서열번호 21)은 인간 PBMC(데이터 나타내지 않음) 및 CD14-양성 세포 자극시 CD80 표면 마커 발현에 차이를 나타내지 않았다(도 10c).

실시예 5

AU-풍부 ORN(서열번호 13) 및 GU-풍부 ORN(서열번호 21)은 용량 의존성 방식으로 특이적 인간 TLR8 신호전달을 자극한다

무반응성 HEK-293 세포를 인간 TLR3 또는 TLR8 발현 플라스미드 및 NFκΒ-루시퍼라제 리포터 유전자 구조물로 안정하게 형질감염시켰다. 세포를 나타낸 ORN 서열(50 ㎍/ml DOTAP와 복합체를 형성한 10μM) 또는 대조군 자극물(10μM R-848, 50 ㎍/ml 폴리IC, 3.3μM ODN 10103 또는 50 ㎍/ml DOTAP)과 함께 16 시간동안 배양하였다. NFκΒ-활성화는 루시퍼라제 활성을 분석함으로써 측정하였다. 결과는 배경(배지)을 초과하는 접힘 유도율로 나타낸다. 6회 독립적 반복중 하나의 대표적 실험을 나타내었다(도 9a).

인간 TLR8을 발현하는 안정한-형질감염 HEK-293 세포를, DOTAP(50 ㎍/ml → 1/3 희석)와 복합체를 형성한 나타낸 농도의 ORN 또는 DOTAP 단독(50 ㎍/ml → 1/3 희석)으로 16 시간동안 자극하였다. NFκΒ 활성화는 루시퍼라제 활성을 분석함으로써 측정하였다. 결과는 배경(배지)을 초과하는 접힘 유도율로 나타낸다. 3회 독립적 반복중 하나의 대표적 실험을 나타내었다(도 9b).

무반응성 HEK-293 세포를 인간 TLR8 발현 플라스미드 및 NFκΒ-루시퍼라제 리포터 유전자 구조물로 안정하게 형질감염시켰다. 세포를 나타낸 ORN 서열(75 ㎍/ml DOTAP와 복합체를 형성한 15μM) 또는 대조군 자극물(15μM R-848 또는 75 ㎍/ml DOTAP) 및 배지(좌측), 200nM 바필로마이신(Baf., 중앙) 또는 1mM 클로로퀸(CQ, 우측)과 함께 16 시간동안 배양하였다. NFκΒ-활성화는 루시퍼라제 활성을 분석함으로써 측정하였다. 결과는 배경(배지)을 초과하는 접힘 유도율로 나타낸다. 4회 독립적 반복중 하나의 대표적 실험을 나타내었다(도 9c).

RPMI 8226 세포를 1000 U/ml 인트론 A와 함께 3 시간동안 예비배양하고, 배지로 2회 세척한 후, DOTAP(50 ㎍/ml → 1/3 희석)와 복합체를 형성한 나타낸 농도의 ORN으로 16 시간동안 자극하였다. IP-10의 사이토카인 방출을 ELISA로 측정하였다. 결과는 pg/ml로 나타내었다. 3회 독립적 반복 중 하나의 대표적 실험을 나타내었다(도 9d).

이들 데이터는 서열번호 13 및 서열번호 21의 TLR8에 대한 특이성을 입증한다.

TLR8 ORN(서열번호 13),l TLR7/8 ORN(서열번호 21) 및 대조군 ORN(서열번호 5)(표 3)를 가지고 고용량(H.D., 10 ㎍/ml) 및 저용량(L.D., 2.5 ㎍/ml) 둘 다에서 분석을 반복하였다. 서열번호 21 처리 만이 IL-12 및 TNF-알파의 상당한 생성을 야기하였다(각각 도 11a 및 11b). 모든 ORN이 IFN-γ의 생성을 자극하였다(도 11c).

실시예 6

마우스 대식세포는 시험관내 또는 생체내에서 AU-풍부 ORN(서열번호 13)에 반응하지 않는다

Raw264.7 세포(도 12a), J774 세포(도 12b) 및 정제된 CD11c+ 세포(밀테니(Milteny), 자기 비드 표지)를 sv129 마우스 비장림프구로부터 분리하고(도 12c 내지 12e), DOTAP(50 ㎍/ml 및 ORN으로 희석)와 복합체를 형성한 나타낸 농도의 ORN, R-848 또는 DOTAP 단독(50 ㎍/ml)로 자극하였다. 16 시간후(도 12a 및 12b) 또는 20 시간후(도 12c 내지 12e)에, 상등액을 수거하고 TNF-알파(도 12a 및 12b), IL-12p40(도 12c), IFN-알파(도 12f) 및 IP-10(도 12e) ELISA에 사용하였다. 데이터는 3회 이상의 실험으로부터 한 개체(도 12a 및 12b) 및 3마리 마우스의 평균(도 12c 내지 12e)을 나타낸다. 생체내에서 마우스 세포를 자극하는 AU-풍부 ORN의 능력을 측정하기 위해, sv129 마우스(n = 5/군)에 DOTPA(60, 20 또는 6 ㎍/ml)와 함께 제형화된 나타낸 양의 ORN을 주입하고, 3 시간후에 혈액 채취하였다. IL-12p40(도 12f), IFN-알파(도 12g) 및 IP-10(도 12h) 생성을 ELISA에 의해 전혈내에서 측정하였다.

실시예 7

정제된 래트 비장림프구는 AU-풍부 ORN(서열번호 13)에 반응하지 않는다

3마리의 스프래그-돌리(Sprague-Dawley) 래트로부터의 비장림프구를 모아서, 나타낸 농도의 서열번호 21, 서열번호 13(둘 다 1/5 희석율하에 62.5 ㎍.ml DOTAP와 복합체를 형성함), R-848 또는 DOTAP 단독(62.5 ㎍/ml → 1/5 희석)으로 자극하였다. 상등액을 20 시간후에 수거하고 TNF-알파 수준을 ELISA로 측정하였다. 도 13에 나타낸 바와 같이, GU-풍부 ORN(서열번호 21)에 의한 자극은 TNF-알파 생성을 야기한 반면, AU-풍부 ORN(서열번호 13)에 의한 자극은 TNF-알파 생성을 야기하지 않았다.

실시예 8

설치류 세포의 AU-풍부 ORN(서열번호 13)에 대한 반응 결핍은 종들 간의 TLR8 다형성으로부터 비롯될 수 있다

인간 및 소의 세포를 AU-풍부 ORN으로 자극한 결과 사이토카인 생성이 야기된 반면, 마우스 및 설치류 세포의 자극은 그렇지 않았다. TLR8 서열 정렬 및 분석을 수행하였다. 상이한 척추동물(인간, 원숭이, 침팬지, 개, 소, 돼지, 마우스 및 래트) 간의 TLR8의 단백질 서열 비교 결과 영역 1의 류신이 풍부한 반복서열(LRR) 3 내에 상당한 차이를 나타내었다. 인간, 침팬지 및 원숭이는 매우 보전적인 반면, 래트, 마우스 및 돼지는 인간과 비교하여 위치 106(마우스), 103(래트) 또는 102(돼지)에서 4AA의 결실을 나타내었고, 소는 2AA(105 내지 106)의 삽입을 나타내었다. 흥미롭게, 돼지 및 소는 동일 영역(위치 97)내에 2AA의 또 다른 결실을 나타내었다. 영역 1의 류신 풍부 반복 영역에서의 결실은 AU-풍부 ORN 결합을 방해할 수 있는 가능성이 있다.

상기에 기술된 명세서는 당해 분야에 숙련된 자가 본 발명을 실행할 수 있게 하기에 충분한 것으로 고려된다. 실시예는 본 발명의 한 태양의 단일 예시로서 나타내고 다른 작용적으로 동등한 태양은 본 발명의 범위에 포함되기 때문에, 본 발명은 나타낸 실시예에 의해 그 범위가 제한되지 않는다. 본원에 나타내고 설명한 것들 이외에 본 발명의 다양한 수정이 상기 설명으로부터 당해 분야에 숙련된 자에게 명백해질 것이며, 첨부한 청구의 범위의 범주에 포함된다. 본 발명의 이점은 본 발명의 각 태양에 반드시 포함되지는 않는다.

본 명세서에 인용된 모든 참조문헌, 특허 및 특허 공개는 본원에 그대로 참고로 인용된다.

SEQUENCE LISTING <110> Coley Pharmaceutical GmbH Coley Pharmaceutical Group Inc. <120> IMMUNOSTIMULATORY OLIGORIBONUCLEOTIDES <130> C1041.70053WO00 <150> 60/739,529 <151> 2005-11-25 <150> 60/778,989 <151> 2006-03-03 <160> 91 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 8 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 1 guaggcac 8 <210> 2 <211> 8 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 2 uuaggcac 8 <210> 3 <211> 8 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 3 cuaggcac 8 <210> 4 <211> 8 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 4 auaggcac 8 <210> 5 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 5 ccgucuguug ugugacuc 18 <210> 6 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 6 uguuuuuucu cuuguuuggu 20 <210> 7 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> 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wherein n is uracil <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> wherein n is uracil <220> <221> misc_feature <222> (14)..(19) <223> wherein n is any deoxyribonucleotide <400> 9 nnnnnanana nannnnnnn 19 <210> 10 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 10 gccaccgagc cgaaggcacc 20 <210> 11 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 11 gccaccgagc cgaauauacc 20 <210> 12 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 12 auauauauau auauauauau 20 <210> 13 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 13 uuauuauuau uauuauuauu 20 <210> 14 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 14 uuuauuuauu uauuuauuua 20 <210> 15 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 15 uuuuauuuua uuuuauuuua 20 <210> 16 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 16 aauaauaaua auaauaauaa 20 <210> 17 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 17 aaauaaauaa auaaauaaau 20 <210> 18 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 18 aaaauaaaau aaaauaaaau 20 <210> 19 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 19 cucucucucu cucucucucu 20 <210> 20 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 20 gugugugugu gugugugugu 20 <210> 21 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 21 uuguuguugu uguuguuguu 20 <210> 22 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 22 uuuguuuguu uguuuguuug 20 <210> 23 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 23 uuuuguuuug uuuuguuuug 20 <210> 24 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 24 cuacuacuac uacuacuacu 20 <210> 25 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 25 guaguaguag uaguaguagu 20 <210> 26 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 26 gucgucgucg ucgucgucgu 20 <210> 27 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (16)..(16) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> wherein n is inosine <400> 27 nuanuanuan uanuanuanu 20 <210> 28 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> wherein n is inosine <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> wherein n is inosine <400> 28 uunuunuunu unuunuunuu 20 <210> 29 <211> 7 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 29 uuguugu 7 <210> 30 <211> 7 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 30 uuauuau 7 <210> 31 <211> 7 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 31 ugugugu 7 <210> 32 <211> 7 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 32 ucucucu 7 <210> 33 <211> 7 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> 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<210> 50 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 50 ccgagccgca auuccc 16 <210> 51 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 51 ccgagccgcu auuccc 16 <210> 52 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 52 ccgagccgca auuccc 16 <210> 53 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 53 ccgagccgcu uacccc 16 <210> 54 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 54 ccgagccgca uucccc 16 <210> 55 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 55 ccgagccgcu aucccc 16 <210> 56 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 56 ccgagccgaa ggcacc 16 <210> 57 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 57 ccgagccgac uuuacc 16 <210> 58 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 58 ccgagccgag uuuacc 16 <210> 59 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> wherein n is thymidine <400> 59 ccgagccgan uuuacc 16 <210> 60 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 60 ccgagccgaa uuuacc 16 <210> 61 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 61 ccgagccgac uguacc 16 <210> 62 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> wherein n is thymidine <400> 62 ccgagccgan uguacc 16 <210> 63 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 63 ccgagccgaa uguacc 16 <210> 64 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 64 ccgagccgau cuuacc 16 <210> 65 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 65 ccgagccgau auuacc 16 <210> 66 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 66 ccgagccgau guuacc 16 <210> 67 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 67 ccgagccgag uucacc 16 <210> 68 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> wherein n is thymidine <400> 68 ccgagccgan uucacc 16 <210> 69 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 69 ccgagccgau cucacc 16 <210> 70 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> wherein n is thymidine <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> wherein n is thymidine <400> 70 ccgagccgau nunacc 16 <210> 71 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 71 ccgagccgau uucacc 16 <210> 72 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> wherein n is thymidine <400> 72 ccgagccgau uunacc 16 <210> 73 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 73 ccgagccgau uuaacc 16 <210> 74 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 74 ccgagccgau ugcacc 16 <210> 75 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> wherein n is thymidine <400> 75 ccgagccgau ucnacc 16 <210> 76 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 76 ccgagccgau ugaacc 16 <210> 77 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 77 ccgagccgag uucacc 16 <210> 78 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> wherein n is thymidine <400> 78 ccgagccgan uucacc 16 <210> 79 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> wherein n is thymidine <400> 79 ccgagccgan uucacc 16 <210> 80 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 80 ccgagccgaa uucacc 16 <210> 81 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 81 ccgagccgag cucacc 16 <210> 82 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 82 ccgagccgaa gguacc 16 <210> 83 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 83 ccgagccgaa ggugcc 16 <210> 84 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 84 ccgagccgaa gcuccc 16 <210> 85 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 85 ccgagccgaa gauacc 16 <210> 86 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 86 ccgagccgaa gguccc 16 <210> 87 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 87 ccgagccgaa gcuacc 16 <210> 88 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 88 ccgagccgaa gcugcc 16 <210> 89 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 89 acccaucuau uauauaacuc 20 <210> 90 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 90 tcgtcgtttt cggcggccgc cg 22 <210> 91 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 91 tcgtcgtttt tcggtcgttt t 21

Claims (107)

1. TLR8 발현 세포를 시험관내에서 N-U-R₁-R₂를 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN)와 전구염증성 사이토카인 생성을 자극하기에 효과적인 양으로 접촉시키는 것을 포함하는, 전구염증성 사이토카인의 생성을 자극하는 방법으로서,

   N-U-R₁-R₂에서, N은 리보뉴클레오티드이고, N은 U를 포함하지 않고, U는 우라실 또는 그의 유도체이고, R은 리보뉴클레오티드이고, R₁ 및 R₂ 중 하나 이상은 아데노신(A) 또는 시토신 또는 그의 유도체이고, N-U-R₁-R₂가 2개 이상의 A를 포함하지 않는 한 R은 U가 아니며;

   ORN이 ACCCAUCUAUUAUAUAACUC(서열번호 89)가 아니고 TLR7/8 모티프를 포함하지 않고 ORN이 4 내지 100개 뉴클레오티드의 길이이며,

   ORN에 대한 IFN-α 생성이 배경에 비해 상당히 유도되지 않는 방법.
2. TLR8 발현 세포를 시험관내에서 N-U-R₁-R₂를 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN)와 전구염증성 사이토카인 생성을 자극하기에 효과적인 양으로 접촉시키는 것을 포함하는, 전구염증성 사이토카인의 생성을 자극하는 방법으로서,

   N-U-R₁-R₂에서, 여기서, N은 리보뉴클레오티드이고, N은 U를 포함하지 않고, U는 우라실 또는 그의 유도체이고, R은 리보뉴클레오티드이고, R₁ 및 R₂ 중 하나 이 상은 아데노신(A) 또는 시토신 또는 그의 유도체이고, N-U-R₁-R₂가 2개 이상의 A를 포함하지 않는 한 R은 U가 아니며;

   ORN이 TLR7/8 모티프를 포함하지 않고, N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄메틸-설페이트(DOTAP)와 복합체를 형성하지 않고 ORN이 4 내지 100개 뉴클레오티드의 길이이며,

   ORN에 대한 IFN-α 생성이 배경에 비해 상당히 유도되지 않는 방법.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

   ORN에 대한 IFN-α 생성이 300 pg/ml 미만인 방법.
4. 제 1 항에 있어서,

   ORN이 N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄메틸-설페이트(DOTAP) 또는 다가양이온성 펩티드와 복합체를 형성하는 방법.
5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

   N이 아데노신 또는 시토신(C) 또는 그의 유도체인 방법.
6. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

   N이 아데노신 또는 시토신인 방법.
7. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

   U가 우라실인 방법.
8. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

   ORN이 하나 이상의 AU를 포함하는 방법.
9. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

   ORN이 하나 이상의 CU를 포함하는 방법.
10. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

    TLR8 발현 세포가 단핵구 또는 단핵구-유래 수지상 세포인 방법.
11. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

    TLR8 발현 세포가 mDC인 방법.
12. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

    ORN이 2개 이상의 AU를 포함하는 방법.
13. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

    ORN이 3개 이상의 AU를 포함하는 방법.
14. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

    N-U-R₁-R₂가 3개 이상의 A를 포함하는 방법.
15. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

    N-U-R₁-R₂가 2개 이상의 C를 포함하는 방법.
16. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

    N-U-R₁-R₂가 1개 이상의 G 또는 C를 포함하는 방법.
17. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

    ORN이 하나 이상의 주쇄 변형을 포함하는 방법.
18. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

    ORN이 단일 가닥인 방법.
19. N-U-R₁-R₂를 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN)로서,

    N-U-R₁-R₂에서, N은 리보뉴클레오티드이고, N은 U를 포함하지 않고, U는 우라실 또는 그의 유도체이고, R은 리보뉴클레오티드이고, R₁ 및 R₂ 중 하나 이상은 아데노신(A) 또는 시토신 또는 그의 유도체이고, N-U-R₁-R₂가 2개 이상의 A를 포함하지 않는 한 R은 U가 아니며;

    상기 ORN은 ACCCAUCUAUUAUAUAACUC(서열번호 89)가 아니고 TLR7/8 모티프를 포함하지 않으며, 4 내지 100개 뉴클레오티드의 길이이고, 하나 이상의 주쇄 변형을 포함하는

    RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
20. 제 19 항에 있어서,

    약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
21. 제 19 항에 있어서,

    N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄메틸-설페이트(DOTAP)와 복합체를 형성한 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
22. 제 19 항에 있어서,

    단일 가닥인 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
23. N-U-R₁-R₂를 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN)로서,

    N-U-R₁-R₂에서, N은 리보뉴클레오티드이고, N은 U를 포함하지 않고, U는 우라실 또는 그의 유도체이고, R은 리보뉴클레오티드이고, R₁ 및 R₂ 중 하나 이상은 아데노신(A) 또는 시토신 또는 그의 유도체이고, N-U-R₁-R₂가 2개 이상의 A를 포함하지 않는 한 R은 U가 아니며;

    상기 ORN은 TLR7/8 모티프를 포함하지 않고, N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄메틸-설페이트(DOTAP)와 복합체를 형성하지 않으며, 4 내지 100개 뉴클레오티드의 길이이고, 하나 이상의 주쇄 변형을 포함하고, 약학적으로 허용되는 담체에 제형화되는

    RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
24. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    N이 아데노신 또는 시토신(C) 또는 그의 유도체인 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
25. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    N이 아데노신 또는 시토신인 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
26. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    U가 우라실인 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
27. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    하나 이상의 AU를 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
28. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    하나 이상의 CU를 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
29. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    N-U-R₁-R₂가 3개 이상의 A를 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
30. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    N-U-R₁-R₂가 2개 이상의 C를 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
31. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    N-U-R₁-R₂가 1개 이상의 G 또는 C를 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
32. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    단일 가닥인 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
33. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    다음 서열중 하나인 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN):

    U*U*A*G*G*C*A*C(서열번호 2),

    A*U*A*G*G*C*A*C(서열번호 4),

    G*C*C*A*C*C*G*A*G*C*C*G*A*A*U*A*U*A*C*C(서열번호 11),

    A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U*A*U(서열번호 12),

    U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U*A*U*U(서열번호 13),

    A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A*U*A*A(서열번호 16),

    A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U*A*A*A*U(서열번호 17),

    A*A*A*A*U*A*A*A*A*U*A*A*A*A*U*A*A*A*A*U(서열번호 18),

    C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U*A*C*U(서열번호 24),

    U*U*A*U*U*A*U(서열번호 30), 또는

    U*A*U*A*U*A*U(서열번호 33).
34. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    분무기를 추가로 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
35. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    흡입기를 추가로 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
36. 제 35 항에 있어서,

    흡입기가 정량식 흡입기인 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
37. 제 35 항에 있어서,

    흡입기가 분말 흡입기인 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
38. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    화학요법제를 추가로 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
39. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    항바이러스제를 추가로 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
40. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    항원을 추가로 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
41. 제 20 항 또는 제 23 항에 있어서,

    약학적으로 허용되는 담체가 주사용으로 제형화되는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
42. 제 20 항 또는 제 23 항에 있어서,

    약학적으로 허용되는 담체가 점막 투여용으로 제형화되는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
43. 치료가 필요한 대상에게 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 ORN을 암을 치료하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료 방법.
44. 제 43 항에 있어서,

    대상에게 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
45. 제 43 항에 있어서,

    대상에게 방사선을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
46. 치료가 필요한 대상에게 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 ORN을 천식을 치료하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 천식의 치료 방법.
47. 치료가 필요한 대상에게 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 ORN을 알레르기를 치료하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 알레르기의 치료 방법.
48. 제 47 항에 있어서,

    대상이 알레르기성 비염을 갖는 방법.
49. 치료가 필요한 대상에게 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 ORN을 면역 반응을 조절하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 면역 반응을 조절하는 방법.
50. 제 49 항에 있어서,

    ORN을 대상에 전달하여 대상에서 자가면역 질환을 치료하는 방법.
51. 제 49 항에 있어서,

    ORN을 대상에 전달하여 대상에서 기도 재형성을 치료하는 방법.
52. 제 49 항에 있어서,

    ORN을 항원 없이 대상에게 투여하는 방법.
53. 제 49 항에 있어서,

    ORN을 경구, 코, 설하, 정맥내, 피하, 점막, 호흡기, 직접 주사 및 피부로 이루어진 군에서 선택된 경로에 의해 전달하는 방법.
54. 제 49 항에 있어서,

    ORN을 사이토카인 발현을 유도하기에 효과적인 양으로 대상에게 전달하는 방법.
55. 제 53 항에 있어서,

    사이토카인이 TNFα, IL-10, IL-6, IFN-γ, MCP1 및 IL-12로 이루어진 군에서 선택되는 방법.
56. 치료가 필요한 대상에게 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 ORN을 바이러스 감염에 의해 악화된 천식을 치료하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 바이러스 감염에 의해 악화된 천식을 치료하는 방법.
57. 치료가 필요한 대상에게 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 ORN을 감염성 질환을 치료하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 감염성 질환을 치료하는 방법.
58. 제 57 항에 있어서,

    대상이 바이러스 감염을 갖는 방법.
59. 제 58 항에 있어서,

    바이러스 감염이 B형 간염인 방법.
60. 제 58 항에 있어서,

    바이러스 감염이 C형 간염인 방법.
61. 제 58 항에 있어서,

    대상에게 항바이러스제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
62. 제 61 항에 있어서,

    항바이러스제가 ORN에 연결되는 방법.
63. 제 57 항에 있어서,

    ORN을 경구, 코, 설하, 정맥내, 피하, 점막, 호흡기, 직접 주사 및 피부로 이루어진 군에서 선택된 경로에 의해 전달하는 방법.
64. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    ORN 모티프가 비-뉴클레오티드 링커에 의해 5' 리보뉴클레오티드와 분리되는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
65. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    ORN 모티프가 비-뉴클레오티드 링커에 의해 3' 리보뉴클레오티드와 분리되는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
66. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    ORN 모티프가 비-뉴클레오티드 링커에 의해 5' 및 3' 리보뉴클레오티드와 분리되는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
67. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    다가양이온성 담체에 제형화되는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
68. 제 43 항에 있어서,

    대상에게 면역자극성 CpG 핵산을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
69. 제 68 항에 있어서,

    ORN 및 면역자극성 CpG 핵산을 별도로 투여하는 방법.
70. 제 68 항에 있어서,

    ORN 및 면역자극성 CpG 핵산을 결합체로서 제형화시키는 방법.
71. 제 68 항에 있어서,

    ORN 및 면역자극성 CpG 핵산을 혼합물로서 제형화시키는 방법.
72. CD4+ Treg 세포를 CD4+ Treg 세포의 억제 효과를 감소시키기에 효과적인 양으로 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 ORN을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 면역억제성 CD4+ 조절 (Treg) 세포를 하향조절하는 방법.
73. 제 72 항에 있어서,

    조성물이 면역자극성 CpG 핵산을 추가로 포함하는 방법.
74. 제 73 항에 있어서,

    ORN 및 면역자극성 CpG 핵산이 연결되지 않는 방법.
75. 제 73 항에 있어서,

    ORN 및 면역자극성 CpG 핵산이 결합체로서 존재하는 방법.
76. 암 치료용 약제의 제조에 있어서, 제 19 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항의 ORN의 조성물의 용도.
77. 제 76 항에 있어서,

    약제가 화학요법제와 함께 사용되기 위한 용도.
78. 제 76 항에 있어서,

    약제가 방사선과 함께 사용되기 위한 용도.
79. 천식 치료용 약제의 제조에 있어서, 제 19 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항의 ORN의 조성물의 용도.
80. 알레르기 치료용 약제의 제조에 있어서, 제 19 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항의 ORN의 조성물의 용도.
81. 제 80 항에 있어서,

    알레르기가 알레르기성 비염인 용도.
82. 면역 반응 조절용 약제의 제조에 있어서, 제 19 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항의 ORN의 조성물의 용도.
83. 제 82 항에 있어서,

    약제가 자가면역 질환을 치료하는데 사용되기 위한 용도.
84. 제 82 항에 있어서,

    약제가 기도 재형성을 치료하는데 사용되기 위한 용도.
85. 제 82 항에 있어서,

    약제가 항원과 함께 사용되기 위한 용도.
86. 제 82 항에 있어서,

    약제가 경구, 코, 설하, 정맥내, 피하, 점막, 호흡기, 직접 주사 및 피부로 이루어진 군에서 선택된 경로에 의해 사용되기 위한 용도.
87. 제 82 항에 있어서,

    면역 반응이 사이토카인 유도를 포함하는 용도.
88. 제 87 항에 있어서,

    사이토카인이 TNFα, IL-10, IL-6, IFN-γ, MCP1 및 IL-12로 이루어진 군에서 선택되는 용도.
89. 바이러스 감염에 의해 악화된 천식을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서, 제 19 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항의 ORN의 조성물의 용도.
90. 감염성 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서, 제 19 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항의 ORN의 조성물의 용도.
91. 제 90 항에 있어서,

    약제가 바이러스 감염을 치료하는데 사용되기 위한 용도.
92. 제 91 항에 있어서,

    바이러스 감염이 B형 간염인 용도.
93. 제 91 항에 있어서,

    바이러스 감염이 C형 간염인 용도.
94. 제 91 항에 있어서,

    약제가 항바이러스제와 함께 사용되기 위한 용도.
95. 제 94 항에 있어서,

    항바이러스제가 ORN에 연결되는 용도.
96. 제 90 항에 있어서,

    약제가 경구, 코, 설하, 정맥내, 피하, 점막, 호흡기, 직접 주사 및 피부로 이루어진 군에서 선택된 경로에 의해 전달되기 위한 용도.
97. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    ORN 모티프가 비-뉴클레오티드 링커에 의해 5' 리보뉴클레오티드와 분리되는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
98. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    ORN 모티프가 비-뉴클레오티드 링커에 의해 3' 리보뉴클레오티드와 분리되는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
99. 제 19 항 또는 제 23 항에 있어서,

    ORN 모티프가 비-뉴클레오티드 링커에 의해 5' 및 3' 리보뉴클레오티드와 분리되는 RNA 올리고뉴클레오티드(ORN).
100. 제 76 항에 있어서,

     약제가 면역자극성 CpG 핵산과 함께 사용되기 위한 용도.
101. 제 100 항에 있어서,

     ORN 및 면역자극성 CpG 핵산이 별도 투여되기 위한 용도.
102. 제 100 항에 있어서,

     ORN 및 면역자극성 CpG 핵산이 결합체로서 제형화되는 용도.
103. 제 100 항에 있어서,

     ORN 및 면역자극성 CpG 핵산이 혼합물로서 제형화되는 용도.
104. CD4+ Treg 세포를 CD4+ Treg 세포의 억제 효과를 감소시키기에 효과적인 양으로 제 19 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항의 ORN을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 면역억제성 CD4+ 조절 (Treg) 세포를 하향조절하는 방법.
105. 제 104 항에 있어서,

     조성물이 면역자극성 CpG 핵산을 추가로 포함하는 방법.
106. 제 105 항에 있어서,

     ORN 및 면역자극성 CpG 핵산이 연결되지 않는 방법.
107. 제 105 항에 있어서,

     ORN 및 면역자극성 CpG 핵산이 결합체로서 존재하는 방법.

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