JP2002521489A - ＣｐＧオリゴヌクレオチドの立体異性体および関連する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 核酸とタンパク質との相互作用は、Ｒ立体異性体について選択的、Ｓ立体異性体について選択的であり得るか、または立体非依存性であり得る。本発明は、ＣｐＧ含有ＤＮＡのＳ立体異性体が、ＣｐＧ ＤＮＡの免疫刺激効果を媒介することにおいて活性であることを実証する。本発明は、ＣｐＧ ＤＮＡについての臨床適用（例えば、ワクチンアジュバント、レトロウイルス疾患、ウイルス疾患、寄生生物疾患または真菌疾患の予防もしくは処置のための免疫活性化因子、あるいは癌免疫治療、アレルギー疾患および喘息疾患の免疫治療など）のための、純粋な立体異性体の、すなわちこの形態について富化されたＤＮＡの使用方法を提供する。本発明はまた、ＣｐＧ ＤＮＡの免疫刺激効果に対向する、Ｒ立体異性体ＤＮＡについての使用法を提供する。このようなＲ立体異性体は、敗血症症候群、腸炎症疾患、乾癬、歯肉炎、全身性エリテマトーデスおよび他の自己免疫疾患のような疾患の処置において有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、一般的に、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの立体異性体、および詳細に
はＳアイソフォームに関する。本発明はまた、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの立体
異性体の使用方法に関する。

【０００２】 （発明の背景） 遺伝コードを運ぶその役割は別として、ＤＮＡは、最近、シグナル伝達分子と
しての機能を示すことが示された（Ｋｒｉｅｇ，Ａ．Ｍ．１９９８、Ｂｉｏｄｒ
ｕｇｓ）。高等真核生物の免疫系は、特定の塩基の状況において、非メチル化Ｃ
ｐＧジヌクレオチドのそれらの状況に基づいて、原核生物の核酸を検出するため
の機構を進化させてきたと考えられる（Ｋｒｉｅｇ，Ａ．Ｋ．ら、１９９５、Ｎ
ａｔｕｒｅ、３７４：５４６）。非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドは、細菌ＤＮ
Ａにおいて通常であるが、脊椎動物ＤＮＡにおいて、不十分であり（「ＣｐＧ抑
制」）そしてメチル化されている（Ｂｉｒｄ，Ａ．Ｐ．、１９８７、Ｔｒｅｎｄ
ｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、３：３４２）。免疫刺激性塩基の状況において、
これらの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むＤＮＡ（「ＣｐＧモチーフ」）
は、Ｂ細胞活性化、活性化誘導アポトーシスに対する耐性ならびにＩＬ−６およ
びＩｇＭの分泌を誘導することにより体液性免疫を誘引する（Ｋｒｉｅｇ，Ａ．
Ｋ．ら、１９９５、Ｎａｔｕｒｅ、３７４：５４６；Ｙｉ，Ａ．Ｋ．ら、１９９
６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５７：５３９４；およびＫｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ら
、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３：２８７９
）。このようなＣｐＧ ＤＮＡはまた直接単球およびマクロファージを活性化し
、Ｔｈ１−様サイトカインを分泌する（Ｂａｌｌａｓ，Ｚ．Ｋ．ら、１９９６、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５７：１８４０；Ｃｏｗｄｅｒｙ，Ｊ．Ｓ．ら、１９
９６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５６：４５７０；およびＨａｌｐｅｒｎ，Ｍ．
Ｄ．ら、１９９６、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６７：７２）。これは、ナ
チュラルキラー（ＮＫ）細胞溶解活性およびインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ
）分泌の活性化を誘導する（Ｂａｌｌａｓ，Ｚ．Ｋ．ら、１９９６、Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．、１５７：１８４０；Ｃｏｗｄｅｒｙ，Ｊ．Ｓ．ら、１９９６、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５６：４５７０；およびＣｈａｃｅ，Ｊ．Ｈ．、１９９７
、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈ．、８４：１８５）。免疫
活性化に対するＣｐＧオリゴヌクレオチドの効果は、１９９７年１０月３０日に
出願された米国特許出願番号０８／９６０，７７４（これは、１９９６年１０月
３０日に出願された米国特許出願番号０８／７３８，６５２の一部継続出願、１
９９５年２月７日に出願された米国特許出願番号０８／３８６，０６３の一部継
続出願、および１９９４年７月１５日に出願された米国特許出願番号０８／２７
６，３５８の一部継続出願である（それぞれの全体が、本明細書中に参考として
援用される））の、共通に割り当てられ、そして共通の特許性を有する米国特許
出願に記載される。

【０００３】 ネイティブのＤＮＡは、ホスホジエステル骨格を有し、そして生存細胞中で、
多くのエキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼにより急速に分解される。
しかし、ヌクレアーゼ耐性ホスホロチオエート骨格を有するＣｐＧオリゴヌクレ
オチドは、著しく増強された免疫刺激効果を有する（Ｋｒｉｅｇ，Ａ．Ｍ．ら、
１９９６、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．、６：１３３およびＺｈａｏ
，Ｑ．ら、１９９６、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃ．、５１：１７３）。正
常なホスホジエステルＤＮＡの骨格は、キラル中心を有さないが、ホスホロチオ
エート改変は、硫黄原子とホスホジエステル結合上の２つの非架橋酸素の１つを
置換し、新しいキラル中心を作製する。各ホスホロチオエートＤＮＡ骨格におけ
るヌクレオチド間結合は、Ｒ立体異性体またはＳ立体異性体のいずれかであり得
る。

【０００４】 ネイティブＤＮＡが、アキラルであるため、ＤＮＡと相互作用するタンパク質
が、立体選択的様式または立体依存的様式で相互作用するかどうかは、公知では
ない。いくつかの研究が、この問題を研究するために、キラルに純粋なホスホロ
チオエートオリゴヌクレオチドを用いて、実施されている。ＤＮＡとのいくらか
の相互作用が、Ｒ立体異性体に特異的であることが見出された。例えば、ヘビ毒
液ホスホジエステラーゼまたは３’エキソヌクレアーゼによるＤＮＡの分解は、
Ｒ立体異性体に特異的であり、そしてＳ立体異性体で極度に非能率的である（Ｂ
ｅｒｇｅｒｓ，Ｐ．Ｍ．およびＦ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、１９７８、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７５：４７９８；Ｂｅｒｇｅｒｓ，Ｐ．Ｍ
．ら、１９７９、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１００：５８５；Ｔａｎｇ，
Ｊ．Ａ．ら、１９９５、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄ
ｅｓ、１４：９８５；Ｋｏｚｉｏｌｋｉｅｗｉｃｚ，Ｍ．ら、１９９７、Ａｎｔ
ｉｓｅｎｓｅ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌ．、
７：４３；およびＧｉｌａｒ，Ｍ．Ａ．ら、１９９８、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ａ
ｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌ．８：３５）。同様に
、ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖のＲＮａｓｅ Ｈ切断は、ＤＮＡ成分のＲ立体異性体に
選択的である（Ｋｏｚｉｏｌｋｉｅｗｉｃｚ，Ｍ．ら、１９９５、Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２３：５０００）。相補的ＲＮＡへのオリゴヌクレ
オチドのハイブリダイゼーションは、ＳについてよりもＲ立体異性体についてよ
り高いことが報告されており（Ｔａｎｇ，Ｊ．ら、１９９５、Ｎｕｃｌｅｏｓｉ
ｄｅｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１４：９８５；およびＫｏｚｉｏｌ
ｋｉｅｗｉｃｚ，Ｍ．ら、１９９５、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、
２３：５０００）、いくつかの実験系においてオリゴヌクレオチドのアンチセン
ス活性を有する（Ｆｅａｒｏｎ，Ｋ．Ｌ．ら、１９９７、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ、Ｗｉｌｅｙ，Ｃ
ｈｉｃｈｅｓｔｅｒ（Ｃｉｂａ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ
２０９）Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９頁）。

【０００５】 一方、いくつかの実験系は、Ｓ立体異性体のみを認識する。例えば、ＤＮＡ依
存性ＲＮＡポリメラーゼは、Ｓ立体異性体に優先的に結合する（Ｂｅｒｇｅｒｓ
，Ｐ．Ｍ．およびＦ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、１９７８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７５：４７９８）。ヌクレアーゼＰ１およびＥｃｏＲＩ
エンドヌクレアーゼは両方に優先的に結合し、そしてＳ立体異性体を切断する（
Ｇｒｉｆｆｉｔｈ，Ｓ．Ａ．Ｄ．、１９８７、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓ．、１５：４１４５；Ｌｅｓｓｅｒ，Ｄ．Ｒ．ら、１９９２、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．、２６７：２４８１０；およびＫｕｒｐｉｅｗｓｋｉ，Ｍ．Ｒ．ら
、１９９６、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３５：８８４６）。注目すべきは、Ｔ７ＲＮＡ
ポリメラーゼはまたＳ塩基を使用し、そしてＲを使用できない（この酵素により
産生されるＲＮＡが、Ｒ立体異性体であるという事実にもかかわらず）（Ｇｒｉ
ｆｆｉｔｈ，Ａ．Ｄ．ら、１９８７、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、
１５：４１４５）。ＤＮＡの特定の４つの鎖構造は、Ｓ立体異性体とより安定で
あるようであり（Ｋａｎｅｈａｒａ，Ｈ．ら、１９９７、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３
６：１７９０）そしていくつかのＳ立体異性体はまた、特定の実験系において、
細胞およびインビボにおいてより大きなアンチセンス活性を有することが報告さ
れている（Ｓｔｅｃ，Ｗ．Ｊ．、１９９７、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ａｎｄ Ｎｉ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌ．、７：５６７）。

【０００６】 これらの立体選択性生物学的活性と対照的に、クレアチンキナーゼとの核酸の
相互作用は、カチオンの存在に依存して、ＲまたはＳ立体異性体のいずれかにつ
いて選択的であり得る（Ｂｅｒｇｅｒｓ，Ｐ．Ｍ．およびＦ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ
、１９８０）。一方、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの、塩基性線維芽
細胞成長因子、ＣＤ４、ラミニンおよびフィブロネクチンへの結合は、立体選択
的ではない（Ｂｅｎｉｍｅｔｓｋａｙａ，Ｌ．ら、１９９５、Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２３：４２３９）。従って、タンパク質との核酸の相互
作用は、Ｒ立体異性体、Ｓ立体異性体について選択的であり得るか、または立体
非依存性であり得る。

【０００７】 （発明の要旨） 本発明は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの立体異性体および使用法に関する。本
発明は、オリゴヌクレオチドを含むリン酸骨格改変ＣｐＧのＳ立体異性体のみが
免疫応答を媒介する際に活性化されるという発見に一部基づく。ＣｐＧ含有核酸
の立体的に無作為な（ｓｔｅｒｅｏｒａｎｄｏｍ）Ｒ立体異性体およびキラルに
純粋なＲ立体異性体の両方が同一の配列のキラルに純粋なＳ立体異性体と比較し
て減少した免疫刺激特性を有することが発見された。Ｓ立体異性体で刺激されて
いる細胞へのＲ立体異性体の添加は、免疫刺激効果において用量依存性の減少を
生じた。従って、本発明の方法により、ＳおよびＲ立体異性体の混合物またはＲ
立体異性体単独を含むＣｐＧ組成物を投与するよりも、Ｓ立体異性体のキラルに
純粋な形態であるＣｐＧ組成物のより低い用量を投与することが可能である。こ
れらの知見は、免疫刺激ＣｐＧ含有核酸の臨床的な開発に重要な意味を有する。

【０００８】 １つの局面において、本発明は、少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫
刺激核酸の組成物である： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、ＣおよびＧは、メチル化されておらず、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、ヌ
クレオチドであり、少なくとも２つのヌクレオチドがキラル中心を形成するリン
酸骨格改変を有し、そして複数のキラル中心は、Ｓキラルを有する。いくつかの
実施態様において、免疫刺激核酸は、少なくとも以下の式を含む配列を有する： ５’ＴＣＮＴＸ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｎは、約０〜２５ヌクレオチドからなる核酸配列である。

【０００９】 いくつかの実施態様において、Ｘ₁Ｘ₂は以下からなる群から選択されるヌクレ
オチドである：ＴｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＣ、ＡｐＧおよびＧｐＧ。他の実施態様に
おいて、Ｘ₃Ｘ₄は以下からなる群から選択されるヌクレオチドである：ＴｐＴ、
ＴｐＡ、ＴｐＧ、ＡｐＡ、ＡｐＧ、ＧｐＡおよびＣｐＡ。さらに他の実施態様に
おいて、Ｘ₁Ｘ₂は以下からなる群から選択されるヌクレオチドであり：ＴｐＴ、
ＴｐＧ、ＡｐＴ、ＧｐＣ、ＣｐＣ、ＣｐＴ、ＴｐＣ、ＧｐＴおよびＣｐＧ；Ｘ₃
は、ＡおよびＴからなる群から選択されるヌクレオチドであり、そしてＸ₄は、
ヌクレオチドであるが、ここで、Ｘ₁Ｘ₂がＴｐＣ、ＧｐＴまたはＣｐＧである場
合、Ｘ₃Ｘ₄はＴｐＣ、ＡｐＴまたはＡｐＣではない。

【００１０】 いくつかの局面または実施態様において、免疫刺激核酸は、二本鎖であり、そ
して他においては１本鎖である。

【００１１】 いくつかの実施態様において、組成物は、骨格改変を有する全てよりは少ない
ヌクレオチドを有する。他の実施態様において、全てよりは少ないキラル中心が
、Ｓキラルを有する。好ましい実施態様において、ヌクレオチドの少なくとも５
０％、７５％または９０％が、骨格改変を有する。他の好ましい実施態様におい
て、キラル中心の少なくとも６０％、７５％または９０％が、Ｓキラリティーを
有する。

【００１２】 組成物は、いくつかの実施態様において、同一の配列を有する免疫刺激核酸を
含む。他の実施態様において、組成物は、少なくとも２つの異なる配列を有する
免疫刺激核酸を含む。

【００１３】 この組成物はまた、他の化合物（例えば、抗原、サイトカイン（例えば、ＧＭ
−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１８、ＩＦＮα、ＴＮＦα、Ｆｌｔ３リガンド、お
よびＩＬ−３）、抗ウイルス、抗細菌、または非核酸アジュバント）を含み得る
。

【００１４】 他の局面において、本発明は、免疫刺激オリゴヌクレオチドを使用する方法を
包含する。これらの方法には、以下が挙げられる：被験体において抗原特異的免
疫応答を誘導する方法、Ｔｈ２からＴｈ１へ被験体の免疫応答を再指向する方法
、被験体においてぜん息を処置する方法、アレルゲンとの接触に対する応答にお
いて、アレルギー反応の発生に対して被験体を脱感作する方法、免疫細胞を活性
化する方法、癌を処置する方法、癌治療を受けた被験体において骨髄の回復を増
強する方法、癌を有する被験体において免疫応答を刺激する方法、この型の方法
は抗原依存細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与し、改良としては、被験体におい
てサイトカイン産生を誘導する方法、ナチュラルキラー細胞溶解活性を刺激する
方法、被験体においてＴｈ１型免疫応答を誘導する方法、および粘膜免疫応答を
誘導する方法。

【００１５】 別の実施態様において、核酸配列は少なくとも式ＧＴＣＧＴＸ₄を含む配列を
有する。

【００１６】 別の局面において、本発明は、ＣｐＧ含有核酸のＲ立体異性体が免疫応答を誘
導するＳ立体異性体の能力を減少するという知見に基づく。そうすることが所望
される場合、部分的にまたは完全にＲ立体異性体から構成されるＣｐＧ核酸を使
用して、免疫応答を阻害し得る。例えば、ＣｐＧ核酸が、非常に高用量で投与さ
れ、そして所望するよりも大きな免疫応答を引き起こす場合、Ｒ立体異性体は、
ＣｐＧの免疫刺激効果をアンタゴナイズするために投与され得る。あるいは、一
過性の免疫刺激効果のみが所望される場合、Ｒ立体異性体は免疫応答を減少する
ために投与され得る。従って、Ｒ立体異性体を適切な時期に投与することにより
、ＣｐＧ誘導免疫応答の時期を調節することが可能である。ＣｐＧのＲ立体異性
体はまた、過剰な免疫応答により媒介される障害の治療的処置に有用である。従
って、Ｒ立体異性体を治療剤として使用して、炎症性障害を処置し得る。

【００１７】 別の局面において、本発明は少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫阻害
核酸の組成物である： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、ＣおよびＧは、メチル化されておらず、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、ヌ
クレオチドであり、少なくとも２つのヌクレオチドがキラル中心を形成するリン
酸骨格改変を有し、そして複数のキラル中心は、Ｒキラリティーを有する。いく
つかの実施態様において、免疫阻害核酸は、少なくとも以下の式を含む配列を有
する： ５’ＴＣＮＴＸ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｎは、約０〜２５ヌクレオチドからなる核酸配列である。

【００１８】 いくつかの実施態様において、Ｘ₁Ｘ₂は以下からなる群から選択されるヌクレ
オチドである：ＴｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＣ、ＡｐＧおよびＧｐＧ。他の実施態様に
おいて、Ｘ₃Ｘ₄は以下からなる群から選択されるヌクレオチドである：ＴｐＴ、
ＴｐＡ、ＴｐＧ、ＡｐＡ、ＡｐＧ、ＧｐＡおよびＣｐＡ。さらに他の実施態様に
おいて、Ｘ₁Ｘ₂は以下からなる群から選択されるヌクレオチドであり：ＴｐＴ、
ＴｐＧ、ＡｐＴ、ＧｐＣ、ＣｐＣ、ＣｐＴ、ＴｐＣ、ＧｐＴおよびＣｐＧ；Ｘ₃
は、ＡおよびＴからなる群から選択されるヌクレオチドであり、そしてＸ₄は、
ヌクレオチドであるが、ここで、Ｘ₁Ｘ₂がＴｐＣ、ＧｐＴまたはＣｐＧである場
合、Ｘ₃Ｘ₄はＴｐＣ、ＡｐＴまたはＡｐＣではない。

【００１９】 いくつかの局面または実施態様において、免疫阻害核酸は、二本鎖であり、そ
して他においては１本鎖である。

【００２０】 いくつかの実施態様において、組成物は、骨格改変を有する全てよりは少ない
ヌクレオチドを有する。他の実施態様において、全てよりは少ないキラル中心が
、Ｒキラリティーを有する。好ましい実施態様において、ヌクレオチドの少なく
とも５０％、７５％または９０％が、骨格改変を有する。他の好ましい実施態様
において、キラル中心の少なくとも６０％、７５％または９０％が、Ｒキラリテ
ィーを有する。

【００２１】 組成物は、いくつかの実施態様において、同一の配列を有する免疫阻害核酸を
含む。他の実施態様において、組成物は、少なくとも２つの異なる配列を有する
免疫阻害核酸を含む。

【００２２】 この組成物はまた、他の化合物（例えば、抗原、サイトカイン（例えば、ＧＭ
−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１８、ＩＦＮα、ＴＮＦα、Ｆｌｔ３リガンド、お
よびＩＬ−３）、抗ウイルス、抗細菌、または非核酸アジュバント）を含み得る
。

【００２３】 本発明はまた、本発明の免疫阻害オリゴヌクレオチドを用いて、被験体におい
て免疫応答を阻害し、そして炎症性疾患を処置する方法を包含する。

【００２４】 さらに別の局面によると、本発明は、抗原非特異的先天免疫活性化および感染
性チャレンジに対する広域スペクトルの耐性を誘導する方法である。

【００２５】 本発明の各々の限定は、本発明の種々の実施態様を包含し得る。従って、任意
の１つのエレメントまたはエレメントの組み合わせを含む本発明の各々の限定が
、本発明の各局面に含まれ得ることが理解される。

【００２６】 （発明の詳細な説明） １つの局面において、本発明は、ＣｐＧ含有核酸のＳ立体異性体が、Ｒ立体異
性体またはその混合物よりも、免疫刺激効果を媒介する際により効果的であると
いう知見に関する。これらの知見は、特に、部分的に、優先的にまたは完全にＳ
立体異性体からなるＣｐＧ調製物のより低い用量の使用を可能にする。

【００２７】 ＣｐＧ含有核酸は、癌、感染性疾患、アレルギー、ぜん息および他の障害を処
置するため、ならびに癌の化学療法後の日和見感染に対する防御を補助するため
に免疫系を刺激する、新規な治療組成物および予防組成物であることが見出され
た。さらに強力な平衡化された、ＣｐＧの刺激に起因する細胞性免疫応答および
体液性免疫応答は、侵入してくる病原および癌細胞に対する身体自身の自然な防
御系を反映する。ＣｐＧ配列は、ヒトＤＮＡにおいては比較的稀であるが、細菌
のような感染生物のＤＮＡにおいて、一般に見出される。ヒト免疫系は、感染の
初期の危険信号としてＣｐＧ配列を認識し、そして他の免疫刺激剤に頻繁に見ら
れるような有害な反応を引き起こすことなく、侵入してくる病原に対して急速か
つ強力な免疫応答を開始するように、明らかに進化している。従って、ＣｐＧ含
有核酸は、この先天免疫防御機構に依存して、免疫療法のための独特かつ自然の
経路を利用し得る。免疫調節に対するＣｐＧ核酸の効果は、本特許出願の発明者
により発見され、そして例えば、以下のような同時係属中の特許出願において広
範に記載されている：米国特許出願番号：０８／３８６，０６３（１９９５年２
月７日出願）（および関連ＰＣＴ ＵＳ９５／０１５７０）；０８／７３８，６
５２（１９９６年１０月３０日出願）；０８／９６０，７７４（１９９７年１０
月３０日出願）（および関連ＰＣＴ／ＵＳ９７／１９７９１、ＷＯ９８／１８８
１０）；０９／１９１，１７０（１９９８年１１月１３日出願）；０９／０３０
，７０１（１９９８年２月２５日出願）（および関連ＰＣＴ／ＵＳ９８／０３６
７８）；０９／０８２，６４９（１９９８年５月２０日出願）（および関連ＰＣ
Ｔ／ＵＳ９８／１０４０８）；０９／３２５，１９３（１９９９年６月３日出願
）（および関連ＰＣＴ／ＵＳ９８／０４７０３）；０９／２８６，０９８（１９
９９年４月２日出願）（および関連ＰＣＴ／ＵＳ９９／０７３３５）；０９／３
０６，２８１（１９９９年５月６日出願）（および関連ＰＣＴ／ＵＳ９９／０９
８６３）。これらの特許および特許出願の各々の全体の内容は、本明細書中に参
考として援用される。

【００２８】 本発明の知見は、上記のＣｐＧ含有核酸の使用およびＣｐＧ核酸についての任
意の他の公知の使用の全てに適用可能である。本発明は、Ｓキラリティーを有す
る改変リン酸骨格を有するＣｐＧオリゴヌクレオチドが、Ｒキラルオリゴヌクレ
オチドおよびＳキラルオリゴヌクレオチドの混合物またはＲキラリティーを有す
るオリゴヌクレオチドよりも優れた免疫活性特性を有するという発見に関する。
従って、本発明は、Ｓキラリティーを有するＣｐＧオリゴヌクレオチドを用いて
免疫系を刺激する任意の方法に有用である。

【００２９】 ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオ
チドを含むオリゴヌクレオチドである。少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌ
クレオチドを含有するオリゴヌクレオチドは、非メチル化シトシン−グアニンジ
ヌクレオチド配列を含有する核酸分子（すなわち、「ＣｐＧ ＤＮＡ」すなわち
５’シトシンに続いて３’グアノシンを含有し、かつこれらがリン酸結合により
連結されたＤＮＡ）であり、そして免疫系を活性化する。ＣｐＧオリゴヌクレオ
チドは、二本鎖または一本鎖であり得る。一般的に、二本鎖分子は、インビボに
おいてより安定であるが、一方、一本鎖分子は、増強された免疫活性を有する。
従って、本発明のいくつかの局面において、オリゴヌクレオチドは、一本鎖であ
ることが好ましく、そして他の局面においてオリゴヌクレオチドは、二本鎖であ
ることが好ましい。用語ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたはＣｐＧ核酸は、本明細
書中で使用される場合、他に示さない限り、免疫刺激性ＣｐＧオリゴヌクレオチ
ドまたは免疫刺激性ＣｐＧ核酸をいう。

【００３０】 用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、複数のヌクレオチド（すなわ
ち、リン酸基および交換可能な有機塩基に連結された糖（例えば、リボースまた
はデオキシリボース）を含む分子であり、これは、置換されたピリミジン（例え
ば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ））または置換されたプ
リン（例えば、アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ））のいずれかである）を意
味するために交換可能に使用される。本明細書中で使用される場合、この用語は
、オリゴリボヌクレオチドおよびオリゴデオキシリボヌクレオチドをいう。この
用語はまた、ポリヌクレオシド（すなわち、ポリヌクレオチドからリン酸を除い
たもの）および任意の他の有機塩基を含有するポリマーを含む。核酸分子は、存
在する核酸供給源（例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡ）から得られ得るが、合成（
例えば、オリゴヌクレオチド合成により生成される）が好ましい。ＣｐＧオリゴ
ヌクレオチド全体は、非メチル化され得るか、または一部が非メチル化され得る
が、少なくとも５’ＣＧ３’のＣは、非メチル化されるべきである。

【００３１】 １つの好ましい実施態様において、本発明は、少なくとも以下の式： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ によって表されるＣｐＧオリゴヌクレオチドを提供し、 ここでＸ₁、Ｘ₂、Ｘ₃、およびＸ₄は、ヌクレオチドである。１つの実施態様にお
いて、Ｘ₂はアデニン、グアニン、またはチミンである。別の実施態様において
、Ｘ₃は、シトシン、アデニン、またはチミンである。

【００３２】 別の実施態様において、本発明は、少なくとも以下の式： ５’Ｎ₁Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄Ｎ₂３’ によって表される単離されたＣｐＧオリゴヌクレオチドを提供し、 ここでＸ₁、Ｘ₂、Ｘ₃、およびＸ₄はヌクレオチドであり、そしてＮは任意のヌク
レオチドであり、そしてＮ₁およびＮ₂は、それぞれ約０〜２５Ｎからなる核酸配
列である。１つの実施態様において、Ｘ₁Ｘ₂は、ＧｐＴ、ＧｐＧ、ＧｐＡ、Ａｐ
Ａ、ＡｐＴ、ＡｐＧ、ＣｐＴ、ＣｐＡ、ＣｐＧ、ＴｐＡ、ＴｐＴ、およびＴｐＧ
からなる群より選択されるヌクレオチドであり；そしてＸ₃Ｘ₄は、ＴｐＴ、Ｃｐ
Ｔ、ＡｐＴ、ＴｐＧ、ＡｐＧ、ＣｐＧ、ＴｐＣ、ＡｐＣ、ＣｐＣ、ＴｐＡ、Ａｐ
Ａ、およびＣｐＡからなる群より選択されるヌクレオチドである。好ましくは、
Ｘ₁Ｘ₂は、ＧｐＡまたはＧｐＴであり、そしてＸ₃Ｘ₄は、ＴｐＴである。他の実
施態様において、Ｘ₁もしくはＸ₂、または両方はプリンであり、かつＸ₃もしく
はＸ₄、または両方はピリミジンであるか、あるいはＸ₁Ｘ₂は、ＧｐＡでありか
つＸ₃もしくはＸ₄、または両方はピリミジンである。別の好ましい実施態様にお
いて、Ｘ₁Ｘ₂は、ＴｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＣ、ＡｐＧ、およびＧｐＧからなる群よ
り選択されるヌクレオチドである。なお別の実施態様において、Ｘ₃Ｘ₄は、Ｔｐ
Ｔ、ＣｐＴ、ＴｐＡ、ＴｐＧ、ＡｐＡ、ＡｐＧ、ＧｐＡ、およびＣｐＡからなる
群より選択されるヌクレオチドである。別の実施態様におけるＸ₁Ｘ₂は、ＴｐＴ
、ＴｐＧ、ＡｐＴ、ＧｐＣ、ＣｐＣ、ＣｐＴ、ＴｐＣ、ＧｐＴ、およびＣｐＧか
らなる群より選択されるヌクレオチドであり；Ｘ₃は、ＡおよびＴからなる群よ
り選択されるヌクレオチドであり、そしてＸ₄はヌクレオチドであるが、ここで
Ｘ₁Ｘ₂が、ＴｐＣ、ＧｐＴ、またはＣｐＧである場合、Ｘ₃Ｘ₄はＴｐＣ、ＡｐＴ
、またはＡｐＣでない。

【００３３】 別の実施態様において、Ｎ₁およびＮ₂の核酸は、ＣＣＧＧもしくはＣＧＣＧの
四量体を含まないか、またはＣＣＧもしくはＣＧＧのトリマーの１より多くを含
まない。ＣＣＧＧもしくはＣＧＣＧの四量体、またはＣＣＧもしくはＣＧＧのト
リマーの１より多くの効果は、オリゴヌクレオチド骨格の状態に部分的に依存す
る。合成オリゴヌクレオチドは、いくつかの実施態様において、５’末端および
／または３’末端で、あるいは５’末端および／または３’末端の近傍で、ＣＣ
ＧＧもしくはＣＧＣＧの四量体、またはＣＣＧもしくはＣＧＧのトリマーの１よ
り多くを含まないかもしれない。例えば、オリゴヌクレオチドが、ホスホジエス
テル骨格またはキメラ骨格を有する場合、そのオリゴヌクレオチドにおいて、こ
れらの配列を含むことは、オリゴヌクレオチドの生物学的活性への任意の影響が
ある場合、最小限のことに過ぎない。この骨格が、完全にホスホロチオエート（
または他のリン酸修飾）であるか、または有意にホスホロチオエートであるなら
ば、これらの配列を含むことは、生物学的活性または生物学的活性の反応速度論
により影響を有し得る。ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、核酸ベクターにコードさ
れている抗原と組み合わせて投与される場合、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの骨格
は、ホスホジエステルおよびホスホロチオエート（または他のリン酸修飾）のキ
メラ的な組合せであることが好ましい。細胞は、完全なホスホロチオエートオリ
ゴヌクレオチドの存在下で、プラスミドベクターを取り込むという問題を有し得
る。従って、ベクターおよびオリゴヌクレオチドの両方が被験体に投与される場
合、オリゴヌクレオチドがキメラ骨格を有するか、またはホスホロチオエート骨
格を有することが好ましいが、プラスミドが細胞に直接的にそれを送達するビヒ
クルと結合し、従って、細胞の取り込みの必要を避けることが好ましい。このよ
うなビヒクルは当業者に公知であり、そして、例えば、リポソームおよび遺伝子
銃を含む。

【００３４】 別の好ましい実施態様において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列５’ＴＣ
Ｎ₁ＴＸ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’を有する。本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、
いくつかの実施態様において、ＧｐＴ、ＧｐＧ、ＧｐＡ、およびＡｐＡからなる
群より選択されるＸ₁Ｘ₂を含み、そしてＸ₃Ｘ₄は、ＴｐＴ、ＣｐＴ、およびＴｐ
Ｃからなる群より選択される。

【００３５】 細胞への取り込みを容易にするために、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、好
ましくは、８〜１００塩基長の範囲にある。しかし、８ヌクレオチドより大きい
任意のサイズ（ｋｂ長でさえ多い）の核酸は、十分な免疫刺激モチーフが存在す
る場合、本発明に従う免疫応答を誘導し得る。なぜなら、より大きい核酸は、細
胞内部でオリゴヌクレオチドに分解されるからである。好ましくは、ＣｐＧオリ
ゴヌクレオチドは、８と１００との間の範囲にあり、そしていくつかの実施態様
においては、８と３０との間のヌクレオチドのサイズである。

【００３６】 「パリンドローム配列」は、逆向きの反復を意味する（すなわち、ＡＢＣＤＥ
Ｅ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’のような配列であり、ここでＡとＡ’は、通常のＷａｔｓ
ｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成し得る塩基である）。インビボにおいて、このよ
うな配列は、二重鎖構造を形成し得る。１つの実施態様において、ＣｐＧオリゴ
ヌクレオチドは、パリンドローム配列を含む。この文脈において使用されるパリ
ンドローム配列は、ＣｐＧがパリンドロームの一部であり、そして好ましくは、
ＣｐＧパリンドロームの中心であるようなパリンドロームをいう。別の実施態様
において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、パリンドロームを含まない。パリンド
ロームを含まないＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＣｐＧジヌクレオチドがパリン
ドロームの一部ではない、パリンドロームである。このようなオリゴヌクレオチ
ドは、ＣｐＧがパリンドロームの中心ではないパリンドロームを含む。

【００３７】 本発明のＣｐＧ核酸配列は、広く上記に記載されるもの、ならびに、それぞれ
、１９９５年２月７日および１９９７年１０月３０日に出願された、米国出願番
号０８／３８６，０６３および０８／９６０，７７４に対する優先権を主張する
、ＰＣＴ公開特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９５／０１５７０およびＰＣＴ／ＵＳ９７／
１９７９１において開示されるものである。例示的な配列は、表１に示される免
疫刺激の配列を含むがこれらに限定されない。

【００３８】

【表１】 本発明における使用のために、核酸（Ｓキラル核酸およびＲキラル核酸の両方
）が、当該分野で周知の多数の手順のいずれかを用いて新規に合成され得る。例
えば、ｂ−シアノエチルホスホルアミダイト法（Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．，
およびＣａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２２：１８５９，１９
８１）；ヌクレオシドＨ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．
２７：４０５１−４０５４，１９８６；Ｆｒｏｅｈｌｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉ
ｄ．Ｒｅｓ．１４：５３９９−５４０７，１９８６，；Ｇａｒｅｇｇら、Ｔｅｔ
．Ｌｅｔ．２７：４０５５−４０５８，１９８６，Ｇａｆｆｎｅｙら、Ｔｅｔ．
Ｌｅｔ．２９：２６１９−２６２２，１９８８）。これらのケミストリーは、市
販されている種々の自動オリゴヌクレオチド合成機によって行われ得る。これら
のオリゴヌクレオチドは、合成オリゴヌクレオチドといわれる。あるいは、Ｃｐ
Ｇジヌクレオチドは、プラスミド中で大規模で産生され得（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，
Ｔ．ら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ」，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９を参照のこと）、そして小さい部
分に分けられるか、または全体が投与される。オリゴヌクレオチドは、制限酵素
、エキソヌクレアーゼ、またはエンドヌクレアーゼを使用する技術のような、公
知の技術を使用して、既存の核酸配列（例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡ）から調
製され得る。この様式において調製されるオリゴヌクレオチドは、単離されたオ
リゴヌクレオチドといわれる。用語ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたはＣｐＧ核酸
（Ｓキラル核酸およびＲキラル核酸の両方）は、合成のＣｐＧオリゴヌクレオチ
ドおよび単離されたＣｐＧオリゴヌクレオチドの両方を含む。

【００３９】 インビボでの使用のために、核酸（Ｓキラル核酸およびＲキラル核酸の両方）
は、好ましくは、分解に対して比較的耐性である（例えば、安定化される）。「
安定化された核酸分子」は、インビボでの分解（例えば、エキソヌクレアーゼま
たはエンドヌクレアーゼを介する分解）に比較的耐性である核酸分子を意味する
。安定化は、長さまたは二次構造の関数である。１０〜数百ｋｂ長のメチル化さ
れていないＣｐＧオリゴヌクレオチドは、インビボでの分解に比較的耐性である
。より短いＣｐＧオリゴヌクレオチドについては、二次構造がこの効果を安定化
および増加させ得る。例えば、オリゴヌクレオチドの３’末端が上流の領域に対
して自己相補性を有するならば、その結果、それは再折り畳みされ得、そして一
種のステムループ構造を形成し、次いでオリゴヌクレオチドは安定となり、従っ
てより活性を示す。

【００４０】 あるいは、核酸の安定化は、リン酸骨格の修飾を介して達成され得る。本発明
の好ましい安定化オリゴヌクレオチドは、修飾された骨格を有する。オリゴヌク
レオチド骨格の修飾は、インビボで投与された場合に、ＣｐＧオリゴヌクレオチ
ドの増強された活性を提供することが実証された。これらの安定化された構造は
、本発明のキラルＣｐＧ分子が少なくとも部分的に修飾された骨格を有するので
、好ましい。オリゴヌクレオチドの５’末端において少なくとも２つのホスホロ
チオエート結合および３’末端において複数のホスホロチオエート結合を含むＣ
ｐＧ構築物は、好ましくは５は、最大活性を提供し、そして細胞内エキソヌクレ
アーゼおよびエンドヌクレアーゼによる分解からオリゴヌクレオチドを保護する
。他の修飾されたオリゴヌクレオチドは、ホスホジエステル修飾されたオリゴヌ
クレオチド、ホスホジエステルの組合せ、およびホスホロチオエートオリゴヌク
レオチド、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエ
ート、およびそれらの組合せを含む。これらの組合せの各々および免疫細胞上の
それらの特定の効果は、１９９５年２月７日および１９９７年１０月３０日にそ
れぞれ出願された、米国特許出願番号０８／３８６，０６３および０８／９６０
，７７４に対する優先権を主張する、ＰＣＴ公開特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９５／０
１５７０およびＰＣＴ／ＵＳ９７／１９７９１においてより詳細に議論され、こ
れらの全体の内容は本明細書によって参考として援用される。これらの修飾した
オリゴヌクレオチドは、増強されたヌクレアーゼ耐性、増加された細胞の取り込
み、増加されたタンパク質結合、および／または変化した細胞内局在に起因して
、より刺激活性を示し得る。

【００４１】 ホスホロチオエートのような改変された骨格は、ホスホルアミデートまたはＨ
−ホスホネートケミストリーのいずれかを利用する自動化技術を用いて合成され
得る。アリールおよびアルキルホスホネートは、例えば、米国特許第４，４６９
，８６３号に記載されるように作製され得；そしてアルキルホスホトリエステル
（ここで荷電した酸素部分は、米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許
第０９２，５７４号に記載されるようにアルキル化される）は、市販の試薬を使
用して、自動化固相合成によって調製され得る。他のＤＮＡ骨格修飾体および置
換体の生成方法が記載されている（Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．およびＰｅｙｍａｎ，
Ａ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４４，１９９０；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ．
，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１：１６５，１９９０）。

【００４２】 ＣｐＧモチーフを含むホスホロチオエートオリゴヌクレオチドおよびホスホジ
エステルオリゴヌクレオチドの両方は、免疫細胞中で活性である。しかし、Ｃｐ
Ｇ特異的効果を誘導するために必要とされる濃度に基づいて、ヌクレアーゼ耐性
ホスホロチオエート骨格ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、より強力である（ホスホ
ロチオエートについて２μｇ／ｍｌに対し、ホスホジエステルについて合計９０
μｇ／ｍｌ）。

【００４３】 他の安定化されたオリゴヌクレオチドには、非イオン性ＤＮＡアナログ（例え
ば、アルキル−およびアリール−ホスフェート（ここで、荷電したホスホネート
酸素がアルキル基またはアリール基によって置換されている））、ホスホジエス
テルおよびアルキルホスホトリエステル（ここで、荷電した酸素部分がアルキル
化されている）が挙げられる。いずれかまたは両方の末端でジオール（例えば、
テトラエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコール）を含むオリゴヌク
レオチドはまた、ヌクレアーゼ分解に実質的に耐性であることが示される。

【００４４】 本発明に従って有用なＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＳキラルまたはＲキラル
ＣｐＧオリゴヌクレオチドである。本明細書中で使用される場合、「ＳキラルＣ
ｐＧオリゴヌクレオチド」とは、少なくとも２つのヌクレオチドがキラル中心を
形成する骨格修飾を有し、かつ複数のキラル中心がＳキラリティーを有するＣｐ
Ｇ核酸である。本明細書中で使用される「ＲキラルＣｐＧオリゴヌクレオチド」
とは、少なくとも２つのヌクレオチドがキラル中心を形成する骨格修飾を有し、
かつ複数のキラル中心がＲキラリティーを有するＣｐＧ核酸である。骨格修飾は
、キラル中心を形成する任意の型の修飾であり得る。その修飾は、ホスホロチオ
エート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエー
ト、およびそれらの組合せを含むがこれらに限定されない。

【００４５】 キラルＣｐＧオリゴヌクレオチドは、骨格修飾を有するオリゴヌクレオチド中
に少なくとも２つのヌクレオチドを有さなくてはならない。しかし、オリゴヌク
レオチド中のすべてのヌクレオチドまたはすべてより少ないヌクレオチドが、修
飾された骨格を有し得る。修飾された骨格を有するヌクレオチドの（キラル中心
といわれる）、複数が単一のキラリティー、ＳまたはＲを有する。本明細書中で
使用される場合、「複数」とは、５０％より多い量をいう。従って、複数のキラ
ル中心がＳキラリティーまたはＲキラリティーを有する限り、すべてより少ない
キラル中心は、ＳキラリティーまたはＲキラリティーを有し得る。いくつかの実
施態様において、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％
、８５％、９０％、９５％、または１００％のキラル中心がＳキラリティーまた
はＲキラリティーを有する。他の実施態様において、少なくとも５５％、６０％
、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％
のヌクレオチドが骨格修飾を有する。

【００４６】 ＳキラルおよびＲキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドは、キラル的に純粋なオリ
ゴヌクレオチドを産生するための当該分野で公知の任意の方法によって調製され
得る。多くの参考文献（例えば、実施例で引用されるＳｔｅｃらの文献、これは
、オキサチアホスホラン（ｏｘａｔｈｉａｐｈｏｓｐｈｏｌａｎｅ）法を使用し
て、立体的に純粋なホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを産生する方法を教
示する）が公開されている（Ｓｔｅｃ，Ｗ．Ｊ．ら、１９９５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈ
ｅｍ．Ｓｏｃ．，１１７：１２０１９）。キラル的に純粋なオリゴヌクレオチド
を作製する他の方法は、ＩＳＩＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのような会
社によって記載されている。米国特許はまたこれらの方法を記載する。例えば、
米国特許第５８８３２３７号；同第５８３７８５６号；同第５５９９７９７号；
同第５５１２６６８号；同第５８５６４６５号；同第５３５９０５２号；同第５
５０６２１２号；同第５５２１３０２号；および同第５２１２２９５号、これら
のそれぞれは、その全体が参考として本明細書によって援用され、立体的に純粋
なオリゴヌクレオチドを生成するための方法を開示する。

【００４７】 ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドは、感染性の生物との感染または特定の癌
抗原が同定されてきた癌、あるいはアレルゲンまたはぜん息に対する素因が既知
であるアレルギーまたはぜん息を発症する危険がある被験体の処置のための予防
的ワクチンとして、本発明のいくつかの局面において有用である。ＳキラルＣｐ
Ｇオリゴヌクレオチドはまた、感染、アレルギー、または癌に対する短期の保護
について抗原またはアレルゲンなしで与えられ得、そしていくつかの場合には、
反復用量が長期の保護を可能にする。本明細書中で使用される場合、「危険があ
る被験体」とは、感染を引き起こす病原体にさらされることの危険を有するか、
または癌もしくはアレルゲンもしくは癌を発症する危険を有する被験体である。
例えば、危険がある被験体は、特定の型の感染性薬剤が見出されている地域に旅
行する予定である被験体であり得、あるいは、その被験体は、ライフスタイルま
たは医学的手順によって、感染性生物を含み得る体液にさらされる被験体、また
は感染性生物またはアレルゲンが同定されている地域において生活している任意
の被験体でさえあり得る。感染を発症する危険にある被験体はまた、医療機関が
特定の感染性生物抗原を用いるワクチン投与を推奨する一般的な集団を含む。そ
の抗原はアレルゲンであり、そしてその被験体はその特定の抗原に対するアレル
ギー反応を発症し、そしてその被験体はその抗原にさらされ得（すなわち、花粉
の季節）、次いで、その患者は、抗原にさらすことの危険がある。ぜん息に対す
るアレルギーを発症する危険がある患者には、アレルギーまたはぜん息を有する
と同定されたが、ＣｐＧ処置の間に活性な疾患を有さない患者、ならびに遺伝的
または環境的因子によりこれらの疾患を発症する危険があると考えられる被験体
が含まれる。

【００４８】 癌を発症する危険がある被験体は、癌を発症する高い可能性を有する被験体で
ある。これらの被験体には、例えば、遺伝的な異常（その存在が癌を発症する高
い可能性に関して相関を有することが実証されている）を有する被験体、および
発癌剤（例えば、タバコ、アスベスト、または他の化学的毒素）にさらされた被
験体、または癌について以前に処置され、そして見かけの寛解にある被験体が含
まれる。癌を発症する危険がある被験体が、その被験体が発症する危険がある癌
の型について特異的な抗原で処置される場合、ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチ
ド被験体は、その癌が発症した場合に、それを殺傷し得る。被験体において腫瘍
が形成され始める場合、その被験体は、腫瘍抗原に対して特定の免疫応答を発生
させる。

【００４９】 予防的処置のためのＣｐＧオリゴヌクレオチドの使用に加えて、本発明はまた
、感染、アレルギー、ぜん息、または癌を有する被験体の処置のためのＣｐＧオ
リゴヌクレオチドの使用を包含する。

【００５０】 「感染を有する被験体」とは、感染性の病原体にさらされ、そして身体中で病
原体の急性または慢性の検出可能なレベルを有する被験体をいう。ＣｐＧオリゴ
ヌクレオチドは、感染性の病原体のレベルを減少させ得るか、または感染性の病
原体を全滅させ得る、抗原特異的粘膜免疫応答を上昇させるために抗原とともに
使用され得る。本明細書中で使用される場合、感染性疾患とは、身体における外
来性の微生物の存在から生じる疾患である。病原体の最初の進入の部位である、
身体の粘膜表面を保護するための有効なワクチンストラテジーおよび処置を開発
することが特に重要である。

【００５１】 「アレルギーを有する被験体」とは、アレルゲンに応答してアレルギー反応を
有するか、またはそのようなアレルギー反応を発症する危険がある被験体をいう
。「アレルギー」とは、物質（アレルゲン）に対する後天的な過敏症をいう。ア
レルギー状態には、湿疹、アレルギー性鼻炎もしくはコリーザ、枯草熱、結膜炎
、気管支ぜん息、じんま疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａもしくはｈｉｖｅｓ）、および
食物アレルギー、ならびに他のアトピー性状態が含まれるがこれらに限定されな
い。

【００５２】 現在、アレルギー疾患は、一般に、低用量の抗原の注射、次いで、続く増加す
る用量の抗原の注射により処置される。この手順は、アレルゲンに対する寛容を
誘導し、さらなるアレルギー反応を予防すると考えられている。しかし、これら
の方法は、有効となるまでに数年を要し得、そしてアナフィラキシーショックの
ような副作用の危険性を伴う。本発明の方法はこれらの問題を回避する。

【００５３】 アレルギーは、一般に、無害なアレルゲンに対するＩｇＥ抗体の生成によって
引き起こされる。非メチル化ＣｐＧオリゴヌクレオチドの粘膜投与によって誘導
されるサイトカインは、主に、「Ｔｈ１」と呼ばれるクラス（例としては、ＩＬ
−１２およびＩＦＮ−γである）であり、そしてこれらは、体液性免疫応答およ
び細胞性免疫応答の両方を誘導する。Ｔｈ１応答に関連する抗体の型は、一般に
、より防御的である。なぜなら、これらは、高い中和能力およびオプソニン作用
能力を有するからである。他の主要な型の免疫応答は、Ｔｈ２免疫応答と呼ばれ
、これはＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１０サイトカインの産生に関連する。
Ｔｈ２応答は主に抗体を含み、そしてこれらは、感染に対して、より少ない防御
的効果を有し、そしていくつかのＴｈ２アイソタイプ（例えば、ＩｇＥ）は、ア
レルギーに関連する。一般に、アレルギー疾患は、Ｔｈ２型免疫応答によって媒
介され、一方、Ｔｈ１応答は感染に対する最良の防御性を提供するが、過剰なＴ
ｈ１応答は、自己免疫疾患に関連するようである。被験体における免疫応答をＴ
ｈ２応答（これはＩｇＥ抗体の産生およびアレルギーに関連する）からＴｈ１応
答（これはアレルギー反応に対して防御的である）へシフトさせるＣｐＧオリゴ
ヌクレオチドの能力に基づいて、免疫応答を誘導するために有効な用量のＣｐＧ
オリゴヌクレオチドを被験体へ投与して、アレルギーを処置または予防し得る。

【００５４】 従って、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、アレルギー状態および非アレルギー状
態（例えば、喘息）の処置において有意な治療的有用性を有する。Ｔｈ２サイト
カイン、特にＩＬ−４およびＩＬ−５は、喘息の被験体の気道において上昇され
る。これらのサイトカインは、喘息の炎症性応答の重要な局面（ＩｇＥアイソト
ープ転換、好酸球走化性および好酸球活性化、ならびに肥満細胞増殖を含む）を
促進する。Ｔｈ１サイトカイン、特にＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２は、Ｔｈ２ク
ローンの形成およびＴｈ２サイトカインの産生を抑制し得る。「喘息」とは、炎
症によって特徴付けられる呼吸器系の障害（気道の狭窄および吸入物質に対する
気道の反応性の増大）をいう。喘息は、全面的にではないが頻繁に、アトピー性
症状またはアレルギー性症状に関連する。

【００５５】 「癌を有する被験体」は、検出可能な癌性細胞を有する被験体である。この癌
は、悪性の癌であってもよいし、悪性でない癌であってもよい。癌または腫瘍に
は、以下が挙げられるがこれらに限定されない：胆管癌；脳の癌；乳癌；頸部癌
；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌；胃癌；上皮内新生物；リンパ腫；肝臓
癌；肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）；黒色腫；神経芽細胞腫；口腔癌（
ｏｒａｌ ｃａｎｃｅｒ）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；肉腫；皮膚癌
；精巣癌；甲状腺癌；および腎臓癌、ならびに他の癌腫および肉腫。

【００５６】 「被験体」とは、ヒト、またはイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ
、ニワトリ、霊長類（例えば、サル）、魚（養殖漁業種）（例えば、サケ）、ラ
ットおよびマウスを含むが、これらに限定されない脊椎動物を意味する。

【００５７】 被験体は抗原に曝露される。本明細書で使用される場合、用語「〜に曝露され
る（する）」とは、インビボで、被験体を抗原と接触させる能動的な工程または
抗原への被験体の受動的曝露のいずれかをいう。被験体を抗原に能動的に曝露す
るための方法は、当該分野において周知である。一般に、抗原は、任意の手段（
例えば、静脈内、筋肉内、経口、経皮、粘膜、鼻腔内、気管内、または皮下投与
）によって被験体に直接的に投与される。抗原は、全身的または局所的に投与さ
れ得る。抗原およびＳ−キラルＣｐＧオリゴヌクレオチドを投与するための方法
は、以下でより詳細に記載される。被験体は、抗原が身体内の免疫細胞への曝露
に利用可能となる場合に、抗原に受動的に曝露される。被験体は、例えば、外来
病原体のその身体への進入によって、または外来抗原を細胞表面に発現する腫瘍
細胞の発生によって、抗原に受動的に曝露され得る。

【００５８】 被験体を抗原に受動的に曝露する方法は、特に、Ｓ−キラルＣｐＧオリゴヌク
レオチドの投与の時期に依存し得る。例えば、癌もしくは感染疾患またはアレル
ギー応答もしくは喘息応答を発症する危険性がある被験体において、この被験体
は、その危険性が最も高い時期（すなわち、アレルギーの季節の間または癌誘導
因子（ｃａｎｃｅｒ ｃａｕｓｉｎｇ ａｇｅｎｔ）への曝露の後）に、規則的
にＳ−キラルＣｐＧオリゴヌクレオチドを投与され得る。さらに、このＣｐＧオ
リゴヌクレオチドは、旅行者が病原菌に曝露される危険性がある外国に旅行する
前に、その旅行者に投与され得る。同様に、Ｓ−キラルＣｐＧオリゴヌクレオチ
ドは、生物戦争（ｂｉｏｗａｒｆａｒｅ）に曝露される危険性のある軍人または
民間人に投与されて、その被験体が抗原に曝露される時および場合に、この抗原
に対する粘膜免疫応答を誘導し得る。

【００５９】 本明細書中で使用される「抗原」は、免疫応答を引き起こし得る分子である。
抗原としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：細胞、細胞抽出物、
タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、多糖、多糖結合体、多糖および他の分子
のペプチド模倣物および非ペプチド模倣物、低分子、脂質、糖脂質、炭水化物、
ウイルスおよびウイルス抽出物、ならびに多細胞生物（例えば、寄生生物および
アレルゲン）。用語抗原は、宿主免疫系によって外来であるとして認識される任
意の型の分子を広範に含む。抗原としては、癌抗原、微生物抗原、およびアレル
ゲンが挙げられるがこれらに限定されない。

【００６０】 本明細書中で使用される「癌抗原」は、腫瘍または癌細胞の表面に会合する化
合物（例えば、ペプチドまたはタンパク質）であり、そしてこの化合物は、ＭＨ
Ｃ分子に関連する抗原提示細胞の表面上に発現された場合に免疫応答を引き起こ
し得る。癌抗原は、癌細胞の粗抽出物を調製すること（例えば、Ｃｏｈｅｎら、
１９９４，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５４：１０５５に記載されるよう
に）、これらの抗原を部分的に精製すること、組換え技術、または既知の抗原の
デノボ合成のいずれかによって、癌細胞から調製され得る。癌抗原としては、組
換え的に発現された腫瘍もしくは癌の免疫原性部分、または腫瘍全体もしくは癌
全体である抗原が挙げられるが、これらに限定されない。このような抗原は、単
離され得るか、または組換え的にもしくは当該分野で公知の任意の他の手段によ
って調製され得る。

【００６１】 本明細書中で使用される「微生物抗原」は、微生物の抗原であり、そしてこれ
は、ウイルス、細菌、寄生生物、および真菌を含むがこれらに限定されない。こ
のような抗原は、インタクトな微生物、ならびに天然の単離物、およびそれらの
フラグメントもしくは誘導体を含み、そしてまた、天然の微生物抗原に対して同
一または類似する合成化合物を含む。これらの抗原は、微生物に対して特異的な
免疫応答を誘導する。化合物が天然の微生物抗原に対して免疫応答（体液性およ
び／または細胞性）を誘導する場合、この化合物は天然の微生物抗原に類似する
。このような抗原は、当該分野において慣用的に使用され、そして当業者に周知
である。

【００６２】 ヒトにおいて見出されているウイルスの例としては、以下が挙げられるがこれ
らに限定されない：Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ヒト免疫不全ウイルス
（例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶもしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／
ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩともいわれる）；および他の分離株、例えば、Ｈ
ＩＶ−ＬＰ）；Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ポリオウイルス、Ａ型
肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス
、ＥＣＨＯウイルス）；Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ（例えば、胃腸炎を引き起こ
す株）；Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）
；Ｆｌａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、デング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウ
イルス）；Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、コロナウイルス）；Ｒｈａｂ
ｄｏｖｉｒａｄａｅ（例えば、水疱性口炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；Ｃｏｒ
ｏｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、コロナウイルス）；Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａ
ｅ（例えば、水疱性口炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ
（例えば、エボラウイルス）；Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、パラ
インフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、ＲＳウイル
ス）；Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、インフルエンザウイルス）
；Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ハンターンウイルス、ブンヤウイルス（
ｂｕｎｇａ ｖｉｒｕｓ）、フレボウイルスおよびナイロウイルス（Ｎａｉｒｏ
ｖｉｒｕｓ））；Ａｒｅｎａ ｖｉｒｉｄａｅ（出血熱ウイルス）；Ｒｅｏｖ
ｉｒｉｄａｅ（例えば、レオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）；
Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ；Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ（Ｂ型肝炎ウイルス
）；Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａ（パルボウイルス）；Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ
（乳頭腫ウイルス、ポリオーマウイルス）；Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ（大半の
アデノウイルス）；Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ（単純ヘルペスウイルス（ＨＳ
Ｖ）１および２、水痘−帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、
ヘルペスウイルス）；Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイル
ス、ポックスウイルス）；およびＩｒｉｄｏｖｉｒｉａｅ（例えば、アフリカ豚
コレラウイルス）；ならびに分類されていないウイルス（例えば、海綿状脳障害
の病因論的因子、デルタ型肝炎の因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損サテライトであ
ると考えられる）、非Ａ型非Ｂ型肝炎の因子（クラス１＝内部伝播；クラス２＝
非経口伝播）（すなわち、Ｃ型肝炎）；ノーウォークウイルスおよび関連ウイル
ス、ならびにアストロウイルス（ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ））。

【００６３】 グラム陰性細菌およびグラム陽性細菌はともに、脊椎動物において抗原として
作用する。このようなグラム陽性細菌としては、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ種、Ｓ
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ種、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種が挙げらる
がこれらに限定されない。グラム陰性細菌としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種が挙げら
れるがこれらに限定されない。感染性細菌の具体的な例としては、以下が挙げら
れるがこれらに限定されない。

【００６４】

【化１】 真菌の例としては、以下が挙げられる：Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆ
ｏｒｍａｎｓ，Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ，Ｃｏｃｃｉｄ
ｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ，Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉ
ｄｉｓ，Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ，Ｃａｎｄｉｄａ ａｌ
ｂｉｃａｎｓ。他の感染性生物体（すなわち、原生生物）としては以下が挙げら
れる：Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａ
ｒｕｍ，Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅ，Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏ
ｖａｌｅ，ならびにＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘおよびＴｏｘｏｐｌａｓ
ｍａ ｇｏｎｄｉｉ）。

【００６５】 他の医療的に適切な微生物は、文献において広範に記載されている（例えば、
Ｃ．Ｇ．Ａ Ｔｈｏｍａｓ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂａ
ｉｌｌｉｅｒｅ Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａｉｎ １９８３（こ
の内容全体は、参考として本明細書中に援用される）を参照のこと）。

【００６６】 上記の微生物抗原の多くはヒト障害に関連するが、本発明はまた、他の非ヒト
脊椎動物を処置するために有用である。非ヒト脊椎動物はまた、本明細書中に開
示されるＣｐＧオリゴヌクレオチドを用いて予防または処置し得る感染を発症し
得る。例えば、感染性のヒト疾患の処置に加えて、本発明の方法は、動物の感染
を処置するために有用である。

【００６７】 本明細書中で使用される場合、「処置」、「処置された」、または「処置する
」という用語は、感染性疾患に関して使用された場合は、被験体（感染の危険が
ある被験体）の病原体による感染に対する抵抗性を増す、言い換えれば、被験体
が病原体によって感染する見込みを減少させる予防的処置、および被験体（感染
した被験体）が感染した後、感染と闘うため（例えば、感染を減少または除去す
る、または悪化するのを防止するため）の処置をいう。

【００６８】 非ヒト脊椎動物の処置のための多くのワクチンが、Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｋ．Ｃｏ
ｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、第３版、
Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍｓ，Ｉｎｃ．、１９９５
で開示されている。上記で論じたように、抗原は、天然の供給源からまたは合成
的に得られた、ウイルス、細菌および真菌のような感染性の微生物、およびその
フラグメントを含む。ヒトおよび非ヒト脊椎動物の感染性ウイルスはどちらも、
レトロウイルス、ＲＮＡウイルス、およびＤＮＡウイルスを含む。レトロウイル
スのこのグループは、単純レトロウイルスおよび複雑なレトロウイルスをどちら
も含む。単純レトロウイルスは、Ｂ型レトロウイルス、Ｃ型レトロウイルスおよ
びＤ型レトロウイルスのサブグループを含む。Ｂ型レトロウイルスの例は、マウ
ス乳腺癌ウイルス（ＭＭＴＶ）である。Ｃ型レトロウイルスは、サブグループの
Ｃ型グループＡ（ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ
）、およびトリ骨髄芽球症ウイルス（ＡＭＶ）を含む）、およびＣ型グループＢ
（マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）、マウス
肉腫ウイルス（ＭＳＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）、脾臓壊死ウ
イルス（ＳＮＶ）、細網内皮症ウイルス（ＲＶ）、およびサル肉腫ウイルス（Ｓ
ＳＶ）を含む）を含む。Ｄ型レトロウイルスは、マソン−ファイザーサルウイル
ス（ＭＰＭＶ）およびサルレトロウイルス１型（ＳＲＶ−１）を含む。複雑なレ
トロウイルスは、レンチウイルス、Ｔ細胞白血病ウイルスおよび泡沫状ウイルス
のサブグループを含む。レンチウイルスは、ＨＩＶ−１を含むが、またＨＩＶ−
２、ＳＩＶ、ビスナウイルス、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、およびウマ伝
染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）を含む。Ｔ細胞白血病ウイルスは、ＨＴＬＶ−Ｉ
、ＨＴＬＶ−ＩＩ、サルＴ細胞白血病ウイルス（ＳＴＬＶ）、およびウシ白血病
ウイルス（ＢＬＶ）を含む。泡沫状ウイルスは、ヒト泡沫状ウイルス（ＨＦＶ）
、サル泡沫状ウイルス（ＳＦＶ）、およびウシ泡沫状ウイルス（ＢＦＶ）を含む
。

【００６９】 脊椎動物において抗原である他のＲＮＡウイルスの例は、以下のものを含むが
これに限定されない。オルトレオウイルス属（哺乳類および鳥類レトロウイルス
両方の複数の血清型）、オルビウイルス属（ブルータングウイルス、ユーベナン
ギー（Ｅｕｇｅｎａｎｇｅｅ）ウイルス、ケメロボウイルス、アフリカウマ疫ウ
イルス、およびコロラドダニ熱ウイルス）、ロタウイルス属（ヒトロタウイルス
、ネブラスカ仔ウシ下痢症ウイルス、マウスロタウイルス、サルロタウイルス、
ウシまたはヒツジロタウイルス、トリロタウイルス）を含むレオウイルス科；エ
ンテロウイルス属（ポリオウイルス、コクサッキーウイルスＡおよびＢ、ＥＣＨ
Ｏ（ｅｎｔｅｒｉｃ ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｈｕｍａｎ ｏｒｐｈａｎ）ウイ
ルス、Ａ型肝炎ウイルス、サルエンテロウイルス、マウス脳脊髄炎（ＭＥ）ウイ
ルス、マウスポリオウイルス（Ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ ｍｕｒｉｓ）、ウシエン
テロウイルス、ブタエンテロウイルス）、カルジオウイルス属（脳心筋炎ウイル
ス（ＥＭＣ）、メンゴウイルス）、ライノウイルス属（少なくとも１１３のサブ
タイプを含むヒトライノウイルス；他のライノウイルス）、アフトウイルス属（
口蹄疫（ＦＭＤＶ））を含むピコルナウイルス科；ブタ小水疱性発疹ウイルス、
サンミグエルアザラシウイルス、ネコピコルナウイルス、およびノーウォークウ
イルスを含むカリチウイルス科；アルファウイルス属（東部ウマ脳炎ウイルス、
セムリキ森林熱ウイルス、シンドビスウイルス、チクングニヤウイルス、オニョ
ンニョンウイルス、ロス川ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳
炎ウイルス）、フラビウイルス（Ｆｌａｖｉｒｉｕｓ）属（蚊媒介黄熱ウイルス
、デング熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マリーバ
レー脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、クンジンウイルス、中央ヨーロッパダニ
媒介ウイルス、極東ダニ媒介ウイルス、キャサヌール森林病ウイルス、跳躍病（
Ｌｏｕｐｉｎｇ ＩＩＩ）ウイルス、ポーワッサンウイルス、オムスク出血熱ウ
イルス）、ルビウイルス属（風疹ウイルス）、ペスチウイルス属（粘膜病ウイル
ス、ブタコレラウイルス、ボーダー病ウイルス）を含むトガウイルス科；ブンヤ
ウイルス属（ブニャンベラおよび関連ウイルス、カリフォルニア脳炎群ウイルス
）、フレボウイルス属（シシリアパパタシ熱ウイルス、リフトバレー熱ウイルス
）、ナイロウイルス属（クリミア−コンゴ出血熱ウイルス、ナイロビヒツジ病ウ
イルス）、およびウウクウイルス属（ウウクニエミーおよび関連ウイルス）を含
むブンヤウイルス科；インフルエンザウイルス属（インフルエンザウイルスＡ型
、多くのヒトサブタイプ）、ブタインフルエンザウイルス、およびトリおよびウ
マインフルエンザウイルス、インフルエンザＢ型（多くのヒトサブタイプ）、お
よびインフルエンザＣ型（別の属の可能性）を含むオルトミクソウイルス科；パ
ラミクソウイルス属（パラインフルエンザウイルス１型、センダイウイルス、血
球吸着ウイルス、パラインフルエンザウイルス２から５型、ニューカッスル病ウ
イルス、耳下腺炎ウイルス）、モルビリウイルス属（麻疹ウイルス、亜急性硬化
性汎脳炎ウイルス、ジステンパーウイルス、牛疫ウイルス）、ニューモウイルス
属（ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ウシＲＳウイルス、およびマウス肺炎ウイルス）
を含むパラミクソウイルス科；ベシクロウイルス（ＶＳＶ）属（チャンディプラ
ウイルス、フランダース−ハートパークウイルス）、狂犬病ウイルス属（狂犬病
ウイルス）、魚類ラブドウイルス、および２つのおそらくはラブドウイルス（マ
ルブルクウイルスおよびエボラウイルス）を含むラブドウイルス科；リンパ性脈
絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭ）ウイルス、タカリベウイルス複合体、およびラッサ
ウイルスを含むアレナウイルス科；伝染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）、マウス
肝炎ウイルス、ヒト腸コロナウイルス、およびネコ伝染性腹膜炎（ネココロナウ
イルス）を含むコロナウイルス科のメンバー。

【００７０】 脊椎動物において抗原となる、例示的なＤＮＡウイルスは、以下のものを含む
がこれに限定されない：オルトポックスウイルス属（大痘瘡、小痘瘡、サル痘、
ワクシニア、牛痘、スイギュウポックス、家兎痘、エクトロメリア）、レポリポ
ックスウイルス属（粘液腫、繊維腫）、アビポックスウイルス属（鶏痘、他のト
リポックスウイルス）、カプリポックスウイルス属（羊痘、ヤギ痘）、スイポッ
クスウイルス属（豚痘）、パラポックスウイルス属（伝染性膿疱性皮膚炎ウイル
ス（ｃｏｎｔａｇｉｏｕｓ ｐｏｓｔｕｌａｒ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ ｖｉｒ
ｕｓ）、偽牛痘、ウシ丘疹性口内炎ウイルス）を含むポックスウイルス科；イリ
ドウイルス科（アフリカブタ熱ウイルス、カエルウイルス２および３、魚類リン
パ嚢腫ウイルス）；アルファヘルペスウイルス属（単純ヘルペス１および２型、
水痘帯状疱疹、ウマ流産ウイルス、ウマヘルペスウイルス２および３、偽狂犬病
ウイルス、伝染性ウシ角結膜炎ウイルス、伝染性ウシ鼻気管炎ウイルス、ネコ鼻
気管炎ウイルス、伝染性喉頭気管炎ウイルス）、ベータヘルペスウイルス（ヒト
サイトメガロウイルスおよびブタ、サル、およびげっ歯類のサイトメガロウイル
ス）；ガンマヘルペスウイルス（エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、マレッ
ク病ウイルス、リスザルヘルペス、クモザルヘルペスウイルス、ノウサギヘルペ
スウイルス、モルモットヘルペスウイルス、リュッケ癌ウイルス）を含むヘルペ
スウイルス科；マストアデノウイルス属（ヒトサブグループＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ
およびグループ化されていないもの、サルアデノウイルス（少なくとも２３の血
清型）、伝染性イヌ肝炎、およびウシ、ブタ、ヒツジ、カエル、および多くの他
の種のアデノウイルス）、アビアデノウイルス属（トリアデノウイルス）；およ
び培養できないアデノウイルスを含むアデノウイルス科；パピローマウイルス属
（ヒトパピローマウイルス、ウシパピローマウイルス、ショープウサギパピロー
マウイルス、および他の種の様々な病原性パピローマウイルス）、ポリオーマウ
イルス属（ポリオーマウイルス、サル空胞形成因子（ＳＶ−４０）、ウサギ空胞
形成因子（ＲＫＶ）、Ｋウイルス、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス、およびリンパ
増殖性パピローマウイルスのような他の霊長類ポリオーマウイルス）を含むパポ
ーバウイルス科；アデノ随伴ウイルス属、パルボウイルス属（ネコ汎白血球減少
症ウイルス、ウシパルボウイルス、イヌパルボウイルス、アリューシャンミンク
病ウイルスなど）を含むパルボウイルス科。最後に、ＤＮＡウイルスは、クール
ーおよびクロイツフェルトヤコブ病ウイルスおよび慢性伝染性神経障害因子（Ｃ
ＨＩＮＡウイルス）のような、上記の科にあてはまらないウイルスを含み得る。

【００７１】 前述のリストのそれぞれは例示であり、そして制限を意図しない。

【００７２】 ヒトにおける抗原特異的免疫応答を誘導するためにＳキラルＣｐＧオリゴヌク
レオチドを使用することに加えて、好ましい実施態様の方法は、雌鶏、鶏、七面
鳥、カモ、ガチョウ、ウズラ、およびキジのようなトリの処置に特によく適して
いる。トリは多くの型の感染に関して主要な標的である。

【００７３】 孵化したトリは、誕生直後に病原性の微生物に曝される。これらのトリは最初
母親由来の抗体によって病原体から守られるが、この保護は単に一時的であり、
そしてそのトリ自身の未成熟な免疫系が、トリを病原体から守り始めなければな
らない。最も影響されやすい時に、若いトリにおける感染を防止することが、し
ばしば望ましい。特にトリが、疾患の迅速な蔓延を引き起こす、閉ざされた宿舎
に収容されている場合、年長のトリにおいて感染を防止することもまた望ましい
。従って、抗原が存在する場合、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドおよび非核
酸アジュバントをトリに投与して、抗原特異的免疫反応を増強することが望まし
い。

【００７４】 鶏におけるよくある感染の例は、鶏伝染性貧血ウイルス（ＣＩＡＶ）である。
ＣＩＡＶは、マレク病予防接種の中断（ｂｒｅａｋ）の調査中に、１９７９年に
日本で最初に単離された（Ｙｕａｓａら、１９７９、Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．２３
：３６６−３８５）。その時以来、ＣＩＡＶは全ての主要な鶏肉産生国において
、市販の鶏肉で検出された（ｖａｎ Ｂｕｌｏｗら、１９９１、ｐｐ６９０−６
９９、Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ Ｐｏｕｌｔｒｙ、第９版、Ｉｏｗａ Ｓｔａｔｅ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ）。

【００７５】 ＣＩＡＶ感染は、若い感受性の鶏において、貧血、出血、および免疫抑制によ
って特徴付けられる臨床疾患を引き起こす。ＣＩＡＶ感染鶏の胸腺および骨髄の
萎縮、および一致した損傷もまた、ＣＩＡＶ感染の特徴である。胸腺、および時
折はファブリーキウス嚢におけるリンパ球の涸渇は、免疫抑制を引き起こし、そ
して２次的なウイルス、細菌、または真菌感染に対する感受性を増し、それは次
いで疾患の経過を悪化させる。免疫抑制は、１つ以上のマレク病ウイルス（ＭＤ
Ｖ）、伝染性ブルザ病（ｂｕｒｓａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）ウイルス、細網内皮症
ウイルス、アデノウイルス、またはレオウイルスの感染後に、疾患を悪化させ得
る。ＭＤＶの病原性は、ＣＩＡＶによって増強されることが報告された（ＤｅＢ
ｏｅｒら、１９８９、ｐ．２８、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ３８
ｔｈ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎ
ｃｅ、Ｔｅｍｐｅ、Ａｒｉｚ．）。さらに、ＣＩＡＶは、伝染性ブルザ病の徴候
を悪化させることが報告された（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｅｒら、１９８９、Ａｖｉ
ａｎ Ｄｉｓ．３３：７０７−７１３）。鶏は、ＣＡＡによって実験的に誘導さ
れた疾患に対して年齢抵抗性を発達させる。これは本質的には２週齢までに完了
するが、年長のトリもなお感染に感受性である（Ｙｕａｓａ，Ｎ．ら、１９７９
、前出；Ｙｕａｓａ，Ｎ．ら、Ａｖｉａｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ２４、２０２−
２０９、１９８０）。しかし、もし鶏がＣＡＡおよび免疫抑制因子（ＩＢＤＶ、
ＭＤＶなど）で二重に感染すると、疾患に対する年齢抵抗性は遅延する（Ｙｕａ
ｓａ，Ｎ．ら、１９７９および１９８０、前出；Ｂｕｌｏｗ ｖｏｎ Ｖ．ら、
Ｊ．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３３、９３−１１６、１９８６
）。疾患の伝染を増強し得るＣＩＡＶの特徴は、環境的不活性化およびいくつか
のよくある消毒薬に対する高い抵抗性を含む。鶏肉産業に対するＣＩＡＶ感染の
経済的影響は、疾患の大発生において感染したトリの１０％〜３０％が死亡する
という事実から明らかである。

【００７６】 トリの予防接種は、他の脊椎動物と同様に、あらゆる年齢で実施され得る。通
常、予防接種は、生微生物に関しては１２週齢までに、不活性化微生物または他
の型のワクチンに関しては１４−１８週の間に実施される。卵における（ｉｎ
ｏｖｏ）予防接種に関しては、予防接種は、胚発達の最後の４分の１に実施され
得る。ワクチンは皮下に、スプレーによって、経口で、眼球内に、気管内に、鼻
腔内に、または本明細書中で記載される他の粘膜伝達方法によって投与され得る
。従って、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、慣用的な予防接種スケジュー
ルを用いて、トリおよび他の非ヒト脊椎動物に投与され得、そして抗原は、本明
細書中で記載されるように、適切な時間の後投与される。

【００７７】 ウシおよび家畜もまた感染に感受性である。これらの動物に影響を与える疾患
は、特にウシにおいて重大な経済的損失を産生し得る。本発明の方法は、ウシ、
ウマ、ブタ、ヒツジ、およびヤギのような家畜において、感染から保護するため
に使用され得る。

【００７８】 ウシはウシウイルスによって感染され得る。ウシウイルス性下痢ウイルス（Ｂ
ＶＤＶ）は、小さな、エンベロープに包まれた＋鎖ＲＮＡウイルスであり、そし
てブタコレラウイルス（ＨＯＣＶ）およびヒツジボーダー病ウイルス（ＢＤＶ）
と共にペスチウイルス属に分類される。ペスチウイルスは以前トガウイルス科に
分類されていたが、いくつかの研究が、フラビウイルスおよびＣ型肝炎ウイルス
（ＨＣＶ）グループと共に、そのフラビウイルス科への再分類を示唆した（Ｆｒ
ａｎｃｋｉら、１９９１）。

【００７９】 ウシおいて重要な病原体であるＢＶＤＶは、細胞培養分析に基づいて、細胞病
原性（ＣＰ）および非細胞病原性（ＮＣＰ）生物型に区別され得る。ＮＣＰ生物
型がより広まっているが、両方の生物型をウシにおいて見出し得る。妊娠ウシが
ＮＣＰ系統に感染した場合、そのウシは、持続的に感染し、そしてその生涯の間
にウイルスを広める、特異的に免疫寛容の仔ウシを出産し得る。持続感染したウ
シは、粘膜疾患に屈服し得、次いで両方の生物型がその動物から単離され得る。
臨床的な徴候としては、流産、奇形発生、および呼吸器の問題、粘膜疾患および
軽症の下痢が挙げられ得る。さらに、群れの流行と関連した、動物の死を引き起
こし得る重症の血小板減少症が記載され、そしてこの疾患と関連する系統は、古
典的なＢＶＤＶよりも悪性であるようである。

【００８０】 ウマヘルペスウイルス（ＥＨＶ）は、無症状から致死的疾患にわたる、ウマに
おける種々の感染を引き起こす、抗原的に区別される生物学的因子のグループを
含む。これらはウマヘルペスウイルス−１（ＥＨＶ−１）、ウマにおける遍在的
な病原体を含む。ＥＨＶ−１は、流産、気道疾患、および中枢神経系の障害の流
行に関連する。若いウマにおける上部気道の最初の感染が、８〜１０日間続く熱
性の疾患を引き起こす。免疫学的に経験した雌馬は、疾患が明らかになることな
く上部気道によって再感染し得るので、流産は、通常前兆無しに起こる。神経学
的な症候群は、呼吸器疾患または流産と関連しており、そしてあらゆる年齢でど
ちらの性別の動物にも影響し得、協調不能、衰弱、および後部麻痺に至る（Ｔｅ
ｌｆｏｒｄ，Ｅ．Ａ．Ｒ．ら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １８９、３０４−３１６、１
９９２）。他のＥＨＶは、ＥＨＶ−２、またはウマサイトメガロウイルス、ＥＨ
Ｖ−３、ウマ交疹ウイルス、および以前はＥＨＶ−１サブタイプ２と分類されて
いたＥＨＶ−４を含む。

【００８１】 ヒツジおよびヤギは、ビスナ−マエディを含む種々の危険な微生物に感染し得
る。

【００８２】 サル、類人猿、およびマカクザルのような霊長類は、サル免疫不全ウイルスに
感染し得る。不活性化細胞ウイルスおよび細胞を含まない全サル免疫不全ワクチ
ンが、マカクザルにおいて保護を提供することが報告された（Ｓｔｏｔｔら（１
９９０）Ｌａｎｃｅｔ ３６：１５３８−１５４１；Ｄｅｓｔｒｏｓｉｅｒｓら
、ＰＮＡＳ ＵＳＡ（１９８９）８６：６３５３−６３５７；Ｍｕｒｐｈｅｙ−
Ｃｏｒｂら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２９３−１２９７；および
Ｃａｒｌｓｏｎら（１９９０）ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉ
ｒｕｓｅｓ ６：１２３９−１２４６）。組換えＨＩＶｇｐ１２０ワクチンが、
チンパンジーにおいて保護を提供することが報告された（Ｂｅｒｍａｎら（１９
９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４５：６２２−６２５）。

【００８３】 飼育されている、および野生のネコはどちらも、種々の微生物の感染に感受性
である。例えば、ネコ伝染性腹膜炎は、ライオン、ヒョウ、チーター、およびジ
ャガーのような飼育または野生ネコのどちらにおいても起こる疾患である。ネコ
におけるこの型または他の型の病原性生物による感染を防止するのが望ましい場
合、本発明の方法が、感染から守るためにネコに予防接種するために使用され得
る。

【００８４】 飼育ネコは、ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）、ネコ肉腫ウイルス（ＦｅＳＶ
）、内因性Ｃ型オンコルナウイルス（ＲＤ−１１４）、およびネコシンシチア形
成ウイルス（ＦｅＳＦＶ）を含むがこれに限定されないいくつかのレトロウイル
スに感染し得る。これらのうち、ＦｅＬＶがリンパ網内性および骨髄性の新生物
、貧血、免疫による疾患、およびヒト後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に似た
免疫不全症候群を含む多様な症状を引き起こす最も重要な病原体である。最近、
ＦｅＬＶ−ＡＩＤＳと呼ばれる特定の複製欠損ＦｅＬＶ変異体が、より特異的に
免疫抑制性質と関連していた。

【００８５】 ネコＴリンパ指向性レンチウイルス（ネコ免疫不全とも呼ばれる）の発見は、
Ｐｅｄｅｒｓｅｎら（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：７９０−７９３にお
いて最初に報告された。ＦＩＶの特徴は、Ｙａｍａｍｏｔｏら（１９８８）Ｌｅ
ｕｋｅｍｉａ、Ｄｅｃｅｍｂｅｒ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ２：２０４Ｓ−２１
５Ｓ；Ｙａｍａｍｏｔｏら（１９８８）Ａｍ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｒｅｓ．４９：１２
４６−１２５８；およびＡｃｋｌｅｙら（１９９０）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：５
６５２−５６５５で報告された。ＦＩＶのクローニングおよび配列分析は、Ｏｌ
ｍｓｔｅｄら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
６：２４４８−２４５２および８６：４３５５−４３６０で報告された。

【００８６】 ネコ伝染性腹膜炎（ＦＩＰ）は、飼育および野生のネコ科動物において予測不
能に起こる散発性の疾患である。ＦＩＰは主には飼育ネコの疾患であるが、ライ
オン、クーガー、ヒョウ、チーター、およびジャガーで診断された。ＦＩＰに罹
患した小型野生ネコは、リンクスおよびカラカル、サンドキャット（ｓａｎｄ
ｃａｔ）、およびパラスキャット（ｐａｌｌａｓ ｃａｔ）を含む。飼育ネコに
おいて、全ての年齢のネコが感受性であるが、その疾患は大部分若い動物におい
て起こる。発症のピークは、６〜１２月齢の間に起こる。５〜１３年齢で発症の
減少が見られ、続いて１４〜１５歳のネコで発生が増加する。

【００８７】 魚、貝、または他の水生生命形態におけるウイルス、細菌、および寄生生物性
の疾患は、水産養殖産業で深刻な問題を提起する。孵化タンクにおける動物の高
密度、または閉ざされた海洋養殖領域のために、伝染性疾患は、例えば魚、貝、
または他の水生生命形態の施設において飼育用動物の多くの割合を根絶し得る。
一旦疾患が進行してからの介入よりも、疾患の予防が、この魚への脅威に対する
より望ましい治療である。魚の予防接種は、免疫を介した長期間の保護を付与し
得る唯一の予防的方法である。核酸に基づくワクチン接種が、Ｄａｖｉｓに発行
された米国特許第５，７８０，４４８号で記載されている。

【００８８】 魚の免疫系は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、リンホカイン、補体、および免疫グロブリン
の存在のような、哺乳動物免疫系と似た多くの特徴を有している。魚は多くの点
で哺乳動物のＢおよびＴ細胞のものと似ているようである役割を有するリンパ球
のサブクラスを有している。ワクチンは、浸漬または経口によって投与され得る
。

【００８９】 水産養殖種は、魚、貝、および他の水生動物を含むがこれに限定されない。魚
は、全ての脊椎のある魚を含む。それは、例えば、サケ科の魚、コイ、ナマズ、
ブリ、タイ、およびスズキのような硬骨魚または軟骨魚であり得る。サケ科は魚
の１つの科であり、マス（ニジマスを含む）、サケ、および北極のイワナ（Ａｒ
ｃｔｉｃ ｃｈａｒ）を含む。貝の例は、クラム、ロブスター、エビ、カニ、お
よびカキを含むがこれに限定されない。他の養殖水生動物は、ウナギ、イカ、お
よびタコを含むがこれに限定されない。

【００９０】 ウイルス性水産養殖病原体のポリペプチドは、ウイルス性出血性敗血症ウイル
ス（ＶＨＳＶ）の糖タンパク質（Ｇ）または核タンパク質（Ｎ）；伝染性造血性
壊死ウイルス（ＩＨＮＶ）のＧまたはＮタンパク質；伝染性膵臓壊死ウイルス（
ＩＰＮＶ）のＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、またはＮ構造タンパク質；コイ春ウイル
ス血症（ＳＶＣ）のＧタンパク質；およびブチナマズウイルス（ＣＣＶ）の膜関
連タンパク質、テグミン（ｔｅｇｕｍｉｎ）もしくはキャプシドタンパク質また
は糖タンパク質を含むがこれに限定されない。

【００９１】 細菌性病原体のポリペプチドは、フルンケル症を引き起こすＡｅｒｏｍｏｎｉ
ｓ ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａの鉄調節外膜タンパク質（ＩＲＯＭＰ）、外膜タン
パク質（ＯＭＰ）、およびＡタンパク質、細菌性腎臓疾患（ＢＫＤ）を引き起こ
すＲｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓａｌｍｏｎｉｎａｒｕｍのｐ５７タンパク質
、エルジニア症の主要表面関連抗原（ｍｓａ）、表面発現サイトトキシン（ｍｐ
ｒ）、表面発現溶血素（ｉｓｈ）、および鞭毛抗原；パスツレラ症の細胞外タン
パク質（ＥＣＰ）、鉄調節外膜タンパク質（ＩＲＯＭＰ）、および構造タンパク
質；Ｖｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍおよびＶ．ｏｒｄａｌｉｉのＯ
ＭＰおよび鞭毛タンパク質；Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌｏｓｉｓ ｉｃｔａｌｕｒ
ｉおよびＥ．ｔａｒｄａの鞭毛タンパク質、ＯＭＰタンパク質、ａｒｏＡ、およ
びｐｕｒＡ；およびＩｃｈｔｈｙｏｐｈｔｈｉｒｉｕｓの表面抗原；およびＣｙ
ｔｏｐｈａｇａ ｃｏｌｕｍｎａｒｉの構造タンパク質および調節タンパク質；
およびリケッチアの構造タンパク質および調節タンパク質を含むがこれに限定さ
れない。

【００９２】 寄生生物性の病原体のポリペプチドは、Ｉｃｈｔｈｙｏｐｈｔｈｉｒｉｕｓの
表面抗原を含むがこれに限定されない。

【００９３】 「アレルゲン」は、感受性の被験体でアレルギー性または喘息応答を誘導し得
る物質（抗原）をいう。アレルゲンのリストは膨大であり、そして花粉、昆虫の
毒液、動物の鱗屑、真菌の胞子および薬物（例えばペニシリン）を含み得る。天
然の、動物および植物アレルゲンの例は以下の属に特異的なタンパク質を含むが
これに限定されない：Ｃａｎｉｎｅ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）；Ｄ
ｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ（例えばＤｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ
ｆａｒｉｎａｅ）；Ｆｅｌｉｓ（Ｆｅｌｉｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）；Ａｍｂ
ｒｏｓｉａ（Ａｍｂｒｏｓｉａ ａｒｔｅｍｉｉｓｆｏｌｉａ）；Ｌｏｌｉｕｍ
（例えばＬｏｌｉｕｍ ｐｅｒｅｎｎｅまたはＬｏｌｉｕｍ ｍｕｌｔｉｆｌｏ
ｒｕｍ）；Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃ
ａ）；Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ）；
Ａｌｄｅｒ；Ａｌｎｕｓ（Ａｌｎｕｓ ｇｕｌｔｉｎｏａｓａ）；Ｂｅｔｕｌａ
（Ｂｅｔｕｌａ ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）；Ｑｕｅｒｃｕｓ（Ｑｕｅｒｃｕｓ ａ
ｌｂａ）；Ｏｌｅａ（Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａ）；Ａｒｔｅｍｉｓｉａ（Ａｒｔ
ｅｍｉｓｉａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）；Ｐｌａｎｔａｇｏ（例えばＰｌａｎｔａｇ
ｏ ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）；Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ（例えばＰａｒｉｅｔａｒ
ｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓまたはＰａｒｉｅｔａｒｉａ ｊｕｄａｉｃａ）
；Ｂｌａｔｔｅｌｌａ（例えばＢｌａｔｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）；Ａ
ｐｉｓ（例えばＡｐｉｓ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）；Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ（例
えばＣｕｐｒｅｓｓｕｓ ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ ａ
ｒｉｚｏｎｉｃａ、およびＣｕｐｒｅｓｓｕｓ ｍａｃｒｏｃａｒｐａ）；Ｊｕ
ｎｉｐｅｒｕｓ（例えばＪｕｎｉｐｅｒｕｓ ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ、Ｊｕｎｉ
ｐｅｒｕｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ、
およびＪｕｎｉｐｅｒｕｓ ａｓｈｅｉ）；Ｔｈｕｙａ（例えばＴｈｕｙａ ｏ
ｒｉｅｎｔａｌｉｓ）；Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ（例えばＣｈａｍａｅｃｙ
ｐａｒｉｓ ｏｂｔｕｓａ）；Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ（例えばＰｅｒｉｐｌａ
ｎｅｔａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）；Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ（例えばＡｇｒｏｐｙｒ
ｏｎ ｒｅｐｅｎｓ）；Ｓｅｃａｌｅ（例えばＳｅｃａｌｅ ｃｅｒｅａｌｅ）
；Ｔｒｉｔｉｃｕｍ（例えばＴｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ）；Ｄａｃｔ
ｙｌｉｓ（例えばＤａｃｔｙｌｉｓ ｇｌｏｍｅｒａｔａ）；Ｆｅｓｔｕｃａ（
例えばＦｅｓｔｕｃａ ｅｌａｔｉｏｒ）；Ｐｏａ（例えばＰｏａ ｐｒａｔｅ
ｎｓｉｓまたはＰｏａ ｃｏｍｐｒｅｓｓａ）；Ａｖｅｎａ（例えばＡｖｅｎａ
ｓａｔｉｖａ）；Ｈｏｌｃｕｓ（例えばＨｏｌｃｕｓ ｌａｎａｔｕｓ）；Ａ
ｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ（例えばＡｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ ｏｄｏｒａｔｕｍ
）；Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ（例えばＡｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ ｅｌａ
ｔｉｕｓ）；Ａｇｒｏｓｔｉｓ（例えばＡｇｒｏｓｔｉｓ ａｌｂａ）；Ｐｈｌ
ｅｕｍ（例えばＰｈｌｅｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ）；Ｐｈａｌａｒｉｓ（例えば
Ｐｈａｌａｒｉｓ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ）；Ｐａｓｐａｌｕｍ（例えばＰａ
ｓｐａｌｕｍ ｎｏｔａｔｕｍ）；Ｓｏｒｇｈｕｍ（例えばＳｏｒｇｈｕｍ ｈ
ａｌｅｐｅｎｓｉｓ）；およびＢｒｏｍｕｓ（例えばＢｒｏｍｕｓ ｉｎｅｒｍ
ｉｓ）。

【００９４】 抗原は、核酸ベクターにコードされた抗原であってもよいし、または抗原は核
酸ベクターにコードされなくともよい。前者の場合、核酸ベクターは被験体に投
与され、そしてインビボで抗原が発現する。後者の場合、抗原は被験体に直接投
与され得る。「核酸ベクターにコードされない抗原」は、本明細書中で使用され
る場合、核酸ではない任意の型の抗原をいう。例えば、本発明のいくつかの局面
では、核酸ベクターにコードされない抗原はポリペプチドである。ポリペプチド
抗原の一次アミノ酸配列に対する重要でない修飾も、未修飾の対応するポリペプ
チドと比べて実質的に等価な抗原活性を有するポリペプチドとなり得る。そのよ
うな修飾は、部位特異的変異誘発によるように意図的、または自然発生的であり
得る。これらの修飾によって産生される全てのポリペプチドは、抗原性が依然と
して存在する限り、この中に含まれる。ポリペプチドは、例えば、ウイルスポリ
ペプチドであり得る。

【００９５】 「実質的に精製された」という用語は、本明細書中で使用される場合、天然で
会合している他のタンパク質、脂質、炭水化物、または他の物質を実質的に含ま
ないポリペプチドをいう。当業者は、タンパク質精製の標準的な技術を用いて、
ウイルスまたは細菌のポリペプチドを精製し得る。実質的に純粋なポリペプチド
はしばしば、非還元ポリアクリルアミドゲルで単一の主要なバンドを生じる。部
分的にグリコシル化されたポリペプチド、またはいくつかの開始コドンを有する
ポリペプチドの場合、非還元ポリアクリルアミドゲルでいくつかのバンドが存在
し得るが、これらは、そのポリペプチドについて特有のパターンを形成する。ウ
イルスまたは細菌のポリペプチドの純度はまた、アミノ末端アミノ酸配列分析に
よって決定され得る。ポリサッカライド、低分子、模倣物などのような、核酸ベ
クターによってコードされない他の型の抗原は、上記で記載される。

【００９６】 本発明はまた、抗原性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを利用する
。抗原が、抗原をコードする核酸分子において被験体に送達され得、その結果、
抗原がインビボで発現されなければならないと考えられる。核酸ベクターにおい
て被験体に送達されるそのような抗原は、「核酸ベクターによってコードされる
抗原」と呼ばれる。抗原をコードする核酸は、真核生物細胞内での抗原核酸の発
現を指示する遺伝子発現配列に作動可能に連結される。「遺伝子発現配列」は、
それに作動可能に連結される抗原核酸の効率的な転写および翻訳を促進する、プ
ロモーター配列またはプロモーター−エンハンサーの組み合せのような、任意の
調節性ヌクレオチド配列である。遺伝子発現配列は、例えば構成的または誘導性
プロモーターのような、哺乳動物またはウイルスのプロモーターであり得る。構
成的哺乳動物プロモーターとしては、以下の遺伝子のプロモーターおよび他の構
成的プロモーターが挙げられるがこれに限定されない：ヒポキサンチンホスホリ
ボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＴＲ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸
キナーゼ、β−アクチンプロモーター。真核生物細胞において構成的に機能する
例示的なウイルスプロモーターとしては、例えばサイトメガロウイルス（ＣＭＶ
）、シミアンウイルス（例えば、ＳＶ４０）、パピローマウイルス、アデノウイ
ルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、サイトメガロウ
イルス由来のプロモーター、モロニー白血病ウイルスおよび他のレトロウイルス
の長末端反復（ＬＴＲ）、ならびに単純疱疹ウイルスのチミジンキナーゼプロモ
ーターが挙げられる。他の構成的プロモーターは、当業者に公知である。本発明
の遺伝子発現配列として有用なプロモーターはまた、誘導性プロモーターを含む
。誘導性プロモーターは、誘導剤の存在下で発現する。例えば、メタロチオネイ
ンプロモーターは、特定の金属イオンの存在下で誘導されて、転写および翻訳を
促進する。他の誘導性プロモーターは、当業者に公知である。

【００９７】 一般的に、遺伝子発現配列は、必要に応じて、ＴＡＴＡボックス、キャッピン
グ配列、ＣＡＡＴ配列などのような、それぞれ転写および翻訳の開始に関わる、
５’非転写配列および５’非翻訳配列を含む。特にそのような５’非転写配列は
、作動可能に連結された抗原核酸の転写制御のためのプロモーター配列を含むプ
ロモーター領域を含む。遺伝子発現配列は、所望の場合、必要に応じてエンハン
サー配列または上流のアクチベーター配列を含む。

【００９８】 抗原核酸は、遺伝子発現配列に作動可能に連結される。本明細書中で使用され
る場合、抗原核酸配列および遺伝子発現配列は、それらが抗原をコードする配列
の発現または転写および／または翻訳を、遺伝子発現配列の影響または制御下に
置くような様式で共有結合している場合、「作動可能に連結している」といわれ
る。２つのＤＮＡ配列は、５’遺伝子発現配列のプロモーターの誘導が抗原配列
の転写を引き起こす場合、および２つのＤＮＡ配列間の結合の性質が（１）フレ
ームシフト変異の導入を引き起こさず、（２）プロモーター領域が抗原配列の転
写を指示する能力を妨害せず、（３）対応するＲＮＡ転写物がタンパク質へと翻
訳される能力を妨害もしない場合、作動可能に連結しているといわれる。従って
、遺伝子発現配列がその抗原核酸配列の転写をもたらすことができ、その結果、
得られる転写物が望ましいタンパク質またはポリペプチドに翻訳されるなら、遺
伝子発現配列は抗原核酸配列に作動可能に連結されている。

【００９９】 本発明の抗原核酸は、免疫系に単独でまたはベクターと共に送達され得る。最
も広い意味では、「ベクター」は、抗原が免疫細胞の表面に発現および提示され
得るように、抗原核酸の免疫系細胞への移入を促進することができる任意のビヒ
クルである。ベクターは一般的に、ベクターの非存在下で起こる分解の程度に比
べて分解が減少して、核酸を免疫細胞に輸送する。ベクターは、免疫細胞中での
抗原核酸の発現を増強するために、必要に応じて上記の遺伝子発現配列を含む。
一般的に、本発明で有用なベクターとしては、抗原核酸配列の挿入または組込み
によって操作された、プラスミド、ファージミド、ウイルス、ウイルス供給源ま
たは細菌供給源由来の他のビヒクルが挙げられるがこれらに限定されない。ウイ
ルスベクターは、好ましい型のベクターであり、そしてウイルスベクターとして
は以下のウイルス由来の核酸配列が挙げられるがこれらに限定されない：モロニ
ーマウス白血病ウイルス、ハーベイマウス肉腫ウイルス、マウス乳腺癌ウイルス
、およびラウス肉腫ウイルスのようなレトロウイルス；アデノウイルス、アデノ
随伴ウイルス；ＳＶ−４０型のウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタインバ
ーウイルス；パピローマウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウイルス；ポ
リオウイルス；およびレトロウイルスのようなＲＮＡウイルス。示されていない
が当該分野で公知の他のベクターを容易に用い得る。

【０１００】 好ましいウイルスベクターは、本質的でない遺伝子が目的の遺伝子で置換され
た非細胞変性真核ウイルスに基づく。非細胞変性ウイルスは、レトロウイルスを
含み、その生活環はゲノムウイルスＲＮＡのＤＮＡへの逆転写、続く宿主細胞Ｄ
ＮＡへのプロウイルスの組込みを含む。レトロウイルスは、ヒト遺伝子治療試験
のために認可された。最も有用なものは、複製欠損レトロウイルスである（すな
わち、望ましいタンパク質の合成を指示できるが、感染性粒子を作ることができ
ない）。そのような遺伝的に変化したレトロウイルス発現ベクターは、インビボ
での高い効率の遺伝子形質導入のために一般的な有用性を有する。複製欠損レト
ロウイルスを産生するための標準的なプロトコール（外来性の遺伝物質のプラス
ミドへの組込み、プラスミドでのパッケージング細胞株のトランスフェクション
、パッケージング細胞株による組換えレトロウイルスの産生、組織培養培地から
のウイルス粒子の収集、およびウイルス粒子による標的細胞の感染の工程を含む
）が、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｍ．、「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅ
ｅｍａｎ Ｃ．Ｏ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９０）およびＭｕｒｒｙ，Ｅ．Ｊ
．「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、７巻、Ｈ
ｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｃｌｉｆｆｔｏｎ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ
（１９９１）で提供される。

【０１０１】 ある適用に好ましいウイルスは、アデノ随伴ウイルス、２本鎖ＤＮＡウイルス
である。アデノ随伴ウイルスは、複製欠損になるように操作され得、そして広い
範囲の細胞型および種に感染することができる。それはさらに、熱および脂質溶
媒安定性；造血細胞を含む多様な系統の細胞における高い形質導入頻度；および
重感染阻害を欠き、従って複数の一連の形質導入を可能にするというような利点
を有する。伝える所によれば、アデノ随伴ウイルスは、部位特異的な様式でヒト
細胞ＤＮＡに組み込まれ得、それによって、レトロウイルスの感染に特徴的な、
挿入変異の可能性および挿入された遺伝子発現の変動を最小にする。さらに、野
生型アデノ随伴ウイルスの感染は、組織培養において、選択圧の非存在下で１０
０を越える継代にわたって追跡され、このことは、アデノ随伴ウイルスのゲノム
組込みは、比較的安定な事象であることを示した。アデノ随伴ウイルスはまた、
染色体外の様式でも機能し得る。

【０１０２】 他のベクターは、プラスミドベクターを含む。プラスミドベクターは、当該分
野で大量に記載され、そして当業者に周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら
、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ」、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８９を参照のこと。過去数年間、プラスミドベクターは
、宿主ゲノム内で複製されることも、宿主ゲノムに組み込まれることもできない
ので、プラスミドベクターは、インビボで遺伝子を細胞に送達するのに特に有利
であることが見出された。しかし、宿主細胞と適合性のプロモーターを有するこ
れらのプラスミドは、プラスミド内に作動可能にコードされた遺伝子からペプチ
ドを発現することができる。いくつかの普通に使用されるプラスミドとしては、
ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ｐＲＣ／ＣＭＶ、ＳＶ４０、およびｐ
ＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔが挙げられる。他のプラスミドが当業者に周知である。さ
らに、プラスミドは、制限酵素および連結反応を用いて特定のＤＮＡフラグメン
トを除去および付加するように注文設計され得る。

【０１０３】 遺伝子を運ぶプラスミドが細菌を用いて免疫系に送達され得ることが、最近発
見された。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａのような改変された形の細菌が、プラスミドで
トランスフェクトされ、そして送達ビヒクルとして使用され得る。細菌性送達ビ
ヒクルは、宿主被験体に経口または他の投与手段によって投与され得る。細菌は
プラスミドを、おそらく消化管の関門を通り抜けることによって、免疫細胞、例
えばＢ細胞、樹状細胞に送達する。高レベルの免疫保護が、この方法論を用いて
達成された。そのような送達方法は、抗原、ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチド
、および／または他の治療剤の全身性送達を利用する、本発明の局面に有用であ
る。

【０１０４】 ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドは、免疫応答を増強するためにアジュバン
トのような他の治療剤と組み合わされ得る。ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよび他
の治療剤は、同時にまたは連続的に投与され得る。他の治療剤が同時に投与され
る場合、それらは同じまたは別の処方で投与され得るが、同時に投与される。他
の治療剤の投与とＣｐＧの投与とが時間的に離れている場合、他の治療剤は互い
におよびＣｐＧと共に逐次投与される。これら化合物の投与の間の時間的な隔た
りは、約数分以上であり得る。他の治療剤としては、アジュバント、サイトカイ
ン、抗体、抗原などが挙げられるがこれらに限定されない。

【０１０５】 ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドは、全身性免疫応答を誘導するアジュバン
トとして有用である。従って、それは抗原に曝露された被験体に送達されて、そ
の抗原に対する増強された免疫応答を産生し得る。

【０１０６】 ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドに加えて、本発明の組成物はまた、非核酸
アジュバントと共に投与され得る。「非核酸アジュバント」は、体液性および／
または細胞性免疫応答を刺激し得る、本明細書中で記載されたＣｐＧオリゴヌク
レオチド以外の任意の分子または化合物である。非核酸アジュバントは、例えば
ｄｅｐｏ効果を引き起こすアジュバント、免疫刺激アジュバント、およびｄｅｐ
ｏ効果を引き起こし、そして免疫系を刺激するアジュバントを含む。

【０１０７】 「ｄｅｐｏ効果を引き起こすアジュバント」は、本明細書中で使用される場合
、抗原が体内でゆっくりと放出され、従って免疫細胞の抗原への曝露を長くする
のを引き起こすアジュバントである。このクラスのアジュバントとしては、ミョ
ウバン（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）；またはＭｏｎｔ
ａｎｉｄｅアジュバントのＳｅｐｐｉｃ ＩＳＡシリーズ（例えば、Ｍｏｎｔａ
ｎｉｄｅ ＩＳＡ ７２０、ＡｉｒＬｉｑｕｉｄｅ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ
）；ＭＦ−５９（Ｓｐａｎ ８５およびＴｗｅｅｎ ８０で安定化した水中スク
アレンエマルジョン；Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉ
ｌｌｅ、ＣＡ）；およびＰＲＯＶＡＸ（安定剤およびミセル形成剤を含む水中油
型エマルジョン；ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａ
ｔｉｏｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）のような、鉱油、非鉱油、油中水型また
は油中水中油型エマルジョン、水中油型エマルジョンを含む、エマルジョンに基
づく処方物が挙げられるがこれらに限定されない。

【０１０８】 「免疫刺激アジュバント」は、免疫系細胞の活性化を引き起こすアジュバント
である。例えば、それは免疫細胞にサイトカインを産生および分泌させ得る。こ
のクラスのアジュバントとしては、ＱＳ２１（ＨＰＬＣ分画で２１番目のピーク
に溶出される糖脂質；Ａｑｕｉｌａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，
Ｉｎｃ．、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ）のような、Ｑ．ｓａｐｏｎａｒｉａの木
の樹皮から精製されたサポニン；ポリ［ジ（カルボキシルアトフェノキシ）ホス
ファゼン（ｐｏｌｙ［ｄｉ（ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｏｐｈｅｎｏｘｙ）ｐｈｏｓ
ｐｈａｚｅｎｅ）（ＰＣＰＰポリマー；Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓ
ｔｉｔｕｔｅ、ＵＳＡ）；モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ；Ｒｉｂｉ Ｉｍｍ
ｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）、ム
ラミルジペプチド（ＭＤＰ；Ｒｉｂｉ）およびスレオニル−ムラミルジペプチド
（ｔ−ＭＤＰ；Ｒｉｂｉ）のような、リポポリサッカライドの誘導体；ＯＭ−１
７４（リピドＡに関連するグルコサミンジサッカライド；ＯＭ Ｐｈａｒｍａ
ＳＡ、Ｍｅｙｒｉｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）；およびＬｅｉｓｈｍａｎｉａ
伸長因子（精製Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａタンパク質；Ｃｏｒｉｘａ Ｃｏｒｐｏｒ
ａｔｉｏｎ、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）が挙げられるがこれらに限定されない。

【０１０９】 「ｄｅｐｏ効果を引き起こし、そして免疫系を刺激するアジュバント」は、上
記で同定した機能を両方有する化合物である。このクラスのアジュバントとして
は、ＩＳＣＯＭＳ（混合サポニン、脂質を含む免疫刺激複合体であり、そして抗
原を保持し得る孔を有するウイルスの大きさの粒子を形成する；ＣＳＬ、Ｍｅｌ
ｂｏｕｒｎｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）；ＳＢ−ＡＳ２（ＭＰＬおよびＱＳ２１を
含む水中油型エマルジョンであるＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍアジュ
バントシステム＃２；ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌｓ［ＳＢＢ］、Ｒｉｘｅｎｓａｒｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）；ＳＢ−ＡＳ４（
ミョウバンおよびＭＰＬを含むＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍアジュバ
ントシステム＃４；ＳＢＢ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）；ＣＲＬ １００５（これらは、
ポリオキシエチレン鎖に隣接した疎水性ポリオキシプロピレン（ｐｏｌｙｏｘｐ
ｒｏｐｙｌｅｎｅ）の直鎖を含む；Ｖａｘｃｅｌ，Ｉｎｃ．、Ｎｏｒｃｒｏｓｓ
、ＧＡ）のようなミセルを形成する非イオン性ブロックコポリマー；およびＳｙ
ｎｔｅｘ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ（ＳＡＦ、Ｔｅｗｅｅｎ
８０および非イオン性ブロックコポリマーを含む水中油型エマルジョン；Ｓｙ
ｎｔｅｘ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯ）が挙げられ
るがこれらに限定されない。

【０１１０】 ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドはまた、粘膜アジュバントとして有用であ
る。全身性免疫および粘膜免疫は両方ともＣｐＧオリゴヌクレオチドの粘膜送達
によって誘導されることが、以前発見された。ＣｐＧオリゴヌクレオチドに応じ
て誘導される全身性免疫は、単独で粘膜に投与された場合に全身性免疫を誘導で
きなかった特定の抗原に対する体液性応答および細胞性応答の両方を含んでいた
。さらに、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよびコレラ毒素（ＣＴ、Ｔｈ２様応答を
誘導する粘膜アジュバント）は両方ともＣＴＬを誘導した。全身性免疫に関して
は、Ｔｈ２様抗体の存在は通常ＣＴＬの欠如と関連するので、これは驚くべきこ
とであった（Ｓｃｈｉｒｍｂｅｃｋら、１９９５）。

【０１１１】 さらに、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、局所粘膜部位（例えば、肺）および離
れた粘膜部位（例えば、下部消化管）の両方において粘膜応答を誘導することが
見出された。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、全身抗体（ＩｇＧ）および局所粘膜
抗体（ＩｇＡ）の誘導に関してＣＴと同様であったが、有意なレベルのＩｇＡ抗
体が、ＣｐＧオリゴヌクレオチドによってのみ離れた粘膜部位で誘導され、そし
てＣＴでは誘導されなかった。ＣＴは一般的に非常に有効な粘膜アジュバントで
あると判断されるので、これは驚くべきことであった。ＣｐＧオリゴヌクレオチ
ドがＣＴに優る別の方法は、応答のＴｈ型に関するものであった。以前に報告さ
れたように（Ｓｎｉｄｅｒ １９９５）、ＣＴは主に、Ｔｈ２型の応答を示す、
抗体のＩｇＧ１アイソタイプを誘導する。対照的に、ＣｐＧオリゴヌクレオチド
は、特に追加免疫後、または２つのアジュバントを組み合わせた場合、主にＩｇ
Ｇ２ａ抗体を伴う、よりＴｈ１であった。一般的に、Ｔｈ１型抗体は、より良い
中和能力を有し、そしてさらに、肺におけるＴｈ２応答は、喘息と関連するので
非常に望ましくない（Ｋａｙ、１９９６、Ｈｏｇｇ、１９９７）。従って、粘膜
アジュバントとしてＣｐＧオリゴヌクレオチドを使用することは、他の粘膜アジ
ュバントが達成できない利点を有する。本発明のＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオ
チドは、全身性免疫応答および粘膜免疫応答の両方を誘導するための粘膜アジュ
バントとして有用である。

【０１１２】 非オリゴヌクレオチド粘膜アジュバントと呼ばれる粘膜アジュバントも、Ｓキ
ラルＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に投与され得る。「非オリゴヌクレオチド粘
膜アジュバント」は、本明細書中で使用される場合、粘膜表面に抗原と共に投与
された場合に被験体において粘膜免疫応答を誘導できる、ＳキラルＣｐＧオリゴ
ヌクレオチド以外のアジュバントである。粘膜アジュバントとしては、細菌毒素
：例えばコレラ毒素（ＣＴ）、ＣＴ Ｂサブユニット（ＣＴＢ）（Ｗｕら、１９
９８、Ｔｏｃｈｉｋｕｂｏら、１９９８）；ＣＴＤ５３（ＶａｌからＡｓｐ）（
Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）；ＣＴＫ９７（ＶａｌからＬｙｓ）（Ｆｏｎｔａ
ｎａら、１９９５）；ＣＴＫ１０４（ＴｙｒからＬｙｓ）（Ｆｏｎｔａｎａら、
１９９５）；ＣＴＤ５３／Ｋ６３（ＶａｌからＡｓｐ、ＳｅｒからＬｙｓ）（Ｆ
ｏｎｔａｎａら、１９９５）；ＣＴＨ５４（ＡｒｇからＨｉｓ）（Ｆｏｎｔａｎ
ａら、１９９５）；ＣＴＮ１０７（ＨｉｓからＡｓｎ）（Ｆｏｎｔａｎａら、１
９９５）；ＣＴＥ１１４（ＳｅｒからＧｌｕ）（Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）
；ＣＴＥ１１２Ｋ（ＧｌｕからＬｙｓ）（Ｙａｍａｍｏｔｏら、１９９７ａ）；
ＣＴＳ６１Ｆ（ＳｅｒからＰｈｅ）（Ｙａｍａｍｏｔｏら、１９９７ａ、１９９
７ｂ）；ＣＴＳ１０６（ＰｒｏからＬｙｓ）（Ｄｏｕｃｅら、１９９７、Ｆｏｎ
ｔａｎａら、１９９５）；およびＣＴＫ６３（ＳｅｒからＬｙｓ）（Ｄｏｕｃｅ
ら、１９９７、Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）を含むがこれらに限定されないＣ
Ｔ誘導体、閉鎖帯毒素ｚｏｔ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ熱不安定エン
テロトキシン、不安定毒素（ＬＴ）、ＬＴ Ｂサブユニット（ＬＴＢ）（Ｖｅｒ
ｗｅｉｊら、１９９８）；ＬＴ７Ｋ（ＡｒｇからＬｙｓ）（Ｋｏｍａｓｅら、１
９９８、Ｄｏｕｃｅら、１９９５）；ＬＴ６１Ｆ（ＳｅｒからＰｈｅ）（Ｋｏｍ
ａｓｅら、１９９８）；ＬＴ１１２Ｋ（ＧｌｕからＬｙｓ）（Ｋｏｍａｓｅら、
１９９８）；ＬＴ１１８Ｅ（ＧｌｙからＧｌｕ）（Ｋｏｍａｓｅら、１９９８）
；ＬＴ１４６Ｅ（ＡｒｇからＧｌｕ）（Ｋｏｍａｓｅら、１９９８）；ＬＴ１９
２Ｇ（ＡｒｇからＧｌｙ）（Ｋｏｍａｓｅら、１９９８）；ＬＴＫ６３（Ｓｅｒ
からＬｙｓ）（Ｍａｒｃｈｅｔｔｉら、１９９８、Ｄｏｕｃｅら、１９９７、１
９９８、Ｄｉ Ｔｏｍｍａｓｏら、１９９６）；およびＬＴＲ７２（Ａｌａから
Ａｒｇ）（Ｇｉｕｌｉａｎｉら、１９９８）を含むがこれらに限定されないＬＴ
誘導体、ＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ（Ｒｏｂｅｒｔｓら、１９９５、Ｃｒｏｐｌｅｙ
ら、１９９５）を含む百日咳毒素ＰＴ（Ｌｙｃｋｅら、１９９２、Ｓｐａｎｇｌ
ｅｒ ＢＤ、１９９２、ＦｒｅｙｔａｇおよびＣｌｅｍｍｅｎｔｓ、１９９９、
Ｒｏｂｅｒｔｓら、１９９５、Ｗｉｌｓｏｎら、１９９５）；毒素誘導体（下記
参照）（Ｈｏｌｍｇｒｅｎら、１９９３、Ｖｅｒｗｅｉｊら、１９９８、Ｒａｐ
ｐｕｏｌｉら、１９９５、ＦｒｅｙｔａｇおよびＣｌｅｍｅｎｔｓ、１９９９）
；リピドＡ誘導体（例えば、モノホスホリルリピドＡ、ＭＰＬ）（Ｓａｓａｋｉ
ら、１９９８、Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８）；ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）
誘導体（Ｆｕｋｕｓｈｉｍａら、１９９６、Ｏｇａｗａら、１９８９、Ｍｉｃｈ
ａｌｅｋら、１９８３、Ｍｏｒｉｓａｋｉら、１９８３）；細菌外膜タンパク質
（例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉの外表面タンパク質Ａ（
ＯｓｐＡ）リポタンパク質、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの
外膜タンパク質）（Ｍａｒｉｎａｒｏら、１９９９、Ｖａｎ ｄｅ Ｖｅｒｇら
、１９９６）；水中油型エマルジョン（例えば、ＭＦ５９）（Ｂａｒｃｈｆｉｅ
ｌｄら、１９９９、Ｖｅｒｓｃｈｏｏｒら、１９９９、Ｏ’Ｈａｇａｎ、１９９
８）；アルミニウム塩（Ｉｓａｋａら、１９９８、１９９９）；およびサポニン
（例えば、ＱＳ２１；Ａｑｕｉｌａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，
Ｉｎｃ．、Ｗｏｒｓｔｅｒ、ＭＡ）（Ｓａｓａｋｉら、１９９８、ＭａｃＮｅａ
ｌら、１９９８）、ＩＳＣＯＭＳ、ＭＦ−５９（Ｓｐａｎ ８５およびＴｗｅｅ
ｎ ８０で安定化された水中スクアレンエマルジョン；Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ
ｏｒａｔｉｏｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）；Ｍｏｎｔａｎｉｄｅアジュバ
ントのＳｅｐｐｉｃ ＩＳＡシリーズ（例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ
７２０；ＡｉｒＬｉｑｕｉｄｅ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）；ＰＲＯＶＡＸ（
安定化洗剤およびミセル形成剤を含む水中油型エマルジョン；ＩＤＥＣ Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃ
Ａ）；Ｓｙｎｔｅｘ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ（ＳＡＦ；Ｓ
ｙｎｔｅｘ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯ）；ポリ［
ジ（カルボキシルアトフェノキシ）ホスファゼン（ＰＣＰＰポリマー、Ｖｉｒｕ
ｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＵＳＡ）およびＬｅｉｓｈｍａｎ
ｉａ伸長因子（Ｃｏｒｉｘａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ
）が挙げられるがこれらに限定されない。

【０１１３】 免疫応答はまた、サイトカイン（ＢｕｅｌｅｒおよびＭｕｌｌｉｇａｎ、１９
９６；Ｃｈｏｗら、１９９７；Ｇｅｉｓｓｌｅｒら、１９９７；Ｉｗａｓａｋｉ
ら、１９９７；Ｋｉｍら、１９９７）またはＢ−７補助的刺激分子（Ｉｗａｓａ
ｋｉら、１９９７；Ｔｓｕｊｉら、１９９７）とキラルＣｐＧオリゴヌクレオチ
ドとの同時投与または同一線上の（ｃｏ−ｌｉｎｅａｒ）発現によって誘導また
は増強され得る。サイトカインは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に直接投与さ
れ得るか、またはサイトカインがインビボで発現し得るように、サイトカインを
コードする核酸ベクターの形態で投与され得る。１つの実施態様では、サイトカ
インはプラスミド発現ベクターの形態で投与される。「サイトカイン」という用
語は、ナノからピコモル濃度の濃度で体液性レギュレーターとして作用し、そし
て正常な状態または病的状態のいずれかにおいて個々の細胞および組織の機能的
活性を調節する、多様なグループの可溶性のタンパク質およびペプチドの一般名
として使用される。これらのタンパク質はまた、直接細胞間の相互作用を媒介し
、そして細胞外環境で起こるプロセスを調節する。サイトカインの例としては、
ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因
子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、インターフェロン
−γ（γ−ＩＦＮ）、ＩＦＮ−α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＧＦ−β、ＦＬ
Ｔ−３リガンドおよびＣＤ４０リガンドが挙げられるがこれらに限定されない。

【０１１４】 サイトカインは、Ｔ細胞応答の指示において役割を果たしている。ヘルパー（
ＣＤ４＋）Ｔ細胞は、他のＴ細胞を含む他の免疫系細胞に対して作用する可溶性
因子の産生を通して、哺乳動物の免疫応答を組み合わせる。最も成熟したＣＤ４
＋Ｔヘルパー細胞は、Ｔｈ１またはＴｈ２の、２つのサイトカインプロファイル
の１つを発現する。Ｔｈ１細胞は、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、
ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、および低レベルのＴＮＦ−
αを発現する。ＴＨ１サブセットは、遅延型過敏症、細胞媒介性免疫、およびＩ
ｇＧ_2aへの免疫グロブリンのクラススイッチを促進する。Ｔｈ２サブセットは、
Ｂ細胞の活性化、抗体産生の促進、およびＩｇＧ₁からＩｇＥへのクラススイッ
チ誘導によって、体液性免疫を誘導する。いくつかの実施態様では、サイトカイ
ンはＴｈ１サイトカインであることが好ましい。

【０１１５】 Ｓキラルオリゴヌクレオチドはまた、Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答へと
、免疫応答を向けなおすのにも有用である。Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答
への免疫応答の向けなおしは、オリゴヌクレオチドに応じて産生されるサイトカ
インレベルを測定することによって（例えば、単球細胞および他の細胞を、ＩＬ
−１２、ＩＦＮ−γ、およびＧＭ−ＣＳＦを含むＴｈ１サイトカインを産生する
ように誘導することによって）評価され得る。Ｔｈ２応答からＴｈ１応答への免
疫応答の向けなおしは、喘息の治療または予防に特に有用である。例えば、喘息
の治療に「有効な量」は、喘息に関連するＴｈ２型免疫応答を、Ｔｈ１型の応答
へと向けなおすのに有用な量であり得る。Ｔｈ２サイトカイン、特にＩＬ−４お
よびＩＬ−５は、喘息被験体の気道で上昇している。これらのサイトカインは、
ＩｇＥアイソタイプのスイッチ、好酸球の走化性および活性化、ならびに肥満細
胞の増殖を含む、喘息の炎症性応答の重要な局面を促進する。Ｔｈ１サイトカイ
ン、特にＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２は、Ｔｈ２クローンの形成およびＴｈ２サ
イトカインの産生を抑制し得る。

【０１１６】 Ｓキラルオリゴヌクレオチドはまた、樹状細胞の生存、分化、活性化および成
熟を改善するのに有用である。ＣｐＧは樹状細胞の細胞生存、分化、活性化およ
び成熟を促進する独特の能力を有することが以前に示された。免疫磁性細胞選別
によって血液から単離された樹状前駆細胞は、ＧＭ−ＣＳＦを伴って２日間イン
キュベーションする間に、樹状細胞の形態的および機能的特徴を発達させる。Ｇ
Ｍ−ＣＳＦ無しでは、これらの細胞はアポトーシスを受ける。ＣｐＧは、樹状細
胞の生存および分化を促進することにおいて、ＧＭ−ＣＳＦに優ることが以前に
見出された（ＭＨＣ ＩＩ発現、細胞の大きさ、粒度）。ＣｐＧはまた、樹状細
胞の成熟を誘導することが見出された。樹上細胞は、抗原を提示すること、およ
び局所の環境でＬＰＳのような微生物分子を検出するパターン認識レセプターの
発現によって、先天的免疫系と後天的免疫系との間にリンクを形成するので、Ｃ
ｐＧで樹状細胞を活性化する能力は、癌およびアレルギー性疾患または感染性疾
患のような障害に対するインビボまたはエキソビボでの免疫治療のために、Ｃｐ
Ｇに基づく戦略の使用を支持する。ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドはまた、
樹状細胞の活性化および成熟誘導にも有用である。

【０１１７】 ＣｐＧ核酸はまた、ナチュラルキラー細胞溶解活性および抗体依存性細胞傷害
性（ＡＤＣＣ）を増加させる。ＡＤＣＣは、ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチド
を、ガン細胞のような細胞標的に特異的な抗体と組み合わせて使用して実施され
得る。ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドがこの抗体と組み合わせて被験体に投
与された場合、被験体の免疫系は腫瘍細胞を破壊するように誘導される。ＡＤＣ
Ｃ手順で有用な抗体は、体内で細胞と相互作用する抗体を含む。細胞標的に特異
的なそのような多くの抗体が当該分野で記載され、そして多くが市販されている
。これらの抗体としては、下記の表に示されたものが挙げられるがこれらに限定
されない。

【０１１８】

【表Ａ】 本発明はまた、抗原に非特異的な先天免疫活性化および感染性チャレンジに対
する広汎なスペクトル耐性を誘導するための方法を含む。用語「抗原に非特異的
な先天免疫活性化」は、本明細書中で使用される場合、Ｂ細胞以外の免疫細胞の
活性化をいい、そして例えば、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、または抗原から独立した様式
にて応答し得る他の免疫細胞、あるいはこれらの細胞のいくつかの組み合わせの
活性化を含み得る。感染性チャレンジに対する広汎なスペクトル耐性が、誘導さ
れる。なぜなら、これらの免疫細胞は、活性形態であり、そして任意の侵入して
いる化合物または微生物に対して応答するようにプライムされる。これらの細胞
は、特定の抗原に対して必ずしも特異的にプライムされるわけではない。これは
、生物戦争、および旅行者のような上記の他の状況において特に有用である。

【０１１９】 本発明はまた、ＣｐＧ含有核酸のＲ立体異性体が免疫応答を低下させるという
知見の基づく。このＲ立体異性体から部分的にまたは完全に構成されるＣｐＧ核
酸は、免疫応答を予防することが所望される場合に、そのようにするために使用
され得る。本明細書中で使用する場合、用語「予防する」とは、免疫応答の発生
を阻害すること、ならびに免疫応答の発生の速度を低下させることをいう。

【０１２０】 このＲ立体異性体はまた、免疫刺激性化合物（例えば、免疫刺激性ＣｐＧ化合
物）の投与によって引き起こされる免疫応答を予防するために有用である。例え
ば、免疫刺激性ＣｐＧ核酸が、過量の用量で投与されており、そして所望される
よりも強い免疫応答を引き起こす場合、Ｒ立体異性体が、ＣｐＧの免疫刺激効果
をアンタゴナイズするために投与され得る。あるいは、一過性の免疫刺激性効果
のみが所望される場合、Ｒ立体異性体は、免疫刺激を低下させるために投与され
得る。従って、適切な時間にＲ立体異性体を投与することによって、ＣｐＧ誘導
性免疫応答のタイミングを調節することが可能である。従って、Ｒ立体異性体は
、過剰の免疫応答を患う被検体を処置するために、治療剤として使用され得る。
「過剰な免疫応答」は、本明細書中で使用される場合、所望される免疫応答より
も大きなその応答をいう。例えば、過剰な免疫応答は、有害な副作用と関連し得
る。過剰な免疫応答は、免疫刺激化合物（例えば、免疫刺激性ＣｐＧオリゴヌク
レオチド）を受けた被検体において誘導され得る。

【０１２１】 ＣｐＧのＲ立体異性体はまた、免疫応答により媒介される障害の治療用処置の
ために有用である。従って、Ｒ立体異性体は、炎症性疾患を患うかまたはそれを
患う危険性がある被検体を処置するための治療剤として使用され得る。「炎症性
疾患または状態」は、本明細書中で使用する場合、傷害および感染の部位の局所
的な炎症によって特徴付けられる任意の状態をいい、そして自己免疫疾患、感染
性炎症状態の特定の形態（例えば、炎症性腸疾患、乾癬、歯肉炎、全身性エリテ
マトーデス、敗血症、髄膜炎、脳水腫、関節炎、腎炎、成人呼吸窮迫症候群、膵
臓炎、筋炎、神経炎、結合組織疾患、静脈炎、動脈炎、脈管炎、アレルギー、ア
ナフィラキシー、エールリヒア症、痛風、器官の移植および／または潰瘍性大腸
炎、ならびに所望されない免疫細胞の活性化によって特徴付けられる、実質的に
任意の他の状態を含むがこれらに限定されない。

【０１２２】 特定の免疫刺激性ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドの刺激指数が、種々の免
疫細胞アッセイにおいて試験され得る。好ましくは、Ｂ細胞増殖に関するこのＣ
ｐＧオリゴヌクレオチドの刺激指数は、マウスＢ細胞培養物における³Ｈウリジ
ンの取り込みによって決定されるように、少なくとも約５、好ましくは少なくと
も約１０、より好ましくは少なくとも約１５、および最も好ましくは少なくとも
約２０である。ここでマウスＢ細胞培養物は、３７℃で２０時間にわたって２０
μＭのオリゴヌクレオチドと接触されており、そして１μＣｉの³Ｈウリジンを
用いてパルスされており；そして米国特許出願第０８／３８６，０６３号および
同第０８／９６０，７７４号（それぞれ、１９９５年２月７日および１９９７年
１０月３０日に出願）に対して優先権を主張する、ＰＣＴ公開特許出願のＰＣＴ
／ＵＳ９５／０１５７０およびＰＣＴ／ＵＳ９７／１９７９１において詳細に記
載されるように、４時間後に回収され、そして計数される。インビボでの使用の
ために、例えば、ＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドが、免疫応答（例えば、抗
体産生）を効果的に誘導し得ることが、重要である。ＲキラルＣｐＧオリゴヌク
レオチドの阻害指数は、刺激ではなく阻害が測定されることを除いて、同型のア
ッセイにおいて評価され得る。

【０１２３】 適切な非メチル化ＣｐＧを含む核酸は、任意の脊椎動物において効果的であり
得る。非メチル化ＣｐＧを含む異なる核酸は、哺乳動物種に依存して、最適な免
疫刺激を引き起こし得る。従って、ヒトにおいて最適な刺激または阻害を引き起
こすオリゴヌクレオチドは、マウスにおいて最適な刺激または阻害を引き起こし
得ず、そしてマウスにおいて最適な刺激または阻害を引き起こすオリゴヌクレオ
チドは、ヒトにおいて最適な刺激または阻害を引き起こし得ない。当業者は、本
明細書中に供給される指針を使用して、本明細書中に記載される慣用的なアッセ
イおよび／または当該分野において公知の慣用的なアッセイを使用して、目的の
特定の哺乳動物種に有用な最適なオリゴヌクレオチドを同定し得る。

【０１２４】 キラルＣｐＧオリゴヌクレオチドは、被検体に直接投与され得るか、または核
酸送達複合体と組み合せて投与され得る。「核酸送達複合体」は、標的化手段（
例えば、標的細胞（例えば、Ｂ細胞表面）に対するより高親和性の結合および／
または標的細胞による細胞性取り込みの増大を生じる分子と会合した（例えば、
イオン結合または共有結合した；あるいはその中にカプセル化された）核酸分子
を意味する。核酸送達複合体の例は、以下と会合した核酸を含む：ステロール（
例えば、コレステロール）、脂質（例えば、カチオン性脂質、ヴィロソームまた
はリポソーム）、あるいは標的細胞特異的結合剤（例えば、標的細胞特異的レセ
プターにより認識されるリガンド）。好ましい複合体は、標的細胞によるインタ
ーナリゼーションの前の有意な脱共役を予防するに十分インビボで安定であり得
る。しかし、この複合体は、適切な条件下で細胞内にて切断可能であり、その結
果核酸は、機能的形態にて放出され得る。

【０１２５】 表面に抗原を送達するための送達ビヒクルが、記載されている。ＣｐＧオリゴ
ヌクレオチドおよび／または抗原ならびに／あるいは他の治療剤は、（例えば、
生理食塩水または緩衝液中で）単独でまたは当該分野で公知の任意の送達ビヒク
ルを使用して投与され得る。例えば、以下の送達ビヒクルが記載されている：渦
巻き状物（Ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅら、１９９４
、１９９６）；エマルソーム（ｅｍｕｌｓｏｍｅ）（Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９
８、Ｌｏｗｅｌｌら、１９９７）；ＩＳＣＯＭ（Ｍｏｗａｔら、１９９３、Ｃａ
ｒｌｓｓｏｎら、１９９１、Ｈｕら、１９９８、Ｍｏｒｅｉｎら、１９９９）；
リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓら、１９９９、Ｍｉｃｈａｌｅｋら、１９８９、
１９９２、ｄｅ Ｈａａｎ １９９５ａ、１９９５ｂ）；生細菌ベクター（例え
ば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ｃａｌｍａｔｔｅ−ｇｕｅｒｉｎ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｌａｃｔｏｂａｃ
ｉｌｌｕｓ）（Ｈｏｎｅら、１９９６、Ｐｏｕｗｅｌｓら、１９９８、Ｃｈａｔ
ｆｉｅｌｄら、１９９３、Ｓｔｏｖｅｒら、１９９１、Ｎｕｇｅｎｔら、１９９
８）；生ウイルスベクター（例えば、ワクシニア、アデノウイルス、単純ヘルペ
ス）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎら、１９９３、１９９５、Ｍｏｓｓら、１９９６、Ｎ
ｕｇｅｎｔら、１９９８、Ｆｌｅｘｎｅｒら、１９８８、Ｍｏｒｒｏｗら、１９
９９）；ミクロスフェア（Ｇｕｐｔａら、１９９８、Ｊｏｎｅｓら、１９９６、
Ｍａｌｏｙら、１９９４、Ｍｏｏｒｅら、１９９５、Ｏ’Ｈａｇａｎら、１９９
４、Ｅｌｄｒｉｄｇｅら、１９８９）；核酸ワクチン（Ｆｙｎａｎら、１９９３
、Ｋｕｋｌｉｎら、１９９７、Ｓａｓａｋｉら、１９９８、Ｏｋａｄａら、１９
９７、Ｉｓｈｉｉら、１９９７）；ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロ
ース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａら、１９９８、Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌら
、１９９８）；ポリマー環（Ｗｙａｔｔら、１９９８）；プロテオソーム（Ｖａ
ｎｃｏｔｔら、１９９８、Ｌｏｗｅｌｌら、１９８８、１９９６、１９９７）；
フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉら、１９９８）；トランスジェニック植物（Ｔａ
ｃｋｅｔら、１９９８、Ｍａｓｏｎら、１９９８、Ｈａｑら、１９９５）；ヴィ
ロソーム（Ｇｌｕｃｋら、１９９２、Ｍｅｎｇｉａｒｄｉら、１９９５、Ｃｒｙ
ｚら、１９９８）；ウイルス様粒子（Ｊｉａｎｇら、１９９９、Ｌｅｉｂｌら、
１９９８）。他の送達ビヒクルが、当該分野において公知であり、そしていくつ
かのさらなる例が、ベクターの考察において以下に提供される。

【０１２６】 用語、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの「有効量」は、所望の生物学的効果を実現
するために必要なまたは十分な量をいう。例えば、粘膜免疫を誘導するためのＳ
キラルＣｐＧオリゴヌクレオチドの有効量は、抗原への曝露の際に抗原に応答し
てＩｇＡの発生を引き起こすに必要な有効量であり、一方、全身免疫を誘導する
ために必要とされる有効量は、抗原への曝露の際に抗原に応答してＩｇＧの発生
を引き起こすに必要な有効量である。本明細書中に提供された教示を組み合せて
、種々の活性化合物および重率因子（ｗｅｉｇｈｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）（例え
ば、効力、相対的なバイオアベイラビリティー、患者の体重、有害な副作用の重
篤度および投与の好ましい様式）の中から選択することによって、効果的な予防
処置レジメまたは治療処置レジメが、計画され得、このレジメは、実質的な毒性
を引き起こさず、そしてなお、特定の被検体を処置するために完全に効果的であ
る。任意の特定の適用に対する有効量は、処置される疾患または状態、投与され
る特定のＣｐＧオリゴヌクレオチド（例えば、核酸中の非メチル化ＣｐＧモチー
フ数またはそれらの位置、オリゴヌクレオチドのキラリティーの程度）、抗原、
被検体のサイズ、あるいは疾患または状態の重篤度のような因子に依存して変動
し得る。当業者は、過度の実験を必要とせずに、特定のＣｐＧオリゴヌクレオチ
ドおよび／または抗原ならびに／あるいは他の治療剤の有効量を経験的に決定し
得る。

【０１２７】 本明細書中に記載される化合物の適切な用量は、代表的には約８０ｍｇ／日〜
１６，０００ｍｇ／日、より代表的には約８００ｍｇ／日〜８０００ｍｇ／日、
および最も代表的には約８００ｍｇ／日〜４０００ｍｇ／日の範囲である。被検
体の体重に関して述べると、代表的な投薬量は、約１〜２００ｍｇ／ｋｇ／日、
より代表的には約１０〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、および最も代表的には約１０〜
５０ｍｇ/ｋｇ／日の範囲である。被検体の体表面積に関して述べると、代表的
な投薬量は、約４０〜８０００ｍｇ／ｍ²／日、より代表的には約４００〜４０
００ｍｇ／ｍ²／日、および最も代表的には約４００〜２０００ｍｇ／ｍ²／日の
範囲である。

【０１２８】 いくつかの実施態様において、特に、ＣｐＧがプラスミドベクター中である場
合、少なくとも５０ｍｇのＣｐＧが、被検体に投与される。他の実施態様におい
て、少なくとも７５ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、
５００ｍｇおよびこれらの間のあらゆる整数値のＣｐＧが、被検体に投与される
。

【０１２９】 本明細書中に記載される任意の化合物について、治療的有効量は、初めに、細
胞培養アッセイから決定され得る。例えば、Ｂ細胞活性化を誘導するために有用
な、有効量のＳキラルＣｐＧオリゴヌクレオチドは、刺激指数に関して上記のイ
ンビトロアッセイを使用して評価され得る。この刺激指数は、特定の被検体に対
する特定のオリゴヌクレオチドの有効量を決定するために使用され得、そしてこ
の投薬量は、被検体において所望のレベルを達成するために上方または下方に調
整され得る。治療的有効量はまた、動物モデルから決定され得る。治療的有効用
量はまた、ヒトにおいて試験されている（ヒトの臨床試験が開始されている）Ｃ
ｐＧオリゴヌクレオチドについて、ならびにワクチン接種の目的のための他のア
ジュバント（例えば、ＬＴ）および他の抗原のような同様の薬理学的活性を示す
ことが公知である化合物についてのヒトのデータから決定され得る。適用された
用量は、投与された化合物の相対的なバイオアベイラビリティーおよび効力に基
づいて調整され得る。上記の方法および当該分野において周知の他の方法に基づ
いて最大効力を達成するために用量を調整することは、当業者の能力の十分な範
囲内である。

【０１３０】 本発明の処方物は、薬学的に受容可能な溶液中にて投与され、これは、塩、緩
衝剤、保存剤、適合性キャリア、アジュバント、および必要に応じて、他の治療
成分の、薬学的に受容可能な濃度を慣用的に含み得る。

【０１３１】 治療における使用のために、有効量のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、所望の表
面（例えば、粘膜、全身）にオリゴヌクレオチドを送達する任意の様式によって
、被検体に投与され得る。本発明の薬学的組成物を「投与すること」は、当業者
に公知の任意の手段によって達成され得る。投与の好ましい経路は、経口、非経
口、筋肉内、鼻腔内、気管内、吸入、眼内、膣内、および直腸を含むがこれらに
限定されない。

【０１３２】 経口投与について、化合物（すなわち、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、抗原、他
の治療剤）は、活性化合物を当該分野において周知の薬学的に受容可能なキャリ
アと組み合せることによって、容易に処方され得る。このようなキャリアは、本
発明の化合物が、処置される被検体による経口摂取のために、錠剤、丸剤、糖剤
、カプセル剤、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして処方される
ことを可能にする。経口での使用のための薬学的調製物は、必要に応じて、所望
される場合、錠剤または糖剤コアを得るために、適切な補助剤を加えた後に、得
られた混合物を粉砕し、そして顆粒の混合物を処理して、固体賦形剤として得ら
れ得る。適切な賦形剤は、特に、糖（ラクトース、スクロース、マンニトールま
たはソルビトールを含む）のような充填剤；例えば、トウモロコシスターチ、コ
ムギスターチ、イネスターチ、ジャガイモスターチ、ゼラチン、トラガカントゴ
ム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のよ
うなセルロース調製物である。所望される場合、崩壊剤（例えば、架橋したポリ
ビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（例えば、アルギン
酸ナトリウム））が、添加され得る。必要に応じて、経口処方物はまた、生理食
塩水または内部の酸条件を中和するための緩衝液中にて処方され得るか、あるい
はいかなるキャリアもなしに投与され得る。

【０１３３】 糖剤コアは、適切なコーティングとともに提供される。この目的のために、濃
縮した糖溶液が、使用され、これは、必要に応じてアラビアゴム、タルク、ポリ
ビニルピロリドン、カルボポールゲル（ｃａｒｂｏｐｏｌ）、ポリエチレングリ
コール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒
または溶媒の混合物を含み得る。染料または色素は、識別のために、または活性
化合物の用量の異なる組合せを特徴付けるために、錠剤または糖剤コーテイング
に添加され得る。

【０１３４】 経口にて使用され得る薬学的調製物は、ゼラチンから作製される押し出し成形
（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル剤、ならびにゼラチンから作製される密封された
軟カプセル剤および柔軟材（例えば、グリセロールまたはソルビトール）を含む
。押し出し成形カプセル剤は、充填剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば
、スターチ）、および／または滑択剤（例えば、タルクもしくはステアリン酸マ
グネシウム）、ならびに必要に応じて安定化剤と混合して、活性成分を含み得る
。軟カプセル剤において、活性化合物は、適切な液体（例えば、脂肪油、液体パ
ラフィン、または液体ポリエチレングリコール）中に溶解または懸濁され得る。
さらに、安定化剤が添加され得る。経口投与のために処方されたミクロスフェア
もまた、使用され得る。このようなミクロスフェアは、当該分野において十分に
定義されている。経口投与のための全ての処方物は、このような投与に適切な投
薬量内であるべきである。

【０１３５】 頬内投与について、この組成物は、従来の様式にて処方された錠剤またはロゼ
ンジの形態を採用し得る。

【０１３６】 吸入による投与については、本発明に従う使用のための組成物は、適切な噴霧
剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロ
テトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体）を使用する、加圧し
たパックまたは噴霧器からのエアロゾルスプレーの提示の形態にて都合よく送達
され得る。加圧したエアロゾルの場合において、この投薬単位は、計測量を送達
する弁を提供することによって決定され得る。吸入器または注入器における使用
のための、例えば、ゼラチンのカプセル剤またはカートリッジが、処方され、こ
れは、化合物の粉末混合物および適切な粉末基剤（例えば、ラクトースまたはス
ターチ）を含む。

【０１３７】 化合物を全身に送達することが所望される場合、この化合物は、注射による（
例えば、ボーラス注射または持続性注入による）非経口投与のために処方され得
る。注射のための処方物は、添加された保存剤と共に、単位投薬形態にて（例え
ば、アンプルにて、または多用量の容器にて）提示され得る。この組成物は、油
状ビヒクルまたは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳剤のような形態を採用
し得、そして懸濁剤、安定化剤および／または分散剤のような処方剤を含み得る
。

【０１３８】 非経口投与のための薬学的処方物は、水溶性形態の活性化合物の水溶液を含む
。さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な油状注射懸濁液として調製され得る。
適切な脂溶性溶媒またはビヒクルは、脂肪油（例えば、ゴマ油）または合成脂肪
酸エステル（例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド）、あるいはリポ
ソームを含む。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を増大させる物質（例えば、カ
ルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン）を
含み得る。必要に応じて、この懸濁液はまた、この化合物の溶解度を増大させて
、非常に濃縮された溶液の調製を可能にする、適切な安定化剤または薬剤を含み
得る。

【０１３９】 あるいは、活性化合物は、使用前には、適切なビヒクル（例えば、無菌の発熱
性物質を含まない水）との構成のために粉末形態である。

【０１４０】 この化合物はまた、例えば、従来の坐剤基剤（例えば、ココアバターまたは他
のグリセリド）を含む、坐剤または貯留（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）浣腸のような直
腸組成物または膣内組成物にて処方され得る。

【０１４１】 上記の処方物に加えて、この化合物はまた、蓄積調製物として処方され得る。
このような長期作用処方物は、適切なポリマー材料もしく疎水性材料（例えば、
受容可能な油状物中の乳剤として）またはイオン交換樹脂を用いてか、あるいは
乏しい溶解性の誘導体として（例えば、乏しい溶解性の塩として）を用いて処方
され得る。

【０１４２】 薬学的組成物はまた、適切な固体またはゲル相キャリアあるいは賦形剤を含み
得る。このようなキャリアまたは賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カル
ウシウム、種々の糖、スターチ、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリマー
（例えば、ポリエチレングリコール）が挙げられるがこれらに限定されない。

【０１４３】 適切な液体または固体の薬学的調製物形態は、例えば、吸入のための水溶液も
しくは生理食塩水溶液、マイクロカプセル化されたもの、渦巻き状化（ｅｎｃｏ
ｃｈｌｅａｔｅｄ）されたもの、微小な金粒子上にコーティングされたもの、リ
ポソーム中に含まれたもの、噴霧されたもの、エアロゾル、皮膚への移植のため
のペレット、または皮膚を引っ掻く鋭い物体上に乾燥されたものである。薬学的
組成物はまた、顆粒剤、散剤、錠剤、コーティングした錠剤、（微小）カプセル
剤、坐剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、クリーム剤、ドロップ剤、または活性化
合物の遅延された放出を有する調製物を含む。ここでこの調製物の賦形剤および
添加剤および／または補助剤（例えば、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、腫脹
（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）剤、滑択剤、香味剤、甘味剤または溶解剤）は、通例、上
記のように使用される。薬学的組成物は、種々の薬物送達系における使用に適切
である。薬物送達についての方法の簡潔な総論は、Ｌａｎｇｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２４９：１５２７〜１５３３、１９９０（これは、本明細書中で参考として
援用される）を参照のこと。

【０１４４】 ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよび抗原は、それ自体（純粋）で、または薬学的
に受容可能な塩の形態で投与され得る。医薬品において使用される場合、この塩
は、薬学的に受容可能であるべきだが、薬学的に受容可能ではない塩が、その薬
学的に受容可能な塩を調製するために、都合よく使用され得る。このような塩に
は、以下の酸から調製される塩を含むがこれらに限定されない：塩酸、臭化水素
酸、スルホン酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエン
スルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸
、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、このような
塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩（例えば、カルボン酸基のナト
リウム、カリウムまたはカルシウム塩）として調製され得る。

【０１４５】 適切な緩衝剤は、以下を含む：酢酸および塩（１〜２％ ｗ／ｖ）；クエン酸
および塩（１〜３％ ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ ｗ／ｖ）
；ならびにリン酸および塩（０．８〜２％ ｗ/ｖ）。適切な保存剤は、塩化ベ
ンザルコニウム（０．００３〜０．０３ ｗ/ｖ）；クロロブタノール（０．３
〜０．９％ ｗ/ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％ ｗ/ｖ）およびチメロ
サール（０．００４〜０．０２％ ｗ/ｖ）を含む。

【０１４６】 本発明の薬学的組成物は、有効量のＣｐＧオリゴヌクレオチドおよび必要に応
じて、抗原および／または他の治療剤（必要に応じて、薬学的に受容可能なキャ
リアに含まれる）を含む。用語「薬学的に受容可能なキャリア」は、ヒトまたは
他の脊椎動物への投与に適切な、１以上の、適合性の固体または液体の、充填材
、希釈剤またはカプセル化物質を意味する。用語「キャリア」は、天然または合
成の有機性成分または無機性成分を示し、この場合、活性成分は、本出願を容易
にするように組み合せられる。薬学的組成物の成分はまた、所望の薬学的効力を
実質的に損なう相互作用が存在しない様式において、本発明の化合物と共に、お
よび互いに混合され得る。

【０１４７】 本発明において有用なＣｐＧオリゴヌクレオチドまたは抗原は、さらなるアジ
ュバント、他の治療剤、または抗原と混合されて送達され得る。混合物は、Ｃｐ
Ｇオリゴヌクレオチドまたはいくつかの抗原あるいは他の治療剤に加えていくつ
かのアジュバントからなり得る。

【０１４８】 種々の投与経路が利用可能である。選択された特定の様式は、当然、選択され
た特定のアジュバントまたは抗原、処置される特定の状態および治療の効力に必
要とされる投薬量に依存する。本発明の方法は、一般的には、医学的に受容可能
である任意の投与様式を使用して実施され得、このような様式とは、臨床的に受
容可能でない有害な効果を引き起こすことなく、免疫応答の効果的なレベルを生
じる任意の様式がを意味する。投与の好ましい様式は、上記で議論される。

【０１４９】 組成物は、単位投薬形態にて都合よく存在し得、そして薬学の分野にて周知の
任意の方法によって調製され得る。全ての方法は、化合物を１以上の付属成分を
構成するキャリアと会合させる工程を包含する。一般に、化合物は、この化合物
を液体キャリア、微細に分割された固体キャリア、またはそれらの両方と均一か
つ緊密に会合させること、次いで必要な場合、この生成物を成形することによっ
て調製される。液体投薬単位は、バイアルまたはアンプルである。固体投薬形態
は、錠剤、カプセル剤および坐剤である。患者の処置については、化合物の活性
、投与の様式、免疫の目的（すなわち、予防または治療）、障害の性質および重
篤度、患者の年齢および体重に依存して、異なる用量が必要とされ得る。所定の
用量の投与が、個々の用量の形態での単回投与、そうでなければいくつかのより
少ない用量単位の両方によって、実行され得る。数週間または数ヶ月離れた特定
の間隔での用量の複数投与は、抗原特異的応答をブーストするために有用である
。

【０１５０】 他の送達系は、時限放出、遅延放出、または徐放性放出の送達系を含み得る。
このような系は、化合物の反復投与を回避し得、このことは、被検体および医師
にとっての簡便性を増大させる。多くの型の放出送達系が、当業者に利用可能で
あり、そして公知である。これらには、ポリマーベースの系（例えば、ポリ（ラ
クチド−グリコチド）、コポリオキザラート、ポリカプロラクトン、ポリエステ
ルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸、およびポリ無水物）が挙
げられる。薬物を含む前述のポリマーの微小カプセル剤は、例えば、米国特許第
５，０７５，１０９号に記載される。送達系はまた、以下の非ポリマー送達系を
含む：ステロール（例えば、コレステロール、コレステロールエステル）および
脂肪酸または中性脂肪（例えば、モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリ
セリド）を含む脂質；ヒドロゲル放出系；サイラスティック系；ペプチドベース
の系；ろうコーティング；従来の結合剤および賦形剤を使用して圧縮した錠剤；
部分的に融合した移植片など。特定の例は、以下のものを含むがこれらに限定さ
れない：（ａ）本発明の薬剤が、米国特許第４，４５２，７７５号、同第４，６
７５，１８９号、および同第５，７３６，１５２号に記載されるようなマトリク
ス内の形態に含まれている侵食系、ならびに（ｂ）活性成分が、米国特許第３，
８５４，４８０号、同第５，１３３，９７４号および同第５，４０７，６８６号
に記載されるようなポリマーから制御された速度で浸透する拡散系。さらに、ポ
ンプベースのハードウェア送達系が使用され得、これらのうちのいくつかは、移
植に採用される。

【０１５１】 本発明はさらに、以下の実施例によって例示され、これは、さらなる限定とし
てはどのようにも解釈されるべきではない。本出願の至る箇所で引用される全て
の参考文献（参考文献、発行された特許、公開特許出願、および共有に係る特許
出願を含む）の内容の全体は、参考として本明細書によって明示的に援用される
。

【０１５２】 （実施例） （方法） （増殖アッセイ）簡潔には、ＢＡＬＢ／ｃマウス（４〜１８週齢）に由来の脾
細胞を、９６ウェルマイクロタイタープレートにおいて、ＲＰＭＩ中５×１０⁵
〜１０⁶細胞／ｍｌで４４時間培養し、次いで、１μＣｉの³Ｈチミジンで４時間
パルスし、その後収集した。ｃｐｍをシンチレーション計数によって決定した。
次いで、増殖アッセイを実行して、本質的に以前に記載された（Ｋｒｉｅｇ，Ａ
．Ｋ．ら、１９９５、Ｎａｔｕｒｅ、３７４：５４６）ようにＢ細胞活性化を測
定した。

【０１５３】 （オリゴヌクレオチド）非立体規則性オリゴデオキシヌクレオチドを、標準的
なホスホルアミダイト法によって調製した。立体的に純粋な（ｓｔｅｒｅｏｐｕ
ｒｅ）ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドを、Ｓｔｅｃら（Ｓｔｅ
ｃ，Ｗ．Ｊ．ら、１９９５、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１１７：１２０１
９）のオキサチアホスホラン（ｏｘａｔｈｉａｐｈｏｓｐｈｏｌａｎｅ）方法に
よって調製した。配列ＴＣＡＡＣＧＴＴ（配列番号２１）を、広汎なファミリー
のＣｐＧ ＤＮＡを示す広汎な免疫刺激効果を有する代表的なＣｐＧモチーフと
しての研究のために選択した。

【０１５４】 （結果）ＢＡＬＢ／ｃ脾細胞を、全てのヌクレオチド間結合が表２に示される
濃度でＲまたはＳのいずれかである立体的に純粋なオリゴヌクレオチドを用いて
培養した。Ｓ立体異性体（ＣＧ−Ｓ）のみが、ちょうど１μｇ／ｍｌの濃度で容
易に検出可能であったＢ細胞増殖を誘導した。対照的に、Ｒ立体異性体（ＣＧ−
Ｒ）は、２４μｇ／ｍｌの濃度でさえもいかなる増殖をも誘導しなかった。

【０１５５】

【表２】 表１に示される配列と同じ配列を有する立体的に不規則なオクタマーは、キラ
ル的に純粋なＳ異性体と比較して、増殖性効果を減少した。さらに、Ｓ立体異性
体で刺激されている細胞にＲ立体異性体を添加することは、増殖性効果における
用量依存性の減少を引き起こした。従って、Ｒ立体異性体は、Ｓ異性体の免疫刺
激をアンタゴナイズする。出願人らは、いかなる機構にも束縛されることを望ま
ないが、これらの結果についての１つの可能性のある説明は、ＣｐＧ効果を媒介
する結合タンパク質が立体依存的な様式にてＣｐＧ ＤＮＡに結合することであ
ると考えられる。あるいは、ＣｐＧがその作用部位に到達する輸送機構が、立体
選択的であり得る。この機構とは関係なく、出願人らは、ＣｐＧのＳ立体異性体
が免疫応答の調節に関与することを実証した。

【０１５６】 先に記載された明細書は、当業者が本発明を実施し得るに十分であると考慮さ
れる。本発明は、提供された実施例により範囲を限定されない。なぜなら、本実
施例は、本発明の１つの局面の１つの例示として意図され、そして他の機能的に
等価な実施態様が、本発明の範囲内だからである。本明細書中に示され、かつ記
載された改変に加えて、本発明の種々の改変が、先の記載から当業者に明らかに
なり、そして添付の特許請求の範囲の範囲内である。本発明の利点および対象は
、本発明の各実施態様によって必ずしも包含されるとは限らない。

【０１５７】 本出願に列挙される全ての参考文献、特許および特許公開は、それらの全体が
本明細書中で参考として援用される。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/00 Ａ６１Ｐ 31/00 １７１ １７１ 35/00 35/00 37/04 37/04 37/06 37/06 37/08 37/08 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，Ｚ Ｗ Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA33 ZA34 ZA59 ZA89 ZB02 ZB05 ZB08 ZB09 ZB11 ZB13 ZB21 ZB26 ZB32

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 組成物であって、以下： 少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、少なくとも２つのヌクレオチ
   ドは、キラル中心を形成するリン酸骨格修飾を有し、ここで、複数の該キラル中
   心は、Ｓキラリティーを有し、ここで、Ｘ₁Ｘ₂は、ＴｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＣ、お
   よびＧｐＧからなる群から選択されるヌクレオチドであり、そしてここで、Ｘ₃
   Ｘ₄は、ＴｐＴ、ＴｐＡ、ＴｐＧ、ＡｐＡ、ＡｐＧ、ＧｐＡ、およびＣｐＡから
   なる群から選択されるヌクレオチドである、を含む組成物。
2. 【請求項２】 組成物であって、以下： 少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、少なくとも２つのヌクレオチ
   ドが、キラル中心を形成するリン酸骨格修飾を有し、ここで、複数の該キラル中
   心は、Ｓキラリティーを有し、ここで、Ｘ₁Ｘ₂は、ＴｐＴ、ＴｐＧ、ＡｐＴ、Ｇ
   ｐＣ、ＣｐＣ、ＣｐＴ、ＴｐＣ、ＧｐＴまたはＣｐＧであり；Ｘ₃は、Ａまたは
   Ｔであり、そしてＸ₄は、ヌクレオチドであるが、ここで、Ｘ₁Ｘ₂が、ＴｐＣ、
   ＧｐＴ、ＴｐＧ、ＴｐＴ、またはＣｐＧである場合、Ｘ₃Ｘ₄はＴｐＣ、ＡｐＴ、
   ＡｐＧ、ＴｐＧ、またはＡｐＣではない、を含む組成物。
3. 【請求項３】 少なくとも７５％の前記キラル中心がＳキラリティーを有す
   る、請求項１または２に記載の組成物。
4. 【請求項４】 少なくとも９０％の前記キラル中心がＳキラリティーを有す
   る、請求項１または２に記載の組成物。
5. 【請求項５】 組成物であって、以下： 少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’ＴＣＮＴＸ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｎは、約０〜２５ヌクレオチドからなる核酸配列であり、ここで、Ｃ
   は、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、ヌクレオチド
   であり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を形成するリン
   酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリティーを有す
   る、を含む組成物。
6. 【請求項６】 組成物であって、以下： 少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
   ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
   形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
   ティーを有する、を含む組成物であり、そしてここで該組成物は、少なくとも２
   つの異なる配列を有する免疫刺激核酸を含む、組成物。
7. 【請求項７】 さらに抗原を含む、請求項１、２、５または６のいずれかに
   記載の組成物。
8. 【請求項８】 さらに抗ウイルス剤を含む、請求項１、２、５または６のい
   ずれかに記載の組成物。
9. 【請求項９】 さらに非核酸アジュバントを含む、請求項１、２、５または
   ６のいずれかに記載の組成物。
10. 【請求項１０】 組成物であって、以下： 一方の鎖上に、少なくとも以下の式を含む配列を有する、二重鎖免疫刺激核酸
    ： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、ここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリティー
    を有する、を含む組成物であり、そして核酸送達複合体をさらに含む組成物。
11. 【請求項１１】 被験体の免疫応答をＴｈ２からＴｈ１へ再指向させるため
    の組成物であって、以下： 被験体の免疫応答をＴｈ２からＴｈ１へ再指向するために有効な量で、少なく
    とも以下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
12. 【請求項１２】 被験体において喘息を処置するための組成物であって、以
    下： 被験体において喘息を処置するために有効な量の、少なくとも以下の式を含む
    配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
13. 【請求項１３】 アレルゲンとの接触に応答したアレルギー反応の発生に対
    して被験体を除感作するための組成物であって、以下： 少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
14. 【請求項１４】 樹状細胞を活性化するための組成物であって、以下： 樹状細胞を活性化するために有効な量の、少なくとも以下の式を含む配列を有
    する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
15. 【請求項１５】 癌を処置するするための組成物であって、以下： 癌を処置するために有効な量の、少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫
    刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
16. 【請求項１６】 前記組成物が、癌治療に対する癌細胞の応答性を増大させ
    るための組成物であり、抗癌治療と組み合わせて投与される前記免疫刺激核酸を
    含む、請求項１５に記載の組成物。
17. 【請求項１７】 前記抗癌治療が抗体である、請求項１６に記載の組成物。
18. 【請求項１８】 癌治療被験体において骨髄の回復を増強するための組成物
    であって、以下： 骨髄の回復を増強するために有効な量の、少なくとも以下の式を含む配列を有
    する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
19. 【請求項１９】 、癌を有する被験体において、抗原依存性細胞性細胞傷害
    （ＡＤＣＣ）に関与するタイプの免疫応答を刺激するための組成物であって、以
    下： 少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
20. 【請求項２０】 被験体においてサイトカイン産生を誘導するための組成物
    であって、以下： 被験体においてサイトカイン産生を誘導するために有効な量の、少なくとも以
    下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
21. 【請求項２１】 ナチュラルキラー細胞溶解活性を刺激するための組成物で
    あって、以下： ナチュラルキラー細胞溶解活性を刺激するために有効な量の、少なくとも以下
    の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
22. 【請求項２２】 被験体においてＴｈ−１型免疫応答を誘導するための組成
    物であって、以下： Ｔｈ−１型免疫応答を誘導するために有効な量の、アジュバントの組み合わせを
    含む、組成物であり、ここで、該アジュバントの組み合わせは、少なくとも以下
    の式を含む配列を有する少なくとも１つの免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、免疫刺激核酸、ならびに少なくとも１つの非核酸アジュバント
    を含む、組成物。
23. 【請求項２３】 粘膜の免疫応答を誘導するための組成物であって、以下： 粘膜の免疫応答を誘導するために有効な量の、少なくとも以下の式を含む配列
    を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｓキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
24. 【請求項２４】 組成物であって、以下： 少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、少なくとも２つのヌクレオチ
    ドは、キラル中心を形成するリン酸骨格修飾を有し、ここで、複数の該キラル中
    心は、Ｒキラリティーを有し、ここで、Ｘ₁Ｘ₂は、ＴｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＣ、お
    よびＧｐＧからなる群から選択されるヌクレオチドであり、そしてここで、Ｘ₃
    Ｘ₄は、ＴｐＴ、ＴｐＡ、ＴｐＧ、ＡｐＡ、ＡｐＧ、ＧｐＡ、およびＣｐＡから
    なる群から選択されるヌクレオチドである、を含む組成物。
25. 【請求項２５】 組成物であって、以下： 少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで少なくとも２つのヌクレオチド
    が、キラル中心を形成するリン酸骨格修飾を有し、ここで、複数の該キラル中心
    は、Ｒキラリティーを有し、ここで、Ｘ₁Ｘ₂は、ＴｐＴ、ＴｐＧ、ＡｐＴ、Ｇｐ
    Ｃ、ＣｐＣ、ＣｐＴ、ＴｐＣ、ＧｐＴまたはＣｐＧであり；Ｘ₃は、ＡまたはＴ
    であり、そしてＸ₄は、ヌクレオチドであるが、ここで、Ｘ₁Ｘ₂が、ＴｐＣ、Ｇ
    ｐＴ、ＴｐＧ、ＴｐＴ、またはＣｐＧである場合、Ｘ₃Ｘ₄はＴｐＣ、ＡｐＴ、Ａ
    ｐＧ、ＴｐＧ、またはＡｐＣではない、を含む組成物。
26. 【請求項２６】 組成物であって、以下： 一方の鎖上に、少なくとも以下の式を含む配列を有する二重鎖免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｒキラリ
    ティーを有する、を含む組成物であり、そして核酸送達複合体をさらに含む、組
    成物。
27. 【請求項２７】 過剰な免疫応答を有する被験体において免疫応答を防ぐた
    めの組成物であって、以下： 免疫応答を防ぐために有効な量の、少なくとも以下の式を含む配列を有する免
    疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｒキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
28. 【請求項２８】 炎症性疾患を有するまたはを有する危険性のある被験体を
    処置するための組成物であって、以下： 免疫応答誘導を防ぐために有効な量の、少なくとも以下の式を含む配列を有す
    る免疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｒキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。
29. 【請求項２９】 組成物であって、以下： 少なくとも以下の式を含む配列を有する免疫刺激核酸： ５’ＧＴＣＧＴＸ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、少なくとも２つのヌクレオチ
    ドは、キラル中心を形成するリン酸骨格修飾を有し、ここで、複数の該キラル中
    心は、Ｓキラリティーを有し、そしてここで、Ｘ₄はヌクレオチドである、を含
    む組成物。
30. 【請求項３０】 感染チャレンジに対する抗原非特異的先天性免疫の活性化
    および広域スペクトル耐性を誘導するための組成物であって、以下： 感染チャレンジに対する抗原非特異的先天性免疫の活性化および広域スペクト
    ル耐性を誘導するために有効な量の、少なくとも以下の式を含む配列を有する免
    疫刺激核酸： ５’Ｘ₁Ｘ₂ＣＧＸ₃Ｘ₄３’ ここで、Ｃは、メチル化されておらず、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄は、
    ヌクレオチドであり、ここで、少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を
    形成するリン酸骨格修飾を有し、そしてここで複数の該キラル中心は、Ｒキラリ
    ティーを有する、を含む組成物。