WO2003075939A1 - Substance contenant de la saponine de soja et procede de production associe - Google Patents

Substance contenant de la saponine de soja et procede de production associe Download PDF

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saponin
soybean
isoflavone
producing
organic solvent
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Satoshi Wanezaki
Shinichi Tsuzaki
Hideo Araki
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Fuji Oil Company, Limited
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    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • the present invention relates to a soybean saponin-containing substance and a method for producing the same.
  • Soybean saponin (hereinafter simply referred to as “saponin”) is a generic term for saponins contained in soybean materials, and is contained in soybean hypocotyls at about 2 to 4% by weight.
  • Sosabogenol A is an aglycone skeleton
  • Darsap A saponin a bisdesmosidic saponin in which a sugar chain is ether-linked to C13 and C-22 positions of aglycone
  • Sosasapogenol B It is classified as a group B saponin, which is a monodesmoside saponin with an aglycone skeleton and a monosaccharide chain with an ether-linked sugar chain at the C-3 position of the aglycone.
  • saponins in which the sugar chain is acetylated have been reported (Kitagawa et al., Chem. Phrm. Bull, 33, (1985)).
  • the soybean material contains isoflavone as a trace component other than savonone, and the soybean hypocotyl contains about 1 to 2% by weight.
  • Isoflavones have daidzein, glycitin, or genistein as the aglycone skeleton, and the isoflavone aglycone, isoflavone glycoside having a sugar chain bonded at the 6-position, and furthermore, the sugar chain has an acetyl group (--COCH 3 ), a malonyl group Acetyl isofura having (-COCH 2 COOH) as a functional group Bon glycoside and malonyl isoflavone glycoside.
  • saponin has various physiological activities such as anti-obesity effect, antioxidant effect and immune activation effect. If there is a material containing saponin in high concentration, it can be easily added to various foods and drinks. It is possible to use it.
  • an object of the present invention is to easily separate saponin and isoflavones extracted from soybean raw materials, and to industrially obtain a saponin-containing substance with high purity and high yield. Disclosure of the invention
  • the present inventors have studied the extraction conditions for the above problems in order to increase the purity and yield of saponin. That is, the extraction temperature was raised to a high temperature or the pH was changed. However, under high temperature conditions, the yield of saponin increased, but at the same time, solids other than saponin were also extracted, resulting in a decrease in the purity of saponin. Therefore, under these conditions, a complicated two-stage purification operation as in the prior art is required, which eventually causes a decrease in the yield. Therefore, another method was determined.
  • saponin is similar in hydrophobicity to isoflavone glycosides, acetyl isoflavone glycosides, and isoflavone aglycone, among isoflavones, it should be difficult to separate them by a technique utilizing these properties.
  • malonyl isoflavone glycosides have a relatively high polarity due to having a dissociating group, and are easily separated from saponin by an adsorbent.
  • Malonyl isoflavone glycosides are naturally contained in soybean most in the natural state, but are heat-labile compounds, and are easily heated to produce isoflavone glycosides, acetyl isoflavone glycosides, or isoflavone ⁇ -glycans. It has the property of changing into glycones. Based on the above findings, in order to obtain saponin with high purity and high yield, malonyl isoflavone glycoside in soybean material should not be changed to isoflavone glycoside, acetyl isoflavone glycoside or isoflavone aglycone.
  • a method for producing a soybean saponin-containing material comprising preparing a water-containing polar organic solvent extract satisfying the following conditions a) and b) from soybean raw materials:
  • the content of malonyl isoflavone glycoside in the total isoflavone content of the extract is not less than 25% by weight
  • soybean saponin-containing material is 60% by weight or more, 2.
  • a method for producing a soybean saponin-containing substance characterized by purifying an aqueous polar organic solvent extract prepared by the method according to any one of the above 1 to 5 by an adsorbent treatment. After treating the aqueous polar organic solvent extract prepared by the method according to any one of the above with an adsorbent, the soy isoflavone-containing fraction is eluted with a water-containing polar solvent having a water content of 65 to 90% by volume, and then eluted.
  • a method for producing a soybean saponin-containing substance comprising eluting a soybean saponin-containing fraction with a water-containing polar solvent having a water content of 5 to 40% by volume,
  • the present invention relates to a process for preparing an extract containing saponin from a soybean material using a water-containing polar organic solvent (hereinafter referred to as “water-containing polar organic solvent extract”). And the saponin extraction into a water-containing polar organic solvent is carried out such that the content of malonyl isoflavone glycoside in the above is 25% by weight or more, preferably 40% by weight or more, more preferably 50% by weight or more. It is characterized in that the extraction is performed so that the ratio is 60% by weight or more, preferably 70% by weight or more, and more preferably 80% by weight or more. By performing extraction under such conditions, it becomes possible to industrially obtain saponin with high purity and high yield.
  • water-containing polar organic solvent extract a water-containing polar organic solvent
  • an aqueous polar organic solvent extract so as to satisfy this condition, Appropriately combine the production conditions such as soy raw material, type of water-containing polar organic solvent and water content, extraction temperature, pH during extraction, and extraction method. Preferred embodiments for obtaining an aqueous polar organic solvent extract satisfying the above conditions will be described below.
  • a soybean raw material containing saponin such as whole soybean, dehulled soybean, dehulled dehypocotyl soybean, defatted soybean, soybean hypocotyl may be used.
  • the amount is relatively high, also antioxidant effect among the saponin is said to particularly strong (Daiminami et al, Proc.Symp.WAKAN-yAKU, I 4, 15 7 -1 62 (19 8 1).) group a
  • soybean hypocotyls with high saponin content about 2 to 4% by weight
  • processed soybean products such as isolated soybean protein, okara, and tofu can be used. is there. Soybean hypocotyls that have a low contamination of seed coat and high hypocotyl purity are preferred.
  • the soybean hypocotyl may be subjected to pretreatment such as dry heat heating or wet heat heating for the purpose of improving flavor and inactivating trypsin inhibitor, but the malonyl isoflavone glycoside is replaced with isoflavone glycoside or ⁇ -flavonoid. If the treatment is carried out to such an extent that the cetyl isoflavone glycoside is changed, the separation efficiency in the purification step after the extraction may be affected. Therefore, it is preferable to use raw soybean hypocotyls. In the case of pretreatment, it is preferable to keep mild treatment with little change in malonyl isoflavone glycoside.
  • Table 1 shows examples of the composition of isoflavones in raw soybean hypocotyls and dry-heated soybean hypocotyls.
  • the soybean hypocotyl that was subjected to dry heat heating (roasting) was almost completely malonyl isoflavone glycoside changed to isoflavone glycoside or acetyl isoflavone glycoside. Is not preferred. (table 1 )
  • a water-containing polar organic solvent that is, an organic solvent miscible with water and containing a desired proportion of water
  • the hydrophilic organic solvent include lower alcohols such as methanol, ethanol and propanol, and acetone. Particularly, it is preferable to use ethanol.
  • Non-polar organic solvents such as ether, chloroform and hexane should be avoided because of poor extraction efficiency of glycoside components such as isoflavones and saponins.
  • the water content of the water-containing polar organic solvent depends on the type of the polar organic solvent, but may be a ratio that enables high-purity and high-yield extraction of saponin, and is preferably 20 to 85% by volume. More preferably, the reaction can be performed at 25 to 70% by volume, and further preferably 25 to 60% by volume. If the water content is too low, the saponin extraction rate will decrease extremely. If it is too high, the isoflavone glycoside and its malonyl and acetyl derivatives will be decomposed, possibly due to the action of ⁇ -darcosidase present in the soybean hypocotyl, and the isoflavone aglycone ratio will increase.
  • the amount of the water-containing polar organic solvent used per one time with respect to the soybean material is not particularly limited, and it depends on the type of the solvent. However, considering the cost, it is preferably 3 to 10 L per kg of the raw material.
  • the temperature at which saponin is extracted from soybean raw materials is lower than the temperature at which malonyl isoflavone glycosides are not easily converted to isoflavone glycosides or acetyl isoflavone glycosides, and 10 to 72 ° C. Is more preferable, and 20 to 65 is still more preferable. If the extraction temperature is too low, it is difficult to extract saponin, and the yield tends to decrease. If the extraction temperature is too high, the malonyl group of the malonyl isoflavone glycoside undergoes hydrolysis or decarboxylation, resulting in an increase in isoflavone glycosides and acetyl isoflavone glycosides. And the purity of saponin tends to decrease.
  • the pH value of the water-containing polar organic solvent is preferably pH 4 to 9, and more preferably pH 5 to 8. If the pH is too low, depending on the water content of the water-containing polar organic solvent, the saponin in the extract is likely to precipitate as precipitates, and the subsequent fractionation process is troublesome. If the pH is too high, malonylisoflavone glycoside is used. However, it is easily converted to isoflavone glycosides, and the efficiency of separation from saponins tends to decrease.
  • the extraction method select a method that can extract the saponin from the soybean raw material into the aqueous polar organic solvent extract at a rate of 60% by weight or more, more preferably 70% by weight or more, and even more preferably 80% by weight or more. do it.
  • the method exemplified above may be selected in consideration of the location and cost at the manufacturing site. On the other hand, when the number of extractions is only one, the extraction rate of savones from soybean materials is difficult to increase, and the yield tends to decrease.
  • aqueous polar organic solvent extract obtained by the above-described embodiment saponin is recovered in high yield (60% by weight or more) from soybean raw materials, and malonyl isoflavone glycoside in total isoflavones is obtained. Is high (25% by weight or more). Extracts satisfying these conditions make it extremely easy to separate and purify saponin and isoflavones thereafter. On the other hand, extraction under mild conditions was not performed, and the content of malonyl isoflavone glycoside in the total amount of isoflavones in the obtained aqueous polar organic solvent extract was less than 25% by weight.
  • acetyl isoflavone glycosides and isoflavone aglycone When the content of saccharides, acetyl isoflavone glycosides and isoflavone aglycone is increased to 75% by weight or more, it becomes difficult to separate from the saponin-containing fraction, resulting in a significant decrease in saponin purity. A purification step will be required.
  • the isoflavone fraction can be very easily removed from the obtained aqueous polar organic solvent extract by a commonly used purification means, and a high-purity saponin fraction can be obtained in a high yield.
  • the preferred embodiment of the purification step is described below.
  • the obtained aqueous polar solvent extract is first treated with an adsorbent. That is, savonine is adsorbed on an adsorbent resin or the like.
  • adsorption resin for example, HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) and SP-825 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), which are porous styrene / divinylbenzene type resins, can be used.
  • Amberlite XAD-2, XAD-4 manufactured by Rohm & Haas Co., Ltd.
  • Duolight S-861, S-862 manufactured by Sumitomo Chemical Co., Ltd.
  • This operation may be performed in a batch manner by charging the resin into a tank, or may be performed by filling the resin into a force ram.
  • the saponin-containing fraction is purified from the liquid. Specifically, it can be purified by the following method.
  • Components other than saponin are selectively removed from the fraction adsorbed on the resin with a water-containing polar organic solvent having a high water content.
  • the water content of the water-containing polar organic solvent is preferably from 65 to 90% by volume. If the water content is too high, a large amount of solvent is required to elute the isoflavone fraction. On the other hand, if the water content is too low, saponin is eluted at the same time as the isoflavone, so that the separation efficiency is reduced and the saponin purity tends to be reduced. (Eluent of fraction containing saponin)
  • a saponin-containing fraction is selectively eluted with a water-containing polar organic solvent having a low water content, and collected.
  • the water content of the water-containing polar organic solvent is preferably 5 to 40% by volume, more preferably 10 to 35% by volume. If the water content is too high, not only will a large amount of solvent be required to elute the saponin-containing fraction, but also it will not be possible to completely recover savonin, causing a decrease in yield. On the other hand, if the water content is too low, the elution efficiency decreases and the cost increases. (Processing of saponin-containing fraction)
  • the eluate of the saponin-containing fraction thus obtained can be processed into a concentrated solution as it is, or can be processed into a powdery / granular form to obtain a “soy saponin-containing substance”.
  • the obtained soybean saponin-containing material has a high purity of a saponin content of 40% by weight or more, preferably 50% by weight per solid content, a high yield from soybean raw materials, and an extremely high production efficiency. It was obtained by
  • the obtained saponin-containing fraction contains 60% or more of group A saponin, which is extremely useful as a saponin-containing substance having higher antioxidant properties. is there.
  • soybean saponin-containing substance By ingesting the obtained soybean saponin-containing substance, anti-obesity effect, anti-oxidation effect, liver injury improvement effect, serum lipid improvement effect, etc. can be expected, and tablets, confectionery, beverages, other health foods and drinks, pharmaceuticals, and cosmetics. And so on.
  • the determination of saponin was performed by thin-layer chromatography.
  • the determination of isoflavone was conducted in accordance with the standard analysis method for soybean isoflavone food standard of the Japan Health and Nutrition Food Association. The following describes each method.
  • the sample was accurately weighed, methanol was added thereto, and the mixture was stirred and extracted for 1 hour, and then centrifuged to obtain an extract. This was repeated again, and the obtained extract was made up to a constant volume.
  • TLC thin layer chromatography
  • the saponin spot was confirmed by comparing the Rf value with the saponin sample. Using a standard straight line prepared in advance with a saponin sample, the area integral of the spot was determined, and the amount of saponin was calculated. Table 2 shows the conditions for thin layer chromatography.
  • a sample corresponding to 10 mg of soy isoflavone was accurately weighed, and 25 mL of 70% by volume ethanol was added thereto. After extraction with stirring at room temperature for 30 minutes, centrifugation was performed to obtain an extract. The residue was subjected to the same extraction operation twice more. The extract solution for a total of three times was made up to 100 mL with 70% by volume of ethanol, and filtered with a 0.45 mPVDF filter to obtain a test solution.
  • the confirmation test for soy isoflavone was 12 kinds of standard products, namely daidzin, genistin, glycitin, daidzein, genistein, glycitin, malonilidine, malonylgenistin, malonyldaricitin, acetildidine, acetylgenistin, acetildaricin (Wako Pure Chemical)
  • the same retention time peak was confirmed using Kogyo Co., Ltd.
  • 12 isoflavone concentrations (daidine equivalent) were quantified using daidzin standard products, and the true isoflavone concentration was calculated by multiplying by the following quantification coefficient. Concentration was calculated.
  • Quantification coefficient of isoflavones daidzin (1,000), genistin (0.814), glycitin (1.090), malonyldidine (1.444), malonylgenistin (1.095), malonylglycitin (1.351), acetildidine (1.094), acetylgenistin (1.064), acetyldaricin (1.197), daidzein (0.583), genistein (0.528), glycitin (0.5740) and various isoflavone concentrations was obtained from the sum of the above.
  • the HPLC conditions for the test solution and the standard solution were as shown in Table 3.
  • the extract thus obtained was dissolved in water, and SV2 was applied to a column (100 mL) packed with a porous styrene / divinylbenzene type synthetic adsorption resin DIAION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation). Loaded.
  • a saponin-containing substance was obtained in the same manner as in Example 1 except that only the number of extractions was one. (Comparative Example 2)
  • Example 1 the saponin yield of the extract was as high as 85%, and the abundance ratio of malonyl isoflavone glycoside was as high as 54.2%. As a result, the obtained saponin-containing material had an extremely high saponin content (60%) and a high yield (72%). Isoflavone, which should normally be difficult to separate from saponin, contained only about 2% by weight, indicating that isoflavone and savonin from the extract were very appropriately separated. Furthermore, of the saponins contained in the saponin-containing substance of Example 1, 67% were group A saponins.
  • Example 2 as in Example 1, the saponin yield of the saponin-containing material was extremely high (73% by weight), but the ratio of malonyl isoflavone glycoside in the extract was 25.3%. Results The saponin content in the saponin-containing material was lower than in Example 1. However, the saponin content was still 40% by weight, which was a satisfactory content. The reason for the decrease was that the extraction temperature was set to 70 ° C, and the abundance ratio of malonyl isoflavone glycoside in the extract was 25.3%, which was lower than that in Example 1, and conversely acetyl isoflavone This is probably because the abundance ratio of glycosides and isoflavone glycosides increased.
  • the saponin yield of the saponin-containing material was reduced to 32% by weight, and the production efficiency was low.
  • the water content of the extraction solvent was changed as shown in Table 5 using the same method as in Example 1, and the saponin and isoflavone in the extract were changed. was examined as to how the content changes.
  • the water content of the aqueous polar organic solvent extract used for extraction is 20 to 85% by volume, more preferably 25 to 7% by volume. It is considered appropriate to perform at 0% by volume.
  • Example 2 To examine the effect of pH during extraction, the same method as in Example 1 was used, and the pH of the aqueous polar organic solvent was changed as shown in Table 6, and the saponin recovery rate and isoflavone abundance ratio in the extract were measured. .
  • the pH was adjusted using hydrochloric acid and sodium hydroxide solution.
  • the pH of the water-containing polar organic solvent is preferably PH 4 to 9, which is near neutral, and more preferably pH 5 to 8.
  • the present invention after the adsorbent treatment from the saponin-containing liquid extracted from the soybean raw material, it is possible to perform only one-step purification by the adsorbent treatment without performing multiple purification steps such as gel filtration and distribution mouth chromatography. It is also possible to industrially obtain a high-purity, high-yield saponin-containing material industrially, and to provide a method for producing a saponin-containing material with extremely high production efficiency. Therefore, it is extremely useful in industrial fields such as food, cosmetics, and pharmaceuticals.

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Description

明 細 書 大豆サポニン含有物及びその製造法 技 術 分 野
本発明は大豆サポニン含有物及びその製造法に関する 背 景 技 術
大豆サポニン （以下、 単に 「サポニン」 と記載する。） は大豆原料中に含まれるサ ポニン類の総称であり、 大豆胚軸中には 2〜4重量％程度含有している。 「ソャサボ ゲノール A」 をァグリコン骨格とし、 ァグリコンの C一 3位と C— 2 2位に糖鎖がェ 一テル結合したビスデスモシドサポニンであるダル一プ Aサポニン、 「ソャサポゲノ ール B」 をァグリコン骨格とし、 ァグリコンの C— 3位に糖鎖がエーテル結合したモ ノデスモシドサポニンであるグループ Bサポニンなどに分類されている。 また、糖鎖 の部分中がァセチル化されたサポニンも報告されている （Kitagawa ら， Chem.Phrm.Bull, 33, (1985))。
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一方、大豆原料中にはサボ二ン以外の微量成分としてイソフラポンが含まれており、 大豆胚軸中には 1 ~ 2重量％程度含有している。イソフラボンはダイゼイン、 グリシ ティン又はゲニスティンをァグリコン骨格としてもち、そのイソフラボンァグリコン、 6位の位置に糖鎖を結合したイソフラボン配糖体、 さらにはその糖鎖がァセチル基 (― COCH3)、 マロニル基 （― COCH2COOH) を官能基としてもつァセチルイソフラ ボン配糖体、 マロ二ルイソフラボン配糖体、 を総称したものである。
サポニンには抗肥満効果ゃ抗酸化作用、免疫活性化作用等の種々の生理活性がある と言われており、サポニンを高濃度に含有する素材があれば様々な飲食品に手軽に添 加して利用することが可能である。
従来、 丸大豆、 脱脂大豆、 大豆胚軸等の大豆原料からサポニン素材を高含有に得る ためには、サポニンとイソフラボン類を適切に分離することが重要であることが知ら れている （JP-62-5917-A公報、 JP61-129134-A公報）。 そのためこれらの公報に記載す るように、 低級アルコールやアセトン等の溶剤により抽出し、 これを HP-20、 XAD-2 等の合成吸着樹脂や活性炭に吸着させ、得られた抽出液を低濃度（1 0〜4 0容量％) の低級アルコールで洗浄し、 次いで高濃度 （7 0 ~ 8 0容量％) の低級アルコールに よりサポニン含有画分を溶出させる工程を第 1段階として行つた上に、 さらに LH-20 等のゲルろ過や分配クロマトグラフィーを用いて精製を行う必要があった。
しかしながら、 上記の方法では高純度のサポニン画分を得るために、最終的にゲル ろ過や分配ク口マトグラフィ一等の精製工程を使用しているように、多段階以上の精 製工程が必要となる。そのため例えば JP-62-5917-A公報の実施例 1ではサポニンの大 豆原料からの収率が 1. 38%と記載されているように、 1〜2 %程度の低収率となつ てしまい、工業的に実用化するには設備コストゃ生産効率の点で問題があった。一方、 サポニンを溶媒で高収率に抽出するには高温で抽出する方法が常法であるものの、か かる方法を使用しても煩雑な操作なしに高純度 ·高収率を満足するサポニン素材は得 られていない。
そこで本発明は、 大豆原料から抽出したサポニンとイソフラボンを容易に分離し、 工業的に高純度かつ高収率でサポニン含有物を得ることを目的とした。 発 明 の 開 示
本発明者らは上記課題について、サポニンの純度及び収率を上げるべく、抽出条件 の検討を行った。 すなわち、 抽出温度を高温に上げたり、 pH を変化させて検討した ところ、 高温条件下ではサポニンの収率は上がるが、 同時にサポニン以外の固形物も 抽出されてしまうため、逆にサポニンの純度が低下してしまう結果となった。従って、 この条件では従来技術のような煩雑な 2段階の精製操作が必要となり、結局収率が低 下してしまう原因となるため、 別の方法を模索することとした。
そこで我々は多段階の精製操作を行わなくとも簡便な操作により高濃度 ·高収率の サポニン含有物を得るために鋭意研究を行う中で、 以下の知見を得られた。
( 1 )サポニンはイソフラボンの中でも特にイソフラボン配糖体、 ァセチルイソフラ ポン配糖体及びィソフラボンァグリコンと疎水性が近似しているため、 これら の性質を利用した手法では分離が困難であること。
( 2 )イソフラボンの中でもマロ二ルイソフラボン配糖体は解離基を有しているため 比較的極性が高く、 吸着剤によりサポニンとの分離が容易であること。
( 3 ) マロ二ルイソフラボン配糖体は天然の状態で大豆中に最も多く含まれるが、 熱 に不安定な化合物であり、 加熱により容易にイソフラボン配糖体、 ァセチルイ ソフラボン配糖体又はイソフラボンァグリコンに変化する性質を有すること。 以上の知見から、サポニンを高純度かつ高収率に得るためには、大豆原料中のマロ 二ルイソフラボン配糖体を、 イソフラボン配糖体、 ァセチルイソフラボン配糖体又は イソフラボンァグリコンに変化させない温和な条件下において多段抽出を行うと、そ の後は吸着剤処理による 1段階の精製工程のみで、サポニンとイソフラボンの分離を 非常に効率良く行うことができ、極めて高純度かつ高収率のサポニン含有物を工業的 に簡便な方法で得られる知見を得、 本発明を完成させるに至った。
すなわち本発明は下記に示す通り、
1 . 大豆原料から下記 a )、 b ) の条件を満たす含水極性有機溶媒抽出液を調製する ことを特徴とする大豆サポニン含有物の製造法、
a )該抽出液の総イソフラボン量におけるマロ二ルイソフラボン配糖体の含有率 が 2 5重量％以上、
b ) 大豆原料からの大豆サポニンの抽出率が 6 0重量％以上、 2 . 大豆原料が生大豆胚軸である上記 1に記載の大豆サポニン含有物の製造法、
3 .含水極性有機溶媒の含水率が 2 0 ~ 8 5容量％である上記 1又は 2に記載の大豆 サポニン含有物の製造法、
4.抽出が 1 0 ~ 7 2 °Cの温度条件で行われる上記 1〜 3の何れかに記載の大豆サボ ニン含有物の製造法、
5 .抽出が多段式で行われる上記 1 ~ 4の何れかに記載の大豆サポニン含有物の製造 法、
6 .上記 1〜 5の何れかに記載の方法により調製された含水極性有機溶媒抽出液を吸 着剤処理により精製することを特徴とする大豆サポニン含有物の製造法、 7 .上記 1 ~ 5の何れか 1項に記載の方法により調製された含水極性有機溶媒抽出液 を吸着剤処理後、含水率 6 5〜9 0容量％の含水極性溶媒で大豆イソフラボン含 有画分を溶出し、次いで含水率 5〜4 0容量％の含水極性溶媒で大豆サポニン含 有画分を溶出させることを特徴とする大豆サポニン含有物の製造法、
8 . 上記 7の製造法により得られる大豆サポニン含有物、
を開示するものである。 発明を実施するための最良の形態
以下本発明について詳述する。
本発明は、 大豆原料から含水極性有機溶媒を使用してサポニンを含有する抽出液 (以下、 「含水極性有機溶媒抽出液」 と記載する。） を調製する工程において、 該抽出 液の総ィソフラボン量におけるマロ二ルイソフラボン配糖体含有率が 2 5重量％以 上、好ましくは 4 0重量％以上、 さらに好ましくは 5 0重量％以上となるように抽出 し、 かつ含水極性有機溶媒へのサポニン抽出率が 6 0重量％以上、好ましくは 7 0重 量％以上、さらに好ましくは 8 0重量％以上となるように抽出することに特徴を有す る。かかる条件での抽出を行うことにより、高純度かつ高収率にサポニンを工業的に 得ることが可能となる。この条件を満たすように含水極性有機溶媒抽出液を得るには、 大豆原料、 含水極性有機溶媒の種類と含水率、 抽出温度、 抽出時の pH、 抽出方式等 の製造条件を適切に組合せる。以下に上記条件を満たす含水極性有機溶媒抽出液を得 るための好ましい態様を示す。
〔含水極性有機溶媒抽出液の調製方法〕
(大豆原料）
本発明において、 サポニンを抽出する原料としては、 丸大豆、 脱皮大豆、 脱皮脱胚 軸大豆、脱脂大豆、大豆胚軸等のサポニンが含まれている大豆原料を用いれば良いが、 特にサポニンの含有量が比較的高く、またサポニンの中でも抗酸化効果が特に強いと いわれている （大南ら， Proc.Symp.WAKAN-YAKU, I4， 157-162 (1981).) グループ Aサ ポニンの含有率が高い大豆胚軸（2〜4重量％程度） を用いるのが収率の点で好まし レ^ また分離大豆蛋白、 オカラ、 豆腐等の大豆加工品を用いることも可能である。 大 豆胚軸は種皮の混入が少なく胚軸純度の高いものが好適である。
なお、大豆胚軸は風味改善やトリプシンィンヒビターを失活させる目的で乾熱加熱 又は湿熱加熱等の前処理を行つても良いが、マロ二ルイソフラボン配糖体がィソフラ ボン配糖体やァセチルイソフラボン配糖体に変化してしまうほどの処理を行うと、抽 出後の精製工程における分離効率に影響を及ぼす可能性があるため、生大豆胚軸を用 いることが好ましい。前処理をする場合には、 マロ二ルイソフラボン配糖体の変化が 少ない温和な処理に留めておく方が好ましい。
参考までに生の大豆胚軸及び乾熱加熱を行った大豆胚軸のイソフラボンの組成の 例を表 1に示す。 この例では乾熱加熱（焙煎） を行った大豆胚軸はマロ二ルイソフラ ボン配糖体がほとんどィソフラボン配糖体又はァセチルイソフラボン配糖体に変化 しているため、 かかる程度まで乾熱加熱を行うことは好ましくない。 (表 1 )
Figure imgf000007_0001
(抽出溶媒）
大豆原料からサポニンを抽出する溶媒としては、含水極性有機溶媒、すなわち水と の混和が可能な有機溶媒であって、所望の割合の水を含有させたものを用いる。親水 性有機溶媒の例としては、 メタノール、 エタノール、 プロパノール等の低級アルコー ルゃ、ァセトン等が挙げられる。特にエタノールを用いることが好ましい。エーテル、 クロ口ホルム、 へキサン等の非極性有機溶媒はイソフラボン、サポニンといった配糖 体成分の抽出効率が悪いため避けた方が良い。
該含水極性有機溶媒の含水率は、極性有機溶媒の種類にもよるが、サポニンの抽出 が高純度かつ高収率に行えるような比率にすればよく、好ましくは 2 0 ~ 8 5容量％、 より好ましくは 2 5〜7 0容量％、さらに好ましくは 2 5〜6 0容量％で行うことが できる。含水率が低すぎると極端にサポニン抽出率が低下させてしまう。 また高すぎ ると大豆胚軸中に存在する β ダルコシダ一ゼが作用するためか、ィソフラボン配糖 体やそのマロニル体、 ァセチル体が分解し、 イソフラボンァグリコンの比率が高くな るため、 イソフラボンとの分離がし難く、 サポニンの純度が低下する傾向になる。 該含水極性有機溶媒の大豆原料に対する 1回あたりの使用量は特に限定されず、溶 媒の種類にもよるが、 コストを考えると原料 1 kg当り 3 ~ 1 0 Lとすることが好ま しい。
(抽出温度）
大豆原料からサポニンを抽出する温度は、マロ二ルイソフラボン配糖体がィソフラ ポン配糖体やァセチルイソフラボン配糖体に変化しにくい温度以下で行うのが好ま しく、 1 0〜 7 2 °Cがより好ましく、 2 0〜 6 5でがさらに好ましい。抽出温度が低 すぎるとサポニンが抽出されにくくなるため収率が低下する傾向となる。また抽出温 度が高すぎるとマロ二ルイソフラボン配糖体のマロニル基が加水分解あるいは脱炭 酸反応し、 イソフラボン配糖体やァセチルイソフラボン配糖体が増加するため、 サボ ニンとの分離がしにくくなり、 サポニンの純度が低下する傾向となる。
(抽出時の pH)
含水極性有機溶媒の pH値は pH 4〜 9が好ましく、 pH 5〜 8がより好ましい。 pH が低すぎると含水極性有機溶媒の含水率によっては、抽出物中のサポニンが沈殿とし て生じやすくなり、 その後の分画工程に手間がかかり、 pHが高すぎるとマロ二ルイ ソフラボン配糖体がィソフラボン配糖体に変化しやすいため、サポニンとの分離効率 が低下する傾向となるためである。
(抽出方式）
抽出方式としては、大豆原料から含水極性有機溶媒抽出液へのサポニンの抽出率が 60重量％以上、 より好ましくは 70重量％以上、 さらに好ましくは 80重量％以上と なるように抽出できる方式を選択すればよい。例えば少なくとも 2段階以上の抽出を 行う多段式抽出法を採用することが好ましい。この際抽出は 1つの抽出容器（タンク） で複数回行ったり （バッチ式)、 複数のタンクを直列に配列し、 各タンクにおいて 1 回以上の抽出を行っても良い。 さらに、直列に配列した各タンクに並列に 1つ以上の タンクを配列することも可能である。多段式以外には、 向流式の連続抽出法等を使用 することも可能である。以上に例示した方式は製造現場における場所や費用等を考慮 して選択すれば良い。 一方、 抽出回数が 1回のみの場合では、 大豆原料からのサボ二 ンの抽出率が上がりにくく、 収率が低下する傾向となる。
以上に示した態様により得られた含水極性有機溶媒抽出液は、大豆原料からサポ二 ンが高収率 （6 0重量％以上） で回収されており、 かつ総イソフラボン中のマロニル イソフラボン配糖体の割合が高い （2 5重量％以上） ものである。 かかる条件を満足 した抽出液は、その後のサポニンとイソフラボンの分離精製が極めて容易となる。一 方、温和な条件での抽出が行われず、 得られた含水極性有機溶媒抽出液の総イソフラ ボン量におけるマロ二ルイソフラボン配糖体含有率が 2 5重量％未満となり、逆にィ ソフラボン配糖体、ァセチルイソフラボン配糖体及びイソフラボンァグリコンの含有 率が 7 5重量％以上に増加した場合には、 サポニン含有画分との分離が困難となり、 著しいサポニン純度の低下を起こし、 複雑な精製工程を要することとなる。
〔サポニン含有画分の精製方法〕
次に、 得られた含水極性有機溶媒抽出液から通常使用されている精製手段により、 極めて容易にイソフラボン画分を除去し、高純度のサポニン画分を高収率で得ること ができる。 以下に精製工程の好ましい態様を示す。
(抽出液の吸着剤処理）
得られた含水極性溶媒抽出液をまず吸着剤処理する。すなわち、 吸着樹脂等にサボ ニンを吸着させる。 吸着樹脂としては、 公知のものを使用することができ、 例えば多 孔性スチレン ·ジビニルベンゼン型樹脂である HP- 20 (三菱化学 （株） 製）、 SP-825 (三菱化学 （株） 製)、 アンバーライト XAD- 2、 XAD-4 (ローム ·アンド 'ハース （株） 製)、 デュオライ卜 S-861、 S-862 (住友化学 (株)製） 等の合成吸着樹脂等を使用する ことが好ましい。 この操作はタンクに該樹脂を投入してバッチ式で行っても良いし、 力ラムに該樹脂を充填して行うことも可能である。
(イソフラボン含有画分の溶出）
次に、該樹脂に吸着させたサポニンを高含有する画分を溶出することにより、抽出 液からサポニン含有画分を精製する。具体的には、以下の方法で精製することができ る。
該樹脂に吸着させた画分から含水率の高い含水極性有機溶媒によりサポニン以外 の成分、 例えばイソフラボン等を選択的に除去する。含水極性有機溶媒の含水率は 6 5〜9 0容量％が好ましい。含水率が高すぎるとイソフラボン画分を溶出するのに大 量の溶媒が必要となる。 また、含水率が低すぎるとサポニンがイソフラボンと同時に 溶出してしまい、分離効率が低下してしまい、サポニンの純度が低下する傾向となる。 (サポニン含有画分溶出）
次に、 含水率の低い含水極性有機溶媒によりサポニン含有画分を選択的に溶出し、 これを回収する。含水極性有機溶媒の含水率は 5 ~ 4 0容量％が好ましく、 1 0〜 3 5容量％がより好ましい。含水率が高すぎるとサポニン含有画分を溶出するのに大量 の溶媒が必要となるばかりではなく、完全にサボ二ンを回収できなくなり収率の低下 を引き起こす。また、含水率が低すぎると溶出の効率が落ち、またコス卜が上昇する。 (サポニン含有画分の加工）
得られたサポニン含有画分の溶出液はそのままで、濃縮液に加工して、 あるいは粉 末 ·粒状に加工して 「大豆サポニン含有物」 とすることができる。
得られた大豆サポニン含有物はサポニン含有量が固形分あたり 4 0重量％以上、好 ましくは 5 0重量％の高純度であり、大豆原料からの収率も高く、極めて生産効率の 高い製法により得られたものである。
また大豆胚軸を大豆原料として用いた場合は、得られたサポニン含有画分中、 グル ープ Aサポニンが 6 0 %以上含まれるため、より抗酸化性の高いサポニン含有物とし て極めて有用である。
(食品等への利用性）
得られた大豆サポニン含有物を摂取することにより、 抗肥満効果、 抗酸化効果、 肝 傷害改善効果、 血清脂質改善効果等も期待でき、 タブレツト、 菓子、 飲料その他の健 康飲食品、 医薬品、 化粧品等に利用することが可能である。 なお、本発明においてサポニンの定量は薄層クロマトグラフィーにより行った。 ま たィソフラボンの定量は （財） 日本健康 ·栄養食品協会の大豆ィソフラボン食品規格 基準分析法に従った。 以下にそれぞれの方法を示す。
(サポニンの定量法）
試料を正確に秤量し、 これにメタノールを加え 1時間攪泮抽出した後、遠心分離し て抽出液を得た。 これを再度繰り返し、 得られた抽出液を一定量に定容した。 これを 薄層クロマトグラフィー （TLC) に負荷した後、 サポニンの標品と Rf値を比較し、 サ ポニンのスポットを確認した。あらかじめサポニン標品にて作製しておいた標準直線 を用いて、 スポットの面積積分値を求め、 サポニン量を算出した。 表 2に薄層クロマ 卜グラフィ一の条件を示す。
(表 2 ) T L Cの条件
Figure imgf000011_0001
(イソフラボンの定量法）
大豆イソフラボンとして l 10mg に対応する試料を正確に秤量し、 これに 70容 量％エタノールを 25mL加えた。 30分間室温で撹拌抽出した後、 遠心分離して抽出液 を得た。 残渣は同様の抽出操作を更に 2回行った。 計 3回分の抽出液を 70容量％ェ 夕ノールで lOOmLに定容し、 0. 45 ; mPVDFフィルタ一にて濾過したものを試験溶液と した。 大豆イソフラボンの確認試験は標準品 12種類、 すなわちダイジン、 ゲニスチ ン、 グリシチン、 ダイゼイン、 ゲニスティン、 グリシティン、 マロニルダィジン、 マ ロニルゲニスチン、 マロニルダリシチン、 ァセチルダィジン、 ァセチルゲニスチン、 ァセチルダリシチン （和光純薬工業株式会社） を用い、 ほぼ同じリテンションタイム のピークを確認した。 定量試験はダイジン標準品を用いて 12種類のイソフラボン濃 度 （ダイジン換算値） を定量し、 下記の定量係数を乗じることにより真のイソフラポ ン濃度を算出した。イソフラボンの定量係数：ダイジン（1 · 000)、ゲニスチン（0. 814)、 グリシチン (1. 090)、 マロニルダィジン (1. 444)、 マロニルゲニスチン （1. 095)、 マ ロニルグリシチン (1. 351)、ァセチルダィジン (1. 094)、ァセチルゲニスチン（1. 064)、 ァセチルダリシチン (1. 197)、 ダイゼイン （0. 583)、 ゲニスティン （0. 528)、 グリシ ティン （0. 740) そして各種イソフラボン濃度の総和からイソフラボン量を求めた。 なお、 試験溶液及び標準溶液の H P L C条件は表 3のように行つた。
(表 3 ) H P L C条件
Figure imgf000012_0001
(実施例）
以下実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明がこれらによつてその技術範 囲が限定されるものではない。 なお、 以下 「％」 は特に断りのない限り、 「重量％」 を示す。
〔実施例 1〕
大豆生胚軸 500 gに含水率 25容量％の含水エタノール 2. 0 Lを加え、 40°Cにて攪 拌抽出を行った。 抽出液をろ過により分離した後、 再度含水率 25容量％の含水エタ ノール 2. 0 Lを加え、 同様に抽出を行い、 2回の抽出液を混合した （得られた抽出液 を「含水極性有機溶媒抽出液」とする。）。該抽出液を減圧下、 40°Cにて濃縮を行った。 このようにして得られた抽出物を水に溶解し、 多孔性スチレン ·ジビニルベンゼン 型の合成吸着樹脂ダイアイオン HP- 20 (三菱化学 (株)製） を充填したカラム （lOOmL) に SV2にて負荷した。
次に、含水率 80容量％の含水エタノールで洗浄し、 さらに含水率 20容量％の含水 エタノールで溶出させることでサポニン画分を得た。 これを減圧下、 40°Cにて濃縮を 行い、 乾燥粉末ィ匕してサポニン含有物を得た。
〔実施例 2〕
実施例 1と同様の方法で、 大豆生胚軸を含水エタノールで抽出する温度のみ 70 に変えて、 サポニン含有物を得た。
〔実施例 3〕
実施例 1と同様の方法で、 大豆生胚軸を含水エタノールで抽出する温度のみ 15°C に変えて、 サポニン含有物を得た。
〔比較例 1〕
実施例 1と同様の方法で、 抽出回数のみを 1回とし、 サポニン含有物を得た。 〔比較例 2〕
実施例 1と同様の方法で、大豆原料のみ大豆焙煎胚軸に変えて、 サポニン含有物を 得た。
実施例 1〜 3並びに比較例 1及び 2により得られた含水極性有機溶媒抽出液の大 豆原料からのサポニン収率 （重量％) と、 該抽出液中の総イソフラボン量を 100%と したときのマロ二ルイソフラボン配糖体 （Ma卜 i so)、 ァセチルイソフラボン配糖体 (Ac- i so)、 イソフラボン配糖体 （Iso) 及びイソフラボンァグリコン （Agl)の存在比 (%)、 並びに吸着剤処理により得られたサポニン含有物中のサポニン含有量 （重 量％)、 イソフラボン含有量 （重量％) 及び大豆原料からのサポニン収率を表 4に示 した。 (表 4 )
Figure imgf000014_0001
表 4より実施例 1では、 抽出液のサポニン収率が 85 %と極めて高く、 かつマロ二 ルイソフラボン配糖体の存在比が 54. 2 %と高かった。 その結果、 得られたサポニン 含有物はサポニンが極めて高含有 （60%) であり、 かつ高収率 （72 %) のものであつ た。通常サポニンとの分離が困難であるはずのイソフラボンは、 2重量％程度しか含 有しておらず、抽出液からのイソフラポン及びサボ二ンが極めて適切に分離されてい ることが示された。 さらに、 実施例 1のサポニン含有物に含まれるサポニンのうち、 67%がグループ Aサポニンであった。
また実施例 2では、実施例 1と同様サポニン含有物におけるサポニン収率が極めて 高かった （73重量％) ものの、 抽出液のマロ二ルイソフラボン配糖体の存在比が 25. 3%となり、その結果サポニン含有物中のサポニンの含有率は実施例 1よりも低く なった。 ただ依然サポニン含有率が 40重量％あり、 満足できる含有率であった。 低 下の原因としては、 抽出温度を 70°Cとしたことにより、 抽出液のマロ二ルイソフラ ボン配糖体の存在比が 25. 3%と実施例 1に比べ低下し、 逆にァセチルイソフラボン 配糖体及びィソフラボン配糖体の存在比が上昇したためと考えられる。
一方、 比較例 1では、 抽出回数が 1回であったためか、 得られたサポニン含有物の サポニン含量は《重量％であったものの、抽出液におけるサポニン収率は 42重量％ o
であったため、 その結果サポニン含有物におけるサポニン収率が 32重量％と低くな り、 製造効率が低いものであった。
比較例 2では、サポニン含有物におけるサポニン収率は高かったものの（78重量％)、 逆にサポニン含有物中のサポニン含有率が 25重量％と極めて低下してしまった。 そ してイソフラボンの含有率が 18重量％もあり、 イソフラボンとサポニンの分画が適 切に行われなかった。 この原因は大豆原料として大豆胚軸を乾熱加熱（焙煎） して用 いたために、熱に不安定なマロ二ルイソフラボン配糖体がァセチルイソフラボン配糖 体に変換したためと考えられる。
以上の結果より、抽出液中のマロ二ルイソフラボン配糖体の存在比が高いほどサボ ニンとの分画が良好であり、逆にマロ二ルイソフラボン配糖体の存在比が低下し、 ァ セチルイソフラボン配糖体ゃィソフラボン配糖体の存在比が高くなるほど吸着樹脂 による分離時のイソフラボン、サポニンの溶出パターンが重なってしまい、 イソフラ ポンとサボニンの分離が難しくなることが判明した。
〔実験例 1〕 含水極性有機溶媒の含水率の検討
抽出時の含水極性有機溶媒の含水率の影響を検討するため、実施例 1と同様の方法 を用いて、抽出溶媒の含水率を表 5のように変化させ、抽出液中のサポニン及びイソ フラボンの含量がどのように変化するか検討を行った。
(表 5)
含水率 (%) 0 10 30 50 60 80 90 サポニン収率 （％) 10 38 86 82 82 76 63
(イソフラボン存在比）
28.6 45.3 55.3 59.6 60.3 65.3 18.0
Ac-iso 0.0 0.0 3.3 4.1 6.3 2.1 6.3
Iso 64.3 46.6 36.3 33.0 31.1 20.6 23.7
Agl 7.1 8.1 5.1 3.3 2.3 12.0 52.0 表 5より含水率が 0%、 10%の場合にはサポニンの回収率が悪かった。 さらにマロ 二ルイソフラボン配糖体の存在比も低下傾向になった。 また、 含水率が 90%の場合 にはサポニン回収率は高いもののイソフラポン配糖体、マ口二ルイソフラボン配糖体 の存在比が極度に低下していた。これは i3—ダルコシダーゼの作用により配糖体が分 解されてァグリコンが生成したものと考えられる。 よってサポニンの回収率、 マロ二 ルイソフラボン配糖体の存在比の面から考えると抽出に用いる含水極性有機溶媒抽 出液の含水率は 2 0〜8 5容量％、より好ましくは 2 5 ~ 7 0容量％で行うことが好 適であると考える。
〔実験例 2〕 抽出液における pHの影響
抽出時の pHの影響を検討するため、 実施例 1と同様の方法を用い、 表 6の通り含 水極性有機溶媒の pHを変化させ、 抽出液におけるサポニン回収率、 イソフラボン存 在比を測定した。 なお pH調整は塩酸及び水酸化ナトリゥム溶液を用いた。
(表 6 )
Figure imgf000016_0001
表 6の結果より、 比較例 3では抽出時に沈殿を形成し、サポニンの回収率が極度に 低下した。 また、 抽出液の回収においても分離が悪く作業効率も著しく低下した。 こ の要因としては PHが低下したことにより、 サポニンの溶解度が低下し、 さらに抽出 液中にタンパク質が沈殿を形成したことによりサポニンが共沈してサポニンの回収 率を低下させてしまったためと推察される。
また比較例 4では、抽出液中のマロ二ルイソフラボン配糖体の存在比が極度に低下 していた。この要因としてはマロ二ルイソフラボン配糖体はアル力リ条件下で不安定 であり、容易にマロニル基が解離し配糖体に変換してしまうためと推察される。 この ため吸着樹脂による分離時のイソフラボン、サポニンの溶出パターンが重なってしま レ、 イソフラボンとサポニンの分離が難しくなるため、 高純度の大豆サポニン含有物 は得られないと判断した。
以上の結果よりサポニン含量及び回収率の点から、 含水極性有機溶媒の PHは中性 付近である PH 4〜9が好ましく、 pH 5〜8がより好ましいと考えられる。 産業上の利用可能性
本発明により、大豆原料から抽出したサポニン含有液から吸着剤処理の後に、ゲル ろ過や分配ク口マトグラフィ一等の多段階の精製段階を踏むことなく、吸着剤処理に よる 1段階の精製のみによっても工業的に高純度かつ高収率のサポニン含有物を得 ることが可能であり、 極めて生産効率の高いサポニン含有物の製造法を提供できる。 したがって食品、 化粧品、 医薬品等の産業分野において極めて有用である。

Claims

請求 の範囲
1 . 大豆原料から下記 a )、 b ) の条件を満たす含水極性有機溶媒抽出液を調製する ことを特徴とする大豆サポニン含有物の製造法。
a )該抽出液の総イソフラボン量におけるマロ二ルイソフラボン配糖体の含有率 が 2 5重量％以上。
b ) 大豆原料からの大豆サポニンの抽出率が 6 0重量％以上。
2 .大豆原料が生大豆胚軸である請求の範囲 1に記載の大豆サポニン含有物の製造法。
3 .含水極性有機溶媒の含水率が 2 0〜 8 5容量％である請求の範囲 1又は 2に記載 の大豆サポニン含有物の製造法。
4 .抽出が 1 0〜7 2 °Cの温度条件で行われる請求の範囲 1 ~ 3の何れかに記載の大 豆サポニン含有物の製造法。
5 .抽出が多段式で行われる請求の範囲 1〜 4の何れかに記載の大豆サポニン含有物 の製造法。
6 .請求の範囲 1〜 5の何れかに記載の方法により調製された含水極性有機溶媒抽出 液を吸着剤処理により精製することを特徴とする大豆サポニン含有物の製造法。
7 ·請求の範囲 1〜 5の何れか 1項に記載の方法により調製された含水極性有機溶媒 抽出液を吸着剤処理後、含水率 6 5〜 9 0容量％の含水極性溶媒で大豆イソフラ ボン含有画分を溶出し、次いで含水率 5〜4 0容量％の含水極性溶媒で大豆サボ ニン含有画分を溶出させることを特徴とする大豆サポニン含有物の製造法。
8 . 請求の範囲 7の製造法により得られる大豆サポニン含有物。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006094747A (ja) * 2004-09-29 2006-04-13 Ajinomoto Co Inc 抗肥満作用を有する組成物及び飲食品
JP2006124324A (ja) * 2004-10-28 2006-05-18 J-Oil Mills Inc 高純度大豆サポニンの製造方法
JP2011126835A (ja) * 2009-12-19 2011-06-30 Fuji Oil Co Ltd サポニンの製造法
JP2011195541A (ja) * 2010-03-23 2011-10-06 Fuji Oil Co Ltd グループｂサポニンの製造法
WO2013001890A1 (ja) 2011-06-28 2013-01-03 株式会社Ｊ－オイルミルズ ソーヤサポゲノール組成物
JP2018538286A (ja) * 2015-11-25 2018-12-27 ナチュラル レスポンス、エセ．ア．Ｎａｔｕｒａｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ， Ｓ．Ａ． 植物からサポニンを得る方法

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0723102D0 (en) * 2007-11-26 2008-01-02 Univ Brighton Bioactive and resorbable soy-based biomaterials
US8217165B2 (en) * 2008-06-17 2012-07-10 Pawan Kumar Goel Process for the extraction of furostanolic saponins from fenugreek seeds
US8597712B2 (en) * 2009-09-28 2013-12-03 Whitewave Services, Inc. Soy beverage substantially free of isoflavones and method of production
KR20110138001A (ko) * 2010-06-18 2011-12-26 (주)아모레퍼시픽 유색콩 추출물을 함유하는 조성물
CN102351924A (zh) * 2011-09-05 2012-02-15 江南大学 一种茶皂素提取液的浓缩方法
PL3009010T3 (pl) 2011-12-19 2020-10-19 Purecircle Sdn Bhd Sposoby oczyszczania glikozydów stewiolowych
BR112015014876B1 (pt) 2012-12-19 2020-11-03 Purecircle Sdn Bhd rebaudiosídeo x amorfo, composição edulcorante compreendendo o dito rebaudiosídeo x, método para preparar o rebaudiosídeo x amorfo e método para preparar uma bebida
EP2986149B1 (en) 2013-03-15 2019-08-21 The Coca-Cola Company Novel glucosyl steviol glycosides, their compositions and their purification
CN105283464B (zh) 2013-03-15 2018-02-13 可口可乐公司 甜菊醇糖苷、其组合物以及其纯化
EP3683315A1 (en) 2014-08-19 2020-07-22 Purecircle SDN BHD Method for preparing rebaudioside m
BR112017004240B1 (pt) 2014-09-02 2022-04-05 The Coca-Cola Company Processo para preparar uma composição de glicosídeo de esteviol aquoso não tratado, extrato de stevia aquoso não tratado preparado pelo referido processo e alimento ou bebida
EP3223609B1 (en) 2014-11-29 2021-08-25 The Coca-Cola Company Novel diterpene glycosides, compositions and purification methods
EP3340807A4 (en) 2015-08-27 2019-05-08 PureCircle SDN BHD STEVIA EXTRACTS
EP3766362B1 (en) 2015-10-02 2022-12-28 The Coca-Cola Company Method of production of steviol glycoside sweeteners with improved flavor profiles
WO2017172766A1 (en) 2016-03-28 2017-10-05 The Coca-Cola Company Sweetness and taste improvement of steviol glycoside or mogroside sweeteners with flavonids
AU2017246876B2 (en) 2016-04-06 2021-09-23 The Coca-Cola Company Sweetness and taste improvement of steviol glycoside or mogroside sweeteners
EP3547850B1 (en) 2016-12-01 2024-05-15 PureCircle USA Inc. Stevia plant and uses thereof
AU2019263007A1 (en) 2018-04-30 2020-12-03 The Coca-Cola Company Methods for improving the solubility of steviol glycoside mixtures, and uses
MX2022003500A (es) 2019-09-27 2022-07-12 Coca Cola Co Mezclas de edulcorantes con sabor mejorado.
CN110702843B (zh) * 2019-09-30 2022-05-17 东莞微领生物科技有限公司 无患子皂苷标准品的非标定量测定试剂盒及测定方法
KR20240046918A (ko) 2021-09-01 2024-04-11 더 코카콜라 컴파니 카페인 및/또는 이의 유도체 및 폴리페놀을 포함하는 조성물 및 방법

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6136225A (ja) * 1984-07-30 1986-02-20 Airin:Kk サポニン類の単離法
JPH0436242A (ja) * 1990-05-30 1992-02-06 Fuji Oil Co Ltd 大豆サポニンの製造法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61129134A (ja) * 1984-11-28 1986-06-17 Airin:Kk 大豆よりのサポニンの精製法
JPS625917A (ja) * 1985-07-03 1987-01-12 Airin:Kk 大豆胚芽よりのイソフラボン類を含有しないサポニンの製造法
JPH08283283A (ja) * 1995-04-14 1996-10-29 Kikkoman Corp マロニルイソフラボン配糖体及び該物質からイソフラボン配糖体又はイソフラボンアグリコンを取得する方法
US6033714A (en) * 1996-03-13 2000-03-07 Archer Daniels Midland Company Process for production of isoflavone fractions from soy

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6136225A (ja) * 1984-07-30 1986-02-20 Airin:Kk サポニン類の単離法
JPH0436242A (ja) * 1990-05-30 1992-02-06 Fuji Oil Co Ltd 大豆サポニンの製造法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GRIFFITH AARON P. ET AL.: "Improved methods for the extraction and analysis of isoflavones from soy-containing food and nutritional supplements by reversed-phase high-performance liquid chromatography and liquid chromatography-mass spectrometry", J. CHROMATOGRAPHY A, vol. 913, 2001, pages 397 - 413, XP004232806 *
MAKOTO SHIMOYAMADA ET AL.: "Partition of soybean saponins between butanol and water", FOOD SCI. TECHNOL. INT., vol. 1, no. 2, 1995, pages 112 - 114, XP002969475 *
MAKOTO SHIMOYAMADA ET AL.: "Solubilities of soybean saponins and their solubilization with a bisdesmoside saponin", NIPPON SHOKUHN KOGYO GAKKAISHI, vol. 40, no. 3, 1993, pages 210 - 213, XP002969474 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006094747A (ja) * 2004-09-29 2006-04-13 Ajinomoto Co Inc 抗肥満作用を有する組成物及び飲食品
JP2006124324A (ja) * 2004-10-28 2006-05-18 J-Oil Mills Inc 高純度大豆サポニンの製造方法
JP4632024B2 (ja) * 2004-10-28 2011-02-16 株式会社Ｊ−オイルミルズ 高純度大豆サポニンの製造方法
JP2011126835A (ja) * 2009-12-19 2011-06-30 Fuji Oil Co Ltd サポニンの製造法
JP2011195541A (ja) * 2010-03-23 2011-10-06 Fuji Oil Co Ltd グループｂサポニンの製造法
WO2013001890A1 (ja) 2011-06-28 2013-01-03 株式会社Ｊ－オイルミルズ ソーヤサポゲノール組成物
JP2018538286A (ja) * 2015-11-25 2018-12-27 ナチュラル レスポンス、エセ．ア．Ｎａｔｕｒａｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ， Ｓ．Ａ． 植物からサポニンを得る方法
JP7120921B2 (ja) 2015-11-25 2022-08-17 ナチュラル レスポンス、エセ．ア． 植物からサポニンを得る方法
US11510954B2 (en) 2015-11-25 2022-11-29 Desert King Chile S.A. Method for obtaining saponins from plants

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