UA81219C2 - Device for differentiation of assymetric particles - Google Patents
Device for differentiation of assymetric particles Download PDFInfo
- Publication number
- UA81219C2 UA81219C2 UA2002129791A UA2002129791A UA81219C2 UA 81219 C2 UA81219 C2 UA 81219C2 UA 2002129791 A UA2002129791 A UA 2002129791A UA 2002129791 A UA2002129791 A UA 2002129791A UA 81219 C2 UA81219 C2 UA 81219C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- per
- differentiating
- asymmetric particles
- chromosomes
- probable
- Prior art date
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 94
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 143
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 74
- 210000001766 X chromosome Anatomy 0.000 claims abstract description 72
- 210000002593 Y chromosome Anatomy 0.000 claims abstract description 52
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 38
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 37
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 23
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 17
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 13
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 9
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 34
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 27
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 25
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 22
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 17
- 238000013461 design Methods 0.000 description 15
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 13
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 12
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 12
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 description 11
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 9
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 6
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920005439 Perspex® Polymers 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 5
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 4
- 239000012780 transparent material Substances 0.000 description 4
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 3
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 3
- 241000692885 Nymphalis antiopa Species 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 2
- 240000008100 Brassica rapa Species 0.000 description 2
- 235000000540 Brassica rapa subsp rapa Nutrition 0.000 description 2
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000283080 Proboscidea <mammal> Species 0.000 description 2
- 241000159610 Roya <green alga> Species 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 2
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 2
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- FDSYTWVNUJTPMA-UHFFFAOYSA-N 2-[3,9-bis(carboxymethyl)-3,6,9,15-tetrazabicyclo[9.3.1]pentadeca-1(15),11,13-trien-6-yl]acetic acid Chemical compound C1N(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC2=CC=CC1=N2 FDSYTWVNUJTPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYFYSTBFFDOVJW-UHFFFAOYSA-L 2-[4-[4-(3,5-diphenyltetrazol-2-ium-2-yl)phenyl]phenyl]-3,5-diphenyltetrazol-2-ium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC(=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 WYFYSTBFFDOVJW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- 244000257727 Allium fistulosum Species 0.000 description 1
- 235000008553 Allium fistulosum Nutrition 0.000 description 1
- 241001116389 Aloe Species 0.000 description 1
- 235000003913 Coccoloba uvifera Nutrition 0.000 description 1
- 101100460157 Drosophila melanogaster nenya gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000538132 Moya Species 0.000 description 1
- 101100049053 Mus musculus Vash1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000007256 Nevus Diseases 0.000 description 1
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 1
- 241001387976 Pera Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 240000008976 Pterocarpus marsupium Species 0.000 description 1
- 241000269435 Rana <genus> Species 0.000 description 1
- 241001582326 Renia Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 241001424341 Tara spinosa Species 0.000 description 1
- 241001178076 Zaga Species 0.000 description 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 101150099047 apip gene Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 208000019258 ear infection Diseases 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 229940082150 encore Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000010363 phase shift Effects 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000979 retarding effect Effects 0.000 description 1
- 238000000682 scanning probe acoustic microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 1
- 230000001755 vocal effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6879—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for sex determination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61D—VETERINARY INSTRUMENTS, IMPLEMENTS, TOOLS, OR METHODS
- A61D19/00—Instruments or methods for reproduction or fertilisation
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03B—SEPARATING SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS
- B03B9/00—General arrangement of separating plant, e.g. flow sheets
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0608—Germ cells
- C12N5/061—Sperm cells, spermatogonia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0608—Germ cells
- C12N5/0612—Germ cells sorting of gametes, e.g. according to sex or motility
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01F—MEASURING VOLUME, VOLUME FLOW, MASS FLOW OR LIQUID LEVEL; METERING BY VOLUME
- G01F17/00—Methods or apparatus for determining the capacity of containers or cavities, or the volume of solid bodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1468—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry with spatial resolution of the texture or inner structure of the particle
- G01N15/147—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry with spatial resolution of the texture or inner structure of the particle the analysis being performed on a sample stream
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/149—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry specially adapted for sorting particles, e.g. by their size or optical properties
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pathology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Fluid Mechanics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Description
Винахід стосується виділення популяцій сперматозоїдів високої чистоти з Х-хромосомами або
У-хромосомами і технологій виділення сперматозоїдів, частинок, або ж подій, що грунтуються на таких характеристиках диференціювання, як маса, об'єм, вміст ДНК тощо.
Виділення популяцій сперматозоїдів високої чистоти з Х-хромосомами або уУ-хромосомами можна використовувати для виконання іп міго або іп мімо штучного запліднення овацитів або ооцитів численних видів ссавців, наприклад, порожнисторогих, коней, овець, кіз, свиней, собак, котів, верблюдів, слонів, великої рогатої худоби, буйволів тощо |див. також патент США 5,135,759, що його включено в цей опис шляхом посилання).
Проте в результаті застосування стандартних технологій розділення сперматозоїдів на популяції з Х-хромосомами і М-хромосомами зазвичай одержують популяції сперматозоїдів низької чистоти. Незалежно від способу розділення, сперматозоїди не вдавалося на регулярній основі розділяти на зразки сперми з Х-хромосомами і У-хромосомами високої чистоти, такої як 9095, 9595 або більше за 95965,
Численні технології, котрі безпосередньо або опосередковано грунтуються на різниці в розмірі, масі або густині, було описано у зв'язку з відділенням сперматозоїдів з Х-хромосомами від сперматозоїдів з Х-хромосомами. Як |описано в патенті США Ме4,474,875), до всіх клітин сперми одночасно прикладають виштовхувальну силу, після чого сперматозоїди з Х-хромосомами і сперматозоїди з У-хромосомами виділяють в різних зонах локалізації розділюваного середовища. В |патенті США Мое5,514,537 | описано технологію, за допомогою якої сперматозоїди перетинають колону, упаковану кульками двох розмірів. Сперматозоїди більшого розміру з Х- хромосомами виділяються в шарі з кульками більшого розміру, у той час як сперматозоїди меншого розміру з У-хромосомами виділяються в шарі з кульками меншого розміру. У Іпатенті
США Мо4,605,558| описано, що сперматозоїди роблять диференційованим чином чутливими до градієнта густини, а в (патенті США Мо4,009,2601 використано різницю у швидкостях міграції (або у швидкостях плавання) між сперматозоїдами з МУ-хромосомами і сперматозоїдами з хХ- хромосомами через колону з уповільнюючим середовищем.
Спільною проблемою для всіх зазначених технологій є те, що кожна з них передбачає оброблення всіх сперматозоїдів "в масі" тобто всі сперматозоїди піддають однаковому обробленню одночасно, а клітини сперми з М-хромосомами виходять швидше, раніше або в іншому положенні, ніж клітини сперми з Х-хромосомами. По суті конкретні клітини сперми не піддають кількісному аналізу і фактично не виконують "вимірювання" об'єму, маси, густини або інших характеристик клітин сперми. Індивідуальна кількісна оцінка клітин сперми гарантує переваги в тому розумінні що з'являється можливість контролювати фактичний процес розділення і що об'єктивні кількісні дані формуються навіть в процесі розділення, причому параметри розділення змінюють за бажанням. Крім того, такі технології не пов'язуються з проточними пристроями для сортування клітин.
Також було описано технології розділення сперматозоїдів з використанням проточних цитометрів. За допомогою таких технологій сперматозоїди забарвлюють флуорохромом і "змушують" плисти у вигляді вузького струменя або смуги, що їх піддають впливу джерела збудження або опромінення (наприклад, лазерного променя). Коли забарвлені частинки або клітини проходять через джерело збудження або опромінювання, флуорохром генерує люмінесцентне випромінювання. Люмінесцентне випромінювання збирається системою оптичних лінз, фокусується в детекторі, наприклад, у фотоелектронному помножувачі, которий генерує і помножує електронний сигнал, що його після цього аналізують за допомогою аналізатора. Далі дані відображаються як хроматограми або гістограми з множинним або окремим параметром.
Кількість клітин та величину потоку флуоресценції на 1 клітину використовують як координати див. патент США Мое5,135,759|), що його включено в цей опис шляхом посилання). Проте у разі застосування технології такого типу багато проблем залишаються нерозв'язаними, і виділення популяції клітин сперми високої чистоти з Х-хромосомами або з У-хромосомами є доволі важкою справою.
Серйозною проблемою щодо стандартних технологій з використанням проточного цитометра є орієнтування об'єктів, частинок або клітин в обволікаючому рідинному потоці. Це є особливо проблематичним, коли об'єкт або клітина мають неправильну форму відносно декількох осей, що спостерігається, наприклад, у сперматозоїдів. Одним із аспектів цієї проблеми є встановлення початкового орієнтування об'єкта усередині обволікаючого рідинного потоку. Другим аспектом цієї проблеми є збереження орієнтування об'єкта відносно детектора (фотоелектронного помножувача або ін.) під час вимірювання випромінюваного від об'єкта світла.
Іншою серйозною проблемою щодо стандартних технологій на базі використання проточного цитометра є неможливість інкапсулювати об'єкти або клітини в краплинці рідини. Зокрема, коли краплинки утворюються навколо об'єктів неправильної форми, розміри краплинки можуть виявитися недостатніми для охоплення всіх характеристик об'єктів або клітин. Наприклад, під час виконання описаної вище операції проточної цитометрії краплинки утворюються на дуже великій швидкості, навіть на швидкості від 10000 до 90000 краплинок на секунду, а в деяких варіантах застосування - на швидкості 80000 краплинок на секунду. Коли сперматозоїди інкапсулюють в краплинках (особливо при таких високих швидкостях), частина хвістка або шийки не інкапсулюється. Ця частина хвістка або шийки, яка не інкапсулюється в краплинці, далі реагує на вплив поверхні сопла або ж реагує на середовище навколо краплинки у такий спосіб, що заважає подальшому формуванню краплинки або належному її відхиленню. Внаслідок цього деякі сперматозоїди неможливо аналізувати взагалі (що зменшує ефективність процедури), або ж неможливо з достатнім ступенем розділити для призначення в популяцію, або ж вони відхиляються по невірних траєкторіях, або ж має місце комбінація всіх цих проблем.
Ще однією серйозною проблемою щодо стандартних технологій на базі використання проточного цитометра (а також інших технологій) є збіг імовірних подій вимірювання. Один аспект цієї проблеми полягає в тому, що потік падаючого світла з першої події продовжує продукувати сигнали після того, як потік падаючого світла з другої події починає генерувати сигнал. По суті дві події залишаються принаймні частково не відділеними одна від одної. Інший аспект цієї проблеми полягає в тому, що одночасно ініціюються дві або більше подій, і у формуванні характеристик потоку падаючого світла беруть участь всі події По суті численні події не розділяються взагалі, і об'єкти, що відповідають численним подіям, невірно призначаються до певної популяції або не призначаються до жодної популяції взагалі (або ж спостерігаються обидва явища). Зокрема щодо проточної цитометрії, окремі частинки, об'єкти, клітини або сперматозоїди в потоці суспензії проходять крізь промінь світла, з яким вони взаємодіють з вимірною реакцією (наприклад, крізь люмінесцентне випромінювання). У стандартній проточній цитометрії забарвлені препаратом
Ноесниві сперматозоїди перетинають лазерний промінь, що призводить до люмінесцентного світлового випромінювання. Люмінесцентне світлове випромінювання від збудженого зв'язаного з
ДНК флуорохрому є достатньо яскравим для створення потоку електронів у стандартних фотоелектронних помножувачах протягом періоду часу після закінчення фактичної події випромінювання. Крім того, у стандартному проточному цитометрі лазерний промінь характеризується такими параметрами, як висота ЗОмкм при ширині близько 8О0мкм. Ядро сперматозоїдів ВРХ Івеликої рогатої худоби|, що містять зв'язану з флуорохромом ДНК, має довжину близько Умкм, через що висота лазерного променя є приблизно в три (3) раза більшою за ядро. Така різниця робить можливим одночасне лазерне збудження зв'язаного флуорохрому в декількох сперматозоїдах усередині лазерного променя. Кожна із цих проблем стандартної проточної цитометрії ускладнює відділення окремих подій одна від одної.
Інша серйозна проблема щодо стандартних технологій проточної цитометрії (як і інших технологій) полягає в тому, що об'єкти неправильної форми, наприклад, сперматозоїди, генерують різні сигнали (за формою, тривалістю або кількістю), залежно до їх орієнтування усередині шляху збудження/детектування. По суті окремі об'єкти усередині гомогенної популяції генерують широкий спектр характеристик випромінювання, котрі перекриваються з характеристиками випромінювання окремих об'єктів з іншої гомогенної популяції, що призводить до позбування або зменшення можливості розділення окремих об'єктів таких двох популяцій.
Інша серйозна проблема щодо стандартних технологій проточної цитометрії (як і інших технологій) полягає в тому, що вплив джерела збудження на об'єкти не є рівномірним.
Стандартна променеформувальна оптика (реат зПаріпод оріїсз - В5О0) не забезпечує рівномірного впливу лазерного світла, коли об'єкти знаходяться поблизу периферійної зони променя.
Інша серйозна проблема щодо стандартних технологій проточної цитометрії полягає в тому, що об'єкти (такі як, сперматозоїди) зазнають впливу джерела збудження протягом надмірно довгих періодів часу. Опромінювання клітин (таких як, сперматозоїди) лазерним світлом призводить до пошкодження клітин або до пошкодження ДНК усередині цих клітин.
Інша серйозна проблема щодо стандартних технологій проточної цитометрії полягає в тому, що усередині сопла спостерігається руйнування ламінарного потоку трубкою для нагнітання.
Руйнування ламінарного потоку змінює орієнтування об'єктів неправильної форми усередині потоку і знижує швидкість сортування та чистоту сортованих популяцій сперми з Х-хромосомами або сперматозоїдів з У-хромосомами.
Існують додаткові проблеми щодо технологій, в яких використовують барвники, зв'язані з ядерною ДНК клітин сперми. По-перше, через високий ступінь конденсованості ДНК у ядрі та її плоску форму, стехіометричне забарвлювання ДНК є утрудненим або неможливим. По-друге, забарвлені ядра характеризуються високим коефіцієнтом заломлення. По-третє, барвник, зв'язаний з ДНК з утворенням комплексу "ДНК-барвник", зменшує коефіцієнт запліднення або життєздатність відповідних ембріонів. По-четверте, комплекс "ДНК-барвник" зазвичай опромінюють УФ-випромінюванням, що викликає флуоресценцію барвника. Таке опромінювання впливає на життєздатність сперматозоїдів. Через ці проблеми перевагу віддають застосуванню способу, котрий потребує малу кількість барвника або зовсім не потребує його, або ж потребує малу кількість УФ-випромінювання або зовсім не потребує його, або ж потребує малу кількість і того і іншого або зовсім не потребує ні того ні іншого.
Щодо створення зразків високої чистоти популяцій клітин сперми з Х-хромосомами або з У- хромосомами (живих, фіксованих, життєздатних, нежиттєздатних, неушкоджених, без хвістків або у вигляді ядра), або ж загалом щодо виявлення незначної різниці у фотогенерованому сигналі між послідовними подіями, котрі характеризуються відносно інтенсивним потоком падаючого світла, або ж щодо орієнтування об'єктів неправильної форми у потоці рідини, або ж щодо виключення збіжних подій в межах оптичного шляху або видалення неналежним чином орієнтованих об'єктів з аналізу, цей винахід стосується практично кожної із зазначених проблем.
Задача винаходу в широкому розумінні полягає в одержанні виділених популяцій сперматозоїдів високої чистоти з Х-хромосомами та з У-хромосомами. Виділені штучно популяції сперматозоїдів високої чистоти застосовують у багатьох аспектах, включаючи вибір статі потомства ссавців, різноманітні протоколи іп міо для запліднення овацитів, різноманітні протоколи іп мімо, наприклад, штучного запліднення, комерційні технології, у тому числі виведення призових тварин або м'ясних тварин, або ж збереження рідкісних або вимираючих тварин; це лише декілька прикладів застосування популяцій сперматозоїдів високої чистоти.
Інша задача винаходу в широкому її розумінні охоплює пристрої та способи одержання зразків сперми високої чистоти з Х-хромосомами та уУ-хромосомами.
Описано конкретні варіанти реалізації винаходу, котрі використовують в численних зазначених вище варіантах застосування, які дозволяють одержувати конкретні об'єкти диференціювання яскравих фотоемісійних подій з незначною вимірною різницею у сумарному світловому потоці, орієнтувати об'єкти неправильної форми у потоці рідини, мінімізувати ймовірність збіжних подій усередині оптичного шляху, видаляти сигнал, зумовлений непотрібними неорієнтованими об'єктами усередині оптичного шляху (у тому числі видаляти власне сам об'єкт), а також інкапсулювати об'єкти неправильної форми в краплинці. По суті конкретні об'єкти винаходу є доволі різноманітними.
Інша задача винаходу в широкому її розумінні полягає в одержанні зразків сперматозоїдів з Х- хромосомами або з МУ-хромосомами (живих, фіксованих, життєздатних, нежиттєздатних, неушкоджених, без хвістків або у вигляді ядра клітини сперми) з градуйованим рівнем високої чистоти в інтервалі значень 8095, 8595, 9095, 9595 або навіть більше за 95905.
Інша важлива задача конкретних варіантів реалізації винаходу полягає у сортуванні сперматозоїдів на популяції з Х-хромосомами і популяції з М-хромосомами, котрі характеризуються високою чистотою навіть при високих швидкостях розділення. Високошвидкісне розділення дозволяє одержувати живу сперму для кожної статі із швидкістю 500, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000 і навіть 10000 операцій розділення на секунду і більше.
Інша важлива задача конкретних варіантів реалізації винаходу полягає у практичному виключенні з аналізу або видаленні сперматозоїдів (живих, фіксованих, життєздатних, нежиттєздатних, неушкоджених, без хвістків або у вигляді ядра клітини сперми) з неналежним орієнтуванням у відповідальній за збудження/детектування частині шляху потоку в проточному цитометрі.
Інша важлива задача конкретних варіантів реалізації винаходу полягає в одержанні зразків штучного запліднення з використанням сперматозоїдів з Х-хромосомами або з у-хромосомами, котрі характеризуються високим рівнем чистоти.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є одержання зразків запліднення іп міо з використанням сперматозоїдів з Х-хромосомами або з У-хромосомами, котрі характеризуються високим рівнем чистоти.
Іншою важливою задачею конкретного варіанта реалізації винаходу є попередній вибір статі потомства самиць, запліднених зразками штучного запліднення високої чистоти, причому стать потомства з овацитів, запліднених зразками штучного запліднення високої чистоти, встановлюється з коефіцієнтами успішності вибору 8095, 85905, 9095, 9590 або більше за 95905.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є диференціація фотоемісійних подій з незначною різницею у сумарному випромінюваному світловому потоці.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є фактичне виключення або зменшення рівня фонових шумів, генерованих фотоелектронним помножувачем (навіть при відсутності світла), протягом періоду після зазнання впливу інтенсивного потоку падаючого світла.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є фактичне виключення насичення фотокатода фотоелектронного помножувача(-чів), що його застосовують у зв'язку з проточною цитометрією і т.п.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є зменшення кількості електронів, котрі мігрують від фотокатода фотоелектронного помножувача до першого диноду.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є зменшення сумарного потоку електронів в напрямку до електроду М фотоелектронного помножувача.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є збільшення світлового потоку в напрямку до фотокатода фотоелектронного помножувача без пропорційного зростання рівня фонового сигналу, генерованого фотоелектронним помножувачем.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є зростання рівня сигналу до одержання коефіцієнта фонового сигналу з вимірюваних фотоемісійних подій.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є забезпечення можливості зростання підсилення сигналу, генерованого з фотоелектронного помножувача, протягом періоду перебігу подій, пов'язаних з інтенсивним потоком падаючого світла, або протягом періоду перебігу послідовних подій, пов'язаних з інтенсивним потоком падаючого світла, без насичення фотокатода фотоелектронного помножувача.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є підвищення уявної роздільної здатності хроматограм або гістограм, одержуваних в результаті сортування забарвленої флуорохромом сперми, інших клітин або інших об'єктів, котрі характеризуються незначною різницею у випромінюваному світловому потоці при збудженні зв'язаного флуорохрому(-мів).
Інша важлива задача конкретних варіантів реалізації винаходу полягає в удосконаленні калібрування сортувальних проточних цитометрів при застосуванні їх для сортування сперматозоїдів.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є збільшення швидкості сортування сперми в системах проточних цитометрів.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є збільшення чистоти зразків сперми, сортованих за допомогою проточної цитометрії.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є створення способів відсортування клітин сперми з Х-хромосомами від клітин сперми з У-хромосомами у тих випадках, коли має місце незначна різниця між кількістю ДНК в У-хромосомах і кількістю ДНК в хХ- хромосомах відносно сумарної кількості ядерної ДНК.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є створення способів, котрі дозволяють підвищити уявну роздільну здатність гістограм, одержуваних в процесі відсортування клітин сперми з Х-хромосомами від клітин сперми з У-хромосомами за допомогою проточного цитометра.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є створення променеформувальної оптичної системи, котра дозволяє мінімізувати збіжність об'єктів усередині шляху збудження/детектування.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є створення, променеформувальної оптичної системи, котра дозволяє мінімізувати сумарний світловий потік (у люменах), впливу якого зазнає об'єкт під час перетинання ним збуджуючого променя. Одним із аспектов цієї задачі є зменшення сумарного світлового потоку (у люменах), впливу якого зазнає об'єкт. Другим аспектом цієї задачі є збільшення потужності джерела світла без збільшення сумарного світлового потоку (у люменах), впливу котрого зазнає об'єкт.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є створення променеформувальної оптичної системи, котра дозволяє забезпечити рівномірний вплив променя на об'єкти, що проходять через оптичний шлях.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є створення сопла, котре дозволяє орієнтувати об'єкти неправильної форми в потоці рідини. Одним із аспектів цієї задачі є орієнтування видовжених об'єктів в єдиному напрямку. Другим аспектом цієї задачі є орієнтування дорсально-латерально сплющених об'єктів в єдиному напрямку.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є повне інкапсулювання об'єктів неправильної форми усередині краплини рідини.
Іншою важливою задачею конкретних варіантів реалізації винаходу є диференціювання неналежним чином орієнтованих об'єктів і належним чином орієнтованих об'єктів у потоці рідини.
Іншою задачею варіанта реалізації винаходу є створення технології забезпечення диференційної контрастності інтерференції, завдяки котрій площина об'єктів відповідає потоку рідини з потрібними об'єктами, а площину зображення використовують для вимірювання сигналу, котрий надходить від об'єктів, що проходять через систему.
Іншою задачею варіанта реалізації винаходу є застосування оптичної системи, за допомогою якої створюють два розділених у латеральному напрямку зображення від кожного об'єкта, причому у такий спосіб, що одне використовують для вимірювання фактичного об'єму, а друге - для визначення орієнтування. У такий спосіб вибраковують об'єкти, котрі не були належним чином орієнтованими для точного вимірювання їх об'єму. Таку операцію виконують за допомогою трасформування, причому з таким розрахунком, що світлові імпульси від таких двох зображень можна незалежно детектувати з використанням двох мікроканалів у площині зображення.
Оптичну систему повертають у такий спосіб, що перше зображення ініціює світловий імпульс, пропорційний об'ємові об'єкта, а друге зображення ініціює світловий імпульс, який залежить від орієнтування об'єкта під час його вимірювання.
Іншою задачею варіанта реалізації винаходу є створення способу компенсування знаходження об'єктів усередині потоку рідини. Потік рідини являє собою водяний циліндр, котрий функціонує, наприклад, як циліндрична лінза, отже спотворюючи зображення об'єкта. З погляду на оптичні властивості, такий ефект відповідає циліндру з більш високим коефіцієнтом заломлення (вода), ніж оточуюче його середовище (повітря) Описане в цьому винаході компенсування полягає, наприклад, у застосуванні циліндра з коефіцієнтом заломлення, нижчим за коефіцієнт заломлення оточуючого його середовища, хоча при необхідності застосовують інші компенсуючі елементи різних форм і з різними коефіцієнтами заломлення. Шляхом гарантованого забезпечення проходження світла через такий компенсуючий елемент, оптичний ефект потоку рідини компенсують за рахунок прямо протилежної характеристики цього компенсуючого елемента.
Додаткові задачі цього винаходу описано в інших розділах опису і в пунктах формули винаходу.
На Фіг.1 показано узагальнений варіант проточного цитометра.
На Фіг.2 показано другий вид узагальненого варіанта проточного цитометра.
На Фіг.3 відображено зіставлення одновимірних гістограм по результатах функціонування проточних цитометрів (Мої, Ме2 та МеЗ3) без підсилювача цього винаходу (Фіг.ЗА) з одновимірними гістограмами для тих же самих проточних цитометрів, в котрих використовують конкретний варіант реалізації підсилення цього винаходу (Фіг.3Б); таке порівняння ілюструє удосконалене розділення популяцій сперматозоїдів ВРХ з Х-хромосомами і популяцій сперматозоїдів ВРХ з У- хромосомами.
На Фіг.4 показано одновимірні та двовимірні гістограми, котрі ілюструють стандартне розділення популяцій сперматозоїдів ВРХ з Х-хромосомами і популяцій сперматозоїдів ВРХ з У- хромосомами.
На Фіг.5 показано одновимірні та двовимірні гістограми, котрі ілюструють удосконалене розділення популяцій сперматозоїдів ВРХ з Х-хромосомами і популяцій сперматозоїдів ВРХ з У- хромосомами із застосуванням конкретного варіанта реалізації підсилення цього винаходу.
На Фіг.б показано другий приклад одновимірних та двовимірних гістограм, котрі ілюструють стандартне розділення популяцій сперматозоїдів ВРХ з Х-хромосомами і популяцій сперматозоїдів ВРХ з У-хромосомами.
На Фіг.7 показано другий приклад одновимірних та двовимірних гістограм, котрі ілюструють удосконалене розділення популяцій сперматозоїдів ВРХ з Х-хромосомами і популяцій сперматозоїдів ВРХ з У-хромосомами із застосуванням конфетного варіанта реалізації підсилення цього винаходу.
На Фіг.8 показано одновимірні та двовимірні гістограми, котрі ілюструють стандартне розділення популяцій кінських сперматозоїдів з Х-хромосомами і популяцій кінських сперматозоїдів з У-хромосомами.
На Фіг.9 показано одновимірні та двовимірні гістограми, котрі ілюструють удосконалене розділення популяцій кінських сперматозоїдів з Х-хромосомами і популяцій кінських сперматозоїдів з М-хромосомами із застосуванням конкретного варіанта реалізації підсилення цього винаходу.
На Фіг.10 показано одновимірні та двовимірні гістограми, котрі ілюструють удосконалене розкладення на популяції ядер кінських сперматозоїдів з Х-хромосомами і У-хромосомами із застосуванням конкретного варіанта реалізації підсилення цього винаходу.
На Фіг.11 показано конкретний варіант реалізації модифікованої монтажної плати, котра дозволяє застосувати підсилення цього винаходу щодо проточного цитометра МоРіо?,
На Фіг.12 показано принципіальну електричну схему конкретного варіанта реалізації підсилення цього винаходу щодо проточного цитометра МоРіо?.
На Фіг.13 показано форму лазерного променя, створювану із застосуванням стандартної променеформувальної оптичної системи (Фіг1ЗА) а також форму лазерного променя, створювану за допомогою променеформувальної оптичної системи із зменшеною висотою променя (Фіг.13Б).
На Ффіг.14 показано діаграму, котра дозволяє порівняти чистоту сперматозоїдів з Х- хромосомами (Ффіг.14А) і сперматозоїдів з У-хромосомами (Ффіг.14Б), розділених за допомогою стандартної технології або за допомогою підсилення цього винаходу незалежно або разом із променеформувальною оптикою із зменшеною висотою променя.
На Фіг.15 показано вид спереду променеформувальної оптики із зменшеною висотою променя.
На Фіг.16 показано вид зверху променеформувальної оптики із зменшеною висотою променя.
На Ффіг.17 зображені аксонометрична перспектива і два поперечні перерізи призначеного для орієнтування об'єктів сопла цього винаходу.
На Фіг.18 показано градуйовану послідовність поперечних перерізів призначеного для орієнтування об'єктів сопла цього винаходу.
На Фіг.19 показано вид спереду і вид з торця варіанта реалізації призначеної для нагнітання скошеної трубки цього винаходу.
На Ффіг.20 показано застосовуване за цим винаходом видалення непотрібних неорієнтованих сперматозоїдів (ВШО5) шляхом зіставлення сигналу(-лів) від орієнтованих сперматозоїдів (Фіг.20А та 20Б) і сигналу(-лів) від неорієнтованих сперматозоїдів (Фіг.208 та 20Г).
На Фіг.21 показано аксонометричну перспективу іншого варіанта реалізації призначеної для нагнітання скошеної трубки цього винаходу з лопатеподібним скошеним елементом.
На Ффіг.22 відображено стандартну технологію застосування оптичної системи у зв'язку з використанням проточного цитометра.
На Фіг.23А показано форму та розміри типового сперматозоїду, а на Фіг.23Б показано різницю між вірно орієнтованими сперматозоїдами і невірно орієнтованими сперматозоїдами.
На Ффіг.24 показано варіант реалізації винаходу, конструкція якого дозволяє виконувати вимірювання двох сигналів, що відповідають, наприклад, об'єму та орієнтуванню.
На Фіг.25А та 25Б показано варіант реалізації винаходу, конструкція якого складається з двох половинок з мікроканалом, що відповідає кожній із цих половинок. На Фіг.258 показано площину зображення варіанта реалізації винаходу. На Фіг.25Г показано варіант реалізації винаходу з двома здатними незалежно обертатися поляризаторами.
На Фіг.2б6А та 26Б відображено спосіб компенсації впливу потоку рідини для одного із варіантів реалізації винаходу. На Фіг.268 показано варіант реалізації компенсуючого елемента; на
Фіг.26Г показано інший варіант реалізації компенсуючого елемента, де зображення потоку рідини і компенсуючого елемента виявляються у площині зображення одне поверх одного.
На Фіг.27 показано варіант реалізації інтерференційної оптики цього винаходу.
На Фіг.28 показано другий вид інтерференційної оптики цього винаходу.
Винахід охоплює виділення популяцій сперматозоїдів або клітин сперми високої чистоти з Х- хромосомами та У-хромосомами. Популяції сперматозоїдів високої чистоти з Х-хромосомами та
У-хромосомами містять популяції неушкоджених живих сперматозоїдів, а також можуть містити популяції сперматозоїдів без хвістків (ядра клітин сперми) або ж -при необхідності - популяції інших життєздатних або нежиттєздатних форм сперматозоїдів. Хоча у наведених конкретних прикладах винахід описано в контексті відділення неушкоджених живих клітин сперми, кожна з яких має головку, шийку та хвісток, слід розуміти, що описані технології також передбачають різні варіанти застосування щодо ядер клітин сперми. Крім того, слід розуміти, що популяції сперматозоїдів з Х-хромосомами та у-хромосомами охоплюють сперматозоїди будь-якого самця певного виду ссавців, включаючи, крім іншого, людські сперматозоїди і сперматозоїди загальновідомих тварин, наприклад, порожнисторогих, коней, овець, собак, котів, козлів та кабанів, а також менш звичних тварин, наприклад, слонів, зебр, верблюдів та куду. Цей перелік є прикладом широкого розмаїття тварин, сперматозоїди котрих можна в запланованому порядку сортувати з чистотою не. нижче 9095, але ж цим переліком опис винаходу стосовно сперматозоїдів будь-якого конкретного виду ссавців не обмежується.
Виділені сперматозоїди високої чистоти від ссавців різних видів включають до складу препаратів, що їх використовують при виконанні протоколів штучного запліднення або як складову частину засобів в рамках реалізації комерційних способів, описаних, наприклад, у заявках на (патенти США МоМоб0/211,093, 60/224,050 або в заявці РСТ/О599/17165), або ж використовують при виконанні протоколів штучного запліднення з використанням малих доз, описаних у |заявці
РСТ/О598/27909|, або ж використовують для запліднення іп міо ооцитів тварин, у тому числі людей, як описано в заявці на |(патент США Моб0/253,785), кожну з яких включено в опис цього винаходу шляхом посилання.
Під терміном "чистота" або "висока чистота" слід розуміти кількість у відсотках виділеної популяції сперматозоїдів з конкретною диференціюючою характеристикою або потрібною комбінацією характеристик. Наприклад, якщо популяцію сперматозоїдів виділяють залежно до вмісту Х-хромосом (але не вмісту У-хромосом), популяція з Х-хромосомами з чистотою 90905 являє собою популяцію сперматозоїдів, в котрій 9095 окремих сперматозоїдів містять Х-хромосоми, у той час як 1095 такої популяції сперматозоїдів можуть містити У-хромосоми. По суті поняття "висока чистота" стосовно популяцій з Х-хромосомами або популяцій з М-хромосомами означає значення чистоти, що його вибирають з групи таких інтервалів значень, як від 9095 до близько 10095, від близько 9195 до близько 10095, від близько 9295 до близько 10095, від близько 9395 до близько 10095, від близько 9495 до близько 10095, від близько 9595 до близько 10095, від близько 9695 до близько 10095, від близько 9795 до близько 10095, від близько 9895 до близько 10095 та від близько 9995 до близько 10095.
Автори зауважують, що хоча у численних варіантах реалізації винаходу описано виділення популяцій сперматозоїдів високої чистоти з Х-хромосомами і з У-хромосомами і хоча в цьому описі додатково розкрито по суті пристрої для виділення сперматозоїдів високої чистоти, а також способи виділення і використання виділених популяцій сперматозоїдів високої чистоти, слід розуміти, що фундаментальні поняття винаходу можна застосовувати і до інших типів частинок або подій з відповідними характеристиками диференціювання частинок або з характеристиками диференціювання власне подій. Слід розуміти, що цей винахід можна застосовувати за багатьох різноманітних обставин, за яких виникає потреба у визначенні незначної різниці у фотогенерованому сигналі, наприклад, у разі виявлення дефектів у продукції, експлуатаційного фракціонування потоку, застосування рідинної хроматографії, електрофорезу, комп'ютерної томографії, гамма-камер, пристроїв для вимірювання часу пробігу частинок тощо, що є цілком зрозумілим для фахівців.
Крім того, хоча у цьому тексті наведено описи варіантів виконання пристрою і способи проточного відділення сперматозоїдів з Х-хромосомами від сперматозоїдів з М-хромосомами, опис цих варіантів винаходу не передбачає скорочення обсягу винаходу до лише самого проточного відділення сперматозоїдів або до лише самих систем розділення сперматозоїдів з одержанням високого ступеня чистоти за допомогою проточного цитометра, але радше ці приклади ілюструють фундаментальні поняття винаходу з погляду на їх практичну цінність і з урахуванням широкого кола їх можливих застосувань.
На Фіг.1 та 2 показано варіант проточного цитометра за цим винаходом, у конструкції котрого передбачено джерело (1) частинок або клітин, за допомогою якого вводять або подають частинки або клітини, що їх з метою виконання аналізу забарвлюють принаймні одним флуорохромом.
Частинки або клітини відкладаються усередині сопла (2) у такий спосіб, що їх захоплює потік рідини або обволікаюче рідке середовище (3). Це обволікаюче рідке середовище (3) зазвичай подають за допомогою певного джерела (4) обволікаючого рідкого середовища, причому з таким розрахунком, що коли із джерела (1) частинок або клітин останні подаються в обволікаюче рідке середовище (4), вони одночасно проходять через сопло (2).
Таким чином, стає цілком зрозумілим принцип створення обволікаючим рідким середовищем (3) відповідних умов для частинок або клітин. Оскільки різні рідини подають у проточний цитометр під певним тиском, вони витікають із сопла (2) і виходять із вихідного отвору (5) сопла. Шляхом застосування певного типу осцилятора (6), котрим з великою точністю керують за допомогою пристрою (7) для керування осцилятором, усередині сопла (2) створюють коливання тиску, що їх передають до рідин, які виходять із сопла (2) через вихідний отвір (5) сопла. Оскільки осцилятор (6) функціонує відповідно до стану обволікаючого рідкого середовища (3), потік (8), що виходить із вихідного отвору (5) сопла, врешті-решт і на регулярній основі перетворюється на краплини (9).
Через те, що частинки або клітини оточені потоком рідини або обволікаючого рідкого середовища, краплини (9) захоплюють і переносять в своїй масі окремо виділені частинки або клітини, а також, можливо, і клітини сперми згідно з деякими варіантами реалізації винаходу.
Оскільки краплини (9) захоплюють і переносять частинки або клітини, проточний цитометр застосовують для розділення частинок, клітин, клітин сперми і т.п., виходячи з характеристик частинок або клітин. Цю операцію виконують за допомогою системи (10) чутливого реагування на частинки або клітини. В конструкції системи чутливого реагування на частинки або клітини передбачено принаймні деякого типу детектор або датчик (11), котрий реагує на частинки або клітини, що містяться усередині потоку (8) рідини. Система (10) чутливого реагування на частинки або клітини зумовлює функціонування пристрою залежно до відносної наявності або відносної відсутності певної характеристики, наприклад, флуорохрому, зв'язаного з частинками або клітинами, або ж ДНК усередині клітини, котру збуджують за допомогою такого джерела опромінювання, як лазерний збуджувач (12), що генерує пучок опромінювання, на який, власне, чутливо реагує частинка. У той час як частинки, клітини або ядерні ДНК клітин сперми кожного типу забарвлюють флуорохромом принаймні одного типу, з кожною окремою частинкою або клітиною зв'язують різні кількості флуорохрому, виходячи з кількості зв'язуючих сайтів, доступних для застосовуваного флуорохрому конкретного типу. Щодо сперматозоїдів, доступність зв'язуючих сайтів для барвника Ноеснзі 33342 залежить від кількості ДНК, що міститься усередині кожного із сперматозоїдів. Оскільки сперматозоїди з Х-хромосомами містять більшу кількість ДНК, ніж сперматозоїди з У-хромосомами, сперматозоїди з Х-хромосомами здатні зв'язуватися відповідно з більшою кількістю флуорохрому, ніж сперматозоїди з М-хромосомами. Таким чином, вимірюючи флуоресценцію, випромінювану зв'язаним флуорохромом при збудженні, можна диференціювати сперматозоїди з Х-хромосомами і сперматозоїди з У-хромосомами.
Для здійснення розділення та виділення залежно до характеристик частинок або клітин випромінюване світло приймають датчиком (11) і подають до певного типу системи розпізнавання розділення або аналізатора (13), опід'єднаного до заряджувача краплинок, котрий диференційованим чином заряджає кожну краплинку (9) залежно до характеристик частинок або клітин, що містяться в такій краплинці (93. При цьому система розпізнавання розділення або аналізатор (13) зумовлює можливість відхилення краплин (9) пластинами (14) для електростатичного відхилення залежно до наявності або відсутності в цих краплинах відповідної частинки або клітини.
В результаті за допомогою проточного цитометра виконують розділення частинок або клітин (16), примусово спрямовуючи їх до одного або декількох збиральних посудин (15). Наприклад, якщо аналізатор диференціює клітини сперми залежно до певної їх характеристики, краплинки, котрі захоплюють та переносять сперматозоїди з Х-хромосомами, заряджають позитивно і, таким чином, відхиляють в одному напрямку, у той час як краплинки, котрі захоплюють та переносять сперматозоїди з У-хромосомами, заряджають негативно і, таким чином, відхиляють в іншому напрямку, а невикористану частину потоку (тобто краплинки, котрі не захоплюють частинку або клітину або ж захоплюють непотрібні або непридатні для сортування клітин) залишають назарядженою і, отже, збирають у вигляді невідхиленого потоку і спрямовують в усмоктувальну трубку і т.п., як було розглянуто в заявці на |патент США 09/001,394)|, посилання на яку включено в цей опис. Зрозуміло, що одночасно можна встановлювати багато траєкторій відхилення і виконувати збирання за ними.
Для звичайного розділення частинок, клітин, клітин сперми або сперматозоїдів (неушкоджених, живих, фіксованих, життєздатних, нежиттєздатних або ядер) на популяції високої чистоти з Х-хромосомами і М-хромосомами пристрій для диференціювання частинок і застосовувані способи мають забезпечувати високу роздільну здатність щодо характеристик диференціювання, використовуваних як основа аналізу та розділення.
Щодо сперматозоїдів, диференціювання світла, котре випромінюється флуорохромом, зв'язаним з ядерною ДНК клітин сперми з Х-хромосомами, і світла, котре випромінюється флуорохромом, зв'язаним з ядерною ДНК клітин сперми з У-хромосомами, є складною задачею, про що було сказано вище.
В багатьох випадках застосування сумарна кількість випромінюваного світла як результат фотоемісійних подій, зумовлених функціонуванням детектора (котрий може являти собою фотоелектронний помножувач), є високою, у той час як різниця між кількостями випромінюваного світла як результату кожного з призначених для диференціювання фотоемісійних подій є незначною. Проблема загострюється, якщо фотоемісійні події відбуваються послідовно з високою швидкістю і період часу між фотоемісійними подій є коротким, наприклад, у разі високошвидкісного сортування клітин з використанням проточних цитометрів. У разі розділення частинок, клітин або клітин сперми залежно до різниці у кількості зв'язаного флуорохрому клітини протікають повз джерело збудження, причому встановлюється велика кількість емісійних подій на секунду. В результаті кількість випромінюваного світла, генерованого у потоці частинок, клітин або клітин сперми, буває надзвичайно великою. В умовах зростання швидкості потоку точка його перетину з джерелом збудження стає дуже яскравою. Такий високий рівень яскравості падаючого світла на фотокатоді фотоелектронного помножувача зумовлює дуже мале співвідношення інтенсивності робочого сигналу і інтенсивності фонового сигналу. Рівень фонового сигналу додатково підсилюють, якщо для мічення ядерної ДНК клітин сперми використовують такий флуорохром, як Ноеспзі 33342.
Варіанти розв'язання проблеми переважно сфокусовані на зменшенні сумарної кількості світлового потоку, що потрапляє на трубку фотокатода, шляхом вставлення оптичних фільтрів перед фотоелектронним помножувачем. Такий підхід не викликає зміни кількісного співвідношення робочого сигналу і фонового сигналу, а подальші спроби збільшити чутливість фотоелектронного помножувача призводять до генерування додаткового фонового сигналу, оскільки насичення у фотоелектронному помножувачі відбувається залежно до рівня фонового сигналу.
Зазвичай діапазон зміни напруги для номінального режиму функціонування фотоелектронних помножувачів становить від близько 400 вольт до близько 900 вольт. Нижнє граничне значення напруги при лінійному режимі експлуатації стандартних фотоелектронних помножувачів (наприклад, фотоелектронних помножувачів НУО28 та Н1477 виробництва компанії Нататаїйвзи
Согрогайоп) становить приблизно 300 вольт. По суті обладнання або прилади, в котрих використовують фотоелектронні помножувачі, конфігурують у такий спосіб, що дозволяє експлуатувати ці фотоелектронні помножувачі при напрузі 400 вольт і більше. Навіть якщо існує потреба зменшити кількість електронів на аноді, як описано в (патентах США МоМе4,501,366 та 5,880,457|), між фотокатодом і першим динодом підтримується висока напруга, а зменшення кількості електронів на аноді досягають або шляхом зменшення напруги на решті динодів, або ж шляхом електронного відфільтровування власних темнових шумів або дробових шумів.
Несподівано виявилося, що зменшення значення напруги у фотоелектронному помножувачі від 400 вольт до близько 280 вольт або до близько 250 вольт або навіть до 0 вольт зумовлює можливість диференціювання незначної різниці у кількості фотоемісійного світла, навіть якщо сумарна кількість світла, випромінюваного в результаті кожної фотоемісійної події, є великою, або навіть якщо має місце велика кількість "яскравих" послідовних подій на секунду. Щодо швидкості перебігу ймовірних фотоемісійних подій, котрі мають місце в результаті опромінювання флуорохромів, зв'язаних з ядерною ДНК сперматозоїдів, цей винахід допускає таку швидкість перебігу ймовірних фотоемісійних подій, якої можна досягти в процесі розділення сперматозоїдів на популяції з Х-хромосомами і У-хромосомами із збільшенням до значень швидкості перебігу ймовірних подій розділення принаймні 5000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 6000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 7000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 8000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 9000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 10000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 11000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 12000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 13000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 14000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 15000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 16000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 17000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 18000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 19000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 20000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 25000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 30000 ймовірних подій розділення на секунду та принаймні 35000 ймовірних подій розділення на секунду та більше.
Конкретним прикладом є існуючі сортувальні проточні цитометри Суютаїйоп 5Х МоРіо-, що їх конфігурують з таким розрахунком, щоб експлуатувати фотоелектронний помножувач при напрузі мінімум 400 вольт. Підсилення регулюють з таким розрахунком, щоб експлуатувати фотоелектронний помножувач при вищих значеннях, але не при нижчих значеннях напруги.
Проточні цитометри 5Х МоБіо? перетворюють шляхом реконфігурування контролерів фотопомножувачів. Резистор НІ16С (2,49 кілоом) в каналі З заміняють резистором з опором 2,0 кілоом з метою змінення величини підсилення у підсилювачі, за допомогою котрого здійснюють керування фотоелектронним помножувачем. Таке перетворення дозволило експлуатувати фотоелектронний помножувач при напрузі близько 280 вольт. Аналогічне перетворення проточних цитометрів 5Х МоБіо? з використанням двох паралельно під'єднаних резисторів з опором 3,75 кілоом або резисторів з опором 1,3 кілоом дозволяє експлуатувати фотоелектронний помножувач відповідно при значеннях напруги близько 200 вольт або при значеннях напруги лише трохи більших за 0 вольт. Також стосовно цього перетворення спід зазначити, що нейтральний світлофільтр перед фотокатодом теж знімають в результаті експлуатації фотоелектронного помножувача поза межами діапазону зміни напруги для номінального режиму функціонування.
Несподівано виявилося, що таке перетворення підсилює сигнал до відносної шумової потужності фотоемісійної події в процесі його трансформування в електронний сигнал за допомогою фотоелектронного помножувача. Сигнал фільтра після цього підсилюють шляхом збільшення характеристики підсилювача до відповідного рівня характеристики аналога цифрового перетворювача аналізатора (13), а вихідний сигнал виражають у вигляді одновимірних або двовимірних гістограм.
На Фіг.3 відображено зіставлення одновимірних гістограм, сформованих в трьох різних проточних цитометрах 5Х Мою? (Меї, Ме2, Ме3) до застосування цього винаходу (Фіг.ЗА) і в процесі його застосування (Фіг.З3Б) щодо розділення неушкодженої живої еякульованої сперми
ВРХ. Як випливає з одновимірних гістограм, розділення неушкоджених живих сперматозоїдів (17) з Х-хромосомами і живих сперматозоїдів (18) з М-хромосомами (тобто уявне диференціювання популяції сперматозоїдів з Х-хромосомами і популяції сперматозоїдів з У-хромосомами, представлене точкою мінімуму між піками) завдяки цьому винаходу можна в значній мірі вдосконалити.
Середнє значення швидкості операцій розділення або швидкості операцій сортування неушкоджених живих сперматозоїдів до застосування цього варіанту реалізації винаходу з використанням проточних цитометрів 5Х МоРіІо? становило близько 17,9х106/4,5год, причому як для сперматозоїдів з Х-хромосомами, так і для сперматозоїдів з У-хромосомами (тобто близько 1100 операцій розділення або сортування на секунду в кожному з двох потоків - у першому потоці сперматозоїдів з Х-хромосомами і в другому потоці сперматозоїдів з У-хромосомами), при значенні чистоті близько 87905 і діапазоні значень чистоти від 8495 до 9395. Швидкість перебігу ймовірних подій розділення становила відповідно 22000, 23000 та 20000 для трьох операцій сортування.
Середні швидкості сортування живих сперматозоїдів після згаданого вище перетворення становили близько 40,3х105/4,5год операцій сортування (тобто приблизно 2500 операцій сортування на секунду на один потік) при значенні чистоти 90,895 і діапазоні значень від 8995 до близько 9295. Кількість подій на секунду становила відповідно 13000, 15000 та 19500 для трьох операцій сортування.
З наведених даних випливає висновок, що цей варіант реалізації винаходу не тільки зумовив збільшення чистоти розділених популяцій сперматозоїдів, але також дозволив забезпечити зростання швидкості розділення або швидкості сортування більш ніж удвічі, у той час як швидкість перебігу ймовірних подій розділення фактично зменшилася.
Аналогічним чином на Фіг.4 та 5 показано двовимірні гістограми сортування неушкоджених живих бичачих сперматозоїдів за допомогою проточного цитометра 5Х МоБіо? Меї до застосування цього винаходу (Фіг.4) і після згаданого вище перетворення (Фіг.5). До застосування цього винаходу проточний цитометр 5Х МоРіо? спочатку експлуатували при напрузі на фотокатоді 440 вольт, при потужності лазера 135МВт, коефіцієнті підсилення 1Х і характеристиці нейтрального світлофільтра 1,0 (1/10-та амплітуди) зі швидкістю близько 10000 подій на секунду.
Із застосуванням цього винаходу проточний цитометр 5Х МоБіо? експлуатували при напрузі на фотокатоді близько 262 вольт, при потужності лазера близько 100мВт, коефіцієнті підсилення 4Х, без нейтрального світлофільтра і зі швидкістю близько 10000 ймовірних подій розділення на секунду. З наведених даних випливає висновок, що має місце значне зростання ступеня розділюваності, що підтверджується збільшенням глибини точки мінімуму ("западини") між піками, що відповідають популяції (19) з Х-хромосомами і популяції (20) з У-хромосомами.
Аналогічним чином на Фіг.б6 та 7 показано двовимірні гістограми сортування неушкоджених живих бичачих сперматозоїдів за допомогою проточного цитометра 5Х МоБіо? Ме2 до застосування цього варіанта реалізації винаходу (Фіг.б) і при застосуванні цього варіанта реалізації винаходу (Фіг.7), причому цитометр експлуатували при таких самих параметрах, які відображено відповідно на ФігЗ та 4. Знову ж має місце значне зростання ступеня розділюваності, що підтверджується збільшенням глибини точки мінімуму ("западини") між ліками, що відповідають популяції (21) з Х-хромосомами і популяції (22) з У-хромосомами.
На Ффіг.8 та 9 показано двовимірні гістограми розділення або сортування неушкоджених живих кінських сперматозоїдів за допомогою проточного цитометра 5Х Мою? до застосування цього варіанта реалізації винаходу (Ффіг.8) і при застосуванні цього варіанта реалізації винаходу (Фіг.9).
При застосуванні цього варіанта реалізації винаходу живі кінські сперматозоїди розділяли або сортували при потужності лазерного випромінювання 100мВт і напрузі на фотоелектронному помножувачі менше 300 вольт. Швидкості розділення або швидкості сортування були більшими за 4800 операцій сортування на секунду і в середньому становили 12000 подій на секунду.
Зростання ступеня розділюваності популяції (23) з Х-хромосомами і популяції (24) з хХ- хромосомами є разючим. Дані свідчать про те, що у разі застосування цього варіанта реалізації винаходу можна досягти від близько 8- до близько 9-канального розділення порівняно до 5- канального розділення між піками без застосування цього варіанту реалізації винаходу. Чистота як відсортованої популяції з Х-хромосомами, так і відсортованої популяції з У-хромосомами становила приблизно 93905.
На Фіг.10 показано одновимірну гістограму та двовимірний точковий графік по результатах сортування забарвлених препаратом Ноесиві 33342 ядер клітин жереб'ячої сперми (5-05400), розділених із застосуванням цього варіанта реалізації винаходу. Ядра приготовляли із щойно еякульованої жереб'ячої сперми. Сперму промивали шляхом центрифугування, озвучивали ультразвуком і одержані в результаті головки та хвістки розділяли із застосуванням центрифугування в градієнті густини за Перколем (Регсоі!!). Виділені головки промивали, фіксували 295-им формаліном і потім забарвлювали препаратом Ноеснвзі 33342. Забарвлені ядра стабілізували азидом натрію (0,595). Зразок випробовували із швидкістю 5000 подій на секунду з одержанням гістограм. Забарвлені ядра після цього використовували для калібрування проточного цитометра 5Х МоРиіо-, котрий трансформували, як зазначено вище, для застосування варіанта реалізації винаходу з фотоелектронним помножувачем. Для вирівнювання відображень двох популяцій (забарвлені ядра Х-хромосом та забарвлені ядра У-хромосом) на двовимірному графіку застосовували компенсацію. Слід зауважити, що фрагменти кривої для двох популяцій ядер клітин кінської сперми практично повністю розділені до базисної лінії як це видно на одновимірному графіку.
На Фіг.11 показано спеціальну модифікацію проточного цитометра 5Х МоРісо-, в конструкції котрого передбачено застосування двох підключених паралельно резисторів, що дозволяє забезпечити належне значення 1.8К. Два резистори (25) та (26) з характеристикою 3.57К відповідають приблизно 1.785К, що є достатньо близьким до ефективного значення. У разі застосування такої модифікації фотоелектронний помножувач у цьому конкретному приладі може далі функціонувати при напрузі близько 200 вольт. Зрозуміло, що подібну модифікацію можна створити і для інших приладів з проточними цитометрами або для інших приладів, в котрих використовують фотоелектронний помножувач для вимірювання кількості світла, випромінюваного в результаті конкретних подій.
На Фіг.12 представлено принципіальну електричну схему для такого конкретного варіанта реалізації винаходу.
Інший важливий варіант реалізації винаходу полягає у створенні оптики, котра дозволяє зменшити висоту променя. Як показано на Фіг.13А, стандартна променеформувальна оптична система для опромінювання дозволяє одержати таку форму (27) променя, котра характеризується значно більшою висотою, аніж висота головки(-вок) (28) клітин сперми, які проходять крізь цей промінь. В результаті в пучок опромінювання такої форми одночасно потрапляють декілька головок клітин сперми із зв'язаною з флуорохромом ДНК. У такому разі зв'язаний(-ні) з дезоксирібонуклетїновими кислотами флуорохром(-ми), котрий(-рі) міститься(- тяться) у декількох різних головках клітин сперми, збуджується(-ються) одночасно і флуоресціює(- юють) в рамках однієї емісійної події. По суті попередня або наступна емісійна подія включає збіжний потік падаючого світла, зумовлений впливом на форму (27) променя іншої(-ших) головки(- вок) клітин сперми. Це призводить до зменшення різниці між середніми значеннями світлового потоку для пов'язаних із світловим випромінюванням подій, котрі дозволяють розрізнити сперматозоїди з Х-хромосомами і сперматозоїди з У-хромосомами. Це також призводить до зменшення різниці між середніми значеннями світлового потоку для подій, котрі дозволяють зіставити характеристики світлового випромінювання від сперматозоїдів з Х-хромосомами і від сперматозоїдів з У-хромосомами. Слід зауважити, що збіжне збудження флуорохрому, зв'язаного з кількома різними дезоксирібонуклеїновими кислотами, призводить до зростання середнього значення яскравості для подій, через що вимірна різниця між значеннями світлового потоку для подій складає навіть менший процент від сумарної кількості випромінюваного світлового потоку.
Це ще більше - ускладнює кількісне визначення відмінностей між подій.
Шляхом зменшення висоти променя (як показано на Ффіг.13Б), збіжність кількох різних головок клітин сперми, котрі знаходяться усередині променя (29) із зменшеною висотою під час тієї ж самої події, зменшується. Це призводить до збільшення середнього значення різниці між характеристиками пов'язаних із світловим випромінюванням подій, що дозволяє розрізнити сперматозоїди з Х-хромосомами і сперматозоїди з У-хромосомами. Це також призводить до зменшення середнього значення сумарного світлового потоку для кожного виміряного емісійної події. Щодо конкретних варіантів реалізації винаходу, застосовуваних для сортування клітин сперми ВРХ з максимальними розмірами ядра близько 9мкм, встановлено, що висота променя може складати близько 20мкм. Для цього варіанта застосування встановлено, що менші за 20мкм значення висоти вертикального променя не забезпечували зростання ступеня розділюваності.
Звертаючись до Фіг.14, можна дійти висновку, що застосування оптики, призначеної для створення опромінюючих променів із зменшеною висотою, дозволяє підвищити чистоту сортованих популяцій сперматозоїдів ВРХ з Х-хромосомами (Фіг.14А) і сортованих популяцій клітин сперми ВРХ з У-хромосомами (Фіг.14Б), забарвлених барвником Ноесив5і 33342. Це твердження є справедливим як для 2595-их, так і для 4095-их інтервалів сортування одновимірного піка. Як додатково випливає з фіг.14, призначена для зменшення висоти променя оптична система дозволяє підвищити чистоту розділених сперматозоїдів незалежно від будь- якого іншого аспекта винаходу, наприклад, від змінення описаного вище варіанта реалізації схеми фотопомножувача за цим винаходом (новий РМТ |Іфотопомножувачі), або ж таку оптичну систему можуть використовувати разом із зміненим варіантом реалізації фотопомножувача за цим винаходом з метою ще більшого підвищення чистоти зразків розділених сперматозоїдів.
Інша перевага призначеної для зменшення висоти променя оптики полягає в тому, що час проходження сперматозоїдів у лазерному промені збудження або в пучку опромінювання скорочується. Скорочення часу опромінювання у лазерному промені збудження дозволяє зменшити імовірність стресових навантажень або ушкоджень сперматозоїдів.
Повертаючись до Фіг.13Б, можна дійти висновку, що промінь із зменшеною висотою можна використовувати разом із пучком опромінювання з більшою площею, ніж стандартна. Наприклад, пучки променів (27) стандартної форми - такі, як показано на Ффіг.13А - мають еліптичну форму з розмірами близько ЗОмкмх8Омкм, у той час як цей винахід у разі його застосування для сортування клітин сперми ВРХ дозволяє досягти оптимального ступеня розділюваності популяції з Х-хромосомами і популяції з У-хромосомами при розмірах пучка променів (29) 2 мкмх 160мкм.
Площа пучка променів з розмірами 20мкмх16Омкм є приблизно в 1,3 раза більшою за площу пучка променів з розмірами ЗОмкмх8Омкм. По суті має місце обернена пропорційність щодо втрати енергії в точці падіння променя. Звідси випливає можливість збільшення потужності лазерного променя збудження без жодних побоювань щодо зростання ймовірності шкідливого впливу опромінювання на сперматозоїди. Наприклад, якщо прилад оснащений стандартною променеформувальною оптичною системою, котра дозволяє створити пучок опромінювання з розмірами ЗоОмкмхвОмкм, а лазерний промінь збудження у стандартному варіанті функціонує з потужністю 150мВт, то конкретні варіанти реалізації цього винаходу з розмірами променя 20мкмх 160мкм дозволяють застосовувати лазерний промінь збудження з потужністю З0ОмВт без збільшення сумарної кількості енергії в точці падіння променя. Як варіант, лазерний промінь збудження може функціонувати з потужністю 150мВт, що дозволяє використовувати меншу кількість енергії опромінювання на одиницю площі, зменшити шкідливий вплив опромінювання та подовжити термін експлуатації лазерного пристрою тощо.
Порівняно із стандартною променеформувальною оптичною системою та стандартними підсилювальними пристроями з фотоелектронними помножувачами, призначена для зменшення висоти променя оптична система цього винаходу і підсилення із застосуванням фотоелектронного помножувача цього винаходу підвищують чистоту популяцій сперматозоїдів з Х-хромосомами і ху- хромосомами як мінімум приблизно на 495 або більше.
Променеформувальну оптичну систему (30) цього винаходу монтують у проточному цитометрі у спосіб, відображений на Фіг.15 та 16. Зрозуміло, що світло (31), випромінюване в результаті лазерного збудження флуорохрому(-мів), зв'язаного(-них) з ДНК сперматозоїдів, виявляють за допомогою фотоелектронних помножувачів (32), розташованих під кутами 0 та 90 градусів відносно плоскої поверхні головки (28) клітини сперми під час її проходження крізь лазерний промінь збудження.
Зрозуміло, що забарвлені сперматозоїди слід нагнітати крізь збуджуючий промінь або пучок опромінювання з достатньою точністю, тобто кожну головку клітин сперми орієнтувати у такий спосіб, щоб плоска поверхня цієї головки було поверненою до фотоелектронного помножувача, котрий являє собою розташований під кутом 0 градусів детектор. Точне вимірювання вмісту ДНК у сперматозоїдах можна виконати тільки за результатами аналізу плоскої поверхні лопаткоподібної головки клітини сперми (28). Отже точно виміряють і відсортовують за вмістом ДНК тільки ту частину сперматозоїдів, котра потрапляє у збуджуючий промінь з належним орієнтуванням.
На Фіг.17,18 та 19 показано, що конкретні варіанти реалізації винаходу також включають сопло (33) для орієнтування частинок або клітин сперми, за допомогою котрого створюють гідродинамічні сили, що зумовлюють належне орієнтування сплющених головок клітин сперми під час їх проходження перед фотопомножувачем(-ами). Як показано на Фіг.17, орієнтуюче сопло має внутрішні поверхні (34) конусоподібної форми. Характеристика внутрішнього конуса поступово змінюється від круглого перерізу з боку впускного отвору (35) до перерізу з високим коефіцієнтом еліптичності з боку випускного отвору (36), де потік виходить із наконечника. Власне випускний отвір, (36) має радше круглий переріз, ніж еліптичний. Таким чином, переріз внутрішньої порожнини орієнтуючого сопла (34) змінюється від круглого біля вхідного отвору до вузького еліпсу і далі до круглого біля виходу безпосередньо перед випускним отвором (36). Таку внутрішню форму додатково пояснено за допомогою поперечних перерізів орієнтуючого сопла, наведених на Ффіг.18.
Як показано на Ффіг.19 та 21, трубку (37) для нагнітання (діаметр якої складає близько 0,061 дюйма) використовують разом з орієнтуючим соплом (або із стандартним соплом) (33), скошеним біля наконечника з утворенням лопаткоподібного елемента (38). Сплющений лопаткоподібний елемент (38) орієнтують під кутом 90 градусів відносно найбільшого еліптичного перерізу в орієнтуючому соплі (33). Внутрішній діаметр голки для нагнітання складає приблизно 0,010 дюйма, а в центрі сплющеного лопаткоподібного ребра (38) з голчастою трубкою утворюється закруглений випускний отвір (39).
У конкретних варіантах реалізації скошеної трубки для нагнітання скошений лопаткоподібний елемент конфігурують у формі лопаті, зображеної на Ффіг.21. Застосування лопатеподібного скошеного елемента сприяє збереженню ламінарного потоку обволікаючого рідкого середовища усередині сопла (як стандартного, так і орієнтуючого сопла). По суті ламінарний потік рідини, що його зберігають за допомогою лопатеподібного скошеного елемента, практично не руйнує введені в нього об'єкти. Швидкість сортування сперматозоїдів, уведених в ламінарний потік обволікаючого рідкого середовища, що його зберігають завдяки використанню варіанта реалізації трубки для нагнітання цього винаходу з лопатеподібним скошеним елементом, можна збільшити на 20, 30, 40, 50 і навіть більше відсотків порівняно із стандартною технологією з використанням трубки для нагнітання. Можна виконувати високошвидкісне сортування сперматозоїдів зі швидкостями від близько 4000 до близько 10000 операцій сортування на секунду для кожної статі. Популяції високої чистоти (9095 і більше) з Х-хромосомами і У-хромосомами створюють навіть і при таких високих швидкостях сортування. Трубку для нагнітання цього винаходу із скошеним лопатеподібним наконечником використовують незалежно від описаних в цьому документі аспектів винаходу або в комбінації з ними, або ж незалежно від інших технологій або в комбінації з такими технологіями, описаними, наприклад, у заявках на |патенти США Ме09/454,488)| або в міжнародній заявці на (патент РСТ/О5О0/42350), кожну з яких включено в цей опис шляхом посилання.
Як показано на Ффіг.21, деякі варіанти реалізації трубки- для нагнітання цього винаходу із скошеним лопаткоподібним ребром або лопатеподібного елемента цього винаходу із скошеним лопаткоподібним ребром додатково включають канавки (40) для інтенсифікації ламінарного потоку. Застосування таких канавок (40) для інтенсифікації ламінарного потоку сприяє збереженню ламінарного потоку, спрямованого до випускного отвору трубки для нагнітання. Крім того, застосування інтенсифікованого ламінарного потоку дозволяє зберігати належне орієнтування більшої кількості сперматозоїдів у ламінарному потоці обволікаючого рідкого середовища, в результаті чого збільшуються значення швидкості перебігу ймовірних подій сортування, що у свою чергу призводить до підвищення швидкості сортування для кожної статі або типу сперматозоїдів.
В іншому варіанті реалізації винаходу розмір орієнтуючого вихідного отвору (39) сопла або іншого стандартного отвору задають з таким розрахунком, щоб утворювалися краплинки, в яких інкапсулюють неушкоджені живі клітини сперми в процесі їх виведення з випускного отвору (39).
Повне інкапсулювання клітин сперми не відбувається у разі застосування стандартних технологій захоплення та перенесення таких клітин, радше частина хвістка клітини сперми залишається за межами краплинки. Наприклад, довжина клітин сперми ВРХ відповідає часу їх проходження близько 13,5 мікросекунд, якщо тиск потоку рідини становить близько 50 фунтів на кв. дюйм
ІЗ,515кг/см"| (йдеться про відрізок часу проходження клітини сперми крізь промінь на повну її довжину і при тиску потоку рідини близько 50 фунтів на кв. дюйм). Стандартна технологія створення краплинок для захоплення та перенесення клітин сперми ВРХ дозволяє створювати краплинку з часом проходження 14 мікросекунд (йдеться про час, потрібний для формування сигналу від однієї краплинки у потоці рідини), котра виходить із сопла з діаметром випускного отвору близько 70 мікрометрів і котру роблять чутливою до осцилятора з частотою коливань близько 35 кілогерц. По суті частина хвістка клітини сперми без жодних перешкод виходить за межі краплинки. Для запобігання виходу хвістка клітини сперми за межі краплинки в одному з варіантів реалізації інкапсулювання клітин в краплинках за цим винаходом передбачено випускний отвір з діаметром близько 100 мікрометрів, за допомогою котрого створюють краплинку з часом проходження близько 28 мікросекунд при тиску близько 50 фунтів на кв. дюйм
ІЗ,515кг/см?| і частоті коливань близько 30 кілогерц. Завдяки повному інкапсулюванню неушкодженої живої клітини сперми (включаючи хвісток), клітина сперми практично не взаємодіє з поверхнею сопла після "зарядження" краплинки, а траєкторія відхилення краплинки є точнішою.
Це призводить до істотного зниження ступеня небажаного перехрестного змішування сперми з Х- хромосомами і сперми з У-хромосомами, а також дозволяє збирати відхилювані сперматозоїди більш рівномірно. Рівномірно відхилювані клітини сперми спрямовують до збиральних поверхонь, вплив яких амортизують різними рідинами. Амортизування розділених сперматозоїдів є важливим моментом з погляду на зменшення стресових навантажень, як описано в заявці на |патент США
Ме09/001,394)|, яку включено в цей опис шляхом посилання. Щодо сперматозоїдів інших видів ссавців, цей винахід варіюють з метою одержання краплинок з розмірами, котрі дозволяють інкапсулювати клітини сперми з різними довжинами. Залежно від довжини сперматозоїдів і тиску потоку рідини, процес інкапсулювання в краплинках за цим винаходом у будь-якому разі дозволяє досягти швидкостей утворення краплинок принаймні 10000 краплинок на секунду, принаймні 20000 краплинок на секунду, принаймні 30000 краплинок на секунду, принаймні 40000 краплинок на секунду, принаймні 50000 краплинок на секунду, принаймні 60000 краплинок на секунду, принаймні 70000 краплинок на секунду, принаймні 80000 краплинок на секунду, принаймні 90000 краплинок на секунду, принаймні 100000 краплинок на секунду і т.д. аж до близько 200000 краплинок на секунду - у деяких варіантах реалізації інкапсулювання в краплинках за цим винаходом.
Навіть у разі застосування орієнтуючого сопла за цим винаходом виявлятиметься певна кількість сперматозоїдів або частинок, невірно орієнтованих відносно характеристики променя. Як описано вище, коли орієнтування головки клітини сперми є невірним, тоді точне вимірювання вмісту ДНК з використанням випромінюваного світла стає неможливим. Конкретні варіанти реалізації цього винаходу передбачають видалення непотрібних неорієнтованих сперматозоїдів (гетомаї ої ипаєзігей ипогієпієй зреппазгоа - ВОШБІ або частинок, присутніх у потоці рідини.
Звертаючись до Фіг.1б6 та 20А, можна дійти висновку, що точне вимірювання вмісту ДНК у сперматозоїдах залежить від вірного орієнтування плоскої поверхні лопатеподібної головки (28) клітини сперми відносно детектора. Отже, точну кількісну оцінку та сортування на популяції з Х- хромосомами і М-хромосомами за вмістом ДНК можна виконувати лише для тієї частини сперматозоїдів, котра потрапляє у збуджуючий промінь з належним орієнтуванням, що відображено на Фіг.16 та 20А. Як показано на Ффіг.20А та 20Б, сперматозоїдам, котрі проходять крізь збуджуючий промінь з належним орієнтуванням, відповідає крива (40) сигналу орієнтованого випромінювання, форма якої відрізняється від форми кривої (41) сигналу неорієнтованого випромінювання, що його генерують неорієнтовані сперматозоїди (Фіг.20Г). Зрозуміло, що форма кривої (41) сигналу неорієнтованого випромінювання, що його генерують неорієнтовані сперматозоїди, варіюватиметься залежно до ступеня невірного орієнтування таких сперматозоїдів у збуджуючому проміні. До таких випадків невірного орієнтування налетіть варіант орієнтування, показаний на Фіг.20В, але також належать усі типи орієнтування, що призводять до обертання головки клітини сперми на будь-яку частину повного оберту, котра спричинює порушення центрування поверхні лопатеподібної головки відносно детектора (правильне центрування наведено на Фіг.16), або ж на будь-яку частину повного оберту, котра спричинює порушення центрування осі головки (42) клітини сперми відносно напрямку потоку. Зрозуміло, що визначення вірного орієнтування є різним для кожного виду. Для деяких видів, у котрих головка клітини сперми не є лопатеподібною, вірне орієнтування у збуджуючому промені або відносно детекторів і т.п. визначають за іншими характеристами анатомії або ж сигналу. Проте для сперматозоїдів різних видів, вірно орієнтованих в інтервалі збудження, можна генерувати оптимізований сигнал, котрий відповідає стандартним кривим сигналу випромінювання і служить для подальшого порівняння з послідовними подіями випромінювання.
Шляхом порівняння форми (або інтегральної зони, або ж обох характеристик) кожної кривої сигналу випромінювання із стандартною кривою сигналу випромінювання (або із стандартною інтегральною зоною, або ж з двома цими характеристиками), встановленою для орієнтування сперматозоїдів певного виду ссавців, ідентифікують неорієнтовані клітини сперми, з позитивним результатом при необхідності видаляють сигнал, що його віднімають від одновимірної або двовимірної гістограм, а також неорієнтовані клітини сперми, причому з таким розрахунком, щоб неорієнтовані клітини сперми не накопичувалися ні в популяції з Х-хромосомами, ані в популяції з
У-хромосомами.
Слід зауважити, що - оскільки цей винахід (аспекти винаходу) дозволяє (дозволяють) підвищити ступінь розділюваності двох розділюваних популяцій сперматозоїдів - зростає швидкість відділення популяцій одна від одної і підвищується чистота таких розділюваних популяцій. По суті фахівці тепер отримали можливість сортувати сперматозоїди з надзвичайно високою швидкістю. Швидкості ймовірних подій сортування або розділення збільшуються аж до значень близько 35000 на секунду (не враховуючи збіжні події - йдеться про одночасне перебування певної великої кількості різних сперматозоїдів в інтервалі збудження/детектування).
Швидкість ймовірних подій сортування або розділення корелюється з високими швидкостями розділення або сортування, котрі становлять від близько 5000 до близько 11000 неушкоджених живих клітин сперми для кожної статі на секунду зі збереженням чистоти 90, 92, 93, 95 відсотків і більше. Вищеописані аспекти винаходу також дозволяють отримати популяції з Х-хромосомами і
У-хромосомами ще більш високої чистоти, а саме від близько 97 до близько 9895 та навіть вище, завдяки зменшенню швидкостей сортування або розділення до близько 2000 живих клітин сперми для кожної статі на секунду.
Зрозуміло, що описані вище аспекти винаходу є особливо важливими з погляду на досягнення максимальної швидкості перебігу ймовірних подій сортування або розділення і максимальних кінцевих швидкостей розділення, котрі становлять принаймні 1000 операцій розділення на секунду, принаймні 2000 операцій розділення на секунду, принаймні 3000 операцій розділення на секунду, принаймні 4000 операцій розділення на секунду, принаймні 5000 операцій розділення на секунду, принаймні 6000 операцій розділення на секунду, принаймні 7000 операцій розділення на секунду, принаймні 8000 операцій розділення на секунду, принаймні 9000 операцій розділення на секунду або принаймні 10000 операцій розділення на секунду і більше для кожної статі.
Цей винахід дозволяє виконувати згадане високошвидкісне сортування сперматозоїдів навіть у разі виникнення ускладнень з їх забарвленням або у разі наявності в них анатомічних або хімічних характеристик, котрі ускладнюють процес диференціювання популяцій з Х-хромосомами і з У-хромосомами. Навіть у таких складних випадках популяції сперматозоїдів ВРХ з Х- хромосомами і М-хромосомами виділяють з високою чистотою (від 92950 до 9395) - завдяки досягненню значень швидкості перебігу ймовірних подій сортування від близько 15000 до близько 20000 ймовірних подій сортування на секунду і більше, як описано вище, а також завдяки встановленню значень швидкостей сортування або розділення неушкоджених живих сперматозоїдів для кожної статі (з Х-хромосомами і з МУ-хромосомами) на рівні 2000 неушкоджених живих клітин сперми для кожної статі на секунду.
Звертаючись до фіг.23 та 24, можна побачити, що в одному з варіантів реалізації винаходу для вимірювання об'єму частинки або капсули застосовують технологію забезпечення диференційної контрастності інтерференції. Основний варіант реалізації винаходу стосується частинок, котрі мають різні об'єми, наприклад, головок (28), котрі мають різні об'єми в клітинах сперми з Х-хромосомами і в клітинах сперми з У-хромосомами. Джерело (43) електромагнітного випромінювання генерує електромагнітне випромінювання або пучок променів електромагнітного випромінювання (44) з характеристиками початкового сигналу, що диференційованим чином чутливо реагує на різницю в об'ємі між частинками або головками (28) клітин сперми.
Електромагнітне випромінювання представлене як лазерним випромінюванням, так і численними іншими типами електромагнітного випромінювання, включаючи, крім іншого, НВЧ-випромінювання та УФ-випромінювання тощо. При перетинанні об'єму частинки, капсули або головки клітини сперми із фазозсуваючою речовиною електромагнітне випромінювання фокусується через лінзу (45) об'єктива на детектор (46), котрий чутливо реагує на характеристики сигналу електромагнітного випромінювання. Детектор під'єднують до аналізатора (47). За допомогою аналізатора диференціюють частинки залежно до зміни характеристик сигналу, що їх спостерігали до перетинання об'єму частинки і після перетинання об'єму частинки, а також аналізують сигнал, виходячи з форми інтегральних зон або сигналу, або ж виходячи з обох цих характеристик. У деяких варіантах реалізації цього винаходу аналізування характеристик сигналу включає взаємне накладання характеристик початкового сигналу і характеристик зміненого сигналу після перетинання електромагнітним випромінюванням об'єму частинки, капсули або головки клітини сперми. Накладання характеристик початкового сигналу і характеристики сигналу з фазовим зсувом дозволяє диференційованим чином модулювати інтенсивність променя електромагнітного випромінювання, причому у такий спосіб, що спостерігається кореляція з кількістю фазозсуваючого середовища, що його перетинає електромагнітне випромінювання. В цьому винаході також застосовують додаткові фільтри (48), наприклад, кольорові фільтри.
Звертаючись до Фіг.24, можна побачити, що варіант реалізації оптичної системи за цим винаходом включає застосування оптичної системи, призначеної для забезпечення диференційної контрастності інтерференції, котра дозволяє збільшити фактичний шлях світлового пучка променів до його розщеплення порівняно до стандартної мікроскопії з використанням цифрової ІС (інтегральної схеми), обмеженої граничним значенням роздільної здатності мікроскопа. В цьому варіанті реалізації винаходу індуковане розщеплення перевищує розміри об'єктів, в результаті чого утворюються два окремі зображення, які є розділеними в латеральному напрямку і породжуються одним об'єктом. Друга модифікація передбачає застосування пластин з двозаломлюючого матеріалу, наприклад, пластин Саварта (Замаїг), розташованих на певній відстані від лінзи об'єктива. Цей варіант реалізації винаходу характеризується більш простою конструкцією, оскільки немає потреби поміщати двозаломлюючі матеріали усередині корпусу об'єктива. У стандартних мікроскопах з ІС двозаломлюючий матеріал використовують у вигляді так званих "волластонівських призм" (Ууоїїазюп ргізтв), що їх потрібно поміщати усередині корпусу об'єктива; це зумовлює необхідність застосовувати дорогі лінзи для об'єктивів, виготовлювані спеціально для таких цілей.
Елементи варіанта реалізації винаходу монтують співвісно; до таких елементів належать: джерело (43) електромагнітного випромінювання, наприклад, ртутна дугова лампа, елемент для регулювання спектра, наприклад, полосовий фільтр, елемент (49) для регулювання поляризації, наприклад, листовий поляризатор (53), та коливальна плата (54), котра чутливо реагує на установку, що обертається, конденсор (51) світла, котрий забезпечує конденсування світла на частинки або клітини сперми, наприклад, конденсорна лінза або комплект лінз або мікрооб'єктив, потік (8) рідини, котрий містить частинки або клітини (28) сперми, наприклад, струмінь виштовхуваної під тиском рідини, колектор (45) світла для збирання світла з частинки або клітини, наприклад, мікрооб'єктив з 50-кратним збільшенням і трубчаста лінза, розщеплювач (50) пучка для розщеплення пучка на два і більше компонентів, наприклад, деталь із двозаломлюючого матеріалу у вигляді пластини Саварта, змонтована у такий спосіб, що її орієнтування та розташування можна з точністю контролювати, селектор (55) світлового пучка зображення для вибору тільки того світла, котре відповідає частинці або клітині сперми, наприклад, група мікроканалів, причому по одному мікроканалу (53) для кожного із створюваних зображень.
В одному з варіантів реалізації винаходу елементи монтують у такий спосіб, що джерело (43) світла або його відображення локалізується на задній фокальній поверхні конденсора (45) світла, створюючи феномен, що його часто називають "освітлення Кьолера" (Копіег). Зображення предметної площини максимально точно суміщають із селектором (55) об'єктного світлового пучка або з мікроканалом(-лами) (53) для захоплення світлового потоку від окремих частинок або клітин сперми. Як показано на фігурах 27 та 28, елементи монтують на міцному оптичному столику або верстаті з використанням оправ, підпорок та штативів. Елементи монтують у такий спосіб, що дозволяє точно сфокусувати предметну площину. Цього можна досягти шляхом регулювання потоку рідини за допомогою пристрою для регулювання положення потоку (наприклад, мікрометрів), котрий дозволяє повертати потік з метою його фокусування і розфокусування. Крім того, необхідно обладнати конденсор (51) світла пристроєм (61) для регулювання його положення, що дозволить фокусувати його на площину об'єкта. Слід звернути особливу увагу на монтування двозаломлюючих елементів або розщеплювача (50) пучка, причому перевагу віддають трикоординатному ротаційному елементу.
Звертаючись до Ффіг.25, можна побачити, що варіанти реалізації цього винаходу також включають застосування обох сформованих зображень, що дозволяє визначати орієнтування асиметричних частинок у потоці рідини, включаючи, крім іншого, сперматозоїди, наприклад, клітини бичачої сперми. У варіантах реалізації оцінки орієнтування за цим винаходом застосовують оптичну систему, котра дозволяє регулювати режим поляризації світла, що потрапляє до системи незалежно для обох сформованих зображень. В інтерференційній оптичній системі цього винаходу додатково передбачено елемент (56) для регулювання поляризації, за допомогою якого регулюють режим поляризації світла, що потрапляє до системи. Для детектування орієнтування за цим винаходом елемент (56) для регулювання поляризації вибирають у такий спосіб, щоб він складався з двох частин, відображуваних на селекторі (55) світлового пучка зображення, який в одному з варіантів реалізації винаходу має мікроканал(-ли) (53). Цю операцію виконують шляхом установлення елемента (56) для регулювання поляризації у площині, спряженій з площиною (55) зображення, або ж шляхом застосування іншої оптики, причому з виконанням такої самої операції. Простим прикладом такого елемента є "напівзатінююча" деталь, котра, прикладом, складається з двох напівкруглих частин із поляризуючого матеріалу, наприклад, листовий поляризатор, кут розташування якого вибирають незалежно. Кожний з мікроканалів у площині зображення припадає на одну з половин згаданої півкулі. Кути поляризації вибирають у такий спосіб, що сигнал від одного з мікроканалів (53) відповідає об'єму і є відносно незалежним від кута орієнтування перехожого об'єкта, у той час як інший мікроканал (53) характеризується сигналом, котрий у значній мірі залежить від цього кута орієнтування. Ці два сигнали обробляються за допомогою аналізатора (47) у спосіб, аналогічний способу, застосовуваному, наприклад, у стандартній багатоканальній проточній цитометрії. Щодо цього прикладу, то в ньому складають двовимірні точкові графіки, а також надають користувачеві можливість вибирати вікна на такому графіку.
Удосконаленою модифікацією описаної вище "напівзатінюючої" деталі є конструкція, що її показано на Фіг.25Г. На площину зображення проектуються ті ж самі дві згадані напівсферичні частини, але спосіб їх створення відрізняється. Дзеркало (57) розкладає світловий потік (44) на напівкруглі частини і рекомбінує їх із взаємною компенсацією. Кожна з цих половин перетинає окремий пристрій, призначений для регулювання режиму її поляризації. Перевага цього варіанту реалізації полягає в тому, що кути поляризації регулюють неперервно та незалежно, що, таким чином, полегшує регулювання установки. Використовувані в цьому варіанті реалізації матеріали поставляють фірми, що мають справу із постачанням стандартних оптичних систем, а вставляють їх в установку за допомогою комплекту монтажних інструментів, що їх застосовують для інтерференційної оптики.
Звертаючись до Ффіг2б6, можна побачити, що для введення поправки на артефакти
Іпсевдозображення|, які виникають внаслідок проходження світла через неплоску зону прозорого матеріалу (наприклад, через потік рідини переважно циліндричної форми, котрий, однак, характеризується також і іншими геометричними формами) у варіантах реалізації цього винаходу передбачено включення в конструкцію елемента, за формою аналогічного неплоский зоні, але зворотного з погляду на відносні коефіцієнти заломлення. В конкретному варіанті проточного цитометра така форма є наближеною до циліндра. Для введення поправки на артефакти, які виникають через локалізацію оцінюваних об'єктів усередині циліндричного потоку води, передбачено включення в конструкцію оптичного елемента (58) у вигляді прозорого циліндру, що його поміщають усередину прозорого матеріалу (59) з більш високим коефіцієнтом заломлення. В оптимальному варіанті зображення потоку і зображення компенсуючого елемента розташовані у площині зображення одне поверх одного. Цього можна досягти шляхом поміщення компенсуючого елемента між лінзами об'єктива і площиною зображення, а також шляхом включення в конструкцію допоміжних лінз.
В одному з варіантів реалізації оптичний елемент (58) поміщають усередину тонкої пластини (59) із прозорого матеріалу з більш високим коефіцієнтом заломлення (наприклад, скла або перспексу) і з просвердленим в ній циліндричним отвором. Перевага перспексу полягає в тому, що в ньому легше засвердлити круглу виїмку. Циліндричний отвір заповнюють прозорим матеріалом, коефіцієнт заломлення якого є нижчим за коефіцієнт заломлення оточуючого матеріалу. Для деяких варіантів застосування різниця між коефіцієнтом заломлення цієї речовини і коефіцієнтом заломлення оточуючого матеріалу є такою самою за модулем, але протилежною за знаком щодо різниці між коефіцієнтом заломлення води у потоці і коефіцієнтом заломлення оточуючого повітря. Немає жодної потреби в тому, щоб розміри циліндра і розміри потоку води були однаковими, оскільки створюване лінзами оптичне збільшення дозволяє одержати у площині зображення кінцеві зображення з однаковими розмірами. В деяких варіантах застосування бажано або необхідно регулювати різницю між коефіцієнтами заломлення, що дозволяє компенсувати таке збільшення. Виготовлення такого елемента з перспексу не є складною задачею, причому цю операцію виконують у більшості механічних цехів, робітники яких мають досвід щодо оброблення перспексу або вибраного матеріалу. Розміри цього елемента підбирають з таким розрахунком, щоб він відповідав стандартним інструментам та пристроям для монтування оптичної системи, що дозволяє полегшити включення його в конструкцію оптичної системи.
Точне підбирання коефіцієнтів заломлення є досить складною задачею. Варіант реалізації винаходу, що полегшує регулювання, полягає у створенні певної речовини усередині маси перспексу або іншого вибраного матеріалу, тобто прозорої рідини (58) з відповідним коефіцієнтом заломлення, одним із окремих прикладів якої є органічна олія або суміш олій з наближеним до потрібного значення коефіцієнтом заломлення. Через те, що коефіцієнт заломлення більшості рідин змінюється залежно від температури у значно більшій мірі, ніж коефіцієнти заломлення твердих речовин або скла, можна точно регулювати різницю мок коефіцієнтами заломлення шляхом змінення температури. Цього досягають шляхом включення в конструкцію апарата терморегулятора (60).
Оптичний елемент (58) із прозорих рідин або рідин з певними коефіцієнтами заломлення поставляються фірмами, що спеціалізуються у постачанні хімікатів. Такі фірми часто без ускладнень надають доступ до даних стосовно коефіцієнтів заломлення виготовлюваних ними рідин. Деякі фірми навіть пропонують рідини, що їх спеціально виготовляють з певними гарантованими та стабільними коефіцієнтами заломлення. Терморегулятори та термостати поставляються багатьма фірмами. Практичний спосіб використання параметра теплоти для рідин з певним коефіцієнтом заломлення полягає у застосуванні порожнистих Іпустотілих| монтажних елементів, що їх виготовляють із теплопровідного матеріалу (одним із прикладів якого є метал), в котрих містяться рідини з певними коефіцієнтами заломлення. Користуючись стандартним імерсійним датчиком циклів термостата, що його застосовують у багатьох лабораторіях, через монтажні елементи прокачують воду, у такий спосіб підтримуючи фіксовану та контрольовану температуру елемента.
Обговорення, включене до цієї заявки слід розглядати як базисний опис. Читач повинен усвідомлювати, що у разі конкретного обговорення не наводять в явній формі детальний опис усіх можливих варіантів реалізації, причому існує велика кількість домислюваних неявних варіантів.
Також в повній мірі не пояснюють родові ознаки винаходу і не показують в явній формі, яким чином кожна ознака або елемент можуть фактично представляти більш широку функцію або значну кількість альтернативних або еквівалентних елементів. Крім того, такі елементи включено до цього опису неявно. У той час як цей винахід описано із застосуванням орієнтованої на функціональні ознаки термінології, функції в кожному їх аспекті виконуються за допомогою певного пристрою, підпрограми або програми. Включено не лише пункти формули винаходу на описані пристрої, але також пункти формули винаходу на способи, що дозволяє звертатися до функцій, виконуваних цим винаходом і кожним елементом. Ні опис, ані термінологія жодним чином не обмежують обсягу включених на цей момент пунктів формули винаходу.
Крім того, кожний із різних елементів винаходу і пунктів формули винаходу реалізують різними шляхами. Слід розуміти, що цей опис охоплює кожний з таких варіантів, чи то варіант реалізації будь-якого пристрою або способу, чи навіть лише варіант реалізації будь-якого їх елемента. Зокрема слід розуміти, що - оскільки опис стосується елементів винаходу - словесні визначення кожного елемента виражають за допомогою еквівалентних термінів для пристроїв або еквівалентних термінів для способів, навіть якщо з ними збігаються тільки функція або результат.
Такі еквівалентні, більш широкі та навіть у більшій мірі родові терміни слід-розглядати як такі, що є охопленими описом кожного елемента або механізму функціонування. Такі терміни при необхідності заміняють, що дозволяє зробити явним неявно широкий патентний захист, на який мають право автори цього винаходу. Як окремий приклад, слід розуміти, що визначення будь- якого механізму функціонування можна виразити у вигляді визначення способу реалізації такого механізму функціонування або у вигляді визначення елемента, наявність якого зумовлює такий механізм функціонування. Аналогічним чином, слід розуміти, що розкриття суті кожного фізичного елемента охоплює розкриття суті механізму функціонування, що його дозволяє реалізувати цей фізичний елемент. Щодо цього останнього аспекту, як окремий приклад, розкриття суті "пристрою для розділення краплинок" слід розуміти як таке що охоплює розкриття сутності механізму "розділення краплинок", причому незалежно від того, чи то йшлося про явність, чи ні; навпаки, якщо би йшлося тільки про розкриття сутності механізму "перетворення рідини на газ", це розкриття сутності слід розуміти як таке, що охоплює розкриття сутності "пристрою для розділення краплинок" та навіть способу "розділення краплинок". Слід розуміти, що такі змінення та альтенативні терміни підлягають включенню до опису в явній формі.
Крім того, створюють і подають на розгляд різні комбінації та перестановки будь-яких елементів або варіантів застосування. Для оптимізації конструкції та експлуатаційних характеристик в конкретному варіанті застосування удаються до будь-яких можливих способів.
Будь-які нормативні акти, статути, постанови або правила, згадані в цій заявці на патент, або ж патенти, публікації або інші посилання, згадані в цій заявці на патент, включено в цей опис шляхом посилання. Зокрема кожну із заявок на |патенти США МоМоб0/267571, 60/239,752 та б60ОУ203.089| включено в цей опис шляхом посилання, у тому числі будь-які рисунки та додатки, і кожне із посилань у наведеному нижче переліку посилань також включено в цей опис шляхом посилання.
Зло бонае Бканаскауа 505 б ра злетаїв неот: епзювоеннню т6 Пе яю; 3826,216 08/13/74 Ревіку 00356 36 0002? 000000 зоюбоєо оотатт ЧЕ 67 понлє абетяєв АлбЕ |Вканастава Я рБ Я жов35? 41 аю 000000 424 07800002 001 лвЕАН ОБіото Бмеайюснкув 207 юн бай жлеіляв балеті 36500 рей ялівлеє олово ізнют й ОА рбвАвлЕ астаз Звлові сянют 70204 робале 4,339,34 07382 |Епоссвоп 424 561 дови НИ патент: обов: мило 195 0057 бвйвне авованЕ БЛВЄ Бнетеюх 3 Я04 61 роя жббвлях бювет о Мояес роя МБЕа о жоввлюа виг гвювтя ее | аа
Бзаою |ролаєи Брайан 1530 166 аа
54зелно вювеє (Брашоню 424 БА фо
Блвзяв |Бібвнє МачоєчЕнонеєе: 364 555 бабою влозвея |раюсне Спеаья: 6 00 оба
Бетана; |оБютее Спамеє 35 005 рН (ява, але леет 15402000 бло
Бевошет |Овбеет срешеню 186 2 фл
Блгеявя алое Маасеннюю 17316465 боловИ
БЕЖ ОЯУЮЄ узаоетЕною 106 МБО 006
БЯБОЯБТ |Б5КбвюеЮ ІТотівнестя: 1550167 БЛЕВИ
Боввств ЛЕЄ Неля; 452079 002 івотіене о |вювюе |бемеа: 52 БЮ мбеввяою ве | 33333111 мосоювіз Мова 1
Раківан", Мебегіпагу Месогі 136,1995, р. 495. | я
Апіта! Нергодисцоп Гарогногу Сопйеде ої Ме(еппагу Месдісіле апо Віогледісв! зсвасез, Соіогадо гена Опіхетку, оп Соніпе, СО, 80523,.1982 Й 75(2У 578-585.
ІАпоегвоп, М.К., Автааї, 1. вп4 Еоцапег, А. 1973. Ігацієйне ци еіхелякав іпветіпацюпт тії
Іссебіегвреттта віп Ясна! ХИСІМОуцієпе. 8113-18,
Вакег, КО. бик, Р, апа Мопісп, НОМ. 1988. ЕПОС ої уоівте ої ветев, питбе? ог 5реп ап йо оп ігаперой ої 5раго іп апійсіану. іпзегпілацей цін. 3. Апіпь. сі. 27:88-93. | !
Ватев, Рі. апа Еусеіопе, МН. "Євпу Сіввмаде ап фе Мабета! дудонс Тгапойіюоп й Воміпе
Етбгуов", Тпейодепоюсу, Мої. 33, Мо, 1, апцагу 1990, рр. 141-149
ВБескег, 5.Б. ап Чоппзоп, А... 1992, ЕПесів ої допадоїгоріп теіевавіпо поппопе інтивес іп а роїзаще ог
Ісопілюориє ТаоЛіюпт оп зепіті допадоморів сопсепітайопе пі суціяном і Бе піяге, 3. Апіт. ЗО па ТИ
Вефогі, 5 КІ ап Нійгіств, 1994. Те ейесі ої іпветіпачою мойнне сп редпапсу габоє ог рову! паге5. Тпеподепоюду 42:574-578.
ІБеупап, 7, ві а, "Бехцві Юітогрпієт і ММ-МЕ Вомпе Етбгуоз Ртднсей йот Хо апо х,
Спгогповоте-Беайпо Зремпаюгог Зойва Бу Нюй Зреєй Юм Суютейну", Тпеподепоюду 52,1899, рр. 35:48,
Вівпейат, тла рісквоп, М. "Віайіоп Мепадетепі", Тве Меіеппагу Сввіс: ої Мой дупейса, Едційе.
Нрувснсе, Мої. 8, Мо, 1, Арі 1992, ро 207 - 218.
Вгаспег, У. апа Айеп, МАН., "Мдвоепдовсоріс Ехатіпаноп ої Ше Магех Шепив: Ріпаїпов із Мотпаі!
ІВгахейоп, У.Е. апа Мебпап, МН. 1970. Ропйсацоп апа ргорепієв ої тойісів зптшанно апо пклеіпігіпо
Втешош, ЗНА. апо чаедег, 4... Те біпоє Сак Ненег зухети, Капзає Адгіс. Ма. Кер ої Ргодтеве
Висісї, 5.Р. 1982. Вівесіто репаміог ої а майоп зі расішге йй 20 тагев із зулопгопігоя овсілие. .
ІВоспапавй, вв. еі а), "Іпветіпаної ої Магез ИЙ Цом' Мипіеє ої Бйнег Цозехеі ог бехеці іБреппаюхоа", Тпепйсоепоюду; Мої. 53, рр 1333-1344, (2000)
Вигшахй, 1.0., Ріскен, ВАМ, Мов5, 31. апо Васк, О.С. 1974. Кевпйоспір ої Чигайоп ог евітв 10 ргедпапсу гай ій поппану сусіпо, попчасіавло ппагез, А.М. М.А, 165:714-716,
Савіюк, Б.А., "Пе Мома апі Ще Миїмо-мадіпаі Опійсе апі Не Меййоп ю Сепна! Неайп ої Ше,
Сан, еї ві, "Аззаззтепі ої Мат апо Воаг Зреппаюгог Юойпу Сей-бопіпо бу Бош Суютенгу,
Сан ові, еї ві., ВІВ ої а Має цатв Оепйуей лопі ап ії Мито Майже босу Євийеей Ву! іпгасуюріазтіс іпізсют ої а бійців Ртезштпріме Ма бБрепту, Увівпйпагу Кесога 139,19596, рр. 494-
Спапоег, че. а; "Водде врептвівгові Неві біхе Уайвцой вп Бувінацев ої В верагацопі
Рспапаег, че. "Уеотістювсоріс Сотрайвоп ої Ви рент ап Геукосуїє Спготозоте: Дгеає яв
Вон не НН
Спшпо, У. Бсйепк, 41., Непскпой, ГА. апі Земе, ЗЕ. мг. 1998. АПЙСіВ! іпзетіпацоп ог сівтені, Е., Мсей, Р., Мапіз, 8, Мепацх, 0. ап Раквех, Е. 1998. Мліст іпзептіванолп Тепійтех
Моя пок ення не оте ване оианя тя вити во тут тн,
Стап, 0.0. ої ві, "Ргодчобоп ог Матв Бу ом Оове Іпігашіенпе Іпзетіпайоп жів Бім Суютенісайу
Ста; В.О. ві., "Ргодисіюп Вохіпе Саме Еойоміпло Зерагайоп Х- апа ч- Спготовоте Беанвй
Стат, 0.0. Чоппеоп, І.А. апі Роде, С, 1995, "Зех ргесевсіюп і сайіве: а бе па. Ме Бес.
Си, К," Вже Ойегепсев резееп питап Х запо У Ореппаютог апа ргеїепійгацоп фадповів".
Ситал, 5. 1998. іл: Еаціпе Сапповіє Обгазоподгарну. Бе депасг деіетліваноп. Кайапеп а рев ММ
ІОву, В.М., Ареудеега, 1. Я., оппвоп, І.А. Ууеісі, С.А. М/апо, ЛЕН., Сапіву, Т.С. ап Нівке, А. 1998. війн ої ріг ргезеівсво ог дблсег топомйпо іп миго Тепійхайоп обіп мйто пзаєгеє рід оосмев ру Х
Ювап, Р.М., Ріпкеї, 0, апі Мепасівоб. п, М... 1978. Нуйгодупатіс опеманоп ої єреппаютов пево поді ВН
ГОетіск, 0.5., Мовв, Мі. апа Ріскен, ВМ. 1978. Ебес ої соойпо, віогаце, діусепйгацоп злі
Ібепоаає, н.с. бе опо, О., Гаперееп, І.М. Т.Е. зп Мап Маціепопк-Ое іееим, А.М. 1998, Те! теівцопелір ребавеп Ще питорег ої зреппагютов ізетіпаей апо ще гергойисіме енісіепсу ої чаїгу
Оіппуев, А. еї а, «Тітіпо ої пе Біві Сівамаце Розічпеетіпаноп Айесіз Стуовигміма! ої п. Міго- ргодисей Воміпе Віавіобувів", Мосс Бергой дехеюр 53,1999, ро 318-324,
Бопакізоп, і. Б. "ЕПесі ої іпзетіпайоп Кедітеп оп Єтбгуо Ргодисцоп іп Зирегоуціаіей Сом", Те
Поподіше, ве а, 1998. «Пітіво о омінаноп апег допадоігорій іпдцейовп апа й ітропапсе о вцосвезПя
Вон і вс МНН
Юороіав, К.М. 1979. "Мемівм ої вирегоміавоп вп ігапеїег іп лю ваше", Тіеподепоюду.
Боноіа5, К.Н., Мій, 1. апо Сійвег, Олі. 1974. Іпфисноп ої оушайоп апо тийріє оУшаноп оп
Сиспатр, ., Вочг, В., Сотраточв, У, апа Райпег, Б. 1987. Акетайме зоїшіопь 10 ПОС іпйчсбоп ої)
ІЕмале, М.І. апо імійє, СН. 1977. Іпфисцол об Тойоціа Чемеіорютеяі, пайгайов апа оуцівоп Ву.
Ейтдегаю, В.Р., Реегзоп, М.О. апі Зіміа, Р.) 1993. Ебесі ої сопеапі айтіпізманоп ої а вирргевніоп ої омііавоя допіпо Іпе Бгеедіпо зеавоп. Ат. . Ме Ме, 44746175. тт
Ріопачу, Рівні, "Ейестє ог Аде зі Меапіпо апа ії оп Стомий ої Саме", Опіо Ат. ех. апй
Оем. Сігоціаг, 1985,158:29.
Гочікев, ЧА, ві а! 1977. "АКНАСіВІ іпнзетіпаном ог сайіе мвіпо чагупо питірегв ої врегтаютоа". Ук евіннйнівавінйниннйй
Ргапсоп, М. апа Уататою, Т., п Момеви сг тез сітрію сіеровни ітепегепне! аррісябіе ав)
Еворег, ЕК. "Сппісаї Ехрейспов й! ож Суютеніс Зераганоп ої Натап Хе апа у Спготовоте.
Сатег, бі... ві ві., 1963. "Опапійсаноп огійе Х апа У спгопювоте-рванпо зретптаюгов ої дотевнс ення
ЇСіпінег, 0). 1983. "Зехцаі бейаміог Тойожіпо іпгодисбоп ої а віаціюп мо а огопр ої тагеє, бітіек бЯ Чоб ч Не еаане Біо, ЗТ Ніатех ЕНУ Евемієвя тво РАНА сіеапії, В... 1988. епдег ргезвівестоп: пізіюгісаі, есппіса! зп егвіса! регзресіме, Бетіп Кергод.
Соцпеу, 0.0. аті Ніезе, К.І, 1990, І.арагозсоріс апібсіві іпзегліпацоп іт зпеер, Ме, Сп. М. Атег.
Стопоані, С., ві аі, тр Мило Реодуевоп ої Едціпе Егпбгуов", Віоіюау ої Кергодиснов, Моподгарі бепев!
П. рр. 290-307 (1985) т, ПН
ЇСищом, Є. апа Сотратоце, У. 1983, Рипійснцюп ої едоіпе допадіоїторіпе ап сотрагайме шоу ої
ЇСоттееу, М.Р., ап чойпеов. М.А. "Кесепі ітпргомететі ів ейісівпсу ої йому суютеніс 5зоппо ої х апа У-спготовоте бегіпо хрест ої дотевнс апітав: а гемісєи", 1998, Мем 7евівапі босівїу ої Апіта!
НАМАМАТВИ, «Ріоготиіріїєг Тибет", чеб раде, вир/лямим орг ого/патаглаєзи рн, ратесі
ІНАМАМАТВО, «Теснпіся! Ниоппайоп", че раде, пару. орісвоговататавирпоюдіоде. пт,
Натапо, К.. ег аі., "бепіег Ргехеівсіюп іп Саше мій Іпітасуюріавтісайу іпесівд, Ріо Суютейнісайу
ЇЗопей брепт Нева", Вібіоду ої Кергодисноп 60,1998, рр. 1194-1197.
Їнатієоп, А. еї 8і., 1991. Сотранеоп ог ПОС, Бивегейп апа Іргоєної гог Іпаиопоп ог оуціаноп іп сусппу ппагов. Бо. уві. бо. 3183-1668.
Нам, НМ. «і ау. "Бепйханоп Каїв5 ій Бирегоуціанто Сем Алег Брерозійоп ої Зетеп оп пе)
Ісйбипофіюцінт Мезаг фе 1Лесиває чпекоп ог Айег фобегтіпаног ча Нв Мутабе ої брета,
Нойегег, 5., (есотріе, Б. Мадайоп, т. Раїтег, Е. ап Сотбратоив, У. 1993, Іпдцебоп ої омціавоп їапа зирегоуціацюмт і птагех цзіпо во ВН ап КОН вера Бу пуйгорпобіс іліегасіоп
Іспготаєордгарпу, г. Кергод. еп. 98:597-602.
Нонап, ОМ. Госоівз, вн. апа (Зіпілег, ОМ. 1977. Евілив, сяалацоп ап сопсерноп тойоуйпо) зупслговпіхацом й ргооденівгопе, рговсадіапой Ко? сі яп питай спопопіс допадоторій т ропу!:
І кпагев, о). Апіт. Зої. 44:431-437. що
Ночцвейоег, Ю.0., Ріскей, В.М. Моє, М. аж) Оіаг, Т.Т. 1981, Ейесі ої ехіепдег, потбег о
ІНоматі, в. ві зі. 1991 ; "Сотраганме ветей сгуоргезегуайоп іп 'їєнев (мМиеа ршопоце пато) ап
Іргедпапсіве айег Іарагозсоріс іпігаціенйне іпнзегпіпайоп кл бохеп-впачад врегтаюгтов". У. Кергод.
Еей. 52:109-118,
Ножеаті, 4х5., ві аі., 1997. "Бепзймну о еходепоце допадоїторіпв ог омшеноп апа Іврагозсорісі
Нипівг, К.Н.Е. 1980. Теаперогі апа іогаде ої грептпатогов пе (атвів тередценче гасі, Рос и.
Нузпа, ІН, «і а. 4988; "Сбопадоїгоріп-гегеавіпу погтопе (спнн) денчегей Бу сопіпиоце іпгивіоп, пдусев Тесіце евігив іп тагех ічйпо зезвопа! зсусісну". Реос. Агтеї; Авос. Ед. Ргаб. 181-190.
Пемівме, сна. ап Аіехапоег. ВМ. Ів; Евдціпе Бергодисіоп. Еней Бу МЕКтаот апа Мов5: їез апй
Зако, 0... Мапа, ЗМ. апо Бовігев, Ед. 4992, ЕНес обхоїте: апо сопсепігацоп ої врептпацгтов оп пес МНН
Чолпєов, АЛ. 1986. "Риізаше геівасе ої допадоггорій геівавіпа Воплопе зачапсез оучакоп іп сусіпо! пох кН ово, АД. Вескег, ЗЕ. 1998. "ве ої допайсігоріп-геївавіпо поппопе (СПВН) ігезітепі іо! пдисе товійрів омцівйоп пе апевігоце птаге", о, Меї сі. 8:130-134. (1988)
Зойтпвоп, Г.А, "Абмапсеє іп Сбепдег Ргезеівсйот іп Зйпе" Зошта! ої Кергодистот ап Кепішу! пе НН
Зовбпеоп, 1. А, "Зах Ргевеіестоп і Змйпе Айео Бех Майоє і Ойберіпто Бойомлю Зигтісві! інгетіпанов ої Біо Зопеа Х-апо -Ввайпоа зрета", Кергодисіоп іп. оте Апіптаів, Мої. У6, рр. г309-314(1981) ' міовпхоп, М.А. зпй умеїсв, ся, "бех Ргезвівстіоп: Нідб-хреєй суютеніс ої ап У врегт «ЮнніБоп, І.А. апа Зспідтав, го. «Тве заїеіу зеівсйоп бу ом суютену". Нат. Кергод.
Зоповоп, КА. вт Ріпка, р, "Модійсанов оба і дзе-Вазей Пом Суютеег їог Ніоп-Кезопліоп ОМА. повз НН
Поїлеоп, М.А. ві а!,, "Зех Ргезеіесіюп іп Карр: Ше Віт їот Х апа У брегт Зерагана бу ОМА, вп Сей Зопіпо", Ехсерйопа! РареКарій Робісаноп, ХР-002103476, Вібіовру ої Кергодисцоп 41, рр.
Іаойпзоп, СА, вії ві. "Кюч зопіпо їх ам у спготозоте-реагіпа зрепт ог ОМА цвіпо ап ітргоува нн в НИ
МопАзоп; А, в ві, "Епрапсей ЛПож суютеніс зопіпо ої гпапопавай Х апоі У зрепті: пір! регі зопіїпо «оппеоп, СА. ві аї, "Бех Ргезаіеноп іп Зміпе: БОМ Суютено Зойпю ог Х- ап у- Спготовоте
Зовпесп, А. а, "Іпргомед Пож зопіпо тевошоп ої Х- апа у- спготовопів вейпо уае регі пен т МИШЙ піюппеол, СА. "Бюж суютаціє авіетпіпаноп ої хрегтаогов бах гайо ій ветеп ригропефіу епіснесі пок ВИННИЙ «Довппзов, СА. "зепдее ргехаівсой іп дотевнс апітаів цвіпо йом сутотенсайу зопедй єрепо, і Апіт.!
Зойпеоп, 1. А., "Сепдег ргасеіесіоп іп Маттваіє: Ап оуеглівм", бецієст. ТПегагні. Муеснг, Мої, 103, рр онов, ГА; "Ізоїаной ої Х- апа ч-веава зрепахов Тог ех ргеквівсцог. іп: Охіопі Немівіме 00
Човпво, КА, "Еиссеваиі еп Ргезевсвоп ів Бат Апліпавів", Астісчнигаї вВісівеснпоїоду, 1998, рр.
Каспеї, М.. ві ві., "Овікт (аегаї Опопіабоп, Созей Бу Ром Богоев, ої Ріві Рапісівв іп Еіж-Тнгоцой
ІКапауата, К., і ві, "Реедпапсу бу папє ої раї іпсетіпаног апі 5ив5едцепі єропіапесив сон т НН
Кагабіпив, ві зі., "ЄПосів ої Бод хуоїк-Сигае апі МІК Ехівпает оп Спготайо Зілісїютей Маршу ої
Кінсатіал, МВ. Ногох, Н, вепипувг, 5. Копик, вс. Тек, с. апа Сайовіч, В. 1998: Епес ой п ММ
Саріп, ЗК. ай Сіпфег, 0. 1977. Іфионоп. ої Омщайоп але птокіріє омценотх і збахопайу
Іамкепх, К. 1985, Ргейтіпагу тесців ої поп-еигісаї ілігашегіпе. іпеетіпацюп ої впевр мій Шащей сер ИН меміпсот, О., ві аї, "ОМА-разей Х-епгіснед 5репт верагабйоп а ап адфипсі їо рееітріапавол депейс
Мпозеу, А, а, "Нузегозсоріс Іпхегвацой ої Мага жййй Мопіогеп і ом-йозе Опзехей ої Зах.
Гопегоал, Р., ек 8і., ЧЕПесі ог Тіте Ійтегуаі їтот Іпветліпаною о Рігвї Сіевувов оп пе Оемеюртені ої спосо ва пенні о ісу, 8. аті Неовев, а. «Те ебосів ої питав спогопіс допадеігорій оп аланоя, іепрів ої взілів,
Гапкі Тепіу ів що гпаге". Согей Ме. 56:41-50. (1985)
Пш, КН. ві а. Ча Миго Бепійханой мВ. Біож-Суютецісану- воло Воміпе Зрети", Теподепоюсду 52,1999, рр.1393-1405, :
Мастійай, КІ. зп А.М. Ову, "Реомадіалй Бога - А Бепішу під п Оіагу Сащет", Кчакога Апіта
Везеате Біол, Ріїмаіє Бад, Натійоп, Мем гозвіаті, Треподепоюву, Зеріотоег 1982, Мої. 18 Мо. З,
Маїзцоа, "У. апа Тобай, 5 Спготовота! апагувів іп гпоцуве едде Тепцілей й мо м 5регт вхрозесі то шйгаміюіей йоме (У) алі тету ато еіпуї теїлапевиопаєе (ММ апо ЕМ)", Мові. Кев, 198:131-) 144 (1988)
Махмей, МУ. апа Чобпвол, ї. "СНіопеїгасусіпе Апаувіз ої Воаг Зрептаогоа айег Іпсирацоп, Ром
Суютейне Зомйіпз, боонто, ог Стуоргевегмацноп", Моіесніаг Кергочуоноп апа Оеусіортенві 46, 1997 ірр, 808-418 : махмей, Му. ві ві, "Бепіййу Ої вирегомава Ем'ез айег нмгашеніне. ої смів Іпветіплавог ча ож
Мебопа, СЕ, "Нотопеє ої ще рішнагу дівпа", І: Уеїегіпагу Рпатасоюду апа Тнегарегніся, в
МеКецпа, Т., ві ві., "Мопгешто гаіо5 07 Фагу саше гойсжітю шеппе роду ог сота! іпетіпацоп", 4. ен НИ
Мекіппоп, А. вп Мов, «у "Бдціпе тергодисноп" їеа Еебідег, РиЙадервіа, рр. 281, 289-309, 3454 з МНН /Мекіппоп, А. ага, "Ргефієавів санацоп ій тагез пецей яки аз трат об їбе сп апаіброе
Мекіптог, А.О. ві ві. "Керевієй цве ої а СПАМ Впаіодче дезіогеїт (Омиріалі) тог назієпіпо оушаноп
МмеМий, ТМ. вп. «опавов, МА ож суотенію войпд ої 5реті; іпйцепсе об тепййханов ап
Меен, С., еї аі., "Адмапсіпо ще чле ої еуопліоп іп (пе таго мир а зпоп-іетт іторіат геівавіпо Ще.
ІМегіоп, 4. «а, Нева ої Ром Сутенісану бБопеч Рехеп/пнамей бетеп оп биссез5 Ма ої ій
Меусгь, Р.., Вомипап, Т., Віоддей, ., Сопіоу, Н.8., Сітепех, Т., Кейі, М.Р., Таміог, В.С., Тпауег, 4., пон то тн ТЕ в о оте син то, нон ль сни чн іпріяпі ою ассеівга оучіебопій осно тагех. Ме ес 1402485
Міспаєі5, СВапех, "Бесї ДІ. Басійех Шаг ю, Рос ЕМА МАВ, Тесп. Сом. АЛ. Мергод. "Соіштірів, МО, рр. 2022 "Міснеї, Т.Н., ві аі., Тсасу ої питал спопопіс допадоїгоріп апі допадоїгорій гегеавітю поппопе тог ілавтопіго омиіайов іп Тпогочувосес пагеє", Б. Меї, 6:438-442 (1988)
Мінег, 5.2, "Айбсіві Вгаєдіпо Тесппідцех іп Зпеер", її Мопом О.А. (69. Ситепі Тпегару іп!
Мігекаіа, І.М. апй Рейгораміочаки, ММ. «тве гергодченоп ог потові Фиганоп ої пев іп пе таге Бу ще адтіпівігацоп ог его", Регбі. гімот. Авіт: гово, Абвіг. 5:387 (1957)
Мойпія, Р.С., Сівбоп, К.)., Вгомип, А.М., Сіаліег, А.М. ап Кодцег, С. 1998. Зиссеєвли тепійгацоп іабйог зорегоуцієноп ап Іарагобсоріє ійігаціейпе іпзетілайой ої (а бгоєіай розацт), ТИсСповигих маресшще, вп чаптіеваг майабу, Масторих воидепії, З.Кергой. Бе. 112817.
Могсот, С.В. аті Юикеїючу, МА. "А теввагой 1есплідче Тог Ще оукічса! іпветіланоп ої ріде мвіпа
Мотіє, .Н., ек ві, "Нувіеговсоріє іпеептіпацогп ої пай піитрегв ог зрептаютов а Ще шмегошва!
Мій, УМ. апа Заціег, Б., Чиегаснотв ої еіеговготайс сотронтів мів писівіс асідє" Биго.
Миппе, 8. «Біож суютейгу 5ерагайоп ої х ат КЯ врептаюгоа соцій. дечітетіа т нотапі ептогусв"; Нит. Кергод. (558, (1984)
Можевагі, ві аі., "Зирегомцівнюг ої Совів мій Рийей рЕЗН бирріететеа мій Оейпей Атоипів ої рун", Тнейодепоюду, ої 43, рр 797-802 (1995)
Сівоп, 5.Е. впо Зеківї, 5.Б. г. "Кедисед Охудеп Тепзіоп апо ЕОТА ітргоме Воміпе 7удоїе
Секеірртет іп а Спетісану Оебпед Медішт", дошпаї! ог Апіта! Зсівпсе 78, 2000, рр. 152-157.
Расе, ММ. апа Бийімап, Зм. "Енесі га чепіпо ої іпсегпіпаноп, пигтрег и" врептмогов вод ехіепсег, сотропеців ой ргерпапсу гайе5 Мп тагев інзепіпацей чй Могеп зіайоп зетптеп", і Мері. Реп.
ІБцррі. 23115191 (1975)
Ратівв, ЗЕ, ек ай, "Сарасіяноп ої боміпе зреті Бу пера", Віоібсу ої Кергодисісп, Мої. 38, рр.
РСТ аррісайоп РСТА)599/17165, Щей 28 «цу 1999, впішей "Едцїпе Бувівт гог Моп-ВЗигдіса! АМійсіві
ІРСТ аррйсайоп РСТЛО5ОВ/27909, Пед 31 Оесетрег 1998, епішей "Соттегсіану Ргасіса! Зех- о НН
Реїрро, 4., в аі., "Бех фарпозів ої едшіле рееїтріатпівайог етбуо» йвіпо (пе роїутегаве спаїп вен НИ
ІРетту, Е.3. "Ніщопіса! Васкоговпс іп: Тне Апійсіві Іпзетіпаноп ої Бапт Апітаїв", 4 е4. Есйео ву Є.) репу. Межш Вилок, Киев Опімагну Ргеє5, рр. 3-12., (11968У і
Ресежеп, С.А. вії ві, "Сом апа Са Репотапсе ап. Есопотіс Сопзідегацопз ої Еапу Мгапіпа ої
Бай-Вот Нвег Сівмуе",. Апіт. 5с., 1987, 15,рріВа. м
Ріскей, ВУМ, ві аї, "Басіогь Ілйоепсіло (Ще Тегіпну ої зайоп зрептаютоа їй вп А.І. ргодгат", Рос 8 іатай. бопуг. Апіт. Кергод: АЛ. Ктаком, Рогвпа. 41048 1052, (1978)
Ріскей, ВМ, апа Звіпег, КА. "Весепі Чемеіюртетів іп апійсіві Мізетіпавою іп погеее". Пуестоскі
Ргодиєноп Зсівпсе, 40,1994, рр 31-38.
Ріскен, ВМ. ямі Васк, 0... "Ргосефогев ог ргераганом, сойесцоп, вувішаног апа іпеетіпачог о вівійоп зетеп". С.8.Ш. Ехр. іа. Айіга, Кергод. баб. еп, бейе5 Бий. 935. (1573)
Ріскен, БМ. в аї., Лесі ої сетіпа! ехепоег оп едціпе Теціну", 4. Апіт. Бсі. 40:1136-1143, (1975)
Ріскен, ВАМ. ві аі., Чопйцелсе ої зегпіпа! аддймеє апо раскадійю 5усіете оп Тепййу ої Боміпе «рептпаюогог", і. Апіті. Єсі. Биррі. Ії. 47:12. (1978)
Ріскей, САМ, ві ві., "Мападетепі ої (фе таге Гог пахітит гергосисіме ебісівпсу" Вийейп Мо. 5
Союгадо Зішіе Пдімегайу, ЕС Соц СО, (1989) й ріпка; 0 ей ві., "НІВ гесопліюгй ОМА теавигетепів ої таттайая зрептвохог". Суютейу. 31-95; (1982)
Ріпка), 0, ві зді, "ож сСуютені Веепвіпавоп ої (Не. Ргоропіспе ох. зпі ж. Спготовоте-Вваіпо
Врата ій Загорієз ої Ригропефу берагайні Вий брепти, Зоцивзаї ої Апнтаї Зсівпоє, Мої, 50, Мо. 51985, рр 1303-1307.
Роде, Е. З. "Рішопсв Рагзресіме ої АГ: Соттетсіві Метоай5 ої Ргодисіпо бех Зресійс Бетеп, МЕ!
Ргосецгев", Ргосвеціпов ої те 167 Тесппісві Сопіегепсе. оп Алійсів! пветіпайом 5 Кергодисногп
Сатігпдде, Єпдівпа, 1998, рр, 7-11.
Ргеха, С. ві ві, "Осівтіпаноп ої Оігеспоп-іпіерепчапі Оріїсаї Раїй-іепдій Оівільойоп ог Сей: цМкіпо!
Кавйопаноїмеєну Тгапвтнйей ом Ойбегетіа! Іенегепсе Сопігазі ЛО іпапея", Руєзепівй а Ве
Кай, С, ві ві, "Ргодисбоп ої Рідієїв Ргеввіесівд гог Бех Бойожіпо іп Міго Бепійганоп чйй Х впсі х
Спгогосоте-Везіпо бреппаютоз Бопей бу Бюж Суютейу", Трепйодепоїюду, 47, 1997, рр 795 5 каф, ві ві, "ож рове Іпетіпайоп Тесппідце п (пе Р", Вовг Зетей Ргевегуаной ІМ, 2000, рр. 3115-18. ,
ІВейпо, В.А. е а. "Енегі ої Ргепавізі Апогоделіязцоп Ргегоптапсе, 1 осейоп, апа Сага апа
Беапзогу тгайв оп Нейег5 іп Зіпдіє Саії Нейеє Зувет", і. Апіт. З. 1995, 74: рр 986-982.
Кепе, ММ., ві ві. Чтргохед Ріош Суютенс Бопілу ої Х- ап У- Спготоботе Веаппо Зрепт:
Єиряапіан остваво іп ес Бехей бетеп", Моївсціаг Кергодисіюп апа Осхвіортенпі, 1999, ро 50-
Кепе, МУ, еї ві. "А Момеї Моггіє тої Моге Ебісіспі бреті Обейаноп о Ітргоує Бопіпо ЕтТсвасу СХ (віедег, 0. ва, Те Кеіапопенір Велммеет пе Тіте ої Рігві Сівамадю ої БепіййхеЯ саше Оосуює апі нен інн НН пес нн
Козег, Л.Е. еї ві., "Кергодосіме ейісівпсу п піагех їв впі-нСо атрофію", Рос 9" ІМ. Сопог.
Мо, ТА. еї ві, "Ейесіє ої едційе спопопіс ропассігорій, пиштеп спопопіс допадоторій, ато іарагозсоріє агійсіа! іпзетіпаноп оп вітекус, впбосіпе, апа Шіва! спагастетівнов іп пе доптавцс сві",
Коміву, Н.8., ві а, "Ева ої іпзегтіпаноп усіште оп етіхуо гесоуегу їй тагав", у. Едпіве месва.
Заївтов, 8. "Апнка! іпзегліпацоп ої Ввеер". Спіррепчаіє, Мем Воші УМпаіев, Рибісну Ргевв, вр.В3-
І Байввигу, ОМ. апа мапретат, М. "Рпузіоюду ої Кергодиснов зп Алійсів! Іпзегтіпаноп ої саше", нн НН
Бспепк, 31. апо бедеї, 5, С... "нтитпіпепі Соттегсівантаноп ої бехво Воміпе", Ргосевдфтює, Тпе вепейк, 3, ВЕ В., "Стуоргеземанов ої Бібм-вопеа Вомпе Бретпаютов, Твеплоденоюду 521999, в
БОНТЯ В.І. ві а, "Беййізайоп чіп Зехей Едчіпе Зрептаїюхов Швіпо Іпігасуюріаетіс Івесйоп апа Омідчаві Тазетіпаног ", ТІВ іпегпавопа! Бутровішт Оп Єдціпе Кергодисномв, рр. 139 (АБагасі)! (1898) !
Беме, С. г, "ве ої Бехей Воміпе Зрепт г іп Мйго Бепйланот по Бирегомііаноп", Апітаї
Кергодиєном алі Бістесппоїюду Мабогайюгу, Соіогайо Вів ЦОліметвйу, Ргосееділпах ої Ше 2000)
СЕТАЛАСТЕ Сопуепіоп, Спапойемт, Ріїпсе Ефлагі Ібіапо, Ардиві 2000, рр. 22-28.
Беідеї, с.Е. апа чобпвоп, 1 А, "бехіпо Маттайнап 5регтт- Схегіеми, Тпеподепоїюру 52: 1267-1272, (1999)
Беіде), ЗБ. б, сеї аі., Чпеегтіпабогп ої Нейег» мий Зехей реп", Тпеподепоїору, Мої. 52, рр. 1407- 1421 (1998) Й
Ісееї, СЕ. Зб, ев, "Апійсізі Меелтіпайой о Мейегв й Сосієд, Цийохеп Бехей бетеп "7, тТнеподепоіюду, Мої. 49 рр. 365 (дбвігасі) (1998) ведві, зе. жа ві ві, Чозетіпацюв ої пейегв м вехой Жогеп'ог захо ціа ветет, Тпеподепоюву.
Беїде, в. чі. зві, "Лепіпе Нога іпеетіпаноп ої Нейег ТА Мету ом Митвеге ої Мопітохев апо
Бехей Зретпафогов,, Дпйпаї Кергодчсйюоп апа Віоїесппооду їавогкогу Соїбгайо 5іае Опімевйпу,
Аніагбс Вговдетв Сборегайме, ТПпеподепоїору (1697), рр. 1255-1284
Беміві, ЗЕ, "Зівйив ої Зехіпо Зетеп то Вес? Саще", Техаз АВМ Цпімегейу 451п Аппигі Вееї саше ен ВИМИ
Беїдеї, г, - Б, еї ві, "пзегіпаноп ої Ноїзівїп Нейега МИ: Мегу ож Мотрег ОЇ Опіогей
Бепдег, Р, ві аі., айцепсе ої сота! іпзегаітайоп оп сопсербов гггез іп дану саше", Авт. Бі
Опекоп, М. апа Мооге, М.МУ. 1987. Те гезропбое ої пе вже її ргедпапі таге допадоїгорій апа о погза апівног ріцнагу ехігасі. і. Кергой. Бей 14175177. впйсма, АХ, Ріаісу, Е.М. ап Середеу, 55, 1975. Тпе Гу потал спопопіс дропайсійгорніпй тог оуціаноп Яабе тепцівноп ій піагев: НИВА и. Сопог. Оп Апіт. Керго. апа А. 204-208. бБачнев, Е., "віпипапеоце Апаїусі ОЄ Морі регіт АНПБлея БУ Божу Суютену", Віздповне тесппідцеє ап Аевівіей Кергодусіїуе Тесппоіоду, пе МУеїелйпагу Сіліся ої Мо Атепса, Едціпе
Бдцісеє, Е.М еї ві, "ЕНесі ог дове об Зп ападив оп оуціаноп ій птагеє". Тепйсдепоюду. 41:757-1
Бдцігев, БЕ. "Байу Етбгуспіс 0557 іп Едціпе Оіадпово (Лгазоподтарпу, 1 Ей. рр 157-183 Е95)
Зацігев, ЕД. ві зі, "Сооівей апа йохеп віайол бетеп". Войейт Мо. 8, Союгацо вів Ппімегену, г
Сова, СО419989) виімап, 4. маже, Мб. апа Магвол, Д.. 1973. Оцгайоп ої езтив ап омоавбог те ій попіасіанто тпагев дімеп йутва сбвопопіс допадоторіп? слу (гає зцесевіуа евігоив репйра5. ЗАМАМА. 162:895-898,
Вийнтег, АТ. ап Кобінвоп, ЯМА. ТА рійегепсе їй Огу тав реїмеві їпе Неас ої Х апо У-беагіпо.
Тацаамі, ТА. Теплапспе, 5.2,, Вепзспіпоег, Н.). епі мап Мицгепт, І). 1991. Тре ейесі ої Ще
Тауют СБ. "Ебсіепсу ог Косі ШЩігайоп і Ттадйопа! алі Зех-Сопіопеа бумете ої Вееї
Етовйисов, АЕКС Аліта! Вгесдівуа Кезеаг Огдапігавйол, Ме Майн Коаа, Еанбига ЕМО 390, рр
ІТегуй, Н.В., ві ві, "Зносез5лі Сиуйоте іп Міо ої Зеєр апа Саше Ома", Адпсинйиа! Безейгоії Єоипоїй,
ЦО аррісаной 09/015,454 ей Чайцагу 29,1998, епійей "бузюепть Гог Ітргоміпо УеКІ ої Бехей
Етігуов іп Мапа". 15 аррісайоп о8І001,394, щЯеа Оєбсетівег 311997, епійейа "ЗВнеа Біб апа Сопесіоп Булат о дех-Вресійс Суютегег бопіпо ої реп".
Арріїсабоп, 09/454 488, епійеа Чергова Еюж Суютегег Модлів апі Ком Суютеег Ватріє шин ПИТИ ТИ ТИ МИТИ
Мочетбег
ЦО Арріїсенов, 09/511,959 епішеа "Методе Бог іпргоміпо пев Рішідв апо Сопйесбоп букет Бог
Вех-Зресійс Смотеїег Зоппо ої Зрепті", Щед Гебтшагту 23, 2001.
Арріїсайом, 80/094,720, епіщей "Бувієт ог Іо 0ове Іпетіпайоп ог Єдціпеє", піво міу 30,1508.
Ше Арріїсабоп, 60/224,050., епіцес "Іпієдтаюс бБузієт ог Негі Мападететі МИР Теппіпанстове
ІРгодгат цвіпо Зехед Зетеп", йес Андисї 92000.
ЦВ Аррісацоп, 60/203,089, епішей "Овієсюг Бувієт ог Кевоміпю Зтай Пійвтепсея іп/ РАОЮ-
Сепесаіва бідпа!", ей Мау 9, 2000;
Ш8 Арріїсаноп, 60/238,294, епішей "Нумегозсоріс Іпеетіпаног ої Маг" Пед Осіорег 5, 2009.
Ше Арріїсвйсп, епішей "Бувіет Бог бЗерагантю Егохеп-Тпашей Брепт Сей Іпо Хх-ОПпротовоте дл ж Спготовоте Вавппа Рорціайств", Щей Мохегтрег 28, 2000, ' ! !
Арріїсаноп, епішей Вузіет г іп-маго Репціганоп Бреппаюгоз Зерагаєай іо хХ-
Уап Мине ЕВ. ай, ""Меазигетепі-Вазай єуввацйоя ої орйсаг райнепої дібрийопе тесопацчсей пот зипцівіей ашегопна! іпіенегтепсе сопе падав". чоцта! ої Містозсору 192, РЕ 2, р. 170-176 1998 мап Мипеіег, В.8., ві аї, "Сіатепсе ій Брет Незі Моїште 35 8 "Твеогенса! Базі Тог Зопіо ха у-
Уап Мипеїег, Е.В., ев, "Шесопвіпсноп ої орісаї разніепойй венібиногв Топ ітадев обезіпей. Бу а міде беій айегепца! іпівпесепсе сопітаві пістозсоре". доцта! ої Місговеору 188, Р. 2, р. 149-157) авт
Уа Мипеег, Е.В... "Севіаспієрерайння теаї ітепеготенів", Меме риіїв МУМ-рпізмгвад чуоог рав-
Гмап Миопеег Е.В. сі аі, Спегевсе іп Уоїште оїх- апа уУ-сптотовоте Веваіло Вочіпе реп Неад»
ВЕК ПИ
Махдцех, Я.В АЛ й Вміле; Мах Зцавоу г Овер Іоветіланой й Сом Митрег Бреппагтов
Швіпйр а Моп-зогоїсаі Мейодсіору", 34" Іпівтацопа! Сологезе. оп Апіаї Кергойисноп, Мої. 2,
Уагаиет, У. вії "Оемеіортепі ої а Моп-зогоіса! Овер Ірга Мепйпе іпветіпаєоп ТтТесппідее", М іп'еттацопа! Сопгегелсе оп Вовг Зетеп Ргезегувйоп, Магуїзпо, Андчві, 1999, р 35 апа рою ої «Фізріву Боанмі. ї
Уахдоог, 4. ві ві; "Зцосеввї Сом бове Іпветіпаноп бу а Еібегорне Епбозсоре Теснпідче ій Не бом" Руосееціпої Аппша! Сопівгепсе ої Ще Інфетацолпа! Евійгуо Ттапвіеє Зосієїу, Мефейатнів;
Твеподепоюру, Мої 53, чапоагу, 2000, ро. 201.
Магоцех, з. ві Ві. Нуробзетаце Зеніт Те аз Ріефсог ої Фе Метінапе інеойУ й Ваг
Зрепавогоа". ВоасЗетеп Ртеваглюв ІМ, МА Іпгеспавопа! Сомогепов ої Воас бепеп Ртезегманой,
Магуато, рр. 253.
Магомет, 4. е аі., "Мопецевісві Мега! Тазетіпаноп іп ще Маге", Ргосеефпов ої ве ай Апіпиаі
Сопченцйоп ої Ще Атейсап Аввосівноп ої Єдціпе Ргастіоле, Ваййлоге, Магуївла, ЮОвсетрех 6- 9.1998, Мої. 44, рр 88-89
Мідатепі, М. Риреге, АМ., Миеппе, Р., Емаїйп, А., Мове, р. вид Раїпег Е. 1997. Ефіїпе Бохеп ветеп гветварішу по теййну пе тевийв, Твеподепоюду. 48:907.
Мов, ЛЬ, ек а, "Керговисіме паласетені ог'ійе бгоодтаг", С... хр. а. Апіт. Берг. іа. беп, Бейве: Ви; 981. (1976) І
Моче, ., ВЕ аі., ЕНесі ої пуитбег апа йедцепсу ої іпхетіпацопя оп Тегішу їй іпагев", хі, Кергод..
Гей. Зиррі. 3253-57. (1982)
Моз5, і. Яео ої потай споді попадоторій оп ота ої війгойа сусів апа Тенішу ої погану сусіпо, поп-іастайто таге5". А ММА. 185:704-706, (1874). мувіст, З... ві і, "ож Суютеніс брепп бЗойпо зва РОК о Сопіт Зерагайоп ої Х- ап у.
Спготовоте Вевбпо Вочіпле Зрени", Апіта! Вістесппоіосу, 8 (2), 131-139,1695, рр131 - 139; умейстп МК. і а. "Ріє апа орцсаї тодійсабоп юю а КАС М Я пом вопіпа ої Х» вп т. спготовоте беайпо рати базва оп ОМА", Суютейту 17 (5иррі: 7 74. (15943
МлйБоп, о. вві, ЕНецв ої гередієйі ОО іпіеснопе оп гергоднейме еісівпсу іп ваге5", 9. Уеї Бі. 14:301-308, 11990) І !
Млізоп, М... "Моп-зигоісаі іпігацієйле апйсіа! іпбептіпацоп іп Вйспез ивіпо погеп ветеп", з. Кергодй.
ІБеп Зиррі. 47:307-311. (1593)
Уміповог, ОР. еї аі, "Зех Ргедеіептіпаног ру Зераганйоп об Х апа У Спготовоте-реаіпо Зрепк А
Кечіечи, Кергойуеногп ої Бенйшлацоп авіа Оеуєіюретепі 5, рр; 155-171, (1993) умова, Я апа сіпнетг, о. "Кесепі віце твід (о ре сойесноп ої пвнбріє, епібгуюєв іп ппагев", тТвеподепоюду. 19:01 - 108. 11883)
Мусода, Я, ее, Епесів ої те ої іпзапзіпаног геіайме о вушіаноп оп ргерпапсу гай апа егтргуопіс-
Новз гаіє іп зага", Бо, Усі. З. (ра ТО-415. (1990)
ЇХР-002103478, Ре Віовів, (1988), опе раде І | Й
Крім того, стосовно кожного використовуваного терміна слід розуміти (за винятком ситуацій, коли його використання в даному варіанті застосування не узгоджується з таким тлумаченням), що загальні словарні визначення слід вважати включеними для кожного терміну і будь-яких визначень, альтернативних визначень та синонімів, зібраних, наприклад, у "Напдот Ноизе
Ммереїтег5 ШОпабгіддей ОБісійопагу" (друге видання), таким чином, їх включено до цього опису шляхом посилання. Проте стосовно кожного з наведених вище моментів слід зауважити, що в тій мірі, в котрій такі включені шляхом посилання дані та положення можуть вважатися несумісними з патентуванням цього/цих винаходу(-дів), такі положення жодним чином не можуть вважатися сформульованими заявником(-ками).
Крім того, слід розуміти (за винятком ситуацій, котрі вимагають іншого тлумачення), що термін "включають" або ж його варіанти, прикладом, "включає" або ",... що включає(-чають)" означають включення зазначеного елемента або операції або групи елементів або операцій, але жодним чином не виключення будь-якого іншого елемента або операції або групи елементів або операцій.
Такі терміни слід тлумачити в їх найбільш широкому розумінні, що надає заявникові можливість скористатися максимально широким патентним захистом, офіційно дозволеним у таких країнах, як, наприклад, Австралія і т.п.
Таким чином, слід розуміти, що заявник(-ники) має(-ають) підставу заявити принаймні: і) кожний з описаних в цьому документі пристроїв для перетворення рідини на газ, ії) пов'язані з цими пристроями розкриті по суті і описані способи, їїї) аналогічні, еквівалентні та навіть неявні варіанти кожного із цих пристроїв та способів, ім) ті альтернативні конструкції, за допомогою котрих виконують кожну з наведених функцій, як розкриті по суті та описані, м) ті альтернативні конструкції та способи, за допомогою котрих виконують кожну з наведених функцій, як неявні щодо виконання розкритої по суті та описаної функції, мі) кожну наведену ознаку, елемент та операцію як окремий та незалежний винахід, мії) варіанти застосування, розширення можливостей яких зумовлено використанням різних розкритих по суті систем або елементів, мії) кінцеву продукцію, одержувану за допомогою таких систем або елементів, іх) способи та пристрої, суть яких описано в цьому документі з посиланням на будь-які з доданих прикладів та х) різні комбінації та перестановки кожного з розкритих по суті елементів.
Таким чином, викладені в цьому документі пункти формули винаходу включено шляхом посилання як частину цього опису винаходу, і заявник спеціально наголошує на збереженні свого права повністю або частково використовувати цей включений вміст цих пунктів формули винаходу як додатковий опис для підтвердження будь-якого або всіх пунктів формули винаходу або будь-якого елемента або його складової частини; крім того, заявник спеціально наголошує на збереженні свого права переносити будь-яку частину або цілий включений вміст цих пунктів формули винаходу або ж будь-якого їх елемента або складової частини з тексту опису до тексту пунктів формули або навпаки як необхідної умови для чіткого окреслення предмета пошуків шляхом подання цієї заявки або будь-якої пов'язаної з нею додаткової продовжуючої, виділеної або частково продовжуючої заявки, або ж для отримання будь-якого ефекту винаходу, скорочення розміру мита відповідно до Закону про патенти, відповідних правил та постанов, або ж для дотримання таких законів, правил та постанов будь-якої країни або в рамках будь-якої угоди; такий включений шляхом посилання вміст залишається чинним протягом цілого періоду розглядання цієї заявки, включаючи будь-яку пов'язану з нею додаткову продовжуючу, виділену або частково продовжуючу заявку та будь-як пов'язану з нею заявку на заміну патенту або на продовження терміну його чинності. 6 декрет йгйт. ї г ре й
ДІЙ й й 2 13 д' й 0 й й й 5 ій 8 та ил - Н ло 877-9 -ї гу
ГУ
14 22 44. й я ав .
З в . в 2 п, а і 5;
Ів
Фіг.
ш-, 16 Гб В
ТИ ї -ф0 (фон 2 14- ІС сн--14 ра
І, т у. !
З 16
Цв | 15 | 15 | що
Фі. 7 : Т І ІТ ' 2 з
Фіг За : Я ї А. ' і з з
Фіг. х5
Фі. З йо 19
УДК вт,
Ми сут т
МО шик ут, г 1и
Яд евй лаї ча, дя -0 пт У
БУ ія -х со «М оця
КМИНКх -20
КЕ з
Фіг. 4 20-- - 319 ще. . біс ; фр, 5. и ї
УВК, - й уки ва і «ж
Фіг. 5 ци 772 КЕ в
МЕ меми . ай у ут !
Кор вн
НМ
Ко си
ЖК ТТН й ПАЛ: ща. НН и ний вн ен с мн .
Фіг. 6 їх . :
МК 22 -кй ря Ку ни ой ся . шк отит Ку
З зЯ и здвсюннт шви
ЙЛаТН поті їх Е
Фіг. 7 24 25 інн 25 х ї г З і пен 24 ; - Фіг. 8 оленя 23 кос мг ще к, . . Ме пох 24
Фіг. 9 ї хни, 7 за Ж -59
Кодижня
ЗЕККТЕЕДИ во
Фіг. 10 сок СІ2Е
АД Їх а
БІК тов Арея
Нв В РІ баово в чна ПІД о у сс 00 В АСІБЕ і! Є ення С2ВЕ
СБ ана Мо рев нн са ГБ БІ о-о ДО Де в б До ще В 0 бур кемеми три еко веокекчк вот, ве «есе о тех Ж. ЕК Ж ГЕ! ж ее Ге І.
НИЖ во ше ово ой о в б Ку е-еще 919 і реаюканнкх о С БЕ пере КІЛІЯ ШИ тв : гі до тотовія ще аю тая |В й І вЕРоскх БУ ПОово
Б р мізола кі (Ї ГУ е24950 ві ( / 0 2525
Фіг. 11
Орноп КУ М
Геноїв Соппесі Ж ю СМ (1 то 23 Ор фі соотжнню
ТОБ Й стек Орі фа ; - орі др зв19 якої - ОрНоп фе і
Сойоп Ко ак внзи АД
Пея лк Орпйоп й? СВ1б0; -.АДВрНоп ЖЕ,
ЯМИ пат ви г й 7 | І ли «БО?! кім : і цо з.а9К КО ВО, ; (Ввтоув | КІМ 15 3 і М Та бу Ж , вер и м Гог орі у АЗК я п. кіно У ї2 Віго | В
САМ оЕоЮвВо век В ово ок Ток кою Пазкоовк) ОО 150 т : пеня А ГК жо МВ к150 ВІ170 Н18О зла діа вооои зені у 0-97 Ов-67 щз ов -ї5У ОР; Ї І ше -ї5У Е -
АСМО ух сети ! фо ! : Ан і і мч аа о о й Фіг. 12 з 7 / 27
М в ї
Фіг. 154 : дк х ве х і 23 ш Є опт тп чені тіні І тав шко й аНк. 136
Фіг. 15
СИСТЕМИ ЗЮТАВНЕННЯ РОЗДІЛЕННЯ КТТИН З ХРОМОСОМАМИ нн п ще ! ее -й
Бе Гена СКА- я с.
Осн і ! пу ня
Кк вл як г Саме. на зу і24 Н МоУсН ка йо
ЖЕ : Н про ! Ї 88 о сн - , 25 се и
Іст, нео стор БОЇ Моє ВЕК Ї Нюю. ВЕ пттстев, РМТ Нок РМУ Сткр, оКкту нов. РМТ
Ах ТОД он ФММИДНИ :
Фіг. 140
СИСТЕМИ ЗІСТАВЛЕННЯ РОЗДІЛЕННЯ КЛІТИН З ХРОМОСОМАМИ зв птн
Е ; 84 - се - Я
Е з
Ка 8 зменьх кави 2 : і ! | яке: хо ян 5 вв рення 85 т ! ва бл х. сов, схер, ВЗ Стан, ВЗВОД Мен. БАС ВЕК ВУСІ гар, РВЕ Й нов. РМ (тар, РТуновю ЯМ, нення нн сежтечя ІА юн А
Фіг, 146
Фіг. 14
(ра і, 32 ТЕ в маше ЦО я / з Іо В . 12 п шо (о Я вся
ЗУ ва зо
Фіг. 15 й | З І -к ; я з, /зв
МЖК ти 9 де ; / з пдв
Фіг. 16
: Ж за о я чо
І
56
Ат . Фіг. 17а 34 й Й й / -Щ й
М й й
МІЙ
56 о , що ПерерізА- А"
Фіг. 176 о Фіг. 17
І Кк ' 55 А
Певні ообове ни Ми їх Кк 5. й вовево нн сб Я ЕЕ оо їн
Фіг. 76 !
ЇЇ х / х / у ї х / х : / х / х 7 У / дня ку у / т- те пра М їй : ХА
ІЙ за дв ше лшй ! у. і і х / х 7 х /, т иа - Кк ц ; т ши
Фіг. 19
І с-м ' пок 78 т Фіг. 20а нн :
Фіг. 206 та їх полк е
ЩІ 78 | І
Фіг. 208: де КІ
Фіг. ого
Фіг. 20
Ману Я й
СТЕЙ сн 3
Да, ,
Переріз д-х"
Фіг. 216 х о, и од шт 40 л | не
І. Б д-нт р-н
І. / 1 М о І
Й у ч 5 Се;
УК
ФАК»
ШО; ша
Фіг. 21а
Фіг. 21
З -2 й Е я 4 за М га «вороБОВ5О дк за --- нин ше» ше з Ж Х Ї ! е|К І ререи і; Що в і й . її ! 1 і де ж т
Фіг. 22 за за АЖ же р / Еш / я Уа ав і ї и 77 - ци -к ) , - - -у ! й
Фіг. 25а ТУТ ! й
Вид збоку
БА 28 Б
Вірне орієнтування
Ба 78 р
Невірне орієнтування
Вид зверху
Фіг, 256 ' Фіг. 25 яз мо 8 50 8 не ? т 55 | ММ ї. ВШ! й и М 1 р 7 й й ях щі в і І і 1 ! «йон
Фіг. 24 зв / І 7 7 В; ге | пс "ЯМ вв ря -ч 7
ТА й й Решта оптики : й - Й ек
Фіг. 25а ми
СОНЯ
Фіг, 25г дв Зо ві г їз 5 й / / / / зм і ові / тер щі І ! й /й пек ЖЕ ле , ; зд НІ СМ М й " 25 аз 53 Ай
Фіг. 256
Фіг. 258
Фіг. 25 . ? З довитк к Ваде "ахаріва 1» Матерія 2 куай ЕЙ зве -ю АР і ід ! зв, 16 РО о щ ето со віз
ЩЕ ч їж іх і жі» і ї- їх : вазу Фіг. 2ба Фіг. 366 лют оо нн В
Й ий ЕФ / | з ще ГГ /й и о Ше ІА | Іза яки ПОВНИЙ
Фіг 258 Фіг. 25г зв Я
Фіг. 26 . й й з СМ з
Бах йод о що зе т є щі і їв : СЕ я шт Са - 4 з-- й у 85 й їй Пе 5 их зоре - з Її ос
ЖЕК «лем гй шо ца я ше: с вв . ' Фіг. 27
А де зиск
СУБ
: Й Ох й 1 -тт и т 7 я йо - «о В В и й я не сс ї В ді х
КОР ЕДв Я
АТО Че і і. ІЧ.
Бе Ї ри ш
Я де о І в: ск І ей ие
Фіг. 75
Claims (22)
1. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок, який характеризується тим, що містить: потік рідини, в якому асиметричні частинки мають принаймні одну характеристику диференціювання асиметричних частинок; сопло з випускним отвором для відокремлення від згаданого потоку рідини краплинок, кожна з яких захоплює та переносить одну із згаданих асиметричних частинок; джерело опромінювання, котре генерує пучок променів, що чутливо реагує на згадані асиметричні частинки; оптичну систему, призначену для фокусування згаданого пучка променів, котрий чутливо реагує на згадані асиметричні частинки, причому згадана оптична система дозволяє фокусувати пучок променів певної форми, висота котрого характеризується значеннями від приблизно рівного значенню довжини згаданих асиметричних частинок в напрямку поздовжньої осі до приблизно рівного потрійному значенню довжини згаданих асиметричних частинок в напрямку поздовжньої осі; світловипромінюючу речовину, зв'язану із згаданими асиметричними частинками, причому згадана світловипромінююча речовина випромінює світло, реагуючи на згаданий промінь; детектор, котрий чутливо реагує на згадане світло; аналізатор, під'єднаний до згаданого детектора, причому згаданий аналізатор диференціює згадані асиметричні частинки; заряджувач краплинок, під'єднаний до згаданого аналізатора, в якому згадані краплинки одержують заряд диференційованим чином залежно від згаданої різниці між асиметричними частинками; пристрій для розділення краплинок, який розділяє згадані асиметричні частинки залежно від заряду згаданої краплинки; та принаймні одну посудину для збирання краплин, у котрій збирають згадані краплинки.
2. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 1, який відрізняється тим, що згадана принаймні одна асиметрична частинка являє собою принаймні одну клітину сперми.
3. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 2, який відрізняється тим, що згадана принаймні одна клітина сперми має головку, довжина якої в напрямку поздовжньої осі становить приблизно 9 мікрометрів, а також тим, що висота згаданого пучка опромінювання становить близько 20 мікрометрів.
4. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 1, який відрізняється тим, що згадана принаймні одна характеристика диференціювання асиметричних частинок являє собою орієнтування згаданої асиметричної частинки усередині згаданого потоку рідини, а згаданий детектор диференційованим чином чутливо реагує на згадане світло, випромінюване із згаданої світловипромінюючої речовини, залежно від згаданих характеристик орієнтування частинок.
5. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 4, який відрізняється тим, що згаданий аналізатор диференціює згадані асиметричні частинки залежно від згаданого орієнтування згаданої асиметричної частинки усередині згаданого потоку рідини.
6. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 5, який відрізняється тим, що згадана світловипромінююча речовина, зв'язана із згаданою принаймні однією асиметричною частинкою, містить барвник, зв'язаний з ядерною ДНК клітин сперми.
7. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. б, який відрізняється тим, що згадана характеристика диференціювання асиметричних частинок являє собою різницю в кількості згаданого барвника, зв'язаного з ядерною ДНК клітин сперми з Х-хромосомами і з ядерною ДНК клітин сперми з У-хромосомами.
8. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 7, який відрізняється тим, що згаданий детектор містить принаймні один фотоелектронний помножувач, який характеризується діапазоном зміни напруги для номінального режиму функціонування і який функціонує поза межами згаданого діапазону зміни напруги для номінального режиму функціонування.
9. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 8, який відрізняється тим, що згаданий діапазон зміни напруги для номінального режиму функціонування згаданого фотоелектронного помножувача становить від близько 400 вольт до близько 999 вольт.
10. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 9, який відрізняється тим, що згаданий фотоелектронний помножувач функціонує в діапазоні зміни напруги від близько 0 вольт до близько 300 вольт.
11. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 8, який відрізняється тим, що розміри згаданих відокремлюваних від згаданого потоку рідини краплинок є достатніми для інкапсулювання згаданої клітини сперми одного із згаданих типів, а до згаданих клітин сперми належать неушкоджені живі клітини сперми, котрі складаються принаймні з головки, шийки та хвостика.
12. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 11, який відрізняється тим, що додатково містить сопло з випускним отвором, діаметр котрого становить близько 100 мікрометрів.
13. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 8, який відрізняється тим, що згадані краплинки одержують заряд диференційованим чином залежно від згаданої різниці в кількості згаданого барвника, зв'язаного з ядерною ДНК клітин сперми з Х-хромосомами і з ядерною ДНК клітин сперми з У-хромосомами.
14. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 13, який відрізняється тим, що додатково містить принаймні одну посудину для збирання краплин, у котрій краплинки з клітинами сперми з Х-хромосомами збирають у вигляді популяції клітин з Х-хромосомами.
15. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 13, який відрізняється тим, що додатково містить принаймні одну посудину для збирання краплин, у котрій краплинки з клітинами сперми з У-хромосомами збирають у вигляді популяції клітин з Х-хромосомами.
16. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за пп. 14 або 15, який відрізняється тим, що значення чистоти згаданої популяції згаданих клітин сперми з Х-хромосомами і згаданої популяції згаданих клітин сперми з У-хромосомами вибирають з групи таких інтервалів значень, як від 9095 до близько 100905, від близько 9195 до близько 10095, від близько 9295 до близько 10095, від близько 9395 до близько 10095, від близько 9495 до близько 10095, від близько 9595 до близько 10095, від близько 9695 до близько 10095, від близько 9795 до близько 10095, від близько 9895 до близько 10095 та від близько 9995 до близько 10095.
17. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 16, який відрізняється тим, що в ньому додатково передбачено операцію встановлення значення швидкості перебігу ймовірних подій розділення, причому значення згаданої швидкості перебігу ймовірних подій розділення вибирають з групи таких значень, як принаймні 5000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 6000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 7000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 8000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 9000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 10000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 11000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 12000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 13000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 14000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 15000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 16000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 17000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 18000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 19000 ймовірних подій розділення на секунду, принаймні 20000 ймовірних подій розділення на секунду та принаймні 21000 ймовірних подій розділення на секунду.
18. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 17, який відрізняється тим, що операція розділення згаданих клітин сперми характеризується значенням швидкості розділення, вибраним з групи таких значень, як принаймні 500 операцій розділення на секунду, принаймні 1000 операцій розділення на секунду, принаймні 2000 операцій розділення на секунду, принаймні 3000 операцій розділення на секунду, принаймні 4000 операцій розділення на секунду, принаймні 5000 операцій розділення на секунду, принаймні 6000 операцій розділення на секунду, принаймні 7000 операцій розділення на секунду, принаймні 8000 операцій розділення на секунду, принаймні 9000 операцій розділення на секунду, принаймні 10000 операцій розділення на секунду та 11000 операцій розділення на секунду.
19. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 18, який відрізняється тим, що операція створення краплинок, кожна з яких захоплює і переносить одну із згаданих клітин сперми, характеризується значенням швидкості утворення краплинок, вибраним із групи таких значень, як принаймні 10000 краплинок на секунду, принаймні 20000 краплинок на секунду, принаймні 30000 краплинок на секунду, принаймні 40000 краплинок на секунду, принаймні 50000 краплинок на секунду, принаймні 60000 краплинок на секунду, принаймні 70000 краплинок на секунду, принаймні 80000 краплинок на секунду, принаймні 90000 краплинок на секунду та принаймні 100000 краплинок на секунду.
20. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 19, який відрізняється тим, що до згаданих клітин сперми належать клітини сперми великої рогатої худоби.
21. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 19, який відрізняється тим, що до згаданих клітин сперми належать клітини сперми коней.
22. Пристрій для диференціювання асиметричних частинок за п. 19, який відрізняється тим, що до згаданих клітин сперми належать клітини сперми овець.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US20308900P | 2000-05-09 | 2000-05-09 | |
| US23975200P | 2000-10-12 | 2000-10-12 | |
| US26757101P | 2001-02-10 | 2001-02-10 | |
| PCT/US2001/015150 WO2001085913A2 (en) | 2000-05-09 | 2001-05-09 | High purity x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations of spermatozoa |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA81219C2 true UA81219C2 (en) | 2007-12-25 |
Family
ID=27394507
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA200709359A UA95899C2 (uk) | 2000-05-09 | 2001-05-09 | Популяції сперматозоїдів високої чистоти 3 х-хромосомами та y-хромосомами |
| UA2002129791A UA81219C2 (en) | 2000-05-09 | 2001-09-05 | Device for differentiation of assymetric particles |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA200709359A UA95899C2 (uk) | 2000-05-09 | 2001-05-09 | Популяції сперматозоїдів високої чистоти 3 х-хромосомами та y-хромосомами |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (7) | US7371517B2 (uk) |
| EP (8) | EP2258169B1 (uk) |
| JP (4) | JP5071995B2 (uk) |
| KR (1) | KR100849948B1 (uk) |
| CN (4) | CN102288532B (uk) |
| AR (1) | AR034121A1 (uk) |
| AU (4) | AU2001263039B2 (uk) |
| BR (1) | BR0110731A (uk) |
| CA (1) | CA2408939C (uk) |
| DK (3) | DK2258168T3 (uk) |
| HK (2) | HK1163810A1 (uk) |
| HU (1) | HUP0302232A2 (uk) |
| IL (2) | IL152714A (uk) |
| MX (1) | MXPA02010971A (uk) |
| NO (1) | NO20025370L (uk) |
| NZ (4) | NZ551401A (uk) |
| PL (1) | PL359598A1 (uk) |
| RU (2) | RU2297198C2 (uk) |
| UA (2) | UA95899C2 (uk) |
| WO (1) | WO2001085913A2 (uk) |
| ZA (1) | ZA200209139B (uk) |
Families Citing this family (89)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2264428B1 (en) * | 1997-01-31 | 2017-05-03 | Xy, Llc | Optical apparatus with focussing reflector for converging radiation onto a flow of particles |
| US20020096123A1 (en) * | 1997-12-31 | 2002-07-25 | Colorado State University, Colorado State University Research Foundation | Integrated herd management system utilizing isolated populations of X-chromosome bearing and Y-chromosome bearing spermatozoa |
| US6149867A (en) * | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
| NZ509434A (en) | 1998-07-30 | 2004-03-26 | Univ Colorado State Res Found | Equine system for non-surgical artificial insemination |
| US7208265B1 (en) * | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Xy, Inc. | Method of cryopreserving selected sperm cells |
| EP2258169B1 (en) * | 2000-05-09 | 2019-07-10 | Xy, Llc | Method for isolating X-chromosome bearing and Y-chromosome bearing populations of spermatozoa |
| US7713687B2 (en) | 2000-11-29 | 2010-05-11 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
| AU2002237689B2 (en) | 2000-11-29 | 2008-01-10 | Xy, Llc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into X-chromosome bearing and Y-chromosome bearing populations |
| US11243494B2 (en) | 2002-07-31 | 2022-02-08 | Abs Global, Inc. | Multiple laminar flow-based particle and cellular separation with laser steering |
| WO2004012837A2 (en) | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Xy, Inc. | Low pressure sperm cell separation system |
| US8486618B2 (en) | 2002-08-01 | 2013-07-16 | Xy, Llc | Heterogeneous inseminate system |
| BRPI0313476B1 (pt) | 2002-08-15 | 2015-06-23 | Xy Llc | Citômetro de fluxo de alta resolução |
| US7169548B2 (en) | 2002-09-13 | 2007-01-30 | Xy, Inc. | Sperm cell processing and preservation systems |
| MX345106B (es) * | 2003-03-28 | 2017-01-16 | Inguran Llc * | Método y aparato para orientar esperma en una corriente de líquido. |
| MXPA05010478A (es) | 2003-03-28 | 2005-12-15 | Monsanto Technology Llc | Procedimiento para la tincion de esperma. |
| CA2566749C (en) * | 2003-05-15 | 2017-02-21 | Xy, Inc. | Efficient haploid cell sorting for flow cytometer systems |
| JP5046645B2 (ja) * | 2003-09-04 | 2012-10-10 | アリックス インコーポレイテッド | 血液や細胞等の液体混合物を構成成分に分離する方法、装置およびシステム。 |
| NZ530972A (en) * | 2004-02-05 | 2005-04-29 | Embrionics Ltd | A method and apparatus for orientating and selecting cells |
| EP2260854A1 (en) | 2004-03-29 | 2010-12-15 | Inguran, LLC | Sperm suspensions for sorting into x or y chromosome-bearing enriched populations |
| BRPI0509466A (pt) | 2004-03-29 | 2007-09-11 | Monsanto Technology Llc | uso de uma composição a qual regula as reações de oxidação/redução intracelularmente e/ou extracelularmente em um processo de manchamento ou classificação de espermatozóide |
| CN102643780B (zh) * | 2004-07-22 | 2015-09-02 | 英格朗公司 | 富集精细胞群的方法 |
| EP2269617B1 (en) * | 2004-07-22 | 2016-04-27 | Inguran, LLC | Process for enriching a population of sperm cells |
| WO2006015056A2 (en) * | 2004-07-27 | 2006-02-09 | Dakocytomation Denmarks A/S | Enhancing flow cytometry discrimination with geometric transformation |
| US8101426B2 (en) * | 2007-03-02 | 2012-01-24 | Icyt Mission Technology, Inc. | System and method for the measurement of multiple fluorescence emissions in a flow cytometry system |
| KR100864138B1 (ko) * | 2007-09-04 | 2008-10-16 | 주식회사 노아바이오텍 | 정자의 고순도 성 분리방법 |
| US8171777B2 (en) * | 2007-09-17 | 2012-05-08 | Adam Richard Schilffarth | Systems, storage mediums, and methods for identifying particles in flow |
| US8251887B2 (en) * | 2009-01-24 | 2012-08-28 | Xihe Li | Reproductive technology of low dose semen production and in vitro/in vitro fertilization in domestic animals |
| US8512224B2 (en) * | 2009-01-24 | 2013-08-20 | Xy, Llc | Method of producing an inseminate |
| US9134221B2 (en) | 2009-03-10 | 2015-09-15 | The Regents Of The University Of California | Fluidic flow cytometry devices and particle sensing based on signal-encoding |
| US9645010B2 (en) * | 2009-03-10 | 2017-05-09 | The Regents Of The University Of California | Fluidic flow cytometry devices and methods |
| US20110001963A1 (en) * | 2009-07-02 | 2011-01-06 | Durack Gary P | System and method for the measurement of multiple emissions from multiple parallel flow channels in a flow cytometry system |
| WO2011063454A1 (en) * | 2009-11-24 | 2011-06-03 | Biassex Pty Ltd | Method for influencing sex selection ' in artificial insemination and apparatus for same |
| US20110223587A1 (en) * | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Schulman Joseph D | Optical particle characterization system |
| US20110223586A1 (en) * | 2010-03-11 | 2011-09-15 | David Karabinus | Optical particle characterization system |
| CN102812123A (zh) | 2010-04-01 | 2012-12-05 | 英格朗公司 | 减少经处理的精子样品中的dna断裂的方法和系统 |
| NZ603807A (en) | 2010-06-09 | 2014-09-26 | Xy Llc | A heterogeneous inseminate system |
| US8892184B2 (en) | 2010-10-18 | 2014-11-18 | Siemens Medical Solutions Usa, Inc. | Systems and methods for reducing interference in a dual modality imaging system |
| KR101885936B1 (ko) | 2010-10-21 | 2018-09-10 | 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | 무선 전력이 공급되는 전자 회로를 포함하는 미세 유체 |
| US10908066B2 (en) | 2010-11-16 | 2021-02-02 | 1087 Systems, Inc. | Use of vibrational spectroscopy for microfluidic liquid measurement |
| SG190015A1 (en) * | 2010-11-16 | 2013-06-28 | 1087 Systems Inc | System for identifying and sorting living cells |
| US20120225475A1 (en) | 2010-11-16 | 2012-09-06 | 1087 Systems, Inc. | Cytometry system with quantum cascade laser source, acoustic detector, and micro-fluidic cell handling system configured for inspection of individual cells |
| US8941062B2 (en) | 2010-11-16 | 2015-01-27 | 1087 Systems, Inc. | System for identifying and sorting living cells |
| US9556416B2 (en) * | 2011-02-15 | 2017-01-31 | Microbix Biosystems Inc. | Methods, systems and apparatus for performing flow cytometry |
| WO2012167151A1 (en) | 2011-06-01 | 2012-12-06 | Inguran, Llc | Compositions and methods for improving the quality of processed sperm |
| US9781919B2 (en) | 2011-06-01 | 2017-10-10 | Inguran, Llc | Compositions and methods for improving the quality of processed sperm |
| EP2756074B1 (en) * | 2011-09-14 | 2018-11-07 | Taipei Medical University | Microfluidic chips for acquiring sperms with high motility, productions and applications thereof |
| CN103013811A (zh) * | 2011-09-20 | 2013-04-03 | 北京富通华投资有限公司 | 精子分选仪 |
| US8771934B2 (en) * | 2011-12-09 | 2014-07-08 | The Curators Of The University Of Missouri | Inorganic pyrophosphate and uses thereof |
| US9888990B2 (en) | 2012-06-06 | 2018-02-13 | Inguran, Llc | Methods for use of sex sorted semen to improve genetic management in swine |
| US9433195B2 (en) | 2012-06-06 | 2016-09-06 | Inguran, Llc | Methods for increasing genetic progress in a line or breed of swine using sex-selected sperm cells |
| CN104769414B (zh) * | 2012-09-06 | 2018-08-24 | 古河电气工业株式会社 | 检体识别分离提取装置及检体识别分离提取方法 |
| BR122016005335B1 (pt) | 2012-09-19 | 2021-11-30 | Inguran, Llc | Conjunto de bocal para um sistema de citômetro de fluxo e métodos de fabricação |
| US11668640B2 (en) | 2015-03-06 | 2023-06-06 | Inguran, Llc | Nozzle assembly for a flow cytometry system and methods of manufacture |
| ES2928128T3 (es) * | 2012-09-19 | 2022-11-15 | Inguran Llc | Sistema de citómetro de flujo con punta de boquilla achaflanada |
| US10620213B2 (en) | 2012-10-05 | 2020-04-14 | Inguran, Llc | High pressure sperm sorting and flow cytometer methods |
| AU2013325222B2 (en) | 2012-10-05 | 2016-06-23 | Inguran, Llc | Methods of processing sperm for sex sorting |
| US10816550B2 (en) | 2012-10-15 | 2020-10-27 | Nanocellect Biomedical, Inc. | Systems, apparatus, and methods for sorting particles |
| US10184929B2 (en) * | 2012-12-16 | 2019-01-22 | Satish Deshpande | System to distinguish between X sperm and Y sperm |
| AR096014A1 (es) | 2013-03-08 | 2015-12-02 | Basf Plant Science Co Gmbh | PLANTAS RESISTENTES A HONGOS QUE EXPRESAN EL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN Myb (MybTF) |
| US10371622B2 (en) | 2013-03-14 | 2019-08-06 | Inguran, Llc | Device for high throughput sperm sorting |
| US9757726B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-09-12 | Inguran, Llc | System for high throughput sperm sorting |
| US10662408B2 (en) | 2013-03-14 | 2020-05-26 | Inguran, Llc | Methods for high throughput sperm sorting |
| CN116211532A (zh) * | 2013-03-15 | 2023-06-06 | 英格朗公司 | 使用性别分选的精子增加在父系或母系中的遗传价值的方法 |
| EP2986704B1 (en) * | 2013-04-19 | 2019-04-03 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Non-contact micro droplet dispenser |
| US8961904B2 (en) | 2013-07-16 | 2015-02-24 | Premium Genetics (Uk) Ltd. | Microfluidic chip |
| DE102013218528B3 (de) * | 2013-09-16 | 2014-12-24 | ViaMed GmbH | Vorrichtung zur Anreicherung von Spermatozoen |
| US11796449B2 (en) | 2013-10-30 | 2023-10-24 | Abs Global, Inc. | Microfluidic system and method with focused energy apparatus |
| RU2565348C1 (ru) * | 2014-04-22 | 2015-10-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородский государственный архитектурно-строительный университет" (ННГАСУ) | Измеритель расхода двухфазного потока диэлектрических материалов, перемещаемых воздухом по металлическому трубопроводу |
| ES2663279T3 (es) * | 2014-09-19 | 2018-04-11 | Instruments Utils De Laboratori Geniul, Sl | Procedimiento para la mejora de la calidad en espermatozoides de mamíferos |
| CA2905670A1 (en) | 2014-09-26 | 2016-03-26 | Inguran, Llc | Sex sorted sperm demonstrating a dose response and methods of producing sex sorted sperm demonstrating a dose response |
| US9975122B2 (en) * | 2014-11-05 | 2018-05-22 | 10X Genomics, Inc. | Instrument systems for integrated sample processing |
| DE102016215269B4 (de) * | 2016-08-16 | 2020-12-03 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Vorrichtung und Verfahren zur Vereinzelung biologischer Zellen |
| EP3570853B1 (en) | 2017-01-20 | 2024-07-24 | Inguran, LLC | Sperm processing method, apparatus and related media compositions |
| EP3583401B1 (en) * | 2017-02-16 | 2022-08-31 | Koninklijke Philips N.V. | Particle characterization apparatuses and methods |
| CA3068874A1 (en) | 2017-07-19 | 2019-01-24 | Inguran, Llc | Method and system incorporating beam shaping optics and beam stabilization |
| WO2019043656A1 (en) * | 2017-09-01 | 2019-03-07 | Genus Plc | METHODS AND SYSTEMS FOR ASSESSING AND / OR QUANTIFYING POPULATIONS OF SPERMATOZOIDS WITH SEXUAL ASYMMETRY |
| US10069027B1 (en) | 2017-09-15 | 2018-09-04 | Premium Genetics (Uk) Ltd | Cytometer sperm sex sensing apparatus with an avalanche photodiode |
| CA3096537A1 (en) | 2018-04-09 | 2019-10-17 | Inguran, Llc | Improved sperm nuclei and methods of their manufacture and use |
| US11933707B2 (en) * | 2018-04-17 | 2024-03-19 | Chemometec A/S | Depicting of objects |
| WO2019226790A1 (en) | 2018-05-23 | 2019-11-28 | Abs Global, Inc. | Systems and methods for particle focusing in microchannels |
| DE102018210015B4 (de) * | 2018-06-20 | 2020-04-02 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Vorrichtung und Verfahren zur Sortierung von pulverförmigem, partikelförmigem, granulatförmigem oder stückförmigem Material |
| US10440900B1 (en) * | 2019-01-22 | 2019-10-15 | Calyx Cultivation Tech. Corp. | Grow light with adjustable height and emission spectrum |
| CN117413819A (zh) | 2019-04-18 | 2024-01-19 | 艾步思国际有限责任公司 | 用于连续添加冷冻保护剂的系统和工艺 |
| US11628439B2 (en) | 2020-01-13 | 2023-04-18 | Abs Global, Inc. | Single-sheath microfluidic chip |
| CN111323361B (zh) * | 2020-03-17 | 2022-05-10 | 南通大学 | 一种快速分离精子头、精子尾和正常有活力精子的方法 |
| US11499707B2 (en) | 2020-04-13 | 2022-11-15 | Calyxpure, Inc. | Light fixture having a fan and ultraviolet sterilization functionality |
| US11759540B2 (en) | 2021-05-11 | 2023-09-19 | Calyxpure, Inc. | Portable disinfection unit |
| WO2023177879A1 (en) * | 2022-03-18 | 2023-09-21 | Elephas Biosciences Corporation | Flow cell and sample sorting system |
| CN115060565B (zh) * | 2022-08-16 | 2022-11-01 | 昆明理工大学 | 一种用于预裂爆破模型试验的检测设备及方法 |
Family Cites Families (386)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US139497A (en) | 1873-06-03 | Improvement in washing-machines | ||
| US3299354A (en) * | 1962-07-05 | 1967-01-17 | Coulter Electronics | Aperture tube structure for particle study apparatus |
| US3499435A (en) * | 1967-06-02 | 1970-03-10 | Paul E Rockwell | Esophageal probe for use in monitoring |
| US3547526A (en) | 1967-10-26 | 1970-12-15 | Kollsman Instr Corp | Optical beam cross-section converter |
| US3810010A (en) * | 1968-11-02 | 1974-05-07 | Telefunken Patent | Particle analysis method and apparatus wherein liquid containing particles is sucked into a constricted flow path |
| US3829216A (en) | 1968-11-26 | 1974-08-13 | M Persidsky | Optical system and method for counting sperm cells |
| US3894529A (en) | 1969-04-10 | 1975-07-15 | Bio Controls Inc | Method and means for controlling the sex of mammalian offspring and product therefor |
| US4327177A (en) * | 1969-04-10 | 1982-04-27 | Wallace Shrimpton | Method and means for controlling the sex of mammalian offspring and product therefor |
| US4474875A (en) | 1969-04-10 | 1984-10-02 | Wallace Shrimpton | Method and means for controlling the sex of mammalian offspring and product therefor |
| US3687806A (en) | 1969-11-04 | 1972-08-29 | Bio Controls Inc | Method for controlling sex of mammalian offspring |
| US3661460A (en) * | 1970-08-28 | 1972-05-09 | Technicon Instr | Method and apparatus for optical analysis of the contents of a sheathed stream |
| US3644128A (en) * | 1970-12-28 | 1972-02-22 | Stuart Lipner | Method of preparing comminuted meat products |
| US3756459A (en) | 1971-01-12 | 1973-09-04 | Damon Corp | Method and apparatus for metering fluid utilizing pressure differentials |
| US3833796A (en) | 1971-10-13 | 1974-09-03 | Georgia Tech Res Inst | Method and apparatus for chromosome digitizing |
| BE793185A (fr) * | 1971-12-23 | 1973-04-16 | Atomic Energy Commission | Appareil pour analyser et trier rapidement des particules telles que des cellules biologiques |
| US3826364A (en) | 1972-05-22 | 1974-07-30 | Univ Leland Stanford Junior | Particle sorting method and apparatus |
| US3761941A (en) | 1972-10-13 | 1973-09-25 | Mead Corp | Phase control for a drop generating and charging system |
| US4009260A (en) | 1973-04-19 | 1977-02-22 | Schering Aktiengesellschaft | Fractionation of sperm |
| USRE29141E (en) * | 1973-06-14 | 1977-02-22 | Coulter Electronics, Inc. | Apparatus for orienting generally flat particles for sensing |
| US3893766A (en) | 1973-06-14 | 1975-07-08 | Coulter Electronics | Apparatus for orienting generally flat particles for slit-scan photometry |
| US3947093A (en) * | 1973-06-28 | 1976-03-30 | Canon Kabushiki Kaisha | Optical device for producing a minute light beam |
| US3909744A (en) | 1973-09-24 | 1975-09-30 | United Technologies Corp | Unstable resonator system producing a high irradiance beam in the far field |
| FR2254639B1 (uk) | 1973-12-18 | 1978-06-02 | Agronomique Inst Nat Rech | |
| US4070617A (en) * | 1974-05-08 | 1978-01-24 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Device for controlling the particle flow in an apparatus for measuring the properties of particles suspended in liquid |
| US3973196A (en) | 1974-05-24 | 1976-08-03 | Coulter Electronics, Inc. | Method and apparatus for ejecting a metered amount of particulate sample |
| US3963606A (en) * | 1974-06-03 | 1976-06-15 | Coulter Electronics, Inc. | Semi-automatic adjusting delay for an electronic particle separator |
| US3877430A (en) * | 1974-07-17 | 1975-04-15 | Horst K Wieder | Artificial insemination apparatus |
| US4083957A (en) | 1974-07-26 | 1978-04-11 | Lang John L | Process for the alteration of the sex-ratio of mammals |
| USRE32350E (en) | 1974-11-22 | 1987-02-10 | Bhairab C. Bhattacharya | Thermal convection counter streaming sedimentation and forced convection galvanization method for controlling the sex of mammalian offspring |
| US3976197A (en) | 1974-11-22 | 1976-08-24 | Bhattacharya Bhairab C | Thermal convection counter streaming sedimentation method and apparatus for controlling the sex of mammalian offspring |
| US4092229A (en) | 1975-12-17 | 1978-05-30 | Bhattacharya Bhairab C | Thermal convection counter streaming sedimentation and forced convection galvanization method for controlling the sex of mammalian offspring |
| US4014611A (en) * | 1975-04-30 | 1977-03-29 | Coulter Electronics, Inc. | Aperture module for use in particle testing apparatus |
| US3960449A (en) * | 1975-06-05 | 1976-06-01 | The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Measurement of angular dependence of scattered light in a flowing stream |
| US4021117A (en) | 1975-08-07 | 1977-05-03 | Hildegard Gohde | Process for automatic counting and measurement of particles |
| US4007087A (en) * | 1975-10-17 | 1977-02-08 | Gametrics Limited | Sperm fractionation and storage |
| AU2154077A (en) | 1976-01-27 | 1978-07-27 | Univ Edinburgh | Control of sex ratio in mammalian offspring |
| US4302166A (en) | 1976-04-22 | 1981-11-24 | Coulter Electronics, Inc. | Droplet forming apparatus for use in producing uniform particles |
| US4162282A (en) | 1976-04-22 | 1979-07-24 | Coulter Electronics, Inc. | Method for producing uniform particles |
| GB1583150A (en) | 1976-08-02 | 1981-01-21 | Milk Marketing Board | Apparatus for collecting eggs |
| US4448767A (en) | 1977-10-11 | 1984-05-15 | Sumar Corporation | Preparation of monospecific male-specific antibody and the use thereof for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex |
| US4191749A (en) | 1977-10-11 | 1980-03-04 | Bryant Bernard J | Method and material for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex |
| JPS54123073U (uk) | 1978-02-14 | 1979-08-28 | ||
| JPS54123073A (en) | 1978-03-17 | 1979-09-25 | Hitachi Ltd | Sensitivity adjusting method and device for laser flow meter |
| US4179218A (en) | 1978-05-15 | 1979-12-18 | The Boeing Company | Particle size analyzer |
| DE2832091A1 (de) * | 1978-07-21 | 1980-01-31 | Eidenschink Henning | Optisches verfahren zur bestimmung der teilchengroesse kolloidaler loesungen und messgeraet zur durchfuehrung des verfahrens |
| US4276139A (en) | 1978-08-16 | 1981-06-30 | Lawson Rommon L | Process for magnetic separation and collection of viable female and male spermatozoa |
| US4225405A (en) | 1978-08-16 | 1980-09-30 | Lawson Rommom L | Process for separation and collection of viable female and male spermatozoa |
| US4230558A (en) | 1978-10-02 | 1980-10-28 | Coulter Electronics, Inc. | Single drop separator |
| US4341471A (en) | 1979-01-02 | 1982-07-27 | Coulter Electronics, Inc. | Apparatus and method for measuring the distribution of radiant energy produced in particle investigating systems |
| US4267268A (en) * | 1979-03-12 | 1981-05-12 | Nelson Jr Robert A | Spermatozoa extenders |
| US4274408A (en) * | 1979-03-26 | 1981-06-23 | Beatrice Nimrod | Method for guide-wire placement and novel syringe therefor |
| US4200802A (en) * | 1979-03-28 | 1980-04-29 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Parabolic cell analyzer |
| US4255021A (en) * | 1979-04-20 | 1981-03-10 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Optical device with conical input and output prism faces |
| US4318482A (en) * | 1979-08-20 | 1982-03-09 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method for measuring the velocity of a perturbed jetting fluid in an electrostatic particle sorting system |
| US4317520A (en) * | 1979-08-20 | 1982-03-02 | Ortho Diagnostics, Inc. | Servo system to control the spatial position of droplet formation of a fluid jet in a cell sorting apparatus |
| US4318480A (en) * | 1979-08-20 | 1982-03-09 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method and apparatus for positioning the point of droplet formation in the jetting fluid of an electrostatic sorting device |
| US4325483A (en) * | 1979-08-20 | 1982-04-20 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method for detecting and controlling flow rates of the droplet forming stream of an electrostatic particle sorting apparatus |
| US4318481A (en) * | 1979-08-20 | 1982-03-09 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method for automatically setting the correct phase of the charge pulses in an electrostatic flow sorter |
| DE2943116C2 (de) | 1979-10-25 | 1986-06-19 | Gesellschaft für Strahlen- und Umweltforschung mbH, 8000 München | Einrichtung zur durchflußcytometrischen Reaktions- und/oder Diffusionsmessung |
| US4400764A (en) | 1980-02-05 | 1983-08-23 | The Boeing Company | Low backscatter illumination system |
| US4362246A (en) | 1980-07-14 | 1982-12-07 | Adair Edwin Lloyd | Method of treating collected mammal semen and separating sperm into X Y components |
| US4350410A (en) | 1980-10-08 | 1982-09-21 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Multiprism collimator |
| US4691829A (en) | 1980-11-03 | 1987-09-08 | Coulter Corporation | Method of and apparatus for detecting change in the breakoff point in a droplet generation system |
| US4487320A (en) | 1980-11-03 | 1984-12-11 | Coulter Corporation | Method of and apparatus for detecting change in the breakoff point in a droplet generation system |
| US4395676A (en) | 1980-11-24 | 1983-07-26 | Coulter Electronics, Inc. | Focused aperture module |
| US4361400A (en) | 1980-11-26 | 1982-11-30 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Fluidic assembly for an ultra-high-speed chromosome flow sorter |
| US4680258A (en) | 1981-03-24 | 1987-07-14 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Process for sex determination in man by use of monoclonal antibodies to the H-Y antigen |
| US4818103A (en) * | 1981-05-15 | 1989-04-04 | Ratcom | Flow cytometry |
| US4673288A (en) * | 1981-05-15 | 1987-06-16 | Ratcom, Inc. | Flow cytometry |
| FR2510393A1 (fr) | 1981-07-31 | 1983-02-04 | Bertrand Cassou | Appareil de transfert d'elements de reproduction animale, tels que des embryons |
| US4339434A (en) | 1981-08-17 | 1982-07-13 | Gametrics Limited | Method of increasing the incidence of female offspring |
| US4395397A (en) | 1981-09-17 | 1983-07-26 | Sidney Farber Cancer Institute, Inc. | Apparatus and method for killing unwanted cells |
| US4422761A (en) | 1981-09-28 | 1983-12-27 | Frommer Joseph C | Photo-electric particle sensing system |
| US4515274A (en) * | 1981-12-02 | 1985-05-07 | Coulter Corporation | Particle analyzing and sorting apparatus |
| SU1056008A1 (ru) | 1982-01-25 | 1983-11-23 | Предприятие П/Я Р-6681 | Проточный цитофлуориметр |
| JPS59500340A (ja) | 1982-03-08 | 1984-03-01 | モトロ−ラ・インコ−ポレ−テツド | 集積回路のリ−ドフレ−ム |
| US4511661A (en) | 1982-03-19 | 1985-04-16 | University Patents, Inc. | ATCC HB8116 And its monoclonal anti-H-Y antibody, Hyclonalan |
| US4498766A (en) * | 1982-03-25 | 1985-02-12 | Becton, Dickinson And Company | Light beam focal spot elongation in flow cytometry devices |
| US4629687A (en) | 1982-07-29 | 1986-12-16 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Positive selection sorting of cells |
| US4559309A (en) | 1982-09-01 | 1985-12-17 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Flow cytometry-fluorescence measurements for characterizing sperm |
| EP0120854A4 (en) | 1982-10-05 | 1985-06-10 | Genetic Engineering Inc | PROCESS FOR TREATING SPERM RECOVERED FROM A MAMMAL AND SEPARATING THE SPERM INTO COMPONENTS X AND Y. |
| US4501366A (en) | 1982-12-14 | 1985-02-26 | Adolph Coors Company | Photomultiplier tube assembly |
| JPS59143146A (ja) * | 1983-02-07 | 1984-08-16 | Nippon Kogaku Kk <Nikon> | ミラ−集光型照明光学系 |
| IT1197570B (it) | 1983-02-11 | 1988-12-06 | Serono Ist Farm | Miscele di fsh e lh da ipofisi porcine in rapporto definito |
| US4523809A (en) * | 1983-08-04 | 1985-06-18 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Air Force | Method and apparatus for generating a structured light beam array |
| US4538733A (en) | 1983-10-14 | 1985-09-03 | Becton, Dickinson And Company | Particle sorter with neutralized collection wells and method of using same |
| US4735504A (en) * | 1983-10-31 | 1988-04-05 | Technicon Instruments Corporation | Method and apparatus for determining the volume & index of refraction of particles |
| EP0148497B1 (de) | 1983-12-24 | 1990-10-31 | Inotech Ag | Vorrichtung zum Führen und Sammeln von Licht in der Fotometrie od. dgl. |
| US4573796A (en) * | 1984-01-06 | 1986-03-04 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Apparatus for eliminating background interference in fluorescence measurements |
| US4631483A (en) | 1984-02-01 | 1986-12-23 | Coulter Electronics, Inc. | Particle analyzing apparatus and method of moving particles in suspension through such apparatus |
| US4965204A (en) | 1984-02-06 | 1990-10-23 | The Johns Hopkins University | Human stem cells and monoclonal antibodies |
| US4714680B1 (en) | 1984-02-06 | 1995-06-27 | Univ Johns Hopkins | Human stem cells |
| US4545677A (en) | 1984-03-05 | 1985-10-08 | Becton, Dickinson And Company | Prismatic beam expander for light beam shaping in a flow cytometry apparatus |
| US4600302A (en) | 1984-03-26 | 1986-07-15 | Becton, Dickinson And Company | Flow cytometry apparatus with uniform incoherent light excitation |
| US4605558A (en) | 1984-04-20 | 1986-08-12 | Wallace Shrimpton | Process for cell separation |
| US4660971A (en) | 1984-05-03 | 1987-04-28 | Becton, Dickinson And Company | Optical features of flow cytometry apparatus |
| FR2563726B1 (fr) | 1984-05-04 | 1986-10-10 | Robert Cassou | Appareil d'insemination artificielle, notamment des carnivores |
| DE3580418D1 (de) | 1984-07-31 | 1990-12-13 | Hitachi Ltd | Elektrophoretisches trennverfahren mit freier stroemung und apparat dafuer. |
| DE3574617D1 (de) | 1984-09-11 | 1990-01-11 | Partec Ag | Verfahren und vorrichtung zur sortierung von mikroskopischen partikeln. |
| US4598408A (en) | 1984-10-22 | 1986-07-01 | Trw Inc. | High extraction efficiency cylindrical ring resonator |
| IS1355B6 (is) * | 1984-11-12 | 1989-04-19 | Lister Institute Of Preventive Medicine | Fjölkjarna kannar |
| SU1267231A1 (ru) | 1984-11-21 | 1986-10-30 | Ленинградский Институт Ядерной Физики Им.Б.П.Константинова | Проточный цитофлуориметр-сортировщик клеток |
| JPS61139747A (ja) | 1984-12-12 | 1986-06-27 | Canon Inc | 粒子解析装置 |
| FR2574656B1 (fr) | 1984-12-13 | 1988-08-05 | Cassou Robert | Sonde gynecologique notamment pour l'injection de semence ou d'embryons dans la cavite des animaux, tels que les juments |
| FR2575063B1 (fr) | 1984-12-21 | 1988-07-01 | Cassou Robert | Sonde gynecologique pour insemination artificielle, notamment pour porcins |
| JPS61159135A (ja) | 1984-12-31 | 1986-07-18 | Canon Inc | 粒子解析装置 |
| SU1260778A1 (ru) | 1985-01-31 | 1986-09-30 | Центральный научно-исследовательский рентгено-радиологический институт | Устройство дл флуоресцентного анализа отдельных микрочастиц в потоке |
| US4702598A (en) | 1985-02-25 | 1987-10-27 | Research Corporation | Flow cytometer |
| US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
| JPS61294334A (ja) * | 1985-06-21 | 1986-12-25 | Canon Inc | 粒子解析装置 |
| US4877965A (en) | 1985-07-01 | 1989-10-31 | Diatron Corporation | Fluorometer |
| US4744090A (en) * | 1985-07-08 | 1988-05-10 | Trw Inc. | High-extraction efficiency annular resonator |
| US4794086A (en) | 1985-11-25 | 1988-12-27 | Liquid Air Corporation | Method for measurement of impurities in liquids |
| US4999283A (en) * | 1986-01-10 | 1991-03-12 | University Of Kentucky Research Foundation | Method for x and y spermatozoa separation |
| NL8601000A (nl) * | 1986-04-21 | 1987-11-16 | Jan Greve T H Twente Afdeling | Het gebruik van gepolariseerd licht in stromingscytometrie. |
| US4790653A (en) | 1986-05-22 | 1988-12-13 | Becton Dickinson And Company | Housing for a flow cytometry apparatus with particle unclogging feature |
| FR2609885B1 (fr) | 1987-01-22 | 1989-04-14 | Cassou Robert | Instrument pour l'insemination artificielle, le transfert d'embryons ou le prelevement de liquides folliculaires chez les mammiferes |
| US4780451B1 (en) | 1987-01-23 | 1995-04-04 | Asua International Inc | Composition and method for producing superovulation in cattle |
| US5162306A (en) | 1987-01-23 | 1992-11-10 | Donaldson Lloyd E | Composition and method for producing superovulation in mammals |
| KR970007077B1 (ko) | 1987-03-13 | 1997-05-02 | 코울터 일렉트로닉스 인커퍼레이티드 | 광산란 기술을 이용한 다중-부분식별 분석 방법 |
| US4764013A (en) * | 1987-03-23 | 1988-08-16 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Interferometric apparatus and method for detection and characterization of particles using light scattered therefrom |
| US4765737A (en) | 1987-03-30 | 1988-08-23 | Cornell Research Foundation | Cell size measurements using light in flow cytometry and cell sorting |
| US5021244A (en) | 1988-12-06 | 1991-06-04 | Cytogam, Inc. | Sex-associated membrane antibodies and their use for increasing the probability that offspring will be of a desired sex |
| US5346990A (en) | 1987-04-08 | 1994-09-13 | Cytogam, Inc. | Sex-associated membrane proteins and methods for increasing the probability that offspring will be of a desired sex |
| DE3851458T2 (de) * | 1987-04-08 | 1995-02-09 | Hitachi Ltd | Vorrichtung mit einer scheideförmigen Durchflusszelle. |
| JPS63262565A (ja) * | 1987-04-20 | 1988-10-28 | Hitachi Ltd | フロ−セル |
| FR2614626B1 (fr) * | 1987-04-30 | 1989-07-21 | Ranoux Claude | Conteneur pour fecondation des ovocytes et replacement des embryons chez l'homme et l'animal |
| US5041083A (en) | 1987-06-25 | 1991-08-20 | Terumo Kabushiki Kaisha | Multi-luminal catheter, multi-luminal catheter assembly |
| US4979093A (en) | 1987-07-16 | 1990-12-18 | Cavro Scientific Instruments | XYZ positioner |
| US4987539A (en) * | 1987-08-05 | 1991-01-22 | Stanford University | Apparatus and method for multidimensional characterization of objects in real time |
| US4796788A (en) * | 1987-08-26 | 1989-01-10 | Liqui-Box Corporation | Bag-in-box packaging and dispensing of substances which will not readily flow by gravity |
| US4758729A (en) | 1987-08-28 | 1988-07-19 | Spectra-Physics, Inc. | Apparatus and method for measuring the included angle of a reflective cone |
| US4831385A (en) * | 1987-10-14 | 1989-05-16 | Burlington Industries, Inc. | Vacuum tray fluid-jet start-up system |
| US4980277A (en) | 1987-10-16 | 1990-12-25 | Cultor Ltd. | Cryoprotectant solution and method |
| US4804891A (en) * | 1987-10-16 | 1989-02-14 | Gte Government Systems Corporation | Photomultiplier tube with gain control |
| US4845025A (en) | 1987-11-10 | 1989-07-04 | Coulter Corporation | Biological sample mixing apparatus and method |
| US4988619A (en) * | 1987-11-30 | 1991-01-29 | United States Department Of Energy | Flow cytometry apparatus |
| US5219729A (en) * | 1988-02-25 | 1993-06-15 | Serono Laboratories, Inc. | Fertility assay |
| US4986659A (en) * | 1988-02-29 | 1991-01-22 | Aerometrics, Inc. | Method for measuring the size and velocity of spherical particles using the phase and intensity of scattered light |
| US5622820A (en) * | 1988-03-10 | 1997-04-22 | City Of Hope | Method for amplification and detection of RNA and DNA sequences |
| US4836038A (en) * | 1988-03-18 | 1989-06-06 | Aim Instruments Ltd. | Automated sampler-injector apparatus and method for sampling a quantity of sample and testing portions of said quantity |
| JPH0213830A (ja) * | 1988-06-30 | 1990-01-18 | Canon Inc | 粒子測定装置 |
| JPH0718785B2 (ja) * | 1988-09-19 | 1995-03-06 | 株式会社日立製作所 | フローセル装置 |
| US5779976A (en) * | 1988-11-03 | 1998-07-14 | Igen International, Inc. | Apparatus for improved luminescence assays |
| JPH02168160A (ja) | 1988-12-22 | 1990-06-28 | Omron Tateisi Electron Co | 細胞選別装置 |
| US5760900A (en) * | 1989-03-18 | 1998-06-02 | Canon Kabushiki Kaisha | Method and apparatus for optically measuring specimen |
| US4981580A (en) * | 1989-05-01 | 1991-01-01 | Coulter Corporation | Coincidence arbitration in a flow cytomery sorting system |
| ATE142788T1 (de) | 1989-05-10 | 1996-09-15 | Us Agriculture | Verfahren zur vorwahl des geschlechts der nachkommenschaft |
| DE68924275T2 (de) | 1989-05-12 | 1996-05-02 | Cytogam Inc | Mit dem geschlecht assoziierte membranproteine und methoden zur erhöhung der wahrscheinlichkeit, dass die nachkommenschaft das gewünschte geschlecht besitzt. |
| US4942305A (en) | 1989-05-12 | 1990-07-17 | Pacific Scientific Company | Integrating sphere aerosol particle detector |
| FR2647668A1 (fr) | 1989-06-06 | 1990-12-07 | Medizin Labortechnik Veb K | Pipette de transfert pour embryons |
| US5055393A (en) | 1989-06-13 | 1991-10-08 | Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. | Prenatal sex determination of bovine cells using male-specific oligonucleotides |
| US4954715A (en) | 1989-06-26 | 1990-09-04 | Zoeld Tibor | Method and apparatus for an optimized multiparameter flow-through particle and cell analyzer |
| JPH0353164A (ja) * | 1989-07-20 | 1991-03-07 | Canon Inc | サンプル供給装置及びこれを用いたサンプル測定装置 |
| US5098657A (en) * | 1989-08-07 | 1992-03-24 | Tsi Incorporated | Apparatus for measuring impurity concentrations in a liquid |
| US5030002A (en) | 1989-08-11 | 1991-07-09 | Becton, Dickinson And Company | Method and apparatus for sorting particles with a moving catcher tube |
| US5215376A (en) * | 1989-09-08 | 1993-06-01 | Becton, Dickinson And Company | Method for causing vortices in a test tube |
| US5005981A (en) * | 1989-09-08 | 1991-04-09 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus for method for causing vortices in a test tube |
| EP0418026B1 (en) | 1989-09-13 | 1994-11-30 | Kabushiki Kaisha Tiyoda Seisakusho | Apparatus for pretreating cells for flow cytometry |
| JP2808321B2 (ja) * | 1989-09-19 | 1998-10-08 | 東亜医用電子株式会社 | 細胞分析方法及び装置 |
| EP0422616B1 (en) * | 1989-10-11 | 1996-02-07 | Canon Kabushiki Kaisha | Apparatus for and method of fractionating particle in particle-suspended liquid in conformity with the properties thereof |
| US5034613A (en) | 1989-11-14 | 1991-07-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Two-photon laser microscopy |
| US5101978A (en) * | 1989-11-27 | 1992-04-07 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Fluidic sorting device for two or more materials suspended in a fluid |
| JP3049254B2 (ja) | 1990-02-08 | 2000-06-05 | シスメックス株式会社 | ２種類の光源を備えた光学式粒子分析装置 |
| US5153117A (en) | 1990-03-27 | 1992-10-06 | Genetype A.G. | Fetal cell recovery method |
| US5492534A (en) * | 1990-04-02 | 1996-02-20 | Pharmetrix Corporation | Controlled release portable pump |
| US5150313A (en) | 1990-04-12 | 1992-09-22 | Regents Of The University Of California | Parallel pulse processing and data acquisition for high speed, low error flow cytometry |
| US5087295A (en) | 1990-06-13 | 1992-02-11 | Becton Dickinson And Company | Cleaning cycle for flow cytometers |
| US5559032A (en) | 1990-06-29 | 1996-09-24 | Pomeroy; Patrick C. | Method and apparatus for post-transfer assaying of material on solid support |
| JP3375957B2 (ja) | 1990-07-09 | 2003-02-10 | アムラド・コーポレイション・リミテッド | 白血病抑制因子を用いる胚の増強移植、増殖及び維持 |
| JP2939647B2 (ja) | 1990-07-24 | 1999-08-25 | シスメックス株式会社 | フローイメージングサイトメータにおける自動焦点調整方法 |
| US5259593A (en) | 1990-08-30 | 1993-11-09 | University Of Southern California | Apparatus for droplet stream manufacturing |
| US5132548A (en) | 1990-09-14 | 1992-07-21 | High Yield Technology | High sensitivity, large detection area particle sensor for vacuum applications |
| US5108366A (en) | 1990-09-28 | 1992-04-28 | Ovamed Corporation | Delivery catheter |
| US5273527A (en) | 1992-05-12 | 1993-12-28 | Ovamed Corporation | Delivery catheter |
| US5663048A (en) | 1990-10-04 | 1997-09-02 | University Of Calgary | Y-chromosome specific polynucleotide probes for prenatal sexing |
| US5840482A (en) * | 1990-10-10 | 1998-11-24 | The Regents Of The University Of California | Y chromosome specific nucleic acid probe and method for determining the Y chromosome in situ |
| WO1992008120A1 (en) | 1990-10-29 | 1992-05-14 | Macquarie University | Pulsed laser flow cytometry |
| JP2874746B2 (ja) | 1990-11-22 | 1999-03-24 | シスメックス株式会社 | フローイメージングサイトメータにおけるフローセル機構 |
| JPH0734012B2 (ja) | 1991-02-27 | 1995-04-12 | 東亜医用電子株式会社 | フローイメージサイトメータ |
| JP3121849B2 (ja) | 1991-02-27 | 2001-01-09 | シスメックス株式会社 | フローイメージサイトメータ |
| US5144224A (en) | 1991-04-01 | 1992-09-01 | Larsen Lawrence E | Millimeter wave flow cytometer |
| US5199576A (en) * | 1991-04-05 | 1993-04-06 | University Of Rochester | System for flexibly sorting particles |
| DE9107792U1 (de) * | 1991-06-25 | 1991-09-12 | Labotect-Labor-Technik, Göttingen, GmbH, 3406 Bovenden | Instrumentensatz zum uterinen Embryonentransfer |
| FR2678506B1 (fr) | 1991-07-01 | 2000-03-10 | Claude Ranoux | Procede de fecondation en cycle spontane. |
| US5412466A (en) * | 1991-07-26 | 1995-05-02 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Apparatus for forming flattened sample flow for analyzing particles |
| US5578449A (en) | 1991-10-03 | 1996-11-26 | Hilding Ohlsson, S.A. | Procedure for the sex determination of embryos in mammals especially applied to bovine embryos |
| IT1253226B (it) | 1991-10-24 | 1995-07-11 | Piero Serra | Catetere per l'introduzione o l'aspirazione di liquidi di diversa natura in animali particolarmente per trattamenti ginecologici in bovini, equini e simili |
| US5919621A (en) | 1991-10-24 | 1999-07-06 | Brown; David B. | Methods for diagnosing human male infertility |
| JP3212647B2 (ja) | 1991-10-24 | 2001-09-25 | シスメックス株式会社 | イメージングフローサイトメータ |
| US5370842A (en) | 1991-11-29 | 1994-12-06 | Canon Kabushiki Kaisha | Sample measuring device and sample measuring system |
| JP2593021B2 (ja) | 1991-12-13 | 1997-03-19 | 伊藤ハム株式会社 | ウシ胚の性の識別方法 |
| JPH0517681A (ja) | 1991-12-18 | 1993-01-26 | Anthony Smith Derek | 可燃性物質、煙および有毒ガス抑制組成物の製法 |
| GB2278679B (en) | 1992-02-21 | 1995-09-06 | Secr Defence | Analysis of particle characteristics |
| US5558998A (en) | 1992-02-25 | 1996-09-24 | The Regents Of The Univ. Of California | DNA fragment sizing and sorting by laser-induced fluorescence |
| US5298967A (en) * | 1992-06-02 | 1994-03-29 | Pacific Scientific Company | Measurement of concentrations of dissolved solvent |
| CA2140141A1 (en) | 1992-07-13 | 1994-01-20 | Eric J. Krasnoff | Automated system and method for processing biological fluid |
| US5315122A (en) * | 1992-08-25 | 1994-05-24 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus and method for fluorescent lifetime measurement |
| US5466572A (en) | 1992-09-03 | 1995-11-14 | Systemix, Inc. | High speed flow cytometric separation of viable cells |
| US5736410A (en) * | 1992-09-14 | 1998-04-07 | Sri International | Up-converting reporters for biological and other assays using laser excitation techniques |
| US5275933A (en) | 1992-09-25 | 1994-01-04 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Triple gradient process for recovering nucleated fetal cells from maternal blood |
| US5311290A (en) | 1992-09-30 | 1994-05-10 | Pulp And Paper Research Institute Of Canada | Imaging apparatus and method of fiber analysis |
| US5371585A (en) | 1992-11-10 | 1994-12-06 | Pacific Scientific Company | Particle detecting instrument with sapphire detecting cell defining a rectangular flow path |
| US5359907A (en) | 1992-11-12 | 1994-11-01 | Horiba Instruments, Inc. | Method and apparatus for dry particle analysis |
| FR2699678A1 (fr) | 1992-12-23 | 1994-06-24 | Unceia | Procédé cytométrique de séparation de spermatozoïdes X et Y en fonction de leur contenu en ADN. |
| JPH06197665A (ja) | 1993-01-07 | 1994-07-19 | Norin Suisansyo Chikusan Shikenjo | 体外受精用培地および体外受精方法 |
| AU5839694A (en) | 1993-01-16 | 1994-08-15 | James Andrew Bangham | Signal processing system |
| JP2525713B2 (ja) * | 1993-01-19 | 1996-08-21 | 農林水産省畜産試験場長 | 低分子チオ―ル化合物を用いた牛胚の培養法および輸送法 |
| US5467189A (en) | 1993-01-22 | 1995-11-14 | Venturedyne, Ltd. | Improved particle sensor and method for assaying a particle |
| JP3052665B2 (ja) | 1993-01-26 | 2000-06-19 | 株式会社日立製作所 | フローセル装置 |
| US5453575A (en) | 1993-02-01 | 1995-09-26 | Endosonics Corporation | Apparatus and method for detecting blood flow in intravascular ultrasonic imaging |
| US5367474A (en) | 1993-02-08 | 1994-11-22 | Coulter Corporation | Flow cytometer |
| US5563059A (en) | 1993-02-23 | 1996-10-08 | Genentech, Inc. | Use of human inhibin and human activin to increase the number of mature primate oocytes |
| DE69418131D1 (de) | 1993-03-01 | 1999-06-02 | Gen Signal Corp | Vorrichtung zur erzeugung einer einstellbaren ringförmigen beleuchtung für einen photolithograpischen projektionsapparat |
| NO930980L (no) | 1993-03-18 | 1994-09-19 | Flowtech As | Optisk konfigurasjon for væskeströmcytofotometer |
| US5494795A (en) * | 1993-05-05 | 1996-02-27 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Specific oligonucleotide primers for detection of pathogenic campylobacter bacteria by polymerase chain reaction |
| EP0627643B1 (en) | 1993-06-03 | 1999-05-06 | Hamamatsu Photonics K.K. | Laser scanning optical system using axicon |
| BR9405395A (pt) * | 1993-06-04 | 1999-09-08 | Kwahak Internacional Co Ltda | Dispositivo para inseminação artificial e para transferência de embrião. |
| US5460709A (en) | 1993-06-21 | 1995-10-24 | Helena Laboratories Corporation | Automatic electrophoresis method and apparatus |
| US5483469A (en) * | 1993-08-02 | 1996-01-09 | The Regents Of The University Of California | Multiple sort flow cytometer |
| US6328071B1 (en) | 1993-08-06 | 2001-12-11 | Cary Austin | Well pressure tank |
| EP0649014B1 (en) * | 1993-09-16 | 2005-11-23 | Sysmex Corporation | Particle analyzing apparatus |
| US5503994A (en) * | 1993-10-08 | 1996-04-02 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | System for sample detection with compensation for difference in sensitivity to detection of components moving at different velocities |
| US5480774A (en) * | 1993-10-14 | 1996-01-02 | A/F Protein, Inc. | Determination of genomic sex in salmonids |
| GB9324938D0 (en) * | 1993-12-04 | 1994-01-26 | Atomic Energy Authority Uk | Aerosol generator |
| FI96452C (fi) * | 1994-01-26 | 1996-06-25 | Pekka Haenninen | Menetelmä väriaineiden virittämiseksi |
| AU696154B2 (en) | 1994-03-25 | 1998-09-03 | Daiso Co., Ltd. | Epimerase |
| DE4414940C2 (de) | 1994-04-28 | 1998-07-02 | Pekka Haenninen | Lumineszenz-Rastermikroskop mit zwei Photonen Anregung |
| US5595866A (en) | 1994-05-27 | 1997-01-21 | Methodist Hospital Of Indiana, Inc. | Step-wise method to remove cryoprotectant from sperm |
| DE4419894A1 (de) * | 1994-06-07 | 1995-12-14 | Gip Medizin Technik Gmbh | Endoskopische Punktionsnadelvorrichtung |
| EP0687956B2 (de) | 1994-06-17 | 2005-11-23 | Carl Zeiss SMT AG | Beleuchtungseinrichtung |
| US5631165A (en) * | 1994-08-01 | 1997-05-20 | Abbott Laboratories | Method for performing automated hematology and cytometry analysis |
| US5891734A (en) * | 1994-08-01 | 1999-04-06 | Abbott Laboratories | Method for performing automated analysis |
| US5656499A (en) * | 1994-08-01 | 1997-08-12 | Abbott Laboratories | Method for performing automated hematology and cytometry analysis |
| FR2723735B1 (fr) | 1994-08-18 | 1996-10-31 | Abx Sa | Boitier a branchement automatique pour distribution de reactifs dans un appareil notamment un analyseur hematologique. |
| US5540020A (en) | 1994-09-26 | 1996-07-30 | Santini; Daniel E. | Building panel |
| US5700692A (en) | 1994-09-27 | 1997-12-23 | Becton Dickinson And Company | Flow sorter with video-regulated droplet spacing |
| US5934885A (en) | 1994-10-07 | 1999-08-10 | Bayer Corporation | Reagent pump assembly |
| US5602349A (en) * | 1994-10-14 | 1997-02-11 | The University Of Washington | Sample introduction system for a flow cytometer |
| US5643796A (en) | 1994-10-14 | 1997-07-01 | University Of Washington | System for sensing droplet formation time delay in a flow cytometer |
| US5602039A (en) * | 1994-10-14 | 1997-02-11 | The University Of Washington | Flow cytometer jet monitor system |
| JPH10507524A (ja) | 1994-10-14 | 1998-07-21 | ユニバーシティ オブ ワシントン | 高速フローサイトメータ液滴形成システム |
| US5514537A (en) | 1994-11-28 | 1996-05-07 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Process and apparatus for sorting spermatozoa |
| EP0746865B1 (en) | 1994-12-08 | 2003-03-26 | Molecular Dynamics, Inc. | Fluorescence imaging system employing a macro scanning objective |
| US5632754A (en) * | 1994-12-23 | 1997-05-27 | Devices For Vascular Intervention | Universal catheter with interchangeable work element |
| EP0720012B1 (en) | 1994-12-26 | 2004-09-08 | Sysmex Corporation | Flow cytometer |
| US5835262A (en) | 1994-12-28 | 1998-11-10 | Research Development Corporation Of Japan | Multi-wavelength optical microscope |
| FI98765C (fi) * | 1995-01-16 | 1997-08-11 | Erkki Soini | Virtaussytometrinen menetelmä ja laite |
| US5793485A (en) | 1995-03-20 | 1998-08-11 | Sandia Corporation | Resonant-cavity apparatus for cytometry or particle analysis |
| US5786560A (en) | 1995-03-31 | 1998-07-28 | Panasonic Technologies, Inc. | 3-dimensional micromachining with femtosecond laser pulses |
| RU2205382C2 (ru) | 1995-04-06 | 2003-05-27 | Альфа Лаваль Агри Аб | Способ и устройство для количественного определения частиц в жидких средах |
| US5641457A (en) | 1995-04-25 | 1997-06-24 | Systemix | Sterile flow cytometer and sorter with mechanical isolation between flow chamber and sterile enclosure |
| US5687727A (en) | 1995-05-01 | 1997-11-18 | Danforth Biomedical Incorporated | Catheter adaptor with slitting blade and improved manual control and method of use |
| AU713345B2 (en) | 1995-05-09 | 1999-12-02 | Curators Of The University Of Missouri, The | A system for introducing a fluid into the uterus of an animal |
| US5650847A (en) | 1995-06-14 | 1997-07-22 | Erkki Soini | Method and device for determination of parameters of individual microparticles |
| US5589457A (en) | 1995-07-03 | 1996-12-31 | Ausa International, Inc. | Process for the synchronization of ovulation |
| US6411835B1 (en) | 1997-01-13 | 2002-06-25 | Medispectra, Inc. | Spectral volume microprobe arrays |
| ATE290695T1 (de) | 1995-08-11 | 2005-03-15 | Univ Guelph | Verfahren zum identifizieren von geschlechtsspezifischen und speziesspezifischen molekülen, mit verfahren identifizierte moleküle und verwendung der moleküle |
| JP2001520637A (ja) | 1995-09-06 | 2001-10-30 | ザ・リサーチ・ファンデーション・オブ・ステート・ユニバーシティ・オブ・ニューヨーク | 二光子アップコンバーティング色素および応用 |
| DE19533092A1 (de) | 1995-09-07 | 1997-03-13 | Basf Ag | Vorrichtung zur parallelisierten Zweiphotonen-Fluoreszenz-Korrelations-Spektroskopie (TPA-FCS) und deren Verwendung zum Wirkstoff-Screening |
| US5726751A (en) | 1995-09-27 | 1998-03-10 | University Of Washington | Silicon microchannel optical flow cytometer |
| US5780230A (en) | 1995-10-06 | 1998-07-14 | Coriell Institute For Medical Research | Compositions and methods for human sperm activation and quantitative assessment of human sperm genome replication |
| US6117068A (en) | 1995-10-19 | 2000-09-12 | Elite Genetics, Inc | Artificial insemination system |
| DE69637625D1 (de) | 1995-10-19 | 2008-09-18 | Bio Origyn Llc | Methoden und zusammensetzungen, die das ueberleben und die funktion von keimbahnzellen und embryonen verbessern |
| JP3875754B2 (ja) * | 1995-11-17 | 2007-01-31 | シスメックス株式会社 | フローサイトメータ用標準液 |
| DE19549015C1 (de) | 1995-12-28 | 1997-04-03 | Siemens Ag | Verfahren und Anordnung zur Überwachung eines abreißenden Flüssigkeitstrahls |
| JP3584108B2 (ja) * | 1996-01-08 | 2004-11-04 | キヤノン株式会社 | レンズ鏡筒 |
| BR9600722A (pt) * | 1996-02-14 | 1997-12-30 | Jorge Antonio Rodrigues Claro | Bomba de infusão para contidos em bolsas plásticas flexíveis |
| US5895922A (en) * | 1996-03-19 | 1999-04-20 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence | Fluorescent biological particle detection system |
| US5707808A (en) * | 1996-04-15 | 1998-01-13 | The Regents Of The University Of California | Optical selection and collection of DNA fragments |
| JP2963393B2 (ja) | 1996-06-14 | 1999-10-18 | 浜松ホトニクス株式会社 | 光電子増倍管用電圧分割回路 |
| JP3526142B2 (ja) | 1996-07-18 | 2004-05-10 | パイオニア株式会社 | 光学式ピックアップ装置 |
| US5804436A (en) | 1996-08-02 | 1998-09-08 | Axiom Biotechnologies, Inc. | Apparatus and method for real-time measurement of cellular response |
| EP1012450B1 (en) | 1996-08-07 | 2004-10-20 | Cuno Incorporated | Additive dispensing apparatus |
| US5858667A (en) | 1996-09-06 | 1999-01-12 | Litron Laboratories | Method for the enumeration of micronucleated erythrocyte populations with a single laser flow cytometer |
| US5873254A (en) * | 1996-09-06 | 1999-02-23 | Interface Multigrad Technology | Device and methods for multigradient directional cooling and warming of biological samples |
| US6002471A (en) | 1996-11-04 | 1999-12-14 | California Institute Of Technology | High resolution scanning raman microscope |
| US5799830A (en) | 1996-11-08 | 1998-09-01 | Carroll; David C. | Pressure vessel access port |
| WO1998021355A1 (en) * | 1996-11-15 | 1998-05-22 | Life Technologies, Inc. | Mutants of green fluorescent protein |
| EP2264428B1 (en) | 1997-01-31 | 2017-05-03 | Xy, Llc | Optical apparatus with focussing reflector for converging radiation onto a flow of particles |
| US6534308B1 (en) * | 1997-03-27 | 2003-03-18 | Oncosis, Llc | Method and apparatus for selectively targeting specific cells within a mixed cell population |
| DE19717749A1 (de) | 1997-04-21 | 1998-10-22 | Fraunhofer Ges Forschung | Verfahren und Vorrichtung zur quantitativen und qualitativen on-line-Differenzierung von biotischen und abiotischen Partikeln |
| US6050935A (en) * | 1997-05-09 | 2000-04-18 | Biofertec | Container assembly for intravaginal fertilization and culture and embryo transfer and method of intravaginal fertilization and culture employing such a container |
| ES2260809T3 (es) | 1997-07-01 | 2006-11-01 | Vlp Watertown Limited Partnership | Metodo para la determinacion del sexo de una progenie mamifera. |
| BR9704313A (pt) | 1997-07-08 | 1999-04-06 | Alves Elias Walter | Utilização de ig-y de ovo de galinha associado a anticorpos monoclonais contra antigenos sexo especifico na imunosexagem de espermatozóides de bovinos |
| US5899848A (en) * | 1997-07-14 | 1999-05-04 | Haubrich; Mark A. | Device and process for artificial insemination of animals |
| US5876942A (en) * | 1997-07-24 | 1999-03-02 | National Science Council Of Republic Of China | Process for sexing cow embryos |
| US5985216A (en) * | 1997-07-24 | 1999-11-16 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Flow cytometry nozzle for high efficiency cell sorting |
| US5985538A (en) | 1997-08-01 | 1999-11-16 | Saint Barnabas Medical Center | Cryopreservation and cell culture medium comprising less than 50 mM sodium ions and greater than 100 mM choline salt |
| US5819948A (en) | 1997-08-21 | 1998-10-13 | Van Den Engh; Gerrit J. | Particle separating apparatus and method |
| WO1999015010A1 (en) * | 1997-09-22 | 1999-04-01 | University Of Guelph | Reduction of sperm sensitivity to chilling |
| JP3735190B2 (ja) * | 1997-10-28 | 2006-01-18 | オリンパス株式会社 | 走査型サイトメータ |
| US6086574A (en) | 1997-11-21 | 2000-07-11 | Hyclone Laboratories, Inc. | Fluid delivery systems with diptube connector |
| US5895764A (en) * | 1997-11-24 | 1999-04-20 | University Of New Mexico | Controlled sheath flow injection cytometry |
| US6071689A (en) * | 1997-12-31 | 2000-06-06 | Xy, Inc. | System for improving yield of sexed embryos in mammals |
| US6149867A (en) | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
| US20020096123A1 (en) | 1997-12-31 | 2002-07-25 | Colorado State University, Colorado State University Research Foundation | Integrated herd management system utilizing isolated populations of X-chromosome bearing and Y-chromosome bearing spermatozoa |
| EP1058688A4 (en) | 1998-02-03 | 2004-10-06 | Xy Inc | USE OF SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE PRIMERS TO DETECT THE PRESENCE OF MALE BOVINE CHROMOSOME BY CHAIN AMPLIFICATION BY POLYMERASE |
| WO1999042810A1 (en) | 1998-02-20 | 1999-08-26 | Xy, Inc. | A vibratory system for a sorting flow cytometer |
| US6154276A (en) * | 1998-02-23 | 2000-11-28 | The Regents Of The University Of California | Waveguide detection of right-angle-scattered light in flow cytometry |
| US6248590B1 (en) | 1998-02-27 | 2001-06-19 | Cytomation, Inc. | Method and apparatus for flow cytometry |
| US6042025A (en) * | 1998-03-13 | 2000-03-28 | Smith Et Al. | Two hole dispenser with baffles |
| JP3594794B2 (ja) | 1998-03-24 | 2004-12-02 | 独立行政法人 科学技術振興機構 | ナノ秒時間ゲート分光診断装置 |
| US6642018B1 (en) | 1998-03-27 | 2003-11-04 | Oncosis Llc | Method for inducing a response in one or more targeted cells |
| US6175409B1 (en) * | 1999-04-02 | 2001-01-16 | Symyx Technologies, Inc. | Flow-injection analysis and variable-flow light-scattering methods and apparatus for characterizing polymers |
| JP3350442B2 (ja) | 1998-04-09 | 2002-11-25 | 科学技術振興事業団 | 顕微鏡システム |
| CA2331897C (en) | 1998-05-14 | 2008-11-18 | Luminex Corporation | Multi-analyte diagnostic system and computer implemented process for same |
| CN1664562A (zh) | 1998-05-16 | 2005-09-07 | 阿普尔拉公司 | 用于监测dna聚合酶链反应的仪器 |
| US6079836A (en) | 1998-07-20 | 2000-06-27 | Coulter International Corp. | Flow cytometer droplet break-off location adjustment mechanism |
| NZ509434A (en) * | 1998-07-30 | 2004-03-26 | Univ Colorado State Res Found | Equine system for non-surgical artificial insemination |
| US6729369B2 (en) * | 1998-07-31 | 2004-05-04 | Chata Biosystems, Inc. | Vessel for containing/transporting a fluent substance |
| US20040107150A1 (en) | 1998-07-31 | 2004-06-03 | Chata Biosystems, Inc. Of Colorado | Apparatus and method with vessel for containing/transporting a fluent substance |
| US6087352A (en) | 1998-08-17 | 2000-07-11 | Trout; William E. | Use of Zeranol to modulate reproductive cycles |
| DE69937353T2 (de) * | 1998-08-21 | 2008-07-17 | Union Biometrica, Inc., Somerville | Instrument zur analyse und selektiven verteilung von objektproben |
| US7649153B2 (en) | 1998-12-11 | 2010-01-19 | International Business Machines Corporation | Method for minimizing sample damage during the ablation of material using a focused ultrashort pulsed laser beam |
| US6707551B2 (en) | 2000-01-24 | 2004-03-16 | Amnis Corporation | Multipass cavity for illumination and excitation of moving objects |
| US6671044B2 (en) | 1999-01-25 | 2003-12-30 | Amnis Corporation | Imaging and analyzing parameters of small moving objects such as cells in broad flat flow |
| US6119465A (en) | 1999-02-10 | 2000-09-19 | Mullens; Patrick L. | Shipping container for storing materials at cryogenic temperatures |
| FR2789778B1 (fr) * | 1999-02-12 | 2001-09-14 | France Telecom | Procede pour associer des references d'acheminement a des paquets de donnees au moyen d'une memoire trie, et routeur de paquets appliquant ce procede |
| FR2791645B1 (fr) | 1999-04-02 | 2001-06-15 | Valois Sa | Echantillon de produit fluide destine a la presse |
| US6793387B1 (en) | 1999-05-08 | 2004-09-21 | Chata Biosystems, Inc. | Apparatus for automatic preparation of a mixture and method |
| FR2793708B1 (fr) | 1999-05-21 | 2001-08-03 | Valois Sa | Dispositif de distribution de produit fluide |
| US6372506B1 (en) | 1999-07-02 | 2002-04-16 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus and method for verifying drop delay in a flow cytometer |
| DE19935766A1 (de) * | 1999-07-29 | 2001-02-01 | Friedrich Schiller Uni Jena Bu | Verfahren zur optischen Anregung von Fluorophor-markierter DNA und RNA |
| US6495366B1 (en) | 1999-09-03 | 2002-12-17 | Therakos, Inc. | Uninterrupted flow pump apparatus and method |
| EP1222451A1 (en) | 1999-10-20 | 2002-07-17 | Becton, Dickinson and Company | An apparatus and method employing incoherent light emitting semiconductor devices as particle detection light sources in a flow cytometer |
| US6813017B1 (en) | 1999-10-20 | 2004-11-02 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus and method employing incoherent light emitting semiconductor devices as particle detection light sources in a flow cytometer |
| WO2001028700A1 (en) | 1999-10-21 | 2001-04-26 | Cytomation, Inc. | Transiently dynamic flow cytometer analysis system |
| US7208265B1 (en) | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Xy, Inc. | Method of cryopreserving selected sperm cells |
| US6263745B1 (en) | 1999-12-03 | 2001-07-24 | Xy, Inc. | Flow cytometer nozzle and flow cytometer sample handling methods |
| WO2001049205A1 (es) | 2000-01-03 | 2001-07-12 | Iberica De Reproduccion Asistida, S.L. | Dispositivo de inseminacion artificial en ganado porcino |
| IT1317724B1 (it) * | 2000-01-14 | 2003-07-15 | Istituto Sperimentale Italiano | Procedimento per la produzione di embrioni non umani di sessopredeterminato ad alto valore genetico. |
| EP1257664A4 (en) | 2000-01-28 | 2006-04-05 | Althea Technologies Inc | METHOD FOR THE ANALYSIS OF GENE EXPRESSION |
| US6674923B1 (en) * | 2000-03-28 | 2004-01-06 | Eastman Kodak Company | Method and system for locating and accessing digitally stored images |
| EP2258169B1 (en) * | 2000-05-09 | 2019-07-10 | Xy, Llc | Method for isolating X-chromosome bearing and Y-chromosome bearing populations of spermatozoa |
| EP1287111A4 (en) | 2000-05-19 | 2005-12-28 | Dakocytomation Colorado Inc | QUICK ENTRY SYSTEM OF MULTIMATIC SAMPLE |
| US6700130B2 (en) * | 2001-06-29 | 2004-03-02 | Honeywell International Inc. | Optical detection system for flow cytometry |
| US6590911B1 (en) | 2000-06-02 | 2003-07-08 | Coherent, Inc. | Passively modelocked harmonic-generating laser |
| JP4145467B2 (ja) | 2000-06-26 | 2008-09-03 | 住友重機械工業株式会社 | 極低温冷凍装置 |
| EP1315418A4 (en) | 2000-08-10 | 2004-01-14 | Gtc Biotherapeutics Inc | SPERM CRYOPRESERVATION |
| US20040005582A1 (en) * | 2000-08-10 | 2004-01-08 | Nanobiodynamics, Incorporated | Biospecific desorption microflow systems and methods for studying biospecific interactions and their modulators |
| FR2813283B1 (fr) | 2000-08-25 | 2003-02-14 | Valois Sa | Distributeur a pompe integree |
| EP1190684A1 (en) | 2000-09-05 | 2002-03-27 | Universiteit Gent | Device and method for artificial insemination of bovines and other animals |
| US20040031071A1 (en) * | 2000-10-05 | 2004-02-12 | Xy, Inc. | System of hysteroscopic insemination of mares |
| WO2002028311A1 (en) | 2000-10-05 | 2002-04-11 | Xy, Inc. | System of hysteroscopic insemination of mares |
| SG160186A1 (en) | 2000-10-23 | 2010-04-29 | Medical Instill Tech Inc | Fluid dispenser having a rigid vial and flexible inner bladder |
| US20050064383A1 (en) * | 2000-11-22 | 2005-03-24 | Bashkin James K. | Methods and apparatus for producing gender enriched sperm |
| AU2002237689B2 (en) | 2000-11-29 | 2008-01-10 | Xy, Llc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into X-chromosome bearing and Y-chromosome bearing populations |
| US7713687B2 (en) * | 2000-11-29 | 2010-05-11 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
| US6577387B2 (en) | 2000-12-29 | 2003-06-10 | Johnson & Johnson Vision Care, Inc. | Inspection of ophthalmic lenses using absorption |
| US6673095B2 (en) * | 2001-02-12 | 2004-01-06 | Wound Healing Of Oklahoma, Inc. | Apparatus and method for delivery of laser light |
| US6797139B2 (en) | 2001-03-19 | 2004-09-28 | Applera Corporation | Detection cell for guiding excitation light therein and method for using same |
| US20020186375A1 (en) | 2001-05-01 | 2002-12-12 | Asbury Charles L. | Device and methods for detecting samples in a flow cytometer independent of variations in fluorescence polarization |
| FR2825987B1 (fr) | 2001-06-19 | 2003-12-12 | Valois Sa | Distributeur de produit fluide |
| WO2003008937A2 (en) | 2001-07-18 | 2003-01-30 | The Regents Of The University Of Michigan | Gas-focusing flow cytometer cell and flow cytometer detection system with waveguide optics |
| WO2003020877A2 (en) | 2001-09-01 | 2003-03-13 | Pharmacia Corporation | Staining and sorting genomes and chromosomes using sequence-specific polyamides |
| US6838289B2 (en) | 2001-11-14 | 2005-01-04 | Beckman Coulter, Inc. | Analyte detection system |
| US6831279B2 (en) * | 2001-11-27 | 2004-12-14 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence | Laser diode-excited biological particle detection system |
| US6698627B2 (en) * | 2002-02-19 | 2004-03-02 | Valois S.A.S. | Fluid dispenser |
| JP2004000144A (ja) | 2002-03-29 | 2004-01-08 | Aisin Seiki Co Ltd | 細胞分離選別装置、細胞整列用基板 |
| WO2004003697A2 (en) | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Monsanto Technology Llc | Swine genetics business system |
| JP2005533501A (ja) | 2002-07-22 | 2005-11-10 | エックスワイ，インコーポレイテッド | 精子細胞操作系 |
| WO2004012837A2 (en) | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Xy, Inc. | Low pressure sperm cell separation system |
| BRPI0313476B1 (pt) | 2002-08-15 | 2015-06-23 | Xy Llc | Citômetro de fluxo de alta resolução |
| US7169548B2 (en) | 2002-09-13 | 2007-01-30 | Xy, Inc. | Sperm cell processing and preservation systems |
| JP3983151B2 (ja) | 2002-09-25 | 2007-09-26 | ダイワ精工株式会社 | 魚釣用スピニングリール |
| US7201875B2 (en) * | 2002-09-27 | 2007-04-10 | Becton Dickinson And Company | Fixed mounted sorting cuvette with user replaceable nozzle |
| AU2003297304A1 (en) | 2002-12-19 | 2004-07-22 | Monsanto Technology Llc | Method and means for early detection of pregnancy in animals by combination testing |
| MX345106B (es) | 2003-03-28 | 2017-01-16 | Inguran Llc * | Método y aparato para orientar esperma en una corriente de líquido. |
| MXPA05010478A (es) * | 2003-03-28 | 2005-12-15 | Monsanto Technology Llc | Procedimiento para la tincion de esperma. |
| CN1232231C (zh) | 2003-04-10 | 2005-12-21 | 李喜和 | 以精子分离、胚胎性别鉴定为基础的家畜性别控制方法 |
| CA2566749C (en) | 2003-05-15 | 2017-02-21 | Xy, Inc. | Efficient haploid cell sorting for flow cytometer systems |
| US20050011582A1 (en) * | 2003-06-06 | 2005-01-20 | Haug Jeffrey S. | Fluid delivery system for a flow cytometer |
| EP2260854A1 (en) | 2004-03-29 | 2010-12-15 | Inguran, LLC | Sperm suspensions for sorting into x or y chromosome-bearing enriched populations |
| BRPI0509466A (pt) | 2004-03-29 | 2007-09-11 | Monsanto Technology Llc | uso de uma composição a qual regula as reações de oxidação/redução intracelularmente e/ou extracelularmente em um processo de manchamento ou classificação de espermatozóide |
| EP2269617B1 (en) | 2004-07-22 | 2016-04-27 | Inguran, LLC | Process for enriching a population of sperm cells |
| US20060118167A1 (en) | 2004-12-03 | 2006-06-08 | Xy, Inc. | Pressure regulated continuously variable volume container for fluid delivery |
| US20060147894A1 (en) | 2004-12-30 | 2006-07-06 | Vicam, L.P. | Jacketed vessel for holding semen for sex biasing mammals through artificial insemination and systems and methods for enhancing the probability of sex biasing using the same |
| US7618770B2 (en) * | 2005-07-29 | 2009-11-17 | Xy, Inc. | Methods and apparatus for reducing protein content in sperm cell extenders |
| JP5025388B2 (ja) | 2007-08-27 | 2012-09-12 | シスメックス株式会社 | 試料分析装置及び試料分析方法 |
| CN102119212B (zh) | 2008-06-30 | 2014-08-20 | 迈克必斯生物系统公司 | 分选细胞的方法及装置 |
| US7843653B2 (en) | 2009-02-13 | 2010-11-30 | Coherent, Inc. | Achromatic flat top beam shaping |
| EP2415640B1 (de) | 2010-08-03 | 2013-02-13 | SMR Patents S.à.r.l. | Außenrückspiegel und Verfahren zu dessen Montage |
| JP5805741B2 (ja) | 2013-12-18 | 2015-11-04 | 株式会社藤商事 | 遊技機 |
| US9917165B2 (en) | 2015-05-15 | 2018-03-13 | Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. | Memory cell structure for improving erase speed |
-
2001
- 2001-05-09 EP EP10176904.0A patent/EP2258169B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-09 NZ NZ551401A patent/NZ551401A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-05-09 EP EP10176910.7A patent/EP2258171B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-09 EP EP10176917.2A patent/EP2258172B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-09 EP EP10176919A patent/EP2258173A3/en not_active Withdrawn
- 2001-05-09 AU AU2001263039A patent/AU2001263039B2/en not_active Ceased
- 2001-05-09 EP EP01937288.7A patent/EP1298991B8/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-09 HU HU0302232A patent/HUP0302232A2/hu unknown
- 2001-05-09 CN CN201110172117.4A patent/CN102288532B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-05-09 JP JP2001582502A patent/JP5071995B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-09 DK DK10176889.3T patent/DK2258168T3/da active
- 2001-05-09 DK DK10176908.1T patent/DK2258170T3/en active
- 2001-05-09 IL IL152714A patent/IL152714A/en active IP Right Grant
- 2001-05-09 AU AU6303901A patent/AU6303901A/xx active Pending
- 2001-05-09 NZ NZ545311A patent/NZ545311A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-05-09 EP EP10176908.1A patent/EP2258170B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-09 RU RU2002132899/13A patent/RU2297198C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-05-09 NZ NZ522613A patent/NZ522613A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-05-09 RU RU2006141419/13A patent/RU2393815C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-05-09 EP EP10176924A patent/EP2258174A3/en not_active Ceased
- 2001-05-09 CN CNB018107486A patent/CN100433975C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-05-09 EP EP10176889.3A patent/EP2258168B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-09 CN CN201410254362.3A patent/CN104004710B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-05-09 CA CA2408939A patent/CA2408939C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-09 UA UAA200709359A patent/UA95899C2/uk unknown
- 2001-05-09 CN CN200810166001.8A patent/CN101418280B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-05-09 US US10/275,770 patent/US7371517B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-09 PL PL01359598A patent/PL359598A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2001-05-09 AR ARP010102198A patent/AR034121A1/es active IP Right Grant
- 2001-05-09 DK DK10176917.2T patent/DK2258172T3/en active
- 2001-05-09 BR BR0110731-3A patent/BR0110731A/pt active Search and Examination
- 2001-05-09 KR KR1020027015074A patent/KR100849948B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-05-09 MX MXPA02010971A patent/MXPA02010971A/es active IP Right Grant
- 2001-05-09 WO PCT/US2001/015150 patent/WO2001085913A2/en active Application Filing
- 2001-09-05 UA UA2002129791A patent/UA81219C2/uk unknown
-
2002
- 2002-11-08 NO NO20025370A patent/NO20025370L/no not_active Application Discontinuation
- 2002-11-11 ZA ZA200209139A patent/ZA200209139B/en unknown
-
2004
- 2004-10-07 NZ NZ535812A patent/NZ535812A/en not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-10-13 AU AU2006230651A patent/AU2006230651B2/en not_active Ceased
-
2007
- 2007-08-13 IL IL185349A patent/IL185349A/en active IP Right Grant
-
2008
- 2008-05-01 US US12/113,684 patent/US9145590B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-02 JP JP2008257883A patent/JP5046337B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-05-27 AU AU2010202152A patent/AU2010202152B2/en not_active Ceased
-
2011
- 2011-07-28 JP JP2011166045A patent/JP2012005490A/ja active Pending
-
2012
- 2012-04-26 HK HK12104128.3A patent/HK1163810A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-01-28 US US13/752,090 patent/US20130210056A1/en not_active Abandoned
- 2013-01-28 US US13/752,057 patent/US10208345B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-01-28 US US13/752,074 patent/US20130209996A1/en not_active Abandoned
- 2013-01-28 US US13/752,068 patent/US8703418B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-02-07 JP JP2014022282A patent/JP2014079259A/ja active Pending
- 2014-12-23 US US14/581,536 patent/US20150152497A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-02-26 HK HK15101909.1A patent/HK1201552A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA81219C2 (en) | Device for differentiation of assymetric particles | |
| AU2021203880B2 (en) | Method and system incorporating beam shaping optics and beam stabilization | |
| Givan | Principles of flow cytometry: an overview | |
| EP1295105B1 (de) | Verfahren zur selektion von partikeln | |
| US4500641A (en) | Flow cytometer for identifying algae by chlorophyll fluorescence | |
| US20110143389A1 (en) | Cell analysis apparatus and methods | |
| Davis et al. | Microfluidic cell sorter for use in developing red fluorescent proteins with improved photostability | |
| US20120308998A1 (en) | Methods and systems for reducing dna fragmentation in a population of sperm cells | |
| NZ760907B2 (en) | Method and system incorporating beam shaping optics and beam stabilization | |
| Steinkamp | Identification of Single Cells by Fluorescent and Darkfield Optical Techniques |