UA48111C2

UA48111C2 - Фармацевтична композиція для інгаляції, спосіб її приготування (варіанти) та інгалятор

Info

Publication number: UA48111C2
Application number: UA95125418A
Authority: UA
Inventors: Челль Йоран Ерік БЕКСТРЬОМ; Карл Магнус Олоф ДАЛЬБЕКК; Петер ЕДМАН; Анн Шарлотта Біргіт ЙОХАНССОН
Original assignee: Астра Актіеболаг; Астра Актиеболаг
Priority date: 1993-06-24
Filing date: 1994-06-23
Publication date: 2002-08-15
Also published as: CN1127471A; JP2006089497A; EP0706383B1; IL110085A0; IS4179A; EG21484A; SA94150060B1; FI111909B; SK283253B6; DE69428442D1; HK1009587A1; HU226474B1; IS1796B; ATE206046T1; IL110085A; WO1995000128A1; CZ339395A3; FI956228A; CZ287656B6; SK160295A3

Abstract

Винахід відноситься до фармацевтичної композиції для інгаляції, яка містить суміш фармацевтично активного поліпептиду та речовини, що підсилює його поглинання в легенях хворого. Суміш знаходиться у формі сухого порошку, в якому не менш ніж 50% загальної маси поліпептиду та речовини для підсилення поглинання складається з частинок діаметром не більше 10 мікронів. Ці первісні частинки можуть утворювати агломерати.

Description

Опис винаходу

Настоящее изобретение относится к способам и композициям для доставки лекарственно полезньх 2 пептидов и белков.

Предпосьілки к созданию изобретения

Хотя появление генной инженерии привело к бьістрому расширению списка лекарственньїх средств на основе пептидов, однако, основньмм препятствием терапий на основе пептидов является значительно затрудненная реализация всего потенциала зтой области: в общем, лекарственнье средства на основе 710 пептидов нельзя вводить в зффективньїхх дозах перорально, поскольку они бьістро разрушаются под действием ферментов в желудочно-кишечном тракте до того, как они могут достигать кровотока. Если интересующий полипептид нельзя изменить, чтобьі сделать его относительно устойчивьм к таким ферментам, единственньім практическим способом доставки лекарственного средства, вероятно, является парентеральньй путь, например, внутривенная, внутримьшечная или подкожная иньекция. Введение другими парентеральньми 19 путями (например, абсорбцией через носовье, щечнье или ректальнье оболочки или через легкие) оказалось менее успешньм.

Краткое изложение существа изобретения

Бьіло найдено, что когда пептид или белок (в дальнейшем собирательно именуемье как полипептидь!) сочетают с подходящим усилителем абсорбции и вводят в легкие в форме порошка с подходящим размером частиц, он легко входит в мальй круг кровообращения путем абсорбции через слой зпителиальньїх клеток в нижних дьїхательньїх путях. Зто удобно вьіполняется ингаляцией порошка из устройства-ингалятора, которое отпускает точную дозу порошкообразной комбинации полипептид/усилитель с размером частиц, которьй увеличивает до максимума отложение в нижних дьїхательньх путях, в отличие от полости рта и горла. (С целью облегчения упоминания полипептид и усилитель в дальнейшем собирательно именуются как "активнье с 29 соединения"). Для вьіполнения зтой предпочтительной доставки в легкие по возможности больше активньх Го) соединений должно состоять из частиц, имеющих диаметр менее, чем приблизительно 10мкм (например, между 0,01 - л1Омкм, идеально между 1 - бмкм) . В предпочтительньїх вариантах по меньшей мере 5095 (предпочтительно по меньшей мере 6095, более предпочтительно по меньшей мере 7095, еще более предпочтительно по меньшей мере 8095 и найболее предпочтительно по меньшей мере 9095) от общей массь -- 30 активньх соединений, которье находятся в устройстве-ингаляторе, состоит из частиц с желаемьм пределом «-- размеров диаметров.

Изобретениє, таким образом, включаєт фармацевтическую композицию, содержащую смесь активньїх (37 соединений: (А) фармацевтически активного полипептида и (В) соединения-усилителя, которое усиливаєт с системную абсорбцию полипептида в нижней дьїхательной системе (предпочтительно легких) пациента, причем 35 смесь находится в форме пригодного для ингаляции сухого порошка, в котором по меньшей мере 5095 общей М массьї активньїх соединений (А) и (В) состоит из первоначальньїх частиц, имеющих диаметр менее чем или равньій около 10 микронам. Первоначальнье частиць! могут бьть упакованьі как таковье или могут бьть превращень! в алгомерать, которье затем, в основном, дезагломерируются до введения в дьїхательнье пути « пациента. Композиция может, конечно, содержать, если требуется, другие компонентьі, включая другие З 70 фармацевтически активньсе агентьї, другие усилители и фармацевтически приемлемье наполнители, например, с разбавители или носители. Следовательно, терапевтический препарат настоящего изобретения может з» содержать только зти активнье соединения или он может содержать другие вещества, например, фармацевтически приемлемьйй носитель. Зтот носитель может преимущественно состоять из частиц, имеющих диаметр менее чем около 10 микрон, так что по меньшей мере 5095 полученного в результате порошка в целом 45 состоит из возможно агломерированньїх первоначальньїх частиц, имеющих диаметр менее чем около 10 е микрон; альтернативно носитель может в основном состоять из гораздо больших частиц ("грубьхх частиц"), так о что "готовую к употреблению смесь" можно образовать из активньїх соединений и озтого носителя. В упорядоченной смеси, альтернативно известной как взаимодействующая или адгезивная смесь, мельчайшие - частиць! лекарственного средства (в настоящем изобретении активнье соединения) довольно равномерно -к 70 распределеньі на поверхности грубьїх частиц наполнителя (в настоящем изобретении, фармацевтически приемлемого носителя). В таком случае активнье соединения предпочтительно не находятся в форме

З агломератов до образования готовой к употреблению смеси. Грубье частиць! могут иметь диаметр больше 20 микрон, например, больше 60 микрон. Вьше зтих низших пределов диаметр грубьїх частиц не имеет критического значения, позтому, при желаниий можно применять крупнье частиць разного размера в соответствий с практическими требованиями конкретной готовой препаративной формь!. Не требуется, чтобь

ГФ) грубье частицьі в назначенной смеси бьіли одинакового размера, но они могут иметь сходньій размер в пределах размера назначенной смеси с предпочтительньім диаметром, равньм 60 - 800 микрон. о Полипептид может бьть любьм лекарственно или диагностически пригодньмм пептидом или белком с размером от небольшого до среднего, т.е. с молекулярной массой (ММУУ) до около 40кДа, для которого 60 желательна системная доставка. Для всех таких пептидов в общем пригоднь! и могут применяться механизмь! повьішенной полипептидной абсорбции в соответствии с настоящим изобретением, хотя степень, до которой повьшается их абсорбция, может изменяться в соответствии с МУМ и физико-химическими свойствами полипептида и конкретньм применяемьм усилителем. Ожидается, что в настоящем изобретении будут найболее пригодньії полипептидьії, имеющие молекулярную массу до ЗОкДа, например, полипептидьії, имеющие бо молекулярную массу до 25кДа или до 20кДа, особенно до 15кДа или до 10кДа. Любой желаемьй полипептид можно легко испьїтать для применения в настоящем изобретениий с конкретньм усилителем посредством анализов Іп мімо или Іп мієго, как здесь описано.

Соединением-усилителем, применяеємьм в композициях настоящего изобретения, может бьіть любое боединение, которое усиливает абсорбцию полипептида через зпителий нижних дьїхательньїх путей и в большой круг кровообращения. Термин "усиливает абсорбцию" обозначаєт, что количество полипептида, абсорбированного в большой круг кровообращения в присутствиий усилителя, больше, чем в его отсутствие.

Предпочтительно количество абсорбированного полипептида значительно вьше (р « 0,05) в присутствий усилителя. Пригодность любого потенциального усилителя для применения в настоящем изобретениий можно 7/0 легко определить при помощи анализов Іп мімо или Іп мігго, как здесь описано.

Количество абсорбированного полипептида в соответствий с настоящим изобретением предпочтительно составляет по меньшей мере 15095 количества, абсорбированного в отсутствие усилителя. В предпочтительньх вариантах абсорбция полипептида по меньшей мере удваийваєтся, более предпочтительно утраиваєтся и наийболее предпочтительно учетверяется в присутствии усилителя по сравнению с абсорбцией его в отсутствие /5 усилителя.

Усилитель предпочтительно является поверхностно-активньм веществом, например, солью жирной кислотьІ, солью желчной кислотьї, производньім соли желчной кислотьї, алкилгликозидом, циклодекстри-ном или фосфолипидом. Усилитель может бьіть, например, солью натрия, калия или органического амина жирной кислотьї, жирная кислота предпочтительно является каприновой кислотой или другой жирной кислотой с 10 - 14 го атомами углерода. Предпочтительньм усилителем является капрат натрия. Отношение полипептида к усилителю предпочтительно будет изменяться от 9 : 1 до 1 : 1. Хотя относительное содержание усилителя вьше, чем 1 : 1, должно, по-видимому, усиливать поглощение так же или лучше, чем более низкие относительнье содержания, считают, что количество усилителя не должно бьіть вьіше, чем необходимо для достижения требуемого уровня усиления, поскольку избьток усилителя может вьізьївать нежелательнье с побочньсе действия, например, местное раздражение.

В пределах изобретения находится также способ системного введения фармацевтически активного о полипептида путем назначения пациенту вдьїхания Фврмацевтической композиции настоящего изобретения, в которой по меньшей мере 5095 общей массьї активньїх соединений в месте входа в дьїхательнье пути пациента состоит из частиц, имеющих диаметр менее чем или равньй около 10 микронам. Зто предпочтительно - пд зо осуществляется при помощи устройства-ингалятора, из которого пациент вдьмхает порошок. Когда порошкообразная композиция находится в форме агломератов первоначальньх частиц, устройство -- предпочтительно имеет такую форму, которая индуцирует значительное дезагломерирование агломератов при «- ингаляции порошка пациентом из устройства, так что основная часть агломератов распадаєтся на частиць, имеющие диаметр менее чем или равньй около 10 микрон, до входа порошка в дьїхательную систему пациента. со

Такое дезагломерирование должно происходить внутри устройства, оно обьічно индуцируется воздушной «г турбулентностью, создаваемой в устройстве силой вдьїхания. В упорядоченной смеси агломерать! в общем предпочтительно не образуются. В случає упорядоченной смеси активнье соединения должнь! вьісвобождаться из больших частиц, предпочтительно при ингаляции, или при помощи механических средств в устройстве-ингаляторе, или только под действием вдьїхания, или при помощи других средств, причем активнье « 70 соединения затем отлагаются в нижних дьхательньх путях, а частиць! носителя отлагаются в полости рта. в с Устройство-ингалятор предпочтительно является ингалятором с одной дозой сухого порошка, но может бьїіть альтернативно ингалятором со многими дозами сухого порошка. з Данное изобретение включаєт также способь! изготовления фармацевтической композиции, пригодной для введения ингаляцией. По одному такому способу сначала приготовляют раствор, в котором растворень! (а) Фармацевтически активньій полипептид и (в) соединение-усилитель, которое усиливает системную абсорбцию ї5» полипептида в нижних дьїхательньїх путях пациента. Растворитель затем удаляют из раствора, получая сухой твердьйй остаток, содержащий полипептид и усилитель, и зтот сухой твердьій остаток тонко измельчают для со получения порошка. Второй такой способ включаєт сухое смешивание (а) фармацевтически активного - полипептида и (в) соединения-усилителя и тонкое измельчение полученной смеси. Однако, третий пригодньй способ включаєт стадии получения первого тонко измельченного препарата, содержащего полипептид, и - второго тонко измельченного препарата, содержащего соединение-усилитель, и смешивание вместе двух тонко шк измельченньїх препаратов. Когда нужно включить носитель, исключая случай, когда желательно получить упорядоченную смесь, его можно добавить в раствор или в сухую смесь фармацевтически активного полипептида до тонкого измельчения или тонко измельченньй носитель можно смешать с другими тонко измельченньми компонентами. При получений упорядоченной смеси тонко измельченнье полипептид и усилитель смешивают с подходящим носителем.

Ф) Краткое описание рисунков ка Фиг.1 является графиком, иллюстрирующим влияние различньїх концентраций усилителя, в качестве которого применяют о капрат натрия, на перенос соединения-маркера (маннита) через монослой бор Культивированньїх зпителиальньх клеток.

Фиг.2 является графиком, иллюстрирующим влияние различньїх концентраций усилителя, в качестве которого применяют о капрат натрия, на перенос соединения-маркера (маннита) через монослой культивированньїх зпителиальньїх клеток в присутствиий полипептида (массовое соотношение капрата натрия и полипептида 1: 3). 65 Фиг.3 является графиком концентрации полипептида плазмь! как функции времени после ингаляции только полипептида, полипептида с капратом натрия при соотношенийи 90 : 10 и полипептида и капрата натрия при соотношениий 75: 25.

Подробное описание

Некоторье предпочтительнье вариантьї осуществления изобретения в общем описьіваются ниже.

Полипептид

Полипептид предпочтительно является пептидньім гормоном, за исключением инсулина, например, вазопрессином, аналогом вазопрессина, дезмопрессином, глюкагоном, кортикотропином (АСТН), гонадо-тропином (лютеинизирующий гормон или І НРН), кальцитонином, С-пептидом инсулина, паратироидньм гормоном (РТН), гормоном роста человека (ПОН), гормоном роста (НО), рилизинг--ормоном гормона роста 7/0. «ЗНАН), окситоцином, рилизинг-гормоном кортикотропина (СКН) аналогом соматостатина, аналогом агониста гонадотропина (СпКНа), предсердньм натриуретическим пептидом (ПАМР) , рилизинг--ормоном тироксина (ТЕН), фолликулостимулирующим гормоном (ЕН) и пролактином.

Другие возможнье полипептидьії включают факторьї роста, интерлейкинь, полипептиднье вакцинь, ферменть!, зндорфинь!, гликопротеиньі, липопротейиньі и полипептидьі, включеннье в систему свертьввания 7/5 Крови, которне системно оказьвают фармакологическое действие. Предполагается, что большинство (если не все) полипептидов с размером от малого до среднего, относительно вьісокой растворимостью в воде и изозлектрической точкой между приблизительно рНЗ и рнНв, можно зффективно доставить способами изобретения.

Усилитель

Применение усилителя абсорбции имеет критическое значение, поскольку полипептид сам (один) плохо абсорбируется через легкие. Применяемьй усилитель может бьть любьм из числа соединений, которье действуют, усиливая абсорбцию через слой зпителиальньх клеток, вністилающий нижние дьїхательньсе пути, и в соседнюю легочную сосудистую сеть. Усилитель может вьіполнять зто действие любьм из нескольких возможньїх механизмов. Зти механизмь! предусматривают: с (1) Усиление парацеллюлярной проницаемости полипептида путем индуцирования структурньїх изменений в о месте плотного соединения зпителиальньмх клеток. (2) Усиление парацеллюлярной проницаемости полипептида путем взаймодействия с белковьми или липидньмми компонентами мембрань или зкстракции их и посредством зтого нарушения мембранной целостности. «- зо (3) Взаймодействие между усилителем и полипептидом, которое повьішает растворимость полипептида в водном растворе. Зто можно осуществить путем предупреждения образования агрегатов инсулина (димеров, - тримеров, гексамеров) или растворением молекул полипептида в мицеллах усилителя. «- (4) Снижение вязкости или растворение слизистого барьера, вьиістилающего альвеоль! и проходь! легких, в результате чего зпителиальная поверхность становится способной ок непосредственной абсорбции со

З5 полипептида. «г

Усилители могут функционировать только по одному из изложенньїх вьіше механизмов или по двум или более. Усилитель, действующий по нескольким механизмам, более подходит для промотирования зффективной абсорбции полипептида, чем усилитель, которьій использует только один или два механизма.

Поверхностно-активнье вещества являются, например, классом усилителей, которье, как полагают, « 0 действуют посредством всех указанньїх вьіше механизмов. Поверхностно-активнье вещества являются в с амфифильньми молекулами, имеющими как липофильную, так и гидрофильную часть, с изменяющимся

Й балансом между зтими двумя характеристиками. Если молекула очень липофильная, низкая растворимость а вещества в воде может ограничить его пригодностью. Однако, если гидрофильная часть подавляюще доминирует, то поверхностно-активнье свойства молекуль! могут бьіть минимальньми. Следовательно, чтобь бьіть зффективньм, поверхностно-активное вещество должно обеспечивать подходящий баланс между ї5» достаточной растворимостью и достаточной поверхностной активностью.

Другим свойством поверхностно-активного вещества, которое может бьіть важньім, является общий заряд со поверхностно-активного вещества при значений рН в легких (приблизительно 7,4). При рН 7,4 некоторье - полипептидь! имеют отрицательньй общий заряд. Зто может привести к злектростатическому отталкиванию между молекулами, которое, в свою очередь, может предотвращать агрегирование и тем самьм повьішать - растворимость. Если поверхностно-активное вещество также заряжено отрицательно, оно может

Кк взаймодействовать с полипептидом, например, путем гидрофобного взаймодействия, и может иметь место дополнительное отталкивание среди ополипептидньїх молекул, в таком случае анионогенное поверхностно-активное вещество будет обладать дополнительньм прейимуществом (по сравнению с в поверхностно-активньіми веществами, имеющими нейтральньй или общий положительньй заряд) в усилений абсорбции, способствуя стабилизации полипептида в мономерном состоянии. (Ф, Ряд различньїх соединений, потенциально пригодньїх в качестве усилителей в способах изобретения, ка испьітьівали на крьсах, как описано в приведенном ниже примере 2. Другие вещества с известньїми свойствами по усилению абсорбции или с физическими характеристиками, которне делают их вероятньмми кандидатами бо для применения в способе настоящего изобретения, могут легко испьітьіваться специалистом обьічной квалификации анализом Іп мімо или альтернативно анализом Іп міїго, описаннь!м в примере 1.

Возможно, что комбинация двух или более веществ-усилителей также дает удовлетворительнье результатьі. Считается, что применение такой комбинации в способе настоящего изобретения находится в пределах изобретения. 65 Усилитель, пригодньій для способов настоящего изобретения, может обьединять зффективное усиление абсорбции полипептида с (1) отсутствием токсичности при применяемьх концентрациях и (2) хорошими порошковьми свойствами, т.е. отсутствием клейкой или восковидной консистенции в твердом состоянии.

Токсичность данного вещества можно проверить стандартньми способами, такими как МтТТ-испьтание, например, как описано в Іпі. 9.Рпагт.,65(1990), 249 - 259. Порошковье свойства данного вещества можно

Ввіяснить из опубликованньх данньх для зтого вещества или змпирически.

Одним очень перспективньїм типом усилителя является соль жирной кислоть!. Найдено, что натриевая соль насьіщенньїх жирньїх кислот с углеродной цепью из 10 (т.е. капрат натрия), 12 (лаурат натрия) и 14 (миристат натрия) атомов хорошо пригодна для способа изобретения. Найдено также, что соли калия и лизина каприновой кислотьі зффективньі в способе настоящего изобретения. Если углеродная цепь состоит из менее чем 10 /о атомов, поверхностная активность поверхностно-активного вещества может бьть слишком низкой и, если углеродная цепь состоит более чем из 14 атомов, пониженная растворимость соли жирной кислоть! в воде ограничиваєт ее пригодность.

Наийболее предпочтительньм в настоящем изобретений веществом, которое усиливает абсорбцию полипептида в нижних дьїхательньмх путях, является капрат натрия.

Различнье противоионь! могут изменять растворимость соли насьіщенной жирной кислоть! в воде, так что усилитель, углеродная цепь которого содержит не 10 - 14 атомов, может оказаться даже более предпочтительньм, чем усилители, конкретно указаннье вьіше. Соли ненасьищенньїх жирньїх кислот можно также применять в настоящем изобретении, поскольку они более растворимь! в воде, чем соли насьщенньх жирньїх кислот, и могут позтому иметь более длинную углеродную Цепь, чем последние, и в то же время 2о поддерживают растворимость, необходимую для удачного усилителя абсорбции полипептида.

Все из испьтанньх солей желчньх кислот и производньх солей желчньх кислот (натриевье соли урсодезоксихолата, таурохолата, гликохолата и тауродигидрофузидата) зффективно усиливают абсорбцию полипептида в легких.

В качестве усилителей испьітьївали также фосфолипидь!. Бьіло найдено, что одноцепочечньій фосфолипид с ов (пизофосфатидилхолин) является зффективньм усилителем, тогда как двухцепочечнье фосфолипидь (диоктаноилфосфатидилхолин и дидеканоилфосфатидилхолин) не являются активньми усилителями. Зто і) можно обьяснить тем фактом, что двухцепочечнье фосфолипидь! значительно менее растворимь! в воде, чем их одноцепочечнье аналоги; однако, разумно предположить, что двухцепочечнье фосфолипидь с более короткой цепью, имеющие большую растворимость в воде, чем их аналоги с более длинной цепью, можно -с ди зо применять в настоящем изобретений в качестве усилителей, так что можно применять как одноцепочечньє, так и двухцепочечнье фосфолипидь!. -

Один гликозид, октилглюкопиранозид, испьітьшали в настоящем изобретении в качестве усилителя. БьІло «- найдено, что он обладает некоторой способностью усиливать абсорбцию. Следует также предположить, что другие алкилгликозидь, например, тиоглюкопиранозидьї и мальтопиранозидь, обладают способностью со з5 усиливать абсорбцию в способах настоящего изобретения. «г

Циклодекстриньі и их производнье зффективно усиливают назальную абсорбцию и аналогично могут функционировать в легких. Испьітьвшали диметил-Д-циклодекстрин и нашли, что он обладаєт усиливающим абсорбцию действием.

Другими потенциально пригодньіми поверхностно-активньіми веществами являются салицилат натрия, « 5-метоксисалицилат натрия и встречающиеся в природе поверхностно-активнье вещества, например, соли 8 с глицирризиновой кислотьї, сапонингликозидь и ацилкарнитинь. й Для ионньх усилителей (например, описанньїх вьіше анионогенньїх поверхностно-активньїх веществ) может "» бьіть важна природа противойона. Конкретньїй вьібранньйй противойон может влиять на порошковье свойства, растворимость, стабильность, гигроскопичность и локальную/системную токсичность усилителя или любой готовой препаративной формьі, содержащей зтот усилитель. Он может также влиять на стабильность и/или ї» растворимость полипептида, с которьім его комбинируют. В общем, предполагается, что одновалентнье металлические катионьії, например, натрия, калия, лития и цезия, должнь! бьть пригодньі в качестве бо противойонов для анионогенньїх усилителей. Аммиак и органические аминьі образуют другой класс катионов, - которье, как ожидается, пригодньі для применения с анионогенньми усилителями, имеющими остаток 5р Ккарбоновой кислоть!. Примерь! таких органических аминов включат зтаноламин, дизтано-ламин, тризтаноламин, - 2-амино-2-метилотиламин, бетайнь,, зтилен-диамин, М, М-дибензилотилентетраамин, аргинин, - гексаметилен-тетраамин, гистидин, М-метилпиперидин, лизин, пиперазин, спер-мидин, спермин и три(гидроксиметил)аминометан.

Поскольку зффективное усиление абсорбции полипептида в легких наблюдали для ряда испьтанньх усилителей, предполагается, что можно найти много больше веществ, которье функционируют таким же образом. Микросферь крахмала зффективно усиливают биологическую доступность полипептида, іФ) доставленного через носовьіе оболочки. Их испьтьшвали в качестве усилителя в способах настоящего ко изобретения. Хотя они оказались мало пригодньіми для доставки полипептида через легочньій путь в животной модели, применяемой в изобретении, считается, что зто бьло в основном обусловлено техническими бо трудностями, преодоление которьїх может привести к успешной доставке полипептида через легочньй путь.

Хелатообразующие средства являются классом усилителей, которье, как полагают, действуют путем связьшвания ионов кальция. Поскольку ионьї кальция помогают поддерживать расстояние между клетками и дополнительно снижают растворимость полипептида,связьівание зтих ионов должно по теории как повьішать растворимость полипептидов, так и повьішать парацеллюлярную проницаемость по-липептидов. Хотя 65 Мспьітьівали одно хелатообразующее средство, натриевую соль зтилендиаминтетрауксусной кислоть! (ЕОТА), которая, как бьіло найдено, незффективна в усилений абсорбции инсулина в испьтуемой крьісиной модели,

другие связьівающие ионь!ї кальция хелатообразующие агенть! могут оказаться более пригоднь!ми.

Соотношения полипептида и усилителя

Относительнье соотношения полипептида и усилителя можно при желаний изменять. Для обеспечивания

Зффективной абсорбции вдьїхаемого полипептида должно присутствовать достаточное количество усилителя; однако, количество усилителя следует поддерживать по возможности низким, чтобьї минимизировать риск отрицательного действия, вьізванного усилителем. Хотя следует испьітьївать каждую конкретную комбинацию полипептид/усилитель, чтобьї определить оптимальнье соотношения компонентов комбинации,ожидается, что для достижения приемлемой абсорбции полипептида содержание усилителя должно бьіть более 1095 смеси 7/0 полипептид/усилитель. Для большинства типов усилителей содержание усилителя должно бьть более чем 1590 или более чем 2095, предпочтительно между 2595 и 5095. Предпочтительное соотношение для каждой комбинации полипептид/усилитель (или полипептид/усилитель/разбавитель) может бьть легко определено специалистом обьічной квалификации в области фармакологии стандартньми методиками, основанньми на таких критериях, как зффективная, совместимая доставка оптимальной дозьі, минимизация побочньїх действий /5 М приемлемая скорость абсорбции.

Для действия препарата не требуются дополнительнье компоненть, но при желаниий их можно ввести.

Например, количество порошка, которое составляет однократную дозу данной комбинации полипептид/поверхностно-активное вещество, можно увеличить (например, для применения в устройстве-ингаляторе, которое по конструкции требует большего обьема порошка на дозу) путем разбавления го порошка фармацевтически приемлемьми разбавителями. Для облегчения обработки или улучшения порошковьїх свойств или стабильности препарата в него можно включить другие добавки. Можно добавлять корригент (вкусовое вещество), чтобь! количество порошка, которое неизбежно оседает в полости рта и горле, служило бьі для получения пациентом указания о том (положительной обратной связи), что доза из устройства-ингалятора доставлена. Любая такая добавка должна обладать следующими свойствами: (а) она с об стабильна и не оказьіваєет неблагоприятное действие на стабильность полипептида и усилителя , (в) она не препятствует абсорбции полипептида, (с) она имеет хорошие порошковье свойства, как зтот термин і) понимается в фармации, (4) она не гигроскопична и (е) она при применяемьх концентрациях не обладаєт отрицательньм действием в дьїхательньїх путях. Пригоднье типьі таких добавок включают моно-, ди- и полисахаридьі, спиртьї ряда сахаров и другие полиольі, например, лактозу, глюкозу, рафинозу, мелезитозу, «- зо лактит, мальтит, трегалозу, сахарозу, маннит и крахмал. Так как восстанавливающие сахара, например, лактоза и глюкоза, имеют тенденцию образовать комплексьі с белками, невосстанавливающие сахара, например, 787 рафиноза, мелезитоза, лактит, мальтит, трегалоза, сахароза, маннит и крахмал, могут бьіть предпочтительньми с ди добавками для применения в настоящем изобретении. Такие добавки во всех случаях могут составлять от 090 (т.е. без добавки) до почти 10095 от всего препарата. со

В предпочтительном варианте изобретение предлагаєт терапевтический препарат фармацевтически «г активного полипептида и вещества, которое усиливает абсорбцию зтого полипептида в нижних дьїхательньх путях. Зтот препарат имеет форму сухого порошка, пригодного для ингаляции. По меньшей мере 5Омасс.9о зтого порошка состоит из (а) частиц, имеющих диаметр менее чем около 10 микрон, или (в) агломератов зтих частиц. В другом предпочтительном варианте изобретение предлагает терапевтический препарат, содержащий « Фармацевтически активньій полипептид, вещество, которое усиливаєет абсорбцию полипептида в нижних (7-3 с дьїхательньїх путях, и фармацевтически приемлемьй носитель. Препарат имеет форму сухого порошка, пригодного для ингаляции. По меньшей мере 5Омасс.95 зтого порошка состоит из (а) частиц, имеющих диаметр ;» менее чем около 10 микрон, или (в) агломератов зтих частиц. В следующем предпочтительном варианте изобретение предлагает терапевтический препарат, содержащий активнье соединения: (А) фармацевтически активньй полипептид и (В) вещество, которое усиливает абсорбцию зтого полипептида в нижних дьхательньх їз путях, причем по меньшей мере 5095 общей массь! активньїх соединений (А) и (В) состоит из частиц, имеющих диаметр менее чем около 10 микрон, и фармацевтически приемлемьй носитель. Препарат имеет форму сухого со порошка, пригодного для ингаляции. Упорядоченную смесь можно получить из активньїх соединений и - фармацевтически приемлемого носителя.

Описанньй порошкообразньій препарат можно изготовить несколькими путями, применяя обьічнье - методики. Во многих случаях очищенньій полипептид можно получить из коммерческих источников. И наоборот,

Кк интересующий полипептид можно очистить из природного источника с оприменением стандартньх биохимических методик или можно получить зкспрессией прокариотических или зукариотических клеток, генетически сконструированньх таким образом, чтобьі они содержали нуклеотидную последовательность, Которая кодирует данньій полипептид и имеет соединеннье с ней подходящие последовательности контроля зкспрессии (в том числе трансгенного животного, способного к зкспрессий желаемого пептида или белка,

Ф) например, в его молоке). Такие способь! стандартньї в данной области (смотри, например, Забгоок еї аї. ка Моїіекшіаг Сіопіпд: А Іарогаїогу Мапиа!: Сої4 Зргіпд Нагрог І арогаїгу Ргезв, Соїй Зргіпд Нагрог, Му, 1989).

Пептидь!ї (т.е. полипептидьї, имеющие 30 или менее аминокислотньїх остатков) можно легко синтезировать бор известньіми химическими способами.

Усилители абсорбции, описанньсе вьіше, также обьічно доступньі из коммерческих источников или их можно получить при помощи опубликованньх методик. В случае ионогенньх усилителей противоион, ассоциированньій с усилителем, можно заменить при желании на другой, применяя стандартнье методики ионообмена. 65 При полученийи описанного порошкообразного препарата порошок обьічно необходимо в некоторой стадий способа тонко измельчить в подходящей мельнице, например, струйной мельнице, чтобь! получить первоначальнье частицьі с пределом размера частиц, подходящим для максимального отложения в нижнем дьїхательном пути (т.е. менее 10мкм). Например, можно провести сухое смешивание порошков полипептида и усилителя и затем вещества тонко измельчить вместе. Альтернативно вещества можно тонко измельчить по отдельности и затем смешать. Когда смешиваеємье соединения имеют различньюе физические свойства, например, твердость и хрупкость, устойчивость к тонкому измельчению их различается и для их измельчения в частиць! пригодного размера могут требоваться различнье давления.

Следовательно, когда вещества тонко измельчают вместе, размер полученньх частиц одного из компонентов может бьіть неудовлетворительньім. В таком случае может бьіть вьігодно различнье компоненть! 7/0 Тонко измельчить по отдельности и затем смешать их.

Можно также сначала растворить компоненть! в подходящем растворителе, например, воде, чтобьі! получить смешивание на молекулярном уровне. Зта методика позволяет также устанавливать требуемое значение рнН, например, для улучшения абсорбции полипептида Нужно принимать во внимание фармацевтически приемлемьсе предельі рН от 3,0 до 8,5 для ингаляционньїх продуктов, поскольку продукті с рН вне зтих пределов /5 Могут индуцировать раздражение и сужение дьїхательньх путей. Для получения порошка растворитель следует удалить способом, которьій позволяет сохранить биологическую активность полипептида. Пригодньое методь! сушки включают вакуумное концентрирование, открьтую сушку, распьлительную сушку и сушку вьімораживанием. Обьічно следует избегать температур вьіше 407"С в течение более чем нескольких минут, поскольку может иметь место некоторое разрушение некоторьїх полипептидов. После стадиий сушки твердьй 2о материал можно, если необходимо, измельчить для получения крупного порошка и затем, если необходимо, тонко измельчить.

При желанийи, тонко измельченньй порошок можно обработать для улучшения реологических свойств, например, сухим гранулированием, для образования сферических агломератов с лучшими зксплуатационньми характеристиками до введения его в предназначенное для него устройство-ингалятор. В таком случає с ов устройство должно иметь форму, обеспечивающую значительное дезагломерирование агломератов до вьіхода о порошка из устройства, так что частицьї, входящие в дьїхательнье пути пациента, в основном имеют размер, находящийся в пределах желаемого размера. В тех случаях, когда нужно получить упорядоченную смесь, активное соединение можно обработать, например, тонким измельчением, для получения, если нужно, частиц с размером, находящимся в пределах конкретного размера частиц. Носитель также можно обработать, например, "де зо для получения частиц желаємого размера и желаемьх поверхностньїх свойств, например, конкретного отношения поверхности к массе, или достижения определенной прочности и обеспечения оптимальной силь! - адгезии в упорядоченной смеси. Такие физические требования для упорядоченной смеси хорошо известньІ, так о/р же как и различнье способь! получения упорядоченной смеси, удовлетворяющей зти требования, их может легко определить специалист данной области в соответствий с конкретньіми деталями. со

Предпочтительное ингаляционное устройство должно иметь конструкционнье характеристики, задищающие «г порошок от увлажнения и не допускающие риска случайньх больших доз. Кроме того, желательно, чтобь устройство по возможности удовлетворяло как можно больше из следующих условий: защищало порошок от света; обеспечивало легко вдьсхаемую фракцию и значительное отложение в легких при широком интервале обьемной скорости потока, низкую девиацию дозьй и вдьхаемой фракции, низкую ретенцию порошка в « наконечнике - зто особенно важно для многодозового ингалятора, где полипептид, сохраняющийся в в с наконечнике, может разрушаться и затем вдьїхаться вместе с последующими дозами, низкую адсорбцию у поверхности ингалятора, гибкость в размере доз и низкую ингаляционную устойчивость. Предпочтителен ;» ингалятор с однократной дозой, хотя можно также применять ингалятор с многократной дозой, например, приводимьій в действие вдьїханием ингалятор многоразового пользования, содержащий многократную дозу сухого порошка. Предпочтителен приводимьй в действие вдьїханием ингалятор одноразового пользования, ї5» содержащий однократную дозу сухого порошка.

Бьіл получен и испьітан в анализах Іп мімо описанньій ниже ряд сухих порошкообразньїх готовьїх форм, со содержащих полипептид и различнье усилители. Описан также анализ Іп міо, пригодньій для испьітания - комбинаций полипептид/усилитель.

Пример 1; Способ определения Іп мімо пригодности конкретньїх полипептидов для настоящего изобретения - Стандартньій анализ Іп мімо с применением зпителиальной клеточной линии, СаСо-2 (доступна через як Атегісап Туре Сийиге СоМПесПоп (АТСС), ВоскмШе, МО, ОА) разрабатьшвали для определения способности различньїх соединений-усилителей промотировать перенос маркеров через монослой зпителиальньїх клеток как модели зпителиального клеточного слоя, которьій функционирует в легких для отделения альвеол от легочного Кровоснабжения.

В зтом анализе усилитель и полипептид или другой маркер растворяют в водном растворе при различньх (Ф, отношениях и/или концентрациях и контактируют с апикальной стороной клеточного монослоя. После ка инкубирования в течение бОмин. при 37"С и 9595 ВН (относительная влажность) определяли, например, с применением маркера, меченого радисоактивньм изотопом, количество маркера на ба-золатеральной стороне бо клеток.

Для испьітьіїваемого усилителя, капрата натрия, количество маркера (маннит, молекулярная масса 360), которое появляется на базолатеральной стороне, зависит от концентрации применяемого усилителя, которая составляет по крайней мере вплоть до 16мМ капрата натрия (рис.1). Зто справедливо даже если в смесь усилитель/маннит добавляют полипептид инсулин (массовое соотношение капрата натрия и инсулина 1 : 3) 65 (рис.2). Найдено также, что зта концентрация капрата натрия (16мМ) промотирует абсорбцию через клеточньй монослой двух низкомолекулярньїх пептидов, инсулина (ММУ 5734) и вазопрессина (ММУУ 1208). Количество инсулина, которое прошло через монослой, в присутствий 16мММ капрата натрия удваивалось по сравнению с количеством его в отсутствие любого усилителя; количество вазопрессина, которое абсорбировалось через монослой, повьішалось в 10 - 15 раз по сравнению с количеством в отсутствие любого усилителя.

Наоборот, никакого повьішения в скорости переноса не наблюдали для более вьісокомолекулярньїх белков, например, цитохрома С (ММУУ 12300), карбоновой ангидразь! (МУУ 30000) и альбумина (ММУ 69000) в анализах с применением до 16 мМ капрата натрия. Ожидается, что при более вьісоких концентрациях капрата натрия проницаемость клеток должна повьішаться, что позволит осуществить перенос более вьісокомолекулярньх полипептидов; однако, возможная цитотоксичность капрата натрия может препятствовать применению 7/0 Значительно более вьісоких концентраций зтого усилителя.

Другие усилители могут позволять перенос более вьісокомолекулярньїх полипептидов; их также можно испьітьівать в зтой (Іп мімо) модели зпителиальной клеточной проницаемости, которую можно применять в качестве средства для скрининга с целью бьстрого испьтания любой желаемой комбинации полипептид/усилитель, чтобьії определить пригодность ее в способах настоящего изобретения.

Пример 2: Способ отбора усилителей, пригодньїх для настоящего изобретения

Каждое из соединений, указанньхх в таблице 1, испьітьвшали на его способность усиливать поглощение полипептида (инсулина) в крьісиной модели. Результать! по инсулину взять! в качестве критерия потенциала усилителя в усилении абсорбции других полипептидов.

В различньх испьтаниях применяли различнье формь инсулина; рекомбинантньій человеческий, 2ор полусинтетический человеческий или бьічий. Каждую готовую форму приготовляли, как указано вьіше, сушкой и обработкой раствора инсулин/усилитель или инсулин/усилитель/ лактоза для получения вдьїхаемого порошка.

Порошок вводили крьїісам ингаляцией и содержание глюкозьі в крови крьіс затем контролировали для измерения поглощения инсулина. Зти величинь! сравнивали с соответствующими величинами, полученньіми у крьсс, которье вдьїхали готове формь! инсулина без усилителя. с

Ту же самую модельную систему Іп мімо можно применять для испьітания любого данного пептида или белка на пригодность в способах изобретения путем доставки тем же способом ингаляции готовой формьї, і) содержащей желаемьй пептид или белок в комбинации с усилителем, и количественного определения концентрации желаемого пептида или белка в большом круге кровообращения испьітьїваемого животного (например, стандартньми иммунологическими или биохимическими анализами, подходящими для данного «- зр пептида или белка). «- е со зв й ч 4 Дидеканоилосфетидилюлин | 11100044 З с . 0 придатна 00000000 вто » 15 г со - -о 50

З т Есть действие, то-есть усилитель вьізьівает значительноеснижение содержания глюкозь в крови. - Нет действия или очень небольшое действие (8 Есть действие, но не как отмеченное "їн".

ІФ) Пример 3: Терапевтический препарат в соответствии с изобретением ко Гормон роста человека (ПОН, МУУ 22кДа, источник Нитаїгоре из І Шу, З части) смешивали с капратом натрия (1 часть). Смесь измельчали в механической мельнице Кеїзсп до получения частиц со средним диаметром бр 6б,7мМкм.

Полученньій порошок вводили крьісам внутритрахеально и поглощение ПОН сравнивали с поглощением порошка, ММО 9,бмкм, содержащего ПОН и маннит в тех же соотношениях и полученного таким же образом, как указано вьіше.

Результатьі указали на улучшение поглощения ПОН в готовой форме, включающей капрат натрия, по 65 сравнению с поглощением в случає готовой формь! без усилителя.

Пример 4; Препарат, содержащий полипептид инсулин

МИнсулин здесь применяли в качестве критерия для других пептидов в соответствии с настоящим изобретением.

Биосинтетический человеческий инсулин (53г) подвергали тонкому измельчению в струйной мельнице

АІтісо (товарньй знак, АІпісо Ргосевзз Ріапі ПШтеа) со сжать!м азотом (давление загрузки 7 х 105Па, давление в камере 5 х 107Па) до получения частиц со средним размером 2,4мкм.

Капрат натрия (170г) подвергали тонкому измельчению в струйной мельнице АЇїпісо (ТМ) со сжатьім азотом (давление загрузки 5 х 109Па, давление в камере З х 109Па) для получения частиц со средним диаметром 1,6мкм.

Тонко измельченньій биосинтетический человеческий инсулин (45г) и капрат натрия (14,26г) смешивали в сухом состоянии в соответствии со следующей методикой: половину инсулина добавляли в смешивающее устройство, содержащее цилиндр для смешивания обьемом 4,4л, разделенньій ситом с отверстиями Імм на два отделения, с металлическим кольцом в каждом отделении, помогающим смешиванию и перемешиванию.

Добавляли капрат натрия и в заключение оставшееся количество инсулина. Цилиндр для смешивания 72 закривали, поворачивали на 180 градусов и устанавливали в моторизованньій аппарат для встряхивания.

Мотор включали и встряхивание продолжали приблизительно в течение двух минут, пока весь порошок не проходил через сито. Мотор вьключали и цилиндр для смешивания поворачивали на 180 градусов, снова устанавливали в аппарат для встряхивания и встряхивали снова до тех пор, пока весь порошок не прошел через сито. Зту процедуру повторяли еще восемь раз при общем времени перемешивания приблизительно 20 минут.

Полученньій таким образом препарат вводили 5 собакам ингаляцией при дозе 1Е/кг. Уровень инсулина в плазме крови определяли в разнье моменть! времени после введения препарата.

Полученнье результатьь сравнивали с результатами уровня инсулина в плазме, полученньми, когда биосинтетический инсулин,онко измельченньій, как указано вьіше, для получения частиц со средним с диаметром 2,4 микрон, вводили пяти собакам таким же образом и в таких же дозах, и с результатами уровня о инсулина, полученньми, когда терапевтический препарат инсулина и капрата натрия в соотношениий 90:10 вводили пяти собакам таким же образом и в таких же дозах, как указано вьіше. В зтом случае терапевтический препарат получали следующим образом. Человеческий полусинтетический инсулин гель-фильтровали для снижения содержания цинка от 0,5295 до 0,0195 относительно содержания инсулина. Инсулин (4,5г) и капрат - натрия (0,5г) растворяли в воде (232мл). Раствор перемешивали до осветления (прозрачности) и рн «- устанавливали 7,0. Раствор концентрировали вьіпариванием при 377"С в течение периода около двух дней.

Полученную твердую лепешку размальшали и просеивали через сито с размером отверстий 0О05бмм и /(/ї7- образованньй порошок тонко измельчали в струйной мельнице в частиць! со средним диаметром З,1мкм. с

Результать! зтих сравнений представлень! на рис. З (р - 0,0147 для соотношений от 75: 25 до 100: 0).

Результатьі демонстрируют некотороє улучшениеє в биологической доступности инсулина в случає готовой Ж формь! с соотношением 90 : 10 и драматическое улучшение в биологической доступности инсулина в случає препарата с соотношением 75 : 25, включающего капрат натрия, по сравнению с введением только инсулина.

Claims

« Формула винаходу в с м 1. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что она содержит смесь активньїх соединений (А) » фармацевтически активного ополипептида, оотличного от о инсулина, и (В) оповерхностно активного соединения-усилителя, которое усиливает системную абсорбцию указанного полипептида в нижних дьхательньїх путях пациента; указанное поверхностно-активное соединение является солью желчной кислоть, - производньм осоли желчной кислотьї, алкилгликозидом, циклодекстрином или его производньм или со одноцепочньмм фосфолипидом; указанная композиция представлена в виде сухого порошка, пригодного для ингаляции из ингалятора для сухого порошка в нижние дьїхательнье пути, в котором по меньшей мере 50 95 - общей массь активньх соединений состоит из первоначальньх частиц, имеющих диаметр, меньший или шу» 90 равньй примерно 10 микронам, причем указанньюе первоначальнье частиць! не обязательно представлень! в виде агломератов. "6 2. Фармацевтическая композиция по пункту 17, отличающаяся тем, что дополнительно содержит фармацевтически приемлемьій носитель, которьій включает в себя либо (а) частицьї, имеющие диаметр менее примерно 10 микрон, так что по меньшей мере 50 95 полученного порошка состоит из необязательно агломерированньїх первоначальньх частиц, имеющих диаметр менее о примерно 10 микрон; либо (Б) грубье частиць! так, что готовая к употреблению смесь образуется между активньіми соединениями и де указанньім носителем.

З. Композиция по пункту ї7, отличающаяся тем, что указанньй полипептид является полипептидньм бо гормоном.

4. Композиция по пункту З, отличающаяся тем, что указанньійй гормон является вазопрессином, аналогом вазопрессина, десмопрессином, глюкагоном, кортикотропином (АСТН), гонадотропином (лютеинизирующий гормон, или ІНКН), кальцитонином, паратиреоидньм гормоном (РТН), гормоном роста человека (ПОН), гормоном роста (НО), рилизинг-с-рмоном гормона роста (СНКН), окситоцином, рилизинг-гормоном 65 о кортикотропина (СКН), аналогами соматостатина, аналогами агониста гонадотропина (СпКНа), натриуретическим пептидом предсердия (пПАМР), рилизинг-гормоном тироксина (ТКНтт),

фолликулостимулирующим гормоном (ЕЗН) или пролактином.

5. Композиция по пункту 17, отличающаяся тем, что указанньій полипептид является фактором роста, интерлейкином, полипептидной вакциной, ферментом, зндорфином, гликопротеийином, липопротеийном или полипептидом, вовлеченньм в каскад свертьівания крови, которьій оказьівает системное фармакологическое действие.

6. Композиция по пункту 1, отличающаяся тем, что указанньій полипептид имеет молекулярную массу менее ЗО кДа.

7. Композиция по пункту 1, отличающаяся тем, что указанньій полипептид имеет молекулярную массу менее 7/0 25 кДа.

8. Композиция по пункту 1, отличающаяся тем, что указанньій полипептид имеет молекулярную массу менее 20 кДа.

9. Композиция по пункту 1, отличающаяся тем, что указанньій полипептид имеет молекулярную массу менее кДа. 15 10. Композиция по пункту 1, отличающаяся тем, что указанньй полипептид имеет молекулярную массу менее 10 кДа.

11. Композиция по пункту 1, отличающаяся тем, что указанное поверхностно-активное соединение является солью жирной кислоть.

12. Композиция по пункту 11, отличающаяся тем, что указанная жирная кислота содержит 10-14 атомов 2о углерода.

13. Композиция по пункту 12, отличающаяся тем, что указанная жирная кислота является каприновой кислотой.

14. Композиция по пункту 1, отличающаяся тем, что указанное поверхностно-активное соединение является капратом натрия. с

15. Композиция по пункту 2, отличающаяся тем, что указанная добавка вьбрана из моно-, ди- и о полисахаридов, спиртов ряда сахаров и других полиолов.

16. Композиция по пункту 2, отличающаяся тем, что указанная добавка является нередуцирующим сахаром.

17. Композиция по пункту 2, отличающаяся тем, что указанная добавка вьібрана из рафинозь, мелезитозьі, лактита, мальтита, трегалозьі, сахарозьі, маннита или крахмала. «- зо 18. Ингалятор, отличающийся тем, что он содержит композицию по пункту 1.

19. МИнгалятор по пункту 18, отличающийся тем, что указанная композиция представлена в виде - агломератов, причем указанньій ингалятор изготовлен таким образом, чтобьі индуцировать разрушение «- основной части агломератов в частицьї, имеющие диаметр, меньший или равньїй 10 микронам, при вдьїханий указанньїх агломератов из указанного ингалятора. со

20. Ингалятор по пункту 18, отличающийся тем, что указанньійй ингалятор является приводимь!м в действие «г вдьїханием ингалятором одноразового использования, содержащим однократную дозу сухого порошка.

21. Ингалятор по пункту 18, отличающийся тем, что указанньійй ингалятор является приводимь!м в действие вдьжханием ингалятором многоразового использования, приводимьм в действие вдьїханием и содержащим многократную дозу сухого порошка. «

22. Способ приготовления фармацевтической композиции, определяемой по одному из пунктов в с 1-17, отличающийся тем, что он включаеєет в себя получение раствора, в котором раствореньь (А) фармацевтически активньй ополипептид и (В) ;» соединение-усилитель, которое усиливает системную абсорбцию полипептида в нижних дьїхательньїх путях пациента; удаление растворителя из указанного раствора для получения сухой твердой массьі, содержащей указанньй ї5» полипептид и указанное соединение-усилитель; и тонкое измельчение указанной сухой твердой массь! для получения порошка. со 23. Способ получения фармацевтической композиции, определяемой по одному из пунктов - 1-17, отличающийся тем, что он включаєт в себя сухое смешивание (А) фармацевтически активного полипептида и (В) соединения-усилителя, которое усиливает абсорбцию полипептида в нижних дьхательньх - путях пациента; и Кк тонкое измельчение полученной смеси.

24. Способ приготовления фармацевтической композиции, определяемой по одному из пунктов 1-17, отличающийся тем, что он включает в себя получение первого тонко измельченного препарата, в содержащего полипептид, и второго тонко измельченного препарата, содержащего соединение-усилитель, которое усиливает абсорбцию полипептида в легких пациента; и (Ф, смешивание указанньїх первого и второго тонко измельченньїх препаратов. іме) 60 б5