UA126146C2

UA126146C2 - Терапевтичне антитіло до cd47

Info

Publication number: UA126146C2
Application number: UAA201808714A
Authority: UA
Inventors: Памела Меннінг; Памела Мэннинг; Робін Пуро; Робин Пуро; Джуан С. Альмагро; Роберт В. Карр
Original assignee: Арч Онколоджі, Інк.; Арч Онколоджи, Инк.
Priority date: 2015-09-18
Filing date: 2016-09-17
Publication date: 2022-08-25
Also published as: US10239945B2; AU2016324316B2; US10844124B2; US20180171014A1; CN116425875A; MX2018003374A; JP2018536624A; JP6885606B2; ZA201804326B; EP3349787A2; IL258168A; BR112018005322A2; NZ740686A; RU2018124859A3; PH12018500515A1; WO2017049251A2; AU2016324316A1; WO2017049251A3; CN108348589B; US20190300611A1

Abstract

Винахід стосується моноклонального антитіла або його антигензв’язувального фрагмента, здатного зв’язуватися з CD47. Також винахід стосується фармацевтичної композиції та способу аналізу експресії CD47 на пухлинних та/або імунних клітинах.

Description

(57) Реферат:

Винахід стосується моноклонального антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, здатного зв'язуватися з СОВ47. Також винахід стосується фармацевтичної композиції та способу аналізу експресії СО47 на пухлинних та/або імунних клітинах.

ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ

Дана заявка заявляє пріоритет відповідно до попередніх заявок на патент США МоМо 62/220691, поданої 18 вересня 2015 року; 62/263544, поданої 4 грудня 2015 року; 62/221852, поданої 22 вересня 2015 року; 62/220725, поданої 18 вересня 2015 року; 62/232681, поданої 25 вересня 2015 року; 62/252171, поданої 6 листопада 2015 року, та 62/354592, поданої 24 червня 2016 року; розкриття яких включені в даний документ за допомогою посилання, так, якби вони були написані в даному документі в усій своїй повноті.

ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ

Даний винахід у цілому стосується моноклональних антитіл до СО47 (тАб до СО47) з функціональними профілями, що відрізняються, описаними в даному документі, способів одержання тАб до СО47 та способів застосування цих тАб до СО47 як терапевтичних засобів для попередження та лікування солідних та гематологічних типів раку, ішемічно-реперфузійного пошкодження, серцево-судинних захворювань, автоїмунних захворювань або запальних захворювань або як діагностичних засобів для визначення рівня СО47 у зразках тканин.

ПЕРЕДУМОВИ ВИНАХОДУ сОр47 являє собою рецептор клітинної поверхні, що складається із позаклітинного домену

ІдМ-класу, трансмембранного домену, який пронизує мембрану 5 разів, та цитоплазматичного хвоста, який є результатом альтернативного сплайсингу. Два ліганди зв'язують СО47: сигнальний інгібіторний рецепторний білок «є (5ІКР;а) та тромбоспондин-1 (Т5Р1). Було визначено, що експресія та/або активність СО47 залучений в цілу низку захворювань і порушень. Відповідно, існує потреба в терапевтичних композиціях і способах лікування захворювань та станів, асоційованих з СО47, у людей і тварин, включаючи попередження та лікування солідних та гематологічних типів раку, ішемічно-реперфузійного пошкодження (ІКІ), серцево-судинних захворювань або автоіїмунного або запального захворювання. Також існує потреба в діагностичних композиціях та способах визначення рівня експресії СО47 у зразках пухлини.

КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

У даному винаході описані тАб до СО0О47 з функціональними профілями, що відрізняються.

Ці антитіла характеризуються комбінаціями властивостей, що відрізняються, вибраними з

Зо наступних: 1) проявляють перехресну реактивність з гомологами СО47 одного або декількох видів; 2) блокують взаємодію між СО47 та його лігандом ЗІКРа; 3) посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, 4) індукують загибель чутливих пухлинних клітин людини; 5) не індукують клітинну загибель пухлинних клітин людини; б) характеризуються зниженим зв'язуванням з еритроцитами людини (ПКВС); 7) характеризуються відсутністю зв'язування з

ЯКВС, яке піддається виявленню; 8) спричиняють знижену аглютинацію ПКВС; 9) не спричиняють аглютинацію ПРЕВС, що піддається виявленню; 10) обертають інгібування шляху за участі оксиду азоту (МО) під дією ТОР1 та/або 11) не обертають інгібування шляху за участі МО під дією Т5РІ. Антитіла за даним винаходом застосовні в різних терапевтичних способах лікування захворювань та станів, асоційованих з СО47, у людей та тварин, включаючи попередження та лікування солідних та гематологічних типів раку, автоїмунний захворювань, запальних захворювань, ІКІ та серцево-судинних захворювань. Антитіла за даним винаходом також застосовні як діагностичні засоби для визначення рівня експресії СО47 у зразках тканини.

Варіанти здійснення даного винаходу включають виділені антитіла та їх імунологічно активні зв'язувальні фрагменти; фармацевтичні композиції, які містять одне або декілька моноклональних антитіл до СО47, переважно химерні або гуманізовані форми вказаних антитіл; способи застосування таких моноклональних антитіл до СО47 в терапевтичних цілях та клітинні лінії, які продукують дані моноклональні антитіла до СО47.

Варіанти здійснення даного винаходу включають тАб або їх антигензв'язувальні фрагменти, які визначаються з посиланням на специфічні структурні характеристики, тобто зазначені

БО амінокислотні послідовності або СОК, або повних варіабельних доменів важкого ланцюга або легкого ланцюга. Усі дані антитіла зв'язуються з СО47.

Моноклональні антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти можуть містити щонайменше одну, зазвичай щонайменше три, послідовності СОК, представлені в даному документі, зазвичай у комбінації з каркасними послідовностями із варіабельної області людини або як виділеного пептиду СОК. У деяких варіантах здійснення антитіло містить щонайменше один легкий ланцюг, який містить три послідовності СОК легкого ланцюга, представлені в даному документі, розташовані в каркасній ділянці варіабельної області, що може являти собою без обмеження каркасну ділянку варіабельної області миші або людини, та щонайменше один важкий ланцюг, який містить три послідовності СОК важкого ланцюга, представлені в даному документі, розташовані в каркасній ділянці варіабельної області, що може являти собою без обмеження каркасну ділянку варіабельної області миші або людини.

Переважними варіантами здійснення є тАБб до СО47 або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять варіабельний домен важкого ланцюга, що містить СОКІ1 варіабельного домену важкого ланцюга, СОК2 варіабельного домену важкого ланцюга та СОКЗ варіабельного домену важкого ланцюга, де вказана СОКІ! варіабельного домену важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІО МО:3; вказана СОК2 варіабельного домену важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:4,

ЗЕО ІЮ МО:5, 5ЕО ІЮ МО:6; та вказана СОКЗ варіабельного домену важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮ МО:8,

ЗЕО ІЮ МО:9 і БЕО ІЮ МО:10.

Варіабельний домен важкого ланцюга може містити будь-яку з перерахованих послідовностей СОКІ1 варіабельного домену важкого ланцюга (НСОКТ) в комбінації з будь-якою з послідовностей СОК2 варіабельного домену важкого ланцюга (НСОК2) та будь-якою з послідовностей СОМКЗ варіабельного домену важкого ланцюга (НСОКЗ). Однак особливо переважними є конкретні варіанти здійснення НСОК'І1, та НСОК2, та НСОКЗ, які одержані з одного загального Мн-домену, приклади яких описані в даному документі.

Антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент можуть додатково містити варіабельний домен легкого ланцюга (Мі), який утворює пару з Мн-доменом з утворенням антигензв'язувального домену. Переважними варіабельними доменами легкого ланцюга є домени, що містять СОКІ1 варіабельного домену легкого ланцюга, СОК2 варіабельного домену легкого ланцюга та СОМКЗ варіабельного домену легкого ланцюга, де вказана СОК1 варіабельного домену легкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:11, 5ЕО ІЮ МО:12, 5ЕО ІЮ МО:13, 5ЕО ІЮ МО:14; вказана СОК2 варіабельного домену легкого ланцюга необов'язково містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО:15, 5ЕО ІЮО МО:16, ЗЕО ІЮ МО:17; та вказана СОКЗ варіабельного домену легкого ланцюга необов'язково містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи,

Ко) що складається з 5ЕО ІЮ МО:18, ЗЕО ІЮ МО:19, 5ЕО ІЮО МО:20.

Варіабельний домен легкого ланцюга може містити будь-яку з перерахованих послідовностей СОКІ1 варіабельного домену легкого ланцюга (СОМ) в комбінації з будь-якою з послідовностей СОМК2 варіабельного домену легкого ланцюга (І СОМК2) та будь-якою з послідовностей СОМЗ варіабельного домену легкого ланцюга (І СОКЗ). Однак особливо переважними є конкретні варіанти здійснення ЇСОКІ, та ГСОК2, та І СОКЗ, які одержані з одного загального Мі-домену, приклади яких описані в даному документі.

Будь-яке дане антитіло до СО47 або його антигензв'язувальний фрагмент, які містять МН- домен, що утворює пару з Мі-доменом, будуть містити комбінацію з 6 СОК: СОМК1 варіабельного домену важкого ланцюга (НСОКІ1), СОК2 варіабельного домену важкого ланцюга (НСОК2), СОКЗ варіабельного домену важкого ланцюга (НСОКЗ), СОК1 варіабельного домену легкого ланцюга (СОК1), СОК2 варіабельного домену легкого ланцюга (І СОМ2) та СОКІ1 варіабельного домену легкого ланцюга (СОМ). Хоча всі комбінації з 6 СОК, вибрані з груп послідовностей СОМ, перерахованих вище, є допустимими та знаходяться в межах об'єму даного винаходу, конкретні комбінації з 6 СОК є особливо переважними.

Переважні комбінації з 6 СОМ включають без обмеження комбінації з СОКІ1 варіабельного домену важкого ланцюга (НСОК1), СОК2 варіабельного домену важкого ланцюга (НСОК2),

СОКЗ варіабельного домену важкого ланцюга (НСОКЗ), СОКІ1 варіабельного домену легкого ланцюга (СОКІ), СОМК2 варіабельного домену легкого ланцюга (1СОК2) та СОКЗ варіабельного домену легкого ланцюга (СОМЗ3), вибрані з групи, що складається з

БО () НСОКТ, що містить ЗЕО ІЮ МО:1, НСОК2, яка містить 5ЕО ІЮ МО:4, НСОКЗ, що містить

ЗЕО ІЮ МО:7, І СОКТ, яка містить 5ЕО ІЮ МО:11, ГСОК2, що містить 5ЕО ІЮ МО:15, І СОКЗ, яка містить зхЕО ІЮ МО:18; (ї) НСОМКІ1, що містить ЗЕО ІЮ МО:1, НСОК2, яка містить ЗЕО ІЮ МО:4, НСОКЗ, що містить

ЗЕО ІЮ МО:8, І СОКТ, яка містить 5ЕО ІЮ МО:11, І СОК2, що містить ЗЕО ІЮ МО:15, І СОКЗ, яка містить зхЕО ІЮ МО:18; (ії) НСОМІ1, що містить 5ЕО ІЮ МО:2, НСОК2, яка містить ЗЕО ІЮ МО:5, НСОМКЗ, що містить

ЗЕО ІЮ МО:9, І СОКТ, яка містить 5ЕО ІЮ МО:12, ГСОК2, що містить 5ЕО ІЮ МО:16, І СОКЗ, яка містить зхЕО ІЮ МО:19;

(м) НСОКТ, що містить ЗЕО ІЮ МО:2, НСОК2, яка містить 5ЕО ІЮ МО:5, НСОМКЗ, що містить

ЗЕО ІЮ МО:9, І СОКТ, яка містить 5ЕО ІЮ МО:13, ГСОК2, що містить 5ЕО ІЮ МО:16, І СОКЗ, яка містить ЗЕО ІЮ МО:19; та (м) НСОКТ, що містить ЗЕО ІЮ МО:З3, НСОК2, яка містить ЗЕО ІЮ МО:б6, НСОМКЗ, що містить

ЗЕО ІЮ МО:10, І СОКТ, яка містить ЗЕО ІО МО:14, І СОМК2, що містить зЕО ІЮ МО:17, І СОКЗ, яка містить БЕО ІО МО:20.

Додаткові переважні антитіла до СО47 включають антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять варіабельний домен важкого ланцюга, який має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з амінокислотних послідовностей під ЗЕО ІЮ

МО:21, 5ЕО ІЮ МО:22, 5ЕО І МО:23, 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІЮ МОС26, 5ЕО ІЮ МО:27, 5ЕО І

МО:28, 5БО ІЮ МО:29, 5ЕО ІЮО МО:30, 5ЕО ІЮО МО:31, 5ЕО І МО: 32, 5БЕО ІЮ МО:33, 5ЕО І

МО:34, 5ЕО ІЮО МО:35, 5ЕО ІЮ МО:36, 5БО ІЮ МО:37, 5ЕО ІО МО:38, 5ЕО ІЮО МО:39 і 5ЕО І

МО:40 та амінокислотних послідовностей, що проявляють щонайменше 90 95, 95 95, 97 Фо, 98 90 або 99 95 ідентичність послідовності з однією з викладених послідовностей. Як альтернатива або доповнення переважні антитіла до СО47, включаючи антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, можуть містити варіабельний домен легкого ланцюга, який має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з амінокислотних послідовностей під ЗЕО ІЮ

МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО І МО:43, 5ЕО ІЮ МО:44, 5ЕО ІЮ МОС46, 5ЕО ІЮ МО:48, 5ЕО І

МО:49, 5ЕО ІЮО МО:50, 5ЕО ІО МО:51 і 5ЕО ІО МО:52 та амінокислотних послідовностей, що проявляють щонайменше 90 95, 95 9», 97 90, 98 95 або 99 95 ідентичність послідовності з однією з викладених послідовностей.

Хоча всі можливі варіанти утворення пар Мн-доменів та Мі-доменів, вибраних із груп послідовностей Мн- та Мі-доменів, перерахованих вище, є припустимими та знаходяться в межах об'єму даного винаходу, певні комбінації з Мн- та Мі-доменів є особливо переважними.

Відповідно, переважними антитілами до СО47 або їх антигензв'язувальними фрагментами є такі, що містять комбінацію з варіабельного домену важкого ланцюга (Мн) та варіабельного домену легкого ланцюга (Мі), де комбінація вибрана з групи, що складається з () варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО

ІО МО:21, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність

Ко) під 5ЕО ІЮ МО:41; (і) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО

ІО МО:23, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:43; (ії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під зЗЕО

ІО МО:34, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:49; (ім) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО

ІО МО:36, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:52; (м) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ФЕО

ІО МО:38, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:52; (м) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під зЗЕО

ІО МО:39, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:52; (мі) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО: 24, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ХЕО ІЮ МО:43; (мії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:37, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:52; (їх) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗХЕО

ІО МО:33, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:48; (х) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО

ІО МО:26, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:44; (хі) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під зЗЕО

ІО МО:27, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність 60 під 5ЕО ІЮ МО:44; та

(хі) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:38, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮО МО:51; (хії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:39, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮО МО:51; (хім) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО І МО:40, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:52; (ху) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБЕО ІО МО:36, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮО МО:51; (хм) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:29, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під БЕО ІЮ МО:47; (хмії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:30, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:47; (хмії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:31, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:47; (хіх) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:32, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:47; (хх) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:33, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:47; (ххі) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:29, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну

Ко) послідовність під ЗЕО ІЮ МО:48; (ххії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:30, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:48; (ххії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:31, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:48; (ххім) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗЕБЕО І МО:32, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:48; (хху) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБЕО ІО МО: 26, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮО МО:43; (ххуї) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:27, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під БЕО ІЮ МО:43; (ххмії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:28, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:46; (ххмії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:35, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:50; (ххіх) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:29, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:48; (ххх) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБЕО ІО МО:30, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:48; (хххі) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:31, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну 60 послідовність під ЗЕО ІЮ МО:48;

(хххії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:32, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:48; (хххії) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБО ІО МО:37, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮО МО:51; та (хххім) варіабельного домену важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під

ЗБЕО І МО:40, та варіабельного домену легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:51.

Переважні антитіла до СО47 або їх антигензв'язувальні фрагменти можуть також містити комбінацію з варіабельного домену важкого ланцюга та варіабельного домену легкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга містить послідовність МН, яка характеризується щонайменше 8595 ідентичністю послідовності, або щонайменше 9095 ідентичністю послідовності, або щонайменше 95 95 ідентичністю послідовності, або щонайменше 97 95, 98 95 або 99 95 ідентичністю послідовності з амінокислотними послідовностями важкого ланцюга, показаними вище в (ії) - (хххім), та/"або варіабельний домен легкого ланцюга містить послідовність МІ, яка характеризується щонайменше 85 95 ідентичністю послідовності, або щонайменше 9095 ідентичністю послідовності, або щонайменше 95595 ідентичністю послідовності, або щонайменше 9795, 98905 або 9995 ідентичністю послідовності з амінокислотними послідовностями легкого ланцюга, показаними вище в (ії) - (хххім). Специфічне утворення пар або комбінацій УН та Мі. в частинах від (і) до (хххім) може зберігатись в антитілах до СО47, що мають послідовності МН- та Мі-домену з конкретним відсотковим значенням ідентичності послідовності з цими еталонними послідовностями.

Для всіх варіантів здійснення, де варіабельні домени важкого ланцюга та/або легкого ланцюга антитіл або антигензв'язувальних фрагментів визначені за допомогою конкретних відсоткових значень ідентичності послідовності з еталонною послідовністю, МН- та/або М - домени можуть зберігати ідентичні послідовності СОК з присутніми в еталонній послідовності, так що відмінність присутня тільки в межах каркасних ділянок.

В іншому варіанті здійснення переважні антитіла до СО47 або їх антигензв'язувальні

Зо фрагменти являють собою такі, що містять комбінацію з важкого ланцюга (НС) та легкого ланцюга (І С), де комбінація вибрана з групи, що складається з: () важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під БЕО ІЮО МО:76, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:66; (ії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЗЕО ІЮ МО:77, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:68; (ії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЗЕО ІЮ МО:78, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:69; (м) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮО МО:79, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:70; (м) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮ МО:80, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:70; (м) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІОЮО МО:81, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:70; (мі) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮО МО:82, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:68; (мії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:83, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:70; (їх) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮО МО:84, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:71; (х) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 560 ІЮ МО:85, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:72; (хі) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮО МО:86, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:72; (хі) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮО МО:80, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:73; (хії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:81, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:73; (хім) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:87, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:70;

(ху) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЗЕО ІЮО МО:79, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:73; (хм) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:88, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:74; (хмії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:89, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:74; (хмії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:90, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:74; (хіх) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:91, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під «ЕО ІЮ МО:74; (о) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЗЕО ІЮО МО:84, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:74; (ххїі) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:92, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:71; (ххії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮО МО:89, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:71; (ххії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮО МО:90, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:31; (ххім) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:91, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ХЕО ІЮ МО:71; (хху) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:85, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:68; (ххуї) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:86, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:68; (ххміїї) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5600 ІЮ МО:93, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:100; (ххмії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:94, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:75; (ххіх) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:95, та

Ко) легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:71; (009) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:96, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:71; (хххі) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:97, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:71; (хххії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:98, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:71; (хххії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:83, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:73; (хххім) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:87, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ХЕО ІЮ МО:73; (ххху) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:102, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:101; (хххуї) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:104, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:103; де амінокислотна послідовність МН щонайменше на 90 95, 95 95, 97 95, 9895 або 9995 ідентична їм, а амінокислотна послідовність Мі щонайменше на 90 95, 95 9в, 97 У», 98 96 або 99 95 ідентична їм.

Переважні варіанти здійснення антитіл до СО47, описаних в даному документі, також характеризуються комбінаціями властивостей, які не проявляли антитіла до СО47 з відомого рівня техніки, запропоновані для застосування в терапевтичних цілях у людини. Відповідно, переважні антитіла до СОВ47, описані в даному документі, характеризуються тим, що вони а. зв'язуються з СЮО47 людини, р. блокують зв'язування 5ІКРа з СО47 людини, с. посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини та а. індукують загибель чутливих пухлинних клітин людини.

В іншому переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, антитіла до

Ср47 характеризуються тим, що вони а. зв'язуються з СЮО47 людини, р. блокують зв'язування 5ІКРа з СО47 людини, бо с. посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини,

а. індукують загибель чутливих пухлинних клітин людини та е. не спричиняють аглютинацію еритроцитів людини (ПКВС).

У ще одному переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, антитіла до ср47 характеризуються тим, що вони а. зв'язуються з СЮО47 людини, р. блокують зв'язування 5ІКРа з СО47 людини, с. посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, а. індукують загибель чутливих пухлинних клітин людини та е. спричиняють знижену аглютинацію еритроцитів людини (ПКВС).

В іншому переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, антитіла до ср47 характеризуються тим, що вони а. специфічно зв'язуються з СЮО47 людини, р. блокують зв'язування 5ІКРа з СО47 людини, с. посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, а. індукують загибель чутливих пухлинних клітин людини та е. характеризуються зниженим зв'язуванням з пПКВС.

В іншому переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, антитіла до ср47 характеризуються тим, що вони а. зв'язуються з СЮО47 людини, р. блокують зв'язування 5ІКРа з СО47 людини, с. посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, а. не спричиняють аглютинацію еритроцитів людини (ПКВС) та е. не зв'язуються з пПКВС.

С0р47 характеризуються тим, що вони а. специфічно зв'язуються з СЮО47 людини, р. блокують зв'язування 5ІКР;Ра з СО47 людини, с. посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, а. не спричиняють аглютинацію еритроцитів людини (пКВС) та

Зо е. характеризуються зниженим зв'язуванням з ПКВС.

В іншому переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент також специфічно зв'язуються з СО47 примата, відмінного від людини, де примат, відмінний від людини, може включати без обмеження яванського макака, зелену мавпу, макака-резуса та саймірі.

У ще одному переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язуються з СЮО47 людини, примата, відмінного від людини, миші, кролика та щура.

Різні форми розкритих тАБб до СО47 передбачені в даному документі. Наприклад, тАб до

СбОр47 можуть являти собою повнорозмірні гуманізовані антитіла з каркасними ділянками та константними областями ізотипів ІДА, дО, ЧЕ, до та (ДМ людини, більш конкретно Ідс1, Ідса2,

І9О3, Ідс4, та в деяких випадках з різними мутаціями для зміни Ес-рецепторної функції або попередження обміну РГар-плечима, або фрагмент антитіла, наприклад, Е(ар')2-фрагмент, Е(абр)- фрагмент, одноланцюговий Ем-фрагмент (зсЕм) тощо, розкриті в даному документі.

У переважних варіантах здійснення даного винаходу передбачені фармацевтичні або ветеринарні композиції, які містять одне або декілька тАб до СО47 або фрагментів, розкритих в даному документі, необов'язково химерні або гуманізовані форми, та фармацевтично прийнятний носій, розріджувач або наповнювач.

До даного винаходу існувала потреба в ідентифікації тАб до СО47, які характеризуються функціональними профілями, описаними в даному документі. тАб до СО47 за даним винаходом проявляють відмінні комбінації властивостей, зокрема комбінації властивостей, які роблять тАбБ особливо переважними або придатними для застосування в терапії людини, зокрема в попередженні та/або лікуванні солідних та гематологічних типів раку, ішемічно- реперфузійного пошкодження, автоїмунних та/або запальних захворювань.

Додатковий об'єм застосовності даного винаходу стане очевидним із детального опису, представленого нижче. Однак слід розуміти, що детальний опис та конкретні приклади, хоча й вказують на переважні варіанти здійснення даного винаходу, наведені лише з метою ілюстрації, оскільки з даного детального опису фахівцям в даній галузі стануть очевидні різні зміни та модифікації в межах сутності та об'єму даного винаходу.

СТИСЛИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ

Вищеописані та інші аспекти, ознаки та переваги даного винаходу будуть краще зрозумілі з наведеного далі детального опису, взятого разом з доданим(-и) графічним(-и) матеріалом(- ами), всі з яких наведені лише з метою ілюстрації та не обмежують даний винахід.

ФІГ. 1А. Зв'язування гуманізованих тАб МІ Х4 з клітинами ОМ10 людини, які експресують

СО47 людини. Зв'язування гуманізованих тАр МІ Х4 (МІ Х4пит 01 Ід01, Мі Ха4пит 02 Ідс1,

Мі Хапит 01 Ідс4 РЕ та Мі Х4пит 02 Ід04 РЕ) з СО47 людини визначали за допомогою ЕГІЗА із застосуванням клітин із клітинної лінії ОМ10О, яка експресує СЮО47 людини (0М10 пСО47).

Клітини ОМ10 пС047 висівали в 96-лункові планшети, та вони досягали конфлюентності під час проведення аналізу. Різні концентрації тАб додавали до клітин на 1 год. Клітини промивали, а потім інкубували з міченим НЕР вторинним антитілом протягом 1 год., після чого додавали субстрат для пероксидази.

ФІГ. 18. Зв'язування гуманізованих тАб МІ Х4 з клітинами ОМ10 людини, які експресують

СОр47 людини. Зв'язування гуманізованих тАб МІ Х4 (Мі Х4пит 06 Ідс4 РЕ, Мі Хіпит 07 Ідс4

РЕ, МмХа4пит 12 ІдсС4 РЕ та Мі Х4пит 13 Ід04 РЕ) з С47 людини визначали за допомогою

ЕСІЗБА із застосуванням клітин ОМ10 СО47. Клітини ОМ10 пСО47 висівали в 96-лункові планшети, та вони досягали конфлюентності під час проведення аналізу. Різні концентрації репрезентативних тАр МІ Х4 додавали до клітин на 1 год. Клітини промивали, а потім інкубували з міченим НЕР вторинним антитілом протягом 1 год., після чого додавали субстрат для пероксидази.

ФІГ. 2А. Зв'язування гуманізованих тАБ МІХ4 з КВС людини (пКВС). Зв'язування гуманізованих таб МІ Х4 (МІ Х4пит 01 ІдСї, МІ Х4пит 02 Ідс1, МІ Х4пит 01 Ідс4 РЕ та

Мі Ха4пит 02 Ідс4РЕ) з СО47 людини визначали із застосуванням нещодавно виділених пНКВС. яКВС інкубували протягом 60 хвилин за 37 "С з різними концентраціями тАбр МІ Х4, промивали та інкубували протягом 1 год. з міченим РІТС антитілом віслюка до антитіла людини. Клітини промивали та зв'язування антитіла вимірювали із застосуванням проточної цитометрії.

ФІГ. 28. Зв'язування гуманізованих таб МІ Х4 з КВС людини. Зв'язування гуманізованих тАр МІ хХ4 (МіХапит 07 Ід054 РЕ, МХа4пит 12 Ідсе4 РЕ та Мі Х4пит 13 Ід04 РЕ) з СО47 людини визначали із застосуванням нещодавно виділених ПЕВС. пЕВС інкубували протягом 60 хвилин за 37 "С з різними концентраціями тАБ МІ Х4, промивали та інкубували протягом 1 год. з міченим РБІТС антитілом віслюка до антитіла людини. Клітини промивали та зв'язування антитіла вимірювали із застосуванням проточної цитометрії.

ФІГ. ЗА. Зв'язування гуманізованих тАБ МІ Х8 з клітинами ОМ10 пСО47 людини. Зв'язування химерних (хі) або гуманізованих тАр ІдДС54РЕ МІ ХВ (МІ ХвВнпит 01 ІдСаАРЕ, Мі Хвнпит 04 Ід

РЕ, мМХвпит 07 Ідс4 РЕ та Мі Хвпит 09 Ідс4 РЕ) з СО0О47 людини визначали за допомогою

ЕСІЗА із застосуванням клітин ОМ10 пСО47. Клітини ОМ10 пСО47 висівали в 96-лункові планшети, та вони досягали конфлюентності під час проведення аналізу. Різні концентрації репрезентативних тАр МІ Х8 додавали до клітин на 1 год. Клітини промивали, а потім інкубували з міченим НЕР вторинним антитілом протягом 1 год., після чого додавали субстрат для пероксидази.

ФІГ. ЗВ. Зв'язування гуманізованих ІтАб МІ Х8 з клітинами ОМ10 пСО47 людини. Зв'язування химерних або гуманізованих тАб МІ Х8 (МІ Хвпит 06 Ідс2, МІ Хвпит 07 Ідс2, М Хвпит 08 952 та М Хвпит 09 Іде2) з С0О47 людини визначали за допомогою ЕГІ5ЗА із застосуванням клітин ОМ10О0 пСО47. Клітини ОМ10 пСО47 висівали в 96-лункові планшети, та вони досягали конфлюентності під час проведення аналізу. Різні концентрації репрезентативних тАр МІ ХВ додавали до клітин на 1 год. Клітини промивали, а потім інкубували з міченим НЕР вторинним антитілом протягом 1 год., після чого додавали субстрат для пероксидази.

ФІГ. 4А. Зв'язування гуманізованих тАБб МІХ8 з КВС людини. Зв'язування хі або гуманізованих тАр ІдсС4РЕ МІ Х8 (МІ Хвпшт 01 Ідс4РЕ, Мі Хвпит 03 ІдД54РЕ, МІ Хвпит 07

ІДО4РЕ та Мі Хвпит 10 Ідб4РЕ) з СО47 людини визначали із застосуванням нещодавно виділених КВС людини. КВС інкубували протягом 1 год. за 37"С з різними концентраціями тАб

МІХ8, промивали та інкубували протягом 1 год. з міченим РІТС антитілом віслюка до антитіла людини. Клітини промивали та зв'язування антитіла вимірювали із застосуванням проточної цитометрії.

ФІГ. 48. Зв'язування гуманізованих тАБб МІХ8 з КВС людини. Зв'язування хі або гуманізованих тАб ІдДС4РЕ МІ. Х8 (МІ Хвпит 06 Ідс2, МІ Хвпит 07 Ідс2, МІ Хвпит 08 Ід02 та

МІ Хвпит 09 Ід52) з СО47 людини визначали із застосуванням нещодавно виділених КВС людини. КВС інкубували протягом 1 год. за 37 "С з різними концентраціями тА МІіХВ8, промивали та інкубували протягом 1 год. з міченим РІТС антитілом віслюка до антитіла людини.

Клітини промивали та зв'язування антитіла вимірювали із застосуванням проточної цитометрії.

ФІГ. 5А. Зв'язування гуманізованих тАБ МІ ХУ з клітинами ОМ10 пСО47 людини. Зв'язування хі або гуманізованих тАБб Ідс2 МІ Х9 (МІ Хопит 01 Ідс2, МІ Хопит 02 Ідо2, МІ Хопит 03 ІдС2,

МІ Хо9пит 04 Ідс2 та МХ9пит 05 Ідс2) з СО0О47 людини визначали за допомогою ЕГІЗА із застосуванням клітин ОМ10 СО47 людини. Клітини ОМ10 йСО47 висівали в 96-лункові планшети, та вони досягали конфлюентності під час проведення аналізу. Різні концентрації тАБ додавали до клітин на 1 год. Клітини промивали, а потім інкубували з міченим НКР вторинним антитілом протягом 1 год., після чого додавали субстрат для пероксидази.

ФІГ. 58. Зв'язування гуманізованих тАБ МІ ХУ з клітинами ОМ10 пСО47 людини. Зв'язування хі або гуманізованих тАб ІдСсе МІХ9 (М Хопит 06 Ідс2, М Хопит 07 Ідсе, М ХО9пит 08 ІдДсг,

МІХУпит 09 Ід52 та М Хеопит 10 Іде2) з СО47 людини визначали за допомогою ЕГІ5А із застосуванням клітин ОМ10 пСО47. Клітини ОМ10 пСО47 висівали в 96-лункові планшети, та вони досягали конфлюентності під час проведення аналізу. Різні концентрації тАб додавали до клітин на 1 год. Клітини промивали, а потім інкубували з міченим НКР вторинним антитілом протягом 1 год., після чого додавали субстрат для пероксидази.

ФІГ. 6. Зв'язування гуманізованих тАБбБ МІХУ з КВС людини. Зв'язування хі або гуманізованих тАр ІдсС2 МІХУ з СО47 людини визначали із застосуванням нещодавно виділених ПКВС людини. РВС інкубували протягом 60 хвилин за 37 "С з різними концентраціями тАб МІХ9, промивали та інкубували протягом 1 год. з міченим РІТС антитілом віслюка до антитіла людини. Клітини промивали та зв'язування антитіла вимірювали із застосуванням проточної цитометрії.

ФІГ. 7. Гуманізовані тАр МІ Х4, МІ Х8 та МІ ХО блокують зв'язування 5ІК;а з СО47 на клітинах Уигкаї. 1,5 х 106 клітин Уигкаї інкубували з 5 мкг/мл гуманізованих тАб до СО47, МІ Х4,

МІ.Х8 та МІ Х9 (МІ Х4пит 01 1954 РЕ, МІ Х4пит 07 Ідс4 РЕ, Мі Хвпшт 10 Ідс4 РЕ, Мі Х4пит 11

Ідс54 РЕ, МХопит 03 ІдсС2, МІ Хопит 06 Ід052 та МІ Хопит 08 Ід02), або контрольним антитілом в КРМІ, що містить 10 96 середовища, протягом 30 хв. за 37 "С. Додавали рівний об'єм флуоресцентно міченого злитого білка 5БІКРа-Ес та інкубували протягом додаткових 30 хв. за 37 "С. Клітини промивали та зв'язування оцінювали із застосуванням проточної цитометрії.

ФІГ. 8. Химерні тАБ до СО47, МІ Х4, посилюють фагоцитоз Т-клітин ЧУигкаї під дією макрофагів людини. Макрофаги людини висівали за концентрації 1 х 107 клітин на лунку в 96-

Зо лунковий планшет і залишали для прикріплення на 24 години. 5 х 107 мічених СЕБЕ (1 мкМ) Т- клітин УшКаї людини та 1 мкг/мл химерних тАб МІ Х4 додавали до культур макрофагів та інкубували за 37 "С протягом 2 годин. Клітини Уигкаї, які не піддавали фагоцитозу, видаляли та культури макрофагів інтенсивно промивали. Макрофаги обробляли трипсином і фарбували щодо СО14. Проточну цитометрію застосовували для визначення відсоткового вмісту

СО14/СЕ5Е: клітин у загальній популяції СЮО14» клітин.

ФІГ. 9А. Гуманізовані тАр МІ Х4 посилюють фагоцитоз Т-клітин Уигкаї під дією макрофагів людини. Макрофаги людини висівали за концентрації 1 х 107 клітин на лунку в 9б-лунковий планшет та залишали для прикріплення на 24 години. 5 х 107 мічених СЕБЕ (1 мкМ) Т-клітин

УшїКкаї людини та 1 мкг/мл антитіла додавали до культур макрофагів та інкубували за 37 С протягом 2 годин. Т-клітини ЧУигкаї, які не піддавали фагоцитозу, видаляли та культури макрофагів інтенсивно промивали. Макрофаги обробляли трипсином і фарбували щодо СО14.

Проточну цитометрію застосовували для визначення відсоткового вмісту СО14:/СЕ5Е- клітин у загальній популяції СО14» клітин.

ФІГ. 98. Гуманізовані тАр МІ Х4 посилюють фагоцитоз Т-клітин Уигкаї під дією макрофагів людини. Макрофаги людини висівали за концентрації 1 х 107 клітин на лунку в 9б-лунковий планшет та залишали для прикріплення на 24 години. 5 х 107 мічених СЕБЕ (1 мкМ) Т-клітин

УшїКкаї людини та 1 мкг/мл антитіла додавали до культур макрофагів та інкубували за 37 С протягом 2 годин. Т-клітини УигКаї, які не піддавали фагоцитозу, видаляли та культури макрофагів інтенсивно промивали. Макрофаги обробляли трипсином і фарбували щодо СО14.

ФІГ. 10А. Химерні тАб до СО47, МІ Х8, посилюють фагоцитоз Т-клітин ЧУигкаї під дією макрофагів людини. Макрофаги людини висівали за концентрації 1 х 107 клітин на лунку в 96- лунковий планшет і залишали для прикріплення на 24 години. 5 х 107 мічених СЕБЕ (1 мкм) Т- клітин УигїКаї людини та 1 мкг/мл химерних тАб МІ Х8 додавали до культур макрофагів та інкубували за 37 "С протягом 2 годин. Клітини Уигкаї, які не піддавали фагоцитозу, видаляли та культури макрофагів інтенсивно промивали. Макрофаги обробляли трипсином і фарбували щодо СО14. Проточну цитометрію застосовували для визначення відсоткового вмісту

ФІГ. 108. Гуманізовані тАб МІ Х8 посилюють фагоцитоз клітин Уигкаї під дією макрофагів людини. Макрофаги людини висівали за концентрації 1 х 102 клітин на лунку в 9б-лунковий планшет та залишали для прикріплення на 24 години. 5 х 107 мічених СЕБЕ (1 мкМ) Т-клітин

ФІГ. 11А. Химерні тАб до СО47, М ХО, посилюють фагоцитоз Т-клітин ЧУигкаї під дією макрофагів людини. Макрофаги людини висівали за концентрації 1 х 107 клітин на лунку в 96- лунковий планшет та залишали для прикріплення на 24 години. 5 х 102 мічених СЕБЕ (1 мкМ) Т- клітин УшКаї людини та 1 мкг/мл химерних тАб МІ ХО додавали до культур макрофагів та інкубували за 37 "С протягом двох годин. Клітини УигкКаї, які не піддавали фагоцитозу, видаляли та культури макрофагів інтенсивно промивали. Макрофаги обробляли трипсином і фарбували щодо СО14. Проточну цитометрію застосовували для визначення відсоткового вмісту

СО14ч/СЕ5Е ях клітин у загальній популяції СО14 - клітин.

ФІГ. 118. Гуманізовані тАр МІ ХУ посилюють фагоцитоз Т-клітин ЧУигкаї під дією макрофагів людини. Макрофаги людини висівали за концентрації 1 х 107 клітин на лунку в 96-лунковий планшет та залишали для прикріплення на 24 години. 5 х 107 мічених СЕБЕ (1 мкМ) Т-клітин

УшгКаї людини та 1 мкг/мл антитіла додавали до культур макрофагів та інкубували за 37 "С протягом двох годин. Клітини ЧУигкаї які не піддавали фагоцитозу, видаляли та культури макрофагів інтенсивно промивали. Макрофаги обробляли трипсином і фарбували щодо СО14.

Проточну цитометрію застосовували для визначення відсоткового вмісту СО14-4-/СЕЗЕх клітин у загальній популяції СО14-- клітин.

ФІГ. 12А. Індукція клітинної загибелі Т-клітин УйшКаї людини під дією розчинних гуманізованих тА МІ Х4. Т-клітини Уигкаї (1 х 107) інкубували з 1 мкг/мл гуманізованих тА

МІХА4 в 1 мл середовища ЕРМІ протягом 24 годин за 37 "С. Потім клітини фарбували анексином

М Ї сигнал виявляли за допомогою проточної цитометрії.

ФІГ. 128. Індукція клітинної загибелі Т-клітин УйшКаї людини під дією розчинних

Зо гуманізованих тА МІ Х4. Т-клітини Уигкаї (1 х 107) інкубували з 1 мкг/мл гуманізованих тА

ФІГ. 13ЗА. Індукція клітинної загибелі клітин Уигкаї людини під дією розчинних химерних тАб до СО47, МІ Х8. Т-клітини АГ Її. дигкаї (1 х 107) інкубували з 1 мкг/мл гуманізованих тАб МІ ХВ в 1 мл середовища КРМІ протягом 24 годин за 37 "С. Потім клітини фарбували анексином М та сигнал виявляли за допомогою проточної цитометрії.

ФІГ. 138. Індукція клітинної загибелі клітин Уигкаї людини під дією розчинних гуманізованих тА МІ Х8. Т-клітини АГ. Уигкаї (1 х 107) інкубували з 1 мкг/мл гуманізованих тАб МІ Х8 в 1 мл середовища ЕРМІ протягом 24 годин за 37 "С. Потім клітини фарбували анексином М та сигнал виявляли за допомогою проточної цитометрії.

ФІГ. 14А. Індукція клітинної загибелі клітин УигКаї людини під дією розчинних химерних тАб миші/людини МІХ9. 1 х 107 клітин дигКкаї інкубували з 1 мкг/мл химерних тАБб до СО47, МІ ХО, в 0,1 мл середовища ЕРМІ протягом 24 годин за 37 "С. Потім клітини фарбували анексином М та сигнал аналізували за допомогою проточної цитометрії.

ФІГ. 148. Індукція клітинної загибелі клітин Уигкаї людини під дією розчинних гуманізованих тА МІ ХУ. Т-клітини АГ Її. Удигкаї (1 х 107) інкубували з 1 мкг/мл гуманізованих тАб МІ ХУ в 1 мл середовища ЕРМІ протягом 24 годин за 37 "С. Потім клітини фарбували анексином М та сигнал виявляли за допомогою проточної цитометрії. д52 МІ ХО (хі) являє собою химерне антитіло миші/людини.

ФІГ. 15А. Аглютинація пКВС під дією гуманізованих тАб МІ Х4. Гемаглютинацію оцінювали після інкубації РКВС з різними концентраціями гуманізованих тАБ МІ ХА (25 мкг/мл - 0,4 нг/мл).

Кров розбавляли (1:50) та промивали З рази за допомогою РВ5/"ЕОТА/В5ЗА. ПКВС додавали в 9б-лункові планшети з О-подібним дном з рівними об'ємами антитіл (75 мкл) та інкубували протягом З годин за 37 "С та протягом ночі за 4 "с.

ФІГ. 158. Аглютинація ПКВС під дією химерних та гуманізованих тАб МІ Х8. Гемаглютинацію оцінювали після інкубації ЯКВС з різними концентраціями гуманізованих тдАб МІ ХА (25 мкг/мл - 0,4 нг/мл). Кров розбавляли (1:50) та промивали З рази за допомогою РВЗ/ЕОТА/В5А. ПЕВС додавали в 96-лункові планшети з О-подібним дном з рівними об'ємами антитіл (75 мкл) та інкубували протягом З годин за 37 "С та протягом ночі за 4 "С.

ФІГ. 16. Аглютинація КВС людини під дією гуманізованих тАб МІ ХУ. Гемаглютинацію оцінювали після інкубації КВС людини з різними концентраціями химерних (хі) їдс2 МІХО та гуманізованих тАбБ МІ ХУ. Кров розбавляли (1:50) та промивали З рази за допомогою

РВЗ/ЕОТА/В5А. КВС додавали в 96-лункові планшети з О-подібним дном з рівними об'ємами антитіл (75 мкл) та інкубували протягом З годин за 37 "С та протягом ночі за 4 "С.

ФІГ. 17. Гуманізоване тАб МІ Х4 знижує пухлинний ріст в моделі з ксенотрансплантатом

Каїї. Самицям мишей М5О інокулювали підшкірно в правий бік 0,1 мл суміші з 30 95 АРМІ/70 95

МаїгідеІ "м (ВО Віозсіепсе5; Бедфорд, Массачусетс), що містить суспензію з 5 х 106 пухлинних клітин Каїї. Через п'ять днів після інокуляції вимірювали об'єми пухлин і мишей з пухлинами, які пальпуються, об'ємом 31-74 мм3 випадково розподіляли по 8-10/група. У цей час починали введення МІ Х4пит 07 або РВ5 (контроль). Мишей обробляли за допомогою 5 мг/кг антитіла 5Х/пиждень протягом 4 тижнів за допомогою здійснення внутрішньочеревних ін'єкцій. Значення об'єму пухлини та ваги тіла реєстрували два рази на тиждень.

ФІГ. 18. Гуманізоване тАб МІ Х8 знижує пухлинний ріст в моделі з ксенотрансплантатом

МаїгідеІ "м (ВО Віозсіепсе5; Бедфорд, Массачусетс), що містить суспензію з 5 х 106 пухлинних клітин Каїї. Через п'ять днів після інокуляції вимірювали об'єми пухлин і мишей з пухлинами, які пальпуються, об'ємом 31-74 мм? випадково розподіляли по 8-10/група. У цей час починали введення МІ Хвпит 10 або РВ5 (контроль). Мишей обробляли за допомогою 5 мг/кг антитіла

Б5Х/гтиждень протягом 4 тижнів за допомогою здійснення внутрішньочеревних ін'єкцій. Значення об'єму пухлини та ваги тіла реєстрували два рази на тиждень.

ФІГ. 19. Гуманізоване тАб МІ ХУ знижує пухлинний ріст в моделі з ксенотрансплантатом

Маїгіде! "м (ВО Віозсіепсе5; Бедфорд, Массачусетс), що містить суспензію з 5 х 106 пухлинних клітин Каїї. Через п'ять днів після інокуляції вимірювали об'єми пухлин і мишей з пухлинами, які пальпуються, об'ємом 31-74 мм? випадково розподіляли по 8-10/група. У цей час починали введення МІ ХОпПит 08 Іде2 або РВ5 (контроль). Мишей обробляли за допомогою 5 мг/кг антитіла 5Х/гиждень протягом 4 тижнів за допомогою здійснення внутрішньочеревних ін'єкцій.

Значення об'єму пухлини та ваги тіла реєстрували два рази на тиждень.

Зо ФІГ. 20А. Рівні гемоглобіну в крові після введення гуманізованого тАб МІ ХУ яванським макакам за допомогою внутрішньовенної інфузії. дс2 МІ ХО9пит 08 або середовище-носій вводили у вигляді одногодинної внутрішньовенної інфузії з дозою 5 мг/кг у день 1 та дозою 15 мг/кг у день 18. Рівні гемоглобіну відслідковували протягом усього дослідження та нормалізували щодо контрольних значень.

ФІГ. 208. Рівні КВС в крові після введення гуманізованого тАб МІ Х9 яванським макакам за допомогою внутрішньовенної інфузії. дсС2 МІ ХО9пит 08 або середовище-носій вводили у вигляді одногодинної внутрішньовенної інфузії з дозою 5 мг/кг у день 1 та дозою 15 мг/кг у день 18. Рівні КВС овідслідковували протягом всього дослідження та нормалізували щодо контрольних значень.

ФІГ. 21. Імуногістохімічне фарбування СО47 у пухлинній тканині людини за допомогою химерного тАБ миші/кролика. Локалізацію СО47 в тканину раку молочної залози людини визначали із застосуванням химерного тАр миші/кролика МІ Х4. Залиту в парафін тканину нарізали, фарбували за допомогою 4 мкг/мл очищеного антитіла та локалізацію визначали за допомогою міченого НЕР вторинного антитіла до антитіла кролика. Стрілки позначають ділянки з позитивним результатом фарбування СО47.

ФІГ. 22. Стислий огляд властивостей антитіла до СО47.

ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВАРІАНТІВ ЗДІЙСНЕННЯ ДАНОГО ВИНАХОДУ

Визначення

Якщо не визначено інше, науково-технічні терміни, використовувані у зв'язку з даним винаходом, будуть мати значення, які зазвичай розуміють середні фахівці в даній галузі. Крім того, якщо контекст не потребує іншого, терміни у однині будуть включати форми множини, та терміни у множині будуть включати форму однини. У цілому описані в даному документі методики клітинної та тканинної культури, молекулярної біології та хімічної взаємодії та гібридизації білків та олігонуклеотидів або полінуклеотидів, а також умовні позначення, використовувані у зв'язку з ними, є такими, які добре відомі та зазвичай використовуються в даній галузі техніки.

Використовувані в даному документі терміни "С047", "асоційований з інтегринами білок (ІАР)" "антиген раку яєчників ОАЗ", "Кп-пов'язаний антиген" та "МЕКО" є синонімічними та можуть використовуватись взаємозамінно.

Термін "антитіло до СО47" стосується антитіла за даним винаходом, яке призначене для застосування як терапевтичного або діагностичного засобу, а отже, воно зазвичай буде характеризуватися афінністю зв'язування, необхідною для застосування як терапевтичного та/або діагностичного засобу.

Використовуваний у даному документі термін "антитіло" стосується молекул імуноглобуліну та імунологічно активних частин молекул імуноглобуліну (19), тобто молекул, що містять антигензв'язувальну область, яка специфічно зв'язує антиген (вступає в імунологічну реакцію з ним). Під "специфічно зв'язує" або "вступає в імунологічну реакцію" з або спрямований до мається на увазі, що антитіло реагує з однією або декількома антигенними детермінантами потрібного антигену та не реагує з іншими поліпептидами або зв'язується з набагато меншою афінністю (Ка » 106). Антитіла включають без обмеження поліклональні, моноклональні, химерні, Рар-фрагменти, Рар'-фрагменти, Е(ар)2-фрагменти, одноланцюгові Ем-фрагменти та одноплечові антитіла.

Використовуваний у даному документі термін "моноклональне антитіло" (тА) як застосовується до сполук-антитіл за даним винаходом стосується антитіла, яке походить від однієї копії або клону, в тому числі, наприклад, будь-який еукаріотичний, прокаріотичний або фаговий клон, а не способу, за допомогою якого його отримують. тАб за даним винаходом переважно існують в гомогенній або майже гомогенній популяції. Повні тАб містять 2 важкі ланцюги та 2 легкі ланцюги. "Фрагмент антитіла" стосується молекули, відмінної від інтактного антитіла, яка містить частину інтактного антитіла, що зв'язує антиген, з яким зв'язується інтактне антитіло. Приклади фрагментів антитіла включають без обмеження Ем, Бар, Рар', Раб'-5Н, К(аб)2; діатіла; лінійні антитіла; молекули одноланцюгових антитіл (наприклад, 5сЕм) та поліспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл.

Як розкрито в даному документі, "сполуки-антитіла" стосуються тАБр та їх антигензв'язувальних фрагментів. Додаткові сполуки-антитіла, які проявляють подібні функціональні властивості відповідно до даного винаходу, можна одержати за допомогою традиційних способів. Наприклад, мишей можна імунізувати СО47 людини або його фрагментами, одержані в результаті антитіла можна виділити та очистити, та визначення того, чи характеризуються вони властивостями зв'язування та функціональними властивостями, подібними або аналогічними таким у розкритих у даному документі сполук-антитіл, можна оцінювати за допомогою способів, розкритих у прикладах 3-11 нижче. Антигензв'язувальні фрагменти також можна одержувати за допомогою традиційних способів. Способи одержання та очищення антитіл та антигензв'язувальних фрагментів добре відомі з рівня техніки, та їх можна знайти, наприклад, в Нагіоу/ апа І апе (1988) Апіібодієв, А ІГарогаїгу Мапиаї, Соїа 5рііпд

Нагбог І арогаїогу Ргез55, Соїй 5ргіпуд Нагрог, Мем/ УогК, глави 5-8 та 15.

Моноклональні антитіла охоплюють антитіла, в яких частина важкого та/або легкого ланцюга ідентична або гомологічна відповідним послідовностям в антитілах миші, зокрема СОК миші, тоді коли інша частина ланцюгас-ів) ідентична або гомологічна відповідним послідовностям в антитілах людини. Інші варіанти здійснення даного винаходу включають антигензв'язувальні фрагменти цих моноклональних антитіл, які проявляють зв'язувальні та біологічні властивості, подібні або ідентичні моноклональним антитілам. Антитіла за даним винаходом можуть містити константні області каппа- або лямбда-легкого ланцюга та константні області важкого ланцюга

ІА, дО, ІЧЕ, дос або Ідм, в тому числі константні області з таких підкласів Ідс, як ІДС1, Ід2,

ІЧОЗ та ІдС4, та в деяких випадках з різними мутаціями для зміни Ес-рецепторної функції.

Моноклональні антитіла, що містять розкриті в даному винаході СОК миші, можна одержати за допомогою будь-якого з різних способів, відомих фахівцям в даній галузі, у тому числі способів рекомбінантної ДНК.

Огляди сучасних способів конструювання та поліпшення антитіл можна знайти, наприклад, в

Р. Спатез, Еа., (2012) Апіїроду Епаіпеегіпд: МеїШодз апа Ргоїосоі!5, Зесопа Едійоп (Меїноадвз іп

Моїесшіаг Віоіоаду, ВоокК 907), Нитапа Ргез5, ІЗВМ-10: 1617799734; б. ВА. Моса, Еа., (2011)

Апіїбоду Огид Оівсомегу (МоіІесціаг Медісіпе апа Медісіпа! Спетівігу, Воок 4), Ітрегіа! Соїеде

Ргев5; В. Копівттапп апа 5. Юибеї, Еав., (2010) Апіїроду Епдіпеегіпд Моїштез 1 апа 2 (Зргіпдег

Ргогосоїв), Зесопа Еайіоп; і МУ. БІОПІ апа І. Бігопі (2012) Тнегарешіс апіїбоду епдіпеегіпд: Сцтепі апа їшиге адмапсев агпміпуд Ше 5ігопдеві дом агеа іп Ше рпаптасешііса! іпдивігу, Ууосанеай

Рибіївпіпа.

Способи одержання та очищення антитіл та антигензв'язувальних фрагментів добре відомі з рівня техніки, та їх можна знайти, наприклад, в Напохуу апа І апе (1988) Апііродієв, А І арогаїюгу

Мапиаї, Соїа бргіпуд Натотг І абогаїюгу Ргезз, Соїд бргіпу Наїбог, Мем/ мок, глави 5-8 та 15.

Повнорозмірне антитіло, як воно існує в природі, являє собою молекулу імуноглобуліну (19) "У"-подібної форми, що містить чотири поліпептидних ланцюги: два ідентичних важких (Н) ланцюги та два ідентичних легких (І) ланцюги, пов'язані між собою дисульфідними зв'язками.

Аміно-кінцева частина кожного ланцюга, яку називають фрагментом з антигензв'язувальною областю (РАВ), включає варіабельну область з приблизно 100-110 або більше амінокислот, яка в основному відповідальна за розпізнавання антигену завдяки областям (СОБК), які визначають комплементарність, що містяться в ній. Карбокси-кінцева частина кожного ланцюга визначає константну область ("Ес"-область), яка в основному відповідає за ефекторну функцію.

СОК чергуються з областями, які є більш консервативними та називаються каркасними ділянками ("ЕК"). Амінокислотні послідовності багатьох ЕЕ. добре відомі з рівня техніки. Кожна варіабельна область легкого ланцюга (СУК) та варіабельна область важкого ланцюга (НСМК) складається з З СОК та 4 ЕК, розташованих від аміно-кінця до карбокси-кінця в наступному порядку: ЕК!Т, СОКІ, ЕК2, СОК2, ЕКЗ, СОКЗ, ЕК4. 3 СОК легкого ланцюга називають "СОМ,

ІЇСОК2 та ІСОКЗ", а 3 СОМ важкого ланцюга називають "НСОКІ, НСОМК2 та НСОКУ". СОК містять більшість залишків, які формують специфічні взаємозв'язки з антигеном. Нумерація та положення амінокислотних залишків СОЕ в областях І СУЕ та НСУР відповідає загальновідомій системі нумерації Кабаї, Кабаї еї аї. (1991) Зедиепсез ої Ргоївіп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві, ГА

Еайоп. Публікація МІН Мо 91-3242.

Як описано в даному документі, "антигензв'язувальна область" може також бути визначена як "тіперваріабельні області" "НМА" або "НУ" та стосується структурно гіперваріабельних областей варіабельних доменів антитіла, як визначено Споїпіа та І е5К (Споїніа апа І е5К, Мої.

ВіоІ. 196:901-917, 1987). Існує шість НМЕК, три в МН (НІ, Н2, НЗ) та три в М (І71, 12, 13). У даному документі автори даного винаходу використовували СОК, як визначено КаБбаї, за виключенням Н-СОКТ, який продовжений із включенням НІ.

Існує п'ять типів важких ланцюгів імуноглобуліну (Ід) ссавців, які позначають грецькими буквами са (альфа), б (дельта), є (епсілон), у (гамма) та М (мю), які визначають клас або ізотип антитіла як ІДА, ІдО, ЧЕ, дос або ІдМ відповідно. Ідс-антитіла можна додатково розділити на підкласи, наприклад, Іде, Ідс2, доз та Ід.

Кожний тип важкого ланцюга характеризується конкретною константною областю з послідовністю, відомою з рівня техніки. Константна область ідентична у всіх антитілах одного й того самого ізотипу, але відрізняється в антитілах різних ізотипів. Важкі ланцюги у, с та б мають константну область, що складається з трьох тандемних доменів імуноглобуліну (Ід), і шарнірну область для додаткової гнучкості. Важкі ланцюги М та є мають константну область, що складається з чотирьох доменів Ід.

Шарнірна область являє собою гнучкий відрізок із амінокислот, який зв'язує Ес- та Еар- частини антитіла. Ці області містять цистеїнові залишки, що можуть утворювати дисульфідні зв'язки, які з'єднують два важких ланцюги разом.

Варіабельна область важкого ланцюга відрізняється в антитілах, які продуються різними В- клітинами, але є однаковою для всіх антитіл, що продукуються однією В-клітиною або клоном В- клітини. Варіабельна область кожного важкого ланцюга має довжину приблизно 110 амінокислот та складається з одного домену Ід.

У ссавців легкі ланцюги класифікують на каппа (к) або лямбда (ХА), та вони характеризуються конкретною константною областю, відомою з рівня техніки. Легкий ланцюг має два послідовних домени: один варіабельний домен на аміно-кінці та один константний домен на карбокси-кінці.

Кожне антитіло містить два легких ланцюги, які завжди ідентичні; при цьому тільки один тип легкого ланцюга, к або АХ, присутній в антитілі у ссавців.

Ес-область, що складається з двох важких ланцюгів, які надають три або чотири константних домени залежно від класу антитіла, відіграє роль в модулюванні активності імунних клітин. Під час зв'язування зі специфічними білками Ес-область гарантує, що кожне антитіло забезпечить відповідну імунну відповідь на даний антиген. Ес-область також зв'язується з різними клітинними рецепторами, такими як Ес-рецептори, та іншими імунними молекулами, такими як білки системи комплементу. Таким чином вона опосередковує різні фізіологічні ефекти, в тому числі опсонізацію, клітинний лізис та дегрануляцію тучних клітин, базофілів та еозинофілів.

Використовуваний у даному документі термін "епітоп" стосується конкретної групи амінокислот, розташованих на пептиді або білку, з якою зв'язується антитіло або фрагмент антитіла. Епітопи часто складаються з групи поверхнево хімічно активних молекул, таких як амінокислоти або бічні ланцюги цукрів, і мають специфічні характеристики тривимірної структури, а також специфічні характеристики заряду. Епітопи можуть бути лінійними, тобто бо такими, що беруть участь у зв'язуванні з однією послідовністю амінокислот, або конформаційними, тобто такими, що беруть участь у зв'язуванні з двома або більше послідовностями амінокислот в різних областях антигену, які не обов'язково можуть бути суміжними в лінійній послідовності.

Використовувані в даному документі терміни "специфічно зв'язується", "зв'язує специфічно", "специфічне зв'язування" тощо щодо сполук-антитіл за даним винаходом стосуються здатності специфічного зв'язувального засобу (такого як антитіло) зв'язуватись з цільовими молекулярними частинками замість зв'язування з іншими молекулярними частинками, з якими змішані специфічний зв'язувальний засіб та цільові молекулярні частинки. Вважається, що специфічний зв'язувальний засіб специфічно впізнає цільові молекулярні частинки, якщо він може специфічно зв'язуватись з такою мішенню.

Використовуваний у даному документі термін "афінність зв'язування" стосується сили зв'язування однієї молекули з іншою в певній ділянці молекули. Якщо конкретна молекула буде зв'язуватись або специфічно взаємодіяти з іншою конкретною молекулою, тоді вважається, що ці дві молекули проявляють афінність зв'язування щодо один одного. Афінність зв'язування стосується константи асоціації та константи дисоціації для пари молекул, але для викладених в даному документі способів вимірювання або визначення даних констант не є вкрай необхідним.

Скоріше, показники афінності, використовувані в даному документі для опису взаємодій між молекулами в описаних способах, у цілому являють собою показники припущеної афінності (якщо не вказано інше), що спостерігають у емпіричних дослідженнях, які можна застосовувати для порівняння відносної сили, з якою одна молекула (наприклад, антитіло або інший партнер за специфічним зв'язуванням) буде зв'язувати дві інші молекули (наприклад, дві версії або варіанти пептиду). Поняття афінності зв'язування, константи асоціації та константи дисоціації добре відомі.

Використовуваний у даному документі термін "ідентичність послідовності" означає відсотковий вміст ідентичних нуклеотидних або амінокислотних залишків у відповідних положеннях в двох або більше послідовностях під час вирівнювання послідовностей з максимальним збільшенням збігів послідовностей, тобто з урахуванням гепів та вставок.

Ідентичність можна легко розрахувати за допомогою відомих способів, у тому числі без обмеження описаних в Сотршиїайопа! Моїіесшіаг Віоіоду, ГІ е5К, А. М., єд., Охтога Опімегейу Ргевв5,

Коо) Мем Моїк, 1988; Віосотршиїіпд: Іп'оптаїйс5 апа Сепоте Ргоіесіє5, тій, О. МУ., єд., Асадетіс

Ргезв5, Мем Могк, 1993; Сотриіег Апаїузів ої Зедиепсе Оаїа, Рап І, Стініп, А. М., апа Стініп, Н. С., ед5., Нитапа Ргез5, Мем/ Уегзеу, 1994; Бедиепсе Апаїузів іп МоїІесшіаг Віоіоду, моп Неїпіє, а.,

Асадетіс Рге55, 1987; та бЗедиєпсе Апаїузів Ргітег, СпіреКом, М. апа Оеємегеих, у., ейд5., М

ЗіосКкіоп Рге55, Мем МогКк, 1991; та Сапіпо, Н., апа Гіртап, 0., БІАМ 9. Арріїєй Маїйй., 48: 1073 (1988). Способи визначення ідентичності розроблені для одержання найбільшого збігу між послідовностями, які тестують. Більше того, способи визначення ідентичності кодифіковані в загальнодоступних комп'ютерних програмах.

Оптимальне вирівнювання послідовностей для порівняння можна здійснювати, наприклад, за допомогою алгоритму пошуку локальної гомології тій та УМаїептап, за допомогою алгоритмів вирівнювання щодо гомології, за допомогою способу пошуку подібності, або за допомогою комп'ютерних реалізацій даних алгоритмів (ЗАР, ВЕ5ТРІТ, РАБ5ТА та ТЕА5ТА в пакеті програм СО Умі5сопвіп, доступному від Ассеїгув, Іпс., Сан-Дієго, Каліфорнія, Сполучені

Штати Америки), або за допомогою візуального дослідження. У цілому, див. АЇйб5епПиЇї, 5. Е. єї аї.,

У. Мої. Віої. 215: 403-410 (1990) та Аїївспи! єї а. Мисі. Асіа5 Невз. 25: 3389-3402 (1997).

Одним прикладом алгоритму, який є придатним для визначення відсоткового значення ідентичності послідовностей та подібності послідовностей, є алгоритм ВІ А5Т, який описано в (Айвепиї, 5., єї аі., МСВІ ММ МІН Ветшезаа, Ма. 20894; та Аїївспиї, 5., еї аї., У. Мої. Віої. 215: 403- 410 (1990). Програмне забезпечення для виконання аналізів ВІ АТ є загальнодоступним через

Національний центр біотехнологічної інформації. Даний алгоритм включає спочатку ідентифікацію пар послідовностей з найбільшим балом (Н5Р) шляхом ідентифікації коротких "слів" з довжиною МУ у послідовності, що запитується, які або збігаються, або задовольняють деяке позитивне порогове значення Т під час вирівнювання зі "словом" тієї самої довжини в послідовності з бази даних. Т називають пороговим значенням сусіднього "слова".

Ці вихідні хіти сусідніх "слів" виступають як початкові значення для ініціації пошуків з метою знаходження довших НОР, які їх містять. Хіти "слів" потім подовжують в обох напрямках вздовж кожної послідовності доти, поки може підвищуватись сумарний бал вирівнювання. У випадку нуклеотидних послідовностей сумарні бали розраховують за допомогою параметрів М (доданого балу для пари залишків, що збігаються; завжди; 0) та М (штрафного балу для залишків, що не збігаються; завжди; 0). У випадку амінокислотних послідовностей для бо розрахунку сумарного балу застосовують матрицю замін. Подовження хітів "слів" у кожному напрямку зупиняють, коли сумарний бал вирівнювання зменшується на величину Х від його максимального досягнутого значення, сумарний бал дорівнює нулю або менше через накопичення одного або декількох вирівнювань залишків, які оцінюються негативно, або закінчується будь-яка послідовність. Параметри УМ, Т та Х алгоритму ВІА5Т визначають чутливість та швидкість вирівнювання. У програмі ВІГА5ТМ (для нуклеотидних послідовностей) за замовчуванням використовується довжина "слова" (М/), яка дорівнює 11, очікуване значення (Е), що дорівнює 10, відсічення, яке дорівнює 100, М-5, М - -4, та порівняння обох ланцюгів. Для амінокислотних послідовностей у програмі ВГАБТР за замовчуванням використовується довжина "слова" (Му), яка дорівнює 3, очікуване значення (Е), що дорівнює 10, та матриця замін в'юозОМб2.

Крім розрахунку відсоткового значення ідентичності послідовностей алгоритм ВІ А5Т також виконує статистичний аналіз подібності між двома послідовностями. Однією мірою подібності, яку забезпечує алгоритмом ВІ А5Т, є найменша сумарна ймовірність (Р(М)), що слугує ознакою ймовірності з якою може мати місце випадковий збіг між двома нуклеотидними або амінокислотними послідовностями. Наприклад, послідовність нуклеїнової кислоти, яку тестують, вважають схожою з еталонною послідовністю, якщо найменша сумарна вірогідність під час порівняння послідовності нуклеїнової кислоти, яку тестують, з еталонною послідовністю нуклеїнової кислоти в одному варіанті здійснення становить менше приблизно 0,1, в іншому варіанті здійснення менше приблизно 0,01 та в ще одному варіанті здійснення менше приблизно 0,001.

Використовувані в даному документі терміни "гуманізоване", "гуманізація" тощо стосуються прищеплення СОК моноклонального антитіла миші, розкритих у даному документі, на ЕК та константні області людини. Також цими термінами охоплюються можливі додаткові модифікації

СОК миші та ЕК людини за допомогою способів, розкритих, наприклад, в Кахптіїгі еї аї. (2005)

Меїтоавз 36 (1):25-34 та Нои еї а. (2008) 9. Віоспет. 144 (1):115-120 відповідно, для поліпшення різних властивостей антитіла, як обговорюється нижче.

Використовуваний у даному документі термін "гуманізовані антитіла" стосується тАБ та їх антигензв'язувальних фрагментів, у тому числі розкритих в даному документі сполук-антитіл, що мають зв'язувальні та функціональні властивості відповідно до даного винаходу, аналогічні

Зо розкритим у даному документі, та які мають ЕЕ та константні області, що є майже людськими або повністю людськими, оточуючі СОК, одержані з антитіла, відмінного від людського.

Використовуваний у даному документі термін "ЕК" або "каркасна послідовність" стосується будь-якого з ЕК 1-4. Гуманізовані антитіла та антигензв'язувальні фрагменти, які охоплюються даним винаходом, включають молекули, де будь-яка одна або декілька з ЕК 1-4 є майже або повністю людськими, тобто де присутня будь-яка з можливих комбінацій окремих майже або повністю людських ЕК 1-4. Наприклад, це включає молекули, в яких ЕК1 та ЕК2, ЕК! та ЕКЗ,

ЕКТ, ЕК2 та ЕКЗ тощо, є майже або повністю людськими. Майже людські каркасні ділянки являють собою ділянки, послідовність яких щонайменше на 80 95 ідентична відомій каркасній послідовності зародкової ліні людини. Переважно, майже людські каркасні ділянки характеризуються щонайменше 8595, щонайменше 86 9о, щонайменше 8795, щонайменше 88956, щонайменше 8995, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 92 95, щонайменше 93 95, щонайменше 94 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96 9565, щонайменше 97 96, щонайменше 9895 або щонайменше 99 95 ідентичністю послідовності з каркасною послідовністю, розкритою в даному документі, або з відомою каркасною послідовністю зародкової лінії людини.

Повністю людські каркасні ділянки являють собою ділянки, які ідентичні відомій каркасній послідовності зародкової лінії людини. Послідовності ЕК зародкової лінії людини можна одержати з міжнародної бази даних ІтМипосСепетісв (ІМСТ) та з Те Іттиподіобиїїп РасізВоокК ру Маїгіе-Раше І! еїгтапс апа Сегага ГІ еїгтапс, Асадетіс Ргезз, 2001, зміст яких включено в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті.

Те Іттиподіориїйп Расіє ВоокК являє собою каталог генів імуноглобуліну зародкової лінії людини, які використовуються для створення спектра антитіл людини, та включає записи для 203 генів та 459 алелей з відображенням загалом 837 послідовностей. Окремі записи включають усі гени константної області імуноглобуліну людини та гени зародкової лінії, які відповідають за варіабельність, різноманіття та сполучення, що мають щонайменше один функціональний алель або алель з відкритою рамкою зчитування та які локалізовані в трьох основних локусах. Наприклад, ЕК легкого ланцюга зародкової лінії можна вибрати із групи, що складається з ІЗКМУ30-20, їаКМ2-30, І2КМ2-29, ІЯ4КМ2-28,. ІаКМ1-27, І124КМ3-20, 1аКМ1-17,

ІСКМ1-16, 1-6, І2КМ1-5, ІШКМ1-12, їІ24КМ10-16, їаКМ20-28, І24КМ20-29, І2КМ3-11, ІаКМ1-9, 60 ІСКМ1-39, ІШКМ10-39, і ІЗКМ10-33, та ІБКО1-5 та ЕК важкого ланцюга зародкової лінії можна вибрати із групи, що складається з ІЗНМ1-2, І2НМ1-18, ІНМ1-46, І2НМ1-69, ІНМ2-5, ІНМ2-26,

Іанма2г-70, Танм1-3, Танм1-8, 1анмЗ-9, 1а4НМЗ3-11, І2НМЗ3-15, ї4НМЗ3-20, 124НМЗ3-66, І2НМЗ-72,

ІСШНМЗ-74, ІШНМ4-31, ІШНМЗ3-21, І2НМЗ3-23, ІШНМЗ-30, І2НМЗ3-48, І12НМ4-39, ІШНМ4-59, ії ІСНМ5- 51, і ІНО1-6.

Майже людські РЕК являють собою ділянки, послідовність яких щонайменше на 80 95 ідентична відомій ЕК зародкової лінії людини. Переважно, майже людські каркасні ділянки характеризуються щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 96 965, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичністю послідовності з каркасними послідовностями, розкритими в даному документі, або з відомою каркасною послідовністю зародкової лінії людини.

СОК, охоплені даним винаходом, включають не тільки СОК, які конкретно розкриті в даному документі, але також і послідовності СОК, що мають таку ідентичність послідовності, як щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96 965, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичність послідовності з послідовністю СОК, розкритою в даному документі. Як альтернатива, СОК, охоплені даним винаходом, включають не тільки СОК, які конкретно розкриті в даному документі, але також і послідовності СОР, що мають 1, 2, 3, 4 або 5 амінокислотних замін у відповідних положеннях порівняно з послідовностями СОК, розкритими в даному документі. Така послідовність, ідентична або що має амінокислотну модифікацію відносно СОК, переважно зв'язується з антигеном, який впізнається інтактним антитілом.

Гуманізовані антитіла додатково до розкритих у даному документі, які проявляють подібні функціональні властивості відповідно до даного винаходу, можна одержати за допомогою декількох різних способів АЇІтаадго еї аї. Егопіїег5 іп Віозсіепсе5. Нитапігайоп ої апііродієв5. (2008)

Уап. 1; 13:1619-33.

Відповідно до одного підходу СОК вихідної сполуки-антитіла прищеплюють до каркасної ділянки людини, яка характеризується високою ідентичністю послідовності з каркасною ділянкою вихідної сполуки-антитіла. Ідентичність послідовності нової каркасної ділянки зазвичай буде становити щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 86 95, щонайменше 87 95, щонайменше 88 95, щонайменше 89 95, щонайменше 90 95, щонайменше 91 9565, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 96 95, щонайменше 97 95, щонайменше 9895 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності з послідовністю відповідної каркасної ділянки у вихідній сполуці-антитілі. У випадку каркасних ділянок, що мають 100 амінокислотних залишків, можна змінити один, два, три, чотири, п'ять, шість, сім, вісім, дев'ять або десять амінокислотних залишків. Здійснення такого прищеплення може призвести до зниження афінності зв'язування порівняно з афінністю зв'язування вихідного антитіла. У такому випадку каркасну ділянку можна піддавати зворотному мутагенезу до вихідної каркасної ділянки в певних положеннях з урахуванням конкретних критеріїв, розкритих у Оцееп еї аїЇ. (1991) Ргос. Май. Асай. Зсі. ОБА 88:2869. Додаткові посилання, які описують способи, застосовні для одержання гуманізованих варіантів на основі гомології та зворотних мутацій, включають описані в Оііїптрієгі еї аї. Віоіпіоптаїййс5. 2015 Рер. 1:31 (3):434-435 та патентах США МоМо 4816397, 5225539 і 5693761; та спосіб УмМіпіег і співавторів (опе еї аї. (1986) Маште 321:522-525; Ніесптапп еї а!. (1988) Машге 332:323-327; та Метовеуеп евї а. (1988)

Зсієпсе 239:1534-1536).

Гуманізацію починають з химеризації, способу, розробленого в першій половині 1980-х років (Могтізоп, 5. ., М. У. Чоппзоп, ГІ. А. Неггепрега 4 М. Т. Ої: Спітетіс питап апіїроду тоїіесиіев: тоиве апіїдеп-ріпаіпа дотаїпе м/йй Нитап сопвіапі гедіоп дотаіп5. Ргос. Маї!. Асай. сі. ОБА., 81, 6851-5 (1984)), який полягає в об'єднанні варіабельних (М) доменів антитіл миші з константними (С) доменами людини з одержанням молекул, склад яких на «70 95 відповідає молекулам людини.

Для одержання гуманізованих антитіл можна застосовувати декілька різних способів, які описані в даному документі. Відповідно до одного підходу СОК вихідної сполуки-антитіла прищеплюють до ЕК людини, що характеризується високою ідентичністю послідовності з каркасною ділянкою вихідної сполуки-антитіла. Ідентичність послідовності нової ЕК зазвичай буде становити щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96 95, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності з послідовністю відповідного ЕК у вихідній сполуці-антитілі. У випадку ЕК, що мають 100 амінокислотних залишків, можна змінити один, два, три, чотири, п'ять або більше амінокислотних залишків. Здійснення такого прищеплення може призвести до зниження афінності зв'язування порівняно з афінністю зв'язування вихідного антитіла. У такому випадку 60 ЕК можна піддавати зворотному мутагенезу до вихідної каркасної ділянки в певних положеннях з урахуванням конкретних критеріїв, розкритих у Ойееп еї аї. (1991) Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА 88:2869. Додаткові посилання, які описують способи, застосовні для одержання гуманізованих варіантів на основі гомології та зворотних мутацій, включають описані в Оійтріегі еї аї.

Віоіптоптаїйсв. 2015 Рер. 1:31 (3):434-435 та патентах США МоМо 4816397, 5225539 і 5693761; та спосіб Уміпіег і співавторів ()опез еї аї!. (1986) Майшге 321:522-525; Віесптапп еї а!. (1988) Майте 332:323-327; та Метоеуеп ві а!. (1988) бсіепсе 239:1534-1536).

Ідентифікацію залишків, які слід враховувати для зворотної мутації, можна здійснювати, як описано нижче. Якщо амінокислота підпадає під наступну категорію, то каркасну амінокислоту використовуваної послідовності зародкової лінії людини ("акцепторну ЕВ") замінюють на каркасну амінокислоту з каркасної ділянки вихідної сполуки-антитіла ("донорську ЕВ"): (а) амінокислота в акцепторній каркасній ділянці РЕА людини є незвичною для каркасних ділянок людини у такому положенні, тоді як відповідна амінокислота в донорському імуноглобуліні є типовою для каркасних ділянок людини в цьому положенні; (Б) положення амінокислоти безпосередньо прилегле до однієї з СОК; або (с) будь-який атом бічного ланцюга каркасної амінокислоти знаходиться в межах приблизно 5-6 ангстрем (від центра до центра) від будь-якого атома амінокислоти СОК в тривимірній моделі імуноглобуліну.

Якщо кожна з амінокислот в акцепторній каркасній ділянці ЕК людини та відповідна амінокислота в донорській каркасній ділянці є зазвичай незвичною для каркасних ділянок людини у такому положенні, то таку амінокислоту можна замінити амінокислотою, типовою для каркасних ділянок людини у такому положенні. Такий критерій зворотної мутації дозволяє відновити активність вихідної сполуки-антитіла.

Інший підхід одержання гуманізованих антитіл, які проявляють функціональні властивості, подібні сполукам-антитіл, розкритим в даному документі, передбачає випадковий мутагенез амінокислот у прищеплених СОК без зміни каркасної ділянки та скринінг одержаних молекул щодо афінності зв'язування та інших функціональних властивостей, які є майже такими самими або кращими ніж такі у вихідних сполук-антитіл. Також в кожне положення амінокислоти у кожній

СОК можна ввести одиночні мутації з наступною оцінкою ефектів таких мутацій щодо афінності зв'язування та інших функціональних властивостей. Одиночні мутації, які забезпечують поліпшені властивості, можна комбінувати для оцінки їхніх ефектів в комбінації один з одним.

Крім того, можлива комбінація обох вищезгаданих підходів. Після прищеплення СО конкретні ЕК можна піддавати зворотному мутагенезу додатково до введення амінокислотних замін у СОК. Дана методика описана в Уми єї а. (1999) 9. Мої. Віої. 294: 151-162.

Використовуючи ідеї даного винаходу, фахівець у даній галузі може застосовувати загальноприйняті методики, наприклад, сайт-спрямований мутагенез, для заміни амінокислот у послідовностях СОК та ЕК, розкритих у даному документі, та, таким чином, одержувати додаткові амінокислотні послідовності варіабельної області, одержані з послідовностей за даним винаходом. Майже всі амінокислоти, що зустрічаються в природі, можна вводити в конкретну ділянку заміни. Способи, розкриті в даному документі, можна потім застосовувати для скринінгу цих додаткових амінокислотних послідовностей варіабельної області з метою ідентифікації послідовностей, що мають указані функції іп мімо. Таким чином можна ідентифікувати додаткові послідовності, придатні для одержання гуманізованих антитіл та їх антигензв'язувальних частин відповідно до даного винаходу. Переважно, амінокислотна заміна в каркасних ділянках обмежується одним, двома, трьома, чотирма або п'ятьма положеннями в будь-якій одній або декількох із чотирьох ЕК легкого ланцюга та/або важкого ланцюга, розкритих у даному документі. Переважно, амінокислотна заміна в СОК обмежена одним, двома, трьома, чотирма або п'ятьма положеннями в будь-якій одній або декількох із трьох СОК легкого ланцюга та/або важкого ланцюга. Також можливі комбінації різних змін в цих ЕК та СОК, описаних вище.

Те, що функціональні властивості сполук-антитіл, одержаних в результаті введення амінокислотних модифікацій, що обговорюються вище, відповідають властивостям, які проявляють специфічні молекули, розкриті в даному документі, можна підтвердити за допомогою способів, розкритих у даному документі в розділі "Приклади".

Як описано вище, для подолання проблеми появи у пацієнтів відповіді антитіл людини на антитіло миші (НАМА), щодо антитіл миші проводять генетичні маніпуляції для поступової заміни їх мишачого складу амінокислотними залишками, які присутні в їхніх людських аналогах, за допомогою прищеплення їх областей (СОК), що визначають комплементарність, на каркасні ділянки варіабельної області легкого ланцюга (Мі) та варіабельної області важкого ланцюга (Мн) молекул імуноглобуліну людини, зберігаючи при цьому ті залишки в каркасних ділянках миші,

які вважаються необхідними для цілісності антигензв'язувальної ділянки. Однак ксеногенні СОК гуманізованих антитіл можуть спричиняти антиідиотипічну (анти-1І4) відповідь у пацієнтів.

Для зведення до мінімуму анти-і4 відповіді була розроблена процедура гуманізації ксеногенних антитіл за допомогою прищеплення на каркасні ділянки людини тільки найбільш важливих для взаємодії антитіло-ліганд залишків СОК, яку називали "прищепленням ОК", де тільки важливі залишки (ОК) СОК, що визначають специфічність, прищеплюють на каркасні ділянки людини. Ця процедура, описана в КазПптіїгі еї аі. (2005) Меїтоа» 36 (1):25-34, включає ідентифікацію БОК за допомогою бази даних тривимірних структур комплексів антиген-антитіло з відомою структурою або за допомогою мутаційного аналізу паратопу. Альтернативний підхід до гуманізації, який передбачає збереження більшої кількості залишків СОК, заснований на прищепленні "скорочених" СОК, відрізків із залишків СОК, які включають усі ЗОК. Казптігі еї аї. також розкриває процедуру оцінки реакційної здатності гуманізованих антитіл щодо зразків сироватки крові від пацієнтів, яким вводили антитіло миші.

Інша стратегія для конструювання варіантів антитіл людини з поліпшеними імуногенними властивостями розкрита в Нои еї аї. (2008) 9. Віоспет. 144 (1):115-120. Ці автори розробили гуманізоване антитіло із 48, моноклонального антитіла миші до СО34 людини, за допомогою прищеплення СОК із застосуванням молекулярної моделі 428, побудованої за допомогою гомологічного моделювання, яке реалізується за допомогою комп'ютера. Шляхом застосування цієї молекулярної моделі автори ідентифікували залишки ЕК, які є потенційно важливими для зв'язування антигену. Гуманізовану версію 428 одержали за допомогою перенесення цих ключових залишків ЕЕ миші на каркасну ділянку антитіла людини, яку вибрали на основі гомології з ЕК антитіла миші, разом із залишками СОК миші. Було показано, що одержане гуманізоване антитіло характеризується афінністю зв'язування антигену та специфічністю, подібними таким вихідного антитіла миші, що свідчить про те, що воно може бути альтернативою антитілам миші до СОЗ34, зазвичай застосовним в клінічній практиці.

Варіанти здійснення даного винаходу охоплюють антитіла, створені для попередження розпізнавання імунною системою людини, які містять СОК, розкриті в даному документі, в будь- якій комбінаційній формі, так що передбачувані тАб можуть містити набір СОЕК із одного тАБ миші, розкритого в даному документі, або легкі та важкі ланцюги, які містять набори СОР, що

Зо включають окремі СОК, одержані із двох або трьох розкритих тАБр миші. Такі тАб можна створювати за допомогою стандартних методик молекулярної біології та піддавати скринінгу щодо потрібних активностей за допомогою аналізів, описаних у даному документі. Таким чином, даним винаходом передбачають підхід "поєднання та комбінування" для створення нових тАб, що містять сукупність СОМ із розкритих тАб миші, для досягнення нових або поліпшених терапевтичних активностей.

Моноклональні антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, охоплені даним винаходом, які "конкурують" з молекулами, розкритими в даному документі, являють собою такі, що зв'язують СО47 людини у ділянці(-ках), яка(-ї) ідентична(-ї) або перекривається(-ються) з ділянкою(-ами), в якій(-их) зв'язуються молекули за даним винаходом. Конкурентні моноклональні антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти можна ідентифікувати, наприклад, за допомогою конкурентного аналізу антитіл. Наприклад, можна забезпечити зв'язування зразка очищеного або частково очищеного позаклітинного домену СЮО47 людини з твердою підкладкою. Потім додають сполуку-антитіло або її антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом та моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, які можливо можуть конкурувати з такою сполукою-антитілом за даним винаходом. Одна з двох цих молекул несе мітку. Якщо мічена сполука та сполука без мітки зв'язується з окремими та дискретними ділянками на СО47, тоді мічена сполука буде зв'язуватись на такому самому рівні, незалежно від того, чи присутня можлива конкурентна сполука або ні. Однак, якщо ділянки взаємодії ідентичні або перекриваються, тоді сполука без мітки буде конкурувати, та кількість міченої сполуки, що зв'язується з антигеном, буде зменшуватись. Якщо сполука без мітки присутня у надлишку, тоді мічена сполука буде зв'язуватись в незначній кількості або зовсім не буде зв'язуватись. Для цілей даного винаходу конкурентними моноклональними антитілами або їх антигензв'язьівальними фрагментами є такі, які зменшують зв'язування сполук-антитіл за даним винаходом з СО47 на приблизно 50 95, на приблизно 60 95, на приблизно 70 95, на приблизно 80 95, на приблизно 85 95, на приблизно 86 95, на приблизно 87 95, на приблизно 8895, на приблизно 89 95, на приблизно 90 95, на приблизно 91 95, на приблизно 92 95, на приблизно 93 95, на приблизно 94 95, на приблизно 95 95, на приблизно 96 95, на приблизно 97 95, на приблизно 9895 або на приблизно 9995. Подробиці процедур здійснення таких конкурентних аналізів добре відомі з рівня техніки та можуть бути знайдені, наприклад, в Нагіом/ 60 апа І апе (1988) Апііродієв, А І арогаюгу Мапиаї, Соїа бргіпа Нагбог І абогаїюгу Ргезз, Соїа бргіпд

Нагбог, М.М. Такі аналізи можна виконувати з можливістю кількісного визначення під час застосування очищених антитіл. Калібрувальну криву будують шляхом титрування одного антитіла проти самого себе, тобто одне й те саме антитіло застосовують і як мітку, і як конкурент. За допомогою титрування визначають здатність конкурентного моноклонального антитіла без мітки або його антигензв'язувального фрагмента інгібувати зв'язування міченої молекули з планшетом. Результати відкладають на графічному зображенні та порівнюють концентрації, необхідні для досягнення потрібного ступеня інгібування зв'язування.

Те, чи характеризуються тАр або їх антигензв'язувальні фрагменти, які конкурують зі сполуками-антитілами за даним винаходом в таких конкурентних аналізах, функціональними властивостями, аналогічними або подібними таким у сполук-антитіл за даним винаходом, можна визначити за допомогою цих способів у поєднанні зі способами, описаними в прикладах 3-5 нижче. У різних варіантах здійснення конкурентні антитіла для застосування в терапевтичних способах, охоплених в даному документі, характеризуються біологічними активностями, описаними в даному документі, в діапазоні від приблизно 50 95 до приблизно 100 95 або приблизно 125 95 або більше порівняно з активностями сполук-антитіл, розкритих у даному документі. У деяких варіантах здійснення конкурентні антитіла характеризуються приблизно 50 95, приблизно 60 95, приблизно 70 95, приблизно 80 95, приблизно 85 95, приблизно 90 95, приблизно 91 95, приблизно 92 95, приблизно 93 95, приблизно 94 95, приблизно 95 95, приблизно 96 95, приблизно 97 95, приблизно 98 95, приблизно 99 95 або ідентичною біологічною активністю порівняно з активністю сполук-антитіл, розкритих у даному документі, яку визначають за допомогою способів, розкритих у представленому нижче розділі "Приклади". тАБб або їх антигензв'язувальні фрагменти або конкурентні антитіла, застосовні в композиціях і способах, можуть належати будь-якому з описаних у даному документі ізотипів.

Крім того, будь-який з цих ізотипів може містити додаткові амінокислотні модифікації, як вказано нижче.

Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент або конкурентне антитіло, описані в даному документі, можуть належати ізотипу 91 людини.

Константну область ЇД01 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для

Зо зміни періоду напівжиття антитіла. Період напівжиття антитіла значно регулюється Ес- залежними взаємодіями з неонатальним Ес-рецептором (Коорепіап апа АїЇїКезп, 2007).

Константну область ЇД01 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі можна модифікувати для збільшення періоду напівжиття, у тому числі без обмеження для амінокислотних модифікацій М434А, Т307А/ЕЗВОА/М434А (Реїкома єї а. 2006, Мейпа еї аї.,, 2009); М252Уу/52541/1256Е (РраігАсдца єї аї., 2006);

Т2500/М428І (Ніпоп еї а!ї., 2006) і М4281 /М4345 (7аіеузкКу єї аї., 2010).

На противагу збільшенню періоду напівжиття бувають деякі обставини, коли необхідне зменшення періоду напівжиття, наприклад, для зниження ймовірності виникнення побічних явищ, пов'язаних з антитілами з високою антитілозалежною клітинною цитотоксичністю (ОСС) і комплементзалежною цитотоксичністю (СОС) (Ргевіа 2008). Константну область ЇДО1 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для зменшення періоду напівжиття та/або зменшення ендогенного ДС, у тому числі без обмеження для амінокислотних модифікацій

І25ЗА (РеїКома єї аї., 2006); Р2Б57ИМ4ЗзанН, 0376М/М434Н (Оанца-Маппап еї аї., 2007) і мМ252У/52541/1 256Е/На4ЗЗК/М4ЗА (Массаго еї аї., 2005).

Константну область ЇД01 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для збільшення або зменшення ефекторних функцій антитіла. Ці ефекторні функції антитіла включають без обмеження антитілозалежну клітинну цитотоксичність (АОСС), комплементзалежну цитотоксичність (СОС), антитілозалежний клітинний фагоцитоз (АОСР), зв'язування з С14 та змінене зв'язування з Ес-рецепторами.

Константну область Ї901 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для збільшення ефекторної функції антитіла, у тому числі без обмеження для амінокислотних модифікацій 5298А/ЕЗЗЗА/КЗ334 (ЗПіеїд5 еї а!., 2001); 52390/332Е та 52390/АЗЗ0І /332Е (І агаг еї аІ., 2006); Е2341 /К292Р/УЗ300І,, Е2341І /К292Р/УЗ00І /Р3931І.. і Е243І /К292Р/УЗО00І Л/З3051/Р 3961. (Зіемеппадеп еї аї., 2007); 6236А, 5236А/52390/1332Е та С236А/52390/АЗЗОІ /332Е (Кіспагаз еї аі, 2008); КЗ26А/ЕЗЗЗА, КЗ26А/ЕЗ335 і КЗ326УМ/ЕЗ3335 (Ідибзодіе еї аїЇ.,, 2001); 5267Е та 5267Е//328Е (Зтій ей а. 2012); Н2б8г/5324Т1, 5267Е/Н2б8Е, 5267Е/5234Т1 та

З267Е/Н2б68Р/53241 (Мооге вї а!., 2010); 5298С2с/1299А (ЗагіпекКу еї аї., 2008); ЕЗВ2М/М4281І (дипд еїа!., 2010).

Константну область ЇД01 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для зменшення ефекторної функції антитіла, у тому числі без обмеження для амінокислотних модифікацій М297А та М2970 (ВОої! еї а!., 1993, УмаїКег еї аі., 1989); І 234А/Л 235А (Хи еї аї., 2000);

К214Т/Е233Р/І 234У/І 235А/делеція. (з236/А3270/РЗЗ1А/Ю356Е/ 358М (ОСПпемаєг еї аї., 2008); б2265/02295/Е2З3ЗР/Л 234М/Л 235А (МесЕагспет еї а!., 2007); 5267Е/ 328Е (Спи єї а!., 2008).

Константну область ЇД01 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для зменшення ефекторної функції антитіла, у тому числі без обмеження для амінокислотних модифікацій М234АК5237А (Соїе еї аї., 1999); Е2330, 52370, Р2380, Н2680, Н2г680, Р2716,

МЗ309І, АЗЗО5, АЗЗОВ, РЗЗІ5, На2гб8О/АЗ305/У3091/РЗЗ15, Н2гб68р/АЗ305/УЗОЗІ /Р3315,

Н2г680/АЗЗОВ/УЗО9І /РЗ3315, нг680/АЗЗОВ/УЗОЗІ /Р3315, Ег2330/АЗЗОВ, Е2г330/АЗЗО05,

Е2330/Р271С/АЗЗОВ, Е2330/Р271Сс/А3305, Сс12370/Н2680/Р2710, С2370/Н2680/Р2710, 12370

Р2г71с/АЗЗОВ, 2370/ Р271с1/АЗ305, Е2г3З3р/Н2680/Р271С/АЗЗОВ, ЕгЗ3Зр/Н2гбВО/Р271С/АЗЗОВ,

Егззр/Нн2гбввр/Р27101/АЗ3305, Ег3з3з0/Н2гбВО/Р27101/АЗ3305, с2г37р/н2г680р/Р271С/АЗЗОВ, сегз37р/н2г680/Р271С/АЗЗОВ, са2г37р/н2г68р/Р271С,/АЗ305, с2гз7р/нагабввсуР2г71а/АЗЗ3О05,

Е2г3З30/с2370Б/Н2680/Р271С/АЗЗОВ, Ег3з3зр/с2370/Н2г680/Р271Сс1/АЗЗОВ,

Егззр/с2370/Н2г68р/Р271С0/А3305,. Ег3Зр/с2370О/Н268О/Р271Сс/А3305,. Р2З80О/Е23З0/АЗЗОВ,

Р2З80О/Е2З3З0/АЗЗ305, Р2З80О/Ег330/Р271С/АЗЗОВ, Р2З80/Е2330/Р271С/АЗ305,

Р2гЗ80р/с2370/Н2гб68р/Р2ТО, Р2гЗВО/с2370/Н2гбвО/Р2ТО, Р2З80/с52370/ Р271СО1/АЗЗОВ,

Р2гЗ380/с22370/ Р2г71Сс/АЗ3305, Р2гЗ380/Ег330/Н2г680/Р271С0/АЗЗОВ,

Р2З80/Е2330Б/Н2г68О/Р271С/АЗЗОВ, Р2З80О/Е2гЗ3З0/Н2г680/Р271С0/А3305,

Р2З80/Е2330Б/Н2г68О/Р271С1/АЗ305, Р2гЗ380/с2370/Н2680/Р271С/АЗЗОВ,

Р2гЗз80б/с2370/Н2680/Р271Сс/АЗЗОВ, Р2гЗ80/с2370/Н2680/Р271С/АЗЗ305,

Р2гЗ80б/с2370/Н2680/Р271С0/АЗЗ05, Р2З80О/Ег330/с2370/Н2680/Р271С/АЗЗОВ,

Р2З80О/Е2330/с237О/Н2680/Р271С/АЗЗОВ, Р2З80О/Ег330/с237О/Н2680/Р2710/АЗ3305,

Р2З80/Е2г330Б/с2370/Н2680/Р271С01/А3305 (Ап еї аї., 2009, Мітоїо, 2013).

Зо Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент або конкурентне антитіло, описані в даному документі, можуть належати ізотипу ЇД52 людини.

Константну область 9052 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для збільшення або зменшення ефекторних функцій антитіла. Ці ефекторні функції антитіла включають без обмеження антитілозалежну клітинну цитотоксичність (АОСС), комплементзалежну цитотоксичність (СОС), антитілозалежний клітинний фагоцитоз (АОСР) і зв'язування з С14 та змінене зв'язування з Ес-рецепторами.

Константну область Їд9052 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для збільшення ефекторної функції антитіла, у тому числі без обмеження для амінокислотної модифікації КЗ2бА/Е3335 (Ідизодіє еї аї., 2001).

Константну область (9052 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для зменшення ефекторної функції антитіла, у тому числі без обмеження для амінокислотних модифікацій М234А/с237А (Соїе еї аї., 1999); 2330, 2370, Р2г380, Н2гб680, Н2г680, Р271О,

Н2г680/АЗЗОВ/УЗО9І /РЗ3315, нг680/АЗЗОВ/УЗОЗІ /Р3315, Е2330/АЗЗОВ, Ег2г330/АЗЗО05,

Ег330Б/Р271Сс1/АЗЗОВ, Ег33ЗО/Р271Сс1/АЗ3305, С2370/Н2г680/Р2ТОа, 1237 О/Н2бВСУ/Р2ТО, 12370

Егззр/Нн2гбввр/Р27101/АЗ3305, Ег3з3з0/Н2гбВО/Р27101/АЗ3305, се2г37р/н2г68р/Р271С0/АЗЗОВ, сегз37р/н2г680/Р271С/АЗЗОВ, са2гз37р/н2г680р/Р271С,/АЗЗ305, с2г37р/нН2г6вО/Р271С,1/АЗ3305,

Р2З80О/Е2З3З0/АЗЗ305, Р2З80О/Ег330/Р271С/АЗЗОВ, Р2З80/Ег33р/Р271Сс/АЗЗ305,

Р2гЗ8р/с2370/Н2гб6вр/Р2710, Р2гЗВ8О/с2370/Н26вО/Р2ТО, Р2З80/32370/ Р271С01/АЗЗОВ,

Р2З80/Е2330Б/Н268О/Р271С/АЗ305, Р2гЗ380/с2370/Н2680/Р271 С/АЗЗОВ,

Р2гЗ80/с2370/Н2680/Р271Сс/АЗЗОВ, Р2гЗ380/с2370/Н2680/Р2710/АЗ3305, (510) Р2гЗ80б/с2370/Н2680/Р271С0/АЗЗ05, Р2З80О/Ег330/с2370/Н2680/Р271С/АЗЗОВ,

Р2З380/Е2г3302/с2370/Н2680/Р271С01/АЗ3305 (Ап вї аї., 2009, Мітоїо, 2013).

Ес-ділянку (952 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних в даному документі, можна модифікувати для зміни ізоформи та/або агоністичної активності, у тому числі без обмеження для амінокислотних модифікацій С1275 (Сні-домену), С2325, С2335, С2325/С02335, Сб23651 02395 (УУпйе еї аї., 2015, Где єї а!., 2010).

Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент або конкурентне антитіло, описані в даному документі, можуть належати ізотипу (ДЗ людини.

Константна область 903 людини ов моноклональному антитілі або його антигензв'язувальному фрагменті де вказану константну область /ідсЗ3 людини в моноклональному антитілі або його антигензв'язувальному фрагменті можна модифікувати за однією або декількома амінокислотами для збільшення періоду напівжиття, антитілозалежної клітинної цитотоксичності (АЮСС), комплементзалежної цитотоксичності (СОС) або апоптотичної активності.

Константна область дСЗ3З людини ов моноклональному антитілі або його антигензв'язувальному фрагменті де вказану константну область /ідсЗ3 людини в моноклональному антитілі або його антигензв'язувальному фрагменті можна модифікувати за амінокислотою К435Н для збільшення періоду напівжиття антитіла.

Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент або конкурентне антитіло, описані в даному документі, можуть належати ізотипу ЇдД54 людини.

Константну область Їд054 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для зменшення ефекторних функцій антитіла. Ці ефекторні функції антитіла включають без обмеження антитілозалежну клітинну цитотоксичність (АЮСС) та антитілозалежний клітинний фагоцитоз (АОСР).

Константну область Їд)54 людини в моноклональному антитілі, його антигензв'язувальному фрагменті або конкурентному антитілі, описаних у даному документі, можна модифікувати для запобігання обміну Габ-плечима та/або для зменшення ефекторної функції антитіла, у тому числі без обмеження для амінокислотних модифікацій Е234А/ 235А (Аїеодге еї аї!., 1994); 5228Р,

Г235Е та 5228Р/Л 235Е (Кеаду єї а1., 2000).

Використовуваний у даному документі термін "пухлина" стосується всіх видів росту та проліферації неопластичних клітин, чи то злоякісних або доброякісних, та всіх видів передракових та ракових клітин і тканин.

Використовувані в даному документі терміни "рак", "раковий" та "пухлина" не є взаємовиключними.

Терміни "рак" та "раковий" означають або описують фізіологічний стан у ссавців, який зазвичай характеризується аберантними ростом/проліферацією клітин. Приклади типів раку включають без обмеження карциному, лімфому (тобто лімфому Ходжкіна та неходжкінську лімфому), бластому, саркому та лейкоз. Більш конкретні приклади таких типів раку включають плоскоклітинний рак, дрібноклітинний рак легені, недрібноклітинний рак легені, аденокарциному легені, плоскоклітинну карциному легені, рак черевної порожнини, гепатоцелюлярний рак, рак шлунково-кишкового тракту, рак підшлункової залози, гліому, рак шийки матки, рак яєчників, рак печінки, рак сечового міхура, гепатому, рак молочної залози, рак товстого кишечника, колоректальний рак, карциному ендометрія або матки, карциному слинної залози, рак нирки, рак печінки, рак передміхурової залози, рак вульви, рак щитоподібної залози, карциному печінки, лейкоз та інші лімфопроліферативні порушення, а також різні типи раку голови та шиї.

Використовуваний у даному документі термін "чутливий рак" стосується раку, клітини якого експресують СО47 та які чутливі до лікування антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом або конкурентним антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом за даним винаходом.

Використовуваний у даному документі термін "автоїмунне захворювання" стосується ситуації, коли імунна система організму обертається проти нього самого та помилково атакує здорові клітини.

Використовуваний у даному документі термін "запальне захворювання" стосується захворювання, що характеризується запаленням, яке являє собою фундаментальний патологічний процес, що складається з динамічного комплексу гістологічно видимих цитологічних змін, клітинної інфільтрації та вивільнення медіаторів, яке зустрічається в уражених кровоносних судинах та прилеглих тканинах у відповідь на пошкодження або бо аномальну стимуляцію, спричинену фізичним, хімічним або біологічним засобом, у тому числі локальні реакції та виникаючі в результаті морфологічні зміни; при цьому порушення або видалення шкідливого матеріалу та відповідей призводять до відновлення та лікування.

Використовуваний у даному документі термін "автозапальне захворювання" стосується захворювання, яке виникає, коли вроджена імунна система спричиняє запалення через невідомі причини.

Використовуваний у даному документі термін "ішемія" стосується судинного явища, за якого зниження кровообігу органа, тканини або частини організму спричинено, наприклад, констрикцією або обструкцією однієї або декількох кровоносних судин. Ішемія іноді виникає в результаті вазоконстрикції, або тромбозу, або емболії. Ішемія може призвести до безпосереднього ішемічного пошкодження, пошкодження тканини через загибель клітин, спричинену зниженим постачанням кисню. Ішемія може мати гостру форму, яка виникає під час хірургічного втручання або в результаті травмування тканини, що трапляється під час нещасних випадків, тілесних поранень та у випадку воєнних дій або після забору органів, призначених, наприклад, для наступної трансплантації. Вона також може мати підгостру форму, яка виявляється у разі атеросклеротичного захворювання периферичних судин, за якого поступове звуження кровоносних судин призводить до недостатнього кровотока в тканини та органи. Коли тканина піддається ішемії, ініціюється послідовність хімічних реакцій, які, зрештою, можуть призвести до порушення клітинної функції та некрозу. Якщо кінцевим результатом в зоні ішемії є відновлення кровотока, тоді настає друга серія небезпечних подій, які забезпечують додаткове пошкодження. Таким чином, у всіх випадках, коли відбувається тимчасове зменшення або переривання кровотока у суб'єкта, тоді пошкодження, що виникає в результаті, включає два компоненти - безпосереднє пошкодження, яке з'являється під час періоду ішемії, та наступне опосередковане або реперфузійне пошкодження. "Ішемічний інсульт" може бути спричинений декількома різними видами захворювань.

Найбільш розповсюдженою проблемою є звуження артерій в області голови або шиї. Це частіше за все спричинено атеросклерозом або поступовим відкладенням холестерину. Якщо артерії стають занадто вузькими, тоді клітини крові можуть накопичуватись в них та формувати кров'яні згустки (тромби). Ці кров'яні згустки можуть блокувати артерію в місці, де вони утворюються (тромбоз), або можуть переміщатися та затримуватися в артеріях, які розташовані

Зо ближче до головного мозку (емболія). Мозковий інсульт може виникати у випадку, коли антисклеротична бляшка частково відокремлюється від стінки судини та заважає плину крові через кровоносну судину.

Використовуваний у даному документі термін "реперфузія" стосується відновлення кровотока в тканині, яка ішемізована внаслідок зниження кровотока. Реперфузія являє собою процедуру лікування інфаркту або іншої ішемії шляхом забезпечення можливості відновлення життєздатної ішемізованої тканини, таким чином обмежуючи подальший некроз. Однак реперфузія сама по собі може стати причиною додаткового пошкодження ішемізованої тканини, що спричиняє виникнення реперфузійного пошкодження. Крім безпосереднього пошкодження, яке відбувається під час порушення кровотока, "Іішемічне/(реперфузійне пошкодження" включає пошкодження тканини, яке відбувається після відновлення кровотока. Відповідно до сучасного розуміння більшу частину даного пошкодження спричиняють хімічні продукти, вільні радикали та активні біологічні речовини, які вивільняються ішемізованими тканинами. "Донор, попередник оксиду азоту (МО) або місцевий засіб, що утворює оксид азоту" стосуються сполуки або засобу, який або доставляє МО, або може перетворюватись в МО за допомогою ферментативних або неферментативних процесів. Приклади включають без обмеження газоподібний МО, ізосорбіду динітрит, нітрит, нітропрусид, нітрогліцерин, 3- морфоліносиднонимін (5ІМ-1), 5-нітрозо-М-ацетилпеніциламін (5МАР), диетилентриамін/юмо (РЕТА/МО), 5-нітрозотіоли, Відіїє та аргінін. "Розчинна гуанілілциклаза (5032) є рецептором оксиду азоту в гладенькій мускулатурі судин. У серцево-судинній системі оксид азоту утворюється ендогенно за участю ендотеліальної синтази оксиду азоту з І -аргініну та активує розчинну гуанілілциклазу в сусідніх клітинах гладенької мускулатури судин для підвищення рівнів СЗМР, індукуючи релаксацію судин. Оксид азоту зв'язується з гемовим фрагментом, який в нормі є відновленим, у розчинній гуанілілциклазі та підвищує утворення сСОМР із СТР, що призводить до зниження рівня внутрішньоклітинного кальцію, вазодилатації та розвитку протизапальних ефектів. Окиснення заліза в гемі на 505С знижує сприйнятливість ферменту до оксиду азоту та стимулює вазоконстрикцію. Таким чином, шлях оксид азоту-500-СОМР відіграє важливу роль за серцево- судинних захворювань. Було показано, що азотовмісні сполуки, такі як азид натрію, нітрит натрію, гідроксиламін, нітрогліцерин та нітропрусид натрію, стимулюють 50С, що призводить до бо підвищення рівня СОМР та релаксації судин. На відміну від стимуляторів 50, які зв'язуються з відновленою 55С, активатори 50С активують окиснений або дефіцитний за гемом фермент 5ОС, який не чутливий до дії оксиду азоту, тобто вони стимулюють 55С незалежно від стану окиснення-відновлення. У той час як стимулятори 509С можуть посилювати чутливість відновленої 505 до дії оксиду азоту, активатори 50С можуть підвищувати активність ферменту 50С, навіть якщо фермент знаходиться в окисненому стані та, відповідно, менш чутливий або не чутливий до дії оксиду азоту. Таким чином, активатори 505С не являють собою сполуки на основі оксиду азоту. Слід зазначити огляди Мо55атап еї аї. (2012) Стйіса! Саге Везєагсі апа

Ргасіїсе, том 2012, стаття 290805 та Оегрузпіге апа Мапейна (2012) Апп. Нем. Віоспет. 81:533- 559. "Засіб, який активує розчинну гуанілілциклазу" стосується, наприклад, органічних нітратів (Ані еї а. (2002) 9. Віої. Спет. 277:18253-18256); протопорфірину ІХ (Ідпа!то еї аї. (1982) Ргос.

Май. Асад. сі. ОБА 79:2870-2873); МО-1 (Ко еї аї. (1994) Віоса 84:4226-4233); ВАМ 41-2272 та

ВАМ 41-8543 (Сіазси єї а). (2001 Маїште 410 (6825): 212-553, СМЕ-1571 та А-350619 (огляд наведено в Емдепом еї аї. (2006) Маї. Нем. Огид. Оівсом. 5:755-768); ВАМ 58-2667 (Сіпасіднає

Егеу еї аї. (2008) Чоштаї ої Сіїпіса! Рнаптасоіоду 48 (12): 1400-10); ВАМ 63-2521 (Віосідцаї;

МіШепадог сеї а. (2009) Спеттеаснпет 4 (5): 853-65). Додаткові активатори розчинної гуанілілциклази розкриті в Єіавзсп еї аї. (2011) Сігсціайоп 123:2263-2273; Оетгбузніге апа Мапейна (2012) Апп. Рем. Віоспет. 81:533-559 та Моззатап еї аї. (2012) Стйіса! Саге Везеєагсі апа

Ргасіїсе, том 2012, ІО статті 290805, сторінки 1-12.

Рівень саМР також можна підвищувати за допомогою пригнічення розпаду із застосуванням інгібіторів фосфодіестерази. Приклади "засобу, який інгібує фосфодіестерази циклічних нуклеотидів" включають тадалафіл, варденафіл, уденафіл та силденафіл, аванафіл.

Використовувані в даному документі терміни "здійснення лікування", або "лікувати", або "лікування" означає уповільнення, переривання, затримку, контроль, зупинку, зменшення або обернення прогресування або тяжкості ознаки, симптому, порушення, стану або захворювання, але не обов'язково включає повне усунення всіх пов'язаних із захворюванням ознак, симптомів, станів або порушень. Термін "здійснення лікування" тощо стосується терапевтичного втручання, яке зменшує ступінь вираження ознаки або симптому захворювання або патологічного стану після того, як він почав розвиватись.

Зо Використовуваний у даному документі термін "ефективна кількість" стосується кількості або дози сполуки-антитіла за даним винаходом, яка під час одноразового або багаторазового введення пацієнту або в орган забезпечує необхідне лікування або попередження.

Точна ефективна кількість для будь-якого конкретного суб'єкта буде залежати від його метричних характеристик та стану здоров'я, характеру та ступеню вираження його стану, а також терапевтичних засобів або комбінації терапевтичних засобів, вибраних для введення.

Ефективна кількість для даного пацієнта визначається за допомогою звичайних експериментів та знаходиться на розсуді клініциста. Терапевтично ефективні кількості сполук-антитіл за даним винаходом можуть також включати кількість у діапазоні від приблизно 0,1 мг/кг до приблизно 150 мг/кг, від приблизно 0,1 мг/кг до приблизно 100 мг/кг, від приблизно 0,1 мг/кг до приблизно 50 мг/кг або від приблизно 0,05 мг/кг до приблизно 10 мг/кг на одну дозу, яку водять у забраний орган або пацієнту. Відомі фармацевтичні препарати на основі антитіл слугують керівництвом щодо цього. Наприклад, Негсеріїп "М вводять шляхом внутрішньовенної інфузії розчину в дозі 21 мг/мл, при цьому початкова навантажувальна доза становить 4 мг/кг ваги тіла та тижнева підтримувальна доза становить 2 мг/кг ваги тіла; наприклад, Кйихап'м вводять щотижнево в дозі 375 мг/м.

Терапевтично ефективну кількість для будь-якого окремого пацієнта може визначити фахівець у галузі охорони здоров'я шляхом відслідковування ефекту сполук-антитіл. щодо регресії пухлини, циркулюючих пухлинних клітин, пухлинних стовбурових клітин або протипухлинних відповідей. Аналіз даних, одержаних цими способами, дозволяє модифікувати схему лікування під час терапії, так щоб вводити оптимальні кількості сполук-антитіл за даним винаходом, незалежно від того, чи використовуються вони окремо, або в комбінації один з одним, або в комбінації з іншим терапевтичним засобом, або і з тим, і з іншим, і таким чином можна також визначити лікування. Таким чином, схеми введення дози/лікування можна модифікувати протягом курсу терапії так, щоб вводити найменші кількості сполук-антитіл, застосовуваних окремо або в комбінації, які проявляють придатну ефективність, і так, щоб введення таких антитіл продовжували лише доти, поки це необхідно для успішного лікування пацієнта. Відомі фармацевтичні препарати на основі антитіл слугують керівництвом щодо частоти введення, наприклад, чи варто доставляти фармацевтичні препарати щоденно, щотижнево, щомісячно тощо. Частота та дозування також можуть залежати від тяжкості бо симптомів.

У деяких варіантах здійснення сполуки-антитіла за даним винаходом можна застосовувати як лікарські препарати, призначені для застосування в медицині людини та ветеринарії, які вводять різними шляхами, у тому числі без обмеження пероральним, внутрішньовенним, внутрішньом'язовим, внутрішньоартеріальним, інтрамедулярним, внутрішньочеревним, інтратекальним, інтравентрикулярним, трансдермальним, крізьшкірним, місцевим, підшкірним, внутрішньопухлинним, інтраназальним, ентеральним, сублінгвальним, внутрішньовагінальним, інтравезикулярним або ректальним шляхами. Композиції також можна вводити безпосередньо в місце ураження, таке як пухлина. Лікування дозами може відбуватись за схемою одноразового застосування дози або за схемою багаторазового застосування дози. Безголкові шприці також можна застосовувати для введення фармацевтичних композицій. Зазвичай терапевтичні композиції можна одержати або у вигляді ін'єкційних препаратів, або у вигляді рідких розчинів або суспензій. Також можна одержати тверді форми, придатні для розчинення або суспендування в рідких середовищах-носіях перед ін'єкцією. Ветеринарні застосування включають лікування тварин-компаньйонів/домашніх тварин, таких як коти та собаки; робочих тварин, таких як собаки-поводирі або собаки-помічники та коні; тварин, призначених для спортивних змагань, таких як коні та собаки; тварин зоопарку, таких як примати, тварини сімейства котячих, такі як леви та тигри, ведмеді тощо; та інших цінних тварин, яких тримають у неволі.

Такі фармацевтичні композиції можна одержувати за допомогою способів, добре відомих із рівня техніки, див., наприклад, Кептіпдіоп: Те бсіепсе апа Ргасіїсе ої Рпагтасу, 21:51 Байіоп (2005), Іірріпсой УмМміПате 8 УМіІКіп5, Рпйадеї!рпіа, РА, та містять одну або декілька сполук- антитіл, розкритих у даному документі, та фармацевтично або ветеринарно придатний, наприклад фізіологічно придатний, носій, розріджувач або наповнювач.

У даному винаході описані тАб до СО47 з функціональними профілями, що відрізняються.

Ці антитіла характеризуюся комбінаціями властивостей, що відрізняються, вибраними з наступних: 1) проявляють перехресну реактивність з гомологами СО47 одного або декількох видів; 2) блокують взаємодію між СО47 та його лігандом ЗІКР;а; 3) посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, 4) індукують загибель чутливих пухлинних клітин людини; 5) не індукують клітинну загибель пухлинних клітин людини; б) характеризуються зниженим

Зо зв'зуванням з еритроцитами людини (ПКВС); 7) характеризуються відсутністю зв'язування з

ЯКВС, яке піддається виявленню; 8) спричиняють знижену аглютинацію ПКВС; 9) не спричиняють аглютинацію ПРЕВС, що піддається виявленню; 10) обертають інгібування шляху за участі оксиду азоту (МО) під дією Т5РІ1 та/або 11) не обертають інгібування шляху за участі МО під дією ТОРІ.

Антитіла до СО47 та їх антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом характеризуються комбінаціями властивостей, відмінними від таких у антитіл до СО47 з відомого рівня техніки. Ці властивості та характеристики далі будуть описані більш детально.

Зв'язування з СО47 різних видів

Антитіла до СО4А7 та їх антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом зв'язують СО47 людини. У конкретних варіантах здійснення антитіла до СО47 проявляють перехресну реактивність з гомологами СО47 одного або декількох видів, наприклад, гомологами СО47, що походять від приматів, відмінних від людини. У конкретних варіантах здійснення антитіла до

С0ра47 та їх антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом зв'язуються з СО47 людини та з

СО47, що походять від приматів, відмінних від людини, мишей, щурів та/або кроликів.

Перехресна реактивність з гомологами інших видів може бути особливо корисною під час розроблення та тестування терапевтичних антитіл. Наприклад, доклінічне токсикологічне тестування терапевтичних антитіл часто проводять на видах приматів, відмінних від людини, включаючи без обмеження яванського макака, зелену мавпу, макака-резуса та саймірі. Через це перехресна реактивність з гомологами цих видів може бути особливо придатною для розробки антитіл як клінічних кандидатів.

Блокування взаємодії між С047 та 5ІКРа та стимуляція фагоцитозу

СО47, також відомий як асоційований з інтегринами білок (АР), являє собою рецептор клітинної поверхні розміром 50 кДа, що складається із позаклітинного М-кінцевого домену ІДдМ, трансмембранного домену, який пронизує мембрану п'ять разів, та короткого С-кінцевого внутрішньоклітинного хвоста, що є результатом альтернативного сплайсингу.

Два ліганди зв'язуються з СО47: сигнальний регуляторний білок альфа (5ІКРа) та тромбоспондин-ї (Т5РІ1). ТР присутній у плазмі крові та синтезується багатьма клітинами, в тому числі тромбоцитами. ЗІК;а експресується на гемопоетичних клітинах, які включають макрофаги та дендритні клітини. бо Коли 5ІКРа на фагоциті зв'язується з СО47 на клітині-мішені, ця взаємодія попереджує фагоцитоз клітини-мішені. Взаємодія СО47 та 5БІК;оО ефективно надсилає сигнал "не їж мене" фагоциту (ОіІдепбого еї аї. Зсіепсе 288: 2051-2054, 2000). Блокування взаємодії 5ІКРа та СО47 за допомогою тАбр до СО47 в терапевтичному контексті може забезпечити ефективне протиракове лікування за рахунок стимуляції поглинання та виведення ракових клітин імунною системою хазяїна. Таким чином, важливою функціональною характеристикою деяких тАб до сра47 є здатність блокувати взаємодію СО47 та 5ІКР;а, що призводить до фагоцитозу СО47- експресуючих пухлинних клітин макрофагами. Було показано, що декілька тАб до СО047 блокують взаємодію СО47 та ЗІКРа, у тому числі В6НІ2 (Зейен еї а. Віоса 94:3633-3643,1999;

І аюиг евї аї. У. Іттипої. 167: 2547-2554, 2001; Зиргатапіап еї аї. Віоса 107: 2548-2556, 2006; І їм еї а. У Віої. Снет. 277: 10028-10036, 2002; Вебгез вї аї. у. СеїІшаг Рнузіої. 205: 182-193, 2005),

ВВІС126 (Мегпоп-М/іїзоп єї аї. Єик ) Іттипої. 30: 2130-2137, 2000; 5йибгатапіап єї аї. Віоса 107: 2548-2556, 2006), СС2С6 (Зейен еї аї!. Віоса 94:3633-3643,1999) та 1Е7 (Вебгез вї аї. У. СеїПІшіаг

Ріузіої. 205: 182-193, 2005). Також було показано, що ВбНІ2 та ВАІС126 спричиняють фагоцитоз пухлинних клітин людини під дією макрофагів людини та миші (М/Ппдпат еї а!. Ргос

Маї! Асай бсі ОБА 109 (17):6662-6667, 2012; Снао вї аї. Сеї!! 142:699-713, 2012; ЕР 2242512 ВІ).

Інші існуючі тАб до СО47, такі як 203, не блокують взаємодію СО47 та 5ІВРа (беїйнеп еї аї.

Віоса 94:3633-3643, 1999; І агоиг вї аї. У. Іттипої. 167: 2547-2554, 2001; Вебгез вї аї. У. СеїПшіаг

Рпузіої. 205: 182-193, 2005) та не спричиняють фагоцитоз пухлинних клітин (УмПШіпдпат еї аї.

Ргос Маї! Асай бсі ОБА 109 (17):6662-6667, 2012; Снао евї а. Сеї! 142:699-713, 2012; ЕР 2242512

В1).

Використовуваний у даному документі термін "блокує зв'язування 5ІВРа з СО47 людини" стосується зниження зв'язування 5ІВРа-Ес з СО47 на клітинах Ууиткаї на більш ніж 50 9» під дією тАБ до СО47. тАБ до СО47 за даним винаходом, описані в даному документі, блокують взаємодію СО47 і

ЗІКРа та посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини. "Фагоцитоз" ракових клітин стосується поглинання та розщеплення таких клітин макрофагами та остаточного розщеплення або порушення цих ракових клітин з вивільненням розщеплених або порушених компонентів клітин позаклітинно або внутрішньоклітинно для додаткової обробки. Моноклональні антитіла до СО47, які блокують зв'язування 5ІКРа з СО47,

Зо посилюють фагоцитоз ракових клітин макрофагами. В іншому випадку зв'язування 5ІКРа з ср47 на ракових клітинах дозволило б цим клітинам уникнути фагоцитозу макрофагами. Ракові клітини можуть бути життєздатними або живими раковими клітинами.

Індукування загибелі пухлинних клітин

Деякі розчинні тАБб до СО047 індукують програму загибелі клітин під час зв'язування з СО47 на пухлинних клітинах, що призводить до падіння мітохондріального мембранного потенціалу, втрати здатності виробляти АТР, підвищеної експресії на поверхні клітин фосфатидилсерину (виявляють за збільшенням ступеня забарвлювання анексином У) та загибелі клітин без участі каспаз або фрагментації ДНК. Такі розчинні тАб до СО47 характеризуються потенціалом для лікування різних солідних та гематологічних типів раку. Деякі розчинні тАб до СО47, які, як було показано, індукують загибель пухлинних клітин, включають МАВІ -1, МАВІ -2 та їх фрагменти (патент США Мо 8101719; Опо еї аї. Опсої! Вер. 17: 1189-94, 2007; Кікисні єї а). Віоснет Віорпуз

Вез. боттип. 315: 912-8, 2004), Ааг2 (Рецегзеп вї аї. У. Іттипо. 166: 4931-4942, 2001; І ату єї а. У. Віої. Спет. 278: 23915-23921, 2003) та 1Е7 (Маппа еї аї. 9. Іттипої. 170: 3544-3553, 2003;

Маппа єї а. Сапсег Везеєагси, 64: 1026-1036, 2004). Деякі з описаних в даному документі тАб до

Ср47 за даним винаходом індукують клітинну загибель пухлинних клітин людини.

Терміни "індукування загибелі клітин" або "знищує" тощо застосовуються в даному документі взаємозамінно для позначення того, що додавання сполуки-антитіла за даним винаходом до ракових клітин, які культивують, спричиняє прояв даними клітинами характеристик, що підлягають кількісному визначенню, асоційованих із загибеллю клітин, у тому числі будь-яку одну або декілька з наступних. 1. Підвищене зв'язування анексину М (у присутності іонів кальцію) з пухлинними клітинами, що виявляють за допомогою проточної цитометрії або конфокальної флуоресцентної мікроскопії. 2. Підвищене поглинання пухлинними клітинами флуоресцентної сполуки пропідіум йодиду (що аналізують за допомогою проточної цитометрії), або 7-аміноактиноміцину Ю (7-ААЮО, що аналізують за допомогою проточної цитометрії), або трипанового синього (що оцінюють за допомогою світлової мікроскопії).

З. Втрата функції мітохондрій та мембранного потенціалу в пухлинних клітинах, що аналізують за допомогою одного з декількох доступних засобів вимірювань (потенціометричних флуоресцентних барвників, таких як БіО-С6б або 9С1, або аналізів з використанням формазану, таких як МТТ або М/57Т-1).

Індукція клітинної загибелі стосується здатності певних розчинних антитіл до СО47, антитіл миші, химерних антитіл, гуманізованих антитіл або їх антигензв'язувальних фрагментів (та конкурентних антитіл та їх антигензв'язувальних Фрагментів), розкритих у даному документі, до знищення ракових клітин за допомогою автономного клітинного механізму без участі комплементу або інших клітин, у тому числі без обмеження Т-клітин, нейтрофілів, природних клітин-кілерів, макрофагів або дендритних клітин. У кількісному відношенні індукція клітинної загибелі передбачає без обмеження збільшення більш ніж у 2 рази ступеня забарвлювання анексином М пухлинних клітин людини, спричинене розчинним тАр до СО47, порівняно з фоном, одержаним з негативним контрольним антитілом (гуманізоване антитіло відповідного ізотипу).

Серед гуманізованих або химерних тАБ за даним винаходом ті, які індукують клітинну загибель пухлинних клітин людини, спричиняють підвищене зв'язування анексину У, аналогічне результатам, одержаним для тАБб Ааг2 до СО47 (Рецегзеп еї аї. у). Іттипо. 166: 4931-4942, 2001; Гату еї аї. 9. Віої. Спет. 278: 23915-23921, 2003); 1Е7 (Маппа апа Ргагієг 9. Іттипої). 170:3544-3553, 2003; Маппа апа ЕгаліеєтСапсег Ве. 64:1026-1036, 2004); та МАВІ -1 та 2 (патент

США Мо 7531643 В2; патент США Мо 7696325 В2; патент США Мо 8101719 В2).

Аналізи життєздатності клітин описані в керівництві МСІ/МІН, в якому описані чисельні типи клітинних аналізів, які можна застосовувати для оцінки індукції клітинної загибелі, спричиненої антитілами до СО47: "Сеї! Міарійу Аззаув", Теу І Вівв5, РИ, Віснага А Могамес, В5, Апагем І.

Міе5, М5, НеІєпе А ВепіпК, РИО, Тгасу ) М/оггеМПа, М5 та г іза Міпог, РОЮ. Інформація про авторів, опубліковано 1 травня 2013 року.

Зв'язування з НАВС

СОр47 експресується на еритроцитах людини (НАВС) (Вгом/п. .) Сеї! ВіоїЇ. 111: 2785-2794, 1990; Амепі. Віоспет .)., (1988) 251: 499-505; Кпарр. Віоса, (1989) Мої. 74, Мо. 4, 1448-1450;

Оїїмеїга єї а. Віоспітіса еї Віорпузіса Асіа 1818: 481-490, 2012; Реїгома Р. вії аІ. Сапсег Нез 2015; 75 (15 Б,Їррі): Абзігасі Мо 4271). Було показано, що тАБб до СО47 зв'язуються з ВВС, у тому числі В6Н12 (Вгом/п вї аї. 9. Сеї! Віо!., 1990, Оїїмеїга єї а. Віоснітіса єї Віорпузіса Асіа 1818: 481-

Зо 490, 2012, Реїгома Р. еї аІ. Сапсег Вез 2015; 75 (15 З,иррі): Абеігасі Мо 4271), ВКІС125 (Амепі.

Віоснет .)., (1988) 251: 499-505), ВВІС126 (Амепі. Віоснет .)., (1988) 251: 499-505; Реїгома Р. єї аІ. Сапсег Вез 2015; 75 (15 З,иррі): Абзігасі Мо 4271), 529 (Одег ЕК. еї аі. Сапсег Ке5 2014; 74 (19 зиррі): Абзігасі Мо 5011, Пи еї аІ. РІ о5 Опе. 2015 Зер. 21710 (93: е0137345; 5іКіс В. єї аї. ) Сіїп

Опсої 2016;34 (зиррі; арзігасі 3019)), антитіла до СО47, розкриті в публікації заявки на патент

США Мо 2014/0161799, публікації УМО 2014/093678, публікації заявки на патент США Мо 2014/0363442, та СС2С6 (Реїгома Р. єї а. Сапсег Ве5 2015; 75 (15 Б,иррі): Арзігасі Мо 4271, Одег

В. єї а. Сапсег Нез 2014; 74 (19 Б,иррі): АБзігасі Мо 5011). Було також показано, що злитий білок

ЗІВРа-Ес, який зв'язується з СО47 людини, характеризується зниженим зв'язуванням з ВВС людини порівняно з іншими клітинами людини (Одег В. єї а. Сапсег Вез 2014; 74 (19 Биррі):

Арвзігасі Мо 5011). Зниженого зв'язування з ВВС можна досягати шляхом одержання біспецифічних антитіл тільки з одним СО47-зв'язувальним плечем (Мавієгпак єї а). Сапсег Вев 2015; 75 (15 Биррі): Абрзігасі Мо 2482). Оскільки було показано, що деякі тАбБ до СО47 призводять до зниження кількості ВВС під час введення яванським макакам (Моиппо-7атога В. еї а). Тне ТохісоЇодіві, Зирріетепі о Тохісоіодіса! Зсієпсев, 2015; 144 (1): Абзігасі 596: 127, іш еї аї.Ріо5 Опе. 2015 бер. 21710 (9): е0137345; Рівеївсп єї аі. Сапсег Вез 2015; 75 (15 Биуррі):

Арзігасі Мо 2470), дуже бажано ідентифікувати тАб до СО47, які не зв'язуються з СО47- експресуючими АВС.

Використовувані в даному документі терміни "еритроцит(-и)" та "червонес-ї) кров'яне(-ї) тільце(-я)" є синонімами та використовуються в даному документі взаємозамінно.

Використовуваний у даному документі термін "знижене зв'язування з НКВС" стосується Ка зв'язування тАб до СО47 з ПЕВС, що в 10 або більше разів перевищує Ка на пухлинній клітині людини, де пухлинна клітина являє собою клітину ОМ10ПСО47.

Використовуваний у даному документі термін "відсутність зв'язування" або "МВ" стосується відсутності зв'язування з ЯКВС, що піддається вимірюванню, за концентрації тАб до СО47 не більше 100 мкг/мл включно.

До даного винаходу, описаного в даному документі, не було повідомлень про тАб до СО47, які не зв'язуються з КВС людини, що експресують СО47.

Деякі з тАБб до СО47, розкриті в даному документі, характеризуються зниженим зв'язуванням або відсутністю зв'язування, що піддається виявленню, з ЕВС людини. бо Аглютинація КВС

Аглютинація або гемаглютинація еритроцитів (КВС) являє собою гомотипічну взаємодію, яка виникає, коли КВС агрегують або накопичуються разом після інкубації з різними засобами, включаючи антитіла до антигенів «ВС та білків клітинної поверхні, таких як СО47. Повідомляли, що багато антитіл до СО47 спричиняють гемаглютинацію виділених КВС людини іп міїго залежним від концентрації чином, у тому числі В6Н12, ВКІС126б6, МАВІ -1, МАВІ -2, СС2С6 та 5Е9 (Одег В. єї аІ. Сапсег Без 2014; 74 (19 Б!иррі): Арзігасі Мо 5011, патент США Мо 9045541, Опо еї аІ. Опсої! Вер. 17: 1189-94, 2007; Кікиспі єї аІ. Віоспет Віорпуз Ве5. боттип. 315: 912-8, 2004;

ЗіКіс В. еї аї. У Сіїп Опсої 2016;34 (виррі; абзігасі 3019)). Для цього функціонального ефекту необхідне зв'язування ВВС інтактним бівалентним антитілом, і воно може бути знижене або усунене шляхом одержання або К(аб')-, або змЕм-фрагментів антитіла (по єї аї. Опсої! Вер. 17: 1189-94, 2007; Кікисні еї аі. Віоспет Віорпуз Нез. боттип. 315: 912-8, 2004) або біспецифічних антитіл тільки з одним СО47-зв'язувальним плечем (Мавієгтпак єї аІ. Сапсег Рез 2015; 75 (15 зЗиррі): Абзігасі Мо 2482). Було показано, що інші функціональні властивості цих фрагментів, у тому числі знищення клітин, або знижуються, або зберігаються в цих фрагментах (по еї аї.

Опсої! Вер. 17: 1189-94, 2007; КікКкиспі еї аІ. Віоспет Віорпуз Не5. Соттип. 315: 912-8, 2004).

Антитіло миші 203 є прикладом антитіла до СО47, яке зв'язується з СО47 на еритроцитах, але не спричиняє гемаглютинацію (патент США Ме 9045541, Реїгома єї а. Сапсег Кез 2015; 75 (15 зиррі): АБзігасі Мо 4271).

Було показано, що гемаглютинація знижується/усувається шляхом зниження селективного зв'язування з ВВС людини, але не з іншими клітинами, з використанням злитого білка 5ІНРа-Ес (Оде" В. єї а). Віоса 2013; 122 (21): 3935). Крім того, повідомляли, що мишаче тАб 2АТ до СО47 та гуманізовані версії 2Аї блокують СО47/5І8Ра, але не проявляють гемаглютинуючу активність (патент США Мо 9045541). Повідомляли, що невелика кількість із панелі антитіл миші до СО47 людини (З із 23) не спричиняли гемаглютинацію АВС людини (Ріеєївсп Е еї а). Сапсег

Вез 2015; 75 (15 Б,иррі): Абзігасі Мо 2470). Через це до даного винаходу, описаного в даному документі, існувала необхідність в ідентифікації тАб до СО47, які блокують зв'язування

ЗІВРа/С047, характеризуються відсутністю зв'язування, що піддається виявленню, або зниженим зв'язуванням з АВС та/або не спричиняють гемаглютинацію. Термін "аглютинація" стосується накопичення клітин, тоді коли термін "гемаглютинація" стосується накопичення

Зо певної субпопуляції клітин, тобто ВВС. Таким чином, гемаглютинація є типом аглютинації.

Використовуваний у даному документі термін "знижена гемаглютинація" стосується активності аглютинації АВВС, що піддається вимірюванню, за концентрацій тАб до СО47, що перевищують 1,85 мкг/мл, та відсутності активності, що піддається вимірюванню, за концентрацій, які менші або дорівнюють 1,85 мкг/мл.

Використовуваний у даному документі термін "відсутність гемаглютинації, що піддається виявленню" стосується відсутності активності аглютинації ЯАВВС, що піддається вимірюванню, за концентрацій тАб до 2047, що перевищують або дорівнюють 0,3 пг/мл, до концентрації, що менше або дорівнює 50 мкг/мл.

Деякі з антитіл до СО47, описаних у даному документі, спричиняють знижену гемаглютинацію або відсутність гемаглютинації ВВС людини, що піддається виявленню.

Модулювання шляху за участю МО

Як відзначено вище, Т5РІ також є лігандом для СО47. Шлях за участю Т5РІ1/С047 перешкоджає сприятливим ефектам шляху за участі МО у багатьох типах клітин, у тому числі без обмеження клітинах судин. Шлях за участю МО складається з будь-якого з трьох ферментів (синтази оксиду азоту, МОЗ І, МОЗ ІІ та МОБ І), які утворюють біологічно активний газ МО з використанням аргініну як субстрату. МО може діяти всередині клітини, в якій він виробляється, або в сусідніх клітинах, активуючи фермент, розчинну гуанілілциклазу, який виробляє молекулу- посередника, циклічний ЗМР (СМР). Правильне функціонування шляху за участі МО/СОМР необхідне для захисту серцево-судинної системи від стресів, у тому числі без обмеження стресів, що виникають у результаті поранення, запалення, гіпертензії, метаболічного синдрому, ішемії та ІКІ. У випадку цих клітинних стресів інгібування шляху за участі МО/СОМР під дією системи Т5Р1/С047 посилює ефекти стресу. Це являє собою особливу проблему для серцево- судинної системи, в якій як СОМР, так ії САМР відіграють важливі захисні ролі. Існує багато причин, через які ішемічно-реперфузійне пошкодження спричиняє або робить внесок у виникнення захворювання, травми та несприятливі наслідки хірургічних процедур.

Як розкрито в даному документі, одне або декілька химерних або гуманізованих антитіл до с0р47 будуть обертати інгібування вироблення СОМР під дією Т5Р1. Обернення буде повним (х80 95) або проміжним (20 95 - 80 95). Це обернення інгібування вироблення СОМР під дією

Т5РІ1 буде демонструвати, що тАб до СО47 мають здатність посилювати передачу сигналу за бо участю МО, та означати, що вони застосовні у захисті серцево-судинної системи від стресів, у тому числі без обмеження стресів, що виникають у результаті поранення, запалення, гіпертензії, метаболічного синдрому, ішемії та ішемічно-реперфузійного пошкодження (ІК). Також очікується, що додаткові системи аналізу, наприклад, скорочення клітин гладенької мускулатури, будуть показувати, що деякі химерні або гуманізовані антитіла обертають інгібіторні дії ТОРТ щодо наступних ефектів, які відбуваються в результаті активації передачі сигналу за участю МО.

Як розкрито в даному документі, "повне обернення інгібування шляху за участю МО" стосується більш ніж 80 95 обернення інгібування передачі сигналу за участю МО під дією Т5РІ1 за допомогою тАр до СО47 порівняно з негативним контролем, гуманізованим антитілом відповідного ізотипу.

Як розкрито в даному документі, "проміжне обернення інгібування шляху за участю МО" стосується 20-80 95 обернення інгібування передачі сигналу за участю МО під дією ТЗРІ за допомогою тАр до СО47 порівняно з негативним контролем, гуманізованим антитілом відповідного ізотипу.

Як розкрито в даному документі, "відсутність обернення інгібування шляху за участю МО" стосується менше ніж 20 95 обернення інгібування передачі сигналу за участю МО під дією Т5РІ1 за допомогою тАр до СО47 порівняно з негативним контролем, гуманізованим антитілом відповідного ізотипу.

Переважні комбінації функціональних властивостей

У відомому рівні техніки існують тАбБ до СО47 з комбінаціями деяких, але не всіх функціональних характеристик, описаних в даному документі. Раніше було показано, що гуманізовані тАБб до СО4А7, такі як АВб.12 ІдЧО1, АВб.12-Ідс4Р та АВб.12-ІОс4РЕ (патент США Мо 9045541, публікація заявки на патент США Мо 2014/0161799, публікація УМО 2014/093678, публікація заявки на патент США Мо 2014/0363442) та 569 (Моиппо-латога В. єї аї. ТНе

Тохісоіодібї, ЗХирріетепі о Тохісоіодіса! бсіепсев5, 2015; 144 (1): Арвігасі 596: 127, Пи еї а). Р о5

Опе. 2015 бер. 21; 10 (9): е0137345), зв'язують СО47 людини, блокують взаємодію СО47 та

ЗІВРа та спричинюють фагоцитоз пухлинних клітин людини. Гуманізовані тАб до 2047, АВб.12

Ідс1, АВб.12-ІДс24Р та АВб.12-ІДС4РЕ, також не спричиняють гемаглютинацію АВС людини (патент США Мо 9045541). Гуманізоване тАбБ до СО47, 5Е9, зв'язується з ВВС людини та

Зо спричиняє їх гемаглютинацію (Одег В. єї аі. Сапсег Ве 2014; 74 (19 Б,иррі): Абзігасі Мо 5011,

ЗіКіс В. єї а!. У Сіїп Опсої 2016;34 (5,иррі; арвігасі 3019). тАб миші до 2047, ВбНІ12, ВВІС126 та

Сб2б6, блокують взаємодію СО47 та 5ІВРа, спричиняють фагоцитоз та зв'язуються з ВВС людини та спричиняють їх гемаглютинацію (Реїгома Р. єї а. Сапсег Ве5 2015; 75 (15 Биррі):

Арзігасі Мо 4271, беййНегі еї аіІ. Віоса 94:3633-3643,1999; Мегпоп-М/іїзоп єї аїЇ. Ек У Іттипої. 30: 2130-2137, 2000; І аїоик єї аї. У. Іттипої. 167: 2547-2554, 2001; Зургатапіап єї аї. Віоса 107: 2548-2556, 2006; І іш еї аї. У ВіоЇ. Снет. 277: 10028-10036, 2002). тАб миші до 2047, МАВІ-1 та

МАВІ-2, зв'язуються з С2О47 людини, індукують загибель пухлинних клітин та спричиняють гемаглютинацію АВС (патент США Мо 8101719); тАБб миші Ад22 зв'язується з СО47 людини та індукує загибель пухлинних клітин (Рецегзеп еї аї. у. Іттипої. 166: 4931-4942, 2001; І ату еї а!.

Вії Спет. 278: 23915-23921, 2003) та тАБ миші, 1Е7, зв'язується з СО47 людини, блокує взаємодію СО47 і 5ІВРа та індукує загибель пухлинних клітин (Небгез еї аї. У. СеїІшміаг Рнузіої. 205: 182-193, 2005; Маппа ев! аї. 9. Іттипої. 170: 3544-3553, 2003; Маппа вї аІ. Сапсег Везвєагси, б4: 1026-1036, 2004).

В іншому переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, антитіла до ср47 характеризуються тим, що вони а. зв'язуються з СЮО47 людини, р. блокують зв'язування 5ІКРа з СО47 людини, с. посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, а. індукують загибель чутливих пухлинних клітин людини та е. не спричиняють аглютинацію еритроцитів людини (ПКВС).

У ще одному переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, антитіла до бо С0р47 характеризуються тим, що вони а. зв'язуються з СЮО47 людини, р. блокують зв'язування 5ІКРа з СО47 людини, с. посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, а. індукують загибель чутливих пухлинних клітин людини та е. спричиняють знижену аглютинацію еритроцитів людини (ПКВС).

В іншому переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, антитіла до ср47 характеризуються тим, що вони а. зв'язуються з СЮО47 людини, р. блокують зв'язування ЗІКРа з СО47 людини, с. посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, а. не спричиняють аглютинацію еритроцитів людини (пКВС) та е. не зв'язуються з пПКВС.

В іншому переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, антитіла до ср47 характеризуються тим, що вони а. специфічно зв'язуються з СЮО47 людини, р. блокують зв'язування 5ІКРа з СО47 людини, с. посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, а. не спричиняють аглютинацію еритроцитів людини (ПКВС) та е. характеризуються зниженим зв'язуванням з пКВС.

В іншому переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент також специфічно зв'язуються з СО47 примата, відмінного від людини, де примат, відмінний від людини, може включати без

Зо обмеження яванського макака, зелену мавпу, макака-резуса та саймірі.

У ще одному переважному варіанті здійснення, описаному в даному документі, моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язуються з СО47 людини, примата, відмінного від людини, миші, кролика та щура.

У даному документі описані тАб до СО47 з функціональними профілями, що відрізняються.

Ці антитіла характеризуюся комбінаціями властивостей, що відрізняються, вибраними з наступних: 1) проявляють перехресну реактивність з гомологами СО47 одного або декількох видів; 2) блокують взаємодію між СО47 та його лігандом ЗІКР;а; 3) посилюють фагоцитоз пухлинних клітин людини, 4) індукують загибель чутливих пухлинних клітин людини; 5) не індукують клітинну загибель пухлинних клітин людини; б) характеризуються зниженим зв'язуванням з еритроцитами людини (ПКВС); 7) характеризуються відсутністю зв'язування з

Антитіла до СО47

За багатьох типів раку у людини спостерігають позитивну регуляцію експресії СО47 на клітинній поверхні, і при цьому типи раку з найвищими рівнями експресії СО47, імовірно, найбільш агресивні та найбільш летальні для пацієнтів. Вважають, що підвищена експресія

СОр47 захищає ракові клітини від виведення за допомогою фагоцитозу шляхом надсилання сигналу "не їж мене" макрофагам за допомогою ЗІКРа, інгібіторного рецептора, який запобігає фагоцитозу клітин, що несуть СО47 (ОІдепбого еї аї. Зсієпсе 288: 2051-2054, 2000; даївума! єї аї. (2009) Сеї! 138 (2):271-851; Снао єї а!. (2010) бсіепсе Тгапзіайопа! Медісіпе 2(63):6Зга94). Таким чином, підвищення експресії СО47 за багатьох типів раку забезпечує їм маскування за типу "свій", що уповільнює їх виведення за допомогою фагоцитозу макрофагами та дендритними клітинами.

Антитіла, які блокують СО47 та запобігають його зв'язуванню з З5ІКРа, показали ефективність у моделях пухлин (ксенотрансплантатів) людини у мишей. Такі блокувальні тАб до СО47, які проявляють цю властивість, посилюють фагоцитоз ракових клітин макрофагами, що може знизити пухлинне навантаження (Маїйеї; єї а!. (2009) Сеї! 138 (2): 286-99; патент США Ме 60 9045541; М/іпопат еї аї. (2012) Ргос Маї! Асад. 5сі. ОБА 109 (17):6662-6667; Хіао єї аї. (2015)

Сапсег Гейегз 360:302-309; Спао еї аї. (2012) Сеїї 142:699-713; Кіт еї аї. (2012) І еокетіа 26:2538-2545) і, зрештою, може призвести до вироблення адаптивної імунної відповіді щодо пухлини (Тзепа вї аї. (2013) РМАБ 110 (27)11103-11108; Бою-Рапіоїіа вї а!. (2014) Сапсег Нев. 74 (23): 6771-6783; Пи еї аї. (2015) Маї. Меа. 21 (10): 1209-1215).

Однак існують механізми, за допомогою яких тАБбБ до СО47 можуть атакувати трансформовані клітини, які ще не використовувались під час лікування раку. Декілька груп показали, що певні тАб до СО47 людини індукують клітинну загибель пухлинних клітин людини. тАБб до СО47, Айг22, індукує клітинну загибель декількох ліній пухлинних клітин людини (РеНегзеп еї аї. У. Іттипо. 166: 4931-4942, 2001; І ату еї аї. У. Віої. Спет. 278: 23915-23921, 2003). Було показано, що АО22 індукує швидке порушення функції мітохондрій і швидку клітинну загибель з раннім виведенням на зовнішню поверхню фосфатидилсерину та падінням мітохондріального мембранного потенціалу (І ату еї аї. У. Віої. Снет. 278: 23915-23921, 2003). тАБ до СО47, МАВІ -2, та його фрагменти індукують клітинну загибель ліній лейкозних клітин людини, але не нормальних клітин іп мій, та має протипухлинний ефект в моделях з ксенотрансплантатом іп мімо. (по еї аї. (2007) Опсої. Вер. 17 (5): 1189-94). тАбБ до СО47 людини, 1Е7, індукує клітинну загибель за типів Т-клітинного лейкозу людини (Маппа апа Егагієг (2003) У. Іттипої. 170: 3544-53) та деяких типів раку молочної залози (Маппа апа Егагієг (2004)

Сапсег Везеєагтсп 64 (3):1026-36). 17 знищує пухлинні клітини, що несуть СО47, без дії комплемент- або клітинно-опосередкованого цитолізу МК-клітинами, Т-клітинами або макрофагами. Замість цього, тАбБ до СО47, 17, проявляє свою дію через неапоптозний механізм, який включає безпосередню СО47-залежну атаку на мітохондрії, розряджаючи їх мембранний потенціал і позбавляючи клітину здатності виробляти АТР, що призводить до швидкої клітинної загибелі. Слід зазначити, що тАБб до СО047, 1Е7, не знищує лейкоцити у стані спокою, які також експресують СО47, а лише ті клітини, які "активовані" в результаті трансформації. Таким чином, нормальні циркулюючі клітини, багато з яких експресують СО47, зберігаються, у той час як ракові клітини селективно знищуються токсичним щодо пухлини тАр до СО47 (Маппа апа Егалієг (2003) 9. Іттипої. 170: 3544-53). Можна припустити, що даний механізм полягає у попереджувальній, селективній та безпосередній атаці на пухлинні клітини на відміну від пасивного механізму спричинення фагоцитозу за допомогою простого блокування

Зо зв'язування СО47/5ІАРа. Важливо зазначити, що тАБ 1Е7 також блокує зв'язування 5ІВРа з

СОра47 (Вебгез вї аї. У. СеПшШаг Рнпузіо!. 205: 182-193, 2005) і, таким чином, воно може проявляти свою дію через два механізми: (1) пряма токсичність щодо пухлини та (2) спричинення фагоцитозу ракових клітин. Одне тАб, яке може виконувати обидві функції, може перевищувати тА, яке лише блокує зв'язування СО47/518 Ра.

Після періодів ішемії тканини, виникнення кровотока стає причиною пошкодження, яке називають "ішемічно-реперфузійним пошкодженням" або ІВІ. ІКІ робить внесок у несприятливі наслідки за багатьох хірургічних процедур, за яких має місце ІКІ через необхідність зупинки кровотока на деякий період часу, за багатьох форм/причин травми, за яких кровоток переривається, а пізніше відновлюється в результаті терапевтичного втручання, та за процедур, необхідних для трансплантації органа, серцево/легеневих процедур шунтування, реплантації окремих частин тіла, процедур пластичної та косметичної хірургії та у інших ситуаціях, що передбачають зупинку та повторний запуск кровотока. Сама по собі ішемія спричиняє багато фізіологічних змін, які самі по собі зрештою можуть призвести до некрозу та загибелі клітин і тканин. Реперфузія задає свій власний набір пошкоджувальних подій, у тому числі утворення активних форм кисню, тромбоз, запалення та опосередковане цитокінами пошкодження. Шляхи, які обмежені системою Т5Р1-СО47, являють собою саме ті, які будуть давати найбільший позитивний ефект під час боротьби з пошкодженням від ІРКІ, у тому числі шлях за участю МО. Таким чином, блокування шляху за участю Т5Р1-СО47, як у випадку з розкритими у даному документі антитілами, буде забезпечувати найбільш надійне функціонування цих ендогенних захисних шляхів. Було показано, що тАб до СО47 знижують пошкодження органа на моделях теплової ішемії нирки (Кодегз еї а. У Ат 5ос Мерпгої. 23: 1538- 1550, 2012), ішемічно-реперфузійного пошкодження печінки (Ізепрегу еї аІ. Бигдегу. 144: 752- 761, 2008), трансплантації нирки (Гіп еї аІ. Тгапзріапіайоп. 98: 394-401, 2014; Ноде!гз єї аї. Кідпеу

Іптегапійопаї!. 90: 334-347, 2016)) та трансплантації печінки, у тому числі форм стеатозу печінки, у гризунів (Хіао єї аї. І їмег Тгапзврі. 21: 468-477, 2015; Хіао єї аї. Тгапзріапіайноп. 100: 1480-1489, 2016). Крім того, тАбБ до СО47 спричинювало значне зниження та гіпертрофію правого шлуночка в монокроталіновій моделі легеневої артеріальної гіпертензії (Вацег єї аї. Сагаіїомавзс

Вез. 93: 682-693, 2012). Дослідження на моделі кожного трансплантата показали, що модулювання СО47, у тому числі за допомогою тАБр до СО47, інгібує опосередковану Т5РІ1 бо передачу сигналу СО47. Це призводить до підвищеної активності шляху за участю МО,

Зо результатом чого є зниження ІКІ (Махпітег еї аї. Ріавї ВКесопвіг 5игу. 124: 1880-1889, 2009;

Івепрегоу еї аї. Апегіозсієї Тпгот Мавзс Віої. 27: 2582-2588, 2007; Івепбрего єї аї. Сит Огид Тагдеїв. 9: 833-841, 2008; Ізепбего єї а). Апп 5игу. 247: 180-190, 2008).

Також було показано, що тАбБ до СО47 ефективні в моделях інших серцево-судинних захворювань. На мишачій моделі лівошлуночкової серцевої недостатності з надлишковим тиском у результаті поперечного стенозу аорти тАбБ до СО47 зменшувало гіпертрофію кардіоміоцитів, знижувало фіброз лівого шлуночка, попереджувало збільшення маси лівого шлуночка, знижувало жорсткість шлуночків та нормалізувало зміни профілю петлі об'єм-тиск (Зпатіі-Запіапі єї а). У Ат Неап Авзос., 2014). тАбБ до СО047 зменшувало ступінь відображення атеросклерозу в декількох мишачих моделях (Коїїта еї а. Маїиге., 2016).

Показання до застосування, що являють собою типи раку

У даному винаході розкриті тАб до СО47 і їх антигензв'язувальні фрагменти, ефективні як протиракові терапевтичні засоби, які можна вводити, переважно парентерально, пацієнтам з чутливими типами гемобластозу та солідними пухлинами, зокрема без обмеження типами лейкозу, включаючи системний мастоцитоз, гострий лімфоцитарний (лімфобластний) лейкоз (АГ), Т-клітинний АЇЇ, гострий мієлоїдний лейкоз (АМІ), мієлогенний лейкоз, хронічний лімфоцитарний лейкоз (С1Ї), хронічний мієлоїдний лейкоз (СМІ), мієлопроліферативні порушення/неоплазму, моноцитарний лейкоз і плазмоцитарний лейкоз; множинною мієломою (ММ); макроглобулінемією Вальденстрема; типами лімфоми, включаючи гістіоцитарну лімфому та Т-клітинну лімфому, типи В-клітинної лімфоми, включаючи лімфому Ходжкіна та неходжкінську лімфому, таку як фолікулярна неходжкінська лімфома (МНІ) низького ступеня злоякісності, клітинна лімфома (ЕСС), лімфома з клітин мантійної зони (МС), дифузна крупноклітинна лімфома (ІСІ), дрібноклітинна лімфоцитарна (5) МНІ, фолікулярна МНІ. середнього ступеня злоякісності, дифузна МНІ. середнього ступеня злоякісності, імунобластна

МНІ. високого ступеня злоякісності, лімфобластна МНІ високого ступеня злоякісності, МНІ. з дрібних клітин з нерозщепленими ядрами високого ступеня злоякісності, МНІ з масивним ураженням; солідними пухлинами, включаючи рак яєчників, рак молочної залози, рак ендометрію, рак товстого кишечника (колоректальний рак), рак прямої кишки, рак сечового міхура, рак уротелію, рак легені (недрібноклітинний рак легені, аденокарциному легені,

Зо плоскоклітинну карциному легені), рак бронхів, рак кісток, рак передміхурової залози, рак підшлункової залози, рак шлунка, гепатоцелюлярну карциному (рак печінки, гепатому), рак жовчного міхура, рак жовчних протоків, рак стравоходу, нирково-клітинну карциному, рак щитоподібної залози, плоскоклітинну карциному голови та шиї (рак голови та шиї), рак яєчок, рак ендокринної залози, рак наднирників, рак гіпофіза, рак шкіри, рак м'яких тканин, рак кровоносних судин, рак головного мозку, рак нервів, рак очей, рак оболонок головного мозку, рак ротоглотки, рак гортаноглотки, рак шийки матки та рак матки, гліобластому, медулобластому, астроцитому, гліому, менінгіому, гастриному, нейробластому, мієлодиспластичний синдром, і типами саркоми, включаючи без обмеження остеосаркому, саркому Юінга, лейоміосаркому, синовіальну саркому, альвеолярну саркому м'яких тканин, ангіосаркому, ліпосаркому, фібросаркому, рабдоміосаркому та хондросаркому; та меланомою.

Лікування раку

Як добре відомо середнім фахівцям в даній галузі, під час лікування раку часто використовують комбіновані терапії, оскільки монотерапій або процедур із застосуванням одного компоненту може бути недостатньо для лікування або виліковування захворювання або стану. Традиційні способи лікування раку зазвичай включають хірургічне втручання, лікування за допомогою опромінення, введення комбінації цитотоксичних лікарських засобів для досягнення адитивних або синергічних ефектів і комбінації будь-яких або всіх цих підходів. В особливо застосовних комбінаціях хіміотерапевтичних і біологічних способів терапії використовують лікарські засоби, які діють за рахунок різних механізмів дії, підвищуючи рівень контролю над раковими клітинами або їх цитолізу, підвищуючи здатність імунної системи контролювати ріст ракових клітин, знижуючи імовірність розвитку резистентності до лікарського засобу під час терапії та зводячи до мінімуму можливе перекриття профілів токсичності, що дозволяє застосовувати зменшені дози окремих лікарських засобів.

Класи традиційних протипухлинних/(антибластомних засобів, застосовних у видах комбінованої терапії, що охоплюються способами за даним винаходом, розкриті, наприклад, в

Соодтап а Сійтапе Те РНаптасоіодіса!І Вазів ої Тегарешісв, Гмуейи Еайоп (2010), М.

Вгопіоп, В.А. Спабпег, апа В. С. КпоПтапп Еадв»., бесіоп МІ, "Спетоїпегару ої Меоріавіїс різєазев", Спарієїв 60-63, рр. 1665-1770, МесСтгам-НІЇЇ, МУ, і включають, наприклад, алкілувальні засоби, антиметаболіти, натуральні продукти, низку різноманітних засобів, гормони й антагоністи, лікарські засоби з цілеспрямованою дією, моноклональні антитіла й інші терапевтичні засоби на основі білків.

На додаток до вищесказаного, способи за даним винаходом стосуються лікування показань, що являють собою типи раку, та додатково включають лікування пацієнта за допомогою хірургічного втручання, опромінення та/або введення пацієнту, який цього потребує, ефективної кількості малої хімічної молекули або біологічного лікарського засобу, зокрема без обмеження терапевтичного засобу на основі пептиду, поліпептиду, білка, нуклеїнової кислоти, що традиційно застосовують або знаходяться на даний час на стадії розробки, для лікування станів, пов'язаних з розвитком пухлини. Це включає антитіла й антигензв'язувальні фрагменти, відмінні від розкритих в даному документі, цитокіни, антисенсові олігонуклеотиди, 5івМА та тіВвВМА.

Терапевтичні способи, розкриті та заявлені в даному документі, включають застосування антитіл, розкритих в даному документі, окремо та/або в комбінаціях одне з одним та/або з їх антигензв'язувальними фрагментами за даним винаходом, які зв'язуються з СО47, та/або з конкурентними антитілами, що також проявляють відповідну біологічну/терапевтичну активність, наприклад, в усіх можливих комбінаціях цих сполук-антитіл для досягнення найбільшої ефективності лікування.

Крім того, терапевтичні способи за даним винаходом також охоплюють застосування даних антитіл, їх антигензв'язувальних фрагментів, конкурентних антитіл і їх комбінацій додатково в комбінації з (1) будь-яким одним або декількома протипухлинними терапевтичними засобами лікування, вибраними з хірургічного втручання, опромінення, протипухлинних, антибластомних засобів та комбінацій будь-яких з них, або (2) будь-яким одним або декількома протипухлинними біологічними засобами або (3) еквівалентами будь-якого з вищенаведених в (1) або (2), як буде очевидно середньому фахівцю в даній галузі, у відповідній(-их) комбінації(- ях) для досягнення потрібного терапевтичного ефекту лікування для конкретного показання.

Лікарські засоби на основі антитіл і малих молекул, які посилюють імунну відповідь на рак за допомогою модулювання костимулювальних або інгібувальних взаємодій, що впливають на відповідь Т-клітин на пухлинні антигени, включаючи інгібітори імунних контрольних точок і модулятори костимулювальних молекул, також являють особливий інтерес в контексті комбінованих терапевтичних способів, що охоплюються даним документом, і включають без обмеження інші антитіла до СО47. Пацієнту проводять введення терапевтичних засобів, які зв'язуються з білюм СО47, наприклад антитіл або малих молекул, які зв'язуються з 2047 і запобігають взаємодії між СО47 і 5ІВРа, що приводить до виведення ракових клітин шляхом фагоцитозу. Терапевтичні засоби, які зв'язуються з білюм 2047, комбінують з терапевтичним засобом, таким як антитіло, мала хімічна молекула або біологічний лікарський засіб, розкритий в даному документі, спрямований проти однієї або декількох додаткових клітинних мішеней, що являють собою СО70 (кластер диференціювання 70), 20200 (мембранний глікопротеїн ОХ-2, кластер диференціювання 200), СО154 (кластер диференціювання 154, СО40І, ліганд СО40, ліганд кластера диференціювання 40), СбО223 (ген активації лімфоцитів 3, ГАС3З, кластер диференціювання 223), КІВ (імуноглобулін-подібні рецептори клітин-кілерів), СІТА (ТМЕВ5Е18, глюкокортикоїд-індуковний. ТМЕВ-споріднений білок, індуковний активацією рецептор родини

ТМЕН, АЇІТЕ, представник 18 суперродини рецепторів фактора некрозу пухлини), СО28 (кластер диференціювання 28), СО40 (кластер диференціювання 40, ВрбО0, СОМУ40, ТМЕВ5Е5, представник 5 суперродини рецепторів фактора некрозу пухлини, р50), 2086 (В7-2, кластер диференціювання 86), СО160 (кластер диференціювання 160, ВУ55, МК, МК28), 02568 (ПОНТ, кластер диференціювання 258, представник 14 суперродини лігандів фактора некрозу пухлини,

ТМЕ5Е14, НУЕМІ.,, ліганд НМЕМ, ліганд медіатора проникнення герпесвірусу, І Та), С0270 (НМЕМ, представник 14 суперродини рецепторів фактора некрозу пухлини, медіатор проникнення герпесвірусу, кластер диференціювання 270, ПІСНТА, НМЕА), С0275 (СОБІ,

БО ліганд ІСО5, ліганд індуковного костимулятора Т-клітин, кластер диференціювання 275), 60276 (87-НЗ, В7-гомолог 3, кластер диференціювання 276), ОХ40Ї. (ліганд ОХ40), В7-НА (В7-гомолог 4, МТМ, інгібітор 1 активації Т-клітин, що містять домен М-класу), СІТВІ (ліганд глюкокортикоїд-індуковного рецептора фактора некрозу пухлини, ліганд глюкокортикоїд- індуковного ТМЕР), 4-188Ї (ліганд 4-188), СОЗ (кластер диференціювання 3, Т30), СО25 (І 2Ра, кластер диференціювання 25, а-ланцюг рецептора інтерлейкіну-2, а-ланцюг рецептора

І-2г), 2048 (кластер диференціювання 48, маркер активації В-лімфоцитів, ВІ А5Т-1, сигнальна молекула 2 активації лімфоцитів, БІ АМЕ2), СОбба (Свасат-1, споріднена онкоембріональному антигену молекула 1 клітинної адгезії жовчний глікопротеїн, ВСР, ВОРІ, ВОРІ, кластер диференціювання бба), СО80 (В7-1, кластер диференціювання 80), С094 (кластер бо диференціювання 94), МКО2А (група 2А природних кілерів, представник 1 підродини О лектиноподібних рецепторів клітин-кілерів, КІ РБО1), С09б (кластер диференціювання 96,

ТАСЦЕ, білок, що активується у великій кількості Т-клітинами за пізньої експресії), СО112 (РУКІ2, нектин, споріднений рецептору полівірусу білок 2, медіатор проникнення герпесвірусу

В, НМЕВ, нектин-2, кластер диференціювання 112), СО115 (СЕК, рецептор колонієстимулювального фактора 1, рецептор колонієстимулювального фактора макрофагів, М-

СЕК, кластер диференціювання 115), СО205 (ОЕС-205, І 75, лімфоцитарний антиген 75, кластер диференціювання 205), 20226 (ОМАМ'І, кластер диференціювання 226, допоміжна молекула-ї ОМАХ, РТАТ, антиген 1, який сприяє активації тромбоцитів і Т-клітин), СО244 (кластер диференціювання 244, рецептор 284 природних клітин-кілерів), СО262 (ОК, ТгаїКаг,

ТВА -К2, представник 106 суперродини рецепторів фактора некрозу пухлини, ТМЕКЗЕ10ОВ, кластер диференціювання 262, КІГ ЕК, ТКІСК2, ТВІСКВ, 2ТМЕНО, ТВІСК2А, ТВІСК2В), С0284 (ТоП-подібний рецептор-4, ТІК4, кластер диференціювання 284), СО288 (ТоїіІ-подібний рецептор-8, ТІ К8, кластер диференціювання 288), ТМЕ5ЗЕ15 (представник 15 суперродини фактора некрозу пухлини, інгібітор росту ендотелію судин, МЕСІ, ТІ/1А), Т0О2 (триптофан-2,3- діоксигеназа, ТРН2, ТКРО), ІСЕ-1К (інсуліноподібний фактор росту 1 типу), 502 (дисіалогангліозид 2), ТМІСО2 (білок 2, який містить трансмембранний та імуноглобуліновий домени), ЕОМВ (представник В родини білків, що містять КОМ-домен), МІЗТА (супресор активації Т-клітин, що містить М-домен імуноглобуліну, В7-Н5, В7-гомолог 5), ВТМ 2 (бутирофіліноподібний білок 2), Віп (родина бутирофілінів), ТІСІТ (Т-клітинний імунорецептор з доменами Ід і ІТІМ, М5іт3, МОСАМ), представники 5ідіес (зв'язувальні сіалову кислоту Ід- подібні лектини), нейрофілін, МЕСЕК (рецептор фактора росту ендотелію судин), родина ІТ (ЖЕ, родина імуноглобуліноподібних транскриптів, імуноглобуліноподібні рецептори лейкоцитів), родини МКО (родини групи природних кілерів, лектинові трансмембранні рецептори типу С), МІСА (споріднена поліпептиду МНС класу |! послідовність А), ТОЕВД (трансформувальний фактор В росту), шлях за участю 5ТІМО (шлях за участю стимулятора гена інтерферону), аргіназа (аргінінамідиназа, канаваназа, І! -аргіназа, аргінінтрансамідиназа),

ЕСЕРМІЇ (варіант ІІЇ рецептора епідерамального фактора росту) і ННГА2 (В7-Н7, В7у, НЕВНУ-Н

ТВ-асоційований білок 2, В7-гомолог 7), інгібіторів РО-1 (білок 1 програмованої загибелі клітин,

РО-1, 20279, кластер диференціювання 279), РО-Ї1 (В7-НІ, В7-гомолог 1, ліганд 1 білка

Зо програмованої загибелі, СО274, кластер диференціювання 274), РО-12 (87-ОС, ліганд 2 білка 1 програмованої загибелі клітин, РОСО1Їс2, СО0273, кластер диференціювання 273), СТІ А-4 (білок 4, асоційований з цитотоксичними Т-лімфоцитами, СО152, кластер диференціювання 152), ВТ А (В- і Т-лімфоцитарний атенюатор, СО272, кластер диференціювання 272), індоламін- 2,3-діоксигенази (БО, І0О1), ТІМЗ (НАМСК2, клітинний рецептор 2 вірусу гепатиту А, Т- клітинний імуноглобулін і домен муцину 3, КІМ-3, молекула 3, яка обумовлює пошкодження нирок, ТІМО-3, Т-клітинний імуноглобулін і домен муцину 3), аденозиновий рецептор АгА (рецептор АРО), сорз9 (ектонуклеозидтрифосфатдифосфогідролаза-1, кластер диференціювання 39, ЕМТРО1) ї СО73З (екто-5'--чуклеотидаза, 5'-чуклеотидаза, 5-МТ, кластер диференціювання 73), СО27 (кластер диференціювання 27), ІСО5 (С0278, кластер диференціювання 278, індуковний костимулятор Т-клітин), СО137 (4-188, кластер диференціювання 137, представник 9 суперродини рецепторів фактора некрозу пухлини,

ТМЕКБЕ9), Оох40 (СО0134, кластер диференціювання 134) і ТМЕ5Е25 (представник 25 суперродини рецепторів фактора некрозу пухлини), зокрема антитіла, малі молекули й агоністи, які також конкретно передбачені в даному документі. Додаткові засоби включають 1-10 (інтерлейкін-10, фактор інгібування синтезу цитокінів людини, С5ІЕ) і галектини.

МЕВМОУ? (іпілімумаб; ВгізіоІ-Меуег5 Заціббр) є прикладом схваленого антитіла до СТІ А-4.

КЕМТВИВА? (пембролізумаб; МегскК) і ОРОІМО- (ніволумаб; ВгіхіоІ-Меует5 Зацірр Сотрапу) є прикладами схвалених антитіл до РО-1.

ТЕСЕМТНІО "м (атезолізумаб; Коспе) є прикладом схваленого антитіла до РО-І 1.

Пов'язані з ішемічно-реперфузійним пошкодженням (ІКІ), автоїмунні, автозапальні, запальні, серцево-судинні стани та захворювання

Введення тАб до СО47 або його антигензв'язувального фрагмента, розкритих в даному документі, можна застосовувати для лікування низки захворювань і станів, за яких ІК! є ознакою, яка бере в них участь, і для лікування різних автоїмунних, автозапальних, запальних і серцево-судинних захворювань. До них відносяться трансплантація органа, за якої тАб або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом вводять донору перед забором органа, в забраний донорський орган у розчині для консервації органа, пацієнту-реципієнту або будь-якої їх комбінації; трансплантація шкіри; хірургічні резекції або реконструкція тканин, за яких таке тАб або його фрагмент вводять пацієнту або локально шляхом ін'єкції в уражену 60 тканину, або парентерально; реплантація частин тіла; лікування травматичного пошкодження;

легенева гіпертензія; легенева артеріальна гіпертензія; серповидноклітинна анемія (криза); інфаркт міокарда; порушення мозкового кровообігу; інсульт; ішемія, спричинена хірургічним втручанням; гостре ураження нирок/ниркова недостатність; будь-який інший стан, за якого ІКІ має місце та бере участь у патогенезі захворювання; автоіїмунні та запальні захворювання, включаючи артрит, ревматоїдний артрит, розсіяний склероз, псоріаз, псоріатичний артрит, хворобу Крона, запальне захворювання кишечника, виразковий коліт, вовчак, системний червоний вовчак, ювенільний ревматоїдний артрит, ювенільний ідіопатичний артрит, хворобу

Грейвса, тиреоїдит Хашимото, хворобу Аддісона, целіакію, дерматоміозит, розсіяний склероз, важку міастенію, перніціозну анемію, синдром Шегрена, діабет | типу, васкуліт, увеїт й анкілозувальний спондиліт; автозапальні захворювання, включаючи родинну середземноморську лихоманку, мультисистемне запальне захворювання у немовлят, періодичний синдром, асоційований з мутацією гена рецептора фактора некрозу пухлини (ТМЕ), дефіцит антагоніста рецептора інтерлейкіну-ї1, хворобу Бехчета; серцево-судинні захворювання, включаючи коронарне захворювання серця, захворювання коронарних артерій, атеросклероз, інфаркт міокарда, серцеву недостатність і лівошлуночкову серцеву недостатність. тАр до СО47 і їх антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом також можна застосовувати для підвищення тканинної перфузії у суб'єкта, що потребує такого лікування.

Таких суб'єктів можна ідентифікувати за допомогою діагностичних процедур, які демонструють необхідність підвищеної тканинної перфузії. Крім того, необхідність підвищеної тканинної перфузії може виникнути внаслідок того, що суб'єкт переніс, переносить або перенесе хірургічне втручання, вибране із хірургічного втручання на зовнішніх покривах, хірургічного втручання на м'яких тканинах, хірургічного втручання на складених тканинах, хірургічного втручання з метою трансплантації шкіри, резекції цілісного органа, хірургічного втручання з метою трансплантації органа або реплантації кінцівки або іншої частини тіла.

Лікування пов'язаних з ішемічно-реперфузійним пошкодженням (ІКІ) показань

Способи за даним винаходом, наприклад, що стосуються лікування пов'язаних з ІКІ показань, можуть додатково включати введення пацієнту, який цього потребує, ефективної кількості терапевтичного засобу, що зв'язується з білюом СО47, і донора, попередника оксиду

Зо азоту або й того, й іншого; місцевого засобу, який утворює оксид азоту; засобу, що активує розчинну гуанілілциклазу; засобу, який інгібує фосфодіестерази циклічних нуклеотидів; або будь-якої комбінації будь-яких із вищеперерахованих.

У даних способах донор або попередник оксиду азоту може бути вибраний із газоподібного

МО, ізосорбіду динітрату, нітриту, нітропрусиду, нітрогліцерину, З-морфоліносидноніміну (ЗІМ-1),

З-нітрозо-М-ацетилпеніциламіну (ЗМАР), діетилентриаміну/ноО (ОЕТА/МО), 5-нітрозотіолів, Віаїйе і аргініну.

Засіб, який активує розчинну гуанілілциклазу, може являти собою відмінний від хімічного активатора на основі МО (оксиду азоту) хімічний активатор розчинної гуанілілциклази, яка підвищує рівні СМР в клітинах судин. Такі засоби зв'язують розчинну гуанілілциклазу в ділянці, відмінній від МО-зв'язувального мотиву, й активують фермент незалежно від локального МО або стресу, спричиненого активними формами кисню (КО5). Необмежувальні приклади хімічних активаторів розчинної гуанілілциклази включають органічні нітрати (Агі7 еї аїІ. (2002) 9. Віої.

Спет. 277:18253-18256); протопорфірин ІХ (Ідпато еї аї. (1982) Ргос. Май). Асай. сі. О5А 79:2870-2873); МО-1 (Ко евї а!. (1994) Віоса 84:4226-4233); ВАМ 41-2272 та ВАМ 41-8543 (Єавспі єї аІ. (2001 Маїшге 410 (6825): 212-5), СМЕ-1571 та А-350619 (огляд наведено в Емудепом 6ї аї. (2006) Маї. Нем. Огид. Оівсом. 5:755-768); ВАМ 58-2667 (Сіпасідчаї; Егеу еї аї. (2008) уоштаї ої

Сіїпісаї Ріпаптасоіоду 48 (12): 1400-10); ВАМ 63-2521 (Віосідсаї; Мійепдоп еї аї. (2009)

Спеттвеєаснет 4 (5): 853-65). Додаткові активатори розчинної гуанілілциклази розкриті в Єїазснп еї аї. (2011) Сіксшайоп 123:2263-2273; ЮОегрузпіге апа Мапецйа (2012) Апп. Неу. Віоспет. 81:533- 559 та Моззатап еї аї. (2012) Стіса! Саге Везєагсй апа Ргасіїсе, том 2012, ІО статті 290805, сторінки 1-12.

Засіб, який інгібує фосфодіестерази циклічних нуклеотидів, може бути вибраний із тадалафілу, варденафілу, уденафілу, силденафілу й аванафілу.

Лікування автоїмунних, автозапальних, запальних захворювань і серцево-судинних захворювань

Терапевтичний засіб, який зв'язується з білюм СО47, для лікування автоімунного, автозапального, запального захворювання та/або серцево-судинного захворювання можна об'єднувати з одним або декількома терапевтичними засобами, такими як антитіло, мала хімічна молекула або біологічна, або медична, або хірургічна процедура, які включають без 60 обмеження наведені нижче. Для лікування автоїмунних, автозапальних і запальних захворювань комбіновані терапевтичні засоби являють собою наступні: гідроксихлорохін, лефлуномід, метотрексат, міноциклін, сульфасалазин, абатацепт, ритуксимаб, тоцилізумаб, інгібітори або блокатори ТМЕ (адалімумаб, етанерцепт, інфліксимаб, цертолізумаб пегол, голімумаб), нестероїдні протизапальні лікарські засоби, глюкокортикоїди, кортикостероїди, імуноглобулін для внутрішньовенного застосування, анакінру, канакінумаб, рилонацепт, циклофосфамід, мікофеноляту мофетил, азатіоприн, б-меркаптопурин, белімумаб, бета- інтерферони, ацетат глатирамеру, диметилфумарат, фінголімод, терифлуномід, наталізумаб, 5- аміносаліцилова кислота, мезаламін, циклоспорин, такролімус, пімекролімус, ведолізумаб, устекінумаб, секукінумаб, іксекізумаб, апреміласт, будезонід і тофацитиніб. Для лікування атеросклерозу комбіновані терапевтичні засоби або процедури являють собою наступні: медичні процедури та/або хірургічне втручання, включаючи коронарне втручання (коронарну ангіопластику та стентування) через шкіру, шунтування коронарної артерії та каротидну ендартеректомію; терапевтичні засоби, включаючи інгібітори ангіотензинперетворювального ферменту (АСЕ) (включаючи раміприл, хінаприл, каптоприл й еналаприл), блокатори кальцієвих каналів (включаючи аміодипін, ніфедипін, верапаміл, фелодипін і дилтіазем), блокатори рецепторів ангіотензину (включаючи епосартан, олмесартен, азилсартан, валсартан, телмісартан, лозартан, кандесартан й ірбесартан), комбінацію езетимібу та симвастатину, інгібітори РОБ5КОУ (включаючи алірокумаб й еволокумаб), анацетрапіб й інгібітори НМО-СоА (включаючи аторвастатин, правастатин, симвастатин, розувастатин, пітавастатин, ловастатин і флувастатин). Для лікування серцевої недостатності комбіновані терапевтичні засоби являють собою наступні: інгібітори АСЕ, блокатори рецепторів ангіотензину, інгібітори рецепторів ангіотензину-неприлізину (включаючи комбінацію сакубітрилу та валсартану), діуретики, дигоксин, інотропи, бета-блокатори й антагоністи альдостерону. Для лікування легеневої гіпертензії комбіновані терапевтичні засоби являють собою наступні: силденафіл, тадалафіл, амбрисентан, босентан, мацитентан, ріоцигуат, трепростиніл, епопростенол, ілопрост і селексипаг.

Як розкрито в даному документі, тАб до СО47 вводять перед, одночасно або після введення комбінованих терапевтичних засобів або здійснення медичних або хірургічних процедур.

Інший застосовний клас сполук для комбінованих терапій, передбачених в даному документі, включає модулятори зв'язування 5ІК;а/СО47, такі як антитіла до 5БІКР;а, а також розчинні білкові фрагменти цього ліганду або СО47 самого по собі, які інгібують зв'язування

ЗІК;а з СО47 або перешкоджають йому. Слід зазначити, що охоплені в даному документі терапевтичні способи включають в себе застосування антитіл, розкритих в даному документі, окремо, в комбінації один з одним і/або також з їх антигензв'язувальними фрагментами, наприклад, в усіх можливих комбінаціях цих сполук-антитіл.

Приклади ілюструють різні варіанти здійснення даного винаходу, але не повинні розглядатися як такі що обмежують даний винахід лише такими конкретно розкритими варіантами здійснення.

Діагностика експресії СО47

Діагностика (зокрема додаткова та супутня) є предметом уваги в галузі онкології.

Розроблена низка діагностичних аналізів для терапевтичних препаратів з цілеспрямованою дією, таких як герцептин (Сепепіесі)), тарцева (051 РПаптасеціїсаІ5/зЗепепіесі), іреса (Авіга 7епеса) й ербитукс (Іпсіопе/Вгібїо! Муег5 бацірб). Антитіла тАб до СО47 за даним винаходом особливо добре підходять для використання в діагностичних застосуваннях. Відповідно, в даному винаході передбачений спосіб вимірювання експресії СО47 в пухлинних та/або імунних клітинах із застосуванням тАБб до СО47 за даним винаходом. тАб до СО47 за даним винаходом можна застосовувати в діагностичному аналізі та/або способі іп міго для вимірювання експресії СО47 в пухлинних та/або імунних клітинах, що присутні в зразку пухлини від пацієнта. Зокрема, тАб до СО47 за даним винаходом можуть зв'язувати СО47 на приблизно 1 95 або більше пухлинних та/або імунних клітин, що присутні у зразку від пацієнта, порівняно з еталонним рівнем. В іншому варіанті здійснення тАб до СО47 можуть зв'язувати СО47 на приблизно 5 95 або більше пухлинних та/або імунних клітин у зразку від пацієнта порівняно з еталонним рівнем, наприклад, або зв'язувати щонайменше 10 95, або щонайменше 2095, або щонайменше 3095, або щонайменше приблизно 40 95, або щонайменше приблизно 50 95, або щонайменше приблизно 60 95, або щонайменше приблизно 7095, або щонайменше приблизно 8095, або щонайменше приблизно 9095 або 10-100 95 порівняно з еталонним рівнем. У ще одному варіанті здійснення тАбр до СО47 можуть зв'язувати СО47 на пухлинних та/або імунних клітинах в зразку від пацієнта на рівні, який 60 щонайменше в приблизно 2 рази перевищує еталонний рівень, або щонайменше в приблизно З рази, або щонайменше в приблизно 4 рази, або щонайменше в приблизно 5 разів, або щонайменше в приблизно 10 разів, або який в 2-10 разів або більше перевищує еталонний рівень. Як описано в даному документі, вимірювання експресії СО47 в зразку від пацієнта забезпечує біологічну та/або клінічну інформацію, яка дозволяє приймати рішення з розробки та застосування потенційної лікарської терапії, а саме із застосування антитіл до СО47 для лікування солідних і гематологічних типів раку, автоїмунного захворювання, запального захворювання, атеросклерозу, серцевої недостатності, за яких рецептор СО47 відіграє певну роль.

В одному варіанті здійснення спосіб іп міго передбачає одержання зразка від пацієнта, приведення зразка від пацієнта в контакт з моноклональним антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом, які специфічно зв'язуються з оепітопом у межах послідовності під зЕО ІЮ МО:65, і здійснення аналізу щодо зв'язування антитіла зі зразком від пацієнта, де зв'язування антитіла зі зразком від пацієнта є діагностичною ознакою експресії с0р47 у зразку від пацієнта.

В іншому варіанті здійснення переважні антитіла до СО47 або їх антигензв'язувальні фрагменти, у випадку способу іп міго, являють собою такі, що містять комбінацію з важкого ланцюга (НС) і легкого ланцюга (І С), перелічених в комбінації: () важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЗЕО ІЮ МО:102, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:101; (ії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЗЕО ІЮ МО:104, та легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:103; де амінокислотна послідовність Мн щонайменше на 9095, 9595, 97 95, 9895 або 9995 ідентична їм, а амінокислотна послідовність Мі щонайменше на 90 95, 95 95, 97 9», 98 965 або 99 95 ідентична їм.

Відповідно, діагностичний аналіз відповідно до даного винаходу може передбачати приведення пухлинних та/або імунних клітин в зразку від пацієнта в контакт з тАб до СО47 або його антигензв'язувальним фрагментом, і здійснення аналізу щодо зв'язування тАб до СОА7 зі зразком пухлини від пацієнта, де зв'язування тАб до СО47 зі зразком від пацієнта є діагностичною ознакою експресії СО47. Переважно, зразок від пацієнта являє собою зразок, який містить пухлинні клітини. У даному випадку зв'язування тАб до СО47 за даним винаходом або його антигензв'язувального фрагмента з пухлинними клітинами можна оцінювати щодо експресії СО47. Рівні експресії СЮО47 пухлинними клітинами та/або імунними клітинами у зразку пухлини від пацієнта можуть бути прогностичними ознаками клінічного результату у пацієнта.

Підвищене зв'язування тАб до СО47, що зв'язуються з клітинами у зразку від пацієнта, асоційовано з підвищеною експресією СО47. В одному варіанті здійснення тАб до СО47 за даним винаходом можуть зв'язуватися з приблизно 5 95 або більше пухлинних клітин в зразку від пацієнта, і це може вказувати на те, що пацієнт отримує користь від швидкого втручання щодо солідного та гематологічного раку. Діагностичний аналіз такого виду можна застосовувати для визначення придатних схем лікування для солідних і гематологічних типів раку, що характеризуються відносно високим рівнем зв'язування тАб до СО47 за даним винаходом, тобто підвищеною експресією СО47.

Слід прийняти до уваги, що розкритий в даному документі діагностичний аналіз має низку переваг. Найважливішою з цих переваг є те, що діагностичний аналіз за даним винаходом може надавати користувачу більшу впевненість в експресії СО47 в пухлинних та/або імунних клітинах.

Підвищена чутливість діагностичного аналізу за даним винаходом дозволяє виявляти СО47 в зразку від пацієнта за нижчих рівнів, ніж це було раніше. тАб до СО47 за даним винаходом можна застосовувати як засоби для діагностичного аналізу щодо багатьох форм раку. Конкретні форми раку, які можна успішно досліджувати щодо експресії СО47, включають чутливі типи гемобластозу та солідні пухлини, зокрема без обмеження типи лейкозу, типи лімфоми та солідні пухлини.

У діагностичних аналізах за даним винаходом можна використовувати будь-які придатні засоби для виявлення зв'язування тАб до СО47 для вимірювання експресії СО47. Придатні способи можна вибирати з урахуванням характеру будь-якого репортерного фрагмента, який застосовується як мітка тАбр до СО47 за даним винаходом. Придатні методики включають проточну цитометрію, та формати твердофазного імуноферментного аналізу (ЕГІЗ5А), й аналізи з використанням наночастинок, але жодним чином не обмежуються ними. Особливо переважно, щоб діагностичний аналіз за даним винаходом включав імуногістохімічне дослідження, за якого зразок пухлини піддають дії тАб до СО47 за даним винаходом, і рівень мічення клітин оцінюють за допомогою імуногістохімічного дослідження. 60 Приклади

Приклад 1

Амінокислотні послідовності

СОК легкого ланцюга 1111114сові77 | 7 їсонаг// | 1сов3 7/7 р аю и

ОО П5ОЄИ ОБОтоя Соя

ЗЕО ІЮ МО:11 ЗЕО І МО:15 ЗЕО І МО:18 11111111 рухові 7 | УхвАСОВ2 0 УхвАСОВІЇГГ///:ГЗ 10950900 (000 23

ЗЕО І МО:12 ЗЕО ІО МО:16 ЗЕО І МО:19 пи ТЕТ Коть т 5 ПООООООООООНЯ ПОООООООООООООООООООННЯ НООО

ОВ я

ЗЕО ІЮ МО:13 11111111 1м9соВв1 7777177 |Ух9соВ2 0 УхЗСоВІ////:Г

СПЕ Пот ав

ЗЕО ІЮ МО:14 ЗЕО ІО МО:17 ЗЕО Ір МО 20

СОК важкого ланцюга 107711 нсові 17777777 нерва | 7 нео 11111111 рф УхнсоВі 7 УхеНнСрВва 7777 | УхенНСоВІ/:

Зо ОБО Па

ЗЕО І МО ЗЕО І МОА ЗЕО ІО МО:7 11111111 мхнсовВіШ/ЧУ

ПН ПИ ПИ Е

ЗЕО ІЮ МО:8 77117... фУхвНСОВІ //// УхХАНСОВа 7 | Ухв-НСОВІЇ///:Г 9 оовевє 100

ЗЕО ІЮ МО ЗЕО І МО ЗЕО ІЮ МО:9 11111111 | Ухе-НСОВІ 01 Ухе-НСоВа2. 7777777 | УхеНСОВІ З:

Се поет ФО

ЗЕО І МОЗ ЗЕО ІЮ МО:6 ЗЕО І МО:10

Варіабельні домени легкого ланцюга миші »Ухатипт 01

ОМІ МТОТРІ БІ РУМІ РОАБІЗСАЗНОБІМНТМОаМТМІ СМР ОКРООБРКІ ПИКУЗМАЕБамМРО вЕЗОаЗзИаБзИаТОЕТІ ТІЗВМЕАЕОГ ЯМ СЕОаЗНУРУТРаСсИаткІ ЕК (ЗЕО І МО:41). »Ухатип 02

ОМІ МТОТРІ БІ РУМІ РОАБІЗСАЗНОБІМНТМОа МТМ СМР ОКРООБРКІ ПИКУЗМАЕБаМРО вЕЗОаЗИаБзИаТОЕТІ ТІЗВМЕАЕОЇ ау СЕОСЗНУРУТР,ОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮ МО 42). »Ухвтип 03

РІОМТОТТ55І ЗАБІ аОГВМТІЗСВАБОВІЗММІ МУ МООКРєРраИтУКО ПИМТвІ У5аУРЗАЕЗИа5 авБаторуБіІ ТІМ ЕОЕВІАТУЕСООСМТІ РУУТЕРССИтТкКІ БІК (ЗЕО ІО МО:46). »УхУти 04

ОМЕМТОТРІ БІ РУБІ ЧРОАБІЗСВЗБОМІМОЗМОаМ ТМ ЕМУМ ОКРИОБРКІ ПУКМЕНАЕБамМРО вЕЗОаЗзИаЗИаТОЕТІКІЗАМЕАЕОЇ ауУМСРОВЗНУРМУТРаСОаИткМУвїІКк(ЗЕО ІЮ МО:50).

Варіабельні домени важкого ланцюга миші »УхатитноО1

ЕМО 0О5ОаРЕЇ УКРОАЗУКМЗСКАБИах ТЕТМУМІНМУУКААРИаСаї ЕМІСМІМРУМОСІІ ММЕКЕ кКакадатТУТ5ОоК55ЗТАУМОІ 55 Т5ЕОБАУМУСтвасУУУРєРОУМаОа,тТТттУ55 (5ЕО І МО:21). » Мхати-НОг

ЕМО 0О5ОаРЕЇ УКРОАЗУКМЗСКАБИах ТЕТМУМІНМУУКААРИаСаї ЕМІСМІМРУМОСІІ ММЕКЕ

КакдтУТ5ОоК55ЗТАУМОІ 55 ТЗЕОЗАУУУСтвасиУУєОоУМаОатІ МТУ55 (ЗЕО ІЮ МО:22).

Зо » УхвтигНОЗ

ЕМО! 0О5ОаРЕЇ МКРОІАБЗУКІЗСКАЗИаУЗЕТМУМІНМИ УМОЗНИаТкві ЕУЛаТміоРІ МЕАЮОТТУМОКЕК

СКАТ ТМОКЗ5ЗЗТАМУМВІ 551 ТЗАОЗАУУУСАнас,кААМОУМУСсСОСТеМТУ55 (5ЕО ІЮ МО:С28). »УхУтитног

ОМОЇ ООБСАЕЇ АКРаАЗБМОМЗСКАЗОаУТЕТММУМІНМУУКОАРИаССаІ ЕМО М ТОРАТОМТЕММОК

ЕКОКАТІ ААДОНЗЗОЗТАУМВІ 551 Т5ЕОБАУУУСАсаавУаі амманавзвмТмьо (5ЕО ІЮ МО:З5).

Варіабельні домени легкого ланцюга людини »Ухапиті 01

РІММТО5РІ БІ РУИТРОЕРАБІЗСВЗВОБІМНТ Мам МІ ЯМУ М ОКРИОІОБРАПІІМКУ5МАЕБамМРО вЕЗаЗзОаБзИаТОЕТІКІЗАМЕАВОМУСа уУСРОСЗНУРМТРСОСТКІ ЕК (5ЕО ІЮ МО:43). »Ухапиті 02

ОМММТО5РІ 5І РМТІ ЧОРАБІБСВОВОБІУНТМОа МТМ СМ ЕООВРООБРАВІ УКУ5МАЕБамМР рагЕзазавзаторЕТІі КІЗАМЕАЕОМаУУУСЕОСЗНУРУТЕСОИТКІ ЕК (ЗЕО ІЮ МО 44). »Ухапиті 03

РІММТО5РОБІ АМ5І ЧЧЕВАТІМСНЗВКОБІМНТМОамМТ МІ СМ МООКРООРРКО МКМ МАЕЗаМРО вЕЗОаЗИаБзаИаИТОЕТІТІЗ5І ОАЕОМАМУУСЕОСЗНУРУТЕСОИТКІ ЕК (5ЕО ІЮО МО 45). » Ухвпиті 04

РІОМТО5РОБІ БАБМИарАмМТІТСВАБОВІЗММІ МУ МООКРОаКАРКІ ПУИМТ5ВІ У5БаМРОВЕЗИа5 азаторЕТЕТІЗ5І ОРЕПОІАТУМСООСМТІ РУУТЕРСОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮ МО:АТ). » Ухвпиті 05

РІОМТО5РОБІ БАМИ АВМТІТСВАБОБІЗММІ МУМООКРОКАРКИ МУЗА У5ОаМРЗАЕЗИа5 азатТОЕТІТІЗ5І ОРЕОРАТУУСООСМТІ РУУТЕРСОСТКМЕЇК (5ЕО ІЮ МО:48). » УхвпПиті 06

РІММТО5РІ 5І РУИТРАЕРАБІЗСВАБОВІВЗММІ МУ М ОКРИОБРА ПУМТЗВІ У5МРОВЕЗИБОа

ЗаТОРТКІЗАМЕАВОМИа СО саМТтІ РУТЕСОСТКІ ЕК (ЗЕО ІЮ МО:49). »УхЗ9питі 07

ОМММТО5РІ 5І РМ аОРАБІЗБСВУЗОММОЗМОаМТ М ЕМЕОООВРООЗБРЕАВІ МКМЕНВЕБОаМРОВЕ зававатТорЕТІі КІЗАМЕАЕОМаУУУСЕОС5НУРУТЕСОТКІ ЕК (ЗЕО ІЮ МО:51). »УхЗ9питі 08

РІММТО5РОБІ АМ5І ЧЧЕВАТІМСНОЗОМІМО5МаМ ТМ ЕМ МООКРООРРКІ ГПИКМЕНАВЕБаМРО вЕЗОаЗОаБзаИаИТОЕТІ ТІЗ5І ОАЕОМАУМУУСЕОСЗНУРУТЕРСОИТКІ ЕК (ЗЕО ІЮ МО: 52).

Варіабельні домени важкого ланцюга людини »УМхапитної

Ко) ОМОЇ МОБОАЕУККРИаАБМОУЗСКАБИаИмМТЕТМУМІНУІ ВОАРИаОССІ ЕМ МОаМІМРУМОСІ ММЕКЕ кКавУТмМтТ5ОТ5ІЗТАУМЕЇ 551 А5БООТАУУУСАВаспуУМУРОММСОАТІ МТУ (5ЕО ІЮ МО:23). »УМхапитНног

ОМОЇ МОБОАЕУККРИаАБМОУЗСКАБИаИмМТЕТМУМІНУІ ВОАРИаОССІ ЕМ МОаМІМРУМОСІ ММЕКЕ кКавуУТмМтТ5ОТ5ІЗТАУМЕЇ 551 А5БООТАУУУСАвапуУМУМ ПУ С,СОАТІ МТУ (ЗЕО ІЮ МО:24). »УхапитноЗ

ЕМО МОБСАЕУМККРОАТУКІЗСКУБИамМТЕТМУМІНММОСАРИЕКИ ЕМ МОаМІМРУМОСІІ ММЕКЕК

САМТІТАОТЗТОТАУМЕЇ 551 ВБЕОТАМУУСАТаСУМУРО ММ СОСТТУТУ55 (5ЕО ІЮ МО 25). »УхаАпит ної

ЕМО МОБОАЕМККРОЕБІ КІЗСКаБаИмМ ТЕТМУМІНМУМВОМРИаИакаТагЕМУмМаТміМРММОСІЇ ММЕКЕ

КОаомМтТІЗАОРК5БІЗТАМІ ОМ/55І КАБОТАМУУСАВСОСУМУРОММСОСТТУТУЗ5 (ЗЕО ІЮ МО:С26). »УхаАапитНноО5

ОМОЇ МОБСАЕМККРИОІАБУКУЗСКАБОМУТЕТМУМІНМУМАОАРИасСІ ЕМ МОамМІМРММОСІ ММЕКЕ кКавуУТтмМтТТОтТ5Т5ТАУМЕЇ В5І А5ООТАУУУСАвВасУУУРОММаОСТТУТМ55 (5ЕО ІЮ МО:27). »УхвпитНноб

ОМОЇ МОБСАЕМККРИОІАБУКУЗСКАБОУЗЕТМУМІНМУВОАРИаОСІ ЕМ МОаМмІОРІ МС ТММОК

ЕКОАВУТМТАОТЗТЗТУМУМЕЇ 551 В5ЕОТАУУМСАвСааКААМОУУМУСОСТІ МТУ55 (5ЕО ІЮ МО:29). »УхвпитНноО

ОМОЇ МОБСАЕМККРИаБЗУКУЗСКАБОУЗЕТМММІНМУУВОАРИОССГ ЕМ МОаМІОРІ МСЮТТУМОК

ЕКаВМТІТАОСЕЗТЗТАУМЕЇ 551 ВБЕОТАУУУСАВНИСКААМО УМ СОСТІ МТУ (ЗЕО ІЮО МО:30).

БО »Ухвпитнов

ЕМО МОБОАЕМККРОЕБІ КІСКИ БИ МЗЕТМММІНУУВОМРОаКИагЕМУМОИМІОРІ МО ЮОТТУМОКЕ

КОаомМтТІЗАОРК5ІЗТАМІ ОМ/55І КАБОТАМУУСАВНСОКВАМОММ ПОСТІ МГУ55 (ЗЕО ІЮ МО:31). »УхвпитноОЗ

ОМОЇ МОБСАЕМККРИаБЗУКУЗСКАБОУЗЕТМММІНМУНОАРИОСС ЕМ МОаМІОРІ МСЮТТМАОК

ЕОСАМТІТАОЕЗТОТАУМЕЇ 551 В5ЕОТАУУУСАВОаКААМОМУУМСОСТІ МТ У55 (ЗЕО ІЮ МО:З2). »УхвпитНн1о

ЕМО МОБОАЕМККРОЕБІ КІЗСКОБИаУЗЕТМММІНУУВОМРОаКаТгЕМУМОамМІОРІ МС ЮОТТМ5РОЕ

ОСОМТІЗАОКБІЗТАМІ ОМ/55І КАБОТАМУУСАВнОСОКВАМОУМ аВИті МТУ55 (ЗЕО ІЮ МО:33). »УхвпитнНі11

ОМОЇ МОБСАЕМККРИОАБМОМЗСКАБОаМЗЕТМУМІНУІ ВОАРИОСГ ЕМ МОаМмІОРІ МС ТТ ИМОК

ЕКОВУМТМТ5ЗОТ5ІЗТАММЕЇ 551 А5БОЮТАУУУСАВаСКВАМО МУ С,ОАТІ МТУ (ЗЕО ІЮ МО:З4). »УхЗ9пит 12

ОМОЇ МОБОАЕМККРИОАБУКУЗСКАБИаМУТЕТМУУММІНУМВОАРОСС ЕМ МОаМТОРАТОМТЕМУМО

КЕКОАУТМТАОТОТОТМУМЕЇ 55І ВБЕОТАМУУСАНОСЮІЯМИаЇ ам сОСстІ МТУ55 (ЗЕО ІО

МО:З6). »Ух9питНн1З

ОМОЇ МОБСАЕУМККРИаБОЗУКУЗСКАБИаМУТЕТМУМУМІНУУВОАРИаСаТІ ЕМ МамМТОРАТОМТЕМУМО

КЕКОАВМТІТАСЕЗТЗТАММЕЇ 551 ВБЕОТАУУУСАВнСОСС Уа амМаоОстІі МТУ55 (ЗЕО ІЮ МО:37). »УхЗ9пит 14

ЕМО МОБОАЕМККРОЕБІ КІЗСКаБОаМ ТЕТМУУМІНУУМВОМРаТКаИагЕМУМаМТОРАТОМТЕММОК

ЕКООМТІЗАОКВІЗТАМІ ОМ/551 КАБОТАМУМСАВнОСкСВМаї ам аОстІі МГУ55. (ЗЕО ІЮ МО':38). »Ух9питНн15

ОМОЇ МОБОАЕУМККРИаБЗУКУЗСКАБИаИМУТЕТМУУМІНМУУВОАРИООССЇ ЕМ МОаМТОРАТОМТЕМАО

КРОС,ВАМТІТАРЕЗТЗТАУМЕЇ 551 ВБЕОТАУУУСАВнОСОСВМаї а МуспоОаті МТУ55 (5ЕО І МО:39). »Ух9питНн16

ЕМО МОБОАЕМККРОЕБІ КІЗСКОа БОМ ТЕТМУУМІНУУВОМРОаКаИаг ЕМ МОаМТОРАТОМТЕМРБ5

ЕОСОМТІЗАОКВІЗТАМІ ОМУ5БІ КАБОТАМУУСАВнОСІУаї а иМуУсО,тТІ МТУ55 (ЗЕО ІЮ МО:40).

Ес ДО людини »Ес ЇдД01 людини

АБТКОаРБОМЕРІ АРОБ5КОТЗИасСТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБМУМЗОАІ Т5ОаМНТЕРАМІ О55(11І М5І. 55ММТМРБОББВІ атТОТМІСМУММНКРУОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕЇГ І ЯСРОМЕЇ ЕРРКРКОТ

ІГМІЗАВТРЕМТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕМУ УМВС МЕМНМАКТКРАЕЄєОММОТМАМУБМІ ТМ НОСОМ МО

КЕМКСКМУ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРАВЕРОММТІ РРОНОЄТКМОМ5І ТС МКОЕМРБОІАМЕМ ЕМ

СОРЕММУКТТРРМІ О5ОС5ЕБРІ ЗК ТОКЗВУМОСОММЕЗСО5УМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І РОК (ЗЕО ІО МО:53). »Ес Ід21-М2970 людини

АБТКОаРБОМЕРІ АРОБ5КОТЗИасСТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБМУМЗОАІ Т5ОаМНТЕРАМІ О55(11І М5І. 55ММТМРБОББВІ асТОТМІСМУММНКРУОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕГ І С РОМРІ ЕРРКРКОТ

Ко) ІГМІЗАВТРЕМТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕМУ УМВС МЕМНМАКТКРВЕЕОМО5БТУВМУМ5МІ ТМ НОСОМ МИ

СОРЕММУКТТРРМІ О5ОС5ЕБРІ ЗК ТОКЗВУМОСОММЕЗСО5УМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І РОК (ЗЕО ІЮО МО:54). »Ес ЇдД02 людини

АБТКОаРБОМЕРІ АРСЗ5АЗТ5Е5ТААГ аСІ МКОМЕРЕРУТУБМ М5ИАГТ5ОаМНТЕРАМІ 055: 51.

З5ММТМРОБМЕИТОТУТСММОНКРОЬМТКМОКТМЕВКССМЕСРРСОРАРРМАСРОМРЇ ЕРРКРКОТІ МІ

ЗАТРЕМТСУМММОМ5НЕОРЕМОЄММ УМРаТмМЕМНМАКТКРАЕЄОЕЄМОТЕВУММІ ТМУМНОВУІ МаКЕ

МмКСКУ5БМКаї РАРІЕКТІЗКТКООРАЕЕРОМУМТІ РРОВЕЕМТКМОМОІ ТОЇ МКОЕМРОБОІАМЕМЖМЕЗБМИО

РЕММУКТТРРМІ О5БраЗЕНРІ ЗК ТМОКЗАУМОаММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКБІ 5І 5РОК(ЗЕО

ІО МО:55). »Ес ЇдДОЗ3 людини

АБТКОаРБОМЕРІ АРС5НОТ5ИаСсТААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУУМЗИаАІТ5ОаМНТЕРАМІ О55И11І 5

І 55 УРБОБОІ СТОТМТСМУМНКРОМТКМОКВАМЕЇІ КТР ФОТТНТОРАСРЕРКЗСОТРРРСОРВАВСРЕ

РК5СОТРРРСРВАСРЕРКЗСОТРРРОРАСРАРЕЇ І аа РОМБ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМ ОУН

ЕОРЕМОЕКМ УМВОМЕМНМАКТКРВЕЄОММ5ОТЕНМУ5МІ ТМ НОМ МО КЕМУКСКМУ5МКАЇ РАРІЕК

ТІБКТКООРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТС МКОЕМРБОІАМЕМЖМ ЕБЗСООРЕММУМТТРРМІ 050

ЕР МБ5КІТУОКЗАМОСС,МІЕЗСЗУМНЕАЇІ НМАЕТОКБІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО:56). »Ес ІдД4 людини

БО 55ММТМРБОББІ аСТКТУТСОММОНКРУОМТКМОКАМЕБКМОаРРСОРЗСРАРЕРБІ СОРБМБЇ ЕРРКРКОТІ МІ

ЗАТРЕМТСУММОМ5БОЕОРЕМОЄММ УМО МЕМНМАКТКРВЕЄОЕЄМО ТУВМММІ ТМ НОВУ МОаКЕ

МмКСКУ5БМКаї РОБІЕКТІЗКАКООРАВЕРОММТІ РРООБЕМТКМОМ5І ТС МУКЕЕМРЗОІАМЕМЕЗМОИ

ОРЕММУКТТРРМІ ОБразЕРІ УВІ ТМОКЗАУМОБбСМУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКБІ БІ БІС 0 (ЗЕО

ІО МО:57). »Ес Ідо4 5228Р людини

АБТКОаРБОМЕРІ АРСЗ5АЗТ5Е5ТААГ аСІ МКОМЕРЕРУТУБМ М5ИАГТ5ОаМНТЕРАМІ 055: 51. 55ММТМРБОБВІ ТКУ СОММОНКРУОМТКМОКАМЕБКМОаРРСОРРСОРАРЕРБІ СОРБМРБЇ ЕРРКРКОТІ МІ

МмКСКУ5МКаї РОБІЕКТІЗКАКООРАВЕРОММТІ РРООБЕМТКМОМ5І ТС МКОЕМРБОІАМЕМЖЕЗМИ

ОРЕММУКТТРРМІ ОБравзеЕРІ УЗА ТМОКЗАМОБаММЕЗСЗММНЕАГНМНУТОКБІ БІ БІС 0 (ЗЕО

ІО МО:58). »Ес Ідо4 РЕ людини

АЗТКОаРБОМЕРІ АРСЗАЗТЗЕЗТААЇ СІ МКОМЕРЕРУТУЗУУМЗИАІ ТЗаУНТЕРАМІ О55(Д2І 51

ЗМУ УРБЗБЗІ ИТКТМТОММОНКРОМТКУОКАМЕЗКМОа РРСРРСОРАРЕРЕСОРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ М

ІЗАТРЕУТСММУМОУЗОЕОРЕМОЕЄЕМУ УМВИаМЕМНМАКТКРАЕЄОЄМЗТУАМММІ ТМ НОБУУЛІ МОКЕ

УКСКУЗМКаї РУЬУІЕКТІЗКАКЕИОРАВЕРОМУУТІ РРЗОЄЕМТКМОМУБІ ТС УКаЕМРЗОІАМЕМЕЗМОа

ОРЕММУКТТРРМІ ОБравзЕРІ У5АТМОКЗАМОБаММЕЗСЗММНЕАІЇ НМНУТОКБІ І БІК (ЗЕО

ІО МО:59). »Ес Ідо4 РЕ! людини

АЗТКОаРБОМЕРІ АРСЗАЗТЗЕБЗТААЇ СІ УКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаУНТЕРАМІ О55І 51.

ІЗАТРЕУТСМММОУЗОЕОРЕМОЕЄЕМУ УМВИМЕМНМАКТКРАЕЄОЕЄМЗТУВМУМУМІ ТМІ НОВУ МОаКЕ

ІО МО:99). »Каппа І С людини

ВАТУМААРБЗУРІЕРРБЗОЕОЇ КЗатАБУМСТ І ММЕМРАЕАКМОМКМОМАГ ОБОаМЗОЕЗУТЕООЗКО

ТМ5І 55 ТІ ЗКАОЮОМЕКНКУМАСЕМТНОІ 5БРУТКЗЕМНАСИЕС (5ЕО ІО МО:60). »Ес Ідо2с щура

АВТТАРБМУРІ МРОСЗИТ5а5І МТ аСІ УКОМЕРЕРУТУКУМЗИАаІ 55ИМНТЕРАМІ О5ИІ МТ.

ЗМ ГУРТУ ЗБОТМТОЗМАНРАТК5ОМІ ІКВІЕРВАРКРАРРТОІСЗСООМІ пА!АРЗМУРІЕРРКРКОЇ.

МІТГТРКМТСУММОМЗЕЕЕРОМОЕЄБМ ЕМОМУАМЕТАОТОРНЕЕОІЇ Ма ТЕАМУМУ5ТІ НІОНОЮМУМ5ОК

ЕРКСКУММКОЇ РОРІЕКТІЗКРАСКАВТРОУМТІРРРАЕОМЗКМКУВІ ТСМУТЗЕМРАБІЗМЕМЕВМНСО

ЕГЕООБУКМТІ РМ ОБОЕЗУРІ У5КІ БМОТОБУМАаТріМТсо5УУНЕАЇ НМННТОКМІ БАБРОК (5ЕО

ІО МО:61). »Каппа І С щура

ВАБААРТУБІЕРРЗМЕОЇ Т5аСАТУМСЕУММЕМРАВІЗМКУКІрСаЗЕОВрамі р5УТрООБКОЗТ

У5М55ТІ ЗІ ТКХУЕМЕВНМІ МТСЕУУНКТЗ5ЗРУУКОЕМАМЕС (5ЕО ІЮ МО:62).

Зо Ес ідо кролика »Ідо кролика

СОРКАРБЗМЕРІ АРСОСОаОТРУОБЗТУТ аСІ УКаМІ РЕРУТУГУМЗОТІ ТМСОМАТЕРЗУНОБЗИЇ 5

І 5БМУ5УТ55550РУТСММАНРАТМТКМОКТМАРЗТОЗКРТСРРРЕЇ ЇЇ ОаРБЗМУБІЕРРКРКОТІ МІЗАТР

ЕМТСУМУрУБОВОРЕМОЕЄПТММІММЕОМУАТАВРРІ ВЕСОЄМЗТІВМУЗТІ РІАНОМІ ВЕКЕРКСКУН

МКАЇ РАРІЕКТІЗКАВСОРІ ЕРКМУУТМаРРАЕЕЇ 55085551 ТСМІМСЕМРБОЇЗМЕУМЕКМОКАЕОМУК

ТТРАМІ О5ОСБЗМУРІ У5КІ БМРТЗЕМОВИаОМЕТСЗУМНЕАІ НМНУТОК5БІЗАЗРОК (5ЕО ІЮ МО:63). »Каппа І С кролика

ВОРМАРТМ ІЕРРААВОМАТатуТУСМАМКМЕРОУТМ ТУЕУрИТаттОоОТттатємМме5КТРОМЗАОСТУ

М ЗТ Т5ТОУМЗНКЕУТСКУТОСТТУМОЕМНИЮс (5ЕО ІО МО:64). »0б0р47

ММ/РІМААЇ І аЗАССИавАО ЕМКТКОМЕЕЄТЕСМОТУМІРСЕМТММЕАОМТТЕУМУКУКЕКОа ВО

УТЕрОАЇГ МКЗТУРТОЕЗЗАКІЕУЗОЇ І КаБАБІ КМОКЗРАУЗНТОамММТСЕМТЕЇ ТАЕСЕТПЕ! КУВУМ

ЗМ ЕЗРМЕМІИМІЕРІБЄАІ С ЕУУСОРаИІКктІ КИВЗасСмМрЕКТІАСІ МАСІ МІТМІМІМаАІ ЕМРОЕМБІ КМА тагсмтеташйшінНммимЕтАІаЇІТЗЕМІАЙ МОМІАМІЇ АММИї ЗІ СІААСІРМНОа РІ ІЗИЇ БІ АГ А.

ГО МУМКкКеЕМЕ (ЗЕО І МО:65).

Химерні легкі ланцюги та легкі ланцюги людини »Повнорозмірний Мх4титгі 01

ОМІ МТОТРІ БІ РУМІ РОАБІЗСАЗНОБІМНТМОа МТМ СМР ОКРООБРКІ ПИКУЗМАЕБаМРО вЕЗаЗзОаБзОаТОЕТІ ТІЗВМЕАЕОЇ ау СЕОСЗНУРУТРаСИткКІ ЕІКАТМААРЗУРІЕРРБЗОЕОЇІ Ка

ТАБМУСІ І ММЕМРАЕАКМОМКМОМАЇ ОБОаМЗОЕЗУМТЕООЗКОБЗТУБ5І 55

Г/ТЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСИЕС (5ЕО ІО МО:66). »Повнорозмірний Мх4титгі 01

ОМІ МТОТРІ БІ РУМІ РОАБІЗСАЗНОБІМНТМОа МТМ СМР ОКРООБРКІ ПИКУЗМАЕБаМРО вЕЗОаЗИаБзИаТОЕТІ ТІЗВУМЕАЕОЇ ами СЕОСЗНУРУТРОСТКУЕБІКАТМААРБЗМУРІЕРРБЗОЕОЇ Ка

Г/ТЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСИЕС (5ЕО ІО МО:67). »Повнорозмірний І С Ух4питі 01

РІММТО5РІ БІ РУТРОЕРАБІЗСАЗВОБІМНТМаМТ МІ СУМ ОКРЕОБРАЇ ПУКУЗМАЕБамРо вЕЗаЗзОаЗИаТОЕТІКІЗАМЕАВ Юа СРО ЗНУРМТРСОСТКІ ЕІКАТМААРЗУРІЕРРЗОЕОЇІ КИТ

АБУМСІ ММЕУРАЕАКМОМКМОМАГ ОБаМЗОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ 557

Г/ТЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСИЕС (5ЕО ІО МО:68). »Повнорозмірний І С Ухвпиті 03

РІММТО5РІ БІ РУТРЕОЕРАБІЗСВАБОВІЗММІ ММ ОКРИОЗРА МУЗ У5аУРОВЕЗОЗОа затоОКкІЗАМЕАВОМСаІУУСООамМТ РИТРСОСТКГЕІКАТМААРЗМЕІЕРРБОБОЇ КБатАЗММСІ

ГЯІМЕМРАЕАКМОМКМОМАГОБаМОЕЗМТЕООКОБТУБІ 55

Г/ТЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСИЕС (5ЕО ІО МО:69). »Повнорозмірний І С Ух9питі 02

РІММТО5РОБІ АУБІ ЕВАТІМСВЗЗОМІМО5МОаМ ТМ ЕМ МООКРООРРК ІМКМЕНАВЕБаМРО вЕЗОаЗИаБзаИаИТОЕТІТІЗ5І ОАЕОМАУУУСЕОСЗНУРУТРИОСТКІ ЕІКАТМААРЗМУРІЕРРРБОЕОЇІ Ка

Г/ТЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСИЕС (5ЕО ІО МО:70). »Повнорозмірний І С Ухвпиті 02

РІОМТО5РБОБІ БАМИ ВМТ СВАБОБІЗМУІ МУ УООКРОКАРКІ ПУУТЗВІ 5аУРЗАЕбЗИа5 еБатТОгТІТІЗЗГОРЕОРАТУУСООСМТ РИУТЕОСТКМЕІКАТМААРЗМУРІЕРРБЗОЄЕОЇ КИ ТАБМУМ

СГЕММЕМРАЕАКМОМ КМОМАГОБаИамМмоОЕєВМТЕООКОЗТУБІ 55

Г/ТЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСИЕС (5ЕО ІО МО:71). »Повнорозмірний І С Ух4питі 02

ОМУМТО5РІ 5І РУТ аЧаЧкОРАБІЗСАЗНОБІУНТМОаМТ МІ СМЕООВРООЗРАВИУКУЗМАЕБаМР рагзазазатор вті КІЗАМЕАЕОМамуУУСгОойНУРУТРООСТКІЕІКАТМААРЗМУМЕРІЕРРБЗОБОЇ КБ

С,ТАБУМСІЇ ММЕМРАЕАКМОМУКМОМАГ ОБаМЗОЕЗМТЕООБКОБЗТУБІ 55

Г/ТЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСИЕС (5ЕО ІЮ МО:72). »Повнорозмірний І С Ух9питі 07

ОМММТО5ЗРІ 5І РМТІ аЧ кОРАБІЗСАЗБЗОМІМОБМОЕМ ТМ ЕМ ЕООАРЕОБРАВИМКМЕНАЕБамМР рагзазазатор вті КІЗАМЕАЕОМамуУУСгОойНУРУТРООСТКІЕІКАТМААРЗМУМЕРІЕРРБЗОБОЇ КБ

СТАБММСІ ГММЕМРАЕАКМОМКМОМАГОБаМЗОЕЗМТЕОрБКОБТУБІ ЗІ ТІ ЗКАЮОМЕКНКММА

СЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСЕС (5ЕО ІЮ МО:73). »Повнорозмірний І С Ухвпиті 01

РІОМТО5РББІ БАБМаОВМТІТ СВАБОВІЗММІ МУ МООКРИаКАРКО ІМУТЗАІ х5аУРЗАЕЗИа

Зо еБаТОЕТЕТІЗБ ОРЕПІАТУМСООСМТСРУМТЕОСТКУЄІКАТМААРЗМЕІЕРРБЗОБОЇ КБатТАБМУМ

Г/ТЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСИЕС (5ЕО ІО МО:74). »Повнорозмірний І С Ухвітигі 03

РІОМТОТТ55І ЗАБІ аОГВМТІЗСВАБОВІЗММІ МУУООКРєРОоС,ТУКІ ПИТ У5аУРЗАЕЗИа5 авБатТомУ5ІТІЗМІ ЕОЕВІАТУЕСООСМТІ РУУТЕРВСИТКІ ЕІКАТМААРЗУРІЕРРБЗОЕОЇ Ка ТАБУМУС

ГЕММЕМРАЕАКМОМ КМОМАГОБааМЗОЕЗМТЕООЗКОБТМБІ 55

ГЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЕМАСИЕС (5ЕО ІО МО:100). »Повнорозмірний І С Ух9тиг 104

ОМЕМТОТРІ БІ РУБІ ЧРОАБІЗСВЗБОМІМОЗМОаМ ТМ ЕМУМ ОКРИОБРКІ ПУКМЕНАЕБамМРО вЕЗаЗзИаЗИаТОЕТІКІЗАМЕАЕОЇ СУС ОСЗНУРМУТРаСИаТтТкКУєІКАТМААРЗМУРІЕРРЗОЕОЇІ Ка

Г/ТЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСИЕС (5ЕО ІО МО:75).

Химерні важкі ланцюги та важкі ланцюги людини »Повнорозмірний НС Ух4ітигнНо1

ЕМО 0О5ОаРЕЇ УКРОАЗУКМЗСКАБИах ТЕТМУМІНМУУКААРИаСаї ЕМІСМІМРУМОСІІ ММЕКЕ кКакдатУТ5ОоК55ЗТАУМОІ 55 Т5ЕОБАУМУСтвасУУУР.РОоУМмаОо,тТтт ТУ

АЗТКОаРБОМЕРІ АРСЗАЗТЗЕЗТААЇ СІ УКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаУНТЕРАМІ О5501І 5 55

МУМТУРБЗЗІ атКкТуУТСММОНКРОЬМТКМОКАМЕЗКМОа РРСРРСОРАРЕРЕСИРБЗУНРІ ЕРРКРКОТІ МІЗ

ВТРЕМТСУМУМОУМ5ОЕОРЕМОЕЄЕМУ УМВИаМЕМНМАКТКРАЕЄОЄМЗТУВМУМУЗМІ ТМ НОБУУІ МОКЕМ

КСКУЗМКагі РЗІЕЄЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТ РРІОБЕМТКМОМБІСТСІ МКИаєМРБОІАМЕМЕЗМИО

РЕММУКТТРРМІ ОБравзеЕРІ УЗА ТМОКЗВУМОБаМУМЕЗСЗУМНЕАГ НМНУТОКБІ ЗІ БСК ОО (5ЕО

ІО МО:76). »Повнорозмірний НС Ух4питнНо!1

ОМОІЇ МОБІАЕУККРОАБМОУМЗСКАБОМТЕТМУМІНУМІ ВОА РОСС ЕМ Мам РУМОСТІІ ММЕКЕ кКавУТмМтТ5ОТ5ІЗТАУМЕЇ 551 А5БООТАУУУСАВапуУУУРОМУМС,СОАТІ МУТУЗЗАЗТКОаРБОМЕРІ АРС

ЗАЗТЗЕЗТААЇ аСІ УКОМЕРЕРУТУБУМЗСИАЇ ТЗаУНТЕРАМІ О550І М5І 55БУУГУРЗБИТКТМТ

СМУМОНКРУЬМТКУОКАМЕЗКУОРРОРРСОРАРЕРЕСИРБЗУНРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМУТСУМУМОУБОЕ

ОРЕМОЕЄМУМУрамМЕМНМАКТКРАЕЄОЕЄМЗТУАУММІ ТМІ НОБУУЛІ МСКЕУКОСКУЗМКИаї РЗОЕКТІ

ЗКАКОИОРВЕРОМУТІ РРЗОЄБЕМТКМОМУБІ ТОЇ УКИЕМРЗОІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О502 (510) ЗЕ МА ТМОКЗАУМОБ,ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 51 5І СК (ЗЕО І МО:77).

»Повнорозмірний НС УхвпитнНІ11

ОМОГ МОБОАЕУККРИАБМОУЗСКАБОМЗЕТМУМІНУЛ ВОАРОССІ ЕМ МаМмІОРІ МСЕ ТММОК

ЕКИВМТМТ5ОТ5ІЗТАУМЕЇ 551 АБО ТАУУУСАВаСКВАМО УМ СОАТІ МУТУЗЗАЗТКОаРБЗМУЕРІ А

РОЗА5ЗТЗЕБЗТААЇ СІ УКОМЕРЕРУТУБМУМЗИаАГ ТЗИМНТЕРАМІ О55О01І У5І 55УМТУРЗБ ИаТК ТиИТСОММОнНкКРУЬМТКУМОКАУЕЗКУИаРРСОРРСОРАРЕРЕСИРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУМУМ ОМ

ЗОБОРЕМОЄМУУУраМЕМНМАКТКРАЕЄОЕЄМЗТУВУММІ ТМ НООУ/ЛІ МСОКЕУКСКУЗМКаї РББІ

ЕКТІЗКАКИОРВЕРОММУТІ РРЗОЄБЕМТКМОМУ5І ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОЮ зраз ТМОКЗАМОБаММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 51 5 ЯК (ЗЕО ІЮ МО':78). »Повнорозмірний НС Мх9питн12

ОМОЇ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБОМТЕТММУМІНУУВОАРОССІ ЕМ Мам ГОРАТОМТЕММО

КЕКОАУТМТАОТЗТЗТУММЕЇ 551 В5ЕОТАУУУСАВнССИС Уа ММ СОСТтТІ МТГУЗЗАЗТКОаРОЗМЕРІ

АРСЗАБЗТЗЕЗТААЇ аСІ МКОМЕРЕРУТУБМ МЗСАЇ Та МНТЕРАМІ О55О:І 51 55УМ ГУРЗБМЕИТ

ОТУТСММОНКРУЬМТКМОКТУЕАКССУЕСРРОРАРРУАДСРЗУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУУМОМ

ЗНЕОРЕМОЕМУ УМрамМЕМНМАКТКРАЕЄОЕЄМЗ ТЕЗУ ТУМНОМІ МЕКЕУКСКУЗМКаї РАРІ

ЕКТІЗКТКООРЕАЕЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМБІ ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 0 зравЕг мк ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І РОК (ЗЕО 10 МО:79). »Повнорозмірний НС Мх9питнН14

ЕМОЇ МОБСОАЕУККРОЕБІ КІЗСКаБамТЕТМММмМІНУУВОМРИаКаг єЕУМамтОоРАТОМТЕММОК

ЕКООМТІЗАОКВІЗТАМІ ОМ/551 КАБОТАМУУСАНОЦьССВМаї амуаості МГМ55АЗТКОаРЗМУЕРІ АР

С5АЗТЗЕЗТААЇ аСІ УКОУМЕРЕРУТУБУМЗСИАЇ ТЗаУНТЕРАМІ О55О01 51 55УМ ГМРЗЗМЕРИаТОТ

УТСММОНКРУЬМТКМОКТУЕАКССУМЕСРРОРАРРУАДСРЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУУМ ОУН

ЕОРЕМОЕМУ УМрамЕМНМАКТКРАЕЄОЄМЗТЕВУУЗМІ ТУМНОМІ МЕКЕУКСКУЗМКИаї РАРІЕК

ТІЗКТКЕОРВЕРОМУУТІ РРОВЕЕМТКМОМУ5І ТС УКИОЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ 050 азЕР КІ ТУОКЗАМОСС,ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І РОК (ЗЕО ІО МО:80). »Повнорозмірний НС МхУпПитН15

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаЗЗУКУЗСКАБИОМТЕТМУМУМІНУУВОАРОСИІ ЕУМаТхТОоРАТОМТЕМАО

КРОС,ВАМТІТАРЕЗТЗТАУМЕЇ 551 ВБЕОТАУУУСАНОСОСВУИаї МУ СОС,СТІ МТМЗЗАЗТКОаРБОМЕРІ А

РОЗА5ЗТЗЕБЗТААЇ СІ УКОМЕРЕРУТУБМУМЗИаАГТЗОМНТЕРАМІ О55ОИ1 51 55 УРЗЗМЕИаТтО

ТУТСММОНКРОЬМТКУМОКТУЕВКССУЕСРРСОРАРРМАСРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМУЮрУБ

Коо) НЕОРЕМОЕМУ УМрамЕМНМАКТКРАЕЄЕОЕЄМЗТЕВУУЗМІ ТУМНОРУМІ МЕОКЕУКСКУЗМКаї РАРІЕ

КТІЗКТКОаОРАБЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМУБІ ТС УК ЕУРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 05 рав;гЕг кі ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУММНЕАЇ НМНУТОК5БІ 5І РОК (5ЕО ІЮ МО:81). »Повнорозмірний НС Ухапитног

ОМОІЇ МОБІАЕУККРОАБМОУМЗСКАБОМТЕТМУМІНУМІ ВОА РОСС ЕМ Мам РУМОСТІІ ММЕКЕ кКавУТмМТ5ОТ5ІЗТАУМЕЇ 551 А5ООТАУУУСАвасвууУрумуавоАТІ МГМЗ5АЗТКОаРБЗМЕРІ АРС

СМУМОНКРУЬМТКУОКАМЕЗКУС РРОРРСРАРЕРЕСИРБЗУНРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОСУБОЕ

ОРЕМОЕЄМУМУрамМЕМУМНМАКТКРАЕЄОЕЄМЗТУВУММІ ТМ НОБУУЛІ МСОКЕУКОСКУЗМКИаї РЗБІЕКТІ

ЗКАКОИОРВЕРОМУТІ РРЗОЄБЕМТКМОМУБІ ТОЇ УКИЕМРЗОІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О502

ЗЕ МА ТМОКЗАУМОБ,ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 51 5І СК (ЗЕО ІЮ МО:82). »Повнорозмірний НС Мх9питн1З3

ОМОЇ МОБСАЕУККРИаЗЗУКУЗСКАБОМТЕТММУМІНУМВОАРОССІ ЕМ Мам ГОРАТОМТЕММО

КЕКОАВМТІТАСЕЗТЗТАММЕЇ 551 ВБЕОТАМУУСАНОСВПУ,І ММ СОСТІ МТУЗЗАЗТКОаРБОМЕРІ А

Тит СОММОнНкКРЗОЬМТКУМОКТУЕВКССУМЕСРРСОРАРРМАСРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУМУЮрУБ

НЕОРЕМОЕМУ УМрамЕМНМАКТКРАЕЄЕОЕЄМЗТЕВУУЗМІ ТУМНОРУУЛ МЕКЕУКСКУЗМКаї РАРІЕ

КТІЗКТКОаОРАБЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМУБІ ТС УКИЕМРБЗОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 05 рав;гЕг кі ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУММНЕАЇ НМНУТОК5БІ 5І РОК (5ЕО ІЮ МО:83). »Повнорозмірний НС Ухвпитн1о

ЕМО МОБСАЕУККРОЕБІ КІЗСКаАБОаМЗЕТМУМІНУУВОМРаКаИагЕМУМамІоРІ МС ОТТМЗРБЕ

ОСОМТІЗАОКБІЗТАМІ ОМ/55І КАБОТАМУУСАВНСОаКВАМОУМаВаИаті МТУЗЗАЗТКОаРОЗМЕРІ АР

СЗАЗТЗЕЗТААЇ аСІ УКОМЕРЕРУТУБУМЗСОАЇ ТЗОУНТЕРАМІ О55О(01 51 55УМТУРЗББІі ИаТКТ

УТСММОНКРУЬМТКМОКАМЕЗКУСРРОРРСОРАРЕРЕССОРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОМУ5

ОБОРЕМОЕММ УМраМЕМНМАКТКРАЕЕОЕМЗТУАУУМІ ТМ НОМ МЕОКЕУКСКУЗМКаї РЕ

КТІЗКАКЕОРАЕЕРОММУТІ РРООБЄЕМТКМОМ5І ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 05 равгЕг мА ТМОКЗАМОБаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 51 51 ОК (ЗЕО І МО 84). »Повнорозмірний НС Ухапитної

ЕМО МОБСАЕУККРОЕБІ КІЗСКаБам ГТЕТМУМІНУМ ВОМРИаКаИагГЕУМаміРММОСІІ ММЕКЕ

КОаомМтТІЗАРК5ІЗТАМІ ОМ/55І КАБОТАМУУСАВНОССУМУРОММУ ОСТ ТУТУЗБЗАЗТКОаРОЗМУЕРІ АРС (510) ЗАЗТЗЕЗТААЇ аСІ УКОМЕРЕРУТУБУМЗСИАЇ ТЗаУНТЕРАМІ О550І М5І 55БУУГУРЗБИТКТМТ

ЗКАКОИОРВЕРОМУТІ РРЗОЄБЕМТКМОУБІ ТОЇ УКХ РЗОІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОС

ЗЕ МА ТМОКЗАУМОБ,ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 51 5І СК (ЗЕО ІО МО:85). »Повнорозмірний НС МУха4питнНоО5

ОМОЇ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБОМ ТЕТМУМІНУУВОАРЕОСІ ЕУ/ Мам. УМОСІ ММЕКЕ кКавуУТтмМтТТОтТ5Т5ТАУМЕЇ В5І А5ООТАУУУСАвВасУУУРОУМ ОСТ ТУТУ5ЗАБВТКОаРБЗМЕРІ АР

СЗАЗТЗЕЗТААЇ аСІ УКОУМЕРЕРУТУБУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О55О01и51 55УУТУРЗЗБІ СТКТ

КТІЗКАКЕОРАЕЕРОММУТІ РРООБЄЕМТКМОМ5І ТС УКЕЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ 05 равагЕг мА ТМОКЗАМОБаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 51 51 СК (5ЕО І МО:86). »Повнорозмірний НС Мх9питНн16

ЕМОЇ МОБСАЕУККРОЕБІ КІЗСКаБОамМ ТЕТМУУМІНУУВОМРаТКаТі ЕУМамТОРАТОМТЕУ5РБ

ЕОСОМТІЗАОКБІЗТАМІ ОМУ5БІ КАБОТАМУУСАВнОСНУаї а ИМУуаОС,СтТІ МТГМЗЗАЗТКОаРБЗМУЕРІ А

РОЗА5ЗТЗЕБЗТААЇ СІ УКОМЕРЕРУТУБМУМЗИаАГ ТЗОМНТЕРАМІ О55О11. 51 55 ГУРЗБМЕРИа ТО

КТІЗКТКОаОРАБЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМУБІ ТС УК ЕУРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 05 равагг кі ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУММНЕАЇ НМНУТОК5БІ 5І 5РОК (5ЕО І МО:87). »Повнорозмірний НС Ухвпитноб

ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАБИУЗЕТМУМІНУУВОАРОСС ЕМ МаМмІОРІ МСЮ ТТ ТИМОК

ЕКОВУТМТАОТЗТЗТУМУМЕЇ 551 В5ЕОТАУУУС Аа СаКААМОУУМУСОСТІ МТУЗЗАЗТКОаРБЗМЕРІ А

РОЗА5ЗТЗЕБЗТААЇ СІ УКОМЕРЕРУТУБМУМЗИаАГ ТЗИМНТЕРАМІ О55О01І У5І 55УМТУРЗБ ИаТК

Тит СОММОнНкКРОЬМТКМОКАУМЕЗКУаРРСОРРСОРАРЕРЕСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМУТСУУМОМ

ЕКТІЗКАКИОРВЕРОММУТІ РРЗОЄБЕМТКМОМУ5І ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОЮ зраз ТМОКЗАМОБаММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 5І 5 ЯК (ЗЕО І МО:88). »Повнорозмірний НС УхвпитнНо7

Зо ОМОЇ МОБСАЕУККРИЗЗУКУЗСКАБИУЗЕТМУМІНУУВОАРОСС ЕМ МИаМмІОРІ МОЮ ТТИМОК

ЕКаВМТІТАСЕЗТЗТАУМЕЇ 551 ВБЕОТАУУУСАВНИСКААМО УМ СОСТІ МТГУЗЗАЗТКОаРОЗМЕРІ АР

УТСММОНКРУЬМТКМОКАМЕЗКУСРРСОРРСРАРЕРЕСИаРБЗУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВАВТРЕМТСУУМ ОМ

КТІЗКАКЕОРАЕЕРОММУТІ РРООБЄЕМТКМОМ5І ТС УКЕЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ 05 равгЕг мА ТМОКЗАМОБаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 51 51 ОК (ЗЕО І МО 89). »Повнорозмірний НС УхвпитНнОов

ЕМО МОБСАЕУККРОЕБІ КІЗСКаАБОаМЗЕТМУМІНУУВОМРаКаИагЕМУМамІоРІ МООТТУМОКЕ

КОаОМмтТІЗАОРК5БІЗТАМІ ОМ/55І КАБОТАМУУСАВСОИКВАМОММ ПОСТІ МТГУ55АЗТКОаРЗМУЕРІ АР

УТСММОНКРУЬМТКМОКАМЕЗКУСРРСОРРСРАРЕРЕССОРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМЮУ

КТІЗКАКЕОРАЕЕРОММУТІ РРООБЄЕМТКМОМ5І ТС УКЕЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ 05 равгЕг мА ТМОКЗАМОБаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 51 51 ОК (ЗЕО І МО:С90). »Повнорозмірний НС МУхвпитНоОЗ9

ОМОЇ МОБСАЕУККРОБЗЗУКУЗСКАБИахуЗЕТМУМНУУВОАРООІ ЕУМамІОРІ МЕЮТТМАОК

ЕОСАМТІТАОЕЗТОТАМУМЕЇ 551 В5ЕОТАУУУСАВОаКААМО УМ ОСТІ МТУ5ЗАЗТКОаРЗМУЕРІ А

ТУТСММОНКРЬМТКУМОКАУЕЗКУИаРРСОРРСОРАРЕРЕСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМУТСУУМОМ

ЗОБОРЕМОЄММУУУрамМмЕМНМАКТКРАЕЄОЕЄМЗТУВУММІ ТМ НОБУУ/ЛІ МСОКЕУКСКУЗМКаї РІ

ЕКТІЗКАКИОРВЕРОММУТІ РРЗОЄБЕМТКМОМУ5І ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОЮ зравЕнгмЗвІ ТМОКЗАМОБ,ММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 51 5 ЯК (ЗЕО ІЮ МО С91). »Повнорозмірний НС Ухвпитноб

ОМОЇ МОБСАЕУККРОАБУКУЗСКАБИУЗЕТМУМІНУУВОАРИаССИ ЕУМамІОРІ МД ТТ УМОоК

ЗОБОРЕМОЄМУУУрамМЕМНМАКТКРАЕЄОЕЄМЗТУАМММІ ТМ НОБУУЛІ МСКЕУКСКУЗМКаї РББІ

ЕКТІЗКАКИОРВЕРОММУТІ РРЗОЄБЕМТКМОМУ5І ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОЮ (510) зраз ТМОКЗАМОБаММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 51 5 ЯК (ЗЕО І МО:С92).

»Повнорозмірний НС Ухвтиг-НОЗ

ЕМО 0О5ОаРЕЇ МКРОІАБЗУКІЗСКАЗИаУЗЕТМУМІНМУ УМОЗНаТкві ЕУМЛаТміІоРІ МСОЮТТУМОКЕК

СКАТ ТМОКЗ5ЗЗТАМУМВІ 551 ТЗАО5АУУУСАна,аквАМОУМУСОС,СТОУТУБо

АЗТКОаРБОМЕРІ АРСЗАЗТЗЕЗТААЇ СІ УКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаУНТЕРАМІ О5501І 5 55 ММТуРБОБЗІ атТкКТУТОММОнНКРУЬМТКМОКАМЕЗКМОа РРСРРСОРАРЕРЕСИРБЗУГРІ ЕРРКРКОТІ МІЗ

ВТРЕМТСУМУМОУ5ОЕОРЕМОЕЄЕМУ УМВаМЕМНМАКТКРАЕЄОЕЄМЗТУВМУМУЗМІ ТМ НОБУУЛІ МаКЕМ

ІО МО:93). »Повнорозмірний НС Ух9Утиг-НО4

ОМОГ ООРГСАЕЇ АКРІАЗМОМЗСКАБОМТЕТММУМІНУУКОВРООСІ ЕМИаМТОРАТОМТЕММОК

ЕКОКАТІ АДОНЗЗОЗТАМУМВІ 551 ТЗЕОЗБАУУУСсАсаавУаі амМманаввУТуБАЗТКОаРБЗМЕРІ А

КТІЗКТКОаОРАЕЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМУБІ ТС УК ЕУРБОІАМЕМЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ 05 рав;гЕг кі ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУММНЕАЇ НМНУТОК5БІ 5І РОК (5ЕО ІЮ МО:94). »Повнорозмірний НС Ухвпитноб

ЕКОВУТМТАОТЗТЗТУММЕЇ 551 В5ЕОТАУУУС Аа СКААМОУМУСОСТІ МТГТУ5ЗАЗТКОаРЗМУЕРІ А

КТІЗКТКОаОРАБЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМУБІ ТС УКИЕМРЗВІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 05 рав;гЕг кі ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУММНЕАЇ НМНУТОК5БІ 5І РОК (ЗЕО І МО:95). »Повнорозмірний НС УхвпитнНо7

ОМОЇ МОБСАЕУККРИЗЗУКУЗСКАБИУЗЕТМУМІНУУВОАРОСС ЕМ МИаМмІОРІ МОЮ ТТИМОК

УТоММОнкКРУЬМТКМОКТУЕАВКССУМЕСРРОРАРРУАДСОРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУУМ ОУН

ЕОРЕМОЕМУ УМрамЕМНМАКТКРАЕЄОЄМЗ ТЕМУ ТУМНОМІ МСОКЕУКСКУЗМКаї РАРІЕК

ТІЗКТКЕОРВЕРОМУУТІ РРОВЕЕМТКМОМУ5І ТС УКИОЕМРЗОІАМЕМЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ 050 азЕР КІ ТУОКЗАМОСС,ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І РОК (ЗЕО ІО МО:С96). »Повнорозмірний НС Ухвпитнов

С5АЗТЗЕЗТААЇ аСІ УКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О55О111и51 55 ГМРЗЗМЕИаТОТ

ТІЗКТКООРВЕРОМУМУТІ РРОВЕЕМТКМОМУ5І ТС УКЕОЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ 050 азЕР ЗК ТУОКЗАМОСС,ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І РОК (ЗЕО ІО МО:97). »Повнорозмірний НС УхвпитноЗ?

ОМОЇ МОБСАЕУККРИЗЗУКУЗСКАБИУЗЕТМУМІНУУВОАРОСС ЕМ МаМмІОРІ МЕЮТТМАОК

РОЗА5ЗТЗЕБЗТААЇ СІ УКОМЕРЕРУТУБММЗИаАГТЗОМНТЕРАМІ О55О235Іи51 55 ГУРЗБМЕИТО

КТІЗКТКОаОРАБЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМУБІ ТС УК ЕУРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 05 равагг кі ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУММНЕАЇ НМНУТОКБІ 51 РОК (5ЕО 10 МО:98). »Повнорозмірний І С Ух4тиг-гаїй 01

ОМІ МТОТРІ БІ РУМІ РОАБІЗСАЗНОБІМНТМОа МТМ СМР ОКРООБРКІ ПИКУЗМАЕБаМРО вЕЗОаЗзОаБзИаТОЕТІ ТІЗВУЕАЕОЇ ау СЕОаЗНУРУТРаСаИТткіІ БІК

ВАБААРТУБІЕРРЗМЕОЇ Т5аСАТУМСЕУММЕМРАВІЗМКУКІрСаЗЕОВРИаМІ ОУТРООБКОЗТУ

М55ТІ ЗІ ТКУЕМЕВНМІ М ТСЕМУНКТЗ55РУМУКВЕМАМЕС (ЗЕО ІЮ МО:101). »Повнорозмірний НС Уха4титг-гаїгної

АВТТАРБМУРІ МРОСЗИТ5а5І МТ аСІ УКОМЕРЕРУТУКУМЗОИАІ 55СУНТЕРАМІ ОСІ МТІ 555

МТМРБЗ ЛУ ЗЗОТУТОЗМАНРАТКЗМІ ІКАІЕРААРКРАРРТОІСЗСООМІ САРОЗУРБІЕРРКРКОЇ МІТІ. 600 ТРКМТСМУМОМ5ЕЕЕРОМОЄБУМ ЕМОМУМАВМЕТАОТОРНЕЕОЇ МОаТЕАММТІНІОНОВСУМаИаИкКЕРКС

КУММКОЇ РЗРІЕКТІЗКРАСКАВТРОММТІРРРАЕОМ5КМКМУБІ ТОСМУТЗЕУРАБІЗМЕМЕВНМОЕГ ЕО

ОУКМТІ РМ ОБОЕЗУРІ У5КІ БМОТОБУМАаріМТо5УУНЕАІЇ НМННТОКМІ БА5РОК (ЗБОЮ

МО:102). »Повнорозмірний І С Ух4титг-гарі 01

ВОРМАРТМ ІЕРРААВОМАТатМ ТІМСМАМКМЕРОУТМ ТУЕУрИТттОоТттатємМме5КТРОМЗАОСТУМІ 5

ЗП ТЗТОММЗНКЕУТСКУТОС,ТТ5УМОЕМНИаЮС (5ЕО ІО МО:103). »Повнорозмірний НС Ух4тиг-гарної

СОРКАРБЗМЕРІ АРСОСОаОТРУОБЗТУТ СІ УКаМІ РЕРУТУГУМЗОТІ ТМСОМАТЕРЗУВО БИ У5І 55

МУ5МУМТ5550РУТСММАНРАТМТКМОКТУМАРЗТОЗКРТСРРРЕ СОС РЗМУБРІЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМ

ТСУУМрУБОВОРЕМОЄПГУМІММЕОМАТАВРРІ ВЕСОЕЄЕМ5ТІВУМ5ТІ РІАНОВУМ ВЕОКЕРКСКУНМК

АГРАРІЕКТІЗКАВООРІ ЕРКУУТМОРРВАЕЕЇ 558551 ТСМІМЕЕМРБОІЗМЕМЕКМОаКАЄОМУКТТ

РАМ О5Бра5ЗУРІ У5КІ БМРТЗЕМОВСОаОМЕТСЗУМНЕАЇ НМНУТОК5ІЗА5ЗРОК (ЗЕО ІЮО МО:104).

Приклад 2

Одержання антитіл до СО47

Химерні антитіла, розкриті в даному документі, містять варіабельний домен важкого ланцюга миші та варіабельний домен легкого ланцюга в комбінації з каппа-ланцюгом людини або константними доменами Ес Ідс1, Ідс1-М2970, Ідс2, Ід4, Ідс4 5228Р і Ід64 РЕ людини відповідно. Вони були розроблені таким чином, щоб включати сигнал секреції, й їх клонували в систему експресії у ссавців і трансфікували в клітини СНО для одержання химерних антитіл (миші-людини). Химерні варіанти експресувалися у вигляді повнорозмірних молекул Ідс, секретувалися в середовище, й їх очищували із застосуванням білка А.

З цієї причини гуманізовані антитіла, розкриті в даному документі, містять каркасні ділянки, одержані з геному людини. Набір охоплював різноманіття, яке виявляли в послідовностях ембріональної лінії людини, що забезпечувало одержання функціонально експресованих антитіл іп мімо. Області, які визначають комплементарність (СОК) у варіабельних областях

Зо легкого та важкого ланцюгів антитіл миші та химерних антитіл (миші-людини) описані в даному документі, й їх визначали за допомогою наступних загальноприйнятих правил, розкритих в "Ргоївіп зедиепсе апа 5ігисіиге Апаїузіз ої Апібоду Магіабіе ботаїпе", в Апіроду Епдіпеегіпа ав Мапиа!, єд5. 5. ЮцебеїЇ апа ВА. Копієптапп, 5ргіпдег-Мегіад, НеїдеІрегд (2001)). Потім розробляли варіабельні домени легкого ланцюга людини. Потім гуманізовані варіабельні

З5 домени об'єднували із сигналом секреції та каппа-ланцюгом людини, та константними доменами Ес Іде1, Іде1-М2970), Ідс2, ДОЗ, Ідс4 5228Р і Ід04 РЕ людини, клонували в систему експресії для ссавців і трансфікували в клітини СНО для одержання гуманізованих тАБ.

Гуманізовані варіанти експресувалися у вигляді повнорозмірних молекул дО, секретувалися в середовище, й їх очищували із застосуванням білка А.

Негліколізовану версію (Ідс1-М2970) створювали за допомогою сайт-спрямованого мутагенезу положення 297 у важкому ланцюзі для заміни аспарагіну на глутамін (Ес ІдС1-

М2970 людини, 5ЕО ІЮ МО:54). Варіант 9054 створювали за допомогою сайт-спрямованого мутагенезу положення 228 для заміни серину на пролін, запобігаючи тим самим, обміну Еар- плечима іп мімо. Подвійний мутант 9054 створювали за допомогою сайт-спрямованого мутагенезу положень 228 (серин на пролін) і 235 (лейцин на глутамат) для запобігання обміну

Еаб-плечима і для додаткового зниження Ес-ефекторної функції. Ізотипи Ід2, ІдО3, Ідс4 5228Р і 4054 РЕ конструювали шляхом клонування варіабельного домену важкого ланцюга в рамку зчитування з константними доменами дс2, ІдО3, Ідс4 5228Р і Ід54РЕ людини (Ес Ідс2 людини, 5ЕО ІЮ МО:55, Ес Ід53 людини, ЗЕО ІЮО МО:56; Ес Іде4 5228Р людини 5ЕО ІЮ МО:58 і

БО Ес Ід0с4 РЕ людини, ЗЕО ІЮ МО:59).

Приклад З

Зв'язування моноклональних антитіл (тАбБ) з СО47

Зв'язування химерних антитіл (миші-людини) та гуманізованих антитіл за даним винаходом визначали за допомогою ЕГІЗА із застосуванням клітин ОМ10, трансфікованих СО47 людини (0М10 пС047), або із застосуванням нещодавно виділених еритроцитів людини (ПЕВС), на поверхні яких знаходиться СО47 (Катеї еї а. (2010) Віоса. Тгапеги5. 8 (4):260-266).

Показники активності зв'язування химерних (миші-людини) та гуманізованих тАбБ МіХа4,

МІХ8 ї МГХУ визначали за допомогою аналізу ЕГІБА на клітинній основі щодо клітин ОМ10 пСО47 людини, що експресують на клітинній поверхні СЮО47 людини. Клітини ОМ10 пСО47 бо вирощували в середовищі ІМОМ, яке містило 10 95 термоінактивованої фетальної бичачої сироватки (Віомуезї; 501520). За один день до аналізу З х 107 клітин висівали в 96-лункові планшети СеїІВІМО (Согпіпд Мо 3300, МУУК Мо 66025-626), і до моменту проведення аналізу вони досягали 95-100 956 конфлюентності. Клітини промивали і різні концентрації очищених антитіл в

ІМОМ 37 "С додавали на 1 год. в атмосфері 9595 О2/595 СО». Потім клітини промивали середовищем й інкубували протягом додаткової години за 37 "С з міченим НКР. вторинним антитілом до антитіла людини (Рготеда), розведеним в середовищі з розрахунку 1/2500.

Клітини тричі промивали за допомогою РВ5 і додавали субстрат для пероксидази, 3,3",5,5'- тетраметилбензидин (5ідта; номер за каталогом Т4444). Реакції зупиняли додаванням НСІ до 0,7 н. концентрації та визначали поглинання за 450 нм із застосуванням планшет-рідера моделі

ІпйЯпйе М200 від Тесап. Показники припущеної афінності зв'язування цих клонів з клітинами

ОМ10 пСО47 людини визначали шляхом нелінійної апроксимації (програмне забезпечення

СтарпРаа Р'гізт).

МІ Х8 і МІ хХ9 з СОЮ47 людини на НКВС також визначали із застосуванням проточної цитометрії.

ЯКВС інкубували протягом 60 хв. за 37 "С з різними концентраціями химерних або гуманізованих антитіл в розчині фосфатно-сольового буфера, рН 7,2, 2,5 мМ ЕОТА (РВ5Е).

Потім клітини промивали за допомогою холодного РВЗ-Е й інкубували протягом додаткової години на льоді з міченим РІТС антитілом віслюка до антитіла людини (даскбоп Іттипо

Кезеагсп Гарз, Вест-Гроув, Пенсільванія; номер за каталогом 709-096-149) у РВЗАЕ. Клітини промивали за допомогою РВЕ, зв'язування антитіла аналізували із застосуванням проточного цитометра Сб Ассигі (Весіоп бісКіпзоп) і показники припущеної афінності зв'язування визначали шляхом нелінійної апроксимації (програмне забезпечення СгарпРай Ргіхт) медіанних значень інтенсивності флуоресценції за різних концентрацій антитіла.

Усі химерні (миші-людини) тАБб МІ Х4 зв'язувалися з пухлинними клітинами ОМ10 пСО47 людини за показників припущеної афінності в діапазоні пікомолярних (пМ) значень (таблиця 1).

Аналогічно, гуманізовані тАб МІ Х4 зв'язувалися з пухлинними клітинами ОМ10 пСО47 людини залежним від концентрації чином (ФІГ. ТА та ФІГ. 18) за показників припущеної афінності, що варіюють в діапазоні від пікомолярних до невеликих наномолярних значень (таблиця 2).

Зо Усі химерні тАБб МІ Х4 зв'язувалися з КВС людини за значень припущеної Ка в діапазоні пікомолярних значень, і вони були аналогічні значенням Ка, одержаним для пухлинних клітин

ОМм10 по047 за допомогою ЕГ ІЗА (таблиця 1).

Гуманізовані тАб МІ Х4, ІдсСї М2970 МІ Ха4пит 01, дсС1 М2979 МІ Хапит 02, Ід04 РЕ

М Хапит 01, 954 РЕ Мі Ха4пит 02, 1954 РЕ Мі Х4пит 12 і Ідс4 МІ Х4пит 13, зв'язувалися з

КВС людини за значень Ка, аналогічних значенням, одержаним для пухлинних клітин ОМ10 пСО47, тоді як 94 РЕ Мі Х4пит 06 і д54 РЕ МІ Х4пит 07 проявляли знижене зв'язування з яКВС (ФІГ. 2А, ФІГ. 2В і таблиця 2). Таке різне зв'язування гуманізованих тАб з пухлинними клітинами та КВС було несподіваним, оскільки химерне тАб ІдС4РЕ МІ Х4 зв'язувалося за аналогічних значень припущеної Ка з СО47 як на пухлинних клітинах, так і на КВС (таблиця 1).

Як показано в таблиці 1, усі химерні тАБб (миші-людини) МІ Х8 зв'язувалися з пухлинними клітинами ОМ10 пСО47 людини залежним від концентрації чином за показників припущеної афінності в діапазоні пікомолярних (пМ) значень.

Аналогічно, гуманізовані тАб МІ Х8 зв'язувалися з пухлинними клітинами ОМ10 пСО047 людини залежним від концентрації чином (ФІГ. ЗА і ФІГ. ЗВ) за показників припущеної афінності в діапазоні пікомолярних значень (таблиця 2).

Усі химерні тАр МІ Х8 зв'язувалися з ПКВС за значень припущеної Ка в діапазоні пікомолярних значень, і вони були аналогічні значенням Ка, одержаним для пухлинних клітин

ОМм10 по047 за допомогою ЕГ ІЗА (таблиця 1).

Гуманізовані тАб МІ Х8, 954 РЕ МІ Хвпшт 01, 194 РЕ Мі Хвпит 02, 1904 РЕ Мі Хвпшт 03,

Ідс24 РЕ МІ Хвпит 04, 1954 РЕ Мі Хвпит 05 і д54 РЕ Мі Хвпит 06, Ід04 РЕ Мі Хвпит 07, Ідо4

РЕ МІХвпшт 08, Ідш24 РЕ МІ ХвВНит 09, Ід4с24 РЕ МІ Хвпит 11, ІдСбе МІ Хвпит 06, дае

МІ Хвпит 07, Ідс2 МІ Хвпит 08 іїдс2 МІ Хвпит 09, зв'язувалися з КВС людини за значень Ка, аналогічних значенням, одержаним для пухлинних клітин ОМ10 пСО47, тоді як 454 РЕ

МІ Хвпит 10 проявляв знижене, але зв'язування з НКВС, що піддається вимірюванню (ФІГ. 4А,

ФІГ. 4В і таблиця 2). Таке різне зв'язування гуманізованих тАб з пухлинними клітинами та КЕВС було несподіваним, оскільки химерне тАб Ідс4РЕ МІ Х8 зв'язувалося за аналогічних значень припущеної Ка з СО47 як на пухлинних клітинах, так і на «ВС (таблиця 1).

У таблиці 1 показані показники припущеної афінності зв'язування химерних тАр миші- людини МІ ХО з клітинами ОМ10 пСО47 людини та з КВС людини. Усі химерні тАб зв'язувалися бо з пухлинними клітинами ОМ10 пСО47 за значень припущеної Ка в діапазоні пікомолярних значень. Аналогічно, гуманізовані тАбр МІ ХУ зв'язувалися з пухлинними клітинами ОМ10 пСО47 людини залежним від концентрації чином (ФІГ. 5А і ФІГ. 58) за показників припущеної афінності в діапазоні від пікомолярних до наномолярних значень (таблиця 2).

Усі химерні тАр МІ ХУ зв'язувалися з ПКВС за значень припущеної Ка в діапазоні пікомолярних значень, і вони були аналогічні значенням Ка, одержаним для пухлинних клітин

ОМм10 пСр47 за допомогою ЕГІЗА (таблиця 1). На відміну від химерних тАб гуманізовані тАб

МІХ9, Ід52 МІ ХОпит 01, дсС2 МІ ХОопит 02 ії дс2 М Хопит 07, проявляли знижене, але зв'язування з КВС людини, що піддається вимірюванню (ФІГ. 6, таблиця 2). У гуманізованих тАб ІдсС2 МІ Хопит 03, 04, 05, 06, 08, 09 і 10 було відсутнє зв'язування з КВС, що піддається вимірюванню (таблиця 2). Таке різне зв'язування гуманізованих тАБ з пухлинними клітинами та

ЕВС було несподіваним, оскільки всі химерні тАб ІдсС2 МІ ХУ зв'язувалися за аналогічних значень припущеної Ка з СО47 як на пухлинних клітинах, так і на КВС (таблиця 1).

Таблиця 1

Зв'язування химерних (хі) тАб МІ Х4, МІ Х8 і МІ ХУ з клітинами ОМ10 пСО47 й еритроцитами людини (пПКВС)

Мн Мі ка (пм) ка (пм) НА (ЗЕО І МО!) | (ЗЕО ІЮ МОХ) ЕСІЗА на яввВо яввВо клітинній основі поСр47 ОМ10

МІХА їІдСет М2970 21 41 258 92 Так (хі)

МІХ8 дат М2970 28 46 42 91 Так (хі)

МІ ХУ їІдСет М2970 35 50 275 190 Так (хі)

Таблиця 2

Зв'язування гуманізованих тАбБ МІ-Х4, МІ Х8 і МІ ХУ з 0М10 пСО47 людини й еритроцитами людини (ПКВС) шина ВК

ЕПІЗА на клітинній во во основі пор47 ОМ10 о МіХапитогідсї 77777771 Ї777171717171780111117171171717117011 | так

Постів НИК НО КН

Пі ав НИ НОВ Я ВН

Продовження таблиці 2 «МВ - зв'язування не виявлено за концентрації тАБб не більше 100 мкг/мл. «х- знижене зв'язування КВС. ях|дД - знижена гемаглютинація.

Перехресне зв'язування гуманізованих тАб МІ Х4, МІ Х8 ії МІ ХУ з молекулами інших видів визначали із застосуванням проточної цитометрії. ЕВС миші, щура, кролика або яванського макака інкубували протягом 60 хв. за 37 "С з різними концентраціями гуманізованих антитіл в розчині фосфатно-сольового буфера, рН 7.2, 2,5 мМ ЕОТА (РВЗ-Е). Потім клітини промивали за допомогою холодного РВ5ОЖЕ й інкубували протягом додаткової години на льоді з міченим

РІТС антитілом віслюка до антитіла людини (ЧаскКб5оп Іттипо Кезеагсп ІГарз, Вест-Гроув,

Пенсільванія; номер за каталогом 709-096-149) у РВ5-Е. Клітини промивали за допомогою

РВ5О-Е та зв'язування антитіла аналізували із застосуванням проточного цитометра Сб Ассигі (Весюп біскКіп5оп).

У таблиці З показані показники припущеної афінності зв'язування гуманізованих ІтАб Мі ХА і

МІ.Х8 з КВС від миші, щура та яванського макака, які визначені шляхом нелінійної апроксимації (програмне забезпечення СсгарпРай Ргіхт) медіанних значень інтенсивності флуоресценції за різних концентрацій антитіла. Ці дані показують, що гуманізовані тАб МІ ХА та МІ Х8 зв'язуються з КВС миші, щура, кролика (дані не показані) та яванського макака за значень припущеної Ка в діапазоні від пікомолярних до наномолярних значень (таблиця 4).

Таблиця З

Зв'язування гуманізованих тАБ МІХА та МІ Х8 з КВС миші та щура ка (пм) ка (пм) ка (пм)

ЕВС миші «ВС щура КВС яванського макака

МІХапуит 01 1904 РЕ 16166 29917

МіХапит 07 Іда4 РЕ 21340 17610 4313

МІХВпит 11 1904 РЕ 2473 10921

Приклад 4

Антитіла до СО47 блокують зв'язування СО47/5ІКРа

Для оцінювання ефекту гуманізованих тАБб до СО47 щодо зв'язування СО47 з БІКРа іп міїго використовували наступний спосіб, що базується на зв'язуванні флуоресцентно міченого злитого білка 5ІКРа-Ес з Т-клітинами ЧигкКаї, які експресують СО47.

Злитий білок 5ІКРа-Ес (КО бузіетв, номер за каталогом 4546-5А) мітили із застосуванням набору для мічення антитіл АІеха РісогФ (Іпийгодеп, номер за каталогом А20186) відповідно до інструкцій від виробника. 1,5 х 105 Т-клітин дигкаї інкубували з гуманізованими тАБ (5 мкг/мл), контрольним антитілом людини в КРМІ, що містило 10 95 середовища, або із середовищем окремо протягом 30 хв. за 37 "С. Додавали рівний об'єм флуоресцентно міченого злитого білка

ЗІКРа-Ес та інкубували протягом додаткових 30 хв. за 37 "С. Клітини промивали один раз за допомогою РВЗ5 і кількість міченого БІКР;а-Ес, що зв'язується з Т-клітинами Уигкаї, аналізували за допомогою проточної цитометрії.

Як показано на ФІГ. 7, гуманізовані тАб МІ Х4, МІ Х8 і М ХО блокували взаємодію СО47, експресованого на Т-клітинах Уигкаї, з 5ІРКа, тоді як контрольне антитіло людини (яке не зв'язується з СЮ47) або середовище окремо не блокували взаємодію СО47/51КРа.

Приклад 5

Антитіла до СЮО47 посилюють фагоцитоз

Для оцінювання ефекту химерних (миші-людини) та гуманізованих тАб до СО47, МІ Ха,

МІХ8 ї М Х9, щодо фагоцитозу пухлинних клітин під дією макрофагів іп міго використовували наступний спосіб із застосуванням проточної цитометрії (М/Шпупат еї аї. (2012) Ргос Маї! Асай

Зсі ОБА 109 (17):6662-7 і Твепа єї аї. (2013) Ргос Маї! Асай 5сі ОО 5 А 110 (27)11103-8).

Макрофаги людини одержували шляхом лейкаферезу периферійної крові здорової людини й інкубували в середовищі АІМ-М (І їє Тесппоіодієз) протягом 7-10 днів. Для аналізу фагоцитозу іп міго макрофаги пересівали за концентрації 1 х 107 клітин на лунку в 100 мкл середовища АЇМ-

М в 96-лунковий планшет і залишали для прикріплення на 24 години. Після того як ефекторні макрофаги прикріплювалися до культуральної посудини цільові ракові клітини людини (Чигкаї мітили за допомогою 1 мкМ М-сукцинімідильного естеру 5(6)-карбоксифлуоресцеїн діацетату (СЕЗЕ; Бідта Аїпагісп) і додавали до культур макрофагів за концентрації 5 х 107 клітин в 1 мл середовища АЇМ-М (співвідношення цільових й ефекторних клітин 5:1). тАб до СО47, МІ Х4,

МІХ8 ії МІХ9, (1 мкг/мл) додавали безпосередньо у суміш цільових й ефекторних клітин і залишали інкубуватися за 37 "С протягом 2-3 годин. Через 2-3 години всі не піддані фагоцитозу клітини видаляли та клітини, що залишилися, промивали тричі фосфатно-сольовим буфером (РВ5З; Зідта Аїдгісп). Потім клітини оброблювали трипсином, збирали в мікроцентрифужні пробірки й інкубували зі 100 нг мічених алофікоціаніном (АРС) антитіл до СО14 (ВО Віозсіепсев5) протягом 30 хвилин, промивали один раз й аналізували за допомогою проточної цитометрії (Ассигі Сб; ВО Віозсіепсе5) щодо відсоткового вмісту СО14» клітин, які також були СЕБЕ", що вказувало на завершений фагоцитоз.

Зо Як показано на ФІГ. 8, химерні тАБб (миші-людини) МІ Х4, ІдС1 МІ Х4, ІдС1 М2970 МІ ХА, І54

РЕ МІХА та Ідс4 5228Р МІ Х4, підсилювали фагоцитоз клітин ЧУигкаї під дією макрофагів людини шляхом блокування взаємодії СО47/5І16Ра, і цей поліпшений фагоцитоз не залежав від функції

Ес.

Аналогічно, як показано на ФІГ. 9А та ФІГ. 9В, дс1 Мі Х4пит 01, Ід54 РЕ Мі Х4пит 01,

Іі454 РЕ Мі Хапит 06, 954 РЕ Мі Ха4пит 07, Ідс4 РЕ Мі Ха4пит 12 і 954 РЕ М Х4пит 13 підсилювали фагоцитоз клітин дигКкаї під дією макрофагів людини шляхом блокування взаємодії сра47/51КРа.

Як показано на ФІГ. 10А, химерні тАб (миші-людини) МІ Х8, Ід! М2970 МІ ХВ і 954 РЕ

МІХ8, підсилювали фагоцитоз Т-клітин ЧигКкаї під дією макрофагів людини шляхом блокування взаємодії СО47/51КРа, і цей поліпшений фагоцитоз не залежав від функції Ес.

Аналогічно, як показано на ФІГ. 108, 954 РЕ Мі Хвпшт 01, Ідс4 РЕ Мі Хвпит 03, 1954 РЕ

МІ Хвпит 07, 1904 РЕ Мі Хвпит 08 і ї9д54 РЕ МІ Хвпит 09 підсилювали фагоцитоз клітин Уигкаї під дією макрофагів людини шляхом блокування взаємодії СО47/5ІКРа, і цей поліпшений фагоцитоз не залежав від функції Ес.

Як показано на ФІГ. 114А, усі химерні тАбБ, Ід01-М2970 МІХ, Ідс2 МІХ9 і 954 РЕ МІХ, підсилювали фагоцитоз Т-клітин Уигкаї під дією макрофагів людини шляхом блокування взаємодії СО47/51КРа, і цей поліпшений фагоцитоз не залежав від ефекторної функції Ес.

Аналогічно, як показано на ФІГ. 118, усі гуманізовані тАБ Ід52 МІ Х9 підсилювали фагоцитоз Т- клітин Уигкаї.

Приклад 6

Індукція клітинної загибелі під дією розчинних антитіл до СО47

Було показано, що деякі розчинні антитіла до СО47 індукують селективну клітинну загибель пухлинних клітин. Припускають, що така додаткова властивість селективної токсичності щодо ракових клітин дає переваги порівняно з тАБб, які тільки блокують зв'язування 5ІКРа з СО47.

Індукцію клітинної загибелі під дією розчинних тАБб до СО47 вимірювали іп міго (Маппа еї аї. (2003) 9. Іттипої. 107 (7): 3544-53). Для аналізу клітинної загибелі іп мійго 1 х 105 трансформованих Т-клітин (Т-клітин Чигка)ю людини інкубували з розчинними гуманізованими тАр до СО47, МІ Х4, МІ ХВ їі МІ ХО, (1 мкг/мл) протягом 24 годин за 37 "С. По мірі наставання клітинної загибелі мітохондріальний мембранний потенціал знижується, внутрішній шар бо клітинної мембрани інвертується з виведенням на зовнішню поверхню фосфатидилсеринів 5О0

(РБ), і пропідіум йодид (РІ) може вбудовуватися в ядерну ДНК. З метою виявлення цих змін в клітині клітини потім фарбували за допомогою флуоресцентно міченого анексину М і РІ або 7- аміноактиноміцину О (7-ААБ) (ВО Віозсіепсе5) і сигнал виявляли із застосуванням проточного цитометра Ассигі Сб (ВО Віозсіепсе5). Підвищення виведення Р5 на зовнішню поверхню визначали шляхом вимірювання відсотка підвищення сигналу анексину М і відсотка загиблих клітин шляхом вимірювання відсотка підвищення сигналу Рі або 7-ААЮО. Що важливо для терапевтичних цілей, дані тАб індукують клітинну загибель пухлинних клітин безпосередньо, і для знищення не потрібна участь комплементу або втручання інших клітин (наприклад, МК- клітин, Т-клітин або макрофагів). Таким чином, даний механізм не залежить як від інших клітин, так і від Ес-ефекторної функції. Отже, можна конструювати терапевтичні антитіла, розроблені на основі цих тАб, для зниження Ес-ефекторних функцій, таких як АОСС і СОС, і, тим самим, обмежувати імовірність побічних ефектів, властивих для гуманізованих тАр з незмінними Ес- ефекторними функціями.

Як показано на ФІГ. 12А та ФІГ. 128, розчинні гуманізовані тАб МІХ4А індукували клітинну загибель Т-клітин АЇ ЇЇ. дигКкаї, як виміряно за допомогою збільшення забарвлювання анексином

М ії зафарбовування 7-ААЮ (не показано). Гуманізовані тАб, Ідс!1 Мі Х4пит 01, Ідс4 РЕ

МІХапит 01, Ідс1 МІ Хайит 02, 4024 РЕ Мі Хайпит 02, Ідс24 РЕ Мі Ха4нит 06, Ідс4 РЕ мі Хапит 07, 454 РЕ Мі Х4пит 12 і 9054 РЕ Мі Х4пит 13, спричинювали клітинну загибель.

На відміну від цього гуманізовані тА, Ідс54 РЕ Мі Ха4пит 08 і 9054 РЕ Мі Х4пит 11, не спричинювали клітинну загибель Т-клітин УшигКаї. Індукція клітинної загибелі та стимуляція фагоцитозу чутливих ракових клітин забезпечує додаткову потрібну властивість антитіла та терапевтичну перевагу під час лікування раку.

Як показано на ФІГ. 13А та ФІГ. 138, розчинні химерні та гуманізовані тАб МІ Х8 індукували клітинну загибель Т-клітин АГ игкаї, як виміряно як виміряно за допомогою збільшення забарвлювання анексином У і зафарбовування 7-ААО (не показано). Химерні тАб, їдД1 М2970 (хі) МХ8 і Ід54 РЕ МІХ8, і гуманізовані тАб, ІдсС4 РЕ Мі Хвпит 07 і 954 РЕ Мі Хвпшт 08, індукували клітинну загибель Т-клітин АЇЇ. УдигКкаї. На відміну від цього гуманізовані тА, досі

РЕ міХвпит 02 і 9054 РЕ Мі Хвпшт 04, не спричинювали клітинну загибель Т-клітин Уигкаї.

Індукція клітинної загибелі та стимуляція фагоцитозу чутливих ракових клітин забезпечує

Зо додаткову потрібну властивість антитіла та терапевтичну перевагу під час лікування раку.

Як показано на ФІГ. 14А, розчинні химерні антитіла МІ ХУ індукували клітинну загибель клітин игкаї, як виміряно за допомогою збільшення забарвлювання анексином М і забарвлювання 7-ААО (не показано). На додаток, як показано на ФІГ. 14В, химерне тАБ ІдСс2хі

МІХО9 ії гуманізовані тАбБ, Ідс2 МІ ХОпит 06, дсС2 МІ Хопит 07, Ідс2 МІ Хо9пит 08 ї ІдС2

МІ Хе9пит 09, індукували клітинну загибель клітин Чдигкаї (більше ніж 2-кратне збільшення забарвлення анексином М). На відміну від цього, гуманізовані тАб, ІдсС2 МІ Хопит 01, Ідс2

МІ Х9пит 02, Іде МІ Хопит 03, Ідс2 МІ Хопит 04, Ідсе2 МІ Хопит 05 іІдс2 МІ Хо9пит 010, не спричинювали клітинну загибель клітин Уигкаї. Індукція клітинної загибелі та стимуляція фагоцитозу чутливих ракових клітин забезпечує додаткову потрібну властивість антитіла та терапевтичну перевагу під час лікування раку.

Приклад 7

Гемаглютинація еритроцитів людини (пПКВС)

Було показано, що багато антитіл до СО47, включаючи В6НІ12, ВКІС126, МАВІ1, МАВІ2, сС2С6, 59, спричинюють гемаглютинацію (НА) промитих КВС іп міїго або іп мімо (Реїгома Р. єї аї. Сапсег Нез 2015; 75 (15 5"уррі): Абвігасі пг 4271; патент США Ме 9045541; Опо еї аї. Опсої

Вер. 17: 1189-94, 2007; Кікисні еї аі. Віоспет Віорпуз НКе5. Соттип. 315: 912-8, 2004; 5ІіКіс В. еї а!. У Сіїп Опсої 2016;34 (в,иррі; абзігасі 3019)). Гемаглютинацію НАВС оцінювали після інкубації "АВС з різними концентраціями химерних і гуманізованих тАБ МІ Х4, МІХВ8 ї МІ ХО іп міїго, фактично як описано в Кікистні еї аі. Віоспет Віорпуз Не5. Соттип (2004) 315:912-918. Кров одержували від здорових донорів, розбавляли (1:50) в РВ5/1 мМ ЕОТА/В5А та промивали З рази за допомогою РВ5/ЕОТА/В5А. НАВС вносили в 96б-лункові планшети з О-подібним дном з рівними об'ємами антитіл (75 мкл кожного) та інкубували протягом З годин за 37 "С і протягом ночі за 4 7С.

Як показано на ФІГ. 15А та в таблицях 1 і 2, ДС! М2979 МІХа4нНит 01 спричинював гемаглютинацію НАВС, у той час як гуманізоване тАб 9024 РЕ МІ Х4іпит 01 не спричинювало (концентрація тАр становила від 50 мкг/мл до 0,3 нг/мл). Відсутність гемаглютинації під дією

І424 РЕ Мі Хайит 01 забезпечує додаткову потрібну властивість антитіла та терапевтичну перевагу під час лікування раку.

Як показано на ФІГ. 158 і в таблицях 1 і 2, химерне антитіло Іда4 РЕ МІ ХВ (хі) і гуманізовані 60 антитіла, (924 РЕ МІ Хвнит 08, 424 РЕ Мі Хвнпит 09 і Ід0204 РЕ Мі Хвпит 010, спричинювали гемаглютинацію НАВС, у той самий час гуманізовані АБ, МІ Х8, 424 РЕ Мі Хвнпит 01, Іда24 РЕ

МІ ХвВпит 02, да РЕ МІ Хвпшт 03 ідса РЕ МІ Хвнпит 11, не спричинювали (концентрації тАб становили від 50 мкг/мл до 0,3 нг/мл).

Відсутність гемаглютинації під дією гуманізованих антитіл, (924 РЕ МІ Х4іпит 01, 424 РЕ МіХвнит 01, 4024 РЕ Мі Хвпит 02, Іда4 РЕ МІ Хвпит 03 і дс4 РЕ Мі Хвнит 11, забезпечує додаткову потрібну властивість антитіла та терапевтичну перевагу під час лікування раку.

Як показано на ФІГ. 16А та ФІГ. 16В, химерне антитіло Ідсб2 МІХ9 спричинювало гемаглютинацію НАВС, у той час як усі гуманізовані тА МІ ХУ, за винятком ІДс2 МІ ХОопит 07, не спричинювали (за концентрацій від 50 мкг/мл до 0,3 пг/мл). Однак ступінь гемаглютинації, яку спричинювало МІ ХОпит 07, був знижений порівняно з химерним тАБ Ідс2 МІ ХО. І в даному випадку, відсутність гемаглютинації під дією гуманізованих тА МІ ХО забезпечує додаткову потрібну властивість антитіла та терапевтичну перевагу під час лікування раку.

Приклад 8

Протипухлинна активність іп мімо

Метою даного експерименту було показати, що гуманізовані антитіла МІ ХА, МІ Х8 і МІ ХУ, як приклад проілюстровані за допомогою ІдДСаРЕ МІ Х4 07, дСсА4РЕ МІ Х8 10 і дс2 МІ Хопит 08, знижують пухлинне навантаження іп мімо в мишачій моделі із ксенотрансплантатом лімфоми.

Клітини Най лімфоми Беркітта людини (АТСС Ме ССІ-86, Манассас, Вірджинія) підтримували на АРМІ-1640 (Гопга; Волкерсвілл, Меріленд), доповненому 1095 фетальної бичачої сироватки (ЕВ5; Отеда 5сієпійіс; Тарзана, Каліфорнія), в атмосфері 5 95 СО». Культури розмножували у флаконах для культур тканин.

Самиць мишей Ма (МО0-Са-Рікасесів|1 дудіт му 52У) одержували з Уаскзоп І арогаїогу (Бар-

Харбор, Мен) у віці 5-6 тижнів. Мишей акліматизували перед проведенням робіт і поміщали в мікроіїзоляторні клітки (І ар Ргодисів, Сіфорд, Делавер) у спеціальні непатогенні умови. Мишей годували опроміненим раціоном ТекіІай Спіоба! Оівї? 2920х для лабораторних тварин (Епмідо, раніше Напап; Індіанаполіс, Індіана) та забезпечували автоклавованою водою ай Іріїшт. Усі процедури проводили згідно з рекомендаціями Інституційного комітету з догляду за тваринами та їх використанню.

Самицям мишей М5О інокулювали підшкірно в правий бік 0,1 мл суміші з 30 95 ВРМІ/70 95

Зо Маїгіде! м (ВО Віозсіепсе5; Бедфорд, Массачусетс), що містить суспензію з 5 х 106 пухлинних клітин Каїї. Через п'ять днів після інокуляції цифровий штангенциркуль застосовували для вимірювання діаметрів пухлини в ширину та довжину. Об'єм пухлини розраховували з використанням формули: об'єм пухлини (мм3) - (а х р2/2), де "Б" являє собою найменший діаметр, а "а" являє собою найбільший діаметр. Мишей з пухлинами, які пальпуються, об'ємом 31-74 мм3 рандомізували по 8-10/група і в цей час починали введення МІ ХОпит 08 або РВ5 (контроль). Мишей обробляли за допомогою 5 мг/кг антитіла 5Х/тиждень протягом 4 тижнів за допомогою здійснення внутрішньочеревних ін'єкцій. Значення об'єму пухлини та ваги тіла реєстрували два рази на тиждень.

Як показано на ФІГ. 17, обробка гуманізованим антитілом дДс4 РЕ М Х4пит 07 значущо знижувала пухлинний ріст пухлин Ка)Її (р « 0,05, двофакторний АМОМА), проявляючи протипухлинну ефективність іп мімо.

Як показано на ФІГ. 18, обробка гуманізованим тАб до СО47, Ідс4 РЕ мі Хвпшт 10, значущо знижувала (р « 0,0001, двофакторний АМОМА) пухлинний ріст у пухлин Каї), проявляючи протипухлинну ефективність іп мімо.

Як показано на ФІГ. 19, обробка гуманізованим тАб до СО47, Іде2 МІ Хопит 08, значущо знижувала (р « 0,05, АМОМА) пухлинний ріст у пухлин Каїї, проявляючи протипухлинну ефективність іп мімо.

Приклад 9

Ефект щодо параметрів циркулюючих еритроцитів

Мета даного експерименту полягала в демонстрації того, що гуманізовані антитіла МІ ХО, які не зв'язуються з ЕВС людини іп міїго (таблиця 2), як приклад проілюстровані за допомогою Ідс2 пит1017 08, не спричинюють зниження або вмісту гемоглобіну (НО), або кількості циркулюючих

ЕВС після введення яванським макакам.

Використовували самиць яванського макака походженням з Китаю (СНапевз Вімег

І арогайогіє5, Х'юстон, Техас) вагою 2,5-3 кг відповідно до рекомендацій Інституційного комітету з догляду за тваринами та їх використанню. ІдсС2 МІ Хопит 08 або середовище-носій (РВ5) вводили у вигляді 1-годинної внутрішньовенної інфузії в день 1 за дози 5 мг/кг і в день 18 за дози 15 мг/кг (3 тварини/група). Гематологічні параметри вимірювали протягом усього дослідження у дні -7, -3, З, 8, 12, 18 (перед введенням дози), 20, 25, 29, 35 і 41 і бо порівнювали/нормалізували щодо середніх значень контрольних тварин. Значення кількості

ЕВС і вмісту Ну до обробки в день 0 в групі дс2 МІ Хопит 08 були нижчі, ніж в контрольній групі. Після обробки кожною дозою Ідб2 МІ Хопшит 08 спостерігали мінімальні зміни (« 10 9) вмісту На (ФІГ. 20А) або кількості ЕВС (ФІГ. 208) порівняно з контролем, що показує, що антитіла, які не зв'язуються з КВС людини іп міго, не спричинюють зниження гематологічних параметрів КВС у разі введення яванським макакам.

Приклад 10

Імуногістохімічне фарбування СО47

Виявлення місця розташування експресії СО47 виконували у фіксованих формаліном, залитих в парафін (БЕРЕ) блоках від пацієнтів з різними типами раку (одержаними з комерційних джерел) із застосуванням химерних тАб миші/кролика до СО47. З ЕЕРЕ-блоків нарізали зрізи товщиною 3-4 мікрони, проводили депарафінування й обробляли за допомогою розчину для демаскування антигену. Потім зрізи інкубували з 4 мкг/мл первинних химерних тАр миші/кролика до СО47 протягом 1 год. і з міченим НКР вторинним антитілом до антитіла кролика протягом 20 хвилин. Антитіло до СО4А7, яке зв'язалося з СО47 людини, візуалізували із застосуванням субстрату для пероксидази, 3,3,5,5'--етраметилбензидену. Зрізи перефарбовували гематоксиліном й оцінювали із застосуванням стандартної світлової мікроскопії. Як показано на ФІГ. 21, високий рівень експресії СО47 виявляли в раковій тканині молочної залози людини, як показано за допомогою темних ділянок, позначених стрілками, із застосуванням химерних тАБ миші/кролика до СО47, як приклад проілюстрованих за допомогою химерного тАб миші/кролика МІХ4. Це показує, що дані тАБб можна застосовувати для імуногістохімічного виявлення СО47 людини у зрізах пухлинної тканини, одержаних з ЕЕРЕ- блоків, в діагностичних аналізах.

Приклад 11

Антитіла до СОВ47 регулюють передачу сигналу за участі оксиду азоту

Зв'язування ТОРІ з СО47 активує гетеротримерний О-білок бі, що приводить до зниження внутрішньоклітинних рівнів циклічного АМР (САМР). Крім того, шлях за участі Т5Р1/Сс047 перешкоджає сприятливим ефектам шляху за участі оксиду азоту (МО) в усіх клітинах судин.

Шлях за участі МО складається з будь-якого з трьох ферментів синтаз оксиду азоту (МОЗ І, МОБ

Ії МО І), які утворюють біологічно активний газ МО з використанням аргініну як субстрату. МО може діяти всередині клітини, в якій він виробляється, або в сусідніх клітинах, активуючи фермент, розчинну гуанілілциклазу, який виробляє молекулу-посередника, циклічний ЗМР (СОМР). Правильне функціонування шляху за участі МО/СОМР необхідне для захисту серцево- судинної системи від стресів, зокрема без обмеження стресів, що виникають у результаті поранення, запалення, гіпертензії, метаболічного синдрому, ішемії та ішемічно-реперфузійного пошкодження (ІКІ). У випадку цих клітинних стресів інгібування шляху за участі МО/СОМР під дією системи ТЗР1/СО047 посилює ефекти стресу. Це являє собою особливу проблему для серцево-судинної системи, в якій як СОМР, так ії САМР відіграють важливі захисні ролі. Існує багато причин, через які ішемічно-реперфузійне пошкодження спричиняє або робить внесок у виникнення захворювання, травми та несприятливі наслідки хірургічних процедур.

Метою даного експерименту була демонстрація того, що гуманізовані тАб до СО47 за даним винаходом проявляють здатність обертати опосередковане Т5РІ1 інгібування стимульованого МО синтезу СсОМР, наприклад, як описано раніше із застосуванням моноклонального антитіла миші до СО47, розкритого в Ізепрегуд еї аї. (2006) 9. ВіоІ. Спет. 281:26069-80, або як альтернативи інших наступних маркерів або ефектів, що виникають в результаті передачі сигналу за участі МО, наприклад розслаблення гладком'язових клітин або агрегація тромбоцитів, як раніше описано в МіШег еї а. (2010) Вг 9. Рпагтасої. 159: 1542-1547.

Спосіб, який використовують для вимірювання СсОМР, виконували згідно з описом виробника (набір для флуоресцентного аналізу циклічного СМР СаїспРоїпі, МоЇІесшаг Оемісе5, Саннівейл,

Каліфорнія). Використовували клітини ЧУигкаї УЕб6.1 (АТСС, Манассас, Вірджинія; номер за каталогом ТІВ-152) або інші типи клітин, у яких зберігається шлях передачі сигналу за участі

МО/СОМР під час вирощування в культурі й у яких проявляється сильна та відтворювана інгібіторна відповідь під час зв'язування ТОРІ з СО47. Клітини вирощували в середовищі

Дульбекко в модифікації Іскова, яке містить 5 95 (06./06.) термоінактивованої фетальної бичачої сироватки (ВіоМуезї; номер за каталогом 501520), 100 одиниць/мл пеніциліну, 100 мкг/мл стрептоміцину (Зідта; номер за каталогом Р4222) за значень щільності менше 1 х 105 клітин/мл. У випадку аналізу СОМР клітини висівали в 9б-лункові планшети для культури тканини за щільності 1 х 105 клітин/мл в середовище Дульбекко в модифікації Іскова, яке містить 5 95 (0об./06.) термоінактивованої фетальної бичачої сироватки (ВіоУмезї; номер за каталогом 501520), 100 одиниць/мл пеніциліну, 100 мкг/мл стрептоміцину (Зідта; Мо Р4222), на бо 24 години, а потім переносили в безсироваткове середовище на ніч.

Розкриті в даному документі гуманізовані антитіла, очищені з молекул, одержаних за допомогою тимчасової трансфекції СНО клітин, як описано вище в прикладі 3, а також контрольне химерне антитіло потім додавали за кінцевої концентрації 20 нг/мл, після чого через 15 хвилин додавали 0 або 1 мкг/мл Т5РІ людини (Аїйеп5 Кезеагсп апа ТесппоЇоду, Атенс,

Джорджія, номер за каталогом 16-20-201319). Через додаткові 15 хвилин в половину лунок додавали донор МО, діетиламін (ОЕА)-МОМОат (Саутап Спетісаї, Енн-Арбор, Мічіган, номер за каталогом 82100), за кінцевої концентрації 1 мкМ. Через п'ять хвилин клітини лізували буфером, що постачається в наборі для виявлення СОМР, і аліквоти з кожної лунки аналізували щодо вмісту СОМР.

Припускали, що деякі химерні або гуманізовані антитіла будуть обертати інгібування СОМР під дією Т5РІ1. Обернення буде повним (280 95) або проміжним (20 95 - 80 95). Це обернення інгібування СОМР під дією ТОРІ буде демонструвати, що вони мають здатність посилювати передачу сигналу за участю МО, і означати, що вони застосовні у захисті серцево-судинної системи від стресів, зокрема без обмеження стресів, що виникають у результаті поранення, запалення, гіпертензії метаболічного синдрому, ішемії та ішемічно-реперфузійного пошкодження (ІКІ). Також очікується, що додаткові аналітичні системи, наприклад, скорочення гладком'язових клітин, будуть показувати, що деякі клони химерних або гуманізованих антитіл обертають інгібіторні дії ТОР щодо наступних ефектів, які відбуваються в результаті активації передачі сигналу за участю МО.

ПЕРЕЛІК ПОСЛЕ ЦОВНОСТЕЙ

«10» СБІОМА ТНЕКАРКОТІСВ, ЇМО,

Рако, ВОБуй

Маптітн, Ретеїд ТТ. лішацкс, «МеВ с,

Как, КоБекі М, 180 ТЕВАЛПЕВТИчЧНІ ДАТИРТІЛА ДО СТЬ «Ї3025 копав ве «МИ» бгигио, 8 «ВІ З015-3-ї8 «Ве Бики в «151» 2015-08-25 «5» 658220, 755 хібі 8015-05-18 «Ом Бриз а, вн «щі пет Е-йоно «1505 ви Ва, 174 кі5ї» ват «1502 евилля, ва «ЛЮ ВТ в-ва «І» вих, 263,548 «15їх 8п15-15-04 сь» 104 кіт» Басетіїй вероїя 5.5 «1» їі «їх 10 «ій» руюк «13» ШтУчна Ппоспідоввість «их «ЗИ» мх4-НСОВІ «800» 1 зі Тух ТВУ Ре ТВкК Авв о Тух Уві Ті: Нуз ї 5 18 «кІіОи й «е1їзЗ 10 «вій» Вілок кві Штучна посліпежність «Ей

«Кай сухе шОоВі кох сі ТУ ет Бо тп Вам Тух Ту Те Ні 1 5 15 «ЩІі10х З «МЕ 1 «Ве Білою «гій Штучна послідовність «и «їй ЧЕ Я-НОСЦВІ «ЦО» З сі Туює ТБ Ба Тс дяй ТУХ ТсЮю се Дів 1 ї 10 ч105 я «ії» 17 «к10» Жіпок «Бій» Штучна послідовність «оте «й? ка НОСОКО «ар 4

ТУук її ТУуг о рке тує вв Аве обі 1Бе без ТУукК Авпочао Був ра Був 1 5 10 15

ЗУ

«ій «ит Ті «вій» Відаю кЛ3- Штучна послідеавнасть «ий» со» Ух е ох 5 тук їїз Азр ко їво Азп обі АвроТвК о ТнЕ Тує АБИ сій Буш ЕВе пу ї 5 30 14 іш «ВО в «Віз 47

«їй?» Білик «вії» ЦШвучва послідовність сш? «Чежа МиВ-НСИКО «НО» їй

Тухє Тис АвроБхо Аку ТВЕ о Азротук ЖТНЕ Ото Тух бап Бій бух Рее Пув і 5 10 15 х ле «каш 7 «ші» В свт» дінОЖ «213» щем гемолідовна сте «кака» Уха еНСОВа «00» 7 сім бі ТУк о Тух чаї Бко дво отут 1 їх «51й5 8 «шар В «22» ВБПідек «віях ШЩетуУчноа; послідовність «де» сви Уха нНСсОКа каша» в сі пі» Тук Тук Узі Тих Авр Тух : я «вМ0х з «х13ї5 й «15» Бідок «15» Штучна песблідовністе «щих «га» жх-нСОщЗ ко» 5 спіуУу зі Був лк Вів Меб Азротух

І З

«105 10 «вії 8

«ій» Білок клі» Штучна посблідсвиншисть «чай» «па» ЕВеНСПВЯ «Ом 19 бі БіУу Ака Сваї Шфу ей обту туш 1 5 «ій 1 «в1ї 15 «вів Вівпах «Кі32 Щетуєчна посліІДдОВнНІСТЬ «ВЕУ «ин Мха-БОеПВІ «Оз 11

Вт беж бу бів йоег о ї1іє ві уз Жах дя в СУ во Тв Бує Сем Зх 1 де 10 і5 «ек 15 «К1іїх 11 «5і9» шілок 813 Штучна послідавнікомх «аиХух «232 УКВ СОСОК сах 15

Ах Ава пек сій вро бі БЕЖ вві Тук Бем о АБе ч се 1-5ї ї я їй «кій» 15 сих 11 «вій Білож «13 Црвучня послідсанієть «Ейо «тах МЕС кЯИх 3 вх Аїв ек сій Зах ї3їе ЗХ АБИ Тук ме бл ії 5 18 «Вих 14 «11 15 чиї Бідок «І» ВітУчна послідавністі» «ЕВ»

«ейазх УХА ТС «що» 14

Аксо ех бек сів два 118 Уві біп цех Авп Сіу АБа отТвк Тек Пем Бо ї 5 10 І5 «Кіа» 15 «ввіз «вій» Вілох «233 Штучна послідевністнх «Я» «вил» КУМ «по» 18 цуз ад бек Ава Ас Ве веб з ї-

А - «2105 їй «ЕЕ 7 «Вій» білоє кали Штучна послідсввісте «ВО х ч«Ейаз УК ЇСрКІ «ап» ів

Тук Тпж Зех Ак ви Ху дах ї З «шк 17 «віх 7 «вих Білак сиї3» Штучнз послідовна єть ха» «ви» Уа -їосрка «Фо 17

БУ Маї Ре Ні АхЯ Ре Бех 1 5 «І1бз ТВ «ярі В кхаи17з Білок «13» Штучна послідов ьсть киш «яшт Ук СА «41850» 18 вне бій сьу бек Нів Уві бе Тую ТОЖ ї й кетоз 15 «Ві 9 «вій» БЕЛОК ч«а1йз ЦтуУучна послідовність «ие» «РАЗ» див ВБСОВІ «Ай» 15 ста бів сбіУу Аза ТВ оївО Бо ТхвоТНЕ 1 їх «ЩО 20 «вії а «вій» Білок ха» ЩШеучна послівовність «и «аг Шк ЦСПеЗ «00» й пе бій бі Бех Міз Уві ко тТтр отак 1 5 шир п «й 117 «Вій» Білок «13» Дюфузна послідовність «ВВ» «шах УкітикнНОЇї х«АПОР 1

Шо Уві біп їй біп обі дев Піу Ре Біо Бей омаї бух ко піу дів 1 5 1 15 бас Таї Бу Ме бек був зу Аба бйет СЕУ Тук Твк Ре тТвВх дБ тує о пл Зо

УМ Тїє нів с Ткроуві Був Аж Ажу ркО оБ1іУу бі у во ль Тв 15 сіжЖ ТУух ї1іє Ту Рус Тухк о Ашп яр Б1У ЗІ ес Тук Азо іо бух Рре 5 тв во ух СіуУу Буя йійа Тк Ме) Твх Бек Авр обу беж Бек Бек ТУ Аїів Ту ба то т во

Мет Азр Бей Бек пек зе Тв бек пі Авробех АТЯ Мі Тух тТук Сув 85 БУ. ЗВ тТвЕ Акз сте бі ТЕ ЖУК За) ЕКО Але о ТУЮ Тк чі біпосфу Те ТАх 100 зов 15 їжа Тпх Уаї Яеж Бех 115 «вій» т «25115 17717 «ятфа» Білок «аі13» Штучна песлюодавВну с кг» кла кати НО «ОО» 25 січ Уві біп Бей сій біб Бек БіУу ВЕ ба Геп Уві Пул РКО З1у Аза 1 З 19 їх пек Уді Буш Меж бек Сшв бує віз бек СЕУ Те ТЕ Ре Тих Ал тує ве. й 3

Узі її Ні Тжр Уві Пув Аха Аля рго пі біо сіуУ ем біо Тк о Тіє

З 40 45 сі Тук Ті ТУюк Рхо Тух Авт Авр обіУ їїе Пез Тує Авпосів Буш Епе 50 53 БО руч 15 Був Аза Тв Уві ТБ: Зех Авр муз бек БЕЖ бек Тв Аїз ТУЮ 7о 7 о

Меє Авробей деж дек о без обїве ек ово Аяв бек дія Уві Тек Туюк ув а 5 з5

ТЕ йка біМ бі Тек Тук ді Бе дБЮ Тк ТЕвБ бБІУ бій с0М1у Твк оба о 105 1195 чай Тв зві бак бек 115 «Вій» 2 «ивів 117 «й1иУ Бінсаж «щі» Шкучва послідешвність сих «ши кана «апа

Сів уві БІВ Без Уві 3 зве ШР? дій 1 Уа Був Бу Бе пі Аїа

І З 15 15

Жах уві бій Маії Бек Су був Аа дех бу Тук ТЕ о Рре Тв люмй тує 25 В 3

Ужь їі Нів Тко цей Асо бій Аза рко Бі бів бі Мем осбтй Ткр о мМех 35 40 45 віч Ту Же Тег РКО Ту Аап ойаробію ТЕ іо Тукойжа ШТ бує РБе 50 55 Бо уз піу АК Уі ТОК оМек Тк двух Лав Тл бет С(1е ех Тв дів тує то т Ко

Мев бі Мей Бех Бек цеу Яке бех дЕр дв Тих Атя Уві Тук Тук Пух ків Ако бі бі ТуУук Тук Уві Бо Дер о Туг То Су біб Аїа ТБ Сей тао 108 110

Ча) їпх Маї беж ЖвЕ

ІБ

«Вій» ай не Я «Таз жінок свій НШтучна поспідовифеть «йог «ха» МханинНОх «а ха сів Уві бів ва УВЕ біт Зах Бі діє Біо ай бул пу бро Б1У Ав 1 ; її 15 цех уві Зіп Уві бек Сук бух Дів бер пі» Тек Тв бе Те бвь Тук

Я Ка З таї Ті Ні Тр іо де би Аза РЕ Щі» бІіа сію бехз Зі Ткр Ме 10 43 слу Тух Іі Тук Рже Тук Авп Дар осі Її Бей Тук вп о бі Був РЕе зо 2 о

Гуз біу Ася Уві Тр Ме Тк Бек Аз Тв Зеє Ті Дек Тву взв тує

Б та ть 8о

Ме сіє Мей Чек Зак беш ДтаЯ Зек Ав Азо Твх АЛів У«і Тек Тук Сма на о Зк

Аїа Асо пі Зі Тек Тук Мах Тук Аве Тух Ттр СТУ ба Аза ТБ оце

МФО 105 116

Заві ТВ Уаї Зеж бак це «хі0з 25 «віт 417 «вія» Білок «213» Штучна послідовність «вки» «ІЗ УхаБитнОЗ «іх 5 біцомаї СМ; Гео ув) Бій бах шьу Віа бі Узі бує Був РЕ бім віх у 7 У КЕ; ї З 10 15

Тиж о бЗаї пу ї1те дек Су Буд уаї Бек зпіу Ту ТЖТвЕ Ре Тв: Аа тує 28 не зо чУвЬ її НЕв Тжроуай бій біб дів Во бі був Біб Гевобім ткроМех й т біу Тук Кзе Тух Бо Ту Ави Авробл1у Те Бей тую ввпосій був риє ко Би 89 уз піу йку Уа3 ТНх тка Тс вів АвроТБЕ Бех ТЕ АВЮю Тк Аз тух

Ба то 15 во

Маг біч цей Яшт Яеж бе) Ако Вех біч АвроїтТвк Аіа Уві Тує ТеУє Суд ! зх - 85 50 55 вів Таж Біт сі Тук Тук Уві Бге ДБЮ о Тук Ткр шу Сім Б1іу ТБЕ Ток 159 0 116 чаї Твж чаї дет дек 115

«війх як «115 4117 «и1й» Бьпох «Та» Штучна послідовність «8» «3» Уха паювНОЯ «бах Вб бім Уві біпоБем Уві біп бек 01 Бі біз Уві пує Боб Ркб бі сли і й 16 15 дет цец Буш ТІ бек Сує Був бЗіу бек ЗАУ Тут ТБЕ Рпє ТвЕ АБО тТух

Уві Ії Нів Ткр о Уві Аку біб Меї ВБго бі Був ЩіУу Бей біо Ткро Мед 35 40 С сію тую Ті Тут Кко Тут Акип о Авродіу Її Пез Тух двп сіно оБув Рае 0 5 я

Був зЗАу шій Уві ТЕЖ лі бер ойтів Авр Буз деї Хі бет Тпх Ата о тух

БЕ Та У що

Бецчц бів ТЕв Бет йеж Бей Був Аів меж АБИ Тр Аі Ме отух Тук ув 85 що Зх

Азіа йха піу 1 Тук Тук уві Рез АввоТук Тур осі Суп обі ТБЕ отв 100 105 110

Уа1ї Тис Уві бек бек «КІ» 7 «11 Мр; каз Білою «213 Штучна поролідовнихсть «ах «йЕзз УкаБотнОох «00» в бів хзаї сіп о бе» Уві біпочзех Сіу вів бій Уві Був Був Ето щіу Аїд ї 5 10 т

Бай мМаї Пух Уаї бак Су Бу Віз бе обі ТУЄ ТпжЕ Ре о твпх АБ; тТук маї ль нів Тер Уві Ако бій Аіа Бко біу їй бі їй біц ТкроМех 35 чо 5 біу Тук Тте Тут РЖО Тух Ав дае» О1у 112 Мцез тТух АБп обі) Був Рве

За ЗВ 5

Тух піт ко Уаі Твс о Меб ТТН Те Авр Тк оБЕє ТВЕ Зес Твк Аз тую

Не та но

Має сію їєхь Ако Бех Бво Ак Бех Ар оАзр о Тре Віа Уві ТуУуюк Тут Сув я а т

Аіа Ак біУу СТУ тТух ТУХ Уві Бхе АвроТуУую Тер бік іп пу ТвВк оте 1899 19 чно!

Уві ТБ: Уді бек о шею ач «102 28 «віз її; «918» Білок «Ії Штучна послідовність «Оз «вра МхВтихнОЗ «ай» г шва баз сів цей біп опію дек б1у ко біб без Меб Пує гро Щ1у Ата і в. 12 ї5

Збек Уа! Пув Те Вех Су буз йіа бек сП1у Тух Щек Бпе Тих Ав Тух 2 а 33

Тук їі Вів Ткр ові дво бій бек Ні сі Буже бек Бец сію Жсю їв зо 45

Біт їж ї1е Авш о рко Беч Ав БІ Ар оте ТвЕ о тТУБ Ава цій Бтж вКе

ЗИ зу ВИ

Пув бБіуУу Мув Ада Тис бе Твк Уві Авробувз Бех Бес бек Твсе Лія Тук ва т 78 ва

Межє Ак Бей бек Веї ББо Тьх Бек Аїз Азробеїт Аївз Уяі Тух Тук був

Аїа Ага біу БіУу Пув Ако Аза Меї Авр о ТУє Ттробіу біп біу Тк бах 108 105 т1й

Уві жи Маї Бек беж 115 «105 ат 17 «вій» Білок «213» Штучна послідовність «ех «3» ЧЕиЗНниЩнНОВ «ах 5 сів Уві пі Бец уаї біп о бех біУу Аїз б1ів Уві ша пуд КЗ Бі Від 1 5 15 15 дек Уві мує Заі Берг Сув Бук Аіїа Зек сі Лук бек Рпе Тс вел Тут ка 25 Зо

Тук ЖКе ків Тхр Уві Аху біз Аза бко бі 51 біу їо сіб) тТкЕро мех

У ї У З У Р 38 «0 5

ЗКУ тТухк тів Авр о рРхо Бер Авп біу Аве Тих Тих Тух дви сів був РБе

КУ піУ Ага Мах ТВх Мес Так вк Але о Тс шеє Ту бе їлпк Маї ТУух 52 ще ть я

Ме біс Мед оцет йех БПец вро бек біо йвроТВк Ака Узі Тує Ту Сув ва зо З дів Ахо Бі сі пуб Аа Аза Меб АяротТук Тр п1Уу 10 пере ТВ о їей 09 25 119

УЗЕ Тв Уаї Беж Бех «102 30 а» 317 «812 Відек «дія» Штучна посзідовнаість «ВИ» «23» УхВІннанО? «ОО 30 сів баі сіл їжи Уаії бів бек щіУ йіа біз мазі Був Був Бко пі Єви 1 ю і5 15

Зех Уді бує зі бвг Суд мух Вів дак пі» Тс о Зшке Бе Жорж давл оту 20 25 ЗО

Тук їіе Нів Ткр о Уаї Аква біп Ата кб Б1у біп бЗіу Бей біс Тер Ме 45 що 15 сіу жує їїзв дар вхо пев АБ сіу Вар отАх Твк о Тут Аа С ьлоїув Би о о іув пі дк Уаї тах Те ТВк лі Ар обій Бех Тв дек ТВвж Ат тую со ти 75 82 55 То 75 З

Меї пін лез беж Бех без Ахя деко бій дЕроїВху Вів Мді Тук оТук Су 85 ща 5

А1іва Аха ім ШІ Гра Ахе Аіва Меб Ар отТук То обі» біп обі вх Бер 100 вч її чаї її тах Зех цех 118 «105 31

ЕМ» 117 «піфйз білок «Вїйх Щжузна поеспідевниємь «ех «ев УхВІненОМ «Дію» 31 біз Уаії шщів зїец Заї бій бЗех 0О1Уу Аіа біз Чаї Буз був Рко біфу ЗІ 1 о 16 тб

Зак оїємв Був 118 Яйвк Сув Був бі Зех Біу ТеЄ Жек Ве ТВу Аве Тух дО же Зо

Тут іє Ні Ттр Уа) Ак бій Меб Бко сі Був 5 рем бі кро Ме

ЗО «5

Біу ТуУук їі АвроРко Без дев бі Ако Ти Та ТуУк дев пів Був ВБеЕ а Зо що іУвє піу Бтв Маї тах ів Шев Аза дАвроГуз бек її Щек ТИЖ Аїая Тук по 70 та во їм біб Тер о бЗеїх Єв; Бер Зужд Дія йех Аер три Аїва Меї Тук Тех Сув

ЗО 55 діа вхо бі сі Був одте дів Ме др тує Тер обі Біб бу Так без ї я у у у З. оту ії У У

То ЗБ 115

У ТВХ ба Бех Бех 115 «дід» 32 «вії ТЕ «Від» Вінок «РІ Швучна поєлідаевивіств «й» «вшЯ» РУХВВаНОЯ «дп ЗУ піп мні Щіб йеа Уві бів бек бі діа Фа Узі був бу кто сіу Бе ї 5 їй 15

Зек Уві Був чаї Бек Сув ГУ Аїз Бес Біб Тух Бех ВБе тах ех Тух о а зо

Тук Хіз Ні Тр Ме Ака зів дів Вко сту бін Б3» Гва 51 Тур Ме я! 45 бі тую хів яр Рксо Пен оАяп іУ АвроТвх ТВ оТук Аія піб Гуз ББа а 55 в

Чіп пі Ак Чаї Так її ТК Вів Авросі йвхе їле дес їй Аз Тук 5 то пе ще

Мек сіб бе бех беж ем Аа бЗег січ Аво ТБ Аза Уйї Тут Тек СВ що 50 5

Аза Акц шШтУ су ев Ахоа Аза Мек Авр Тук Тв Бі Біт щіУ тах цех тві Тв Уаь бек бек 115 «Ід» 3 іх 317 сеї» ділок «1» Штучна послідовність

«и» «Ва» УкНриавніВ «по» З

Сілю чаї сію ем Уві бБіп бек Сіу йів сіб Маї Бу бе Рко с афу щи 1 5 15 15 бек Бей Пзув Т1а Бек обря уз 01у Бек сту Ту Баг Ре Тпю Ав Ту а 23 ХО тую Тіз НПіз Тко Узі дов ій Ме о Рко Сьу Суд Сі Без (іо Тжр Ме лу їв 45 сім Ух ії АвробкОо По Ап оБІіУ дерожнкЕ ТБх Тухк вах Вже Бек Бпе

ЗО Зо во біб ші бра Уві Те Її3іе бах Аза Авр Був дет 016 Вех Ту Аза ТУж то 5 во їжа ів ТЕр бек бек їши Му йіз бек Азротрх іа Ме Ту тую сух 5 За п діва Ак щІіУ піт був Аби Аів Мет дер о Тук Тв СЕУ Ак щіу ТВ Бе 05 105 119

Уаї ЖАХ Май беж Беж «2105 34 «її» 17 «кій» Блок. «від» тучна посилені «ЯМИ» «23» ЧЕйВоВЕІї «400» 35 бів Маї щіб сем чаї пів Бех Сі Аза із Уві Буз Му Рго СУ Аїа ї се ШУ 15

А ГІ жо Я бпех чаї біп Мазі бек був Буз Аїа бек Б3іУу Тек бБековле Тнс Авпотух шо но 0

Тук їїе Нтв Тжроцец да спів йївз Бто бі бра бує зей біс тТЕроМеє си кт ще

З ща Зо бі Тухк її2 Дер РКО їз йвоп Сіу Авр о Твк о тТвж Тук Азп бів був ББе в п во пуд сіуУу Аа уаї ТвжЖ Меб ТБж о шек Ар Таг бе Ії бек твк Атд стук «5 7е ть йо мес бій бїеч баеу Беж Би АКш дак йо Ав Тс діа Уві стУут Тук о Сув в ва м

Аїз Акт бі фу мух Ага Аза Меї Аве Тук То біу іп Ага ТЕБЕ Бо

М 105 110

Уві тах МаАї Бех Баш 115 «1 1? «Вій» Білак кіз дрручна мом давнй ох сивО» с«ейа» ЧиОтщиукНОї «00» 38 сіл уві іп цен о йів біз Ббеопіу йіа піц Пец лів бух реко біу Дів 1 Ж 19 і5 бек Уві -іп Ме бер Су Бу Аійа ех Бі ТУЮ ТЕ о Бпе Тк Аза Тух р 5 зо

Тев їїе Нія Тер о Уаї Буя Зіп Ага Рко біуУу Ба Біу Бех під Тхр о ї1е їо ї5 сіу тук тву вро Бко са Тне Дер тує тн зії тує Ал ія Був Вле 5О Жх5 Ко

Був Аза Гуз йів Тих ей Аїз Аза дв» вАоу Бу Бах шех ТИХ Ава тує

БА 70 75 ек

Має дку Гяп обех Бек Пец; Так Бек сі) двр бек Ата чаї Тую Туюк Су во зо щу

Аїз ту БІ оту Ака Маї бі ей бБіу Тук Тер осіу Нів пі Беж Ще 100 195 110

Чаї Тк Уві бек Бех чів

«810 36 дії» 117 «12» Відах «213з Штучна послідовна шть се «кайаа УхЗноювні? «500» 35 сій уві біз пем Таї бій Бех біу Вів біо Уві був Був Рео біу Аїд ї З ТО 15 явЕ Маї це Уві пек буз Ба Аза век бі Тук Ж бе ТвЕ два тух кг 5 Зо

Ткр о їі1в Нів Ткр Уві Вка біл віз Бо Бі бів ось во бів Тк Меїб 85 40 45 сьу Тух Твх АвровВко АкЯ ТВ Ар оТую Так о біц Тує Аяп бів Гуз Бе 5о уз АвроАха Уві Твк Ме ТБж Ага Аврю ТВх о Зек Тс бек Тв о Ууді Тух аб то та во

Мес сів Без ек Вау Сем аж беж біо бе ТПж о Ара Ме. тує Тух Сув дів йха біу в1у Аку Уві ЧіУу Пеб біу тує Тур Бу віп ту Те бев що х95 112 чаї Тих Чаї Беж ек 115 «вій 5 «т1їх Ії «вій білок «вій» ШееучнНа послів

ЕЕ Х ства УхУршанІя

У С піп оМвЕ бів йем уа1ї бій Бе піу Ат біб Уві Був Був Рго сту Беу 1 5 12 ї8

Яват Маї буз Уаї бек Сув Був Дій Жек Сію Тк ТВ рре ТВх АБи Тук

КВ 25 3

Ткр 11 піз Ттроуві Ака бфів Аза Вко пі бій 01Уу йви ЇХ Тур Мей

З 40 ах піу Тук ТЕ АвроБхо Джке ТВ Азр о Бук Тк бів ТУх АввобШій Був Біне 55 БО ув Ах о АкЯ Уа ТвЕ Ті Та Афва Ав об бер отак о леж Тк Аа вує 85 та КЕ во

Мас ери Мо Бек шег Гей Ака дек сі Аве тт Аїа Уві тТук ТУ Су 85 зо з5

Аза дка піу бі йха Уві бі Бев біу Тк Тжр бі Біо сту Тв рес їпО 105 115 чаї Та Уві бвк Беж т «810з В «їз 17 «кіш Вінок «--ї3» Штучна послідовність сих «ЕК» хана тиТ «400: ЗВ січ тУаі спів баз Уаї оїю» бек біу Віз піц Чаї був Був о Вко бїіУ би 1 я 10 І

Явк пев їмув їі дех Св Був бі Яке о ОТМ Тую ЖТБЕ Ра ТБе Бай бук та 2 зо тТЕр 1 Ні Тур о чЗа3з Мк бів МеК Бко бтіУу Гу бі пем Ой Тев Мах зіу Тук ТЬк Аве Рхо Ася ТЕ Ав Ту тп о бін Тує вва бів о Бує Бпє

БЕ 55 Бо

Кув Авт сій Уві Те Гі бек Дія Бзр оЇїув Зах її бех Твк Аїв Ту бо те тв во

Бей пій Ткр о бех За їеи Бу вів 5еу Аве о ТВх Аіа Мек тую Теж КУув зо ца

Аіїа вхо сьу СТУ Лев Ві бу це) 515 Тух ЖтробБіу Бій Ху ТВ Тех що 185 118

Уві тТпх УЗ) дек о шех

МЕ

«иа 38 «112 117 каїй» Білок «Й13з Штучна послідовність «аех касй УХВНИВНІВ «а» Зх іп Узі Б Бей Уві іп бек Бі Аїв Бій ай Був був Рко іу Бех ї З та 15

Бек Чаї цув Маві беж Сув Був Аїа бек зу ТУж ТНЖ пе Тр обей Ту о Ко Б

Ткр Ті Вів Тер Уві Ажха біпоАзв бо БУ Біл о БіУу Без ші ТЕ Мет

ЗЕ зо й пі Тук тек Ав орхо Ако Тв о Азротук тех Сіл ЖТух Вів Бій беж Ка но Зо іІВ пів біт дка сві Те жіє ТВ о Атав Лв бій бек ТвсобБех ТВ лі ТУж

ЕЕ 7 що

Ме пім їдже ще бек реа дк дет Сію Ар о тТвЕ Ава Мав Тух тує Сук дів йге сі ПіУу Ак Щі пз Ге) опіу Тук Тур ім ої у тТВвЖ Бек 309 05 Те

Маї Тит Уаї беж щае 5 «КИ» й «РЕ 7 «ій» Білок «Щі» ЦШеУучна послідовність «ах как» УхОБоОтА1 й «40» жо ьо Уві біп ів Уві біб Зк бі Вів біз УВІ Буд був Бо пБуУу БИ ї 5 19 15

Бех цем Пує Ті век був бух бі бек Зфу Тук Тк Рй» Тпе Ап ТЧує

Ткр їїів Ніз Ттр Уаї Ага бів Ма о Вкго бі цув бі йеи сій Тжхр Мей 38 Б 45 сі Тухк ТИЖ Азробжхо вка ТВх Ар отТук ТНх біз Туг ех Бра бек ВНа

Зо 55 йо біпобіуУу піп Ма)ї ТБЕ о їїе беж із АВ обув ех 138 Зах Так Аза тує 55 7о | ТЕ во

Іво бій Тв о Яат дех Пез ув Аїія бЗех АвроТвх Аів Меб Тух ТУ Сув 55 о з

Аза Мк пїу Бі Ва Маї БРу рей Бім Тук ТЕр бі бів шіу Тк Гей 1.0 105 1170

Чаї ТБ о Маі беж бек 115 ка» 1 «їм 112 ко Вімшє «183» Штучна послідовність кийО» «ей МкЕвлиЕЦї «400» 41

Алю чаї бер Меї Ти Пів ТВ Бко без бер обез Бко Узі Аха ев Ту 1 З їй 5

АБ осіп Аіз Бех Ті Веї Сеє ха вв дк біз Бек тіФ Зві Нів риє 20 а хо деп обіу Авп о ТвВЕ Тух Ес Се Жжв о ББе ев біл ув РЕб слу Тфіхі ях

БІ 5

Бо Му Бей ойем їХе ТУух Був Уві бах Авт оАжч Ре ех бі Маї ро 5о ва 50

Авр о Аку Ве бех біу дек біт бек сту ЖЕ АвороВвВе Тк оїво ТвВх о ї1є во то 75 5о цЗежх Ах хуаї Біб Аїа 1 Авзройез БЗіу Маї Тує Тук Сув Ре біб СТУ яв ев Зк бек Ніх Узі Ре Тує Так Бе о біу бу Біу ТВх був зем іч їХе бує 109 не 112 «ВИ Я: «кіїз 117 «Вій» Білок «ІЗ» Шеучма послідовність си «й Ххатактой «а002 42

Ввр Уві Пео Меб Тйх бів Тс Бро пеш бек о беш ко ЧМві Ап їм Фіу ї Х ко ї5

Аве Сів Ав бек ТівБ о Звї Суз аку о шШеж Аке бі бек те Маї Нав ТИХ дви ЩІ Ав так о Тїук Бей БУ ТЕВБ Бпвобен с БУуБ вКО ст біт ех

Зк й де жо и 5

Бжа бує цей без Їїе Тук був Уві Бах Авчртодка Бе бак о1іу Уві БЕ ввоолст о Бйз беж Біу Бек БіУ бек О1Уу Тахо Авробпе Тахо їши Те» їх пек йга Уві біс АХв бів йеюв о цеа біу Уві Тк Ток Сув бле бін бі ва зо За дет Ні уаї ро Тух Трх Рпе БІ із БіУ бнЕ Бу« ак бів тії Був 100 то5 її ср 4 к21їх 112 «їй Білок «МЕЗ» йвучна пошлідсвні ств ках «ВИЗ бука НопьОї «Фо0О0» 43 двроїїе5 мві Мебс Тк бій бек вка і); Чек оБебв Боб Маї тп вВге щі ї 5 10 15 сіб Бго Атїя бек о Їбіє Щек Су: Ахо зеж да біпоЗех Те Уві шва ТЕ зва шьу Ана ЖТвЕ Тук Сей Бім Тк тує бец БМ пу Бе» ЗЕУ шев бек 15 ІЗ 45 ка Дхй пем о їбево 11 тує пу УМаі йЗеж Ави да Бе Зежб спі бві БКке

Бо на 50

Авровха ве Бах СЕУ Бек бім Бек о б19» Твх Адро обі Тек оїмлі бує ТТе 55 то ТВ но бат йку Маї сіє йтів лав о двроуві су тіє Тує Тук бух БЕе бів осбіу

Зо аа зек нів Уві Ба ТУжє Тк рве бі а ШіУу ЖК бух вен бів іє їЦУБ то 125 110 «вій Я «їх 315 «ів Бінек «рій Штучна песпідсевиісиь «кв «оз» УкаБиті па «вод» Я

Кві: їТаї Мав мес ТЕ пів бек вхо їео бвх дез Рко Уві Тйт без сту 1 х 16 15 сів РКО Аїв ех 118 Бек оСуюк Аг Чет АхЯ бів дет Т16 УВУ нія ТВ «о ше за

Аквобзіт двпоТвж о Тук ії) біУу ТКЮ Ре бів сім дже рух» Бу БІЄб ех 4 не

Бхе Ако Акш Бво Ті ТУую Кує Уа) пек Аяй Ак Ббе дех бів Уві Бк

ЗИ У во вкр ку РВЕ бек Зі бер су ек Сіу Тк йжр оба Бк пев їлєж Ї Ще а то ТВ о дек Ах Уві пі Аза сій дяротаї бі Мві тую тк ув ВВе пд си 85 ді З5 бек нів Ущі Рко Тук Тну рив б1у бій бІ1у Тк був ем СТВ тв їв 100 а що «і» 45 «Рі» 115 2179 Вілок «135 Штучна посолідсвність чих «Еш» УМкаіВотоОЗ «оо» 45

Авр о бБе Уні Мек ТЕ бів бек Рекс Ародвк Се) Ака Уві бек їмо щіу ч с З КН

На ії ке ля ах Ат Віз ТВ їі вв о сСуз джхо Бех АК біз ех Її ува) нів тВЕ

Авпопів Авзотбах тує Бей бі Тк оТух біп біп Бу Бо біу бів Ро ї5 за ща

Рго був цеч цес Ї18е Тук Буж За) Век Авп одха Бе Шегс бі Ущі Бко

Бе 5а во вар Ажа виє бек су беж бі» бек 51 ТВЕ Ар о Биє Тк без Тк 112 б Та тА 5о

Бех дес Меоз сії Аїа ій дар о Уаї Аа уві теє Тук сСув Ве йій Бу 85 а ЗУ зек Нів Май Рко Тух ТБ Ре біу бій Б)іУ Твк о БУух ев 1 ЗЕ Був ї0о 105 119 ск» аб «Ме 307 «1» Ббінож «віз Штучна посдідавні сть «Ех «ВИЗ» УкЯшикгОЗ «4300: ав ве Ії бій Мес ЗВ бів тнє ТпЕ Бас Беж Ба Бех ів веж Бей б1у 1 5 10 15

КАвр Ак Уві Тк ті: Сех Сув Аке Аїз ах біт АзроТів бег АввотТУх «0 йо 3 їйец Ана Тер Тут біт біп Був Рго Авробі» Твк Ма. Був пес Гей Те 35 4 45 тут Тухк ТВт бек Аго Бей Тух бек Сіу Ма1і Ро бек дра РББ Чек біт ей 55 о дек спіу бек Б1у тк о Аво Тук Бех цей ТрЕ їїе бех деп Бей сіб ІЙ о зо 15 но

Січ Аврої116 Аза так ТУхХ Рпє Сув біпобіа б1у деп о ТБІ Гев Ржо Тер 35 за ЗВ

Тих Бра біу біу бБфіу Так оБбув їх біз 1Ке Був 109 105 «210» 47 «8115 107 «Рів» Білок «Яї3» Штучна послідовна сВЬ «ех «риЗ» мхелцнОї «(р 47

Авр їі бін Меб Тк о біп Бех рко бек Яек Гей бак Аза беж Уді Сіу 1 5 10 15

Авр о Ака Уаі Тк її Так оСув Аха Зіа Жет сСіп Аврої31е Бех Авп о тТук 26 яв за їез Авп Тер о Тук біо саїфб цув го п1у Був йід Рко Був цей цем Тіє 38 40 45

ТУк Тух ївйк Бех Ат бе Тук Бек бІу уві РЕ Бек ак РБе бек 0) о 25 ви

Зес О1у Бех сіу ТЗк о Авр оББе Тато РБе Тахо (Зе Щек Бер Пец бій Бе то пе ца біз Авр тів Аїа ЖВк оТук Тук Сув біп біб п1іу АвпоТвжк о ЇГеу Вко ТЕр 85 па 25

Тіт Ре сіу бБіп БШІТуУ Тих Був Ущі сіб їіе Пув 150 105 «вій» 4 «її» 107

«8127 білок «2132 Штучна поспідсвніств «ех «вах хво «по» 48

Ав о Т1е біл оМеб Так бів Бех Бко Зак его іхпті Звх Афа Бех Уаї СТУ

З 5 10 15

Азр Ако аю тТнж Ї18е ТНх Суз Ага Аїз бек біб бек фе Бех Ап тую 29 ап Зо

Тез АвбоТтТІр Тек бій сід Був Рро біу Ппуг Аїа Бка Пув ем обей ї1е

Тук Тук Тих бак ка Мем Тук бек 51у Маії Біб дек Аго РБе бек бі

Ба о ви

Звк біУу бах пі1У ТАх Авт Ре Тв Бе) ТВі Їфе бек бек їо біз Бк а 70 та ча

Сі АвровБре діа Твх ТУух Тук Сув б1б о біп 51іУу АвлоТвах бею рко Тур ва Зо З

ТнЕ Ба піу бів біу ТБх Був Уді біб тів Бруб 100 іїа5 «210» «8 «ії» 107 «гі» Білок «122 Штучна послідовність «жо «Тіз Укхвламі ОВ «АдО» 48

Азо о І1ев Уві Мек Трх бів бЗех Бко Без бек Гео Рко За1 Те рко Біу 1 й 16 15 бій Рко Вів пек ї1іє бас о Сув Ак вів Бак біп Абгрої16 йо Аво тує го 5 ЗО

Кезч АвпоТтр отут цей бій Був Рхо б1у бій бег Бо йк3 Пса Бей їі 35 о С

Тук Тух Твх бек Ака рес Тух Зеїх Б1у Уа) Рео АБроАка Ре беж ПТУ 0 55 о

БЕЖ піу Бех Сію ТВк Авр о Ріне ТЕ Сей Був Ге Бек Аг чаї бій Акта 5а то 75 во азроАзо чаї піу Те Туж Тек о Сув бів біп біу ВЕ Тк оїео Боб Ткр ях що 5

ТВжх Бре піч бів бі Твж бух пем оо Ті Був 100 105 «10» Ба кавів 115 кеїйи Білиох «2135 Штучвя послідовність «й? УхЗшокБОй «-войз 5О

Азе Уві Рпе Меб ТЬЕ бій ТВх ро без бек ем Рре уві Бек їжа пі 1 З КУ) ї5

Аве бій Аза Бех Тіє бек Сув Агу ча Беж б) Аз їзїіа Уді біб Бех «и 5 за це 21 Азп о ТБкЕ тТУК іі піз Тк отук пев бів Був ко БІ бій ще дз ах Ваий тв ТУ ії 3 тув тує ес й ев ке їх їх о. Ам

ЗА а ах

Его мух цецз їжи Кі Тук Сув Уві ре Ніз ага ББе беж бі ві Бко

ЗО же ай

Во Ахо Бра бек сіу Веб бі Бех Сб1іу ТЕ АвзроБбе Тс Ббео Бу І1Те 65 78 75 ва йех Ага Уві Бій Аза біз Авр без бі ай ТУує Тк Сув ре б1іп сту во що 5

Щек Вів Узі ВЕБ Ткротвх Ре б1у бі Щі ТВх Був Уві сіб лі бує 2 125 ЕЕ «0» ві «лі ЛІ: «їй Білок о тах ХУ, г У буть Я ті. чена Щщетучна Послідовність «ФВ ха» Зк лан?

са

Адроуві Заї Меї Ти Бій Бех Роз Гей Бех Бей Бк МІ ВНХ сей біт 1 У 10 15 бів Бк Аіа Бек її бек був Ако ех бек Сів Ав Х3іе ві бів ек во 25 30 дБ біу Дам тах Тух дев с ТгроРне єїп обі ка БКа Фу Б бег 35 о 5

Еко дко Ай лез їі Тук Був Чаї Вп нія та ре бек Пух жах ко ви 55 Бо

Ар оАєд РБЄ бек сіру Зек біу Чек 51У Так Авр Бе ТЕ Тез зму Ме 53 7о 5 КО ек йха Уаї біз дів Б) лавр оУаї сі чаї Тук Тук Сув Бе ОІВ б 85 по зу

Зет Ніз 31 Вхо Тух ЖВкЕ Ра сі ій 0лу ТВЕ о бУуш Мем БІО Ліве Був

Її 118 «Вп» 5 квіїз Бі» «Ши Білок кій» ШМеучна йзслійдовністіх «иа» «РеЇх МиЗниВЬОВ «а 5 зе Тіє УМаї Меї ТИЖ біб йех Еко Авробех зец Афа Уві бек бец Піу 1 5 І 15

Зо АкУ Аїа ТП бів Лев Сув Вку Чек Бек Ста дев» фе Уві біб ект

КО 25 ЗО

Ав осіу вза ЖЖ Те Бей бів Тв лук Бій сій Був хе біу іп КУ хв

Вкб Був Гео ей Зів ТУ був Ма1ї Бе Ніз дк Ре Чак о плу Маж ве 2 5 0

Ав озАка Бе бек Сіу Бех біу Бак біу ТВх ДАвю Бе Тв бдео Тйх Лів

БУ 70 тв но пев жхех ней 5іп Дін Біз Аве аз Аіа уві Тук Тух був Ве біб піу бек ніш Маі Бе Тук ТВ Ре Бі Бі1бз сту ТБ опт бер» бід Іще вуш 105 105 11 «Іійз 83 «8112 330 «шій» Білок «Вій» Ношо варієпа «Вих 5 дів пвх ТБ пух бім Вка дек зві Не бка ре Яра Рко бек йжк Був 1 с їй 15 бек тк шк БІУ Бі Ту АЛіа Азія Пец біу був Би Маї цуя А5ротТух що В 30

ЕМе Бк біб Рхо Маі ТВх Маї бак Тв оАвп Бех Б1Уу Аїв БО ТВ бвЕ

Що 45 ціу маї Нів Тпт БВе Бхо Аза Уаї Бенц піп Зеє Зак пьу Гео) ТУухк беж 5о о 0 їзи Бек Бет Уні Уві ТНк Чаї Рхо Яех Зех дак Ббео о бІ1уУ Тож Бій тТБхХ ба 7О 75 о тТук о їТів Суд Дві Уаі Дай нів був РЕ Бех дви) Тих Був баі АБр. бук яБ Зо вже

Уж Ма бій Бо Був бек о Сух яр був ТНе Бін о ТпгоСув бую БЕ СуВ ї0о 195 Та

Ехо Ака ко біб Гей сей БІУу пі Бо ех УЩЇ Рбе дви бле Ехо Ба 115 125 125 пу Рто був АБЮ Тйх Бен Мес Її Жехє Аку Тих Роз бі ві таж Сув їіза 155 140 чаї маї Уві Авжр ві беж Ні Бі) АвроБко піч Мак був ВБвБе АвБа Ттр 145 ї5О ї55 ї16й тТук чві Авробіу У-ї бів уаї Ні Ав)» біз Був ТВКкК БУ ко Да сій ї55 ї75 ІТ5

З1ій бій Тух Ап бек о Тьу Тує га Маї Уві Жек Уеії їшна Ткх Мал Бе ї18о 195 150

Нів спів АзроТжр Мем дви о сзу Суб 510 Ту уз Су їу5 уа1| бек Ав 155 200 205

Муз лій Гїец Рко Аза Ркге їТ1а Пій Був Тато І1є Бех Був Аїа Ду бі ті 2415 ТЕО бів Бто ага б) Рко біб Уві Тук тах бен Рко Рко бек йхо Азропій

ЕЕ 2-30 238 23 іеи ТВЕ Був Азп о біп Уаі дек Мей ТБ Сув Бей Мві Був п)Уу Бе о Тук 245 250 я

Вже Бех АББ (іє лів Маї біб Тр біз беж Аве 01 був Бо ши ел во 285 та дЕп о Тук Був Тит ТВЕ Бко рко Уві Ге) Ар обет дер б1іу Ввх Бре ре 275 290 285 ів оТук бек їв Темі Тк За) Авробуз Бак о Аха Тер опіп бів п1іУ Ав 230 295 З00

Мак Ро Бех Сув Зехк Уві Меїб Піз біч Аза йео Ньв АзпоНів ТУЄ ТИХ піп о бУв бек Без бек о їеу дек Рго бі Бук 325 за «їй 54 «11» ВО «війт Білок 213 Штучна послідовність «ДЕЙ «893» Ж Та91-М9570 дюдини «ах 58

А1а Шеж Тв ув біу Бко Бех Маї Ре Рко Гео Аза Рхо бЗех бек Був 1 З 1 15

Зек ТВ Зек піу сту ТВї Ага ліва івц п01у Сув їв Уві був АвороТук й 25 30 пе Бге бій Бго Уві ТВк о Уді бех Тер Ази Мет 01Уу Атя іево ТВ бак рН а с1у чаї нів твроББе Бко Аза Че1 бай о біз бек бек біу бе) Тук бег що 55 бо іей Зах Бек Уаії Уві тах Уві рто Зек Щек Зеж Пец Зі» ТВе бій тв є5 за та по

Тухк їі Сув Ази Узі АвпоКів Гуз Рхо бек Аво Тв Буя Уа Авро Був ва зо ЗЕ

Був Уві Бій Рхо був беїг Су АБЮ Туя ТВк Ні тах Суз Бо Бко Сує 100 105 112

Бгто Аіа Ркз піп фею без бі біу бсо 5ег о уУаії Рбє Бео Бе Бе бро 115 150 125

Був ко Буз Ар ТП Ге Ме і1іе Бех Ага Тах Рго біб Уві тах Сух ї5о 135 140 те1ї 731 Уві АзроУваі баг Нів біс АвроВкб біз Уді Був ББе АВІб тт 145 ї5 ув ї5о

Тук Уві Авр біу Уа) піч Уді Нія Ав Аза Бов ТВЕ Буз Роз вка біз 165 ук 175 біз біп тує біт ех тТлкоТуУух Ат Маї Узі Бех чаї іїео Тих Уві ех 180 155 150 нів Зіп Ар о тТсв о іву дво обіу Муз С10а Тк Бу Сув Пув Уві Бех Да 135 200 205 їув Аіїа їй Ро Акв Бо її ба Був Так о Ї1ів бех ув Кіа Був Ту го Ака 010 Бо бій Уаії Ту Те бе ро Бко Бех Ака БЮ 1 из КИ 215 хо ви Тв ув Ав обів Уаї Бех Де) Твк був пеу Уві Був Зі Бе тує

Бго бЗех Двв їі1іє Аза уві Зі Теробіс Бех йед обі бзп Бко біл дви 250 285 ато

Авап о Тук був о ТпЕ Тбж Рко Рко Уаї еп Азробег Ар Бу Бех РКе Це 275 28 285 із тую бет Пув їв Тпх Уві АвроБув дет Аква те бій біп бу Ал

ОО 95 30

Уаї Рне Бех Сув бек Уаі Меї Ліз біз Ата Бей Ні АвпоНів ТУю ТЕ 305 310 15 БУ біп Був бег оцец бек бей дес Бко йіу Буз 325 330 «1» 55 «1їз 326 «ій Білек «2135 Бото ззріенпа каойп» 55 від беє ТВ Був ШІіу Рко бет Маї Ре ро Пец Аїа БКО Су Бах Ака 1 5 1 15

Бек ТтТву бек пі0 бех Тнпх дія Віа Бе» пі Суво Ме» Узі Був АвротТук по ХВ 30

Ре Бо піч Буо Маії ТВ Уаі бЗех Ткр о Ава о Зеїх ПІіу Аївз фена Тпж бек їх 45 45 зі Уві Нія Тип Бре Бго Аіасуві ївоа бій бек Бех Зі їевн Тук о зех о їв БО

Бей дек Зек Уаї Уві Тк Ха! Ро Бех Бек Ап о Рве п3іу ТВу біп ту во 7 В во

Тух Тих Сув Ав ві АвроНія Му Бко Бех АвпоТру Був Уаії АвроБук 85 зо пе

Тьх Уві біч Ако муз Сув Сув маї бій Сув Рко Бго Сук о Бко Аза ро 1050 105 16 бто ув) Аїа су Вко Бех Маї бе Бер Ба Рко Бко Бу КО Був Ар 115 іо 155

ТЕ ес; Меї Кіз Бек йка Твк о рко 51 Ха) тТвх о Сув Маії Уві Майї Авр 130 125 148 чаї ет Нів біш Авр о Ехо бБіч ві бів Впе АзпоТїко Тук о МаЗі Двробіхю 145 150 155 160 тві сій баії Чі Аа Аза пух ТВХ Був Рко Ак біц бій бій Бне Аве 165 179 їі ех Ух ве Вжоа Хаї мМаї Зех Уві їоб ТвкоУві Уві Ні біо вв о Тжр 150 185 ї1з0 ем дсп біу Був бін Тух Був Сув Був Уві бек Авп о Був п1у Би вто ї85 по 205 вза вБко Іі БІЧ був ТЕ Тіе Бех Пуз ТВх Був п19 біз Ро Аха Пі 215 ВО

Еко Бій Уві Тук Тв ем РБсо Рко Зек Ако бій бО1й Меї Тр обує йвд 230 435 440 піс Узі Бес Без Тс Сея їй таї бук Б1у ВБе Тук Рко бах Аврої1їв 745 250 85

Аіїа ак біб тТкросіч 5Зеж о Аякц о1іу бій БК 010 Ав оАвп отТух був тТнк 750 25 -то

ТпкоРко хо Мет Теми Дяр Хек о Авробіу Зво ре Ве Го ТУух бе» Мув 75 280 5 рей тах Уві Азов оіїув Бек Аха Ткробіп біл о біуУу йяп Маії Бл бех Суд 28 255 Зоо дет Маії МесЄ Нв бів Аіїв пед Ні АвпоНія Тує ТВ біп бух Бех Гей 305 0 315 32

Зежх ей Бех Рхо Бі ув «10» 56 «ка1ЕЮх 377 «ід» Білсхуя «213» Ношо варіть «0О0х 56

Аіа Зах ТЇТпж Суа сі бро Зах Заї Ре Бго Бей Аза Бха Суб Бех Ако 1 Кі 10 15

Зехк ТтТБк ек шіУу бі ТК о Азіа Аза Гей Сі1у Сув цей Уа) Му АвротТух ж У 30

Не Бо іш Ро Уві ТвВх Уві Бек Тв Авп о бвк бі Аза Ббеиа Тпж бек

35 40 45 біу маї Нія твх Бве Бк Аз узі Бе) бій Зах Хек їі зб бУую Бех

Пез Зег бек Чаї Уві Тах Уві рРко бЯег бек Бек їви Зіу ТБ біб ТА ва 79 ТЕ Ва

Тух ЖТйг обу Ави ві Авп о Ніз Буз Бке Бек дво ТВ Був Ві Авропув

Ака Уві біш бец пу Тк о Рха ії біу Ар ТВ ТВ Нів Твх о Сув о Бго 105 110

Ак Сув Рхго бі БРго бує бЗес Суз Авротвх Бго Рко Бо Сея Рто Ако 120 ха

Сук Рко бій Рко ГБув бек Ст Ар о ТВЕ о Бко Рхо Рко Суд Рко вка Сув 130 135 140

Бгто біз Рхс Був Бек Сув Авр о Твх о Бко Вко Рко Сув Рхо Ага Су Рко 145 153 155 153

Аїа Все бій тТецвш бе біу біу Бус Бех У ве о Бео Ва о Ржо Бе буд ї55 ї7о ї75 вхо дув Азротнях Бей Мек Їіїє бек Ахо Тв о Бго біз Узі ТБх буз Уа. 180 155 180

Маї Уа1ї Авроуа)! бек Нія бій Ар о Вго б01м Уві біп Ре Бу Ткр Тук 155 200 205

Уві Авв обі заї піч Уві Нів Авп о Атва Буш ТБЕ Бе Ро Аа сжц іч сія Тух Алп о Зек Тег Ре Ака Уві Уві Зах Маї ем ТВк Уві бе) ія гей 230 23 45

ЗІ АвроїТквогеги Авп обЗім був Бі Тук Буз Сув буз Меї ек Авап о Гук 245 25 за ків їли Бко Аза то І16 біб Був ТВх ї1є Беє цуч Тахо Ппув бу Іл гео со о

Бко Аху бМма ро біп Уві Тух ТЕ Гем ВБкб РХО Бек оАкоа Ш31ю Сов Ме

275 280 85

ТВж бух Авпо бів Уві Хек ем ЖБК Сув о йо Маї був С1у Бе ТуУук Бех що 2935 зп0 бек Азо Тіз Аза Уайї біб ТК бла Зех бак біб спі ко пір й Аа

За ЗІ 315 КК.

Тух Ав о ТЬЕ Тит око Рео Мет ЇГезуа АвробЗехк Авробіу Зеї Не Ре цев 425 330 335

Тук Яеж був цер ТВх Чаї Ар обув бек Ак Ттр Сів бів біу Авпої12 340 345 150

ББе пек Суя Зах Уві Меї Ні бій Аїв без Ні Ал оАка Бе Твх о сСій 355 зей 65

Гуз Вехк йевц беж ев бек Во піу Був 370 375 «1 57 «2115 326 кій» Білок «2135 Ношщо варівна «4005 87

Атїа Бех Тк Був Зіу хо бак Уві Рпе Рсо Пер Аза Рко Суз хек Ага

К 5 15 15

Зек ТБу Бек бів Шек ТБж Аза Атїа Гей б1у Суз їн Маві Був АвроТук

Ба -к; ех я о А вве рРко піц вко Ма! Тв Уа) ех Тер Алло дек піу Ата Без ТАХ бек

У пі ві Ні Тит Ре ка Аїз Уаї без бій бек бек пі Гей ТУХ бо

Зо 55 Бо їеч дек Чак ува) Уа1 ТІ Узі Бо Бек бек ек Бшо СІУу ТБх Був Ток о 7о т но

Тух ТВт Сув Авпобаії АвроНів Був ка ЯЗеї Аяй Тих Пув Уві АвроБув 85 за ЗВ

Акз Уві бі Заг Був Тук Пі Еко Бо Суз Рко Бек йея Бо Аза Бо 165 105 15 сій Вб о без бі 51У Во Бех хаї КНе їеи бе кб РКО бе Бо Був 115 1950 155

Аве отих пейп Меб 118 Бек Я Тпж о Рко бід уві Тр оСив тв Увї Учі1 ї30 їз 140

Азе Уаї Бех біп єїб Айва о вгОо Іо Уві бів вве дав Тхр о Тек Уві АВо 145 150 155 тео піу ві біч Уві Ніш дви Аха Був ТЕ був рт Ак бів біз бів ББе 155 170 75

Ави век ТнНЕе Тук АДЖЕЯ уні Уві Бех Маі Бяй Тих Уві Беробпта БІ Айр 180 їв мя

Ткв ач Ава осіу Був З10 тую був був Їж Ме1ї Бех Ап оБбув б1У Тео 195 200 ОВ

Бттхо ек Бек її» Бій Гуз Тс ї1є бек Був Атїа Гуз Біу па хо дка тій АВ ев сл вхо бів Уаії Тух тТвж Кар Бо ко Бек обів Біч бій Ме ЖЕ був

В 23О ау: а

Авп о білю чаї век бем Тк Сук цеп Уві Буд сі РВе о Бує Бко ках АБЕж 248 що шцЕ

Ті йіФ Уві пйійш Тк бів беж Ав» бІіу бій Бус б) Ав бал оТук Буз 250 Хв а

Тв Тк орго ко Маї їей Азробек Ар б1Уу Бех Ре Ре їей Тук Ов 230 85

Ага їн Тпж Уві Авробев вех ву Тер осв біз обіу Ав Майї Бе Беж 28 295 Зо був овех уяі Ме Нів 51 Азїв бе НІВ Али Пів ТУх ТВ біл бух ех

З 1 З15 КУ їм бах Без дев Бей бу зав «210 58 «ії» 326

«2122 Білок «213» Штучна лослідовність «ща» «У Бо-їФаб5і 52528Р людини «400» 58

Аза ек ТВт Гув й1у Рко беж Уві Ре Рко Ппей АТа Рко бує бек АкФ 1 5 10 15

ЯХак о ТОє беїт біз бет ТО Аза Аза Ме біу Сев їеиа Заї Ппув Авротухє 20 25 5 вне Рез біз Буо Уві ТНК оуз1 Че Те оАва бек піу вка цем ЖБК ошШет 45 0 45 сіу йаї Нів Твг о РнНеє Рхо Аза уаї їн бій бек бЗех 0І1у їй Тук беж

За 5 50

Іви бек бек уві Уа) ТВг Уві Рко Бех Зех Бек йез б1у Тк Су ТВЕ о 75 о

Туж Твт о пув Ава о баі АвзроНів Буз рко Бех АвроТвх Гуя Уа1і вер Бу 85 зо ЗУ

Акт уаі січ бак дув Тук біу Вкго Бко бу РКО Рго Суз Еко Аза Рго 150 105 110 січ Ре і-й сіу сіу ко БеК о Уа1ї Бе Бей Ре Ро РКО Пул во Го 115 1259 і2З

Аво о тТвЕ Бе Меж Ті6 Єв о Аку Тйж Рко біц Маї ТБ був Мі Меії Маї 139 135 140

Авиа оМаі дек біп біб АвроБко бід Маї бРва Баба дяйп о ТкроТук Маї др 145 155 155 155 біу Уві бім Уві Ні Авп о Аза ГПув тає Пув Бко Аку іш Ві піп РБе 165 170 ВВ

Анп оШех ТБ о Туг Аку Уві Уаі бег Уві Без Таж Узі ізо ів сій Авр 180 185 190

Тхв о бек йзп спі Був блю Тут Був Сув лув Чаї бек Азп ойув п1у Це 155 200 205

Руб) пех Беж Тра сію Буш ТП дів бек Бу Лія Був б3у сій ко дк ій кіз й

Січ Бео пуб Мак Теє ТНЕ Без Ро Бо Чех ші б) бі Меб ТЕ Був

Кк Зо 73А 240

Дап бБіпоуаї бек їв ТВх був о їебв Маї Був С1уУу Ре Туху Бо бек Двр 245 БИ 255 її Аїв Уаї б1м тТкробію бех Авт Сту са вто біз) дай авт туко бух о 285 ау тах ТВх Вко Рко Уаї бен Ав ово Азробіу бек Ре ББе о бем Ту вве 215 250 БУ

Ака ев Так УМаї Дер ув дек Вт Ткр о бій бів біу АвпоХаіїі Же бе 250 га: Зо

Суз беж Уві Меї Нія біз ліз Бе) Нія зп оНів Тук Тк бів був Бех

ЗВ 3то ЗУ зай

Пес Бех ей дек їй бі 325 «иї» ««21ї» 3865 «1ї? Білок «ВіЗм Штучна послідовність «830» «3» Кота РЕ людини «ах Ба

Аїа Бег Тахо ту бі ко Бек Мат РБе Бхз Гео Аїв РКО Сув Бех ко 1 5 15 ів

Зав Ти Бек сію бек ТйЄ Аза Лів Гей щі був Бей Уді Був о АвроО ту ги 28 за

Ве Рг бій Рго о Уаї Тах Чаї беї ТтроАяв бек ЗЬу Афа реп Тк бег

З5 40 ах щі Уві Нів ТБЕ Бре Бко Аїа Маї Беч біб Бех бає СТУ Пи тую ес по ЗБ 80

Те) бек ек Уві Уеї ТБгоУзі Бо Зех бек бех Бей З1Уу Тр Був ТАХ вх 70 те В

ТУуюк Тк Сув Ап о Уаї дер Вів Був Бо бек Аво Тв був Уві Авро був

ВЕ зо З

Акз уві біз Зеж цувоТух СЕУ Ро Ехо (т5 Бест рт був Бра Аза Ро 199 105 110 сій Віз сіб біу бі РКО Зет Уаї РБє Бво Бе Ба без Був Бхо Бук 126 та

АкротТОЕ Тем Меб Ії Бех АкяЯ Тр Рко сів Маї Тву о сСув Майї «ії Уві 130 125 1459 дво Ууаї дес бів бій дев Вкш ів Уді бій Рв дав лев оТук Уві Ар 145 50 їі ї6о сі сві сі) Уаі йіз дев Аіа бує ТВх був Без Яку бів Ба БІВ рае 155 ї75 175

АвпобБех ТТН Тук Акд чаї ма1 век Маїф зву Тахо уві без Ні бів Аве 15 і1нЕ 155

Ттроіви Вапосіу був Біо Тухк був Сув Буз Мі ек Айва Буш ЗКУ ев р во 05

Буте бек бек ліє біз бе Тв їі век був Ліка Був б1іу іс Все АкУ 2Ій 15 22о січ Вже бів уд ТУЮ ТВгоБбец ке бхо бек бів Біб біо Меб Тв Був 225 - 35 235

Авподщіт Майї Чак о Бецш Тр Сув Без Уві Му 01Уу Бе Тух ко Бех дер

Жах 25 ви ії: йіз Уві Бім Тр ші беї Авпобіу біп хо біз Ава дза Тук Був

ТтТВк тн ко Ро Уаї Бей Ав; Бек Аве обіу дек Рпе Бле зи Тух ВЕ та 280 ши

Ака їво твк Уві Авр о Буг бак йго Тхр бій біб йпім дай ві гРБе зехс 290 235 З00 сСує Шек Уві Мей Мів сію Дів їем Нв деп бів ТУК Твх бЗів Був бех

Зо5. кити 315 ЗМО їш-щч йвУ їве5 БЖ Мейо бі

З

«віп Бо ши «вів БІіНнОК «51» Нове зарівлв «по» 60

Акт Тв Уаї Аза Аза Ро бех Зві Ве Ті Бе Бгто Рко бек Ар 16 ї З 10 15 сій реа Був беж слу Тк АтТа бак оУаї УЮ Сув Бей оїев Ав вжи РНе до 25 о

Тух Бкб все БІВ Аїз Бу уві бій Тур бує маї АБр ов Зів Без бід за то З ет бі Два» Бек біл зла Бек Узі Тк бі: бів дер овЕХ Пув двБЮ Бад

Зо 55 во

Тих Тук Бех Ммеб беж Бех ТБ іє Те Мем бек о бБуз Вів Ар отук ви 85 Ще ть ва

Був Ніз був У«і ТК АТ Суз Сі За ТвЕ НІВ біп біб іо Бек веж ях Б ЗВ хз Увїі Тк о ПБук беж Рре Ав» дк Су бів Су 100 05 «іх в1 «жіїз 398 «вій» Бідок ки» БКаєтсив хабтив «по» ві

Аїа йха Тв Твх Аіа ко Бех Маї Тук Рко їехі Уві Рко біу Сув ех ї 5 і5 15

Олу Тк бек біу Бех мео Ма. ТВЕ бен бу Су бям У Був бКе Тк й а Зо

Бае хо біз РЕб Уві Тк Уві Пув Кр оАзп бек біу Аза беб пеж Бек

За 40 45

-іУ Мазі Нів о ТВЕ ББе Рко Віз Уві Бей біл бєс пір Гео ую ЖЖ це

За як дек Зах бек «ії ТБЕ о Уазї Бкб Бек Зек Тпх Трробех Бек Біо Те Уві ча та 5

ТБЕ Сув Бех Уві Аіе Мія Рко дів ТВк о Буз Бек Айп о їеи Те Був АКО

ВІ ЗО за

Хіе сій вто вка Аха то БУуз бхо Аху Бко Бо ТЕЖ аБЮ о ТІів Суз ЗБЕ 120 105 118

Суб аз Ав Аяп Би пі АкЯ Бо бБеє ба) РБе тів РНе Еко Рко Був.

МІВ 150 х25. кс Ммув Аз її бейп Межб їі Тих Ге) ТвК о БвЗз Пе оХаї ТВк був Чаї 135 135 149

Уаї Маі Авр баЗї бек піп сій біб Бко зр оУаі біп Ре бек Тв Бе ї45 по 155 6

Уаї йзр яп Маї дка уві Бе Тайх Ава Фів ТБЕ Сів Бжо Піч йім ср 165 Мо ї75 дів рес Азп шіу Твху Бе Яка Хаї Уа бе Тьт реа НБів Те біп нів ї8о 185 150 сів дер Ткв Ме дек обі дув біз ББе о пув Сув їбув МНЕ дво оАяй БУ5 195 ой жа5

Авооцез Ббко Бех Рко їі пі Буз Тв Ті бек Гуз Бо та БіЖ Був 210 15 2750 дів Вхо ТП оБко сів Уві Тує Тпж Тїе Ро Рсо Рко Ака ба біп Мех 8225 ЗО 238 240

Бех Бук Ап був Мві Бек цей Твх Сув Меї УЗ ТАх Зв Бе Тук ко та5 ав 25 він Бек її беж мМаї шій Тк: пів АкЗ Ат о біУ ОМ Б біб бів Аяо ба аб то

ТУк Мув Авп отв іч Бгто Уві Бвго Ашр бЗеє Авробій Бек Тує Бпе Бей 275 во 28

Тук бах був зем бЗех Уді Азр о ТБк АвробБехк Ттр Мек Ага біу Авробі1е -8о 255 Зо

Тух ТВу Су бек Уві Чаї Ніз Сів Аля ГПею Ні АБ» Ні бів тах Бл 305 16 515 зво

Був Ат Пец Шеє Ак бех Рхб пі Буд

ЗА

«дій» БУ «вії 107 «ній» Біпок «132 йвксбів хабойе «400» 62

Ахго віз Авровів Аза Ро ТБкоуа1ї Чех Ті Бе Рхо Рко бек Меї 51) ї 5 10 15

Біп йем ТвЕ беж ші» Б)іу Аза Так Маї Уві Ст?тя Ре У) йвп дви Ре о рн за тук Рко дк Ар 3їе бек оба) пух ТЕКв о Дув їі АБроб3іу Бак шк о сІп 45 СК я

Ахч Ар піт Уаї Ге Вар Бех уві Тне о азробівй дар Бек Був Авробех 50 ву БО

ТвЕ Тухє бБет Маї бек бек ТНк Бей бек Ге) ТВі МПуд Маї Сі) Тух 1; та ТУ й

Ака нів о АвБІ без бук ТА Сув піц Чаї Маї Ів Був Тв Мех Бех Зег ве Зо з5

Ртго Уаї Уві цув бес Ре Азз Ак Авп обі був 109 105 «102 еЗ «вії» 353 «вій» Білоє «із Огустоївдиав сомісовав ка» 03 піу біп Бжо був Дів Бо Бек уаї Ре Рко Меб від Рка буз Сув біу 1 5 10 15

Авр тТвЕ Рко ЯЖве беж ТЕЖ Уді Так ойец бі був оБео Уві дув б1У Тук я 25 30

Ме Во біо Ре Маі Твт Май То Ткродви бек БІЄ ТВ оЇТшу Твк Ав 30 5

Зі чаї вка ТВ Рпе Рхо бех уві Ак бі Бех Зеж б13у їши Тук Зеу

ЗО 55 ай іви Беж Зек Уді Заї Бек Уаї ТЬк Беб бек бек біп Рко Уаі Твкг о Сув

БЕ ти 75 БО двп осаї Азіз ніш со Аза ТВ АвповтеБЕ уз Усі Аз Був ТВЕ Уві Аїд па За Зх

Бо зет ТВх о Сув беж беж Рхо Тахо Сув руб Бке Рко Зі Без Та Му їх 125 19 бу вхо Бех ах ре Ті ВБе бе вка рув Рео Бук бр о їТВх Ге Меб 115 170 125

ЯТе бБеє Дко ТйЖж вко Зійш Уа! Тех оСув Уаі Чаї баї АвроУзі Бех ст ї35 і155 140

Азв АБО Вко Бін уві Бій Вбе тах оїКЮ Тух ІЗа Аве вт пра бій Уві 145 їБо 155 160

Аха ТЕ Ата АкФ Бо БКо Гей АкгУ пі) ста бів Бпе Вей бек пт Ї1е 155 їто ІТ вхоа Уві чаї Яеве Таж Пец Бхо їде Віз Нія піл Ар оТїтр беч деко обу 150 185 1850

Буд Пій Бе Мув Су Був Мав Ні АвпобеУє Аїв о бей Ро Аз вхо Те

І85 200 те січ Був Тнж Іі беїб Був Аза Дюка оїУу біб хз їжа п1в Бк Гу Увд 210 15 зай

Ту ТВх Ме бі» Его Рко Ага біб св без бек дес дка сек аю ес и 230 238 4

Без ТЕ Су Ме ЇІ1іє Ав» біу рЬе Туг Ро беж Двр оті бек мМаї бір

КЗЗ 250 Как

Ткв ші був Ал спі був АЇа бів дв оАап Тух був ТВж ТВх Бо Аїд 250 255 270

Чаї пев Авродек Азв бір бЗех Тук ВБе Гео о Тук бек о Биз меб беж уві

ВО 85

Ртеа тТнк дак біз Тр БІВ Аа пі бю о чві вве тТвх був Зах Маї Мек 2230 За І

Ні біш діа ре Бі хв) Ні ТУЮ Ту біз пу Чеїг 118 Бет Ака бер 303 ЗІ Зв ко

Тхо Блу цук «рій» ба «11» ТЯ «Вій» БЕдек «різ бйкУуєсоїдоня «піс ця «400» 53 дк Авр о рхо Зтаї ба гто рн Уві мезо її Бпе ха рхо Аза дів Ар ї а та ї5 піп йаїі вів Тнк біт тТнЕ У) Таж гів чаї Сув уві Аза Аве Буш ТуУЄ ка. 28 за

Ве рес Вероба)і ТВх Чаї Та Жсробійп Ул) бвробіу Тк ТНЕ б1а тах що сив 45

Тк бі ЖІ бій Депо дек Був ТПгоБко 010 АЛюп о бе Аза АБ оСую ТЕ

ЗО Мо що

Тук Ап ї-врводек дек Тнх Пез тТвж о Бем Тж бек Тв бів тую дай Беж 55) а 75 во

ЯМ му По тТУх Тв був бух маї Тв Ів су тво тах Бе Майї хаї

БЕ за ЗБ сій беж на Ва о Акоа б1і1у лавр Сув 0 «віри 5 «вії» 253 «813з Білок

ЕМ Ноше шзруив «ПИ жа

Мес ТкроБхо Пей Хаі Аїа Аіз Бей мем Мер сіу Бех Аід Сув Сув БіУу ї 5 10 15 бех Аа біц бец Без Бе Ап о Гуз ТВх Бух Зеє Уаї біб Ве ХБбк Ре зо й 30

Сув о Ав АзротТвх Хаї баї Т1їе Бгто Су Ра Ма) Твх Ав Ме 015 Аза 35 чо я

СбіпоАва ТБе о ТнкЕ обіц Маі Тує уві Гуз Ттробуз Ре Гуз Біу Аку Авр з о

І1е Тук Тв ВНае Авробіу Аіїа їец Авп Був Беї Тр Уві Бгто Тлх двр 5 то 15 во тре дек Бек Ата Був Ї1є йІ1юЮ Уудлі Зек біб Лео йей бух Ббіу Авр Лів

З за за дек їжи Бух Мет Авробуз Яес АвБр о Аза Уві вх Ні ТК обу Авдотук 00 105 15

Тк оСув бін Уді Тк бій Гео Тс Ак бій 51» сії Тс о ї1е Т1в бій 115 120 125 їз му Тух Ах уаї Уві Бе Тур Ре беж Рко Авп бій деп отТіє 120 139 135 140 їів Уві ІЗїе Бе Руб 112 Ре Аза ТІїе Гей обей Бе Тк біУу пів Рбе 145 150 155 165 бу 118 Пув ТЬх пед цув Тук Акад Зех спі бі Меї Авробіо Був тих їах 178 175

Ії Дій Гец івц уді Віа суу Пес мМаї ї1є Теж уві ї1е Маї Іі Уві 150 185 130 сіу Ага Тїє Бей Ре Уві Буо бі біч Тук Зек Пец пух Аво Аїів Ту 195 ой 5 біу цез біу еп оті УЗЬЮ ЖЕ Бех Тнг пі її Мей бі Пев 08и Ніз та 515 ий

Тух Тук Ха) Рье Зет ТБжх Аіа 116 бі» йеа Тк бах пе Уаї ї1е А1та 225 23О0 23 230

Тіє Гей Уві 1те біп Улі І1іє Аза Тук їі6 ву Азіх бві ві бі Без 245 а5о 255

Бех їшм Су Ї31е Аза Аза Сув Т1е Рго Меї Нів бі бо шум Бен її во 2595 270

Зак біу рей Бек Т16 Пер Ав пев Аза біп печії З1У Бей Уаії Тук ть яко ча

Мат уж Бе чаї Сів

ЗО

«10» «б «вів 518 «210 Відок стї3» Штучна послідовність кеййх «иа» Повнорезвмірний Ух4юижнг «пах б

Ажрохщі Пцец Мекх тТВх сів Тв бко Пед бек ген рсО Ма) Ави оїво п1У 1 З 15 15

Авр о біп Аза бек Ті пет Сух ку Зех дга бпію бек їі Маї Нія ТЕ 27о ке Зо

Авпос1іу Авп отв Тух Пе (п1іуУ ТкровББе пей біл був Рко сту бів Бех 35 40 45

Еко був їжи ем Ті Тук Буз Уві бех Авп Ака Різ ех сб1у Уві рРуо

ЗО а во

АвроАко Ре бех піу Чек б1у бек біу Твх Ар РО Так ре) ТНЕ Ті 7 т Що

Бек Акч бтаі 015 Ага бів Авзр о їєз Б1У Уві Тук Тух Су Рне бів бу а за 5

ЯШехк нів Уві Бе Тук Тих Бе біх біу бфу ТОБ оПпув Без бій Ї12 Був о 105 1185 ага Тк о тУаї Аїв віа Рез дет Уві Ба тів Бе Рко Ре Бах Атробзц 1 120 ях бів їв їв Бех ШУ Тх Аза Бек Уві Уа) Суя їйен Ге) Ада Алло ре 135 135 145

Тук рез Ахяп Сіо Аза Був Уві біб ТероБув Майї АвроАлми ВІВ Тем Був 145 за 135 120 бах пі Адп бек бін бро Бех уві Тих бів бі» дзр беж Мув Ар Бек 155 то ї78

ТЕЖ Тую беж Теш дет Бек Тих Гек ТВ о іГємй бес Гуз Аїв Аяр о Тут БИ ї85 185 150

Бу Нів Бу Мавї ТУук Віа Су Сів Уаї Тахо Ні іа біу ма бек олех

Іа ов 205

Вко За) ТЕЖ Був ес Ре Ав о Ака щу ЄВИ був о Іа «вій 57 «її» 219 «ша» БілоОож е-2135 Штучна посліюіпливність «Ох «аа» Повнеброезвмаснми Уха ьО «фах 67 дае Маї Бей Меж Тих біт Твт Рко Беж озек Їжнхі Бк Уві дво іш МТУ 1 5 19 ІЗ

Акробій Аїа бек Тіе Вес Суз Акад ВЗех Ак бів бек Т1е Уві НІВ ТВ 23 за о в-ва біу Аза ТК ТУЮ во біу ТЕ ва цей» бів Був Бо 01іу іп бек їй 45 45

Ржа цуз і без їла Тув ірея Уві дек Ав Ас Ре вет піу УША рук зо 5 йо дер ака Рбе Нек Піу Чек Піу беж Б1у ТВ Дер пе ТК цей ТвВк її й 7а то 8о

Вес Аха Уаії іш Ата біз Азроїо біу Уві Тук Тут Сув ВБе біб щіу в За 35

Зег Ні та1ї1 Бк ТУх Тр Ве обі діє 51» Тв Був Уаї бів їі пуд

То їп5 ї18

Ака Тих Уа) Аза Афа Рекс Бех Маії РнНе Тіз РБз Ро Рхо шежх Ав опа 15 То 155 січ зи уз Бех пІіу ТБт Атіа пес уні Уві Св бен дей дап Аво Ре. 130 135 142

Тук Еко Дкоа бій Аївз МЛув Маї пів Ткр муз Ма1ї Аве оджа Діва бем біл 145 150 153 155

Чет Бі Ап бех бів сіб бах Уаїф Так обіц бій Авр ех цу Авробех 155 170 1758

ТБх Тукг Жет Пцеч Жак о бехї Ту ей ТАК о Мей дає пев Аза АвротТує со 180 іч 150 іКув Нів МПує чаї Тут Аїа Сув бін Уві Тих Ні бій Бі Ме беж Зеї 155 200 ап

Бхо Уаї ТВх Був Бек РБржш Авп о АкЯ біУу біб Суз 5 «810» ЄВ «811 218 «Л1й» Бінок «ВІ» Штучна послідовність ке «иа» Повнорозмірний С Уха ої «ВО» ай

Ажр тів Уаї Меї Твк бат Бак Ро Бей Бех Грем о Бк Маї ТВ ко 51 1 З 10 ТУ біп о бгз діа Бех Т16 Бех був Аг дек Ака піп Яек І)е Уві Ві Тпж 29 25 30

Ави піу айви ТБ оТух їжи Ту Тер оТух ГПеб біо Був Був 01Уу біп ек ве ЩО 5

Ехо Аха бей Гео Ї1е Тук був Уа) бак Азп о Асуа бле Бех біу Ма) Рко за 39 ай лЛвр о Ага Врпе Бех біб бак бі Ббет 0іу ТЬт Ар оРНе ТВ Меч гул їТе еВ 79 ть во

Чек оАкча Уві січ Ата йнр о АнроМаї Піу тів Тех Тух Сув Бе б5іп біу 53 ЗО За дак нів Маї Вго ТУЮ ТЕ Бе біУу бій аку ТВ пув дей СЯ Бав Буг ой 115 10

Аха ТЕ Маї вів йів Бгто бек Чаї Ре І1е Ре Рхо Бо цех АввоБІ 115 122 125 бі Бе Був сбех сі ТВ Аза 5 уаї ба бе це йво Аяй Аа Бне 130 135 145

Тук реко йха сів Аїда був баї бів оТквр Був 81 АБроАзп Аква Те бЇр 145 ї5О 1855 | 160

Зек Сіт йвл бек бій сій бек Уаї ТК осів бій др оче Бу йвробех 155 170 175

ТиЕ Тек дет йео Яєв бе Тк їз» ТК Бец бех був Аза йею ТуУК Об 1850 1щ5 їзо

Був Ні Був чаї Тут Ата Сув бів УВ1 Тйх Нія біп бБ)іу цем шек век 135 о ВОЗ

Рко Уві ТІ цув ес Ріпа Авб Ах бу 01 Су зай 215 жк. би «вмре 68 «кіз гї8 «вит Бінок кат Штучна побдідовністе акме «тара» ПпПовнерозмьрний БО Чет Оої «оз ва

Вар їїз Уаї Меї Трг пій бек рхо Сем бек їз Бо Уді Тр Бко біу і к 10 т5 сів Бгто дв Бек о їїс ет Суб Аху Аїз Бек біб Аве» її Бек обна Тук а 5 30 ївп дя» ТЕО тек ем о бів бух Бут ПЗУ пів дек о Бко ака їм! бем Її

За 40 45

Тук бух ТВк бех ге єм Того бек Сім Узі Рхо Авр буд бе ЗЄж сту 5 во

Мет осіу кет б1у Таж АвроБпе Тс Оез о Був Ті бах дку Маї біб Аза 55 то А зо

Азю Ав ові біу Хі Туст Тус Сув бів о біп бБіу Ажшха Тих Без Бгб Ткр 85 Зо За

Тнж Ре біу біп Щіу ТВж Ббуз пез Січ Тіз уз Аха Тахо Уаі Аів Аїд 100 105 11

Бто бах Уві не Ті Вне Ро Рхо Бех зр бт0) біз їм; Муз Бег сту 115 120 125 тТвВк Аза ех Уаії Уаї Сув ев гео Авп оАво Рре Тук Бко Аке ба ліва 125 135 140

Буз уаї біп Тер буз Маї Авр Авп о АЛіа Гей бів бек бі» Азп бек 01 1485 159 155 160 бій Бек чаї тах біз бір Аяр Бех Був Азюо Бек Тих Тук Бех Мер) бек 155 170 175

Век твх Бе)» ТЕ Пецп бек Був Аіїв вВзр о Тук біл ге Ні гук чаї Тук 180 155 50

Аза Сув 5100 Ууаї Твх нів біп біу Гео бек бек о Бко Уві Те о БПув бек 155 200 Пе

Впе Авт Ахо піу 10 Су 210 «вій» 70 «йіїз 219 «еї1й» Бікок «вїЇЗ3х Штучна воспідовність «Ох «а3» пПовизровмішний 1 УхЗвитибе «к«400х то

Ачлр тів Уаї Меї ТвВх біп Бех рого АвробБах Гео) Аїа оУуаї Бех Пец бу ї 5 10 15 піч Акч Аква Тв Ті Авп о Су Аа бес бек Зійп АБи ЇЇз Уві Зфа Бек

В. 5 зе

Ази осіу ази отТвг Тук о бви бім Ткв; Тук шій піп о пух Рко піу біп Вк хо Був іо їжа тї1їе Тук Гуз Уаї РоОе Нів ку ББе зак пі УвЕ РЕа

Зо 5 по

Ав овкоа Ре Бех бїу чек біу Зак бі Тех Авр о ББеа ТВе Сев ТВе ї18

Ба 7а 75 о бЗег бет їви Зіп Ага БІВ Авроув) Вів Маї Тук Тук Сув Врпае Око біу а 50 з5

Зек Нів Чаї Во Туг Тк Рез» оБіу бів бьу Ту Був Бей сім їТе буя 105 їа5 10 вх Тв Уві Авіа А1їз Бго бе таї БНе їі Бпе РКО Боб бат Аве и ї1ть 150 іа іп бе Був Зак о сІіУу ТНЕ Дія Вех Уаі Чаї Сув Ме) без Ав Два Не 159 135 148

Ту Бко ду Сів АвБа Пув о Уві бій Ткр о бул Чі Ар оАво Ат; цей вал 145 тах 155 160 бек йім Авкй бек Бій бій бех уні ТвЕ о біч біо Ар обех Був АвровеЕ їв 79 ГКУ

ТНЕ Тук Бех їз бек бек ТНУ ей ТВХ пев беї пу Ава авротух 51

Во 185 ї50 їув Нія пув баї Тух Аза Сув бі) Уаі Трж Пів біб бу цем беж Чех 155 Ой 28

Бхо бі ТЬх Буз дек Рее Аве йхо СІ біз був щій 215 «а» 71 «211 214 «ій» Білок «йРВх Штучна поспідовність крах «йиЗ»У пПовнорознмаюрвнй 10 квант? «ак ті дев її Бі Меб Тих о йів бех Бко Бек беж Сей Зеє Лів Бе баї 1у 1 З 10 І15

АвроАка уаї тТвх 16 тн Суч дкаЯ Аїд ББЖ Пій Вет 16 дех Ав ТУЄ зо їв Ав оТко Тух біп Бій Був Еко Б1у су Аз о Вхо Був ев ем о Тіе дл я 45

Тук Тук тих дек АхоЯ Бец Тух Бах зіу Уві ко Бек йку Бле Бех бі ви 55 БО ек шіУу Чек щі Тих Авр оБас Тк Бед Те Т1е Зеє Чех їевх б1п РЖо 25 за 78 во біз двЕ о Рпв Аза Тк тує Тук Сув бій бі бі дай ТВ цем Ро Ткр ях зо з5 тах Бе бі зів піу ТВК Був Уаїі бів Ті Бра дк Твж ві Аза ліз 102 105 10 хо бек Майї Бе іє Рве Рхо Рхо Бек Авробіз бій Гей бух Чек Б15 115 150 125 танк віз беж Маї Маї Ста Мей йем о йвп ойво Ре Тух хо Ага біц Аза 130 135 140

Був Уаї біп їв пен Уві дйероАви йіа во біб пек біУу Ам зт бів 145 У59 155 160 рій дек Чаї ТвВх бін біп Ар бек був Аво Бек ТБг оТук мех Бем ек 165 179 15

Хек ТЕ Їво тах ай бек Був діва о Авр оту піц Був Вів Буз Уві ТУЮ ї8а т 159

Аїа СУув піп Уві Трх Вів біл обкУ Бей бес дев ко Уві ТЕ Був Зежх 135 ОО 205

Бе дв ка п1іу фо був 2 «вів та «Ії» от «ді185 Білок «3138» Штучна послідовність «Ей» «вай Павноровзмірнив С МеЯниМООх

«Фо 7

Вар баії Заї Меєс ТЕ бів бек реко Беб; бек Беб вто Маї ТБЕ єв бБІіх

І о То 15 іп Бус ав бер їі йех Св Ак обет Аа їй бек їїі-во Уві Нів те

ЗВ ра КІ ди ж хх

Авпошіу дал отак о Тухк ей бі ТЕр о РБе біт сія жа Рко пу біп бе 35 що 45

РІЗ) вка ВК Мей Її Бек вує Уві Бек ба АкКУ Бе пес Бім Уві Ро

За за

Авроагу Ве беж СТУ б біу бек бі. ТОЖ Ляв гне Тих ев меш Те в те 5 во

Беж ййха ві бій йта б3іх Аве ові Ст Уді Тук Тує Суз РБе шій біх

ЗВ ща 5 бек Нів Чаї ко Тук Тих ВвБе біу бів ш)у ЖВе пу Бей 5іч 1ї5 був 1890 5 115

Ага таж уві Аіа Аїа РКО дек чаю Ре гів РБе РЕ Біб бек Ащо бі 115 120 їі щі їзи Пує бек бБу ЖЕ діа бек УБ1і Уві Су Пем ої АБО демо ЕКЕ їі І 148

Тук Рко ба ій Аза Був Уні біб Ткр Був бі Аве Аво Аба цес ій 145 15 155 150

Зак б1іу йза бес біп о бри Чех Уві Тзк бій бів Аво беї Був Авр Бех 155 а 175

Твтг о Тух ек БЕши бек дек Тлк ЇМ отТнх їви бак Був вів дер о тую Б т8й ї85 Кая,

БУ пів Був Маї ТК Аза Суз Фім Уаї ТБ Нів бів о бЕУ пев бек Бек

І55 ОО М ке маї Тв рев Ве ББе Дзп Да іє 1 См ехо Маї Тв Муз бек РВе бзп о лАкЯа Бі ЄДа Сув 715 215 «и 73 «МЕ» БІВ

«війт Білок «2133 Штучна послідсвність «Ей» «ий» Повнозраоазмісний Є УкЗнотоОї «ОО» 73

Аве хаї Уаї Меї Тех сів бек о вко ем обЗех Бей Кеш уаї тах рез Б1уУ 1 З 19 5 піп Ркта Аза бек Ї1і6 Хег обуя« Ак Зех Бех бій Аа 1і2 Маї біп ех хО 25 за авлобіт йди Тк Тук рей бій Тхр о Бпєе Бі бій Аке Бко С01у біт бех 10 45

Вко Ахку Аке їєм Т1іа Тує БУ Уві Бапе Ні Акт Рпе бат Біу Ма1 ВКО 5О Б БО

Аве оАхо РВе бек пі бек бі беж п1у Тпт о АвБровВе ТІ беб був т18 65 то та о дек Аг Уві біз Вів 53) Азврвоуві біу ві Тух Тук Сув Ре сій сіу я що 25

Чаху Нів Уві Бхо Тук Так ве сіу спів ЛУ ТБ о 1Ту5 пен спав Т1іе Гув 109 10 119

АкКа Тк Уві Аїз Азія Рхо Бек Уві Ре 11є Ре Рхо Рекс опер Авроі 115 150 155 дів йо Був бех біу Твх Аза Бек Уві Уаї Су Те Гео Аз) Ап бле 135 155 148

Тук Бо Ага біз Аза Буш Уві біп Тер оБуз УМаї Ар Азп о Азя Тех Ів 145 і5а 155 160 бек 5іУу дат бек бів бій Бех Уаї тах СМ) бів Авр оБек був Авр о бек 155 170 ї75

Тіх Тухк Бех Гей Бех Бех ТІ Їер 7бйх Бей Бех Гуз Аїв Аве о Тує біз 180 195 во

Був Кіз Муз Май Ту Аза СУув піц Уаї ТБ Нія бігову цей беж Бек 185 200 205

Бже УВІ тах Буз Вдак Бееє АвбойЕш шіау са пух

Іо 215 ках я ка1їз 514 «лїйм рілок «513» Швучна послідевийотх «хо «ИЯюм Повнорозміюний С мхиВвоншШОї «Ой» 74 дар оте пів Мес Тв о шів ве бЕа беж Зах їйю беж дів ех Уві сбхе 1 ге 19 та

АвроАжа Мві ТЬЕ о їТе Твх о Сув Ак для Зеж 5335 Дев Зів ес Ав Ту о В о їшб Ап Тер о Тух був зії бує РКО Ту бує Аіа Ро Був Бей фе Ттв 35 4 ща

Ту Тукю Трж бех дДка Ген отух Бех П1у Уві вро бет все Рре беж сію ко ув 20 ех сбіуУу Зех Б1У ТВЕ Ав» Ре Тк Бе Тік Тіє Хек Беж БбБем бір око то ЗЕ БО іч Аве Ті ків Ту Тухк Тук о Сув сів захо бі» Аво ТВЕ о беб Бко Тр 83 Зо дк тик орпе бі бат бі Тит Бу баї ій ті Зув Лю тах УВІ Аз АТа - 7 В, -х с 120 105 уяНе

РІш ет уві ЕВе Ї1і8 Ріршж Бко ко Зх Адр біс бів ів був дек СТУ 115 150 135

Тег діа бек Уві Уаї Сує цем Тєш Ави Ден» Бізе Тук го Да ало діа 130 135 140 пуз чаї бів Тур ому ТВі АвроАвй Аа Бей бій ЗеЖ Ту Авподех СА «5 ї5О 155 ї5о бін бе» тУаї тах 5165 Біб АЗроЯвж мує Аа беж Тв тує шеє Би Зах їй5 Іа 178

Чежт Тих Без Тпж їжа беж Бу АтТа Дяр о Тук 1 Був Нів Був о Маві Тук 188 195 їв

Вів Суз бій Уаї Жак нів бів Бі бер бек бек о Бка Уві ТвЕ Пуз Бех 155 200 5 га Ач Ака бі Бі Сув «еї0» 75 чеїїз ІЗ «а» Білак «813» Нтучна послідовність.

Ех «ваших Повнорозмірний МС оужмих БОЯ сао» 75

Акороуві пе Меб Та бій ТВЕ Ро їв бек їеи Рхо ув) бек Тева оту 1 5 що т ї В ще їй

Авр обів Аїв Зек її Век Суз Ака бек бек біп Ап їі Уаї Бім ех ди 25 за

Ана біу Деми Тк Тух їн) сій ТгроТук Пе) Зіп Був Бко бІУ ба ех 33 5

Вго Пув о пей ем її тує Пув а? ре Ніз Вс Бає бек Бі Мак Бо 55 5о

Вер дка Ре бек й1і» Зеу Бі Бек бі Ту Бар обве Тахо Бво Був Те по то та зо

Бак вка чаї Піч Віа ім Авр обез б3Зіу Майї Тух Тух Св Бо бів ЩІУ 85 ЗО 5

Шех Ні ба. ко ТкЕроїбж Ре шію біУу БіуУ Тв був Мей АЮ БЕе буд

Іо вав їхо

Ахч ТвВк ав Аза Аїа ре бек Ха! РК Ті Кпе вро ББо Шек Аврозіш 115 1250 125 бів ес бмв байк йпбу Тех ліз беж Уа) Узі Суя Дмецз Бео Аве Ази о гре 1559 і135 146

Тук Рхо Ако бів діва Пуз Маї бів Тер опув Уаї Авр о АвпоАла Тена бів 145 150 155 1590

Чак опіу Авп оМек біп Б) чес Узі Тпс біз бій Вар бе бух АвроЗех 65 І7а 5

Тнг тує дет Бен Шеж КЖет ТЛЄ ішй тах бер бех уз Аза Агро ЖУух бід 180 185 150 іув Ніз Бу Узі Тукє Аза Су сій Мавотжвк нів о бів бу Без Бек ее 1935 «00 295 ко Заї Тне Був Беж Рне два Ако Сі бів був 210 28 «и 75 «ТІ 444 «І» Білок «ІМ Штучна послідовнисте «Вих кине Певноровмірний НС тУватокнОї «ох тб

Сів Уві біб бен біз бів бек пі Ркб біз Би Уві Був орРко пі А1а ї За 10 15 беж Уві Пув Мек Взж Сув пув Аза бек обі Ту Тк РВЕ ТЬБт Ав тує да 5 їй о У ЗУ

Чві ї1їє Ні Ту Уві Був Ага Дко Бхо бі біб С1у бемобім Ткрої1)е 5 сту Тук їієе Ту Рхо Тук Аво Авробіє Т)іє Без Туж Ав з3іМ БУВ Рі во 55 во

Був щі Ду Аза Тк Уа) ТВЕ беж Авробув ак де йвж Тих АБ Тек 65 Ки т5 а

Мак Авооїо мек мех бем ТВ дек 010 Аврошеє Аз Уві Туб Тук Сув пд за ща ва чо 5 тТвк Аха о сіу П1у тТук Туг Уві ККО Авв Тут Тго щі піп біу ТвкотТве ки) 1955 110

Без Тих Маї бек Звж о йіа бек Твх Був Сіу Бко ЗекЕ Уаії Бе Рко лей 1ІВ5 Тхй 175

Атїз рко Суз бЗеу ке 5ех ТббЕ Звк б) Бек Тпх Аза Вів Сер о стіу пу їз 135 145 їв Уві уз Аве о Тук вве Бкб біз рка Уві Тих Уаї бек Тгр Ай хек 145 150 ї-5 165

ЗАМ Аїв ша Те беє ЗУ УВІ Нів тв Ре Бхо Ачба Уві без бо Бех 65 170 їт5

Бек бі Гев Ток Бех пе) беж Шак ува Маві Тв а) Рко бу йеє ДЕК у І : ех Е Тр : Бах, е 180 ї53 іа цецобіу Тк руа Тр Тут ТВх Сув деп о Ущі Ар о Нів ГСув Вто Жек дав 133 да во

ТЕ пу уві Ар Був Ака уві біз Бех Був Тух Сіу ВрКо БЕо Суя Рего 210 715 ай

РЕ Сую Рекс АТа Бго З1Я Рпе бів сТіу біу ко Бех Маї Рее ев вне 225 Зо па 240

Еко Бко Був Бра Муз йдврожиК Бей оМеї їі Бек ода Тис Ехо бім Уа тах ЗБ Б

Твжт Сув уві Уді Маї двроуаї бек біп біз йзв о бке бід хаі бій вне ой 55 27О йза о ткр тує баі АБростТу Уї б) Чаї нів Ав о Авфа Був ТНК БуБ Бко 27 аа 235 га біз сто біп Бре Ав обек ТИї Туєк Вка Уаї Маї бЗежє Уаї бе сне

Катя 295 09 чаї Пе) Ніз ші АзроТтроцяй Ас йіу Ббуз біз Тує пуб Суз Муз Уві.

Ку 315 315 ча

Вех Аша МУ ПТУ Бер бко бек Бех їіе бідш Був о твк Ті Зеж Бу АБа

Зах За зах ув біу бій Бхо ка б1) Рез іп Уві тую ТнЕ ем Бо Бо дек сій 40 ЗУ 350 віч йо Ме Тв о Муш Ав БЕ МчІ бек Пес» Тас Сея ем Майї Беж Бу

З 360 305

Бпе тТух Рус Бех Аврь ї118 Аза Маї бій Тр бій вт Авт пу 1п о РЕа

З 35 зно сій йо Ашй Тук Був ТВЕ Трж о Бе» Рко Узі бе Ар о бех др о піу Бек 85 Б 295 1953

ЇїМне Рв о бем ТуУух Зек Аа пе Тк Уві Ав Цув бек дру ЖК іп о бзЗ 305 10 415

Зіж авп Мі Ре Зеж був беж Уві Ме Нв Біо Аїв їв Ні дво ід 42 455 З

Тухк ТвВк сій мує беж Лв) Бех їв Зеж еп о сІіу ГрМув вав 440 «-г1йя 77 «11» «й «рід Білою «13 цевучна глюсті даже. «и: «иа» ЛовноерозмівниВ НС УхЗвВожної «00 ТІ сів уУлі сів ев Уві бів век пі Ай бів Мі Пув був БЕЗ БІГУ Аза ї З 10 15 бек Уві бів уУаії Бех Суз Буг Аіа 5ех БІіУ Тує ТЬБх Рле ТВк Вел Тук 3 28 в)

Уві Те Нв отТжр Бе) Аке пів Аза Бгто сі» бій піу Їж Бій тер Має їй біУу тує її Тує рРко Тук Аза дДвросьу Ії цей Тук Авп СОМ Бу РнеЄ 5О КЕ о іов бір вка Ма! ТвВЕ Меє ТВі беж Ар Таж беж їі йде ТВх Аза Тук та 75 о

Меї Яаїш пес бах бех Бей ду йес Азрв АвроТтТВу дія Узі Тук ТУг Сув 85 за ха діа Аа алу Біт Тук Тук Уві Еко Аве тує ТЕ оші сзфл дів Лек фе ї0о Ка 1 чаї тТМж уві бек йех він Зех ТБЕ Бушж шШЛу Рекс бек Уві Рие Ркє Бе 115 120 155

Аза рхо Сук беє Ах беж Твж о Зек сіб Бех ТК Аз Аз цем піт Суз 130 ії135 140 іви Маї ув о Авротух Ре вко біз бке Уа) Тв уаї Зек ТКр оАвп ек 145 50 ТБ ї6о щу Аїз Бей тТне дек бі Ууді ніж Те оввБа го Аза уві цев бра бек 165 170 8

Зех Біу їше Тух Зеж бед Бех Бер оМні Заії Тах Уві ко Беж ох Зеш 180 155 195 іша З1у Тк Був ТБ Тек Твх Сея Ав сбві Ар оНія Цув Еко бек Аве 195 250 5

ТАЖ Пув Уаї ДБЮ був Аку Уді біз бек Був Тує сі рхо Бко бую Бко

Іа БІВ зао

Бу Сув вк діа бро біб вне бій ЗБу біу рРко бек УМаї Не пев Роде 23 3 во во рхо був вже мук Ар Тас Бей Месб її бек дгу ТО Бо бік уві п аа

ТвВЕ Суз Узі Хаї Уві Аврв Хві Бек бів бій йвор о рхо сіб Уві бу Бе 25БО гав и

Ази Ткор о Тух Узі АБ» обіу Уаї сій Теї Ні Аа діа Зув ТВХ Був Ві 275 280 85

Аа чРри біб біо Бе дев бек Тих Тек дрЯї Узі уві бак Уа Бев ТвЕ 250 255 Зо

Уаї цем Вів бів вро Тхе Цео Авт ошіу бує 50 тТукобув Єтв Буш Уаї зп 315 315 32

Чек Азп пу піу Гей бо бек бек Це сів Був Тк ї1ї6 Бех бує ВІВ їуз біу бів о Бго Аве пі Бко біп Маї Тук Тв їй ко БКо бек біл засо | 345 з5о дів бів Мек тк ув Анни Піп Уаї бек пе ТБЕ Сув без аЗі Бшвову 355 Зо 383

Рпе Тук Рко ех Аврот1а Аза уві 1) Тер обі бек Азо сту біп РК

Зо 375 380 сій Ана Ап отТук муз Тахо Твх о Бре Вко Уві Гей вар беж Авор опПіу Ве 385 350 аз5 пс

Вре Ве рес Тух Бех Ак Мей ТБЕ Узі Бер Пух бек Ака Тур БІ бім 405 410 315

Бі» Ав Уві РБе бек Су бвс уаї Мак нів бів Ата ївуа Ні дзпоніх 420 425 155

Тук Твх бій Сук ек Мен бак Бец Зеї Мем щі пу 41415 Я «10» 79 «ії» 444 «12» Білок «213» Штучна послідовні озмь «ай кі» Повнорозмірнмий НС УхйВитнії «00» 78 біб таї сів ї-і Заі бі бек 01У Авв біз Уаї був пу Ко бі Аїд зек чаї сів Уві Зах Су Се Аза Бес Сіу Тух Зет Бе Тк Аза ТУК я о 30

Тух Іле Вів Ткр Бей Ахо Сіп Аза ка б01іу біт піу Бей обіц Ткр Мей з5 30 аа пів ТУук Т1іе Авр ово Бей Ази Сі Аво Тйх Твх ТуУує Дяп біз Був ера

ЗО 25 БО

Був б5іу Акта Уві Твх о Мег тТну бек Аве о ТОх бек ї15 Бех ТЕ Аз Тук та 7т5 80

Мек сіб іо вВех ЗекЕ Пеб Ах Бак Ар о АдроспЕ Аіа уві Тук тТук був 85 за за

Аза Ака піу пБУу уз Акоа Аза Мех Азр о ТУух Тор бі бій Аіїз Так бе 100 115 ма

Маї ТвВж ві Бек Бех Афіа Зех Тл був 0іу Бо Яєк УЩзЮ Ре Бко Бей 115 хо ка

Аїа ско Сув ек Ате Бех Тс Хек біб бек Твах АїТа Аз Бео біу Сув ї3о 335 о бемоуві Був дар Тую РБе Бко Бій сво Маї Тнт Уві бву Тюр дДни ех 145 ї59 Г55 я) дік Аза гей їБк бек обу Маії Ніж Тк о гБе рго діа Уаї Пео сів дек їх ут 175

Бек сіу їзи Тут бек рес бБех бек Маії Уві Тк Уві Буо Вес бегв Дек їво 185 180

Її біу Тиж Був Та Тухк Тих Сує Авб уз) Азр о Пів був РкоО Мах Ал 195 298 205

ТЕ Був Уві АЮ уз Ах Уа осів бак бує Тук Бу Бо РЕ Шев ра

ІВ іх ей

Еко Суч Ркз Ата Ркей бім РВе ція с1і1у бі Бо дек дя) Ве Без ре жий 250 2383 24 рко Во бух РБка Пув йвр Тахо беш мес Їїє дек Ак Та Бко сін Уві 545 250 255

Тк Сує Уві Уві УФ Ар о бві бек СтТп бів АвроРко 230 Уві біп Ре що 285 ато дав отже о тТує Уві йо сіу Маї бі Уві Ві АЕп Аіа пу ТВ Був рКо : Е Х У 5 275 280 85 дта ців сіб бій РО двбобак Тк Тек Ака Чаї Уві Бек Маї Бем оту 250 5 з0п0

Уві Бе Ніж сіб Авротхро Бен дви бі Був сів Тух Мув Сук Гуз Маї 05 310 ЗІ ЗЕ беж Веб був сжфу Шец бко бек Бек їЩїе бід Пуш ТБ їі бек буж Вів за5 330 335 пу Зіу 10 Во Аа бід Ро со1ів Уві Тух ТЕ їео Ро вхб бек суп.

ЗЯо 3лі5 зво сі сп) м о Меї Тс Був дви біп Уаї Бех Пев оте Су ївюн Уві Гу Щ1У 355 зво З

Вре Тек Був бек Азр Ті Дів Уві ЗМ то біб бек о Аяап 519 БЕ вка ат і 282 сі АБп Ави Тук Був ТЕ ТВх Бо Рго Уві ев Авр Бех Дар сіу дек 385 ЗО 395 400

Ере о Бле їжа тТУух беж йха Бец їбвВг Уві Ав орув дек дка Ткробій 15. 405 410 315 а1Уу деп уаї Бе Ябвхе Сук Шек Уа Меб ів 0313 Аза Бей Ні Аед нів с; 325 180

Тух Трж осів Буш йех Бей бек пев Зех Мец Су Бук 435 рано; «ві» 78 «211» 843 «їй» Відою «15» Врручна послідовність «щих «Ей» Повкорозмірний НО УкЗниатні? «ап» 78 сії Уаї Бій їнб Ущі 010 Бех бі Аза бій ба) був ЗУ Вко Сі Аїа дек Уаі їу« Маї Чек Сув ув ліз Бек пі Ту Тв Ре Тек Двпотує ж 25 За

ТжроТіє Нів Ткр Уві Дка Біб дів Бо бі» бій 51 во бій Ткромех ах ее ря сіУу тТук Тих йвр о рхо Ака ТВголбяр Тер ТвЕ бі тую дай бік Був Бе що пе о уж АБО Асщ Уві ТнНЕ Мес Тех Аку Ввротвх беє Тк бак ТВг о Уві тує 83 а У ва

Мек Зійш їПем Бек Бех Гя) ДЕщ дек ЗВ Аве ТВ о Аз о Маїф Тух Тує Суг ви Б З5

А1іа Аво сіу Бі Аха УВЕ о біу ев біу Тук Тер обіу піп бі Тве Тез 105 105 115

Чаї Тит Уві Зех бек Аіа Зек ТЕ Був У Бко дех Уа Ре ру» Меч 115 іп 1 діа Бко Суд Зех Ахоа беє ТВж бек сій Бек Те АТіаз віз ії 539 Сув 130 35 їй їво Уві був зр тує Ре Вко Бій Рго уві Тех Маї Бех тер Авт бех 145 МБО 155 ї1бО біу Аїа цео Тк Зет пі Уві Ціз ТЕ Рбе Бо Аква Уві з віп Зех ї55 175 у бек сЗіу Бей Туж деж Ті Зах Зшет Уві Уві ТЕ оУаї ВБжо бек бах Ав 185 195 135

Бе ші ТВх біп тТвЕ тую Тв о Сув Два о Уаі дароНія Му Вхо Беж Ав ї35 20о КО

Тиг Був Маї Авр бух Тк Уві бій Ага МПув бух Сув УВІ бій Сув Во 1 5 кий

Еко Сув Ехо Аза Бко Бхо Уаі Аїв бі Бо бек Уа) Рів обей Ява то 25 ща 235 ай вже цу Ехо уж Авр отТиЄ Цей Меб 11 Бек Ат Тйв вхо сій ві ТНх 245 250 255

Сув уаї баз Уві Авроуві пек нія 010 АзроржО пів Ущаі біо БВ Ап во ге аа

Тке Тут Уаї Ар щі Уаї Зв) о У«1ї ів АБа Аія Суб Тс Був Вко Ако 275 ТВО 285 біч сі бів Ве дво обеат Так ББе Дко ба1і Маї Шев чаї Без ТВтх Уаї 250 535 ЗО чаї Ніж зії Авр отТкр єн о Ачп біу був б3іп тут був Сув Муз У чех

З10 ЗІ5 зо

Ана ому біу ев Буре Аза вро Хіе Біб боб Тв їїе Бех Ббуб5 Так оБух 85 30 35 біуУу бій Ркс Ака 1 Бхо Зіп Уві Тук Тк їец РК Рго бдех Ага шій 340 з45 а ій Меї Тс бує йзп о біп Уві бек БеЯ ТЛ Сув ря уаї пу 15 вне 355 зао зев

ТуУук Вкго Бех Аяр о Їїіє Аів Маї Біб Тур біб бек АБ (і бів Буа бБіч

Зо З 82

Ава оби Тек Мув ТЕЖ ТИиЄ Ркз Бко Меє Без йвробех Авроб1і Шев пе зе Зо 355 то

ВБе Ті Тук Чаж був Бей ТК таї Ве Був беб Ахо Тхр Бій Бій пі 05 419 15

Ав очаії рив Зех був бек Уві Ме Нів йіб Лів ев Бі АвпонхВ Тух 20 425 439

Тих спів Був бек Мей Бек Бей бек Бко ТУ че 435 44о «вій» ВО кеіР 44 хвійз Білок «213» Штучна послідовність «Вих тхРи3з Повнорсзмірний НЄ о уканиаья «пох БО зЗіч Уаї біл без Уві бія пет піу Аів біб Уві Був Був Бка БУ и 4 8 18 15

Зек їжи цув їТе бах Су бул Сіу бек піу Тук Ту Бле Тих Аво Тух 20 25 20

Тир ї1їе Ні ТЕр Уві йха Сів Меб Роз Бі бух С1у Беб пів ТкроМеє

За їй 45 і тТук тТвх Азроббо хо Ту двротТую ТВх Фі Ту Ава обі Бр вне о ща Бо

Був йяр Б Чі ТвК ТЕ» бех Аіа Аз був пет ТІВ бех ТВК діа Тук

Ба 7о 75 я ей бів тер обек Бех Бей був Аза Бек АЮ Тис Аїз Меїс Тух Тух Сув то 5

Аїа Аха сі біу Ака Уаї йіу лез біу тую о ркр Ту біб біу ТвЖ Без їпо 105 її

Уаі Тв уаї Бех беж діа дес ТВг оцув пі Ркб бек уві Бе боб Цей 120 125 діа Бко Сук Бех йхо бек їТвВу бак б1іч Зек Те Аза Аз Пе бО1у Суд ії30 135 1450

Тез Уаї Буд дво ТУК Ріє Рко 015 Ре Уві Тек Уві Зех ТЕр оАво Бех 15 їІ50 ТАБ 1

БЗЕУ Аза Тез Тс дек БІ ві Нів ТВх Ре вто під Ук Тен бі Бех

Т65 то 175 ех Сі фени Туж бе Кей Чає чат уві Уаї Тру Маі БЕ Зебє ЗК Ав 155 їн ї50

Ре сіб Тв бів Ту Тухє Тк Су Авп о уаї АвроБав був Бо Бе Авв 195 ЦО Би

ТВ опув Узі двроБув Тих Уві біш вку Буш був Су Маї То Сув Бхо 2о І 220

Рекс оСув бто Аз ВБко Рко Уві Аїв біб Ро Беж Уві Бе пев Ре бтго шив Ос 235 4 то Беж РКО Бу двроТвж мен Меб тів беж Аве тн бек біб УВІ ТАК

Суз чаї Маї маї дер отаї бек нія сій Авробго бій Уа1ї біп РвБе деп

КЕ) ех 7

Тур о Тук Уаї двросіу Узі пів Уві Нів зб Аза уз о ТВх їу Бхо дка 215 280 а сію Шьфа біз Різ Аво бех ТЕ Не йка бві ові Бер Уві зей тв хХеї во 238 зво

Маї Шів сій АвроткровБео Депп обі Був біо Ту бух Су Бу о Уах зе запа 31 з15 320

Кави обу біт гема Рко Аів Бгто Ї16 СРО Був Тк Те бах Був ТВж їв 395 356 355 піу пра Бко Аха бій го іп Уа) Тує Те Гб БЕо Ббжо беж Вт ій

За 5 зво сіл Меє Тих Мцув Ав осів уді беж ви Так був Бем Уві був бпьу Не

З ЗО збо

Тук Вко Бек йвр о 1ле Аза Уві бій Ттр біс бет дав бІіу піп о Бго бід

Зо ке 255

Аве Ажи Тук Ку ТВ Твт Ро бо Меб Пеб Авройек Аз ОПіу беє Ве 385 зай 5 ЕЗНЕН)

Рпе іши Тук бек Був мез ТВІ чаї Вар Був беж Аку ТЕБОБІВ бід осіу ях 1 115

Бер аю Бе бек Сув Бех в) Мас нів іа Аів Бе п бе Мав тре 455 25 30 тиж бів Був Бех ец бек цей век Вка бі Був 35 440 их ві евії»х 433 «2142 Шілок «8135 Штучна послідсвність «икй «гей» Повноровзмірний ВО УхЗвОопНЯ «00» 81

Біл Уві бій йви ді біб йет піу іш біз Уві бух Був о бко пту век ії З 10 15 цех Уаїі був Уві бек Суб Гуз Аз Вес біу Тух ТВх Біє Тит два Тує йа за

ТЕжо Тіе Ні Тр оба) Агро бів Аїа Во б5Біу бій біб Тшн 16 Ткр Меє зо ї5 сів тую ТЕ Ар орко Аж ТМ о ЛероТук Тк жа Ту Аїа бів Буї ВКе т За 5 віп оту Ага Чаї тТвк її Тв Аза Бер бід ех ТБ Бех Те Віа тук 65 7о 78 за

Ме сій ев бек йве би Ак бек бій зр о ТЬВ А1із Маї Тух Тук Сух 85 о що діа Акч сіу б1У Ака Уаї бі цеч біУ Тук Тер опіу біп біу ТВх бец 106 105 119

Уаї ТБх Уві бек о Век діа бек ТВкК о Пув біу Рго бек Уві Бпе Рго Без 115 120 125

Аза Рго Сує Бех Аку Бек Тлх бек Сі) Бек Твг Аза Аза іви піу Сув 130 135 150 їец Уві. дух Аво» Ту Рбе бо ОР Ркго Узі Тих Уді Хек Тур Ал бе 145 150 155 15 сту Вів йо ТНк Бех піу Уві Нів Тих Рре Бко Аа Уві без біп бек 165 179 175 бек Щі Бей Тук бек Мем бек бек Уа1ї Уві Ту За1ї Ро Зах бек Ап 189 185 130 ва пі Тахо біб Тв оТУк ТВЕ Сез Дві Уві Аяр о Нів Буз Вго Зек дам 135 20 205

Тих Був Уаі Авробув Тнх Уві бій Аку Був Сув Сув Уві біо Суз Рко

Ка) 215 го ко Сув о Бто Аза Рхб Рро Маії Азїа йпіу Еко б5вкоУві Ббе о Беб Бпе Во 275 ЗО 235 240

Вко Був рРко Був Авр о ТвБу цем Мек 1125 Бетг Ахо Тс рко біш Уві Так 245 аз 5

Сув Уаї Уві Уві Азр Уві бек Нв біс Авр бо біз Уві біб Бе Аня

БО 25 ато

Тер Тук Маї Аворобіж МУаії бі) Уаї Нів Авп о Аівя був ТНу Пе Ро АкФ ї75 280 265 біз бів бі» РБе Авп бек ТвВх не Ак Уаї За) Яех Мяі Без Тве Уа) 280 255 Зб

УЮ нів бів Азр о БЕвоГеоа Аза піУу пув Бій ТУук Гу Сув Був Уві Бех запа зі 355 323

Авпойуз піу йцеч БКо Аіа хо Ізфе бій Був тТрх Тіз Важ був ТВх Був 385 50 35 оіУу Біп бто Аке пі Ро бів Уві Жук Тахо Тем Ркго Бо бЗехб Ахо 1 349 зах 35) бій Ме Тахо був Ап осівй Уа1і цеє без ТЕ Сув беп Уві Був Бу Рре 58 ЗО 3655

ТРК Ркоз Бек Ар 112 А1їв Узі із Ткро біз бек Азов пі пів Бо ЗМ ато за 350

ДвгпоАва Туг о Гув ТБт ТВх о РкЕс Бгто Мес Се) Авробех АБЮ б1у беж РБе

БУ зва 335 па пе їви Тег обет Б Її) Тк Уаі вору Бех Ак Тер бів біл 0б1Уу 125 410 415 ййшпоЗаю Бне сбег оСув бек Уві Мес Нів біб Аїз ївзо Ні йяй Мія Туг 420 455 430

Тах бів Буш Бех їм Бех Гей беє Рко бі Був 435 450 «й1й» 82 «віз 444 «вій щційлок «ії» Дручзна послідовність

БУ

«ший» Повворозмірний НС Уха ПВитнОг «005 вх сій Мві біб беб Уві біп Бех бі» АТа бій маї був Був Бко біу А1їа 1 В 10 15

Бек ТаЮ сій Узі бек о Сув був Авфа бек біу Тух Твюх ВМа Тв Адий Тут к. 25 за уаї Іїе Нів Тгр обу Аку біп Аза Рто 01у біб біб рей бі Тер Ммеї сіу Жук Ті Тук ро БРУх Ав о АвиосіУ Т1е Бей Тук Авв обі Був ле 5Е щи

Куз зіу йтш Угі ТЕ Меї Тлг оЗек ввр ото бек їле бех ТВ Аїв Тух ба за ть 80

Меї біб бе бек бе Бец Ака беж АвроАво Тк Аза уві Тух ТУух Суя ща за за дів Ага бі» сту ТУЄЄ Тук Маї Тук дяр Теж Тк» ПіУу біг Аза так Гей 19о 1655 пе

Узі Тик Уві Бех Зак Вів ес ТБж о пузв бі Ро Зех Узі Ре тка Зм 115 150 125 дів Бус Суз бек Аг ЯЗеж Твх Жек сій Зеї ТВк Аза Аза бец Оу Сув 130 135 145

Те) Уві цу Ахроїсе Реве обо їй Бго Уві Тахо Маї бек Тро Ав обЗех 145 | 150 155 тво пі Аза цей ТМх беж біо Уа чів тм бе хо ів Уві Бех бі ех 165 ї75 175 цех БР інш Туж бат Їхрі Бех бек Ууаі Уві Тих УЗі ро Бех бек пет 185 185 188 їва Щі Твк Буш ТЕБк Тк Тите Сув йяп Уві Ажробів Буз ко Бех Авй

МТ) 205

Тих Му Уаі Ав Був Аа Уві пів беї зу Тує БіУ Вго Рко Сув вка зів сь лю ке Мей же у рто Суд Рко Аія Ржо Зі не біб слу ву бю» Мек Уаї Бле Ге ре ва ай за5 дах жо ро Був Рко Був Авр оте Пей МеЕ їі Бек Аху ТВ Рко бін Ув1 вав 250 255

Тис оСув Маії бзі Уаї Аср чаї бек біз сій др о Бко біз Уві бій Ре

БО бо що

АвпоТтроТух Уві Ане біб Уві Сіц з) Нішх Авоп Аза Був ТВх бує ко

КІВ го ВО дко бід сів біп Ре вбвБо Бех ТЕ Тух АкУ Мві Маї Зеж Уві цей Тк 90 5 зп чаї цем Кіз Чіп даб ТІр обез Авп обі Був сій Тук Бук був Тр ові 305 310 З1 329 дек о вавп о їбув біт і го Хек обек Ї1іе бій був Тк Ті Бех Був Від

Зх зза ав

Був І біз го Ага пла Кто піз Уаі Тк Тас бем ВКо ко бек 1 340 345 о пі біо Меб ТВЖ цуз Аво біл о уаї бек Мей Так був йео Уаїф уз бу

З55 Зк За бе тТук Бсо беж Ер Ті» Аїа Уаїф щі то бій беж Аза і іп ВЕ

Зо ЗІ зо сів Авб дво ТУК Був бле ТВх вхо Рхо Узі бец айвзв Бек ав щу зе 395 ай За 08

Евпе Віце рей Тут дет дк ем ТВЖ Уві Авр омцуз бек АкЯ Тер бує БЛЛЯ

З З рову З ії 405 До 415

Авпоуаі Віце бек Су бек Уві Межб бів біз Аїя Бех бів Аво Пів 2 185 3за

Тук Тбх бів Був хек цес Зея цез ех Га паху Був 355 46 «ев» 83 «ве 443 «2102 Вілок «сах Штумна послідсвнасть кала» «шила Повнорозицений НЄ Укоїеанії «по» 83 пів Уаї біз пейп Уві біб бех бі Аїва ств Маї Був Був Бро ОДУ Ек ї в та їв

Бех Маї Був баї Чех Сув Буш бів Вех Піу Тух Ту Ре Тип Ава тує 8 5

Тк т116 нів ТжроМаї АтОо бів дія ха Зіу Сів бте ем с ТЕ Ма

За 5 45 сту тую Твх дар о Бо Ак Тахо двр тес Тк 01 Тух Люп бій Пув Бов ви 55 БО їГув Авподка Уві! Тв бів Те Аза Аяробв) Бек Кп бек ТБЕ Аз тує 65 то В ко

Мес сід ГПеп Зег Бек Без йку Бек спіл Авор о ТВх Аза Уві Ту Тук Суд 85 зо ЗБ

Аза Ага с1іу біу Ака Уді піу Пец йіу Тук Тхр біу бів пі ТВж Бей 1 105 110

Укі Тах Уа) Век Зек Аза Зех Тйх Пув Б1Уу Рко Бек Уві ВБе Бко Ге 115 120 125 діа РЕо Суз дех дка Бех Тах взех біо Бех ТК о Аїа Аїз бе бі Сув 130 135 140 їв Уві в двр Тут Впе Рко бі Ркто Уаї ТвВкЕ о Уаі Зау Тер Ав бет 145 155 155 160

Сіу Аїв Гей ТвВк бек обі Маі Нів ТВс о БНе Ркб Аївя Узі ви Сів Бех 155 179 175

Бех шпіуУу Пец Тук Бек Гей бек бек Уа| Уві Тих Уа) Рко бек Бех Дви і89 185 150

Епе біУ Тах біг ТВХ Тук Тс о Сув Аза оУаї Ав; о Ніз Пув Рез бех Авп 195 200 25

Тих їПув Уві Авр ої Твх Маі 01 АкФфоБуз Суб Суя Заї бій Сув Вко 210 215 яхй вхо Сує пха Аіа ркКко Ехо Млі) Ава біУу Рко беє Ма пе БМем пе о Бго яЕ» З 235 280

Вхо був Вхо Вуз Ав о ТвЕ Без Мес Т1е бек йка ТВу Рко бім Уві ТЕ 285 250 255

Суз Маї Уві Майї Азр Маії бек Яів бій Азр о Рго біб Уаї біп Рое Ав 250 265. 270

Ткр о Тук Уаї Авв о БіуУу Маі біз Узі Ніз Авп о Аза Буз ТК о ПУуз Ртз Ака

КЕ: 28О 28 пів біз слю Ре Ап о бет Тв Бере Акщ Уві Мді бах Хаї Пемй Твк оці 28 235 Зо тУаю ів біп двр откр оце Ап обі Бу бій Тук буяє Сув Пув Уві бах

Е Е В. й 4 і: . зав з10 З1а 320

Авп ому бі рес Рро Аївз рхо 112 ЗРО був Так Ті Беї Був ТНЕ ЦУуз

З25 330 З35 бПіУж біп Ро Ак б) Рко біп оУг3і Тук о Тпвк Гео Бго Бко Бек Ак 51 зай 345 аБО сі Ме Тв Муз йей бі» Чаї бек без ТВЕ Сув Бей ЧУВ Був 01у Ре за 350. 365

Тух Рко вех Ав їіє Лів Уа бій ТЕр ви вах йнпобіу Бій ве си ато ат ЗО

Ав оАвпоТую Бує ТВ о ТвЕ Вто БО Меб їво Авровех лЛаропіу Бех Бре

ЗВ 350 335 9

Вре Пец о Тук бек оп 2 Тих М3і АвроПпуз бег йкоа Тер бій Сбіп бфу 05 10 415

Авт чаї бе бек Су ЧЗет Уа! Мех Ніз піч Аїа бею Нів АДво нів Тук 2 325 30

Тк остТоб Був пех Бай Бех Бей Бек ко БУ БУ 435 445 «105 54 «ВТ 444 «йї-» Білок «13» Шручна послідевність «ах «823» Повнововзмірний ЯС хво О «Ада» й біс т7аї сіб дей Уві бів Бек О1у Азїава бів УЮї бу Був РкФ о біу йім 1 5 10 ї5

Зак ви Муз ї1іє Бек Сув Був і Бек ос1іу Тук Бех бле ТНХ Ав тТтУє 5 ЗО тТух їі Ніз Кр Майї Ак бій Ме Бко бі пув сБУу Ма З Тк Меї я 45 сіу тТух Тфе йзро вто пей Ав пі Аво Тк Тег Тук бах хо Зах ре о біп о б1іу бів Маї ТЕ її бек Дів АвроГув йек оті Бех Тву Аіфа о ттх 65 То й во

Ге) бій Тгробех бег Бе) Був Ада Зек о вйзр Тв Дід МеЕ Ту Туюк Сує ях о 5

Аїа Ага Бі Сіу був йха Аза Ме Авротує Ткр б1У Аку бу Тв цей 100 105 їо

Чаї Те Хві бек бех Аба Бек Тах пу ОТу рес цек Уа) Вре Ро Цей 115 170 125

Аіїз БЕ буч бек Дж шк їТлпє Беж ПУ Зеє їзЗх Аза Вів їн ТУ Су іх 135 14

Беч Маї Був дДеюб Те Бра ро біб РКО Ущі ТОЕ УВ. бек Ткр Дело вах сі діва пен ТВ беж біу Уві Бів Тахо ББе Бгто Біа Зв) Гео 017 Бех 165 і75 175

Зек Ту Бей Тук Бет Ге» Зег бек Ма уяї Тпх Уаї Рхо ес бек Дех 185 185 о ей біу Трх Був ТИЖ Тут ТИ о Сув Ав Уаї Ар оНія Був РЕшб Шек Авт

І85 ня 205

ТнНкЕ Буя чаї дярв Був Ака Уві йпао0 беж ву ТУукК ші Бжо ркО Сук ррех 718 ДіЗ 250

РКО Сув Рко Ала Рко Я: вве сі бі Бо Ба бек Узі БбБе Без Ре їхх5 23 235 ЖАХ вка го пу Бко Бе АвроїТах Бей МеЄ Тіз Зес бко лк БІб 5 Уві

Я 5 БЕ

Твх бу Уві Хаі ТВі Ар тат Веб біб ій Ар оВко Зіц уві бів РНе 250 рас 27

Дзпоїжр о тТук Уві Авробту Маю зії Уві нів беуя Аза Був ТВх Буш РЕо та о зва

Ака іо бів біб Бе Ав пех ТВе о ТУкК Ако Уві У«і Беж Уаі їв ТНЕ 290 295 ЗО

Уаї цец Ків бій двротТжродев дяп осі Був бБіс Тук бу Сув Боя Уві

ОВ Зій 315 340

Шдех Вал був піу Бев Ро Бех бек їі біб бук ТИ Ті бек пов дід

ЗК а 355

Мув сіу Зіп Рко се б7 обко біз Уаї Бук ТВх Бей Рко Рео Беж Бір зій 345 щи

Сів ші) Меб тв Був Авт бій Уві Зек їж ТВЕ Се ем Уві Бев о бТУ 55 Зо За ве Тух Бхо бек Авр оті дів Уві біз Тер обі бек Ава сіУу бій Ро та 75 зо бін й дво Туг буяє ТВБЕ ОТЖЕ Бо Рко Уді бе Аве бер ввробію Жег

З85 З 395 що пе Вре без Тухк бек Аку їм; їх Уні АвроПув бек Аго Тр бів Бій 405 що 415 піу Ат Маї Рне бек Сув Чех Чаї Мебї Біз 015 Діва цей Бі йБл ні 12О 425 30

Тук ТВ Б) Буш бек Бер бек рей обвк Бем су ев 435 жа ай» 85 «ші» Я «ет ВЕДОок «213» Шеучна гель довнікть «ЙО» «ей» Повморовмірний ВС канон Х «4002 сі Уаї 5Біз їв Чаї 3 беж пі Аза бів Мі Був Буд БО плу Зі

ІН Ко 1 г ІЗ КЕ 1 5 ро у

Хек їв Буз Ї1е бтегоСтв Цув о Зі вах біу Тук Тв ВБе ТВк депо Тує дО 5 Зо

Уві тіє Мі Тр Уві Ак о бію Меб ко щі бух біу ва біб Ттгр Чех 35 40 45 біт Тух Ті тує Ежо Тук АБ блю СТУ Ті Бей Тук дБ СТО буд Ре

За БО

Пух біж бів Маї Тих 115 Бек дів Аве Ів бег їі1і8 бек Тв Аіа Тук во й 75 8 без пів Ттр оЗек бек Бем Буш Аза пек Авро Те Аїз Меб Тук Тухк буя 85 за ща

Аа Аа піу пі тую ТуУук УВА Вто Аве отук Тр обіу щі бьу ТВ ТЕ тай 5 їх чаї Те Мві бех бек Дів Бек Тих Був біу Гео беж аз Ра Ра Це ї115 120 щи

Аїа Еко Сув шеє Ако бах ТрЕ беж бів бехс Тпх Аїз Аіа Пец шоу Су ї5 їз о їз Маі бух бат Тух ЖНе Рекс бів Без ді Те о Маї бе Тер Ав ше 335 150 її5 160 сту Ата Без Таж чес бІУ Ма) Ніж ТБк Бе» Бк ЗІн Уві бец шуб щеф 155 ха 75

Чек зіу Бей: тує ех Пезч бек ек Уві Уші ТЕ Маю Бкб Бвкойаесє Зек 159 185 ї90

Гб біб Жвк Був Ти Ту ТвВЕ Сув Ав о уаі дяроНія Зув Бк Бек Ав 155 Ой 5

Тих пу Уві Ар Гу ха Маї біз Бек Був Тує біт Бхе бро См Бе кс Су хо Аів Рхо бі Бе бро бі Біу Бхо бек Мі рве обей Ре йо 230 235 А

Ро Вже цу Ро Буш Авр Тв бейп оМек ті пет ко ТВ Без Бі Уай зай 5О я

Тк Сув МАї Уві Маї дДяв Маї бек сл біз Аве Бо Зі Уві Зій Ре во 255 В

Аза Тжр Тук Уві Авробіж Узі бі; Маї Кіз Авп йта був Тнх буя Бо кед НО 25

Ага Бім сіб Зі Ре Аа цех Тек о Тук Ат Уві Маї ет Ах ей ТЕ 250 25 Од

Уві іо нів бів Ав отр оїви дп опію Був біз тує був Сув Був Уві а5 319 ЗУ ке ек АваоМув лу цею Бсо ек бек Бі Щіч Був Таж ї1їе бек був Ліз

Зи5 зо 335 уз Бі Біп Рео Акп біз вхо ів Узі Ту ТВЕ во хо то век бів

Зо зав зо бно сто Має Тих був вел іп таї Бех реп Тйх Сув Ше Уаі був біу 55 збо 5

Ве Тук Ехо дек Аяр Ті він Уаі бів Тр бів Бех Ага о піу Бібп РК

Зо За ЗО сії Аа Авт Тук Був ТБЕ ТВк Рго Бго Маї цес Азов обБет Ар оту Баг зн5 З за5 400

Бвпе вве Ге Тує бек Ака Гей Тахо Уві Аяр Бе Бек Аква Тур ЗЕ Сі 305 С 15

Зіу Авв оМаї Ре Зак був Бек уві Мей нів 5Іб Аіа цес Ні Аво дав 120 т25 1350

Тук Тнжх ам уз бех їБед Чет Бей бек бео о1у Був 435 140 «І10з ВЕ «115 844 «ші» Білок

ІВ Шеучма. пос позанєцн» сво ч«айЗе Повнорозмірвий НС Уухаананох «ОО» Ве сіо таї біпоіїй Заї сіл Зак бігу літа бід Май пу цу Еко бі Аїв 1 5 10 15

Бек Уа) Був Укі ех Сув Бк оАія Бек су Тух Тих Рпе Тр о Ава Тук 2 й Зо

Уві Тіє Лів Ткр Маї Дкч бій Вта Бко сіу іп біу зею осі Тхо Ме бі Тук Ї118 Тук Бро Туж Ап обер бу її рей отТух Ав щі Був ре

БО Б о

Муз бзіу ку Уа) Твг о Веї Твк ЇїнНЕ йвро Тек дес Твк бек Тс ойДіа Ту нд; 75 9; ме біч їв; Дка беж Бей ойка Ба ЯвроАвБротьх Ага Уаї Тек Тут Су 85 о 5 дів АкаЧ сіУ С1У Тек тТух Май Рус АБ тТух Ткр обі ств бі ТИ ТЕ

Т05 То

УА Тбх Маії бах ет Аіїа Бек Тк Був Щіу Бра бек оба1і Бре Вха Бе 120 18Уу

Аїз Его Суб бер дДго Бех Трк беж Зі дет Твх Аза ія без БОРУ Су ї8О ї35 Ав їжшь чаї ГБ АЮ Тухк Ре Рко тв бро Уві Тк о Улі Бех ТЕР Ав бек 145 5щ-о 158 ї6о с1У Аї8 цез Тих бек 615 Уаї Ві тТЬс о вбе тро Ав Уа) їжшм бій бек 155 Кто ї75 йдех бі їі Тух Жеж Гей бек ше Уві Зв) Ту Уві бо дек беву ех 180 185 125 аа біУ Бк о бує ТВ Тух Тс Сув бвтп о Уді Кво нів Муш Ро Бер о Дед ти ру Уа зв Був Акоу Маї Сіо пежх вуз ту сі» Рко ко Се РЕ 210 215 вва хо Сув Бжоа Вів Бо біз Ве Бій пі Ту ро Явх Уаії Бе о бей Бе жа 230 35 240

РКО Бго був осруо їуз дар Тват Гей Мес 118 Бех Ако Тс Ро бій Уві 245 а5 255

ТВх Сув Та) Уві Маії Аво Уві Бех біп сій Аво Бко їм Хві бій Ве

ОВ а ТО

Аза їхр о Тужх Уві Авр о зіУ ба біо мах нів Аво Аза Бу ТЕ Був Вже ше жо З

Яга Б1З біш пів Рое Ав ех ТБк о ТеЄ дк Маї Уві бек Уві ем ТВ о па Зо чаї їви Ні біпо Ав Тер оцез Аяп ПІ1Уу Буг Ла Тук Був Сув був Маі1

Зо Зі5 зе

Жак дав руб Піу Бей рхо Чех Бек Т1е біз Гу Твж її Зех був Ата 325 355 355

Ту бі біо Вко Ат Бій Бо іп Уаї Ту Тк Пец Во ко Бех біт

За0 ЗЯ5 зво бін сло Ме ТвЕ Був Аби піз баї Бек бек ТпкК оСув сем о маї ру Лу 355 3659 яку впе тТук Бгто Бех дЗв лів Віз Уа Сів Ткв біз щаЖх Ав бі Піп вко 379 ЗУ 380 іо ваз Аа ТУухк Буз Тих ле о рго Ро Уві Беб Азо бет ДЕр о піУу бах лах 9 255 40 вне Бе їз Тек йеж о дрто їєс ТВ Уві Ар Гуз Бек йху Ттор бал салі 408 а 312 ді Азп о уаї ре беж був беж уві Меї Ліз сіб Дів іє Бів Ав НІ 425 133 тек Тк бій Був Бех Бей бек без бас рем піу Буд 435 440 «ема» «їз 443 «А1и2 Білаж «813 Шеучна послідовність «ВО» «ай» Повноероезмаютняй НС о беЗннтнів «пав 87 біз уві бів бе) Маї бів дак біУ Аїз біз Уві був Буз Ехо щі 1 ї 8 Та 15

Бек без Пув 116 Беж Суб Був піу Зах біу Тух ТВ о Бпя ТВх Аво те ша їв За

Тке Тіє Нів Ттр Ма1і Ака біт Месє Бхо Сіу Пух Сіу ем осі Тр Меє «5 біу Тух ТвВх Авровко Ага ТБ ойвротТух ТНК біо Бух Бех Бро Беж Ре п в бів БТ пів без ТВ 118 бе дія Азр обу Бех ХЗіє Бех Тв діа тує 65 то у о цем біз Тер обех бек Мей Буз дів бе дер Те Аза Меї Тух Тух о сСмв 85 зо 5

Аїа Ака пі бІу Ака Уві ші без біу Тук Ткр біу сій біу Тк Пе 199 115 Во чаї Тв Чаї ех бек Аза бег ТВх Був ШіУ Рко Зех Маї нє ББгО Ме 115 170 12

Аіа ро Сув Зах Ат Зжу Таж бе біб Бек ТЕ Аіа Вій Бей біу бук ї1зоа 138 140

Бевз Уві Був АюротТух Бра Бк біб рхо Ха) То Уві Бех Тур Аа Зевс 145 ї50 355 1650 пі Аїа лез Те бак бїу Уа1і Ні ТЕ ББа Рко Афа Уві еп бій Зех її То 175

Пес П3іу без Тук Бех Бер бах бек маї Уві Тйж Уаї Вухо беж бек лап 180 185 150 вве о б1у Ж бій ТЕ Тек Тв Сув о дап Маї Ар о Нів Був Бко о Яек Ав 135 а 5

Тих Був Маї ВЕ ої Тк Уві Ра АтаЯ Буз Сув Су Мві біб Св оБко від 215 го

Бгто Сув Рхо Аів Спо Рго Маї Аз пі Бко ев Уві Рез ої Бе ро ве 23 35 ах

Бкє Пув Рко Гуз Вр о Твх Бем Ме 118 Зек Ако ТВБх Бо Фі мав ТВ 245 ко 255

Су Уві Зав Уві Азр Уві бек Ні щім Ар Бхо бро УвХ бів бле дал 250 КО ал

Тхр тТУК Заі Азор бу чаї бій ОА Ні Ав Афя Буз ТНХх Пул Бко ка т во а чЗіч січ Ста пе Дяп о бек ТВг о ве Ако Уві таї Беж Майї їні ВТВХ Уві 295 ях зо

Уві ія бій Аяр отр о їев Дві бів пух біч Тух Бу пух Був чаї дек зо5 о 315 за

Азпоьун піУу їшу Рго Аіа Еко її» бРй Буз Твг о ті6 Веб Дуя ТЕ пуд х У -у Е . У У ка 33 33 пі асо Бо йо бІб Рко бБіп Уві Тух ТвкоЇею Бхо Бо бек овку ій зай 345 ЗУ біч Ме Тах буз Азп бів Уві беж Мей Твж Суз реп Уві Був сОї1у Рее 355 збо 385

Тук Еко Бех дер Ті Аїв уві 51 ТкЕробіз бет АБ біж бі; Бк бі а З зво

АвтпоАвт Тук пуф ТНЖ Ту Бо Бо МеЄ Меїй Ав обек Аве осСіу Звк ББе

Зп5 9 355 300 вве пед Тек опа Буз Беж Тнх Уві дер Гу Бех Ах Ткрозій бів сту 405 4410 115

Аа УМаї Ве Бех Суз бер о уві Мер Пів біз Аїзвз бе; Нів Авй Нів Тух 424 425 430 тиж піз Був Бех цей оЗек реп бек вхо щ1іУ жа 435 44 кв10з З рії» аа чаїв» БНО кій ітучна пОСпідовнасв «шеО «23» Повнорозмісний Во УуханошнОоЄ «Ой» яв

Сів Ув3і біз Бех Уві бів бет -0Уу Врта біо Маї Був Був Вко бі» Ада ї її хо 35

Пес Уві Був маї бах Ста Був Аза бек оіу Тух ех Ре члЕ дя Тук о 25 30

Тек їзе Ніє Ткр бай дех бів йів Бо бі Бо піуУу ва бів ТероМех

За о ях сі Тук іе АвроРко Бец Авп пі Авю Тек о тах Тув лем сій Був Ре 50 55 БИ

Вуз Щ1Уу Ахеа уаї тТнЕ Ме отак Ася Ав отТвБх бек Твг бек ТББЕ Уві Тут ва 7 75 но

Меб 515 пев бек яву цей АкКоа Бех біо Азротнж Аїд Узі тує ТУк бух й зо ЗЕ віз вкч б1іу бі був вхо Аія Мех Азротуюх Тк сі» бін БІУу тнж Бву 1059 195 119

Уаі Тйх Уа! Бек бЗес Аїв бех Та пу бі Вко бех Уві Ре Бр баб. 180 125

Аза Рко Сув Бех Аке Бех ТПг бек обі Чех ТВх діа вів Пец біу Су 130 35 140 їЧецв бзі Був оАвро Тек ВВаК Ро піс ко Заї ТВі в) бек ТЕроАво ее 145 155 155 ІБ шу йіз Се) Тйх Бек спіу УВІ Нів Та Ве Рг Аза чаї бе о йбобв ес 1565 і79 175 їек сту пем Тук о хеюк еп бе ек Уві Маї ТЕБЕ Уві Рео бек беж Бек і8о 1855 195 цез щіу ТБк о Був ТНЕ Тух ТВ Сев Мп Уві Аво» Нів Був рРко бах дво 185 209 205

Так Буш уаї Аяр Був бга Уяі біз бех Муя Бук б1у Ро Вто Сов Вго 216 215 | 236

Рга Сув Рхо Аза Ехо біз Бе бій Б» б) РКО Зеб Уві Реве ео ее ге ий 235 40 рЕо Бхо Був Бхо Був АвротТВх Бей о Меє її Бех й Тв Бк 01 Уві жа я БЕ

ТБкоСуз таї Маї Уві АвооМаю Же сів 01 Авробте під Ук опіо Не г т 270

Аяшп Тхо о Тук Маі Аве оіу Уві біб Уа) Нів Ав оА1із бух ТОЖ Був Бк в по ВА

Аха сіб бій бій РВе АБО йеж Твг о Тух Атха Уйі Уа) беж Узі їжм тТвЕ и 5 що

Чаї їви Ні піп Авр отв Беж Аза бі Був бі: тУК БУ Сув бує ув) зо5 За з15 2

Чек Ава Був біу цей Рко бех бек їв біз Був ТЕ її бек Буш Аїа

ЗБ о зз5 їз бі» Пів Бго Акуо Січ Рто бій Уві Тук Так о пцем Вко Ро бер ів 350 345 зво сій БЕи Меє ТЕ Був Аво іп Ма) ЯЗех без ТВЕ Сує Бей Уаї бух БІ1У

З55 Зо З655

Ре тТуж Рхео беж Азр І12е Афв Майї сій Ккрослоа Бек Аза обБі5 біз ро за 75 зво

Із Ашпа Ява ТУкК ПуЗз Тих Тк БКко РЕо Уві Гео Авродек Аде ослу Бек

Зв5 ЗО з 00

Ре бе Гев вує Бех Ак Гр Тс Уві Ар оБув бек ово Тк осів біо ча за 45 су Ап ув) Біне ех Сув бек Узі Меї Яїв ій Аза Гей Нів Ави Пів 350 125 45

Тук тиж біп бук бек Бей бек фбац бек бен сіу Був «Ох я «Ж112 344 «Вій Бінак «Кіа» щтучна послідеовність

Ей «ФУ3» Повнорозмірний НС УкЕБуюнОЇ «Ор» ва бін Ма) Зів їй Уві 013 Бех Бі Аїа біз Уві Був Бук Рко Біу Бек 1 5 10 ї5

Бек гаі був УВА вет Суй був Ата Бек 015 Тс чех ме Тс Ав отує то 2 за

Тук їі Нів Тер Уві Ако Бій Аза Ркб о с1у біп Бі Бей 03 Ткв Мет біу Туш Ії Дер Бхо Сем Ав біуУу Авротвк Твжх Тук Авп бів Пул вне зо 55 60

Буш піу Ах Уаії Тву ї1е ТЬе Аа Авробій бек тТвх Бек Твх А) Тух 63 то т ВО

Ме біз Пед бек Бех Ме Ако Зеї БО Ав о ТВБк Аза Уві Тук Хук Сув

ЕК Зо 55

Аіа Ако бБіу піу бух вка А1в Меї Авротук Тхробіу бів ОБУ Тк Бей 1090 ВО 119 чаї твх Маі Бек Бех Аіїа Зех Тс о Ггув біу Рхо Зех Уві ВБе Ркоа бец 115 1720 125

Азїв Бко Суз Бех Акоа Вех ТЬс Бак сій Яег ТБк Аза Аівз зе) бі був 130 135 110 їенв о Уаї Ззув АвроТув Ре ВБко біо Бге уві Тах Уві Вехг Ткр о Аша бек т45 15 155 169 сіуУу Аіз пен тп о бат бСіУу Ув) Нів ТВк о Бле хз дів Уа Бе ів бег 155 170 378

Бет пу Пец Тук Вет цей бах Бек Уаї У Тк: Уаді Рко Бах бек дах 155 185 т йез біу Твс Гув ТВг о Тук ТЕ Сув деп Уві Ав» о Чів Гув Бко Бек Двп

Ах 20О 05

ТапгоБуз Уві Вар Був Ах Маї б3ій бех був ТуУк б1іу Рхто Рко Сув го 210 2515 22

Рхо Суш Рко Аза Бко 013 Рбе бів біу йіу Бо бек Уві ВБе Гец РВЕ йо 23 ване тав

Вта Рго Буз Рко Був Аво Тк ої Меб їі бек Ах Тк о рко біз УВУ 245 250 255

Твк оСув Хаі Уві Ма) Ар Уаі Зек біп 010 АхроРко Сьй Хваі піп Рре тео 765 жа

Аезв їж ТУук чаї Ар осі Маі бій Уаї Нів дя» вів БУ ТБк Був РЕо 275 зва зв

Ах спів біб бів Бе Аян о бек Твх о Тук о Дко Ма) Уді ех Уа1ї Бею тнх 5) 235 КІН

Уві йеч Бів б1пз Ар отТер о цеи Ява о біу бух пін Тук Був Суз Пух ха зах 416 З5 о пак одап о буз БЗ1іУу пен Рез Бех мек їв бій пух ТВ тів Жек Був Мій

ЗО ЗО 355

Був БіУу 1й РКО Аа біз Бко Ей Уві Тук ТЕ о бей Рез бро Зек б1й 340 345 ЗО біц біцш Меї ТБ йув Ава 01п Мазі Беж їн ТУ був Бу Уві Гуз біу 355 зЗсо зе5

КБе Тух Бгто Зах АвроїЇе Аза Мві сіб Тер бів бею Ави пі бів Вко

ЯК ЗТ зво січ Аве Аза Тух Пух Тпж Твжх Бгто Бко Уаї рей АвроЗек др 51іУу бет 385 380 зав ос

Ер» Бпе бем о тТук Бек Ахо і-й Тк Уві дав о ге Бех Аке Тер бів ЗБ 405 т 15 пі» Ав) Уді Рне аб Су беж Уві Мек Ні сій Діа цем ів яп; НізЗ ав чих 4130

ТУхХ ТБтг бів бСшв о бех (ей беж Бец беж цем бі Гуз 235 450 ке105 ЗО «еїї» 444 «818з Білеоє «віх Штучна пеосшлідовністі «2205 кваЗх пПбвнорозмірний НС УкВлитноВ «а» сі) Ма бів їбч Уа) йпі0 бек бі ліз біл уУаі Му уз Вке бу І 1 5 19 15

УХек Гео Був їі Зек Су МЦув Су Бек біу Тук бек Рре Твх Ази Тук з те в ТУ я Ки -

тує їі Нів Тюр о Угі Акд бій Мей Бко бі Гуз бі цеч біз Тесв Мей зу 40 45

БіУу Тух тт Авв вхо Гей дви б1іу Аа Тв біб Тек Ав» бів Бук Ве зо Во БО пуз склу щік бві Та Тіз бек Хів Ав о їзуя ек її Беж ТНЕ Алла тух 70 ть во еч ін їхр бах ек цев Був бів зЗек Аво о Твх Аа Мер о бух ТУЄ Су в: 90 з5

Ма Аха БА бу ув до вій Меб Ар отТую Тв о с1у піп ос1уУу Тр Гей

Ми 105 Мо

ЧвВь їх ві пек бек Діва бвк ТВх бує у вхо Бех Ма1ї Вп БЕ Бей 129 125

АтТа Рез Суз бех Ака бак ТаХх бек біц Бек Тих Аза Аья пев біу Су 130 ї35 140 цез хаії бу Авр отТух ре то бій Ркб Уві ТипжЖ баї бек ТЕр ОА бе 5 ї58 їз 165 біУу Аів Пе) Тих Бер ші Маї Нів Тис ве Рхо АбБа Узі Гео бал Бех 165 170 їт ес Біу Мей Тук ет Гей Бест цех Уві Маїі Тих Уві Рюко Бех йес Бек

І80 іче І80 рес піу ТЕЖ бує ТБ оТух ТЕ Сув Ав» Уві АвроНів Був Вке бек Дал тб 59 5 тих Був уві Авр Був йха Уаї ба Бек оцув Тук бБіУ Рхо РЕб Са РКО 1 215 г же бує Ре Аза Ркосо вна із с1У пьу РЕБ ет Уві БНе Бей рРКе ее: 239 745 то

Бкго вхо був ро Буш Вдю Тк Гей Ме ТТ) бек Аху Те рхо ід Ма1 245 йо 25

ТвЕ обу Уві Маї Уві Вар Фа Шеє ОЗО сім АзроБко ЗКо Ма бів БАЗ ав тб дв

Ап отТке тТух Уаї Дар обі чай сій Уві Вів дей біз Був ЖВК Був Вге

Ба 283 Я

Ак пів біз біп Бе дп обех ТнЕ Тух Ахо Уві Уві ех Уаі ес Тву хво 95 300

Уві без Пів Зк Азр о ТкЕр ої Авпоб1Уу ПУ пім Те Був Су БВ Уві за5 З ЗЬ5 Зо мех йзп обу пу цем Бхо ех беб Тіє сій пу Так Ті бек тя Лів 355 330 З35 іГУуш ЩІ бій Ро Аке сій Бко бій ав ТУЮ Тк бем вхо РКО ще сю

Зо 345 350 сіл шпіц Меб Тахо був Ав Мо Мей дек о Пед ТВх Сук із бай Був пІіу 355 Зо 65

Епе Тут Рта бек Азр ІІ Аза Уві Фіз Тур обіб Зехм АзпошіУ бів ко о ат зво пів Ави Аза о тТух буз ТВЕ Тнт руо ко Маії цео Авробеї Або БіУ Бек хх 33 Зх що пе Бе їво ТУЄ Бер оАку Ге) ТВЕ Уаї Вер був бек Ак троп ої ча 430 415 сіу як уаю Бе Бек Су Бас Уаї Меб Ніз біб Іа беу Нів Ай Нів

Ка ЕВ 35

Туює Тпху Біб Бу Бек бем бйеї Бей Вех еп СБіу Був 435 4349 «10» 81 «ВІ1ї» 444 «щій» БілоЕ «кійж ПШтузчзна послідовність «ЯМ «тай пПовнерозмірвий НС УхВвВитнОоВ «або 8 біп Уаї біб їж Уві бін бек Бі Ата 510 Чаї Гув був Бгто піу бек 1 о 16 ї5

Зак Маї Пув Уа1ї бек Сув пуз Аза Бех біу Тух Жех Ріпе Тву Азп о Тує 20 25 за

Тук ІТе Нів Ткр Уаї АкЧ бів Аза Рхо піу бій бі Тез бій ТкроМек щіУу тТук лЛіє Азр Гко Бец Ап Бі1у Ар» ТЕ ТтТвх Тукх Ага піп Був КЕпе

Бо

Стів о Біу Ака баї Тк ої1ів ТВ Аіз Аяробіз Бех Тк бек Тах Аїв тТух 65 70 5 во

Меє бій Бе обек Явет о Пец Ак бек 010 Авроївнж Аза Уві ТУ Тук Сук

Атїа Ато біт бі Був Аку Азіва Мек Авю Тух Ткр о З1іу біпоБІУ Твт бе їо00 105 118

Чаї Тк Уві ВЗек Бех Аїв Зех Тк Бу с1уУ Рко йек Уві Блє Бко Гви 115 179 т25

Аіа Ро Суз бБет вхо бек Тих бек Сі бЗвї ТІ АЗа Аіа Бео ЗРу Сув 130 135 140

Мви Уві Буг АвроТетк Ре Ркс бів Бхо Уві Тахо Маї зех ТЕ оАво ек 145 155 155 іп зі Вів рес Твх Бех піу Маії Ні тТВвж Рре Рхо Аза Узі Гей бБіп бек 155 170 175

Зех біУу ес Тук о Вех Пец бех Бех Маі чаю ТБ; Уві ко бек Бех сек 80 185 180 їез біу Так Був Тис ТУук Тк См Авп о Уаї АвроНів ев о Бо бех яп

Тк опув Маї АвроПУую Аку Чаї сій Бек МПув Тук біу Вк РЕО Суд Ро 715 215 Ж.

Рго Сув вхо Азвз Рко бі Рпе пі піу спі Вго бех Уаю Бпе Тен РБе

З 230 235 240

Рке Рко Гуз хо був АяроТпх цем Меї Ті дек Ахо тах РКО січ Ув3 245 252 258

Таж бує Уві Маї Уа! Азр о Ммаії йек піп бій АвроБго біз Уві бір Вбе 250 205 хто

Ав оТхроТух Уві Авробіу Уві 01 Уві Бі5 Азов Аїа бує Тахо пу Рко 975 во 285

Акч бр обр піб Бе АБ Бех Тнх Тук Ако Уві Уві Ве»ж Уві Ген тах а5и 295 Зоо

Так зем Нів біп Аве оТхр Гей Ави бі Пув Пій Тук о Був о Сув Гук Уві 305 зло 315 320 зех Аяп о Гу біу ем Рко ес бек Тіз біш ГУБ Твх Ті бек Був А1а 325 за зах

Був пі сів ко Ако бі Рко сів Уді Тук Тих Пец Ркоа ркЗ бек 10 345 345 350 бів бій Меб Тв оБуя Аво о бЗіпо Уаї Хек Бе» Твк Су Гей УвР о пув біу 355 збо зв5

Бме Тук Рхо бех Авр о І1е Аза уві Ото Ткро сію Бех Авп Пп1у бів о вко 370 315 80 8іч АвпоАвп о Тут був ТВХ ТП рха ко Мі іев АвробБек Авр о біу бек зи5 50 55 300 ре вне Гем Тук Беж Ака Гео Тс Уві Авр обу бек Ак Тер піп 03 30х ЕК 15

Зі Аво Уаії Ре бек Сув беж Уві Меї Ні сів Аза їн Нів Аяп нів 420 425 430

Тухє Тк бів був Бах Ген бек Гей бек Бе су Був 435 4140 «802 З «ії» 444 «віх» Вівок «815» Штучна поспіль сть «ах «3» Цовноровзмірний НО МкЕВІнланоє «005 55 піз Уві бкп о йей Угі піз ех біу Аза сів Маі Був Буш ЕКО бКМ АХ 1 З 18 15

Хек Уві Гу Ув) Бек пуя Тув Аія дек біу Тук Зек ЕБе ТО Аза Тух 2 у за

Тут Ії Піз Тер Уаі Акоа біп Аіа Рко біу бі біу їецп біо Тер Ме 35 49 45

СТУ Тут Ії Авр о Рко Меп Ави о біу Ав оТвЕ Тахо тую Авпобів був ВА» 0 кВ БО

Му бі1у Аху Ма1ї Тих Мес Тпх Ахо Авр Твх бБес Тпв Бех Тих уві ТУук 65 то 75 во

Ме: бі бе) Яех Бек Без Ах беж 510 Аво Тк Аа Май Тук Тух Сук зо оз

Аїа Аку бі сі у Аку Вів Меє Авротук Тер біу шій бі Твж Їїви 150 105 110 бві Тв» узі бех Бех Дів Бек ТК був п1іу Рус бех Зі Бе Бо Гео 115 129 12

А1а Бко Сув Зех Ах Зв ТвВх дес біб Бех Тк Аза Аїа йем бафу Сук 132 135 ї40 їво Уді Буш АвротТух ББе Рго біз Рко Уа1ї Твх Уві) бас Тго АвпоЗеЕ 145 150 155 ТЕО

О1Уу Аа цей ТвВу бек Сіу Маії Ні Тахо ББе хо Аза Уві іш бів Бек 185 170 1715

Бех біу Гей Тук бек бе бек бек Уаії УМаї Трж Уві Рка бег бек бек їщо 185 130

Бей бі ТВі Ммув ТВх Тук Тк о Сувз Ав Чаї Ар о Нів Був Еко Бех Авл 1935 20 25

Так був Уві вав Був Ак Уві піз Явх бух Тук біу РКО Рхо Су Рко тіпа 1 що ек же важ

Бко Сет о Вко АТа Ехо бій Ве бій бе щіу ко бек о Мщі Бе гена пе 275 239 а й

Вко Вго Був Вха Був АвротТвх їв Меб Г3е бек Ака ТВ о Рго бій Уві 245 о Ж

ТнЕ Сук о баі Уві Уві АвроУді беї біп Бій АвроБко біб уз) бін вне я й «ТО

Ап Тр отух Уві Авои о сау Уві сів Уві Нів Аяп о Аіїа буд ТВг Бе Вко рес 28

Ако бій бій біз Ре Авто йег ТВт Тук Ахо Уаі Уві Зеко Уві бе ТВ 2950 95 ЗО еа1ї їн Нів Сжо двроТтр Мем дви о сіуУ Був П1М Тук їуз Суб ув Маї ха 15 З ЗІй

Зек Авт муж піу Бер Бо ех Бек т1і« бі бпує ТИС їі беж Був Лів

З25 33 335

Гуз сі біп Ехо вх Бій ро бі уві тТук о тТвх Бер Бко Бко Зежх пік

Зо 45 зва піш бію Мет Тахо був би бій Мі баб пем Тит Сув Цеб уві Був ЗКУ в 350 Ба

Ве Тс Еко пек Авр їТе АтТа Уаї сі) Тр бій бет Авп Бі піп ро

Зо БЖ ЗВО сі Аа жи Тук Бук ТЕ ВТК Ро Ркб Маї Бей дяр о Бех дБробіу Хе яще за ве еУ вна вп цей Тух Бек о Ака ійео ТвК Узі Ав о був Бех дДеа Ттв пів Бій 405 410 15 сі Авя уд) Бпе пеж Сув Как Уі Меб Ніж біс Азія Гео Нів Ав Ні 420 425 430

ТуУуж Тр піє БшЖа Бек бе) Зех ев Бех Бей Шіу Буд 435 340 ка» 3 «птіх 444 сита Бідок ча» Штучна послідовність «ие їй» Повнорозмірнний С УхбаоженИ З «до» 953 біч Уа) біб бен о біп бів Зею БЗ1іУу Бо бід Мей Меб Бу Рхо сіу Аїв 1 5 їй 15

Зек Уві Суб ЇТ1е бек Суз Гу Ава бЗех б1у Тук Бех БВе тТБх Ал ТУг 20 о 30 тТук Іі Нів Тр оХаї Аво бій Зег Вів бі Був бек бец біз Ттр о ї18

Зх 40 У сіу Тук ї1е Азр Еко бейп о Дво с1у Ар оТБЕ ТБ о Тук Ав Пій Буз РБе и За 50 ув о зіу Був Аїз тах пен так Уві Авр був бех пет пак твх діа Тук то 75 Во

Мес Аку цей Бех бег бен ТВХ бак Віз Азр обес Аза аз Тух Тук Сув 85 о 5

Аза Ака аіу Бі Пузв Ах дія Мес Азр Тух Ткр о сіу біп біу Твту бек 100 105 10 чаї Трх Маї Бек бах Аїа бек Тпж Ппуя Сі Руо Бех Ха1ї Рв Бко Ге 115 120 125

Аза рко Сув бек дко Бех ЖВЕ дес спі Бех ТЬьт Аза Аїа Цей пу ук 130 135 140

Бе УМаі Буз Авр оТух Рпе го сіб Реб Уаї ТвВх Уаї бек Тк оАвп Бек 145 150 155 150 сіу Віа це тах бек б1іу Уаї Нів Тпт Рпе Рго Аїа Уа) цей біб Зех 1685 і78 175 дет біу Гев Тую Беїг Тео; Беї Беж Уві Уаї ТБж Ууаї Рхо цвк Бек ех іно 1855 і їви фу Тпж ому Тих ТУ Тих Сув Ап Уа) Авор о Ні Б Рхо беж Вв8о 155 280 295

Твх Бу Уа1ї Азр був Ах Уві біц бек Був Тух біу Рт5 Вко Сув Рко жо зії хо ко Сув Бо Аїа Ро біч БВе спів б1у бі РКО Вес Уві вре Бе Ре яв 23 235 тай

Ркто Рко цу Рко Був дар ТИХ Теп Мес її Зех АсЯ Та Рго іч Уві

ТАБ 280 па

Тих Сув МАаї Уаї Уч«і Авроуа) бек осій сіб АвроБхо 5320 баї б5іп вве 260 Кая ТО

Авопотхор о Тух Уаї Авр осі Уаї бі Уві Нів Аз оАфа Був ТВх Дув Руо

Б во 285

Ахо віс біб біп Ре дзпобех тах Тух йгу Маї маї Бех Заії Ген: Тв ага 235 зо

Чаї тем бів піп Аво Тер Бей) Ап о біу уз бід Тех Був Сух Пув Уві

За 310 ЗІ 320

Зех дап Гу п1іу їеви Рез бек бек ТА б10 Бу ТвхХ Ті баї Пув Аза 225 330 235 іїуз бвіу бі вго дка під РКО спів Уві Тук ТвЕк о Гею Рко Ро Бех біл 340 345 350 бім піз Ме ТБк Був Авп бів Уді Зек Пем ТК о Суз Би Уві Ів Бу 355 350 365

Впе Тут РКО бек Аврої1е Бі Умі біз ТЕр обі бЗех Аа обБіу піп Бке то 315 39 ій Авлп АБи ТУЮ Муз ТБЕ ТБх Рхо РгО базі во Авробеак Ар о З)уУ Бе 355 350 55 оо

Впе Рів бе Тук пеб Ака без Тпк Маї АвроБ»ув Веї Ак ТІВ о біп бі 325 410 та сіу Ав Уві вве бек бов Беж Уаії Меї чі піч Кіа Геом МНів Ави Нія реч 425 430

Тут Та б3)іб Був бек оре) бех їжі бек Гей б3уу БУВ 135 440 «вір» За «ві15 «45 каіїій» Білок «13» Втучна послідовна ст» «дай» «КЗ?» Повноровзмірнвий БОС МкЗшиак- НОЇ

«Оп» 98 іп чаї біп Беб бій біб Ре БІ Аза щі йем о Аів Був ре Ему діа 1 5 ії 15

Зак Уві біл Меб пає бує ії Аіз Зет ЗКУ ТУукК Тих РБре твЕ Аво Тук я 45 Зо

ТЕ їіє НівБ ТЕроУа) Бе ШІіІВ ДюЯ Бгто біу Сіп бтУ дев бій ТЕЗ Те 3Е 40 45

С1Уу Тух Тих Азр орто Аху Твк оАво Тує ТвЕ біз Тух дп бій Туз Бле

БТ це во ув Аз» Був Ата ТБ рен Аза дів Ар оАку Зех беж ех їТлу Аїв тує та 5 5 мес Аа Сбесо Бек бек Мей ТВЕ Зекобіз АБр бе Аа Уві Тух Тук Сув ба о та

Ака біу біу Бі1у Ах уаї 01у рез щіу Ту Ткропів Ні Сіу Зеур бех що 105 мо

Ууаї Тих уві дек Зак Аїа пек ТНК мук дію Бгро бек Жак ме Кго Бей

У з 115 120 125 віз го був Бек Ажу бек ТЕ бек обібю Бек То йів Аза пед оску ств о ї35 140

Ген) Уаї Буз АвротТук Ре буе пій рКо Уві ТВБт о Уаї Бах Тр дат ЗХ 145 155 іх 1650 сіу Аій Сей тв Беж собу Уді Дів тах о Бре бе вія Чаї цей бів Зеє 165 170 178

Бек бі Без Тух бЗех Бес бех Зах Уві Уві ТБк Чаї Еко ех Ше Ав

ЧО Ун5 ї850 ле слу ТНК обі Тих ТУК ТИЖ о Сув Аза Уа) Акропів пуд ККОо ек АБИ 185 200 255

Твт огув чаі двроївз Твж о Маї б) вка був Сув Суб Уві бій був Рхо 210 -тї5 го

Втко Сув Екс Аза Бро Бхо чаї Аіва ЗІУ Бго Ветї Маїі Ре Бей рае ро 28 23 235 жо

Ехо Пух Рко Гу АвротТвх Без Меб Тіе Бек Ах Та Рко біш Уві ТВвХ 288 25О 255

Сув таї уаї Уві Авр оМаї Бек Нів Січ АвроБто під аї біп бе Деп 60 285 та тТке отТук Уві Авросту Маї пт Уві Мія АвпоАїа Був Тахо ПУ РЕо ДЕД

ТВ ВО ах сіб бів бій Рпе Аза обех Тк Ріє Ак Уаї Уаї бек о Маі рем тТвх Ув1 чаї Нів біп о АДашр ТК Пе) Ада бі» ув біз ТУук Був Суд Був о Упі Бек 05 310 315 325

Авп о мув СТУ Сец Рко Аза Кко т1іе бі Пуз ТВ Ті бек ПУБ ТиК бук 325 330 315

Піу піп Бго Ака бій Ре Біо Маї Тух Твх Бена Бко Біо Звї Ахо 31 з3а 345 350

Яра Меб ТБЕ Був Аяпт шБіпз Уві беж Гео ТнхУ Ств ів о Мді Був біу Ре 355 360 355 тТух Еко чех Авр І1в дід Уаі З Тр оСіш йек Авпосб1іу біп о вВко 51

З'д 375 зво

Ап Ап о Тук Гув Тис ТВкЕ о БЕо Ро Меї ово Аво» Беї Авробіу вк Рене 390 395 що

Ре їі Тук бек о Пув Беп Трє Узі Ар о цув Вех Ага Тхробіп біп біу 405 410 415

Ап оуаї Ре беж Сув бБеїт Уаї Мебє Ні біб Абе пе Нів Азо Нів Тує 35 а 430

ТВЕ бів Буя бек Гей бех Бей бек Рко біу цув 435 лад «ЛП ЗВ «1 444 «Вій» Білок «213» Штучна лослідсвністи «Ох

«8232 Повнорозмірний НС УхблчЧанОб «ОО» 85 біб Уаї біб рей Увь обів бех біУу Вів бій Мав був Будз Вко бпту Аква і 5 15 15

Зеї Узі Пув Маі Шех Сув Був Аз бек сбіу Тук бек РНе ТВх Ава Тук 2о 25 30

ТУук ІТ біз Ткр Уві Акта Піо Аїв Ро 01у сіп бі Пео с ТкроМмеє де п х щ 35 о 45 су тТУХ ІТіє Авр орко Пеб Лапозіу АвзротТву ТпЕ Тук Ашп біз Був Реве

Б5о

Туз 51у Ако Ма) Трк Меї Тих Аха АвроїнНк бек ТБк бек ТлЕ Уві Тук 5 70 15 о

Мет бій без; бек бех Без Ака Бек піч АвБр оТВх Ав Уві Тук Тух Сув

НУ зо о

Аїа Ач Зі бу Буш Ахо Аза Меб АБЮ о ТУук тер о біу піп бім ТБк Гей бо 105 10

Уві Тк ув) Зег бат Аїз Бех ТВ оГув бім Рро Зек Удав Ре Ехо Меч 115 125 125

Азка Ро Су бек Ах Бех Тв Бек бій бек Твх Аіа А18 Гей біу Сув 130 135 146 їеи о Маї був Авр о Туг Рие Рко бій Вго Уді Тйх Заї Бех Тер Авп бек 145 ТО 155 155 сіу вів Мво ТВх Бех пьу Уві Ніж Твх Бе РЕО Аза Уві їем бів бес 165 170 175

Шек о б1у Тжн: Тук Бех Бец ес ВЗек Уаї Чаї ТЬх Уаї рко беї Зажх Ав 180 185 180

Бе сіу ТБЕ біп Тато Тук тах Сув Азп Уаї Ар о Нів Був Рко Бех Ат 155 Кен ОВ

То Гуз Маї АвроБув Тв Уві бій ДгчЧ був Су Сх Уві Січ Сув Бо ід 215 ра:

Бксо Сув Вко Аіа Рко Рго Уві Аза спіу бо беї Уаї РБе Гео Бл ро 225 230 235 чо

Ркго ру Рко Бу др ТПк їжи Мес 12 бек дка Твх РБхо бїв Уві ТвЕ -45 ЗО вано

Суз Уаї Уа)! Уаії Аз о Уаї бет Ні б13 Авр орто біз Маі біп ерпе дп 200 265 270

Ттр о ТуУукх Уаі Авробіу Чаї Бій Уа. Ніз Авав Аза Мув ТВ був о гхо да 275 -86 288 біш пі» біп Ре Азвп обек ТАх ре АкЯ За1ї Ууаї бек Уві Пец ТБж Уаї 250 255 зо

Уві нів біп Азр Тхр о ієо Авп сіуУ Був бід Тук бує Сув Був Уа1 цех за ЕІ ЗіБ 520

Авпобпув біу еп Бко Азія Рко ї1їе біб Був Тк І1іє Чех Гуз ТрЕ Був

Зв 330 335 спіу шШіп ко Ака біш Бко бів уві Тухк ТНК Гео хо РКО бек Ака пі

ЗО 345 з59 іш Меї Тпг Туз оАвп оЗійп Уаі Зеак Пец твЕ о Сув їм Уві Бук щі Ре 355 360 з4е

Тук Ртс Бех Авир ої1е дід чаї біз Ткр обі) Бех Азпобіу СІ Бхо бір зта 375 зно

Авп Ада ТУухХ Був Так ТВкЕ о Рео Рко Меб ех Азр» бек Авр Зіу Зех ле 385 390 355 400

Бе пен Тухк бек Ппув Бред Тк Узі Авр оБуз Зек Ака Тур пів пів щу 405 416 415

АДлв Уві Ре дак о Сув йех Уаї Меє Нів бій АвТа Без Ні АвпоНія тех 4120 45 430

ТВЕ біл Пув обБех іїієцп Бек Без) Век Рго Б1Уу ПУБ 435 340 «10» 96 «21ї» 443 «Вій» Жінок «218» Щтучна послідовність

«Квт «хе3з Повворовзмірний НС МхбЗБбнанОї «ау» ЗЕ біп Уаї біз Гей Уві бО31йб яеї БіУ Ат шБІіч уаї Був Був Бко ОКУ бек 1 5 то 15

Шек УЗЮ Буз чаї Ше бух Му Аза ББЖ біу Тук Шет Ре ТЕЖ Аз Ту го 25 за їУух Тіз» Нія Ткр чаї Ахо біп Аза Рео с1іу бій біу Па іч Ткр о Мех 35 49 15

Сіу Тук Ії Авр Ро цем Аяп Б1У АвротвЕ Тк о тТук Ай бій Був РБе за хо Бо ів Біу Ака Уві Тих ІТе ЖТБк Аза Авробім Бех Тахо бех Твг Аза Тур

БЕ 70 75 55

Меб бів ем о бжк бек їв Ага бек бід Ар оТБх Аза Чак о тТух Тук Суз

Зо 95

Аза вкч біу піУ тв Аг Аза Ме бяр о Тук Ткр обту біб обі Таж ей ї19а та 110

Уві Тк таз Зет Бек о віа Бех ТВр оГуя бі Бус шек Ма РБе Бхб рес 175 ТО іх

Аїа Кко Сув Бек дра бек Трк дек Сі) Бек Тит Віва Афа їео біу Сув 135 ЗЕ 145 їи Уві Був АвротТуУуК Бпе Рро бій Бго Уаі1і Тк Уді ЯЧег Ткродзп бек 150 153 1655 51» А1іа цей Тк ойек б3)у Уві Нів Тпу Рре Бхб Аїд Маї Це) бів Зех 155 170 175 зах бі Пем Тух Бех Беб Вех бех Уві Заї Тих Уаіїі Ркб бехї бах Ав 180 155 Іо

Бле 0ЇІУ То біп Так оТук ТрЕ Сув Авпв оМаі АвроНів Був Ро бек Ав 185 ОО 205

Тіт Пув Уві Авр обу Тих Маї сій вра Був Сув Суз Уаї біз Сук Бко 210 215 ло ва Суб Біо АМза Рко РКО Уві Азія 51 Рхо бе Ма Ре Бен РН вка 225 «30 235 540

Во Був ко рев Авро тих бец Меж Ії бер Аху Тк Бко біз Уві Ту

Рак 25 аа сув узі Уаї Уві Аве Уві Бек Нів бій Авкор оБго бір Уві бів Ре Авт 250 В й

ТЕЮ ОТУх Узі Авробі баї сі ав піз Ава Аза Був ТВХ Мув хо Ако аа яко не ів Сі стій пе Авподес Тл вне Ако Уві Маї зеж Чаї ей тнє УВУ 230 85 зас

Маї Нів бій АвротТкр опе дна о бфу Без БРи Тук Був о Суа Був УВА беж

Зпх 315 ьо ЗИ

Авт був обі Меац о Рез Аза Бко 118 біб Муз Твх Тіз бах пуз ЖнЕ Бра 325 3530 338 бі бій Рко Аку бін Бко піб Уві Тух Тс Бей ко Бо бек йха 52 з40 345 50 сіє Мебє тах бує Авпосів МВ Зеж рей ТвЕ о Суз Ббепа о ба1і Був о біу РБе

З збі 355

Тут Бжко ек Ар оТлів віч бві сіб о тТжв о ші) ех Ай біУ Бій Бо с то я КІВ.

Авп о Азо ТУух пу Тк тиж жо РкЕОо Моб Гео АБЮ беж дво о спіУу ех вве

За 390 395 чо

ЕБе Бей Тук бех був Бем ТпхІ Хаї Авр Буз бек Ака Тер біб бів Бу 405 10 15

Ап очМаї бе Чек Сув о бБеї уаї Мек о Ніа бі Аза їшеа Ньв дей Нів Тук 420 455 430 тТБж бій пув вах ви бек рай бех вБко о Б5іу Був 435 340 «вій» 57 «511» 453

«Вій» Білок «ВІ ШтуУуУчна впаслідовиоте «ий» «в23» Повнорозмірний НС УивпоНОВ «00» 97 бів Уаї бій Бевз уві сій бек біу Азіз Бій Уа) ру Був Рг З1У бі 1 З 15 15

Зак їй Кпув Ті1о Бехт Сув Був Біу бек 01у тую Бек РНе ТБ оАви Тух а 25 Зо тут І1е Нів Ткр Узі Ах бів Меб вхо б1у Гуз Біу пез бій Тер Мет

Зх 48 35 сіу стух Ге Аврорко рей Авпоб1іу Авр о ТВх о тТЬЕ о Тук Авп сп о Мув Ре 50 55 Бо

Гув Біх б)? Уві Тбк Їїе Бех Аза Авр оБуз Зех 118 5Зву Таж Аза Ту та ТЗ по

Беца бів Тур обек бек ря) Бе йій йех дБротипг Азз Меж Тук ТУ Сує

Аза Ака сію бБіу ГУх Ах Аіа Меї йБю Тух Ттр бі бі» біу Тр оГев 100 105 110

Чаї Тнж Уа) Бех бХет Аза бек Тих Муз Шбіу БРго бек Маї Рре РБке Цен 115 14 185

Аіїа Рко Сув бЗет Аха дек Тс бек 0100 бехт ТВх Аза Аза Гео сту Сув 155 135 уча їм уві Бух двроТух Бе Рко біо Бо Уа) Твт Уді бетг Тер Ав Бех 145 150 155 БО піу Аїва Лев тТВху бек пім Уаї Пів Тк о Ра бго А)з Уві цез пі» дв та5 170 175

Звк піУу Бей Тук Бех Гей бек бБег УуУаї баї Тк Уві Ррос бек Берг Авп 159 1й5 190

Рпе бі Тв о йіп Тпж Тух ТВ Сув о дАвп о Уа)ї барв оНів був Бко дек Ав 195 200 05

Тв цЦув уві АвЕр Гук ТВ ЗВі біо Ах був Сув Сув ві пів Сум Ро жів ІЗ ке вка був рко Діа Еко бро уві Аза пі» вк обер аї вв ре» Риш БРтЄ й З 35 шяа

Еко цуЗ Рко Пув Ар о Тк Бзво Меї Ті бек Ага Тпк о РІ січ Уві Тех 245 250 еВ

Сув У Уві Уві Авроуаї Мек Нія бїо0 Авробго 010 Маї бів Рае Авп зо ек ЕТО

Тхювогтує уаії Ля Є1у Маї біз Уві Нів Аваи Аза Був Тв о Бух РКО Ак

Бик що НЕ іч 010 бів Бме Аво пек Теж Ре дто УаЗ Уві бе Ха3і Гео ЖЕ Уві

Уві Ніз бі Азвр Тер їец Аз ЗЬу пу сів отую ув о сСув бук зві Вехг

З95 ЗІ зії зви

Ав Оу. сіу Бі то Аза Бка ї1є 01 Був ТЕ Те беу Буш тах о пув

ОВ 338 335 біу бій БРго Аха бін Бе пів уві Тук Трт рев Бе ро бек Ака 01 за 245 355 бі Меб Тв був Аза бів Уві бек їжи Тк оСувз Без Уві Був СБУ ВБе 425 60 365

ТЕ Бо ет двр 115 Аза Уві біз ТЕросі) Бех Авп обіу 5во о Вхб бій

ЗУ 375 350

Ав ДАЕ ТУк Пув ТНЕ ТНК РІВ Рг о Меб рем о АБю Бех Ар обі баб Ре

ЗУ З 35 в те іви Тук беж цув Бво ТТН Уві Ахр Бу бек Ав Ткросів ЗМ бу 425 с 11

Ав о Уаз Ре бек о Суз бек Уві Меї Піза 030 Аів пцем Ні Дяк нів Жук йо за 13 їни кіз Бу БеК Бей дех бев Бек о рЕс ТУ Був 415 440

«й» 88 «1 445 «йі2х Білок «813 Шуручна послідоввість «вах сЕй3» Повноразмірний С МебнотниУ «апа» 8 бій Заі бів їжи Уві біб бек біУу АтТа сій УЗзЬ був Був Бко біу Щек 1 5 10 15

Бех уві Пух Уві дет Су Був Діа чек пі Тух бек Бе ТБк о Аво ТУух 28 25 за

ТжЕ Т1е Вів ТЕрБоба1і Ахоа бів Айзз Вто біт піп бр дво бів Тер Мех

З1уУу тТук ті бар Рко Бео йспобіу Длр о тає ТВ Тук Аїв біт бух Ро бів бі Аха Уві Ти їїе ТБ Аза Авросів бес ТвЕ хет Твк Аза тує

Б 70 та по

Меї би їжи Бей Мек ев Ака Зак біч Ав отТвх АТа Ук тую ТУук Суз не Зо 5 діа Аху Ок Бі був о Ако із Мех АввоТує ТКр обу віп оіУ Тис ву 100 198 То

Ууаї ТвВк уаї Бех Бек А1їа Чек тик оГув біу Бра Бек Уа) Ре Бко без 115 150 125

А1із Без Стя бех Аху ех Так Зекх бій бек Твх дів дів Без бі Суз 130 ї35 146 їм Уаї Був Взр Тут БвВе Бко біо Бо Уві Тпх узі Зах Тур дей бек 145 і50 Т55 150 сі Аза ге Тих Бек бту баї нів ту Бе бко Віа аж пео бій Зег 165 ї7О Ж75

Бек бі їв Тух Щек Пем бек бек Уві Маї Тпг ові Рко бек Же. Авт тво 185 їв

Ве сіу Твж Сів Тв Тут Тв о Сув АвпоУаї Дяю ів Був Ро бек Анд 1955 200 за

Тих Був Уа йев мук Так Уаї Бій АрЯя був Суб Сув Учі 01й Сув БЕе їй 1 КІВІ вто Суб Рко Дія бро Бро ві АЗіа спі Ро Бех Ма1ї Ве їжа ББе ово 225 Ж 235 240 хо душ Рко Гу Аве о Тйх дей МеЄ Ті зе Ако ТвВу Бк ба уві Те 235 ро: 255 шує Чві Маї Уві) Авр Уві Веб Чів 14 дер обо біб Маї бій рве Авп 260 255 2 тТтв о тТук Уві Азр пі таї 510 чаї Ніз дяп АТа уз ТИХ цув Ехо Ах ра 28о. 285 пів бів б рае дай беж Тк впе Ако Заї Уві беж Уж Мец ТЕ ха 290 я5 зо "ві нів біп ово Тхробец яп обі» Буд 010 Тек Був Сув Був Маї бек ї У Оу Ь У У У 305 зЗІВ 315 Зо

Ави Пув біу їем Рхо Аїв бро Ї1фе оби Пув Тк бів Бек Був ТЕ Муз з 330 33

СіУ біп го дка біб Ро Прп оУві ТУух Тв ве БЕо РЕ шШек Аа си зай 345 ВО бі Мей тТвх Був дБ сій Уві дек їх ТВх Суд їец Уєї Мцув МУ ВК 355 Зо ЗЕ5

Тук ко Бах Ахр Тіз Аїва баїі біз Тхоб бій бех Аза БЕУ пів БкОо 610 то 35 зво

Ав ойек Тут рБуз Трт ТВЕ РБко ко Ме Гей АБр обек Авр о бЬе беж Бпе 385 З50 Ух дай вве Беж тТух беж Мує Мей ТВЕ Уаї Авроїув вс Аву Тр Сто бів біу що 410 315 дви Ужі Ве Чек був беж Ууваі Меб Ніж сій йів Геюв Ні Ав нів жує 26 425 АЗО

ТтТвеодій Був беж іо бек Бей Зах ке лу ГУув

Ай

«вій 5 «ві Зав «вів Білок «213» Штучна послідовність «же» «ваз Бс-ї504 ВЕ людини каих ав

Аїа Зет ТаАх мув Сі Бо бек Уві Бве Бго Бец Аза Рко був бваЕ АкО 1 5 їо їх

Ве ЖЕ Бех 010 деж ТЕ Аза вів ей бі сСув Меб аб був АвеоОтук о га за вна око біз Рей Уві ТЕ Маії леї Тер Ав Бек біуУу Атїа Бей ТБх свЕ

БК о 45 сім Уаї Ні ТВк Бе Ро Аїа Уві Пец біп Бех бек біу Іво Тух Бек 5 0 ї-ви оЖек о бдех баї Усі Тк о Маї Руо Зех Зек беж во біу Тк буя Тпх 7 75 о

Тує Таж Сук АЛяв о Заії Аюр Вів Гу Ра бек Дал ТВх Був Уві АвроБуз з5 чо ЗЕ

Аг уаї біц бек був ТУухХ Щі БЕКОо Рко Суб хз рРко Сув вхо діа Бо 100 105 110 біз ве бін біу су Еко бвт Уаї Ре Ме ВБе Ре Бгто уз Бго бух 115 120 125

Авротах їво Меїх Ії Бех Ако ТВ Бко бі Маї Тв Сеуз Мав бах жі 1530 135 14

Вар оУаі бах бій й1о0 Авро ро 1 бз1і бій РБе дей ТЕр о Тує Чаї Аве 1х5 150 155 150 пі Ущі пів Уві бів Ап о Аіз Му ТНК Був Ре ага бів шо піз Ре 155 170 175

Ада обек ТВх ТУК ОАхо Чаї Уві бе Уві ем ТтТву Хі Беи ів пі йар 180 ї85 152

Тур ем дв осіу Був біс Жух ув Суз пу Уаї Бек Ав Був бі ей 195 20а ОВ

Рко Бек бек 1125 бій Буш ТВж Т1іє бох Буз Аів уз біу біп Ркго Ако 210 ЕВ й

Ста РК бій Уаї ТУХ ЖАХ Бей Рго Рко Бех біт бів Ба Ме ТВ Буш 225 28 ша о взпобіп Маї беж Бей Тв Сув тб Уві Туз 51У Ре Тук ро вк Авр 245 ай пе їЇзв Вів Маї Зі Тез обіч бек Авп о біу бій Бо 510 Ав ода о Тук о Гув 250 пе 27

Тв їпе Бко рРко уві бец двр беж Авр опіу дек Рає рре Без ТУх Бех ре Ву 285

Агч їіви ТВ Узі Авроїує Бех Аха Тгробіп їв пі АвпоУві Бе бех 290 2595 00

Суз Бех Уаї Меї нів піп Ата їеОо НІВ Ав піз Ту Тех сій дув век 395 Зо 35 320 їн бек без Бек ей б1у

ЗЕ

«210 100 «11» 2143 «ка» Ббілоє «33» Штучна поспідовність «ТУ» сих Пповнореовмірний Б УХЕшегі «по» то0

Авво їі бій Меб Тпх со Твк Жнк Зех Зах їйи Щек Аза ВЕ Гей біжх ія З їо 15

АзроАкб Уаі таж ті ек був вка Аів бех со1п Ав ї1е дет дво отук ві В 30

Тео Аз Ткр о Тух біп біп обу Кхо Авробіу Твх УМаї був Мей без Їїе о 45

Тут Тук ТЕ Бек Ак їви Ту Мес сіу Уві Бхо бек два Рне Чек о бту 0 ХВ во бек біб бехк бі Між Ар оТеє дер сей ТВ Т1е бех Азво без 0310 біо 655 т 75 що сів Авв 112 Ала ТЕ Туєк Бе Сув іп обіп бі Аа ТВх Без Бго бр щ Зх

Тк вра біУу шіу бу тах Ду бев бі: їїе Був АжУ ТБ Маїф вів Аа 190 105 110

Рго Бех Уві Ре Лів РБе ВБро ко Бех йвр о біз бів беб Бу Зек соїу

ТЕЗ 1720 125

Ті: дів Явж Уві Заї СУБ Без цем Ап Аза Бе Тух ро Ахо 010 Дів 12 155 142

Буя Узі піз Ттробув уні АзроАвт дів би бів Бек піу Два Чек бі 145 150 ї55 ї65о

Січ бех Маї тТнх бйзів бій Авробес був Авро Бек Твах Ту бех бен бех 165 179 175

Зех Рг дач Тих Мео ех їв Аба вро тух піп Був Ні Був Уаі ох 153 188 1330

Вів Сув 21Я уві тТвЖ нія бій біу беб Бек Зех Рео Уві ТвЕ бух Бех 195 г20о 05

Ре Адп дж бі Бі Суз 218 «ВО» 0 «2112 719 «вій» Білок «213» Прручна послідовність ка ч тезах Повноревзміюний Ухатишеєеюкавеьої «вп

Аворо Маї Ген Межє Тахо бів Тих Бхо пек бек пеб Бко Уві дДвпоБбемз ПТУ їх 8 18 15 дар сів Аза бех Т1іє Бех Цув йка Чег о Ака бів Бек їі уві іє ТвЕ

Ка: 25 за

Авп о піу бвп о тТвАх тус пез Біу Ткр о Бе без обіп бук Рко сіу Їж дех ха 15

Бто Був Пец без ї1е ТУук Гуз Уві Зек Авв о Ако Бе Зежх Біу Маї РкЕз зо же во

Аяр Ака Бе Бах біу бек зіу Бех Б5іу Тпх Азр оЗйе ТКх Гей ТЕ Тів та Що ЗО

Зех Ако Маї біз Аїа піц Авроїей піу Уві Тук Тук Сув Рае біп 535 з5 Зо а5 бех Нів Уаї Ро Тук ТП Ре б1у бі пі ТБ Був ів біб 318 Бук 100 105 110

Аха вів авзроАїва Аїа бо Теж Уаї Бех Ті Бе Вро вхо МекоМех ОТ 115 125 125 біз Іво Тк обех Біу біу АвБа Таж За) Маї Су Ре Узі Аво Авт БКе 130 15 142

Тут Рко Ака Авр о їїв ех Уві Був Тюр був їів Ану шБіУ Бек 035 іп 135 159 135 150 дхч АЮ Зіу Уві ї2о Азр Зах Уві Тв Азробійп Аяр Зех Ббуя АвроБбек ів5 175 175

Тих Тук бак Ме Яес Зевс ТОс о іею Веб цем Тк Був Маї бій Тух бі 130 185 130

Ага Нів Депо обец Тут Тк оСув Біб Уаі Уві Нів Гуз Тв»х бех Бех Бех 1955 220 245

Вкго чаї Уа! Був бБетї Ре Дяп Ак Ап о біц Сув 219 215 к«и1ї0з 105 «5115 846 «Вій» Білок «13» Штучна послідовність «Ох «аа Повнорозмірний Ухаштокткасїної «4002 107 сій чаї бій без сію щі Бек ПТУ Бко 010 Пеб Уві Був ке» б1У А1та

Мк їх ІН г пе ж - А чо бек Маї Був Меб бек Сув Суд Аза бек су Туюк ТЕ Ра ТБЕ Аа Тек та З 30 уаї тТіє Нія Тгр Уаї Був Ах Акач го біж іп бЕу ем бів Тгю Ї1їе 35 о 45 сіу Тук Ії бух БРко Тух Аве Авробі Ті Пец тУхХ Ав бів бу Рпе 50 а о

Був Біу Пує Азїн Тв Ма ТвУ Бек АБропух бек обех Бас ВХ діє ТУХ 653 7о 75 о

Мас Ар о бемМ Чек о бек Бей Тахо Зея сіб Авробек Вів Чаї Тух Тук сСув зо 5

Так Ага бБіу 01у Тук ТУЮ Уві Ехо Авр о ТуУук ТЕВ Щ1ІУ бід іє ТБху Ток іо 105 М15 їеа Тк о Уаї бек Жехє Аіва Ака Тв ТЕ ліва ко бек Маї Тух ро Мей 115 120 їх8 чаї Ехо Біу був бЗес біу Тнх 5Зек З1у зе опер Уаї ТЕ Бей біу СУБ ї3о0 іїі35 149

Мво уз бук сбіу тую Рбе Ро 51 вхо УЗі Так оУві Був Тур Ввпобеє 135 БО з55 ї1БО піУу Аза Пер бек Чек сім Ма1ї Нів Тех Ре бує Аза маї Зем бів бе їа5 170 175 бСіу без Тух ТвВк цем бек беж Бех Уді Тк Укі Еко Бех Яег ТБЕ Тгр їво тн5 та веж бек бів ТЕ Чаї Та оСув бех Уаї Аза Пів Рто Аба ТрЕ був бе 155 о 205

Ави ота їі реє дез І1е сіб Бо вхо ДгУ вхо Буд вхо дже Ро Же 210 215 2758

Тих йвроїіе Сув бек був Авкр о АвроДвп їні біу Агоу Бко бех Уві Ре йо ай 235 чо

Тіє ВБа рЕоО бго Муз Бко Вуз Авр 112 Бем Ме Трє Твх Меш Таж БЕб

АБ 3 ай ув ча тн Суз УЗ Ма) хЗаї дер Уві ех бів Яри піз хе АБО Уа 20 65 78 пів Бе беж Ткробве Уа) Ар дяп Ул1і Аву Уві Ре ТЕ Діва біт ТВе бів Бкео Ні а Сі 14 Сем Аз бі ТБ Ре Дко чаі Зві ех ТТ їні Ні тів Іа Нів бій дяр Тр оМеї Явк БУ Був бій Бе був Сув

За Зо 315 кВ

КБуз УВІ Ап Ач ту вйВр мезо Ртб Бек о Бко Ї16 ба пу ТВЖ т11е Бех

За 330 ЗАВ зув Еко Ах біх Бу вій йку ТЕ Ро біп о Маї Ту Твг ї1їе Бхо БХо5 зай З4х з5а

Бго дка бій піз Мак дек Бов дер о був Уві бек рев Так Сує Мек Уві 55 36 362

ТвВЕх бек вве Тує Во Аза бек Ті Бек У«ї 010 Тко б1в де дви о щіу зо Зх вже сій цей біс 5іпоАврвоТук Був Ав Так рей Бко та1ї цею Хр о Бех ля 85 З зай асо сіз Бех Тух РБе гей Тух хек Бу вВбм бек та) АБе о їТнх Ар оБбех Тер ча 415

Мек Ака сіу Авор ої3Зе Тух Трх був бек У) Уві Нів бій дія Бец Ків ї2о 425 30

Авип оНів Ніз Тв бій БУ Авп о цез бек джу Бех Бгто Б1у Був 435 то 445 «ва ОЗ «пі хіб «В18У пілох «13» Штучна порладевнаксть. «ях «ч«йш3» ПовзнорозмірнняЯя Укатшик-кавоої «м» 105

Аво Уві Ге Ме Тве Бій Те Рго цей беж цех Бко Чаї дя-т пей бу 4 й 10 15

Азр пів Аза Зег о Тіє дев о Сух Ага беї Ака бій обБех Т1е Уаі Ні ТБх 2 25 За

АввосьУ Ява Твк ТУЮ рем оєлу ТкроБне Бей бів» Суж Бко бБіуУу Бій бег а 45

Рхо Був ів Бей Піе ТуУук Був ні беж Авай Аку ие Яеву сі» Уа рт

З 55 що

Ав вхо Рпе бек ші йек Сім Шеж сіу Тих АвБ ові Жнк зез ТНК Ті

Бк КЕ та во

Бек Ак Уві бів Аза Сів Авроїам о БіУ Уві Тує Ту бух Бе бів сбіУу вх во 55 дек Нів Маї Ехо Тук Тих Ве спі» бпіу 35 ТЕ бує ва піч Ге Беж 100 105 їта

Аху взроБко Уві Аїв Рхо тик Уа) цем ті РБа Бке Ркб Віа Аза авр 115 Її і55 сів Маї Аза ТпЕ піуУ їж Ма1ї ТЕЖ Тіз Уді Суб бві Віа Авт Бе ТУК 136 135 140 їйе Бхо Дер уяї Тйроуаї Тв отТкробіз баї дер об1у Тк Тк бів ТВЕ 145 ї50 155 тво

ТвкЕ о бім ЇїТе біо Або Бех Був ТЕ Еко бій Авй Беж Аза БЮ СУує ТЕ ї55 75 ї75

Тух Авп опе) бек ех Тахо Без ТЕ Мем ТИЖ Бес ТОК бій Теж деп бе іо 185 50 нів Був біо Тух тни Су Був уві Тк бій б) ТВЕ ТЕ бек Уаі Чаї 1955 200 ОВ 5іл Бех ЕБе Аля Ак б1Уу Дар Сув 21 215 «10» 104 «г1їз 445 «каш Білок «ІВ Штучна послідовність

«Ей «вах Повнореозмірний УхАикесавної «400» 104 бід Маї біп цем бБіп бій бек СІ Рко Сіо їебз Уві Був Бро бу Аза ї ІЯ 19 18 дех УМаї Був Меб беж СУ оф Аза бек ойіб Тук Тк Бе ТпХ ДЕй ТУЮ 15 Зо

Уа жі Нія Тхр Уві був Вк йка Рхо бі бів бтУу Гев БІ їбжр 118 сі Тух Її ТУк бхо Тух Ази Авр о пЬу Фів бем о тТУує ап Біо Був Вре ві З5 БО цу сіу Бу Аїв ТрЕ Маї тих Бех дзр Гуз Бех цею Дек ТЯх Аа Тук

Б то 75 й

Мес вер оїєц бек бек ма Трж Беж осів Ажробех Ада о Маї Ту ТК о Суя 85 й; 85

ТЕХ ва бБіу Сіу Тує Тує уаї Ро йзротує Тер о біу біп бі Тож ТвЕ що 105 шо ей Ту Зах Бех Зв щу сію РгО Був дів Ехо йзк ові ра Бжео 115 150 195

Аз Рхо Сув Сув П1у Авр Тс оБто Зех бег Твк Уа1ї Твк Тез ЗУ Сув 150 135 149

Бен оуаї Був сі тТух їжи Вжко біш РКО Увї Тр оаі Ти ТВ Ав беу 145 150 155 т60 бі» ТвВс їз ТБЖОАзВ о боу Уві Ахщ Тих Бве Рго Бех Са дк дія Бе 185 178 1ї175 шк сі» їви Ту еко Гво бехтобек Уві Уаї Беж Улі Тк Бек бек йетг 180 185 1552 біп Рко баї Тк оСує Аве Уві Аіа Нів Бо Дів Жих Де ТМ Муз Уві) 195 200 205

Ач обу Тк Уді Аза Ехо бек Тих Сув Зех зу рко бе бує ро рКо меч: 215 жо

Вко піц бе) оїбев сл» балу ро хек Узі Рпе Тіе Різ Бо ко Був РЕО муз Аве ТцкЕ ев Меї ЇЇ8 беє Ага ТБ во біс уаї БЕ Сув Уві Уве у ЗО 255

УаЬ Авш уаї ех Бій Авродав хо 13 тТаї бів вне тТвЕ був о тТух ї1в

БО ге5 ато

Ав ДЕР бів 010 УВІ Ах ТВ Аіз Асо Вко Рко цей Ак пів бів бій я ВО 25.

Рре Авп бег Тв ІїІ1їє Ака Уді Ма) Бек Ти Гей рка їзіве Аба Нія бів

ВО еВя зи0

Ар отжтробви Аху 1Уу бух БІО Бпе суб Сух мув Уві піз йзй був одіа

Зп З1о БУ ва)

Шцец РЕ Аза Вке ле бів Був ТИХ Те бек бує Лів лк ру бій БЕ»

Зо 230 335 цей бій Рхз був Уві Тук Твх Має бшіу Боб Бкро Дкд бій бій без Зак зо 345 Зо бек Актоцек Уві бег рем ТК обСув Меб 118 Авт Сіу Ба Тук бхо цер

ЗБЕ зро ЗБ

Авроїів дек уві пів Бквобін руз АвпопуУу Мув іа бін Ар Авт Тук 370 5 зва

Бук тТвх ТВе о Бко ліз Чаї Без Ар бек Авроб1іуУ беж Жух Бе Бен тує зЗв5 зав 385 00

Чех цув пев Беж Уві бо ТБ бет сл Те б1ій Аа біу дав чі вне

ТВ Суз Зех Уві Меї Нія 51: Аіз Без Ні Аво Нів Тук ТВж біб ув о го 430

Бек її6 Бек Аке Беє БубБ сту Пув

Claims

55 440 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, здатні зв'язуватися з СО47, при цьому антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містить комбінацію з варіабельного домену важкого ланцюга (УН) і варіабельного домену легкого ланцюга (МІ), де комбінація вибрана із групи, що складається з: () МнН-домену, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО:38, та Мі -домену, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:51;

(її) МН-домену, який містить амінокислотну послідовність під 5БЕО ІЮ МО:39, та МІ -домену, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:51; (ії) МН-домену, який містить амінокислотну послідовність під зЗЕО ІЮ МО:40, та Мі -домену, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:51; (м) МН-домену, який містить амінокислотну послідовність під БЕО ІЮ МО:З6, та Мі -домену, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:52; (м) МН-домену, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕС ІЮ МО:38, і МІ -домену, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:52; (мі) МН-домену, який містить амінокислотну послідовність під хЕО ІЮ МО:39, і МІ -домену, який містить амінокислотну послідовність під зЗЕО ІЮ МО:52; і (мії) МН-домену, який містить амінокислотну послідовність під БЕО ІЮ МО:40, і МІ -домену, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:52.

2. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, який містить щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, вибрані із групи, що складається з: () важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під 5Е0О ІЮ МО:80, та легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:73; (ї) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮ МО:81, та легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮ МО:73; (ії) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:87, та легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮ МО:73; (м) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮ МО:79, та легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зФЕО ІЮ МО:70; (м) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮ МО:80, та легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮ МО:70; (м) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮ МО:81, та легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЗЕО ІЮ МО:70; і (мі) важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО:87, та легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність під зЗЕО ІЮ МО:70. Зо 3. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1 або 2, що являє собою химерне або гуманізоване антитіло, або при цьому моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент перехресно реагує з гомологами СО47 одного або декількох видів.

4. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, що містить комбінацію із СОМК1 варіабельного домену важкого ланцюга (НСОКІ), СОК2 варіабельного домену важкого ланцюга (НСОК2), СОКЗ варіабельного домену важкого ланцюга (НСОКЗ), СОКІ1 варіабельного домену легкого ланцюга (СОМК1), СОМК2 варіабельного домену легкого ланцюга (СОК2) та СОКЗ варіабельного домену легкого ланцюга (СОМЗ3), де НСОКІ1 містить ЗЕО Ір МО:3, НСОКО містить 5ЕО ІЮ МО:6, НСОКЗ містить 5ЕО ІЮ МО:10, І СОКІ1 містить ЗЕ ІО МО:14, І СОКО містить ЗЕО ІЮ МО:17 ії СОКЗ містить ЗЕО ІЮ МО:18.

5. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-4, де моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент не зв'язується з еритроцитами людини (ПКВС).

б. Фармацевтична композиція, яка містить указане моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким із пп. 1-5 і фармацевтично або фізіологічно прийнятний носій, розріджувач або наповнювач.

7. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-5 або композиція за п. 6 для застосування в терапії людини.

8. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-5 або композиція за п. б для застосування у: ї) зниженні вираженості, попередженні та/або лікуванні ішемічно-реперфузійного пошкодження або автоїмунного, автозапального, запального або серцево-судинного захворювання, або ії) зниженні вираженості, попередженні та/або лікуванні серцевої недостатності, або ії) попередженні або лікуванні раку у пацієнта-людини, при цьому ішемічно-реперфузійне пошкодження, автоїмунне захворювання, автозапальне захворювання, запальне захворювання, серцево-судинне захворювання, серцева недостатність і рак пов'язані з експресією СО47.

9. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент для застосування за п. 8, що посилює фагоцитоз пухлинних клітин указаного раку, при цьому пухлинні клітини експресують СО47.

10. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент для застосування за п. 8, де вказаний рак вибраний із групи, що складається з лейкозу, лімфоми, раку яєчників, раку молочної залози, раку ендометрія, раку товстого кишечнику, раку прямої кишки, раку сечового міхура, раку уротелію, раку легені, раку бронхів, раку кісток, раку передміхурової залози, раку підшлункової залози, раку шлунка, гепатоцелюлярної карциноми, раку жовчного міхура, раку жовчних проток, раку стравоходу, нирковоклітинної карциноми, раку щитоподібної залози, плоскоклітинної карциноми голови та шиї, раку яєчок, раку ендокринної залози, раку надниркових залоз, раку гіпофіза, раку шкіри, раку м'яких тканин, раку кровоносних судин, раку головного мозку, раку нервів, раку очей, раку оболонок головного мозку, раку ротоглотки, раку гортаноглотки, раку шийки матки і раку матки, гліобластоми, медулобластоми, астроцитоми, гліоми, менінгіоми, гастриноми, нейробластоми, меланоми, мієлодиспластичного синдрому та саркоми.

11. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент для застосування за п. 10, де: а) вказаний рак легені являє собою недрібноклітинний рак легені, аденокарциному легені або плоскоклітинну карциному легені; Б) вказаний лейкоз вибраний із групи, що складається із системного мастоцитозу, гострого лімфоцитарного (лімфобластного) лейкозу (АГІ), Т-клітинного А, гострого мієлоїдного лейкозу (АМІ), мієлогенного лейкозу, хронічного лімфоцитарного лейкозу (СІ), множинної мієломи (ММ), хронічного мієлоїдного лейкозу (СМ, мієлопроліферативних порушення/неоплазми, мієлодиспластичного синдрому, моноцитарного лейкозу та плазмоцитарного лейкозу; с) вказана лімфома вибрана із групи, що складається з гістіоцитарної лімфоми та Т-клітинної лімфоми, типів В-клітинної лімфоми, включаючи лімфому Ходжкіна та неходжкінську лімфому, таку як фолікулярна неходжкінська лімфома (МНІ) низького ступеня злоякісності, лімфома центру фолікула (ЕСС), лімфома з клітин мантійної зони (МС), дифузна крупноклітинна лімфома (0 СІ), дрібноклітинна лімфоцитарна (5) МНІ., фолікулярна МНІ. середнього ступеня злоякісності, дифузна МНІ середнього ступеня злоякісності, імунобластна МНІ високого ступеня злоякісності, лімфобластна МНІ. високого ступеня злоякісності, МНІ. з дрібних клітин з Зо нерозщепленими ядрами високого ступеня злоякісності, МНІ з масивним ураженням і макроглобулінемія Вальденстрема; і/або а) вказана саркома вибрана з групи, що складається з остеосаркоми, саркоми Юінга, лейоміосаркоми, синовіальної саркоми, альвеолярної саркоми м'яких тканин, ангіосаркоми, ліпосаркоми, фібросаркоми, рабдоміосаркоми та хондросаркоми.

12. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-5, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент вводять внутрішньовенно або підшкірно.

13. Спосіб аналізу експресії СО47 на пухлинних та/або імунних клітинах із застосуванням моноклонального антитіла або його антигензв'язувального фрагмента за будь-яким із пп. 1-5, що специфічно зв'язується з епітопом у межах послідовності під зЕО ІЮ МО:65.

І - в 10 "р /й зе УМрХавннв 0 1АСІ ра ди я УБЖанив 01 1всЯРЕ ге ї у - цк І - У Хавнт (2 еСаРЕ Ще я УгХавит 03 їяСИ і 10400 чоб0 0 чо0бо0 п

2.0 ї я 16. ля й - УБХавВиїм 96вСЯРЕ м / ї -к- У Хавот 071еСаРЕ Бо 05 | ЛГ / -е УСХЯаВйиат 12 1504РЕ ЩЕ У ДІ - МіХанит 13 ІеС4РЕ ТЕ Мн. о жи. МАЙНО ої БЕ 400000 4000 то0бо10000о ІЗ

Ф м з0000 я й ик -- ХтХаїннв 01 ВСІ - 200004 Уа че тд гі є те УрАатіит. 95 1601 І не чрЖавнт бі еСаРЕ 100804 р й скан зчетте «г У Хавит 02 вСЯРЕ ва 1 10100 обо 00000 нм 300005 г: ! й - - МИХ ся | и ее УгХавит 07 1вСЯРЕ режи як УуБХамни 12 Інб4РЕ тс Ду. мм як УМ Ханит 13 ТвбаРЕ ї А о 1000 обо 000000 "М

1,0 ! Осн Є - УІ.ХВІеСЯРЕ хі 7 ку УТХВеСсЯРЕ хобі пра 2 щ и ши чи еко уржвшт ( еСЯРЕ ; "УК вд Щ/ як УБХВнит (НівСаРЕ 8 | ДІЇ -е МЕ ХЯвВит 07 1564РЕ ша зл ІЙ зе УБХВВвав 09 1иСаРЕ 0,0 Кв с ооо вка шив ши Фі Я 0 00 ню чо000 100000 ам

2.5 4 : я СК ХВвит 061262 А ні жна т 07 82 х К й і, 5 й я УБХЯнит 08802 й А Я - рі й че УурХхяним 0982 т : до 1,01 у й о | у я 0,5 я - в Шк й ' КН. ЩО Нию 000 опо ПМ

0000 . т я УТ ХЯйит 01 1еСарЕ Урни / а Ук жЖянит 03 есарЕ г, ДДТ УХяпйит 03 зеСаРЕ КО Я й, й я "Й ОУКХЯвнт 07 СЯ РЕ щ й в УТ ХЯвит 10 1еСЯРЕ не й 10000- / УТХВ ЕСЕ хі 3 00 о ТОЮ 0100000 "М зоб і з000о: й що | , 7 нан УЕХЯВит 06 Теб2 ов / п чає У1.ХВінни 071502 ЩЕ / /7 -- урЖВнит. 081962 100007 пи -- урХВвнт, 09 1662 ва 00000300 400 4000 10000 100000 "М

ФІГ. 48

ЩЕ «ан Ух 1802 хі Т ж «ре УТловИт 0 ес Е 104 -ке УБХонит, 02 їеб2 й : веж й -ае УБХОнИт 03 еб2 и МІ чан ур Жовит. 04 16С2 З вв я Ж і «фе УБХОВат 05 ЕС ви и 10 1О000 вм

15. ! Й ек УЖ Таб хі щи щК,. «Ще УБХОЗит 06 1802 Е ї це. Ї /і. их з УЖ 47 ївО2 т | ДИ х «ве УТ ЖХОННиМИ 08 об - | я ЗИ зх же що в | лу У че УКХ Ян 0916652. О вві / ТЕ «ін УЕХоОВит 1010662 Ві 19 1000 10000 ам

! ; ди ще: и ль 150085 й "ее У Ховат 01 13

Е . / че уїхУвшт 021603 100005 у че УТ ХОвит. 07 1502 вв А саке У1.Х9 Тв хі 1 400 ло06 0000000 400000 "М ОО а0095 ЩІ 30005 ЩІ ех ША! ж 000 в-ИЯО ОЇ сон КИТИ Й НІЙ 8-4 Іоан ану Кріон Генон Ян - Е ЕЕ я в ВЕ ие енн ен: ШИ не Ко «о і т, «ее е 5 ш є зе М Б Б 8 5 Гея - -і ! ре - -- о і | - ща - го; - ОБ ЕЕ 500 мя т в ш В ще шк - з ще ШЕ ШЕ: я 5 : и и В ке) Е е

ФІГ.7 я г | с-ще щ- Ша, й Е . НЕ т-- йинй дя ши щі Е? ше жк Н у Е ї вв. нх Е. К Гек ЕЕ т Ей ів. и ь в я іх ЕН шише кдеш, т Б - г - в Е Шо Ж т, » х о М я З ж е, й їй їх - З х в 2 ж х й 5 Як се

ФІГ. 8

З 1605 - м я 5 8 - - К т петдіек я в я ши Е 5 ше вид М жк а Е ях й закін щ В КЕ т Б. Ж іо Ед ЕЕ о Бо вт вч я : ж 5; З Є - не е -

ФІГ. ЗА

-

4. і Ж К Гані ; - 5 зно - и в маджо ря іх З ск Жрююнкк ; :

БЕ. | і виш | ши ще й в : | і ШЕ і ЩЕ : і ня ; і ЩЕ ; і і : дя ше ше ши ши в я 4 . | ЩЕ щ ЩЕ і ; ма шо: : З ; ШЕ. З Й Е ва ; і щ щ ш З о "рих й : щ Е і со - Бе зі ш в їн : ва Ве -к я п ра т ще г» (7 с с (о о Бо о В є, че Фе на - Гой вої й ох Н і в. -к ! щі Е в ї мя Е в г З Кз в х З я як вя -Е Я а не т ке я ви ж х ж і ні 5 ук шк ї БО і с ї-й Е я 80 --в бен ! щ йо ї к й Ай по ! щОж те в Еш -

с я « ше -- як ре й з - - м й Ж ак їй з в "Бе що» Соя тк З дк о в Бик я Ре еЕ еш т 5 - 7 и Кк : -к х ні о 405 «у» ще за - Я | З м ї : земне фей КО у ен пнойння ; щ он, дя щи "ши ши ши ЩО в Е ши ще ше ше и ши щк ши шк мн ж зві : ; ЖЕ ЖЕ КЗ їі : во Ой ши ши ши ши ж ши ши ше і З ) і. я. щЕ Я ! ) ги х ; ЩЕ: ШІ : і і і Ї кое з ; ; : ЖЕ: їі З се ех ШИ ш шини ши ши ї НЕ оре жан й и З НИ ЗИ ПЕК З ЗИ ЗНО АН Як ЖАННИ ТУ як «к хо шо ооо що ово що р м - Ба ва в. З ве й це сш щ (в х ся ку ко кі ке В я М В ЕЕ БЕ є ни: ши кі - т сі кі не ек нк У ще

ФІГ. 108

- і о | -- я г

: 8. «оо Ї ЩЕ «ак Н |; і Я в ши Ж ку і і З ш нк : ЕВ,

в . Ба Мн | мя Е -о іх я а ше 5 В я - 5 - щоб фс ро г Е сих Я їх «М 5 х - ФІГПА С т з з З жк В ШЕ М З ЕІ

МЕ . я шк і. о я ; -- ем Е я Е - 20 і ше ще шк | ї и Ї Й ши в В Го ер ОН ше ши ж ши ши не не Ен не нн з НЕ в іш ши шу ше ще ши ше Е ше: и ЕН Я ї и іш ши ши ши ши ши ше ши шов ЙО ЕН жк ще й аБаООова дня папки ве Кай сссвння мавад ов овно на тонн ще гене с шніх з див "7 ейвоововево ех Же (5 свроба ко ек ик є в ЗВ ване тож ооо шо Ф отр я в ово а ж в Б Е Б Б 5 Б Б БЕ з в БЕ 8 5 Б я Б 8 8 Е МЯйлИВиМах 5 Є Ше че чо зе ПИЙ З Шев? БК

ФІГ. 11Б з. в Я ши шши шш шо Е : І. ї ї Я ко | І ї 1 р я---- сн с и "не - Со -к о як НІ і -і о з З Е з, Е з, А Е Е В ш - у : ше ши ни от м ю ж цк -й : - х сх

51 | щш 205 ши шише ше ше їх! Се ; "ж ; з ся їжи ср Е о НИ ЗИ з» о 5 хх х у: есЯ Бе 5 0 5 5 о : Янв ні БЕ м ве жд оф ко ни ни НЕ Не сь овово ТІ -в в ЕЕ БЕ Е КЕ -- як - ш ст а - як я ї - я ?е Кая (0 СЕ - Я І Іще нене ше нина и ие

ФІГ. 128 во- «а -ї- їх а: най Б і Ек 30- й я 20. ш п: М о р їх о о в їх В ее я по ше ЕКО ї В -

ФІГ. 13А хх шк шщ я оо ШЕ ше а ще ше с) ше ши иш р ра Бі «на сини ши ши ние с к кт -к - г с що хек: 2 кк «5 - о о пе Те В ук ; чек не де - 8 БЕ ЕЕ ж 9 ОО ОБ ово «ни ни ши Ши : - : та ге " М й Б їх ве - - - ї и и

ФІГ. 138

60 з ж ай. " ю 1 ше Е г ПО. ті В. ій до 2. їх ке нені с о -к дб яко й ще ше МВ ото ОО Е о о ШИ 5 т вх ще і - се

БО 805 Еш м | щ шщщї ш 30 | і Е ї ! ще г ! ши ще ще -ї - ке Ж й 5 В 9 а 55 55 5 о т: Вин ие НЕ А Ж - Ст ин ме НН о В «НЕ Р НН ос я п шк роті роя, Б ж б в І 6 6 Б Б Б я т я В 5 Б 88 5 ш в б ж ш 8 Еш 8 ж ду до до до В ш ше ши ко ник ни я ИН З й я ми км м ке кеш не нини не ние ше і - жо : Є з нн ех

ФІГ. 1465 мкгімалааВ : х У їх х п НИ В м ни НС и шк они и У М З М МЕ За Ден нн с ен ен енно: де. оди оНнн очне ие ех сени; ХУБХаїнша ВЕ я о о 5 т, 5 т. ШИЇ М В и а НК А КН НН и у и Се Ван и и о НН ВН НН НН НС и ОО УСХавиот БО ЯРЕ о в Я п й а а п я ши а см шо ша а БО Б в ЩЕ й миг/мл тА в Фо ев УТХЯї з ли не сь че СУК ХвівсяРЕх вело Ооа ЛИЙ КУЄ вк с ОО зокре У У х «5 Ул с її: ее «АВічих Ніро с о о. о. о - її ОІВСЯРЕ нн. с г УБХВіман 03 . селен тен о. о Пе а МК во ММ віск с я х. ле ока КО ОО Ох ОО о о С Ох пише УСХвнищ ВЕС ЯРЕ Бо с - т ВЖЕ КЕ о х м Ох о. о з Є Її УТХВва і. с її: її. о. УТ я ооо ПМОКОВ 5. о о. с ч ; ПлОеО В За ОО З КВК ЗО о 0 в. в. іл; 09 ївСЯРЕ о о. о . о 5. 0 п в лхввит ло есаре 8 кох -- СО ОККО о сн Ка. ЧІ Хв ховаю ОМ МОХ Ох з в. . п . ; й | - ня Це Ох ОВ т ша х. - в с Я ЗВ НВ х и п Я о її й 1. Ко Оу ХО Оу

ФІГ. 15838 мкл шк КОШО НА; а ве я ме КИ зе. необроблені шо ов «айв й з . ях Контральне гумані роблені с ие негуманкован пе с п 6 са нн 1 ши її хо тсах с. ї і. в у ее п п 0. УБХОВин. у Й о. с. о. 5 с ти Фе п нн о і що Бо шо. С ОО Усова 02 1с3 п о. с:

- п. о утхвни п ВИ г Овши 031802 0 с є г. ке УШхов о А . нн Ховат МІ с с о в УБХовни. 05 1202 о с п вва с ОО оо ос ОКО Ех 0. ння це

ФІГ. 16А мкм щшАВ ж - А в ших дк НК с и ЗИ ОМ КО ХО о о ОМ ПЕК Кос ЕК Як з с 5553 ннани ПІЕ ВВІВ : Вин нн Кеантрольне гуминізоване тА с у в В я ше с УС хонти 06 ївЄЗ с па нн УСХОВвни 07 602 с І о 5 міховвиє піт с Ух 091503 в с 5. шй ше Утоїння Ніла с УТХ9 бі хі с. о шини

ФІГ. 1683 2500 й Контроль із сгредовніцем-носієм 0004 зеурханат 07164 РЕ, я СЕ Ж 5 мгйкк) Ї : є т ї й Кі -ш І Е 1500. А їх як І: 1000 я Т 2 нн а г и рао.05 що КЕ 4 щей» Ше й 5 їз Б ж 3 Ди обробки

ФІГ.17

Що «а Контроль із середовніцем-носієм 20 де урхявьт 101964 РЕ, 5 мг/кх) ! ї -вю0і Х, ! р м ше я 18004 і ще и ях То» ще я В й | нії Е: що і ще Е «0001 М шо . й щ б. се в сне си и ОС МЛМ ЄВ 0 5 0 15 7 55 30 55 Дні обробки за | «ча Контроль із. сереловнінеменосієм я ча УБховим 08162, 5 мг/ко ! ж 15004 і Е ЩЕ ! о р«005 БО / Еш що Ж Дню ! Ж дж м о й то 18 2 я ет дні обробки

ФІГ. 19

2 140 с ї лі з ин чне - учнів з нови ва те Вк ми ї Е ! Е 0,80 5 8 070 і вве

ОО. ФО 0505 щ і ! Е о Е як 0,30 Її Е 020 ч то. її В МКК 15 ме/ку - о г г юю 235 юю 55 4 День е 1 Б З с « |: ж ОА 5 Е ня в Ще і ї щ х Я ї і ШЕ вод Е 02 і бмг/ке і ї5 мг/кг Е ЗБ І 7 Б 5 5 50 25 5 День

ФІГ. 208

ВЕ ВОК в о Я СКК . НИ УЗ Од Ме клику. с м пос по й Во А. о пон . У с о о 5; Кт о КК ХЗВИ 0: (З хв о й її їх що о . . СО, її 0 пшня о. щу М п і ін ак ККУ ПДДНИ А Мох о

0 о. Шо й у о. с

ШК. о о ке ХО же ОКО що с сх СО ПИОЙДУУ СК я . г 3 ех ск х ах п п п Б о о КА а КО ОО ОявеКОх ЕК ОК о о М о МАЕ ко о. соя Ж 6. с о нн ох Її с і ши о в ОЙ вх що ЗК ЯН КЕ ТВ КБ КК САККВЯ ОВ ке ОБ 5 о З КО 9 ши 00. е- С о с ТО ш « ин с иа ХХ хиоон Ко лова о о шо Б Хооц з 0. о І 5 оч о З і : а. с Її Я ії Ж Й пк Не КО о Зх Мо Я ЩЕ шої М ж

ФІГ. 21 поп по п зп сс УНН п Знизити о спо с зим компостом, сини зни Зими миши ї : ! : ії 1 Во ри і : : Н : Е : ! Н ! ! : ' х Нр Не бОшоЗ Ж Н їх : НО Н ї : : : Н ' Н Н Н ! : НЕ ШИ НИ ЗНЗ ІНН ОН И : : : Н Н Н : Н ' : НК Ж РОМ» Н 1 ЕЕ : ТОЖ ї ї Н Н Н Н Н м ' : ! : БЕ 5 БР О: ниЕШН ШИ ож : МИ З М І М ' Н Н 1 БЕ ож 10 Н КО : : Н їх : Н Н Не ее ТБ щі ! : : БО хі ри ор 110. : : В 15 рай. ! Н : ни НН НН и о ник І НН НИ ММС і : що кв : : Н 1 я ож х Н тож ТВ.

НУ що ЕЕ : Н : ОО Ж 1 МО ! : Н їх ко Бі Н с бе ож «1 В : Н Й НЕ БЕ Ву: : : ! Еш що ОМ. що ши щі : : ГЕ БО ще щі : : : їх но и зн не он НН ИН ПН си НЕ СЕН : : їх НИЗ НЕ : пи ни п ПР С М НН З о Я М НИ З с п п В с КО с СЕ : Н : зн и І ЗВ и З ПМ В п Оп ЗШ : : Н ри ж.

ВО : Н Н :Е НЯ новини В НЯ с Е жк Мої щі ої Н їж ЕНН з : Н Н нан НИ Коша жк У Ж ошщо Об що МІ ху: : Ох ха од до і Н Н : НУ НЯ Б рН Мощі 1 йо я п ОМ ОщІ Що: Я сш 1-х Н не нн ННЯ Ж а ни АН НИХ Кит шив ен оче шиї ОО їх ! шо шо 11 рн І ІІ ВЕ 5 БЖ то 1 І І ! несш нн не НИ НН В В ЗІ В Не З НН НН І Я СНИ ЕІ : Віті я й рвав ЕВ У Б ІЗ ЕІ пк й : ож КОМ Ж Н ко о у сш КІВІ Вип БІ що я НТ 1 В щі : НУ ен ран НИ НН СИ Не В НН де МО що мот ОЇ ОО 1-4 ТЬ ДО дО У ОБО : роажо І ШОЇ плющ о РО 2 БІ ші шві Ух Я ЕН МОВІ І В : ям вх в. я ВІ й В ЖІ 5: В БІК Н нн пе НН З и З ДН с І НН З НН НН В ВЕ НА ВЕ нн нн нн ж а с а НИ а В с С В а В А А СН роми жати по т Не пн.

У Н Й Н ' ; ї Н Н Н Н Н Н : Н МЕ ХЯ пи БЕ ХО МІЯ ТЕ хх хх Н : рожі: ї г Н х ! Мрхаине века рю ля яр в дрож їжі ко Й Н : НИКИ ! Кох : ! пфХамих ВЕН РК р та 146 Б мо хм їх. : 1 ож 1х І: Я и ! х ї ВВЕ ДН о ЗМ ке МИ: З М ПИ з З З З М З ПИ ВИ ЧИЯ 1 ї ше и : рожі , х Н пен с п а п п п а а п и п п п а п а у ПО ЖИ Зб1аа рі РОМ хх ря їх НИ НН Е хі : ше ЗИ и Н рмоїнак ПКрОХ ЖІ ях кі род : рожі : НЕ ЕЕ ЗЕ : оон нн З нн нон пон фан. пефрентютрння пен нин ння пон нн нн певна ши не пон зн нн пБцянни Б ВОЗ ав 8 Я хх хх Кк. ! жі Н НИ ЕЕ ! пе ве ВН ХІН: ПН С З НЕ З І ІН ВО ЗИ НК ЧН Н ї ох їжі божі ! х ! лвКХаня ВТБ 137 1 8 хро вк : ЖК НЕОН НИ НК НН МАН : ие Мочи МОВУ Мн пиши нн з пн нин нн зни пн ев он зи пн зн, сн Ман БУДИ ВЕ ОХ 1 ЯВОЇ ВООТХ ; І І М НИ ЯН ! НЕ Н : жі хі Н х Н мое но з по па а па п С па п п п а па па п п п а В пи пит вк од НО Н Н : Н : Н : : Н : ! Н і : Хна ОБІШОЯ ВЕ КО ЯК В 1 рр ох ря її Н їх | : : НЕ ШЕ роко спи МИ с МІ У ЕМ | ж хі хі : їх ї Н НИК ЗЕ У: ЗЕ нн вн в пою в в пиши по пон по нн по ня о пон п нн зн повинно срок орди Тв я вх Н ! Н Я ; Е : : ї Н Н МЛН пЗ КЗ АВ ВО х І іх! Божок хі Н кі : охо : Жіховно Мі 0395 33 М хі ківі арк МНН ЕЕ Я о ов вв п пн вно ванн пон ння она нн пн зно пон нн З вин пон нн пня знов и Жижонив нив ЯМ 1 тохі х хі кох рок Я рони ни ни нн ик ник нн ня нн ня МН нн вини МНН и вин ото о З ША НЕ М Є ВИ МЕ М І ДЕ НИ НЕ НИК Н рокі Н тт мі. вази. да Ток й Н Н Н Н Н Н ї х Н Н Н Н Н ЗЕ о НВ вно я о МЕ З ПИ В ДЕ НН Н НЕ ЕЕ ! кої ох : о о ви ни в о по пи нн зон оо ня вн пав нн пон зони нн нс нн нн нн пн он нн зона пдохинан МОХ ВІ З ЯТІ МО хх кі їх |і ! 1 Ж : |і Н х овен онов зн ви по вн п п в нн сп зн пс он в нн зн п нн пн ново вавннн Тбкжюнв БІБ РЕ ЗР І ЯТІ Я ОК ххх їх Н ро хо ! око Н х : КУН там я я ок ї 1 і Н ї ї ї ї : ! ' ! Я В Н : УБжкице ВЕБ РК ОЇ ЗІ Р ЯТІ ЯДРО хх хі ож Й ро ! охо! Боох БД Вашя НЕБУ РК ОЇ ЛЯХ З ЯР ІОН ОТ охо хх і ож В ШИ ЗШ : 0 НИ З вон вх З ДН ВНУ НЕ В М НЕ ЗИ М Є ЧИ й : рокі ! НЕ Н х. : Мих инич БГБИНА ВКОЇ ЗВ АК ЗО 3 ях АН ж Е і ож : хі хі НІШ ЧЕ ооо он нн нн пон нн по нн нон пон о пн нн пон п пи пн пи ни Ма хквиих ЕХ ун З ЗП в З ЗИ НИ З М У МВ : Й Кох : НЕ НЕ НН ! х Н пи ново т лк М а В З В І З Н Н око Н НН ННИНННКУ Н : х Н ово и Ве З ВН І ІН НН НЕ ЗЕ ї ОК: : НЕ З : х і рн Баба шко Я ЩІ 8 ох ххх і кі. : їх ож око ринка Есть 1 де я мом ххх | ! хі : кож і НЕ при Іха кв: НИ ИН НИ НН ЧАН А ЕН : і хі ! жо Їх: : ооо хе ВІ НЕ СОН ИН ЗВ НЕ С : і ож ! НИ НЕ ох нн и а а п о п а п ан в а в в и ПК Вно (Бо авіа кох хо : : НИ : ж охо : х : Жіжхвват ЕЙ 1 НО ЯН Я око кох і Е їх: і кі хі НИ: но ни нив кро но ПН ен в знан зона ЗИ ЧОН, пн: знннннв зони ЗП вн пн зн кон зон пити пн ТТАВАашт ПО КОХ ЕН: С НИ УНН УНН ИН Н Н їх 1 Н НИ З І х Іходом ЛО Х Ден З НсІМНИеЄ МИ УМ І ЗМО їжі хі 1 хі Н нище З НЕ У

Кло шк ри иа и и и Н Н Н ї Н ! ї 1 Н Н Н : Н |. Міховом: ХХ КяЯйЙ 5 85 Я хх Шк УМ Не ИН : кі Н ож 1 хо і пса а п а п и в п а а і М о и п п р

Я 7