UA121112C2 - Антитіло до ox40 та його застосування - Google Patents

Антитіло до ox40 та його застосування Download PDF

Info

Publication number
UA121112C2
UA121112C2 UAA201610812A UAA201610812A UA121112C2 UA 121112 C2 UA121112 C2 UA 121112C2 UA A201610812 A UAA201610812 A UA A201610812A UA A201610812 A UAA201610812 A UA A201610812A UA 121112 C2 UA121112 C2 UA 121112C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
amino acid
acid sequence
cells
human
Prior art date
Application number
UAA201610812A
Other languages
English (en)
Inventor
Чанчунь ДУ
Дзеонг Кім
Дзеонг КИМ
Цзін Чжу
Цзин ЧЖУ
Джек ІІІ Беверс
Джэк Беверс III
Кевін Волш
Кевин Волш
Алмейда Патрісія де
АЛМЕЙДА Патрисия ДЕ
Джеймс Ендья
Джэймс Эндья
Є Шень
Е Шень
Original Assignee
Дженентек, Інк.
Дженентек, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=52829446&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA121112(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Дженентек, Інк., Дженентек, Инк. filed Critical Дженентек, Інк.
Publication of UA121112C2 publication Critical patent/UA121112C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Abstract

Винахід стосується антитіла до ОХ40. Винахід також стосується виділеної нуклеїнової кислоти, клітини-хазяїна, способу отримання антитіла, імунокон'югату, композиції, способу лікування особи, що страждає на рак та застосування антитіла у лікуванні раку.

Description

(57) Реферат:
Винахід стосується антитіла до ОХ40. Винахід також стосується виділеної нуклеїнової кислоти, клітини-хазяїна, способу отримання антитіла, імунокон'югату, композиції, способу лікування особи, що страждає на рак та застосування антитіла у лікуванні раку.
АЗКЦ ОХ-експресуючих клонів ВТА 74 129 сі веФе до б о
Ж Во що ' с : 9 50
Е св х А й пере вх Кз х я ца я Ще хи «г ка сх до я г ту Ф
КЗ є ки ку а | - ях | є
Ж й я че з І-й є
ДЕ о ще ще гей це (о; Ко ди А Кк діх А г с -
Бог) АК вх
Ф о
ПЕРЕХЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
0001) Ця заявка заявляє пріоритет за попередніми заявками серійні Ме: 61/973193, подана 31 березня 2014 р.; 61/989448, подана 6 травня 2014 р.; 62/073873, подана 31 жовтня 2014 р., та 62/080171, подана 14 листопада 2014 р.; кожна з яких включена до цього документа у повному обсязі шляхом посилання.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
І0002| Зміст наступного представлення текстового файлу у форматі АЗСІЇ включено до цього документа у повному обсязі шляхом посилання: у формі, що зчитується машиною, (СЕ) переліку послідовностей (назва файлу: 1463920291405ЕО ІТ Хі, дані записані: 26 березня 2015 р., розмір: 143 КВ).
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ
Ї0О00ОЗ| Цей винахід відноситься до антитіл проти ОХ40 та способам застосування таких антитіл.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
0004 ОХ40 (також відомий як СО34, ТМЕКЗЕ4 та АСТЗ5) є представником суперродини рецепторів фактору некрозу пухлин. ОХ40 не експресується конститутивно на наївних Т- клітинах, але індукується після захоплення рецептора Т-клітин (ТСК). Ліганд ОХ40, ОХ401, переважно експресується на антигенпрезентуючих клітинах. ОХ40 на високому рівні експресується активованими СО4-Т-клітинами, активованими СО8-Т-клітинами, Т-клітинами пам'яті та регуляторними Т-клітинами. Сигналінг ОХ40 може викликати костимулуючі сигнали по відношенню до СО4 та СЮО8 Т-клітин, що призводить до посилення проліферації клітин, виживання, ефекторного функціонування та міграції. Сигналінг ОХ40 також посилює розвиток та функціонування Т-клітин пам'яті. 0005) Регуляторні Т-клітини (Тгед) у великій кількості присутні в пухлинах і дренуючих пухлини лімфатичних вузлах, які виникають при багатьох показаннях для лікування ракових захворювань, що включають меланому, НДРЛ, рак нирок, яєчників, товстого кишківника, підшлункової залози, молочної залози та гепатоцелюлярний рак. У підкласі цих показань збільшені внутрішньопухлинні щільності клітин Т гед пов'язують з несприятливим прогнозом для пацієнта, що дає привід припустити, що ці клітини грають важливу роль у супресуванні
Зо протипухлинного імунітету. Були описані ОХ40-позитивні лімфоцити, що проникають до пухлини.
Ї000О6| Очевидно, що залишається потреба в агентах, які мають клінічні властивості, які є оптимальними для розробки терапевтичних засобів. Винахід, описаний у цьому документі, відповідає цій вимозі та пропонує інші переваги.
Ї0О007| Усі посилання, цитовані у цьому документі, включи патентні заявки та публікації, у повному обсязі включені у даний документ шляхом посилання. стислиИ опис 0008) В одному аспекті винаходу пропонуються виділені антитіла, які зв'язуються з ОХ40 людини.
Ї0О009| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому дане антитіло являє собою виснажуюче антитіло. В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому антитіло виснажує популяцію клітин, які експресують ОХ40 людини іп міїго, та зв'язують ОХ40 людини з афінністю меншою ніж або рівною близько 1 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіла виснажують СО4-- ефекторні Т-клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіла виснажують регуляторні
Т-клітини (Тгед). У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом АЗКЦ та/або фагоцитозу. У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом
АЗКЦ.
І0010) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, які зв'язують ОХ40 людини з афінністю меншою ніж або рівною близько 0,45 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло зв'язує ОХ40 людини з афінністю меншою ніж або рівною близькою 0,4 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитілозв'язуюча афінність визначається з використанням радіоіїмуноаналізу. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло зв'язує ОХ40 людини та ОХ40 яванського макака. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування з ОХ40 людини та яванського макака визначається з використанням аналізу ЕАС5. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування з ОХ40 людини має ЕС50 меншу ніж або рівну 0,2 мкг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування з ОХ40 людини має ЕС5О меншу ніж або рівну 0,3 мкг/мл або нижче. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування з ОХ40 яванського макака має ЕС5О меншу ніж або рівну 1,5 мкг/мл. У бо деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування з ОХ40 яванського макака має ЕС5О меншу ніж або рівну 1,4 мкг/мл. 0011) В іншому аспекті у винаході пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, які збільшують (або здатні збільшувати) проліферацію СО4- ефекторних Т-клітин та/або збільшують продукцію цитокінів СО4- ефекторною Т-клітиною у порівнянні з проліферацією та/або продукцією цитокінів до обробки антитілом-агоністом проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу цитокін являє собою гама-інтерферон. 0012) В іншому аспекті у винаході пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, які збільшують (або здатні збільшувати) проліферацію Т-клітин пам'яті талабо призводять до збільшення продукції цитокінів клітинної пам'яті. У деяких варіантах реалізації винаходу цитокін являє собою гама-інтерферон. 0013) В іншому аспекті у винаході пропонується агоніст ОХ40 людини, який інгібує (або здатний інгібувати) функціонування Тгед. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіла інгібують Тгед-супресію функціонування ефекторних Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу функціонування ефекторних Т-клітин полягає у проліферації та/або продукції цитокінів ефекторними Т-клітинами. У деяких варіантах реалізації ефекторна Т-клітина являє собою
Срах ефекторну Т-клітину. (0014) В іншому аспекті у винаході пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, які збільшують (або здатні збільшувати) сигнальну трансдукцію ОХ40 в клітині-мішені, яка експресує ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу сигнальна трансдукція ОХ40 виявляється шляхом моніторингу низхідної передачі сигналу МЕКВ (наприклад, в експресуючих
ОХа40 клітинах, наприклад, СО4-- ефекторній Т-клітині, СО8-- ефекторній Т-клітині, СЮО4 --Т-клітині пам'яті). 0015) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, які стабільні після обробки при 40С протягом двох тижнів.
І0016| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ4 людини, причому антитіла містять Ес-поліпептид варіанта ІдС1, що містить мутацію, яка усуває зв'язування з ефекторними клітинами людини, при цьому антитіла мають знижену активність відносно антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, які містять нативну послідовність Ес-частини
ІДО1. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіла містять варіант Ес-частини, що містить
Зо мутацію, яка усуває зв'язування з Ес (наприклад, мутацію САМА або М2970). У деяких варіантах реалізації винаходу активність полягає в одному або більше зі: збільшення проліферації та/або продукції цитокінів СО4- ефекторними Т-клітинами, збільшення проліферації та/або продукції цитокінів СО4--Т-клітинами пам'яті, та/"або виснаження популяції клітин за допомогою АЗКЦ та/або фагоцитозу.
І0017| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому перехресне зв'язування антитіла потрібне для функціонування антитіл-агоністів проти
ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу функціонування антитіл-агоністів проти
ОХ40 людини полягає в одному або більше зі: збільшення проліферації та/або продукції цитокінів СО4- ефекторними Т-клітинами, збільшення проліферації та/або продукції цитокінів
Ср44Т-клітинами пам'яті, талабо виснаження популяції клітин за допомогою АЗКЦ та/або фагоцитозу. 0018) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому антитіло містить (а) домен МН, що містить () НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 2, 8 або 9, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність зХЕО
ІО МО: 3, 10, 11, 12, 13 або 14, та (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІЮО МО: 4, 15 або 19, та (їм) НМЕА-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:5, (м) НМА-12, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:6, та (мі) НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 7, 22, 23, 24, 25, 26, 27 або 28.
Ї0019| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому антитіло містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:2; (Б)
НМВА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБСО ІЮ МО:3; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО 4; (4) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:5; (е) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:6, та () НМК-1І З, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО:7.
І0020| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому антитіло містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:2; (Б)
НМВА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБСО ІЮ МО:3; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 562 ІЮ МО 4; (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:5; (е) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:6, та () НМК-1І З, 60 що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО:26.
І0021)| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому антитіло містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:2; (Б)
НМВА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБСО ІЮ МО:3; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО 4; (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:5; (е) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:6, та () НМК-1І З, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІО МО:27.
І0022| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому антитіло містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (УН), яка має щонайменше 9096, 9195, 9295, 9396, 9495, 9595, 9696, 97 95, 9895, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70,72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 108, 114, 116, 183 або 184.
І0023| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який має щонайменше 90 то, 91 то, 92 то, 93 то, 94 то, 95 то, 96 то, 97 то, 98 то, 9995 або 10095 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІЮ МО:57, 59, 61, 63, 65,67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 109, 115 або 117.
І0024)| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому антитіло містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (УН), яка має щонайменше 9096, 91965, 92965, 9395, 9495, 9595, 96, 97 96, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІЮ МО:56. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність УН, яка має щонайменше 90 9, 91 95, 92 Фо, 93 Уо, 94 Фо, 95 Фо, 96 95, 97 95, 98 90 або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені з БЕО ІЮО МО:56 усього від 1 до 10 амінокислот. У деяких варіантах реалізації винаходу МН містить один, два або три
НМЕ, вибраних з: (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:2, (в) НМЕ-
Н2, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ОО МО:З3, та (с) НМК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:4.
Зо І0025| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, причому антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), що має щонайменше 90 95, 91 96, 92 95, 93 95, 94 95, 95 90, 96 95, 97 95, 98 9, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЕС ІЮ МО:57. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність МІ, яка має щонайменше 90 95, 91 Фо, 92 95, 93 Уо, 94 95, 95 95, 96 Уо, 97 Чо, 98 Фо або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені усього від 1 до 10 амінокислот з 5ЕО ІЮ МО: 57. У деяких варіантах реалізації винаходу МІ. містить один, два або три НУК, вибраних з (а)
НМВА-Ї1, що містить амінокислотну послідовність ЗБЕ ІО МО:5; (Б) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:б, та (с) НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:7. (0026) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МН 5ЕО ІЮ МО: 56.
І0027| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МІ 5ЕО ІЮО МО: 57. (0028) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:56 та послідовність МІ 5ЕО ІЮО МО: 57. (0029) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що
БО містять послідовність МН 5ЕО ІЮ МО: 94.
І00ОЗ30) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 95.
І0031) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:94 та послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 95. 0032) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МН 5ЕО ІЮ МО: 96.
І0033) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 97. (0034) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що 60 містять послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:96 та послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 97.
І0035) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МН ЗЕО ІЮ МО: 180. (0036) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО: 179.
І0037| В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:180 та послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 179. 0038) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МН ЗЕО ІЮ МО: 182.
І0039) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МІ. 5ЕО ІЮ МО: 181. (0040) В іншому аспекті винаходу пропонуються антитіла-агоністи проти ОХ40 людини, що містять послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:182 та послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 181. 0041 У деяких варіантах реалізації будь-яких з антитіл за цим винаходом антитіло являє собою повнорозмірне антитіло ЇдДС1 людини.
І0042| У деяких варіантах реалізації винаходу будь-яких з антитіл за цим винаходом антитіло являє собою антитіло людини. У деяких варіантах реалізації будь-яких з антитіл за цим винаходом антитіло являє собою гуманізоване антитіло. У деяких варіантах реалізації будь-яких з антитіл за цим винаходом антитіло являє собою химерне антитіло.
ЇО043)У деяких варіантах реалізації будь-яких з антитіл за цим винаходом антитіло являє собою голе антитіло. (0044) В іншому аспекті винаходу пропонуються виділені нуклеїнові кислоти, кодуючі будь- які з антитіл проти ОХ40 людини (наприклад, антитіла-агоністи), представлені у цьому документі.
І0045| В іншому аспекті винаходу пропонуються клітини-хазяїни, які містять нуклеїнові кислоти, що кодують будь-які з антитіл проти ОХ40 людини (наприклад, антитіла-агоністи), представлені у цьому документі.
Ї0046| В іншому аспекті винаходу пропонуються способи продукування антитіла, що включають культивування клітин-хазяїнів таким чином, щоб продукувалося дане антитіло. У деяких варіантах реалізації винаходу спосіб додатково включає виділення антитіла з клітини- 0) хазяїна.
І0047| В іншому аспекті винаходу пропонуються імунокон'югати, що містять будь-які з антитіл проти ОХ40 людини (наприклад, антитіла-агоністи), представлені у цьому документі, та цитотоксичний агент. (0048) В іншому аспекті винаходу пропонуються фармацевтичні препарати, що містять будь- які з антитіл проти ОХ40 людини (наприклад, антитіла-агоністи), представлені у цьому документі, та фармацевтично прийнятний носій. У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь-які з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, в концентрації між близько 10 мг/мл та близько 100 мг/мл, (Б) полісорбат, причому концентрація полісорбату складає від близько 0,02 95 до близько 0,06 95; (с) гістидиновий буферний розчин з рН від близько 5,0 до рН близько 6,0 та (а) сахарид, причому концентрація сахариду складає від близько 120 мМ до близько 320 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу гістидиновий буферний розчин має рН від 5,0 до 6,0. У даних варіантах реалізації винаходу сахарид являє собою сахарозу. У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь-яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (б) полісорбат 20, причому концентрація полісорбату складає близько 0,02 95; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН 6,0 та (4) сахарозу, причому концентрація сахарози складає близько 320 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь-яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 20, причому концентрація полісорбату складає близько 0,02 95; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН 5,5 та (4) сахарозу, причому концентрація сахарози складає близько 240 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь-яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 20, причому концентрація полісорбату складає близько 0,04 95; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН 6,0 та (4) сахарозу, причому концентрація сахарози складає близько 120 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь-яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 40, причому концентрація полісорбату складає близько 0,04 95; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН 5,0 та (а) сахарозу, причому концентрація сахарози складає близько 240 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу бо фармацевтичний препарат містить (а) будь-яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини,
описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 40, причому концентрація полісорбату складає близько 0,04 95; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН 6,0 та (4) сахарозу, причому концентрація сахарози складає близько 120 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить (а) домен МН, що містить (ї) НМВА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 2, 8 або 9, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність зХЕО
ІО МО: 3, 10, 11, 12, 13 або 14, та (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІЮО МО: 4, 15 або 19, та (ім) НМА-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:5, (м) НМА-12, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:6, та (мі) НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 7, 22, 23, 24, 25, 26, 27 або 28. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:2; (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МОЗ; (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:4; (4) НМЕ-11, що містить амінокислотну послідовність 562 ІЮ МО:5; (е) НМАК-1І12, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:6, та () НМК-1І 3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІО МО:7. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить (а) НМВА-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:2; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:3; (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:4; (4) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:5; (е) НМВА-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:6, та () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з
ЗЕО ІО МО:26. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:2; (5) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:3; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО 4; (4) НУМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:5; (е) НМЕ-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО 10 МОб, та () НМК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність вибрану з ЗЕО ІЮ МО:27. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (МН), яка має щонайменше 9096, 9195, 9295, 9396, 9495, 9595, 9696, 97 95, 9895, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 108, 114, 116, 183 або 184. У деяких
Зо варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить варіабельний домен легкого ланцюга (М), який має щонайменше 90 95, 91 Фо, 92 95, 93 о, 94 95, 95 90, 96 9, 97 У, 98 9, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 109, 115 або 117. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (УН), яка має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 9, 94 95, 95 У, 96 90, 97 Фо, 98 95, 9995 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ
МО:56. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність МН, яка має щонайменше 90 965, 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 97 95, 9895 або 9995 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені з 5ЕО ІЮО МО:56 усього від 1 до 10 амінокислот. У деяких варіантах реалізації винаходу МН містить один, два або три НУК, вибраних з: (а) НМЕ-НІ, яка містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:2, (р) НУВ-Н2, яка містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮО МОЗ, та (с) НМЕК-НЗ, яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:4. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який має щонайменше 90 96, 91 95, 9295, 93 95, 94 95, 95 95, 96 905, 97 9Уо, 98 9о, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотної послідовністю ЗЕО ІО МО:57. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність М, яка має щонайменше 90 95, 91 Фо, 92 Уо, 93 Уо, 94 Фо, 95 о,
БО 96 95, 97 95, 98 90 або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/"або видалені усього від 1 до 10 амінокислот з ЗЕО ІЮО МО: 57. У деяких варіантах реалізації винаходу МІ. містить один, два або три НУК, вибраних з (а) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:5; (5) НМЕ-
Ї2, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО:б, та (с) НМК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО:7. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МН 5ЕО ІО МО: 56. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МІ 5ЕО ІЮО МО: 57. У деяких варіантах реалізації 60 винаходу антитіло препарату містить послідовність МН 5ЕО ІО МО:56 та послідовність МІ 5ЕО
ІО МО: 57. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МН
ЗБО І МО: 94. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 95. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:94 та послідовність МІ. ЗЕО ІО МО: 95. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МН ЗЕО ІО МО: 96. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МІ ЗЕО ІО МО: 97. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МН 5ЕО ІЮ
МО:96 та послідовність МІ 5ЕО ІО МО: 97. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МН 5ЕО ІО МО: 180. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МІ ЗЕО ІЮО МО: 179. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:180 та послідовність МІ 5ЕО
ІО МО: 179. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МН
ЗБО ІЮО МО: 182. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 181. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло препарату містить послідовність МН ЗЕО ІЮО МО:182 та послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 181. 0049) В іншому аспекті винаходу антитіла-агоністи проти ОХО людини, запропоновані у цьому документі, призначені для застосування в якості лікарського засобу. 0050) В іншому аспекті винаходу антитіло-агоніст проти ОХО людини, запропоноване у цьому документі, призначене для застосування при лікуванні раку. 0051) В іншому аспекті винаходу антитіло-агоніст проти ОХО людини, запропоноване у цьому документі, призначене для застосування в одному або більше з: інгібування Тгед- функціонування (наприклад, інгібування супресивної функції Тгед), знищення експресуючих
ОХ40 клітин (наприклад, клітин, які експресують високі рівні ОХ40), збільшення функціонування ефекторних Т-клітин та/або збільшення функціонування Т-клітин пам'яті, зменшення несприйнятливості пухлини, посилення функціонування Т-клітин та/лабо виснаження експресуючих ОХ-40 клітин. 0052) В іншому аспекті винаходу пропонується застосування антитіла-агоніста проти ОХО людини, представленого у цьому документі, у виробництві лікарського засобу для лікування раку.
Зо 0053) В іншому аспекті винаходу пропонується застосування антитіла-агоніста проти ОХО людини, представленого у цьому документі, у виробництві лікарського засобу для одного або більше з: інгібування Тгед-функціонування (наприклад, інгібування супресивної функції Тгеод), знищення експресуючих ОХ4 клітин (наприклад, клітин, які експресують високі рівні ОХ40), збільшення функціонування ефекторних Т-клітин та/або збільшення функціонування Т-клітин пам'яті, зменшення несприйнятливості пухлини, посилення функціонування Т-клітин та/або виснаження експресуючих ОХ-40 клітин. 0054) В іншому аспекті винаходу пропонуються способи лікування індивіда, що має ракове захворювання, які включають введення індивіду ефективної кількості будь-якого з антитіл- агоністів проти ОХ40 людини, представлених у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу способи додатково включають введення додаткового терапевтичного засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний засіб містить хіміотерапевтичний засіб. У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний засіб містить антагоніст зв'язування осі РО-1.
ІЇ0055| В іншому аспекті винаходу пропонуються способи діагностики або виявлення з використанням будь-якого з антитіл проти ОХ40 людини, представлених у цьому документі.
ІЇ0056| В іншому аспекті винаходу пропонуються набори або промислові препарати, що містять будь-яке з антитіл проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу набори або промислові препарати, що містять антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, описане у цьому документі та необов'язковий фармацевтично прийнятний носій. У деяких варіантах реалізації винаходу набори або промислові препарати додатково містять інструкції для введення лікарського засобу для лікування раку.
І0057| Слід розуміти, що одна, кілька або всі з властивостей різних варіантів реалізації винаходу, описаних у цьому документі, можуть комбінуватися з утворенням інших варіантів реалізації винаходу за цим винаходом. Ці та інші аспекти за цим винаходом будуть очевидними спеціалісту у даній галузі техніки. Ці та інші варіанти реалізації за цим винаходом додатково описані у детальному описі, що йде далі.
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
0058) ФІГ. 1: Варіанти гуманізованих ОХ40-антитіл аналізували методом РАС5 для оцінки зв'язування антитіл з пиОХ40, що експресувався на поверхні клітин Ниї78. бо 0059) ФІГ. 2: Антитіло-агоніст ТА7.9г.1 проти ОХ40 зв'язувалося з високою афінністю з Т-
клітинами людини та яванського макака.
ІЇ0О6О| ФІГ. ЗА та ЗВ: (ФІГ. ЗА) Мар 1А7.дг.1 не впливало на проліферацію Т-клітин у відсутності перехресного зв'язування. Концентрація тар 1А7.9дг.1, що збільшувалася, костимулювала проліферацію СО4--Т-клітин пам'яті у відповідь на перехресне зв'язування антитіла проти СОЗ3. Розрахована ЕС5О для костимулюючого ефекту тартА?7.9дг.1 склала 9,96 нг/мл (п-2). (ФІГ. ЗВ). Концентрації тар ТА7.д9г.1, що збільшувалися, костимулювали продукцію бра44Т-клітинами пам'яті інтерферону-гама у відповідь на перехресне зв'язування антитіла проти СОЗ.
Ї0О61| ФІГ. 4А: У присутності зв'язаного з планшетом антитіла проти СОЗ зв'язане з планшетом тар 1А7 костимулювало проліферацію ефекторних Т-клітин. На противагу цьому, костимулююча активність припинялася, коли тар 1А7 вводили у розчинній формі у присутності зв'язаного з планшетом антитіла проти СОЗ, до аналогічного рівня, який спостерігався зі зв'язаним з планшетом контрольним ізотипним антитілом у присутності зв'язаного з планшетом антитіла проти СОЗ.
І0062| ФІГ. 48: МАБ тА 391.1, що містить мутацію М2970, виявилося нездатним костимулювати проліферацію клітин Тей. На відміну від нього тар 1А7 дг.1 дикого типу (немутоване) костимулювало індуковану антитілом проти СОЗ проліферацію клітин Теїйї.
ІОО6ЗІ ФІГ. 5: Обробка антитілом-агоністом проти ОХ40 інгібувала опосередковану клітинами
Тгед супресію наївних СО4--Т-клітин. Наївні СО4-«Т-клітини (Тп) при самостійному культивуванні інгібувалися додаванням клітин Тгтед та контрольним ізотипним антитілом. Опосередковане клітинами Тгед інгібування проліферації наївних СО4жТ-клітин припинялося у культурах, що містять антитіло проти ОХ40, тар 1А7.дг1. Дані представлені як середні значення з З незалежних експериментів. 00641 ФІГ. 6: Обробка за допомогою таб Т1А7.дг.1 порушувала супресивну функцію клітин
Тгеа. 0065) ФІГ. 7А та 7В: (ФІГ. 7А) Обробка тар 1А7.дг.1 індукувала АЗКЦ ОХ40-експресуючих Т- клітин. (ФІГ. 78). Обробка тар А?7.дг1 (191) індукувала більший рівень АЗКЦ ОХх40- експресуючих СО4-«Т-клітин у порівнянні з рівнем АЗКЦ, індукованим таб ТА7.ди (да). 0066) ФІГ. вА та 88: ВТ474-людські ОХ40-трансгенні клони експресували різні рівні ОХ40
Зо людини. ФІГ. 8А, експресуючі низький рівень ОХ40 клітини ВТ474. ФІГ. 88, експресуючі високий рівень ОХ40 клітини ВТ474.
Ї0О67| ФІГ. 9: Обробка за допомогою антитіла-агоніста проти ОХ40 |індукувала антитілозалежний клітинно-опосередкований фагоцитоз ліній клітин, експресуючих ОХ40 людини, та рівень антитілозалежного клітинно-опосередкованого фагоцитозу був чутливим до рівня експресії ОХ40 в клітинах-мішенях. 0068) ФІГ. 10: Обробка антитілом-агоністом ТА7.дг1 проти ОХ40 індукувала АЗКЦ в ОХ40- експресуючих клітинах. 0069 ФІГ. 11А-І: Амінокислотні послідовності варіабельних ділянок антитіл проти ОХ40.
Відмічені послідовності НМК-НІ, -Н2 та -НЗ3 важкого ланцюга та НМЕК-11, -12 та -І3 легкого ланцюга. Амінокислотні положення пронумеровані у відповідності з системою нумерації Кабата, як описано у цьому документі.
Ї00701| ФІГ. 12А: Маб 1А7дг1 проти ОХ40 людини зв'язувалося з клітинами Ниї78-пОХ40 дозозалежним чином, 70 95 від максимального зв'язування спостерігали при близько 200 нг/мл антитіла (вказано позначеним крапками квадратом). 00711 ФІГ. 128: ОХ40І -Чад продемонструвало дозозалежне зв'язування з клітинами Ниї78- похо. 00721 ФІГ. 12С: Зв'язування таб 1А7.9г.1 проти ОХ40 людини з клітинами Ниї78-пОХ40 зменшувалося по мірі зниження концентрації ОХ401І -Пад.
І0073| ФІГ. 120: Присутність контрольного ЮК5-Пад не впливало на зв'язування тар 1ТА7.9г.1. 00741 ФІГ. 13: Фармакокінетика (ФК) застосування ТА7.дг1 у дозах 1 мг/кг або 10 мг/кг у мишей СІЮ. 0075) ФІГ. 14А та 148: Введення 1А7.дг1 яванським макакам призводило до мінімальних або тимчасових збільшень рівня с-реактивного білка (СЕР). (ФІГ. 14А) Спостерігали рівні СЕР з часом у макак, яким давали дози 0 мг/кг або 0,01 мг/кг. (ФІГ. 148) Спостерігали рівні СЕР з часом у макак, яким давали дози 0,3 мг/кг або 10 мг/кг. 0076) ФІГ. 15А та 158: Введення 1А7.дг1 яванським макакам призводило до мінімальних або тимчасових збільшень змішаного піднабору цитокінів. (ФІГ. 15А) Рівні протизапальних цитокінів ІЇ.б та МОРІ з часом. (ФІГ. 158) Рівні протизапальних цитокінів ІІ 10 та ІІ га з часом. бо На ФІГ. 15А та 158 відмічені стрілками окремі макаки у групі, яка отримувала дозу 10 мг/кг, які демонстрували тимчасові збільшення рівнів цитокінів. 0077) ФІГ. 16А та 168: Вплив 1А7.дІ1 на яванських макак підтверджували даними ФК у сироватці та зайнятості периферичних рецепторів. (ФІГ. 16А) ФК у сироватці макак, яким вводили 0,01, 0,3 або 10 мг/кг 1А7.аг1. (ФІГ. 168) Зайнятість рецепторів ОХ40 на периферичних
Ср4-Т-клітинах з часом у макак, яким вводили 0,01, 0,3 або 10 мг/кг ТА7.дІ1. 0078) ФІГ. 17: Фармакокінетика (ФК) застосування ТА7.дг1 у дозах 0,5, 5 або 30 мг/кг у яванських макак. 00791 ФІГ. 18: Зайнятість рецепторів ОХ40 з часом у макак, яким вводили 0, 0,5, 5 або 30 мг/кг 1А7.9г1. Стрілками вказані дні, в які були отримані зразки.
ІОО80О)1 ФІГ. 19: Рівні МСР-1 з часом у макак, яким вводили 0, 0,5, 5 або 30 мг/кг 1А7.911.
ІЇ0О81| ФІГ. 20: У макак, яким вводили 0, 0,5, 5 або 30 мг/кг 1А7.дІї не спостерігали статистично значимої активації або проліферації периферичних Т-клітин.
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВАРІАНТІВ РЕАЛІЗАЦІЇ ВИНАХОДУ
Ї. ВИЗНАЧЕННЯ (0082) Термін "дисфункція" у контексті імунної дисфункції відноситься до стану зниженної імунної сприйнятливості до антигенного стимулювання.
І0083)| Термін "дисфункціональний", як використовується у цьому документі, також включає рефрактерність або несприйнятливість до розпізнавання антигена, конкретно порушеній здатності переводити розпізнавання антигена у забезпечення низхідних ефекторних функцій Т- клітин, таких як проліферація, продукція цитокінів (наприклад, гама-інтерферону) та/або знищення клітин-мішеней. (0084) "Посилення функціонування Т-клітин" означає індукувати, викликати або стимулювати ефекторну Т-клітинну або Т-клітинну пам'яті для того щоб отримати відновлене, довготривале або посилене біологічне функціонування. Приклади посилення функціонування Т-клітин включають: збільшену секрецію у-інтерферону у СО8: ефекторних Т-клітин, збільшену секрецію у-інтерферону у СО4ж- Т-клітин пам'яті тал"або ефекторних Т-клітин, збільшену проліферацію ср4- ефекторних Т-клітин та/або Т-клітин пам'яті, збільшену проліферацію СО8-- ефекторних
Т-клітин, збільшену сприйнятливість до антигена (наприклад, виведення), відносно таких рівнів до втручання. В одному варіанті реалізації винаходу рівень посилення складає щонайменше
Зо 50 95, в альтернативному варіанті 60 9», 70 бо, 80 90, 90 95, 100 90, 120 95, 150 9», 200 95. Спосіб вимірювання цього посилення відомий спеціалісту у даній галузі техніки.
І0085| "Несприйнятливість пухлини" відноситься до процесу, в якому пухлина уникає імунного розпізнавання та виведення. Тому, як терапевтична концепція, несприйнятливість пухлини "лікується", коли таке уникнення послаблене, а пухлини розпізнаються та атакуються імунною системою. Приклади розпізнавання пухлини включають зв'язування пухлини, зменшення розмірів пухлини та виведені пухлини. 0086) "Імуногенність" відноситься до здатності конкретної речовини провокувати імунну відповідь. Пухлини є імуногенними та такими, що посилюють імуногенність пухлини, допомагаючи у виведенні пухлинних клітин завдяки імунній відповіді.
І0087| "Акцепторний каркас людини" для цілей цього документа являє собою каркас, що містить амінокислотну послідовність каркаса варіабельного домена легкого ланцюга (МІ) або каркас варіабельного домена важкого ланцюга (МН), отриману з імуноглобулінового каркаса людини або консенсусного каркаса людини, як визначено нижче. Акцепторний каркас людини "отриманий з" імуноглобулінового каркаса людини або консенсусного каркаса людини може містити таку ж як у них амінокислотну послідовність або може містити зміни в амінокислотній послідовності. У деяких варіантах реалізації винаходу кількість амінокислотних змін складає 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, 6 або менше, 5 або менше, 4 або менше,
З або менше або 2 або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу акцепторний каркас МІ. людини за послідовністю ідентичний послідовності імуноглобулінового каркаса МІ людини або послідовності консенсусного каркаса людини. (0088) "Афінність" відноситься до сили сумарних загальних нековалентних взаємодій між окремою ділянкою зв'язування молекули (наприклад, антитіла) та її партнером зі зв'язування (наприклад, антигеном). Якщо не вказане інше, як використовується у цьому документі, "афінність зв'язування" відноситься до природної афінності зв'язування, яка відображає взаємодію 1:11 між членами пари, що приймає участь у зв'язуванні (наприклад, антитілом та антигеном). Афінність молекули Х до її партнера У, як правило, можна представити у вигляді константи дисоціації (Ка). Афінність може вимірюватися за допомогою загальноприйнятих методів, відомих у даній галузі техніки, у тому числі описаних у цьому документі. Конкретні ілюстративні та типові варіанти реалізації винаходу, пов'язані з вимірюванням афінності бо зв'язування, описані у подальшому.
00891 "Антитіло-агоніст", як використовується у цьому документі, являє собою антитіло, яке активує біологічну активність антигена, який воно зв'язує. 0090 "Антиангіогенний агент" відноситься до сполуки, яка блокує або до деякого ступеня перешкоджає розвитку кровоносних судин. Антиангіогенний агент може, наприклад, бути малою молекулою або антитілом, ясе зв'язується з фактором росту або рецептором фактору роста, що задіяний у стимуляції ангіогенезу. В одному варіанті реалізації винаходу антиангіогенний агент являє собою антитіло, яке зв'язується з фактором росту ендотелію судин (ФРЕС), таке як бевацизумаб (АМАЗТІМ). 0091 "Антитілозалежна клітинно-опосередкована цитотоксичність" або "АЗКЦ" відноситься до виникнення цитотоксичності, при якій секретований імуноглобулін, зв'язаний на рецепторах
Ес (БСК), презентується на певних цитотоксичних клітинах (наприклад, МК-клітинах, нейтрофілах та макрофагах), що дає можливість цим цитотоксичним ефекторним клітинам специфічно зв'язуватися клітиною-мішенню, що несе антиген, та у подальшому знищувати цю клітину-мішень цитотоксинами. Первинні клітини для опосередковання АЗКЦ експресують лише
ЕсукП, тоді як моноцити експресують ЕсуВі, ЕсукКіІ!Ї та ЕсукіІШ. Дані з експресії Рок на гемопоетичних клітинах зібрані в табл. З на сторінці 464 статті Камеїсі апа Кіпеї, Аппи. Вемх.
Іттипої! 9:457-92 (1991). Для оцінки активності АЗКЦ молекули, яка представляє інтерес, може проводитися аналіз АЗКЦ іп міїго, такий як описаний у патенті США Мо 5500362 або 5821337, або
США Мо 6737056 (Ргезіа). Придатні для таких аналізів ефекторні клітини включають МКПК та
МК-клітини. В альтернативному варіанті, або додатково, активність АЗКЦ молекули, яка представляє інтерес, може оцінюватися іп мімо, наприклад, на тваринній моделі, такій як описано в Сіупе5 єї а. РМАБ (О5А) 95:652-656 (1998). Типовий аналіз для оцінки активності
АЗКЦ пропонується у прикладах цього документа. 00921 Терміни "антитіло проти ОХ40" та "антитіло, що зв'язується з ОХ40" відносяться до антитіла, яке здатне до зв'язування ОХ40 з достатньою афінністю, так що антитіло стає придатним в якості діагностичного та/або терапевтичного засобу для таргетінгу ОХ40. В одному варіанті реалізації винаходу ступінь зв'язування антитіла проти ОХ40 з неспорідненим не-0ОХ40 білком складає менше ніж близько 1095 зв'язування антитіла з ОХ40 за результатами вимірювання, наприклад, шляхом радіоїмуноаналізу (РІА). У деяких варіантах реалізації
Зо винаходу антитіло, яке зв'язується з ОХ40, має константу дисоціації (Ка) х 1 мкМ, х 100 нМ, х 10
НМ, НМ, х0,1 НМ, х 0,01 нМ або х 0,001 нМ (наприклад, 1038 М або менше, наприклад від 1058
М до 10-33 М, наприклад від 109 М до 10-33 М). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 зв'язується з епітопом ОХ40, який зберігається серед ОХ40 різних видів. 0093) Як використовується у цьому документі, термін "зв'язує", "специфічно зв'язується 3" або являється "специфічним для" відноситься до вимірюваних та відтворюваних взаємодій, таких як зв'язування між мішенню та антитілом, яке є визначаємим за наявністю мішені у присутності гетерогенної популяції молекул, які включають біологічні молекули. Наприклад, антитіло, яке зв'язується з або специфічно зв'язується з мішенню (якою може бути епітоп) являє собою антитіло, яке зв'язує цю мішень з більшою афінністю, авідністю, більшою ймовірністю та/або на більшою тривалістю, ніж воно зв'язується з іншими мішенями. В одному варіанті реалізації винаходу ступінь зв'язування антитіла з неспорідненою мішенню складає менш ніж близько 1095 зв'язування антитіла з мішенню за результатами вимірювання, наприклад, шляхом радіоіїмуноаналізу (РІА). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, яке специфічно зв'язується з мішенню, має константу дисоціації (Ка) х 1 мкМ, х 100 нМ, х 10 нМ, «х 1
НМ або х 0,1 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло специфічно зв'язується з епітопом на білці, який зберігається серед таких білків різних видів. В іншому варіанті реалізації винаходу специфічне зв'язування може включати, але не потребує виняткового зв'язування. (0094) Термін "антитіло" у цьому документі використовується у самому широкому розумінні та охоплює різні структури антитіл, включаючи, але не обмежуючись ними, моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, мультиспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла) та фрагменти антитіл, за умови, що вони проявляють потрібну антигензв'язуючу активність.
Ї0095| "Фрагмент антитіла" відноситься до молекули, що відрізняється від інтактного антитіла, яка містить частину інтактного антитіла, яке зв'язує антиген, з яким зв'язується інтактне антитіло. Приклади фрагментів антитіла включають, але не обмежуються ними, Ем,
Бар, Рар", Рар'ЗН, Е(ар")»; діатіла; лінійні антитіла; молекули одноланцюгових антитіл (наприклад, 5сЕм) та мультиспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл.
Ї0096| "Антитіло, яке зв'язується з таким же епітопом" в якості еталонного антитіла відноситься до антитіла, яке блокує зв'язування еталонного антитіла з його антигеном у конкурентному аналізі на 50 95 або більше, і, навпаки, еталонне антитіло блокує зв'язування бо антитіла з його антигеном у конкурентному аналізі на 50 95 або більше. Типовий конкурентний аналіз представлений у цьому документі.
Ї0097| Термін "зв'язуючий домен" відноситься до ділянки поліпептиду, який зв'язується з іншою молекулою. У випадку ЕСК зв'язуючий домен може містити частину його поліпептидного ланцюга (наприклад, його альфа-ланцюга), який відповідає за зв'язування Ес-ділянки. Один придатний зв'язуючий домен являє собою позаклітинний домен альфа-ланцюга ск. 0098) Поліпептид з Ес варіанта Ідс зі "зміненим" ЕСК щодо активності АЗКЦ або фагоцитозу являє собою поліпептид, який має або посилену, або знижену активність зв'язування ЕсВА (наприклад, ЕсукК) та/або активність АЗКЦ та/або активність фагоцитозу у порівнянні з вихідним поліпептидом або поліпептидом, що містить нативну послідовність Ес-ділянки.
Ї0099| Термін "ОХ40", як використовується у цьому документі, відноситься до будь-якого нативного ОХ40 з будь-якого джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) та гризуни (наприклад, миші та щурі), якщо не вказане інше. Термін охоплює "повнорозмірний" непроцесований ОХ40, а також будь-яку форму ОХ40, яка виникає у результаті процесингу у клітині. Термін також охоплює варіанти ОХ40, що зустрічаються у природі, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти. Амінокислотна послідовність типового ОХ40 людини показана у ЗЕО ІЮ МО:1.
ІО100)| "Активація ОХ40" відноситься до активації рецептора ОХ40. В цілому, активація ОХ40 призводить до трансдукції сигналу.
ІО1011| Терміни "рак" та "раковий" відносяться до або описують фізіологічний стан у ссавців, який, як правило, характеризується нерегульованим ростом клітин. Приклади раку включають, але не обмежуються ними, карциному, лімфому, бластому, саркому та лейкоз або лімфоїдні злоякісні новоутворення. Більше конкретні приклади таких ракових захворювань включають, але не обмежуються ними, плоскоклітинний рак (наприклад, епітеліальний плоскоклітинний рак), рак легень, включаючи дрібноклітинний рак легень, недрібноклітинний рак легень, аденокарциному легень та плоскоклітинну карциному легень, рак черевної порожнини, гепатоцелюлярний рак, шлунковий рак або рак шлунку, включаючи рак шлунково-кишкового тракту та стромальний рак шлунково-кишкового тракту, рак підшлункової залози, гліобластому, рак шийки матки, рак яєчника, рак печінки, рак сечового пухиря, рак сечовивідних шляхів, гепатому, рак молочної залози, рак товстого кишківника, рак прямої кишки, колоректальний рак,
Зо карциному ендометрію або матки, карциному слинної залози, рак нирки або нирковий рак, рак простати, рак вульви, рак щитовидної залози, карциному печінки, карциному заднього проходу, карциному статевого члена, меланому, поверхневу меланому, що поширюється, обмежений передраковий меланоз, акральні лентигінозні меланоми, нодулярні меланоми, множинну меланому та В-клітинну лімфому; хронічну лімфоцитарну лейкемію (СГ); гостру лімфобластоїдну лейкемію (АЇЇ); волосатоклітинну лейкемію; хронічну мієлобластоїдну лейкемію та посттрансплантаційний лімфопроліферативний розлад (РТІ 0), а також аномальну васкулярну проліферацію, пов'язану з факоматозами, набряком (таку як пов'язану з пухлинами головного мозку), синдром Мейгса, рак головного мозку, а також рак голови та шиї, і пов'язані з ними метастази. У деяких варіантах реалізації винаходу ракові захворювання, які піддаються лікуванню антитілами за цим винаходом, включають рак молочної залози, колоректальний рак, рак прямої кишки, недрібноклітинний рак легень, гліобластому, неходжкінську лімфому (НХЛ), нирково-клітинний рак, рак простати, рак печінки, рак підшлункової залози, саркому м'яких тканин, саркому Капоші, карциноїдну карциному, рак голови та шиї, рак яєчника, мезотеліому та множинну мієлому. У деяких варіантах реалізації винаходу рак вибирають з: недрібноклітинного раку легень, гліобластоми, нейробластоми, меланоми, карциноми молочної залози (наприклад, тричі негативний рак молочної залози), шлункового раку, колоректального раку (СКС) та гепатоцелюлярної карциноми. Ще у деяких варіантах реалізації винаходу рак вибирають з: недрібноклітинного раку легень, колоректального раку, гліобластоми та карциноми молочної залози (наприклад, тричі негативний рак молочної залози), включаючи метастатичні форми цих видів раку.
І0102| Терміни "проліферативний клітинний розлад" та "проліферативний розлад" відносяться до розладів, які зв'язані з деяким ступенем проліферації аномальних клітин. В одному варіанті реалізації винаходу проліферативний клітинний розлад являє собою рак.
ІО10О3| Термін "химерне" антитіло відноситься до антитіла, в якому частина важкого та/або легкого ланцюга отримана з конкретного джерела або виду, тоді як залишок важкого та/або легкого ланцюга отриманий з іншого джерела або виду. 01041 "Клас" антитіла відноситься до типа константного домена або константної ділянки, що знаходяться на своєму важкому ланцюзі. Існує п'ять основних класів антитіл: ІдА, дО, ЧЕ, дос та І9М, та деякі з них можуть додатково підрозділятися на підкласи (ізотипи), наприклад, дос, бо Ідс2, Ідсіз, Ся, ДА: та ІдАг. Константні домени важкого ланцюга, що відповідають різним класам імуноглобулінів, називаються відповідно а, б, є, у та рн. 0105) "Комплементзалежна цитотоксичність" або "КЗЦ" відноситься до лізису клітини-мішені у присутності комплементу. Активація класичного шляху активації комплементу ініціюється зв'язуванням першого компонента системи комплементу (Сід) з антитілами (відповідного підкласу), які зв'язані антигеном, що ними розпізнається. Для оцінки активації комплементу, може бути виконаний аналіз КЗЦ, наприклад, як описано в 5а77апо-бапіого еї аї., у. Іттипо).
Меїйод5 202:163 (1996). Описані поліпептидні варіанти зі зміненими амінокислотними послідовностями Ес-ділянки (поліпептиди з варіантом Ес-ділянки) та збільшеною або зменшеною здатністю зв'язування С1д, наприклад, у патенті США Мо 6194551 ВІ та МО 1999/51642. Див. також, наприклад, Ідизодіє еї аї. У. Іттипої. 164: 4178-4184 (2000).
ІО106)| Термін "цитостатичний засіб" відноситься до сполуки або композиції, які зупиняють ріст клітини як іп міїго, так та іп мімо. Тому цитостатичний засіб може бути таким, який значно знижує відсотковий вміст клітин в 5-фазі. Додаткові приклади цитостатичних засобів включають агенти, які блокують проходження клітинного циклу індукуванням зупинки 50/51 або зупинки М- фази. Гуманізоване антитіло проти Нег2 трастузумаб (НЕКСЕРТІМФ) є прикладом цитостатичного засобу, яке індукує зупинку 50/51. Класичні блокатори М-фази включають алкалоїди барвінку (вінкристин та вінбластин), таксани та інгібітори топоіїзомерази ІЇ, такі як доксорубіцин, епірубіцин, даунорубіцин, етопозид та блеоміцин. Деякі агенти, блокуючі С1, також призводять до зупинки 5-фази, наприклад, ДНК-алкілуючі агенти, наприклад, тамоксифен, преднізолон, дакарбазин, мехлоретамін, цисплатин, метотрексат, 5-фторурацил та ага С. Додаткову інформацію можна знайти у книзі Мепаеїзопп апа Ізгаєї, ед5., Те Моїесшаг
Вавзів ої Сапсетг, розділ 1, під назвою "Сеї| сусіє гедшайоп, опсодепе5, апа апііпеоріавіїс агиав", написаною МигаКаті еї а. (М.В. Зайпаег5, РПйадеї!рпіа, 1995), наприклад, с. 13. Таксани (паклітаксел та доцетаксел) є протираковими препаратами, які отримують з тисового дерева.
Доцетаксел (ТАХОТЕКЕФ, Кпопе-Рошціеєпс Когег), який отримують з європейського тису, є напівсинтетичним аналогом паклітаксела (ТАХОЇФ, ВгібіоІ-Муег5 зЗапціБб). Паклітаксел та доцетаксел стимулюють збірку мікротрубочок з димерів тубуліну та стабілізують мікротрубочки шляхом запобігання їх деполімеризації, що призводить до інгібування в клітинах мітозу.
І0107| Термін "цитотоксичний засіб", що використовується у цьому документі, відноситься до
Зо речовини, яка інгібує або пригнічує клітинне функціонування та/або викликає загибель або руйнування клітин. Цитотоксичні засоби включають, але не обмежуються ними, радіоактивні ізотопи (наприклад, АЇ2", 1191, (125, уз, Де"86, Де88, 5пті/1»з, Віг12, рзг2, Ррг!2 та радіоактивні ізотопи
Гм); хіміотерапевтичні засоби або лікарські речовини (наприклад, метотрексат, адріаміцин, алкалоїди барвінку (вінкристин, вінбластин, етопозид), доксорубіцин, мелфалан, мітоміцин С, хлорамбуцил, даунорубіцин або інші інтеркалюючі агенти); інгібуючі ріст агенти, ферменти та їх фрагменти, такі як нуклеолітичні ферменти; антибіотики; токсини, такі як низькомолекулярні токсини або ферментативно активні токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження, включаючи їх фрагменти та/або варіанти, та різні протипухлинні або протиракові засоби, описані нижче. 0108) "Виснажуюче антитіло проти ОХ40" являє собою антитіло проти ОХ40, яке знищує або виснажує популяцію ОХ40-експресуючих клітин. Виснаження експресуючих ОХ40 клітин може досягатися різними механізмами, такими як антитілозалежна клітинно-опосередкована цитотоксичність та/або фагоцитоз. Виснаження ОХ40-експресуючих клітин може аналізуватися іп міго, у цьому документі пропонуються типові способи аналізу іп міго з використанням АЗКЦ та фагоцитозу. У деяких варіантах реалізації ОХ40-експресуюча клітина являє собою СО4ж ефекторну Т-клітину людини. У деяких варіантах реалізації ОХ40-експресуюча клітина являє собою трансгенну клітину ВТ474, яка експресує ОХ40 людини. 0109) "Ефекторні функції" відносяться до тих видів біологічної активності, яка притаманна
Ес-ділянці антитіла, які змінюються в залежності від ізотипу антитіла. Приклади ефекторних функцій антитіл включають: зв'язування Сід та комплементзалежну цитотоксичність (КЗЦ); зв'язування з рецептором Ес; антитілозалежну клітинно-опосередковану цитотоксичність (АЗКЦ); фагоцитоз; знижуючу регуляцію клітинних поверхневих рецепторів (наприклад, В- клітинного рецептора) та активацію В-клітин.
ІО110)| "Ефективна кількість" агенту, наприклад, фармацевтичного препарату, відноситься до кількості, ефективної в дозуваннях та протягом потрібних періодів часу, для досягнення потрібного терапевтичного або профілактичного результату. 0111 "Рецептор Ес" або "Есе" описує рецептор, який зв'язується з Ес-ділянкою антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу БСК являє собою нативний БСК людини. У деяких варіантах реалізації винаходу БСК являє собою рецептор, який зв'язує антитіло Ідс (гама- бо рецептор), та включає рецептори підкласів ЕсуВіІ, ЕсукКІ! та ЕсукІ, включаючи алельні варіанти та альтернативно сплайсовані форми цих рецепторів. Рецептори ЕсуКіІ! включають ЕсувВІА (активуючий рецептор) та ЕсукКІІВ (інгібуючий рецептор), які мають подібні амінокислотні послідовності, які відрізняються головним чином за їх цитоплазматичними доменами.
Активуючий рецептор ЕСУКІЇА містить у своєму цитоплазматичному домені імунорецепторний тирозиновий активуючий мотив (ІТАМ). Інгібуючий рецептор ЕсукіІВ містить у своєму цитоплазматичному домені імунорецепторний тирозиновий інгібуючий мотив (ІТГІМ). (Див., наприклад, Юаєгоп, Аппи. Нем. Іттипої. 15:203-234 (1997). Огляд щодо ЕсК, наприклад, міститься у Камеїсії апа Кіпеї, Аппи. Веу. Іттипої 9:457-92 (1991); Сареї! евї а!., Іттипотеїноа5 4:25-34 (1994) та де Нааз еї аї., у. І ар. Сіїп. Мед. 126:330-41 (1995). Інші ЕСЕ, включаючи ті, які будуть ідентифіковані у майбутньому, у цьому документі охоплені терміном "ЕСЕ". Термін "рецептор Ес" або "БСК" також включає неонатальний рецептор, БсоКп, який відповідає за перенос материнських (9 плоду (Сицуег єї аї., У. Іттипої. 117:587 (1976) та Кіт еї аї., 9.
ІттипоїЇ. 24:249 (1994)) та регуляцію гомеостазу імуноглобулінів. Методи вимірювання зв'язування з ЕсКп добре відомі (див., наприклад, Спеїе апа Уага., Іттипої. Тодау 18(12):592- 598 (1997); СПейе еї аї!., Маїште Віоїесппоіоаду, 15(7):637-640 (1997); Ніпюп еї аї., у. ВіоЇ. Снет. 279(8):6213-6216 (2004); МО 2004/92219 (Ніпоп еї аі!.). Може аналізуватися зв'язування іп мімо з
ЕсКп людини та період напіввиведення з сироватки поліпептидів з високою афінністю зв'язування ЕСЕ людини, наприклад, у трансгенних мишах або трансфікованих лініях клітин людини, що експресують ЕСЕ людини, або у приматах, яким вводяться поліпептиди з варіантом
Ес-ділянки. У заявці УМО 2000/42072 (Ргезіа) описуються варіанти антитіл з покращеним або зниженим зв'язуванням з ЕСЕ. Див. також, наприклад, 5опієїЇа5 еї аї. у. Вісі. Снет. 9(2):6591-6604 (2001). (0112) Термін "Ес-ділянка" у цьому документі використовується для позначення С-кінцевої ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну, яка містить щонайменше частину константної ділянки.
Термін включає Ес-ділянки з нативними послідовностями та варіанти Ес-ділянок. В одному варіанті реалізації винаходу Ес-ділянка важкого ланцюга до людини продовжується від Суз226 або від Рго230 до карбоксильного кінця важкого ланцюга. Однак Ес-ділянка може містити або не містити С-кінцевий лізин (І уз447). Якщо не вказане інше, нумерація амінокислотних залишків у
Ес-ділянці або константній ділянці відповідає системі нумерації ЄЮ, що також називається
Ко) індексом Є), як описано в КаБбаї еї аІ., Зедоепсев ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві, Бій Еа.
Рибіїс Неацй 5егмісе, Маїйопаї! Іпвійшез ої Неайй, Веїйезаа, МО, 1991.
ІО113| "Функціональна Ес-ділянка" має "ефекторну функцію" нативної послідовності Ес- ділянки. Типові "ефекторні функції" включають зв'язування С14, КЗЦ" зв'язування з рецептором
Ес; АЗКЦ; фагоцитоз; знижуючу регуляцію клітинних поверхевих рецепторів (наприклад, В- клітинний рецептор; ВСЕ) і т. п. Для таких ефекторних функцій звичайно потрібна Ес-ділянка, яка повинна об'єднуватися зі зв'язуючим доменом (наприклад, варіабельним доменом антитіла) та може оцінюватися з використанням різних аналізів, як описано, наприклад, у визначеннях цього документа. (0114) "Ефекторні клітини людини" відносяться до лейкоцитів, які експресують один або більше Ес та виконують ефекторні функції. У деяких варіантах реалізації винаходу клітини експресують щонайменше суки! та виконують ефекторну(ї) функцію(ї) АЗКЦ. Приклади лейкоцитів людини, які опосередковують АЗКЦ, включають мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК), природні клітини-кілери (МК), моноцити, цитотоксичні Т-клітини та нейтрофіли. Ефекторні клітини можуть бути виділені з нативного джерела, наприклад, з крові.
ЇО115| "Каркасний" або "РК" відноситься до залишків варіабельних доменів, що відрізняються від залишків гіперваріабельних ділянок (НМК). ЕК варіабельного домена звичайно складається з чотирьох доменів ЕК: ЕК, ЕК2, ЕКЗ та ЕКА. Відповідно, послідовності
НМЕ та ЕК у складі МН (або МІ) звичайно проявляються у наступній послідовності: ЕК1-НІ(І 1)-
ЕнН2г-нНа(І2)-ЕНЗ-НЗ(І 3)-ЕНА.
ІО116| Терміни "повнорозмірне антитіло", "інтактне антитіло" та "ціле антитіло" у цьому документі використовуються взаємозамінно та відносяться до антитіла, яке має структуру практично аналогічну структурі нативного антитіла, або яке має важкі ланцюги, які містять Ес- ділянку, визначену у цьому документі.
ІО117| Терміни "клітина-хазяїн", "лінія клітин-хазяїнів" та "культура клітин-хазяїнів" у цьому документі використовуються взаємозамінно та відносяться до клітин, в які введена екзогенна нуклеїнова кислота, включаючи потомство таких клітин. Клітини-хазяїни включають "трансформанти" та "трансформовані клітини", які включають первинно трансформовану клітину та отримане з них потомство, незалежно від кількості пасажів. Потомство може бути не повністю ідентичним материнській клітині за вмістом нуклеїнових кислот та може містити 60 мутації. До обсягу цього опису включене мутантне потомство, отримане шляхом скринінгу або відбору, яке має таку ж функцію або біологічною активністю, як і вихідна трансформована клітина. 0118) "Антитіло людини" являє собою антитіло, що має амінокислотну послідовність, яка відповідає послідовності антитіла, що продукується організмом людини або клітиною людини та/або отримана з нелюдського джерела, в якому використовуються репертуари антитіл людини або інші послідовності, кодуючі антитіла людини. З цього визначення антитіла людини, зокрема, виключене гуманізоване антитіло, що містить антигензв'язуючі залишки нелюдського похождення.
ЇО119| "Консенсусна каркасна ділянка людини" являє собою каркасну ділянку, яка представляє амінокислотні залишки, що найчастіше зустрічаються при відборі каркасних послідовностей МІ. або УН імуноглобулінів людини. Звичайно відбір послідовностей МІ або УН імуноглобулінів людини здійснюють з підгрупи послідовностей варіабельних доменів. Звичайно підгрупа послідовностей являє собою підгрупу за Кабаї еї аїЇ., бедиєпсев5з ої Ргоївїп5 ої
Ітітипо!іодіса! Іпіегев5і, БИ Еайоп, МІН Рибіїсайоп 91-3242, Ве(Шезаа МО (1991), моїв. 1-3. В одному варіанті реалізації винаходу для Мі підгрупа являє собою підгрупу каппа І, згідно Кабаї еї аІ., вище. В одному варіанті реалізації винаходу для УН підгрупа являє собою підгрупу ПІ, згідно Кабаї еї аї., вище.
ІО120)| "Гуманізоване" антитіло відноситься до химерного антитіла, що містить амінокислотні залишки від нелюдських НМК та амінокислотні залишки від ЕК людини. У деяких варіантах реалізації винаходу гуманізоване антитіло буде містити практично всі з щонайменше одного, а звичайно двох, варіабельних доменів, в яких всі або практично всі з НМК (наприклад, СОК) відповідають таким ділянкам нелюдського антитіла, а всі або практично всі ЕК відповідають таким ділянкам антитіла людини. Гуманізоване антитіло необов'язково може містити щонайменше частину константної ділянки людини, отриману з антитіла людини. "Гуманізована форма" антитіла, наприклад, нелюдського антитіла, відноситься до антитіла, яке піддали гуманізації. 01211 Термін "гіперваріабельна ділянка", що використовується у цьому документі, або "НМЕ" відноситься до кожній з ділянок варіабельного домена антитіла, які є гіперваріабельними за послідовністю ("визначаючі комплементарність ділянки" або "СОК") та/або утворують
Зо структурно визначені петлі ("гіперваріабельні петлі"), та/або містять контактуючі з антигенами залишки ("антигенні контакти"). Звичайно антитіла містять шість НМЕ: три у МН (НІ, Н2, НЗ) та триум (11,12, 13). Типові НМК у цьому документі включають: (а) гіперваріабельні петлі, що зустрічаються на амінокислотних залишках 26-32 (11), 50-52 (12), 91-96 (І 3), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2) та 96-101 (НЗ) (Споїніа апа І! евК, У. Мої. Віої. 196:901-917 (1987)); (5) СОК, що зустрічаються на амінокислотних залишках 24-34 (І 1), 50-56 (І 2), 89-97 (І 3), 31-
ЗБЬ (НІ), 50-65 (Н2) та 95-102 (НЗ) (Кабаї єї аї!., хХедоепсез ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодіса! Іпіегеві,
БП Еа. Рибіїс Неайй 5егмісе, Маїййопаї Іпзійшез ої Неанй, Веїпезаа, МО, (1991)); (с) антигенні контакти, що зустрічаються на амінокислотних залишках 2706-36 (І 1), 46-55 (І 2), 89-96 (13), 30-356 (НІ), 47-58 (Н2) та 93-101 (НЗ) (МасСаїйшт еї аї. 9). Мої. ВіоІ. 262: 732-745 (1996)) та (4) комбінації з (а), (Б) та/або (с), включаючі амінокислотні залишки НМ 46-56 (12), 47-56 (12), 48-56 (І 2), 49-56 (12), 26-35 (НІ), 26-356 (НІ), 49-65 (Нг), 93-102 (НЗ) та 94-102 (НЗ).
Якщо не вказане інше, залишки НУ. та інші залишки в варіабельному домені (наприклад, залишки ЕК) нумеруються у цьому документі у відповідності з Кабаї еї а!., вище.
В одному варіанті реалізації винаходу залишки НМК містять ідентифіковані на ФІГ. 11А-Ї або в інших місцях цього опису.
ІО122| "Імунокон'югат" являє собою антитіло, кон'юговане з однією або більше гетерологічними молекулами, включаючи, але не обмежуючись цитотоксичним засобом.
БО ІО1231| "Індивід" або "суб'єкт" є ссавцем. Ссавці включають, але не обмежуються ними, одомашнені тварини (наприклад, корови, вівці, кішки, собаки та коні), примати (наприклад, люди та тваринні примати, такі як мавпи), кролики та гризуни (наприклад, миші та щурі). У деяких варіантах реалізації винаходу індивід або суб'єкт є людиною. (0124) "Стимулювання росту або проліферації клітин" означає збільшення клітинного росту та проліферації на щонайменше 10 95, 20 95, 30 90, 40 95, 50 о, 60 90, 70 95, 80 У, 90 95, 95 90 або 100 95.
ІО125| "Виділене" антитіло являє собою антитіло, яке було відділено від компонентів його природного оточення. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло очищають до більше ніж 95 95 або 99 95 чистоти за результатами визначення, наприклад, електрофоретичним аналізом бо (наприклад, ДСН-ПААГ-електрофорезом, ізоелектричним фокусуванням (ІЕФ), капілярним електрофорезом) або хроматографічним аналізом (наприклад, іонообмінна або зворотно- фазова ВЕРХ). Огляд методів оцінки чистоти антитіл див., наприклад, ЕРіайтап еї аї., 9.
Спготагоаг. В 848:79-87 (2007). 0126) "Виділена" нуклеїнова кислота відноситься до молекули нуклеїнової кислоти, яка була відділена від компонентів її природного оточення. Виділена нуклеїнова кислота включає молекулу нуклеїнової кислоти, що міститься у клітинах, які звичайно містять таку молекулу нуклеїнової кислоти, однак ця молекула нуклеїнової кислоти присутня поза хромосомою або у положенні хромосоми, яке відрізняється від природного положення даної молекули у хромосомі.
І0127| Вираз "виділена нуклеїнова кислота, кодуюча антитіло проти ОХ40" відноситься до однієї або більше молекул нуклеїнової кислоти, кодуючим важкі та легкі ланцюги антитіла (або їх фрагменти), включаючи такую(ї) молекулу(и) нуклеїнових кислот, що знаходяться в одному векторі або в окремих векторах, та така(ї) молекула(и) нуклеїнових кислот, що присутні в одному або більше місцях клітини-хазяїна.
І0128| Термін "моноклональне антитіло", як використовується у цьому документі, відноситься до антитіла, яке отриманому з популяції практично гомогенних антитіл, тобто окремі антитіла, що складають популяцію, є ідентичними та/або зв'язують такий же епітоп, за виключенням можливих варіантів антитіл, наприклад, що містять мутації, які зустрічаються у природі або з'являються у процесі отримання препарату моноклонального антитіла, такі варіанти звичайно присутні у незначних кількостях. На відміну від препаратів поліклональних антитіл, які звичайно містять різні антитіла, направлені проти різних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло препарату моноклонального антитіла направлено проти однієї детермінанти на антигені. Тому, модифікатор "моноклональне" указує на властивість антитіла, як на отримане з практично гомогенної популяції антитіл, та її не слід інтерпретувати як потребу отримання антитіла шляхом будь-якого конкретного способу. Наприклад, моноклональні антитіла, які пропонується застосовувати у відповідності з цим винаходом, можуть бути отримані багатьма методиками, включаючи, але не обмежуючись ними, гібридомний спосіб, способи з використанням рекомбінантних ДНК, способи фагового дисплею та способи із застосуванням трансгенних тварин, що містять всі або частину локусів імуноглобулінів людини, такі способи та інші типові способи для отримання моноклональних антитіл, що описуються у
Зо цьому документі.
ІО129| "Голе антитіло" відноситься до антитіла, яке не кон'юговане з гетерологічним фрагментом (наприклад, цитотоксичним фрагментом) або радіоїзотопною міткою. У фармацевтичному препараті може бути присутнім голе антитіло.
ЇО1З30| "Нативні антитіла" відносяться до молекул імуноглобулінів, що зустрічаються у природі, з різними структурами. Наприклад, нативні антитіла ІдсС являють собою гетеротетрамерні глікопротеїни з молекулярною масою близько 150000 дальтон, що складаються з двох ідентичних легких ланцюгів та двох ідентичних важких ланцюгів, з'єднаних дисульфідними зв'язками. У напрямку від М- до С-кінця кожний важкий ланцюг має варіабельну ділянку (УН), що також називається варіабельним важким доменом або варіабельним доменом важкого ланцюга, який супроводжується трьома константними доменами (СНІ, СН2 та СНЗ).
Аналогічним чином, у напрямку від М- до С-кінця кожний легкий ланцюг має варіабельну ділянку (М), що також називається варіабельним легким доменом або варіабельним доменом легкого ланцюга, який супроводжується константним легким (С!) доменом. В залежності від амінокислотної послідовності свого константного домена легкий ланцюг антитіла можна віднести до одного з двох типів, що називаються капа (к) та лямбда (ХА). "Нативна послідовність
Ес-ділянки" містить амінокислотну послідовність, ідентичну амінокислотній послідовності Ес- ділянки, що виявлена у природі. Нативна послідовність Ес-ділянок людини включає нативну послідовність Ес-ділянки 91 людини (алотипи не-А та А); нативну послідовність Ес-ділянки
Іу352 людини; нативну послідовність Ес-ділянки ДОЗ людини та нативну послідовність Ес- ділянки ІдД4 людини, а також їх варіанти, що зустрічаються у природі.
ІО191| Термін "листок-вкладиш в упаковку" використовується по відношенню до інструкцій, які звичайно вкладають у продажні упаковки терапевтичних засобів, та які містять інформацію щодо показань, застосування, дозування, введення, комбінованої терапії, протипоказань та/або попереджень, які стосуються застосування таких терапевтичних засобів.
ІО132| «Відсоток (965) ідентичності амінокислотної послідовності" щодо еталонної поліпептидної послідовності визначають як відсоток амінокислотних залишків послідовності- кандидата, ідентичних амінокислотним залишкам в еталонній поліпептидній послідовності після вирівнювання послідовностей та, за необхідності, введення гепів для досягнення максимального відсотку ідентичності послідовностей, причому при визначенні ідентичності бо послідовностей не враховуються будь-які консервативні заміни. Вирівнювання з метою визначення відсотка ідентичності амінокислотних послідовностей може здійснюватися різними способами у межах рівня знань, доступних спеціалісту у даній галузі техніки, наприклад, з використанням загальнодоступного комп'ютерного програмного забезпечення, такого як ВІ А5Т,
ВІ А5Т-2, АГІОМ або програмного забезпечення Медаїдп (ОМАБТАК). Спеціалісти у даній області можуть визначити параметри, які підходять для вирівнювання послідовностей, у тому числі будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання порівнюваних послідовностей на всій довжині. Однак для целей цього документа значення 95 ідентичності амінокислотних послідовностей отримують з використанням комп'ютерної програми для порівняння послідовностей АЇГІОМ-2. Комп'ютерна програма для порівнення послідовностей
АПСИМ-2 розроблена Сепепіесії, Іпс., а вихідний код був зареєстрований поряд з інформацією для користувача у Бюро реєстрації авторських прав США, штат Вашингтон, округ Колумбія, 20559, де він зареєстрований під Ме реєстрації авторського права ТХО510087. Програма АГІСМ- 2 знаходиться у вільному доступі в сепепіесй, Іпс., м. Южний Сан Франциско, штат Каліфорнія, або її можна скомпілювати з вихідного коду. Для застосування в операційній системі ОМІХ, що включає цифрову версію ОМІХ М4.00, програму АГІСМ-2 потрібно скомпілювати. Всі параметри порівняння послідовностей задані програмою АГІСМ-2 та не зміняються.
ЇО133| У випадках, коли АЇІОМ-2 застосовується для порівняння амінокислотних послідовностей, 95 ідентичності амінокислотних послідовностей для даної амінокислотної послідовності А до, з або у порівнянні з даною амінокислотною послідовностю В (що можна в альтернативному варіанті сформулювати як ця амінокислотна послідовність А, яка містить або характеризується визначеним 956 ідентичності амінокислотних послідовностей до, з або у порівнянні з даною амінокислотною послідовністю В) розраховують наступним чином: 100 помножують на дріб (Х/У), де Х являє собою кількість підрахованих амінокислотних залишків як ідентичних співпадінь, визначених при програмному вирівнюванні послідовностей А та В програмою для вирівнювання послідовностей АЇЇ(5М-2, та де М являє собою загальну кількість амінокислотних залишків у послідовності В. Слід розуміти, що якщо довжина амінокислотної послідовності А не рівна довжині амінокислотної послідовності В, то 95 ідентичності амінокислотної послідовності А до амінокислотної послідовності В не буде рівною 95 ідентичності амінокислотної послідовності В до амінокислотної послідовності А. Якщо не вказано інше, всі значення 95 ідентичності амінокислотних послідовностей, що використовуються у цьому документі, отримують як описано безпосередньо у попередньому параграфі з використанням комп'ютерної програми
АПИаМ-2. (0134) Термін "фармацевтичний препарат" відноситься до препарату, який знаходиться у такій формі, щоб забезпечувати ефективність біологічної активності активного інгредієнту, що міститься в ній, та яка не містить додаткових компонентів, що мають неприйнятну токсичність для суб'єкта, якому слід вводити препарат.
ІЇ0135| "Фармацевтично прийнятний носій" відноситься до інгредієнту фармацевтичного препарату, що відрізняється від активного інгредієнту, який є нетоксичним для суб'єкта.
Фармацевтично прийнятний носій включає, але не обмежується переліченим, буфер, допоміжна речовина, стабілізатор або консервант. 0136) Як використовується у цьому документі, "лікування" (та його граматичні варіанти, такі як "лікувати" або "проведення лікування") відноситься до клінічного втручання при намаганні змінити природний розвиток захворювання індивіда, що піддають лікуванню, та може здійснюватися або для профілактики, або в ході розвитку клінічної патології. Бажані ефекти лікування включають, але не обмежуються ними, попередження виникнення або повернення захворювання, полегшення симптомів, зменшення будь-яких прямих або непрямих патологічних наслідків захворювання, запобігання метастазів, зменшення швидкості прогресування хвороби, покращення або тимчасове полегшення хворобливого стану та досягнення ремісії або покращеного прогнозу. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіла за цим винаходом використовуються для затримки розвитку захворювання або сповільнення прогресування захворювання.
І0137| Термін "пухлина" відноситься росту та проліферації всіх неопластичних клітин, як злоякісних, так і доброякісних, а також передракових та ракових клітин та тканин. Терміни "рак", "раковий", "розлад проліферації клітин" "проліферативний розлад" та "пухлина" не є взаємовиключаючими, як відмічено у цьому документі.
ІО138| Термін "варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" відноситься до домена важкого або легкого ланцюга антитіла, який приймає участь у зв'язуванні антитіла з антигеном.
Варіабельні домени важкого ланцюга та легкого ланцюга (МН та МІ, відповідно) нативного бо антитіла звичайно мають подібні структури, причому кожний домен містить чотири консервативні каркасні ділянки (ЕК) та три гіперваріабельні ділянки (НМК). (Див., наприклад,
Кіпаї єї аі. Киру Іттипоіоду, б" ей., ММ.Н. Ргеетап апа Со., раде 91 (2007).) Для надання антигензв'язуючої специфічности може бути достаточнім одного домена МН або МІ. Крім того, антитіла, які зв'язують конкретний антиген, можна виділити, використовуючи домен МН або Мі. з антитіла, яке зв'язує антиген, для скринінгу бібліотеки послідовностей, комплементарних доменам МІ. або УН, відповідно. Див., наприклад, Ропоїапо еї аї., У. Іттипої. 150:880-887 (1993);
Сіаікзоп еї аї., Майте 352:624-628 (1991).
І0О139| "Варіант Ро-ділянки" містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від нативної послідовності Ес-ділянки завдяки щонайменше одній амінокислотній модифікації, переважно одній або більше амінокислотним замінам. Переважно, варіант Ес-ділянки містить щонайменше одну амінокислотну заміну у порівнянні з нативною послідовністю Ес-ділянки або
Ес-ділянки вихідного поліпептиду, наприклад, від близько однієї до близько десяти амінокислотних замін та переважно від близько однієї до близько п'яти амінокислотних замін у нативній послідовності Ес-ділянки або у Ес-ділянці вихідного поліпептиду. Варіант Ес-ділянки у цьому документі будет переважно мати близько 80 95 гомології з нативною послідовністю Ес- ділянки та/або Ес-ділянки вихідного поліпептиду та переважніше всього щонайменше близько 90 95 гомології з ними, переважніше щонайменше близько 95 95 гомології з ними. (0140) Термін "вектор", як використовується у цьому документі, відноситься до молекули нуклеїнової кислоти, здатної забезпечувати репродукцію іншої зв'язаної з нею нуклеїнової кислоти. Термін включає вектор у вигляді структури нуклеїновой кислоти, що самореплікується, а також вектор, введений до геному клітини-хазяїна, в яку його ввели. Деякі вектори здатні керувати експресією нуклеїнових кислот, з якими вони функціонально зв'язані. Такі вектори відмічені у цьому документі "експресійними векторами". 0141) "Консенсусний каркас підгрупи ПІ МН" містить консенсусну послідовність, отриману з амінокислотних послідовностей у варіабельному важкому ланцюзі підгрупи ПІ за Кабаї еї аї. В одному варіанті реалізації винаходу амінокислотна послідовність консенсусного каркаса підгрупи ІШ МН містить щонайменше частину або всі з кожної з наступних послідовностей:
ЕМОЇ МЕЗО СИ МОРОИБІ ВІ 5СААБЗ (5ЕО ОО МО:185)-НІ-МУАОАРИКИ ЕММ (5ЗЕО ІЮ МО:186)-
Н2-ВЕТІЗАОМОКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАММУС (5ЕБО 10 МО:187)-НЗ-ЖСОСТІ МТУ55 (5ЕО Ір
Коо) МО:188). 0142) "Консенсусний каркас підгрупи | МІ" містить консенсусну послідовність, отриману з амінокислотних послідовностей у варіабельному легкому ланцюзі капа підгрупи І за Кабаї еї аї.
В одному варіанті реалізації винаходу амінокислотна послідовність консенсусного каркаса підгрупи І МН містить щонайменше частину або всі з кожної з наступних послідовностей:
РІОМТО5РБОБІ БАБМОИарАМТІТО (5ЕО ІЮ МО:189)-І 1--УМООКРОКАРКИИІМ (5ЕО ІЮ МО:190)-
Г2-аМРЗАЕЗОаЗОаЗаИаТОЕТІ ТІЗ5 ОРЕОБРАТУМОС (5ЕО 10 МО 191)-і3-БЕОСТКМЕІК (5ЕО 1
МО:192). 0143) Термін "цитотоксичний засіб", що використовується у цьому документі, відноситься до речовини, яка інгібує або пригнічує клітинне функціонування та/або викликає загибель або руйнування клітин. Цитотоксичні засоби включають, але не обмежуються ними, радіоактивні ізотопи (наприклад, Аї211, І131, 1125, М90, Ке186, Ке188, 5т153, Ві212, РЗ2, РБр212 та радіоактивні ізотопи Гц); хіміотерапевтичні засоби; інгібуючі ріст агенти, ферменти та їх фрагменти, такі як нуклеолітичні ферменти, та токсини, такі як низькомолекулярні токсини або ферментативно активні токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного проходження, включаючи їх фрагменти та/або варіанти. Типові цитотоксичні засоби можуть вибиратися з антимікротубулінових агентів, координаційних комплексів платини, алкілуючих агентів, антибіотичних агентів, інгібіторів топоїзомерази ІІ, гормонів та аналогів гормонів, інгібіторів механізмів сигнальної трансдукції, непов'язаних з рецепторами тирозинкінази інгібіторів ангіогенезу, імунотерапевтичних агентів, проапоптичних агентів, інгібіторів ЛДГ-А; інгібіторів біосинтезу жирних кислот; інгібіторів сигналінгу клітинного циклу; інгібіторів НОАС, інгібіторів протеасом та інгібіторів ракового метаболізму. 0144 В одному варіанті реалізації винаходу цитотоксичні засоби вибираються з антимікротубулінових агентів, координаційних комплексів платини, алкілуючих агентів, антибіотичних агентів, інгібіторів топоїзомерази ІЇ, антиметаболітів, інгібіторів топоізомерази І, гормонів та аналогів гормонів, інгібіторів механізмів сигнальної трансдукції, непов'язаних з рецепторами тирозинкінази інгібіторів ангіогенезу, імунотерапевтичних агентів, проапоптичних агентів, інгібіторів ЛДГ-А, інгібіторів біосинтезу жирних кислот, інгібіторів сигналінгу клітинного циклу, інгібіторів НОАС, інгібіторів протеасом та інгібіторів ракового метаболізму. В одному варіанті реалізації винаходу цитотоксичний засіб являє собою таксан. В одному варіанті бо реалізації винаходу таксан являє собою паклітаксел або доцетаксел. В одному варіанті реалізації винаходу цитотоксичний засіб являє собою агент на основі платини. В одному варіанті реалізації винаходу цитотоксичний засіб являє собою антагоніст ЕСЕ. В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст ЕСЕК являє собою М-(З-етинілфеніл)-6,7-біс(2- метоксиетокси)хіназолін-4-амін (наприклад, ерлотиніб). В одному варіанті реалізації винаходу цитотоксичний засіб являє собою інгібітор КАРЕ. В одному варіанті реалізації винаходу інгібітор
ЕАЕ являє собою інгібітор ВКАЕ та/або СКАБЕ. В одному варіанті реалізації винаходу інгібітор
КАР являє собою вемурафеніб. В одному варіанті реалізації винаходу цитотоксичний засіб являє собою інгібітор РІЗК. 01451 "Хіміотерапевтичное засобо" включає хімічні сполуки, придатні для лікування раку.
Приклади хіміотерапевтичних засобів включають ерлотиніб (ТАКСЕМАФ, Сепепіесп/о5і
РІпагт.), бортезоміб (МЕ САОЕФ, Мійеппішт Рпагт.), дисульфірам, епігалокатехіну галат, саліноспорамід А, карфілзоміб, 17-ААС (гелданаміцин), радіцикол, лактатдегідрогеназу А (ЛДГ-
А), фульвестрант (ГАЗ ООЕХФ, Авігалепеса), сунітіб (ЗОТЕМТФ, Ріїгег/Зидеп), летрозол (РГЕМАКАФ, Момагії5), іматинібу мезилат (ЗІ ЕЕМЕСФ, Момапів), фіназунат (МАТАЇГ АМІВФ),
Момапйів), оксаліплатин (ЕГОХАТІМФ, Запоїї), 5-ФУ (5-фторурацил), лейковорин, рапаміцин (сіролімус, КАРАМИОМЕФ, Умуеїй), лапатиніб (ТУКЕКВФ, 5К572016, Сіахо тій Кіїпе), лонафаміб (ЗСН 66336), сорафеніб (МЕХАМАКФ, Вауег ар»), гефитиніб (ІКЕЗ5АФ,
Авіга/епеса), АС1478, алкілуючі агенти, такі як тіотепа та циклофосфамід СУТОХАМФ); алкілсульфонати, такі як бусульфан, імпросульфан та піпосульфан; азиридіни, такі як бензодопа, карбоквон, метуредопа та уредопа; етиленіміни та метилмеламіни, включаючи алтретамін, триетиленмеламін, триетиленфосфорамід, триетилентіофосфорамід (та триметилмеламін; ацетогеніни (особливо булатацин та булатацинон); камптотецин (включаючи топотекан та іринотеан); бріостатин; калістатин; СС-1065 (включаючи його синтетичні аналоги адозелезін, карзелезін та бізелезін); криптофіцини (особливо криптофіцин 1 та криптофіцин 8); адренокортикостероїди (включаючи преднізон та преднізолон); ципротерону ацетат; 5а- редуктази, включаючи фінастерид та дутастерид); вориностат, ромідепсин, панобіностат, вальпроєву кислоту, моцетиностату доластатин; альдезлейкін, тальк з дуокарміцином (включаючи синтетичні аналоги КМУуУ-2189 та СВ1-ТМІ1); елеутеробін; панкратистатин; саркодиктилін; спонгістатин; азотисті іприти, такі як хлорамбуцил, хломафазин,
Зо хлорфосфорамід, естрамустин, іфосфамід, мехлоретамін, мехлоретаміноксиду гідрохлорид, мелфталан, новембіхін, фенестерин, преднімустин, трофосфамід, урамустин; нітросечовини, такі як кармустин, хлорзотоцин, фотемустин, ломустин, німустин та ранімустин; антибіотики, такі як ендиїнові антибіотики (наприклад, каліхеміцин, особливо каліхеаміцин ут! та каліхеаміцин 11 (Апдем/ Сет. пі. Ей. ЕпоїЇ. 1994 33:183-186); динеміцин, включаючи динеміцин А; бісфосфонати, такі як клодронат; еспераміцин; а також хромофор неокарзиностатину та споріднені хромобілкові хромофори ендиїнових антибіотиков), аклациномізини, актиноміцин, аутраміцин, азасерин, блеоміцини, кактиноміцин, карабіцин, каміноміцин, карзинофілін, хромоміцини, дактиноміцин, даунорубіцин, деторубіцин, б-діазо-5-оксо-І -сорлейцин,
АОКІАМУСІМФ (доксорубіцин), морфолінодоксорубіцин, ціаноморфолінодоксорубіцин, 2- піролінодоксорубіцин та дезоксидоксорубіцин), епірубіцин, езорубіцин, ідарубіцин, марцеломіцин, мітоміцини, такі як мітоміцин С, мікофенолова кислота, ногаламіцин, оливоміцини, пепломіцин, порфіроміцин, пуроміцин, квеламіцин, родорубіцин, стрептонігрин, стрептозоцин, туберцидін, убенімекс, зиностатин, зорубіцин; антиметаболіти, такі як метотрексат та 5-фторурацил (5-ФУ); аналоги фолієвої кислоти, такі як деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пуринів, такі як флударабін, б-меркаптопурин, тіаміприн, тіогуанін; аналоги піримідинів, такі як анцитабін, азацитидин, б-азаурідин, камфора, цитарабін, дідезоксіурідин, доксифлуридин, еноцитабін, флоксиурідин; андрогени, такі як калустерон, дромостанолона пропионат, епитиостанол, мепитиостан, тестолактон; пригнічуючі функції надниркових залоз засобів, такі як аміноглутетимід, мітотан, трилостан; добавку для поповнення фолієвої кислоти, такі як фолінієва кислота; ацеглатон; альдофосфаміду глікозид; амінолевулінову кислоту; енілурацил; амсакрин; бестрабуцил; бізантрен; едатраксат; дефофамін; демеколцин; діазиквон; елфомітин; еліптинію ацетат; епотилон; етоглюцид; нітрат галію; гідроксисечовину; лентінан; лонідайнін; майтанзиноїди, такі як майтанзин та анзамітоміцини; мітогуазон; мітоксантрон; мопідамнол; нітраерин; пентостатин; фенамет; пірарубіцин; лозоксантрон; подофілінову кислоту; 2-етилгідразид; прокарбазин; полісахаридний комплекс РОКФ (нь Майигаї! Ргодисів, м. Юджин, штат Орегон); разоксан; ризоксин; сизафуран; спірогерманій; тенуазонієву кислоту; триазіквон; 2,2'2"-трихлортриетиламін; трихотецини (особливо токсин Т-2, веракурин А, рорідин А та ангуіїдин); уретан; виндезин; дакарбазин; маномустин; мітобронітол; мітолактол; піпоброман; гацитозин; арабінозид ("Ага-С");
Ге) циклофосфамід; тіотепа; таксоїди, наприклад, ТАХОЇ (паклітаксел; ВгізіоІ-Муєтв Бацірь
Опсоіоду, м. Прінстон, штат Нью-Джерсі), АВКАХАМЕФ (що не містить кремофор), сконструйовані на основі наночастинок альбуміну препарати паклітаксела (Атегісап
РПпагтасеціїса! Рагіпег5, м. Шаумбург, штат Ілінойс) та ТАХОТЕКЕФ (доцетаксел, доксетаксел;
Запоїі-Амепіїз); хлорамбуцил; ЗЕМ2АКФ (гемцитабін); б-тіогуанін; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платини, такі як цисплатин та карбоплатин; вінбластин; етопозид (МР-16); іфосфамід; мітоксантрон; вінкристин; МАМЕЇВІМЕФ |(винорелбін); новантрон; теніпозид; едатрексат; дауноміцин; аміноптерин; капецитабін (ХЕ ОБАФ)); ібандронат; СРТ-11; інгібітор топоїзомерази
КЕ 2000; дифторметилорнітин (ОМЕО); ретиноїди, такі як ретиноєва кислота, та фармацевтично прийнятні солі, кислоти та похідні будь-яких з перелічених вище речовин. 0146) Хіміотерапевтичний засіб також включає (ї) протигормональні агенти, які приймають участь у регулюванні або інгібуванні дії гормонів на пухлини, такі як антиестрогени та селективні модулятори естрогенних рецепторів (ЗЕКМ), включаючи, наприклад, тамоксифен (включаючий
МОГ МАОЕХФ; тамоксифену цитрат), ралоксифен, дролоксифен, йодоксифен, 4- гідрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, 1117018, оонапрістон та БАКЕБЗТОМФ (тореміфіну цитрат); (ії) інгібітори ароматази, які інгібують фермент ароматазу, що регулює продукцію естрогенів у надниркових залозах, такі як, наприклад, 4(5)-імідазоли, аміноглутетимід, МЕСАБЕФ (мегестролу ацетат), АКОМАБІМО (екземестан; Ріїйгег), форместан, фадрозол, КІМІЗОКФ (ворозол), РЕЕМАКАФ (летрозол; Момапіз) та АКІМІОЕХФ (анастрозол;
Авіга/епеса); (ії) антиандрогени, такі як флутамід, нілутамід, бікалутамід, лейпролід та гозерелін; бузерелін, триптерелін, медроксипрогестерону ацетат, діетилстильбестрол, премарин, флуоксиместерон, повністю транс-ретиноєву кислоту, фенретинід, а також троксацитабін (1,3-діоксолановий нуклеозидний аналог цитозину); (ім) інгібітори протеїнкіназ; (м) інгібітори ліпідкіназ; (м) антисмислові олігонуклеотиди, зокрема інгібуючі експресію генів у механізмах сигналінгу, задіяних у розладі проліферації клітин, такі як, наприклад, РКС-альфа,
Каїг та Н-Кав; (мії) рибозими, такі як інгібітори експресії ФРЕС (наприклад, АМСІО2УМЕФ) та інгібітори експресії НЕК2; (мії) вакцини, такі як вакцини для генної терапії, наприклад,
АГ ОМЕСТІМФ, І ЄЕОМЕСТІМФО, та МАХІОФ; РКОЇ ЕЄОКІМО,, пі! -2; інгібітор топоіїзомерази 1, такої як ГШКТОТЕСАМФ; АВАКЕГІХО гтнН та (їх) фармацевтично прийнятні соли, кислоти та похідні будь-яких з перелічених вище речовин.
Зо 01471 Хіміотерапевтичний засіб також включає антитіла, такі як алемтузумаб (Сатраїй), бевацизумаб (АМАБТІМФ), (зепепіесп); цетуксимаб (ЕКВІТОХФ, Ітсіопе); панитумумаб (МЕСТІВІХФ, Атдеп), рутиксимаб (КІТОХАМФЕ», Сепепіесп/Віодеп дес), пертузумаб (ОММІТАКОФ), 204, Сепепіесії), трастузумаб (НЕКСЕРТІМФ), Сепепіесії), тозитумомаб (Веххаг,
Согіхіа) та кон'югат антитіло-лікарська речовина, гемтузумаб озогаміцин (МУ ОТАКОФ, Умуеїт).
Додаткові гуманізовані моноклональні антитіла з терапевтичним потенціалом у якості агентів в комбінації зі сполуками за цим винаходом включають: аполізумаб, азелізумаб, атлізумаб, бапінеузумаб, біватузумаб мертанзин, кантузумаб мертанзин, цеделізумаб, цертолізумаб пегол, цидфузитузумаб, цидтузумаб, даклізумаб, екулізумаб, ефалізумаб, епратузумаб, ерлізумаб, фелвізумаб, фонтолізумаб, гемтузумаб озогаміцин, інотузумаб озогаміцин, іпілімумаб, лабетузумаб, лінтузумаб, матузумаб, меполізумаб, мотавізумаб, мотовізумаб, наталізумаб, німотузумаб, ноловізумаб, нумавізумаб, окрелізумаб, омалізумаб, палівізумаб, пасколізумаб, пекфузитузумаб, пектузумаб, пекселізумаб, ралівізумаб, ранібізумаб, реслівізумаб, реслізумаб, резивізумаб, ровелізумаб, руплізумаб, сибротузумаб, сиплізумаб, сонтузумаб, такатузумаб тетраксетан, тадоцизумаб, талізумаб, тефібазумаб, тоцилізумаб, торалізумаб, тукотузумаб целмолейкін, тукузитузумаб, умавізумаб, уртоксазумаб, устекінумаб, визилізумаб, антиїнтерлейкін-12 (АВТ-874/9695, УМуєїй Кезеагсп апа АББОоЇїй І арогаїйогіє5), який являється рекомбінантним та повністю відповідає послідовності людини, повнорозмірне антитіло Ідс1 А, генетично модифіковане для розпізнавання білка інтерлейкін-12 р40. (0148) Хіміотерапевтичний засіб також включає "інгібітори ЕСЕК", які відносяться до сполук,
БО які зв'язуються з або іншим чином взаємодіють безпосередньо з ЕСЕК та запобігають або знижують його активність з передачі сигналу, та в альтернативному варіанті, що називається "антагоніст ЕСЕК". Приклади таких засобів включають антитіла та малі молекули, які зв'язуються з ЕСЕК. Приклади антитіл, які зв'язуються з ЕСЕК включають МАБ 579 (АТСС СК.
НВ 8506), МАЬ 455 (АТОС СВІ НВ8507), МАБ 225 (АТС СВІ 8508), МАБ 528 (АТОС СВІ 8509) (див. патент США Мо 4943533, Мепаеїзопп еї аї.) та їх варіанти, такі як химеризоване 225 (С225 або цетуксимаб; ЕЕВИОТІХФ) та реконструйоване антитіло людини 225 (Н225) (див. МО 96/40210, Ітсіопе бувзіветве Іпс.); ІМО-118, повністю людське ЕСЕК-таргетуюче антитіло (ІтсІопе); антитіло, яке зв'язує мутант ЕСЕК ІІ типу (патент США Мо 5212290); гуманізовані та химерні антитіла, які зв'язують ЕСЕК як описано у патенті США Мо 5891996 та антитіла людини, бо які зв'язують ЕСЕРЕ, такі як АВХ-ЕСЕ або панітумумаб (див. УУО98/50433, Абдепіх/Атдеп); ЕМО
55900 (СЗігадіюцно сеї аї. Єшиг. У. Сапсег З2А:636-640 (1996)); ЕМО7200 (матузумаб) -- гуманізоване
ЕСЕВ-антитіло, направлене проти ЕСЕК, яке конкурує як з ЕСЕ, так і з ТОБ-альфа за зв'язування ЕСЕК (ЕМО/Мегск); антитіло проти ЕСЕК людини, НиМах-ЕСЕВ (СепМаБб); повністю людські антитіла, відомі як Е1.1, Е2.4, Е2.5, Еб.2, Еб.4, Е2.11, Еб. З і Е7.6. З та описані в 5 6235883; МОХ-447 (Медагех Іпс) і тАбБ 806 або гуманізоване тАб 806 (оппз еї аї.,.». Віої.
Спет. 279(29):30375-30384 (2004)) Антитіло проти ЕСЕК може бути кон'югованим з цитотоксичним засобом, таким чином утворюючи імунокон'югат (див., наприклад, ЕРб59439А2,
МегскК Раїепі СтрН). Антагоністи ЕСЕК включают малі молекули, такі як сполуки, описані у патентах США Мо: 5616582, 5457105, 5475001, 5654307, 5679683, 6084095, 6265410, 6455534, 6521620, 6596726, 6713484, 5770599, 6140332, 5866572, 6399602, 6344459, 6602863, 6391874, 6344455, 5760041, 6002008 та 5747498, а також наступних публікаціях РСТ: УМО98/14451,
МУ/098/50038, МУО99/09016 та УУО99/24037. Конкретні низькомолекулярні антагоністи ЕСЕ включають О51-774 (СР-358774, ерлотиніб, ТАКСЕМАФ Сепепієсп/О5І РНаптасецііса!5); РО 183805 (СІ 1033, 2-пропенамід, М-І4-(З-хлор-4-фторфеніл)аміно|-7-І(І3-(4-морфолініл)пропокси |- б-хіназолініл|-. дигідрохлорид, Ріїлег Іпс.); 201839, гефитиніб (ІКЕЗБАФ) 4-(3-хлор-4- фтораніліно)-7-метокси-6-(З-морфолінопропокси)хіназолін, Азігалепеса); 2М 105180 ((б-аміно-4- (З-метилфеніламіно)-хіназолін, -епеса); ВІВХ-1382 (М8-(З-хлор-4-фторфеніл)-М2-(1- метилпіперидин-4-іл)-піримідо(|5,4-4|піримідин-2,8-діамін, Воепгіпдег ІпдеІпеїйт); РКІ-166 ((Н)-4-
І4-(1-фенілетил)аміно|-1 Н-піроло|2,3-4|піримідин-б-іл|-фенол); (К)-6-(4-гідроксифеніл)-4-((1- фенілетил)аміно|-7Н-піроло|2,3-4|піримідин); СІ -387785 (М-І4-(З-бромфеніл)аміно|-6- хіназолініл|-2-бутинамід); ЕКВ-569 (М-(4-(З-хлор-4-фторфеніл)аміно|-3-ціано- 7-етокси-6- хінолініл|-4--диметиламіно)-2-бутенамід) (Умуеїй); Ас1478 (Ріїгеу; АС1571 (50 5271; Рії7ег); подвійні інгібітори тирозинкіназ ЕСЕЕ/НЕКЗ, такі як лапатиніб (ТУИКЕКВФ, 55К572016 або М-ІЗ3- хлор-4-((З3 / фторфеніл)метокси|феніл|-6(5(Ц(2-метилсульфоніл)етил|аміно|метил|-2-фураніл|-4- хіназолінамін).
І0149| Хіміотерапевтичні засоба також включають "інгібітори тирозинкіназ", включаючи
ЕСЕВ-таргетуючі лікарські речовини, відмічені у попередньому параграфі; низькомолекулярний інгібітор тирозинкінази НЕК2, такої як ТАК1І65, що пропонується ТаКеда; СР-724714 -- пероральний селективний інгібітор тирозинкінази рецептора ЕгоВ2 (Ріїгег та О5І); подвійні
Зо інгібітори НЕК, такі як ЕКВ-569 (що пропонується Умуеїй), який преимущено зв'язуєт ЕСЕЕК, але інгібует як НЕМК2-, так та ЕСЕБК-сверхекспресуючі клітини; лапатиниб (55К572016; що пропонується Сіахо-ЗтійпКіІїпе), пероральний інгібітор тирозинкіназ НЕК2 та ЕСЕ; РКІ-166 (що пропонується Момагії5); інгібітори рап-НЕК, такі як канертиніб (СІ-1033; РІпагтасіа); інгібітори
Ваї-1, такі як антисмисловой агент ІЗІЗ-5132, що пропонується І5БІЗ Рпагтасеціїйса!5, який інгібує передачу сигналу від Каї-1; інгібітори ТК, таргетуючі не-НЕК, такі як іматиніб мезилат (СГЕЕМЕСФ, що пропонується Сіахо 5тіййКіїпе); багатоцільові інгібітори тирозинкіназ, такі як сунітиніб (ФЗОТЕМТФ, що пропонується Рії?ег); інгібітори тирозинкінази рецептора ФРЕС, такі як ваталаніб (РТК787/2К222584, що пропонується Момагів/5спегіпд Ас); інгібітор СІ-1040 позаклітинно регулюємої МАРК-кінази І (що пропонується РПаптасіа); хіназоліни, такі як РО 153035,4-(З-хлоранілін) хіназолін; піридопіримідини; піримідопіримідини; піролопіримідини, такі як СОР 59326, СОР 60261 та СОР 62706; піразолопіримідини, 4-(феніламіно)-7Н-піроло|2,3-а) піримідини; куркумін (диферулоїлметан, 4,5-біс (4-фторанілін)фталімід); тирфостини, що містять фрагменти нітротіофену; РО-0183805 (У/атте!"-І атбег); антисмислові молекули (наприклад, такі, що зв'язуються з НЕК-кодуючою нуклеїновою кислотою); хіноксаліни (патент США Мо 5804396); трифостини (патент США Мо 5804396); 206474 (Авіга 7епеса); РТК-787 (Момапів/5сНегіпду АС); інгібітори рап-НЕК, такі як СІ-1033 (Ріїгег); афінітак (ІІ 3521; Івіб// Шу); іматініб мезилат (СГ ЕЕМЕСФ)); РКІ 166 (Момапів); УМ2016 (Сіахо 5тіййКіїпе); СІ-1033 (Ріїге); ЕКВ-569 (УУуеєїй); семаксиніб (Ріїгег); 206474 (Азігалепеса); РТК-787 (Момапів/5спегіпд Ас); ІМСО-1С11 (Ітпсіопе), рапаміцин (сіролімус, ТКАРАМОМЕФ) або описані у будь-якій з наступних публікацій патентів: патент США Мо 5804396; УМО 1999/09016 (Атегісап Суапатід); УМО 1998/43960 (Атегісап
Суапатіа); У/О 1997/38983 (Уатег І атбеп); УУ/О 1999/06378 (У/атег І атбеп); УУ/О 1999/06396 (У/атег І атреп); УУО 1996/30347 (Ріїгег, Іпс); УУО 1996/33978 (7епеса); МО 1996/3397 (7епеса) та УМО 1996/33980 (7епеса).
ІО150| Хіміотерапевтичні засоби також включають дексаметазон, інтерферони, колхіцин, метоприн, циклоспорин, амфотерицин, метронідазол, алемтузумаб, алітретиноїн, алопуринол, аміфостин, триоксид мишьяку, аспарагіназу, живу вакцину БЦЖ, бевацузимаб, бексаротен, кладрибін, хлофарабін, дарбепоетин альфа, денілейкін, декстразоксан, епоетин альфа, елотиніб, філграстим, хістреліну ацетат, ібритумомаб, інтерферон альфа-2а, інтерферон альфа-2р, леналідомід, левамізол, месну, метоксален, нандролон, неларабін, нофетумомаб, бо опрелвекін, паліфермін, памідронат, пегадемазу, пегаспаргазу, пегфілграстим, пеметрекседу динатрій, плікаміцин, порфімеру натрій, хінакрин, расбуриказу, сарграмостим, темозоломід, ММ- 26, 6-ТО, тореміфен, третиноїн, АТКА, валрубіцин, золедронат та золедронову кислоту та їх фармацевтично прийнятні солі.
ІО1511) Хіміотерапевтичні засоби також включають гідрокортизон, гідрокортизону ацетат, кортизону ацетат, тиксокортолу півалат, триамцинолону ацетонід, триамцинолоновий спирт, мометазон, амцинонід, будезонід, дезонід, флуоцинонід, флуоцинолону ацетонід, бетаметазон, бетаметазону натрію фосфат, дексаметазон, дексаметазону натрію фосфат, флуокортолон, гідрокортизон-17-бутират, гідрокортизон-17-валерат, аклометазону дипропіонат, бетаметазону валерат, бетаметазону дипропіонат, преднікарбат, клобетазон-17-бутират, клобетазон-17- пропіонат, флуокортолону капроат, флуокортолону півалат та флупреднідену ацетат; селективні імунні протизапальні пептиди (Іт5АЇ!О), такі як фенілаланін-глутамін-гліцин (ГЕС) та його ЮО-ізомерна форма (Теб) (ІМИОГАМ ВіоТпегарешіс5, ГГ С); протиревматичні лікарські речовини, такі як азатіоприн, циклоспорин (циклоспорин А), ЮО-пеніциламін, солі золота, гідроксихлорохін, лефлуномідеміноциклін, сульфасалазин, блокатори фактору некрозу пухлин альфа (ФНОа), такі як етанерцепт (Епбгеї), інфліксимаб (Кептісаде), адалімумаб (Ниптіга), цертолізумаб пегол (Сіпт?іа), голімумаб (Зітропі), блокатори інтерлейкіну 1 (ІЛ-1), такі як анакінра («Кіпеге), блокатори костимуляції Т-клітин, такі як абатацепт (Огепсіа), блокатори інтерлейкіну 6 (ІЛ-б), такі як тоцилізумаб (АСТЕМЕКАФ)); блокатори інтерлейкіну-13 (ІЛ-13), такі як лебрикізумаб; блокатори інтерферону альфа (ІФН), такі як ронталізумаб; блокатори інтегрину бета-7, такі як гпиМАБ Веїа7; блокатори механізму дії ІДЕ, такі як анти-М1 прайм; блокатори секретуємого гомотримерного Таз та мембранозв'язаного гетеротримера І Та1/рВ2, такі як антилімфотоксин альфа (І Та); радіоактивні ізотопи (наприклад, Аї211, І131, І125, М90, Ве186,
Ке188, 5т153, Ві212, РЗ32, РБ212 та радіоактивні ізотопи Гц); різні досліджувані засоби, такі як тіоплатин, РЗ-341, фенілбутират, ЕТ-18-ОСНЗ або інгібітори фарнезилтрансферази (І -739749,
ІЇ-744832); поліфеноли, такі як кверцетин, ресвератрол, піцеатанол, епігалокатехіну галат, теафлавіни, флавоноли, проціанідини, бетулінову кислоту та її похідні; інгібітори аутофагії, такі як хлорохін; дельта-9-тетрагідроканабінол (дронабінол, МАКІМОЇІ Ф); бета-ларахон; лапахол; колхіцини; бетулінову кислоту; ацетилкамптотецин, скополектин та 9-амінокамптотецин); подофілотоксин; тегафур (ШЕТОКАГ Ф); бексаротен (ТАКОКЕТІМФ)); бісфосфонати, такі як клодронат (наприклад, ВОМЕРО5БФ або О5ТАСФ), етидронат (ОІОКОСАЦФ), МЕ-58095, золедронову кислоту/золедронат (2ОМЕТАФ), алендронат (БОБАМАХФ), памідронат (АКЕОІАФ), тилудронат (ЗКЕГІОФ) або ризедронат (АСТОМЕЇ Ф) та рецептор епідермального фактору росту (ЕСЕ-К); вакцини, такі як вакцина ТНЕКАТОРЕФ); перифозин, інгібітор СОХ-2 (наприклад, целекоксиб або еторікоксиб), інгібітор протеосом (наприклад, РЗЗ341); ССІ-779;
З5 типіфарніб (К11577); орафеніб, АВТ510; інгібітор Всі-2, такий як облімерсен натрій (СЕМАБЗБЕМЗЕФ)); піксантрон; інгібітори фарнезилтрансферази, такі як лонафарніб (ЗСН 6636,
ЗАКАЗАКТМ) та фармацевтично прийнятні солі, кислоти та похідні будь-якої з перелічених вище речовин; а також комбінації з двох або більше з перелічених вище речовин, таких як
СНОР, абревіатура для комбінованої терапії циклофосфаміду, доксорубіцину, вінкристину та преднізолону, та РОЇ ЕОХ, абревіатура для режиму лікування з оксаліплатином (ЕГОХАТІМТМ), комбінованим з 5-ФУ та лейковорином.
ІО1521| Хіміотерапевтичні засоби також включають нестероїдні протизапальні лікарські речовини з анальгезуючим, жарознижуючим та протизапальним ефектами. НПЗП включають неселективні інгібітори ферменту циклооксигенази. Конкретні приклади НПЗП включають аспірин, похідні пропіонової кислоти, такі як ібупрофен, фенопрофен, кетопрофен, флурбіпрофен, оксапрозин та напроксен, похідні оцтової кислоти, такі як індометацин, суліндак, етодолак, диклофенак, похідні енолової кислоти, такі як пироксикам, мелоксикам, теноксикам, дроксикам, лорноксикам та зоксикам, похідні фенамінової кислоти, такі як мефенамінова кислота, меклофенамінова кислота, флуфенамінова кислота, толфенамінова кислота та інгібітори СОХ-2, такі як целекоксиб, еторикоксиб, луміракоксиб, парекоксиб, рофекоксиб, рофекоксиб та валдекоксиб. НПЗП можна назначати для симптоматичного полегшення патологічних станів, таких як ревматоїдний артрит, остеоартрит, запальні артропатії, анкілозуючий спондиліт, псоріатичний артрит, симптом Рейтера, гострий подагричний артрит, дисменорея, метастатичний біль у кістках, головний біль та мігрень, післяопераційний біль, стан від слабого до помірного болю через запалення та пошкодження тканин, лихоманка, кишкова непрохідність та ниркова колька. 0153) Термін "цитокін" являє собою загальний термін для білків, що вивільняються однією популяцією клітин, які діють на іншу клітину як міжклітинні медіатори. Прикладами таких цитокінів є лімфокіни, монокіни; інтерлейкіни (ІЛ), такі як ІЛ-1, ІЛ-1а, ІЛ-2, ІЛ-3, ІЛ-4, ІЛ-5, ІЛ-6, ІЛ- 60 7, ІЛ-8, ІЛ-9, ІЛ-11, ІЛ-12, ІЛ-15; фактор некрозу пухлин, такий як ФНО-а або ФНО-ВД, та інші поліпептидні фактори, включаючи ІБ та ліганд КИ (КІ) та інтерферон-гама. Як використовується у цьому документі, термін цитокін включає білки, отримані з природних джерел або з культури рекомбінантних клітин, та біологічно активні еквіваленти цитокінів з нативними послідовностями, включаючи отримані синтетично низькомолекулярні елементи та їх фармацевтично прийнятні похідні та солі. (0154) Термін "антагоніст зв'язування осі РО-1" являє собою молекулу, яка інгібує взаємодію партнера зі зв'язування осі РО-1 з або одним або більше його партнерами зі зв'язування так, що усувається дисфункція Т-клітин, що виникає в результаті передачі сигналу по осі сигналінгу РО- 1, в результаті призводячи до відновлення або посилення функціонування Т-клітин (наприклад, проліферація, продукція цитокінів, загибель клітин-мішеней). Як використовується у цьому документі, антагоніст зв'язування осі РО-1 включає антагоніста зв'язування РО-1, антагоніста зв'язування РО-1 1 та антагоніста зв'язування РО-1 2. 0155) Термін "антагоністи зв'язування РО-1" представляють молекулу, яка зменшує, блокує, інгібує, припиняє або перешкоджає сигнальній трансдукції, що виникає в результаті взаємодії
РО-1 з одним або більше з його партнерів зі зв'язуванню, таких як РО-І1, РО-І2. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою молекулу, яка інгібує зв'язування РО-1 з його партнерами зі зв'язування. У конкретному аспекті винаходу антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з РО-ІЇ1 та/або РО-І2. Наприклад, антагоністи зв'язування РО-1 включають антитіла проти РО-1, їх антигензв'язуючі фрагменти, імуноадгезини, білки злиття, олігопептиди та інші молекули, які зменшують, блокують, інгібують, припиняють або перешкоджають сигнальній трансдукції, що виникає в результаті взаємодії РО-1 з РО-І1 та/або РО-12. В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 знижує негативний костимулюючий сигнал, опосередкований білками клітинної поверхні або такий, що проходить через них, які експресуються на Т-лімфоцитах, що опосередковують передачу сигналу через РО-1 таким чином, щоби зробити дисфункціональну Т-клітину менше дисфункціонуючою (наприклад, посилюючи ефекторні відповіді на розпізнавання антигенів). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою антитіло проти
РО-1. У конкретному аспекті винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою сполуку МОХ-1 106, описану у цьому документі. В іншому конкретному аспекті винаходу антагоніст зв'язування
Зо РО-1 являє собою сполуку МегокК 3745, описану у цьому документі. В іншому конкретному аспекті винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою сполуку СТ-011, описану у цьому документі. (0156) Термін "антагоністи зв'язування РО-ІЇ1" представляють молекулу, яка зменшує, блокує, інгібує, припиняє або перешкоджає сигнальній трансдукції, що виникає в результаті взаємодії РО-Ї1 з одним або більше з його партнерів зі зв'язуванню, таких як РО-1, В7-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-/1 являє собою молекулу, яка інгібує зв'язування РО-Ї1 з його партнерами зі зв'язування. У конкретному аспекті винаходу антагоніст зв'язування РО-І1 1 інгібує зв'язування РО-І1 з РО-1 та/або В7-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністи зв'язування РО-Ї1 включають антитіла проти РО-І11, їх антигензв'язуючі фрагменти, імуноадгезини, білки злиття, олігопептиди та інші молекули, які зменшують, блокують, інгібують, припиняють або перешкоджають сигнальній трансдукції, що виникає в результаті взаємодії РО-Ї1 з одним або більше його партнерами зі зв'язування, такими як РО-1, В7-1. В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-Ї 1 знижує негативний костимулюючий сигнал, опосередкований білками клітинної поверхні або через них, які експресуються на Т-лімфоцитах, що опосередковують передачу сигналу через
РО-ЇЇ таким чином, щоби зробити дисфункціональну Т-клітину менше дисфункціонуючою (наприклад, посилюючи ефекторні відповіді на розпізнавання антигенів). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-Ї1 являє собою антитіло проти РО-І1. У конкретному аспекті винаходу антитіло проти РО-Ї17 являє собою сполуку УУу243.55.570, описану у цьому документі. В іншому конкретному аспекті винаходу антитіло проти РО-І1 являє собою сполуку МОХ-1 105, описану у цьому документі В ще іншому конкретному аспекті винаходу антитіло проти РО-І 1 являє собою сполуку МРОЇ 32804А, описану у цьому документі.
І0157| Термін "антагоністи зв'язування РО-1/2" представляють молекулу, яка зменшує, блокує, інгібує, припиняє або перешкоджає сигнальній трансдукції, що виникає в результаті взаємодії РО-І2 з одним або більше з його партнерів зі зв'язуванню, таких як РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1І2 являє собою молекулу, яка інгібує зв'язування РО-12 з його партнерами зі зв'язування. У конкретному аспекті винаходу антагоніст зв'язування РО-1І2 інгібує зв'язування РО-1І2 з РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністи зв'язування РО-І 2 включають антитіла проти РО-1 2, їх антигензв'язуючі фрагменти, 60 імуноадгезини, білки злиття, олігопептиди та інші молекули, які зменшують, блокують, інгібують,
припиняють або перешкоджають сигнальній трансдукції, що виникає в результаті взаємодії РО-
Ї2 з або одним або більше його партнерами зі зв'язування, такими як РО-1. В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-/2 знижує негативний костимулюючий сигнал, опосередкований білками клітинної поверхні або такий, що проходить через них, які експресуються на Т-лімфоцитах, що опосередковують передачу сигналу через РО-/2 таким чином, щоби зробити дисфункціональну Т-клітину менше дисфункціонуючою (наприклад, посилюючи ефекторні відповіді на розпізнавання антигенів). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-І 2 являє собою імуноадгезин. 0158) Термін "фагоцитоз" означає інтерналізацію клітин або твердих частинок клітинами. У деяких варіантах реалізації винаходу фагоцитуючі клітини або фагоцити представляют собою макрофаги або нейтрофіли. У деяких варіантах реалізації клітини являють собою клітини, які експресують ОХ40 людини. Методи аналізу фагоцитозу відомі у даній галузі техніки та включають застосування мікроскопії для виявлення наявності клітин, інтерналізованих всередину інших клітин. В інших варіантах реалізації винаходу фагоцитоз виявляється з використанням методу БАС, наприклад, шляхом виявлення наявності міченої клітини, що виявляється, всередині іншої клітини (яка може бути помічена з можливістю виявлення, наприклад, іншою міткою, ніж перша клітина). 0159) Фраза "не має значної активності" або "практично не активне" стосовно антитіла, як використовується у цьому документі, означає, що антитіло не проявляє активність, яка перевищує фоновий рівень (у деяких варіантах реалізації, яка перевищує фоновий рівень, що є статистично достовірним). Фраза "від незначної до відсутності активності" стосовно антитіла, як використовується у цьому документі, означає, що антитіло не показує біологічно значимої величини функціонування. Функціонування може вимірюватися або виявлятися у відповідності з будь-яким аналізом або методикою, відомою у даній галузі техніки, включаючи, наприклад, описані у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу функціонування антитіла полягає у стимуляції проліферації та/або секреції цитокінів ефекторними Т-клітинами.
ІО160| Термін "біомаркер" або "маркер" як використовується у цьому документі звичайно відноситься до молекули, яка включає ген, мРНК, білок, вуглеводну структуру або гліколіпід, експресія якої в або на тканині або клітині, або секретування, може виявлятися відомими
Зо методами (або методами, описаними у цьому документі) та є прогностичним або може використовуватися для прогнозування (або допомагати прогнозувати) сприйнятливість клітини, тканини або пацієнта щодо режимів лікування.
ІО161| Терміном "зразок, отриманий від пацієнта" означає сукупність клітин або рідин, отриману від пацієнта, хворого раком. Джерелом зразка тканини або клітин може бути щільна тканина, наприклад, зі свіжого, замороженого та/або законсервованого зразка органу або тканини, або біоптат, або аспірат; кров або будь-які складові крові; рідини організму, такі як спинномозкова рідина; амніотична рідина, перитонеальна рідина або внутрішньотканева рідина; клітини, отримані у будь-який момент часу у період вагітності або розвитку суб'єкта. Зразок тканини може містити сполуки, які за природою не змішуються природнім чином з тканиною, такі як консерванти, антикоагулянти, буферні речовини, фіксатори, живильні речовини, антибіотики та їм підобні. Приклади зразків пухлин у цьому документі включають, але не обмежуються ними, біоптат пухлини, тонкоголчастий аспірат, бронхіолярний лаваж, плевральну рідину, мокроту, сечу, відібрані хірургічним шляхом зразки, циркулюючі клітини пухлини, сироватку, плазму, циркулюючі в плазмі білки, асцитну рідину, первинні культури клітин або ліній клітин, отриманих з пухлин або таких, що проявляють пухлиподобні властивості, а також законсервовані зразки пухлин, такі як зафіксовані у формаліні, залиті парафіном зразки пухлин або заморожені зразки пухлин.
І0162| Фраза "на основв експресії" при застосуванні у цьому документі, означає, що інформація про рівень експресії або наявності, або відсутності експресії (наприклад, наявності або відсутності, або переважання (наприклад, відсоткового вмісту відображення на клітинах) одного або більше біомаркерів за цим винаходом (наприклад, наявності або відсутності, або кількості, або переважання ЕсК-експресуючих клітин, або, наприклад, наявності або відсутності, або кількості, або переважання ефекторних клітин людини) використовується для надання інформації про рішення стосовно лікування, інформації, наданої у листку-вкладиші в упаковці або керівництві з маркетингу/реклами тощо. 0163) Раковий або біологічний зразок, який "містить ефекторні клітини людини" є зразком, який при діагностичному аналізі, містить ефекторні клітини людини, присутні у зразку (наприклад, ефекторні клітини людини, що інфільтруються). 0164) Раковий або біологічний зразок, який "містить ЕсЕ-експресуючі клітини" є зразком, бо який при діагностичному аналізі, містить ЕсК-експресуючі клітини, присутні у зразку (наприклад,
ЕсВ-експресуючі клітини, що інфільтруються). У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСК являє собою Есук. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСК являє собою Есук, що активується.
І0165| Фраза "отримані рекомендації щодо лікування", як використовується у цьому документі, відноситься до використання інформації або даних, отриманих відносно рівня або наявності с-теї у зразку, отриманому від пацієнта, для ідентифікації пацієнта як такого, що підходить або не підходить для лікування за допомогою терапії. У деяких варіантах реалізації винаходу терапія може включати антитіло проти с-теї (наприклад, онартузумаб). У деяких варіантах реалізації винаходу терапфя може включати антагоніст ФРЕС (наприклад, бевацизумаб). У деяких варіантах реалізації винаходу терапія може включати антитіло-агоніст проти ОХ40 людини. Інформація або дані можуть бути надані у будь-якій формі: письмовій, усній або електронній. У деяких варіантах реалізації використання отриманої інформації або даних, включає передачу, надання, протоколювання, зберігання, відправку, пересилку, подачу, проходження, доставку, розподіл інформації або їх комбінацію. У деяких варіантах реалізації передачу, надання, протоколювання, зберігання, відправку, пересилку, подачу, проходження, доставку, розподіл інформації або їх комбінацію здійснюють за допомогою обчислювального пристрою, блока аналізатора або їх комбінації. У деяких додаткових варіантах реалізації винаходу передачу, надання, протоколювання, зберігання, відправку, пересилку, подачу, проходження, розподіл інформації або їх комбінацію здійснює індивід (наприклад, лаборант або медичний робітник). У деяких варіантах реалізації винаходу інформація або дані включають порівняння кількості або переважання ЕсК-експресуючих клітин по відношенню до еталонного рівня. У деяких варіантах реалізації винаходу інформація або дані включають порівняння кількості або переважання ефекторних клітин людини по відношенню до еталонного рівня. У деяких варіантах реалізації винаходу інформація або дані включають показання, що у зразку присутні або відсутні ефекторні клітини людини або ЕсЕ-експресуючі клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу інформація або дані включають показання, що ЕсК-експресуючі клітини або ефекторні клітини людини присутні у конкретному відсотковому вмісті клітин (наприклад, з високим переважанням). У деяких варіантах реалізації винаходу інформація або дані включають показання, що пацієнт підходить для лікування або не підходить для лікування за допомогою терапії, що включає антитіло-агоніст проти ОХ40 людини.
Зо І. КОМПОЗИЦІЇ ТА МЕТОДИ
ІО166) В одному аспекті винахід, зокрема, базується на ідентифікації багатьох зв'язуючих
ОХ40 агентів. У деяких варіантах реалізації винаходу пропонуються антитіла (наприклад, антитіла-агоністи), які зв'язують ОХ40 людини. Антитіла за цим винаходом придатні, наприклад, для діагностики або лікування раку та інших розладів, пов'язаних з експресією та/або активністю
Ох.
А. Типові антитіла проти ОХ40
ІО167)| В одному аспекті у винаході пропонуються виділені антитіла, які зв'язуються з ОХ40 людини.
ІЇО168) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини зв'язує
ОХ40 людини з афінністю менш ніж або рівною близько 0,45 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 людини зв'язує ОХ40 людини з афінністю менш ніж або рівною близько 0,4 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 людини зв'язує
ОХ40 людини з афінністю менш ніж або рівною близько 0,5 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу афінність зв'язування визначається з використанням радіоіїмуноаналізу.
ІО169)| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини зв'язує
ОХ40 людини та ОХ40 яванського макака. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування визначається з використанням аналізу БАС5. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування з ОХ40 людини має значення ЕС5О близько 0,2 мкг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування з ОХ40 людини має значення ЕС5О близько 0,3 мкг/мл або нижче. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування з ОХ40 яванського макака має значення ЕС5О близько 1,5 мкг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування з ОХ40 яванського макака має значення ЕС5О близько 1,4 мкг/мл.
ІО170| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини не зв'язується з ОХ40 щура або ОХ40 миші.
ІО171| У деяких варіантах реалізації антитіло-агоніст проти ОХ40 людини виснажується антитілом проти ОХ40 людини (наприклад, виснажує популяцію клітин, які експресують ОХ40 людини). У деяких варіантах реалізації винаходу експресуючі ОХ40 людини клітини являють собою СО4ж ефекторні Т-клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу експресуючі ОХ40 людини клітини являють собою клітини Тгед. У деяких варіантах реалізації винаходу бо виснаження відбувається шляхом АЗКЦ та/або фагоцитозу. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло опосередковує АЗКЦ шляхом зв'язування ЕсукК, експресованого ефекторною клітиною людини, та активування функціонування ефекторних клітин людини. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло опосередковує фагоцитоз шляхом зв'язування Есук, експресованого ефекторною клітиною людини, та активування функціонування ефекторних клітин людини. Типові ефекторні клітини людини включають, наприклад, макрофаги, природні клітини-кілери (МК), моноцити, нейтрофіли. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна клітина людини являє собою макрофаг. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна клітина людини являє собою МК-клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається не внаслідок апоптозу. 0172) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить функціональну Ес-ділянку. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна функція функціональної Есо-ділянки являє собою АЗКЦ. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна функція функціональної Ес-ділянки являє собою фагоцитоз. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна функція функціональної Ес-ділянки являє собою АЗКЦ та фагоцитоз. У деяких варіантах реалізації Ес-ділянка являє собою ІдсС1 людини. У деяких варіантах реалізації Ес-ділянка являє собою Ідс4 людини.
ІО173| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини не індукує апоптоз у ОХ40-експресуючих клітин (наприклад, Тгед). У деяких варіантах реалізації винаходу апоптоз аналізується з використанням концентрації антитіла 30 мкг/мл, наприклад, шляхом визначення того, чи відбувся апоптоз, з використанням анексину М та забарвлення Тгед пропідію йодидом. 0174) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини посилює функціонування СО4-- ефекторних Т-клітин, наприклад, шляхом збільшення проліферації СО4-- ефекторної Т-клітини та/або збільшення продукції гама-інтерферону СО4- ефекторною Т- клітиною (наприклад, у порівнянні з проліферацією та/або продукцією цитокінів до обробки антитілом-агоністом проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу цитокін являє собою гама-інтерферон. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує кількість протипухлинних (інфільтруючих) СО4ж- ефекторних Т-клітин (наприклад, загальну кількість СЮО4ж- ефекторних Т-клітин або, наприклад, відсотковий вміст
Зо СОра4х клітин у популяції СО45- клітин), наприклад, у порівнянні з кількістю протипухлинних (інфільтруючих) СО4ЖТ-клітин перед обробкою антитілом-агоністом проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує кількість внутрішньопухлинних (інфільтруючих) СО4- ефекторних Т-клітин, які експресують гама- інтерферон (наприклад, загальну кількість експресуючих гама-інтерферон СО4-- клітин або, наприклад, відсотковий вміст експресуючих гама-інтерферон СО4 клітин в загальній кількості
Срах клітин), наприклад, у порівнянні з кількістю внутрішньопухлинних (інфільтруючих) СО4--Т- клітин, які експресують гама-інтерферон перед обробкою антитілом-агоністом проти ОХ40 людини. 0175) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує кількість внутрішньопухлинних (інфільтруючих) СО8-- ефекторних Т-клітин (наприклад, загальну кількість СОв8-- ефекторних Т-клітин або, наприклад, відсотковий вміст СО8' клітин у популяції
Сраба клітин), наприклад, у порівнянні з кількістю внутрішньопухлинних (інфільтруючих)
Ср8-Т-ефекторних клітин перед обробкою антитілом-агоністом проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує кількість внутрішньопухлинних (інфільтруючих) СОв- ефекторних Т-клітин, які експресують гама- інтерферон (наприклад, відсотковий вміст СО8- клітин, які експресують гама-інтерферон в загальній кількості СО8- клітин), наприклад, у порівнянні з кількістю внутрішньопухлинних (інфільтруючих) СО8'Т-клітин, які експресують гама-інтерферон перед обробкою антитілом- агоністом проти ОХ40 людини.
ІО176) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини посилює функціонування Т-клітин пам'яті, наприклад, шляхом збільшення проліферації Т-клітини пам'яті та/або збільшення продукції цитокінів клітиною пам'яті. У деяких варіантах реалізації винаходу цитокін являє собою гама-інтерферон.
ІО177| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини інгібує функціонування Тгед, наприклад, шляхом зменшення Тгед-супресії функціонування ефекторних
Т-клітин (наприклад, проліферації ефекторних Т-клітин та/або збільшення продукції цитокінів ефекторними Т-клітинами. У деяких варіантах реалізації ефекторна Т-клітина являє собою
Срах ефекторну Т-клітину. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини знижує кількість внутрішньопухлинних (інфільтруючих) Тгед (наприклад, загальну бо кількість Тгед або, наприклад, відсотковий вміст ЕохЗр- клітин в популяції СО4-- клітин).
І0178| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини конструюється для збільшення ефекторної функції (наприклад, у порівнянні з ефекторною функцією ІДС! дикого типу). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло має збільшене зв'язування з рецептором Есу. У деяких варіантах реалізації у антитіла відсутня фукоза, приєднана (прямо або опосередковано) до Ес-ділянки. Наприклад, кількість фукози у такому антитілі може складати від 1 95 до 80 95, від 1 95 до 65 95, від 5 95 до 65 95 або від 20 95 до 40 95.
У деяких варіантах реалізації винаходу Ес-ділянка містить розделені навпіл олігосахариди, наприклад, в яких біантенальний олігосахарид, приєднаний до Ес-ділянки антитіла, розділений навпіл СІСМАс. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить Ес-ділянку з однією або більше амінокислотними замінами, які покращують АЗКЦ, наприклад, замінами у положеннях 298, 333 та/або 334 ЕРс-ділянки (ЕО-нумерація залишків). 0179) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує сигнальну трансдукцію ОХ40 в клітині-мішені, яка експресує ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу сигнальна трансдукція ОХ40 виявляється шляхом моніторингу низхідної передачі сигналу МЕКВ.
ЇО180| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини стабільно після обробки при 40С протягом двох тижнів. 0181) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини зв'язує ефекторні клітини людини, наприклад, зв'язує Есук (наприклад, активуючи сук), що експресується ефекторними клітинами людини. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна клітина людини виконує (здатна виконувати) ефекторну функцію для АЗКЦ. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна клітина людини виконує (здатна виконувати) ефекторну функцію для фагоцитозу. 0182) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить Ес-поліпептид варіанта Ідс1, що містить мутацію, яка усуває зв'язування з ефекторними клітинами людини (наприклад, мутацію ЮАМА), має знижену активність (наприклад, для функціонування СО4ж- ефекторних Т-клітин, наприклад, проліферації), відносно антитіла- агоніста проти ОХ40 людини, що містить нативну послідовність Ес-частини ІДС1. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить Ес-поліпептид
Зо варіанта ІдС1, що містить мутацію, яка усуває зв'язування з ефекторними клітинами людини (наприклад, мутацію САМА), не має значної активності (наприклад, для функціонування СО4ч ефекторних Т-клітин, наприклад, проліферації). 0183) У деяких варіантах реалізації винаходу для функціонування антитіл-агоністів проти
ОХ40 людини потрібне перехресне зв'язування антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу функціонування полягає у стимуляції проліферації СО4ж- ефекторних Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу перехресне зв'язування антитіла визначається шляхом прикріплення антитіла-агоніста проти ОХ40 людини на твердій поверхні (наприклад, на планшеті для культивування клітин). У деяких варіантах реалізації винаходу перехресне зв'язування антитіла визначається шляхом введення мутації до Ес-частини антитіла Ідс1 (наприклад, мутація САМА) та дослідження функціонування мутантного антитіла. 0184) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини конкурує за зв'язування ОХ40 людини з ОХ401. У деяких варіантах реалізації винаходу додавання ОХ40І. не посилює функціонування антитіла проти ОХ40 людини в аналізі іп міїго. 0185) У відповідності з іншим варіантом реалізації винаходу антитіла-агоністи проти ОХ40 людини включають будь-яке одне, будь-яку комбінацію або всі з наступних властивостей: (1) зв'язують ОХ40 людини з афінністю менше ніж або рівною близько 0,45 нМ, у деяких варіантах реалізації зв'язують ОХ40 людини з афінністю менше або рівною близько 0,4 нМ, у деяких варіантах реалізації зв'язують ОХ40 людини з афінністю менше або рівною близько 0,5 нМ, у деяких варіантах реалізації винаходу афінність зв'язування визначається з використанням радіоїмуноаналізу; (2) зв'язують ОХ40 людини та ОХ40 яванського макака, у деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування визначається з використанням аналізу ГАС5, (3) зв'язують
ОХ40 людини зі значенням ЕС5О близько 0,2 мкг/мл, у деяких варіантах реалізації зв'язування з
ОХ40 людини має ЕС50 близько 0,3 мкг/мл або нижче, у деяких варіантах реалізації зв'язуються
ОХ40 яванського макака зі значенням ЕС5О близько 1,5 мкг/мл, у деяких варіантах реалізації зв'язування з ОХ40 яванського макака має ЕС5О близько 1,4 мкг/мл, (4) практично не зв'язуються з ОХ40 щура або ОХ40 миші, (б) є виснажуючими антитілами проти ОХ40 людини (наприклад, виснажують популяцію клітин, які експресують ОХ40 людини), у деяких варіантах реалізації клітини являють собою СО4-- ефекторні Т-клітини та/або клітини Тгед, (7) посилюють функціонування СО4-- ефекторних Т- клітин, наприклад, шляхом збільшення проліферації СО4-- бо ефекторної Т-клітини та/або збільшення продукції гама-інтерферону СО4- ефекторною Т-
клітиною (наприклад, у порівнянні з проліферацією та/або продукцією цитокінів перед обробкою за допомогою антитіла-агоніста проти ОХ40 людини), (8) посилюють функціонування Т-клітин пам'яті, наприклад, шляхом збільшення проліферації Т-клітини пам'яті та/або збільшення продукції цитокінів клітиної пам'яті, (9) інгібують функціонування клітин Тгед, наприклад, шляхом зменшення Тгед-супресії функціонування ефекторних Т-клітин (наприклад, проліферації ефекторних Т-клітин та/або секреції цитокінів ефекторними Т-клітинами). У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна Т-клітина являє собою СО4ж- ефекторну Т-клітину, (10) збільшують сигнальну трансдукцію ОХ40 в клітині-мішені, яка експресує ОХ40 (у деяких варіантах реалізації винаходу сигнальна трансдукція ОХ40 виявляється шляхом моніторингу низхідної передачі сигналу МЕКВ), (11) стабільні після обробки при 40С протягом двох тижнів, (12) зв'язують ефекторні клітини людини, наприклад, зв'язують ЕсуК, що експресується ефекторними клітинами людини, (13) антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить Ес- поліпептид варіанта ІдС1, що містить мутацію, яка усуває зв'язування з ефекторними клітинами людини (наприклад, М2970) має знижену активність (наприклад, для функціонування СО4-- ефекторних Т-клітин, наприклад, проліферації), відносно антитіла-агоніста проти ОХ40 людини, що містить нативну послідовність Ес-ч-астини ІдС1, у деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить Есо-поліпептид варіанта ІДС1, що містить мутацію, яка усуває зв'язування з ефекторними клітинами людини (наприклад, М2970) не має значної активності (наприклад, для функціонування СО4ж- ефекторних Т-клітин, наприклад, проліферації), (14) перехресне зв'язування антитіла (наприклад, шляхом зв'язування рецептора
Ес) потрібне для функціонування антитіл-агоністів проти ОХ40 людини. 0186) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:3; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО 4; (4) НМВ8-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮ МО:5; (е) НМВ-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:б, та () НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:7. (0187) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке
Зо містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НМК, вибрані з (а)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ОО МО:2, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО:З3, та (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:4. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:4. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:4, та НМК-І 3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:7. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:4, НМК-І З що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:7, та НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:3. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ОО МО:2, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО:З3, та (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО 1О МО 4. 0188) В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ НУК, вибрані з (а)
НМВА-Ї1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО ОО МО:5, (Б) НМВ-І2, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:б, та (с) НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ьЕО ІЮ МО:7. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМА-1І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:5; (Б) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:6, та (с) НМК-І 3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО:7.
І0189) В іншому аспекті винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини за цим винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (ї) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:2; (ії) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:3, та (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 562 ІЮ МО:4, та (6) домен Мі, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ НМК, вибрані з (ї) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:5; (ії) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:6, та (с) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:7. (0190) В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке бо містить (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:2; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ОО МО:3; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:4; (4) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:5; (є) НМВ-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:6, та (І) НМК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІЮ МО:7.
ІО191)| В одному аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2; (Б) НМВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:3; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО 4; (4) НУМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:5; (е) НМЕ-І2, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО:б, та () НМК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:26.
І0192| В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО4, та НМК-1І 3, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО:С26. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:4, НМК-І З що містить амінокислотну послідовність БЗЕО
ІО МО:26, та НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:3. (0193) В іншому аспекті винаходу антитіло за цим винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (і)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО ІО МО:2; (ії) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО:3, та (її) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:4, та (Б) домен Мі, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ. НУК, вибрані з (ї) НМА-11, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:5; (ії) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:6, та (с) НМЕ-1 3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:26.
І0194| В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить (а) НМЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:3; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО 4; (4) НУМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:5; (е) НМЕ-І2, що містить амінокислотну послідовність ЕС ОО МО:б, та () НМК-ІЇЗ, що містить амінокислотну
Ко) послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:26. 0195) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:3; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО 4; (4) НУМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:5; (є) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:б, та () НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:27.
І0196| В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:4, та НМК-1І 3, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:27. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:4, НМК-І З що містить амінокислотну послідовність БЗЕО
ІО МО:27, та НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:3.
І0197)| В іншому аспекті винаходу антитіло за цим винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (і)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО ІО МО:2; (ії) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІО МО:3, та (ії) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:4, та (Б) домен Мі, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ. НУК, вибрані з (ї) НМА-11, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:5; (ії) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:6, та (с) НМЕ-1 3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:27.
І0198)| В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:3; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО 4; (4) НУМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:5; (є) НМЕ-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:б, та () НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:27. (0199) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:2, 8 або 9; (Б) НМНК-Н2, що містить 60 амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:3, 10, 11, 12, 13 або 14; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:4,15 або 19; (4) НМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:5; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:6, та (д НМА-1І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:7, 22, 23, 24, 25, 26, 27 або 28. 0200) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НМУ, вибрані з (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 2, 8 або 9, (Б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 3, 10, 11, 12, 13 або 14, та (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 4, 15 або 19. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить
НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 4, 15 або 19. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ
МО:4, 15 або 19, та НМК-1І 3, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 7, 22, 23, 24, 25, 26, 27 або 28. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО 10 МО: 4, 15 або 19, НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 7, 22, 23, 24, 25, 26, 27 або 28, та НМЕА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІО МО: 3, 10, 11, 12, 13 або 14. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО
ІО МО: 2, 8 або 9, (Б) НМЕ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 3, 10, 11, 12, 13 або 14, та (с) НМЕ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 4, 15 або 19. 0201) В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ НМ, вибрані з (а) НМВ-І71, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 5; (6) НМЕК-12, що містить, амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:6, та (с) НМК-ІЇЗ що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 7, 22, 23, 24, 25, 26, 27 або 28. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:5; (в) НМАК-1І12, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:6, та (с) НМА-І 3, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮО МО: 7, 22, 23, 24, 25, 26, 27 або 28. (0202) В іншому аспекті винаходу антитіло за цим винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (і)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 2, 8 або 9, (її) НМАК-Н2, що містить
Ко) амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 3, 10, 11, 12, 13 або 14, та (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІЮО МО: 4, 15 або 19; та (б) домен МІ, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовности МІ. НМК, вибрані з (ї) НМА-І-1, що містить амінокислотну послідовність ЗБОЇ ІЮ МО:5, (ії) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:6, та (с) НМА-1І-3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 7,22, 23, 24, 25, 26, 27 або 28.
І0203| В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, що містить (а) НМЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 2, 8 або 9, (Б) НМЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 3, 10, 11, 12, 13 або 14; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 4, 15 або 19; (4) НМК-1І1, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:5; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:6, та (д НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО: 7, 22, 23, 24, 25, 26, 27 або 28. (0204) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:172; (Б) НМВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:173; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ
МО:174; (а) НУВ-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:5; (е) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮО МО:6, та () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:175. У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-Н2 не містить
ОМУРОААДААЗУМОКЕМКЕ (5ЕО ІО МО:193). У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-НЗ не містить АРКУУАААА (5ЕО ІО МО:194). У деяких варіантах реалізації винаходу НМАК-І3 не містить
ОСАДАДАДАТ (5ЕО ІЮ МО:195). 0205) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НМЕК, вибрані з (а) НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність БО 10 МО:172, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:173, та (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:174. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:174. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:174, та НМАК-І 3, що містить 60 амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:175. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5Е0О ІЮ МО:174, НМК-І З що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:175, та НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:173. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО:172, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІО МО:173, та (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:174. У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-Н2 не містить
ОМУРОААДААЗУМОКЕМКЕ (5ЕО ІО МО:193). У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-НЗ не містить АРКУУАААА (5ЕО ІО МО:194). У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-1І З не містить
ОСАДАДАДАТ (5ЕО ІЮ МО:195).
І0206| В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить (а) НМА-Ї1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:5; (Б) НМК-ІЇ2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:6, та (с) НМК-І 3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО:175. У деяких варіантах реалізації винаходу НМВ-ЇЗ3 не містить ОДАДАДААААТ (5ЕО ІЮ
МО:195). (0207) В іншому аспекті винаходу антитіло за цим винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (і)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:172; (ії) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮ МО:173, та (ії) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО:174, та (Б) домен Мі, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ. НМК, вибрані з (ї) НМЕ-1І 1, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:5; (ії) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:6, та (с) НМЕ-1 3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:175.
І0208| В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, що містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:172; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:173; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ
МО:174; (а) НУВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:5; (є) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮО МО:6, та () НМК-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮО МО:175. У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-Н2 не містить ОМУРОААААЗУМОКЕКЕ (ЗЕО ІЮО МО:193). У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-
Зо НЗ не містить АРКМ/АААА (5ЕО ІЮО МО:194). У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-ЇЗ не містить ОДАААДААТ (ЗЕО ІЮ МО:195).
І0209| Усі можливі комбінації перелічених вище замін охоплюються консенсусними послідовностями ЗЕО ІЮ МО:172, 173, 174 та 175. (0210) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:29; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:30; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ
МО:33; (4) НМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:37; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮ МО:39, та (І) НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:42. 0211) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НМЕК, вибрані з (а) НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:29, (в) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:30, та (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:33. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність
ЗБЕО ІЮ МО:33. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:33, та НМК-І 3, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО:42. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:33, НМК-ІЗ що містить амінокислотну послідовність
БО ЗБЕО ІЮ МО:42, та НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО ІО МО:30. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а)» НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:29, (в) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:30, та (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:33. (0212) В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ НМ, вибрані з (а) НМК-І71, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:37, (в) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:39, та (с) НМА-І 3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:42. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМК-Ї1, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:37; (Б) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО:39, 60 та (с) НМА-1І 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:42.
0213) В іншому аспекті винаходу антитіло за цим винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (і)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗБОЇ ІЮ МО:29; (її) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:30, та (ії) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:33, та (5) домен МІ, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ. НУК, вибрані з (ї) НМА-11, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО:37; (ії) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО':39, та (с) НМЕ- 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:42. (0214) В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить (а) НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:29; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:30; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ
МО:33; (4) НМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:37; (є) НМЕ-12, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО:39, та () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:42. (0215) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:29; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:30; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:33; (4) НМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:37; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО:39, та () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:42. (0216) В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ НМ, вибрані з (а) НМЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:37, (в) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:40, та (с) НМА-І 3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:42. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМК-Ї1, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:37; (Б) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:40, та (с) НМА-1І 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:42. (0217) В іншому аспекті винаходу антитіло за цим винаходом містить (а) домен МН, який
Зо містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (і)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБСО ІЮ МО:29; (її) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:30, та (ії) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:33, та (5) домен МІ, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ. НУК, вибрані з (ї) НМА-11, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО:37; (ії) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО 40, та (с) НМЕ- 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:42. (0218) В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить (а) НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:29; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:30; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ
МО:33; (4) НМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:37; (є) НМЕ-12, що містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:40, та () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:42. (0219) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:29; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:30, 31 або 32; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:33; (а) НУВ-І 1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:37; (є) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮ МО:39, 40 або 41, та () НМАЕ-І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:42, 43 або 44. (0220) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НМЕК, вибрані з (а) НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:29, (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 30, 31 або 32, та (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:33.
В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:33, та НМАК-І-3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 42, 43 або 44. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:33, НМК-І З, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 42, 43 або 44, та НМАК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 39, 40 або 41. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМЕ-НІ, що містить 60 амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:29, (в) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність
Зо
ЗЕО ІЮ МО:30, 31 або 32, та (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:33. (0221) В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ НМ, вибрані з (а) НМЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:37, (в) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 39, 40 або 41, та (с) НМК-1І 3, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 42, 43 або 44. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:37; (в) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО: 39, 40 або 41, та (с) НМК-1І 3, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 42, 43 або 44. (0222) В іншому аспекті винаходу антитіло за цим винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (і)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:29, (ії) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 30, 31 або 32, та (ії) НМВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО:33, та (Б) домен Мі, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовности МІ НМК, вибрані з (ї) НМАК-І 1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:37, (і) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 39, 40 або 41, та (с) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 42, 43 або 44.
І0223| В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить (а) НМЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:29; (Б) НМК-Н2 що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 30, 31, або 32; (с) НМА-НЗ що містить, амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:33; (а) НУВ-І 1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:37; (є) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 39, 40 або 41, та () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІО МО: 42, 43 або 44. (0224) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:29; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:175; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ
МО:33; (4) НУВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:37; (е) НМК-12, що
Зо містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:177, та (Її) НМК-І-3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:178. (0225) В одному аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НМЕК, вибрані з (а) НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:29, (в) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:175, та (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:33. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність
ЗБЕО ІЮО МО:33, та НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:177. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:33, НМК-І З що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:178, та
НМУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:176. У додатковому варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО
ІО МО:29, (р) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:176, та (с) НМЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:33. (0226) В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ НМ, вибрані з (а) НМК-І71, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:37, (в) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:177, та (с) НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:177. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМК-Ї1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:37; (Б) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ
МО:177, та (с) НМА-І-3, що містить амінокислотну послідовність ХЕО І МО:178. (0227) В іншому аспекті винаходу антитіло за цим винаходом містить (а) домен МН, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (і)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО ІЮ МО:29; (її) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО І МО:176, та (ії) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:33, та (5) домен МІ, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ. НУК, вибрані з (ї) НМА-11, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО:37; (ії) НУВ-І 2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:177, та (с) НМЕ-
ІЇ 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:178.
І0228| В іншому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке містить (а) НМАК-НІ, що 60 містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:29; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:176; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ
МО:33; (4) НМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:37; (є) НМЕ-12, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:177, та (Її) НМК-І-3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:178. 02291 У будь-якому з перелічених вище варіантів реалізації винаходу антитіло-агоніст проти
ОХха40 є гуманізованим. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить НУК як у будь-якому з перелічених вище варіантів реалізації винаходу або для будь-якого з варіантів реалізації винаходу на ФІГ. 11А-Ї, та додатково містить акцепторний каркас людини, наприклад, імуноглобуліновий каркас людини або консенсусний каркас людини. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить НМК, як у будь-якому з перелічених вище варіантів реалізації винаходу, та додатково містить МН та/або Мі, що містить послідовність ЕК, показану на ФІГ. 11А-І. (0230) В іншому аспекті винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (МН), що має щонайменше 90 95, 91 9», 92 95, 93 9, 94 95, 9595, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 108, 114, 116, 183 або 184. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність
МН, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 9495, 95 95, 96 95, 97 У, 98 95 або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені всього від 1 до 10 амінокислот в ЗЕО ІЮ МО:56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 108, 114, 116, 183 або 184. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НМЕК (тобто в ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МН в 5ЕО ІЮ МО: ЗЕО ІЮО МО:56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 108, 114, 116, 183 або 184, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МН містить один, два або три НУК, вибраних з: (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2, (Б)
Зо НМВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:З3, та (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:4.
І0231| В іншому аспекті винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, причому антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), що має щонайменше 90 95, 91 96, 92 95, 93 95, 94 95, 95 90, 96 95, 97 95, 98 9, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:57, 59, 61, 63,65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 109, 115 або 117. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність М, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 У, 93 905, 94 У, 95 Уо, 96 У, 97 Чо, 98 Фо або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені всього від 1 до 10 амінокислот в 5ЕО ІЮ МО: 57, 59, 61, 63, 65,67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 109, 115 або 117. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НМК (тобто в ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність Мі в ЗЕО ІЮ МО: 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 109, 115 або 117, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МІ. містить один, два або три НМК, вибраних з (а) НМК-1І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:5; (5) НМК-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮО МО:6б, та (с) НМК-ІЗ, що містить амінокислотну
БО послідовність ЗЕО ІЮ МО:7. (0232) В іншому аспекті винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (МН), що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 9, 94 95, 9595, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІО МО:56. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність УН, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 95 або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінени, вставлені та/або видалені усього від 1 до 10 амінокислот в 5ЕО ІЮО МО:56. У деяких варіантах бо реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НУК (тобто в
ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МН в 5ЕО ІЮ
МО:56, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МН містить один, два або три НМУЕ, вибраних з: (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:2, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО:3, та (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:4.
І0233| В іншому аспекті винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, причому антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), що має щонайменше 90 95, 91 96, 92 95, 93 95, 94 95, 95 90, 96 95, 97 95, 98 9, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЕС ІЮ МО:57. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність М, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 У, 93 905, 94 У, 95 Уо, 96 У, 97 Чо, 98 Фо або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені всього від 1 до 10 амінокислот в ЗЕО ІЮ МО: 57. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НМК (тобто в ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МІ. в БЕО ІЮ МО: 57, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МІ містить один, два або три НУК, вибраних з (а)
НМВА-Ї1, що містить амінокислотну послідовність ЗБЕ ІО МО:5; (Б) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:б, та (с) НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:7. (0234) В іншому аспекті винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (МН), що має щонайменше 90 95, 91 9», 92 95, 93 9, 94 95, 9595, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:180. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність УН, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 95 або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені,
Ко) вставлені та/або видалені усього від 1 до 10 амінокислот з ЗЕО ІЮ МО:180. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НУК (тобто в
ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МН в 5ЕО ІЮ
МО:180, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МН містить один, два або три НМУЕ, вибраних з: (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:2, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:3, та (с) НМВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:4.
І0235| В іншому аспекті винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, причому антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), що має щонайменше 90 95, 91 96, 92 95, 93 95, 94 95, 95 90, 96 95, 97 95, 98 9, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:179. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність М, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 У, 93 905, 94 У, 95 Уо, 96 У, 97 Чо, 98 Фо або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені всього від 1 до 10 амінокислот в ЗЕО ІЮ МО: 179. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НМК (тобто в ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МІ. в ЗЕО ІО МО: 179, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності.
У конкретному варіанті реалізації винаходу МІ. містить один, два або три НМК, вибраних з (а)
НМВА-Ї1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО І МО:5; (Б) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:б, та (с) НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:7. (0236) В іншому аспекті винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (МН), що має щонайменше 90 95, 91 9», 92 95, 93 9, 94 95, 9595, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО:94. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність УН, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 95 або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить таку послідовність, зберігає бо здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінени,
вставлені та/або видалені усього від 1 до 10 амінокислот в 5ЕО ІЮО МО:94. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НУК (тобто в
ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МН в 5ЕО ІЮ
МО:94, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МН містить один, два або три НМК, вибраних з: (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:2, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО:3, та (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:4.
І0237| В іншому аспекті винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, причому антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), що має щонайменше 90 95, 91 96, 92 95, 93 95, 94 95, 95 90, 96 95, 97 95, 98 9, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЕС І0О МО:95. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність М, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 У, 93 905, 94 У, 95 Уо, 96 У, 97 Чо, 98 Фо або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінени, вставлені та/або видалені усього від 1 до 10 амінокислот в 5БЕО ІЮ МО:95. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НМК (тобто в ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МІ. в БЕО ІО МО:95, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МІ містить один, два або три НУК, вибраних з (а)
НМВА-Ї1, що містить амінокислотну послідовність ЗБЕ ІО МО:5; (Б) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:б, та (с) НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:26. (0238) В іншому аспекті винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (МН), що має щонайменше 90 95, 91 9», 92 95, 93 9, 94 95, 9595, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІО МО:96. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність УН, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 95 або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінени, вставлені та/або видалені усього від 1 до 10 амінокислот в 5ЕО ІЮО МО:96. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НУК (тобто в
ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МН в 5ЗЕО ІО
МО:96, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МН містить один, два або три НМУЕ, вибраних з: (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:2, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮО МО:3, та (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:4.
І0239| В іншому аспекті винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, причому антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), що має щонайменше 90 95, 91 96, 92 95, 93 95, 94 95, 95 90, 96 95, 97 95, 98 9, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЕС ІЮ МО:97. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність М, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 У, 93 905, 94 У, 95 Уо, 96 У, 97 Чо, 98 Фо або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені усього від 1 до 10 амінокислот в ЗЕО ІЮ МО:97. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НМК (тобто в ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МІ. в БЕО ІО МО:97, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МІ. містить один, два або три НУК, вибраних з (а)
НМВА-Ї1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ОО МО:5; (Б) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:б, та (с) НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:27. (0240) В іншому аспекті винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (МН), що має щонайменше 90 95, 91 9», 92 95, 93 9, 94 95, 9595, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність МН, що має щонайменше 90 965, бо 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 97 95, 9895 або 9995 ідентичності, містить заміни
(наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені всього від 1 до 10 амінокислот в ХЕО ІЮ МО: 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НМК (тобто в ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МН в ЗЕО ІЮ МО: 5ЕО ІЮО МО: 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МН містить один, два або три
НМЕ, вибраних з: (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 29, (5) НМА-
Н2г, що містить амінокислотну послідовність 5БО ІЮ МО:30, та (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:33.
І0241| В іншому аспекті винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, причому антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), що має щонайменше 90 95, 91 96, 92 95, 93 95, 94 95, 95 90, 96 95, 97 95, 98 9, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність Мі, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 95 або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені всього від 1 до 10 амінокислот в ЗЕО ІЮ МО: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НУК (тобто в ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МІ в ЗЕО ІЮО МО: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МІ. містить один, два або три НМК, вибраних з (а) НМЕ-11, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:37; (Б)
НМНВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕС ІЮО МО:39, та (с) НМК-І3, що містить
Ко) амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:42. (0242) В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та Мі в БЕО
ІЮ МО:56 та 5ЕО ІЮ МО:57, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗБОЮ МО:58 та 5ЕБЕО ІЮ МО:59, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗБОЮ МО:б60 та 5ЕО ІЮ МО:61, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗБОЮ МО:62 та 5ЕБЕО ІЮ МО:63, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗБОЮ МО:64 та 5ЕБЕО ІЮ МО:65, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗЕО ІО МО:6б та 5ЕО ІЮ МО:67, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗБОЮ МО:68 та 5ЕБЕО ІЮ МО:69, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗБОЮ МО:70 та 5ЕО ІЮ МО:71, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗБОЮ МО:72 та 5ЕБЕО ІЮ МО:73, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗБОЮ МО:74 та 5ЕБЕО ІЮ МО:75, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗБОЮ МО:76 та 5ЕБЕО ІЮ МО:77, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗБОЮ МО:78 та 5ЕБЕО ІЮ МО:79, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗБОЮ МО:80 та 5ЕО ІЮ МО:81, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗБОЮ МО:82 та 5ЕБЕО ІЮ МО:83, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. 60 в ЗБОЮ МО:84 та 5ЕБЕО ІЮ МО:85, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗБОЮ МО:86б та 5ЕБЕО ІЮ МО:87, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗБОЮ МО:88 та 5ЕО ІЮ МО:89, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗБОЮ МО:90 та 5ЕБЕО ІЮ МО:91, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗБОЮ МО:92 та 5ЕБЕО ІЮ МО:93, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗБОЮ МО:94 та 5ЕБЕО ІЮ МО:95, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗБОЮ МО:96 та 5ЕБЕО ІЮ МО:97, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗБОЮ МО:98 та 5ЕБЕО ІЮ МО:99, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗЕО ОО МО:100 та 5ЕО ІЮ МО:101, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗЕО ІЮО МО:108 та 5ЕО ІЮ МО:109, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності УН та М. в ЗЕО ІО МО:114 та 5ЕО ІЮ МО:115, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗЕО ІО МО:116 та 5ЕО ІЮ МО:117, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗЕО ІО МО:183 та 5ЕО ІЮ МО:65, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗЕО ІО МО:184 та 5ЕО ІЮ МО:69, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. (0243) В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ в ЗЕО
ІЮ МО:118 та 5БО ІЮ МО:119, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих
Зо послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗЕО ІЮО МО:120 та 5ЕО ІЮ МО:121, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗЕО ІО МО:122 та 5ЕО ІЮ МО:123, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності УН та М. в ЗЕО ІО МО:124 та 5ЕО ІЮ МО:125, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗЕО ІЮО МО:126 та 5ЕО ІЮ МО:127, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗЕО ІЮО МО:128 та 5ЕО ІЮ МО:129, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗЕО ІО МО:130 та 5ЕО ІЮ МО:131, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗЕО ІО МО:132 та 5ЕО ІЮ МО:133, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗЕО ІО МО:134 та 5ЕО ІЮ МО:135, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗЕО ІЮО МО:136 та 5ЕО ІЮ МО:137, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗЕО ІО МО:138 та 5ЕО ІЮ МО:139, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗЕО ІО МО:140 та 5ЕО ІЮ МО:141, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗЕО ІО МО:142 та 5ЕО ІЮ МО:143, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та М. в ЗЕО ІО МО:144 та 5ЕО ІЮ МО:145, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН та МІ. в ЗЕО ІЮО МО:146 та 5ЕО ІЮ МО:147, відповідно включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей.
І0244| В іншому аспекті винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, бо причому антитіло містить МН як у будь-якому з варіантів реалізації винаходу, запропонованих вище, та МІ. як у будь-якому з варіантів реалізації винаходу, запропонованих вище. (0245) У додатковому аспекті у винаході пропонується антитіло, яке зв'язується з таким же епітопом, як запропоноване у цьому документі антитіло проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло являє собою антитіло-агоніст проти ОХ40 людини. (0246) У додатковому аспекті винаходу антитіло проти ОХ40 у відповідності з будь-яким з перелічених вище варіантів реалізації винаходу являє собою моноклональне антитіло, включаючи химерне, гуманізоване антитіло або антитіло людини. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 являє собою фрагмент антитіла, наприклад, Ем, Раб, Раб", 5сЕм, діатіло або фрагмент Е(ар")». В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло являє собою повнорозмірне антитіло, наприклад, інтактне антитіло Їдс1 або інший клас або ізотип антитіла, визначенний у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло являє собою повнорозмірне інтактне антитіло Іде. (0247) У додатковому аспекті винаходу антитіло проти ОХ40 у відповідності з будь-яким з перелічених вище варіантів реалізації винаходу може включати будь-яку з ознак, самостійно або у комбінації, як описано нижче у розділах 1-7:
Афінність антитіл (0248) У деяких варіантах реалізації винаходу запропоноване у цьому документі антитіло має константу дисоціації (Ка) «1 мкМ, «100 нМ, «10 нМ, «1 НМ, «0,1 нМ, «0,01 нМ або х0,001 нм (наприклад, 109 М або менше, наприклад від 102 М до 103 М, наприклад від 107 М до 1073 М).
І0249| В одному варіанті реалізації цього винаходу Ка вимірюють аналізом зв'язування антигена, міченого радіоактивним ізотопом (РІА). В одному варіанті реалізації РІА проводять з використанням ЕРар-версії антитіла, що представляє інтерес, та його антигена. Наприклад, афінність зв'язування Бар з антигеном у розчині визмірюють шляхом зрівноваження Еар з мінімальною концентрацією (/251І)-міченого антигена у присутності ряда титрованих концентрацій неміченого антигена з наступним захопленням зв'язаного антигена на планшеті, вкритому антитілом проти Раб (див., наприклад, Спеп еї аї., У. Мої. Віої. 293:865-881(1999)). Щоб визначити умови аналізу, багатолункові планшети МІСЕОТІТЕК? (Тпепто 5сіепійс) покривають протягом ночі захоплюючим антитілом проти Раб (Сарреї Гарзх) в концентрації 5 мкг/мл у 50 мМ розчині карбонату натрію (рН 9,6), а потім блокують 295 (мас./об.) розчином бичачого
Зо сироваткового альбуміну в РВЗ протягом від двох до п'яти годин при кімнатній температурі (приблизно 23 "С). У планшеті, що не містить адсорбент (Мипс Мо 269620), змішують 100 пМ або 26 пмМ Г2ІЦ-антигена з серійними розведеннями Раб, що представляє інтерес (наприклад, у відповідності 3 оцінкою антитіла проти ФРЕС, Рар-12, описаного в Ргезіа єї а!І., Сапсег Вев. 57:4593-4599 (1997)). Потім Раб, що представляє інтерес інкубують протягом ночі; однак інкубацію можна продовжувати протягом більш тривалого періоду (наприклад, близько 65 годин), щоб забезпечити досягнення рівноваги. Післе цього суміші переносять у планшет для захоплення та інкубують при кімнатній температурі (наприклад, протягом однієї години). Потім розчин видаляють та планшет промивають вісім разів 0,1 95 розчином полісорбату 20 (ТМУМЕЕМ- 209) в РВ5. Коли планшети висохнуть, додають 150 мкл/лунку сцинтилятора (МІСВОЗСІМТ-20 "М; Раскага) та проводять підрахунок для планшетів на гама-лічильнику ТОРСОШМТ "М (РаскКага) протягом десяти хвилин. Концентрації кожного Раб, які забезпечують зв'язування, що складає 2095 або менше від максимального, вибирають для застосування в аналізах конкурентного зв'язування. 02501 У відповідності з іншим варіантом реалізації винаходу, Ка вимірюють з використанням аналізу поверхневого плазмонного резонансу ВІАСОКЕЄ. Наприклад, аналіз з використанням
ВІАСОВЕ?9-2000 або ВІАСОКЕ-3000 (ВіАсоге, Іпс., м. Піскатауей, Нью-Джерсі) проводять при 25"С на чипах з імобілізованим антигеном СМ5 при «10 одиницях відповіді (КО). В одному варіанті реалізації винаходу біосенсорні чипи на основі карбоксиметильованого декстрану (СМ5, ВІАСОКЕ, Іпс.) активують гідрохлоридом М-етил-М'-(З-диметиламінопропіл)-карбодиіміду (ЕОС) та М-гідроксисукцинімідом (МН5) у відповідності з інструкціями постачальника. Антиген розбавляють 10 мМ розчином ацетату натрію, рН 4,8, до 5 мкг/мл (50,2 мкМ) і потім вводять його зі швидкістю потоку 5 мкл/хвилину до досягнення приблизно 10 одиниць відповіді (КО) від приєднаного білка. Після введення антигена вводять 1 М етаноламіну, щоб блокувати групи, які не прореагували. Для вимірювання кінетики вводять двократні серійні розведення Раб (від 0,78
НМ до 500 нМ) в РВ5, що містить 0,05 95 полісорбату 20 (ТУМЕЕМ-207М) в якості ПАР (поверхнево активної речовини) (РВ5Т), при 25 "С на швидкості потоку приблизно 25 мкл/хв.
Швидкості асоціації (Коп) та швидкості дисоціації (Коб) розраховують, використовуючи просту взаємно однозначну модель зв'язування Ленгмюра (програма для обробки даних ВІАСОКЕСЄ, версія 3.2) шляхом одночасної підгонки сенсограм асоціації та дисоціації. Рівноважну константу 60 дисоціації (Ка) розраховують як співвідношення Копк/Коп. Див., наприклад, Спеп еї аї., у). Мої. Віо!.
293:865-881 (1999). Якщо швидкість асоціації перевущує 106 М-1 с-1 за даними приведеного вище аналізу поверхневого плазмонного резонансу, то швидкість асоціації можна визначити шляхом застосування методики погашення флуоресценції, яка вимірює збільшення або зменшення інтенсивності випромінення флуоресценції (довжина хвилі збудження - 295 нМ; довжина хвилі випромінення - 340 нМ, полоса пропускання 16 нМ) 20 нМ комплексу антиген- антитіло (Гар-форма) при 25"С в РВ5, рН 7,2, у присутності концентрацій антигена, що підвищуються, при вимірюванні у спектрометрі, такому як спектрофотометр, обладнаний для дослідження методом зупиненого потоку (Амім Іпзігитепів), або спектрофотометр 5І/М-АМІМСО "М, серія 8000 (Тпеппобресігопіс) з коветою з перемішуванням.
Фрагменти антитіл
ІО251| У деяких варіантах реалізації винаходу запропоноване у цьому документі антитіло являє собою фрагмент антитіла. Фрагменти антитіл включають, але не обмежуються ними, фрагменти Раб, Рар", Раб'-5Н, Е(ар")», Ем та зсгЕм, а також інші фрагменти, описані нижче. Огляд деяких фрагментів антитіл приведений в Нийзоп а). Маї. Мей. 9:129-134 (2003). Огляд фрагментів з5сЕм приведений у див., наприклад, РійскіпОп, в Те РНаптасоіоду ої Мопосіопаї
Апііродієв, мої. 113, Возепригуд апа Мооге еав., (Зргіпдег-Мепад, Мем Могк), рр. 269-315 (1994); див. також УМО 93/16185 та США Мо 5571894 та 5587458. Відносно обговорення фрагментів Бар та К(ар)»2, що містять залишки епітопа зв'язування рецептора реутилізації та мають збільшений період напіввиведення іп мімо, див. США Мо 5869046. (02521 Діатіла являють собою фрагменти антитіл з двома антигензв'язуючими сайтами, вони можуть бути бівалентними або біспецифічними. Див., наприклад, ЕР 404097; МО 1993/01161;
Нидзоп еї аї., Маї. Мед. 9:129-134 (2003) та Ноїїпдег еї аї., Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 90: 6444- 6448 (1993). Триатіла та тетратіла також описані в Ниазоп еї аї., Маї. Мед. 9:129-134 (2003).
І0253| Однодоменні антитіла являють собою фрагменти антитіл, що містять весь варіабельний домен важкого ланцюга антитіла або його частину, або весь варіабельний домен легкого ланцюга антитіла або його частину. У деяких варіантах реалізації винаходу однодоменне антитіло являє собою однодоменне антитіло людини (Юотапіїв, Іпс., УМайкпат, МА; див., наприклад, патенти США Мо 6248516 В1). (0254) Фрагменти антитіл можуть бути отримані різними методиками, що включають, але не
Зо обмежені протеолітичним розщепленням інтактного антитіла, а також продукцією рекомбінантними клітинами-хазяїнами (наприклад, Е. соїї або фагом), описаними у цьому документі.
Химерні та гуманізовані антитіла 0255) У деяких варіантах реалізації винаходу запропоноване у цьому документі антитіло являє собою химерне антитіло. Деякі химерні антитіла описані, наприклад, у патенті США Мо 4816567 та статті Могізоп еї аї., Ргос. Май). Асай. сі. ОБА, 81:6851-6855 (1984)). В одному прикладі химерне антитіло містить нелюдську варіабельну ділянку (наприклад, варіабельну ділянку, отриману з організму миші, щура, хом'яка, кроля або тваринного примата, наприклад, мавпи) та константну ділянку людини. У додатковому прикладі химерне антитіло являє собою антитіло "з переключенням класу", в якому клас або підклас змінений у порівнянні з класом вихідного антитіла. Термін "химерні антитіла" включає антигензв'язуючі фрагменти таких антитіл. (0256) У деяких варіантах реалізації винаходу химерне антитіло являє собою гуманізоване антитіло. Як правило, нелюдське антитіло гуманізують для зниження імуногенності для людей та зберігання при цьому специфічності та афінності вихідного нелюдського антитіла. Звичайно гуманізоване антитіло містить один або більше варіабельних доменів, в яких НУК, наприклад,
СОК (або їх частини), отримані з нелюдського антитіла, а ЕК (або їх частини), отримані з послідовностей людських антитіл. Гуманізоване антитіло також буде необов'язково містити щонайменше частину людської константної ділянки. У деяких варіантах реалізації деякі залишки
ЕК в гуманізованому антитілі замінюють відповідними залишками з нелюдського антитіла (наприклад, антитіла, з якого отримані залишки НМК), наприклад, для відновлення або покращення специфічності або афінності антитіла.
І0257| Гуманізовані антитіла та способи їх отримання розглядаються, наприклад, в АіІтадго апа Егапвзоп, Егопі. Віозсі. 13:1619-1633 (2008), та додатково описані, наприклад, в Кіесптапп еї а!І., Майте 332:323-329 (1988); Оцеєп еї аї., Ргос. Маї"! Асад. 5сі. ОБА 86:10029-10033 (1989); патентах США Мо 5821337, 7527791, 6982321 та 7087409; КазПптігі еї аЇ., МеїШйоав5 36:25-34 (2005) (описує прищеплення визначаючої специфічність ділянки (ЗОК)); РааІап, Мої. Іттипо). 28:489-498 (1991) (описує "зміну поверхні"); БаІгАсдиа єї аїІ., Мештоаз 36:43-60 (2005) (описує "перетасовку ЕК") та О5рошцгп еї аїЇ., Меїйосдвз 36:61-68 (2005) та КійїткКа еї аї., Вг. У. Сапсег, бо 83:252-260 (2000) (описує підхід "направленого відбору" для перетасовки ЕК).
(0258) Каркасні ділянки людини, які можуть застосовуватися для гуманізації включають, але не обмежуються ними: каркасні ділянки, вибрані з використанням метода "найкращої відповідності" (див., наприклад, Зіт5 еї аїІ. У. ІттипоїЇ. 151:2296 (1993)); каркасні ділянки, отримані з консенсусної послідовності людських антитіл, що містить конкретну підгрупу варіабельних ділянок легкого або важкого ланцюга (див., наприклад, Сагег еї аїЇ. Ргос. Маї).
Асад. сі. ОБА, 89:4285 (1992) та Ргезіа еї аї. У. Іттипої., 151:2623 (1993)); зрілі (соматично мутовані) каркасні ділянки людини або каркасні ділянки зародкової лінії людини (див., наприклад, Аїтадго апа ЕРгапе55оп, Егопі. Віобсі. 13:1619-1633 (2008)); та каркасні ділянки, що походять з бібліотек скринінгу ЕК (див., наприклад, Васа еї аї., 9). Віої. Спет. 272:10678-10684 (1997) та Козок еї аї., У. Віої. Снет. 271:22611-22618 (1996)).
Антитіла людини 0259) У деяких варіантах реалізації винаходу запропоноване у цьому документі антитіло являє собою антитіло людини. Антитіла людини можна отримувати з використанням різних методик, відомих у даній галузі техніки. Антитіла людини описані у загальних рисах у мап ріЇк апа мап де УМУіпКе!ї, Си. Оріп. Рпаптасої. 5: 368-74 (2001) та І опрегуд, Сит. Оріп. Іттипої. 20:450-459 (2008). (0260) Антитіла людини можна отримати шляхом введення імуногена трансгенній тварині, яку модифікували для продукування інтактних антитіл людини або інтактних антитіл, що містить варіабельні ділянки людини, у відповідь на антигенну стимуляцію. Такі тварини звичайно містять всі або частину локусів імуноглобулінів людини, які замінюють ендогенні локуси імуноглобулінів або які присутні поза хромосомами, або інтегровані випадковим чином у хромосоми тварини. У таких трансгенних мишей ендогенні локуси імуноглобулінів звичайно інактивовані. Огляд способів отримання антитіл людини з трансгенних тваринних див. І опрего,
Маї. Віоїесн. 23:1117-1125 (2005). Див. також, наприклад, патенти США Мо 6075181 та 6150584, що описують технологію ХЕМОМОИБЕ"М; патент США Мо 5770429, що описує технологію
НимМмаре»; патент США Мо 7041870, що описує технологію К-М МОШБ5БЕФ), та публікацію заявки на патент США Мо 05 2007/0061900, що описує технологію МеіосімМоизеф). Варіабельні ділянки людини з інтактних антитіл, які утворені в організмі таких тварин, можна додатково модифікувати, наприклад, шляхом комбінування з іншою константною ділянкою людини. (0261 Антитіла людини також можна отримати за допомогою гібридомних способів. Описані людські мієломні та мишино-людські гетеромієломні лінії клітин, що використовують для продукування моноклональних антитіл людини. (Див., наприклад, Ко2бог .). Іттипої., 133: 3001 (1984); Вгодеийг єї аїІ., Мопосіопа! Апіїбоду Ргодисіоп Тесппідне5 апа Арріїсанйопв5, рр. 51-63 (Магсе! ОекКкКег, Іпс., Мемж/ МоїК, 1987) та Воегпег еї аї., У. Іттипої!., 147: 86 (1991)). Антитіла людини, отримані шляхом технології з використанням В-клітинних гібридом людини, також описані в І і єї аї., Ргос. Маї!. Асад. 5сі. ОБА, 103:3557-3562 (2006). Додаткові способи включають описані, наприклад, в патенті США Мо 7189826 (що описує продуковання моноклональних антитіл ІДМ людини з гібридомних ліній клітин) та Мі, Хіапдаї Міапуїхиє, 26(4):265-268 (2006) (що описує повністю людські гібридоми). Технологія з використанням людських гібридом (технологія Ттіота) також описана в МоїІтег5 апа Вгапаїеїп, Нібіоіоду апа Нісіораїйоїоду, 20(3):927-937 (2005) та МоїІтег5 апа Вгапаїеїп, Меїнодвз апа Ріпаїпоз іп Ехрегітепіа! апа Сіїіпіса! Рнаптасоіоду, 27(3):185-91 (2005). (0262| Антитіла людини також можна отримувати шляхом виділення послідовностей варіабельного домена клону Ем, вибраних з людських бібліотек фагових дисплеїв. Такі послідовності варіабельного домена можна потім об'єднати з потрібним константним доменом людини. Методики вибору антитіл людини з бібліотек антитіл описані нижче.
Антитіла, отримані з бібліотек (0263) Антитіла за цим винаходом можна виділити шляхом скринінгу комбінаторних бібліотек антитіл з потрібною активністю або активностями. Наприклад, у даній галузі техніки відомо безліч способів створення бібліотек фагових дисплеїв та скринінгу таких бібліотек на антитіла, що мають потрібні характеристики зв'язування. За такими способами складений огляд, наприклад, в Ноодепроо т еї аї. в Меїносз іп Моїесшціаг Віоіоду 178:1-37 (О'Віїєп єї а)!., єд., Нитап
Ргев55, Тоїоула, МУ, 2001) та вони додатково описані, наприклад, у МсоСайегіу еї аї., Маїиге 348:552-554; Сіасквоп еї аї., Мате 352: 624-628 (1991); Магкз еї аї., у. Мої. Вісі. 222: 581-597 (1992); Магк5 апа Вгадригу, в Меїпод5 іп МоїіІесшаг Віооду 248:161-175 (1/0, ед., Нитап Ргев5,
Тоюма, МУ, 2003); Зідни еї аї., у. Мої. Віої. 338(2): 299-310 (2004); І ее еї аї., у. Мої. Віої. 340(5): 1073-1093 (2004); РейПоизе, Ргос. Маї!. Асад. 5сі. ОБА 101(34): 12467-12472 (2004) та | ее еї аї., у.
Іттипої. Меїйоавз 284(1-2): 119-132(2004). (0264) У деяких способах використання фагових дисплеїв репертуари генів УН та МІ. окремо бо клонують шляхом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) та рекомбінують випадковим чином у фагових бібліотеках, які потім можна піддавати скринінгу на антигензв'язуючі фаги, як описано в
Муіпіег єї а. Апп. Веу. Іттипої!., 12: 433-455 (1994). Як правило, фаг відображає фрагменти антитіл або у вигляді одноланцюгових фрагментів Ем (5сЕм), або у вигляді фрагментів Еар.
Бібліотеки, отримані з імунізованих джерел, надають антитіла, що мають високу афінність до імуногена, без необхідності конструювання гібридом. В альтернативному варіанті може клонуватися наївний репертуар (наприклад, отриманий з організму людини) для забезпечення єдиного джерела антитіл до широкого діапазону невласних, а також власних антигенів, без якої- небудь імунізації, як описано сзгіййн5 еї а, ЕМВО у, 12: 725-734 (1993). Нарешті, наївні бібліотеки можна також отримати синтезом шляхом клонування сегментів М-генів, що не піддавали реаранжуванню, зі стволових клітин та з використанням ПЛР-праймерів, які містять випадкову послідовність для кодування гіперваріабельних ділянок СОРБЗ, та завершення реаранжування іп міо, як описано Ноодепроот апа Уміпіег, /). Мої. Віої., 227: 381-388 (1992).
Публікації патентів, що описують фагові бібліотеки антитіл людини включають, наприклад: патент США Мо 5750373 та публікації патентів США Мо 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 та 2009/0002360.
І0265| Антитіла або фрагменти антитіл, виділені з бібліотек антитіл людини, у цьому документі вважаються антитілами людини або фрагментами антитіл людини. б. Мультиспецифічні антитіла (0266) У деяких варіантах реалізації винаходу запропоноване у цьому документі антитіло являє собою мультиспецифічне антитіло, наприклад, біспецифічне антитіло. Мультиспецифічні антитіла являють собою моноклональні антитіла, які мають специфічності зв'язування у щонайменше двох різних сайтів. У деяких варіантах реалізації винаходу одна зі специфічностей зв'язування спрямована на ОХ40, а інша -- на будь-який інший антиген. У деяких варіантах реалізації винаходу біспецифічні антитіла можуть зв'язуватися з різними епітопами ОХ40.
Біспецифічні антитіла також можуть застосовуватися для переміщення цитотоксичних агентів в клітини, які експресують ОХ40. Біспецифічні антитіла можна отримити у вигляді повнорозмірних антитіл або фрагментів антитіл.
І0267| Методики для отримання мультиспецифічних антитіл включають, але не обмежуються рекомбінантною коекспресією двох пар важкого ланцюга-легкого ланцюга
Зо імуноглобулінов, що мають різну специфічность (див. Міїбїеіїпй апа СцейПо, Маїште 305: 537 (1983)), МУО 93/08829 та ТгаипесКег еї а, ЕМВО 3. 10: 3655 (1991)) та рекомбінантну технологию "виступ-у-впадину" (див., наприклад, патенти США Мо 5731168). Мультиспецифічні антитіла також можуть бути отримані шляхом конструювання з використанням ефекту електростатичної взаємодії для отримання молекул Ес-гетеродимерних антитіл (УМО 2009/089004А1); перехресного зв'язування двох або більше антитіл або фрагментів (див., наприклад, патент США Мо 4676980 та Вгеппап еї аї., бсієпсе, 229: 81 (1985)); з використанням лейцинових застібок для створення біспецифічних антитіл (див., наприклад, КовіеІпу еї аї., у.
Ітітипої., 148(5):1547-1553 (1992)); з використанням технології "діатіл" для отримання фрагментів біспецифічних антитіл (див., наприклад, Ноїйпдег еї аї., Ргос. Маї). Асад. 5сі. О5А, 90:6444-6448 (1993)) та з використанням димерів одноланцюгових Ем (5Ем) (див., наприклад,
Стибрег еї аї., у. Іттипої., 152:5368 (1994)) та отриманням триспецифічних антитіл, як описано, наприклад, в Тий еї аї. У. Іттипої!. 147: 60 (1991). (0268) Сконструйовані антитіла з трьома або більше функціональними антигензв'язуючими сайтами, включаючи "антитіла-восьминоги", також включені у даний документ (див., наприклад, 5 2006/0025576А1).
І0269| Антитіло або фрагмент у цьому документі також включає "Бар подвійної дії" або "ВАР", що містить антигензв'язуючий сайт, який зв'язується з ОХ40, а також іншим відмінним антигеном (див., наприклад, О5 2008/0069820). 7. Варіанти антитіл (0270) У деяких варіантах реалізації винаходу передбачаються варіанти амінокислотних послідовностей антитіл, запропонованих у цьому документі. Наприклад, може виникнути необхідність у покращенні афінності зв'язування та/або інших біологічних властивостей антитіла. Варіанти амінокислотних послідовностей антитіл можна отримати шляхом введення відповідних модифікацій у нуклеотидну послідовність, кодуючу антитіло, або шляхом пептидного синтезу. Такі модифікації включають, наприклад, делеції з та/або інсерції в та/або заміни залишків всередині амінокислотних послідовностей антитіла. Для досягнення кінцевої конструкції, можна зробити будь-які комбінації делецій, інсерцій та замін, за умови, що кінцева конструкція має потрібні характеристики, наприклад, зв'язування антигена.
Варіанти замін, інсерцій та делецій бо ІО271| У деяких варіантах реалізації винаходу пропонуються варіанти антитіл, що містять одну або більше замін амінокислот. Сайти, що представляють інтерес для заміщуючого мутагенезу, включають НМК та ЕК. Консервативні заміни показані в табл. А під заголовком "переважні заміни". Більш суттєві зміни представлені в табл. А під заголовком "типові заміни", та як додатково описано нижче, стосовно класів бокових ланцюгів амінокислот. Амінокислотні заміни можуть вводитися в антитіло, що представляє інтерес, та продукти, що пройшли скринінг на потрібну активність, наприклад, збереження/покращення зв'язування антигенів, зменшення імуногенності або покращення АЗКЦ або КЗЦ.
ТАБЛИЦЯ А залишок заміни заміни
Ше) 77111111 (Сема; МекАза;Рпеснорлейцин.///// Пе цец(Ю 77771111 |Норлейцин; Пе; Мар МесАівуРлєїд//-/ Пе 77777777 (0272) Амінокислоти можна згрупувати у відповідності із загальними властивостями бокових ланцюгів: (1) гідрофобні: Норлейцин, Меї, Аа, маї, Г ем, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Суб, Зег, ТАг, Азп, Сп; (3) кислотні: Ар, СМ; (4) основні: Нів, І ув, Аг; (5) залишки, які впливають на орієнтацію ланцюга: су, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ріє. (0273) Неконсервативні заміни будуть передбачати заміну представника одного з вказаних класів представником іншого класу.
І0274| Один тип варіанта, що замінюють, включає заміну одного або більше залишків гіперваріабельних ділянок вихідного антитіла (наприклад, гуманізованого або людського антитіла). Звичайно результуючий) варіант(и), вибрані для додаткового дослідження будуть мати модифікації (наприклад, покращення) за визначеними біологічними властивостями (наприклад, збільшена афінність, знижена імуногенність) відносно вихідного антитіла та/або будуть мати практично збережені визначені біологічні властивості вихідного антитіла. Типовий варіант, що замінюють, є антитілом зі зрілою афінністю, який може бути безперешкодно отриманий, наприклад, з використанням методик визрівання афінності на основі фагового дисплею, таких як описані у цьому документі. Коротко, один або більше залишків НМК є мутованими, а варіанти антитіл відображаються на фазі та піддаються скринінгу на конкретну
Зо біологічну активність (наприклад, афінність зв'язування). (0275) Зміни (наприклад, заміни), наприклад, для покращення афінності антитіл можна зробити в НМК. Такі зміни можуть бути проведені в "гарячих точках" НМЕ, тобто залишках, кодованих кодонами, які піддаються мутації з високою частотою під час процесу соматичного визрівання (див., наприклад, Спожмапигу, Меїпоадз Мої. Віої!. 207:179-196 (2008)) та/або залишках, які контактують з антигеном, з тестуванням отриманого варіанта МН або Мі на афінність зв'язування. Визрівання афінності шляхом конструювання та повторного відбору зі вторинних бібліотек описано, наприклад, в Ноодепроот еї аі. в Мейоз іп МоїІесшціаг Віоіоду 178:1-37 (О'Віїєп есеї аї., еа., Нитап Ргез5, Тоїома, М), (2001)). У деяких варіантах реалізації винаходу із визріванням афінності різноманіття вводиться у варіабельні гени, вибрані для визрівання будь- яким з безліч способів (наприклад, ПЛР з внесенням помилок, перетасовка ланцюгів або олігонуклеотидспецифічний мутагенез). Потім створюють вторинну бібліотеку. Потім бібліотеку піддають скринінгу для ідентифікації будь-яких варіантів антитіл з потрібною афінністю. Інший спосіб для введення різноманіття задіює НУК-направленні підходи, в яких кілька залишків НУК (наприклад, 4-6 залишків одночасно) піддають рандомізації. Залишки НМУМК, задіювані у зв'язування антигена, можуть бути конкретно ідентифіковані, наприклад, з використанням скануючого аланіном мутагенезу або моделюванням. Мішенями зокрема є СОБ-НЗ та СОК-Ї 3.
І0276| У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції або делеції можуть відбуватися всередині одного або більше НМК, оскільки такі зміни практично не знижують здатність антитіла до зв'язування антигена. Наприклад, в НМК можна здійснити консервативні зміни (наприклад, консервативні заміни, запропоновані у цьому документі), які практично не знижують афінність зв'язування. Такі зміни можуть, наприклад, знаходитися поза залишками, контактуючих з антигеном в НМК. У деяких варіантах реалізації винаходу у послідовностях МН та Мі. варіантів, запропонованих вище, кожний НУК або не змінений, або містить не більше ніж одну, дві або три амінокислотні заміни.
І0277| Прийнятний спосіб для ідентифікації залишків або ділянок антитіла, які можуть бути цілями для мутагенезу, називають "скануючим аланіном мутагенезом", як описано Сиппіпапат апа М/еїїз (1989) бсіепсе, 244:1081-1085. У цьому способі залишок або група залишків-мішеней (наприклад, заряжені залишки, такі як аго, азр, Ппі5, Іу5 та дім) ідентифікують та замінюють нейтрально або негативно зарядженою амінокислотою (наприклад, аланіном або фенілаланіном) для визначення того, чи зачіпляється взаємодія антитіла з антигеном. В амінокислотні положення, що демонструють функціональну чутливість до початкових замін, можна вводити додаткові заміни. Альтернативно або додатково, точки контакту антитіла з антигеном ідентифікують з використанням кристалічної структури комплексу антиген-антитіло.
Такі контактні або сусідні з ними залишки можна використовувати в якості мішеней або видаляти їх як кандидатів для заміни. Варіанти можна піддавати скринінгу, щоб визначити, чи мають вони потрібні властивості. (0278) Інсерції амінокислотних послідовностей включають аміно- та/або карбоксильні кінцеві злиття, які знаходяться у діапазоні довжин від одного залишку до поліпептидів, що містять сотню або більше залишків, а також інсерції всередині послідовностей з одного або багатьох амінокислотних залишків. Приклади кінцевих інсерцій включають антитіло з М-кінцевим метіонільним залишком. Інші інсерційні варіанти молекули антитіла включають злиття з М- або
С-кінцем антитіла з ферментом (наприклад, для терапії АОЕРТ) або поліпептидом, який збільшує період напіввиведення антитіла з сироватки. р) Варіанти глікозилювання (0279) У деяких варіантах реалізації винаходу запропоноване у цьому документі антитіло змінюють для збільшення або зменшення ступеню, до якого гліколизьовано антитіло.
Додавання або делеція сайтів глікозилювання в антитілі може безперешкодно виконуватися шляхом зміни амінокислотної послідовності так, щоб створювався або видалявся один або більше сайтів глікозилювання.
І0280| Якщо антитіло містить Ес-ділянку, можна змінити приєднаний до нього вуглевод.
Нативні антитіла, отримані за допомогою клітин ссавців, як правило, містять розгалужений біантенальний олігосахарид, який звичайно приєднується М-зв'язком до А5п297 домена СН2 Ес- ділянки. Див., наприклад, Умгідні еї аІ. ТІВТЕСН 15:26-32 (1997). Олігосахарид може включати різні вуглеводи, наприклад, манозу, М-ацетилглюкозамін (СІСМАс), галактозу та сіалову кислоту, а також фукозу, приєднану до сісМАс у "стовбурі" біантенальної олігосахаридної структури. У деяких варіантах реалізації винаходу модифікації олігосахариду в антитілі за цим винаходом можна здійснити з тим, щоб створити варіанти антитіла з визначеними покращеними властивостями.
ІО281| В одному варіанті реалізації винаходу пропонуються варіанти антитіл, що мають вуглеводну структуру, в якій відсутня фукоза, приєднана (прямо або опосередковано) до Ес- ділянки. Наприклад, кількість фукози у такому антитілі може складати від 1 95 до 80 95, від 1 9о до 6595, від 595 до 65 95 або від 20 95 до 40 95. Кількість фукози визначають розрахунком середньої кількості фукози в сахаридному ланцюгу на Азп297 відносно суми всіх глікоструктур, приєднаних до Азп 297 (наприклад, комплексних, гібридних структур та структур з високим 60 вмістом манози), вимірянної методом мас-спектрометрії МАСОІ-ТОЕ, як описано, наприклад, в
УМО 2008/077546. А5п297 позначає остаток аспарагіну, розташований біля положення 297 Ес- ділянки (Ен-нумерація залишків Ес-ділянки); однак А5п297 також може розташовуватися на відстані близько х З амінокислоти вище або нижче положення 297, тобто між положеннями 294 та 300, внаслідок незначних варіацій послідовностей в антитілах. Такі варіанти фукозилювання можуть мати покращену функцію АЗКЦ. Див., наприклад, публікації патентів США Ме 05 2003/0157108 (Ргезіа, І); 05 2004/0093621 (Куосула Накко Кодуо Со., ЦЯ). Приклади публікацій, що відносяться до "дефукозильованим" або "фукозодефіцитним" варіантам антитіл включають: 5 2003/0157108; МО 2000/61739; МО 2001/29246; 05 2003/0115614; 005 2002/0164328; 05 2004/0093621; 005 2004/0132140; 005 2004/0110704; 005 2004/0110282; 05 2004/0109865; МО 2003/085119; УМО 2003/084570; МО 2005/035586; УМО 2005/035778; УО2005/053742;
МО2002/031140; ОкКалакі еї аї. У. Мої. Вісі. 33611 239-1249 (2004); Матапе-ОНпикі еї аї. Віоїесн.
Віоепао. 87: 614 (2004). Приклади ліній клітин, здатних продукувати дефукозильовані антитіла, включають клітини Гес13 СНО, дефіцитні за фукозилюванням білків (КірКа еї аї. Агсн. Віоспет.
Віорпув. 249:533-545 (1986); заявка на пат. США Мо 05 2003/0157108 А, Ргевзіа, І, та УУО 2004/056312 АТ, Адатз еї аї., особливо у прикладі 11), та нокаутні лінії клітин, такі як нокаутні клітини СНО за геном альфа-1,6-фукозилтрансферази, ЕОТВ8, (див., наприклад, Хатапе-ОНпикі еї аї. Віоїесн. Віоєпод. 87: 614 (2004); Капаа, У. еї а!., Віоїтеснпо!. Віоепо., 94(4):680-688 (2006) та
МО2003/085107).
І0282| Варіанти антитіл додатково забезпечують розділеними навпіл олігосахаридами, наприклад, в яких біантенальний олігосахарид, приєднаний до Ес-ділянки антитіла, розділений навпіл СІСМАс. Такі варіанти антитіл можуть мати знижене фукозилування та/або покращене функціонування для АЗКЦ. Описані приклади таких варіантів антитіл, наприклад, в М/О 2003/011878 (Чеап-Маїгеї еї аІ.); патент США Мо 6602684 (Штапа еї аІ) та 05 2005/0123546 (Йтапа єї аІ.). Також пропонуються варіанти антитіл з щонайменше одним залишком галактози в олігосахариді, приєднаним до Ес-ділянки. Такі варіанти антитіл можуть мати покращене функціонування для КЗЦ. Описані такі варіанти антитіл, наприклад, в УМО 1997/30087 (Раїеї еї а); МО 1998/58964 (Каїсй, 5.) та УМО 1999/22764 (Каїс, 5.). с)Варіанти Ес-ділянок
І0О283| У деяких варіантах реалізації винаходу до Ес-ділянки запропонованого у цьому документі антитіла може бути введена одна або більше амінокислотних модифікацій, тим самим забезпечуючи створення варіанта Ес-ділянки. Варіант Рс-ділянки може містити послідовність
Ес-ділянки людини (наприклад, Ес-діляна Ідс1, Ідс2, ДСЗ або Ідсб4 людини), що містить амінокислотну модифікацію (наприклад, заміну) в одному або більше положень амінокислот. (0284) У деяких варіантах реалізації в цьому винаході передбачається варіант антитіла, який має деякі, але не всі ефекторні функції, що роблять його бажаним кандидатом для застосувань, в яких важливе значення має період напіввиведення антитіла іп мімо, хоча окремі ефекторні функції (такі як комплементна та АЗКЦ) не є необхідними або є шкідливими. Для підтвердження відновлення/ослаблення активності КЗЦ та/або АЗКЦ можна проводити аналізи цитотоксичності іп міо та/або іп мімо. Наприклад, для підтвердження того, що антитіло не зв'язується ЕсуВ (отже, по всій ймовірності, втрачає активність АЗКЦ), але зберігає здатність зв'язуватися з
ЕсКп, можна проводити аналізи зв'язування рецептора Ес (БСК). Первинні клітини для опосередкування АЗКЦ, клітини МК експресують лише Ес(КІїїЇ, тоді як моноцити експресують
Ес(ВІ, Ес(А І та Ес(КІЇ. Дані з експресії ЕСК на гемопоетичних клітинах зібрані в табл. З на сторінці 464 статті Камеїсп апа Кіпеї, Аппи. Вем. Іттипої. 9:457-492 (1991). Не обмежуючі приклади аналізів іп міо для оцінки активності АЗКЦ молекули, що представляє інтерес, описані в патенті США Ме 5500362 (див., наприклад, Неї5ігот, І. еї а). Ргос. Маг! Асад. сі. ОБА 83:7059-7063 (1986)) та Неїївігот, І еї аЇ., Ргос. Маг! Асад. бсі. ОБА 82:1499-1502 (1985); 5 821 337 (див. Вгиддетапп, М. еї аї., У. Ехр. Мей. 166:1351-1361 (1987)). В альтернативному варіанті можна застосовувати методи аналізів без радіоактивних міток (див., наприклад, аналіз цитотоксичності без радіоактивних міток АСТІ "М для проточної цитометрії (СеїІПесппоїоду, Іпс. м. Маунтин-Вью, штат Каліфорнія) та аналіз цитотоксичності без радіоактивних міток СуїютТох 969 (Рготеда, м. Мадісон, штат Вісконсин)). Прийнятні ефекторні клітини для таких аналізів включають мононуклеарні клітини періферичної крові (МКПК) та клітини-природні кілери (МК). В альтернативному варіанті, або додатково, активність АЗКЦ молекули, що представляє інтерес, може оцінюватися іп мімо, наприклад, на тваринній моделі, такій як описано в Сіупез еї аї. Ргос.
Маг! Асай. сі. ОБА 95:652-656 (1998). Для підтвердження того, що антитіло не здатне зв'язувати Сід та, відповідно, не має активності КЗЦ, можна також проводити аналізи зв'язування С14. Див., наприклад, зв'язування С14д та СЗс методом ІФА в УМО 2006/029879 та
УМО 2005/100402. Для оцінки активації комплемента, може бути проведений аналіз КЗЦ (див., 60 наприклад, Салапо-Запіого еї аї., У. Іттипої. Меїноде 202:163 (1996); Стадо, М.5. єї аї!., Віосй
101:1045-1052 (2003) та Стадд, М.5. апа М.). Сіеппіє, Віоса 103:2738-2743 (2004)). Визначення зв'язування БсКп та виведення/періодів напіввиведення іп мімо також можна проводити з використанням методів, відомих у даній галузі техніки (див., наприклад, РеїКома, 5.В. еї аї., ТИг1.
Іттипої. 18(12):1759-1769 (2006)).
І0285| Антитіла зі зниженою ефектною функцією включають такі з заміною одного або більше залишків Ес-ділянки 238, 265, 269, 270, 297, 327 та 329 (патент США Мо 6737056). Такі
Ес-мутанти включають Ес-мутанти з замінами за двома або більше положеннями амінокислот 265, 269, 270, 297 та 327, включаючи так званий Ес-мутант "САМА" із заміною залишків 265 та 297 на аланін (патент США Мо 7332581).
І0286| Описані деякі варіанти антитіл з покращеним або погіршеним зв'язуванням з ЕсК. (Див., наприклад, патенти США Мо 6737056; УМО 2004/056312 та ЗпПіеїдз еї аї., у. Віої. Снет. 9(2): 6591-6604 (2001)).
І0287| У деяких варіантах реалізації винаходу варіант антитіла містить Ес-ділянку з однією або більше амінокислотними замінами, які покращують АЗКЦ, наприклад, із замінами у положеннях 298, 333 та/або 334 Ес-ділянки (ЕО-нумерація залишків).
І0288| У деяких варіантах реалізації винаходу зміни проводяться на Ес-ділянці, що призводить до зменшення (тобто або покращення, або погіршення) зв'язування С1д та/або комплементзалежної цитотоксичності (КЗЦ), наприклад, як описано в патенті США Мо 6194551,
УМО 99/51642 та Ідизодіє еї аї. у. Іттипої. 164: 4178-4184 (2000).
І0289| Антитіла з підвищеними періодами напіввиведення та покращеним зв'язуванням з неонатальним рецептором Ес (БсКп), який відповідає за перенос материнських ДО плоду (Сцуег еї аї., У. Іттипої. 117:587 (1976) та Кіт еї аї., у). Іттипої. 24:249 (1994)), описані в 052005/0014934А1 (Ніпоп еї а1.). Дані антитіла містять Ес-ділянку з однією або більше замінами в них, які покращують зв'язування Ес-ділянки з ЕсКп. Такі Ес-варіанти включають варіанти із замінами по одному або більше залишків Ес-ділянки: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, наприклад, заміна залишку 434 Ес-ділянки (патент США Мо 7371826). (0290) Див. також ЮОипсап 8. УМіптег, Мате 322:738-40 (1988); патент США Мо 5648260; патент
США Мо 5 624 821 та М/О 94/29351, що стосуються інших прикладів варіантів Ес-ділянки.
Зо а) Варіанти антитіл, сконструйовані введенням цистеїну
І0О291| У деяких варіантах реалізації винаходу може бути потрібним створення антитіл, сконструйованих введенням цистеїну, наприклад, "ті0мМАБ", в яких один або більше залишків антитіла заміщені залишками цистеїну. У конкретних варіантах реалізації винаходу заміщені залишки знаходяться в доступних сайтах антитіла. В результаті заміщення даних залишків цистеїном у доступних сайтах антитіла таким чином розташовуються реакційноздатні тіольні групи, які можна використовувати для кон'югації антитіла з іншими фрагментами, такими як фрагменти лікарських речовин або фрагменти лінкер-лікарська речовина, для створення імунокон'югату, як додатково описано у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу цистеїном можна замінити один або більше з наступних залишків: М205 (нумерація Кабат) легкого ланцюга; А118 (нумерація ЕЮ) важкого ланцюга та 5400 (нумерація Е)) Ес-ділянки важкого ланцюга. Сконструйовані введенням цистеїну антитіла можуть бути отримані як описано, наприклад, в патенті США Мо 7521541.
Я) Похідні антитіл 0292) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, запропоноване у цьому документі, можна додатково модифікувати, щоб воно містило додаткові небілкові фрагменти, відомі у даній галузі техніки та легко доступні. Фрагменти, які підходять для дериватизації антитіла, включають, але не обмежуються водорозчинними полімерами. Не маючі обмежуючого характеру приклади водорозчинних полімерів включають, але не обмежуються ними, поліетиленгліколь (ПЕГ), співполімери етиленгліколю/пропіленгліколю, карбоксиметилцелюлозу, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі-1,3-диоксолан, полі-1,3,6-триоксан, співполімер етилену/малеїнового ангідриду, поліамінокислоти (у вигляді гомополімерів або статистичних співполімерів), декстран або полі(н- вінілпіролідон)поліетиленгліколь, гомополімери пропіленгліколю, співполімери поліпропіленоксиду/етиленоксиду, поліоксиетильовані поліоли (наприклад, гліцерину), полівініловий спирт та їх суміші. Перевагою пропіональдегіду поліетиленгліколю у іиробництві є його стабільність у воді. Полімер може мати будь-яку молекулярну масу та може бути розгалуженим або нерозгалуженим. Кількості полімерів, приєднаних до антитіла, може змінюватися та, у випадку приєднання більше одного полімеру, вони можуть представляти собою одинакові або різні молекули. В цілому, кількість та/або тип полімерів, що 60 використовують для дериватизації, можна визначити з урахуванням факторів, що включають,
але не обмежуються ними, конкретні властивості або функції антитіла, що підлягають покращенню, незалежно від того, чи буде похідне антитіла використовуватися у терапії при визначених умовах тощо.
І0293| В іншому варіанті реалізації винаходу пропонуються кон'югати антитіла та небілкового фрагмента, які можна вибірково нагрівати шляхом впливу опромінення. В одному варіанті реалізації винаходу небілюовий фрагмент являє собою вуглецеву нанотрубку (Кат еї аІ,, Рос. Майї). Асай. сі. ОБА 102: 11600-11605 (2005)). Опромінення може мати будь-яку довжину хвилі, та включає, але не обмежується переліченим, довжини хвиль, які не завдають шкоди звичайним клітинам, але нагрівають небілюовий фрагмент до температури, при якій гинуть клітини поблизу з антитілом-небілковим фрагментом.
В. Рекомбінантні способи та композиції (02941 Антитіла можна отримати з використанням рекомбінантних способів та композицій, наприклад, описаних в патенті США Мо 4816567. В одному варіанті реалізації винаходу пропонується виділена нуклеїнова кислота, кодуюча антитіло проти ОХ40, описане у цьому документі. Така нуклеїнова кислота може кодувати амінокислотну послідовність, що містить Мі, та/або амінокислотну послідовність, що містить МН антитіла (наприклад, легкий та/або важкий ланцюги антитіла). У додатковому варіанті реалізації винаходу пропонуються один або більше векторів (наприклад, експресійні вектори), що містять такі нуклеїнові кислоти. У додатковому варіанті реалізації винаходу пропонується клітина-хазяїн, що містить таку нуклеїнову кислоту. В одному такому варіанті реалізації винаходу клітина-хазяїн містить (наприклад, була трансформована з використанням): (1) вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить Мі антитіла, та амінокислотну послідовність, що містить МН антитіла, або (2) перший вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить МІ. антитіла, та другий вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить МН антитіла. В одному варіанті реалізації винаходу клітина-хазяїн являє собою еукаріотичну клітину, наприклад, клітину яєчника китайского хом'ячка (СНО) або лімфоїдну клітину (наприклад, клітину МО, МБО, 5р20). В одному варіанті реалізації винаходу пропонується спосіб отримання антитіла проти ОХ40, причому даний спосіб включає культивування клітини-хазяїна, що містить нуклеїнову кислоту, кодуючу антитіло, як описано вище, в умовах, що підходять для експресії антитіла та, необов'язково, виділені антитіла з клітини-хазяїна (або середовища культивування клітини- хазяїна).
І0295| Для рекомбінантної продукції антитіла проти ОХ40 нуклеїнову кислоту, кодуючу антитіло, наприклад, описане вище, виділяють та вбудовують в один або більше векторів для подальшого клонування та/або експресії в клітині-хазяїні. Таку нуклеїнову кислоту можна легко виділити та секвенувати з використанням традиційних процедур (наприклад, шляхом використання олігонуклеотидних зондів, здатних специфічно зв'язуватися з генами, кодуючими важкий та легкий ланцюги антитіла). (0296) Клітини-хазяїни, що підходять для клонування або експресії векторів, кодуючих антитіло, включають прокаріотичні або еукаріотичні клітини, описані у цьому документі.
Наприклад, антитіла можна отримувати в бактеріях, зокрема, якщо глікозилювання та Ес- ефекторна функція не є необхідними. Стосовно експресії фрагментів та поліпептидів антитіл в бактеріях див., наприклад, патенти США Мо 5648237, 5789199 та 5840523. (Див. також Спагюоп,
Метод іп МоїІесшіаг Віоіоду, Мої. 248 (В.К.С. І о, єд., Нитапа Ргевзв, Тоїома, МУ, 2003), рр. 245- 254, що описують експресію фрагментів антитіл в Е. сої). Після експресії антитіло можна виділити з маси бактеріальних клітин в розчинну фракцію та можна додатково очистити. 0297) Окрім прокаріотів в якості хазяїнів для клонування або експресії векторів, кодуючих антитіло, підходять еукаріотичні мікроорганізми, такі як міцеліальні гриби або дріжджі, що включають штами грибів та дрожджів з "гуманізованими" механізмами глікозилювання, які призводять до отримання антитіла з частково або повністю людським профілем глікозилювання. Див. Сегпдго55, Маї. Віоїесп. 22:1409-1414 (2004) та Її еї аї., Маї. Віоїесн. 24:210-215 (2006).
І0298| Клітини-хазяїни, що підходять для експресії глікозильованого антитіла, також отримують з багатоклітинних організмів (безхребетних та хребетних). Приклади клітин безхребетних включають клітини рослин та комах. Ідентифіковані багаточисельні бакуловирусні штами, які можна використовувати у поєднанні з клітинами комах, особливо для трансфекції клітин 5родорівега Ігидірегаа.
І0О299| В якості хазяїна також можна використовувати культури рослинних клітин. Див., наприклад, патенти США Мо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 та 6417429 (що описують бо технологію РІГ АМТІВООІЕ5'"М для отримання антитіл в трансгенних рослинах).
ІОЗО0І В якості хазяїна також можна використовувати клітини хребетних. Наприклад, можуть підходити лінії клітин ссавців, адаптованих для росту в суспензії. До інших прикладів підходящих ліній клітин-хазяїнів ссавців відносяться лінія СМ нирки мавпи, трансформована
ЗУ40 (СО05-7); ембріональна лінія нирки людини (293 або клітини 293, описані, наприклад, в
Станат еї аї, У. Сеп Мігої. 36:59 (1977)); клітини нирки новонародженого хом'ячка (ВНК); клітини
Сертолі миші (клітини ТМ4, описані, наприклад, в Маїпег, ВіоІ. Нергоа. 23:243-251 (1980)); клітини нирки мавпи (СМ); клітини нирки африканської зеленої мартишки (МЕКО-76); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітини нирки собаки (МОСК; клітини печінки щура лінії рийаю (ВК! ЗА); клітини легень людини (М/138); клітини печінки людини (Нер 02); клітини пухлини молочної залози миші (ММТ 60562); клітини ТКІ, описані, наприклад, в Маїнег еї аї.,
Аппаї5 М.У. Асай. 5сі. 383:44-68 (1982); клітини МКС 5 та клітини Е54. Інші підходящі лінії клітин- хазяїнів ссавців включають клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), включаючи клітини
ОНЕВАСНО (пашь еї аї!., Ргос. Май). Асад. сі. ОБА 77:4216 (1980)) та мієломні лінії клітин, такі як 0, МБО та 5рг/0. Для огляду за деякими лініями клітин-хазяїнів ссавців, що підходять для продукції антитіл, див., наприклад, Уагакі апа Уми, Меїнодз іп МоіІесшціаг Віоіоду, Мої. 248 (В.К.О.
Іо, єд., Нитапа Ргез5, Тоїоула, МУ), рр. 255-268 (2003).
С. Аналізи
ІЇОЗ30О1| Антитіла проти ОХ40, запропоновані у цьому документі, можна ідентифікувати, піддавати скринінгу або характеризувати за їх фізичними/хімічними властивостями та/або біологічними активностями шляхом різних аналізів, відомих у даній галузі техніки. 1. Аналізи зв'язування та інші аналізи 0302) В одному аспекті антитіло за цим винаходом досліджують на його антигензв'язуючу активність, наприклад, за допомогою відомих методів, таких як ІФА, вестерн-блотінг тощо.
Зв'язування ОХ40 можна визначати з використанням способів, відомих у даній галузі техніки, та типові способи описані у цьому документі. В одному варіанті реалізації винаходу зв'язування вимірюють з використанням радіоїмуноаналізу. У прикладах представлений типовий радіоїмуноаналіз. ОХ40-антитіло йодують та готують суміші для конкурентної реакції, що містять фіксовані концентрації йодованого антитіла та концентрації, що зменшуються, серійно розведених немічених 07 Х40-антитіл. Клітини, експресуючі ОХ40 (наприклад, клітини ВТ474
Зо стабільно трансфіковані ОХ40 людини), додають до реакційної суміші. Після інкубації клітини промивають для відділення вільного йодованого ОХ40-антитіла від ОХ40-антитіла, зв'язаного з клітинами. Визначають рівень зв'язаного йодованого ОХ40-антитіла, наприклад, шляхом підрахунку радіоактивності, зв'язаної з клітинами, та визначають афінність зв'язування з використанням стандартних методів. В іншому варіанті реалізації винаходу здатність ОХ40- антитіла до зв'язування з ОХ40, що експресується на поверхні (наприклад, на субпопуляціях Т- клітин) оцінюють з використанням проточної цитометрії. Отримують периферичні білі клітини крові (наприклад, з організму людини, яванського макака, щура або миші) та клітини блокують сироваткою. Мічене ОХ40-антитіло додають у вигляді серійних розведень та Т-клітини також забарвлюють для виявлення субпопуляцій Т-клітин (с використанням способів, відомих у даній галузі техніки). Після інкубації зразків та промивання клітини піддають сортуванню з використанням проточного цитометра, а дані аналізують з використанням способів добре відомих у даній галузі техніки. В іншому варіанті реалізації винаходу зв'язування ОХ40 можна аналізувати з використанням поверхневого плазмонного резонансу. Типовий метод поверхневого плазмонного резонансу представлений у прикладах.
ІЇО303| В іншому аспекті винаходу можна використовувати конкурентні аналізи для розпізнавання антитіла, яке конкурує за зв'язування з ОХ40 з будь-яким з антитіл проти ОХ40, описаних у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу таке конкуруюче антитіло зв'язується з таким самим епітопом (наприклад, лінійним або конформаційним епітопом), який зв'язується будь-яким з антитіл проти ОХ40, описаним у цьому документі. Детальний опис типових способів картування епітопа, з яким зв'язується антитіло, представлений в Могті5 (1996) "Еріюре Марріпд Ргоїосоїв" іп Меїпоаз іп Моїіесшаг Віоіоду мої. 66 (Нитапа Ргев5, Тоїома, МУ).
Конкурентний аналіз представлений у прикладах.
ІЇО304| У типовому конкурентному аналізі імобілізований ОХ40 інкубують у розчині, що містить перше мічене антитіло, яке зв'язується з ОХ40 (наприклад, таб 1ТА7.9г.1, тар ЗС8.аг5), та друге немічене антитіло, що підлягає дослідженню на здатність конкурувати з першим антитілом за зв'язування з ОХ40. Друге антитіло може бути присутнім у супернатанті гібридом.
В якості контролю імобілізований ОХ40 інкубують в розчині, що містить перше мічене антитіло, але не друге немічене антитіло. Після інкубації в умовах, що забезпечують зв'язування першого антитіла з ОХ40, видаляють надлишок незв'язаного антитіла та виміряють кількість мітки, 60 зв'язаної з імобілізованим ОХ40. Якщо кількість мітки, зв'язаної з імобілізованим ОХ40, у тестованому зразку значно знижена у порівнянні з контрольним зразком, то це означає, що друге антитіло конкурує з першим антитілом за зв'язування з ОХ40. Див. Нагіоуу/ апа І апе (1988)
Апіїродієв: А І арогаюгу Мапиаї сп.14 (Соїа 5ргіпд Наотг І арогаюгу, Со 5рііпуд Нагбог, МУ). 2. Аналізи активності 0305) В одному аспекті винаходу пропонуються аналізи для розпізнавання антитіл проти
ОХ40, що мають біологічну активність. Біологічна активність може включати, наприклад, зв'язування ОХ40 (наприклад, зв'язування ОХ40 людини та/або яванського макака), збільшення
ОХх40-опосередкованої сигнальної трансдукції (наприклад, збільшення МЕКВ-опосередкованої транскрипції), виснаження популяції клітин, які експресують ОХ40 людини (наприклад, Т-клітин), виснаження популяції клітин, які експресують ОХ40 людини шляхом АЗКЦ та/або фагоцитозу, посилення функціонування Т-ефекторних клітин (наприклад, СО4ж- ефекторних Т-клітин), наприклад, шляхом збільшення проліферації ефекторних Т-клітин та/або збільшення продукції цитокінів (наприклад, гама-інтерферону) ефекторними Т-клітинами, посилення функціонування
Т-клітин пам'яті (наприклад, СО4«Т-клітин пам'яті), наприклад, шляхом збільшення проліферації
Т-клітин пам'яті та/або збільшення продукції цитокінів Т-клітинами пам'яті (наприклад, гама- інтерферону), інгібування функціонування регуляторних Т-клітин пам'яті (наприклад, шляхом зменшення Тгед-супресії функціонування ефекторних Т-клітин (наприклад, функціонування
Сра4ж ефекторних Т-клітин), зв'язування ефекторних клітин людини. Також пропонуються антитіла, що мають таку біологічну активність іп мімо та/або іп міїго.
ІОЗО6) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло за цим винаходом досліджують на таку біологічну активність.
Ї0О307| Костимуляцію Т-клітин можна аналізувати з використанням способів, відомих у даній галузі техніки, та типові методи описані у цьому документі. Наприклад, Т-клітини (наприклад, ефекторні Т-клітини або клітини пам'яті) можна отримувати з периферичних білих клітин крові (наприклад, виділених з цільної крові людини з використанням центрифугування на градієнті з фіколу). Т-клітини пам'яті (наприклад, СО4-Т-клітини пам'яті) або ефекторні Т-клітини (наприклад, СО4-- клітини Тей) можна виділяти з МКПК з використанням способів, відомих у даній галузі техніки. Наприклад, можна застосовувати набір Міпкепуі для виділення СО4--Т-клітин пам'яті або набір Мікепуї для виділення наївних СО4-Т-клітин. Виділені Т-клітини культивують у
Зо присутності антигенпрезентуючих клітин (наприклад, опромінених ГІ-клітин, які експресують
СО32 та СО80), та активованих додаванням антитіла проти СОЗ у присутності або відсутні антитіл-агоністів проти ОХ40. Вплив антитіла-агоніста проти ОХ40 на проліферацію Т-клітин можна вимірювати з використанням методів добре відомих у даній галузі техніки. Наприклад, можна застосовувати набір СейПТйег Сіо (Рготеда), а результати зчитувати на пристрої для зчитування Мийіареї! (Регкіп ЕІтег). Вплив антитіла-агоніста проти ОХ40 на функціонування Т- клітин також можна визначати аналізом цитокінів, що продукуються Т-клітинами. В одному варіанті реалізації винаходу визначають продукцію інтерферону-гама СОр4«Т-клітинами, наприклад, шляхом вимірювання вмісту інтерферону-гама у супернатанті культури клітин.
Методи вимірювання вмісту інтерферону-гама добре відомі у даній галузі техніки. (0308) Функціонування клітин Тгтед можна аналізувати з використанням способів, відомих у даній галузі техніки, та типові способи описані у цьому документі. В одному прикладі аналізують здатність регуляторних Т-клітин супресувати проліферацію ефекторних Т-клітин. Т-клітини виділяють з цільної крові людини з використанням способів, відомих у даній галузі техніки (наприклад, виділення Т-клітин пам'яті або наївних Т-клітин). Очищені СО4-- наївні Т-клітини мітять (наприклад, за допомогою СЕБЕ), а очищені клітини Тгед мітять іншим реактивом.
Опроміненні антигенпредставляючі клітини (наприклад, І-клітини, експресуючі СО32 та СО80) спільно культивують з міченими очищеними наївними СО4--Т-клітинами та очищеними Ттгед.
Співкультури активують з використанням антитіла проти СОЗ та досліджують у присутності або відсутності антитіла-агоніста проти ОХ40. Після проходження відповідного періоду часу (наприклад, б діб спільного культивування), рівень проліферації СО4- наївних Т-клітин відстежують шляхом розведення барвника при неповному забарвленні мітками (наприклад, неповне забарвлення мітками СЕЗЕ) з використанням аналізу ЕАС5.
ІОЗ09І| Сигналінг ОХ40 можна аналізувати з використанням способів, добре відомих у даній галузі техніки, та типові способи описані у цьому документі. В одному варіанті реалізації винаходу створюють трансгенні клітини, які експресують ОХ40 людини та репортерний ген, що містить промотор МЕКВ, злитий з репортерним геном (наприклад, бета-люциферази).
Додавлення антитіла-агоніста проти ОХ40 до клітин призводить до збільшенної транскрипції
МЕКВ, яку виявляють з використанням аналізу на присутність репортерного гена.
ІЇО310| Фагоцитоз можна аналізувати, наприклад, шляхом використання макрофагів бо моноцитарного походження або клітин 0937 (лінії клітин гістіоцитичної лімфоми людини з морфологією та характеристиками зрілих макрофагів). Експресуючі ОХ40 клітини додають до макрофагів моноцитарного походження або клітинам 0937 у присутності або відсутні антитіла- агоніста проти ОХ40. Після культивування клітин протягом відповідного періоду часу, відсоток фагоцитозу визначають шляхом контролю відсоткового вмісту клітин, які двічі забарвлені за маркерами 1) макрофагів або клітин ШУ37 та 2) експресуючих ОХ40 клітин, та діленням цього значення на загальну кількість клітин, які демонструють маркери експресуючих ОХ40 клітин (наприклад, СЕР). Аналіз може проводитися методом проточної цитометрії. В іншому варіанті реалізації винаходу аналіз може проводитися аналізом флуоресцентної мікроскопії.
Ї0311| АЗКЦ можна аналізувати, наприклад, з використанням способів, добре відомих у даній галузі техніки. Типові способи описані у розділі визначень, а типовий аналіз описаний у прикладах. У деяких варіантах реалізації винаходу рівень ОХ40 визначають на експресуючій
ОХ40 клітині, яку використовують для дослідження в аналізі на АЗКЦ. Клітину можна забарвлювати міченим антитілом, що виявляється, проти ОХ40 (наприклад, мічене РЕ), потім з використанням проточної цитометрії визначають рівень флуоресценції та результат представляють як медіанну інтенсивність флуоресценції (СІФ). В іншому варіанті реалізації винаходу АЗКЦ можна аналізувати набором для аналізу СейТйег сію, а життєздатність/циотоксичність клітин можна визначати методом хемілюмінесценції. (0312) Афінності зв'язування різних антитіл з ЕСУКІА, ЕСсуУКПА, ЕсукіІІВ та двома алотипами
ЕСУКША (Е158 та М158) можна виміряти аналізами зв'язування лігандів на основі ІФА з використанням відповідствуючих рекомбінантних рецепторів Есу. Очищені рецептори Есу людини експресуються як білки злиття, що містять позаклітинний домен рецепторного у- ланцюга, зв'язаного на С-кінці з поліпептидним маркером СІу/бхНіз/глютатіон 5-трансферазою (517). Афінності зв'язування антитіл з такими рецепторами Есу людини аналізують наступним чином. Для рецепторів з низькою афінністю, тобто ЕсукІА (СОЗ32А), ЕсукКІІВ (СО32В) та двох алотипів ЕсуУКША (СО16), Е-158 та У-158, антитіла можна випробувати як мультимери шляхом перехресного зв'язування з фрагментом Е(аб"')2 козла проти капа-ланцюга людини (ІСМ
Віотедіса!; м. Ірвайн, штат Каліфорнія) у приблизно молярному співвідношенні 1:3 антитілосперехресно зв'язуючий Е(ар")». Планшети покривають антитілом проти а5тТ (Сепепіесп) та блокують бичачим сироватковим альбуміном (БСА). Після промивання
Зо фосфатно-сольовим буферним розчином (РВ5), що містить 0,05 95 Твін-20 за допомогою пристрою для промивання ЕЇ х405 м (Віотек Іпзігитепів; м. Уінускі штат Вермонт), до планшету додають рецептори Есу в концентрації 25 нг/лунку та інкубують при кімнатній температурі протягом 1 години. Після цього планшети промивають, додають серійні розведення випробуваних антитіл у вигляді мультимерних комплексів та планшети інкубують при кімнатній температурі протягом 2 годин. Після промивання планшетів для видалення незв'язаних антитіл, зв'язані з рецептором Есу антитіла виявляють кон'югованою Е(ар")»-пероксидазою хріну (НЕР), кон'югованою з фрагментом антилюдського Е(ар")2 козла (Часкзоп ІттипоВезвеагси
Іарогагогіеє; м. Запад Гров, штат Пенсильванія) з наступним додаванням субстрату тетраметилбензидіну (ТМБ) (КігКкедаага 8. Регту І арогаїогіеє; м. Гейтерсберг, штат Меріленд).
Планшети інкубують при кімнатній температурі протягом 5-20 хвилин в залежності від випробуваних рецепторів Есу для забезпечення можливості проявлення забарвлення. Реакцію зупиняють 1 М НзРоОх та вимірюють поглинання при 450 нм за допомогою пристрою зчитування для мікропланшетів (ЗресігамМах?е 190, МоіІесшаг Ремісе5; м. Санівейл, штат Каліфорнія). Криві зв'язування "доза-відповідь" будують на графіку залежності середніх значень поглинання подвійних розведень антитіла по відношенню до концентрацій антитіла. Значення ефективної концентрації антитіла, при якій виявляють 5095 максимальної відповіді при зв'язуванні рецептора Есу (ЕСво), визначали після підгонки кривої зв'язування за чотирьеохпараметричним рівнянням з використанням програми ЗойМах Рго (МоїІесшціаг Оемісев5). 0313) Для відбору антитіл, які індукують загибель клітин, втрату цілісності мембрани на що вказує, наприклад, поглинання пропідію йодиду (РІ), трипанового синього або 7ТААЮ можна оцінювати відносно контроля. Аналіз поглинання РІ можна проводити у відсутності комплементу та імунних ефекторних клітин. Експресуючі ОХ40 клітини інкубують лише з середовищем або середовищем, що містить відповідне моноклональне антитіло в концентрації, наприклад, близько 10 мкг/мл. Клітини інкубують протягом періоду часу (наприклад, 1 або З діб). Після кожної обробки клітини промивають та переносять до аліквоти. У деяких варіантах реалізації винаходу клітини переносять до аліквоти у накритих 35 мм сіткою пробірках 12 х 75 (1 мл на пробірку, З пробірки на групу обробки) для видалення скупчень клітин. Потім у пробірки вводять
РІ (10 мкг/мл). Зразки можна аналізувати з використанням проточного цитометра ЕАСЗСАМ М та програмного забезпечення СеПйОцевзі РАСЗСОММЕКТ "М (Весіюп біскКіпзоп). бо ІО314| Клітини для застосування у будь-якому з перелічених вище аналізів іп міго включають клітини або лінії клітин, які природнім чином експресують ОХ40 або які були сконструйовані для експресії ОХ40. Такі клітини включають активовані Т-клітини, клітини Тгед та активовані Т- клітини пам'яті, які природнім чином експресують ОХ40. Такі клітини також включають лінії клітин, які експресують ОХ40, та лінії клітин, які звичайно не експресують ОХ40, але були трансфіковані нуклеїновою кислотою, що кодує ОХ40. Типові лінії клітин, запропоновані у цьому документі, для застосування у будь-якому з перелічених вище аналізів іп міго включають трансгенні клітини ВТА74 (лінія ракових клітин молочної залози людини), які експресують ОХ40.
ЇО315| Слід розуміти, що може проводитися будь-який з перелічених вище аналізів з використанням замість або у доповнення до антитіла проти ОХ40 імунокон'югату за цим винаходом.
ЇО316Ї Слід розуміти, що може проводитися будь-який з перелічених вище аналізів з використанням антитіла проти ОХ40 та додаткового терапевтичного засобу.
О. Імунокон'югати (0317) У винаході також пропонуються імунокон'югати, що містять антитіло проти ОХ40 за цим документом, кон'юЮговане з одним або більше цитотоксичними засобами, такими як хіміотерапевтичні засоби або лікарські речовини, інгібуючі ріст агенти, токсини (наприклад, білкові токсини, ферментативно активні токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження або їх фрагменти) або радіоактивні ізотопи.
ІО318) В одному варіанті реалізації винаходу імунокон'югат являє собою кон'югат антитіло- лікарське речовино (АБС), в якому антитіло кон'югуване з одним або більше лікарськими речовинами, включаючи, але не обмежуючись ними, майтанзиноїд (див. патенти США Мо 5208020, 5416064 та європейський патент ЕР 0 425 235 В1); ауристатин, такий як фрагменти лікарських речовин монометилауристатину ОЕ та ОЕЄ (ММАЕ та ММАБЕ) (див. патенти США Мо 5635483 та 5780588 та 7498298); доластатин; каліхеаміцин або його похідні (див. патенти США
Мо 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 та 5877296; Ніптап еї аї.,
Сапсег Вев. 53:3336-3342 (1993) та І оде еї аї., Сапсег Рез. 58:2925-2928 (1998)); антрациклін, такий як дауноміцин або доксорубіцин (див. Кгаїх еї аї., Ситепі Мед. Спет. 13:477-523 (2006);
Уейтеу еї а!., Віоогдапіс 5 Мед. Спет. І ейег5 16:358-362 (2006); Тогдом еї аї., Віосопі. Спет. 16:717-721 (2005); Мааду єї аї., Ргос. Май). Асад. сі. ОБА 97:829-834 (2000); ВбБиромснік еї аї.,
Коо) Віоогд. є Мед. Спет. І ейегв 12:1529-1532 (2002); Кіпо еї а!., У. Мед. Спет. 45:4336-4343 (2002) та патент США Мо 6630579); метотрексат; віндезин; таксан, такий як доцетаксел, паклітаксел, ларотаксел, тезетаксел та ортатаксел; трихотецин та СС1065.
ІО319)| В іншому варіанті реалізації винаходу імунокон'югат містить антитіло, описане у цьому документі, кон'юговане з ферментативно активним токсином та його фрагментом, що включає, але не обмежується ними, ланцюг дифтерійного токсину А, незв'язуючі активні фрагменти дифтерійного токсину, ланцюг екзотоксину А (із Роендотопах аегидіпоза), ланцюг рицину А, ланцюг абрину А, ланцюг модекцину А, альфа-сарцин, білки АЇІецигйев гогаї, білки діантину, білки Рпуїїаса Атегісапа (РАРІ, РАРІЇ та РАР-5), інгібітор Мотогаїса спагапца, курцин, кротин, інгібітор бЗараопагіа опйісіпаїїх, гелонін, мітогелін, рестриктоцин, феноміцин, еноміцин та трихотецени.
І0О320)| В іншому варіанті реалізації винаходу імунокон'югат містить антитіло, описане у цьому документі, кон'юЮговане з радіоактивним атомом з утворенням радіокон'югату. Для отримання радіокон'югатів доступно безліч радіоактивних ізотопов. Приклади включають Аг", 81, 25, узо, Ве!86, Ве88, Зп!53, Віг12, раг, рРрет2 та радіоактивні ізотопи и. Коли для виявлення використовують радіокон'югат, то він може містити радіоактивний атом для сцинтиграфічних досліджень, наприклад, їс99т або 1123, або спінову мітку для візуалізації ядерного магнітного резонансу (ЯМР) (також відомого як магнітно-резонансна томографія, МРТ), таку як той же йод- 123, йод-131, індій-111, фтор-19, вуглець-13, азот-15, кисень-17, гадоліній, марганець або залізо. 03211 Кон'югати антитіла та цитотоксичного засобу можуть бути отримані з використанням багатьох біфункціональних агентів для зв'язування білків, таких як М-сукцинімідил-3-(2- піридилдитіо)пропіонат (ЗРОР), сукцинімідил-4-(М-малеїмідометил)циклогексан-1-карбоксилат (ЗМСС), імінотіолан (ІТ), біфункціональні похідні імідоефірів (такі як диметиладипімідат НС), активні естери (такі як дисукциніміділеоуберат), альдегіди (такі як глутаральдегід), біс- азидосполуки (такі як біс-(п-азидобензоїл)гександіамін), похідні біс-діазонію (такі як біс-(п- діазоніюбензоїл)-етилендіамін), діїзоцианати (такі як толуол-2,6-діїізоцианат) та біс-активні фторсполуки (такі як 1,5-дифтор-2,4-динітробензол). Наприклад, імунотоксин рицин можна приготувати як описано в Мена еї аїЇ., Зсієпсе 238:1098 (1987). Типовим хелатуючим агентом для кон'югації радіонуклеотиду з антитілом є мічена вуглецем-14 1-ізотіоцианатбензил-3- бо метилдіетилентриамінпентаоцтова кислота (МХ-ОТРА). Див. УМО94/11026. Лінкер може бути
"розщеплюваним лінкером", який полегшує вивільнення цитотоксичної лікарської речовини у клітині. Наприклад, можна використовувати кислотолабільний лінкер, чутливий до пептидаз лінкер, фотолабільний лінкер, диметильний лінкер або дисульфмісний лінкер (Спагі еї аї.,
Сапсег Вез. 52:127-131 (1992); патент США Мо 5208020).
І0322| У цьому документі імунокон'югати або АБС навмисно розглядаються, але не обмежуються, такими кон'югатами, отриманими із застосуванням крос-лінкерних реактивів, що включають, але не обмежуються ними, ВМР5, ЕМОС5, МВ5, НВМ5, І С-5МСС, МВ5, МРВН,
ЗВАР, 5ІА, ЗІАВ, ЗМОС, ЗМРВ, ЗМРН, сульфо-ЕМСО5, сульфо-СМВ5, сульфо-КМИ5, сульфо-
МВ5, сульфо-5ІАВ, сульфо-5МСОС, сульфо-5МРВ, та зУЗВ (сукцинімідил-(4- вінілсульфон)бензоат), які серійно випускаються (наприклад, компанією Ріегсе Віоїесппоіоду,
Іпс., м. Рокфорд, штат Ілінойс, США).
Е. Способи та композиції для діагностики та виявлення
ІОЗ23| У деяких варіантах реалізації винаходу будь-яке із запропонованих у цьому документі антитіл проти ОХ40 придатне для виявлення присутності ОХ40 у біологічному зразку. Термін "виявлення", як використовується у цьому документі, охоплює кількісне або якісне виявлення. У деяких варіантах реалізації винаходу біологічний зразок містить клітину або тканину, таку як зразок пухлини (наприклад, НДРЛ або пухлину молочної залози). 03241) В одному варіанті реалізації винаходу для застосування у способі діагностики або виявлення пропонується антитіло проти ОХ40. У додатковому аспекті винаходу пропонується спосіб виявлення присутності ОХ40 у біологічному зразку. У деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає приведення у контакт біологічного зразка з антитілом проти ОХ40, описаним у цьому документі, в умовах, що забезпечують зв'язування антитіла проти ОХ40 з
ОХа40, та виявлення того, чи утворюється комплекс між антитілом проти ОХ40 та ОХ40. Такий спосіб може представляти собою метод іп міго або іп мімо. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 застосовується для відбору суб'єктів, що підходять для терапії за допомогою антитіла проти ОХ40, наприклад, коли ОХ40 являє собою біомаркер для відбору пацієнтів.
ІО325) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 для застосування у способі діагностики або виявлення являє собою антитіло проти ОХ40 людини, що містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:2; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:3; (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:4; (4) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:5; (е) НМК-ІЇ2, що містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:6, та () НМА-І З, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:7.
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить (а) домен МН, що містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (ї) НМАЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮО МО:2; (ії) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО:3, та (ії) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:4, та (Б) домен МІ,, що містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності
МІ. НМЕ, вибрані з (ї) НМК-1І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:5; (її) НМК-1 2, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:6, та (с) НМЕК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІОЮО МО:7. У деяких варіантах реалізації винаходу ОХ40-антитіло містить (а)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ОО МО:2; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:3; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:4; (а) НУВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:5; (є) НМЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮО МО:6, та () НМК-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО:7. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (МН), що має щонайменше 90 95, 91 9, 9296, 9395, 9495, 95905, 9695, 97 95, 9895, 9995 або 10095 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:180. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність МН, що має щонайменше 90 Фо, 91 Фо, 92 У, 93 У, 94 95, 95 95, 96 Уо, 97 Чо, 98 Фо або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені усього від 1 до 10 амінокислот з 5ЕО ІЮ МО:180. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НМК (тобто в ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МН в ЗЕО ІЮ МО:180, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності.
У конкретному варіанті реалізації винаходу МН містить один, два або три НУЕ, вибраних з: (а) 60 НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ОО МО:2, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО:З3, та (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:4. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який має щонайменше 90 95, 91 95, 92 Фо, 93 9», 94 Ор, 9596, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО:179. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність МІ, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 95 або 99 95 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені всього від 1 до 10 амінокислот в ЗЕО ІО МО: 179. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НУК (тобто в
ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність Мі в ЗЕО ІЮ МО: 179, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МІ містить один, два або три НМК, вибраних з (а) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:5; (в) НМАК-1І12, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:6, та (с) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:7.
ІО326) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40, що застосовується у способі діагностики або виявлення, являє собою антитіло проти ОХ40 людини, що містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:29; (в) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО:З30; (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:31; (4) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:37; (е) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО:39, та () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:42. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить (а) домен МН, що містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (їі)
НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:29; (ії) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:30, та (ії) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО:31, та (б) домен МІ, що містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ. НУК, вибрані з (ї) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність
Зо ЗЕО І МО:37; (ії) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО':39, та (с) НУВ-
ЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІО МО:42. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕ
ІО МО:29; (5) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:30; (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:31; (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:37; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО:39, та (5 НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗБЕО І МО:42. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить послідовність варіабельного домена важкого ланцюга (МН), що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 9о, 94 95, 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 95, 9995 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ
МО:182. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність МН, що має щонайменше 90 95, 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 97 95, 9895 або 9995 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, яке містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінени, вставлені та/або видалені усього від Її до 10 амінокислот в 5ЕО ІЮ МО:182. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НМЕК (тобто в ЕК).
Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність МН в 5ЕО ІЮ МО:182, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МН містить один, два або три НУК, вибраних з: (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну
БО послідовність ЗЕО ІЮ МО:29, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ
МО:30, та (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО І МО:31. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 90, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:181. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність МІ, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 9, 9395, 9495, 95965, 966, 9795, 9895 або 9995 ідентичності, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції відносно еталонної послідовності, але антитіло- агоніст проти ОХ40 людини, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з
ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу були замінені, вставлені та/або видалені всього 60 від 1 до 10 амінокислот в 5ЕО ІЮ МО: 181. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни,
інсерції та делеції відбуваються у ділянках за межами НМК (тобто в ЕК). Необов'язково антитіло-агоніст проти ОХ40 людини містить послідовність Мі в ЗЕО ІЮО МО: 181, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МІ. містить один, два або три НУК, вибраних з (а) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО:37; (5) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:39, та (с) НМЕ- 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:42.
ІО327| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить послідовність МН
ЗБО ІО МО: 180. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить послідовність МІ 5ЕО ІО МО: 179. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:180 та послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 179. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить послідовність МН 5ЕО ІО МО: 182. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 181. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти ОХ40 містить послідовність МН 5ЕО
ІО МО:182 та послідовність МІ. ЗЕО І МО: 181.
І0З328| Типові розлади, які можуть бути діагностовані з використанням антитіла за цим винаходом включають рак.
ІОЗ29)| У деяких варіантах реалізації винаходу пропонуються мічені антитіла проти ОХ40.
Мітки включають, але не обмежуються ними, мітки або фрагменти, які виявляються безпосередньо (такі як флуоресцентні, хромофорні, електроннощільні, хемілюмінесцентні та радіоактивні мітки), а також фрагменти, такі як ферменти або ліганди, які виявляються непрямим способом, наприклад, шляхом ферментативної реакції або молекулярної взаємодії.
Типові мітки включають, але не обмежуються ними, радіоїзотопи З2Р, 7140, 125), ЗН та "ЛІ, флуорофори, такі як хелати рідкоземельних металів або флуоресцеїн та його похідні, родамін та його похідні, дансил, умбеліферон, люциферази, наприклад, люцифераза світляка та бактеріальна люцифераза (патент США Мо 4737456), люциферин, 2,3-дигідрофталазиндіони, пероксидазу хріну (НКР), лужну фосфатазу, В-галактозидазу, глюкоамілазу, лизоцим, сахаридоксидази, наприклад, глюкооксидаза, галактозооксидаза та глюкозо-6- фосфатдегідрогеназа, гетероцикличні оксидази, такі як уриказа та ксантиноксидаза, зв'язані з ферментом, який використовує пероксид водню для окиснення попередника барвника, таким як
Ко) НЕР, лактопероксидаза або мікропероксидаза, біотин/авідин, спінові мітки, бактеріофагові мітки, стабільні вільні радикали тощо.
ЇОЗЗ0О| В одному аспекті у винаході пропонуються діагностичні способи, наприклад, для виявлення раку у пацієнта, який ймовірно відповідає на лікування за допомогою антитіла- агоніста проти ОХ40 людини.
ІО331| У деяких варіантах реалізації винаходу пропонуються способи виявлення пацієнтів, які ймовірно відповідають на лікування за допомогою антитіла-агоніста проти ОХ40 людини, причому способи включають (ї) визначення присутності або відсутності, або кількості (наприклад, кількості у цьому розмірі зразка) клітин, експресуючих ЕскК у зразку ракової тканини, отриманої від пацієнта, та (ії) виявлення пацієнта, як такого, що ймовірно відповідає на лікування, якщо зразок містить клітини, експресуючі ГСК (наприклад, велику кількість клітин, експресуючих ГСК). Способи виявлення клітин, які експресують ЕСЕ, включаючи, наприклад, метод ІГХ, добре відомі у даній галузі техніки. У деяких варіантах реалізації винаходу ГСК являє собою Есук. У деяких варіантах реалізації винаходу ГСК являє собою Есук, що активується. У деяких варіантах реалізації винаходу рак являє собою будь-яке ракове захворювання, описане у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу рак являє собою недрібноклітинний рак легень (НДРЛ), гліобластому, нейробластому, меланому, карциному молочної залози (наприклад, тричі негативний рак молочної залози), шлунковий рак, колоректальний рак (СКС) та гепатоцелюлярну карциному. У деяких варіантах реалізації винаходу метод являє собою метод іп мійго. У деяких варіантах реалізації винаходу спосіб додатково включає (її) рекомендацію лікування за допомогою антитіл-агоністів проти ОХ40 людини (наприклад, будь- яким з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі). У деяких варіантах реалізації винаходу способи додатково включають (ім) лікування пацієнта за допомогою антитіл- агоністів проти ОХ40 людини. 0332) У деяких варіантах реалізації винаходу пропонуються способи виявлення пацієнтів, які ймовірно відповідають на лікування за допомогою антитіла-агоніста проти ОХ40 людини, причому способи включають (ї) визначення присутності або відсутності, або кількості (наприклад, кількості у цьому розмірі зразка) ефекторних клітин людини (наприклад, інфільтруючих ефекторних клітин) в зразку раку, отриманому від пацієнта, та (ії) виявлення пацієнта, як такого, що ймовірно відповідає на лікування, якщо зразок містить ефекторні клітини бо (наприклад, велику кількість ефекторних клітин). Способи виявлення інфільтруючих ефекторних клітин людини, включаючи, наприклад, метод ІГХ, добре відомі у даній галузі техніки. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторні клітини людини являють собою один або більше типів з МК-клітин, макрофагів, моноцитів. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторні клітини експресують Есук, що активується. У деяких варіантах реалізації винаходу метод являє собою метод іп мйго. У деяких варіантах реалізації винаходу рак являє собою будь-яке ракове захворювання, описане у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу рак являє собою недрібноклітинний рак легень (НДРЛ), гліобластому, нейробластому, меланому, карциному молочної залози (наприклад, тричі негативний рак молочної залози), шлунковий рак, колоректальний рак (СКС) та гепатоцелюлярну карциному. У деяких варіантах реалізації винаходу спосіб додатково включає (ії) рекомендацію лікування за допомогою антитіл-агоністів проти ОХ40 людини (наприклад, будь-яким з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі). У деяких варіантах реалізації винаходу способи додатково включають (ім) лікування пацієнта за допомогою антитіл-агоністів проти ОХ40 людини. 0333) Запропоновані методи забезпечення діагностики раку включають: (ї) вимірювання вмісту експресуючих БСК клітин (наприклад, рівень або присутність або відсутність, або переважання ЕсК (наприклад, відсотковий вміст клітин, експресуючих ЕсК, наприклад, методом
ІГХ)) у зразку, отриманому від пацієнта; (ії) діагностування пацієнта, як такого, що має ракове захворювання, що містить біомаркер ЕСК (наприклад, високий рівень біомаркера ЕСЕ), коли зразок містить біомаркер експресії БСК. У деяких варіантах реалізації винаходу спосіб додатково включає (іїї) вибір терапії, що включає (а) антитіло-агоніст проти ОХ40 людини або (б) рекомендацію проведення пацієнту терапії що включає антитіло-агоніст проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу метод являє собою метод іп міїго.
І0334| Запропоновані методи забезпечення діагностики раку включають: (ї) вимірювання вмісту ефекторних клітин людини (наприклад, рівень або присутність або відсутність, або переважання (наприклад, відсотковий вміст ефекторних клітин людини) ефекторних клітин людини) у зразку, отриманому від пацієнта; (ії) діагностування пацієнта, як такого, що має ракове захворювання, що містить ефекторні клітини людини (наприклад, високий рівень ефекторних клітин людини), якщо зразок містить біомаркер ефекторних клітин людини. У деяких варіантах реалізації винаходу спосіб додатково включає (ії) вибір терапії, що включає (а)
Зо антитіло-агоніст проти ОХ40 людини або (Б) рекомендацію проведення пацієнту терапії, що включає антитіло-агоніст проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу метод являє собою метод іп міїго.
ІО335)| Запропоновані методи для рекомендації лікування пацієнта, що має рак, включають: () вимірювання вмісту експресуючих БСК клітин (наприклад, рівень або присутність або відсутність, або переважання ЕсЕ (наприклад, відсотковий вміст клітин, експресуючих ЕсК) в зразку, отриманому від пацієнта; (ії) рекомендацію лікування за допомогою антитіла-агоніста проти ОХ40 людини, якщо зразок містить експресуючі ЕСЕ клітини (у деяких варіантах реалізації винаходу високий рівень експресуючих БСК клітин). У деяких варіантах реалізації винаходу метод додатково включає (ії) вибір для пацієнта терапії, що включає антитіло-агоніст проти
ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу метод являє собою метод іп міїго. (0336) Запропоновані методи для рекомендації лікування пацієнта, що має рак, включають: () вимірювання вмісту ефекторних клітин людини (наприклад, рівень або присутність або відсутність, або переважання ефекторних клітин людини (наприклад, відсотковий вміст ефекторних клітин людини) в зразку, отриманому від пацієнта; (ії) рекомендацію лікування за допомогою антитіла-агоніста проти ОХ40 людини, якщо зразок містить ефекторні клітини людини (у деяких варіантах реалізації винаходу високий рівень ефекторних клітин людини). У деяких варіантах реалізації винаходу метод додатково включає (ії) вибір для пацієнта терапії, що включає антитіло-агоніст проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу метод являє собою метод іп міїго.
ІО337| У деяких варіантах реалізації винаходу будь-якого із запропонованих у цьому документі винаходів зразок відбирають перед лікуванням за допомогою антитіла-агоніста проти
ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу зразок відбирають перед лікуванням за допомогою протиракового лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу зразок відбирають після метастазування ракового захворювання. У деяких варіантах реалізації винаходу зразок фіксують формаліном та заливають парафіном (БЕРЕ). У деяких варіантах реалізації винаходу зразок є біоптатом (наприклад, пункційним біоптатом), отриманим хірургічним шляхом зразок (наприклад, отриманий хірургічною резекцією зразок) або тонкоголчастий аспірат.
Е. Фармацевтичні препарати бо ІЇО338| Фармацевтичні препарати антитіла проти ОХ40, описані у цьому документі,
отримують шляхом змішування такого антитіла, що має потрібний ступінь чистоти, з одним або більше необов'язковими фармацевтично прийнятними носіями (ВНетіпаїоп'є РНаптасецііса)
Зсіепсез 161п еййіоп, О5ої, А. Еа. (1980)), в формі ліофілізованих препаратів або водних розчинів. Фармацевтично прийнятні носії звичайно є нетоксичними для реципієнтів у дозуваннях та концентраціях, що використовуються, та включають, але не обмежуються ними: буферними речовинами, такими як фосфат, цитрат та інші органічні кислоти; антиоксиданти, які включають аскорбінову кислоту та метионін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламонію хлорид); гексаметонію хлорид; бензалконію хлорид; бензетонію хлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкілларабени, такі як метил- або пропілпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; З-пентанол та м-крезол); низькомолекулярні (менш ніж близько 10 залишків) пептиди; білки; такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин; аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші вуглеводи, які включають глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕДТК; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; солеутворуючі протиїони, такі як натрій; комплекси металів (наприклад, 7п-білкові комплекси) та/або неіонні ПАРи, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ). Приклади фармацевтично прийнятних носіїв у цьому документі додатково включають агенти, що забезпечують внутрішньотканевий розподіл лікарських речовин, такі як розчинні нейтрально-активні глікопротеїни, що містять гіалуронідазу (ЗНАБЕСР), наприклад, розчинні глікопротеїни РН-20 людини, що містять гіалуронідазу, такі як ГНИиИРН2гО (НМ ЕМЕХУ, Вахіег Іпіегпайіопаї, Іпс.). Деякі приклади 5НАБЕОР та способи їх застосування, включаючи гНиРН20О, описані у публікаціях патентів США Мо 2005/0260186 та 2006/0104968. В одному аспекті винаходу ЗНАБЕСР комбінують з одним або більше додатковими глікозаміногліканазами, такими як хондроїтинази. 0339) У деяких варіантах реалізації винаходу "гістидиновий буферний розчин" є буферним розчином, що містить іони гістидину. Приклади гістидинових буферних розчинів включають гістидин-хлоридний, гістидин-ацетатний, гістидин-фосфатний, гістидин-сульфатний. Виявлено, що переважним визначеним у прикладах цього документу гістидиновим буферним розчином є гістидин-ацетатний. У переважному варіанті реалізації винаходу гістидин-ацетатний буферний розчин готують титруванням І -гістидину (основа, тверда речовина) оцтовою кислотою (рідина).
Зо У деяких варіантах реалізації винаходу гістидиновий буферний розчин або гістидин-ацетатний буферний розчин має рН від 5,0 до 6,0, у деяких варіантах реалізації винаходу рН від 5,3 до 5,8. (0340) У деяких варіантах реалізації винаходу "сахарид" у цьому документі включає загальну сполуку (СН2О)п та його похідні, що включають моносахариди, дисахариди, трисахариди, полісахариди, цукроспирти, редукуючі цукри, нередукуючі цукри тощо. Приклади сахаридів у цьому документі включають глюкозу, сахарозу, трегалозу, лактозу, фруктозу, мальтозу, декстран, гліцерин, декстран, еритрит, гліцерин, арабіт, силіт, сорбіт, маніт, мелібіозу, мелезитозу, рафінозу, манотриозу, стахіозу, мальтозу, мальтулозу, глюцит, мальтит, лактит, ізомальтулозу тощо. У деяких варіантах реалізації винаходу сахарид являє собою нередукуючий дисахарид, такий як трегалоза або цукроза.
ЇО34А1| У деяких варіантах реалізації винаходу у цьому документі "поверхнево активна речовина (ПАР)» відноситься до поверхнево-активної речовини, переважно неіонному ПАРУ.
Приклади поверхнево активних речовин у цьому документі включають полісорбат (наприклад, полісорбат 20 та ополісорбат 80); полоксамер (наприклад, полоксамер 188); тритон; додецилсульфат натрію (ДСН); лаурилсульфат натрію; октилглікозид натрію; лаурил-, міристил- ; лінолеїл- або стеарилсульфобетаїн; лаурил-, міристил-, лінолеїл- або стеарилсаркозин; лінолеїл-, міристил- або цетилбетаїн; лауроамідопропіл-, кокамідопропіл-, лінолеамідопропіл-, міристамідопропіл-, пальмідопропіл- або ізостеарамідопропілбетаїн (наприклад, лауроамідопропіл); міристамідопропіл-, пальмідопропіл- або ізостеарамідопропілдиметиламін; натрію метилкокоїл- або динатрію метилолеїлтаурат та серія МОМАОЦОАТ М (Мопа Іпадивігієв,
Іпс., м. Патерсон, штат Нью-Джерсі); поліетиленгліколь, поліпропіленгліколь та співполімери етилен- та пропіленгліколю (наприклад, плюроніки, РЕб68 тощо) тощо. У деяких варіантах реалізації винаходу ПАР являє собою полісорбат 20. У деяких варіантах реалізації винаходу
ПАР являє собою полісорбат 80. (0342) Приклади ліофілізованих препаратів антитіл описані у патенті США Мо 6267958. Водні препарати антитіл включають ті, що описані в патенті США Мо 6171586 та М/О2006/044908, причому останні препарати містять гістидин-ацетатний буферний розчин.
Ї0343| Запропонований у цьому документі препарат також може містити більше одного активного інгредієнту, якщо це необхідно для конкретного показання, що підлягає лікуванню, переважно інгредієнти з активностями, які доповнюють одна одну, та не спричиняти 60 несприятливий вплив одна на одну. Наприклад, може бути потрібним додаткове забезпечення додатковим лікарським засобом (приклади яких пропонуються у цьому документі). Відповідно, такі активні інгредієнти присутні в комбінації у кількостях, ефективних для передбачуваної мети.
І0344| Активні інгредієнти можна поміщати у мікрокапсули, отримані, наприклад, за допомогою методики коацервації або міжфазної полімеризації, наприклад, гідроксиметилцелюлозні або желатинові мікрокапсули та полі-(метилметакрилатні) мікрокапсули, відповідно, у колоїдні системи доставки лікарських засобів (наприклад, ліпосоми, альбумінові мікросфери, мікроемульсії, наночастинки та нанокапсули) або в макроемульсії. Такі методики описані в Ветіпдіоп'є Рнаптасеціїса! Зсієпсев5 161п єайіоп, Озої, А. Ей. (1980).
Ї0345| Можна приготувати препарати із сповільненим вивільненням. Підходящі приклади препаратів із сповільненим вивільнення включають напівпроникні матриці твердих гідрофобних полімерів, що містить антитіло, матриці яких приготовлені у формі профільованих виробів, наприклад, плівок або мікрокапсул. 0346) Препарати, призначені для введення іп мімо, звичайно є стерильними. Стерильність може легко досягатися, наприклад, шляхом фільтрації через мембрани для стерильної фільтрації.
ІО347| У деяких варіантах реалізації винаходу у цьому документі пропонуються фармацевтичні препарати, що містить: (а) будь-яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі; (5) гістидиновий буферний розчин при рН 5,0-6,0.
ІО348| У деяких варіантах реалізації винаходу у цьому документі пропонуються фармацевтичні препарати, що містять: (а) будь-яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі; (б) гістидиновий буферний розчин при рН 5,0-6,0; (с) сахарид та (а)
ПАР. 0349) У деяких варіантах реалізації будь-якого з препаратів антитіло-агоніст проти ОХ40 людини присутнє у концентрації між близько 10 мг/мл та близько 100 мг/мл (наприклад, близько 15 мг/мл, 18 мг/мл, 20 мг/мл, 60 мг/мл та 75 мг/мл). У деяких варіантах реалізації антитіло- агоніст проти ОХ40 людини присутнє у концентрації близько 20 мг/мл. У деяких варіантах реалізації антитіло-агоніст проти ОХ40 людини присутнє у концентрації близько 50 мг/мл. У деяких варіантах реалізації антитіло-агоніст проти ОХ40 людини присутнє у концентрації близько 60 мг/мл. У деяких варіантах реалізації антитіло-агоніст проти ОХ40 людини присутнє у
Зо концентрації близько 70 мг/мл.
ЇОЗ35О| У деяких варіантах реалізації будь-якого з препаратів сахарид присутній у концентрації від близько 75 мМ до близько 360 мМ (наприклад, близько 100 мМ, близько 120
ММ, близько 240 мМ, від близько 320 мМ до близько 360 мМ). У деяких варіантах реалізації сахарид присутній у концентрації близько 120 мМ. У деяких варіантах реалізації сахарид присутній у концентрації близько 240 мМ. У деяких варіантах реалізації сахарид присутній у концентрації близько 320 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу сахарид є дисахаридом. У деяких варіантах реалізації винаходу дисахарид є трегалозою. У деяких варіантах реалізації винаходу дисахарид є сахарозою.
ЇО351| У деяких варіантах реалізації будь-якого з препаратів гістидиновий буферний розчин присутній у концентрації від близько 1 мМ до близько 50 мМ (наприклад, від близько 1 мМ до близько 25 мМ). У деяких варіантах реалізації винаходу гістидиновий буферний розчин присутній у концентрації близько 10 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу гістидиновий буферний розчин присутній у концентрації близько 20 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу гістидиновий буферний розчин присутній у концентрації близько 30 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу гістидиновий буферний розчин є гістидин-ацетатним. 03521 У деяких варіантах реалізації будь-якого з препаратів ПАР являє собою полісорбат (наприклад, полісорбат 20 або полісорбат 40), полоксамером (наприклад, полоксамер 188); тритоном; додецилсульфатом натрію (ДСН); лаурилсульфатом натрію або октилглікозидом натрію.
ЇОЗ353) У деяких варіантах реалізації будь-якого з препаратів ПАР являє собою полісорбат. У деяких варіантах реалізації полісорбат присутній у концентрації від близько 0,005 95 до близько 0,1 95. У деяких варіантах реалізації полісорбат присутній у концентрації близько 0,005 95. У деяких варіантах реалізації полісорбат присутній у концентрації близько 0,02 965. У деяких варіантах реалізації полісорбат присутній у концентрації близько 0,04 95. У деяких варіантах реалізації полісорбат присутній у концентрації близько 0,06 95. У деяких варіантах реалізації винаходу полісорбат є полісорбатом 20. У деяких варіантах реалізації винаходу полісорбат є полісорбатом 80.
ЇО354| У деяких варіантах реалізації будь-якого з препаратів препарат розводять розчинником (наприклад, 0,990 МасСі)М У деяких варіантах реалізації антитіло-агоніст проти бо ОХ40 людини присутне у концентрації близько 1 мг/мл.
(0355) Зокрема, у цьому документі пропонуються фармацевтичні препарати, що містять (а) будь-які з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат, причому концентрація полісорбату складає від близько 0,005 95 до близько 0,195, та (с) гістидиновий буферний розчин (наприклад, гістидиновий буферний розчин з рН між 5,0 та 6,0). 0356) У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь-які з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі (наприклад, в концентрації між близько 10 мг/мл та близько 100 мг/мл), (б) полісорбат, причому концентрація полісорбату складає від близько 0,02 95 до близько 0,06 95; (с) гістидиновий буферний розчин (наприклад, гістидиновий буферний розчин з рН від 5,0 до 6,0) та сахарид, причому концентрація сахариду складає від близько 120 мМ до близько 320 мМ. У даних варіантах реалізації винаходу сахарид є сахарозою.
ІО357| У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь-які з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі в концентрації між близько 10 мг/мл та близько 100 мг/мл, (Б) полісорбат, причому концентрація полісорбату складає від близько 0,02 95 до близько 0,06 95; при цьому полісорбат є полісорбатом 20 або полісорбат 40; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН від 5,0 до 6,0) та сахарид (наприклад, сахарозу) в концентрації від близько 120 мМ до близько 320 мМ.
ІЇО358) У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь- яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 20, причому концентрація полісорбату складає від близько 0,02 95 до близько 0,06 905; (с) гістидин- ацетатний буферний розчин (наприклад, гістидин-ацетатний буферний розчин з рН від 5,0 до 6,0) та (а) сахарозу, причому концентрація сахарози складає від близько 120 мМ до близько 320
ММ. 0359) У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь- яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 40, причому концентрація полісорбату складає від близько 0,02 95 до близько 0,06 905; (с) гістидин- ацетатний буферний розчин (наприклад, гістидин-ацетатний буферний розчин з рН між 5,0 та 6,0) та сахарозу, причому концентрація сахарози складає від близько 120 мМ до близько 320
ММ.
Зо 0360) У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь- яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 20, причому концентрація полісорбату складає близько 0,02 95; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН 6,0 та (4) сахарозу, причому концентрація сахарози складає близько 320 мМ.
ІО361) У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь- яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 20, причому концентрація полісорбату складає близько 0,02 95; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН 5,5 та (4) сахарозу, причому концентрація сахарози складає близько 240 мМ. 0362) У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь- яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 20, причому концентрація полісорбату складає близько 0,04 95; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН 6,0 та (4) сахарозу, причому концентрація сахарози складає близько 120 мМ. 0363) У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь- яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 40, причому концентрація полісорбату складає близько 0,04 95; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН 5,0 та (а) сахарозу, причому концентрація сахарози складає близько 240 мМ. 0364) У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить (а) будь- яке з антитіл-агоністів проти ОХ40 людини, описаних у цьому документі, (Б) полісорбат 40, причому концентрація полісорбату складає близько 0,04 95; (с) гістидин-ацетатний буферний розчин з рН 6,0 та (4) сахарозу, причому концентрація сахарози складає близько 120 мМ.
ЇО365| У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат являє собою рідкий фармацевтичний препарат. У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат являє собою стабільний фармацевтичний препарат. У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат являє собою стабільний рідкий фармацевтичний препарат. 0366) У деяких варіантах реалізації будь-якого з фармацевтичних препаратів, описаних у цьому документі, антитіло-агоніст проти ОХ40 людини фармацевтичного препарату присутнє у концентрації між близько 10 мг/мл та близько 100 мг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу концентрація антитіла-агоніста проти ОХ40 людини знаходиться між близько будь-якого із значень від 10 мг/мл до 50 мг/мл, від 10 мг/мл до 75 мг/мл, від 25 мг/мл до 75 мг/мл, від 50 мг/мл 60 до 100 мг/мл, від 50 мг/мл до 75 мг/мл та/або від 75 мг/мл до 100 мг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу концентрація антитіла-агоніста проти ОХ40 людини складає більше ніж близько будь-якого значення з 20 мг/мл, 30 мг/мл, 40 мг/мл, 50 мг/мл, 60 мг/мл, 70 мг/мл або 100 мг/мл.
ЇО367| Фармацевтичний препарат переважно містить полісорбат. Полісорбат звичайно включають у кількості, яка знижує утворення агрегатів (таке як виникає при струшуванні або перезенні). Приклади полісорбату включають, але не обмежуються ними, полісорбат 20 (поліоксиетилен (20) сорбітан монолаурат), полісорбат 40 (поліоксиетилен (20) сорбітан монопальмітат), полісорбат 60 (поліоксиетилен (20) сорбітан моностеарат) та/або полісорбат 80 (поліоксиетилен (20) сорбітан моноолеат). У деяких варіантах реалізації винаходу полісорбат являє собою полісорбат 20 (поліоксиетилен (20) сорбітан монолаурат). У деяких варіантах реалізації будь-якого з фармацевтичних препаратів, описаних у цьому документі, концентрація полісорбату є достатньою для мінімізації агрегації та/або підтримання стабільності протягом тривалого терміну зберігання та/або у процесі введення (наприклад, після розведення у пакеті для в/в введення). У деяких варіантах реалізації винаходу концентрація полісорбату складає близько 0,005 95 мас./об., близько 0,02 95 мас./об., близько 0,04 95 мас./об. та менш ніж близько 0,1 95 мас./об. У деяких варіантах реалізації винаходу концентрація полісорбату складає більше ніж 0,01 95 мас./0об. та менш ніж близько 0,1 95 мас./об. У деяких варіантах реалізації винаходу концентрація полісорбату складає близько будь-якого значення з 0,005 95 мас./0б., близько 0,02 95 мас./об., близько 0,03 95 мас./об., близько 0,04 95 мас./об. або близько 0,05 95 мас./0б6. У деяких варіантах реалізації полісорбат присутній у концентрації близько 0,04 95. У деяких варіантах реалізації полісорбат присутній у концентрації близько 0,02 95.
ЇО368| Фармацевтичний препарат переважно містить сахарид. Сахариди включают моносахариди, дисахариди, трисахариди, полісахариди, сахароспирти, редукуючі сахари, нередукуючі сахари тощо. Додаткові приклади сахаридів включають, але не обмежуються ними, глюкозу, сахарозу, трегалозу, лактозу, фруктозу, мальтозу, декстран, гліцерин, декстран, ерітрит, гліцерин, арабіт, силіт, сорбіт, маніт, мелібіозу, мелезитозу, рафінозу, манотриозу, стахіозу, мальтозу, мальтулозу, глюцит, мальтит, лактит, ізомальтулозу тощо. У деяких варіантах реалізації винаходу сахарид є дисахаридом. У деяких варіантах реалізації винаходу сахарид є нередукуючим дисахаридом. У деяких варіантах реалізації винаходу сахарид є
Зо трегалозою.
І0369| Сахарид звичайно включають у кількості, яка знижує утворення агрегатів. У деяких варіантах реалізації будь-якого з фармацевтичних препаратів, описаних у цьому документі, сахарид присутній у концентрації між близько будь-якого зі значень від 50 мМ до 250 мМ, від 75
ММ до 200 мМ, від 75 мМ до 150 мМ, від 100 мМ до 150 мМ або від 110 мМ до 130 мМ, або від 100 мм до 320 мМ, або від 240 мм до 320 мМ, або від 240 мМ до 400 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу сахарид присутній у концентрації більше ніж близько будь-якого із значень 50 мМ, 75 мМ, 100 мм, 110 мм або 115 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу сахарид присутній у концентрації близько будь-якого із значень 100 мМ, 110 мМ, 120 мМ, 130 мм або 140 мМ. У деяких варіантах реалізації сахарид присутній у концентрації близько 120 мМ. У деяких варіантах реалізації будь-якого з препаратів сахарид присутній у концентрації від близько 75 мМ до близько 360 мМ (наприклад, близько 100 мМ, близько 120 мМ, близько 240
ММ, від близько 320 мМ до близько 360 мМ). У деяких варіантах реалізації сахарид присутній у концентрації близько 240 мМ. У деяких варіантах реалізації сахарид присутній у концентрації близько 320 мМ.
ЇО370О| Фармацевтичний препарат переважно містить гістидиновий буферний розчин.
Приклади гістидинових буферних розчинів включають, але не обмежуються ними, гістидин- хлоридний, гістидин-сукцинатний, гістидин-ацетатний, гістидин-фосфатний, гістидин- сульфатний. У деяких варіантах реалізації винаходу гістидиновий буферний розчин є гістидин- ацетатним. У деяких варіантах реалізації будь-якого з фармацевтичних препаратів, описаних у цьому документі, концентрація гістидинового буферного розчина складає між близько будь- якого з значений від 1 мМ до 50 мМ, від 1 мМ до 35 мМ, від 1 мМ до 25 мМ, від 1 мМ до 20 мМ, від 7,5 ММ до 12,5 мМ або від 5 мМ до 15 мМ, від 20 мМ до 30 мМ, від 25 мМ до 35 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу концентрація гістидинового буферного розчина складає близько будь-якого з значений 5 мМ, 7,5 мМ, 10 мМ, 12,5 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мм, 35 мМ або 40
ММ. У деяких варіантах реалізації винаходу концентрація гістидинового буферного розчина складає близько 10 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу концентрація гістидинового буферного розчина складає близько 20 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу концентрація гістидинового буферного розчина складає близько 30 мМ. У деяких варіантах реалізації винаходу концентрація гістидинового буферного розчина складає близько 40 мМ. У бо деяких варіантах реалізації винаходу будь-якого з фармацевтичних препаратів, описаних у цьому документі, гістидиновий буферний розчин має рН між рнН 5,0 та 6,0, наприклад, близько будь-якого з значений рН 5,0, рН 5,1, рН 5,2, рН 5,3, рН 5,4, рН 5,5, рН 5,6, рН 5,7, рН 5,8, рН 5,9 або рН 6,0. У деяких варіантах реалізації винаходу значення рН знаходиться між рн 4,9 та рн 6,3.
І0371| Фармацевтичний препарат, описаний у цьому документі, також може містити більше однієї активної сполуки, потрібної при конкретному показанні, що підлягає лікуванню, переважно із доповнюючими видами активності, які не спричиняють негативного впливу одна на одну. Такі молекули відповідно присутні в комбінації в кількостях, які ефективні для передбачуваного призначення.
ІЇО372| Додатково у цьому документі пропонуються флакони та способи наповнення флаконів, що містять фармацевтичний препарат, описаний у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується фармацевтичний препарат, переважно у водній формі, поміщеній всередину флакона з корком, що піддається проколюванню голкою шприца.
Бажано, щоб флакон зберігався при близько 2-8 "С, а також до 30 "С, протягом 24 годин до введення суб'єкту, що цього потребує. Флакон, наприклад, може представляти собою флакон на 15 куб. см (наприклад, для дози 200 мг).
Ї0373| Фармацевтичний препарат для введення переважно являє собою рідкий препарат (неліофілізований), що не піддавали попередній ліофілізації. У той же час фармацевтичний препарат може бути ліофілізованим, але переважно -- ні. У деяких варіантах реалізації будь- якого із фармацевтичних препаратів, даний фармацевтичний препарат являє собою ліофілізований фармацевтичний препарат. У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат являє собою рідкий препарат. У деяких варіантах реалізації винаходу фармацевтичний препарат не містить кількість солі, що забезпечує тонічність, таку як хлорид натрію. У деяких варіантах реалізації будь-якого з фармацевтичних препаратів, даний фармацевтичний препарат є розбавленим. б. Терапевтичні способи та композиції 03741) Будь-які з антитіл проти ОХ40 людини, запропонованих у цьому документі, можна застосовувати у терапевтичних способах. 0375) В одному аспекті винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини пропонується для
Зо застосування в якості лікарського засобу. У додаткових аспектах винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини пропонується для застосування при лікуванні раку. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини пропонується для застосування у способі лікування. У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується антитіло-агоніст проти
ОХ40 людини для застосування у способі лікування індивіда, що має ракове захворювання, яке включає введення індивіду ефективної кількості цього антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. В одному такому варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає введення індивіду ефективного кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного засобу, наприклад, як описано нижче.
ІО376)| В одному аспекті винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини для застосування у посиленні імунної функції (наприклад, шляхом підвищення регуляції опосередкованих клітинами імунних реакцій) у індивіда, що має ракове захворювання, яке включає введення індивіду ефективної кількості цього антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. В одному аспекті винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини для застосування у посиленні функціонування Т-клітин у індивіда, що має ракове захворювання, яке включає введення індивіду ефективної кількості цього антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. В одному аспекті винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини для застосування при виснаженні популяції ОХ40-експресуючих клітин людини (наприклад, експресуючих ОХ40 Т- клітин, наприклад, експресуючих ОХ40 Тгед) що включає введення індивіду ефективної кількості цього антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом АЗКЦ. У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом фагоцитозу. Пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини для лікування індивіда, що має несприйнятливість пухлини.
ІЇ0О377| У додаткових аспектах винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини для застосування при лікуванні інфекції (наприклад, при ураженні або вірусом, або іншим патогеном). У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини для застосування у способі лікування індивіду, що має інфекцію, яка включає введення індивіду ефективної кількості цього антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу інфекція викликана вірусом та/або бактеріями. У деяких варіантах реалізації винаходу інфекція викликана патогеном. бо ЇО378| У додатковому аспекті у винаході пропонується для застосування антитіло проти
ОХ40 при виробництві або приготуванні лікарського засобу. В одному варіанті реалізації винаходу лікарський засіб призначено для лікування раку. У додатковому варіанті реалізації винаходу лікарський засіб призначений для застосування у способі лікування раку, що включає введення пацієнту, що має ракове захворювання, ефективної кількості цього лікарського засобу.
В одному такому варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає введення індивіду ефективного кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного засобу, наприклад, як описано нижче.
ІО379| В одному аспекті винаходу лікарський засіб призначений для застосування для посилення імунної функції (наприклад, шляхом підвищення регуляції опосередкованих клітинами імунних реакцій) у індивіда, що має ракове захворювання, який включає введення індивіду ефективного кількості цього лікарського засобу. В одному аспекті винаходу лікарське засіб призначений для застосування при посиленні функціонування Т-клітин у індивіда, що має ракове захворювання, який включає введення індивіду ефективної кількості цього лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації дисфункціональний розлад Т-клітин являє собою рак. В одному аспекті винаходу лікарський засіб призначений для застосування при виснаженні популяції ОХ40-експресуючих клітин людини (наприклад, клітин, експресуючих високий рівень
ОХ40, наприклад, експресуючих ОХ40 Т-клітин), що включає введення індивіду ефективної кількості цього лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом АЗКЦ. У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом фагоцитозу. В одному аспекті винаходу лікарський засіб призначено для лікування індивіда, що має несприйнятливість пухлини.
ЇОЗ380| У додаткових аспектах винаходу пропонується лікарський засіб, призначений для застосування при лікуванні інфекції (наприклад, при ураженні бактеріями або вірусом, або іншим патогеном). У деяких варіантах реалізації винаходу лікарський засіб призначений для застосування у способі лікування індивіда, що має інфекцію, який включає введення індивіду ефективної кількості цього лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу інфекція викликана вірусом та/або бактеріями. У деяких варіантах реалізації винаходу інфекція викликана патогеном.
ЇО381| У додатковому аспекті у винаході пропонується спосіб лікування ракового
Зо захворювання. В одному варіанті реалізації винаходу спосіб включає введення індивіду, що має таке ракове захворювання ефективної кількості антитіла проти ОХ40. В одному такому варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає введення індивіду ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агенту, як описано нижче. "Індивідом" у відповідності з будь-яким з перелічених вище варіантів реалізації винаходу може бути людина.
ІО382| В одному аспекті винаходу пропонується спосіб посилення імунної функції (наприклад, шляхом підвищення регуляції опосередкованих клітинами імунних реакцій) у індивіда, що має ракове захворювання, який включає введення індивіду ефективної кількості антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. В одному аспекті винаходу пропонується спосіб посилення імунної функції Т-клітин у індивіда, що має ракове захворювання, який включає введення індивіду ефективної кількості антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. В одному аспекті винаходу пропонують спосіб виснаження популяції ОХ40-експресуючих клітин людини (наприклад, клітин, які експресують високий рівень ОХ40, наприклад, експресуючих ОХ40 Т- клітин), яка включає введення індивіду ефективної кількості антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом АЗКЦ. У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом фагоцитозу.
Пропонується антитіло-агоніст проти ОХ40 людини для лікування індивіда, що має несприйнятливість пухлини.
ІО383) У деяких варіантах реалізації винаходу приклади ракового захворювання додатково включають, але не обмежуються ними, В-клітинну лімфому (що включає неходжкінську лімфому (НХЛ) низького ступеня ураження/фолікулярну; дрібноклітинну ліроцитарну (513 НХЛ; НХЛ середнього ступеня/фолікулярну; дифузну НХЛ середнього ступеня; лімфобластну НХЛ високого ступеню; дрібноклітинну з нерозсіченими ядрами НХЛ високого ступеня; масивне захворювання НХЛ; мантійноклітинну лімфому; СНіД-асоційововану лімфому та макроглобулемію Вальденстрома); хронічний лімфоцитарний лейкоз (СІ1); гострий лімфобластний лейкоз (АГ); волосатоклітинний лейкоз; хронічний мієлобластний лейкоз та посттрансплантаційний лімфопроліферативний розлад (РТІ 0), а також аномальну васкулярну проліферацію, пов'язану з факоматозами, набряком (таким як зв'язаний з пухлинами головного мозку), проліферативні розлади В-клітин та синдром Мейгса. Більше конкретні приклади включають, але не обмежуються ними, рецидивуючу або рефрактерну НХЛ, НХЛ першої лінії та бо низького ступеню ураження, НХЛ стадій Ш/М, резистентну до хіміотерапії НХЛ, лімфобластний лейкоз та/або лімфому попередників В-клітин, дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому, В- клітинний хронічний лімфоцитарний лейкоз та/або пролімфоцитарний лейкоз та/або дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому, В-клітинну пролімфоцитарну лімфому, імуноцитому та/або лімфоплазматичну лімфому, лімфоплазматичну лімфому, В-клітинну лімфому з клітин маргінальної зони, лімфому маргінальної зони селезінки, екстранодальну лімфому з клітин маргінальної зони -- МАЇТ, нодальну лімфому з клітин маргінальної зони, волосатоклітинний лейкоз, плазмацитому та/або мієлому плазмацитів, лімфому низького ступеня/фолікулярну,
НХЛ середнього ступеня/фолікулярну, мантійноклітинну лімфому, лімфому з клітин центра фолікула (фолікулярную), дифузну НХЛ середнього ступеня, дифузну крупноклітинну В-клітинну лімфому, агресивну НХЛ (що включає агресивну НХЛ першої лінії та агресивну рецидивуючу
НХЛ), НХЛ, рецидивуючу після або рефрактерну до трансплантації аутологічних стовбурових клітин, первинну медіастинальну крупноклітинну В-клітинну лімфобластну НХЛ, первинну ефузійну лімфому, імунобластну НХЛ високого ступеня, лімфобластну НХЛ високого степеня, дрібноклітинну з нерозсіченими ядрами НХЛ високого ступеня, масивне захворювання НХЛ, лімфому Беркіта, крупноклітинний гранулярний лімфоцитарний лейкоз клітин-попередників (периферичних), фунгоїдний мікоз та/або синдром Сезарі, лімфоми шкіри (кожні), анапластичну крупноклітинну лімфому, ангіоцентричну лімфому.
ІО384) У деяких варіантах реалізації винаходу приклади ракових захворювань додатково включають, але не обмежуються ними, В-клітинні проліферативні розлади, які додатково включають, але не обмежуються ними, лімфоми (наприклад, В-клітинну неходжкінську лімфому (НХЛ)) та лімфоцитарний лейкоз. Такі лімфоми та лімфоцитарні лейкози включают, наприклад, а) фолікулярні лімфоми, Б) дрібноклітинну лімфому з нерозсіченими ядрами/ лімфому Беркіта (що включає ендемічну лімфому Беркіта, спорадичну лімфому Беркіта та не-Беркіта лімфому), с) лімфоми з клітин маргінальної зони (що включають екстранодальну В-клітинну лімфому з клітин маргінальної зони (мукозальні лімфоми лімфатичних тканин, МАГ), нодальну В-клітинну лімфому з клітин маргінальної зони та лімфому з маргінальної зони селезінки), 4) мантійноклітинну лімфому (МС), е) крупноклітинну лімфому (що включає В-клітинну дифузну крупноклітинну лімфому (ОСІ), дифузну змішано-клітинну лімфому, імунобластну лімфому, первинну медіастинальну В-клітинну лімфому, ангіоцентричну лімфому-пульмонарну В-клітинну
Зо лімфому), й волосатоклітинний лейкоз, 9) лімфоцитарну лімфому, макроглобулемію
Вальденстрома, п) гострий лімфоцитарний лейкоз (АГ), хронічний лімфоцитарний лейкоз (СГЦ/ дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (5), В-клітинну пролімфоцитарну лейкемію, Її) плазмацитарні новоутворення, плазмацитарну мієлому, множинну мієлому, плазмацитому та/або |) хворобу Ходжкіна.
ЇО385| У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів ракове захворювання являє собою В-клітинний проліферативний розлад. У деяких варіантах реалізації винаходу В- клітинний проліферативний розлад являє собою лімфому, неходжкінську лімфому (НХЛ), агресивну НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу повільноростучу НХЛ, рефрактерну
НХЛ, рефрактерну повільноростучу НХЛ, хронічний лімфоцитарний лейкоз (СГ, дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому, лейкоз, волосатоклітинний лейкоз (НСІ), гострий лімфоцитарний лейкоз (АГ) або мантійноклітинну лімфому. У деяких варіантах реалізації винаходу В-клітинне проліферативний розлад являє собою НХЛ, таку як повільноростучу НХЛ та/або агресивну НХЛ. У деяких варіантах реалізації винаходу В-клітинний проліферативний розлад являє собою повільноростучу фолікулярну лімфому або дифузну крупноклітинну В- клітинну лімфому. 0386) У додатковому аспекті винаходу у винаході пропонуються фармацевтичні препарати, що містять будь-яке з антитіл проти ОХ40, запропонованих у цьому документі, наприклад, для застосування у будь-якому з перелічених вище терапевтичних способів. В одному варіанті реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить будь-яке з антитіл проти ОХ40, представлених у цьому документі, та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті реалізації винаходу фармацевтичний препарат містить будь-яке з антитіл проти ОХ40, представлених у цьому документі, та щонайменше один додатковий терапевтичний агент, наприклад, описаний нижче.
ІО387| У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом антитіла- агоністи проти ОХ40 людини інгібують імунітет до пухлин шляхом інгібування функціонування
Тгед (наприклад, інгібування супресивної функції Тгед), знищення експресуючих ОХ40 клітин (наприклад, клітин, які експресують високі рівні ОХ40), збільшення функціонування ефекторних
Т-клітин та/або збільшення функціонування Т-клітин пам'яті. У деяких варіантах реалізації будь- якого зі способів за цим винаходом антитіла-агоністи проти ОХ40 людини лікують ракове бо захворювання шляхом інгібування функціонування Тгед (наприклад, інгібування супресивної бо функції Тгед), знищення експресуючих ОХ40 клітин (наприклад, клітин, які експресують високі рівні ОХ40), збільшення функціонування ефекторних Т-клітин та/або збільшення функціонування Т-клітин пам'яті. У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом антитіла-агоністи проти ОХ40 людини посилюють імунну функцію шляхом інгібування функціонування Тгед (наприклад, інгібування супресивної функції Тгед), знищення експресуючих ОХ40 клітин (наприклад, клітин, які експресують високі рівні ОХ40), збільшення функціонування ефекторних Т-клітин та/або збільшення функціонування Т-клітин пам'яті. У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом антитіла-агоністи проти
ОХ40 людини посилюють функціонування Т-клітин шляхом інгібування функціонування Тгед (наприклад, інгібування супресивної функції Тгед), знищення експресуючих ОХ40 клітин (наприклад, клітин, які експресують високі рівні ОХ40), збільшення функціонування ефекторних
Т-клітин та/або збільшення функціонування Т-клітин пам'яті.
ІЇО388| У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів антитіло-агоніст проти ОХ40 людини є виснажуючим антилюдським антитілом-агоністом. У деяких варіантах реалізації винаходу лікування за допомогою антитіла-агоніста проти ОХ40 людини призводить до виснаження популяції клітин (наприклад, виснаження популяції ОХ40-експресуючих клітин, наприклад, виснаження популяції клітин, які експресують високі рівні ОХ40). У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом АЗКЦ. У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом фагоцитозу.
ІО389| У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів антитіло-агоніст проти ОХ40 людини інгібує функціонування Тгед, наприклад, шляхом інгібування Тгед-супресії функціонування ефекторних Т-клітин та/або Т-клітин пам'яті "у деяких варіантах реалізації винаходу проліферації та/або секреції цитокінів ефекторними Т-клітинами та/або Т-клітинами пам'яті) відносно функціонування Тгед перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40. У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує проліферацію ефекторних Т-клітин відносно проліферації ефекторних Т-клітин перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40. У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує проліферацію Т-клітин пам'яті відносно проліферації Т-клітин пам'яті перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40. У деяких
Зо варіантах реалізації будь-якого зі способів антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує продукцію цитокінів ефекторними Т-клітинами (наприклад, продукцію гама-інтерферону) відносно продукції цитокінів ефекторними Т-клітинами перед введенням антитіла-агоніста проти
ОХ40. У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує продукцію цитокінів Т-клітинами пам'яті (наприклад, продукцію гама-інтерферону) відносно продукції цитокінів Т-клітинами пам'яті перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40.
У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує проліферацію СО4- ефекторних Т-клітин та/або проліферацію СО8ж ефекторних Т- клітин відносно проліферації СО4-- ефекторних Т-клітин та/або проліферації СО8- ефекторних
Т-клітин перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40. У деяких варіантах реалізації будь- якого зі способів антитіло-агоніст проти ОХ40 людини збільшує проліферацію Т-клітин пам'яті (наприклад, проліферацію СО4--Т-клітин пам'яті) відносно проліферації Т-клітин пам'яті перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу СО4 ефекторні Т-клітини у індивіда мають посилену проліферацію, секрецію цитокінів та/або цитолітичною активністю відносно проліферації, секреції цитокінів та/або цитолітичної активності перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. 0390) У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів кількість СО4- ефекторних Т- клітин відносно підвищено перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу секреція цитокінів СО4- ефекторними Т-клітинами відносно підвищена перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів СОвж ефекторні Т-клітини у індивіда мають відносно посилену проліферацію, секрецію цитокінів та/"або цитолітичну активність перед введенням антитіла- агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу кількість СО8-- ефекторних
Т-клітин відносно підвищено перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу секреція цитокінів СО8З- ефекторними Т-клітинами відносно підвищена перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини.
ІО391| У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом антитіло- агоніст проти ОХ40 людини зв'язує ефекторні клітини людини, наприклад, зв'язує ЕсукК, що експресується ефекторними клітинами людини. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна клітина людини виконує ефекторну функцію для АЗКЦ. У деяких варіантах реалізації бо винаходу ефекторна клітина людини виконує ефекторну функцію для фагоцитозу.
0392) У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом антитіло- агоніст проти ОХ40 людини, що містить Ес-поліпептид варіанта Ідс1, що містить мутацію, яка усуває зв'язування з ефекторними клітинами людини (наприклад, мутацію ОАМА або М2975), має знижену активність (наприклад, для функціонування СО4- ефекторних Т-клітин, наприклад, проліферації), відносно антитіла-агоніста проти ОХ40 людини, що містить нативну послідовність
Ес-части ІдС1. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, що містить Ес-поліпептид варіанта Ідс1, що містить мутацію, яка усуває зв'язування з ефекторними клітинами людини (наприклад, мутацію САМА або М29705), не має значної активністі (наприклад, для функціонування СО4-- ефекторних Т-клітин, наприклад, проліферації).
ІЇО393| У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом для функціонування антитіл-агоністів проти ОХ40 людини потрібне перехресне зв'язування антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу функціонування полягає у стимуляції проліферації СО4- ефекторних Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу перехресне зв'язування антитіла визначається шляхом прикріплення антитіла-агоніста проти ОХ40 людини на твердій поверхні (наприклад, на планшеті для культивування клітин). У деяких варіантах реалізації винаходу перехресне зв'язування антитіла визначається шляхом введення мутації до
Ес-частини антитіла ІдСс1 (наприклад, мутація ОБАМА або М2975) та дослідження функціонування мутантного антитіла. 0394) У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів Т-клітини пам'яті у індивіда мають відносно посилену проліферацію та/або секрецію цитокінів перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу кількість Т-клітин пам'яті відносно підвищено перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу секреція (рівень) цитокінів Т-клітинами пам'яті відносно підвищена перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів Тгед у індивіда мають відносно зменшене інгібування функціонування ефекторних Т- клітин (наприклад, проліферації та/або секреції цитокінів) перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу кількість ефекторних Т-клітин відносно підвищено перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу секреція (рівень) цитокінів ефекторними Т-клітинами відносно підвищена перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини.
ІЇО395| У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом кількість внутрішньопухлинних (інфільтруючих) СО4-- ефекторних Т-клітин (наприклад, загальна кількість ср4- ефекторних Т-клітин або, наприклад, відсотковий вміст СО4-- клітин у популяції СО45-- клітин) відносно підвищено перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом кількість внутрішньопухлинних (інфільтруючих) СО4-ж- ефекторних Т-клітин, які експресують гама-інтерферон (наприклад, загальний гама-інтерферон, що експресується СО4-- клітинами, або, наприклад, відсотковий вміст гама-інтерферону, що експресується СО4.- клітинами, у загальній популяції СО4-- клітин) відносно підвищено перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини.
І0396| У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом кількість внутрішньопухлинних (інфільтруючих) СО8-- ефекторних Т-клітин (наприклад, загальна кількість
СО8- ефекторних Т-клітин або, наприклад, відсотковий вміст СО8-- у популяції СО45-- клітин) відносно підвищено перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом кількість внутрішньопухлинних (інфільтруючих) СОвж- ефекторних Т-клітин, які експресують гама-інтерферон (наприклад, відсотковий вміст СО8-- клітин, які експресують гама-інтерферон у загальній популяції СО8ч- клітин) відносно збільшено перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини.
ІЇ0397| У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом кількість внутрішньопухлинних (інфільтруючих) Тгед (наприклад, загальна кількість Тгед або, наприклад, відсотковий вміст ГохЗр.- клітин у популяції СО4-- клітин) відносно знижено перед введенням антитіла-агоніста проти ОХ40 людини.
ЇО398| У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом введення антитіла-агоніста проти ОХ40 людини проводиться у комбінації з введенням пухлинного антигена. У деяких варіантах реалізації пухлинний антиген містить білок. У деяких варіантах реалізації пухлинний антиген містить нуклеїнову кислоту. У деяких варіантах реалізації винаходу протипухлинний антиген являє собою пухлинну клітину. 03991 У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом при раковому захворюванні проявляються ефекторні клітини людини (наприклад, пухлина інфільтрується ефекторними клітинами людини). Методи виявлення ефекторних клітин людини, включаючи, 60 наприклад, метод ІГХ, добре відомі у даній галузі техніки. У деяких варіантах реалізації винаходу при раковому захворюванні проявляються високі рівні ефекторних клітин людини. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторні клітини людини являють собою один або більше типів з МК-клітин, макрофагів, моноцитів. У деяких варіантах реалізації винаходу рак являє собою будь-яке ракове захворювання, описане у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу рак являє собою недрібноклітинний рак легень (НДРЛ), гліобластому, нейробластому, меланому, карциному молочної залози (наприклад, тричі негативний рак молочної залози), шлунковий рак, колоректальний рак (СКС) та гепатоцелюлярну карциному. 0400) У деяких варіантах реалізації будь-якого зі способів за цим винаходом при раковому захворюванні проявляються клітини, експресуючі БСК (наприклад, пухлина інфільтрується клітинами, експресуючими ЕсК). Методи виявлення ЕСК, включаючи, наприклад, метод ІГХ, добре відомі у даній галузі техніки. У деяких варіантах реалізації винаходу при раковому захворюванні проявляються високі рівні клітин, експресуючих ЕсСК. У деяких варіантах реалізації винаходу ГЕС являє собою ЕсукК. У деяких варіантах реалізації винаходу СК являє собою
ЕсуК, що активується. У деяких варіантах реалізації винаходу рак являє собою недрібноклітинний рак легень (НДРЛ), гліобластому, нейробластому, меланому, карциному молочної залози (наприклад, тричі негативний рак молочної залози), шлунковий рак, колоректальний рак (СКС) та гепатоцелюлярну карциному. 04011) "Індивідом" у відповідності з будь-яким з перелічених вище варіантів реалізації винаходу переважно є людина.
Ї0402| Антитіла за цим винаходом можна застосовувати у терапії або самостійно або у комбінації з іншими засобами. Наприклад, антитіло за цим винаходом можна спільно вводити з щонайменше одним додатковим терапевтичним засобом. 0403) Такі комбіновані терапії, відмічені вище, охоплюють комбіноване введення (при якому два або більше терапевтичних засобів включені у ті ж або окремі препарати) та розділене введення, у цьому випадку введення антитіла за цим винаходом може проходити до, одночасно та/або після введення додаткового терапевтичного засобу або засобів. В одному варіанті реалізації винаходу введення антитіла проти ОХ40 та введення додаткового терапевтичного засобу проходить у межах близько одного місяця або у межах близько одного, двох або трьох тижнів, або у межах близько одного, двох, трьох, чотирьох, п'яти або шести діб одне від одного.
Зо Антитіла за цим винаходом можна також застосовувати у комбінації з радіаційною терапією. (0404) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з хіміотерапією або хіміотерапевтичним засобом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з радіаційною терапією або радіотерапевтичним засобом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з таргетною терапією або таргетним терапевтичним засобом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з імунотерапією або імунотерапевтичним засобом, наприклад, моноклональним антитілом.
ЇО405) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором РАКР (наприклад, олапаранібом, рукапарибом, нірапарибом, цедиранібом, ВММ673, веліпарибом), трабектедином, наб-паклітакселом (альбумінзв'язаний паклітаксел, АВКАХАМЕ), требананібом, пазопанібом, цедиранібом, палбоциклібом, еверолімусом, фторпіримидином (наприклад, БОЇРОХ, БОЇ РІК), ІРГ, регорафенібом, реолізином, алімтой. зикадією, сутентом, торизелом (темзиролимус), инлитой (акситиниб,
Ріїге), афинитором (еверолімус, Момагії5), нексаваром (сорафенібом, Опух / Вауєг), волтрієнтом, пазопанібом, акситинібом, ІМА-901, АС5-003, кабозантинібом, вінфлуніном, інгібітором Норо0 (наприклад, апаторзином), Аа-ам-С5Е (СТ-0070), темазоломідом, ІЛ-2, ІФНа, вінбластином, таломідом, дакарбазином, циклофосфамідом, леналідомідом, азацитидином, леналідомідом, бортезомідом (УЕГГ САОЕ), амрубіцином, карфілзомібом, пралатрексатом та/або ензастаурином. 0406) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом зв'язування осі РО-1. Антагоніст зв'язування осі РО-1 включає, але не обмежується ними, антагоніст зв'язування РО-1, антагоніст зв'язування РО-Ї 1 та антагоніст зв'язування РО-/2. Альтернативні назви ""ЮО-1" включають СО279 та 5ІЕВ2.
Альтернативні назви "РО-І 1" включають В7-НІ1, В7-4, СО274 та В7-Н. Альтернативні назви "РО-
ІГ2" включають В7-ОС, Віас та СО273. У деяких варіантах реалізації винаходу РО-1, РО-І та РО-
Ї2 являють собою РО-1, РО-Ї1 та РО-І2 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою молекулу, яка інгібує зв'язування РО-1 з його партнерами-лігандами за зв'язуванням. У конкретному аспекті винаходу партнери-ліганди за бо зв'язуванням РО-1 являють собою РО-І І та/або РО-І2. В іншому варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-11 є молекулою, яка інгібує зв'язування РО-І 1 з його партнерами за зв'язуванням. У конкретному аспекті винаходу партнери за зв'язуванням РО-І/1 являють собою
РО-1 та/"або В7-1. В іншому варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-І2 є молекулою, яка інгібує зв'язування РО-1/2 з його партнерами за зв'язуванням. У конкретному аспекті винаходу партнер за зв'язуванням РО-/2 являє собою РО-1. Антагоніст може бути антитілом, його антигензв'язуючим фрагментом, імуноадгезином, білком злияття або олігопептидом. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою антитіло проти РО-1 (наприклад, антитіло людини, гуманізоване антитіло або химерне антитіло). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти РО-1 вибирають з групи, що складається з МОХ-1106 (ниволумаб, ОРОІМО), Мегок 3475 (МК-3475, пембролізумаб,
КЕМТКОБА) та СТ-011 (підилізумаб). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою імуноадгезин (наприклад, імуноадгезин, що містить позаклітинну або зв'язуючу РО-1 частину РО-І1 або РО-І2, злиту з константною ділянкою (наприклад, Ес- ділянкою імуноглобулінової послідовності). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою АМР-224. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-І 1 являє собою антитіло проти РО-11. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-РО-Ї1 антагоніст зв'язування вибирають з групи, що складається з МУ/243.55.570,
МРОІ 3280А, МЕ0І4736 та МОХ-1105. МОХ-1105, також відомий як ВМ5-936559, являє собою антитіло проти РО-Ї1, описане в УУМО2007/005874. Антитіло УУу243.55.570 (послідовності варіабельних ділянок важкого та легкого ланцюгів, показані в зЕО ІЮО Мо. 20 та 21, відповідно) являє собою антитіло проти РО-І1, описане в УМО 2010/077634 АІ. МОХ-1106, також відоме як
МОХ-1106-04, ОМО-4538, ВМ5-936558 або ниволумаб, являє собою антитіло проти РО-ї1, описане в УМО2006/121168. Мегск 3475, також відомий як МК-3475, 5СН-900475 або пембролізумаб, являє собою антитіло проти РО-1, описане в М/О2009/114335. СТ-011, також відомий як ПВАТ, ПВАТ-1 або підилізумаб, являє собою антитіло проти РО-1, описане в
МО2009/101611. АМР-224, також відоме як В7-ОСІд, являє собою злитий розчинний рецептор
РО-І/2-Ес, описаний в УМ/О2010/027827 та УМО201 1/066342. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло проти РО-1 являє собою МОХ-1106. Альтернативні назви "МОХ-1106" включають МОХ-1 106-04, ОМО-4538, ВМ5-936558 або ніволумаб. У деяких варіантах реалізації
Зо винаходу антитіло проти РО-1 являє собою ніволумаб (реєстраційний номер САБ5: 946414-94-4). 0407) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом, направленим проти активації костимулуючої молекули. У деяких варіантах реалізації винаходу активація костимулюючої молекули може включати СО40, сОр226, С028, СІТК, СО137, С027, НМЕМ або С0127. У деяких варіантах реалізації винаходу агоніст, направлений проти активації костимулюючої молекули, є антитілом-агоністом, яке зв'язується з СО40, СО226, С028, ОХ40, СІТЕ, СО137, 2027, НМЕМ або СО127. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом, направленим проти інгібування костимулюючої молекули. У деяких варіантах реалізації винаходу інгібуюча костимулююча молекула може включати СТІ А-4 (також відомий як СО152), РО-1, ТІМ-3, ВТІ А, МІ5ТА, І да-3, В7-НЗ, В7-НА, ІБО, ТІСІТ, МІСА/В або аргіназу. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст, направлений проти інгібування костимулюючої молекули, є антитілом-агоністом, яке зв'язується з СТІ А-4, РО-1, ТІМ-3, ВТІ А, МІ5ТА, І дО-3 (наприклад, білок злиття І АС-3-Їдс (ІМРЗ21)), В7-НЗ, В7-НА, ІБО, ТІСІТ, МІСА/В або аргіназа.
ІО408) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом, направленим проти СТІ А-4 (також відомого як СО152), наприклад, блокуючим антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти
ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з іпілімумабом (також відомим як МОХ-010, МОХ-101 або МегуоуФ). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з тремелімумабом (також відомим як тицилімумаб або СР-675206).
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом, направленим проти В7-НЗ (також відомого як СО276), наприклад, блокуючим антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з МОА271. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом, направленим проти
Таг-бета, наприклад, метелімумабом (також відомим як САТ-192), фрезолімумабом (також відомим як 5С1008) або І 2157299.
І0409) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з лікуванням, включаючим адоптивний перенос Т-клітин (наприклад, цитотоксичних Т-клітин або СТІ), експресуючих химерний рецептор антигена (САК). У деяких бо варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з
ОСАКТІ9. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з М/Т1287. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти
ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з КТЕ-С19 (Кпе). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з СТІ 019 (Момагпів). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з лікуванням, включаючим адоптивний перенос Т-клітин, що містить домінантно- негативний рецептор ТОЕ-бета, наприклад, домінантно-негативний рецептор ТОБЕ-бета І! типу.
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з лікуванням, що включає застосування протоколу НЕКСКЕЕМ (див., наприклад, сайт
СііпісаІТгіаІ5.дом, ідентифікатор МСТО0889954).
ЇО410)| У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом, направленим проти СО19. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з МОКОО208. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом, направленим проти СО3З8. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з даратумумабом. 0411) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом, направленим проти СО137 (також відомим як ТМЕКЗЕ9, 4-188 або ІА), наприклад, активуючим антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднані з урелумабом (також відомим як ВМ5- 663513). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом, направленим проти СО40, наприклад, активуючим антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з СР-870893. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом, направленим проти ОХ40 (також відомим як
СО0134), наприклад, активуючим антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з іншим антитіло проти ОХ40м (наприклад, АдопОХ). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом, направленим проти СО27, наприклад,
Зо активуючим антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з СОХ-1127. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом, направленим проти індолеамін-2,3-діоксигенази (БО). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністом
ІСО є 1-метил-О-триптофан (також відомий як 1-0О-МТ). 0412) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом, направленим проти СО137 (також відомим як ТМЕКЗЕ9, 4-188 або ІА), наприклад, активуючим антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднані з урелумабом (також відомим як ВМ5- 663513). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом, направленим проти СО40, наприклад, активуючим антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з СР-870893 або КО7009789. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом, направленим проти ОХ40 (також відомим як СО134), наприклад, активуючим антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом, направленим проти СО27, наприклад, активуючим антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з СОХ-1127 (також відомим як варлілумаб). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом, направленим проти індолеамін-2,3-діоксигенази (ІРО). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністом ІБО є 1-метил-О-триптофан (також відомий як 1-0-МТ). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністом ІБО є антагоніст ІРО, показаний в М/О2010/005958 (зміст якого явно включено у даний документ шляхом опису). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст ІБО є 4-(2-Каміносульфоніл)аміно|етил)аміно)-
М-(3-бром-4-фторфеніл)-М'-гідрокси-1,2,5-оксадіазол-3-карбоксимідамідом (наприклад, як описано в прикладі 23 ММО2010/005958). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст ІЮО являє собою
«ОН Е б нот / Фі нар Вг
Н н
М. "М о .
У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст ІО являє собою ІМСВ24360. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст ІРО являє собою індоксимодом (О-ізомер 1-метил- триптофану). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з кон'югатом лікарська речовина-антитіло. У деяких варіантах реалізації винаходу кон'югат антитіло-лікарська речовина містить мертанзин або монометилауристатин Е (ММАЕ). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти
ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з кон'югатом анти-МаРі2о антитіло-ММАЕ (також відомим як ЮОМІВОбО0ОА, КС7599 або ліфастузумаб ведотин). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини проти можна вводити у поєднанні з трастузумабом емтанзином (також відомим як Т-ОМІ1, адо-трастузумаб емтанзин або
КАОСУЇ АФ, Сзепепіесі). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з кон'югатом анти-МОС16 антитіло--ММАЕ, ОМОС5754А. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з кон'югатом анти-МОС16 антитіло--ММАЕ, ОМОС4064А. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з кон'югатом антитіло-лікарська речовина, що таргетуючим рецептор ендотеліну В (ЕОМВЕК), наприклад, кон'юЮгованим з ММАЕ антитілом, направленим проти ЕОМВК. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з кон'югатом антитіло-лікарське речовино, таргетуючим комплекс лімфоцитарного антигена 6, локус Е (ГУбЕ), наприклад, кон'югованим з ММАЄЕ антитілом, направленим проти ГубЕ (також відомим як
РІГМЕ5953А). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з полатузумабом ведотином. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з кон'югатом лікарська речовина-антитіло, таргетуючим СОЗ0О. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з АОСЕТКІЗ (також відомим як бретуксимаб ведотин). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з полатузумабом ведотином. 0413) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна
Зо вводити у поєднанні з інгібітором ангіогенезу. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антитілом, направленим проти ФРЕС, наприклад, ФРЕС-А. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бевацизумабом (також відомим як АМА5ТІМФ), (зепепіесп).
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антитілом, направленим проти ангіопоетину 2 (також відомого як Апд2). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з
МЕОБІЗ617. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антитілом, направленим проти МЕСЕК2. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з рамуцирумабом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з білюом злиття рецептора ФРЕС. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з афліберцептом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні із зів- афліберцептом (також відомим як пастка ФРЕС або 7айгарфФф). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з біспецифічним антитілом, направленим проти ФРЕС та Апд2г. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з КО7221 (також відомим як вануцизумаб). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором ангіогенезу та у поєднанні з антагоністом зв'язування осі РО-1 (наприклад, антагоністом зв'язування РО-1, таким як антитіло проти РО-1, антагоністом зв'язування РО-11, таким як антитіло проти РО-11, та антагоністом зв'язування РО-12, таким як антитіло проти РО-І2). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бевацизумабом та антагоністом зв'язування осі РО-1 (наприклад, антагоністом зв'язування РО-1, таким як антитілом проти -РО-1, антагоністом зв'язування РО-11, таким як антитіло проти РО-11, та антагоністом зв'язування РО-12, таким як анти-РО-І2 антитіло). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бевацизумабом та МОХ-1106 (ніволумаб, ОРОІМО). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бевацизумабом та Мегск 3475 (МК-3475, пембролізумаб, КЕУТКОБА). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бевацизумабом та СТ-011 (піділізумаб). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бевацизумабом та УМ/243.55.570. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бевацизумабом та МРОЇ 3280А. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти
ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бевацизумабом та МЕ0ОІ4736. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бевацизумабом та МОХ-1105. 0414) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антинеопластичним засобом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні со засобом, таргетуючим СЗЕ- 1 (також відомим як М-СЗЕК або СО115). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антитілом проти С5Е-1К (також відомим як ІМСО-С54 або І У3022855). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антитілом проти С5Б-1К, КО7155 (також відомим як КО5509554 або емактузумаб). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інтерфероном, наприклад, інтерфероном-альфа або інтерфероном-гама. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з рофероном-А (також відомим як рекомбінантний інтерферон альфа-2а). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з 2М-С5Е (також відомим як рекомбінантний гранулоцитарно-макрофагальний колонієстимулюючий фактор людини, ги /ОМ-С5БЕ, сарграмостим або ІешиКіпеФ). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти
ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ІЛ-2 (також відомим як альдеслейкін або РгоїЇеикіпФф)).
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ІЛ-12. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини
Зо можна вводити у поєднанні з ІЛ27. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ІЛ-15. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з А Т-803. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антитілом, таргетуючим СО20. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що таргетує
СО20, являє собою обінутузумаб (також відомий як ЗА101 або СалумафФ) або ритуксимаб. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антитілом, таргетуючим СІТК. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що таргетує СІТК, являє собою ТКХ518. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, що таргетує СІТЕ, являє собою МКО4166 (МегскК). 0415) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором тирозинкінази Брутона (ВТК). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ібрутинібом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором ізоцитратдегідрогенази 1 (ІОНІ) та/або ізоцитратдегідрогенази 2 (ІОН).
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з АС-120 (Адіов). 0416) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з обінутузумабом та антагоністом зв'язування осі РО-1 (наприклад, антагоністом зв'язування РО-1, таким як антитілом проти РО-1, антагоністом зв'язування РО-І 1, таким як антитіло проти РО-І1, та антагоністом зв'язування РО-12, таким як антитіло проти РО-
І 2). 0417) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з протираковою вакциною. У деяких варіантах реалізації винаходу протиракова вакцина являє собою пептидну протиракову вакцину, яка у деяких варіантах реалізації винаходу являє собою індивідуальну протиракову вакцину. У деяких варіантах реалізації винаходу пептидна протиракова вакцина являє собою мультивалентний довгий пептид, мультипептид, пептидну суміш, гібридний пептид або вакцину на основі дендритних клітин, збуджених пептидами (див., наприклад, Уатада еї аї., Сапсег сі, 104:14-21, 2013). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у бо поєднанні з ад'ювантом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з лікуванням, яке включаює агоніст ТІК, наприклад, Роїу-
ІС/С (також відомим як Нійопої5), І Р5, МРІ або Сро ОМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з фактором некрозу пухлин (ФНО) альфа. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ІЛ-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з НМОВІ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом ІЛ-10.
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом ІЛ-4. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти
ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом ІЛ-13. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом ІЛ-17.
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антагоністом НУЕМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти
ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом ІСО5, наприклад, шляхом введення ІСО5-
Ї або антитілом-агоністом, направленим проти ІСО5. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з таргетуючим СХЗСІ1 лікуванням. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з таргетуючим СХСІ 9 лікуванням. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з таргетуючим СХСІ110 лікуванням. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з таргетуючим ССІ 5 лікуванням. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом І РА-1 або ІСАМІ1. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агоністом селектину. 0418) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором В-Каї. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з вемурафенібом (також відомим як 2еїІрогактв).
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з дабрафенібом (також відомим як Таїїпіаг?). У деяких варіантах реалізації винаходу
Зо антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з енкорафенібом (І СХ818). 0419) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором ЕСЕК. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ерлотинібом (також відомим як Тагсемаф). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором ЕСЕК-Т790М. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з гефітинібом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з афатинібом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з цетуксимабом (також відомим як ЕгрйихФ)). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з панітумумабом (також відомим як Месіїріж?). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з роцилетинібом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з А2О9291. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором МЕК, таким як МЕК!Т (також відомим як МАР2К'І) та/або МЕК2 (також відомим як
МАРА2К2). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з кобіметинібом (також відомим як 50С-0973 або ХІ-518). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з траметинібом (також відомим як МекКіпібзкя). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бініметинібом.
І0420) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором В-Каї (наприклад, вемурафенібом або дабрафенібом) та інгібітором МЕК (наприклад, МЕКІ та/або МЕК2 (наприклад, кобіметиніб або траметиніб). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором ЕКК (наприклад, ЕКК1/2). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з 5З0ОС-0994. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором В-Каї, інгібітором МЕК та інгібітором ЕККТ1Т/2. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором ЕСЕК, інгібітором бо МЕК та інгібітором ЕККТ/2. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з одним або більше інгібіторів механізму МАР-кіназ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з СК127. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором К-Вав. 0421) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором с-Меї. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з онартузумабом (також відомим як МеїМАБ). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором кінази анапластичної лімфоми (АК). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з АЕ802 (також відомим як СН5424802 або алектиніб). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з кризотинібом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з церитинібом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором фосфатидилінозит-З-кінази (РІЗК). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бупарлізибом (ВКМ-120). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з піктилізибом (також відомим як 5О0С-0941). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бупарлізибом (також відомим як ВКМ-120). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти
ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з перифозином (також відомим як ККХ-0401).. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з дельта-селективним інгібітором фосфатидилінозит-З-кінази (РІЗК). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з іделалізибом (також відомим як 55-1101 або САЇ -101). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з тазелізибом (також відомим як 6500-0032). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ВУ -719. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором АКІ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з МК2206. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з а5Кб90693. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з іпатасертибом (також відомим як З0ОС-0068). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором ттоК. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з сіролімусом (також відомим як рапаміцин). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з темсіролімусом (також відомим як ССІ-779 або Тогізе|т). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з еверолімусом (також відомим як КАОООТ). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ридафоролімусом (також відомим як АР-23573, МК-8669 або дефоролімус). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з О5І-027. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з А2О8055. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ІМК128. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з подвійним інгібітором РІЗК/тТОмК. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ХІ 765. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з З0ОС-0980. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з
ВЕ2235 (також відомим як ММР-ВЕ2235). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ВсОТ226. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з 55К2126458. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з РЕ-04691502. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з РЕ-05212384 (також відомим як РКІ-587). (0422) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агентом, який селективно руйнує естрогеновий рецептор. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з бо а,ОС-0927. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором НЕКЗ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з дуліготузумабом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором 501. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором МОМ2. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором ВСІ2. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з венетоклаксом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором СНКТІ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з 5З0ОС-0575. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з інгібітором сигнального механізму активованого білка педдепод. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ЕКІМЕОСЕ. 0423) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з радіотерапією. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з гемцитабіном. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з наб-паклітакселом (АВКАХАМЕ). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з трастузумабом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ТМЕС. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ІЛ27. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з циклофосфамідом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з агентом, який рекрутує до пухлини Т-клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з лірилумабом (ІРН2102/8ВМ5-986015). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з іделалізибом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антитілом, яке таргетує СОЗ та СО20. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з КЕСМ1979. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з антитілом, яке таргетує СОЗ та СО19. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з блінатумомабом. (0424) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з онколітичним вірусом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з карбоплатином та наб-паклітакселом.
У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з карбоплатином та паклітакселом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з цисплатином та пеметрекседом. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з цисплатином та гемцитабіном. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло- агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з БОЇ ЕОХ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло-агоніст проти ОХ40 людини можна вводити у поєднанні з ЕОЇ РІКІ. (0425) Такі комбіновані терапії, відмічені вище, охоплюють комбіноване введення (при якому два або більше терапевтичних засобів включені у ті самі або окремі препарати) та розділене введення, у цьому випадку введення антитіла за цим винаходом може проходить до, одночасно та/або після введення додаткового терапевтичного засобу та/або ад'юванту. Антитіла за цим винаходом можна також застосовувати у комбінації з радіаційною терапією. (0426) Антитіло за цим винаходом (та будь-який додатковий терапевтичний засіб) можна вводити будь-яким підходящим способом, що включає парентеральне, внутрішньолегеневе, інтраназальне введення та, якщо це необхідно для місцевого лікування, введення у вогнище ушкодження. Парентеральні інфузії включають внутрішньом'язове, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, внутрішньочеревне або підшкірне введення. Введення доз можна здійснювати будь-яким підходящим шляхом, наприклад, за допомогою ін'єкцій, таких як внутрішньовенні або підшкірні ін'єкції що почасти залежить від того, чи є введення короткочасним або тривалим. У цьому документі пропонуються різні схеми введення доз, включаючи, але не обмежуючись переліченим, однократне або багатократне введення протягом різних періодів часу, болюсне введення та імпульсну інфузію.
І0427| Антитіла за цим винаходом можна включати до складу препарату, дозувати та 60 вводити способом, який узгоджується з належною медичною практикою. Фактори, які слід враховувати у цьому контексті, включають конкретні розлади, що підлягають лікуванню, конкретний ссавець, що підлягає лікуванню, клінічний стан окремо взятого пацієнта, причину розладу, місце доставки засобу, спосіб введення, графік введення та інші фактори, відомі медичним працівникам. Для антитіла не потрібно та не обов'язково, що воно готується у препараті з одним або більше агентами, які у даний час застосовується для попередження та лікування указаного розладу. Ефективна кількість таких інших агентів залежить від кількості антитіла, що присутне у препараті, типу розладу або лікування та інших факторів, які обговорюються вище. Звичайно вони застосовуються у таких самих дозуваннях та з шляхами введення, які описані у цьому документі, або від близько 1 до 99 95 дозувань, описаних у цьому документі, або у будь-якому дозуванні або будь-яким шляхом, який емпірично/клінічно визначені як підходящі. (0428) Для запобігання або лікування захворювання підходяще дозування антитіла за цим винаходом (що використовується самостійно або у комбінації з одним або більше іншими додатковими терапевтичними засобами) буде залежати від типу захворювання, що підлягає лікуванню, типу антитіла, важкості та протікання захворювання, того, чи вводиться антитіло з попереджуючою або терапевтичною метою, попередньої терапії, історії хвороби пацієнта, чутливості до антитіла та припису лікаря. Антитіло підходить для введення пацієнту однократно або у кілька прийомів. У залежності від типу та важкості захворювання, антитіло можна застосовивати для введення пацієнту у початковому передбаченому дозуванні від близько 1 мкг/кг до 40 мг/кг, наприклад, шляхом одного або більше роздільних введень або шляхом неперервної інфузії. Одне типове добове дозування може знаходитися у діапазоні від близько 1 мг/кг до 100 мг/кг або більше, в залежності від згаданих вище факторів. У випадку багатократних введень протягом кількох тижнів або довше, у залежності від стану, лікування, як правило, може продовжуватися до досягння потрібного ступеня пригнічення симптомів захворювання. Такі дози можна вводити з перервами, наприклад, кожний тиждень або кожні три тижні (наприклад, таким чином, що пацієнт отримує від близько двох до приблизно двадцяти або, наприклад, близько шести доз антитіла). Можна вводити початкову підвищену навантажувану дозу, за якою іде одна або більше знижених доз. Однак можуть підходити інші режими дозувань. Хід такого лікування можна легко контролювати за допомогою звичайних методик та аналізів.
Зо І0429| Слід розуміти, що може здійснюватися використання будь-якого з перелічених вище препаратів або терапевтичних способів з використанням замість або у доповнення до антитіла проти ОХ40 імунокон'югату за цим винаходом.
І. Промислові препарати та набори
ІЇ0430| В іншому аспекті винаходу пропонується промисловий препарат, що містить речовини, придатні для лікування, попередження та/або діагностики описаних вище розладів.
Промисловий препарат містить контейнер та зв'язану з контейнером етикетку або етикетку, що знаходиться на ньому, або листок-вкладиш в упаковку. Підходящі контейнери включають, наприклад, пляшки, флакони, шприци, пакети для розчинів для внутрішньовенного введення тощо. Контейнери можуть бути виготовлені із багатьох матеріалів, таких як скло або пластмаса.
У контейнері міститься композиція, яка сама по собі або у комбінації з іншою композицією є ефективною для лікування, попередження та/або діагностики патологічного стану, та може мати стерильний порт доступу (наприклад, контейнер може представляти собою пакет або флакон з розчином для внутрішньовенного введення, що має пробку, з можливістю проколювання голкою для підшкірних ін'єкцій). Щонайменше один активний агент в композиції є антитілом за цим винаходом. На етикетці або на листку-вкладиші в упаковку вказано, що композиція використовується для лікування стану вибору. Більш того, промисловий препарат може містити (а) перший контейнер з композицією, що міститься у ньому, причому композиція містить антитіло за цим винаходом, та (Б) другий контейнер з композицією, що міститься у ньому, при цьому композиція містить додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний засіб.
Промисловий препарат у цьому варіанті реалізації винаходу може додатково містити листок- вкладиш в упаковку, в якому указано, що композиції можна застосовувати для лікування конкретного патологічного стану. В альтернативному варіанті або додатково промисловий препарат може додатково містити другий (або третій) контейнер, що містить фармацевтично прийнятний буферний розчин, такий як бактеріостатична вода для ін'єкцій (ВУУЕІ), фосфатно- сольовий буферний розчин, розчин Рингера та розчин декстрози. Препарат може додатково включати інші матеріали, доцільні з точки зору виробника або споживача, включаючи інші буферні розчини, розчинники, фільтри, голки та шприци. 0431) У деяких варіантах реалізації винаходу у цьому документі пропонується набір, що містить антитіло-агоніст проти ОХ40 людини, описаний у цьому документі, та необов'язковий бо фармацевтично прийнятний носій. У деяких варіантах реалізації винаходу набор додатково містить інструкції для введення лікарського засобу для лікування раку. 04321 Слід розуміти, що будь-який з указаних вище промислових препаратів замість або у доповнення до антитіла проти ОХ40 може містити імунокон'югат за цим винаходом.
Послідовності
ГНСУаОЮТуУРЗБМОВССНЕСАРОМОМУЗАСЗАЗОМТУСАРСОаРОАа
ОХ40 людини ЕММОМУЗЗКРОКРОТУСМІ АЗ5аЗЕВНКОЇ СТАТОЮТУСВНСВАСТ (без сигнального | ОР О5МКРАМОСАРСРРОНЕЗРИЮОМОАСКРИТМСТІ АСКНТІ О 4 пептиду) РАБМЗЗВАІСЕОВОРРАТОРОЕТОСТРРАВРІТМОРТЕАМ/РАТЗО
СРОТАРУМЕМРОаСВАМААІЇ СІ СІ МІС СР АШІ АГ М ААРОН.
РРОАНКРРОаСазЕВТРІОЕЕОСАВАНЗТІ АКІ
НУВ-НІ1- 1ТА7.9г.1 1ТА?7.9г.2 1ТА7.9г.З 1ТА7.9г.4 1ТА7.9г.5 1А7.дг.5' 1ТА7.9г.6 1ТА?7.9г.7 1А7.дг.7
ТА7.аг МАО 1А7.дгМАВА
ТА7.аг.Мард
ТА7.аг.ЗО0С05
ТА7.аг.Мазо 1А7.Аїа.1 1А7. Аа? рзУМ5 2 1А7.Аа.З 1А7.Аїа.4 1А7.Аа.5 1А7.Аїа.б 1А7.Аа.7 1А7.Аїа.в8 1А7.Аа.9 1ТА7.Аа.10 1А7.Аа.11 1ТА7.Аа.12 1ТА7.Аа.13 1ТА7.Аа.14 1ТА7.Аа.15 1ТА7.Аа.16
НУв-нНег- 1ТА7.9г.1 1ТА?7.9г.2 1ТА7.9г.З 1ТА7.9г.4 1ТА7.9г.5 1А7.дг.5' 1ТА7.9г.6 1ТА?7.9г.7 1А7.дг.7 1А7.9г ОА
ТА7.агЕ5
ТА?7.Аїа.1
ТА?7.Аїа.2 1ТА7.Аїа.З оОМУРОМОО5ЗУМОКЕВЕ З
ТА?7.Аїа.4 1ТА7.Аа.5 1ТА7.Аїа.6
ТА?7.Аїа.7 1ТА7.Аїа.8 1ТА7.Аїа.9 1ТА7.Аїа.10
ТА?.Аїа.11
ТА7.АІа.12 1ТА7.АЇа.13
ТА?7.Аїа.14 1ТА7.АЇа.15 1ТА7.АЇа.16 нНУВ-НЗ- 1ТА7.9г.1 1ТА?7.9г.2 1ТА7.9г.З 1ТА7.9г.4 1ТА7.9г.5 1А7.дг.5' 1ТА7.9г.6 1ТА?7.9г.7 1А7.дг.7 1А7.9г ОА
ТА7.агЕ5
ТА7.аг МАО
ТА7.агМАБА АРАМ/УЕБМ 4
ТА7.аг.Мард
ТА7.аг.ЗО0С05
ТА7.аг.Мазо
ТА7.агрАМАВА
ТА?7.Аїа.1
ТА?7.Аїа.2 1ТА7.Аїа.З
ТА?7.Аїа.4 1ТА7.Аа.5 1ТА7.Аїа.6
ТА?7.Аїа.7
ТА7-Аіа.15 1ТА7.Аїа.16
НМУВ-І1- 1ТА7.9г.1 1ТА?7.9г.2 1ТА7.9г.З 1ТА7.9г.4 1ТА7.9г.5 1А7.дг.5' 1ТА7.9г.6 1ТА?7.9г.7 1А7.дг.7 1А7.9г ОА
ТА7.агЕ5
ТА7.аг МАО
ТА7.агМАБА
ТА7.аг.Мард
ТА7.аг.ЗО0С05
ТА7.аг.Мазо
ТА7.агрАМАБА | ВАБОВІЗММІ М 5
ТА?7.Аїа.1
ТА?7.Аїа.2
ТА?7.Аїа.З
ТА?7.Аїа.4
ТА7.Аїа.5
ТА7.Аїа.6
ТА?7.Аїа.7
ТА?7.Аїа.8
ТА7.Аїа.9
ТА7.Аїа.10
ТА?.Аїа.11
ТА7.АІа.12
ТА7.Аа.13
ТА?7.Аїа.14
ТА7.Аа.15
ТА7.Аа.16
НМВ-І2- 1ТА7.9г.1 1ТА?7.9г.2 1ТА7.9г.З 1ТА7.9г.4 1ТА7.9г.5 1А7.дг.5' 1ТА7.9г.6 1ТА?7.9г.7 1А7.дг.7 1А7.9г ОА
ТА7.агЕ5
ТА7.аг МАО
ТА7.агМАБА
ТА7.аг.Мард
ТА7.аг.ЗО0С05
ТА7.аг.Мазо
ТА7.агрАМАВА |ТА 5
ТА?7.Аїа.1
ТА?7.Аїа.2
ТА?7.Аїа.З
ТА?7.Аїа.4
ТА7.Аїа.5
ТА7.Аїа.6
ТА?7.Аїа.7
ТА?7.Аїа.8
ТА7.Аїа.9
ТА7.Аїа.10
ТА?.Аїа.11
ТА7.АІа.12
ТА7.Аа.13
ТА?7.Аїа.14
ТА7.Аа.15
ТА7.Аа.16
НМВ-І 5- 1ТА7.9г.1 1ТА?7.9г.2 1ТА7.9г.З 1ТА7.9г.4 1ТА7.9г.5 1А7.дг.5' 1ТА7.9г.6 1ТА?7.9г.7 1А7.дг.7 1А7.9г ОА
ТА7.агЕ5
ТА7.аг МАО
ТА7.агМАБА ООСНТІ РРТ 7
ТА7.аг.Мард
ТА7.аг.ЗО0С05
ТА7.аг.Мазо
ТА7.агрАМАВА
ТА?7.Аїа.8
ТА7.Аїа.9
ТА7.Аїа.10
ТА?.Аїа.11
ТА7.АІа.12
ТА7.Аа.13
ТА?7.Аїа.14
ТА7.Аа.15
ТА7.Аа.16
НМУВв-НІ- салаті АВ
НМУВв-НІ-
ТА7.агЕ5 ЕБУМ5 1ТА7.агОАМАВА
НУв-нНег-
ТА7.аг МАО ОМУРОМАОЗБУМОКЕВЕ 10
НУв-нНег-
ТА7.агМАБА 1А7.9г.ОАМАРА ОМУРОМАВАБУМОКЕВЕ 11
НУв-нНег-
ТА7.аг.Мард ОМУРОМарАБУМОКЕВЕ 12
НУв-нНег-
ТА7.аг.ЗО0С05 ОМУРОБИОЗЗУМОКЕВЕ 13
НУв-нНег-
ТА7.аг.Мазо оОМУРОМазЗЗУМОКЕВЕ 14
НУв-НЗ-
ТА?7.Аїа.8 АРАМУЕЗА 15
НУв-НЗ-
ТА7.Аїа.9 АРАМ/УАБМ 16
НУв-НЗ-
ТА7.Аїа.10 АРАМАБ5М 17
ПОСЛІДОВНІСТЬ 5ЕО ІЮ МО:
НУВ-НЗ- 1А7.Аїа.11 АРАМУЕБМ 18
НУВ-НЗ- 1А7.Аіа.12 АРВМ/УЕАМ 19
НУВ-НЗ- 1А7.АІа.13 АРВАМЕБМ 20
НУВ-НЗ- 1А7.Аа.14 ААВМ/УЕБУ 21
НМВ- 3- 1А?7.Аїа.1 ООСНТІ РАТ 22
НМВ-Ї 3- 1А7.Аіа.2 ООСНТАРРТ 23
НМВ-І 3-1А7.Аа.З ООСАТІ РРТ
НУА-АЗ-1А? Аа. 4 УСНА РРТ
НМВ-І 3-1А7.Аа.5 ООАНТІ РРТ
НМВ-І 3-1А7.Аа.6 ООСНТІ АРТ
НМУВ-І 3-1А7.АІа.7 ОДОНТІ РРТ
НУВ-НІ- 3С8.9г.1
ЗС8.9г.2 3С8.91.3 3С8.9г.4 3С8.9г.5 308.9г.5.52041 3С8.9г.5.ЕО 3С8.91.5.00 3С9.9г.5.00 3С8.9г.5.0А 3С8.9г.6 3С8.9г.7 3С8.91.8
Зсв.9го МУИЕ 29 3С8.91.10
ЗС8.9г.11
ЗС8.А.1
ЗС8.А.2
ЗС8.А.З
ЗС8.А.А
ЗС8.А.5
ЗС8.А.6
ЗС8.А.7
ЗС8.А.8
ЗС8.А.9
ЗС8.А.10
НУв-наг- 3С8.9г.1
ЗС8.9г.2 3С8.91.3 3С8.9г.4 3С8.9г.5 308.9г.5.52041
ЗС8.аг.5.Баа 3С8.91.5.00 3С8.9г.6 3С8.9г.7 3С8.91.8 3С8.91.9
ЗС89г10 МІМРАБаОТУУВЕКЕКО 0)
ЗС8.9г.11
ЗС8.А.1
ЗС8.А.2
ЗС8.А.З
ЗС8.А.4
ЗС8.А.5
ЗС8.А.6
ЗС8.А.7
ЗС8.А.8
ЗС8.А.9
ЗС8.А.10
НУв-наг-
НУв-наг-
НУВв-НЗ- 3С8.9г.1
ЗС8.9г.2 3С8.91.3 3С8.9г.4 3С8.9г.5 308.9г.5.52041
ЗС8.аг.5.Баа 3С8.91.5.00 3С8.9г.5.0А 3С8.9г.5.00 3С8.9г.6
ЗС8.9г.7 рвІгрУу З3 3С8.91.8 3С8.91.9 3С8.91.10
ЗС8.9г.11
ЗС8.А.1
ЗС8.А.2
ЗС8.А.З
ЗС8.А.4
ЗС8.А.5
ЗС8.А.6
ЗС8.А.7
НУВв-НЗ-
ЗС8.А.8 АВІ 0У 34
НУВв-НЗ-
ЗС8.А.9 рАГрУ 35
НУВв-НЗ-
НУВ-1- 3С8.9г.1
ЗС8.9г.2 3С8.91.3 3С8.9г.4 3С8.9г.5 308.9г.5.52041
ЗС8.аг.5.Баа 3С8.91.5.00 3С8.9г.5.0А 3С8.9г.5.00 3С8.9г.6 3С8.9г.7 3С8.91.8
ЗС8 99 НАБОВІБЗЗМІМ 37 3С8.91.10
ЗС8.9г.11
ЗС8.А.1
ЗС8.А.2
ЗС8.А.З
ЗС8.А.4
ЗС8.А.5
ЗС8.А.6
ЗС8.А.7
ЗС8.А.8
ЗС8.А.9
ЗС8.А.10
НУв-12- 3С8.9г.1
ЗС8.9г.2 3С8.91.3 3С8.9г.4 3С8.9г.5 3С8.9г.5.0А 3С8.9г.5.00 3С8.9г.6 3С8.9г.7 3С8.91.8 3С8.91.9
ЗС8.аг10 НатТМГЕО 38
ЗС8.9г.11
ЗС8.А.1
ЗС8.А.2
ЗС8.А.З
ЗС8.А.4
ЗС8.А.5
ЗС8.А.6
ЗС8.А.7
ЗС8.А.8
ЗС8.А.9
ЗС8.А.10
ПОСЛІДОВНІСТЬ 5ЕО ІЮ МО:
НУВ-12-
ЗС8.9г5.505 НОТМЕ5 39
НУВ-12-
ЗС8.аг.5.Баа НОТМ ЕЕ 40
НУВ-12-
З3С8.9г.5.00 НОаТМЕО ді
НУВ-І З 3С8.9г.1
ЗС8.9г.2 3С8.91.3 3С8.9г.4 3С8.9г.5 308.9г.5.52041
ЗС8.аг.5.Баа 3С8.91.5.00 3С8.9г.5.0А 3С8.9г.5.00 МНУАОГРУТ 42 3С8.9г.6 3С8.9г.7 3С8.91.8 3С8.91.9 3С8.91.10
ЗС8.9г.11
ЗС8.А.8
ЗС8.А.9
ЗС8.А.10
НУВ-І 3-
ЗС8.А.1 АНУАОГРУТ 43
НУВ-І 3-
ЗС8.А.2 МАМАОЕРУТ ДА
НУВ-І 3-
ЗС8.А.З МНААОГРУТ 45
НУВ-І 3-
ЗС8.А.4 МНУААЕРУТ 46
НУВ-І 3-
ЗС8.А.5 МНУАОАРУТ 47
НУВ-І 3-
ЗС8.А.6 МНУАОГАХТ 48
НУВ-І 3-
ЗС8.А.7 МНУАОГРАТ 49
НУВ-НІ1- 102.аг1 1292 рамі 50 102.9г.3 нУв-Нг-102.9г 1 102.аг.2 МІ ЗаИаТТОУМААРІ5 51 102.9г.3 нНМУв-НЗ-102. 91.1 102.9г.2 ЕЕМОУ 52 102.9г.3
НМУВ-І1- 102.аг1 102912 ВАБОВІБМРЕЇ М 53 102.9г.3
НМВ-І2- 102.аг1 102912 уУт5АГНь5 54 102.а9г.3
НМнВ-І 3- 102.аг1 102.92 ООСМТІ РУТ 55 102.9г.3 1А7 г ЕМО МОБСАЕЄЕУККРОАЗУКУЗСКАБахТЕТО5УМБУМАОАРОО
Мн І СГЕУМаОМУРєРОМарвеиМоОКкЕВЕНМТІТВОТ5Т5ТАМІ ЕЇ 55І 5 56
ЕОТАУУУСМ АРЕМ/МЕЗУУМУСсОСТІ МТУ 1А7 г РІОМТО5РБЗБІ БАБМИОВМТІТ СААБОВІЗМУЇ МУ МООКРИаКАР
М І крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 57
СНТІ РРТЕОСТКМЕЇїК 1А7 92 ЕМО МОБСАЕЄЕУККРОАЗУКУЗСКАБахТЕТО5УМБУМАОАРОО
Мн І СГЕУМаОМУРОМарвеиМОКкЕВЕАМТІТМОТ5ТЗТАМІ ЕІ 55185 58
ЕОТАУУУСМ АРЕМ/МЕЗУУМУСсОСТІ МТУ 1А7 92 РІОМТО5РБЗБІ БАБМИОВМТІТ СААБОВІЗМУЇ МУ МООКРИаКАР
М І крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 59
СНТІ РРТЕОСТКМЕЇїК 1А7 9.3 ЕМО МОБСАЕЄЕУККРОАЗУКУЗСКАБахТЕТО5УМБУМАОАРОО
М І СГЕМОМУРОМарвеиМОкЕВАЕВМТІТМОТ5ТЗТАМІ БІ 55І В
ЗЕОТАУУУСМ АРАДУУУєЗУМСОСТІ МТУ 1А7 9.3 РІОМТО5РБЗБІ БАБМИОВМТІТ СААБОВІЗМУЇ МУ МООКРИаКАР
М І крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 61
СНТІ РРТЕОСТКМЕЇїК
ТАТ дгА ЕМО МОБСАЕЄЕУККРОАЗУКУЗСКАБахТЕТО5УМБУМАОАРОО
Мн І СГЕУМаОМУРОМароаиМОКкеЕВНЕВМТІТМОТ5ТЗТАМІ ЕІ 55185 62
ЕОТАУУУСМ АРЕМ/МЕЗУУМУСсОСТІ МТУ
ТАТ дгА РІОМТО5РБЗБІ БАБМИВАВМТІТСААБОВІЗМУЇ МУ МООКРИаКТМ
М І крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 63
СНТІ РРТЕОСТКМЕЇїК 1А7 9.5 ЕМО МОБСАЕЄЕУККРОАЗУКУЗСКАБахТЕТО5УМБУМАОАРОО
Мн І СГЕУМаОМУРОМароаиМОКкеЕВНЕВМТІТМОТ5ТЗТАМІ ЕІ 55185 64
ЕОТАУУУСМ АРЕМ/МЕЗУУМУСсОСТІ МТУ 1А7 9.5 РІОМТО5РБЗБІ БАБМИВАВМТІТСААБОВІЗМУЇ МУ МООКРИаКТМ
М І крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 65
СНТІ РРТЕОСТКМЕЇїК 1А7 9.6 ЕМО МОБСАЕЄЕУККРОАЗУКУЗСКАБахТЕТО5УМБУМАОАРОО
Мн І СГЕУМаОМуУРєРОМар5ЗУМОКЕНЕВМТІТМОТ5ТЗТАМІ БІ 55185
ЕОТАУУУСМ АРЕМ/МЕЗУУМУСсОСТІ МТУ 1А7 9.6 РІОМТО5РБЗБІ БАБМИВАВМТІТСААБОВІЗМУЇ МУ МООКРИаКТМ
М І крмМтЗАСАБамМРЗНЕЗОБОЗВаИаКОМТІ ТЗІ ОРЕОРАТУРСО 67
ОСНТРРТЕРСОСТКМЕІК
1А7 9.7 ЕМО МОБСАЄЕУККРОАЗУКУЗСКАБахУТЕТО5УМБУМАОАРОО
Мн І СГЕУМаОМуУРєРОМар5ЗУМОКЕНЕВМТІТМОТ5ТЗТАМІ БІ 55185
ЕОТАУУУСМ АРЕМ/МЕЗУУМУСсОСТІ МТУ 1А7 9.7 РІОМТО5РБЗБІ БАБМИВАВМТІТСААБОВІЗМУЇ МУ МООКРИаКТМ
М І крмМтЗАСАБамМРЗНЕЗОБОЗВаИаКОМТІ ТЗІ ОРЕОРАТУРСО
ОСНТРРТЕРСОСТКМЕІК
1А7 ГА ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАЗИОМ ТЕТОАУМЗУМНОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 70
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 ГА РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 71
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7.9Г ЕВ ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИМ ТЕТЕЗБУМЗУУВОАРОО
МН. СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 72
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7.9Г ЕВ РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 73
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7.9г-МАОБ5 ЕМО МОБСАЕМККРИИАБУКУЗСКАЗИОМ ТЕТОБУМБЗУМАОАРОО
Мн СГЕУЛОаОМУРОМАОБЗУМОКЕВЕНМТІТВОТ5ТЗТАМІ БІ 55І 5 74
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 ДГ. МАО РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 75
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7 дГ.МАСА ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБИМТЕТОБУМБЗУМАОАРОО
Мн СГЕУЛОаОМУРОМАВАБУМОКЕВЕНМТІТВОТ5ТЗТАМІ БІ 55І 5 76
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 дГ.МАСА РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 77
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7 ДГ. МОрА ЕМО МОБСАЕМККРИАБУКУЗСКАБИМТЕТО5УМЗУМУМАОАРОО
Мн СГЕУЛарМУРОМИардБУМОКЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 78
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 ДГ. МОрА РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 79
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7 ді. 5005 ЕМО МОБИАЕУККРИаАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТО5УМЗУМУМАОАРОО
Мн СГЕУЛаСмММРєРОЗОрБЗИМОКЕВЕВМТІТВОТТОТАМІ БІ 55 5
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 ді. 5005 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 81
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7 ді. МО55 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛОаОмММуРОМаввОММОКЕВЕВМТІТВОТТОТАМІ БІ 551 5 82
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 ді. МО55 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 83
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7.дГ.ОАМАСА ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМ ТЕТОАУМЗУМВОАРОЮ
Мн СГЕУЛОаОМУРОМАВАБУМОКЕВЕНМТІТВОТ5ТЗТАМІ БІ 55І 5 84
ЕОТАМУУСМІ АРВУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7.дГ.ОАМАСА РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
І М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 85
СНТ-РРТЕСОСТКУЕБЇІК 1А7. Аа 4 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7. Аа 4 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М І крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 87
СНТ-РАТЕСОСТКУЕБЇїК 1А7. Аа? ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 88
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 Аа? РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М І крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ
СНТАРРТЕОСТКМЕЇїЇК 1А7 Аа З ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн І СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 Аа З РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 91
САТІ РРТРЕЕОСТКМЕЇК
1А7 Аа А ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 92
ЕОТАМУУСМІ АРВУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 Аа А РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крмМтЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогЕТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 93
СНАГРРТЕФОСТКМЕЇїК 1А7 Аа 5 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 94
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 Аа 5 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крмМтЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІВ ОРЕОБАТУУСОЮ 95
АНТРРТЕРЕОСТКУБЇІК
1А7 Аа. 6 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 Аа. 6 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крмМтЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІВ ОРЕОБАТУУСОЮ 97
СНТАРТЕСОСТКМЕЇК
1А7 Аа 7 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5
ЕОТАМУУСМІ АРВАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7 Аа 7 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крим ЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтоОгТІ ТІВ ОРЕОБАТУУСОА
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7 Аа 8 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 100
ЕОТАМУУСМІ АРВУУМЕЗАУМУСОСТІ МТУ
1А7 Аа 8 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М крмМтЗАСАБамМРЗНЕЗОБОЗатоОгТІ ТЗ ОРЕОРБАТУУСОЮ 101
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7Аа9 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 102
ЕОТАУУУСМІ АРВУУМАБУМСОСТІ МТУ
1А7Аа9 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М І крмМтЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтТОгТІТІЗБІОРЕОБАТУУСОЮ 103
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7Аа10 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн І СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 104
ЕОТАУММУСМІ АРВУУАЕЗМУСОСТІ МТУ
1А7Аа10 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М І крмМтЗАСНБамРЗАЕЗаЗавзатовТІ ТЗІ ОРЕОБАТУУСОЮ 105
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7 Аа. 11 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн І СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 106
ЕОТАУУУСМІ АРАМУМЕЗУМСОСТІ МТУ55 1А7 Аа. 11 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М І крмМтЗАСНБамРЗАЕЗаЗОаЗатовТІ ТЗІ ОРЕОБАТУУСОЮ 107
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК
1А7.Аіа 12 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 108
ЕОТАМУУСМІ АРВУУХМЕАМУУСОСТІ МТУ
1А7.Аіа 12 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСВАБОВІБММІ МУМООКРОКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 109
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7. Аа 13 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 110
ЕОТАМУУСМІ АРВАМЕЗУУМСОСТІ МТУ
1А7. Аа 13 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСВАБОВІБММІ МУМООКРОКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 111
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7.Аіа.14 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 112
ЕОТАМУУСМІ ААВУУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7. Аа 14 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРОКАР
М крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 113
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7.Аіа 15 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн І СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 114
ЕОТАМУУСАЇ АРАУУМЕЗУУУСОСТІ МТУ
1А7.Аіа 15 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСААБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М І крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 115
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 1А7. Аа 16 ЕМО МОБСАЕУМККРИИАБУКУЗСКАБЗИОМТЕТОЗУМОУМВОАРОО
Мн І СГЕУЛаСмМуРОМИарвемиМмокЕАЕНМТІТАОТЗТ5ТАМІ БІ БІ 5 116
ЕОТАУУУСУМААРАМ УЕЗУМСОСТІ МТУ
1А7. Аа 16 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСВАБОВІЗММІ МУМООКРИЕКАР
М І крим тЗАСАБамМРЗНЕЗОЗОЗаИтогТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОЮ 117
СНТ-РРТЕСОСТКМЕЇК 3с8.9г ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн СГЕУЛОМІМРОБаЮТУуУЕКЕеКОаАМТІТАОТ5ТЗТАМІ БІ 55І ЗЕ 118
РТАМУУСАНОВІ ОМУУСОСТІ МТУ
3с8.9г РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАЗОВІЗЗММУМУООКРИКАРК
М пинатМ ЕрамРзАЕЗазавзатов тт ОРЕОРАТУУСУНУ 119
АОГРУТЕСОСТКМЕЇК
ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
ЗС8.9г.2 СГЕУЛОМІМРОБаЮТУуУЕКЕРКОаАМТІТАОТЗТЗТАМІ БІ 55І ЗЕ 120
Мн ОТАМУУСАВНОВІ ОМУСОСТІ МТУ 3с8.9г.2 РІОМТО5РББІ БАБМООВМТІТСНАЗОВІЗЗММУМУООКРИКАРК
М І пинатМ ЕрамРзАЕЗазавзатов тт ОРЕОРАТУУСУНУ 121
АОГРУТЕСОСТКМЕЇК
3с8.9г.3 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 122
ЗЕОТАУУУСАВОВС ОМ СсОС,СТІ МТУ 3с8.9г.3 РІОМТО5РББІ БАБМООВМТІТСНАЗОВІЗЗММУМУООКРИКАРК
М І пинатМ ЕрамРзАЕЗазавзатов тт ОРЕОРАТУУСУНУ 123
АОГРУТЕСОСТКМЕЇК
3с8.9г.4 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн СГЕУЛОМІМРОБаЮТУуУЕКЕРКОаАМТІТАОТЗТЗТАМІ БІ 55І ЗЕ 124
РТАМУУСАНОВІ ОМУУСОСТІ МТУ
3с8.9г.4 РІОМТО5РББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 125
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
3С8.9г.5 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 126
ЗЕОТАУУУСАВОВС ОМ СсОС,СТІ МТУ
3С8.9г.5 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 127
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
3с8.9г.5.80 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
МН І СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 128
ЗЕОТАУУУСАВОВС ОМ СсОС,СТІ МТУ 3с8.9г.5.80 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М вИПУнатм'єваУРєРЗАЕЗОБаЗОаТОгЕТІ ТЗІ ОРЕОБАТУМСУН 129
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
3С8.91.5.ЕС ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
МН І СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 130
ЗЕОТАУУУСАВОВГ ОМ СсСОСТІ МТУ55 3С8.9г.5.ЕС РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М СИПУнНатмМм' є сУРєРБНЕЗОВОаЗОаТОЕТІ ТІВ ОРЕОБАТУМСУН 131
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
3с8.91.5.0С ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Ме І СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 132
ЗЕОТАУУУСАВОВС ОМ СсОС,СТІ МТУ 3с8.91.5.0С РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М спУнатмМм'єоамМиРЗНЕЗОЗИЗОТОБТІТІЗЗІОРЕОРБАТУМУСУН 133
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
3с8.9г.6 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СГЕУЛОМІМРОБаЮТУуУЕКЕРКОаАМТІТАОТЗТЗТАМІ БІ 55І ЗЕ 134
РТАМУУСАНОВІ ОМУУСОСТІ МТУ
3с8.9г.6 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М спУунатМм ЕєрамРзнЕЗОЗаБЗСИАОМТІ ТЗІ ОРЕОБАТУМСМУН 135
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
3С8.91.7 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 136
ЗЕОТАУУУСАВОВГ ОУмУСсСОоС,СТІ ТУ 3С8.91.7 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М спУунатМм ЕєрамРзнЕЗОЗаБЗСИАОМТІ ТЗІ ОРЕОБАТУМСМУН 137
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
3с8.9г.8 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СГЕУЛОМІМРОБаОТУУЕКЕКОаАМТІ ТАОТ5ТОТАМІ БІ 55І 5 138
ЕОТАУУУСАНОВІ ОУУУСОСТІ МТУ55 3с8.9г.8 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 139
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
3с8.91.9 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СГЕУЛОМІМРОБаОТУУЕКЕКОаАМТІ ТАОТ5ТОТАМІ БІ 55І 5 140
ЕОТАУУУСАНОВІ ОУУУСОСТІ МТУ55 3с8.91.9 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУМУООКРИаКЗРК
М І пинатМ ЕрамРзАЕЗазавзатов тт ОРЕОРАТУУСУНУ 141
АОГРУТЕСОСТКМЕЇК
Зс8.9г.10 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СГЕУЛОМІМРОБаОТУУЕКЕКОаАМТІ ТАОТ5ТОТАМІ БІ 55І 5 142
ЕОТАУУУСАНОВІ ОУМУСОСТІ МТУ55
Зс8.9г.10 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІЗЗМИМУММООКРОКАБРК
М І пинатМ ЕрамРзАЕЗазавзатов тт ОРЕОРАТУУСУНУ 143
АОГРУТЕСОСТКМЕЇК
ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО зс8.аг11 СГЕУЛОМІМРОБаОТУУЕКЕКОаАМТІ ТАОТ5ТОТАМІ БІ 55І 5 144
Мн ЕОТАМУУСАНОВІ ОМУСОСТІ МТУ 3С8.9г.11 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІЗЗММУМУООКРИКАРК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 145
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
ЗС8.А ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 146
ЗЕОТАУУУСАНОВІ ОМ СсОСТІ МТУ
ЗС8.А РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОЗаБОаТОвТІ ТЗІ ОРЕОРАТУМУСАН 147
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
ЗС8.А ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 148
ЗЕОТАУУУСАНОВІ ОМ СсОСТІ МТУ
ЗС8.А РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОБаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСМА 149
ХАОГРУТЕСОСТКУБІК
ЗС8АЗ ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 150
ЗЕОТАУУУСАНОВІ ОМ СсОСТІ МТУ
ЗС8.АЗ РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 151
ААОГРУТЕССОСТКУБІК
ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
ЗС8.А.4 СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 152
Мн ЗЕОТАУМУУСАНОВІ ОМ СОСТІ МТУ
ЗС8АА РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 153
ХААЕГРУТРЕОСТКМЕЇК
ЗС8. АБ ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 154
ЗЕОТАУУУСАНОВІ ОМ СсОСТІ МТУ
ЗС8. АБ РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 155
ХАОСОАРУТЕРСОСТКМЕїК
ЗС8.А 6 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 156
ЗЕОТАУУУСАНОВІ ОМ СсОСТІ МТУ
ЗС8.А 6 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 157
ХАОГАУТЕРСОСТКУЄК
ЗС8А7 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СІ ПЕУМІСМІМРОЗОО ГТ УУЗЕКЕКОКМТІ ТАОТЗТЗТАМІ ЕІ З5І КК 158
ЗЕОТАУУУСАНОВІ ОМ СсОСТІ МТУ
ЗС8А7 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 159
ХАОЕРАТЕСОСТКУЕБЇІК
ЗС8.А 8 ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СГЕУЛОМІМРОБаОТУУЕКЕКОАМТІ ТАОТЗТОТАМІ БІ 55І 5 160
ЕОТАУУУСАВАНІ ОМУСОСТІ МТУ
ЗС8.А 8 РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 161
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК зс8.АЗ ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СГЕУЛОМІМРОБаОТУУЕКЕКОАМТІ ТАОТЗТОТАМІ БІ 55І 5 162
ЕОТАУУУСАВОАЇ ОММСОСТІ МТУ зс8.АЗ РІОМТОРББІ БАБМООВМТІТСНАБЗОВІБЗММУММООКРОКЗЕК
М І спУнатм'єрамМмРЗнЕЗОВаИаБОаТОвТІ ТІВ ОРЕОРАТУМУСУН 163
ХАОЕГРУТЕСОСТКУБІК
З3С8.АО ЕМО МОБСАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИМАЄТММ ТЕММВОАРОО
Мн І СГЕУЛОМІМРОБаОТУУЕКЕКОАМТІ ТАОТЗТОТАМІ БІ 55І 5 164
ЕОТАУУУСАДОВАЮУМСОСТІ ТУ
3С8А 10 ІОМТО5РББІ БАБМООВМТІТСНАБОВІВОМІММУМООКРакКЗЕК
М І СИПМНатМм ЕОСаМУРОНЕБОаБЗИавБаТтоОгТтІ ТІ ОРЕОБАТУУСУН 165
ХАОЕРУТЕСаОСТКМЕК 102.91 ЕМОЇ МЕБОРИЇ МКРОЕТІ І ТСТУБаБ5І ТОМОаМІ МІВОРРОКИЇ.
М І ЕМИаМІМУуЗасСТТОУМААРІЗБАМТІЗМОТ5КМОГ5І КІ Б5МТААОТА 166
МУХСУВЕЕМО УМ СХОСТІ МТМ55 102.91 ІОМТО5РБОБІ БАБМООВМТІТ СВАБОВІЗМЕІ МУМООКРИаКАР
М КГ МУЗА НБИМРОВЕЗаЗава то ЕТІ ТІЗ5І ОРЕОБАТУУСОЮ 167
СМТ РИ ТЕаОСТКМЕЇК
ЕМОЇ МЕБОРИЇ МКРОЕТІ І ТСТУБаБ5І ТОМОаМІ МІВОРРОКИЇ. 102.аг2 ЕМОаМІМУуЗасСТТОУМААРІЗБАМТІЗКОТ5КМОМ5І КІ 5БМТААОТА 168
Мн МУХСУВЕЕМО УМ СХОСТІ МТМ55 102.9г2 ІОМТО5РБОБІ БАБМООВМТІТ СВАБОВІЗМЕІ МУМООКРИаКАР
М КГ МУЗА НБИМРОВЕЗаЗава то ЕТІ ТІЗ5І ОРЕОБАТУУСОЮ 169
СМТ РИ ТЕаОСТКМЕЇК 102.9г.3 ЕМОЇ МЕБОаРИЇ МКРОЕТІ БІ ТСТУБаБ5І ТОМІ ММВОРРОКОИ
М І ГЕМ ЯМІ БИаСТТОММААРІ5НІ ТІЗКОТ5КМОМ5БІ КІ 55МТААО 170
ТАУМУСМАЕЕМО МУ СЮСТІ МТУ55 102.9г.3 ІОМТО5РБОБІ БАБМООВМТІТ СВАБОВІЗМЕІ МУМООКРИаКАР
М КГ МУЗА НБИМРОВЕЗаЗава то ЕТІ ТІЗ5І ОРЕОБАТУУСОЮ 171
СМТ РИ ТЕаОСТКМЕЇК
НІ
ОМУРОХ х 2 х з х«ЗУМОКЕРЕ, де Хі являє собою М або 5, Хі нг собою А або 5 нНЗ або Е, Хз являє собою 5 або А, а Ха являє собою А або У.
ОХіхохзхахвхвхТ, Де Хі являє собою А або С, Хо являє собою
СОМ (ТА?) НМУВ- А або б, Хз являє собою А або Н, Ха являє собою А або Т, Х5 175
ІЗ являє собою А або І, Хе являє собою А або Р, а Х7 являє собою
А або Р.
НМУВ-І З або А, а Хз являє собою У або А.
РІОМТОТТ55І БАБІ СОВМТІЗСВАБОВІЗММІ МУМООКєРрИатУк 1А7 Мі ГЛИМТВІ АБаМРОВЕЗаБабвакоОмгїІ ТІЗМ ЕОЕОМААМЕСОО 179
СНТІ РРТЕССИТКІ БІК
ЕМО ОО5БОаРЕЇ МКРОАЗБУКІЗСКАБИаУТЕТОБУМеУМУКОЗНОКТ 1А?7 Мн ГЕО ЮОМУРОМИароБУМОКЕВЕКМТІ ТМОКО5ТТАММЕЕН5БІ Т5 180
ЕОБАММУСМІ АРАММЕБУМИТОаТТУТУ55
РІЄМТОБРУОБМ5М5І арТтУІТСНАБОВІЗВМІММІ ООКРОаКОЕН
ЗС8 М СИМНаИтМІ ЕОСІРОВЕБававаАОУ5І ТЗІ ЕБЕОЕАВУУСУНУ 181
АОЕРМТЕРСаСИТКІ БІК
ОМО! ОО5ОАЕЇ УАРОТЗУКУЗСКАБамМАЕТММІ ТЕМ УКОВРИаО
ЗС8 Мн СГЕУЛОМІМРабБОаОТМУ5ЕКЕКОКМТІ ТАОКО5ОТАММОЇ 551 5 182
ЕОБАМУРСАНОВІ ОУМССОСТТІ ТУ55 1АТ г. ЕМО МОБАЕУККРИАБУКУЗСКАБаУТЕТО5УМОУМУУНОАРИаО ув СГЕУЛОаЮОММРОМаО5БОУМОКЕВЕВМТІ ТМОТ5ТОТАМІ ЕІ 551 В 183
ЗЕОТАМУУСМІ АРАМУЕЗУМИОСТІ МТУ55 1АТ аг ЕМО МОБАЕУККРОАБУКУЗСКАЗаИУТЕТО5УМОУМУМВОАРИаО ув І СГЕУЛОаЮОММРОМаО5БОУМОКЕВЕВМТІ ТМОТ5ТОТАМІ ЕІ 551 В 184
ЗЕОТАМУУСМІ АРАМУЕЗУМИОСТІ МТУ55
ПРИКЛАДИ
Матеріали та методи
Ї0433| Поверхневий плазмонний резонанс: Кінетику зв'язування антитіл проти ОХ40 вимірювали з використанням поверхневого плазмонного резонансу (ППР) на приладі Віасоге 3000 (СЕ Неайсаге). Антитіло проти Ес людини (СЕ Неайсаге) імобилизували на сенсорному чипі СМ5 шляхом приєднання на основі аміну з використанням запропонованого виробником протоколу. Антитіло проти ОХ40 захоплювалося на рівні 300-400 резонансних одиниць (КО).
Зв'язування антитіла вимірювали з ОХ40 людини (Зіпо Віоіодіса!І Іпс). Для експериментів застосовували серії двократних концентрацій пиОХ40 у діапазоні або від 18,75 до 300 нМ або від 6,25 до 200 нМ. Сенсограми зв'язування ОХ40 записували з використанням часу введення 2 хвилини зі швидкістю потоку 30 мкл/хв при температурі 25"С та з рухомим буфером з 10 мМ
ГЕПЕС, рН 7,4, 150 мм Масі та 0,005 95 твіну 20. Після введення протягом 600 с контролювали дисоціацію ліганду та антитіла у рухомому буфері. Поверхню регенерували між циклами зв'язування за допомогою введення 40 мкл З М хлориду магнію. Після віднімання значення холостого розчину, який містив лише рухомий буфер, сенсограми, що спостерігали для зв'язування ОХ40 з антитілами проти ОХ40, аналізували з використанням моделі зв'язування
Ленгмюра 1:11 за допомогою програмного забезпечення, поставленого виробником для розрахунку кінетичних констант та констант зв'язування.
Ї0434| Перехресне блокування: Експерименти з перехресного блокування проводили з використанням поверхневого плазмонного резонансу (ППР) на приладі Віасоге 3000 (СЕ
Неаййсаге), як описано вище. Для аналізу застосовували два формати. У першому -- гібридомні вихідні антитіла 1А7, 3С8 та 102 захоплювалися з використанням антимишачого Ес (СЕ Неашсаге) в різних проточних комірках. Потім ОХ40 людини (5іпо Віоіодіса! Іпс) пропускали через антитіла протягом 2 хвилин, забезпечуючи можливість їх зв'язування. Після цього слідувало введення протягом 2,5 хвилин клонів антитіл проти ОХ40 1ТА7.9г.1, 3С8.дг.5 та 102.спітега. Збільшення значень у резонансних одиницях (КІ) указує на відсутність перехресного блокування, а відсутність змін значень в КО вказує на конкуренцію. У другому форматі форму антитіл інвертували та гуманізовані варіанти захоплювали з використанням
Зо антилюдського Ес (СЕ Неаїївсаге). Після цього проходило введення протягом 2 хвилин пиОХ40, а потім мишачих антитіл. Кожний з клонів був здатен до зв'язування у присутності інших двох клонів та конкурував за зв'язувані лише з самим собою. 0435) Отримання варіантів антитіл: Варіанти клонів 1А7, 3С8 та 102 гуманізованих антитіл- агоністів проти ОХ40 отримували з використанням мутагенезу КипКеї. Варіанти антитіл транзієнтно експресували в клітинах 293 та потім випробували на зв'язування та функціональність.
Ї0436| Аналіз ЕАС5: Лінію Ншї78 Т-клітин людини стабільно трансфікували за допомогою
ОХ40 людини та клони гуманізованих антитіл проти ОХ40 досліджували методом ЕАС5 з використанням клітин Ниї78-0Х40 для оцінки того, чи зберігають варіанти зв'язування експресованого на клітинній поверхні ОХ40. Після блокування за допомогою буфера для блокування ГАСЗ (1Х РВ5, 0,5 95 БСА, 0,05 95 азид Ма), клітини забарвлювали протягом 30 хвилин на льоду з кожною концентрацією антитіла 0,1, 1,0 або 10,0 мкг/мл. Після забарвлення клітини 2х промивали холодним буфером для ГАСЗ (1Х РВ5, 0,5 95 БСА, 0,05 95 азид Ма). Потім клітини забарвлювали протягом 30 хвилин на льоду анти-пшЕс з фікоеритрином (РЕ) або анти- тис з РЕ. Перед зчитуванням даних на приладі ЕАС5ЗСаїїбиг забарвлені клітини Зх промивали холодним буфером для БЕАС5З з наступним аналізом з використанням програмного забезпечення РіІоу/о.
Ї0437| Випробування стабільності: Антитіла-агоністи проти ОХ40 піддавали аналізу на стабільність, що включав стрес-випробування при нагріванні та випробування при хімічному стресі. Для випробувань при нагріванні зразки антитіла у вигляді препарату витримували при 40С протягом двох тижнів, потім піддавали аналізу, наприклад, на присутність ізомеризованих або дезамінованих амінокислотних залишків у залишках СОК, що визначають з використанням триптичного картування з використанням РХ-МС/МС. Для випробування при хімічному стресі зразки антитіла у вигляді препарату піддавали дії окиснюваних умов (наприклад, з використанням в якості окиснюючого агенту ААРН), потім аналізували на присутність залишків, що окиснилися, (наприклад, М або М/) в СОК з використанням триптичного картування з використанням РХ-МС/МС.
ІЇ0438| Аналіз рівноважного зв'язування антитіла-агоніста проти ОХ40 ЛТА7.9г.1 з рекомбінантним ОХ40-білком людини, експресованим на трансфікованих клітинах ВТ-474: Маб бо 1А7.9г.1 йодували з використанням метода Іододеп (Егакег апа ЗрескК 1978). Мічене радіоїзотопом тар ЛТА7.9дг1 очищували від вільного /725І1-Ма методом гель-фільтрації з використанням колонки МАР-5; очищене антитіло мало питому активність 24,3 мКю/мкг. У 96- лункові планшети поміщали суміші для конкурентной реакції об'ємом 50 мкл, що містить фіксовану концентрацію йодованого тар 1А7.дг.1 та концентрації, що зменшувалися, серійно розведених немічених тар ТА7.49г.1. Стабільно трансфіковані клітини ВТ-474, експресуючі ОХ40 людини, культивували при 37 "С в 5 95 СО». Клітини знімали з колби з використанням розчину для дисоціації клітин (Зідта-Аїдгісй; м. Сент-Луїс, штат Місурі) та промивали буфером для зв'язування (ОМЕМ з 2 95 ЕВ5, 50 мМ ГЕПЕС, рн 7,2, 2 мМ азид натрію). Добавляли промиті клітини при приблизній щільності 5х104 клітин у 0,2 мл буферу для зв'язування в 96-лункові планшети, що містять 50 мкл сумішей для конкурентної реакції. Кінцева концентрація йодованого антитіла в кожній конкурентній реакції з клітинами склала приблизно 100 пМ (приблизно 16,0х104 срт на 0,25 мл), а кінцева концентрація неміченого антитіла у конкурентній реакції з клітинами змінювалася, починаючи з 500 нМ та зменшуючись З-кратними етапами, по 10 значеннях концентрацій з наступним етапом без додавання неміченого антитіла з використанням лише буферу для зв'язування. Суміші для конкурентних реакцій з клітинами інкубували протягом 2 годин при кімнатній температурі. Для кожної концентрації неміченого антитіла суміш для конкурентних реакций з клітинами аналізували у трьох повторностях. Через 2 години інкубації суміші для конкурентних реакцій переносили у фільтрувальний планшет
МіПроге МийівзсгтеепФ (МіПроге; м. Білерика, штат Масачусетс) та промивали чотири рази за допомогою буфера для зв'язування для відділення вільного від зв'язаного йодованого антитіла.
Активність фільтрів підраховували на гама-лічильнику УлаНйас Умігага 1470 (РегкіпЕІтег І їе апа
Апаїуїса! Зсієпсе5 пс.; м. Уелслі, штат Масачусетс). Дані зв'язування оцінювали з використанням програмного забезпечення Мем/і ідапа (Сепепіес!), в якому для визначення афінності зв'язування антитіла застосований алгоритм підгону Мансона та Родбарда (Мипзоп апа НРодбрага 1980).
І0439| Зв'язування антитіла-агоніста 1А7.9г.1ї проти ОХ40 з експресованим на клітинній поверхні ОХ40 на Т-клітинах людини, яванського макака, щури та миші шляхом проточної цитометрії: Периферичні білі клітини крові (МКПК) отримували з цільної крові людини, маврикійського яванського макака, щура або миші шляхом лізису червоних клітин крові з
Зо використанням буфера для лізису еритроцитів (ВО Віозсіепсе, м. Сан-Хосе, штат Каліфорнія).
Клітини блокували за допомогою 10 95 сироватки людини, яванського макака, щура або миші, відповідно, у РВ5 протягом 15 хвилин при 4 "С та поміщували на 96б-лункові планшети в кількості еквівалентній 100 мкл цільної крові на реакцію. (0440 Мар 1А?7.9г.1, мічене за допомогою АїЇеха Ріо? 647 (або контролем антитіла трастузумабом, міченим за допомогою Аїеха Ріцог? 647), титрували та зв'язували з клітинами, починаючи з 9 мкг/мл у 3-кратних серійних розведеннях для зразків людини, щура та миші та 8 мкг/мл у 2-кратних серійних розведеннях для зразків маврикійського яванського макака. МКПК одночасно забарвлювали протягом 30 хвилин в темноті при 4 "С для ідентифікації підгруп популяцій Т-клітин згідно наступного опису: людини, анти-СОЗ-РЕ-Су7, анти-РеєбОР-СУуБ.5, анти-«С0О8-8М510 (ВО Віозсіепсе5); яванського макака, анти- СОЗ-РЕ-Су7, анти-СО4-РегСрР-
Су5.5, анти-СО8-АРС-Н7 (ВО Віозсіепсе5); щура, анти-СОЗ3-РЕ, анти-С0О4-РІТС (ВО Віозсієпсев); миші, анти-СО3-РІТС, анти-СО4-РЕ (еВіозсіепсе, м. Сан Дієго, штат Каліфорнія). 0441) Потім клітини промивали двічі за допомогою буферу для забарвлювання ГАСЗ (ВО
Віозсіепсе) та фіксували за допомогою 1 95 параформальдегіду (ЕМ5) в РВ5 перед введенням зразка у проточний цитометр. (0442) Всі зразки аналізували на приладі ВО Віозсіеєпсе5 ЕАСзЗСапіо ІІ. Для налаштування аналітичного гейту та нормалізації забарвлення таб 1ТА?7.9г.1-АІеха 647 застосовували фонове забарвлення Т-клітин контрольного антитіла трастазумабу. Отримані дані аналізували з використанням програмного забезпечення ВО ЕАС5.
І0443| Костимуляція ефекторних Т-клітин, опосередкована антитілом-агоністом 1ТА?7.9г.1 проти ОХ40: Периферичні білі клітини крові (МКПК) виділяли з цільної крові людини з використанням пристрою для аферезу Тгіта АссеІ та додатково збагачували їх шляхом центрифугування на градієнті фіколу-гіпаку (ЗЕ ПпеайПпсаге). З МКПК виділяли СО4--Т-клітини пам'яті з використанням набору Мійепуі для виділення СО4--Т-клітин пам'яті (МінКепуї) у відповідності з інструкціями виробника. І-клітини, які експресували СО32 та СО80, опромінювали дозою 5000 рад та використовували їх в якості антигенпрезентуючих клітин.
І0444)| Опромінені СО32-СО80-4Ї -клітини (5000 клітин/лунку) змішували з СО4--Т-клітинами пам'яті (50000 клітин/лунку) та культивували при 37 "С в 5595 СО02 у 96-лунковому планшеті.
Середовище для культивування складалося з КРМІ 1640 з 1095 ЕВ5, Сіша-МАХ, пірувату бо натрію, пеніциліну/стрептоміцину, незамінних амінокислот та бета-меркаптоетанолу.
(0445) Активували СО4 «Т-клітини пам'яті у спільних культурах СО32-СО80І -клітин шляхом додавання 40 нг/мл антитіла проти СОЗ (клон 5РЗ4) та (ВО Віозсіепсев5) та різних кількостей тар 1А7.9г.1 або ізотипного контролю (антитіла проти глікопротеїну Ю ВПГ, анти-90) (серійно двократно розведений від 320 нг/мл до 0,16 нг/мл). Рівні ІФН-гама в супернатанті оцінювали методом І цтіпех (Віо-Кай) на 5 добу культивування, а проліферацію Т-клітин вимірювали методом люмінесценції клітин Тег-сіІо (Рготеда) та зчитували дані на пристрої зчитування
Епмізіоп Мийіабьеї! (Регкіп ЕІтег) на 7 добу культивування.
РЕЗУЛЬТАТИ: (0446| Антитіла-агоністи проти ОХ40 зв'язували ОХ40 людини з субнаномолярною афінністю. Для вимірювання кінетики зв'язування антитіл проти ОХ40 з ОХ40 людини застосовували аналіз поверхневого плазмонного резонансу. Варіанти гуманізованого антитіла 1А7 показали високу афінність зв'язування з ОХ40 людини, виміряну методом Віасоге.
Результати цього аналізу показані в таблиця 2.
Таблиця 2
Кінетичні константи для варіантів гуманізованого антитіла 1А7 проти ОХ40, що зв'язуються з ОХ40 людини 1ТА?Т.агл1 4,3ве5 1,526-4 0,529 1ТА7.аг2 4 4465 2,33е-4 0,524 1ТА7.аг.З 4,62е5 2,АЗе-4 0,525 1ТА7.аг.4 3,4565 1,63Зе6-4 0,472
ТАТ ог з7вов зво 1А7.9г.6 3,р91е5 6,93е-5 0,177 1А7.дг. и 4,01е5 1,456-4 0,360
І0447| Варіанти гуманізованого антитіла 3С8, що показало високу афінність з пиОХх40.
Результати цього аналізу показані в таблиця 3.
Таблиця З
Кінетичні константи для варіантів гуманізованого антитіла ЗС8 проти ОХ40, що зв'язуються з ОХ40 людини 3С8.9г.1 4,12е5 2 6в7е-3
Зс8.9г.2 4,66е5 2 ББе-З
ЗС8. ог. 49865 1,96е-3 3С8.9г.5 45Те5 6,19е-4 3С8.9г.6 3,95е5 1,22е-3 3С8.9.7 4,86е5 6,8Бе-4
ЗС8.9г.8 3,29е5 7,09е-4 3С8.9г.9 40465 1,73е-3
Продовження таблиці З 3С8.9г.10 3,82е5 1,08е-3
ЗС8.9г.11 3,21е5 9,17е6-4 3с8.9г.13 46565 9,17е6-4 3С8.9г.14 Б12е5 8,58е-4 (0448) Гуманізовані варіанти антитіла 102 показали знижене зв'язування з пиОХ40 у порівнянні з вихідним гібридомним антитілом. Результати цього аналізу показані в таблиця 4.
Таблиця 4
Кінетичні константи для варіантів гуманізованого антитіла 102 проти ОХ40, що зв'язуються з ОХ40 людини того я т7во тр ог3 73ов т63е (0449) Аналіз ЕАС5: Варіанти гуманізованих ОХ40-антитіл аналізували методом ЕАС5 для оцінки зв'язування антитіл з пИОХ40, що експресувався на поверхні клітин Ниї78. Результати цього аналізу показані на ФІГ. 1. Гуманізовані антитіла-агоністи 1А7.д4г.1, ТА7.9г.2, ТА7.а91г.3, 3С8.9г.1, 3С8.9г.2 та 3С8.9г.3 проти ОХ40 добре зв'язувалися з ОХ40 людини, що експресувався на клітинній поверхні. (0450) Експерименти з перехресного блокування: Кожний з клонів був здатен зв'язуватися у присутності двох інших клонів та конкурував за зв'язування з ОХ40 людини лише з самим собою, що дає підставу припускати, що антитіла 1А7, 3С8 та 102 не конкурують одне з одним за зв'язування з ОХ40 людини.
І0451| Отримання та визначення характеристик варіантів ОХ40-антитіл: Варіанти клонів антитіл 1ТА7.9г.1 та 3С8.дг.5 проти ОХ40 отримували шляхом мутагенезу КипКеі! для забезпечення мутації залишків мотивів СОК, які були потенційно лабільними (наприклад, у стресових умовах при нагріванні). Для антитіла Т1А7.дг1 ідентифікували послідовності з 5 (0 знаходиться в СОКНІ; 05 -- потенційно піддається збільшеній ізомеризації) та МОЗ (в СОК
Нг; Мб -- потенційно піддається збільшеній ізомеризації), як потенційно нестабільними залишками, та їх піддавали мутації, як показано в табл. 5. Варіанти досліджували методом
Віасоге, як описано вище для оцінки зв'язування кінетики та аналізів костимулювання для визначення біологічної активності.
Таблиця 5
Мутації, введені у варіанти тар 1А7.а9г.1
Змінені послідовності (вихідна
Антитіло послідовність 2? послідовність, що мутувала) 1ТА7.9грА Сов НІ 055-рА 1ТА7.9г.Е5 СОВА НІ 055-Е5 1ТА7.дг МАО Сов нг Марі- МАО 1А7.дгМАВА Сов нг Марі- МАВА 1А7.дгМардА сов нг Марі» Мард 1ТА7.дги 505 сов нг Ммарз-»5аро 1А7.дг Мао сов нг Ммарз-»Ммаво
І0452| Мутація залишків ОЗ (ОО знаходиться у СОМ НІ) або на БА або на Е5 значимо не змінювала афінність зв'язування з пиИОХ40 (табл. 6). Мутація залишків МОЮ в СОК Н2 на
МАО, МАБА, МОВА та МОо5з5 значимо не змінювала афінність зв'язування з ОХ40 людини.
Мутація МОО5 (в СОК Н2г) на 5505 призводила до двократної втрати афінності зв'язування (табл. 6). Варіанти антитіл аналізували з використанням аналізу костимулювання Т-клітин та рівень костимулювання Т-ефекторних клітин для варіантів значимо не змінювався у порівнянні з антитілом 1А7.911 (дані не показані).
Таблиця 6
Кінетичні константи для варіантів антитіл ТА7 проти ОХ40,що зв'язуються з ОХ40 людини 1А7 ди 10 з2зев 1,29е-4 0,398 1ТА7.9грА Сов НІ 05-рА 3З,21е5 8,326-5 0,259 1ТА7.9г.Е5 Сов НІ 055-Е5 ЗАе5 1,0Уе-4 0,319 сов нг 1ТА7.дг МАО МОСО5-УМАОЄ 2,7565 1,216-4 0,442 сов нг 1А7.дгМАВА МСО5-УМАПА 3,04е5 1,086-4 0,355 сов нг 1А7.агмарА МСО5-ЗМОепА 3,37е5 1,0Уе-4 0,322 сов нг 1А7.аг5аО5 Мсов-есо5 2,30е5 2,28е-4 0,993 сов нг 1А7.агмаво МОСОо5-Ме55 3З,49е5 1,08е-4 0,311 сов нг 1А7.дгОАМАВА Мареі-МАВА 3,87е5 2,156-4 0,557
Сов НІ 05-рА
Ї0453| Для антитіла З3С8.дг5 послідовності з ОТ (в СОКН2г) та ОС (в СОК 12) (обидві потенційні сайти ізомеризації) ідентифікували як потенційно нестабільні залишки в антитілі
З3С8.9г.5. Мутації отримували в кожній з цих послідовностей, як показано в таблиця 7.
Таблиця 7
Мутації, введені у варіанти тар ЗС8.9г.5
Змінені послідовності (вихідна
Клон антитіла послідовність 2? послідовність, що мутувала) сов нг 3С8.9г.рА бТ-зпА сов нг
ЗС8.9г.рО рт»ро
СОВ1І2 3С8.9г.5.Ес оС ЕС
СОВ1І2 3С8.91.5.00 раезос
СОВ1І2 3С8.9г.5.525 ро-е 0454) Мутація залишків ОТ в СОК Н2 або на БА або на БО призводила до втрати афінності на ОХ40 людини (у порівнянні з афінністю вихідного антитіла) (табл. 8). Мутація залишків ОС в
СОМ 12 на будь-які з ЕС, ОО та 50 значимо не змінювала афінність зв'язування (таблиця 8).
Таблиця 8
Кінетичні константи для стабільних варіантів антитіл 3С8 проти ОХ40, що зв'язуються з ОХ40 людини сов нг сов нг
СОВ1І2
СОВ1І2
СОВ1І2 (0455) Випробування стабільності: Антитіло ТА7.9г.1 піддавали випробуванню стабільності, як описано вище, а послідовності з 05 (О знаходиться у СОК НІ) та МОЗ (в СОК Н2) були стабільними в умовах випробувань при тепловому стресі. У доповнення до цього залишки М та
М (в СОВБ-НІ, -Н2 та -НЗ) не показали неприйнятних рівнів окиснення під час випробування на хімічний стрес.
Ї0456| Антитіло 3С8.дг.5 також піддавали випробуванню на стабільність. У той час як залишки ОТ були стабільними в умовах випробувань при тепловому стресі, залишки ОО (СОБК-
ІЇ2) не були стабільними в умовах випробувань при тепловому стресі.
І0457| Отримання та визначення характеристик сканованих аланіном мутантів ОХ40-антитіл:
Отримували мутанти аланінового сканування Т1А7.9г.1 та З3С8.9г.5, наприклад, для перевірки впливу мутацій на афінність зв'язування. У доповнення до цього визначали вплив афінності зв'язування на активність антитіл. Отримували мутанти з використанням мутагенезу Кипкеї для зміни амінокислотних залишків у третій СОК легкого ланцюга та важкого ланцюга. Варіанти антитіл транзієнтно експресували в клітинах 293 та випробували методом Віасоге 3000 на зв'язування з ОХ40 людини. 0458) Результати цього експерименту показані у табл. 9. Аланінові заміни в СОК З важкого ланцюга у положеннях 96 (ТА7.АІа.14), 97 (ТА7.Айа.11), 98 (ТА7.АІа.13), 99 (ТА7.Аа.10) та 100 (ТА?7.Аа.9) показали знижене зв'язування з пиОХ40. Ці результати дають підставу припустити, що залишки в положеннях 96, 97, 98, 99 та 100 можуть мати значення для зв'язування антитіл з
ОоХ40. Визначення функціональних характеристик мутантів Аіа-сканування ТА7.Аїа9, 1А7.Аїа10, 1А7.АІа11, 1А7.Аіа13 та 1А7.АЇа14 в іп міго аналізі костимулювання Т-клітин показало, що зменшена афінність ОХ40-антитіл корелювала зі зниженою здатністю антитіл до костимуляції проліфераційної активности ефекторних Т-клітин.
Таблиця 9
Кінетичні константи для зв'язування з ОХ40 людини варіантів сканування аланіном антитіла 1А7.9г.1 проти ОХ40 (заміщений аланін підкреслений) іссова но-СоВ З КО (нм)
ООСНТІ РРТ МАРВМУУЕБУ
ТАТ аг (ЗЕО 10 МО 7) (ЗЕ 10 МО:209)
ОАСНТІ РРТ МАРВМУУЕБУ
1АТ.лат (5ЕО 10 МО:28) (ЗЕ 10 МО:209)
ООАНТІ РРТ МАРВМУУЕБУ
1АТ.ліа.в (ЗЕ 10 МО:26) (ЗЕ 10 МО:209)
ООСАТІ РРТ МАРВМУУЕБУ й 1Ат.ЛаЗ (ЗЕ01О МО:24) (ЗЕ 10 МО:209)
ООаНАГРРТ МАРВМУУЕБУ 1А7.лал (ЗЕО 10 МО:25) (ЗЕ 10 МО:209)
ОСОаНТАРРТ МАРВМУУЕБУ й 1А7.лаг (5ЕО 10 МО:23) (ЗЕ 10 МО:209)
ОСаНТІ АРТ МАРВМУУЕБУ 1А7 Лаб (5ЕО 10 МО:27) (ЗЕ 10 МО:209)
ООСНТІ РАТ МАРВМУУЕБУ й 1Ат.лал (56010 МО:22) (5ЕО 10 МО:209)
ООСНТІ РРТ АГАРАМ/УЕБУ 1А7.Мал5 (ЗЕО 10 МО 7) (ЗО 10 МО-196) ов
ООСНТІ РРТ МААРАМ/УЕБМ 1А7.Лал6 (ЗЕО 10 МО 7) (5ЕО 10 МО:201)
ООСНТІ РРТ МААВМУУЕБУ
1А7.Мал4 (ЗЕО 10 МО 7) (ЗЕ 10 МО:202)
ООСНТІ РРТ МАРАМУЕБУ
1А7.Мал (ЗЕО 10 МО 7) (ЗЕО1О МО:203)
Продовження таблиці 9 (ЗЕО І МО77) (ЗЕО І МО 204) зв'язування
І0459| Аналіз варіантів сканування аланіном антитіла З3С8.дг5 показаний в табл. 10. Варіанти антитіл, що містять аланінові заміни в СОК З важкого ланцюга та легкого ланцюга у положеннях 91, 93, 94 та 95 показали значно знижене зв'язування з пиОХ40. Усі три положення (95, 96 та 97) в СОКЗ важкого ланцюга при мутації на аланін показали знижене зв'язування з пПИОХ40.
Таблиця 10
Кінетичні константи для варіантів сканування аланіном антитіла 3С8.9г.5 проти ОХ40, що зв'язуються з ОХ40 людини (аланінова заміна підкреслена) 000 рлосова 000 носова 00 (юю
(0460) Маб 1А7.9г.1, що зв'язувалося з високою афінністью з ОХ40 людини, аналізували з використанням радіоімунологічного аналізу: Дослідження рівноважного зв'язування проводили, як описано для визначення афінності тар 1А7.дг.1 до ОХ40 людини, що експресувалося на трансфікованих клітинах ВТ-474. Значення Ка зведені у табл. 11. Середнє виміряне значення афінності зв'язування складало 0,45 нМ (п-3, окремі значення 0,43, 0,44, 0,49).
Таблиця 11
Аналіз рівноважного зв'язування тар ТА7.9г.1, що зв'язувалося з клітинами ВТ-474, які експресували рекомбінантний ОХ40 людини . . Середня Ка (НМ)
Антитіло Аналіз ка (нм) со 1 0,43 2 0,44 1ТА?7.дг З 049 0,45 - 0,03
І0461| Маб 1ТА?7.9г.1, що зв'язувалося з високою афінністю з ОХ40, експресованим на Т- клітинах людини, яванського макака, щура та миші: Зв'язування тар 1А7.9дг1 з ОХ40, експресованим на Т-клітинах людини, яванського макака, щура та миші, оцінювали аналізом на основі на проточної цитометрії. Середні значення ЕС5О для тар 1А7.9г.1, що зв'язується з Т- клітинами людини та яванського макака, зведені в табл. 12, а криві зв'язування показані на ФІГ. 2. Результати вказують, що тар1тА?7.9г.1 зв'язувалося з Т-клітинами людини та яванського макака з подібною високою афінністю зі значеннями ЕС5О 0,2202-0,026 (1,47 нМ) та 0,14220,0001 мкг/мл (0,946 нМ) відповідно для Т-клітин людини та яванського макака. Не виявлено вимірюване зв'язування тарітіА?7.9г.1 з Т-клітинами щура або миші.
Таблиця 12
Зв'язування таб 1А7.49г.1 з Т-клітинами людини та яванського макака 0117001 Аналіз | ЕСво(мкуимл) | Середня ЕСвю (мкг/мл) (СО) . 1 0,143 0,142 - 0,00014 ? 0,196
Людина З 0,184 0,220530,053
А 0,201 0,298 (0462) Лікування за допомогою антитіла-агоніста тар1тА?7.дг.1 проти ОХ40 костимулювало проліферацію та продукцію інтерферону-гама Т-ефекторними клітинами з наступним захопленням рецепторів Т-клітин дозозалежним чином: Як описано, СО4--Т-клітини пам'яті костимулювалися фіксованою концентрацією антитіла проти СОЗ та перемінною концентрацією антитіла проти ОХ40 або контрольного антитіл. У відсутності перехресного зв'язування антитіла тар 1А7.аг1 проти СОЗ не впливало на проліферацію Т-клітин (ФІГ. ЗА). Концентрація тар 1А7.9г.1, що збільшувалася, костимулювала проліферацію СО4кТ-клітин пам'яті у відповідь на перехресне зв'язування антитіла проти СОЗ. Розрахована ЕС5О для костимулюючого ефекту тарт А?7.дг.1 складала 9,96 нг/мл (п-2, ФІГ. ЗА). Концентрації таб ТА7.49г.1, що збільшувалися, костимулювали продукцію інтерферону-гама СО4-Т-клітинами пам'яті в відповідь на перехресне зв'язування антитіла проти СОЗ (ФІГ. ЗВ). Ці результати продемонстрували, що
Зо агоніст тар1тА7.9г.1 проти ОХ40 костимулював проліферацію та продукцію інтерферону-гама
Ср4-Т-клітинами пам'яті.
Матеріали та методи ЇЇ (0463) 1. Антитіла: Очищене антитіло проти ОХ40 людини (РЕ) (клон АСТЗ5), 951 миші (РЕ), антитіло проти СОЗ людини (клон 5РЗ34), антитіло проти СО4 людини (РІТС), антитіло проти СО25 людини (РЕ), антитіло проти СО45КА людини (АРС), антитіло проти СОЗ3-АРС людини та очищене антитіло миші проти СО115б людини придбані у ВО біозсіепсев5.
Алемтузумаб (Сатраїйй) придбаний у сСепгуте. Антитіло проти СО52 людини (АРС) придбано у бідта. Антитіло козла проти дО миші АЇеха РіІшог 647 придбано у Іпмігодеп. Антитіло проти
СО0127 людини (еРішог 450) та антитіло щури проти ОХ40 миші (РЕ, клон ОХ86) придбані у еВіозсіепсе5. Антитіло ІА7дг1 проти ОХ40 людини, ритуксимаб (химерне антитіло проти СО20,
ІЧО1) та антитіло проти глікопротеїну ЮО ВПГ (антитіло проти 90, 951 людини) отримували у компанії Сепепіесп. Антилюдський Ід (РЕ) придбаний у ВО Віозсіепсе5. Набір ІІ для виділення
СОр4 людини отриманий у Мінйепуї Віоїесп. Набір для виділення МК людини придбаний у від
Зієт СеїЇ Тесппоіоду. 04641 2. Клітини та середовища 0465) а, Лінії клітин: ВТА74 (лінія клітин раку молочної залози людини) придбана у АТСОС; лінія амфотропних клітин на основі 293 придбана у І їе Тесппоїоду. ВТ474 та амфотропні клітини культивували та підтримували у середовищі ОМЕМ з добавкою 10 95 ЕВзЗ/пен/стреп в інкубаторі при 37С/595 СО». І|-клітини, що експресують СО3З2а та СО80, культивували та підтримували у повному середовищі ЕРМІ (ЕРМІ-1640 з добавкою 10 95 ЕВ5З (інактивованої нагріванням)/пен/стреп/глутамін/незамінні амінокислоти/55 мкМ ВМЕ) в інкубаторі при 37С/5 95
СО». 0937 (лінія моноцитних клітин людини) культивували та підтримували у повному середовищі КРМІ в інкубаторі при 37С/5 95 СО». (0466) 6, Отримання ОХ40-експресуючих клонів ВТ474: Для отримання плазміди людини
ОхХ40-М5СУ (пОХх40-М5СМУ) КкДНК ОХ40 людини клонували, як білок злиття з маркером 5'- глікопротеїн Ю ВПГ (90), у ретровірусному векторі МОСМ ІКЕ5 СЕР (Сіопіесп). Амфотропні пакуючі клітини Рпоепіх трансфікували за допомогою плазміди ПОХ40-МЗСМ шляхом Еидепе
НО (Коспе). У подальшому клітини ВТ474 інфікували за допомогою вірусних супернатантів з трансфікованих амфотропних клітин. Пули ОХ40-експресуючих клітин ВТ474 збагачували шляхом сортування клітин з поверхневими маркерами 90- та СЕР. ОХ40-експресуючі клони отримували за допомогою аналізу з обмеженим розведенням ОХ40-експресуючих клонів.
Клони, експресуючі високий та низький рівні ОХ40, відбирали на основі експресії на поверхні маркеру 90, а рівні експресії ОХ40 -- проточною цитометрією. Для визначення рівнів експресії
ОХ40 людини на клонах ВТ474 ОХ40-експресуючі клітини забарвлювали за допомогою антилюдського ОХ40-РЕ (клон АСТЗ5, ВО Віозсіепсе5), а рлуоресценцію клітин вимірювали на
ЕАС5 Сапіо ІІ (ВО Віозсіепсе) та аналізували її з використанням програмного забезпечення
Номіо (Ттеезнаг).
Зо І0467| с, Виділення нормальних мононуклеарних клітин периферичної крові людини (МКПК),
Т-клітин, моноцитів та МК-клітин: Нормальні зразки периферичної крові людини отримані від донорів -- зареєстрованих співробітників Сепепіеспй та предоставленівідділом медичного забезпечення співробітників підприємства. Нормальна лейкоцитна плівка людини доставлена з банку крові м. Сан-Франциско через відділ медичного забезпечення співробітників сепепіесі.
Периферичні білі клітини крові (МКПК) виділяли з цільної крові людини з використанням пристрою для аферезу Тгіта Ассе! та додатково збагачували їх шляхом центрифугування на градієнті фіколу-гіпаку (СЕ Неайпсагеє).
І0468| З МКПК виділяли СО4-Т-клітини пам'яті з використанням набору Мінепуії для виділення СО4-Т-клітин. СО4- наївні Т-клітини забарвлювали за допомогою СО4-РІТС, СО025-РЕ та СО127-е450 (еВіозсіепсе5) для сортування СЮО4-С025-20127 ж клітин та СЮАСО25:60127- клітин. Клітини Тгед сортували з того самого донора за допомогою ЕАС5 Агіа (ВО Віозсіепсев5).
Чистоту відсортованих клітин підтверджували проточним цитометричним аналізом безпосередньо після сортування. 0469) МКПК із зразків цільної крові, виділені шляхом центрифугування на градієнті фіколу- паку, використовували для виділення моноцитів. Моноцити виділяли з МКПК з використанням набору для виділення моноцитів (Мінепуї). Виділені моноцити культивували від 7 до 14 діб у повному середовищі КРМІ у присутності 20 нг/мл ОМ-С5Е для отримання макрофагів моноцитарного похождення (МОМ).
Ї0470| Нормальні МК-клітини людини виділяли з МКПК лейкоцитної плівки з використанням набору для збагачення МК-клітин людини (5іет СеїЇ Тесппоіоду) у відповідності з інструкціями виробника та клітини безпосередньо використовували для аналізу АЗКЦ.
І0471| З, Реактиви для маркування клітин: Очищені СО4- наївні Т-клітини мітили за допомогою СЕБЕ з використанням набору для проліферації клітин СейПТгтасе СЕБЕ (Ше
Тесппоіоду), а очищенні клітини Тгед мітили за допомогою набору з червоним флуоресцентним клітинним лінксером РКН2б (Зідта). Обидва набори використовували у відповідності з інструкціями виробника. (0472) 4. Аналіз супресії Тгед: І-клітини, які експресували СО32 та СО80, опромінювали дозою 5000 рад та використовували їх в якості антигенпрезентуючих клітин для аналізу супресії бр4-0025-060127- клітин. бо І0473| Опромінені СО32-С080-І -клітини (5000 РАД, 10000 клітин/лунку) висівали на плоскодонний 9б-лунковий планшет для культивування культур тканин та підтримували протягом ночі в інкубаторе при 37С/5 95 СО2. На наступний день проліферацію СО4- наївних Т- клітин у присутності або відсутності відсортованих клітин Тгед оцінювали у наступному аналізі супресії СО4-2025-020127-Т-клітин.
Ї0474| Для моніторингу проліферації наївних СО4-Т-клітин до кожної лунки аналітичного планшета, яка вже містила висіяні за день до цього І -клітини, добавляли 100000 мічених СЕЗЕ (5 мкм) наївних СО4-Т-клітин. Для випробування супресивної функції клітин Тгед до кожної лунки, що містить мічені СЕЗЕ СО4-- наївні Т-клітини, добавляли 200000 мічених РКН2б (2 мкм) клітин Тгед. Для випробування активності антитіла 1А7.дІ1 проти ОХ40, 1А7.дІ1 або ізотипного контрольного антитіла -- антитіло проти СО20 (ритуксимаб) (кожне в концентрації 200 нг/мл) їх добавляли до спільної культури наявних СО4-Т-клітин, клітин Тгтед та опромінених бОр32-0080:Ї -клітин. До клітин добавляли розчинне антитіло проти СОЗ до кінцевої концентрації 2,5 нг/мл. Перед отриманням даних аналітичний планшет підтримували в інкубаторі протягом б діб при 37С/595 СО». На добу 6 проліферацію наївних СО4 Т-клітин відслідковували за розведенням барвника СЕЗЕ, а флуоресценцію клітин вимірювали на ЕАС5
Сапіо ІІ (ВО Віозсіепсе) та аналізували її з використанням програмного забезпечення Біомо (Ттєевіаг). (0475) 5. Аналіз антитілозалежного клітинно-опосередкованого фагоцитозу (АЗКФ): В аналізі
АЗКФ в якості фагоцитних ефекторних клітин застосовували клітини ШУО37. На 96-лунковий планшет для культивування тканин висівали 50000 клітин ШУ37, мічених за допомогою РКН2б (2 мкм). До клітин ШО37 добавляли змінні кількості антитіл: антитіла проти ОХ40, 1А7.дг1 або антитіла проти НЕКЗ (ізотипний контроль -- трастузумаб) (2-кратні серійні розведення від 1000 до 7,8 нг/мл). В якості клітин-мішеней в аналізі АЗКФ застосовували або клони ВТ474 з високою
ОХ40-експресією або низькою ОХ40-експресієй. В аналітичний планшет до клітин Ш937 добавляли 5000 ОХ40-- клітин ВТ474. Аналітичний планшет інкубували в інкубаторі протягом 4 годин при 37С/5 95 СО». Потім клітини збирали для вимірювання флуоресценції клітин на ЕАС5
Сапіо ІІ (ВО Віозсіепсе) та аналізували її з використанням програмного забезпечення РіІом/о (Ттєезіаг). Відсоткове значення фагоцитозу розраховували шляхом ділення подій ЗЕР-РКН2бя (тобто виміряних клітин 0937, які поглинули клітини ВТА474) на всі події СЕР: (всі клітини ВТ474).
Зо (0476) 6, Аналіз антитілозалежної клітинно-опосередкованої цитотоксичності (АЗКЦ): Для демонстрації того, що 1А7.д91І1 індукує АЗКЦ експресуючих ОХ40 Т-клітин, первинні МК-клітини спільно культивували з активованими первинними СО4-Т-клітинами. СО4-Т-клітини та МКк- клітини виділяли у одного і того ж донора МКПК з використанням, відповідно, набору для виділення СО4 Т-клітин людини (набір Мійепуї) та набора для збагачення МК-клітин людини (ет СеїЇ ТесппоІоду). Експресія ОХ40 на виділених СО4Т-клітинах індукувалася шляхом активування Т-клітин за допомогою ФГА (5 мкг/мл) протягом 48 годин у повному середовищі
ВРМІ-1640. Для аналізу АЗКЦ в якості позитивного контролю використовували алемтузумаб (пАбБ проти СО52), а в якості негативного контролю використовували антитіло проти дО.
Активовані СО4-- клітини (5000 на лунку) інкубували зі змінними кількостями 1ТА7.дг1 або контрольних антитіл (3-кратні серійні розведення від 10000 до 0,01 нг/мл) протягом 30 хвилин в 9б-лунковому аналітичному планшеті для культивування тканин. У подальшому аналіз АЗКЦ ініціювали шляхом додавання до кожної лунки МК-клітин (50000 клітин). Потім аналітичний планшет інкубували в інкубаторі протягом додаткових 20 годин при 37С/5 95 СО». Потім спільні культури забарвлювали за допомогою антилюдських СО4-РІТС та 7ААО (ВО Віозсіепсев). Після промивання РВ5З дані отримули шляхом проточної цитометрії (ВО БАсСзсаїїбрег) та аналізували програмою РіІом/о (Тгеебзіагї). Частоту загибелі (АЗКЦ) ОХ40-експресуючих СО4 Т-клітин визначали за відсотковим вмістом клітин СО4-7ААЮ: до загальної кількості СО4 Т-клітин.
Ї0477| Для демонстрації того, що 1А7дг1 індукувало ОХ40-чутливу АЗКЦ, клони ВТ474 людини з високою та низькою експресією ОХ40 (лінія клітин раку молочної залози людини) висівали (5000 на лунку) у 96-лунковий аналітичний планшет з чорним дном для культивування тканин для забезпечення приєднання та підтримували їх в інкубаторі протягом 24 годин при 370/5 96 СО». Потім до клітин ВТ474 добавляли антитіло проти СО20 (ізотипний контроль) або антитіло-агоніст ТА7.д/1 проти ОХ40. Первинні МК-клітини людини здорових донорів виділяли з
МКПК лейкоцитної плівки з використанням набору для збагачення МК-клітин людини (5іет СеїЇ
Тесппоіоду) та потім в лунки, що містять клони ВТ474, в присутності антитіла проти СО20 (ізотипний контроль ритуксимаб) або 1А7.д9гї добавляли 50000 очищених МК-клітин. Перед додаванням реактиву СеїЇТПйегоІо для захоплення хемілюмінесцентного сигналу аналітичний планшет інкубували протягом 24 годин. Відсотковий вміст клітин, що піддавалися опосередкованій антитілами проти ОХ40 АЗКЦ, розраховували шляхом ділення сигналу від 60 оброблених антитілами клітин на такий сигнал від необроблених клітин. Для компенсації фонового сигналу від МК-клітин віднімали сигнал від культури одних МК-клітин.
Результати ІІ (0478) Маб 1А?7.9г.1 інгібувало Тгед-супресію СО4-- наївних Т-клітин: Авторами досліджено чи буде перехресне зв'язування ОХ40 шляхом зв'язування антитіла-агоніста проти ОХ40 з клітинами Тгед інгібувати їх здатність інгібувати проліферацію наївних Т-клітин. Проліферацію наївних С04-Т-клітин індукували перехресним зв'язуванням антитіла проти СОЗ у відсутності 1А7.д/1. Додавання клітин Тгед до культур наївних Т-клітин супресувало індуковану антитілом проти СОЗ проліферацію наївних Т-клітин. Обробка за допомогою тАБр 1А7.49г.1 інгібувала супресивну функцію регуляторних Т-клітин (п-3, ФІГ. 6). Проліферацію наївних Т-клітин вимірювали моніторингом популяцій з низьким рівнем СЕБЕ шляхом проточного цитометричного аналізу. Цей результат продемонстрував, що тА 1А?7.9г.1 інгібувало супресивну функцію клітин Тгед. (0479| ВТ474-пОХх40-трансгенні клони експресували різні рівні ПОХ40: Рівні експресії ОХ40 людини визначали в клонах трансгенних клітин ВТ474 з використанням забарвлювання на поверхні пОХ40 та значень середньої інтенсивності флуоресценції (СІФ) проточним цитометричним аналізом. Клон ВТ474 з високою експресією ОХ40 людини експресував більше ніж 5-кратно більше ОХ40, ніж клон ВТ474 з низькою експресією ОХ40 людини, зі значеннями
СІФ рівним 5243, відміченим для клону з високою експресією ОХ40 (ФІГ. 88) та значенням СІФ рівним 994, відміченим для клона з низькою експресією ОХ40 (ФІГ. 8А). Антитіло ізотипного контролю, трастузумаб, мало значення СІФ рівне 10 (дані не показані).
І0480| Обробка антитілом-агоністом проти ОХ40 індукувала ОХ40-залежний антитілозалежний клітинно-опосередкований фагоцитоз (АЗКФ) Для визначення того, чи опосередковує АЗКФ таб 1А7.9г.1 проти ОХ40 людини, мієлоїдні клітини 0937 культивували з
ОХ40-експресуючими клітинами-мішенями, клонами ВТА474, які експресували високі або низькі рівні ОХ40. Обробка антитілом-агоністом ТА7 проти ОХ40 індукувала фагоцитоз клонів ВТ474- пОХ40, експресуючих низькі або високі рівні ПОХ40, дозозалежним чином, як проаналізовано з використанням БАС5 (ФІГ. 9). У доповнення до цього більш високий рівень фагоцитозу спостерігали з використанням клона ВТ474 з високою експресієй пОХ40, ніж якщо використовували клон ВТ474 з низькою експресією пПОХ4, що дає підставу припустити, що
Зо опосередкований ОХ40-антитілом клітинно-опосередкований фагоцитоз залежав від рівня експресії ОХ40 на клітинах-мішенях (ФІГ. 9). На противагу цьому, трастузумаб (що також називають герцептин), антитіло ізотипного контролю, опосередкувало лише 10 95 фагоцитозу, як показано з використанням клона ВТ474 з високою експресією пОХ40. Ці дані продемонстрували, що тар 1ТА?7.а4г.1 індукувало фагоцитоз експресуючих ОХ40 клітин-мішеней та що рівні антитілозалежного клітинно-опосередкованого фагоцитозу корелювали з рівнями
Ох. (04811) Обробка антитілом-агоністом ТА7.дг1 проти ОХ40 індукувала АЗКЦ у клонів ВТ474, експресуючих ОХ40 людини, та рівень АЗКЦ був значно вище для клітин, експресуючих високі рівні ОХ40, у порівнянні з рівнем АЗКЦ для клітин, експресуючих низькі рівні ОХ40: Обробка антитілом-агоністом ТА7.9г1 проти ОХ40 індукувала АЗКЦ в ОХ40-експресуючих клітинах (ФІГ. 10). Для виявлення АЗКЦ проводили аналіз СеїПТпегоіо. Обробка антитілом-агоністом ТА7.дг1 проти ОХ40 у концентрації 0,1 мкг/мл індукувала значну АЗКЦ у клітин ВТ474 з низькою експресією пОХ40, що підтверджено зниженою життєздатністю клітин-мішеней. Обробка антитілом-агоністом ТА7.дг1 проти ОХ40 при концентрації 0,1 мкг/мл приводила до ще більш значної АЗКЦ клітин ВТ474 з високою експресією пПОХ40. Різница між АЗКЦ для клонів ВТ474 з низькою та високою експресією пПОХ40 була статистично значимою (р-0,0077). На противагу цьому, обробка ритуксимабом (контроль) не змінювала життєздатність клонів ВТ474, експресувавших як високий, так та низький рівень ОХ40. Ці дані продемонстрували те, що
ОХ40-антитіло-агоніст 1А7.9г1 було здатним опосередкувати загибель ОХ40-експресуючих клітин іп міго. У доповнення до цього рівень АЗКЦ був значно вище для клітин, експресуючих високі рівні ОХ40, у порівнянні з рівнем АЗКЦ для клітин, експресуючих низькі рівні ОХ40: ОХ40 високо експресується у внутрішньопухлинних Т-клітин та внутрішньопухлинні клітини Тгед людини експресують високі рівні ОХ40 людини. (0482) Активність антитіла-агоніста проти ОХ40 була залежною від перехресного зв'язування та вимагала Ес-ефекторної функції для костимулювання ефекторних Т-клітин: Для визначення того, чи було тар 1А7 залежним від перехресного зв'язування антитіла для костимулювання проліферації ефекторних Т-клітин, до культури добавляли таб 1А7.9г.1 у зв'язаній з планшетом формі або розчинній формі. Результати цього експеримента показані на ФІГ. 4А. У присутностии зв'язанного з планшетом антитіла проти СОЗ зв'язане з планшетом тар 1А7.9г.1 бо костимулювало проліферацію СО4ж ефекторних Т-клітин. Навпаки, костимулююча активність припинялася, коли 1А7 вводили в розчинній формі в присутності зв'язаного з планшетом антитіла проти СОЗ, до аналогічного рівня, який спостерігався зі зв'язаним з планшетом контрольним ізотипним антитілом у присутності зв'язаного з планшетом антитіла проти СОЗ. Ці результати дали підставу припустити, що для костимуляції тар Т1А7 ефекторних Т-клітин може бути потрібним перехресне зв'язування (наприклад, забезпечене шляхом приєднання тар 1А7.дг.1 до планшету). 0483) Для додаткового встановлення того, чи потрібне таб 1А7.49г.1 перехресне зв'язування для активності, було отримане мутантне антитіло для створення антитіла, яке було нестабільним для зв'язування з рецептором Ес-гама, презентованим на клітинах. Коротко, потрібний для зв'язування з рецепторами Ес-гама Ес-залишок аспарагін 297, сайт для М- зв'язаного глікозилювання, піддавали мутації у гліцин (М2970) для запобігання зв'язування Ес антитілами з рецепторами Ес. Результати цього експерименту показані на ФІГ. 48. МАБ ТА? а9г.1 (дОс1), що містить мутацію М2970, виявилося нездатним костимулювати проліферацію клітин
Тейї. На відміну від нього тар 1А7 адг.1 дикого типу (немутоване) костимулювало індуковану антитілом проти СОЗ проліферацію клітин Теїї. Разом з результатами, показаними на ФІГ. 4А, ці результати демонструють, що активність агоніста тар 1А7 дг.1 проти ОХ40 була залежною від перехресного зв'язування, потребуючи наявності Ес-ефекторної функції для костимулювання ефекторних Т-клітин.
І0484| Маб 1А7 9г.1 9051 мало більш сильну активність перехресного зв'язування, ніж 1ТА7.дг.1 Ідсб4. Ізотипи антитіл мали відмінне зв'язування з рецепторами Ес-гама. Для ідентифікації ізотипу, який забезпечував найбільш сильну активність з костимуляції ефекторних
Т-клітин, активність тар 1А7.9г.1, що містить Ес ЇдДс1 людини, порівнювали з активністю тар 1А7 4г.1 на скелеті Ід4 людини. Результати цього експерименту показані на ФІГ. 5. Мар 1А7 9г.1-і901 костимулювало індуковану антитілом проти СОЗ проліферацію ефекторних Т-клітин більш сильно, ніж костимулювало тар ТА? дг.1-Іі3454. Цей результат показав, що тав1тА?7 адг.1, що містить Ес ЇдсС1 людини, мало більш сильну активність перехресного зв'язування, ніж тар 1А7.д1, що містить Ес Ід4 людини.
І0485| Обробка тар 1А7.9г.1 індукувала АЗКЦ ОХ40-експресуючих Т-клітин. Антитіла, які розпізнавали антигени клітинної поверхні, мали потенціал для опосередкування виснаження
Зо популяції клітин-мішеней шляхом антитілозалежної клітинно-опосередкованої цитотоксичності (АЗКЦ). Для визначення того, чи індукує тар1т1А7.дг АЗКЦ, створювали клітини-мішени, які експресують високі рівні ОХ40, шляхом стимулювання СО4--Т-клітин периферичної крові за допомогою ФГА та приводили їх в контакт з тар 1А7.9г.1 у присутності ефекторних клітин людини. Результати цього експерименту показані на ФІГ. 7А. Обробка тар 1А7.9г.1 індукувала
АЗКЦ у ОХ40-експресуючих Т-клітин, якщо МК-клітини культивували зі стимульованими СО4кТ- клітинами (у співідношенні 10 МК-клітин: 1 о активовану Т-клітину). Цей результат продемонстрував, що 1А7.491/1 індукувало АЗКЦ для Т-клітин, які експресують високі рівні ОХ40.
Виснаження індукованого тар.1А7.дг.1 було менше інтенсивним, ніж індуковане обробкою позитивним контрольним антитілом, алемтузумабом (таб проти СО52). На противагу цьому, обробка негативним контролем таб проти 90 (ізотипний контроль) не призвело до індукції
АЗКЦ. 0486) Для визначення того, чи демонструють антитіла тар 1А7.9г.1 з різними ізотипами Ес різну активність АЗКЦ іп міїго, активність тар 1ТА?7.дг1 з ізотипом ІДС1 порівнювали з активністю таб 1А7.9г1 з ізотипом Ідс4. Результати цього експерименту показані на ФІГ. 7В. Обробка тар
А7.911 (ІдС1) індукувала більший рівень АЗКЦ у ОХ40-експресуючих СОВ4Т-клітин у порівнянні з рівнем АЗКЦ, індукованим тар 1А7.9г1 (1404).
Матеріали та методи ПІ
І0487| Аналіз конкурентного зв'язування ОХ40І та антитіла проти ОХ40. Антитіло 1А7адг1 проти ОХ40 кон'югували з АїЇеха БРіІйогб47. Білки ОХ40І-йад людини та ОК5-йад людини отримували у Сепепіесп. Антитіло проти Пад, кон'юговане з АІеха Рішог 555, придбане у СеїЇ
Зідпаїїпуд (Мо 3768 за каталогом). Трансгенні клітини Ниї78-НОХ40 (Ниї78-пОХ40, лінію Т-клітин людини, трандукована для експресії ОХ40 людини ретровірусом) культивували та підтримували у повному середовищі КРМІ (КРМІ-1640 з добавкою 1095 ЕВ5 (інактивованою нагріванням)/пен/стреп/глутамін/незамінні амінокислоти/55 мкМ ВМЕ) в інкубаторі при 37С/5 95
Со».
Ї0488| Спочатку виконували титрування зв'язування тар 1А7дг з ОХ40. Застосовували клітини 1 х 106 Нишї78-пОХ40 та концентрацію тавртА?7дг титровали з 2-кратним зниженням концентрації, починаючи від 10 мкг/мл. Через 30 хв інкубації при 4С клітини двічі промивали в буфері для промивання (РВБ/0,5 96 ЕВ5/2 мМ ЕДТК) з наступним отриманням даних на бо проточному цитометрі РЕАСзСапіоі! (ВО). Потім дані аналізували програмою Ріом/о (Тгеевзіаг) та отримували средню інтенсивність флуоресценції (СІФ). Кількість тар 1А7.9г.1 (200 нг/мл), яке створювало приблизно 70 95 від максимуму СІФ, вибирали для використання у конкурентному аналізі. Титрування зв'язування ОХ40І -Пад здійснювали аналогічним чином, за виключенням того, що ОХ401І -Яад титрували з З-кратним зниженням концентрації, починаючи від 10 мкг/мл.
І0489| Аналіз конкурентного зв'язування ОХ40Ї та тар проти ОХ40 проводили згідно наступного опису: ОХ40І -Яад або контрольний ОК5-Пад добавляли в концентрації від 10 мкг/мл до 10 нг/мл до 1 х 105 клітин Ниї78-пОХ40. Через 30 хв інкубації при 4С клітини промивали двічі у буфері для промивання, а потім для дослідження конкуренції між ОХ40І. та таб 1А7.9г.1 проти пОХ40 добавляли 10 мкг/мл анти-Пад-АЇеха РіІшог 555 та 200 нг/мл таб 1А7.9г.1-АіІехаРійогб47.
Через 30 хв інкубації при 4С клітини двічі промивали у буфере для промивання з наступним отриманням даних на проточному цитометрі РАСЗСапіо!! (ВО). Потім дані аналізували програмою РіІоулЛо (Тгеезіаг) та отримували значення СІФ зв'язування 1А7дг1.
Результати ПІ
Ї0490| Експеримент з титруванням продемонстрував, що тар 1А7дг1 проти ОХ40 людини зв'язулося з клітинами Ниї78-пОХ40 дозозалежним чином, 70 95 від максимального зв'язування спостерігали при близько 200 нг/мл антитіла (ФІГ. 12А). Для експериментів з конкуренції вибирали цю концентрацію. ОХ40І-Пад також продемонструвало дозозалежное зв'язування з клітинами Ниї78-пОХ40 (ФІГ. 128). 0491) У конкурентному аналізі зв'язування тар 1А7.9г.1 проти ОХ40 людини з клітинами
Ниї78-пОХ40 зменьшувалося по міре зниження концентрації ОХ40І-Пад (ФІГ. 120). На противагу цьому, присутності контрольного ОК5-Пад не впливало на зв'язування тар 1ТА7.9г.1 (ФІГ. 1203), указуючи на те, що зв'язування ОХ401Ї. з клітинами Ниї78-0ОХ40 було специфічним. Ці дані продемонстрували, що ОХ40. конкурує з тар Т1А7дг1 проти ОХ40 людини за зв'язування з пОХ40 на клітинах Ниї78-0ОХ40. В аналогічних експериментах для З3С8.дг5 також спостерігали конкуренцію за зв'язування з ОХ401.
Матеріали та методи ІМ
І0492| Фармакокінетична (ФК) оцінка антитіла проти ОХ40 на мишах. Самкам мишей
Вб.СВ17-Рікасзесів/52У (п-12 тварин/групу) давали єдину В/В ін'єкцію ІЇДС1 1А7.д9/1 (МОХРКО916) в дозі 1 мг/кг або 10 мг/кг на добу 0. Кожній миші давали об'єм дози 5 мл/кг (доза 1 мг/кг була в
Зо концентрації 0,2 мг/мл; доза 10 мг/кг була в концентрації 2 мг/мл). Зразки крові (125-150 мкл) відбирали у кожної тварини шляхом пункції сердця (3 моменти часу на тварину; З тварини на момент часу) через 5 хвилин; 1, 3, 8, та 24 години та 2, 4, 7, 10, 14, 21 та 28 діб після введення дози. Для дослідження не відбирали зразки перед введенням дози. Зразки збирали у пробірки, що містять пробірки для відділення сироватки, та обробляли як описано нижче. 0493) При температурі зовнішнього середовища протягом щонайменше 20 хвилин перед центрифугуванням давали можливість зразкам утворити згусток. Центрифугування починали у межах 1 години після відбору при відносній віддентрованої силі 11000 оборотів у хвилину протягом 5 хвилин у центрифузі, налаштованій на підтримання 22С-82С. Відділену від крові сироватку переносили у попередньо марковані пробірки на 0,5 мл з кришками. Зразки до аналізі зберігали у морозильнику, налаштованому на -8026. 0494) Аналізували 1А7.д911 Ід01 за допомогою стандартного ІФА з використанням в якості захоплюючого реактиву антилюдських ІдсС барана та в якості реактиву для виявлення антилюдського ДО козла з пероксидазою хріну (НКР). Ефективну межу виявлення (00) для цього аналізу складала 0,08 мкг/мл. 0495) Для кожної тварини аналізували дані концентрації у сироватці у порівнянні з періодом часу з використанням моделі болюсного В/В введення та рідкісного відбору зразків (модель 201), М/пМопіїп Рго, версія 5.2.1, (Ріагзідчнї Согрогайоп; м. Маунтин-Вью, штат Каліфорнія). Всі аналізи ФК базувалися на необробленому пулі даних окремих тварин. Для оцінки конкретних параметрів ФК застосовували наступні методи: Стах (максимальна концентрація), А!йс ав (площа під кривою концентрації сироватки у порівнянні з періодом часу від моменту часу - 0 до моменту часу останньої вимірюваної концентрації розраховували з використанням лінейного правила трапецій), АОСтії (площа під кривою концентрації сироватки у порівнянні з періодом часу, екстрапольованим до нескінченності), Стах/О (доза, нормалізована до Стах), АОсСіп/О (доза, нормалізована до Ас), СІ. (кліренс; Доза/АОсіп), М55 (об'єм розподілу у рівноважному стані) та |/2»,А; (кінцевий період напіввиведення).
Результати ІМ 0496) Після введення 1 та 10 мг/кг спостерігали ФК, які були пропорціональними дозі Ід1 1ТА?7.д (ФІГ. 13). Параметри ФК зведені в табл. 13 нижче.
Таблиця 13
Параметри ФК
Ї0497| Для Л1А7.9гІ1 у мишей ЗСІО, що не несуть пухлини, спостерігали лиінійну пропорціональну дозі ФК. Ці дані дають можливість припустити, що фармакокінетика Ідс1 1ТА7.дІ1 она рівнях досліджених доз була очікуваною для неперехресно реактивного моноклонального антитіла Їде1 людини у мишей та підобна такій для типових моноклональних антитіл ДО1.
Матеріали та методи М (0498) Пілотні 4-тижнівні дослідження токсичності на яванських макаках. Носій (10 мМ ацетату гістидину, б 95 сахарози, 0,02 95 твін 20, рН 5,8) або Ідс1 1А7.дг1 внутрішньовенно вводили по 0,01, 0,3 або 10 мг/кг/і дозу самцям яванських макак. Режими дозування складали один раз кожні 2 тижні для трьох доз (що вводяться на добу 1, 15 та 29). Кінцевий розтин виконували через три доби після введення останньої дози. Кінцеві точки безпеки включали: клінічні та добові спостереження, клінічну патологію, коагуляцію, аналіз сечі, макроскопічний та мікроскопічний аналіз, токсикокінетику (ТК) та титри антитіл проти терапевтичних засобів (АТА).
Фармакодинамичні (ФД) аналізи включали цитокіни сироватки, активацію/проліферацію/виснаження популяції Т-клітин та зайнятість рецепторів ОХ40.
Ї0499| Кров збирали шляхом пункції вен. Додаткові зразки крові отримували (наприклад, завдяки згортанню несироваткових зразків), якщо не перевищувалася допустима частота збору зразків та об'єм крові. Якщо інші типи зразків відбирали у той же час, що і зразки для ЕАСЗ5 та
ФД, то такі зразки відбирали після пункції вен з наступним відбором зразків для ЕАС5 та ФД.
Сечу збирали шляхом дренажу зі спеціальних підставок з нержавіючої сталі у клітках. Після збору зразки передавали у відповідну лабораторію для обробки. Зразки крові переробляли у сироватку, а сироватку аналізували на різні клініко-хімічні параметри. 0500) Окремі клініко-хімічні значення аналізували за допомогою аналізатора ОГУМРОБФ аиб4бе. Вміст С-реактивного білка (СЕР) виміряли методом імунотурбідіметрії.
ЇО5О1| Для аналізу вмісту цитокінів у вказані моменти часу збирали зразки крові з антикоагулянтом К2-ЕДТК. Після центрифугування до проведення аналізу плазму збирали та зберігали при -80 "С. Рівні цитокінів визначали з використанням технології аналізу Ї ОМІМЕХФ
Зо ХМАРФ (І итіпех, м. Остин, штат Техас), технологія мультиплексування на основі використання гранул, яка дає можливість одночасного кількісного визначення багатьох цитокінів. Зразки аналізували з використанням планшетного набору з магнітними гранулами для визначення цитокінів тваринних приматів МІСІРГЕХ? МАР (ЕМО Мійіроге, м. Білерика, штат Масачусетс) у відповідності з протоколом виробника. Стандарт містив суміш рекомбінантних ССЗЕ, СМО5Е,
ІФНУ, ІЛІбета, ІІ га, ІЛ2, ІЛ4, ІЛ5, ІЛб, ІЛВ8, ІЛІТО, ІЛІ2/23р4а0, ІЛІ13, ІЛІ15, ІЛІ17А, ІЛ18, МОРІ,
МІРТальфа, МІРІТбета, 50040, ТоБальфа, ФНОальфа та ФРЕС. Діапазони стандартних кривих складали 4,6-3000 пг/мл для ІЛа4; 11,6-7500 пг/мл для ІЛІ1О та ІЛІ18 та 2,3-1500 пг/мл для всіх інших цитокінів. Зразки плазми розбавляли 1:3 з наступними трьома серійними розведеннями 122 у 96-лункових планшетах та добавляли суміш кон'югованих з антитілом флуоресцентних гранул, специфічних до кожного цитокіну. Планшети інкубували протягом 30 хвилин при кімнатній температурі з наступною інкубацією протягом ночі при 49С. На наступний день до зразків добавляли сумішь біотинільованих виявляємих антитіл та планшети інкубували протягом 1 години при кімнатній температурі з наступною З30-хвилинною інкубацією зі стрептавідином-фікоеритрином. Потім оцінювали сигнали флуоресценції з використанням приладу ГОМІМЕХФ РІ ЕХМАР 30 з інтенсивністю сигнала фікоеритрину, відповідної кількості присутнього цитокіну. Концентрації цитокінів в сироватці визначали п'яти-параметричним підбором стандартних кривих для кожного білка.
ІЇ0502| Концентрацію Ідс1 ТА7.дг1 у сироватці макак аналізували з використанням стандартного ІФА. В якості захоплюючого реактиву використовували антилюдський Ідс барана (НА) (абсорбований організмом макака), а в якості реактиву для виявлення використовували антилюдський до козла (НІ), кон'югований з пероксидазою хріну (НЕР).
0503) Зразки крові для аналізів зайнятості рецепторів з використанням проточної цитометрії відбирали протягом усього дослідження. Для аналізу проточної цитометрії забарвлюючих поверхневих маркерів (наприклад, рецептора ОХ40) готували суміші антитіл для кожного забарвлюючого набору у кожний день дослідження. Відповідну аліквоту суміші розподіляли у позначених лунках 9б-лункового планшета з глибокими лунками. Для кожної тварини у відповідні лунки, що містять забарвлюючу суміш, переносили та змішували в них 100 мкл зразка цільної крові. Забарвлену кров інкубували у темноті при температурі оточуючого середовища протягом мінімум 30 хвилин. Червоні клітини крові лізували за допомогою 1,8 мл 1Х розчину ВО
ЕАСЗ І узе (ВО Віозсіепсе5) протягом щонайменше 6 хвилин при кімнатній температурі. Зразки центрифугували, видаляли аспірацією та відкидали супернатант. Осади клітин промивали двічі 18 мл НВБ55. Після другого промивання кожний зразок ресуспендували у 300 мкл 1 95 параформальдегіду. Кожний зразок (200 мкл) переносили у відповідні лунки 96б-лункового планшета з О-подібним дном для отримання даних на проточному цитометрі ВО БАС5 Сапіо ІІ.
Аналіз даних проводили з використанням програмного забезпечення ЕБАС5 Оіма (ВО
Віозсіепсез). Лімфоцити ідентифікували на основі профілю Е5С/55С, а Т-клітини визначали у гейтах як СОЗ3-/550м, Наступний ієрархічний розподіл у гейтах СОЗТ-клітин використовували для ідентифікації та підрахунку кожного з піднаборів Т-клітин. Зайнятість ОХ40 на бо03-004-008-Тп-лімфоцитах оцінювали з використанням флуоресцентно міченого досліджуваного препарату (антитіла проти ОХ40), який не зв'язується з ОХ40 у присутносій введеного досліджуваного препарату. В якості ізотипного контролю для 1ТА7.9г1 використовували нерелевантне гуманізоване антитіло Ідс1. Фракцію Т-клітин, які були позитивними вище показника ізотипного гейта, класифікували як 96ОХ40-- клітини.
ЇО504| План дослідження зведений в табл. 14 нижче.
Таблиця 14
План пілотного дослідження на токсичність
Група Кть само Досліджуваний Доза (мг/кг) Ймовірна Стах Ймовірна Соц макак препарат (95 зайнятості) | (95 зайнятості) 117171111714 1111711 нНосій 07171117 -1Ї111- 0,2 мкг/мл 0,05 мкг/мл 200 мкг/мл 60 мкг/мл 0505) Дослідження на токсичність згідно належної лабораторної практики (СІ Р). Носій (20
ММ ацетату гістидину, 240 мМ сахарози, 0,02 95 полісорбату 20, рН 5,5) або Ідс1 1А7.д9г1 вводили шляхом внутрішньовенного болюса по 0,5, 5 або 30 мг/кг/ дозу самцям та самкам яванських макак (п'ять самців та п'ять самок на групу). Режими дозування складали один раз кожні 2 тижні протягом шести тижнів для всіх з чотирьох доз (що вводять на добу 1, 15, 29 та 43). Тварини основного дослідження призначалися для кінцевого розтину на добу 45. Тварини, призначені для розтину після відновлення, проходили 6 тижнів відновлення після останнього введення дози та піддавалися розтину на добу 85. Кінцеві точки безпеки включали: клінічні та добові спостереження, клінічну патологію, коагуляцію, аналіз сечі, макроскопічний та мікроскопічний аналіз, токсикокінетику (ТК), титри антитіл проти терапевтичних засобів (АТА),
СМ безпеки фармакологічних та нейрологічних оцінок. Фармакодинамичні (ФД) аналізи включали цитокіни сироватки, активацію/проліферацію/виснаження популяції Т-клітин та зайнятість рецепторів ОХ40 (периферичних та тканинних).
Ї05О6| Кров збирали шляхом пункції вен. Перед відбором крові збирали сечу з/шляхом дренажу зі спеціальних підставок з нержавіючої сталі у клітках протягом ночі на танучий лід.
Після збору зразки передавали у відповідну лабораторію для обробки. Тварин обмежували у прийомі їжі перед відбором крові на клініко-хімічні дослідження.
ЇО507| Концентрацію Ідс1 ЛТА7.дг1 у сироватці макак аналізували з використанням стандартного ІФА. 0508) Зайнятість рецепторів визначали шляхом оцінки зв'язування АЕб647-міченого 1А7.д9г1 на СО3-С204--Т-хелперних лімфоцитах методом проточної цитометрії. Коротко, добавляли 100 мкл цільної крові або суспензій однакових клітин у відповідні лунки 9б-лункового планшета об'ємом 2,2 мл/лунку, наповнені 1,8 мл свіжоприготованого розчину РПпапт Гузе. Зразки перемішували у лунці та інкубували протягом 20 хвилин при кімнатній температурі. Після лізису зразки центрифугували, супернатанти відкидали та зразки промивали один раз за допомогою 1,8 мл НВЗ5. Після промивання клітини блокували у 100 мкл 10 95 сироватки яванського макака та інкубували протягом мінімум 15 хвилин у темноті в холодильнику, налаштованому на підтримання 2-82С. Після етапу блокування у відповідні лунки на планшеті добавляли відповідні об'єми суміші антитіл, вміст планшета змішували та потім інкубували протягом мінімум 30 хвилин у темноті в холодильнику, налаштованому на підтримання 2-82С. Після інкубації планшет промивали двічі 1,8 мл НВБ55, а зразки ресуспендували в 300 мкл 195 параформальдегіду та інкубували протягом 10-15 хвилин у темноті в холодильнику, налаштованому на підтримання 2-82С. Після інкубації 200 мкл кожного зразка переносили у 96- лунковий планшет з лунками з му-подібним дном та аналізували на цитометрі. Прилад проточного цитометра давав дані з відносної поширеності типів клітин з маркерними антигенами. Зразки аналізували із застосуванням проточного цитометра ГАСЗСапіо "м || та програмного забезпечення ОІМАФ 6.0. Дані, отримані для кожної тварини у кожний момент часу після отримання дози, порівнювали з відповідним значенням попереднього дослідження, а також діапазоном контрольних значень. Величину збільшення або зменшення оцінювали у другу чергу для визначення потенційної біологічної значимості будь-якої зміни, що спостерігається.
ЇО50О9| Рівні МСР-1 вимірювали валідованими методами на основі ГОМІМЕХФ.
Мультиплексний сендвіч-імуноаналіз на основі гранул являє собою твердофазний аналіз білка, в якому в якості твердої підкладки використовуються спектрально кодовані гранули, кон'юговані зі специфічними до речовини, що аналізується, імобілізованими антитілами. До лунок добавляли стандарти та зразки та присутня речовина, що аналізується (цитокін), зв'язана специфічним імобілізованим антитілом, кон'югувала з кодованою кольором гранулою (кожна кольорова гранула є специфічною до 1 цитокіну). В аналізі система виявлення представляла собою стрептавідин, кон'югований з флуоресцентним білком, К-фікоеритрином або стрептавідин-фікоеритрином (стрептавідин-КРЕ), змішана зі специфічними до речовини, що
Зо аналізується, біотинільованими антитілами для виявлення. Вміст кожної лунки мікропланшета затягувалося у прилад Гитіпех. Шляхом моніторингу спектральних властивостей гранул та кількості зв'язанної з КРЕ флуоресценції одночасно визначали концентрації кількох речовин, що аналізуються. Для осадження дебрису зразки центрифугували. Лунки 96б-лункового фільтрувального планшета для множинного скринінгу промивали 200 мкл буферного розчину для промивання. Потім переносили стандарти, зразки контролю якості (ОС) та зразки (25 мкл) у відповідні лунки, що містять 25 мкл буферного розчина для аналізу з наступним додаванням 25 мкл відповідного робочого розчину з антитілами на гранулах. Планшет інкубували у темноті при кімнатній температурі на струшувачі для планшетів, налаштованому на сильне струшування протягом 2 годин (ж 5 хвилин), потім промивали двічі 200 мкл буферного розчину для промивання з наступним додаванням до кожної лунки 25 мкл антитіл для виявлення. Планшет інкубували у темноті при кімнатній температурі протягом 1 години (42 хвилини) на струшувачі для планшетів, налаштованому на сильне струшування. Потім до кожної лунке планшета добавляли 25 мкл робочого розчину робочого стрептавідину-КРЕ та планшет інкубували у темноті при кімнатній температурі протягом 30 хвилин (4-1 хвилина) на струшувачі для планшетів, налаштованому на сильне струшування. Після промивання планшета двічі 200 мкл буферного розчину для промивання, до кожної лунки добавляли 150 мкл проточної рідини та планшет інкубували при кімнатній температурі протягом щонайменше 5 хвилин у темноті на струшувачі для планшетів, налаштованому на сильне струшування. Планшет зчитували на системі Гитіпех. Стандарти МСР-1 макака готували в аналітичному розчиннику, покриваючи
БО діапазон концентрацій від 37500 до 6000 пг/мл. Значення ОО та ШІ 00) аналізу складали від 75,00 до 6000 пг/мл. Зразки ОС МСР-1 макака готували в аналітичному розчиннику у теоретичних концентраціях 200, 1000 та 3200 пг/мл. У доповнення до цього ендогенним ОС (ЕОС) був розміщений у планшеті чистий зразок, що знаходився у діапазоні кривою.
ЇО510| План дослідження зведений в табл. 15 нижче.
Таблиця 15
План дослідження на токсичність згідно СГ Р
К-ть тварин на
К-ть й - К-ть тварин на й .
Досліджуваний Доза . | кінцевому розтині
Група яванських кінцевому розтині : й отеоондм водо, В ІНТЕ, ВИНИ, доба 85 11111 БРБМО |носій/////// 1770 | ЗМ | 7 2Р2М0 1А7.9г
Результати У
Пілотне дослідження токсичність
ІЇО511| Метою цього дослідження була оцінка токсичності, токсикокінетичного профілю та фармакодинаміки антитіла проти ОХ40 (19051 1А7.д4911) при введенні шляхом внутрішньовенної ін'єкції яванським макакам один раз кожні 2 тижні (доба 1, 15 та 29) для всіх З доз. 0512) Внутрішньовенне введення Ідс1 Т1А7.9г1 добре переносилося яванськими макаками аж до 10 мг/кг один раз кожні 2 тижні протягом 4 тижнів та всі тварини доживали до запланованого розтину. Спостерігали мінімальні збільшення рівня с-реактивного білка (СЕР) (ФІГ. 14А та В) з тимчасовими збільшеннями рівня СКР, які обмежувалися трьома АТАх макаками, головним чином у групі, що отримувала високу дозу (10 мг/кг). Подібним чиномтимчасові збільшення у змішаному піднаборі цитокінів (ФІГ. 15А та В) обмежувалися трьомя АТАх макаками, головним чином у групі, що отримувала високу дозу (10 мг/кг). У решти
АТАж або АТА- тварин не спостерігалося клінічних патологічних змін або підвищення рівнів цитокінів. Не спостерігали збільшення рівня ІФНУу, як очікувалося у відсутності антигенної стимуляції. 0513) Дія підтверджувалася у всіх тварин шляхом вимірювань ФК у сироватці (ФІГ. 16А) та зайнятості периферичних рецепторів (ФІГ. 168). Значення Стах дози першого циклу було пропорційним для всіх трьох груп. На базі АОСО-14 при дозі 10 мг/кг ФК знаходилося на очікуваному для антитіла Ідс1 рівні. Високу частоту появу АТА спостерігали: у З з 4 тварин у групах, що отримували 0,01 та 0,3 мг/кг, та у 2 з 4 тварин у групі, що отримувала 10 мг/кг. Вплив зменшувався з концентрацією у сироватці та зайнятістю рецепторів. Дані результати продемонстрували, що В/В введення 1А7.9г11 добре переносилося яванськими макаками у вказаній схемі дозування.
Дослідження на токсичність згідно СІ Р
І0514| Метою Сі Р-дослідження на токсичність було визначення токсичності ТА7.дг1 у яванських макак, яким внутрішньовенно вводили дози 0, 0,5, 5 та 30 мг/кг/дозу на добу дослідження 1, 15, 29 та 43 з наступними 42 добами без введення доз (період відновлення).
Зо 0515) Внутрішньовенне введення ІдсС1 ТА7.дг1 добре переносилося яванськими макаками аж до 30 мг/кг один раз кожні 2 тижні протягом б тижнів та всі тварини доживали до запланованих моментів часу розтину на добу 45 та 85. Спостерігалася очікувана пропорційна
ФК для антитіла Ідс1 (ФІГ. 17). Дія та зайнятість рецепторів підтримувалася на рівні дози 30 мг/кг (ФІГ. 18). АТА виявляли у всіх тварин на рівнях доз 0,5 та 5 мг/кг із втратою дії та зайнятості рецепторів, але не на рівні дози 30 мг/кг. У тварин, що отримували середні дози, спостерігали тимчасове повищення рівня МСР-1 (ФІГ. 19). Не спостерігали ні статистично значимої активації або проліферації периферичних Т-клітин (ФІГ. 20), ні будь-якого значимого зниження абсолютних кількостей периферичних Т-клітин. 0516) На закінчення після першої дози не спостерігали клінічних спостережень або змін параметрів клінічної патології. Після введення 20ї дози, ймовірно через АТА (співставних у обох дослідженнях), спостерігали гострі реакції після дози та тимчасові збільшення рівнів гострофазних білків та цитокінів. Не відмічали зв'язані з введенням лікарських речовин зміни маси органів, макроскопічних або мікроскопічних даних. АТА виявляли у всіх тварин у групах, що отримували дози 0,5 та 5 мг/кг (але не 30 мг/кг) із втратою дії та зайнятості рецепторів.
Виявлено, що 1А7.9дг1 зв'язує ОХ40 людини з високою афінністю (0,45 нМ) та ФК, як очікувалося, була типовою для ІдС1 та пропорціональною дозі. Ці дані переносяться на параметри для організму людини Сі -2,5 мл/добу/кг та М/2 -3 тижнів. Не спостерігалося значимих впливів ФД на кількість або стан активації Т-клітин у тканинах або на периферії.
Оскільки ОХ40 тимчасово експресувався лише в активованих Т-клітинах, а здорові яванські макаки будуть мати знехтувано малу кількість активованих Т-клітин, то не дивно, що відсутня значима активація або проліферація периферичних Т-клітин та відсутні значимі зміни в абсолютних кількостях периферичних Т-клітин.
ІО517| Хоча вищевикладений винахід було детально описано шляхом ілюстрації та прикладу у цілях ясності розуміння, описання та приклади не повинні бути витлумачені як обмежуючі обсяг цього винаходу. Розкриття всієї патентної та наукової літератури, процитовані у цьому документі, явно включені в нього у повному обсязі шляхом посилання.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 Сепепгресі, Іпс.
РО, Спапдаспип
КІМ, Ссеопд 2НО, діпд
ВЕУЕВ5, аск «1205 АНТИТІЛА ПРОТИ ОХ40 ТА СПОСОБИ ЇХ ЗАСТОСУВАННЯ «130» 146392029140 «1405 Ще не призначений «1415 Узгожено з цим документом «1505 75 61/973193 «1515 2014-03-31
Зо «1505 705 61/989448 «1515 2014-05-06 «1505 785 62/073873 «1515 2014-10-31 «1505 75 62/080171 «1515 2014-11-14 «1605 209 «1705 РБавЕе5ЕО для Міпдомжв, версія 4.0 «21051 «2115 249 «2125 ПРТ «213» Ношо зарієепь «4005 1
Тец Нів Сув Уаії с1у Авр ТПг Туг Рго Бек Авп Авр Агуд Сув Сув Нів 1 в; 10 15 бі Сув Акд Рго с1у Авп сіу Меє Уаі Бек Агуд Сув Бест Агд бек біп 20 25 30
АвпоТПг Уаї Сув Агд Рго Сув біу Рго б1у Рпе Туг Авп Авр Уа1! Уаї 35 40 45
Ззек бек Пув Рго Сув Пув Рго Сув ТПг Ткгр Сув АБп Гец Агуд бек 01Уу 0) зо (216) зек біц Акд Гуз біп Тейп Сув ТПг Аза ТПг о біп Авр ТПг Уа1ї! Сув Агд 65 70 75 во
Сув Акуд Аї1а сіу ТПг біп Рго Гей Авр Бек Тук Ппув Рго біу Уаі Авр 60 85 90 95
Сув Азїа Рго Сув Рго Рго сіу Нів Рпе бек Рго с1іу Авр АвБп біп А1а
100 105 110
Сув Кпув Рго Тер ТПг Авп о Сув ТПпг Гей Аїа сіу Ппув Нів ТПг Іец сіп 115 120 125
Рго Аза бек АвБп бек бек Авр Аїа І1е Сув бій Авр Агуд АвБр Рго Рго 130 135 140
Аза ТПг біп Рго біп б1іцш Тбпг біп б1у Рго Рго Аїа Агуд Рго Ії1е ТЕГ 145 150 155 160
Ууаї біп Рго ТПг бій Аза Тер Рго Акуд ТБг бек біп б1у Рго бек ТПг 165 170 175
Агуд Рго Уаі біц Уаї Рго сіу б1у Акуд Аїа Уаії Аї1а Аза І1е Іецч с1Уу 180 185 190
Тец б1у Гей Уаії Ге с1іу Гей Гей с1іу Рго Гей Аїа І1ї1е Гец Іецй А1а 195 200 205
Тецп Тук Гей Гей Агуд Агуд Авр біп Агуд Гей Рго Рго Авр Аїа Нів Гу 210 215 220
Рго Рго біу біу біу бек Рпе Агд ТПг Рго І1е сіп бій бі сбіп Аї1а 225 230 235 240
Авр Аза Нів бек ТПг Іецп Аїа Гув5 І1е 245 «2105 2 «2115 5 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність
Зо «4005 2
Авр Бек Тук Меє 5ег 1 5 «2105 З «2115 17 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 З
Авр Меє Тукг Рго Авр Авп об1іу Авр бек бек Тук Авп біп Гпув Робе Агд 1 в) 10 15 січ «2105 4 «2115 8 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 4
Аза Рго Агуд Тер Тук РПе бек Уаї 60 1 5
«2105 5 «2115 11 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 5
Акуд Аза бек біп Авр І1е Бек Авп Туг ГІец Авп 1 5 10 «2105 6 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 6
Тук ТПг Бек Агд Гец Агд 5ег 1 5 «2105 7 «2115 9
Зо «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 7 біп бі1іп сб1у Нів ТПг Гей Рго Рго ТПг 1 5 «2105 8 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 8
Авр Аїа Тук Меє 5ег 1 5 «2105 9 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 60 «223» Синтетична послідовність
«4005 9 біц бек Тук Ме 5ег 1 5 «2105 10 «2115 17 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 10
Авр Меє Туг Рго Авр АвБп Аза Авр бек бек Туг АБп о біп Пув Ріе Агд 1 5 10 15 сіц «210511 «2115 17 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 11
Зо Авр Меє Туг Рго Авр АвБп Аза Авр Аїа бек Туг АБп о біп Пув Ріе Агд 1 5 10 15 сіц «2105 12 «2115 17 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 12
Авр Меє Туг Рго Авр АвБп о с1іу Авр Аїа бек Туг АБп о біп Пув Ріе Агд 1 5 10 15 сіц «2105 13 «2115 17 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 13 (516) Авр Меє Туг Рго Авр бек с1у Авр бек бек Туг АБп о біп Пув Ріе Агд 1 5 10 15 сіц «2105» 14 «2115 17 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 14
Авр Меє Тукг Рго Авр Авп обіу бек бек бек Тук Авп біп Гув Рпе Агд 1 5 10 15 сіц «2105 15 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 15
Аза Рго Агуд Тер Туг Рое б5ег Аїа 1 5 «2105 16 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 16
Аза Рго Агуд Тер Туг А1їа бек Уаї 1 5 «2105 17 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 17
А1а Рго Акуд Тгр А1а Ріре бек Уаї 1 5 «2105 18 (516) «2115 8 «2125 ПРТ
«2135 Штучна послідовність «223» Синтетична послідовність «4005 18
Аза Рго Аїа Тгр Тук РПе бек Уаї 1 5 «2105 19 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 19
А1а Рго Акуд Тер Туг Рпе Аїа Уаї 1 5 «2105 20 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 20
Аза Рго Агуд Аїа Тук РПе бек Уаї 1 5 «2105 21 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 21
Аза Аза Агуд Тер Тукг РПе бек Уаї 1 5 «2105 22 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 22 біп бі1іп сб1у Нів ТПпг Гей Рго Аїа ТПг 60 1 5
«2105 23 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 23 біп бі1іп сб1у Нів ТпПг Аїа Рго Рго ТПг 1 5 «2105 24 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 24 біп бі1іп сб1у Аза ТПг Гей Рго Рго ТПг 1 5 «2105 25 «2115 9
Зо «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 25 біп бі1іп сб1у Нів Аза Гей Рго Рго ТПг 1 5 «2105 26 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 26 сбіп біп Аїа Нів ТБг Гей Рго Рго ТПг 1 5 «2105 27 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205
Гс10) «223» Синтетична послідовність
«4005 27 біп бі1іп сб1у Нів ТПпг Гей Аза Рго ТПг 1 5 «2105 28 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 28 сіп Аїа с1у Нів ТПг Гей Рго Рго ТЕПг 1 5 «2105 29 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 29
Ап оТук Ггец І1е с1ци 1 5 «2105 30 «2115 17 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 30
Уаї І1їе Авп Рго сіу Бек с1іу Авр ТПг Тук Тук бек біц Гуз РпПе Гу 1 5 10 15 сову «2105 31 «2115 17 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 31
Уаї І1їе Авп Рго сіу Бек сіу Авр Аїа Тук Тук бек біц Гув РпПе Гу 1 5 10 15 сову 60
«2105 32 «2115 17 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 32
Уаї І1їе АвБп Рго сіу бек б1у Авр біп Тук Тук бек бій Гпув Роре Гув 1 5 10 15 сову «2105 33 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 33
Авр Агд ТГеч Авр Туг 1 5 «2105 34
Зо «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 34
Аза Агд Гей Авр Туг 1 5 «2105 35 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 35
Авр Аїа Гей Авр Туг 1 5 «2105» 36 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність (516) «220» «223» Синтетична послідовність
«4005 36
Авр Агуд Аїа АБр Туг 1 5 «2105 37 «2115 11 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 37
Нів Аїа бек сбіп Авр І1е бек бек Туг І1е Уаї 1 5 10 «2105 38 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 38
Нів с1у ТБкг Авп Гец біц Авр 1 5 «2105 39 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 39
Нів сб1іу ТПкгЕ Авп Гец біц 5ег 1 5 «2105 40 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 40
Нів с1у ТПг Авп тей сіц сіц 1 5 «2105 41 (516) «2115 7 «2125 ПРТ
«2135 Штучна послідовність «223» Синтетична послідовність «4005 41
Нів сб1іу ТПкгЕ Авп Гец сбіц сіп 1 5 «2105 42 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 42
Уаї Нів Тук Аїа сіп Рібе Рго Тук Тіг 1 5 «2105 43 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 43
Аза Нів Тут Аза біп Рпе Рго Тук ТЕПг 1 5 «2105 44 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 44
Ууаї Аза Туг Аїа сбіп Робе Рго Тук ТЕГ 1 5 «2105» 45 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 45
Ууаї Нів Аза Аза сіп Робе Рго Тук ТЕГ
Гс10) 1 5
«2105 46 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 46
Уаї Нів Туг Аза Аза Робе Рго Тук ТЕГ 1 5 «2105 47 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 47
Уаї Нів Ту Аїа сбіп Аза Рго Тук ТЕГ 1 5 «2105 48 «2115 9
Зо «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 48
Уаї Нів Туг Аїа сіп Рбе Аза Тук ТЕГ 1 5 «2105 49 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 49
Уаї Нів Ту Аїа сіп Рбе Рго Аїа ТЕПг 1 5 «2105 50 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205
Гс10) «223» Синтетична послідовність
«4005 50
Авр Тук сіу Уаї Іей 1 5 «210551 «2115 16 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 51
Меє І1е Тер бек с1у біу ТПг ТБг Авр Туг Авп Аїа Аїа Рре І1е 5ег 1 5 10 15 «2105 52 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 52 сі бій Меє Авр Туг 1 5 «2105 53 «211511 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 53
Акуд Аза бек біп Авр І1е Бек Авп Рібе ГІец Авп 1 5 10 «2105 54 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 54
Тук ТПг Бек Агд Гец Нів 5ег 1 5 «2105 55 «2115 9 (516) «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність
«223» Синтетична послідовність «4005 55 біп бі1іп б1у Авп ТПг Гей Рго Тер ТЕГ 1 5 «2105 56 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 56 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 в) 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 с1у Авр Меє Тук Рго Авр Авп о біу Авр бек бек Туг Авп біп Ппув РБГе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув
Зо 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115
З5 «2105 57 «2115 107 «212» ПРТ 40 «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 45 «4005 57
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30 50 Тем АвБп оТгр Тук біп біп Гпув Ркго сбіу Ппув Аза Рго ГУу5 Іецй Гей Те
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1е Бек Бек Гей сбіп Рго 55 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 60
«2105 58 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 58 сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек бі1у Аї1а сіш Уаї пув Гув Рго с1у А1їа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! Тс І1е ТПпг Уаї Авр ТПг бек ТПг о бБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 59 «2115 107
Зо «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність
З5 «4005 59
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 40 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо 45 зек с1іу бек біу ТПгЕ Авр Рпе ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 50 100 105 «2105» 60 «2115» 117 55 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 60 «4005 60 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Уаії бек Сув Гув Аза Бек с1іу Тук ТПкг Рібе ТБг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тгр Уаі Агуд біп А1їа Рго сіу біп с1у Іеп бій Тер І1е 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уаї! ТБ ІТец ТПг Уаії Авр ТПг бек ТПг о бБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105» 61 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005» 61
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Зо Авр Агуд Уаі ТПг І1е ТПг Сув Агуд Аїа бек біп АвБр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 35 50 з9 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95 40 ТПЕ Рпе с1у біп сб1іу ТПг пув УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105 62 45 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 62 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек біу Туг ТПг Рібе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Туг АвБп обіп Гпув РІПе (516) 50 з9 бо
Акуд бій Агуд Уа! Тс І1е ТПпг Уаї Авр ТПг бек ТПг о бБег ТПг Аїа Туг
65 70 75 80
Тецп біц Гей бек Бек Гей Агуд Бек бій Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105» 63 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 63
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тс Сув Агуд Аза Бек біп Авр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув ТПг Уа1ї пуб Гец Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТпПг бек Агуд Гей Агуд бек біу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Тукг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго
Зо 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 64 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005» 64 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 в) 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 с1у Авр Меє Тук Рго Авр Авп о біу Авр бек бек Туг Авп біп Ппув РБГе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! Тс І1е ТПпг Уаї Авр ТПг бек ТПг о бБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 60
«2105» 65 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 65
Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек ІТецй бек Аза бек Уа1і с1Уу 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув ТПг Уа1ї пуб Гец Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агд бек біу Уаі Ркго Бек Агкд Ріе бег 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 сі Авр Рпе Аза ТПг Туг Туг Сув біп біп с1у Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105» 66 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність
Зо «2205 «223» Синтетична послідовність «4005» 66 сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек бі1у Аї1а сіш Уаї пув Гув Рго с1у А1їа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! Тс І1е ТПпг Уаї Авр ТПг бек ТПг о бБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 67 «2115 107 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 60 «4005 67
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тем АвБп оТгр Тук біп біп Гпув Рко біу Ппув ТПкг Уаї ГУув Іецй Ге Те 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу Гпув Авр Тук ТПг Іецй ТПг І11е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аза ТПг Тук Рпе Сув сбіп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105» 68 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005» 68 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Зо Тук Меє бек Тгр Уаі Агуд біп А1їа Рго сіу біп с1у Іеп бій Тер І1е б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе бо
Акуд бій Агуд Уа! Тс І1е ТПпг Уаї Авр ТПг бек ТПг о бБег ТПг Аїа Туг 35 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110 40 Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105» 69 45 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» 50 «223» Синтетична послідовність «4005» 69
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15 55 Авр Агуд Уаі ТПг І1е ТПг Сув Агуд Аїа бек біп АвБр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув ТПг Уа1ї пуб Гец Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У (516) 50 з9 бо зек сіу бек біу Гпув Авр Тук ТПг Іецй ТПг І11е Бек Бек Гей сбіп Рго
65 70 75 80 бі Авр Рпе Аза ТПг Тук Рпе Сув сбіп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 70 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 70 бі Маї біп Гей Уаі сбіп бек сіу Аїа біц Уаї Гув Гув Рго сС1у Аїа 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр Аї1а 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд сбіп Азїа Рго сб1у сіп с1у Гей бій Тер І1е 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Агуд бій Акуд Уа! Тс І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бБес ТпПг бек ТПг А1тїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Агкуд Тер Тукг Рібе бек Уаі Тгр с1у сбіп с1у ТПг Ієец
Зо 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 71 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 71
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТпПг бек Агуд Гей Агуд бек сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 бо «2105 72 «2115» 117
«212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 72 бі Маї біп Гей Уаі сбіп бек с1у Аїа біш Уа1 пув пув Рго с1у Аїа 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек біу Туг ТПг Рпе ТПг бій 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд сбіп Аза Рго сіу біп с1у ІїІей бій Тер І1е 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уаї Тс І1е ТПг Агуд Авр о Тс бек ТПг обег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї тец Аза Рго Акуд Тгр Туг Рібе бек Уаі! Тер сбіу сбіп с1у ТБбг Іеєц 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 73 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність
Зо «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 73
Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек Гей бек Аїа бек Уаі 1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго сіу Ппув Аїа Ркго Гув Іечп Ге Ше 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг Іїе бек бек Гец біп Рго 65 70 75 80 сі Авр Рпе Аза ТПг Туг Туг Сув біп сбіп с1іу Нів ТБг ТІецй Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіп біу ТЕ Гуз УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105 74 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 74 (516) сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек бі1у Аї1а сіш Уаї пув Гув Рго с1у А1їа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 с1у Авр Меє Тук Рго Авр АвБп Аза Авр бек бек Туг Авп біп Ппув РБГе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 75 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 75
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІТецй бек Аїа бек Уаїі с1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Зо Тем АБп оТгр Тук біп біп пуб Ркго біу Ппув Аза Рго ПУув Гецп Геч І1е
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1е бек бек Гец біп Рго 35 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 40 «2105 76 «2115» 117 «212» ПРТ 45 «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність 50 «4005 76 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30 55 Тук Меє бек Тгр Уаі Агуд біп А1їа Рго сіу біп с1у Іеп бій Тер І1е 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп Аза Авр Аїа бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг (516) 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув
85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 77 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 77
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек с1іу бек біу ТПгЕ Авр Рпе ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув
Зо 100 105 «2105 78 «2115» 117 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 78 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аза бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Аїа бек Тукг Авп біп Тув РБПе бо 50 Агуд бій Акуд Уа! Тс І1їе ТПг Агуд Авр ТБг обег ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 55 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 бо «2105 79 «2115 107
«212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 79
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Агуд Уаі ТПг І1е ТПг Сув Агуд Аїа бек біп АвБр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе с1у біп сб1іу ТПг пув УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105 80 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205
Зо «223» Синтетична послідовність «4005 80 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек сб1і1у Тук ТПг Рібе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр бек с1іу Авр бек бек Туг АвБп обіп Гпув РІПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп біцш Гей бек Бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї теп Аза Рго Акуд Тгр Туг Рібе бек Уа! Тер сбіу біп с1у ТПкг Іец 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 81 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 81 (516) Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек ІТецй бек Аза бек Уа1і с1Уу 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Суб Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТпПг бек Агуд Гей Агуд бек сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 82 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 82 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 в) 10 15 зек Уаії Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше
Зо с1у Авр Меє Тук Рго Авр Авп о біу бек бек бек Туг Авп біп Гпув Ріе бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп біц Гей бек Бек Гей Агуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув
З5 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 40 «2105 83 «2115 107 «212» ПРТ 45 «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність 50 «4005 83
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тс Сув Акуд Аза Бек біп Авр І1е бек Авп Туг 20 25 30 55 Тем АвБп оТгр Тук біп біп Гпув Ркго сбіу Ппув Аза Рго ГУу5 Іецй Гей Те 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агд Бек сіу Уаі Рго Бек Агкд Ріе бег 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго (516) 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Ні ТПг Іецй Рго Рго
85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105» 84 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 84 сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек бі1у Аї1а сіш Уаї пув Гув Рго с1у А1їа 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр Аї1а
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 20 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп Аза Авр Аїа бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80 25 Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег
Зо 115 «2105 85 «2115 107 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 85
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агд бек біу Уаі Рго бек Агд Рпе бег 01Уу бо 50 зек с1іу бек біу ТПгЕ Авр Рпе ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТБПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 55 100 105 «2105» 86 «2115» 117 бо «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність
«223» Синтетична послідовність «4005 86 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тгр Уаі Агуд біп А1їа Рго сіу біп с1у Іеп бій Тер І1е 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 87 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205
Зо «223» Синтетична послідовність «4005 87
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Агуд Уаі ТПг І1е ТПг Сув Агуд Аїа бек біп АвБр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Тукг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго А1а 85 90 95
ТПЕ Рпе с1у біп сб1іу ТПг пув УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105 88 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 88 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сіу Аїа сбіш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 (516) зек Уаії Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек біу Тукг ТП Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Азїа Рго сіу біп с1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Агуд бій Акуд Уа! Тс І1їе ТПг Агуд Авр ТБг обег ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105» 89 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 89
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е
Зо Тук Тук ТпПг бек Агуд Гей Агуд бек сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аза ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Аа Рго Рго
З5 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 40 «2105 90 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 45 «220» «223» Синтетична послідовність «4005 90 бі Маї біп Гей Уаі сбіп бек с1у Аїа бій Уаї Гуз Гув Рго сС1у Аїа 50 1 в) 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд сбіп Аза Рго сб1у сіп с1у Гей бій Тер І1е 35 40 45 55 с1у Авр Меє Тук Рго Авр Авп о біу Авр бек бек Туг Авп біп Ппув РБГе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уаї Тс І1е ТПг Агуд Авр оТБПг о бБег ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 60 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Агкуд Тер Тукг Рпе бек Уаі Тгр с1у сбіп с1у ТПг Ієец
100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 91 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 91
Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек ІТецй бек Аза бек Уа1і с1Уу 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 20 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 25 сі Авр Рпе Аза ТПг Туг Туг Сув біп сбіп с1у Аїа ТБг ТІецй Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105
Зо «2105 92 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність
З5 «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 92 сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек бі1у Аї1а сіш Уаї пув Гув Рго с1у А1їа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе бо
Акуд бій Агуд Уаї Тс І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80 50 Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Агкуд Тер Тукг Рпе бек Уа1і Тер сіу біп б1у ТПг Ієц 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 55 115 «2105 93 «2115 107 бо «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність
«223» Синтетична послідовність «4005 93
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек Гей бек Аза бек Уаі с1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тем АБп оТгр Тук біп біп пуб Ркго біу Ппув Аїа Рго Пув Гецп Геч І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг Іїе бек бек Гец біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів Аїа Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіп біу ТПг Гуз Уаї бій І1е Гув 100 105 «2105» 94 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність
Зо «4005 94 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тгр Уаі Агуд біп А1їа Рго сіу біп с1у Іеп бій Тер І1е 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 95 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 95
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15 (516) Авр Агуд Уаі ТПг І1е ТПг Сув Агуд Аїа бек біп АвБр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо
Ззек с1іу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп Аза Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105» 96 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 96 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе бо
Зо Агуд бій Акуд Уа! Тс І1їе ТПг Агуд Авр ТБг обег ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 35 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 40 «2105 97 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 45 «220» «223» Синтетична послідовність «4005 97
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 50 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45 55 Тук Тук ТпПг бек Агуд Гей Агуд бек сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гец Аїа Рго 60 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув
100 105 «2105 98 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 98 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек сб1у Тук ТПг Рібе ТПг Авр 5ег
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 20 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95 25 Уаї теп Аза Рго Акуд Тгр Туг Рібе бек Уа! Тер сбіу біп с1у ТПкг Іец 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115
Зо «2105» 99 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність
З5 «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 99 40 Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек ІТецй бек Аза бек Уа1і с1Уу 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 45 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 50 сі Авр Рпе Аза ТПг Туг Туг Сув біп Аза сіу Нів ТБг ТІецй Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 55 «2105 100 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 60 «2205
«223» Синтетична послідовність «4005 100 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 в) 10 15 зек Уаії Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рібе ТБг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 с1у Авр Меє Тук Рго Авр Авп о б1іу Авр бек бек Туг АБп біп Гпув Ріе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп біц Гей бек Бек Гей Агуд Бек бій Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Туг Рпе бек Аза Тгр сбіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 101 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність
Зо «4005 101
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тс Сув Агуд Аза бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тем АвБп оТгр Тук біп біп Гпув Ркго сбіу Ппув Аза Рго ГУу5 Іецй Гей Те 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек сіу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Тукг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 102 «2115» 117 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 102 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30 (516) Тук Меє бек Тгр Уаі Агуд біп А1їа Рго сіу біп с1у Іеп бій Тер І1е 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Пес бій Гец бек бек Гей Агуд бек бій Авр ТПг Аїа Уа1ї! Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тут Аїа бек Уаії Тер сі1у біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 103 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 103
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Аїа бек біп Авр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агд бек біу Уаі Рго Бек Акд Ріе бег 01Уу бо
Зо зек с1іу бек біу ТПгЕ Авр Рпе ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Ні ТПг Іецй Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув
З5 100 105 «2105 104 «2115» 117 40 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність 45 «4005 104 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 50 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо 55 Агуд бій Акуд Уа! Тс І1їе ТПг Агуд Авр ТБг обег ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Аїа Рпе бек Уаії Тгр сіу біп б1у ТПг Іецй (516) 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег
«2105 105 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 105
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Агуд Уаі ТПг І1е ТПг Сув Агуд Аїа бек біп Авр І1е бек Авп Туг
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агд бек біу Уаі Рго бек Агд Рпе бБег 01Уу 20 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТБг Гец Рго Рго 85 90 95 25 ТПЕ Рпе с1у біп сб1іу ТПг пув УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105» 106
Зо «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205
З5 «223» Синтетична послідовність «4005 106 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 40 зек Уаії Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек біу Тукг ТП Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 45 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї теп Аза Рго Аїа Тгр Туг Рібе бек Уа! Тер сбіу біп с1у ТПкг Іец 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 107 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 60 «2205
«223» Синтетична послідовність «4005 107
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТпПг бек Агуд Гей Агуд бек сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 108 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 108 бі Маї біп Гей Уаі біп бек с1іу Аїа сбіш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а
Зо 1 в) 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 с1у Авр Меє Тук Рго Авр Авп о біу Авр бек бек Туг Авп біп Ппув РБГе бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТБПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 40 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Туг Рпе Аза Уаї Тгр сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 45 «2105 109 «2115 107 «212» ПРТ 50 «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 55 «4005 109
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30 (516) Тем АвБп оТгр Тук біп біп Гпув Ркго сбіу Ппув Аза Рго ГУу5 Іецй Гей Те 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 сі Авр Рпе Аза ТПг Туг Туг Сув біп сбіп с1іу Нів ТБг ТІецй Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 110 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 110 сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек б1у Аїа сій Уаї Ппув Ппув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд сбіп Азїа Рго с1у сіп с1у Гей бій Тер І1е б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе бо
Акуд бій Агуд Уаї ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг о бБег ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Зо Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Агкуд Аза Тукг Ріе бек Уаі Тгр с1у сбіп с1у ТПг Ієец 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег
З5 115 «2105 111 «2115 107 40 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність 45 «4005 111
Авр І1е сіп Месє ТіПг о біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 50 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо 55 зек с1іу бек біу ТПгЕ Авр Рпе ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 60 100 105
«2105 112 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 112 бі Маї біп Гей Уаі сбіп бек с1у Аїа біш Уа1 пув пув Рго с1у Аїа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агуд сбіп А1їа Рго сіу сбіп сіу Іецп сі Тгр І1е 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уаї Тс І1е ТПг Агуд Авр о Тс бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гейш Аза Аза Агуд Тер Тукг Рпе бек Уаі! Тгр сі1у сбіп с1у ТПг Ієец 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 113
Зо «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205
З5 «223» Синтетична послідовність «4005 113
Авр І1е сіп Месє ТіПг о біп бек Рго Бек Бек Гей бБег Аза бек Уаі с1У 1 5 10 15 40 Авр Агуд Уаі ТПг І1е ТПг Сув Агуд Аїа бек біп АвБр І1е бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго сіу Ппув Аїа Ркго Гув Іечп Ге Ше
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 45 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг Іїе бек бек Гец біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе с1у біп сбіу ТПЕг Ппув Уаї січ І1їе Гув 100 105 «2105 114 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 60 «223» Синтетична послідовність
«4005 114 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе 50 55 бо
Агуд бій Акуд Уа! Тс І1їе ТПг Агуд Авр ТБг обег ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза гей Аза Рго Агд Тгр Тук Рібе бек Уаі Тгр с1у сбіп с1у ТПг Ієец 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 115 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 115
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецй бек Аїа бек Уаї с1У
Зо 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Ркго Гув Іечп Ге Ше 35 Тук Тук ТпПг бек Агуд Гей Агуд бек сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1е бек бек Гец біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 40 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіп біу ТПг Гуз Уаї сіц І1е Гув 100 105 45 «2105» 116 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 50 «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 116 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 55 1 в) 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 (516) с1у Авр Меє Тук Рго Авр Авп о біу Авр бек бек Туг Авп біп Ппув РБГе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уа! ТБ І1е ТПг Агуд Авр о ТБПг бек ТПг обБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї Аї1а Аза Рго Акуд Тгр Туг Робе бек Уа! Тер сбіу біп с1у ТПкг Іец 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105 117 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 117
Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек ІТецй бек Аза бек Уа1і с1Уу 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80
Зо сі Авр Рпе Аза ТПг Туг Туг Сув біп сбіп с1іу Нів ТБг ТІецй Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105
З5 «2105 118 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 40 «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 118 45 сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек бі1у Аї1а сіш Уаї пув Гув Рго с1у А1їа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 50 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Іїе ТПг Агуд Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80 55 Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 зек Бег 60
«2105 119 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 119
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30
Іїе Уаії Тер Тук біп сбіп Ппув Рго с1у їув Аїа Рго Ппув Геч Іецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 120 «2115» 114 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність
З5 «4005 120 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Туг Аза Робе ТБг АвБп Туг 20 25 30 40 Тем І1ї1е біц Тер Уаі Акуд біп Аїа Рго с1у сбіп с1у Те бій Тер Пе сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу Бек с1у Авр ТПг Тук Тук бек біп Ппув РПе бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Іїе ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 45 65 70 75 80
Тецп біц Гей бек Бек Гей Агуд Бек бій Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 50 Бек вБег «2105 121 55 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 60 «223» Синтетична послідовність
«4005 121
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Нів Аза Бек біп Авр І1е бек бек Туг 20 25 30
ІІе УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго бі1у Гув Азїа Рго Пув Гей Гей І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец біц Авр сіу Уаі Рго Бек Агкд Ріе бег 01Уу 50 55 бо зек с1іу бек біу ТПгЕ Авр Рпе ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аза ТПг Туг Тук Сув Уаї Нів Туг Аїа біп Рпе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 122 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 122 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг
Зо 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе бо 35 цув б1у Акуд Уаії ТпПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг А1тїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 40 100 105 110 зек Бег 45 «2105 123 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 50 «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 123
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 55 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30
ІІе УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго бі1у Гув Азїа Рго Пув Гей Гей І1е 35 40 45 (516) Тук Нів с1у ТБг Авп Ге бій Авр сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе с1у біп сб1іу ТПг пув УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105 124 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 124 бі Маї біп Гей Уаі біп бек с1іу Аїа сбіш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек біу Туг Аї1а Рпе ТПг Авп Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Іїе ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Зо А1а Агуд Авр Агуд тей Авр Тук Тер с1іу біп б1у ТПг Гей Уа1і ТіПг Уаї 100 105 110 зек Бег
З5 «2105» 125 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 125
Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек ІТецй бек Аза бек Уа1і с1Уу 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 сі Авр Рпе Аза ТПг Тугк Тук Сув Уаї Ні Тук Аїа біп Роре Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 60 «2105» 126
«2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 126 бі Маї біп Гей Уаі сбіп бек с1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у Аїа 1 в) 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сбіп Аза Рго сіу біп с1іу Гецй б1й Тгр Ше 35 40 45 сіу Маї І1їе Авп Рго сіу бек б1іу Авр ТПг Тук Тук бек бій Ппув РІГе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бБег ТПг Аза Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр біу біп сб1у ТПпг Гец Уаї! ТіПг Уаї 100 105 110 зек Бег «2105 127 «2115 107 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність
З5 «4005 127
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІТецй бек Аза бек Уаїі с1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30 40 Іїе Уаії Тер Тук біп сбіп Ппув Рго с1іу Пув бек Рпе Гуз с1у Геп Те
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1е Бек бек Гец біп Рго 45 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 50 «2105» 128 «2115» 114 «212» ПРТ 55 «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 60 «4005 128 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а
1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 зек Бег «2105 129 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 129
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг
Зо 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец біц бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо 35 зек с1іу бек біу ТПгЕ Авр Рпе ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 40 100 105 «2105 130 «2115» 114 45 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність 50 «4005 130 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Уаії бек Сув Гув Аза Бек с1іу Туг Аїа Робе ТБг АвБп Туг 55 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сбіу Бек сіу Авр ТПг Туг Тук бек біп Ппув РПе 50 55 бо (516) цув б1у Акуд Уаії ТпПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг А1тїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110
Бек вБег «2105 131 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 131
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Агуд Уаії ТПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е бек бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп Тїец бі бій с1у Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаії Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
Зо ТПЕ Рпе с1у біп сб1іу ТПг пув УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105 132
З5 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 40 «223» Синтетична послідовність «4005 132 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 45 зек Уаії Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек біу Туг Аї1а Рпе ТПг Авп Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
А1а Агуд Авр Агуд тей Авр Туг Тер с1іу біп б1у ТПг Гей Уа1і ТіПг Уаї 100 105 110 зек Бег 60 «2105 133
«2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 133
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1у ТБг Авп Гецш бій біп сіу Уа1і Ркго бБег Агд Рпе бек 1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аза ТПг Туг Тук Сув Уаії Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 134 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність
Зо «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 134 бі Маї біп Гей Уаі сбіп бек сіу Аїа біц Уаї Гув Гув Рго сС1у Аїа 1 в) 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 35 40 45 сіу Маї І1їе Авп Рго сіу бек б1іу Авр ТПг Тук Тук бек бій Ппув РІГе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Іїе ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 зек Бег «2105 135 «2115 107 «212» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 60 «4005 135
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У
1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу Азїа Авр Тук ТПг Іецй ТПг І11е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 сі Авр Рпе Аза ТПг Тугк Тук Сув Уаї Ні Тук Аїа біп Роре Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105» 136 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 136 сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек сі1у Аї1а сій Уаї Ппув Ппув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сбіп Аза Рго сіу біп с1у Іейп б1й Тгр Ше
Зо 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аза Туг 65 70 75 80
Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр с1у біп сіу ТБПг Гец Уаї! ТіПг Уаї 100 105 110 зек Бег «2105 137 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 137
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго Бек Бек Гей бек Аза бек Уаі с1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30
ІТІе УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Рго с1іу Ппув бек Рпе пуб Сс1іу Іецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо (516) Ззек б1іу бек біу А1ї1а Авр Тук ТПг Тецй ТПг І1їе бек бек Іецйц сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіп біу ТЕ Гуз УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105 138 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 138 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 Тем І1ї1е біц Тер Уаі Акуд біп Аїа Рго с1у сбіп с1у Те бій Тер Пе сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе бо пув б1у Акуд Уа1і ТПг Гей ТПг Агуд Авр о ТпПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 25 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110
Зо Бек вБег «2105 139
З5 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 40 «223» Синтетична послідовність «4005 139
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15 45 Авр Агуд Уаії ТПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е бек бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95 55 ТПЕ Рпе с1у біп сб1іу ТПг пув УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105» 140 60 «2115» 114 «212» ПРТ
«2135 Штучна послідовність «223» Синтетична послідовність «4005 140 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо цув б1у Акуд Уаії ТпПг Гей ТБПг Акуд Авр о ТБбПг бБес Тпг бек ТПг Аза Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 зек Бег «2105 141 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність
Зо «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 141
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Пув бек Рго Пув Гей Гей І1е 35 40 45
Тук Нів с1у ТБг Авп Ге бій Авр сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 142 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 142 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а (516) 1 в) 10 15 зек Уаії Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Туг Аза Робе ТБг Авп Туг
20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу Бек с1у Авр ТПг Тук Тук бек біп Ппув РПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уа1і ТПг Гей ТПг Агуд Авр о ТпПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп біц Гей бек Бек Гей Агуд Бек бій Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
А1а Агуд Авр Агуд тей Авр Туг Тер с1іу біп б1у ТПг Гей Уа1і ТіПг Уаї 100 105 110 зек Бег «2105 143 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 143
Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек ІТецй бек Аза бек Уа1і с1Уу 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е бек бек Туг 20 25 30
ІІе УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго б1у Гув Аїа Рпе Гпув Гей Гей І1е
Зо 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец біц Авр біу Уаі Рго Бек Акд Ріе бег 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 сі Авр Рпе Аза ТПг Тугк Тук Сув Маї Нів Туг Аїа сбіп Рре Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105» 144 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005» 144 сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек бі1у Аї1а сіш Уаї пув Гув Рго с1у А1їа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уа1і ТПг Гей ТПг Агуд Авр о ТпПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80 (516) Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 зек Бег «2105» 145 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005» 145
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 Іїе Уаії Тер Тук біп сбіп пув Рго с1у їув Аїа Рго Ппув с1у Іецй І1е
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 25 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105
Зо «210» 146 «2115» 114 «212» ПРТ 35 «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 40 «400» 146 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сіу Аїа сбіш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30 45 Тем І1ї1е біц Тер Уаі Акуд біп Аза Рго с1у сбіп с1у Те бій Тер Пе 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уа1і ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 50 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 55 Бек вБег «2105» 147 60 «2115 107 «212» ПРТ
«2135 Штучна послідовність «223» Синтетична послідовність «4005 147
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек с1іу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Аза Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105» 148 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність
Зо «4005» 148 бі Маї біп Гей Уаі сбіп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув Пув Рго с1у Аїа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг
З5 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сбіп Аза Рго сіу біп с1іу Гей біц Тер Ше сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе бо 40 цув б1у Акуд Уаії ТпПг Гей ТБг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тер біу біп сб1у ТПпг Геи Уаі! ТіПг Уаї 45 100 105 110 зек Бег 50 «2105» 149 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 55 «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 149
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІТецй бек Аїа Бек Уаї с1У (516) 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг
20 25 30
ІТІе УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Пув бек Рпе Ппув с1у Іецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1е Бек Бек Гец біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Аїа Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе с1у біп сб1іу ТПг пув УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105 150 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 150 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек біу Туг Аї1а Рпе ТПг Авп Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе
Зо 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95 35 А1а Агуд Авр Агуд тей Авр Туг Тер с1іу біп б1у ТПг Гей Уа1і ТіПг Уаї 100 105 110 зек Бег 40 «2105 151 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 45 «220» «223» Синтетична послідовність «4005 151
Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек ІТецй бек Аза бек Уа1і с1Уу 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 (516) сі Авр Рпе Аза ТПг Туг Туг Сув Уаії Ніз Аза Аза сбіп Роре Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 152 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 152 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 в) 10 15 зек Уаії Ппув Уаії бек Сув Гув Аза Бек с1іу Туг Аїа Робе ТБг АвБп Туг
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 20 сіу Маї І1їе Авп Рго с1іу бек б1у Авр ТПг Тугк Тук бек біц Ппув Ріе бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп біцш Гей бек Бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 25 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 зек Бег
Зо «2105 153 «2115 107 «212» ПРТ 35 «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 40 «4005 153
Авр І1е сіп Месє ТіПг о біп бек Рго Бек Бек Гей бБег Аза бек Уаі с1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е Тпг Сув Нів Азїа Бек біп Авр І1е бек бек Туг 20 25 30 45 Іїе Уаії Тер Тук біп сбіп Ппув Рго с1іу Пув бек Рпе Ппув с1у Іеч І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго Бек Акд Ріе бег 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 50 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаї Нів Туг Аза Аза Рібе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 55 «2105 154 «2115» 114 «212» ПРТ
Гс10) «213» Штучна послідовність
«223» Синтетична послідовність «4005 154 сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек бі1у Аї1а сіш Уаї пув Гув Рго с1у А1їа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 зек Бег «2105 155 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність
Зо «4005 155
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг
З5 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо 40 зек с1іу бек біу ТПгЕ Авр Рпе ТПг Гей ТіПг І1е бек бек Гей біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Аза Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 45 100 105 «2105 156 «2115» 114 50 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 55 «4005 156 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 60 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е
35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агд Тец Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110
Зек вег «2105 157 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 157
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Агуд Уаії ТПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е бек бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У
Зо 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Аїа Туг 85 90 95 35 ТПЕ Рпе с1у біп сб1іу ТПг пув УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105 158 40 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» 45 «223» Синтетична послідовність «4005 158 бі Маї біп Гей Уаі сбіп бек с1у Аїа бій Уаї Гуз Гув Рго сС1у Аїа 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек біу Туг Аї1а Рпе ТПг Авп Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сбіп Аза Рго сбіу біп с1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1у Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аза Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95 (516) А1а Агуд Авр Агуд тей Авр Тук Тгр сіу біп с1іу ТПг Те Уаї ТПг Уаї 100 105 110 зек Бег «2105 159 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 159
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек Бек Гей бБег Аза бек Уаі с1У 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг
ІТІе УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Рко с1іу Ппув бек Рпе пуб Сс1іу Іецй І1е 20 Тук Нів с1у ТБг Авп Ге бій Авр сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг Іїе бек бек Гец біп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув Уаії Нів Туг Аза сбіп Робе Рго А1а 25 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіп біу ТЕ Гуз УМаї сій І1е Гув 100 105
Зо «2105 160 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 35 «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 160 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 40 1 в) 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е 35 40 45 45 сіу Маї І1їе Авп Рго сіу бек б1іу Авр ТПг Тук Тук бек бій Ппув РІГе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 50 85 90 95
Аза Агуд Аїа Агд Тецйц Авр о Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПпг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 зек Бег 55 «2105 161 «2115 107 «212» ПРТ
Гс10) «213» Штучна послідовність
«223» Синтетична послідовність «4005 161
Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек ІТецй бек Аза бек Уа1і с1Уу 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 сі Авр Рпе Аза ТПг Тугк Тук Сув Уаї Ні Тук Аїа біп Роре Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105 162 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 162
Зо сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек бі1у Аї1а сіш Уаї пув Гув Рго с1у А1їа 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Ту Аза Рпе ТПг Авп о Туг 20 25 30
Тецп І1е бій Тер Уаі Агуд сіп Аза Рго сіу біп сіу Гец біц Тгр І1е
З5 35 40 45 сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу бек с1іу Авр ТПг Тукг Тук бек біц Гув РБПе 50 55 бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек біц Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Аза Іецй Авр Туг Тгр бі1у біп с1у ТПг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 зек Бег «2105 163 «2115 107 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 163
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг 60 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е
35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу Уаі Рго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 «2105» 164 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 164 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек бі1у Туг Аза Рпе ТБг Авп Туг 20 25 30
Тем І1ї1е біц Тер Уаі Акуд біп Аїа Рго с1у сбіп с1у Те бій Тер Пе сбі1у Маії І1їе Авп Рго сіу Бек с1у Авр ТПг Тукг Тук Бек біп пув РПе бо пув б1у Акуд Уаі ТПг Гей ТПг Аза Авр ТПг бек ТПг бек ТПг Аїа Туг
Зо 65 70 75 80
Тецп біц Гей бек Бек Гей Агуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аза Агуд Авр Агуд Аза АвБр Туг Тгр бі1у біп сб1у ТПг Гей Уа1і1 ТПг Уаї 100 105 110 35 Бек вБег «2105» 165 40 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» 45 «223» Синтетична послідовність «4005 165
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15 50 Авр Агуд Уаії ТПг І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп АвБр І1е бек бек Туг 20 25 30
І1е УМаї Теср Тук біп бі1іп Гпув Ркго біу Ппув бек Рпе Ппув с1у Гецй І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец біц Авр біу Уаі Ркго Бек Агкд Ріе бег 01Уу 55 50 з9 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аза ТПг Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аїа біп Рпе Рго Туг 85 90 95 (516) ТПЕ Рпе с1у біп сб1іу ТПг пув УМаї сій І1е Гув 100 105
«210» 166 «2115 113 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «400» 166 бі Маї біп Гей Уаі бій бек с1іу Рго сіу Гецй Уа1! Ппув Рго бек бій 1 5 10 15
ТПЕ Гей бек Гей ТПг Сув ТПг Уа1! бек біу Рбе бек ІТецй ТПг Авр Туг сі1у Маї Гей Тгр І1ї1е Агуд сбіп Рго Рго сіу пув сіу Гец біц Тгр І1е сі1у Меє І1е Тер Бек сб1іу с1іу ТПг ТПг Авр Туг Авп Аїа Аза РоПе І1е бо 20 зек Акад Уа1і ТПг І1е бек Уаі Авр ТПг бек Гув АБп о біп Рпе бек Іецй 65 70 75 80
Туз Гей бек бек Уаі ТПг Аза Аза Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув Уаї 85 90 95
Акуд бій біц Месє Авр Туг Тер біу біп б1у ТПг Гей Уа1і ТПг Уа1ї 5ег 25 100 105 110 зег
Зо «2105 167 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 35 «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 167
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 40 1 в) 10 15
Авр Акуд Уаї ТПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Ріє 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго с1іу Ппув Аїа Рго пуб Гей Іецй І1е 35 40 45 45 Тук Тук ТпПг бек Агуд Гей Нів бек сіу Уа1і Рго Бек Агд Рпе бек 01Уу 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Тукг Тук Сув біп біп с1у Авп ТПг Гей Рго Тгр 50 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105 55 «2105» 168 «2115 113 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність бо «2205 «223» Синтетична послідовність
«4005 168 бі Маї біп Гей Уаі бій бек сіу Ркго біу Гец Уаї Гув Рго бек с1ци 1 5 10 15
ТПЕ Гей бек Гей ТПг Сув ТПг Уаї бек с1у Рібе бек Тецй ТПг Авр Туг 20 25 30 сі1у Маї Гей Тгр І1ї1е Агуд біп Рго Рго біу пув б1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 сі1у Меє І1е Тер Бек сб1іу с1іу ТПг ТПг Авр Туг Авп Аїа Аза РоПе І1е 50 55 бо зек Акд Уаії ТПг І1е бек Гув Авр ТПг Бек Ппув Авп о біп Уаї бек Ієей 65 70 75 80
Туз Гей бек бек Уаі ТПг Аза Аза Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув Уаї 85 90 95
Агд бій бій Меє Авр Тук Тер с1у біп сб1у ТПг Гей Уа1 ТіПг Уаї 5екг 100 105 110 зег «2105» 169 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 169
Зо Авр чІ1е сіп Меє ТПг сбіп бек Рго бек бек Гей бек Аїа бек Уаі 1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Ріє 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго сіу Ппув Аїа Ркго Гув Іечп Ге Ше
З5 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Нів бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг Іїе бек бек Гец біп Рго 65 70 75 80 січ Авр Рпе Аза ТПг Тугк Тук Сув біп біп б1у Авп ТБПг Тецй Рго Тгр 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіп біу ТЕ Гуз УМаї сій І1е Гув 100 105 «2105 170 «2115 113 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 170 сій Маї біп Гецп Уаі сій бек б1іу Рго сб1у Гецп Уаії Пув Рго бек сіц 1 5 10 15
ТПЕ Гей бек Гей ТПг Сув ТПг Уа1! бек біу Рбе бек ІТецй ТПг Авр Туг 20 25 30 сі1у Маї Гей Тер Уаі Агуд біп Рго Рго сбіу Ппув сіу Гей біц Тгр Іей 60 35 40 45 сі1у Меє І1е Тер Бек сб1іу с1іу ТПг ТПг Авр Туг Авп Аїа Аза РоПе І1е
50 55 бо зек Агд Пец ТПг І1е бек Гпув Авр ТПг бек Гув Авп о біп Уаі1 бек ГІец 65 70 75 80
Туз Гей бек бек Уаі ТПг Аза Аза Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув Уаї 85 90 95
Акуд бій біц Месє Авр Туг Тер біу біп б1у ТПг Гей Уа1і ТПг Уа1ї 5ег 100 105 110 зег «2105 171 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 171
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецйп бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТПг І1е Тпг Сув Агуд Азїа бек біп Авр І1е Бек Авп Ріє 20 25 30
Тем АвБп оТгр Тук біп біп Гпув Ркго сбіу Ппув Аза Рго ГУу5 Іецй Гей Те
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Нів бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У бо зек сіу бек біу ТПг Авр Рпе ТПг Іецй ТПг І1ї1е Бек Бек Гей сбіп Рго
Зо 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аїа ТПг Тукг Тук Сув біп біп с1у Авп ТПг Гей Рго Тгр 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сбіп сбіу ТПг Гуз Уаї сбіц І11е Гув 100 105
З5 «2105 172 «2115 5 «212» ПРТ 40 «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 45 «2205 «221» ВАРІАНТ «2222 1 «223» Хаа - 0 або Е 50 «2205 «221» ВАРІАНТ «222» 2 «223» Хаа - 5 або д 55 «4005 172
Хаа Хаа Тук Мес 5ег 1 5 60 «2105 173 «2115 17
«2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «2205 «221» ВАРІАНТ «222» 6 «223» Хаа - М або 5 «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 7 «223» Хаа - А або б «2205 «221» ВАРІАНТ «222» 8 «223» Хаа - 0 або 5 «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 9 «223» Хаа - А або 5 «4005 173
Авр Меє Туг Рго Авр Хаа Хаа Хаа Хаа бек Тук Авп біп Гув Рпе Агд 1 5 10 15 сіц «2105 174 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 5 «223» Хаа - ХУ або А «2205 «221» ВАРІАНТ «222» 6 «223» Хаа - А або Е «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 7 «223» Хаа - 5 або А «2205 «221» ВАРІАНТ «222» 8
Гс10) «223» Хаа - А або У
«4005 174
Аза Рго Агуд Тгр Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5 «2105 175 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 2 «223» Хаа - А або о «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 З «223» Хаа - А або б «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 4 «223» Хаа - А або Н «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 5 «223» Хаа - А або Т «2205 «221» ВАРІАНТ «222» 6 «223» Хаа - А або І, «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 7 «223» Хаа - А або Р «2205 «221» ВАРІАНТ «222» 8 «223» Хаа - А або Р «4005 175 сіп Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Тс 1 5 «2105 176 «2115 17 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205
Гс10) «223» Синтетична послідовність
«221» ВАРІАНТ «2225 З «223» Хаа - Т, А або 0 «4005 176
Уаї І1їе Авп Рго сіу Бек сіу Авр Хаа Тук Тук бек біц Гув РПе Гу 1 5 10 15 сову «2105 177 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 7 «223» Хаа - 5, Е або 0 «4005 177
Нів с1іу ТБкг Авп Гец сіц Хаа 1 5 «2105 178 «2115 9 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 1 «223» Хаа - У або А «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 2 «223» Хаа - Н або А «2205 «221» ВАРІАНТ «2225 З «223» Хаа - У або А «4005 178
Хаа Хаа Туг Аїа сбіп Рпе Рго Тук Хаа 1 5 «2105 179 60 «2115 107 «2125 ПРТ
«2135 Штучна послідовність «223» Синтетична послідовність «4005 179
Авр І1е сіп Месє ТПг о біп Тс ТБг обег бек ІГецйп бек Аза бек Геш 0Щ1У 1 5 10 15
Авр Акуд Уаї ТіПг І1е бек Сув Агуд Аїа бек біп Авр І1е Бек Авп Туг 20 25 30
Тец АБп Тер Ту біп біп пув Рго Авр с1іу ТПг Уа1ї пуб Гец Іецй І1е 35 40 45
Тук Тук ТПг бек Агд Тец Агуд бек біу Уаі Ркго бек Агуд Рпе Бех 0Щ1У 50 55 бо
Ззек с1іу бек біу Ппув Авр Тук Рпе Гей ТіПг І1е Бек Авп Гецп бій сіп 65 70 75 80 бі Авр Уаї Аза Аїа Тук Рпе Сув сбіп біп сіу Нів ТПг Гей Рго Рго 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу сіу біу ТПгЕ Гув Гец біц І11е Гув 100 105 «2105 180 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність
Зо «4005 180 бі Маї біп Гей біп біп бек с1іу Рго біш Гей Уа1! пуб Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув І1е бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег
З5 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаї Ппув біп бек Нів сбіу пуб ТПг Іейп б1п Тгр Ше б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе бо 40 Агд бій пув Ма! ТПг Гей ТпПК оУаії Авр Пув бек бек ТПг ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Меє бій Рпе Агуд Бек Гей ТПг Бек бій Авр бек Аїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаї Тер сі1у Тс б1у ТПг ТтПпс 45 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 50 «2105 181 «2115 107 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 55 «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 181
Авр І1е Гец Меєс ТіПг біп бек Рго бек бек Меє бек Уаі Бек Ге 0Щ1У (516) 1 в) 10 15
Авр ТПг Уаї бек І1е ТПг Сув Нів Аза бек біп Авр І1е Бек Бек Туг
20 25 30
І1е Уаї Тер їец біп бі1іп Гпув Ркго біу Гпув бек Рпе Агуд с1іу Гей І1е 35 40 45
Тук Нів с1іу ТБг Авп о Тец б1іц Авр сіу І1е Рго бек Агуд Рпе Бех щЩ1У 50 55 бо зек сіу бек біу Азїа Авр Тугк бек Іецй ТПг І1е Бек Бек Гей бій б5ег 65 70 75 80 бі Авр Рпе Аза Авр Туг Тук Сув Уаі Нів Туг Аза сіп Робе Рго Туг 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу с1у біу ТПЕ Гпув Геп бі І1е Гув 100 105 «2105 182 «2115» 114 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 182 біп УМаії біп Гей сбіп біп бек сі1у Аїа бій Гей Уа1і Агд Рго с1іу ТЕПг 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Маї бек Сув Ппув Аїа бек сб1у Тук Аїа Робе ТПг Ап Туг 20 25 30
Те І1е бій Тер Уаі пув сбіп Агуд Рго сбіу біп сіу Гец біц Тгр І1е сбі1у Маії І1їе Авп Рго сбіу Бек сіу Авр ТПг Туг Тук бек біп Ппув РПе
Зо 50 з9 бо пув б1у Ппув Уа1і ТПг Гей ТПг Аза Авр Гпув бек бек бек ТПг Аїа Туг 65 70 75 80
Меє сіп Гей бек бек Гей ТПг бек біц Авр бек Аза Уа1ї Тук РПе Сув 85 90 95 35 А1а Агуд Авр Агуд тей Авр Туг Тер с1у біп б1у ТПг ТПс Гей ТіПг Уаї 100 105 110 зек Бег 40 «2105 183 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність 45 «220» «223» Синтетична послідовність «4005 183 сій Маї біп Гецп Уаі сіп бек б1у Аїа сій Уаї Ппув Ппув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаії Ппув Уаії бек Сув Гув Аза Бек с1іу Тук ТПкг Рібе ТБг Авр 5ег 20 25 30
Тук Меє бек Тер Уаі Агд біп Аза Рго сіу біп сб1у Іейп б1й Тгр Ше 35 40 45 б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр бБекг бек Туг АвБп обіп Гпув РПе 50 55 бо
Акуд бій Агуд Уаї! ТБ ІТец ТПг Уаії Авр ТПг бек ТПг о бБег ТПг Аїа Туг 65 70 75 80 (516) Пес бій Гецй бек бек Гей Агуд бек бій Авр ТПг Аїа Уа1ї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105» 184 «2115» 117 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 184 бі Маї біп Гей Уаі біп бек сі1у Аїа біш Уа1 Ппув пув Рго с1у А1а 1 5 10 15 зек Уаї Ппув Уаії бек Сув Гув Аїа бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Авр 5ег 20 Тук Меє бек Тгр Уаі Агуд біп А1їа Рго сіу біп с1у Іеп бій Тер І1е б1у Авр Меє Туг Рго Авр Авп сіу Авр Бек бек Тукг Авп біп Тув РБПе бо
Акуд бій Агуд Уаї! ТБ ІТец ТПг Уаії Авр ТПг бек ТПг о бБег ТПг Аїа Туг 25 65 70 75 80
Тецп бій Гей бек Бек Гей Акуд Бек бій Авр ТПг АТїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 95
Уаї гей Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаії Тер сіу біп б1у ТПг Іецй 100 105 110
Зо Уа1ї ТрПг Уаї бек 5ег 115 «2105» 185 35 «2115 25 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 40 «223» Синтетична послідовність «4005 185 бі Маї біп Гей Уаі бі бек сі1у сіу с1у Гей Уаі1 сіп Рго с1у 01У 1 5 10 15 45 зек Гечп Акд Гей бек Сув Аза Аїа 5ег 20 25 «210» 186 50 «2115 13 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 55 «223» Синтетична послідовність «4005» 186
Тер Уаі1 Акуд сбіп Аза Рго сіу пув сіу Геп бій Тгр Уаї 1 5 10 60
«2105 187 «2115 30 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 187
Агуд Рпе ТПг І1їе 5Бег Агуд Авр АвБп о бек Пув АвБп оТПг Гей Туг Іеч сі1іп 1 5 10 15
Ме Авп бек гей Агуд Аїа біц Авр ТБг Аїа Уаї Тук Тук Сув 20 25 30 «2105 188 «211511 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 188
Тер б1у біп с1у ТБПг Ге Уа! ТПг Уаї бек 5ег 1 5 10 «2105» 189
Зо «2115 23 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 189
Авр І1е сіп Месє ТіПг біп бек Рго бек бек ІГецй бек Аїа бек Уаї с1У 1 5 10 15
Авр Агуд Уаі ТПг І1е ТПкг Сув 20 «2105 190 «2115 15 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 190
ТЕр Тук біп сіп Пув Рго біу Пув Аза Ркго їув Іецй Іеп І1е Туг 1 5 10 15 «2105 191 «2115 32 «2125 ПРТ
Гс10) «213» Штучна послідовність
«223» Синтетична послідовність «4005 191 сіу Ма1і Ркго Бек Агкуд Ріе бек сіу бек сіу бек біу ТПг Авр Рпе Тіг 1 5 10 15
Тецп ТПг І1їе Бек Бек Гей біп Рго бій Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув 20 25 30 «2105 192 «2115 10 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 192
Рпе с1у біп бі1у ТПЕ Гпув Уаї сій І1їе Туз 1 5 10 «2105 193 «2115 17 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 193
Авр Меє Туг Рго АвБр Аї1а А1ї1а Аза Аза бек Тук Авп біп пув Рпе Агд 1 5 10 15 сіц «2105 194 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 194
Аза Рго Агд Тгр Аїа Аїа Аза Аї1а 1 5 «2105 195 «2115 9 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність 60 «4005 195 біп Аїа Аїа Аїа Аїа Аїа Аїа Азїа ТПг
1 5 «2105 196 «2115 10 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 196
Аза гей Аза Рго Агд Тгр Тук Рібе бек Уаї 1 5 10 «2105 197 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 197
Аза Акгуд Аїа Агд Гей АвБр Туг 1 5 «2105 198 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична послідовність «4005 198
Аза Агуд Авр Аїа Гей Авр Туг 1 5 «2105 199 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 199
Аза Агуд Авр Агуд Аїа АвБр Туг 1 5 «2105 200 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність 60 «2205
«223» Синтетична послідовність «4005 200
Аза Агуд Авр Агд Гей АвБр Туг 1 5 «2105 201 «2115 10 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 201
УуУаї Аза Аза Рго Акуд Тер Тукг Рпе бек Уаї 1 5 10 «2105 202 «2115 10 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 202
Зо Уаї теп Аза Аза Акуд Тгр Тукг РіПе бек Уаї 1 5 10 «2105 203 «2115 10 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 203
Уаї гей Аза Рго Аза Тер Тукг Рпе бек Уаї 1 5 10 «2105 204 «2115 10 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 204
Уаї гей Аза Рго Агуд Аза Тук Ре бек Уаї 1 5 10 60 «2105 205 «2115 10
«2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 205
Уаї гей Аза Рго Агкуд Тгр Аїа Рпе бек Уаї 1 5 10 «2105 206 «2115 10 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 206
Уаї гей Аза Рго Агкуд Тер Туг Аїа бек Уаї 1 5 10 «2105 207 «2115 10 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетична послідовність «4005 207
Уаї гей Аза Рго Агкуд Тер Туг Рпе Аїа Уаї 1 5 10 «2105 208 «2115 10 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 208
Уаї гей Аза Рго Агуд Тер Туг Рпе бег Аї1а 1 5 10 «2105 209 «2115 10 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична послідовність «4005 209 (516) Уаї тец Аза Рго Акуд Тгр Тук РіПе бек Уаї 1 5 10

Claims (25)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Антитіло, яке зв'язує ОХ40 людини, де антитіло включає: (1) варіабельний домен (УН) важкого ланцюга, який включає амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО:56; і (2) варіабельний домен (МІ) легкого ланцюга, який включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:57.
2. Антитіло за п. 1, де антитіло, що зв'язує ОХ40 людини, являє собою агоністичне антитіло до нелюдського ОХ40.
З. Антитіло за п. 1 або п. 2, де антитіло зв'язує ОХ40 людини з афінністю, що менша або дорівнює приблизно 0,4 НМ.
4. Антитіло за будь-яким із пп. 1-3, де антитіло зв'язує ОХ40 людини і ОХ40 яванського макаки.
5. Антитіло за будь-яким із пп. 1-4, де антитіло стійке після обробки при 40 "С протягом двох тижнів.
6. Антитіло за будь-яким із пп. 1-5, де антитіло являє собою фрагмент антитіла, вибраний з групи, яка складається з Раб, Раб", Раб'-5Н, К(аб/)», Ем і зсЕм фрагментів.
7. Антитіло за будь-яким із пп. 1-5, що додатково включає Ес ділянку людського ЇдО1.
8. Антитіло за будь-яким із пп. 1-5, де антитіло являє собою моноклональне антитіло.
9. Виділена нуклеїнова кислота, що кодує антитіло за будь-яким із пп. 1-8.
10. Клітина-хазяїн, яка включає нуклеїнову кислоту за п. 9.
11. Спосіб отримання антитіла, що включає культивування клітини-хазяїна за п. 10, в результаті чого отримується антитіло.
12. Спосіб за п. 11, що додатково включає відновлення антитіла із клітини-хазяїна.
13. Імунокон'югат, який включає антитіло за будь-яким із пп. 1-8, кон'юговане з цитотоксичним агентом або маркером.
14. Композиція, яка включає антитіло за будь-яким із пп. 1-8 і фармацевтично прийнятний носій.
15. Композиція за п. 14, де композиція включає буфер, поверхнево-активну речовину і сахарид.
16. Композиція за п. 14, де композиція включає 10 мг/мл-100 мг/мл антитіла, 0,01 95-0,1 95 (мас./о06.) поверхнево-активної речовини, 100 ммоль-320 ммоль сахариду, 1 ммоль-50 ммоль гістидинового буфера, та має рН 5,0-6,0.
17. Композиція за п. 14, де композиція включає 10 мг/мл-100 мг/мл антитіла, 0,01 95-0,1 95 (мас./о06.) поверхнево-активної речовини, 100 ммоль-150 ммоль сахариду, 1 ммоль-25 ммоль гістидинового буфера, і має рН 5,0-6,0.
18. Композиція за п. 14, де композиція включає 50 мг/мл-75 мг/мл антитіла, 0,01 95-0,1 95 (мас./о0б6.) поверхнево-активної речовини, 110 ммоль-130 ммоль сахариду, 20 ммоль-30 ммоль гістидинового буфера, і має рН 5,0-6,0.
19. Композиція за п. 14, де композиція включає 10 мг/мл-100 мг/мл антитіла, 0,02 95-0,06 95 (мас./о0б.) полісорбату, 100 ммоль-320 ммоль сахарози, Її ммоль-50 ммоль гістидинового буфера, і має рН 5,0-6,0.
20. Композиція за п. 14, де композиція включає 60 мг/мл антитіла, 0,03 95 (мас./об.) полісорбату, 120 ммоль сахарози, 20 ммоль гістидинацетатного буфера, і має рн 5,5.
21. Спосіб лікування особи, яка страждає на рак, що включає введення особі ефективної кількості антитіла за будь-яким із пп. 1-8, де рак проявляє ефекторні клітини людини і/або клітини, які експресують ЕсЕ, або інфільтрований ними.
22. Спосіб за п. 21, що додатково включає введення додаткового лікарського препарату.
23. Спосіб за п. 22, де додатковий лікарський препарат включає хемолікарський препарат.
24. Спосіб за п. 22, де додатковий лікарський препарат включає антагоніст, що зв'язує вісь РО-
1.
25. Спосіб за п. 24, де антагоніст, що зв'язує вісь РО-1, являє собою антагоніст, який зв'язує РО-
І1.
26. Спосіб за п. 25, де антагоніст, який зв'язує РО-І 1, являє собою антитіло до РО-Ї 1.
27. Спосіб за п. 26, де антитіло анти-РО-І1 являє собою МРОЇ 3280А.
28. Спосіб за п. 24, де антагоніст, що зв'язує вісь РО-1, являє собою антагоніст, що зв'язує РО-1.
29. Спосіб за п. 28, де антагоніст, що зв'язує РО-1, являє собою антитіло до РО-1.
30. Спосіб за п. 29, де антитіло до РО-1 являє собою ніволумаб або пембролізумаб.
31. Спосіб за будь-яким із пп. 21-30, де рак вибраний із групи, що складається з раку грудей, раку легень, меланоми, нирково-клітинного раку, раку сечового міхура, колоректального раку і бо раку яєчників.
32. Спосіб за будь-яким із пп. 21-30, де рак являє собою тричі негативний рак грудей.
33. Спосіб за будь-яким із пп. 21-30, де рак являє собою недрібноклітинний рак легень.
34. Спосіб за будь-яким із пп. 21-30, де рак являє собою рак сечовивідних шляхів.
35. Застосування антитіла за будь-яким із пп. 1-8 або композиції за п. 14 у лікуванні раку, де рак проявляє ефекторні клітини людини і/або клітини, які експресують ЕСК, або інфільтрований ними.
36. Застосування за п. 35, де антитіло або композиція мають бути введені з додатковим лікарським препаратом.
37. Застосування за п. 36, де додатковий лікарський препарат включає хемолікарський препарат.
38. Застосування за п. 36, де додатковий лікарський препарат включає антагоніст, що зв'язує вісь РО-1.
39. Застосування за п. 38, де антагоніст, що зв'язує вісь РО-1, являє собою антагоніст, що зв'язує РО-І 1.
40. Застосування за п. 39, де антагоніст, що зв'язує РО-І 1, являє собою антитіло до РО-1 1.
41. Застосування за п. 40, де антитіло анти-РО-І1 являє собою МРОЇІ 3280А.
42. Застосування за п. 38, де антагоніст, що зв'язує вісь РО-1, являє собою антагоніст, що зв'язує РО-1.
43. Застосування за п. 42, де антагоніст, що зв'язує РО-1, являє собою антитіло до РО-1.
44. Застосування за п. 43, де антитіло до РО-1 являє собою ніволумаб або пембролізумаб.
45. Застосування за будь-яким із пп. 35-44, де рак вибраний із групи, яка складається з раку грудей, раку легень, меланоми, нирково-клітинного раку, раку сечового міхура, колоректального раку і раку яєчників.
46. Застосування за будь-яким із пп. 35-44, де рак являє собою тричі негативний рак грудей.
47. Застосування за будь-яким із пп. 35-44, де рак являє собою недрібноклітинний рак легень.
48. Застосування за будь-яким із пп. 35-44, де рак являє собою рак сечовивідних шляхів.
49. Застосування антитіла за будь-яким із пп. 1-8 у виробництві лікарських препаратів для лікування раку, де рак проявляє ефекторні клітини людини і/або клітини, які експресують ЕСЕ, або інфільтрований ними.
«і Нуб 1д7 щи т 1АТ.дг пик я І Ю; І ї ії й їй Мі в ! і ї ові 5 щї ш Я Я т : ШИ ШИ ї- пк м Ід пти ї и КИ ці ї х ія 0- і ппнко тн. щй 0- я й сонне з тя х тт ні що ШІ я . Ще | т Ні 100 101 102 03 04 ї00 401 102 403 106 ЕІ 2-Н ЕГ2-Н А в Нув 3С8 вій 1А7 92 Цот п. не НК В шу; 5 Ок Ж ше Е Ой В пи В АД я ДЕ Е дум 8-й М 7 Що в / -- й Ах ся -к я00 З01 402 03 404 109 401 02 з03 40 ЕСо-Н Кен «є Нув 102 ой омод ЛАТ КЗ п і Ї Не МЕ и ЕЕ ! Же 5 м Е і А І і 7 и Ка п У і ЕЕ - у Н ї -ї 1 де: і Р; 13 ЯК | Е я ап-я М х / І 0-х З к о Ко с вк 100 401 302 1034 400 401 402 03 404 ван ЕІ2-н
ФІГ. 1.
А АЙ ЗсС8в.аг М ОН 4 ій в ше рик х | ОЦІ д ОД - ше пед 109 101 402 403 404 РІ 2-Н пп ЗС8.дп2 пл г і і Її Й кі Е щі і 5 шу 7 : ; Е т. щ ! / ! ІЙ чн 0- яс ї ся -й і рарінх тт 100 301 402 303 408 ЕГе-Н лев ЗС8. 93 Й То г Е в й БІ де ПИШЕ НК і Н й Го о Бси ней сне то 100 401 102 103 108
ЕГ2.Н
ФІГ. 1 (продовж). ов : 100 раки 2 8 ра 5 Е 75 й -в- супа тво пи ря х Б -й- супі?7179. тип шо 50 7 й; 5 | Середня ЕСБО ОЛАР МИЙКИ - 5 25 сс: ОО мкм, 5 -к. х о : а -ї -2 -ї о 1 Іо (МОХКО9 16-Аівхаба | (мкг/мя)
ФІГ. 2.
ФІГ. ЗА. 4000000 -е-- анти анти СО В забор питан во Й -- ТА? ді занти-сПЗ В -- ЗАТ в го0бсо0 : Ф ке. З 8 3000900 Мане: зав нік нь Е о о ер Фо Я их су Я У Нм 3 3 1500
ФІГ. ЗВ, -- анти-дО тавти-СОЗ д. -е- ЗАЙ дії жтанти-СІЗ с. о 1000 Е ІЗ 2 500 по е Бон Кс й? лм ан и а В « нг/мА зоробоо - анти-ДО -- -а- ТАТ (зв'язане з планшетом) -- 2000000 | -- ТА? (розчинке) пк Ж ; ї я й М ш Й ві ж- 1000000 о Гя
Ж. 0 опенеутттвяретевт тертя кое т х доКО ще зе: , нгймл
ФІГ. ЗА.
ЗОообООо. те- щити аю занти- СЗЗ щ -- 1А7 гі занти-СІЮЗ
Ж. зобобде: д ев ДА ВМО) ввнти- СОЮЗ КО Ф ж 1000000 - я т, З ж З о: т - є ши м нан а ме и й нг/мА
ФІГ. 48. -«зо0аосо: д тане анти Па) занти-с ОЗ - дн їз І -- анти и л- ТЗ ДЯ) тавти-сО З
-. 2000000 з ТО ЗАЙ огі (дО) занти-СсОЗ х Є ден -як АХ ді ОО) занти- СОЮЗ г на Ен В ся шо. вх С о 1об0000 хе вний а З же ик Вес кое ВДЕ В з - а - 0 те е Й ке бо ково шк -ЖХ М немл
ФІГ. 5.
НУ - 00 ж В І х 01 0 ж 40 о я ТЯ | о У 20 В я дес 4 о Іс одні Тп Та Та гео я ТАТ. аг Тед в ізотип.
ФІГ. б.
ФІГ. 7А. 120 400 є з т анти в шк . і --- Алемтузумаб ай ху - Ат а що що ко о мя як с 4 о
- в. Е 7 -о пислище Ж 5 лозу зо? 30736900 402 мкг/мл 146
ФІГ. 7В. ші -Е- Алемтузумаб ПОС) 120 нн -е- ВВ да наве анти ІЗ ЙО) СД сет пішов ів о -я- античліЗ (04) ій во що Як бін нен 1А? ди (Де) 5 аа ве дню 7 1А7 де Па) - 80 хо) ло 5 46 еле З Ж а ря й . КЗ 30 ло ло? лоб лоб 4002 Ммиглад
ФІГ. А. Фіг. КВ. зад пн т ЗО щіво Е гою до 2 ж 100 Ї 2 - - ц пет я е с то? Ще бю 10 то? чо! що то Це похАвб ВТ474-пОХ4) низька втаТ4-нОХ40 висок. во втатавОохасівис А? ог
460. - втатАвохао (низ.), 1А7 ді дао -й ВтТАТАНОХЯО (вис), терцептин Ку во ! Кк е Ще а її ото «в Ф а. е 8 вої е з Б БО т В 40 3-9: б зо в «с: о й ги; а То ше чу уч Ух я 10 100 1000 нг/ма
ФІГ. 9.
АЗКЦ Ох-експресуючих клонів ВТ474 злої вве я о м 5) Ж Во Ф В : У Е А - шк й паче 2 Іа;
д. Я ся ще ще Й й Ко Б дух о Е сої вх -Е ще сх и й ще А с ф чи Со с вх Сх У ів. Я Я Са У ще з Я х си й СУ де Ка ог сія Ж о о Ах Є 5 ах А - 5 ф Ф
ФІГ. 10. Тидкреслені песлідовості СОК у відповідності з визначенням Кабата Варіавальна ділянка пепгкого ланцюга ЕЕ Ве ОС Кб СОМ аЖЕИОУ МИ опо жот М ООП ПКЕЕ ГЕ ВВП ЕЦЕКЕВоВТНВоВІІ Ії ОІОМТОТтТ5ВІЗАБСОВУТІЗСсСВАЗИВІВМЖМУ ТЕКИ ВВ іїдтуї вам 5 ЗАМІС УТ ВЙСНАЗОВІВЗаХ Мк овк РК татої ВібмтокяаесевоАЕМОСНУХ ВСКАВООІЗМУМИМООК РН їжі оламІкжИ: І ЗАЗАсСОовВУТ КсСВКАВОВЕВМЖІ МУ ОКк пе іа? ОіІоМмлОоКі5 І ЗАЗМСОпУТИДДСНАЗОВ ВАХ жо К РЕЯ затв ВіІОМтТОКВЯВІ З АЗНООНУТ ВЕСПАЗОВОІсМуУуМиОаВКк РЕЯ тато ВвіІОМмтОоКкщУ 5 ЗМО пУТІВЙСВТАВОЮ ЕМ МУ Х ак РЕМ зу ВІбМТОКЖНББАВВСОВКУТ І ВВСВАЗОоОВіВКТ1ІнНИУМОК РЕЯ 17 А пІсМтОрИаЗ ЗІ ЗАБВОПАУТІВСКАбОВІБонНІМИикоайк РЕЯ тіж ВІОМТОКЕИЗ БІ З АЗМСОНУТ ВІСПА кТУІ Мито К РЕЯ ії ро пВапбпмтОоКЕіаасвазЗоовУТ св АВОІВМУ ММС РЕСВМ ТАТЯСНАПА бБІДМТОКНІВ І ЗАЗШООВУТІВЙСНАБОВІБНХ КТК РЕЯ ів? мО0А ВІОМТОКЖІЗБВІ ЗАЗШСОНУТВИСНАВСВІСЬМУиЖООК РІЄНЯ ідтясєво5 Змови тТіВспАВОВіІВВнуУМАМОО Кк РІКА їЩ?7сно55 БіомІоКшаазооААзщШОвЕУтТІВСпАЗОВСВІЗМНУТ Маси ККЗ ЗАТ ОАМАВА о ОМТОКНИЗЗ і зЗАЗМОСОВУТ І ВЯСВАЗОВІ ЗМІ МУьтОЗК РЕВ 1АагАх! бОіамтокваЗЗіЗАЗМОРВСВНУТВІСяЛовВІВнНУ Ми сОКк РЕЄВЯ 1? Аз ВБІОМТОКИЧЕЗІ ЗАЗДСОНУТ ИН ВВСНАВОВІВНУ ЄМО К РЕНІ за2моз ВІісМТОКІЗЗі ВАЗДОВАУ ТІ ВАСТАБОВОВІЗМУ МАТОВЕ ВИ 1АТ1Аяя 1 бмтТОСВН Ві ЗАЗМСОВУТ сСВАВОВІЗнНтТ МУК РЕЯ 1А:2Ааз оІаМмтОБНЗ І ЗАБЕРУ ВІСНАЗОВІВМХ НОВИХ РЕНІ затв пІСМТОКНИВВ В АМООНИУТ ВСНАЗаОВІВМУ ик РІВ ЗА7лат ПОМ тОоКНИВБІ Ве ОВУ ДІСВАВООСІВЗНнНУ:МИХУОО Кк РИН та?дав БІОМТОКНИОЗБАЗНСОВУТ І ЩЕСВАВОВІЗМТІі ВУЖ вК РЕВА 17 йно ршитокнаЗвіІЗ АСОМ ВЕСНА ВІВМНТ МУ ТОа Кк РЕЗНЯ 1А7 АЛЛО В БОоМмтОБДУЯВВІ БАБМСЮНУТ ВЕСНА ОСІВНУ КУСОК РЕ ТАТА рІОМІОКВИ5 і ЗАЗ УТІВСТАВСО ЇМ НИТОК ОНИ Ід? двлі ВІОМТОЖЖИЗ5Іі ЗАЗОСОВУТІВЩСНАВЗОВОВІБМ НУО ЖК РЕННЯ 17 Калі ПОіамтожниБі З АБ5МООКУТ ЙСНАСОВІВНИ МУК рЕсВИ 17 Авлі ВіОоМмтовіЗ:БаА СОКУ ТІВСВНАВОО І ЗМУ МУК ОЕЕЯН ідт вів пам 5ЗАЗЮСОМУТІВВОСНКНАЗЮОВІБНУСМАЖаК РК і двла бзомтарвЗ зі ЗАЗ ОВхТіІЩСКАЗОВавм муха к РК з рі1їМмтоЗРІБМЗМУУБ5ІОПпПІУВБІТСНАчаОТаЗ УМ аКАоК зсяжї бВарімто Ра НИМ ОІУВИ т сСнАЗОВІ БУ УОКРОакК Зсвойх бірімтОавЕ ВЕ аОоКіІудйі ТспнАЗОПІЗВ І УВО ВКРОК Зсвлиї біо ІЕЕ ТОнНАЗОбВІБОМ і мекв К Всваа ріфімтове 5 Іа ою т снНАЗаО ГУ М ОдОокКРОХ Зо біта со УВІ п сСнАЗОрБ БІ УВК РОК зов БА Обзор ОБІУнНі гСНАБВОВіВОМаи м пакевЕ Зв о Мт ов РБК рЕзУзЯ тонАаБОвВІВеМ і мама йкиок зсадз 5 о ім тов ев Бувай тсназоаріваУ УМО сСКРак зов око ОІВ КОСУ псмАВЗОВІВІУУ вокеаю
ФГ.ТА.
ЗСвасвос ВМ то ее вва ОБ т снАЗаОІ ВХ МУК ок За б ВірімтоБ РУ БАЗИС ОБІУІ ТТ сНАБОВЛ аж УДЧНОСКРОК Зал рум за СОІЧЗУВІ ТОМА ВІВаХ кОУЩООКтВК Зсвоєв поем о РЕВЕ ОЇ УВІ СснНАЗОВІбОхіІМУВАООсСКкКВОоК Зсва З рімімтоабРЗ Емо ЗрУщітснаворівауУтУЩЮОСКРЕОК Зсвос3о вовна то Баха Оу Тс мАЗОС БЖ мок РУК Зсвагї ОпнМмто о З оВІсаовіяУвітснНАБОпІВуУ УВО КАИК сват пом това ВНІС онАБаОІвЕВУ УА ОКкРОК зоваб ім о 5 свв ТснАБЗаВІ БИ Ума аКРОК ЗОБА о Бім то и Б БІО ру тоНАБОрІ ЗУ р УчщОовкРЕК зсвАя п'рерат о а чи Зоо МІТснНАЗООСІвОІАІМУШООСКРОК зсвАв о Бема еко снАВОВіваУ УчЧЩШОЮСКРаХ зЗсвАя шіврмт ОЗ БОКІВ УЮИІТСснНАЗОаОВІ ЗУ УВО ВОК зсааст о Бвімтоаве етос о ут снавою і У жо кРОК ЗсвАй пімІМІ ОРЕ ВЕОЮЮОВУВТСсНАЗОВІ ВВ УВО РОК зсвде біБІМтТО З З осо тснАБІВ ВВ УВК РОК зано вм та еВ піду тсвававі ВУ МОСК зе ріомтозтавБівАзівОанУтТівспАБОВІВМЕХшУЧОКАВОВ мШихдж 0іомлхоКЩЕ з БаАБщОоОВУТ І ШСКкКАЗОріІБ5 МЕ МОСК шоісл пІОМТОСВІє ВІ БАЗШСОВУТ ШСВАЗОбіБвМмРрЕМмуКОСН р Шгаз віск ОоЕЙИЗ І чАВШОБКМТ І ЙЙСНАВОСЮІ ВМ МАУ ТО КоВ СОВИ кн ООСОВІ й екаєт скекранкнооох сСосчнвкинИиИсяВВинНиЕсиВВЕз Екс екиених їм: тукікіІхутввіВваоУувЗнЕЗЗЗЗЗОаОКОТКАІРІЗМЕЕОЕВХА затії Ек іі Ух танін вБОУРаНЕВОо Во КОКС ЕаЕ ОА зАуже ак аіххтаньнОсвАеВ аорта ОА іа ШИК уУ 1 УТЗВІВНЗаМеВРВЕЗВБ5ОВсВЯриНІ т ЗНУ Е ВЕЖА зі я ТУКЕкІухул ень рРаВР ово ОВО айь т Б ОЯаЕоА зна тТУКів іх твнівабМми вне; Во ОВЕН ваше ОокА затв ТУКЕср Ух тТВНІВВОМРЕНЕВОСвОСВаКОУДЖЬТ І ВК ЙИЕ ОКА моні ЗТУКО іст КЗСУРІВАЕВЗЕВБВОКОХВВЬ ТТ ЗК ОКА лат ВА ШЯКізуу танками ово воював ті ЗБ еячЕ ОЕЯА
17 ЕВ БЯЯКІ. пітона ово Оваайіт: БЦ еЯав ОКА івта кар: БЕК слУУ тТоІНсвЗОсУВНнНЕБВОЗСсЗВИОВВКЬ ТЕНи Ка А
ЗАТ МАрА гак і хууУтанкінЕЗУРаЕВЕВсСИОВОВКОВВКІ ті ЗК КДУв ОА зб ора ЕК ьІ ут васСУвВНЕВВ ЗОБОВ т: ЗК ОКА
1зАтосвора Кжакії і хуУТаввасУВаНнеЯовосЗОКОВБИНЯІ Ті ЗЕ ЕЯЕ ОІЖА їат7осно ЕВЕШКі в іуутавіВБСУРВНЕЇВв а ОоБ5ОСВНОВБЯМ ТІ КІ вичЕ ВЗА іАТСАМАСА КЕЩЯкКіІ і УУтспІ ЯЗ ОМВЕНЕ Б ОСВОЗаДНОЮЕЯ Ті БИ ВЕЖА ідтлої БЕШИКіс іх танькосУРБаЕВОВОБОоВБІОВВН ТІ ЗБ: КЖЯк ОА 17Аат ВЧКІі п УУтЗНнНЬВвЗоМВНЕво во ОГа т КЕ ВШЕ ВЕЖА їіаг ва ЕВДКІі 1 утавінваУРЗАЕВОСВОЗОВЕОВаЖІ ТІ ЗБ ВЯЄ ОА 1А7Ааї КШИКІіг УУтЗРАВЗСУВОВЕБВОоБОоЗсВЕСИВЯ ТІ Іа Є ОНА зате БЗикКі з іуутеніьвнВСУваВЕМСВБ ОВО ТБ ЕЕЧЕ ОА тА; мав Ежшкі с паху тувІнВОоУРиБНАЕ ВО Зо сСВНОБАЙ ТІ КІ ваше ОА 1дтАат кі сіУуУ ав: ЗОМ ваВЕБОоВОІ ав ОБВЯ ті ЗК БЯШЕ ВА зЗілва БЕК: :іххутаВіВоОомешнЕВоВОоВОоВОВакь У Край ОА їАглав Фк хужтвкввнаохрЕВхВово товКВИ т: Я є ЗЕКА тАгАвло Жак с лУХ т вНІ ВОМ ово ОМ ОЖИЬ ЗК ОА ла;ляалі ВжЖУктаі і ттявіввамрРЕН Во вВо ворот хи руд кор латмяло ЕЕк у їі ху такі ка рРЗАЕБОЗааВОВІОКВИ т ІВ ОА 1Агвіалз Джікі с учуУтьнІНВОУвадеЗаВЗо МОДИ о ЗБ ВЕ ОА Зак аела Жак: ух тан нвами кож о КИ ох зАтлюлу фак сіуктанівносМвЗККкаУсСВІ В ННОВаИ т ЗА ЕЯЕ ОТЖА ТАхлзв ДІД, іхухтопівооивавкосвов ок: т ЕН ЯдЕ ой ма ЗЕВСі г УНОТМУБОбІРтРаВКЕБОЗОБОАрУВСІ ББ5КЕВЕОКА зовог ЖИМ суУнотукЕооевнкз о ОКО Зо асо леді? БЕЯсє УунстчьЕпошиЗну Зоо аовак т ЗЗЬМЕЕОв А звзхз Ба і У ноаїміЕСОВРЗАЕЗОВОЗОВЕИЕВЕ: Ті З КЕ А зсвеа я ЗкЕДЗцсахнвІМ СВО. ЗНе ВВС ЗоВОДВА. ТІ З ЕОР А Зсвог5 БЕЇсС1УноМі ООРЗ РЗсСВСВОВАОВВХІ ТІ (МНЕ А Збвозоа ЗесусУнотМмівосрРЯвЕЗОовСВОВНОДВЕО ТІ З рНЕЕОКА Зсвнкоою зга іхвоствні оса ЗабоЗоІМОовЯ т З АЕоРА Зсва 550 Заг туноїві : воно зо ОЇ кохає ОА Зсваиосо ее нат м совок иа т з ЗІрЕшеО КА Збашвов шЕШовічноїмувроювовея ово ОД тові вашв ОА ЗсяжВ СЕНСЬ І Хатні ОВЕВСВСВСАЮУКІ ті Ба НЯЕ п ЕА зСев БЕСсІУНатисеЕООМрЕИкВОвсосАБХВВ ТІ Б ВЕЧЕрЕХ зав ВЕС сСіУнНОТММЕСОЮДЕеЗЙАкКБОВОВакарЕжЕ те зсвоа ЗБЕ хногмуЕрОоиАЕБСВОоВНОВДЯЬ ТІ 5 КАМЕР ЕА зсязоло РЕЯ: п Увотмісосревио5 ооо ті 5 ОвА зоба БЕЖлсСіУнОотМі ОР аки сьо сДНОВИЙС ТІ З ШЕ РА зсалі 5РІЙФС1і1УНОТМІ БОР анеВа5ОВСВНОВВІ ТІ ЗІВА зало зво віУВотнуєромвавизазозонаорин т 51 РА ваз ВЕС КІтТНОТнНЬсОоОсЩшеВКРЗОоЗоаМОБИЯ ТІ ЗБ ЮЙЯЕО Є А баня БЕК УНСсСТМУЕОооШеВке оз оКОГВН ТІ зв цНео кА зсзлз Зевс нате ооутонЕоЗ З ОКО ВЯ. ТІ 5 НЯ Завя БРШОЇУнвУМЕ ЕОР БЗНЕБОЗЗОКІОВКЯ: І ЗІ БШЯКОВА зва; БРІЯОСЇ УВОотТміІ ЕОР ЯКЕОоВОо БОКОВІ ТІ МШЯЕОЕ ХХ зав ЗЕВС НнотТкІі Осн ОСВОБОВІрЯВН ТІ КЕКВ А зсоах ЗРЕДсСІ п уноІкі оо ОЬОДВЕУ ТІ 55 МЕ ВЕА зва Згфдбсі п «нстмівосДРІвиЗаво оо ті гИДЕсЕА юс: тпУукКісіуУТОВІНІСУРІВЕТОаБОВСТОМУ5І ТІМ ЕОЕПВНА зга Ек узі хуУтТЗвВІяЗзаУтаНРЕравово хори її ЗК ЗЕ о А збгоул Як зсуві ОВОвО ТОК І КК ОА хто2о3 Як сі пута насутанкещовово торт КЕ о пт Е ОН юних век и А А Я т аУксСвВабнтіІввтІкОВСсСТКІ ВІК 1К7 уйспоасвнтіврРткБМОТКЕШЕ ІК тд хсааснліІРВТРвОВОТКМЕ ІК АТЗ УМсСОдОнліввуУвОМСсСТКДЕ ІК Зате «спос тіветесійзІКЦДКІ Кк ЛАтЖЗ «сосен тіДвтЕЗМСтТКИЦв ІК ЗАТ до ЄВсООанНтТеРРтТЕСрВІаТКАЕ ЯК ча? ХБсоЗаМнтТвРтЕОТатТиККЕ ІК ІА ВА уШфсадснті вет варівї ки ік.
т
1. ія
ФІГ. ПС зд? жа УВС ЗОоснтТьвР ТЕ ОБІОлТКИМЕ: ХК татосмавв фев ооснтТ ге ву кавове Кк Затон А Вуса оонуврРТКОЮВОТКЕ СК ТА ВОСА ШуУВДСОЗОсНтТіРТЕ ВІТМЕН Кк чего оо нумсаоснтвветрЕовіШТКЕК зага чово фасон вет ЕМ ТКВЕ Кк.
ТАТоепАМАВА ВЕС оцОнНТ квт БОМ КЕ ІК їАтАвла Уфа ссосНнт РЕК ковтка Кк Аг азо Вау сооон тв тв ост кк ау Ава вес осодіті етері зт Аен ус сонет отв Кк тата ву сооднН ер ТЕ сво КЕ ІК зага ВЕУ сОовн тре тест КЕ К 157 жат КЕУВАСОоКІнНті тт еОорІС т КЕ МКТ Аа ВИтВИС ОО ті рт Ед КАЕї Ага ЖиУаЯСОО сн кі вет ЕОвНУТККЕ ЇЇ ХК ЗАтТАвІ вус Обонтіввлеосющотквка 1Ат ав ВИС СОН ер ЕН КАШ Кк 15БАвТО КУА СООнті ет ЗНО ККИЕ І К. зАтАвлз ЩАУКасСОоЮсВтІ вето ат зделала ваша осантТі витер о КА яма вести ТАтАв'ї ВУС ОоОсНтк РЕ ЕоетТКЕ ик За ПУЖсУНЖАСРРУТЕОСОСТКЬЕВК Задл Ку сУНУАОЕ ХЕ КЕйЕ 1 Зоая ЩЕУ ХСН УАсЦЕРУ ТЕО ТКЕ ІК зсЗаз ВЕУ ЄИНАЦЕРАІ РОМ ОТКІКІК ЗСажа ШАХ СМНУАСЕВУ ТЕ КОМ Е ІК зового ДУ сову РУТ РОСТЕ К ЗсЗоаЗОА ВСУ АСЦЕРУТЕСВЦУТКИЕ ЕК жаосвоа Де СМНУАСЕВтТ ТЕО тТКЕНЕ ІК саше Ду оУневОовтУ тет Кк зов Ше СУунуАЦЕРИТЕ СІСТИ ЕК Зсводс5ав вт суне АДЕРУ ТЕО ТЕ Кк Зсаож ву усУНУДаЕРУТЕВрЧОТКЕНЕ ІК ЗСОоє ВУ УСУВУАОВЄРЕУТКОМОТКщЕ і ЗСздв жу суда Ор КВК Зв ШЕУ СУНеАдЕВУТЕврІСТКЧЕ Кк вою ВУ СНУ АОЕ КОВІ КАЧЕ ІК саслю ДИ сСУунтдОкВв рон КАЕ Кк залі всех сн АсвЕвУ ТЕМ ТК К ваг ВЕУ суда ге тест КАвІК ваз шу см Аа тТЕОовІСТКЕ ІК жаля утома АЕН ТЕ сок ІК яд шу сУунУудовуУткОоМОТКМЕ Кк вас ВЕУ см АДЕДЕУТЕОоВІСТКІЗЕЇК ВАТ ВЕУ СсСУНУАЮЄ КТ осв тТКІЕ Кк НАВ ВЕУ СМНУАСОЕРУТЕСЮТОТКЕІК Зсвла Вау сСуУнуУАОЕвРТ ОСТІ К ЗсСяА ШЕУУСУНУАДОЕ Р ТЕОМаткщЕ: Кк що тУксорснтівРжукОовОотТКківІк чел терсовомтиватеоМеоткщдЕ Кк зро птеМмМсОсомта вт е ост Кк заозоз тс сосеМмті вата ТК Взріабельна ділянко взжкого ланцюга о СОКОМ хай Шомчр комент тов ювІпппувеєвенапнавЕУВІаиІщЕВЕВ І 1 ЕМО СОЗОРЕТУКРОАБУКІБСКАБОУТЕТОВУМОМУКОВНО зіжі ЕМОСДОЗСсТтЕДНЯКР.ОАдеУКраСсСКАВОУТЕ ТО ЗМ БУС ВНО ТА? ЕМО ЩОБОКМЕАНКОЗАВУКШДОСКАКОУТЕТОВ УВЕСТИ чатшжа УСТ ОЗ МЕДУ ЗАЗ УКШОСКАВСУТЕТОВУМа УЮ лита ЕчОЦКОЗ ТЕ ЕЯКесАЗУКИШОСКАБОМ Тк ТОВУкОмУОВЯНО іт ЕМО ОВК ЗАЗ сСскьЬзОоутвтоЗУМма жов А? ЕМО Тс ДИкКо ЗА УКШОсСКазОотТктТовУма око їатдт чага ось", сАсУуУКЮоСсСКавоутрТОВУМаМОВЯИО тт ОА ЕЗОТЛЩОВсСЕІСДАЯКР.ОАБМУКІасСкАВСЯУ ТЕ т оЕуХ м ЗОВ пса ЕЗ ЕУОТО ОКЕАН КР,.ЗАВЗУКІВСКА ВО ІД мч ОоКЯто 1зАато мав Мосс судак иоАЗУКИЮЗСКАВОУТЕТОЗУМа ОККО ТА? МА кУОсВасстІсІЕНКР.ОАЗУКЩШОСКаАВаКУТЕТОоОВиМЕ УЧНЯ ТАТ МОбА ЕУОКВИа СТІК СА УКИСКАОУТЕТОВчМаМУТОВЯШО і? бо ВЕУ ЕВЕР АВК СКАВОХУТЕтТОоВиМа Уа О 1? дмов КУБІВ ВОоГсЯВНКибАЗУКОУСКАВОХТКТОоВиМаМчЧ ОВО ТАТ БАМАВА касові ВЯкР, САУ сСКАВаУ те ом жшУНаННЯС ід?Ави ЕМО стісвйнкКР.ОАДаУКИаІСКАВОУтТЕТОВУМ У ОВЯВО «сват ЕМОї1Ще сек ЗАВУКІасСКкКавстуте ов имеЕмУЩОаКНИС затв моло санки бАЗУКЮаСКаЗаУтТЕтТОоЗУМаЖУу ОМ ЗА7Аза ЕМОсМОЗ ВЕ ДИКА.ОЗАЗУКІаСКАЗаттЕтТОо хм чОовНЯС ЗАТ Аза МОЩІ ДЯКкАОАВУКИиІСКАЗОУТЕРтТОВУ МУКУ ід? Ав ЕМОї1Мо8 Ед аКА ОАЕ КИаскаАяст томі оКНИо тата в МОаї1ЩО З вдяки бАЗУКІВСКАовсТУТЕ ТОМУ ЮІОКВЯО тАтАюВв Мао ЕЙ ЕКАОАЗУКИСсСКАЗОХТ ЕТ ом ВЗ оКВо 17 я ЕМО З ЧЕКА вАЗУКІЗ СКАЗ ХТО М Ж чНОорНиО ча;длвлу вМсі18чаз се ЕКР,.ОАВУКЕІВСКАВШХ ТЕ РО 5 мМ ху УНОБВНО «Аллі Емма ЕКИЯКСАБУКИВСКАЗОТІЕТВЕхМмежУОВКЖЯО та? Айва ЕМО ск", ОАБУКВВСсСКАЗОХТЕТпПоУМЗУМщОоВчас іт лих БУЗОК ОАЗУКВсСКАВОХТЕтТрвхМмиМОВЯИе ІТ АлЯ ЕМО ОТЧЕ ДНЯК СА МУМКІВСКАБЗОЄТЕТО ВУ ММ УЩОВЧИС Ат Аз ЕМО ВО 5 ЕЙ ЧКР.ОАЛаКсКАВОУТЕ ТОМУ щОоЮКІИХ І1лТмМал16 ЕЕ УОЩО 5 сЕКЙКР.сАВУКЩІСКАВОУТКктТОВУ Мом оВИИЗ З ОМООО5БАБІ УВРОТОУУКУБСКАЗОЧАЕТНУЇ з ЕВУКОВНВ збвогі МОБ 5ОАЕКДНРОМВЗУКУВСКАВОУАЕ ТАКІ ЕМО а зсзаг МОКЩОБОСАЕУНРОВВУКУВСКАБОЖ АТМ І ЖУР зва УПБ ОАЕЕИь Ва УКУсКАВОМАВТВХ І ЕЖУОКРО збе УВІ БОСАКИЕЯРЗЕІУКУВСКАБВОТМАВІТММС Іі ЕОР О Зсвг У«ОСМОБОАЕДЯЯРОГЗаУКУВСКАВЗСУАЕТМУї ! ЕМ МІЗОКЯР зовасвоА Ч"ОСМЦОаБОАЕИЯЧРРОМВОУКУБСКАБОСТАвТКМИ Еш З своя пс УС сСАЕДЯлр оку СКАВОМАЕТМУ Є ЕМО Р З зсах ВО Устав сАЕДИЯль УК УВСКАВОХАКІМХ и ЕМО зсвхоке МО МОобоАсКИаР ОВ УКкУСКаАБОочАЕТММУї я на
ФІГ. ПЕ. зсяархос Ос ю5ОсАЕИДІе ст УКУВСКАВСУАРЕ МУ УВО звмо У О МОБСАККИЖЯРСВВУКУВСКАВОСУАРІМУ Ен УЮІЮЬ зош СО КО БСАККЕЯРОЮВОУКУВСКАБВОТУАРІТМХ МЕ КУЮВЬ зол Гри щоЗсА КЕР сВІУКУуВСКАЗОМАКТ ММ СЕУ зсас а оо сКюзсАЕИ Ком УкУуасковсхакхмті і єму ОогіР Зва о реа кю зсАсідаиРОВЗУЄУВСКАБВОМАЕтТ МІ ЕМО Є зсово»мм рама зсаАвКНЯНР ов УкУЗСКаВОотТавтми уро зва і Ов сАКИНЯЯР.ОВ:УКУЗсКАВСУАЕТ мк ЕУмМІОВРа зок? ВУ МщОовсАЕІЮЕЯ ОКУ СКАВОСТВЕТ НУ І журі Р спа УОЗ АЄСКИДЯЗРОВІБУКУВСКАВОХАЕТАМ І кУ УЗ О яка ВУ СІВОЗАЕНДЕЯРСВІЗУКУ СКАЗ ХУАЕТМХ І ЕЙУЮЬЗЯРО ЗАВ ЯУСІБОВСАБЕИДЯРСТОУКУБСКАБОУАвІМУ сур Р о асалс ВУХО БАЕКИВЯРОоДІЄУкУВСсСКАВОУКАЕІМХУ І ЕЖУЮОТІРО звА! мога зоА судоку сКАВУАРІТІМЖКІ СЕУ аа УСІ БОсАІИФЯІРОТОУКУВСКАВОУАРІМХ ЖУКІВ зало ЗМО (ЧО БОАЕНИЖЯР ОВУ КУВСКАЗОУХРІМЧУ ії ЕКУрСТМв Є хай час ща вок ува еУуювокааваматт мі Емо о пе схсіКкОаБорРСІМОРБІЗІВІІСТУВСЕВТОУБУТжУВОВИВ зак НУМО стуво вести Во Ро зов Бічо дого ев о сСтУВОвБ то оУ УКР че ЩУоіІйДдЯЗовоУВІР І З стозакаітооуімУВОКИ Па ня СУТ пи в ЕК ВК я р а У МАУ КТ ЕМІСОМУРОМИОВЕУМОКУВЕНУТІТУЮКИВІТАХМЕЕА їїжл БЕ ЕЙ і сОоМУвОВМОВоЗУМОК В ЕрЕ КИтОодЕ ни А ре Ат БЯЧСЕчІВОМУЮВМОООВУМОКЕВ ЕН ТИ У ода а се чату ВЕН ЕМ вОМуУРОМсСОБУУМОКЕНЕКЕИ Ті ТУ ода АЕН зх ВЕ ЕК бОМУРОМСІБаУМИКЕН ЕТ КИтТ У ОДЯЗ ВТ ВЖЕКНКУ Аж ОЦЕ ЕІ ВОМУвОМсоВауУМОКЕ НМ тт У ОД ЗДНІтТ а УНЩЕКНКЗ затв БЕК ЕДІООМУРОМООвБУ ОК ЕВіІМ ТКУ У ЖИ ВЩеЯ т ах У КУ ЕКЗ лаз? ВЕБ ЕВТ І ОСОМУРОМОВаІВУМОКЕНЕМ тКИтТ У ПИВІ А ВЕ КВАІ зло Чі УЛ ОйМуУРВНООЗБ УВК ТЕТ ОВИКаТ А ТЕЖ ЕТНЯ міш ев зЖч ку СОМУРОМОСОВЕЖНОККЯ ВІХИ ТБІСВИ ЗНАК А ЕНН 1дтжнАю5 річ кВІспМуРОМІЧОЗБУМОКЕНЕВКИ тТИЯТІУрВКВИУт АЕН ЗАТ мабА фі міому ІМ оВЗУмакетвеки ти тічову ай А еВ лалоемоА мч кв ЗамуУРОМОосовЗкаєєвЕКІУ тат свЕ ов А ХЕ ахрлнвоюе КО ЕМІсоМмУоЕОБУКОКЕ КЕ вто оДЯ А ВЕН затимоз5 в ЕІ сомУОМОДя ЗУ МИанЕВЕВІМ тат ОКЯ АНІ АЕН ідтоОАМАЮА фен мом око У мекв Еріх тжк това саи т А В св їАтАвл м ЕЕ сСОМУуРОМСспаБУНОаКеВЕУ тост ЕН Кіа? ЯН ЕМ ЗОМУРОМОВВБУМИКЕВЕВУ ТНТУ ОВІ ВИТ А У ИЕНАКУ заг мах МІДІ ЕМІбОомМуРОМОВаВУМОКЕАЕКЯМ ТЩЯ Товт А уже ИН ЗАг лах БИЧ ЕНИВОМуУРОВМОСОВВУМОКЕ А ЕВКУ ТИТОВА АЕН ТА? Ан ВЕ ЕМІООСМУВОМСОЗУМОКеНЕНІУ ТВ КІ ОВИ КАТ АУНІЕНВУ зА?7Азв ВІДЕО МУРОМСОВББВТМОКЕ НЕБУ ТИЯТКЮВИЗИВІТ АКНЕ їА7з!? ма смІвбОоМУРОМНСОВЗБВМОКАВЕЦУТЕИТрІСДИЗКФІТАУКЮЕЯНА зах Аза СІЧ ЕУ ам оМооЗЗ как ТИ ОсВИ иа А УВК затв СЕ ЕМВ ПйОМУВОцСсСОоБВБЗкнаюк Ер Ева А ее -х с
ФІГ. 11Е.
чзд'іщало Ві ЕІ сОомУвомМапраЗоемокеи крути това ат ТЕТ зАтваля ВН ЕКІСВПМевоТМСрванИк ЕЕ ВЕТО ВІсввст А УВІ зах Аяіх ВЕЗІЕКІсОМерРОМОНаВУМИаКЕНЕКІ, ВИТ КІсви вит АТІНЕННКЯ Аїда ВЕЧЬЕУ БОоМуУвВОомМОоввауМОКЕНЕЗУУ ТЯЙ ТКЗОКИ АНЯ АТ ТА? мая БЕЗ ЕІ СОМУРОМОВЕВУМОКЕВЕВІУ ТЕИТСУОВИВВШІТ АКА ЕТ 1ілель ВЕС ЕМжІООМУРОМОСВ МОКІЯ И ТОВ А У ЕК 1АтАвлЕ ВЕ жів Оома ох маком Біо тей ові А ТЕ В ка діжу ОсСТуВЕКЕККУлЛтТАСКВАІВІАУМО В зол сбзєМІвМІМВвоВаОтУ ВЕК о У ОВТ АНУ вої аДовЕЖжЖевВУ Меп ВЕКЕКОУ ТИТА АЮ хХемі спсівЕВібМ г мМасвортУХУВБК КОВІ ТІ Її АВ НЯ ТЕМІ 5 Звща ОСЬ нап сабо тУТУВЕКЕКОВІ ТЕТ АОВІВЯИ ТА ззще Обі ОЮУЗВМРСВОСТИТаЕКЕКОоКУМ і ТАОДІОВАБТ АК 38 5ОА пеЕЕК ву ЕВ СЕКЕКО тром т АВ Зсарзю обі ЕМІаУтмРозарих ВЕК еЕковіх те ово т АВ Зсвоаги о ОЕМ ОМІМРОООІМУЗЕКРКОДЕУ ТТ ТА ПВАВИЗ ТА ТИШІ зов Ей авіа імнеивбвОоїУуУВвЕКАКОВІУ ТІ ТАНКИ А І В зсадвоз асьЕЖІаМ МИСТ КЕКОВІМ ТТ АОВИЗДа ТАН 5 Зсае ОсьЕЖмОУ МЕС сСОТЕЕКЕКОКИ ТЕЙ АОКІЗДЯЗ ІТ АУНКЯІ зва? сБіЕШІ ЗУ ОВаОотТУВЕєКЕКСКІМ ТИ А ОКИБНЯВ І АНЯ 5 мзФя ОбсЕМЕІВМІМРОЗВОТУХВЕКЕКОЮВІУ Ти ТЕВоВіеВАО т АНІ жвФта ОСІ ЕМІбМАІМРоЗзсОотУуМВЕКЕКОВІМ ти ТЯ ВИ т А ТИЩ З ЗОВ ОСЬ ЕЖІУСУ МОВО ТУУВЗЕИРКОЮУ ТІ Тов еВИ КАН В ЗЖва ор ЕжіІЮМІ МО БСОТУУВЕКЕКОГІ ТІ ТОК ТАКИ 5 зад ОЗ ЕЖІОУ МОВ ТУДЯКЕХОрІУ Ті ТАОВІЗНИТА УЮ В Маг ЗОТЕВІ ОУН СсСабОотуУтУВЕКЕКОЇМ ТІ ТАРИ ТА УЮ МвАз ОБЕЕШ У МРОВООтТУСаЕКЕКОВІИ ТІ т А ОКИОВИО т а УКВ 5 ЗСВАЯ ОбІЕЖІСМІМРОВаОТУЄВЕКЕКОрВІМ Ті ТАЖ АЖКЕЖЖІ ЗАВ ОСІ1ЕЖІСУМНРОЗБбОТУУВЕКЕКОВЯУ ІТ АВВЩОВЕ ТАНЯ зва ПО сУ15мМіМРОЗСсСВТУХУВЕКЕКОММ ТА ТАС ЗВИО ТАТИ. 5 зва? ОСІБ ОрСтІУувИКЕКОМІУТ СТАДА ТАН ВАВ асьЕМІОМЕНвО БЮТ В КЕ КОрКИ т тТ АОВЕЗДИБІ ААУ В ВАЗ асСгЕЧрОМЕМВОВСОТУХЬеКЕКОВІМ Ті ТАОВИОНАО ТА УНІ В зозА ОСЬЕЖЛОУз МОВО ТУУВЕКЕКОЮУ ТІ ТАКІ А М: каісЕМОоМмІж З ОаТтІВУМАЛАкваВНіВІнКОакКВаМеККМ па КОТЕМШОМІД, ЗОСІТОУМААЕІ В ' Бк кс каз по КсСІБУЩОаМіІШ БОЛІ УМААЕТВВ пікова кох 5 тежа КБІЕВМ ОМ 5 БСсСІТФУМАВЕ ВК ДДТЕКОоДИКОУ КЕ ВЕД ин СОМ чееквти НЕзюнВЕкавинаиниВи НЯ ВЕ ВВ Е ТАТ Ві ТЗЕПІАУКМУСУВЄ АРТЕМ ТВ ТТ МТ МБ ї7щ-а ВАД ОЖШАУУУСМС АРМ В стали тм а їду ВАК ОМВАМУ УСІ АВКУИКЕВМмщОовЗ ТИМ 85 Аля ЗАЯВ ОВНА МУ МАВ Моро ТЯМ ТА 55 іа ВІЗОВА Ус Мі АРЯяМУ КМУ ТУ 1Агоїв ІЗ ОВУ АН ЯУ ХЕ Вимог хв Б тато БІДІ ЕОДДАУХХСМ КАРАТЕ ЗУ їсал ЗззфзеЕовоуУусх АННИ Вчора р том вв
ФІГ. 116.
СТОК ЗІБ ОМА УСЮ АРАМ ЕВ Мо тІЙУ ТУ 5 В зт ЗІБ ЕОВАУчУСсСМИІїАРНУЄХЕБВОжсСЬОо ТКУ ТМ 1ідтамАв5 ЗІЗ ЕПБІААМУЄСМІ АРЕЖХ к МмсНО ТАМ У З ЗіАтш ноя БІВ ОВВАУТУСМІівВнУЖ ЕВ ОЮІО ТЕУ ТУ В ідемо ВІБЗЗЕВШАМ ХО АР в В Усі тм 5 іа? бо Ба овжАМ УЖ Мі АНУ ЕОМ ТЕМ ТМ 5 5 здуденов ЗЕВС УА УдОоОо ТУ тм В ЗА? ОАМАрА ВБІК ОВУ ТКС АВ ук орі ит 5 5 Звїжаї ЗіБ ОВВАМУУ СІ АР УкЗУОор ТІМ м Ага ЗІБ ЕОЖАУтТУСстїАвАУтЖЕ вом ІИитТиВ їв? й БІВ ЕОВЯАУУУЄМіАРАМУ вмч атІУтУВ В 1Атавна ВІЗ ЕПВАЛУХСУАРВА ЖК УоІНО ТІЯИТ УВ5 12 АБ ЗАІЯОБОВАУХсСУвАРНИЯКаМИврІо У тТУВ чАтАвя ВІЗ ЕОЖВА МУ ММ АРМ ЕВ УМОВНО ТЯ м Б ід ві БІСЕРА УХУХУСММАВ Нут В мар У ТМ 55 заумав БІВ ЕОВВАУ СМ АевУУ ВОК Тит м а В тАглшо НЕ ЕОВША сан МУ ово КІТ 1д?лАвло БА ЕОоавУУ с АРВУДЕ З Ужоо У тм Б 1АхАвлі БАБІ ЕОВАУУсМЕ АРХ в око ку ТУ В З ідтлівля Бір ЕОЮАМУ СМІРНОВ ТІ М 8 З ЗАтАвНоЗ ЗА КРасоДЯА У ЄМ АР в КО ТІМ у м З 8 Ат Алі БАЛІВ ЕОДАМУ САДИ ЕВ Уж ТІЯуУ т М я 5 іт ав Нр ме ее НН МАМ їА?лалв Бір ОА мс УДАРУ ЕВ УК ртіЯМ і мМ В жа БІТЗЕрВАМУтСАВОВіІ,. оуУжОЗОТТЕтТУЄь зсвогі ЗАЕЕОБДАУУЮСАКОЮКИЕ. пужаоо тика зсадо ЗР ЕВКАМВІСАНОМІ 0 Ох о тим В Зсвокз БОКАХ УМНСАКИОВІ ЇЇ ОХОТУ ЗСвлнє ВІЗ ЕВВАУВСАНОВІ ВУ вОов Тит 5 5 зсвого БІДА ВНСАНВОВМІ о... бХУСОоСТЮТ В зЗспеопв ВАВ ОВВАУУВНСАНОВЬ. ВУЖ ОЗ ТАТУ В ЗСаа5ро Бі ЕОЩАУВСОВВОВЕ овес КИТ В аСвеєзав ЗЕ БЦНАУУЙСАВЕВЕ. ружоострт Ух в Збашеко ЗІБ ЕВЯНАУУВАСАНИКЕ о Умшасв чу З Зсвапоюв ВІ ЕОВЕАЧУВАСАВОКІ. «Вужшвос тт м З ЗСвасб БІБ ЕПДВАМВИСАНОВІ «ве зщо тІНЯтТ 5 5 Зсває? Знав ОоМАТШНСАВОонНЬ . руУжасо тінюдт м 5 5 Зав 8 БАЧ ЕНІДАУВВСАНОВІ. рол 5 Зовава БІБ ЕОрЩАУВСЯАВОКІ 0 песо
Зоб. ЗЕВІВЕВВВАУУВСАНОВІ охжозоваткваат У 5 Зсвогає Бір ЕрЕАУВвВсАНОНІ 0 охмсаолІвитм ЗСВА1 БЬБІБЕБВВАУЗВНСАВОНІ. пуУжООов ЕТ ЗОБА? ЗБЕІЗ ЕРА УВСАНОНО «ПУ ЖжЖООСТІВИТУ ЄВ зсвка ЗБЕ ЕОВВАУУЮСЬКОВО о. ОУжсОоБІИВИТУВ зва. ЗІЗ ЕПНАХУВМСАНОВХ. овен еня є. У ККД зала ЗАЧ ЕОДНАТВСЬВОКІ вуж сОо ТУ Зс8АЄ ІЗ ЕПЦАУУМСАНОЕВІ. отухвсоа тут зоаАлт вир сОоВАУХВАСАНОВО. пуд оотитм В. ЗсвАВ БЕЗ ЕОНАХхУВСАВІВ. рушоовтауту в ЗСяАЯ БІВ ЕОВАУУВСАНОМІ. Оохжадостт зевАлз ЗОНА УУВСАНО НІ. ел некяяеИ в У КД ше БІО ТАТХУХсМЕВвЕМ. Юм Оова там тм трасою ЗШ ТАМУ С УЯЛЕЕМ, пуд остІшеУтуУв оце Бо пасе ВМ .пучаовотутУВа В «НИ: "ж УСУВЕЕМ.. НН
ФО. 1А?аі зв'язується з НигуЯ 4000 З00о т, 2000 Щі Кк р. х зи 100 а КІ М й 1 то 100 т000 0 лобоо 1А?7ат, ні/мл
ФІГ. 1І2А.
ОХ, зв'язується з Ниції?8 БО 000 « В в
9. зооо є
3. М У 2000 ; Є (ФІ | Кк 1000 « У ж я ж г и о 1 10 100 то0о0 10000 Оха401:-йад, нік
ФІГ. 128. ОХАОІ. конкурує з ТА? 10000 -8 ОХАОІ -пад - ВОбО | . «а ВЕ5-йгао
5 Н.Н Кс єн б вро а а ооо а, - "ча. . 2000 ее о : Е 10 760 чо000 010000 З'єднаний з Пад конкурент, ну/мл НУ 12с.
СНБ не конкурує з ТАТ то00о -- 8000 ве. г; « г. « г. чт г. «В - -Ф ці Ф е - 6000 Г2, ШИ І 4300 вх 2000: о шия 1 10 100 100о 0000 ОБ-йво, нг/мл
ФІГ. 120.
Е! . і : В з !
Б. Н ше АН її 10 мкг : В о до 1 міг Е Е Бош шк и шо зом с щої ! х Ши НН; і Я а 2 :
В є. : Ши и а : о 18 20 зо : "ФІГ, 13,
спр 0 мокганти-оха4й Стр я 001. мг/кганти-ОХ40 то 8 в ще ї- ж то газу по ь н о 2 ох їй з кох Щі ра А га уча ще сет отсійксн й ШПОЛІ схов шифру на Ме «70 о 190 20 30-60 0 130 20ЙД 30 МОМЕНТ ЧАСУ ЧНГО4А, Стр З - 0.3 мг/кг анти-Охай Спо 8 10 мкг анти-Охао0 Ї 8 ї т в я кї 4 ТЗ КЕ а. М й в -- Ех 1 - В г 2 їх БОМ Ж ї с КА ку 0 рен вн ИН виш шшн -40 Фо 10 20 30-00 9 10 20 Д 30 МОМЕНТ ЧАСУ
ФІГ. 148.
пРО-запальні ів МеР-1 4500. 15по6. у Ф 9 Ве е ши ' у
Кх. г НАООТ, ох ОО Ех - 70000 тінаові ях е лова» ох - Не Ох Фо Тк НДЦ щі йо п У -- 500 НА З х (0 Боро: іх пе - ме 1 в і Тож г ія я - ма 2-3 сс х дтльюх дос дсидр лова по 2 15 365 395 30 31 35 б я 9 ла ї6 99 30 31 35 Період часу (діб) Період часу (іс) рент: Досліджено 22. цитокіни Ї-- Носій тя В.О мг/кг маси анти-ОХАО ях 005 мг/кг маси анти-охай тет 30 мед, маси знтичохаа
ФІГ. 15А, ПРОТИ запальні ІЛІВ ІЛ ії са вВкю ч20а- т вава, т паОде- Е Ще Я як» пе - НИ збо. г. , - щ00- надо з то 2 во Яаро її хи 8 ня. зе пе х А, й І Оля т гос ЕН я х В 300» А ях ти - - Я х и шк т 003; яхт й ї ги т. - ни 7 ух, Ох о Ці Том, . 1 т Гу ях соус ЕЕ е Бк бла іірвврит оо т т 7 ї - Й Й з 0 я 5 Б їй т3 30 332 09 025 16 29 30 31 35 Період часу (діб Період часу (діб! Досліджено 22 цитокіни -я- Несій ре ОД мок маси ОХ40 Їе- бу мік мас охай рення 40-меже маси ОХЯО м шк
ФІГ. 158.
інн дю ФК у сироватці отв ОД Гете - 40031 10 меке чо рах ДО І рендн-- ЗО0ТІ коди шо те Гній 3002 я іже г 106 Стат - іх Б зов) МЕ ї кг й ше АНЯ Еооброн : Е мая й. ! кий Кф опе дк. х Зв. г ня дон 2002 вої мік ЕЗ От кс х що вени о : щ - ! йде 2004 Е ' й х т. поч ух КЗ і хх -е А М щ- т, ії З Я рот Ж и да ппнннн сотня й й , о а їв 28 зо Період засу (діб)
ФІГ. 16А. уки оптнннт іе-ак- Од
2. | пев по Зайнитість ---- Я003 ТО мог ; оеякя- 8004 т а Ї шнєжня Зоо щ дж І І роюнкдтиют т і і нед 02 8 яю сви сан юн КОНТ ГО мгікк Іа ие вн Фо ж І: х і: м ри дин Ш ни и маш Й З ВО: я пи п М нн рн нн я
8.5 З буре вот вою жк вадах щ ре ротик Яд як ЗЕ Во ще х х се тя . | сь вро мік?
хо. Ви х ро ор: шо 0 ри и ву -е аа и є 2 я у Вк Мо; - т : бити о 8 16 за 32 Доба дослідження
ФІГ. 168.
НОВОЮ я ше : -- Р айкні ши ши ще щі УщищИ до ши ми М ше 5 ЩЕ ШИН дк : сх ке . КО З о ї їх а ча І З 25. КЗ ї- й В и " і во х уч 0,5 мкг й їм 5 с а КК возюю ОВО Ко св А вм в в. ЩЕ Ше: ИН Шия х ї Е м о Зб може а ЗД снення В онннння Ж, шк ї жали тю житя шхттнютт ие У МЕ В у: З : Ї. А тен б МКГ є яю нин ее НЯ п. пок ЗО МІС бе : Е-У г щ
З й. г 10 ях пихи т мм тих цс юну жати ті ти ви и ме тиин де ! 5 : о 20 48 60 8 Період часу (діб);
ФІГ. 17. 1290 Ф | Ба В це ' " о КУ З ово у Ж гоЯ я х Е. Е. о х т й х З ща ц І я К щ і. у і » шк з сх Ї " 1 : я З о Боб моку ща Є -кч 5, Й г з о це - БМ й - ; Я Ин МК НИ Я
8. но ех ежрттеюучечнтсттйв Я ЗО меїкг 7 щі за І 35 і Доба дослідження рення МеР-1 | яти ОО ЕК 5300. : тин уагікг Ж ву МЕР) - | ен бу вки (ч) ї пили о могою І і тестя Б ме (В - «000 : : сито В міне ок) Х ! Е , | миття: ВО мой (о - вмткг (9) І А Н потлния т ЗО мокР в. х на З т Н і х Н 77 зов. А ну Її Я КЕ. М - Я кА - Яд Ми Со ЩО. ї пк о Еш 5 КО НВ зичн с, я ву акеттеть р -0-50 34 15 385 17 43 44 45 Цоба дослідження
ФІГ. 19, 23 -- б мкг і5 -- ОБ мке о: | Я же В Мо о ж яко ЗО коке що ло кА | ше ж лена й дн Й Ше: щі ще с: в і; Кон НИК 5-Й Я т о та сесне ; 0 10 259 зо «а БО Ддаба дослідження «РІГ. 20.
UAA201610812A 2014-03-31 2015-03-30 Антитіло до ox40 та його застосування UA121112C2 (uk)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461973193P 2014-03-31 2014-03-31
US201461989448P 2014-05-06 2014-05-06
US201462073873P 2014-10-31 2014-10-31
US201462080171P 2014-11-14 2014-11-14
PCT/US2015/023432 WO2015153513A1 (en) 2014-03-31 2015-03-30 Anti-ox40 antibodies and methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA121112C2 true UA121112C2 (uk) 2020-04-10

Family

ID=52829446

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201610812A UA121112C2 (uk) 2014-03-31 2015-03-30 Антитіло до ox40 та його застосування

Country Status (29)

Country Link
EP (2) EP3632934A1 (uk)
JP (2) JP6637439B2 (uk)
KR (1) KR20160145624A (uk)
CN (1) CN106103486B (uk)
AU (1) AU2015241037B2 (uk)
BR (1) BR112016022658A2 (uk)
CA (1) CA2943262A1 (uk)
CL (1) CL2016002462A1 (uk)
CR (1) CR20160500A (uk)
DK (1) DK3126394T3 (uk)
EA (1) EA201691974A1 (uk)
ES (1) ES2763898T3 (uk)
HR (1) HRP20192285T1 (uk)
HU (1) HUE046767T2 (uk)
IL (1) IL247898A0 (uk)
LT (1) LT3126394T (uk)
MA (2) MA40682B1 (uk)
MX (1) MX2016012781A (uk)
PE (2) PE20161571A1 (uk)
PH (1) PH12016501894B1 (uk)
PL (1) PL3126394T3 (uk)
PT (1) PT3126394T (uk)
RS (1) RS59738B1 (uk)
SG (1) SG11201607969XA (uk)
SI (1) SI3126394T1 (uk)
TW (1) TWI680985B (uk)
UA (1) UA121112C2 (uk)
WO (1) WO2015153513A1 (uk)
ZA (1) ZA201606630B (uk)

Families Citing this family (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1539228B1 (en) 2002-09-11 2010-12-29 Genentech, Inc. Novel composition and methods for the treatment of immune related diseases
CN104655854A (zh) 2008-04-09 2015-05-27 健泰科生物技术公司 用于免疫相关疾病的治疗的新组合物和方法
ES2687282T3 (es) 2013-03-18 2018-10-24 Biocerox Products B.V. Anticuerpos humanizados ANTI-CD134 (OX40) y sus usos
KR20230118704A (ko) 2013-07-16 2023-08-11 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 tigit 억제제를 사용한 암을치료하는 방법
EP3126386A1 (en) 2014-03-31 2017-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists
US20160160290A1 (en) 2014-11-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Methods and biomarkers for predicting efficacy and evaluation of an ox40 agonist treatment
CA2966523A1 (en) 2014-11-03 2016-05-12 Genentech, Inc. Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof
SG11201703376QA (en) * 2014-11-06 2017-05-30 Genentech Inc Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors
TWI820377B (zh) 2015-05-07 2023-11-01 美商艾吉納斯公司 抗ｏｘ４０抗體及其使用方法
HUE061253T2 (hu) 2015-05-29 2023-06-28 Bristol Myers Squibb Co Antitestek OX40 ellen és azok felhasználásai
AU2016274585A1 (en) * 2015-06-08 2017-12-14 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-OX40 antibodies
RU2732591C2 (ru) 2015-09-25 2020-09-21 Дженентек, Инк. Анти-tigit антитела и способы применения
BR112018002570A2 (pt) 2015-10-02 2018-10-16 Hoffmann La Roche molécula de ligação ao antígeno biespecífica, anticorpo biespecífico, polinucleotídeos, anticorpo que se liga especificamente ao ox40, composição farmacêutica e método para inibir o crescimento de células tumorais em um indivíduo
US10624974B2 (en) 2015-10-15 2020-04-21 Dingfu Biotarget Co., Ltd. Anti-OX40 antibody and application thereof
MA45488A (fr) 2015-10-22 2018-08-29 Juno Therapeutics Gmbh Procédés, kits et appareil de culture de cellules
MX2018006477A (es) * 2015-12-02 2018-09-03 Agenus Inc Anticuerpos y metodos de uso de estos.
US20200079862A1 (en) * 2015-12-03 2020-03-12 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof
DE102016105069A1 (de) * 2016-03-18 2017-09-21 Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät Antivirale Immuntherapie durch Membranrezeptorligation
CN114703244A (zh) 2016-05-10 2022-07-05 豪夫迈·罗氏有限公司 重组产生多肽期间减少三硫键的方法
CN109475603B (zh) 2016-06-20 2023-06-13 科马布有限公司 抗pd-l1抗体
JP2019530434A (ja) * 2016-08-05 2019-10-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド アゴニスト活性を有する多価及び多重エピトープ抗体ならびに使用方法
JP2019526623A (ja) * 2016-08-08 2019-09-19 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． 抗ｏｘ４０結合タンパク質
US11279948B2 (en) 2016-08-31 2022-03-22 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Genetically modified non-human animal with human or chimeric OX40
CN107815465B (zh) 2016-08-31 2021-03-16 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 人源化基因改造动物模型的制备方法及应用
MA46770A (fr) 2016-11-09 2019-09-18 Agenus Inc Anticorps anti-ox40, anticorps anti-gitr, et leurs procédés d'utilisation
EP3555134A2 (en) 2016-12-19 2019-10-23 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Novel tnfr agonists and uses thereof
US20190375847A1 (en) 2017-02-15 2019-12-12 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination treatment for cancer
CN108623686A (zh) 2017-03-25 2018-10-09 信达生物制药(苏州)有限公司 抗ox40抗体及其用途
JP2021501801A (ja) * 2017-11-01 2021-01-21 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 癌の処置に用いるための免疫刺激アゴニスト抗体
WO2019106605A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Combination treatment for cancer
US11142579B2 (en) 2017-12-06 2021-10-12 Sorrento Therapeutics, Inc. Variant antibodies that bind OX40
WO2019129137A1 (zh) 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
CN115925943A (zh) 2017-12-27 2023-04-07 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pd-l1抗体及其用途
CN109970856B (zh) 2017-12-27 2022-08-23 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
WO2019129136A1 (zh) 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pd-l1抗体及其用途
CN108218990B (zh) 2017-12-29 2021-03-02 南京优迈生物科技有限公司 分离的抗体或其抗原结合片段及其在肿瘤治疗中的应用
MY195411A (en) * 2017-12-29 2023-01-19 Ap Biosciences Inc Monospecific and Bispecific Proteins With Immune Checkpoint Regulation for Cancer Therapy
CN111393529B (zh) * 2018-01-29 2022-02-22 康源博创生物科技(北京)有限公司 与ox40l非竞争结合的抗ox40抗体
TW202003555A (zh) 2018-03-07 2020-01-16 英商葛蘭素史克智慧財產發展有限公司 用於純化重組多肽之方法
AU2019236865A1 (en) 2018-03-23 2020-10-01 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against MICA and/or MICB and uses thereof
KR20200136454A (ko) 2018-03-27 2020-12-07 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 자외선 신호를 사용한 단백질 농도의 실시간 모니터링
CN111936625A (zh) 2018-03-29 2020-11-13 豪夫迈·罗氏有限公司 调节哺乳动物细胞中的生乳活性
AU2019264712A1 (en) 2018-05-11 2021-01-07 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Fully human antibodies against OX40, method for preparing same, and use thereof
US20210277135A1 (en) 2018-07-13 2021-09-09 Bristol-Myers Squibb Company Ox-40 agonist, pd-1 pathway inhibitor and ctla-4 inhibitor combination for use in a method of treating a cancer or a solid tumor
TWI754157B (zh) 2018-07-25 2022-02-01 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 抗ｔｉｇｉｔ抗體及其用途
CN112513088B (zh) 2018-09-26 2023-05-16 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗ox40抗体、其抗原结合片段及其医药用途
CN113166248B (zh) * 2018-11-26 2022-05-27 南京金斯瑞生物科技有限公司 人源化抗人ox40单克隆抗体及其制备方法和用途
US20220017632A1 (en) * 2018-12-25 2022-01-20 Hanx Biopharmaceutics, Inc Anti-ox40 monoclonal antibody and application thereof
US10442866B1 (en) 2019-01-23 2019-10-15 Beijing Mabworks Biotech Co. Ltd Antibodies binding OX40 and uses thereof
US20220135619A1 (en) 2019-02-24 2022-05-05 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating a protein
US20220220430A1 (en) 2019-05-23 2022-07-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of monitoring cell culture media
CN114174538A (zh) 2019-05-30 2022-03-11 百时美施贵宝公司 适合于免疫肿瘤学疗法的多肿瘤基因特征
US20220233691A1 (en) 2019-05-30 2022-07-28 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
EP3976832A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
CN110172090B (zh) * 2019-06-03 2020-04-03 中山标佳生物科技有限公司 Cd134单克隆抗体及其制备方法和癌症治疗中的应用
WO2020259667A1 (zh) * 2019-06-28 2020-12-30 江苏恒瑞医药股份有限公司 Tlr激动剂与抗ox40抗体或其抗原结合片段联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途
EP4061851A4 (en) * 2019-11-21 2023-12-20 BeiGene, Ltd. METHODS OF TREATING CANCER USING ANTI-OX40 ANTIBODIES IN COMBINATION WITH PI3 KINASE DELTA INHIBITORS
CN114729047A (zh) * 2019-11-21 2022-07-08 百济神州(北京)生物科技有限公司 使用抗ox40抗体与化学治疗剂组合治疗癌症的方法
AU2020407208A1 (en) 2019-12-17 2022-06-02 Amgen Inc. Dual interleukin-2 /tnf receptor agonist for use in therapy
WO2021190582A1 (zh) * 2020-03-25 2021-09-30 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种抗ox40抗体药物组合物及其用途
EP4127153A2 (en) 2020-03-26 2023-02-08 Genentech, Inc. Modified mammalian cells having reduced host cell proteins
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
MX2022012913A (es) * 2020-04-17 2022-11-14 Hutchison Medipharma Ltd Anticuerpo anti-ox40 y usos del mismo.
JP2023533217A (ja) 2020-06-24 2023-08-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド アポトーシス耐性細胞株
CA3192344A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Genentech, Inc. Crispr/cas9 multiplex knockout of host cell proteins
MX2023002326A (es) 2020-08-31 2023-03-21 Bristol Myers Squibb Co Firma de localizacion celular e inmunoterapia.
WO2022076318A1 (en) 2020-10-05 2022-04-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods for concentrating proteins
AU2021361083A1 (en) * 2020-10-13 2023-05-11 Almirall, S.A. Bispecific molecules and methods of treatment using the same
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
WO2022146947A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
EP4267172A1 (en) 2020-12-28 2023-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Subcutaneous administration of pd1/pd-l1 antibodies
EP4289865A1 (en) 2021-02-04 2023-12-13 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-tnfr2 antibody and use thereof
EP4314068A1 (en) 2021-04-02 2024-02-07 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
JP2024514222A (ja) 2021-04-19 2024-03-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 改変された哺乳動物細胞
WO2022246259A1 (en) 2021-05-21 2022-11-24 Genentech, Inc. Modified cells for the production of a recombinant product of interest
CN115403670A (zh) 2021-05-26 2022-11-29 安徽瀚海博兴生物技术有限公司 抗cd40抗体及其用途
CN115611983A (zh) 2021-07-14 2023-01-17 三优生物医药(上海)有限公司 Cldn18.2结合分子及其用途
TW202323280A (zh) * 2021-10-15 2023-06-16 新加坡商創響私人有限公司 包含抗－ｏｘ４０單株抗體的藥物製劑
WO2023173011A1 (en) 2022-03-09 2023-09-14 Bristol-Myers Squibb Company Transient expression of therapeutic proteins
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2024054992A1 (en) 2022-09-09 2024-03-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of separating chelator

Family Cites Families (137)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CU22545A1 (es) 1994-11-18 1999-03-31 Centro Inmunologia Molecular Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
AU639726B2 (en) 1989-09-08 1993-08-05 Duke University Structural alterations of the egf receptor gene in human gliomas
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE164395T1 (de) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
DE69333807T2 (de) 1992-02-06 2006-02-02 Chiron Corp., Emeryville Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür
WO1994011026A2 (en) 1992-11-13 1994-05-26 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
GB9314893D0 (en) 1993-07-19 1993-09-01 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
ATE207366T1 (de) 1993-12-24 2001-11-15 Merck Patent Gmbh Immunokonjugate
US5679683A (en) 1994-01-25 1997-10-21 Warner-Lambert Company Tricyclic compounds capable of inhibiting tyrosine kinases of the epidermal growth factor receptor family
IL112248A0 (en) 1994-01-25 1995-03-30 Warner Lambert Co Tricyclic heteroaromatic compounds and pharmaceutical compositions containing them
IL112249A (en) 1994-01-25 2001-11-25 Warner Lambert Co Pharmaceutical compositions containing di and tricyclic pyrimidine derivatives for inhibiting tyrosine kinases of the epidermal growth factor receptor family and some new such compounds
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
AU686466B2 (en) 1994-07-21 1998-02-05 Akzo Nobel N.V. Cyclic ketone peroxide formulations
US5804396A (en) 1994-10-12 1998-09-08 Sugen, Inc. Assay for agents active in proliferative disorders
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
WO1996030347A1 (en) 1995-03-30 1996-10-03 Pfizer Inc. Quinazoline derivatives
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
GB9508565D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quiazoline derivative
GB9508538D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
US5747498A (en) 1996-05-28 1998-05-05 Pfizer Inc. Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
JPH11507535A (ja) 1995-06-07 1999-07-06 イムクローン システムズ インコーポレイテッド 腫瘍の成長を抑制する抗体および抗体フラグメント類
CZ1598A3 (cs) 1995-07-06 1998-04-15 Novartis Ag Pyrrolopyrimidiny a způsoby jejich přípravy
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US5760041A (en) 1996-02-05 1998-06-02 American Cyanamid Company 4-aminoquinazoline EGFR Inhibitors
GB9603095D0 (en) 1996-02-14 1996-04-10 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
CN100503580C (zh) 1996-04-12 2009-06-24 沃尼尔·朗伯公司 酪氨酸激酶的不可逆抑制剂
DE69716916T2 (de) 1996-07-13 2003-07-03 Glaxo Group Ltd Kondensierte heterozyklische verbindungen als protein kinase inhibitoren
ID18494A (id) 1996-10-02 1998-04-16 Novartis Ag Turunan pirazola leburan dan proses pembuatannya
US6002008A (en) 1997-04-03 1999-12-14 American Cyanamid Company Substituted 3-cyano quinolines
UA73073C2 (uk) 1997-04-03 2005-06-15 Уайт Холдінгз Корпорейшн Заміщені 3-ціанохіноліни, спосіб їх одержання та фармацевтична композиція
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
AU7165698A (en) 1997-05-06 1998-11-27 American Cyanamid Company Use of quinazoline compounds for the treatment of polycystic kidney disease
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
DE69830315T2 (de) 1997-06-24 2006-02-02 Genentech Inc., San Francisco Galactosylierte glykoproteine enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur deren herstellung
ZA986729B (en) 1997-07-29 1999-02-02 Warner Lambert Co Irreversible inhibitors of tyrosine kinases
ZA986732B (en) 1997-07-29 1999-02-02 Warner Lambert Co Irreversible inhibitiors of tyrosine kinases
TW436485B (en) 1997-08-01 2001-05-28 American Cyanamid Co Substituted quinazoline derivatives
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
EP1028751B1 (en) 1997-10-31 2008-12-31 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
CN1278176A (zh) 1997-11-06 2000-12-27 美国氰胺公司 喹唑啉衍生物作为用于治疗结肠息肉的酪氨酸激酶抑制剂的应用
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
DK1034298T3 (da) 1997-12-05 2012-01-30 Scripps Research Inst Humanisering af murint antistof
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
IL138608A0 (en) 1998-04-02 2001-10-31 Genentech Inc Antibody variants and fragments thereof
ES2340112T3 (es) 1998-04-20 2010-05-28 Glycart Biotechnology Ag Ingenieria de glicosilacion de anticuerpos para la mejora de la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.
GEP20032997B (en) 1998-11-19 2003-06-25 Warner Lambert Co N-[4-(3-Chloro-4-Fluoro-Phenylamino)-7-(3-Morpholin-4-Yl-Propoxy)-Quinazolin-6-Yl]-crylamide, as an Irreversible Inhibitor of Tyrosine Kinases
WO2000042072A2 (en) 1999-01-15 2000-07-20 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1176195B1 (en) 1999-04-09 2013-05-22 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
KR100797667B1 (ko) 1999-10-04 2008-01-23 메디카고 인코포레이티드 외래 유전자의 전사를 조절하는 방법
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
JP4668498B2 (ja) 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 ポリペプチドの製造方法
WO2001044463A1 (en) 1999-12-15 2001-06-21 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
DK1242438T3 (da) 1999-12-29 2007-02-12 Immunogen Inc Cytotoksiske midler omfattende modificerede doxorubiciner og daunorubiciner og deres terapeutiske anvendelse
LT2857516T (lt) 2000-04-11 2017-09-11 Genentech, Inc. Multivalentiniai antikūnai ir jų panaudojimas
PL218428B1 (pl) 2000-10-06 2014-12-31 Kyowa Hakko Kogyo Kk Komórka, sposoby wytwarzania przeciwciał, leki zawierające przeciwciała, komórka CHO i przeciwciało klasy IgG
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7041870B2 (en) 2000-11-30 2006-05-09 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
EP2180044A1 (en) 2001-08-03 2010-04-28 GlycArt Biotechnology AG Antibody glycosylation variants having increased anti-body-dependent cellular cytotoxicity
WO2003035835A2 (en) 2001-10-25 2003-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20040259150A1 (en) 2002-04-09 2004-12-23 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of enhancing of binding activity of antibody composition to Fcgamma receptor IIIa
PL373256A1 (en) 2002-04-09 2005-08-22 Kyowa Hakko Kogyo Co, Ltd. Cells with modified genome
CA2481837A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
WO2003084569A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicament contenant une composition anticorps
ES2362419T3 (es) 2002-04-09 2011-07-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Células con depresión o deleción de la actividad de la proteína que participa en el transporte de gdp-fucosa.
US20050031613A1 (en) 2002-04-09 2005-02-10 Kazuyasu Nakamura Therapeutic agent for patients having human FcgammaRIIIa
AU2003239966B9 (en) 2002-06-03 2010-08-26 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
ES2295639T3 (es) * 2002-06-13 2008-04-16 Crucell Holland B.V. Agonistas del receptor ox40=(=cd134) y uso terapeutico descripcion.
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
AR042485A1 (es) 2002-12-16 2005-06-22 Genentech Inc Anticuerpo humanizado que se une al cd20 humano
CA2510003A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US20080241884A1 (en) 2003-10-08 2008-10-02 Kenya Shitara Fused Protein Composition
AU2004280065A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using RNA inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
EA036531B1 (ru) 2003-11-05 2020-11-19 Роше Гликарт Аг Гуманизированное антитело типа ii к cd20 (варианты), фармацевтическая композиция, содержащая эти варианты антитела, и их применение
ZA200603619B (en) 2003-11-06 2008-10-29 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
ZA200608130B (en) 2004-03-31 2008-12-31 Genentech Inc Humanized anti-TGF-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
CA2561533C (en) 2004-04-13 2015-06-16 Yvo Graus Anti-p-selectin antibodies
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
NZ580115A (en) 2004-09-23 2010-10-29 Genentech Inc Cysteine engineered antibody light chains and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
DK2161336T4 (en) 2005-05-09 2017-04-24 Ono Pharmaceutical Co Human monoclonal antibodies for programmed death 1 (PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapies
AU2006265108C1 (en) 2005-07-01 2013-01-17 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (PD-L1)
US8679490B2 (en) 2005-11-07 2014-03-25 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
TWI461436B (zh) * 2005-11-25 2014-11-21 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd 人類ｃｄ１３４（ｏｘ４０）之人類單株抗體及其製造及使用方法
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
EP2016101A2 (en) 2006-05-09 2009-01-21 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
SI2242771T1 (sl) * 2007-12-14 2013-09-30 Bristol-Myers Squibb Company Vezane molekule k humanemu ox40 receptorju
ES2774337T3 (es) 2008-01-07 2020-07-20 Amgen Inc Método para fabricación de moléculas heterodímeras Fc de anticuerpos utilizando efectos de conducción electrostática
RU2531758C2 (ru) 2008-02-11 2014-10-27 Куретек Лтд. Моноклональные антитела для лечения опухолей
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
PT2824100T (pt) 2008-07-08 2018-05-10 Incyte Holdings Corp 1,2,5-oxadiazoles como inibidores da indoleamina 2,3-dioxigenase
KR20110074850A (ko) 2008-08-25 2011-07-04 앰플리뮨, 인크. Ｐｄ-１ 길항제 및 그의 사용 방법
SG10201708690SA (en) 2008-12-09 2017-12-28 Genentech Inc Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
US20130017199A1 (en) 2009-11-24 2013-01-17 AMPLIMMUNE ,Inc. a corporation Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
EP2399604A1 (en) * 2010-06-25 2011-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Novel antibody formulation

Also Published As

Publication number Publication date
SG11201607969XA (en) 2016-10-28
CN106103486B (zh) 2020-04-21
MX2016012781A (es) 2016-12-14
HUE046767T2 (hu) 2020-03-30
AU2015241037B2 (en) 2020-10-15
HRP20192285T1 (hr) 2020-03-06
PL3126394T3 (pl) 2020-05-18
PE20211291A1 (es) 2021-07-20
EP3126394B1 (en) 2019-10-30
SI3126394T1 (sl) 2020-01-31
MA40682A (fr) 2017-02-08
PT3126394T (pt) 2019-12-19
CA2943262A1 (en) 2015-10-08
CL2016002462A1 (es) 2017-06-23
JP2017514461A (ja) 2017-06-08
EP3126394A1 (en) 2017-02-08
EP3632934A1 (en) 2020-04-08
PE20161571A1 (es) 2017-02-07
RS59738B1 (sr) 2020-02-28
PH12016501894A1 (en) 2017-01-09
AU2015241037A1 (en) 2016-10-13
ES2763898T3 (es) 2020-06-01
WO2015153513A1 (en) 2015-10-08
AU2015241037A9 (en) 2016-11-03
WO2015153513A8 (en) 2016-10-13
EA201691974A1 (ru) 2017-04-28
TW201620937A (zh) 2016-06-16
CR20160500A (es) 2016-12-14
IL247898A0 (en) 2016-11-30
BR112016022658A2 (pt) 2017-10-17
DK3126394T3 (da) 2020-01-13
KR20160145624A (ko) 2016-12-20
ZA201606630B (en) 2020-12-23
MA51552A (fr) 2021-03-24
CN106103486A (zh) 2016-11-09
LT3126394T (lt) 2020-01-27
MA40682B1 (fr) 2020-01-31
JP2020072678A (ja) 2020-05-14
JP6637439B2 (ja) 2020-01-29
PH12016501894B1 (en) 2017-01-09
TWI680985B (zh) 2020-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA121112C2 (uk) Антитіло до ox40 та його застосування
EP3519441B1 (en) Chimeric engulfment receptor molecules
AU2020202712B2 (en) Treatment of cancer with dual targeting of CD47 and EGFR
US20180346586A1 (en) Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies
US9975957B2 (en) Anti-OX40 antibodies and methods of use
AU2013306390B2 (en) Antibodies and vaccines for use in treating ROR1 cancers and inhibiting metastasis
US20210023135A1 (en) Cellular immunotherapy compositions and uses thereof
JP7026047B2 (ja) 免疫調節剤を併用するがんの治療
US8212009B2 (en) Methods and compounds for lymphoma cell detection and isolation
JP2021519580A (ja) キメラ貪食受容体のための発現ベクター、遺伝子改変宿主細胞およびそれらの使用
JP2020534871A (ja) キメラエンガルフメント受容体分子および使用方法
CN109154027A (zh) 用于监测和治疗癌症的方法
US20230227566A1 (en) Amhrii-binding compounds for preventing or treating lung cancers