經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1224010 A7 - —__B7____ 五、發明說明（1 ) 技衞頜Μ 本發明為關於肌虜老化抑制劑和/或虜質改善劑，及 由該肌虜老化抑制劑和/或慮質改善劑所構成之抑制肌 慮老化和/或改善虜質用化粧料。 背暑坊衞 自以往，在取得防止雛紋、鬆弛、乾燥肌慮等麻煩原 因之肌虜老化及虜質惡化等美容效果之目的下，乃於廣 泛之化粧料中配合防止老化之素材。 於化粧料中所配合之防止老化之素材可大致區別成過 氧化脂質抑制劑及細胞賦活劑〇 具有過氧化脂質抑制作用之素材有羥基酸、維生 素Α、 胡籮《素、維生素Βΐ2、維生素Ε、或Puraltin 、Puratonin等色素類、黃岑、芸香甘、芝麻萃取物、 茶萃取物等。另一方面，細胞賦活劑已知有Muminex、 乙醇酸、y-胺基酸、唾液酸、蜂王膠、當藥萃取物、 曰本當藥、高麗參萃取物等。已知細胞賦活劑為促進膠 原合成之材料、具有庸質改善作用之材料等。 促進膠原合成之材料已知有轉化生長因子>81、血小 板生長因子、基本纖維母細胞生長因子、類胰島素生長 因子1等各種生長因子及絲蛋白等。 具有慮質改善作用之材料已知有尿囊素、蘆薈萃取物 、人參萃取物、胎盤萃取物、牛血液除蛋白質、醱酵代 謝物等。 已報導羥基脯胺酸衍生物為藉由令鼠肝臟破碎物之耗 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注咅心事項再填寫本頁)
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1224010 A7 _B7__ 五、發明說明（2 ) 氧量增加，而可利用作為可保持肌虜彈性之化粧料（特 開平1-131107)，但一切關於鼠肝臟破碎物耗氧量增加 與對於肌慮之效果關係、及作為化粧品之有效性數據則 未示出，且由該報告並無法結論出羥基脯胺酸衍生物可 有效作為化粧品。 迄今，並無實際證明羥基脯胺酸或羥基脯胺酸之衍生 物可有效作為化粧品之報告。 已有於增強保濕效果之目的下，於粘蛋白（持開平 5 - 3 3 9 1 4 0)、或甘胺酸甜藥鹸與吡咯烷酮羧酸或其鹽（特 開平9 - 8 7 1 2 6 2 )等中添加胺基酸之化粧品報告。於該報 告中，雖舉出羥基脯胺酸作為胺基酸之例，但關於羥基 脯胺酸作為化粧品之效果的一切數據並未被示出。 並未知羥基脯胺酸及羥基脯胺酸之N-醛基衍生物為具 有促進表皮細胞增殖之活性，於纖維母細胞中促進膠原 合成之活性，且並未知利用該活性之化粧材料。 更且，迄今仍未知使用撤生物所製造之羥基脯胺酸之 化粧料。 發明夕搦沄 本發明之目的為在於提供具有肌慮老化抑制作用和/ 或虜質改善作用之表皮細胞增殖促進劑、纖雒母細胞之 膠原合成促進劑、表皮之水分保持機能改善劑等之肌虜 老化抑制劑和/或肌質改善劑，及含有該肌虜老化抑制 劑和/或虜質改善劑之抑制肌虜老化和/或改善虜質用 化粧料。 -4 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------------------線丨0 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 1224010 A7 ___B7 _— _ 五、發明說明（3 ) 本發明者等人，對於具有保濕效果、肌I»老化抑制作 用及虜質改善作用且安全性高之化粧料進行致力檢討， 結果於羥基腩胺酸或其N -醯基衍生物中發現效果，並且 到達完成本發明。 卽，本發明為關於以下之（1 )〜（1 4 )。 (1) 一種肌虜老化抑制劑和/或虜質改善劑，其為以 羥基脯胺酸或羥基脯胺酸之卜醯基衍生物或其鹽作為有 效成分。 (2) —種如上述（1)記載之肌虜老化抑制劑和/或虜質 改善劑，其特徵為羥基脯胺酸或羥基脯胺酸之卜醯基衍 生物相對於全重量為含有0·01〜5重量35。 (3) —種如上逑（1)或（2)記載之肌虜老化抑制劑和或 虜質改善劑，其中羥基脯胺酸之卜醯基衍生物為Ν-乙醯 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項 1¾ t i 訂 物 生 衍 化 基 醯 丙- N 或 物 生 衍 化 基 \)/ 1 /(\ 逑 上 如 C1 種 制 抑 化 老 虜 肌 之 钱 IIE 記 項 1 任 和 -劑基 劑 善 改 質 虜 或 式 順 / 酸 胺 脯 式 順 酸 胺 脯 基 羥 羥 一 4- 式 順 由 為 酸 胺 脯 基 羥 中 基 羥- 3- 式 順 / 酸 胺 脯 - D I 基 基 羥 I 4 - 式 反 / 酸 胺 I線. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 式 < , 3 反 I 、式 酸反 胺及 脯酸 酸 胺 基 羥 逑 上 如 I 種 基 羥 胺脯 脯基 L-羥 -之 出 選 -3所 式中 反群 、成 0 0 0 -ffl胺所 -D脯酸 胺 脯 基 羥 制 抑 化 老 虜 肌 之 钱 ΠΕ 記 項 1 任 産 所 物 生 撤 由 為 酸 胺 脯 基 羥 中 其 劑 善 。 改酸 質胺 虜脯 或基 / 羥 和的 劑生 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 122401ο A7 B7 &、發明說明（） (6) —種如上逑（5)記載之肌虜老化抑制劑和/或虜質 改善劑，其中微生物為由來自屬於Afflyc〇lat〇psis屬、 指狀孢子囊（Dactylosporangium)屬及鏈霉® (Streptomyces)屬所選出之微生物之導入腩胺酸第3位 氫氧化酶或脯胺酸第4位氫氧化酶基因之撤生物。 (7) —種如上逑（1)〜（6)任一項記載之肌虜老化抑制 劑和/或虜質改善劑，其中肌庸老化抑制劑和/或虜質 改善劑為表皮細胞之增殖促進劑。 (8) —種如上逑（1)〜（6)任一項記載之肌虜老化抑制 劑和/或慮質改善劑，其中肌虜老化抑制劑和/或虜質 改善劑為纖維母細胞之膠原合成促進劑。 (9) 一種如上逑（1)〜（6)任一項記載之肌虜老化抑制 劑和/或虜質改善劑，其中肌虜老化抑制劑和或/ #質 改善劑為表皮之水分保持機能改善劑。 (10) —種如上逑（1)〜（6)任一項記載之肌虜老化抑制 劑和/或虜質改善劑，其中肌虜老化抑制劑和/或廉質 改善劑為形成雛紋之抑制劑或改善劑。 (11) 一種如上述（1)〜（1〇)任一項記載之肌虜老化抑 制劑和/或慮質改善劑，其中肌虜為人類之肌®。 (12) —種抑制肌虜老化和/或改善慮質用化粧料，其 為含自上逑（1)〜（11)任一項記載之肌虜老化抑制劑和/ 或虜質改善劑。 (13) —種如上述（12)記載之化粧料，其中經基脯胺酸 或羥基脯胺酸之卜乙醯基衍生物或其鹽為卜乙醯趣基脯 -6 一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · --線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1224〇i〇 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 i、發明說明（5 ) 胺酸或其鹽。 (1 4 ) 一種如上述（1 2 )或（1 3 )記載之化粧料，其為於化 粧料中含有一種或二種以上選自卵磷脂、溶血卵磷脂及 透明質酸之成分。 本發明所謂之肌虜老化抑制劑和/或慮質改善劑，為 意指具有肌齋老化抑制作用或肌質改善作用之物質，或 者，具有肌虜老化抑制作用與庸質改善作用兩者作用之 物質。 本發明所使用之羥基脯胺酸可為脯胺酸為D體或L體 、或羥基之位置為第3位或第4位、及其之立髖異構物 為順式或反式所構成的8種立體異構物。具體之羥基脯 胺酸可列舉順式-4-羥棊-L-脯胺酸、順式-4-羥基脯 胺酸、順式-3-羥基-L-脯胺酸、順式-3-羥基-D-脯胺酸 、反式-4-羥基脯胺酸、反式-4-羥基-D-脯胺酸、反 式-3-羥基脯胺酸及反式-3-羥基脯胺酸。 羥基脯胺酸為以膠原中之主要構成胺基酸成分型式、 或以彈性蛋白之構成胺基酸型式、廣泛存在於自然界中 的一種胺基酸，例如可將來自豬及牛等動物之膠原予以 酸解，並且依常法精製則可製造。 反式-4-羥基-L-脯胺酸可使用由Amycolatopsis屬或 指狀孢子囊（Dactylosporangium)屬所單離之腩胺酸第4 位氫氧化酶（特開平7-313179號公報）進行製造。又，順 式-3-羥基脯胺酸可使用鏈霉薗屬（Streptomyces)屬 所單離之脯胺酸第3位氫氣化酶（特開平7 - 3 2 2 8 8 5號公報） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再 I · I . 本頁 訂· -線- -1 1224010 A7 _____B7_ 五、發明說明（6 ) 進行製造[Bio-industry， 14,31(1997)]。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明中，使用微生物所製造之羥基脯胺酸，由可輕 易取得更優良品質之物質方面而言為佳。 本發明所用之羥基脯胺酸的N-醯基衍生物，可列舉上 逑各種羥基脯胺酸之立體異構物的N-醯基衍生物。該N-醯基衍生物之醯基雖無特別限制，但較佳為磺數1〜2 4 個、更佳為碩數1〜12個、特佳為磺數1〜6個之醯基， 且具體而言列舉甲醯基、乙醯基、丙醯基、丁醯基、異 丁醯基、戊醯基、待戊醯基、己醯基、庚醯基、辛醯基 、壬醯基、癸醯基、十一醯基、十二醯基等。 羥基脯胺酸或羥基脯胺酸之N-醯基衍生物之鹽可列舉 鈉、鉀、鋰等之鹺金屬鹽、鈣、鎂等之鹸土金屬鹽、銨 鹽、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、三異丙醇胺等之 胺之加成鹽及精胺酸、離胺酸等之鹼性胺基酸之加成鹽 等。 -—線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 羥基脯胺酸之N -醯基衍生物可根據公知之方法進行調 製。例如，羥基脯胺酸之N-醯基衍生物可藉由令直鐽或 分技狀之磺數1〜24個之飽和或不飽和脂肪酸，使用亞 硫醯氯、光氧等鹵化劑，變換成氯化物、溴化物等鹵化 物後，與前逑之羥基脯胺酸縮合則可製造，或將脂肪酸 變換成酸酐後，與羥基脯胺酸反應則可製造。 脂肪酸可列舉例如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸 、戊酸、異戊酸、特戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、 癸酸、十一磺酸、十二磺酸等之單獨或組合的脂肪酸。 -8- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224010 A7 _____B7__ 五、發明說明（7 ) 以下例示經由醯基鹵化物，製造羥基脯胺酸之卜醯基 衍生物之方法。 請 先 閱 讀 背 之 注 意 事 項 將脂肪酸於二氯甲烷、氯仿、四氯化磺、苯、甲苯、 二甲苯、正己烷等溶劑中分散，並於其中添加1〜5倍當 量之鹵化劑令其反應，取得脂肪酸齒化物。其次，令羥 基脯胺酸溶解或分散於溶劑中，並且將所得之溶液一邊 保持於5〜7fl°C，一邊將上逑之脂肪酸鹵化物相對於羥 基腩胺酸加入0.3〜3.Q倍當量，並且進行醯基化反應則 可製造羥基脯胺酸之醯基衍生物。 訂 使用醯基化反應所用之溶劑可列舉水、甲醇、乙醇、 異丙醇、異丁醇、丙酮、甲苯、四氫呋喃、乙酸乙酯、 N，卜二甲基甲醯胺、二甲基亞硪等，其可單獨或混合使 用。將羥基脯胺酸於溶劑中溶解或分散時，視霈要亦可 將相對於羥基脯胺酸之0.8〜2.0倍當量之氫氧化鈉、氫 氣化鉀等之鹸性物質，於溶劑中溶解或分散亦可。 線 欲取得羥基脯胺酸之卜醯基衍生物之鹽時，於羥基腩 胺酸之N-醯基衍生物為以鹽型式取得之情形中，可就其 原樣進行精製，以游離型式取得之情形中，則可於適當 之溶劑中溶解或懸浮，並且加入鹼令其形成鹽卽可。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 可使用例如結晶化、層析等通常之方法進行精製。 於本發明之肌虜考化抑制劑和/或虜質改善劑及含有 彼等之抑制肌虜老化和/或虜質改善用化粧料中，可將 順式/反式-4-羥基-L/D-脯胺酸、順式/反式-3-羥基 - L/D-脯胺酸、或彼等之N-醯基衍生物或其鹽予以單獨 -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1224010 A7 _J7_ 五、發明說明（8 ) 或混合使用。
此些羥基脯胺酸或羥基脯胺酸之醯基衍生物或其鹽 於肌慮老化抑制劑和/或慮質改善劑及化粧料中之含量 ，可視效果而於廣泛範圍中增減。此些化合物於肌虜老 化抑制劑和/或虜質改善劑及化粧料中之含量，可列舉 例如0.01〜5重量％，且較佳為〇·1〜5重量％，特佳為〇·5 〜3重量U 於本發明中，所諝的肌慮老化作用和/或虜質改善作 用可例示例如表皮細胞之增殖促進作用，纖維母細胞之 膠原合成促進作用、表皮之水分保持機能改善作用、抑 制或改善形成皺紋之作用等，但並非限定於此。又，肌 虜可例如鼠、狗、貓、馬等玩賞動物等及人類之肌虜， 但以人類肌慮為佳。 又，纖維母細胞之膠原合成促進劑、表皮之水分保持 機改善劑，以羥基脯胺酸之Ν-醯基衍生物為佳，且以 乙醯基羥基脯胺酸為更佳。 於本發明之肌慮老化抑制劑和/或肌質改善劑及由肌 虜老化抑制劑和/或庸質改善劑所構成之抑制肌慮老化 和/或改善廉質用化粧料中，除了上逑之必須成分，視 霈要亦可含有通常化粧材料所配合之成分。 .配合成分可列舉例如固型油、半固型油、其他之保濕 劑、軟化劑、水溶性高分小、油溶性高分子、各種界面 活性劑、無機及有機顔料、聚矽氧烷或氟化合物所處理 之無機及有機顔料、有機染料等之色劑、乙醇、紫外線 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
1224010 A7 _B7_^ 五、發明說明（9 ) 吸收劑、防腐劑、抗氯化劑、色素、增粘劑、PH調整劑 、香料、血行促進劑、冷感劑、制汗劑、殺菌劑、肌虜 柔軟劑、水等，且可在不損害本發明目的、效果之質、 量之範圍内含有。 固型、半固型油可列舉凡士林、羊毛脂、微晶狀蠟、 巴西棕櫚蠟、小燭樹蠟；椰子油脂肪酸、月桂酸、硬化 牛脂脂肪酸等之高级脂肪酸；月桂醇、鯨鱲醇、硬脂醇 、山蝓醇等之高級醇等。 液體油可列舉例如鱺梨油、橄欖油、荷荷巴油等之植 物油；油酸、異硬脂酸等之脂肪酸；十六醇、油醇等之 醇類；2-乙基己酸鯨蠘酯、肉豆蔻酸2-辛基十二酯、二 -2 -乙基己酸新戊二醇、三-2-乙基己酸甘油酯、油酸 - 2-辛基十二酯、肉豆蔻酸異丙酯、三異硬脂酸甘油酯 、2 -乙基己酸二甘油酯、長鏈醯基麩胺酸辛基十二酯等之 酯油；二甲基聚矽氧烷、甲基氫聚矽氧烷、甲基苯基聚 矽氧烷、八甲基璟四矽氧烷等之矽油；流動石蠟、凡士 林、角鯊烯、角鯊烷等之液狀烴油等。 保濕劑可列舉脂溶性保濕劑、低分子保濕劑及高分子 保濕劑。 脂溶性保濕劑可列舉例如溶血卵磷脂、卵磷脂、膽固 醇、膽固醇醋、神經鞘脂質、神經醯胺等。 低分子保濕劑可列舉絲胺酸、麩胺醯胺、山梨醇、甘 露醇、甘油、吡咯烷酮-羧酸鈉、1，3-丁二醇、丙二醇 、乳酸、乳酸鹽等。 -11- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再Wk本頁) . --線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1224010 A7 B7 五、發明說明（1% (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 高分子保濕劑可列舉透明質酸、透明質酸鈉、彈性蛋 白、藻酸、粘多糖類、聚乙二醇、聚元冬胺酸鹽、水溶 性幾丁質等。 軟化劑可列舉例如長鏈醯基麩胺酸膽固醇酯、羥基硬 脂酸膽固醇、12-羥基硬脂酸、硬脂酸、玫瑰酸、羊毛 脂脂肪酸膽固醇酯等。 --線· 界面活性劑可列舉例如聚氣乙烯（簡稱為P0E)鯨蠘醚 、Ρ0Ε硬脂酸酯、Ρ0Ε山梨糖醇酐單月桂酸酯、甘油脂肪 酸酯、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯硬化憩麻油等之非離 子界面活性劑；潔爾滅、氯化硬脂醯三甲基銨、氯化二 鯨蠟基二甲基銨、氯化山蝓醯基三甲基銨等之陽離子界 面活性劑；2-椰子基-N-羧甲基羥乙基眯唑啉甜菜鹸 、醯胺醋酸甜菜鹼等之兩性界面活性劑；高级醇硫酸鹽 、高级醇醚硫酸鹽、長鏈脂肪酸鹸金颶鹽、長鏈脂肪酸 鹼土金屬鹽、長鏈脂肪酸鹼性胺基酸鹽、N-長鏈醯基胺 基酸、卜長鏈醛基胺基酸鹽等之陰離子界面活性劑。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 水溶性高分子可列舉例如羧甲基纖維素、甲基纖維素 、羥甲基纖維素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠 、鹿角膠、糊精、糊精脂肪酸酯、羧乙烯基聚合物、阽 吨酮膠、明膠、藻酸鈉、阿拉伯膠等之化粧料所泛用之 水溶性高分子。 油溶性高分子可列舉聚乙烯毗咯烷酮·二十磺烯共聚 物、聚乙烯吡咯烷酮•十六磺烯共聚物、硝基纖維素、 高級聚矽氧烷等化粧料所泛用之油溶性高分子。 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224010 A7 _B7_ __ 五、發明說明（U) 有機及無機顔料可列舉例如矽酸、無水砂酸、矽酸1舅 、滑石、絹雲母、雲母、高嶺土、紅色氣化鐵、粘土、 膨潤土、鈦被膜雲母、羥基氮化鉍、氯化錯、氧化1負、 氧化鋅、氣化鈦、氧化鋁、硫酸鈣、硫酸賴、硫酸fJI、 磺酸鈣、磺酸鎂、氧化鐵、群青、氧化鉻、氫氯化銘、 異極礦及磺黑及其複合體等之無機粉體；聚醇胺、聚醋 、聚丙烯、聚苯乙烯、聚胺基甲酸酯、乙嫌基樹脂、脲 樹脂、苯酚樹脂、氟樹脂、矽樹脂、丙嫌酸樹脂、蜜胺 樹脂、環氧樹脂、聚磺酸酯樹脂、二乙嫌基苯•苯乙嫌 共聚物、絲粉、纖維素、CI顔料黃、CI顔料撥等之有機 粉體；及此些無機粉體與有機粉體之混合粉體等。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -線· 有機粉體可使用硬脂酸鈣等之金屬肥皂；嫁蠘基碟酸 鋅鈉、月桂基磷酸鋅、月桂基磷酸錚等之焼基磷酸多價 金屬鹽；N -月桂醯-冷-丙胺醯鈣、N -月桂醯丙胺醯 鋅、N -月桂醯甘胺酸鈣等之醯基胺基酸多價金屬鹽；N-月桂醯-牛磺酸鈣、N-棕櫚醯-牛磺酸精胺酸、Να-硬化 牛脂脂肪酸醯基精胺酸等之Ν-醯基鹼性胺基酸；Ν-月桂 醯甘胺醯甘胺酸等之Ν-醯基多肽；胺基辛酸、α-胺 基月桂酸等之胺基脂肪酸；聚乙烯、聚丙烯、尼龍 、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、二乙烯基苯•苯乙烯 共聚物、四氟化乙烯等之樹脂粉髏等。 紫外線吸收劑可列舉例如對胺基苯甲酸、對二甲胺基 苯甲酸辛酯等之對胺基苯甲酸衍生物，· 2-羥基-4-甲氯 基二苯酮、二羥基二甲氧基二苯酮等之二苯酮衍生物； -1 3 ~ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224010 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ___B7_五、發明說明（12) 對甲氧基肉桂酸乙酯、對甲氣基肉桂酸辛酯等之甲氧基 肉桂酸衍生物；水楊酸辛酯、水楊酸高S酯等之水楊酸 衍生物；N-苯甲醯-0-甲基脱氫酪胺酸2-乙基己酯 等之脱氫胺基酸衍生物；4-(3,4-二甲氧苯基）亞甲 基-2, 5-二氧基-卜咪唑烷丙酸2-乙基乙酯等之伸苄基乙 内醯脲衍生物；尿刊酸、尿刊酸乙酯、4-第三丁基-4 ’-甲氧基二苯甲醯甲烷、2-( 2羥基-5甲基苯基）苯並 三唑等。 防腐劑可列舉對羥基苯甲酸甲酯等。 肌虜柔軟劑可列舉流動石蠟、凡士林、橄欖油、角鯊 烷、羊毛脂、合成酯油等。 上逑任一成分均可在不損害本發明目的、效果之範圍 内配合，且較佳為〇·〇1〜5重量Sk待佳為0·01〜3重量i 本發明中的表皮細胞增殖促進劑、纖維母細胞之膠原 合成促進劑、表皮之水分保持機能改善劑、抑制或改善 形成雛紋之藥劑等之肌虜老化抑制劑和/或廉質改善劑 及化粧料，可採用溶液、乳化物、練狀混合物等型態。 又，於本發明之該肌虜老化抑制劑和/或庸質改善翔| 所構成之抑制肌虜老化和/或慮質改善用化粧料中，可 包含洗面霜、洗面泡沫、清潔霜、清潔乳、清潔化粧水 、按摩霜、冷霜、保濕霜、乳液、化粧水、髮鹫、刮毛 後用霜、防曬霜、日曬用油、沐浴乳、洗髮乳、潤絲精 、護髮霜、養毛料、育毛料、髮霜、髮液、定型水、噴 髮劑、染髮劑、漂髮劑、彩色潤絲精、彩色噴_ @ -1 4 - (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) -¾ 線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224010 A7 __B7_ , 13 五、發明說明（） 定波浪液、粉餅、蜜粉、眼影、手霜等。 又，肌虜老化抑制劑和/或虜質改善劑及由該肌虜老 化抑制劑和/或虜質改善劑所構成之抑制肌虜老化和/ 或膚質改善用化粧料之型態，並無待別限定，可例如為 乳液、乳霜、化粧水、髮蕾、粉底、毛髮化粧料等。 本發明之肌廉老化抑制劑和/或醱質改善劑及由該肌 虜老化抑制劑和/或庸質改善劑所構成之抑制肌虜老化 和/或慮質改善用化粧料之使用方法，雖依據年齡、個 人差異而不同，但期望令具有羥基脯胺酸或羥基脯胺酸 之N-醯基衍生物或其鹽之化粧料濃度為〇·〇1〜5重量X、 較佳為0.1〜5重量χ、特佳為0.5〜3重量35，並以1日1回 〜數回塗佈以0.1〜5微升、較佳為1〜5微升、特佳為2 微升，但並非限定於此。 其次，列舉實施例，更加詳細說明本發明，但本發明 並非被其所約制。 用Μ窗嫵gg明夕播住型態 實施例1 含反式-4 -羥基-L -脯胺酸之化粧料之調製 於精製水中，添加反式-4-羥基脯胺酸（以下，亦 簡稱為Hyp、協和醱酵工業公司製）〇·5重量》：、對羥基苯 甲酸甲酯0.1重量S：及甘油〇·17重量％，並且混合熔解， 調製成含有Hyp之化粧料（化粧料1)。 實施例2 含有反式-.4-羥基-L-脯胺酸之化粧料之調製 於精製水中，添加Hyp 3重量X、對羥基苯甲酸甲酯 0.1重量及甘油0.17重量％，並且混合熔解，調製成含 -1 5 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公愛） (請先閱讀背面之注意事項再¾寫本頁) · •線_ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1224010 A7 B7 14 五、發明說明（） 有Hyp之化粧料（化粧料2)。 ------------丨 Γ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例3 含有卜乙醯基-反式-4-羥基-L-脯胺酸之化 粧料之調製 於精製水中，添加卜乙醯基-反式-4-羥基-L-脯胺酸 (以下，亦簡稱為N-Acety卜Hyp、協和醱酵工業公司製） 3重量X、對羥基苯甲酸甲酯〇.1重量％及甘油〇·17重量X， 並且混合熔解，調製成含有N-Acetyl-Hyp之化粧料（化 粧料3)。 實施例4 含有膠原之化粧料之調製 於精製水中，添加膠原（Collagen CLR、壽化學）1重 量％、對羥基苯甲酸甲酯0.1重量％及甘油0·17重量！《，並 且混合熔解，調製成含有膠原之化粧料（化粧料4)。 實施例5 含有反式-4-羥基脯胺酸及卵磷脂之化粧 料之調製 線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 於精製水中，添加Hyp 0.5重量％、卵磷脂[SLP-White H、True Lecithin工業公司製】〇· 〇5重量％、透明質酸 (透明質酸LP、協和醱酵工業公司製）0·〇1重量％、對羥 基苯甲酸甲酯0.1重量％及甘油0.17重量χ，並且混合熔 解，調製成含有Hyp及卵磷脂之化粧料（化粧料5)。 實施例6 含有反式-4-羥基-L-脯胺酸及溶血卵磷脂之 化粧料之調製 於精製水中，添加Hyp 3重量X、溶血卵磷脂 [Lysolecithin協和、協和醱酵工業公司製]0·01重量χ 、對羥基苯甲酸甲酯0.1重量X及甘油重量X，並且 -1 6 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224010 A7 B7 五、發明說明（15) 混合熔解，調製成含有Hyp及卵磷脂之化粧料（化粧料6)。 實施例7 含有反式-4-羥基-L-脯胺酸及卵磷脂之化粧 料之調製 於精製水中，添加Hyp 3重量3!、卵磷脂[PC92H、True Lecithin工業公司製]〇·〇 5重量％、透明質酸（透明質酸 LP、協和醱酵工業公司製）〇·〇1重量X、對羥基苯甲酸甲 酯0.1重量X及甘油0.17重量％，並且混合熔解，調製成 含有Hyp及卵磷脂之化粧料（化粧料7)。 實施例8 含有反式-4-羥基-L-脯胺酸及卵磷脂之化粧 料之調製 於精製水中，添加Hyp 3重量X、卵磷脂[SLP-White Η 、True Lecithin工業公司製）0.05重量％、透明質酸（透 明質酸LP、協和醱酵工業公司製）〇·〇1重量％、對羥基苯 甲酸甲酯0.1重量S：及甘油0.17重量《，並且混合熔解， 調製成含有Hyp及卵磷脂之化粧料（化粧料8)。 以上，於實施例1〜8中所調製之化粧料之組成，總結 示於表1 。 (請先閱讀背面之注意事項再_本頁) 訂_· ;線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224010 A7B7 , 16 五、發明說明（） 第1表化粧料之組成 組成分（重量X) 化粧料 (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) Hyp 0.5 3 - - 0.5 3 3 3 N-Acetyl-Hyp - 一 3 - - - - - 膠原 - - - 1 猜 - - - 卵磷脂SLP - - - - 0.05 一 - 0.05 卵磷脂PC92 - - - - - - 0.05 - 溶血卵磷脂 - - - - - 0.05 - - 透明質酸 - - - - 0.01 0.01 0.01 0.01 對羥基苯甲酸甲酯 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 甘油 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .¾ -·線.
Hyp :反式-4-羥基-L-脯胺酸 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 N-Acety卜Hyp: N-乙醯基-反式-4-羥基脯胺酸 卵碟脂 SLP:卵碟脂[SLP-White Η、 True Lecithin工 業（株）] 卵磷脂 PC92··卵磷脂[PC92H、True Lecithin工業（株）] -1 8 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224〇i〇 Α7 Β7 五、發明說明（17) 實施例9 於人類纖維母細胞中促進膠原合成之活性 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 合成膠原之測定為根據「Col lag ene實驗法」（永井等 人替、講談社Scientific),以下列方法進行。 將來自人類新生兒之纖維母細胞（三光純藥公司製）， 使用添加103!胎牛血清之DMEM培養基[Virology，8, 396 (1 9 5 9 )]，於3 7 °C、5 S； C 0 2之條件下定期培養後，添加3 η 檩幟甘胺酸及受驗物質，並再培養72小時。尚，DMEM培 養基為使用於日水製藥公司製之『Gulbecco修飾法之 Eagle培養基「Nissui」②』中，添加麩胺醯胺4毫莫耳 /公升、磺酸氫鈉適量、HEPES 10毫莫耳/公升、冑徽 素G鉀50 U/nil、鏈黴素5D微克/毫升、胎牛血清10%的 培養基。 於所得之培養液中，添加500微莫耳/公升苯基甲烷 磺醯氟（PMSF)後，將細胞及培養基回數，並以超音波弄 碎，取出蛋白質。 於該萃取液中添加100微莫耳/公升牛血清白蛋白（BSA) 及1U三氯乙酸（TCA)後，以3 0 0 rpm離心分離5分鐘，並 回收沈澱物。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 於該沉澱物中，以上逑進行培養所用之培養容器底面 積每lcm 2 8微升地加入0 · 2莫耳/公升之NaOH將其溶解 後，以等容量之1莫耳/公升磷酸緩衝液予以中和。 於所得之蛋白質溶液100微升中，加入25毫莫耳/公 升氯化鈣10撤莫耳/公升、62·5毫莫耳/公升L-乙基馬 來醯亞胺2微莫耳/公升、膠原酶（和光純藥工業公司製 -19-本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224010 A7 B7 五、發明說明（18) ;膠原分析用）20單位，並於37°C進行90分鐘反應。 將該反應液以分子量10, 〇〇〇之超過濾予以分離，並測 定過濾液之蛋白質部分的放射活性（CDP)，將其作為新 合成的_原。測定未過濾之蛋白質部分的放射活性（N C D P ) ，並且依據下逑之式1 ，算出膠原合成比。 相對的促進膠原合成之活性（膠原合成之變化），為以 受驗物質相對於對照組之膠原合成比之相對值型式，依 據下逑之式2算出。 (式1 )
CDP 膠原合成bb = C D P + N C D P (式2 ) 相對的促進膠原=受驗物質之膠原合成比 -X 1〇〇 合成之活性U) 之膠原合成比 結果不於表2。 於Hyp、lAcetyl-Hyp任一者均察見促進膠原合成之 活性。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) τ訂· 線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 表2 促 進膠原 合成之活 性 受驗物質 OnM 0 . IbiM lmM Hyp 100 108.3 117.1 N-Acetyl-Hyp 100 12 1.1 119.7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224〇i〇 A7 B7 ^__1_ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 q發明說明（） 實施例10 於人類表皮細胞中的増殖活性 人類表皮細胞之增殖活性為根據全細胞攝入[溴化 3 - (4，5-二甲基瞎唑-2-基卜2，5-二苯基四唑鏺】（MTT), 並以570ηιη(參考值=650nm)之波長將所生成的MTT甲腊 (MTT formazan)量予以比色定量之MTT法（細胞培養冚、 4 4 7 7 - 4 4 8 2，（ 1 9 8 4 ))為準進行測定。 即，將來自人類新生兒之正常表皮角化細胞（三光純 藥公司製），以KGM培養基（三光純藥）以37°C、5U02下 進行定期培養，並且添加Hyp及N-Acety 1-Hyp，培養4 日。其次，將磷酸緩衝液（PH7 · 4、無鈣和_)中溶解成5 毫克/毫升濃度之MTT試藥，以1/10量添加至培養液中, 再於5U02下、37 °C中培養4小時。將培養基除去後， 以含有0.4莫耳/公升鹽酸之異丙醇萃取細胞中的HTT甲 腊，並以6 3 0 nm為對照測定5 7 0 nm中的吸光度。 結果示於表3 。 於Hyp、fj -Acetyl-Hyp任一者均察見表皮細胞之增殖 活性。於Hyp則察見濃度依賴性的增殖活性〇 表3 表皮細胞之增殖活性 受驗物質 OmM 1 0 mM 1 0 0 m Μ Hyp 100 111.6 135.1 N-Acetyl-Hyp 10 0 108.7 85.9 -21- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) % -線· 1224010 A7 B7 2 0x 五、發明說明（） 實施例11 於鼠表皮細胞中的增殖活性 由3日齡C3 Η鼠，依據谷垣等人之方法[日皮會誌、 1 1 4 5 - 1 1 5 2 ( 1 9 8 9 )]為準剝離表皮細胞。 將該表皮細胞以0.25¾胰蛋白酶處理後，以離 心分離5分鐘，取得細胞。將該細胞播種至添加1 G %胎 牛血清之DMEM培養基中，並於37°C培養1日，調製鼠表 皮細胞。 將該鼠表皮細胞，以加入受驗物質（Hyp或N-Acetyl -Hyp)之無血清MCDB153培養基培養6日後，將磷酸緩衝 液（PH7.4、無鈣和鎂中溶解成5毫克/毫升濃度之MTT 試藥，以1/10量添加至培養液中，再於5%C02下、37Ό 中培養4小時。除去培養基後，以含有〇 · 4莫耳/毫升 鹽酸之異丙醇萃取細胞中的MTT甲腊，並以6 3 0 ηιη為對照 測定5 7 0 nm中的吸光度。 結果示於表4 。 於Hyp、N-Acetyl-Hyp任一者均察見表皮細胞之增殖 活性。 表4 表皮細胞之增殖活性 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 受驗物質 0 // Μ 1 μ Μ 3 Μ 1 0 // Μ Hyp 100 88 . 6 107.5 126 N-Acety1-Hyp 100 110.7 118.2 121.9 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224010 A7 B7 2 1 五、發明說明（ 實施例12 水分保持機能之評價（1) 為了察見實施例1〜8所調製之化粧料（1)〜（8)的虜 改善效果，乃以連續使用調査水分維持機能的變彳匕。 (試驗方法） 以2 3〜2 8歳的健康女性4名作為小組討論參加者 (Paneler)，以每日、早晚2回、歷3星期或2個月， 於前腕彎曲部的受檢部位，將受檢化粧料各塗佈2 _升 /平方公分。 (評價方法） 經時性地，測定早上塗佈前的受撿部位之水分含量。 測定機器為使用SKICON-20MIBS公司製】，將探測器垂 直於受檢部位，測定肌虜傳導度（=水分含量）。 測定值愈高則表示水分含量愈高。受檢部位之肌庸傳 導度變化（相對傳導度），為以相對於無處理部位之傳導 度變化之相對值型式，依據下逑之式3算出。 (式3 > 受檢部位之各日傳導度無處理部位之各日傳導度 相對傳導度U)= -+---X100 受撿部位之fl日傳導度無處理部位之fl日傳導度 結果不於表5-1及表5-2。
Hyp、N-Acety卜Hyp均經由連績使用而増加肌虜的水 分含量，並且察見水分維持機能的改善。又，N-Acetyl -Hyp為具有提高膠原之改善效果。 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ------------%ih (技叫先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
l· — — -訂·1·-------線—I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1224010 A7 B7 22五、發明說明（） 表5-1水分維持機能之改善 相對傳導度U) 受驗物質 〇曰後 14曰後 28日後 42日後 56日後 精製水 100 96.9 94.5 88.7 93.8 化粧料（1) 100 125.2 119.8 111.1 109.6 化粧料（2) 100 127.5 118.2 108.6 110.3 化粧料（3) 100 238.2 226.9 233.5 186.3 化粧料（4) 100 133.3 134.5 130.8 121.5 化粧料（5) 100 157.8 124.6 132.4 127 ________________1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -24- r f MM Μ·· MM MM Μ·雷 β·|ΙΙ MM MM KM —Μ — _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224010 A7 B7_ 五、發明說明\3 ) 表5-2水分維持機能之改善 相對傳導度U) 受驗物質 〇日後 5日後 9日後 16日後 21日後 精製水 100 96.9 94.5 88.7 93.8 化粧料（4) 100 104.3 129.9 115.3 136.8 化粧料（6) 100 120.9 144.3 140.6 172 化粧料（7) 100 108.3 150.2 123.3 145.2 化粧料（8) 100 117 145.7 185.9 146.1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例13 水分維持機能之評價（2) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 對於N-Acetyl-Hyp之水分維持效果，以單回處理評價 其濃度依賴性。 (試驗方法） 以2 3〜3 2歲的健康女性1 2名作為小組討論參加者，測 定前腕彎曲部之受檢部位的水分含量後，將受驗物質各 以2微升/平方公分塗佈並且放置。 3小時後測定，並以塗佈前之水分含量為100 %之相對 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1224010 A7 B7 五、發明說明（2 4) 值進行評價。 結果示於表6 。N-Acetyl-Hyp均於單回處理中顯示出 濃度依賴性的水分維持效果。 第6表N-Acetyl-Hyp之水分維持機能 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 於 實 施 例 1 2之 實 施 時 9 製 作 參 加 者 受 驗 部 位 之 矽 複 製 品 [使用商品名 r Ski η Ca s t J X 山 田 粧 業 公 司 製 ]， 並 根 據 下 述 基 準 求 出 肌 虜 狀 態 之 分 數 9 評 價 虜 質 改 善 效 果 肌 虜 狀 態 分 數 ： 分 數 1 肌 虜 之 皮 溝 不 鮮 明 察 見 剝 落 的 角 質 〇 分 數 2 肌 虜 之 皮 溝 稍 不 鮮 明 或 一 方 向 性 強 〇 分 數 3 雖 察 見 肌 慮 之 皮 溝 9 但 淺 或 者 一 方 向 性 強 〇 分 數 4 察 見 肌 虜 之 皮 溝 或 稍 微 為 網 孔 狀 0 分 數 5 清 楚 察 見 肌 痛 之 皮 溝 為 美 麗 的 網 孔 狀 0 結 果 示 於 表 7 〇 與 精 製 水 塗 佈 部 位 相 比 較 9 化 粧 料 (1 )〜（5)分 數 為 上 升 0 . 4〜2 .1 察 見 明 顯 的 庸 質 改 善 0 即 9 呈 現 肌 理 細 腻 之 皮 儀 5 可 察 見 抑 制 或 改 善 雛 紋 形 成 -26- ;線· N-Acetyl-Hyp m Sst /Λ-- U 3¾ 5% 10% 相對傳導度U) 9 1 1 0 0 1 2 9 1 8 6 1 8 9 實施例14 虜質改善效果 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1224010 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（2 ) 之效果。又，配合卵磷脂之化粧料（5 )，比不配合之化 粧料（1)之分數高，且取得使用感亦為提高之結果。 表7 分數 受驗物質 分數 精製水 2 . 3 化粧料（1) 3 . 7 化粧料（2 ) 2 . 8 化粧料（3 ) 4 . 4 化粧料（4) 3 . 8 化粧料（5 ) 3 . 6 以上，本發明之肌虜老化抑制劑和/或庸質改善劑及 化粧料，因為具有表皮細胞之增殖促進作用，纖維母細 胞之膠原合成促進作用、表皮之水分保持機能改善作用 、抑制或改善皺紋形成之作用等，故確認可有效抑制肌 廉老化和/或改善虜質等。 -2 7 - 参紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ---：---ί—--^訂 i--------線J (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1224010 A7 _B7_ 2 6 五、發明說明（） 齑業h夕可刹用件 若根據本發明，則可提供於肌慮之老化抑制作用和/ 或慮質改善作用等有效之肌虜老化抑制劑和/或虜質改 善劑及化粧料。 -------------隹ih (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -28-
一一口，> IJ ϋ -ϋ I l^i n ai·— I ϋi^i n i·— ^it I ^^1 n l·— n 1_ϋ Lt I I n 1 i^i ϋ I .1 n a— I 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）