TW202128206A - 植物發酵液用於製備減脂的組合物的用途 - Google Patents
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- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Abstract
一種植物發酵液用於製備減脂的組合物的用途，其中植物發酵液是由薑（Zingiber officinale
）、辣椒（Capsicum annuum
）、山楂（Crataegus pinnatifida
）及甜菜（Beta vulgaris
）根的浸提液經複數菌種發酵所製得。並且，複數菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。
Description
本發明關於一種發酵液，特別是關於一種植物發酵液的製備方法及其用途。
自有機及天然的飲食概念興起後，生技公司及食品業者積極投入關於天然植物的相關產品之研發。為使植物相關產品對身體健康助益有科學驗證的基礎，植物的活性成分分析及功效評估成為產品開發的重點項目。
而產品開發的項目常與現今社會關注的議題有關，如減重、美白、腸胃保健、生酮飲食等。
在一些實施例中，一種植物發酵液用於製備減脂的組合物的用途，其中植物發酵液是由薑、辣椒、山楂及甜菜根的浸提液經複數菌種發酵所製得。
在一些實施例中，複數菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。
在一些實施例中，植物發酵液的皂苷含量至少為7433 ppm。
在一些實施例中，植物發酵液具有促進脂肪細胞分解的能力。
在一些實施例中，植物發酵液具有提升以下基因中至少一基因的表現量的能力：UCP1基因、UCP2基因、ATGL基因及LIPE基因。
在一些實施例中，植物發酵液具有改善受體的至少一體組成的能力：體重、腰圍、全身體脂率及軀幹體脂率。
在一些實施例中，浸提液是由甜菜根、山楂、辣椒、薑與溶劑在95℃下靜置1小時所製得。
在一些實施例中，溶劑為水，甜菜根、山楂、辣椒、薑及水的重量比為1:1:1~3:3~8:250~300，且植物發酵液是由浸提液與8%（V/V）-13%（V/V）的葡萄糖經複數菌種發酵所製得。
綜上所述，根據任一實施例的植物發酵液，其具有減脂的作用，並可用以製備減脂的組合物。根據任一實施例的植物發酵液，其具有促進脂肪細胞分解的能力、提升以下基因中至少一基因的表現量的能力：UCP1基因、UCP2基因、ATGL基因及LIPE基因、以及改善受體的體組成（如，體重、腰圍、全身體脂率、軀幹體脂率或其組合）的能力，進而用於受體減脂。並且，根據任一實施例的植物發酵液，其具有至少7433 ppm的皂苷含量。
於下列實施方式的說明中，除非另有相關說明，則「%」及「wt%」符號是指重量百分比，「%（V/V）」及「vol%」符號是指體積百分比。
在一些實施例中，植物發酵液是由薑（Zingiber officinale
）、辣椒（Capsicum annuum
）、山楂（Crataegus pinnatifida
）及甜菜（Beta vulgaris
）根的浸提液經複數菌種發酵所製得。其中，複數菌種包括酵母菌（Yeast）、乳酸桿菌（Lactobacillus
）及醋酸菌（Acetobacter aceti
）。
在一些實施例中，薑、辣椒、山楂及甜菜根的浸提液是以薑原料、辣椒原料、山楂原料、甜菜根原料及溶劑製備而得之。舉例來說，薑原料是指薑（Zingiber officinale
）的根莖、辣椒原料是指辣椒（Capsicum annuum
）的新鮮果實、山楂原料是指經乾燥處理後的山楂（Crataegus pinnatifida
）的果實、甜菜根原料是指經乾燥處理及磨粉後的甜菜（Beta vulgaris
）的根部（如，甜菜根粉末），以及溶劑為水。
在一些實施例中，將薑原料、辣椒原料、山楂原料及水混合後進行前處理以形成第一混合液。舉例來說，前處理可以但不限於切碎、絞碎、碾碎、粗碎等。在一示範例中，薑原料、辣椒原料、山楂原料及水混合後進行粗碎，且粗碎後的各原料再以孔徑為12毫米的篩網進行過篩。藉此，確保薑原料、辣椒原料及山楂原料經過前處理後的粒徑可以小於或等於12毫米。
於此，甜菜根原料：山楂原料：辣椒原料：薑原料：水的重量比例為1:1：1~3：3~8：250~300。在一些示範例中，甜菜根原料：山楂原料：辣椒原料：薑原料：水的重量比例可以為1：1：2.8：8：270、1：1：3：8：250或1：1：2.8：8：300。
於薑原料、辣椒原料、山楂原料及水進行前處理後，以第一混合液與甜菜根原料進行浸提處理以得到浸提液。舉例來說，甜菜根原料的添加時間點可以為浸提處理前或浸提處理期間。並且，浸提處理係指將溶液於95℃下靜置1小時。於此，所述「溶液」是指第一混合液與甜菜根原料，或是者第一混合液與甜菜根原料混合而成的第二混合液。
在一些示範例中，於第一混合液中加入甜菜根原料，以得到第二混合液。接著，將第二混合液於95℃下靜置1小時以得到浸提液。
在另一些示範例中，將第一混合液於95℃下靜置1小時並於靜置期間加入甜菜根原料。於此，待95℃靜置第一混合液及甜菜根原料1小時後可得到浸提液。
待浸提液冷卻至小於40℃後，加入葡萄糖至浸提液並與其均勻混合。並且，待葡萄糖完全溶解後可得到培養液。在一些實施例中，葡萄糖的添加量為8%-13%（V/V）。於此，培養液的糖度為8°Bx。並且，足夠的糖度可以確保後續發酵的順利進行，並使菌種有足夠的養分生長。
接著，加入複數菌種至由浸提液及葡萄糖混合而成的培養液中，進行發酵7日以得到植物發酵液。其中，複數菌種包括0.1%的酵母菌、0.05%的乳酸菌及5%的醋酸菌（Acetobacter aceti
）。在一些實施例中，於發酵前不濾除培養液中的固形物（即，進行浸提程序後的薑原料、辣椒原料、山楂原料及/或甜菜根原料）。換言之，是直接將菌種加入培養液進行發酵，藉以利用菌種進一步提取固形物中的活性成分。
在一些實施例中，酵母菌可以是市售的啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae
）。舉例而言，向財團法人食品工作發展研究所所採購寄存編號BCRC20271（國際寄存ATCC26602）菌株的啤酒酵母。
在一些實施例中，乳酸菌可以為市售的副乾酪乳桿菌（Lactobacillus paracasei
）。舉例而言，採用寄存編號BCRC910882菌株的副乾酪乳桿菌TCI058。
在一些實施例中，醋酸菌可以為向美國菌種中心（American Type Culture Collection, ATCC）採購寄存編號ATCC15973（國內寄存編號BCRC11688）的醋酸菌。
在一些實施例中，於培養液中加入0.1%的酵母菌後進行發酵24小時以形成第一初發酵液。接著，加入0.05%的乳酸菌至第一初發酵液進行發酵24小時以形成第二初發酵液。然後，5%的醋酸菌至第二初發酵液行發酵120小時以形成第三初發酵液。於此，第三初發酵液的pH值小於3.5±0.5、其糖度為2.5±0.3°Bx，且其酸度0.5±0.3。
在一些實施例中，將第三初發酵液過濾並濃縮以得到植物發酵液。舉例來說，第三初發酵液可以孔徑200mesh的篩網過濾後，於55℃~65℃進行減壓濃縮。
在一些實施例中，添加寡糖至植物發酵液以使其糖度達到40°Bx以形成植物發酵飲品。於此，寡糖係指由3個~10個單醣分子聚合而成的低聚糖。其中，寡糖可為果寡糖、半乳寡糖、木寡糖、異麥芽寡糖等。在一些實施例中，所添加的寡糖可為含60%異麥芽寡糖的寡糖溶液。
在一些實施例中，植物發酵液的皂苷（Saponin）含量至少為7433 ppm。並且，植物發酵液相較於浸提液或培養液具有較高的皂苷含量。換言之，透過複數菌種發酵所製備的植物發酵液可生成較多的皂苷含量，進而可減少受體對於食物中脂肪吸收之能力。
在一些實施例中，植物發酵液具有提升去耦合蛋白質（uncoupling protein，UCP）相關基因的能力。舉例來說，植物發酵液具有提升UCP1基因或/及UCP2基因的表現量的能力。去耦合蛋白質作為棕色脂肪含有較多的的蛋白質之一，且UCP1蛋白質能加快細胞分解脂肪酸的速率，以產生熱量。因此，當受體服用植物發酵液後，可提升UCP1基因或/及UCP2基因的表現量，進而促進去耦合蛋白質生成，並加快細胞分解脂肪酸。
在一些實施例中，植物發酵液具有促進脂肪細胞分解的能力。舉例來說，植物發酵液可促進脂肪分解。脂肪分解（Lipolysis）是指脂肪細胞內所貯存的三酸甘油酯（triglyceride, TG）被逐步降解為脂肪酸（fatty acid, FA）與甘油（Glycerol），故而當脂肪分解時會生成甘油。因此，植物發酵液亦可提高脂肪細胞分解的甘油量。
在一些實施例中，植物發酵液具有提升脂肪分解相關基因的表現量的能力。舉例來說，植物發酵液具有提升ATGL（Adipose triglyceride lipase）基因或/及LIPE（Lipase）基因的表現量的能力。因此，當受體服用植物發酵液後，可提升ATGL基因或/及LIPE基因的表現量，進而促進脂肪分解酶生成，並使脂肪分解。
在一些實施例中，植物發酵液具有改善一受體的至少一體組成的能力：體重、腰圍、全身體脂率及軀幹體脂率。舉例來說，當受體服用植物發酵液後，可減少受體的體重、腰圍、身體脂率、軀幹體脂率或其組合，進而達成受體減脂之作用。
基此，植物發酵液可用以製備用以減脂的組合物。
在一些實施例中，組合物可以為液態（如，植物發酵飲品等）或固態（如，植物發酵液粉末、植物發酵液錠等）。在一些實施例中，液態的組合物的使用劑量為5毫升/天。
在一些實施例中，組合物可以為液態（如，植物發酵飲品等）或固態（如，植物發酵液粉末、植物發酵液錠等）。在一些實施例中，液態的組合物的使用劑量為6毫升/天，而固態組合物的使用量為0.65克/天。
例
1
：植物發酵液的製備
首先，混合1重量份的乾燥後的山楂果實（產地：中國）、3重量份的新鮮辣椒果實（產地：台灣）、8重量份的薑的根莖（產地：台灣）及270重量份的水，並以均質機進行粗碎後再以孔徑12毫米的篩網進行過篩使以形成第一混合液。然後，加入1重量份的甜菜根粉末（產地：印度）至第一混合液中以形成第二混合液，並將第二混合液於95℃下靜置1小時，以形成浸提液。接著，加入11%（V/V）的葡萄糖至浸提液以形成培養液。於此，培養液亦可稱為植物浸提液。
於靜置後，待植物浸提液冷卻後加入0.1%的BCRC20271菌株之啤酒酵母，並於30℃下進行發酵1天以形成第一初發酵液。再加入0.05%的BCRC910882菌株之副乾酪乳桿菌至第一初發酵液中，並於30℃下進行發酵1天以形成第二初發酵液。接著，加入5%的BCRC11688菌株之醋酸菌至第二初發酵液中，並於30℃下進行發酵5天以形成第三初發酵液。於此，第三初發酵液的pH值為3.5±0.5、其糖度為2.5±0.3°Bx，且其酸度0.5±0.3。
接著，以200mesh過濾第三初發酵液後，於60℃下減壓濃縮，以得到植物發酵液。
例
2
：總
皂苷含量測試
於此，所使用作為標準品的溶液為1000ppm的齊墩果酸（Oleanolic acid，品牌：Sigma，編號：O5504-100MG）溶液，其係以甲醇（Methanol，品牌：JT Baker）溶解配置，並以甲醇序列稀釋為0ppm、100ppm、200ppm、400ppm、600ppm、800ppm等濃度。
將各濃度的齊墩果酸溶液分別取100μL至微量離心管中，並於70℃~85℃烘箱中烘乾各濃度的齊墩果酸溶液使其完全乾燥。接著，於各微量離心管加入100μL的5%香草醛（vanillin，品牌：Sigma，編號：A11169），並加入400μL的高氯酸（Perchloric acid，品牌：Sigma，編號：30755-1L）混合均勻後，置於65℃水浴中反應15分鐘，以形成混合溶液。於此，所使用的5%香草醛是以乙酸（Acetic acid，品牌：JT Baker，編號：9508-03）配置。
接著，取40μL的混合溶液至96孔盤並於每孔加入200μL的乙酸混合均勻以形成測試溶液，並測量其在531nm下之吸光值。於此，依照所量測的吸光值對應齊墩果酸溶液的濃度繪製標準曲線。
於此，將例1得到的植物浸提液作為控制組的測試樣品，且將例1所製備得到的植物發酵液作為實驗組的測試樣品。
取100μL的測試樣品至微量離心管中，並於70℃~85℃烘箱中烘乾測試樣品使其完全乾燥。接著，於各微量離心管加入100μL的5%香草醛，並加入400μL的高氯酸混合均勻後，置於65℃水浴中反應15分鐘，以形成混合溶液。
取40μL的混合溶液至96孔盤並於每孔加入200μL的乙酸混合均勻以形成測試溶液，並測量其在531nm下之吸光值。接著將依據標準曲線以內插法的方式計算控制組及實驗組的總皂苷含量，如圖1所示。
請參閱圖1。控制組的總皂苷含量為4080 ppm，而實驗組的總皂苷含量為7433 ppm。換言之，實驗組的總皂苷含量為控制組的總皂苷含量1.82倍。由此可知，透過複數菌種發酵後可顯著提高植物發酵液的總皂苷含量。因此，相較於服用植物浸提液，當受體服用植物發酵液或以其製備的組合物時，有助於抑制受體吸收食物中脂肪的能力。
例
3
：去耦合蛋白質相關基因表現測試
於此，去耦合蛋白質相關基因包括UCP1（gene ID 7350）基因及UCP2（gene ID 7351）基因。
於此，所使用的細胞培養基為添加有20%的胎牛血清（fetal bovine serum，FBS；Gibco公司，編號10438-026）、1%的抗生素-抗黴菌素（Antibiotic-Antimycotic）（Gibco公司，編號15240-062）的α-最低限度必需培養基（α-Minimum essential medium，簡稱α-MEM）（Gibco公司，編號12000-022）。
首先，取1x105
個小鼠骨髓基質細胞OP9（購自BCRC，編號6566；以下稱OP9細胞）至每孔含有2毫升細胞培養基的六孔細胞培養盤中，於37℃下培養24小時。
將OP9細胞分為實驗組、控制組及空白組。移除各組別的細胞培養基並更換為每孔2mL實驗培養基，然後置於37℃下分別接續培養6小時。其中，實驗組的實驗培養基為含有0.25vol%的例1中所得到的植物發酵液的細胞培養基。控制組的實驗培養基為含有0.25vol%的例1中所得到的植物浸提液的細胞培養基。空白組的實驗培養基為單純的細胞培養基（即不含植物發酵液及植物浸提液）。
收集各組的OP9細胞，並以RNA萃取試劑套組（購自Geneaid公司，台灣，Lot No. FC24015-G）萃取出各組的RNA。接著，各組取1000奈克（ng）的RNA作為模板，透過SuperScript®
III反轉錄酶（購自Invitrogene公司，美國，編號18080-051）將RNA反轉錄為相應之cDNA。再藉由ABI StepOnePlusTM
即時PCR系統（ABI StepOnePlusTM
Real-Time PCR system（Thermo Fisher Scientific公司，美國））、KAPA SYBR FAST（購自Sigma公司，美國，編號38220000000）及表1的引子（SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:4）對各組的cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction）以觀察OP9細胞內去耦合蛋白質相關基因的表現量。定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應的儀器設定條件為95°C反應20秒，接著95°C反應3秒，60°C反應30秒，並重複40個迴圈，並使用2-ΔCt方法進行基因定量，如圖2所示。於此，藉由cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應可間接定量基因的mRNA表現量，進而推斷基因編碼的蛋白質的表現量。
需要特別說明的是，圖2中的基因表現是以相對表現倍率呈現，其中使用Excel軟體之STDEV公式計算標準差，且各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析。在圖2中，「*」代表在與空白組比較下其p值小於0.05、「**」代表在與空白組比較下其p值小於0.01、「***」代表在與空白組比較下其p值小於0.001，以及「###」代表在與控制組比較下其p值小於0.001。
表1
| 目標基因 | 引子名稱 | 序列編號 | 序列 |
| UCP1 | UCP1-F | SEQ ID NO:1 | AGGCTTCCAGTACCATTAGGT |
| UCP1-R | SEQ ID NO:2 | CTGAGTGAGGCAAAGCTGATTT | |
| UCP2 | UCP2-F | SEQ ID NO:3 | ATGGTTGGTTTCAAGGCCACA |
| UCP2-R | SEQ ID NO:4 | CGGTATCCAGAGGGAAAGTGAT |
於表1中，F為順向引子（Forward primer），而R為反向引子（Reverse primer）。
請參閱圖2。將空白組的各組去耦合蛋白質相關基因的相對表現量視為1.00（即空白組的各組基因的表現量為100%）。相較於空白組，實驗組的UCP1基因的相對表現量為5.00，且實驗組的UCP2基因的相對表現量為6.44。並且，相較於空白組，控制組的UCP1基因的相對表現量為1.35，且控制組的UCP2基因的相對表現量為0.69。於此，實驗組的UCP1基因及UCP2基因的表現量相較於空白組及控制組有顯著的提升，代表植物發酵液能有效地提高去耦合蛋白質相關基因。換言之，當受體服用植物發酵液時，能提高去耦合蛋白質相關基因的表現量，進而能促進去耦合蛋白質的表現，並能加速受體脂肪酸的分解。
例
4
：
脂肪細胞分解甘油量測試
於此，將脂肪細胞中甘油（Glycerol）的含量作為量化指標，以觀察是否有產生脂肪分解作用。
於此，所使用的細胞培養基為添加有20%的胎牛血清（fetal bovine serum，FBS；Gibco公司，編號10438-026）、1%的抗生素-抗黴菌素（Antibiotic-Antimycotic）（Gibco公司，編號15240-062）的α-最低限度必需培養基（α-Minimum essential medium，簡稱α-MEM）（Gibco公司，編號12000-022）。
首先，取8×104
個小鼠骨髓基質細胞OP9（購自美國典型培養物保存中心（American Type Culture Collection，ATCC®），編號ATCC CRL-2749；以下稱OP9細胞）至每孔含有500μL細胞培養基的24孔培養盤中，於37℃下培養7天。於7天的細胞培養期間中，每隔3天更換細胞培養基。並於培養7天後，以顯微鏡（ZEISS；放大倍率400x）觀察OP9細胞內的油滴形成，藉以確認OP9細胞已完全分化為脂肪細胞，供後續實驗使用。
然後，將分化完成的脂肪細胞分為實驗組、控制組及空白組。移除各組別的細胞培養基，並更換成每孔500μL實驗培養基，然後置於37℃下接續培養7天。於7天的培養期間，每3天更換一次新鮮的500μL實驗培養基。其中，實驗組的實驗培養基為含有0.125vol%之例1所製備的植物發酵液的細胞培養基。控制組的實驗培養基為含有0.125vol%之例1所得到的植物浸提液的細胞培養基。空白組的實驗培養基為單純的細胞培養基（即不含植物發酵液或植物浸提液）。
接著，以細胞甘油基檢測試劑套組（Glycerol cell-based assay kit，購自Cayman，美國，產品編號10011725）依據下列步驟測量甘油含量。收集各組的實驗培養基（即已培養過脂肪細胞的實驗培養基，但不包括脂肪細胞），並各取其中的25μL轉移到新的96孔培養盤中，並於各孔中加入100μL之重構游離甘油測定試劑（Reconstituted free glycerol assay reagent），再於室溫下作用15分鐘後，將96孔培養盤以ELISA讀數器讀取各組之OD540nm
的吸光度，以量化各組脂肪細胞分解並釋放至實驗培養基中的甘油量。
請參閱圖3。於此，將空白組的脂肪細胞分解甘油量視為100%。控制組的脂肪細胞分解甘油量為103.13%，而實驗組的脂肪細胞分解甘油量為109.53%。於此，相較於空白組及控制組，實驗組的脂肪細胞內的脂肪細胞分解甘油量明顯提升。由此可知，植物發酵液能有效地促進脂肪分解，具有提升受體的脂肪代謝的功能，進而達成減脂之功能。
例
5
：脂肪分解相關基因表現測試
於此，脂肪分解相關基因包括ATGL（gene ID 57104）基因及LIPE（gene ID 3991）基因。
於此，所使用的細胞培養基為添加有20%的胎牛血清（fetal bovine serum，FBS；Gibco公司，編號10438-026）、1%的抗生素-抗黴菌素（Antibiotic-Antimycotic）（Gibco公司，編號15240-062）的α-最低限度必需培養基（α-Minimum essential medium，簡稱α-MEM）（Gibco公司，編號12000-022）。
首先，取1x105
個小鼠骨髓基質細胞OP9（購自BCRC，編號6566；以下稱OP9細胞）至每孔含有2毫升細胞培養基的六孔細胞培養盤中，於37℃下培養24小時。
將OP9細胞分為實驗組、控制組及空白組。移除各組別的細胞培養基並更換為每孔2mL實驗培養基，然後置於37℃下分別接續培養6小時。其中，實驗組的實驗培養基為含有0.25vol%的例1中所得到的植物發酵液的細胞培養基。控制組的實驗培養基為含有0.25vol%的例1中所得到的植物浸提液的細胞培養基。空白組的實驗培養基為單純的細胞培養基（即不含植物發酵液及植物浸提液）。
收集各組的OP9細胞，並以RNA萃取試劑套組（購自Geneaid公司，台灣，Lot No. FC24015-G）萃取出各組的RNA。接著，各組取1000奈克（ng）的RNA作為模板，透過SuperScript®
III反轉錄酶（購自Invitrogene公司，美國，編號18080-051）將RNA反轉錄為相應之cDNA。再藉由ABI StepOnePlusTM
即時PCR系統（ABI StepOnePlusTM
Real-Time PCR system（Thermo Fisher Scientific公司，美國））、KAPA SYBR FAST（購自Sigma公司，美國，編號38220000000）及表2的引子（SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:8）對各組的cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction）以觀察OP9細胞內的脂肪分解相關基因的表現量。定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應的儀器設定條件為95°C反應20秒，接著95°C反應3秒，60°C反應30秒，並重複40個迴圈，並使用2-ΔCt方法進行基因定量，如圖4所示。於此，藉由cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應可間接定量基因的mRNA表現量，進而推斷基因編碼的蛋白質的表現量。
需要特別說明的是，圖4中的基因表現是以相對表現倍率呈現，其中使用Excel軟體之STDEV公式計算標準差，且各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析。在圖4中，「*」代表在與空白組比較下其p值小於0.05、「***」代表在與空白組比較下其p值小於0.001、「#」代表在與控制組比較下其p值小於0.05，以及「###」代表在與控制組比較下其p值小於0.001。
表2
| 目標基因 | 引子名稱 | 序列編號 | 序列 |
| ATGL | ATGL-F | SEQ ID NO:5 | GGATGGCGGCATTTCAGACA |
| ATGL-R | SEQ ID NO:6 | CAAAGGGTTGGGTTGGTTCAG | |
| LIPE | LIPE-F | SEQ ID NO:7 | TGGCACACCATTTTGACCTG |
| LIPE-R | SEQ ID NO:8 | TTGCGGTTAGAAGCCACATAG |
於表2中，F為順向引子（Forward primer），而R為反向引子（Reverse primer）。
請參閱圖4。將空白組的各組脂肪分解相關基因的相對表現量視為1.00（即空白組的各組基因的表現量為100%）。相較於空白組，實驗組的ATGL基因的相對表現量為4.43，且實驗組的LIPE基因的相對表現量為5.29。並且，相較於空白組，控制組的ATGL基因的相對表現量為0.45，且控制組的LIPE基因的相對表現量為0.06。於此，實驗組的ATGL基因及LIPE基因的表現量相較於空白組及控制組有顯著的提升，代表植物發酵液能有效地提高脂肪分解相關基因。換言之，當受體服用植物發酵液時，能提高ATGL基因及LIPE基因的表現量，進而能促進脂肪甘油三酯脂酶及脂肪酶的表現，並能促進受體的脂肪分解。
例
6
：
人體試驗
於此，將37.5wt%的例1所製備的植物發酵液與62.5wt%的異麥芽寡糖混合以形成植物發酵溶液，並將10mL的植物發酵溶液以水調配成50mL之植物發酵飲品。
受試者：10位受試者（年齡介於20-60歲的男性及女性）。其中，受試者的BMI大於或等於24並小於27，且男性受試者的體脂率大於25%、女性受試者的體脂率大於30%。
測試項目：體重、腰圍、全身體脂率及軀幹體脂率、腰圍。
測試方式：令10位受試者每日飲用5mL植物發酵飲品，並連續飲用4周。於飲用前（即第0週）及飲用4週後（即第4週），以體重計（廠牌：TANITA，產品：四肢與軀幹體組成計，型號BC-545F）測量此些受試者的體重、全身體脂率及軀幹體脂率，並以布尺量測此些受試者的腰圍。其中，量測腰圍時，需去除受試者腰部覆蓋的衣物，並於受試者輕鬆站立、雙手自然下垂時，以受試者的肚臍為水平量測點量取受試者的腰圍數值。
請參閱圖5，10位受試者的平均體重從78.1公斤（第0週）下降至77.5公斤（第4週）。請參閱圖6，10位受試者的平均腰圍從95.4公分（第0週）下降至93.7公分（第4週）。請參閱圖7，10位受試者的平均全身體脂率從33.5%（第0周）下降至33.0%（第4週）。請參閱圖8，10位受試者的軀幹體脂率從35.2%（第0週）下降至34.6%（第4週）。
換言之，相比飲用前（第0週），持續飲用4週含有植物發酵液的植物發酵飲品後可使此些受試者的平均體重下降0.6公斤、使此些受試者的平均腰圍減少1.7公分、使此些受試者的平均全身體脂率下降0.5%以及使此些受試者的平均軀幹體脂率下降0.6%。
由此可知，長期使用植物發酵液可改善受體的體重、腰圍、全身體脂、軀幹體脂，即植物發酵液具瘦身減肥之功效。
綜上所述，根據本發明任一實施例的植物發酵液可用於製備減脂的組合物。換言之，前述之組合物具有下列一種或多種功能：促進脂肪細胞分解、促進脂肪代謝、抑制脂肪吸收、提升以下基因中至少一基因的表現量：UCP1基因、UCP2基因、ATGL基因及LIPE基因、改善受體的至少一體組成：體重、腰圍、全身體脂率及軀幹體脂率。並且，任一實施例的植物發酵液的皂苷含量至少為7433 ppm。
雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神所作些許之更動與潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
無
圖1是總皂苷含量的實驗數據圖；
圖2是去耦合蛋白質相關基因的實驗數據圖；
圖3是脂肪細胞分解甘油量的實驗數據圖；
圖4是脂肪分解相關基因的實驗數據圖；
圖5是第0週及第4週的受試者的體重數據圖；
圖6是第0週及第4週的受試者的腰圍數據圖；
圖7是第0週及第4週的受試者的全身體脂率數據圖；以及
圖8是第0週及第4週的受試者的軀幹體脂率數據圖。
Claims (8)
- 一種植物發酵液用於製備一減脂的組合物的用途，其中植物發酵液是由薑（Zingiber officinale ）、辣椒（Capsicum annuum ）、山楂（Crataegus pinnatifida ）及甜菜（Beta vulgaris ）根的浸提液經複數菌種發酵所製得。
- 如請求項1所述之用途，其中該複數菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。
- 如請求項1所述之用途，其中該植物發酵液的皂苷含量至少為7433 ppm。
- 如請求項1所述之用途，其中該植物發酵液具有促進脂肪細胞分解的能力。
- 如請求項1所述之用途，其中該植物發酵液具有提升以下基因中至少一基因的表現量的能力：UCP1基因、UCP2基因、ATGL基因及LIPE基因。
- 如請求項1所述之用途，其中該植物發酵液具有改善一受體的至少一體組成的能力：體重、腰圍、全身體脂率及軀幹體脂率。
- 如請求項1所述之用途，其中該浸提液是由該甜菜根、該山楂、該辣椒、該薑與一溶劑在95℃下靜置1小時所製得。
- 如請求項7所述之用途，其中該溶劑為水，該甜菜根、該山楂、該辣椒、該薑及該水的重量比為1:1:1~3:3~8:250~300，且該植物發酵液是由該浸提液與8%（V/V）-13%（V/V）的葡萄糖經該複數菌種發酵所製得。
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