TW202102247A

TW202102247A - 植物發酵物及其製備方法與用於胃臟保健的用途

Info

Publication number: TW202102247A
Application number: TW108128133A
Authority: TW
Inventors: 林詠翔; 莊偉秀
Original assignee: 大江生醫股份有限公司
Priority date: 2019-07-08
Filing date: 2019-08-07
Publication date: 2021-01-16
Also published as: CN112190644A; TWI814972B; TW202102250A; TWI711458B; TWI779296B; CN112190515A; CN112190616A; EP3763392A1; CN112190515B; US20210007986A1; TWI743769B; CN112190714B; TW202102244A; CN112190714A; TW202102203A

Abstract

本發明提供一種植物發酵物及其製備方法與用於胃臟保健的用途，本發明之植物發酵物能有效抑制胃幽門螺旋桿菌的生長、有效降低胃臟細胞中會促進發炎反應之IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、IL-3基因、及TNF-α基因之表現量，並能同時提升會抑制發炎反應的TGFβ基因之表現量，以提升體內抗胃幽門桿菌的活性，並同時降低胃臟的發炎反應，以達到胃部保健的功效；其中，該植物發酵物係將由一萊菔子、一山藥、及一山楂萃取物所組成之混合物先以酵母菌與胚芽乳桿菌進行發酵，再以醋酸桿菌進行發酵而獲得。

Description

植物發酵物及其製備方法與用於胃臟保健的用途

本發明係關於一種植物發酵物及其製備方法與用於製備胃臟保健之組合物的用途，尤其是一種植物發酵物用於抑制胃幽門螺旋桿菌的生長、降低胃臟細胞中會促進發炎反應之IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、IL-3基因、及/或TNF-α基因之表現量、及/或提升會抑制發炎反應的TGFβ基因之表現量；其中，該植物發酵物係將由一萊菔子、一山藥、及一山楂萃取物所組成之混合物先以酵母菌及胚芽乳桿菌進行發酵，再以醋酸桿菌進行發酵而獲得。

發炎反應為血管系統之組織對致炎因子及局部損傷所發生的防禦性反應，主要由組織受到外傷、出血或病原感染等刺激所激發之生理反應，其中包含紅腫、發熱、疼痛等症狀。發炎反應是先天免疫系統為移除有害之刺激或病原體並促進組織修復等的保護措施，通常情況下，發炎反應是有益的，然而，有時發炎反應可能引起人體自身免疫系統的過敏反應，會導致如類風濕性關節炎和紅斑狼瘡症等免疫系統過敏病症。其中，類固醇、非固醇類抗發炎藥物、以及抗組織胺等藥物，係目前醫藥上常用於抑制發炎反應之藥物，但該些藥物皆有其各自之副作用。

另外，若身體的發炎反應持續性且全身性的發生，免疫細胞會一直不斷重複的招募、增殖、分化、遷移等，並持續釋放細胞激素引起更多的發炎反應，此種現象稱為慢性發炎，而目前已有許多研究證實慢性發炎與動脈硬化、心肌梗塞、糖尿病、阿茲海默症等疾病形成有關。然而，因慢性發炎的機制比急性發炎複雜許多，無法透過上述之單一藥物而輕易獲得改善，因此目前僅能建議患者藉由改善飲食習慣、生活作息等方式來改善慢性發炎的症狀。

胃臟是重要消化器官之一，若未善加保護，不但影響食物的消化，也容易引發胃病。尤其現代人在快節奏的步調下生活，加上不健康的飲食習慣，很容易與胃病為伍，不但影響健康，也影響飲生活品質。胃炎是指胃黏膜出現炎症反應，可分為急性胃炎、慢性胃炎以及特定型胃炎，常見的致病成因包括藥物、飲酒以及幽門螺旋桿菌。目前，胃炎的治療以藥物為主，並合併以調整生活習慣來改善。

胃幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)是一種微需氧的革蘭氏陰性細菌，可產生尿素酶(Urease)分解尿素形成氨，以中和胃酸，使得其能夠生長在強酸環境下的胃部黏膜層；研究已顯示胃幽門螺旋桿菌為造成慢性胃炎及消化性潰瘍的主因，其亦與胃癌、胃淋巴癌的形成相關。因此，若能夠增加體內抗胃幽門螺旋桿菌的活性，則能夠達到腸胃道保健的功效。

綜上所述，為能更有效抗發炎又減輕藥物的副作用，特別係針對維持人體正常機能非常重要的胃臟，開發一種天然成分且能有效達到胃臟抗發炎反應的組合物，著實有其必要性。

緣此，本發明之一目的在提供一種用於胃臟保健的植物發酵物，其係由下列重量百分比的原料與方法所製成：一萊菔子1-3%、一山藥1-5%、一山楂1-3%，將上述配比之該萊菔子、該山藥及該山楂混合成一混合物，並經由一溶劑萃取獲得一植物萃取物，再經一發酵方法所製成。

本發明之另一目的在提供一種如前所述之植物發酵物用於製備一胃臟保健之組合物的用途；且該植物發酵物之有效濃度為至少1%(v/v)。

在本發明之一實施例中，該植物萃取物係將該萊菔子、該山藥、及該山楂的混合物以水為溶劑在50-100℃下萃取0.5-3小時所獲得；且該混合物及水係以3-11：20-40(w/w)之比例混合。

在本發明之又一實施例中，該發酵方法係包括先經由一酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)與一胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum)進行發酵後，再經由一醋酸桿菌(Acetobacter aceti)進行發酵而獲得；該酵母菌之添加量為0.01-0.5%(w/w)；該胚芽乳桿菌之添加量為0.01-0.25%(w/w)；該醋酸桿菌之添加量為1-20%(w/w)；且該酵母菌、該胚芽乳桿菌、及該醋酸桿菌之發酵時間比為1-5：3-15。

在本發明之又一實施例中，該植物發酵物係降低一胃臟細胞中介白素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)基因、介白素-23(Interleukin-23,IL-23)基因、介白素-12A(Interleukin-12A,IL-12A)基因、介白素-3(Interleukin-3,IL-3)基因、及/或腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因的表現量。

在本發明之另一實施例中，該植物發酵物係提升一胃臟細胞中乙型轉化生長因子(Transforming growth factor β,TGF-β)基因的表現量。

在本發明之又一實施例中，該植物發酵物係提升抑制胃幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)的生長。

在本發明之又一實施例中，該植物發酵物係提升一胃臟細胞之抗發炎活性。

本發明將萊菔子、山藥、及山楂混合物之萃取物先以酵母菌及胚芽乳桿菌進行發酵，再以醋酸桿菌進行發酵而獲得之植物發酵物，能直接且有效抑制胃幽門螺旋桿菌的生長，亦能有效降低胃臟細胞中會促進發炎反應之IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、IL-3基因、及TNF-α基因之表現量，並同時提升會抑制發炎反應的TGFβ基因之表現量；中醫五行經絡是氣血運行的通道，如經絡通則百病消，而本發明之植物發酵物能夠提升體內抗胃幽門桿菌的活性，並同時降低胃臟的發炎反應，能有效達到胃部保健的功效。因此，本發明之植物發酵物可用於製備胃臟保健之組合物的用途，且該組合物是一醫藥品、或一食品，可藉由口服、塗抹等方式給予一個體。

以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

圖1係為本發明之一實施例的植物發酵物抑制胃幽門螺旋桿菌生長之照片。

圖2係為本發明之一實施例的植物發酵物降低胃臟細胞中IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、及IL-3基因之表現量的長條圖。*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001。

圖3係為本發明之一實施例的植物發酵物降低胃臟細胞中TNF-α基因、及提升TGFβ基因之表現量的長條圖。*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001。

本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。

使用Excel軟體進行統計分析。數據以平均值±標準差(SD)表示，個此之間的差異以學生t檢驗(student's t-test)分析。

萊菔子(Raphani Semen)是蘿蔔(Raphanus sativus L.)的乾燥成熟種子，蘿蔔為十字花科(Cruciferae)萊服屬(Raphanus)一年或二年生草本植物。萊菔子呈卵圓形或橢圓形之扁狀，長約2.5-4毫米、寬約2-3毫米，表面為黃棕色、紅棕色或灰棕色，一端有深棕色的圓形種臍，一側則有數條縱溝，種皮薄而脆，具有二呈黃白色的子葉，具有油性。萊菔子味道淡，帶有微苦及辛味。萊菔子有化痰止咳的功效。

山藥(Dioscorea batatas)為薯蕷科(Dioscoreaceae)薯蕷屬(Dioscorea)多年生蔓性草本植物，又稱薯蕷、野腳板薯、淮山、柱薯等名。山藥塊莖生長於地下，呈球形或圓筒形，且表皮為黑褐色或深紅色，具有密生鬚根，塊莖的斷面乾時為白色，可做實用或藥用，山藥塊莖具有清熱解毒、祛痰、止瀉、消渴、及降血糖的功效。

山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)為薔薇科(Rosaceae)山楂屬(Crataegus)落葉喬木植物，又稱山里紅、紅果、酸楂、赤棗、海紅等名。山楂果實呈近球形或梨形，直徑約1-1.5公分，果皮為帶有淺色斑點之深紅色，且存有萼片；具有3-5個果小核，外表稍具稜角，內面則兩側平滑；山楂的花期為5-6月，果期則為9-10月。山楂果實味酸，可供食用，例如做成果醬或蜜餞；果實乾燥後可供藥用，具有降血壓、降血脂的功效。

如本文中所使用的，用語「植物發酵物」意為萊菔子、山藥、山楂先以1-3：1-5：1-3(w/w)之比例混合後再與溶劑以3-11：1：20-40(w/w)之比例經一特定時間與溫度萃取而得之萃取物，再以酵母菌、胚芽乳桿菌及醋酸桿菌依序進行一三段式發酵而獲得，其中該酵母菌之添加量為0.01-0.5%(w/w)；該胚芽乳桿菌之添加量為0.01-0.25%(w/w)；該醋酸桿菌之添加量為1-20%(w/w)。

本文所述之「有效濃度」係表示能有效抑制胃幽門螺旋桿菌生長、降低胃臟細胞中IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、IL-3基因、及TNF-α基因表現量、及提升其中TGFβ基因表現量所需之本發明植物發酵物的濃度。有效濃度依所作用的對象而可能不同，但可藉由例如劑量遞增試驗(dose escalation)以實驗決定其有效濃度。

依據本發明，有關微生物發酵反應的操作程序與參數條件等是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地(parenterally)或局部地(topically)投藥的劑型，這包括，但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、無菌的粉末(sterile powder)、外部製劑(external preparation)以及類似之物。

依據本發明，醫藥品可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該醫藥上可接受的載劑可包含一或多種但不限於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，該醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及它們的組合。

依據本發明，該醫藥品可以一選自於由下列所構成之群組中的非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥：皮下注射(subcutaneous injection)、表皮內注射(intraepidermal injection)、皮內注射(intradermal injection)以及病灶內注射(intralesional injection)。

依據本發明，食品產品可被當作食品添加物(food additive)，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。

依據本發明，食品產品的種類包括但不限於：飲料(beverages)、發酵食品(fermented foods)、烘培產品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食補充品(dietary supplements)。

本發明提供一種植物發酵物及其製備方法與其用於護胃保健的用途，本發明之植物發酵物是將萊菔子、山藥、山楂與溶劑以1-3：1-5：1：20-40(w/w)之比例經一特定時間與溫度萃取而得之萃取物，先以酵母菌及胚芽乳桿菌進行發酵，再以醋酸桿菌進行發酵而獲得，其中該酵母菌為BCRC20271之菌株、該胚芽乳桿菌為BCRC910805之菌株、該醋酸桿菌為BCRC11688之菌株。本發明之植物發酵物可有效抑制體內胃幽門螺旋桿菌的生長；降低胃臟細胞中IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、IL-3基因、及TNF-α基因表現量；並能提升其中TGFβ基因表現量。

同時，本發明用於護胃保健之組合物，亦可包含一有效量之植物發酵物及一醫藥上可接受之載體，該組合物係一醫藥品、或一食品。

以下將詳細說明本發明植物發酵物之詳細製備方法、該植物發酵物提升肝臟細胞抗氧化活性之功效的測試、以及該植物發酵物提升肝臟細胞中抗老化基因表現量之功效的測試，以證實本發明之植物發酵物可有效抑制體內胃幽門螺旋桿菌的生長、降低胃臟細胞中會促進發炎反應之基因的表現量、並能同時提升其中會抑制發炎反應之基因的表現量，以達到護胃保健之功效。

實施例1 本發明之植物發酵物的製備方法

在本發明一實施例中，將萊菔子、山藥的塊莖、山楂的果實以1-3：1-5：1-3之重量百分比混合後，再將該混合物與水、醇、或醇水混合物之萃取溶劑以3-11：20-40重量百分比均勻混合，其中萃取溶劑較佳為水，並於 50-100℃下同時滅菌萃取0.5-3小時後，將該植物水萃取物冷卻至室溫供後續二階段式發酵使用，以下列三種菌依序進行二階段發酵：酵母菌及胚芽乳桿菌共同殖菌發酵後，再殖以醋酸桿菌進行發酵，此發酵順序無法前後對調，且其發酵時間比為1-5：3-15。在本發明一較佳實施例中，首先於該萃取溶液中植入0.01-0.5%(w/w)之酵母菌(Saccharomyces cerevisiae，購買於生物資源保存與研究中心，台灣，編號為BCRC20271)以及0.01-0.25%(w/w)之胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum TCI028，專利寄存於生物資源保存與研究中心，台灣，編號為BCRC910805)，於25-35℃下進行前發酵1-5天，實際時間視發酵狀態而異。接著直接植入1-20%(w/w)之醋酸桿菌(Acetobacter aceti，購買於生物資源保存與研究中心，台灣，編號為BCRC11688)，於25-35℃下進行後發酵3-15天，實際時間視發酵狀態而異；其中，胚芽乳桿菌TCI028係已於中華民國專利申請號第106145146號完成專利寄存。最後在不移除此三種菌之情況下，使用設定的糖度範圍2-4°、pH<4、酒精>5%等規格，如檢驗符合該規格，則判定發酵完成並得到發酵液。接著，將該發酵液於45-70℃進行減壓濃縮，並以200-400mesh網篩過濾，再添加40-70%異麥芽寡糖調整規格後，於95-105℃下加熱90分鐘進行滅菌，即得到本發明之植物發酵物。

實施例2 本發明之植物發酵物抑制胃幽門螺旋桿菌生長之功效

本發明之一實施例為進行本發明之發酵二階段步驟提高植物發酵物抑制胃幽門螺旋桿菌生長之功效測試，利用抑菌圈法試驗其抑菌功效，其中抑菌圈法又稱擴散法，是利用待測物在洋菜膠中擴散使其周圍的細菌生長受到抑製而形成透明圈，即抑菌圈，並根據抑菌圈之大小以判定待測物之抑菌效用的方法，常用於抗生素產生菌的分離篩選。

首先，將1%之胃幽門螺旋桿菌(購買於生物資源保存與研究中心，台灣，編號為BCRC 15415)接種於含有5%羊血(CMP^® Sheep Blood，購自啟新生物科技公司，台灣)的MRS Broth(de Man,Rogosa and Sharpe,BD Difco^TM Lactobacilli MRS Broth)中，於37℃下培養4天後，取500μL之該胃幽門螺旋桿菌的菌液塗佈於血盤(CMP^® PPM Blood Agar Plate(BAP)(TSA with 5% Sheep Blood)，購自啟新生物科技公司，台灣)上。確認菌液接吸收後，使用1mm的玻璃棒在血盤上打一洞，並將血盤分成以下三組：(1)僅加入水的空白控制組、(2)加入50-100μL經過適當稀釋(1-5倍稀釋)之前述植物水萃取物的比較組、及(3)加入50-100μL經過適當稀釋(1-5倍稀釋)之本發明植物發酵物的實驗組，其中第(2)組及第(3)組之稀釋倍率相同，接著將各組於37℃下培養3-4天後，觀察各組產生抑菌圈之拮抗結果。

本發明之植物發酵物抑制胃幽門螺旋桿菌生長之的實驗結果如圖1所示。經本發明之植物發酵物作用後，在血盤之洞周圍形成一明顯的抑菌圈；經植物水萃取物作用後，與空白控制組相同，皆未產生抑菌圈。此結果顯示本發明之植物發酵物在經過本發明之微生物二階段發酵步驟後，能有效抑制胃幽門螺旋桿菌的生長，能夠提升體內抗胃幽門桿菌的活性，以達到胃部保健的功效。

實施例3 本發明之植物發酵物調控胃臟細胞中基因表現量之功效

本發明之一實施例為使用人類胃臟上皮細胞AGS細胞進行本發明之發酵二階段步驟提高植物發酵物調控胃臟細胞中抗發炎基因表現量之功效測試。該AGS細胞係購自美國典型培養物保藏中心，編號ATCC^® CRL-1739^TM，且該細胞係培養於含有10%之胎牛血清(Fetal Bovine Serum，購自Gibco，美國)以及90%之RPMI-1640細胞培養液(購自Gibco，美國)中，其中加入1%之青黴素-鏈黴素。

首先，將1×10⁶個AGS細胞培養於含有2mL上述細胞培養液之6孔培養盤中，於37℃培養16-18小時，接著將細胞分成以下六組：(1)僅加入細胞培養液之空白控制組、(2)加入LPS(購自Sigma，美國，編號L2880-25MG Lot#044M4004V)之負控制組、(3)加入1%(v/v)本發明之植物發酵物的實驗組、(4)加入1%(v/v)山楂發酵物的比較組、(5)加入1%(v/v)萊菔子發酵物的比較組、及(6)加入1%(v/v)山藥發酵物的比較組，並將該些組別之細胞分別於37℃下作用6小時後，測試各組AGS細胞中目標基因的表現量；其中，山楂發酵物係將山楂與水以1：1-1.5之比例混合，並於50-100℃下同時滅菌萃取0.5-3小時後，再以實施例1中相同之二階段發酵步驟製備所得；萊菔子發酵物係將萊菔子與水以1：1.5-2.5比例混合，並於50-100℃下同時滅菌萃取0.5-3小時後，再以實施例1中相同之二階段發酵步驟製備所得；山藥發酵物係將山藥與水以1：1.5比例混合，並於50-100℃下同時滅菌萃取0.5-3小時後，再以實施例1中相同之二階段發酵步驟製備所得。首先，將AGS細胞以細胞裂解液(RB buffer，購自Geanaid公司，臺灣，Cat No.RBD300)回收細胞後，使用RNA萃取試劑套組(購自Geneaid公司，臺灣，Cat No.RBD300)分別收集該六組細胞內之RNA，接著利用SuperScript^® III反轉錄酶(購自Invitrogene公司，美國，編號18080-051)以2000ng之萃取RNA為模板，並以表1之組合引子及反轉錄酶進行反轉錄作用，以產生該些基因之mRNA所相應之cDNA產物，接著利用ABI StepOnePlus^TM Real-Time PCR system(Thermo Fisher Scientific公司，美國)，以及KAPA SYBR FAST(購自Sigma公司，美國，編號38220000000)將該六組反轉錄後產物分別以表1之組合引子進行定量即時聚合酶連鎖反應(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)試驗，條件為95℃反應1分鐘預熱後，再進行以下95℃反應15秒、58℃反應15秒、72℃反應30秒之總共40個循環的程序。用以定量IL-1β基因、IL-8基因、IL-6基因、IL-10基因、IL-18基因、TNF-α基因、IL-16基因、IL-23基因、IL-12A基因、IFNG基因、TGFβ基因、IL-3基因、及IL-4基因之mRNA的表現量，其中定量數值係取由閾值循環數(Ct)，而目標基因的mRNA相對量係推導自方程式2^-△△Ct，其中△C_T=C_{T比較組或實驗組目標基因/控制組目標基因}-C_{T TBP}(TATA結合蛋白，TATA-binding protein)；△△C_T=C_{T比較組或實驗組目標基因}-C_{T控制組目標基因}；各組中各基因的fold change則為2^-△△Ct。接著，再利用Excel軟體決定變異係數與是否在統計上具有顯著差異(*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001)。

本發明之植物發酵物降低胃臟細胞中IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、及IL-3基因之表現量的實驗結果如圖2所示。其中，IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、及IL-3基因所編碼的蛋白質，皆係會促進發炎反應的細胞介質，因此降低該些基因的表現量，能夠減緩發炎反應的發生。

經本發明之植物發酵物作用後，相較於空白控制組，能分別顯著降低AGS細胞中IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、及IL-3基因之表現量達0.84倍、0.82倍、0.74倍、及0.96倍；經負控制組的LPS作用後，AGS細胞中IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、及IL-3基因的表現量皆會上升；經山楂水萃取物後，AGS細胞中IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、及IL-3基因之表現量亦皆會上升；經萊菔子水萃取物作用後，AGS細胞中IL-1β基因、IL-12A基因、及IL-3基因之表現量皆會上升，而相較於空白控制組，IL-23基因之表現量則會顯著降低至0.92倍；經山藥水萃取物作用，AGS細胞中IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、及IL-3基因之表現量皆會上升。此些結果顯示本發明之植物發酵物在經過本發明之微生物二階段發酵步驟後，因此能有效降低胃臟上皮細胞中會促進發炎反應之的IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、及IL-3基因之表現量，能夠有效降低胃臟的發炎反應，達到胃部保健的功效。

本發明之植物發酵物降低胃臟細胞中TNF-α基因、及提升TGFβ基因之表現量的實驗結果如圖3所示。經本發明之植物發酵物作用後，相較於空白控制組，能分別顯著降低AGS細胞中TNF-α基因之表現量達0.6倍，並同時顯著提升TGFβ基因之表現量達1.53倍，其餘基因之表現量則與控制組相似或差異不大(數據未顯示)；經負控制組的LPS作用後，AGS細胞中TNF-α基因之表現量上升達空白控制組的1.72倍，且TGFβ基因之表現量降低為空白控制組的0.9倍，其餘基因之表現量則與控制組相似或差異不大(數據未顯示)；經山楂水萃取物後，AGS細胞中TNF-α基因之表現量上升達空白控制組的2.1倍，且TGFβ基因之表現量降低為空白控制組的0.89倍，其餘基因之表現量則與控制組相似或差異不大(數據未顯示)；經萊菔子水萃取物作用後，AGS細胞中TNF-α基因、及TGFβ基因之表現量分別上升達空白控制組的1.2倍、及1.04倍，其餘基因之表現量則與控制組相似或差異不大(數據未顯示)；經山藥水萃取物作用，AGS細胞中TNF-α基因、及TGFβ基因之表現量分別上升達空白控制組的2.34倍、及1.09倍，其餘基因之表現量則與控制組相似或差異不大(數據未顯示)。此些結果顯示本發明之植物發酵物在經過本發明之微生物二階段發酵步驟後，能有效降低胃臟上皮細胞中會促進發炎反應之的TNF-α基因之表現量，並能同時提升會抑制發炎反應的TGFβ基因之表現量，因此能夠有效降低胃臟的發炎反應，達到胃部保健的功效。

綜上所述，本發明將萊菔子、山藥、及山楂混合物之萃取物先以酵母菌及胚芽乳桿菌進行發酵，再以醋酸桿菌進行發酵而獲得之植物發酵物，能直接且有效抑制胃幽門螺旋桿菌的生長，亦能有效降低胃臟細胞中會促進發炎反應之IL-1β基因、IL-23基因、IL-12A基因、IL-3基因、及TNF-α基因之表現量，並同時提升會抑制發炎反應的TGFβ基因之表現量；中醫五行經絡是氣血運行的通道，如經絡通則百病消，而本發明之植物發酵物能夠提升體內抗胃幽門桿菌的活性，並同時降低胃臟的發炎反應，能有效達到胃部保健的功效。因此，本發明之植物發酵物可用於製備胃臟保健之組合物的用途，且該組合物是一醫藥品、或一食品，可藉由口服、塗抹等方式給予一個體。

【生物材料寄存】

食品工業發展研究所(台灣)；民國106年12月13日；編號BCRC910805

<110> 大江生醫股份有限公司

<120> 植物發酵物及其製備方法與用於胃臟保健的用途

<160> 28

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 1

<210> 2

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 2

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 3

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 4

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 5

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 6

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 7

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 8

<210> 9

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 9

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 10

<210> 11

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 11

<210> 12

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 12

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 13

<210> 14

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 14

<210> 15

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 15

<210> 16

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 16

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 17

<210> 18

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 18

<210> 19

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 19

<210> 20

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 20

<210> 21

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 21

<210> 22

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 22

<210> 23

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 23

<210> 24

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 24

<210> 25

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 25

<210> 26

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 26

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 27

<210> 28

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 28

Claims

一種用於胃臟保健的植物發酵物，其係由下列重量百分比的原料與方法所製成：一萊菔子1-3%、一山藥1-5%、一山楂1-3%，將上述配比之該萊菔子、該山藥及該山楂混合成一混合物，並經由一溶劑萃取獲得一植物萃取物，再經一發酵方法所製成。
如申請專利範圍第1項所述之植物發酵物，其中該植物萃取物係將該萊菔子、該山藥、及該山楂的混合物以水為溶劑在50-100℃下萃取0.5-3小時所獲得。
如申請專利範圍第2項所述之植物發酵物，其中該混合物及水係以3-11：20-40(w/w)之比例混合。
如申請專利範圍第1項所述之植物發酵物，其中該發酵方法係包括先經由一酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)與一胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum)進行發酵後，再經由一醋酸桿菌(Acetobacter aceti)進行發酵而獲得。
如申請專利範圍第4項所述之植物發酵物，其中該酵母菌之添加量為0.01-0.5%(w/w)；該胚芽乳桿菌之添加量為0.01-0.25%(w/w)；該醋酸桿菌之添加量為1-20%(w/w)。
一種如申請專利範圍第1項所述之植物發酵物用於製備一胃臟保健之組合物的用途。
如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該植物發酵物係降低一胃臟細胞中介白素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)基因、介白素-23(Interleukin-23,IL-23)基因、介白素-12A(Interleukin-12A,IL-12A)基因、介白素-3(Interleukin-3,IL-3)基因、及/或腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因的表現量。
如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該植物發酵物係提升一胃臟細胞中乙型轉化生長因子(Transforming growth factor β,TGF-β)基因的表現量。
如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該植物發酵物係提升抑制胃幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)的生長。
如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該植物發酵物係提升一胃臟細胞之抗發炎活性。
如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該植物發酵物之有效濃度為至少1%(v/v)。