KR20160006922A

KR20160006922A - 사스레피나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20160006922A
Application number: KR1020140086600A
Authority: KR
Inventors: 정지은; 위안진; 박화식
Original assignee: 전라남도
Priority date: 2014-07-10
Filing date: 2014-07-10
Publication date: 2016-01-20

Abstract

본 발명은 사스레피나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 상기 사스레피나무 추출물은 보습촉진, 주름개선, 피부탄력개선, 피부노화 방지 또는 피지감소 등의 피부상태를 개선시키는 효능을 가지는 페놀성 화합물 및 아미노산 성분을 다량 함유하고 있으므로, 본 발명의 조성물은 본 발명의 조성물은 건조한 피부, 피지 과다분비로 인한 피부의 지저분함, 잔주름이나 주름에 의한 피부노화, 피부탄력 저하 등과 같은 좋지 않은 피부상태를 개선시키기 위한 화장료로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

사스레피나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition for improving skin conditions comprising Eurya japonica extracts}

본 발명은 사스레피나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 보습촉진, 주름개선, 피부탄력개선, 피부노화 방지 또는 피지감소 등의 효능을 가지는 사스레피나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

현대인들은 급격한 식생활습관의 변화, 스트레스, 불규칙한 생활패턴, 환경오염 및 심한 기후변화 등으로 인해 피부면역 시스템의 부조화가 초래되어 아토피, 건선, 탈모, 자외선에 의한 주름, 기미 또는 주근깨 등과 같은 다양한 피부질환에 시달리고 있다. 이와 같은 피부질환을 예방하기 위해 다양한 기능을 갖는 기능성 화장품에 대한 연구가 계속되고 있다. 구체적으로, 피부에 수분을 공급하기 위한 화장품, 모공의 크기를 줄이기 위한 화장품, 피부 각질을 제거하기 위한 화장품, 주름을 완화시키기 위한 화장품, 미백기능을 갖는 화장품 등 다양한 기능을 가진 화장품들이 출시되고 있다. 그러나 각 화장품들은 목적하는 효능을 다르므로 각 효능을 만족시키기 위하여 수종의 화장품을 이용해야하는데, 과도한 화장품의 사용은 화학적 성분에 의해 피부의 부종, 홍반, 염증, 습진 등을 유발시키는 문제가 있다.

이에 상기 문제를 해결하기 위하여 채소, 과일, 허브차 등의 천연 식물을 각종 기능성 화장품 원료로 활발히 이용되고 있다. 그 한 예로, 감잎, 연뿌리, 불가사리, 감태, 율피, 솔잎, 호프, 목이버섯, 함초, 파프리카, 감초 등의 추출물을 첨가하여 미백, 주름개선, 피부상태 개선, 피부보호 등의 효과가 뛰어난 화장품 개발을 위한 연구가 진행되고 있다.

한편, 사스레피나무(Eurya japonica)는 차나무과에 속하는 상록활엽 관목으로 한국, 일본, 대만, 중국, 인도 등의 해안가 산기슭에서 생장하며, 영목, 무치러기나무, 세푸랑나무, 가새목이라고도 한다. 사스레피나무의 잎에는 3-헥센-1-올(3-hexen-1-ol)이 함유되어 있고, 과실에는 크리산테민(chrysanthemin)이, 종자에는 지방유가 함유되어 있어 거풍, 제습, 소종, 지혈, 류마티스성 관절통, 복부팽만, 외상출혈 등을 치료하는데 사용되어져 왔다. 또한, 목재는 세공재로 쓰이며, 가지와 잎을 태운 잿물 또는 과실은 염료로 사용하였다. 최근에는 사스레피나무의 잎 추출물이 알도즈 환원 효소를 억제하므로 당뇨합병증 예방 및 치료를 위해 사용할 수 있다고 보고되었다(Jung et al., Natural product Sciences, 9(1):34-37, 2003; 이윤미 et al., 한국생약학회지, 39(3):165-173, 2008). 그러나 사스레피나무의 알도즈 환원효소 억제 효능을 나타내는 물질 또는 각질, 주름 또는 피지 등의 피부상태를 예방 또는 개선할 수 있는 사스레피나무의 생리활성물질을 확인하고, 이를 활용한 사례는 아직까지 보고된 바가 없다.

이에 본 발명자들은 사스레피나무의 생리활성물질 함량 또는 조성을 분석하여 건조한 피부, 피지 과다분비로 인한 피부의 지저분함, 잔주름이나 주름에 의한 피부노화, 피부탄력 저하 등의 피부상태를 개선할 수 있는 조성물을 개발하고 노력한 결과, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 보습촉진, 주름개선, 피부탄력개선, 피부노화 방지 또는 피지감소 등의 효능을 가지는 사스레피나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 사스레피나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 사스레피나무 추출물은 사스레피나무의 가지, 잎, 열매, 수피 및 뿌리로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 바람직하게는 잎을 추출하여 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 사스레피나무 추출물은 당업계에 공지된 추출방법 및 추출용매를 이용하여 수득할 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 헥산, 1,3-부틸렌글리콜을 단독 또는 2종 이상 혼합한 것을 사용하여 수득할 수 있다. 상기 추출방법은 특별히 제한되지 않으며, 예를 들어, 수증기 증류법, 열수 추출물 또는 유기용매를 이용한 직접 추출법 등이 있으나, 유기용매를 이용한 직접 추출법을 사용하여 추출하는 것이 바람직하다.

구체적 예로, 본 발명의 사스레피나무 추출물은 사스레피나무 잎 분말을 추출용매에 침지하고 60 내지 80℃의 온도, 바람직하게는 65 내지 75℃에서 20 내지 30시간, 바람직하게는 20 내지 26시간 동안 2 내지 4회 가열하여 얻을 수 있다. 이러한 조건으로 추출이 이루어지는 경우 바닐릭산(vanillic acid), 파라-쿠마릭산(ρ-coumaric acid), 살리실산(salicylic acid), 프로토카테큐산(protocatechuic acid) 및 레스베라트롤(resveratrol) 등을 주요성분으로 하는 페놀성 화합물 및 아미노산의 성분의 함량이 최대로 함유된 추출물을 얻을 수 있다.

하나의 구체적 실시에서, 사스레피나무를 잎을 건조한 후 분말화하여 80% 메탄올 이용하여 75℃에서 24시간 동안 3회 반복 추출하여 수득한 사스레피나무 메탄올 추출물과 사스레피나무를 잎을 건조한 후 분말화한 사스레피나무 잎 분말을 초임계유체 추출장치에 주입하고, 40℃의 온도 및 압력별(150bar, 400bar)로 변화를 주어 2회 추출하여 수득한 사스레피나무 초임계유체 추출물의 총 폴리페놀 함량, 총 플라보노이드 함량, DPPH 라디컬 소거능, 및 아미노산 성분 및 함량을 측정하였다. 그 결과, 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량은 80% 메탄올을 이용하여 추출한 추출물이 초임계유체 추출법을 이용하여 추출한 추출물에 비하여 높게 측정되었고, DPPH 라디컬 소거능은 80% 메탄올을 이용하여 추출한 추출물이 초임계유체 추출법을 이용하여 추출한 추출물에 비하여 약 17배 뛰어난 것으로 측정되었다. 또한, 80% 메탄올을 이용하여 추출한 추출물은 초임계유체 추출법을 이용하여 추출한 사스레피나무 추출물에 비하여 총 아미노산 함량이 3 내지 7배, 바람직하게는 4 내지 6배 증가된 것을 확인하였다(실시예 1 내지 4 참조).

본 발명에 있어서, 사스레피나무 추출물은 여과, 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 피부상태 개선은 피부의 보습촉진, 주름개선, 피부탄력개선, 피부노화방지 또는 피지감소로 건조한 피부, 피지 과다분비로 인한 피부의 지저분함, 잔주름이나 주름에 의한 피부노화, 피부탄력 저하 등과 같은 좋지 않은 피부상태를 경감시키거나 양호한 상태로 변경 및/또는 유도하는 것을 말한다.

본 발명의 상기 사스레피나무 추출물은 보습촉진, 주름개선, 피부탄력개선, 피부노화방지 또는 피지감소 등의 효능을 가지며, 이는 상기 추출물에 특히 많이 함유된 페놀성 화합물 및 아미노산에 의하여 이루어진다.

본 발명에 있어서, 사스레피나무 추출물은 10 ㎕의 추출물 중에 바닐릭산(vanillic acid)이 20 내지 26 mg%, 파라-쿠마릭산(ρ-coumaric acid)이 20 내지 26 mg%, 살리실산(salicylic acid)이 35 내지 45 mg%, 프로토카테큐산(protocatechuic acid)이 30 내지 40 mg% 및 레스베라트롤(reveratrol)이 30 내지 40 mg% 함유되어 있으며, 보다 바람직하게는 바닐릭산(vanillic acid)이 23.83 mg%, 파라-쿠마릭산(ρ-coumaric acid)이 23.87 mg%, 살리실산(salicylic acid)이 40.27 mg%, 프로토카테큐산(protocatechuic acid)이 34.73 mg% 및 레스베라트롤(reveratrol)이 35.59 mg% 함유되어 있다.

상기 바닐릭산(vanillic acid)은 산화물에 의해 산화되거나 부식성의 융해작용을 받은 바닐린(vanillin)으로부터 얻을 수 있는 페놀성 화합물 중 하나로, 항산화작용, 항돌연변이작용, 피부 노폐물 제거 효과, 항암작용 및 항염증작용 등에 대한 효과가 있어 피부병 치료, 궤양성 대장염 개선, 염증질환의 치료 등에 이용되는 것으로 알려져 있다(대한의생명과학회지, 2007, 하대호 et al., 13(4):349-354; Exp. Dermatol., 2010, Chou et al., 19(8):742-750; 원광대학교 보건환경대학원 석사학위논문, 2009, 김지미).

상기 파라-쿠마릭산(ρ-coumaric acid)은 시남산(cinnamic acid)이 산화효소에 의해 산화되어 생성된 페놀성 화합물 중 하나로, 티로시나아제 활성 억제, 항산화, 항균, 항암 등에 대한 효과가 있어, 미백, 주름 등의 화장료 조성물, 심혈관계 질환 예방 등에 이용되는 것으로 알려져 있다(경북대학교 대학원, 박사학위논문, 2010, 안상미; 경북대학교 대학원, 석사학위논문, 2012, 송교선; 경북대학교 의학전문대학원, 석사학위논문, 2010, 이승진).

상기 살리실산(Salicylic acid)은 미백, 각질제거, 보습, 항노화, 피지 또는 피부 노폐물 제거, 해열, 진통의 효과, 항균 및 항염증 등에 대한 효과가 있어 진통제, 해열제 및 피부염증질환 치료의 조성물 등에 이용되는 것으로 알려져 있다(대한민국 등록특허 제10-0350252호; Drug Res., 2014, Rehman et al., 64(3):159-165.).

상기 프로토카테큐산(protocatechuic acid)은 멜라닌 생성 억제, 콜라겐 합성, COX 활성 억제, 탈모방지 등에 대한 효과가 있어 미백, 주름개선 등의 화장료 조성물, 염증질환 개선 및 탈모방지 조성물 등에 이용되는 것으로 알려져 있다(대한민국 등록특허 제10-0863618호).

상기 레스베라트롤(resveratrol)은 3,5,4’-트리하이드록시-트랜스-스틸벤(3,5,4'-trihydroxy-trans-stilbene)이라고도 하며, 자외선 차단, 모공수축, 색소침착, 항주름, 미백, 보습, 염증질환 치료, 심장질환 예방 및 항암 등에 대한 효과가 있어 미백, 주름개선 등의 화장료 조성물, 및 심장질환 또는 암 질환을 치료하는 약제학적 조성물 등에 이용되는 것으로 알려져 있다(대한민국 등록특허 제10-1146206호; 대한민국 공개특허 제2007-0032156호; 대한민국 등록특허 제10-1001287호; 대한민국 공개특허 제2005-0017066호; 대한민국 등록특허 제10-0423073호).

또한, 본 발명의 사스레피나무 추출물은 상기 페놀성 화합물 이외에도 18종의 아미노산이 함유되어 있으며, 특히 글루타민(glutamine), 글루타민산(glutamate), 리신(lysine), 알라닌(alanine) 및 페닐알라닌(phenylalanine)이 다량 함유되어 있다.

본 발명에 있어서, 사스레피나무 추출물은 1mg의 추출물 중에 글루타민(glutamine) 및 글루타민산(glutamate)이 750 내지 850 ng, 리신(lysine)이 350 내지 450 ng, 알라닌(alanine)이 200 내지 300 ng 및 페닐알라닌(phenylalanine)이 200 내지 300 ng 함유되어 있으며, 보다 바람직하게는 글루타민(glutamine) 및 글루타민산(glutamate)이 797.93 ng, 리신(lysine)이 375.32 ng, 알라닌(alanine)이 244.49 ng 및 페닐알라닌(phenylalanine)이 223.84 ng 함유되어 있다.

상기 글루타민(glutamine) 및 글루타민산(glutamate)은 성장호르몬 분비를 원활하게 하고, 면역기능을 유지시켜주며, 아토피, 자외선 또는 접촉성에 의한 피부염증질환을 개선시키는 효과가 있는 것으로 알려져 있다(대한민국 등록특허 제10-0883342호; 대한민국 등록특허 제10-0953900호).

상기 리신(lysine)은 항체, 호르몬, 효소 및 콜라겐의 생성 및 복구를 돕고, 감기, 고열 등에 의한 입가의 발진과 포진 바이러스에 강력한 항균활성을 가지며, 체내에서 질소의 균형을 유지시키는 효과가 있는 것으로 알려져 있다(한국영양학회지, 2009, 김선아 et al., 38(11):1492-1498).

상기 알라닌(alanine)은 간 대사를 촉진하여 유해물질을 무독화하고, 알코올 분해효소가 활발히 작용하도록 도와주며, 이뇨작용으로 알코올을 빨리 배설시키는 역할을 한다. 또한, 화장료 조성물에 사용되어 보습 및 피부탄력에 효과가 있는 것으로 알려져 있다(대한민국 등록특허 제10-0667462호).

상기 페닐알라닌(phenylalanine)은 필수 아미노산의 하나로 혈액뇌관문을 통과하여 뇌의 화학물질에 직접적으로 작용한다. 또한, 항우울작용이 뛰어나고, 진통 작용하는 생리활성물질의 분해를 지연시켜 진통효능을 연장하며, 염증을 조절한다. 뿐만 아니라 페닐케톤뇨증(phenylketonuria; PKU)을 개선하고, 피부탄력에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다(생물정신의학, 2001, 민경준, 8(1):37-46; 대한민국 공개특허 제2009-0024287호; Biomaterials Res., 2009, 김영진, 13(1):30-36).

따라서, 본 발명의 사스레피나무 추출물은 보습촉진, 주름개선, 피부탄력개선, 피부노화 방지 또는 피지감소의 효능을 가지므로 피부상태를 개선시킬 수 있는 화장료 조성물로 사용 가능하다.

하나의 구체적 예로, 본 발명의 사스레피나무 추출물은 바닐릭산(vanillic acid), 파라-쿠마릭산(ρ-coumaric acid), 살리실산(salicylic acid), 프로토카테큐산(protocatechuic acid) 및 레스베라트롤(resveratrol) 등을 주요성분으로 하는 페놀성 화합물, 및 글루타민(glutamine), 글루타민산(glutamate), 리신(lysine) 및 페닐알라닌(phenylalanine) 등을 주요성분으로 하는 아미노산을 함유하고 있으므로, 이를 화장료 산업에 활용할 경우 보습촉진, 주름개선, 피부탄력개선, 피부노화 방지 또는 피지감소를 위한 화장료 조성물로서의 가능성을 제시하고 있다.

본 발명의 조성물은 상술한 사스레피나무 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있다. 이러한 성분들은, 예를 들어 항산화제, 안정화제, 비타민, 안료 및 항료와 같은 통상적인 보조제 및/또는 담체가 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 보습촉진, 주름개선, 피부탄력개선, 피부노화 방지 또는 피지를 감소시키는 효과를 증진시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 이러한 제형은, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

상기 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있다. 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

상기 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

상기 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

상기 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

한편, 본 발명의 사스레피나무 추출물은 천연원료로서 인체에 대한 부작용이 화학적 합성의약품 보다 극히 적어 장기간 사용시에도 안심하고 사용할 수 있으므로, 상기한 바와 같은 화장료 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.

본 발명에 따른 사스레피나무 추출물은 보습촉진, 주름개선, 피부탄력개선, 피부노화 방지 또는 피지감소 등의 효능을 가지는 페놀성 화합물 및 아미노산 성분을 다량 함유하고 있으므로, 본 발명의 조성물은 건조한 피부, 피지 과다분비로 인한 피부의 지저분함, 잔주름이나 주름에 의한 피부노화, 피부탄력 저하 등과 같은 좋지 않은 피부상태를 개선시키기 위한 화장료로서 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 80% 메탄올 또는 초임계유체 추출법을 이용하여 추출한 사스레피나무 추출물의 총 폴리페놀 함량을 측정한 결과이다.
도 2는 80% 메탄올 또는 초임계유체 추출법을 이용하여 추출한 사스레피나무 추출물의 총 플라보노이드 함량을 측정한 결과이다.
도 3은 80% 메탄올 또는 초임계유체 추출법을 이용하여 추출한 사스레피나무 추출물의 아미노산 함량 및 성분을 측정한 결과이다.
도 4는 80% 메탄올을 이용하여 추출한 사스레피나무 추출물의 페놀산(phenolic acid)의 함량 및 성분을 측정한 결과이다.

이하, 제조예 및 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 제조예 및 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

제조예 1 : 사스레피나무( Eurya japonica , EJ) 추출물 제조

1-1. 사스레피나무 메탄올 추출물 제조

사스레피나무의 잎을 열풍건조기(HJ-2012, 홍진기계)를 이용하여 45℃에서 24시간 동안 건조한 후 분말화하였다. 그 다음 80% 메탄올을 이용하여 75℃에서 24시간 동안 3회 반복 추출하였다. 그 후 상기 추출한 시료를 감압농축하여 시료액으로 제조하였다.

1-2. 사스레피나무 초임계유체 추출물 제조

사스레피나무의 잎을 열풍건조기(HJ-2012, 홍진기계)를 이용하여 45℃에서 24시간 동안 건조한 후 분말화하였다. 그 다음 초임계유체 추출장치(ISA-SCFE-0050-0700-080, 일신오토클레이브, 한국)에 상기 사스레피나무 잎 분말을 100g의 양으로 주입하고, 120분 동안 초임계유체 추출을 2회 실시하였다. 초임계유치 추출 조건은 하기 표 1에 나타낸 바와 같이, 압력별(150 bar, 400 bar)로 변화를 두었으며, 온도는 40℃로 설정하였다. 초임계유체 추출 시 이산화탄소의 유량은 분당 60ml로 하였고, 초임계 이산화탄소와 함께 보조용매로서 주정을 에탄올(주정)을 사용하였으며, 주입량은 분당 3ml을 60분 동안 주입하였다.

초임계연구장비 2번 사용 ((ISA-SCFE-0500-0700-080) - A31)
CO₂ 유량	60ml/min			보조용매종류			주정
총추출시간	120분			보조용매유량			2ml/min 60분
분리조1 조건	40 bar, 40℃			분리조2 조건			0 bar, 40℃
추출공정 (분)	등압	퍼징	가압		추출유지	보조용매주입		추출유지	감압
	5	5	10		30	60		30	5

실시예 1 : 사스레피나무의 추출방법에 따른 총 폴리페놀 함량 측정

상기 제조예 1의 메탄올 또는 초임계유체추출법으로 추출한 사스레피나무 추출물(EJ)의 총 폴리페놀 함량은 폴린-데니스법(Folin-Denis, 1912)에 따라 측정하였다. 구체적으로, 상기 사스레피나무 추출물 100 ㎕에 폴린-데니스 시약 500 ㎕를 가하여 암소에서 3분 동안 정치한 후, 0.75% Na₂CO₃ 용액 400 ㎕를 가하여 혼합하였다. 그 다음 상기 혼합물을 암소에서 30분 동안 정치한 후 분광광도계(UV/VIS spectrophotometer, optizen 3220bio)를 이용하여 760nm에서 흡광도를 측정하였고, 갈산(galic acid, sigma Co., St. Louis, MO, USA)을 표준품으로 검량성(R²=0.9998)을 작성하여 정량하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.

실험결과, 80% 메탄올을 이용하여 추출한 추출물의 총 폴리페놀 함량은 70.81 mg/g이고, 초임계유체법으로 추출한 추출물의 총 폴리페놀 함량은 82.41 mg/g으로, 초임계유체법으로 추출한 사스레피나무 추출물이 80% 메탄올을 이용하여 추출한 사스레피나무 메탄올 추출물에 비하여 높게 측정되었으나, 유의적인 차이는 나타내지 않았다.

실시예 2 : 사스레피나무의 추출방법에 따른 총 플라보노이드 함량 측정

상기 제조예 1의 메탄올 또는 초임계유체추출법으로 추출한 사스레피나무 추출물(EJ)의 총 플라보노이드 함량은 지아 등(Jia et al., 1999)의 방법을 일부 변경하여 측정하였다. 구체적으로, 상기 사스레피나무 추출물 300 ㎕에 증류수 1,200 ㎕를 첨가하여 혼합한 후 5분 동안 정치하였다. 그 다음 상기 혼합물에 5% NaNO₂ 90 ㎕를 첨가한 후 5분 동안 실온에서 반응시켰다. 그 다음 10% AlCl₃ 90 ㎕를 첨가하여 25℃에서 5분 동안 반응시킨 후 1M NaOH 600 ㎕를 첨가하여 10분 동안 반응시켰다. 그 다음 분광광도계를 이용하여 510nm에서 흡광도를 측정하고, 루틴(rutin, sigma Co., St. Louis, MO, USA)를 이용하여 검량선(R²=0.999)을 작성하여 정량하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.

실험결과, 80% 메탄올을 이용하여 추출된 추출물의 플라보노이드 함량은 65.9 mg/g이였고, 초임계유체법을 이용하여 추출된 추출물들의 플라보노이드 함량은 47.5 mg/g 으로, 80% 메탄올을 이용하여 추출된 추출물이 초임계유체 추출물에 비하여 높게 측정되었으나, 유의적인 차이는 나타내지 않았다.

실시예 3 : 사스레피나무의 추출방법에 따른 DPPH 라디컬 소거능 측정

상기 제조예 1의 메탄올 또는 초임계유체추출법으로 추출한 사스레피나무 추출물(EJ)의 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 라디칼 소거능은 바이오이즈의 방법(Biois, 1958)을 변형하여 측정하였다. 구체적으로, 상기 사스레피나무 추출물 400 ㎕을 100 μM DPPH 용액 1ml에 첨가한 후 혼합하여 30분 동안 암소에서 반응시켰다. 그 다음 517nm에서 흡광도를 측정하고, 하기 실험식 1을 이용하여 DPPH 라디칼 소거능을 백분율로 나타내었다. 대조군으로는 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하였다. 그 결과를 표 2에 나타내었다.

[실험식 1]

DPPH 라디컬 소거능(%) = {(대조군 흡광도 - 추출물 흡광도) / 대조군 흡광도} × 100

80% 메탄올 추출물		초임계유체 추출물		대조군 (Ascorbic acid)
농도		농도		-
0.0015%	2.48±1.44	0.01%	13.83±0.55
0.003%	5.72±0.42	0.2%	27.70±2.91
0.006%	13.09±0.88	0.25%	29.65±1.06
0.012%	25.45±0.59	0.5%	42.65±4.50
0.025%	45.37±1.88
0.05%	70.34±3.04
EC50(%)¹⁾	0.029	EC50(%)	> 0.5%	0.0060±0.76
¹⁾ DPPH 라디컬을 50% 저해하는데 필요한 추출물의 농도

실험결과, 80% 메탄올 추출물은 농도가 증가할수록 DPPH 소거능이 증가하였으며, 초임계유체 추출물에 비하여 자유 라디컬 소거능력(EC₅₀)이 약 17배 뛰어난 것으로 나타났다.

실시예 4 : 사스레피나무의 추출방법에 따른 구성 아미노산의 조성 및 함량 측정

상기 제조예 1의 메탄올 또는 초임계유체추출법으로 추출한 사스레피나무 추출물(EJ)을 가수분해하였다. 그 다음 상기 가수분해한 시료 약 6.6 mg를 취하여 PICO-tag 방법을 이용하여 PITC 라벨링을 실시하고, 상기 PITC가 라벨링된 시료를 400 ㎕ 분석용액에 녹인 후 10 ㎕를 시험용액으로 하여 하기 표 3의 조건으로 한국기초과학지원연구소 대전센터에 의뢰하여 구성 아미노산의 조성 및 함량을 측정하였다. 그 결과를 표 4 및 도 3에 나타내었다.

	Condition
System	Waters
Column	Pico-tag column (3.9 X 300mm, 4 ㎛, waters)
Detector	254 nm
Injection volumn	10 ㎕
Flow rate	1.0 ml/min
Column oven	30℃
Mobile phase	min	140mM sodium acetate (6% ACN)	60% ACN
	0	100	0
	9.0	86	14
	9.2	80	20
	17.5	54	46
	17.7	0	100
	21.0	100	0
	24.0	100	0
	25.0	100	0

(Unit : ng/mg)
	80% 메탄올 추출물	초임계유체 추출물
알라닌	244.49	13.20
아르기닌	7.32	-
Asp¹⁾	195.45	-
시스테인	54.66	40.08
Glu²⁾	797.93	22.93
글리신	88.90	-
히스티딘	29.80	-
이소루신	39.24	39.11
루신	90.46	5.81
리신	375.32	355.81
메티오닌	13.87	12.93
페닐알라닌	223.84	-
프롤린	84.02	-
세린	59.89	-
티로신	26.43	39.32
트레오닌	41.85	-
트립토판	152.61	-
발린	84.39	-
합계	2,610.48	529.19
¹⁾Asp: 아스파르트산염+아스파라긴 ²⁾ Glu: 글루탐산+글루타민

실험결과, 80% 메탄올을 이용하여 추출한 추출물은 총 18종의 아미노산이 검출되었고, 총 아미노산 함량은 2,610.48 ng/mg이였다. 이 중 Glu의 함량이 797.93 ng/mg로 가장 높았고, 리신, 알라닌, 페닐알라닌 순으로 높은 비율을 차지하였다. 반면, 초임계유체법으로 추출한 추출물은 총 8종의 아미노산이 검출되었고, 이 중 리신이 355.81 ng/mg으로 가장 높게 검출되었다.

실시예 5 : 사스레피나무 메탄올 추출물의 페놀산 조성 및 함량 측정

상기 제조예 1의 메탄올을 이용하여 추출한 사스레피나무 추출물(EJ)로부터 크리저 등(Krygier et al., 1982)의 방법을 이용하여 유리형, 에스테르형 및 결합형 페놀산을 추출 분리하고, HPLC(High pressure liquid chromatography,1200 series, agilent technologies, USA)를 이용하여 페놀산 함량을 분석하였다. 우선 분석 시료는 상기 제조예 1의 메탄올을 이용하여 추출한 사스레피나무 추출물(EJ) 분말을 헥산으로 탈지 처리한 것을 사용하였다. 유리형 페놀산은 상기 탈지한 시료 10g을 증류수로 3회 반복 추출하여 추출액을 얻은 다음, 1N HCl을 이용하여 pH를 2.0으로 조절한 후 디에틸에테르: 에틸-아세테이드(1: 1) 혼합액을 이용하여 분리 용출하였다. 에스테르형 페놀산은 상기 탈지한 시료 10g을 증류수로 3회 반복 추출하여 추출액을 얻은 다음, NaOH를 첨가하여 최종 NaOH 농도가 2N이 되도록 조절한 후 실온에서 4시간 이상 가수분해 시킨 다음 가수분해된 용액을 다시 HCl 용액으로 pH가 2.0이 되도록 조절한 후 디에틸에테르: 에틸-아세테이드(1: 1) 혼합액을 이용하여 분리 용출하였다. 마지막으로 결합형 페놀산은 유리형 페놀릭 산을 추출하고 남은 잔사를 2N NaOH 250ml에 가하여 가수분해시킨 후 HCl 용액으로 pH가 2.0이 되도록 조절한 다음 디에틸에테르: 에틸-아세테이드(1: 1) 혼합액을 이용하여 분리 용출하였다. 각각 분리 용출하여 얻어진 유리형, 에스테르형 및 결합형 페놀산은 30℃이하의 온도에서 감압농축한 후 HPLC용 메탄올 용액으로 일정량 용해한 다음 멤브레인 필터(0.2 ㎛)에 여과한 후 HPLC를 이용하여 하기 표 5의 조건으로 분석하였다. 페놀성 화합물의 정성 및 정량분석은 17종의 페놀성 화합물의 표준물질을 일정비율로 희석하여 HPLC를 통해 각각의 피크면적(peak area)을 얻어 희귀곡선식을 이용하여 농도를 측정하였다. 표준물질의 희귀곡선식은 표 6에 나타냈으며, 정성분석 결과는 도 4에 나타내었다. 그 결과를 표 7 및 도 4에 나타내었다.

	Condition
System	Agilent
Column	ODS 4.6×250mm
Detector	UV 280 nm
Injection vol.	10 ㎕
Flow rate	0.7 ml/min
Column oven	30℃
Mobile phase	min	2% Acetic acid	70% ACN
	0	100	0
	10	100	0
	15	94	6
	30	94	6
	40	85	15
	70	70	30
	85	65	35
	90	60	40
	110	0	100
	120	100	0

페놀산 표준물질	희귀곡선식
갈산	y=40.05x+330.66
겐티스산	y=1.66x+21.40
카테킨	y=9.16x-20.20
바닐릭산	y=20.91x-104.91
카페산	y=54.36x+21.91
클로로겐산	y=35.90x-172.23
시링산	y=52.01x-431.81
에피갈로카테킨 갈레이트	y=11.59x+44.48
ρ-쿠마릭산	y=70.31+1032.75
살리실산	y=8.87x-42.22
갈로카테킨 칼레이트	y=6.86x-1.77
트랜스 페룰산	y=33.37x+351.75
2-하이드록시 시남산	y=24.09x-758.46
프로토카테큐산	y=6.07x-58.38
나린긴	y=25.01x+234.1
나린게닌	y=11.04x+7.14
레스베라트롤	y=51.04x+249.63

(Unit : mg%, dry basis)
페놀산	유리형	에스테르형	결합형	합계
갈산	N.D	N.D	N.D	N.D
겐티스산	N.D	N.D	N.D	N.D
카테킨	N.D	1.79	N.D	1.79
바닐릭산	N.D	9.20	14.63	23.83
카페산	N.D	N.D	N.D	N.D
클로로겐산	N.D	0.68	N.D	0.68
시링산	0.76	1.38	N.D	2.14
에피갈로카테킨 갈레이트	N.D	3.58	N.D	3.58
ρ-쿠마릭산	0.29	6.23	17.35	23.87
살리실산	5.32	18.69	16.26	40.27
갈로카테킨 칼레이트	3.45	7.08	N.D	10.53
트랜스 페룰산	0.04	N.D	19.19	19.23
2-하이드록시 시남산	N.D	2.31	6.19	8.5
프로토카테큐산	8.41	26.32	N.D	34.73
나린긴	N.D	13.34	N.D	13.34
나린게닌	2.29	2.77	8.61	13.67
레스베라트롤	N.D	11.20	24.39	35.59
총합계	20.56	104.57	106.62	231.75

실험결과, 80% 메탄올을 이용하여 추출된 사스레피나무 추출물의 페놀산은 결합형 페놀산의 함량이 가장 높았고, 다음으로는 에스테르형, 유리형 순으로 페놀산이 존재하였다. 유리형과 결합형은 7종, 에스테르형은 13종의 페놀산이 검출되었다. 구체적으로 유리형은 프로토카테큐산과 살리실산이 각각 8.41 mg%, 5.32 mg%로 가장 많이 검출되었고, 에스테르형 역시 프로토카테큐산과 살리실산이 각각 26.32 mg%, 18.69 mg%로 가장 많이 검출되었으며, 결합형은 레스베라트롤과 트랜스 페놀산이 각각 24.39 mg%, 19.19 mg%로 검출되었다.

Claims

보습촉진, 주름개선, 피부탄력개선, 피부노화방지 또는 피지감소를 위한 피부상태 개선용 화장료 조성물로서, 사스레피나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 사스레피나무 추출물은 바닐릭산(vanillic acid), 파라-쿠마릭산(ρ-coumaric acid), 살리실산(salicylic acid), 프로토카테큐산(protocatechuic acid) 및 레스베라트롤(reveratrol)이 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 피부상태 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 사스레피나무 추출물은 10 ㎕의 추출물 중에 바닐릭산(vanillic acid)이 20 내지 26 mg%, 파라-쿠마릭산(ρ-coumaric acid)이 20 내지 26 mg%, 살리실산(salicylic acid)이 35 내지 45 mg%, 프로토카테큐산(protocatechuic acid)이 30 내지 40 mg% 및 레스베라트롤(reveratrol)이 30 내지 40 mg% 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 피부상태 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 사스레피나무 추출물은 글루타민(glutamine), 글루타민산(glutamate), 리신(lysine), 알라닌(alanine) 및 페닐알라닌(phenylalanine)이 함유되어 것을 특징으로 하는 피부상태 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 사스레피나무 추출물은 1mg의 추출물 중에 글루타민(glutamine) 및 글루타민산(glutamate)이 750 내지 850 ng, 리신(lysine)이 350 내지 450 ng, 알라닌(alanine)이 200 내지 300 ng 및 페닐알라닌(phenylalanine)이 200 내지 300 ng 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 피부상태 개선용 화장료 조성물.