TW200406218A - Composition and combination comprising a isoflavone and a plant sterol - Google Patents
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Description
V V 200406218 玖、發明說明: 【發明領域】 本發明係關於用以降低血液中低密度脂蛋白膽固醇及總 膽固醇濃度之組合物及方法,明確言之,本發明係關於含 有植物固醇,大豆蛋白,及異黃酮,及其組合之組合物, 其可用以降低血液中LDL-膽固醇及總膽固醇濃度,並預防 或減少動脈硬化症的發生。 【先前技術】 心血管疾病為發病率及死亡率之重要問題,特別是在美 國及西歐國家。發生心血管疾病有數種導因,包括對該疾 病有遺傳傾向者’性別,生活類素,諸如吸煙及飲食, 年齡,高血壓,及高血脂症,包括高膽固醇血症。這些因 素中(特別是高血脂症及高膽固醇血症)會產生動脈硬化 症’這是血管及心臟疾病的主因。 i對人類血管疾病及冠狀心臟疾病而言,血液中含高膽e 鮮濃度是-個主要危險因素,低密度脂蛋白膽固醇後文希 為"LDL-膽固醇")的增加及總膽固醇的增加直接與冠狀,〈 臟疾病危險性的增加有關,3Q福瑞心 研九30^_^,安德森(Anderson),卡斯替利⑽咖叫 利威(Levy), JAMA,257冊,第 2176_8〇頁(198 乃。 名人良中才砰取大豆蛋白物質可降 忠θ Ο貝J降低硇狀心臟疾病的危β * 八因可減少血清中膽固酶 同甲膘固%的含1所致。大豆蛋白物1
已=可降低動物血液中總膽固醇量κ 蛋白對人類血清脂肪中脂質之效果metH
O:\88\88644.DOC 200406218 析中顯示,飲食中大豆蛋白明顯與降低人體血清中總膽固‘ 醇及LDL-膽固醇濃度有關,攝取大色蛋白對血清脂質效應 之.Meta-分析’安德森,強恩斯特(Johnstone),及谷克-尼威 爾(Cook-Newell),新英格蘭醫藥雜誌·,333冊,第5卷,276_82 頁(1995)。 攝取含於整個大旦中之化合物_植物固醇-亦已證明可降 低血液中循環性膽固醇總量及LDL膽固醇含量,食物;物 里_醇:代謝、優點及副也11論,林(Ling)&瓊恩斯(jones), 生命科學·,第57 : 3冊,第195-206頁(1995)。植物固醇係由 植物所產生的固醇,除了在固醇支鏈上第C24位置上含有某 些取代基外’其結構與膽固醇非常相似,一般植物固醇包 括如圖1所示之未飽和固醇麥胚固醇,菜油固醇,豆固 醇,及圖2所示其相對飽和之麥胚固烷醇(sit〇stan〇1)及菜油 固烷醇(campestanol)。植物固醇的食物來源為玉米油,大 且油’及其他含有相當疏水性化合物之植物油。 圖3及4中所示之植物雌激素異黃酮是整個大豆中另一群 之化合物’近來已證明其為降低血液中LDL及總膽固醇濃 度尤重要因子,純化濃縮異黃酮(特別是吉尼斯丹 (genistein))可抑制膽固醇的生化合成作用,並預防lDl膽固 醇的氧化作用,此為發展動脈硬化症的重要步驟,參考·, 韓國專利申請案97_20丨03:氣i匕—低密度蛋白-平滑肌^ 活化作用:一|田胞增殖住_方及致粥瘤性互能 那特瑞吉恩(Natarajan)等人·,脂肪研究雜誌% : 9 第 2005-16 頁(1995 九月)。
O:\88\88644.DOC 200406218 以整個大豆產製大豆油,大豆蛋白及醫藥或食物補充組 合物(慣用加工處理中,是將植物固醇,異黃酉同及大豆蛋 白^開的1用機械性或化學萃取作用將去殼大豆之植物 固和與大且蛋白分開,而異黃酮會在含有脂肪及脂防溶解 且油分液中,大豆油分液與所剩的大豆物質分離 去脂肪大豆物質用於大豆及蔬菜油中,其可進__步處理 形成製餅材料,人造奶油,及卵磷脂。 ::::豆物質(一般為去脂肪大豆薄片)可作為製備具 疋貝貝3里《大且蛋白物質(諸如大豆蛋白濃縮物及大豆 2白分離物)之起始物質,用以製備大豆蛋白產物之去脂肪 大豆物質亦含有異黃嗣,然而,製備大豆蛋白物 豆蛋白濃縮物及大豆蛋白分離物)之慣用流程中,實質本量 ==係利用醇類萃取或水溶液萃取,清洗大豆蛋白物 • •且蛋白物質分離的,參考 第3-6頁(大豆蛋白協會發行,⑽)。 白:=:製Γ豆Γ物質時,焦點是將異黃嗣與大豆蛋 、、刀 因為當大且蛋白物質中存有異黃酮時,常與 不艮風味,氣味及/或色澤有關,例如美案 购34揭示,將蛋白物質與吸收性樹脂,= :物::去除異黃酮之步驟,以製備較佳風味之大2 :溶液萃取能產製出較佳風味之蔬菜蛋二 =因醇類去除大豆蛋白物質中異黃銅相當有效果,: 考例如.,曰本㈣申較63_245,6似。 ^
O:\88\88644.DOC 200406218 近來的努力焦點亦著重於自植物物質(特別是大豆及t 蓿)中分離異黃酮,以提供一種對健康有益之純化異黃酮物 質。例如下列的專利申請案揭示各種自植物物質中分離異 黃酮之方法:美國專利申請案4,428,876 ; 5,702,752 ; 5,679,806 ; 4,390,559 ; 4,366,248 ; 4,366,082 ; 4,264,509 ; 4,232,122 ; 4,157,984 ;日本專利申請案 1-258669A ; 5-170756A; 41-90720A; 62-126186A; 62-126185A;及PCT 專利申請案WO93/23069。分離的異黃酮化合物可用於醫藥 組合物或食物補充組合物中,以預防或治療各式有害健康 之症狀,包括降低增加之膽固醇含量,例如,美國專利申 請案 5,516,528 ; 5,424,331 ; 5,569,459 ; 5,654,011 及 PCT 專 利申請案WO93/23069中揭示分離異黃酮物質可用於醫藥 或食物補充組合物。 利用大豆成分之新方法及組合物,以提供明顯降低血液 中LDL與總膽固醇含量至明顯減少動脈硬化症及冠狀心臟 疾病仍是必須的。 【發明内容】 本發明一個主旨係提供含有大豆蛋白物質之組合物,其 中大豆蛋白物質乾重中至少含有49%大豆蛋白,至少一種 選自吉尼斯丹,丹吉因(daidzein),格力西丹(glycitein),生 機素A(biochanin A),福馬尼丁(formononetin)及其相對之天 然存在之糖苷及糖甞共軛物之異黃酮,及一種植物固醇, 其中植物固醇至少為0.49%組合物重量百分比。 本發明另一個主旨係提供一種含有大豆蛋白物質之組合 O:\88\88644.DOC -9 - 200406218 物其中大且蛋白物質乾重中至少含有49%大豆蛋白,及, 種植物固醇,其中植物固醇為0.49%組合物重量百分比。 固主ej本务明&供一種組合物,其包括至少一種 k自口尼斯丹’丹吉因,格力西丹,生機素A,福馬尼丁及 其相對之自然存在之糖:y:及料共輛物之異黃酮,及一種 植物固醇,其中植物固醇至少為〇 49%組合物重量百分比。 本發明另個主旨係提供一種降低人體血液中咖濃度及 總膽固醇含量之方法,其係同時投與人體大豆蛋白物質乾 重中至少含有49%大豆蛋白,一種選自吉尼斯丹,丹吉因, 格力西丹’生機素A,福馬尼丁及其相對之天然存在之料 及糖菩共輛物之異黃酮,及—種植物固醇,以降低人體血 /夜中LDU辰度及總膽固醇。同時投與的植物固醇含量為包 括至少是同時投用之大豆蛋白物質,異黃酮,及植物固醇 組合總量之0.49%。較佳的主旨中,植物固醇,大豆蛋白物 質,、及異黃酮是同時投與人體,以預防或減少人體動脈硬 化症的發生。 本毛月另個王曰係-種降低人類血液中ldl濃度及總膽 固醇含量之方法’其係同時投與人體至少含有49%大豆蛋 白物貝乾重大旦蛋白之大豆蛋白物質,及一種植物固醇, 、降低人血液中LDL ’辰度及總膽固醇。同時投用之植物 固醇含量為至少包括同時投用大豆蛋白物質及植物固醇组 合總量之0.49%。較佳的主旨中,植物固醇及大豆蛋白物暂 是同時投與人體,以預防或減少人體動脈硬化症的發生。、 本發明另個主旨係一種降低人類血液中低密度脂蛋白膦
O:\88\88644.DOC -10- 200406218 固醇及總膽固醇含量之方法,其中同時投與人體一種植物· 固醇及一種選自吉尼斯丹,丹吉因,格力西丹,生機素A, 福馬尼丁及其相對之自然存在之糖苷及糖甞共軛物異黃 酮,以降低人體血液中LDL濃度及總膽固醇。同時投與的 植物固醇含量為包括至少是同時投用之大豆蛋白物質,異 黃酮,及植物固醇組合總量之〇.49%。較佳的主旨中,同時 投與人體植物固醇及異黃酮,以預防或減少人體動脈硬化 症的發生。 二本發明另個主旨是提供一種包括大豆子葉物質及植物固 醇< 組合物,其中植物固醇至少為〇49%組合物重量百分 比。 【實施方式】 本專利說明書中所用"Mal"一詞代表”丙二醯基",而”Ac" 代表"乙醯基”,,,減少”或其衍生字句&包括完全或部分抑制 專—性生物效應(文中係使用減少一詞^另外,本專利說明 書中所用,,異黃嗣”或"植物雌激素"意指單—異黃酮或植物 雌激素兩者,或當,,異黃酮,,或”植物雌激素,,定義為至少—種 &自群異黃酮時,則為多種的異黃酮或植物雌激素。"異 只酮糖甘"意指異黃酮部分上共價鍵結碳水單體部分,,,異 黃酉同糖料輛物,,意指具有另—個分子部分(諸如酿)鍵結至 異黃酮料碳料分之異黃_#。另外本專利說明書中 所用"醫藥製劑"為一種化合物或與賦型劑結合之混合物, 根據醫師的處方’該賦型劑能有效的傳送化合物,或將化 合物傳送至人體。"櫃檯製劑”為-種化合物或與賦型劑結
O:\88\88644.DOC -11 - 200406218 口之此合物,其可有效的傳送化合物,或將化合物傳送至_ 人體,該賦型劑無須醫師處方即可投與人體。 本發明發現當人體同時投用有效含量之能促使膽固醇降 低之每種活性成分時,植物固醇與大豆蛋白物質及/或異黃 酮組合,可相乘性地降低人體血液中低密度脂蛋白膽固醇 及總膽固醇含量。因此,本發明的範圍係利用植物固醇(另 名為’’植物留醇類”)大豆蛋白物質及/或選擇性異黃酮組 合,以降低血液中LDL及總膽固醇濃度之組合物及方法。 除此之外,因植物固醇與大豆蛋白物質及特別是與異黃酮 組合使用時,利用其可降低血液$LDL及總膽固醇濃度, 及抗氧化劑效應及酪胺酸激酶抑制性的特性,進而可有效 預防或減少動脈硬化症的發生,因此,本發明的範圍亦包 括預防或減少動脈硬化症發生的組合物及方法。 組合物 在一個具體實例中,本發明組合物包括植物固醇與包括 至少為49%大豆蛋白物質乾重之大豆蛋白或至少一種選自 吉尼斯丹’丹吉因’格力西丹,生機素A,福馬尼丁,及其 自然形成之糖甘及糖替共輛物之異黃酮組合,或植物固醇 與異黃酮或大豆蛋白物質兩者組合。大部分較佳的組合物 含所有三種成分,一種植物固醇,一種大豆蛋白物質,及 一種異黃酮,因此可相互利用每種成分的LDL及總膽固醇 降低效應。 另一個具體實例,本發明組合物包括一種植物固醇與大 豆子葉物質(主要含有約37%至約44%的大豆蛋白重量百分 O:\88\88644.DOC 12- 200406218 比)的組合,此大豆子葉/植物固醇組合物可另外包括至少一 種選自吉尼斯丹,丹吉因,格力西丹,生機素A,福馬尼丁, 及其天然形成之糖苷及糖苷共軛物之異黃酮。 植物固醇 用杰、’且$物中的植物固醇包括飽和及未飽和植物固醇兩 者用毛本發明組合物較佳的未飽和植物固醇為圖1中所示 </5-麥胚脂醇,菜油固醇,及豆脂醇,而用於組合物中較 佳的飽和植物固醇為圖2中所示的菜油固烷醇及麥胚固烷 醇,未飽和麥胚脂醇,菜油固醇是特別佳。 本發明組合物植物固醇含量至少為組合物總重的 0.49% ’更佳者約〇.5%至約99 5%之組合物總重,而最佳者 為’勺1 /〇土約60 /〇組合物總重。組合物中植物固醇的相對本 量端視組合物中是否含有大豆蛋白物質而定,假若組合: 中3有大且蛋白物質’通常組合物中植物固醇含量。组合物 總重的百分比)明顯低於不含大豆蛋白物質之組合物。 大豆蛋白物質 在-個具體實财,本發明組合物利大豆蛋白物質之 大豆蛋白物質中含有至少49%大豆蛋白含有物質乾重之大 豆蛋白,較佳的大豆蛋白物質含有至少49%大豆蛋白(乾幻 為去脂大豆粉及大豆餅’其含有自49%大豆蛋白至約抓大 豆蛋白重量比’·大豆濃縮物’其含有自至少伽大豆蛋白 至約90%大豆蛋白重量比;及大豆蛋白分離物,其包含至 少90%大豆蛋白重量比。大豆蛋白濃縮物及大豆蛋白分離 物係特別佳。另-個具體實例中,可用於本發明組合物中 O:\88\88644.DOC -13- 200406218 的大豆蛋白物質為大豆子葉物質。 本發明組合物中大豆蛋白物質的含量範圍自〇%至 99.55%組合物總重,當組合物中包括大豆蛋白物質時,其 較佳係至少為組合物之主要物,更佳者存有自約55%至約 99.55% ’甚至更佳者為自約75%至約99.55%,而最佳者為 自約80%至約99.5之組合物總重。假若組合物中不含異黃 酮,則組合物中可始終含有大豆蛋白物質。 異黃酮 用於本發明組合物中之異黃酮為甞配基異黃酮吉尼斯 丹,丹吉因,格力西丹,生機素A,福馬尼丁(圖3中所示), 及天然形成之糖甞及這些苷配基異黃酮糖苷共軛物,包括 吉尼斯丁(genistin) ’ 6”_〇_Mal 吉尼斯丁,6"_〇_Ac 吉尼斯 丁,丹辛(daidzin),6”_〇_Mal丹辛,6”_〇 Ac丹辛格力丁 (glycitin),及6"_〇_Mal格力丁(圖4中所示)。組合物中可用 -種或多種的異黃酮,嘗配基異黃_特別佳,因為其為里 黃酮中最具生物活性者。用 八 戸“ $用万、組合物中最佳的異黃酮為吉 尼,、斤丹,丹吉因,生機素八及/或福馬尼丁。 中異黃酮的含#_自心祕°錢合物總重。 爵,、且&物中含有大豆蛋白物 γA 了 、、且合物中的異音酮含量 靶園自约0%至约!5%的組合物 。里 本量自糾〇 ηΛ«。/ 直所存有的異黃酮最佳 。里自約〇._6%至約1G%組合物總重 4- B· ^ a j./ ^ 伯^右組合物中不含 :蛋白物貝,組合物中都可含有異黃酮。 用技藝中所熟知的流程及步 組合,以製備本發明組合物。 〖上述所述之成分並
O:\88\88644.DOC -14- 200406218 從植物體中,利用萃取及分離方法製取植物固醇,或利^ 用或學合成固醇的方式製取植物固醇,另一種方式是,萃 耳含植物固醇之植物體中含足夠量植物固醇之油脂用於組 合物中’以提供組合物中所需含量之植物固醇,其中自植 物中所萃取之油脂係根據慣用方法回收植物油脂製取。 較佳的具體實例中,植物固醇係根據美國專利申請案 3’993,756(特別是範例10)所述之方法,獲自大豆油脂非皂 化4刀之大昱油脂,該文獻一併供本專利說明書參考。簡 而吕之,含有約40-50%重量比植物固醇之大豆油脂之非皂 化部分係製取自整個大豆,利用慣用的分解,去殼,製成 薄片’及萃取步驟自整個大豆中製取大豆油脂,利用慣用 大且油脂純化步驟純化大豆油脂,直至最終的去味步驟。 大豆油脂的去味作用於減壓2-3毫米汞柱下,於225°C-235 C下進行,以便自大豆油脂中蒸餾及分離出含有植物固醇 之萃取物。將萃取物與甲醇及濃硫酸(重量比丨克萃取物: 1.72克甲醇:〇·〇ΐ9克硫酸)於65_7〇π下加熱迴流3_4小時, 將萃取物中所含之游離脂肪酸轉換成曱酯,終止反應後, 減壓下去除甲醇,用8(M0(TC的水清洗殘餘油狀物質,以 去除硫酸。而後在20-30毫米汞柱下,於ΐ7〇_ι90°C下,利用 条館作用去除脂肪酸的甲酯,純化所得之殘餘物,以提供 含有40-5 0%植物固醇大豆油脂非皂化部分。非皂化部分中 之植物固醇為万-麥胚脂醇,菜油固醇及豆脂醇。非皂化部 份可進一步利用HPLC純化,以製取每個個別的植物固醇, 或較佳者,直接用於本發明植物固醇的來源。 O:\88\88644.DOC -15- 200406218 /3 -麥胚固醇亦可根據已知的步騾自其他數種的植物油* 脂中卒取之’沒-麥胚固醉可根據安德森(Anderson)等人美 國化學學會雜誌·,48,2897(1926)所揭示的步驟自小麥種子 油脂及玉米油脂中分離;利用格羅爾(Gloyer)等人美國化學 學會雜誌,61,1901(1939)中所揭示的方法自裸麥種子油脂 中分離;利用威力斯(Wallis)有機化學雜誌·,2,335(1937)中 所揭示的方法自棉花油脂中分離;利用山德威斯特 (Sandqvist)等人 Ber.64,21 67(1931)中所述之方法自 tall 〇η 中分離,以上文獻一併供本專利說明書參考。 根據費合茲(Fernholz)等人美國化學學會雜誌 63,1155(1941)中所提供之步驟,菜油固醇可自其他植物油 脂中萃取之,該文獻一併供本專利說明書參考。菜油固醇 亦可利用塔吉亞(Tarzia)等人,義大利Gazz化學·, 97,102(1967)及化學摘要·,67,32883〇1(1967)中所述之步騾合 成之,該文獻一併供本專利說明書參考,豆固醇可自大豆 或葫蘆豆中分離。 利用氫化作用可自未飽和植物固醇製備飽和的植物固 醇,利用慣用氫化作用步驟,沒-麥胚固醇及豆固醇可轉換 成麥胚固烷醇,而菜油固醇可轉換成菜油固烷醇。 某些植物固醇為市售商品,因此可直接購買後用於本發 明組合物中,例如,菜油固醇及豆固醇可自亞爾瑞奇 (Aidrich)化學公司.,940威斯特聖保羅大道,米爾瓦其,威爾 康新講買。/3-麥胚固醇及麥胚隨醇可自夕格馬⑻卿) 化學公司,3050斯布魯斯街,聖路易士,密蘇里州。 O:\88\88644.DOC -16- 200406218 在一個具體實例中,大豆蛋白物質為去脂大豆蛋白粉或· 細粒,大旦蛋白濃縮物,或大豆蛋白分離物,每種均含至 少49%的大豆蛋白重量百分比。為製取去脂大豆粉或大豆 、、田粒’根據彳貝用大旦處理方法將整個大豆清洗,研磨,製 成薄片,並去脂,以產製去脂薄片,片狀物,粉狀物,或 塊狀物,從這些所製物質可製備大豆粉及大豆細粒。去脂 大1薄片及大旦粉可為市售商品。根據慣用的處理方法, 將去脂大豆薄片,片狀物,粉狀物,或塊狀物持續的研磨 成細狀型態,以製備去脂大豆粉及去脂大豆細粒。去脂大 且粉研磨成大小為150 #或更小的顆粒(足夠讓顆粒通過 100號美國篩網),而去脂大豆細粒研磨自大小15〇#至2〇〇〇 #(足夠讓顆粒通過1〇號至80號美國篩網)。去脂大豆粉及去 脂大豆細粒含有自49%大豆蛋白至約65%大豆蛋白重量百 分比,大豆粉及大豆細粒其他成分主要為碳水化合物,大 且纖維,及灰份。去脂大豆粉及大豆細粒為市售商品,可 直接講買應用於本發明組合物中。 組合物中所用較佳的大豆蛋白物質為大豆蛋白濃縮物或 大且蛋白分離物,其所含的大豆蛋白較大豆粉或細粒多。 大豆蛋白濃縮物含有自約65%大豆蛋白至約90%大豆蛋白 重量百分比,而大豆蛋白濃縮物其他成分主要為大豆纖維 及其他多醣類。可利用慣用之大豆蛋白濃縮物加工方法製 備本發明所用之大豆蛋白濃縮物,其包括⑴利用醇水溶液 (較佳為乙醇或甲醇水溶液)清洗去脂大豆薄片或大豆粉;(ii) 利用大豆蛋白等電點之pH(pH 4 4_4 6)稀釋酸清洗去脂大
O:\88\88644.DOC 17- 200406218 ^薄片或大豆粉;或㈣加熱帶有濕氣的去脂大豆薄片或大 j以#性蛋白,而後用水清洗大豆薄片或大豆粉。大 广蛋白漠縮物為市售商品’可直接購買應用於本發明 物。 、本發月組合物更佳的大豆蛋白物質為大豆蛋白分離 勿(另名為分離大豆蛋白),是加工大豆蛋白物質中具有最高 、 虫白百刀比。大且蛋白分離物含有至少約90%大豆 蛋白重量百分比,而大豆蛋白分離物其他主要的成分為灰 份及水分。利用慣用形成大豆蛋白分離物之加工步驟製備 本發明組合物所用之大豆蛋白分離物,其中用pH自約6至約 11《水溶液(較佳為稀釋氫氧彳⑽,聽_,或氧氧化按 水=液)萃取去脂大豆薄片,而含有可溶性蛋白之萃取液與 、合陡物貝(諸如大且纖維及其他不溶性多醋類)分離,將所 萃取之分離PH值調整至大豆蛋白的等電點,較佳約PH 4 4.6以7儿嬴蛋白質。將沉澱的蛋白質與萃取物的液體 部分分開,以便將蛋白質與可溶性碳水化合物分開,而後 清洗分離的蛋白質,中和,產生大豆蛋白分離物。大豆蛋 白分離物為市售商品,可直接購買應用於本發明組合物中。 另一個具體實例,大豆蛋白物質為大豆子葉物質,其含 :約37%至約44%大豆蛋白重量百分比。為製取大豆子㈣ 質,將整個大豆去殼,根據慣用大豆加工技術將大豆子葉 撥開,撥開子葉後,子葉分離,將混合的大豆經足夠大小 的蒒網選擇性去除較小的子葉’而分離出子葉,磨碎生的 子葉’以製備粉末或粉狀物。 O:\88\88644.DOC -18- 200406218 本發明組合物所用的異黃酮化合物為植物(諸如豆莢,苜 蓿,及葛藤(pueraria root)的根)中所發現自然形成的物質。 通常這些異黃酮的豆莢來源包括大豆,埃及豆,及各式其 他的豆莢與豆類,這些含異黃酮化合物的苜蓿來源包括紅 苜宿及地下苜宿。大豆為特別佳的異黃酮化合物來源(除了 大豆中不含有格力西丹及其醣苷)。 異黃酮化合物可自天然植物來源製備之,而利用技藝中 已知的流程可以合成方式製備異黃酮化合物,例如王 (Wong)(食品農業科學雜誌.,第13冊,304頁(1962))所揭示丹 吉因可自紅苜宿中分離得之,或可自格恩力(Ganguly)及塞 爾(Sarre)所提供之黴菌 Micromonospora halophytica 中分離 之,此兩篇文獻一併供本專利說明書參考。利用貝克(Baker) 等人(化學學會雜誌.,274頁(193 3));威斯力(”^:^7)等人 (Ber.第66冊,第685頁(1933)),麥海爾(Mahal)等人(化學學會 雜誌·,第1769頁(1934)),貝克等人(化學學會雜誌.,第1852 頁(1953)),或福克斯(Farkas)(Ber.第 90冊,第 2940 頁(1957)) 所提供之方法,以合成方式製備丹吉因,以上文獻一併供 本專利說明書參考。利用福克斯等人(Ber.,第92冊,第819 頁(1959))之方法可以合成方式製備異黃酮醣苷丹辛,該篇 文獻一併供本專利說明書參考。將丹辛與丙二驢基或乙酉盡 基酐進行慣用的惠化作用後可製備丹吉因異黃酮醣苷共軛 物6’_Mal丹辛及6’-Ac-丹辛。 可藉由貝克(Baker)等人(化學學會雜誌3 115頁(1928));諾 瑞西哈克利(Narasimhachare)等人(J. Sci. Ind· Res.,第 12 O:\88\88644.DOC -19- 200406218 冊,第 287 頁(1953));優得(Yoder)等人(Proc. Iowa Acad. Sci·; 自61冊,第271頁(1954));及吉姆普力恩(Zemplen)等人(Acta· Chim. Acda. Sci. Hung·,第 19冊,第 277頁(1959))所提供之方 法合成製備吉尼斯丹’以上所列文獻一併供本專利說明書 參考。異黃酮糖甞吉尼斯丁可以吉姆普力恩等人(Ber.,76B 冊,第1110頁(1943))之方法合成製備,該文獻一併供本專 利說明書參考。將吉尼斯丁與丙二酿基或乙醯基酐進行慣 用的皂化作用後可分別製備吉尼斯丁異黃酮共軛物’ 6,-0-Mal吉尼斯丁及6’·〇·Αο吉尼斯丁。 可利用貝克等人(自然169 : 706(1952))所提供之方法合成 製備格力西丹,格力西丹亦可利用伯布(p〇Pe)等人(化學及 工業(倫敦)第1092頁(1953))所提供之方法自紅苜蓿分離 之,該文獻一併供本專利說明書參考。利用威斯力等人 (Ber·66 : 685(1933))及克吉(Kagel)等人(Tetrahedron Letters, 第593頁(1962))所揭示的方法合成福馬尼丁,此二文獻一併 供本專利說明書參考。利用瓦爾兹(Walz) (Αηη·489 : 11 8(1 93 1))的方法可自大豆粉分離出福馬尼丁,或利用布瑞 力(BradbUry)等人(化學學會雜誌第3447頁(195 1))所提供之 分法自苜蓿中分離之。 在最佳的具體實例中,本發明組合物之異黃酮成分自大 >蛋白物焉间收,該大豆蛋白物質亦可用於組合物中,如 &所述秀黃_是大豆中天然存在的化合物。在製備大豆 蛋白粉’細粒’濃縮物,及某些異黃酮之分離物可存於大 ?香白物暂 乂 、中。以適當加工技術處理前述之大豆蛋白物
O:\88\88644.DOC 200406218 參⑦貭用加工之大豆蛋白物質所製得之大豆蛋白粉,* 且1二'辰、%物,或分離物中所含有的異黃酮含量明顯增加, 〈’醇類清洗或萃取大豆蛋白物質應避免,因為異 黃酮於醇類水溶液中的溶解度相當大,且大豆蛋白濃縮物 不應以醇類清洗製備之,因為異黃嗣需留於大豆蛋白物質 主:: ' 卜以水i液清洗大豆蛋白物質應減少,因為 二先a去除大且蛋白中的異黃酮。清洗(假若有需要)應於冷 藏欠〜之/皿度(自0 C至45。(:)下進行,以便增加異黃酮於 =中的不溶性’並減少清洗過程中異黃酮的流失。在用水 清洗或萃取大豆蛋白物質之前,大豆蛋白物質中的異黃酮 應轉換成其嘗配基形式(如下所述),以減少於水中的溶解 度。上述所用保持大豆蛋白物質中異黃酮的方法所製之大 豆蛋白物質中含有較多之異黃酮。 斤“大 在另-個具體實例中,自植物物質中所分離天然存在之 異黃酮或異黃酮類可用於本發明組合物中。自植物物質中 分離天然存在之異黃酮的較佳方法是以醇類萃取植物物 質,以便自植物物質中取出異黃酉同’較佳是甲醇或乙醇, 或水溶液,較佳為驗性水溶液。較佳者係在萃取異黃酮化 合物之前,研磨植物物f,以便增加自植物物質中里鲁酮 化合物的回收率。利用慣用分離步驟(諸如逆向高解析液態 層析(’’HPLC’’)可自萃取物中分離出異黃酮化合物。 在較佳的具體實例中,異黃酮化合物吉尼斯丹,士尼斯 丁,6,-0-遍吉尼斯丁,㈣_Ae_吉尼斯丁,丹吉因,口丹^, 6’_0-Mal丹辛’ 6’-0-Ac丹辛,格力西丹,权 心力西丁,及 O:\88\88644.DOC -21 - 200406218 6’-O-Mal格力西丁分離自大豆物質,較佳為市售大豆物質… 可分離出異黃酮化合物之大豆物質包括:大豆,去殼大豆, 大豆片,大豆粉,大豆細粒,大豆薄片(全脂或去脂),大豆 子葉,大豆醣,大豆蛋白濃縮物,大豆漿,大豆漿蛋白, 及大豆蛋白分離物。在一個具體實例中,以低分子量的有 機萃取溶劑(較佳者為醇類,乙酸乙酯,丙酮,或乙醚,而 最佳者為乙醇或甲醇水溶液)自大豆,去殼大豆,大豆片, 大豆粉,大豆細粒,大豆薄片,大豆蛋白濃縮物,大豆漿 蛋白,或大豆蛋白分離物中萃取出異黃酮,最佳的萃取劑 的pH為大豆蛋白的等電點(約pH 4至pH 5),以減少被萃取 劑所萃取出之大豆蛋白含量。 含有異黃酮之萃取劑與不溶性大豆物質分開,以形成含 有高量異黃酮之萃取液,假若有需要,可濃縮萃取液去除 溶劑後,回收高含量異黃酮物質,藉此可製備固態高含量 異黃酮物質,其可用於本發明組合物及方法中。 在更佳的具體實例中,異黃酮可進一步與萃取液中其他 大豆物質分離,含有異黃酮萃取液可與能吸附萃取液中異 黃酮之物質接觸,再以溶劑將所吸附之異黃酮自吸附物質 上沖堤下來,該溶劑可使異黃酮自吸附物質上區別沖堤下 來。 在較佳的具體實例中,利用慣用逆向HPLC分離技術,可 將萃取液中的異黃酮與不純物分離。自大豆物質中萃取異 黃酮,並與萃取液中不溶性大豆物質分離後,過濾萃取液 以除不溶性物質,可進行HPLC分析。利用可釋放鍵結異黃 O:\88\88644.DOC -22- 200406218 酮及萃取液中不純物之特定吸附物質填充慣用市售 吕柱’、製備HPLC管柱。吸附物質為任何逆相HpLc填充物 質,然而,較佳的填充物質係根據負載能力,分離效果, 及價錢選定的。此…較佳的填充物質為可羅馬西爾 (K_sll)C18 16微米1〇〇填充珠,購自艾卡諾貝爾_ N〇bel),諾貝爾工業,瑞典。 過滤之萃取液通過填充之HPLC管柱,直至管柱所有的鍵 結位置均完全被異黃酮所飽和,其可自管柱流出之沖堤液 中檢測出異黃酮得知。而後用溶劑沖堤HPLC管柱進行分離修 作用。在較佳的具體實例中,沖堤溶劑較佳者為極性溶劑, 諸如乙醇,甲醇,乙酸乙酿,或乙腈,而較佳者為具有約 30%至約9G%醇類含量之水溶液,最佳者為約5()%,而最佳 的醇類為乙醇。 從管柱的沖堤液中分離收集異黃酮化合物及不純物,根 據慣用HPLC及分析化學技術,可自其他沖堤分液中鐘定出 含有異黃酮之沖堤分液,自管柱中收集含有異黃酮之分 液,利用蒸發作用去除溶劑中揮發含量(例如醇類),假若蒸 發作用可去除所有的溶劑,則可直接回收異黃酮化合物, 或是將所剩之溶劑(例如水)冰冷之,並將所剩之溶劑進行離 心作用或過遽,以回收異黃酮。 在特別佳的具體實例中,回收自植物物質之異黃酮醣2 共軛物及異黃酮醣苷轉可換成其相對之苷配基異黃酮形 式。異黃酮糖苷共軛物及異黃酮糖甞轉換成苷配基異黃酮 係文植物雌激素異黃酮於萃取前先萃取的受質影響,或
O:\88\88644.DOC -23- 200406218 不溶性免物質中分離萃取液後所得豐含異黃酮影響。咸信, 苷配基異黃酮化合物對降低血液中LDL及總膽固醇濃度, 及預防或減低動脈硬化的發生特別的有活性。從含水萃取 液中分離甞配基異黃酮較分離其相對醣甞共軛物及醣苷形 式谷易’因為嘗配基較不溶於水。 異黃酮糖苷共輛物(例如6"_〇-Mal吉尼斯丁,6,,-〇-Ac吉 尼斯丁,6”-0-Mal丹辛,6”-〇_Ac-丹辛,及6”-〇_Mal格力西 丁)可轉換成其相對之醣苷(例如吉尼斯丁,丹辛,及格力西 丁),將含有異育酮之萃取液或受質形成pH約為6至約丨3之 鹼性水溶液,較佳約pH 9至約pH U,並在溫度約2它至約 121°C處理該鹼性水溶液一段轉換所需的足夠時間,較佳為 、、力25 C至約75 C ’較佳約3G分鐘至約5小時,更佳約3〇分鐘 至約1.5小時。將異黃酮醣嘗與能分切込‘石―醣苷結之酵素 (較佳為市售之貝他_配苷酶,阿爾法_或貝他-乳糖甞酶,果 膠酶乳糖酶,或葡萄糖-澱粉酶)於該酵素活性之pH(較佳 為約pH 3至約pH 9)下,於溫度約25t至約75。〔〕(較佳約45 C至約65。〇反應一段足夠轉換的時間,一般約丨小時至約 24小時,較佳約1小時至約3小時,可將異黃酮(例如吉尼斯 丹辛,及格力西丁)轉換成其相對之苷配基形式(例如吉 尼斯丹,丹吉因,及格力西丹)。 " 利用慣用分離步驟可料配基異黃酮與植物受質分離, 例如,利用低分子量的醇類萃取大豆或苜較質後,可萃 取出莊配基異黃_,利用慣用再結晶作用或HPLC,可自萃 液中刀離出甘配基異黃酮。在較佳的具體實例中,自大
0\88\88644.DOC -24- 200406218 且党質所分離及用於本發明組合物或方法之異黃酮組合物 包括至少40%吉尼斯丹,至少15%丹吉因,及至切。格力 西丹。在本發明另-個具體實例中,自大豆受質所分離及 用於本發明組合物或方法之異黃酮組合物包括至少吉 尼斯丹,至少5%丹吉因,及至少〇·5%格力西丹。 用於本發明組合物中之數種異黃酮化合物為市售商品, 可購貝以調配本發明組合物,或用於本發明的方法 中。例如’吉尼斯丹,丹吉因,及格力西丹為市售商品, 可購自因多分(Indofine)化學公司,ρ.ο Β〇χ 473,塞馬威利 (Somerville) ’紐澤西州08876。生機素a可購自米爾威其 (Milwaukee),溫斯康辛州 53233。 植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮可一起添加成分 組合成本發明之組合物,較佳的方式為將各成分混合一 起。例如,將植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮置於攪 拌或混合容器中,混合這些物質一段完全混合所需之時間。 車义佳的是將成分混合一起,致使所得之組合物所含之各 成分具有生物活性含量,雖然組合物不侷限於每種成分具 有生物活性含量,因為為了達到所要降低血中LDL及總膽 固醇濃度之效果,投用組合物的次數可多不只一次。較佳 組合物中含有約5〇〇毫克至約50克之植物固醇,而更佳約1 克至約1 〇克至植物固醇。當組合物含有大豆蛋白物質時, 較佳為組合物中含有約5克至約100克之大豆蛋白物質,更 佳是組合物中含有約10克至約40克之大豆蛋白物質。當組 合物中含有異黃酮時,較佳為組合物中含有約丨〇毫克至約 O:\88\88644.DOC -25- 200406218 _〇笔克《異黃酮,更佳是組合物中含有約25毫克至約細▲ 毫克之異黃酬。 在較佳的具體實例中,植物固醇及大豆蛋白物質及/或異 黃酮可與適當之賦型_配成醫藥或櫃檯傳送系統。利用 技藝中所知之方法可製備含有植物固醇及大豆蛋白物質及 /或異黃酮之醫藥或櫃檯調配物’例如,本發明成分可調配 成錠片,膠囊,粉末,懸浮液,非經腸投藥用之溶液,I 如靜脈,肌肉,及皮下方式投藥,以及利用一般及慣用的 載劑,鍵結齊!,稀釋劑,及賦型劑調配成經皮適用之貼片 溶液。 用以調配根據本發明之醫藥或櫃檯調配物之惰性醫藥學 上可接受賦型劑包括澱粉’甘料,硫酸鈣,_氫二鈣: ,脂酸鎂,珍㈣生物,及/或醣類,諸如蔗糖,乳糖及葡 萄糖。鍵結劑包括麟甲基纖維素及其他纖維素衍生物, 動物膠’天然及合成膠,包括藻酸,諸如藻酸鋼,聚乙二 醇,壤及其類似物。用於本發明之稀釋劑包括適當之油脂, 食鹽水,醋發’諸如右旋糖水溶液或葡萄♦唐水溶液,及 乙二醇類’諸如聚乙二醇或聚丙二醇。其他職型劑包括油 酸納,乙酸納,硬脂酸納’氯化納,苯甲酸納,滑石粉, 及硬脂酸鍰’及其類似物;分散劑包括瓊脂,碳酸舞,碳 酸氫鈉,澱粉,黃素膠,及其類似物;及吸附載體,諸如 膨土及高嶺土。呈色劑及香料亦可添加至醫藥或櫃檀調配 物中。 在另-個較佳的具體實例中,將各種成分或其混合物以 O:\88\88644.DOC -26- 200406218 食品成分加入食品中制 乂製備含有植物固醇及夫5疋 質及/或異普酮之飫令μ ” 畔夂大a蛋白物 幾乎所有… j。可添加這些成分之食品包括 s 、艮一但較佳者為含有作為功能成分植物固醇 《^蛋白物質或蔬菜油。例如,可添加植物固醇及 蛋白物質及/或異相之食品包括(但不侷限於)肉類,諸: p疋礼化肉’及滷肉;飲料,諸如營養性飲料,運動飲 =蛋白質強化飲料,果汁,牛奶,牛奶替代物,及減肥 札酪’諸如硬乳酪或軟乳冑,奶油乳酪,酸乳酪; 冷滚點心,諸如冰澳淋’冰牛奶,低脂冷;東點心,及非奶 類冷滚點心;優格;糖漿;布丁;麵包產品;沙拉醬;及 ^料及塗抹醬’諸如美奶兹及洋芋片沾料。最佳的植物固 醇及大二蛋白物負(包含或不包含異黃酮)是為泥狀物所形 成之礼化物’其特別可用於乳化的食品及飲料中,諸如沙 拉醬’優格,大豆乳酪,乳化肉,及粉末飲料。 下列非限制性調配物說明包含植物固醇及大豆蛋白及/ 或異黃酮化合物之根據本發明組合物,及其用於根據本發 明之方法。 調配物 下列凋配物1-4說明包括用於本發明組合物之植物固醇 及大豆蛋白物質及/或異黃酮之醫藥或櫃檯調配物。 調配物1 動物膠膠囊 利用下列成分製備硬動物膠膠囊:異黃酮25_1⑼毫克/膠 囊,植物固醇500-2000毫克/膠囊;澱粉,NF 〇-1〇〇〇毫克/ O:\88\88644.DOC -27- 200406218 膠囊;殿粉可流動性粉末(M_毫克/膠囊;聚硬氧液35〇 厘史0-20毫克/膠囊。混合成分’經篩網過篩,填充至膠囊 中。 調配物2 鍵片 利用下列成分製備錠片:植物固醇25〇 豆蛋白物質—毫克/鍵片;微結晶纖 /錠片;《0-50毫克/錠片、硬脂酸鎂或硬脂酸〇_15毫克/ ’壎蒸〇_4〇〇毫克/鍵片;二氧切,膠狀物 (M毫克/錠片,及乳糖(M00毫克/錠片。混合成分並壓鍵形 成錠片。 調配物3 懸浮液 利用下列成分製備懸浮液:異黃嗣0毫克/5毫升; 植物固醇250-2000毫克/5毫升;大豆蛋白物㈣2〇〇〇毫 克/5毫升;叛基甲基纖維素㈣_7⑽亳克/5毫升;苯甲酸納 0-10毫克/5¾升;純水5毫升;及所需之香料及呈色劑。 調配物4 非經腸溶液 揽拌内含1.5%重量比之活性成分(活性成分為大豆蛋白 物質,植物固醇,及異黃酮,重量比例為5 : 4 : i)之i 〇 %體 積比之丙二SI及水溶液’利用氯化鈉將該溶液製成等張溶 液,ϋ無菌化。 下列調配物5-8為利用植物固醇及豐含用於根據本發明 O:\88\88644.DOC -28- 200406218 組合物異黃酮之大豆蛋白分離物所製成之飲食補充物。下 列豐含異黃酮之大旦蛋白分離物主要每克大豆蛋白中包含 約1至約7毫克之異黃酮化合物。 ° 調配物5 即食飲料 利用下列成分製成即食飲料: 成分 水 百分比組合物,書斧卜卜 75-82 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 10-15 植物固醇 3-5 蔗糖 5-8 可可 0.1-1 維生素/礦物質 0.1-1 香料 0.1-1 纖維素膠 〇.1-0.5 即食飲料可製成每份8盎司,每份含有約20克大豆蛋白, 包括約2 0至約14 〇毫克之異黃酮化合物及約6克之植物固 醇。 調配物6 粉末式飲料 利用下列化合物製備粉末式飲料 ·· 成分 百分比組合物’重量比 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 75-85 植物固醇 5-10 O:\88\88644.DOC -29 200406218 蔗糖 8-15 A Maltodextrin 1-5 維生素/礦物質 0.5-2 阿斯巴甜 0-0.5 香料 0-0.5 將3 0克粉末式飲料調配物添加 至水中,製成每份含有約 23克大豆蛋白分離物,包括約23克至約161毫克的異黃酮化 合物及約2 · 5克之植物固醇。 調配物7 食物棒 利用下列成分製成食物棒: 成分 百分比组合物,書量比 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 20-30 植物固醇 1-5 玉米糖漿 30-45 米糖漿固體 7-14 甘油 1-5 可可 2-7 圖覆化合物 15-25 食物棒每份70克,含有約15克大豆蛋白分離物,含有約 1 5至約1 〇 5毫克之異黃酮化合物及約2克植物固醇。 調配物8 大豆優格 利用下列成分製成大豆優格: O:\88\88644.DOC -30- 200406218 百分比組合物,重量j: 水 50-70 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 5-15 植物固醇 5-15 蔗糖 3-8 玉米澱粉 1-5 葡萄糖 0.3-1 纖維素膠 1-3 培養液(優格) 0.01-0.1 水果 10-20 維生素/礦物質 0.05-0.3 大豆優格每份製成17〇克, 每份含有約17克之大豆蛋白分 離物’含有約17至約170毫克異黃酮化合物及含有約17克植 物固醇。 方法 本發明亦關於以植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃 化合物降低人體血液中低密度脂蛋白膽固醇濃度之方法 :續規律性(較佳為每日)的投與人體大豆蛋白物質及/或 黃嗣化合物,可降低血液tLDUt_及總膽固醇濃度 植物固醇較佳者為如前所述之麥胚脂醇,菜油固醇, 麥胚固垸醇或菜油固垸醇。大豆蛋白 =或大豆蛋白物質,其含有至少49%大豆蛋二 :物,蛋白’諸如大豆粉,大豆細粒,濃縮物,或. 離物。兴黃酮化合物選自一種或多種如前所述之吉尼;
O:\88\88644.DOC -31 - 200406218 丹,丹吉因,格力西丹,格力西丹,福馬尼丁,及其天然· 形成之糖苷或糖苷共軛物。植物固醇及大豆蛋白物質及/戋 異黃酮較佳係以如前所述之醫藥或櫃檯組合物或飲食補充 物投用之,端视投藥途徑的效率及/或接受度而定。 在某特定時間内,較佳為每日,同時投用或依序投用植 物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮化合物,最佳者為同時 投用存於前述本發明發明組合物中之植物固醇及大豆蛋白 物質及/或異黃酮化合物。另一種方式,植物固醇及大豆蛋 白及/或異黃酮化合物以個別的成分依序投用之,本專利2 明書中所M依序”一詞意指在某特定的一段時間内(例如一 天),個別投用各種的成分,但不侷限於立即個別依序投用 每種的成分。 人體投用之植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮化合 物含量可有效的傳送至血液中,並降低血液中膽固醇; 度。每種可降低血液中膽固醇濃度成分之劑量端視數種因 素而定’包括投用成分的個體高矮胖痩,投用成分人體血 液中膽固醇的濃度,及投用成分之途徑嘯據持續性基礎, 有效降低血液中膽固醇之植物劑量為較佳是植物固醇投用 劑量自則毫克/天至50克/天,而更佳者自天至5克, 天。較佳地’假若投用,則所投用用以降低血液中膽固醇 又大旦蛋白物質的大豆蛋白物質劑量自5克/天至1㈧克/ 天’更佳者為H)克/天至30克/天。較佳地,若有投用異黃酉同, 則有效降低血液中膽固之異黃酮投用劑量自 1000毫克/天,更佳為自25毫克/天至200毫克/天。 土
O:\88\88644.DOC -32- 200406218 當同時投用降低LDL及總膽固醇濃度之含量時,植物固★ 醇及大互蛋白物質及/或異黃酮可相互合作的降低人體血 液中膽固醇濃度。用於本發明之植物固醇,大豆蛋白物質, 及異黃降低人體血液中LDL及總膽固醇濃度之機制各 有不同,或者不同的機制間有重疊相同之處。咸信這些物 質降低膽固醇的機制與其他物質之此種機制相互作用,進 而加速其他物質降低膽固醇的機制。組合膽固醇減低成分 之降低膽固醇機制的加速活性造成血液中降低ldl及總膽 固醇濃度之總降低量大於個別分開成分時LDL及總膽固醇 濃度所造成之降低量。 例如,同時投用植物固醇,大豆蛋白物質,及異黃酮的 某種機制可相乘性的降低血液中LDL及總膽固醇濃度,其 係結合某些各物質原有之降低膽固醇的機制。已知植物固 醇藉由避免腸吸收飲食中膽固醇,而影響膽固醇及膽酸間 的腸肝循環平衡。此減少在腸肝膽固醇循環調節上之膽固 醇回饋作用,是因肝臟需膽固醇合成膽酸。經由肝臟細胞 中LDL膽固醇受體,肝臟可自血液中獲取必要的膽固醇, 其可藉由投用植物固醇上調節(upregulated),或合成所需之 膽固醇。假若肝臟所需之膽固醇源自血液,則血液中膽固 醇濃度會下降。 大旦蛋白可降低血液中LDL及總膽固醇濃度的某種已知 機制是增加糞便中膽酸的排泄量。增加糞便膽酸排泄量可 促使肝臟製造更多的膽酸,而膽酸的生成即是以膽固醇為 受質。如前所述,肝臟以血液中膽固醇生成膽酸,則可降 O:\88\88644.DOC -33- 200406218 低金液中膽固醇的濃度。 組合投用根據本發明之植物固醇及大豆蛋白可共同調敕 腸肝膽固醇血中的平衡作用,進而導致明顯降低血液= LDL及總膽固醇濃度。利用植物固醇抑制腸吸收飲食膽固 醇會使肝臟缺少膽固醇,咸信部分可自血液取走膽固醇。 利用大旦蛋白促使糞便膽酸排泄的增加可加速肝臟膽固醇 的缺之’利用植物固醇以增加自肝臟去除膽固醇(為膽酸受 質),此進一步可自血液中去除一部份的膽固醇。 本發明所用的異黃酮可與植物固醇組合,或與植物及大 =蛋白物質組合共同合作’而有效的降低咖及總膽固醇 敬度,邵分係因為&黃酮可上調節(叩叫此⑷或增加肝 LDL膽固醇_受體的數目。本發明所用的異黃嗣為吉尼斯 丹,丹吉因,格力西丹’福馬尼丁,生機素A,及其相對之 天然存在之糖菩及糖誓共輕物,其為植物雌激素,已知在 活體中具有雌激素的效果。雌激素增加肝臟咖膽固醇受 =的數目’其可明顯增加血漿進人至肝臟之咖膽固顆粒 澄清度。根據本發明,利用異黃酮的雌激素效應,增加上 調節㈣egUlation)或肝LDL膽固醇受體數目,與^植物 固醇及/或大豆蛋白物質促使肝臟所需之膽固醇相配合 後,可明顯促使自血液進入肝臟膽固醇之澄清度。 、然而,根據本發明方法不侷限於某特定的作用,明確言 之’因為同時投用植物固醇,異黃酮,及/或大豆蛋白物^ 減低血液中LDL及總膽固醇濃度之機制有數種,例如,除 了增加膽酸排泄改變膽固醇血液平衡外,因大豆蛋白中含
O:\88\88644.DOC 200406218 有高含量的精胺酸’可專-性作用於蛋白f7s儲存單位 上’可改變血清中騰增血糖素成血清胰島素,進而影響肝 臟中膽固醇的代謝,可增加血清中游離甲狀腺素,致二可 降低血液中的LDL及總膽固醇。植物固醇亦可利用其他抑 制腸吸收膽固醇外之機制減低膽固醇,因為利用直接注射 將植物固醇血流中,已證明可降低膽固醇。 或大豆蛋白分離物。較佳的投藥及保存方法—如以相關的 植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮降低血《中L D L及總 膽固醇濃度所述。 本發明亦關於人體同時投用植物固酵及大豆蛋白物質, 以預防,減少動脈硬化症發生之方法,該大豆蛋白物質為 大且子葉物質或大豆蛋白物質,其内含有至少帆大豆蛋 白重量百分比及/或至少一種選自吉尼斯丹,丹吉因,=力 西丹’福馬尼丁,生機素A,及其㈣之天然存在之糖芬及 糖甞共輛物之異黃酮,較佳的植物固醇至少為一種万·麥脐 固醇’菜油固醇’豆固醇,麥胚固燒醇,及豆固燒醇= 豆蛋白物質較佳者為大豆粉’大豆細粒,大豆蛋白濃縮物, 如鈾所述,當人體投用足夠促使降低膽固醇含量之植物 固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮之各種成分時,可有效地 共同降低血中LDL及總膽固醇濃度,血液中咖膽固醇含量 的增加與動脈硬化症的發生有關,因為LDL膽固醇為^成 動脈硬化病灶的重要成分。因此,可降低LDL膽固醇之植 物固醇,大且蛋白物質,及/或異黃酮之組合物可有效的預 防或減少動脈硬化症的發生。 O:\88\88644.DOC -35- 200406218 在較佳的具體實例中,不論是否投用大豆蛋白物質,同 時纽合投用異黃酮與植物固醇,可預防或減少動脈硬化症 的發生’因為異黃酮除了可降低血液中既膽固醇濃: 外,兴黃酮提供抗_動脈硬化症活性。具體言之,這些里土 酮在血管中可提供對抗動脈硬化症重要的保護作用了異= 酮--特別是I配基異黃酮吉尼斯丹,丹吉因,生機素A,及 福馬尼丁 ·_可抑制LDL膽固醇的氧化作用。既膽固醇的氧 化作用為形成動脈硬化症重要的㈣,因為咖氧化作用 增加其動脈病因性。某些異黃酮,明確言之為吉尼斯丹, 丹口因,及生機素A亦為酶胺酸激酶抑制劑,藉由抑制酵素 酪胺酸激酶活性,可抑制動脈硬化病灶及血栓的形成,因 此,同時投用植物固醇及至少一種根據本發明之異黃嗣(包 含或不含大豆蛋白物質)可預防或減少動脈硬化症的發 生,因其兩者可相互合作降低血液中LDL及總膽固醇濃 度,並抑制形成及動脈硬化病灶成長之機制。 範例1 選擇5至50位男性進行臨床研究,這些男性患有中度至重 度的過膽固醇血症,例如其血液中總膽固醇含量為25〇毫克 /100¾升,或更南。將這些男性分為5組,第一組投與3〇克 不含兴育酮4大旦蛋白分離飲食補充物(利用醇萃取去除 異黃酮)(”大豆”組),第二組投與5克植物固醇飲食補充物, 其中含有植物固醇冷-麥胚固醇(”植物固醇,,組),第三組投 用75毫克異黃綱飲食補充物,其中含有異黃酮吉尼斯丹及 丹吉因(”異黃酮”組),第四組投用含有3〇克分離大豆蛋白, O:\88\88644.DOC -36- 200406218 5克植物麥胚固醇,及75毫克異黃酮吉尼斯丹及丹吉因 之之飲食補充物("組合,,組),而第五組不投用飲食補充物(,, 控制”組)。這些實驗組之飲食中均不在提供異黃酮,植物 固醇及大豆蛋白的來源,兩組中亦不投用雌激素,此飲食 狀況持續6個月。 在開始此種飲食之前,測量病患血液中總膽固醇及低密 度脂蛋白膽固醇含量之基準,各組病患在接受此種相關飲 食6個月之後,再測定其血液中之含量基準,比較每組成員 中所得之結果,並比較研究開始前及結束後所得之結果。 組合投用植物固醇,大豆蛋白物質,及異黃酮顯示所降低 LDL及總膽固醇含量百分比大於投用大豆組,植物固醇 組,異黃酮組,及控制組所降低LDL或總膽固醇含量。 上述範例係利用活性證明植物固醇及大豆蛋白物質及/ 或異黃酮之組合使用可降低人體血液中LDL膽固醇濃度。 範例2 選擇5至50位女性進行臨床研究,這些女性已停經,並診 斷為動脈硬化症患者,例如已診斷為動脈硬化病灶者,包 括狹窄症及閉▲病灶。將這些女性分為5組,第一組投與3 〇 克不含異黃酮之大豆蛋白分離飲食補充物(利用醇萃取去 除異黃酮)(n大豆’’組),第二組投與5克植物固醇飲食補充 物’其中含有植物固醇-麥胚固醇(,,植物固醇”組),第三 組投用75毫克異黃酮飲食補充物,其中含有異黃酮吉尼斯 丹及丹吉因異黃酮”組),第四組投用含有30克分離大豆蛋 白’ 5克植物泠-麥胚固醇,及75毫克異黃酮吉尼斯丹及丹 O:\88\88644.DOC -37- 200406218 吉因之之飲食補充物(”組合”組),而第五組不投用飲食補充、 物(”控制”組)。這些實驗組之飲食中均不在提供異黃_,植 物固醇及大豆蛋白的來源,兩組中亦不投用雌激素,此飲 食狀況持續6個月。 在開始此種飲食之前,測量病患血液中總膽固醇;高密 度及低密度脂蛋白膽固醇含量之基準;及某選定血管(諸如 表面大腿動脈或肱動脈)中狹窄症與動脈硬化病灶之程 度,以研究血管反應非_進展性(例如利用高解析超音波)。 各組病患在接受此種相關飲食6個月之後,再測定其血液中 之含量基準,比較每組成員中所得之結果,並比較研究開 始鈾及結束後所得之結果。組合投用植物固醇,大豆蛋白 物質,及異黃酮與增加的抗_動脈硬化活性有關,組合組相 較於大豆組、植物固醇組、異黃酮組及控制組而言,並沒 有治療顯示可有幅減少粥樣硬化症病灶及狹窄症或是減少 粥樣硬化症病灶或狹窄症的累積。 上述範例係利用活性證明植物固醇及大豆蛋白物質及/ 或異黃酮之組合使用可預防或減少人體動脈硬化病灶之發 生。 【圖式簡單說明】 圖1為未飽和植物固醇沒-麥胚固醇,菜油固醇,及豆固 醇之分子結構。 圖2為飽和植物固醇麥胚固醇,菜油固醇,及豆固醇之分
子結構。 W 圖3為本發明所用苷配基異黃酮之分子結構。 O:\88\88644.DOC -38- 200406218 圖4為異黃酮糖嘗及異黃酮糖:y:共輛物之分子結構。 O:\88\88644.DOC •39-
Claims (1)
- 200406218 拾、申請專利範圍:一種降低人體血液中總膽固 之組合物,其包括 醇及低密度脂蛋白膽固醇 丹吉因,格力西丹,生機素 及其天然存在之糖苷及糖苷共 至少一種選自吉尼斯丹 A ’福馬尼丁之異黃酮, 輛物;及 植物口醇,其中植物固醇包括至少為重量計之 組合物。 2.根據申請專利範圍第!項之組合物,其中該植物固酵至 二為召麥胚知醇’菜油固醇,豆固醇,麥胚固烷醇,或 菜油燒醇。 3·根據申凊專利聋&圍第!項之組合物,其中該異黃酮包括 土少0.0066%該組合物重量比。 4.根據申請專利範圍第1項之組合物另夕卜包括一種賦型 浏,其中植物固醇’大豆蛋白物質,異黃酮,及賦型劑 組合成醫藥或櫃檯製劑。 5·根據申請專利範圍第4項之組合物,其中該醫藥或櫃檯 製劑為錠片,膠囊,粉末,懸浮液,或溶液。 6·根據申請專利範圍第丨項之組合物另外包括水,其中植 物固醇’大豆蛋白物質,異黃酮,及水組合成水乳化液。 7·根據申請專利範圍第6項之組合物併入食品物質中。 8·根據申請專利範圍第丨項之組合物併入食品物質中。 9· 一種降低人體血液中總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇 之組合,其包括 O:\88\88644.DOC i200406218 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17, 植物固醇及至少一種選自吉尼斯丹,丹吉因,格力西‘ 丹,生機素A,福馬尼丁,及其天然存在之糖#及糖誓 共輛物之異黃_,以降低該人體血液中總膽固醇及孤 膽固醇濃度,其中植物固醇包括至少〇49%重量計之植 物固醇及異黃酮組合含量。 根據申請專利範圍第9項之組合,其中該植物固醇為足 以提供自約500毫克/天至約5〇克/天之劑量。 根據申請專利範圍第9項之組合,其中該異黃酮投用的 含量自約10毫克/天至約1000毫克/天之含量。 根據申請專利範圍第9項之組合,其中該植物固醇至少 一種為/3-麥胚脂醇,菜油固醇,豆固醇,麥胚固烷醇, 或豆固燒醇。 根據申請專利範圍第9項之組合,其中植物固醇及異黃 酮製備於食品中。 根據申請專利範圍第9項之組合,其中植物固醇及異黃 酮製備於醫藥或櫃檯製劑中。 一種預防或減少動脈硬化症發生的組合,其包括 植物固醇及至少一種選自吉尼斯丹,丹吉因,格力西 丹,生機素A,福馬尼丁,及其天然存在之糖苷及糖苷 共輛物之異黃酮,其中植物固醇包括至少〇·49%重量計 之植物固醇及異黃酮組合含量。 根據申請專利範圍第15項之組合,其中該植物固醇足以 提供自約500毫克/天至約5〇克/天之劑量。 根據申請專利範圍15項之組合,其中該異黃酮足以提供 O:\88\88644.DOC -2- I I406218 自約10毫克/天至約1000毫克/天之含量。 以㈣中請專利範園第15項之組合,其中該植物固醇至少 —種為^麥胚脂醇,菜油固醇,豆固醇,麥胚固境醇, 或豆固烷醇。 根據申4專利範圍第15項之組合,其中植物固醇及豈龙 酮製備於食品中。 /、只 根據申巧專利la園第15喝之組合,其中植物固醇及異普 酮製備於醫藥或櫃檯製劑中。 、康申明專利範園第2〇項之組合,其中該醫藥或櫃檯製 劑為錠片,膠囊,粉末,懸浮液,或溶液。O:\88\88644.DOC -3 -
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