TWI242437B - Composition for reducing low density lipoprotein cholesterol concentration - Google Patents

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1242437 一 五、發明說明（1) 發明範疇 本發明係關於用以降低也液中低密度脂蛋白膽固醇及總 · 膽固醇濃度之組合物及方法’明確言之，本發明係關於含 有植物固醇，大豆蛋白，及異黃酮，及其組合之組合物， 其可用以降低血液中LDL-膽固醇及總膽固醇濃度，並預防 或減少動脈硬化症的發生° 發明背景 心jk管疾病為發病率及死亡率之重要問題，特別是在美 國及西歐國家。發生心血管疾病有數種導因，包括對該疾 病有遺傳傾向者，性別，生活類型因素，諸如吸煙及飲 ^ 食，年齡，高血壓，及高如知症’包括高膽固醇血症。這 些因素中（特別是高血脂疲及向膽固醇血症）會產生動脈硬 化症，這是血管及心臟疾病的主因。 對人類血管疾病及冠狀心臟疾病而言，血液中含高膽固 醇濃度是一個主要危險因素’低密度脂蛋白膽固醇（後文 稱為n LDL -膽固醇"）的增加及總膽固醇的增加直接與冠狀 心臟疾病危險性的增加有關’膽固醇及死亡率：30福瑞明 漢研究30年的追縱，安德森（Anderson)，卡斯替利 (Cas t e 1 1 i ) & 利威（Le vy )，J ΑΜΑ，2 5 7 冊，第 2 1 7 6-8 0 頁 ❿ (1987)。 飲食中攝取大豆蛋白物質可降低冠狀心臟疾病的危險 性，其因可減少血清中膽固醇的含量所致。大豆蛋白物質 已知可降低動物血液中總膽固醇及LDL_膽固醇含量，近來 研究攝取大豆蛋白對人類血清脂肪中脂質之效果meta_分 -

第6頁 1242437 五、發明說明（2) 析中顯示，飲食中大豆蛋白明顯與降低人體血清中總膽固 醇及LDL-膽固醇濃度有關，攝取大豆蛋白對血清脂皙教座 —^ a " ’安德森’強恩斯特（J o h n s t ο n e )，及谷克一 尼威爾（Co〇k-Newell)，新英格蘭醫藥雜誌、·，333冊，第5 卷，276-82 頁（1995)。 攝取含於整個大豆中之化合物—植物固醇—亦已證明可降 低血液中循環性膽固醇總量及LDL膽固醇含量，食物植物 ϋ : 副乍用總論，林（LingU瓊^ (J〇neS) ’ 生命科學·，第 57 :3 冊，第 1 9 5-20 6 頁（ 1 9 9 5 )。 植物固醇係由植物所產生的固醇，除了在固醇支鏈上第k 位置上含有某些取代基外，其結構與膽固醇非常相似，: 般植物固醇包括如圖丨所示之未飽和固醇々-麥胚固醇，菜 油固醇，豆固醇，及圖2所示其相對飽和之麥胚固烷醇 么从0^1^1101)及菜油固烷醇（CamPeStan〇1) D植物固醇的 食物來源為玉半、、占，丄一、， 物之植物油。 大丑油’及其他含有相當疏水性化合 Φ 之及^中所不之植物雌激素異黃酮是整個大豆中另一群 产之重要來已5登明其為降低血液中LDL及總膽固醇濃 mm，純化滚縮異黃_(特別是吉尼斯丹

膽固醇的氧化作用 醇的生化合成作用，並預防LDL 考·，韓國專利申往安0此為發展動脈硬化症的重要步驟，參 队jg胞中-AjLa/之婼:20103 ·· 化低㈣月旨i白-平滑 瘤1 生可能田月包# ^ ~~ ^ 特瑞吉恩CNatara jan)等人·，脂肪研

第7頁 1242437 五、發明說明（3) 究雜誌· 36 : 9第2 0 0 5-1 6頁（ 1 9 9 5九月）。 以整個大豆產製大豆油，大豆蛋白及醫藥或食物補充組 合物之慣用加工處理中，是將植物固醇，異黃酮及大豆蛋 白分開的。利用機械性或化學萃取作用將去殼大豆之植物 固醇與大豆蛋白分開，而異黃酮會在含有脂肪及脂肪溶解 物之大豆油分液中，大豆油分液與所剩的大豆物質分離 --π去脂肪大豆物質”--用於大豆及蔬菜油中，其可進一步 處理形成製餅材料，人造奶油，及卵鱗脂。 去脂肪大豆物質（一般為去脂肪大豆薄片）可作為製備具 有實質含量之大豆蛋白物質（諸如大豆蛋白濃縮物及大豆 蛋白分離物）之起始物質，用以製備大豆蛋白產物之去脂 肪大豆物質亦含有異黃酮，然而，製備大豆蛋白物質（諸 如大豆蛋白濃縮物及大豆蛋白分離物）之慣用流程中，實 質含量之異黃酮係利用醇類萃取或水溶液萃取，清洗大豆 蛋白物質後與大豆蛋白物質分離的，參考大豆蛋白產物， 特性，營養觀點，及利用，第3-6頁（大豆蛋白協會發行， 1 98 7 )。 在商用產製大豆蛋白物質時，焦點是將異黃酮與大豆蛋 白物質分離，因為當大豆蛋白物質中存有異黃酮時，常與 不良風味，氣味及/或色澤有關，例如美國專利申請案 5, 8 04, 234揭示，將蛋白物質與吸收性樹脂混合後，可自 大豆物質中去除異黃酮之步驟，以製備較佳風味之大豆蛋 白。利用醇萃取大豆蛋白物質是特別佳的，因為醇萃取作 用較水溶液萃取能產製出較佳風味之蔬菜蛋白物質，部分

1242437 五、發明說明（4) ； 原因係因醇類去除大豆蛋白物質中異黃酮相當有效果，參 考例如·，日本專利申請案63-245, 648A。 . 近來的努力焦點亦著重於自植物物質（特別是大豆及苜 蓿）中分離異黃酮，以提供一種對健康有益之純化異黃酮 · 物質。例如下列的專利申請案揭示各種自植物物質中分離 異黃酮之方法：美國專利申請案4, 428, 876 ; 5, 702, 752 ; 5,679,806 :4,390,559 ；4,366,248 ；4,366,082 ； 4 ’ 264 ’ 509，4’ 232，122 ;4，157，984 ;日本專利申請案 1-258669A ；5-170756A ；41-90720A ；62-126186A ； 62- 1 2 6 1 8 5A ;及PCT專利申請案WO9 3/23 0 6 9。分離的異黃 | 酮化合物可用於醫藥組合物或食物補充組合物中，以預防 或治療各式有害健康之症狀，包括降低增加之膽固醇含 量，例如，美國專利申請案5, 5 1 6, 5 28 ; 5, 424, 331 ; 5, 5 69, 459 ; 5, 654, 011 及PCT 專利申請案w〇9 3/23 〇69 中揭 示分離異黃酮物質可用於醫藥或食物補充組合物。.匕 利用大豆成分之新方法及組合物’以提供明顯降低血夜 中LDL與總膽固醇含量至明顯減少動脈硬化症及冠狀心臟 . 疾病仍是必須的。 發明摘要

本發明一個主旨係提供含有大豆蛋白物質之組合物，复 中大豆蛋白物質乾重中至少含有49%大豆蛋白，至少—種、 選自吉尼斯丹，丹吉因（daidzein)，格力西丹 (glycitein)，生機素A(biochanin A)，福馬尼丁 (formononetin)及其相對之天然存在 之糖苷及糖苷共軛物

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五、發明說明（5) 之異黃酮，及一種植物固醇，其 組合物重量百分比。 、 醇至〉、為0. 4 9 % 本發明另一個主旨係提供一種 物，其中大豆蛋白物質乾重中至二:蛋白4質之組合 「匕種植物固醇，其中植物固醇為G49%組分及 另—個主旨，本發明提供一種組人 及其相對之自然存在之糖苷及糖常 钿馬尼丁 種植物固醇，其中植物固醇 / β之異黃酮，及一 比。 并〆為0·49%組合物重量百分 總降低人體血液十ldl濃度及 重中J二方大法豆蛋， 因，格力西丹，生機素八 ^自°尼斯丹，丹吉 之糖脊及糖脊共輛物之異/m其相對之天然存在 人體血液中LDL、、農声只她瞒 及一種植物固醇，以降低 量為包括s丨、/二 固醇。同時投與的植物固醇含 物固醇@人^胃Λ 大五蛋白物質，異黃酮，及植 豆蛋=Π 9%。較佳的主旨中，植物固醇，大 體動脈二貝二酮是同時投與人體，防或減少人 "版硬化症的發生。 固醇人^另個主曰係一種降低人類血液中LDL濃度及總膽 白物杯ί ^方法’其係同時投與人體至少含有4 9%大豆蛋 、L大旦蛋白之大旦蛋白'物質，及一種植物固醇，

第10頁 1242437 五、發明說明（6) 以降低人體血液中LDL濃度及總膽固醇。同時投用之植物 固醇含量為至少包括同時投用大豆蛋白物質及植物固醇組 合總量之0 . 4 9 %。較佳的主旨中，植物固醇及大豆蛋白物 質是同時投與人體，以預防或減少人體動脈硬化症的發 生。

本發明另個主旨係一種降低人類血液中低密度脂蛋白膽 固醇及總膽固醇含量之方法，其中同時投與人體一種植物 固醇及一種選自吉尼斯丹，丹吉因，格力西丹，生機素 A，福馬尼丁及其相對之自然存在之糖苷及糖苷共軛物異 黃酮，以降低人體血液中LDL濃度及總膽固醇。同時投與 的植物固醇含量為包括至少是同時投用之大豆蛋白物質， 異黃酮，及植物固醇組合總量之0. 4 9 %。較佳的主旨中， 同時投與人體植物固醇及異黃酮，以預防或減少人體動脈 硬化症的發生。 本發明另個主旨是提供一種包括大豆子葉物質及植物固 醇之組合物，其中植物固醇至少為0 . 4 9 %組合物重量百分 比0

圖形簡要說明 圖1未飽和植物固醇yS -麥胚固醇，菜油固醇，及豆固醇 之分子結構。 圖2為飽和植物固醇麥胚固醇，菜油固醇，及豆固醇之 分子結構。 圖3本發明所用苷配基異黃酮之分子結構。 圖4代表異黃酮糖苷及異黃snt苷共軛物之分子結構。 1242437 五、發明說明（7) 較佳具體實例說明 本專利說明書中所用n Ma 1π —詞代表π丙二醯基”，而 . n Acn代表’’乙醯基π ，”減少π或其衍生字句為包括完全或部 分抑制專一性生物效應（文中係使用減少一詞）。另外，本 ‘ 專利說明書中所用π異黃酮π或”植物雌激素π意指單一異黃 酮或植物雌激素兩者，或當π異黃酮π或π植物雌激素"定義 為至少一種選自一群異黃酮時，則為多種的異黃酮或植物 雌激素。’'異黃酮糖苷π意指異黃酮部分上共價鍵結碳水單 體部分，π異黃酮糖苷共軛物π意指具有另一個分子部分 (諸如酯）鍵結至異黃酮糖苷碳水部分之異黃酮糖苷。另外❶ 本專利說明書中所用π醫藥製劑π為一種化合物或與賦型劑 結合之混合物，根據醫師的處方，該賦型劑能有效的傳送 化合物，或將化合物傳送至人體。π櫃檯製劑π為一種化合 物或與賦型劑結合之混合物，其可有效的傳送化合物，或 將化合物傳送至人體，該賦型劑無須醫師處方即可投與人 體。 本發明發現當人體同時投用有效含量之能促使膽固醇降 低之每種活性成分時，植物固醇與大豆蛋白物質及/或異 黃酮組合，可相乘性地降低人體血液中低密度脂蛋白膽固 醇及總膽固醇含量。因此，本發明的範圍係利用植物固醇 (另名為π植物甾醇類π )大豆蛋白物質及/或選擇性異黃酮 組合，以降低血液中LDL及總膽固醇濃度之組合物及方 法。除此之外，因植物固醇與大豆蛋白物質及特別是與異 ： 黃酮組合使用時，利用其可降低血液中LDL及總膽固醇濃 .

第12頁 1242437 五、發明說明（8) 度，及抗氧化劑效應及酪胺酸激酶抑制性的特性，進而可 有效預防或減少動脈硬化症的發生，因此，本發明的範圍 — 亦包括預防或減少動脈硬化症發生的組合物及方法。 組合物 ' 在一個具體實例中，本發明組合物包括植物固醇與包括 至少為49%大豆蛋白物質乾重之大豆蛋白或至少一種選自 吉尼斯丹’丹吉因，格力西丹，生機素A，福馬尼丁，及 其自然形成之糖苷及糖苷共軛物之異黃酮組合，或植物固 醇與異育酮或大豆蛋白物質兩者組合。大部分較佳的組合 物含所有三種成分，一種植物固醇，一種大豆蛋白物質， 及一種異黃S同’因此可相互利用每種成分的LDL及總膽固 醇降低效應。 一另一個具體實例，本發明組合物包括一種植物固醇與大 豆子葉物質（主要含有約37%至約44%的大豆蛋白重量百分 比）的組合’此大豆子葉/植物固醇組合物可另外包括至少 一種選自吉尼斯丹，丹吉因，格力西丹，生機素A，福馬 尼丁，及其天然形成之糖苷及糖苷共軛物之異黃酮。 植物固醇

用於組合物中的植物固醇包括飽和及未飽和植物固醇兩 _用於本啦明，合物較佳的未飽和植物固醇為圖1中所 :之麥胚脂醇’菜油固肖，及豆脂醇，而用於組合物 ^較佳的飽和㈣固醇為圖2中所示的菜油固烧醇及麥胚 口烷醇，未飽和/3-麥胚脂醇，菜油固醇是特別佳。 本發明組合物植物固醇含量玄少為組合物總重的

1242437 五、發明說明（9) 0. 4 9%，更佳者約0. 5%至約99. 5%之組合物總重，而最佳者 為約1 %至約6 0 %組合物總重。組合物中植物固醇的相對含 量端視組合物中是否含有大豆蛋白物質而定，假若組合物 中含有大豆蛋白物質，通常組合物中植物固醇含量（組合 物總重的百分比）明顯低於不含大豆蛋白物質之組合物。 大豆蛋白物質 在一個具體實例中，本發明組合物所用大豆蛋白物質之 大豆蛋白物質中含有至少49%大豆蛋白含有物質乾重之大 豆蛋白，較佳的大豆蛋白物質含有至少49%大豆蛋白（乾 重）為去脂大豆粉及大豆餅，其含有自49 %大豆蛋白至約 65%大豆蛋白重量比；大豆濃縮物，其含有自至少65%大豆 蛋白至約90%大豆蛋白重量比；及大豆蛋白分離物，其包 含至少9 0 %大豆蛋白重量比。大豆蛋白濃縮物及大豆蛋白 分離物係特別佳。另一個具體實例中，可用於本發明組合 物中的大豆蛋白物質為大豆子葉物質。 本發明組合物中大豆蛋白物質的含量範圍自0 %至9 9 . 5 5 % 組合物總重，當組合物中包括大豆蛋白物質時，其較佳係 至少為組合物之主要物，更佳者存有自約5 5 %至約 9 9 · 5 5 %，甚至更佳者為自約7 5 %至約9 9 . 5 5 %，而最佳者為 自約8 0 %至約9 9 . 5之組合物總重。假若組合物中不含異黃 酮，則組合物中可始終含有大豆蛋白物質。 異黃酮 用於本發明組合物中之異黃酮為苷配基異黃酮吉尼斯 丹，丹吉因，格力西丹，生機素A，福馬尼丁（圖3中所

第14頁 1242437 I五、發明說明（ίο) 示）’及天然形成之糖脊及這些脊配基異黃酮糖脊共輕 物’包括吉尼斯丁（genistin)，6Π-〇-Mai吉尼斯丁， 6"-0-Ac 吉尼斯丁，丹辛（daidzin)，6，，-Ο-Mal 丹辛， 6" - 0-Ac 丹辛，格力丁（giyCitin)，及6"-〇 - Mai 格力丁（圖 4中所示）。組合物中可用一種或多種的異黃酮，苷配基異 黃嗣特別佳’因為其為異黃酮中最具生物活性者。用於組 合物中最佳的異黃酮為吉尼斯丹，丹吉因，生機素A及/或 福馬尼丁。

組合物中異黃酮的含量範圍自0%至約66%組合物總重。 當組合物中含有大豆蛋白物質時，組合物中的異黃酮含量 範圍自約0%至約丨5%的組合物總重，所存有的異黃酮最佳 含量自約0 · 0 0 6 6 %至約1 〇 %組合物總重，假若組合物中不含 大豆蛋白物質，組合物中都可含有異黃酮。 利用技蟄中所熟知的流程及步驟製取上述所述之成分並 組合’以製備本發明組合物。

從植物體中，利用萃取及分離方法製取植物固醇，或利 用或學合成固醇的方式製取植物固醇，另一種方式是，萃 =含植物固醇之植物體中含足夠量植物固醇之油脂用於組 合物中丄以提供組合物中所需含量之植物固醇，其中自植 物中戶2十取之油脂係根據慣用方法回收植物油脂製取。 車乂仏的具體實例中，植物固醇係根據美國專利申請案 99^ = 6(特別是範例10)所述之方法，獲自大豆油脂非 ，化f分之大豆油脂，該文獻一併供本專利説明書參考。 簡而"之’含有約4 0 - 5 0 %重量m植物固醇之大豆油脂之非

第15頁 1242437 五、發明說明（11) ~ ~ ； 息化部分係製取自整個大豆，利用慣用的分解，去殼，製 成薄片，及萃取步驟自整個大豆中製取大豆油脂，利用慣 用大豆油脂純化步驟純化大豆油脂，直至最終的去味步、_ I。大立油脂的去味作用於減壓2 - 3毫米汞柱下，於2 2 5 °C ' — 23 5 t下進行，以便自大豆油脂中蒸餾及分離出含有植物 固醇之萃取物。將萃取物與曱醇及濃硫酸（重量比1克萃取 物：1 · 72克曱醇：〇· 〇1 9克硫酸）於6 5-7 0 t：下加熱迴流3-4 ' 小時’將萃取物中所含之游離脂肪酸轉換成甲酯，終止反 f後’減壓下去除曱醇，用8 0 -1 〇 〇的水清洗殘餘油狀物 "貝’以去除硫酸。而後在2 0 - 3 0毫米汞柱下，於1 7 〇 - 1 9 0 °C # 下’利用蒸餾作用去除脂肪酸的甲酯，純化所得之殘餘 物’以提供含有4 0 - 5 0 %植物固醇大豆油脂非皂化部分。非 息化部分中之植物固醇為/5 -麥胚脂醇，菜油固醇及豆脂 酉予。非皂化部份可進一步利用HPLC純化，以製取每個個別 的植物固醇，或較佳者，直接用於本發明植物固醇的來 源。 匕万麥胚固醇亦可根據已知的步驟自其他數種的植物油 月曰中萃取之麥胚固醇可根據安德森（Anderson)等人 美國化學學會雜誌·，48, 28 97 ( 1 926 )所揭示的步驟自小麥鬱 種子油脂及玉米油脂中分離；利用格羅爾（G1〇yer)等人美 國化學學會雜誌、，61，1 9 0 1 ( 1 93 9 )中所揭示的方法自裸麥種 子’由脂中分離；利用威力斯（Wa 1 1 i s )有機化學雜誌·， 2 & 3 3 5 ( 1 9 3 7 )中所揭示的方法自棉花油脂中分離；利用山 -德威斯特（SandqVist)等人Ber•节4, 2 1 6 7 ( 1 93 1 )中所述之方 .

第16頁 1242437 五、發明說明（12) 法自t a 1 1 〇 i 1中分離’以上文獻一併供本專利説明書參 考。 他植物 装油固 〇 根據費合茲（Fernholz)等人美國化學學合雜士士 63,⑴仙川中所提供之步驟，菜油子固干醇曰可V其 油知中萃取之，该文獻一併供本專利說明書參考 醇亦可利用塔吉亞（TarzU)等人，義大利Gaz/ 97，1〇2 ( 1 967 )及化學摘要.，67 328 83q(i96 , Ϊ合Ϊ”該：獻一併供本專利說明書參考，豆固Μ 大立或胡盧五中分離。 利用氫化作用可白矣激4 醇’利用慣用氫化作用步驟，：固醇製備飽和的植物固 換成麥胚固院醇，而菜 ：轉〜胚固，及豆固醇可轉 因此可直接購買後用於本發 明組合物中，例如， 〜口此可直接購買 (Aldrich)化學公司=醇及豆固醇可自亞爾瑞奇 威爾康新講買。^麥胚固威斯特聖保羅大道，米爾瓦其， (Slgma)化學公司，mod::固院醇可自夕格馬 州。 布，目、斯街，聖路易士，密蘇里 在一個具體實例中， 細粒，大豆蛋白濃縮物，=白物質為去脂大豆蛋白粉或 少4 9%的大豆蛋白重量百八—且蛋白分離物，每種均含至 細粒’根據慣用大豆處理刀 '為製取去脂大豆粉或大豆 成薄片，並去脂，以產努去^ =整個大豆清洗，研磨，製 塊狀物’⑯這些所製物質可：i片，片狀物，粉狀物，或 、衣備大豆粉及大豆細粒。去脂 某些植物固醇為市售商品 轉換成米油固烷醇。 1242437 五、發明說明（13) 大豆薄片及大豆粉可為市售商品。根據慣用的處理方法， 將去脂大豆薄片，片狀物，粉狀物，或塊狀物持續的研磨 成細狀型態，以製備去脂大豆粉及去脂大豆細粒。'去脂大 丑粉研磨成大小為1 5 0 //或更小的顆粒（足夠讓顆粒通^ 100號美國筛網）’而去脂大豆細粒研磨自大小15〇 ^^ 2 0 0 0 //(足夠讓顆粒通過1〇號至80號美國餘細λ ? 、q邴辦I)。去脂大豆 粉及去脂大豆細粒含有自49%大豆蛋白至一 旦 沁大豆蛋白重 1百分比，大豆粉及大豆細粒其他成分主I 从丄_ , 要為碳水化合 物’大豆纖維，及灰份。去脂大豆粉及大 入八五細粒為市隹商 ⑩ 品，可直接購買應用於本發明組合物中。 ” " 組合物中所用較佳的大豆蛋白物質為大吾及 大豆蛋白分離物，其所含的大豆蛋白較大豆^濃縮物或 干又八且粉或έ田粒多。 大豆蛋白濃縮物含有自約65%大豆蛋白至約9〇% : 量百分比，而大豆蛋白濃縮物其他成分主I ^大丑蛋白重 其他多聽類。可利用慣用之大豆蛋白濃縮物加工=f f 本發明所用之大豆蛋白濃縮物，其包括（丨）利 > (較佳為乙醇或甲醇水溶液）清洗去脂大豆镇1用醇水浴液 (ii)利用大豆蛋白等電點之pH(pH 4. 4-4 in似 脂大豆薄片或大豆粉；或（i i i )加熱帶有濕$釋酸清洗一去 薄片或大豆粉，以變性蛋白，而後用水清、、先;的去月曰大且 豆粉。大豆蛋白濃縮物為市售商品，可t姑 4 θ次人 發明組合物。 直接鱗買應用於本 用於本發明組合物更佳的大豆蛋白物質一 物（另名為分離大豆蛋白），是加·工大豆蛋白兄蛋白7刀離 < Θ物質中具有最

第18頁 1242437 五、發明說明（14) 高之大豆蛋白百分比。大豆蛋白分離物含有至少約90 %大 豆蛋白重量百分比，而大豆蛋白分離物其他主要的成分為 灰份及水分。利用慣用形成大豆蛋白分離物之加工步驟製 備本發明組合物所用之大豆蛋白分離物，其中用p Η自約6 至約1 1之水溶液（較佳為稀釋氫氧化鈉，氫氧化鈣，或氧 氧化銨水溶液）萃取去脂大豆薄片，而含有可溶性蛋白之 萃取液與不溶性物質（諸如大豆纖維及其他不溶性多醣類） 分離，將所萃取之分離pH值調整至大豆蛋白的等電點，較 佳約p Η 4. 4 - 4. 6，以沉殿蛋白質。將沉殿的蛋白質與萃取 物的液體部分分開，以便將蛋白質與可溶性碳水化合物分 開’而後清洗分離的蛋白質’中和’產生大丑蛋白分離 物。大豆蛋白分離物為市售商品，可直接購買應用於本發 明組合物中。 另一個具體實例，大豆蛋白物質為大豆子葉物質，其含 有約37%至約44%大豆蛋白重量百分比。為製取大豆子葉物 質，將整個大豆去殼，根據慣用大豆加工技術將大豆子葉 撥開，撥開子葉後，子葉分離，將混合的大豆經足夠大小 的篩網選擇性去除較小的子葉，而分離出子葉，磨碎生的 子葉，以製備粉末或粉狀物。 本發明組合物所用的異黃酮化合物為植物（諸如豆莢， 苜蓿，及葛藤（p u e r a r i a r ο 〇 t)的根）中所發現自然形成的 物質。通常這些異黃®g的豆莢來源包括大豆，埃及豆，及 各式其他的豆莢與豆類，這些含異黃酮化合物的苜蓿來源 包括紅苜宿及地下苜宿。大豆I特別佳的異黃S同化合物來

第19頁 1242437 五、名务明說明 (15) ~ ' 源（除/大豆中不含有格力西丹及其醋苷）。 異κ酮化合物可自天然植物來源製備之，而利用技藝中 已知的流程可以合成方式製備異黃酮化合物，例如王 (Wong)(食品農業科學雜誌·，第13冊，3〇4頁（1 962 ))所揭示- 丹吉因可自紅苜宿中分離得之，或可自格恩力（Ganguly) 及塞爾（Sarre)所提供之黴菌Micr〇m〇n〇sp〇ra ' hlophytica中分離之，此兩篇文獻一併供本專利說明書 · 蒼考。利用貝克（Baker)等人（化學學會雜誌·，274頁 ( 1 933 )) ’威斯力（Wesley)等人（Ber•第66冊，第685頁 ( 1 933 )) ’麥海爾（Mahal)等人（化學學會雜誌·，第1 76 9頁 · ( 1 9 34 )) ’貝克等人（化學學會雜誌·，第1 8 52頁（1 9 5 3 ))， 或福克斯（Farkas)(Ber·第90冊，第2940頁（ 1 95 7 ))所提供 之方法’以合成方式製備丹吉因，以上文獻一併供本專利 說明書參考。利用福克斯等人（Ber•，第92冊，第819頁 (1959))之方法可以合成方式製備異黃酮醣苷丹辛，.該篇 文獻一併供本專利說明書參考。將丹辛與丙二醯基或乙醯 基酐進行慣用的皂化作用後可製備丹吉因異黃酮醣苷共軛 物6’-Mai丹辛及6’-Ac -丹辛。

可藉由貝克（Baker)等人（化學學會雜誌3115頁 A (1928));諾瑞西哈克利（Narasimhachare)等人（J. Sci·

Ind· Res·，第 12 冊，第 287 頁（ 1 9 5 3 ));優得（Yoder)等人 (Proc· Iowa Acad. Sci.,自 61 冊，第271 頁（1954))；及 吉姆晋力恩（Zemplen)等人（Acta. Chim. Acda. Sci. - j Hung·，第19冊，第277頁（ 1 9 5 9 )今所提供之方法合成製備吉

第20頁 1242437 五、發明說明（16) — 尼斯丹，以上所列文獻一併供本專利說明書參考。異黃_ 糖苷吉尼斯丁可以吉姆普力恩等人（Ber.，76B冊，第111〇 | 頁（1 9 4 3 ))之方法合成製備，該文獻一併供本專利說明書 I 參考。將吉尼斯丁與丙二醯基或乙醯基酐進行慣用的皂化 |~ 作用後可分別製備吉尼斯丁異黃酮共軛物，6, -〇 — Mal吉尼卜 斯丁及6-〇-Ac-吉尼斯丁。 可利用貝克等人（自然1 6 9 : 70 6 ( 1 95 2 ))所提供之方法合 成製備格力西丹，格力西丹亦可利用伯布（p〇pe)等人（化 學及工業（偷放）第1 〇 9 2頁（1 9 5 3 ))所提供之方法自紅苜稽 分離之，該文獻一併供本專利說明書參考。利用威斯力等^ 人（Ber· 6 6 : 68 5 ( 1 933 ))及克吉（Kagel)等人（Tetrahedr〇n Letters，第5 93頁（ 1 9 62 ))所揭示的方法合成福馬尼丁，此 二文獻一併供本專利說明書參考。利用瓦爾茲（Waiz) (Ann.489 : 1 1 8 ( 1 93 1 ))的方法可自大豆粉分離出福馬尼 丁，或利用布瑞力（Bradbury)等人（化學學會雜誌第3447 頁（1951))所提供之分法自苜蓿中分離之。 在最佳的具體實例中’本發明組合物之異黃酉同成分自大 且蛋白物質回收，該大豆蛋白物質亦可用於組合物中，如 前所述1黃酮是大豆中天然存在的化合物。在製備大豆 蛋白粉，細粒，濃縮物’及某些異黃_之分離物可存於大參 豆蛋白物質中。以適當加工技術處理前述之大豆蛋白物 吳，杈以’丨貝用加工之大豆蛋白物質所製得之大豆蛋白粉， 細粒，濃縮物，或分離物中所含有的異黃酮含量明顯^ 加’具體言之’醇類清洗或萃取大豆蛋白物質應避免；因 1242437 五、發明說明（17) 為異黃酮於醇類 縮物不應以醇類 物質中，除此之 因為清洗會去除 應於冷藏至冰冷 異黃酮於水中的 失。在用水清洗 中的異黃酮應轉 水中的溶解度。 法所製之大豆蛋 在另一個具體 異黃酮或異黃酮 分離天然存在之 質，以便自植物 或水溶液，較佳 合物之前，研磨 化合物的回收率 態層析（"HPLCn ) 在較佳的具體 水溶液中的 清洗製備之 外，以水溶 大豆蛋白中 之溫度（自0 不溶性，並 或萃取大豆 換成其苷配 上述所用保 白物質中含 實例中，自 類可用於本 異黃酮的較 物質中取出 為驗性水溶 植物物質， 。利用慣用 可自萃取物 實例中，異 溶解度相當大，且大豆蛋白濃 ，因為異黃酮需留於大豆蛋白 液清洗大豆蛋白物質應減少， 的異黃酮。清洗（假若有需要） °C至4 5 °C )下進行，以便增加 減少清洗過程中異黃酮的流 蛋白物質之前，大豆蛋白物質 基形式（如下所述），以減少於 持大豆蛋白物質中異黃酮的方 有較多之異黃酮。 植物物質中所分離天然存在之 發明組合物中。自植物物質中 佳方法是以醇類萃取植物物 異黃酮，較佳是甲醇或乙醇， 液。較佳者係在萃取異黃酮化 以便增加自植物物質中異黃酮 分離步驟（諸如逆向高解析液 中分離出異黃酮化合物。 黃酮化合物吉尼斯丹，吉尼斯 丁，6’-O-Mal吉尼斯丁，6’-0-Ac-吉尼斯丁，丹吉因，丹 辛，6’ -0-Mai丹辛，6’ -〇-Ac丹辛，格力西丹，格力西 丁，及6’ -〇-Mal格力西丁分離自大豆物質，較佳為市售大 豆物質。可分離出異黃酮化合物之大豆物質包括：大豆， 去殼大豆，大豆片，大豆粉，天豆細粒，大豆薄片（全脂

第22頁 1242437 五、發明說明（18) 或去脂），大_ \漿，大豆漿蛋 | I中，以低分子 醋，丙酮，或 丨豆，去殼大豆 大！蛋白濃縮 出異黃酮，最 4至ρ Η 5 )，以 含有異黃酉同 有高量異黃酉同 溶劑後，回收 異黃酮物質， 在更佳的具 大豆物質分離 黃酮之物質接 上沖堤下來， 來。 在較佳的具 i將萃取液中的 I 黃酮，並與萃 以除不溶性物 I酮及萃取液中. I柱，製備I1PLC ; I |然而，較佳的4 ! ^_______ 包子葉，大豆醣，— 白’及大豆蛋白分離且蛋白』農缩物，大豆 量的有機萃取溶劑在—侗具體實例 乙醚’而最佳者又者為醇類，乙酸乙 ，大豆片，大4 :或甲醇水溶液)自大 物，大豆漿蛋白，或旦細粒，大豆薄片， 佳的萃取劑的ρΗ為大-足蛋白分離物中萃取 減少被萃取劑所萃取2蛋白的等電點（約PH 之萃取劑與不溶之大豆蛋白含量。 之萃取液，假若有需：物『：開，以形成含 高含量異黃酮物質而# ’可濃缩萃取液去除 其可用於本發明組合：：：製備固態高含量 體實例中，異黃綱可：及：法中。 ，含有里普8ΠΚ π 進—步與萃取液中其他 为共汽酮卒取液可盥处也 觸，再以溶劑將所吸附：：主附萃取液中異 該溶劑可使里普酮ή ^ 頁_自吸附物質 、“Π自吸附物質上區別沖堤下 體實例中，利用慣用 ^ ^ . 、 硬向HPLC分離技術，可 異頁酮與不純物分離。 離i u j 取液中Iα丄- 自大丑物質中萃取異 質，1，合'大且物質分離後，過濾萃取液 :進行HPLC分析。利用可釋放鍵結異黃 A、 之特定吸附物質填充慣用市售HPLC管 1主°吸附物質為任何逆相HPLC填充物質， 、充物質係根據貧载能力，分離效果，及價 1242437 五、發明說明（19) 錢選定的。此一。較佳的填充物質為可羅馬西爾（Kr〇masi i ) C18 1 6微米1 00 A填充珠，購自艾卡諾貝爾（Eka N〇bel )， 諾貝爾工業，瑞典。 過濾之萃取液通過填充之HPLC管柱，直至管柱所有的鍵 結位置均完全被異黃酮所飽和，其可自管柱流出之沖堤 中檢測出異黃酮得知。而後用溶劑沖堤HpLC管柱進行分 作用。在較佳的具體實例中，沖堤溶劑較佳者為極性溶 劑，諸如乙醇，甲醇，乙酸乙酯，或乙腈，而較佳者 有約30%至約90%醇類含量之水溶液，最佳者為約5〇%，'具 最佳的醇類為乙醇。 而 從管柱的沖堤液中分離收集異黃酮化合物及不純 據慣用HPLC及分析化學技術，可自其他沖堤分液中梦丄根 :有異黃酮之沖堤分液，自管柱中收集含有異黃酮：：出 j，利用瘵發作用去除溶劑中揮發含量（例如醇類: $發作用可去除所有的溶劑，則可直接回收異黃晚：苦 或疋將所剩之溶劑（例如水）冰冷之，並 進行離心作用或過濾，以回收異黃酮。 ^之岭刪 此，特別佳的具體實例中，回收自植物物質之異黃_ ^，物，異黃酮醣苷轉可換成其相對之苷配基異黃_形 私、r 5嗣糖脊共輛物及異黃酮糖苷轉換成替配基里次 :=植物雌激素異黃酮於萃取前先萃取的受質影響，痞§同 岭性吳物質中分離萃取液後所得豐含異黃酮影響。=t 及-己基異汽S同化合物對降低血液中乙D L及總膽固醇濃度δ，° 預防或減低動脈硬化的發生得別的有活性。從含水贫 1242437 五、發明說明（20) ^ ^ 液中分離苷配基異黃酮較分離其相對醣苷共軛物及醣苷形 式容易，因為苷配基較不溶於水。 乂 異汽酮糖脊共|厄物（例如β" U a 1吉尼斯丁，6— a c 士 尼斯丁，6”-〇-Mai 丹辛，6”—〇 —Ac—丹辛，及6，，_〇 —Mal 袼二 西丁）可轉換成其相對之醣脊（例如吉尼斯丁，丹辛，及 力西丁），將含有異黃酮之萃取液或受質形成pH約為6至二 13之鹼性水溶液，較佳約pH 9至約pH n，並在溫度約^ =約121。(：處理該鹼性水溶液一段轉換所需的足夠時間， 乂佳為約2 5 C至約7 5 C，較佳約3 0分鐘至約5小時，更佳 分鐘至約1 · 5小時。將異黃酮醣苷與能分切)，4—万—醣 Ϊ: S:素(較佳為市售之貝他—配苷酶，阿爾法-或貝他-n 1 膠酶，乳糖酶，或葡萄糖-殿粉酶）於該酵素 7 5。r =車乂佳。為約pH 3至約pH 9 )下，於溫度約2 5 °C至約 r "ί約45 C至約65。。）反應-段足夠轉換的時間，- 3;;:^ 24小時，較佳約1小時至約3小時，可將異 ;二丁，丹辛，及格力西丁 )轉換成其相對之 甘配基开，式（例如吉尼斯丹’丹吉因，及格力西丹卜 利^㈣分離步料料配基異黃⑽ 的醇類萃取大豆或首稽受質後，可萃 w tin異_ ’利用慣用再結 基異黃，。在較佳的具體= 匕二士 發明組合物或方法之異黃I组合物 ί在2 尼斯丹，至少15%丹吉因，及至少1%格力西 本魚明另一個具體實例卜自大豆受質所分離及用

第25頁 1242437

五、發明說明（21) I 於本發明組合物或方法之異黃酮組合物包括至少8 5 %吉尼 | 斯丹，至少5%丹吉因，及至少〇.5%格力西丹。 i 用於本發明組合物中之數種異黃酮化合物為市售商品，i 可購買得之，以調配本發明組合物，或用於本發明的方法i 中。例如’吉尼斯丹，丹吉因，及格力西丹為市售商品， 可購自因多分（111(1〇以116)化學公司，？ 〇.6〇\ 473，塞馬 | 威利（Somervi 1 le)，紐澤西州〇88 7 6。生機素a可購自米爾| 威其（Mi 1 waukee)，溫斯康辛州53 2 33。 | 植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮可一起添加成分 j 組合成本發明之組合物，較佳的方式為將各成分混合一 $ 起。例如，將植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酿]置於 攪拌或混合容器中，混合這些物質一段完全混合所需之時i 間。 較佳的是將成分混合一起，致使所得之組合物所含之各 成分具有生物活性含量，雖然組合物不侷限於每種成分具 有生物活性含量，因為為了達到所要降低血中LDL及總膽 固醇濃度之效果，投用紱合物的次數可多不只一次。較佳 組合物中含有約5 〇 〇毫克至約5 〇克之植物固醇，而更佳約1 克至約1 0克至植物固醇。當組合物含有大豆蛋白物質時， 較佳為組合物中含有約5克至約100克之大豆蛋白物質，更i 佳是組合物中含有約丨〇克至約4 〇克之大豆蛋白物質。當組 合物中含有異黃酮時，較佳為組合物中含有約1 〇毫克至約 1 0 0 0毫克之異黃酮，更佳是組合物中含有約2 5毫克至約 200毫克之異黃酮。 _一

第26頁 1242437 i五、發明說明（22)

I ! 在較佳的具體實例中，植物固醇及大豆蛋白物質及/或 異黃酮可與適當之賦型劑調配成醫藥或櫃檯傳送系統。利 用技藝中所知之方法可製備含有植物固醇及大豆蛋白物質 ί 及/或異黃酮之醫藥或櫃檯調配物，例如，本發明成分可 調配成錠片，膠囊，粉末，懸浮液，非經腸投藥用之溶 液，諸如靜脈，肌肉，及皮下方式投藥，以及利用一般及 慣用的載劑，鍵結劑，稀釋劑，及賦型劑調配成經皮適用 之貼片溶液。

用以調配根據本發明之醫藥或櫃檯調配物之惰性醫藥學 上可接受賦型劑包括澱粉，甘露醇，硫酸鈣，磷酸氫二 鈣，硬脂酸鎂，矽酸衍生物，及/或醣類，諸如蔗糖，乳 糖及葡萄糖。鍵結劑包括羧基甲基纖維素及其他纖維素衍 生物，動物膠，天然及合成膠，包括藻酸，諸如藻酸納， 聚乙二醇，蠟及其類似物。用於本發明之稀釋劑包括適當 之油脂，食鹽水，St溶液，諸如右旋糖水溶液或葡萄糖水 溶液，及乙二醇類，諸如聚乙二醇或聚丙二醇。其他賦型 劑包括油酸鈉，乙酸鈉，硬脂酸鈉，氣化鈉，苯曱酸鈉， 滑石粉，及硬脂酸鎂，及其類似物；分散劑包括瓊脂，碳 酸鈣，碳酸氫鈉，澱粉，黃素膠，及其類似物；及吸附載 體，諸如膨土及高嶺土。呈色劑及香料亦可添加至醫藥或 櫃檯調配物中。 在另一個較佳的具體實例中，將各種成分或其混合物以 食品成分加入食品中，以製備含有植物固醇及大豆蛋白物 質及/或異黃酮之飲食補充劑。--可添加這些成分之食品包

第27頁 1242437 -j 五、發明說明（23)

括幾乎所有的食品，但較佳者A 醇之大豆蛋白物質或蔬菜油。：3有作為功能成分植物固 豆蛋白物質及/或異黃酮之食σ ，可添加植物固醇及大 諸如碎肉，乳化肉，及滷肉？°飲包料括不=於)肉類， 動飲料，s白質強化飲料，果、t + 4如Ϋ養性飲料，運 減肥飲料；乳㉟，諸如硬乳二:牛奶，牛奶替代物，及 萨.A、# Eh或軟乳赂，奶油乳路，酸乳 酪，冷凍點心，诸如冰淇淋， 非奶類冷；東點^ ;優格H 2脂冷；東點心，及 醬H料及塗抹醬，諸如:奶!丁；麵包產品；沙拉 植物固醇及大豆蛋白物質（包'人7及洋竿片沾料。最佳的 物所形成之乳化物’其特別可3用或二包含異黃酮)是為泥狀 ^ 、 、付⑴了用於乳化的食品及飲料中， 諸如沙拉醬，優格，大豆乳路 A阶’礼化肉，及粉末飲料。 下列非限制性調配物說明包含植物固醇及大豆蛋白及/ 或異黃酮化合物之根據本發明組合物，及其用於根據本發 明之方法。 x 調配物 下列調配物1-4說明包括用於本發明組合物之植物固醇 及大且蛋白物質及/或異黃酮之醫藥或櫃檯調配物。 調配物1 動物膠膠囊 利用下列成分製備硬動物膠膠囊：異黃酮2 5 — 1 0 0毫克/ 膠囊；植物固醇5 0 0 - 2 0 0 0毫克/膠囊；澱粉，肝〇 一 1 〇 〇 0毫 克/膠囊；澱粉可流動性粉末〇 —丨00 〇毫克/膠囊；聚矽氧液 3 5 0厘史〇 - 2 0毫克/膠囊。混合成分，經篩網過篩，填充至

1242437 ,-------- ** 五、發明說明（24) 膠囊中。 調配物2 錠片 利用下列成分製備鍵片：植物固醇2 5 0 - 5 0 0毫克/錠片； 大豆蛋白物質1 0 0 0 - 2 0 0 0毫克/錠片；微結晶纖維素2 〇 一 3 〇 〇 毫克/錠片；澱粉0-50毫克/錠片、硬脂酸鎂或硬脂酸〇 — 5 宅克/叙片，一氧化石夕’燻蒸0 - 400毫克/鍵片；二氧化 矽，膠狀物0-1毫克/錠片，及乳糖〇-；[ 00毫克/錠片。浪合 成分並壓錠形成錠片。 調配物3 懸浮液 利用下列成分製備懸浮液··異黃酮〇·丨―200毫克/5毫 升；植物固醇2 50-2000毫克/5毫升；大豆蛋白物質5〇〇 一 2 0 0 0毫克/5毫升；羧基曱基纖維素鈉5〇_7〇〇毫克/5毫升； 苯甲酸鈉0-10毫克/5毫升；純水5毫升；及所需之香$料及 呈色劑。 調配物4 非經腸溶液 攪:拌内含1 · 5 %重量比之活 物質，植物固醇，及異黃酮 體積比之丙二醇及水溶液， >谷液’並無菌化。 性成分（活性成分為大豆蛋白 ，重量比例為5 : 4 : 1 )之1〇.% 利用氣化鈉將該溶液製成等張 下列調配物5 … 句〜用植物固醇汉$ 1¾、用於根據本4 組合物異黃酮之大豆蛋自分離#所製成之飲食補充物 1242437 五、發明說明（25) 列豐含異黃酮之大豆蛋白分離物主要每克大豆蛋白中包含 約1至約7毫克之異黃酮化合物。 調配物5 即食飲料 利用下列成分製成即食飲料： 成分 百分比組合物，重量比 水 75-82 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 10-15 植物固醇 蔗糖 可可

3-5 5-8 1-1

維生素/礦物質 0.1-1 香料 0 . 1 - 1 纖維素膠 0 . 1 - 0. 5 即食飲料可製成每份8盘司，每份含有約2 0克大豆蛋 白，包括約2 0至約1 4 0毫克之異黃酮化合物及約6克之植物 固醇。 調配物6

粉末式飲料 利用下列化合物製備粉末式飲料： 成分 百分比組合物，重量比 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 75-85 植物固醇 5-10

蔗糖

第30頁 1242437 I五、發明說明（26) 1-5 0.5-2 0-0. 0-0.

Ma1todextr i n 維生素/礦物質 阿斯巴甜 香料 將3 0克粉末式飲料調配物添加至水中，製成每份含有約 2 3克大豆蛋白分離物，包括約2 3克至約1 6 1毫克的異黃酮 化合物及約2. 5克之植物固醇。 9 調配物7 食物棒 利用下列成分製成食物棒： 百分比、组合物，重量比 20-30 1-5 30-45 7-14 成分 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 植物固醇 玉米糖漿 米糖漿固體 甘油 可可 2-7 圖覆化合物 15-25 食物棒每份7 0克，含有約1 5克大豆蛋白分離物，含有約 1 5至約1 0 5毫克之異黃酮化合物及約2克植物固醇。 調配物8 大豆優格 利用下列成分製成大豆優格： - 成分 -百分比組合物，重量比 .

第31頁 1242437 五、發明說明（27) 水 50-70 豐含異黃酮大豆蛋白分離物 5-15

植物固醇 蔗糖 玉米澱粉 葡萄糖 纖維素膠 培養液（優格） 水果 維生素/礦物質 大豆優格每份製成1 7 0克，每份含有約1 7克之大豆蛋白 分離物，含有約1 7至約1 7 0毫克異黃酮化合物及含有約1 7 克植物固醇。 方法 本發明亦關於以植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮 化合物降低人體血液中低密度脂蛋白膽固醇濃度之方法。 持續規律性（較佳為每日）的投與人體大豆蛋白物質及/或 異黃酮化合物，可降低血液中LDL膽固醇及總膽固醇濃 度，植物固醇較佳者為如前所述之/3 -麥胚脂醇，菜油固 & 醇，豆固醇，麥胚固烷醇或菜油固烷醇。大豆蛋白物質則 為大豆子葉物質或大豆蛋白物質，其含有至少49%大豆蛋 白物質乾重之大豆蛋白，諸如大豆粉，大豆細粒，濃縮 物，或分離物。異黃酮化合物選自一種或多種如前所述之 — 吉尼斯丹，丹吉因，格力西丹「格力西丹，福馬尼丁，及 ·

第32頁 1242437 五、發明說明（28) ----——_ 其天然形成之糖苷或板一u ” 4糖甘共軛物。植物固醇及大豆蛋白物 皙及/或異音酮較估技 ^ ^ 貝 飞、佳係以如前所述之醫藥或櫃檯組合物戍 飲食補充物投用之，έ山鉬批公、a "认l * 、視投樂途徑的效率及/或接受度而 定。 — 在某特定時間内，較佳為每日，同時投用或依序投用植 物固醇及大旦蛋白物質及/或異黃酮化合物，最佳者為同 時投用存於前述本發明發明組合物中之植物固醇及大豆蛋 白物質及/或異黃酮化合物。另一種方式，植物固醇及大 豆蛋白及/或異黃酮化合物以個別的成分依序投用之，本 專利說明書中所用’’依序"一詞意指在某特定的一段時間内 (例如一天），個別投用各種的成分，但不侷限於立即個別 依序投用每種的成分。 人體投用之植物固醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮化合 物含量可有效的傳送至血液中，並降低血液中膽固醇濃 度。每種可降低血液中膽固醇濃度成分之劑量端視數種因 素而定’包括投用成分的個體高矮胖瘦，投用成分人體血 液中膽固醇的濃度，及投用成分之途徑。根據持續性基 礎’有效降低血液中膽固醇之植物劑量為較佳是植物固醇 投用劑量自5 0 0亳克/天至50克/天，而更佳者自1克/天至5 克/天。較佳地，假若投用，則所投用用以降低血液中膽 固醇之大豆蛋白物質的大豆蛋白物質劑量自5克/天至丨〇 〇 克/天’更佳者為10克/天至30克/天。較佳地，若有投用 異黃酮’則有欵降低血液中膽固之異黃酮投用劑量自1 〇毫 克7天至1000毫克/天，更佳為纩25毫克/天至200毫克/

第33頁 1242437 五、發明說明（29) 天。 當同時投用降低LDL及總膽固醇濃度之含量時，植物固 醇及大豆蛋白物質及/或異黃酮可相互合作的降低人體血 液中膽固醇濃度。用於本發明之植物固醇’大豆蛋白物 質’及異黃酮可降低人體血液中LDL及總膽固醇濃度之機 制各有不同，或者不同的機制間有重疊相同之處。咸信這 些物質降低膽固醇的機制與其他物質之此種機制相互作、 用’進而加速其他物質降低膽固醇的機制。組合膽固醇減 低成分之降低膽固醇機制的加速活性造成血液中降低ldl 及總膽固醇濃度之總降低量大於個別分開成分時1^[及總 膽固醇濃度所造成之降低量。 甘::，同時投用植物固醇，大豆蛋白物質，及異黃酮的 ^^可相乘性的降低血液中LDL及總膽固醇濃度，其 al鋅I些各物質原有之降低膽固醇的機制。已知植物固 的^肝^ ί腸吸收飲食中膽固醇’而影響膽固醇及膽酸間 醇回俨彳作二平彳ί。此減少在腸肝膽固醇循環調節上之膽固 tLDL a ^ ^ ^ ° ^ ^ ^ ^ ^ ^ 豆可臟可自血液中後取必要的膽固醇， ，叮=由投用植物固醇上調節、 需之膽固醇。妒萁日+邮^ _ MiatecU，或合成所 膽固醇濃度會〗降。、&之膽固醇源自血液’則血液中 機制是择力n 11 /夜中LDL及總膽固醇濃度的某種已知 促使肝排泄量。增加糞便膽酸排泄量可 〜更夕的錢，而贍酸的生成即是以膽固醇為

第34頁 1242437 五、發明說明（30) ^ - 受質二：：所述，肝臟以血液中膽固醇生成膽㉟，則可降 低血液中膽固醇的濃度。 組合投用根據本發明之植物固醇及大豆蛋白可共同調整 m固/血中的平衡作用，進而導致明顯降低血液中 肝^醇濃度°利用植物固醇抑制腸吸收飲食膽固 j;;肝：缺少膽固醇’咸信部分可自血液取走膽固醇。 的缺丑白促使糞便膽酸排泄的增加可加速肝臟膽固醇 為併，利用植物固醇以增加自肝臟去除膽固醇（為膽酸 又=)，此進一步可自血液中去除—部份的膽固醇。 一發明所用的異黃酮可與植物固醇組合，或與植物及大 白物質組合共同合作，而有效的降低LDL及總膽固醇 =X部分係因為異黃酮可上調節（upregulate)或增加肝 丹膽、固醇-受體的數目。本發明所用的異黃酮為吉尼斯 、，丹吉因，格力西丹，福馬尼丁，生機素A，及其相對 之天然存在之糖苷及糖苷共軛物，其為植物雌激素.，已知 f :體中具有雌激素的效果。雌激素增加肝臟LDL膽固醇 又也的數目，其可明顯增加血漿進入至肝臟iLDL膽固顆 沒4度。根據本發明，利用異黃酮的雌激素效應，增加 上调節（upregulation)或肝LDL膽固醇受體數目，與利用 植物固醇及/或大豆蛋白物質促使肝臟所需之膽固醇相配 合後’可明顯促使自血液進入肝臟膽固醇之澄清度。

然而，根據本發明方法不侷限於某特定的作用，明確言 心’因為同時投用植物固醇，異黃酮，及/或大豆蛋白物 質減低血液中LDL及總膽固醇濃_一度之機制有數種，例如，

第35頁 1242437 五、發明說明（31) 除了增加膽酸排泄改變膽固醇血液平衡外，因 一 含有高含量的精胺酸，·可專一性作用於蛋白二$足蛋白中 上，可改變血清中胰增血糖素成血清胰島素貝、b儲存單位 臟中膽固醇的代謝，可增加血清中游離曱狀腺進而影響肝 降低血液中的LDL及總膽固醇。植物固醢介_素’致使可 U4奸邓可利 制腸吸收膽固醇外之機制減低膽固醇，因為 用/、他抑 將植物固醇血流中，已證明可降低膽固醇Y 用直接注射 本發明亦關於人體同時投用植物固醢B丄一 N野久X豆蛋白物哲 以預防或減少動脈硬化症發生之方沐 兮 貝’ 大豆子葉物質或大豆蛋白物質，其内含有至 物_貝為 白重量百分比及/或至少一種選自吉尼斯丹，°且蛋 力西丹，福馬尼丁’生機素A ’及其相對之天然^ ’格 脊及糖替共輛物之異黃酮’較佳的植物固醇至少子之糖 /5 -麥胚固醇，菜油固醇，豆固醇，泉 v -—種 院醇。大豆蛋白物質較佳者為大豆粉夕，胚夫固院醇’及豆固 白濃縮物，或大豆蛋白分離物。較估沾机# 及蛋 一 权佳的投藥及保存方法— 如以相關的植物固醇及大豆蛋白物皙爲/ w貝及/或異普酮降低 液中LDL及總膽固醇濃度所述。 ^ 如前所述，當人體投用足夠促使卩备柄备 > %丨牛低膽固醇含量之棺 固醇及大豆蛋白物質及/或異黃i同之夂括 物 地共同降低血中LDL及總膽固醇濃度，血液中LDL膽文八 量的增加與動脈硬化症的發生有關，因為ldl膽固醇為/ 成動脈硬化病灶的重要成分。因&，可降低LDL膽固醇‘ 植物固醇，大豆蛋白物質，及/-—或異黃酮之組合物可有欢

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1242437 _ 五、發明說明（32)^ -— 的預防或減少動脈硬化症的發生。 在較佳的具體^ / Μ 1 時組合浐用遵t 例中.，不論是否投用大豆蛋白仏 的發生，®為里廿：、植物固#’可預防或減少動脫石“,？ .田廿為異更_除了可降低血液中丨DT睡 脈硬化症 外，異頁酮提供抗—動 L膽固醇濃度 黃酮在血管中可担W動脈硬化症活性。具體言之，、+此s ^ 可楗供對抗動脈硬化症重要# & g绝二/、 厂；特別是脊配基異黃酮吉尼斯丹；：：護作用，異 ，的氧化作用為形成動脈硬化症重 ：用：DL膽固 :作用增加其動脈病因性。某些異黃二：確；= 氧 ，丹，丹吉因，及生機素A亦為路胺酸 °為。尼 抑制酵素路胺酸激酶活性，可抑制動脈藉由 形成，因此，同時投用植物固醇及至少一種；栓的 生包含因或：含/豆蛋白物質)可預防或減少動脈= 辟!! 因其兩者可相互合作降低血液中ldL及總膽固 醇浪度，並抑制形成及動脈硬化病灶成長之機制。s 範例1 選擇5至50位男性進行臨床研究，這些男性患有中度至 ^度的過膽固醇血症，例如其血液中總膽固醇含量為2 5 〇 笔克/ 1 0 0毫升，或更高。將這些男性分為5組，第一組投 與30克不含異黃酮之大豆蛋白分離飲食補充物（利用醇萃 取去除異黃酮）（π大豆，，組），第二組投與5克植物固醇飲食 補充物，其中含有植物固醇沒—麥胚固醇（”植物固醇,， 組）’第三組投用7 5毫克異黃酮欠食補充物，其中含有異

第37頁 1242437 五、發明說明（33) ^ ^----- —^^ 黃_吉尼斯丹及丹吉因（”異黃_"組），第四組投用含 士分離大豆蛋=，5克植物麥胚固醇，及75毫 吉尼斯丹;丹吉因之之飲食補充物（"組 五= 用飲ί補充物(”控制"組）。這些實驗組之飲食中均不 異同，植物固醇及大豆蛋白的來源，I组 杈用雌激素，此飲食狀況持續6個月。 =始在匕種飲食之前，測量病患血液 ί6Λ :醇含量之基準，各組病患在接受此種相關； 二之後，罐其血液中之含量基準，比較每組成 :中斤：之結果，並比較研究開始前及結束後所得之牡 果。組合投用植物固醇，大豆蛋、 降低L D L及總膽固醇含量百分比蛋大白/貝及異』顯示所 醇組，異黃嗣組，及控= 植物固 ^ 利、、且所降低LDL或總膽固醇含量。 ^乾例係利用活性證明植物固醇及大豆蛋白 或之組合使用可降低人體血液中咖膽固醇濃貝戶及/ I&J12 又。 ^至50位女性進行臨床研 杉斷為動脈硬化症患者，例如 —女/生已如經，並 包括狹窄荇乃μ食广^仍如已0畊為動脈硬化病灶者， 與…含ί 豆；= =组，第， ::除異黃酉同)(”大豆，，組），第二組投與〜=(利用醇萃 補充物，发φ人古姑_ /、見植物固醇餘夺

组），第_气中/有植物固醇沒-麥胚固醇("植物固醇R 普S同士 —，、且用耄克異黃酮飲食補充物，复中八士 、。尼斯丹及丹吉因（"異黃酮"組） 且、己有異 — π q、'且才又用含有3 0

第38頁 1242437 五、發明說明（34) 士 大丑蛋：5克植物召—麥胚固醇，及75毫克異黃酮 〇匕斤丹及丹〇 口之之飲食補充物（,，組合π組），而第五組 飲：補充物("控制”組）。這些實驗組之飲食中均不 在k t、異n植物固醇及大豆蛋白的來源，@組中亦不 投用雌激素，此飲食狀況持續6個月。 在開始此種飲食之前’測量病患血液中總膽固醇；高密 度及低密度脂蛋白膽E]醇含量之基準；及某選定血管（諸 如表面大腿動脈或肢動脈）中狹窄症與動脈硬化病灶之程 度，以研究企管反應非-進展性（例如利用高解析超音 波）。各組病/在接受此種相關飲食6個月之後，再測定其 里土乎冗早乂母組成貝中所得之結果，並比較 研及結束後所得之結果。組合投用植物固醇，大 豆蛋白物貝，及異黃嗣與增加的抗—動脈硬化活性有關， 組合組=於大豆組、植物固醇組、異黃_組及控制組而 ;:療顯示可有幅減少粥樣硬化症病灶及狹窄症 或疋減少粥樣硬化症病灶或狹窄症的累積。 上述範例係利用活性證明植物固醇二^豆蛋白物質及/ 或異黃，之組合使用可預防或減少人體動脈硬化病灶 生〇 ’又

Claims (1)

1242437 修正 案號 8910fi7?!9 I I -- ^ 年月日 六、申請專利範圍 1 · 種F牛低人體血液中總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇 之組合物，其包括 大豆蛋白物質 之大豆蛋白； 其包括至少為4 9 %大豆蛋白物質乾重 至^ 種異貝’ ’其選自吉尼斯丹（genistein)，丹 吉因（（18土（126111)，格力亦门/ 1 .丄.、 4德各Δ 刀西丹（glycitein) ’生機素A (biochanin A)，福馬尤丁 μ ，穷盆妥缺在 * J ^ T (I or mo n on e 11 n J ，及吳大然仔 在之糖苷及糖苷共軛物；及 植物固醇’其中植物固醇包括至少為〇 · 4 9 %重量計之 組合物。 2 ·根據申請專利範圍第i項之組合物，其中該大豆蛋白 _ 物質為大豆蛋白分離物。 3 ·根據申請專利範圍第1項之組合物，其中該大豆蛋白 物質選自至少一種大豆蛋白濃縮物，大豆粉，或大豆細 粒。 4 ·根據申請專利範圍第1項之組合物，其中該植物固醇 至少為万-麥胚脂醇（yj-sitosterol)，菜油固醇 (campesterol)，豆固醇（stigmasterol)，麥胚固烧醇 (s i t ost ano 1 )，或菜；:由 @ 醇(campestanol) 〇

5 ·根據申請專利範圍第1項之組合物，其中該異黃酮包 括至少0 · 0 0 6 6 %重量計之該組合物。 6 ·根據申請專利範圍第1項之組合物，另外包括一種賦 型劑，其中該植物固醇，大豆蛋白物質，異黃酮，及賦型 劑組合成醫藥或櫃檯製劑。

O:\63\63729-921017.ptc 第41頁 1242437 案號 89106739 年 月 修正 六、申請專利範圍 其中該醫藥或櫃 或溶液。 另外包括水，其 ，及水組合成水乳 係併入食品物質 ，係併入食品物質 7 .根據申請專利範圍第6項之組合物 檯製劑為錠片，膠囊，粉末，懸浮液， 8 .根據申請專利範圍第1項之組合物 中該植物固醇，大豆蛋白物質，異黃酮 化液。 9 .根據申請專利範圍第8項之組合物 中 〇 1 0 .根據申請專利範圍第1項之組合物 中 〇 1 1 . 一種降低人體血液中總膽固醇及低密度脂蛋白膽固 醇之組合，其包括 植物固醇，内含至少49%大豆蛋白物質乾重之大豆蛋 白之大豆蛋白物質，及至少一種選自吉尼斯丹，丹吉因 格力西丹，生機素A，福馬尼丁，及其天然存在之糖苷及 糖苷共軛物之異黃酮，其中植物固醇包括至少〇. 4 9%重量 之植物固醇，大豆蛋白物質，及異黃酮組合含量。 1 2 .根據申請專利範圍第1 1項之組合，其中植物固醇足 以提供約5 0 0毫克/天至約5 0克/天之劑量。 1 3 .根據申請專利範圍1 1項之組合，其中該大豆蛋白物 質足以提供自約5克/天至約1 0 0克/天之含量。 1 4.根據申請專利範圍1 1項之組合，其中該異黃酮足以 提供自約1 0毫克/天至約1 0 0 0毫克/天之含量。 1 5 .根據申請專利範圍第1 1項之組合，其中該植物固醇 至少一種為召-麥胚脂醇，菜油固醇，豆固醇，麥胚固烷

O:\63\63729-921017.ptc 第42頁 1242437 案號 89106739 年 月 曰 修正 々、申請專利範圍 醇，或菜油烷醇。 1 6 .根據申請專利範圍第1 1項之組合，其中該大豆蛋白 物質選自至少一種大豆蛋白濃縮物，大豆蛋白分離物，大 豆粉，及大豆細粒。 1 7.根據申請專利範圍第1 1項之組合，其中植物固醇， 大豆蛋白物質，及異黃酮製備於食品中。 1 8 .根據申請專利範圍第1 1項之組合，其中植物固醇， 大豆蛋白物質，及異黃酮製備於醫藥或櫃檯製劑中。 1 9 .根據申請專利範圍第1 8項之組合，其中該醫藥或櫃 檯製劑為鍵片，膠囊，粉末，懸浮液，或溶液。 2 0 . —種預防或減少動脈硬化症發生的組合，其包括 植物固醇，内含至少4 9 %大豆蛋白物質乾重之大豆蛋 白之大豆蛋白物質，及至少一種選自吉尼斯丹，丹吉因， 格力西丹，生機素A，福馬尼丁，及其天然存在之糖苷及 糖苷共輊物之異黃酮，其中植物固醇包括至少0. 4 9 %重量 計之植物固醇，大豆蛋白物質，及異黃酮組合含量。 2 1 .根據申請專利範圍第2 0項之組合，其中該植物固醇 足以提供自約5 0 0毫克/天至約5 0克/天之劑量。 2 2 .根據申請專利範圍第2 0項之組合，其中該大豆蛋白 物質足以提供自約5克/天至約1 0 0克/天之含量。 2 3 .根據申請專利範圍2 0項之組合，其中該異黃酮足以 提供自約1 0毫克/天至約1 0 0 0毫克/天之含量。 2 4.根據申請專利範圍第2 0項之組合，其中該植物固醇 至少一種為/5-麥胚脂醇，菜油固醇，豆固醇，麥胚固烷

O:\63\63729-921017.ptc 第43頁 1242437 案號 89106739 A_η 修正 六、申請專利範圍 醇，或豆固烷醇。 2 5 .根據申請專利範圍第2 0項之組合，其中該大豆蛋白 物質選自至少一種大豆蛋白濃縮物，大豆蛋白分離物，大 豆粉，及大豆細粒。 2 6 .根據申請專利範圍第2 0項之組合，其中植物固醇， 大豆蛋白物質，及異黃酮製備於食品中。 2 7.根據申請專利範圍第2 0項之組合，其中植物固醇， 大豆蛋白物質，及異黃酮製備於醫藥或櫃檯製劑中。 _ 2 8 .根據申請專利範圍第2 7項之組合，其中該醫藥或櫃 檯製劑為錠片，膠囊，粉末，懸浮液，或溶液。

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