FI59416C - Foerfarande foer utvinning av beta-sitosterol ur en sterolblandning utvunnen fraon raosaopans neutralfraktion - Google Patents

Description

\UMr*\ [B] (l1)KUULUTUSjULKAISU γλι-. / WA 1 J UTLÄGGN I NGSSKRIFT 0^4 16 C (45) Patentti myönnetty 10 08 1931 Patent iseddelat ’ (51) Kv.HL/Hit.a.3 C 07 J 9/00 SUOMI—FINLAND (21) p*t*ottih^.m*»*-pw«nt«i^iu»ii.I 793612 (22) HtktmlipCIvt — Ant5knln(*dtg 19.11.79 ^ (23) Alkupilvi—GIMfh«od*g 19.11.79 (41) Tullut Julklsuksl — Bllvlt offwttlig μ nMM«IMIItu· hm,^ „ krtj.ua»

Patent- och reglatontyrolKn ' AmMom uttajd och utUkrHtm pubitcand 30. oU. 8l (32)(33)(31) Pyydetty «cuolkMM —feglrd prlorltut (71) Farmos-Yhtymä Oy, PL 425, 20101 Turku 10, Suomi-Finland(FI) (72) Lasse Antero Koskenniska, Oulu, Suomi-Finland(FI) (54) Menetelmä ^-sitosterolin erottamiseksi raakasuovan neutraali-jakeesta eristetystä steroliseoksesta - Förfarande för ut-vinning av /3-sitosterol ur en sterolblandning utvunnen frän rasäpans neutralfraktion

Keksinnön kohteena on menetelmä 13-sitosterolin eristämiseksi raakasuovan neutraalijakeesta eristetystä steroliseoksesta. Tällöin saadaan 0r-sito-sterolia, joka sisältää korkeintaan 4 %, edullisesti alle 2 %,&(. -sito-sterolia ja alle 6 % kampesterolia. Muiden epäpuhtauksien osuus on yhteensä alle 0,5 %.

Lääketeollisuudessa β-sitosterolia voidaan käyttää sinänsä farmaseuttisiin tarkoituksiin, sekä lähtöaineena steroidivälituotteiden valmistamiseksi. Tärkeä edellytys on kuitenkin se, että p-sitosteroli täyttää tietyt laatuvaatimukset. On esim* välttämätöntä saada 0-sitosterolia, jonka ^ -sitosterolipitoisuus on mahdollisimman alhainen, eli ainakin alle 4 %. Luonnolliset 0-sitosterolilähteet, kuten esim. sulfaattisellun raakasuovan neutraalijakeesta erotettu sitosteroliseos, voivat sisältää runsaasti 0( -sitosterolia, eli noin 20 % tai enemmän.

-2- 59416 σ< - ja 0-sitosterolin erottaminen toisistaan on siten käytännössä tärkeä tehtävä. Tämän ongelman ratkaisemiseksi on ehdotettu mm. seuraavia menetelmiä: U.S.-patentissa n:o 2 573 265 kuvataan menetelmää β-sitosterolia muistuttavien sitosterolien erottamiseksi muista steroleista siten, että lähtöaine liuotetaan hiilivetyyn tai halogenoituun hiilivetyyn, jonka jälkeen |>sitosterolit ja sen tyyppiset sitosterolit kiteytetään HClO^in tai HPF^n avulla.

Julkaisussa Sci.Res. (Dakka, Pak.) 1969, s. 162, kuvataan mm. - ja |3-sitosterolin erottamista kromatograafisesti aluminiumoksidilla.

Suomalaisessa patentissa n:o 57 956 kuvataan menetelmää |3-sitosterolln eristämiseksi seoksista, jotka sisältävät mm. myös -sitosterolia.

Tunnusomaista tälle menetelmälle on se, että lähtöaine käsitellään vahvalla, epäorgaanisella tai orgaanisella hapolla orgaanisessa liuottlmes-sa. Happokäsittelyn jälkeen reaktiotuote, joka saadaan esim. jäähdyttämällä liuos tai haihduttamalla liuotin pois, kiteytetään sopivasta orgaanisesta liuottimesta. Jos lähtöaineena käytetään raakasuovan neutraali-jakeesta erotettua steroliseosta, saadaan tämän menetelmän mukaisesti lopputuote, joka sisältää noin 90 % |3-sltosterolia, noin 6 % kampestero-lia,o^ -sitosterolin hajoamisesta johtuvia toisiintumlstuotteitä ja mahdollisesti vedenlohkeamistuotteita. VarsinaistaOC -sitosterolia on lopputuotteessa hyvin vähän; alle 2 %, jos on valittu sopivat olosuhteet.

Suomalaisessa patenttihakemuksessa n:o 783 279 kuvataan menetelmää θ( -sitosterolin poistamiseksi 0-sitosterolirikasteista, jolloin 0r-sitostero-lirikaste käsitellään liuotinseoksella, joka sisältää aromaattisia ja/tai alifaattisia hiilivetyjä sekä estereitä, ja lisäksi mahdollisesti pieniä määriä ketoneja, alkoholeja, orgaanisia happoja ja vettä. Epäkohtana tässä menetelmässä on mm. se, että |3-sitosterolin saanto jää melko alhaiseksi, alle 55 %, samoin kuin lopputuotteen θζ -sitosterolipitoisuus jää yli 2 X:n.

-3_ 59416 Tässä keksinnössä tähdätään edellä mainittujen epäkohtien poistamiseen. Keksinnönmukaisella menetelmällä saadaan p-sitosterolia talteenotetuksi hyvällä saannolla, yli 70 %, jos olosuhteet valitaan sopivasti. Lisäksi saadun lopputuotteen-sitosterolipitoisuus on korkeintaan 4 % ja samalla saadaan poistetuksi jonkun verran kampesteroliakin, mikä on eduksi, kun lopputuotetta käytetään farmaseuttisiin tarkoituksiin. Varsin huomattava etu on siinä, että lopputuote ei sisällä käytännöllisesti katsoen muita haitallisia komponentteja. Kampesterolin, |3- ja cK-sitostero-lin lisäksi lopputuote sisältää muita tuotteita vain alle 0,5 %.

Tunnusomaista keksinnönmukaiselle menetelmälle on seuraava: Lähtöaine, joka on raakasuovan neutraalijakeesta eristetty, 13-sitosterolia sisältävä seos, keitetään palautuksella liuotinseoksessa, johon sisältyy ksyleeni, tolueeni tai mesityleeni, sekä metanoli, etanoli, asetoni tai metyleeni-kloridi, sekä vettä. Ksyleenin, tolueenin tai mesityleenin sijasta voidaan myös käyttää jonkin näistä seosta heksaanin tai heptaanin kanssa.

Kun lähtöaine on liuennut, saostetaan [3-sitosterolirikas tuote, esim. jäähdyttämällä liuos. Saostunut p-sitosterolirikas tuote sisältää korkeintaan 4 1 o( -sitosterolia. Mikäli vielä halutaan päästä alempiin C<-s itosterolipitoisuuksiin, voidaan toistaa yllä mainittu menetelmä saadulla lopputuotteella. Menetelmässä käytetyt liuottimet ovat helposti regeneroitavissa tislaamalla, koska ne ovat stabiileja ja helposti haihtuvia.

Keksintöä voidaan kuvata lähemmin seuraavilla esimerkeillä. Kaikissa esimerkeissä on lähtöaineena käytetty raakaa |3-sitosterolia, joka on raakasuovan neutraalijakeesta eristetty steroliseos. Eristys on tapahtunut suomalaisessa kuulutusjulkaisussa n:o 57598 kuvatun menetelmän mukaisesti. Tämän raa'an 0-sitosterolin koostumus on ollut seuraava: |3-sitosteroli 64,8 % O^-sitosteroli 19,0 % kampesteroli 5,5 % muut 10,7 %

Esimerkki 1 -4- 59416

Reaktiokolviin punnittiin 5,0 g raakaa 0-sitosterolia. Lisättiin 20 ml heptaania, 10 ml ksyleenia, 5 ml metanolia sekä 1 ml vettä. Seosta keitettiin, kunnes lähtöaine oli liuennut. Seos jäähdytettiin lämpötilaan + 5°C - 0°C, jossa se pidettiin 4 h. Syntynyt sakka suodatettiin ja saatiin lopputuotetta (=sakka) 2,8 g. Tämä sisälsi

|3-sitosterolia 93,4 X

kampesterolia 4,9 %

oC -sitosterolia 1,4 X

muita 0,3 %

Esimerkki 2

Reaktiokolviin punnittiin 5,0 g raakaa 0-sitosterolia. Lisättiin 15 ml heptaania, 10 ml mesityleeniä, 10 ml metanolia ja 1 ml vettä. Jatkettiin edellisen esimerkin mukaisesti ja saatiin 2,5 g lopputuotetta, jonka koostumus oli β-sitosterolia 94,3 % kampesterolia 4,8 X C^-sitosterolia 0,8 % muita 0,1 %

Esimerkki 3

Reaktiokolviin punnittiin 5,0 g raakaa |3-sitosterolia. Lisättiin 20 ml heksaania, 10 ml tolueenia, 5 ml etanolia ja 1 ml vettä. Käsittelyä jatkettiin esimerkki l:n mukaisesti ja saatiin 2,2 g lopputuotetta, jonka koostumus oli 0-sitosterolia 92,5 % kampesterolia 5,1 %

-sitosterolia 2,0 X muita 0,4 X

Esimerkki 4 5941 6

Reaktiokolviin punnittiin 5,0 g raakaa 3-sitosterolia. Lisättiin 20 ml heptaania, 10 ml ksvleenia, 5 ml etanolia ja 1 ml vettä. Käsittelyä jatkettiin muuten esimerkki l:n mukaisella tavalla, paitsi että seos jäähdytettiin + 15°C:een. Lopputuotetta saatiin 1,6 g ja sen koostumus oli |3-sitosterolia 94,0 % kampesterolia 4,8 %

0< -sit osterolia 1,1 % muita 0,1 X

Esimerkki 5

Reaktiokolviin punnittiin 5,0 g raakaa (3-sitosterolia. Lisättiin 20 ml ksyleenia, 15 ml metyleenikloridia ja 2 ml vettä. Jatkettiin esimerkki 1:n mukaisesti ja saatiin 2,2 g lopputu t^tt" jonka koostumus oli |3-sitosterolia 92,4 % kampesterolia 5,1 % o< -sitosterolia 2,0 % muita 0,5 %

Esimerkki 6

Reaktiokolviin lisättiin 5,0 g raakaa |3-sitosterolia. Lisättiin 20 ml tolueenia, 15 ml asetonia ja 2 ml vettä. Jatkettiin esimerkki l:n mukaisesti ja saatiin 2,5 g lopputuotetta, jonka koostumus oli |3-sitosterolia 93,3 % kampesterolia 4,9 % 0<-sitosterolia 1,5 % muita 0,3 %

Esimerkki 7 - 6 - 5941 6

Reaktiokolviin lisättiin 5,0 g raakaa (3-sitosterolia. Lisättiin 20 ml ksyleenia, 15 ml asetonia ja 2 ml vettä. Jatkettiin esimerkki l:n mukaisesti ja saatiin 2,6 g lopputuotetta, jonka koostumus oli |3^sitosterolia 94,0 % kampesterolia 4,9 % ©(-sitosterolia 1,1 % muita 0,0 %

Menetelmää voidaan helposti soveltaa teollisessa mittakaavassa panosreak-tiona. Raaka-aine, 0-sitosterolipitoinen seos, ja liuotinseos lisätään reaktoriin. Keitetään palautuksella, kunnes raaka-aine on liuennut.

Liuos jäähdytetään lämpötilaan 0°C - +5°C, missä se pidetään 4 h. Tämän jälkeen sakka suodatetaan pois. Saadaan valkoista tuotetta saannolla 76-96 %, riippuen raaka-aineen -sitosterolipitoisuudesta. Lopputuotteen o(. -sitosterolipitoisuus on noin 3 %, mikäli raaka-aineessa on ollut 20-25 % o(. -sitosterolia. Lopputuotteen ^(.-sitosterolipitoisuutta voi daan pienentää jäähdytyslämpötilaa nostamalla.

Emäliuoksesta tislataan orgaaninen liuotinseos pois. Jäännökseen lisätään vettä ja suodatetaan ©(-sitosterolia, kampesterolia ja muita neut-raaliepäpuhtauksia sisältävä seos pois. Jäännöksen o( -sitosterolipitoisuus on 60-62 % (pakattu kolonni SE-30).

Tarvittaessa lopputuotteelle tehdään uusintakäsittely samoilla liuotin-suhteilla. Tällöin saadaan |3-sitosterolia, jonka ©(-sitosterolipitoisuus on alle 1 %.

Claims (2)

1. 5941 6 7 Patenttivaatimus
2. 1. Menetelmä p-sitosterolin erottamiseksi raakasuovan neutraalijakeesta eristetystä steroliseoksesta hyvällä saannolla, edullisesti yli 60 %:n saannolla, jotta saataisiin puhdistettua p-sitosterolia, joka sisältää korkeintaan 4 % oi -sitosterolia ja 6 % kampesterolia ja muita epäpuhtauksia yhteensä korkeintaan 0,5 %, käsittelemällä mainittua seosta orgaanisia liuottimia ja vettä sisältävällä liuotinseoksella, tunnettu siitä, että a) β-sitosterolipitoiseen seokseen lisätään liuotinseos siten, että painosuhde (3-sitosterolinen seos : liuotinseos on 1:2 - 1:30, edullisesti 1:5 - 1:8, johon liuotinseokseen sisältyy ksyleeni, tolueeni tai mesityleeni tai jonkin näistä seos heksaanin tai heptaanin kanssa, 44-82 palno-% metanoli, etanoli, asetoni tai metyleenikloridi, 14-51 paino-% sekä vettä ainakin sen verran, että hiilivetyfaasi tulee kyllästetyksi vedellä b) kuumennetaan, edullisesti liuotinseoksen kiehumispisteeseen, kunnes β-sitosterolipitoinen seos liukenee c) saostetaan β-sitosterolirikas tuote, edullisesti jäähdyttämällä liuos lämpötilaan + 15°C tai sen alle d) erotetaan saostettu |3-sitosterolirikas tuote, joka on olennaisesti vapaa -sitosterolista sisältäen korkeintaan 20 % lähtöseoksen 0^ -sitosterolimäärästä, emäliuoksesta suodattamalla e) toistetaan mahdollisesti toimenpiteet a)-d) käyttäen edellisessä kohdassa saatua lopputuotetta lähtöaineena.