SU1386031A3 - Способ идентификации вирусов и бактерий - Google Patents

Способ идентификации вирусов и бактерий Download PDF

Info

Publication number
SU1386031A3
SU1386031A3 SU833663405A SU3663405A SU1386031A3 SU 1386031 A3 SU1386031 A3 SU 1386031A3 SU 833663405 A SU833663405 A SU 833663405A SU 3663405 A SU3663405 A SU 3663405A SU 1386031 A3 SU1386031 A3 SU 1386031A3
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
dna
nucleic acid
virus
cells
sample
Prior art date
Application number
SU833663405A
Other languages
English (en)
Inventor
Марьют Ранки Туула
Эрик Седерлунд Ханс
Original Assignee
Орион-Ихтюмя Ой (Фирма)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Орион-Ихтюмя Ой (Фирма) filed Critical Орион-Ихтюмя Ой (Фирма)
Application granted granted Critical
Publication of SU1386031A3 publication Critical patent/SU1386031A3/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/808—Automated or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/823—Immunogenic carrier or carrier per se

Abstract

Изобретение относитс  к генной инженерии и касаетс  способа идентификации вирусов и бактерий с помощью сэндвич-гибридизации нуклеиновых кислот. Цель изобретени  - упрощение способа. Способ индентификации вирусов и бактерий заключаетс  в том,. что контактирование пробы осуществл ют с реагентом, нанесенным на нитроцеллюлозу , и с меченным 1 реагентом . 6 табл.

Description

СО
с
со
00 05
о со
сн
Изобретение относитс  к генной инжейерии и касаетс  способа идентификации вирусов и бактерий с помощью сэндвич-гибридизации нуклеиновых кислот .
Цель изобретени  - упрощение способа .
Упрощение способа обеспечиваетс  за счет того, что контактирование пробы осуществл ют одновременно с реагентом нанесенным на нитроделлюлоJ О С
ЗУ, и с меченным I реагентом.
(
Способ подтверждаетс  следующими примерами.
Пример 1. Реагенты.
Выращивают аденовирус типа 2(АТСС VR-846 из KTL, т.е. National Publie Health Uhstitute Хальсинки), очищают и выдел ют ДНК далее будет называтьс  ) ДНК, переваривают с ВатНТ-ограничительным ферментом на четыре фрагмента. Из. этих четырех фрагментом два клонируют в BamHIcaum вектора pBR322 (ВКЬ). Затем бактериальный хоз ин (E.coli НБЮГ (К12) gal, pro, leu, hrs, hrm recA, str, F (полученный из KTL) трансформируют полученной плазмидной смесью. Из числа трансформированных бактериальных клонов выбирают те, которые наиболее веро тно содержат рекомби- нантную плазмидную ДНК, а именно стойкие к ампициллину и тетрадикли- ну клоны. Однако бактерии, содержащи рекомбинантную плазмидную ДНК, чувствительны к тетрациклину, поскольку сашпВатН находитс  в пределах тетра циклинового гена, и введение инород- ной ДНК в эту зону разрушает геи. Клоны, содержащие плазмиды, pBR322, KTL N E231 и Ad2D-pBR322, KTL-EH230, выращивают и очищают. Рекомбинантную плазмиду Adj D-pBR322 используют в качестве фильтра-реагента . Согласно изобретени  нет необходимости удал ть плазмидную последовательность , поскольку данна  проба не содержит последовательности pBR322. Дл  радиоактивного мечени  нуклеиновую кислоту отдел ют от pBR322-ДHK после вываривани  с Bamlil посредством электрофореза агарозного ,тела. С-фрагмент выдел ют из LGT-ara розы посредством экстракции фенолом или электроэлюировани  и концентрируют путем осаждени  этанолом.
Фиксаци  ДНК на фильтре.
0 5 0 0 r
0
Рекомбинантную плазмиду pBR322 денатурируют до одноцепной формы и обрабатывают 0,2 н. NaOH (5 мин, ), после чего ДНК охлаждают , перед переносом на фильтр нейтрализуют и ввод т пипеткой в раствор, среда 4 SSC на льду (,t5 М NaCl,. 0,015 М цитрат натри ). Фильтры (Schleicher и Shiill ВА85 нитроцеллюлоза ), тщательно смачивают в растворе 4 SSC (примерно 2 ч) до ввода ДНК. ДНК фиксируют на фильтре в разбавленном растворе (0,5-1,0 мкг/мл) путем всасывани  этого раствора через фильтр при слабом вакууме. Этот фильтр способен поглощать ДНК вплоть до 180 мкг/см. Используют концентрации ДНК в пределах от 0,5 мкг ДНК/ /2,5 см диаметра фильтра до 1,0 мкг/ /ДНК/0,7 см диаметра фильтра. После фильтрации ДНК фильтры промывают в 4«SSC, высушивают при комнатной температуре и прокаливают в вакуумной печи при в течение 2 ч.
Мечение радиоактивного фрагмента нуклеиновой кислоты.
Используемым дл  мечени  радиоактивным индикатором  вл етс  изотоп
J/2 с
I . Этот изотоп детектируют с использованием - т-счетчиков, которые наиболее до ступны дл  лабораторных применений. Период полураспада этого изотопа составл ет 60 дней, в результате чего срок использовани  меченых I реагентов составл ет примерно 4 мес.
Мечение Путем Nick-трансл ции.
В данной реакции ДНК становитс  радиоактивно меченой, когда раствор
содержит меченую изотопом I
/25
дезоксинуклеозидную трифосфатазу (dCTP) в качестве субстрата, в данном случае называемую 125i-d-CTP (радиоактивный центр, Амершам: -7 500 Ci/ммоль), При оптимальных услови х может быть достигнута удельна  активность 10 отсч/мин/мкг ДНК. Меченую ДНК очищают от нуклеотидов, оставшихс  в реакционной смеси, путем простой гель-фильтрации, например путем использовани  Биогел  РЗО (Биоради- активного).
Другие способы мечени .
Реагент (одноцепна  нуклеинова  кислота, продуцированна  MI3 тг -фа- гом) подвергают мечению путем химического иодировани , в котором актив
ный I ковалентно св зан с нуклеиновой кислотой.
В случае РНК-содержащего вируса клонирование фрагментов генома осуществл ют таким образом, что сначала получаетс  воспроизводима  копи  ДНК (с ДНК) вируса РНК посредством обратной транскриптазы, а затем посредством ДНК-полимеразы воспроизводитс  втора  цепь ДНК.
Проведение испытани .
Обработка пробы.
Микробную нуклеиновую кислоту,подвергаемую исследованиюi выдел ют из самого микроба, а также из зараженных клеток, после чего ее денатурируют до одноцепной формы. Вырусные геномы высвобождают путем обработки материала пробы 1%-ным додецилсуль- фатом натри  (SDS) и разрушают белки защищающие посредством К-обработки протеиназой (1 мг/мл, 37°С, 60 мин). Кроме того, бактериальные пробы разрушают с использованием обработки лизоцимом и этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЕДТА).
Если проба содержит большие количества в зкой высокомолекул рной клеточной ДНК, то с целью уменьшени  в зкости этой пробы воздействуют ультразвуком или путем продавливани  пробы несколько раз через тонкое отверстие .
Гибридизаци .
Гибридизацию осуществл ют, например , в 50%-ном формамиде (деионизи- рованный, выдержанный при - 20°С) в , раствор 1 Denhardt, содержа- 1ЦИЙ 1% SDS и 0,5 мг/мл ДНК (лососева  сперма или зобна  железа теленка), при 37 С и обычно в течение ночи (16- 20 ч). Выбранные дл  испытани  фильтры термостатируют в соответствующем сосуде, в который вводитс  смесь гибридизации , и начинаетс  гибридизаци  Эта смесь гибридизации содержит предварительно обработанную пробу, в ко торую вводитс  радиоактивна  нуклеинова  кислота (или кислоты) в качестве реагента, котора  денатурирована совместно с этой пробой путем кип чени  в течение 5 мин с последующим быстрым охлаждением при 0°С; концентрированные растворы формамида, SSC и Denhardt, которые ввод т пи- петкой в денатурированную и охлажденную смесь нуклеиновых кислот. После смешивани  смесь гибридизации ввод т
0
5
0
5
0
5
0
пипеткой на фильтры в сосуде гибридизации . После гибридизации фильтры осторожно промывают и в отдельности подвергают замеру в j--счетчике.
Детектирование аденовируса методом сэндвич-гибридизации (табл. I).
Среду гибридизации измер ют в испытательной пробирке, содержащей лишь фильтр и меченую нуклеиновую кислоту . в качестве реагента, без пробы. Среду гибридизации создают последовательност ми pBR322, наход щимис  в меченой нуклеиновой кислоте (реагента). Эти последовательности гибридизируют непосредственно с фильтром без участи  пробы. Фильтры, содержащие зобную железу теленка и не содержащие ДНК, используют в данном испытании как контрольные, показыва , на специфичность гибридизации и на уровень неспецифической среды, создаваемой, например, при недостаточной промывке.
В табл, 1 среду, обусловленную реагентами, отдел ют от срт, гибриди- зированных с фильтрами.
Мечена  нуклеинова  кислота в качестве реагента.
Adj-BamHl, С - фрагмент, очищенный , удельна  активность 90-10 отсч/ /мин/мкг (200000 отсч/мин I /реакци  ).
Гибридизаци ; 50%-ный формамид, 4KSSC. РастворDenhardt, содержащий 0,5 мг/мл ДНК спермы лосос  и 1% SDS, 37 С, 16 ч.
Промывка: 0,1% SSC, комнатна  температура, 40 мин.
Пробы: ДНК Аденовируса типа 2
(BRL).
Заражают аденовирусом типа 2 клетки Heha. Эти клетки затем разрушают путем обработки 1% SDS с последующим .вывариванием 1 мг/мл протеиназы-К- фермента (сигма) в течение 30 мин при 37°С. Перед денатурированием пробу пропускают через тонкое отверстие. Значени , приведенные в табл. I, были рассчитаны путем выделени  среды реагента, полученной при осуществлении аналогичной гибридизации, но без пробы.
Приме р 2. Детектирование РНК- вируса посредством сэндвич-гибридизации (табл. 2).
Используют модель РНК-вируса, а
именно штамм Semlike-Fores-t (прото- типный штамм, полученный в Лондонской школе гигиены и местной медицины ), который  вл етс  рдноцепочной РНК. Получают ДНК, которую клонируют в точку PstI- плаэмида pBR322. Ползгча- ют рекомбинантную плазмиду рКТНЗ12 KTL № ЕН232. Клон бактерий, содержащих эту плаэмиду, имеет длину, тавл ющую примерно 1400 нуклеотидов со структурной белковой частью, примерно от нуклеотида 200 до нуклеоти- да 1600, когда нумераци  ведетс  от начала структурных rerios. Дл  продуцировани  реагентов рекомбинантнзто плазмидную ДНК рКТНЗ12 обрабатывают с ограничительным ферментом EcoRI (BRL) (последовательность, происход ща  от вируса Semlike Forest, не содержит , точек распознавани  дл  фермента EcoRI), и эту линейно выт нутую плазмиду раздел ют на два фермента с использованием фермента Xhol (BRL). Точка распознавани  последнего расположена внутри вирусной последовательности Semlike-Forest. Фрагмент А EcoRI-Xhal большего размера (примерно 3900 основных пар) фиксируют на фильтре, и фрагмент В меньшего размера (примерно 1850 основных
подвергают мечению изотопом с использованием метода ник
пар)
1175
трансл ции. В данном испытании ис пользуют как свободный вирус SemliRe Forest, так и зараженные вирусом клетки, В обоих случа х специфические нуклеиновые кислоты вируса дан ной пробы состо т полностью из РНК.
Меченные нуклеиновые кислоты в качестве, реагентов EcoRI-XhoI - фрагмент В плазмида рКТНЗ12, удельна  активность 9040 отсч/мкг ДНК (200000 отсч/мин 1 реакци ).
Гибридизаци . Как описано в ; табл. 1.
Промывка. Как описано в табл. I.
Пробы. До проведени  испытани  вирус Semlike-Forest (30 мкг) разрушают посредством SDS. Зараженные клетки подвергают обработке, как ука зано в табл. 1. Заражение вирусом Semlike-Forest осуществл ют на клетках ВНК-2.
Данные, приведенные в табл. 2, рассчитывают с учетом среды реагента полученной при аналогичной гибридизации , без пробы.
П р и м е р 3. Проба вируса, в ко торой вирусный передатчик РНК детектируетс  посредством метода сэндвич- гибридизации (табл. 3).
- Реагенты сзндвич-гибридизации получают из ДНК вируса SV 40 (BRL) путем разделени  ДНК на две части с использованием Pstl-фермента. Эти фрагменты выдел ют и очищают посреди ством электрофореза на агарозном геле . Фрагмент А (4000 основных пар) подвергают радиоактивному мечению тем ник трансл ции 1 и фрагмент В (1220 основных пар) фиксируют на фильтре .
Фрагменты.ДНК выбирают таким образом , что каждый содержит гены, коди г рующие как ранние, так и поздние
передатчики инфекции. Так, например, фрагмент В содержит примерно 700 основных пар от структурного белкового гена VP1 и более 600 основных пар
20 от гена более ранних передатчиков инфекции. Поскольку ДНК вируса SV 40 сама по себе представл ет собой кольцо с ковалентной св зь о, то она не может быть детектирована в данном
25 испытании до линейного выравнивани . Следовательно, при использовании зараженных клеток в качестве пробы можно проверить, насколько предлагаемьм способ пригоден дл  детектировани  воспроизведенных молекул РНК вирусного генома. Как видно из результатов, приведенных в табл. 3, данное испыта- |Ние пригодно дп  исследовани  зараженных клеток. В табл. 3 также показано , что одни и те же реагенты используют дл  исследовани  как вирусной ДНК, так и полученной из нее m РНК (информационной РНК).
Мечена  нуклеинова  кислота, используема  в качестве реагента.
Более длинный А-фрагмент Pst ДНК вируса SV 40, удельна  активность 28-10 отсч/мкг ДНК (200.000 отсч/мин
лЛ 5
I реакци ).
Гибридизаци . Как описано в табл, 1. Продолжительность гибридизации 40 ч.
Промывка. Как оп.исано в табл. 1.
Пробы. Дп  вируса SV-40 (BRL) обрабатывают ограничительным ферментом EcoRI (BRL). Клетки С VI заражают вирусом SV 40 и собирают через 40 ч после заражени . Обработка пробы осуществл етс  как описано в табл. I. 55 Данные рассчитаны с учетом среды реагента, полученной при аналогичной гибридизации, осуществл емой без пробы.
30
35
40
45
50
Приме р 4. Детектирование Bacillus amyloliquefaciens посредством сэндвич-гибридизации.
Данные реагенты представл ют со- бой фрагменты с -амилазного гена В.amyloliquefaciens Е, 18, которые выдел ют дл  данного испытани  из рекомбинантной плазмиды рКТНЮ путем обработки ограничительным ферментом и последующего электрофореза агароз- ного гел . Фрагменты, используемые дл  данного испытани , представл ют собой фрагментные участки Clal-EcoRI о -амилазного гена (460 основных пар) (Clal Boehringer Mannheim) и фрагмент EcoRI BamHI (1500 основных пар). Фрагмент EcoRI-BamHI фиксируют на фильтре, и фрагмент Clal-EcoRl подвергают радиоактивному мечению изотопом I методом ник трансл ции .
Как видно из табл. 4, В.amyloliquefaciens в пробе идентифицируетс  путем сэндвич-гибридизации на основе одного о -амилазного гена. E.coli дает отрицательный результат в данном испытании (неотличим от среды).
Мечена  нуклеинова  кислота в ка- честве реагента.
Фрагмент Clal-EcoRI с -амилазного гена от плазмиды рКТНЮ, удельна  активность 35-10 отсч/мин/мкг (200000 отсч/мин I /реакци ).
Гибридизаци . Как описано в табл.1
Промывка. Как описано в табл. 1.
Пробы., Бактериальные пробы обрабатывают лизоцимом (67 мкг/мл) в течекие 30 мин при 37 С; в пробы E.coli ввод т также 5 ммоль ЕДТА. После такой обработки во все пробы ввод т SDS (до конечной концентрации 2%), затем их дважды пропускают через очень тонкое отверстие с целью сниже ки  в зкости, после чего их подвергают денатурированию путем кип чени , как описано в тексте, относ щемс  к обработке проб.
Данные, приведенные в табл. 4,
рассчитаны с учетом среды реагента, полученной при аналогичной гибридизации без пробы.
П р и м е р 5. Пример получени  системы комбинаций реагента на основе метода сэндвич-гибридизации (табл. 5).
Пробы, исследуемые в данном испытании , представл ют собой клетки.
0 5 0
5
о
О
5
0
5
зараженные трем  вирусами (аденовирус , вирус SV 40 и тетраплоидньй вирус Herpes, имеющий лишь один определенный детерминантньй ген) , и пробу, содержащую бактерии Bacillus amyloliquefaricus. В каждую пробу ввод т одновременно следующие реагенты: п ть фильтров, каждый из которых содержит один тип ДНК от вируса SV 40, аденовируса, о/-амилазного гена Bacillus amyloliquefaricus и зобной железы теленка, а также фильтр, не содержащий ДНК; кроме того , ввод т 200000 отсч/мин каждого из следующих меченых нуклеиновокис- лотных реагентов: ДНК - реагент вируса SV 40, аденовируса и о -амилазно- го гена.
Данный пример показывает, что можно без разделени  разбавленного раствора пробы исследовать одновременно соответствующие серии микробов путем ввода в пробу комбинации реагентов . Така  проба может содержать как вирусную, так и бактериальную нуклеиновую кислоту. Данные фильтры могут быть помечены определенным обозначением (марка, метка), котора  определ ет содержание в них реагентов и какой микроб фиксирован (гибридизи- рован) с ними. Эта метка может быть представлена в виде цифр или букв, например 1 или SV 40 2 или Ad и т.д., или могут быть прин ты другие обозначени , например -f дл  SV 40 или 3 дл  AD или О дл  Bacillus.
Меченые нуклеинокислотные реагенты . Вирус SV 40 как и в табл. 3. Аденовирус как и в табл. 1 . о -амилазный ген как и в табл. 4.
. Гибридизаци . Как в табл.1.
Промывка. Как в табл I.
Пробы. Клеточные пробы, зараженные вирусом SV 40 и аденовирусом, были описаны соответственно в табл.3 и 1.
Клетки Vero 10 заражают вирусом Herpes (тетраплоидом, имеющим лишь один определенный детерминантньй ген) типа 1. Клетки собирают через 20 ч после заражени , поскольку может иметь место фагоцитарньм эффект. Пробу обрабатывают таким же образом, как описано дл  клеток, зараженных аденовирусом (табл. I),
20
91386031
Проба Bacillus amyloliquefaciens. Как в табл, 4.
Данные, приведенные в табл, 5, рассчитаны с учетом среды реагента, полученной при осуществлении аналогичной гибридизации без пробы.
П р и м е р 6. Детектирование Escherichia coli путем сэндвич-гибридизации (табл. 6).to
Реагенты получают из отр-А-гена (А - ген наружного мембранного белка) Escherichia coli,
Гибридные плазмиды рКТНАО и рКТН45, используемые в качестве исходного материала, приготавливают из плазмиды pTUlOO.
Плазмиду рКТН45 (наход щуюс  на хранении как KTL, в институте Natio- nal Public Health Хельсинки, под номером ЕМ254),. используемую в качестве фильтра-реагента, состоит из 740 основных пар от 5 -концевого звена гена отрА, введенного в плазмид PBR322,
Плазмида рКТН40 содержит 300 основных пар от З -концевого звена гена отрА, после чего следует 1400 основных пар от генома E.coli, Плазмиду рКТН40 расщепл ют ограничительным ферментом BamHI до получени  фрагмента ДНК E,coii, который содержит 1700 основных пар, как указано выше. Этот фрагмент перенос т в одноцепной бактериофаг М13тр7. Рекомбинантный фаг КТН1207 (обозначаемьй как KTJj № ЕН256) подвергают мечению изотопом I и используют в качестве инди- катора в способе сзндвич-гибридизации .
ДНК от разрушенных клеток E.coli, а также выделенна  и очищенна  ДНК от клеток E.coli детектируют посредством сэндвич-гибридизации, как покапр
ну пр
от по за
5 Ф
25
30
35
40
ги вк ти с н м т а т к о н п э в т ч т
зано в табл. 6.
Меченые нуклеинокислотные реагенты m KTHI207, удельна  активность 8-10 отсч/мин/мкг ДНК (200000 отсч/ /мин/реакци ).
Гибридизаци . раствор IxDen- hardt без BSA (альбумин бычьей сыворотки , 0,25% SDS 200 мкг/мл ДНК спермы Herring 17,5 ч 65 С,
Промывка. Как описано в табл. 1.
Пробы. ДНК клеток E.coli К 12 НВ101 выдел ют, ДНК денатурируют
10
при концентрации 7 ммоль NaOH, при 100°С, 5 мин.
Клетки обрабатывают лизоцимом (500 мкг/мл), ЕДТА (70 ммоль, 37°С, 30 мин), SDS (0,25%, 65°С) и свободную ДНК денатурируют путем кип чени  при концентрации NaOH 14 ммоль, при 100°С, 5 мин.
Данные, представленные в табл, 6, откорректированы на среду реагента, полученную при аналогичной гибридизации , без пробы.

Claims (1)

  1. Формула изобретени 
    Способ идентификации вирусов и бактерий, основанный на сэндвич- гибридизации нуклеиновых кислот, включающий последовательное контактирование пробы нуклеиновой кислоты с нуклеиново-кислотным реагентом, нанесенным на твердьй носитель, и меченым нуклеиново-кислотным реагентом , с последующим радиоактивным, анализом, отличающийс  тем, что, с целью упрощени  способа, контактирование пробы осуществл ют одновременно с реагентом, нанесенным на твердый носитель, с последующей промывкой полученного гибрида, при этом дл  идентификации аденовирусов в качестве реагента, нанесенного на твердьй носитель, используют pBR322 размером 47000 п.р., а в качестве меченого реагента-фрагмент Adj BamHI размером 6200 п.о., дл  идентификации вируса Semiike-Forest - фрагмент EcoRI-XKoI размером 3900 п.о плазмиды рКТН312 и фрагмент EcoRI- Xhol плазмидь: рКТН312 размером 1850 п.о., дл  идентификаций вируса SV 40-PstI - фрагмент вируса SV 4,0 размером 1220 п.о. , дл  идентифика- ции бактерий Bacillus amyloliquefaciens - фрагменты EcoRI-BamHI пЛазми- дь1 рКТНЮ размером 1500 п.о. и Clal- EcoRI плазмиды pKTHlO размером 4600 п.6., дл  идентификации Escherichia coli - плазмиду рКЗ Н45 размером 740 п.о. и рекомбинантный фаг тКТН1207 размером 1700 п.о., дл  одновременной идентификации аденовирусов , SV 40, SimliKe-Forest, Bi amyloliquefaciens и E.coli используют все описанные выше реагенты одновременно .
    Т а б л и ц а 1 Испытание с аденовирусом
    2-ДНК аденовирусного
    типа (BRL)
    (500 нг)
    НеЬа-клет- ки (6-10), зараженные аденовирусом
    - pBR322 плазмиды, 2 мкг. ДНК зобной железы теленка, 1 мкг (Boehvinger Manheim). Холостое испытание (отсутствие ДНК).
    Таблица
    Детектирование вируса Semlike-Fo- rest посредством метода сэндвич- гибридизации
    Вирус Sem- like-Fo- rest 30 мкг
    Клетки,
    зараженные
    вирусом
    Semiike- Forest (5-10)
    Незараженные клетки
    Фрагмент А EcoRI-XhoI (1,2 мкг)
    плазмиды pKTH3i2.
    ДНК зобной железы теленка, 1 мкг. Холостое испытание (отсутствие
    ДНК).
    , 9000
    49
    8200
    3340
    33
    2698
    10
    10
    8
    Таблица 3
    Детектирование вируса SV 40 посредством сэндвич-гибридизации
    1
    20061
    159
    104
    (0,2 мкг) ДНК кольцевого вируса; SV-40, вываренный с Pstl - ограничительным ферментомлп ДНК зобной железы теленка, 1 мкг.
    Холостое испытание (отсутствие ДНК)
    Таблица4 Бактериальна  диагностика посредством сэндвич-гибридизации
    ДНК плаз- ми ды рКТНЮ (выт нута  в линию ) I мкг
    5773
    47
    Без пробы EcoRl-BamHI фрагмент о -амилаз- ного гена из плазмиды РКТНЮ, мкг. .ДНК зобной железы теленка, 1 мкг.
    vff tef.
    Холостое испытание (без ДНК).
    Клетки, зараженные вирусом SV 40
    (юМ
    Клетки, зараженные аденовирусом типа 2 (6-ГО)
    Клетки, зараженные вирусом Herpes (тетраплоидом)
    (юМ
    Bacillus amy- loliquefасiens
    Незараженные клетки
    Как описано в табл. 3.
    Как и в табл. 1 . Как и в табл. 4.
    ДНК зобной железы теленка, 1 мкг. . Холостое испытание (отсутствие ДНК).
    Табли Детектирование путем сэндвич-гибридизации
    ДНК от E.CDli К 12 НВ101 а) 2-10
    ДНК от E.coli К 12 НВ101 а) 2 -10
    ТаблицаЗ
    13
    22
    31
    8750
    13
    13
    6500
    16
    282
    2206
    Клетки E.coli К12НВ101 б) 2-10
    Клетки E.celi KI2HB101 б) 2 -108
    а)Р д молекул ДНК
    б)Р д клеток
    11лазмида рКТН45, 1,088 мкг (2 молекул), ДНК зобной железы теленка, 1,088 мкг.
    Холостое испытание (отсутствие ДНК)
    II 13
    2327
    12
SU833663405A 1981-10-16 1983-11-15 Способ идентификации вирусов и бактерий SU1386031A3 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI813251A FI63596C (fi) 1981-10-16 1981-10-16 Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1386031A3 true SU1386031A3 (ru) 1988-03-30

Family

ID=8514776

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU833663405A SU1386031A3 (ru) 1981-10-16 1983-11-15 Способ идентификации вирусов и бактерий

Country Status (13)

Country Link
US (2) US4486539A (ru)
EP (2) EP0098267A1 (ru)
JP (2) JPS58501703A (ru)
AT (1) ATE31735T1 (ru)
AU (1) AU548854B2 (ru)
CA (1) CA1192120A (ru)
DE (2) DE79139T1 (ru)
DK (1) DK173744B1 (ru)
FI (1) FI63596C (ru)
HU (1) HU196242B (ru)
RO (1) RO86356B (ru)
SU (1) SU1386031A3 (ru)
WO (1) WO1983001459A1 (ru)

Families Citing this family (340)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI63596C (fi) * 1981-10-16 1983-07-11 Orion Yhtymae Oy Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser
US5288611A (en) * 1983-01-10 1994-02-22 Gen-Probe Incorporated Method for detecting, identifying, and quantitating organisms and viruses
US5723597A (en) * 1983-01-10 1998-03-03 Gen-Probe Incorporated Ribosomal nucleic acid probes for detecting organisms or groups of organisms
US5567587A (en) * 1983-01-10 1996-10-22 Gen-Probe Incorporated Method for detecting, the presence and amount of prokaryotic organisms using specific rRNA subsequences as probes
US4689295A (en) * 1983-01-20 1987-08-25 Integrated Genetics, Inc. Test for Salmonella
US4994373A (en) 1983-01-27 1991-02-19 Enzo Biochem, Inc. Method and structures employing chemically-labelled polynucleotide probes
US4948882A (en) * 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
EP0135587B2 (en) * 1983-02-22 2002-12-18 Syngene, Inc. Defined sequence single strand oligonucleotides incorporating reporter groups, process for the chemical synthesis thereof, and nucleosides useful in such synthesis
IL71064A (en) * 1983-02-28 1989-10-31 Lifecodes Corp Paternity and forensic test involving analysis of dna polymorphic genetic regions
US5593832A (en) * 1983-02-28 1997-01-14 Lifecodes Corporation Method for forensic analysis
CA1228811A (en) 1983-05-05 1987-11-03 Robert G. Pergolizzi Assay method utilizing polynucleotide sequences
CA1222680A (en) * 1983-07-05 1987-06-09 Nanibhushan Dattagupta Testing dna samples for particular nucleotide sequences
US4959309A (en) * 1983-07-14 1990-09-25 Molecular Diagnostics, Inc. Fast photochemical method of labelling nucleic acids for detection purposes in hybridization assays
US4737454A (en) * 1983-07-14 1988-04-12 Molecular Diagnostics, Inc. Fast photochemical method of labelling nucleic acids for detection purposes in hybridization assays
CA1231303A (en) * 1983-08-05 1988-01-12 Robert J. Carrico Detection of bacteria by nucleic acid hybridization
US5539097A (en) * 1983-09-02 1996-07-23 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide polymeric support system
JPS6091999A (ja) * 1983-10-25 1985-05-23 Fujirebio Inc ポリヌクレオチドの測定方法
GB8331071D0 (en) * 1983-11-22 1983-12-29 Karayiannis P Assay for dna/rna
US4724202A (en) * 1983-12-12 1988-02-09 Molecular Diagnostics, Inc. Use of non-hybridizable nucleic acids for the detection of nucleic acid hybridization
IL73577A (en) * 1983-12-12 1989-10-31 Miles Lab Method and reagent system for detecting dna or rna sequences in a test medium containing single stranded dna or rna using antibodies to intercalation complexes with double stranded nucleic acid
US4777129A (en) * 1983-12-12 1988-10-11 Molecular Diagnostics, Inc. Nucleic acid probe detectable by specific nucleic acid binding protein
US4849208A (en) * 1984-01-30 1989-07-18 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method of preparation and use
US4843122A (en) * 1984-01-30 1989-06-27 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method of preparation and use
US4707440A (en) * 1984-01-30 1987-11-17 Enzo Biochem, Inc. Nucleic acid hybridization assay and detectable molecules useful in such assay
US4943523A (en) * 1984-01-30 1990-07-24 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method of preparation and use
US5002885A (en) * 1984-01-30 1991-03-26 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method preparation and use
US4849505A (en) * 1984-01-30 1989-07-18 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method of preparation and use
FI71768C (fi) * 1984-02-17 1987-02-09 Orion Yhtymae Oy Foerbaettrade nykleinsyrareagenser och foerfarande foer deras framstaellning.
CA1223222A (en) * 1984-02-22 1987-06-23 Nanibhushan Dattagupta Immobilized nucleic acid-containing probes
DE3583640D1 (de) * 1984-04-05 1991-09-05 Florey Howard Inst Hybridisierungs-histochemie.
CA1260372A (en) * 1984-04-27 1989-09-26 Elazar Rabbani Hybridization method for the detection of genetic materials
US5288609A (en) * 1984-04-27 1994-02-22 Enzo Diagnostics, Inc. Capture sandwich hybridization method and composition
US6221581B1 (en) * 1984-04-27 2001-04-24 Enzo Diagnostics, Inc. Processes for detecting polynucleotides, determining genetic mutations or defects in genetic material, separating or isolating nucleic acid of interest from samples, and useful compositions of matter and multihybrid complex compositions
US4766064A (en) * 1984-05-07 1988-08-23 Allied Corporation Displacement polynucleotide assay employing polyether and diagnostic kit
US4766062A (en) * 1984-05-07 1988-08-23 Allied Corporation Displacement polynucleotide assay method and polynucleotide complex reagent therefor
US4670380A (en) * 1984-05-23 1987-06-02 Molecular Diagnostics, Inc. Assays utilizing labeled nucleic acid probes
US5132206A (en) * 1984-06-11 1992-07-21 Dreyer William J Fluorescent pigments for tagging biological molecules
US4749647A (en) * 1984-06-22 1988-06-07 Genetic Systems Corporation Polymerization-induced separation assay using recognition pairs
FR2567541B1 (fr) * 1984-07-13 1987-02-06 Pasteur Institut Sonde d'adn et procede pour la detection de " shigelles " et des souches entero-invasives de escherichia coli
US4755458A (en) * 1984-08-30 1988-07-05 Enzo Biochem, Inc. Composition and method for the detection of the presence of a polynucleotide sequence of interest
US4563417A (en) * 1984-08-31 1986-01-07 Miles Laboratories, Inc. Nucleic acid hybridization assay employing antibodies to intercalation complexes
US5955261A (en) * 1984-09-04 1999-09-21 Gen-Probe Incorporated Method for detecting the presence of group-specific viral mRNA in a sample
US4775619A (en) * 1984-10-16 1988-10-04 Chiron Corporation Polynucleotide determination with selectable cleavage sites
US5430136A (en) * 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US4820630A (en) * 1984-11-23 1989-04-11 Digene Diagnostics, Incorporated Assay for nucleic acid sequences, particularly genetic lesions, using interactive labels
US4734363A (en) * 1984-11-27 1988-03-29 Molecular Diagnostics, Inc. Large scale production of DNA probes
US5242794A (en) * 1984-12-13 1993-09-07 Applied Biosystems, Inc. Detection of specific sequences in nucleic acids
US4883750A (en) * 1984-12-13 1989-11-28 Applied Biosystems, Inc. Detection of specific sequences in nucleic acids
GB2179448B (en) * 1984-12-19 1989-06-07 Blair Malcolm A D Improved sandwich hybridisation technique for the detection of nucleotide sequences
GB8432118D0 (en) * 1984-12-19 1985-01-30 Malcolm A D B Sandwich hybridisation technique
US4670379A (en) * 1984-12-19 1987-06-02 E. I. Du Pont De Nemours And Company Polynucleotide hydridization assays employing catalyzed luminescence
FI72146C (fi) * 1985-01-02 1987-04-13 Orion Yhtymae Oy Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror.
US4785086A (en) * 1985-01-17 1988-11-15 Integrated Genetics, Inc. Test for Campylobacter
US5851767A (en) * 1985-03-04 1998-12-22 The Regents Of The University Of California Detection of prokaryotic organism by DNA hybridization
US4792519A (en) * 1985-03-05 1988-12-20 International Technology Corporation Method for the monitoring and control of microbial populations
US5217866A (en) * 1985-03-15 1993-06-08 Anti-Gene Development Group Polynucleotide assay reagent and method
US5470974A (en) * 1985-03-15 1995-11-28 Neu-Gene Development Group Uncharged polynucleotide-binding polymers
US6197563B1 (en) 1985-03-28 2001-03-06 Roche Molecular Systems, Inc. Kits for amplifying and detecting nucleic acid sequences
US6040166A (en) 1985-03-28 2000-03-21 Roche Molecular Systems, Inc. Kits for amplifying and detecting nucleic acid sequences, including a probe
EP0200113A3 (en) * 1985-04-30 1987-03-18 Pandex Laboratories, Inc. A method of solid phase nucleic acid hybridization assay incorporating a luminescent label
ES8707343A1 (es) * 1985-06-13 1987-07-16 Amgen Un metodo para aislar una secuencia de acido nucleico objetivo seleccionada
US4751177A (en) * 1985-06-13 1988-06-14 Amgen Methods and kits for performing nucleic acid hybridization assays
US5641630A (en) * 1985-06-13 1997-06-24 Amgen Inc. Method and kit for performing nucleic acid hybridization assays
US5273882A (en) * 1985-06-13 1993-12-28 Amgen Method and kit for performing nucleic acid hybridization assays
AU558846B2 (en) * 1985-06-21 1987-02-12 Miles Laboratories Inc. Solid-phase hydridization assay using anti-hybrid antibodies
US4831125A (en) * 1985-07-01 1989-05-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company DNA probe for corynebacterium kutscheri
US4824776A (en) * 1985-07-25 1989-04-25 Molecular Biosystems, Inc. Method for increasing the sensitivity of nucleic acid hybridization assays
US5155216A (en) * 1985-08-15 1992-10-13 Amoco Corporation Nucleic acids labeled with a chemiluminescent acridine ester
US4868104A (en) * 1985-09-06 1989-09-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Homogeneous assay for specific polynucleotides
US5595908A (en) * 1985-09-26 1997-01-21 University Of Southern Mississipi Piezoelectric device for detection of polynucleotide hybridization
EP0244471A4 (en) * 1985-10-24 1988-01-28 Siska Diagnostics Inc NUCLEIC ACID SAMPLES MARKED WITH LANTHANIDE CHELATE.
US5258283A (en) * 1985-11-05 1993-11-02 Battelle Memorial Institute Detection and differentiation of coxiella burnetii in biological fluids
US4876186A (en) * 1985-11-05 1989-10-24 Battelle Development Corporation Detection and differentiation of coxiella burnetii in biological fluids
JPS63502477A (ja) * 1985-12-03 1988-09-22 エル・ギユ−リイ・エム・ラフアツト 病気診断のための方法、装置および製品
US4910300A (en) * 1985-12-11 1990-03-20 Chiron Corporation Method for making nucleic acid probes
US4868105A (en) * 1985-12-11 1989-09-19 Chiron Corporation Solution phase nucleic acid sandwich assay
US4882269A (en) * 1985-12-13 1989-11-21 Princeton University Amplified hybridization assay
JP3293820B2 (ja) * 1985-12-13 2002-06-17 エンゾ− バイオケム インコ−ポレイテツド 標的ポリヌクレオチドにハイブリツド形成するための新規な一工程方法とポリヌクレオチド化合物
FI76119C (fi) * 1986-02-27 1988-09-09 Orion Yhtymae Oy Kvantitativ bestaemning av nukleinsyramolekyler och reagensfoerpackning som anvaends vid foerfarandet.
US4968602A (en) * 1986-03-05 1990-11-06 Molecular Diagnostics, Inc. Solution-phase single hybridization assay for detecting polynucleotide sequences
US4925785A (en) * 1986-03-07 1990-05-15 Biotechnica Diagnostics, Inc. Nucleic acid hybridization assays
US5242823A (en) * 1986-03-07 1993-09-07 International Genetic Engineering, Inc. Cloning of the 38kd Mycoplasma hyorhinis regression-associated antigen
EP0250662B1 (en) * 1986-06-25 1994-08-24 The Regents Of The University Of California Detection of mycoplasma by DNA hybridization
JP2534529B2 (ja) * 1986-07-24 1996-09-18 ブリティシュ・テレコミュニケ−ションズ・パブリック・リミテッド・カンパニ 放射発生器
DE3785658T2 (de) * 1986-08-11 1993-08-12 Siska Diagnostics Inc Methoden und zusammensetzungen fuer tests mit nukleinsaeuresonden.
US5849478A (en) * 1986-08-14 1998-12-15 Cashman; Daniel P. Blocked-polymerase polynucleotide immunoassay method and kit
US4917999A (en) * 1986-09-02 1990-04-17 Miles Inc. Oligonucleotide probes for detection of α-amylase genes
US5714380A (en) 1986-10-23 1998-02-03 Amoco Corporation Closed vessel for isolating target molecules and for performing amplification
US7087742B1 (en) 1986-11-24 2006-08-08 Gen-Probe Incorporated Oligonucleotide probes for the detection and/or quantitation of non-viral organisms
US6150517A (en) 1986-11-24 2000-11-21 Gen-Probe Methods for making oligonucleotide probes for the detection and/or quantitation of non-viral organisms
US7138516B1 (en) 1986-11-24 2006-11-21 Gen-Probe Incorporated Oligonucleotide probes for the detection and/or quantitation of non-viral organisms
US5541308A (en) * 1986-11-24 1996-07-30 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes for detection and/or quantitation of non-viral organisms
US5994059A (en) * 1986-11-24 1999-11-30 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes and methods for detecting Streptomyces enterococci
US4946786A (en) * 1987-01-14 1990-08-07 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US5266466A (en) * 1987-01-14 1993-11-30 President And Fellows Of Harvard College Method of using T7 DNA polymerase to label the 3' end of a DNA molecule
US4942130A (en) * 1987-01-14 1990-07-17 President & Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US5145776A (en) * 1987-01-14 1992-09-08 President & Fellows Of Harvard College Method of using T7 DNA polymerase to mutagenize and fill-in DNA
US4994372A (en) * 1987-01-14 1991-02-19 President And Fellows Of Harvard College DNA sequencing
US4795699A (en) * 1987-01-14 1989-01-03 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US5599667A (en) * 1987-03-02 1997-02-04 Gen-Probe Incorporated Polycationic supports and nucleic acid purification separation and hybridization
AU622104B2 (en) * 1987-03-11 1992-04-02 Sangtec Molecular Diagnostics Ab Method of assaying of nucleic acids, a reagent combination and kit therefore
US6270961B1 (en) * 1987-04-01 2001-08-07 Hyseq, Inc. Methods and apparatus for DNA sequencing and DNA identification
CA1317860C (en) * 1987-04-01 1993-05-18 Daniel Louis Kacian Techniques for preparing specimens for bacterial assays
US5225324A (en) * 1987-04-24 1993-07-06 Bioscience International, Inc. Diagnostics for mycobacteria in public health, medical, and veterinary practice
GB8709803D0 (en) * 1987-04-24 1987-05-28 Mcfadden J J Treatment of crohn's disease &c
US4994368A (en) 1987-07-23 1991-02-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Amplification method for polynucleotide assays
US5273879A (en) * 1987-07-23 1993-12-28 Syntex (U.S.A.) Inc. Amplification method for polynucleotide assays
DE3851810T2 (de) * 1987-07-31 1995-02-09 Gen Probe Inc Polynukleotidentest unter Benutzung von Oligonukleotiden zur Eliminierung von unerwünschten Kreuzreaktionen.
US5089386A (en) * 1987-09-11 1992-02-18 Gene-Trak Systems Test for listeria
US5359100A (en) * 1987-10-15 1994-10-25 Chiron Corporation Bifunctional blocked phosphoramidites useful in making nucleic acid mutimers
US5656731A (en) * 1987-10-15 1997-08-12 Chiron Corporation Nucleic acid-amplified immunoassay probes
AU2714988A (en) * 1987-10-23 1989-06-01 Siska Diagnostics, Inc. Lanthanide chelate-tagged nucleic acid probes
US6013531A (en) * 1987-10-26 2000-01-11 Dade International Inc. Method to use fluorescent magnetic polymer particles as markers in an immunoassay
US6348332B1 (en) 1987-11-24 2002-02-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill DNA molecule encoding gonorrhoeal hybrid PIA/PIB protein
CA1340506C (en) * 1987-11-24 1999-04-20 Nicholas H. Carbonetti Production of gonorrheal pi proteins and vaccines
ATE133454T1 (de) * 1987-12-01 1996-02-15 Amoco Corp Nachweis von salmonella
US5354657A (en) * 1988-01-12 1994-10-11 Boehringer Mannheim Gmbh Process for the highly specific detection of nucleic acids in solid
GB8810400D0 (en) 1988-05-03 1988-06-08 Southern E Analysing polynucleotide sequences
US20050019760A1 (en) * 1988-03-05 2005-01-27 Oxford Gene Technology Limited Analysing polynucleotide sequences
US7811751B2 (en) 1988-05-03 2010-10-12 Oxford Gene Technology Limited Analysing polynucleotide sequences
US5700637A (en) * 1988-05-03 1997-12-23 Isis Innovation Limited Apparatus and method for analyzing polynucleotide sequences and method of generating oligonucleotide arrays
US6054270A (en) * 1988-05-03 2000-04-25 Oxford Gene Technology Limited Analying polynucleotide sequences
US5024933A (en) * 1988-05-10 1991-06-18 Enzo Biochem, Inc. Method and kit for sample adherence to test substrate
ATE114726T1 (de) * 1988-05-10 1994-12-15 Du Pont Verfahren zum schnellen nachweis von nukleinsäuren.
US5294533A (en) * 1988-07-05 1994-03-15 Baylor College Of Medicine Antisense oligonucleotide antibiotics complementary to the macromolecular synthesis operon, methods of treating bacterial infections and methods for identification of bacteria
US5047523A (en) * 1988-08-02 1991-09-10 Ortho Diagnostic Systems Inc. Nucleic acid probe for detection of neisseria gonorrhoea
US5185243A (en) * 1988-08-25 1993-02-09 Syntex (U.S.A.) Inc. Method for detection of specific nucleic acid sequences
WO1990006372A1 (en) * 1988-12-01 1990-06-14 Microprobe Corporation Substrates for peroxidase assaying
US7172863B1 (en) 1988-12-09 2007-02-06 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes and methods for detecting Neisseria gonorrhoeae
US5324829A (en) * 1988-12-16 1994-06-28 Ortho Diagnostic Systems, Inc. High specific activity nucleic acid probes having target recognition and signal generating moieties
CA2005927A1 (en) * 1988-12-21 1990-06-21 Chander Bahl Method of preparing nucleotide probes using a bridging complement
US5237016A (en) * 1989-01-05 1993-08-17 Siska Diagnostics, Inc. End-attachment of oligonucleotides to polyacrylamide solid supports for capture and detection of nucleic acids
US5514550A (en) * 1989-02-03 1996-05-07 Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. Nucleic acid test article and its use to detect a predetermined nucleic acid
CA2009708A1 (en) * 1989-02-13 1990-08-13 Jane D. Madonna Nucleic acid probe for the detection of salmonella human pathogens
US5856092A (en) * 1989-02-13 1999-01-05 Geneco Pty Ltd Detection of a nucleic acid sequence or a change therein
US5049489A (en) * 1989-04-17 1991-09-17 The Standard Oil Company 16S rRNA oligonucleotide probes for the identification of sulfate-reducing bacteria
US6551784B2 (en) 1989-06-07 2003-04-22 Affymetrix Inc Method of comparing nucleic acid sequences
US5800992A (en) 1989-06-07 1998-09-01 Fodor; Stephen P.A. Method of detecting nucleic acids
US5744101A (en) * 1989-06-07 1998-04-28 Affymax Technologies N.V. Photolabile nucleoside protecting groups
US6955915B2 (en) * 1989-06-07 2005-10-18 Affymetrix, Inc. Apparatus comprising polymers
US6040138A (en) * 1995-09-15 2000-03-21 Affymetrix, Inc. Expression monitoring by hybridization to high density oligonucleotide arrays
US6919211B1 (en) * 1989-06-07 2005-07-19 Affymetrix, Inc. Polypeptide arrays
US5143854A (en) 1989-06-07 1992-09-01 Affymax Technologies N.V. Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof
US6379895B1 (en) 1989-06-07 2002-04-30 Affymetrix, Inc. Photolithographic and other means for manufacturing arrays
US5925525A (en) * 1989-06-07 1999-07-20 Affymetrix, Inc. Method of identifying nucleotide differences
EP0405592A3 (en) * 1989-06-30 1991-07-17 Sanyo Chemical Industries Ltd. A method for detection of nucleic acid and reagents for their detection
US5106730A (en) * 1989-07-24 1992-04-21 Microprobe Corporation Lactam-containing compositions and methods useful for the hybridization of nucleic acids
US5232829A (en) * 1989-09-29 1993-08-03 Hoffmann-La Roche Inc. Detection of chlamydia trachomatis by polymerase chain reaction using biotin labelled lina primers and capture probes
CA2028012A1 (en) * 1989-10-23 1991-04-24 Randall Dimond Hybridization assay for campylobacter rrna
GB8924989D0 (en) * 1989-11-06 1989-12-28 Scotgen Ltd Method and device for the detection of antibiotic resistance
JP2589618B2 (ja) * 1989-12-14 1997-03-12 デイド、インターナショナル、インコーポレイテッド 磁気応答性螢光ポリマー粒子及びその利用
CA2032203C (en) * 1989-12-29 2009-05-19 Christine L. Brakel Amplification capture assay
US5721097A (en) * 1990-02-02 1998-02-24 N. V. Innogenetics S.A. Hybridization probes for the detection of branhamella catarrhalis strains
AU7188491A (en) * 1990-02-02 1991-08-21 N.V. Innogenetics S.A. Hybridization probes for the detection of (branhamella catarrhalis) strains
US6013431A (en) * 1990-02-16 2000-01-11 Molecular Tool, Inc. Method for determining specific nucleotide variations by primer extension in the presence of mixture of labeled nucleotides and terminators
US5200314A (en) * 1990-03-23 1993-04-06 Chiron Corporation Polynucleotide capture assay employing in vitro amplification
AU7429591A (en) * 1990-04-18 1991-10-24 Gene-Trak Systems Nucleic acid probes for the detection of giardia lamblia
HUT64623A (en) * 1990-05-04 1994-01-28 Chiron Corp Protein and nucleinic acid samples and immunic essays containing them
US5670316A (en) * 1990-05-07 1997-09-23 Daikin Industries, Ltd. Diagnostic applications of double D-loop formation
US5232830A (en) * 1990-05-11 1993-08-03 Microprobe Corporation Intrinsic fluorescent quenching methods
US5695926A (en) * 1990-06-11 1997-12-09 Bio Merieux Sandwich hybridization assays using very short capture probes noncovalently bound to a hydrophobic support
WO1992001471A1 (en) * 1990-07-24 1992-02-06 The Uab Research Foundation Methods of use of bovine respiratory syncytial virus recombinant dna, proteins vaccines, antibodies, and transformed cells
US6730305B1 (en) 2000-05-08 2004-05-04 The Uab Research Foundation Nucleotide sequences encoding bovine respiratory syncytial virus immunogenic proteins
IL99025A0 (en) * 1990-08-15 1992-07-15 Astra Ab Novel process for the detection of pathogens using dna probes
WO1992008808A1 (en) * 1990-11-14 1992-05-29 Siska Diagnostics, Inc. Non-isotopic detection of nucleic acids using a polystyrene support-based sandwich hybridization assay and compositions useful therefor
WO1992010588A1 (en) * 1990-12-06 1992-06-25 Affymax Technologies N.V. Sequencing by hybridization of a target nucleic acid to a matrix of defined oligonucleotides
USH1398H (en) * 1990-12-28 1995-01-03 Campbell; James R. DNA-based fluourescent sensor
EP0497464A1 (en) * 1991-01-31 1992-08-05 Amoco Corporation Rapid microbial diagnostics by in situ hybridization in aqueous suspension
ES2108109T3 (es) * 1991-02-14 1997-12-16 Dade Microscan Inc Nuevos oligonucleotidos conjugados con quelatos de lantanidos.
US6004744A (en) 1991-03-05 1999-12-21 Molecular Tool, Inc. Method for determining nucleotide identity through extension of immobilized primer
EP0533952A4 (en) * 1991-04-15 1993-07-07 Sumitomo Electric Industries, Ltd. Process for separating or extracting nucleic acid from specimen containing the same
US5556748A (en) * 1991-07-30 1996-09-17 Xenopore Corporation Methods of sandwich hybridization for the quantitative analysis of oligonucleotides
ATE161586T1 (de) 1991-10-11 1998-01-15 Behringwerke Ag Verfahren zur herstellung eines polynukleotids zum gebrauch in ''single-primer'' amplifizierung und phosphorothioat-enthaltende oligonukleotide als primer in nukleinsäureamplifizierung
US5612199A (en) * 1991-10-11 1997-03-18 Behringwerke Ag Method for producing a polynucleotide for use in single primer amplification
US6652808B1 (en) * 1991-11-07 2003-11-25 Nanotronics, Inc. Methods for the electronic assembly and fabrication of devices
US6051380A (en) * 1993-11-01 2000-04-18 Nanogen, Inc. Methods and procedures for molecular biological analysis and diagnostics
US5605662A (en) 1993-11-01 1997-02-25 Nanogen, Inc. Active programmable electronic devices for molecular biological analysis and diagnostics
US6017696A (en) 1993-11-01 2000-01-25 Nanogen, Inc. Methods for electronic stringency control for molecular biological analysis and diagnostics
US5849486A (en) 1993-11-01 1998-12-15 Nanogen, Inc. Methods for hybridization analysis utilizing electrically controlled hybridization
US6048690A (en) * 1991-11-07 2000-04-11 Nanogen, Inc. Methods for electronic fluorescent perturbation for analysis and electronic perturbation catalysis for synthesis
US5632957A (en) * 1993-11-01 1997-05-27 Nanogen Molecular biological diagnostic systems including electrodes
US6569382B1 (en) 1991-11-07 2003-05-27 Nanogen, Inc. Methods apparatus for the electronic, homogeneous assembly and fabrication of devices
ES2049618B1 (es) * 1991-11-13 1994-11-01 Consejo Superior Investigacion Metodo de diagnostico y clasificacion de especies de trypanosoma cruzi.
WO1993020234A1 (en) * 1992-03-31 1993-10-14 E.I. Du Pont De Nemours And Company A rapid, high capacity nucleic acid based assay
US6100099A (en) 1994-09-06 2000-08-08 Abbott Laboratories Test strip having a diagonal array of capture spots
DE4212555A1 (de) * 1992-04-15 1993-10-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zum Nachweis von Nukleinsäuren
US5543292A (en) * 1992-06-16 1996-08-06 Hitachi, Ltd. Process for the measurement of nucleic acids
DK0652973T3 (da) * 1992-07-31 1997-09-15 Behringwerke Ag Fremgangsmåde til indføring af definerede sekvenser ved 3-enden af polynukleotider
US7713528B1 (en) 1993-02-18 2010-05-11 Enzo Therapeutics, Inc. Method for in vivo delivery of active compounds using reagent conjugate
US6294323B1 (en) 1993-04-14 2001-09-25 Behringwerke Ag Self initiating single primer amplification of nucleic acids
EP0701629B1 (en) * 1993-05-28 2006-08-02 Mount Sinai School of Medicine of New York University Bc200 rna, probes therefor and use thereof
DE4344742A1 (de) * 1993-06-09 1994-12-15 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur Immobilisierung von Nukleinsäuren
US5532122A (en) * 1993-10-12 1996-07-02 Biotraces, Inc. Quantitation of gamma and x-ray emitting isotopes
US5854084A (en) 1996-07-12 1998-12-29 Biotraces, Inc. Enhanced chromatography using multiphoton detection
US6225059B1 (en) 1993-11-01 2001-05-01 Nanogen, Inc. Advanced active electronic devices including collection electrodes for molecular biological analysis and diagnostics
US7314708B1 (en) * 1998-08-04 2008-01-01 Nanogen, Inc. Method and apparatus for electronic synthesis of molecular structures
US6287517B1 (en) 1993-11-01 2001-09-11 Nanogen, Inc. Laminated assembly for active bioelectronic devices
US6309602B1 (en) 1993-11-01 2001-10-30 Nanogen, Inc. Stacked, reconfigurable system for electrophoretic transport of charged materials
US6254827B1 (en) 1993-11-01 2001-07-03 Nanogen, Inc. Methods for fabricating multi-component devices for molecular biological analysis and diagnostics
US6375899B1 (en) 1993-11-01 2002-04-23 Nanogen, Inc. Electrophoretic buss for transport of charged materials in a multi-chamber system
US7172864B1 (en) 1993-11-01 2007-02-06 Nanogen Methods for electronically-controlled enzymatic reactions
US20040077074A1 (en) * 1993-11-01 2004-04-22 Nanogen, Inc. Multi-chambered analysis device
US6319472B1 (en) 1993-11-01 2001-11-20 Nanogen, Inc. System including functionally separated regions in electrophoretic system
US6331274B1 (en) 1993-11-01 2001-12-18 Nanogen, Inc. Advanced active circuits and devices for molecular biological analysis and diagnostics
US6726880B1 (en) 1993-11-01 2004-04-27 Nanogen, Inc. Electronic device for performing active biological operations and method of using same
US7582421B2 (en) * 1993-11-01 2009-09-01 Nanogen, Inc. Methods for determination of single nucleic acid polymorphisms using a bioelectronic microchip
US7101661B1 (en) 1993-11-01 2006-09-05 Nanogen, Inc. Apparatus for active programmable matrix devices
US6638482B1 (en) 1993-11-01 2003-10-28 Nanogen, Inc. Reconfigurable detection and analysis apparatus and method
US6315953B1 (en) * 1993-11-01 2001-11-13 Nanogen, Inc. Devices for molecular biological analysis and diagnostics including waveguides
US6068818A (en) * 1993-11-01 2000-05-30 Nanogen, Inc. Multicomponent devices for molecular biological analysis and diagnostics
KR100230909B1 (ko) * 1993-11-29 1999-12-01 다니엘 엘. 캐시앙 광범위의 유기체로부터 핵산 추출 방법
DE69506393T2 (de) * 1994-04-04 1999-07-01 Ciba Corning Diagnostics Corp Hybridisation-ligitation-verfahren zum nachweis von spezifischen dns sequenzen
US7323298B1 (en) 1994-06-17 2008-01-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Microarray for determining the relative abundances of polynuceotide sequences
US7378236B1 (en) 1994-06-17 2008-05-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method for analyzing gene expression patterns
US5807522A (en) * 1994-06-17 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for fabricating microarrays of biological samples
US7857957B2 (en) * 1994-07-07 2010-12-28 Gamida For Life B.V. Integrated portable biological detection system
US6379897B1 (en) * 2000-11-09 2002-04-30 Nanogen, Inc. Methods for gene expression monitoring on electronic microarrays
US6403367B1 (en) 1994-07-07 2002-06-11 Nanogen, Inc. Integrated portable biological detection system
US5545527A (en) * 1994-07-08 1996-08-13 Visible Genetics Inc. Method for testing for mutations in DNA from a patient sample
US8236493B2 (en) 1994-10-21 2012-08-07 Affymetrix, Inc. Methods of enzymatic discrimination enhancement and surface-bound double-stranded DNA
CA2163393C (en) * 1994-11-30 2003-04-22 Colleen Marie Nycz Amplification and detection of mycobacteria nucleic acids
US5783387A (en) * 1995-02-06 1998-07-21 The Regents Of The University Of California Method for identifying and quantifying nucleic acid sequence aberrations
US5731153A (en) * 1996-08-26 1998-03-24 The Regents Of The University Of California Identification of random nucleic acid sequence aberrations using dual capture probes which hybridize to different chromosome regions
US5610023A (en) * 1995-03-31 1997-03-11 Lee Laboratories, Inc. Method of purification of clostridium difficile toxin A and production of mono-specific antibodies
US5783453A (en) * 1995-06-29 1998-07-21 Chiron Diagnostics Corporation Non-separation specific binding chemiluminescent assay
US5616465A (en) * 1995-08-09 1997-04-01 The Regents Of The University Of California Detection and isolation of nucleic acid sequences using competitive hybridization probes
US6027879A (en) * 1995-08-09 2000-02-22 The Regents Of The University Of California Detection and isolation of nucleic acid sequences using a bifunctional hybridization probe
US5770365A (en) * 1995-08-25 1998-06-23 Tm Technologies, Inc. Nucleic acid capture moieties
US20040086917A1 (en) * 1995-09-27 2004-05-06 Nanogen, Inc. Methods for electronic fluorescent perturbation for analysis and electronic perturbation catalysis for synthesis
EP0880598A4 (en) * 1996-01-23 2005-02-23 Affymetrix Inc RAPID EVALUATION OF NUCLEIC ACID ABUNDANCE DIFFERENCE, WITH A HIGH-DENSITY OLIGONUCLEOTIDE SYSTEM
WO1997035033A1 (en) 1996-03-19 1997-09-25 Molecular Tool, Inc. Method for determining the nucleotide sequence of a polynucleotide
US5814490A (en) * 1996-06-11 1998-09-29 Becton, Dickinson And Company Amplification and detection of chlamydia trachomatis nucleic acids
US5910410A (en) * 1996-09-06 1999-06-08 Hewlett-Packard Company Dual tag binding assay
US5853993A (en) * 1996-10-21 1998-12-29 Hewlett-Packard Company Signal enhancement method and kit
US6706473B1 (en) 1996-12-06 2004-03-16 Nanogen, Inc. Systems and devices for photoelectrophoretic transport and hybridization of oligonucleotides
EP2295988A2 (en) * 1996-12-31 2011-03-16 High Throughput Genomics, Inc. Multiplexed molecular analysis apparatus and its fabrication method
US6110678A (en) 1997-05-02 2000-08-29 Gen-Probe Incorporated Two-step hybridization and capture of a polynucleotide
US6534273B2 (en) 1997-05-02 2003-03-18 Gen-Probe Incorporated Two-step hybridization and capture of a polynucleotide
DE19741715A1 (de) * 1997-09-22 1999-03-25 Hoechst Ag Pentopyranosyl-Nucleosid, seine Herstellung und Verwendung
CA2313483C (en) * 1997-12-12 2017-12-05 Digene Corporation Assessment of human papilloma virus-related disease
US20100105572A1 (en) * 1997-12-19 2010-04-29 Kris Richard M High throughput assay system
US20030096232A1 (en) 1997-12-19 2003-05-22 Kris Richard M. High throughput assay system
US6238869B1 (en) 1997-12-19 2001-05-29 High Throughput Genomics, Inc. High throughput assay system
US20030039967A1 (en) * 1997-12-19 2003-02-27 Kris Richard M. High throughput assay system using mass spectrometry
US6232066B1 (en) 1997-12-19 2001-05-15 Neogen, Inc. High throughput assay system
US6458533B1 (en) 1997-12-19 2002-10-01 High Throughput Genomics, Inc. High throughput assay system for monitoring ESTs
ES2322859T3 (es) 1998-05-01 2009-06-30 Gen-Probe Incorporated Analizador de diagnostico automatizado.
DE19824900B4 (de) 1998-06-04 2006-05-04 Roche Diagnostics Gmbh DNA-Nachweis über einen Strangreassoziationskomplex
WO2000058472A2 (en) 1999-03-31 2000-10-05 The University Of North Carolina At Chapel Hill Isolated dna encoding cullin regulators roc1 and roc2, isolated proteins encoded by the same, and methods utilizing the same
US6235479B1 (en) 1999-04-13 2001-05-22 Bio Merieux, Inc. Methods and devices for performing analysis of a nucleic acid sample
US7101989B1 (en) 1999-07-09 2006-09-05 University Of North Carolina At Chapel Hill DsrA protein and polynucleotides encoding the same
FR2803913B1 (fr) * 2000-01-13 2002-08-16 Pasteur Sanofi Diagnostics Procede d'immobilisation de reactif(s) affin(s) sur phase solide hydrophobe
US20050214825A1 (en) * 2000-02-07 2005-09-29 John Stuelpnagel Multiplex sample analysis on universal arrays
US7582420B2 (en) * 2001-07-12 2009-09-01 Illumina, Inc. Multiplex nucleic acid reactions
AU2001238068A1 (en) * 2000-02-07 2001-08-14 Illumina, Inc. Nucleic acid detection methods using universal priming
US7955794B2 (en) 2000-09-21 2011-06-07 Illumina, Inc. Multiplex nucleic acid reactions
US8076063B2 (en) * 2000-02-07 2011-12-13 Illumina, Inc. Multiplexed methylation detection methods
AU2001247328C1 (en) * 2000-03-08 2006-10-26 Datascope Investment Corp. Methods for assay and detection on a microarray
WO2001068916A1 (en) * 2000-03-16 2001-09-20 Bionex, Inc. Method for detecting mutation of nucleic acid
US7439016B1 (en) * 2000-06-15 2008-10-21 Digene Corporation Detection of nucleic acids by type-specific hybrid capture method
US7601497B2 (en) * 2000-06-15 2009-10-13 Qiagen Gaithersburg, Inc. Detection of nucleic acids by target-specific hybrid capture method
US20040185464A1 (en) * 2000-09-15 2004-09-23 Kris Richard M. High throughput assay system
US20020169562A1 (en) * 2001-01-29 2002-11-14 Gregory Stephanopoulos Defining biological states and related genes, proteins and patterns
EP1481076A4 (en) 2001-07-12 2005-05-11 Illumina Inc MULTIPLEX NUCLEIC REACTIONS
US6893822B2 (en) 2001-07-19 2005-05-17 Nanogen Recognomics Gmbh Enzymatic modification of a nucleic acid-synthetic binding unit conjugate
US20050147984A1 (en) * 2001-08-31 2005-07-07 Clondiag Chip Technologies Gmbh Interaction detection on several probe arrays
US6696254B2 (en) * 2001-11-21 2004-02-24 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Detection and identification of enteric bacteria
US7041811B2 (en) * 2001-12-19 2006-05-09 Dr. Chip Biotechnology, Inc. Method for detecting Escherichia coli
US20030175709A1 (en) * 2001-12-20 2003-09-18 Murphy George L. Method and system for depleting rRNA populations
US7579147B2 (en) * 2002-05-07 2009-08-25 Wake Forest University Health Sciences Mutations in the macrophage scavenger receptor 1 gene alter risk of prostate cancer, asthma, and cardiovascular disease
BRPI0310060B8 (pt) * 2002-05-17 2021-07-27 Becton Dickinson Co sistema automatizado para isolar, amplificar e detectar uma seqüência de ácido nucléico alvo ou uma proteína
US20030219755A1 (en) * 2002-05-24 2003-11-27 Nanibhushan Dattagupta Compositions and methods for performing hybridization assays using target enhanced signal amplification (TESA)
US7601493B2 (en) 2002-07-26 2009-10-13 Nanogen, Inc. Methods and apparatus for screening and detecting multiple genetic mutations
US20040259105A1 (en) * 2002-10-03 2004-12-23 Jian-Bing Fan Multiplex nucleic acid analysis using archived or fixed samples
AU2003301825A1 (en) * 2002-10-31 2004-06-07 Pfizer Products, Inc. Panels of molecular targets differentially expressed during cd8+ t-cell priming
US20040191803A1 (en) * 2002-11-22 2004-09-30 Michela Gallagher Target for therapy of cognitive impairment
EP2248912B8 (en) * 2002-11-26 2013-04-17 University of Maryland, Baltimore County High sensitivity assays for pathogen detection using metal-enhanced fluorescence
US20040235019A1 (en) * 2003-03-06 2004-11-25 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Diagnostics and therapeutics for the gene expression signature of PPAR-gamma receptor ligand
CA2525413C (en) 2003-05-19 2010-08-17 Gen-Probe Incorporated Compositions, methods and kits for determining the presence of trichomonas vaginalis in a test sample
JP4675330B2 (ja) 2003-11-14 2011-04-20 デューク ユニバーシティ シャルコー・マリー・ツース病２ａ型の検出方法
GB0411081D0 (en) * 2004-05-18 2004-06-23 Glaxo Group Ltd Novel apparatus
DK1778867T3 (da) * 2004-07-01 2010-08-02 Gen Probe Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til detektering af nucleinsyrer i en biologisk prøve
US7662562B2 (en) * 2004-08-10 2010-02-16 Becton, Dickinson And Company Method for rapid identification of microorganisms
US7828954B2 (en) * 2004-09-21 2010-11-09 Gamida For Life B.V. Electrode based patterning of thin film self-assembled nanoparticles
US7314542B2 (en) * 2004-09-23 2008-01-01 Nanogen, Inc. Methods and materials for optimization of electronic transportation and hybridization reactions
EP1909108B1 (en) 2005-03-10 2019-05-29 Gen-Probe Incorporated Systems and methods to perform assays for detecting or quantifiying analytes
EP2333561A3 (en) 2005-03-10 2014-06-11 Gen-Probe Incorporated System for performing multi-formatted assays
EP1871913A2 (en) * 2005-03-25 2008-01-02 Ambion, Inc. Methods and compositions for depleting abundant rna transcripts
ATE551433T1 (de) 2005-05-06 2012-04-15 Gen Probe Inc Verfahren und produkte zum erfassen von nukleinsäurezielen
AU2006342447B2 (en) 2005-12-28 2013-06-20 Translational Therapeutics, Inc Translational dysfunction based therapeutics
US20080118914A1 (en) * 2006-01-04 2008-05-22 Charlotte Dawn Blowe Follistatin gene as a genetic marker for first parity litter size in pigs
US20070186298A1 (en) * 2006-01-04 2007-08-09 Blowe Charlotte D Follistatin gene as a genetic marker for reproductive and performance traits in pigs
CA2652454C (en) 2006-05-24 2013-04-30 Gen-Probe Incorporated Compositions, methods and kits for determining the presence of mycobacterium tuberculosis complex organisms in a test sample
DK1945821T3 (da) 2006-06-06 2011-03-07 Gen Probe Inc Mærkede oligonukleotider og anvendelse deraf i fremgangsmåder til amplifikation af nukleinsyrer
NZ576149A (en) 2006-09-29 2012-06-29 Translational Therapeutics Inc Eif4e regulon-based diagnostics
US9938641B2 (en) * 2006-12-18 2018-04-10 Fluidigm Corporation Selection of aptamers based on geometry
EP1978111B1 (en) 2007-04-02 2013-03-27 Gen-Probe Incorporated Compositions, kits and related methods for the detection and/or monitoring of Pseudomonas aeruginosa
EP2657351B1 (en) 2007-12-21 2018-06-20 Biomerieux Sa Detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus
WO2009126336A1 (en) * 2008-04-11 2009-10-15 Becton, Dickinson And Company Methods of controlling the sensitivity and dynamic range of a homogeneous assay
EP2806037B1 (en) 2008-05-13 2016-09-21 Gen-Probe Incorporated Inactivatable target capture oligomers for use in the selective hybridization and capture of target nucleic acid sequences
CA2723917A1 (en) 2008-05-30 2009-12-30 Gen-Probe Incorporated Compositions, kits and related methods for the detection and/or monitoring of salmonella
WO2010019550A2 (en) 2008-08-12 2010-02-18 Shiraz Pharmaceuticals, Inc. Method of identifying disease risk factors
US8288520B2 (en) * 2008-10-27 2012-10-16 Qiagen Gaithersburg, Inc. Fast results hybrid capture assay and system
AU2009324884B2 (en) 2008-11-25 2013-10-03 Gen-Probe Incorporated Compositions and methods for detecting small RNAs, and uses thereof
US8748133B2 (en) 2008-12-30 2014-06-10 Gen-Probe Incorporated Compositions, kits and related methods for the detection and/or monitoring of Listeria
AU2010208311B2 (en) * 2009-01-28 2016-07-07 Qiagen Gaithersburg, Inc. Sequence-specific large volume sample preparation method and assay
EP2425019B1 (en) * 2009-05-01 2014-03-19 QIAGEN Gaithersburg, Inc. A non-target amplification method for detection of rna splice-forms in a sample
CN102427885B (zh) 2009-05-15 2016-10-19 简·探针公司 用于在执行磁性分离工序的仪器中实现磁体的自动移动的方法和设备
US8999675B2 (en) 2009-08-31 2015-04-07 Gen-Probe Incorporated Dengue virus assay
CA2773320C (en) 2009-09-14 2018-02-20 Qiagen Gaithersburg, Inc. Compositions and methods for recovery of nucleic acids or proteins from tissue samples fixed in cytology media
AU2010339861A1 (en) 2009-12-21 2012-10-25 Becton, Dickinson And Company Methods for identifying drug resistant Mycobacterium
WO2011087789A2 (en) 2009-12-22 2011-07-21 Becton, Dickinson And Company Methods for the detection of microorganisms
US8790879B2 (en) 2010-01-22 2014-07-29 Gen-Probe Incorporated Probes for detecting the presence of Trichomonas vaginalis in a sample
CN102822353A (zh) 2010-01-29 2012-12-12 奇亚根盖瑟斯堡股份有限公司 确定和确认样品中存在hpv的方法
EP2528932B1 (en) 2010-01-29 2016-11-30 QIAGEN Gaithersburg, Inc. Methods and compositions for sequence-specific purification and multiplex analysis of nucleic acids
JP2013531976A (ja) 2010-05-11 2013-08-15 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー ｓｐｎＫ菌株
WO2011146629A2 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Qiagen Gaithersburg Inc. Methods and compositions for sequence-specific purification and multiplex analysis of nucleic acids
AU2011258501B2 (en) 2010-05-25 2016-07-07 Qiagen Gaithersburg, Inc. Fast results hybrid capture assay and associated strategically-truncated probes
EP2743704A3 (en) 2010-07-23 2014-06-25 Beckman Coulter, Inc. System or method of including analytical units
EP2678442B1 (en) 2011-02-24 2019-01-16 QIAGEN Gaithersburg, Inc. Materials and methods for detection of hpv nucleic acid
EP2998399A1 (en) 2011-05-03 2016-03-23 Dow AgroSciences LLC Enhancing spinosyn production with oxygen binding proteins
EP4219740A3 (en) 2011-09-06 2023-08-16 Gen-Probe Incorporated Closed nucleic acid structures
DE102011114984B3 (de) * 2011-09-28 2012-11-22 Universität Rostock Sequenzspezifische Analyse von Nukleinsäuren
KR20140091032A (ko) 2011-11-07 2014-07-18 베크만 컬터, 인코포레이티드 검체 수송 시스템의 자기 감쇠
KR20140091033A (ko) 2011-11-07 2014-07-18 베크만 컬터, 인코포레이티드 검체 컨테이너 검출
CN104105969B (zh) 2011-11-07 2016-10-12 贝克曼考尔特公司 离心机系统和工作流程
EP3373015A1 (en) 2011-11-07 2018-09-12 Beckman Coulter Inc. Aliquotter system and workflow
ES2844324T3 (es) 2011-11-07 2021-07-21 Beckman Coulter Inc Brazo robótico
JP6082018B2 (ja) 2011-11-07 2017-02-15 ベックマン コールター， インコーポレイテッド サンプルを処理するためのシステムおよび方法
CN104169437B (zh) 2011-12-23 2017-07-11 生物梅里埃公司 甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌的mecA变体菌株的检测
US9631195B2 (en) 2011-12-28 2017-04-25 Dow Agrosciences Llc Identification and characterization of the spinactin biosysnthesis gene cluster from spinosyn producing saccharopolyspora spinosa
KR102018934B1 (ko) 2012-02-27 2019-09-06 도레이 카부시키가이샤 핵산의 검출 방법
US10472683B2 (en) 2012-06-01 2019-11-12 Akron Biotechnology, LLC. Detection of Mycoplasma in cell cultures and cell culture derived biologicals
WO2014006025A2 (en) 2012-07-02 2014-01-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Marker of pathogenicity in salmonella
US9416403B2 (en) 2012-08-31 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Method of detecting target nucleic acid
US10427162B2 (en) 2016-12-21 2019-10-01 Quandx Inc. Systems and methods for molecular diagnostics
CA3108105A1 (en) 2018-08-08 2020-02-13 Gen-Probe Incorporated Compositions, methods and kits for detecting mycoplasma genitalium
JP2022518510A (ja) 2019-01-25 2022-03-15 ジェン－プローブ・インコーポレーテッド 薬物耐性ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍの検出
WO2021041056A1 (en) 2019-08-23 2021-03-04 Gen-Probe Incorporated Compositions, methods and kits for detecting treponema pallidum
EP4182482A1 (en) 2020-07-17 2023-05-24 Gen-Probe Incorporated Detection of macrolide-resistant mycoplasma genitalium

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3896217A (en) * 1973-03-19 1975-07-22 Summa Corp Method and apparatus for radioimmunoassay with regeneration of immunoadsorbent
US3930956A (en) * 1973-10-29 1976-01-06 The Regents Of The University Of Michigan Method for the genetic detection of microorganisms
SU649751A1 (ru) * 1977-06-14 1979-02-28 Московский Ордена Ленина И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им.М.В.Ломоносова Способ идентификации микроорганизмов
US4139346A (en) * 1977-11-28 1979-02-13 Enzo Bio Chem Incorporated Nucleic acid and protein binding paper
FR2422956A1 (fr) * 1978-04-13 1979-11-09 Pasteur Institut Procede de detection et de caracterisation d'un acide nucleique ou d'une sequence de celui-ci, et reactif enzymatique pour la mise en oeuvre de ce procede
FR2444713A1 (fr) * 1978-12-18 1980-07-18 Pasteur Institut Procede de production d'un adn comprenant le genome du virus de l'hepatite b et vecteur le comportant
US4302204A (en) * 1979-07-02 1981-11-24 The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University Transfer and detection of nucleic acids
US4359535A (en) * 1979-10-01 1982-11-16 George Pieczenik Autonomously replicating DNA containing inserted DNA sequences
US4358535A (en) * 1980-12-08 1982-11-09 Board Of Regents Of The University Of Washington Specific DNA probes in diagnostic microbiology
US4446237A (en) * 1981-03-27 1984-05-01 Life Technologies, Inc. Method for detection of a suspect viral deoxyribonucleic acid in an acellular biological fluid
EP0062286A1 (en) * 1981-03-31 1982-10-13 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Diagnostic test for hepatitis B virus
CA1219824A (en) * 1981-04-17 1987-03-31 David C. Ward Modified nucleotides and methods of preparing and using same
JPS5840099A (ja) * 1981-07-17 1983-03-08 アモコ・コ−ポレ−ション 光−放射ポリヌクレオチドの交雑診断方法
FI63596C (fi) * 1981-10-16 1983-07-11 Orion Yhtymae Oy Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Cellulosa, 1977, 12, р. 23-36. *

Also Published As

Publication number Publication date
US4563419A (en) 1986-01-07
RO86356B (ro) 1985-04-01
DK275183A (da) 1983-06-15
HU196242B (en) 1988-10-28
EP0079139A1 (en) 1983-05-18
DK275183D0 (da) 1983-06-15
AU8957582A (en) 1983-05-05
JPS58501703A (ja) 1983-10-13
US4486539A (en) 1984-12-04
CA1192120A (en) 1985-08-20
FI63596B (fi) 1983-03-31
EP0098267A1 (en) 1984-01-18
DE3277917D1 (en) 1988-02-11
DE79139T1 (de) 1983-11-24
FI63596C (fi) 1983-07-11
ATE31735T1 (de) 1988-01-15
EP0079139B1 (en) 1988-01-07
WO1983001459A1 (en) 1983-04-28
AU548854B2 (en) 1986-01-02
RO86356A (ro) 1985-03-15
JPH0632637B1 (ru) 1994-05-02
DK173744B1 (da) 2001-09-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SU1386031A3 (ru) Способ идентификации вирусов и бактерий
EP0133671B1 (en) Detection of bacteria by nucleic acid hybridization, labeled probes and test kit therefore
US4358535A (en) Specific DNA probes in diagnostic microbiology
EP0237737B1 (en) A composition specific for neisseria gonorrhoea
EP0648222B1 (en) Methods of single nucleotide primer extension to detect specific alleles and kits therefor
CN110724769A (zh) 检测非洲猪瘟病毒mgf360-505r基因的pcr引物组、试剂盒及检测方法
CN110904272A (zh) 一种同时检测多种病原微生物的引物探针组合、试剂盒以及方法
Brandon et al. Early detection of bovine leukosis virus DNA in infected sheep using the polymerase chain reaction
JP3476821B2 (ja) カンピロバクタージュジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）のゲノムの核酸の塩基配列と特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列
CN116334255B (zh) 一种沙门氏菌新型核酸检测试剂盒及其非诊断性检测方法
CN116334254B (zh) 一种多杀性巴氏杆菌新型核酸检测试剂盒及其非诊断性检测方法
CN116334253B (zh) 一种用于鸡毒支原体和滑液囊支原体的核酸检测试剂盒
CN115725792B (zh) 一种通用型禽白血病病毒核酸检测试剂盒
de la Cruz et al. Hemolysis determinant common to Escherichia coli strains of different O serotypes and origins
Gradil et al. Detection of verotoxigenic Escherichia coli in bull semen using the polymerase chain reaction
EP0294595B1 (en) Polynucleotide composition and method for its production
JPH06253847A (ja) 炭疽菌検出のためのオリゴヌクレオチドおよびそれを用いた検出方法
JP2008539718A (ja) ネコ・ヘモプラズマの分離株
NO163699B (no) Fremgangsmaate og reagenskombinasjon for diagnose av mikroorganismer.
Butcher et al. The electrophoretic analysis of low molecular weight nucleic acids from Crohn's disease tissues in the search for an unconventional small infections agent
Beaty et al. Nucleic acid hybridization: applications to diagnosis of microbial infections and to genotypic analysis.
JPH0349696A (ja) 細菌検出のためのオリゴヌクレオチドおよびそれを用いた検出法
JPH08173198A (ja) 核酸合成法
Kalionis Gene Isolation by Screening hgtll Expression Libraries with DNA-Binding Site Probes
IL106199A (en) Method of single nucleotide prime extension to detect specific alleles and kit therefor