FI72146C - Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror. - Google Patents
Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror. Download PDFInfo
- Publication number
- FI72146C FI72146C FI850004A FI850004A FI72146C FI 72146 C FI72146 C FI 72146C FI 850004 A FI850004 A FI 850004A FI 850004 A FI850004 A FI 850004A FI 72146 C FI72146 C FI 72146C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- hybridization
- poly
- probe
- affinity pair
- dna
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 28
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 15
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 57
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims description 2
- 229910000083 tin tetrahydride Inorganic materials 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRLRJZRHRJEWJY-VCOUNFBDSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-[3-[3-(4-azido-2-nitroanilino)propyl-methylamino]propyl]pentanamide Chemical compound C([C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1)CCCC(=O)NCCCN(C)CCCNC1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1[N+]([O-])=O BRLRJZRHRJEWJY-VCOUNFBDSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108010008286 DNA nucleotidylexotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100029764 DNA-directed DNA/RNA polymerase mu Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 1
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 1
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 1
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 description 1
- 241000283160 Inia Species 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- JGQHTPYIIXRFLR-UHFFFAOYSA-N [2-(9h-fluoren-1-yl)-2-oxoethyl] acetate Chemical class C1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C(=O)COC(=O)C)=CC=C2 JGQHTPYIIXRFLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 125000004149 thio group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
721 46
Menetelmä nukleiinihappojen tunnistamiseksi
Keksinnön kohteena on menetelmä nukleiinihappojen tunnistamiseksi liuoksessa tapahtuvan hybridisaaticn avulla.
05 Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että hybridisaatioreaktiossa käytetään kahta samassa liuoksessa olevaa koetinta. Detektorikoetin on leimattu merkkiaineella ja nk. kiinnitinkoettimeen on kiinnitetty komponentti, joka voi toimia osapuolena affiniteetiparissa, jolloin hybridi-10 säätiössä muodostunut kiinnitinkoetin:näyte:detektorikoetin--hybridi voidaan erottaa muista hybridisaatioseoksessa olevista komponenteista affiniteettiparin toisen osapuolen avulla.
15 Nukleiinihappojen tunnistamisessa on käytetty erilaisia hybridisaatiomenetelmiä. Esimerkkeinä voidaan mainita suorat hybridisaatiomenetelmät ja kerroshybridisaatiomenetelmät. Suorissa hybridisaatiomenetelmissä nukleiinihapponäyte on joko liuoksessa tai kiinnitettynä kiinteään kantajaan.
20 Tunnistettava nukleiinihappo osoitetaan käyttäen yhtä leimattua koetinta. Kerroshybridisaatiomenetelmissä (ΓΙ 63596) käytetään kahta erillistä koetinta, joilla osoitetaan tunnistettava nukleiinihappo näyteliuoksesta. Toinen käytetyistä koettimista on leimattu merkkiaineella ja toinen on 25 kiinnitetty kiinteään kantajaan.
Olemme kehittäneet uuden hybridisaatiomenetelmän, jossa käytetään kahta erilaista koetinta mutta molemmat koettimet ovat samassa liuosfaasissa. Koska hybridisaatioon osallistuva 30 näyte ja molemmat koettimet ovat samassa liuosfaasissa, hybridisaatioreaktio tapahtuu huomattavasti nopeammin kuin kerroshybridisaatiossa, jossa toinen koetin on kiinnitetty kiinteään kantajaan. Keksinnön mukaisessa menetelmässä tunnin inkubointiaika on riittävä. Yksivaiheisessa kerroshybridi-35 säätiössä (FI 63596) riittävä hybridisaatio tapahtuu vasta 12 2 721 46 tunnissa. Kun suoritetaan kaksivaiheista kerroshybridisaati-ota, tarvitaan vähintään 24 tunnin hybridisaatioaika (Dunn ja Hassell, Cell 12, 23-36, 1977).
05 Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytetään edullisesti kahta koetinta. Koettimet ovat tunnistettavaksi tarkoitetulle nukleiinihapolle riittävän homologisia nukleiinihappofrag-mentteja. On edullista, mutta ei välttämätöntä, jos koettimet ovat homologisia suhteellisen lähellä toisiaan sijaitseville 10 kohdille tunnistettavassa nukleiinihapossa. Koettimet eivät saa olla toisilleen homologisia.
Koettimet voidaan valmistaa synteettisesti, puolisynteetti-sesti, yhdistelmä-DNA-tekniikalla tai suoraan luonnosta 15 eristetyistä nukleiinihapoista. Koetin voi olla sopivaan vektoriin sidottu. Se voi sisältää vektoriosia tai olla täysin vapaa vektoriosista.
Detektorikoetin on leimattu sopivilla merkkiaineilla.
20 Merkkiaineina voidaan käyttää erilaisia radioaktiivisia isotooppeja tai radioaktiivisesti leimattuja yhdisteitä. Merkkiaine voi myös olla fluoresoiva, luminesoiva, valoa emittoiva, entsymaattisesti tai immunologisesti osoitettavissa oleva jne. Esimerkkeinä voidaan mainita biotiinin ja 25 avidiinin tai streptavidiinin affiniteettiin perustuvat merkkiaineet (Leary et ai., P.N.A.S. 80, 4045-4049, 1983), lantanidikelaatit (US 4,243,880 ja US 4,374,120), ferritiini-ja hemeyhdisteet, immunologisesti osoitettavat hapteenit kuten AAF ja AIF (erilaiset asetoksiasetyylifluoreenideri-30 vaatit (WO 8302286)). Myös proteiinien välityksellä tapahtuva tunnistaminen on mahdollista. Keksinnön mukainen menetelmä ei ole riippuvainen käytetystä merkkiaineesta. Menetelmään voidaan vapaasti soveltaa kaikki tunnetut nukleiinihappo-hybridisaatioon soveltuvat merkkiaineet.
Il 72146 3
Kiinnitinkoettimeen on kiinnitetty komponentti, joka voi toimia osapuolena affiniteettiparissa. Tällaisia affiniteet-tipareja ovat esimerkiksi biotiini-avidiini tai biotiini-streptavidiini, raskasmetalliderivaatti-tioryhmä (Dale and 05 Ward, Biochemistry 14, No 11, 2458-2469, 1975), erilaiset homopolynukleotidit, esimerkiksi poly dG - poly dc, poly dA - poly dT tai poly dA - poly U. Mutta myös muita affiniteettipareja voidaan käyttää, kunhan komponenteilla on tarpeeksi voimakas affiniteetti toisiinsa. Immunologisissa 10 menetelmissä käytettyjen ligandien ja konjugaattien joukosta löytyy sopivia affiniteettipareja.
Ennen hybridisaatioreaktion suorittamista näyte käsitellään siten, että nukleiinihapot vapautuvat hybridisaatioliuokseen 15 yksisäikeisessä muodossa. Hybridisaatio suoritetaan hybridi-saatioseoksessa, jossa nukleiinihapot, detektorikoetin ja kiinnitinkoetin on tarvittaessa saatettu yksisäikeiseen muotoon. Hybridisaatioliuoksena voidaan käyttää erilaisia tarkoitukseen sopivia puskureita. Hybridisaatio tapahtuu 20 lämpötilavälillä 0-80°C, mutta edullista on käyttää 65°C:n lämpötilaa. Jos hybridisaatioliuos sisältää formamidia (40-55 %), voidaan käyttää 37°C lämpötilaa. Hybridisaatio-ajaksi riittää tunti.
25 Kun hybridisaatio on tapahtunut, liuosta laimennetaan tarvittaessa siten, että olosuhteet ovat edullisia affini-teettiparille. Tämän jälkeen seos saatetaan kontaktiin affiniteettiparin toisen osapuolen kanssa, joka on kytkettynä sopivaan kantajaan. Kantajana voi toimia esimerkiksi affini-30 teettikromatografiapylväs, filtteri, muovi- tai lasipinta.
Affiniteettikantajan materiaali voi olla esimerkiksi selluloosaa, latexia, polyakrylamidia, dextraania tai agaroosia. Näitä materiaaleja voidaan käyttää myös suspensioina 35 koeputkessa. Edullista on myös käyttää koeputkia, joiden 4 72146 sisäpintaan on kiinnitettynä affiniteettiparin toinen osapuoli. Materiaalien valinta edellyttää, että siihen voidaan kiinnittää komponentti, jolla on affiniteettia kiinnitinkoettimeen kiinnitettyyn komponenttiin.
05
Mikäli näyte sisältää tunnistettavaksi tarkoitettua nukleiinihappoa, hybridisaatiossa syntyy kiinnitinkoetin:näyte: detektorikoetin-hybridi. Tämä hybridi tarttuu fraktioinnissa kiinteään kantajaan. Kantajaan tarttuneen fraktion leima 10 voidaan mitata tavanomaisin menetelmin suoraan kantajasta tai eluoinnin jälkeen eluoidusta liuoksesta.
Fraktioinnissa voidaan affiniteettikromatografiän tilalla käyttää myös muita järjestelmiä, esimerkiksi faasiekstrakti-15 ota tai magneettikenttiä.
Seuraavissa sovellutusesimerkeissä keksinnön mukainen menetelmä kuvataan tarkemmin. Keksinnön mukainen menetelmä ei ole riippuvainen esimerkeissä käytetyistä nukleiinihappo-20 fragmenteista. Alan asiantuntijalle on itsestään selvää miten vastaavanlaisia nukleiinihappofragmentteja voidaan valmistaa.
Esimerkki 1 25 Adenoviruksen DNA:n tunnistaminen solulysaatista käyttäen homopolynukleotidia 125
Detektorikoettimena käytettiin lilla leimattua rekombi-nanttifaagia mkTH 1206, joka on adenoviruksen (tyyppi 2) 30 Bgl II fragmentti adenoviruksen geenikartan positiosta 42-45,3 %. Kyseinen rekombinanttifaagi on deponoitu kantakokoelmaan Deutsche Sammlung von Mikroorganismen numerolla DSM 2827 ja sen spesifinen aktiivisuus on 7 7 x 10 cpm/jug DNA. Koetin on kuvattu tarkemmin julkaisussa 35 Ranki et ai., Gene 21., 77-85, 1983.
5 72146
Kiinnitinkoettimena käytettiin rekombinanttiplasmidia pkTH 1202, joka on deponoitu kantakokoelmaan Deutsche Sammlung von Mikro-organismen numerolla DSM 2824 ja koostuu adenoviruksen BamHI D fragmentista (karttapositio 29-42 %) kloonattuna 05 pBR322 plasmidiin. Rekombinanttiplasmidi pkTH 1202 (DSM 2824) pilkottiin restriktioentsyymillä Hae III ja fragmenttien 3' päihin liitettiin poly A-häntä terminaalitransferaasient-syymin avulla. Hännän pituus mitattiin H-A inkorporaatiolla. Pituus oli keskimäärin n. 70 A-tähdettä. Ennen käyttöä 10 kiinnitin denaturoitiin keittämällä. Näytteenä käytettiin adenovirukselle infektoituja A-549 soluja. Infektoituja soluja inkuboitiin 2i tuntia. Solut kerättiin ja rikottiin 1 %:lla natriumdodekyylisulfaattiliuoksella. Liuos sisälsi n. 106 solua/ml. Viskositeetti alennettiin sonikoimalla.
15 Kontrollina käytettiin ei-infektoituja A-549 soluja, joita käsiteltiin identtisesti. Ennen hybridisaatiota näytettä keitettiin 5 min. 0,02 M NaOH:ssa, jäähdytettiin 0°C:ksi ja neutraloitiin etikkahapolla.
20 Testiä varten yhdistettiin koeputkessa 500.000 cpm detektori-koetinta, 50 ng kiinnitin-DNA:ta ja 10 /ui näytettä. Tilavuus säädettiin 50 /uliksi ja puskuriliuoksena käytettiin 0,6 M natriumkloridia 0,06 M natriumsitraattia, 0,02 M natriumfos-faattia (pH 7,6) ja 0,5 % natriumdodekyylisulfaattia. Seosta 25 inkuboitiin 1 tunti 65°C:n lämpötilassa.
Hybridisaation jälkeen liuos jäähdytettiin + 20°C:ksi ja valutettiin hitaasti läpi kromatografiapatsaan, jossa oli 1 ml oligo dT-selluloosaa. Läpimennyt liuos otettiin talteen 30 ja valutettiin uudestaan patsaan läpi. Sen jälkeen patsasta pestiin 20 ml:lla liuosta, joka sisälsi 0,15 M natriumklori-dia, 0,015 M natriumfosfaattia (pH 7,6) ja 0,5 % natriumdodekyylisulfaattia. Kiinnittynyt DNA irroitettiin lopulta 1 ml:lla 0,02 M NaOHilla. Tämä liuos otettiin talteen ja sen 35 radioaktiivisuus määritettiin.
125 721 46 6
Tulos: I-aktiivisuus (cpm) 05 Näyte: infektoidut solut Kontrollisolut 5230 325 10
Esimerkki 2
Chlamydia trachomatiksen DNA:n tunnistaminen käyttäen 15 bioti ini-streptavidi inia 125
Detektorikoettimena käytettiin I:lla leimattua rekom-binanttifaagia mkTH 1245, joka sisältää kaksi BamHI - Sali DNA fragmenttia kloonista pkTH 1220, jotka yhdessä ovat 20 kytkettynä Ml3mp8 vektoriin. Klooni pkTH 1220 on deponoitu kantakokoelmaan Deutsche Sammlung von Mikroorganismen numerolla DSM 2825 ja on kuvattu julkaisussa Palva et ai., FEMS Microbiology Letters 23, 83-89, 1984.
25 Kiinnitinkoettimena käytettiin rekombinanttiplasmidia pkTH
1250. Tämä plasmidi koostuu 2,9 kb:n Sali - Clal fragmentista plasmidista pkTH 1220 (DSM 2825) sekä vektorista pAT 153. pkTH 1250 DNA:han liitettiin biotiinimolekyylejä kovalentti-sesti käyttäen tunnettua "nick-translaatio" -menetelmää 30 (Rigby et ai., J. Mol. Biol. 113, 237-251, 1977) ja biotine- ll-UTP:ta substraattina (Bethesda Research Laboratories, BRL). Kiinnitin-DNA keitettiin puskurissa 10 mM Tris-Cl pH 7,6, 1 mM EDTA 5 min ennen käyttöä.
35 Näytteenä oli rekombinanttiplasmidi pkTH 1220 (DSM 2825).
7 72146 Tämä plasmidi sisältää noin 10 kb Chlamydia trachomatikselle tunnusomaista DNA:ta kytkettynä vektoriin pBR322. Plasmidi toimii malli-DNA:na edustaen bakteerin genomi-DNA:ta. Ennen käyttöä plasmidia keitettiin 5 min 0,02 M NaOH:ssa, jonka 05 jälkeen liuosta neutraloitiin etikkahapolla.
Affiniteettimateriaalina käytetty Streptavidiini kytkettiin CNBr-aktivoituun Sepharoseert®^(Axen et ai., Nature 214, 1302-1304, 1967).
10
Testiä varten yhdistettiin koeputkessa 500.000 cpm koetinta, 50 ng kiinnitin DNA:ta ja 10 ng näyte DNA:ta. Tilavuus asetettiin 20 jul:ksi ja puskuriliuos oli sama kuin esimerkissä 1. Kontrolli-DNA oli vasikan kateenkorvan DNA.
15
Seosta inkuboitiin 60 min 65°C:n lämpötilassa. Tämän jälkeen lisättiin 500 yul puskuriliuosta, jonka koostumus oli: 0,1 M Tris-Cl pH 7,5, 0,1 M NaCl, 2 mM MgClj, 0,05 % Triton x-100. Liuos fraktioitiin lopulta Streptavidiini-Sepharos^^-pylvääs-20 sä, siten että biotinyloitu DNA tarttui Streptavidiiniin, mutta muu DNA meni patsaan läpi. Radioaktiivinen koetin tarttui vain hybridimuodostuksen seurauksena. Tarttunut radioaktiivisuus määritettiin siirtämällä pylväs kokonaisuudessaan gammalaskijän laskentaputkeen.
25 125
Tulos: I-aktiivisuus (cpm) 30 Näyte: 10 ng pkTH 1220 10 ng kontrolli-DNA:ta 1350 115 8 721 46
Esimerkki 3
Plasmidin pBR322 DNA;n identifioiminen käyttäen antigeeni-vasta-aineparia, 05
Detektorikoettimena käytettiin plasmidin pBR322 johdannaista, josta Pstl-Sall-fragmentti (3613-3651) on poistettu. Plasmidi leimattiin fotobiotiinilla käyttäen tunnettua menetelmää (Forster et ai., Nucleic Acids Res. 13, 745-761, 1985) ja 10 kaupallisia reagensseja.
Kiinnitinkoettimena käytettiin rekombinanttifaagin M13mpll DNArta, johon plasmidin pBR322 Pstl-Sall-fragmentti oli liitetty. DNA oli sulfonoitu tunnettua menetelmää käyttäen 15 (Orgenics Ltd. Yavne, Israel).
Näytteenä oli E. Coli HB101, johon oli liitetty plasmidi pBR322. Plasmidin pBR322 määrää lisättiin käyttäen kloramfenikoliamplifikaatiota (Maniatis et ai. Molecular 20 Cloning, A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory 1982). Bakteerisolut rikottiin lysotsyymillä ja niitä keitettiin NaOHsssa kuten julkaisussa Palva, J.Clin. Microbiol. 1J3, 92-100, 1983 on kuvattu.
25 Monoklonaaliset antisulfonivasta-aineet kiinnitettiin polystyreenistä valmistettujen mikrotiitterilevyjen kuoppiin standardimenetelmin (McKearn, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, ed. Kennett et ai., Plenum Press, 1980).
30 Testiä varten 5x10^ rikottua E. coli solua (sekä ilman että liitettynä pBR322-plasmidiin), 100 ng kiinnitin-DNA:ta ja 100 ng detektori-DNA:ta yhdistettiin hybridisaatioliuokseksi, jonka tilavuus säädettiin 50yul:ksi. Hybridisaatio-olosuhteet olivat samat kuin esimerkissä 1 lukuunottamatta sitä, että 9 72146 lisättiin 5 % polyetyleeniglykolia (PEG 6000) ja natriumdode-kyylisulfaattipitoisuus oli 0,1 %.
Hybridisaation jälkeen liuos laimennettiin 250 yul:ksi lisää-05 mällä 0,02 M natriumfostaattia (pH 7,6), jonka jälkeen liuos siirrettiin mikrotiitterilevyn kuoppaan, johon vasta-aine oli kiinnitetty. Tämän jälkeen inkuboitiin 2 tuntia 37°C:ssa. Mikrotiitterilevyn kuoppaa pestiin sen jälkeen 0,15 M natriumkloridi-, 0,02 M natriumfosfaatti-, 0,05 % triton-10 X-100-liuoksella.
Detektorikoetin havaittiin lisäämällä streptavidiinia (BRL), pesemällä, lisäämällä biotinyloitua alkaalista fosfataasia (BRL) ja pesemällä kuten julkaisussa Leary et ai., Proc.
15 Natl. Acad. Sei. USA, 80, 4045-4049, 1983 on kuvattu. Lopuksi lisättiin 250 μΐ paranitrofenyylifosfaattiliuosta (35 mg/ml, Sigma) dietanoliamiinipuskurissa (pH 10). 60 minuutin kuluttua reaktio pysähdytettiin ja absorbanssi mitattiin 410 nm:ssa.
20
Tulos: A 410 nm 25 Näyte: solut joihin oli Kontrollisolut liitetty pBR322 (ilman pBR322) > 2 0,1
Claims (7)
1. Menetelmä nukleiinihappojen tunnistamiseksi hybridisaa-tiomenetelmällä käyttäen kahta, samassa liuosfaasissa olevaa 05 koetinta, joista n.k. detektorikoetin on leimattu sopivalla, mitattavalla merkkiaineella tunnettu siitä, että n.k. kiinnitinkoettimeen on liitetty komponentti, joka voi toimia osapuolena affiniteettiparissa, jolloin hybridisaatio-reaktiossa muodostunut kiinnitinkoetin:näyte:detektorikoe-10 tin-hybridi voidaan eristää muista hybridisaatioseoksessa olevista komponenteista kiinteään kantajaan kiinnitetyn affiniteettiparin toisen osapuolen avulla.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu 15 siitä, että affiniteettipari on biotiini-avidiini tai biotiini-streptavidiini.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että affiniteettipari on homopolynukleotidipari. 20
4. Patenttivaatimusten 1 ja 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että affiniteettipari on poly dC -poly dG.
5. Patenttivaatimusten 1 ja 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että affiniteettipari on poly dA -poly dT.
6. Patenttivaatimusten 1 ja 3 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että affiniteettipari on poly dA -poly U.
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä tunnettu siitä, että affiniteettipari on antigeeni-vasta-aine.
Priority Applications (21)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI850004A FI72146C (fi) | 1985-01-02 | 1985-01-02 | Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror. |
| CH5378/85A CH666696A5 (de) | 1985-01-02 | 1985-12-17 | Verfahren zur identifizierung von nucleinsaeuren. |
| GB08531414A GB2169403B (en) | 1985-01-02 | 1985-12-20 | Identification of nucleic acids |
| BE0/216059A BE903937A (fr) | 1985-01-02 | 1985-12-24 | Methode pour l'identification d'acides nucleiques. |
| JP60299797A JPH0669400B2 (ja) | 1985-01-02 | 1985-12-27 | 核酸の同定方法 |
| NO855308A NO166743C (no) | 1985-01-02 | 1985-12-27 | Fremgangsmaate til identifikasjon av nukleinsyrer. |
| HU855030A HU196453B (en) | 1985-01-02 | 1985-12-29 | Process for the identification of nucleinic acids |
| FR858519394A FR2575493B1 (fr) | 1985-01-02 | 1985-12-30 | Methode pour l'identification d'acides nucleiques |
| IT23408/85A IT1201514B (it) | 1985-01-02 | 1985-12-30 | Procedimento per la identificazione di acidi nucleici |
| RO121637A RO94651B (ro) | 1985-01-02 | 1985-12-30 | Metoda pentru identificarea acizilor nucleici |
| LU86238A LU86238A1 (fr) | 1985-01-02 | 1985-12-30 | Methode pour l'identification d'acides nucleiques |
| AT0376785A AT397514B (de) | 1985-01-02 | 1985-12-30 | Verfahren zur indentifizierung von nukleinsäuren |
| DE19853546312 DE3546312A1 (de) | 1985-01-02 | 1985-12-30 | Verfahren zur identifizierung von nucleinsaeuren |
| ZA859895A ZA859895B (en) | 1985-01-02 | 1985-12-30 | A method for the identification of nucleic acids |
| CA000498834A CA1271705A (en) | 1985-01-02 | 1985-12-31 | Method for the identification of nucleic acids |
| AU51748/85A AU561382B2 (en) | 1985-01-02 | 1985-12-31 | Identification of nucleic acid by hybridization probes |
| IE333385A IE58290B1 (en) | 1985-01-02 | 1985-12-31 | A method for the identification of nucleic acids |
| IL77489A IL77489A (en) | 1985-01-02 | 1985-12-31 | Method for the identification of nucleic acids in solution by hybridisation with at least two probes one labelled,the other bonded to one component of a specific binding pair |
| NLAANVRAGE8503597,A NL189427C (nl) | 1985-01-02 | 1985-12-31 | Werkwijze voor het identificeren van nucleinezuren. |
| DK000386A DK164932C (da) | 1985-01-02 | 1986-01-02 | Fremgangsmaade til identificering af nukleinsyrer ved en hybridiseringsmetode, hvor mindst to sonder er i samme oploesningsfase, idet den ene, detektorsonden, er maerket med en egnet detekterbar markoer |
| SE8600011A SE463212B (sv) | 1985-01-02 | 1986-01-02 | Metod foer identifiering av nukleinsyror |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI850004 | 1985-01-02 | ||
| FI850004A FI72146C (fi) | 1985-01-02 | 1985-01-02 | Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror. |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI850004A0 FI850004A0 (fi) | 1985-01-02 |
| FI850004L FI850004L (fi) | 1986-07-03 |
| FI72146B FI72146B (fi) | 1986-12-31 |
| FI72146C true FI72146C (fi) | 1987-04-13 |
Family
ID=8520136
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI850004A FI72146C (fi) | 1985-01-02 | 1985-01-02 | Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror. |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0669400B2 (fi) |
| AT (1) | AT397514B (fi) |
| AU (1) | AU561382B2 (fi) |
| BE (1) | BE903937A (fi) |
| CA (1) | CA1271705A (fi) |
| CH (1) | CH666696A5 (fi) |
| DE (1) | DE3546312A1 (fi) |
| DK (1) | DK164932C (fi) |
| FI (1) | FI72146C (fi) |
| FR (1) | FR2575493B1 (fi) |
| GB (1) | GB2169403B (fi) |
| HU (1) | HU196453B (fi) |
| IE (1) | IE58290B1 (fi) |
| IL (1) | IL77489A (fi) |
| IT (1) | IT1201514B (fi) |
| LU (1) | LU86238A1 (fi) |
| NL (1) | NL189427C (fi) |
| NO (1) | NO166743C (fi) |
| RO (1) | RO94651B (fi) |
| SE (1) | SE463212B (fi) |
| ZA (1) | ZA859895B (fi) |
Families Citing this family (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5288609A (en) * | 1984-04-27 | 1994-02-22 | Enzo Diagnostics, Inc. | Capture sandwich hybridization method and composition |
| US6060237A (en) | 1985-02-26 | 2000-05-09 | Biostar, Inc. | Devices and methods for optical detection of nucleic acid hybridization |
| IL79112A (en) * | 1985-06-13 | 1992-01-15 | Abbott Lab | Method for the isolation of a nucleic acid sequence and kit for performing a hybridization assay |
| US4910300A (en) * | 1985-12-11 | 1990-03-20 | Chiron Corporation | Method for making nucleic acid probes |
| US4868105A (en) * | 1985-12-11 | 1989-09-19 | Chiron Corporation | Solution phase nucleic acid sandwich assay |
| US4882269A (en) * | 1985-12-13 | 1989-11-21 | Princeton University | Amplified hybridization assay |
| FI76119C (fi) * | 1986-02-27 | 1988-09-09 | Orion Yhtymae Oy | Kvantitativ bestaemning av nukleinsyramolekyler och reagensfoerpackning som anvaends vid foerfarandet. |
| AU622104B2 (en) * | 1987-03-11 | 1992-04-02 | Sangtec Molecular Diagnostics Ab | Method of assaying of nucleic acids, a reagent combination and kit therefore |
| FI894132A7 (fi) * | 1987-06-26 | 1989-09-01 | Du Pont | Kontaminoivien sekvenssien affiniteettipoisto kloonatusta yhdistelmänu kleiinihaposta kaappaushelmiä käyttämällä |
| KR960002234B1 (ko) * | 1987-07-31 | 1996-02-13 | 젠-프로우브 인코오퍼레이티드 | 바람직하지 못한 교차반응을 제거하기 위한 올리고뉴클레오티드를 사용하는 폴리뉴클레오티드에 대한 측정방법 |
| EP0305145A3 (en) * | 1987-08-24 | 1990-05-02 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Methods and probes for detecting nucleic acids |
| EP0304845A3 (en) * | 1987-08-28 | 1991-03-06 | Profile Diagnostic Sciences Inc. | Method and kit for assaying gene expressions |
| CA1325761C (en) * | 1987-12-25 | 1994-01-04 | Takanori Oka | Method of detecting an intended nucleic acid in a sample |
| DE3800644A1 (de) * | 1988-01-12 | 1989-07-20 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum hochspezifischen nachweis von nukleinsaeuren in loesung |
| US5104791A (en) * | 1988-02-09 | 1992-04-14 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Particle counting nucleic acid hybridization assays |
| EP0436547B1 (en) * | 1988-05-10 | 1994-11-30 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Process for rapid nucleic acid detection |
| US5185243A (en) * | 1988-08-25 | 1993-02-09 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method for detection of specific nucleic acid sequences |
| AU629845B2 (en) * | 1988-08-30 | 1992-10-15 | Abbott Laboratories | Detection and amplification of target nucleic acid sequences |
| US5858652A (en) * | 1988-08-30 | 1999-01-12 | Abbott Laboratories | Detection and amplification of target nucleic acid sequences |
| GB2225112A (en) * | 1988-11-22 | 1990-05-23 | Ici Plc | Hybridisation probes |
| US5082935A (en) * | 1988-12-15 | 1992-01-21 | Amoco Corporation | Diagnostic reagents made by attaching cytidine containing nucleic acid probes to amino functionalized solid supports by bisulfite mediated transamination |
| JP3015462B2 (ja) * | 1989-02-06 | 2000-03-06 | ジーン‐トラック・システムス | リステリア検出のためのプローブ類及び方法 |
| AU5269590A (en) | 1989-03-10 | 1990-10-09 | Gene-Trak Systems | Immobilized oligonucleotide probes and uses therefor |
| EP0481999B1 (en) * | 1989-03-10 | 1997-07-23 | VYSIS, Inc. | Preventing interference with affinity capture schemes |
| WO1991000926A1 (en) * | 1989-07-11 | 1991-01-24 | Microprobe Corporation | Quantification of bacteria using a nucleic acid hybridization assay |
| US5334501A (en) * | 1989-07-11 | 1994-08-02 | Microprobe Corporation | Quantification of bacteria using a nucleic acid hybridization assay |
| GB8924989D0 (en) * | 1989-11-06 | 1989-12-28 | Scotgen Ltd | Method and device for the detection of antibiotic resistance |
| US5580970A (en) * | 1989-12-01 | 1996-12-03 | Amoco Corporation | Detection of HPV transcripts |
| AU7429591A (en) * | 1990-04-18 | 1991-10-24 | Gene-Trak Systems | Nucleic acid probes for the detection of giardia lamblia |
| EP0529070A1 (en) * | 1991-02-27 | 1993-03-03 | Amoco Corporation | Methods for improving the sensitivity of hybridization assays |
| WO1993020234A1 (en) * | 1992-03-31 | 1993-10-14 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | A rapid, high capacity nucleic acid based assay |
| US7713528B1 (en) | 1993-02-18 | 2010-05-11 | Enzo Therapeutics, Inc. | Method for in vivo delivery of active compounds using reagent conjugate |
| WO1997038131A1 (en) * | 1996-04-11 | 1997-10-16 | Valentina Filippovna Kulikova | Method for detecting a nucleic acid chain to be analysed |
| US5853993A (en) * | 1996-10-21 | 1998-12-29 | Hewlett-Packard Company | Signal enhancement method and kit |
| GB0016833D0 (en) | 2000-07-07 | 2000-08-30 | Lee Helen | Improved dipstick assays (2) |
| US7465540B2 (en) | 2000-09-21 | 2008-12-16 | Luminex Corporation | Multiple reporter read-out for bioassays |
| CN1303221C (zh) * | 2003-01-27 | 2007-03-07 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | 使用亲和放大的集成信号基团的靶核酸检测法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI63596C (fi) * | 1981-10-16 | 1983-07-11 | Orion Yhtymae Oy | Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser |
| FR2518755B1 (fr) * | 1981-12-23 | 1986-04-11 | Pasteur Institut | Sonde contenant un acide nucleique modifie et reconnaissable par des anticorps specifiques et utilisation de cette sonde pour detecter et caracteriser une sequence d'adn homologue |
| GB8306426D0 (en) * | 1983-03-09 | 1983-04-13 | Malcolm A D B | Detecting polynucleotide sequence |
| CA1228811A (en) * | 1983-05-05 | 1987-11-03 | Robert G. Pergolizzi | Assay method utilizing polynucleotide sequences |
| NO843838L (no) * | 1983-09-26 | 1985-03-27 | Ortho Diagnostic Systems Inc | Fremgangsmaate for detektering av nukleinsyre |
| ZA849593B (en) * | 1983-12-12 | 1985-07-31 | Miles Lab | Hybridization assay employing labeled pairs of hybrid binding reagents |
| FR2558172B1 (fr) * | 1984-01-16 | 1986-06-13 | Inst Nat Sante Rech Med | Sonde contenant un acide nucleique modifie et reconnaissance par des anticorps specifiques et utilisation de cette sonde et de ces anticorps specifiques pour detecter et caracteriser une sequence d'adn homologue |
| CA1223222A (en) * | 1984-02-22 | 1987-06-23 | Nanibhushan Dattagupta | Immobilized nucleic acid-containing probes |
| FR2560298B1 (fr) * | 1984-02-28 | 1988-07-15 | Mors | Procede et dispositif de reglage avec precision de la chute de pression d'un fluide initialement sous pression elevee, tel qu'un fluide hydraulique par exemple alimentant un groupe hydraulique, et application du procede au dispositif dans un groupe ou une centrale hydraulique, en etant integre ou non, notamment a une table de machine ou a tout dispositif de support d'outillage |
| NZ211453A (en) * | 1984-03-22 | 1989-01-06 | Biotechnology Research Enterpr | Aryl azides, their preparation and use in the detection, localisation and isolation of polynucleotides |
| US4766062A (en) * | 1984-05-07 | 1988-08-23 | Allied Corporation | Displacement polynucleotide assay method and polynucleotide complex reagent therefor |
-
1985
- 1985-01-02 FI FI850004A patent/FI72146C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-12-17 CH CH5378/85A patent/CH666696A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-12-20 GB GB08531414A patent/GB2169403B/en not_active Expired
- 1985-12-24 BE BE0/216059A patent/BE903937A/fr not_active IP Right Cessation
- 1985-12-27 JP JP60299797A patent/JPH0669400B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-27 NO NO855308A patent/NO166743C/no not_active IP Right Cessation
- 1985-12-29 HU HU855030A patent/HU196453B/hu unknown
- 1985-12-30 ZA ZA859895A patent/ZA859895B/xx unknown
- 1985-12-30 DE DE19853546312 patent/DE3546312A1/de active Granted
- 1985-12-30 IT IT23408/85A patent/IT1201514B/it active
- 1985-12-30 LU LU86238A patent/LU86238A1/fr unknown
- 1985-12-30 RO RO121637A patent/RO94651B/ro unknown
- 1985-12-30 FR FR858519394A patent/FR2575493B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-30 AT AT0376785A patent/AT397514B/de not_active IP Right Cessation
- 1985-12-31 NL NLAANVRAGE8503597,A patent/NL189427C/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-12-31 IL IL77489A patent/IL77489A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-12-31 CA CA000498834A patent/CA1271705A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-31 AU AU51748/85A patent/AU561382B2/en not_active Expired
- 1985-12-31 IE IE333385A patent/IE58290B1/en not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-01-02 SE SE8600011A patent/SE463212B/sv not_active IP Right Cessation
- 1986-01-02 DK DK000386A patent/DK164932C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI72146C (fi) | Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror. | |
| US4563417A (en) | Nucleic acid hybridization assay employing antibodies to intercalation complexes | |
| US4562159A (en) | Diagnostic test for hepatitis B virus | |
| AU597896B2 (en) | Method and kit for performing nucleic acid hybridization assays | |
| CA1253777A (en) | Nucleic acid hybridization assay employing immobilized rna probes | |
| US6555317B2 (en) | Detection of differences in nucleic acids | |
| US5981171A (en) | Diagnostic assays using nucleic acid probes | |
| JPH0740960B2 (ja) | 核酸検出用キット | |
| EP0146815B1 (en) | Nucleic acid hybridization assay employing antibodies to intercalation complexes | |
| EP0062286A1 (en) | Diagnostic test for hepatitis B virus | |
| US4840892A (en) | Polynucleotide hybridization probes | |
| Stark et al. | Immunomagnetic separation and solid-phase detection of Bordetella pertussis | |
| EP0172153B1 (en) | Polynucleotide hybridization probes | |
| WO2000043545A2 (en) | Detection of drug resistant organisms | |
| JPH0531108B2 (fi) | ||
| EP0401313B1 (en) | Macromolecular conjugate | |
| WO2000043546A9 (en) | Detection of drug resistant organisms |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: SANGTEC MEDICAL AB |
|
| FG | Patent granted |
Owner name: SANGTEC MOLECULAR DIAGNOSTICS AB |
|
| MA | Patent expired |