JPS61185200A - 核酸の同定方法 - Google Patents
核酸の同定方法Info
- Publication number
- JPS61185200A JPS61185200A JP60299797A JP29979785A JPS61185200A JP S61185200 A JPS61185200 A JP S61185200A JP 60299797 A JP60299797 A JP 60299797A JP 29979785 A JP29979785 A JP 29979785A JP S61185200 A JPS61185200 A JP S61185200A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hybridization
- probe
- affinity
- poly
- pair
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、溶液中でのハイブリダイゼーシヨンによる核
酸の同定方法に関する。
酸の同定方法に関する。
［従来の技術］
種々のハイブリダイゼーション法が核酸の同定のために
用いられている。その例として、たとえば直接ハイブリ
ダイゼーション法およびすンドイツチハイブリダイゼー
ション法をあげることができる。直接ハイブリダイゼー
ション法においては、核酸試料は溶液中にあるかまたは
固体の担体に固定される。固定されるべき核酸は、１個
の標識されたプローブによって明示される。サンドイッ
チハイブリダイゼーション法（米国特許第４．４８６，
５３９号明細書参照）においては、２個の別々のプロー
ブが用いられ、それらによって同定されるべき核酸が試
料溶液中で明示される。検出プローブ（ｄｅｔｅｃｔｏ
ｒ ｐｒｏｂｅ）は標識物質で標識され、他のプローブ
が固体の担体に固定される。
用いられている。その例として、たとえば直接ハイブリ
ダイゼーション法およびすンドイツチハイブリダイゼー
ション法をあげることができる。直接ハイブリダイゼー
ション法においては、核酸試料は溶液中にあるかまたは
固体の担体に固定される。固定されるべき核酸は、１個
の標識されたプローブによって明示される。サンドイッ
チハイブリダイゼーション法（米国特許第４．４８６，
５３９号明細書参照）においては、２個の別々のプロー
ブが用いられ、それらによって同定されるべき核酸が試
料溶液中で明示される。検出プローブ（ｄｅｔｅｃｔｏ
ｒ ｐｒｏｂｅ）は標識物質で標識され、他のプローブ
が固体の担体に固定される。
［問題点を解決するための手段］
本発明による方法は、少なくとも２個のプローブがハイ
ブリダイゼーション反応に用いられることで特徴づけら
れる。検出プローブには標識が付着される。他のプロー
ブ、いわゆる捕捉プローブ（ｃａｐｔｕｒｉｎｇ ｐｒ
ｏｂｅ）には、他の成分に対して親和性を有する成分が
付着され、このことによってハイブリダイゼーションの
結果できた補足プローブ：標的の核酸：検出プローブの
ハイブリッドをハイブリダイゼーション混合物中に存在
する他の成分から分離することができる。
ブリダイゼーション反応に用いられることで特徴づけら
れる。検出プローブには標識が付着される。他のプロー
ブ、いわゆる捕捉プローブ（ｃａｐｔｕｒｉｎｇ ｐｒ
ｏｂｅ）には、他の成分に対して親和性を有する成分が
付着され、このことによってハイブリダイゼーションの
結果できた補足プローブ：標的の核酸：検出プローブの
ハイブリッドをハイブリダイゼーション混合物中に存在
する他の成分から分離することができる。
２個の異なるプローブが用いられ両方のプローブがとも
に溶液相にある新しいハイブリダイゼーション法が今や
開発された。この方法でのハイブリダイゼーションの反
応は、ハイブリダイゼーションにかかわる標的の核酸お
よび該２個のプローブの両方が同じ溶液相にあるので、
１個のプローブが固体の担体に固定されているサンドイ
ッチハイブリダイゼーション法におけるよりもかなり急
速に行なわれる。本発明の方法によれば、１時間のイン
キュベーシッン時間で充分である。シングルステップハ
イブリダイゼーシッン（米国特許第４．４Ｈ，５３９号
明細書参照）においては、１２時間未満では充分なハイ
ブリダイゼーションが達成されない。ツーステップハイ
ブリダイゼーション（ダン（Ｄｕｎｎ）およびハラセル
（Ｈａｓｓｅｌｌ）の「セル（Ｃｅｌｌ）、１２巻、２
３〜３６頁、１９７７年」参照）が行なわれるときは、
少なくとも２４時間のハイブリダイゼーション時間が必
要である。
に溶液相にある新しいハイブリダイゼーション法が今や
開発された。この方法でのハイブリダイゼーションの反
応は、ハイブリダイゼーションにかかわる標的の核酸お
よび該２個のプローブの両方が同じ溶液相にあるので、
１個のプローブが固体の担体に固定されているサンドイ
ッチハイブリダイゼーション法におけるよりもかなり急
速に行なわれる。本発明の方法によれば、１時間のイン
キュベーシッン時間で充分である。シングルステップハ
イブリダイゼーシッン（米国特許第４．４Ｈ，５３９号
明細書参照）においては、１２時間未満では充分なハイ
ブリダイゼーションが達成されない。ツーステップハイ
ブリダイゼーション（ダン（Ｄｕｎｎ）およびハラセル
（Ｈａｓｓｅｌｌ）の「セル（Ｃｅｌｌ）、１２巻、２
３〜３６頁、１９７７年」参照）が行なわれるときは、
少なくとも２４時間のハイブリダイゼーション時間が必
要である。
少なくとも２個のプローブが本発明による方法において
有利にも用いられる。プローブは標的の核酸に充分に相
同な（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）核酸断片である。同定さ
れるべき核酸中のお互いに比較的接近した部位にプロー
ブが相同であることが、必要ではないが有利である。プ
ローブはお互いにＩＩＪ［してはならない。
有利にも用いられる。プローブは標的の核酸に充分に相
同な（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）核酸断片である。同定さ
れるべき核酸中のお互いに比較的接近した部位にプロー
ブが相同であることが、必要ではないが有利である。プ
ローブはお互いにＩＩＪ［してはならない。
プローブは、組みかえＤＮＡ技術によって合成的もしく
は半合成的に調製することもできるし、天然から直接単
離された核酸から調整することもできる。プローブはま
た、いくつかの筋から商業的に入手できる。プローブは
適当なベクターに結合していてもよい。プローブはベク
タ一部分を含んでいてもよいし、ベクタ一部分が完全に
欠けていてもよい。
は半合成的に調製することもできるし、天然から直接単
離された核酸から調整することもできる。プローブはま
た、いくつかの筋から商業的に入手できる。プローブは
適当なベクターに結合していてもよい。プローブはベク
タ一部分を含んでいてもよいし、ベクタ一部分が完全に
欠けていてもよい。
検出プローブは適当な標識で標識される。標識として種
々の放射性同位元素または放射的に標識された化合物を
用いてよい。標識物質はまた、螢光性のもの、冷光を発
するもの、光を発するもの、または酵素的もしくは免疫
学的に明示しうるものなどであってよい。ビオチンとア
ビジンもしくはストレプトアビジン、ランタニドキレー
ト、フェリチンとヘム化合物、およびアセトキシアセチ
ルフルオレン誘導体（ＶＯ第８３０２２８６号明細書参
照）のような免疫学的に明示しうるハプテンをその例と
してあげることができる。タンパク質で仲介された同定
もまた可能である。本発明による方法は、用いられた標
識によらない。核酸のハイブリダイゼーシヨンのために
好適な現在知られているすべての標識物質、およびそれ
らが将来発展されるものを制限なく本発明の方法に用い
ることができる。
々の放射性同位元素または放射的に標識された化合物を
用いてよい。標識物質はまた、螢光性のもの、冷光を発
するもの、光を発するもの、または酵素的もしくは免疫
学的に明示しうるものなどであってよい。ビオチンとア
ビジンもしくはストレプトアビジン、ランタニドキレー
ト、フェリチンとヘム化合物、およびアセトキシアセチ
ルフルオレン誘導体（ＶＯ第８３０２２８６号明細書参
照）のような免疫学的に明示しうるハプテンをその例と
してあげることができる。タンパク質で仲介された同定
もまた可能である。本発明による方法は、用いられた標
識によらない。核酸のハイブリダイゼーシヨンのために
好適な現在知られているすべての標識物質、およびそれ
らが将来発展されるものを制限なく本発明の方法に用い
ることができる。
他のプローブ、いわゆる捕捉プローブには、他の成分に
対して親水性を有する成分が付着される。ビオチン−ア
ビジンもしくはストレプトアビジン、重金属誘導体−チ
オ基、およびポリｄＧ−ポリｄＣ，ポリｄＡ−ポリｄＴ
、およびｄＡ−ボリＵのような種々のホモポリヌクレオ
チドが好適な親和性のペア（ａ（ＴＪｎｌｔｙ ｐａｉ
ｒ）である。他の親和性のペアもまた用いることができ
るが、そのばあい各成分はお互いに充分強力な親和性を
有していなければならない。好適な親和性のペアは、免
疫学的方法に用いられるリガンドおよびコンジュゲート
（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）に見出される。
対して親水性を有する成分が付着される。ビオチン−ア
ビジンもしくはストレプトアビジン、重金属誘導体−チ
オ基、およびポリｄＧ−ポリｄＣ，ポリｄＡ−ポリｄＴ
、およびｄＡ−ボリＵのような種々のホモポリヌクレオ
チドが好適な親和性のペア（ａ（ＴＪｎｌｔｙ ｐａｉ
ｒ）である。他の親和性のペアもまた用いることができ
るが、そのばあい各成分はお互いに充分強力な親和性を
有していなければならない。好適な親和性のペアは、免
疫学的方法に用いられるリガンドおよびコンジュゲート
（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）に見出される。
／′Ｓイブリダイゼーション反応が行なわれる前に、ハ
イブリダイゼーション溶液中にジングルストランドのか
たちの標的の核酸を放出するように試料が処理される。
イブリダイゼーション溶液中にジングルストランドのか
たちの標的の核酸を放出するように試料が処理される。
ハイブリダイゼーションは、標的の核酸、標識されたプ
ローブおよび捕捉プローブが、必要なばあいにジングル
ストランドにされたハイブリダイゼーション混合物中で
行なわれる。種々の好適なバッファーをハイブリダイゼ
ーション溶液として用いることができる。ハイブリダイ
ゼーションは０〜８０℃の温度範囲内でおこるが、６５
℃の温度を用いるのが有利である。ハイブリダイゼーシ
ョン溶液がホルムアミド（４０〜５５％）を含をしてい
るときは、３７℃の温度を用いることができる。ハイブ
リダイゼーション時間としては１時間で充分である。
ローブおよび捕捉プローブが、必要なばあいにジングル
ストランドにされたハイブリダイゼーション混合物中で
行なわれる。種々の好適なバッファーをハイブリダイゼ
ーション溶液として用いることができる。ハイブリダイ
ゼーションは０〜８０℃の温度範囲内でおこるが、６５
℃の温度を用いるのが有利である。ハイブリダイゼーシ
ョン溶液がホルムアミド（４０〜５５％）を含をしてい
るときは、３７℃の温度を用いることができる。ハイブ
リダイゼーション時間としては１時間で充分である。
ハイブリダイゼーションがおこったときは、溶液は、必
要なばあいに、親和性のペアに有利な条件にするために
希釈される。そののち混合物は親和性のペアのもう一方
と接触される。捕捉プローブ二標的の核酸：検出プロー
ブのハイブリッドを補足するために、アフィニティーク
ロマトグラフィーカラム、フィルター、プラスチック表
面およびガラス表面などを用いることができる。
要なばあいに、親和性のペアに有利な条件にするために
希釈される。そののち混合物は親和性のペアのもう一方
と接触される。捕捉プローブ二標的の核酸：検出プロー
ブのハイブリッドを補足するために、アフィニティーク
ロマトグラフィーカラム、フィルター、プラスチック表
面およびガラス表面などを用いることができる。
アフィニティーカラムの担体材料は、たとえばセルロー
ス、ラテックス、ポリアクリルアミド、デキストランま
たはアガロースであってよい。これらの材料はまた試験
管中での懸濁液としても用いることができる。その内部
表面に親和性のペアの他の成分が固定化された試験管を
用いることもまた有利である。捕捉プローブに付着した
成分に対して親和性を有する成分がそれに固定化されう
るということが、選ばれた材料の先要条件である。
ス、ラテックス、ポリアクリルアミド、デキストランま
たはアガロースであってよい。これらの材料はまた試験
管中での懸濁液としても用いることができる。その内部
表面に親和性のペアの他の成分が固定化された試験管を
用いることもまた有利である。捕捉プローブに付着した
成分に対して親和性を有する成分がそれに固定化されう
るということが、選ばれた材料の先要条件である。
試料中に同定されるべき核酸が含まれていると、ハイブ
リダイゼーションの結果、捕捉プローブ：標的の核酸：
検出プローブのハイブリッドかえられる。分別のあいだ
にこのハイブリッドは担体に付着する。担体に付着した
分画の標識は、従来の方法によって担体から直接または
溶出液から溶出したのちに測定することができる。
リダイゼーションの結果、捕捉プローブ：標的の核酸：
検出プローブのハイブリッドかえられる。分別のあいだ
にこのハイブリッドは担体に付着する。担体に付着した
分画の標識は、従来の方法によって担体から直接または
溶出液から溶出したのちに測定することができる。
アフィニティークロマトグラフィーのかわりに他のシス
テム、たとえば相抽出または磁場を分別に用いることが
できる。
テム、たとえば相抽出または磁場を分別に用いることが
できる。
［実施例］
つぎに本発明を実施例を用いてさらに詳しく説明するが
、本発明はもとよりこれらに限られるものではない。
、本発明はもとよりこれらに限られるものではない。
実施例１
ホモポリヌクレオチドによる細胞溶解産物からのアデノ
ウィルスＤＡＮの同定 用いた検出プローブは １で標識された組みかえファ
ージｍＫＴ８１２０Ｂであり、該ファージは、アデノウ
ィルス２型の遺伝子地図上の４２−４５．３％の位置か
らのアデノウィルスゲノムのＢｇｌ ＩＩ断片を含んで
いた。該組みかえファージは、菌保存機関であるトイチ
ェ ザムルンクフォン ミクロオルガニスメン＜Ｄｅｕ
ｔｓａｈｅＳａｌｆｆｌｌｕｎｇ Ｙｏｎ旧ｃｒｏｏ
ｒｇａｎｉｓｍｅｎ（ＤＳＭ））に寄託番号ＤＳＭ ２
８２７で寄託されている。該ファージの特性は７ｘ １
０’ ｃｐＩｌ／μｇ ＤＮＡであった。該プローブは
、ランキ（Ｒａｎｋｉ）らの「ジーン（Ｇｅｎｅ）、７
７〜８５頁、１９８３年」に一層詳細に記載されている
。 捕捉ブσ−ブは組みかえプラスミドｐＫＴＨ１２ｏ
２であり、該プラスミドは菌保存機関であるトイチェ
ザムルンク フォノ ミクロオルガニスメンに寄託番号
ＤＳＭ ２８２４で寄託されており、プラスミドｐＢＲ
３２２にクローニングされたアデノウィルスのＢａａ＋
ＨＩ Ｄ断片（遺伝子地図の位置＝２９−４２％）から
なっていた。組みかえプラスミドｐＫＴＨ１２０２（Ｄ
ＳＭ ２８２４）は制限酵素１１ａｅＩＩＩを用いて断
片化し、その断片の３°末端にターミナルトランスフエ
ラーゼ酵素を用いてポリへの尾を連結した。ポリへの尾
の長さは３Ｉ＋−八を組み込むことによって測定した。
ウィルスＤＡＮの同定 用いた検出プローブは １で標識された組みかえファ
ージｍＫＴ８１２０Ｂであり、該ファージは、アデノウ
ィルス２型の遺伝子地図上の４２−４５．３％の位置か
らのアデノウィルスゲノムのＢｇｌ ＩＩ断片を含んで
いた。該組みかえファージは、菌保存機関であるトイチ
ェ ザムルンクフォン ミクロオルガニスメン＜Ｄｅｕ
ｔｓａｈｅＳａｌｆｆｌｌｕｎｇ Ｙｏｎ旧ｃｒｏｏ
ｒｇａｎｉｓｍｅｎ（ＤＳＭ））に寄託番号ＤＳＭ ２
８２７で寄託されている。該ファージの特性は７ｘ １
０’ ｃｐＩｌ／μｇ ＤＮＡであった。該プローブは
、ランキ（Ｒａｎｋｉ）らの「ジーン（Ｇｅｎｅ）、７
７〜８５頁、１９８３年」に一層詳細に記載されている
。 捕捉ブσ−ブは組みかえプラスミドｐＫＴＨ１２ｏ
２であり、該プラスミドは菌保存機関であるトイチェ
ザムルンク フォノ ミクロオルガニスメンに寄託番号
ＤＳＭ ２８２４で寄託されており、プラスミドｐＢＲ
３２２にクローニングされたアデノウィルスのＢａａ＋
ＨＩ Ｄ断片（遺伝子地図の位置＝２９−４２％）から
なっていた。組みかえプラスミドｐＫＴＨ１２０２（Ｄ
ＳＭ ２８２４）は制限酵素１１ａｅＩＩＩを用いて断
片化し、その断片の３°末端にターミナルトランスフエ
ラーゼ酵素を用いてポリへの尾を連結した。ポリへの尾
の長さは３Ｉ＋−八を組み込むことによって測定した。
ポリＡの尾の平均の長さは＾の約７０残基であった。補
足プローブは用いる前に沸騰させることによって変成さ
せた。
足プローブは用いる前に沸騰させることによって変成さ
せた。
用いた試料は、アデノウィルスの感染したＡ−５４９細
胞からなっていた。該細胞を感染後２１時間インキュベ
ートした。細胞を集め、１％ドデシル硫酸ナトリウム溶
液を用いて溶解した。溶液は約１０６細胞／ ｍｌを有
していた。超音波処理によってその粘度を下げた。同様
に処理された感染されていないＡ−５４９細胞をコント
ロールとして用いた。ハイブリダイゼーシヲンする前に
試料を５分間、０．０２Ｍ ＮａＯＨ中で沸騰させ、０
℃に冷却し、酢酸で中性にした。
胞からなっていた。該細胞を感染後２１時間インキュベ
ートした。細胞を集め、１％ドデシル硫酸ナトリウム溶
液を用いて溶解した。溶液は約１０６細胞／ ｍｌを有
していた。超音波処理によってその粘度を下げた。同様
に処理された感染されていないＡ−５４９細胞をコント
ロールとして用いた。ハイブリダイゼーシヲンする前に
試料を５分間、０．０２Ｍ ＮａＯＨ中で沸騰させ、０
℃に冷却し、酢酸で中性にした。
テストのために、５０００００ｃｐａ＋の検出プローブ
、５０ｎｇの捕捉プローブＤＮＡおよび１０Ｍｇの試料
を試験管中に一緒に入れた。容量を５０Ｍｇに調節し、
バッファー溶液として０．６Ｈの塩化ナトリウム、Ｏ，
ＯＧＭのクエン酸ナトリウム、０．０２Ｍのリン酸ナト
リウム（ｐＨ７，８）および０．５％ ドデシル硫酸ナ
トリウムを用いた。混合物を６５℃で１時間インキュベ
ートした。
、５０ｎｇの捕捉プローブＤＮＡおよび１０Ｍｇの試料
を試験管中に一緒に入れた。容量を５０Ｍｇに調節し、
バッファー溶液として０．６Ｈの塩化ナトリウム、Ｏ，
ＯＧＭのクエン酸ナトリウム、０．０２Ｍのリン酸ナト
リウム（ｐＨ７，８）および０．５％ ドデシル硫酸ナ
トリウムを用いた。混合物を６５℃で１時間インキュベ
ートした。
ハイブリダイゼーション後、溶液を２０℃に冷却し、オ
リゴｄＴセルロース １ｍｌををするクロマトグラフィ
ーカラムにゆっくり通した。カラムを通した溶液を回収
し、再びカラムに通した。
リゴｄＴセルロース １ｍｌををするクロマトグラフィ
ーカラムにゆっくり通した。カラムを通した溶液を回収
し、再びカラムに通した。
そののちカラムを、０．１５）ｌの塩化ナトリウム、０
、（３１５Ｍのリン酸ナトリウム（ｐｌ＋７．６＞およ
び０．５％ドデシル硫酸ナトリウムを含有する溶液２０
ｍ１で洗浄した。付着したＤＮＡは０．０２Ｍ ＮａＯ
Ｈ１ｍ１を用いることによって最終的に取りはずされた
。この溶液を回収し、その放射能を決定した。結果を第
１表に示す。
、（３１５Ｍのリン酸ナトリウム（ｐｌ＋７．６＞およ
び０．５％ドデシル硫酸ナトリウムを含有する溶液２０
ｍ１で洗浄した。付着したＤＮＡは０．０２Ｍ ＮａＯ
Ｈ１ｍ１を用いることによって最終的に取りはずされた
。この溶液を回収し、その放射能を決定した。結果を第
１表に示す。
第 １ 表
実施例２
ビオチン−ストレプトアビジンによるトラコーマクラミ
ゾイアＤＮＡの同定 用いた検出プローブは ■で標識した組みかえファー
ジａｌＫＴＩＩ １２４５であり、該ファージはｐＫＴ
１１１２２（ｌクローンからの２つのＢａｍ１ｌｌ−３
ａｌ ｌ ＤＮＡ断片を含んでおり、それら２つのＤＮ
Ａ断片はＭｌＳｍｐ８ベクターに一緒に連結した。ｐＫ
ＴＨＬ２２０クローンは菌保存機関であるトイチェ ザ
ムルンク フォノ ミクロオルガニスメンに寄託番号Ｄ
ＳＭ ２８２５で寄託されており、パルバ（Ｐａｌｖａ
）らのｒ ＦＥＭＳ ミクロバイオロジー レターズ
（旧ｃｒｏｂｌｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ）、２３巻
、Ｈ−ｇ９頁、１９８４年」に記載されている。
ゾイアＤＮＡの同定 用いた検出プローブは ■で標識した組みかえファー
ジａｌＫＴＩＩ １２４５であり、該ファージはｐＫＴ
１１１２２（ｌクローンからの２つのＢａｍ１ｌｌ−３
ａｌ ｌ ＤＮＡ断片を含んでおり、それら２つのＤＮ
Ａ断片はＭｌＳｍｐ８ベクターに一緒に連結した。ｐＫ
ＴＨＬ２２０クローンは菌保存機関であるトイチェ ザ
ムルンク フォノ ミクロオルガニスメンに寄託番号Ｄ
ＳＭ ２８２５で寄託されており、パルバ（Ｐａｌｖａ
）らのｒ ＦＥＭＳ ミクロバイオロジー レターズ
（旧ｃｒｏｂｌｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ）、２３巻
、Ｈ−ｇ９頁、１９８４年」に記載されている。
用いた補足プローブは組みかえプラスミドｐＫＴＨ１２
５Ｇであった。このプラスミドは、プラスミドｐＫＴＨ
１２２０（ＤＳＭ ２８２５）からの ２．９ｋｂの５
ａｌｌ−Ｃ＃ａｌ断片およびベクターｐＡＴ１５３から
なっていた。
５Ｇであった。このプラスミドは、プラスミドｐＫＴＨ
１２２０（ＤＳＭ ２８２５）からの ２．９ｋｂの５
ａｌｌ−Ｃ＃ａｌ断片およびベクターｐＡＴ１５３から
なっていた。
知られたニックトランスレーション法（リグビー （Ｒ
ｌｇｂｙ）らの「ジャーナル オブ モレキュラー バ
イオロジー、 １１３、２３７〜２５１頁、１９７７年
参照）および基質としてビオチン−Ｕ−ｔｌＴＰ （
、ベテスダ リサーチ ラボラトリーズ（Ｂｅｔｈｅｓ
ｄａ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）
製）を用いてビオチン分子をｐＫＴＨ１２５０ＤＮＡに
共付結合的に連結させた。補足プローブは、用いる前に
１０ｍＭのトリス−Ｃ＃（ｐＨ７，８）および１ａ＋Ｍ
のＥＤＴＡからなるバッファー中で５分間沸騰させた。
ｌｇｂｙ）らの「ジャーナル オブ モレキュラー バ
イオロジー、 １１３、２３７〜２５１頁、１９７７年
参照）および基質としてビオチン−Ｕ−ｔｌＴＰ （
、ベテスダ リサーチ ラボラトリーズ（Ｂｅｔｈｅｓ
ｄａ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）
製）を用いてビオチン分子をｐＫＴＨ１２５０ＤＮＡに
共付結合的に連結させた。補足プローブは、用いる前に
１０ｍＭのトリス−Ｃ＃（ｐＨ７，８）および１ａ＋Ｍ
のＥＤＴＡからなるバッファー中で５分間沸騰させた。
標的の核酸は、組みかえプラスミドｐＫＴＩＩ１２２０
（ＤＳＭ ２ｇ２５）であった。このプラスミドは、ベ
クターｐＢＲ３２２に連結した、トラコーマクラミゾイ
ア（ＣｈｌＢｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏＩＩａｔｌｓ）の
特性を示すＤＮＡの約１０ｋｂを含有していた。該プラ
スミドは、細菌のゲノムＤＮＡをあられす標準的なりＮ
八として役立った。使用する前に該プラスミドは０．０
２ＭのＮａ０Ｉｌ中で５分間沸騰させ、そののち酢酸で
溶液を中性にした。
（ＤＳＭ ２ｇ２５）であった。このプラスミドは、ベ
クターｐＢＲ３２２に連結した、トラコーマクラミゾイ
ア（ＣｈｌＢｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏＩＩａｔｌｓ）の
特性を示すＤＮＡの約１０ｋｂを含有していた。該プラ
スミドは、細菌のゲノムＤＮＡをあられす標準的なりＮ
八として役立った。使用する前に該プラスミドは０．０
２ＭのＮａ０Ｉｌ中で５分間沸騰させ、そののち酢酸で
溶液を中性にした。
親和性の材料として用いるストレプトアビジンを、アク
セン（Ａｘｅｎ）らの「ネーチャー、 ２１４．１３０
２〜１３０４頁、１９６７年」にしたがってＣＮＢｒ活
性化セファロース（ファルマシア（ｐｈａｒｍａｃｉａ
）製）に固定した。
セン（Ａｘｅｎ）らの「ネーチャー、 ２１４．１３０
２〜１３０４頁、１９６７年」にしたがってＣＮＢｒ活
性化セファロース（ファルマシア（ｐｈａｒｍａｃｉａ
）製）に固定した。
テストのために、５０００００ｃｐＩｌの検出プローブ
、５０ｎｇの補足プローブＤＮＡおよびｌＯｎｇの標的
のＤＮＡを試験管中に一緒に入れた。容量を２０Ｍｇに
調節し、バッファー溶液は実施例１と同じものを用いた
。コントロールのＤＮＡは子牛胸腺ＤＮ＾であった。
、５０ｎｇの補足プローブＤＮＡおよびｌＯｎｇの標的
のＤＮＡを試験管中に一緒に入れた。容量を２０Ｍｇに
調節し、バッファー溶液は実施例１と同じものを用いた
。コントロールのＤＮＡは子牛胸腺ＤＮ＾であった。
混合物を６５℃で６０分間インキュベートした。
そののち、０．１Ｍのトリス−ＣＩ （ｐＨ７、５）、
０．１Ｈの？ＪａＣ１，２ｍＭのＭｇ（Ｊ：および０．
０５％のトリトンＸ−１００からなるバッファー溶液５
００μｇを加えた。最後に溶液をストレプトアビジン−
セファロースカラム０．２ｍｌ中で分別した。叙上のバ
ッファー１０ｍ１、および０．０１５Ｍの塩化ナトリウ
ム、０．０１５Ｍのリン酸ナトリウム（ｐＨ７，６）お
よび０．５％ドデシル硫酸ナトリウム（５０℃）のバッ
ファー１０ｍ１で洗浄した。こうしてビオチン化された
（ｂｉｏｔ １ｎｙｌａｔｅｄ）ＤＮＡはストレプトア
ビジンに付着し、一方その他のＤＮＡはカラムを通り過
ぎた。放射性のプローブはハイブリッドの形成の結果と
してのみ付着した。カラム全体をガンマカウンターのカ
ウンター管内に移すことによって捕捉された放射能を決
定した。結果を第２表に示す。
０．１Ｈの？ＪａＣ１，２ｍＭのＭｇ（Ｊ：および０．
０５％のトリトンＸ−１００からなるバッファー溶液５
００μｇを加えた。最後に溶液をストレプトアビジン−
セファロースカラム０．２ｍｌ中で分別した。叙上のバ
ッファー１０ｍ１、および０．０１５Ｍの塩化ナトリウ
ム、０．０１５Ｍのリン酸ナトリウム（ｐＨ７，６）お
よび０．５％ドデシル硫酸ナトリウム（５０℃）のバッ
ファー１０ｍ１で洗浄した。こうしてビオチン化された
（ｂｉｏｔ １ｎｙｌａｔｅｄ）ＤＮＡはストレプトア
ビジンに付着し、一方その他のＤＮＡはカラムを通り過
ぎた。放射性のプローブはハイブリッドの形成の結果と
してのみ付着した。カラム全体をガンマカウンターのカ
ウンター管内に移すことによって捕捉された放射能を決
定した。結果を第２表に示す。
第 ２ 表
実施例３
抗原一抗体ペアによるプラスミドｐＢＲ３２２ＤＮＡの
同定 用いた検出プローブは、プラスミドｐＢＲ３２２（いく
つかのルートから商業的に入手可能である）からＰｓｔ
ｌ−８ａｌｔ（３ＧＩ３−６５１）断片を取り除いた派
生物であった。該プラスミドを、知られた方／Ｊ：（フ
ォースター（Ｆｏｒｓｔｅｒ）らの［ヌクレイツク ア
シッズ リサーチ、１３．７４５〜７６１頁、１９８５
年」参照）および商業的に入手可能な試薬（ブレサ（Ｂ
ｒｅｓａ） 、アゾレード（Ａｄｅｌａｉｄｅ）、オー
ストラリア）を用いフォトビオチン （ｐｈｏｔｏｂｔｏｔ ｉｎ）で標識した。
同定 用いた検出プローブは、プラスミドｐＢＲ３２２（いく
つかのルートから商業的に入手可能である）からＰｓｔ
ｌ−８ａｌｔ（３ＧＩ３−６５１）断片を取り除いた派
生物であった。該プラスミドを、知られた方／Ｊ：（フ
ォースター（Ｆｏｒｓｔｅｒ）らの［ヌクレイツク ア
シッズ リサーチ、１３．７４５〜７６１頁、１９８５
年」参照）および商業的に入手可能な試薬（ブレサ（Ｂ
ｒｅｓａ） 、アゾレード（Ａｄｅｌａｉｄｅ）、オー
ストラリア）を用いフォトビオチン （ｐｈｏｔｏｂｔｏｔ ｉｎ）で標識した。
用いた捕捉プローブは、ｐＢＲ３２２のＰｓｔ ｌ−３
ａｌ Ｉ断片が導入された組みかえファージＭ１３ａ＋
ｐＨからのＤＮＡであった。該ＤＮＡは知られた方法（
オルゲニンクス（Ｏｒｇｅｎ １ｃｓ）Ｌｔｄ 、ヤブ
ン（Ｙａｖｎｅ）、イスラエル）を用いてスルホン化さ
れていた。
ａｌ Ｉ断片が導入された組みかえファージＭ１３ａ＋
ｐＨからのＤＮＡであった。該ＤＮＡは知られた方法（
オルゲニンクス（Ｏｒｇｅｎ １ｃｓ）Ｌｔｄ 、ヤブ
ン（Ｙａｖｎｅ）、イスラエル）を用いてスルホン化さ
れていた。
試料はプラスミドｐＢＲ３２２を運ぶ大腸菌１１８ＩＯ
Ｉであり、その量はクロラムフェニコール増幅（マニア
ティス（ＭａｎｉａｔｉＳ）らの［モレキュラークロー
ニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ） 、ア
ラボラトリ−マニュアル（Ａ １ａｂｏｒａｔｏｒｙ
ｍａｎｕａｌ）コールド スプリング ハーバ−ラボ
ラトリ−（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ）、１９８２年」参照）を用いて増
加させた。細菌細胞をリゾチームで溶解し、ついでパル
バの「ジャーナル オブ クリニカル ミクロバイオロ
ジー （Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、旧ｃｒｏｂｉｏ１）、１８
．９２〜１００頁、１９８３年」に記載されているよう
にしてＮａ０ＩＩ中で沸騰させた。
Ｉであり、その量はクロラムフェニコール増幅（マニア
ティス（ＭａｎｉａｔｉＳ）らの［モレキュラークロー
ニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ） 、ア
ラボラトリ−マニュアル（Ａ １ａｂｏｒａｔｏｒｙ
ｍａｎｕａｌ）コールド スプリング ハーバ−ラボ
ラトリ−（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ）、１９８２年」参照）を用いて増
加させた。細菌細胞をリゾチームで溶解し、ついでパル
バの「ジャーナル オブ クリニカル ミクロバイオロ
ジー （Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、旧ｃｒｏｂｉｏ１）、１８
．９２〜１００頁、１９８３年」に記載されているよう
にしてＮａ０ＩＩ中で沸騰させた。
アンチスルホン（ａｎｔｉｓｕｌ「ｏｎｅ）モノクロー
ナル抗体を用い標準的な方法（マソカーン（Ｍｃｋｅａ
ｒｎ）の「ハイブリドーマズ：ア ニューディメンジョ
ン イン バイオロジカル アナリシスイズ（Ｈｙｂｒ
ｉｄｏｍａｓ ：ΔＮｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ ｉ
ｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ） 、ケネ
ット（Ｋｃｎｎｅｔｔ）ら編、プレヌム プレス（Ｐｌ
ｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）、１９８０年」参照）によって
ポリスチレンマイクロタイター壁を肢位した。
ナル抗体を用い標準的な方法（マソカーン（Ｍｃｋｅａ
ｒｎ）の「ハイブリドーマズ：ア ニューディメンジョ
ン イン バイオロジカル アナリシスイズ（Ｈｙｂｒ
ｉｄｏｍａｓ ：ΔＮｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ ｉ
ｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ） 、ケネ
ット（Ｋｃｎｎｅｔｔ）ら編、プレヌム プレス（Ｐｌ
ｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）、１９８０年」参照）によって
ポリスチレンマイクロタイター壁を肢位した。
テストのために、溶解した大腸菌細胞（ｐＢｌ？３２２
を有するものおよび有さないものの両方）５Ｘ１０６を
、ハイブリダイゼーション混合物５０μΩ中に補足ＤＮ
Ａ １１００ｎおよび検出プローブｌＱＯｎｇとともに
一緒にした。５％ポリエチレングリコール（ＰＩＥＧ
６０００）を混合物に加えたことおよびドデシル硫酸ナ
トリウムの濃度がｏ、ｉｘであったほかは、条件は実施
例１と同じであった。
を有するものおよび有さないものの両方）５Ｘ１０６を
、ハイブリダイゼーション混合物５０μΩ中に補足ＤＮ
Ａ １１００ｎおよび検出プローブｌＱＯｎｇとともに
一緒にした。５％ポリエチレングリコール（ＰＩＥＧ
６０００）を混合物に加えたことおよびドデシル硫酸ナ
トリウムの濃度がｏ、ｉｘであったほかは、条件は実施
例１と同じであった。
ハイブリダイゼーション後、０．０２Ｍのリン酸ナトリ
ウム（ｐＨ１７，６）を加えることによって溶液を２５
０μｇに希釈し、そののち溶液を抗体が被覆されたマイ
クロタイター壁に移した。これを３７℃で２時間インキ
ュベートした。該壁をつぎに０．１５Ｍの塩化ナトリウ
ム、 ０．０２Ｍのリン酸ナト’） ラム（ｐＨ７，６
） オ、Ｊ：び０．０５％ノ） ＩＪトンＸ−１００を
含有する溶液で洗浄した。リアリー（Ｌｅａｒｙ）らの
「プロシーディンゲス オブ ナショナルアカデミ−オ
ブ サイエンスイズ オブザ ユナイテッド ステイツ
オブ アメリカ、８０．４０４５〜４０４９頁、１９
８３年」に記載されているようにしてストレプトアビジ
ン（ベテスダ リサーチ ラボラトリーズ（ＢＲＬ）製
）を加え、洗浄し、ビオチン化されたアルカリホスファ
ターゼ（ＢＲＬ製）を加え、洗浄することによって、検
出プローブの存在を見えるようにした。最後にジェタノ
ールアミンバッファー（ｐ）１１０）中のｐ−ニトロフ
ェニルホスフェート（シグマ製） （３５ｓｇ／ｍ１） ２５０μｇを加えた。６０分後、反応を停止させ、４１
０ｎｍにおける吸収を測定した。結果を第３表に示す。
ウム（ｐＨ１７，６）を加えることによって溶液を２５
０μｇに希釈し、そののち溶液を抗体が被覆されたマイ
クロタイター壁に移した。これを３７℃で２時間インキ
ュベートした。該壁をつぎに０．１５Ｍの塩化ナトリウ
ム、 ０．０２Ｍのリン酸ナト’） ラム（ｐＨ７，６
） オ、Ｊ：び０．０５％ノ） ＩＪトンＸ−１００を
含有する溶液で洗浄した。リアリー（Ｌｅａｒｙ）らの
「プロシーディンゲス オブ ナショナルアカデミ−オ
ブ サイエンスイズ オブザ ユナイテッド ステイツ
オブ アメリカ、８０．４０４５〜４０４９頁、１９
８３年」に記載されているようにしてストレプトアビジ
ン（ベテスダ リサーチ ラボラトリーズ（ＢＲＬ）製
）を加え、洗浄し、ビオチン化されたアルカリホスファ
ターゼ（ＢＲＬ製）を加え、洗浄することによって、検
出プローブの存在を見えるようにした。最後にジェタノ
ールアミンバッファー（ｐ）１１０）中のｐ−ニトロフ
ェニルホスフェート（シグマ製） （３５ｓｇ／ｍ１） ２５０μｇを加えた。６０分後、反応を停止させ、４１
０ｎｍにおける吸収を測定した。結果を第３表に示す。
第 ３ 表
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 同じ溶液相にある検出プローブおよび捕捉プローブ
の少なくとも２個のプローブをハイブリダイゼーション
法において用い、該検出プローブは検出しうる標識で標
識され、該捕捉プローブには親和性のペアーの一方が付
着し、ハイブリダイゼーション反応で生成した捕捉プロ
ーブ：標的の核酸：検出プローブのハイブリッドが親和
性のペアのもう一方によって単離されることを特徴とす
る核酸の同定方法。 ２ 親和性のペアがビオチン−ストレプトアビジンまた
はビオチン−アビジンである特許請求の範囲第１項記載
の方法。 ３ 親和性のペアがホモポリヌクレオチドのペアである
特許請求の範囲第１記載の方法。 ４ 親和性のペアがポリｄＣ−ポリｄＧである特許請求
の範囲第１項または第３項記載の方法。 ５ 親和性のペアがポリｄＡ−ポリｄＴである特許請求
の範囲第１項または第３項記載の方法。 ６ 親和性のペアがポリｄＡ−ポリＵである特許請求の
範囲第１項または第３項記載の方法。 ７ 親和性のペアが重金属誘導体−チオ基である特許請
求の範囲第１項記載の方法。 ８ 親和性のペアが抗原一抗体である特許請求の範囲第
１項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI850004A FI72146C (fi) | 1985-01-02 | 1985-01-02 | Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror. |
| FI850004 | 1985-01-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61185200A true JPS61185200A (ja) | 1986-08-18 |
| JPH0669400B2 JPH0669400B2 (ja) | 1994-09-07 |
Family
ID=8520136
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60299797A Expired - Lifetime JPH0669400B2 (ja) | 1985-01-02 | 1985-12-27 | 核酸の同定方法 |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0669400B2 (ja) |
| AT (1) | AT397514B (ja) |
| AU (1) | AU561382B2 (ja) |
| BE (1) | BE903937A (ja) |
| CA (1) | CA1271705A (ja) |
| CH (1) | CH666696A5 (ja) |
| DE (1) | DE3546312A1 (ja) |
| DK (1) | DK164932C (ja) |
| FI (1) | FI72146C (ja) |
| FR (1) | FR2575493B1 (ja) |
| GB (1) | GB2169403B (ja) |
| HU (1) | HU196453B (ja) |
| IE (1) | IE58290B1 (ja) |
| IL (1) | IL77489A (ja) |
| IT (1) | IT1201514B (ja) |
| LU (1) | LU86238A1 (ja) |
| NL (1) | NL189427C (ja) |
| NO (1) | NO166743C (ja) |
| RO (1) | RO94651B (ja) |
| SE (1) | SE463212B (ja) |
| ZA (1) | ZA859895B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01215300A (ja) * | 1988-01-12 | 1989-08-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | ハイブリツド形成による定義された配列の核酸の検出方法 |
| JPH08308595A (ja) * | 1985-06-13 | 1996-11-26 | Amgen | 核酸ハイブリダイゼーション検定を行うためのキット |
Families Citing this family (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5288609A (en) * | 1984-04-27 | 1994-02-22 | Enzo Diagnostics, Inc. | Capture sandwich hybridization method and composition |
| US6060237A (en) | 1985-02-26 | 2000-05-09 | Biostar, Inc. | Devices and methods for optical detection of nucleic acid hybridization |
| US4868105A (en) * | 1985-12-11 | 1989-09-19 | Chiron Corporation | Solution phase nucleic acid sandwich assay |
| US4910300A (en) * | 1985-12-11 | 1990-03-20 | Chiron Corporation | Method for making nucleic acid probes |
| US4882269A (en) * | 1985-12-13 | 1989-11-21 | Princeton University | Amplified hybridization assay |
| FI76119C (fi) * | 1986-02-27 | 1988-09-09 | Orion Yhtymae Oy | Kvantitativ bestaemning av nukleinsyramolekyler och reagensfoerpackning som anvaends vid foerfarandet. |
| AU622104B2 (en) * | 1987-03-11 | 1992-04-02 | Sangtec Molecular Diagnostics Ab | Method of assaying of nucleic acids, a reagent combination and kit therefore |
| AU2084988A (en) * | 1987-06-26 | 1989-01-19 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Affinity removal of contaminating sequences from recombinant cloned na using capture beads |
| JP2783568B2 (ja) * | 1987-07-31 | 1998-08-06 | ジェン‐プローブ インコーポレイテッド | 望ましくない交差反応を排除するためにオリゴヌクレオチドを使用するポリヌクレオチドの検定法 |
| EP0305145A3 (en) * | 1987-08-24 | 1990-05-02 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Methods and probes for detecting nucleic acids |
| EP0304845A3 (en) * | 1987-08-28 | 1991-03-06 | Profile Diagnostic Sciences Inc. | Method and kit for assaying gene expressions |
| CA1325761C (en) * | 1987-12-25 | 1994-01-04 | Takanori Oka | Method of detecting an intended nucleic acid in a sample |
| US5104791A (en) * | 1988-02-09 | 1992-04-14 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Particle counting nucleic acid hybridization assays |
| ATE114726T1 (de) * | 1988-05-10 | 1994-12-15 | Du Pont | Verfahren zum schnellen nachweis von nukleinsäuren. |
| US5185243A (en) * | 1988-08-25 | 1993-02-09 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method for detection of specific nucleic acid sequences |
| US5858652A (en) * | 1988-08-30 | 1999-01-12 | Abbott Laboratories | Detection and amplification of target nucleic acid sequences |
| AU629845B2 (en) * | 1988-08-30 | 1992-10-15 | Abbott Laboratories | Detection and amplification of target nucleic acid sequences |
| GB2225112A (en) * | 1988-11-22 | 1990-05-23 | Ici Plc | Hybridisation probes |
| US5082935A (en) * | 1988-12-15 | 1992-01-21 | Amoco Corporation | Diagnostic reagents made by attaching cytidine containing nucleic acid probes to amino functionalized solid supports by bisulfite mediated transamination |
| CA2025236A1 (en) * | 1989-02-06 | 1990-08-07 | Walter King | Probes and methods for the detection of listeria |
| DE69031121T2 (de) * | 1989-03-10 | 1997-11-13 | Vysis Inc | Interferenzverhinderung mit affinitätseinfangschemas |
| JP3046837B2 (ja) | 1989-03-10 | 2000-05-29 | バイシス・インコーポレーテツド | 固定化されたオリゴヌクレオチドのプローブおよびそれらの使用 |
| AU6075490A (en) * | 1989-07-11 | 1991-02-06 | Microprobe Corporation | Quantification of bacteria using a nucleic acid hybridization assay |
| US5334501A (en) * | 1989-07-11 | 1994-08-02 | Microprobe Corporation | Quantification of bacteria using a nucleic acid hybridization assay |
| GB8924989D0 (en) * | 1989-11-06 | 1989-12-28 | Scotgen Ltd | Method and device for the detection of antibiotic resistance |
| US5580970A (en) * | 1989-12-01 | 1996-12-03 | Amoco Corporation | Detection of HPV transcripts |
| AU7429591A (en) * | 1990-04-18 | 1991-10-24 | Gene-Trak Systems | Nucleic acid probes for the detection of giardia lamblia |
| WO1992015708A1 (en) * | 1991-02-27 | 1992-09-17 | Amoco Corporation | Methods for improving the sensitivity of hybridization assays |
| WO1993020234A1 (en) * | 1992-03-31 | 1993-10-14 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | A rapid, high capacity nucleic acid based assay |
| US7713528B1 (en) | 1993-02-18 | 2010-05-11 | Enzo Therapeutics, Inc. | Method for in vivo delivery of active compounds using reagent conjugate |
| US5853993A (en) * | 1996-10-21 | 1998-12-29 | Hewlett-Packard Company | Signal enhancement method and kit |
| GB0016833D0 (en) | 2000-07-07 | 2000-08-30 | Lee Helen | Improved dipstick assays (2) |
| US7465540B2 (en) | 2000-09-21 | 2008-12-16 | Luminex Corporation | Multiple reporter read-out for bioassays |
| CN1303221C (zh) * | 2003-01-27 | 2007-03-07 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | 使用亲和放大的集成信号基团的靶核酸检测法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60151559A (ja) * | 1983-12-12 | 1985-08-09 | マイルス・インコーポレーテッド | 挿入複合体に対する抗体を使用する核酸ハイブリダイゼーシヨン分析 |
| JPS6187A (ja) * | 1984-03-22 | 1986-01-06 | バイオテクノロジ−・リサ−チ・エンタ−プライゼズ・エス・エイ・プロプライアタリ−・リミテツド | 非放射性生物学的プロ−ブ |
| JPS6131100A (ja) * | 1984-05-07 | 1986-02-13 | アライド―シグナル・インコーポレーテッド | 置換ポリヌクレオチド検定法およびそのポリヌクレオチド複合体試薬 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI63596C (fi) * | 1981-10-16 | 1983-07-11 | Orion Yhtymae Oy | Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser |
| FR2518755B1 (fr) * | 1981-12-23 | 1986-04-11 | Pasteur Institut | Sonde contenant un acide nucleique modifie et reconnaissable par des anticorps specifiques et utilisation de cette sonde pour detecter et caracteriser une sequence d'adn homologue |
| GB8306426D0 (en) * | 1983-03-09 | 1983-04-13 | Malcolm A D B | Detecting polynucleotide sequence |
| CA1228811A (en) * | 1983-05-05 | 1987-11-03 | Robert G. Pergolizzi | Assay method utilizing polynucleotide sequences |
| CA1256005A (en) * | 1983-09-26 | 1989-06-20 | W. Peter Hansen | Sandwich hybridization method for nucleic acid detection |
| FR2558172B1 (fr) * | 1984-01-16 | 1986-06-13 | Inst Nat Sante Rech Med | Sonde contenant un acide nucleique modifie et reconnaissance par des anticorps specifiques et utilisation de cette sonde et de ces anticorps specifiques pour detecter et caracteriser une sequence d'adn homologue |
| CA1223222A (en) * | 1984-02-22 | 1987-06-23 | Nanibhushan Dattagupta | Immobilized nucleic acid-containing probes |
| FR2560298B1 (fr) * | 1984-02-28 | 1988-07-15 | Mors | Procede et dispositif de reglage avec precision de la chute de pression d'un fluide initialement sous pression elevee, tel qu'un fluide hydraulique par exemple alimentant un groupe hydraulique, et application du procede au dispositif dans un groupe ou une centrale hydraulique, en etant integre ou non, notamment a une table de machine ou a tout dispositif de support d'outillage |
-
1985
- 1985-01-02 FI FI850004A patent/FI72146C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-12-17 CH CH5378/85A patent/CH666696A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-12-20 GB GB08531414A patent/GB2169403B/en not_active Expired
- 1985-12-24 BE BE0/216059A patent/BE903937A/fr not_active IP Right Cessation
- 1985-12-27 JP JP60299797A patent/JPH0669400B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-27 NO NO855308A patent/NO166743C/no not_active IP Right Cessation
- 1985-12-29 HU HU855030A patent/HU196453B/hu unknown
- 1985-12-30 DE DE19853546312 patent/DE3546312A1/de active Granted
- 1985-12-30 ZA ZA859895A patent/ZA859895B/xx unknown
- 1985-12-30 FR FR858519394A patent/FR2575493B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-30 RO RO121637A patent/RO94651B/ro unknown
- 1985-12-30 AT AT0376785A patent/AT397514B/de not_active IP Right Cessation
- 1985-12-30 IT IT23408/85A patent/IT1201514B/it active
- 1985-12-30 LU LU86238A patent/LU86238A1/fr unknown
- 1985-12-31 CA CA000498834A patent/CA1271705A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-31 IE IE333385A patent/IE58290B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-12-31 IL IL77489A patent/IL77489A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-12-31 AU AU51748/85A patent/AU561382B2/en not_active Expired
- 1985-12-31 NL NLAANVRAGE8503597,A patent/NL189427C/xx not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-01-02 SE SE8600011A patent/SE463212B/sv not_active IP Right Cessation
- 1986-01-02 DK DK000386A patent/DK164932C/da not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60151559A (ja) * | 1983-12-12 | 1985-08-09 | マイルス・インコーポレーテッド | 挿入複合体に対する抗体を使用する核酸ハイブリダイゼーシヨン分析 |
| JPS6187A (ja) * | 1984-03-22 | 1986-01-06 | バイオテクノロジ−・リサ−チ・エンタ−プライゼズ・エス・エイ・プロプライアタリ−・リミテツド | 非放射性生物学的プロ−ブ |
| JPS6131100A (ja) * | 1984-05-07 | 1986-02-13 | アライド―シグナル・インコーポレーテッド | 置換ポリヌクレオチド検定法およびそのポリヌクレオチド複合体試薬 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08308595A (ja) * | 1985-06-13 | 1996-11-26 | Amgen | 核酸ハイブリダイゼーション検定を行うためのキット |
| JPH01215300A (ja) * | 1988-01-12 | 1989-08-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | ハイブリツド形成による定義された配列の核酸の検出方法 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS61185200A (ja) | 核酸の同定方法 | |
| US5200313A (en) | Nucleic acid hybridization assay employing detectable anti-hybrid antibodies | |
| US4563417A (en) | Nucleic acid hybridization assay employing antibodies to intercalation complexes | |
| EP0188450B1 (en) | Methods for the in vitro detection and identification of unknown pathogens or genetic entities | |
| CA1253777A (en) | Nucleic acid hybridization assay employing immobilized rna probes | |
| CA1258623A (en) | Probe containing a modified nucleic acid, recognizable by specific antibodies and use of this probe and these specific antibodies to detect and characterize a homologous dna sequence | |
| EP0464067B1 (en) | Solid phase diagnosis of medical conditions | |
| EP0144914A2 (en) | Hybridization assay employing labeled pairs of hybrid binding reagents | |
| JPS60262055A (ja) | 核酸のハイブリツド形成分析法およびそれに用いる試薬系 | |
| US5981171A (en) | Diagnostic assays using nucleic acid probes | |
| EP0146815B1 (en) | Nucleic acid hybridization assay employing antibodies to intercalation complexes | |
| Dahlén et al. | Sensitive detection of genes by sandwich hybridization and time-resolved fluorometry | |
| EP0487718B1 (en) | NUCLEIC ACID PROBES with negatively charged haptens which are attached to the probe via a hydrazine binding moiety | |
| JPH0531108B2 (ja) | ||
| JPS63282659A (ja) | 核酸の測定方法および測定剤 | |
| Nichols et al. | A rapid purification of T4 polynucleotide kinase using Blue Dextran-Sepharose chromatography | |
| JPH07505291A (ja) | 配列決定法 | |
| EP0543222A1 (en) | Method for detecting nucleic acids and relative diagnostic kit | |
| JPH03130097A (ja) | 核酸の検出法及び検出試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |