HU196453B - Process for the identification of nucleinic acids - Google Patents
Process for the identification of nucleinic acids Download PDFInfo
- Publication number
- HU196453B HU196453B HU855030A HU503085A HU196453B HU 196453 B HU196453 B HU 196453B HU 855030 A HU855030 A HU 855030A HU 503085 A HU503085 A HU 503085A HU 196453 B HU196453 B HU 196453B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- hybridization
- pair
- sample
- affinity
- solution
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás nukleinsavak azonosítására oldatban történő hibridizálással. A találmány szerinti eljárás során a hibridizációs reakcióban legalább két mintát alkalmazunk. A detektor-mintához jelzőanyagot kötünk, a másik, un. megkötőmintához (.capturing probe’) olyan komponenst kötünk, amely egy másik komponens iránt affinitással bir. igy a hibridizálás eredményeként kapott megkötő-minta, cél-nukleinsav, detektor-minta hibrid a hibridizációs elegyben jelenlevő más komponensektől elkülöníthető.
Nukleinsavak azonosítására különböző hibridizációs eljárások használatosak. Példaként a közvetlen hibridizációs eljárást és a szendvics-hibridizációs eljárást említjük. A közvetlen hibridizációs eljárásban a nukleinsav minta oldatban van vagy szilárd hordozóhoz kötött. Az azonosítandó nukleinsavat jelzett minta segítségével mutatják ki. A szendvics-hibridizációs eljárásban (lásd a 4 486 539. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban) két külön mintát alkalmaznak, amelyeknek segítségével az azonosítandó nukleinsavat a mintaoldatból mutatják ki. A detektor-mintát jelzőanyaggal jelzik, a másik mintát szilárd hordozóhoz kötik.
Olyan új hibridizációs módszert dolgoztunk ki, amelyhez két különböző mintát alkalmazunk, amelyek mindegyike oldatban van. Mivel mind a hibridizációban résztvevő cél-nukleinsav, mind a két minta azonos oldott fázisban van, a hibridizációs reakció lényegesen gyorsabban megy végbe, mint a szendvics-hibridizációs eljárás esetén, amelynél az egyik minta szilárd hordozóhoz kötött. A találmány szerinti eljárás során 1 óra inkubációs idő elegendő. Az egylépéses szendvics-hibridizáláshoz (lésd a 4 486 539. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban) legalább 12 óra hibridizációs idő szükséges. A kétlépéses szendvics-hibridizálásboz [lásd a Dunn és Hassell, Cell. Vol. 12, 23-36 (1977) szakirodalmi helyen] legalább 24 óra hibridizációs idő szükséges.
A találmány szerinti eljárásban előnyösen legalább két mintát alkalmazunk. A minták a cél-nukleinsavval kellően homológ nukleinsav fragmentumok.
Előnyős, de nem szükségszerű, hogy a minták a meghatározandó nukleinsavban egymáshoz viszonylag közel lévő helyekkel monológok legyenek. A minták egymással nem lehetnek átfedőek.
A mintákat szintetikusan, félszintetikusan, rekombináns - DNS technikával állítjuk elő vagy közvetlenül természetes forrásból izolált nukleinsavakat alkalmazunk. A minták több helyről kereskedelmi forgalomból is beszerezhetők. A mintát megfelelő vektorhoz is köthetjük, tartalmazhat vektorrészeket vagy vektorrészektől teljesen mentes lehet.
A detektor-mintát megfelelő jelzőanyaggal jelezzük. Jelzőanyagként különböző radioaktív izotópokat vagy radíoaktívan jelzett vegyületeket alkalmazhatunk. A jelzőanyag lehet még például fluoreszcens, lumineszcens vagy fényemittáló anyag és enzimes vagy immunológiai módszerrel kimutatható anyag is. A jsízőanyagokra példaként említhetjük a biotin- és avidin- vagy sztreptavidin-, lantanida-kelát-, ferritin- és hem-vegyület - alapú anyagokat, az immunológiai módszerekkel kimutatható hapténeket, például acetoxi-aeetil-fluorén-származékokat (WO 8302286). Az azonosítást végezhetjük fehérjék közvetítésével is. A találmány szerinti eljárást az alkalmazott jelzőanyag nem befolyásolja. Az eljárásban bármely, a nukleinsav hibridizáláshoz alkalmas, napjainkban ismert jelzőanyag használható. A másik mintához, az úgynevezett megkötő mintához hozzákötünk egy olyan komponenst, amely egy másik komponens iránt affinitással bir. Megfelelő affinitáspárok a biotin és az avidin vagy sztreptavidin; a nehézfémszármazékok és a tiocsoportok; a különböző homopolinukleotidok, így a poli dG és a poli dC; a poli dA és a poli dT; a poli dA és a poli U. De ezeken kívül más affinitáspárok is alkalmazhatók, feltéve hogy komponenseik egymás iránti aktivitása elég erős. Megfelelő affinitáspárokat találunk például az immunológiai módszerekhez használt ligandumok és konjugátumok között.
Mielőtt a hibridizációs reakciót végrehajtanánk a vizsgálandó mintát úgy kezeljük, hogy a cél-nukleinsav szimpla szál formában legyen jelen a hibridizáló oldatban. A hibridizálást olyan hibridizáló elegyben hajtjuk végre, amely a cél-nukleinsavat, a jelzett-nrntát és a megkötőmintát tartalmazza, ha szükséges szimpla szálúvá alakítva. Hibridizáló oldatként különböző puffereket használhatunk. A hibridizálást 0-80 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 65 °C hőmérsékleten végezzük. Ha a hibridizáló oldat formamidot (40-55%) tartalmaz, a hibridizálást 37 °C-on végezzük. A hibridizáláshoz 1 óra idő elegendő.
A hibridizálás befejezése után az oldatot kívánt esetben meghígitjuk, hogy az affinitáspárok számára kedvező körülményeket bi:-tosítsunk. Ezután az elegyet az affinitáspár második párjával hozzuk érintkezésbe. A megkötóminta, cél-nukleotid, detektor-minta hibrid összekapcsolására affinitás kromatográfiás oszlopokat, szűrőket, műanyag- és üvegfelületeket használhatunk.
Az affinitáskromatográfiás oszlop hordozóanyaga lehet például cellulóz, latex, poliakrilamid, dextrán vagy agaróz. Ezek az anyagok alkalmazhatók vizsgálócsövekben szuszpenzióként is. Előnyös az is, ha olyan vizsgélócsövet használunk, amelynek belső falához van rögzitve az affinitáspár másik komponense. A kiválasztott anyaggal szemben előfeltétel, hogy olyan komponenst lehessen hozzá kapcsolni, amely affinitással bir a megkötő-mintához kötött komponenshez.
Ha a vizsgálandó minta az azonosítandó nukleinsavat tartalmazza, a detektor-minta, cél-nukleinsav, megkötő-minta hibridet nyerjük a hibridizálás eredményéül. A frakcionálás során ez a hibrid a hordozóhoz tapad. A frakciót jelző, a hordozóhoz tapadó anyagot ismert módszerekkel mérhetjük közvetlenül a hordozón vagy eluálást követően az eluátumból.
A frakcionálásra az affinitáskromatográfiás eljáráson kívül más módszerek is használhatók, például fázis extrahálás vagy mágneses mező.
A találmány szerinti eljárást a következőkben példákban mutatjuk be. A találmány szerinti eljárás nem függ a példákban használt nukleinsav fragmentumoktól.
1. Példa
Adenovírus DNS azonosítása sejt-lizátumból homopolinukleotidok segítségével
Detektor-mintaként 125J-tel jelzett mKTH 1206 rekombináns fágot alkalmazunk, amely a
2. típusú adenovírus, a géntérképen 42-45,3% helyzetű adenovírus genomjának Bgl II-fragmentumát tartalmazza. A rekombináns fágot a .Deutsche Sammlung von Mikroorganismen ’ letéti helyen DSM 2827. számon letétbe helyeztük. A rekombináns fág fajlagos aktivitása 7 107 cpm/pg DNS. A minta részletesebb ismertetése a Ranki és mtsai: Gene 21 77-85 (1983) szakirodalmi helyen található.
Megkötő-mintaként a pKTH 1202 rekombináns plazmidot alkalmazzuk, amelyet a .Deutsche Sammlung von Mikroorganizmen' letéti helyen a DSM 2824. számon helyeztük letétbe. A rekombináns plazmid a pBR322 plazmidba klónozott adenovírus BamHI fragmentumot tartalmaz (a géntérképen 29-42% helyzetű). A pKTH 1202 (DSM 2824) rekombináns plazmidot Hae III restrikciós enzim alkalmazásával fragmentáljuk, és a fragmentumok 3’ végeire poli A farkat kötünk terminális transzferáz enzim segítségével. A farok hosszát 3H-A beépítésével mérjük. A farok átlagos hossza körülbelül 70 A-egység. A megkötő-mintát felhasználás előtt forralással denaturáljuk.
A vizsgálandó minta adenovírussal fertőzött A-549 sejteket tartalmaz. Az A-549 sejtek alveoláris epithelium folytonos sejtvonal sejtjei, az ATCC törzskatalógusban ATCC CCL 185 számon szerepelnek, és az ATCC törzsgyűjteményből beszerezhetők. A sejteket a befertőzést követően 21 órán át inkubáljuk. A sejteket ezután összegyűjtjük és 1%-os nátrium-dodecil-szulfét-oldat alkalmazásával lizáljuk. Áz oldat 10® sejtet tartalmaz mililiterenként. Az oldat viszkozitását ultrahang kezeléssel csökkentjük. Kontrollként azonosan kezelt, nem fertőzött A-549 sejteket alkalmazunk. Hibridizálás előtt a vizsgálandó mintát 0,02 mól/l-es nátrium-hidroxid-oldatban 5 percig forraljuk, majd 0 °C-ra hütjük, és ecetsavval semlegesítjük.
A vizsgálathoz 500 000 cpm detektor-mintát, 50 ng megkötő-minta DNS-t és 10 pl vizsgálandó mintát mérünk egy vizsgálócsőbe. Az elegy térfogatát 50 pl-re egészítjük ki, ehhez 0,6 mól/1 nátríum-kloridot, 0,06 mól/1 nátriura-citrátot, 0,02 mól/1 pH 7,6-os nátrium-foszfátot és 0,5% nátrium-dódecil-szulfátot tartalmazó puffért alkalmazunk. Áz elegyet 1 órán át 65 °C-on inkubáljuk.'
A hibridizáló oldatot ezután +20 °C-ra hűtjük és lassan átengedjük 1 ml oligo dT cellulózt tartalmazó kromatografálóoszlopon. Az áthaladt oldatot összegyűjtjük és ismét átengedjük az oszlopon. Ezután az oszlopot 20 ml 0,15 mól/1 nátríum-kloridot, 0,015 mól/1 nátrium-foszfátot (pH = 7,6) és 0,5% nátrium-dodecil-szufátot tartalmazó oldattal mossuk. A DNS kötését végül 1 ml 0,02 mól/l-es nátrium-hidroxid alkalmazásával bontjuk meg. Ezután meghatározzuk a kapott oldat radioaktivitását.
Eredményeink a kővetkezők:
125 J aktivitás (cpm)
Cél-nukleinsav, Kontroll sejtek fertőzött sejtek
5230 325
2. Példa
Chlamydia trachomatis DNS azonosítása biotin-sztreptavidin affinitáspár segítségével
Detektor-mintaként 125J-tel jelzett mKTH 1245 rekombináns fágot alkalmazunk, amely a pKTH 1220 klón két Bam Hl - Sál I DNS fragmentumát tartalmazza, és ezek együtt az M13mp8 vektorhoz kötöttek. A pKTH 1220 kiónt a .Deutsche Sammlung von Mikroorganismen letéti helyen DSM 2825. számon helyeztük letétbe. A pKTH 1220 klón részletes ismertetése a Palva és mtsai: PEMS Microbiology Letters 23, 83-89 (1984) szakirodalmi helyen szerepel.
Megkötő-mintaként a pKTH 1250 rekombináns plazmidot alkalmazzuk. Ez a plazmid a pKTH 1220 plazmid (DMS 2825). 2 900 bázis Sáli - Clal fragmentumából és a pAT Ϊ53 vektorból áll. A biotinmolekulát a pKTH 1250 DNS-hoz kötjük kovalensen Rigby és mtsai, ismert módszerével (.nick transzláció') [J. Mól. Bioi. 113, 237-251 (1977)] és biotin-11-UTP-t (Bethesda Kutató Laboratórium) alkalmazunk szubsztrátumként. A megkötő-minta DNS-t 1 mmól/1 EDTA tartalmú 10 mmól/l-es pH 7,6-os trisz-Cl pufferben 5 percig forraljuk felhasználás előtt.
A célnukleinsav a pKTH 1220 rekombináns plazmid (DSM 2825). Ez a plazmid kö-36 rülbelül 10 000 bázist tartalmaz a Chlamydia trachomatisra jellemző DNS-ből a pBR322 vektorhoz kötve. A plazmid DNS modellként szolgál, a baktérium genom DNS-ját képviseli. Alkalmazás előtt a plazmidot 0,02 mól/l-es nátrium-hidroxidban 5 percig forraljuk, majd az oldatot ecetsavval semlegesítjük.
A sztreptavidint, amit az affinitáspár egyik tagjaként használunk, CNBr-dal aktivált Sepharosehoz (Pharmacia gyártmány) kötjük Axen és mtsai [Natúré 214 1302-1304 (1967)] módszere szerint.
A vizsgálathoz a vizsgálócsőbe 500 000 cpm detektor-mintát, 50 ng megkötő-mintát és 10 ng cél DNS-t mérünk. A minta térfogatát 20 μΙ-re egészítjük ki az 1. példában megadott pufferrel· Kontroll DNS-ként borjú timusz DNS-t alkalmazunk.
Az elegyet 65 °C-on 60 percig inkubáljuk, majd 500 μΐ 0,1 mól/1 pH 7,5-ös trisz-HC1, 0,1 mól/1 NaCl, 2 mmól/MgCh és 0,05% triton X-100 tartalmú pufferoldatot adunk hozzá. Végül az oldatot 0,2 ml sztreptavidin-Sepharose töltetű oszlopon frakcionáljuk. Az oszlopot 10 ml fenti pufferrel és 10 ml 0,015 mól/1 nátrium-klorid, 0,015 mól/1 pH = = 7,6-os nátrium-foszfát és 0,5% nátrium-dodecil-szulfát tartalmú 50 °C-os pufferrel mossuk, igy a biotinilezett DNS a sztreptavidinhez kapcsolódik, mig a többi DNS áthalad az oszlopon. A radioaktivitás a hibridképzödés folytán jelenik meg a mintában. A hibrid radioaktív anyag tartalmát ügy mérjük, hogy a teljes oszlopot gammaszámláló számlálócsövébe helyezzük.
Eredményeink a kővetkezők:
125J aktivitás (cpm)
Cél-nukleinsav 10 ng kontroli.
DNS ng pKTH 1220
1350 115
3. Példa pBR 322 plazmid DNS azonosítása antigén-antitest pár segítségével
Detektor-próbaként a pBR322 plazmid (kereskedelmi forgalomban beszerezhető) olyan származékát alkalmazzuk, amelyből a Pstl-Sall (3613-651) fragmentumot előzetesen eltávolitottuk. A plazmidot ismert módon [Forster és mtsai, Nucleic Acids Rés. 13, 745-761 (1985)] és kereskedelmi forgalomból beszerzett reagensekkel (Bresa, Adelaide, Ausztrália) fotobiotinnal jelezzük.
Megkötő-mintaként pBR322-Pstl-SalI fragmentumot tartalmazó M13mpll rekombináns fág DNS-ját használjuk. A DNS ismert módon szulfonált (Orgenics Ltd. Yavne, Isméi).
A pBR322 plazmidot hordozó E. coli HB101 minta mennyiségét kloramfenikolos sokszorozás alkalmazásával növeljük (Maniatis és mtsai, Molecular cloning. A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory 1982). A baktérium sejteket lizozimmal lizáljuk, majd nátrium-hidroxiddal forraljuk Palva közleményében [J. Clin. Mikrobiol. 18, 92-100 (1983)] ismertetett módon.
Antiszulfon monoklonális antitesteket alkalmazunk polisztirol mikrotiter lyukak ismert módon való bevonására.
(Hybridomas: a new dimension in biologycal analyses, Mc Kearn; kiadó: Kennett és mtsai, Plenum Press, 1980).
A vizsgálathoz 5x10® lizált E. coli sejtet (pBR322-vel, illetve anélkül) 100 ng megkőtő-minta DNS-val és 100 ng detektor-mintával 50 ,ul hibridizációs elegybe viszünk. A körülmények az 1. példában megadottak, azzal az eltéréssel, hogy az elegyhez 5% poli(etilén-glikol)-t (PEG 6000) adunk és a nátrium-dodecil-szulfátot 0,1% koncentrációban alkalmazzuk. A hibridizálást követően az oldatot 0,02 mól/l-es, pH = 7,6-os nátrium-foszfáttal 250 μΙ-re hígítjuk, majd az oldatot az antitesttel bevont mikrotiter lyukakba visszük. Ezt ezután 2 órán át 37 °C-on inkubáljuk. A lyukakat ezután 0,15 mól/1 nátrium-kloridot, 0,02 mól/1 pH = 7,6-os nátrium-foszfátot és 0,05% triton X-100-t tartalmazó oldattal mossuk. A detektor-mintát a következő módon tesszük láthatóvá: sztreptavidint (Bethesda Research Laboratories) adunk hozzá, mossuk, biotinilezett lúgos foszfatázt (Bethesda Research Laboratories) adunk hozzá, majd Leary és mtsai által leírt módon mossuk (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 4045-4049 (1983)]. Végül 25C μΐ 35 mg/ml-es pH = 10-es dietanol-amin-pufferes p-nitro-fenil-foszfát oldatot (Szigma' adunk hozzá. 60 perc reakcióidő eltelte utón 410 nm-en mérjük az abszorpciót.
' Eredményeink a kővetkezők:
A-uo nm
Cél-nukleinsav, pBR 322 menpBí 322 tartalmú sejtek tes sejtek >2 0.15
Claims (5)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás nukleinsavak oldatban való azonosításéra hibridizációs módszerrel azzal jellemezve, hogy legalább két azonos oldott fázisban lévő mintát alkalmazunk, egy detektor-mintát kimutatható jelzőanyaggal jelzünk és egy megkötő-mintához kötjük, amely utóbbi egy affinitáspár egyik tagja, és a hibridizációs reakcióban kapott megkötő-minta, cél-n ikleinsav, detektor-minta hibridet az affinitáspár másik tagja segítségével izoláljuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy affinitáspárként biotin, sztreptavidin vagy biotin, avidin part alkalmazunk.1.96453 párként poli dA-poli dT párt alkalmazunk.6. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy affinitáspárként poli dA - poli U párt alkalmazunk.5 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy affinitáspárként antigén-antitest párt alkalmazunk.
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy affintáspárként homopolinukleotid párt alkalmazunk.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy affinitáspárként poli dC-dG párt alkalmazunk.
- 5. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy affinitás-
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI850004A FI72146C (fi) | 1985-01-02 | 1985-01-02 | Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT40166A HUT40166A (en) | 1986-11-28 |
| HU196453B true HU196453B (en) | 1988-11-28 |
Family
ID=8520136
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU855030A HU196453B (en) | 1985-01-02 | 1985-12-29 | Process for the identification of nucleinic acids |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0669400B2 (hu) |
| AT (1) | AT397514B (hu) |
| AU (1) | AU561382B2 (hu) |
| BE (1) | BE903937A (hu) |
| CA (1) | CA1271705A (hu) |
| CH (1) | CH666696A5 (hu) |
| DE (1) | DE3546312A1 (hu) |
| DK (1) | DK164932C (hu) |
| FI (1) | FI72146C (hu) |
| FR (1) | FR2575493B1 (hu) |
| GB (1) | GB2169403B (hu) |
| HU (1) | HU196453B (hu) |
| IE (1) | IE58290B1 (hu) |
| IL (1) | IL77489A (hu) |
| IT (1) | IT1201514B (hu) |
| LU (1) | LU86238A1 (hu) |
| NL (1) | NL189427C (hu) |
| NO (1) | NO166743C (hu) |
| RO (1) | RO94651B (hu) |
| SE (1) | SE463212B (hu) |
| ZA (1) | ZA859895B (hu) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5288609A (en) * | 1984-04-27 | 1994-02-22 | Enzo Diagnostics, Inc. | Capture sandwich hybridization method and composition |
| US6060237A (en) | 1985-02-26 | 2000-05-09 | Biostar, Inc. | Devices and methods for optical detection of nucleic acid hybridization |
| IL79112A (en) * | 1985-06-13 | 1992-01-15 | Abbott Lab | Method for the isolation of a nucleic acid sequence and kit for performing a hybridization assay |
| US4868105A (en) * | 1985-12-11 | 1989-09-19 | Chiron Corporation | Solution phase nucleic acid sandwich assay |
| US4910300A (en) * | 1985-12-11 | 1990-03-20 | Chiron Corporation | Method for making nucleic acid probes |
| US4882269A (en) * | 1985-12-13 | 1989-11-21 | Princeton University | Amplified hybridization assay |
| FI76119C (fi) * | 1986-02-27 | 1988-09-09 | Orion Yhtymae Oy | Kvantitativ bestaemning av nukleinsyramolekyler och reagensfoerpackning som anvaends vid foerfarandet. |
| AU622104B2 (en) * | 1987-03-11 | 1992-04-02 | Sangtec Molecular Diagnostics Ab | Method of assaying of nucleic acids, a reagent combination and kit therefore |
| AU2084988A (en) * | 1987-06-26 | 1989-01-19 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Affinity removal of contaminating sequences from recombinant cloned na using capture beads |
| JP2783568B2 (ja) * | 1987-07-31 | 1998-08-06 | ジェン‐プローブ インコーポレイテッド | 望ましくない交差反応を排除するためにオリゴヌクレオチドを使用するポリヌクレオチドの検定法 |
| EP0305145A3 (en) * | 1987-08-24 | 1990-05-02 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Methods and probes for detecting nucleic acids |
| EP0304845A3 (en) * | 1987-08-28 | 1991-03-06 | Profile Diagnostic Sciences Inc. | Method and kit for assaying gene expressions |
| CA1325761C (en) * | 1987-12-25 | 1994-01-04 | Takanori Oka | Method of detecting an intended nucleic acid in a sample |
| DE3800644A1 (de) * | 1988-01-12 | 1989-07-20 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum hochspezifischen nachweis von nukleinsaeuren in loesung |
| US5104791A (en) * | 1988-02-09 | 1992-04-14 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Particle counting nucleic acid hybridization assays |
| ATE114726T1 (de) * | 1988-05-10 | 1994-12-15 | Du Pont | Verfahren zum schnellen nachweis von nukleinsäuren. |
| US5185243A (en) * | 1988-08-25 | 1993-02-09 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method for detection of specific nucleic acid sequences |
| US5858652A (en) * | 1988-08-30 | 1999-01-12 | Abbott Laboratories | Detection and amplification of target nucleic acid sequences |
| AU629845B2 (en) * | 1988-08-30 | 1992-10-15 | Abbott Laboratories | Detection and amplification of target nucleic acid sequences |
| GB2225112A (en) * | 1988-11-22 | 1990-05-23 | Ici Plc | Hybridisation probes |
| US5082935A (en) * | 1988-12-15 | 1992-01-21 | Amoco Corporation | Diagnostic reagents made by attaching cytidine containing nucleic acid probes to amino functionalized solid supports by bisulfite mediated transamination |
| CA2025236A1 (en) * | 1989-02-06 | 1990-08-07 | Walter King | Probes and methods for the detection of listeria |
| DE69031121T2 (de) * | 1989-03-10 | 1997-11-13 | Vysis Inc | Interferenzverhinderung mit affinitätseinfangschemas |
| JP3046837B2 (ja) | 1989-03-10 | 2000-05-29 | バイシス・インコーポレーテツド | 固定化されたオリゴヌクレオチドのプローブおよびそれらの使用 |
| AU6075490A (en) * | 1989-07-11 | 1991-02-06 | Microprobe Corporation | Quantification of bacteria using a nucleic acid hybridization assay |
| US5334501A (en) * | 1989-07-11 | 1994-08-02 | Microprobe Corporation | Quantification of bacteria using a nucleic acid hybridization assay |
| GB8924989D0 (en) * | 1989-11-06 | 1989-12-28 | Scotgen Ltd | Method and device for the detection of antibiotic resistance |
| US5580970A (en) * | 1989-12-01 | 1996-12-03 | Amoco Corporation | Detection of HPV transcripts |
| AU7429591A (en) * | 1990-04-18 | 1991-10-24 | Gene-Trak Systems | Nucleic acid probes for the detection of giardia lamblia |
| WO1992015708A1 (en) * | 1991-02-27 | 1992-09-17 | Amoco Corporation | Methods for improving the sensitivity of hybridization assays |
| WO1993020234A1 (en) * | 1992-03-31 | 1993-10-14 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | A rapid, high capacity nucleic acid based assay |
| US7713528B1 (en) | 1993-02-18 | 2010-05-11 | Enzo Therapeutics, Inc. | Method for in vivo delivery of active compounds using reagent conjugate |
| US5853993A (en) * | 1996-10-21 | 1998-12-29 | Hewlett-Packard Company | Signal enhancement method and kit |
| GB0016833D0 (en) | 2000-07-07 | 2000-08-30 | Lee Helen | Improved dipstick assays (2) |
| US7465540B2 (en) | 2000-09-21 | 2008-12-16 | Luminex Corporation | Multiple reporter read-out for bioassays |
| CN1303221C (zh) * | 2003-01-27 | 2007-03-07 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | 使用亲和放大的集成信号基团的靶核酸检测法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI63596C (fi) * | 1981-10-16 | 1983-07-11 | Orion Yhtymae Oy | Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser |
| FR2518755B1 (fr) * | 1981-12-23 | 1986-04-11 | Pasteur Institut | Sonde contenant un acide nucleique modifie et reconnaissable par des anticorps specifiques et utilisation de cette sonde pour detecter et caracteriser une sequence d'adn homologue |
| GB8306426D0 (en) * | 1983-03-09 | 1983-04-13 | Malcolm A D B | Detecting polynucleotide sequence |
| CA1228811A (en) * | 1983-05-05 | 1987-11-03 | Robert G. Pergolizzi | Assay method utilizing polynucleotide sequences |
| CA1256005A (en) * | 1983-09-26 | 1989-06-20 | W. Peter Hansen | Sandwich hybridization method for nucleic acid detection |
| ZA849596B (en) * | 1983-12-12 | 1985-07-31 | Miles Lab | Hybridization assay with immobilization of hybrids by anti-hybrid binding |
| FR2558172B1 (fr) * | 1984-01-16 | 1986-06-13 | Inst Nat Sante Rech Med | Sonde contenant un acide nucleique modifie et reconnaissance par des anticorps specifiques et utilisation de cette sonde et de ces anticorps specifiques pour detecter et caracteriser une sequence d'adn homologue |
| CA1223222A (en) * | 1984-02-22 | 1987-06-23 | Nanibhushan Dattagupta | Immobilized nucleic acid-containing probes |
| FR2560298B1 (fr) * | 1984-02-28 | 1988-07-15 | Mors | Procede et dispositif de reglage avec precision de la chute de pression d'un fluide initialement sous pression elevee, tel qu'un fluide hydraulique par exemple alimentant un groupe hydraulique, et application du procede au dispositif dans un groupe ou une centrale hydraulique, en etant integre ou non, notamment a une table de machine ou a tout dispositif de support d'outillage |
| NZ211453A (en) * | 1984-03-22 | 1989-01-06 | Biotechnology Research Enterpr | Aryl azides, their preparation and use in the detection, localisation and isolation of polynucleotides |
| US4766062A (en) * | 1984-05-07 | 1988-08-23 | Allied Corporation | Displacement polynucleotide assay method and polynucleotide complex reagent therefor |
-
1985
- 1985-01-02 FI FI850004A patent/FI72146C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-12-17 CH CH5378/85A patent/CH666696A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-12-20 GB GB08531414A patent/GB2169403B/en not_active Expired
- 1985-12-24 BE BE0/216059A patent/BE903937A/fr not_active IP Right Cessation
- 1985-12-27 JP JP60299797A patent/JPH0669400B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-27 NO NO855308A patent/NO166743C/no not_active IP Right Cessation
- 1985-12-29 HU HU855030A patent/HU196453B/hu unknown
- 1985-12-30 DE DE19853546312 patent/DE3546312A1/de active Granted
- 1985-12-30 ZA ZA859895A patent/ZA859895B/xx unknown
- 1985-12-30 FR FR858519394A patent/FR2575493B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-30 RO RO121637A patent/RO94651B/ro unknown
- 1985-12-30 AT AT0376785A patent/AT397514B/de not_active IP Right Cessation
- 1985-12-30 IT IT23408/85A patent/IT1201514B/it active
- 1985-12-30 LU LU86238A patent/LU86238A1/fr unknown
- 1985-12-31 CA CA000498834A patent/CA1271705A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-31 IE IE333385A patent/IE58290B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-12-31 IL IL77489A patent/IL77489A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-12-31 AU AU51748/85A patent/AU561382B2/en not_active Expired
- 1985-12-31 NL NLAANVRAGE8503597,A patent/NL189427C/xx not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-01-02 SE SE8600011A patent/SE463212B/sv not_active IP Right Cessation
- 1986-01-02 DK DK000386A patent/DK164932C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU196453B (en) | Process for the identification of nucleinic acids | |
| US4563417A (en) | Nucleic acid hybridization assay employing antibodies to intercalation complexes | |
| US6060242A (en) | PNA diagnostic methods | |
| EP0464067B1 (en) | Solid phase diagnosis of medical conditions | |
| US5629158A (en) | Solid phase diagnosis of medical conditions | |
| US5858754A (en) | Methods of analysis and manipulation of DNA utilizing mismatch repair systems | |
| US6008031A (en) | Method of analysis and manipulation of DNA utilizing mismatch repair systems | |
| US5102784A (en) | Restriction amplification assay | |
| US5695926A (en) | Sandwich hybridization assays using very short capture probes noncovalently bound to a hydrophobic support | |
| JPH0740960B2 (ja) | 核酸検出用キット | |
| EP0163220B1 (en) | Nucleic acid hybridization assay employing detectable anti-hybrid antibodies | |
| West et al. | Purification and properties of the recA protein of Proteus mirabilis. Comparison with Escherichia coli recA protein; specificity of interaction with single strand binding protein. | |
| US5981171A (en) | Diagnostic assays using nucleic acid probes | |
| JPH09182591A (ja) | 択一的ヌクレオチド配列の識別手段 | |
| CA2152218A1 (en) | Rapid dna test for detecting quinolone-resistant staphylococcus aureus pathogens in clinical material | |
| EP0146815B1 (en) | Nucleic acid hybridization assay employing antibodies to intercalation complexes | |
| AU6513598A (en) | Assaying nucleotides in solution using pna probes | |
| Scheller et al. | Clones of individual repetitive sequences from sea urchin DNA constructed with synthetic Eco RI sites | |
| US4840892A (en) | Polynucleotide hybridization probes | |
| Sahoo et al. | Termination of DNA replication in vitro: requirement for stereospecific interaction between two dimers of the replication terminator protein of Bacillus subtilis and with the terminator site to elicit polar contrahelicase and fork impedance. | |
| EP0172153B1 (en) | Polynucleotide hybridization probes | |
| WO1999041414A1 (en) | Methods for identifying nucleic acid mutations using mismatch modification | |
| Nichols et al. | A rapid purification of T4 polynucleotide kinase using Blue Dextran-Sepharose chromatography | |
| EP0253894A1 (en) | Dna probe and method of preparing the same | |
| WO2000043545A2 (en) | Detection of drug resistant organisms |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HPC4 | Succession in title of patentee |
Owner name: SANGTEC MEDICAL AB, SE |
|
| HPC4 | Succession in title of patentee |
Owner name: SANGTEC MOLECULAR DIAGNOSTICS AB, SE |