NO843838L - Fremgangsmaate for detektering av nukleinsyre - Google Patents
Fremgangsmaate for detektering av nukleinsyreInfo
- Publication number
- NO843838L NO843838L NO843838A NO843838A NO843838L NO 843838 L NO843838 L NO 843838L NO 843838 A NO843838 A NO 843838A NO 843838 A NO843838 A NO 843838A NO 843838 L NO843838 L NO 843838L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- nucleic acid
- gene
- detection
- probe
- base sequence
- Prior art date
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 62
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 62
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 40
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims description 28
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 claims description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 23
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 claims description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 23
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 23
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 14
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 14
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 7
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 6
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims description 6
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 6
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 claims 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 claims 2
- 230000023077 detection of light stimulus Effects 0.000 claims 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 231100000206 health hazard Toxicity 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører generelt området nukleinsyreteknologi og spesielt angår den metoder for detektering av spesifikke gener eller basesekvenser på enkelstrenget nukleinsyre.
Den nylige utvikling innen genteknikk og spesielt manipu-leringen av nukleinsyrer og gener for å fremme produksjon av ønskede metabolitter, enzymer og erkjennelsen av at visse sykdomstilstander styres av identifiserbare basesekvenser, har skapt et behov for metoder for detektering av tilstedeværelsen av (ønskede eller uønskede) gener eller basesekvenser i nukleinsyrer.
Formålet med oppfinnelsen er å tilveiebringe følsomme metoder for detektering av slike gener eller basesekvenser .
Ranki et al. har i Gene, 21:77-85 (1983) beskrevet en sandwichanalyse med DNA-probe egnet for detektering av en spesifikk del av en DNA-streng. For å gjøre dette blir en probe immobilisert på nitrocellulose og anvendes for å fange DNA-prøven (deoksyribosenukleinsyre) ved hybridisering med det spesifikke gen som undersøkes. Ranki tilveiebringer også en annen probe som er merket og også ikke-spesifikk overfor det gen som er av interesse.
Ranki's metode er imidlertid forbundet med flere ulemper inkludert variasjoner i spesifikk og ikke-spesifikk bindingsegenskap for utvidede, faste bærersystemer slik som de som benytter nitrocellulose. Repeterbarheten for slike faste bærerpreparater har vist seg å være en hoved-vanskelighet ved fremstillingen av belagte makroskopiske overflater slik som belagte reagensrør innen området immunoanalyse. Disse variasjoner begrenser i siste instans analysens sensitivitet til området for variasjonene. Det kan følgelig forventes at lignende problemer vil være knyttet til Ranki's metode.
Det er et formål med oppfinnelsen å unngå disse begrens-ninger ved å tilveiebringe en fremgangsmåte som er i stand til mer repeterbar kommersiell produksjon.
Ifølge foreliggende oppfinnelse er det tilveiebragt fremgangsmåter for detektering av nukleinsyrer som har et ønsket gen eller basesekvens, innbefattende tilveie-bringelse av nukleinsyren som skal testes i en enkelstrenget form og deretter anbringelse derav i kontakt med en merket nukleinsyreprobe som er spesifikk for en gitt del av nukleinsyrestrengen. En biotinylert nukleinsyreprobe som er spesifikk for en forskjellig del av nukleinsyrestrengen, bindes til en avidinbelagt mikropartikkel. Strengen som har den merkede proben hybridisert dertil, blandes deretter med de således fremstilte mikropartiklene. Binding av DNA-strengen til mikropartikkelen foregår gjennom den biotinylerte proben som dekker mikropartikkelen. Avidin-biotin-koblingen er tilstrekkelig sterk til å tillate separering av mikropartikkelen som er bundet til DNA fra ubundet materiale. Det bundede materiale blir deretter analysert for merking. Tilstedeværelsen av merkingen er et tegn på tilstedeværelsen av en streng som har begge deler for hvilke de biotinylerte og merkede prøver er spesifikke. Hvilken som helst av disse deler kan være genet eller basesekvensen av intereese. Minskingen i merking i oppløsning kan alternativt overvåkes og relate-res til tilstedeværelsen av genet eller basesekvensen av interesse.
Oppfinnelsens prinsipper forstås ytterligere under henvisning til figuren hvor: figuren skjematisk viser merkingen og immobiliseringen av en enkelstrenget nukleinsyre .
Under henvisning til figuren er det tilveiebragt en enkelstrenget nukleinsyre 10, og denne kan være i form av ribosenukleinsyre eller deoksyribosenukleinsyre som i det minste har blitt redusert til en enkelstrenget form ved en hvilken som helst av en rekke velkjente teknikker slik som oppvarming eller tilsetning av en sterk base. Nukleinsyrestrengen 10 omsettes med både en nukleinsyreprobe 11 som har en merking 12 og en biotinylert nukleinsyreprobe 13. Disse reaksjoner vil bli utført i oppløsning og fortrinnsvis med et overskudd av merket nukleinsyreprobe 11.
Det er også tilveiebragt mikropartikler 14 belagt med avidin. Mikropartiklene kan være fremstilt fra en rekke forskjellige materialer inkludert glass, nylon, poly-metakrylat, annet polymermateriale, eller biologiske celler. Slike mikropartikler kan lett oppnås fra en rekke kilder inkludert f.eks. Polyscienes Inc., Pennsylvania. Et avidinbelegg kan lett tilveiebringes ved fysikalsk absorp-sjon eller direkte kjemiske midler slik som kobling via den aktive N-hydroksysuksinimidesteren (Manning et al., Biochemistry 16:1364-1370, 1977), i tilfellet for glass eller en karbodiimid-kobling i tilfellet for nylon (Jasiewicz et al., Exp. Cell Res. 100:213-217, 1976).
Dersom det er ønsket å unngå bruk av avidin-biotin-koblingsmekanismer med mikropartikler, kan man i stedet benytte nitrocellulose-mikropartikler, i motsetning til Ranki's nitrocelluloseark, for oppnåelse av direkte kje-misk binding av enkelstrenget nukleinsyre til den faste fasen. Selv om f estemekanismen enda er ukjent, har man erkjent at etter festing av nukleinsyren, så må gjenværende festesteder bli blokkert ved reaksjon med ytterligere DNA slik som lakseteste-DNA før anvendelse av den således fremstilte fastfase-overflaten.
Blandingen av nukleinsyre som har biotinylert probe hybridisert dermed med de avidinbelagte mikropartiklene eller kulene vil, på grunn av den sterke avidin-biotin-tiltrekningen, resultere i immobilisering av nukleinsyre-hybridparet. Nukleinsyren kan deretter separeres fra de ubundede materialene ved sentrifugering, filtrering, eller vasketrinn slik som de som kan anvendes med heterogene immunoanalyseteknikker.
Merkingen vil fortrinnsvis velges slik at den er optisk detekterbar med lett tilgjengelige instrumenter for oppnåelse av akseptable sensitiviteter. Slike merkinger vil innbefatte f.eks. fluoroforer, dvs. de som fluorescerer under egnede eksitasjonsbølgelengder, kjemiluminescerende merkinger som luminescerer under hensiktsmessige kjemiske betinghelser, eller en hvilken som helst av de enzym-tilknyttede merkemekanismene hvorved et detekterbart produkt dannes under innvirkning av en enzymmerking på et substrat. Det kan f.eks. velges et slikt prrodukt som lett kan detekteres kolorimetrisk. Merkingen kan istedenor være en radioisotop selv om dette er mindre foretrukket. Isotopmerkinger er imidlertid typisk mindre foretrukne fordi de krever spesiell håndtering p.g.a. betydelig helsefare som er forbundet med slike merkinger, de har be-grenset lagringstid, og krever kostbart utstyr slik som scintillasjons- eller gammatellere. Slike andre merkings-typer omfattes av oppfinnelsen og vil f.eks. innbefatte materialer som er i besittelse av detekterbare elektro-magnetiske egenskaper.
I tillegg til de ovenfor beskrevne mikropartiklene skal det også forstås at de her tilveiebragte fremgangsmåter kan benyttes med andre typer av fast fase-overflater inkl. f.eks. veggene i en mikrotiterbeholder, røreskovler eller andre makroskopiske overlater slik som skiver eller bånd. Slike skiver eller bånd kan ha avidinbeleggene anordnet derpå i et mønster. Slike mønstere er nyttige f.eks. i den instrumentklasse som benytter synkron detektering.
Forskjellige velkjente teknikker er tilgjengelige for kobling av merkinger med nukleinsyreprober. En slik teknikk er beskrevet av Langer et al., i Proe. Nati. Acad. Sei.
78:6633-6637, 1981.
En foretrukken reaksjonsrekkefølge som benytter avidin- og biotin for å koble merking 12 til probe 11, vil innebære følgende trinn: Først blir biotinylert probe 11 reagert med nukleinsyrestreng 10 fulgt av reaksjon av avidinkoblet merking 12 med biotinylert probe 11 for dannelse av en første blanding. Separat blir avidinbelagte mikropartikler 14 reagert med biotynilert probe 13 for dannelse av en annen blanding. Den første og den andre blandingen reageres for å tillate dannelse av komplekser som illustrert på figuren. Disse immobilierte kompleksene blir deretter separert og merkingen som er tilknyttet disse, eller den frie merking som er tilbake i oppløsningen, blir målt. Et eksempel på en ikke-foretrukket reaksjonsrekkefølge ville gi binding av en biotinylert probe 11 med en avidinbelagt mikropartikkel 14.
Reaksjonsrekkefølgen mellom den enkelstrengede nukleinsyren, den biotinylerte nukleinsyreproben (som ikke benytter avidin-biotin), den merkede nukleinsyreproben og den avidinbelagte fast fase-bæreren kan varieres etter forskerens behov. Det kan f.eks. være ønskelig å reagere den biotinylerte nukleinsyreproben med den avidinbelagte fast fase-overflaten før tilsetning av nukleinsyrestrengen. Nukleinsyrestrengen kan enten reageres på for-hånd med den merkede nukelinsyreproben eller reageres dermed på et senere trinn. En ikke-foretrukken reaksjons-rekkefølge vil gi binding av en biotinylert probe 11 til en avidinbelagt mikropartikkel 14.
I en annen utførelse kan det være ønskelig å tilveiebringe mikropartikler belagt med biotinylerte nukleinsyre-probe-segmenter som er egnet for analyse. Disse mikropartikler kan deretter tilpasses en hvilken som helst gitt analyse ved reaksjon av en lengre nukleinsyreprobe, eller bindingsprobe, med den biotinylerte proben slik at den delen av bindingsproben som er homolog med den biotinylerte proben, danner en dobbeltstrenget nukleinsyredel. Den gjenværende delen av bindingsproben vil fortrinnsvis være homolog med det gen som søkes i nukleinsyren som analyseres. Fremstillingen av den faste fasedelen på denne måten, spesielt med hensyn til mikropartikler, vil gi anledning til fremstilling i stor målestokk, og vil sørge for tilførsel av vesentlige komponenter som er egnet for en hvilken som helst nukelinsyreanalyse.
Anvendelse av mikropartikler er meget foretrukket fordi det er forventet at det kan være betydelig variasjon av immobilisert probe 13 som er til stede på mikropartikler 14, men dersom en stor mengde mikropartikler 14 frem-stilles, og vilkårlig fordeler blant en rekke analyse-tester, så vil variasjonen i totalprobe 13 fra test til test reduseres i forhold til den resiproke kvadratrot av antallet av benyttede partikler pr. test.
Den erfarne forsker vil lett forstå at separering av ubundede nukeinsyrestrenger i de utførelser som benytter fast fase-overflater slik som mikrotiter-brønnvegger, eller makroskopiske overflater og lignende, lett vil tilveiebringes ved forsiktige vasketrinn. Nukelinsyreprober slik som de som er aktuelle i foreliggende oppfinnelse, kan lett oppnås fra en rekke forskjellige kilder inkludert Enzo-Biochem, New York, NY.
Claims (27)
1. Fremgangsmåte for detektering av tilstedeværelsen av nukleinsyre inneholdende et gen eller basesekvens av interesse, karakterisert ved at man
a) tilveiebringer nukleinsyren som skal testes i form av en enkelstreng;
b) bringer en biotinylert nukleinsyreprobe som er spesifikk for et første gen eller basesekvens av nevnte nukleinsyre i kontakt med en avidinbelagt fast fase-bærer;
c) reagerer nukleinsyren med et overskudd av merket nukleinsyreprobe som er spesifikk for et annet gen eller annen basesekvens i nevnte nukleinsyre og lar en hvilken som helst hybridisering av den merkede proben og nukleinsyren foregå;
d ) reagerer nukefflinsyren med den biotinylerte nukleinsyreproben og lar en hvilken som helst hybridisering av den biotinylerte proben og nukleinsyren foregå;
e) separerer den ubundede nukleinsyren fra den bundede nukelinsyren; og
f) detekterer merkingen som er forbundet med nevnte bundede nukleinsyre eller minskingen i mengden av merking i oppløsning for bestemmelse av tilstedeværelsen av nukleinsyre inneholdende det gen eller den basesekvens som er av interesse.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at den faste fasen velges fra gruppen bestående av mikropartikler og makroskopiske overflater.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at den faste fasen omfatter mikropartikler.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at den faste fasen omfatter makroskopiske overflater.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4, karakterisert ved at den biotinylerte merking immobiliseres på den makroskopiske overflaten i et spesielt rommønster.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering av fluorescens.
7. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering av kjemiluminescens.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering av en isotopisk merking.
9. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering av produkter av enzymatiske merkinger .
10. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering av lysspredning.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering ved kolorimetri.
12. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at reaksjonsrekkeføl-gen er som angitt i krav 1.
13. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at trinn a) ytterligere innbefatter spalting av dobbeltstrenget nukleinsyre til enkelstrenget nukleinsyre dersom nukleinsyren er deoksyribosenukleinsyre.
14. Fremgangsmåte for detektering av tilstedeværelsen av nukleinsyre inneholdende et gen eller en basesekvens av interesse, karakterisert ved at man
a) tilveiebringer nukeinsyren som skal testes i form av en enkelt streng;
b) ytterligere tilveiebringer avidinbelagte mikropartikler som har blitt reagert med en første biotinylert nukleinsyreprobe for dannelse av et første mikropartikkelelement;
c) bringer nevnte første mikropartikkelelement i kontakt med et nukleinsyreprobe-bindingsmiddel som har en første del som er reaktiv med i det minste en del av nevnte første biotinylerte nukleinsyreprobe og en en annen del som er reaktiv med et første gen eller basesekvens i nevnte nukleinsyre og lar en hvilken som helst hybridisering foregå for dannelse av en første blanding;
d) reagerer nukleinsyren med et overskudd av merket nukleinsyreprobe som er spesifikk for et annet gen eller basesekvens av nevnte nukleinsyre og lar en hvilken som helst hybridisering av den merkede proben og nukleinsyren foregå for dannelse av en annen blanding;
e) den første blandingen med den andre blandingen;
f) separerer mikropartikkelimmobilisert nukleinsyre fra ubundet nukleinsyre; og
g) detekterer merkingen som er forbundet med den immobiliserte nukleinsyredelen for bestemmelse av tilstedeværelsen av nukleinsyre inneholdende det gen eller den basesekvens som er av interesse.
15. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at den faste fasen velges fra gruppen bestående av mikropartikler og makroskopiske overflater.
16. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at den faste fasen omfatter mikropartikler.
17. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at den faste fasen omfatter makroskopiske overflater.
18. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at den biotinylerte merkingen immobiliseres på nevnte makroskopiske overflater i et spesifikt rommønster.
19. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering av fluorescens.
20. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering av chemiluminescens.
21. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering av en isotopisk merking.
22. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering av produkter av enzymatiske merkinger .
23. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering av lysspredning.
24. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at detekteringstrinnet omfatter detektering ved kolorimetri.
25. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at reaks jonsrekke-følgen er som angitt i krav 14.
26. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at trinn a) ytterligere omfatter spalting av dobbeltstrenget nukleinsyre til enkeltstrenget nukleinsyre dersom nukleinsyren er deoksyribosenukleinsyre.
27. Fremgangsmåte for detektering av tilstedeværelsen av nukleinsyre inneholdende et gen eller en basesekvens av interesse, karakterisert ved at man
a) tilveiebringer nukleinsyren som skal testes i form av en enkelt streng;
b) fester en nukleinsyreprobe som er spesifikk for et gen eller en basesekvens av nevnte nukleinsyre til en nitrocellulosepartikkel;
c) reagerer nukleinsyren med et overskudd av merket nukleinsyreprobe som er spesifikk for et første gen eller basesekvens av nevnte nukleinsyre og lar en hvilken som helst hybridisering av den merkede proben og nukleinsyren foregå;
d) reagerer nukleinsyren med nevnte nitrocellulose-tilknyttede nukleinsyreprobe og lar en hvilken som helst hybridisering foregå;
e) separerer nevnte ubundede nukleinsyre fra nevnte bundede nukleinsyre; og
f) detekterer merkingen som er knyttet til nevnte bundede nukleinsyre eller minskingen i mengden av merking i oppløsning for bestemmelse av tilstedeværelsen av nukleinsyre inneholdende det gen eller den basesekvens som er av interesse.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US53613883A | 1983-09-26 | 1983-09-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO843838L true NO843838L (no) | 1985-03-27 |
Family
ID=24137316
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO843838A NO843838L (no) | 1983-09-26 | 1984-09-25 | Fremgangsmaate for detektering av nukleinsyre |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0139489A3 (no) |
| JP (1) | JPS6093355A (no) |
| AU (1) | AU3355484A (no) |
| CA (1) | CA1256005A (no) |
| NO (1) | NO843838L (no) |
Families Citing this family (54)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0154505B1 (en) * | 1984-02-28 | 1992-09-30 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Diagnosis of gene abnormalities by restriction mapping using a sandwich hybridization format |
| CA1260372A (en) * | 1984-04-27 | 1989-09-26 | Elazar Rabbani | Hybridization method for the detection of genetic materials |
| US5288609A (en) * | 1984-04-27 | 1994-02-22 | Enzo Diagnostics, Inc. | Capture sandwich hybridization method and composition |
| US4766064A (en) * | 1984-05-07 | 1988-08-23 | Allied Corporation | Displacement polynucleotide assay employing polyether and diagnostic kit |
| US4766062A (en) * | 1984-05-07 | 1988-08-23 | Allied Corporation | Displacement polynucleotide assay method and polynucleotide complex reagent therefor |
| CA1253777A (en) * | 1984-06-01 | 1989-05-09 | Robert J. Carrico | Nucleic acid hybridization assay employing immobilized rna probes |
| EP0184701B1 (en) * | 1984-12-03 | 1994-06-08 | Hoechst Celanese Corporation | A method for determining a ligand |
| FI72146C (fi) * | 1985-01-02 | 1987-04-13 | Orion Yhtymae Oy | Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror. |
| CA1272443A (en) * | 1985-02-22 | 1990-08-07 | Nanibhushan Dattagupta | Solution-phase dual hybridization assay for detecting polynucleotide sequences |
| ATE171185T1 (de) * | 1985-03-15 | 1998-10-15 | Antivirals Inc | Immunotestmittel für polynukleotid und verfahren |
| GB8509367D0 (en) * | 1985-04-12 | 1985-05-15 | Amersham Int Plc | Nucleic acid hybridisation |
| ES8707343A1 (es) * | 1985-06-13 | 1987-07-16 | Amgen | Un metodo para aislar una secuencia de acido nucleico objetivo seleccionada |
| US5273882A (en) * | 1985-06-13 | 1993-12-28 | Amgen | Method and kit for performing nucleic acid hybridization assays |
| US4868104A (en) * | 1985-09-06 | 1989-09-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Homogeneous assay for specific polynucleotides |
| US4868105A (en) * | 1985-12-11 | 1989-09-19 | Chiron Corporation | Solution phase nucleic acid sandwich assay |
| US4882269A (en) * | 1985-12-13 | 1989-11-21 | Princeton University | Amplified hybridization assay |
| EP0286642A4 (en) * | 1985-12-17 | 1990-06-27 | Genetics Inst | TEST PROCEDURE BY MEANS OF POLYNUCLEOTIDE DISPLACEMENT AND REAGENT COMPLEX. |
| US4818680A (en) * | 1985-12-18 | 1989-04-04 | Mary Collins | Method and kit involving displacement and rehybridization of labeled polynucleotide |
| US4925785A (en) * | 1986-03-07 | 1990-05-15 | Biotechnica Diagnostics, Inc. | Nucleic acid hybridization assays |
| FR2601455B1 (fr) * | 1986-07-11 | 1989-08-04 | Stallergenes Lab | Nouveaux reactifs biologiques en phase solide et leur procede d'obtention |
| WO1988002785A2 (en) * | 1986-10-14 | 1988-04-21 | Beckman Instruments, Inc. | Improved nucleic acid hybridization technique and kit therefor |
| US5714380A (en) * | 1986-10-23 | 1998-02-03 | Amoco Corporation | Closed vessel for isolating target molecules and for performing amplification |
| ZA877772B (en) * | 1986-10-23 | 1988-04-20 | Amoco Corporation | Target and background capture methods and apparatus for affinity assays |
| US5750338A (en) * | 1986-10-23 | 1998-05-12 | Amoco Corporation | Target and background capture methods with amplification for affinity assays |
| US5599667A (en) * | 1987-03-02 | 1997-02-04 | Gen-Probe Incorporated | Polycationic supports and nucleic acid purification separation and hybridization |
| AU622104B2 (en) * | 1987-03-11 | 1992-04-02 | Sangtec Molecular Diagnostics Ab | Method of assaying of nucleic acids, a reagent combination and kit therefore |
| AU601021B2 (en) * | 1987-03-11 | 1990-08-30 | Molecular Diagnostics, Inc. | Assay for necleic acid sequences in a sample |
| JPH02503983A (ja) * | 1987-06-26 | 1990-11-22 | イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・アンド・カンパニー | 捕捉ビーズを用いる組み換えクローン化ｎａからの混入配列のアフイニテイ除去 |
| EP0305145A3 (en) * | 1987-08-24 | 1990-05-02 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Methods and probes for detecting nucleic acids |
| FI80476C (fi) * | 1987-10-09 | 1990-06-11 | Orion Yhtymae Oy | Foerbaettrat hybridisationsfoerfarande, vid foerfarandet anvaent redskap och reagensfoerpackning. |
| CA1312277C (en) * | 1987-12-18 | 1993-01-05 | Richard C. Sutton | Avidin- and biotin-immobilized reagents, analytical elements and methods of use |
| JPH03504199A (ja) * | 1988-05-10 | 1991-09-19 | イー・アイ・デユポン・ド・ネモアース・アンド・コンパニー | 迅速な核酸検出法 |
| WO1990002205A1 (en) * | 1988-08-25 | 1990-03-08 | Angenics, Inc. | Detection of nucleic acid sequences using particle agglutination |
| US6235488B1 (en) | 1988-09-29 | 2001-05-22 | Agilent Technologies, Inc. | Surface preparation for chemical-specific binding |
| AU5269590A (en) | 1989-03-10 | 1990-10-09 | Gene-Trak Systems | Immobilized oligonucleotide probes and uses therefor |
| EP0416730B1 (en) * | 1989-09-08 | 1996-05-22 | Hewlett-Packard Company | Substrate preparation for chemical-species-specific binding |
| GB8924989D0 (en) * | 1989-11-06 | 1989-12-28 | Scotgen Ltd | Method and device for the detection of antibiotic resistance |
| GB8926269D0 (en) * | 1989-11-21 | 1990-01-10 | Dynal As | Plasmid |
| DE4001154A1 (de) * | 1990-01-17 | 1991-07-18 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur herstellung von modifizierten nukleinsaeuren |
| US5556748A (en) * | 1991-07-30 | 1996-09-17 | Xenopore Corporation | Methods of sandwich hybridization for the quantitative analysis of oligonucleotides |
| ES2049618B1 (es) * | 1991-11-13 | 1994-11-01 | Consejo Superior Investigacion | Metodo de diagnostico y clasificacion de especies de trypanosoma cruzi. |
| WO1993013225A1 (en) * | 1991-12-23 | 1993-07-08 | Chiron Corporation | Htlv-1 probes for use in solution phase sandwich hybridization assays |
| US5656432A (en) * | 1992-02-10 | 1997-08-12 | Bio Merieux | Genomic DNA fragment of Streptococcus pneumoniae, hybridization probe, amplification primer, reagent and method for the detection of Streptococcus pneumoniae |
| FR2687168B1 (fr) * | 1992-02-10 | 1994-03-25 | Bio Merieux | Fragment de l'adn genomique de streptococcus pneumoniae, sonde d'hybridation, amorce d'amplification, reactif et procede de detection de streptococcus pneumoniae. |
| US7713528B1 (en) | 1993-02-18 | 2010-05-11 | Enzo Therapeutics, Inc. | Method for in vivo delivery of active compounds using reagent conjugate |
| US5445936A (en) * | 1993-09-15 | 1995-08-29 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method for non-competitive binding assays |
| US6203978B1 (en) * | 1996-05-31 | 2001-03-20 | Du Vergier Ltd. | Capture of single stranded nucleic acids |
| US20060275782A1 (en) | 1999-04-20 | 2006-12-07 | Illumina, Inc. | Detection of nucleic acid reactions on bead arrays |
| US7582420B2 (en) | 2001-07-12 | 2009-09-01 | Illumina, Inc. | Multiplex nucleic acid reactions |
| US8076063B2 (en) | 2000-02-07 | 2011-12-13 | Illumina, Inc. | Multiplexed methylation detection methods |
| US7955794B2 (en) | 2000-09-21 | 2011-06-07 | Illumina, Inc. | Multiplex nucleic acid reactions |
| CA2467814A1 (en) * | 2001-12-03 | 2003-06-12 | Illumina, Inc. | Multiplexed methylation detection methods |
| DE602004022943D1 (de) | 2003-05-30 | 2009-10-15 | Nanosphere Inc | Verfahren zum nachweis von analyten auf grundlage von evaneszenzbelichtung und auf streuung beruhender nachweis von nanopartikelsondenkomplexen |
| CN102822352B (zh) * | 2010-03-31 | 2015-07-29 | 有限会社山口技术特许机构 | 利用核酸色谱法的肺炎病原菌的检出方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2422956A1 (fr) * | 1978-04-13 | 1979-11-09 | Pasteur Institut | Procede de detection et de caracterisation d'un acide nucleique ou d'une sequence de celui-ci, et reactif enzymatique pour la mise en oeuvre de ce procede |
| CA1219824A (en) * | 1981-04-17 | 1987-03-31 | David C. Ward | Modified nucleotides and methods of preparing and using same |
-
1984
- 1984-09-25 NO NO843838A patent/NO843838L/no unknown
- 1984-09-25 CA CA000463935A patent/CA1256005A/en not_active Expired
- 1984-09-25 EP EP84306513A patent/EP0139489A3/en not_active Withdrawn
- 1984-09-26 AU AU33554/84A patent/AU3355484A/en not_active Abandoned
- 1984-09-26 JP JP59199665A patent/JPS6093355A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6093355A (ja) | 1985-05-25 |
| EP0139489A2 (en) | 1985-05-02 |
| CA1256005A (en) | 1989-06-20 |
| EP0139489A3 (en) | 1988-01-13 |
| AU3355484A (en) | 1986-09-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO843838L (no) | Fremgangsmaate for detektering av nukleinsyre | |
| EP2217928B1 (en) | Alternate labeling strategies for single molecule sequencing | |
| AU658962B2 (en) | Rapid assays for amplification products | |
| EP1036332B1 (en) | Multiple assay method | |
| Nolan et al. | Flow cytometry: a versatile tool for all phases of drug discovery | |
| WO2000061806A2 (en) | GENERIC cDNA OR PROTEIN ARRAY FOR CUSTOMIZED ASSAYS | |
| Walt | Imaging optical sensor arrays | |
| CN108660191A (zh) | 一种基于编码微球反应器的数字化多重核酸检测方法 | |
| US6468751B1 (en) | Method and apparatus for performing amplification of nucleic acid on supports | |
| EP1540344A1 (en) | Fluorescence polarization assay | |
| EP1355146A2 (en) | Use of the multipin platform as anchor device | |
| US5132206A (en) | Fluorescent pigments for tagging biological molecules | |
| JP2006518183A (ja) | コード核酸担体 | |
| WO2000055363A2 (en) | Analysis of differential gene expression | |
| US7553620B2 (en) | Method for determining polynucleotides in a sample without attaching these to a support, and using detection probes | |
| Fortina et al. | Fluorescence-based, multiplex allele-specific PCR (MASPCR) detection of the ΔF508 deletion in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene | |
| US20060084101A1 (en) | Two-color chemiluminescent microarray system | |
| JP3910000B2 (ja) | １塩基置換検出方法 | |
| EP1392863B1 (en) | Method for determining the presence of extension products | |
| US20070212710A1 (en) | Competitive hybridization of dna probes and method of using the same | |
| JP2001255327A (ja) | 多孔質支持体と遅延蛍光を用いる物質の検出及び／又は定量法 | |
| US20020115095A1 (en) | Production method of micro-reactors gene chips | |
| US5910410A (en) | Dual tag binding assay | |
| JP2003135098A (ja) | 遺伝子検査方法 | |
| JP2001269198A (ja) | 多型遺伝子の型を決定する方法 |