FI63596B - Mikrobdiagnistiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser - Google Patents

Mikrobdiagnistiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser Download PDF

Info

Publication number
FI63596B
FI63596B FI813251A FI813251A FI63596B FI 63596 B FI63596 B FI 63596B FI 813251 A FI813251 A FI 813251A FI 813251 A FI813251 A FI 813251A FI 63596 B FI63596 B FI 63596B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
nucleic acid
reagent
fragment
labeled
sample
Prior art date
Application number
FI813251A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI63596C (fi
Inventor
Tuula Marjut Ranki
Hans Erik Soederlund
Original Assignee
Orion Yhtymae Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Orion Yhtymae Oy filed Critical Orion Yhtymae Oy
Priority to FI813251A priority Critical patent/FI63596C/fi
Priority to PCT/FI1982/000038 priority patent/WO1983001459A1/en
Priority to JP57502956A priority patent/JPS58501703A/ja
Priority to HU823529A priority patent/HU196242B/hu
Priority to AU89575/82A priority patent/AU548854B2/en
Priority to EP82902982A priority patent/EP0098267A1/en
Priority to JP57502956A priority patent/JPH0632637B1/ja
Priority to FI823452A priority patent/FI823452A0/fi
Priority to US06/434,182 priority patent/US4486539A/en
Priority to DE8282305489T priority patent/DE3277917D1/de
Priority to AT82305489T priority patent/ATE31735T1/de
Priority to EP82305489A priority patent/EP0079139B1/en
Priority to CA000413539A priority patent/CA1192120A/en
Priority to DE198282305489T priority patent/DE79139T1/de
Publication of FI63596B publication Critical patent/FI63596B/fi
Priority to NO83832061A priority patent/NO163699C/no
Priority to DK198302751A priority patent/DK173744B1/da
Application granted granted Critical
Publication of FI63596C publication Critical patent/FI63596C/fi
Priority to RO112563A priority patent/RO86356B/ro
Priority to SU833663405A priority patent/SU1386031A3/ru
Priority to US06/566,532 priority patent/US4563419A/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/808—Automated or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/823—Immunogenic carrier or carrier per se

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)

Description

63596
Nukleiinihappojen kerroshybridisaatioon perustuva mikrobi-diagnostinen menetelmä ja menetelmässä käytettäviä reagenssien yhdistelmiä 5
Keksinnön kohteena on nukleiinihappojen kerroshybridisaatioon kiinteällä kantajalla perustuva mikrobidiagnosti-10 nen menetelmä yhden tai useamman mikrobin ja/tai mikrobi- ryhmän yhtäaikaiseksi osoittamiseksi yhdestä jakamattomasta näytteestä sekä menetelmässä käytettävä sarja reagenssien yhdistelmiä.
15 Perinteisessä mikrobidiagnostiikassa mikrobin läsnäolo tutkittavissa näytteissä on osoitettu eristämällä kyseinen mikrobi. Rikastuskasvatuksen jälkeen mikrobi on tunnistettu joko biokemiallisten ominaisuuksiensa perusteella tai immunologisin menetelmin. Tällainen diagnostiikka 20 edellyttää, että näytteessä oleva mikrobi on lisääntymiskykyinen. Eristämisen kautta tapahtuva tunnistus on lisäksi työläs menetelmä, joka,virusten kyseessä ollen saattaa kestää 4-6 viikkoa.
25 Keksinnön tarkoituksena on aikaansaada diagnostinen menetelmä, jossa mikrobin läsnäolo näytteessä osoitetaan tunnistamalla sen perintöaines, nukleiinihappo, herkän ja spesifisen nukleiinihappohybridisaation avulla. Nukleiinihappohybridisaatio sinänsä on vanha ja tunnettu 30 menetelmä nukleiinihappojen identiteettiä tutkittaessa. Vastakkaismerkkisillä nukleiinihapposäikeillä on kyky muodostaa tiukka kaks isäikeinen rakenne vastinemästen pariutumissäännön perusteella, ja syntynyt hybridi voidaan erottaa yksisäikeiseksi jääneestä nukleiini-35 haposta.
2 63596
Nukleiinihapon tunnistukseen perustuvia menetelmiä on tähän mennessä sovellettu mikrobidiagnostiikkaan jonkin verran. Enterotoksigeeninen E. coli -bakteeri on osoitettu ulostenäytteistä pesäkehybridisaation avulla 5 käyttäen koettimena toksiinin tuotosta vastaavaa geeniä.
Positiivinen hybridisaatio havaitaan autoradiografiän avulla (Moseley, S.L. et ai. J. Infect. Dis. (1980) 142, 892 - 898). Pesäkehybridisaatio perustuu alun-10 perin Grunsteinin ja Hognessin kehittämään menetelmään (Proc. Natl. Acad. Sei. USA (1975) 72, 3961 - 3965). Lisäksi hybridisaatiota on sovellettu Herpes simplex 1 ja Herpes simplex 2 -virusten erottamiseen toisistaan (Brautigam A.R. et ai. J. Clin. Microbiol. (1980) 12, 15 226 - 234), ei kuitenkaa pikadiagnostisena menetelmänä vaan rikastekasvatuksen jälkeen virusta tyypitettäessä. Tässä menetelmässä liukoinen kaksisäikeinen hybridi erotetaan yksisäikeiseksi jääneestä affiniteetti-kromatografiän avulla.
20
Hiljattain on tehty työ, jossa Epstein-Barr-viruksella infektoiduista soluista peräisin oleva DNA, ts. näyte, tiettyjen käsittelyjen jälkeen on suoraan kiinnitetty filttereille. Kyseinen nukleiinihappo tunnistetaan 25 hybridisoimalla filtterit radioaktiivisen koettimen läsnäollessa ja positiivinen hybridisaatio detektoidaan autoradiografiän avulla (Brandsma, I. & Miller, K. (1980) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 77, 6851 - 6855).
30 Julkaisussa the Lancet 10 Det., ss. 765 - 7, 1982 esitetään samantapainen menetelmä, jossa radioaktiivisesti leimatulla koettimella osoitetaan hepatitis B-virus näytteestä, jonka DNA on saatettu yksisäikeiseksi ja on kiinnitetty nitroselluloosafiltteriin. Hakemusjulkaisussa 35 DE 2950295 kuvataan tällaisen hepatitis B-viruksen radioaktiivisella merkkiaineella varustetun koettimen valmistusmenetelmä yhdistelmä-DNA-tekniikkaa hyväksikäyttäen.
3 63596
Keksintömme mukaisessa menetelmässä käytetään sarjaa rea~ genssien yhdistelmiä, jotka koostuvat vähintään kahdesta erilaisesta nukleiinihapporeagenssista, jotka on valmistettu saman mikrobin tai mikrobiryhmän genomin eri osista.
5 Näistä nukleiinihapporeagensseista toinen on sidottu kiinteään kantajaan ja toinen on leimattu merkkiaineella.
Näiden kahden nukleiinihapporeagenssin avulla voidaan suoraan näytteestä, jonka DNA on saatettu yksisäikeiseksi, osoittaa kaikki mikrobit ja mikrobiryhmät, joita varten 10 on valmistettu reagensseja. Keksintömme mukaisen kahdesta reagenssista koostuvan sarjan käyttö tekee diagnostisoimis-menetelmän huomattavasti spesifisemmäksi kuin edellä kuvattu menetelmä ja mahdollistaa myös erilaisten kitti-yhdistelmien rakentamisen ja samanaikaisen käytön ilman 15 että nämä reagenssit häiritsevät toisiaan ja testin spesifisyyttä .
Käsiteltävänä oleva keksintö perustuu kerroshybridisaa-tiotekniikkaan (Dunn, A.R. & Hassell, 3.A. (1977) Cell 12, 20 23 - 36), jonka ansiosta näytteen käsittely ja hybridin detektio saadaan yksinkertaiseksi. Tämän takia tekniikka soveltuu erinomaisen hyvin diagnostiseen käyttöön.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä yhdestä ja samasta 25 näytteestä, joka sisältää diagnostisoitavien mikrobien tai mikrobiryhmien yksisäikeiseksi saatettuja nukleiinihappoja, voidaan sitä jakamatta tunnistaa kaikki halutut mikrobit tai mikrobiryhmät lisäämällä näytteeseen jokaista tunnistettavaksi tarkoitettua mikrobia tai mikrobiryhmää 30 kohden kaksi nukleiinihapporeagenssia. Nämä nukleiini-happoreagenssit sisältävät samasta mikrobista tai 63596 mikrobiryhmästä peräisin olevat keskenään täysin erilaiset mutta edullisesti toistensa lähettyvillä sijainneet nukleiinihappo-fragmentit, jotka voidaan valmistaa joko suoraan mikrobigenomista tai sinänsä tunnettua yhdistelmä-QNA-5 tekniikkaa hyväksi käyttäen ja näistä nukleiinihappo- fragmenteista toinen on saatettu yksisäikeiseksi ja kiinnitetty kiinteään kantajaan edullisesti nitroselluloosa-filtterille ja toinen on saatettu yksisäikeiseksi ja leimattu jollakin menetelmään soveltuvalla merkkiaineella. 10 Kun nämä nukleiinihapporeagenssit, kaksi erilaista jokaista tunnistettavaksi tarkoitettua mikrobia tai mikrobi-ryhmää kohden, saatetaan kosketukseen näytteessä olevien tunnistettavaksi tarkoitettujen yksisäikeisten nukleiinihappojen kanssa, nämä nukleiinihapot sitoutuvat kiinteällä 15 kantajalla oleviin vastaaviin tunnistaviin nukleiinihappo-fragmentteihin ja muodostuneet kiinteällä kantajalla olevat hybridit leimautuvat vastaavien leimattujen nukleiinihappo-fragmenttien avulla. Nämä leimatut nukleiinihappofragmen-tit eivät yksin hybridisoidu kiinteällä kantajalla oleviin 20 nukleiinihappofragmentteihin vaan näytteestä peräisin oleviin yksisäikeisiin nukleiinihappoihin. Tällöin ainoastaan ne kiinteät kantajat, joihin on sitoutunut näytteessä olevia vastaavia nukleiinihappoja, leimautuvat, ja nämä kiinteät kantajat voidaan huuhtoa ja leimaus mitata sinänsä 25 tunnetuin menetelmin.
Keksinnön mukaista menetelmää voidaan periaatteessa käyttää kaikkien nukleiinihappoja, joko DNA:ta tai RNA:ta sisältävien organismien kuten esimerkiksi virusten, bakteerien, 30 homeiden ja hiivojen tunnistamiseksi. Tämän menetelmän erityisetuna voidaan pitää sitä, että samasta näytteestä voidaan yhtäaikaisesti tutkia kaikkien kyseeseen tulevien sekä bakteerien että virusten läsnäolo riippumatta siitä sisältävätkö mikrobit DNArta tai RNA:ta. Reagensseja 35 yhdistelemällä voidaan ts. rakentaa "kitti”-kokonaisuuksia siten, että kutakin tunnistettavaa mikrobia varten on oma 5 63596 tunnuksella varustettu kiinteä kantajansa ja merkkiaineella varustettu nukleiinihapporeagenssinsa. Näytteeseen voidaan lisätä kaikki reagenssien yhdistelmään kuuluvat filtterit yhdellä kertaa, samoin leimatut nukleiinihappo-5 reagenssit. Kun hybridisaatio on tapahtunut, kiinteät kantajat pestään ja leimautuminen mitataan. Ainoastaan oikea kiinteä kantaja tulee leimatuksi eli se jota vastaava mikrobigenomi oli näytteessä.
10 Menetelmää ja sarjaa reagenssien yhdistelmiä voidaan käyttää mm. lääketieteellisessä mikrobiologiassa, eläinlääketieteellisessä mikrobiologiassa, elintarvikehygienisissä tutkimuksissa sekä kasvitautien mikrobidiagnostiikassa. Näytteeksi kelpaavat kaikki eläin- tai kasvikudoksesta 15 peräisin olevat homogenaatit, potilaseritteet kuten veri, uloste, nenänielu- ja uretralima. Voidaan arvioida, että menetelmä on riittävän herkkä osoittamaan kliinisissä näytteissä normaalisti esiintyvät mikrobimäärät. Näytteessä olevan mikrobin esirikastus viljelyn avulla on 20 luonnollisesti mahdollista ennen tunnistustestin suorittamista ja joissakin tapauksissa se on suorastaan välttämätöntä. Menetelmä soveltuu myös sellaisten näytteiden tutkimiseen, joista mikrobi ei ole enää viljeltävissä, mutta mikrobin osia on vielä runsaasti näytteessä 25 (esim. antibioottihoito on aloitettu) tai mikrobin viljely on erityisen työläs ja vaikea toimenpide (esim. anaerobiset bakteerit, joita kuitenkin on runsaasti märkänäytteissä, kun kyseessä on anaerobin aiheuttama infektio).
30
Menetelmää voidaan soveltaa kliinisen lääketieteen ja elintarvikehygienian mikrobidiagnostiikassa esim. seu-raavien mikrobien tai mikrobiryhmien tunnistamiseen.
6
Respiratoriset infektiot: 63596 a) Bakteerit: ^-hemolyyttinen streptococci, (A-ryhmä), Haemophilus influenzae. Pneumococci, Mycoplasma 5 pneumoniae, mykobakteerit b) Virukset: Influenza A, Influenza B, Parainfluenssa 1-3, Respiratory syncytial virus, adenovirukset, coronavirukset, rhinovirukset 10
Ripulit: a) Bakteerit: Salmonella, Shigella, Yersinia entero-colitica, enterotoxigeeninen E. coli, Clostridium 15 di fficile, campylobakteerit b) Virukset: rotavirukset, parvovirukset, adenovirukset, enterovirukset 20 Sukupuolitaudit: a) Bakteerit: Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum. Chlamydia trachomatis 25 b) Virukset: Herpes simplex -virus c) Hiivat: Candida albicans d) Alkueläimet: Trichomonas vaginalis 30
Sepsis : a) Bakteerit: yj-hemolyyttinen streptococci, (A-ryhmä), Pneumococci, enterobakteerit ryhmänä 7 63596
Elintarvi kehygienia: a) Bakteerit: salmonellat ja Clostridium perfringens 5 Riippuen reagenssien valinnasta testin spesifiteetti voidaan rajata mikrcbikohtaiseksi (esim. salmonellat) tai valitsemalla tunnistavat reagenssit kokonaiselle mikrobi-ryhmälle yhteisen geenin alueelta voidaan tunnistaa esimerkiksi koko enterobakteeriryhmä.
10
Keksinnön mukaisessa kerroshybridisaatiotekniikassa tarvittavat nukleiinihapporeagenssit tuotetaan yhdistelmä-DNA-tekniikan avulla. Seuraavassa kuvataan esimerkki 1:ta varten tuotetut reagenssit ja testin suoritus.
15
Reagenssit
Adenovirus 2 (kanta säilytetty KTLsssä eli Kansanterveyslaitoksessa Helsingissä) kasvatetaan ja puhdistetaan 20 ja DNA eristetään (Petterson, U. & Sambrook, J. (1973) J. Mol. Biol. _73, 125 - 130) (kutsutaan Ad2-DNA: ksi) .
DNA hajotetaan BamHI - restriktioentsyymillä (BRL eli Bethesda Research Laboratories), joka katkaisee DNA:n neljään aina samanlaiseen fragmenttiin. Näistä neljästä 25 kaksi fragmenttia liitetään vektoriksi valitun pBR322-plasmidin (BRL) BamHI-katkaisukohtaan T4-ligaasientsyymin (BRL) avulla. (Fragmentteja ei erotettu toisistaan ennen ligaatiota, vaan plasmidin kulloinkin saama lisä - eli insertti - tunnistetaan vasta kloonauksen jälkeen.) 30 Tämän jälkeen plasmidi-DNA, jonka joukossa nyt on myös niin kutsuttuja rekombinanttiplasmideja eli sellaisia molekyylejä, jotka ovat hyväksyneet adenoviruksen DNA-jaksoja osikseen toivotulla tavalla, siirretään bakteeri - isäntään (E. coli HB101 (K12)(ga1 , pro , leu , hrs , hrm~, recA, 35 str , F )(KTL:Stä) transformaation avulla (Cohen, S.N. et ai. (1972) Proc. Natl. Acad. Soi. USA 69, 2110 - 2114). Transformoituneiden bakteerikloonien joukosta valitaan sellaiset, jotka todennäköisimmin sisältävät rekombi-nantti-plasmidin. Bakteeri saa pBR322-plasmidilta sekä __ - 1,.. .... - β 63596 ampisilliini- että tetrasykliiniresistenssigeenit (Bolivar, F. et ai. ( 1977) Gene £, 95-113). Rekombinanttiplasmidia sisältävät bakteerit taas ovat tetrasykliinilie herkkiä, koska BamHI-entsyymi katkaisee plasmidi-DNA:n tetrasyk-5 liiniresistenssigeenin alueelta ja tälle alueelle liittyvä vieras DNA tuhoaa geenin. Plasmidin saama insertti karakterisoidaan plasmidirikastuksen jälkeen BamHI-digestion avulla määrittämällä insertin koko agaroosigeelielektro-foreesin avulla. Reagensseiksi valitaan vierekkäiset 10 Ad2~DNA:n BamHI D- ja C-fragmentit (vrt. geenikartta), (Söderlund, H. et ai. ( 1976) Cell 7, 585 - 593). Oikeat, rekombinanttiplasmidit, Ad2C-pBR322, KTL n:oEH231 ja Ad2D-pBR322, KTL n:o EH230, kasvatetaan ja puhdistetaan kuten on kuvattu (Clewell, D.B. and Helinski, D.R. (1969) 15 Proc. Natl. Acad. Sei. USA 62, 1159 - 1166).
Rekombinanttiplasmidi Ad2D-pBR322 käytetään sellaisenaan filtterireagenssiksi. Plasmidisekvenssejä ei tätä tarkoitusta varten tarvitse poistaa, koska näytteessä ei ole 20 pBR322-sekvenssejä. Sen sijaan radioaktiiviseksi leimattava nukleiinihapporeagenssi Ad2_BamHI C-fragmentti erotetaan pBR322-DNA:sta BamHI-digestion jälkeen agaroosi-geelielektroforeesin avulla. C-fragmentti eristetään LGT-agarase (Marine Colloids, Inc.) -geelistä fenoli-25 ekstraktion tai elektroeluution avulla (Wieslander, L.
( 1979) Anal. Biochem. 9_8, 305 - 309) ja konsentroidaan saostamalla etanolilla.
Leimatuksi nukleiinihapporeagenssiksi valittava nukleiini-30 happofragmentti on erittäin tarkoituksenmukaista edelleen kloonata toiseen vektoriin, jolloin päästään eroon hybridisaatio taustasta, mikä johtuu leimattuun nukleiinihappo-reagenssiin epäpuhtautena jääneiden plasmidijaksojen suorasta hybridisaatiosta filtteriin. Tällainen opti-35 maalinen toinen vektori on yksisäikeinen DNA-faagi M13 mp7 (BRL), johon on helppo siirtää esimerkiksi BamHI-entsyymin avulla aikaansaatuja DNA-fragmentteja (Messing, 0. et ai.
(1981) Nucleic Acids Res. £, 309 - 323).
9 DNA:n kiinnitys filtterille 63596
Rekombinanttiplasmidi Ad2Ö-pBR322 denaturoidaan yksisäi-keiseksi ja katkotaan sokeasti muutamasta kohdasta 0.2 N 5 NaOH-käsittelyllä (5 min 100°C), jonka jälkeen DNA jäähdytetään ja juuri ennen filtterille siirtoa neutraloidaan ja pipetoidaan siirtoliuokseen 4 x SSC -mediumiin jäillä (SSC = 0.15 M NaCl, 0.015 Π Na-sitraatti). Filtterit (Schleicher & Schull ΒΑΘ5 ni troselluloosa) kostutetaan 10 huolella 4 x SSC -liuoksessa (noin 2 t) ennen DNA-apli-kaatiota. DNA tartutetaan filtterille laimeassa liuoksessa (0.5 - 1 /ug/ml) suodattamalla liuos filtterin läpi lievässä vesi-imussa, jolloin DNA tarttuu. Filtteri kykenee sitomaan 0NA:ta noin 1Θ0 jug/cm (Kafatos, F.C.
15 et ai. ( 1979] Nucleic Acids Research 7_, 1541 - 1552). Käytetään DNA-konsentraatioita 0.5 yug DNA:ta/ 2.5 cm halkaisijaltaan oleva filtteri aina 1 yugraan DNA:ta/7 mm halkaisijaltaan oleva filtteri. DNA-suoda-tuksen jälkeen filtterit pestään 4 x SSC:llä, kuivataan 20 huoneen lämmössä ja viimeksi käsitellään +80-asteisessa vakuumiuunissa 2 h, jonka jälkeen DNA säilyy niissä vakaana ja filtterit voidaan säilyttää huoneen lämmössä pitkiä aikoja (Southern, E.M. (1975) 0. Mol. Biol. 96, 503 - 51 7) .
25
Radioaktiivisen nukleiinihappofragmentin leimaus 125
Radioaktiivisena leimana käytetään I-isotooppia .
30 Tämä on detektoitavissa Y~laskijalla, joka on olemassa useimmissa suurissa laboratorioyksiköissä. Isotoopin puoliintumisaika on 60 päivää, jonka takia tällä leimattujen reagenssien käyttöaika on noin 4 kk.
1 G
63596 "Nie k-translation”-leimaus
Menetelmän ideana on vaihtaa jokin nukleiinihapon nukleotideista radioaktiiviseksi , jolloin samalla koko DNA leimautuu. 5 Tämä tapahtuu Rigby, P.W.3. et al.:n (1977) 3. Mol. Biol. 113, 237 - 251) julkaiseman menetelmän mukaisesti. Reaktiossa DNA leimautuu radioaktiiviseksi, kun liuoksessa on 125 raaka-aineena I-isotoopi 11a leimattu dedksinukleosidi- 125 trifosfaatti, tässä tapauksessa I-dCTP (Radiochemical 10 Centre, Amersham: >1500 Ci/mmol). Optimaalisissa olo- 9 suhteissa DNA:han saadaan leimaa jopa 10 cpm yug DNA:ta kohti. Leimattu DNA puhdistetaan reaktiossa vapaaksi jääneistä nukleotideista yksinkertaisen geelisuodatuksen avulla, esim. käyttämällä BioGel P30:tä (BioRad).
15
Muu leimaus
Yksisäikeinen M13 mp7-faagissa tuotettava nukleiinihappo- 20 reagenssi on tarkoituksenmukaista leimata suoran jodee- 125 rauksen avulla, jolloin reaktiivinen I liitetään kova-lentisti nukleiinihappoon (Commerford, S.L. (1971) Biochemistry _1_0, 1993 - 2000, Orosz, J.M. and Wetmur, 3.G.
( 1974) Biochemistry j_3, 5467 - 5473). Vaihtoehtoisesti 25 nukleiinihappo voidaan saattaa radioaktiiviseksi liittämällä sen päihin radioaktiivinen nukleotidi terminaalisen transferaasin avulla (Roychoudhury, R. and Wu, R. (19B0) Meth. Enzymol. 6_5, 43 - 62).
30 Edellä käsitelty reagenssivalmistus koskee sellaisia mikrobeja, joiden perintöaines on DNA:ta. RNA-viruksien genomifragmenttien kloonaus tapahtuu siten, että ensin tehdään virus RNA:sta DNA-kopio (cDNA) reverse transkrip-taasientsyymin avulla, jonka jälkeen DNA-polymeraasi saat-35 taa DNA:n kaksisäikeiseksi ja DNA on kloonattavissa kuten yllä on esitetty (Salser, W. (1979) in Genetic Engineering, Ed. A.M. Chakrabarty, CRC Press, pp. 53 - 81).
11 63596
Kunkin mikrobin kohdalla käytetään mahdollisimman tarkoituksenmukaista kloonausmenetelmää, jossa käytettävä vektori sekä isäntä voivat vaihdella. Kyseeseen voivat tulla λ-faagi vektorina, muut plasmidit, kosmidit, kloonaus 5 mm. Bacillus subtilis -bakteerissa jne. (Recombinant DNA, Benchmarck Papers in Microbiology, Voi. 15, Ed. K.3. Denniston & L.W. Enqvist, Dowden, Hutchinson & Ross, Inc. (19BDj Ish-Horowicz, D. and Burke, 3.F. (19813 Nucleic Acids Research j), 2989 - 29983 .
10
Testin suoritus Näytekäsittely 15
Tutkittava mikrobinukleiinihappo on vapautettava sekä mikrobin sisältä että infektoiduista soluista ja denaturoitava yksisäikeiseen muotoon. Virusgenomit saadaan vapautetuiksi käsittelemällä näytemateriaali 1 %:sella nat-20 riumdodekyylisulfaattiliuoksella (SDS) ja hajottamalla niitä suojaavat proteiinit proteinaasi-K-käsittelyllä (1 mg/ml +37°, 60 min). Bakteerinäyte on näiden lisäksi hajotettava lysotsyymi- ja EDTA-käsittelyin .
25 3os näyte sisältää runsaasti sitkeää jättiläiskokoista solu-DNA:ta, tätä on katkottava sieltä täältä viskositeetin alentamiseksi esim. sonikoimalla tai puristamalla näyte ohuen neulan läpi muutamia kertoja.
30
Hybridisaatio
Hybridisaatio tapahtuu esimerkiksi 50 %:sessa formami-dissa (deionisoitu, säilytetty -20°C:ssa), 4 x SSC:ssä, 1 x 35 Denhardtin liuoksessa (Denhardt, D.T. (1966) Biochem.
Biophys. Res. Commun. 2_3, 641 - 646), jossa on 1 % SDS sää ja 0,5 mg/ml DNAsta (salmon sperm tai calf thymus) +37°C:ssa 12 63596 yleensä yli yön 16 - 20 tuntia. Testiin valitut filtterit inkuboidaan sopivassa astiassa, johon pipetoidaan hybridi* saatioliuos ja hybridisaatio aloitetaan. Hybridisaatio* liuos koostuu (a) esikäsitellystä näytteestä ja tähän yhdis* 5 tetystä radioaktiivisesta nukleiinihapporeagenssista/rea* gensseista, jotka on denaturoitu keittämällä 5 minuuttia, jonka jälkeen liuos on nopeasti jäähdytetty 0°C:een; (b) konsentroiduista formamidi-, SSC- ja Denhardt*liuoksista, jotka pipetoidaan denaturoituun ja jäähtyneeseen 10 seokseen (a). Sekoituksen jälkeen hybridisaatioliuos pipetoidaan hybridisaatioastiaan filttereille. Hybridi* saation jälkeen filtterit pestään huolellisesti ja filtterit lasketaan yksitellen V-laskijassa.
15 Keksintö selvennetään vielä muutamalla käyttöesimerkillä.
Esimerkki 1
Adenoviruksen detektio kerroshybridisaatio-menetelmän 20 avulla (Taulukko 1)
Testin yksityiskohdat selviävät taulukkotekstistä. Kerros-hybridisaatiomenetelmä kykenee osoittamaan virus-DNA:n liuoksesta, mutta yhtälailla virusgenomi on mahdollista 25 detektoida infektoiduista soluista.
Hybridisaation tausta mitataan putkessa, johon ei ole lisätty laisinkaan näytettä vaan ainoastaan filtteri ja leimattu nukleiinihapporeagenssi. Tausta johtuu leimatun nukleiini-30 happoreagenssin sisältämistä pBR322-jaksoista, jotka suoraan hybridisoituvat filtteriin ilman välittävää näytettä. Testissä kontrolleina käytetyt calf thymus ja tyhjät filtterit kuvaavat toisaalta hybridisaation spesifiteettiä ja toisaalta esim. pesujen riittämättömyydestä johtuvaa 35 epäspesifisen taustan suuruutta.
Seuraavissa taulukoissa filttereille hybridisoituneista cpm-arvoista on vähennetty reagensseista johtuva tausta.
Taulukko 1 13 63596
Adenovirustesti 5 Näyte Filtterit (cpm)
Adeno 1) Calf thymus 2) Blanko 3)
Adenovirus 2-DNA (BRL) 10 (500 ng) 9000 49
Adenoviruksella infektoidut HeLa-solut (6 x 10^) 8200 15
Filtterit; 13 Ad2D-pBR322-plasmidi 2 yug 2) Calf thymus DNA 1 yug (Boehringer Mannheim) 3) Blanko Cei DNA:ta) 20
Leimattu nukleiinihapporeagenssi;
Ad2_BamHI C-fragmentti puhdistettuna, spesifinen aktiviteetti 90 x 10^ cpm/^ig (200000 cpm ^"’i/reakt io) 25 Hybridisaatio:
50 % formamidi, 4 x SSC
Denhardtin liuos, jossa 0,5 mg/ml salmon sperm DNA ja 1 % SDS, + 37°C, 16 t 30 Pesu; 0,1 x SSC, huoneenlämmössä 40 min Näytteet;
Adenovirus 2-DNA (BRL) 35 Adenovirus, tyyppiä 2 -infektio tapahtuu HeLa-soluissa. Solut hajoitetaan 1 % SDS-käsittelyllä, jonka jälkeen niille lisätään proteinaasi-K-entsyymi (Sigma) 1 mg/ml ja annetaan vaikuttaa +37°C:ssa 30 min. Ennen denatu-raatiota näyte puristetaan ohuen neulan läpi.
14 63596
Taulukon arvoista on vähennetty reagenssien aiheuttama tausta, joka on saatu vastaavasta hybridisaatiosta ilman näytettä.
5 Esimerkki 2 RNA-yiruksen detektio kerroshybridisaatiomenetelmän avulla (taulukko 2) 10 RNA-virusmalIina käytetään Semliki Forest virusta (proto-tyyppikanta, saatu London School of Hygiene and Tropical Medicine'Itä), jonka genomi on yksisäikeistä RNArta.
Virusgenomia mallina käyttäen valmistetaan cDNA, joka kloonataan pBR322-plasmidiin sen Pstl-katkaisukohtaan kuten 15 Garoff et ai. ovat kuvanneet (Proc. Natl. Acad. Sei. (1980) USA 77 6376 - 6380). Saatu rekombinanttiplasmidi on pKTH312 KTL n:o EH 232. Sen virusgenomista peräisin oleva osa on noin 1400 nukleotidia pitkä ja peräisin viruksen rakenneproteiinien alueelta, noin nukleotidista 200 20 nukleotidiin 1600, kun numerointi aloitetaan rakennegeeni-en alusta (Garoff, H. et ai. 1980). Reagenssivalmistusta varten koko rekombinanttiplasmidi pKTH312 linearisoidaan EcoRI-restriktioentsyymi1lä (BRL) (Semliki Forest viruksesta peräisin olevissa sekvensseissä ei ole EcoRI-entsyymin 25 tunnistuskohtaa), ja tämä puolestaan katkaistaan kahdeksi fragmentiksi XhoI-entsyymillä (BRL), jonka katkaisukohta paikantuu Semliki Forest viruksen sekvenssien alueelle. Suurempi EcoRI - XhoI-fragmentti A (noin 3900 emäsparia pitkä) kiinnitetään filtterille, kun pienempi fragmentti 125 30 B (noin 1850 emäsparia pitkä) leimataan I:lla nick translaation avulla.
Näytteenä kokeessa käytetään sekä kokonaista Semliki Forest virusta että Semliki Forest viruksella infektoituja soluja. 35 Molemmissa tapauksissa näytteen virusspesifiset nukleiinihapot koostuvat yksinomaan RNArsta.
Taulukko 2 15 63596
Semliki Forest viruksen detektio kerroshybridisaatiomenetel-män avulla 5 __ Näyte Filtterit (cpm)
Semliki Forest Calf thymus 2) Blanko 3) virus 1) 10 Semliki Forest virus 30 ^ig 3340 - 33
Semliki Forest viruksella infektoidut solut (5 x 105) 2698 8 10 15
Ei infektoidut solut 10 5 8
Filtterit; 20 1) pKTH312 plasmidin EcoRI-XhoI-fragmentti A 1,2 jug 2) Calf thymus DNA 1 /jg 3) Blanko (ei DNA:ta)
Leimatut nukleiinihapporeagenssit: 25 Plasmidin pKTH312 EcoRI-XhoI-fragmentti B, spesifinen c λ y c aktiviteetti 90 x 10 cpm//ug DNA (200000 cpm I/reaktio)
Hybridisaatio:
Kuten esimerkissä 1 30
Pesu;
Kuten esimerkissä 1 Näytteet; 35 Semliki Forest virus 30 /jg hajoitetaan. SDS:llä ennen testiä. Infektoidut solut käsitellään kuten esimerkissä 1 on selostettu. Semliki Forest virusinfektio suoritetaan BHK-21-soluissa.
i ' l 16 63596
Taulukon 2 arvoista on vähennetty reagenssien aiheuttama tausta, joka on saatu vastaavasta hybridisaatiosta ilman näytettä.
5 Esimerkki 3
Virusnäyte, jossa viruksen lähetti-RNA detektoidaan kerros hybridisaati omenetelmän avulla (taulukko 3) 10 Kerroshybridisaatioreagenssit valmistetaan SV40-viruksen DIMA:sta (BRL) siten, että DNA katkaistaan kahteen palaan
Pstl-entsyymin (Baehringer Mannheim) avulla (Lebowitz, P.
and Weissman, S.M. (1979) Curr. Topics in Microbiol.
Immunol, 8_7, 43 - 172) ja fragmentit eristetään ja puhdiste-
15 taan agaroosigeelielektroforeesin avulla. Fragmentti A
(4000 emäsparia) leimataan radioaktiiviseksi nick-trans-125 laatiossa I:llä ja fragmentti B (1220 emäsparia) kiinnitetään filtterille.
20 ONA-fragmentit on valittu siten, että molemmissa on sekä myöhäisiä että aikaisia lähettejä koodittavia alueita. Niinpä B sisältää noin 700 emästä rakenneproteiini VP1:n geenistä ja yli 600 emästä aikaisten lähettien geenistä. Koska SV40-viruksen DNA sinänsä on kovalentisti suljettu 25 rengas, se ei sovellu testissä näytteeksi ilman, että se avataan lineaariseksi. Niinpä käytettäessä infektoituja soluja näytteenä voidaan testata, kuinka hyvin menetelmä soveltuu virusgenomin mukaan tehtyjen RNA-kopioiden osoittamiseen. Taulukosta 3 ilmenee, että testi soveltuu 30 erinomaisesti infektoitujen solujen tutkimiseen. Se demonstroi myös, että samoilla reagenssei1la voidaan tutkia sekä itse virus-DNA että sen mukaan tehdyt lähetti-RNAst.
63596
Taulukko 3 1 7 SV40-virusten detektio kerroshybri-'disaatiomenetR·] mäi ι·ή 5 Näyte Filtterit (cpm) SV40 1) Calf thymus 2) Blanko 3)
Koe 1 SV4Q-virus-DNA (50 ng) 10 (linearisoitu) 20061 159 104
Ei näytettä - 1 5 Koe 2 SV40-viruksella infektoidut CV1-solut 40 t infektion jälkeen (10^ solua) 30814 294 530 20 Ei infektoidut solut -
Filtterit: 1) SV40-viruksen sirkulaarisesta DNA:sta Pstl-restriktio- 25 entsyymillä katkaistu lyhyempi fragmentti PstI B 0,2 yug 2) Calf thymus DNA 1 /Jg 3) Blanko (ei DNA:ta)
Leimattu nukleiinihapporeagenssi: 30 sV40-viruksen-DNA:sta peräisin oleva pitempi PstI A-fragmentti, spesifinen aktiviteetti 28 x 106 cpm//Jg DNA (200000 cpm 125I/reaktio)
Hybridisaatio:
Kuten esimerkissä 1 35 Hybridisaatioaika on 40 tuntia
Pesu;
Kuten esimerkissä 1 18 63596 Näytteet: SV40-virus-DNA (BRL) on linearisoitu EcoRI- restriktioentsyymin (BRL) avulla. CV1-solut (Biomedical Centre, Upsala University) infektoidaan SV40-viruksella (saatu Janice Y.
5 Chou & Robert G. Martinilta, NIH, Bethesda) ja solut kerätään 48 tuntia infektion jälkeen. Näytekäsittely tapahtuu kuten esimerkissä 1.
Taulukon 3 arvoista on vähennetty reagenssien aiheuttama 10 tausta, joka on saatu vastaavasta hybridisaatiosta ilman näytettä.
Esimerkki 4 15 Bacillus amyloliquefaciensin detektio kerroshybridisaatio-menetelmän avulla (Taulukko 4)
Reagensseina on käytetty B. amyloliquefacjens* in E18 (VTT eli Valtion Teknillinen Tutkimuslaitos) o(-amylaasigeenin 20 fragmentteja, jotka on tätä testiä varten eristetty rekombi-nanttiplasmidi pKTH10:stä (Palva, I. et ai, (19Θ1) Gene, V5 43.-5 T) restri ktioentsyymikäsittelyn jälkeen agaroosigeeli-elektoroforeesin avulla. Testiä varten käytetyt fragmentit ovat 0(-amy laasigeenialueen Cla!>EcoRI-f ragmentti , (460 25 emäsparia) (Clal Boehringer Mannheim) ja EcoRI-BamHI-frag~ mentti (1500 emäsparia). Näistä EcoRI-BamHI-fragmentti kiinnitetään filtterille ja Clal-EcoRI-fragmentti leima*· taan l*L-li-isotaopi 1 la radioaktiiviseksi nick-translaation avu 1la.
30
Taulukosta 4 käy ilmi, että kerroshybridisaatiotekniikan avulla B. amyloliquefaciens on tunnistettavissa näytteestä sen sisältämän yhden (X-amylaasigeenin perusteella. E. coli oli testissä negatiivinen (antoi taustaan rinnastettavan 35 tuloksen).
19 63596
Taulukko 4
Bakteeridiagnostiikka kerroshybridisaation avulla 5 Näyte Filtterit (cpm) 0(-amylaasi 1] Calf thymus 2) Blanko 3)
pKTHlQ-plasmidi-DNA
(linearisoitu) 1 μg 5773 47 10
Ei näytettä - E. coli HB101 (109) - - 1 5 Bacillus amylolique- faciens (3 x 10 ) 3377
Bacillus amylolique- faciens (109) 2871 20 _I___
Filtterit; 1) pKTH10-plasmidin (X-amylaasigeenin EcoRI-BamHI-fragmentti 0,35 yug 25 2) Calf thymus DNA 1 ^ug 31 Blanko (ei DNA:ta)
Leimattu nukleiinihapporeagenssi: pKTHIO-plasmidin CV-amy laasigeenin Clal-EcoRI-f ragmentti , 6 125 30 spesifinen aktiivisuus 35 x 10 cprrv^ug (200000 cpm I/reaktio)
Hybridisaatio:
Kuten esimerkissä 1 35 Pesu:
Kuten esimerkissä 1 20 63596 Näytteet:
Bakteerinäytteet käsitellään lysotsyyrai 1 lä (67 yug/ml) 30 min +37°C; E. coli näytteeseen lisätään myös 5 mM EDTA. Käsittelyn loputtua kaikille näytteille lisätään SDS (2 %), 5 näytteet puristetaan ohuen neulan läpi kaksi kertaa viskositeetin alentamiseksi ja denaturoidaan keittämällä, kuten on kuvattu tekstissä näytekäsittelyn yhteydessä.
Taulukon 4 arvoista on vähennetty reagenssien aiheuttama 10 tausta, joka on saatu vastaavasta hybridisaatiosta ilman näytettä.
Esimerkki 5 15 Esimerkki kerroshybridisaatiomenetelmään perustuvasta "kittinä” toimivasta reagenssien yhdistelmästä (taulukko 5) Näytteinä tällä testillä tutkitaan kolmella eri viruksella infektoituja soluja (adenovirus, SV40 virus ja Herpes 20 simplex virus) sekä Bacillus amyloliquefaciens-bakteeria sisältävä näyte. Kuhunkin näytteeseen sekoitetaan yhtäaikaisesti kaikki seuraavat reagenssit: filttereistä 1 kpl SV40-virus, adenovirus-, Bacillus amyloliquefaciensin Λ-amylaasigeeni- ja calf thymus-DNA:ta sisältävä filtteri 25 sekä yksi tyhjä filtteri; näiden lisäksi 200000 cpm kutakin seuraavista leimatuista nukleiinihapporeagensseista: SV40-virus-, adenovirus- ja 0(-amylaasigeeni-DNA-reagenssit,
Esimerkkimme osoittaa, että näytteestä voidaan sitä laimen-30 tamatta ja jakamatta tutkia samalla kertaa tarkoituksenmukainen sarja mikrobeja sekoittamalla reagenssit näytteeseen. Näytteenä voi toimia sekä virus- että bakteerinukleiinihappo. Näytteessä olevan mikrobin identifiointi on helppoa, koska se tapahtuu tunnuksilla 35 varustettujen filttereiden perusteella.
Taulukko 5 21 63596
Kerroshybridisaatiomenetelmään perustuva kit 5 Näyte Filtterit (cpm) SV40 1) Adeno 2) 0(-arry- Calf Blanko 5) laasi 3) thymus 4) SV40-viruksella irifek- 10 toidut solut MO6) 16390 2 13 22 31
Adeno-2-viruksella infektoidut solut (6 x 105) - 6750 5 13 15
Herpes simplex-viruk-sella infektoidut solut MO6) - 5 13 20 Bacillus amylolique- faciens MQ9) 15 8 6500 16 5
Ei infektoidut solut 25
Filtterit; 1) kuten esimerkissä 3 2) kuten esimerkissä 1 3) kuten esimerkissä 4 30 4) Calf thymus DNA 1 yug 5) Blanko (ei DNA:ta)
Leimatut nukleiinihapporeagenssit: SV40“virus kuten esimerkissä 3 35 Adenovirus kuten esimerkissä 1 (X-amy laasi geeni kuten esimerkissä 4 22
Hybridisaatio; 63596
Kuten esimerkissä 1 Pesu: 5 Kuten esimerkissä 1 Näytteet: SV40 viruksella infektoidut solunäytteet on selostettu taulukossa 3. Adenoviruksella infektoidut solunäytteet 10 on selostettu taulukossa 1.
0
Herpes simplex, tyyppiä 1 viruksella infektoidaan 10 Vero-solua. Solut kerätään näytteeksi 20 tunnin kasvatuksen jälkeen, kun soluissa voidaan mikroskooppisesti havaita 15 virusinfektion merkit. Näyte käsitellään samoin kuin adenoviruksella infektoidut solut (esimerkki 1).
Bacillus amyloliquefaciens näyte:
Kuten taulukossa 4 20
Taulukon 5 arvoista on vähennetty reagenssien aiheuttama tausta, joka on saatu vastaavasta hybridisaatiosta ilman näytettä.
Il 63596 5 23
Esimerkki 6
Escherichia colin detektio kerroshybridisaatiomenetelmän avu 11a (Taulukko 6)
Testireagenssit valmistettiin E. colin ompA-geenin fragmenteista. OmpA (outer memhrane protein A) on E. colin ulko-membraaniprotei i ni.
10 Lähtömateriaalina käytettiin SITRA:n yhdistelmä-DNA-ryhmän (Pauli Kallio, pro gradu-tutkielma, Helsingin yliopiston yleisen mikrobiologian laitos) pTU100 plasmidista (Henning et ai. ( 1979), proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 7_6, 4360-4364) prosessoimia hybridiplasmideja pKTH40 ja pKTH45.
15 pKTH45-plasmidia (deponoitu KTLrlle no:lla EH254), joka sisältää 740 emäsparia ompA-geenin 5’ -päästä pBR322-plasmidiin liitettynä, käytettiin suoraan filtterireagens-s ina.
20 pKTH40-plasmidi sisältää noin 300 emäsparia ompA-geenin 3' -päästä ja sitä välittömästi seuraavat noin 1400 emäs-paria E. colin muuta genomia. pKTH40 pilkottiin BamHI restriktioentsyymillä, jolloin saatiin yhteensä 1700 25 emäsparia käsittävä E. colista peräisin oleva DNA-frag* mentti. Se siirrettiin yksisäikeiseen bakteriofaagiin M13mp7 (Messing et ai. (19B1), Nucl. Acids Res. £, 309-321, Heidecker et ai. (19Θ0), Gene _1_0, 69-73, Gardner et ai. (19Θ1), Nucl. Acids Res. £, 2871-286Θ). Saatua yhdistel-30 mäfaagia, mKTH12Q7 (deponoitu KTL:lle noilla EH256), käytettiin kerroshybridisaatiossa koettimena leimaamalla 12 5 se J-isotoopilla radioaktiiviseksi kuten on kuvattu kohdassa "Muu leimaus" sivu 9.
35 Kuten testistä (taulukko 6) ilmenee, voidaan sekä rikot- tujen E. coli solujen DNA että E. colista eristetty puhdas DNA detektoida kerroshybridisaatiomenetelmän avulla.
Taulukko 6 24 63596
Escherichia coli-bakteerin detektio kerroshybridisaatio’· menetelmän avulla 5 __ Näyte Filtterit (cpm) ompA 1) Calf thymus 2) Sianko 3) E. coli K12 HB101'DNA 10 a) 2 x 107 282
E. coli K12 HB101 DNA
a) 2 x 108 2206 15 E. coli K12 HB101 solut b) 2 x 107 1113 E. coli K.12 HB101 solut b) 2 x 10® 2327 12 5 20 _____ a) DNA-molekyylien lukumäärä, b) solujen lukumäärä
Filtterit: 25 1) pKTH45 plasmidi 1,088 jug (2 x 10^ molekyyliä) 2) Calf thymus DNA 1,088 ;ug 3) Blanko (ei DNA:ta)
Leimatut nukleiinihapporeagenssit; 30 mKTH 1207, spesifinen aktiviteetti 8 x 107 cpm/jug DNA (200000 cpm/reaktio)
Hybridisaatio; 4 x SSC, 1 x Denhardt ilman BSA:ta (bovin serum albumin),
35 0,25 % SDS, 200 /ug/ml Herring sperm DNA, 17,5 h, ♦65°C
Pesu;
Kuten esimerkissä 1 63596 25 Näytteet: E. coli K12 HB101 - DNA eristettiin Marmur-menetelmälla (Marmur (1961), J. Mol. Biol. 3, 208-21Θ). DNA:n denatu-raatio testiä varten tehtiin 7 mM NaGH, 100 C, 5 min.
5 Solut hajotettiin lysotsyymi (500 /jg/ml), EDTA (70 mM, + 37°C, 30 min), SOS (0,25 %, +65°C, 15 min) käsittelyllä ja vapautunut DNA denaturoitiin alkalikeitolla (14 mM NaOH, +100°C, 5 min).
10 Taulukon 6 arvoista on vähennetty reagenssien aiheuttama tausta, joka on saatu vastaavasta hybridisaatiosta ilman näytettä.

Claims (10)

  1. 26 63596
  2. 1. Nukleiinihappojen kerroshybridisaatioon kiinteällä kantajalla perustuva mikrobidiagnostinen menetelmä yhden tai 5 useamman mikrobin ja/tai mikrobiryhmän yhtäaikaiseksi tunnistamiseksi, jossa menetelmässä käytetään kahta erilaista nukleiinihapporeagenssia, joista toinen käsittää yksisäi-keisenä kiinteään kantajaan sidotun nukleiinihappofragmentin ja toinen käsittää yksisäikeiseksi saatetun jollakin merk-10 kiaineella leimatun nukleiinihappofragmentin, tunnet-t u siitä, että sarja, joka koostuu vähintään kahdesta eri nukleiinihapporeagenssista jokaista tunnistettavaksi tarkoitettua mikrobia ja/tai mikrobi ryhmää kohden ja joista reagensseista toinen on sidottu kiinteään kantajaan ja 15 toinen leimattu sinänsä tunnetulla merkkiaineella, saatetaan kosketukseen yhdessä jakamattomassa näytteessä olevien tunnistettaviksi tarkoitettujen mikrobien tai mikrobiryhmien sinänsä tunnetulla tavalla yksisäikeisiksi saatettujen nukleiinihappojen kanssa, jolloin näytteestä 20 peräisin olevasta nukleiinihapposeoksesta ne nukleiinihapot, joita vastaavia nukleiinihapporeagensseja käytetään, hybridisoituvat kiinteään kantajaan sidottuihin vastaaviin tunnistaviin nukleiinihappofragmentteihin ja muodostuneet kiinteään kantajaan tartutetut hybridit leimautuvat vastaa-25 vien leimattujen nukleiinihappofragmenttien avulla näiden sitoutuessa näytteestä peräisin oleviin kiinteään kantajaan sitoutuneihin nukleiinihappoihin ja kiinteän kantajan leimaus mitataan sinänsä tunnetuin menetelmin.
  3. 2. Sarja reagenssien yhdistelmiä, jotka on tarkoitettu käytettäväksi patenttivaatimuksen 1 mukaisessa menetelmässä, tunnettu siitä, että sarjaan kuuluu jokaista tunnistettavaksi tarkoitettua mikrobia ja/tai mikrobiryhmää kohden vähintään kaksi nukleiinihapporeagenssia, joihin 35 tarvittavat mikrobista ja/tai mikrobiryhmästä peräisin olevat kahdet erilaiset nukleiinihappofragmentit on 63596 27 valmistettu mikrobigenomin eri osista mutta edullisesti toisiaan lähellä sijaitsevista fragmenteista joko suoraan mikrobigenomista tai sinänsä tunnettua yhdistelmä-DNA-tekniikkaa hyväksi käyttäen ja nämä mikrobikohtaiset, joko 5 ryhmä- tai lajispesifiset nukleiinihappofragmentit on saatettu yksisäikeisiksi ja toinen on kiinnitetty kiinteään kantajaan ja toinen leimattu jollakin merkkiaineella.
  4. 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen sarja reagenssien yhdis-10 telmiä, tunnettu siitä, että siihen adenoviruksen tunnistamiseksi kuuluu kiinteään kantajaan sidottuna nukle-iinihapporeagenssina adenoviruksen rekombinanttiplasmidia Ad2DpOR322 ja leimattuna nukleiinihapporeagenssina adenoviruksen Ad^-BamHI C-fragmenttia. 15
  5. 4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen sarja reagenssien yhdistelmiä, tunnettu siitä, että siihen Semliki Forest -viruksen tunnistamiseksi kuuluu kiinteään kantajaan sidottuna nukleiinihapporeagenssina pKTH312-plasmidin
  6. 20 EcoRI-XhoI fragmenttia A ja leimattuna nukleiinihapporeagenssina pKTH312-plasmidin EcoRI-XhoI fragmenttia B.
  7. 5. Patenttivaatimuksen 2 mukainen sarja reagenssien yhdistelmiä, tunnettu siitä, että SV40-viruksen tunnis- 25 tamiseksi kuuluu kiinteään kantajaan sidottuna nukleiinihapporeagenssina SV40-viruksen PstI B-fragmenttia ja leimattuna nukleiinihapporeagenssina SV40-viruksen PstI A-fragmenttia.
  8. 6. Patenttivaatimuksen 2 mukainen sarja reagenssien yhdis telmiä, tunnettu siitä, että siihen Bacillus amyloliquefaciens’in tunnistamiseksi kuuluu kiinteään kantajaan sidottuna nukleiinihapporeagenssina Bacillus amyloliquefaciens' in pKTHIO plasmidissa olevan of-amylaasi-35 geenin EcoRI-BamHI-fragmenttia ja leimattuna nukleiinihapporeagenssina Bacillus amyloliquefaciens’in pKTHIO 63596 26 plasmidissa olevan CX-amylaasigeenin Clal-EcoRI-fragmenttia.
  9. 7. Patenttivaatimuksen 2 mukainen sarja reagenssien yhdistelmiä, tunnettu siitä, että siihen 5 Escherichia colin tunnistamiseksi kuuluu kiinteään kantajaan sidottuna nukleiinihapporeagenssina pKTH45 plasmidi ja leimattuna nukleiinihapporeagenssina yhdistelmä-faagi mKTH1207.
  10. 10 B. Patenttivaatimusten 2, 3, 5 ja 6 mukainen sarja reagenssien yhdistelmiä, tunnettu siitä, että siihen mainittujen mikrobien sekä virusten että bakteerien, kuten adenoviruksen, SV40-viruksen ja Bacillus amyloliquefaci-ens'in tunnistamiseksi ja erottamiseksi samasta näytteestä, 15 joka sisältää eri mikrobeista peräisin olevia nukleiinihappoja, kuuluu kiinteisiin kantajiin sidottuina nukleiini-happoreagensseina adenoviruksen Ad2DpBR322 rekombinantti-plasmidia, SV40-viruksen PstI B-fragmenttia sekä Bacillus amyloliquefaciens'in pKTHIO-plasmidissa olevan CX-amylaasi-20 geenin EcoRI-BamHI-fragmenttia; sekä leimattuina nukleiini-happoreagensseina adenoviruksen Ad2~BamHI C-fragmenttia, SV40-viruksen PstI A-fragmenttia sekä Bacillus amylolique-faciens'in pKTHIO plasmidissa olevaa CX-amylaasigeenin Clal-EcoRI-fragmentti a. 2'} Patentkrav 63 5 9 6
FI813251A 1981-10-16 1981-10-16 Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser FI63596C (fi)

Priority Applications (19)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI813251A FI63596C (fi) 1981-10-16 1981-10-16 Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser
PCT/FI1982/000038 WO1983001459A1 (en) 1981-10-16 1982-09-29 A method and reagent combination for the diagnosis of microorganisms by sandwich hybridization of nucleic acids
JP57502956A JPS58501703A (ja) 1981-10-16 1982-09-29 微生物鑑別方法及び微生物鑑別試剤の組み合わせ
HU823529A HU196242B (en) 1981-10-16 1982-09-29 Process and reagent combination for identifying microorganisms by sandwich-hybridization of nucleic acids
AU89575/82A AU548854B2 (en) 1981-10-16 1982-09-29 A method and reagent combination for the diagnosis of microorganisms
EP82902982A EP0098267A1 (en) 1981-10-16 1982-09-29 A method and reagent combination for the diagnosis of microorganisms by sandwich hybridization of nucleic acids
JP57502956A JPH0632637B1 (fi) 1981-10-16 1982-09-29
FI823452A FI823452A0 (fi) 1981-10-16 1982-10-11 Foerfarande foer stabilisering av i nukleinsyrehybridisering anvaenda filter
US06/434,182 US4486539A (en) 1981-10-16 1982-10-14 Detection of microbial nucleic acids by a one-step sandwich hybridization test
DE8282305489T DE3277917D1 (en) 1981-10-16 1982-10-15 A method and reagent combination for the identification of microorganisms and the use of sandwich hybridization of nucleic acids therefor
AT82305489T ATE31735T1 (de) 1981-10-16 1982-10-15 Methode und reagenskombination zur indentifikation von mikroorganismen und die anwendung der sandwichhybridisierung von nukleinsaeuren hierfuer.
EP82305489A EP0079139B1 (en) 1981-10-16 1982-10-15 A method and reagent combination for the identification of microorganisms and the use of sandwich hybridization of nucleic acids therefor
CA000413539A CA1192120A (en) 1981-10-16 1982-10-15 Method and reagent combination for the diagnosis of microorganisms
DE198282305489T DE79139T1 (de) 1981-10-16 1982-10-15 Methode und reagenskombination zur indentifikation von mikroorganismen und die anwendung der sandwichhybridisierung von nukleinsaeuren hierfuer.
NO83832061A NO163699C (no) 1981-10-16 1983-06-07 Fremgangsmaate og reagenskombinasjon for diagnose av mikroorganismer.
DK198302751A DK173744B1 (da) 1981-10-16 1983-06-15 Fremgangsmåde og reagenskombination til diagnose af mikroorganismer
RO112563A RO86356B (ro) 1981-10-16 1983-11-15 Metoda de identificare microbiana
SU833663405A SU1386031A3 (ru) 1981-10-16 1983-11-15 Способ идентификации вирусов и бактерий
US06/566,532 US4563419A (en) 1981-10-16 1983-12-29 Detection of microbial nucleic acids by a one-step sandwich hybridization test

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI813251A FI63596C (fi) 1981-10-16 1981-10-16 Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser
FI813251 1981-10-16

Publications (2)

Publication Number Publication Date
FI63596B true FI63596B (fi) 1983-03-31
FI63596C FI63596C (fi) 1983-07-11

Family

ID=8514776

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI813251A FI63596C (fi) 1981-10-16 1981-10-16 Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser

Country Status (13)

Country Link
US (2) US4486539A (fi)
EP (2) EP0098267A1 (fi)
JP (2) JPS58501703A (fi)
AT (1) ATE31735T1 (fi)
AU (1) AU548854B2 (fi)
CA (1) CA1192120A (fi)
DE (2) DE3277917D1 (fi)
DK (1) DK173744B1 (fi)
FI (1) FI63596C (fi)
HU (1) HU196242B (fi)
RO (1) RO86356B (fi)
SU (1) SU1386031A3 (fi)
WO (1) WO1983001459A1 (fi)

Families Citing this family (341)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI63596C (fi) * 1981-10-16 1983-07-11 Orion Yhtymae Oy Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser
US5723597A (en) * 1983-01-10 1998-03-03 Gen-Probe Incorporated Ribosomal nucleic acid probes for detecting organisms or groups of organisms
US5288611A (en) * 1983-01-10 1994-02-22 Gen-Probe Incorporated Method for detecting, identifying, and quantitating organisms and viruses
US5641631A (en) * 1983-01-10 1997-06-24 Gen-Probe Incorporated Method for detecting, identifying, and quantitating organisms and viruses
US4689295A (en) * 1983-01-20 1987-08-25 Integrated Genetics, Inc. Test for Salmonella
US4994373A (en) 1983-01-27 1991-02-19 Enzo Biochem, Inc. Method and structures employing chemically-labelled polynucleotide probes
AU596068B2 (en) * 1983-02-22 1990-04-26 Syngene, Inc. Defined sequence single strand oligonucleotides incorporating reporter groups, process for the chemical synthesis thereof, and nucleosides useful in such synthesis
US4948882A (en) * 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US5593832A (en) * 1983-02-28 1997-01-14 Lifecodes Corporation Method for forensic analysis
IL71064A (en) * 1983-02-28 1989-10-31 Lifecodes Corp Paternity and forensic test involving analysis of dna polymorphic genetic regions
CA1228811A (en) * 1983-05-05 1987-11-03 Robert G. Pergolizzi Assay method utilizing polynucleotide sequences
CA1222680A (en) * 1983-07-05 1987-06-09 Nanibhushan Dattagupta Testing dna samples for particular nucleotide sequences
US4737454A (en) * 1983-07-14 1988-04-12 Molecular Diagnostics, Inc. Fast photochemical method of labelling nucleic acids for detection purposes in hybridization assays
US4959309A (en) * 1983-07-14 1990-09-25 Molecular Diagnostics, Inc. Fast photochemical method of labelling nucleic acids for detection purposes in hybridization assays
CA1231303A (en) * 1983-08-05 1988-01-12 Robert J. Carrico Detection of bacteria by nucleic acid hybridization
US5539097A (en) * 1983-09-02 1996-07-23 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide polymeric support system
JPS6091999A (ja) * 1983-10-25 1985-05-23 Fujirebio Inc ポリヌクレオチドの測定方法
GB8331071D0 (en) * 1983-11-22 1983-12-29 Karayiannis P Assay for dna/rna
IL73577A (en) * 1983-12-12 1989-10-31 Miles Lab Method and reagent system for detecting dna or rna sequences in a test medium containing single stranded dna or rna using antibodies to intercalation complexes with double stranded nucleic acid
US4724202A (en) * 1983-12-12 1988-02-09 Molecular Diagnostics, Inc. Use of non-hybridizable nucleic acids for the detection of nucleic acid hybridization
US4777129A (en) * 1983-12-12 1988-10-11 Molecular Diagnostics, Inc. Nucleic acid probe detectable by specific nucleic acid binding protein
US5002885A (en) * 1984-01-30 1991-03-26 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method preparation and use
US4849505A (en) * 1984-01-30 1989-07-18 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method of preparation and use
US4849208A (en) * 1984-01-30 1989-07-18 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method of preparation and use
US4843122A (en) * 1984-01-30 1989-06-27 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method of preparation and use
US4707440A (en) * 1984-01-30 1987-11-17 Enzo Biochem, Inc. Nucleic acid hybridization assay and detectable molecules useful in such assay
US4943523A (en) * 1984-01-30 1990-07-24 Enzo Biochem, Inc. Detectable molecules, method of preparation and use
FI71768C (fi) * 1984-02-17 1987-02-09 Orion Yhtymae Oy Foerbaettrade nykleinsyrareagenser och foerfarande foer deras framstaellning.
CA1223222A (en) * 1984-02-22 1987-06-23 Nanibhushan Dattagupta Immobilized nucleic acid-containing probes
WO1985004720A1 (en) * 1984-04-05 1985-10-24 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology Hybridization histochemistry
US5288609A (en) * 1984-04-27 1994-02-22 Enzo Diagnostics, Inc. Capture sandwich hybridization method and composition
US6221581B1 (en) * 1984-04-27 2001-04-24 Enzo Diagnostics, Inc. Processes for detecting polynucleotides, determining genetic mutations or defects in genetic material, separating or isolating nucleic acid of interest from samples, and useful compositions of matter and multihybrid complex compositions
CA1260372A (en) * 1984-04-27 1989-09-26 Elazar Rabbani Hybridization method for the detection of genetic materials
US4766062A (en) * 1984-05-07 1988-08-23 Allied Corporation Displacement polynucleotide assay method and polynucleotide complex reagent therefor
US4766064A (en) * 1984-05-07 1988-08-23 Allied Corporation Displacement polynucleotide assay employing polyether and diagnostic kit
US4670380A (en) * 1984-05-23 1987-06-02 Molecular Diagnostics, Inc. Assays utilizing labeled nucleic acid probes
US5132206A (en) * 1984-06-11 1992-07-21 Dreyer William J Fluorescent pigments for tagging biological molecules
US4749647A (en) * 1984-06-22 1988-06-07 Genetic Systems Corporation Polymerization-induced separation assay using recognition pairs
FR2567541B1 (fr) * 1984-07-13 1987-02-06 Pasteur Institut Sonde d'adn et procede pour la detection de " shigelles " et des souches entero-invasives de escherichia coli
US4755458A (en) * 1984-08-30 1988-07-05 Enzo Biochem, Inc. Composition and method for the detection of the presence of a polynucleotide sequence of interest
US4563417A (en) * 1984-08-31 1986-01-07 Miles Laboratories, Inc. Nucleic acid hybridization assay employing antibodies to intercalation complexes
US5955261A (en) * 1984-09-04 1999-09-21 Gen-Probe Incorporated Method for detecting the presence of group-specific viral mRNA in a sample
US4775619A (en) * 1984-10-16 1988-10-04 Chiron Corporation Polynucleotide determination with selectable cleavage sites
US5430136A (en) * 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US4820630A (en) * 1984-11-23 1989-04-11 Digene Diagnostics, Incorporated Assay for nucleic acid sequences, particularly genetic lesions, using interactive labels
US4734363A (en) * 1984-11-27 1988-03-29 Molecular Diagnostics, Inc. Large scale production of DNA probes
US5242794A (en) * 1984-12-13 1993-09-07 Applied Biosystems, Inc. Detection of specific sequences in nucleic acids
US4883750A (en) * 1984-12-13 1989-11-28 Applied Biosystems, Inc. Detection of specific sequences in nucleic acids
US4670379A (en) * 1984-12-19 1987-06-02 E. I. Du Pont De Nemours And Company Polynucleotide hydridization assays employing catalyzed luminescence
GB2179448B (en) * 1984-12-19 1989-06-07 Blair Malcolm A D Improved sandwich hybridisation technique for the detection of nucleotide sequences
GB8432118D0 (en) * 1984-12-19 1985-01-30 Malcolm A D B Sandwich hybridisation technique
FI72146C (fi) * 1985-01-02 1987-04-13 Orion Yhtymae Oy Foerfarande foer identifiering av nukleinsyror.
US4785086A (en) * 1985-01-17 1988-11-15 Integrated Genetics, Inc. Test for Campylobacter
US5851767A (en) * 1985-03-04 1998-12-22 The Regents Of The University Of California Detection of prokaryotic organism by DNA hybridization
US4792519A (en) * 1985-03-05 1988-12-20 International Technology Corporation Method for the monitoring and control of microbial populations
US5217866A (en) * 1985-03-15 1993-06-08 Anti-Gene Development Group Polynucleotide assay reagent and method
US5470974A (en) * 1985-03-15 1995-11-28 Neu-Gene Development Group Uncharged polynucleotide-binding polymers
US6197563B1 (en) 1985-03-28 2001-03-06 Roche Molecular Systems, Inc. Kits for amplifying and detecting nucleic acid sequences
US6040166A (en) * 1985-03-28 2000-03-21 Roche Molecular Systems, Inc. Kits for amplifying and detecting nucleic acid sequences, including a probe
EP0200113A3 (en) * 1985-04-30 1987-03-18 Pandex Laboratories, Inc. A method of solid phase nucleic acid hybridization assay incorporating a luminescent label
US4751177A (en) * 1985-06-13 1988-06-14 Amgen Methods and kits for performing nucleic acid hybridization assays
US5273882A (en) * 1985-06-13 1993-12-28 Amgen Method and kit for performing nucleic acid hybridization assays
IL79112A (en) * 1985-06-13 1992-01-15 Abbott Lab Method for the isolation of a nucleic acid sequence and kit for performing a hybridization assay
US5641630A (en) * 1985-06-13 1997-06-24 Amgen Inc. Method and kit for performing nucleic acid hybridization assays
AU558846B2 (en) * 1985-06-21 1987-02-12 Miles Laboratories Inc. Solid-phase hydridization assay using anti-hybrid antibodies
US4831125A (en) * 1985-07-01 1989-05-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company DNA probe for corynebacterium kutscheri
US4824776A (en) * 1985-07-25 1989-04-25 Molecular Biosystems, Inc. Method for increasing the sensitivity of nucleic acid hybridization assays
US5155216A (en) * 1985-08-15 1992-10-13 Amoco Corporation Nucleic acids labeled with a chemiluminescent acridine ester
US4868104A (en) * 1985-09-06 1989-09-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Homogeneous assay for specific polynucleotides
US5595908A (en) * 1985-09-26 1997-01-21 University Of Southern Mississipi Piezoelectric device for detection of polynucleotide hybridization
WO1987002708A1 (en) * 1985-10-24 1987-05-07 Siska Diagnostics, Inc. Lanthanide chelate-tagged nucleic acid probes
US5258283A (en) * 1985-11-05 1993-11-02 Battelle Memorial Institute Detection and differentiation of coxiella burnetii in biological fluids
US4876186A (en) * 1985-11-05 1989-10-24 Battelle Development Corporation Detection and differentiation of coxiella burnetii in biological fluids
JPS63502477A (ja) * 1985-12-03 1988-09-22 エル・ギユ−リイ・エム・ラフアツト 病気診断のための方法、装置および製品
US4910300A (en) * 1985-12-11 1990-03-20 Chiron Corporation Method for making nucleic acid probes
US4868105A (en) * 1985-12-11 1989-09-19 Chiron Corporation Solution phase nucleic acid sandwich assay
JP3293820B2 (ja) * 1985-12-13 2002-06-17 エンゾ− バイオケム インコ−ポレイテツド 標的ポリヌクレオチドにハイブリツド形成するための新規な一工程方法とポリヌクレオチド化合物
US4882269A (en) * 1985-12-13 1989-11-21 Princeton University Amplified hybridization assay
FI76119C (fi) * 1986-02-27 1988-09-09 Orion Yhtymae Oy Kvantitativ bestaemning av nukleinsyramolekyler och reagensfoerpackning som anvaends vid foerfarandet.
US4968602A (en) * 1986-03-05 1990-11-06 Molecular Diagnostics, Inc. Solution-phase single hybridization assay for detecting polynucleotide sequences
US4925785A (en) * 1986-03-07 1990-05-15 Biotechnica Diagnostics, Inc. Nucleic acid hybridization assays
US5242823A (en) * 1986-03-07 1993-09-07 International Genetic Engineering, Inc. Cloning of the 38kd Mycoplasma hyorhinis regression-associated antigen
EP0250662B1 (en) * 1986-06-25 1994-08-24 The Regents Of The University Of California Detection of mycoplasma by DNA hybridization
JP2534529B2 (ja) * 1986-07-24 1996-09-18 ブリティシュ・テレコミュニケ−ションズ・パブリック・リミテッド・カンパニ 放射発生器
DE3785658T2 (de) * 1986-08-11 1993-08-12 Siska Diagnostics Inc Methoden und zusammensetzungen fuer tests mit nukleinsaeuresonden.
US5849478A (en) * 1986-08-14 1998-12-15 Cashman; Daniel P. Blocked-polymerase polynucleotide immunoassay method and kit
US4917999A (en) * 1986-09-02 1990-04-17 Miles Inc. Oligonucleotide probes for detection of α-amylase genes
US5714380A (en) 1986-10-23 1998-02-03 Amoco Corporation Closed vessel for isolating target molecules and for performing amplification
US7087742B1 (en) 1986-11-24 2006-08-08 Gen-Probe Incorporated Oligonucleotide probes for the detection and/or quantitation of non-viral organisms
US5994059A (en) * 1986-11-24 1999-11-30 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes and methods for detecting Streptomyces enterococci
US5541308A (en) * 1986-11-24 1996-07-30 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes for detection and/or quantitation of non-viral organisms
US6150517A (en) 1986-11-24 2000-11-21 Gen-Probe Methods for making oligonucleotide probes for the detection and/or quantitation of non-viral organisms
US7138516B1 (en) 1986-11-24 2006-11-21 Gen-Probe Incorporated Oligonucleotide probes for the detection and/or quantitation of non-viral organisms
US4994372A (en) * 1987-01-14 1991-02-19 President And Fellows Of Harvard College DNA sequencing
US5266466A (en) * 1987-01-14 1993-11-30 President And Fellows Of Harvard College Method of using T7 DNA polymerase to label the 3' end of a DNA molecule
US4946786A (en) * 1987-01-14 1990-08-07 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US4942130A (en) * 1987-01-14 1990-07-17 President & Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US5145776A (en) * 1987-01-14 1992-09-08 President & Fellows Of Harvard College Method of using T7 DNA polymerase to mutagenize and fill-in DNA
US4795699A (en) * 1987-01-14 1989-01-03 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US5599667A (en) * 1987-03-02 1997-02-04 Gen-Probe Incorporated Polycationic supports and nucleic acid purification separation and hybridization
AU622104B2 (en) * 1987-03-11 1992-04-02 Sangtec Molecular Diagnostics Ab Method of assaying of nucleic acids, a reagent combination and kit therefore
US6270961B1 (en) * 1987-04-01 2001-08-07 Hyseq, Inc. Methods and apparatus for DNA sequencing and DNA identification
CA1317860C (en) * 1987-04-01 1993-05-18 Daniel Louis Kacian Techniques for preparing specimens for bacterial assays
GB8709803D0 (en) * 1987-04-24 1987-05-28 Mcfadden J J Treatment of crohn's disease &c
US5225324A (en) * 1987-04-24 1993-07-06 Bioscience International, Inc. Diagnostics for mycobacteria in public health, medical, and veterinary practice
US4994368A (en) 1987-07-23 1991-02-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Amplification method for polynucleotide assays
US5273879A (en) * 1987-07-23 1993-12-28 Syntex (U.S.A.) Inc. Amplification method for polynucleotide assays
EP0304184B1 (en) * 1987-07-31 1994-10-12 Gen-Probe Incorporated Assay for polynucleotides employing oligonucleotides to eliminate undesirable cross reactions
US5089386A (en) * 1987-09-11 1992-02-18 Gene-Trak Systems Test for listeria
US5656731A (en) * 1987-10-15 1997-08-12 Chiron Corporation Nucleic acid-amplified immunoassay probes
US5359100A (en) * 1987-10-15 1994-10-25 Chiron Corporation Bifunctional blocked phosphoramidites useful in making nucleic acid mutimers
AU2714988A (en) * 1987-10-23 1989-06-01 Siska Diagnostics, Inc. Lanthanide chelate-tagged nucleic acid probes
US6013531A (en) * 1987-10-26 2000-01-11 Dade International Inc. Method to use fluorescent magnetic polymer particles as markers in an immunoassay
CA1340506C (en) * 1987-11-24 1999-04-20 Nicholas H. Carbonetti Production of gonorrheal pi proteins and vaccines
US6348332B1 (en) 1987-11-24 2002-02-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill DNA molecule encoding gonorrhoeal hybrid PIA/PIB protein
ATE133454T1 (de) * 1987-12-01 1996-02-15 Amoco Corp Nachweis von salmonella
US5354657A (en) * 1988-01-12 1994-10-11 Boehringer Mannheim Gmbh Process for the highly specific detection of nucleic acids in solid
GB8810400D0 (en) 1988-05-03 1988-06-08 Southern E Analysing polynucleotide sequences
US20050032048A1 (en) * 1988-05-03 2005-02-10 Oxford Gene Technology Limited Analyzing polynucleotide sequences
US7811751B2 (en) 1988-05-03 2010-10-12 Oxford Gene Technology Limited Analysing polynucleotide sequences
US5700637A (en) * 1988-05-03 1997-12-23 Isis Innovation Limited Apparatus and method for analyzing polynucleotide sequences and method of generating oligonucleotide arrays
US6054270A (en) * 1988-05-03 2000-04-25 Oxford Gene Technology Limited Analying polynucleotide sequences
US5024933A (en) * 1988-05-10 1991-06-18 Enzo Biochem, Inc. Method and kit for sample adherence to test substrate
EP0436547B1 (en) * 1988-05-10 1994-11-30 E.I. Du Pont De Nemours And Company Process for rapid nucleic acid detection
US5294533A (en) * 1988-07-05 1994-03-15 Baylor College Of Medicine Antisense oligonucleotide antibiotics complementary to the macromolecular synthesis operon, methods of treating bacterial infections and methods for identification of bacteria
US5047523A (en) * 1988-08-02 1991-09-10 Ortho Diagnostic Systems Inc. Nucleic acid probe for detection of neisseria gonorrhoea
US5185243A (en) * 1988-08-25 1993-02-09 Syntex (U.S.A.) Inc. Method for detection of specific nucleic acid sequences
WO1990006372A1 (en) * 1988-12-01 1990-06-14 Microprobe Corporation Substrates for peroxidase assaying
US7172863B1 (en) 1988-12-09 2007-02-06 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes and methods for detecting Neisseria gonorrhoeae
US5324829A (en) * 1988-12-16 1994-06-28 Ortho Diagnostic Systems, Inc. High specific activity nucleic acid probes having target recognition and signal generating moieties
GR1000347B (el) * 1988-12-21 1992-06-25 Ortho Diagnostic Systems Inc Μεθοδος παραγωγης νουκλεοτιδικων ανιχνευτων χρησιμοποιωντας ενα συμπληρωμα γεφυρωσεως.
US5237016A (en) * 1989-01-05 1993-08-17 Siska Diagnostics, Inc. End-attachment of oligonucleotides to polyacrylamide solid supports for capture and detection of nucleic acids
US5514550A (en) * 1989-02-03 1996-05-07 Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. Nucleic acid test article and its use to detect a predetermined nucleic acid
CA2009708A1 (en) * 1989-02-13 1990-08-13 Jane D. Madonna Nucleic acid probe for the detection of salmonella human pathogens
US5856092A (en) * 1989-02-13 1999-01-05 Geneco Pty Ltd Detection of a nucleic acid sequence or a change therein
US5049489A (en) * 1989-04-17 1991-09-17 The Standard Oil Company 16S rRNA oligonucleotide probes for the identification of sulfate-reducing bacteria
US6551784B2 (en) 1989-06-07 2003-04-22 Affymetrix Inc Method of comparing nucleic acid sequences
US5143854A (en) * 1989-06-07 1992-09-01 Affymax Technologies N.V. Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof
US5925525A (en) * 1989-06-07 1999-07-20 Affymetrix, Inc. Method of identifying nucleotide differences
US5800992A (en) 1989-06-07 1998-09-01 Fodor; Stephen P.A. Method of detecting nucleic acids
US5744101A (en) 1989-06-07 1998-04-28 Affymax Technologies N.V. Photolabile nucleoside protecting groups
US6040138A (en) 1995-09-15 2000-03-21 Affymetrix, Inc. Expression monitoring by hybridization to high density oligonucleotide arrays
US6379895B1 (en) 1989-06-07 2002-04-30 Affymetrix, Inc. Photolithographic and other means for manufacturing arrays
US6955915B2 (en) * 1989-06-07 2005-10-18 Affymetrix, Inc. Apparatus comprising polymers
US6919211B1 (en) * 1989-06-07 2005-07-19 Affymetrix, Inc. Polypeptide arrays
EP0405592A3 (en) * 1989-06-30 1991-07-17 Sanyo Chemical Industries Ltd. A method for detection of nucleic acid and reagents for their detection
US5106730A (en) * 1989-07-24 1992-04-21 Microprobe Corporation Lactam-containing compositions and methods useful for the hybridization of nucleic acids
US5232829A (en) * 1989-09-29 1993-08-03 Hoffmann-La Roche Inc. Detection of chlamydia trachomatis by polymerase chain reaction using biotin labelled lina primers and capture probes
CA2028012A1 (en) * 1989-10-23 1991-04-24 Randall Dimond Hybridization assay for campylobacter rrna
GB8924989D0 (en) * 1989-11-06 1989-12-28 Scotgen Ltd Method and device for the detection of antibiotic resistance
WO1991009141A1 (en) * 1989-12-14 1991-06-27 Baxter Diagnostics Inc. Magnetically responsive fluorescent polymer particles and application thereof
CA2032203C (en) * 1989-12-29 2009-05-19 Christine L. Brakel Amplification capture assay
CA2075186A1 (en) * 1990-02-02 1991-08-03 Rudi Rossau Hybridization probes for the detection of branhamella catarrhalis strains
US5721097A (en) * 1990-02-02 1998-02-24 N. V. Innogenetics S.A. Hybridization probes for the detection of branhamella catarrhalis strains
US6013431A (en) * 1990-02-16 2000-01-11 Molecular Tool, Inc. Method for determining specific nucleotide variations by primer extension in the presence of mixture of labeled nucleotides and terminators
US5200314A (en) * 1990-03-23 1993-04-06 Chiron Corporation Polynucleotide capture assay employing in vitro amplification
AU7429591A (en) * 1990-04-18 1991-10-24 Gene-Trak Systems Nucleic acid probes for the detection of giardia lamblia
CA2081455A1 (en) * 1990-05-04 1991-11-05 Michael S. Urdea Protein-nucleic acid probes and immunoassays using same
KR100245284B1 (ko) * 1990-05-07 2000-03-02 이노우에 노리유끼 이중 d-루프 형성의 진단학적 응용
US5232830A (en) * 1990-05-11 1993-08-03 Microprobe Corporation Intrinsic fluorescent quenching methods
US5695926A (en) * 1990-06-11 1997-12-09 Bio Merieux Sandwich hybridization assays using very short capture probes noncovalently bound to a hydrophobic support
US6730305B1 (en) 2000-05-08 2004-05-04 The Uab Research Foundation Nucleotide sequences encoding bovine respiratory syncytial virus immunogenic proteins
EP0540645A4 (en) * 1990-07-24 1993-12-29 The Uab Research Foundation Methods of use of bovine respiratory syncytial virus recombinant dna, proteins vaccines, antibodies, and transformed cells
IL99025A0 (en) * 1990-08-15 1992-07-15 Astra Ab Novel process for the detection of pathogens using dna probes
AU9115891A (en) * 1990-11-14 1992-06-11 Siska Diagnostics, Inc. Non-isotopic detection of nucleic acids using a polystyrene support-based sandwich hybridization assay and compositions useful therefor
DK0834575T3 (da) * 1990-12-06 2002-04-02 Affymetrix Inc A Delaware Corp Identifikation af nucleinsyrer i prøver
USH1398H (en) * 1990-12-28 1995-01-03 Campbell; James R. DNA-based fluourescent sensor
EP0497464A1 (en) * 1991-01-31 1992-08-05 Amoco Corporation Rapid microbial diagnostics by in situ hybridization in aqueous suspension
ES2108109T3 (es) * 1991-02-14 1997-12-16 Dade Microscan Inc Nuevos oligonucleotidos conjugados con quelatos de lantanidos.
US6004744A (en) 1991-03-05 1999-12-21 Molecular Tool, Inc. Method for determining nucleotide identity through extension of immobilized primer
WO1992018647A1 (en) * 1991-04-15 1992-10-29 Sumitomo Electric Industries, Ltd. Process for separating or extracting nucleic acid from specimen containing the same
US5556748A (en) * 1991-07-30 1996-09-17 Xenopore Corporation Methods of sandwich hybridization for the quantitative analysis of oligonucleotides
US5612199A (en) * 1991-10-11 1997-03-18 Behringwerke Ag Method for producing a polynucleotide for use in single primer amplification
CA2080305A1 (en) 1991-10-11 1993-04-12 Linda M. Western Method for producing a polynucleotide for use in single primer amplification and phosphorothioate-containing oligonucleotides as primers in nucleic acid amplification
US5849486A (en) * 1993-11-01 1998-12-15 Nanogen, Inc. Methods for hybridization analysis utilizing electrically controlled hybridization
US5605662A (en) * 1993-11-01 1997-02-25 Nanogen, Inc. Active programmable electronic devices for molecular biological analysis and diagnostics
US5632957A (en) 1993-11-01 1997-05-27 Nanogen Molecular biological diagnostic systems including electrodes
US6652808B1 (en) * 1991-11-07 2003-11-25 Nanotronics, Inc. Methods for the electronic assembly and fabrication of devices
US6048690A (en) * 1991-11-07 2000-04-11 Nanogen, Inc. Methods for electronic fluorescent perturbation for analysis and electronic perturbation catalysis for synthesis
US6017696A (en) 1993-11-01 2000-01-25 Nanogen, Inc. Methods for electronic stringency control for molecular biological analysis and diagnostics
US6569382B1 (en) 1991-11-07 2003-05-27 Nanogen, Inc. Methods apparatus for the electronic, homogeneous assembly and fabrication of devices
US6051380A (en) * 1993-11-01 2000-04-18 Nanogen, Inc. Methods and procedures for molecular biological analysis and diagnostics
ES2049618B1 (es) * 1991-11-13 1994-11-01 Consejo Superior Investigacion Metodo de diagnostico y clasificacion de especies de trypanosoma cruzi.
US6100099A (en) 1994-09-06 2000-08-08 Abbott Laboratories Test strip having a diagonal array of capture spots
WO1993020234A1 (en) * 1992-03-31 1993-10-14 E.I. Du Pont De Nemours And Company A rapid, high capacity nucleic acid based assay
DE4212555A1 (de) * 1992-04-15 1993-10-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zum Nachweis von Nukleinsäuren
US5543292A (en) * 1992-06-16 1996-08-06 Hitachi, Ltd. Process for the measurement of nucleic acids
JPH07509365A (ja) * 1992-07-31 1995-10-19 デイド・ベーリング・マルブルク・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング ポリヌクレオチド類の３’末端に特定配列を導入する方法
US7713528B1 (en) 1993-02-18 2010-05-11 Enzo Therapeutics, Inc. Method for in vivo delivery of active compounds using reagent conjugate
US6294323B1 (en) 1993-04-14 2001-09-25 Behringwerke Ag Self initiating single primer amplification of nucleic acids
JPH08510649A (ja) * 1993-05-28 1996-11-12 マウント シナイ スクール オブ メディシン オブ ザ シティー ユニバーシティー オブ ニューヨーク Ｂｃ２００ｒｎａ、それに対するプローブ及びその使用
DE4344742A1 (de) * 1993-06-09 1994-12-15 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur Immobilisierung von Nukleinsäuren
US5532122A (en) * 1993-10-12 1996-07-02 Biotraces, Inc. Quantitation of gamma and x-ray emitting isotopes
US5854084A (en) 1996-07-12 1998-12-29 Biotraces, Inc. Enhanced chromatography using multiphoton detection
US6375899B1 (en) 1993-11-01 2002-04-23 Nanogen, Inc. Electrophoretic buss for transport of charged materials in a multi-chamber system
US20040077074A1 (en) * 1993-11-01 2004-04-22 Nanogen, Inc. Multi-chambered analysis device
US7314708B1 (en) * 1998-08-04 2008-01-01 Nanogen, Inc. Method and apparatus for electronic synthesis of molecular structures
US6068818A (en) 1993-11-01 2000-05-30 Nanogen, Inc. Multicomponent devices for molecular biological analysis and diagnostics
US7172864B1 (en) 1993-11-01 2007-02-06 Nanogen Methods for electronically-controlled enzymatic reactions
US6726880B1 (en) 1993-11-01 2004-04-27 Nanogen, Inc. Electronic device for performing active biological operations and method of using same
US6331274B1 (en) 1993-11-01 2001-12-18 Nanogen, Inc. Advanced active circuits and devices for molecular biological analysis and diagnostics
US6319472B1 (en) 1993-11-01 2001-11-20 Nanogen, Inc. System including functionally separated regions in electrophoretic system
US6309602B1 (en) 1993-11-01 2001-10-30 Nanogen, Inc. Stacked, reconfigurable system for electrophoretic transport of charged materials
US6315953B1 (en) 1993-11-01 2001-11-13 Nanogen, Inc. Devices for molecular biological analysis and diagnostics including waveguides
US6638482B1 (en) 1993-11-01 2003-10-28 Nanogen, Inc. Reconfigurable detection and analysis apparatus and method
US7101661B1 (en) 1993-11-01 2006-09-05 Nanogen, Inc. Apparatus for active programmable matrix devices
US7582421B2 (en) * 1993-11-01 2009-09-01 Nanogen, Inc. Methods for determination of single nucleic acid polymorphisms using a bioelectronic microchip
US6287517B1 (en) 1993-11-01 2001-09-11 Nanogen, Inc. Laminated assembly for active bioelectronic devices
US6225059B1 (en) 1993-11-01 2001-05-01 Nanogen, Inc. Advanced active electronic devices including collection electrodes for molecular biological analysis and diagnostics
US6254827B1 (en) 1993-11-01 2001-07-03 Nanogen, Inc. Methods for fabricating multi-component devices for molecular biological analysis and diagnostics
KR100230909B1 (ko) * 1993-11-29 1999-12-01 다니엘 엘. 캐시앙 광범위의 유기체로부터 핵산 추출 방법
ATE174066T1 (de) * 1994-04-04 1998-12-15 Ciba Corning Diagnostics Corp Hybridisation-ligitation-verfahren zum nachweis von spezifischen dns sequenzen
US7378236B1 (en) 1994-06-17 2008-05-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method for analyzing gene expression patterns
US5807522A (en) * 1994-06-17 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for fabricating microarrays of biological samples
US7323298B1 (en) 1994-06-17 2008-01-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Microarray for determining the relative abundances of polynuceotide sequences
US6379897B1 (en) * 2000-11-09 2002-04-30 Nanogen, Inc. Methods for gene expression monitoring on electronic microarrays
US6403367B1 (en) * 1994-07-07 2002-06-11 Nanogen, Inc. Integrated portable biological detection system
US7857957B2 (en) * 1994-07-07 2010-12-28 Gamida For Life B.V. Integrated portable biological detection system
US5545527A (en) 1994-07-08 1996-08-13 Visible Genetics Inc. Method for testing for mutations in DNA from a patient sample
US8236493B2 (en) 1994-10-21 2012-08-07 Affymetrix, Inc. Methods of enzymatic discrimination enhancement and surface-bound double-stranded DNA
CA2163393C (en) * 1994-11-30 2003-04-22 Colleen Marie Nycz Amplification and detection of mycobacteria nucleic acids
US5731153A (en) * 1996-08-26 1998-03-24 The Regents Of The University Of California Identification of random nucleic acid sequence aberrations using dual capture probes which hybridize to different chromosome regions
US5783387A (en) * 1995-02-06 1998-07-21 The Regents Of The University Of California Method for identifying and quantifying nucleic acid sequence aberrations
US5610023A (en) * 1995-03-31 1997-03-11 Lee Laboratories, Inc. Method of purification of clostridium difficile toxin A and production of mono-specific antibodies
US5783453A (en) * 1995-06-29 1998-07-21 Chiron Diagnostics Corporation Non-separation specific binding chemiluminescent assay
US6027879A (en) * 1995-08-09 2000-02-22 The Regents Of The University Of California Detection and isolation of nucleic acid sequences using a bifunctional hybridization probe
US5616465A (en) * 1995-08-09 1997-04-01 The Regents Of The University Of California Detection and isolation of nucleic acid sequences using competitive hybridization probes
US5770365A (en) * 1995-08-25 1998-06-23 Tm Technologies, Inc. Nucleic acid capture moieties
US20040086917A1 (en) * 1995-09-27 2004-05-06 Nanogen, Inc. Methods for electronic fluorescent perturbation for analysis and electronic perturbation catalysis for synthesis
EP0880598A4 (en) * 1996-01-23 2005-02-23 Affymetrix Inc RAPID EVALUATION OF NUCLEIC ACID ABUNDANCE DIFFERENCE, WITH A HIGH-DENSITY OLIGONUCLEOTIDE SYSTEM
WO1997035033A1 (en) 1996-03-19 1997-09-25 Molecular Tool, Inc. Method for determining the nucleotide sequence of a polynucleotide
US5814490A (en) * 1996-06-11 1998-09-29 Becton, Dickinson And Company Amplification and detection of chlamydia trachomatis nucleic acids
US5910410A (en) * 1996-09-06 1999-06-08 Hewlett-Packard Company Dual tag binding assay
US5853993A (en) * 1996-10-21 1998-12-29 Hewlett-Packard Company Signal enhancement method and kit
US6706473B1 (en) 1996-12-06 2004-03-16 Nanogen, Inc. Systems and devices for photoelectrophoretic transport and hybridization of oligonucleotides
WO1998029736A1 (en) * 1996-12-31 1998-07-09 Genometrix Incorporated Multiplexed molecular analysis apparatus and method
US6534273B2 (en) 1997-05-02 2003-03-18 Gen-Probe Incorporated Two-step hybridization and capture of a polynucleotide
WO1998050583A1 (en) 1997-05-02 1998-11-12 Gen-Probe Incorporated Two-step hybridization and capture of a polynucleotide
DE19741715A1 (de) * 1997-09-22 1999-03-25 Hoechst Ag Pentopyranosyl-Nucleosid, seine Herstellung und Verwendung
EP1038029A2 (en) * 1997-12-12 2000-09-27 Digene Corporation Universal collection medium
US20100105572A1 (en) * 1997-12-19 2010-04-29 Kris Richard M High throughput assay system
US6458533B1 (en) 1997-12-19 2002-10-01 High Throughput Genomics, Inc. High throughput assay system for monitoring ESTs
US6232066B1 (en) 1997-12-19 2001-05-15 Neogen, Inc. High throughput assay system
US20030039967A1 (en) * 1997-12-19 2003-02-27 Kris Richard M. High throughput assay system using mass spectrometry
US20030096232A1 (en) * 1997-12-19 2003-05-22 Kris Richard M. High throughput assay system
US6238869B1 (en) 1997-12-19 2001-05-29 High Throughput Genomics, Inc. High throughput assay system
ATE426456T1 (de) 1998-05-01 2009-04-15 Gen Probe Inc Automatische diagnostische analysevorrichtung
DE19824900B4 (de) 1998-06-04 2006-05-04 Roche Diagnostics Gmbh DNA-Nachweis über einen Strangreassoziationskomplex
JP2002539833A (ja) 1999-03-31 2002-11-26 ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル カリンレギュレーターｒｏｃ１およびｒｏｃ２をコードする単離ｄｎａ、それらによってコードされた単離タンパク質、ならびにそれらの利用法
US6235479B1 (en) 1999-04-13 2001-05-22 Bio Merieux, Inc. Methods and devices for performing analysis of a nucleic acid sample
US7101989B1 (en) 1999-07-09 2006-09-05 University Of North Carolina At Chapel Hill DsrA protein and polynucleotides encoding the same
FR2803913B1 (fr) * 2000-01-13 2002-08-16 Pasteur Sanofi Diagnostics Procede d'immobilisation de reactif(s) affin(s) sur phase solide hydrophobe
US7582420B2 (en) * 2001-07-12 2009-09-01 Illumina, Inc. Multiplex nucleic acid reactions
US20050214825A1 (en) * 2000-02-07 2005-09-29 John Stuelpnagel Multiplex sample analysis on universal arrays
US20020006617A1 (en) * 2000-02-07 2002-01-17 Jian-Bing Fan Nucleic acid detection methods using universal priming
US8076063B2 (en) * 2000-02-07 2011-12-13 Illumina, Inc. Multiplexed methylation detection methods
US7955794B2 (en) 2000-09-21 2011-06-07 Illumina, Inc. Multiplex nucleic acid reactions
AU2001247328C1 (en) * 2000-03-08 2006-10-26 Datascope Investment Corp. Methods for assay and detection on a microarray
WO2001068916A1 (en) * 2000-03-16 2001-09-20 Bionex, Inc. Method for detecting mutation of nucleic acid
US7601497B2 (en) * 2000-06-15 2009-10-13 Qiagen Gaithersburg, Inc. Detection of nucleic acids by target-specific hybrid capture method
US7439016B1 (en) * 2000-06-15 2008-10-21 Digene Corporation Detection of nucleic acids by type-specific hybrid capture method
US20040185464A1 (en) * 2000-09-15 2004-09-23 Kris Richard M. High throughput assay system
US20020169562A1 (en) * 2001-01-29 2002-11-14 Gregory Stephanopoulos Defining biological states and related genes, proteins and patterns
EP2246438B1 (en) 2001-07-12 2019-11-27 Illumina, Inc. Multiplex nucleic acid reactions
US6893822B2 (en) 2001-07-19 2005-05-17 Nanogen Recognomics Gmbh Enzymatic modification of a nucleic acid-synthetic binding unit conjugate
US20050147984A1 (en) * 2001-08-31 2005-07-07 Clondiag Chip Technologies Gmbh Interaction detection on several probe arrays
US6696254B2 (en) * 2001-11-21 2004-02-24 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Detection and identification of enteric bacteria
US7041811B2 (en) * 2001-12-19 2006-05-09 Dr. Chip Biotechnology, Inc. Method for detecting Escherichia coli
US20030175709A1 (en) * 2001-12-20 2003-09-18 Murphy George L. Method and system for depleting rRNA populations
US7579147B2 (en) * 2002-05-07 2009-08-25 Wake Forest University Health Sciences Mutations in the macrophage scavenger receptor 1 gene alter risk of prostate cancer, asthma, and cardiovascular disease
CN1653338A (zh) * 2002-05-17 2005-08-10 贝克顿·迪金森公司 用于分离、放大和检测目标核酸序列的自动化系统
US20030219755A1 (en) * 2002-05-24 2003-11-27 Nanibhushan Dattagupta Compositions and methods for performing hybridization assays using target enhanced signal amplification (TESA)
US7601493B2 (en) * 2002-07-26 2009-10-13 Nanogen, Inc. Methods and apparatus for screening and detecting multiple genetic mutations
US20040259105A1 (en) * 2002-10-03 2004-12-23 Jian-Bing Fan Multiplex nucleic acid analysis using archived or fixed samples
US20050037369A1 (en) * 2002-10-31 2005-02-17 Neote Kuldeep Singh Panels of molecular targets differentially expressed during CD8+ T cell priming, and methods for therapy and diagnosis utilizing the same
KR20050083971A (ko) * 2002-11-22 2005-08-26 더 존스 홉킨스 유니버시티 인지능 손상의 치료를 위한 표적
ATE479775T1 (de) 2002-11-26 2010-09-15 Univ Maryland Biotechnology Hochempfindliche assays für die pathogendetektion unterverwendung der metallverstärkten fluoreszenz
US20040235019A1 (en) * 2003-03-06 2004-11-25 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Diagnostics and therapeutics for the gene expression signature of PPAR-gamma receptor ligand
EP1633893B1 (en) 2003-05-19 2012-01-25 Gen-Probe Incorporated Compositions, methods and kits for determining the presence of trichomonas vaginalis in a test sample
WO2005049866A2 (en) 2003-11-14 2005-06-02 Duke University Methods of detecting charcot-marie tooth disease type 2a
GB0411081D0 (en) * 2004-05-18 2004-06-23 Glaxo Group Ltd Novel apparatus
DK1778867T3 (da) * 2004-07-01 2010-08-02 Gen Probe Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til detektering af nucleinsyrer i en biologisk prøve
US7662562B2 (en) * 2004-08-10 2010-02-16 Becton, Dickinson And Company Method for rapid identification of microorganisms
US7828954B2 (en) * 2004-09-21 2010-11-09 Gamida For Life B.V. Electrode based patterning of thin film self-assembled nanoparticles
US7314542B2 (en) * 2004-09-23 2008-01-01 Nanogen, Inc. Methods and materials for optimization of electronic transportation and hybridization reactions
EP2333561A3 (en) 2005-03-10 2014-06-11 Gen-Probe Incorporated System for performing multi-formatted assays
EP2348320B1 (en) 2005-03-10 2024-05-01 Gen-Probe Incorporated Methods and systems for detecting multiple fluorescent emission signals
US20090264635A1 (en) * 2005-03-25 2009-10-22 Applera Corporation Methods and compositions for depleting abundant rna transcripts
EP1877581B1 (en) 2005-05-06 2012-03-28 Gen-Probe Incorporated Methods and products for nucleic acid target capture
WO2007123579A2 (en) 2005-12-28 2007-11-01 Translational Therapeutics Translational dysfunction based therapeutics
US20080118914A1 (en) * 2006-01-04 2008-05-22 Charlotte Dawn Blowe Follistatin gene as a genetic marker for first parity litter size in pigs
US20070186298A1 (en) * 2006-01-04 2007-08-09 Blowe Charlotte D Follistatin gene as a genetic marker for reproductive and performance traits in pigs
US8058006B2 (en) 2006-05-24 2011-11-15 Gen-Probe Incorporated Method for obtaining and initiating amplification of a target nucleic acid sequence
ATE536424T1 (de) 2006-06-06 2011-12-15 Gen Probe Inc Markierte oligonukleotide und ihre verwendung in nukleinsäureverstärkungsverfahren
AU2007320026B2 (en) 2006-09-29 2014-04-03 Translational Therapeutics, Inc. eIF4E regulon-based diagnostics
US9938641B2 (en) * 2006-12-18 2018-04-10 Fluidigm Corporation Selection of aptamers based on geometry
EP1978111B1 (en) 2007-04-02 2013-03-27 Gen-Probe Incorporated Compositions, kits and related methods for the detection and/or monitoring of Pseudomonas aeruginosa
AU2008343878B2 (en) 2007-12-21 2014-08-07 bioMérieux Detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus
WO2009126336A1 (en) * 2008-04-11 2009-10-15 Becton, Dickinson And Company Methods of controlling the sensitivity and dynamic range of a homogeneous assay
WO2009140374A2 (en) 2008-05-13 2009-11-19 Gen-Probe Incorporated Inactivatable target capture oligomers for use in the selective hybridization and capture of target nucleic acid sequences
EP2297358A2 (en) 2008-05-30 2011-03-23 Gen-Probe Incorporated Compositions, kits and related methods for the detection and/or monitoring of salmonella
EP2324126B1 (en) 2008-08-12 2014-04-23 Zinfandel Pharmaceuticals, Inc. METHOD OF IDENTIFYING Alzheimer's DISEASE RISK FACTORS
US8288520B2 (en) 2008-10-27 2012-10-16 Qiagen Gaithersburg, Inc. Fast results hybrid capture assay and system
AU2009324884B2 (en) 2008-11-25 2013-10-03 Gen-Probe Incorporated Compositions and methods for detecting small RNAs, and uses thereof
US8748133B2 (en) 2008-12-30 2014-06-10 Gen-Probe Incorporated Compositions, kits and related methods for the detection and/or monitoring of Listeria
JP6108661B2 (ja) * 2009-01-28 2017-04-05 キアジェン ゲイサーズバーグ インコーポレイテッド 配列特異的な大量試料調製方法およびアッセイ法
AU2010242867B2 (en) * 2009-05-01 2016-05-12 Qiagen Gaithersburg, Inc. A non-target amplification method for detection of RNA splice-forms in a sample
US9011771B2 (en) 2009-05-15 2015-04-21 Gen-Probe Incorporated Method and apparatus for effecting automated movement of a magnet in an instrument for performing a magnetic separation procedure
JP6057460B2 (ja) 2009-08-31 2017-01-11 ジェン−プローブ・インコーポレーテッド デングウイルスアッセイ
WO2011032124A1 (en) 2009-09-14 2011-03-17 Qiagen Gaithersburg, Inc. Compositions and methods for recovery of nucleic acids or proteins from tissue samples fixed in cytology media
EP2516675A1 (en) 2009-12-21 2012-10-31 Becton, Dickinson and Company Methods for identifying drug resistant mycobacterium
US9404160B2 (en) 2009-12-22 2016-08-02 Becton, Dickinson And Company Methods for the detection of microorganisms
EP2531515B1 (en) 2010-01-22 2015-10-21 Gen-Probe Incorporated Probes for detecting the presence of trochomonas vaginalis in a sample
CA2787924A1 (en) 2010-01-29 2011-08-04 Qiagen Gaithersburg, Inc. Methods and compositions for sequence-specific purification and multiplex analysis of nucleic acids
US9605303B2 (en) 2010-01-29 2017-03-28 Qiagen Gaithersburg, Inc. Method of determining and confirming the presence of an HPV in a sample
KR20130080007A (ko) 2010-05-11 2013-07-11 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 Ｓｐｎｋ 균주
EP2572001A2 (en) 2010-05-19 2013-03-27 QIAGEN Gaithersburg, Inc. Methods and compositions for sequence-specific purification and multiplex analysis of nucleic acids
WO2011149897A1 (en) 2010-05-25 2011-12-01 Qiagen Gaithersburg, Inc. Fast results hybrid capture assay and associated strategically-truncated probes
EP2752668A3 (en) 2010-07-23 2014-10-15 Beckman Coulter, Inc. System Or Method Of Including Analytical Units
CA2828224A1 (en) 2011-02-24 2012-08-30 Qiagen Gaithersburg, Inc. Materials and methods for detection of hpv nucleic acids
EP2520653B1 (en) 2011-05-03 2017-03-29 Dow AgroSciences LLC Integration of genes into the chromosome of saccharopolyspora spinosa
EP3620533B1 (en) 2011-09-06 2023-01-18 Gen-Probe Incorporated Closed nucleic acid structures
DE102011114984B3 (de) * 2011-09-28 2012-11-22 Universität Rostock Sequenzspezifische Analyse von Nukleinsäuren
JP6062449B2 (ja) 2011-11-07 2017-01-18 ベックマン コールター， インコーポレイテッド 標本コンテナ検出
BR112014011046A2 (pt) 2011-11-07 2017-06-13 Beckman Coulter, Inc. fluxo de trabalho e sistema de centrífuga
JP6190380B2 (ja) 2011-11-07 2017-08-30 ベックマン コールター， インコーポレイテッド 等分機システムおよびワークフロー
BR112014011044A2 (pt) 2011-11-07 2017-04-25 Beckman Coulter Inc amortecimento magnético para sistema de transporte de espécime
US9910054B2 (en) 2011-11-07 2018-03-06 Beckman Coulter, Inc. System and method for processing samples
KR102040996B1 (ko) 2011-11-07 2019-11-05 베크만 컬터, 인코포레이티드 로봇식 아암
JP2015511116A (ja) 2011-12-23 2015-04-16 ビオメリューＢｉｏｍｅｒｉｅｕｘ メチシリン耐性黄色ブドウ球菌の変異型ｍｅｃＡ株の検出
US9631195B2 (en) 2011-12-28 2017-04-25 Dow Agrosciences Llc Identification and characterization of the spinactin biosysnthesis gene cluster from spinosyn producing saccharopolyspora spinosa
CA2865541C (en) * 2012-02-27 2019-11-05 Toray Industries, Inc. Nucleic acid detection method
US10472683B2 (en) 2012-06-01 2019-11-12 Akron Biotechnology, LLC. Detection of Mycoplasma in cell cultures and cell culture derived biologicals
WO2014006025A2 (en) 2012-07-02 2014-01-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Marker of pathogenicity in salmonella
US9416403B2 (en) 2012-08-31 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Method of detecting target nucleic acid
US10427162B2 (en) 2016-12-21 2019-10-01 Quandx Inc. Systems and methods for molecular diagnostics
US20210310059A1 (en) 2018-08-08 2021-10-07 Gen-Probe Incorporated Compositions, methods and kits for detecting mycoplasma genitalium
EP3914732A1 (en) 2019-01-25 2021-12-01 Gen-Probe Incorporated Detection of drug-resistant mycoplasma genitalium
US20220298548A1 (en) 2019-08-23 2022-09-22 Gen-Probe Incorporated Compositions, methods and kits for detecting treponema pallidum
US20230243001A1 (en) 2020-07-17 2023-08-03 Gen-Probe Incorporated Detection of Macrolide-Resistant Mycoplasma Genitalium
WO2024099985A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Bayer Aktiengesellschaft Targeted crop protection product application based on genetic profiles

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3896217A (en) * 1973-03-19 1975-07-22 Summa Corp Method and apparatus for radioimmunoassay with regeneration of immunoadsorbent
US3930956A (en) * 1973-10-29 1976-01-06 The Regents Of The University Of Michigan Method for the genetic detection of microorganisms
SU649751A1 (ru) * 1977-06-14 1979-02-28 Московский Ордена Ленина И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им.М.В.Ломоносова Способ идентификации микроорганизмов
US4139346A (en) * 1977-11-28 1979-02-13 Enzo Bio Chem Incorporated Nucleic acid and protein binding paper
FR2422956A1 (fr) * 1978-04-13 1979-11-09 Pasteur Institut Procede de detection et de caracterisation d'un acide nucleique ou d'une sequence de celui-ci, et reactif enzymatique pour la mise en oeuvre de ce procede
FR2444713A1 (fr) * 1978-12-18 1980-07-18 Pasteur Institut Procede de production d'un adn comprenant le genome du virus de l'hepatite b et vecteur le comportant
US4302204A (en) * 1979-07-02 1981-11-24 The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University Transfer and detection of nucleic acids
US4359535A (en) * 1979-10-01 1982-11-16 George Pieczenik Autonomously replicating DNA containing inserted DNA sequences
US4358535A (en) * 1980-12-08 1982-11-09 Board Of Regents Of The University Of Washington Specific DNA probes in diagnostic microbiology
US4446237A (en) * 1981-03-27 1984-05-01 Life Technologies, Inc. Method for detection of a suspect viral deoxyribonucleic acid in an acellular biological fluid
EP0062286A1 (en) * 1981-03-31 1982-10-13 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Diagnostic test for hepatitis B virus
CA1219824A (en) * 1981-04-17 1987-03-31 David C. Ward Modified nucleotides and methods of preparing and using same
JPS5840099A (ja) * 1981-07-17 1983-03-08 アモコ・コ−ポレ−ション 光−放射ポリヌクレオチドの交雑診断方法
FI63596C (fi) * 1981-10-16 1983-07-11 Orion Yhtymae Oy Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser

Also Published As

Publication number Publication date
DK275183D0 (da) 1983-06-15
EP0098267A1 (en) 1984-01-18
DK275183A (da) 1983-06-15
US4486539A (en) 1984-12-04
RO86356B (ro) 1985-04-01
HU196242B (en) 1988-10-28
DK173744B1 (da) 2001-09-03
WO1983001459A1 (en) 1983-04-28
AU548854B2 (en) 1986-01-02
SU1386031A3 (ru) 1988-03-30
CA1192120A (en) 1985-08-20
ATE31735T1 (de) 1988-01-15
AU8957582A (en) 1983-05-05
DE3277917D1 (en) 1988-02-11
US4563419A (en) 1986-01-07
JPH0632637B1 (fi) 1994-05-02
EP0079139B1 (en) 1988-01-07
RO86356A (ro) 1985-03-15
EP0079139A1 (en) 1983-05-18
DE79139T1 (de) 1983-11-24
JPS58501703A (ja) 1983-10-13
FI63596C (fi) 1983-07-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI63596B (fi) Mikrobdiagnistiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser
EP0133671B1 (en) Detection of bacteria by nucleic acid hybridization, labeled probes and test kit therefore
US4358535A (en) Specific DNA probes in diagnostic microbiology
JP2798499B2 (ja) 感染症診断用プローブ
JP2607496B2 (ja) カンピロバクター検出用プローブ
EP0133288A2 (en) Bacterial detection by nucleic acid hybridization, labeled probes and test kit therefore
US5942394A (en) Detection of protozoan parasites
EP1721991B1 (en) Method of detecting nucleic acid and utilization thereof
EP0484385A4 (en) Quantification of bacteria using a nucleic acid hybridization assay
Pettersson et al. Nucleic acid hybridization—an alternative tool in diagnostic microbiology
JP2000511058A (ja) Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｋａｎｓａｓｉｉを検出するための組成物および方法
CN110923362B (zh) 用于同时检测单纯疱疹病毒i型/ii型胶体金层析试剂盒及其应用
JPH03206899A (ja) クリプトコックス・ネオホルマンスの検出に用いる核酸プローブおよび方法
CN116334255B (zh) 一种沙门氏菌新型核酸检测试剂盒及其非诊断性检测方法
JPH07184697A (ja) 腸内細菌科細菌の検出のためのオリゴヌクレオチド
JPH10508499A (ja) カンピロバクターのゲノム核酸配列と特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列
CN116334254B (zh) 一种多杀性巴氏杆菌新型核酸检测试剂盒及其非诊断性检测方法
US5348857A (en) Probes and method for identifying species and biovars of brucella
Begaud et al. Detection of enterotoxigenic Escherichia coli in faecal specimens by acetylaminofluorene-labelled DNA probes
NO163699B (no) Fremgangsmaate og reagenskombinasjon for diagnose av mikroorganismer.
CN116064943A (zh) 一种用于检测猫细小病毒与支气管败血波士杆菌的探针、引物组以及试剂盒和应用
CN113652494A (zh) 一种检测幽门螺杆菌的探针、引物组和试剂盒
Liu et al. Genotypic identification
CN110923347A (zh) 解脲脲原体核酸检测胶体金层析试剂盒及其应用
Beaty et al. Nucleic acid hybridization: applications to diagnosis of microbial infections and to genotypic analysis.

Legal Events

Date Code Title Description
MA Patent expired

Owner name: SANGTEC MOLECULAR DIAGNOSTICS AB