SK283693B6 - Spôsob prípravy kamptotecínu alebo jeho farmaceuticky prijateľnej soli - Google Patents

Abstract

Opisuje sa spôsob prípravy vodorozpustných analógov kamptotecínu všeobecného vzorca (I) vrátane spôsobu prípravy ich medziproduktov a zlúčenín pripravených týmto postupom. Takto pripravené vodorozpustné analógy kamptotecínu je možné použiť na inhibíciu rastu nádorových buniek citlivých proti týmto analógom.ŕ

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka spôsobu prípravy vodorozpustných analógov kamptotecínu vrátane prípravy príslušných medziproduktov a zlúčenín, pripravených týmto spôsobom. Tieto vodorozpustné analógy kamptotecínu môžu byť použité na inhibíciu rastu nádorových buniek, citlivých proti týmto analógom.

Doterajší stav techniky

Oddelenie reťazcov DNA, má základný význam v bunkových procesoch, ako je replikácia a transkripcia DNA. Pretože eukaryontná transkripcia je chromozomálnymi proteínami organizovaná do chromatínu, sú konce scvrknuté a reťazce sa nemôžu rozvinúť bez pomoci enzýmov, ktoré menia technológiu. Enzýmami schopnými zmeniť topológiu DNA v eukaryontných bunkách, sú topoizomcrázy. V dôsledku tejto funkcie sú nevyhnutne nutné k proliferácii eukaryontných buniek. Topoizomeráza I je monomérny enzým s molekulovou hmotnosťou približne 100 000. Enzým sa viaže na DNA, vyvoláva prechodné rozlomenie jedného reťazca, uvoľňuje dvojitú špirálu (alebo tento jav umožňuje) a potom znovu zlom spája pred odpojením od reťazca DNA. Prostriedky, ktoré inhibujú pôsobenie topoizomerázy

I, teda môžu interferenciou s proliferáciou eukaryontných buniek pôsobiť ako protirakovinové prostriedky.

Kamptotecín je vodorozpustný cytotoxický alkaloid, produkovaný stromami Camptotheca accuminata, pochádzajúcich z Číny, a rastlinami Nothapodytes foetida, známymi tiež ako Mappia foetida, pochádzajúcich z Indie. O kamptotccínc a niekoľkých jemu blízkych zlúčeninách je známe, že inhibujú topoizomerázu I. Kamptotecín a jemu blízke príbuzné zlúčeniny inhibujúce topoizomerázy I, sa neukázali vhodnými na vývoj klinických cytolyticky pôsobiacich liečiv v dôsledku nedostatku klinickej účinnosti, neprijateľnej dávky limitujúcej toxicity, nepredvídateľnej toxicity, zlej rozpustnosti vo vode alebo neprijateľnej skladovacej stability. Existuje teda potreba protinádorových prostriedkov, ktoré by nemali nežiaduce vlastnosti týchto zlúčenín.

Patent US 4 604 463, vydaný 5. 8. 1986 Miyasakovi a d., opisuje deriváty kamptotecínu s aminokarbonyloxyskupinou alebo chlórkarbonyloxyskupinou v niektorej z polôh 9, 10 a 11 kruhu A a uvádza, že tieto zlúčeniny majú protinádorovú účinnosť s nízkou úrovňou toxicity. Ako spôsob výroby týchto derivátov kamptotecínov je v patente US 4 604 463 uvedený postup, keď sa na derivát kamptotecínov s hydroxylovou skupinou v niektorých z polôh 9, 10 a

II, prípadne substituovaný v polohe 7, pôsobí fosgénom a výsledný chlórkarbonyloxyderivát sa prípadne nechá reagovať s amínom, alebo alternatívny postup, keď sa derivát kamptotecínu s hydroxylovou skupinou v niektorých z polôh 9, 10 a 11, prípadne substituovaný v polohe 7, pôsobí priamo reaktívnym funkčným derivátom karbamovej kyseliny.

Patent US 4 473 692, vydaný 25. 9. 1984 Miyasakovi a d., patent US 4 545 880, vydaný 8. 10. 1985 Miyasakovi a d., a zverejnená patentová prihláška EP 0 074 256 opisujúca deriváty kamptotecínu, o ktorých uvádzajú, že majú protinádorovú účinnosť s nízkou úrovňou toxicity. Zlúčeniny, uvedené v týchto dokumentoch majú určité substituenty v polohách 5, 7 a 10. Tieto dokumenty opisujú spôsoby prípravy týchto zlúčenín vrátane spôsobu prípravy ich medziproduktov. Jeden z týchto spôsobov spočíva v príprave 1,2,6,7-tetrahydrokamptotecínu katalytickou hydrogená ciou kamptotecínu v rozpúšťadle, ako je kyselina octová, zmes dioxánu s kyselinou octovou alebo zmes dioxánu s kyselinou chlorovodíkovou, v prítomnosti katalyzátora na báze vzácneho kovu za atmosférického tlaku. Získaný tetrahydro-produkt sa prevádza na 10-nitrokamptotecín ťažkopádnym mnohostupňovým sledom operácií, ktoré zahŕňajú dehydrogenáciu tetrahydroderivátov oxidačným činidlom. Toto oxidačné činidlo nezavádza do derivátov kamptotecín hydroxylovú skupinu. V uvedených dokumentoch je opísaný chemizmus premeny nitroskupiny na rôzne príbuzné zlúčeniny. Iný postup, uvedený v týchto dokumentoch, sa týka prípravy 10-hydroxykamptotecínov fotolýzou kamptotecín-1-oxidu dvojstupňovým procesom.

Pri 10-hydroxykamptotecíne bola zaznamenaná farmakologická účinnosť. Japonská patentová prihláška bez prieskumu č. 59-5188 (1984) opisuje spôsob prípravy 10-hydroxykamptotecínu z 1,2,6,7-tetrahydrokamptotecínu. Neskôr uvedená zlúčenina sa podľa citovaného japonského dokumentu získava hydrogenáciou kamptotecínu v kyseline octovej alebo zmesi dioxánu a kyseliny octovej za normálneho tlaku a teploty v prítomnosti platinového katalyzátora.

10-hydroxykamptotecín sa podľa tohto dokumentu získava reakciou 1,2,6,7-tetrahydrokamptotecínu s oxidačným činidlom, vybraným zo skupiny zahŕňajúcej tetraacetát olova, CAN (nitrát ceričitoamónny), Fremyho soľ, (nitrosodisulfonát draselný (KSO₃)₂NO), kyselinu chrómovú alebo oxid chrómový, dvojchrómany, manganistan draselný a chlorid železitý.

Patentová prihláška EP 0 088 642, zverejnená 14. 9. 1983 opisuje kamptotecín-7-karboxamid a jeho deriváty. Pri ich príprave sa kamptotecín-7-karboxylová kyselina nechá reagovať najprv s činidlom, aktivijúcim karboxylovú skupinu a potom s amoniakom alebo zodpovedajúcim amínom. V prihláške sa uvádza, že tieto zlúčeniny sú vhodné ako meziprodukty na prípravu farmaceutických prostriedkov alebo iných skupín nových kamptotecínových derivátov.

Wani a d., J. Med. Chem. 29, 2358 - 2363 (1986) opisujú vývoj niekoľkých kamptotecínových derivátov s protinádorovou účinnosťou, zahŕňajúcich 9-nitro-20(S)-kamptotecín, 9-amino-20(S)-kamptotecín, 9-acetamido-10-hydroxy(20)-kampotecín. Sú uvedené i postupy prípravy týchto látok.

Wani a d., J. Med. Chem. 23, 554 - 560 (1980) opisuje syntézu rôznych analógov kamptotecínu vrátane analógu, kde na C-10 je dietylaminoéter.

Wani a d., J. Med. Chem. 30, 1774 - 1779 (1987) opisuje syntézu rôznych 11-substituovaných analógov kamptotecínu, zahŕňajúcich substituenty kyán, nitro, amino, dimetylamino, formyl, aminometyl a hydroxymetyl. Wani a d. tiež opisuje prípravu rôznych zlúčenín. Na prípravu 11 -aminometyl-analógu sa uvádza spôsob, kedy sa refluxuje roztok 11-formyl-kamptotecínu a 2-aminoizomaslovej kyseliny v DMF, na čo sa zahustí a pridá sa vodná HC1. Uvádza sa však, že 11-aminometyl-analóg i jeho hydrochlorid sú neúčinné.

V patente Spojených štátov amerických číslo US

004 758 sú opísané deriváty kamptotecínu všeobecného vzorca (A)

v ktorom X predstavuje hydroxyskupinu, atóm vodíka, skupinu -CH₂NH₂, alebo formylovú skupinu a skupina R predstavuje atóm vodíka ak skupina X predstavuje -CHjNH₂, alebo formylovú skupinu, alebo skupina R predstavuje skupinu -CHO alebo substituovanú metylovú skupinu, ak skupina X predstavuje atóm vodíka alebo hydroxyskupinu. Deriváty kamptotecínu podľa uvedeného dokumentu potom neobsahujú v polohe 11 žiadny substituent.

V patente Spojených štátov amerických číslo 4 894 456 sú opísané mono- alebo disubstituované analógy kamptotecínu všeobecného vzorca (B)

	u	H	.CH
	f a) 1		1
Vk,			N	. σ
10	9	7	T
			0

(B), v ktorých je kruh A substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi vybranými zo skupiny zahŕňajúcej hydroxyskupinu, nitroskupinu, aminoskupinu, atóm chlóru, atóm brómu, atóm jódu, atóm fluóru, alkylovú skupinu obsahujúcu od 1 do 8 atómov uhlíka, alkoxylovú skupinu obsahujúcu od 1 do 8 atómov uhlíka, trifluórmetylovú skupinu, aminometylovú skupinu, amidoskupinu, hydrazínoskupinu, azidoskupinu, formylovú skupinu a kyanoskupinu a ďalej skupiny obsahujúce zvyšky aminokyselín viazané ku kruhu A cez atóm dusíka. Výhodnými aminokyselinovými skupinami podľa tohto dokumentu je 20 prírodných aminokyselín s konfiguráciou L.

V patente Spojených štátov amerických číslo 4 943 579 sú opísané deriváty kamptotecínu so substituovanou hydroxylovou skupinou v polohe 20 všeobecného vzorca (C)

o (C), v ktorom R¹ predstavuje atóm vodíka alebo alkylovú skupinu a R môže predstavovať nasledujúce skupiny: skupinu COCH₂NH₂.HC1; skupinu COCH2NHCH3.HCI; skupinu COCH₂NHC₂H₅.HC1;

skupinu COCH₂N(C₂H₅)₂.HC1;

skupinu COCH(NH₂)CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂NH₂.2HCI;

skupinu COCH(NH₂)CH₂CH₂COOH.HC1;

skupinu COCH₂CH₂COO Na⁺;

skupinu HPO₃'Na⁺.

Aj napriek týmto snahám stále ostáva potreba účinných protinádorových prostriedkov a účinných spôsobov ich prípravy.

Podstata vynálezu

Vynález poskytuje nový spôsob prípravy vodorozpustných analógov kamptotecínu vrátane spôsobu prípravy ich medziproduktov. Uvedené spôsoby samy osebe alebo ako schéma celkového procesu predstavujú účinný prostriedok získania týchto zlúčenín.

Vynález ďalej poskytuje zlúčeniny, pripravené uvedeným procesom. Zlúčeniny podľa vynálezu vyhovujú potre be prostriedkov, inhibujúcich topoizomerázu I, atraktívnych na vývoj klinických liečiv ako cytolytiká.

Predmetom vynálezu je celkový postup prípravy vodorozpustných analógov kamptotecínu všeobecného vzorca (I)

kde

R je vodík alebo alkoxyskupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka,

R¹ je skupina -O-R², -S-R³ alebo -N-(R⁴)(R⁵),

R², R³, R⁴ a R⁵ sú rovnaké alebo rôzne a znamenajú vodík, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 6 atómov uhlíka, hydroxyalkylovú skupinu obsahujúcu 3 až 6 atómov uhlíka, C|. .₆dialkylamino-C₂.₆alkylovú skupinu, C_l-_(ialkylamino-C₂. .₆alkyl, aminoalkylovú skupinu obsahujúcu 2 až 6 atómov uhlíka alebo 3 - 7 členný nesubstituovaný alebo substituovaný karbocyklický kruh, alebo, ak je R¹ skupina -N-(R⁴)(R⁵), môžu byť skupiny R⁴ a R⁵ spojené spolu s dusíkovým atómom, ku ktorému sú viazané, na substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklický kruh, ktorý môže obsahovať ďalšie heteroatómy, a

R⁶ je vodík, nesubstituovaný alebo substituovaný alifatický zvyšok obsahujúci 1 až 6 atómov uhlíka alebo substituent, tvoriaci spolu s kyslíkovým atómom, cez ktorý je viazaný, farmaceutický prijateľnú esterovú skupinu, pričom, tento postup zahŕňa stupne:

(a) čistenie kamptotecínu alebo 11-Q.f. alkoxykamptotecinu, (b) hydrogenáciu uvedeného kamptotecínu alebo 11-Cj_₆alkoxykamptotecínu na 1,2,6,7-tetrahydrokamptotecín alebo 11 -C₁.₆alkoxy-1,2,6,7-tetrahydrokamptotecín, (c) oxidáciu uvedeného 1,2,6,7-tetrahydrokamptotecínu alebo 11-C| ₍,alkoxy-1.2.6,7-tetrahydrokamptotccínu na 10-hydroxykamptotecín alebo lO-hydroxy-C^alkoxykamptotecín, a (d) prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca (lb), v ktorom R¹ znamená amínovú skupinu -N(R⁴)(R⁵) a R⁶ znamená atóm vodíka Mannichovou reakciou, pričom stupeň (d) zahŕňa tieto stupne:

(i) prípravu zlúčeniny vzorca (lb), kde R¹ je amínová skupina -N-(R⁴)(R⁵) a R⁶ je vodík, alebo jej farmaceutický prijateľné soli reakciou 10-hydroxykamptotecínu alebo 10-hydroxy-11-C|.₆alkoxykamptotecínu so zlúčeninou všeobecného vzorca (II)

CH₂[-N-(R⁴)(R⁵)]₂ (II), v ktorom:

R⁴ a R⁵ majú rovnaký význam ako bolo uvedené pri vzorci (lb), a (ii) prípadne sa (a) pripraví zlúčenina vzorca (lb), kde R¹ je -O-R² alebo -S-R³, alebo jej farmaceutický prijateľné soli konverziou aminoskupiny zlúčeniny pripravenej v stupni (i) na -O-R² alebo -S-R³, a/alebo (b) pripraví zlúčenina vzorca (lb), kde R⁶ má iný význam ako vodík alebo jej farmaceutický prijateľné soli konverziou hydroxylovej skupiny v polohe 10 zlúčeniny pripravenej v stupni (i) na skupinu -OR⁶, kde R⁶ má s výnim kou vodíka rovnaký význam, ako bolo uvedené pri všeobecnom vzorci (lb).

Zlúčeniny vzorca (I) sú zvlášť vhodné ako protinádorové prostriedky.

Celkový postup prípravy zlúčenín vzorca (I) je znázornený na schéme I. Zlúčeniny vzorca (la) sú zlúčeniny vzorca (I), kde R¹ je -N-(R⁴)(R⁵) a ani R⁴, ani R⁵ nie je hydroxyetyl. Zlúčením vzorca (I), kde R⁴ alebo R⁵ je hydroxyetyl, je možné pripraviť napríklad Mannichovou reakciou zlúčeniny, pripravené v stupni (2) schémy I, s paraformaldehydom a etanolamínom v kyseline octovej.

Schéma I objasňuje prípravu zlúčenín, kde R⁶ je vodík. Zlúčeniny vzorca (I), kde R⁶ je iné než vodík, je možné získať napríklad vytvorením vhodnej éterovej alebo esterovej skupiny po naviazaní substituentu v polohe 9 v stupni (3). Spôsob vytvorenia takejto éterovej alebo esterovej skupiny je možné zvoliť z metód, známych odborníkom.

Schéma I

(la)

HO-R²

O

V opise a nárokoch sa kruhy a jednotlivé polohy označujú týmto spôsobom:

Ako je zrejmé zo schémy I, spočíva prvý stupeň celkového postupu v premene kamptotecínu alebo jeho U-alkoxy-analógov na 1,2,6,7-tetrahydrokamptotecín (ďalej len tetrahydrokamptotecín) alebo jeho 11-alkoxy-analóg. Východiskový 11-alkoxykamptotecín je možné pripraviť akýmkoľvek známym spôsobom, napríklad spôsobom opísaným Wanim a d., J. Med. Chem. 29, 2358 - 2363 (1986) na syntézu analógov kamptotecínu. Podľa vynálezu sa ako 11 -alkoxykamptotecín výhodne používa 11-metoxykamptotecín.

Východiskový kamptotecín pre tento stupeň je dostupný, ako je uvedené, ako prirodzene produkovaný alkaloid. Okrem toho boli zaznamenané spôsoby jeho totálnej syntézy, prehľady pozri napríklad Hutchinson, Tetrahedron 37, 1047 (1981), a Suffness a Cordell, „The Alkaloids. Chemistry and Pharmacology“, Brossi, A., ed., zväzok 25, Academic Press, Orlando, Florida, 73 (1985). Jedna cesta prípravy kamptotecínu, ktorý je na uhlíku v polohe 20 racemický, je opísaná Wanim a d., J. Med. Chem. 23, 554 (1980). Racemický kamptotecín, získaný postupom podľa Waniho a d., sa čistí pomocou chromatografie, a potom sa kryštalizuje z konkrétneho prostredia. Prostredie, ktoré Wani a d. používajú pri kryštalizácii, je však zlým rozpúšťadlom na čistenie kamptotecínu od znečisťujúcich príbuzných alkaloidov, takže chromatografia je nevyhnutnou súčasťou procesu čistenia.

SK 283693 Β6

Pre spôsob podľa vynálezu je možné ako východiskovú látku použiť tak prírodný, ako i synteticky vyrobený kamptotecín.

S ohľadom na polohu 20 sú výhodné S izoméry východiskových látok.

Čistenie východiskového kamptotecínu alebo 11-alkoxykamptotecinu

Čistenie kamptotecínu alebo jeho 1 l-Cj^alkoxy-analógu ďalej opísaným spôsobom má zvlášť dobré výsledky, ak sa použijú tieto zlúčeniny ako východiskové látky v celkovom procese prípravy vodorozpustných analógov kamptotecínu podľa vynálezu. Spôsob čistenia kamptotecínu alebo 11-C₁.₆alkoxykamptotecínu konkrétne zahŕňa prvý stupeň, keď sa zmes, obsahujúca kamptotecín alebo 11-Cj. _₆alkoxykamptotecín a jeho nečistoty, uvedie do styku s rozpúšťadlom, schopným oddeliť z uvedenej zmesi alkaloidy iné než kamptotecín a 11-Cj.₆alkoxykamptotecín a takisto nečistoty, ktoré sú schopné spomaľovať hydrogenáciu kamptotecínu alebo ll-C|.₆alkoxykamptotecínu na zodpovedajúce 1,2,6,7-tetrahydro-analógy a aspoň časť kamptotecínu alebo ll-C₁.₆alkoxykamptotecínu alebo uvedených nečistôt alebo obidvoch týchto zložiek sa rozpustí, a druhý stupeň, keď sa oddelí kamptotecín alebo 11-C_bsalkoxykamptotecín. Kamptotecín alebo 11-C|.₆alkoxykamptotecín, oddelený v druhom stupni čistenia, je výhodne zbavený nečistôt, ktoré sú schopné spomaľovať hydrogenáciu kamptotecínu alebo 1 l-C^alkoxykamptotecínu na zodpovedajúce 1,2,6,7-tetrahydro-analógy. Ak je to žiaduce, je možné kvôli zvýšeniu čistoty kamptotecínu alebo 11-Cj. .₆alkoxy-analógu postup čistenia opakovať s rovnakým alebo iným rozpúšťadlom.

Opísané čistenie je obzvlášť vhodné na odstraňovanie nečistôt, ktoré sa ťažko odstraňujú v záverečných stupňoch celkového procesu podľa vynálezu. Napríklad nečistený kamptotecín, obsahujúci 85 až 87 % hmotnostných kamptotecínov a 9 až 12 % nečistôt (HPLC, PAR - peak area ratios), je možné týmto spôsobom vyčistiť na obsah kamptotecínu vyšší než 96 % (HPLC, PAR). Čistený kamptotecín alebo ll-C|.₆alkoxykamptotecín je možné oveľa spoľahlivejšie hydrogenovať na zodpovedajúce tetrahydro-produkty oproti nečisteným zlúčeninám, ktoré obsahujú nečistoty, spomaľujúce hydrogenáciu. Platí to najmä pri zväčšenom meradle použitia procesu. Tento spôsob navyše umožňuje účinné odstránenie nečistôt s použitím relatívne malého objemu rozpúšťadla.

Výhodné množstvo rozpúšťadla, používané v prvom stupni, je asi 10 až 35 objemov rozpúšťadla na objem kamptotecínu alebo ll-C|.₆alkoxykamptotecínu. Ako príklady rozpúšťadiel, vhodných na čistenie podľa vynálezu, je možné uviesť Ν,Ν-dimetylformamid, N-metylpyrolidón, kyselinu octovú, kyselinu trifluóroctovú, dimetylsulfoxid, zmes kyseliny octovej a dimetylsulfoxid a zmes kyseliny octovej a kyseliny chlorovodíkovej.

Spôsob čistenia podľa vynálezu je možné aplikovať buď na prirodzene produkovaný alebo na syntetický kamptotecín. Výhodne sa používajú rozpúšťadlá, uvedené skôr ako príklady. Kamptotecín, získavaný z rastlín Nothapodytes foetida, sa výhodne čistí buď z kyseliny octovej alebo Ν,Ν-dimetylformamidu, buď jednostupňovo, alebo zväčša tak, že sa v prvom stupni použije kyselina octová, výhodne kyslá a potom sa prípadne uskutoční druhý stupeň s použitím výhodného Ν,Ν-dimetylformamidu, spravidla kyslého. Druhý stupeň čistenia vedie k ďalšiemu zvýšeniu výťažku pri nasledujúcej hydrogenácii. V prípade kamptotecínu z Nothapopdytes foetida je účelné počas čistenia, výhodné je čistenie kyselinou octovou, pridávať látku absorbujúcu ne čistoty, ako je aktívne uhlie. Kamptotecín, získaný zo stromov Camptotheca accuminata, sa výhodne čistí pomocou Ν,Ν-dimetylformamidu, spravidla kyslého. K zvýšeniu čistoty získaného kamptotecínu je možné zaradiť druhé čistenie, výhodné z kyslého Ν,Ν-dimetylformamidu.

Teplota, použitá na rozpustenie, je vhodná medzi 60 °C a teplotou refluxu rezpúšťadla a najvhodnejšia je približne 100 °C. K zdokonaleniu čistenia je možné použiť chladenie po rozpustení. Kamptotecín alebo 11-alkoxykamptotecín môže byť napríklad oddelený v druhom stupni spôsobu podľa vynálezu metódou, ako je filtrácia.

Hydrogenácia na tetrahydrokamptotecín alebo jeho 11-alkoxy-analóg

Hydrogenácia kamptotecínu na tetrahydrokamptotecín bola opísaná napríklad v japonskom patente č. 59-5188, ktorý, ako je uvedené, opisuje vykonávanie hydrogenačnej reakcie v kyseline octovej, alebo v zmesi dioxánu a kyseliny octovej za normálneho tlaku a teploty v prítomnosti platinového katalyzátora. Táto metóda však nie je úplne uspokojivá, vzhľadom na to, že hydrogenovaný produkt je reaktívny. Hydrogenácia preto pokračuje po vzniku požadovaného tetrahydrokamptotecínového produktu ďalej za vzniku príliš redukovaných produktov. Okrem toho, zatiaľ čo použitie tlaku vyššieho než atmosférického, neuvedené v citovanom japonskom patente, by bolo žiaduce z hľadiska rýchlejšieho priebehu reakcie alebo lepšej konverzie východiskového kamptotecínu, bolo zistené, že takéto tlaky nie je možné účinne použiť v procese, ako je spôsob podľa citovaného japonského patentu, vzhľadom na ďalší rast tvorby veľmi redukovaných produktov.

Vynález ponúka spôsob premeny kamptotecínu alebo jeho 11-alkoxy-analógu na tetrahydrokamptotecín alebo jeho 11-alkoxy-analóg, spočívajúci v tom, že sa kamptotecín alebo 11-C_l.₆alkoxykamptotecín privádza do styku s vodíkom a hydrogenačným katalyzátorom v prítomnosti moderátora hydrogenačného katalyzátora, kde sa moderátor volí z jedov hydrogenačných katalyzátorov. Moderátor, používaný podľa vynálezu, spostredkováva reakciu, umožňuje jej úplné prebehnutie s minimalizáciou alebo zamedzením tvorby príliš redukovaných produktov. Použitie spôsobu podľa vynálezu poskytuje značné zlepšenie konverzie substrátu a selektivity reakcie. Tetrahydro-produkty sú stabilné proti ďalšej hydrogenácii pri reakčných podmienkach, ktoré môžu zahŕňať supraatmosférické tlaky vodíka a zvýšené teploty.

Kamptotecín alebo 11 -alkoxykamptotecín, získaný akýmkoľvek spôsobom, výhodne čistený opísaným spôsobom podľa vynálezu, môže byť hydrogenovaný spôsobom podľa vynálezu.

Moderátor hydrogenačného katalyzátora podľa vynálezu môže byť vybraný zo zlúčenín, o ktorých je známe, že otravujú hydrogenačné katalyzátory. Príklady moderátorov zahŕňajú zlúčeniny síry, ako je dimetylsulfoxid (DMSO) alebo tiofén. Obzvlášť výhodné je ako moderátor katalyzátora použiť DMSO. Ak sa použije ako moderátor katalyzátora zlúčenina síry, môže byť zahrnutá na hydrogenačnom katalyzátore. Príkladom sú sulfidované hydrogenačné katalyzátory.

Používané množstvo moderátora katalyzátora môže byť zvolené tak, aby sa dosiahlo zlepšenie konverzie substrátu alebo selektivity oproti konverzii substrátu alebo selektivite, dosahované pri vykonávaní reakcie bez moderátora. Výhodné množstvo moderátora je asi 0,2 až 5 % objemových moderátorov, ako je DMSO, na objem reakčného prostredia.

Vhodné hydrogenačné katalyzátory môžu byť zvolené zo známych hydrogenačných katalyzátorov. Ich príklady sú katalyzátory na báze vzácnych kovov, ako je platina, napríklad oxid platičitý PtO₂, ktorý môže byť vopred redukovaný, napríklad vodíkom v kyseline octovej, ďalej paládium alebo ródium.

Katalyzátory môžu byť nanesené na materiáli, ako je uhlie alebo oxid hlinitý. Použitie nosičového katalyzátora môže znížiť celkové použité množstvo kovu pri zachovaní dostatočnej rýchlosti hydrogenácie, a je teda výhodné. Príklady takýchto katalyzátorov zahŕňajú platinu a uhlie, napríklad 5 % Pt/C, platinu na sulfidovanom uhlí, napríklad 5 % Pt/sulfidované uhlie, a platinu na oxide hlinitom, napríklad 5 % Pt/oxid hlinitý. Obzvlášť výhodná je platina na uhlí, najmä 5 % Pt/C.

Použité množstvo hydrogenačného katalyzátora je možné zvoliť tak, aby účinne prebehla reakcia. Napríklad, ak sa použije ako hydrogenačný katalyzátor 5 % Pt/C, je výhodné použiť množstvo katalyzátora vrátane nosiča, zodpovedajúcemu asi 20 až 110, spravidla asi 50 % hmotnostným, vzťahujúc na hmotnosť substrátu kamptotecínu alebo 11-alkoxykamptotecínu. Obzvlášť výhodné je množstvo katalyzátora 5 % Pt/C, obsahujúceho približne 2,5 % platiny, vzhľadom na hmotnosť východiskovej látky.

Konverziu na tetrahydro-produkt je možné podľa vynálezu vykonávať pri vhodnom tlaku vodíka, napríklad použitím atmosférického tlaku vodíka. Dobre sa však používa vyšší než atmosférický tlak vodíka. Pri týchto vyšších tlakoch prebieha reakcia rýchlejšie alebo prichádza k úplnejšiemu spotrebovaniu východiskovej látky, pričom nedochádza k vzniku príliš redukovaných produktov, takže je možné dosiahnuť objemovú účinnosť s vyšším prechodovým výkonom. Výhodne je možné používať tlaky vodíka nad asi 241,5 kPa. Obzvlášť výhodné sú hodnoty tlaku vodíka asi 345 až 483 kPa.

Výhodná je atmosféra, obsahujúca v podstate vodík. Reakčné prostredie pri spôsobe podľa vynálezu výhodne obsahuje kvapalnú fázu, obsahujúcu rozpúšťadlo, v ktorom je produkt rozpustný a katalyzátor aktívny, s objemom, umožňujúcom účinné premiešanie média a dobrú difúziu vodíka. Príkladom kvapaliny tvoriacej kvapalnú fázu, je kyselina octová, ktorá sa výhodne používa v množstve asi 10 až 30 objemov kyseliny octovej na objem kamptotecínu alebo 11 -alkoxykamptotecínu, pričom sú výhodné nižšie množstvá ako 30 objemov kyseliny octovej na objem východiskovej látky, ale nadbytočné množstvo kvapalného média môže reakciu spomaľovať.

Teplota, pri ktorej sa reakcia vykonáva, leží výhodne medzi teplotou miestnosti a 90 °C, prednostne od 40 do 80 “C. Pri zahrievaní prebieha reakcia rýchlejšie a presnejšie sa dokončí, než v prípade vykonávania pri teplote miestnosti.

Poradie kontaktovania reakčných zložiek môže byť zvolené ľubovolne.

Hydrogenáciou východiskových látok môžu vznikať štyri stereoizoméry zodpovedajúcich produktov, ktoré sa líšia s ohľadom na relatívne polohy vodíkových atómov, viazaných k mostíkovým uhlíkovým atómom, zdieľaným kruhmi B a C. Výroba všetkých týchto stereoizomérov a ktoréhokoľvek z nich patrí do rozsahu spôsobov podľa vynálezu.

Vynález sa tiež týka nových 1 l-C₁.₆alkoxy-l,2,6,7-tetrahydrokamptotecínových medziproduktov, pripravovaných pri spôsobe podľa vynálezu. Nové medziprodukty je možné pripravovať spôsobom, pri ktorom sa uvádza do styku 11-C .₆alkoxykamptotecín s vodíkom a hydrogenač ným katalyzátorom, prípadne ďalej s použitím uvedeného moderátora hydrogenačného katalyzátora.

Izoláciu tetrahydro-produktov je možné vykonávať vhodným spôsobom, napríklad procesom čistenia, opísaným v japonskom patente č. 59-5188. Výhodný spôsob spočíva vo filtrácii na odstránenie hydrogenačného katalyzátora, na ktorý môže bezprostredne nadväzovať ďalší stupeň celkovej reakčnej schémy, t. j. opísaná konverzia tetrahydro-produktov na ich 10-hydroxy-analógy.

Oxidácia 10-hydroxykamptotecínu alebo jeho 10-hydroxy-11-alkoxy-analógov

Druhý stupeň celkového procesu podľa schémy I zahŕňa konverziu tetrahydrokamptotecínu alebo jeho 11-alkoxy-analógu na 10-hydroxykamptotecín alebo jeho 10-hydroxy-ll-alkoxy-analóg. Východiskové látky pre tento stupeň sa výhodne získavajú opísaným spôsobom hydrogenácie podľa vynálezu.

Konverzia tetrahydrokamptotecínu na 10-hydroxykamptotecín bola opísaná v japonskom patente č. 59-5188, ktorý, ako je uvedené, opisuje použitie oxidačného činidla, vybraného zo skupiny zahŕňajúcej tetracetát olova, CAN (dusičnan ccričitoamónny), Fremyho soľ (nitrosodisulfonát draselný (KSO₃)₂NO), kyselinu chrómovú alebo oxid chrómový, dvojchrómany, manganistan draselný a chlorid železitý. Japonský patent uvádza, že rozpúšťadlá, používané na túto reakciu zahŕňajú kyselinu octovú, metanol, etanol, chloroform, pyridín, benzén, metylénchlorid, dioxán, THF, vodu a kyselinu trifluóroctovú a jej zmesi. Bolo však zistené, že spôsob podľa japonského patentu má nevýhodu v tom, že oxidácia nie je príliš selektívna a okrem toho 10-hydroxy-kamptotecínu vzniká podstatné množstvo nežiaduceho kamptotecínu, ktorý musí byť oddelovaný od konečného produktu. Samotný 10-hydroxykamptotecín je taktiež reaktívny a počas postupu podľa japonského patentu má tendenciu sa rozkladať. Použitie oxidačného činidla je tetraacetan olova, môže okrem toho spôsobovať kontamináciu konečného produktu ťažkých kovov.

Vynález ponúka spôsob oxidácie tetrahydrokamptotecínu alebo jeho ll-Ci_₆alkoxy-analógu na 10-hydroxykamptotecín alebo jeho 10-hydroxy-l 1-alkoxy-analóg, spočívajúci v tom, že sa tetrahydrokamptotecín alebo 11-C₁.₆alkoxytetrahydrokamptotecín uvádza v kvapalnom reakčnom prostredí do styku s oxidačným činidlom, pričom (a) kvapalné reakčné prostredie obsahuje kvapalinu zvolenú tak, aby sa aspoň časť vznikajúceho 10-hydroxykamptotccínu alebo 10-hydroxy-l 1-alkoxykamptotecínu počas reakcie zrážala, s výhradou, že ak sa použije ako východiskové látka tetrahydrokamptotecín a ak sa nepoužije ďalej uvedené oxidačné činidlo (b), nie je kvapalina, použitá ako kvapalné reakčné prostredie (a), tvorená metanolom, alebo (b) oxidačným činidlom jc persulfát draselný, jodozylbenzén, ester jodozylbenzénu, jodistan sodný alebo jodistan draselný. Ak sa použije ako východisková látka tetrahydrokamptotecín a ak sa nepoužije oxidačné činidlo (b), nie je uvedené kvapalné reakčné prostredie (a) výhodne tvorené jednotlivo žiadnou z látok zo skupiny, zahŕňajúcej metanol, etanol, chloroform, benzén, metylénchlorid, dioxán a vodu.

Výhoda použitia kvapalného reakčného prostredia (a) spočíva v tom, že sa vznikajúci 10-hydroxy- alebo 10-hydroxy-11 -alkoxy-kamptotecín vyzráža a je tak v podstate izolovaný pri minimalizácii alebo vylúčení ďalších reakcií hľadaného produktu. Použitím takéhoto prostredia je možné minimalizovať alebo odstrániť tvorbu kamptotecínu alebo 11-alkoxykamptotecínu ako nežiaduceho vedľajšieho produktu. Okrem toho je takto možné v postreakčnom prostredí minimalizovať alebo vylúčiť tvorbu iných než po žadovaných produktov nadbytočnou oxidáciou, a tak dosiahnuť značne zvýšený výťažok produktu.

Kvôli vyvolaniu zrážania je výhodné používať kvapalné reakčné prostredie (a), obsahujúce zmes vody a organického rozpúšťadla. Kvapalné prostredie (a), obsahujúce zmes vody a organického rozpúšťadla, je možné získať napríklad zmiešaním vody s organickou kvapalinou, napríklad kyselinou octovou, acetónom, N,N-dimetylformamidom alebo alkoholom s nízkou molekulovou hmotnosťou, ako metanol, etanol, alebo izopropylalkohol, v takom vzájomnom pomere, že sa vo vzniknutej kvapalnej kompozícii zráža aspoň časť vznikajúceho 10-hydroxykamptotecínu alebo jeho 10-hydroxy-l 1-alkoxy-analógu.

Uvedeným výrazom „alkohol s nízkou molekulovou hmotnosťou“, satú rozumie alkohol, ktorý je pri teplote, pri ktorej je používaný, kvapalný, výhodne C_rC4alkohol.

Výhodné zloženie kvapaliny, používané ako reakčné prostredie, zahŕňa kompozície obsahujúce vodu a organické rozpúšťadlo, kde množstvo vody predstavuje 25 až 75 % objemových, vzťahujúc na celkový objem kvapaliny. Zvlášť vhodný objemový pomer vody k rozpúšťadlu, ako je kyselina octová, acetón, Ν,Ν-dimetylformaimd alebo alkohol s nízkou molekulovou hmotnosťou, je približne 1:1.

Výhodne sú produkty podľa vynálezu v kvapalnom reakčnom prostredí (a) nerozpustné.

Ďalšia výhoda sa dosiahne, ak sa použije ako kvapalné prostredie voda v spojení s kyselinou octovou. Ak sa použije kyselina octová samotná, vzniká tak 10-acetoxykamptotecín alebo jeho 10-acetoxy-l 1-alkokxyanalóg, ako i 10-hydroxy-kamptotecin alebo jeho 10-hydroxy-l 1-alkoxy-analóg, pričom acetoxy-zlúčniny vznikajú v značnom množstve. Prídavok vody minimalizuje, alebo úplne odstraňuje množstvo týchto acetoxy-zlúčenín, nachádzajúcich sa v postrerakčnom prostredí, tak je možné, ak je to žiaduce, vynechať zvláštny stupeň hydrolýzy týchto zlúčenín na 10-hydroxykamptotecín alebo jeho 10-hydroxy-l 1-alkoxy-analógy.

Výhodou uvedených oxidačných činidiel (b) je, že sú dostatočne mierne, aby dochádzalo k malej alebo žiadnej deštrukcii 10-hydroxv- alebo 10-hydroxy-l 1-alkoxykamptotecínových produktov ďalších oxidácií. Zvlášť výhodné oxidačné činidlá (b) sú estery jodozylbenzénu, napríklad estery vzorca PhI(OR⁷)2, kde Ph je fenyl, R⁷ v každej skupine -OR⁷ môže byť také isté alebo rôzne a znamená vodík, -C(O)-R⁸ alebo -SO2-R⁹, R⁸ a R⁹ sú nesubstituované alebo substituované uhľovodíkové zvyšky a R⁷ v aspoň jednej zo skupín -OR⁷ je iné než vodík. Ako príklady týchto esterov je možné uviesť jódbenzén(bis) trifluóracetát, získaný esterifikáciou jodozylbenzénu kyselinou trifluóroctovou, jódbenzéndiacetát, získaný esterifikáciou jodozylbenzénu kyselinou octovou a hydroxy(tosyloxy)jódbenzén, získaný esterifikáciou jodozylbenzénu kyselinou toluénsulfónovou. Najvýhodnejší z nich je jódbenzéndiacetát:

(PhI(OC(O)CH₃)₂).

Je výhodné používať oxidačné činidlo (b) spravidla jódbenzéndiacetát, pri použití kvapalného prostredia (a), lebo s touto kombináciou sa dosiahnu obzvlášť dobré výsledky.

Množstvo oxidačného činidla je možné voliť tak, aby umožnilo prebehnutie reakcie. Výhodné je množstvo vyššie než dva ekvivalenty oxidačného činidla, vzťahujúc na tetrahydrokamptotecín alebo jeho 11-alkoxy-analóg. Najvýhodnejšie je množstvo rovnajúce sa približne trom ekvivalentom oxidačného činidla, vzťahujúc na tetrahydrokamptotecín alebo jeho 11-alkoxy-analóg. Pri použití uvedeného oxidačného činidla (b) je možné použiť kvapalné prostredie, ako je Ν,Ν-dimetylformamid, acetón, alkohol s níz kou molekulovou hmotnosťou, alebo výhodne octová kvapalina, ale najvýhodnejšie je uvedené kvapalné prostredie (a)·

Vsádzka východiskovej tetrahydro-zlúčeniny je výhodná v množstve asi 2 až 10, spravidla 5 až 10 % hmotnostných, vzťahujúc na hmotnosť kvapalného prostredia. Je možné voliť tlaky a teploty, vhodné na uskutočnenie reakcie, výhodný je atmosférický tlak a teplota miestnosti. Reakciu je možné uskutočňovať v atmosfére vzduchu.

Vynález sa taktiež týka nových 10-hydroxy-l 1-C_b .₆alkoxy-kamptotecínových medziproduktov a ich prípravy. Tieto nové medziprodukty je možné pripraviť spôsobom, pri ktorom sa 1 l-C^alkoxy-1,2,6,7-tetrahydrokamptotecín uvádza v kvapalnom reakčnom prostredí do styku s oxidačným činidlom, a výhodne opísaným spôsobom.

Príprava zlúčenín vzorca (I)

Zlúčeniny vzorca (I) sa pripravujú počnúc tretím stupňom celkového postupu podľa schémy I. Východiskové 10-hydroxykamptotecíny alebo 10-hydroxy-l 1-alkoxykamptotecíny pre tento stupeň sa výhodne pripravujú opísanou oxidačnou metódou. Je však možné použiť aj východiskové látky, získané iným spôsobom. Napríklad 10-hydroxykamptotecín je prirodzene produkovaná zlúčenina, ktorú je možné nájsť v rovnakej rastline ako kamptotecín. 10-metoxykamptotecín, ktorý bol taktiež izolovaný z rovnakej rastliny ako kamptotecín, je možné previesť na 10-hydroxykamptotecín refluxovaním s brómovodíkom. 10-hydroxykamptotecín je možné získať taktiež spôsobom, opísaným v citovanej japonskej patentovej prihláške č. 59-5188, redukciou pyridínového kruhu kamptotecinu s nasledujúcou oxidáciou tetraacetátom olova. Racemický 10-hydroxykamptotecin je možné ďalej pripraviť spôsobom podľa Waniho ad., J. Med. Chem. 23, 554 (1980).

Vynález poskytuje spôsob prípravy zlúčenín vzorca (I), pri ktorom východisková látka podlieha reakcii rýchlo a môže byť v podstate spotrebovaná. Konkrétne vynález poskytuje spôsob prípravy zlúčeniny vzorca (lb)

kde

R je vodík alebo C_b6alkoxy,

R¹ je -O-R¹, -S-R³ alebo -N-(R⁴)(R⁵),

R², R³, R⁴ a R³ sú rovnaké alebo rôzne a znamenajú vodík, C_b6alkyl, C_{3 6}hydroxyalkyl, C_{l 6}dialkylamino-C₂.₆alkyl, C₁.₆alkylamino-C₂.₆alkyl, C₂.₆aminoalkyl alebo 3-7 členný nesubstituovaný alebo substituovaný karbocyklický kruh, alebo ak je R’ -N-(R⁴)(R⁵), môžu byť skupiny R⁴ a R^s spojené spolu s dusíkovým atómom, ku ktorému sú viazané, na substituovaný alebo nesubstiovaný heterocyklický kruh, ktorý môže obsahovať ďalšie heteroatómy, a

R⁶ je vodík, C_b6 nesubstituovaný alebo substituovaný alifatický zvyšok alebo substituent, tvoriaci spolu s kyslíkovým atómom, cez ktorý je viazaný, farmaceutický prijateľnú esterovú skupinu, alebo jej farmaceutický prijateľné soli, pri čom sa (i) pripraví zlúčenina vzorca (lb), kde R¹ je aminová -N-(R⁴)(R⁵) a R⁶ je vodík, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ reakcií 10-hydroxykamptotecínu alebo 10-hydroxy-l 1-C|.6alkoxykamptotecínu so zlúčeninou vzorca (II)

CH₂/-N-(R⁴) (R⁵)/₂ (II), kde R⁴a R⁵ majú význam, uvedený pri vzorci (Ib), a (ii) prípadne sa (a) pripraví zlúčenina vzorca (Ib), kde R¹ je -O-R² alebo -S-R³, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ konverziou aminoskupiny zlúčeniny, pripravenej v stupni (i), na -O-R² alebo -S-R³ alebo (b) sa pripraví zlúčenina vzorca (Ib), kde R⁶ je iné ako vodík, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ konverziou hydroxylovej skupiny v polohe 10 zlúčeniny, pripravenej v stupni (i), na skupinu -OR⁶, kde R⁶ má s výnimkou vodíka význam, uvedený pri vzorci (Ib).

V stupni (ii) (a) uvedeného spôsobu je možné zlúčeniny, kde R¹ je -O-R² alebo -S-R³, pripraviť napríklad zahrievaním zlúčeniny, pripravenej v uvedenom stupni (i), s príslušným alkoholom vzorca HO-R² alebo tiolom vzorca HS-R³, kde R² a R³ majú význam, uvedený pri vzorci (Ib), v inertnom rozpúšťadle, akojeN,N-dimetylformamid. Pokiaľ ide o prípravu zlúčeniny, kde R¹ je -O-R¹ alebo -S-R³, je výhodné pripraviť v stupni (i) zlúčeninu, kde R¹ je skupina -N(CH₃)₂. Ak je zlúčenina, pripravená v stupni (i), voľnou bázou, je možné v stupni (ii) (a) pridať malé množstvo silnej kyseliny, ako je kyselina chlorovodíková. Stupeň (ii) (a) je možné prevádzať súčasne so stupňom (i) alebo po ňom. Obidva stupne je možné vykonávať súčasne pri príprave zlúčeniny, kde R¹ je -O-R² alebo -S-R³, napríklad zahrnutím príslušného alkoholu alebo tiolu do reakčnej zmesi, v stupni (i), pričom sa do reakčnej zmesi buď pridá silná kyselina, alebo je aminoskupina vo forme soli so soľnou kyselinou. Stupeň (ii) (b) je možné vykonávať po stupni (i).

Pokiaľ ide o R⁶, príklady C,.6 nesubstituovaných alebo substituovaných alifatických zvyškov zahŕňajú alifatické zvyšky s priamym alebo rozvetveným reťazcom a výhodne ide o nesubstituované alebo substituované C|.4alkylové zvyšky. Príklady farmaceutický prijateľných esterov zahŕňajú tie, kde R⁶ je C|.6nesubstituovaný alebo substituovaný alifatický karbonylový zvyšok s priamym alebo rozvetveným reťazcom, výhodný C,.₄ nesubstituovaný alebo substituovaný alkylkarbonylový zvyšok.

Výrazom „karbocyklický kruh“ sa chápe úplne nasýtený, čiastočne nasýtený alebo úplne nasýtený kruhový systém.

Výhodné zlúčeniny vzorca (Ib) zahŕňajú tie zlúčeniny, kde R¹ je dimetylamino, N-morfolíno, N-metylpiperazinyl, (4-piperidín) N-piperidinyl, cyklohexylamino, N-metylanilíno, etoxy, cyklopropylamino, N.N-dimetylaminoetoxy, Ν,Ν-dimetylaminoetyltio, N,N-dimetylaminoetylamino alebo metylamino. Obzvlášť výhodné sú zlúčeniny vzorca (Ib), kde R¹ je dimetylamino alebo N-morfolíno, spravidla dimetylamino, a ich hydrochloridy a acetáty.

Vzájomný pomer reagujúcich látok v stupni (i) je možné voliť tak, aby bolo možné uskutočniť reakciu. Výhodne sa použije prebytok zlúčeniny vzorca (II), napríklad množstvo, rovnaké alebo väčšie ako 1,2 ekvivalentu zlúčeniny vzorca (II), vzťahúce sa na východiskový 10-hydroxy- alebo 10-hydroxy-l 1-alkoxykamptotecín.

Teplota, používaná pri vykonávaní reakcie so zlúčeninou vzorca (II), sa výhodne pohybuje medzi 0 °C a teplotou refluxu rozpúšťadla, najvýhodnejšie sa používa teplota miestnosti. Použitie teploty miestnosti minimalizuje tepelný rozklad relatívne menej stabilných zlúčenín vzorca (Ib), napríklad tých vo forme voľnej bázy alebo acetátu, ktoré vznikajú napríklad vtedy, ak sa použije ako rozpúšťadlo kyselina octová. Výhodný je atmosférický tlak. Reakciu je možné vykonávať v atmosfére vzduchu.

Spôsob podľa vynálezu na prípravu zlúčenín vzorca (Ib) je možné vykonávať v rozpúšťadle, ako je kyselina octová. Navážka východiskovej 10-hydroxy- alebo 10-hydroxy-11-alkoxy-zlúčeniny je výhodne asi 4 až 10 % hmotnostných, vzťahujúc na hmotnosť rozpúšťadla.

Výhodné uskutočnenie spôsobu podľa vynálezu zahŕňa, spravidla v stupni (i), použitie rozpúšťadla, zvoleného zo skupiny, zahŕňajúcej acetonitril a alkoholy s nízkou molekulovou hmotnosťou. Rozpúšťadlo, tvorené acetonitrilom alebo alkoholom s nízkou molekulovou hmotnosťou, môže byť zamiešané s jednou alebo viacerými ďalšími organickými kvapalinami. Ak sa použije ako rozpúšťadlo acetonitril, môže byť napríklad použitý samotný alebo v zmesi s alkoholom s nízkou molekulovou hmotnosťou alebo s inertným chlórovaným uhľovodíkom, ako je metylénchlorid. Ak sa použije ako rozpúšťadlo alkohol s nízkou molekulovou hmotnosťou, môže byť napríklad použitý samotný alebo v zmesi s inertným chlórovaným uhľovodíkom.

Použitie zmesi alkoholu s nízkou molekulovou hmotnosťou a inertného chlórovaného uhľovodíka ako rozpúšťadla je výhodné. Zvlášť výhodné je použitie zmesi alkoholu s nízkou molekulovou hmotnosťou, ako je 1-propanol, a metylénchloridu, najvýhodnejšie v objemovom pomere asi 5 dielov alkoholu k asi 10 dielom metylénchloridu.

Použitie výhodného rozpúšťadlového systému pri príprave zlúčenín vzorca (Ib) poskytuje výhody v porovaní napríklad s použitím rozpúšťadla, ako je kyselina octová, v tom, že reakciu je možné vykonávať bez kyseliny, čo umožňuje priamu izoláciu soli s kyselinou bez výmeny solí, a je možné zvýšiť výťažok získavaného produktu, napríklad dokonalejším spotrebovaním východiskovej látky. Ak sa požaduje získanie danej soli, je možné použiť priamy prídavok príslušnej kyseliny, samotnej alebo v roztoku. Okrem toho použitím uvedeného výhodného rozpúšťadlového systému je možné kamptotecín, nečistotu vzniknutú napríklad počas uvedeného oxidačného stupňa, odstrániť v materských lúhoch, a tak zvýšiť čistotu izolovaného produktu.

Zlúčeniny vzorca (I) je možné použiť pri ďalej opísanej metóde «kryštalizácie. Zlúčeniny vzorca (Ib) nezahŕňajú zlúčeniny vzorca (I), kde R², R³, R⁴ alebo R⁵ sú hydroxyetylová skupina. Tieto zlúčeniny je možné získať spôsobom podľa európskeho patentu č. 0 321 122.

Je uznávanou skutočnosťou, žc dôsledkom asymetrického atómu uhlíka v kruhu E zlúčenín vzorca (I), t. j. atómu uhlíka č. 20, bude existencia optických izomérov. Výhodným izomérom je S-izomér, ale do rozsahu zlúčenín vzorca (I) patrí i R-izomér a racemická zmes (racemát).

Farmaceutický prijateľné soli a spôsoby ich prípravy je možné ponechať na výber odborníkovi. Výhodné farmaceutický prijateľné soli zlúčenín vzorca (I) zahŕňajú acetát, metánsulfonát a spravidla hydrochloridy, ako je mono- a dihydrochlorid. Dihydrochlorid je možné získať prídavkom prebytku kyseliny chlorovodíkovej a vzniká pravdepodobne protoáciou chinolínového dusíku v kruhu B, rovnako ako dusíku skupiny R¹. Príklady farmaceutický prijateľných solí zahŕňajú také kvartéme amónne soli, ktoré je možné napríklad pripraviť reakciou zlúčeniny, získanej v stupni (i) uvedeného postupu, s alkylačným činidlom. Takouto výhodnou soľou je zlúčenina vzorca (I), kde substituentom v polohe 9 je CH₂-N(CH₃)_c+. Príklady farmaceutický prijateľných aniónov kvartérnych solí zlúčenín vzorca (I) zahŕňajú metánsulfonát a chlorid.

Vynález sa taktiež týka nových zlúčenín vzorca (I), kde R je Ci.₆alkoxy.

Čistenie a izolácia vodorozpustných analógov kamptotecínu

Zlúčeniny vzorca (I) alebo ich farmaceutický prijateľné soli, pripravené napríklad uvedeným spôsobom, je možné čistiť a izolovať metódami, ako je kolónová chromatografia a lyofilizácia alebo stripovanie. Výhodne sa však zlúčenina vzorca (I)

kde

R je vodík alebo C ^alkoxy,

R¹ je -O-R², -S-R³ alebo -N-(R⁴)(R⁵), R², R³, R⁴ a R⁵ sú rovnaké alebo rôzne a znamenajú vodík, Ci_₆alkyl, C₂.₆hydroxyalkyl, C_l.₍,dialkylamino-C₂.6alkyl, C_l.₆alkylamino-C₂.6alkyl, C₂.₆aminoalkyl alebo 3 - 7 členný nesubstituovaný alebo substituovaný karbocyklický kruh, alebo, ak je R¹ -N-(R⁴)(R⁵), môžu byť skupiny R⁴ a R⁵ spojené spolu s dusíkovým atómom, ku ktorému sú viazané, na substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklický kruh, ktorý môže obsahovať ďalšie heteroatómy, a

R⁶ je vodík, C|.₆ nesubstituovaný alebo substituovaný alifatický zvyšok alebo substituent, tvoriaci spolu s kyslíkovým atómom, cez ktorý je viazaný, farmaceutický prijateľnú esterovú skupinu, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ čistí a izoluje spôsobom, pri ktorom sa (a) pridá prvá kvapalina, ktoráje rozpúšťadlom pre zlúčeninu, v takom množstve, že aspoň časť zlúčeniny sa rozpustí za vzniku roztoku alebo suspenizie, (b) potom sa k roztoku alebo suspenzii, získaných v stupni (a), pridá druhá kvapalina, ktorá uľahčuje rekryštalizáciu rozpustenej zlúčeniny, a zlúčenina sa rekryštalizuje, a (c) filtráciou sa získá zlúčenina vzorca (I) alebo jej soľ.

Stupne (a) až (c) uvedeného postupu sa výhodne vykonávajú pri teplote, ktorá v podstate vylučuje nestabilitu zlúčeniny vzorca (I) alebo jej soli.

Spôsob čistenia podľa vynálezu poskytuje úspory nákladov a prácnosti v porovnaní napríklad s čistením chromatografií. Produkt, získaný týmto spôsobom, je tiež čistejší ako v prípade chromatografie. Izolácia produktu filtráciou šetrí čas a prácnosť v porovnaní napríklad s lyofilizáciou a s produktom sa manipuluje jednoduchšie ako s lyofilizovaným produktom. Okrem toho je možné počas opísaného spôsobu regulovať obsah soli, napríklad chloridov, v produkte. Obsah chloridov v surovom produkte sa môže napríklad pohybovať od < 100 % do > 200 % teórie pre monohydrochlorid a môže byť v prípade monohydrochloridu na túto hodnotu nastavený.

Rozpúšťadlom, použitým v stupni (a), môže byť akékoľvek rozpúšťadlo, ktoré v dostatočnom množstve rozpúšťa aspoň časť zlúčeniny vzorca (I) alebo jej soli za vzniku roztoku alebo suspenzie. Výhodne sa povaha a množstvo rozpúšťadla volí tak, aby došlo v podstate k úplnému rozpusteniu. Počas stupňa (a) je možné použiť mierne zohriatie, výhodne zohriatie na teplotu, ktorá v podstate zabraňuje nestabilite zlúčeniny, napríklad na teplotu pod približne 40 °C. Najvýhodnejšie je rozpúšťanie pri teplote miestnosti. Je výhodné používať asi 3 až 15 objemov rozpúšťadla na objem čistenej zlúčeniny.

Výhodným rozpúšťadlom pre stupeň (a) je voda, ale je možné použiť organické rozpúšťadlá alebo zmesi vody a miešateľných organických rozpúšťadiel. Je taktiež možné použiť zriedenú kyselinu chlorovodíkovú.

Po stupni (a) sa obyčajne vykonáva filtrácia na odstránenie prítomných nežiaducich nerozpustných látok. Filtráciu je možné vykonávať metódami, známymi odborníkom. Roztok alebo suspenzia, získaná v stupni (a), alebo jej fíltrát, ak sa aplikuje po stupni (a) filtračný stupeň, sa výhodne zahustí, napríklad použitím vákua. Výhodné je zahustenie pri teplote miestnosti.

V stupni (b) sa pridáva kvapalina, ktorá uľahčuje rekryštalizáciu roztoku alebo suspenzie. Je výhodné teplotu počas tohto stupňa udržiavať pod 40 °C, najvýhodnejšie na teplote miestnosti. Výhodné množstvo kvapaliny, pridávané v stupni (b), je asi 15 až 60 objemov kvapaliny na objem čistenej zlúčeniny. Ako príklady kvapalín, pridávaných v stupni (b), je možné uviesť acetón, acetonitril, nižšie alkoholy, ako je metanol, etanol, 1-propanol alebo 2-propanol, alebo tetrahydrofurán, výhodné 1-propanol alebo acetón. Prídavok rozpúšťadla v stupni (a) s nasledujúcim prídavkom kvapaliny v stupni (b) poskytuje výhody oproti napríklad súčastnému pridávaniu týchto kvapalín. Rozpúšťaním v stupni (a) je možné prevádzať omnoho rýchlejšie a omnoho dokonalejšie a je možné použiť filtračný stupeň na odstránie nerozpustných nečistôt. Okrem toho lepšie rozpúšťanie v stupni (a), dosiahnuté postupným prídavkom, umožňuje uskutočňovať rozpúšťanie za relatívne nízkych teplôt, a tak minimalizovať alebo odstrániť rozklad čistenej zlúčeniny.

Rekryštalizovaná zmes sa výhodne mieša alebo chladí až po plné vyzrážanie produktu, ktorý sa potom získa filtráciou. Produkt je možné sušiť, napríklad za vákua alebo za zahrievania.

Vodorozpustné analógy kamptotecínu vzorca (I) alebo ich solí je možné používať v množstve, účinnom pri inhibícii rastu nádorových buniek, citlivých proti týmto analógom, u zvierat, ktoré ich potrebujú, a vo farmaceutických prostriedkoch, schopných tejto inhibície. Cytotoxické zlúčeniny vzorca (1) sú účinnými inhibítormi čistené topoizomerázy (I). Farmaceutické prostriedky môžu obsahovať účinné množstvá zlúčeniny vzorca (I) alebo jej soli, inhibujúcc rast nádorových buniek, a inertný farmaceutický prijateľný nosič na riedidlo.

Zlúčenina vzorca (I) alebo jej soľ sa aplikuje v bežnej dávkovej forme, pripravenej v spojení terapeuticky účinného množstva zlúčeniny („účinná zložka“) so štandardnými farmaceutickými nosičmi na riedidlá bežnými postupmi. Tieto postupy môžu zahrňovať miešanie, granuláciu, lisovanie alebo rozpúšťanie zložiek podľa povahy požadovaného prípravku. Farmaceutické prostriedky môžu byť pripravované vo forme jednotkových dávok, vhodných na parenterálnu alebo orálnu aplikáciu.

Použitý farmaceutický nosič môže byť napríklad buď pevný alebo kvapalný. Príklady pevných nosičov sú laktóza, sádrovec, sacharóza, mastenec, želatína, agar, pektín, arabská guma, stearád horečnatý, kyselina stearová a podobne. Príklady kvapalných nosičov sú sirup, arašidový olej, olivový olej, voda a pod. Podobne môže nosič alebo riedidlo obsahovať známy retardačný materiál, ako je glycerylmonostearát alebo glyceryldistearát samotný alebo spolu s voskom, etylcelulózu, hydroxypropylmetylcelulózu, metylmetakrylát a pod.

Je možné používať širokú škálu farmaceutických foriem. Ak sa používa napríklad pevný nosič, môže byť prípravok tabletovaný, vkladaný do tvrdých želatínových kapsúl vo forme prášku, alebo paliet alebo vo forme tabletiek alebo pastiliek. Množstvá pevného nosiča sa môžu značne meniť, ale výhodne sa pohybuje od asi 25 miligramov do asi 1 gramu. Ak sa používa kvapalný nosič, môže byť prípravok vo forme sirupu, emulzie, mäkkých želatínových kapsúl, sterilného injekčného roztoku alebo suspenzie v ampulke, alebo fľaštičke alebo v nevhodnej kvapalnej suspenzii.

Na získanie stabilnej vodorozpustnej dávkovej formy sa farmaceutický prijateľná soľ zlúčeniny vzorca (1) rozpúšťa vo vodnom roztoku organickej alebo anorganickej kyseliny, napríklad v 0,3 M roztoku kyseliny jantárovej alebo výhodne kyseliny citrónovej. Ak nie je dostupná rozpustná soľ, rozpustí sa zlúčenina vzorca (I) vo vhodnom pomocnom rozpúšťadle, alebo ich kombinácii. Príklady takýchto rozpúšťadiel zahŕňajú, ale neobmedzujú sa na alkohol, propylénglykol, potyetylénglykol 300, polysorbát 80, glycerín a pod. v koncentrácii 0 až 60 % celkového objemu.

Kompozícia môže mať taktiež formu roztoku soli účinnej zložky vo vhodnom vodnom vehikule, ako je voda alebo izotonický roztok soli alebo dextrózy. Pri zlúčeninách vzorca (I), ktoré nemajú v polohe 9 bázický postranný reťazec, vytvorí rozpustnú soľ soľ alkalického kovu, napríklad sodná soľ karboxylátu, vzniknutého alkalickou hydrolýzou laktónu kruhu E.

Je zrejmé, že praktické výhodné dávky zlúčenín vzorca (I), používaných v prostriedkoch podľa vynálezu sa menia podľa konkrétneho použitého komplexu, konkrétneho formulovaného prípravku, spôsobu aplikácie a konkrétneho ošetrovaného miesta, pacienta a choroby. Optimálne dávky pre daný súbor podmienok je možné zistiť bežnými metódami stanovenia dávok.

Pri parenterálnej aplikácii zlúčenín vzorca (I) sa veľkosť obyčajne používaných dávok pohybuje do očakávanej úrovne asi 20 mg/m² povrchu tela za deň počas jedného až piatich dní.

V praxi však môžu byť dávkované množstvá väčšie. Výhodne sa aplikácia opakuje asi každý štvrtý týždeň v štyroch liečebných kúrach. Pri orálnych aplikáciách sa veľkosť zvyčajne používaných dávok pohybuje do očakávanej úrovne asi 20 mg/m² povrchu tela za deň počas jedného až piatich dní a liečebné kúry sa opakujú vo vhodných intervaloch v praxi však môžu byť dávkované množstvá väčšie.

Spôsob inhibície rastu živočíšnych nádorových buniek, citlivých proti zlúčenine vzorca (I) alebo jej soli, zahŕňa podávanie účinného množstva, inhibujúceho rast nádoru, tejto zlúčeniny živočíchovi, napadnutému uvedenými nádorovými bunkami. V priebehu liečby môže byť účinná zložka podávaná parenterálne alebo orálne denne v množstve so všeobecnou očakávanou hornou hranicou asi 20 mg/m² telesného povrchu počas 1 až 5 dní s opísaným opakovaním liečebných kúr vo vhodných intervaloch. V praxi môžu byť dávkované množstvá väčšie.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Rekryštalizácia kamptotecínu (čínsky materiál)

31,1 g (20 S) kamptotecínu sa za intenzívneho miešania pri 155 °C rozpustí v 620 ml N,N-dimetylformamidu. Roztok sa pomaly ochladí na teplotu miestnosti. Po dokončení kryštalizácie za miešania sa suspenzia prefiltruje a získa sa svetložltá pevná látka. Analýza HPLC ukazuje asi 98 % kamptotecínu s dvomi menšími nečistotami (každá asi 1 %) a dlhšiu retentačnú dobu než pri kamptotecíne. Vzorka sa premyje metanolom a suší na vzduchu. Získa sa

24,9 g vysušenej látky, 1.1. 263 - 265 °C (korigovaný výťažok 91 %).

Príklad 2

Rekryštalizácia kamptotecínu (čínsky materiál)

301 g surového kamptotecínu sa za miešania suspenduje v 3000 ml Ν,Ν-dimetylformamidu. Zmes sa mieša asi 14 h pri približne 100 °C a pomaly sa za miešania ochladí na teplotu miestnosti. Pevná látka sa zhromažďuje vhodným spôsobom a premyje metanolom. Po vykonanom sušení do konštantnej hmotnosti 250 g sa produkt suspenduje počas > 12 h v 2500 ml (10 objemov v jednotkách hmotnosť/objem) Ν,Ν-dimetylformamidu s teplotou 100 °C. Suspenzia sa pomaly za miešania ochladí na teplotu miestnosti. Produkt sa zhromaždi, premyje metanolom a suší do konštantnej hmotnosti 236 g (celkový korigovaný výťažok 86 %), 1.1. 263 - 265 °C.

Príklad 3

Rekryštalizácia kamptotecínu (indický materiál)

291 g (20 S) kamptotecínu sa za miešania a zohrievania po reflux rozpustí v 10,2 1 kyseliny octovej. Pridá sa asi 10 % hmotnostných aktívneho uhlia (29 g) a horúca suspenzia sa prefiltruje cez Celit. Získaná zmes sa zahusti destiláciou na objem asi 5,8 1. Zmes sa za miešania ochladí na teplotu miestnosti, pevný produkt sa zhromaždí, premyje metanolom a suší do konštantnej hmotnosti. Získa sa asi 230 g látky. Podľa HPLC má vzorka obsah 98 % hmotnostných kamptotecínu.

Časť (23,4 g) vzorky (20 S) kamptotecínu, čisteného uvedeným spôsobom, sa asi 24 h mieša s 234 ml Ν,Ν-dimetylformamidu s teplotou 100 °C. Suspenzia sa za miešania ochladí na teplotu miestnosti a pevný kamptotecín sa zhromaždí filtráciou. Po premytí metanolom a vysušení do konštantnej hmotnosti má produkt pri HPLC 99 % kamptotecínu.

Príklad 4

Rekryštalizácia kamptotecínu (čínsky materiál)

1500 g čínskej vzorky (20 S) kamptotecínu sa 24 h mieša pri 100 °C s 15,0 1 Ν,Ν-dimetylformamidu. Suspenzia sa za miešania počas 24 h ochladí na teplotu miestnosti, prefiltruje a premyje 2 x 7,5 I metanolu pri vzniku svetlo žltej pevnei látky. Pevná látka sa suší vo vákuu a získa sa 1277 g látky.

1277 g (20 S) kamptotecínu z uvedeného postupu sa 24 h mieša pri 100 °C s 12,8 1 Ν,Ν-dimetylformamidu. Suspenzia sa za miešania počas 24 h ochladí na teplotu miestnosti, prefiltruje a premyje 2 x 6,4 1 metanolu. Svetložltá pevná látka sa suší vo vákuu. Získa sa 1197 g látky. Produkt podľa HPLC má obsah > 99 % kamptotecínu oproti štandardnej vzorke látky.

Príklad 5

Príprava 10-hydroxykamptotecínu

a) Príprava tetrahydrokamptotecínu

Do vysokotlakového miešaného autoklávu z nehrdzavejúcej ocele s objemom 22 1 sa predloží suspenzia, obsahujúca 1000 g kamptotecínu v ľadovej kyseline octovej. Do reaktora sa pridá 500 g 5 % platiny na uhlí, suspendovanej ľadovou kyselinou octovou tak, že sa pri reakcii použije celkovo asi 10 1 kyseliny octovej (objemu v jednotkách objem/hmotnosť proti kamptotecínu). Pridá sa 75 ml dimetylsulfoxidu a reaktor sa tesne uzavrie. Po premytí dusíkom sa do miešaného reaktora vpustí vodík s tlakom približne 490 kPa. Tento približný tlak vodíka sa udržuje počas celej nasledujúcej redukcie. Reaktor sa postupne zo hreje na teplotu asi 65 °C a starostlivo sa sleduje príjem spotreby vodíka. Po asi 6 h spotreba vodíka v podstate ustane, i keď je možné v reakcii spoľahlivo pokračovať minimálne 24 h bez pozorovateľného poklesu výťažku produktu, Reakčná zmes sa ochladí asi na 30 °C, odplyní sa do atmosféry a vyberie sa z reaktora. Reaktor sa premyje asi 11 1 ľadovej kyseliny octovej. Na odstránenie suspendovaného katalyzátora sa celkový objem kyseliny octovej prefiltruje a spojené objemy sa analyzujú v HPLC kvôli stanoveniu obsahu tetrahydrokamptotecínu (približne 874 g, výťažok 89 %). Po skončení analýzy sa produk priamo v roztoku kyseliny octovej oxiduje opísaným spôsobom.

b) Príprava 10-hydroxykamptotecínu

Približne jedna polovica opísaného roztoku tetrahydrokamptotecínu v kyseline octovej (asi 10,4 1 objemu roztoku, obsahujúceho približne 398 g, 1,13 mol tetrahydrokamptotecínu) sa predloží do miešanej sklenenej nádoby s objemom 22 1. Roztok sa destiláciou zahustí na asi 40 % pôvodného objemu (4 1). Roztok sa zriedi takým istým množstvom destilovanej vody a mieša sa pri približne 20 °C. Vznikne hustá biela suspenzia zrazeniny. Suspenzia sa rýchlo mieša a rýchle sa pridá 728 g (2,0 ekv.) jódbenzéndiacetátu. Pozoruje sa mierna exoterma asi do 35 °C. V troch približne rovnakých dieloch sa v hodinových intervaloch pridá ďalších 400 g (1,1 ekv.) jódbenzéndiacetátu. Po skončení prídavku sa suspenzia mieša asi 14 h. Suspenzia sa predestiluje a v niekoľkých častiach sa pridá celkove 6 1 zmesi kyselina octová - voda 1 : 1 tak, aby bol v prvej časti destilácie zachovaný približne konštantný objem. Po zhromaždení asi 12 1 sa destilácia zastaví a suspenzia sa mieša približne 16 h pri teplote miestnosti. Produkt sa zhromaždí a premyje metanolom. Produkt sa suší do konštantnej hmotnosti 398 g (výťažok, korigovaný na zistený obsah, 88 %). Produkt s teplotou topenia 267 - 268 °C obsahuje približne 1 % kamptotecínu.

Príklad 6

Príprava 10-hydroxykamptotecínu

1720 ml vody sa pomaly pridá k roztoku 127 g (20 S) tetrahydrokamptotecínu v 1720 ml kyseliny octovej. Po skončení prídavku sa získa hustá krémovo zafarbená suspenzia, ktorá sa ťažko mieša.

Za rýchleho miešania sa počas približne 6 min. pridá 314 g (2,0 ekv.) jódbenzéndiacetátu. Pri rozpustení takmer všetkej zrazeniny sa farba suspenzie mení na tmavozelenú. V priebehu niekoľkých minút suspenzia vybledne do žltej farby za vzniku väčšieho množstva zrazeniny. Teplota stúpne maximálne na 36 °C. V miešaní sa pokračuje 1 h pri teplote miestnosti. Po tomto sa v priebehu 1 min. pridá ďalších 76 g (0,5 ekv.) jódbenzéndiacetátu. Suspenzia sa mieša ďalšiu (1) h bez pozorovateľnej exotermy. Po tomto sa za pokračujúceho miešania pridá ďalších 63 g (0,4 ekv.) jódbenzéndiacetátu. Po ďalších 1,5 h sa pridá ďalších 16 g (0,1 ekv.) jódbenzéndiacetátu, takže celkový prídavok oxidačného činidla predstavuje 3,0 ekvivalentu.

Suspenzia sa mieša 18 h pri teplote miestnosti. Potom sa zahriatím zmesi oddestiluje rozpúšťadlo za atmosférického tlaku. Opakovane sa pridáva celkom 5160 ml roztoku kyselina octová - voda 1 : 1 na udržanie približne konštatného objemu počas prevažnej časti destilácie. Suspenzia sa nakoniec zahustí na konečný objem približne 1720 ml. Počiatočný odobraný destilát je zakalený a pri odoberaní sa delí na dve fázy. Ťažšia fáza destilátu je tvorená väčšinou jódbenzénom. Destilácia sa zastaví a žltá suspenzia sa 24 h mieša do vychladnutia pri teplote miestnosti. Pevná látka sa zhromaždí filtráciou a premyje dvakrát po 860 ml metano lu, pričom sa metanol odstráni filtráciou. Zhromaždená pevná látka sa suší vo vákuu. Po vysušení sa získa 171 g produktu (výťažok izolácie 91 %, korigovaný na čistotu produktu, stanovenú HPLC voči štandardnej vzorke látky). Izolovaný produkt obsahuje približne 1 % kamptotecínu ako vedľajší produkt.

Príklad Ί

Príprava (20 S) 9-N,N-dimetylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecínhydro-chloridu

Do banky s objemom 22 1 sa predloží 428 g 10-hydroxy-kamptotecinu. Po prídavku 4280 ml metylénchloridu a 2140 ml 1-propanolu sa do miešanej suspenzie počas asi 5 min. pridá 259 g bis(dimctylamino)mctánu. Suspenzia sa mieša a pomocou HPLC sa periodicky monitoruje prítomnosť východiskovej látky. Po 5 h nezostáva detegovateľná (< 0,1 %) východisková látka. Po dobe rekcie asi 6 h sa počas asi 2 h nepretržite pridáva 514 g koncentrovanej vodnej kyseliny chlorovodíkovej v 2140 ml 1-propanolu. V miešaní sa pokračuje asi 16 h. Produkt sa zhromaždí filtráciou a premyje metylénchloridom. Produkt sa vysuší do konštantnej hmotnosti a získa sa 415 g (výťažok 91 %) titulnej zlúčeniny.

Príklad 8

Príprava (20 S) 9-N,N-dimetyaminometyl-10-hydroxy-kamptotecínacetátu

2,60 mmol (20 S) 10-hydroxykamptotecínu reaguje s 6,08 mmol bis(dimetylamino)metánu v 15,45 ml kyseliny octovej. Po reakcii sa izoluje titulná zlúčenina.

Príklad 9

Príprava (20 S) 9-morfolínometyl-10-hydroxy-kamptotecínacetátu

Titulná zlúčenina sa pripraví spôsobom podľa príkladu 8 náhradou bis(dimetylamino)metánu bis(N-morfolíno)metánom.

Príklad 10

Príprava (20 S) 9-N-metylpiperazinylmetyl-10-hydroxy-kamptotecínacetátu

Titulná zlúčenina sa pripraví spôsobom podľa príkladu 8 náhradu bis(dimetylamino)metánu bis(N-metylpiperazinyl)metánom.

Príklad 11

Príprava (20 S) 9-(4-piperidínopiperidinyl)metyl-10-hydroxy-kamptotecín-acetátu

Titulná zlúčenina sa pripraví spôsobom podľa príkladu 8 náhradou bis(dimetylamino)metánu bis(4-piperidínopiperidinyl)metánom.

Príklad 12

Príprava (20 S) 9-trimetylamóniummetyl-10-hydroxy-kamptotecínmetán-sulťonátu mg 9-N,N-dimetylaminometyl-10-hydroxykamptotecínacetátu, pripraveného podľa príkladu 8, sa rozpusti približne v 70 ml CH₂C1₂ a prefiltruje. Filtrát sa spojí s metylmetánsulfonátom (1 ml), ochladí a čiastočne zahustí v prúde argónu. Po 4 h sa rozpúšťadlo zahustí na polovicu objemu a ochladí. Zrazenina sa prefiltruje, rozpustí vo vode (10 ml) premyje atylacetátom (3 x 10 ml) a potom petroléterom (10 ml) a lyofilizuje za vzniku titulnej zlúčeniny.

Príklad 13

Príprava (20 S) 9-cyklopropylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecíny-hydrochloridu

9-cyklopropylaminomety 1-1O-hydroxykamptotecínacetát sa pripraví spôsobom podľa príkladu 8, náhradou bis(dimetylamino)metánu bis(cyklopropyl-amino)metánom. Acetát sa prevedie na titulný hydrochlorid pôsobením 0,1 NHC1.

Príklad 14

Príprava (20 S) 9-etoxymetyl-10-hydroxykamptotecínu

Titulná zlúčenina sa pripraví refluxovaním (20 S) 9-Ν,Ν-dimetylaminometyl-1O-hydroxy-kamptotecínydrochloridu, pripraveného spôsobom podľa príkladu 7, s 95 % etanolom.

Príklad 15

Príprava (20 S) 9-(N-metylanilínometyl)-10-hydroxy-kamptotecínu

Titulná zlúčenina sa pripraví spôsobom podľa príkladu 8 náhradou bis(dimetylamino)metánu bis(N-metylanilíno)metánom.

Príklad 16

Príprava (20 S) 9-cyklohexylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecínhydrochloridu

Titulná zlúčenina sa pripraví spôsobom podľa príkladu 7 náhradou bis(dimetylmino)metánu bis(cyklohexylamino)metánom.

Príklad 17

Príprava (20 S) 9-N,N-dimetylaminotetyltiometyl-10-hydroxy-kamptotecin-hydrochloridu

Zmes (20 S) 9-N,N-dimetylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecín-hydrochloridu (100 mg, pripraveného spôsobom podľa príkladu 7 a 2-dimetylaminoetántiolu (13 ml) sa 5 h zahrieva pri 85 °C pod argónom. Nerozpustná pevná látka (prebytočný tiol) sa odfiltruje a filtrát sa zahustí vo vákuu na olejovitý zvyšok, ktorý sa prečistí pomocou MPLC s rezervnými fázami. Produkt sa eluuje s použitím 5 % až 10 % metanolu vo vode za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.

Príklad 17

Príprava (20 S) 9-N,N-dimetylaminoetyltiometyl-10-hydroxykamptotecín-hydrochloridu

Zmes (20 S) 9-N,N-dimetylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecínhydrochloridu (100 mg), pripraveného spôsobom podľa príkladu 7, a 2-dimetylaminoetántiolu (13 ml) sa 5 h zahrieva pri 85 °C pod argónom. Nerozpustná pevná látka (prebytočný tiol) sa odfiltruje a filtrát sa zahustí vo vákuu na olejovitý zvyšok, ktorý sa prečistí pomocou MPLC s reverznými fázami. Produkt sa eluuje s použitím 5 % a 10 % metanolu vo vode za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.

Príklad 18

Príprava (20 S) 9-N,N-dimetylaminoetyloxymetyl-10-hydroxy-kamptotecín-hydrochloridu.

Zmes 9-N,N-dimetylaminometyl-10-hydroxy-kamptoteeínu vo forme voľnej bázy, pripraveného podľa prvého reakčného stupňa v príklade 7 (100 mg) v 2-dimetylaminoetanole (4 ml), obsahujúca tri kvapky 3N HC1, sa 24 h zahrieva pri 80 °C pod argónom. K polopevnej reakčnej zmesí sa pridá voda (5 ml) a izopropylalkohol (10 ml) a filtráciou sa získa titulná zlúčenina.

Príklad 19

Príprava (20 S) 9-N,N-dimetylaminoetylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecín-dihydrochloridu (20 S) 9-N,N-dimetylaminoetylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecínacetát sa pripraví spôsobom podľa príkladu 8 náhradou bis(dimetylamino)metánu bis(dimetylaminoetylamino)metánom. Na získaný acetát sa pôsobí vodou (10 ml) a izopropylalkoholom (10 ml) obsahujúcim 3N HCI (3 ml). Vyzrážaná pevná látka sa zhromaždí, premyje izopropylalkoholom a vysuší na titulnú zlúčeninu.

Príklad 20

Príprava (20 R, S) 9-N,N-dimetylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecínacetátu

Titulná zlúčenina sa pripraví spôsobom podľa príkladu 8, ale východiskovou látkou je racemický 10-hydroxykamptotecín, pripravený postupom podľa Waniho a d., J. Med. Chem. 23, 554 (1980). Racemický 10-hydroxykamptotecín je možné pripraviť tak isto z (20 S) 10-hydroxykamptotecínu týmto postupom:

a) Príprava 10-hydroxy-20-chlór-20-deshydroxy-kamptotecínu

7,8 g 10-hydroxykamptotecínu sa suspenduje v 780 ml metylénchloridu pri teplote miestnosti. Pridá sa 16 ml pyridu a potom 22 ml tionylchloridu. Zmes sa mieša v atmosfére dusíka. Pevná látka sa rýchlo rozpustí za číreho jasne žltého roztoku, ktorý asi po 15 h zhnedne. Roztok sa ochladí na 0 °C a opatrne sa pridá 780 ml 4N vodnej kyseliny chlorovodíkovej za vzniku tmavočervenej suspenzie. Po zahrievaní na teplotu miestnosti, trvajúcom asi 2,5 h, sa pevný produkt zhromaždí filtráciou, premyje vodou a suší na vzduchu, získa sa 6,57 g žltej pevnej látky, 1.1. 215 - 218 (rozkl.). Rozkladom z reakčných materských lúhov sa izoluje ďalších 1,2 g produktu.

b) Príprava 10-hydroxy-20-deshydroxykamptotecínu

6,03 g produktu uvedenej reakcie (a) sa suspenduje s 5,15 g aktivovaného zinkového prachu v 300 ml ľadovej kyseliny octovej. Vzniknutá hustá suspenzia sa intenzívne mieša pri teplote miestnosti. Po asi 24 h sa pridá 6 ml 4N vodnej kyseliny chlorovodíkovej a v miešaní sa pokračuje niekoľko hodín. Žltooranžová suspenzia sa zriedi 1200 ml zmesi metanolmetylchlorid 1 : 1 (objem/objem) za vzniku číreho hnedého roztoku s určitým množstvom suspendovaných častíc zinku. Roztok sa prefiltruje cez Celit a zahustí vo vákuu za vzniku tmavohnedej pevnej látky. Pevný produkt sa dôkladne premyje vodou, izoluje filtráciou a suší na vzduchu do konštantnej hmotnosti 5,36 g, 1.1. 296 °C (rozkl.).

c) Príprava (20 R,S) 10-hydroxykamptotecinu

2,51 g produktu, získaného uvedeným spôsobom (b), sa rozpustí v 25 ml Ν,Ν-dimetylformamidu a pridá sa 1,6 ml 40 % vodného dimetylaminu za vzniku veľmi tmavého roztoku. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti za prebublávania roztoku vzduchom. Po 5,5 h sa reakčná zmes zriedi 75 ml vody za vzniku žltohnedej zrazeniny. Pevný produkt sa zhromaždí filtráciou, premyje vodou a suší na vzduchu do konštantnej hmotnosti 1,97 g. Táto látka sa použije na prípravu racemickej titulnej zlúčeniny podľa príkladu 8.

Príklad 21

Príprava (20 S) 9-N,N-dimetylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecíndihydrochloridu

9-N,N-dilmetylaminometyl-10-hydrokamptotecínacctát (0,389 g) pripravený podľa príkladu 8, sa rozpustí v 0,4 N kyseliny chlorovodíkovej (6 ml), lyofilizuje a odparuje 40 h za vysokého vákua za vzniku titulnej zlúčeniny.

Príklad 22

Rekryštalizácia (20 S) 9-N,N-dimetylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecín-hydrochloridu

101 g hydrochloridu titulnej zlúčeniny (obsahujúceho 84,0 g voľnej bázy) sa rozpustí miešaním pri teplote miestnosti s 1000 ml deionizovanej vody. Získaná riedka suspenzia sa prefiltruje cez vrstvu Celitu. K premytiu filtračného koláča sa použije 500 ml vody a čisté filtráty sa spoja. Filtrát sa zahustí destiláciou za zníženého tlaku na približne 1/2 objemu. Vznikne hustá žltá suspenzia. Suspenzia sa za miešania postupne zriedi prídavkom 3000 ml acetónu. Svetložltá suspenzia sa mieša pri teplote miestnosti celkovo 16 h. Pevný produkt sa zhromaždí filtráciou a suší vo vákuu do konštantnej hmotnosti. Získa sa 86,8 g produktu (výťažok, korigovaný na obsah voľnej bázy, 91 %),

1.1. 229 - 230 °C.

Príklad 23

Rekryštalizácia (20 S) 9-N,N-dimetylaminometyl-10-hydroxy-kamptotecín-hydrochloridu

124 g titulnej zlúčeniny (obsahujúcej 90 g volnej bázy) sa mieša pri teplote miestnosti s 1240 ml deionizovanej vody. Vzniknutá riedka suspenzia sa prefiltruje cez Celit. Po premytí filtračného koláča vodou sa spojené vodné vrstvy zahustia na 1/2 objemu a potom sa zriedi 1860 ml (15 objemov objem/hmotnosť) 1-propanolu. Roztok sa zahustí vákuovou destiláciou azeotropickým varom s ďalšími 3720 ml (30 objemov objem/hmotnosť) 1-propanol, pridanými po častiach. Destilácia sa prevádza do konečného objemu približne 1860 ml (15 objemov objem/hmotnosť). Suspenzia sa mieša niekoľko hodín pri teplote miestnosti k dokončeniu kryštalizácie. Pevný produkt sa zhromaždí a suší do konštantnej hmotnosti. Získaný produkt má hmotnosť 113 g (výťažok 92 %, korigovaný na obsah voľnej bázy), 229 - 230 °C.

Claims (36)

1. Spôsob prípravy zlúčeniny vzorca (1b) alebo farmaceutický prijateľnej soli tejto zlúčeniny, pričom táto zlúčenina všeobecného vzorca (Ib) má nasledujúcu štruktúru v ktorej:

R je vodík alebo alkoxyskupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka,

R¹ je skupina -O-R², -S-R³ alebo -N-(R⁴)(R⁵),

R², R³, R⁴ a R⁵ sú rovnaké alebo rôzne a znamenajú vodík, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 6 atómov uhlíka, hydroxyalkylovú skupinu obsahujúcu 3 až 6 atómov uhlíka, Cj. ,₆dialkylamino-C₂.₆alkylovú skupinu, C|-,,alkylamino-C₂-₆alkyl, aminoalkylovú skupinu obsahujúcu 2 až 6 atómov uhlíka alebo 3-7 členný nesubstituovaný alebo substituovaný karbocyklický kruh, alebo, ak je R¹ skupina -N-(R⁴)(R⁵), môžu byť skupiny R⁴ a R⁵ spojené spolu s dusíkovým atómom, ku ktorému sú viazané, na substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklický kruh, ktorý môže obsahovať ďalšie heteroatómy, a

R⁶ je vodík, nesubstituovaný alebo substituovaný alifatický zvyšok obsahujúci 1 až 6 atómov uhlíka alebo substituent, tvoriaci spolu s kyslíkovým atómom, cez ktorý je viazaný, farmaceutický prijateľnú esterovú skupinu, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa stupne:

(a) čistenie kamptotecínu alebo 11-C|.₆alkoxykamptotecínu, (b) hydrogenáciu uvedeného kamptotecínu alebo 11-C_b6 alkoxy kamptotecínu na 1,2,6,7-tetrahydrokamptotecín alebo 11 -Ci.₆alkoxy-1,2,6,7-tetrahydrokamptotecín, (c) oxidáciu uvedeného 1,2,6,7-tetrahydrokamptotecínu alebo ll-C₁.₆alkoxy-l,2,6,7-tetrahydrokamptotecínu na 10-hydroxykamptotecín alebo 10-hydroxy-Cj.₆alkoxykamptotecín, a (d) prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca (Ib), v ktorom R¹ znamená amínovú skupinu -N(R⁴)(R⁵) a R⁶ znamená atóm vodíka Mannichovou reakciou, pričom stupeň (d) zahŕňa tieto stupne:

(i) prípravu zlúčeniny vzorca (Ib), kde R¹ je amínová skupina -N-(R⁴)(R⁵) a R⁶ je vodík, alebo jej farmaceutický prijateľné soli reakciou 10-hydroxykamptotecínu alebo 10-hydroxy-11-C₁,₆alkoxykamptotecínu so zlúčeninou všeobecného vzorca (II)

CH₂[-N-(R⁴)(R⁵)]₂ (II), v ktorom:

R⁴ a R^s majú rovnaký význam, ako bolo uvedené pri vzorci (Ib), a (ii) prípadne sa (a) pripraví zlúčenina vzorca (Ib), kde R¹ jc -O-R² alebo -S-R³, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ konverziou aminoskupiny zlúčeniny pripravenej v stupni (i) na -O-R² alebo -S-R³, a/alebo (b) sa pripraví zlúčenina vzorca (Ib), kde R⁶ má iný význam ako vodík alebo jej farmaceutický prijateľná soľ konverziou hydroxylovej skupiny v polohe 10 zlúčeniny pripravenej v stupni (i) na skupinu -OR⁶, kde R⁶ má s výnimkou vodíka rovnaký význam, ako bolo uvedené pri všeobecnom vzorci (Ib).

2. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa t ý m , že sa v stupni (ii) aminoskupina -N-(R⁴)(R⁵) prevedie na -O-R² zahrievaním zlúčeniny, pripravenej v stupni (i), s alkoholom vzorca HO-R², R² má význam, uvedený v nároku 1.

3. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že sa v stupni (ii) aminoskupina -N-(R⁴)(R⁵) prevedie na -S-R³ zahrievaním zlúčeniny, pripravenej v stupni (i), s tiolom vzorca HS-R³, kde R³ má význam uvedený v nároku 1.

4. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa t ý m , že R' v zlúčenine vzorca (Ib) je dimetylaminoskupina, N-morfolínová skupina, N-metyl-piperazinylová skupina, (4‘-piperidín)N-piperidinylová skupina, cyklohexylamínová skupina, N-metylanilínová skupina, etoxyskupina, cyklopropylamínová skupina, N,N-dimetylaminoetoxyskupina, Ν,Ν-dimetylaminoetyltioskupina, N,N-dimetylaminoetylamínová skupina alebo metylamínová skupina.

5. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že R¹ je dimetylamínová skupina alebo N-morfolínová skupina.

6. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že stupeň (i) sa vykonáva v kvapalnom prostredí obsahujúcom acetonitril alebo alkohol obsahujúci 1 až 4 atómy uhlíka.

7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa t ý m , že kvapalné prostredie obsahuje alkohol obsahujúci 1 až 4 atómy uhlíka a inertný chlórovaný uhľovodík.

8. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa t ý m , že kvapalné prostredie obsahuje alkohol vybraný zo skupiny zahŕňajúcej alkoholy obsahujúce 1 až 4 atómy uhlíka a dichlórmetán.

9. Spôsob podľa ktoréhokoľvej z nárokov 1 až 8, v y z n a č u j ú c i sa tým, že uvedený 10-hydroxykamptotecín alebo 10-hydroxy-l 1-C|._flalkoxykamptotccín sa pripraví oxidáciou zodpovedajúceho 1,2,6,7-tetrahydrokamptotecínu alebo 11-Cj.ealkoxy-1,2,6,7-tetrahydrokamptotecínu zahŕňajúcou stupeň kontaktovania uvedeného tetrahydrokamptotecínu alebo 11-alkoxytetrahydrokamptotecínu s oxidačným činidlom v kvapalnom reakčnom prostredí, ktoré obsahuje kvapalinu, zvolenú tak, aby sa aspoň časť vznikajúceho 10-hydroxykamptotecinu alebo 10-hydroxy-l 1-alkoxykamptotecínu počas reakcie zrážala, s tou podmienkou, že ak sa použije ako východisková látka tetrahydrokamptotecín, je uvedené oxidačné činidlo buď vybrané zo skupiny zahŕňajúcej peroxysíran draselný, jodozylbenzén, ester jodozylbenzénu, jodistan sodný a jodistan draselný, alebo kvapalina použitá v uvedenom kvapalnom reakčnom prostredí nie jc samotný metanol, etanol, chloroform, benzén, dichlórmetán, dioxán alebo voda.

10. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa t ý m , že uvedené kvapalné reakčné prostredie obsahuje zmes vody a organického rozpúšťadla, ktoré je vybrané zo skupiny zahŕňajúcej kyselinu octovú, acetón a N,N-dimetylformamid.

11. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že uvedené kvapalné reakčné prostredie obsahuje zmes vody a alkoholu obsahujúceho 1 až 4 atómy uhlíka.

12. Spôsob podľa nároku 11, vyznačujúci sa t ý m , že uvedený alkohol obsahujúci 1 až 4 atómy uhlíka je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej metanol, etanol a izopropylalkohol.

13. Spôsob podľa nároku 10, 11 alebo 12, vyznačuj ú c i sa tým, že uvedená zmes vody a organického rozpúšťadla obsahuje od 25 do 75 objemových percent vody.

14. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 10 až 13, vyznačujúci sa tým, že uvedená zmes vody a organického rozpúšťadla obsahuje 50 objemových percent vody.

15. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 9 až 14, vyznačujúci sa tým, že oxidačným činidlom je ester jodozylbenzénu.

16. Spôsob podľa nároku 15, vyznačujúci sa t ý m , že esterom je ester vzorca PhI(OR⁷)2, kde Ph je fenylová skupina, R⁷ v každej skupine -OR⁷ môže mať rovnaký alebo odlišný význam, pričom znamená vodík, skupinu -C(O)-R⁸ alebo skupinu -SO2-R⁹, R⁸ a R⁹ sú nesubstituované alebo substituované uhľovodíkové zvyšky a R⁷ v aspoň jednej zo skupín -OR⁷ má iný význam ako vodík.

17. Spôsob podľa nároku 15 alebo 16, vyznačujúci sa tým, že esterom je jódbenzén(bis)trifluóracetát, jódbenzéndiacetát alebo hydroxy(tosyloxy)-jódbenzén.

18. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že uvedený 1,2,6,7-tetrahydrokamptotecín alebo 1 l-C|.₆alkoxy-l,2,6,7-tetrahydrokamptotecín sa pripraví hydrogenáciou kamptotecinu alebo 1 l-Ci.₆alkoxy-kamptotecínu zahŕňajúcou stupeň kontaktovania kamptotecinu alebo 1 l-C|.₆alkoxy-kamptotecínu s vodíkom a hydrogenač ným katalyzátorom v prítomnosti moderátora hydrogenačného katalyzátora, kde uvedený moderátor je vybraný z hydrogenačných katalyzátorových jedov.

19. Spôsob podľa nároku 18, vyznačujúci sa t ý m , že moderátorom hydrogenačného katalyzátora je zlúčenina síry.

20. Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa t ý m , že moderátorom hydrogenačného katalyzátora je dimetylsulfoxid.

21. Spôsob podľa nároku 18, vyznačujúci sa t ý m , že hydrogenačným katalyzátorom je vzácny kov.

22. Spôsob podľa nároku 21, vyznačujúci sa t ý m , že hydrogenačným katalyzátorom je platina.

23. Spôsob podľa nároku 22, vyznačujúci sa t ý m , že platina je nanesená na uhlí alebo oxide hlinitom.

24. Spôsob podľa nároku 18, vyznačujúci sa t ý m , že hydrogenácia sa vykonáva za vyššieho ako atmosférického tlaku vodíka.

25. Spôsob podľa nároku 24, vyznačujúci sa t ý m , že tlak je volený v oblasti tlakov vyšších ako 241 kPa.

26. Spôsob podľa nároku 18, vyznačujúci sa t ý m , že sa použije kvapalné reakčné prostredie, v ktorom je uvedený tetrahydrokamptotecín alebo 11-C_]f,alkoxytetrahydrokamptotecín rozpustný.

27. Spôsob podľa nároku 26, vyznačujúci sa t ý m , že uvedené kvapalné reakčné prostredie obsahuje kyselinu octovú.

28. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že uvedený kamptotecín alebo 11-C₁₆alkoxykamptotecín sa čistí metódou zahŕňajúcou:

prvý stupeň, pri ktorom sa zmes obsahujúca kamptotecín alebo 1 l-Cj^alkoxykamptotecín a jeho nečistoty' uvádza do styku s rozpúšťadlom, ktoré je schopné z uvedenej zmesi oddeliť alkaloidy iné ako uvedený kamptotecín a 11-C₍.₆alkoxykamptotecín a rovnako nečistoty, ktoré sú schopné spomaľovať hydrogenáciu uvedeného kamptotecinu alebo 11 -C^alkoxykamptotccinu na zodpovedajúce 1,2,6,7-tetrahydro-analógy, a rozpustenie aspoň časti uvedeného kamptotecinu alebo 11-C_;.₅alkoxy-kamptotecínu alebo uvedených nečistôt alebo obidvoch, a druhý stupeň, keď sa uvedený kamptotecín alebo 11-C₁₆alkoxykamptotecin oddelí.

29. Spôsob podľa nároku 28, vyznačujúci sa t ý m , že kamptotecín alebo 11-C|.₆alkoxykamptotecín, oddelený v druhom stupni, je v podstate bez nečistôt, spomaľujúcich hydrogenáciu kamptotecinu alebo 1 l-C^alkoxy-kamptotecínu na zodpovedajúce 1,2,6,7-tetrahydroanalógy.

30. Spôsob podľa nároku 28, vyznačujúci sa t ý m , že uvedeným rozpúšťadlom je N,N-dimetylformamid, N-metylpyrolidón, kyselina octová, kyselina trifluóroctová, dimetylsulfoxid, zmes kyseliny octovej a dimetylsulfoxidu, zmes etanolu a dimetylsulfoxidu alebo zmes kyseliny octovej a kyseliny chlorovodíkovej.

31. Spôsob podľa nároku 28, vyznačujúci sa t ý m , že v prvom stupni sa použije prirodzene produkovaný kamptotecín.

32. Spôsob podľa nároku 31, vyznačujúci sa t ý m , že sa použije kamptotecín produkovaný rastlinou druhu Nothapodyles foetida, a rozpúšťadlom, použitým v prvom stupni, je kyselina octová.

33. Spôsob podľa nároku 32, vyznačujúci sa t ý m , že kamptotecín sa po čistení v kyseline octo14 vej ďalej aspoň čiastočne rozpustí v N,N-dimetylformamide a oddelí sa od nej.

34. Spôsob podľa nároku 32, vyznačujúci sa t ý m , že sa pridá látka absorbujúca nečistoty.

35. Spôsob podľa nároku 34, vyznačujúci sa t ý m , že látkou absorbujúcou nečistoty je aktívne uhlie.

36. Spôsob podľa nároku 31, vyznačujúci sa t ý m , že sa použije kamptotecín, produkovaný stromom druh Camptolheca accuminata, a rozpúšťadlom, použitým v prvom stupni, je N,N-dimetylformamid.