SI9720048A - Derivati piridazino /4,5-b/-kinolin 5-oksida, njihova priprava in njihova uporaba kot antagonisti glicina - Google Patents

Derivati piridazino /4,5-b/-kinolin 5-oksida, njihova priprava in njihova uporaba kot antagonisti glicina Download PDF

Info

Publication number
SI9720048A
SI9720048A SI9720048A SI9720048A SI9720048A SI 9720048 A SI9720048 A SI 9720048A SI 9720048 A SI9720048 A SI 9720048A SI 9720048 A SI9720048 A SI 9720048A SI 9720048 A SI9720048 A SI 9720048A
Authority
SI
Slovenia
Prior art keywords
quinoline
oxo
hydroxy
oxide
dihydropyridazino
Prior art date
Application number
SI9720048A
Other languages
English (en)
Other versions
SI9720048B (sl
Inventor
Wojciech Danysz
John Christoper et al Frank B Dehn & Co. Marsden
Markus Gold
Ivars Kalvinsh
Christoper Grahm Raphael Parsons
Irene Piskunova
Eguene Rozhkov
Original Assignee
Merz + Co. Gmbh & Co.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merz + Co. Gmbh & Co. filed Critical Merz + Co. Gmbh & Co.
Publication of SI9720048A publication Critical patent/SI9720048A/sl
Publication of SI9720048B publication Critical patent/SI9720048B/sl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D237/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings
    • C07D237/26—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4166—1,3-Diazoles having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. phenytoin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/26—Psychostimulants, e.g. nicotine, cocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Abstract

Piridil-ftalazin dioni s formulo (I), kjer sta R1 in R2 izbrana iz skupine sestoječe iz vodika, halogena in metoksi ali kjer R1 in R2 skupaj tvorita metilendioksi, in farmacevtsko sprejemljive soli le-teh, in farmacevtski sestavki, ki vsebujejo učinkovite količine le-teh, delujoče kot antagonisti glicinaB, so koristni za borbo proti nevrološkim motnjam, ki so povezane z ekscitotoksičnostjo in motnjami pri delovanju glutamatergične nevrotransmisije pri živi živali, ki jih potrebuje, vključno s človekom.ŕ

Description

DERIVATI PIRIDAZINO [4,5-B]-KINOUN 5-OKSIDA, NJIHOVA PRIPRAVA IN NJIHOVA UPORABA KOT ANTAGONISTI GLICINA
POLJE IZUMA
Nove kemijske spojine, ki so dioni pirido-ftalazina, farmacevtski sestavki, ki jih vsebujejo in njihova uporaba proti nevrološkim motnjam, ki so povezane z ekscitotoksičnostjo in z motnjami pri delovanju glutamatergične nevrotransmisije.
OZADJE IZUMA IN PREJŠNJA STROKA
Glutamat je verjetno največji ekscitacijski transmiter v centralnem živčnem sistemu, vendar pa je verjetno udeležen tudi v mnogih patoloških in ekscitotoksičnih procesih. Obstaja veliko zanimanje za razvoj antagonistov glutamata kot takšnega za terapijo (glej revijalni članek Danysz in ostali). Glutamat aktivira tri večje vrste ionotropskega receptorja, namreč a-amino 4hidroksi-5-metil-4-isoksazolpropionsko kislino (AMPA), kainat in N-metil-D-aspartat (NMDA) in več vrst metabotropskih receptorjev. Antagonizem NMDA receptorjev ima potencialno širok obseg terapevtskih aplikacij. Funkcionalno oviranje NMDA receptorjev lahko dosežemo z učinkovanjem na različne razpoznavne položaje kot na primarni položaj transmiterja, na strihninsko-neobčutljiv glicinski položaj, (glicinB), na položaj poliamina in na položaj fenciklidina, umeščen znotraj kationskega kanala.
Desenzbilizacija receptorja lahko predstavlja fiziološki proces, ki služi kot endogeni kontrolni mehanizem za preprečevanje dolgoročne nevrotoksične aktivacije receptorjev glutamata, vendar pa dopušča njihovo začasno fiziološko aktivacijo. V primeru NMDA receptorja, je koantagonist glicin endogeni ligand, ki inhibira takšno desenzibilizacijo, tako da aktivira položaj glicinaB- Zanimivo je, da ishemija ne poveča samo koncentracijo izvenceličnega glutamata temveč tudi koncentracijo glicina in, čeprav je zadnji učinek manj izrazit, učinkuje dejansko mnogo dlje. Tako bi lahko pod takšnimi pogoji nekateri polni antagonisti glicinas obnovili normalno sinaptično transmisijo s povečanjem desenzibilizacije NMDA receptorja do njegove fiziološke ravni. V resnici je bilo na podlagi centralnega predpisovanja pri laboratorijskih živalih izraženo mnenje, da antagonisti glicina lahko nudijo boljše terapevtsko okno kot učinkovine, ki delujejo na drugih razpoznavnih mestih NMDA receptorskega kompleksa. Žal so slabe farmakokinetične lastnosti večine antagonistov glicinas do nedavna izključile jasno verifikacijo tega predloga po sistemskem dajanju. Vendar pa so poročali, da imajo nekateri antagonisti glicinaB zelo dobre terapevtske kazalce po sistemskem dajanju v modelih hiperalgezije in kot anksiolitiki.
PREDLOŽENI IZUM
Mi smo sedaj razvili serijo tricikličnih “pirido-ftalazin dionov”. Spojine klase I so strukturno sorodne patentiranim antagonistom glicinaB Zenece (ICI, EPA 0 516 297 Al, 02.12.92). Spojine klase II so N-oksidni derivati teh spojin in niso razgrnjeni ali predloženi v patentu Zenece. Spojine klase II so tudi močni antagonisti glicinaB in vitro in kažejo mnogo boljšo in vivo sistemsko koristnost in/ali prodornost možganske krvne bariere kot spojine klase I. Poleg tega solni derivati teh spojin, dobljenih na primer z dodatkom holina in 4-tetrametilamonija (4-NH3), še nadalje izboljšajo biokoristnost.
Nove spojine predloženega izuma imajo vnaprej predvidljivo uporabnost pri zdravljenju naslednjih motenj. 1. Akutna ekscitotoksičnost kot ishemija med kapjo, traumo, hipoksijo, hipoglicemijo in hepatično encefalopatijo. 2. Kronične nevrodegenerativne bolezni kot Alzheimerjeva bolezen, vaskularna demenca, Parkinsonova bolezen, Huntingtonova bolezen, multipla skleroza, amiotrofična lateralna skleroza, AIDS-nevrodegeneracija, olivopontocerebelarna atrofija,
Tourette-ov sindrom, bolezen motornih nevronov, disfunkcija mitohondrija, sindrom Korsakova in Creutzfeldt-Jakobova bolezen. 3. Druge motnje povezane z dolgoročnimi plastičnimi spremembami v centralnem živčnem sistemu kot kronična bolečina, odpornost proti mamilom, zavisnost in vdajanje (na primer opioidom, kokainu, benzodiazepinom in alkoholu) in pozno razvijajoča se diskinezija. 4. Epilepsija (splošni in delni kompleksni napad), shicofrenija, strah, depresija, akutna bolečina, spastičnost in brnenje v ušesih.
PREDMET IZUMA
Predmet izuma je zagotavljanje novih in bolj učinkovitih pirido-ftalazin dionskih spojin, farmacevtskih sestavkov le-teh in postopka za zdravljenje nevroloških motenj povezanih z ekscitotoksičnostjo in motnjami pri delovanju glutamatergične nevrotransmisije z le-temi. Nadaljnji predmet izuma je zagotavljanje takšnih novih spojin, pripravkov in postopka, ki izpolnjujejo predhodne teoretske zahteve. Dodatni predmeti bodo postali razvidni v nadaljevanju, še drugi predmeti izuma pa bodo postali razvidni izurjenemu strokovnjaku.
POVZETEK IZUMA
Izum torej obsega naslednje vidike, med drugimi, posamezno ali v kombinaciji:
spojino, izbrano iz piridil-ftalazin dionov, z naslednjo formulo:
kjer sta R1 in R2 izbrana iz skupine, ki jo sestavljajo vodik, halogen in metoksi ali kjer R1 in R2 skupaj tvorita metilendioksi, in farmacevtsko sprejemljive soli le-te; takšna spojina, kjer je sol izbrana iz holina in njegove 4-tetrametil-amonijeve soli; takšna spojina, ki je izbrana iz skupine, ki jo sestavljajo
4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidro-piridazino [4,5-b]-kinolin 5-oksid,
8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino [4,5-b}-kinolin 5-oksid,
8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino [4,5-b]-kinolin 5-oksid,
8-fluoro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino [4,5-b]-kinolin 5-oksid
7.8- dikloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino-[4,5-b]-kinolin 5-oksid 7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino [4,5-b}-kinolin 5-oksid in
7- kloro-8-bromo-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-bJ-kinolin 5-oksid, in farmacevtsko sprejemljive soli zgoraj nevedenih; in takšna spojina, ki je izbrana iz skupine, ki jo sestavljajo:
4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidro-piridazino[4,5-bFkinolin 5-oksidna sol holina,
8- kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-fluoro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
7.8- dikloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
7-kloro-8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinol i n 5-oksidna sol holina.
Poleg tega farmacevtski sestavek, ki kot aktivno sestavino vsebuje učinkovito količino takšne kot antagonist glicinae delujoče spojine;
takšen farmacevtski sestavek, ki kot aktivno sestavino vsebuje učinkovito količino takšne kot antagonist glicinaB delujoče spojine v obliki njene soli holina;
takšen farmacevtski sestavek, ki vsebuje kot aktivno sestavino učinkovito količino takšne kot antagonist glicinaB delujoče spojine izbrane iz skupine, ki jo sestavljajo
4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidro-piridazino [4,5-bJ-kinolin 5-oksid,
8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b}-kinolin 5-oksid,
8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
8-fluoro-4-hidroksi-1 -okso-1 ^-dihidropiridazino^.S-bFkinolin 5-oksid,
7.8- dikloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid, 7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid in
7- kloro-8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b}-kinolin 5-oksid ali farmacevtsko sprejemljiva sol katerekoli od zgoraj nevedenih; in takšen farmacevstki sestavek, ki vsebuje kot aktivno sestavino učinkovito količino takšne kot antagonist glicinaB delujoče spojine izbrane iz skupine, ki jo sestavljajo
4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidro-piridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksida sol holina,
8- kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-bromo-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-bFkinolin 5-oksida sol holina, 8-fluoro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
7.8- dikloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, in
7- kloro-8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina.
Dalje, postopek za borbo proti nevrološkim motnjam povezanih z ekscitotoksičnostjo in motnjami pri delovanju glutamatergične nevrotransmisije pri živi živali, ki obsega ukrep zdravljenja žive živali z učinkovito količino takšne kot antagonist glicinas delujoče spojine ali farmacevtskega sestavka; takšen postopek, kjer je spojina v obliki njene soli holina; takšen postopek, kjer je spojina izbrana iz skupine, ki jo sestavljajo
4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidro-piridazino[4,5-b}-kinolin 5-oksid,
8- kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
8-fluoro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b}-kinolin 5-oksid,
7.8- dikloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-bJ-kinolin 5-oksid, in 7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid in
7- kloro-8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid ali farmacevtsko sprejemljiva sol katerekoli od zgoraj navedenih; in takšen postopek za borbo proti nevrološkim motnjam povezanih z ekscitotoksičnostjo in motnjami v delovanju glutamatergične nevrotransmisije pri živi živali, ki obsega ukrep dajanja živi živali, v primeru nujne potrebe, učinkovite količine spojine, delujoče kot antagonist glicinas, izbrane iz skupine, ki jo sestavljajo
4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidro-piridazino[4,5-b}-kinolin 5-oksidna sol holina,
8- kloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-bhkinolin 5-oksidna sol holina, 8-bromo-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-bJ-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-fluoro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-bhkinolin 5-oksidna sol holina,
7.8- dikloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
7-kloro-8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina.
DETAJLNI OPIS IZUMA
Naslednja razprava, primeri in farmakologija so podani za ilustracijo predloženega izuma, vendar pa jih ni treba upoštevati kot omejevalne.
POSTOPKI IN REZULTATI
Osnovna struktura tricikličnih “pirido-ftalazin dionov’ klase I in II
O
O
R1/R2 = H in / ali halogen
R1/R2 = H in / ali O-CH3
R1/R2 = H in / ali metilendioksi
KEMIJA
Splošni postopki za pripravo dimetil-kinolin-2,3-dikarboksilat 1-oksidov (3).
Hladno raztopino (ledena kopel) 2-nitrobenzaldehida 1 (25 mM) in natrija (27 mM) v brezvodnem metanolu (40 ml) smo 30 min tretirali z raztopino dimetil(dietoksifosfinil) sukcinata 2 (30 mM pripravljenega tako, kot je opisano v S. Linke in ostali, Lieb. Ann. Chem. 1980(4), 542) v brezvodnem metanolu (10 ml). Dobljeno temno raztopino smo stresali pri 0-5°C 1,5 ure, topilo smo izparili pri zmanjšanem pritisku in ostanek porazdelili med etilacetat in vodo. Etilacetat smo sušili nad natrijevim sulfatom in nato izparili pri zmanjšanem pritisku. Preostanek smo rekristalizirali iz izopropanola, da bi dobili dimetil-kinolin-2,3dikarboksilat 1-oksid 3, kot je naveden v naslovu, v obliki belkastega (ali rahlo rumenega) praška.
Fizikalne lastnosti in spektralni 1H-NMR podatki za spojine 3 so podani v tabelah 1 in 2.
a. 5- bromo-4-kloro-2-nitrobenzaldehid (1f.).
Zmesi žveplove (VI) kisline (40 ml) in natrijevega nitrata (2,66 g, 31,3 mM) pri 0-5°C smo dodali 3-bromo-4-klorobenzaldehid (6,25 g, 28,5 mM). Dobljeno zmes smo stresali pri sobni temperaturi 7 ur in nato razredčili z vodo z ledom (300 ml). Oborjene trdne snovi smo filtrirali, sprali z vodo in sušili, pri čemer smo dobili prašek. Rekristalizacija te snovi iz zmesi izopropanola in vode (2:1) je dala 2-nitrobenzaldehid 1f, kot je naveden v naslovu, (3,6 g, 51,5%) v obliki rumenega praška s tališčem 81-82°C.
Analiza ΟγΗΕΒιΌΙΝΟβ
Izračunano (%): C 31,79 H 1,14 N 5,30
Dobljeno (%): C 31,55 H 0,98 N 5,09
1H-NMR (CDCI3), δ: 8,22 (S,1H), 8,23 (s,1H), 10,39 (s,1H)
b. 4-bromo-5-kloro-2-nitrobenzaldehid (1g).
Z uporabo postopka (a), vendar izhajajoč iz 4-bromo-3-klorobenzaldehida (2,97 g, 13,5 mM), smo dobili spojino 1g navedeno v naslovu (1,9 g, 53,0%) v obliki bledo rumenega praška s tališčem 95 - 98°C.
Analiza C7H3BrCINO3:
Izračunano (%) : C 31,79 H 1,14 N 5,30
Dobljeno (%) : C 31,60 H 1,01 N 5,11
1H-NMR (CDCla), δ : 8,02 (S,1 H), 8,43 (S,1H), 10,39 (s,1H)
Splošni postopek za pripravo dimetil kinolin-2,3-dikarboksilatov (7).
Raztopino N-oksida 3 (10 mM) in fosoforjevega triklorida (30 mM) v brezvodnem kloroformu (100 ml) smo refluksirali 7 ur. Topilo smo odstranili pri zmanjšanem tlaku in preostanek porazdelili med etilacetat in vodo. Organsko fazo smo sušili nad natrijevim sulfatom in nato izparili pri zmanjšanem tlaku. Ostanek smo rekristalizirali iz izopropanola, da bi dobili dimetil kinolin-2,3dikarboksilat 7, naveden v naslovu, v obliki belkastega (ali bledo rumenega) praška.
Fizikalne lastnosti in 1H-NMR spektralne podatke za spojine 7 prikazujeta tabeli 3 in 4.
Splošni postopek za pripravo 4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazinol4,5-bJ-kinolin 5-oksidov (5).
Raztopini (ali suspenziji) dimetil kinolin-2,3-dikarboksilat 1-oksida 3 (5 mM) v vrelem etanolu (25 ml) smo med mešanjem in v atmosferi argona dodali hidrazin hidrat (15 mM), zmes smo refluksirali 3 ure, med tem časom je nastala temna oborina. Po ohladitvi na sobno temperaturo smo reakcijsko zmes filtrirali, zbrane oborine pa smo izprali z etanolom in etrom in sušili, da bi dobili sol hidrazina 4. Dobljeno snov smo stresali pri 70 do 110°C 3 ure v ocetni kislini (15 ml) in, po ohladitvi na sobno temperaturo, zmes razredčili z vodo (45 ml) in nato filtrirali, da bi pridobili trdno snov. Pridobljeno trdno snov smo izprali z etanolom in sušili, kar je dalo temno rumeno trdno snov. Več rekristalizacij te snovi iz dimetilformamida je dalo piridazino[4,5-b]kinolin 5-oksid 5, ki je naveden v naslovu, v obliki oranžnega praška.
Fizikalne lastnosti in 1H-NMR spektralne podatke za spojine 5 prikazujeta tabeli 5 in 6.
Splošni postopek za pripravo 1,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropiridazino[4,5-b]-kinolinov (9).
Raztopini (ali suspenziji) dimetil kinolin-2,3-dikarboksilata 7 (5 mM) v vrelem etanolu (25 ml) smo med mešanjem dodali hidrat hidrazina (30 mM) in refluksirali zmes 8 ur, med tem časom je nastala oborina. Po ohladitvi na sobno temperaturo smo reakcijsko zmes filtrirali in dobljeno trdno snov izprali z etanolom in etrom ter sušili, pri čemer smo dobili sol hidrazina 8. To snov smo stresali 3 ure pri 70 - 100°C v ocetni kislini (15 ml) in, po ohladitvi na sobno temperaturo, smo zmes razredčili z vodo (45 ml) in nato filtrirali, da bi dobili trdne snovi. Dobljene trdne snovi smo izprali z etanolom in etrom, da bi dobili piridazino[4,5-b]kinolin 9, ki je naveden v naslovu, v obliki rumenega praška.
Fizikalne lastnosti in 1H-NMR spektralne podatke za spojine 9 prikazujeta tabeli 7 in 8.
Splošni postopek za pripravo 4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazinol4,5-bj-kinolin 5-oksidnih soli holina (6) in 1,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropiridazino[4,5-b}-kinolinskih soli holina (10).
Suspenziji piridazino[4,5-b]kinolina 9 ali N-oksida 5 (10 mM) v metanolu (50 ml) smo med mešanjem dodali hidroksid holina (10,5 mM, 45 m.% raztopina v metanolu). Dobljeno raztopino smo koncentrirali, za kar smo uporabili rotirajoči izparilnik, trdni preostanek pa smo rekristalizirali iz etanola, da bi dobili sol holina 10 ali 6, navedeno v naslovu, v obliki higroskopičnega oranžnega (ali rdečega) praška.
Fizikalne lastnosti in 1 H-NMR spektralni podatki za spojine 9 in 10 so navedeni v tabelah 9, 10 in 11, oziroma 12.
φ «
L_
Ο
5C
Ν >8 <8
in O O O O o in
• • • • •
rt σι (N σι rH o OJ
ID O· 5Γ ’ί· lO «O
ID r* O IO iD cn CD
t OJ 0» σι CD o» O
rt rt rt H rt rt OJ
1 1 J 1 1 » 1
in «n m 5Γ n rt lO
oj ID σι co O
rt rt rt rt rt rt OJ
Μ
Ο
Μ 'δ
Ό
Λ οί ι
C ό
e
Η
Z
o c ^ž. X
5 o Q
> P U
c Φ
iza elen z
(0 c < g
o c (0 c □ Ό (0 X
N U
r-4 CD
CO o in Ti in in
• o σι ^4 io
in 5J· • • • • •
<? 51» »T D n
rH OJ in co OJ <n in
«H CQ o> tn lO iH OJ
« « • * • • •
5Γ n OJ (Ώ OJ OJ OJ
O r- σι CD σι 00
00 03 in r-4 rH ω m
• « • • « • »
σι OJ in in F-t r-4
in in 5Γ in Ti 5T
ID 5? r-4 r-4 5Γ *5·
tn 0* rH o OJ O- O·
• • • • • • •
in < 5J> in 5Γ cn n
5f IO o in OJ OJ
OJ τί σι io o· Tf
• • • • • • •
Γ0 OJ o OJ OJ M
C r-4 σι MO o σι σι
o· co co CO m m ID
* • • • • • •
σι OJ in in rM rM
in in 5f in 5Γ Ti 'T
m ιΛ — Ο ο
ε ‘5 c
ο >
η α
*c
ο.
(0 β>
ύ (0 (0
ο
Ul oz «3 c
Ο α
ω υο1Λ ΠοΟ U ° h „
SCuo-O-^^C^o-tnfflC^m^ S CN X CM S Π +, <\J i ro -Γ ω % L·
U U υ u - 2 ° ϋ (0 JO tn n
Ό 0) <« O) <n cn cn ω
rTabela 3: Pripravljeni dimetil kinolin-2,3-dikarboksilati
N «D »O ro ±1
2
C?
o c •3L n o 2
> o Q
c ω E ω U
a>
<o c
<
-'i’ o
c to c
□ o
ro l_
N
cz cc ra c
o
CL w
O o
»a o O O
GO o •
CO CA •r* vn \o ka
00 co CA CA
\D ΤΓ γ- rr* ka O
O KA ια rJ r- n
r— ·—· r—
5 1 (S 1 KA 1 CA 1 m oi
δ ka KA *— ·— Γί
«— — *— r—
c r-‘ «r v
i ch vr
o LD VO v* co r*
Ό o CH Csl 00 00
vi vi v/ ka xr m m
ΓΜ Ch Ln {Τ' v 00 «γ-
<A a C 00 vr ια
V ΠΊ m C-l CH CH ri
OD V -e r- S n CH \D vn o LO r- v
m ka 90 o' ©< ci' ΓΑ
Ό m V Vi vr vr
rJ rJ LO t—
c- o m m vr ca
vn a a vr m ΓΊ
ΓΗ m
V
S m'
•r· ca o m m
xr oo co ka A
m m CH CN ri
L0 ε r- ri m ν Γ- KA KA A A
Γ*Ί A* co CA O\ m m
vo A •<T KA v ’Τ
O
Z
u
v
CH g- CH o m “ VO
X CH □
U o o o z i? <J3
X C,X 3^D □ 2
O O U tu 0 ja O
CJ CD r« r—
U r—
T>
<u u_i σ>
r16 ralni podatki za spojine
»A
Tabela 5: Pripravljeni 4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]kinolin oksidi 5 jc
OJ
M
0) »o — O — o . (0 H
Z
Co'
QX O C .2. L· o O X
Analiza elementov o
£ z
Izračunano X
(J
rt
Uci cu c
θ'
o.
ω
CM
N b« iz\ O O
ΤΓ «j oo
O- co c— o
o n
Λ o o c o m <—i Λ Λ
CM o
CM ·ν.
oo m
<A o O σ-i ro o n· vo m —
oo
C\ O o O
04 O o c
< Os c-v Λ m Λ m A
CN
O\ CZ ir ca rtl 'O ir 'T <—i ca t 1— c
o ni
CA —
CM CM
VJ — rti m CA cn
CM ΓΜ — CM mo ir r— «ci m t—’ CA cm in ir ir rti ir c-l rti CA MO
OO «Cl <—I
OO CA
O CM rti CM ir nIT — m ir m •Μη CCA
C- oo rti Cl
CA O t—
CA — CM
MO ir CM mo ir
C\ ^3~ — 04 o Γ «o T
CCM ni r*
vrv — OO
SO OO
r** C ni
tr> vrv 'S’
XT ΓΜ t-* tt m i/Ί OO
VI ΚΓ ΓΠ roo m
o r·*
Z
X t
T* o
O o o m O rt-\ O rt-» 21
z G z — z CM A — ΰ
u .o ni ca mo oo o Li. •o oo CA CD
X T“ CL X Τ’ rn ξε T- T- Ci x T* CM wx X
t· O Τ’ u o T O Τ’ Τ’ u
α jo u vn vr» vrv
Os
Os
Λ3ΓΜ o — *Tv v<S z
u u« cd
I
T (J
M-| ni ir m
u_ o cc o
Ό Φ vrv ι/Ί
SO
VTv oc vrv tn tn
CD
CZ) vrv oo sO srv is
x_ s. r-*'
X ti X X ti ti X
— «— — —-
<Z) v? Vri* Vri vri* vri Vri*
u. uJ ul ti u> »J
X X X X X X X
o O O C Uri OO CM
c SO ; C o O CM m
H T CM CM Γ4 V rr
*— *“
z—*· X X
n: I X X X X X
V-M <_> ·—
vri Vri* Vri* vri* V5* v? vri*
tJ X u.' X l2 X uJ X u> X tJ X X
uri uri O CM sn SO m
SC O o OS CM O
O ΓΜ V“ o' X CM CM
«m *c~ ·—
u~i
CA
II
Tabela 6: 1H-NMR (DMSO-de) spektralni podatki za spojine
E
c.
a co ra c
'o
CL ω
,__ -□
fc tn Ό
C/3 s—*·
o uri
·*· O Γ-
OŠ OŠ od
<*<
ti ti X
·* _ •
US o vn
CM CM CM
II
Ί •o o
-D
CM oo oo ti ca tl ti — . c£ σ<
t II o _
X ti o
CA
II •σ
D
Ό ί—ι
OO
O\ *□ d.
Ό X—X
X Os O SO uri* ti ti ti
CM uri cm’ »
* °°L OO 11 vri OT cn
Ξ ti ti SO O O rr O
Os r* *“ *“· uri OŠ CA <A
06 uri c od s-Z z—i
( s© CM CM 11 ti X ti ti
T 11 II CM *—
od r·» CM vs vf vi in
X O <3 u? OŠ CM CD 0 Os O O O
CM OŠ Os 11 OŠ od CA CA
£ OO 11 *—> 11 ·—> -0 X X ti ti
CM -o -O Ό _T Λ
-c Ό O CD vri vri Vri
OO Uri *—*
OO r* r* r^ r*s O 0
oc O CM c II 00 00 Os
X od 00 od 00 00 00
TO X 0 T3 CO
«zri tzs izs Uri uri Uri Uri
ra
CA «o co
IO
O u-; O C V> V)
VO oo ri + CM A
00 oo oo oo oo o
c o·’ o o O o
o c c c O o
Γ*Ί Γ*Ί m ΓΊ m n
Λ Λ Λ Λ Λ Λ
\O 00
KO OS A r~ oo
cš κό O CA 00 oo
·— ΤΓ Γ— » CM
</Λ 00 f- O CM
τΓ CM — rr r- rr
m ri ri CM
m Os ^r m T \O
tt 00 r* r-· ΤΓ —
ri M3 M3 O
KO m ΤΓ tn 'T -t
r- O\ 00 O r-
r* OS ΓΊ — A oo
oš KO “Γ od »T CM
^r r* O CA rr
rr © to Γ-; VI
rS ri ri CM
r< m m ΤΓ T Ό
O\ m CM 00 ΤΓ
• m κη t£> c
KO vn T vi T ΤΓ
ΓΜ
rM ΓΜ n
ο od οο
Ο
Ο η
Λ οο ca
CM
Ο αm
CM d
πΓΟΟ
CM rr ιο tO χτ ό
<τ ο ο
Ζ ? ξ - _ / 5 r a ci u.
— Λ rr “i CA
J (N £ (N I (N -J. _ _ ~J J - J3 a
c
IO '_i ca /— Ζ ~ z Ν r υ Ώ □
ΖΧ.· . ‘ •Ό σa »o „ _ Ό (□ CM C2 £» cm ^5» n «-> <*V i» <a
IO vi a
m •o co co a
co n
IO
Tabela 8: 1H-NMR (DMSO-d«) spektralni podatki za spojine
z—— <—s z—*
X X I X X X
CN CM CM CM CN CM
* *
V) V) VI VI V) C/l
ul ul ul ul u.
JO X) JD JO X
s—'
o o tn O o vn
SO MO v-s CS sO SO
X“ wr- X- T“ V V
T- X“ V- wr- tc
TD vo
m
X oo
·—
X—
V5 X
SD
CN <X
OŠ CM
χΜκ It
X
<“-7
IZ? «o
CN o<
ii II
*—>
Ο-
TD Χ
CN *—1
un
oo TO TO
Z—s
X X oo oo
o
vi eri
II X
o K ^-
m —'1 X
σ< TD vn
« CN z»“·«. s*-''·
X CN OO CM v> sn π x X X
£ r- ΤΓ OO X CN oš X vi co • ΤΓ Os psj « vi s—/ CN CN OŠ C/T co CM Ch
oo irf C ^-1
1 CN CM V) sf X X
C4 II ul c* _
JO •“1
OO ZM * V) VI
•—M r“> vo *
X o’ U* SO θί 'C' r- so Os
CN OŠ u CO 11 — u OO oo
E MO ·“·» X CN I~ -d X X
-c C“ •o •
OO TO E “O v/-> <z> cz)
'—Z
i sO CN so Γ*ι Γ- CN
C- o —. Os II ’Τ sn
co oo r- —> OO oo
a os
JD
Os
CJ o
TD
OS o
Os os
X
CN iJ
JO
O r«o so
CN
Os
X vi
ΓΟΟ x
vi oo
Ό
OO oo o\
JC
Φ se
N
v> «n in o
ri r^‘ -J Γ-
vs 00 r* η
Φ o
XZ) ϋ = 0
o ac m rs
oc 00 O C
M n
Os m 1
r- oc Ξ\ o
·— — n
<Ο, (β c
o £
O
M ω
c
Ό '3
O ώ
o c
£ ιό
O c
'n (0
Ό
C a
o
so sr SO νΊ
oc OJ 00 O
vi 4 ri
p« «v «M *»
n r> rs rs
rs sr Os r-
sc vi sr’ vš
SO vs
m 00 r*·
4 cS sr
vs V sr m
Os VS
Os VS
CM
Cs
VS rs t
n o Π O
n v Os o
sO vi sf in
sr rs in Os
oc cs r*· *T
sr’ o< ’Τ —-
vs sr rr m
ό (0 je o
I
I je o
k.
o
Έ «
c o
>
<0
OS ra ra
Δ (0
H
C o o’ z ~
C
L.
C4
C o
a ω
rl
N h«
Σ
Z e
n
I «a
z— sr Z So 2. * n T v Z /-*S -t
ri r s s«/ so CS \o
rs Oi vO θ' «m v» Ό
rs I u rs —T Z O ΤΓ I <0 U ΓΊ
Γ3 &
f- sc r- rVS vs
u.
a
O rvs •a o
r· vs s
so sr
Γ— vs ac
SC sc 'J •C
JS
X
4fi
0.5 (d)
ω
ω o
o *·= o CD H
C O p p O 0 O
oi 00 v OO VO vs CA m co CN CA vs CA
O <A \£> CS CN O c*s (N CO C CN CA C CN 1 rs O CN *
1 CN O < CA oc « ^3· CS CN CA CN CN vs O CN r* c CN O (N
Tabela 11: Pripravljene l,4-diokso-1,2,3,4-tetrahldropirida2ino[4,5-bhkinoiinske soli holina 10
vs CN •c- p vs rs r* CN CA VS O p rs 5Γ v CN rs cn
CA rs vs vs rs CN rs p O o r*- vs
r-’ VS vs vO vs v ΤΓ
>
o c
0)
E φ
φ
CD
N c
<
rs (N vs
o r* cc ^r 00
o p p r*
ί?· ΤΓ rN Γ- (N
VS ΤΓ VS ΧΓ ΤΓ
Š
CN ^r
O fsJ j:
X o
vo r* rN r(N
ΤΓ rCA vs
CN vs
CN
CD
N
CA vs
ΓΊ
VS
VS o
c
CD
C □
»o
CD
N \O
CN xr νΊ «
Lu r«
CZ cZ
CD
C
CN e
Σ oJ
O
CC
O vs
O xz u
ps □f
Ό
U
-O c
τχ \O o cs
Ό vs
CA ΤΓ vs o (N vs CA CA ’Τ
s \o vs p
rS CN r-’
ST VS τ
r·-»
r““» O O O T
« £ n g — z ΤΓ IW z—s rs
o co u vs
vs e» CA — rs m 9C
rs rs 3; rs — X rs
(J
O
u.
•o o
Ό (N
ΟΟ fVS VS vs \r fN
Cs (N
O v
Z _ y £
O ΓΊ X ~ <e o
co
VS
V
CN
CA
CN
V
O
Z co *a z
«e o
co c\
OJ zz o
TT 00 C*· p-. Q\ Os
VS vs VS
25 (d) 10 (d, c) 2.5 (c)
X
FARMAKOLOGIJA
In vitro
Študij vezave receptorja
Priprava membrane in določitev proteina
Pripravo tkiv smo izvedli po Fosterju in Wongu (1987). Sprague-Dawley podgane moškega spola (200-250 g) smo obglavili in hitro odstranili njihove možgane. Opno smo secirali in homogenizirali v 20 volumnih ledeno mrzle 0,32 M sukroze, za kar smo uporabili stekleno-teflonski homogenizator. Homogenate smo centrifugirali pri 1000 x g 10 minut. Tableto smo zavrgli, plavajočo snov nad tekočino pa centrifugirali pri 20.000 x g 20 minut. Dobljeno tableto smo ponovno suspendirali v 20 volumnih destilirane vode in centrifugirali 20 min pri 8000 x g. Plavajočo snov nad tekočino in rjavo rumeno prevleko smo nato trikrat centrifugirali (48.000 x g 20 minut) v prisotnosti 5 mM Tris-HCI, pH 7,4. Vse postopke centrifugiranja smo izvedli pri 4°C. Po resuspendiranju v 5 volumnih 5 mM Tris-HCI, pH 7,4, smo suspenzijo membran hitro zamrznili pri -80°C do dneva poskusa. Na dan poskusa smo membrane odtajali in izprali štirikrat z resuspenzijo v 5 mM Tris-HCI, pH 7,4 in centrifugiranjem pri 48.000 x g 20 minut. Končno tableto smo suspendirali v poskusnem pufru.
Količino proteina v končnem membranskem pripravku smo določili po postopku Lowry-ja (1951) z nekoliko modifikacijami (Hartfree, 1972). 50 μΙ vzorcev proteina (v trojnikih) smo razredčili na 1 ml z destilirano vodo in obdelali z 0,9 ml raztopine, ki je vsebovala 2 g kalijevega natrijevega tartrata in 100 g Na2CC>3 v 500 ml 1N NaOH in 500 ml vode. Slepi vzorec in standard (z beljakovino iz volovksega seruma) smo pripravili na isti način. Epruvete smo za minut postavili v vodno kopel pri 50°C in ohladili na sobno temperaturo. Dodali smo 100 μΙ raztopine, ki je vsebovala 2 g kalijevega natrijevega tartrata in 1 g CUSO4 x 5 H2O v 90 ml vode in 10 ml 1N NaOH. Vzorce smo pustili stati na sobni temperaturi najmanj 10 minut, nato smo med mešanjem hitro dodali 3 ml Folin-Ciocalteu-jevega reagenta (1 ml reagenta razredčenega s 15 ml vode). Epruvete smo ponovno segrevali pri 50°C 10 minut in ohladili na sobno temperaturo. Absorbance smo nato odčitali v 1 cm kivetah pri 650 nm. Končna koncentracija proteina uporabljenega pri našem študiju je bila med 100 in 250 pg/ml.
Inkubacijo pri obeh poskusih vezave smo končali z uporabo Millipore filtrnega sistema. Vzorce, vse v trajniku, smo trikrat izprali z 2,5 ml ledeno mrzlega poskusnega pufra na filtrih iz steklenih vlaken, dobljenih pri Schleicher & Schuell-u, pod konstantnim vakuumom. Po ločenju in izpiranju smo filtre postavili v scintilacijsko tekočino (5 ml; Ultima Gold), radioaktivnost, ki se je obdržala na filtrih pa smo določili s konvencionalnim števcem tekočinske scintilacije (Hevvlett Packard, Liquid Scintillation Analyser). “Popolna vezava” je bila absolutna količina vezanega radioliganda v odsotnosti vsakršnih dodatkov, medtem ko je bila “nespecifična vezava” ugotovljena v prisotnosti visoke koncentracije konkurentov.
Poskus vezave [3H]5,7-DCKA
Poskuse smo izvedli po postopkih, ki so jih modificirale prejšnje skupine (Canton in ostali, 1992; Yoneda in ostali, 1993). Membrane smo suspendirali in inkubirali v 10 ml Tris-HCl, pH 7,4. Inkubacijski čas je bil 45 minut pri 4°C. Nespecifično vezavo [3H]5,7-DCKA smo definirali z dodatkom nemarkiranega glicina pri 0,1 mM. Prekinitvena raztopina je vsebovala 10 mM Tris-HCl in 10 mM magnezijevega sulfata, pH 7,4. Filtracija je potekala kolikor mogoče hitro.
Poskuse spodrinjenja smo izvedli s fiksno koncentracijo ^HjSJ-DCKA 10 nM. Testne spojine smo razredčili v vodi ali DMSO in jih dodali v najmanj 5 različnih koncentracijah.
Poskus vezave pHjglicina
Poskusi vezave pHjglicina smo izvedli po postopku, ki so ga opisali Kessler in ostali (1989). Podganje membrane možganske opne smo pripravili, kot je bilo predhodno opisano, končno tableto pa smo suspendirali v 50 mM Tris-acetata, pH 7,4. Najmanj 5 različnih koncentracij testnih spojin smo inkubirali z 20 nM pHjglicina 30 minut pri 4°C v prisotnosti 100 μΙ strihnina. Vse spojine smo raztopili v vodi oziroma DMSO-u. Nespecifično vezavo smo določili z vključitvijo 100 μΜ glicina v inkubacijsko zmes. Inkubacijo smo končali z razredčitvijo vzorcev z 2 ml prekinitvene raztopine (50 mM Tris-HCI z 10 mM magnezijevega sulfata, pH 7,4, ohlajene na <2° C), temu pa je sledilo še nadaljnje izpiranje z
2,5 ml pufra. Filtriranje smo izvedli kolikor mogoče hitro.
Rezultati
Osem od preizkusnih spojin je imelo IC50 v poskusu pHJ-DCKA < 1μΜ (glej tabelo 13). Učinkovitost šest izbranih spojin v poskusu s |3H]-glicinom se zdi na prvi pogled večja, vendar pa se to ne odraža v velikih razlikah v Kds (ni prikazano). Izmed posebno zanimivih dvojic spojin imajo spojine klase II večjo afiniteto kot spojine klase I v poskusu s [3H]-DCKA. Ta razlika ni bila toliko očitna v [3Hj- glicin- poskusu.
Tabela I3a
Tabela 13b
Mrz 2/ Substanca [3H]DCKA IC50 μΜ -i [3H] glicin . IC«0 μΜ
499 II 16.0
501 8-Cl-I 0.120 0.080
502 8-C1-II 0.020 0.013
503 8-Br-I 0.250 0.013
514 8-Br-II 0.010 0.004
519 8-F-I 1.100 0.015
516 8-F-II 0.300 0.017
515 7,8-DiCl-I 0.530
518 7,8-DiCl-II 0.650 j
Mrz 2/ Substanca [3H]DCKA IC50 μΜ
572 8-F-l (Chol) 1.14
571 8-F-II (Chol) 0.32
569 8-Cl-I (Chol) .....0.97
576 8-C1-II (Chol) 0.45
Sponke z obližem
Postopki
Boljše collicule smo dobili iz podganjih embrijev (E20 do E21), ki smo jih nato prenesli v Hank-ovo zapufrano raztopino soli (Gibco), brez kalcija in magnezija, na ledu. Celice smo mehansko ločili v 0,05% DNAazi / 0,3% ovomukoidu (Sigma) po 15 minutni predinkubaciji z 0,66 % tripsinom / 0,1 % DNAazo (Sigma). Ločene celice smo nato centrifugirali pri 18 G 10 minut, resuspendirali v minimalnem esencialnem gojišču (Gibco) in z njimi prevlekli pri gostoti 200.000 celic na cm2 plastično petrijevko (Falcon) predhodno prevlečeno s poliL-lizinom (Sigma). Celice smo hranili z zapufranim NaHCCVHEPES minimalnim esencialnim gojiščem dopolnjenim s 5 % serumom telečjega zarodka in 5 % konjskim serumom (Gibco) in inkubirali pri 37°C s 5 % CO2 pri 95 % vlagi. Gojišče smo popolnoma zamenjali po inhibiciji nadaljne glialne mitoze s citozinβ-D-arabinofuranozidom (20 μΜ Sigma) po 7 dneh in vitro. Zatem smo deloma zamenjevali gojišče dvakrat na teden. Boljšo kulturo collicula smo izbrali za te poskuse, ker zagotavlja zelo stabilne pogoje za beleženje, ki so absolutna predhodna zahteva za poskuse odvisnosti od napetosti in kinetične poskuse. Poleg tega so relativno majhni nevroni (soma 15-20 μιη Φ) idealno primerni za zmanjšanje problemov zapufrane difuzije na minimum za koncentracijske poskuse s sponkami.
Beleženje pri poskusih s sponkami z obližem smo izvedli iz teh nevronov s poliranimi steklenimi elektrodami (4-6 mQ) na način cele celice pri sobni temperaturi (20-22°C) s pomočjo ojačevalnika EPC-7 (List). Preizkusne snovi smo polagali z vklapljanjem kanalov hitrega superfuzijskega sistema narejenega po naročilu s skupnim izlivom (10-20 ms časi zamenjave), intracellularna raztopina je vsebovala naslednje količine (mM): CsCI (120), TEACI (20), EGTA (10), MgCI2 (1), CaCI2 (0,2), glukoza (10), ATP (2), cAMP (0,25); pH smo naravnali na 7,3 s CsOH ali HCI. Izvencelične raztopine so imele naslednjo osnovno sestavo (mM): NaCl (140), KCI (3), CaCI2 (0,2), glukoza (10), HEPES (10), sukroza (4,5), tetrodotoksin (ΤΤΧ 3*10-4). Pri večini poskusov je bil glicin (1 μΜ) prisoten v vseh raztopinah. Poskuse za preizkus odvisnosti tricikličnih “pirido-ftalazin dionov” od glicina smo izvedli v stalni prisotnosti rastočih koncentracij glicina (1-10 μΜ).
Rezultati
Pet dvojic tricikličnih “pirido-ftalazin dionov” imajo IC50 proti notranjim tokovom k NMDA (200 μΜ) v nizkem μΜ območju, spojine klase II pa so bile približno 2-3 krat učinkovitejše od spojin klase I (tabela 14a). Najbolj učinkoviti od teh sta bili Mrz 2/502 in Mrz 2/514. Ta učinek je bil posredovan na položaju glicinas, kot je pokazal paralelni pomik pri krivuljah odziva na koncentracijo v prisotnosti rastočih koncentracij glicina. Tako so bili Kbs Mrz-ja 2/502, kot je bilo ocenjeno po Cheng-Prusovem razmerju, podobni pri 1, 3 in 10 μΜ glicinih (80, 124 oziroma 118 nM). Razen tega učinki Mrz 2/501 in 2/502 niso bili odvisni od napetosti. Vse preizkušene spojine so bile približno tri do desetkrat učinkovitejše proti tokovom pri ravnotežnem stanju kot proti najvišjim tokovom. Derivati holina imajo podobno učinkovitost do prostih kislin in vitro (tabela 14b).
V nasprotju s tem so bili trije od teh učinkovitih antagonistov glicinas samo zelo šibki antagonisti notranjih tokovov do AMPA (100 μΜ). Mrz 2/502, 2/514 in 2/516 so imeli IC50 proti najvišjim AMPA induciranim tokovom 25, 73 oziroma 18 μΜ, vendar pa so bile vse IC50 > 100 μΜ bistveno neaktivne proti tokovom na najvišjem nivoju (tabela 14a). Tak akcijski profil, čeprav zelo šibek, je značilen za kompetitivne AMPA antagoniste receptorjev, ki prednostno zaustavljajo nedesensibilizirana najvišja stanja, nizko afinitetna stanja receptorja (glej Parsons in ostali, 1994).
Tabela 14a
Mrz 2/ Substanca Vrh NMDA IC50 μΜ Plato NMDA ICS0 μΜ Vrh AMPA IC50 μΜ Plato AMPA 1 ICS0 μΜ
585 I 65.9 19.1 j
499 II 51.2 13.8 |
I 501 8-Cl-I 2.3 0.7 j
I 502 8-Cl-II 0.8 0.3 25.0 150.0 I
503 8-Br-I 1.7 0.6 I
514 8-Br-II 0.5 0.2 72*7 307.0 |
519 8-F-I 18.0 5.8
516 8-F-II 6.3 1.6 17.6 >100 1
515 7.8-DiCl-I 3.7 0.9
518 7,8-DiCl-II 3.8 0.8
539 7-C1.8-Br-I 5.3 0.7
551 7-C1,8-Br-II 2.4 0.6
538 7-Br,.8-Cl-I 93.9 2.5
568 7-Br,8-Cl-II ’ 10.0 1.5
554 8-O-CH,-I 170 36.2 1
Tabela 14b
Mrz 2/ Substanca Vrh NMDA ICjo μΜ Plato NMDA IC50 μΜ
569 8-Cl-I (Chol) 2.0 0.5
576 8-Cl-II (Chol) 1.1 0.5
586 8-Br-I (Chol) 2.2 0.6
570 8-Br-II (Chol) 0.6 O.1 I
572 8-F-I (Chol) 12.4 3.5_1
571 8-F-II (Chol) 4.9 1.0 I
578 8-O-CH,-II(Chol) 101 7.7 1
575 7-O-CH.-I (Chol) 94.0 . 14.5 |
Ekscitotoksičnost in vitro
Postopki
Izolacija nevronov možganske opne je bila podobna, kot je opisano pri beleženjih za sponke z obližem, le da smo uporabili podganje zarodke po 1719 dnevu brejosti. Z nevroni smo obložili ploščico s 24 jamicami (Greiner) z gostoto 300.000 celic / jamico prevlečeno s poli-D-lizinom 0,025 mg/ml. Celice smo gojili v modificiranem Dulbecco esencialnem gojišču (DMEM, GIBCO) dopolnjenem z 10 % s toploto dezaktiviranim serumom telečjega zarodka. Kulture smo vzdrževali pri 37° C pri 5 % CO2. Gojišče smo spremenili prvič po enem tednu, nato pa vsake 3 dni, tako da smo zamenjali polovico gojišča s svežim gojiščem. Za poskuse smo uporabili kulture starane 17 dni.
Izpostavljanje EAA smo izvedli v gojišču MEM-N2 brez seruma (Bottenstein 1979), ki je vsebovalo 0,5 mM NMDA/ΙμΜ glicina in testno zdravilo. Celice smo predhodno inkubirali z zdravili in 1 μΜ glicina za 15 minut pred dodatkom NMDA. Po 24 urah smo morfološko preiskali citotoksični učinek s fazno kontrastnim mikroskopom in ga biokemično kvantificirali z meritvijo izliva LDH.
Aktivnost LDH smo določili na zgoraj plavajočem po 24 urah po postopku Wroblewskega in La Due-ja (1955). Na kratko, 0,1 ml zgoraj plavajočega smo dodali 0,9 ml natrijevega-fosfatnega pufra (pH= 7,5), ki je vseboval natrijev piruvat (22,7 mM) in NADH (0,8 mg/10 ml) pri sobni temperaturi. Prevedbo piruvata v laktat smo beležili pri 340 nm v teku 10 minut v Kontron spektrofotometru.
Rezultati
Popolne krivulje odvisnosti od koncentracije še niso razpoložljive. Vendar pa so bile nizke koncentracije v μΜ Mrz 2/501 in Mrz 2/502 učinkoviti nevroprotektanti in vitro, pri čemer se zdi, da je Mrz 2/502 v tem pogledu bolj učinkovit (glej tabelo 15).
Tabela 15
Mrz 2/ Substanca Citotoksičnost j in vitro I IC50 μΜ J
501 8-C1-I <5 1
502 8-C1-II <<s 1
503 8-Br-I >20 |
In vivo
Antikonvulzijska aktivnost
Cilj
Cilj je, oceniti lastnosti antagonistov NMDA receptorja testiranih učinkovin, tako da se oceni antikonvulzijske učinke. Poleg tega smo ocenili vlogo transporterjev organskih kislin pri eliminaciji testiranih učinkovin iz možgan z uporabo inhibitorja, probenicida, pri trajanju antikonvulzijske aktivnosti.
Postopki
Albino švicarske miši moškega spola (19 - 21 g), nastanjene po 10 do 15 v kletki, smo uporabili za preizkus NMDA smrtnostnega testa (Leander in ostali, 1988). Za konvulzije, ki jih povzroča pentilentetrazol (PTZ), smo uporabili albino švicarske miši (25 - 34 g), nastanjene po 40 v kletki, (58x38x20 cm), medtem ko smo za maksimalni elektrošok (MES) in motorne poškodbene teste NMR uporabili miši ženskega spola (18 - 28 g), nastanjene po 5 na kletko. Vse živali smo držali ad libitum z vodo in hrano pod 12 urnim cilkusom svetlobe in teme (prižig luči ob 6 uri zjutraj) in pri nadzorovani temperaturi (20 ± 0,5° C). Vse poskuse smo izvedli med deseto uro zjutraj in peto uro popoldan. Testirane učinkovine smo vbrizgali 0,5 minut, i.p. pred povzročitvijo konvulzij, če ni bilo določeno drugače (glej spodaj). Mrz 2/502 smo raztopili v solni raztopini z dodatkom NaOH. Večino drugih sredstev smo raztopili v naslednji raztopini: 0,606 g Tris; 5,0 g glukoze; 0,5 g Tween 80; in 95 ml vode. Holin in tetrametilamonijeve soli smo raztopili v destilirani vodi.
Pri z NMDA povzročenih konvulzijskih testih pri miših smo najprej naredili zvezo med dozo in odzivom za NMDA za določitev ED97 doze, ki smo jo nato uporabili za testiranje antagonističnih lastnosti. Po vbrizganju ED97 doze NMDA smo živali položili v majhno kletko (20x28x14 cm) in jih opazovali 20 minut. Farmakološka končna točka je bila smrt po klonusnih konvulzijah in tonusnih napadih.
Pentilentetrazol smo vbrizgali v dozi 90 mg/kg (i.p.) Nato smo beležili 30 minut prisotnost splošne tonusne konvulzije, ker je ta parameter mnogo občutljivejši za antagoniste NMDA receptorjev kot klonusne konvulzije. Za farmakološko končno točko smo vzeli prisotnost tonusa v zadnjih udih z izstegnitvijo.
MES (100 Hz, 0,5 sekund trajanje šoka, 50 mA jakost šoka, 0,9 ms trajanje impulza, Ugo Basile) smo uporabili preko roženičnih elektrod. Prisotnost tonusnih konvulzij smo beležili (tonusno stegnjenje zadnjih tac z najmanjšim kotom proti telesu 90°). Pri dodatnem poskusu smo mišim vbrizgali probenicid (200 mg/kg) 30 minut pred dajanjem testiranih učinkovin, da bi ocenili vlogo transporta organskih kislin pri eliminaciji (trajanje učinkovanja). Cilj je bil, doseči ED50 za vse beležene parametre z uporabo Litchfield Wilcoxonovega (1949) testa za odvisnost od količine doze.
Rezultati
Samo štiri spojine od testiranih spojin, vse klasa II, so bile učinkovite, ko smo dali i.p. pri M.E.S. testu (Mrz 2/499, Mrz 2/502, Mrz 2/516 in Mrz 2/514 glej tabelo 16a). Povezane spojine klase I niso bile aktivne. Vse štiri spojine so imele na videz zelo kratke razpolovne dobe in vivo. Zdelo se je, da je PTZ test občutljivejši model za učinkovanje antagonistov glicinae pri danem i.p. in v resnici so bile iste spojine klase II učinkovite pri 2 - 4 krat manjših dozah, medtem ko so ostale spojine klase I neučinkovite.
Soli holina istih N- oksidnih derivatov (structure II) imajo jasne protikonvulzijske aktivnosti v vseh treh modelih, medtem ko so bili ne-N-oksidni derivati bodisi neaktivni ali Šibki (tabela 16b). Poleg tega se zdi, da imajo soli holina daljše trajanje učinkovanja. Vbrizganje probenicida je znatno podaljšalo trajanje protikonvulzijskega delovanja vseh testiranih učinkovin. Na primer, razpolovna doba 2/514 in 2/570 je bila 40 oziroma 80 minut v odsotnsoti probenicida. V prisotnosti probenicida se je razpolovna doba podaljšala na 180 oziroma 210 minut. Tako se zdi, da transport organskih kislin v horoidnem pleksusu ven iz možgan igra pomembno vlogo pri kratkem trajanju delovanja testiranih spojin. Probenicid v uporabljeni dozi (200 mg/kg) nima neodvisnega učinka na konvulzije same po sebi, povzročene po MES-u.
Tabela I6a
Mrz 2/ Substanca MES i.p. (IDS0 mg/kg) NMDA i.p. (ID50 mg/kg) PTZ i.p. (IDS0 mg/kg)
585 I >100.0 58.9 59.0
499 II 87.0 18.6
501 8-Cl-I >100.0 >100.0 >40.0
502 8-C1-II 47.6 26.0 8.3
503 8-Br-I >100.0 > 100.0 >100.0
514 8-Br-II 20.2 99.0 12.8
519 8-F-I >60.0 >100.0 >100.0
516 8-F-II 16.6 40.0 7.9
515 7,8-DiCl-I >100.0 98.0 >100.0
518 7f8-DiCl-II >60.0 >100.0
539 7-C1,8-Br-I >60.0 >100.0 >100.0
538 7-Br,8-Cl-I >60.0 106.0 >100.0
554 8-O-CH,-1 >100.0
Tabela 16b
Mrz 2/ Substanca MES i.p. ( IDjq mg/kg)
577 II (Chol) 23.7
569 8-Cl-I (Chol) >50
576 8-Cl-H (Chol) 7.7
5R6 8-Br-I (Chol) >50
570 8-Br-II (Chol) 12.8
572 8-F-I (Chol) >100 1
571 8-F-II (Chol) 15.5 I
574 7 8-DiCl-I (Chol) >100 I
578 8-O-CH,-II (Chol) >ioo.Q_J
575 7-O-CHi-I (Chol) >100.(1--1
Mikroelektroforetska aplikacija agonistov EAA hrbteničnim nevronom in vivo
Zmožnost teh antagonistov glicinas za delovanje kot antagonisti NMDA receptorjev in vivo smo ocenili z uporabo i.v. dajanja proti odzivom posameznih nevronov podganje hrbtenjače na mikroelektroforetsko aplikacijo AMPA in NMDA. Spojine klase II Mrz 2/502 in Mrz 2/516 so bile močni antagonisti NMDA receptorjev in vivo z ID50 1,2 oziroma 1,8 mg/kg i.v., medtem ko so bile sorodne spojine klase I popolnoma neaktivne navzgor do 16 mg/kg i.v. Tri do štiri krat večje doze so tudi delovale antagonistično na odzive na AMPA, čeprav je to navidezno pomanjkanje selektivnosti v nasprotju s poskusi in vitro (glej tabelo I7a).
Tabela 17a
Mrz 2/ Substanca Mikroelektro- foretično NMDA (IDS0 rag/kg i.v. ) Mikroelektro- foretično AMPA (ID50 mg/kg i.v. )
501 8-Cl-I >16.0 > 16.0
502 8-Cl-II 1.2 4.9
5X9 8-F-I >16.0 >16.0
516 8-F-II 1.8 3.6 |
Soli holina so bile približno enako učinkovite kot proste kisline v tem modelu po dajanju i.v., vendar pa so bile nekoliko bolj selektivne za NMDA nasproti AMPA (Tabela 17b). Še enkrat, ne-N-oksidni derivati (spojine klase I) so bili neučinkoviti.
Tabela 17 b
Mrz 2/ Substanca Mikroelektro- toretično NMDA (IDS0 mg/kg i.v. ) Mikroelektro- 1 foretično AMPA (ID50 mg/kg i.v.) J
577 II (Chol) 34.0 >32.0
569 8-C1-I (Chol) >16.0 > 16.0 |
576 8-C1-II (Chol) 2.8 > 16.0 I
586 8-Br-I (Chol) >16.0 > 16.0 I
I 570 8-Br-II (Chol) 4.5 > 16.0 I
572 8-F-I (Chol) >16.0 >16.0 |
571 8-F-II (Chol) 4.7 9.2 |
DISKUSIJA
Štiri spojine klase II Mrz 2/499, 2/501, 2/514 in 2/516 so antagonisti glicinaB in vitro in imajo in vivo mnogo boljšo sistemsko / ali CNS uporabnost kot z njimi povezane sorodne spojine klase I (Mrz 2/585, 2/501, 2/503 in 2/519). Dostop do CNS je večji problem pri skoraj vseh antagonistih glicinaB razvitih do danes, vendar pa je ta nova klasa spojin premagala to večjo oviro in so torej terapevtično pomembni antagonisti glicinaBADICIJSKE SOLI
Z uporabo postopkov, ki so bili opisani zgoraj za spojine 5, 6, 7, 8, 9 in 10, smo pripravili adicijske soli s kvaternarnimi amini (na primer 4-tetrametilamonij, 4- tetraetilamonij), kvaternarnimi aminoalkoholi (na primer holin), ali kvaternarnimi amino kislinami (na primer Ν,Ν,Η-trimetilserin). Soli holina in 4-tetrametilamonija (4-NH3) bistveno izboljšajo biouporabnost in imajo prednost.
FARMACEVTSKI SESTAVKI
Spojine v skladu s predloženim izumom lahko vdelamo v farmacevtske sestavke, ki poleg učinkovite spojine predloženega izuma vsebujejo farmacevtsko sprejemljiv nosilec ali razredčilo. Takšne sestavke lahko dajemo živi živali, še posebej živemu človeku, po oralni ali parenteralni poti. Na primer, trdni pripravki ali farmacevtski sestavki za oralno dajanje imajo lahko obliko kapsul, tablet, pilul, praškov ali granulatov. V takšni trdni farmacevtski formulaciji aktivno snov ali pro-surovino zanjo zmešamo z najmanj enim farmacevtsko sprejemljivim razredčilom ali nosilcem kot s trsnim sladkorjem, z laktozo, škrobom, smukcem, sintetičnimi ali naravnimi gumami, z vezivom kot želatina, maščobami kot natrijev stearat, in/ali z dezintegrantom kot natrijev bikarbonat. Da bi omogočili zadrževalno-izpustni učinek lahko vgradimo v farmacevtski sestavek snov kot hidrokoloid ali drug polimer. Dodatne snovi kot maščobe ali pufri se prav tako lahko dodajo, kot je v tej stroki konvencionalno. Tablete, pilule ali granulate lahko po želji prevlečemo z enterično prevleko. Tekočine za oralno jemanje so lahko v obliki liposomov, emulzij, raztopin ali suspenzij, ki vsebujejo splošno uporabljena inertna razredčila kot vodo. Poleg tega takšni tekoči farmacevtski sestavki lahko vsebujejo tudi omočitvene, emulzijske, disperzijske ali splošno površinsko aktivne učinkovine kot tudi snovi, ki dajejo sladek, začinjen ali dišavni okus.
Primerni pripravki za parenteralno aplikacijo so lahko, med drugimi, sterilne vodne ali nevodne raztopine, suspenzije, liposomi ali emulzije. Dodatne snovi, ki jih je mnogo že znanih za te oblike predstavitve nekega farmacevtskega sestavka, lahko uporabimo kot farmacevtsko sprejemljivo razredčilo ali nosilni material.
Odvisno od nameravanega načina aplikacije in trajanja zdravljenja, lahko spreminjamo natančno odmerjanje aktivne spojine v pripravku izuma, posebno tako, kot lečeči zdravnik ali veterinar menita, da je primerno. Aktivne učinkovine predloženega izuma lahko samoumevno kombiniramo za dajanje z drugimi farmakološko aktivnimi učinkovinami.
Pri sestavkih predloženega izuma lahko v veliki meri spreminjamo deleže aktivne učinkovine v sestavku, pri čemer je potrebno zgolj, da aktivna sestavina izuma ali pro-surovina zanjo predstavljata ali zagotavljata učinkovito količino, t.j., takšno, da dobimo ustrezno učinkovito dozo, ki je v skladu z uporabljeno obliko doziranja. Jasno je, da lahko predpišemo nekoliko oblik doziranja kot tudi nekoliko posameznih aktivnih spojin istočasno ali približno istočasno ali celo v istem farmacevtskem sestavku ali formulaciji.
POSTOPKI ZDRAVLJENJA
Kot smo predhodno omenili, so spojine predloženega izuma ustrezne, posebno v obliki farmacevtskih sestavkov ali njihovih formulacij, za oralno ali parenteralno dajanje, pri čemer so točna posamezna odmerjanja kot tudi dnevni odmerki v nekem posebnem primeru seveda določeni v skladu z dobro utečenimi medicinskimi in/ali veterinarskimi principi v skladu z navodili lečečega zdravnika ali veterinarja.
Razen oralnega ali parenteralnega dajanja lahko uporabimo rektalno in/ali intravenozno dajanje, pri čemer odmerke na splošno znatno zmanjšamo, kjer uporabljamo parenteralno dajanje, čeprav ima oralno dajanje prednost. Ustrezna je približno eno do tri gramska količina na dan v obliki ponovljenih ali razdeljenih odmerkov. Lahko uporabimo tudi širše razpone, približno 0,5 do približno 10 g na dan, odvisno od okoliščin pri nekem individualnem primeru. Čeprav smo ugotovili, da je 500 mg aktivne bistvene sestavine posebno primernih za uporabo v tabletah, lahko posamezna odmerjanja varirajo od okoli 200 do 1000 mg, predlaganih 500 mg za uporabo v tabletah pa seveda lahko dajemo oralno, na primer enkrat do trikrat na dan. Samo ob sebi umevno je, da lahko predpišemo več kot eno tableto v eni posamezni dozi, kot naj bi bilo zahtevano za doseganje zgoraj ugotovljenih dnevno predlaganih eno do tri gramskih količin na dan za oralno dajanje.
Kot smo že ugotovili, spojino v skladu z izumom ali pro-surovino zanjo lahko dajemo živi živali, pri čemer je vključen tudi živi človek, po katerikoli od številnih poti, na primer, oralno kot v kapsulah ali tabletah, parenteralno v obliki sterilnih raztopin ali suspenzij ali z implantacijo peletov in v nakaterih primerih intravenozno v obliki sterilnih raztopin. Drugi samoumevni načini dajanja so kožni, podkožni, bukalni, intramuskularni in intraperitonalni, posebni način dajanja pa bo kot po navadi izbral lečeči zdravnik ali veterinar.
Tako smo videli, da predloženi izum zagotavlja nove pirido-ftalazin dionske spojine in farmacevtske sestavke zanje kot tudi postopke za borbo proti nevrološkim motnjam, ki so povezane z ekscitotoksičnostjo in s tem motenim delovanjem glutamatergične nevrotransmisije, pri čemer v celoti zagotavlja dolgo pričakovano rešitev predhodno obstoječega problema, ki ga prejšnja stroka ni primerno rešila.
Upoštevati je treba, da predloženi izum ni omejen na točne spojine, sestavke, metode ali postopke, ki smo jih razgrnili, ker bodo številne modifikacije in spremembe v tem oziru takoj jasne izurjeni osebi v stroki, v katero spada predloženi izum, zaradi česar moramo razumeti predloženi izum tako, da je omejen samo s celotnim obsegom, ki ga lahko legalno uskladijo priloženi zahtevki.
REFERENCE
Bottenstein JE, Sato GH (1979): Proč. natl. Acad. Sci. USA 76, pp 514-517. Canton T, Doble A, Miquet JM, Jimonet P, Blanchard JC (1992): J. Pharm. Pharmacol. 44, pp. 812-816.
Dansyz W, Parsons CG, Bresink I, Quack G (1995): Drug News & Perspectives 8, pp. 261-277.
Foster AC, Wong EHF (1987): Brit. J. Pharmacol. 91, pp. 403-409.
Hartfree EF (1972): Analytical Biochemistry 48, pp. 422-427.
Kessler M, Terramani T, Lynch G, Baudry M (1988): J. Neurochem. 52, pp. 1319-1328.
Leander JD, Lawson RR, Ornstein PL, Zimmerman DM (1988): Brain Res. p. 115.
Litchfield JT, Wilcoxon F (1949): J. Pharmacol. Exp. Ther. 96, p. 99.
Lowry OH, Rosenbrough NJ, Farr AL, Randell RJ (1951): J. Biol. Chem. 193, pp. 265-275.
Parsons CG, Gruner R, Rozental J (1994): Neuropharmacology 33, pp. 589-604. Wroblewski F, LaDue JS (1955): Soc. Exp. Biol. Med. 90, p. 210.
Yoneda Y, Suzuki T, Ogita K, Han DK (1993): J. Neurochem. 60, pp. 634-645.
Za MERZ + CO. GMBH & CO. [DE/DE] Eckenheimer Landstrasse 100-104
D-60318 Frankfurt am Main (DE)

Claims (14)

  1. PATENTNI ZAHTEVKI
    1. Spojina izbrana iz tistih piridil-ftalazin dionov, ki imajo naslednjo formulo:
    označena s tem, da sta R1 in R2 izbrana iz skupine sestoječe iz vodika, halogena in metoksi ali s tem, da R1 in R2 skupaj tvorita metilendioksi, ali farmacevtsko sprejemljiva sol le-te.
  2. 2. Spojina v skladu z zahtevkom 1, označena s tem, da je sol izbrana iz holina in iz 4-tetrametil amonijeve soli le-tega.
  3. 3. Spojina v skladu z zahtevkom 1, označena s tem, da je izbrana iz skupine, ki jo sestavljajo
  4. 4-hidroksi-1 -okso-1, 2-dihidro-piridazino[4,5-b] -kinolin 5-oksid,
    8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    8-fluoro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dih id ro piridazino[4,5-b]-kinol i n 5-oksid,
    7,8-dikloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazirio[4,5-b]-kinolin 5-oksid, in 7-kloro-8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid in farmacevtsko sprejemljiva sol katerekoli od zgoraj navedenih.
    4. Spojina v skladu z zahtevkom 2, označena s tem, da je izbrana iz skupine, ki jo sestavljajo
    4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidro-piridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
    8-kloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-fluoro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
    7,8-dikloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, in
    7- kloro-8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-d i h id ropirid azino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina.
  5. 5. Farmacevtski sestavek, označen s tem, da vsebuje kot aktivno sestavino učinkovito količino spojine v skladu z zahtevkom 1, delujoče kot antagonist glicinaB, skupaj s farmacevtsko sprejemljivim nosilcem ali razredčilom.
  6. 6. Farmacevtski sestavek, označen s tem, da vsebuje kot aktivno sestavino učinkovito količino spojine v skladu z zahtevkom 1, delujoče kot antagonist glicinaB, v obliki njene soli holina skupaj s farmacevtsko sprejemljivim nosilcem ali razredčilom.
  7. 7. Farmacevtski sestavek, označen s tem, da vsebuje kot aktivno sestavino učinkovito količino spojine, delujoče kot antagonist glicinaB, izbrane iz skupine, ki jo sestavljajo
    4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidro-piridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
  8. 8- kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    8-fluoro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    7,8-dikloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid, 7-kloro-8-bromo-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-okisd ali farmacevtsko sprejemljiva sol katerekoli od zgoraj navedenih.
    8. Farmacevtski sestavek, označen s tem, da vsebuje kot aktivno sestavino učinkovito količino spojine, delujoče kot antagonist glicinaB, izbrane iz skupine, ki jo sestavljajo
    4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidro-piridazino [4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-kloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-fluoro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
    7.8- dikloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
    7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, in
    7- kloro-8-bromo-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina.
  9. 9. Uporaba spojine v skladu z zahtevkom 1 za izdelavo zdravila za borbo proti nevrološkim motnjam, ki so povezane z ekscitotoksičnostjo ali motnjami pri delovanju glutamatergične nevrotransmisije pri živi živali, označena s tem, da vključimo v omenjeno zdravilo učinkovito količino spojine delujoče kot antagonist glicinaB.
  10. 10. Uporaba spojine v skladu z zahtevkom 1 v obliki njene soli holina za proizvodnjo zdravila za borbo proti nevrološkim motnjam, ki so povezane z ekscitotoksičnostjo in motnjami pri delovanju glutamatergične nevrotransmisije pri živi živali, označena s tem, da vključimo v omenjeno zdravilo učinkovito količino spojine delujoče kot antagonist glicinaB.
  11. 11. Postopek v skladu z zahtevkom 9, označen s tem, da spojino izberemo iz skupine, ki jo sestavljajo
    4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidro-piridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    8- kloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    8-bromo-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihiudropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    8-fluoro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-di h id ropi ridazi no [4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    7.8- dikloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid,
    7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid in
    7- kloro-8-bromo-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid ali farmacevtsko sprejemljiva sol katerekoli od zgoraj navedenih.
  12. 12. Postopek v skladu z zahtevkom 10, označen s tem, da spojino izberemo iz skupine, ki jo sestavljajo
    4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidro-piridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
    8- kloro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-bj-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, 8-fluoro-4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
    7,8-dikloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina,
    7-bromo-8-kloro-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksidna sol holina, in
    7-kloro-8-bromo-4-hidroksi-1 -okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-bj-kinolin 5-oksidna sol holina.
  13. 13. Postopek za pripravo 4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-bj-kinolin 5oksida, označen s tem, da obsega način pretvorbe dimetil kinolina-2,3-dikarboksilat 1oksida v sol hidrazina z reakcijo s hidrazin hidratom in hidrolizo dobljene soli hidrazina, da bi dobili želeni 4-hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid.
  14. 14. Postopek v skladu z zahtevkom 13, označen s tem, da tako dobljeni 4hidroksi-1-okso-1,2-dihidropiridazino[4,5-b]-kinolin 5-oksid pretvorimo v njegovo sol holina z reakcijo s hidroksidom holina.
SI9720048A 1996-07-25 1997-07-25 Derivati piridazino /4,5-b/-kinolin 5-oksida, njihova priprava in njihova uporaba kot antagonisti glicina SI9720048B (sl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/686,346 US5776935A (en) 1996-07-25 1996-07-25 Pyrido-phtalazin diones and their use against neurological disorders associated with excitotoxicity and malfunctioning of glutamatergic neurotransmission
PCT/EP1997/004057 WO1998004556A1 (en) 1996-07-25 1997-07-25 Pyridazino [4,5-b]-quinoline 5-oxide derivatives, their preparation and their use as glycine antagonists

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SI9720048A true SI9720048A (sl) 1999-12-31
SI9720048B SI9720048B (sl) 2002-02-28

Family

ID=24755940

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SI9720048A SI9720048B (sl) 1996-07-25 1997-07-25 Derivati piridazino /4,5-b/-kinolin 5-oksida, njihova priprava in njihova uporaba kot antagonisti glicina

Country Status (31)

Country Link
US (1) US5776935A (sl)
EP (1) EP0931081B1 (sl)
JP (1) JP3595342B2 (sl)
KR (1) KR100598206B1 (sl)
CN (1) CN1093860C (sl)
AR (1) AR004158A1 (sl)
AT (1) ATE224894T1 (sl)
AU (1) AU719993B2 (sl)
BR (1) BR9710569A (sl)
CA (1) CA2261923C (sl)
CZ (1) CZ289293B6 (sl)
DE (1) DE69715893T2 (sl)
DK (1) DK0931081T3 (sl)
EA (1) EA001711B1 (sl)
ES (1) ES2180041T3 (sl)
FI (1) FI112946B (sl)
GE (1) GEP20022801B (sl)
HK (1) HK1020193A1 (sl)
HU (1) HU223780B1 (sl)
IL (1) IL128225A (sl)
LT (1) LT4591B (sl)
LV (1) LV12260B (sl)
NO (1) NO310820B1 (sl)
PL (1) PL189572B1 (sl)
PT (1) PT931081E (sl)
SI (1) SI9720048B (sl)
SK (1) SK283536B6 (sl)
TW (1) TW402605B (sl)
UA (1) UA63911C2 (sl)
WO (1) WO1998004556A1 (sl)
ZA (1) ZA976612B (sl)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030176435A1 (en) * 2002-12-17 2003-09-18 Brown Dean Gordon Compounds and methods for the treatment of pain
US6444702B1 (en) 2000-02-22 2002-09-03 Neuromolecular, Inc. Aminoadamantane derivatives as therapeutic agents
US7250394B2 (en) * 2001-08-20 2007-07-31 Maiken Nedergaard Treatment of glial tumors with glutamate antagonists
EP1298581A1 (fr) * 2001-09-27 2003-04-02 C.S.E.M. Centre Suisse D'electronique Et De Microtechnique Sa Procédé et dispositif pour calculer les valeurs des neurones d'un réseau neuronal
US7037524B2 (en) * 2001-10-03 2006-05-02 Herbalscience, Llc Oral delivery of a botanical
US7029707B2 (en) * 2001-10-03 2006-04-18 Herbalscience, Llc Method of producing a processed kava product having an altered kavalactone distribution and processed kava products produced using the same
US7105185B2 (en) 2001-10-03 2006-09-12 Herbalscience, Llc Kavalactone profile
US7291352B2 (en) 2001-10-03 2007-11-06 Herbalscience Llc Methods and compositions for oral delivery of Areca and mate' or theobromine
US20050069596A1 (en) * 2001-10-03 2005-03-31 Gow Robert T. Compositions and methods comprising kava and anti-anxiety compounds
US7001620B2 (en) 2001-10-03 2006-02-21 Herbal Science, Llc Kavalactone product
US20050037025A1 (en) * 2002-10-03 2005-02-17 Gow Robert T. Methods and compositions comprising kava and mate' or theobromine
US20040082543A1 (en) * 2002-10-29 2004-04-29 Pharmacia Corporation Compositions of cyclooxygenase-2 selective inhibitors and NMDA receptor antagonists for the treatment or prevention of neuropathic pain
US7294353B2 (en) * 2003-10-24 2007-11-13 Herbalscience, Llc Methods and compositions comprising ilex
CN1917892A (zh) * 2003-10-24 2007-02-21 草本制药科学有限责任公司 包含冬青的方法和组合物
MX2007012443A (es) * 2005-04-08 2007-12-13 Abbott Lab Formulaciones farmaceuticas orales que comprenden acido fenofibrico y/o sus sales.
KR20100063087A (ko) * 2007-09-20 2010-06-10 코텍스 파마슈티칼스, 인크. 글루타메이트 시냅스 반응 향상을 위한 3-치환된 1,2,3-트리아진-4-온 및 3-치환된 1,3-피리미디논
EP2264035A1 (en) * 2009-06-04 2010-12-22 Merz Pharma GmbH & Co. KGaA Glycine B antagonists
US9737531B2 (en) 2012-07-12 2017-08-22 Glytech, Llc Composition and method for treatment of depression and psychosis in humans
CA3067162A1 (en) 2017-06-12 2018-12-20 Glytech Llc. Treatment of depression with nmda antagonists and d2/5ht2a or selective 5ht2a antagonists
USD895157S1 (en) 2018-03-06 2020-09-01 IsoTruss Indsutries LLC Longitudinal beam
CN109912503B (zh) * 2019-04-01 2022-04-08 江南大学 一种2,3-二酰基喹啉类化合物的合成方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9208511D0 (en) * 1991-05-09 1992-06-03 Ici Plc Compounds
US5597922A (en) * 1994-07-29 1997-01-28 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University And The University Of Oregon Glycine receptor antagonist pharmacophore

Also Published As

Publication number Publication date
JP2000515872A (ja) 2000-11-28
WO1998004556A1 (en) 1998-02-05
NO990306D0 (no) 1999-01-22
LT4591B (lt) 1999-12-27
EP0931081A1 (en) 1999-07-28
ATE224894T1 (de) 2002-10-15
PT931081E (pt) 2003-02-28
IL128225A (en) 2005-09-25
BR9710569A (pt) 1999-08-17
CA2261923C (en) 2006-01-24
HK1020193A1 (en) 2000-03-31
CN1228778A (zh) 1999-09-15
NO310820B1 (no) 2001-09-03
CA2261923A1 (en) 1998-02-05
HUP9903104A2 (hu) 2000-03-28
AR004158A1 (es) 1998-11-04
SI9720048B (sl) 2002-02-28
FI990134A (fi) 1999-03-24
DE69715893D1 (de) 2002-10-31
SK283536B6 (sk) 2003-09-11
KR100598206B1 (ko) 2006-07-07
DK0931081T3 (da) 2003-01-27
HUP9903104A3 (en) 2000-04-28
PL189572B1 (pl) 2005-08-31
PL331323A1 (en) 1999-07-05
CZ289293B6 (cs) 2001-12-12
UA63911C2 (uk) 2004-02-16
CN1093860C (zh) 2002-11-06
DE69715893T2 (de) 2003-01-30
HU223780B1 (hu) 2005-01-28
IL128225A0 (en) 1999-11-30
SK10399A3 (en) 2000-01-18
EA001711B1 (ru) 2001-06-25
ES2180041T3 (es) 2003-02-01
FI990134A0 (fi) 1999-01-25
TW402605B (en) 2000-08-21
JP3595342B2 (ja) 2004-12-02
KR20000029568A (ko) 2000-05-25
AU719993B2 (en) 2000-05-18
US5776935A (en) 1998-07-07
FI112946B (fi) 2004-02-13
LT99007A (en) 1999-07-26
EA199900161A1 (ru) 1999-10-28
LV12260A (lv) 1999-04-20
CZ2019997A3 (cs) 1999-09-15
LV12260B (en) 1999-08-20
AU4296997A (en) 1998-02-20
EP0931081B1 (en) 2002-09-25
GEP20022801B (en) 2002-09-25
NO990306L (no) 1999-03-15
ZA976612B (en) 1998-02-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SI9720048A (sl) Derivati piridazino /4,5-b/-kinolin 5-oksida, njihova priprava in njihova uporaba kot antagonisti glicina
WO2017063509A1 (zh) 氧杂螺环类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CH675722A5 (sl)
DD254202A5 (de) Verfahren zur herstellung von thiazole(4,5-c)chinolin-derivaten
CN102256973A (zh) 用于降低脂类水平的紫堇碱衍生物
DE69732090T2 (de) Indol-2,3-dione-3-oxim derivate
DE69911935T2 (de) Granulatimide-derivate zur behandlung von krebs
DE60100621T2 (de) 4-heteroaryl-1,4-diazabicyclo 3.2.2.]nonane, ihre herstellung und ihre therapeutische anwendung
JP2004513125A (ja) 疼痛治療のためのｎ−型カルシウムチャンネル拮抗薬
CN109937202A (zh) 作为pde2抑制剂的[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶化合物
UA124783C2 (uk) ФАРМАКОЛОГІЧНО АКТИВНІ АЛІЦИКЛІЧНО ЗАМІЩЕНІ ПОХІДНІ ПІРАЗОЛО[1,5-a]ПІРИМІДИНУ
DE69823339T2 (de) Atropisomere 3-heteroaryl-4(3h)-chinazolinone zur behandlung von neurodegenerativen und cns-trauma zuständen
Madsen et al. NMDA receptor agonists derived from ibotenic acid. Preparation, neuroexcitation and neurotoxicity
JP2906339B2 (ja) 活性成分としてデヒドロエボジアミン−ＨＣｌを含有する記憶増強および抗痴呆剤
DE69922936T2 (de) Verwendung von indol-2,3-dione-3-oximderivate als ampa-antagonisten
CZ9897A3 (en) Heterocyclic condensed morphinoid derivatives, pharmaceutical composition containing such compounds and application of said compounds
US6503922B2 (en) Bridged nicotine compounds for use in the treatment of CNS pathologies
JP2004513118A (ja) 疼痛治療のためのｎ−型カルシウムチャンネル拮抗薬
CN102781941B (zh) 用于治疗神经变性和神经精神紊乱的桥头胺环稠合吲哚和二氢吲哚
DE60019807T2 (de) Pyridazino-quinolin derivat und verfahren zur behandlung von schmerz
DE102004063223A1 (de) Chinolinderivat, dessen Verwendung, Herstellung und dieses enthaltendes Arzneimittel
DD238793A5 (de) Verfahren zur herstellung von amin-derivaten des pyrazins
CH669729A5 (sl)
DE60119949T2 (de) 1,2,5,10-TETRAHYDROPYRIDAZINOi4,5-BöCHINOLIN-1,10-DIONE UND IHRE ANWENDUNG IN DER BEHANDLUNG VON SCHMERZEN
NZ219242A (en) Quinazolinone derivatives and pharmaceutical compositions

Legal Events

Date Code Title Description
IF Valid on the event date
KO00 Lapse of patent

Effective date: 20090325