SK283536B6 - Pyridylftalazindióny, spôsob ich prípravy a použitie a farmaceutické prostriedky na ich báze - Google Patents

Pyridylftalazindióny, spôsob ich prípravy a použitie a farmaceutické prostriedky na ich báze Download PDF

Info

Publication number
SK283536B6
SK283536B6 SK103-99A SK10399A SK283536B6 SK 283536 B6 SK283536 B6 SK 283536B6 SK 10399 A SK10399 A SK 10399A SK 283536 B6 SK283536 B6 SK 283536B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
oxo
hydroxy
dihydropyridazino
oxide
quinoline
Prior art date
Application number
SK103-99A
Other languages
English (en)
Other versions
SK10399A3 (en
Inventor
Wojciech Danysz
Markus Gold
Ivars Kalvinsh
Christopher Graham Raphael Parsons
Irene Piskunova
Eugene Rozhkov
Original Assignee
Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa filed Critical Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa
Publication of SK10399A3 publication Critical patent/SK10399A3/sk
Publication of SK283536B6 publication Critical patent/SK283536B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D237/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings
    • C07D237/26—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4166—1,3-Diazoles having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. phenytoin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/26—Psychostimulants, e.g. nicotine, cocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Opisujú sa pyridylftalazindióny všeobecného vzorca (II), kde R1 a R2 sú vybrané zo súboru pozostávajúceho z vodíka, halogénu a metoxyskupiny, alebo kde R1 a R2 dohromady tvoria metyléndioxyskupinu a ich farmaceuticky prijateľné soli; spôsob prípravy týchto zlúčenín a tieto zlúčeniny na použitie na liečenie neurologických ochorení spojených s existenčnou toxicitou a chybnou funkciou glutamátergného neuronálneho prenosu u živých zvierat; farmaceutické prostriedky, ktoré ich obsahujú.ŕ

Description

Vynález sa týka určitých ďalej definovaných pyridylftalazindiónov, spôsobu ich prípravy, týchto zlúčenín na použitie na liečenie neurologických ochorení spojených s excitačnou toxicitou a chybnou funkciou glutamátergného neuronálneho prenosu pri živých zvieratách; a farmaceutických prostriedkov s obsahom týchto zlúčenín.
Doterajší stav techniky
Glutamát je pravdepodobne hlavným excitačným prenášačom v centrálnom nervovom systéme, ale pravdepodobne sa zúčastňuje aj pri mnohých patologických dejoch a dejoch s excitačnou toxicitou. Preto existuje značný záujem o vývoj antagonistov glutamátu na terapeutické účely (pozri Danysz et al., 1995). Glutamát aktivuje tri typy hlavných ionotropných receptorov, konkrétne receptory pre kyselinu a-amino-3-hydroxy-5-metyl-4-izoxazolpropiónovú (AMPA), kainát a N-metyl-D-aspartát (NMDA) a niekoľko typov metabotropných receptorov. Antagonizácia NMDA receptorov má potenciálne široký rozsah terapeutických aplikácií. Funkčná inhibícia NMDA receptorov sa môže dosiahnuť pomocou účinku na rôznych rozpoznávacích miestach, ako je primáme miesto pre neuroprenášač, glycínové miesto nesenzitívne na strychnín (glycínB), polyamínové miesto a fencyklidínové miesto lokalizované vnútri katiónového kanálu.
Znecitlivenie receptora môže predstavovať fyziologický proces slúžiaci ako endogénny kontrolný mechanizmus na zabránenie dlhodobej neurotoxickej aktivácii glutamátových receptorov, ale umožňuje ich prechodnú fyziologickú aktiváciu. V prípade NMDA receptorov je koagonista glycín endogénnym ligandom inhibujúcim také znecitlivenie pomocou aktivácie glycinB miesta. Zaujímavé je to, že ischémia zvyšuje nielen koncentráciu extracelulámeho glutamátu, ale aj glycínu a aj keď je druhý uvedený účinok menej výrazný, pretrváva omnoho dlhšie. Preto môžu niektoré úplné antagonisty glycínuB obnoviť normálny synaptický prenos za takých podmienok zvýšením znecitlivenia NMDA receptora na jeho fyziologickú úroveň. Okrem toho pri podaní antagonistov glycínu laboratórnym zvieratám bolo naznačené, že umožňujú lepšie terapeutické okienko ako činidlá pôsobiace na iných rozpoznávacích miestach NMDA receptorového komplexu. Nanešťastie zlé farmakokinetické vlastnosti väčšiny antagonistov glycínB miesta donedávna vylučovali jasné potvrdenie tejto hypotézy po systémovom podaní. Uviedlo sa však, že niektoré antagonisty glycínu majú veľmi dobré terapeutické účinky po systémovom podaní v modeloch hyperalgézie a ako anxiolytiká.
Podstata vynálezu
Teraz sme vyvinuli sériu tricyklických „pyridoftalazindiónov“. Zlúčeniny triedy I sú štruktúrne príbuzné s patentovanými antagonistami glycínuB od Zeneca (ICI, EPA 0516297 Al, 2. 12. 1992). Trieda II zlúčenín sú N-oxidové deriváty týchto zlúčenín a nie sú opísané ani naznačené v patente pre Zeneca. Zlúčeniny triedy II sú tiež účinnými antagonistami glycínuB in vitro a prejavujú omnoho lepšiu in vivo systémovú dostupnosť a/alebo prienik cez hematoencefalickú bariéru ako zlúčeniny triedy I. Okrem toho soli týchto zlúčenín, vyrobené napríklad adíciou cholínu a
4-tetrametylamoniaku (4-NH3) , majú ďalej zlepšenú biodostupnosť.
Nové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu majú predpokladané využitie v liečbe nasledovných ochorení: 1. akútnej excitačnej toxicity, ako je ischémia pri mŕtvici, traume, hypoxii, hypoglykémii a hepatálnej encefalopatii, 2. chronických neurodegeneratívnych ochorení, ako je Alzheimerova choroba, vaskuláma demencia, Parkinsonova choroba, Huntingtonova choroba, roztrúsená skleróza, amyotrofická laterálna skleróza, AIDS-neurodegenerácia, olivopontocereberálna atrofia, Tourettov syndróm, ochorenie motorických neurónov, mitochondriálna dysfunkcia, Korsakoffov syndróm a Creutzfeldtova-Jakobova choroba, 3. iných ochorení súvisiacich s dlhodobými plastickými zmenami v centrálnom nervovom systéme, ako je chronická bolesť, lieková tolerancia, závislosť a návyk (napríklad na opiáty, kokaín, benzodiazepíny a alkohol) a tarditívna dyskinéza, 4. epilepsie (generalizovaných a čiastočných záchvatov), schizofrénie, úzkosti, depresie, akútnej bolesti, spasticity a tinitu.
Predmetom vynálezu sú pyridylftalazindióny všeobecného vzorca (II)
kde R1 a R2 sú vybrané zo súboru pozostávajúceho z vodíka, halogénu a metoxyskupiny alebo kde R1 a R2 dohromady tvoria metyléndioxyskupinu, a ich farmaceutický prijateľné soli.
Vo výhodnom uskutočnení vynálezu sú soli vybrané z cholínovej a 4-tetramefylamóniovej soli.
Obzvlášť výhodne ide o pyridylftalazindión, ktorý je vybraný zo súboru pozostávajúceho z 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
8-chlór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
8-bróm-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
8-fluór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
7,8-dichlór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b] chinolín-5-oxidu,
7-bróm-8-chlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazmo[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
7-chlór-8-bróm-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu a farmaceutický prijateľných solí ktorejkoľvek z uvedených zlúčenín.
Ako konkrétny pyridylftalazindión možno uviesť najmä zlúčeninu, ktorá je vybraná zo súboru pozostávajúceho zo soli 4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5 -b] chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-chlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-bróm-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-fluór-4-hydroxy-l-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 7,8-dichlór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 7-bróm-8-chlór-4-hydroxy-l-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom a soli 7-chlór-8-bróm-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinol(n-5-oxidu s cholínom.
Predmetom vynálezu je ďalej aj farmaceutický prostriedok, ktorého podstata spočíva v tom, že obsahuje ako aktívnu zložku glycíntaa antagonistické množstvo pyridylftalazindiónu definovaného skôr spolu s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom.
Vo výhodnom uskutočnení obsahuje farmaceutický prostriedok podľa vynálezu obzvlášť výhodné zlúčeniny uvedené skôr.
Predmetom vynálezu sú ďalej definované pyridylftalazindióny na použitie na liečenie neurologických ochorení spojených s excitačnou toxicitou a chybnou funkciou glutamátergného neuronálneho prenosu pri živých zvieratách.
Napokon je predmetom vynálezu aj spôsob prípravy 4-hydroxy-1-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-o-
ktorého podstata spočíva v tom, že sa dimetylchinolín-2,3 -dikarboxylát-l-oxid vzorca (3)
O (3), kde Me znamená metyl, premení na hydrazínovú soľ vzorca (4)
(4), reakciou s hydrátom hydrazínu a vzniknutá hydrazínová soľ vzorca (4) sa hydrolyzuje za vzniku požadovaného 4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu (5) a potom sa získaný 4-hydroxy-1-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxid vzorca (5) prípadne premení reakciou s cholínhydroxidom na cholínovú soľ.
Nasledujúci opis, príklady a farmakológia sa uvádzajú na ilustráciu a nijako neobmedzujú rozsah predkladaného vynálezu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Metódy a výsledky
Základná štruktúra tricyklických „pyridoftalazindiónov“ triedy I a II
R'/R2 = H a/alebo halogén, R‘/R2 = H a/alebo 0-CH3, R1;R2 = H a/alebo metyléndioxyskupina.
Chemická časť
Všeobecný postup prípravy dimetylchinolín-2,3-dikarboxylát-1-oxidov (3)
Chladný (v ľadovom kúpeli) roztok 2-nitrobenzaldehydu (25 mM) a sodíka (27 mM) v bezvodom metanole (40 ml) sa spracuje počas 30 minút s roztokom dimetyl(dietoxyfosfinyljsukcinátu 2 (30 mM), pripraveným technikou opísanou v S. Linke et al., Lieb. Ann. Chem. 1980 (4), 542, v bezvodom metanole (10 ml). Vzniknutý tmavý roztok sa mieša pri 0 až 5 °C 1,5 hodiny, rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi etylacetát a vodu. Etylacetát sa vysuší síranom sodným a potom sa odparí za zníženého tlaku. Zvyšok sa rekryštalizuje z izopropylalkoholu za získania titulného dimetylchinolín-2,3-dikarboxylát-1-oxidu 3 ako špinavobieleho (alebo svetložltého) prášku.
Fyzikálne charakteristiky a ’H-NMR spektrálne údaje zlúčenín 3 sú uvedené v tabuľkách 1 a 2.
a) 5-Bróm-4-chlór-2-nitrobenzaldehyd (lf)
K zmesi kyseliny sírovej (40 ml) a dusičnanu sodného (2,66 g, 31,3 mM) sa pri 0 až 5 °C pridá 3-bróm-4-chlórbenzaldehyd (6,25 g, 28,5 mM). Vzniknutá zmes sa mieša pri izbovej teplote 7 hodín a potom sa riedi ľadovou vodou (300 ml). Vyzrážané tuhé látky sa filtrujú, premyjú sa vodou a sušia sa za získania prášku. Pri rekryštalizácii tohto materiálu zo zmesi izopropylalkoholu a vody (2 : 1) sa získa titulný 2-nitrobenzaldehyd 1 f (3,6 g, 51,5 %) ako svetložltý prášok, t. t. 81 až 82 °C.
Analýza pre C7HjBrClNO3: Vypočítané (%): C 31,79, H 1,14, N 5,30 Zistené (%): C 31,55, H 0,98, N 5,09.
’H-NMR (CDClj) δ: 8,22 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 10,39 (s, 1H).
b) 4-Bróm-5-chlór-2-nitrobenzaldehyd (lg)
Postupom podľa stupňa (a) s tou výnimkou, že ako východisková látka sa použije 4-bróm-3-chlórbenzaldehyd (2,97 g, 13,5 mM) sa získa titulná zlúčenina lg (1,9 g, 53,0 %) ako svetložltý prášok, 1.1. 95 až 98 °C. Analýza pre C7H3BrClNO3:
Vypočítané (%): C 31,79, H 1,14, N 5,30 Zistené (%): C 31,60, H 1,01, N 5,11.
’H-NMR (CDClj) δ: 8,02 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 10,39 (s, 1H).
Všeobecný postup prípravy dimetylchinolín-2,3-dikarboxylátov (7)
Roztok N-oxidu 3 (10 mM) a chloridu fosforitého (30 mM) v bezvodom chloroforme (100 ml) sa zohrieva pri teplote spätného toku 7 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi etylacetát a vodu. Organická vrstva sa suší síranom sodným a potom sa odparí za zníženého tlaku. Zvyšok sa rekryštalizuje z izopropylalkoholu za získania titulného dimetylchinolín-2,3-dikarboxylátu 7 ako špinavobieleho (alebo svetložltého) prášku.
Fyzikálne charakteristiky a ’H-NMR spektrálne údaje zlúčenín 7 sú uvedené v tabuľkách 3 a 4.
Všeobecný postup prípravy 4-hydroxy-l-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidov (5)
K miešanému roztoku (alebo suspenzii) dimetylchinolín-2,3-dikarboxylát-l-oxidu 3 (5 mM) vo vriacom etanole (25 ml) v atmosfére argónu sa pridá hydrát hydrazínu (15 mM) a zmes sa zohrieva pri teplote spätného toku 3 hodiny, počas ktorých sa vytvorí tmavá zrazenina. Po ochladení na izbovú teplotu sa reakčná zmes filtruje a odobraný tuhý materiál sa premyje etanolom a éterom a suší sa za získania hydrazínovej soli 4. Táto látka sa mieša pri 70 až 110 °C 3 hodiny v kyseline octovej (15 ml) a po ochladení na izbovú teplotu sa zmes zriedi vodou (45 ml) a potom filtruje za získania tuhej látky. Získaná tuhá látka sa premyje etanolom a vysuší za vzniku žltej tuhej látky. Pri niekoľkých rekryštalizáciach tejto látky z dimetylformamidu sa získa titulný 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxid 5 ako oranžový prášok.
Fyzikálne charakteristiky a ‘H-NMR spektrálne údaje zlúčenín 5 sú uvedené v tabuľkách 5 a 6.
Všeobecný postup prípravy l,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydropyridazino[4,5-b]chinolínov (9)
K miešanému roztoku (alebo suspenzii) dimetylchinolín-2,3-dikarboxylátu 7 (5 mM) vo vriacom etanole (25 ml) sa pridá hydrát hydrazínu (30 mM) a zmes sa zohrieva pri teplote spätného toku 8 hodín, počas ktorých sa vytvorí zrazenina. Po ochladení na izbovú teplotu sa reakčná zmes filtruje a odobraný tuhý materiál sa premyje etanolom a éterom a suší sa za získania hydrazínovej soli 8. Táto látka sa mieša pri 70 až 110 °C 3 hodiny v kyseline octovej (15 ml) a po ochladení na izbovú teplotu sa zmes riedi vodou (45 ml) a potom filtruje za získania tuhej látky. Získaná tuhá látka sa premyje etanolom a vysuší za vzniku titulného pyridazino[4,5-b]chinolínu 9 ako žltého prášku.
Fyzikálne charakteristiky a ’H-NMR spektrálne údaje zlúčenín 9 sú uvedené v tabuľkách 7 a 8.
Všeobecný postup prípravy 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxid-chinolínových solí (6) a l,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydropyridazino[4,5-b]chinolín, chinolínových solí (10)
K miešanému roztoku pyridazino[4,5-b]chinolínu 9 alebo N-oxidu 5 (10 mM) v metanole (50 ml) sa pridá hydroxid cholínu (10,5 mM, 45 % hmotn. roztok v metanole. Vzniknutý roztok sa skoncentruje pomocou rotačnej odparky a tuhý zvyšok sa rekryštalizuje z etanolu za vzniku titulnej cholínovej soli 10 alebo 6 ako hygroskopického oranžového (alebo červeného) prášku.
Fyzikálne charakteristiky a ’H-NMR spektrálne údaje zlúčenín 6 a 10 sú uvedené v tabuľkách 9, 10 a 11, 12 v príslušnom poradí.
o N*Me3CH2CH2OH
1 1 1 t
R1-W YNH
10 0
Zlúč. R1 RJ Vzorec (m.h.) Elementárna analýza 1.1. (°ci Výťa žok 1%)
Vypočítané (%) Zistené (%)
C | H | N C 1 H 1 N
3a H H C|1HUNOS (261.2) 59.77 4.24 5.36 59.84 4.11 5.31 175-176 61.5
3b r< C1 CuHuCINO, (295.7) 52.81 3.41 4.74 52.80 3.32 4.78 126-127 49.0
3c n Br CnHleBrNOs (340.2) 45.89 2.96 4.11 45.57 2.75 4.00 160-170 72.0
3d H F C13H1oFNO, (279.2) 55.86 3.60 5.01 55,19 3.3B 4.95 194-196 49.0
3e C1 C1 CuH,CliNOs (330.1) 47.30 2.75 4.24 47.1B 2.62 4.14 183-186 41.0
3f C1 Br C13H,BrClNO5 (374.6) 41.69 2.42 3.74 41.39 2.13 3.65 171-173 60.0
3g Br C1 CtjRjBrCINOjf 41.69 2.42 3.74 41.68 2.25 3.75 206-208 62.5
374.6)
Tabuľka 2: 'H-NMR (CDC13) spektrálne údaje pre zlúčeniny 3
Zlúčenina (ppm), J (Hz)
3a 3.98(s, 311), 4,11, (s, 3H), 7.66-8.05 (m, 311), 8.43 (s, 111), 8.75 (dd. J, = 8.5, J2 = 2.0,1 Tí)
3b 3.98 (s, 3H), 4.11 (s, 3H), 7.71 (dd, J( =8.5, J2 = 2.5,111), 7.91 (d. J =8.5, t H), 8.38 (s, 1H), 8.74 (d, J =2.5,1 H)
3c 3.91 (s,3H).4.07(s,3H). 7,13 (dd. J, -9.5. J2 = 2.0,11I), 7.44 (d, J = 2.0, lH), 8.22 (s, 111), 8.58 (d, J =9.5,11J)
3d 3.98 (s, 311), 4.11 (s, 31 J), 7.48-7.72 (m, 211), 8.31 (s, 111), 8.73 (dd, J, =» 10.0, J2 = 5.0,1H)
3c 3.97 (s, 311), 4.10 (s, 3Π), 8.08(s, 111), 8.28 (s, Hl), 8.83 (s, III)
3f 3.97 (s, 311), 4.09 (s, 3H), 8.26 (s, 211),8.82 (s, 1H)
3β 3.97 (s, 311), 4.09 (s, 3H), 8.06 (s, 111), 8.27 (s, 1 H), (02 9s, 1 H)
Tabuľka 3: Pripravené dimetylchinolín-2,3-dikarboxyláty 7
Zlúč.
R' R’
Vzorec (m.h.)
Ripmencarna analýza 1.1.
wnočítane W I Zistené (%)
C 1 H 1 N Č | H ( N (°C)
Výťažok (t)
7a H H
CUH„NO,
(245.2)
7b H C1 (279.7)
7c H Br CuHwBrNO» (324.1)
7d H F CuIfioFNO< (263.2)
7e a a CbUANO, (314.1)
7f Cí nr CulIsBrCÍOí (348.6)
’g Br a CDII«Br€10< (348.6)
«3.67 4.52 S.7I 63.48
$5.83 3.60 5.01 55.74
48.17 3.11 4.32 48.09
59.32 3.83 5.32 59.23
49.71 2.89 4.46 49.56
43.55 2.53 3.91 43.60
43.55 2.53 3.91 43.47
4.52 5.63 104-106 08.0
3.59 $.00 152-154 90.0
3.05 4.26 155-157 81.5
3.79 5.26 119-121 85.0
2.85 4.41 113-115 96.0
2.48 3.88 128-130 95.0
151 3.87 142-144 67.0
Tabuľka 4: 'H-NMR (CDC13) spektrálne údaje pre zlúčeniny 7
Zlúčenina (ppm), J (I lz)
7a 3.98 (s, 311), 4.06 (s, 3i 1). 7.58-8.00 (m, 3H), 8.21 (dd, J| = 9.5, .I2 - 2.0,111), 8.77 8.77 (s, IH)
7b 3.97 (s, 3Π),4.06 (s, 311), 7.76 (dd, J, - 9.5, J2 - 2.0, IH), 7.90 (d, J « 2.0,1 H), 8.67 (s, 111)
7c 3.97 (s, 311),4.07 (s, 3H), 7.90 (dd, J, -9.5,J2-2.0, H 1),8.09 (m, 211),8.66 (s, 111)
7d 3.98 (s, 3H). 4.07 (s, 3H). 7.49-7.72 (ra, 2H), 8.20 (dd, J, = 10, J2 = 5.0.111), 8.69 (s. IH)
7c 3.97 (s,311).4.04 (s.311), 8.02(s, 111), 8.31 (s, IM), 8.64 (s, III)
7Γ 3.98 (s, 311), 4.06 (s, 311),8.24 (s, Hl),8.31 (s, IH),8.68(s, IH)
3.96(s,311),4.04 (s,311),8.03 (s, IH), 8.53 (s, IH), 8.62 (s, 111)
Tabuľka 5: Pripravené 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidy 5
Mrz2/ Zlúč. R1 R2 Vzorec (m.h.) Elementárna analýza 1.1. (°C) Výťažok (*)
Vypočítané (¾) Zistené (t)
c 1 JJ L N C 1 H 1 N
499 5a H H CuHjNjOj (229.2) 57.65 3.08 18.33 57.56 2.93 18.22 >300 44.5
502 5b H Cl ChIUCÍNjOj (263.6) 50.11 2.29 15.94 49.34 2.29 15.40 >300 88.0
514 5c II Br CnllsBrNjOj (308.1) 42.88 1.96 13.63 42.57 1.91 13.49 >300 78.0
516 5d H F ChHsFNjOj (247.2) 55.44 2.44 16.99 53.44 2.35 16.90 297-298 37.0
518 5e Cl C! CnHjCIjNjOj (298.1) 44.32 1.69 14.10 44.17 1.91 14.34 >300 16.0
551 5Γ C1 Br CnlIjBrCINjOj (342.5) 38.57 1.47 12.27 37.93 1.33 11.94 >300 15.0
568 se Br Cl CnIIíBrClNjOj 38.57 1.47 12.27 38.17 1.31 12.00 >300 17.0
(342.5)
Tabuľka 6: 'H-NMR (CDC13) spektrálne údaje pre zlúčeniny 5
Zlúčenina (ppm), JII lz) orotonv aromatického kruhu (a OCH3)
NH, OH (zameniteľné)
5n 7.R8-B.28 (m, zii), mo-s./v (in, zii), v.07 (s, IH)
10.65 (br. s, IH), 12.00 (br. s, 111)
5b 8.07 (dd, J, = 9.0. Jj- 2.5,1H),8.59 (d, J = 9.0, IH), B.69 (d, J - 2.5, IH), 9.11 (s, IH)
12.05 (br.s, IH), 14.60(br.s, IH)
5c 8.27(dd, J, = 9.0, J2 = 2.0,1H), 8.60(d, J = 9.0, IH), 8.82 (d, J = 2.0, III), 9.00 (s, IH)
11.00 (br. s, IH), 12.00(br.s, Hl)
5d 8.07 (ddd, J, = 9.5, J2 = 8.5, J, - 2.5,111), 8.36 (dd, J, = 9.5, J2 Jj = 5.0,111),9.02 (s, Hl)
5e 8.83 (s, 111), 8.90 (s, t H), 9.06 (s, 111)
5Γ 8.80(s, 111),9.00(s, IH),9.01 (s, 111)
8.90 (s, 1 H), 9.01 (s, I H), 9.04 (s, 1 H)
2.5, III), 8.75 (dd, J| = 9.5, 10.92 (br.s, 1 H), 12.00 (br.s, III)
11.25 (br.s, III), 12.05 (br.s, III)
12.06 (br.s, Hl), 14.28 (br.s, III)
12.13 (br.s, III), 14.32 (br.s, IH)
SK 283536 Β6
Tabuľka 7: Pripravené l,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydropyridazino[4,5-b]chinolíny 9
Mrz27
Zlúč.
R1
R’
Vzorec (m.h.)
Elementárna analýza
Vypočítané {%] Zistené
Č | Íl J~Ň C | H ΠΓ-
Výťažok (%)
585 9a l< 11 CnHiNjOi (213.2) 61.97 3.31 19.71 61.43 3.45 19.16 >300 86.0
50i 9b H Cl Ct.lUCINjOj (247.6) 53.35 2.44 16.97 32.89 2.28 16.68 >300 88.5
503 9c II Br CfMBrNjOj (292.1) 45.23 2.07 14.39 44.74 2.11 14.09 >300 82.0
519 9d II F chii6fna (231.2) 57.14 2.60 18.18 56.73 2.47 17.99 >300 84.0
515 9e Cl Cl ChIIANA (282.1) 46.84 1.79 14.90 46.44 1.70 14.87 >300 82.5
539 9f C1 Br C|,lIsBrCIN)O3 (326.5) 40.46 1.54 12.87 40.16 1.42 12.88 >300 69.5
538 ?8 Br Cl C||HjBrC!NjOj 40.46 1.54 12.87 40.23 1.40 12.98 >300 88.0
(326.5)
Tabuľka 8: '-H-NMR (CDC13) spektrálne údaje pre zlúčeniny 9
Zlúč. 8(ppm),J(Hz)
protóny aromatického kruhu NH (zameniteľné)
9a 7.76-8.16 (m, 2H), 8.22-8.47 (m, 211), 9.30 (s, 111) 11.60 (br. s, 211)
9b 8.02 (dd, J i - 9.0, J3 - 2.5,1H), 8.28 (d, J = 9.0,111), 8.52 (d, J - 2.5,1 H), 9.26 (s; 1 í 1) 11.60 (br. s, 211)
9c 8.16 (m, 211), 8.60 (br. s, 1 H), 9.25 (s, 111) 11.55 (br. s, 211)
9d 7.93 (ddd. J, = 9.5, J2(|tn -9.0, J3 = 2.5, III), 8.18 (dd, J1(II.F) = 9.5, J2 =» 2.5, Hl), 8.36 (dd, Jt“ 9.5,^)-5-5. ΙΠ). 9.24 (s, 111) í 1.90 (br. s, 2TI)
9e 8.47 (s, 111), 8.67 (s, 111),9.22 (s, lll) 11.60 (br. s, 211)
9Γ 8.52 (s, 11-1),8.91 (s, IH), 9.28 (s, 111) ll.65(br. s,2II)
9g 8.68 (s, 111), 8.71 (s, 1 H),9.26 (s, Hl) 11.70 (br. s, 21 J)
Tabuľka 9: Pripravené 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidy-cholínové soli 6
Mrz2/ Zlúč.
R'
Vzorec (m.h.)
Elementárna analýza
Vypočítané pro 6xHa0(i) Zistené (k)
C | 11 ] N C | 11 | N
Výťažok (%)
577 6a H H CuHjjNA (332.4) 54.84
576 6b H Cl Ci4H„C1N,O4 49.93
(366.8)
570 6c 11 Br C|íH|»BrNA 44.75
(411.4)
571 6d 11 F ΓμΒ,,ΡΝΑ 51.19
(366.4)
574 6e Cl Cl
6Γ Cl Br
6« Br Ct
6.32 15.99 54.76 632 15.86 179-180 52.5
5.50 14.55 49.31 5.47 14.24 185-188 87.5
4.92 13.04 44.85 4.93 12.86 391-193 71.5
5.63 14.92 51.74 5.73 14.95 201-203 27.0
‘x-1.0 (a, b, c)
0.5 (d)
SK 283536 Β6
Tabuľka 10: 'H-NMR (CDC13) spektrálne údaje pre cholínové soli 6 zlúč.
protóny cholínu (ppm), J ÍHz) protony aromatického kruhu
6b 3.22 (s, 9H), 3.50 (m, 2tt). 4.01 (m, 211)
6c 3.20ÍS, 911), 3.48 (m, 211), 3.99 (m, 2! I)
6cl 3.22 (s, 9H), 3.51 (m, 2R), 4.02 (m, 211)
7.69-8,00 (m, 2H), 8.18 (d,J = 8.0,1 H), 8.59 (s, 111), 8.76 (d, J = 8.5,111)
7.88 (dd, J, - 9.0, J,» 2.5,1 H), 827 (d, J - 2.5.1 H), 8.52 (s, 111), 8.76 (d, J - 9.0,111)
7.99 (dd, J, <= 9.5, J2» 2.0. III), 8.41 (d, J - 2.0,1 (I). 8.53 (s. 11f), 8.64 (d, 3 = 9.5. III)
7.64-7.98 (m, 211), 8.62 (s, 1H), 8.87 (dd, J, - 10.0, J, = 5.0, ΠΙ)
Tabuľka 11: Pripravené l,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydropyridazino-[4,5-b]chinolín-cholínové soli 10
Vzorec
Elementárna analýza
Mrz2/ Zlúč.
Vypočítané pro ΙΟχΗ^Ο (k)
C I H |~
Zistené (V)
I h I n
1.1.
(°C1
Výťažok <%)
604 10a II H ĽfíHiiiN^Oj (316.36) 54.26 7.59
596 10b 11 CI ci4h,»cina (350.8) 54.08 5.53
586 roc H Br C|4lIt4BrN40j (395.3) 43.64 5.49
572 lOd H F CtjH^FNxOj (331.4) 52.16 15.20
574 lOe C1 C1 CI41I„CI3N4O, (385.3) 47.65 4.99
598 tor a Br C(4n|,BrCIN40j (429.7) 42.92 4.5
597 [Og Br CI C15fl„1Jr€IN40j (429.7) 42.92 43
• x » 0.25 (d)
1.0 (d, c)
2.5 (c)
14.06 54.23 7.39 14.25 102-110 82.0
15.76 54.(0 555 15.61 189-191 «4.0
12.72 44.07 5.14 12.73 234-236 61.0
5.74 52.08 6.23 15.19 229-230 95.0
13.89 47.24 5.03 13.60 205-208 83.(1
1X51 42.78 4.60 1X44 207-209 92.0-
12.51 42.66 4.57 12.37 201-203 95.0
Tabuľka 12: 'H-NMR (CDC13) spektrálne údaje pre cholínové soli 10 cholínové protóny
Zlúč.
δ (ppm), J (Hz) protóny aromatického kruhu
10a 321 (s. 911). 3.51 (m, 211). 4.01 (m, 2H) 7.64-8.57(m,4H),9.17 (s, Itl)
10b 3.25 (s, 9H). 3.52 (m, 2H), 4.02 (m, 2H) 7.89 (dd, J) = 9.0, Jj = 2.5. Itl), 823 (d,3 = 2.5, III),834 (d. J = 9.0, III), 9.13 (s, 1 H)
10c 322 (s, 911), 3.47 (m, 211). 357 (m, 2H) 7.99 (dd, .1, - 9.0, J2 - 2.0,111), 826 (d. J >- 9.0,111), 8.41 (d, J « 2.0.1H), 9.09 (s, Hl)
UM 320(s, 9H), 3.49 (m, 2H), 3.98 (m. 2ID 7.64-7.81 (m,211).839(dd. J, -9.5, J3~5.0,1H),9.l2(s, 111)
10c 3.22 (s, 9H), 3.51 (m. 211), 4.02 (m, 2H) 8.46 (s, 111),8.55 (s, 111),9.14 (s, 1H)
ior 322 (s, 911), 3.50 (m, 211), 4.00 (m, 2H) 8.53 (s, 1H),8.64 (s, 111),9.13 (s, 1H)
IOg 322 (s, 9H), 3.50 (m, 211), 4.02 (m, 211) 8.43 (s, 1H), 8.73 (s, III), 9.13 (s. Hl)
SK 283536 Β6
Farmakologická časť
In vitro
Štúdie väzby na receptor Membránové prípravky a určenie proteínu
Príprava tkaniva sa uskutoční podľa Foster a Wong (1987). Samce potkanov Sprague-Dawley (200 až 250 mg) sa usmrtia a rýchlo sa im odoberú mozgy. Mozgová kôra sa oddelí a homogenizuje sa v 20 objemoch ľadovo chladnej 0,32 M sacharózy pomocou skleného-teflónového homogenizátora. Homogenizát sa centriíúguje pri 1000 x g 10 minút. Peleta sa odstráni a supematant sa centriíuguje pri 20 000 x g 20 minút. Vzniknutá peleta sa resuspenduje v 20 objemoch destilovanej vody a centrifúguje sa 20 minút pri 8000 x g. Potom sa supematant a „buffy coat centrifúgujú trikrát (20 minút pri 48 000 x g) za prítomnosti 5 mM Tris-HC1, pH 7,4. Všetky kroky centrifugácie sa uskutočnia pri 4 °C. Po resuspendovaní v 5 objemoch 5 mM Tris-HCl, pH 7,4 sa membránová suspenzia rýchlo zmrazí pri -80 °C a uskladní sa do testovania. Pri testovaní sa membrány rozmrazia a premyjú sa 4-krát resuspendovaním v 5 mM Tris-HC1, pH 7,4 a centrifugáciou 20 minút pri 48 000 x g. Konečná peleta sa suspenduje v testovacom tlmivom roztoku.
Množstvo proteínu vo výslednom membránovom prípravku sa určí technikou, ktorú opísal Lowry (1951) s určitými modifikáciami (Hartfree, 1972). 50 μΐ proteínových vzoriek (trojito) sa zriedi na objem 1 ml destilovanou vodou a spracuje sa s 0,9 mi roztoku obsahujúceho 2 g vínanu draselno-sodného a 100 g Na2CO3 v 500 ml IN NaOH a 500 ml vody. Slepé vzorky a štandardy (s hovädzím sérovým albumínom) sa spracujú rovnakým spôsobom. Tuby sa umiestnia do vodného kúpeľa pri 50 °C na 10 minút a ochladia sa na izbovú teplotu. Pridá sa 100 μΐ roztoku obsahujúceho 2 g vínanu draselno-sodného a 1 g CuSO4.5H2O v 90 ml vody a 10 ml NaOH. Vzorky sa nechajú pri izbovej teplote najmenej 10 minút a potom sa za miešania rýchlo pridajú 3 ml Folinovho-Ciocaltcuovho činidla (1 ml činidla zriedený 15 ml vody). Tuby sa znova zohrejú na 50 °C na 10 minút a ochladia na izbovú teplotu. Absorbancie sa potom odčítajú v 1 cm kyvetách pri 650 nm. Výsledná koncentrácia proteínu použitého pre naše štúdie je medzi 100 a 250 pg/ml.
Inkubácia v obidvoch väzbových testoch sa ukončí použitím filtračného systému Millipore. Vzorky, všetky v trojakom uskutočnení, sa trikrát prepláchnu 2,5 ml ľadovo chladného testovacieho tlmivého roztoku cez filtre zo sklených vláken, získané od Schleicher and Schuell, pri konštantnom vákuu. Po separácii a vypláchnutí sa filtre umiestnia do scintilačnej kvapaliny (5 ml; Ultima Gold) a rádioaktivita zachytená na filtroch sa určí pomocou bežného kvapalinového scintilačného počítača (Hcwlett Packard. Liquid Scintillation Analyser). „Celková väzba“ je absolútne množstvo rádioligandu naviazaného za neprítomnosti akýchkoľvek ďalších substancií, zatiaľ čo „nešpecifická“ väzba je určená za prítomnosti vysokých koncentrácií kompetitívneho činidla.
(3H)5,7-DCKA väzbový test
Pokusy sa uskutočnili technikou opísanou predtým (Canton et al., 1992; Zoneda et ak, 1993). Membrány sa suspendovali a inkubovali v 10 mM Tris-HCl, pH 7,4. Inkubačná doba bola 45 minút pri 4 “C. Nešpecifická väzba (3H)5,7-DCKA sa definovala adíciou neoznačeného glycínu pri 0,1 mM. Ukončovací roztok obsahoval 10 mM Tris-HC1 a 10 mM síranu horečnatého, pH 7,4. Filtrácia sa uskutočnila tak rýchlo, ako to bolo možné. Nahradzovacie pokusy sa uskutočnili s fixnou koncentráciou (3H)5,7
-DCKA 10 nM. Testované zlúčeniny sa zriedili vodou alebo DMSO a pridali sa najmenej v 5 rôznych koncentráciách.
(3H) glycínový väzbový test (3H)glycínové väzbové testy sa uskutočnia technikou, ktorú opísal Kessler a spolupracovníci (1989). Potkanie kortikálne membrány sa pripravia opísanou technikou a výsledná peleta sa suspenduje v 50 mM Tris-acetátu, pH 7,4. Aspoň 5 rôznych koncentrácií testovaných zlúčenín sa inkubuje s 20 nM (3H)glycínu 30 minút pri 4 °C za prítomnosti 100 μΜ strychnínu. Všetky zlúčeniny sa rozpustia vo vode alebo v DMSO v príslušnom poradí. Nešpecifická väzba sa určí obsiahnutím 100 μΜ glycínu v inkubačnej zmesí. Inkubácia sa ukončí zriedením vzoriek 2 ml stop-roztoku (50 mM Tris-HCl obsahujúci 10 mM síranu horečnatého, pH 7,4, ochladeného na teplotu nižšiu ako 2 °C) a potom ďalším vypláchnutím 2,5 ml tlmivého roztoku. Filtrácia sa uskutoční tak rýchlo, ako je to možné.
Výsledky z testovaných zlúčenín malo IC50 v (3H)-DCKA teste < 1 μΜ (pozri tabuľka 13). Účinnosť šiestich vybraných zlúčenín v (’H)-glycínovom teste sa na prvý pohľad zdá vyššia, ale táto skutočnosť sa neodráža v Kd (nie je uvedené). Z obzvlášť zaujímavých zlúčenín majú zlúčeniny triedy II vyššiu afinitu ako zlúčeniny triedy I v (3H)-DCKA teste. Tento rozdiel nie je taký zreteľný v (3H)-glycínovom teste.
Tabuľka 13a
Mrz/2 Zlúčenina (’H)-DCKA IC50 μΜ (3H) -glycín ICS0 μΜ
499 II 16,0
501 8-C1-I 0,120 0,080
502 8-C1-I1 0,020 0,013
503 8-Br-I 0,250 0,013
514 8-Br-II 0,010 0,004
519 8-F-I 1,100 0,015
516 8-F-II 0,300 0,017
515 7,8-diCl-I 0,530
518 7,8-diCl-lI 0,650
Tabuľka 13b_____________________________
Mrz/2 Zlúčenina (Ή) -DCKA ΙΟ^,μΜ
572 8-F-I (chol) 1,14
571 8-F-II (chol) 0,32
569 8-C1-I (chol) 0,97
576 8-C1-II (chol) 0,45
Plošné svorky
Colliculi superiores sa získali z potkaních embryí (E20 až E21) a potom sa preniesli do Hankovho pufrovaného salinického roztoku bez vápnika a horčíka (Gibco) na ľade. Bunky sa mechanicky disociovali v 0,05 % DNAze/0,3 % ovomukoidu (Sigma) a potom nasledovala 15-minútová preinkubácia s 0,66 % trypsínom/0,1 % DNAzou (Sigma). Disociované bunky sa potom centrifúgovali 10 minút pri 18 G, resuspendovali v minimálnom esenciálnom médiu (Gibco) a umiestnili s hustotou 200 000 buniek na cm2 na plastové Petriho misky (Falcon), vopred potiahnuté poly-L-lyzínom (Sigma). Bunky sa kultivovali v NaHCO3/HEPES pufrovanom minimálnom esenciálnom médiu doplnenom 5 % fetálnym teľacím sérom a 5 % konským sérom (Gibco) a inkubovali sa pri 37 °C s 5 % CO2 pri 95 % vlhkosti. Mé dium sa úplne vymenilo po inhibícii ďalších mitos gliálnych buniek cytozín-P-D-arabinofuranozidom (20 μΜ, Sigma) po asi 7 dňoch in vitro. Potom sa médium menilo čiastočne dvakrát za týždeň. Kultúry colliculus superior sa vybrali na tieto pokusy, pretože umožňujú veľmi stabilné zaznamenávacie podmienky, ktoré sú absolútnou požiadavkou pre pokusy závislosti od napätia a pre kinetické pokusy. Okrem toho relatívne malé neuróny (telo 15 až 20 pm v priemere) sú ideálne vhodné na minimalizáciu problémov súvisiacich s difúziou tlmivého roztoku na koncentračné svorkové pokusy.
Snímanie plošných svoriek sa uskutočnilo z týchto neurónov pomocou elektród z lešteného skla (4 až 6 mO) v module celých buniek pri izbovej teplote (20 až 22 °C) pomocou zosilňovača EPC-7 (List). Testované zlúčeniny sa aplikovali otvárateľnými kanálmi systému vyrobeného bežným spôsobom na rýchlu superfúziu s bežným výtokom (10 až 20 ms výmenný čas). Obsahy intracelulárneho roztoku boli nasledovné (mM): CsCl (120), TEAC1 (20, EGTA (10), MgCl2 (1), CaCl2 (0,2), glukóza (10), ATP (2), cAMP (0,25; pH sa upravilo na 7,3 CsOH alebo HC1. Extraceluláme roztoky mali nasledovné základné zložky (mM): NaC1 (140), KC1 (3), CaCl2 (0,2), glukóza (10), HEPES (10), sacharóza (4,5), tetradotoxín (TTX 3*10-4). Pre väčšinu pokusov bol glycín (1 μΜ) prítomný vo všetkých roztokoch. Pokusy na testovanie závislosti tricyklických „pyridoftalazindiónov na glycíne sa uskutočnili v trvalej prítomnosti zvyšujúcej sa koncentrácie glycínu (1 až 10 μΜ).
Výsledky
Päť párov tricyklických „pyridoftalazindiónov“ malo IC50 proti vnútornému prúdu vzhľadom na NMDA (200 μΜ) v nízkom rozmedzí μΜ a zlúčeniny triedy II boli všeobecne dva až trikrát účinnejšie ako zlúčeniny triedy I (tabuľka 14a). Najúčinnejšie z týchto zlúčenín boli Mrz 2/502 a Mrz 2/514. Tento účinok bol sprostredkovaný na glycínB mieste, ako sa dokazuje paralelným posunom kriviek závislosti od koncentrácie za prítomnosti zvyšujúcich sa koncentrácií glycínu. Preto boli Kb Mrz 2/502, ako sa hodnotia podľa Chengovho-Prusoffovho vzťahu, podobné pri koncentrácii glycínu 1, 3 a 10 μΜ (80, 124 a 118 nM, v príslušnom poradí). Ďalej účinky Mrz 2/501 a 2/502 neboli závislé od napätia. Všetky testované zlúčeniny boli tri- až desaťkrát účinnejšie proti stabilným prúdom ako proti vrcholovým prúdom. Cholínové deriváty mali podobné účinnosti ako voľné kyseliny in vitro (tabuľky 14b).
Naopak tri z týchto účinných antagonistov glycínB miesta boli len slabými antagonistami vnútorných prúdov vzhľadom na AMPA (100 μΜ). Mrz 2/502, 2/514 a 2/516 mali IC50 proti vrcholovým prúdom indukovaným AMPA 25, 73 a 18 μΜ, v príslušnom poradí, ale boli v podstate inaktívne proti prúdom vo fáze plató pri IC50 > 100 μΜ (tabuľka 14a). Aj keď je tento profil účinku veľmi slabý, je typický pre kompetitívne antagonisty AMPA receptora, ktoré preferenčne blokujú vrcholový neznecitlivený stav, stav receptora, pri ktorom má nízku afinitu (pozri Parson et al., 1994).
Tabuľka 14a
Mrz 2/ Zlúč. Vrchol NMDA IC50 μΜ Plató NMDA IC5o μΜ Vrchol AMPA IC50 μΜ Plató AMPA IC50 μΜ
585 I 65,9 19,1
499 II 51,2 13,8
501 8-C1-I 2,3 0,7
502 8-C1-II 0,8 0,3 25,0 150,0
503 8-Br-I 1,7 0,6
514 8-Br-II 0,5 0,2
519 8-F-I 18,0 5,8
516 8-F-II 6,3 1,6
515 7,8-diCl-I 3,7 0,9
518 7,8-diCl-II 3,8 0,8
539 7- C1, 8- Br-I 5,3 0,7
551 7- C1, 8- Br-II 2,4 0,6
538 7- Br, 8- C1-I 93,9 2,5
568 7- C1, 8- Br-II 10,0 1,5
554 8-O-CH3-I 170,0 36,2
Tabuľka 14b___________________________________
Vrchol Plató
Mrz 2/ Zlúčenina NMDA NMDA
IC50 μΜ IC50 μΜ
569 8-C1-I (chol) 2,0 0,5
576 8-CI-II (chol) 1,1 0,5
586 8-Br-I (chol) 2,2 0,6
570 8-Br-II (chol) 0,6 0,1
572 8-F-I (chol) 12,4 3,5
571 8-F-II (chol) 4,9 1,0
578 8-O-CH3-II (chol) 101 7,7
575 7-O-CHj-I (chol) 94,0 14,5
Excitotoxicita in vitro
Techniky
Izolácia kortikálnych neurónov bola podobná ako izolácia opísaná na snímanie plošných svoriek s tou výnimkou, že sa použili fetálne potkany 17. a 19. deň gestácie. Neuróny sa umiestnili v 24-jamkovej platni (Greiner) s hustotou 300 000 buniek na jamku potiahnutú poly-L-lyzínom 0,025 mg/ml. Bunky sa kultivovali v Dulbeccovom modifikovanom esenciálnom médiu (DMEM, Gibco) doplnenom 10 % fetálnym teľacím sérom (Gibco), inaktivovaným teplom. Kultúry sa uchovávali pri 37 °C a 5 % CO2. Médium sa najprv vymenilo po jednom týždni a potom sa po každých troch dňoch vymenila polovica média za čerstvé. Na pokusy sa použili 17-dňové kultúry.
Expozícia EAA sa uskutočnila v médiu MEM-N2 bez séra (Bottenstein 1979) obsahujúcom 0,5 mM NMDA/1 μΜ glycínu a testovanú zlúčeninu. Bunky sa vopred inkubovali so zlúčeninou a 1 μΜ glycínu 15 minút pred pridaním NMDA. Po 24 hodinách sa morfologicky vyšetroval cytotoxický efekt mikroskopom s fázovým kontrastom a tento efekt sa biochemický kvantifikoval meraním uvoľnenia LDH.
Aktivita LDH sa určila v supematante po 24 hodinách technikou, ktorú opísal Wroblewski a La Due (1955). Stručne, 0,1 ml supematantu sa pridal do 0,9 ml tlmivého roztoku fosforečnanu sodného (pH = 7,5) obsahujúceho pyruvát sodný (22,7 mM) a NADH (0,8 mg/10 ml) pri izbovej teplote. Konverzia pyruvátu na laktát sa zaznamenávala pri 340 nm v priebehu 10 minút na Kontron Spectrophotometer.
Výsledky
Úplné krivky závislosti od koncentrácie nie sú doteraz dostupné. Ale nízke μΜ koncentrácie Mrz 2/501 a Mrz 2/502 boli účinné v neuroprotekcii in vitro s tým, že Mrz 2/502 sa zdala v tomto ohľade účinnejšia (pozri tabuľka 15).
SK 283536 Β6
Tabuľka 15
Mrz 2/ Zlúčenina Cytotoxicita in vitro IC50 μΜ
501 8-C1-I <5
502 8-C1-II «5
503 8-Br-I >20
In vivo
Antikonvulzívna aktivita
Cieľ
Zhodnotenie antagonistických charakteristík testovaných zlúčenín na NMDA receptore hodnotením antikonvulzívnych účinkov. Ďalšia úloha prenášačov organických kyselín v eliminácii testovaných zlúčenín v mozgu sa hodnotila pomocou vplyvu inhibítora, Probenicidu, na trvanie antikonvulzivnej aktivity.
Techniky
Samce albínov myší Swiss (19 až 21 g) umiestnené v počte 10 až 15 na box sa použili na test NMDA letality (Leander et al., 1988). Na kŕče indukované pentyléntetrazolom (PTZ) sa použili samce albínov myší Swiss (25 až 34 g) umiestnené v počte 40 na box (58 x 38 x 20 cm), zatiaľ čo v testoch maximálnych elektrošokov (MES) a testoch motorických porúch sa použili samice myší NMR (18 až 28 g) umiestnené v počte 5 na box. Všetky zvieratá boli napájané a kŕmené podľa potreby za 12-hodinového cyklu svetlo-tma (svetlo od 6 hodín) a pri kontrolovanej teplote (20 + 0,5 °C). Všetky pokusy sa uskutočnili medzi 10. a 17. hodinou. Testované činidlá sa injikovali i. p. 15 minút pred indukciou kŕčov, ak nie je uvedené inak (pozri ďalej). Mrz 2/502 sa rozpustila v salinickom roztoku s pridaným NaOH. Väčšina ďalších činidiel sa rozpustila v nasledovnom roztoku: 0,606 g Tris; 5,0 g glukózy; 0,5 g Tween 80 a 95 ml vody. Cholínové a tetrametylamóniové soli sa rozpustili v destilovanej vode.
V testoch kŕčov indukovaných NMDA na myšiach sa najprv určili vzťahy dávka-odpoveď pre NMDA na určenie dávky ED97, ktorá sa potom použila na testovanie antagonistických vlastností. Po injekcii ED97 dávky NMDA sa zvieratá umiestnili v malom boxe (20 x 28 x 14 cm) a pozorovali sa 20 minút. Smrť, ktorej predchádzali klonické kŕče a tonické záchvaty, bola farmakologickým koncovým javom.
Pentyléntetrazol sa injikoval v dávke 90 mg/kg (i. p.). Prítomnosť celkových tonických záchvatov sa potom skórovala 30 minút, pretože tento parameter je senzitívnejší na antagonizmus na NMDA receptore ako klonické kŕče. Farmakologický konečný sledovaný parameter bola prítomnosť tonusu v zadných tlapkách s natiahnutím.
MES (100 Hz, trvanie šoku 0,5 sekúnd, intenzita šoku 50 mA, trvanie impulzu 0,9 ms, Ugo Basile) sa aplikoval pomocou komeálnych elektród. Zaznamenávala sa prítomnosť tonických kŕčov (tonická extenzia zadných tlapiek s minimálnym uhlom k telu 90°). V ďalšom pokuse sa myšiam injikoval Prebenicid (200 mg/kg) 30 minút pred podaním testovaných činidiel na hodnotenie úlohy transportu organických kyselín na elimináciu (trvanie účinku). Cieľom bolo získať ED50 pre všetky vyšetrované parametre pomocou Litchfield Wilcoxonovho (1949) testu na závislosť od dávky.
Výsledky
Z testovaných zlúčenín boli účinné len štyri zlúčeniny, všetky z triedy II, pri podaní i. p. v MES teste (Mrz 2/499, Mrz 2/502, Mrz 2/516 a Mrz 2/514, pozri tabuľka 16a). Zlúčeniny triedy I boli neúčinné. Všetky štyri zlúčeniny mali zreteľne veľmi krátke polčasy in vivo. Zdá sa, že test PTZ je citlivejším modelom pre antagonistickú aktivitu na glycínB mieste pri podaní i. p. a okrem toho, rovnaké zlúčeniny triedy II boli aktívne pri 2- až 4-násobne nižších dávkach, zatiaľ čo zlúčeniny triedy I zostávali inaktívne (tabuľka 16a).
Cholínové soli týchto rovnakých N-oxidových derivátov (štruktúry II) mali zreteľnú antikonvulzívnu aktivitu vo všetkých troch modeloch, zatiaľ čo ich non-N-oxidové deriváty boli buď inaktívne, alebo mali len slabú aktivitu (tabuľka 16b). Okrem toho sa zdá, že cholínové soli majú dlhšie trvanie účinku. Injekcia probenicidu významne predlžovala trvanie účinku všetkých testovaných činidiel. Napríklad polčasy 2/514 a 2/570 boli približne 40 a 80 minút, v príslušnom poradí, za absencie probenicidu. Za prítomnosti probenicidu boli polčasy predĺžené na približne 180 a 210 minút v príslušnom poradí. Preto sa zdá, že transport organických kyselín von z mozgu v choroidálnom plexe má významnú úlohu v krátkom trvaní účinku testovaných zlúčenín. Probenicid v použitej dávke (200 mg/kg) nemá sám osebe žiadny nezávislý účinok na kŕče indukované MES.
Tabuľka 16a
Mrz 2/ Zlúč. MES i. p. (ID50 mg/kg) NMDA i. p. (ID5o mg/kg) PTZ i. p. (ID50 mg/kg)
585 I >100,0 58,9 59,0
499 II 87,0 18,6
501 8-C1-I >100,0 >100,0 >40,0
502 8-C1-II 47,6 26,0 8,3
503 8-Br-I >100,0 >100 >100,0
514 8-Br-II 20,2 99,0 12,8
519 8-F-I >60,0 >100,0 >100,0
516 8-F-II 16,6 40,0 7,9
515 7,8-diCl-I >100, 0 98,0 >100,0
518 7,8-diCl-II >60,0 >100,0
539 7-C1,8-Br-I >60,0 >100,0 >100,0
538 7-Br,8-Cl-I >60,0 106,0 >100,0
554 8-O-CH3-I >100,0
Tabuľka 16b
Mrz 2/ Zlúčenina MES i. p. (ID50 mg/kg
577 II (chol) 23,7
569 8-C1-I (chol) >50
576 8-C1-II (chol) 7,7
586 8-Br-I (chol) >50
570 8-Br-II (chol) 12,8
572 8-F-I (chol) >100
571 8-F-II (chol) 15,5
574 7,8-diCl-I (chol) >100,0
578 8-O-CH3-II (chol) >100,0
575 7-O-CHj-I (chol) >100,0
Mikroelektroforetická aplikácia EAA agonistov do spinál-
nych neurónov in vivo
Schopnosť týchto antagonistov glycínB miesta účinko-
vať ako antagonisty NMDA receptora in vivo sa hodnotila pomocou účinku i. v. (podania proti odpovedi jednotlivých neurónov miechy potkanov na mikroelektroforetickú aplikáciu AMPA a NMDA. Zlúčeniny triedy II Mrz 2/502 a Mrz 2/516 boli účinnými antagonistami NMDA receptora in vivo s ID50 1,2 a 1,8 mg/kg i. v., v príslušnom poradí, zatiaľ čo pôvodné zlúčeniny triedy I boli úplne inaktívne až do 16 mg/kg i. v. Troj- až štvornásobne vyššie dávky antagonizovali aj odpovede na AMPA, aj keď toto zreteľné chýbanie selektivity je v protiklade k testom in vitro (tabuľka 17a).
Tabuľka 17a
Mrz 2/ Zlúč. mikroelektroforetické podanie NMDA (IDS0 mg/kg i. v.) mikroelektroforetické podanie AMPA (ID50 mg/kg i. v.)
501 8-C1-I >16,0 >16,0
502 8-C1-II 1,2 4,9
519 8-F-I >16,0 >16,0
516 8-F-II 1,8 3,6
Cholínové soli boli približne rovnako účinné ako voľné kyseliny v tomto modeli po i. v. podaní, ale boli o niečo viac selektívne pre NMDA vzhľadom na AMPA (tabuľka 17b). Opäť non-N-oxidové deriváty (zlúčeniny triedy I) boli inaktívne.
Tabuľka 17b
Mrz 2/ Zlúč. mikroelektroforetické podanie NMDA (ID50 mg/kg i. v.) mikroelektroforetické podanie AMPA (IDjo mg/kg i. v.)
577 II (chol) 34,0 >32,0
569 8-C1-I (chol) >16,0 >16,0
576 8-C1-II (chol) 2,8 >16,0
586 8-Br-I (chol) >16,0 >16,0
570 8-Br-II (chol) 4,5 >16,0
572 8-F-I (chol) >16,0 >16,0
571 8-F-II (chol) 4,7 9,2
Diskusia
Štyri zlúčeniny triedy II Mrz 2/499, 2/501, 2/514 a 2/516 sú antagonistami glycínB miesta in vitro a majú omnoho lepšiu in vivo systémovú a/alebo CMS biodostupnosť ako ich východiskové zlúčeniny triedy I (Mrz 2/585, 2/501, 2/503 a 2/519). Prienik do CMS je hlavným problémom takmer všetkých doteraz vyvinutých antagonistov glycínB miesta, ale táto nová trieda zlúčenín prekonáva tento hlavný problém a tvorí preto terapeuticky relevantné antagonisty glycínB miesta.
Adičné soli
Pomocou opísaných techník pre zlúčeniny 5, 6, 7, 8, 9 a 10 sa pripravia adičné soli s kvartémymi amínmi (napríklad 4-tetrametylamónna soľ, 4-tetraetylamónna soľ), s kvartérnymi aminoalkoholmi (napríklad cholínom) alebo s kvartémymi aminokyselinami (napríklad Ν,Ν,Ν-trimetylserínom). Cholínové a 4-tetrametylamónne (4-NH3) soli významne zlepšujú biodostupnosť a sú výhodné.
Farmaceutické prostriedky
Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sa môžu spracovať na farmaceutické prostriedky obsahujúce farmaceutický prijateľný nosič alebo riedidlo a aktívnu zlúčeninu podľa predkladaného vynálezu. Také prostriedky sa môžu podať živočíchom, najmä ľuďom, orálnym alebo parenterálnym spôsobom. Napríklad prípravky v tuhej forme alebo farmaceutické prostriedky na orálne podanie môžu mať formu kapsúl, tabliet, piluliek, práškov alebo granulátu. V takých tuhých farmaceutických prostriedkoch je aktívna zlúčenina alebo jej proliečivo zmiešané s aspoň jedným farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom, ako je trstinový cukor, laktóza, škrob, mastenec alebo syntetické alebo prirodzené gumy, so spojivom, ako je želatína, s klzným činidlom, ako je stearan sodný a/alebo s činidlom podporujúcim rozpadavosť, ako je hydrogenuhličitan sodný. Na umožnenie spomaleného uvoľňovania sa môže do farmaceutického prostriedku zapracovať substancia, ako je hydrokoloid alebo iný polymér. Môžu sa pridať aj ďalšie činidlá, ako sú lubrikačné činidlá alebo tlmivé roztoky, ako je v odbore bežné. Tablety, pilulky alebo granuláty môžu mať enterálny obal, ak je to žiaduce. Kvapalné prípravky na orálne podanie môžu byť vo forme lipozómov, emulzií, roztokov alebo suspenzií obsahujúcich bežne používané inertné riedidlá, ako je voda. Ďalej môžu také kvapalné farmaceutické prostriedky obsahovať zmáčadlá, emulgačné, dispergačné alebo povrchovo aktívne činidlá, ako aj sladidlá, chuťové korigens alebo čuchové korigens.
Vhodnými prostriedkami na orálne podanie môžu byť okrem iných sterilné vodné alebo nevodné roztoky, suspenzie, lipozómy alebo emulzie. Ďalšie substancie, ktoré sa používajú na túto formu farmaceutických prostriedkov, môžu byť použité ako farmaceutický prijateľné riedidlá alebo nosiče.
Podľa zamýšľaného spôsobu podania a trvania terapie sa môže presná dávka v prostriedkoch podľa predkladaného vynálezu líšiť a je určená ošetrujúcim lekárom alebo veterinárom. Aktívne činidlo podľa predkladaného vynálezu sa môže kombinovať s iným farmakologicky aktívnym činidlom.
V prostriedkoch podľa predkladaného vynálezu sa môže pomer aktívneho činidla alebo činidiel v prostriedku veľmi líšiť, nutné je len to, aby aktívna zložka podľa predkladaného vynálezu alebo jej proliečivo tvorilo alebo poskytovalo účinné množstvo, t. j. aby sa pri použití uvedenej dávkovej formy podala vhodná účinná dávka. Samozrejme niekoľko dávkových foriem, ako aj niekoľko jednotlivých aktívnych zlúčenín sa môže podať v rovnaký alebo približne rovnaký čas alebo aj v tom istom farmaceutickom prostriedku alebo formulácii.
Spôsob liečby
Ako sa uviedlo, zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú vhodné - najmä vo forme farmaceutických prostriedkov alebo prípravkov - na orálne alebo parenterálne podanie určitých jednotlivých dávok, ako aj denných dávok v jednotlivých prípadoch, ktoré sú pochopiteľne určené podľa dobre známych lekárskych a/alebo veterinárnych zásad ošetrujúcim lekárom alebo veterinárom.
Okrem orálneho a parenterálneho podania sa môže použiť rektálne a/alebo intravenózne podanie a dávky sú významne znížené, ak sa použije parenterálne podanie, aj keď orálne podanie je výhodnejšie. Vhodné je množstvo približne 1 až 3 g/deň vo forme opakovaných alebo delených dávok. Širšie rozmedzie od približne 0,5 g do 10 g sa môže tiež použiť v závislosti od okolností jednotlivých prípadov. Aj keď dávka 500 mg aktívnej zložky je výhodná najmä na použitie v tabletovej forme, jednotlivé dávky môžu byť v rozmedzí od približne 200 do 1000 mg a dávka 500 mg navrhnutá na použitie v tabletách môže byť samozrejme podaná orálne, napríklad raz až trikrát za deň. Je samozrejmé, že dávka vyššia ako jedna tableta sa môže podať v jednej dávke, ak je to nutné na splnenie navrhnutého denného orálneho podania množstva 1 až 3 g na deň.
Ako sa už uviedlo, zlúčenina podľa predkladaného vynálezu alebo jej proliečivo sa môžu podať živočíchom vrátane ľudí akýmkoľvek spôsobom, napríklad orálne, ako kapsuly alebo tableta, parenterálne vo forme sterilných roztokov alebo suspenzií alebo pomocou implantácie peliet a v niektorých prípadoch intravenózne vo forme sterilných roztokov. Inými bežnými spôsobmi podania sú kožné, podkožné, bukálne, intramuskulárne a intraperitoneálne spôsoby podania a určitý spôsob podania sa vyberie ošetrujúcim lekárom alebo veterinárom.
Je preto zrejmé, že predkladaný vynález poskytuje nové pyridoftalazindiónové zlúčeniny a farmaceutické prostried ky obsahujúce také zlúčeniny, ako aj spôsoby liečby neurologických ochorení spojených s excitačnou toxicitou a chybnou funkciou glutamátergného prenosu, čo dohromady poskytuje dlho očakávané riešenie existujúcich problémov, ktoré neboli zodpovedajúcim spôsobom vyriešené.
Malo by byť jasné, že predkladaný vynález sa neobmedzuje na určité zlúčeniny, prostriedky, spôsoby alebo postupy, ktoré sú tu opísané, pretože odborníkom v odbore budú jasné mnohé modifikácie a zmeny týchto uskutočnení, a preto je predkladaný vynález obmedzený len v zmysle plného rozsahu pripojených patentových nárokov.
Odkazy:
Bottenstein JE, Sato GH (1979): Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, pp. 514-517.
Canton T, Doble A, Miquet JM, Jimonet P, Blanchard JC (1992): J. Pharm. Pharmacol. 44, pp. 812 - 816.
Dansyz W., Parsons CG, Bresink I, Quack G (1995): Drug News & Perspectives 8, pp. 261 - 277.
Foster AC, Wong EHF (1987): Brit. J. Pharmacol. 91, pp. 403-409.
Haitfree EF (1972): Analytical Biochemistry48, pp. 422 až 427. Kessler M, Terramani T, Lynch G, Baudry M (1989): J. Neurochem. 52, pp. 1319 - 1328.
Leander JD, Lawson RR, Omstein PL, Zimmerman DM (1988): Brain Res. 448, p. 115.
Litchfield JT, Wilcoxon F (1949): J. Pharmacol. Exp. Ther. 96, p. 99.
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randell RJ (1951): J. Biol. Chem. 193, pp. 265 - 275.
Parsons CG, Gruner R, Rozcntal J (1994): Neuropharmacology 33, pp. 589 - 604.
Wroblewski F, LaDue JS (1955): Soc. Exp. Biol. Med. 90, p. 210.
Yoneda Y, Suzuki T, Ogita K, Han DK (1993): J.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (14)

1. Pyridylftalazindióny všeobecného vzorca (II) kde R1 a R2 sú vybrané zo súboru pozostávajúceho z vodíka, halogénu a metoxyskupiny alebo kde R1 a R2 dohromady tvoria metyléndioxyskupinu, a ich farmaceutický prijateľné soli.
2. Pyridylftalazindióny podľa nároku 1, kde soli sú vybrané z cholínovej a 4-tetrametylamóniovej soli.
3. Pyridylftalazindión podľa nároku 1, ktorý je vybraný zo súboru pozostávajúceho zo 4-hydroxy-1-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu, 8-chlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
8-bróm-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b] chinolín-5-oxidu,
8-fluór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-bjchinolín-5-oxidu,
7,8-dichlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
7-bróm-8-chlór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
7- chlór-8-bróm-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu a farmaceutický prijateľných solí ktorejkoľvek z uvedených zlúčenín.
4. Pyridylftalazindión podľa nároku 2, ktorý je vybraný zo súboru pozostávajúceho zo soli 4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-chlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-bróm-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-fluór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 7,8-dichlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-bjchinolín-5-oxidu s cholínom, soli 7-bróm-8-chlór-4-hydroxy-1 -oxo- 1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom a soli 7-chlór-8-bróm-4-hydroxy-l-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom.
5. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ako aktívnu zložku glycínp antagonistické množstvo pyridylftalazindiónu podľa nároku 1 spolu s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom.
6. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ako aktívnu zložku glycínbeta antagonistické množstvo pyridylftalazindiónu podľa nároku 1 vo forme cholínovej soli spolu s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom.
7. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ako aktívnu zložku glycínbeta antagonistické množstvo pyridylftalazindiónu vybraného zo súboru pozostávajúceho z 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
8- chlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
8-bróm-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu, 8-fluór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
7,8-dichlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu, 7-bróm-8-chlór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu, 7-chlór-8-bróm-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu a farmaceutický prijateľných solí ktorejkoľvek z uvedených zlúčenín.
8. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ako aktívnu zložku glycíntp antagonistické množstvo pyridylftalazindiónu vybraného zo súboru pozostávajúceho zo soli 4-hydroxy-1-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-chlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-bróm-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu ď cholínom, soli 8-fluór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, solí 7,8-dichlór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom,
SK 283536 Β6 soli 7-bróm-8-chlór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom a soli 7-chlór-8-bróm-4-hydroxy-l -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom.
9. Pyridylftalazindióny podľa nároku 1 na použitie na liečenie neurologických ochorení spojených s excitačnou toxicitou a chybnou funkciou glutamátergného neuronálneho prenosu pri živých zvieratách.
10. Pyridylftalazindióny vo forme cholínových solí podľa nároku 1 na použitie na liečenie neurologických ochorení spojených s excitačnou toxicitou a chybnou funkciou glutamátergného neuronálneho prenosu pri živých zvieratách.
11. Pyridylftalazindión vybraný zo súboru pozostávajúceho zo
4-hydroxy-l -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
8-chlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-bJchinolín-5-oxidu,
8-bróm-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
8-fluór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
7,8-dichlór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
7-bróm-8-chlór-4-hydroxy-l-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu,
7-chlór-8-bróm-4-hydroxy-1 -oxo- 1,2-dihydropyridazino[4,5 -b] chinolín-5 -oxidu a farmaceutický prijateľných solí ktorejkoľvek z uvedených zlúčenín na použitie na liečenie neurologických ochorení spojených s excitačnou toxicitou a chybnou funkciou glutamátergného neuronálneho prenosu pri živých zvieratách.
12. Pyridylftalazindión vybraný zo súboru pozostávajúceho zo soli 4-hydroxy-l-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-chlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-bróm-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 8-fluór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 7, 8-dichlór-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom, soli 7-bróm-8-chlór-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom a soli 7-chlór-8-bróm-4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu s cholínom na použitie na liečenie neurologických ochorení spojených s excitačnou toxicitou a chybnou funkciou glutamátergného neuronálneho prenosu pri živých zvieratách.
13. Spôsob prípravy 4-hydroxy-l-oxo-1,2-dihydropyridazino [4,5-b]chinolín-5-oxidu vzorca (5)
A XCOOMí Ľ L (3) R’^ XCOOMe
kde Me znamená metyl, premení na hydrazínovú soľ vzorca (4) reakciou s hydrátom hydrazínu a vzniknutá hydrazínová soľ vzorca (4) sa hydrolyzuje za vzniku požadovaného 4-hydroxy-1 -oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxidu (5).
14. Spôsob podľa nároku 13, vyznačujúci sa tým, že sa získaný 4-hydroxy-l-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolín-5-oxid vzorca (5) premení reakciou s cholínhydroxidom na cholínovú soľ.
Koniec dokumentu
SK103-99A 1996-07-25 1997-07-25 Pyridylftalazindióny, spôsob ich prípravy a použitie a farmaceutické prostriedky na ich báze SK283536B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/686,346 US5776935A (en) 1996-07-25 1996-07-25 Pyrido-phtalazin diones and their use against neurological disorders associated with excitotoxicity and malfunctioning of glutamatergic neurotransmission
PCT/EP1997/004057 WO1998004556A1 (en) 1996-07-25 1997-07-25 Pyridazino [4,5-b]-quinoline 5-oxide derivatives, their preparation and their use as glycine antagonists

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK10399A3 SK10399A3 (en) 2000-01-18
SK283536B6 true SK283536B6 (sk) 2003-09-11

Family

ID=24755940

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK103-99A SK283536B6 (sk) 1996-07-25 1997-07-25 Pyridylftalazindióny, spôsob ich prípravy a použitie a farmaceutické prostriedky na ich báze

Country Status (31)

Country Link
US (1) US5776935A (sk)
EP (1) EP0931081B1 (sk)
JP (1) JP3595342B2 (sk)
KR (1) KR100598206B1 (sk)
CN (1) CN1093860C (sk)
AR (1) AR004158A1 (sk)
AT (1) ATE224894T1 (sk)
AU (1) AU719993B2 (sk)
BR (1) BR9710569A (sk)
CA (1) CA2261923C (sk)
CZ (1) CZ289293B6 (sk)
DE (1) DE69715893T2 (sk)
DK (1) DK0931081T3 (sk)
EA (1) EA001711B1 (sk)
ES (1) ES2180041T3 (sk)
FI (1) FI112946B (sk)
GE (1) GEP20022801B (sk)
HK (1) HK1020193A1 (sk)
HU (1) HU223780B1 (sk)
IL (1) IL128225A (sk)
LT (1) LT4591B (sk)
LV (1) LV12260B (sk)
NO (1) NO310820B1 (sk)
PL (1) PL189572B1 (sk)
PT (1) PT931081E (sk)
SI (1) SI9720048B (sk)
SK (1) SK283536B6 (sk)
TW (1) TW402605B (sk)
UA (1) UA63911C2 (sk)
WO (1) WO1998004556A1 (sk)
ZA (1) ZA976612B (sk)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030176435A1 (en) * 2002-12-17 2003-09-18 Brown Dean Gordon Compounds and methods for the treatment of pain
US6444702B1 (en) 2000-02-22 2002-09-03 Neuromolecular, Inc. Aminoadamantane derivatives as therapeutic agents
NZ531785A (en) * 2001-08-20 2007-03-30 Maiken Nedergaard Treatment of glial tumors with ionotropic glutamate receptor antagonists
EP1298581A1 (fr) * 2001-09-27 2003-04-02 C.S.E.M. Centre Suisse D'electronique Et De Microtechnique Sa Procédé et dispositif pour calculer les valeurs des neurones d'un réseau neuronal
US7029707B2 (en) * 2001-10-03 2006-04-18 Herbalscience, Llc Method of producing a processed kava product having an altered kavalactone distribution and processed kava products produced using the same
US20050069596A1 (en) * 2001-10-03 2005-03-31 Gow Robert T. Compositions and methods comprising kava and anti-anxiety compounds
US7037524B2 (en) * 2001-10-03 2006-05-02 Herbalscience, Llc Oral delivery of a botanical
US7105185B2 (en) 2001-10-03 2006-09-12 Herbalscience, Llc Kavalactone profile
US7291352B2 (en) 2001-10-03 2007-11-06 Herbalscience Llc Methods and compositions for oral delivery of Areca and mate' or theobromine
US7001620B2 (en) 2001-10-03 2006-02-21 Herbal Science, Llc Kavalactone product
US20050037025A1 (en) * 2002-10-03 2005-02-17 Gow Robert T. Methods and compositions comprising kava and mate' or theobromine
US20040082543A1 (en) * 2002-10-29 2004-04-29 Pharmacia Corporation Compositions of cyclooxygenase-2 selective inhibitors and NMDA receptor antagonists for the treatment or prevention of neuropathic pain
US7294353B2 (en) * 2003-10-24 2007-11-13 Herbalscience, Llc Methods and compositions comprising ilex
CN1917892A (zh) * 2003-10-24 2007-02-21 草本制药科学有限责任公司 包含冬青的方法和组合物
US20060280790A1 (en) * 2005-04-08 2006-12-14 Ju Tzuchi R Pharmaceutical formulations
NZ584098A (en) * 2007-09-20 2012-05-25 Cortex Pharma Inc 3-substituted 1,2,3-triazin-4-one's and 3-substituted 1,3-pyrimidinone's for enhancing glutamatergic synaptic responses
EP2264035A1 (en) * 2009-06-04 2010-12-22 Merz Pharma GmbH & Co. KGaA Glycine B antagonists
US9737531B2 (en) 2012-07-12 2017-08-22 Glytech, Llc Composition and method for treatment of depression and psychosis in humans
EP3638234A1 (en) 2017-06-12 2020-04-22 Glytech LLC. Treatment of depression with nmda antagonists and d2/5ht2a or selective 5ht2a antagonists
USD895157S1 (en) 2018-03-06 2020-09-01 IsoTruss Indsutries LLC Longitudinal beam
CN109912503B (zh) * 2019-04-01 2022-04-08 江南大学 一种2,3-二酰基喹啉类化合物的合成方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9208511D0 (en) * 1991-05-09 1992-06-03 Ici Plc Compounds
US5597922A (en) * 1994-07-29 1997-01-28 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University And The University Of Oregon Glycine receptor antagonist pharmacophore

Also Published As

Publication number Publication date
EA001711B1 (ru) 2001-06-25
LV12260B (en) 1999-08-20
EP0931081A1 (en) 1999-07-28
EP0931081B1 (en) 2002-09-25
SI9720048B (sl) 2002-02-28
FI990134A (fi) 1999-03-24
EA199900161A1 (ru) 1999-10-28
IL128225A (en) 2005-09-25
ZA976612B (en) 1998-02-10
HUP9903104A2 (hu) 2000-03-28
CN1093860C (zh) 2002-11-06
AR004158A1 (es) 1998-11-04
LT4591B (lt) 1999-12-27
CN1228778A (zh) 1999-09-15
IL128225A0 (en) 1999-11-30
GEP20022801B (en) 2002-09-25
HK1020193A1 (en) 2000-03-31
US5776935A (en) 1998-07-07
AU719993B2 (en) 2000-05-18
CA2261923C (en) 2006-01-24
ES2180041T3 (es) 2003-02-01
NO990306D0 (no) 1999-01-22
PT931081E (pt) 2003-02-28
CZ289293B6 (cs) 2001-12-12
KR20000029568A (ko) 2000-05-25
ATE224894T1 (de) 2002-10-15
DE69715893D1 (de) 2002-10-31
CZ2019997A3 (cs) 1999-09-15
HU223780B1 (hu) 2005-01-28
FI990134A0 (fi) 1999-01-25
NO990306L (no) 1999-03-15
HUP9903104A3 (en) 2000-04-28
PL189572B1 (pl) 2005-08-31
NO310820B1 (no) 2001-09-03
DK0931081T3 (da) 2003-01-27
SI9720048A (sl) 1999-12-31
JP2000515872A (ja) 2000-11-28
LT99007A (en) 1999-07-26
UA63911C2 (uk) 2004-02-16
WO1998004556A1 (en) 1998-02-05
CA2261923A1 (en) 1998-02-05
SK10399A3 (en) 2000-01-18
TW402605B (en) 2000-08-21
KR100598206B1 (ko) 2006-07-07
DE69715893T2 (de) 2003-01-30
FI112946B (fi) 2004-02-13
JP3595342B2 (ja) 2004-12-02
PL331323A1 (en) 1999-07-05
BR9710569A (pt) 1999-08-17
LV12260A (lv) 1999-04-20
AU4296997A (en) 1998-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK283536B6 (sk) Pyridylftalazindióny, spôsob ich prípravy a použitie a farmaceutické prostriedky na ich báze
DE69609602T2 (de) Pyrazolderivate und verfahren zu deren herstellung
JP3272357B2 (ja) 抗増殖性キナゾリン
CZ398591A3 (en) N-acyl-2,2-benzodiazepine derivative, process of its preparation and a pharmaceutical preparation containing thereof
CZ223998A3 (cs) Derivát 5H-thiazolo/3,2-a/pyrimidinu, způsob jeho přípravy meziprodukt pro jeho přípravu a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje
JPH09510223A (ja) 複素環式化合物、その調製及び使用
JP2010502606A (ja) カルシウムチャンネル遮断薬としてのインドロキノリン化合物
CA2119579A1 (en) Heterocyclic compounds and their preparation and use
UA124783C2 (uk) ФАРМАКОЛОГІЧНО АКТИВНІ АЛІЦИКЛІЧНО ЗАМІЩЕНІ ПОХІДНІ ПІРАЗОЛО[1,5-a]ПІРИМІДИНУ
EP0581106A1 (en) Substituted aminothienopyridines, a process for their preparation and their use as medicaments
US6602865B1 (en) Pyridazino(4,5-b)(1,5)oxazepinone, -thiazepinone and -diazepinone compounds
ES2202879T3 (es) Derivados halogenados de 2,3-benzodiazepina triciclica y composiciones farmaceuticas que los contienen.
WO2001098280A2 (en) 5h-2,3-benzodiazepine antagonists of excitatory amino acid receptors
EP1129097B1 (en) Novel type condensed pyridazinone compounds
DE69431441T2 (de) Trizyklische verbindungen mit affinität für den 5-ht1a rezeptor
JPS6031834B2 (ja) 新規の１，２−ジヒドロピリド〔３，４−ｂ〕ピラジン類
KR100274171B1 (ko) Nmda수용체길항제로작용하는4-(말단치환-알콕시)-퀴놀린-2-카복실산유도체