EA001711B1

EA001711B1 - Производные пиридазино [4,5-b] хинолин-5-оксида или их фармацевтически приемлемые соли, их применение в качестве антагонистов глицина, фармацевтическая композиция, способ получения производных пиридазино [ 4,5-b] хинолин-5-оксида или их соли холина

Info

Publication number: EA001711B1
Application number: EA199900161A
Authority: EA
Inventors: Войцех Даниш; Маркус Гольд; Иварс Калвиньш; Кристофер Грэхам Рафаэль Парсонс; Ирина Пискунова; Евгений Рожков
Original assignee: Мерц + Ко. Гмбх Унд Ко.
Priority date: 1996-07-25
Filing date: 1997-07-25
Publication date: 2001-06-25
Also published as: HUP9903104A2; LV12260A; CN1228778A; EP0931081A1; ES2180041T3; FI990134A; JP2000515872A; ZA976612B; IL128225A; GEP20022801B; HK1020193A1; UA63911C2; HUP9903104A3; KR20000029568A; NO990306D0; PL331323A1; TW402605B; CZ2019997A3; CN1093860C; SI9720048B

Abstract

Пиридил-фталазин-дионы, имеющие формулу (I), где Rи Rвыбирают из группы, включающей водород, галоген и метокси или где Rи Rвместе образуют метилендиокси, и их фармацевтически приемлемые соли; и фармацевтические композиции, содержащие эффективное глицин-антагонистическое количество этих соединений, используемые для борьбы с неврологическими нарушениями, связанными с эксцитотоксичностью и дисфункцией глутаматергической нейротрансмиссии в требующем лечения животном, включая человека.

Description

Область изобретения

Новые химические соединения, которые являются пиридо-фталазин-дионами, содержащие их фармацевтические композиции и их применение при неврологических нарушениях, связанных с эксцитотоксичностью и дисфункцией глутаматергической нейротрансмиссии.

Обоснование изобретения и предшествующий уровень техники

Глутамат является, вероятно, основным стимулирующим медиатором в центральной нервной системе, но, кроме того, возможно, вовлекается во многие патологические и эксцитотоксичные процессы. И, как таковой, представляет большой интерес при получении антагонистов глутамата для терапевтического применения (см., Эапухх е£а1., 1995, Эгид №\\ъ &

Регаресйуек, 8, рр.261 -277, для обзора). Глутамат активирует три основных типа ионотропного (ионотропического) рецептора, а именно, αамино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолпропионовую кислоту (АМРА), каинат и Ν-метил-Оаспартат (ΝΜΌΑ) и некоторые типы метаботропических рецепторов. Антагонизм ΝΜΌΑ рецепторов потенциально имеет широкую область терапевтического применения. Функциональное ингибирование ΝΜΌΑ рецепторов может быть достигнуто через воздействие на различные участки распознавания, такие как участок первичного медиатора, нечувствительный к стрихнину участок глицина (глицин_В), участок полиамина и участок фенциклидина, локализованный внутри катионного канала.

Десенсибилизация рецептора может представлять физиологический процесс, который служит механизмом эндогенного регулирования для предотвращения долговременной нейротоксичной активации глутамат-рецепторов, но допускает их временную физиологическую активацию. В случае ΝΜΌΑ рецептора совместным агонистом глицина является эндогенный лиганд, ингибирующий такую десенсибилизацию путем активации участка глицина_в. Интересно, что ишемия повышает не только концентрацию внеклеточного глутамата, но также концентрацию глицина и, хотя этот последний эффект является менее явным, он в действительности сохраняется много дольше. Следовательно, некоторые полные глицин_в-антагонисты могут восстанавливать нормальную синаптическую передачу в таких условиях путем повышения ΝΜΌΑ рецепторной десенсибилизации до ее физиологического уровня. В действительности, на основании общего введения лабораторным животным, было выдвинуто предположение, что глицин_В-антагонисты могут давать большее терапевтическое окно, чем агенты, действующие на другие участки распознавания ΝΜΌΑ рецепторного комплекса. К сожалению, плохие фармако-кинетические свойства большинства глицинв-антагонистов, до самого последнего времени, исключали четкую проверку этого пред положения после общего введения. Однако сообщается, что некоторые глицинВ-антагонисты имеют очень хорошие терапевтические индексы после общего введения в моделях гипералгезии и в качестве транквилизаторов (анксиолитиков).

Настоящее изобретение

Заявителями получен ряд трициклических пиридо-фталазин-дионов. Соединения класса I структурно относятся к патентованным глицин_в-антагонистам 2епеса (1С1, ЕРА 0 516 297 Α1, 02.12.92). Класс II соединений составляют Ν-оксид-производные этих соединений, и они не описаны и не выдвинуты в качестве возможных соединений в патенте 2епеса. Соединения класса II также являются сильными антагонистами глицина_в ίη νίΐτο (в лабораторном сосуде) и проявляют значительно большую ίη νίνο (в живом организме) общую усвояемость и/или проникновение через гематоэнцефалический барьер, чем соединения класса I. Кроме того, солевые производные этих соединений получают, к примеру, добавлением холина и 4тетраметиламмония (4-МН₃), дополнительно улучшая биоприменимость.

Новые соединения по данному изобретению имеют прогнозируемое применение в лечении следующих болезней.

1. Острая эксцитотоксичность, такая как ишемия во время внезапного приступа, травма, гипоксия, гипогликемия и печеночная энцефалопатия (гепатаргия).

2. Хронические нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера, васкулярное слабоумие, болезнь Паркинсона, болезнь Нцп1шд1оп', рассеянный склероз, боковой амиотрофический склероз, СПИД-нейродегенерация, оливопонтоцеребеллярная дистрофия, синдром Тоигебе', мотонейронная болезнь, митохондриальная дисфункция, синдром Корсакова и болезнь Крейтцфельда-Якоба.

3. Другие болезни, связанные с длительными восстановительными изменениями в центральной нервной системе, такие как хроническая боль, толерантность к лекарственному средству, лекарственная зависимость и привыкание к чрезмерному употреблению лекарственных средств (например, к опиатам, кокаину, бензодиазепинам и алкоголю) и поздняя дискинезия.

4. Эпилепсия (распространенный и парциальный комплексный эпилептические припадки), шизофрения, боязнь, депрессия, острая боль, мышечная спастичность и шум в ушах.

Цели изобретения

Цель изобретения состоит в получении новых и более эффективных соединений пиридофталазин-диона, их фармацевтических композиций и разработке способа лечения ими неврологических нарушений, связанных с эксцитотоксичностью и дисфункцией глутаматергической нейротрансмиссии. Дальнейшая цель изо3 бретения состоит в получении таких новых соединений, композиций и способа, которые соответствуют вышеуказанным теоретическим требованиям. Дополнительные цели будут выявлены ниже, а еще другие цели изобретения очевидны для любого специалиста в соответствующей области.

Краткое описание изобретения

Итак, изобретение включает следующие аспекты, среди прочего, отдельно или в комбинации.

Соединение, которое выбирают из тех пиридил-фталазин-дионов, что имеют следующую формулу:

где В_| и В₂ выбирают из группы, включающей водород, галоген и метокси, или где В! и В₂вместе образуют метилендиокси, и его фармацевтически приемлемые соли; такое соединение, соль которого выбирают из его соли с холином или 4-тетраметиламмонием; такое соединение, которое выбирают из группы, включающей

4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид,

8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь] хинолин-5-оксид,

8-бром-4-гидрокси-1 -оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь] хинолин-5-оксид,

8-фтор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид,

7,8-дихлор-4 -гидрокси-1 -оксо -1,2-дигидро пиридазино[4,5-Ь] хинолин-5-оксид,

7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид и

7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид и фармацевтически приемлемую соль любого из вышеперечисленных соединений; и такое соединение, которое выбирают из группы, включающей соль 4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь] хинолин-5-оксид-холина, соль 8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 8-бром-4-гидрокси-1 -оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 8-фтор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина, соль 7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина и соль 7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина.

Кроме того, фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента такое соединение в эффективном глицин_вантагонистическом количестве; такая фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента такое соединение, в эффективном глицинв-антагонистическом количестве, в форме соли холина; такая фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента соединение, в эффективном глицинв-антагонистическом количестве, которое выбирают из группы, включающей

4-гидрокси-1 -оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5-оксид,

8-хлор-4-гидрокси-1 -оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид,

8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид,

7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид,

7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь]хинолин-5 -оксид и

7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь]хинолин-5 -оксид или фармацевтически приемлемую соль любого из вышеперечисленных соединений; и такая фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента соединение, в эффективном глицин_в-антагонистическом количестве, которое выбирают из группы, включающей соль 4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 8-фтор-4-гидрокси-1 -оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина, соль 7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] -хинолин-5 -оксидхолина и соль 7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксидхолина.

Далее, способ борьбы с неврологическими нарушениями, связанными с эксцитотоксичностью и дисфункцией глутаматергической нейротрансмиссии в живом животном, включающий стадию введения требующему лечения живому животному такого соединения или фармацевтической композиции, в эффективном глицинв-антагонистическом количестве, такой спо5 соб, где соединение существует в форме соли холина;

такой способ, где соединение выбирают из группы, включающей

4-гидрокси-1 -оксо- 1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь]-хинолин-5 -оксид,

8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

8-бром-4-гидрокси-1 -оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

8-фтор-4-гидрокси-1 -оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид,

7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1 -оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид и

7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид или фармацевтически приемлемую соль любого из вышеперечисленных соединений; и такой способ борьбы с неврологическими нарушениями, связанными с эксцитотоксичностью и дисфункцией глутаматергической нейротрансмиссии в живом животном, включающий стадию введения требующему лечения живому животному соединения, в эффективном глицин_В-антагонистическом количестве, которое выбирают из группы, включающей соль 4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина, соль 8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина, соль 8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 8-фтор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина, соль 7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1 -оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина и соль 7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1 -оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина.

Подробное описание изобретения

Подразумевается, что последующее обсуждение, примеры и фармакология приведены с целью иллюстрации данного изобретения, а не в порядке ограничения.

Способы и результаты

Основная структура трициклических пиридо-фталазин-дионов класса I и класса II:

О о

о о он

К.1/К2 = Н и/или галоген

Я1/Я2 = Н и/или О-СН₃

К.1/К2 = Н и/или метилендиокси

Химия

Основной способ получения диметил-хинолин2,3-дикарбоксилат-1-оксидов (3)

Охлажденный раствор (ледяная баня) 2нитробензальдегида 1 (25 мМ) и натрия (27 мМ) в безводном метаноле (40 мл) обрабатывают в течение 30 мин раствором диметил (диэтоксифосфинил) сукцината 2 (30 мМ, получен как описано Ыике с1 а1., ЫеЬ. Апп. Сйет., 1980(4), 542) в безводном метаноле (10 мл). Полученный темный раствор перемешивают при 0-5°С в течение 1,5 ч, растворитель упаривают при пониженном давлении и остаток распределяется между этилацетатом и водой. Этилацетат сушат над сульфатом натрия и затем упаривают при пониженном давлении. Остаток перекристаллизовывают из изопропанола, получая указанный в заглавии диметил хинолин-2,3-дикарбоксилат1-оксид 3 в виде не совсем белого (или светло желтого) порошка.

Физические свойства и 'Н-ЯМРспектральные данные для соединений 3 приведены в таблицах 1 и 2.

a. 5-Бром-4-хлор-2-нитробензальдегид (11).

К смеси серной кислоты (40 мл) и нитрата натрия (2,66 г, 31,3 мМ) при 0-5°С добавляют 3бром-4-хлорбензальдегид (6,25 г, 28,5 мМ). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 7 часов и разбавляют ледяной водой (300 мл). Осажденные твердые продукты отфильтровывают, промывают водой и сушат, получая порошок. Перекристаллизация этого соединения из смеси изопропанола и воды (2:1) дает указанный в заглавии 2нитробензальдегид 11 (3,6 г, 51,5%) в виде светло-желтого порошка, т.пл. 81-82°С. Анализ для С₇Н₃ВгСШО₃:

Рассчитано (%): С 31,79; Н 1,14; N 5,30; Найдено (%): С 31,55; Н 0,98; N 5,09. ’Н-ЯМР (СЭС1₃), δ: 8,22 (с, 1Н), 8,23 (с, 1Н), 10,39 (с, 1Н).

b. 4-Бром-5-хлор-2-нитробензальдегид (1ё).

Используя способ (а), за тем исключением, что исходят из 4-бром-3-хлорбензальдегида (2,97 г, 13,5 мМ) получают указанное в заглавии соединение 1д (1,9 г, 53,0%) в виде светложелтого порошка, т.пл. 95-98°С.

Анализ для С₇Н₃ВгС1ИО₃:

Рассчитано (%): С 31,79; Н 1,14; N 5,30; Найдено (%): С 31,60; Н 1,01; N 5,11.

'Н-ЯМР (СИС1₃), δ: 8,02 (с, 1Н), 8,43 (с, 1Н), 10,39 (с,1Н).

Основной способ получения диметил хинолин2,3-дикарбоксилатов (7)

Раствор Ν-оксида 3 (10 мМ) и трихлорида фосфора (30 мМ) в безводном хлороформе (100 мл) нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение 7 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток распределяется между этилацетатом и водой.

Органический слой сушат над сульфатом натрия и затем упаривают при пониженном давлении. Остаток перекристаллизовывают из изопропанола, получая указанный в заглавии диметил хинолин-2,3-дикарбоксилат 7 в виде не совсем белого (или светло-желтого) порошка.

Физические свойства и 'Н-ЯМРспектральные данные для соединений 7 приведены в таблицах 3 и 4.

Основной способ получения 4-гидрокси-1-оксо1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 оксидов (5)

К перемешиваемому раствору (или суспензии) диметил хинолин-2,3-дикарбоксилат-1оксид 3 (5 мМ) в кипящем этаноле (25 мл) в атмосфере аргона добавляют гидразин-гидрат (15 мМ) и смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение 3 ч, за это время образуется темный осадок. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь отфильтровывают, и собранные твердые продукты промывают этанолом и диэтиловым эфиром и сушат, получая соль гидразина 4. Это вещество перемешивают при 70-110°С 3 ч в уксусной кислоте (15 мл) и, после охлаждения до комнатной температуры, смесь разбавляют водой (45 мл) и затем фильтруют, чтобы собрать твердые продукты. Собранные твердые продукты промывают этанолом и сушат, получая темно-желтое твердое вещество. Несколько перекристаллизаций этого продукта из диметилформамида дают указанный в заглавии пиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид 5 в виде оранжевого порошка.

Физические свойства и 'Н-ЯМРспектральные данные для соединений 5 приведены в таблицах 5 и 6.

Основной способ получения 1,4-диоксо-1,2,3,4тетрагидропиридазино[4,5-Ь] хинолинов (9)

К перемешиваемому раствору (или суспензии) диметил хинолин-2,3-дикарбоксилата 7 (5 мМ) в кипящем этаноле (25 мл) добавляют гидразин-гидрат (30 мМ) и смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение 8ч, за это время образуется осадок. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь отфильтровывают, и собранные твердые продукты промывают этанолом и диэтиловым эфиром и сушат, получая соль гидразина 8. Это вещество перемешивают при 70-100°С 3 ч в уксусной кислоте (15 мл) и, после охлаждения до комнатной температуры, смесь разбавляют водой (45 мл) и затем фильтруют, чтобы собрать твердые продукты. Собранные твердые продукты промывают этанолом и диэтиловым эфиром и сушат, получая указанный в заглавии пиридазино[4,5-Ь] хинолин 9 в виде желтого порошка.

Физические свойства и ¹Н-ЯМРспектральные данные для соединений 9 приведены в таблицах 7 и 8.

Основной способ получения солей 4-гидрокси-1 оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5оксид-холина (6) и солей 1,4-диоксо-1,2,3,4тетрагидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-холина (10) К перемешиваемой суспензии пиридазино[4,5-Ь] хинолина 9 или Ν-оксида 5 (10 мМ) в метаноле (50 мл) добавляют гидроокись холина (10,5 мМ, 45 вес.% раствор в метаноле). Полученный раствор концентрируют, используя роторный испаритель, и твердый остаток перекристаллизовывают из этанола, получая указанную в заглавии соль холина 10 или 6 в виде гигроскопичного оранжевого (или красного) порошка.

Физические свойства и ¹ Н-ЯМР-спектральные данные для соединений 6 и 10 приведены в таблицах 9, 10 и 11, 12, соответственно.

Таблица 1. Полученные диметил хинолин-2,3дикарбоксилат-1-оксиды 3

За ΗН

ЗЬ НС1

Зс НВг за нг

Зе С1С1

3£ С1Вг

Зд ВгС1

Элементарн	ый анализ.
Рассчитано (%)	Найдено (8)
С \| Н \| N	с \| н \| к

(26 Г. 2) С„Н₁₀С1НО, (295.7) С_пН_1вВгИО, (340.2) С_1эН_1оЕЫО₅ (279.2) С₁₎Н,С1,ИО_! (330.1) С_пН,ВгС1ЫО, (374.6)

С_1ЭН,ВгС1ИО,(

374.6)

59.774.24

52.813.41

45.892.96

55.863.60

47.302.75

41.692.42

5.3659.84

4.7452.00

4.1145.57

5.0155.19

4.2447.18

3.7441.39

3.7441.68

4.115.31

3.324.7В

2.754.00

3.384.95

2.624.14

2.133.65

2.253.75

175-176 61.5

126-127 49.0

168-170 72.0'

194-196 49.0

183-186 41.0

171-173 60.0

206-208 62.5

Таблица 2. ¹Н-ЯМР (СПС1₃)-спектральные данные для соединений 3

Соедин, | ..... .....-&(м.д ), Д (Гц) ' ”

За 3.98(8, ЗН), 4.11, (8, ЗН), 7.66-8.05 (т, ЗН), 8.43 (5,1Н), 8.75 (<Ш, 1! = 8.5,1_г - 2.0,111)

ЗЬ 3.98 (5, ЗН), 4.11 (8. ЗН), 7.71 (4с1.1₍ =8.5, = 2.5,1Н), 7.91 (ά, ί =8.5,1Н), 8.38 (з, 1Н), 8.74 (6,1 =2.5,1Н)

Зс 3.91 (з, ЗН), 4.07 (з, ЗН), 7.Ι3 (6<1,=9.5,1_г = 2.0,1Н), 7.44 (ά, ) = 2.0,1Н), 8.22 (з, 1Н), 8.58 (ά, 3 =9.5,1Н)

М 3.98 (5, ЗН), 4.11 (5, ЗН), 7.48-7.72 (т,2Н), 8.31 ($, 1Н), 8.73 (<5с5,1, = 10.0.= 5.0, ΙΗ)

Зс 3.97 (з, ЗН). 4.10 (5, ЗН), 8.08(5,1Н), 8.28 (8,1Н), 8.83 (5,1Н)

ЗГ 3.97 (5, ЗН), 4.09 (8, ЗН), 8.26 (8,2Н), 8.82 (8,1Н) '

3₈ 3.97 (э, ЗН), 4.09 (з, ЗН), 8.06 (8, 1Н), 8.27 (з, 1Н), (02 9з, 1Н)

Таблица 3. Полученные диметил-хинолин-2,3дикарбоксилаты 7

7а ΗН

7Ь НС1

7с НВг

7а ΗР

7е С1С1

1£ С1Вг

7д Вга ε,,Η,.Νο, (245.2) СпН^аио.

(279.7) СцН«ВгЫО.

(324.1)

ΟηΗ|οΗΝΟ« (2632) СпН^О.

(3141) С|>Н,Вг€10₄ (348.6) СиНЩгСЮ, (348.6)

63.674.52

55.833.60

48.17З.И

59.323 83

49.71289

43.552.53

5.71 63.484.52

5.01 55.743.59

4.32 48.093.05

5.32 59.233.79

4.46 49.562.85

3.91 43,602.48

91 43.472.51

5.63 104-10688.0

5.00 152-15490.0

4.26 155-15781.5

5.26 119-121850

4.41 113-11596.0

3.88 128-13095.0

3.87 142-14467.0

Таблица 4. ¹Н-ЯМР (С1ТС1₃)-спектральные данные для соединений 7

Соедин δ (м.Д·). 7 (Гц)

7а 3.98 (5,ЗН), 4.06 (5, ЗН), 7.58-8.00 (т, ЗН), 8.21 (Μ Λ = 9.5,б, = 2.0,1 Н>, 8.77 (т,2Н), 8.77 (β, 1Н)

7Ь 3.97 ($. ЭН). 4.06 (8, ЗЮ, 7.76 «ИД ' 9-5.7а ” 2 0,1Н), 7.90 (б, б = 2.0,1Н), 8.67 (а, 1Н)

7с 3.97 (5, ЗН), 4.07 (я. ЗН), 7.90 (<«,6, = 9.5,1₂ = 2.0,1Н), 8.09 (т, 2Н). 8.66 (з, 1Н)

7ά 3.98 (з, ЗН), 4.07 (з, ЗН), 7.49-7.72 (т, 2Н), 8.20 «И Д, = 10,1₂ - 5.0.1Н), 8.69 (5, 1Н)

7е 3.97 (з.ЗН), 4.04 (я. ЗН). 8.02 (&, 1Н), 8.31 (я, 1Н), 8.64 (з. 1Н)

3.98 (5, ЗН), 4.06 ($, ЗН), 8.24 (з, 1Н), 8.33 (я, 1Н), 8.68 (я, IН)

7(· 3.96 (5,311). 4.04 (я. ЗН), 8.03 (з, 1 Н>, 8.53 (я, 1Н), 8.62 (з, ΙΗ)

Таблица 10. ¹Н-ЯМР (С1)₃О1))-снектра.1Ы1ые данные для солей холина 6

Таблица 5. Полученные 5,4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5-оксиды 5

Таблица 11. Полученные соли 1,4-диоксо-1,2,3,4тетрагидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-холина 10

			Формула	Элементарный анализ
Мга2/	Соедин	о’	(ипм)	Рассчитано для ЮхНзОН Найдено (34) <%) 1	(с»	Выход
				“сП Н 1 » 1 С 1 Н 1 N

499

502

514

516

518

551

568

5а ΗН

5Ь НС1

5с ИВг

ΗЕ

5е С1С1

5Г С1Вг

5₈ ВгС1

Ο,,Η,Ν,Ο, (229.2) С,|Н₆С1ЫА (263.6)

Си^ВгЫА (308.1)

СцНбРИА (247.2) Ο,,Ηί^Ν,Ο, (298.1)

Ο,,Η,ΒγΟΝ,Ο, (342.5) ο,,η,ΒγΟνα (342.5)

57.653.0«

50.112.29

42.881.96

55.442.44

44.321.69

38.571.47

18.3357.56

15.9449.34

13.6342.57

16.9953.44

14.1044.17

12.2737.93

12.2738.17

2.9318.22

2.2915.40

1.9113.49

2.3516.90

1.9114.34

1.3311.94

1.3112.00 >30044.5 >30088.0 >30078.0

297-29837.0 >30016.0 >3001 5.0 >300>7.0

596

586

572

574

598

597

10а II	н	€₁₆Η_ΜΝΑ (316.36)	54.26	7.59	14.06	54.23	7.39	14.25	102-1)0	82.0
106	II	С1	С_\|4Н\|»С1Ы₄О) (350.8)	54.08	5.53	15.76	54.10	555	15.61	189-191	84.0
10с	н	Вг	Ο,Μ,ΒγΝ,Ο, (395.3)	43.64	549	12.72	.44.07	5.14	12.73	234-236	61.(
104	н	Е	С_нН„ГН,О, (334.4)	52.16	15.20	5.74	52.08	6.23	15.19	229-230	95.(
10е	С1	С1	с„Н\|,С11Ы₄о, (385.3)	47.65	4.99	13.89	47.24	5.03	13.60	205-208	83.1
ЮГ	С1	Вг	ε,ίΗ,ίβΛίΝ,ο, (429.7)	42.92	4.5	1251	42.78	4.60	12.44	207-209	92.1
1«8	Вг	С1	0₁₆Η„Βγ€ΙΝ₄Ο, (429.7)	42.92	4.5	12.51	42.66	4.57	12.37	201-203	951

25 (0) 1.0(.1,е) 2.5(с)

Таблица 6. ¹Н-ЯМР (ДМСО-О₆) -спектральные данные для

соединений 5
Соедин	1 8 (м.д.), 7 (Гц) '
\| ароматические протоны (и ОСНз)	\| 1411.0Н(обыениваеыые)
5а	7.88-8.28 (т, 2Н). 8.46-8.79 (т, 2Н), 9.07 (з, 1Н)	10.65 (Ьг. з, 1Н). 12.00 (Ьг. з, 1Н)
5Ь	8.07 (00,1, = 9.0,1, = 2.5,1Н),8.59 (0,1 = 9.0,1Н), 8.69 (0,1 = 2.5,1Н), 9.11 (я, ΙΗ)	12.05 (Ьг. з,1Н), 14.60(Ьг. я, ΙΗ)
5с	8.27(60,1, = 9.0,1, = 2.0,1 Я), 8.60 (0,1 = 9.0. Ж), 8.82 (4,1 = 2.0, ΙΗ). 9.00 (я, ΙΗ)	11.00 (Ьг.з. 1Н), 12.00 (Ьг.зДН)
50	8.07 (000,1, - 9.5,1, = 8.5.1, = 2.5,1Я), 8.36 (44,1, = 9.5, 1, = 2.5,1Н). 8.75 (44.1, = 9. 11 = 5.0, 1Н),902 (5.1Н)	5. 10.92(Ьг.я, ΙΗ). 12.00 (Ьг.я, ΙΗ)
5с	8 8Э(з, 1Н), 8.90(3,111),9.06 (з, \|Н)	11.25 (Ьг. я,1Н), 12.05 (Ьг. в, 1Н)
5ί	8.80(5, 1Н1.9 00 (5,1Н), 9.01 (з, ΙΗ) '	12.06 (Ьг.з, ΙΗ), 14.28 (Ьг.в, ΙΗ)
58	8.90 (β, 1Я), 9.01 (5,1Я), 9.04 (з, 1Я)	12.13 (Ьг.з. 1Н), 14.32 (Ьг. з, 1Н)

Таблица 12. ¹Н-ЯМР(СП₃ОП)-спектральные данные для солей холина 10

Соедин	8 (м.д.), л (Гн)
„ро,о„„	I .„о—™, пр»™
10а	3.21 (я. 9Н), 3.51 (т,2Н).4.01 (т, 211)	7.64-8.57 (т,4Н), 9.17 (в, ΙΗ)
ЮЬ	3.25 (в, 9Н), 3.52 (т, 2Н), 4.02 (т, 211)	7.89(00,1\|=9.0.1ι = 2.5, ΙΗ). 8.23 (0.1 = 2.5,1Н),8.34 (<1,1 = 9.0,1Н),9.13(в, 1Н)
Юс	3.22 (в, 9Н), 3.47 (т, 2Н). 3.97 (т, 2Н)	7.99 (00,1( = 9.0,1; - 2.0, ΙΗ). 8.26 (0.1 = 9.0,1Н), 8.41 (0,1 - 2.0.1Н). 9.09 (а, )Н)
	3.20(5,9Н), 3.49 (т, 2Н), 3.98 (т,2Ю	7.64-7.81 ((0,24),8.39(00,1( = 9.5,11 = 5.0,111),9.12(8, 1Н)
Юс	3.22 (5,9Н), 3.51 (т, 2Н), 4.02 (т. 2Н)	8.46 (я. 1Н), 8.55 (в, 1Н). 9.14 (в, 1Н)
ЮГ	3.22 (в, 9Н), 3.50 (т, 2Н), 4.00 (т, 211)	8.5.3 (в, Ж), 8.64(3,1Η1.9.Ι3 (в, 1Н)
10β	3.22 (я, 9Н). 3.50 (т, 2Н), 4.02 (т, 21!)	8.43 (в. 1Н). 8.73 (в, 1Н),9.13 (в, 1Н)

Таблица 7. Полученные 1,4-диоксо-1,2,3,4тетрагидропиридазино [4,5-Ь] хинолины 9

585

501

503

519

515

539

538

9а ΗН

9Ь НС1

9с НВг

ИНЕ

9е С1С1

9Г С1Вг

9₈ ВгС1

С_ИН,Ы_ЭО₁ (213.2) (247.6)

С_(|Н,8гМ₃О_! (292.1) (231.2) Ο,,Η,εΐιΝΑ (282.1) С„Н₅ВгС1М,О₃(326.5) СнНДШЫА (326.5)

61.973.31

53.352.44

45.232.07

57.142.60

46.841.79

40.461.54

19.7161.43

16.9732.89

14.3944.74

18.1856.73

14.9046.44

12.8740.16

12.8740.23

3.4519.16

2.2816.68

2.1114.09

2.4717.99

1.7014.87

1.4212.88

1.4012.98 >300 >300 >300 >300 >300 >300 >300

86.0

88.5

82.0

84.0

82.5

69.5

88.0

Таблица 8. ¹Н-ЯМР (ДМСО-О₆) - спектральные данные для соединений 9 ~ ⁵ (и·¹¹·¹» ^{α (Г,||)}.

ароматические протоны I

9а 7.76-8.16 (т, 2Н), 8.22-8.47 (т, 2Н), 9.30(8, ГН) II.60(Ьг. 8,2Н)

9Ь 8.02(00.1( = 9.0.1, = 2.5,14),8.28(0,1 = 9.0, ΙΗ). 8.52(4,3-2.5, 14).9.26 (з, ΙΗ) 11.60 (Ьг. в. 2Н)

9с 8.16 (т, 2Н), 8.60 (Ьг. 8, ΙΗ), 9.25 (з, I Η) 11.55 (Ьг. я. 2Н)

7.93 (ООО, 1, = 9.5,1,_(НР| =9.0. 3, = 2.5, 1Н), 8.18 (00,1_||Н._Р) = 9.5.1₂ = 2.5, ΙΗ), 8.36 (00, 11.90 (Ьг. я, 2Н)

Л-9 5,= 5 5, ΙΗ),9.24(ί» ЗН)

9е 8.47 (я, 1Н), 8.67 (з. 1Н), 9.22 (я, IН) 11.60 (Ьг. 8,2Н)

9! 8.52 (з, 1Н), 8.91 (з, IЯ), 9.28 (з. 1Я) II .65(Ьг. в, 2Н)

9₈ 8.68 (з, 1Н), 8.71 (я, 1Н), 9.26 (я, IН) 11.70 (Ьг. я, 2Н)

Таблица 9. Полученные соли 4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина 6

Фармакология

Ιη νίΐΓΟ

Изучение рецепторного связывания Получение мембран и определение белка

Препарирование ткани осуществляют согласно Ро81ег А.С. & \νοη§ ЕНЕ, 1987, Вп(. 1.Рйагтасо1. 91, рр. 403-409. Самцов БргадиеЭа\\!еу крыс (200-250 г) обезглавливают и быстро удаляют головной мозг. Кору головного мозга расслаивают и гомогенизируют в 20 объемах охлажденной льдом 0,32 М сахарозы, используя стекло-тефлоновый гомогенизатор. Гомогенат центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин. Осадок в пробирке после центрифугирования отбрасывают и супернатант центрифугируют при 20 000 об/мин в течение 20 мин. Образовавшийся осадок в пробирке после центрифугирования повторно суспендируют в 20 объемах дистиллированной воды и центрифугируют в течение 20 мин при 8000 об/мин. Затем супернатант и светлый слой кровяного сгустка трижды центрифугируют (48 000 об/мин в течение 20 мин) в присутствии 5 мМ Трис-НС1 рН 7,4. Все стадии центрифугирования выполняют при 4°С. После повторного суспендирования в 5 объемах 5 мМ Трис-НС1, рН 7,4 суспензию мембран быстро замораживают при -80°С до дня испытаний. В день испытаний мембраны размораживают и промывают четыре раза путем суспендирования в 5 мМ Трис-НС1, рН 7,4 и центрифугируют при 48.000 об/мин в течение 20 мин. Конечный осадок в пробирке после центрифугирования суспендируют в буфере для испытания.

Количество белка в конечном препарате определяют по способу ЬоАгу О.Н. е!.а1., 1951, 1. Вю1. Меб., 90, р.210 с некоторыми модификациями Нагйтее Е.Р., 1972, Апа1у1.Вюсбет. 48, рр.422-427.

мкл образцов белка (в трех экземплярах) разбавляют до 1 мл дистиллированной водой и обрабатывают 0,9 мл раствора, содержащего 2 г калий-натриевого тартрата и 100 г Иа₂СО₃ в 500 мл 1н. ЫаОН и 500 мл воды. Холостой опыт и стандарт (с альбумином бычьей сыворотки) подготавливают таким же образом. Пробирки помещают в водяную баню при 50 °С на 10 мин и охлаждают до комнатной температуры. Добавляют 100 мкл раствора, содержащего 2 г калий-натриевого тартрата и 1 г Си8О₄ х 5 Н₂О в 90 мл воды и 10 мл 1н ЫаОН. Образцы оставляют при комнатной температуре, по меньшей мере, на 10 мин, затем быстро добавляют при перемешивании 3 мл реагента РойиСюсабеи (1 мл реагента разбавляют 15 мл воды). Пробирки вновь нагревают при 50°С в течение 10 мин и охлаждают до комнатной температуры. Затем определяют абсорбцию в 1 см кюветах при 650 нм. Конечная концентрация белка, используемая для изучении, находится в пределах 100-250 мкг/мл.

Инкубирование в обоих испытаниях на связывание заканчивают, используя фильтрующую систему Мбброге. Образцы, все в тройном экземпляре, промывают трижды при постоянном вакууме 2,5 мл охлажденного льдом буфера для испытаний на фильтрах из стекловолокна, поставляемых 8сЫе1сбег & 8сбие11 . После разделения и промывки фильтры помещают в сцинтиллирующую жидкость (5 мл; ИИта Со1б) и удерживаемую на фильтрах радиоактивность определяют, используя обычный жидкий сцинтилляционный считчик (НеА1еб Раскагб, Ыс.|шб 8ст1б1абои Апа1у§ег). Общее связывание представляет абсолютное количество радиолиганда, связанного в отсутствии какихлибо добавок, тогда как неспецифическое связывание определяют в присутствии высокой концентрации конкурента.

Испытание на [³Н] 5.7-ЭСКА-связывание

Эксперименты проводят способами, представляющими модификацию предшествующих (Саи1ои Т. е!.а1.,1992, 1. Рбагт. Рбагтасо1. 44, рр. 812-816; УопебаУ.е1.а1., 1993, 1. Иеигосбет. 60, рр.634-645).

Мембраны суспендируют и инкубируют в 10 мМ Трис-НС1, рН 7,4. Время инкубации - 45 мин при 4°С. Неспецифическое связывание [³Н]5,7-ИСКЛ определяют, добавляя немеченый глицин при 0,1 мМ. Стоп-раствор содержит 10 мМ Трис-НС1 и 10 мМ сульфата магния, рН 7,4.

Фильтрование выполняют по возможности быстро. Эксперименты по замещению выполняют с фиксированной концентрацией [³Н]5,7-ЭСКЛ, равной 10 нМ. Испытуемые соединения разбавляют водой или ДМСО и добавляют, по меньшей мере, в 5 различных концентрациях.

Испытание на связывание [³Н]глицина

Испытание, на связывание [³Н] глицина выполняют по способу, описанному КекДег М., е1. а1., 1989, Л. Иеигосбет. 52, рр. 1319-1328. Кортикальные мембраны крыс получают как описано выше и конечные осадки в пробирке после центрифугирования суспендируют в 50 мМ Трис-ацетат, рН 7,4. По меньшей мере, 5 различных концентраций испытуемых соединений инкубируют с 20 нм [³Н]глицина в течение 30 мин при 4°С в присутствии 100 мкМ стрихнина. Все соединения растворяют в воде или ДМСО, соответственно. Неспецифическое связывание определяют путем введения 100 мкМ глицина в инкубируемую смесь. Инкубирование обрывают, разбавляя образцы 2 мл стопраствора (50 мМ Трис-НС1, включая 10 мМ сульфата магния, рН 7,4, охлажденный до <2°С) с последующим дополнительным промыванием 2,5 мл буфера. Фильтрование выполняют по возможности быстро.

Результаты

Восемь из числа исследуемых соединений имеют значения 1С₅₀ в [³Н] -ЭСКЛ-испытании <1 мкМ (см. таблицу 13). Активность шести отобранных соединений в [³Н]-глицинсвязывании, на первый взгляд, выше, но это не отражается в больших различиях величин Кб (не приведено). Из пар соединений, представляющих особый интерес, соединения класса II обладают большим сродством в [³Н]-ЭСКАиспытании, чем соединения класса I. Это различие не так очевидно в [³Н] -глицин-испытании.

Таблица 13а

Μγζ 2/	Соединение	[³Н]-ПСКА Ю₅₀ мкМ	[³Н]-глицин Ю₅₀ мкМ
499	II	16,0
501	8-С1-1	0,120	0,080
502	8-С1-П	0,020	0,013
503	8-ВгА	0,250	0,013
514	8-Вг-П	0,010	0,004
519	8-^	1,100	0,015
516	8-Р-П	0,300	0,017
515	7,8-ДиС1-1	0,530
518	7,8-ДиС1-11	0,650

Таблица 13Ь

Μγζ 2/	Соединение	[³Н]-ПСКА Ю₅₀ мкМ
572	8-РА (Хол.)	1,14
571	8-Р-П (Хол.)	0,32
569	8-СН (Хол.)	0,97
576	8-С1-П (Хол.)	0,45

Пэтч-кламп Способы

8ирегюг соШсиб получают из эмбрионов крыс (Е20-Е21) и затем переносят в буферный раствор солей Напк (61Ьсо), не содержащий кальция и магния. Клетки подвергают механической диссоциации в 0,05% ΌΝΑ;·^/0,3% ονοтисо1б (овомукоид) (81дта). С последующей 15-минутной преинкубацией с 0,66% трипсин/ 0,1% ΌΝΑαδο (81дта). Затем диссоциированные клетки центрифугируют при 186 в течение 10 мин, ресуспендируют в минимальном количестве основной среды (61Ьсо) и высевают при плотности 200000 клеток см^-2 на предварительно покрытые поли-Ь-лизином (81дта) пластиковые чашки петри (Га1соп). Клетки выращивают на основной среде с минимальным количеством №1НСОз/НЕРЕЗ-бу(|)ера. дополненной 5% сывороткой плода коровы и 5% лошадиной сыворотки (61Ьсо) и инкубируют при 37°С с 5% СО₂ при влажности 95%. Среду полностью заменяют с последующим ингибированием дополнительного глиального митоза цитозин-Р-Э-арабинофуранозидом (20 мкМ 81дта) после приблизительно 7 дней ίη νίΐΓο. После чего среду частично меняют дважды в неделю. Культура кирепог соШси1и8 была выбрана для этих экспериментов, поскольку она обеспечивает очень стабильные условия регистрации, которые являются абсолютной предпосылкой для экспериментов по зависимости от напряжения и кинетических экспериментов. Кроме того, относительно небольшие нейроны (нервные клетки) (сома 15-20 мкм 0) идеально подходят для минимизации проблем диффузии в буфере для экспериментов кламп-концентрации.

Пэтч-кламп регистраторы были изготовлены из этих нейронов с полированными стеклянными электродами (4-6 МОм) по методу целой клетки при комнатной температуре (20-22°С) с добавлением ЕРС-7-усилителя (Ьк1). Испытуемые соединения наносят с помощью коммутационных каналов сделанной на заказ системы для быстрого переливания с общим истечением (периоды обмена 10-20 миллисекунд). Состав внутриклеточного раствора следующий (мМ):

СкС1 (120), ТЕАС1 (20), Ε6ΤΑ (10), МдС1₂(1), СаС12 (0,2), глюкоза (10), АТР (2), САМР (0,25); рН доводят до 7,3 с помощью СкОН или НС1. Внутриклеточные растворы имеют следующий основной состав (мМ): Ν;·ιΟ1 (140), КС1 (3), СаС1₂ (0,2), глюкоза (10), ΗΕΡΕ8 (10), сахароза (4,5), тетродотоксин (ТТХ 3*10-4). В большинстве экспериментов глицин (1 мкМ) присутствует во всех растворах. Эксперименты по испытанию глицин-зависимости трициклических пиридо-фталазин-дионов осуществляют при постоянном присутствии возрастающих концентраций глицина (1-10 мкМ).

Результаты

Пять пар трициклических пиридофталазин-дионов имеют значения 1С₅₀, по сравнению с внутренними токами для ΝΜΌΑ (200 мкМ), в области низких мкМ и соединения класса II обычно в 2-3 раза более активны, чем соединения класса I (таблица 14а). Наибольшую активность из них имеют Μγζ 2/502 и Μγζ 2/514.

Этот эффект опосредован на участок глицина_в, как очевидный, путем параллельного сдвига кривых концентрация - ответная реакция в присутствии возрастающих концентраций глицина. Таким образом, величины КЬ для Μγζ 2/502, как определено по соотношению Сйепд-Ргикой', являются одними и теми же в глицине 1, 3 и 10 мкМ (80, 124 и 118 нМ, соответственно). Кроме того, действия Μγζ 2/501 и Μγζ 2/502 не зависят от напряжения. Все испытанные соединения приблизительно в 3-10 раз более активны по отношению к токам установившегося режима, чем к максимальным токам. Производные холина обладают аналогичными эффективностями относительно свободных кислот ίη ν Иго (таблица 14Ь).

В противоположность, из этих сильных антагонистов глицинав только три являются очень слабыми антагонистами токов, направленных внутрь к АМРА (100 мкМ). Μγζ 2/502, Μγζ 2/514 и Μγζ 2/516 имеют значения 1С₅₀ относительно максимальных АМРА-индуцированных токов 25, 73 и 18 мкМ, соответственно, но в значительной степени не активны в отношении платовых токов, все значения 1С₅₀ > 100 мкМ (таблица 14а). Этот профиль активности, хотя очень слабый, является характерным для конкурентных АМРА-рецепторных антагонистов, которые предпочтительно блокируют максимально не десенсибилизированное состояние, состояние низкого сродства рецептора (см. Рагкоп С.6. е!.а1., 1994, №игорйагтасо1о§у 33, рр. 589-604).

Таблица 14а

Μγζ 2/	Соединение	Максимальный ΝΜΙ1Α 1С₅₀ мкМ	Платовый ΝΜΙ1Α 1С₅₀ мкМ	Максимальный АМРА 1С₅₀ мкМ	Платовый АМРА 1С₅₀ мкМ
585	I	65,9	19,1
499	II	51,2	13,8
501	8-С1-1	2,3	0,7
502	8-С1-П	0,8	0,3	25,0	150,0
503	8-Вг-1	1,7	0, 6
514	8-Вг-П	0,5	0,2	72,2	307,0
519	8-Γ-Ι	18,0	5,8
516	8-Г-Н	6,3	1,6	17,6	>100
515	7,8-ДиС1-1	3,7	0,9
518	7,8-ДиС1-11	3,8	0,8
539	7-С1,8-Вг-1	5,3	0,7
551	7-С1,8-Вг-П	2,4	0,6
538	7-Вг,8-С1-1	93,9	2,5
568	7-Вг,8-С1-П	10,0	1,5
554	8-О-СН3-1	170	36,2

Таблица 14Ь

Μγζ 2/	Соединение	Максимальный ΝΜΏΑ 1С50 мкМ	Платовый ΝΜΏΑ 1С50 мкМ
569	8-С1-1 (Хол.)	2,0	0,5
576	8-С1-П (Хол.)	1,1	0,5
586	8-Вг-1 (Хол.)	2,2	0,6
570	8-Вг-П (Хол.)	0,6	0,1
572	8-Γ-Σ (Хол.)	12,4	3,5
571	8-Γ-ΙΣ (Хол.)	4,9	1,0
575	7-О-СН3-1 (Хол.)	94,0	14,5
578	7-О-СН3-П (Хол.)	101	7,7

Эксцитотоксичность ίη νίΐΓΟ

Способы

Выделение кортикальных нейронов осуществляют аналогично способу, описанному для регистраторов в виде скобки из наклеенного пластыря, за тем исключением, что используют зародыши крыс на 17-19 дни развития плода. Нейроны высевают на пластину с 24 ячейками (Огетег), при плотности 300 000 клеток/ячейка, покрытая поли-О-лизином 0,025 мг/мл. Клетки выращивают в ЭЫЬессо'к модифицированной основной среде (ΌΜΕΜ, С1ВСО), дополненной 10% термически инактивированной околоплодной серозной жидкости теленка (С1Ьсо). Культуры выдерживают при 37° С и 5% СО₂. Среду обновляют первый раз через одну неделю и затем каждые 3 дня, заменяя половину среды, свежей средой. Для экспериментов используют культуры, выдержанные 17 дней. Взаимодействие с ЕАА осуществляют в не содержащей сыворотку МЕМ-Ы2-среде (ВоИегМеш ЕЕ. е!.а1., 1979, Ргос. Ыа11. Асаб.8сг И8А 76, рр. 514-517), содержащей 0,5 мМ ΝΜΌΑ, 1мкМ глицина и испытуемое лекарственное средство. Перед добавлением ΝΜΌΑ, клетки предварительно инкубируют с лекарственными средствами и 1 мкМ глицина в течение 15 мин. Через 24 ч цитотоксический эффект оценивают морфологически под фазово-контрастным микроскопом и оценивают количественно биохимически, измеряя истечение ЬЭН.

Активность ЬЭН определяют в супернатанте спустя 24 ч по способу \УгоЬ1е\т8к| Р. & Ьа Эие 1.8., 1955,8ос. Ехр. Вю1. Меб. 90, р.210). Вкратце, 0,1 мл супернатанта добавляют к 0,9 мл натрий-фосфатного буфера (рН 7,5), содержащего пируват натрия (22,7 мМ) и ΝΑΌΗ (0,8 мг/10 мл) при комнатной температуре. Превращение пирувата в лактат регистрируют при 340 нм в течение 10 мин на спектрофотометре Контрона.

Результаты

Полные кривые концентрация - ответная реакция все же не доступны. Однако, Μγζ 2/501 и Μγζ 2/502 при низких концентрациях являются эффективными нейрозащитными средствами ίη тйго. очевидно, что Μγζ 2/502 является более активным в этом отношении (см. таблицу 15).

Таблица 15

Μγζ 2/	Соединение	Цитотоксичность ίη νίΐΐΌ 1С₅₀ мкМ
501	8-С1-1	<5
502	8-С1-11	<<5
503	8-Вг-1	>20

Ιη νί то

Противоконвульсивная активность Цель

Изучение ΝΜΌΑ-рецепторных антагонистических свойств испытуемых агентов путем оценки противоконвульсивных действий. Дополнительно изучают роль органических кислотных транспортных средств в удалении из головного мозга испытуемых агентов, путем применения ингибитора, пробеницида (РгоЬеп1с1б), продолжительности противоконвульсивного действия.

Способы

Для ΝΜΌΑ-испытания на летальность (Ъеапбег е!.а1., 1988, Вгаш Век. 448, р.115) используют самцов мышей альбиносов 8^188 (19-21 г), содержащихся по 10-15 на клетку. Для пентилентетразол (РТ2)-индуцируемых конвульсий используют самцов мышей альбиносов 8\τίκ8 (25-34 г), содержащихся по 40 на клетку (58х38х20 см), тогда как в испытаниях на максимальный электрошок (ΜΕ8) и испытаниях на двигательную недостаточность используют ΝΜΒ самок мышей (18-28 г), содержащихся по на клетку. Всех животных обеспечивают водой и пищей ад либитум (на усмотрение исполнителя) при 1 2-часовом цикле день-ночь (день с часов утра) и при контролируемой температуре (20±0,5°С). Все эксперименты выполняют между 10 часами утра и 5 часами дня. Испытуемые соединения впрыскивают внутрибрюшинно (1.р) за 15 мин до стимулирования конвульсий, если не оговорено особо (см. ниже). Μγζ 2/502 растворяют в растворе соли, дополненном Ν;·ιΟΗ. Большинство других агентов растворяют в следующем растворе: 0,606 г Трис; 5,0 г глюкозы; 0,5 г Твин 80 и 95 мл воды. Соли холина и тетраметиламмония растворяют в дистиллированной воде.

В испытании на ΝΜΌΑ-индуцируемые конвульсии, на мышах, сначала получают соотношение доза - ответная реакция, чтобы определить дозу ΕΌ₉₇, которую затем используют для испытания антагонистических свойств. После впрыскивания ЕП₉--дозы ΝΜΌΑ, животных помещают в маленькую клетку (20х28х14 см) и наблюдают в течение 20 мин. Фармакологической конечной точкой является гибель, которой предшествуют клонические конвульсии и тонические припадки.

Пентилентетразол впрыскивают при дозе 90 мг/кг (1.р). Затем подсчитывают наличие общих тонических конвульсий в течение 30 мин, поскольку этот параметр более чувствителен к антагонистам ΝΜΌΑ-рецепторов, чем клонические конвульсии. За фармакологическую конечную точку берут наличие тонуса в задних конечностях при вытягивании.

ΜΕ8 (100 Гц, 0,5 с длительность шока, 50 мА шоковая интенсивность, 0,9 мс длительность импульса, Идо Вакбе) прикладывают посредством корнеальных электродов. Подсчитывают наличие тонических конвульсий (тоническое вытягивание задних лап с минимальным углом к телу 90°). В дополнительном эксперименте мышам впрыскивают пробеницид (200 мг/кг) за 30 мин до введения испытуемых агентов, чтобы определить роль органического кислотного транспортного средства в очищении (длительность действия). Цель состоит в получении зна чений ΕΌ₅₀ для всех параметров, оцениваемых использованием теста Ы1с11Пс1б Ι.Τ., ^йеохои Р., 1949, 1. Рйагтасо1. Ехр. Тйег. 96, р. 99 для количественной характеристики реакции на до^зу.

Результаты

Из испытанных соединений, только четыре соединения, все класса II, эффективны при 1.р. введении в М.Е.8.-испытании (Μγζ 2/499, Μγζ 2/502, Μγζ 2/516 и Μγζ 2/514, см. таблицу 16а). Действующие совместно соединения класса I не активны. Очевидно, все четыре соединения имеют очень короткий полупериод жизни ίη νίνο. По-видимому, ΡΤΖ-испытание является более чувствительной моделью действия глицин_в-антагонистов, вводимых 1.р, и, в действительности, те же самые соединения класса II активны при 2-4-кратном снижении доз, тогда как соединения класса I остаются неактивными (таблица 16а).

Соли холина именно этих производных Νоксида (структуры II) имеют ярко выраженную противоконвульсивную активность во всех трех моделях, тогда как их не-И-оксидные производные либо не активны, либо мало активны (таблица 16Ь). Кроме того, кажется, что соли холина обладают большей продолжительностью действия. Впрыскивание пробенецида значительно продляет продолжительность противоконвульсивного воздействия всех испытуемых агентов. К примеру, полупериоды жизни соединений 2/514 и 2/570 составляют около 40 и 80 минут, соответственно, в отсутствии пробеницида. В присутствии пробеницида полупериоды жизни продляются до порядка 180 и 210 мин, соответственно. Итак, очевидно, что органические кислотные транспортные средства в хороидальных нервных сплетениях вне головного мозга играют важную роль в кратковременности действия испытуемых соединений. Пробенецид при используемой дозе (200 мг/кг) сам по себе не обладает независимым действием на МЕ8индуцируемые конвульсии.

Таблица16а

Μγζ 2/	Соединение	МЕ8 1.р. /ПК, мг/кг)	ΝΜΌΑ 1.р. /ПК, мг/кг)	ΡΤΖ 1.р. (II К, мг/кг)
585	I	>100,0	58,9	59,0
499	II	87,0		18,6
501	8-СИ	>100,0	>100,0	>40,0
502	8-С1-П	47,6	26,0	8,3
503	8-ВгП	>100,0	>100,0	>100,0
514	8-Вг-П	20,2	99,0	12,8
519	8-Р4	>60,0	>100,0	>100,0
516	8-Р-П	16,6	40,0	7,9
515	7,8-ДиС1-1	>100,0	98,0	>100,0
518	7,8-ДиС1-11	>60,0	>100,0
539	7-С1,8-ВгП	>60,0	>100,0	>100,0
538	7-Вг,8-СМ	>60,0	106,0	>100,0
554	8-О-СНз-!	>100,0

Таблица 16Ь

Μγζ 2/	Соединение	МЕ8 1.р. (ПК, мг/кг)
577	11(Хол.)	23,7
569	8-С1-1(Хол.)	>50
576	8-С1-11(Хол.)	7,7
586	8-Вг-ЦХол.)	>50
570	8-Вг-П(Хол.)	12,8
572	8-Р-ЦХол.)	>100
571	8-Р-П (Хол.)	15,5
574	7,8-ДиС1-1(Хол.)	>100
578	8-О-СН3-11(Хол.)	>100
575	7-О-СН3-1(Хол.)	>100

Микроэлектрофоретическое применение ЕАА агонистов на спинномозговые нейроны ίη νίνο.

Исследуют способность этих глицин_вантагонистов действовать как ΝΜΌΑрецепторные антагонисты ίη νίνο, используя ί.ν (внутривенное) введение, по сравнению с ответными реакциями отдельных нейронов в спинном мозге крыс на микроэлектрофоретическое нанесение АМРА и ΝΜΌΑ. Соединения класса II Μγζ 2/502 и Μγζ 2/516 являются сильными ΝΜΌΑ-рецепторными антагонистами ίη νίνο при значениях ГО₅₀ 1,2 и 1,8 мг/кг ί.ν, соответственно, тогда как исходные соединения класса I полностью не активны даже при увеличении этих значений до 16 мг/кг ί.ν. Трех-четырехкратное превышение доз также дает антагонистические ответные реакции на АМРА, хотя это свидетельствует об отсутствии селективности по сравнению с испытаниями ίη νίΐτο (таблица 17а).

Таблица 17а

Μγζ 2/	Соединение	Микроэлектрофоретический ΝΜΌΑ (ГО₅₀ мг/кг ί.ν.)	Микроэлектрофоретический АМРА (ПК, мг/кг ί.ν.)
501	8-С1-!	>16,0	>16,0
502	8-С1-П	1,2	4,9
519	8-РЧ	>16,0	>16,0
516	8-Р-П	1,8	3,6

В этой модели соли холина обладают приблизительно равной активностью со свободными кислотами после ί.ν введения, но слегка более селективны в отношении ΝΜΌΑ по сравнению с АМРА (таблица 17Ь). Снова, не-Νоксидные производные (соединения класса I) не активны.

Таблица 17Ь

Μγζ 2/	Соединение	Микроэлектрофорегичаский ΝΜΌΑ (ПК, мг/кг ί.ν.)	Микроэлектрофоретический АМРА (II )₅·, мг/кг ί.ν.)
577	11(Хол.)	34,0	>32,0
569	8-СН(Хол.)	>16,0	>16,0
576	8-С1-П(Хол.)	2,8	>16,0
586	8-Вг-1(Хол.)	>16,0	>16,0
570	8-Вг-П(Хол.)	4,5	>16,0
572	8-Р-ЦХол.)	>16,0	>16,0
571	8-Р-П(Хол.)	4,7	9,2

Обсуждение

Четыре соединения класса II, Μγζ 2/499, Μγζ 2/501, Μγζ 2/514 и Μγζ 2/516 являются глицин_В-антагонистами ίη νίΐτο и обладают значительно большей ίη νίνο системной и/или ί.'Ν819 применимостью, чем связанные исходные соединения класса I (Μτζ 2/585, Μτζ 2/501, Μτζ 2/503 и Μτζ 2/519). Доступ к ΟΝ8 является главной проблемой почти для всех глицин_вантагонистов, полученных к настоящему времени, но этот новый класс соединений преодолевает это основное препятствие и, следовательно, они являются терапевтически актуальными глицин_в-антагонистами.

Аддитивные соли

Используя вышеизложенные способы, получают аддитивные соли соединений 5, 6, 7, 8, 9 и 10 с четвертичными аминами (к примеру, 4тетраметиламмонием, 4-тетраэтиламмонием), четвертичными аминоспиртами (к примеру, холином) или четвертичными аминокислотами (к примеру, Ν,Ν,Ν-триметилсерином). Соли холина и 4-тетраметиламмония (4-ΝΉ₃) существенно улучшают биоприменимость и являются предпочтительными.

Фармацевтические композиции

Соединения по данному изобретению могут быть переработаны в фармацевтические композиции, включающие фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель вдобавок к активному соединению по данному изобретению. Такие композиции могут быть введены живому животному, особенно живому человеку, путем перорального или парентерального способа введения. К примеру, твердые препараты или фармацевтические композиции для перорального введения могут быть взяты в форме капсул, таблеток, пилюль, порошков или гранул. В таких твердых фармацевтических составах активное соединение или его пролекарство смешивают, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, таким как тростниковый сахар, лактоза, крахмал, тальк или синтетические или натуральные смолы, связующим веществом, таким как желатин, смазывающим веществом, таким как стеарат натрия и/или разъединяющим веществом, таким как бикарбонат натрия. Для обеспечения эффекта замедленного высвобождения в фармацевтическую композицию может быть включено такое соединение, как гидроколлоид или другой полимер. Дополнительные вещества, такие как смазывающие вещества или буферы, могут также быть добавлены общепринятым способом. При желании, таблетки, пилюли или гранулы могут быть покрыты энтеросолюбильной оболочкой. Жидкости для перорального применения могут быть в форме липосом, эмульсий, растворов или суспензий, содержащих обычно используемые инертные разбавители, такие как вода. Вдобавок, такие жидкие фармацевтические композиции могут также содержать смачивающие, эмульгирующие, диспергирующие или, вообще, поверхностноактивные агенты, равно как подсластители, отдушки или придающие аромат вещества.

Подходящими препаратами для парентерального применения могут быть, среди прочего, стерильные водные и неводные растворы, суспензии, липосомы или эмульсии. В качестве фармацевтически приемлемого разбавителя или носителя могут быть использованы дополнительные вещества, среди которых многие уже известны для этой формы введения фармацевтической композиции.

Зависящая от предполагаемого способа введения и продолжительности лечения точная доза активных соединений в препаратах по данному изобретению может быть изменена, главным образом, по усмотрению лечащего врача или ветеринара. Активные агенты данного изобретения, безусловно, могут быть объединены для введения с другими фармакологически активными агентами.

В композициях по данному изобретению соотношения активного агента или агентов в композиции могут широко варьироваться, необходимым является только, чтобы активный ингредиент по данному изобретению или его пролекарство составляли или обеспечивали эффективное количество, т.е. такое количество, при котором в выбранной лекарственной форме будет присутствовать подходящая эффективная доза. Очевидно, что несколько лекарственных форм, равно как несколько индивидуальных активных соединений можно вводить одновременно или приблизительно в одно и то же время, или даже в той же самой фармацевтической композиции или в том же фармацевтическом составе.

Способ лечения

Как указано ранее, соединения по данному изобретению пригодны, особенно, в форме фармацевтических композиций, для перорального или парентерального введения, точные индивидуальные дозы, равно как суточные дозы, в каждом конкретном случае определяются, конечно, в соответствии с хорошо установленными медицинскими и/или ветеринарными принципами и согласно предписаниям лечащего врача или ветеринара.

В дополнение к пероральному или парентеральному введению, можно использовать ректальное (прямо кишечное) и/или внутривенное введение, когда используют парентеральное введение, то дозы обычно значительно снижаются, хотя пероральное введение является предпочтительным. Пригодным является количество приблизительно от одного до трех грамм на день в форме повторной или разделенной дозы. Более широкий интервал, порядка 0,5 - 10 г на день, также может быть применен в зависимости от состояния конкретного больного. Хотя найдено, что 500 мг активной основы особенно пригодно для применения в таблетках, индивидуальные дозировки могут варьироваться приблизительно от 200 до 1000 мг, а 500 мг, рекомендуемые для применения в таблетках, можно, конечно, вводить перорально, к примеру, от одного до трех раз в день. Само собой разумеется, что в разовой дозе можно вводить больше, чем одну таблетку, если требуется достичь вышеуказанных рекомендуемых суточных количеств для перорального введения от одного до трех грамм в день.

Как уже сказано, соединение по изобретению или его пролекарственная форма могут быть введены живому животному, включая живого человека, любым из многочисленных путей, к примеру, перорально в виде капсул или таблеток, парентерально в форме стерильных растворов или суспензий, или подкожной или внутримышечной имплантацией кусочка ткани, а в некоторых случаях внутривенно в форме стерильных растворов. Другими очевидными способами введения являются кожный, подкожный, транс-буккальный, внутримышечный и внутрибрюшинный, и конкретный способ введения, как обычно, выбирает лечащий врач или ветеринар.

Таким образом, установлено, что данное изобретение предлагает новые соединения пиридо-фталазин-диона и содержащие их фармацевтические композиции, а также способ борьбы с неврологическими нарушениями, связанными с эксцитотоксичностью и вследствие этого с дисфункцией глутаматергической нейротрансмиссии, все вместе это дает долгожданное решение ранее существовавшей проблемы, неадекватно решаемой на предшествующем уровне техники.

Следует понимать, что данное изобретение не ограничивается соединениями, композициями, способами или методиками, строго соответствующими указанным, поскольку многочисленные модификации и изменения их сразу же становятся очевидными для специалиста в той области техники, к которой это изобретение принадлежит, поэтому данное изобретение следует рассматривать ограниченным только общими рамками объема, которые могут быть установлены на основании приложенных пунктов.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Производные пиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксида общей формулы где К_| и К₂ выбирают из группы, включающей водород, галоген и метокси, или где К₁ и К₂вместе образуют метилендиокси, или их фармацевтически приемлемые соли.
2. Соединение по п. 1, где соль выбирают из соли холина и соли 4-тетраметиламмония.
3. Соединение по п.1, которое выбирают из группы, включающей
4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

8-хлор-4-гидрокси-1 -оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид,

8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид,

8-фтор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид,

7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид,

7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид и

7- хлор-8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино-[4,5-Ь]хинолин-5-оксид и фармацевтически приемлемую соль любого из вышеперечисленных соединений.

4. Соединение по п. 2, которое выбирают из группы, включающей соль 4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина, соль 8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина, соль 8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина, соль 8-фтор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина, соль 7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина, соль 7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина и соль 7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина.
5. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента эффективное по отношению к глицин_в антагонистическое количество соединения по п.1 вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.
6. Фармацевтическая композиция по п.5, содержащая в качестве активного ингредиента соединение по п.1 в форме соли холина.
7. Фармацевтическая композиция по п. 5, содержащая соединение, выбранное из группы, включающей

4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]-хинолин-5-оксид,
8- хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

8-фтор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино-[4,5-Ь]хинолин-5-оксид и

7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]-хинолин-5-оксид или фармацевтически приемлемую соль любого из вышеперечисленных соединений.

8. Фармацевтическая композиция по п.6, содержащая в качестве соли холина эффективное количество соединения, выбранного из группы, включающей соль 4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина, соль 8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 8-бром-4-гидрокси-1 -оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 8-фтор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина, соль 7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1 -оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина и соль 7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1 -оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина.
9. Применение соединения по п.1 для производства лекарственного препарата для борьбы с неврологическими нарушениями, связанными с эксцитотоксичностью и дисфункцией глутаматергической нейротрансмиссии в живом животном, при содержании в указанном препарате соединения по п. 1 в эффективном по отношению к глицин_в антагонистическом количестве.
10. Применение по п.9, при котором используется соединение по п.1 в форме соли холина.
11. Применение по п.9, при котором используется соединение, выбранное из группы, включающей

4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5-оксид,

8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

8-фтор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид,

7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь]хинолин-5 -оксид и

7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь]хинолин-5 -оксид или фармацевтически приемлемая соль любого из вышеперечисленных соединений.
12. Применение по п. 10, при котором используется соединение, выбранное из группы, включающей соль 4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксид-холина, соль 8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина, соль 8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина, соль 8-фтор-4-гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксид-холина, соль 7,8-дихлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина, соль 7-бром-8-хлор-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина и соль 7-хлор-8-бром-4-гидрокси-1-оксо-1,2дигидропиридазино [4,5-Ь] хинолин-5 -оксидхолина.
13. Способ получения производных пиридазино[4,5-Ь]хинолин-5-оксида и их фармацевтически приемлемых солей по п. 1, включающий стадию превращения диметил хинолин-2,3дикарбоксилат-1-оксида в соль гидразина реакцией с гидразин-гидратом и гидролиз образующейся соли гидразина с последующим получением в случае необходимости соответствующей фармацевтически приемлемой соли.
14. Способ по п.13, где полученный 4гидрокси-1-оксо-1,2-дигидропиридазино[4,5-Ь] хинолин-5-оксид превращают в его соль холина реакцией с гидроокисью холина.