CZ289293B6 - Pyridylftalazindiony, způsob jejich přípravy a pouľití a farmaceutické prostředky na jejich bázi - Google Patents
Pyridylftalazindiony, způsob jejich přípravy a pouľití a farmaceutické prostředky na jejich bázi Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289293B6 CZ289293B6 CZ1999201A CZ2019997A CZ289293B6 CZ 289293 B6 CZ289293 B6 CZ 289293B6 CZ 1999201 A CZ1999201 A CZ 1999201A CZ 2019997 A CZ2019997 A CZ 2019997A CZ 289293 B6 CZ289293 B6 CZ 289293B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- quinoline
- oxo
- hydroxy
- oxide
- dihydropyridazino
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D237/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings
- C07D237/26—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
- C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D471/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
- A61K31/4166—1,3-Diazoles having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. phenytoin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
- A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/26—Psychostimulants, e.g. nicotine, cocaine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Neurology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
Pyridylftalazindiony obecn ho vzorce II, kde R1 a R2 jsou vybr ny ze souboru sest vaj c ho z vod ku, halogenu a methoxyskupiny nebo kde R1 a R2 dohromady tvo° methylendioxyskupinu a jejich farmaceuticky p°ijateln soli; zp sob p° pravy t chto slou enin a tyto slou eniny pro pou it pro l en neurologick²ch onemocn n spojen²ch s excita n toxicitou a chybnou funkc glutam tergn ho neuron ln ho p°enosu u iv²ch zv °at; farmaceutick prost°edky, kter je obsahuj .\
Description
Pyridylftalazindiony, způsob jejich přípravy a použití a farmaceutické prostředky na jejich bázi
Oblast techniky
Vynález se týká určitých dále definovaných pyridylftalazindionů, způsobu jejich přípravy, těchto sloučenin pro použití pro léčení neurologických onemocnění spojených s excitační toxicitou a chybnou funkcí glutamátergního neuronálního přenosu u živých zvířat; a farmaceutických prostředků s obsahem těchto sloučenin.
Dosavadní stav techniky
Granulát je pravděpodobně hlavní excitační přenašeč v centrálním nervovém systému, ale pravděpodobně se také účastní mnoha patologických dějů a dějů s exitační toxicitou. Proto existuje značný zájem o vývoj antagonistů glutamátu pro terapeutické účely (viz Danysz et al., 1995). Glutamát aktivuje tři typy hlavních ionotropních receptorů, konkrétně receptory pro a-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-izoxazolpropionovou kyselinu (AMPA), kianát a N-methylD-aspartát (NMDA) a několik typů metabotropních receptorů. Antagonizace NMDA receptorů má potenciálně široký rozsah terapeutických aplikací. Funkční inhibice NMDA receptorů může být dosažena pomocí účinku na různých rozpoznávacích místech, jako je primární místo pro neuropřenášeč, glycinové místo nesenzitivní na strychnin (glycinB), polyaminové místo a fencyklidinové místo lokalizované uvnitř kationtového kanálu.
Znecitlivění receptoru může představovat fyziologický proces sloužící jako endogenní kontrolní mechanismus pro zabránění dlouhodobé neurotoxické aktivace glutamátových receptorů, ale umožňuje jejich přechodnou fyziologickou aktivaci. V případě NMDA receptorů je ko-agonista glycin endogenním ligandem inhibujícím takové znecitlivění pomocí aktivace glycinB místa. Zajímavé je, že ischemie zvyšuje nejen koncentraci extracelulámího glutamátu, ale také glycinu a ačkoliv je druhý uvedený účinek méně výrazný, přetrvává mnohem déle. Proto mohou někteří úplně antagonisté glycinuB obnovit normální synaptický přenos za takových podmínek zvýšením znecitlivění NMDA receptoru na jeho fyziologickou úroveň. Kromě toho, že při podání antagonistů glycinu laboratorním zvířatům bylo naznačeno, že umožňují lepší terapeutické okénko než činidla působící na jiných rozpoznávacích místech NMDA receptorového komplexu. Naneštěstí špatné farmakokinetické vlastnosti většiny antagonistů glycinB místa donedávna vylučovaly jasné potvrzení této hypotézy po systémovém podání. Nicméně, bylo popsáno, že někteří antagonisté glycinu mají velmi dobré terapeutické účinky po systémovém podání v modelech hyperalgesie a jako anxiolytika.
Podstata vynálezu
Nyní byla vyvinuta série tricyklických „pyrido-ftalazindionů“. Sloučeniny třídy I jsou strukturálně příbuzné s patentovými antagonisty glycinuB od Zeneca (ICI, EPA 0516297 Al, 2.12.1992). Třída II sloučenin jsou N-oxidové deriváty těchto sloučenin a nejsou popsány ani naznačeny v patentu pro Zeneca. Sloučeniny třídy II jsou také účinní antagonisté glycinuB in vitro a vykazují mnohem lepší in vivo systémovou dostupnost a/nebo průnik přes hematoencefalickou bariéru než sloučeniny třídy I. Kromě toho, soli těchto sloučenin, vyrobené například adicí cholinu a 4-tetramethylamoniaku (4-NH3), mají dále zlepšenou biodostupnost.
Nové sloučeniny podle předkládaného vynálezu mají předpokládané využití v léčbě následujících onemocnění. 1. Akutní excitační toxicity jako je ischemie při mrtvici, traumatu, hypoxii, hypoglykemii a hepatální encefalopatii. 2. Chronických neurodegenerativních onemocnění jako je Alzheimerova nemoc, vaskulámí demence, Parkinsonova nemoc, Huntingtonova nemoc,
-1CZ 289293 B6 roztroušená skleróza, amyotrifická laterální skleróza, AIDS-neorodegenerace, olivopontocerebellámí atrofie, Tourettův syndrom, onemocnění motorických neuronů, mitochondriální dysfunkce, Korsakoffuv syndrom a Creutzfeldt-Jakobova nemoc. 3. Jiných onemocnění souvisejících s dlouhodobými plastickými změnami v centrálním nervovém systému jako je chronická bolest, léková tolerance, závislost a návyk (například na opiáty, kokain, benzodiazepiny a alkohol) a tarditivní dyskinéza. 4. Epilepsie (generalizovaných a částečných záchvatů), schizofrenie, úzkosti, deprese, akutní bolesti, spasticity a tinitu.
Předmětem vynálezu jsou pyridylftalazindiony obecného vzorce II
(II), kde Rl a R2 jsou vybrány ze souboru sestávajícího z vodíku, halogenu a methoxyskupiny nebo kde Rl a R2 dohromady tvoří methylendioxyskupinu, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Ve výhodném provedení vynálezu jsou soli vybrány z cholinové a 4-tetramethylamoniové soli.
Zvláště výhodně se jedná o pyridylftalazindion, který je vybrán ze souboru sestávajícího z
4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu,
8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 8-fluor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 7,8-dichlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 7-chlor-8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, a farmaceuticky přijatelných solí kterékoliv z výše uvedených sloučenin.
Jako konkrétní pyridylftalazindion je možno zvláště uvést sloučeninu, která je vybrána ze souboru zahrnujícího ze soli 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-fluor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 7,8-dichlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s chinolinem, soli 7-brom-8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem a soli 7-chlor-8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem.
Předmětem vynálezu je dále také farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje jako aktivní složku glycinbeta antagonistické množství pyridylftalazindionu definovaného výše, spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
-2CZ 289293 B6
Ve výhodném provedení obsahuje farmaceutický prostředek podle vynálezu zvláště výhodné sloučeniny uvedené výše.
Předmětem vynálezu jsou dále také pyridylftalazindiony definované výše, s výhodou zvláště výhodné sloučeniny uvedené výše, pro použití pro léčení neurologických onemocnění spojených s excitační toxicitou a chybnou funkcí glutamátergního neuronálního přenosu u živých zvířat.
Konečně je předmětem vynálezu také způsob přípravy 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino-[4,5-b]-chinolin-5-oxidu vzorce 5
(5)z jehož podstata spočívá v tom, že se dimethylchinolin-2,3-dikarboxylát-l-oxid vzorce 3
kde Me znamená methyl, převede na hydrazinovou sůl vzorce 4
reakcí s hydrátem hydrazinu a vzniklá hydrazinová sůl vzorce 4 se hydrolyzuje za vzniku požadovaného 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino-[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, načež se získaný 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino-[4,5-b]chinolin-5-oxid vzorce 5 popřípadě převede reakcí s cholinhydroxidem na cholinovou sůl.
-3CZ 289293 B6
Následující popis, příklady a farmakologie jsou uvedeny pro ilustraci a nijak neomezují rozsah předkládaného vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Metody a výsledky
Základní struktura tricyklických „pyrido-ftalazindionů“ třídy I a Π
Rl/R2= H a/nebo halogen, R1/R2 = H a/nebo O-CH3, R1/R2 = H a/nebo methylendioxy.
Chemická část
Obecný postup pro přípravu dimethyl-chinolin-2,3-dikarboxylát-l-oxidů (3)
Chladný (v ledové lázni) roztok 2-nitrobenzaldehydu 1 (25 mM) a sodíku (27mM) v bezvodém methanolu (40 ml) se zpracuje během 30 minut s roztokem dimethyl(diethoxyfosfinyl)sukcinátem 2 (30 mM, připraveným technikou popsanou s S. Linke et al., Lieb. Ann. Chem. 1980(4), 542) v bezvodém methanolu (10 ml). Vzniklý tmavý roztok se míchá při 0 až 5 °C po dobu 1,5 hodiny, rozpouštědlo se odpaří za redukovaného tlaku a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Ethylacetát se suší přes síran sodný a potom se odpaří za zisku titulního dimethylchinolin-2,3-dikarboxylát-l-oxidu 3 jako špinavě bílého (nebo světle žlutého) prášku.
Fyzikální charakteristiky a 1 H-NMR spektrální data sloučenin 3 jsou uvedeny v tabulkách 1 a 2.
a. 5-brom-4-chlor-2-nitrobenzaldehyd (lf)
Do směsi kyseliny sírové (40 ml) a dusičnanu sodného (2,66 g, 31,3 mM) při 0 až 5 °C se přidá 3-brom-4~chlorbenzaldehyd (6,25 g, 28,5 mM). Vzniklá směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 7 hodin a potom se ředí ledovou vodou (300 ml). Vysrážené pevné látky se filtrují, promyjí se vodou a suší se za zisku prášku. Při rekrystalizací tohoto materiálu ze směsi izopropanolu a vody (2:1) se získá titulní 2-nitrobenzaldehyd lf (3,6 g, 51,5%) jako světle žlutý prášek, t.t. 81 až 82 °C.
Analýza pro C7H3BrClNO3:
Vypočítáno (%): C 31,79, H 1,14, N 5,30.
Zjištěno (%): C 31,55, H 0,98, N 5,09.
-4CZ 289293 B6 ’Η-NMR (CDC13): δ: 8,22 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 10,39 (s, 1H).
b. 4-brom-5-chlor-2-nitrobenzaldehyd (lg)
Postupem podle stupně (a) s tou výjimkou, že jako výchozí materiál se použije 4-brom-3chlorbenzaldehyd (2,97 g, 13,5 mM) se získá titulní sloučenina lg (1,9 g, 53,0%) jako světle žlutý prášek, t.t. 95 až 98 °C.
Analýza pro CjHsBrClNCh:
Vypočítáno (%): C 31,79, H 1,14, N 5,30.
Zjištěno (%): C 31,60, H 1,01, N 5,11.
’Η-NMR (CDCI3) 6: 8,02 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 10,39 (s, 1H).
Obecný postup pro přípravu dimethyl-chinolin-2,3-dikarboxylátů (7)
Roztok N-oxidu 3(10 mM) a chloridu fosforitého (30mM) v bezvodém chloroformu (100 ml) se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 7 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za redukovaného tlaku a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Organická vrstva se suší přes síran sodný a potom se odpaří za redukovaného tlaku. Zbytek se rekrystalizuje z izopropanolu za zisku titulního dimethyl-chinolin-2,3-dikarboxylátu 7 jako špinavě bílého (nebo světle žlutého) prášku.
Fyzikální charakteristiky a ’Η-NMR spektrální data sloučenin 7 jsou uvedeny v tabulkách 3 a 4.
Obecný postup pro přípravu 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidů (5)
Do míšeného roztoku (nebo suspenze) dimethyl-chinolin-2,3-dikarboxylát-l-oxidu 3 (5 mM) ve vroucím ethanolu (25 ml) v atmosféře argonu se přidá hydrát hydrazinu (15 mM) a směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 3 hodin, během nichž se vytvoří tmavá sraženina. Po ochlazení na pokojovou teplotu se reakční směs filtruje a odebraný pevný materiál se promyje ethanolem a etherem a suší se za zisku hydrazinové soli 4. Tento materiál se míchá při 70 až 110 °C po dobu 3 hodin v kyselině octové (15 ml) a po ochlazení na pokojovou teplotu se směs ředí vodou (45 ml), a potom se filtruje za zisku pevného materiálu. Získaný pevný materiál se promyje ethanolem a suší se za zisku tmavě žluté pevné látky. Při několika rekrystalizacích tohoto materiálu z dimethylformamidu se získá titulní 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxid 5 jako oranžový prášek.
Fyzikální charakteristiky a ’Η-NMR spektrální data sloučenin 5 jsou uvedeny v tabulkách 5 a 6.
Obecný postup pro přípravu l,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydropyridazino[4,5-b]-chinolinů (9)
Do míšeného roztoku (nebo suspenze) dimethyl-chinolin-2,3-dikarboxylátu 7 (5 mM) ve vroucím ethanolu (25 ml) se přidá hydrát hydrazinu (30 mM) a směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 8 hodin, během nichž se vytvoří sraženina. Po ochlazení na pokojovou teplotu se reakční směs filtruje a odebraný pevný materiál se promyje ethanolem a etherem a suší se za zisku hydrazinové soli 8. Tento materiál se míchá při 70 až 100 °C po dobu 3 hodin v kyselině octové (15 ml) a po ochlazení na pokojovou teplotu se směs ředí vodou (45 ml), a potom se filtruje za zisku pevného materiálu. Získaný pevný materiál se promyje ethanolem a etherem a suší se za zisku titulního pyridazino[4,5-b]-chinolinu 9 jako žlutého prášku.
Fyzikální charakteristiky a ’Η-NMR spektrální data sloučenin 9 jsou uvedeny v tabulkách 7 a 8.
-5CZ 289293 B6
Obecný postup pro přípravu 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidchinolinových solí (6) a l,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydropyridazino[4,5-b]-chinolin, chinolinových solí (10)
Do míšeného roztoku pyridazino[4,5-b]chinolinu 9 nebo N-oxidu 5 (10 mM) v methanolu (50 ml) se přidá hydroxid cholinu (10,5 mM, 45% hmot, roztok v methanolu. Vzniklý roztok se koncentruje pomocí rotační odparky a pevný zbytek se rekrystalizuje z ethanolu za zisku titulní cholinové soli 10 nebo 6 jako hygroskopického oranžového (nebo červeného) prášku.
Fyzikální charakteristiky a ‘H-NMR spektrální data sloučenin 6 a 10 jsou uvedeny v tabulkách 9, 10 a 11,12, v příslušném pořadí.
-6CZ 289293 B6
Tabulka 1:
'H-NMRÍCDCU) spektrální data pro sloučeniny 3
| Slouč. | R1 | R2 | Vzorec (m.h.) | Elementární analýza | tt (°C) | Výtěžek (%) | |||||
| Vypočítáno (%) | Zjištěno (%) | ||||||||||
| C | H | N | c | H | N | ||||||
| 3a | H | H | CuHnNO, (261.2) | 59,77 | 4,24 | 5,36 | 59,84 | 4,11 | 5,13 | 175-176 | 61,5 |
| 3b | H | Cl | C13Hi0CINO3 (295.7) | 52,81 | 3,41 | 4,74 | 52,80 | 3,32 | 4,78 | 126-127 | 49,0 |
| 3c | H | Br | CjjHioBtNOj (340.2) | 45,89 | 2,96 | 4,11 | 45,57 | 2,75 | 4,00 | 168-170 | 72,0 |
| 3d | H | F | C13H10FNO5 (279.2) | 55,86 | 3,60 | 5,01 | 55,19 | 338 | 4,95 | 194-196 | 49,0 |
| 3e | Cl | Cl | CuHsCljNOj (330.1) | 4730 | 2,75 | 4,24 | 47,18 | 2,62 | 4,14 | 183-186 | 41,0 |
| 3f | Cl | Br | CnHsBrClNOj (374.6) | 41,69 | 2,42 | 3,74 | 4139 | 2,13 | 3,65 | 171-173 | 60,0 |
| 3g | Br | Cl | CjjHjBrClNOj (374.6) | 41,69 | 2,42 | 3,74 | 41,68 | 2,25 | 3,75 | 206-208 | 62,5 |
Tabulka 2: 'H-NMR (CDC13) spektrální data pro sloučeniny 3
| Sloučenina | δ (ppm), J (Hz) |
| 3a | 3,98 (s, 3H), 4,11, (s, 3H), 7,66-8,05 (m, 3H), 8,43 (s, IH), 8,75 (dd, Ji = 8,5, J2 = 2,0, IH), |
| 3b | 3,98 (s, 3H), 4,11 (s, 3H), 7,71 (dd, Jj = 8,5, J2 = 2,5, IH), 7,91 (d, J = 8,5, IH), 8,38 (s, IH), 8,74 (d, J = 2,5, IH) |
| 3c | 3,91 (s, 3H), 4,07 (s, 3H), 7,13 (dd, J! = 9,5, J2 = 2,0, IH), 7,44 (d, J = 2,0, IH), 8,22 (s, IH), 8,58 (d, J = 9,5, IH) |
| 3d | 3,98 (s, 3H), 4,11 (s, 3H), 7,48-7,72 (m, 2H), 8,31 (s, IH), 8,73 (dd, Ji = 10,0, J2 = 5,0, IH) |
| 3e | 3,97 (s, 3H), 4,10 (s, 3H), 8,08 (s, IH), 8,28 (s, IH), 8,83 (s, IH) |
| 3f | 3,97 (s, 3H), 4,09 (s, 3H), 8,26 (s, 2H), 8,82 (s, IH) |
| Jí | 3,97 (s, 3H), 4,09 (s, 3H), 8,06 (s, IH), 8,27 (s, IH), (02 9s, IH) |
Tabulka 3: Připravené dimethylchinolin-2,3-dikarboxyláty 7
| Slouč. | R* | R2 | Vzorec (m.h.) | Elementární analýza | tt (°C) | Výtěžek (%) | |||||
| Vypočítáno (%) | Zjištěno (%) | ||||||||||
| C | H | N | C | H | N | ||||||
| 7a | H | H | C13HhNO< (245.2) | 63,67 | 4,52 | 5,71 | 63,48 | 4,52 | 5,63 | 104-106 | 88,0 |
| 7b | H | Cl | C13H10CINO4 (279.7) | 55,83 | 3,60 | 5,01 | 55,74 | 3,59 | 5,00 | 152-154 | 90,0 |
| 7c | H | Br | Ci3HI0BrNO4 (324.1) | 48,17 | 3,11 | 4,32 | 48,09 | 3,05 | 4,26 | 155-157 | 81,5 |
| 7d | H | F | (263.2) | 59,32 | 3,83 | 5,32 | 59,23 | 3,79 | 5,26 | 119-121 | 85,0 |
| 7e | Cl | Cl | C13H9C12NO4 (314.1) | 49,71 | 2,89 | 4,46 | 49,56 | 2,85 | 4,41 | 113-115 | 96,0 |
| 7f | Cl | Br | C13H,BrC104 (348.6) | 43,55 | 2,53 | 3,91 | 43,60 | 2,48 | 3,88 | 128-130 | 95,0 |
| 7g | Br | Cl | CuHsBrClOí (348.6) | 43,55 | 2,53 | 3,91 | 43,47 | 2,51 | 3,87 | 142-144 | 67,0 |
Tabulka 4: ’Η-NMR (CDC13) spektrální data pro sloučeniny 7
| Sloučenina | δ (ppm), J (Hz) |
| 7a | 3,98 (s, 3H), 4,06 (s, 3H), 7,58-8,00 (m, 3H), 8,21 (dd, Ji = 9,5, J2 = 2,0, 1H), 8,77 (m, 2H), 8,77 (s, 1H) |
| 7b | 3,97 (s, 3H), 4,06 (s, 3H), 7,76 (dd, Ji = 9,5, J2 = 2,0,1H), 7,90 (d, J = 2,0, 1H), 8,67 (s, 1H) |
| 7c | 3,97 (s, 3H), 4,07 (s, 3H), 7,90 (dd, Ji = 9,5, J2 = 2,0, 1H), 8,09 (m, 2H), 8,66 (s,lH) |
| 7d | 3,98 (s, 3H), 4,07 (s, 3H), 7,49-7,72 (m, 2H), 8,20 (dd, Ji = 10, J2 = 5,0, 1H), 8,69 (s, 1H) |
| 7e | 3,97 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 8,02 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,64 (s, 1H) |
| 7f | 3,98 (s, 3H), 4,06 (s, 3H), 8,24 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,68 (s, 1H) |
| 7g | 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 8,03 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,62 (s, 1H) |
Tabulka 5: Připravené 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolin-5-oxidy 5
| Miz 2/» | Slouč. | R1 | R2 | Vzorec (olIl) | Elementární analýza | tt (°C) | Výtěžek (%) | |||||
| Vypočítáno (%) | Zjištěno (%) | |||||||||||
| C | H | N | C | H | N | |||||||
| 499 | 5a | H | H | CnHrNjOj (229.2) | 57,65 | 3,08 | 1843 | 57,56 | 2,93 | 18,22 | >300 | 44,5 |
| 502 | 5b | H | Cl | ChH«C1N3O3 (263.6) | 50,11 | 2,29 | 15,94 | 4944 | 2,29 | 15,40 | >300 | 88,0 |
| 514 | 5c | 11 | Br | C11H6&N3O3 (308,1) | 42,88 | 146 | 13,63 | 42,57 | 1,91 | 13,49 | >300 | 78,0 |
| 516 | 5d | H | F | CnHeFNjOj (2474) | 55,44 | 2,44 | 16,99 | 53,44 | 245 | 1690 | 297- 298 | 37,0 |
| 518 | Se | Cl | Cl | CuHjCliNjO, (298.1) | 4442 | 1,69 | 14,10 | 44,17 | 1,91 | 1444 | >300 | 16.0 |
| 551 | 5f | Cl | Br | CnHjBrClNiOj (342.5) | 38,57 | 1,47 | 1247 | 37,93 | 1,33 | 11,94 | >300 | 15.0 |
| 568 | 5g | Br | Cl | CnHjBrCINjOj (342.5) | 38,57 | 1,47 | 1247 | 38,17 | 141 | 12,00 | >300 | 17,0 |
* Mrz 2 / znamená označení sloučeniny
Tabulka 6: ’Η-NMR (CDC13) spektrální data pro sločeniny 5
| Sloučenina | δ (ppm), J (Hz) | |
| protony aromatického kruhu (a OCH3) | NH, OH (zaměnitelné) | |
| 5a | 7,88-8,28 (m, 2H), 8,46-8,79 (m, 2H), 9,07 (s, 1H) | 10,65 (br. s, 1H), 12,00 (br. s, 1H) |
| 5b | 8,07 (dd, Ji = 9,0, J2 = 2,5,1H), 8,59 (d, J = 9,0, 1H), 8,69 (d, J = 2,5,1H), 9,11 (s, 1H) | 12,05 (br. s, 1H), 14,60 (br. s, 1H) |
| 5c | 8,27 (dd, Ji = 9,0, J2 = 2,0,1H), 8,60 (d, J = 9,0, 1H), 8,82 (d, J = 2,0,1H), 9,00 (s, 1H) | 11,00 (br. s, 1H), 12,00 (br. s, 1H) |
| 5d | 8,07 (ddd, Ji = 9,5, J2 = 8,5, J3 = 2,5,1H), 8,36 (dd, Ji = 9,5, J2 = 2,5,1H), 8,75 (dd, Ji = 9,5, J2 = 5,0,1H), 9,02 (s, 1H) | 10,92 (br. s, 1H), 12,00 (br. s, 1H) |
| 5e | 8,83 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), 9,06 (s, 1H) | 11,25 (br. s, 1H), 12,05 (br. s, 1H) |
| 5f | 8,88 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 9,01 (s, 1H) | 12,06 (br. s, 1H), 14,28 (br. s, 1H) |
| Jg | 8,90 (s, 1H), 9,01 (s, lH),9,04(s, 1H) | 12,13 (br. s, 1H), 14,32 (br. s, 1H) |
-8CZ 289293 B6
Tabulka 7: Připravené 1,4—dioxo-1,2,3,4—tetrahydropyridazino[4,5—bjchinoliny 9
| Mrz 2/ | Slouč. | R1 | R2 | Vzorec (mi.) | Elementární analýza | tt (°C) | Výtěžek (%) | |||||
| Vypočítáno (%) | Zjištěno (%) | |||||||||||
| C | H | N | C | H | N | |||||||
| 585 | 9a | H | H | CiJbNjOj (213.2) | 61,97 | 331 | 19,71 | 61,43 | 3,45 | 19,16 | >300 | 86,0 |
| 501 | 9b | H | Cl | CiiHeCINjOi (247,6) | 53,35 | 2,44 | 16,97 | 32,89 | 2,28 | 16,68 | >300 | 88,5 |
| 503 | 9c | H | Br | CnHíBrNjOj (292,1) | 45,23 | 2,07 | 14,39 | 44,74 | 2,11 | 14,09 | >300 | 82,0 |
| 519 | 9d | H | F | CnHeFNjO! (231.2) | 57,14 | 2,60 | 18,18 | 56,73 | 2,47 | 17,99 | >300 | 84,0 |
| 515 | 9e | Cl | Cl | Cn^CljNjOj (282^2) | 46,84 | 1,79 | 14,90 | 46,44 | 1,70 | 14,87 | >300 | 82,5 |
| 539 | 9f | Cl | Br | Ci iHíBrCINjOi (326.5) | 40,46 | 1,54 | 12,87 | 40,16 | 1,42 | 12,88 | >300 | 69,5 |
| 538 | Br | Cl | CnHjBrCINjCh (326.5) | 40,46 | 1,54 | 12,87 | 40,23 | 1,40 | 12,98 | >300 | 88,0 |
Tabulka 8: 'H-NMR (CDCI3) spektrální data pro sloučeniny 9
| Slouč. | 5 (ppm), J (Hz) | |
| protony aromatického kruhu | NH (zaměnitelné) | |
| 9a | 7,76-8,16 (m, 2H), 8,22-8,47 (m, 2H), 9,30 (s, 1H) | 11,60 (br. s, 2H) |
| 9b | 8,02 (dd, Ji = 9,0, J2 = 2,5, 1H), 8,28 (d, J = 9,0,1H), 8,52 (d,J = 2,5,1H), 9,26 (s,lH) | 11,60 (br. s,2H) |
| 9c | 8,16 (m, 2H), 8,60 (br. s, 1H), 9,25 (s, 1H) | 11,55 (br. s,2H) |
| 9d | 7,93 (ddd, Jt = 9,5, J^f) = 9,0, J3= 2,5,1H), 8,18 (dd, J1(HF) = 9,5, J2 = 2,5, 1H), 8,36 (dd, Ji = 9,5, Jw= 5,5,1H), 9,24 (s, 1H) | ll,90(br. s,2H) |
| 9e | 8,47 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 9,22 (s, 1H) | 11,60 (br. s, 2H) |
| 9f | 8,52 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 9,28 (s, 1H) | 11,65 (br. s, 2H) |
| 9g | 8,68 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 9,26 (s, 1H) | 11,70 (br. s, 2H) |
Tabulka 9: Připravené 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]chinolm-5-oxidy10 cholinové soli 6
| Mrz 2/ | Slouč. | R1 | R2 | Vzorec (mi.) | Elementární analýza | tt CC) | Výtěžek (%) | |||||
| Vypočítáno pro6xH2O(%) | Zjištěno (%) | |||||||||||
| C | H | N | C | H | N | |||||||
| 577 | 6a | H | H | C1ÍH20N4O4 (332.4) | 54,84 | 632 | 15,99 | 54,76 | 632 | 15,86 | 179-180 | 52,5 |
| 576 | 6b | H | Cl | C16H19C1N4O4 (366.8) | 49,93 | 5,50 | 14,55 | 4931 | 5,47 | 1434 | 185-188 | 87,5 |
| 570 | 6c | H | Br | Ct4Hj9BrN4O4 (411,4) | 44,75 | 4,92 | 13,04 | 44,85 | 4,93 | 12,86 | 191-193 | 71,5 |
| 571 574 | 6d 6e 6f 6g | H Cl Cl Br | F Cl Br Cl | C1ÍH19FN4O4 (366,4) | 51,19 | 5,63 | 14,92 | 51,74 | 5,73 | 14,95 | 201-203 | 27,0 |
* x = 1,0 (a,b,c)
0,5 (d)
-9CZ 289293 B6
Tabulka 10: ’Η-NMR (CDC13) spektrální data pro cholinové soli 6
| Slouč. | δ (Pí | jm), J (Hz) |
| protony cholinu | protony aromatického kruhu | |
| 6a 6b 6c 6d 6e 6f Jg | 3,20 (s, 9H), 3,47 (m, 2H), 3,98 (m, 2H) 3,22 (s, 9H), 3,50 (m, 2H), 4,01 (m, 2H) 3,20 (s, 9H), 3,48 (m, 2H), 3,99 (m, 2H) 3,22 (s, 9H), 3,51 (m, 2H), 4,02 (m, 2H) | 7,69-8,00 (m, 2H), 8,18 (d, 1 = 8,0,1H), 8,59 (s, 1H), 8,76 (d, J = 8,5,1H) 7,88 (dd, J, = 9,0, J2 = 2,5,1H), 8,27 (d, J = 2,5,1H), 8,52 (s, 1H), 8,76 (d, J = 9,0,1H) 7,99 (dd, Ji = 9,5, J2 = 2,0,1H), 8,41 (d, J = 2,0,1H), 8,53 (s, 1H), 8,64 (d, J = 9,5,1H) 7,64-7,98 (m, 2H), 8,62 (s, 1H), 8,87 (dd, Jj = 10,0, J2 = 5,0,1H) |
Tabulka 11: připravené l,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydropyridazino[4,5-b]chinolin-cholinové soli
| Mrz 2/ | Slouč. | R1 | R2 | Vzorec (m.h) | Elementární analýza | tt CC) | Výtěžek (%) | |||||
| Vypočítáno pro 10xH2O(%) | Zjištěno (%) | |||||||||||
| C | H | N | C | H | N | |||||||
| 604 | 10a | H | H | CiíHjoNxOj (316.36) | 54,26 | 7,59 | 14,06 | 54,23 | 739 | 14,25 | 102-110 | 82,0 |
| 596 | 10b | H | Cl | CmHwCINA (350.8) | 54,08 | 5,53 | 15,76 | 54,10 | 5,55 | 15,61 | 189-191 | 84,0 |
| 586 | 10c | H | Br | CieHipBfN^O) (395.3) | 43,64 | 5,49 | 12,72 | 44,07 | 5,14 | 12,73 | 234-236 | 61,0 |
| 572 | lOd | H | F | CiíHijFN.Oj | 52,16 | 15,20 | 5,74 | 52,08 | 6,23 | 15,19 | 229-230 | 95,0 |
| 574 | lOe | Cl | Cl | C16H1SCI1N4O3 (385.3) | 47,65 | 4,99 | 13,89 | 47,24 | 5,03 | 13,60 | 205-208 | 83,0 |
| 598 | lOf | Cl | Br | Cj eHieSrClNxiOj (429.7) | 42,92 | 4,5 | 12,51 | 42,78 | 4,60 | 12,44 | 207-209 | 92,0 |
| 597 | lOg | Br | Cl | CieHiaBrC^Ch (429.7) | 42,92 | 4,5 | 12,51 | 42,6ž | 4,57 | 1237 | 201-203 | 95,0 |
* x = 0,25 (d)
1,0 (d,c)
2,5 (c)
Tabulka 12: !H-NMR (CDC13) spektrální data pro cholinové soli
| slouč. 10a 10b 10c lOd lOe lOf 10g | δ (ppm), J (Hz) |
| cholinové protony | protony aromatického kruhu |
| 3.21 (s, 9H), 3,51 (m, 2H), 4,01 (m, 2H) 3,25 (s, 9H), 3,52 (m, 2H), 4,02 (m, 2H) 3.22 (s, 9H), 3,47 (m, 2H), 3,97 (m, 2H) 3,20 (s, 9H), 3,49 (m, 2H), 3,98 (m, 2H) 3,22 (s, 9H), 3,51 (m, 2H), 4,02 (m, 2H) 3,22 (s, 9H), 3,50 (m, 1H), 4,00 (m, 2H) 3,22 (s, 9H), 3,50 (m, 2H), 4,02 (m, 2H) | 7.64- 8,57 (m, 4H), 9,17 (s, 1H) 7,89 (dd, Ji = 9,0, J2 = 2,5,1H), 8,23 (d, J = 2,5,1H), 8,34 (d, J = 9,0,1H), 9,13 (s, 1H) 7,99 (dd, Ji = 9,0, J2 = 2,0,1H), 8,26 (d, J = 9,0,1H, 8,41 (d, J = 2,0,1H), 9,09 (s, 1H) 7.64- 7,81 (m, 2H), 8,39 (dd, Ji = 9,5, J2 = 5,0,1H), 9,12 (s,lH) 8,46 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 9,14 (s, 1H) 8,53 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 9,13 (s, 1H) 8,43 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 9,13 (s, 1H) |
-10CZ 289293 B6
Farmakologická část
In vitro
Studie vazby na receptor
Membránové přípravky a určení proteinu
Příprava tkáně se provede podle Foster a Wong (1987). Samci Sprague-Dawley krys (200 - 250 g) se usmrtí a jejich mozky se rychle odeberou. Kůra mozková se oddělí a homogenizuje se ve 20 objemech ledově chladné 0,32 M sacharózy pomocí skleněného-teflenového homogenizátoru. Homogenát se centrifuguje při 1000 x g po dobu 10 minut. Peleta se odstraní a supematant se centrifuguje při 2000 x g po dobu 20 minut. Vzniklá peleta se resuspenduje ve 20 objemech destilované vody a centrifuguje se po dobu 20 minut při 8000 x g. Potom se supematant a „buffy coat“ centrifugují třikrát (48000 x g po dobu 20 minut) za přítomnosti 5 mM Tris-HCl, pH 7,4. Všechny kroky centrifugace se provedou při 4°C. Po resuspendování v 5 objemech 5 mM Tris-HCl, pH 7,4 se membránová suspenze rychle zmrazí při -80 °C a uskladní se do testování. Při testování se membrány rozmrazí a promyjí se 4-krát resuspendováním v 5 mM Tris-HCl, pH 7,4 a centrifugací při 48000 x g po dobu 20 minut. Konečná peleta se suspenduje v testovacím pufru.
Množství proteinu v konečném membránovém přípravku se určí technikou, kterou popsal Lowiy (1951) s určitými modifikacemi (Hartfree, 1972): 50 μΐ proteinových vzorků (trojitě) se ředí na objem 1 ml destilovanou vodou a zpracuje se s 0,9 ml roztoku obsahujícího 2 g vínanu draselného-sodného a 100 g Na2CO3 v 500 πύ IN NaOH a 500 ml vody. Slepé vzorky a standardy (s hovězím sérovým albuminem) se zpracují stejným způsobem. Tuby se umísti do vodní lázně při 50 °C na 10 minut a ochladí se na pokojovou teplotu. Přidá se 100 μΐ roztoku obsahujícího 2 g vínanu draselno-sodného a 1 g CuS04 x 5 H2O v 90 ml vody a 10 ml NaOH. Vzorky se nechají při pokojové teplotě po dobu nejméně 10 minut a potom se za míchání rychle přidají 3 ml Folin-Ciocalteuova činidla (1 ml činidla ředěný 15 ml vody). Tuby se znovu zahřejí na 50 °C na dobu 10 minut a ochladí se na pokojovou teplotu. Absorbance se potom odečítají v lem kyvetách při 650 nm. Konečná koncentrace proteinu použitého pro naše studie je mezi 100 a 250 gg/ml.
Inkubace v obou vazebných testech se ukončí za použití Millipore filtračního systému. Vzorky, všechny ve trojím provedení, se třikrát propláchnou s 2,5 ml ledově chladného testovacího pufru přes filtry ze skelných vláken získané od Schleicher and Schuell při konstaltním vakuu. Po separaci a vypláchnutí se filtry umístí do scintilační kapaliny (5 ml; Ultima Gold) a radioaktivita zachycená na filtrech se určí pomocí běžného kapalinové scintilačního počítače (Hewlett Packard, Liquid Scintillation Analyser). „Celková vazba“ je absolutní množství radioligandu navázaného za nepřítomnosti jakýchkoliv dalších substancí, zatímco „nespecifická“ vazba je určena za přítomnosti vysokých koncentrací kompetitivního činidla.
(3H)5,7-DCKA vazebný test
Pokusy byly provedeny technikou popsanou dříve (Canton et al., 1992; Zoneda et al., 1993). Membrány byly suspendovány a inkubovány v 10 mM Tris-HCl, pH 7,4. Inkubační doba byla 45 minut při 4°C. Nespecifická vazba (3H)5,7-DCKA byla definována adicí neznačeného glycinu při 0,1 mM. Ukončovací roztok obsahoval 10 mM Tris-HCl a 10 mM síranu hořečnatého, pH 7,4. Filtrace byla provedena tak rychle, jak to bylo možné. Nahrazovací pokusy byly provedeny s fixní koncentrací (3H)5,7-DCKA 10 nM. Testované sloučeniny byly ředěny vodou nebo DMSO a byly přidány nejméně v 5 různých koncentracích.
-11 CZ 289293 B6 (3H)glycinový vazebný test (3H)glycinové vazebné testy se provedou technikou, kterou popsal Kessler a spolupracovníci (1989). Krysí kortikální membrány se připraví technikou popsanou výše a výsledná peleta se suspenduje v 50 mM Tris-acetonu, pH 7,4. Alespoň 5 různých koncentrací testovaných sloučenin se inkubuje s 20 nM (3H)glycinu po dobu 30 minut při 4 °C za přítomnosti 100 μΜ strychninu. Všechny sloučeniny se rozpustí ve vodě nebo v DMSO, v příslušném pořadí. Nespecifická vazba se určí obsažením 100 μΜ glycinu v inkubační směsi. Inkubace se ukonči ředěním vzorků 2 ml stop - roztoku (50 mM Tris-HCl obsahující 10 mM síranu hořečnatého, pH 7,4, ochlazeného na teplotu < 2 °C) a potom dalším vypláchnutím 2,5 ml pufru. Filtrace se provede tak rychle, jak je možné.
Výsledky z testovaných sloučenin melo IC50 v (3H)-DCKA testu < 1 μΜ (viz tabulka 13). Účinnost šesti vybraných sloučenin v (3H)-glycinovém testu se na první pohled zdá vyšší, ale tato skutečnost se neodráží v Kd (není uvedeno). Ze zejména zajímavých sloučenin mají sloučeniny třídy Π vyšší afinitu než sloučeniny třídy I v (3H)-DCKA testu. Tento rozdíl není tak zřetelný v (3H)-glycinovém testu.
Tabulka 13a
| Mrz/2 | Sloučenina | (TThDCKA IC50 μΜ | (3H)-glycin IC50 μΜ |
| 499 | Π | 16,0 | |
| 501 | 8—Cl—I | 0,120 | 0,080 |
| 502 | 8-Cl-n | 0,020 | 0,013 |
| 503 | 8-Br-I | 0,250 | 0,013 |
| 514 | 8-Βγ-Π | 0,010 | 0,004 |
| 519 | 8-F-I | 1,100 | 0,015 |
| 516 | 8-F-II | 0,300 | 0,017 |
| 515 | 7,8—diCl—I | 0,530 | |
| 518 | 7,8-diCl-II | 0,650 |
Tabulka 13b
| Mrz/2 | Sloučenina | (3H)-DCKA IC50 μΜ |
| 572 | 8-F-I (chol) | 1,14 |
| 571 | 8-F-H (chol) | 0,32 |
| 569 | 8—Cl—I (chol) | 0,97 |
| 576 | 8-Cl-n (chol) | 0,45 |
Plošné svorky
Colliculi superiores byly získány z krysích embryí (E20 až E21) a potom byly přeneseny do Hankova pufrovaného salinického roztoku bez vápníku a hořčíku (Gibco) na ledu. Buňky byly mechanicky7 disociovány v 0,05% DNAse/0,3% ovomukoidu (Sigma) a potom následovala 15 minutová pre-inkubace s 0,66% trypsinem/0,1 % DNAsou (Sigma). Disociované buňky byly potom centrifugovány při 18 G po dobu 10 minut, byly resuspendovány v minimálním esenciálním médiu / Gibco) a byly umístěny v hustotě 20000 buněk na cm2 na platové Petriho misky (Falcon) předem potažené poly-L-lysinem (Sigma). Buňky byly kultivovány
-12CZ 289293 B6 v NaHCOs/HEPES pufrovaném minimálním esenciálním médiu doplněném 5% fetálním telecím sérem a 5% koňským sérem (Gibco) a byly inkubovány při 37 °C s 5% CO2 při 95% vlhkosti. Médium bylo zcela vyměněno po inhibici dalších mitos gliáďních buněk cytosin-p-D-arabinofuranosidem (20 μΜ, Sigma) po asi 7 dnech in vitro. Potom bylo médium měněno částečně dvakrát týdně. Kultury colliculus superior byly vybrány pro tyto pokusy, protože umožňují velmi stabilní zaznamenávací podmínky, které jsou absolutním požadavkem pro pokusy závislosti na napětí a pro 20 pm v průměru) se ideálně hodí pro minimalizaci problémů souvisqících s difúzí pufru pro koncentrační svorkové pokusy.
Snímání plošných svorek bylo provedeno z těchto neuronů pomocí elektrod z leštěného skla (4 až 6 ηιΩ) v modulu celých buněk pn pokojové teplotě (20 až 22 °C) pomocí EPC-7 zesilovače (List). Testované sloučeniny byly aplikovány otvíratelnými kanály běžným způsobem vyrobeného systému pro rychlou superfíizi s běžným výtokem (10 až 20 ms výměnná doba). Obsahy intracelulámího roztoku byly následující (mM): CsCl (120), TEAC1 (20), EGTA (10), MgCl2 (1), CaCl2 (0,2), Glukóza (10), ATP (2), cAMP (0,25); pH bylo upraveno na 7,3 CsOH nebo HC1. Extracelulámí roztoky měly následující základní složky (mM): NaCl (140), KC1 (3), CaCl2 (0,2), glukóza (10), HEPES (10), sacharóza (4,5), tetradotoxin (ΤΓΧ 3*10-4). Pro většinu pokusů byl glycin (1 pM) přítomen ve všech roztocích. Pokusy pro testování závislosti tricyklických „pyrido-ftalazin dionů“ na glycinu byly provedeny v trvalé přítomnosti zvyšující se koncentrace glycinu (1 a 10 pM).
Výsledky
Pět párů tricyklických „pyrido-ftalazin dionů“ mělo IC50 proti vnitřnímu proudu vzhledem k NMDA (200 pM) v nízkém rozmezí pM a sloučeniny třídy II byly obecně 2-3 krát účinnější než sloučeniny třídy I (tabulka 14a). Nejúčinnější z těchto sloučenin byly Mr 2/502 a Mrz 2/514. Tento účinek byl zprostředkován na glycinB místu, jak je dokázáno paralelním posunem křivek závislosti na koncentraci za přítomnosti zvyšujících se koncentrací glycinu. Proto byly Kb Mrz 2/502, jak jsou hodnoceny podle Chang-Prusoffova vztahu, podobné při koncentraci glycinu 1, 3 a 10 pM (80, 124 a 118 nM, v příslušném pořadí). Dále, účinky Mrz 2/501 a 2/502 nebyly závislé na napětí. Všechny testované sloučeniny byly tri- až desetkrát účinnější proti stabilním proudům než proti vrcholovým proudům. Cholinové deriváty měly podobné účinnosti jako volné kyseliny in vitro (tabulky 14b).
Naopak, tři z těchto účinných antagonistů glycinB místa byly pouze slabými antagonisty vnitřních proudů vzhledem k AMPA (100 pM). Mrz 2/502, 2/514 a 2/516 měly IC5o proti vrcholovým proudům indukovaným AMPA 25, 73 a 18 pM, v příslušném pořadí, ale byly v podstatě inaktivní proti proudům ve fázi plato při IC50 > 100 pM (tabulka 14a). Tento profil účinku, ačkoliv je velmi slabý, je typický pro kompetitivní antagonisty AMPA receptoru, které preferenčně blokují vrcholový neznecitlivěný stav, stav receptoru, při kterém má nízkou afinitu (viz Parson et al., 1994).
-13CZ 289293 B6
Tabulka 14a
| Mrz 2/ | Sloučenina | Vrchol NMDA IC50 μΜ | Plato NMDA IC50 μΜ | Vrchol AMPA IC50 μΜ | Plato AMPA ICsouM |
| 585 | I | 65,9 | 19,1 | ||
| 499 | Π | 51,2 | 138 | ||
| 501 | 8-C1-I | 2,3 | 0,7 | ||
| 502 | 8-Cl-n | 0,8 | 0,3 | 25,0 | 150,0 |
| 503 | 8-Br-I | 1,7 | 0,6 | ||
| 514 | 8-Br-H | 0,5 | 0,2 | 72,7 | 307,0 |
| 519 | 8-F-I | 18,0 | 5,8 | ||
| 516 | 8-F-H | 6,3 | 1,6 | 17,6 | >100 |
| 515 | 7,8-diCl-I | 3,7 | 0,9 | ||
| 518 | 7,8-diCl-n | 3,8 | 0,8 | ||
| 539 | 7-C1,8-Br-I | 5,3 | 0,7 | ||
| 551 | 7-Cl,8-Br-n | 2,4 | 0,6 | ||
| 538 | 7-Br,8-Cl-I | 93,9 | 2,5 | ||
| 568 | 7-Cl,8-Br-II | 10,0 | 1,5 | ||
| 554 | 8-O-CH3-I | 170,0 | 36,2 |
Tabulka 14b
| Mrz 2/ | Sloučenina | Vrchol NMDA IC50 μΜ | Plato NMDA IC50 μΜ |
| 569 | 8-C1-I (chol) | 2,0 | 0,5 |
| 576 | 8-C1-H (chol) | 1,1 | 0,5 |
| 586 | 8-Br-I (chol) | 2,2 | 0,6 |
| 570 | 8-Br-II (chol) | 0,6 | 0,1 |
| 572 | 8-F-I (chol) | 12,4 | 3,5 |
| 571 | 8-F-II (chol) | 4,9 | 1,0 |
| 578 | 8-O-CH3-II (chol) | 101 | 7,7 |
| 575 | 7-O-CH3-I (chol) | 94,0 | 14,5 |
Excitoxicita in vitro
Techniky
Izolace kortikálních neuronů byla podobná jako izolace popsaná pro snímání plošných svorek s tou výjimkou, že byly použity fetální krysy v den 17 - 19 gestace. Neurony byly umístěny ve 15 24-jamkové plotně (Greiner) v hustotě 300000 buněk na jamku potaženou poly-D-lysinem
0,025 mg/ml. Buňky byly kultivovány vDulbeccově modifikovaném esenciálním médiu (DMEM, Gibco) doplněném 10% teplem inaktivovaným fetálním telecím sérem (Gibco). Kultury byly uchovávány při 37 °C a 5% CO2. Médium bylo prvně vyměněno po jednom týdnu a potom byla po každých třech dnech vyměněna polovina média za čerstvé. Pro pokusy byly použity 20 kultury stán 17 dnů.
Expozice EAA byla provedena v médiu MEM-N2 bez séra (Bottenstein 1979) obsahujícím 0,5 mM NMDA/1 μΜ glycinu a testovanou sloučeninu. Buňky byly předem inkubovány se sloučeninou a 1 μΜ glycinu po dobu 15 minut před přidáním NMDA. Po 24 hodinách byl 25 morfologicky vyšetřován cytotoxický efekt mikroskopem s fázovým kontrastem a tento efekt byl biologicky kvantifikován měřením uvolnění LDH.
-14CZ 289293 B6
Aktivita LDH byla určena v supematantu po 24 hodinách technikou, kterou popsal Wroblewski aLa Due (1955). Stručně, 0,1 ml supematantu se přidal do 0,9 ml pufru fosforečnanu sodného (pH = 7,5) obsahujícího pyruvát sodný (22,7 mM) a NADH (0,8 mg/10 ml) při pokojové teplotě. Konverze pyruvátu na laktát se zaznamenávala při 340 nm v průběhu 10 minut na Kontron 5 Spectrofotometer.
Výsledky
Úplné křivky závislosti na koncentraci nejsou dosud dostupné. Nicméně, nízké μΜ koncentrace 10 Mrz 2/501 a Mrz 2/502 byly účinné v neuroprotekci in vitro, stím, že Mrz 2/502 se zdála být v tomto ohledu účinnější (viz tabulka 15).
Tabulka 15
| Mrz 2/ | Sloučenina | Cytotoxicita in vitro IC50 μΜ |
| 501 | 8-C1-I | <5 |
| 502 | 8-C1-H | «5 |
| 503 | 8-Br-I | >20 |
In vivo
Antikonvulzivní aktivita
Cíl
Zhodnocení antagonistických charakteristik testovaných sloučenin na NMDA receptoru hodnocením antikonvulzivních účinků. Další role přenašečů organických kyselin v eliminaci 25 testovaných sloučenin z mozku byla hodnocena za pomoci vlivu inhibitoru, Probenicidu, na trvání antikonvulzivní aktivity.
Techniky
Samci albínů Swiss myší (19 -21 g) umístění v počtu 10 - 15 na box byly použity pro test NMDA letality (Leander et al., 1988). Pro pentylentetrazolem (PTZ) indukované křeče byli použiti samci albínů Swiss myší (25 - 34 g) umístění v počtu 40 na bos (58 x 38x20 cm), zatímco v testech maximálních elektrošoků (MES) a testech motorických poruch byly použity samci NMR myší (18 - 28 g) umístěné v počtu 5 na box. Všechna zvířata byla napájena a krmena podle potřeby za 12-hodinového cyklu svědo-tma (světlo od 6 hodin) a při kontrolované teplotě (20 ± 0,5 °C). Všechny pokusy byly provedeny mezi 10 a 17 hodinou. Testovaná činidla byla injikována i.p. 15 minut před indukcí křečí, pokud není uvedeno jinak (viz dále). Mrz 2/502 byla rozpuštěna v salinickém roztoku s přidaným NaOH. Většina dalších činidel byla rozpuštěna v následujícím roztoku: 0,606 g Tris; 5,0 g glukózy; 0,5 g Tween 80;
a 95 ml vody. Cholinové a tetramethylamoniové soli byly rozpuštěny v destilované vodě.
V testech křečí indukovaných NMDA na myších byly nejprve určeny vztahy dávka-odpověď pro NMDA pro určení dávky ED97, která byla potom použita pro testování antagonistických vlastností. Po injekci ED97 dávky NMDA byla zvířata umístěna v malém boxu (20 x 28 x 14 cm) 45 a byla pozorována po dobu 20 minut. Smrt, které předcházely klonické křeče a tonické záchvaty, byla farmakologickým koncovým jevem.
Pentylentetrazol byl injikován v dávce 90 mg/kg (i.p.). Přítomnost celkových tonických záchvatů byla potom skórována po dobu 30 minut, protože tento parametr je senzitivnější pro
-15CZ 289293 B6 antagonismus na NMDA receptoru než klonické křeče. Farmakologický konečný sledovaný parametr byla přítomnost tonu v zadních tlapkách s natažením.
MES (100 Hz, trvání šoku 0,5 sekund, intenzita šoku 50 mA, trvání impulzu 0,9 ms, Ugo Basile) 5 byl aplikován pomocí komeálních elektrod. Byla zaznamenávána přítomnost tonických křečí (tonická extenze zadních tlapek s minimálním úhlem ktělu 90°). V dalším pokusu byl myším injikován Prebenicid (200 mg/kg 30 minut před podáním testovaných činidel pro hodnocení úlohy transportu organických kyselin pro eliminaci (trváni účinku). Cílem bylo získat ED50 pro všechny vyšetřované parametry pomocí Litchfield Wilcoxanova (1949) testu pro závislost na ío dávce.
Výsledky
Z testovaných složek byly účinné pouze čtyři sloučeniny, všechny z třídy Π, při podání i.p. 15 v MES testu (Mrz 2/499, Mrz 2/502, Mrz 5/516 a Mrz 2/514, viz tabulka 16a). Sloučeniny třídy I byly neúčinné. Všechny čtyři sloučeniny měly zřetelně velmi krátké poločasy in vivo. PTZ test se zdá být citlivějším modelem pro antagonistickou aktivitu na glycmB místu při podání i.p. a kromě toho, stejné sloučeniny třídy Π byly aktivní při 2 - 4 násobně nižších dávkách, zatímco sloučeniny třídy I zůstávaly inaktivní (tabulka 16a).
Cholinové soli těchto stejných N-oxidových derivátů (struktury II) měly zřetelnou antikonvulzivní aktivitu ve všech třech modelech, zatímco jejich non-N-oxidové deriváty byly buď inaktivní, nebo měly pouze slabou aktivitu (tabulka 16b). Kromě toho se zdá, že cholinové soli mají delší trvání účinku. Injekce probenicidu významně prodlužovala trvání účinku všech 25 testovaných činidel. Například poločasy 2/514 a 2/570 byly okolo 40 a 80 minut, v příslušném pořadí, za absence probenicidu. Za přítomnosti probenicidu byly poločasy prodlouženy na přibližně 180 a 210 minut, v příslušném pořadí. Proto se zdá, že transport organických kyselin ven z mozku v choroidálním plexu má významnou úlohu v krátkém trvání účinku testovaných sloučenin. Probenicid v použité dávcé (200 mg/kg) nemá sám o sobě žádný nezávislý účinek na 30 křeče indukované MES.
Tabulka 16a
| Mrz 2/ | Sloučenina | MES i.p. (ID50 mg/kg) | NMDA i.p. (ID5o mg/kg) | PTZ i.p. (IDÍO mg/kg) |
| 585 | I | >100,0 | 58,9 | 59,0 |
| 499 | II | 87,0 | 18,6 | |
| 501 | 8-C1-I | >100,0 | >100,0 | >40,0 |
| 502 | 8—Cl—II | 47,6 | 26,0 | 8,3 |
| 503 | 8-Br-I | >100,0 | >100,0 | >100,0 |
| 514 | 8-Βγ-Π | 20,2 | 99,0 | 12,8 |
| 519 | 8-F-I | >60,0 | >100,0 | >100,0 |
| 516 | 8-F-II | 16,6 | 40,0 | 7,9 |
| 515 | 7,8-diCl-I | >100,0 | 9,0 | >100,0 |
| 518 | 7,8-diCl-H | >60,0 | >100,0 | |
| 539 | 7-Cl,8-Br-I | >60,0 | >100,0 | >100,0 |
| 538 554 | 7- Br,8-Cl-I 8- O-CHj-I | >60,0 >100,0 | 106,0 | >100,0 |
-16CZ 289293 B6
Tabulka 16b
| Mrz 2/ | Sloučenina | MES i.p. (ID50 mg/kg) |
| 577 | Π (chol) | 23,7 |
| 569 | 8-Cl-I(chol) | >50 |
| 576 | 8-C1-H (chol) | 7,7 |
| 586 | 8-Br-I (chol) | >50 |
| 570 | 8-Br-I (chol) | 12,8 |
| 572 | 8-F-I (chol) | >100 |
| 571 | 8-F-B (chol) | 15,5 |
| 574 | 7,8-diCl-I (chol) | >100,0 |
| 578 | 8-O-CH3-II (chol) | >100,0 |
| 575 | 7-O-CH3-I (chol) | >100,0 |
Mikroelektroforetická aplikace EAA agonistů do spirálních neuronů in vivo
Schopnost těchto antagonistů glycinB místa účinkovat jako antagonisté NMDA receptoru in vivo byla hodnocena pomocí účinu i.v. podání proti odpovědi jednotlivých neuronů míchy krys na mikroelektroforetickou aplikaci AMPA a NMDA. Sloučeniny třídy Π Mrz 2/502 a Mrz 2/516 byly účinnými antagonisty NMDA receptoru in vivo s ID50 1,2 a 1,8 mg/kg i.v., v příslušném pořadí, zatímco původní sloučeniny třídy I byly zcela inaktivní až do 16 mg/kg i.v.. Troj- až čtyřnásobně vyšší dávky také antagonizovaly odpovědi na AMPA, ačkoliv toto zřetelné chybění selektivity je v protikladu k testům in vitro (tabulka 17a).
Tabulka 17a
| Mrz 2/ | Sloučenina | mikroelektroforetické podání NMDA (ID50 mg/kg i.v.) | mikroelektroforetické podání AMPA (ID5o mg/kg i.v.) |
| 501 | 8—Cl—I | >16,0 | >16,0 |
| 502 | 8-Cl-n | 1,2 | 4,9 |
| 519 | 8-F-I | >16,0 | >16,0 |
| 516 | 8—F—Π | 1,8 | 3,6 |
Cholinové soli byly přibližně stejně účinné jako volné kyseliny v tomto modelu po i.v. podání, ale byly o něco více selektivní pro NMDA vzhledem kAMPA (tabulka 17b). Opět, non-Noxidové deriváty (sloučeniny třídy I) byly inaktivní.
Tabulka 17b
| Mrz 2/ | Sloučenina | mikroelektroforetické podání NMDA (ID50 mg/kg i. v.) | mikroelektroforetické podání AMPA (ID50 mg/kg i.v.) |
| 577 | II (chol) | 34,0 | >32,0 |
| 569 | 8—Cl—I (chol) | >16,0 | >16,0 |
| 576 | 8-C1-H (chol) | 2,8 | >16,0 |
| 586 | 8-Br-I (chol) | >16,0 | >16,0 |
| 570 | 8-Br-H (chol) | 4,5 | >16,0 |
| 572 | 8-F-I (chol) | >16,0 | >16,0 |
| 571 | 8-F-II (chol) | 4,7 | 9,2 |
-17CZ 289293 B6
Diskuse
Čtyři sloučeniny třídy Π Mrz 2/499, 2/501, 2/514 a 2/516 jsou antagonisty glycinB místa in vitro a mají mnohem lepší in vivo systémovou a/nebo CNS biodostupnost než jejich výchozí sloučeniny třídy I (Mrz 2/585, 2/501, 2/503 a 2/519). Průnik do CNS je hlavním problémem pro téměř všechny dosud vyvinuté antagonisty glycinB místa, ale tato nová třída sloučenin překonává tento hlavní problém a tvoří proto terapeuticky relevantní antagonisty gtycinB místa.
Adiční soli
Pomocí technik popsaných výše pro sloučeniny 5, 6, 7, 8, 9 a 10 se připraví adiční soli s kvartémími aminy (například 4-tetramethylamonná sůl, 4-tetraethylamonná sůl), kvartémími aminoalkoholy (například cholinem), nebo kvartémími aminokyselinami (například N,N,N-trimethylserinem). Cholinové a 4-tetramethylamonné (4-NH3) soli významně zlepšují biodostupnost a jsou výhodné.
Farmaceutické prostředky
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být zpracovány do farmaceutických prostředků obsahujících farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo a aktivní sloučeninu podle předkládaného vynálezu. Takové prostředky mohou být podány živočichům, zejména Údem, orálním nebo parenterálním způsobem. Například, přípravky v pevné formě nebo farmaceutické prostředky pro orální podání mohou mít formu kapslí, tablet, pilulek, prášků nebo granulátu.
V takových pevných farmaceutických prostředcích je aktivní sloučenina nebo její proléčivo smísena s alespoň jedním farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem jako je třtinový cukr, laktóza, škrob, talek nebo syntetické nebo přirozené gumy, pojivém jako je želatina, kluzným činidlem jako je stearan sodný a/nebo činidlem podporujícím rozpadavost jako je hydrogenuhličitan sodný. Pro umožnění zpomaleného uvolňováni může být do farmaceutického prostředku zapracována substance jako je hydrokoloid nebo jiný polymer. Mohou být přidána také další činidla, jako jsou lubrikační činidla nebo pufry, jak je v oboru běžné. Tablety, pilulky nebo granuláty mohou být opatřeny enterálním potahem, pokud je to žádoucí. Kapalné přípravky pro orální podání mohou být ve formě liposomů, emulzí, roztoků, nebo suspenzi obsahujících běžně používaná inertní ředidla jako je voda. Dále mohou takové kapalné farmaceutické prostředky obsahovat smáčivá, emulgační, dispergační nebo povrchově aktivní činidla, stejně jako sladidla, chuťová korigens nebo čichová korigens.
Vhodné prostředky pro orální podání mohou být - mimo jiné - sterilní vodné nebo nevodné roztoky, suspenze, liposomy nebo emulze. Další substance, které jsou používány pro tuto formu farmaceutických prostředků, mohou být použity jako farmaceuticky přijatelná ředidla nebo nosiče.
Podle zamýšleného způsobu podání a trvání terapie se může přesná dávka v prostředcích podle předkládaného vynálezu lišit a je určena ošetřujícím lékařem nebo veterinářem. Aktivní činidlo podle předkládaného vynálezu může být kombinováno s jiným farmakologicky aktivním činidlem.
V prostředcích podle předkládaného vynalezu se může poměr aktivního činidla nebo činidel v prostředku velmi lišit, nutné je pouze to, aby aktivní složka podle předkládaného vynálezu nebo její proléčivo tvořila nebo poskytovala účinné množství, tj. aby byla při použití uvedené dávkované formy podána vhodná účinná dávka. Samozřejmě, několik dávkových forem, stejně jako několik jednotlivých aktivních sloučenin může být podáno ve stejnou nebo v přibližně stejnou dobu nebo i ve stejném farmaceutickém prostředku nebo formulaci.
-18CZ 289293 B6
Způsob léčby
Jak bylo uvedeno výše, sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou vhodné - zejména ve formě farmaceutických prostředků nebo přípravků - pro orální nebo parenterální podání určitých 5 jednotlivých dávek stejně jako denních dávek v jednotlivých případech, které jsou pochopitelně určeny podle dobře známých lékařských a/nebo veterinárních zásad ošetřujícím lékařem nebo veterinářem.
Kromě orálního a parenterálního podání může být použito rektální a/nebo intravenózní podání 10 a dávky jsou významně redukovány, pokud je použito parenterální podání, ačkoliv orální podání je výhodnější. Vhodné je množství přibližně 1 až 3 g/den, ve formě opakovaných nebo dělených dávek. Širší rozmezí od přibližně 0,5 g do 10 g může být také použito, v závislosti na okolnostech jednotlivých případů. Ačkoliv dávka 500 mg aktivní složky je zqména výhodná pro použití v tabletové formě, jednotlivé dávky mohou být v rozmezí od přibližně 200 do 1000 mg a dávka 15 500 mg navržená pro použití v tabletách může být samozřejmě podána orálně, například jednou až třikrát za den. Je samozřejmé, že dávka vyšší než jedna tableta může být podána v jedné dávce, jak je nutné pro splnění navrženého denního orálního podání množství 1 až 3 g na den.
*
Jak již bylo uvedeno, sloučenina podle předkládaného vynálezu nebo její proléčivo může být 20 podána živočichům včetně lidí jakýmkoliv způsobem, například orálně jako kapsle nebo tableta, parenterálně ve formě sterilních roztoků nebo suspenzí nebo pomocí implantace pelet, a v některých případech intravenózně ve formě sterilních roztoků. Jinými běžnými způsoby podání jsou kožní, podkožní bukální, intramuskulámí a intraperitoneální způsob podání, a určitý způsob podání bude vybrán ošetřujícím lékařem nebo veterinářem.
Je proto zřejmé, že předkládaný vynález poskytuje nové pyrido-ftalazindionové sloučeniny a farmaceutické prostředky obsahující takové sloučeniny, stejně jako způsoby pro léčbu neurologických onemocnění spojených s excitační toxicitou a chybnou funkcí glutamatergního neuronálního přenosu, což dohromady poskytuje dlouho očekávané řešení existujících problému, 30 které nebylo odpovídajícím způsobem vyřešeny.
Mělo by být jasné, že předkládaný vynález není omezen na určité sloučeniny, prostředky, způsoby nebo postupy, které jsou zde popsány, protože odborníkům v oboru budou jasné mnohé modifikace a změny těchto provedení a proto je předkládaný vynález omezen pouze ve smyslu 35 plného rozsahu připojených patentových nároků.
Odkazy:
Bottenstein JE, Sáto GH (1979): Proč. Nati. Acad. Aci. USA 76, pp. 514-517.
Canton T, Double A. Miquet JM, Jimonet P, Blanchard JC (1992): J. Pharm. Pharmacol. 44, pp. 812-816.
Dansyz W, Parsons CG, Bresink I, Quack G (1995): DrugNews &Perspectives 8, pp. 261-277.
Foster AC, Wong EHF (1987): Brit. J. Pharmacol. 91, pp. 403-409.
Hartfree EF (1972): Analytical Biochemistry 48, pp. 422-427.
Kessler M. Terramani T, lynch G, Baudry M (1989): J. Neurochem. 52, pp. 1319-1328.
Leander JD, Lawson RR, omstein PL, Zimmerman DM (1988): Brain Res. 448, p. 115.
Litchfieldt JT, Wilcoxon F (1949): J. Pharmacol. Exp. Ther. 96, p. 99:
-19CZ 289293 B6
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randell RJ (1951): J. Biol. Chem. 193, pp. 265-275.
Parsons CG, Gruner R, Rozental J (1994): Neuropharmacology 33, pp. 589-604.
Wroblewski F, LaDue JS (1955): Soc. Exp. Biol. Med. 90, p. 210.
Yoneda Y, Suzuki T, Ogita K, Han DK (1993): J. Neurochem. 60, pp. 634-645.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (14)
1. Pyridylftalazindiony obecného vzorce Π kde R1 a R2 jsou vybrány ze souboru sestávajícího z vodíku, halogenu a methoxyskupiny nebo kde R1 a R2 dohromady tvoří methylendioxyskupinu, a jejich farmaceuticky přijatelné solí.
2. Pyridylftalazindiony podle nároku 1, kde soli jsou vybrány z cholinové a 4-tetramethylamoniové soli.
3. Pyridylftalazindion podle nároku 1, který je vybrán ze souboru sestávajícího z
4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 8-brom-4-hydroxy- 1-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 8-fluor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu,
7,8-dichlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazmo[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 7-brom-8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 7-chlor-8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, a farmaceuticky přijatelných solí kterékoliv z výše uvedených sloučenin.
4. Pyridylftalazindion podle nároku 2, který je vybrán ze souboru sestávajícího ze soli 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-chlor-4-hydroxy-1-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-fluor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyiidazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 7,8-dichlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli7-brom-8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem a
-20CZ 289293 B6 soli 7-chlor-8-brm-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem.
5. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku glyciiibeta antagonistické množství pyridylftalazindionu podle nároku 1, spolu s farmaceuticky' přijatelným nosičem nebo ředidlem.
6. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku glyciiibeta antagonistické množství pyridylftalazindionu podle nároku 1 ve formě cholinové soli, spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
7. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku glycinbeta antagonistické množství pyridylftalazindionu vybraného ze souboru sestávajícího z
4-hydroxy- 1-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 8-chlor-4-hydroxy- 1-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 8-fluor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu,
7.8- dichlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 7-brom-8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu,
7- chlor-8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, a farmaceuticky přijatelných solí kterékoliv z výše uvedených sloučenin.
8. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku glyciribeta antagonistické množství pyridylftalazindionu vybraného ze souboru sestávajícího ze soli 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazmo[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-fluor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazmo[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 7,8-dichlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolm-5-oxidu s cholinem, soli 7-brom-8-chlor-4-hydroxy- 1-oxo-1,2-dihydropyridazmo[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 7-chlor-8-brom-4-hydroxy- 1-oxo-1,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem.
9. Pyridyltfalazindiony podle nároku 1 pro použití pro léčení neurologických onemocnění spojených s excitační toxicitou a chybnou funkcí glutamátergního neuronálního přenosu u živých zvířat.
10. Pyridylftalazindiony ve formě cholinových solí podle nároku 1 pro použití pro léčení neurologických onemocnění spojených s excitační toxicitou a chybnou funkcí glutamátergního neuronálního přenosu u živých zvířat.
11. Pyridylftalazindion podle nároku 1 vybraný ze souboru sestávajícího z
4-hydroxy-1-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu,
8- chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu, 8-fluor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu,
7.8- dichlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chmolm-5-oxidu, 7-brom-8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolm-5-oxidu, 7-chlor-8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu,
-21CZ 289293 B6 a farmaceuticky přijatelných solí kterékoliv z výše uvedených sloučenin pro použití pro léčení neurologických onemocnění spojených s excitační toxicitou a chybnou funkcí glutamátergního neuronálniho přenosu u živých zvířat.
12. Pyridylftalazindion podle nároku 1 vybraný ze souboru sestávajícího ze soli 4-hydroxy-1-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-brom-4-hydroxy-l-oxo-I,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 8-fhior-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s chinolinem, soli 7,8-dichlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem, soli 7-brom-8-chlor-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazmo[4,5-b]-chinolin-5-oxidu s cholinem a soli 7-chlor-8-brom-4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino[4,5-b]-chinolni-5-oxidu s cholinem pro použití pro léčení neurologických onemocnění spojených s excitační toxicitou a chybnou funkcí glutamátergního neuronálniho přenosu u živých zvířat.
13. Způsob přípravy 4-hydroxy- 1-oxo-l,2-dihydropyridazino-[4,5-b]-chinoliii-5-oxidu vzorce 5, (5), kde R1, R2 mají význam uvedený vnároku 1, vyznačující se tím, že se dimethylchinolin-2,3-dikarboxylát-l-oxid vzorce 3
R’
R’ /COOMe ''COOMe (3), kde Me znamená methyl, R1, R2 mají význam uvedený v nároku 1 převede na hydrazinovou sůl vzorce 4 (4)
-22CZ 289293 B6 reakcí s hydrátem hydrazinu a vzniklá hydrazinová sůl vzorce 4 se hydrolyzuje za vzniku požadovaného 4-hydroxy-l-oxo-l,2-dihydropyridazino-[4,5-b]-chinolin-5-oxidu.
14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že se získá 4-hydroxy-l-oxo-l,2dihydropyridazino-[4,5-b]-chinolin-5-oxid vzorce 5 převede reakcí s cholinhydroxidem na cholinovou sůl.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/686,346 US5776935A (en) | 1996-07-25 | 1996-07-25 | Pyrido-phtalazin diones and their use against neurological disorders associated with excitotoxicity and malfunctioning of glutamatergic neurotransmission |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2019997A3 CZ2019997A3 (cs) | 1999-09-15 |
| CZ289293B6 true CZ289293B6 (cs) | 2001-12-12 |
Family
ID=24755940
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ1999201A CZ289293B6 (cs) | 1996-07-25 | 1997-07-25 | Pyridylftalazindiony, způsob jejich přípravy a pouľití a farmaceutické prostředky na jejich bázi |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5776935A (cs) |
| EP (1) | EP0931081B1 (cs) |
| JP (1) | JP3595342B2 (cs) |
| KR (1) | KR100598206B1 (cs) |
| CN (1) | CN1093860C (cs) |
| AR (1) | AR004158A1 (cs) |
| AT (1) | ATE224894T1 (cs) |
| AU (1) | AU719993B2 (cs) |
| BR (1) | BR9710569A (cs) |
| CA (1) | CA2261923C (cs) |
| CZ (1) | CZ289293B6 (cs) |
| DE (1) | DE69715893T2 (cs) |
| DK (1) | DK0931081T3 (cs) |
| EA (1) | EA001711B1 (cs) |
| ES (1) | ES2180041T3 (cs) |
| FI (1) | FI112946B (cs) |
| GE (1) | GEP20022801B (cs) |
| HK (1) | HK1020193A1 (cs) |
| HU (1) | HU223780B1 (cs) |
| IL (1) | IL128225A (cs) |
| LT (1) | LT4591B (cs) |
| LV (1) | LV12260B (cs) |
| NO (1) | NO310820B1 (cs) |
| PL (1) | PL189572B1 (cs) |
| PT (1) | PT931081E (cs) |
| SI (1) | SI9720048B (cs) |
| SK (1) | SK283536B6 (cs) |
| TW (1) | TW402605B (cs) |
| UA (1) | UA63911C2 (cs) |
| WO (1) | WO1998004556A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA976612B (cs) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030176435A1 (en) * | 2002-12-17 | 2003-09-18 | Brown Dean Gordon | Compounds and methods for the treatment of pain |
| US6444702B1 (en) | 2000-02-22 | 2002-09-03 | Neuromolecular, Inc. | Aminoadamantane derivatives as therapeutic agents |
| AU2002329799B2 (en) * | 2001-08-20 | 2007-03-15 | Maiken Nedergaard | Treatment of glial tumors with glutamate antagonists |
| EP1298581A1 (fr) * | 2001-09-27 | 2003-04-02 | C.S.E.M. Centre Suisse D'electronique Et De Microtechnique Sa | Procédé et dispositif pour calculer les valeurs des neurones d'un réseau neuronal |
| US7037524B2 (en) * | 2001-10-03 | 2006-05-02 | Herbalscience, Llc | Oral delivery of a botanical |
| US7001620B2 (en) | 2001-10-03 | 2006-02-21 | Herbal Science, Llc | Kavalactone product |
| US20050069596A1 (en) * | 2001-10-03 | 2005-03-31 | Gow Robert T. | Compositions and methods comprising kava and anti-anxiety compounds |
| US7029707B2 (en) * | 2001-10-03 | 2006-04-18 | Herbalscience, Llc | Method of producing a processed kava product having an altered kavalactone distribution and processed kava products produced using the same |
| US7105185B2 (en) | 2001-10-03 | 2006-09-12 | Herbalscience, Llc | Kavalactone profile |
| US7291352B2 (en) | 2001-10-03 | 2007-11-06 | Herbalscience Llc | Methods and compositions for oral delivery of Areca and mate' or theobromine |
| US20050037025A1 (en) * | 2002-10-03 | 2005-02-17 | Gow Robert T. | Methods and compositions comprising kava and mate' or theobromine |
| US20040082543A1 (en) * | 2002-10-29 | 2004-04-29 | Pharmacia Corporation | Compositions of cyclooxygenase-2 selective inhibitors and NMDA receptor antagonists for the treatment or prevention of neuropathic pain |
| US7294353B2 (en) * | 2003-10-24 | 2007-11-13 | Herbalscience, Llc | Methods and compositions comprising ilex |
| US7279184B2 (en) * | 2003-10-24 | 2007-10-09 | Herbalscience, Llc | Methods and compositions comprising Ilex |
| US20060280790A1 (en) * | 2005-04-08 | 2006-12-14 | Ju Tzuchi R | Pharmaceutical formulations |
| KR20100063087A (ko) * | 2007-09-20 | 2010-06-10 | 코텍스 파마슈티칼스, 인크. | 글루타메이트 시냅스 반응 향상을 위한 3-치환된 1,2,3-트리아진-4-온 및 3-치환된 1,3-피리미디논 |
| EP2264035A1 (en) * | 2009-06-04 | 2010-12-22 | Merz Pharma GmbH & Co. KGaA | Glycine B antagonists |
| US9737531B2 (en) | 2012-07-12 | 2017-08-22 | Glytech, Llc | Composition and method for treatment of depression and psychosis in humans |
| CN110996948A (zh) | 2017-06-12 | 2020-04-10 | 格莱泰施有限责任公司 | 用nmda拮抗剂和d2/5ht2a或选择性5ht2a拮抗剂治疗抑郁症 |
| USD895157S1 (en) | 2018-03-06 | 2020-09-01 | IsoTruss Indsutries LLC | Longitudinal beam |
| CN109912503B (zh) * | 2019-04-01 | 2022-04-08 | 江南大学 | 一种2,3-二酰基喹啉类化合物的合成方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9208511D0 (en) * | 1991-05-09 | 1992-06-03 | Ici Plc | Compounds |
| US5597922A (en) * | 1994-07-29 | 1997-01-28 | State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University And The University Of Oregon | Glycine receptor antagonist pharmacophore |
-
1996
- 1996-07-25 US US08/686,346 patent/US5776935A/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-07-23 TW TW086110479A patent/TW402605B/zh not_active IP Right Cessation
- 1997-07-24 ZA ZA9706612A patent/ZA976612B/xx unknown
- 1997-07-25 EP EP97918944A patent/EP0931081B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-25 GE GEAP19974684A patent/GEP20022801B/en unknown
- 1997-07-25 BR BR9710569A patent/BR9710569A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-07-25 ES ES97918944T patent/ES2180041T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-25 DE DE69715893T patent/DE69715893T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 HU HU9903104A patent/HU223780B1/hu active IP Right Grant
- 1997-07-25 AT AT97918944T patent/ATE224894T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 PL PL97331323A patent/PL189572B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 CN CN97197534A patent/CN1093860C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 SI SI9720048A patent/SI9720048B/sl not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 JP JP50849998A patent/JP3595342B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 SK SK103-99A patent/SK283536B6/sk unknown
- 1997-07-25 DK DK97918944T patent/DK0931081T3/da active
- 1997-07-25 CA CA002261923A patent/CA2261923C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 AR ARP970103380A patent/AR004158A1/es active IP Right Grant
- 1997-07-25 CZ CZ1999201A patent/CZ289293B6/cs unknown
- 1997-07-25 AU AU42969/97A patent/AU719993B2/en not_active Ceased
- 1997-07-25 IL IL12822597A patent/IL128225A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 UA UA99021084A patent/UA63911C2/uk unknown
- 1997-07-25 PT PT97918944T patent/PT931081E/pt unknown
- 1997-07-25 WO PCT/EP1997/004057 patent/WO1998004556A1/en active IP Right Grant
- 1997-07-25 KR KR1019997000627A patent/KR100598206B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 EA EA199900161A patent/EA001711B1/ru not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-01-22 LV LVP-99-14A patent/LV12260B/en unknown
- 1999-01-22 NO NO19990306A patent/NO310820B1/no unknown
- 1999-01-25 FI FI990134A patent/FI112946B/fi active
- 1999-01-25 LT LT99-007A patent/LT4591B/lt not_active IP Right Cessation
- 1999-11-02 HK HK99104938A patent/HK1020193A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ289293B6 (cs) | Pyridylftalazindiony, způsob jejich přípravy a pouľití a farmaceutické prostředky na jejich bázi | |
| KR100492052B1 (ko) | 인돌-2,3-디온-3-옥심유도체,이의제조방법및이를포함하는약제학적조성물 | |
| JPH09504519A (ja) | ピリダジノキノリン化合物 | |
| JP2004513125A (ja) | 疼痛治療のためのｎ−型カルシウムチャンネル拮抗薬 | |
| IE910685A1 (en) | Heterocyclic compounds and their preparation and use | |
| JPH0311067A (ja) | 興奮性アミノ酸拮抗剤 | |
| AU680632B2 (en) | Quinoxalinedione derivatives as EAA antagonists | |
| UA124783C2 (uk) | ФАРМАКОЛОГІЧНО АКТИВНІ АЛІЦИКЛІЧНО ЗАМІЩЕНІ ПОХІДНІ ПІРАЗОЛО[1,5-a]ПІРИМІДИНУ | |
| JP2005508894A (ja) | 痛みの治療のためのｎ型カルシウムチャネルアンタゴニスト | |
| JP3727569B2 (ja) | テトラヒドロキナゾリン−２，４−ジオンおよびそれらの治療用途 | |
| US6602865B1 (en) | Pyridazino(4,5-b)(1,5)oxazepinone, -thiazepinone and -diazepinone compounds | |
| EP1001956B1 (en) | 2,3-benzodiazepine derivatives | |
| TW200924772A (en) | Heterobicyclic-substituted quinolones useful as nitric oxide synthase inhibitors | |
| JPH04128288A (ja) | キノロンカルボン酸誘導体及びその製造方法 | |
| US20010046991A1 (en) | Derivatives of quinoline as alpha-2 antagonists | |
| EP1296960A2 (en) | 5h-2,3-benzodiazepine antagonists of excitatory amino acid receptors | |
| JP2004513117A (ja) | 疼痛治療のためのｎ−型カルシウムチャンネル拮抗薬 | |
| EP1129097A1 (en) | Novel type condensed pyridazinone compounds | |
| RU2267485C2 (ru) | Производные 3-аминометилхинолона-2 в качестве ингибиторов no-синтетазы и способ их получения, биологически активные соединения и фармацевтическая композиция на их основе | |
| NO803561L (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av benzylidenderivater |